JP2003073395A - Ｎ−アシル化プリンヌクレオシド誘導体の単離精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】効率的なＮ−アシルプリンヌクレオシド誘導体
の単離精製法を提供する。 【解決手段】Ｎ−アシル化プリンヌクレオシド誘導体の
高濃度塩基性溶液中に酸の水溶液を加え、反応液のｐＨ
を弱酸性にまで傾けることでＮ−アシル化プリンヌクレ
オシド誘導体を結晶で単離する。 【効果】これまで、単離精製においては中性あるいは塩
基性条件で濃縮しなければならなかったが、濃縮操作を
することなくＮ−アシル化プリンヌクレオシド誘導体を
結晶として高収率に単離可能になった。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はＮ−アシル化プリン
ヌクレオシド誘導体の効率的かつ選択的な単離精製法に
関する。尚、本発明においてＮ−アシル化プリンヌクレ
オシド誘導体をＮ−アシル−プリンヌクレオシド誘導体
ということがある。

【０００２】

【従来の技術】近年、ゲノム創薬の進展に伴いアンチセ
ンスＤＮＡ医薬などが急速に開発されつつある。それに
伴い、原料となるＤＮＡオリゴマー、さらにオリゴマー
の原料となる保護化デオキシヌクレオシドの需要が増大
している。

【０００３】Ｎ−アシループリンヌクレオシド誘導体
は、Ｎ−アシル−プリンヌクレオシド誘導体は、制癌
剤、抗ウイルス剤をはじめとする医薬品や農薬として有
用であるとともに、近年開発されつつあるアンチセンス
ＤＮＡなどの原料としても有用な化合物であり、保護化
ヌクレオシド類の原料となる化合物である。これらの化
合物は、一般的には１）プリンヌクレオシド誘導体のア
ミノ基および水酸基をアシル化（パーアシル化）したの
ちに、水酸基についたアシル基を選択的に脱保護する方
法、２）プリンヌクレオシド誘導体のアミノ基および水
酸基をすべてシリル化したのちに選択的にＮ−アシル化
を行い、さらにシリル基の脱保護を行う方法、が知られ
ている。

【０００４】１）の方法で反応させた場合の例として
は、たとえば特開昭５８−１８０５００号公報やシンセ
シス ９６５頁（１９８４年）（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，
９６５−８，１９８４．）、蛋白質・核酸・酵素、２６
巻、５３１頁（１９８１年）などが知られている。これ
らの方法によれば、加水分解後の生成物を含む希薄な塩
基性溶液をピリジニウム型のイオン交換樹脂を通して、
酸性に片寄らないように中和を行い、さらに樹脂に付着
した化合物を回収するために大量の溶媒で洗浄したのち
に、集めた溶媒を濃縮または濃縮乾固するため、大量に
製造する上では容積効率や操作の面で非常に問題が多
い。また、ヘルベチカ キミカ アクタ、６５巻、２３
７２頁（１９８２）．（Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍ
ｉｃａ Ａｃｔａ，６５，２３７２（１９８２）．）に
おいては、アルカリ加水分解後、生成物を含む塩基性溶
液を中和したのちに濃縮乾固を行い、さらにアルコール
で目的物を溶解抽出し、その溶媒を留去して得られた固
体を水より再結晶を行い目的物を得ている。このよう
に、加水分解後に濃縮乾固を行っているため、大量製造
には向いていない。

【０００５】２）の方法で反応させた例としては、ジャ
ーナル オブ アメリカン ケミカル ソサエティ、１
０４巻、１３１６頁（１９８２年）（Ｊ． Ａｍ． Ｃ
ｈｅｍ． Ｓｏｃ．，１０４，１３１６（１９８
２）．）や特表平６−５０７８８３号公報においては、
反応後、アンモニア水存在下の生成物の塩基性反応液を
いったん濃縮したのちに、シリル基由来の不純物を分液
で除去してから結晶化あるいは再度濃縮を行っており、
またＰＣＴ出願ＷＯ２０００／７５１５４号公報では加
水分解後、生成物を含む溶液をｐＨを８から９にコント
ロールしたのちに濃縮し、やはりシリル基に由来する不
純物を有機溶媒に溶解することで除去している。またシ
ンセシス ５４０頁（１９８３年）（Ｓｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ，５４０（１９８３）．）においては、やはりピリジ
ン過剰存在下、濃縮操作を行ったのち、大量のエーテル
／ヘキサン混合溶媒中で再沈殿を行った後に、さらに再
結晶を行っている。

【０００６】このように、これまで知られた方法では濃
縮操作を避けることができず、さらに濃縮の際に塩基性
条件あるいは中性条件が必要であった。これは、ピリジ
ンや水などの高沸点溶媒を濃縮するためには、高い温度
をかける必要があるからである。高温度での酸性溶液中
では、一般的にヌクレオシド類のグリコシド結合が切断
される可能性が高くなる。また、温度を下げて濃縮操作
を行うためには、高減圧下で行う必要があり、大量に製
造する際には現実的ではない。一方で、アルカリ性溶液
中で濃縮する際には、アルカリ溶液中での高温での安定
性が確保される必要がある。しかし、アルカリ溶液中で
はＮ−アミド結合が切断され、もとのヌクレオシド誘導
体に戻ってしまう事も知られているため、反応処理時の
ｐＨのコントロールが非常に難しく問題があると考えら
れていた。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は濃縮な
どの煩雑な操作をせずに、Ｎ−アシル化プリンヌクレオ
シド誘導体を単離精製する方法を提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】我々は鋭意検討を重ねた
結果、Ｎ−アシル化プリンヌクレオシド誘導体の塩基性
溶液に、酸を加えて中和し、さらに酸性にまで溶液のｐ
Ｈを傾けることで、濃縮操作をすることなくＮ−アシル
化プリンヌクレオシド誘導体を結晶として高収率に単離
可能であることを見出し，本発明を完成した。即ち、本
発明は、以下のとおりである。 ［１］ 一般式〔１〕［化２］

【０００９】

【化２】

【００１０】（式中、Ｒ１は炭素数１〜１５のアシル基
を、Ｒ２は水素原子、ハロゲン原子又は置換されている
アルコキシを表す）で表されるプリンヌクレオシド誘導
体の塩基性溶液に、酸性の水溶液を添加することにより
該プリンヌクレオシド誘導体を結晶化することを特徴と
する、Ｎ−アシル化プリンヌクレオシド誘導体の単離精
製法。 ［２］ 酸性の水溶液を加添加した後の処理液のｐＨが
２．０以上６．５以下である［１］に記載のＮ−アシル
化プリンヌクレオシド誘導体の単離精製法。 ［３］ 酸性の水溶液を加えた後のｐＨが５．０以上
６．５以下である［２］に記載のＮ−アシル化プリンヌ
クレオシド誘導体の単離精製法。 ［４］ 酸性の水溶液が鉱酸の水溶液である、［１］か
ら［３］のいずれか一項に記載のＮ−アシル化プリンヌ
クレオシド誘導体の単離精製法。 ［５］ 鉱酸が塩酸である、［４］に記載のＮ−アシル
化プリンヌクレオシド誘導体の単離精製法。 ［６］ 塩基性溶液中の溶媒が水と、炭素数１〜５のア
ルコール、ＴＨＦ、ジオキサン、ピリジン、トリエチル
アミン、ジメトキシエタン、アセトニトリル、ＤＭＦ、
ＤＭＩ、トルエンよりなる群から選ばれる一種以上の溶
媒との混合物である［１］から［５］のいずれか一項に
記載のＮ−アシル化プリンヌクレオシド誘導体の単離精
製法。 ［７］アルコールがメタノール、エタノール、イソプロ
ピルアルコールの少なくとも一種である［６］に記載の
Ｎ−アシル化プリンヌクレオシド誘導体の単離精製法。 ［８］ 全有機溶媒量がプリンヌクレオシド誘導体の１
０重量倍以下であり、炭素数１から３のアルコール以外
の有機溶媒量が一般式〔１〕で表されるプリンヌクレオ
シド誘導体の２重量倍以下である、［６］または［７］
に記載のＮ−アシル化プリンヌクレオシド誘導体の単離
精製法。 ［９］ 塩基が水酸化ナトリウム、水酸化カリウムのい
ずれかである［１］から［８］のいずれか一項に記載の
Ｎ−アシル化プリンヌクレオシド誘導体の単離精製法。 ［１０］ 塩基性溶液中に酸の水溶液を添加する際の塩
基性溶液の温度が１０℃以下である、［１］から［９］
のいずれか一項に記載のＮ−アシル化プリンヌクレオシ
ド誘導体の単離精製法。 ［１１］ 一般式〔１〕においてＲ１はイソブチリル
基、Ｒ２は水素原子を表すことを特徴とする［１］から
［１０］のいずれか一項に記載のＮ−アシル化プリンヌ
クレオシド誘導体の単離精製法。

【００１１】

【発明実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。一
般式〔１〕で表されるＮ−アシル化プリンヌクレオシド
誘導体において、Ｒ１における炭素数１から１５のアシ
ル基とは、直鎖状、あるいは分岐して、さらにその先が
置換されてもよいアルキルアシル基またはシクロアルキ
ルアシル基、置換されてもよいベンゾイル基等を表す。
たとえばアルキルアシル基の例としては、ホルミル基、
アセチル基、プロピオニル基、ｎ−ブチリル基、イソブ
チリル基、２−メチルブチリル基、３−メチルブチリル
基、ピバロイル基、バレリル基、２−メチルバレリル
基、カプロイル基、ヘプタノイル基、オクタノイル基、
デカノイル基等が挙げられる。シクロアルキルカルボニ
ル基の例としては、シクロプロパンカルボニル基、シク
ロヘキサンカルボニル基、シクロペンタンカルボニル基
等が挙げられる。

【００１２】置換されてもよいベンゾイル基におけるフ
ェニル基上の置換基は、無置換でもよいしフェニル基上
の２位、３位、４位のいずれかの位置に置換基があって
もよい。また、複数の位置に置換基があってもよい。複
数の置換基がある場合はその置換基は同一であってもそ
れぞれ異なるものであってもよい。

【００１３】フェニル基上の置換基の例としてはたとえ
ば、メチル基、エチル基、イソプロピル基などのアルキ
ル基、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロピルオキシ
基、ｉ−プロピルオキシ基などのアルキルオキシ基、ニ
トロ基、アミノ基、メチルアミノ基、エチルアミノ基、
ｎ−プロピルアミノ基、ｉ−プロピルアミノ基、ジメチ
ルアミノ基、ジエチルアミノ基などの置換もしくは無置
換アミノ基、フルオロ基、クロロ基、ブロモ基などのハ
ロゲン基、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、
ベンゾイル基などのアシル基、ホルミルオキシ基、アセ
チルオキシ基、プロピオニルオキシ基、ベンゾイルオキ
シ基などのアシルオキシ基、ホルムアミド基、アセトア
ミド基、ベンズアミド基などのアミド基、フェニル基や
２−ピリジニル，３−ピリジニル、４−ピリジニルなど
の芳香環等が挙げられる。

【００１４】置換されてもよいベンゾイル基の具体例と
してはたとえば、ベンゾイル基、２−メトキシベンゾイ
ル基、３−メトキシベンゾイル基、４−メトキシベンゾ
イル基、２−メチルベンゾイル基、３−メチルベンゾイ
ル基、４−メチルベンゾイル基、２−ニトロベンゾイル
基、３−ニトロベンゾイル基、４−ニトロベンゾイル
基、３，５−ジニトロベンゾイル基、２−アミノベンゾ
イル基、３−アミノベンゾイル基、４−アミノベンゾイ
ル基、４−ジメチルアミノベンゾイル基、２−クロロベ
ンゾイル基、３−クロロベンゾイル基、４−クロロベン
ゾイル基、２−ブロモベンゾイル基、３−ブロモベンゾ
イル基、４−ブロモベンゾイル基、３，５−ジクロロベ
ンゾイル基、２，４−ジクロロベンゾイル基、パークロ
ロベンゾイル基、４−フェニルベンゾイル基等が挙げら
れる。

【００１５】Ｒ２におけるハロゲン基とは、フッ素原
子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を表す。Ｒ２にお
ける置換された水酸基とは、カルボン酸エステル、スル
ホン酸エステル、エーテル、ウレタン、シリル基などの
一般的な水酸基の保護基となりうる置換基により置換さ
れた水酸基を表す。水酸基の保護基の例としては、メチ
ル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ
−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ペンチル
基、ベンジル基、２−メトキシベンジル基、３−メトキ
シベンジル基、４−メトキシベンジル基、２−メチルベ
ンジル基、３−メチルベンジル基、４−メチルベンジル
基、メトキシエチル基、エトキシエチル基、ベンジルオ
キシメチル基、ベンジルオキシエチル基、アセトキシメ
チル基、アセトキシエチル基、ベンゾイルオキシメチル
基、ベンゾイルオキシエチル基、メトキシエトキシエチ
ル基、プロパルギル基、アリル基等のアルキル基または
アルキル基の先にさらに置換されたアルキル基、フェニ
ル基、２−メトキシフェニル基、３−メトキシフェニル
基、４−メトキシフェニル基、４−フェニルフェニル
基、２−ピリジニル基、３−ピリジニル基、４−ピリジ
ニル基等のアリール基、ホルミル基、アセチル基、プロ
ピオニル基、ベンゾイル基、２−メトキシベンゾイル
基、３−メトキシベンゾイル基、４−メトキシベンゾイ
ル基、２−メチルベンゾイル基、３−メチルベンゾイル
基、４−メチルベンゾイル基、２−ニトロベンゾイル
基、３−ニトロベンゾイル基、４−ニトロベンゾイル
基、４−フェニルベンゾイル基、２−クロロベンゾイル
基、３−クロロベンゾイル基、４−クロロベンゾイル基
などのアシル基、アミノカルボニル基、ジメチルアミノ
カルボニル基、メチルアミノカルボニル基、エチルアミ
ノカルボニル基、ジエチルアミノカルボニル基、フェニ
ルアミノカルボニル基などのウレタン基、メタンスルホ
ニル基、エタンスルホニル基、ベンゼンスルホニル基、
２−メチルベンゼンスルホニル基、３−メチルベンゼン
スルホニル基、４−メチルベンゼンスルホニル基、トリ
フルオロメタンスルホニル基、トリクロロメタンスルホ
ニル基等のスルホン酸エステル基、トリメチルシリル
基、トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル
基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基などのシリル基が挙
げられる。

【００１６】Ｒ２の置換された水酸基の例としてはたと
えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロピルオキシ
基、イソプロピルオキシ基、ｎ−ブチルオキシ基、ｉ−
ブチルオキシ基、ｔ−ブチルオキシ基、ペンチルオキシ
基、ベンジルオキシ基、２−メトキシベンジルオキシ
基、３−メトキシベンジルオキシ基、４−メトキシベン
ジルオキシ基、２−メチルベンジルオキシ基、３−メチ
ルベンジルオキシ基、４−メチルベンジルオキシ基、メ
トキシエチルオキシ基、エトキシエチルオキシ基、ベン
ジルオキシメトキシ基、ベンジルオキシエトキシ基、ア
セトキシメトキシ基、アセトキシエトキシ基、ベンゾイ
ルオキシメトキシ基、ベンゾイルオキシエトキシ基、メ
トキシエトキシエトキシ基、プロパルギルオキシ基、ア
リルオキシ基、フェニルオキシ基、２−メトキシフェニ
ルオキシ基、３−メトキシフェニルオキシ基、４−メト
キシフェニルオキシ基、４−フェニルフェニルオキシ
基、２−ピリジニルオキシ基、３−ピリジニルオキシ
基、４−ピリジニルオキシ基、ホルミルオキシ基、アセ
チルオキシ基、プロピオニルオキシ基、ベンゾイルオキ
シ基、２−メトキシベンゾイルオキシ基、３−メトキシ
ベンゾイルオキシ基、４−メトキシベンゾイルオキシ
基、２−メチルベンゾイルオキシ基、３−メチルベンゾ
イルオキシ基、４−メチルベンゾイルオキシ基、２−ニ
トロベンゾイルオキシ基、３−ニトロベンゾイルオキシ
基、４−ニトロベンゾイルオキシ基、４−フェニルベン
ゾイルオキシ基、２−クロロベンゾイルオキシ基、３−
クロロベンゾイルオキシ基、４−クロロベンゾイルオキ
シ基、アミノカルボニルオキシ基、ジメチルアミノカル
ボニルオキシ基、メチルアミノカルボニルオキシ基、エ
チルアミノカルボニルオキシ基、ジエチルアミノカルボ
ニルオキシ基、フェニルアミノカルボニルオキシ基、メ
タンスルホニルオキシ基、エタンスルホニルオキシ基、
ベンゼンスルホニルオキシ基、２−メチルベンゼンスル
ホニルオキシ基、３−メチルベンゼンスルホニルオキシ
基、４−メチルベンゼンスルホニルオキシ基、トリフル
オロメタンスルホニルオキシ基、トリクロロメタンスル
ホニルオキシ基、トリメチルシリルオキシ基、トリエチ
ルシリルオキシ基、ｔ−ブチルジメチルシリルオキシ
基、ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ基などが挙げら
れる。

【００１７】塩基性溶液とは、塩基性物質を溶解させた
溶液のことを表す。塩基としては水酸化リチウム、水酸
化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化セシウム、炭酸
リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウ
ム、アンモニア、トリエチルアミン,トリブチルアミ
ン、ピリジン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルピロ
リジン、Ｎ−メチルモルホリンなどが挙げられる。中で
も水酸化ナトリウム、水酸化カリウムが好ましい。溶媒
としては、水および水と有機溶媒の混合溶媒が挙げられ
る。混合溶媒中の有機溶媒としては、たとえばメタノー
ル、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノー
ル、ｎ−ブタノール、エチレングリコール、ジエチレン
グリコール、エチレングリコールモノメチルエーテルな
どのアルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなど
のケトン類、アセトニトリル，プロピオニトリルなどの
ニトリル類、ＴＨＦ、ジオキサン、ジメトキシエタン，
ジエトキシエタンなどのエーテル類、ＤＭＦ、ＤＭＩな
どのアミド類、ジメチルスルホキシドなどのスルホキシ
ド類、トリエチルアミン、ピリジン等の塩基類、ジクロ
ロメタン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、
トルエン、ベンゼンなどの芳香族化合物などが挙げられ
るが、なかでもたとえばメタノール、エタノール、ｎ−
プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、エ
チレングリコール、アセトン、アセトニトリル、ＴＨ
Ｆ、ジオキサン、ジメトキシエタン、ＤＭＦ、ＤＭＩ、
ピリジン、トリエチルアミンおよびそれらの混合溶媒が
好ましく、さらに好ましくはメタノール、エタノール、
ｎ−プロパノ−ル、イソプロパノール、ピリジン、アセ
トトニトリルおよびそれらの混合溶媒である。

【００１８】塩基の濃度については、塩基が溶解可能な
範囲であれば特に問題はないが、０．１モル／Ｌ以上の
溶液であることが望ましく、さらに望ましくは１モル／
Ｌ以上の溶液である。塩基の量は、Ｎ−アシル化プリン
ヌクレオシド誘導体に対して０．５倍以上１０倍以下が
望ましい。

【００１９】塩基性溶液中の有機溶媒の量は、Ｎ−アシ
ル化デオキシプリンヌクレオシド誘導体が溶解できれば
特に規定されないが、一般式〔１〕で表されるプリンヌ
クレオシド誘導体の１重量倍以上、２０重量倍以下が望
ましく、さらに望ましくは１重量倍以上、１０重量倍以
下である。さらにそのうちアルコール以外の有機溶媒量
は１重量倍以上、５重量倍以下が望ましく、さらに望ま
しくは３重量倍以下である。

【００２０】酸の溶液を添加する操作の際の温度につい
ては、混合溶媒の凝固点以上室温までの範囲で設定可能
であるが、温度の上昇により加水分解やグリコシド結合
の切断が起こりやすくなることをふまえ、望ましくは混
合溶媒の凝固点以上、１０℃以下であり、さらに望まし
くは混合溶媒の凝固点以上５℃以下である。

【００２１】中和に用いる酸としては、無機および有機
の酸が挙げられる。具体的には、塩酸、臭化水素酸、硫
酸、硝酸、リン酸、ほう酸、トリフルオロ酢酸、酢酸、
クエン酸、蓚酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン
酸などが挙げられるが，好ましくは塩酸、臭化水素酸、
硫酸であり、さらに好ましくは塩酸である。

【００２２】酸の濃度については、酸が溶解可能な範囲
であれば特に問題はないが、０．１モル／Ｌ以上の溶液
であることが望ましく、さらに望ましくは１モル／Ｌ以
上の溶液である。酸の添加量については、結晶が析出す
れば特に制限されないが、塩基性条件ではアミドの加水
分解が進行し、酸性が強いとグリコシド結合が徐々に分
解して行くため、ｐＨ２以上７未満になるように加える
ことが望ましく、さらに望ましくはｐＨ５以上６．５以
下になるように加えることが望ましい。

【００２３】結晶の析出の際には、熟成時間を置くこと
もできる。熟成時間は結晶が十分析出するのに要する時
間あればよいが、１０分から２４時間が望ましく、さら
に好ましくは３０分から１２時間である。

【００２４】原料となるＮ−アシル化プリンヌクレオシ
ド誘導体は、対応するプリンヌクレオシド誘導体をたと
えば特開昭５８−１８０５００号公報やシンセシス ９
６５項（１９８４年）（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，９６５，
１９８４．）、蛋白質・核酸・酵素 ２６巻 ５３１項
（１９８１年）、ヘルベチカ キミカ アクタ ６５巻
２３７２項（１９８２）（Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈ
ｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，６５，２３７２（１９８
２）．）などの方法、参考例１に例示した方法などによ
り合成可能である。このようにして合成したＮ−アシル
化プリンヌクレオシド誘導体は粗生成物のままでも、一
旦精製を行ったうえでも利用できる。

【００２５】以上の発明により、Ｎ−アシル化プリンヌ
クレオシド誘導体を濃縮などの操作を経ることなく効率
的に単離精製することができるようになった。

【００２６】

【実施例】以下に実施例をあげて本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれらによって限定されるものではな
い。

【００２７】参考例１ ２’−デオキシグアノシン１水和物 １４０ｇをピリジ
ン２８０ｍｌで２回共沸脱水した後、ピリジン８９０ｍ
ｌに縣濁させた。氷冷下イソブチリルクロリド２６３ｇ
を滴下した後、氷冷下２時間攪拌した。反応マスを氷水
２０００ｇ中に空けた後、ジクロロメタンで抽出した。
有機層を１０％塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後乾
燥、溶媒留去して３６３ｇまで濃縮した。この粗反応物
をエタノール１１００ｇに溶解し、−５℃まで冷却した
後、水酸化ナトリウム１１８ｇの水１３５５ｇ溶液を５
℃以下を保ちながら滴下してさらに２時間攪拌した。反
応マスをＨＰＬＣでモニターすることによりＮ−イソブ
チリル−２’―デオキシグアノシンが生成していること
を確認した。

【００２８】実施例１ 参考例１に基づき調整したＮ−イソブチリル−２’−デ
オキシグアノシン溶液中に６％塩酸水溶液１１７０ｇを
氷冷下滴下したのち、３０分間攪拌した。析出した結晶
をろ過した後に結晶を水２００ｇで２回洗浄し、減圧下
５０℃で乾燥することにより、Ｎ２−イソブチリル−
２’−デオキシグアノシン１４４ｇ（２’−デオキシグ
アノシンよりの収率８７％）を白色固体として得た。標
品とＮＭＲスペクトルが一致することにより構造を確認
した。この際、濾液中のｐＨは６．２であった。

【００２９】参考例２ ２’−デオキシグアノシン１水和物 ９．０ｇをピリジ
ン２２ｍＬで２回共沸脱水した。ピリジン６０ｍＬに縣
濁させた後、−２℃まで冷却し、イソブチリルクロリド
１６．７ｍＬを滴下した。氷冷下で１時間、さらに室温
で１時間攪拌した後、氷水１８０ｇ中に滴下した。ジク
ロロメタンで抽出した後有機層を飽和食塩水で洗浄，乾
燥、溶媒留去して得た粗生成物２６．３ｇをイソプロピ
ルアルコール１００ｍＬに溶解した。冷却した後水酸化
ナトリウム７．１ｇの水８８ｇ溶液を滴下したのち２時
間氷冷下で攪拌した。反応液のサンプルをＨＰＬＣで分
析することによりＮ−イソブチリル−２’―デオキシグ
アノシンが生成していることを確認した。

【００３０】実施例２ 参考例２により調整した塩基性溶液中に、６％塩酸水溶
液を５℃以下を保ちながら滴下していったところ、約４
０ｇ滴下したところで結晶が析出してきた。この時のｐ
Ｈは６．５であった。そのまま３０分攪拌した後ろ過
し、結晶を水２０ｍＬで２回洗浄したのち減圧下５０℃
で１０時間乾燥することにより、Ｎ２−イソブチリル−
２’−デオキシグアノシン８．７９ｇ（２’−デオキシ
グアノシンよりの収率８２．６％）を白色固体として得
た。

【００３１】参考例３ ２‘−デオキシグアノシン１水和物 １１ｇをピリジン
２７ｍＬで２回共沸したのち、ピリジン７０ｍＬに縣濁
させた。氷冷下イソブチリルクロリド２０．３ｍＬを加
えた後、氷冷で１時間、室温で２時間攪拌した。氷水２
２０ｇ中に空けた後、ジクロロメタンで抽出した。有機
層を飽和食塩水で洗浄後、乾燥、溶媒留去して２５．５
ｇまで濃縮した。イソプロピルアルコール１００ｍＬに
溶解したのち、氷冷下水酸化ナトリウム９．６ｇの水９
６ｇ溶液を滴下した後、２時間氷冷下で攪拌した。６％
塩酸水溶液５３ｇを氷冷下滴下した後氷冷下で１時間攪
拌した。析出した結晶をろ過したのち、得られた結晶を
水２０ｍＬで２回洗浄した。結晶を５０℃減圧下加熱乾
燥することにより、Ｎ２−イソブチリル−２’−デオキ
シグアノシン６．００ｇ（収率４６％）を白色固体とし
て得た。この際の濾液のｐＨは９．７であった。

【００３２】比較例１ ２‘−デオキシグアノシン１水和物１．７２ｇをピリジ
ン１１ｍＬと２回共沸したのち、ピリジン２．５ｇとジ
クロロメタン１７ｇを加えた。この縣濁液に氷冷下イソ
ブチリルクロリド３．４４ｇのジクロロメタン１３ｍＬ
溶液を加えた後、室温で２時間攪拌した。氷水１３０ｇ
中に滴下した後、ジクロロメタンで抽出した。有機層を
乾燥，溶媒留去したのち、トルエンおよびヘキサンで共
沸し４．１ｇにまで濃縮した。このうち０．９５ｇにエ
タノール２０ｍＬを加えて溶解した。この溶液を４℃〜
５℃に保ちながら２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１５ｍＬ
を２０分間かけて滴下したのち、氷冷下で１５分間攪拌
した。反応液を０℃まで冷やした後、２Ｎ塩酸水溶液で
ｐＨ７．０になるまで加えた。この時点では結晶は析出
しなかった。このまま２０℃以下を保ちながら溶媒を減
圧濃縮し、さらにエタノールを加えて共沸脱水して固体
化した。得られた固形物にエタノール２０ｍＬを加え、
５分間縣濁させた後さらに４０℃で５分間攪拌した。不
溶物をろ過で除いた後、さらに固体に２０ｍＬのエタノ
ールを加え５分間縣濁させた後４０℃で５分間攪拌し、
ろ過した。濾液を濃縮乾固したのちに５０℃の水６０ｍ
Ｌに溶解し、活性炭３０ｍｇを加え、１０分間攪拌し
た。活性炭をろ過した後に、この溶液を徐々に冷却し、
析出した結晶を濾取し、４０℃で減圧乾燥した。白色固
体を０．３４ｇ（収率約７２％）得た。

【００３３】

【発明の効果】これまで、単離精製においては中性ある
いは塩基性条件で濃縮しなければならなかったが、濃縮
操作をすることなくＮ−アシル化プリンヌクレオシド誘
導体を結晶として高収率に単離可能になった。

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式〔１〕［化１］ 【化１】 （式中、Ｒ１は炭素数１〜１５のアシル基を、Ｒ２は水
   素原子、ハロゲン原子又は置換されているアルコキシを
   表す）で表されるプリンヌクレオシド誘導体の塩基性溶
   液に、酸性の水溶液を添加することにより該プリンヌク
   レオシド誘導体を結晶化することを特徴とする、Ｎ−ア
   シル化プリンヌクレオシド誘導体の単離精製法。
2. 【請求項２】 酸性の水溶液を加添加した後の処理液の
   ｐＨが２．０以上６．５以下である請求項１に記載のＮ
   −アシル化プリンヌクレオシド誘導体の単離精製法。
3. 【請求項３】 酸性の水溶液を加えた後のｐＨが５．０
   以上６．５以下である請求項２に記載のＮ−アシル化プ
   リンヌクレオシド誘導体の単離精製法。
4. 【請求項４】 酸性の水溶液が鉱酸の水溶液である、請
   求項１から３のいずれか一項に記載のＮ−アシル化プリ
   ンヌクレオシド誘導体の単離精製法。
5. 【請求項５】 鉱酸が塩酸である、請求項４に記載のＮ
   −アシル化プリンヌクレオシド誘導体の単離精製法。
6. 【請求項６】 塩基性溶液中の溶媒が水と、炭素数１〜
   ５のアルコール、ＴＨＦ、ジオキサン、ピリジン、トリ
   エチルアミン、ジメトキシエタン、アセトニトリル、Ｄ
   ＭＦ、ＤＭＩ、トルエンよりなる群から選ばれる一種以
   上の溶媒との混合物である請求項１から５のいずれか一
   項に記載のＮ−アシル化プリンヌクレオシド誘導体の単
   離精製法。
7. 【請求項７】 アルコールがメタノール、エタノール、
   イソプロピルアルコールの少なくとも一種である請求項
   ６に記載のＮ−アシル化プリンヌクレオシド誘導体の単
   離精製法。
8. 【請求項８】 全有機溶媒量がプリンヌクレオシド誘導
   体の１０重量倍以下であり、炭素数１から３のアルコー
   ル以外の有機溶媒量が一般式〔１〕で表されるプリンヌ
   クレオシド誘導体の２重量倍以下である、請求項６また
   は７に記載のＮ−アシル化プリンヌクレオシド誘導体の
   単離精製法。
9. 【請求項９】 塩基が水酸化ナトリウム、水酸化カリウ
   ムのいずれかである請求項１から８のいずれか一項に記
   載のＮ−アシル化プリンヌクレオシド誘導体の単離精製
   法。
10. 【請求項１０】 塩基性溶液中に酸の水溶液を添加する
    際の塩基性溶液の温度が１０℃以下である、請求項１か
    ら９のいずれか一項に記載のＮ−アシル化プリンヌクレ
    オシド誘導体の単離精製法。
11. 【請求項１１】 一般式〔１〕においてＲ１はイソブチ
    リル基、Ｒ２は水素原子を表すことを特徴とする請求項
    １から１０のいずれか一項に記載のＮ−アシル化プリン
    ヌクレオシド誘導体の単離精製法。