KR100544847B1 - 보호화 2'-데옥시시티딘류의 정제법 - Google Patents

보호화 2'-데옥시시티딘류의 정제법 Download PDF

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Abstract

(과제) 종래에 효율적으로 정제하기 어려웠던 보호화 2'-데옥시시티딘류를 효율적으로 정제하는 방법을 제공한다.
(해결수단) 물과 복합체를 형성하는 결정으로 결정화시킴으로써 불순물을 제거하여 보호화 2'-데옥시시티딘류를 고순도로 정제한다.
(효과) 지금까지 칼럼 크로마토그래피법으로만 가능했던 고순도의 보호화 2'-데옥시시티딘류를 쉽고 대규모로 합성할 수 있게 되었다.

Description

보호화 2'-데옥시시티딘류의 정제법{METHOD FOR THE PURIFYING PROTECTED 2'-DEOXYCYTIDINES}
본 발명은 보호화 2'-데옥시시티딘류 및 그 물과 복합체를 형성한 결정에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 본 발명은 5'위치 보호화 2'-데옥시시티딘류의 제조방법, 정제방법에 관한 것이다.
5'위치 보호화 2'-데옥시시티딘류는 최근 개발되고 있는 안티센스 DNA 등의 원료로서 유용한 화합물이다.
최근, 게놈 창약이 진전됨에 따라 안티센스 DNA 의약 등이 급속하게 개발되고 있다. 이에 따라 원료가 되는 DNA 올리고머, 또한 올리고머의 원료가 되는 보호화 데옥시누클레오사이드류의 수요가 증대되고 있다. 한편, 의약품의 용도에는 함유되어 있는 불순물에 의한 부생성물의 생성을 최대한 억제하기 위하여, 매우 고순도의 중간체 제품을 사용할 필요가 있다.
지금까지 5'위치 보호화 데옥시누클레오사이드류는, 일본 공개특허공보 소58-180500호, 동 소63-179889호나 일본 특허공표공보 평6-507883호 등의 예에서 알 수 있는 바와 같이 칼럼 크로마토그래피법으로 정제되어 왔다. 이 방법으로 는 극성이나 구조가 크게 다른 불순물의 정제는 비교적 쉽지만, 유사구조를 갖는 불순물의 제거는 어렵다. 예컨대, 5', 3'위치의 양측 수산기가 디메톡시트리틸기와 같은 트리틸 유도체로 보호된 불순물 또는 필요한 5'위치가 아니라 3'위치의 수산기가 디메톡시트리틸기와 같은 트리틸 유도체로 보호된 불순물 등은 잘 제거되기 어렵고, 또한 이들 불순물은 의약품 제조상 다음 공정 이후에 영향이 큰 불순물이므로 그 혼입은 매우 큰 문제다. 또한, 칼럼 크로마토그래피법은 공업화에서 대규모의 정제장치가 필요하고, 또한 대량의 용매를 필요로 하기 때문에, 장래의 대량 생산, 대량 공급에서는 매우 큰 문제라고 하지 않을 수 없다.
또, 지금까지도 칼럼 크로마토그래피를 사용하지 않고 불순물을 제거하기 위한 검토가 이루어져 왔다. 구체적으로는 재침전법에 의한 정제에 대해서, 일본 공개특허공보 소60-152495호나 PCT 출원 WO 200075154호 및 WO 0039138호에 개시되어 있다. 재침전에 의한 방법이란 미리 비정제 화합물을 가용성 용매에 용해시킨 후에 불용성 용매를 첨가 또는 불용성 용매에 적하함으로써 강제적으로 재석출시키는 방법이다. 이 때문에 기본적으로 정제능력은 낮으며 상기에서 나타낸 바와 같은 불순물의 제거는 어렵다. 또, 가용성 용매와 불용성 용매의 양비를 적절하게 조정하는 것은 공업적으로는 어렵고, 양비를 잘못하면 쉽게 오일화시키거나 점성이 있는 침전을 발생시켜 정제하는 데에 실패하기 쉽다. 실제로 일본 공개특허공보 소60-152495호의 방법에 의하면, 점성이 있는 엿 형상으로 수득되는 경우가 있어 공업적으로 문제가 있다. 지금까지는 재침전에 의한 비결정질화의 방법은 개시되어 왔으나, 결정화에 의해 결정을 수득하는 방법에 대해서는 공지되 어 있지 않았다.
종래의 문제점을 감안하여 효율적이며 특별한 설비를 필요로 하지 않는 매우 고순도의 보호화 2'-데옥시시티딘류의 제조법을 제공하는 것이다.
과제를 해결하기 위한 수단
본 발명자들은 상기 과제에 대해서 예의 검토한 결과, 보호화 2'-데옥시시티딘류 및 물을 함유하는 용액으로부터 물과 복합체를 형성한 보호화 2'-데옥시시티딘류의 결정화에 성공하였다. 그럼으로써, 종래 기술에서는 어려웠던 결정화 또는 재결정에 의한 정제법으로 정제할 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성시켰다.
즉, 본 발명은
[1] 하기 화학식 1
Figure 112003019980925-pat00001
(식 중, m 및 n은 각각 독립적으로 임의의 정수, R1은 4-메톡시트리틸기, 4,4'-디메톡시트리틸기 또는 트리페닐메틸기를, B1은 아미노기가 보호된 시토신기를 나타냄)로 표시되는 보호화 2'-데옥시시티딘류의 물과 복합체를 형성한 결정.
[2] 화학식 1로 표시되는 화합물이 하기 화학식 2
Figure 112003019980925-pat00002
(식 중, m 및 n은 상기와 동일함)로 표시되는 [1]에 기재된 물과 복합체를 형성한 결정.
[3] N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 함유량이 0.1 % 이하인 [2]에 기재된 물과 복합체를 형성한 결정.
[4] 하기 화학식 3
Figure 112003019980925-pat00003
(식 중, R1 및 B1은 상기와 동일함)으로 표시되는 화합물 또는 물을 함유하는 용액으로부터, 화학식 3으로 표시되는 보호화 2'-데옥시시티딘류를, 물과 복합체를 형성한 결정으로 석출시켜 이를 회수하는 것을 특징으로 하는 보호화 2'-데옥시시티딘류의 정제법.
[5] 용액에 함유된 물의 양이 화학식 3에 대하여 0.5 당량 이상인 것을 특징으로 하는 [4]에 기재된 보호화 2'-데옥시시티딘류의 정제법.
[6] 화학식 3으로 표시되는 화합물이 하기 화학식 4
인 [4] 또는 [5]에 기재된 보호화 2'-데옥시시티딘류의 정제법.
[7] 수득된 결정 중에서 N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 함유량이 0.1% 이하인 [6]에 기재된 보호화 2'-데옥시시티딘류의 정제법.
[8] 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 보호화 2'-데옥시시티딘류의 물과 복합체를 형성한 결정을, 대기압 이하의 압력으로 건조시킴으로써, 물과 복합체를 형성하지 않는 화학식 3 또는 화학식 4로 표시되는 보호화 2'-데옥시시티딘류의 제조방법.
발명의 실시형태
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 화학식 1 또는 화학식 3의 B1에서의 아미노기가 보호된 시토신기의 보호기로는, 알킬기, 알킬아실기 또는 치환될 수도 있는 벤조일기를 들 수 있다.
이 경우 알킬기는 직쇄형이거나 분지될 수도 있고, 또다른 관능기(치환기)가 결합될 수도 있다. 이 치환기로는 예컨대 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 2-프로필기, n-부틸기, i-부틸기 등을 들 수 있다.
알킬아실기는 직쇄형이거나 분지될 수도 있고, 고리를 형성할 수도 있으며, 또다른 관능기(치환기)가 붙을 수도 있다. 이 치환기로는, 예컨대 아세틸기, 프로피오닐기, n-부티릴기, i-부티릴기, 피발로일기, 발레릴기, 이소발레릴기, 시클로프로필기, 페닐아세틸기, 페녹시아세틸기, (이소프로필페녹시)아세틸기 등을 들 수 있다.
벤조일기는 무치환이거나 치환될 수도 있고, 또한 페닐기의 2위치, 3위치, 4위치 중 어느 위치에 치환기가 있을 수도 있다. 또, 복수의 위치에 치환기가 있을 수도 있다. 치환기로는, 예컨대 메틸기, 에틸기, 2-프로필기, n-부틸기, t-부틸기 등과 같은 알킬기, 히드록실기, 메톡시기, 에톡시기, n-프로필옥시기, 2-프로필옥시기, n-부틸옥시기 등과 같은 알킬옥시기, 니트로기, 플루오로기, 클로로기, 브로모기, 요오드기 등과 같은 할로겐기, 아미노기, 메틸아미노기, 에틸아미노기, n-프로필아미노기, 디메틸아미노기, 디에틸아미노기, 디이소프로필아미노기 등과 같은 알킬아미노기, 아세틸기, 프로피오닐기, 벤조일기 등과 같은 아실기, 페닐기, 피리디닐기 등을 들 수 있다.
구체적으로는, 벤조일기, 2-클로로벤조일기, 3-클로로벤조일기, 4-클로로벤조일기, 2-브로모벤조일기, 3-브로모벤조일기, 4-브로모벤조일기, 2-플루오로벤조일기, 3-플루오로벤조일기, 4-플루오로벤조일기, 2-메톡시벤조일기, 3-메톡시벤조일기, 4-메톡시벤조일기, 2-니트로벤조일기, 3-니트로벤조일기, 4-니트로벤조일기, 2-아미노벤조일기, 3-아미노벤조일기, 4-아미노벤조일기, 2-메틸아미노벤조일기, 3-메틸아미노벤조일기, 4-메틸아미노벤조일기, 2-디메틸아미노벤조일기, 3-디메틸아미노벤조일기, 4-디메틸아미노벤조일기, 4-페닐벤조일기, 4-아세틸벤조일기 등을 들 수 있다.
보호화 2'-데옥시시티딘류 및 물을 함유하는 용액은, 이들 2 종류의 성분을 함유하는 한에서 용매를 함유해도 된다. 이 경우 용매는 보호화 2'-데옥시시티딘류를 물과 복합체를 형성한 결정으로 석출할 수 있는 용매라면 특별히 한정되지 않지만, 예컨대 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 펜탄올, 시클로헥산올 등과 같은 알코올류, 디에틸에테르, 테트라히드로푸란, 디옥산 등과 같은 에테르류, 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤 등과 같은 케톤류, 펜탄, 헥산, 메틸펜탄, 시클로헥산, 헵탄, 노난, 데칸 등과 같은 포화탄화수소류, 벤젠, 톨루엔, 쿠멘, 자일렌, 메시틸렌, 디이소프로필벤젠, 트리이소프로필벤젠 등과 같은 방향족 탄화수소류, 디클로로메탄, 클로로포름, 디클로로에탄 등과 같은 할로겐화 탄화수소류, 피리딘, 루티딘, 퀴놀린 등과 같은 피리딘류, 트리에틸아민, 트리부틸아민 등과 같은 3급 아민류, 아세토니트릴, 디메틸포름아미드, 디메틸이미다졸리디논, 디메틸술폭사이드 등과 같은 극성용매 등을 들 수 있다. 이들 용매는 단일 또는 몇 종류 혼합하여 사용할 수도 있다.
물과 복합체를 형성한 결정이란, 결정구조를 형성하기 위해서 물이 보조적인 역할을 하고 있는 상태를 나타내고, 결정 격자에 물을 주입한 형태로 결정을 형성하거나 물과의 약한 상호작용에 의해 복합체를 형성하거나 하는 등 어느 경우나 포 함하고 있다. 물과의 복합체 형태와 결정 구조에 대해서는 특별히 제한되지 않는다.
보호화 2'-데옥시시티딘류의 물과 복합체를 형성한 결정에는, 결정화할 때에 사용되는 보호화 2'-데옥시시티딘류 및 물을 함유하는 용액에서 유래되는 용매를 결정화를 저해하지 않는 범위에서 미량 함유할 수도 있다.
결정화할 때의 물의 양은 보호화 2'-데옥시시티딘류에 대하여 0.5 당량 이상이면 되지만, 바람직하게는 1 당량 이상이다.
물과 복합체를 형성시키는 방법으로는 특별히 한정되지 않지만, 예컨대 보호화 2'-데옥시시티딘류를 함유하는 용액에 물을 첨가하거나, 또는 물을 함유한 용매에 보호화 2'-데옥시시티딘류를 첨가함으로써 수득할 수도 있다.
결정화할 때의 보호화 2'-데옥시시티딘류의 농도는 결정화할 수 있는 농도면 특별히 한정되지 않지만, 통상 1% ~ 50%, 바람직하게는 5% ~ 40% 범위에서 실시된다.
결정화할 때의 온도는 특별히 규정되지 않지만, -10℃로부터 용매의 비등점 범위가 바람직하다. 또, 통상 1도의 결정화에서 충분히 정제할 수 있지만, 추가로 반복 재결정을 실시함으로써 더 고순도로 할 수도 있다. 또한, 재결정할 때에는 결정종류를 접종할 수도 있다.
이와 같이 하여 수득된 보호화 2'-데옥시시티딘류의 물과 복합체를 형성한 결정은, 필요에 따라 대기압 이하의 압력, 바람직하게는 0.1㎜Hg ~ 10㎜Hg에서 건조시킴으로써, 수분 함량이 저하된 보호화 2'-데옥시시티딘류의 물과 복합체를 형 성한 결정, 물과 복합체를 형성하지 않은 보호화 2'-데옥시시티딘류의 분말 또는 보호화 2'-데옥시시티딘류의 분말을 수득할 수 있다.
건조시킬 때의 온도로는 물을 제거할 수 있으면 특별히 한정되지 않지만, 통상 실온 ~ 200℃ 범위에서 실시된다. 또, 건조 조작시에 질소 등의 수분을 함유하지 않은 기체를 흘려 보내는 건조나 실리카겔, 오산화이인 등의 탈수제를 사용하는 탈수도 가능하다.
본 발명의 정제법에 의해 제거되는 불순물로는, N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘, N4-벤조일-3',5'-O-비스(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘 등을 들 수 있고, 이들 불순물 중 N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 보호화 2'-데옥시시티딘류 중의 함유량은 물과 복합체를 형성하고 있는지의 여부에 관계없이 0.1% 이하, 바람직하게는 0.01% 이하이고, N4-벤조일-3',5'-O-비스(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 보호화 2'-데옥시시티딘류 중의 함유량은 물과 복합체를 형성하고 있는지의 여부에 관계없이 0.3% 이하, 바람직하게는 0.1% 이하이다(이 경우, %는 시료를 액체 크로마토그래피에 의해 측정한 경우의 차트의 면적비, Area%를 나타냄).
이상 본 발명에 따라 보호화 2'-데옥시시티딘류를 효율적으로 정제할 수 있게 되었다.
[실시예]
이하에 실시예를 들어 본 발명을 구체적으로 설명하는데, 본 발명은 이들에 의해 한정되지 않는다.
<실시예 및 비교예의 HPLC 조건-1(N4-벤조일-2'-데옥시시티딘, N4-벤조일-3',5'-O-비스(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 분석조건>
칼럼: Develosil TMS-UG-5
150㎜ ×직경 4.6㎜
유속: 0.6㎖/min.
칼럼 온도: 35℃
검출 파장: 254㎚
이동상: 구배 조건
시간(min.) B액(%)
0 20
30 100
35 100
37 20
50 STOP
[A 액]
물(2940㎖)에 NaH2PO4ㆍ2수화물(1.92g), Na2HPO4(2.43g)를 용해시킨 후, MeOH(60㎖)를 첨가 혼합하고 탈기시킨다.
[B 액]
물(300㎖)에 NaH2PO4ㆍ2수화물(196㎎), Na2HPO4(248㎎)를 용해시킨 후, MeOH(2700㎖)를 첨가 혼합하고 탈기시킨다.
<실시예 및 비교예의 HPLC 조건-2(N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 분석 조건)>
칼럼: YMC-Pack CN A-512
150㎜ ×직경 6.0㎜
유속: 1.0㎖/min.
칼럼 온도: 35℃
검출 파장: 235㎚
측정 시간: 80min.
주입량: 10㎕
이동상: 구배 조건
시간(min.) B액(%)
0 14
25 50
60 100
80 100
82 14
102 STOP
[A 액]
물(2000㎖)에 NH4H2PO4(1.15g), (NH4)2HPO4 (0.92g)를 용해시킨 후 탈기시킨다.
[B 액]
아세토니트릴(1200㎖)과 A 액(400㎖)을 혼합시킨 후 탈기시킨다.
<실시예 및 비교예의 XRD 측정조건>
기기: RAD-1A(㈜리가쿠)
X선 타겟: Cu 30kV 15mA
측정 속도 : 2°/min.
<실시예 및 비교예의 DSC 분석조건>
기기: DSC821e(METTLER TOLEDO)
용기 재질: 알루미늄제
온도상승속도: 5℃/min
질소 기류하에서 측정
참고예 1 (N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 제조)
N4-벤조일-2'-데옥시시티딘 119.0g을 피리딘 1.5ℓ에 용해시켰다. 4,4'-디메톡시트리틸클로리드 113.5g을 실온에서 2시간 동안 첨가한 후 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 탄산수소나트륨 33.8g을 첨가한 후, 다시 2시간 동안 교반한 후 반응액을 농축시켰다. 잔류물에 아세트산에틸 1.2ℓ, 물 300㎖를 첨가하여 교반하였다. 소량의 포화식염수를 첨가하여 분액하고, 유기층을 동일하게 재차 물로 세정한 후 무수황산마그네슘으로 건조시켰다. 여과 후 용매를 증류 제거한 후, 아세트산에틸 용매를 사용하여 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다. 목적물을 함유하는 프랙션을 디이소프로필에테르 2.0ℓ 중에 격렬하게 교반하면서 적하한 후, 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 여과하여 수득된 고체를 50℃에서 감압 건조시켜 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 프리체(free form) 153.3g을 수득하였다. 이 프리체는 XRD 측정에서 비결정질이었다. 또, 이 프리체 중에는 원료인 N4-벤조일-2'-데옥시시티딘, 부생성물인 N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘 및 N4-벤조일-3',5'-O-비스(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘이 각각 1.0 Area%, 0.15 Area%, 2.2 Area% 함유되어 있다.
실시예 1 (N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정의 합성)
참고예 1에서 합성된 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 프리체(2.0g)를 1,2-디클로로에탄(5㎖)에 용해시키고, 물(1.0g)을 첨가하여 -24℃에서 1일간 결정을 석출하였다. 수득된 결정을 여과한 후, 50℃에서 감압 건조시켜 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정(0.8g)을 수득하였다. 수분값은 칼 피셔 분석에서는 2.7%였다. 또, 이 결정은 XRD 측정에서 명확한 결정성 피크를 가지며, 특히 5.6°, 7°, 10.3°에서 샤프한 흡수를 가졌다. 또, DSC 측정에 의해 109℃에 결정 융해에 따른 흡열 피크를 가졌다.
이 복합체에 함유된 N4-벤조일-2'-데옥시시티딘, N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘 및 N4-벤조일-3',5'-O-비스(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘은 각각 0.05 Area%, 검출 한계(0.01%) 이하, 0.05 Area% 함유되어 있다.
NMR(CDCl3) δ8.7(s, 1H), 8.3(d, 1H), 7.9(d, 2H), 7.2-7.6(m, 13H), 6.8-6.9(m, 4H), 6.3(m, 1H), 4.5(m, 1H), 4.2(m, 1H), 3.8(s, 6H), 3.4-3.5(m, 2H), 2.7-2.9(m, 2H), 2.3(m, 1H)
실시예 2 (N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정의 합성)
참고예 1에서 합성된 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 프리체(2.0g)를 아세트산부틸(5㎖)에 용해시키고 헥산(0.5㎖)을 적하한 후, 물(0.1g) 및 실시예 1에서 수득된 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시 시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정(10㎎)을 첨가하여 빙냉화에서 1일간 결정을 석출하였다. 수득된 결정을 여과한 후, 50℃에서 감압 건조시켜 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정(1.3g)을 수득하였다. 수분값은 칼 피셔 분석에서는 2.2%였다. 또, 이 결정은 XRD 측정에서 명확한 결정성 피크를 가지며, 특히 5.6°, 7°, 10.3°에서 샤프한 흡수를 가졌다. 또, DSC 측정에 의해 112℃에 결정 융해에 따른 흡열 피크를 가졌다.
이 복합체에 함유된 N4-벤조일-2'-데옥시시티딘, N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘 및 N4-벤조일-3',5'-O-비스(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘은 각각 0.12 Area%, 검출 한계(0.01%) 이하, 0.07 Area% 함유되어 있다.
실시예 3 (N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정의 합성)
참고예 1에서 합성된 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 프리체(2.0g)를 아세토니트릴(5㎖)에 용해시키고 물(7㎖)을 적하한 후, 실시예 1에서 수득된 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정(10㎎)을 첨가하여 빙냉화에서 5시간 동안 결정을 석출하였다. 수득된 결정을 여과한 후, 50℃에서 감압 건조시켜 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정(1.3g)을 수득하였다. 또, 이 결정은 DSC 측정에 의해 112℃에서 결정 융해에 따른 흡열 피크를 가졌다.
이 복합체에 함유된 N4-벤조일-2'-데옥시시티딘, N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘 및 N4-벤조일-3',5'-O-비스(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘은 각각 0.1 Area%, 검출 한계(0.01%) 이하, 0.04 Area% 함유되어 있다.
실시예 4 (N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정의 합성)
참고예 1에서 합성된 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 프리체(2.0g)를 아세톤(5㎖)에 용해시키고 물(8㎖)을 적하한 후, 실시예 1에서 수득된 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정(10㎎)을 첨가하여 빙냉화에서 5시간 동안 결정을 석출하였다. 수득된 결정을 여과한 후, 50℃에서 감압 건조시켜 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정(1.4g)을 수득하였다. 또, 이 결정은 DSC 측정에 의해 114℃에서 결정 융해에 따른 흡열 피크를 가졌다.
이 복합체에 함유된 N4-벤조일-2'-데옥시시티딘, N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메 톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘 및 N4-벤조일-3',5'-O-비스(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘은 각각 0.07 Area%, 검출 한계(0.01%) 이하, 0.1 Area% 함유되어 있다.
실시예 5 (N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정의 합성)
N4-벤조일-2'-데옥시시티딘(40.3g)을 피리딘(302.4g)에 현탁시키고 10℃까지 냉각시켰다. 4,4'-디메톡시트리틸클로라이드(47.5g)를 같은 온도에서 첨가한 후, 10℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 종료 후 탄산수소나트륨(12.9g)을 첨가한 후, 실온에서 2시간 동안 교반한 후 반응액을 농축시켰다. 잔류물에 아세트산부틸(473g)을 첨가하여 실온에서 1시간 동안 교반한 후 불용물을 여과하였다. 수득된 유기층에, 실온에서 헥산(140g)을 적하하고, 이어서 물(3.3g) 및 실시예 1에서 수득된 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정(0.1g)을 첨가하여 실온에서 1일간 결정을 석출한 후 다시 헥산(93g)을 적하하고, 실온에서 5시간 동안 결정을 석출하였다.
수득된 결정을 여과한 후, 50℃에서 감압 건조시켜 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정(63.7g)을 수득하였다. 또, 이 결정은 DSC 측정에 의해 110℃에서 결정 융해에 따른 흡열 피크를 가졌다.
또한, 이 복합체 중에는 원료인 N4-벤조일-2'-데옥시시티딘, 부생성물인 N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘 및 N4-벤조일-3',5'-O-비스(4, 4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘이 각각 0.05 Area%, 검출 한계(0.01%) 이하, 0.15 Area% 함유되어 있다.
실시예 6 (N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정의 정제)
실시예 5에서 수득된 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정(60g), 활성탄(3g)을 아세토니트릴(300g)에 첨가하여 55℃에서 1시간 동안 처리하였다. 불용물을 여과 분리한 후, 물(240g)을 적하하고, N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정(0.1g)을 첨가하여 2시간 동안 실온에서 결정을 석출한 후 다시 물(240g)을 적하하고, 실온에서 2시간 동안 결정을 석출하였다. 수득된 결정을 여과한 후 50℃에서 감압 건조시켜 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정(55.8g)을 수득하였다. 수분값은 컬 피셔 분석에서는 2.3%였다.
또, 이 결정은 DSC 측정에 의해 114℃에서 결정 융해에 따른 흡열 피크를 가졌다.
또한, 이 복합체 중에는 원료인 N4-벤조일-2'-데옥시시티딘, 부생성물인 N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘 및 N4-벤조일-3',5'-O-비스(4, 4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘이 각각 검출 한계(0.01%) 이하, 검출 한계(0.01%) 이하, 0.05 Area% 함유되어 있다.
실시예 7 (N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 합성)
N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 물과 복합체를 형성한 결정(40g)을 선반단(棚段) 건조기를 사용하여 감압 하(10㎜Hg), 65℃에서 질소를 흘려 보내면서 40시간 동안 건조시켰다. 건조 후 목적물인 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘(39.1g)의 백색 분말을 수득하였다. 또, 수득된 분말 중에 함유되는 수분값은 0.1%였다. XRD 측정에서 본 분말은 명확한 결정성 피크는 관찰되지 않고 비결정질화 되어 있다. DSC 측정에서도 결정 융해에 따른 흡열 피크가 소실되었다.
비교예 1
WO 00/75154를 참고로 하였다. 즉, 2.00g의 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 프리체[N4-벤조일-2'-데옥시시티딘, N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘 및 N4-벤조일-3',5'-O-비스(4,4'-디메톡 시트리틸)-2'-데옥시시티딘이 각각 1.0 Area%, 0.15 Area%, 2.2 Area% 함유]를 2.3㎖의 아세토니트릴에 용해시켰다. 이 용액을 물 41㎖ 중에 격렬하게 교반하면서 적하한 후 1시간 동안 교반하였다. 석출된 백색 고체를 여과하여 물로 2회 세정하였다. 50℃에서 감압 건조시켜 1.82g의 N4-벤조일-5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘을 수득하였다. 또, 이 고체는 XRD 및 DSC 측정에서 결정에 따른 흡수 피크 또는 흡열 피크를 갖지 않아 결정화되지 않은 것으로 판명되었다. 또, 이 복합체에 함유된 N4-벤조일-2'-데옥시시티딘, N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘 및 N4-벤조일-3',5'-O-비스(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘은 각각 0.9 Area%, 0.13 Area%, 1.8 Area%이고, 본 방법에 따른 정제 효과는 거의 확인되지 않았다.
본 발명에 따라 대량 제조할 수 있는 방법을 사용하여, 종래의 방법에 비해 효율적으로 고순도의 보호화 2'-데옥시시티딘류를 제조할 수 있게 되었다.

Claims (8)

  1. 하기 화학식 1
    [화학식 1]
    Figure 112005034496421-pat00005
    (식 중, m 및 n은 각각 1 ~ 10 인 정수, R1은 4-메톡시트리틸기, 4,4'-디메톡시트리틸기 또는 트리페닐메틸기를, B1은 아미노기가 알킬기, 알킬아실기, 벤조일기, 또는 치환된 벤조일기로 보호된 시토신기를 나타냄)로 표시되는 화합물의 결정.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 화학식 1로 나타내는 화합물이 하기 화학식 2
    [화학식 2]
    Figure 112005034496421-pat00006
    (식 중, m 및 n은 각각 1 ~ 10 인 정수임)로 표시되는 화합물의 결정.
  3. 제 2 항에 있어서, N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 함유량이 0.1% 이하인 화합물의 결정.
  4. 하기 화학식 3
    [화학식 3]
    Figure 112005034496421-pat00007
    (식 중, R1은 4-메톡시트리틸기, 4,4'-디메톡시트리틸기 또는 트리페닐메틸기를, B1은 아미노기가 알킬기, 알킬아실기, 벤조일기, 또는 치환된 벤조일기로 보호된 시토신기를 나타냄)으로 표시되는 화합물 또는 물을 함유하는 용액으로부터, 화학식 3으로 표시되는 2'-데옥시시티딘류를 물과 복합체를 형성한 결정으로 석출시켜 이를 회수하는 것을 특징으로 하는 2'-데옥시시티딘류의 정제법.
  5. 제 4 항에 있어서, 용액에 함유된 물의 양이 화학식 3에 대하여 0.5 당량 이상인 것을 특징으로 하는 2'-데옥시시티딘류의 정제법.
  6. 제 4 항 또는 제 5 항에 있어서, 화학식 3으로 표시되는 화합물이 하기 화학식 4
    [화학식 4]
    Figure 112005034496421-pat00008
    인 2'-데옥시시티딘류의 정제법.
  7. 제 6 항에 있어서, 수득된 결정 중에서 N4-벤조일-3'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-2'-데옥시시티딘의 함유량이 0.1% 이하인 2'-데옥시시티딘류의 정제법.
  8. 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 2'-데옥시시티딘류의 물과 복합체를 형성한 결정을, 대기압 이하의 압력으로 건조시킴으로써, 물과 복합체를 형성하지 않는 화학식 3 또는 화학식 4로 표시되는 2'-데옥시시티딘류의 제조방법.
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