CN100420738C - 一种自然虫尸分离的芽孢杆菌及其用途 - Google Patents

Abstract

一种自然虫尸分离的芽孢杆菌及其用途，命名为芽孢杆菌E19(Bacillus sp.E19)，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏日2006年9月11日，保藏中心编号CCTCCNO.M 206089。它用作制备杀灭鲮翅目、鞘翅目、同翅目害虫的生物杀虫剂。单个菌体形态是：营养体呈杆状，芽孢卵圆形，有光泽，伴孢晶体近似圆形、棱形。本菌对人畜无害，不污染环境，不伤害天敌；能蕴藏于土壤和虫尸中，重复感染害虫死亡，控制某一地区的害虫不再发生或少发生；本菌能杀灭美国白蛾、马尾松毛虫、柑桔风蝶、杉梢小卷叶蛾、二化螟、三化螟、棉铃虫、菜青虫、棉大卷叶螟、梨眼天牛幼虫、玉米螟、苹果绵蚜若虫等，杀虫率达86-94%。本菌种对森林害虫、蔬菜害虫感染力强，对农作物害虫感染力稍低。

Description

一种自然虫尸分离的芽孢杆菌及其用途

技术领域

本发明涉及生物防治领域，具体涉及一种的芽孢杆菌及其用途。

背景技术

利用微生物杀灭病虫害已越来越被人们重视，如现有《对鞘翅目害虫有效的苏云金芽孢杆菌菌株和基因》(专利申请号200410009808)，是一种苏云金芽孢杆菌菌株(Bacillus thuringiensis)，通过使用cry8E和cry8F基因或其组合，使它们对鞘翅目害虫的毒力高于出发菌株和单基因表达产物。《一种蜡状芽孢杆菌及制备方法》(专利申请号02115706)，公开了蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus，Bc Ym-2102，CCTCCNo.M202011。能显著提高苏云金杆菌杀虫剂的杀虫活性，制备方法适用于工业生产。《一种具有广谱杀虫活性的苏云金芽孢杆菌菌株及制备方法》(专利申请号02115580)公开了苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis Tm13-14，CCTCC No.M202004。是对虫尸经表皮消毒、研碎，置于营养培养液中，振荡培养，培养液稀释，涂布到分离培养基上，恒温箱中倒置培养，单菌落纯化，接种于发酵培养基进行摇瓶发酵，至伴孢晶体脱落；发酵液稀释，进行靶标昆虫的生物测定。《一株杀鞘翅目害虫的苏云金芽孢杆菌》(专利申请号01114288)，公开了苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis yc-03，CCTCC No.M201003)，对鞘翅目害虫有高毒杀灭性。

发明内容

本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种对人畜无害，不污染环境，不伤害天敌，能有效杀灭鲮翅目、鞘翅目、同翅目害虫的芽孢杆菌及其用途。

本发明目的的实现方式为，一种自然虫尸分离的芽孢杆菌，命名为芽孢杆菌E19(Bacillus sp.E19)，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏日2006年9月11日，保藏中心编号CCTCC NO：M 206089。

一种自然虫尸分离的芽孢杆菌的用途，用作制备杀灭鲮翅目、鞘翅目、同翅目害虫的生物杀虫剂。

本申请人经过20多年的研究，实践证明本菌有以下重要特点：

1、本申请人曾用本菌液喂养鸡10只、猪2头一年，生长正常，在施药区内三天后发现有瓢虫、蜜蜂活动，证明本菌对人畜无害，不污染环境，不伤害天敌，

2、本菌种能蕴藏于土壤和虫尸中，遇到适宜的气候，能重复感染害虫死亡，长期使用能控制某一地区的害虫不再发生或少发生，

3、本菌在0.5-1％的氯氰菊脂浓度下，芽孢不失活性，

4、杀灭鲮翅目、鞘翅目、同翅目害虫，杀虫率达到86-94％，

5、本菌种对森林害虫、蔬菜害虫感染力强，但对农作物害虫感染力稍低。

具体实施方式

本菌种是本申请的第一申请人1978年在在湖北省鄂州市调查杉木幼林害虫杉梢小卷叶蛾危害情况时，发现有自然死亡的虫尸，经本人分离筛选提纯后重复感染杉梢小卷叶蛾幼虫，杉梢小卷叶蛾幼虫再死亡，死亡虫尸体变软发黑尾部有粘液，初步确定为细菌类的病原体。1980年送到湖北省农科院进行鉴定，农科院植物保护研究所专家确认是苏云金杆菌的变种。

分离筛选提纯方法为：在无菌室内，将杉梢小卷叶蛾虫自然死尸用75％的酒精表面消毒后，用无菌水清洗三次，再将虫尸放入研钵中研碎，移入装有玻璃珠和100ml蒸馏水的三角瓶中震荡30分钟，再在无菌条件下进行稀释分离，将不同浓度的稀释液用移液管移到6支装有9ml无菌水的试管中，用移液管移到6个培养皿中，倒入牛肉膏蛋白胨培养基，在30℃温度下培养72小时，即获得单个芽孢杆菌菌落。

从电子显微镜下观察，本菌单个菌体形态是：营养体呈杆状，菌端圆角菌体大小1.1-2微米×3-4微米，芽孢卵圆形，有光泽，大小0.8-0.9微米×2微米，伴孢晶体近似圆形、棱形，大小0.6-1.8微米。

本菌种的培养是在牛肉膏蛋白胨、葡萄糖琼脂培养基上，菌落乳白色，圆盘状，在29℃-30℃培养24小时出现针头大的小白点，48小时直径0.4cm此时中央长出圆环，72小时直径达1.2cm，中央圆环直径0.2cm，圆环中央呈白色粘块状，微有光泽，干燥，呈粗颗粒状，边缘如卷发，深层菌落似奶油状，整个菌落平坦，边缘不规则，呈粗布状向外展开，略带放射状皱纹，深层菌落呈毡块状，有纹状放射线。

本菌能产生毒素，主要的有两种，即α-内毒素和β-外毒素，尤以β-外毒素表现明显。α-内毒素(晶体蛋白)可使昆虫肠道内膜，造成细菌的营养细胞易于侵袭和穿肠道底膜进入血淋巴，最后因饥饿和败血症而死亡。β-外毒素在昆虫变态时候造成提前化蛹，不能羽化、蛹变成畸形。

由于本菌能产生α-内毒素和β-外毒素等毒素，能防止以下害虫：

鳞翅目害虫：美国白蛾、马尾松毛虫、杨扇舟蛾、黄刺蛾、杉梢小卷叶蛾、苹果小卷叶蛾、柑桔凤蝶：二化螟、三化螟、稻纵卷叶螟、稻苞虫、棉铃虫、棉大卷叶螟、玉米螟、烟青虫、甘蔗螟、银杏大蚕蛾、核桃举肢蛾、菜青虫、小菜蛾；

鞘翅目：梨眼天牛幼虫、铜绿金龟子幼虫。

同翅目：苹果绵蚜若虫。

以上害虫用本菌进行喷雾或注射，杀虫率达到86-94％。

当阳市农丰生物研究所用本菌的不同浓度、不同时间与清水对比作了杀灭菜青虫的试验，具体结果见下表：

从表中可见，本菌杀灭菜青虫的杀灭率达84％以上。

1983年9月，鄂城县(即现鄂州市)林业特产局用本菌作了杀灭松毛虫的试验，试验结果如下：

小区试验：经96小时的观察和检查，杀虫效果为：1∶100倍杀虫率达90.4％，1∶200倍杀虫率达84.3％，1∶400倍杀虫率达72.1％。

大区试验：1∶100倍经96小时的观察和检查，杀虫率达63.6％，1∶200倍经120小时的观察和检查，杀虫率达88.7％，1∶400倍经96小时的观察和检查，杀虫率达83.2％。

2001年鄂州市白雉山生物研究所用本菌作了杀灭菜青虫的大田试验，除个别外，杀虫率基本在96％以上。

河北省唐山市路南区郑各庄村民陆××、熊××因种植的20余亩意杨树的树叶被美国白蛾吃光了，严重影响树木的正常生长，用本菌稀释液喷杀，两天后，大量的死亡毛虫落在地上，树叶上基本无虫。

湖北省当阳市河蓉镇丁长村四组村民郑××，因种植的40余亩水稻有二化螟、三化螟、稻苞虫危害，用本菌稀释液喷杀，效果好，打药时无气味。

湖北省鄂州市梁子区太和镇柯畈村村民柯××、刘××，从2003年-2006年对种植的150亩柑桔用本菌稀释液喷杀柑桔凤蝶，效果好，有效防止了柑桔凤蝶的危害。

湖北省当阳市草果湖农场职工胡××、郑××，因种植的20余亩棉田有棉铃虫危害，用本菌稀释液喷杀，效果好，小棉铃虫死亡很多，大棉铃虫作的茧变黑。

Claims (3)

1. 一种自然虫尸分离的芽孢杆菌，其特征在于命名为芽孢杆菌E19(Bacillus sp.E19)，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏日2006年9月11日，保藏中心编号CCTCC NO：M 206089。

2. 根据权利要求1所述的一种自然虫尸分离的芽孢杆菌，其特征在于单个菌体形态是：营养体呈杆状，菌端圆角菌体大小1.1-2微米×3-4微米，芽孢卵圆形，有光泽，大小0.8-0.9微米×2微米，伴孢晶体近似圆形、棱形，大小0.6-1.8微米。

3. 一种权利要求1所述的自然虫尸分离的芽孢杆菌的用途，其特征在于用作制备杀灭鲮翅目、鞘翅目、同翅目害虫的生物杀虫剂。