CN100376588C - 一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法。方法的步骤如下:1)新鲜蛋黄先用丙酮脱脂,真空抽滤,滤饼用酒精提取,合并滤液,真空浓缩得到粗磷脂;2)经钝化的氧化铝用甲醇湿法装柱,先用甲醇冲洗;3)粗磷脂用甲醇溶解后加入层析柱,并开始收集流出液;4)待卵磷脂开始穿透后用纯甲醇冲洗,收集流出液;5)流出液经薄层色谱TLC分析后合并卵磷脂馏份,经真空浓缩、冻干后可得到纯度大于95%的卵磷脂;6)最后用含氨水的甲醇溶液再生柱子,再用甲醇冲洗后可重新进样。本发明具有工艺简单、操作方便、处理量大、产率高、产品纯度高、成本较低、较适合于大规模工业化制备等优点。
Description
技术领域
本发明涉及磷脂类,尤其涉及一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法。
背景技术
磷脂普遍存在于动植物细胞的原生质和生物膜中,对生物膜的生理活性和机体的正常代谢有重要的调节功能,同时它具有良好的乳化性和抗氧化性,因而被广泛应用于食品、医药、化妆品等行业。卵磷脂和脑磷脂是其中两种重要的磷脂,化学名称分别为磷脂酰胆碱(phosphotidylcholine,简称PC)和磷脂酰乙醇胺(Phosphatidyl Ethanolamine,简称PE)。
卵磷脂是构成人体细胞膜的主要成份,是保持细胞正常形态和功能的生命基础物质之一,对人体的正常代谢有重要的调节作用。它对心、脑血管的作用是保持血管壁的弹性和渗透性,软化血管,增加高密度脂蛋白的含量,减少或清除血管内壁沉积物,防止血液凝聚;对神经系统的作用是使神经反应敏锐,提高记忆力,预防健忘症和老年痴呆症;可有效地防治肝功能疾病和缓解糖尿病;可促进损伤细胞的更新,提高人体免疫力。70年代以来,世界上就把卵磷脂用于保健食品,总销售量仅次于复合维生素C和维生素E,名列第三位。卵磷脂的缺乏是造成心脑血管疾病等现代文明病的主要原因之一。
卵磷脂分子结构中同时具有亲水基和疏水基,这种双极性质使卵磷脂表现出优良的表面活性,属于应用较广的磷酸型两性表面活性剂,具有乳化、增稠、稳定、分散、增溶、湿润、润滑等功能,可广泛应用于食品、饲料、医药、化妆品、涂料、油墨、纺织、皮革、石油制品及植物保护等工农业生产。
高纯度卵磷脂产品是指含PC大于95%的卵磷脂产品。由于高纯度卵磷脂产品纯度高,无异味、乳化性强,不仅在食品工业中可较大量地添加使用,还可做成保健品、医药品等。特别是在医药上,卵磷脂在水中可自动形成颗粒状的脂质体,因此高纯度卵磷脂可用作静脉注射用水包油型乳液的乳化剂;由卵磷脂形成的脂质体用作活性组分的载体,可降低药物毒性,增加药效。目前纯度大于95%的磷脂产品我国尚依赖进口,因此,开发出适合我国国情的、低成本、高纯度卵磷脂制备方法,具有重要的经济和社会价值。
卵磷脂的精制方法主要有萃取法、柱层析法、沉淀法、膜分离法等。柱层析法由于具有操作简便、分离效果好、不需昂贵设备、处理量大等优点,因而倍受关注。在柱层析法研究中,目前主要集中在价廉的氧化铝和硅胶。对于氧化铝通常是PC先出峰,而对于硅胶通常是PE先出峰。为了得到高纯度的PC,本专利采用氧化铝作为吸附剂,同时选用除PC和PE外其它磷脂较少的蛋黄作为原料。
发明内容
本发明的目的是提供一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法。
方法的步骤如下:
1)新鲜蛋黄先用丙酮脱脂,真空抽滤,滤饼用酒精提取,合并滤液,真空浓缩得到粗磷脂;
2)经钝化的氧化铝用甲醇湿法装柱,先用甲醇冲洗,所说的经钝化的氧化铝是指通过加入少量水以减少氧化铝的活性,经钝化后的氧化铝含水量为重量百分比6%~12%;
3)粗磷脂用甲醇溶解后加入层析柱,并开始收集流出液;
4)待卵磷脂开始穿透后用纯甲醇冲洗,收集流出液;
5)流出液经薄层色谱TLC分析后合并卵磷脂馏份,经真空浓缩、冻干后可得到纯度大于95%的卵磷脂;
6)最后用含氨水的甲醇溶液再生柱子,再用甲醇冲洗后可重新进样。
本发明的具有以下优点:
1)工艺简单,操作方便,较适合于大规模工业化制备;
2)氧化铝可循环使用,成本较低;
3)氧化铝柱层析过程可在室温下进行;
4)产品纯度高,经本工艺精制后可得纯度大于95%的卵磷脂产品;
5)柱层析过程处理量大、产率高;
6)为近年来鸡蛋丰产、供过于求、难以存放等问题的解决提供新方法,为鸡蛋的深加工开辟一条新路,促进禽蛋行业的发展。
具体实施方式
溶剂提取法得到的粗磷脂,用甲醇混合溶剂溶解后在室温下过氧化铝柱,待PE开始流出后改用纯甲醇冲洗,收集流出液,经TLC分析后合并卵磷脂的馏份,再经浓缩、冷冻干燥后可得卵磷脂产品。柱子经含氨水的甲醇溶液再生、甲醇冲洗后可循环使用。
氧化铝钝化方法:氧化铝在120℃下脱水活化12小时,活化好的氧化铝转移至干燥器中,冷却后,加入一定量的去离子水。密封存放72小时以上,以备柱层析用。
实施例1
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂三次,真空抽滤,滤饼用95%酒精提取二次,合并滤液,真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析,粗磷脂中PC含量为79.6%(wt%),PE含量为14.8%(wt%)。取含水量为8%的氧化铝用甲醇湿法装Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml),先用甲醇冲洗50ml。进110ml浓度为100mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇),接着用200ml甲醇冲洗,流速控制在0.4ml/min,加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份,经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.5g,经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为96.0%。柱子用含氨2%(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25%的氨水配制)冲洗150ml,再用甲醇冲洗100ml后可重新进样,同样冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例2
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂三次,真空抽滤,滤饼用95%酒精提取二次,合并滤液,真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析,粗磷脂中PC含量为79.6%(wt%),PE含量为14.8%(wt%)。取含水量为10%的氧化铝用甲醇湿法装Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml),先用甲醇冲洗50ml。进110ml浓度为100mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇),接着用200ml甲醇冲洗,流速控制在0.6ml/min,加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份,经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.7g,经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为95.2%。柱子用含氨1%(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25%的氨水配制)冲洗200ml,再用甲醇冲洗100ml后可重新进样,冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例3
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂二次,真空抽滤,滤饼用95%酒精提取二次,合并滤液,真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析,粗磷脂中含PC76.0%(wt%)、PE15.0%(wt%)。取含水量为12%的氧化铝用甲醇湿法装Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml),先用甲醇冲洗50ml。进200ml浓度为50mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇),接着用200ml甲醇冲洗,流速控制在0.8ml/min,加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份,经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.0g,经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为95.0%。柱子用含氨0.5%(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25%的氨水配制)冲洗300ml,再用甲醇冲洗100ml后可重新进样,冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例4
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂二次,真空抽滤,滤饼用95%酒精提取二次,合并滤液,真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析,粗磷脂中含PC76.0%(wt%)、PE15.0%(wt%)。取含水量为6%的氧化铝用甲醇湿法装Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml),先用甲醇冲洗50ml。进70ml浓度为150mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇),接着用200ml甲醇冲洗,流速控制在0.4ml/min,加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份,经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.4g,经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为94.8%。柱子用含氨3%(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25%的氨水配制)冲洗150ml,再用甲醇冲洗100ml后可重新进样,同样冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例5
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂三次,真空抽滤,滤饼用95%酒精提取三次,合并滤液,真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析,粗磷脂中含PC77.5%(wt%)、PE15.2%(wt%)。取含水量为8%的氧化铝用甲醇湿法装Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml),先用甲醇冲洗50ml。进200ml浓度为50mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇),接着用200ml甲醇冲洗,流速控制在1.0ml/min,加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份,经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.3g,经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为95.1%。柱子用含氨0.1%(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25%的氨水配制)冲洗500ml,再用甲醇冲洗100ml后可重新进样,冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例6
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂三次,真空抽滤,滤饼用95%酒精提取三次,合并滤液,真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析,粗磷脂中含PC77.5%(wt%)、PE15.2%(wt%)。取含水量为10%的氧化铝用甲醇湿法装Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml),先用甲醇冲洗50ml。进110ml浓度为100mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇),接着用200ml甲醇冲洗,流速控制在0.6ml/min,加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份,经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.8g,经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为95.9%。柱子用含氨0.5%(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25%的氨水配制)冲洗300ml,再用甲醇冲洗100ml后可重新进样,冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例7
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂三次,真空抽滤,滤饼用无水酒精提取二次,合并滤液,真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析,粗磷脂中含PC77.0%(wt%)、PE15.5%(wt%)。取含水量为10%的氧化铝用甲醇湿法装Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml),先用甲醇冲洗50ml。进110ml浓度为100mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇),接着用200ml甲醇冲洗,流速控制在0.8ml/min,加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份,经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.5g,经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为95.7%。柱子用含氨1%(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25%的氨水配制)冲洗200ml,再用甲醇冲洗100ml后可重新进样,冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例8
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂三次,真空抽滤,滤饼用无水酒精提取二次,合并滤液,真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析,粗磷脂中含PC77.0%(wt%)、PE15.5%(wt%)。取含水量为8%的氧化铝用甲醇湿法装Φ1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml),先用甲醇冲洗50ml。进70ml浓度为150mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇),接着用200ml甲醇冲洗,流速控制在0.4ml/min,加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份,经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.3g,经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为95.0%。柱子用含氨2%(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25%的氨水配制)冲洗150ml,再用甲醇冲洗100ml后可重新进样,同样冲洗流速控制在0.4ml/min。
Claims (2)
1.一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法,其特征在于,方法的步骤如下:
1)新鲜蛋黄先用丙酮脱脂,真空抽滤,滤饼用酒精提取,合并滤液,真空浓缩得到粗磷脂;
2)经钝化的氧化铝用甲醇湿法装柱,先用甲醇冲洗,所说的经钝化的氧化铝是指通过加入少量水以减少氧化铝的活性,经钝化后的氧化铝含水量为重量百分比6%~12%;
3)粗磷脂用甲醇溶解后加入层析柱,并开始收集流出液;
4)待卵磷脂开始穿透后用纯甲醇冲洗,收集流出液;
5)流出液经薄层色谱TLC分析后合并卵磷脂馏份,经真空浓缩、冻干后可得到纯度大于95%的卵磷脂;
6)最后用含氨水的甲醇溶液再生柱子,再用甲醇冲洗后可重新进样。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法,其特征在于所说的含氨水的甲醇溶液中氨的含量为重量百分比0.1~3%。
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