CN1733777A - 一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法。方法的步骤如下：1)新鲜蛋黄先用丙酮脱脂，真空抽滤，滤饼用酒精提取，合并滤液，真空浓缩得到粗磷脂；2)经钝化的氧化铝用甲醇湿法装柱，先用甲醇冲洗；3)粗磷脂用甲醇溶解后加入层析柱，并开始收集流出液；4)待卵磷脂开始穿透后用纯甲醇冲洗，收集流出液；5)流出液经薄层色谱TLC分析后合并卵磷脂馏份，经真空浓缩、冻干后可得到纯度大于95％的卵磷脂；6)最后用含氨水的甲醇溶液再生柱子，再用甲醇冲洗后可重新进样。本发明具有工艺简单、操作方便、处理量大、产率高、产品纯度高、成本较低、较适合于大规模工业化制备等优点。
Description
技术领域
本发明涉及磷脂类，尤其涉及一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法。
背景技术
磷脂普遍存在于动植物细胞的原生质和生物膜中，对生物膜的生理活性和机体的正常代谢有重要的调节功能，同时它具有良好的乳化性和抗氧化性，因而被广泛应用于食品、医药、化妆品等行业。卵磷脂和脑磷脂是其中两种重要的磷脂，化学名称分别为磷脂酰胆碱(phosphotidylcholine，简称PC)和磷脂酰乙醇胺(Phosphatidyl Ethanolamine，简称PE)。
卵磷脂是构成人体细胞膜的主要成份，是保持细胞正常形态和功能的生命基础物质之一，对人体的正常代谢有重要的调节作用。它对心、脑血管的作用是保持血管壁的弹性和渗透性，软化血管，增加高密度脂蛋白的含量，减少或清除血管内壁沉积物，防止血液凝聚；对神经系统的作用是使神经反应敏锐，提高记忆力，预防健忘症和老年痴呆症；可有效地防治肝功能疾病和缓解糖尿病；可促进损伤细胞的更新，提高人体免疫力。70年代以来，世界上就把卵磷脂用于保健食品，总销售量仅次于复合维生素C和维生素E，名列第三位。卵磷脂的缺乏是造成心脑血管疾病等现代文明病的主要原因之一。
卵磷脂分子结构中同时具有亲水基和疏水基，这种双极性质使卵磷脂表现出优良的表面活性，属于应用较广的磷酸型两性表面活性剂，具有乳化、增稠、稳定、分散、增溶、湿润、润滑等功能，可广泛应用于食品、饲料、医药、化妆品、涂料、油墨、纺织、皮革、石油制品及植物保护等工农业生产。
高纯度卵磷脂产品是指含PC大于95％的卵磷脂产品。由于高纯度卵磷脂产品纯度高，无异味、乳化性强，不仅在食品工业中可较大量地添加使用，还可做成保健品、医药品等。特别是在医药上，卵磷脂在水中可自动形成颗粒状的脂质体，因此高纯度卵磷脂可用作静脉注射用水包油型乳液的乳化剂；由卵磷脂形成的脂质体用作活性组分的载体，可降低药物毒性，增加药效。目前纯度大于95％的磷脂产品我国尚依赖进口，因此，开发出适合我国国情的、低成本、高纯度卵磷脂制备方法，具有重要的经济和社会价值。
卵磷脂的精制方法主要有萃取法、柱层析法、沉淀法、膜分离法等。柱层析法由于具有操作简便、分离效果好、不需昂贵设备、处理量大等优点，因而倍受关注。在柱层析法研究中，目前主要集中在价廉的氧化铝和硅胶。对于氧化铝通常是PC先出峰，而对于硅胶通常是PE先出峰。为了得到高纯度的PC，本专利采用氧化铝作为吸附剂，同时选用除PC和PE外其它磷脂较少的蛋黄作为原料。
发明内容
本发明的目的是提供一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法。
方法的步骤如下：
1)新鲜蛋黄先用丙酮脱脂，真空抽滤，滤饼用酒精提取，合并滤液，真空浓缩得到粗磷脂；
2)经钝化的氧化铝用甲醇湿法装柱，先用甲醇冲洗；
3)粗磷脂用甲醇溶解后加入层析柱，并开始收集流出液；
4)待卵磷脂开始穿透后用纯甲醇冲洗，收集流出液；
5)流出液经薄层色谱TLC分析后合并卵磷脂馏份，经真空浓缩、冻干后可得到纯度大于95％的卵磷脂；
6)最后用含氨水的甲醇溶液再生柱子，再用甲醇冲洗后可重新进样。
本发明的具有以下优点：
1)工艺简单，操作方便，较适合于大规模工业化制备；
2)氧化铝可循环使用，成本较低；
3)氧化铝柱层析过程可在室温下进行；
4)产品纯度高，经本工艺精制后可得纯度大于95％的卵磷脂产品；
5)柱层析过程处理量大、产率高；
6)为近年来鸡蛋丰产、供过于求、难以存放等问题的解决提供新方法，为鸡蛋的深加工开辟一条新路，促进禽蛋行业的发展。
具体实施方式
溶剂提取法得到的粗磷脂，用甲醇混合溶剂溶解后在室温下过氧化铝柱，待PE开始流出后改用纯甲醇冲洗，收集流出液，经TLC分析后合并卵磷脂的馏份，再经浓缩、冷冻干燥后可得卵磷脂产品。柱子经含氨水的甲醇溶液再生、甲醇冲洗后可循环使用。
氧化铝钝化方法：氧化铝在120℃下脱水活化12小时，活化好的氧化铝转移至干燥器中，冷却后，加入一定量的去离子水。密封存放72小时以上，以备柱层析用。
实施例1
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂三次，真空抽滤，滤饼用95％酒精提取二次，合并滤液，真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析，粗磷脂中PC含量为79.6％(wt％)，PE含量为14.8％(wt％)。取含水量为8％的氧化铝用甲醇湿法装Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml)，先用甲醇冲洗50ml。进110ml浓度为100mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇)，接着用200ml甲醇冲洗，流速控制在0.4ml/min，加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份，经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.5g，经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为96.0％。柱子用含氨2％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25％的氨水配制)冲洗150ml，再用甲醇冲洗100ml后可重新进样，同样冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例2
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂三次，真空抽滤，滤饼用95％酒精提取二次，合并滤液，真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析，粗磷脂中PC含量为79.6％(wt％)，PE含量为14.8％(wt％)。取含水量为10％的氧化铝用甲醇湿法装Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml)，先用甲醇冲洗50ml。进110ml浓度为100mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇)，接着用200ml甲醇冲洗，流速控制在0.6ml/min，加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份，经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.7g，经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为95.2％。柱子用含氨1％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25％的氨水配制)冲洗200ml，再用甲醇冲洗100ml后可重新进样，冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例3
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂二次，真空抽滤，滤饼用95％酒精提取二次，合并滤液，真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析，粗磷脂中含PC76.0％(wt％)、PE15.0％(wt％)。取含水量为12％的氧化铝用甲醇湿法装Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml)，先用甲醇冲洗50ml。进200ml浓度为50mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇)，接着用200ml甲醇冲洗，流速控制在0.8ml/min，加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份，经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.0g，经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为95.0％。柱子用含氨0.5％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25％的氨水配制)冲洗300ml，再用甲醇冲洗100ml后可重新进样，冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例4
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂二次，真空抽滤，滤饼用95％酒精提取二次，合并滤液，真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析，粗磷脂中含PC76.0％(wt％)、PE15.0％(wt％)。取含水量为6％的氧化铝用甲醇湿法装Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml)，先用甲醇冲洗50ml。进70ml浓度为150mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇)，接着用200ml甲醇冲洗，流速控制在0.4ml/min，加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份，经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.4g，经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为94.8％。柱子用含氨3％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25％的氨水配制)冲洗150ml，再用甲醇冲洗100ml后可重新进样，同样冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例5
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂三次，真空抽滤，滤饼用95％酒精提取三次，合并滤液，真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析，粗磷脂中含PC77.5％(wt％)、PE15.2％(wt％)。取含水量为8％的氧化铝用甲醇湿法装Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml)，先用甲醇冲洗50ml。进200ml浓度为50mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇)，接着用200ml甲醇冲洗，流速控制在1.0ml/min，加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份，经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.3g，经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为95.1％。柱子用含氨0.1％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25％的氨水配制)冲洗500ml，再用甲醇冲洗100ml后可重新进样，冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例6
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂三次，真空抽滤，滤饼用95％酒精提取三次，合并滤液，真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析，粗磷脂中含PC77.5％(wt％)、PE15.2％(wt％)。取含水量为10％的氧化铝用甲醇湿法装Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml)，先用甲醇冲洗50ml。进110ml浓度为100mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇)，接着用200ml甲醇冲洗，流速控制在0.6ml/min，加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份，经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.8g，经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为95.9％。柱子用含氨0.5％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25％的氨水配制)冲洗300ml，再用甲醇冲洗100ml后可重新进样，冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例7
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂三次，真空抽滤，滤饼用无水酒精提取二次，合并滤液，真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析，粗磷脂中含PC77.0％(wt％)、PE15.5％(t％)。取含水量为10％的氧化铝用甲醇湿法装Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml)，先用甲醇冲洗50ml。进110ml浓度为100mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇)，接着用200ml甲醇冲洗，流速控制在0.8ml/min，加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份，经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.5g，经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为95.7％。柱子用含氨1％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25％的氨水配制)冲洗200ml，再用甲醇冲洗100ml后可重新进样，冲洗流速控制在0.4ml/min。
实施例8
新鲜蛋黄先用丙酮脱脂三次，真空抽滤，滤饼用无水酒精提取二次，合并滤液，真空浓缩得到粗磷脂。经HPLC分析，粗磷脂中含PC77.0％(wt％)、PE15.5％(wt％)。取含水量为8％的氧化铝用甲醇湿法装Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱体积为25ml)，先用甲醇冲洗50ml。进70ml浓度为150mg/ml的粗磷脂溶液(溶剂为甲醇)，接着用200ml甲醇冲洗，流速控制在0.4ml/min，加样后开始收集流出液(按每份约5ml收集)。流出液经TLC分析后合并卵磷脂馏份，经真空浓缩、冻干后得卵磷脂6.3g，经HPLC分析产品中卵磷脂的含量为95.0％。柱子用含氨2％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比为25％的氨水配制)冲洗150ml，再用甲醇冲洗100ml后可重新进样，同样冲洗流速控制在0.4ml/min。
Claims (3)
1.一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法，其特征在于，方法的步骤如下：
1)新鲜蛋黄先用丙酮脱脂，真空抽滤，滤饼用酒精提取，合并滤液，真空浓缩得到粗磷脂；
2)经钝化的氧化铝用甲醇湿法装柱，先用甲醇冲洗；
3)粗磷脂用甲醇溶解后加入层析柱，并开始收集流出液；
4)待卵磷脂开始穿透后用纯甲醇冲洗，收集流出液；
5)流出液经薄层色谱TLC分析后合并卵磷脂馏份，经真空浓缩、冻干后可得到纯度大于95％的卵磷脂；
6)最后用含氨水的甲醇溶液再生柱子，再用甲醇冲洗后可重新进样。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法，其特征在于所说的经钝化的氧化铝是指通过加入少量水以减少氧化铝的活性，经钝化后的氧化铝含水量为重量百分比6％～12％。
3、根据权利要求1所述的一种高纯度蛋黄卵磷脂的制备方法，其特征在于所说的含氨水的甲醇溶液中氨的含量为重量百分比0.1～3％。
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