CN100382841C - 一种治疗酒精性肝炎的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

一种治疗酒精性肝炎的中药组合物，是由枳子、泽泻、丹参、大黄、何首乌、郁金、黄芪、茯苓、决明子、山楂、海藻、木香按一定重量配比制备而成。它可以被制备成任何一种常用内服剂型。本发明对治疗酒精性肝炎有显著的疗效，而且无毒副作用，有效率达93.3%。

Description

一种治疗酒精性肝炎的中药组合物及其制备方法

技术领域：

本发明属于中药领域，尤其是涉及一种治疗酒精性肝炎的中药组合物及其制备方法。

背景技术：

WHO在一份报告中指出：“酒精中毒是当今世界范围内第一公害，其毒性可累及全身器官，对肝脏的影响最大，在西方国家，酒精中毒是80％肝硬变的原因。”随着我国人民物质生活的提高，饮酒人数逐年增加，12亿人口中有酒民约3亿人，我国酒精性肝炎的发病率大有上升的趋势，在现在和不远的将来，酒精性肝炎将成为危害国民健康的一个重大疾病。酒精性肝炎发生的病因是由于长期的大量饮酒导致湿热酒毒内蕴，气机郁滞，血脉瘀阻，湿热之邪久瘀不祛，气血湿热互结腹中或形成痞块。目前，治疗这种疾病西医学仍以综合疗法为主，中医治疗多为专方专药或古方新用，口服汤剂为主，且多为个案报导，临床缺乏大宗病例及随机、对照、双盲的研究，没有统一的诊断标准和疗效标准，报导疗效不令人信服，因此，目前还没有治疗酒精性肝炎的有效药物问世。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是提供一种疗效显著的治疗酒精性肝炎的中药组合物及其制备方法。

本发明中药组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：

枳椇子200-500重量份        泽泻100-400重量份

丹参100-400重量份          大黄50-150重量份

何首乌200-450重量份        郁金100-400重量份

黄芪200-450重量份          茯苓100-400重量份

决明子200-450重量份        山楂200-450重量份

海藻200-450重量份          木香100-300重量份。

本发明中药组合物的原料药组成及配比优选如下(按重量份)：

枳椇子300-400重量份        泽泻200-300重量份

丹参150-250重量份          大黄50-100重量份

何首乌250350重量份         郁金150-250重量份

黄芪250-350重量份          茯苓200-300重量份

决明子250-350重量份        山楂250-350重量份

海藻250-400重量份          木香100-300重量份。

本发明中药组合物的原料药组成及配比最佳为(按重量份)：

枳椇子375重量份            泽泻225重量份           丹参225重量份

大黄75重量份               何首乌300重量份         郁金225重量份

黄芪300重量份              茯苓225重量份           决明子300重量份

山楂300重量份         海藻300重量份        木香150重量份。

本发明中药组合物的制备方法：

木香、郁金加4～8倍量水，水蒸气蒸馏提取挥发油5～8小时，蒸馏后的水溶液及药渣另器收集，挥发油以2～5倍量β-环糊精应用研磨法制成包合物，丹参、何首乌加药材4～8倍量65～90％乙醇回流提取2～5次，每次1～3小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至80℃相对密度1.20-1.45，药渣与蒸馏提取挥发油后的木香、郁金药渣合并，与剩余八味一起加3～7倍药材量水浸泡2～5.5小时后煎煮1～3次，每次1～4小时，合并煎液及蒸馏后的水溶液，滤过，滤液减压浓缩至80℃相对密度1.05-1.25，醇沉，充分搅拌，静止18～26小时，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至80℃相对密度1.20-1.45，与丹参、何首乌醇提物合并，加糊精450～700g，混匀，80℃减压干燥，粉碎成细粉，药粉加入挥发油包合物，经过常规工序直接或加入药学上接受的赋型剂制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液体制剂、皮下给药制剂、栓剂中的任一种，优选颗粒剂。

本发明对治疗酒精性肝炎有显著的疗效，而且无毒副作用。

以下通过试验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括了本发明药物(以下称酒肝颗粒)的药效学试验和临床疗效观察试验。

[试验例1]本发明药物对酒肝颗粒对酒精性肝损伤动物模型的治疗作用

试验材料：

选本发明药物酒肝颗粒，规格：5g/袋。血脂宁冲剂，吉林敦化华康药业公司产品，批号：040722。

试验方法：

1.1动物分组与饲养

受试大鼠60只，雌雄各半。体重180-200克。称量体重后，将动物随机分每组10只。

动物分笼饲养，每笼5只，自由饮水，每天一次给予制备的高胆固醇混合饲料，按文献方法改进，饲料配比例为：1％胆固醇、5％的猪油、1％植物油。

1.2肝损伤模型的制备：除正常对照组外，其余五组大鼠每天按1ml/100g体重灌胃给予白酒(65。)，1次。并分别在试验的1、5、10、15天按0.3ml/100g体重皮下注射40％的CCL₄，同时给予高脂混合饲料。

1.3给药途径与剂量：于模型制备第3天起开始在给予白酒后2小时灌胃给药。每天一次。各组动物给药剂量为：阳性对照组：3g·kg^-1体重(30％的血脂宁冲剂10ml·kg^-1)；酒肝高剂量组：5g·kg^-1体重(50％酒肝颗粒10ml·kg^-1)；酒肝中剂量组：3g·kg^-1体重(30％酒肝颗粒10ml·kg^-1)；酒肝低剂量组：1g·kg^-1体重(10％酒肝颗粒10ml·kg^-1)；正常对照组和模型组给予自来水10ml·kg^-1(同体积)。

1.4取样检测与观测指标：所有动物给药21天，给药结束后，大鼠在乙醚麻醉下，经腹主动脉取血，3000转/分离心30分钟，取血清生化分析仪检测。

检测指标；全自动生化分析仪测定：天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、丙氨酸氨基转换酶(ALT)、总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、总胆红素(T-BIL)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)。

1.5处死动物，摘取肝脏，10％福尔马林固定，常规透明，脱水，石蜡包埋，切片，HE和Masson染色，光镜下观察肝脏脂肪变、肝细胞坏死及纤维组织沉着的程度。病变程度按4级分级法，比较各组动物肝脂肪变程度。

2.实验结果

2.1酒肝颗粒对酒精性肝损伤模型动物血清酶含量的影响

结果表明，与对照组比较模型组动物AST、ALT含量明显升高(P＜0.001)，提示大剂量酒精辅以CCL₄，高脂饮食等因素可引起动物肝脏损伤。与模型组比较，酒肝颗粒给药高、中剂量组动物血清AST、ALT含量明显降低(P＜0.05，P＜0.01)。说明该制剂对酒精性肝损伤有保护作用。

表-1酒肝颗粒对大鼠急性酒精性/CCL₄肝损伤血清ALT和AST含量的影响

与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.

2.2酒肝颗粒对酒精性肝损伤模型动物血清总胆固醇、甘油三酯含量影响

结果表明，与对照组比较模型组动物T-CHO、TG含量明显升高(P＜0.001、0.01)，提示酒精/CCL₄/高脂饮食复合因素可致肝损伤，并伴有血脂水平升高。与模型组比较，给药组动物血清中T-CHO、TG含量明显降低(P＜0.01、0.05)，说明酒肝颗粒对酒精/CCL₄/高脂饮食复合因素所致的肝损伤及脂代谢障碍有改善作用。结果详见表2.

表-2酒肝颗粒对酒精/CCL₄/高脂饮食复合因素所致肝损伤模型动物血清T-CHO、TG水平的影响

与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.

2.3酒肝颗粒对酒精性肝损伤模型动物血清总胆红素含量的影响

与对照组比较，模型组动物血清总胆红素(T-BIL)含量明显升高(P＜0.05)。酒精/CCL₄/高脂饮食复合因素可造成动物肝细胞损伤作用。与模型组比较，酒肝低剂量组和酒肝高剂量组动物血清总胆红素(T-BIL)明显降低(P＜0.01、P＜0.05)。提示酒肝颗对酒精性肝损伤模型动物的血红素代谢有调节作用。结果见表3。

表-3酒肝颗粒对酒精/CCL₄/高脂饮食复合因素所致肝损伤模型动物血清T-BIL含量的影响

与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.

2.4酒肝颗粒对酒精性肝损伤模型动物血清总蛋白、白蛋白影响

与对照组比较，各组动物血清总蛋白量没有明显的变化。模型组动物血清白蛋白水平明显低于对照组，表明酒精性肝损伤动物肝脏白蛋白合成能力下降。与模型组比较，酒肝颗粒高剂量组动物血清总蛋白量高于模型组(P＜0.05)；酒肝颗粒中剂量组和低剂量组动物血清白蛋白有增高趋势，酒肝颗粒对酒精性肝脏蛋白合成障碍有改善作用。

表-4酒肝颗粒对酒精/CCL₄/高脂饮食复合因素所致肝损伤动物血清TP、ALB的影响

与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.

2.5酒肝颗粒对酒精性肝损伤模型动物血清HDL-C和LDL-C含量的影响

与对照组比较，肝损伤模型组动物血清高密度脂蛋白(HDL-C)水平降低、低密度脂蛋白(LDL-C)水平升高，提示酒精/CCL₄/高脂饮食复合因素对肝脏脂蛋白代谢有明显影响。与模型组比较，酒肝颗粒(5g·kg^-1)给药可明显抑制LDL-C水平升高，抑制HDL-C水平降低，酒肝颗粒(3g·kg^-1)给药可抑制LDL-C水平升高，一定剂量的酒肝颗粒对酒精性肝损伤动物模型脂蛋白类代谢异常有改善作用。

表-5酒肝颗粒对酒精/CCL₄/高脂饮食复合因素所致肝损伤模型动物血清HDL-C和LDL-C含量的比较

与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.

2.6酒肝颗粒对酒精性肝损伤模型动物肝组织形态学变化影响

结果表明，模型组大鼠肝组织标本脂肪变程度明显增加，部分动物肝脏脂肪变呈区域或成片，表明此方法可复制肝脂肪变模型，酒肝颗粒高剂量给药组动物肝脏脂肪变、纤维组织沉着程度明显轻于模型组，中剂量和低剂量给药组也有一定的改善趋势，表明酒肝颗粒对酒精/CCL₄/高脂饮食复合因素所致的肝损伤有明显的改善作用。(观察方法及分级标准详见病理报告)。观察结果见表6。

表-6各组动物肝脏病变程度分级的比较(4级法)

与模型组比较：*P＜0.05。

结果表明：酒肝颗粒口服给药(5g·kg^-1、3g·kg^-1)剂量对酒精肝损伤模型动物的肝损伤有一定程度的保护作用。

[试验例2]酒肝颗粒对乙硫氨酸(DL-E)致动物脂肪肝的影响

1、实验方法：小鼠60只，雌雄各半，体重20-24克。随机分6组，每组10只，各组动物均灌胃给药。给药剂量分别为：酒肝颗粒1组，15g/kg(75％混悬液0.2ml/10g体重)。酒肝颗粒2组，10g/kg(50％混悬液0.2ml/10g体重)。酒肝颗粒3组，5g/kg(25％混悬液0.2ml/10g体重)阳性对照组：血脂宁10g/kg(50％溶液0.2ml/10g体重)。正常对照组：给蒸馏水，0.2ml/10g体重。模型组：蒸馏水，0.2ml/10g体重。

连续给药3天，与末次给药后1小时，除正常对照组外，其它5组动物灌胃给予乙硫氨酸250mg/kg，(2.5％的乙硫氨酸0.1ml/10g体重)，24小时后，脱椎处死动物，取肝脏0.2g，加入1.8ml匀浆液。制成肝组织匀浆，然后3500转/分离心20分钟，取上清液，用全自动生化分析仪测量总胆固醇含及甘油三酯(TG)的含量。

2、实验结果及讨论：

与对照组比较，模型组动物肝组织匀浆液中TG水平明显升高，提示DL-E可以诱发动物肝脏脂肪蓄积而导致脂肪肝.与模型组比较，酒肝颗粒给药1、2、3组动物肝组织TG含量明显下降，表明酒肝颗粒对DL-E所致肝脂肪蓄积有明显的改善作用。胆固醇含量测定模型组与给药组间未见显著性差异。

表-7乙硫氨酸肝损伤模型动物肝组织匀浆液TG和CHO含量的比较

与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.

与对照组比较：###P＜0.001，#P＜0.05.

[试验例3]酒肝颗粒对动物单核吞噬细胞功能的影响(廓清法)

1、实验方法：取健康雄性小鼠50只，体重18-22克，随机分为5组，每组10只，各组动物按下列剂量灌胃给药，酒肝颗粒1组：15g/kg(75％混悬液0.2ml/10g体重)。酒肝颗粒2组：10g/kg(50％混悬液0.2ml/10g体重)；酒肝颗粒3组：5g/kg(25％混悬液0.2ml/10g体重)；阳性对照组：血脂宁10g/kg(50％溶液0.2ml/10g体重)。正常对照组：给蒸馏水，0.2ml/10g体重。连续给药7天，于末次给药后30分钟，小鼠经尾静脉注射印度墨汁0.05ml/10g体重。分别于注射后1分钟和5分钟用吸管(预先用肝素生理盐水湿润)经眶静脉取血20μl，溶于2ml 0.1％碳酸氢钠溶液中摇匀。将分光光度计波长调至650nm，眶静脉取正常小鼠血20μl，溶于2ml0.1％碳酸氢钠溶液中摇匀。用以光度计调0，然后分别测定各组样本的光密度值(OD)。

将小鼠脱椎处死，分别称取小鼠的肝脏、脾脏重量，按公式计算各组小鼠的吞噬指数和吞噬活性。

2.实验结果：酒肝颗粒给药各组动物吞噬指数明显高于对照组，提示酒肝颗粒对小鼠非特异性免疫吞噬功能有一定促进作用.

表-8酒肝颗粒对小鼠非特异性免疫功能的影响

与对照组比较：***P＜0.001

[试验例4]酒肝颗粒动物急性毒性试验

材料与方法：

1.动物：昆明小鼠6～8周龄，体重18-20克，雌雄各半，由白求恩医科大学实验动物部提供。

2.药品：酒肝颗粒规格：5g/袋(含生药3.0g/g颗粒剂)，长春中医学院附属医院制剂室提供(批号：981118)。配制浓度：40％、80％、110％。供试验时灌胃给药。

3.试验方法：

预试验：取小鼠8只，分为两组，每组4只，分别灌胃给予40％和80％的酒肝颗粒40ml/kg体重。动物给药后经连续观察7天均未见毒性反应及死亡，故无法计算动物半数致死量，改为最大耐受量(MTD)测定。最大耐受量(MTD)测定：(1)动物数量：取小鼠20只，雌雄各半。禁食16小时(不禁水)。

(2)给药途径：所有受试动物经灌胃给药(与临床给药途径一致)。

(3)给药剂量：试验当日上、下午各给药一次，给药剂量为受试动物按40ml/kg体重(最大容积)灌胃给予110％的酒肝颗粒(最大浓度)。

(4)观察毒性反应：受试小鼠给药后，立即观察毒性反应，并记录动物的外观、行为活动、精神状态、食欲、大、小便及其颜色、被毛、肤色、呼吸、分泌物等，连续观察七天，逐日记录给药后动物出现的反应。

实验结果：给药后连续观察七天，所有动物的外观、体征、行为活动、精神状态、饮食、尿便、等均未见异常改变。口、眼、鼻等处无异常分泌物，体重变化见表-9。所有给药动物无死亡。

表-9酒肝颗粒给药期间体重变化表(±s)

讨论与说明：因该制剂临床用量大，受给药体积及浓度限制，小鼠急毒一次性给药无法达到毒理学要求的剂量，故一日两次给药。

按小鼠最大灌胃容量(40ml/kg)给予最大浓度酒肝颗粒最大浓度(110％)，因受药物浓度及灌胃体积所限给药剂量已无法再增加，故给药剂量已达最大耐受剂量，结果受试动物一天累积给药剂量为88g/kg体重，折合生药量为264g生药/kg体重。酒肝颗粒临床给药量为0.25g/kg(折合生药0.75g生药/kg)。按公斤体重计算，酒肝颗粒小鼠口服最大耐受量(MTD)以达成人每日用量的352倍以上。给药后连续观察七天所有受试小鼠均未见有异常表现，无一死亡。由此可以证明该药口服的安全性很大。

[试验例5]酒肝颗粒动物长期毒性试验

材料与方法：

1.受试药品：酒肝颗粒规格：5克/袋(每克粉剂含生药3.0g)，长春中医学院附属医院制剂室提供。(批号：981118)。实验时分别配制成100％和75％的混悬液供灌胃给药。

2.动物及分组：Wistar大鼠60只。♀、♂各半。购自吉林省药品检验所动物室(合格证号：9900010)。

3.实验仪器：全自动生化分析仪(日本日立公司7070型)；

全自动血球分析仪(日本东亚公司KE-3500)。

4.实验方法：

(1)实验分组：由于急性毒性试验结果表明在352倍剂量下未见毒性反应，推测该制剂毒性较低，因此设高低2个剂量组。

取60只大鼠随机分为对照组、酒肝颗粒高剂量和低剂量三组，每组20只，雌雄各半。大鼠常规饲养，适应环境一周，活动、粪便等均未见异常后进行试验。

(2)给药剂量及途径：三组动物每天上午分别按下列剂量灌胃给药一次：酒肝颗粒高剂量组20g/kg(100％酒肝颗粒混悬液，2ml/100g体重，折合生药量为60g/kg；为临床用量的80倍)；低剂量组15g/kg(75％酒肝颗粒混悬液，2ml/100g体重，折合生药量为45g/kg：为临床用量的60倍)；对照组，等容积蒸馏水。

(3)试验周期：根据长毒给药时间应为临床试验用药期2-3倍的原则，本试验给药期为连续给药12周(临床用药周期的2倍)。给药期间注意观察、记录各组动物的外观体征、行为活动、粪便性状、饮食数量及生长发育状况等项指标。每7天称量并记录体重一次。于最后一次给药后24小时，每组处死14只(2/3)动物，取血、取材，做血液学、血液生化学、病理解剖学检查。动物的脏器标本进行病理组织学检查。每组余下的6只(1/3)动物停药继续饲养2周，以便了解该药物可能出现的毒性反应的可逆程度及有无延迟性毒性反应。观察2周后处死。观察内容与给药期间相同。

(4)检查项目：进食量、体重、外观、饮食、活动情况等)。

血液学检测项目包括；白细胞计数(WBC)及分类-分叶(Sg)、淋巴(Ly)；红细胞计数(RBC)；血红蛋白含量(HGB)；红细胞压积(HCT)；血小板计数(Pit)；玻片法检测：凝血时间。

血液生化学检测项目包括：天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、丙氨酸氨基转换酶(ALT)、肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)。

系统尸检和病理组织学检查：摘取心、肝、脾、肺、肾。用电子天秤称重后，计算其脏器系数(g/100g体重)；对尸体及重要器官(心、肝、脾、肺、肾)进行肉眼及镜下病理组织学检查。

(5)数据的统计学处理：实验数据经计算机处理，以均数加减标准差表示，组间差异的显著性检验用t检验。

实验结果：

1.对受试动物一般状态和体重的影响

实验期间，三组动物均活动自如、毛色光泽、外观清洁(口、眼、鼻处无不良分泌物)、饮食尿便正常、发育良好。结果表明，与对照组比较，酒肝颗粒高剂量及低剂量组大鼠未见异常表现。各组间动物体重增长无显著性差异(P＞0.05)，各组动物体重变化结果见表10。

2受试动物血常规检测结果：血液学检测结果表明，给药期间及停药后二周，酒肝颗粒高、低剂量组大鼠的RBC、HGB、HCT、PLT、WBC、Sg、Ly等各项生理指标都在正常值范围之内，且与对照组比较均无明显差异(P＞0.05)。结果详见表11。

3与肝肾功能有关的血液生化学指标检测结果：血液生化学检测结果表明，给药组动物的天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、丙氨酸氨基转换酶(ALT)、肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)，提示酒肝颗粒长期用药对动物的肝、肾功能无毒副作用。结果详见表12。

4系统尸检和病理组织学检查结果：将受试动物分两批(末次给药后24小时和停药后两周)处死，取心、肝、脾、肺、肾，经肉眼观察，三组动物的上述脏器标本的外观、形态、大小及颜色均正常，未发现充血、肿胀及坏死等异常现象；将上述组织器官经福尔马林固定、脱水、包埋、切片进行组织病理学检查。结果表明，送检动物的脏器标本经病理组织学检查，亦末见组织萎缩、增生、炎细胞浸润及细胞退行性病变等明显的病理变化及与中毒有关的病理性改变。

将受试动物分两批(末次给药后24小时和停药后二周)处死。摘取心、肝、脾、肺、肾，用精密电子天平称重后，分别计算出各器官的脏器系数(脏器重/每百克体重)。结果表明，给药组动物的脏器系数与对照组比较无显著性差异(P＞0.05)。提示酒肝颗粒长期给药对动物主要器官的生长发育无明显的影响。各组动物脏器系数见表13。

结论与说明：

酒肝颗粒临床成人口服剂量成药为15g/d(5g×3次)，即60kg体重成人0.25g/kg/d。疗程为6周。根据长期毒性实验给药途径应与临床相一致及给药时间应为临床用药周期二～三倍的原则。本实验选用灌胃给药，给药周期确定为12周(为临床用药时间的2倍)，由于该药毒性较低，小鼠急性毒性实验未能测出LD50，口服最大耐受剂量为88g/kg体重，达临床成人每日用量(0.25g/kg)的352倍，仍未见明显毒性反应。故本实验仅设高、低两个剂量组。高剂量组给药剂量20g/kg(折合生药量：60g/kg)和低剂量组15g/kg(折合生药量：45g/kg)，分别为临床人用剂量的80倍和60倍。由于给药容积的限制给药量已无法再增加。

鉴于给药期间及停药后，高、低两剂量组动物的一般状态、血常规、肝肾功能等多项生理生化指标与对照组比较均无明显差异，送检高剂量组大鼠的脏器标本也未见有异常病理改变。表明酒肝颗粒毒性较低，临床剂量口服安全性较大。以下是动物长期毒性试验数据。

表10.酒肝颗粒给药期动物体重的变化

续表10-酒肝颗粒长期毒性试验可逆性观察期动物体重的变化

注：与对照组比较*P＞0.05

表11.给药期各组大鼠血常规检测结果

注：与对照组比较*P＞0.05

续表11.停药2周后各组大鼠血常规检测结果

注：与对照组比P＞0.05

表12给药期间大鼠肝、肾功能检测结果

注：与对照组比较*P＞0.05

续表12.停药二周后大鼠肝、肾功能检测结果

注：与对照组比较*P＞0.05

表13.连续给药后各组大鼠主要脏器系数的比较(

g/100g)

与对照组比较*P＞0.05

续表13.停药两周后各组大鼠主要脏器系数的比较(g/100g)

与对照组比较*P＞0.05

[试验例6]本发明组合物提取工艺技术条件的研究

(1)应用水蒸气蒸馏法提取木香、郁金中挥发油技术条件的优选：应用水蒸气蒸馏法提取操作，经预试、影响提取挥发油效果的主要因素有蒸馏时用水量及蒸馏时间。针对这二个因素，我们在预试验基础上进行了如下试验：取木香40g，郁金60g，混匀，共4份，分别置挥发油提取器中，分别加400ml、500ml、600ml、700ml(即药材4、5、6、7倍)水，浸泡6小时后，加热蒸馏提取，自有回流液产生时开始计时，并控制相同回流速度，分别记录不同时刻挥发油提得量。

表14优选木香、郁金挥发油提取条件结果表

以上结果表明，木香、郁金二味药材中挥发油的提取条件宜为药材加6倍量水，蒸馏提取5小时。

(2)应用乙醇对丹参、何首乌中脂溶性成分提取技术条件的优选：据文献报导，丹参、何首乌中的主要成分为脂溶性并多用较高浓度乙醇回流提取，经预试，我们确定了影响提取效果的四个因素，即提取时A：每次加乙醇量；B：所用乙醇浓度；C：每次提取时间；D：提取次数，结合实际情况，我们为每个因素确定了三个水平，见表15。

表15丹参、何首乌应用乙醇回流提取考察因素水平表

我们应用正交试验以丹参中丹参酮II_A的提取量为指标，按L₉(3⁴)正交表进行试验。

具体操作步骤：取丹参30g，何首乌40g，按表20条件加乙醇回流提取，提取物回收乙醇至干，加95％乙醇定容至250ml容量瓶中，测定其中丹参酮II_A的含量，结果见表16，结果方差分析见表17。

表16：丹参、何首乌乙醇提取正交试验结果表

表17丹参、何首乌乙醇提取正交试验结果方差分析表

F_0.10(2，2)＝9.00    F_0.05(2，2)＝19.00

以上结果表明，B、C、D之因素水平变化对实验结果有显著影响，结合直观分析，丹参、何首乌乙醇回流提取条件宜为A₃B₂C₂D₃，即加5倍量80％乙醇，每次提取1.5小时，回流提取4次。

(3)煎煮法提取枳椇子、决明子、泽泻、茯苓、山楂、黄芪、大黄、海藻等药材，木香、郁金蒸馏后的药渣及丹参、何首乌醇提后的药渣条件优选：

枳椇子、决明子、泽泻、茯苓、山楂、黄芪、大黄、海藻八味药材中成分均为水溶性，故我们采用煎煮法对其进行提取，为了避免成分损失，将已蒸馏或醇提过的木香、郁金、丹参、何首乌药渣一起兑入进行水提，经预试，我们确定影响提取效果的四个因素，即A：煎煮时每次加水量；B：每次煎煮时间；C：煎煮次数，并结合实际情况为每个因素确定了三个水平，见表18。

表18煎煮法提取药材考察因素水平表。

我们应用正交试验，以黄芪中代表成分黄芪甲甙的提取量及总浸出物重为指标，按L₉(3⁴)正交表进行试验，考察了以上三个因素水平变化对试验结果的影响。

具体操作步骤：按处方比例取药材105g，共9份，将其中木香、郁金应用上述优选的最佳工艺条件提挥发油，将丹参、何首乌用乙醇按最佳工艺条件提取后，药渣与枳椇子等药材合并，按表19所列条件进行煎煮提取操作，提取液滤过并浓缩并干燥至恒重，粉碎成细粉，测定总浸出粉以及其中黄芪甲甙的量。

表19煎煮法优选条件正交试验及结果表

表20煎煮法优选条件正交试验结果方差分析表

F_0.1(2，2)＝9.00    F_0.05(2，2)＝19.00

以上结果可知A、B、C三因素水平变化均对试验结果有显著影响，煎煮法条件宜为A₁B₃C₂即加4倍量水，煎煮2小时，共煎2次。

[试验例7]制剂成型工艺研究

1、由于本制剂剂型为无糖颗粒剂，又药材均以提取物进入成品，所以我们选择糊精为辅料，作为稀释剂。

关于糊精用量的多少，我们进行了如下试验：取药材提取物与β-环糊精混合物，加糊精混匀后以90％乙醇为润湿剂制颗粒，见表21。

表21稀释剂糊精用量选择表

由以上结果，我们选择制1000g成品时，加600g糊精做为稀释剂。

2、制颗粒所用润湿剂的选择：

由于需制粒的粉末是药材提取物、β-环糊精包合物、糊精的混合物，故选用以水或乙醇为润湿剂制颗粒。取上述混合物200g以水或一定浓度乙醇制软材，再制湿颗粒，结果见表22。

表22不同润湿剂制湿颗粒结果表

由以上结果，我们选90％乙醇为润湿剂制颗粒。

3、湿颗粒干燥温度的选择：

表23选择湿颗粒干燥温度结果表

由以上结果，我们选择40℃-50℃为湿颗粒干燥温度。

4、包装材料的选择：

由于成品药材提取物比例较大，故我们选定防水防气性能较好的复合膜为内包装材料。并根据处方药材剂量，换算出成品的单服剂量为5g，故我们选定以复合膜袋做内包装，内装成品5.0g。

[试验例8]本发明药物治疗酒精性肝炎的临床观察

1.一般资料收治门诊病例共60例，其中男55例，女5例。年龄30～40岁17例，41～50岁29例，51～60岁11例，61～65岁3例。其中病程最短5年半，最长27年。

2.诊断标准：(1)中医证候诊断标准

证侯：湿热酒毒瘀结证。主症：胁肋疼痛，脘腹胀闷，口渴少饮，食少纳呆，大便溏而不爽，舌质红，舌苔黄腻。次症：肢体困重，身热不扬或汗出不解，腹胀满，恶心欲呕，身目发黄，烦躁易怒，肝掌，蜘蛛痣，或胁下积块，脉濡数。湿热酒毒瘀结证主症4项(舌象必备)或主症3项(舌象必备)加次症3项，即可诊断。

(2)西医诊断标准：①有长期饮酒史，一般超过5年，折合酒精量＞40g/d，女性＞20g/d，或2周内有大量饮酒史(＞40g/d)。有遗传易感性因素时，即使饮酒折合乙醇＜40g/d发生酒精性肝炎患者。②有长期饮酒史，未作活检，影像学诊断(超声或CT)有脂肪肝特异性表现，并符合下列诊断依据：a.饮酒量增加可作为发病或恶化的诱因；b.AST为主的血清转氨酶升高；c血清胆红素升高(＞34.2umol/L)。附加项目：a.腹痛；b.发热；c.外周血象白细胞增加；d.ALT增加＞2.0ULN；e.GGT增高＞2.0ULN；f.AKP增高＞2.0ULN(ULN为正常值上限)。③食欲不振，恶心呕吐，腹胀乏力，腹痛，发热，体重减轻等症状。④面色灰暗，颜面毛细血管扩张，肝肿大，肝掌或蜘蛛痣，黄疸，肝区压痛等体征。⑤肝功能及血脂异常。⑥肝脏B超轻度或明显增大，光点反射增强，分布欠均匀，回声衰减。

有长期饮酒史，发病日期/不明，但影像学、腹腔镜或肝活体组织病理检查符合慢性肝炎改变，或根据症状、体征、化验、肝脏B超综合分析亦可做出诊断。

酒精性肝炎病情分度标准：a.肝功能及血脂损害分度标准

轻度：临床症状、体征轻微或缺如，肝功能及血脂CHO、TG指标仅1或2项轻度异常者。

中度：症状、体征、实验室检查属于轻度和重度之间者。

重度：有明显或持续的酒精性肝炎症状，如乏力，纳差，腹胀，便溏等，伴有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣，并排除其他原因，且无门脉高压征者。实验室检查血清ALT和(或)AST、GGT反复或持续升高，白蛋白降低或白蛋白/球蛋白(A/G)比值异常，丙种球蛋白明显升高。除前述条件外，凡白蛋白≤32g/l，胆红素大于5倍正常上限，2项检测中有1项达上述程度及CHO≥7.9mmol/l或TG≥5.6mmol/l1项者即可诊断为酒精性肝炎重度。(见表1)

b.B超检查病情分度标准

轻度：肝脏形态饱满，肋下≤1.0cm，肝脏轮廓尚清晰，肝实质回声近场光点弥漫性增强，远场回声1/3衰减。

中度：肝脏形态增大，肋下1.1～2cm，肝脏轮廓欠清晰，肝实质回声近场光点明显增强，远场回声2/3衰减。

重度：肝脏形态明显增大，肋下≥2.1cm，肝脏轮廓不清晰，肝实质回声近场光点明显增强，远场回声完全衰减呈无回声区。

表24酒精性肝炎实验室检查异常程度参考指标

3.治疗方法：每日口服3次，每次1袋，连续服用两个月。

4.疗效评定标准：(1)临床痊愈：临床症状、体征消失，肝功能、血脂、恢复正常，肝B超基本正常。

(2)显效：临床症状、体征基本消失，肝功能、血脂及肝B超由重度转为中度，或由中轻度恢复正常。

(3)有效：临床症状、体征好转，肝功能、血脂及肝B超由重度转为中度或由中度转为轻度。

(4)无效：临床症状、体征无明显缓解，肝功能、血脂及肝B超无明显改变甚至加重。

5.治疗结果(见下表)表25总疗效分析(％)

经Ridit分析，u＝2.053，P＜0.05，说明两组总疗效有显著性差异，治疗组明显优于对照组。

表26治疗前后症状比较

总之，在两个月中，用酒肝颗粒治疗30例，结果痊愈10例，显效13例，有效5例，无效2例，总有效率93.3％。

实施例1本发明药物的颗粒剂制备

枳椇子375g  泽泻225g   丹参225g   大黄75g       何首乌300g

郁金225g    黄芪300g   茯苓225g   决明子300g    山楂300g

海藻300g    木香150g

木香、郁金加6倍量水，水蒸气蒸馏提取挥发油5小时，蒸馏后的水溶液及药渣另器收集，挥发油以4倍量β-环糊精应用研磨法制成包合物、丹参、何首乌加药材5倍量80％乙醇回流提取4次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至80℃相对密度1.30-1.35，药渣与蒸馏提取挥发油后的木香、郁金药渣合并，与剩余八味一起加5倍药材量水浸泡4小时后煎煮2次，每次2小时，合并煎液及蒸馏后的水溶液，滤过，滤液减压浓缩至80℃相对密度1.10-1.15，醇沉，充分搅拌，静止24小时，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至80℃相对密度1.30-1.35，与丹参、何首乌醇提物合并，加糊精600g，混匀，80℃减压干燥，粉碎成细粉，与木香、郁金的β-环糊精包合物混匀，以90％乙醇为润湿剂颗粒，40℃-50℃条件下，喷雾干燥，经常规工艺制成颗粒剂1000g。

实施例2本发明药物的胶囊剂制备

枳椇子350g   泽泻200g    丹参200g   大黄50g       何首乌250g

郁金150g     黄芪250g    茯苓200g   决明子260g    山楂250g

海藻300g     木香100g

木香、郁金加4倍量水，水蒸气蒸馏提取挥发油6小时，蒸馏后的水溶液及药渣另器收集，挥发油以3倍量β-环糊精应用研磨法制成包合物、丹参、何首乌加药材4倍量80％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至80℃相对密度1.30-1.35，药渣与蒸馏提取挥发油后的木香、郁金药渣合并，与剩余八味一起加4倍药材量水浸泡3小时后煎煮2次，每次2小时，合并煎液及蒸馏后的水溶液，滤过，滤液减压浓缩至80℃相对密度1.10-1.15，醇沉，充分搅拌，静止20小时，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至80℃相对密度1.30-1.35，与丹参、何首乌醇提物合并，加糊精500g，混匀，80℃减压干燥，粉碎成细粉，与木香、郁金的β-环糊精包合物混匀，以90％乙醇为润湿剂颗粒，40℃-50℃条件下，喷雾干燥，经常规工艺制成胶囊剂。

实施例3本发明药物的片剂制备

枳椇子400g   泽泻250g    丹参225g    大黄100g      何首乌350g

郁金250g     黄芪300g    茯苓250g    决明子350g    山楂300g

海藻350g  木香250g

木香、郁金加8倍量水，水蒸气蒸馏提取挥发油8小时，蒸馏后的水溶液及药渣另器收集，挥发油以5倍量β-环糊精应用研磨法制成包合物、丹参、何首乌加药材6倍量80％乙醇回流提取4次，每次2.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至80℃相对密度1.30-1.35，药渣与蒸馏提取挥发油后的木香、郁金药渣合并，与剩余八味一起加6倍药材量水浸泡4小时后煎煮2次，每次3小时，合并煎液及蒸馏后的水溶液，滤过，滤液减压浓缩至80℃相对密度1.10-1.15，醇沉，充分搅拌，静止24小时，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至80℃相对密度1.30-1.35，与丹参、何首乌醇提物合并，加糊精650g，混匀，80℃减压干燥，粉碎成细粉，与木香、郁金的β-环糊精包合物混匀，以90％乙醇为润湿剂颗粒，在40℃-50℃条件下干燥，喷雾干燥，整粒、压片，经常规工艺制成片剂。

Claims (6)

1.一种治疗酒精性肝炎的中药组合物，其特征在于：该中药组合物是由下列原料药制成的：

枳椇子200-500重量份    泽泻100-400重量份

丹参100-400重量份      大黄50-150重量份

何首乌200-450重量份    郁金100-400重量份

黄芪200-450重量份      茯苓100-400重量份

决明子200-450重量份    山楂200-450重量份

海藻200-450重量份      木香100-300重量份。

2.如权利要求1所述的一种治疗酒精性肝炎的中药组合物，其特征在于：该中药组合物是由下列原料药制成的：

枳椇子300-400重量份    泽泻200-300重量份

丹参150-250重量份      大黄50-100重量份

何首乌250-350重量份    郁金150-250重量份

黄芪250-350重量份      茯苓200-300重量份

决明子250-350重量份    山楂250350重量份

海藻250-400重量份     木香100300重量份。

3.如权利要求1所述的一种治疗酒精性肝炎的中药组合物，其特征在于：该中药组合物是由下列原料药制成的：

枳椇子375重量份    泽泻225重量份    丹参225重量份

大黄75重量份    何首乌300重量份    郁金225重量份

黄芪300重量份   茯苓225重量份      决明子300重量份

山楂300重量份   海藻300重量份      木香150重量份。

4.如权利要求1或2或3所述的一种治疗酒精性肝炎的中药组合物，其特征在于：该中药组合物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液体制剂、皮下给药制剂、栓剂中的任一种。

5.如权利要求4所述的一种治疗酒精性肝炎的中药组合物的制备方法，其特征在于：该方法为：

木香、郁金加4～8倍量水，水蒸气蒸馏提取挥发油5～8小时，蒸馏后的水溶液及药渣另器收集，挥发油以2～5倍量β-环糊精应用研磨法制成包合物，丹参、何首乌加药材4～8倍量65～90％乙醇回流提取2～5次，每次1～3小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至80℃相对密度1.20-1.45，药渣与蒸馏提取挥发油后的木香、郁金药渣合并，与剩余八味一起加3～7倍药材量水浸泡2～5.5小时后煎煮1～3次，每次1～4小时，合并煎液及蒸馏后的水溶液，滤过，滤液减压浓缩至80℃相对密度1.05-1.25，醇沉，充分搅拌，静止18～26小时，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至80℃相对密度1.20-1.45，与丹参、何首乌醇提物合并，加糊精450～700g，混匀，80℃减压干燥，粉碎成细粉，药粉加入挥发油包合物，经过常规工序直接或加入药学上接受的赋型剂制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液体制剂、皮下给药制剂、栓剂中的任一种。

6.如权利要求5所述的一种治疗酒精性肝炎的中药组合物的制备方法，其特征在于：制备颗粒剂的方法为：

木香、郁金加6倍量水，水蒸气蒸馏提取挥发油5小时，蒸馏后的水溶液及药渣另器收集，挥发油以4倍量β-环糊精应用研磨法制成包合物、丹参、何首乌加药材5倍量80％乙醇回流提取4次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至80℃相对密度1.30-1.35，药渣与蒸馏提取挥发油后的木香、郁金药渣合并，与剩余八味一起加5倍药材量水浸泡4小时后煎煮2次，每次2小时，合并煎液及蒸馏后的水溶液，滤过，滤液减压浓缩至80℃相对密度1.10-1.15，醇沉，充分搅拌，静止24小时，滤过，滤液回收乙醇并减压浓缩至80℃相对密度1.30-1.35，与丹参、何首乌醇提物合并，加糊精600g，混匀，80℃减压干燥，粉碎成细粉，与木香、郁金的β-环糊精包合物混匀，以90％乙醇为润湿剂颗粒，40℃-50℃条件下，喷雾干燥，经常规工艺制成颗粒剂。