CH661866A5 - Synergistisches arzneimittelpraeparat zur behandlung von leberkrankheiten. - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft ein synergistisches Arzneimittelpräparat zur Behandlung von Leberkrankheiten.

Die Entwicklung der leberdiagnostischen Verfahren . (Biopsie, Endoskopie, Sonographie usw.) haben ein zeitigeres und genaueres Erkennen der Leberkrankheiten ermöglicht. Auf die Frühdiagnose hätte eine rechtzeitige Therapie zu folgen, jedoch sind die therapeutischen Möglichkeiten wesentlich hinter den diagnostischen zurückgeblieben. Gleichzeitig ist die Häufigkeit der Leberkrankheiten in den letzten Jahrzehnten stark angestiegen.

Aus epidemiologischen Untersuchungen ging einwandfrei hervor, dass die Anzahl der Leberkranken eine steigende Tendenz zeigt (Statisztikai Evkönyv 1949 — 1955, Központi Statisztikai Hivatal, Budapest 1971 / = Statistisches Jahrbuch 1949 — 1955, herausgegeben vom Zentralen Amt für Statistik). In Ungarn sind 1977 dreimal so viel Menschen an Leberzirrhose gestorben wie 1955.

Ein bedeutender Anteil der an Leberzirrhose Gestorbenen starb im arbeitsfähigen Alter, zwischen 40 und 59 Jahren. Im Jahre 1970 betrug der Anteil dieser Altersgruppe unter den an Zirrhose Gestorbenen 35%, 1978 jedoch bereits 41%.

Diese Daten stehen in Einklang mit den aus den Sterblichkeitsstatistiken von 26 Ländern ableitbaren Folgerungen: die Häufigkeit der Leberzirrhose steigt auf der ganzen Welt derart an, dass man von einer Leberzirrhose-Epidemie sprechen könnte.

Für die derartige Verbreitung der Leberkrankheiten ist neben zahlreichen sonstigen Faktoren in erster Linie der Alkoholismus verantwortlich zu machen. Die Fettleber, die alkoholische Hepatitis und die alkoholische Zirrhose sind heutigentags die häufigsten Formen der Lebererkrankungen.

Die Therapie der Leberkrankheiten kann nicht als gelöst betrachtet werden (Orvosi Hetilap, 112:386 [1971]; Z. ärztl. Fortbildung 68:234 [1974]; Knoll: Gyógyszertan [1974]; Sze-keres: Orvosi Gyógyszertan [1980],

Aus welchem Grund auch immer der die Leberfunktion schädigende Prozess beginnt, als auf jeden Fall charakteristisches Prinzip kann festgestellt werden, dass der Verlauf der Krankheit von dem Gleichgewicht bestimmt wird, das sich zwischen dem schädigenden Agens (Virus, Alkohol usw.) und der für das Lebergewebe kennzeichnenden Regenerationsbereitschaft einstellt. Gegenwärtig besteht zur Beseitigung der Noxa (des schädigenden Agens) kaum eine Möglichkeit; das ist vor allem bei den bereits ausgebildeten und progredierenden Leberkrankheiten der Fall. Davon ausgehend kann die einzige reale Zielsetzung der Therapie nur die Unterstützung der natürlichen Regenerationsbereitschaft der Lebergewebe sein. Deshalb kommen zur Therapie von

Leberkrankheiten Verfahren in Frage, die in gleich welcher Form fähig sind, die geschädigte Leberfunktion so zu stützen, dass dadurch die von Natur aus vorhandenen und noch funktionsfähigen regenerativen Kräfte gestärkt werden. In 5 Kenntnis des komplexen Charakters der Leberfunktionen ist dies als Monotherapie nicht denkbar.

Der Erfolg der poly therapeutischen Verfahren hängt davon ab, ob es gelingt, für die Herstellung des Kombinationspräparates dasjenige Grundpharmakon zu finden, welches io zur Beeinflussung des als grundlegend betrachteten pathologischen Vorganges am geeignetsten ist. Ist das Grundpharmakon gefunden, so können dann Kombinationen ausgearbeitet werden, die zur Herstellung von Arzneimitteln «mit mehreren Angriffspunkten» geeignet sind.

15 In der Behandlung von Leberkrankheiten zeigen die Präkursoren der Nukleotide die Eigenschaften eines Grund-pharmakons (Dtsch. Med. Wschr. 78,1331 [1953]; Dtsch. Med. Wschr. 81, 573 [1956]).

Diese Nukleotide oder Nukleoside sind im allgemeinen 20 nicht fähig, die Zellmembran zu durchdringen, ferner sind sie auch häufig toxisch (Angew. Chem. 82, 730 [1970]; J. Med. Chem. 15,1334 [1972]). Die Herstellung der Nukleotide ist sehr umständlich und auch teuer.

Deswegen suchte die Forschung nach chemischen Struk-25 turen, die leicht in die Zelle eindringen und dort zu Nukleotiden umgesetzt werden.

Es ist bekannt, dass die durch Äthylalkohol verursachte Fettleber, für die die Anhäufung von Triglyceriden und ATP-Verringerung kennzeichnend sind, durch Verabrei-30 chung von Guanin, GTP oder ATP nicht normalisiert werden kann (Arch. Int. Pharmacodyn. 232, 302 [1978]). Durch intraperitoneale Applikation von Adenin (6-Aminopurin) können die Fettleber und die ATP-Verringerung zwar normalisiert werden, jedoch bildet das 6-Aminopurin unter an-35 derem die Metaboliten 8-Oxyadenin und 2,6-Dioxyadenin, die die Nierenfunktionen schwer schädigen (J. Pharm. Exp. Ther. 140,20 [1952]).

Die Applikation des Nukleotid-Präkursors Orotsäure führt ebenfalls zu Störungen des Lipidmetabolismus der Le-40 ber, zur Ausbildung einer Fettleber (J. Biol. Chem. 238,2464 [1963]). Diese Form der Fettleber kann, da sie von Äthionin ausgelöst ist, durch Applikation von Adenin (6-Aminopurin) normalisiert werden, jedoch ist für therapeutische Zwek-ke dieser Weg wegen der bereits erwähnten toxischen Wir-45 kung auf die Nieren nicht gangbar.

Der Purin-Präkursor 5-Amino-imidazol-4-carboxamid (AICA) (Science 112, 634 [1950], J. Biol. Chem. 196, 513 [1952]) wurde in Form seines mit Orotsäure gebildeten Salzes für therapeutische Zwecke eingesetzt (J. Med. Sei. 15, 50171 [1964]; Ann. Histochim. 14, 79 [1969]) unter dem Markennamen AicoratR.

Die Tatsache, dass AicoratR keinen therapeutischen Erfolg hatte, ist auf den einfachen Umstand zurückzuführen, dass die Orotsäure an sich als leberschädigend zu betrachten 55 ist (J. Biol. Chem. 238,2464 [1963]), d.h. das orotsäure Salz von AICA war eine Kombination, in der die positive Wirkung der einen Komponente durch die negative Wirkung der anderen ausgelöscht wurde.

Ziel der Erfindung war es, ein Imidazolcarboxamid-Deri-6C vat zu finden, das über die vorteilhaften Eigenschaften des Purin-Präkursors verfügt, jedoch frei von dessen (im Falle AicoratR erkannten) negativen Wirkungen ist.

In Exp. Path (15,271 -287 [1978]) wird über die günsti-65 gen Wirkungen des 5-Amino-imidazol-4-carboxamid-ortho-phosphates (im folgenden AICA-Phosphat) auf die experimentell mit Tetrachlorkohlenstoff geschädigte Leber berichtet.

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Es ist bekannt, dass aus 2-Amino-2-cyano-acetamid und Formamidin-orthophosphat AICA-Phosphat hergestellt werden kann (ungarische Patentschrift Nr. 164 397). Das auf die dort beschriebene Weise hergestellte rohe AICA-Phosphat ist für therapeutische Zwecke unbrauchbar.

Reines, für therapeutische Zwecke geeignetes, AICA-Phosphat wird hergestellt, indem man eine 50 Gew. % alkoholische Lösung von 5,4-aminoimid azol-5,4-carboxamid mit Orthophosphorsäure umsetzt. Gemäss diesem Verfahren wird hochreines AICA-Phosphat durch Umsetzen der AICA-Base mit Orthophosphorsäure in alkoholischem Medium hergestellt.

Es wurde nun gefunden, dass das auf die erwähnte Weise hergestellte AICA-Phosphat beziehungsweise seine mit Vitaminen, insbesondere mit Vitaminen B und E gebildeten Kombinationen, vorteilhaft zur Behandlung sowohl der alkoholischen Fettleber wie auch anderer, im Endergebnis zu dem unter der Bezeichnung Cirrhosis hepatitis bekannten Endzustand führender Krankheitsprozesse unterschiedlichen Ursprungs, zur Hemmung der pathologischen Progression dieser Prozesse verwendet werden können.

Das an sich verabreichte hochreine AICA-Phosphat hat folgende Eigenschaften:

1) In Untersuchungen zur akuten Toxizität löste es auch in höheren Dosen weder bei peroraler noch bei intravenöser Applikation toxische Symptome aus (LD50 an Nagetieren bei Applikation p.o. über 5000 mg/kg, i.v. über 1000 mg/ kg), d.h. das AICA-Phosphat ist eine atoxische Substanz. Über 6 Monate laufende Untersuchungen zur chronischen Toxizität an Nagetieren und anderen Testtieren ergaben,

dass auch die 15 — 30fache Menge der geplanten therapeutischen Dosis zu keinerlei toxischen Erscheinungen führte.

2) Bei der Untersuchung der allgemeinen pharmakody-namischen Wirkungen von AICA-Phosphat erwies sich, dass die Verbindung — die Leber ausgenommen — in der angewendeten klassischen pharmakologischen Einstellung auf sonstige Organe und Organsysteme kaum eine Wirkung ausübt; die Wirkung auf die Leber ist als organspezifisch zu betrachten.

3) Bei der Untersuchung der gerichteten pharmakodyna-mischen (leberspezifischen) Wirkung wurde festgestellt, dass das AICA-Phosphat über zahlreiche vorteilhafte Eigenschaften verfügt. Bei Untersuchungen mit radioaktiv markiertem AICA-Phosphat ist nachweisbar, dass mit dem zeitlichen Voranschreiten der Behandlung der Anteil des Leberserums ansteigt. Das radioaktiv markierte AICA-Phosphat kann in der RNS-Fraktion der Leberzellen nachgewiesen werden. Durch die Wirkung der Behandlung mit AICA-Phosphat wird die Eiweisssynthese in den Leberzellen intensiviert, die Menge des Glycogens steigt an. Im Falle von mit Äthionin experimentell hervorgerufener Leberschädigung wird durch AICA-Phosphat die Fettabnormität der Leber bedeutend vermindert (die durch Äthionin hervorgerufene Leberschädigung entspricht dem in der Humanpathologie als alkoholische Fettleber bezeichneten Krankheitsbild am besten (Trends in Pharmacological Sciences 82, vor. 3. N° 9, S. 365-367).

4) In Immunreaktionen steigt durch die Wirkung von AICA-Phosphat sowohl die Anzahl der aktiven E-Rosetten wie auch die Gesamtzahl der E-Rosetten an.

Die chronischen Leberkrankheiten sind im allgemeinen durch den Mangel an Phosphatanionen, genauer: durch die krankhafte Verringerung der intrazellularen Konzentration an Phosphatanionen gekennzeichnet. Dieser Phosphatmangel ist häufig die Folge akuten, aber noch häufiger die Folge chronischen Alkoholismus (Clin. Chim. Acta 78, 353 [1978]).

Die sonstigen Salze von AICA, zum Beispiel AICÀ-Hydrochlorid, AICA-Pyrophosphat und AICA-Orotat, erreichen an der experimentell geschädigten Leber die Wirkung des AICA-Phosphates nicht. Dies ist zum Teil darauf zurückzuführen, dass das mit dem AICA-Phosphat in den Organismus eingebrachte Phosphat an der Synthese des 5 ATP und des (beim Aufbau der Nukleotide aus Präkursern eine wichtige Funktion ausübenden) a — D-Ribofuranose-1-pyrophosphat-5-phosphates teilnimmt.

Unter Berücksichtigung der Grundwirkung des AICA-Phosphats bestand nun die Zielstellung darin, eine Kombi-10 nation auszuarbeiten, die neben der leberschützenden (die regenerativen Eigenschaften fördernden) Wirkung des Grundmoleküls zur symptomatischen und kausalen Behandlung der alkoholischen Fettleber geeignet ist.

Es wurde gefunden, dass die Wirkung des AICA-15 Phosphats hochgradig gesteigert werden kann, wenn es in Kombination mit Vitaminen, insbesondere Vitaminen B und E, angewendet wird.

Die Wirkung der Komponenten und der Kombination wurde an durch Äthionin ausgelöster Leberschädigung un-20 tersucht. Die Ergebnisse werden durch Angabe des Triglyce-ridgehaltes der Leber ausgedrückt. (Der Triglyceridgehalt wurde 2 Tage nach Verabreichung von 250 mg/kg Äthionin gemessen. Jeder Wert ist der Durchschnittswert von 10 Tieren.) Zu der Untersuchung wurden 200 g schwere CFY-25 Ratten männlichen Geschlechts verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 zusammengefasst.

Tabelle 1

30 Behandlung p.o.

Triglycerid- Verringerung gehalt der Leber (D) % mMol/g

35

40

Äthionin 250 mg/kg 0,042 Äthionin 250 mg/kg

-(-AICA-Phosphat 200 mg/kg 0,031 26

Äthionin 250 mg/kg

+ AICA-Phosphat 200 mg/kg

+ Vitamin Bi 0,1 mg/kg 0,022 47,7

Äthionin 250 mg/kg

+ AICA-Phosphat 200 mg/kg

+ Vitamin E 10 mg/kg 0,023 47,5

45 Aus der Tabelle ist klar ersichtlich, dass die verwendeten Vitamine die Wirkung des AICA-Phosphats bedeutend erhöhen.

Histologische Untersuchungen zeigen, dass sich durch 250 mg/kg Äthionin bereits 2 Tage nach der Verabreichung 5o eine diffuse Degeneration der Leber mit grossen Tropfen entwickelt, und am 5. Tag ist das histologische Bild von feinverteilten Fetttropfen bestimmt. Durch 200 mg/kg AICA-Phosphat p.o. wird die Verfettung der Leber vermindert, und diese Wirkung wird durch die Vitamine Bi und E verstärkt. Die Ergebnisse der histologischen Untersuchung sind

55

in der Tabelle 2 zusammengefasst.

Tabelle 2

Semiquantitative Bewertung der Leberverfettung auf der Basis der Oil-red-o Färbung, nach Vergiftung und unterschiedlichen Behandlungen

Vergiftung Behandlung semiquantitative Bewertung*

Äthionin

Äthionin AICA-Phosphat

2. Tag: 5. Tag: 2. Tag: 5. Tag:

+ + +

+ + (±)

+ + (±) + (±)

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4

Tabelle 2 (Fortsetzung)

Vergiftung Behandlung semiquantitative Bewertung*

Äthionin AICA-Phosphat 2. Tag:

+ Vitamin Bi 5. Tag:

Äthionin AICA-Phosphat 2. Tag:

+ Vitamin E 5. Tag:

Angewandte Dosen:

Äthionin 250 mg/kg p.o.

AICA-Phosphat 200 mg/kg p.o. Vitamin Bt 0,1 mg/kg p.o.

Vitamin E 10 mg/kg p.o.

* Durchschnitt von 5 Untersuchungen

Gegenstand der Erfindung ist demnach ein synergistisches Arzneimittelpräparat zur Behandlung von Leber-Krankheiten. Das Arzneimittelpräparat ist dadurch gekennzeichnet, dass es als Wirkstoff 5-Amino-imidazol-4-carbox-amid-orthophosphat mit einem Schmelzpunkt von 192 —194 °C und Vitamine, vorzugsweise Vitamine B und E, enthält.

Das erfindungsgemässe Präparat enthält vorzugsweise 20 — 60 Gew.-% 5-Amino-imidazol-4-carboxamid-ortho-phosphat (Smp. 192—194°C) und 0,01 —20 Gew.-% Vitamin. Das erfindungsgemässe Präparat wird vorzugsweise als peroral verabreichbare Zubereitung formuliert. Beispielhaft seinen Tabletten, Dragees, Kapseln genannt. Eine Formulierungseinheit (z.B. Tablette) enthält bevorzugt 100 bzw. 200 mg Wirkstoff.

Die Erfindung wird an Hand der folgenden Beispiele näher erläutert.

Beispiel 1

AICA-Phosphat 200 mg

Thiaminumchlorid (Vitamin Bi) 5 mg

Riboflavin (Vitamin B2) 5 mg

Pyridoxiniumchlorid (Vitamin Bg) 6 mg dl-a-Tokolferolacetat (Vitamin E) 4 mg

Talkum 20 mg

Lactose 50 mg

Stärke 50 mg

Stearin 8 mg

Luviscol (VA. 64) 8 mg mikrokristalline Cellulose (Avicel) 44 mg

400 mg

Dragierüberzug

Carbowax6000 1,0 mg

Titandioxyd 4,0 mg

Methylcellulose 6,8 mg

Luviscol (VA. 64) 6,8 mg

Talkum 21,4 mg

40 mg

Das AICA-Phosphat wird mit der Stärke und dem Milchzucker homogenisiert. Das Luviscol und das Stearin werden in Isopropanol gelöst, und mit der erhaltenen Lösung wird das Pulvergemisch granuliert. Das Granulat wird bei 40 — 50 C getrocknet und dann durch ein Sieb der Maschenweite von 16 mesh regranuliert. Dann werden das Homogenisat der Vitamine, die mikrokristalline Cellulose und das Talkum zugemischt. Das Granulat wird erneut getrocknet, bis sein Feuchtegehalt 1,5% erreicht. Aus dem Granulat werden in der üblichen Weise bikonvexe Drageekerne gepresst. Diese werden in einer Überdruckvorrichtung in der beim Filmdragieren üblichen Weise mit einem Überzug versehen.

Beispiel 2

AICA-Phosphat 200 mg

Nicotinamid 9 mg

Methionin 50 mg

Folsäure 1 mg

Luviscol (VA. 64) 4 mg

Stearin 4 mg

Lactose 108 mg

Stärke 12 mg

Gelatine 2 mg

400 mg

Schritt 1

Das Luviscol und das Stearin werden in Isopropanol gelöst, und mit der Lösung wird das AICA-Phosphat granu-20 liert. Das Granulat wird getrocknet und durch ein Sieb der Maschenweite 16 mesh regranuliert. Dann werden die übrigen unter Schritt 1 angegebenen Komponenten zugemischt.

Schritt 2

Die Gelatine wird in destilliertem Wasser vorgequellt und dann auf dem Wasserbad bei 70 °C gelöst. Mit der erhaltenen Lösung wird das Gemisch aus Milchzucker und Stärke angefeuchtet, durch ein Sieb der Maschenweite 16 mesh granuliert und das Granulat in einem Fliessbetttrock-30 ner bei 60 °C getrocknet.

Die in den Schritten 1 und 2 erhaltenen Granulate werden miteinander homogenisiert und auf übliche Weise zu bikonvexen Drageekernen verpresst. Diese werden auf die im Beispiel 1 angegebene Weise mit einem Überzug versehen.

Beispiel 3

Schritt 1 AICA-Phosphat 200 mg

Methionin 50 mg

40 Ornitin-asparginat 25 mg

Luviscol (VA. 64) 6 mg

Stearin 4 mg

Schritt 2 Lactose 100 mg

Stärke 10 mg

45 Gelatine 5 mg

400 mg

Die Dragees werden auf die im Beispiel 2 angegebene Weise hergestellt.

50

Beispiel 4

Herstellung von 5-Amino-imidazol-4-carboxamid-orthophosphat (AICA-Phosphat) in reinem Zustand 34,48 g von 4(5)-Amino-imidazol-5(4)-carboxamid-55 monohydrat (AICÀ) werden in 200 ml einer 50:50-Volumen Mischung aus Äthylalkohol und Wasser unter Rühren bei 45 bis 50 °C gelöst und die so hergestellte Lösung wird dann mit Aktiv-Kohlen behandelt. 27,7 g von 85% Orthophosphorsäure werden dann der bereinigten Lösung beigefügt. Die er-60 sten Kristalle bilden sich ungefähr 5 Minuten nach der Beifügung der Orthophosphorsäure. Die.Reaktionsmischung wird während 20 Minuten gerührt und anschliessend in einem Eisbad während 2 Stunden gekühlt. Die erhaltene Mischung wird dann abfiltriert, mit 30 ml trockenem Äthylal-65 kohol gewaschen und getrocknet. Es werden 51,2 g (Ausbeute 95%) farblose Kristalle erhalten; Schmelzpunkt 192 bis 194 °C.

+ + 5

4- Schritt 1

+ +

+

10

Schritt 2

s

Claims (5)

661 866 PATENTANSPRÜCHE

1. Synergistisches Arzneimittelpräparat zur Behandlung von Leberkrankheiten, dadurch gekennzeichnet, dass es als Wirkstoff 5-Amino-imidazol-4-carboxamid-orthophosphat mit einem Schmelzpunkt von 192 bis 194°C enthält.

2. Synergistisches Arzneimittelpräparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es 20 — 60 Gew.-% 5-Ami-no-imidazol-4-carboxamid-orthophosphat und 0,01 —20 Gew.-% Vitamin(e) enthält.

3. Synergistisches Arzneimittelpräparat nach Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass es als Vitamine Vitamine der B-Gruppe und/oder Vitamin E enthält.

4.

5-Amino-imidazol-4-carboxamid-orthophosphat mit einem Schmelzpunkt von 192 bis 194°C.