CN102260286A - 一种分离纯化粗产品L-α-甘油磷酸胆碱的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种分离纯化粗产品L-α-甘油磷酸胆碱的方法，首先将粗产品L-α-甘油磷酸胆碱加入无水乙醇中，于50℃搅拌溶解，然后加入活化碱性三氧化二铝，搅拌脱色2小时，离心分离后除去下层三氧化二铝固相，对上层溶液相进行干燥浓缩，直到溶液相成为粘稠状油状物为止，然后将浓缩后的溶液相经过硅胶层析柱，收集含有L-α-甘油磷酸胆碱产品的洗脱液，将收集到的洗脱液蒸发浓缩除去溶剂，真空干燥即得提纯产物。本发明方法产物纯度可达99.5％以上，所用三氧化二铝和无水乙醇可以再生重复利用，成本低、较适合大规模工业化生产。

Description

一种分离纯化粗产品L- α -甘油磷酸胆碱的方法

一、技术领域

[0001] 本发明涉及一种分离纯化粗产品L-α -甘油磷酸胆碱的方法。

二、背景技术

[0002] L- α -甘油磷酸胆碱（L- α -GPC)是体内天然存在的水溶性磷脂代谢产物，它能够穿过血脑屏障，是乙酰胆碱和磷酸卵磷脂合成的胆碱源。L- α -GPC属于胆碱酯酶抑制剂，能够有效的预防和治疗脑缺血性中风、轻至中度阿尔茨海默氏症导致的记忆力下降和认知功能障碍，轻至中度多发性脑梗死型痴呆，改善年轻患者的记忆力和提高注意力，改善衰老患者的脑健康状况，是保肝良药和治疗老年痴呆的处方药。

[0003] 对粗产品L- α -甘油磷酸胆碱进行分离纯化，使其达到药用级别，能够使用于临床和制剂研究，可以提高我国医疗水平，并有效的降低由于进口 L-α-甘油磷酸胆碱药物制剂所导致的药价偏高。

[0004] L-α -GPC分子式为C8H2tlNO6P,分子量为257. 22，可与水混溶，能溶于甲醇，乙醇，不溶于氯仿、醚、油类，在紫外可见光下无特征吸收。L-α -GPC的结构式如下：

[0005]

[0006] 实验室制备的粗产品L- α -甘油磷酸胆碱颜色为深棕色，纯净的L- α -甘油磷酸胆碱应为无色透明。粗产品L-α-甘油磷酸胆碱达不到药用级别，需要经过分离纯化后，才能进行制剂研究和临床应用。

[0007] CN 102041281A使用活性炭脱色和离子交换树脂层析的方法对L- α -甘油磷酸胆碱进行分离纯化，能够得到纯度达98. 8%的产品，纯度不高，不能直接进行制剂和临床研

[0008] W0/2007/145476使用的分离纯化L- α -甘油磷酸胆碱的方法是：将L- α -甘油磷酸胆碱在乙醇溶液中结晶）后，用离子交换树脂进行分离纯化；EP 0486100 Al所使用的分离纯化L-α -甘油磷酸胆碱的方法是：α -GPC首先通过阳离子交换树脂层析后，然后在乙醇溶液里面结晶，从而达到分离纯化的目的。以上两种分离纯化方法都对L- α -甘油磷酸胆碱进行了结晶，这对L-α -甘油磷酸胆碱粗产品的纯度要求较高，其分离提纯较为复杂， 成本较高。

三、发明内容

[0009] 本发明旨在提供一种提纯率高、能耗低、所用分离纯化材料可以再生重复利用、成本低、适合大规模工业化生产的分离纯化粗产品L-α -甘油磷酸胆碱的方法。[0010] 本发明解决技术问题采用如下技术方案：

[0011] 本发明分离纯化粗产品L-α -甘油磷酸胆碱的方法的特点在于：利用三氧化二铝脱色法和硅胶柱层析法相结合的工艺对粗产品L- α -甘油磷酸胆碱进行分离纯化。

[0012] 本发明分离纯化粗产品L-α -甘油磷酸胆碱的方法的特点在于按以下步骤操作：

[0013] 将粗产品L-α -甘油磷酸胆碱加入无水乙醇中，于50°C搅拌溶解，然后加入活化碱性三氧化二铝，搅拌脱色2小时，离心分离后除去下层三氧化二铝固相，对上层溶液相进行干燥浓缩，直到溶液相成为粘稠状油状物为止，然后将浓缩后的溶液相经过硅胶层析柱， 收集含有L-α -甘油磷酸胆碱产品的洗脱液，将收集到的洗脱液蒸发浓缩除去溶剂，真空干燥即得提纯产物。

[0014] 本发明分离纯化粗产品L-α -甘油磷酸胆碱的方法的特点也在于：所述L-α -甘油磷酸胆碱与活化碱性三氧化二铝的质量比为1 ： (5-10)；所述L-α-甘油磷酸胆碱与硅胶层析柱中装填的活化硅胶粉的质量比为1 ： (40-50)。

[0015] 本发明分离纯化粗产品L-α -甘油磷酸胆碱的方法的特点也在于：用活化碱性三氧化二铝脱色时所用试剂为无水乙醇；硅胶柱层析时所用洗脱剂为混合溶剂，所述混合溶剂中甲醇、乙醇和氯仿的体积比为50 ： 35 ： 15。

[0016] 碱性三氧化二铝和硅胶粉的质量对分离纯化效果影响很大，要求其颗粒细致、大小均勻，亦即有较大的表面积和适当的吸附活性，否则不能与样品组分、样品溶剂、展开剂发生化学反应，更不能与溶剂及展开剂发生溶解。通常三氧化二铝的吸附能力与其自身的含水量有关。含水越多，吸附活性越小，吸附能力越小。硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱，其吸附活性也与含水量呈负性相关。本发明所选用的碱性三氧化二铝和硅胶粉均是100-200 目的。

[0017] 碱性三氧化二铝的预处理方法是：将碱性三氧化二铝平铺在容器中，于250°C的烘箱中烘烤4小时，得到活化碱性三氧化二铝；

[0018] 硅胶粉的预处理方法是：将硅胶粉平铺在容器中，于105°C的烘箱中烘烤30分钟， 得到活化硅胶粉。

[0019] 粗产品L- α -甘油磷酸胆碱颜色为深棕色，纯净的L- α -甘油磷酸胆碱应为无色透明。

[0020] 与现有技术相比本发明的有益效果：

[0021] 1、本发明首先使用活化碱性三氧化二铝对粗产品L-α-甘油磷酸胆碱脱色，然后用硅胶柱对脱色后的L- α -甘油磷酸胆碱层析，能够得到纯度达99. 5%以上的L- α -甘油磷酸胆碱产品，该纯化产品可以直接用于制剂研究。

[0022] 2、本发明脱色所使用的三氧化二铝可以再生利用，脱色时所使用的溶剂无水乙醇也可以经过冷凝回收利用，能耗低、成本低、适合大规模工业化生产。

四、附图说明

[0023] 图1是粗产品L- α -甘油磷酸胆碱的HPLC谱图。

[0024] 图2是经过活化碱性三氧化二铝脱色的L- α -甘油磷酸胆碱的HPLC谱图。

[0025] 图3是经过硅胶柱层析的终产品L- α -甘油磷酸胆碱的HPLC谱图。五、具体实施方式

[0026] 本发明所用粗产品L- α -甘油磷酸胆碱为通过常规方法制备得到或者市购，市购厂家为常熟富士莱医药化工有限公司、启东亚美化工有限公司和苏州工业园区亚科化学试剂有限公司。

[0027] 本发明非限定实施例如下。

[0028] 1、碱性三氧化二铝和硅胶粉的预处理：

[0029] 将碱性三氧化二铝（100-200目)平铺在容器中，于250°C的烘箱中烘烤4小时，得到活化碱性三氧化二铝；将硅胶粉（100-200目）平铺在容器中，于105°C的烘箱中烘烤30 分钟，得到活化硅胶粉。

[0030] 2、碱性三氧化二铝对粗产品L- α -甘油磷酸胆碱脱色：

[0031] 称取粗产品L-α-甘油磷酸胆碱（深棕色），加入无水乙醇，在50°C下搅拌溶解后，加入粗产品L- α -甘油磷酸胆碱质量5-10倍量的活化碱性三氧化二铝，搅拌脱色池，离心分离，除去下层三氧化二铝固相，将上层溶液相蒸发浓缩除去溶剂，得到塑黄色的脱色后的L-α-甘油磷酸胆碱。

[0032] 由图1可以看出，粗产品L-α -甘油磷酸胆碱含有杂质色谱峰，纯度很低；由图2 可以看出，经过碱性三氧化二铝脱色后，在L- α -甘油磷酸胆碱的液相色谱图中，杂质峰明显减少。经过该步骤脱色后，L-α -甘油磷酸胆碱的纯度达到85%以上。

[0033] 3、脱色后的L- α -甘油磷酸胆碱过硅胶层析柱

[0034] a、硅胶柱装柱：

[0035] 称取粗产品L- α -甘油磷酸胆碱质量的40-50倍的活化硅胶粉，用甲醇浸泡后，湿法装柱。装柱的效果直接影响层析分离效果，装好的硅胶柱应该是密实均勻无气泡。

[0036] b、上样

[0037] 向脱色后的L-α-甘油磷酸胆碱中添加无水乙醇，无水乙醇的添加量为使 L-α -甘油磷酸胆碱恰好全部溶解为止，然后将L-α -甘油磷酸胆碱的乙醇溶液缓缓加入层析柱项端的平面内。

[0038] C、洗脱

[0039] 缓慢向硅胶层析柱内加入洗脱剂进行洗脱，注意在洗脱的过程中，柱上端溶剂不能干，并对柱下端流出的洗脱液分段收集，检测，合并含有L- α -甘油磷酸胆碱的洗脱液， 蒸发浓缩除去溶剂，即可得到无色透明的的L-α-甘油磷酸胆碱产品。在洗脱过程中，所用洗脱液为复合溶剂，其体积比为：甲醇：乙醇：氯仿=50 ： 35 ： 15。

[0040] 通过由图3看出，经过硅胶柱层析后，L- α -甘油磷酸胆碱的液相色谱图为一个单峰，其纯度可以达到99. 5%以上。

[0041] 4、碱性三氧化二铝的再生

[0042] 市售的碱性三氧化二铝为纯白色粉末，对粗产品L-α -甘油磷酸胆碱脱色后碱性三氧化二铝变为深棕色。

[0043] 碱性三氧化二铝的再生步骤如下：将脱色过粗产品L- α -甘油磷酸胆碱的碱性三氧化二铝，用蒸馏水反复的洗剂后，置于马弗炉中，在400°C下煅烧池，即可实现再生。再生后的碱性三氧化二铝恢复为纯白色粉末。

Claims (4)

1. 一种分离纯化粗产品L-α -甘油磷酸胆碱的方法，其特征在于：利用三氧化二铝脱色法和硅胶柱层析法相结合的工艺对粗产品L- α -甘油磷酸胆碱进行分离纯化。

2.根据权利要求1所述的分离纯化粗产品L-α -甘油磷酸胆碱的方法，其特征在于按以下步骤操作：将粗产品L-α -甘油磷酸胆碱加入无水乙醇中，于50°C搅拌溶解，然后加入活化碱性三氧化二铝，搅拌脱色2小时，离心分离后除去下层三氧化二铝固相，对上层溶液相进行干燥浓缩，直到溶液相成为粘稠状油状物为止，然后将浓缩后的溶液相经过硅胶层析柱，收集含有L-α -甘油磷酸胆碱产品的洗脱液，将收集到的洗脱液蒸发浓缩除去溶剂，真空干燥即得提纯产物。

3.根据权利要求2所述的分离纯化粗产品L-α -甘油磷酸胆碱的方法，其特征在于： 所述L-α-甘油磷酸胆碱与活化碱性三氧化二铝的质量比为1 ： (5-10)；所述L-α-甘油磷酸胆碱与硅胶层析柱中装填的活化硅胶粉的质量比为1 ： (40-50)。

4.根据权利要求2所述的分离纯化粗产品L-α -甘油磷酸胆碱的方法，其特征在于： 用活化碱性三氧化二铝脱色时所用试剂为无水乙醇；硅胶柱层析时所用洗脱剂为混合溶剂，所述混合溶剂中甲醇、乙醇和氯仿的体积比为50 ： 35 ： 15。