CN108424432B

CN108424432B - 一种3’-氧-甲氧乙基核苷的制备方法

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Publication number: CN108424432B
Application number: CN201710571029.9A
Authority: CN
Inventors: 李喜群; 孙波
Original assignee: Shanghai Zhaowei Technology Development Co ltd
Current assignee: Shanghai Zhaowei Technology Development Co ltd
Priority date: 2017-07-13
Filing date: 2017-07-13
Publication date: 2021-04-23
Anticipated expiration: 2037-07-13
Also published as: CN108424432A

Abstract

本发明公开了一种3’‑氧‑甲氧乙基核苷的制备方法。所述方法包括步骤：(1)使结构如式B所示的化合物与硅烷化保护的碱基经缩合得到结构如式C所示的化合物；所述碱基选自胸腺嘧啶、5‑甲基胞嘧啶、腺嘌呤或2,6‑二氨基嘌呤；和(2)将结构如式C所示的化合物经碱解反应得到结构如式A所示的3’‑氧‑甲氧乙基核苷；

Description

一种3’-氧-甲氧乙基核苷的制备方法

技术领域

本发明涉及核苷化合物合成领域，具体地涉一种3’-氧-甲氧乙基核苷的制备方法。

背景技术

近年，随着基因组创药的发展，反义寡核苷酸药物被急速开发，究其原因在于较传统药物来讲其具有以下多种优势，例如特异性较强、信息量较大等。由于作用于遗传信息传递的上游，所需药量较低，副作用也较少。

3’-氧-甲氧乙基核苷是第二代反义寡核苷的类似物，是核苷合成的基础原料。3’-氧-甲氧乙基核苷除可作为药物开发工具外，还可用于科学研究，特别是功能基因组学研究。但是现有文献报道其在合成关键步骤尚存在难以工业化的局限，无法避免各种异构体的产生。而在工业上要想去除各种异构体一般要借助制备型色谱或是反复结晶。通过制备型色谱制备，无法满足工业化要求，而多次结晶，必然收率降低，也无法满足工业要求。另一方面，在医药品的用途中，为了抑制由含有的杂质生成的副生成物，有必要使用非常高纯度的寡核苷。

迄今为止，文献报道的合成方法难以满足市场需求并且整个路线的总收率较低，没有适合工业化制备3’-氧-甲氧乙基核苷的方法。即使是实验室规模的实验，国内外也鲜有文献报道，通常获得3’-氧-甲氧乙基核苷的途径为在制备2’-氧-甲氧乙基核苷的过程中作为副产物分离而得到，收率也较低，难以规模放量。

因此，本领域迫切需要提供一种有效且无需特别设备，适合大规模工业化生产，可得到高纯度3’-氧-甲氧乙基核苷的制备方法。

发明内容

本发明旨在提供一种高纯度3’-氧-甲氧乙基核苷的制备方法。

本发明提供了一种结构如式A所示的3’-氧-甲氧乙基核苷的制备方法，所述方法包括步骤：

(1)使结构如式B所示的化合物与硅烷化保护的碱基经缩合得到结构如式C所示的化合物；所述碱基选自胸腺嘧啶、5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤或2,6-二氨基嘌呤；和

(2)将结构如式C所示的化合物经碱解反应得到结构如式A所示的3’-氧-甲氧乙基核苷；

在另一优选例中，所述缩合的催化剂为三氟甲磺酸三甲基硅酯(TMSOTf)。

在另一优选例中，所述硅烷化保护的碱基是在悬浮于溶剂的碱基中加入硅烷化试剂，在60-85℃得到硅烷化保护的碱基；所述硅烷化试剂为N,O-双(三甲基硅烷基)乙酰胺(BSA)或1,1,1,3,3,3,-六甲基二硅烷(HMDS)；所述溶剂为乙腈和/或二氯乙烷；所述碱基和硅烷化试剂的摩尔比为1∶2.0-3.0；更佳地，所述碱基和硅烷化试剂的摩尔比为1∶2.4-2.8；最佳地，为1∶2.5-2.6。

在另一优选例中，所述缩合的反应温度为60-85℃；更优选为75-80℃。

在另一优选例中，所述碱解所用试剂为浓氨水溶液。

在另一优选例中，所述结构如式B所示的化合物是将3-氧-甲氧乙基-D-核糖体上1位、2位和5位羟基与苯甲酰氯反应后而得。

在另一优选例中，所述结构如式B所示的化合物通过下述步骤而得：

(i)使结构如式IM4所示的化合物中唯一的一个羟基与苯甲酰氯反应得到结构如式IM5所示的化合物；

(ii)使结构如式IM5所示的化合物中的丙酮叉保护基脱除后，得到结构如式IM6所示的化合物；和

(iii)使结构如式IM6所示的化合物中的两个羟基与苯甲酰氯反应得到结构如式B所示的化合物；

在另一优选例中，所述具有1位、2位和5位羟基的3-氧-甲氧乙基-D-核糖体是使结构如式IM1所示的化合物中的两个丙酮叉形成羟基而得；

(a)将结构如式SM所示的1,2；5,6-双丙酮叉阿洛糖与2-氯乙基甲醚进行羟基的烷基化反应得到结构如式IM1所示的化合物；

(b)使将结构如式IM1所示的化合物选择性脱除5,6-位丙酮叉保护基而得到结构如式IM2所示的化合物；

(c)使结构如式IM2所示的化合物的邻二醇氧化至醛而成结构如式IM3所示的化合物后将醛还原为醇得到结构如式IM4所示的化合物；

(d)使结构如式IM4所示的化合物中唯一的一个羟基与苯甲酰氯反应得到结构如式IM5所示的化合物；

(e)使结构如式IM5所示的化合物中的丙酮叉保护基脱除后，得到结构如式IM6所示的化合物；和

(f)使结构如式IM6所示的化合物中的两个羟基与苯甲酰氯反应得到结构如式B所示的化合物；

在另一优选例中，将结构如式A所示的3’-氧-甲氧乙基核苷进行结晶得到高纯度的结构如式A所示的化合物。

据此，本发明提供了一种有效且无需特别设备，适合大规模工业化生产，可得到高纯度3’-氧-甲氧乙基修饰的核苷的制备方法，可满足市场的需求。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，发现可以修饰性阿洛糖为起始原料，在得到甲氧乙基修饰的D-核糖中间体后通过对1，2，5位羟基用苯甲酰基保护后得到关键中间体B；并以此修饰糖作为糖基来源，通过核苷缩合反应与硅烷化保护的碱基进行缩合，从而规模化、经济地大量合成3’-氧-甲氧乙基核苷，获得非常高纯度的目标化合物。在此基础上，完成了本发明。

本发明中涉及的主要化合物的结构式：

其中，Base即碱基选自胸腺嘧啶、5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤或2,6-二氨基嘌呤。

如本发明所用，“室温”是指15-35℃，优选为20-30℃。

本发明中的一个关键中间体是结构如式B所示的化合物，以此修饰糖作为糖基来源，通过一种磺酸酯作为核苷缩合反应的催化剂，与硅烷化保护的碱基进行缩合，得到结构如式A所示的化合物，可以避免2’-氧-甲氧乙基核苷异构体的产生。

具体的方法包括步骤：

第一步，使含有结构如式B所示的化合物和碱基的体系与硅烷化试剂混合后升温得澄清的体系；所述碱基选自胸腺嘧啶、5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤或2,6-二氨基嘌呤；

第二步，降温后在体系中加入缩合催化剂后升温进行缩合反应，得到结构如式C所示的化合物；

第三步，使结构如式C所示的化合物通过碱解反应脱除保护基得到结构如式A所示的化合物。

上述第一和第二步中，均升温至60-85℃；上述第二步中降温至零下5℃-25℃；更优选为0-10℃。

上述第一步中，所述碱基和硅烷化试剂的摩尔比为1∶2.0-3.0；优选为1∶2.4-2.8；更优选为1∶2.5-2.6。

在本发明的一种实施方式中，上述第一步中将结构如式B所示的化合物和碱基悬浮于溶剂中后滴加硅烷化试剂，升温使体系澄清；所述硅烷试剂包括N,O-双(三甲基硅烷基)乙酰胺(BSA)和1,1,1,3,3,3,-六甲基二硅烷(HMDS)；所述溶剂为乙腈和/或二氯乙烷。

上述第二步中使用磺酸酯作为糖缩合的催化剂。作为本发明的优选方式，所述的磺酸酯是三氟甲磺酸三甲基硅酯(除腺嘌呤以外)，腺嘌呤使用四氯化锡作为缩合催化剂。

在本发明的一个实施例中，上述第二步降温加入缩合催化剂后，升温至第一步中获得澄清体系的温度。

在本发明的一种实施方式中，当碱基为腺嘌呤时，使用四氯化锡作为缩合催化剂，不必经过硅烷化，直接与结构如式B所示的化合物进行缩合反应，得到结构如式C所示的化合物。

在本发明的一种实施方式中，上述第三步是用碱性溶液使结构如式C所示的化合物溶解后室温下反应得到结构如式A所示的化合物；上述碱性溶液中含有氨水。本领域已知的一些可替代方法也可用于该步的碱解脱保护反应。

在本发明的一种实施方式中，将结构如式A所示的化合物的粗品与乙醇混合后结晶得到高纯度的3’-氧-甲氧乙基修饰的核苷化合物。

在本发明的一个实施例中，更进一步地，利用已知方法，利用脱氨酶将3’-氧-甲氧乙基-2,6-二氨基嘌呤核苷进一步转化为3’-氧-甲氧乙基鸟嘌呤核苷。

本发明使用便宜易得的修饰性阿洛糖通过氧-烷基化反应，高收率、单一选择性地引入甲氧乙基基团；然后通过选择性脱除保护基后再进行邻二醇氧化，从而减掉一个碳原子；然后再将醛基还原为羟基，从而完成糖型的转换，得到关键的甲氧乙基修饰的D-核糖中间体；接着，对D-核糖的5-位羟基用疏水性较强的苯甲酰基进行保护，以便利于后继处理；然后脱除D-核糖中1,2-位羟基的丙酮叉保护基后再用苯甲酰基保护，从而得到关键中间体B(即结构如式B所示的化合物)。

具体地，通过下述步骤获得结构如式B所示的化合物：

第一步，使结构如式SM所示的1,2；5,6-双丙酮叉阿洛糖与2-氯乙基甲醚进行羟基的烷基化反应，得到结构如式IM1所示的化合物；

第二步，使结构如式IM1所示的化合物选择性脱除其5,6-位丙酮叉保护基，制得结构如式IM2所示的化合物；

第三步，使结构如式IM2所示的化合物的邻二醇氧化至醛，得到结构如式IM3所示的化合物；

第四步，结构如式IM3所示的化合物的醛还原为醇，得到结构如式IM4所示的化合物；

第五步，用苯甲酰氯对结构如式IM4所示的化合物中唯一的一个羟基进行修饰，从而得到结构如式IM5所示的化合物；

第六步，脱除结构如式IM5所示的化合物中唯一的丙酮叉保护基，得到1,2-位羟基裸露的结构如式IM6所示的化合物；

第七步，用苯甲酰氯对结构如式IM6所示的化合物中的两个羟基进行修饰，得到结构如式B所示的化合物。

在本发明的一个实施例中，上述第一步是将结构如式SM所示的1,2；5,6-双丙酮叉阿洛糖与二甲亚砜(DMSO)和质量浓度为50％的氢氧化钾溶液混合后，加入2-氯乙基甲醚在50-60℃进行羟基的烷基化反应，从而制得结构如式IM1所示的化合物。

在本发明的一个实施例中，上述第二步是将结构如式IM1所示的化合物同催化量的三氟醋酸和乙醇/水的混合溶液进行混合后在室温搅拌反应得到结构如式IM2所示的化合物；较佳地，以混合溶液的总体积计，其中三氟醋酸的浓度范围为5-10v/v％(浓度太低，反应太慢；浓度太高，副反应较多)。经过筛选，发明人发现，三氟醋酸在此反应中的表现较为优良；并且当选用乙醇/水体系时，反应选择性和反应速度较高。

可以使用本领域常规的方法将结构如式IM2所示的化合物中的邻二醇氧化至醛，例如但不限于，上述第三步中将结构如式IM2所示的化合物与高碘酸钠反应，氧化邻二醇至醛，得到结构如式IM3所示的化合物。

可以使用本领域常规的方法将结构如式IM3所示的化合物中的醛还原为醇，例如但不限于，上述第四步中将结构如式IM3所示的化合物与硼氢化钠反应得到结构如式IM4所示的化合物。

在本发明的一个实施例中，上述第五步是在0-25℃将结构如式IM4所示的化合物、三乙胺和苯甲酰氯混合，室温下进行对羟基修饰的反应，得到结构如式IM5所示的化合物。

上述第六步是用酸将将结构如式IM5所示的化合物中的唯一丙酮叉保护基脱除，得到1,2-位羟基裸露的、结构如式IM6所示的化合物；所述的酸为盐酸。

在本发明的一个实施例中，上述第七步是在将结构如式IM6所示的化合物和苯甲酰氯混合，室温下对结构如式IM6所示的化合物中的两个羟基进行修饰，得到结构如式B所示的化合物。

在本发明的一种实施方式中，结构如式B所示的化合物可通过如下合成路线制备获得：

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

本发明的主要优点在于：

1、发明人筛选较多条件后，发现可以利用市场上供应充足，便宜易得的双丙酮叉阿洛糖为起始原料，经过一系列常规反应，最后得到关键修饰结构的D-核糖；然后再在特定催化剂作用下生成单一构型的产物，避免了现有技术中会产生难以分离的2’位和3’位异构体的情况的发生，极大地解决了生产中的问题，较大地提高了转化率以及降低了产物纯化难度，便于规模化生产。

2、本发明制备过程中无需特殊或危险性试剂，对设备，人员素质等无高等级要求。

3、本发明提供的纯化方法简便，无需特殊设备，成本低廉。

4、本发明提供的纯化方法效果显著，目标化合物的含量可以达到99.5％。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，实施例中的定义各试剂的量的百分比(％)是质量体积比(w/v)。

本发明下述实施例中的HPLC(高效液相色谱)条件：

反应监控：

柱：YMC-AQ C18 5μm 4.6*250mm

流速：0.8mL/min

波长：260nm

流动相：A液：TEAA缓冲液(0.1摩尔/升的乙酸水溶液用三乙胺调至pH＝7.0)。B液：色谱级乙腈。分析过程中A液，B液在线脱气，氦气流速50mL/min。

梯度：

时间(min)	A％	B％
			0	35	65
4	35	65
			8	5	95
16	5	95
			20	35	65
30	35	65

目标产品检验HPLC条件：

柱：YMC-AQ C18 5μm 4.6*250mm

流速：0.8mL/min

波长：260nm

流动相：A—甲醇 B—10mmol/L醋酸铵溶液。分析过程中A液，B液在线脱气，氦气流速50mL/min。

梯度：

时间(min)	A％	B％
			0	0	100
3	0	100
			6	50	50
16	50	50
			20	0	100
30	0	100

实施例1

3’-氧-甲氧乙基-5-甲基尿苷的制备

1.1,2；5,6-双丙酮叉-3-甲氧乙基阿洛糖(IM1)的制备：

氩气保护下，称取60.0g SM(1,2；5,6-双丙酮叉阿洛糖)，加入300mL DMSO溶解，300mL 50％KOH水溶液搅拌5分钟，向反应液中加入43.6g 2-氯乙基甲基醚，加热至55℃反应。反应16小时后，取样TLC检测，显示原料SM已全部消失，原料上部有一新点生成。

反应过程中，TLC检测条件为：乙酸乙酯/正己烷＝3/5体系展开后，用5％硫酸的甲醇溶液浸板后热风枪吹板至显黑色斑点，原料Rf:0.25，产物Rf:0.3。

反应完毕后，向反应液中加入800mL二氯甲烷稀释，倒入500mL水中萃取，有机相再分别用600mL去离子水萃取3次，合并水相，500mL二氯甲烷反萃一次。合并的有机相用60g无水硫酸钠干燥后过滤。滤液于40℃减压浓缩至无冷凝液滴下，得粗品1,2；5,6-双丙酮叉-3-甲氧乙基阿洛糖(IM1)85.0g。

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):5.70(d,J＝3.6Hz,1H),4.68(t,J＝4.2Hz,1H),4.69-4.22(m,1H),3.96-3.90(m,2H),3.82-3.79(t,1H),3.77-3.74(t,1H),3.68-3.66(m,1H),3.59-3.56(m,1H),3.50(t,J＝4.8Hz,2H),3.25(s,3H),1.43(s,3H),1.33(s,3H),1.27(s,6H).

2. 1,2-丙酮叉-3-氧-甲氧乙基-D-核糖(IM4)的制备：

称取化合物IM1 73g，在730mL由5％的TFA，5％的H₂O，90％的EtOH组成的混合溶液(体积百分比)中室温搅拌反应。TLC检测原料IM1全部消失后(TLC检测条件为：乙酸乙酯体系展开后，用5％硫酸的甲醇溶液浸板后热风枪吹板至显黑色斑点，原料Rf:0.9，产物Rf:0.3)，用NaOH水溶液调节pH到中性，向此反应液中加入NaBH₄ 54.3g，室温搅拌反应，TLC检测IM2原料点消失(TLC检测条件为：乙酸乙酯体系展开后，用5％硫酸的甲醇溶液浸板后热风枪吹板至显黑色斑点，原料Rf:0.3，产物Rf:0.4)后，滤去白色固体。

滤液降至0℃后，分批加入NaBH4，室温搅拌，TLC检测IM3原料点消失后(TLC检测条件为：乙酸乙酯体系展开后，用5％硫酸的甲醇溶液浸板后热风枪吹板至显黑色斑点，原料Rf:0.4，产物Rf:0.35)，滤去固体。滤液浓缩干得化合物IM4 42.0g。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):5.69(d,J＝4.0Hz,1H),4.70(brs,1H),4.65(t,J＝4.2Hz,1H),3.80(dd,J₁＝2.0Hz,J₂＝4.5Hz,1H),3.69-3.38(m,7H),3.25(s,3H),1.44(s,3H),1.27(s,3H).

3. 1,2-丙酮叉-3-氧-甲氧乙基-5-氧-苯甲酰基-D-核糖(IM5)的制备：

称取化合物IM4 37.0g，300mL二氯甲烷溶解，降温至0℃后，加入三乙胺22.6g，滴加苯甲酰氯31.4g，25℃搅拌反应。TLC检测IM4原料点消失后(TLC检测条件为：乙酸乙酯体系展开后，用5％硫酸的甲醇溶液浸板后热风枪吹板至显黑色斑点，原料Rf:0.35，产物Rf:0.6)，加入冷的饱和碳酸氢钠水溶液搅拌1小时后分出有机相，干燥浓缩后硅胶柱层析后得IM5 27.0g，纯度95.0％，收率：51.4％。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.01(d,J＝7.0Hz,2H),7.68(t,J＝7.5Hz,1H),7.56-7.53(m,2H),5.79(d,J＝3.5Hz,1H),4.74-4.76(m,1H),4.58(dd,J₁＝5.0Hz,J₂＝12.0Hz,1H),4.35-4.32(m,1H),4.18-4.15(m,1H),3.88-3.83(m,1H),3.78-3.72(m,1H),3.66-3.62(m,1H),3.43-3.37(m,2H),3.16(s,3H),1.41(s,3H),1.24(s,3H).

4. 3-氧-甲氧乙基-5-氧-苯甲酰基-D-核糖(IM6)的制备：

称取化合物IM5 29.8g，150mL四氢呋喃溶解，加入盐酸149mL，25℃搅拌反应。HPLC检测IM5原料反应完，加入乙酸乙酯和水萃取，有机相干燥浓缩后得粗品IM6 20.0g，纯度92.0％，收率75.7％。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.03-8.02(d,J＝7.0Hz,2H),7.68-7.65(m,1H),7.55-7.52(m,2H),6.48-6.47(d,J＝4.0Hz,1H),5.07-5.06(d,J＝3.5Hz,1H),4.85(brs,1H),4.48-4.45(m,1H),4.32-4.28(m,1H),4.13-4.10(m,1H),4.02-4.00(m,1H),3.94-3.93(m,1H),3.70-3.67(m,1H),3.60-3.56(m,1H),3.47-3.45(m,2H),3.24(s,3H).

5. 1,2,5-氧-三苯甲酰基-3-氧-甲氧乙基-D-核糖(化合物B)的制备：

称取化合物IM6 20.0g，200mL二氯甲烷溶解，加入苯甲酰氯22.5g，25℃搅拌反应。HPLC检测反应完成后，淬灭反应，用水洗涤3次，有机相干燥浓缩后层析得产品化合物B27.0g，纯度99.4％，收率81.0％。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.09-8.06(m,4H),8.05-8.00(m,4H),7.96-7.92(m,4H),7.75-7.63(m,5H),7.61-7.56(m,5H),7.53-7.43(m,6H),7.34(t,J＝8.0Hz,2H),6.76(d,J＝4.0Hz,1H),6.47(s,1H),5.81(d,J＝4.0Hz,1H),5.62(dd,J₁＝4.0Hz,J₂＝6.0Hz,1H),4.72-4.60(m,4H),4.55-4.49(m,2H),4.46-4.43(m,2H),3.80-3.69(m,4H),3.45(t,J＝4.5Hz,2H),3.43-3.40(m,1H),3.39-3.37(m,1H),3.18(s,3H),3.12(s,3H).

6. 3’-氧-甲氧乙基-5-甲基尿苷(A-1)的制备：

称取化合物B 22.0g，胸腺嘧啶6.4g悬浮于250mL乙腈中，滴加BSA 21.5g，升温至75℃使体系溶清。反应液降至5℃后，滴加TMSOTf 14.1g，反应温度恢复到75℃。HPLC监控反应完成后，淬灭反应。乙酸乙酯稀释反应液，水洗，有机相干燥浓缩得粗品C-1。该粗品用200mL甲醇/氨水溶解，25℃搅拌反应过夜。反应完成后，浓缩，加入100mL无水乙醇结晶后得产品3’-氧-甲氧乙基-5-甲基尿苷(A-1)10.0g，纯度99.7％，收率74.8％。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):11.28(brs.1H),7.72(d,J＝1.0Hz,1H),5.76(d,J＝6.0Hz,1H),5.25(d,J＝6.0Hz,1H),5.14(t,J＝5.0Hz,1H),4.18(dd,J₁＝6.0Hz,J₂＝11.0Hz,1H),3.91(q,J＝3.5Hz,1H),3.84(m,1H),3.75(m,1H),3.63(m,2H),3.55(m,1H),3.48(m,2H),3.27(s,3H),1.78(s,3H).

实施例2

3’-氧-甲氧乙基-5-甲基胞苷(A-2)的制备

称取化合物B 22.5g，5-甲基胞嘧啶6.5g悬浮于250mL乙腈中，滴加BSA 26.4g，升温至75℃使体系溶清。反应液降至5℃后，滴加TMSOTf 14.4g，反应温度回复到75℃。HPLC监控反应完成后，淬灭反应。乙酸乙酯稀释反应液，水洗，有机相干燥浓缩得粗品C-2。该粗品用200mL甲醇/氨水溶解，25℃搅拌反应过夜。反应完成后，浓缩，加入100mL无水乙醇结晶后得产品3’-氧-甲氧乙基-5-甲基胞苷(A-2)10.5g，纯度99.9％，收率77.0％。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.67(s.1H),7.27(brs,1H),6.79(brs,1H),5.76(d,J＝5.0Hz,1H),5.12(m,2H),4.12(dd,J₁＝5.0Hz,J₂＝10.5Hz,1H),3.90-3.88(m,1H),3.82-3.80(m,1H),3.73-3.64(m,2H),3.61-3.52(m,2H),3.49-3.44(m,2H),3.26(s,3H),1.81(s,3H).

实施例3

3’-氧-甲氧乙基腺嘌呤核苷(A-3)的制备

称取化合物B 26.0g，腺嘌呤8.1g悬浮于250mL乙腈和1,2-二氯乙烷中，降温至10℃，滴加四氯化锡26.1g，滴加完毕后25℃搅拌反应。HPLC监控反应完成后，用水淬灭。二氯甲烷稀释反应液，水洗，有机相干燥浓缩得粗品C-3。该粗品用200mL甲醇/氨水溶解，25℃搅拌反应过夜。反应完成后，浓缩，层析得产品3’-氧-甲氧乙基腺苷(A-3)12.1g，纯度99.6％，收率70％。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.35(s.1H),8.15(s,1H),7.34(s.2H),5.89(d,J＝8.5Hz,1H),5.48-5.45(m,1H),5.41(d,J＝8.5Hz,1H),4.77-4.73(m,1H),4.06-4.05(m,1H),4.02-4.01(m,1H),3.92-3.79(m,1H),3.70-3.66(m,2H),3.59-3.52(m,1H),3.51-3.50(m,2H),3.35(s,2H),3.29(s,3H).

实施例4

3’-氧-甲氧乙基鸟嘌呤核苷的制备

1.3’-氧-甲氧乙基-2,6-二氨基嘌呤核苷(A-4)的制备：

称取195g化合物B在2000mL三口瓶中，加入63g 2,6-二氨基嘌呤，1200mL干燥DCE和161.6g BSA；放入75±2℃油浴中搅拌反应，插上冷凝管回流。体系变澄清后，继续搅拌一小时，然后停止加热，待溶液冷却至40±2℃后，缓慢滴加入117.8g TMSOTf，控制滴加速度，以使体系不爆沸，滴加完后，继续于75±2℃下回流搅拌反应。HPLC监控反应完成后，淬灭反应。二氯甲烷稀释反应液，水洗，有机相干燥浓缩得粗品C-4。该粗品用1000mL甲醇/氨水溶解，25℃搅拌反应过夜。反应完成后，浓缩至不滴，加入无水乙醇500mL，溶解浓缩剩余物，结晶后得产品3’-氧-甲氧乙基-2,6-二氨基嘌呤核苷(A-4)105g，纯度99.5％，收率82.1％。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.93(s,1H),6.80(s.2H),5.76(s.2H),5.72(d,J＝6.5Hz,1H),5.52(s,1H),5.44(s,1H),4.67-4.65(m,1H),4.02-4.00(m,1H),3.72-3.68(m,2H),3.61-3.58(m,1H),3.54-3.53(m,2H),3.39(s,2H),3.26(s,3H).

2. 3’-氧-甲氧乙基-鸟嘌呤核苷(A-5)的制备：

称取25g化合物A-4在500mL三口瓶中，加入250mL去离子水，调节体系pH至7.3，加入0.25g腺苷脱氨酶(ADA)，体系于37.5±2℃下搅拌反应。HPLC监控反应完成后，反应完成后体系中即有固体析出。将反应体系浓缩至125mL左右，过滤，水淋洗，得产品3’-氧-甲氧乙基鸟嘌呤核苷(A-5)18g，纯度99.8％，收率72.0％。

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):10.65(s.1H),7.94(s,1H),6.48(s.2H),5.71(d,J＝6.0Hz,1H),5.32(d,J＝6.0Hz,1H),5.08-5.06(m,1H),4.56-4.52(m,1H),3.96-3.95(m,2H),3.79-3.75(m,1H),3.69-3.60(m,2H),3.55-3.48(m,3H),3.28(s,3H).

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims

1.一种结构如式A所示的3’-氧-甲氧乙基核苷的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(1)使结构如式B所示的化合物与硅烷化保护的碱基经缩合得到结构如式C所示的化合物；所述碱基选自胸腺嘧啶、5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤或2,6-二氨基嘌呤；

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述缩合的催化剂为三氟甲磺酸三甲基硅酯。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述硅烷化保护的碱基是在悬浮于溶剂的碱基中加入硅烷化试剂，在60-85℃得到硅烷化保护的碱基；所述硅烷化试剂为N,O-双(三甲基硅烷基)乙酰胺或1,1,1,3,3,3,-六甲基二硅烷；所述溶剂为乙腈和/或二氯乙烷；所述碱基和硅烷化试剂的摩尔比为1∶2.0-3.0。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述缩合的反应温度为60-85℃。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述缩合的反应温度为75-80℃。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述碱解所用试剂为浓氨水溶液。

7.如权利要求1-6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述结构如式B所示的化合物通过下述步骤而得：

(ii)使结构如式IM5所示的化合物中的丙酮叉保护基脱除后，得到结构如式IM6所示的化合物；

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述结构如式B所示的化合物通过下述步骤而得：

(e)使结构如式IM5所示的化合物中的丙酮叉保护基脱除后，得到结构如式IM6所示的化合物；

9.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，将结构如式A所示的3’-氧-甲氧乙基核苷进行结晶得到高纯度的结构如式A所示的化合物。