CA2435942A1

CA2435942A1 - Utilisation d'un isothiocyanate, d'un thiocyanate ou de leur melange en tant que depigmentant

Info

Publication number: CA2435942A1
Application number: CA002435942A
Authority: CA
Inventors: Daniel Jean
Original assignee: Individual
Current assignee: LMD SAS
Priority date: 2001-01-26
Filing date: 2002-01-24
Publication date: 2002-08-01
Also published as: FR2820036A1; SK9612003A3; HUP0303018A2; JP2004520371A; MXPA03006731A; CZ20032012A3; US20040077715A1; EP1353644A1; FR2820036B1; KR20030086256A; WO2002058664A1; PL364826A1

Abstract

La présente invention concerne l'utilisation d'un isothiocyanate de formule générale I suivante : R1-N=C=S dans laquelle R1 représente un groupe alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, acétyle, alkylcarbonyle, alcoxy, cycloalkyle, aryloxy, arylcarbonyle, acide carboxylique, ester carboxylique ou un groupe -(CH2)nR3 dans lequel n représente un nombre entier allant de 1 à 5 et R3 représente un groupe fonctionnel polaire, avantageusement un atome d'halogène, un groupe sulfoxyde, carbonyle, nitro, thioester, thioéther, sulfonyle, sulfinyle, nitrile, acide carboxylique, ester carboxylique, alkylthio ou hydroxyde, d'un thiocyanate de formule générale II suivante : R2-S=C=N dans laquelle R2 représente un groupe alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, acétyle, alkylcarbonyle, alkoxy, cycloalkyle, aryloxy, arylcarbonyle, acide carboxylique, ester carboxylique ou un groupe -(CH2)nR3 dans lequel n représente un nombre entier allant de 1 à 5 et R3 représente un groupe fonctionnel polaire, avantageusement un atome d'halogène, un groupe sulfoxyde, carbonyle, nitro, thioester, thioéther, sulfonyle, sulfinyle, nitrile, acide carboxylique, ester carboxylique, alkylthio ou hydroxyle, ou de leur mélanges pour la fabrication d'un médicament ou d'une composition cosmétique destinée à
inhiber la tyrosinase.

Description

Utilisation d'un isothiocyanate, d'un thiocyanate ou de leur mélange en tant que dépigmentant La présente invention concerne les dépigmentants et en particulier l'utilisation d'isothiocyanates ôu de thiocyanates en tant que dépigmentant.
La pigmentation de la peau chez les humains provient d'une série complexe de processus cellulaires qui s'effectue dans une unique population de cellules appelées mélanocytes. Les mélanocytes sont situés dans la partie inférieure de l'épiderme, et leur fonction est de synthétiser un pigment brun, la mélanine, qui protège le corps des effets dommageables des radiations ultra violettes. La mélanine est déposée dans les mélanosomes, vésicules présentes à
l'intérieur des mélanocytes. Les mélanosomes sont expulsés des mélanocytes et véhiculés vers la surface de la peau par les kératinocytes, qui assimilent la mélanine contenue dans les mélanosomes. La teinte foncée de la peau est proportioimelle à la quantité de mélanine synthétisée par les mélanocytes et transférée aux kératinocytes. Dans certains cas, il est préférable de réduire ou d'inhiber la mélanogénèse, par exemple, pour éclaircir la peau, pour éliminer les taches de vieillesse ou pour réduire l'hyperactivité des mélanocytes.
Pendant longtemps, les compositions cosmétiques contenant un péroxyde tel que le péroxyde d'hydrogène ou le péroxyde de zinc ont été utilisées dans le but d'enlever les taches, telles que les taches de rousseur, qui apparaissent sur la peau. Toutefois, les péroxydes sont extrêmement instables et, en conséquence, leur stockage est problématique. De plus, l'incorporation stable de ces peroxydes dans des bases cosmétiques est difficile et les péroxydes eux-mêmes n'ont pas un effet suffisamment blanchissant.
D'un autre côté, des préparations cosmétiques comprenant de la vitamine C, de la cistéine ou du soufre colloïdal ont commencé à être utilisées dans le but de blanchir la peau. Toutefois, les effets de ces substances ne sont pas satisfaisants.
Pendant longtemps, l'hydroquinone a été la molécule dépigmentante de référence et employée dans de nombreuses préparations de dermo-cosmétique.

2 Toutefois, ce produit n'est pas sans danger et présente une cytotoxicité
importante pour les mélanocytes susceptibles de provoquer des dépigmentations irréversibles.
Récemment, l'acide kojique a été utilisé efficacement en tant que substance inhibant la formation de la mélanine dans la peau humaine. En conséquence, différentes préparations cosmétiques destinées à dépigmenter la peau et contenant de l'acide kojique (publication de brevet japonais n°56-18569) ou un ester de l'acide kojique avec un acide carboxylique aromatique telle que l'acide cinnamique ou l'acide benzoïque (publication de brevet japonais N°
60/100005) ou des diester de l'acide lcojique (publications des brevets japonais N°61-60801 et 60-17961) ont été décrites. Ces acides kojiques et esters d'acide lcojique sont donc connus comme étant des substances capables d'inhiber la mélanogénèse. Toutefois, l'acide kojique présente une efficacité variable selon les individus et en moyenne insuffisante.
En conséquence, la recherche d'autres produits dépigmentants est toujours d' actualité.
De façon surprenante, les déposants ont découvert que certaines molécules appartenant à la famille des thiocyanates et des isothiocyanates avaient un effet inhibiteur très net sur la tyrosinase in vitro.
Les isothiocyanates peuvent être extraites de différentes crucifères, dont le brocoli, Lepidium dabra et les radis, comme le sulforaphane et le sulforaphène.
Le sulforaphane et certains de ses analogues de synthèse sont connus comme protecteur contre l'effet mutagène de substances chimiques comme celles contenues dans la fumée de tabac par exemple. Cet effet passe par l'induction de systèmes enzymatiques impliqués dans l'évacuation des molécules mutagènes hors de l'organisme. Il semblerait également que ces molécules agissent aussi directement sur le mécanisme de la mutagenèse (W0 94/19948, CaYCinogenesis, 8, 12, 1987, pages 1971-1973 ; Catacef° Research, 51, 13, 1991, pages 2068).
Toutefois, l'action de ces substances en tant que dépigmentant n'a jamais été décrite.
La présente invention concerne donc l'utilisation d'un isothiocyanate de formule générale I suivante

3 Rl-N=C=S
I
dans laquelle Rl représente un groupe alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, acétyle, alkylcarbonyle, alkoxy, cycloallcyle, aryloxy, arylcarbonyle, acide carboxylique, ester carboxylique ou un groupe -(CH2)"R3 dans lequel n représente un nombre entier allant de 1 à 5 et R3 représente un groupe fonctionnel polaire, avantageusement un atome d'halogène, un groupe sulfoxyde, carbonyle, nitro, thioester, thioéther, sulfonyle, sulfmyle, nitrile, acide carboxylique, ester carboxylique, alkylthio ou hydroxyle, d'un thiocyanate de formule générale II suivante Ra-S=C=N

dans laquelle RZ représente un groupe alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, acétyle, alkylcarbonyle, alkoxy, cycloalkyle, aryloxy, arylcarbonyle, acide carboxylique, ester carboxylique ou un groupe -(CHZ)"R3 dans lequel n représente un nombre entier allant de 1 à 5 et R3 représente un groupe fonctionnel polaire, avantageusement un atome d'halogène, un groupe sulfoxyde, carbonyle, nitro, thioester, thioéther, sulfonyle, sulfinyle, nitrite, acide carboxylique, ester carboxylique, alkylthio ou hydroxyle, ou de leur mélanges pour la fabrication d'un médicament ou d'une composition cosmétique destinée à inhiber la tyrosinase.
Par le terme « groupe alkyle », on entend au sens de la présente invention tout groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbones, linéaire ou ramifié substitué
ou non, en particulier, le groupe CH3.
Par le terme « groupe alcényle », on entend au sens de la présente invention tout groupe alcényle de 2 à 10 atomes de carbones, linéaire ou ramifié, substitué ou non, en particulier, le groupe vinyle.
Par le terme « groupe alcynyle», on entend au sens de la présente invention tout groupe alcynyle de 2 à 10 atomes de carbones, linéaire ou ramifié, substitué
ou non, en particulier, le groupe éthynyle.

4 PCT/FR02/00288 Par le terme « groupe alkylcarbonyle», on entend au sens de la présente invention tout groupe alkyle tel que défini ci-dessus lié par l'intermédiaire d'un groupe carbonyle. Un exemple de groupe alkylcarbonyle est le groupe acétyle.
Par le terme « groupe allcoxy », on entend au sens de la présente invention tout groupe alkoxy de 1 à 10 atomes de carbones, linéaire ou ramifié substitué
ou non, en particulier, le groupe OCH3.
Par le terme « groupe cycloalkyle », on entend au sens de la présente invention tout cycle composé de groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbones, substitué ou non, en particulier, le groupe cyclohéxyle.
Par le terme « groupe aryle », on entend au sens de la présente invention un ou plusieurs cycles aromatiques ayant 5 à 8 atomes de carbones, pouvant être accolés ou fusionnés, substitués ou non. En particulier, les groupes aryles peuvent être des groupes phényle ou naphthyle et les substituants des atomes d'halogène, des groupes alkoxy tels que définis ci-dessus, des groupes alkyle tels que définis ci-dessus ou le groupe nitro.
Par le terme « groupe aryloxy », on entend au sens de la présente invention tout groupe aryle tel que défini ci-dessus, lié par l'intermédiaire d'un groupe alkoxy tel que défini ci-dessus.
Par le terme « groupe aralkyle », on entend au sens de la présente invention tout groupe aryle tel que défini ci-dessus, lié par l'intermédiaire d'un groupe alkyle tel que défini ci-dessus. En particulier un groupe aralkyle est un groupe benzyle.
Par le terme « groupe arylcarbonyle», on entend au sens de la présente invention tout groupe aryle tel que défini ci-dessus, lié par l'intermédiaire d'un groupe carbonyle. Un exemple de groupe arylcarbonyle est le groupe benzoyle.
Par le terme « acide carboxylique », on entend au sens de la présente invention tout groupe allcyle tel que défini ci-dessus auquel est lié un groupe carboxy (-COOH).
Par le terme « groupe sulfonyle», on entend au sens de la présente invention tout groupe alkyle, cycloalkyle ou aryle tels que définis ci-dessus, lié
par l'intermédiaire d'un groupe 502.

Par le terme « groupe sulfinyle», on entend au sens de la présente invention tout groupe alkyle, cycloalkyle ou aryle tels que définis ci-dessus, lié
par l'intermédiaire d'un groupe SO.
Par le terme « groupe alkylthio», on entend au sens de la présente

5 invention tout groupe alkyle tels que définis ci-dessus lié par l'intermédiaire d'un atome de soufre.
La présente invention concerne également l'utilisation d'un isothiocyanate de formule générale I, d'un thiocyanate de formule générale II ou de leur mélanges pour la fabrication d'un médicament ou d'une composition cosmétique destinée à éclaircir ou dépigmenter l' épiderme ou à éliminer les taches de vieillesse.
Avantageusement le thiocyanate est un thiocyanate de formule générale II
dans laquelle RZ représente le groupe aralkyle, de façon encore plus avantageuse, il s'agit du benzylthiocyanate.
Avantageusement le thiocyanate de formule générale II est sous la forme d'un sel, de façon encore plus avantageuse de sodium ou de potassium.
Les thiocyanates peuvent être obtenus parallèlement aux isothiocyanates lors de la dégradation des glucosinolates des crucifères par la myrosinase (Pharmacognosie, Phytochimie, Plantes Médicinales, Bruneton, ed . Lavoisier, Paris, 1993, p. 177). Certains sont de synthèse et disponibles commercialement comme le benzylthiocyanate, chez la société Fluka (réf. 13929).
Dans un mode de réalisation particulier, l'isothiocyanate de formule générale I est un isothiocyanate de synthèse, en particulier dans lequel Rl représente un groupe, aryle, acétyle, alkylcarbonyle, cycloalkyle, arylcarbonyle ou arylalkyle. Avantageusement l'isothiocyanate est choisi dans le groupe constitué
par le cyclohéxylisothiocyanate, le benzylisothiocyanate, l'acétylisothiocyanate et le benzoylisothiocyanate.
Les isothiocyanates de synthèse sont disponibles commercialement. Ainsi le cyclohéxylisothiocyanate, le benzylisothiocyanate et le benzoylisothiocyanate sont disponibles auprès de la société Aldrich (ref.ClO-540-6 ; 25,249-2 et 26,165-3 respectivement) et l'acétylisothiocyanate auprès de la société Fluka (re~
01230).

6 Les autres isothiocyanates peuvent être synthétisés suivant la méthode et les exemples indiqués dans le brevet US 5,411,986.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'isothiocyanate de formule générale I est obtenu par extraction d'une crucifère, avantageusement choisi dans le groupe constitué du brocoli, du Lépidium dabra et du radis. De façon encore plus avantageuse il est choisi dans le groupe constitué par le sulforaphane ou le sulforaphène.
En particulier, le procédé d'extraction des crucifères comprend les étapes suivantes - Traitement de la crucifère, avantageusement lyophilisée, par un solvant miscible à l'eau ou un mélange eau-solvant, avantageusement de l'acëtone, - Concentration de la solution obtenue, avantageusement sous pression réduite, - Filtration du produit obtenu, - Traitement avec du nitrate d'argent à 0°C, - Filtration du précipité complexe argentique ainsi formé, - Déplacement de ce complexe par le thiosulfate de sodium, - Extraction de la suspension obtenue avec un solvant organique non miscible à l'eau, avantageusement choisi dans le groupe constitué par le chloroforme, l'éther, l'acétate d'éthyle ou leur mélange, de façon encore plus avantageuse un mélange éther éthylique-chloroforme, - Séchage de la phase organique, - Eventuellement purification du produit obtenu, en particulier par chromatographie sur plaque.
Les exemples suivant de préparation du sulphoraphane et sulphoraphène par extraction de crucifères sont donnés à titre indicatif non limitatif.
Exemule 1 :Préparation du sulforaphane On traite 90 g de brocoli lyophilisé (Brassica oleracea italica) par trois décoctions à reflux dans de l'acétone à 75 %.

7 Les solutions extractives sont réunies et concentrées sous pression réduite jusqu'à 100 g. On filtre sur papier. Le filtrat est placé à 0°C et on ajoute 100 ml d'une solution aqueuse à 60 % de nitrate d'argent. On le filtre le précipité
sur verre fritté et on rince par trois fois 100 ml d'eau distillée. On traite ensuite le précipité par 100 ml d'une solution aqueuse à 60 % de thiosulfate de sodium et on laisse agir à 0°C en agitant pendant deux heures.
La suspension obtenue est ensuite extraite dans une ampoule à décanter par six fois 50 ml d'un mélange éther éthylique-chloroforme (8/2 v/v). La phase organique est séchée sur sulfate de sodium puis évaporée sous pression réduite.
On obtient 32 mg de sulforaphane brut. On dépose le résidu sur une plaque de chromatographie préparative de gel de silice et on élue par un mélange d'isopropanol et de méthanol (7/3 v /v).
La plaque est révélée par du nitrate d'argent ammoniacal sur une petite partie afin de déterminer la zone de migration du sulforaphane. On gratte cette zone et on extrait le sulforaphane de la silice par du chloroforme. On évapore le chloroforme et on obtient 9 mg de sulforaphane. Le sulforaphane est identifié par chromatographie en phase gazeuse couplée à un spectromètre de masse.
Exemple 2 : préparation du sulforaphène On opère de la même façon que sur le brocoli mais en utilisant des graines de radis (raphanus sativus).
On obtient 7 mg de sulforaphène après purification par chromatographie sur plaque.
Exemple 3 : synthèse du (D,L)-sulforaphane On dissout 40 g de 4-chlorobutyronitrile (réf. Aldrich C 3,000-0) dans 800 ml d'alcool éthylique absolu préalablement distillé sur sodium.
On ajoute ensuite 27 g de méthane thioate (réf. Fluka 71742) et on laisse sous agitation à 25°C pendant 15 heures. La suspension est filtrée sur papier et évaporée sous pression réduite. On reprend par 400 ml d'éther éthylique. On filtre

8 à nouveau sur papier. On obtient une solution éthérée contenant 32 g de 4-méthylthiobutyronitrile brut.
On prépare une suspension de 25 g d'hydrure de lithimn-alumïnium dans 400 ml d' éther éthylique.
On ajoute progressivement la solution de 4-méthylthiobutyronitrile à la suspension d'hydrure de lithium-aluminium, puis on porte à reflux pendant 2 h 30.
La suspension est ensuite neutralisée en ajoutant lentement et sous reflux 80 ml d'eau distillée. Quand l'ébullition cesse, on ajoute ensuite 120 ml d'eau distillée pour achever la neutralisation de l'hydrure restant. On filtre sur verre fritté.
L'insoluble est lavé sur le filtre par 200 ml d'éther éthylique. Les fractions éthérées sont réunies et évaporées à sec. On obtient 26,9 g de méthylthiobutylamine. On reprend le produit obtenu par 80 ml d'acétone à
laquelle on ajoute petit à petit 23 ml de peroxyde d'hydrogéne à 35 %. On place une nuit au bain-marie à 50°C.
On ajoute ensuite un peu de charbon actif, on filtre et on ajoute lentement 200 ml de chloroforme contenant 20 ml de thiophosgène, puis 300 ml d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium à 5 %. On laisse agir 30 min.
On extrait ensuite le mélange à contre-courant par 8 fois 200 ml de dichlorométhane. La phase organique est recueillie, séchées sur sulfate de sodium et évaporée.
Le résidu est ensuite rectifié à 135 °C sous 7.10-Z Torr. On obtient 12,5 g de D,L-sulforaphane dont l'identité est vérifiée par spectrométrie de masse.
Les exemples suivant de mesure du pouvoir inhibiteur de la tyrosinase sont donnés à titre indicatif non limitatif.
Mesure du pouvoir inhibiteur de la tyrosinase On utilise Ia réaction suivante : la L Dopa (L-3,4-dihydroxyphenylalanine, obtenue chez la société Sigma (ref D-9628)) incolore est oxydée en dopachrome colorée absorbant à 475 nm. Cette réaction est catalysée par de la tyrosinase

9 fongique (EC 1.14.18.1, obtenue chez la société Sigma (réf T-7755)). La cinëtique de la réaction est enregistrée par la mesure de la densité optique (DØ) en fonction du temps à 30° C.
Les compositions des différentes solutions utilisées sont les suivantes Tampon nH 6,5 Phosphate monopotassique 0,70 g Phosphate disodique 0,69 g Eau distillée q.s .100 ml IO
Solution de substrat L Dopa à 0,35 % (p/v) dans la solution tampon pH 6,5 Solutions d'inhibiteurs Les molécules inhibitrices sont dissoutes directement dans le tampon pH 6,5, dans le méthanol à 50 % (méthanol-eau distillée) ou dans le méthanol pur selon leur solubilité.
Les concentrations en poids par volume des différentes solutions d'inhibiteurs sont : 0,2 %, 0,1 %, 0,05 %, 0,025 %, 0,0125 %, 0,00625 % et 0,00312 %.
Solution d'enz, rne Tyrosinase à 0,010 % (p / v) dans la solution tampon pH 6,5.
Les quantités de ces différentes solutions utilisées lors des essais sont présentées dans les tableaux 1 et 2 pour chaque réaction étudiée Tableau 1 :Réaction enzyme-substrat Blanc Essai Tampon 1,8 ml 1,3 ml Substrat 1 ml 1 ml Enzyme 0 ml 0,5 ml Solvant de l'inhibiteur0,2 ml 0,2 ml Inhibiteur 0 ml 0 ml Tableau 2 :Réaction enzyme-substrat-inhibiteur Blanc Essai Tampon 1,8 ml 1,3 ml Substrat 1 ml 1 ml Enzyme 0 ml 0,5 ml Solvant de l'inhibiteur0,2 ml 0 ml Inhibiteur diffrentes0 ml 0,2 ml concentration L'action de la tyrosinase est évaluée par la vitesse initiale de la réaction mesurée sur les enregistrement de D.O.
On porte sur une courbe les vitesses initiales des réactions sans inhibiteurs

10 (concentration 0) et les vitesses aux diverses concentrations testées.
Le pouvoir inhibiteur d'une molécule est défini comme la concentration qui réduit de 50 % l'action de la tyrosinase.
Les molécules testées en tant qu'inhibiteur ont été acquises auprès des sociétés Aldrich ou Fluka selon les produits, à l'exception du sulforaphane et du sulforaphène préparés de la façon indiquée dans les exemple 1 et 2.

11 Les résultats obtenus sur les molécules testées sont rassemblés dans le tableau suivant Molcule Concentration inhibant 50 l'activit enzymatique de la tyrosinase en % (poids/volume) Hydroquinone (Aldrich ref.24,012-5)0,154 (molcule de rfrence) Cyclohexylisothiocyanate 0,104 (Aldrich ref.ClO-540-6) Benzylisothiocyanate 0,0980 (Aldrich ref. 25,249-2) Sulforaphane 0,103 Sulforaphne 0,112 Actylisothiocyanate (Fluka ref. 0,055 01230) Benzoylisothiocyanate 0,0063 (Aldrich ref.26,165-3) Thiocyanate de Potassium 0,20 Benzylthiocyanate (Fluka rf 13929)0,25 Le sulforaphane inhibe la tyrosinase environ 1,5 fois plus que l'hydroquinone.
On constate donc que tous les isothiocyanates utilisés dans le tableau sont supérieurs à l'hydroquinone et que le plus actif d'entre eux, le benzoylisothiocyanate est environ 24 fois plus actif que l'hydroquinone.
Les thiocyanates ont quant à eux une activité analogue à celle de l'hydroquinone.
Essai du pouvoir dépi~mentant du benzoylisothiocyanate et du sulforaphane comparativement à l'acide koligue et à l'hydroauinone chez le cobaye pigmenté.
Des cobayes à peau pigmentée préalablement tondus, ont reçu deux fois par jour, 5 jours sur 7, des applications de crème à base de glycérine contenant 5%
d'acide

12 kojique (réf.Aldrich 22,046-9) ou 5% d'hydroquinone (réf.Aldrich H 1,790-2) ou 5% de benzoylisothiocyanate (réf. Aldrich 30,818-8) ou 5% de sulforaphane de synthèse préparé selon l'exemple 3 au cours de 1 à 2 mois de traitement. Ces applications ont été réalisées sur des zones circulaires de 2 cm de diamètre repérées par marquage indélébile à l'encre jaune.
Après 4 semaines de traitement et après une période de desquamation de la peau au niveau des spots hydroquinone et benzoylisothiocyanate, on note un blanchiment important de la peau pour tous les produits sauf pour l'acide kojique qui n'a aucun effet.
Essai du pouvoir d'inhibition de la synthèse de la mélanine sur des mélanocytes en culture par le sulforaphane comparativement à l'acide ko'lique L'hydroquinone ne peut pas être utilisée comme produit de référence dans ce test à cause de sa trop grande cytotoxicité. Ces tests ont été réalisés sur des lots de cellules différents au cours d'expériences indépendantes et répétées (8 fois).
La synthèse de mélanine en cinétique ou après 6 jours de traitement (une fois par jour) a été testée ; la viabilité des cellules est vérifiée en MTT et/ou en coloration au cristal violet .
Les résultats sont exprimés en mg/ml de mélanine dans la mesure où les cellules sont ensemencées à la même concentration.
A la concentration de 0,00035 %, l'hydroquinone et le sulforaphane inhibent la synthèse de mélanine alors que l'acide kojique et le benzoylisothiocyanate n'ont plus d' effet. Sur l' ensemble des tests (8 tests indépendants), nous avons obtenu à
la concentration de 0,00035 % pour tous les produits 26,22 % d'inhibition pour le sulforaphane, 1 % pour l'acide kojique, 9,5 %
pour le benzoylisothiocyanate et 42 % pour l'hydroquinone.

13 Essai du pouvoir d'inhibition de la synthèse de mélanine sur des peaux humaines pimentées reconstituée en culture Des épidermes pigmentés type 6 (correspondant à de la peau noire), à raison de trois échantillons par test ont été traités quotidiennement pendant 5 jours avec une crème témoin de composition (en % en poids) suivante alcool ctostarylique 7 sulfate ctostarylique de sodium 0,7 acide starique 3 glycrine 20 mlange de nipa esters dans du phnoxythanol0,5 trithanolamine 0,2 eau distille 68 de l'acide kojique à une concentration de 3,5.10-5 (p/p) et du sulforaphane à
une concentration de 3,5.10-6 (p/p) dans la même crème servant d'excipient.
A la fin du traitement, on laisse les peaux en culture pendant encore deux jours et on procède à l'extraction de la mélanine à partir des peaux traitées et des peaux témoins par un mélange de solvants et d'hydroxyde de sodium (Solvable ~ de Packa>"d Biosciezzce B. Y.) et on quantifie la mélanine extraite par colorimétrie selon une méthode décrite précédemment (Clzezrzical Characterizatiozz of Hair Melazzins izz hariozzs Coat-Color Mutants of Mice ; Hiroyuki Ozeki et al., J.
Invest. Derzzzatol.105, 3,1995, 361-36~.
On constate que l'acide kojique inhibe la synthèse de la mélatonine de 8 % et le sulforaphane de 30 % bien que sa concentration soit dix fois inférieure à
celle de l'acide kojique.

Claims

REVENDICATIONS

1. Utilisation d'un isothiocyanate de formule générale I suivante :
R1-N=C=S
I
dans laquelle R1 représente un groupe alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, acétyle, alkylcarbonyle, alkoxy, cycloalkyle, aryloxy, arylcarbonyle, acide carboxylique, ester carboxylique ou un groupe -(CH2)n R3 dans lequel n représente un nombre entier allant de 1 à 5 et R3 représente un groupe fonctionnel polaire, avantageusement un atome d'halogène, un groupe sulfoxyde, carbonyle, nitro, thioester, thioéther, sulfonyle, sulfinyle, nitrile, acide carboxylique, ester carboxylique, alkylthio ou hydroxyle, d'un thiocyanate de formule générale II suivante R2-S=C N
II
dans laquelle R2 représente un groupe alkyle, alcényle, alcynyle, aryle, acétyle, alkylcarbonyle, alkoxy, cycloalkyle, aryloxy, arylcarbonyle, acide carboxylique, ester carboxylique ou un groupe -(CH2)n R3 dans lequel n représente un nombre entier allant de 1 à 5 et R3 représente un groupe fonctionnel polaire, avantageusement un atome d'halogène, un groupe sulfoxyde, carbonyle, nitro, thioester, thioéther, sulfonyle, sulfinyle, nitrile, acide carboxylique, ester carboxylique, alkylthio ou hydroxyle, ou de leur mélanges pour la fabrication d'un médicament ou d'une composition cosmétique destinée à inhiber la tyrosinase

2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le thiocyanate de formule générale II est sous la forme d'un sel, avantageusement de sodium ou de potassium.

3. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'isothiocyanate de formule générale I est obtenu par extraction d'une crucifère, avantageusement choisi dans le groupe constitué du brocoli, du Lépidium dabra et du radis.

4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que l'isothiocyanate est choisi dans le groupe constitué par le sulforaphane ou le sulforaphène.

5. Utilisation selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'isothiocyanate de formule générale I est un isothiocyanate de synthèse choisi dans le groupe constitué par le cyclohéxylisothiocyanate, le benzylisothiocyanate, l'acétylisothiocyanate et le benzoylisothiocyanate.

6. Utilisation selon l'une des revendications précédentes pour la fabrication d'un médicament ou d'une composition cosmétique destinée à
éclaircir ou dépigmenter l'épiderme ou à éliminer les taches de vieillesse.