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PATENTANSPRÜCHE 1. Polypeptidderivate der Formel I
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worin Acyl für den Acylrest einer organischen oder anorganischen Säure Z für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, A für den am a-C-Atom befindlichen Rest einer natürlichen Aminosäure, wobei der Rest
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die L- oder D-Konfiguration haben kann, und falls A für
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steht, der Phenylring dieses Restes durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen und/oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiert sein kann, B für Phe oder im Phenylrest durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiertes Phe, C für gegebenenfalls im Benzolring durch F, C1, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiertes L- oder D-Trp,
wobei die a-Aminogruppe durch Methyl substituiert sein kann, D für Lys, wobei die a-Aminogruppe durch Methyl und/ oder die s-Aminogruppe durch Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen substituiert sein kann, E für den Rest einer natürlichen L-Aminosäure oder einer entsprechenden D-Aminosäure, wobei die a-Aminogruppe eine Methylgruppe tragen kann, F für COORI, CH2OR2, CO-NR3R4 oder
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Rl für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen R2 für Wasserstoff oder den Rest eines physiologisch annehmbaren, physiologisch hydrolysierbaren Esters R3 für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen, jedoch falls R4 für -CH(Rs)-X steht, nur für Wasserstoff oder Methyl R4 für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder
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Rs für den am a-C-Atom befindlichen Rest einer natürlichen Aminosäure,
inklusive Wasserstoff, oder für einen HO-CH2 CH2- oder HO(-CH2)3-Rest, wobei die Gruppe II die L- oder D-Konfiguration haben kann X für
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R6 für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen R7 für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen und Yi und Y2 beide für Wasserstoff oder zusammen für eine Bindung stehen, wobei die Reste in den Stellungen 2 und 7 in D- oder L-Form vorliegen können, mit der Massgabe, dass 1.) D- und/oder L-Cysteinreste nur in den Stellungen 2 und 7 vorliegen und 2.) Acyl weder für den Rest einer natürlichen Aminosäure oder einer entsprechenden D-Aminosäure, noch für einen durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituierten L- oder D-Phenylalaninrest stehen kann,
sowie die Säureadditionssalze und Komplexe dieser Polypeptidderivate.
2. Verfahren zur Herstellung der Polypeptidderivate gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man sämtliche Schutzgruppen, die in einer geschützten Verbindung mit der in Formel I angegebenen Sequenz vorhanden sind, entfernt.
3. Verfahren zur Herstellung der Polypeptidderivate gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man zwei Peptideinheiten, von denen jede mindestens eine Aminosäure oder einen Aminoalkohol in geschützter oder ungeschützter Form enthält und eine Peptideinheit den Acylrest enthält, durch eine Amidbindung miteinander verknüpft, wobei die Peptidbindung in der Weise erfolgen soll, dass die in der Formel I enthaltene Aminosäuresequenz hergestellt wird und allfällig vorhandene Schutzgruppen entfernt.
4. Verfahren zur Herstellung der Polypeptidderivate gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel I, worin Yi und Y2 für Wasserstoff stehen, zu einer Verbindung der Formel I, worin Yi und Y2 zusammen für eine Bindung stehen, oxidiert.
5. Pharmazeutische Präparate enthaltend mindestens eine Verbindung der Formel I gemäss Anspruch 1 oder ein Säureadditionssalz oder ein Komplex einer solchen Verbindung.
Gegenstand der Erfindung sind neue Polypeptidderivate der Formel I
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worin Acyl für den Acylrest einer organischen oder anorganischen Säure Z für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, A für den am a-C-Atom befindlichen Rest einer natürlichen Aminosäure, wobei der Rest
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die L- oder D-Konfiguration haben kann, und falls A für
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steht, der Phenylring dieses Restes durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen und/oder Alkoxy mit
1 bis 3 C-Atomen substituiert sein kann, B für Phe oder im Phenylrest durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiertes Phe, C für gegebenenfalls im Benzolring durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituiertes L- oder D-Trp, wobei die a-Aminogruppe durch Methyl substituiert sein kann, D für Lys, wobei die a-Aminogruppe durch Methyl und/ oder die s-Aminogruppe durch Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen substituiert sein kann, E für den Rest einer natürlichen L-Aminosäure oder einer entsprechenden D-Aminosäure,
wobei die a-Aminogruppe eine Methylgruppe tragen kann, F für COORI, CH2OR2, CO-NR3R4 oder
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Rl für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen R2 für Wasserstoff oder den Rest eines physiologisch annehmbaren, physiologisch hydrolysierbaren Esters R3 für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen, jedoch falls R4 für -CH(Rs)-X steht, nur für Wasserstoff oder Methyl R4 für Wasserstoff,
Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder
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R5 für den am a-C-Atom befindlichen Rest einer natürlichen Aminosäure (inklusive Wasserstoff) oder für einen HO-CH2 CH2- oder HO(-CH2)3-Rest, wobei die Gruppe II die L- oder D-Konfiguration haben kann X für COORx, CH2OR oder
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R6 für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen R7 für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen und Yi und Y2 beide für Wasserstoff oder zusammen für eine Bindung stehen, wobei die Reste in den Stellungen 2 und 7 in D- oder L-Form vorliegen können, mit der Massgabe,
dass 1.) D- und/oder L-Cysteinreste nur in den Stellungen 2 und 7 vorliegen und 2.) Acyl weder für den Rest einer natürlichen Aminosäure oder einer entsprechenden D-Aminosäure, noch für einen durch F, Cl, Br, NO2, NH2, OH, Alkyl mit 1 bis 3 C-Atomen oder Alkoxy mit 1 bis 3 C-Atomen substituierten L- oder D-Phenylalaninrest stehen kann, sowie die Säureadditionssalze und Komplexe dieser Polypeptidderivate und Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen.
In der Formel I sind unter Acyl besonders die Acylreste der organischen Carbonsäuren und Sulfonsäuren, der Sulfaminsäuren sowie der Kohlensäure und ihrer Derivate zu verstehen.
Als Beispiel für solche Acylreste können genannt werden:
1. RCD worin R für einen verzweigten oder unverzweigten, gesättigten oder ungesättigten, gegebenenfalls substituierten aliphatischen, cycloaliphatischen, aromatischen oder heterocyclischen Rest steht, besonders für Alkyl (gesättigte oder ungesättigt), mit 1 bis 30 C-Atomen, Phenyl, Naphthyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen,
2. R' SO2 worin R' für Alkyl mit 1 bis 10 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen steht,
3. R"OCO worin R" für Alkyl mit 1 bis 10 C-Atomen oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen steht
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worin R2XX für Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 10 C-Atomen, Phenyl oder Phenylalkyl mit 7 bis 10 C-Atomen und RlV für Wasserstoff oder Alkyl mit 1 bis 10 C-Atomen stehen.
A steht in der Formel I vorteilhaft für einen lipophilen Rest, besonders für die Benzylgruppe; die
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hat bevorzugt die D-Konfiguration.
B steht vorzugsweise für Phe C steht vorzugsweise für -(D)-Trp D steht vorzugsweise für Lys, MeLys oder Lys (g-Me), speziell für Lys E steht vorzugsweise für den Rest einer natürlichen Aminosäure, besonders für Thr F steht vorzugsweise für
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besonders für
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wobei der Rest -CH(Rs)-X vorzugsweise die L-Konfiguration hat R3 steht bevorzugt für Wasserstoff, Rs für CH20H,
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i-Butyl, CH2CH20H oder (CH2)3-OH, besonders für CH2OH oder
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X steht vorzugsweise für
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oder besonders für CH2OR2
R2 steht bevorzugt für Wasserstoff R2 als Rest eines Esters steht vorzugsweise für HCO, Alkyl carbonyl mit 2 bis 12 C-Atomen, Phenylalkylcarbonyl mit 8 bis 12 C-Atomen oder Benzoyl.
Die Reste in den Stellungen 2 und 7 haben vorzugsweise die L-Konfiguration.
Als Säureadditionssalze kommen solche mit organischen Säuren, polymeren Säuren oder anorganischen Säuren in
Frage. Unter Komplexen sind solche Verbindungen zu ver stehen, die beim Zusatz anorganischer Salze oder Hydroxide (z.B. Ca-, Zn-Salze) und oder beim Zusatz polymerer organischer Stoffe entstehen.
Die vorliegende Erfindung umfasst Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der obigen Formel. Sie können nach für die Synthese von Verbindungen dieser Art allgemein bekannten Methoden hergestellt werden.
Beispielsweise können die Verbindungen der obigen Formel hergestellt werden, indem man a) sämtliche Schutzgruppen, die in einer geschützten Verbindung mit der in Formel I angegebenen Sequenz vorhanden sind, entfernt, oder b) zwei Peptideinheiten, von denen jede mindestens eine Aminosäure oder einen Aminoalkohol in geschützter oder ungeschützter Form enthält und eine Peptideinheit den Acylrest enthält, durch eine Amidbindung miteinander verknüpft, wobei die Peptidbindung in der Weise erfolgen soll, dass die in der Formel I enthaltene Aminosäuresequenz hergestellt wird und allfällig vorhandene Schutzgruppen entfernt, oder c) eine Verbindung der Formel 1, worin Yi und Y2 für Wasserstoff stehen, zu einer Verbindung der Formel, worin YI und Y2 zusammen für eine Bindung stehen, oxidiert.
Es handelt sich hierbei um in der Peptidchemie an sich bekannte Methoden: sie können analog zu den in den nachstehenden Beispielen beschriebenen Verfahren ausgeführt werden.
Insofern die Herstellung der Ausgangsprodukte nicht besonders beschrieben wird, sind die Verbindungen bekannt oder können nach an sich bekannten Methoden hergestellt und gereinigt werden. Die am a-N-Atom acylierten Aminosäuren oder Peptide können z.B. durch Acylierung der am a-N-Atom nicht acylierten Aminosäuren oder Peptide mit an sich bekannten Acylierungsmitteln, wie z.B. reaktiven Säurederivaten, Isocyanaten usw. nach an sich bekannten Verfahren hergestellt werden.
Die Polypeptidderivate der Formel I und die physiologisch verträglichen Säureadditionssalze bzw. Komplexe dieser Verbindungen weisen im Tierversuch interessante pharmakodynamische Eigenschaften auf. Sie können daher als Heilmittel verwendet werden. Insbesondere bewirken sie eine Hemmung der GH-Sekretion. Sie finden deshalb Verwendung für alle Indikationen, bei welchen eine Hemmung der GH-Sekretion erwünscht ist. Im Vordergrund steht die Verwendung beim Diabetes mellitus und der Angiopathie sowie bei der Acromegalie.
Die Hemmung der GH-Sekretion kann wie folgt gezeigt werden: Verwendet werden männliche Ratten in Nembutalnarkose, 15 Minuten nach Verabreichung eines Peptides in mehreren logarithmisch gestaffelten Dosen an je mindestens 4 Tieren wird nach Dekapitation Blut entnommen. Die Bestimmung des GH-Spiegels in Serum erfolgt mittels Radioimmuno-assay. Bei diesen Versuchen werden die Polypeptide in Dosen von 0,01 bis 100 pg/kg iv. oder im. verabreicht.
Die Polypeptidderivate der Formel I sowie ihre physiologisch verträglichen Säureadditionssalze und Komplexe hemmen auch die Magen- und Pankreassekretion. Diese Hemmung kann in Tierversuchen z.B. mit den Methoden beschrieben in Triangle 16(2), 105 (1977) durch W. Doepfner und U. Brinerbzw. in Scand. J. Gastroint. 6, 423 (1971) durch S. J. Kouturek et al., nachgewiesen werden.
Die erfindungsgemässen Verbindungen können daher auch bei gastrointestinalen Erkrankungen wie Ulcera, gastrointestinalen Blutungen und akuter Pankreatitis Verwendung finden.
Ein besonderer Vorteil dieser Verbindung ist ihre länger anhaltende Wirkung.
Für die obigen Anwendungen hängt die zu verabreichende Dosis von der Verabreichungsart sowie der Behandlungsart ab. Zufriedenstellende Resultate erhält man bei der Verabreichung der Verbindung der Formel I in einer Dosis zwischen 0,03 und 300 Rg/kg.
Bei grösseren Säugetieren soll die Tagesdosis der Verbindung der Formel I zwischen 0,002 und 20 mg betragen. Diese Dosis kann nötigenfalls in 2 bis 4 Anteilen oder auch als Retardform verabreicht werden. So enthalten die Teildosen etwa 0,0005 bis 10 mg der Verbindung der Formeln neben festen oder flüssigen Trägersubstanzen. Die Erfindung betrifft auch pharmazeutische Präparate, die Verbindungen der Formel I enthalten. Diese Präparate, beispielsweise eine Lösung oder eine Tablette, können nach bekannten Methoden, unter Verwendung der üblichen Hilfs- und Trägerstoffe, hergestellt werden.
In den nachfolgenden Beispielen erfolgen alle Temperaturangaben in Celciusgraden. Die [a]00-Werte sind unkorrigiert.
Es werden folgende Abkürzungen verwendet: AcOH = Essigsäure BOC = tert. Butyloxycarbonyl BTFA = Bor-tris-trifluoracetat DCCI = Dicyclohexylcarbodiimid DMF = N,N-Dimethylformamid HOBT = N-Hydroxybenzotriazol MBzl = p-Methoxybenzyl Me = Methyl MeOH = Methanol NEt3 = Triäthylamin ONP = 4-Nitrophenoxy TFA = Trifluoressigsäure THF = Tetrahydrofuran Thr-ol = Threoninolrest Z = Benzyloxycarbonyl Zp = Zersetzungspunkt Beispiel
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Thr-ol
1,0 gr CH3-(CH2)16-CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp- Lys(Z)-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol und 7,1 ml Thioanisol werden in 15 ml Trifluoressigsäure bei 0 gelöst.
Man kühlt auf -10 , gibt 15 ml 2 m BTFA in TFA zu und rührt I l/2 Stunden bei -5" -: - 100. Anschliessend versetzt man unter Rühren mit 80 ml kaltem (-50"C) abs. MeOH. Nach 5 Minuten verrührt man mit 20 ml HCl/Äther(-Sn) in 3 lt abs. Äther. Ausgefallenes Produkt wird abfiltriert, mit Äther gewaschen, dann sofort in total 4 It Dioxan/H20 (7:3) gelöst. Man gibt 4 n NH40H zu bis zu einem pH von 7-7,5. Man rührt im offenen Gefäss bei Raumtemperatur bis zur negativen Probe auf - SH Gruppen (z.B. Ellmann-Test). Durch Zugabe von verdünntem HCI wird der pH auf 3-4 eingestellt. Die Lösung wird im Vakuum eingeengt, dann lyophilisiert.
Das Rohprodukt wird gereinigt durch Chromatographie an Kieselgel in einem Gemisch von Chloroform/Methanol/Eisessig/ Wasser. Fraktionen, die das gewünschte Produkt enthalten, werden vereinigt, im Vakuum nach Zugabe von H O eingeengt und lyophilisiert. Man erhält die Titelverbindung.
[a]o = -27" (c = 0,5 in 95% AcOH)
Das Ausgangsprodukt kann wie folgt hergestellt werden: a) BOC-Cys(MBzl)-Thr-ol
6,3 gr BOC-Cys(MBzl)-OH in 50 ml THF wird auf -20" abgekühlt und unter Rühren versetzt mit 2,1 ml N-Methylmorpholin, dann tropfenweise bei -15" mit 2,4 ml Chlor ameisensäureisobutylester. Nach 5 Minuten Rühren bei - 15 gibt man eine kalte Lösung (- 10 ) von 3,3 gr H-Thr-ol, Hydrochlorid und 4,1 ml N-Methylmorpholin in 30 ml DMF zu.
Man rührt 2 Stunden bei 0", dann 2 Stunden bei Raumtemperatur. Man gibt 50 ml 10% KHCO3-Lösung zu und engt das Reaktionsgemisch im Vakuum ein. Man verdünnt mit Essigester und wäscht 3 x mit 2n Citronensäure, 3 x mit 10% KHCO-Lösung, dann 30% NaC1-Lösung. Man trocknet die org. Phase über Na2SO4 und dampft im Vakuum ein.
Man erhält die Titelverbindung als Öl.
[a]D = -31"(c = 1,3 in DMF); b) H-Cys(MBzl)-Thr-ol, Trifluoracetat
Eine Lösung von 7,1 gr BOC-Cys(MBzl)-Thr-ol und 5 ml Thioanisol in 25 ml Methylenchlorid wird mit 50 ml TFA versetzt und 20 Minuten bei Raumtemperatur stehen gelassen.
Man verdünnt mit ca. 1,5 It Äther und filtriert ausgefallenes Produkt ab. Man wäscht mit Äther, trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]D = 8,3 (c = 1,1 in 95% AcOH); Smp. 152" c) BOC-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol
9,7 gr BOC-Thr-OH und 4,9 ml N-Methylmorpholin in 50 ml THF werden auf -25" abgekühlt und tropfenweise versetzt mit 5,9 ml Chlorameisensäure-isobutylester. Anschliessend rührt man 5 Minuten bei -15"C und gibt danach eine kalte Lösung (- 10 ) von 20 gr H-Cys(MBzl)-Thr-ol, Trifluoracetat und 9,8 ml N-Methylmorpholin in 50 ml THF zu. Man rührt ca. 2 Stunden bei 0 , dann 2 Stunden bei Raumtempe ratur.
Man gibt 20 ml 10% KHCO3 zu und engt das Reaktionsge misch im Vakuum ein. Man verdünnt mit Essigester und wäscht: 2n Zitronensäure, KHCO310%ig, zuletzt 30% NaCI
Lösung. Die Essigester-Phase wird über Na2SO4 getrocknet, dann im Vakum eingedampft.
Der Rückstand wird aus MeOH/Äther/Hexan kristallisiert. Man filtriert, wäscht mit Äther, trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]D = -23" (c = 1 in DMF); Smp. 117" d) H-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol, Trifluoracetat
Eine Lösung von 16 gr BOC-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol und
17 ml Thioanisol in 100 ml Methylenchlorid wird auf 0 abgekühlt und versetzt mit 150 ml TFA. Man lässt 20 Minuten bei
Raumtemperatur stehen und verrührt darauf mit Äther. Ausgefallenes Produkt wird abfiltriert, mit Äther gewaschen und getrocknet. Man erhält die Titelverbindung.
[al2D0 = + 0,6 (c = 1 95% AcOH); Smp. 72" e) BOC-(D)Trp-Lys(Z)-OMe
23,3 gr HCI. H-Lys(Z)-OMe werden in 300 ml DMF gelöst, versetzt mit 9,8 ml NEt3, 11,8 gr HOBT und 21,3 BOC (D)Trp-OH; darauf wird die Lösung auf - 15"C abgekühlt.
Man gibt 15,6 gr DCCI in 50 ml DMF zu und rührt ca. 16
Stunden bei 0 , dann 2 Stunden bei Raumtemperatur.
Man verdünnt das Reaktionsgemisch mit Essigester/Äther und filtriert Dicyclohexylharnstoff ab. Das Filtrat wird gewa schen: 2n Citronensäure, H2O, KHCO310%ig, dann NaCI
Lösung 30%. Die organische Phase wird über Na2SO4 getrocknet, dann im Vakuum stark eingeengt. Man kristalli siert durch Zugabe von Äther/Hexan. Man filtriert, wäscht mit Äther/Hexan-Gemisch, trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]20 = - 12,6 (c = 1 in DMF); Smp. 1400 f) H-(D)Trp-Lys(Z)-OMe, Hydrochlorid
30 gr BOC-(D)Trp-Lys(Z)-OMe in 150 ml Methylenchlorid wird auf 0 abgekühlt und mit 150 ml TFA versetzt.
Man lässt eine Stunde bei Raumtemperatur rühren und gibt dann das Reaktionsgemisch zu einem Gemisch von 30 ml HCl/Äther (¯in) in 4 It Äther. Man verrührt und filtriert ausgefallenes Produkt ab, wäscht den Rückstand mit Äther, trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]2D = -44" (c = 1 in 95% AcOH); Smp. 101" g) BOC-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-OMe
35 gr HCI. H-(d)Trp-Lys(Z)-OMe in 350 ml DMF werden versetzt mit 9,5 ml NEt3, 13 gr HOBT und 17 gr BOC Phe-OH. Die Lösung wird auf -20" abgekühlt und mit 14,5 gr DCCI in 50 ml DMF versetzt. Man rührt ca. 18 Stunden bei 0 , dann 1 Tag bei Raumtemperatur. Man filtriert ausgefallenen Dicyloharnstoff ab und engt darauf das Filtrat ein. Man verdünnt mit Methanol und gibt H20 zu bis das Produkt ausfällt. Man filtriert, wäscht den Rückstand mit einem Gemisch von MeOH/H20 (4:1) und trocknet. Man erhält die Titelverbindung.
[a]2D0 = + 1,1 (c = 1 in DMF) Smp = 180"C.
h) BOC-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-OH
16 gr BOC-Phe-(D)-Trp-Lys(Z)-OMe werden in 160 ml Dioxan-HzO (8:2) suspendiert und mit 26 ml 1 n NaOH ver setzt. Man rührt total l 11/2 Stunden bei Raumtemperatur. Die entstandene Lösung wird mit H20 auf ca. 500 ml verdünnt und im Vakuum eingeengt. Darauf wird mit ln HCI unter Rühren auf pH 1,5-2 eingestellt. Ausgefallenes Produkt wird abfiltriert und mit H20 neutral gewaschen. Man trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]2D = +7,6 (c = 1, DMF) Zp = 85-90 i) BOC-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol
9 gr H-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol, Trifluoracetat in 100 ml DMF werden versetzt mit 2,5 ml NEt3, 11,2 gr BOC-Phe (D)Trp-Lys(Z)-OH und 4 gr HOBT. Zu dieser Lösung gibt man bei 200 3,7 gr DCCI in 10 ml DMF. Man rührt ca. 18 Stunden bei 0 und 2 Stunden bei Raumtemperatur.
Ausgefallener Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und mit Methanol verdünnt. Man gibt unter Rühren H20 zu bis Produkt ausfällt.
Man filtriert, wäscht mit MeOH-H20 (4: 1), trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]20 = -140(c= 1, DMF) Smp. 135" j) H-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol, Hydrochlorid
13 gr BOC-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol werden in 60 ml TFA-H20-Gemisch (15:1) kalt gelöst, dann 30 Minuten bei Raumtemperatur stehen gelassen. Das Reaktionsgemisch wird in einem Gemisch von 3 It Äther + 20 ml HCI in Äther 5n verrührt. Ausgefallenes Produkt wird abfiltriert, mit Äther gewaschen und getrocknet. Man erhält die Titelverbindung.
[a]20 = -3" (c = 1 DMF) Zp 110 k) BOC-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH
4,83 gr H-Cys(MBzl)-OH wird in einem Gemisch von
100 ml Dioxan-HIO (7:3) und 20 ml NaOH In gelöst, dann mit 7,73 gr BOC-(D)Phe-ONP versetzt und ca. 20 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird mit H20 verdünnt und Dioxan im Vakuum entfernt. Die wässrige Phase wird mit Äther gewaschen, dann mit HCI auf pH 2 gestellt. Ausgefallenes Produkt wird mit einem Essigester/ Äther Gemisch extrahiert. Die organische Phase wird mit H20 gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, dann im Vakuum eingedampft. Man erhält die Titelverbindung als Schaum.
[a]D = -17 (c = 0,9 in DMF)
1) HCI. H-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH
5 gr BOC-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH werden in einem Gemisch von 80 ml TFA und 10 ml H20 gelöst und 3/4 Stunden bei Raumtemperatur stehen gelassen. Man verdünnt mit Äther und fällt das Produkt durch Zugabe von 20 ml Äther/HCl 5n. Man filtriert, wäscht mit Äther, trocknet und erhält die Titelverbindung.
[ai20 = -38,5" (c = 0,93 in 95% AcOH) Smp. = 189 m) CH3(CH2)16CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH
0,5 gr HCI. H-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH in 20 ml DMF wird versetzt mit 0,33 ml NEt3, 0,16 gr HOBT, dann 0,48 gr CH3(CH2)16CO-ONP. Man lässt ca. 6 Stunden bei Raumtemperatur rühren. Anschliessend wird das Reaktionsgemisch mit MeOH verdünnt, mit HCI auf pH -1,5 gestellt, dann unter Rühren mit H20 versetzt bis Produkt ausfällt. Man filtriert, wäscht mit einem Gemisch von MeOH-H2O (1:1), trocknet und erhält die Titelverbindung.
[cL]2o0 = - 130 (c = 0,4 in DMF); Smp. 138 n) CH3(CH2)i 6CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp- Lys(Z)-Thr-Cys(MBzl)Thr-ol
1,05 gr H-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol, Hydrochlorid; 0,61 gr CH3(CH2)16CO-(D)Phe- Cys(MBzl)-OH und 0,19 gr HOBT werden in 20 ml DMF gelöst und mit 0,14 ml NEt3 versetzt. Die Lösung wird auf -2 abgekühlt und mit 0,21 gr DCCI in 2 ml DMF versetzt.
Man rührt ca. 18 Stunden bei 0-4", dann 5 Stunden bei Raumtemperatur. Ausgefallener Dicylohexylharnstoff wird abfiltriert. Das Filtrat wird mit Methanol verdünnt und unter Rühren mit H20 versetzt bis Produkt ausfällt. Man filtriert, wäscht mit Methanol-H2O (4: 1), trocknet und erhält die Titelverbindung.
[a]20 = 17,20 (c = 1,DMF);Smp.208
Auf analoge Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, wurden aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen folgende Polypeptide hergestellt: Beispiel 2
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[a]2D0 = -42,8" (c = 0,5 in 95% AcOH)
Zwischenprodukte a) CH3-CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH [a]2D0 = 22,7 (c = 1 DMF) Smp.:
94 b) CH3-CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp-Lys(Z)-Thr- Cys(MBzl)-Thr-ol [oi2D0 = 28,40 (c = 1, DMF) Zp.: 1800
Beispiel 3
EMI5.2
[α]D20 = -36 (c = 1,1;95% AcOH)
Zwischenprodukte a) CH3-(CH2)7-CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-OH [a]2C = -28 (c = 1,1, DMF); Smp. 136 b) CH3(CH2)7-CO-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp-Lys(Z)- Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol [afD0 = 21 (c = 1, DMF);
Smp. 190
Beispiel 4
EMI5.3
[α]D20= -33o (c = 1,0 in 95% AcOH) Zwischenprodukte
EMI5.4
[α]D20 = -2,4o (c = l,0inDMF)Smp. 165
EMI5.5
Cys(MBzl)-Thr-ol [a]7D0 = -9,6 (c= 1,0inDMF)Smp. 1800