BRPI1013836B1 - cepa bacteriana de mycoplasma bovis atenuada, avirulenta, método para atenuação de mycoplasma bovis, composição imunogênica e método para sua produção - Google Patents

Abstract

vacina viva modificada aprimorada de mycoplasma bovis a presente invenção refere-se a novas cepas bacterianas de m. bovis atenuadas que sofreram passagem pelo menos 110 vezes. além disso, a presente invenção também proporciona composições imunogênicas compreendendo bactérias vivas de qualquer uma dessas cepas bacterianas de m. bovis atenuadas, sua fabricação e uso para o tratamento e profilaxia de infecções por m. bovis e combinações com outras vacinas ou medicamentos veterinários.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para CEPA BACTERIANA DE MYCOPLASMA BOVIS ATENUADA, AVIRULENTA, MÉTODO PARA ATENUAÇÃO DE MYCOPLASMA BOVIS, COMPOSIÇÃO IMUNOGÊNICA E MÉTODO PARA SUA PRODUÇÃO.

O presente pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido de Patente Provisório U.S. Número de Série 61/172.543, depositado em 24 de Abril de 2009.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIA

O presente pedido contém uma listagem de sequência no formato de paper e em formato legível em computador, os ensinamentos e conteúdos do qual são aqui incorporados por referência.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a Mycoplasma bovis (M. bovis) que é considerado como sendo uma das espécies mais patogênicas de Micoplasma e causa perdas econômicas significativas mundialmente. Micoplasmas causam sinais clínicos graves em gado de todas as idades. M. bovis é o patógeno Mycoplasma mais frequente que causa pneumonia, mastite e artrite em gado e seu papel etiológico também foi associado à otite, queratoconjuntivite, sinovite e distúrbios reprodutivos em vacas e bois. Em geral, Micoplasmas são difíceis de tratar, uma vez que eles carecem de uma parede ou membrana celular, o que tende a torná-los resistentes a várias classes de tratamentos com antibiótico de amplo espectro comumente usados. Micoplasmas diferem de vírus pelo fato de que Micoplasmas são maiores do que a maioria dos vírus e danificam as células teciduais se prendendo à superfície das células e destruindo as mesmas, ao invés de entrar nas células. Animais infectados com M. bovis têm respostas imunes deprimidas e podem exibir sinais de infecção por M. bovis, tais como febre, depressão, anorexia, respiração difícil, descarga nasal e ocular, tosse, espirros, respiração profunda, roncos, debilidade e articulações inchadas, mastite, infecções no ouvido médio, abortos, decúbito e morte. O organismo persiste em ambientes sem higiene, quentes e úmidos. Micoplasmas podem sobreviver no leite e parecem

Segue-se folha 1a/144

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1a/144 mesmo prosperar na presença de grandes números de leucócitos, os quais

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O documento US 6.548.069 divulga uma composição de vacina que incorpora uma bacterina inativada de célula integral contendo pelo menos duas cepas de M. bovis mortas e que um isolado pode alterar rapidamente seus antígenos em cultura. A patente ensina que cepas de alta passagem de mais de cerca de 50 passagens podem perder a infectividade e estimular uma resposta imune mais pobre quando usadas em uma bacterina. Ela ensina o uso de uma cepa de Mycoplasma a qual sofreu passagem não mais do que cerca de dez vezes ou menos antes de produção em escala massiva porque acredita-se que os antígenos retenham seu estado natural e, assim, estimularão uma resposta imune protetora contra o microorganismo infeccioso.

M. bovis morta não é tão eficaz ou eficiente quanto desejado na diminuição da gravidade de sintomas clínicos associados a uma infecção por Mycoplasma bovis. Mesmo passagem em um baixo nível de dose não produz uma vacina de Mycoplasma com alta eficácia, de modo que os sintomas clínicos sejam grandemente reduzidos em animais quando comparado com animais que não receberam tal vacina. As vacinas de M. bovis inativadas de baixa passagem que estão disponíveis não mostram uma grande redução na gravidade dos sintomas clínicos em animais quando comparado com animais que não receberam tal vacina.

A natureza do mercado requer que os fazendeiros sejam capazes de imunizar eficazmente seus animais para uma ampla variedade de condições de uma forma eficiente. Outras condições que seriam adequadas para imunização eficiente incluem, mas não estão limitadas a, Vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV), vírus da Parainfluenza-3 (PI-3), Vírus Sincicial Respiratório Bovino (BRSV), Herpes Vírus Bovino (BHV-1), Rotavirus Bovino, Breda vírus, calici-like vírus, Adenovirus, Astrovirus e Parvovirus, Mannheimia haemolytica (formalmente Pasteurella haemolytica), Pasteurella multocida, Actinomyces (Arcanobacterium) pyogenes, Haemophilus somnus (re-classificado como Histophilus somni), Chlamydiae, canfilobacteriose genital bovina, Leptospirose, Brucelose, Clostridia, Escherichia coli, Cryptosporidium parvum, Mycobacterium avium paratuberculosis, Salmonella, Myco

3/144 bacterium avium paratuberculosis, Cryptosporidiosis, mastite, Dermatom looses, infecções do trato respiratório inferior, Trichomoniases, Neospora Canum, Babesiose e semelhantes.

Permanece uma necessidade por uma composição imunogênica eficaz para estimular uma resposta imunológica contra M. bovis para diminuição da gravidade de ou redução da incidência de sinais de infecção de M. bovis e para redução ou eliminação da incidência de sinais de infecção por M. bovis.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção proporciona uma composição imunogênica ou vacina a qual usa cepas de M. bovis atenuadas de alta passagem, de modo que sinais de infecção por M. bovis e/ou a infecção por M. bovis em si e/ou a incidência ou gravidade, sejam reduzidas em animais que receberam a composição imunogênica ou vacina quando comparado com aqueles animais com infecção por cepas de M. bovis do tipo silvestre. A composição imunológica da presente invenção confere início rápido de proteção e proteção duradoura a um animai que precisa da mesma.

A invenção proporciona cepas ou isolados de M. bovis atenuados e avirulentos os quais tenham sofrido passagem pelo menos 110 vezes que provocam ou estimulam uma resposta imune quando administrados a um animal. De acordo com outro aspecto, a presente invenção também refere-se à bactérias M. bovis atenuadas tendo as mesmas características que a cepa de bactéria M. bovis depositada com a ATCC sob os números de acesso PTA-9666 e PTA-9667.

Uma cepa de M. bovis da presente invenção, atenuada através de múltiplas passagens ou atenuação serial conforme descrito acima, pode ser usada como um remédio, de preferência como um remédio veterinário. Ainda, as cepas de M. bovis atenuadas da presente invenção podem ser usadas para o preparo de composições veterinárias, para a profilaxia ou tratamento de infecções causadas por M. bovis em animais suscetíveis à infecção por M. bovis.

Tal composição imunológica seria adequada como um regime de

4/144 imunização em uma dose ou duas doses ou múltiplas doses (dose inicial seguida por reforço(s)), uma composição imunológica adequada e conveniente para administração através de diversas vias e uma composição imunológica que é compatível com outros imunogênios e composições imunológicas para preparo de vacinas combinadas.

Em outra modalidade da presente invenção, as cepas de M. bovis da presente invenção podem ser combinadas com outros medicamentos, terapias ou vacinas.

A presente invenção também proporciona um método para produção da composição imunogênica da presente invenção. O método compreende obtenção de uma cepa virulenta de M. bovis e passagem da referida cepa pelo menos 110 vezes, de modo que ela se torne atenuada e avirulenta. A cepa de alta passagem pode, então, ser misturada com componentes adicionais incluindo, mas não limitado a, veículos farmaceuticamente aceitáveis, diluentes, outros medicamentos, composições ou vacinas terapêuticas e combinações das mesmas.

A presente invenção também proporciona um método de tratamento ou profilaxia de animais tendo uma infecção por M. bovis para reduzir os sinais de infecção por M. bovis, reduzir a gravidade de ou incidência de sinais clínicos de infecção por M. bovis, reduzir a mortalidade de animais a partir de infecção por M. bovis e combinações dos mesmos.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A figura 1 é um gráfico ilustrando os escores de lesão pulmonar para animais que receberam um isolado de M. bovis que sofreu passagem 135 vezes de acordo com a presente invenção;

A figura 2 é um gráfico ilustrando os escores totais de debilidade para animais que receberam um isolado de M. bovis que sofreu passagem 135 vezes de acordo com a presente invenção;

A figura 3 é um gráfico ilustrando o inchaço articular total para animais que receberam um isolado de M. bovis que sofreu passagem 135 vezes de acordo com a presente invenção;

A figura 4 é um gráfico ilustrando os escores de artrite para a

5/144 nimais que receberam um isolado de M. bovis que sofreu passagem 135 vezes de acordo com a presente invenção;

A figura 5 é um gráfico ilustrando uma comparação de sorologia para o Grupo com Vac Viva I, II, III e sem Vacina (SQ+IN apenas); e

A figura 6 é um gráfico ilustrando uma comparação de sorologia para Vac Viva I usando diversas vias de administração.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Definições

Para fins da presente invenção, os termos isolado e cepa são usados permutavelmente e diferenças entre cepas ou isolados individuais podem ser detectadas usando caracterização de perfil de DNA (isto é, diferentes cepas ou isolados terão diferentes caracterizações de perfil). Para fins da presente invenção, os termos vacina e composição são usados permutavelmente.

Os termos e expressões a seguir são usados aqui:

Atenuação significa redução da virulência de um patógeno. Na presente invenção, atenuação é sinônimo de avirulento. Na presente invenção, uma bactéria atenuada é uma na qual a virulência tenha sido reduzida, de modo que ela não causa sinais clínicos de uma infecção por M. bovis, mas é capaz de induzir a uma resposta imune no mamífero alvo, mas pode também significar que os sinais clínicos têm a incidência ou gravidade reduzidas em animais infectados com M. bovis atenuado em comparação com um grupo de controle de animais infectados com M. bovis não atenuado e que não receberam a bactéria atenuada. Nesse contexto, o termo reduz/reduzida significa uma redução de pelo menos 10%, de preferência 25%, ainda mais preferivelmente 50%, ainda mais preferivelmente 60%, ainda mais preferivelmente 70%, ainda mais preferivelmente 80%, ainda mais preferivelmente 90% e, mais preferivelmente, de 100% quando comparado com o grupo de controle, conforme definido acima. Assim, uma cepa de M. bovis atenuada, avirulenta é uma que é adequada para incorporação em uma composição imunogênica compreendendo uma bactéria viva modificada de M. bovis.

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Diluentes podem incluir água, solução salina, dextrose, etanol, glicerol e semelhantes. Agentes isotônicos podem incluir cloreto de sódio, dextrose, manitol, sorbitol e lactose, dentre outros. Estabilizantes incluem albumina e sais alcalinos de ácido etileno diamina tetra acético, dentre outros.

Uma quantidade eficaz, para fins da presente invenção, significa uma quantidade de uma composição imunogênica capaz de induzir a uma resposta imune que reduz a incidência ou diminui a gravidade de infecção por M. bovis em um animal. Particularmente, uma quantidade eficaz refere-se à unidades de formação de colônia (Colony Forming Units - UFC) por dose. A composição imunogênica ou vacina preferida da presente invenção tem pelo menos 1,0 E7 UFC das bactérias vivas das bactérias M. bovis atenuadas, avirulentas por dose, mais preferivelmente 8,4 E7 UFC ou 9,4 E7 UFC das bactérias vivas das bactérias M. bovis atenuadas, avirulentas por dose. Um exemplo (mas não se pretende estar limitado a tal exemplo) de uma quantidade eficaz seria uma vacina de M. bovis administrada através das vias intranasal e subcutânea simultaneamente administrada 2 vezes com um intervalo de 2 semanas em um alto nível de dose (1E9 UFC).

Cepa de alta passagem, bem como o termo sofreu passagem pelo menos 110 vezes, para fins da presente invenção, refere-se a uma cepa de M. bovis que tenha sofrido passagem mais de 110 vezes, mais preferivelmente, mais de 115 vezes, mais preferivelmente, mais de 120 vezes, ainda mais preferivelmente, mais de 125, ainda mais preferivelmente, mais de 130 vezes, mais preferivelmente, mais de 133 vezes, ainda mais preferivelmente, mais de 135 vezes e ainda mais preferivelmente entre 135 e 145 vezes, especificamente mais preferivelmente mais de 140 vezes e mais preferivelmente mais de 145 vezes e, ainda mais preferivelmente, mais de 150 vezes.

O termo tendo as características da cepa bacteriana de M. bovis depositada na ATCC sob números de acesso PTA-9666 e PTA-9667 significa que tal cepa bacteriana é atenuada e é capaz de reduzir a taxa de mortalidade e eutanásia em um grupo de animais em pelo menos 83%

7/144 quando comparado com um grupo de animais de controle não vacinados. Além disso, o termo também significa que tal cepa bacteriana é atenuada e é capaz de reduzir a taxa de mortalidade e eutanásia em um grupo de animais em pelo menos 56% quando comparado com um grupo de animais de controle não vacinados após a administração de uma única dose da referida vacina. Adicionalmente, o termo também significa que tal cepa bacteriana é atenuada e é capaz de reduzir a taxa de mortalidade e eutanásia em um grupo de animais em pelo menos 65% quando comparado com um grupo de animais de controle não vacinado após a administração de uma única dose da referida vacina.

Uma composição imunoqênica ou imunolóqica refere-se a uma composição de matéria que compreende pelo menos um antígeno o qual estimula uma resposta imunológica no hospedeiro de uma resposta imune celular e/ou anticorpo-mediada à composição ou vacina de interesse. Usualmente, uma resposta imunológica inclui, mas não está limitado a, um ou mais dos seguintes efeitos: a produção ou ativação de anticorpos, células B, células T auxiliares, células T supressoras e/ou células T citotóxicas e/ou células T gama-delta, dirigidas especificamente a um antígeno ou antígenos incluídos na composição ou vacina de interesse. De preferência, o hospedeiro mostrará uma resposta imunológica terapêutica ou protetora de que a resistência à nova infecção será intensificada e/ou a gravidade clínica da doença reduzida. Tal proteção será demonstrada por uma redução ou falta de sinais clínicos normalmente mostrados por um hospedeiro infectado, um tempo de recuperação mais rápido e/ou duração ou titulação bacteriana diminuída nos tecidos ou fluidos corporais ou excreções do hospedeiro infectado.

O termo Testaqem imunoqênica significa infecção de gado com as bactérias M. bovis que sofreram passagem e monitoramento do desenvolvimento da resposta de anticorpo humoral contra M. bovis no gado infectado.

O termo Eficácia aprimorada de modo que sinais clínicos associados à infecção por M. bovis e/ou a infecção por M. bovis em si sejam re

8/144 duzidos em comparação com as vacinas atualmente disponíveis quando os animais vacinados são expostos ao M. bovis ou sofrem infecção por cepas de M. bovis do tipo silvestre refere-se a uma redução na incidência ou gravidade de sinais clínicos de infecção por M. bovis quando se compara vacinas feitas de cepas que sofreram passagem conforme ensinado pela presente invenção com vacinas de M. bovis que estavam disponíveis antes da presente invenção. Nesse contexto, animais não vacinados ou vacinados com vacinas de M. bovis disponíveis antes da presente invenção terão sinais clínicos de infecção por M. bovis que são pelo menos 30% e possivelmente até mais preferivelmente pelo menos 40%, ainda mais preferivelmente pelo menos 50%, ainda mais preferivelmente pelo menos 60%, ainda mais preferivelmente pelo menos 70%, ainda mais preferivelmente pelo menos 75%, ainda mais preferivelmente pelo menos 80%, ainda mais preferivelmente pelo menos 85%, ainda mais preferivelmente pelo menos 90% e, mais preferivelmente, pelo menos 95% ou mais prevalentes do que em animais que receberam uma administração de uma composição imunogênica de M. bovis de acordo com a presente invenção.

O termo que precisa de tal administração ou que precisa de tal tratamente de administraçãc significa que a administraçãc cu tratamente está asseciade ae referçe eu melhora na saúde ou qualquer outro efeito médico positivo sobre a saúde dos animais que recebem a composição imunogênica de acordo com a presente invenção.

O termo Proteção duradoura refere-se à eficácia aprimorada que persiste durante pelo menos 3 semanas, mais preferivelmente pelo menos 6 meses, ainda mais preferivelmente pelo menos 1 ano, ainda mais preferivelmente pelo menos 2 anos para animais de corte e pelo menos 6 meses, mais preferivelmente pelo menos 1 ano, ainda mais preferivelmente pelo menos 2 anos, ainda mais preferivelmente pelo menos 3 anos e ainda mais preferivelmente pelo menos 4 anos para animais leiteiros. Para animais de corte e animais leiteiros, é mais preferido que a proteção duradoura persista até a idade média na qual os animais de corte são comercializados pela carne e a idade na qual os animais leiteiros concluem sua vida produtiva

9/144 de leite.

O termo Avaliação da patologia pulmonar refere-se à observação dos pulmões após necropsia incluindo, mas não limitado a, avaliação de consolidação, lesões e formações nodulares, bem como avaliação da cavidade torácica, incluindo pleurite e acúmulo de fluido.

O termo Mortalidade refere-se à morte causada por infecção por M. bovis. Isso inclui a situação onde a infecção é tão grave que um animal sofre eutanásia para impedir sofrimento e proporcionar um fim humanitário à sua vida.

O termo Sinais de infecção por M. bovis refere-se a manifestações de infecção ou doença causada por M. bovis, incluindo o(s) sintoma(s) clínico(s) e patologia tipicamente experimentada pelo gado infectado com M. bovis do tipo silvestre. Essas manifestações de infecção ou doença podem tomar muitas formas incluindo, mas não limitado a, febre, depressão, anorexia, respiração difícil, descarga nasal e ocular, tosse, espirros, respiração profunda, roncos, debilidade e articulações inchadas, infecções do ouvido médio, descarga pela inflamação do ouvido interno, abortos e outros distúrbios reprodutivos, decúbito, infecção respiratória, cabeça inclinada, ataxia, artrite, mastite, otite, queratoconjuntivite, sinovite, pleurite, lesões pulmonares, consolidação pulmonar e formação nodular nos pulmões, fluido sinovial aumentado, cápsula articular espessa e morte.

O termo um veículo veterinário aceitável, veículo farmaceuticamente aceitável ou veículo inclui qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, adjuvantes, agentes de estabilização, diluentes, conservantes, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos, agentes para retardo de adsorção e semelhantes. Em algumas modalidades preferidas e especialmente aquelas que incluem composições imunogênicas liofilizadas, agentes de estabilização para uso na presente invenção incluem estabilizantes para liofilização ou secagem por congelamento.

A presente invenção proporciona uma composição imunogênica ou vacina a qual supera os problemas inerentes em vacinas anteriores e proporciona uma vacina segura, eficaz que utiliza cepas de M. bovis de alta

10/144 passagem atenuadas, de modo que sinais de infecção por M. bovis e/ou a infecção por M. bovis em si e/ou incidência ou gravidade sejam reduzidas em animais que receberam a composição imunogênica ou vacina comparada com infecção por cepas de M. bovis do tipo silvestre. Adicionalmente, o efeito letal de M. bovis é reduzido quando a composição imunogênica da presente invenção é administrada a um animal (por exemplo, bezerros aos quais é fornecida a vacina de acordo com a presente invenção estão em um menor risco de desenvolver sinais de infecção por M. bovis, bem como morte associada à infecção por M. bovis e quaisquer sinais clínicos cujo resultado seria menos grave ou prevalente do que em animais que não receberam qualquer vacina, mas foram infectados com M. bovis ou receberam uma vacina não de acordo com a presente invenção).

Adicionalmente, os rebanhos experimentarão um menor número de animais infectados e doentes em um rebanho quando é administrada aos animais a vacina de acordo com a presente invenção quando comparado com animais não vacinados, mas infectados e, de preferência, mesmo quando comparado com animais vacinados com vacina(s) convencionalmente disponível(is). As cepas de alta passagem, atenuadas da presente invenção conferem eficácia adicional quando comparado com outras vacinas atualmente no mercado.

A presente invenção confere cepas atenuadas e avirulentas ou isolados de M. bovis os quais tenham sofrido passagem pelo menos 110 vezes que provocam ou estimulam uma resposta imune quando administrados a um animal. Vantajosamente, tais cepas ou isolados atenuados e avirulentos de M. bovis os quais sofreram passagem pelo menos 110 vezes provocam ou estimulam uma resposta imune que protege os animais que receberam a composição imunogênica da presente invenção e reduzem o risco de que os animais morram ou tenham de sofrer eutanásia como um resultado de infecção por M. bovis. A composição imunogênica também tem o benefício de reduzir o número de animais em um rebanho que experimentam morte ou eutanásia como um resultado de infecção por M. bovis. Ainda, foi mostrado que a composição reduz a incidência e gravidade de sinais clínicos

11/144 de infecções por M. bovis em animais individuais e rebanhos.

Em uma modalidade, é divulgada uma composição imunogênica a qual compreende uma ou mais cepas de M. bovis de alta passagem que tenham sofrido passagem pelo menos 110 vezes e um veículo farmaceuticamente aceitável. A composição imunogênica da presente invenção estimula uma resposta imune ou imunogênica contra infecção por M. bovis em animais e, de preferência, gado. Geração da resposta imunogênica tem o efeito de diminuição da incidência e gravidade de sinais clínicos de infecção por M. bovis, bem como redução de mortalidade e eutanásia como um resultado de infecção por M. bovis.

Outra modalidade proporciona um método de produção da composição imunogênica da presente invenção. O método compreende obtenção de uma cepa virulenta de M. bovis e passagem da referida cepa pelo menos 110 vezes, de modo que ela se torne atenuada e avirulenta. A cepa de alta passagem pode, então, ser opcionalmente misturada com componentes adicionais incluindo, mas não limitado a, adjuvantes, veículos, diluentes farmaceuticamente aceitáveis e combinações dos mesmos. O método compreende, em geral, (a) passagem de bactérias M. bovis mais de 110 vezes para produzir bactérias M. bovis cultivadas; (b) obtenção de bactérias M. bovis cultivadas; e (c) propagação de bactérias M. bovis não patogênicas, mas imunogênicas, para obter as bactérias M. bovis atenuadas.

Em formas preferidas desse método, há uma etapa adicional de testagem de uma bactéria M. bovis cultivada obtida sob a etapa (b) quanto a sua patogenicidade e imunogenicidade. De preferência, essa etapa é feita antes da etapa (c). Testagem de patogenicidade compreende infecção de gado com as bactérias que M. bovis que sofreram passagem e monitoramento do gado infectado quanto ao desenvolvimento de sintomas clínicos de uma infecção por M. bovis.

A presente invenção também proporciona um método de redução da incidência de morte ou eutanásia resultante de infecção por M. bovis em uma vaca individual ou dentro de um rebanho de gado. O método compreende administração de uma cepa de alta passagem de M. bovis, que so12/144 freu passagem pelo menos 110 vezes, a um bovino. Foi mostrado que a composição imunogênica da presente invenção reduz a mortalidade em gado e em rebanhos quando comparadas com aqueles animais que não receberam a vacina, bem como quando comparado com aquelas cepas que sofreram passagem menos de 110 vezes. De preferência, a mortalidade em gado e em rebanhos é reduzida em pelo menos 10%, mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 20%, ainda mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 25%, mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 30%, ainda mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 40%, ainda mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 50%, ainda mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 56%, ainda mais preferivelmente mortalidade é reduzida em pelo menos 60%, ainda mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 70%, ainda mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 75%, ainda mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 80%, ainda mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 83%, and, mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 90% quando comparado com aqueles animais que não receberam a vacina.

Adicionalmente, a mortalidade em gado e em rebanhos é reduzida em pelo menos 10%, mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 20%, ainda mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 25%, mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 30%, ainda mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 40%, ainda mais preferivelmente, a mortalidade é reduzida em pelo menos 48% quando comparado com aquelas cepas que sofreram passagem menos de 110 vezes quando comparado com outras cepas de M. bovis incluindo, por exemplo, cepas bacterianas de M. bovis depositadas com a ATCC sob números de acesso PTA-8694; PTA 8695; ou PTA 8696.

Outra modalidade inclui um método para o tratamento ou profilaxia de infecções causadas por M. bovis. O método compreende administração de uma quantidade eficaz da composição imunogênica da presente

13/144 invenção a um animal, em que o referido tratamento ou profilaxia é selecionada do grupo consistindo em redução de sinais de infecção por M. bovis, redução da gravidade ou incidência de sinais clínicos de infecção por M. bovis, redução da mortalidade de animais por infecção por M. bovis e combinações dos mesmos.

A outra modalidade inclui um método de redução da incidência e/ou gravidade de sintomas clínicos de infecção por M. bovis. O método compreende, em geral, administração de uma cepa de alta passagem de M. bovis, que sofreu passagem pelo menos 110 vezes, a animais, de preferência gado. Mais particularmente, o método pode ser usado para reduzir a consolidação pulmonar em virtude de infecção por M. bovis. A eficácia da administração de uma cepa de alta passagem de M. bovis a um animal que precisa da mesma pode ser verificada em uma série de formas convencionais, incluindo avaliação da patologia pulmonar. De preferência, avaliação da patologia pulmonar, especificamente o percentual de consolidação pulmonar atribuído à lesões em virtude de M. bovis conforme comumente classificado para várias espécies, pode ser feita pós-necropsia. Ainda mais preferivelmente, tal patologia pulmonar será reduzida, quando comparado com o grupo não vacinado, em pelo menos 33%, mais preferivelmente pelo menos 50%, ainda mais preferivelmente pelo menos 70%, ainda mais preferivelmente pelo menos 80%, ainda mais preferivelmente pelo menos 90% e, mais preferivelmente, em pelo menos 95%.

Um resultado surpreendente da presente invenção revelou que passagem adicional da cepa de M. bovis levou a uma eficácia aumentada da vacina. Quando resultados de estudos de eficácia para cepas anteriores de alta passagem, isto é, aquelas que sofreram passagem menos de 110 vezes (por exemplo, cepas bacterianas de M. bovis depositadas com a ATCC sob números de acesso PTA-8694; PTA 8695 ou PTA 8696), foram comparadas com os resultados desses estudos usando a cepa de maior passagem da presente invenção, foi surpreendente descobrir que houve uma redução na mortalidade ou eutanásia por razões humanitárias para gado resultante de infecção por M. bovis usando a cepa da presente invenção.

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Adicionalmente, foi um resultado surpreendente que a administração de uma dose da cepa que sofreu maior passagem da presente invenção era tão ou mais eficiente e eficaz que a administração em duas doses da cepa que sofreu alta passagem anterior, que sofreu passagem menos de 110 vezes, na redução do número de gado que experimentou morte ou eutanásia como um resultado de infecção por M. bovis. Embora uma redução na mortalidade de cerca de 56%, quando comparado com animais não vacinados, tenha sido conferida por uma única administração das cepas de M. bovis atenuadas da presente invenção que sofreram passagem mais de 110 vezes, duas administrações de cepas de M. bovis atenuadas que sofreram passagem não mais do que 106 vezes foram necessárias para obter a mesma redução na mortalidade.

Em uma modalidade preferida, a cepa de alta passagem de M. bovis sofreu passagem pelo menos 110 vezes em cultura de célula in vitro, mais preferivelmente entre 110 vezes e 200 vezes, ainda mais preferivelmente entre cerca de 110 e 180 vezes, ainda mais preferivelmente, pelo menos 115 vezes, ainda mais preferivelmente pelo menos 120 vezes, ainda mais preferivelmente entre 120 e 170 vezes, ainda mais preferivelmente pelo menos 125 vezes, ainda mais preferivelmente entre 125 e 160 vezes, ainda mais preferivelmente, pelo menos 130 vezes, ainda mais preferivelmente entre 130 e 150 vezes, ainda mais preferivelmente pelo menos 131 vezes, mais preferivelmente, pelo menos 132 vezes, ainda mais preferivelmente, pelo menos 133 vezes, mais preferivelmente, pelo menos 134 vezes e ainda mais preferivelmente, pelo menos 135 vezes e, mais preferivelmente entre 135 e 145 vezes.

As cepas de M. bovis úteis em uma vacina ou composição imunogênica podem ser qualquer cepa ou isolado de M. bovis tendo as mesmas propriedades que as cepas da invenção, conforme descrito aqui. Cepas representativas incluem aquelas depositadas com a ATCC em Manassas, VA em 18 de Dezembro de 2008, sob os termos do Tratado de Budapeste e designadas com os números de depósito na ATCC PTA-9666 e PTA-9667. Essas cepas são patogênicas antes de passagem mas, após passagem da

15/144 cepa, conforme descrito acima e particularmente após passagem mais de 110 vezes, as cepas que sofreram passagem resultantes eram atenuadas, avirulentas e produziram uma resposta imune em um animal que recebeu uma administração da composição imunogênica da cepa. Em particular, essas cepas levam à eficácia aumentada e mostram uma mortalidade reduzida em gado e em rebanhos quando usadas como uma vacina viva modificada. Vantajosamente, a vacina ou composição imunogênica da presente invenção que utiliza tais cepas depositadas exibiu proteção cruzada eficaz contra outras cepas de M. bovis que não a cepa que sofreu passagem para atenuação e, então, usadas como um componente antigênico.

Composições Combinadas

Em outra modalidade da presente invenção, as cepas de M. bovis da presente invenção podem ser combinadas com outros medicamentos, terapias ou vacinas. Condições que seriam adequadas para imunização eficiente incluem, mas não estão limitadas a, Vírus da diarréia viral bovina (Bovine Viral Diarrhea Virus - BVDV), Virus da Parainfluenza-3 (PI-3), Virus sincicial respiratório bovino (Bovine Respiratory Syncytial Virus - BRSV), Herpesvirus bovino (Bovine Herpesvirus - BHV-1), Rotavirus bovino, Breda virus, urn virus calici-like, Adenovirus, Astrovirus e Parvovirus, Mannheimia haemolytica (formalmente Pasteurella haemolytica), Pasteurella multocida, Actinomyces (Arcanobacterium) pyogenes, Haemophilus somnus (reclassificada como Histophilus somni), Chlamydiae, canfilobacteriose genital bovina, Leptospirosis, Brucelose, Clostridia, Escherichia coll, Cryptosporidium parvum, Mycobacterium avium paratuberculosis, Salmonella, Mycobacterium avium paratuberculosis, Cryptosporidiosis, mastitis, Dermatomycoses, infecções do trato respiratório inferior, Trichomoniases, Neospora Canum, Babesiose semelhantes.

Vírus da diarréia viral bovina (Bovine Viral Diarrhea Virus BVDV) tipo 1 (BVDV-1) e tipo 2 (BVDV-2) causa diarréia viral bovina (bovine viral diarrhea - BVD) e doença mucosal (mucosal doença - MD) em gado (Baker, 1987; Moennig e Plagemann, 1992; Thiel et al., 1996, aqui totalmente incorporado por referência). A divisão de BVDV em 2 sorotipos é baseada

16/144 em diferenças significativas a nível de sequências genômicas (resumidas em Heinz et al., 2000, aqui totalmente incorporado por referência), as quais também são óbvias a partir de reações de anticorpo de neutralização cruzado limitadas (Ridpath et al. 1994, totalmente incorporado por referência). Inativação da atividade de RNase que reside dentro de E^rns resulta em um BVDV apatogênico atenuado o qual pode ser usado como uma vacina viva modificada (WO 99/64604, aqui totalmente incorporado por referência). O pedido de patente internacional W02005/111201 (aqui totalmente incorporado por referência) proporciona uma outra geração de BVDV atenuado adequado para vacinas contra MLV, as quais compreendem múltiplos BVDV modificados tendo pelo menos uma mutação na sequência de codificação para glicoproteína E^rns e pelo menos outra mutação na sequência de codificação para N^pro, em que a referida mutação na sequência de codificação para glicoproteína E^rns leva à inativação de atividade de RNase residente em E^rns e/ou a referida mutação na sequência de codificação para N^pro leva à inativação da referida N^pro. Além disso, diversos vírus BVDV atenuados convencionais são conhecidos na técnica, os quais são também candidatos adequados para o desenvolvimento de vacinas.

Vírus da Parainfluenza-3 (PI-3) é um vírus de RNA classificado na família paramixovírus. Infecções causadas por PI-3 são comuns em gado. Embora PI-3 seja capaz de causar doença, usualmente ele está associado à infecção subclínica a branda. O papel mais importante de PI-3 é servir como um iniciador que pode levar ao desenvolvimento de pneumonia bacteriana secundária. Sinais clínicos incluem pirexia, tosse, descarga nasal e lacrimal serosa, taxa respiratória aumentada e sons respiratórios aumentados. A gravidade dos sinais clínicos pioram com o início de pneumonia bacteriana. Fatalidades por pneumonia não complicada por PI-3 são raras. Lesões incluem consolidação pulmonar crânio-ventral, bronquiolite e alveolite com congestão e hemorragia acentuadas. Corpos de inclusão podem ser identificados. A maioria dos casos fatais também terá uma broncopneumonia bacteriana concorrente.

Vírus sincicial respiratório bovino (BRSV) é um vírus de RNA

17/144 classificado como um pneumovírus na família paramixovírus. Além de gado, ovelha e cabras podem também ser infectadas por vírus sinciciais respiratórios. Esse vírus foi denominado por seu efeito citopático característico - a formação de células sinciciais. BRSV está distribuído mundialmente e o vírus é abundante na população de gado. Infecções pelo BRSV associadas à doença respiratória ocorrem predominantemente em gado de corte e leiteiro jovem. Imunidade passivamente derivada não parece prevenir infecções pelo BRSV, mas ainda reduzirão a gravidade da doença. Exposições iniciais ao vírus estão associadas à doença respiratória grave; subsequentes exposições resultam em doença subclínica a branda. BRSV parece ser um vírus importante no complexo de doença respiratória bovina em virtude de sua frequência de ocorrência, predileção pelo trato respiratório inferior e sua capacidade de predispor o trato respiratório à infecção bacteriana secundária. Em surtos, a morbidade tende a ser alta e casos fatais podem ser 0-20%. Sinais incluem temperatura retal aumentada de 40-42°C, depressão, ingestão de alimento diminuída, taxa respiratória aumentada, tosse e descarga nasal e lacrimal. Em geral, sinais respiratórios predominam. Dispnéia pode se tornar pronunciada nos últimos estágios da doença. Enfisema subcutâneo é, algumas vezes, reportado. Pneumonia bacteriana secundária é uma ocorrência frequente. Um padrão de doença bifásica foi descrito, mas não é consistente. Lesões macroscópicas incluem uma pneumonia intersticial difusa com enfisema subpleural e intersticial junto com edema intersticial. Essas lesões são similares a e devem ser diferenciadas de outras causas de pneumonia intersticial. Exame histológico revela células sinciciais no epitélio bronquiolar e parênquima pulmonar, corpos de inclusão intracitoplásmica, proliferação e/ou degeneração de epitélio bronquiolar, epitelização alveolar, edema e formação de membrana hialina.

Infecção por Salmonella spp. pode produzir diarréia em animais em todas as idades, especialmente aquelas que estão sob estresse, confinadas ou expostas a um suprimento de água ou alimento pesadamente contaminado. Salmonelose é causada por muitas espécies de salmonelas e caracterizada clinicamente por um ou mais de três síndromes principais - septi

18/144 cemia, entente aguda e entente crônica. A incidência tem aumentado com a intensificação de produção de animais de criação. Bezerros jovens usualmente desenvolvem a forma septicêmica. Gado adulto desenvolve enterite aguda. Enterite crônica pode se desenvolver ocasionalmente em gado. Animais prenhas podem abortar. Em animais mais velhos, a doença se manifesta por disenteria e toxemia e mortalidade pode ser significativa. Embora muitas outras Salmonella spp. possam causar doença, as mais relevantes em gado são S. typhimurium, S. dublin e S. newport. Embora seus padrões clínicos resultantes não sejam distintas, diferentes espécies de salmonelas tendem a diferem quanto à sua epidemiologia. O perfil de plasmídeo e padrões de resistência a fármaco são, algumas vezes, marcadores úteis para estudos epidemiológicos. Fezes de animais infectados podem contaminar a água e alimento, leite, carnes frescas e processadas de abatedouros, produtos de animais e plantas usados como fertilizantes ou gêneros alimentícios, pasto e campos naturais e muitos materiais inertes. O organismo pode sobreviver durante meses em áreas quentes, úmidas, tal como em baias de alimentação de porcos ou em represas de água, mas sobrevive menos de 1 semana em estrume de gado que sofreu compostagem. Roedores e pássaros silvestres são fontes de infecção, a prevalência de infecção varia entre espécies e países e é muito maior do que a incidência de doença clínica, a qual é comumente precipitada por situações estressantes, tais como privação súbita de alimento, transporte, estiagem, apinhamento, parto e administração de alguns fármacos.

Outros patógenos gastrointestinais relevantes que podem ser usados na presente invenção incluem Escherichia coli, Cryptosporidium parvum e Mycobacterium avium paratuberculosis. Infecção por Escherichia coli causa grave doença intestinal em animais jovens caracterizada como diarréia neonatal, diarréia pós-desmame, doença por edema e/ou septicemia, dependendo dos fatores de virulência presente na cepa que causa a infecção. Os bezerros infectados com E. coli patogênica podem desenvolver grave diarréia que causa desidratação fatal ou infecções septicêmicas fatais. Paratuberculose é uma enterite crônica contagiosa caracterizada por diarréia

19/144 persistente e progressiva, perda de peso, debilitação e eventualmente morte. Ela afeta o gado, ovelha, cabras, lhamas, camelos, cervo e outros ruminantes domésticos, exóticos e silvestres. Ela também foi reconhecida em coelhos silvestres; cavalos e porcos podem ser infectados experimentalmente. A distribuição é mundial.

Animais com paratuberculose deverão ser considerados como riscos zoonóticos potenciais até que a situação seja esclarecida. O organismo causador é Mycobacterium avium paratuberculosis, formalmente conhecido como M. paratuberculosis ou M. johnei. Ocasionalmente, outras subespécies de M. avium são isoladas de cães. O organismo é muito resistente e pode sobreviver no pasto durante mais de 1 ano, mas a luz do sol, solos alcalinos e estiagem reduzem sua taxa de sobrevivência. Ele é disseminado em grandes números em fezes de animais infectados e a infecção é adquirida por ingestão de alimento e água contaminados. Introdução da doença em um rebanho limpo é usualmente por portadores subclinicamente infectados. Infecção é adquirida precocemente na vida, mas sinais clínicos raramente se desenvolvem em gado < 2 anos de idade. A resistência aumenta com a idade e é improvável que o gado primeiro exposto como adulto se torne infectado. A maioria dos bezerros são infectados logo após o nascimento por forragens contaminadas com fezes de animais infectados ou ao serem alojados em cercados contaminados. O organismo pode também estar presente no colostro e leite de vacas infectadas e infecções intrauterinas também foram descritas. Após ingestão, as bactérias infectam macrófagos na mucosa do intestino delgado inferior e em nódulos linfáticos associados. A maioria dos animais eliminará a infecção por meio de uma resposta imune célula-mediada precoce que encoraja a atividade microbicida em macrófagos. Em animais suscetíveis, os organismos multiplicam e provocam uma entente crônica que leva à doença clínica. Essa pode levar meses a anos para se desenvolver e é usualmente associada a um declínio na imunidade célula-mediada e elevam um anticorpo ineficaz no soro. Contudo, disseminação fecal começa antes que sinais clínicos sejam evidentes. Mycobacterium avium paratuberculosis pode ser isolado das fezes, nódulos linfáticos

20/144 mesentéricos e ileocecais, paredes intestinais espessas e, menos frequentemente, o úbere e trato reprodutivo de ambos os sexos.

Criptosporidiose é uma enterocolite de distribuição cosmopolitana causada pelo parasita coccidiano Cryptosporidium parvum. Ele não é hospedeiro-específico e é comum em ruminantes jovens, particularmente bezerros; ele é também encontrado no homem e em porcos e é raro em cães, gatos e cavalos. Outros criptosporídeos causam doença em répteis e pássaros. A doença em bezerros, caracterizada por perda de peso e diarréia aquosa, é clinicamente indistinguível de muitas outras causas de diarréia em bezerros. Cryptosporidium parvum é um protozoário diminuto que é transmitido pela via fecal-oral. Oócitos são esporulados (quatro esporozoitos) quando disseminados nas fezes e, portanto, são imediatamente infecciosos. O período médio de incubação é de ~4 dias. Bezerros de 1-3 semanas de idade parecem ser mais suscetíveis. Sinais tais como anorexia, perda de peso, diarréia e espasmos se assemelham àqueles causados por vários outros patógenos intestinais; contudo, infecções sem sinais ocorrem. Criptosporidiose não complicada raramente é fatal. A doença pode ser grave em indivíduos imunocomprometidos. Se doença grave em bezerros é observada, outros agentes doentios ou infecções concorrentes deverão ser excluídas. Embora C. parvum possa infectar virtualmente todo o trato intestinal, o intestino delgado distai é usualmente afetado mais gravemente. Infecção em cavalos está limitada ao intestino delgado. Lesões macroscópicas podem consistir de mucosa intestinal hiperêmica e conteúdos intestinais amarelados. Microscopicamente, atrofia vilosa branda a grave com organismos periféricos na borda pilosa é evidente. Diferentes de Eimeria e Isospora spp, os quais são parasitas intracelulares, C. parvum é intramembranoso e reside dentro da borda pilosa das células epiteliais intestinais.

Inflamação da glândula mamária (mastite) é quase sempre em virtude dos efeitos de infecção por patógenos bacterianos ou micóticos. Mastite pode estar associada à infecção por muitos outros organismos, incluindo Streptococcus uberis, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella spp. Pseudomonas ae

21/144 ruginosa, Actinomyces pyogenes, Mycoplasma spp, Nocardia asteroides, Serratia, Mycobacterium spp, Clostridium perfringens, Pasteurella spp, yeasts e Prototheca spp.

Dermatomicoses (Dermatofitose) em animais são doenças antropozoonóticas da pele e tecido relacionado. Sintomas clínicos são caracterizados por perda de pêlo na área afetada, hiperemia, formação de crostas e capas semelhante a amianto. Inflamação é frequentemente acompanhada por supuração. Dermatomicoses são frequentemente também caracterizadas por infecção localizada da pele. Dermatomicoses em animais trazem um impacto sócio-econômico substancial. Animais doentes requerem tratamento prolongado e podem disseminar a infecção para animais e seres humanos. Dermatofitoses são causadas por infecções micóticas por Trichophyton spp. ou Microsporum spp. Causas mais relevantes para o gado são Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagrophytes ou Trichophyton sarkisovii.

Uma infecção do trato respiratório inferior, usualmente resultando em bronquite ou pneumonia, pode ser causada por qualquer um de vários nematoides parasíticos, incluindo Dictyocaulus viviparus, em gado. Esse verme do pulmão pertence à superfamília Trichostrongyloidea e tem ciclos de vida diretos. O verme do pulmão de gado é comum no nordeste da Europa e é a causa de vários surtos de husk ou hoose em gado de pasto jovem. Em virtude do fato de a infecção por D. viviparus em gado ser a doença mais economicamente importante, ela foi mais investigada e muitas das observações da mesma são aplicáveis à outras espécies. Doença clínica usualmente se desenvolve quando de primeira exposição à larvas infecciosas suficientes. Em gado, usualmente isso ocorre durante sua primeira vez no pasto; contudo, um aumento no número de gado mais velho afetado foi reportado. Sinais de infecção pelo verme do pulmão oscilam de tosse moderada com taxas respiratórias ligeiramente aumentadas à tosse persistente grave e dificuldade e mesmo insuficiência respiratória. Ganho de peso reduzido, rendimentos reduzido de leite e perda de peso acompanham muitas infecções em gado. Infecções subclínicas patentes podem ocorrer em todas as espécies. Os sinais mais consistentes em gado são taquipneia e tosse.

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Tricomoníase é uma doença venérea por protozoário em gado caracterizada primariamente por morte fetal precoce e infertilidade, resultando em intervalos prolongados de parição. Distribuição provavelmente é mundial. O protozoário causador, Trichomonas (Tritrichomonas) foetus, é piriforme e tem comumente 10-15 χ 5-10 pm, mas há pleomorfismo considerável. Ele pode se tornar esférico quando cultivado em meio artificial. Em sua extremidade anterior, há três flagelos de cerca do mesmo comprimento que o corpo do parasita. Uma membrana ondulada se estende o comprimento do corpo e é limitada por um filamento marginal que continua além da membrana como um flagelo posterior. Embora T foetus possa sobreviver ao processo usado para congelamento de sêmen, ele é morto através de secagem ou altas temperaturas. Trichomonas foetus é encontrado no trato genital de gado. Quando as vacas são cruzadas naturalmente com um boi infectado, 3090% se tornam infectadas, sugerindo que há diferenças na resistência. Variação na suscetibilidade de cruzamento à tricomaníase podem também existir. Bois de todas as idades podem permanecer infectados indefinidamente, mas é menos provável em machos mais jovens. Em contraste, muitas vacas estão livres de infecção dentro de 3 meses após cruzamento. Contudo, a imunidade não é duradoura e reinfecção ocorre. Transmissão pode também ocorrer quando o sêmen de boi infectado é usado para inseminação artificial. O sinal mais comum é infertilidade causada por morte embriônica. Isso resulta em cruzamento repetido e estação de parição prolongada. Morte fetal e abortos podem também ocorrer, mas não são tão comuns quanto perdas no início da gestação. Trichomonas foetus foi encontrado em culturas vaginais tomadas tão tarde quanto 8 meses de gestação e, aparentemente, bezerros vivos podem nascer de mães infectadas. Infecção uterina ocasionalmente se desenvolve após cruzamento.

Neospora caninum é um parasita protozoário intracelular oblíquo que foi anteriormente confundido com Toxoplasma gondii. Apenas estágios assexuais são conhecidos e eles se assemelham ao T gondii. O ciclo de vida completo de N. caninum é desconhecido, mas pode ser transmitido transplacentalmente em cães, gado, cabras, ovelhas e gatos e a prole sub

23/144 sequente pode ser afetada. Taquizoitos têm 5-7 χ 1-5 pm, dependendo do estágio de divisão. Eles se dividem por endodiogenia. Taquizoitos são encontrados em miócitos, células neurais, células dérmicas, macrófagos e outras células. Cistos teciduais de até 100 pm de diâmetro são encontrados em células neurais; a parede do cisto é amorfa e tem até 4 pm de espessura. Os cistos não têm septo e encerram bradizoitos afunilados de 7 χ 1,5 pm. Em gado leiteiro, N. caninum é a principal causa de aborto em muitos países, particularmente nos EUA. Os bezerros podem ser abortados, natimortos, nascer abaixo do peso, fracos ou paralisados ou eles podem se tornar paralisados dentro de 4 semanas de nascimento. Encefalite não supurativa é a principal lesão em tecidos fetais abortados. Aborto pode ocorrer por toda a gestação e algumas vacas podem abortar novamente; mas mães desses bezerros são clinicamente normais.

Babebiose é causada por parasitas protozoários intraeritrocíticos do gênero Babesia. Uma ampla faixa de animais domésticos e silvestres e ocasionalmente o homem são afetados pela doença, a qual é transmitida por carrapatos e tem uma distribuição mundial. Duas espécies importantes em gado - Babesia bigemina e Babesia bovis - são disseminadas em áreas tropicais e subtropicais e são o foco dessa discussão. Em áreas endêmicas, duas características são importantes na determinação do risco de doença clínica: 1) bezerros têm um grau de imunidade (relacionada a anticorpos derivados do colostro e à idade) que persiste durante ~6 meses e 2) animais que se recuperam de infecções por Babesia estão imunes ao longo da vida. Assim, em altos níveis de transmissão por carrapato, todos os bezerros recém-nascidos infectados com Babesia aos 6 meses de idade, mostram poucos, se quaisquer, sinais clínicos e, subsequentemente, estarão imunes. Essa situação de estabilidade endêmica pode ser fomentada por uma redução natural (por exemplo, climática) ou artificial (por exemplo, tratamento com acaricida) nos números de carrapato para níveis onde a transmissão de Babesia por carrapatos em bezerros é insuficiente para assegurar que todos são infectados durante esse período inicial crítico. Outras circunstâncias que podem levar a surtos de clínicos incluem a introdução de gado suscetível em

24/144 áreas endêmicas e a incursão de carrapatos infectados com Babesia em áreas previamente sem carrapatos. Variação de resistência em imunidade foi demonstrada, mas provavelmente não é de significância na técnica. A doença aguda dura, em geral, um curso de ~1 semana. Um primeiro sinal é febre (frequentemente 41 °C ou maior), a qual persiste e é acompanhada depois por inapetência, taxa respiratória aumentada, tremores musculares, anemia, icterícia e perda de peso com hemoglobinemia e hemoglobinúria nos estágios finais. Envolvimento do SNC em virtude de acumulo de eritrócitos parasitados em capilares cerebrais ocorre frequentemente com infecção por B. bovis. Constipação ou diarréia podem estar presentes. Vacas prenhas frequentemente abortam. Com cepas virulentas de M. bovis, uma síndrome de choque hipotensivo, combinada com inflamação não específica generalizada, alterações de coagulação e estase eritrocítica, contribuem para a patogênese. Com a maioria das cepas de B. bigemina, os efeitos patogênicos referem-se mais diretamente à distribuição de eritrócitos. Animais que se recuperam de doença aguda permanecem infectados uma série de anos com B. bovis e durante uns poucos meses no caso de B. bigemina. Nenhum sinal é evidente durante esse estado de portador. Lesões incluem um baço alargado e friável; um fígado intumescido com vesícula biliar alargada contendo bile granular espessa; rins congestionados, de cor escura; e anemia e icterícia generalizadas. A urina é, com frequência, mas não invariavelmente, vermelha. Outros órgãos, incluindo o cérebro e coração, podem mostrar congestão ou hemorragias petequiais. A suscetibilidade de cruzamentos de gado a infecções por Babesia varia; por exemplo, gado Brahman é mais resistente a infecção por B. bovis do que cruzamentos Britânicos.

Conforme descrito acima, a presente invenção também refere-se à vacinas combinadas e/ou o uso combinado de composições imunogênicas para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que as infecções são causadas por M. bovis e pelo menos um outro patógeno relevante em gado. A vacina combinada, conforme descrito aqui compreende pelo menos um antígeno M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado, avirulento, conforme fornecido com os mesmos e um ou mais ou

25/144 tros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por um ou mais de outros patógenos relevantes em gado. O uso combinado ou o método de coadministração de dois ou mais antígenos de patógenos que afetam o gado compreende administração de uma primeira composição imunogênica compreendendo antígeno M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado, avirulento conforme fornecida com os mesmos e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por a outro patógeno relevante em gado.

Outros patógenos relevantes em gado que não M. bovis incluem aqueles conforme listado na seção antecedentes acima, mas não estão limitados a: i) patógenos de origem viral, tais como Vírus da diarréia viral bovina (Bovine Viral Diarrhea Virus - BVDV) tipo 1 (BVDV-1) e tipo 2 (BVDV-2), Virus da Parainfluenza-3 (PI-3), Vírus da rinotraqueíte bovina infecciosa (Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus - IBR), Vírus sincicial respiratório bovino (Bovine Respiratory Syncytial Virus - BRSV), Herpesvirus bovino (Bovine Herpesvirus - BHV), Rotavirus bovino (BRV), Enterovirus bovino (Bovine Enterovirus - BEV), Coronavirus bovino (BCV), Raiva bovina (BR), Parvovirus bovino (BPV) e Adenovirus e Astrovirus; ii) patógenos de origem bacteriana, tais como Mannheimia haemolytica (formalmente Pasteurella haemolytica), Pasteurella multocida, Haemophilus somnus (Histophilus ovis e Haemophilus agni), Actinomyces (Corynebacterium), Actinomyces pyogenes, Chlamydia psittaci, Campylobacter fetus venerealis e Campylobacter fetus fetus (formalmente C. fetus intestinalis), Leptospira interrogans, Leptospira pomona e Leptospira grippotyphosa, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjobovis), Brucella abortus, Brucella suis e Brucella melitensis, Eschericia coli, Listeria monocytogenes, Chlamydia psittaci, Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium haemolyticum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Moraxella bovis, Klebsiella spp, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhimurium; Salmonella newport, Mycobacterium avium paratuberculosis, Staphylococcus aureus, Streptococ

26/144 cus dysgalactiae, Mycoplasma dispar e Ureaplasma spp. e Streptococcus uberis iii) patógenos de outra origem, tais como Tritrichomonas foetus, Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton sarkisovii, Neospora caninum (formalmente Toxoplasma gondii), Cryptsporidium parvum, Cryptsporidium hominis, Babesia bigemina e Babesia bovis e Dictyocaulus viviparous (Doença do verme pulmonar).

O uso combinado ou o método de coadministração de dois ou mais antígenos de patógenos que afetam o gado compreende administração de uma primeira composição imunogênica compreendendo M. bovis antigen, de preferência o M. bovis atenuado, avirulento, conforme fornecido com os mesmos e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por um outro patógeno de gado, em que o referido outro patógeno de gado é selecionado do grupo consistindo em: i) patógenos de origem viral, tais como Vírus da diarréia viral bovina (Bovine Viral Diarrhea Virus - BVDV) tipo 1 (BVDV-1) e tipo 2 (BVDV-2), Virus da Parainfluenza-3 (PI-3), Vírus da rinotraqueíte bovina infecciosa (Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus - IBR), Virus sincicial respiratório bovino (Bovine Respiratory Syncytial Virus - BRSV), Herpesvirus bovino (Bovine Herpesvirus - BHV), Rotavirus bovino (BRV), Enterovirus bovino (Bovine Enterovirus - BEV), Coronavirus bovino (BCV), Raiva bovina (BR), Parvovirus bovino (BPV) e Adenovirus e Astrovirus; ii) patógenos de origem bacteriana, tais como Mannheimia haemolytica (formalmente Pasteurella haemolytica), Pasteurella multocida, Haemophilus somnus (Histophilus ovis e Haemophilus agni), Actinomyces (Corynebacterium), Actinomyces pyogenes, Chlamydia psittaci, Campylobacter fetus venerealis e Campylobacter fetus fetus (form al mente C. fetus intestinal is), Leptospira interrogans, Leptospira pomona e Leptospira grippotyphosa, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Brucella abortus, Brucella suis e Brucella melitensis, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Chlamydia psittaci, Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium haemolyticum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Moraxella bovis,

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Klebsiella spp, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhimurium; Salmonella newport, Mycobacterium avium paratuberculosis, Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalactiae, Mycoplasma dispare Ureaplasma spp. e Streptococcus uberis e iii) patógenos de outra origem, tais como Tritrichomonas foetus, Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton sarkisovii, Neospora caninum (formalmente Toxoplasma gondii), Cryptsporidium parvum, Cryptsporidium hominis, Babesia bigemina e Babesia bovis e Dictyocaulus viviparous (Doença do verme pulmonar) ou qualquer outro patógeno listado na seção antecedentes ou conhecido por ser patogênico em gado.

A presente invenção refere-se a vacinas combinadas e/ou ao uso combinado de composições imunogênicas para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que as infecções são causadas por M. bovis e pelo menos um outro patógeno relevante para o gado, em que a referida vacina ou uso combinado compreende ou faz uso de um antígeno M bovis, de preferência o M. bovis avirulento atenuado, conforme descrito aqui e um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Vírus da diarréia viral bovina (Bovine Viral Diarrhea Virus - BVDV) tipo 1 (BVDV-1) e tipo 2 (BVDV-2), Virus da Parainfluenza-3 (PI-3), Vírus da rinotraqueíte bovina infecciosa (Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus - IBR), Vírus sincicial respiratório bovino (Bovine Respiratory Syncytial Virus - BRSV), Herpesvirus bovino (Bovine Herpesvirus - BHV), Rotavirus bovino (BRV), Enterovirus bovino (Bovine Enterovirus - BEV), Coronavirus bovino (BCV), Raiva bovina (BR), Parvovirus bovino (BPV), Adenovirus Astrovirus, Mannheimia haemolytica (formalmente Pasteurella haemolytica), Pasteurella multocida, Haemophilus somnus (Histophilus ovis e Haemophilus agni), Actinomyces (Corynebacterium), Actinomyces pyogenes, Chlamydia psittaci, Campylobacter fetus venerealis e Campylobacter fetus fetus (formalmente C. fetus intestinalis), Leptospira interrogans, Leptospira pomona e Leptospira grippotyphosa, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Brucella abortus, Bru

28/144 cella suis e Brucella melitensis, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Chlamydia psittaci, Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium haemolyticum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Moraxella bovis, Klebsiella spp, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhimurium; Salmonella newport, Mycobacterium avium paratuberculosis, Cryptsporidium parvum, Cryptsporidium hominis, Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, Mycoplasma spp, Mycoplasma dispar e Ureaplasma spp., Tritrichomonas foetus, Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton sarkisovii, Neospora caninum (formalmente Toxoplasma gondii), Babesia bigemina e Babesia bovis e Dictyocaulus viviparous (Doença do verme pulmonar) e/ou qualquer outro patógeno conhecido por ser patogênico em gado, incluindo os patógenos discutidos em antecedentes.

O uso combinado ou o método de coadministração de dois ou mais antígenos de patógenos que afetam o gado compreende administração de uma primeira composição imunogênica compreendendo M. bovis antigen, de preferência o M. bovis atenuado, avirulento, conforme fornecido com os mesmos e pelo menos uma outra composição imunogênica compreendendo um ou mais outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por um outro patógeno de gado, em que o referido outro patógeno de gado é selecionado do grupo consistindo em: Vírus da diarréia viral bovina (Bovine Viral Diarrhea Virus BVDV) tipo 1 (BVDV-1) e tipo 2 (BVDV-2), Virus da Parainfluenza-3 (PI-3), Vírus da rinotraqueíte bovina infecciosa (Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus - IBR), Vírus sincicial respiratório bovino (Bovine Respiratory Syncytial Virus - BRSV), Herpesvirus bovino (Bovine Herpesvirus - BHV), Rotavirus bovino (BRV), Enterovirus bovino (Bovine Enterovirus - BEV), Coronavirus bovino (BCV), Raiva bovina (BR), Parvovirus bovino (PPV), Adenovirus Astrovirus, Mannheimia haemolytica (formalmente Pasteurella haemolytica), Pasteurella multocida, Haemophilus somnus (Histophilus ovis e Haemophilus agni), Actinomyces (Corynebacterium), Actinomyces pyogenes, Chlamydia psittaci, Campylobacter fetus venerealis e Campylobacter fetus fetus (for

29/144 malmente C. fetus intestinalis), Leptospira interrogans, Leptospira pomona e Leptospira grippotyphosa, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Brucella abortus, Brucella suis e Brucella melitensis, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Chlamydia psittaci, Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium haemolyticum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Moraxella bovis, Klebsiella spp, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhimurium; Salmonella newport, Mycobacterium avium paratuberculosis, Cryptsporidium parvum, Cryptsporidium hominis, Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, Mycoplasma spp, Mycoplasma dispar, Mycoplasma bovis e Ureaplasma spp., Tritrichomonas foetus, Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton sarkisovii, Neospora caninum (formalmente Toxoplasma gondii), Babesia bigemina e Babesia bovis e Dictyocaulus viviparous (Doença do verme pulmonar) e/ou qualquer outro patógeno listado na seção antecedentes ou conhecido por ser patogênico em gado. De preferência, a outra composição imunogênica compreende um antígeno de um ou mais de qualquer um dos patógenos relevantes em gado conforme listado acima.

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada ou o uso combinado de composições imunogênicas para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e/ou reprodutivo em gado, em que a vacina combinada ou uso combinado compreende um antígeno M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR [combo 001]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR [combo 002], De acordo com uma modalidade preferida, o antígeno IBR é um vírus vivo modificado [combo 003]. De acordo com uma outra modalidade, a vacina combinada de M. bovis atenuado e IBR contém

30/144 um antibiótico, por exemplo, neomicina, para conservação [combo 004],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por PI-3 [combo 005]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno PI-3 [combo 006]

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 007], De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 008].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por BHV [combo 009]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antíge

31/144 no BHV [combo 010].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e PI-3 [combo 011]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR e PI-3 [combo 012].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 013]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 014].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e BHV [combo 015]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antíge

32/144 no cada de IBR e BHV [combo 016].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por PI-3 e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 017], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de PI-3 e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 018].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por PI-3 e BHV [combo 019]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de PI-3 e BHV [combo 020].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 021], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M.

33/144 bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3 e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 022], De preferência, todos os antígenos virais são vírus vivos modificados [combo 023].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por BRSV e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 024], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de cada de BRSV e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 025].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e BHV [combo 026]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, BHV e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 027],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis

34/144 atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e BHV [combo 028]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de PI-3 e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e BHV [combo 029].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e BHV [combo 030]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, BHV e PI-3 [combo 031].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e BHV [combo 032], De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, BHV PI-3 e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 033].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado

35/144 contra infecções bacterianas dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por H. somnus [combo 034], De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno H. somnus [combo 035].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais e bacterianas dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e H. somnus [combo 036]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de H. somnus e IBR [combo 037],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais e bacterianas dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e H. somnus [combo 038]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3 e H. somnus [combo 039],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em

36/144 que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e H. somnus [combo 040]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3 e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e um antígeno de H. somnus [combo 041], De acordo com uma outra modalidade da referida vacina combinada, os antígenos IBR, PI-3 são vírus mortos [combo 042], De acordo com uma outra modalidade, qualquer uma das referidas vacinas combinadas, de preferência a vacina combinada que compreende antígenos IBR morto e PI-3 morto, contém neomicina e timerosal como conservantes [combo 043].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções virais dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), BHV e H. somnus [combo 044], De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, BHV, PI-3 e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e um antígeno de H. somnus [combo 045].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado

37/144 e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionados do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona. [combo 046]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos de pelo menos uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionados do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona [combo 047],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionados do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona. [combo 048]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionados do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa,

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Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona [combo 049],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e Leptospira pomona [combo 050]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR, de preferência um vírus vivo modificado e pelo menos uma bacterina de Leptospira pomona [combo 51].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionados do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona [combo 052], De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR e PI-3 e um ou mais antígenos cada de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionados do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospi

39/144 ra hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardj'o-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona [combo 053].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae e Leptospira pomona [combo 054]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira hardjo, Leptospira icterohaemorrhagiae e Leptospira pomona [combo 055].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionadas do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona [combo 056]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR,

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PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e um ou mais antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionados do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona [combo 057].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae e Leptospira pomona [combo 058]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e um ou mais antígenos cada de Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae e Leptospira pomona [combo 059]. De acordo com uma modalidade preferida, os antígenos virais são vírus mortos e os antígenos bacterianos são bacterinas [combo 060]. De preferência, as referidas vacinas combinadas, conforme descrito nesse parágrafo, ainda contêm neomicina e timerosal como conservantes [combo 061].

De acordo com uma outra modalidade, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui, vírus vivos modificados de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e bacterina de Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptos

41/144 pira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardj'o-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae e Leptospira pomona [combo 062], De acordo com uma outra modalidade preferida, a vacina combinada descrita nesse parágrafo compreende neomicina como um conservante [combo 063].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo2), BHV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionados do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona. [combo 064]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR BHV, PI-3 e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e um ou mais antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionados do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona [combo 065].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por uma ou mais

42/144 espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e H. somnus [combo 066]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e pelo menos um antígeno de H. somnus [combo 067],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e H. somnus [combo 068]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR e pelo menos um antígeno cada de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e pelo menos um antígeno de H. somnus [combo 069].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e H. somnus [combo 070]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3 e pelo menos um antígeno cada de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e pelo menos um antígeno de H. somnus [combo 071],

43/144

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona e H. somnus [combo 072]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona e H. somnus [combo 073].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e H. somnus [combo 074], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e um ou mais antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e pelo menos um antígeno de H. somnus [combo 075].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado

44/144 contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospirahardjo prajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona e H. somnus [combo 076]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira hardjo, Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona e H. somnus [combo 077],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), BHV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e H. somnus [combo 078]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), BHV e um ou mais antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e pelo menos um antígeno de H. somnus [combo 079].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada

45/144 compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e Campylobacter fetus [combo 080]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um ou mais antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e pelo menos um antígeno de Campylobacter fetus [combo 081].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira Icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona e Campylobacter fetus [combo 082]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos antígeno cada de Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira Icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona e Campylobacter fetus [combo 083]. De acordo com uma modalidade mais preferida, os antígenos bacterianos são culturas inteiras das referidas bactérias quimicamente inativadas, adsorvidas em hidróxido de alumínio [combo 084], De acordo com uma outra modalidade preferida, a referida vacina combinada compreende gentamicina e Anfotericina B como conservantes [combo 085].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada

46/144 compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e Campylobacter fetus [combo 086]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de IBR e um ou mais antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e pelo menos um antígeno de Campylobacter fetus [combo 087],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e Campylobacter fetus [combo 088]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3 e um ou mais antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e pelo menos um antígeno de Campylobacter fetus [combo 089].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e Campylobacter fetus [combo 090]. De acordo com uma mo

47/144 dalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e um ou mais antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e pelo menos um antígeno de Campylobacter fetus [combo 091].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), BHV, uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e Campylobacter fetus [combo 092], De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), BHV e um ou mais antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e pelo menos um antígeno de Campylobacter fetus [combo 093],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima, H. somnus e Campylobacter fetus [combo 094], De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais

48/144 antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima e pelo menos um antígeno cada de H. somnus e Campylobacter fetus [combo 095].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima, H. somnus e Campylobacter fetus [combo 096]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, H. somnus e Campylobacter fetus e um ou mais antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima, [combo 097],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima, H. somnus e Campylobacter fetus [combo 098]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, H. somnus e Campylobacter fetus e um ou mais antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima, [combo 099].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada

49/144 compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo, Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona, H. somnus e Campylobacter fetus [combo 100]. De acordo com uma outra modalidade, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona, H. somnus e Campylobacter fetus [combo 101].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima, H. somnus e Campylobacter fetus [combo 102], De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), H. somnus e Campylobacter fetus e um ou mais antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima [combo 100].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV

50/144 (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira Pomona, H. somnus e Campylobacter fetus [combo 103]. De acordo com uma outra modalidade, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona, H. somnus e Campylobacter fetus [combo 104],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), BHV e uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima, H. somnus e Campylobacter fetus [combo 105]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), BHV, H. somnus e Campylobacter fetus e um ou mais antígenos cada, de uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, conforme mencionado acima [combo 106].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções dos sistemas respiratório e reprodutivo em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por

51/144

BHV, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), PI-3, IBR, Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira borgpetersenii Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Campylobacter fetus [combo 107], De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende atenuada M. bovis, conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de BHV, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), IBR, PI-3, Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira borgpetersenii Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e/ou Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira borgpetersenii, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Campylobacter fetus [combo 108].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência ο Μ. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Pasteurella haemolytica e Pasteurella multocida [combo 109]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de bacterina de Pasteurella haemolytica e bacterina de Pasteurella multocida [combo 110] De acordo com uma outra modalidade preferida, a referida vacina combinada compreende neomicina e timerosal como conservantes [combo 111].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, Pasteurella haemolytica e

52/144

Pasteurella multocida [combo 112], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno de cada de IBR, de preferência como vírus vivos modificados, bacterina de Pasteurella haemolytica e bacterina de Pasteurella multocida [combo 113]. De acordo com uma outra modalidade preferida, a referida vacina combinada compreende neomicina e timerosal como conservantes [combo 114],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, Pasteurella haemolytica e Pasteurella multocida [combo 115]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, de preferência como vírus vivos modificados, bacterina de Pasteurella haemolytica e bacterina de Pasteurella multocida [combo

116] . De acordo com uma outra modalidade preferida, a referida vacina combinada compreende neomicina e timerosal como conservantes [combo

117] ,

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), Pasteurella haemolytica e Pasteurella multocida [combo 118]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, de preferência como vírus vivos modificados, BVDV

53/144 (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), bacterina de Pasteurella haemolytica e bacterina de Pasteurella multocida [combo 119]. De acordo com uma outra modalidade preferida, a referida vacina combinada compreende neomicina e timerosal como conservantes [combo 120],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), BHV, Pasteurella haemolytica e Pasteurella multocida [combo 121], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), BHV, de preferência como vírus vivos modificados, bacterina de Pasteurella haemolytica e bacterina de Pasteurella multocida [combo 122], De acordo com uma outra modalidade preferida, a referida vacina combinada compreende neomicina e timerosal como conservantes [combo 123].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por BRSV [combo 124], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos antígeno de BRSV [combo 125].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado

54/144 contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR e BRSV [combo 126]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos antígeno de cada IBR, de preferência como vírus vivos modificados e BRSV [combo 127],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3 e BRSV [combo 128]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, de preferência como vírus vivos modificados e BRSV [combo 129].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 130]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BRSV, de preferência como vírus vivos modificados e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 131].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado

55/144 contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BRSV, BHV e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 132], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BRSV, BHV, de preferência como vírus vivos modificados e BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2) atenuado [combo 133].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e BRSV [combo 134], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e BRSV [combo 135],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e BRSV [combo 136]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, de preferência como vírus vivos modificados, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e BRSV [combo 137],

56/144

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e BRSV [combo 138]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, de preferência como vírus vivos modificados, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e BRSV [combo 139].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e BRSV [combo 140]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência como vírus vivos modificados, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e BRSV [combo 141],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), BHV, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e BRSV [combo 140]. De acordo com

57/144 uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), BHV, de preferência como vírus vivos modificados, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e BRSV [combo 141],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 142], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 143].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 144], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, de preferência como vírus vivo modificado, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 145].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e

58/144 outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 146]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, de preferência como vírus vivos modificados, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 147],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 148]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência como vírus vivos modificados e Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 149].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), de preferência atenuada BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), BHV, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 150]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e

59/144 pelo menos um antígeno cada de IBR, PI-3, BVDV (tipo 1 e/ou tipo 2), BHV, de preferência como vírus vivos modificados, Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida e H. somnus [combo 151].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 e 151], que ainda compreende componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionados do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo, Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona [combo 152]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 e 151], que ainda compreende um ou mais antígenos cada de uma ou mais espécies de Leptospira, de preferência selecionados do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjopráftno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona. [combo 153].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 e 151 ], que ainda compreende um componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Campylobacter fetus [combo 154],

60/144

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 110, 111,112,

113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126,127,

128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141,142,

143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 e 151], que ainda compreende antígeno de Campylobacter fetus [combo 155].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 110,

111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125,

126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140,

141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 e 151], que ainda compreende um componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por uma ou mais espécies patogênicas de Leptospira, de preferência selecionados do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira riard/oprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona e Campylobacter fetus [combo 156]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150 e 151], que ainda compreende um ou mais antígeno cada de Campylobacter fetus e de uma ou mais espécies de Leptospira, de preferência selecionados do grupo consistindo em Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira borgpetersenii, Leptospira hardjo (Leptospira hardjopráfAno e Leptospira hardjo-bovis), Leptospira prajitno, Leptospira icterohaemmorrhagiae, Leptospira bovis, Leptospira interrogans e Leptospira pomona, and. [combo 157].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada

61/144 compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Clostridium perfringens, de preferência Tipos A, C e/ou D [combo 158]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e toxinas de Clostridium perfringens Tipos C e D [combo 254], De acordo com uma modalidade mais preferida, a referida vacina compreende antígenos, de preferência toxinas, de Clostridium perfringens, de preferência Tipos A, B, C, e/ou D [combo 159].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende um componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Clostridium perfringens, de preferência Tipos A, C e/ou D [combo 160]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024,

025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038,039,

040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053,054,

055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068,069,

62/144

070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083,084,

085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098,099,

100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113,114,

115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128,129,

130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143,144,

145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende antígeno de Clostridium perfringens, de preferência Tipos A, C, e/ou D [combo 161]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028,

029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042,043,

044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057,058,

059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072,073,

074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087,088,

089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102,103,

104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117,118,

119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132,133,

134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147,148,

149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende antígeno de Clostridium perfringens Tipos, B, C, e/ou D [combo 162],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D e Clostridium tetani [combo 163]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e toxinas de Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D e Clostridium tetani [combo 164], De acordo com uma modalidade mais preferida, a refe

63/144 rida vacina compreende antígenos, de preferência toxinas, de Clostridium perfringens Tipos A, B, C, e/ou D e Clostridium tetani [combo 165].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D e Clostridium tetani [combo 166]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024,

025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038,039,

040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053,054,

055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068,069,

070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083,084,

085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098,099,

100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113,114,

115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128,129,

130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143,144,

145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende antígeno de Clostridium perfringens Tipos A, C, e/ou D e Clostridium tetani [combo 167]. De acordo com uma outra modalidade, a presen64/144 te invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011,012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028,

029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042,043,

044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057,058,

059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072,073,

074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087,088,

089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102,103,

104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117,118,

119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132,133,

134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147,148,

149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende um ou mais antígenos de Clostridium perfringens Tipos A, B, C, e/ou D e Clostridium tetani [combo 168].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D [combo 169]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos, de preferência toxinas, cada de Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D [combo 170].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo001,

002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015,016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

65/144

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D [combo 171]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024,

025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039,

040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054,

055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069,

070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084,

085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099,

100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114,

115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129,

130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144,

145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende um ou mais antígenos cada de of Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D [combo 172]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010,

011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025,

026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040,

041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055,

66/144

056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069,070,

071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084,085,

086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099,100,

101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114,115,

116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129,130,

131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144,145,

146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156 e 157], que ainda compreende um ou mais antígenos cada de Clostridium perfringens Tipos, A, B, C, e/ou D, Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium tetani [combo 173].

De acordo com uma modalidade mais preferida, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii, Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D e BRSV [combo

174] . De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos, de preferência toxinas, cada de Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D e Mycoplasma bovis [combo

175] ,

De acordo com uma modalidade mais preferida, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii, Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D e H. somnus. [com

67/144 bo 176]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos, de preferência toxinas, cada de Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos C e D e H. somnus. [combo 177],

De acordo com uma modalidade mais preferida, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii, Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D, BRSV e H. somnus [combo 178]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos, de preferência toxinas, cada de Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii e Clostridium perfringens Tipos A, C e/ou D, Mycoplasma bovis e H. somnus [combo 179].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Salmonella, de preferência Salmonella dublin, Salmonella newport e Salmonella typhimurium [combo 180]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais toxinas de Salmonella, de preferência cada um de Salmonella dublin, Salmonella newport e/ou Salmonella typhimurium [combo 181].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refe68/144 re-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015,016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164,165,

166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178 e 179], que ainda compreende componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Salmonella, de preferência Salmonella dublin, Salmonella newport e Salmonella typhimurium [combo 182]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025,

026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039,040,

041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054,055,

056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069,070,

071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084,085,

086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099,100,

101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114,115,

116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129,130,

131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144,145,

146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 254,159,

160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173,174,

175, 176, 177, 178 e 179], que ainda compreende um ou mais antígenos, de preferência toxinas de Salmonella, de preferência cada um de Salmonella

69/144 dublin, salmonella newport e/ou Salmonella typhimurium [combo 183].

De acordo com uma modalidade preferida, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida, Salmonella, de preferência Salmonella dublin, Salmonella newport e Salmonella typhimurium [combo 184], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida, Salmonella, de preferência Salmonella dublin, Salmonella newport e Bacterina-Toxoide de Salmonella typhimurium [combo 185]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a referida vacina combinada compreende múltiplos isolados de Pasteurella haemolytica Tipo A1 e uma fração toxoide associada e isolados únicos de P. multocida, S. dublin e S. typhimurium [combo 186].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Moraxella bovis e/ou Klebsiella spp., de preferência Klebsiella pneumoniae [combo 187], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais toxinas cada de Moraxella bovis e/ou Klebsiella spp., de preferência Klebsiella pneumoniae [combo 188].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031,

70/144

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164,165,

166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179,180,

181, 182, 183, 184, 185 e 186], que ainda compreende componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Moraxella bovis e/ou Klebsiella spp., de preferência Klebsiella pneumoniae [combo 189]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021,

022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035,036,

037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050,051,

052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065,066,

067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080,081,

082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095,096,

097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110,111,

112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125,126,

127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140,141,

142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155,156,

157, 158, 254, 159, 163, 164, 165, 169, 170, 174, 175, 176, 177, 178,179,

180, 181, 184, 185 e 186], que ainda compreende um ou mais antígenos, de preferência toxinas, cada de Moraxella bovis e/ou Klebsiella spp., de preferência Klebsiella pneumoniae [combo 190].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado

71/144 contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Escherichia coli [combo 191]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais toxinas de Escherichia coli [combo 192],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164,165,

166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179,180,

181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189 e 190], que ainda compreende um componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Escherichia coli [combo 193]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015,

016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029,030,

031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044,045,

046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059,060,

061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074,075,

72/144

076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089,090,

091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104,105,

106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119,120,

121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134,135,

136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149,150,

151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 254, 159, 160, 161, 162, 163,164,

165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178,179,

180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189 e 190], que ainda compreende antigen, de preferência uma toxina de Escherichia coli [combo 194],

De acordo com uma modalidade preferida, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida, Salmonella dublin, Salmonella typhimurium e Escherichia coli [combo 195]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos cada de Pasteurella haemolytica, Pasteurella multocida, Salmonella dublin, Salmonella typhimurium e Bacterina-Toxoide de Escherichia coli [combo 196]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a referida vacina combinada compreende múltiplos isolados de Pasteurella haemolytica Tipo A1 e uma fração toxoide associada e isolados únicos de P. multocida, S. dublin e S. typhimurium [combo 197],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Rotavirus bovino [combo 198]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina

73/144 combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e antígeno de Rotavirus bovino [combo 199].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164,165,

166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179,180,

181, 182, 183, 184, 185,186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 195, 196 e 197], que ainda compreende um componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Rotavirus bovino [200]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027,

028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042,

043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057,

058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072,

073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087,

088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102,

103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117,

118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132,

133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147,

148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 254, 159, 160, 161,

74/144

162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 e 197], que ainda compreende antígeno de Rotavirus bovino [combo 201].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Coronavirus bovino [combo 202], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e antígeno de Coronavirus bovino [combo 203].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164,165,

166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179,180,

181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194,195,

196 e 197], que ainda compreende um componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Coronavirus bovino [combo 204], De acordo com uma outra

75/144 modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023,

024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037,038,

039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052,053,

054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067,068,

069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082,083,

084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097,098,

099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112,113,

114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127,128,

129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142,143,

144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158,

254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171,172,

173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186,187,

188,189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 e 197], que ainda compreende antígeno de Coronavirus bovino [combo 205].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por coronavirus bovino e Rotavirus bovino [combo 206]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos cada de coronavirus bovino e Rotavirus bovino [combo 207],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

76/144

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164,165,

166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179,180,

181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194,195,

196 e 197], que ainda compreende componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por coronavirus bovino e Rotavirus bovino [combo 208]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018,

019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032,033,

034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047,048,

049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062,063,

064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077,078,

079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092,093,

094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107,108,

109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122,123,

124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137,138,

139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152,153,

154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166,167,

168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181,182,

183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196 e 197], que ainda compreende um ou mais antígenos cada de coronavirus bovino e Rotavirus bovino [combo 209].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada

77/144 compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Cryptosporidium parvum [combo 210]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e antígeno de Cryptosporidium parvum [combo 211],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164,165,

166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179,180,

181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194,195,

196, 197, 198, 199, 200, 201,202, 203, 204, 205, 206, 207, 208 e 209], que ainda compreende um componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Cryptosporidium parvum [combo 212], De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024,

025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038,039,

040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053,054,

055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068,069,

78/144

070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083,084,

085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098,099,

100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113,114,

115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128,129,

130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143,144,

145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158,254,

159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172,173,

174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187,188,

189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208 e 209], que ainda compreende antígeno de Cryptosporidium parvum [combo 213].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Cryptosporidium hominis [combo 214], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e antígeno de Cryptosporidium hominis [combo 215].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

79/144

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164,165,

166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179,180,

181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194,195,

196, 197, 198, 199, 200, 201,202, 203, 204, 205, 206, 207, 208 e 209], que ainda compreende um componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Cryptosporidium hominis [combo 216]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024,

025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038,039,

040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053,054,

055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068,069,

070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083,084,

085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098,099,

100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113,114,

115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128,129,

130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143,144,

145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158,254,

159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172,173,

174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187,188,

189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208 e 209], que ainda compreende antígeno de Cryptosporidium hominis [combo 217].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Cryptosporidium parvum e Cryptosporidium hominis [combo 218]. De acordo com

80/144 uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos cada de Cryptosporidium parvum e Cryptosporidium hominis [combo 219].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164,165,

166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179,180,

181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194,195,

196, 197, 198, 199, 200, 201,202, 203, 204, 205, 206, 207, 208 e 209], que ainda compreende componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Cryptosporidium parvum e Cryptosporidium hominis [combo 220]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018,

019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032,033,

034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047,048,

049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062,063,

064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077,078,

079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092,093,

094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107,108,

81/144

109,	110,	111,	112,	113,	114,	115,	116,	117,	118,	119,	120,	121,	122,	123,
124,	125,	126,	127,	128,	129,	130,	131,	132,	133,	134,	135,	136,	137,	138,
139,	140,	141,	142,	143,	144,	145,	146,	147,	148,	149,	150,	151,	152,	153,
154,	155,	156,	157,	158,	254,	159,	160,	161,	162,	163,	164,	165,	166,	167,
168,	169,	170,	171,	172,	173,	174,	175,	176,	177,	178,	179,	180,	181,	182,
183,	184,	185,	186,	187,	188,	189,	190,	191,	192,	193,	194,	195,	196,	197

198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208 e 209], que ainda compreende um ou mais antígenos cada de Cryptosporidium parvum e Cryptosporidium hominis [combo 221].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Mycobacterium avium paratuberculosis [combo 222], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e antígeno de Mycobacterium avium paratuberculosis [combo 223].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164,165,

82/144

166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179,180,

181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194,195,

196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209,210,

211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220 e 221], que ainda compreende um componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Mycobacterium avium paratuberculosis [combo 224], De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024,

025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038,039,

040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053,054,

055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068,069,

070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083,084,

085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098,099,

100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113,114,

115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128,129,

130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143,144,

145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158,254,

159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172,173,

174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187,188,

189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220 e 221], que ainda compreende antígeno de Mycobacterium avium paratuberculosis [combo 225].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Adenovírus [combo 226]. De acordo com uma modalidade preferida, a vaci

83/144 na combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e antígeno de Adenovirus [combo 227],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164,165,

166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179,180,

181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194,195,

196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209,210,

211,212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221,222, 223, 224 e 225], que ainda compreende um componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Adenovirus [combo 228]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026,

027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041,

042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056,

057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071,

072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086,

087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101,

102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116,

117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131,

84/144

132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145,146,

147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159,160,

161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172, 173, 174,175,

176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187, 188, 189,190,

191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204205,

206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219,220,

221, 222, 223,224 e 225], que ainda compreende antígeno de Adenovirus [combo 229].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Astrovírus [combo 230]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e antígeno de Astrovirus [combo 231].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164,165,

166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179,180,

181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194,195,

85/144

196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 e 229], que ainda compreende um componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Astrovirus [combo 232], De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022,

023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036,037,

038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051,052,

053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066,067,

068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081,082,

083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096,097,

098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111,112,

113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126,127,

128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141,142,

143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183,184,

185,186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198,199,

200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213,214,

215, 216, 217, 218, 219, 220, 221,222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 e229], que ainda compreende antígeno de Astrovirus [combo 233].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Parvovirus bovino [combo 234], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e antígeno de Parvovirus bovino

86/144 [combo 235].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092,	093,	094,	095,	096,	097,	098,	099,	100,	101,	102,	103,	104,	105,	106,
107,	108,	109,	110,	111,	112,	113,	114,	115,	116,	117,	118,	119,	120,	121,
122,	123,	124,	125,	126,	127,	128,	129,	130,	131,	132,	133,	134,	135,	136,
137,	138,	139,	140,	141,	142,	143,	144,	145,	146,	147,	148,	149,	150,	151,
152,	153,	154,	155,	156,	157,	158,	254,	159,	160,	161,	162,	163,	164,	165,
166,	167,	168,	169,	170,	171,	172,	173,	174,	175,	176,	177,	178,	179,	180,
181,	182,	183,	184,	185,	186,	187,	188,	189,	190,	191,	192,	193,	194,	195,

196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210,

211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225,

226, 227, 228, 229, 230, 231, 232 e 233], que ainda compreende um componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Parvovirus bovino [combo 236]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017,

018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031,032,

033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046,047,

048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061,062,

063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076,077,

078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091,092,

093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106,107,

108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121,122,

123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136,137,

87/144

138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151,152,

153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165,166,

167, 168, 169, 170,171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180,181,

182, 183, 184, 185,186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195,196,

197 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204 205, 206, 207, 208, 209, 210,211,

212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225,226,

227, 228, 229, 230, 231, 232 e 233], que ainda compreende antígeno de Parvovirus bovino [combo 237],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Cryptosporidium parvum, Adenovirus, Astrovirus, Parvovirus bovino e Mycobacterium avium paratuberculosis [combo 238]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência ο Μ. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos cada de Cryptosporidium parvum, Adenovirus, Astrovirus, Parvovirus bovino e Mycobacterium avium paratuberculosis [combo 239].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Escherichia coli, Salmonella spp., de preferência Salmonella dublin, Salmonella typhimurium e Salmonella newport, Rotavirus bovino e coronavirus bovino, Cryptosporidium parvum, Adenovirus, Astrovirus, Parvovirus bovino e Mycobacterium avium paratuberculosis [combo 240]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um

88/144 ou mais antígenos cada de Escherichia coli, Salmonella spp., de preferência Salmonella dublin, Salmonella typhimurium e Salmonella newport, Rotavirus bovino e coronavirus bovino, Cryptosporidium parvum, Adenovirus, Astrovírus, Parvovirus bovino e Mycobacterium avium paratuberculosis [combo 241],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Streptococcus spp., de preferência Streptococcus uberis e/ou Streptococcus dysgalactiae [combo 242], De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e antígeno de Streptococcus spp., de preferência cada um de Streptococcus uberis e/ou Streptococcus dysgalactiae [combo 243]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos de Streptococcus spp., de preferência cada um de Streptococcus uberis e/ou Streptococcus dysgalactiae [combo 244],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Streptococcus spp., de preferência Streptococcus uberis e/ou Streptococcus dysgalactiae e/ou Staphylococcus aureus [combo 245]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos de Streptococcus spp., de preferência cada um de Streptococ

89/144 cus uberis e/ou Streptococcus dysgalactiae e/ou Staphylococcus aureus [combo 246].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer urn de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092,	093,	094,	095,	096,	097,	098,	099,	100,	101,	102,	103,	104,	105,	106,
107,	108,	109,	110,	111,	112,	113,	114,	115,	116,	117,	118,	119,	120,	121,
122,	123,	124,	125,	126,	127,	128,	129,	130,	131,	132,	133,	134,	135,	136,
137,	138,	139,	140,	141,	142,	143,	144,	145,	146,	147,	148,	149,	150,	151,
152,	153,	154,	155,	156,	157,	158,	254,	159,	160,	161,	162,	163,	164,	165,
166,	167,	168,	169,	170,	171,	172,	173,	174,	175,	176,	177,	178,	179,	180,
181,	182,	183,	184,	185,	186,	187,	188,	189,	190,	191,	192,	193,	194,	195,

196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231,232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240 e 241], que ainda compreende componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Streptococcus spp., de preferência Streptococcus uberis e/ou Streptococcus dysgalactiae e/ou Staphylococcus aureus [combo 247], De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018,

019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033,

034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048,

049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063,

064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078,

079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093,

90/144

094,	095,	096, 097, 098, 099,	100,	101,	102,	103,	104,	105,	106,	107,	108,
109,	110,	111, 112, 113, 114,	115,	116,	117,	118,	119,	120,	121,	122,	123,
124,	125,	126, 127, 128, 129,	130,	131,	132,	133,	134,	135,	136,	137,	138,
139,	140,	141, 142, 143, 144,	145,	146,	147,	148,	149,	150,	151,	152,	153,
154,	155,	156, 157,158, 254,	159,	160,	161,	162,	163,	164,	165,	166,	167,
168,	169,	170,171, 172, 173,	174,	175,	176,	177,	178,	179,	180,	181,	182,
183,	184,	185,186, 187, 188,	189,	190,	191,	192,	193,	194,	195,	196,	197
198,	199,	200, 201, 202, 203,	204	205,	206,	207,	208,	209,	210,	211,	212,
213,	214,	215, 216, 217, 218,	219,	220,	221,	222,	223,	224,	225,	226,	227,
228,	229,	230, 231, 232, 233,	234,	235, :	236, ;	237, 238, 239, 240 e	241],	que

ainda compreende um ou mais antígenos cada de Streptococcus spp., de preferência Streptococcus uberís e/ou Streptococcus dysgalactiae e/ou Staphylococcus aureus [combo 248]. De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024,

025, 026, 027, 028, 029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038,039,

040, 041, 042, 043, 044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053,054,

055, 056, 057, 058, 059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068,069,

070, 071, 072, 073, 074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083,084,

085, 086, 087, 088, 089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098,099,

100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113,114,

115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128,129,

130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143,144,

145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158,254,

159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170,171, 172,173,

174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185,186, 187,188,

189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197 198, 199, 200, 201, 202,203,

204 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217,218,

219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232,233,

234, 235, 236, 237, 238, 239, 240 e 241], que ainda compreende um ou mais antígenos de vários sorotipos de Streptococcus spp., de preferência

91/144 de vários sorotipos cada de Streptococcus uberis e/ou Streptococcus dysgalactiae e/ou Staphylococcus aureus [combo 249].

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Streptococcus spp., de preferência Streptococcus uberis, Streptococcus dysgalactiae e/ou Staphylococcus aureus, Klebsiella spp. e Mycoplasma spp. [combo 250]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos de Streptococcus spp., de preferência de Streptococcus uberis, Streptococcus dysgalactiae e/ou Streptococcus aureus, Klebsiella spp. e Mycoplasma spp. [combo 251]. De acordo com uma modalidade mais preferida, a vacina combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos de Streptococcus spp., de preferência cada um de Streptococcus uberis e/ou Streptococcus dysgalactiae, Staphylococcus aureus, Klebsiella spp., Mycoplasma spp. e endotoxina [combo 252],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas em gado, em que a vacina combinada compreende M. bovis,, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por Trichophyton e Microsporum, de preferência selecionados do grupo consistindo em Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton equinum, Trichophyton sarkisovii, Microsporum canis, Microsporum canis var. obesum, Microsporum canis var. distortum e Microsporum gypseum [combo 253]. De acordo com uma modalidade preferida, a vacina

92/144 combinada compreende M. bovis, de preferência o M. bovis atenuado e avirulento conforme descrito aqui e um ou mais antígenos de Trichophyton e Microsporum, de preferência selecionados do grupo consistindo em Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton equinum, Trichophyton sarkisovii, Microsporum canis, Microsporum canis var. obesum, Microsporum canis var. distortum e Microsporum gypseum [combo 254],

De acordo com uma outra modalidade, a presente invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016,

017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028, 029, 030,031,

032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042, 043, 044, 045,046,

047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057, 058, 059, 060,061,

062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072, 073, 074, 075,076,

077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087, 088, 089, 090,091,

092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102, 103, 104, 105,106,

107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120,121,

122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,136,

137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150,151,

152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161, 162, 163, 164,165,

166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179,180,

181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194,195,

196, 197, 198, 199, 200, 201,202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224,225,

226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239,240,

241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250 e 251], que ainda compreende componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por infecções causadas por Trichophyton e Microsporum, de preferência selecionados do grupo consistindo em Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton equinum, Trichophyton sarkisovii, Microsporum canis, Microsporum canis var. obesum, Microsporum canis var. distortum e Microsporum gypseum [combo 255]. De acordo com uma outra modalidade, a presente

93/144 invenção refere-se a uma vacina combinada de acordo com qualquer um de [combo 001, 002, 003, 004, 005, 006, 007, 008, 009, 010, 011, 012, 013, 014, 015, 016, 017, 018, 019, 020, 021, 022, 023, 024, 025, 026, 027, 028,

029, 030, 031, 032, 033, 034, 035, 036, 037, 038, 039, 040, 041, 042,043,

044, 045, 046, 047, 048, 049, 050, 051, 052, 053, 054, 055, 056, 057,058,

059, 060, 061, 062, 063, 064, 065, 066, 067, 068, 069, 070, 071, 072,073,

074, 075, 076, 077, 078, 079, 080, 081, 082, 083, 084, 085, 086, 087,088,

089, 090, 091, 092, 093, 094, 095, 096, 097, 098, 099, 100, 101, 102,103,

104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117,118,

119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132,133,

134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147,148,

149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157,158, 254, 159, 160, 161,162,

163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176,177,

178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191,192,

193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201,202, 203, 204, 205, 206,207,

208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221,222,

223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236,237,

238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251 e 252], que ainda compreende um ou mais antígenos de Trichophyton e Microsporum, de preferência selecionados do grupo consistindo em Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton equinum, Trichophyton sarkisovii, Microsporum canis, Microsporum canis var. obesum, Microsporum canis var. distortum e Microsporum gypseum [combo 256].

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção também refere-se ao uso combinado ou coadministração de qualquer um dos antígenos fornecidos nas vacinas combinadas [combo 1 a combo 256]. De preferência, o antígeno M. bovis é fornecido em uma primeira composição imunogênica e qualquer outro antígeno/antígenos são fornecidos em uma ou mais de outras composições imunogênicas a ser administradas.

De acordo com outra modalidade, os componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por um ou mais patógeno(s) relevante(s) para o gado como fonte da

94/144 vacina combinada fornecida com os mesmos é qualquer um incluído nas vacinas selecionadas do grupo consistindo em: Alpha 7®, ALPHA-7/MB®, ALPHA-CD®, BAR-VAC® 7, BAR-VAC® 7/SOMNUS, BAR-VAC® 8, BARVAC® CD, BAR-VAC® C/DT, BREED-BACK® FP 10, BREED-BACK® FP 10 HS, BREED-BACK® FP 5, BREED-BACK® FP 5 HS, BREED-BACK-10®, CALIBER® 3, CALIBER® 7, ELITE 4®, ELITE 9®, ELITE 9-HS®, EXPRESS®! 0, EXPRESS®10-HS, EXPRESS® 3, EXPRESS® 3/Lp, EXPRESS 4®, EXPRESS® 5, EXPRESS® 5-HS, EXPRESS® 5-PHM, EXPRESS® I, EXPRESS® l/LP, OCU-GUARD® MB, PULMO-GUARD® MpB, PULMOGUARD® PH-M, PULMO-GUARD® PH-M/SDT, PULMO-GUARD® PHM-1, TETGUARD®, VIBRIO-LEPTO-5® (todas da Boehringer Ingelheim, St. Joseph, MO); Cobalt® 7, l-Site®, Lepto 5, Master Guard® Preg 5, Master Guard® 10, Master Guard® 10 + Vibrio, Master Guard® J5, P.H.M. Bac® 1, Pre-vent 6®, Respromune® 4, Respromune® 4 + Somnumune® (IM, SC), Respromune® 5 l-B-P+BRSV, Respromune® 5+L5, Respromune® 5+L5 Somnus, Respromune® 5+Somnumune, Respromune® 5+VL5, Respromune® 8, Respromune® 9, Respromune® 10, Scour Vac® 4, Scour Vac® 9, Scour Vac® E coli + C, Somnumune®, Titanium® 3, Titanium® 4, Titanium® 4 L5, Titanium® 5, Titanium® 5 L5, Titanium® 5+P.H.M. Bac®-1, Titanium® BRSV 3, Titanium® IBR, Titanium® IBR-LP (todas da Agri Laboratories Inc., St. Joseph, MO); Herd-Vac® 3, Herd-Vac® 3 S, Herd-Vac® 8, Herd-Vac® 9, Surround® 4, Surround® 4+HS, Surround® 8, Surround® 9, Surround® 9+HS, Surround® HS, Surround®™ L5, Surround™ V-L5 (todas da BioCor, Omaha, NE (Pfizer)); Mycomune® (Biomune Co., Lenexa, KS); vacina Bluetongue, vacina contra a Diarréia Viral Bovina, bacterina bovina de Campylobacter fetus, Essential 1, Essential 2, Essential 2+P, Essential 3, Essential 3+T, Essential 4, Lepto-5, bacterina de Mannheimia haemolytica-Pasteurella multocida, Pre-breed 6, Pre-breed 8, Respira-1, Respira-3, vacina Wart (todas da Colorado Soro Company, Denver, CO); Pyramid® 3, Pyramid® 4, Pyramid® 4 + Presponse® SQ, Pyramid® 5, Pyramid® 8, Pyramid® 9, Pyramid® IBR, Pyramid® IBR+Lepto, Triangle® 1 + Tipo II BVD, Triangle® 3 + VL5, Triangle® 4 + HS, Triangle® 4 + PH/HS, Triangle® 4 + PH-K, Trian

95/144 gle® 4 + Tipo II BVD, Triangle® 9 + HS, Triangle® 9 + PH-K, Triangle® + Tipo II BVD, Trichguard®, Trichguard® + V5L, TriVib 5L® (todas da Fort Dodge Animal Health, Overland Park, KS (Wyeth)); bacterina J-5 de Escherichia coli, bacterina de espécies Serpens; toxoide-bacterina de Staphylococcus aureus (todas da Hygieia Biological Laboratories, Woodland, CA); Endovac-Bovi® com Immuneplus® (Immvac, Inc., Columbia, MO); 20/20 Vision® com Spur®, L5 SQ, Neoguard®, MasterGuard® Preg 5, Once PMH®, Once PMH® SQ, Vibralone®-L5, Vision® 7 Somnus com Spur®, Vision® 7 com Spur®, Vision® 8 Somnus com Spur®, Vision® 8 com Spur®, Vision® CD-T com Spur®, Vision® CD com Spur®, Vista® IBR SQ, Vista® 3 SQ, Vista® 5 SQ, Vista® 5 L5 SQ, Vista® Once SQ, VL5 SQ, Volar®, (todas da Intervet Inc., Millsboro, DE); Vac®, Reliant® 3, Reliant® 4, Reliant® IBR, Reliant® IBR/BVD, Reliant® IBR/Lepto, Reliant® Plus BVD-K (Dual IBR®), Reliant® Plus (Dual IBR®), Respishield® 4, Respishield® 4 L5, Respishield® HM (todas da Merial LTD, Duluth, GA); Arsenal® 4,1, Arsenal® IBR, Arsenal® IBR BVD, Bovine Pili Shield®, Bovine Pili Shield®+C, Clostri Shield® 7, Clostri Shield® BCD, Fusogard®, Lepto Shield® 5, Pinkeye Shield® XT4, Salmo Shield® T, Salmo Shield® TD, Scour Bos® 4, Scour Bos® 9, Somnu Shield® Trep Shield® HW, Vib Shield® L5, Vib Shield® Plus, Vib Shield® Plus L5, Vira Shield® 2, Vira Shield® 2+BRSV, Vira Shield® 3, Vira Shield® 3+VL5, Vira Shield® 4, Vira Shield® 4+L5, Vira Shield® 5, Vira Shield® 5+L5, Vira Shield® 5+L5 Somnus, Vira Shield® 5+Somnus, Vira Shield® 5+VL5, Vira Shield® 5+VL5 Somnus, Vira Shield® 6, Vira Shield® 6+Somnus, Wart Shield® (todas da Novartis Animal Health, Basel, Suíça); Bovi-K® 4, BoviShield® 3, Bovi-Shield® 4, Bovi-Shield® BRSV, Bovi-Shield® FP® 4+L5, Bovi-Shield® GOLD 3, Bovi-Shield® GOLD 5, Bovi-Shield® GOLD FP® 5 L5, Bovi-Shield® GOLD FP® 5 VL5, Bovi-Shield® Gold IBR-BVD, BoviShield® Gold IBR-BVD-BRSV-LP, Bovi-Shield® IBR, Bovi-Shield® IBRBRSV-LP, Bovi-Shield® IBR-BVD, Bovi-Shield® IBR-BVD-BRSV-LP, BoviShield® IBR-PI3-BRSV, Calf-Guard®, CattleMaster® 4, CattleMaster® 4+L5, CattleMaster® 4+VL5, CattleMaster® BVD-K, CattleMaster® Gold FP® 5, CattleMaster® Gold FP® 5 L5, Defensor® 3, Fortress® 7, Fortress® 8, For

96/144 tress® CD, Leptoferm®-5, One Shot®, One Shot Ultra® 7, One Shot Ultra® 8, PregGuard® FP 9, PregGuard® Gold FP® 10, Resvac® BRSV/Somubac®, Resvac® 4/Somubac®, ScourGuard 3® (K), ScourGuard 3® (K)/C, Somubac®, Spirovac®, Spirovac® L5, Spirovac® VL5, StayBred® VL5, TSV-2®, Ultrabac® 7, Ultrabac® 7/Somubac®, Ultrabac® 8, Ultrabac® CD, UltraChoice® 7, UltraChoice® 8, UltraChoice® CD, Upjohn J-5 Bacterin®, Vibrin® (todas da Pfizer Inc., New York, NY); Covexin® 8 Vacina, Electroid® 7 Vacina, Electroid® D, Guardian®, Jencine® 2, Jencine® 3, Jencine® 4, Nasalgen® IP Vacina, Piliguard® Pinkeye-1 Trivalent, Piliguard® Pinkeye + 7, Piliguard® Pinkeye Triview®, Siteguard® G, Siteguard® MLG Vacina (todas da Schering-Plough Animal Health Corporation, Kenilworth, NJ); MycoBac® B, Poly-Bac B® 3, Poly-Bac B® Somnus, Super Poly-Bac B® Somnus (todas da Texas Vet Lab, Inc., San Angelo, TX), Virabos®-3 com Immunostim®, Virabos®-4 + H. somnus com Immunostim® e Virabos®-4 com Immunostim® (todas da Bioniche Animal Health, Athens, GA), em que o antígeno M. bovis, de preferência ο M. bovis atenuado, avirulento conforme descrito aqui, é adicionado. Alternativamente, quando antígeno M. bovis está presente em qualquer uma dessas vacinas, M. bovis atenuado avirulento conforme descrito aqui, é adicionado ou o antígeno M. bovis presente em qualquer uma dessas vacinas é substituído pelo M. bovis atenuado, avirulento conforme descrito aqui.

Dose e administração

De acordo com a presente invenção, uma quantidade eficaz da vacina combinada administrada ao gado confere imunidade eficaz contra infecções microbiológicas causadas por M. bovis e pelo menos um outro patógeno conforme listado acima. Combinações preferidas de antígenos para o tratamento e profilaxia de doenças microbiológicas em gado são listadas acima.

Em formas preferidas, o volume de dose da vacina combinada, bem como de cada composição imunogênica quando separadamente coadministradas é não mais do que 5 mL, mais preferivelmente não mais do que 3 ml e mais preferivelmente não mais do que 2 ml. Em uma modalidade mais

97/144 preferida, a dose é 2 ml de preferência, administrada intranasalmente, com 1 ml sendo administrada em cada narina, mais preferivelmente administrada intramuscularmente, ainda mais preferivelmente administrada subcutaneamente e, mais preferivelmente, administrada intranasal e subcutaneamente em uma ocasião como uma única dose. Em algumas formas preferidas, uma segunda ou administração subsequente da composição imunogênica seria administrada após a primeira administração. Tal administração subsequente ocorrería de preferência, pelo menos 10 dias após a administração inicial, mais preferivelmente entre pelo menos 10 -32 dias, mais preferivelmente entre pelo menos 12-30 dias, ainda mais preferivelmente pelo menos 14 dias e, mais preferivelmente, entre pelo menos 14-28 dias. Em formas mais preferidas, a vacina seria administrada como uma única dose de preferência no Dia 0 ou, em formas alternativas, 14-28 dias depois, de preferência, no Dia 0 e 14-28 dias depois com exposição à formas patogênicas de M. bovis não ocorrendo até após o término do regime de imunização. Em uma forma mais preferida, nenhum reforço é necessário e a vacina é administrada apenas uma vez. A vacina é administrada aos animais a partir de 1 dia de idade até a fase adulta de preferência a bezerros a partir de 1 dia de idade até a fase de gado jovem adulto com 2 anos de idade, mais preferivelmente a bezerros a partir de 1 dia de idade até 16 semanas de idade e, mais preferivelmente, a bezerros de 6 semanas a 12 semanas de idade. Tal administração diminuiu ou reduziu os sinais de infecção por M. bovis, conforme descrito abaixo. De preferência, sinais de infecção por M. bovis no grupo vacinado, conforme descrito acima, são reduzidos em pelo menos 50%, mais preferivelmente pelo menos 60%, ainda mais preferivelmente pelo menos 70% e ainda mais preferivelmente pelo menos 75% em comparação com o grupo não vacinado. Avaliação da patologia pulmonar, especificamente o percentual de consolidação pulmonar atribuído à lesões em virtude de M. bovis, conforme comumente classificado para várias espécies, foi feita pós-necropsia. De preferência, as lesões pulmonares são reduzidas em pelo menos 33%, mais preferivelmente pelo menos 50%, ainda mais preferivelmente pelo menos 70%, ainda mais preferivelmente pelo menos 80%, ainda mais preferivelmente

98/144 pelo menos 90% e, mais preferivelmente, em pelo menos 95% em comparação com um grupo não vacinado.

A quantidade de vacina combinada que é eficaz depende dos ingredientes da vacina e do esquema de administração. Tipicamente, quando antígeno bacteriano é usado na vacina combinada ou em um uso combinado, a vacina ou composição imunogênica contém uma quantidade de cerca de 10³ a cerca de 10¹° unidades de formação de colônia (Colony Forming Units - UFC) do antígeno bacteriano por dose de preferência, cerca de 10⁴ a cerca de 10⁹ UFC do antígeno bacteriano por dose, mais preferivelmente cerca de 10⁵ a cerca de 10⁶ UFC do antígeno bacteriano por dose. Por exemplo, o M. bovis atenuado, avirulento é de preferência, usado em quantidades de cerca de 10² a cerca de 10¹° UFC por dose de preferência, cerca de 10³ a cerca de 10⁹ UFC por dose, ainda mais preferivelmente em uma quantidade de cerca de 10⁸ a cerca de 10¹° UFC por dose, mais preferivelmente, em uma quantidade de cerca de 2,1 x 10⁹ UFC por dose.

Tipicamente, quando um vírus inativado ou um preparado de vírus vivo modificado é usado na vacina combinada ou em um uso combinado, a vacina ou composição imunogênica contendo cerca de 10² a cerca de 10⁹ TCID50 de antígeno viral por dose de preferência, cerca de 10³ a cerca de 10⁸ TCID50 de antígeno viral por dose, mais preferivelmente, cerca de 10⁴ a cerca de 10⁸ TCID50de antígeno viral por dose. Por exemplo, cerca de 10⁵ a cerca de 10⁸ TCID50 por dose de atenuada BVDV (tipos 1 e 2) é eficaz quando administrada duas vezes ao animal durante um período de cerca de 3 a 4 semanas. Em geral, antígeno inativado é normalmente usado em maiores quantidades do que vírus vivos modificados.

No caso em que a vacina combinada compreende IBR vivo modificado, a quantidade de antígeno IBR está de preferência, em uma faixa de cerca de 10⁵ a 10^7,5 TCID50 por dose. No caso em que a vacina combinada compreende PI3 vivo modificado, a quantidade de antígeno PI3 está de preferência, em uma faixa de cerca de 10⁷ a 10⁹ TCID50 por dose. No caso em que a vacina combinada compreende BRSV vivo modificado, a quantidade de antígeno BRSV está de preferência, em uma faixa de cerca de 10^4,5 a

99/144

10^6,5 TCID50 por dose. No caso em que a vacina combinada compreende antígenos mortos, a TCID50 ou UFC indica a quantidade de antígeno por dose na cultura viva antes de inativação e, para IBR, a quantidade de antígeno IBR está de preferência, em uma faixa de cerca de 1O^7,0 a 1O^9,0 TCID50 por dose. No caso em que a vacina combinada compreende PI3 morto, a quantidade de antígeno PI3 está de preferência, em uma faixa de cerca de 10^7,2 a 10^9,2 TCID50 por dose. No caso em que a vacina combinada compreende BRSV morto, a quantidade de antígeno BRSV está de preferência, em uma faixa de cerca de 10^5,° a 10^7,5 TCID50 por dose. No caso em que a vacina combinada compreende Leptospira spp. morto, a quantidade de cada antígeno Leptospira spp. está de preferência, em uma faixa de cerca de 10^7,0 a 10¹° (UFC) por dose. No caso em que a vacina combinada compreende H. somnus morto e/ou Pasteurella multocida morto e/ou Mannheimia haemolytica morto, a quantidade de antígeno H. somnus e/ou antígeno Pasteurella multocida e/ou antígeno Mannheimia haemolytica está de preferência, em uma faixa de cerca de 10^6,° a 10¹° unidades de formação de colônia (Colony Forming Unit - UFC) por dose.

Uso combinado/método de tratamento

Um outro aspecto da presente invenção refere-se ao uso combinado de composições imunogênicas para o tratamento e/ou profilaxia de gado contra infecções microbiológicas, em que as infecções são causadas por M. bovis e pelo menos um outro patógeno relevante para o gado.

Ainda outra modalidade importante da invenção é um método para a profilaxia ou tratamento de doenças causadas por M. bovis e outro(s) micro-organismo(s) patogênico(s) de gado, em que um antígeno M. bovis de preferência, o M. bovis atenuado, avirulento conforme descrito aqui e outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia da infecção causada pelo referido outro micro-organismo patogênico de gado de preferência, conforme descrito aqui, são administrados a um animal que precisa dos mesmos em uma dose adequada, conforme conhecido por aqueles versados na técnica.

O uso combinado ou o método de coadministração de dois ou

100/144 mais antígenos de patógenos que afetam o gado compreende administração de uma primeira composição imunogênica compreendendo um antígeno M. bovis de preferência, o M. bovis atenuado, avirulento conforme fornecido com a mesma e pelo menos uma outra composição imunogênica compreendendo um componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por um outro patógeno de gado. De preferência, o outro patógeno é um dos patógenos conforme listado aqui. De preferência, a primeira e a outra composições imunogênicas são administradas separadamente. De preferência, a outra composição imunogênica compreende um ou mais componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por um outro patógeno de gado que não M. bovis. Mais preferivelmente, a primeira e a outra composições imunogênicas são administradas juntas por meios tais como mistura antes de administração e/ou formulando a primeira e a outra composições imunogênicas em um único recipiente.

A coadministração de cada uma das composições imunogênicas ocorre simultaneamente, o que significa pelo menos dentro de 48 horas, de preferência dentro de 24 horas, ainda mais preferivelmente dentro de 12 horas, ainda mais preferivelmente dentro de 6 horas, ainda mais preferivelmente dentro de 3 horas, ainda mais preferivelmente dentro de 2, horas, ainda mais preferivelmente dentro de 1 hora. A via de administração de cada uma das composições imunogênicas depende do modo de ação e pode ser a mesma, mas também podería ser diferente.

De acordo com uma outra modalidade, o antígeno M. bovis fornecido com a mesma e um ou mais de outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por um outro patógeno relevante para o gado que não M. bovis podem ser usados como um medicamento. De preferência, esse medicamento é a vacina e pode ser usado para diminuição ou redução dos sinais de uma infecção por M. bovis. Mais preferivelmente, esse medicamento ou vacina pode ser usada para diminuição ou redução dos sinais de uma infecção por M. bovis e associada a ou causada por uma infecção do outro antígeno relevan

101/144 te para gado.

Formulações

Um outro aspecto da presente invenção é o preparo da(s) vacinais) combinada(s). Aqueles versados na técnica podem determinar componentes adicionais os quais estão presentes na composição da invenção. (Vide também Remington's Pharmaceutical Sciences, (1990) 18^â ed. Mack Publ., Easton). Soluções estéreis injetáveis, fisiologicamente aceitáveis conhecidas podem ser usadas. Para preparo de uma solução pronta para uso para injeção ou infusão parenteral, soluções isotônicas aquosas tais como, por exemplo, solução salina ou soluções de proteína plasmática correspondentes, estão prontamente disponíveis. As composições farmacêuticas da presente invenção podem estar presentes como liofilizados ou preparados secos, os quais podem ser reconstituídos com uma solução injetável conhecida diretamente antes de uso sob condições estéreis, por exemplo, como um kit de partes.

Além disso, as composições imunogênicas e vacina da presente invenção podem incluir um ou mais veículos veterinários aceitáveis. Conforme usado aqui, um veículo veterinário aceitável inclui quaisquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, adjuvantes, agentes de estabilização, diluentes, conservantes, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos, agentes para retardo de absorção e semelhantes.

Diluentes podem incluir água, solução salina, dextrose, etanol, glicerol e semelhantes. Agentes isotônicos incluem cloreto de sódio, dextrose, manitol, sorbitol e lactose, dentre outros. Estabilizantes incluem albumina e sais alcalinos de ácido etilenodiaminatetra-acético, dentre outros.

Adjuvantes incluem, mas não estão limitados a, o sistema de adjuvante RIBI (Ribi Inc.), alume, gel de hidróxido de alumínio, Colesterol, emulsões óleo-em-água, emulsões água-em-óleo tais como, por exemplo, adjuvantes completo e incompleto de Freund, Block Copolymer (CytRx, Atlanta GA), SAF-M (Chiron, Emeryville CA), CARBOPOL®, adjuvante AMPHIGENO, saponina, Quil A, QS-21 (Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL) ou outras

102/144 frações de saponina, monofosforil lipídio A, adjuvante de lipídio-amina Avridina, enterotoxina sensível ao calor de E. coli (recombinante ou de outro modo), toxina do cólera ou dipeptídeo de muramila, dentre muitos outros.

As composições imunogênicas podem ainda incluir um ou mais de outros agentes imunomodulatórios tais como, por exemplo, interleucinas, interferons ou outras citocinas. As composições imunogênicas podem também incluir Gentamicina e Mertiolate. Embora as quantidades e concentrações de adjuvantes e aditivos úteis no contexto da presente invenção possam ser prontamente determinadas por aqueles versados na técnica, de preferência, a composição compreende de cerca de 50 ug a cerca de 2000 ug de adjuvante e, de preferência, cerca de 250 ug/ ml de dose da composição de vacina. Em outra modalidade preferida da presente invenção, um antibiótico está presente em uma quantidade de cerca de 1 ug/ml a cerca de 60 ug/ml e, de preferência, menos de cerca de 30 ug/ml.

De acordo com uma outra modalidade, a vacina combinada (ou combinação imunogênica) é primeiro desidratada. Se a composição é primeiro liofilizada ou desidratada através de outros métodos, então, antes de vacinação, a referida composição é reidratada em soluções aquosas (por exemplo, solução salina, PBS (solução salina tamponada com)) ou não aquosas (por exemplo, emulsão baseada em óleo mineral ou óleo vegetal/metabolizável dupla ou única), baseada em alumínio, adjuvante baseado em carbômero).

De acordo com uma outra modalidade, a composição imunogênica ou vacina combinada conforme fornecido com a mesma, a qual compreende pelo menos um antígeno M. bovis e um ou mais de outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por um outro patógeno relevante para o gado que não M. bovis é formulada como uma vacina combinada de dose fixa. De preferência, a composição imunogênica ou vacina combinada fornecida com a mesma, em particular a vacina combinada de dose fixa é formulada para uso como uma vacina de dose única ou múltiplas doses, embora a formulação para uso como uma vacina de dose única seja mais preferida. Em outras

103/144 palavras, as composições imunogênicas ou vacina, de preferência a vacina combinada de dose fixa fornecida com as mesmas, é formulada para administração como uma única dose ou doses múltiplas, embora a formulação para administração como uma dose única seja mais preferida. Conforme mostrado na seção Exemplos, tal administração de dose única do antígeno M. bovis é eficaz para diminuição ou redução dos sinais de uma infecção por M. bovis. Assim, de acordo com uma outra modalidade, as composições imunogênicas fornecidas com a mesma, em particular a vacina combinada de dose fixa, são formuladas para uso como uma vacina de dose única, em que a administração de tal dose única é eficaz na diminuição ou redução dos sinais de uma infecção por M. bovis.

Modos de Administração e Dosagem

Composições da presente invenção podem ser administradas de qualquer maneira convencional. Exemplos de métodos de administração incluem qualquer um que fornece acesso às células do sistema imune a uma composição imunogênica incluindo, mas não limitado a, oral, transdérmica, intradérmica, intravenosa, subcutânea, intramuscular, intraocular, intraperitoneal, intrarretal, intravaginal, intranasal, intragástrica, intratraqueal, intrapulmonar ou qualquer combinação das mesmas. Modos preferidos de administração são intramuscular, subcutânea e intranasal, com subcutânea e intranasal sendo especialmente preferidas. Se desejado ou necessário, imunizações de reforço podem ser fornecidas uma ou várias vezes em diversos intervalos. Contudo, é uma modalidade preferida da presente invenção que a vacinação seja administrada como uma única dose. Após administração de tal vacina, uma resposta imune é estimulada no animal e sinais de infecção por M. bovis têm a incidência e/ou gravidade reduzida, bem como uma redução na taxa de mortalidade, em comparação com animais expostos a bactérias ou isolados do tipo silvestre após estímulo com uma forma virulenta de M. bovis.

Em formas preferidas, o volume de dose da vacina é não mais do que 5 mL, mais preferivelmente não mais do que 3 ml e mais preferivelmente não mais do que 2 ml. Em uma modalidade mais preferida, a dose

104/144 seria 2 ml, de preferência administrada intranasalmente, com 1 ml sendo administrada em cada narina, ainda mais preferivelmente administrada subcutaneamente e, mais preferivelmente, administrada intranasal e subcutaneamente em uma ocasião como uma única dose. Em algumas formas preferidas, uma segunda ou administração subsequente da composição imunogênica seria administrada após a primeira administração.

Tal administração subsequente ocorrería, de preferência, pelo menos 10 dias após a administração inicial, mais preferivelmente entre pelo menos 10-32 dias, mais preferivelmente entre pelo menos 12-30 dias, ainda mais preferivelmente pelo menos 14 dias e, mais preferivelmente, entre pelo menos 14-28 dias. Em formas mais preferidas, a vacina seria administrada no Dia 0 como uma única dose ou, em formas alternativas, no Dia 0 e 14-28 dias depois com exposição a formas patogênicas de M. bovis não ocorrendo até após o término do regime de imunização. Em uma forma mais preferida, nenhum reforço é necessário e a vacina é administrada apenas uma vez. A vacina é administrada aos animais do 1 dia de idade até a fase adulta, de preferência a bezerros do 1 dia de idade através de fase de gado adulto jovem com 2 anos de idade, mais preferivelmente a bezerros do 1 dia de idade até 16 semanas de idade e, mais preferivelmente, a bezerros de 6 semanas até 12 semanas de idade. Tal administração reduziu os sinais de infecção por M. bovis, conforme descrito abaixo. Na verdade, os estudos aqui mostram que sinais de infecção por M. bovis nos grupos vacinados, conforme descrito acima, foram reduzidos em pelo menos 50%, mais preferivelmente, pelo menos 60%, ainda mais preferivelmente, pelo menos 70%, ainda mais preferivelmente, pelo menos 75%, mais preferivelmente, pelo menos 80%, ainda mais preferivelmente pelo menos 83%, mais preferivelmente, pelo menos 85% e, ainda mais preferivelmente, pelo menos 90% em comparação com o grupo não vacinado.

Em uma modalidade preferida, as composições imunogênicas da presente invenção são eficazes na estimulação de um início de imunidade dentro de 14 dias após administração de uma única dose. Em uma modalidade adicionalmente preferida, a composição imunogênica da presente in

105/144 venção é eficaz na estimulação de duração de imunidade de pelo menos 42 dias após administração de uma única dose da composição imunogênica.

Em outra modalidade preferida, as composições imunogênicas da presente invenção podem ser coadministradas a um animal (de preferência gado). Especificamente, dois ou mais antígenos do antígeno M. bovis da presente invenção podem ser administrados a um animal e pelo menos um outro componente imunologicamente ativo eficaz para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por um outro patógeno relevante para o gado que não M. bovis (discutido em maiores detalhes infra). O antígeno M. bovis da presente invenção e o(s) componente(s) imunologicamente ativo(s) podem ser coadministrados ou administrados separadamente. Um exemplo de coadm In 1st ração separada inclui o antígeno M. bovis e o(s) componente(s) imunologicamente ativo(s) ocorre dentro de 2 dias. Alternativamente, o antígeno M. bovis e um ou mais componentes imunologicamente ativos podem ser formulados como uma vacina combinada de dose fixa. Outra modalidade preferida seria administração de dois ou mais antígenos os quais compreendem um antígeno M. bovis e um ou mais componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecções causadas por um outro patógeno relevante para o gado que não M. bovis em uma dose apenas. Alternativamente, duas, três ou quatro doses podem ser administradas, isto é, coadministradas ou administradas separadamente.

Em uma modalidade preferida, a composição imunogênica da presente invenção contém um adjuvante. Adjuvantes podem incluir hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio, saponinas, por exemplo, Quil A, QS-21 (Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL), emulsão água-em-óleo, emulsão óleo-em-água, emulsão água-em-óleo-em-água. A emulsão pode ser baseada, em particular, em óleo de parafina líquida leve (tipo Farmacopeia Européia); óleo de isoprenoide, tal como esqualano ou esqualeno; óleo resultante da oligomerização de alcenos, em particular de isobuteno ou deceno; ésteres de ácidos ou de alcoóis contendo um grupo alquila linear, mais particularmente óleos vegetais, oleato de etila, di-(caprilato/caprato) de propileno glicol, tri

106/144 (caprilato/caprato) de glicerila ou dioleato de propileno glicol; ésteres de ácidos graxos ramificados ou alcoóis, em particular ésteres de ácido isosteárico. O óleo é usado em combinação com emulsificantes para formar a emulsão. Os emulsificantes são, de preferência, tensoativos não iônicos, em particular ésteres de sorbitan, de manídeo (por exemplo, oleato de anidromanitol), de glicol, de poliglicerol, de propileno glicol e de ácido oleico, isosteárico, ricinoleico ou hidróxi-esteárico, os quais são opcionalmente etoxilados e blocos copoliméricos de polioxipropileno-polioxietileno, em particular os produtos Pluronic, especialmente L121. Vide Hunter eí al., The Theory and Practical Application of Adjuvants (Ed. Stewart-Tull, D. E. S.). John Wiley and Sons, NY, páginas 51-94 (1995) e Todd et al., Vaccine 15: 564-570 (1997), aqui totalmente incorporados por referência. Por exemplo, é possível usar a emulsão SPT descrita na página 147 de Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach editado por M. Powell e M. Newman, Plenum Press, 1995 e a emulsão MF59 descrita na página 183 desse mesmo livro.

Um outro exemplo de um adjuvante é um composto escolhido dos polímeros de ácido acrílico ou metacrílico e dos copolímeros de anidrido maleico e derivados de alquenila. Compostos adjuvantes vantajosos são os polímeros de ácido acrílico ou metacrílico os quais são reticulados, especialmente com polialquenil éteres de açúcares ou polialcoóis. Esses compostos são conhecidos pelo termo carbômero (Phameuropa Vol. 8, No. 2, Junho de 1996, aqui totalmente incorporado por referência). Aqueles versados na técnica também poderão se referir à Patente U.S. No. 2.909.462 (aqui totalmente incorporada por referência), a qual descreve tais polímeros acrílicos reticulados com um composto poli-hidroxilado tendo pelo menos 3 grupos hidroxila, de preferência não mais do que 8, os átomos de hidrogênio de pelo menos três hidroxilas sendo substituídos por radicais alifáticos insaturados tendo pelo menos 2 átomos de carbono. Os radicais preferidos são aqueles contendo de 2 a 4 átomos de carbono, por exemplo, vinilas, alilas e outros grupos etilenicamente insaturados. Os radicais insaturados podem, em si, conter outros substituintes, tal como metila. Os produtos vendidos sob o nome Carbopol (BF Goodrich, Ohio, EUA) são particularmente apropriados.

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Eles são reticulados com uma alii sacarose ou com alil pentaeritritol. Dentre esses, podem ser mencionados Carbopol 974P, 934P e 971P. Mais preferido é o uso de Cabopol 971P. Dentre os copolímeros de anidrido maleico e derivados de alquenila estão os copolímeros EMA (Monsanto), os quais são copolímeros de anidrido maleico e etileno. A dissolução desses polímeros em água leva a uma solução acida que será neutralizada, de preferência para pH fisiológico, de forma a proporcionar a solução de adjuvante na qual a composição imunogênica, imunológica ou de vacina em si será incorporada.

Outros adjuvantes adequados incluem, mas não estão limitados a, o sistema de adjuvante RIBI (Ribi Inc.), Block co-polymer (CytRx, Atlanta GA), SAF-M (Chiron, Emeryville CA), monofosforil lipídio A, adjuvante de lipídio-amina Avridina, enterotoxina sensível ao calor de E. coli (recombinante ou de outro modo), toxina do cólera, IMS 1314 ou dipeptídeo de muramila ou citocinas que ocorrem naturalmente ou recombinantes ou análogos das mesmas ou estimulantes de liberação de citocina endógena, dentre muitos outros.

De preferência, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 100 pg a cerca de 1 g por dose. Ainda mais preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 100 pg a cerca de 500 mg por dose. Ainda mais preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 500 pg a cerca de 250 mg por dose. Ainda mais preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 750 pg a cerca de 100 mg por dose. Ainda mais preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 1 mg a cerca de 50 mg por dose. Ainda mais preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 1 mg a cerca de 10 mg por dose. Mais preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 1 mg por dose.

Veículos

Além disso, as composições imunogênicas e vacina da presente invenção podem incluir um ou mais veículos veterinários aceitáveis. Assim, a presente invenção refere-se ao uso de uma cepa de M. bovis, atenuada a

108/144 través de múltiplas passagens ou atenuação serial, conforme descrito acima, como um remédio, de preferência como um remédio veterinário. Cepas de M. bovis atenuadas, conforme descrito acima, podem ser usadas para o preparo de uma composição farmacêutica, conforme descrito aqui, para a profilaxia ou tratamento de infecções causadas por M. bovis. Conforme notado acima, essas composições farmacêuticas/composições de vacina podem ser usadas para o tratamento e/ou profilaxia de animais suscetíveis à infecção por M. bovis.

Métodos de tratamento ou profilaxia

Em outro aspecto da presente invenção, a invenção é um método para o tratamento ou profilaxia, incluindo uma diminuição da incidência de infecção do tipo silvestre em um rebanho ou redução na gravidade de sinais de infecção por M. bovis associada a M. bovis do tipo silvestre, a animais infectados aos quais são administradas as composições imunogênicas de acordo com a presente invenção em comparação com animais que não são vacinados ou vacinados com vacinas disponíveis antes da presente invenção. Adicionalmente, administração da vacina de acordo com a presente invenção reduz o número de animais em um rebanho que se tornaram infectados com M. bovis. Tal método envolve, em geral, a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma cepa de M. bovis atenuada por meio dos métodos divulgados acima, a um indivíduo ou rebanho de indivíduos que precisa de tal tratamento. De preferência, sintomas clínicos têm a incidência ou gravidade diminuídos em pelo menos 10%, mais preferivelmente em pelo menos 20%, ainda mais preferivelmente em pelo menos 30%, ainda mais preferivelmente em pelo menos 40%, ainda mais preferivelmente em pelo menos 50%, ainda mais preferivelmente em pelo menos 60%, ainda mais preferivelmente em pelo menos 70%, ainda mais preferivelmente em pelo menos 80%, ainda mais preferivelmente em pelo menos 90% e, mais preferivelmente, em pelo menos 95% em comparação com animais que não são vacinados ou vacinados com uma composição imunogênica de M. bovis que estava disponível antes da presente invenção, mas subsequentemente infectados por M. bovis do tipo silvestre.

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EXEMPLOS

Os exemplos a seguir são fornecidos para fins de ilustração e não se destinam a limitar o escopo da presente invenção.

Exemplo 1: Preparo e Test agem de uma vacina de isolado de M. bovis 5 de alta passagem

Materiais e Métodos

Quarenta e quatro (44) bezerros foram criados. Pós-desmame, os bezerros foram aleatoriamente atribuídos a 1 de 5 grupos. Os bezerros tinham 6 ± 2 semanas de idade no início do estudo e receberam vacinação 10 de acordo com a atribuição de grupo no Dia 0 e Dia 14. Aproximadamente quatro (4) semanas depois (Dia 27), os bezerros foram estimulados com M. bovis virulento ou meio apenas de acordo com a atribuição de grupo. Dezesseis (16) após estímulo (Dia 43), os bezerros sofrerem necropsia. Os grupos de tratamento são resumidos na Tabela 1.

Tabela	: Grupos de Tratamento
Grupos	Animais/ grupo	Substância de Teste	Estímulo
Artigo	Dose/Via	Esquema de Adm.	Material	Dose/Via	Esquema de adm.
Grupo 1	8	MLVde/W. bovis	~1OSUFC em 2 ml/ SQ e ~109UFC 2 mLIN	Dia 0 e 14	/W. bovis (Isolado Único Fresco)	30 ml de material de estímulo e 10 ml de PBS	Dia 27 (aprox. 4 semanas após vacinação)
Grupo 2	9	MLVde/W. bovis	~1OSUFC em 2 ml SQ	Dia 0	/W. bovis (Isolado Único Fresco)	30 ml de material de estímulo e 10 ml de PBS	Dia 27 (aprox. 4 semanas após vacinação)
Grupo 3	9	MLVde/W. bovis	~108UFC em 2 ml SQ	Dia 0	/W. bovis (Isolado Único Fres- co)	30 ml de material de estímulo e 10 ml de PBS	Dia 27 (aprox. 4 semanas após vacinarão)

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Tabela	: Grupos de Tratamento
Grupos	Animais/ grupo	Substância de Teste	Estímulo
Artigo	Dose/Via	Esquema de Adm.	Material	Dose/Via	Esquema de adm.
Grupo 4	9	MLVde/W. bovis	~107 UFC em 2 ml SQ	Dia 0	M. bovis (Isolado Único Fresco)	30 ml de material de estímulo e 10 ml de PBS	Dia 27 (aprox. 4 semanas após vacinação)
Grupo 5	9	Meio ape- nas	2 ml SQ	Dia 0	M. bovis (Isolado Único Fresco)	30 ml de material de estímulo e 10 ml de PBS	Dia 27 (aprox. 4 semanas após vacinação)

A cepa de Mycoplasma bovis viva de alta passagem, ATCC PTA-9666 (candidato à vacina 052823A131 MS+4), a qual sofreu passagem 135 vezes em meio de cultura bruto, foi usada para vacinação. Essa cepa foi obtida de um surto de doença que ocorre naturalmente, então, sofreu pas5 sagem serial em um meio Friis modificado (isto é, modificado para remover os componentes de SNC do mesmo) para preparar o material. Mais especificamente, o isolado foi crescido em meio Friis suplementado com extrato de levedura a 10% e soro de cavalo a 20%. A cultura foi crescida 24 ± 2 horas a 37^s C após inoculação com um volume apropriado de cultura de semente 10 determinado antes do estudo. Material foi, então, congelado a <-60°C. Antes de vacinação, o material foi rapidamente descongelado e três níveis de dose foram preparados usando meio Friis como o diluente.

Preparo de 1e9 UFC (Grupos 1 e 2):

Dose de 2 ml administrada subcutaneamente e (grupo 1 apenas)

Dose de 2 ml administrada intranasalmente (1 ml em cada narina)

SQ Total: 8,4E8 UFC/Animal

IN Total: 8,4E8 UFC/Animal

Preparo de 1e8 UFC (Grupo 3):

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Dose de 2 ml administrada subcutaneamente

SQ Total: 9,4E7 UFC/Animal

Preparo de 1e8 UFC (Grupo 4):

dose de 2 ml administrada subcutaneamente.

SQ Total: 1,0E7 UFC/Animal

Vacina Viva Modificada de M. bovis PTA-9666 (2- Vacinação) Mycoplasma bovis viva de alta passagem PTA-9666 em meio de cultura bruto.

O isolado usado para vacinação foi obtido de um surto de doença que ocorre naturalmente, então, sofreu passagem serial no meio Friis modificado. Material foi preparado em BlVI. O isolado foi crescido em meio Friis suplementado com extrato de levedura a 10% e soro de cavalo a 20%. A cultura foi crescida 24 ± 2 horas a 37^s C após inoculação com um volume apropriado de cultura de semente determinado antes do estudo. O material foi congelado (<-60°C). Antes de vacinação, material foi rapidamente descongelado e um único nível de dose foi preparado usando meio Friis como o diluente.

Preparado de 1e9 UFC (Grupo 1):

Dose de 2 ml administrada subcutaneamente e dose de 2 ml administrada intranasalmente (1 ml em cada narina)

SQ Total: 7,2E8 UFC/Animal

IN Total: 7,2E8 UFC/Animal

Meio apenas (1^â Vacinação) Meio Friis suplementado com extrato de levedura a 10% e soro de cavalo a 20% em 2 ml administrado subcutaneamente.

SQ Total: 0 UFC/Soro animal

Um sumário da linha de tempo do estudo está abaixo na Tabela

2.

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Tabela 2: Linha de Tempo d	o Estudo
Dia	Evento	Amostras	Testagem
-42	Adquirir Animais	—	-
-42 a 0	Observações gerais (Diariamente)	--	--
-35	Coletar amostras	Esfregaço nasal (Úmido/Seco)	M. bovis (Cultura/PCR)
Sangue (SST)	M. bovis (ELISA)
Biópsiade orelha	BVDV (IHC)
-3a-1	Transferir animais	--	—
0a28	Avaliação clínica	--	—
0	Coletar amostras	Esfregaço nasal (Úmido/Seco)	M. bovis (PCR)
Sangue (SST)	M. bovis (ELISA)
1-Vacinação (Todos os grupos)	--	--
Avaliação do local de injeção	--	--
14	Avaliação do local de injeção.	--	--
Coletar amostras	Esfregaço nasal (Úmido/Seco)	M. bovis (Cultura/PCR)
Sangue (SST)	M. bovis (ELISA)
2- Vacinação (Grupo 1 apenas)	--	--
27	Coletar amostras	Esfregaço nasal (Úmido/Seco)	M. bovis (Cultura/PCR)
Sangue (SST)	M. bovis (ELISA)
Avaliação do local de injeção	--	--
Estímulo	—	-
27 a 43	Observação clínica (Diariamente)	--	--
34	Coletar amostras	Esfregaço nasal (Úmido/Seco) Sangue (SST)	M. bovis (Cultura/PCR) M. bovis (ELISA)

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Dia	Evento	Amostras	Testagem
43	Coletar amostras (Pré)	Esfregaço nasal (Úmido/Seco)	M. bovis (Cultura/PCR)
Sangue (SST)	M. bovis (ELISA)
Necropsia e Patologia macroscópica (% Via pulmonar)	--	--
Coletar amostras (Pós)	Esfregaço das tonsilas (Úmido/Seco)	M. bovis (Cultura/PCR)
Tecido pulmonar (Preservado)	M. bovis (IHC)
Tecido pulmonar (Fresco)	M. bovis (Cultura/PCR)

AMOSTRAGEM

Esfregaco

Esfregaços nasais foram coletados de todos os bezerros nos Dias -22, 0, 14, 27, 34 e 43 (ou dia seguinte). Na necropsia, esfregaços das tonsilas foram coletados de todos os bezerros. Esfregaços da articulação foram tomados de animais com anormalidades clínicas. Além disso, amostras foram tomadas de outros locais em determinados animais mostrando envolvimento de área. Em todos os casos, três esfregaços estéreis foram esfregados em torno das regiões, tão assepticamente quanto possível, durante uns poucos segundos e, então, removidos. Os esfregaços foram colocados de volta nos recipientes de transporte. Dois esfregaços foram colocados em recipientes de transporte individuais com meio e um foi colocado em um recipiente de transporte sem meio. Os esfregaços foram apropriadamente etiquetados com o número de Estudo, número de ID do bezerro e data. As coleções de amostra foram registradas no Sample Collection Record. Os esfregaços foram armazenados sobre gelo e transportados no mesmo dia para o BIVI - St. Joseph. As distribuições dos esfregaços foram documentadas em um Formulário de Distribuição de Espécime.

Forma de Distribuição

Soros

Sangue foi coletado de todos os bezerros nos Dias -42, 0, 14, 27, 34 e 43 (ou dia seguinte). Sangue foi coletado assepticamente da veia jugular de

114/144 cada bezerro em um Tubo Separador de Soro (Serum Separator Tube SST) de 12,5 ml_. As coleções de amostra foram registradas no Sample Collection Record. O sangue foi distribuído ao BIVI - St. Joseph com a distribuição sendo documentada em um Formulário de Distribuição de Espécime. Soro foi, então, colhido de cada tubo por meio de centrifugação e transferido para um criofrasco estéril. As amostras foram armazenadas a 4^s C até testagem, seguido por armazenamento a longo prazo a -20^s C.

Tecido

De todos os animais, amostras de pulmão foram coletadas a critério do Investigador de Estudo. Áreas nas quais lesões macroscópicas foram observadas foram objetivadas para amostragem. As amostras foram colocadas em sacos de embalar para mistura e etiquetadas com o número do animal. As amostras teciduais foram armazenadas sobre gelo e transportadas no mesmo dia para o BIVI - St. Joseph. Um conjunto adicional de tecidos pulmonares foi coletado e colocado em solução de formalina a 10% e apropriadamente etiquetado. Amostras teciduais fixadas foram enviadas ao ISU - Veterinary Diagnostic Laboratory. Os locais de amostra selecionados para cada bezerro são listados no Sample Collection Record.

TESTAGEM

Microbiologia

Esfregaços colocados no meio de transporte e amostras teciduais foram enviados ao BIVI para isolamento de Mycoplasma bovis (dia de postagem de amostras apenas). Resumidamente, esfregaços foram misturadas em 5 mL de caldo seletivo para Micoplasma. Uma pequena amostra (aproximadamente 5 mm) foi cortada de tecido pulmonar e homogeneizada em 5 mL de meio Friis completo. 100 ui de homogenato foram adicionados ao caldo seletivo para Micoplasma. As culturas foram incubadas a 37C/5% de CO₂, Após 4-14 dias, o caldo foi examinado quanto ao crescimento e subcultivado em lâminas para isolamento. Todas as amostras de subcultura positivas foram armazenadas a -70^s C.

PCR

Esfregaços de cada bezerro não colocados em meio de trans

115/144 porte e amostras teciduais foram enviados ao BIVI onde DNA foi extraído e testado por meio de PCR usando primers e sonda específica para o gene uvrC de M. bovis desenvolvido no BIVI. Os resultados de PCR foram expressos como positivos ou negativos para detecção de DNA de M. bovis.

Sorologia

Amostras de soro foram testadas usando um ELISA comercialmente disponível da Biovet (Canadá) usando o protocolo fornecido com o kit de teste. Resultados do ELISA são expressos como leituras de Densidade Óptica (OD). As ODs das amostras foram comparadas com o nível de Positividade (ODp média x 0,3) estabelecido pelo controle positivo incluído no kit de teste. Resultados positivos foram, então, interpretados de acordo com o esquema de classificação do fabricante. 0 sendo sem soroconversão a 4 sendo soroconversão muito forte (vide soroconversão abaixo na Tabela 3).

Tabela 3: Soroconversão

Intervalo	Interpretação
OD amostra < Nível de Positividade	Negativo (0)
Nível de Positividade < OD Amostra < 1,75 * Nível de Positividade	+1
1,75 * Nível de Positividade < OD Amostra < 2,3 * Nível de Positividade	+2
2,3 * Nível de Positividade < OD Amostra < 3 * Nível de Positividade	+3
OD Amostra > 3 * Nível de Positividade	+4

Histopatologia/IHC

Tecidos fixados em formalina foram enviados ao ISU Veterinary

Diagnostic laboratory e testados através de um corte corado com hematoxilina/eosina e imunohistoquímica usando anticorpos monoclonais específicos para M. bovis

Exames clínicos

Diariamente, observações gerais foram realizadas do Dia 0 ao Dia 27 e, então, observação clínicas diárias feitas do Dia 28 até eutanásia e necropsia. Observações clínicas e gerais notaram desvio da norma e foram documentadas.

Necropsia

Após eutanásia, cada animal sofreu necropsia. A cavidade torá

116/144 cica e traqueia foram examinadas para cada bezerro e observações macroscópicas registradas no Necropsia Report Record. Os pulmões e cerca de 6 polegadas de traqueia de cada bezerro foram removidos intactos para exame adicional e coleta de amostra.

Patologia pulmonar

Para cada conjunto de pulmões, cada lobo pulmonar foi examinado por meio de visualização e palpação. A qualidade e quantidade de patologia presente (como um percentual) por cada lobo pulmonar em virtude de M. bovis foi determinado. Cada percentual de lobo pulmonar foi, então, pe10 sado e somado para determinar o percentual de pulmão total com patologia.

Patologia articular

Articulações afetadas foram examinadas e observações macroscópicas registradas.

Tabela 4: Métodos estatísticos de análise entre grupos para cada parâ15 metro

Parâmetro	Sistema de Escore	Avaliação de Cada Parâmetro	Análise estatística entre Grupos
% total de Patologia pulmonar	Patologia macroscópica Soma do % de patologia do lobo pulmonar multiplicado pela fração lobular de pulmão total por animal	Escores de % total de patologia pulmonar entre grupos	Teste de Wilcoxon
Sinais clínicos de Tosse PósEstímulo	Observação clínica (por dia) 0 = Sem Tosse 1 = Tosse	Número de animais com escores de tosse > 0 do Dia 27 (DPCO) ao Dia 43 (DPC 16)/número total de animais no grupo.	Teste Exato de Fisher
Número de dias com escores de tosse > 0 do Dia 27 (DPC 0) ao Dia 43 (DPC 16)/número total do Dias.	Teste Exato de Fisher

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Parâmetro	Sistema de Escore	Avaliação de Cada Parâmetro	Análise estatística entre Grupos
Sinais clínicos de Debilidade Pós- Estímulo	Observação clínica (por dia) Escore de Gravidade de Debilidade (por membro) 0 = Sem Debilidade 1 = Brando 2 = Moderado 3 = Severe Nota: Escore de 5 se removido precocemente do estudo por razões humanitárias Soma de escore de debilidade por animal	Número de animais com escores totais de debilidade > 0 do Dia 27 (DPC 0) ao Dia 43 (DPC 16)/número total de animais no grupo.	Teste Exato de Fisher
Número de dias com escores totais de debilidade > 0 do Dia 27 (DPC 0) ao Dia 43 (DPC 16)/número total do Dias.	Teste Exato de Fisher
Escores totais de debilidade entre grupos	Teste de Wilcoxon
Sinais clínicos de Inchaço articular PósEstímulo	Observação clínica (por dia) Escore de inchaço articular (por animal) 0 = Sem inchaço 1-12 = Número de articulações com inchaço Nota: Último escore para o restante do estudo se removido precocemente do estudo por razões humanitárias	Número de animais com escores totais de inchaço articular > 0 do Dia 27 (DPC 0) ao Dia 43 (DPC 16)/número total de animais no grupo.	Teste Exato de Fisher
Número de dias com escores totais de inchaço articular > 0 do Dia 27 (DPC 0) ao Dia 43 (DPC 16)/número total do Dias.	Teste Exato de Fisher
Escores totais de inchaço articular entre grupos	Teste de Wilcoxon
Taxas de remoção precoce (Mortalidade ou Taxa de Repasse)	Observação clínica (por dia) 0 = Vivo 1 = Morte ou remoção precoce por razões humanitárias	Número de animais removidos do estudo antes do Dia 43 (DPC 16)/número total de animais no grupo	Teste Exato de Fisher

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Parâmetro	Sistema de Escore	Avaliação de Cada Parâmetro	Análise estatística entre Grupos
Sinais clínicos de artrite PósEstímulo	Observação clínica (por dia) Soma de dos escores totais de debilidade e inchaço articular	Número de animais com escore de artrite > 0 do Dia 27 (DPC 0) ao Dia 43 (DPC 16)/número total de animais no grupo.	Teste Exato de Fisher
Número de dias com escore de artrite > 0 do Dia 27 (DPC 0) ao Dia 43 (DPC 16)/número total do Dias.	Teste Exato de Fisher
Escores totais de artrite entre grupos	Teste de Wilcoxon
Escores totais de artrite entre grupos por dia	Teste de Wilcoxon

Redução percentual para todos os parâmetros

Grupos comparados usando redução percentual [1(vacina/estímulo)] e significância estatística para cada parâmetro.

Tabela 5. Redução percentual e Significância para todos os parâmetros quando comparado com o sumário de grupo de controle com estímulo

	% total de Patologia pul- monar	Sinais clínicos de Tosse Pós-Estímulo	Sinais clínicos de Debilidade Pós-Estímulo
Grupo	Escores totais % de Patologia pulmonar	Número de animais com escores de tosse > 0	Dias com escores de tosse > 0	Número de animais com escores totais de debilidade >0	Dias totais com debilidade >0	Escores totais de debilidade
1	68%	0%	-57%	33%	-8%	70%
2	30%	-19%	-129%	11%	-8%	31%
3	57%	-14%	-86%	5%	-8%	10%
4	71%	77%	85%	-11%	-17%	6%

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Tabela 5 (2^a parte)

	Sinais clínicos de Inchaço articular Pós-Estímulo	Taxas de remoção precoce	Sinais clínicos de Escore de artrite
Pós-Estímu	0
Grupo	Número de animais com escores totais de inchaço articular > 0	Dias com escores totais de inchaço articular > 0	Escores totais de inchaço articular	Número de animais removido precocemente do estudo	Número de animais com escore de artrite > 0	Número de dias com escore de artrite > 0	Escores totais de artrite
1	33%	0%	63%	83%	17%	-8%	67%
2	26%	-8%	58%	55%	11%	-8%	39%
3	-33%	-8%	22%	43%	-33%	-8%	12%
4	-14%	-17%	32%	33%	-33%	-17%	10%

Grupo 1 = 2 Alta dose (IN/SQ duplo Dia 0 e Dia 14)

Grupo 2 = 1 Alta dose (SQ Dia 0)

Grupo 3 = 1 Dose média (SQ Dia 0)

Grupo 4 = 1 Baixa dose (SQ Dia 0)

Grupo 5 = Controle com estímulo apenas (todos os valores são em comparação com controles de estímulo)

DISCUSSÃO

O objetivo desse estudo foi avaliar a eficácia de um candidato à vacina de M. bovis vivo de alta passagem em 3 níveis de dosagem diferentes (1E9, 1E8 e 1E7 UFC por dose) administrada subcutaneamente (SQ) com uma única dose (Dia 0). Um grupo de controle de vacina foi também incluído e fornecidas dois doses (dias 0 e 14) SQ e intranasalmente (IN) com o alto nível de dose de vacina.

Os isolados de estímulo e candidatos à vacina de Mycoplasma bovis usados nesse estudo se originavam de diferentes fazendas naturalmente infectadas. Foi anteriormente mostrado que o isolado de estímulo foi causam doença pulmonar e articular durante estímulo experimental e predominava em estudos de estímulo isolado misto. Os candidatos à vacina viva são isolados de alta passagem originalmente derivados de amostras

120/144 diagnosticas. Alta passagem dos candidatos à vacina foi realizada por meio de diluição limitativa serial em meio de base de Friis suplementado com soro de cavalo e extrato de levedura. Embora nenhuma diferença apreciável tenha sido observada na taxa de crescimento no meio de Friis completo, em alta passagem, o candidato à vacina PTA-9666 demonstrou crescimento restrito sobre algumas formulações de agar seletivas para Mycoplasma, enquanto que o isolado parental de baixa passagem não mostra restrição de crescimento aparente. Também, genótipos dos isolados de estímulo e vacina são dissimilares (conforme determinado por meio de caracterização de perfil por POR da sequência de inserção).

O procedimento de estímulo usou um volume total de 30 mL do isolado de estímulo e resultou no grupo de controle com estímulo mostrando patologia pulmonar em todos os animais e envolvimento articular em 6 de 8 animais.

Múltiplos parâmetros foram investigados durante esse estudo para acessar os benefícios da vacina e identificar possíveis parâmetros primários para futuros estudos. Desses parâmetros, as taxas de remoção do animal e sinais clínicos articulares (debilidade e inchaço articular) foram propostos como indicadores de proteção articular. Patologia pulmonar (percentual de lesões pulmonares macroscópicas) e sinais clínicos de tosse foram propostos como indicadores de proteção pulmonar. Escores de lesão pulmonar são fornecidos na figura 1. Escores totais de debilidade foram também tomados e são apresentados na figura 2.

Pós-estímulo, o grupo com vacina em alta dose SQ/IN dupla (grupo 1) teve uma menor incidência de inchaço articular e taxas de remoção, comparado com o grupo de controle com estímulo (grupo 5). Além disso, o grupo 1 mostrou uma tendência de incidência reduzida de artrite, conforme mostrado na figura 4, No grupo com vacina em alta dose SQ/IN única (grupo 2), uma tendência foi observada de uma menor incidência de inchaço articular, conforme mostrado na figura 3. Outros grupos mostram uma redução na incidência de sinais clínicos articulares e taxas de remoção.

Cinco animais tiveram um teste positivo para anticorpos ao M.

121/144 bovis antes de ou no Dia 0 e 5 de 9 dentro do grupo de controle com estímulo tiveram um teste positivo durante a fase de vacinação antes de estímulo (vide Desvio de Protocolo 3 & 4). Razões para as titulações de soro antes de exposição podem incluir reatividade cruzada com o reagente de ELISA, anticorpos maternos e/ou material residual de estudos anteriores.

Os dados para esse isolado que sofreu passagem 135 vezes foram comparados com os dados para esse isolado quando sofreu passagem 106 vezes. Especificamente, os dados foram comparados onde ambas as passagens do isolado foram administradas duas vezes subcutânea e intranasalmente. No estudo de 135 passagens, apenas 1 animal de 8 foi removido do estudo em virtude de morte e repasse. No estudo de 106 passagens, 4 de 9 animais foram removidos do estudo em virtude de morte e repasse. Morte e repasse foram induzidas no isolado que sofreu passagem 135 vezes em 31,9%. Os resultados são resumidos na Tabela 6.

Tabela 6: Comparação de 135 passagens com 106 passagens quanto à morte e repasse
	Método de administração	Número de Animais Removidos em virtude de Morte e repasse	Percentual
135 passagem	Duas vezes subcutânea e intranasalmente	1/8	12,5%
106 passagem (Vac Viva I)	Duas vezes subcutânea e intranasalmente	4/9	44,4%
Diferença			31,9%

CONCLUSÕES

O candidato à vacina PTA-9666 contra Mycoplasma bovis através das vias intranasal e subcutânea simultâneas administrada 2 vezes com um intervalo de 2 semanas em um alto nível de dose (1E9 UFC) mostrou uma redução de escores totais de inchaço articular e taxas de remoção precoce (proteção articular) em bezerros privados de colostro quando estimulados.

Exemplo 2: Eficácia de vacina viva contra Mycoplasma bovis (05-2823 P106) usando várias vias de administração

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Materiais e Métodos bezerros desmamados negativos para Mycoplasma bovis foram criados. No pós-desmame (6 semanas ±2 semanas), os bezerros foram aleatoriamente atribuídos a 1 de 6 grupos. Os bezerros foram deixados se adaptar durante seis (6) dias e receberam vacinação de acordo com a atribuição de grupo no Dia 0. Aproximadamente quatro (4) semanas depois (Dia 28), todos os bezerros foram estimulados com M. bovis virulento de acordo com a atribuição de grupo. Catorze (14) dias após estímulo (Dia 42), os bezerros sofreram necropsia. Três candidatos à vacina viva foram usados para imunizar os bezerros. Eles são referidos como Vacina Viva I de M. bovis, Vacina Viva II de M. bovis e Vacina Viva III de M. bovis. Essas três cepas representativas incluem 052823A106, depositada com a ATCC em Manassas, VA em 16 de Outubro de 2007 sob os termos do Tratado de Budapeste e designada como PTA-8694 (Vac Viva I); 05249A102, também depositada com a ATCC em Manassas, VA em 16 de Outubro de 2007 sob os termos do Tratado de Budapeste e designada como PTA 8696 (Vac Viva II); e 0519021B106, também depositada com a ATCC em Manassas, VA em 16 de Outubro de 2007 e designada como PTA 8695 (Vac Viva III).

Aos grupos 1, 2, e 3 foi fornecida Vacina Viva I no Dia 0 e Dia

14. Ao Grupo 1 foram administrados 2 mL subcutaneamente e 2 mL intranasalmente para cada administração. Ao Grupo II foram administrados 2 mL subcutaneamente para cada administração. Ao Grupo III foram administrados 2 mL intranasalmente para cada administração. Ao Grupo IV foi administração um grupo de controle e foram administrados 2 mL de meio subcutaneamente e 2 mL de meio intranasalmente para cada administração. Ao Grupo V foi administrada Vacina Viva II no Dia 0 e Dia 14 em uma dose de 2 mL subcutaneamente e 2 mL intranasalmente para cada administração. Ao Grupo VI foi fornecida Vacina Viva III no Dia 0 e Dia 14 em uma dose de 2 mL subcutaneamente e 2 mL intranasalmente para cada administração. Todos os grupos foram estimulados com M. bovis virulento no Dia 28. Um sumário de design do Estudo é ilustrado na Tabela 7.

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Tabela 7: Grupos de tratamento
Grupos	Animais/ grupo	Substância de Teste	Estímulo
Artigo	Dose/Via	Esquema de adm.	Material	Dose/Via	Esquema de adm
Grupo 1	10	M bovis Vivai	2 ml SQ e 2mLIN	DiaOe 14	M. bovis (24466-192)	120 ml de material de estímulo com 15 ml PBS	Dia 28 (aprox. 4 semanas após vacinação)
Grupo 2	10	M bovis Vivai	2 ml SQ	DiaOe 14	M. bovis (24466-192)	120 ml de material de estímulo com 15 ml PBS	Dia 28 (aprox. 4 semanas após vacinação)
Grupo 3	9	M bovis Vivai	2mLIN	DiaOe 14	M. bovis (24466-192)	120 ml de material de estímulo com 15 ml PBS	Dia 28 (aprox. 4 semanas após vacinação)
Grupo 4	9	Meio apenas	2 ml SQ e 2mLIN	DiaOe 14	M. bovis (24466-192)	120 ml de material de estímulo com 15 ml PBS	Dia 28 (aprox. 4 semanas após vacinação)
Grupo 5	2	M bovis Viva II	2 ml SQ e 2mLIN	DiaOe 14	M. bovis (24466-192)	120 ml de material de estímulo com 15 ml PBS	Dia 28 (aprox. 4 semanas após vacinação)
Grupo 6	2	M bovis Viva III	2 ml SQ e 2mLIN	DiaOe 14	M. bovis (24466-192)	120 ml de material de estímulo com 15 ml PBS	Dia 28 (aprox. 4 semanas após vacinação)

O isolado de Vacina Viva I de M. bovis usado para vacinação foi obtido de um surto de doença que ocorre naturalmente, então, sofreu pas sagem serial (106 vezes) em meio Friis modificado. O isolado foi crescido em meio Friis suplementado com extrato de levedura a 10% e soro de cava124/144

Io a 20%. A cultura foi crescida 24 ± 2 horas a 37^s C após inoculação com um volume apropriado de cultura de semente determinado antes do estudo. O isolado foi usado sem diluição. Descobriu-se que a concentração média pré- e pós-vacinação era de 3,0E9 UFC/ml.

O isolado de Vacina Viva II de M. bovis usado para vacinação foi obtida de um surto de doença que ocorre naturalmente, então, sofreu passagem serial (102 vezes) em meio Friis modificado. O isolado foi crescido em meio Friis suplementado com extrato de levedura a 10% e soro de cavalo a 20%. A cultura foi crescida 24 ± 2 horas a 37^s C após inoculação com um volume apropriado de cultura de semente determinado antes do estudo. O isolado foi usado sem diluição. Descobriu-se a concentração média prévacinação era de 7,8E8 UFC/ml.

O isolado de Vacina Viva III de M. bovis usado para vacinação foi obtida de um surto de doença que ocorre naturalmente, então, sofreu passagem serial (106 vezes) em meio Friis modificado. O isolado foi crescido em meio Friis suplementado com extrato de levedura a 10% e soro de cavalo a 20%. A cultura foi crescida 24 ± 2 horas a 37^s C após inoculação com um volume apropriado de cultura de semente determinado antes do estudo. O isolado foi usado sem diluição. Descobriu-se que a concentração média pré-vacinação era de 1,7E8 UFC/ml.

O material de estímulo, um isolado de M. bovis virulento, foi obtido de um surto de doença que ocorre naturalmente. Descobriu-se que a concentração média pré- e pós-estímulo era de 1,8E9 UFC/ml.

Amostras foram tomadas dos animais, tais como esfregaços nasais e testes de sangue. O Esquema de Amostra é resumido na Tabela 8.

Tabela	8: Linha de tempo de estudo
Dia	Evento	Amostras	Testagem
Aprox. - 42	Adquirir Animais	--	--
-42 a 0	Observações gerais (Diariamente)	--	--

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Dia	Evento	Amostras	Testagem
Aprox. - 35	Coletar amostras	Esfregaço nasal (Úmido/Seco)	M. bovis (Cultura/PCR)
Sangue (SST)	M. bovis (ELISA)
Biópsiade orelha	BVDV (IHC)
-6	Transferir animais	-	-
0a28	Avaliação clínica	—	—
0	Coletar amostras	Esfregaço nasal (Úmido/Seco)	M. bovis (Cultura/PCR)
Sangue (SST)	M. bovis (ELISA)
1-Vacinação	-	-
14	Avaliação do local de injeção.	--	--
Coletar amostras	Esfregaço nasal (Úmido/Seco)	M. bovis (Cultura/PCR)
Sangue (SST)	M. bovis (ELISA)
2- Vacinação	-	-
27	Coletar amostras	Esfregaço nasal (Úmido/Seco)	M. bovis (Cultura/PCR)
Sangue (SST)	M. bovis (ELISA)
28	Estímulo	—	—
29 a 42	Observação clínica (Diariamente)	--	--
35	Coletar amostras	Esfregaço nasal (Úmido/Seco)	M. bovis (Cultura/PCR)
Sangue (SST)	M. bovis (ELISA)
41	Coletar amostras	Esfregaço nasal (Úmido/Seco)	M. bovis (Cultura/PCR)
Sangue (SST)	M. bovis (ELISA)
42	Necropsia e Patologia macroscópica	--	--
Coletar amostras (Pós)	Esfregaço das tonsilas (Úmido/Seco)	M. bovis (Cultura/PCR)
Tecido pulmonar (Preservado)	M. bovis (IHC)
Tecido pulmonar (Fresco)	M. bovis (Cultura/PCR)
Esfregaços da articulação (Úmido/Seco)	M. bovis (Cultura/PCR)

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AMOSTRAGEM

Esfregaços nasais foram coletados de todos os bezerros nos Dias 0, 14, 27, 35 e 41, Na necropsia, esfregaços das tonsilas foram coletados de todos os bezerros. Esfregaços da articulação foram tomados de animais com anormalidades clínicas. Além disso, amostras foram tomadas de outros locais em determinados animais mostrando envolvimento de área. Em todos os casos, três esfregaços estéreis foram esfregados em torno das regiões, tão assepticamente quanto possível, durante uns poucos segundos e, então, removidos.

Tecido

De todos os animais, amostras de pulmão foram coletados. Áreas nas quais lesões macroscópicas foram observadas foram objetivadas para amostragem. Um conjunto adicional de tecidos pulmonares foi coletado e colocado em solução de formalina a 10%.

Soros

Sangue foi coletado de todos os bezerros nos Dias 0, 14, 27, 35 e 41. Sangue foi coletado assepticamente da veia jugular de cada bezerro em um Tubo Separador de Soro (Serum Separator Tube - SST) de 12,5 ml_. TESTAGEM

Microbiologia

Resumidamente, esfregaços foram misturadas em 5 mL de caldo seletivo para Micoplasma. Uma pequena amostra (aprox. 5 mm) foi cortada de tecido pulmonar e homogeneizada em 2mL de meio Friis completo. 100 ul de homogenato foram adicionados ao caldo seletivo para Micoplasma. As culturas foram incubadas a 37C/ 5% de CO2, Após 4-14 dias, o caldo foi examinado quanto ao crescimento e subcultivado em lâminas para isolamento. Todas as amostras de subcultura positivas foram armazenadas a 70^s C.

PCR

DNA foi extraído e testado por meio de PCR usando primers e sonda específica para o gene uvrC de M. bovis. Os resultados de PCR foram expressos como positivos ou negativos para detecção de DNA de M. bovis.

127/144

Sorologia

Amostras de soro foram testadas usando um ELISA comercialmente disponível da Biovet (Canadá) usando o protocolo fornecido com o kit de teste. Resultados do ELISA são expressos como Leituras de Densidade Óptica (Optical Density - OD). As ODs das amostras foram comparadas com o nível de Positividade (ODp média x 0.3) estabelecido pelo controle positivo incluído no kit de teste. Resultados positivos foram, então, interpretados de acordo com o esquema de classificação do fabricante, com 0 sendo sem soroconversão a 4 sendo soroconversão muito forte.

Histopatologia/IHC

Tecidos fixados em formalina foram enviados ao ISU Veterinary Diagnostic laboratory e testado através de um corte corado com hematoxilina/eosina e imunohistoquímica usando anticorpos monoclonais específicos para M. bovis.

Sinais clínicos

Diariamente observações gerais foram realizados do Dia 0 ao Dia 28 e, então, observação clínicas diárias feitas do Dia 29 até eutanásia e necropsia. Observações clínicas e gerais notaram desvio da norma e foram documentadas.

Necropsia

Após eutanásia, cada animal sofreu necropsia. A cavidade torácica e traqueia foram examinadas para cada bezerro e observações macroscópicas registradas no Necropsia Report Record. Os pulmões e cerca de 6 polegadas de traqueia de cada bezerro foram removidos intactos para exame adicional e coleta de amostra.

Para cada conjunto de pulmões, as superfícies pulmonares dorsal e ventral foram fotografadas com uma etiqueta para a orelha apropriada ao lado de cada vista.

Patologia pulmonar

Para cada conjunto de pulmões, cada lobo pulmonar foi examinado por meio de visualização e palpação. Uma aproximação de quanto a patologia foi presente (como um percentual) por cada lobo pulmonar em vir

128/144 tude de M. bovis foi determinada. Cada percentual de lobo pulmonar foi, então, pesado e somado para determinar o percentual de pulmão total com patologia.

Patologia articular

Articulações afetadas foram examinadas e observações macroscópicas registradas.

Alterações no Protocolo de Estudo

Seis animais foram excluídos de análise. Um animal foi excluído de cada um dos Grupos I, II e III. Três animais foram excluídos do Grupo IV. Descobriu-se que um animal no Grupo II morreu com patologia pulmonar inconsistente por M. bovis e o resto foi excluído da análise por testagem positiva para M. bovis. Vinte e dois animais foram removidos antes de término do estudo no Dia 30-38 por razões humanitárias. Um animal no grupo 5 foi removido no Dia 40, antes de término do estudo porque o animal morreu por asfixia após ficar preso no cocho de ração.

Resultados e Discussão

Pós-Estímulo Sinais clínicos

Observação clínicas foram feitas do Dia 28 ao Dia 42. Tosse, respiração difícil, depressão, articulações inchadas, debilidade e queda da orelha foram observações clínicas notadas durante essa fase do estudo. Os sinais clínicos foram divididos em três tipos (respiratórios, articulares e outros) típicos de infecção por Mycoplasma bovis. Sinais respiratórios incluíam tosse, respiração rápida/difícil e descarga nasal. Sinais articulares incluíam articulações inchadas e debilidade.

Patologia pulmonar

Na necropsia, pulmões foram coletados e observados quanto à lesões associadas a M. bovis. Os animais exibiam variabilidade nas características patológicas, tais como consolidação e formação de lesão nodular. Os resultados de envolvimento pulmonar foram expressos como um percentual usando um sistema de escore, o qual reflete o percentual do pulmão total com patologia macroscópica associada à infecção por M. bovis. Em alguns casos, determinação de envolvimento pulmonar foi atrasada por adesões ou

129/144 a natureza atípica das lesões.

Patologia articular

Na necropsia, articulações de animais que exibiam anteriormente sintomas clínicos (inchaço e/ou debilidade) foram examinadas para patologia macroscópica. Áreas afetadas variavam por animal e podem envolver o carpe, coxa, joelho, machinho e/ou cotovelo. Animais apresentados com inchaço macroscópico, fluido sinovial aumentado, aparência de fluido anormal ou espessamento da cápsula articular. Em bezerros mais gravemente afetados, fibrina estava presente, assim como erosão da superfície articular. Amostras de fluidos articulares e/ou esfregaços da superfície foram testados através de cultura e PCR quanto à presença de Mycoplasma bovis.

Detecção por PCR de M. bovis de amostras nasais, tonsilas e pulmão

As passagens nasais foram coletadas de cada animal por esfregaço nos Dias 0, 14, 27, 35 e 41 ou Dia de Necropsia. Além disso, durante post-mortem, amostras de tonsilas foram tomadas por esfregaço e tecido pulmonar representativo foi recuperado. A frequência de detecção usando PCR em tempo real objetivando um marcador geral de M. bovis (uvrC) foi analisada. Além disso, tonsila e tecido pulmonar foram analisados usando um ensaio de PCR de end-point recentemente desenvolvido que objetiva marcadores não encontrados no isolado de estímulo de M. bovis, mas encontrado em todos os candidatos à vacina.

Sorologia de M. bovis

Todas as amostras foram testadas no ELISA de M. bovis da Biovet para monitorar a resposta sorológica ao M. bovis. Soroconversão foi classificada de acordo com multiplicadores de grupo de ODs de positividade. Os escores sorológicos médios detectados de cada grupo nos Dias 0, 14, 27, 35 e Pós (pós representa uma faixa de dias de estudo de 37 a 41 em virtude de remoção precoce de determinados animais) foram analisados. A figura 5 ilustra os resultados de sorologia para Vac Viva I, II, III e controles e a figura 6 ilustra a comparação de sorologia para Vac Viva I usando diversas vias de administração.

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DISCUSSÃO

O objetivo desse estudo foi avaliar a eficácia de uma vacina viva experimental contra Mycoplasma bovis (05-2823 P106) usando diversas vias de administração de 2 mL (SQ, IN, SQ+IN) catorze dias depois e um modelo de estímulo duplo na espécie alvo. O modelo de estímulo usou um alto volume administrado em dois locais do pulmão com a adição de uma administração IV. Além disso, dois outros candidatos à vacina viva (05-249 P102 e 05-1902-1 P106) foram avaliados quanto à eficácia usando apenas a via SQ+IN.

Os isolados de estímulo e candidatos à vacina de Mycoplasma bovis se originavam de diferentes fazendas naturalmente infectadas. Foi mostrado anteriormente que o isolado de estímulo causa doença pulmonar e articular durante estímulo experimental e predominava em estudos de estímulo isolado misto. Os candidatos à vacina viva são isolados de alta passagem originalmente derivados de amostras diagnosticas. Alta passagem dos candidatos à vacina foi realizada por meio de diluição limitativa serial em meio de base de Friis suplementado com soro de cavalo e extrato de levedura. Embora nenhuma diferença apreciável tenha sido observada na taxa de crescimento no meio de Friis completo, em alta passagem, candidato à vacina 05-2823 P106 demonstrou crescimento restrito sobre algumas formulações de agar seletivas para Mycoplasma, enquanto que o isolado parental de baixa passagem não mostra restrição de crescimento aparente. Também, genótipos dos isolados de estímulo e vacina são dissimilares (conforme determinado por meio de caracterização de perfil por POR da sequência de inserção).

O procedimento de estímulo usou um volume total de 120 mL do isolado de estímulo administrado a cada animal, resultando no grupo com estímulo apenas mostrando patologia pulmonar e envolvimento articular em todos os animais.

Múltiplos parâmetros foram investigados durante esse estudo para acessar os benefícios da vacina. Desses parâmetros, as taxas de remoção do animal e sintomas clínicos articulares foram usados como indicadores primários de

131/144 proteção articular. Patologia pulmonar (percentual de lesões pulmonares macroscópicas) foi usada como o indicador primário de proteção pulmonar. Outros dados, tais como detecção de organismo no tecido, distribuição articular e sorologia, forneceram dados adicionais para confirmação.

Todos os grupos mostraram algum benefício protetor do pulmão e articular após receberem o candidato à vacina de Mycoplasma bovis Vacina Viva I (05-2823 P106), a despeito da via ou via combinada, conforme demonstrado por uma redução nas lesões pulmonares, sintomas clínicos articulares e as taxas de remoção do animal. A via SQ e IN combinada (Grupo 1) resultou na maior redução de lesões pulmonares (86%) comparado com os grupos usando apenas uma única via. Adicionalmente, os resultados de lesões pulmonares, sintomas clínicos articulares e reduções na taxa de remoção sugerem benefício pelo recebimento de dois outros candidatos à vacina Vacina Viva II (05-249 P102) e Vacina Viva III (05-1902-1 P106) através de uma via SQ e IN combinada. Resultados do ELISA demonstraram uma forte resposta humoral à vacinação com todos os candidatos à vacina.

Todos os candidatos à vacina demonstraram segurança. Nenhum animal de qualquer grupo que recebeu a vacina apresentou sintomas clínicos durante o período de vacinação e apenas um animal que recebeu Vacina Viva III (05-1902-1 P106) mostrou reatividade em um local de injeção. Adicionalmente, os resultados de PCR mostraram detecção de M. bovis não estímulo em tecido da tonsila de grupos que receberam apenas um candidato à vacina através da via IN e detecção de não estímulo em tecido pulmonar em apenas um único animal que recebeu Vacina Viva I (05-2823 P106) através de ambas as vias IN e SQ. Uma comparação de sorologia para Vac Viva I, II, II e nenhuma vacina, onde a vacina foi administrada subcutânea e intramuscularmente, é fornecida na figura 5. A figura 5 ilustra que a Vac Viva III teve consistentemente o maior nível de sorologia, com a Vac Viva II tendo sorologia igual à Vac Viva III para os dias 27, 35 e pósnecropsia. Todos os grupos tiveram sorologia maior do que o grupo ao qual não foi fornecida vacina. A figura 6 ilustra a comparação da sorologia para Vac Viva I, usando diversas vias de administração, administração subcutâ

132/144 nea e intramuscular teve consistentemente a maior sorologia durante o periodo de estudo, com administração intramuscular apenas estando em segundo. Todos os grupos tiveram valores de sorologia maior do que aqueles animais aos quais a vacina não foi administrada.

CONCLUSÕES

Benefícios protetores (respiratórios e articulares) foram observados para os candidato à vacina de M. bovis Vacina Viva I (05-2823 P106), Vacina Viva II (05-249 P102) e Vacina Viva III (05-1902-1 P106) via através das vias intranasal e subcutânea simultâneas administrada 2 vezes com um intervalo de 2 semanas em bezerros privados de colostro usando um estímulo pulmonar/articular duplo.

Benefícios protetores (respiratórios e articulares) foram observados para o candidato à vacina de M. bovis Vacina Viva I (05-2823 P106) com administração intranasal ou subcutânea 2 vezes com um intervalo de 2 semanas em bezerros privados de colostro usando um estímulo pulmonar/articular duplo.

Exemplo 3: Caracterização de Perfil de DNA

O processo de caracterização de perfil de DNA foi usado para diferenciar cepas de M. bovis por meio de isolamento, amplificação e detecção de DNA usando os métodos e primers conforme divulgado no documento WO 2008-030619.

Materiais e Métodos

Isolados de Mycoplasma sp. foram usados nos estudos. Os isolados foram obtidos de fontes in-house ou isolados de campo obtidos de animais infectados. Os isolados foram crescidos usando uma combinação de agar e caldo seletivos para Micoplasma durante 1-7 dias. Para isolar o DNA, culturas de caldo foram centrifugadas e peletizadas. DNA da pelota foi, então, extraído (usando o kit Qiagen DNeasy Tissue e resuspenso em água de grau molecular). DNA genômico foi quantificado usando Picogreen (Invitrogen). Primers foram projetados baseado nas sequências de inserção conhecidas (elementos passíveis de transposição) presentes no genoma bacteriano (Mycoplasma bovis) e são divulgadas no documento WO 2008-030619.

133/144

Primers externos foram manualmente selecionados das extremidades do elemento (excluindo as regiões repetidas terminais) em uma T_m de 55-58C. Reações de PCR foram, então, realizadas usando uma mistura mestre para PCR Multiplex (kit Qiagen Multiplex PCR). As reações continham 1x Mistura Mestre, 300 nM de cada primer e 1 ng de DNA template. Condições de ciclização térmica foram 95^SC durante 15 minutos, 35 ciclos de 94^SC durante 30 segundos, 56,1 ^SC durante 90 segundos, 72^SC durante 2 minutos, com uma extensão final de 72^SC durante 4 minutos e uma manutenção de 4^SC. Os produtos amplificados foram separados sobre um gel de agarose a 4% com brometo de etídio (Invitrogen E-gel), passados durante 50 minutos em temperatura ambiente e a imagem formada sob luz UV.

Resultados e Discussão

Os resultados mostraram que cada um dos isolados usados no presente pedido tinha uma caracterização de perfil única. Contudo, conforme mostrado no Exemplo 2, cada isolado era também uma vacina de cultura viva atenuada eficaz que era eficaz ao conferir proteção cruzada contra um isolado de estímulo tendo uma caracterização de perfil diferente de qualquer um dos candidatos à vacina. Três isolados de campo, 05-2823 P106 (PTA8694), 05-249 P102 (PTA-8696) e 05-1902-1 -P106 (PTA-8695), foram crescidos e o DNA isolado de acordo com o protocolo acima. 2-5 ng de DNA de cada isolado foram amplificados de acordo com o protocolo acima usando um múltiplo de 4 conjuntos de primers identificados como SEQ ID Nos. 1-8, conforme divulgado no documento WO 2008-030619. Os produtos amplificados foram separados sobre um gel de agarose Invitrogen E-gel a 4% contendo brometo de etídio (de acordo com o fabricante) durante 50 minutos e visualizados sob luz UV. Todos os isolados produziram padrões únicos. Os padrões eram reproduzíveis usando alíquotas independentes sob as condições de reação de PCR de amostra.

Exemplo 4: Análise comparativa de eficácia da vacina de Mycoplasma bovis na passagem 135 quando comparado com vacina no menor nível de passagem de 106

O estudo no Exemplo 2 usou a vacina de Mycoplasma bovis na

134/144 menor passagem 106 e mediu a eficácia na proteção de bezerros vacinados contra 3 manifestações chave de doença por Mycoplasma bovis: Sinais clínicos de doença respiratória, debilidade e remoção precoce ou eutanásia e morte resultante de uma miríade grave de sinais clínicos causados pela doença por Mycoplasma bovis. A última manifestação da doença tem, obviamente, mais consequências e, portanto, foi considerada a característica mais importante de eficácia da vacina. Esse parâmetro mais importante foi usado para medir quaisquer diferenças na eficácia entre a vacina na passagem 106 e passagem 135.

No estudo descrito no Exemplo 2 com vacina que sofreu 106 passagens, o grupo 1 (Vac Viva I SQ+IN) recebeu vacina duas vezes em um intervalo de 14 dias e através de duas vias de administração, intranasal (IN) e subcutaneamente (SQ), em cada evento de vacinação. Grupos de bezerros distintos foram também vacinados com vacina que sofreu 106 passagens. Mais pertinente foi o Grupo 2 (Vac Viva I SQ), ao qual foi fornecida vacina duas vezes em intervalos de 14 dias, mas através de uma via de administração, apenas subcutaneamente (SQ), em cada evento de vacinação.

Após vacinação, os Grupo 1 e Grupo 2 vacinados e um grupo distinto (Grupo 4) de bezerros não vacinados (Sem Vac) foram propositalmente expostos a Mycoplasma bovis virulento distribuído diretamente a cada bezerro. Doença resultante de exposição ao estímulo foi medida e comparada entre os grupos e especificamente, comparando-se o sinal mais significativo de doença, remoção precoce (morte), em bezerros vacinados no Grupo 1 e Grupo 2 com bezerros não vacinados (Sem Vac) no Grupo 4 para medir a eficácia da vacina que sofreu 106 passagens. Conforme apresentado na Tabela 8, vacina que sofreu 106 passagens no Grupo 2 duas vezes em intervalos de 14 dias, mas através de uma via de administração, subcutaneamente, conferiu uma redução notável de 56% na morte/eutanásia. Vacina que sofreu 106 passagens no Grupo 1 (Vac Viva I SQ+IN) duas vezes em intervalos de 14 dias e através de duas vias de administração, intranasal (IN) e subcutaneamente (SQ), em cada evento de vacinação, conferiu a mesma redução notável de 56% na morte/eutanásia a bezerros vacinados.

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TABELA 9

	F	iespiratório	Articular	Remoção precoce
Grupo	Afe- tado	Frequência	% Redu- ção	Afeta- do	Frequên- cia	% Redu- ção	Afeta- do	Frequên- cia	% Redu- ção
1	Vac Viva I (SQ+IN)	3/9	33%	0%	6/9	67%	33%	4/9	44%	56%
2	Vac Viva I (SQ)	0/9	0%	100%	7/9	78%	22%	4/9	44%	56%
4	Sem Vac	2/6	33%		6/6	100%		6/6	100%

Nesse estudo, a vacina de Mycoplasma bovis na maior passagem 135 foi também avaliada quanto a sua eficácia na proteção de bezerros vacinados contra a manifestação mais importante de doença por Mycoplasma bovis, taxas de remoção precoce ou eutanásia e morte resultante de uma grave miríade de sinais clínicos causados pela doença por Mycoplasma bovis. No estudo descrito no Exemplo 1, o grupo 1 também recebeu vacina duas vezes em intervalos de 14 dias através de duas vias de administração, intranasal (IN) e subcutaneamente (SQ), em cada evento de vacinação, conforme feito no estudo descrito no Exemplo 2, com vacina que sofreu 106 passagens. Contudo, a diferença crítica entre as vacinas no Grupo 1 de cada um desses dois estudos foi o nível de passagem. No estudo do Exemplo 2, ao Grupo 1 foi fornecida vacina em um nível de passagem 106 e nesse segundo estudo do Exemplo 1, o Grupo 1 recebeu vacina na maior passagem 135.

Grupos distintos de bezerros foram também vacinados com vacina que sofreu 135 passagens no estudo descrito no Exemplo 1. Mais pertinente, novamente, foi o Grupo 2, ao qual foi fornecida vacina apenas uma vez através de uma via de administração, subcutaneamente (SQ). Após vacinação, ambos os bezerros do Grupo 1 e Grupo 2 vacinados e um grupo distinto (Grupo 5) de bezerros não vacinados foram propositalmente expostos a Mycoplasma bovis virulento distribuído diretamente a cada bezerro. Doença resultante de exposição ao estímulo foi medida e comparada entre os grupos. Especificamente, a eficácia foi determinada comparando-se o

136/144 sinal mais significativo da doença, taxas de remoção precoce (morte), em bezerros vacinados no Grupo 1 e Grupo 2 com os bezerros não vacinados no Grupo 5 para medir a eficácia da vacina que sofreu 135 passagens. Conforme apresentado na Tabela 10, vacina que sofreu 135 passagens fornecida ao grupo 1 duas vezes em intervalos de 14 dias através de duas vias de administração, intranasal (IN) e subcutaneamente (SQ), em cada evento de vacinação conferiu uma eficácia muito imprevista e muito alta ao reduzir as taxas de remoção precoce (morte) dos bezerros em 83% ou uma eficácia muito maior foi obtida com a vacina que sofreu 106 passagens, que conferiu uma taxa de remoção precoce notável, mas menor, de 56%. Os resultados comparativos entre os dois estudos aparecem na Tabela 11.

Também imprevista foi a eficácia obtida no Grupo 2 do estudo do Exemplo 1, com uma única dose de vacina. O Grupo 2 recebeu apenas uma única dose de vacina que sofreu 135 passagens através de uma via de administração, subcutaneamente. Essa vacina que sofreu mais passagens, 135, conferiu uma redução de 55,6% (56%) na morte/eutanásia dos bezerros. Em contraste, a vacina que sofreu 106 passagens requereu duas doses de vacina, uma dose de priming, seguido por um reforço 14 dias depois no estudo do Exemplo 2 para obter eficácia comparável distribuída apenas em uma dose (nenhum reforço necessário) a bezerros que receberam a vacina que sofreu 135 passagens no estudo do Exemplo 1.

TABELA 10: Redução percentual e Significância para todos os parâmetros em comparação com o controle de estímulo

	% total de Patologia pulmonar	Sinais clínicos de Tosse Pós-Estímulo	Sinais clínicos de Debilidade Pós-Estímulo
Grupo	Escores totais % de Patologia pulmonar	Número de animais com escores de tosse >0	Dias com escores de tosse >0	Número de animais com escores totais de debilidade de >0	Dias com escores totais de debilidade >0	Escores totais de debilidade
1	68%*	07o	-577o	337o	-87o	707o*
2	307o	-197o	-1297o	117o	-87o	317o

137/144

TABELA 10 (2^a parte)

	Sinais clínicos de Inchaço articular Pós- Estímulo	Taxas de remoção precoce	Sinais clínicos de Escore de artrite Pós-Estímulo
Grupo	Número de animais com escores totais de inchaço articular >0	Dias com escores totais de inchaço articular >0	Escores totais de inchaço articular	Número de animais com escore de artrite >0	Número de dias com escore de artrite >0	Número de dias com escore de artrite >0	Escores totais de artrite
1	33%	0%	63%**	83%**	17%	-8%	67% *
2	26%	-8%	58% *	55% *	11%	-8%	39%

Grupo 1 = 2 Alta dose (IN/SQ duplo Dia 0 e Dia 14) Grupo 2 =

Alta dose (SQ Dia 0)

Tabela 11: Resultados comparativos de vacina que sofreu 135 passa5 gens e 106 passagens__________________________________________

Número de estudo	Grupo	Passagem da Vacina	Doses	Reforço	Via de Vacinação	Redução: Morte em virtude de M. bovis
Exemplo 2	1	106	2	Sim	IN&SQ	56%
Exemplo 1	1	135	2	Sim	IN&SQ	83%a
Exemplo 2	2	106	2	Sim	SQ	56%
Exemplo 1	2	135	1b	Não	SQ	56%

(a) Vacina que sofreu 135 passagens confere redução imprevista na morte em virtude de M. bovis comparado com vacina que sofreu 106 passagens (b) Vacina que sofreu 135 passagens é eficaz como uma única 10 dose sem a necessidade de reforço, enquanto que vacina que sofreu 106 passagens requer um reforço para redução comparável na morte em virtude de M. bovis

Consequentemente, a vacina que sofreu 135 passagens conferiu um nível de eficácia aprimorado e inesperadamente maior ao reduzir signifi15 cativamente a morte em virtude de infecção por Mycoplasma bovis usando uma única dose de vacina mais conveniente, mais barata, enquanto que a

138/144 vacina que sofreu 106 passagens requereu duas doses de vacina para conferir eficácia comparável. Além disso, eficácia substancialmente melhor de redução de 83% na morte foi obtida com o Grupo 1 de alta passagem do estudo do Exemplo 1 usando um regime de vacinação idêntico àquele usado com o Grupo 1 de baixa passagem do estudo do Exemplo 2, a única diferença sendo a vacina que sofreu 135 passagens no primeiro e a vacina que sofreu 106 passagens no último estudo. A vacina que sofreu 135 passagens reduziu a morte em virtude de Mycoplasma bovis em 83% quando comparado com uma eficácia menor, mas notável, de 56% com a vacina que sofreu 106 passagens. Tipicamente, a eficácia da vacina é reduzida em passagens progressivas in vitro à medida que o micro-organismo se adapta à cultura de célula e perde expressão de proteínas de virulência potencialmente imunogênicas. Inesperadamente, a vacina de M. bovis avirulento da presente invenção demonstrou eficácia aprimorada em resposta à maiores passagens in vitro e, especificamente, na progressão da vacina que sofreu 106 passagens para 135 passagens.

Exemplo 5: Doses de imunização mínimas

Materiais e Métodos

Uma cultura bacteriana viva de M. bovis avirulento em apresentação liofilizada que foi reidratada com diluente água estéril foi usada em 2 x doses de 2 ml administradas em intervalos de 2 a 3 semanas via injeção subcutânea em gado de 6 semanas de idade ou mais velho.

O design de estudo utilizou 3 grupos tratados com vacina e 1 tratado com placebo, cada um contendo 15 a 17 bezerros. Todos os animais de teste receberam duas doses subcutâneas de vacinas experimentais formuladas em 3 níveis diferentes de antígeno ou uma vacina de placebo composta do meio usado para produzir a cultura de Mycoplasma bovis. Os bezerros tinham 6 semanas de idade no momento de administração da primeira dose de vacina ou placebo. Os bezerros foram estimulados no Dia 42 e observações pós-estímulo foram feitas durante 28 dias. Parâmetros primários de mortalidade/repasse e debilidade e inchaço articular em qualquer dia foram observados para avaliar a eficácia da vacina.

139/144

A Tabela 12 resume as conclusões feitas pela análise dos dados.

Tabela 12: Doses de imunização mínimas

Variável	Tratamento	No. de bezerros	Fração Prevenida	Mínima CL de 95%	Máxima CL de 95%	Conclusão
Mortalidade/ Repasse	Baixa dose = 106a;dose	16	0,04	-0,859	0,5113	Eficácia incompleta
Dose mediana = 107S/dose	15	0,1467	-0,631	0,6163	Eficácia incompleta
Alta dose = 108Sdose	17	0,6235	0,0855	0,9268	Eficácia Estabelecida
Placebo	15
Presença de Debilidade	Baixa dose = 106a;dose	16	0,2857	0,1	0,5994	Eficácia incompleta
Dose mediana = 107S/dose	15	0,0857	-0,324	0,4046	Eficácia incompleta
Alta dose = 108Sdose	17	0,6667	0,3653	0,8513	Eficácia Estabelecida
Placebo	15
Presença de Inchaço	Baixa dose = 1068/dose	16	0,1818	-0,468	0,5908	Eficácia incompleta
Dose mediana = 107S/dose	15	0,0303	-0,693	0,4606	Eficácia incompleta
Alta dose = 108S/dose	17	0,5722	0,0498	0,866	Eficácia Estabelecida
Placebo	15

CONCLUSÕES

Uma dose preferida de 1O^8,9CCU₅o foi eficaz, conforme avaliado.

Exemplo 6: Segurança - Disseminação e Transmissão

Materiais e Métodos

Uma cultura bacteriana de M. bovis vivo avirulento em apresen

140/144 tação liofilizada foi reidratada com diluente água estéril e usada em 2 x doses de 2 ml administradas em intervalos de 2 a 3 semanas via injeção subcutânea em gado de 6 semanas de idade ou mais velho.

A disseminação e transmissão da cepa de vacina foram também avaliadas em bezerros privados de colostro. Nesse estudo >10 logs de vacina de baixa passagem, derivada de semente Mestre (MS +3) foram administrados através da via subcutânea a 10 bezerros. Amostras incluindo 15 diferentes tecidos e esfregaços foram coletadas de bezerros tratados em intervalos semanais durante 5 semanas após administração. Para avaliar a transmissão da vacina, 10 bezerros sentinela foram misturados com os bezerros vacinados por todo o estudo. A Tabela 13 mostra os resultados desse estudo.

Tabela 13: Sumário de design experimental e resultados de disseminação e transmissão

Tratamento	Administração	No. de bezerros	Dose	Resultados
Cultura de trabalho de Mycoplasma bovis (MS + 3)	Injeção subcutânea	10	1010’5/dose	Nenhum isolado de M. tows além de 14 dias pós-vacinação. Nenhuma lesão ou sinais clínicos
Misturados com bezerros tratados	Contato animal com animal	10	Sentinelas	Nenhum M. tows detectado. Nenhuma lesão ou sinais clínicos

CONCLUSÕES

A amostragem do Dia 14 foi a única recuperação de vacina de

Mycoplasma bovis, cultura viva avirulenta e a única em uma amostra de tecido de tonsila de um único bezerro no grupo vacinado. As 129 amostras restantes coletadas de bezerros que receberam a dose do Dia 7 ao Dia 35 após vacinação foram todas negativas para M. bovis.

Dentro desse estudo, um número igual de bezerros sentinela foi misturado com os bezerros vacinados. Nenhum M. bovis foi isolado de qualquer um das amostras de esfregaço ou tecidos dos bezerros sentinela.

Os dados dos Exemplos 5 e 6 demonstraram a segurança e eficácia da vacina da presente invenção. As vacinas da presente invenção fo

141/144 ram altamente eficazes na prevenção de doença em virtude de M. bovis após duas injeções subcutâneas na dose mínima de imunização (10^8,9/dose). As avaliações de segurança em bezerros jovens, altamente suscetíveis privados de colostro (Colostrum Deprived - CD) confirmaram a segurança de uma dose excessiva de 20 vezes injetada subcutaneamente. Estudos de segurança também demonstraram que a vacina é segura quando injetada subcutaneamente.

Exemplo 7: Preparo de vacinas combinadas

Vacina A

M. bovis, IBR e BVDV tipos 1 e 2

Cepas de BVDV tipo 1 e 2 vivo atenuado, tendo pelo menos uma mutação na sequência de codificação para glicoproteína E^rns e/ou pelo menos outra mutação na sequência de codificação para N^pro, em que a referida mutação na sequência de codificação para glicoproteína E^rns leva à inativação de atividade de RNase residente em E^rns e/ou a referida mutação na sequência de codificação para N^pro leva à inativação da referida N^pro (conforme descrito no documento WO 2005/111201, aqui totalmente incorporado por referência), são crescidas em células MDBK até uma TCID50 de cerca de 1O⁵’° a 10^8,1 por ml de fluido de cultura. Uma cepa viva atenuada de IBR é crescida em células MDBK até uma TCID50 de cerca de 10^5,° a 10^8,6 por ml de fluido de cultura. Uma cepa viva atenuada de M.bovis, conforme descrito acima, é crescida em células MDBK até uma UFC de cerca de 10¹° por ml de fluido de cultura. Cada um dos fluidos de cultura é coletado. Quantidades iguais dos antígenos são misturadas e liofilizadas por meio de técnicas padrões. Para reconstituição, uma solução aquosa é usada. Uma dose da vacina combinada contém 2 ml dos antígenos reconstituídos. A dose final inclui IBR (1O⁵⁰ a 10⁸’⁶ TCID50), BVDV-1 (1O⁵⁰ a 10⁸’¹ TCID50), BVDV-2 (1O⁵⁰ a 10⁸’¹TCID50) e M. bovis (2,1 x 10⁹ UFC).

Vacina B

M. bovis, IBR, BVDV tipos 1 e 2 e PI3

Os preparados dos antígenos IBR, BVDV 1 e 2 e M. bovis são crescidos conforme descrito para a vacina A. Além disso, uma cepa viva a

142/144 tenuada de PI3 é crescida em células MDBK até uma TCID₅₀ de cerca de 10^4,2 a 10^6,5 por ml de fluido de cultura. Após o que, ο PI3 contendo fluido de cultura é colhido. Uma quantidade de 10^4,2 a 10^6,5 (TCID50) do antígeno PI3 é misturada com o IBR e BVDV tipos 1 e 2. A mistura é, então, liofilizada por meio de técnicas padrões, de modo que uma dose da vacina combinada reconstituída contenha 2 ml, conforme descrito para a vacina A. A dose final inclui IBR (1O⁵⁰ a 10⁸’⁶ TCID50), BVDV-1 (10⁵° a 10⁸’¹ TCID50), BVDV-2 (10⁵° a 10^8,1 TCID50), M. bovis (2,1 x 10⁹UFC) e PI3 (10⁴’² a 10⁶’⁵TCID₅₀).

Vacina C

M. bovis, BVDV tipos 1 e 2, PI3, Mannheimia (Pasteurella) haemolytica

BVDV 1 e 2, bactéria M. bovis de acordo com a presente invenção e vírus PI3 são crescidos conforme descrito para as vacinas A e B. Após os fluidos de cultura serem colhidos, os antígenos são liofilizados. Mannheimia (Pasteurella) haemolytica é crescida até a titulação atingir 10^8,° a 10¹¹ células por ml de cultura. As bactérias são inativadas e um fluido de cultura é liofilizado ou seco por congelamento ou formulado como um líquido que não inativará as culturas atenuadas de BVD, M. bovis e PI3. Uma quantidade de 1O^{8 0} a 10^11,° células bacterianas liofilizadas ou secas por congelamento ou formuladas em líquido são misturados com 0 antígeno BVDV tipos 1 e 2 liofilizado (cada um em uma quantidade de 10^5,° a 10^8,1 TCID50), antígeno PI3 (10^7,3 a 10^8,3TCID50) e antígeno M. bovis (2,1 x 10^9,UFC). As quantidades finais de antígeno por dose são BVDV-1 (10^5,° a 10^8,1 TCID50), BVDV-2 (10^5,° a 10⁸’¹ TCID50), PI3 (10⁷’³ a 10⁸’³TCID50) M. bovis (2,1 x 10⁹ UFC) e Mannheimia (Pasteurella) haemolytica (10^8,0 a 10^11,0 células).

Vacina D

M. bovis BVDV tipos 1 e 2, IBR, PI3, Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira hardjo, Leptospira pomoma, Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis

BVDV 1 e 2, M. bovis, IBR e PI3 são crescidos conforme descrito para as vacinas A e B. Após os fluidos de cultura serem colhidos, os vírus e M. bovis são liofilizados. Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa,

143/144

Leptospira hardjo, Leptospira pomoma, Leptospira borgpetersenii hardjobovis são separadamente cultivados até atingir 10^8,° a 10^11,° células por ml de cultura. As culturas de Leptospira são inativadas e fluidos de cultura são liofilizados ou secos por congelamento ou formulados como um líquido que não é virucida para os antígenos vivos da vacina. Cada 10^8,° a 10^11,° das células bacterianas liofilizadas ou secas por congelamento são reconstituídos com o BVDV tipos 1 e 2 modificado liofilizado (cada um em uma quantidade de 1O⁵’° a 10^7,° TCID50), PI3 vivo modificado (10^7,3 a 10^8,3 TCID50), M. bovis vivo modificado (2,1 x 10⁹ UFC) e IBR vivo modificado (10^6,1 a 10^7,7 TCID50) usando água estéril para injeção ou os componentes liofilizados são reconstituídos usando a formulação não virucida líquida das culturas de Leptospira. A suspensão reconstituída (2 ml por dose) contém traços de neomicina como conservante. As quantidades finais de antígeno por dose são BVDV-1 (1O⁵⁰ a 1O⁷⁰ TCID50), BVDV-2 (1O⁵⁰ a 1O⁷⁰ TCID50), PI3 (10⁷·³ a 10^8,3TCID50) M. bovis (2,1 x 10⁹ UFC), PI3 (10^7,3 a 10^8,3TCID₅₀) e Leptospira canicola, Leptospira gríppotyphosa, Leptospira hardjo, Leptospira pomoma e Leptospira borgpetersenii hardjo-bovis (cada 10^8,° a 10^11,0 células).

Vacina E

M. bovis, BVDV tipos 1 e 2, IBR, PI3 e H. somnus

BVDV 1 e 2, M. bovis, IBR e PI3 são crescidos, conforme descrito para as vacinas A e B. Após os fluidos de cultura serem colhidos, os vírus e M. bovis são liofilizados. H. somnus é cultivado até obtenção de 10^7,1 a 10⁹’² células por ml de cultura. A cultura de bactérias é inativada e um fluido de cultura é liofilizado ou seco por congelamento ou formulado como um líquido que não é virucida para os antígenos vivos da vacina. 10^7,1 a 10^9,2das bactérias liofilizadas ou secas por congelamento são reconstituídos com 0 BVDV tipos 1 e 2 modificados liofilizados (cada um em uma quantidade de 1O⁵’° a 10^{7 0}TCID50), PI3 vivo modificado (10^7,3 a 10^8,3TCID50), M. bovis vivo modificado (2,1 x 10^9,UFC) e IBR vivo modificado (10^6,1 a 1O^7,7TCID5o) usando água estéril para injeção ou os componentes liofilizados são reconstituídos usando a formulação não virucida líquida da cultura bacteriana de H. somnus. A suspensão reconstituída (2 ml por dose) contém traços de neo144/144 micina como conservante. As quantidades finais de antígeno por dose são BVDV-1 (1O⁵⁰ a 1O⁷⁰ TCID50), BVDV-2 (1O⁵⁰ a 1O⁷⁰ TCID50), PI3 (10⁷’³ a 10^8,3TCID50) M. bovis (2,1 x 10⁹ UFC), PI3 (10^7,3a 10^8,3TCID50) e H. somnus (10^7,1 a 10⁹’² células).

Vacina F

M. bovis, IBR, BVDV tipos 1 e 2, PI3 e BRSV

O preparado de IBR, PI3, BVDV 1 e 2 e antígenos de M. bovis são crescidos conforme descrito para as vacinas A e B. Além disso, uma cepa viva atenuada de BRSV é crescida em células MDBK até uma TCID₅₀ de cerca de 10^5,° a 10^7,2 por ml de fluido de cultura. Após 0 que, 0 BRSV contendo fluido de cultura é colhido. Após os fluidos de cultura serem colhidos, os antígenos são misturados e liofilizados, conforme descrito para as vacinas A e B. Uma quantidade de 10^5,° a 10^7,2do antígeno BRSV é misturada com os antígenos IBR, BVDV tipos 1 e 2 e M. bovis. A mistura é, então, reconstituída em um volume de dose de 2 ml, conforme descrito para a vacina A. Para reconstituição, uma solução aquosa é usada. Uma dose da vacina combinada contém 2 ml dos antígenos reconstituídos. A dose final inclui IBR (1O⁵⁰ a 10⁸’⁶ TCID50), BVDV-1 (1O⁵⁰ a 10⁸’¹ TCID50), BVDV-2 (1O⁵⁰ a 10⁸’¹ TCID50), M. bovis (2,1 x 10⁹ UFC), PI3 (10⁴’² a 10⁶’⁵TCID₅₀) e BRSV (10⁵⁰ a10^7,2 TCID50).

Claims (12)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Cepa bacteriana de Mycoplasma bovis atenuada, avirulenta, caracterizada pelo fato de que a bactéria sofre passagem mais de 110 vezes, e que a cepa de Mycoplasma bovis atenuada, avirulenta é selecionada do grupo consistindo em: a cepa bacteriana de Mycoplasma bovis atenuada depositada com a ATCC sob número de acesso PTA-9666 e PTA-9667, e quaisquer cepas bacterianas de Mycoplasma bovis atenuadas descendentes da mesma.
2. 2. Método para atenuação de Mycoplasma bovis, caracterizado pelo fato de que compreende:

   a. passagem de bactérias Mycoplasma bovis entre 135 e 145 vezes para produzir bactérias Mycoplasma bovis cultivadas;

   b. obtenção de bactérias Mycoplasma bovis cultivadas;

   c. testagem de bactérias Mycoplasma bovis cultivadas obtidas sob a etapa b) quanto a sua patogenicidade e imunogenicidade, sendo que a testagem da patogenicidade compreende:

   A) Infecção do gado com a bactéria Mycoplasma bovis que sofreram passagem; e

   B) monitoramento do gado infectado quanto ao desenvolvimento de sintomas clínicos de uma infecção por Mycoplasma bovis; e

   d. Propagação das bactérias Mycoplasma bovis não patogênicas, mas imunogênicas para obter bactérias Mycoplasma bovis atenuadas.
3. 3. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que as bactérias Mycoplasma bovis sofrem passagem in vitro.
4. 4. Método, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que a testagem de patogenicidade compreende:

   a. infecção do gado com bactérias Mycoplasma bovis que sofreram passagem; e

   b. monitoramento do desenvolvimento da resposta de anticorpo humoral contra Mycoplasma bovis no gado infectado.
5. 5. Composição imunogênica, caracterizada pelo fato de que

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   2/3 compreende bactérias vivas de qualquer uma das cepas de Mycoplasma bovis atenuadas, avirulentas, como definidas na reivindicação 1.
6. 6. Composição imunogênica, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos 1,0E7 UFC das bactérias vivas das bactérias Mycoplasma bovis atenuadas, avirulentas, por dose.
7. 7. Composição imunogênica, de acordo com a reivindicação 5 ou 6, caracterizada pelo fato de que uma dose da composição imunogênica é formulada em 1 ou 2 ml.
8. 8. Composição imunogênica, de acordo com a reivindicação 5 ou 7, caracterizada pelo fato de que é formulada para administração em uma única dose.
9. 9. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 8, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um ou mais de outros componentes imunologicamente ativos eficazes para o tratamento e/ou profilaxia de infecção microbiológica em gado causada por um outro patógeno de gado que não Mycoplasma bovis.
10. 10. Composição imunogênica, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que a referida infecção microbiológica em gado causada por um outro patógeno de gado que não Mycoplasma bovis é causada por um ou mais componentes imunogênicos selecionados do grupo consistindo em: Vírus da diarréia viral bovina (BVDV), Vírus da Parainfluenza-3 (PI-3), Vírus da rinotraqueíte bovina infecciosa (IBR), Vírus sincicial respiratório bovino (BRSV), Herpesvírus bovino (BHV), Rotavírus bovino (BRV), Enterovírus bovino (BEV), Coronavírus bovino (BCV), Raiva bovina (BR), Parvovírus bovino (BPV), Adenovírus Astrovírus, Mannheimia haemolytica (formalmente Pasteurella haemolytica), Pasteurella multocida, Haemophilus somnus (Histophilus ovis e Haemophilus agni), Actinomyces (Corynebacterium), Actinomyces pyogenes, Chlamydia psittaci, Campylobacter fetus venerealis e Campylobacter fetus fetus (formalmente C fetus intestinalis), Leptospira interrogans, Leptospira hardjo, Leptospira pomona e Leptospira grippotyphosa, Leptospira canicola, Leptospira

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    3/3 grippotyphosa, Leptospira hardjo (Leptospira hardjoprajitno e Leptospira hardjo-bovis), Brucella abortus, Brucella suis e Brucella melitensis, Listeria monocytogenes, Chlamydia psittaci, Clostridium chauvoei, Clostridium septicum, Clostridium haemolyticum, Clostridium novyi, Clostridium sordellii, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Moraxella bovis, Klebsiella spp, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhimurium; Salmonella newport, Mycobacterium avium paratuberculosis, Cryptsporidium parvum, Cryptsporidium hominis, Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Mycoplasma spp, Mycoplasma dispar e Ureaplasma spp., Tritrichomonas foetus, Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton sarkisovii, Neospora caninum (formalmente Toxoplasma gondii), Babesia bigemina e Babesia bovis, Dictyocaulus viviparous (Doença do verme pulmonar), e combinações dos mesmos.
11. 11. Composição imunogênica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 10, caracterizada pelo fato de que a composição imunogênica é uma vacina.
12. 12. Método para produção de uma composição imunogênica, como definida em qualquer uma das reivindicações 5 a 11, caracterizado pelo fato de que compreende a mistura das referidas bactérias de uma cepa de Mycoplasma bovis atenuada, avirulenta, com um veículo farmacêuticamente aceitável.