JP5789897B2 - マイコプラズマ・ボビス ワクチン - Google Patents
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Description
[配列リスト]
本出願は紙形式及びコンピュータ可読形式の配列リストを有しており、その教示内容は参照することによりここに援用される。
M.ボビスワクチンを開示している当技術分野で入手可能な参考文献がいくつか存在する。米国特許番号6,548,069は、少なくとも2つの死滅したM.ボビス株を有する全細胞不活性化細菌ワクチン(バクテリン)を包含するワクチン組成物を開示している。他の入手可能な参考文献には、不活性化ワクチンを製造するために10回よりも少なくM.ボビス株を継代することが開示されているが、連続継代を介して感染性又は病原性のM.ボビス株を弱毒化することや、そのような弱毒化生M.ボビス株を非病原性の生培養ワクチンの本質とすることは述べられていない。
先行技術は、死滅したM.ボビスがマイコプラズマ・ボビス感染と関連する臨床症状の重症度を軽減するのに効果的又は効率的ではないという点で不十分である。低レベルでの継代を行っても、臨床症状が大きく軽減されるほど高い有効性を有するマイコプラズマワクチンは産生されない。低代継代で不活性化された入手可能なM.ボビスワクチンは、臨床症状の重症度において大きな軽減を示さない。また、前記米国特許番号6,548,069は、高代継代したM.ボビスの弱毒化株を免疫原性又はワクチン組成物に用いるという思想を以下の教示により意識的に強く排除している。
「マイコプラズマ分離株は培養中でその抗原を急速に変えるため、約50回を超える高代継代株を本発明の細菌ワクチン中に用いると、その高代継代株は感染性を失い、より乏しい免疫応答を引き起こし得る。従って、新しい分離株や未だ病原性を有する培養株、すなわち、宿主動物に感染する能力を保持している株を用いることが好ましい。世代の臨界数が存在することは知られていないが、本発明は、大量生産前に約10回以下、好ましくは約5回以下継代したマイコプラズマ株から開始することが好ましい。培養中の低世代(fewer generations)の株を用いることにより、抗原がその自然状態を保ち、これにより感染性微生物に対する防御免疫応答を引き起こすと考えられる。」
例えば、M.Powell及びM.Newman,Plenum Press,1995による「Vaccine Design,The Subunit and Adjuvant Approach」の第147ページに記載されているSPTエマルジョンや、同じくこの本の第183ページに記載されているエマルジョンMF59を用いることが出来る。
「希釈剤」には、水、生理食塩水、デキストロース、エタノール、グリセロールなどが含まれ得る。等張剤には、特に、塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール及びラクトースが含まれ得る。安定剤には、特に、アルブミン及びエチレンジアミン四酢酸のアルカリ塩が含まれる。
「肺病変の評価」とは、死体解剖後の肺の観察を意味し、硬化、病変及び結節形成の評価並びに胸膜炎及び液体貯留を含む胸腔の評価を含むが、これらに限定されることはない。
本発明において、「有効量」とは、動物におけるM.ボビス感染の発症を低減する又はその重症度を軽減する免疫応答を引き起こすことのできる免疫原性組成物の量を意味する。特に、有効量とは、1投与当たり10E3〜10E10、好ましくは10E6〜10E10のコロニー形成単位(CFU)を意味する。
本明細書において用いられる「そのような投与を必要としている」又は「そのような投与治療を必要としている」とは、前記投与/治療が、本発明による免疫原生組成物を接種される動物の健康若しくは健康に関する他の有益な医学的効果の向上又は改善に関連することを意味する。
従って、他の態様によると、本発明は、上記のように複数回継代又は連続的弱毒化を介して弱毒化されたM.ボビス株の、薬、好ましくは動物用薬(veterinary medicine)としての使用に関する。
本発明の他の態様において、ワクチン接種を受けていないか本発明の前に入手可能であったワクチンを接種した動物と比較して、本発明による免疫原性組成物を投与した群れにおける野生型感染の発症の低下や、当該免疫原性組成物を投与した野生型M.ボビス感染動物に関連するM.ボビス感染の兆候の重症度の軽減を含む治療方法又は予防方法が提供される。また、本発明によるワクチンを投与することにより、群れ中のM.ボビスに感染する動物の数が減少する。そのような方法は、一般的に、そのような治療を必要とする対象又は対象の群れに、上記の方法を介して弱毒化されたM.ボビス株を治療的に有効な量投与することを含む。好ましくは、ワクチン接種を受けていないか本発明前に入手可能であったM.ボビス免疫原性組成物をワクチン接種された動物であってその後に野生型のM.ボビスに感染した動物と比較すると、臨床症状の発症又はその重症度が10%以上、好ましくは20%以上、より好ましくは30%以上、さらにより好ましくは40%以上、さらにより好ましくは50%以上、さらにより好ましくは60%以上、さらにより好ましくは70%以上、さらにより好ましくは80%以上、さらにより好ましくは90%以上、最も好ましくは95%以上減少する。
以下の実施例は、本発明の好ましい実施態様の代表例である。実施例に記載のいずれも、発明の全体的な範囲を限定するものではないと理解される。
この実施例により、2つの異なるチャレンジモデルを1つの標的種に用いて、実験的生M.ボビスワクチンの有効性を評価した。
<<材料及び方法>>
4〜8週齢の初乳非給与ホルスタイン子牛35頭を用いた。全ての動物が試験対象患者基準を満たした。すなわち、全ての動物がM.ボビスに陰性反応を示し、チャレンジ時に健康であった。最初に、子牛をランダムに4グループの1つに割り当てた。グループ1〜3は各々9頭の子牛を有し、グループ4は8頭の子牛を有していた。グループ1及び2の子牛に、106回継代したM.ボビス分離株052823(05−2823−1A−3A P106+)(ATCC指定番号:PTA−8694)の未加工培養である生ワクチン1(Live Vac1)でワクチン接種した。一方、グループ3及び4の子牛には培地のみでワクチン接種した。グループ1及び2に対するワクチン分離株は、自然に生じる病気発生から得られ、その後M.ボビスに適した培地で連続的に106回継代された。調査前に決定した適切な量の種培養を植菌した後、37℃で24±2時間培養した。その分離株を希釈することなく用いた。平均的なワクチン接種前接種後濃度は2.1E9(CFU/mL)であった。そのワクチンを皮下投与で2mL、鼻腔内投与で2mL(それぞれの鼻孔に1mL)投与した。自然に起きる感染及び疾患を引き起こすために、病原性のM.ボビスで調査対象の全子牛をチャレンジした。なお、グループ1及び3には高チャレンジ用量を、グループ3及び4には低チャレンジ用量を接種した。
テスト材料の投与量と投与方法を表1にまとめる。
微生物の検査に関して、綿棒でぬぐったものを輸送培地に入れ、M.ボビス分離株の有無を調べるために組織サンプルを輸送した。簡潔に述べると、綿棒でぬぐったものを5mLのマイコプラズマ選択的培養液中で回転させた。肺サンプルから小さなサンプル(約5mm)を切り出し、2mLのマイコプラズマ培地中でホモジネートした。100μLのホモジネートを、当該マイコプラズマ選択的培養液に加えた。37℃/5%CO2で培養物をインキュベートした。4〜14日後、増殖の有無についてその培養液を調べ、単離するためにプレートに二次培養した。全ての陽性二次培養サンプルを−70℃で保存した。
PCRに関して、輸送培地に入れられていない各子牛から綿棒でぬぐったもの及び組織サンプルを、DNA抽出及びM.ボビスのuvrC遺伝子に特異的なプライマーとプルーブを用いたPCRによる検査のために輸送した。PCR検査の結果を、M.ボビスDNA検出に陽性又は陰性で表現した。
血清学検査に関して、検査キットを備えたプロトコルを使用し、市場で入手できるELISA(Biovet,Canada)を用いて、血清サンプルを検査した。ELISAの結果を、光学濃度(OD)測定値として表した。サンプルのODを、検査キット中に含まれる陽性コントロールが規定する陽性度レベル(平均ODp×0.3)と比較した。その後、陽性結果を以下の基準で解釈した。
臨床的検査に関して、0日目〜28日目まで毎日の一般的観察を行い、その後28日目から安楽死及び死体解剖まで毎日の臨床的観察を行った。基準から外れた臨床的及び一般的観察に注目し、それを記した。
死体解剖で、各子牛の胸腔及び気管を調べ、肉眼観察を記録した。各子牛の肺及び約6インチの気管を、更なる調査及びサンプル採取のために無傷で取り除いた。各セットの肺について、各々適切な耳標を傍らにつけて背面及び前面の肺表面の写真を撮った。
肺病変に関し、M.ボビスが原因で各肺葉当たりどの程度の病変が(割合として)存在するかを求めるために、各肺葉を視診及び触診により調べた。その後、各肺葉の割合を測定し合計して、病変を有する肺全部の割合を求めた。
感染した関節を調査し肉眼観察を記録することにより、関節病変を検査した。
データを分析するために、データを集約した。臨床症状と肉眼で見える病変の減少率(%)を、以下の式を用いて計算した。
減少率(%)=[1−(治療/非治療)]×100
また、グループ2及び3各々の動物1頭とグループ4の動物2頭を、37日目に人道的理由で除いた。
1日目〜26日目まで、チャレンジ前の臨床評価を行った。調査期間中に、緩い/水っぽい排泄物、鬱病、垂れ耳及び嗜眠が観察された。適切な獣医医療を施した。どの観察日のどのグループからも、有害な部位反応やマイコプラズマ特異的臨床症状は見られなかった。27日目〜43日目まで、チャレンジ後の臨床評価を行った。この調査期間中に見られた全ての臨床的観察は、咳、努力性呼吸、鬱病、食欲不振、関節腫脹、跛行、及び垂れ耳であった。チャレンジ後の期間中の臨床スコアの発生率を下記の表3にまとめる。グループ1では9頭中2頭の子牛が感染の少なくとも1つの臨床兆候を伴って感染しており、そのうち2頭は呼吸兆候を示し、1頭は関節感染の兆候を示していた。グループ3では、全ての子牛が少なくとも1つの臨床兆候を伴って感染しており、そのうち7頭の子牛が呼吸兆候を示し、3頭の子牛が関節感染の兆候を示していた。グループ2では、9頭中4頭の子牛が少なくとも1つの臨床兆候を伴って感染しており、呼吸兆候を示した子牛はおらず、4頭の子牛が関節感染の兆候を示していた。グループ4では、7頭の子牛が少なくとも1つの臨床兆候を伴って感染しており、そのうち1頭の子牛が呼吸兆候を示し、7頭の子牛が関節感染の兆候を示していた。
グループ2=ワクチンあり/低用量呼吸器チャレンジ
グループ3=ワクチンなし/高用量呼吸器チャレンジ
グループ4=ワクチンなし/低用量呼吸器チャレンジ
0=M.ボビス増殖なし
1=M.ボビス増殖あり
M=入り混じり/又はその他
PCR
0=M.ボビス陰性
1=M.ボビス陽性
ELISA
0=陰性
1=1.75×までの陽性度
2=1.75×から2.3×まで陽性度
3=2.3×から3.0×まで陽性度
4=3.0×以上の陽性度
NS=サンプルなし
NT=検査せず
この調査により、子牛における皮下及び鼻腔内の両方に2回投与される生M.ボビスワクチンの有効性、並びに、標的種におけるチャレンジモデルが評価された。当該チャレンジモデルには高用量呼吸器チャレンジ及び低用量呼吸器チャレンジが含まれた。また、この調査により、1回及び2回のワクチン投与後の有効性、免疫発現、及び間接的な評価による免疫持続期間、セロコンバージョン又は体液性免疫応答も評価された。ワクチン接種後に起きる免疫発現と免疫持続は確かに証明された。
チャレンジM.ボビス分離株とワクチンM.ボビス分離株は、自然感染した異なる動物が起源であった。チャレンジとして用いられた分離株は、実験的チャレンジの間に肺疾患と関節疾患の両方を引き起こすことが過去に示され、混合分離株チャレンジ研究において主流であった。ワクチン分離株は、元々は診断用試料に由来する高代継代した分離株である(継代回数106)。また、本明細書に記載されるフィンガープリント法を用いたところ、チャレンジ分離株及びワクチン分離株の遺伝子型は非類似であることが示された。
低用量の呼吸器チャレンジされたグループ(2及び4)において、肺病変の減少(96%)がワクチン接種されたグループで観察された。また、ワクチン接種したグループは、関節臨床症状の相当な減少(50%)を示した。
この調査の目的は、3種の生ワクチン候補の安全性と有効性を求めることにある。
<<材料及び方法>>
調査に用いられた子牛は6±2週齢であり、6グループに分けられた。表7に示すように、グループ1は10頭の動物からなり、調査0日目(D0)と14日目(D14)にM.ボビス生ワクチンIでワクチン接種された。グループ1は、0日目及び14日目に、2mLを皮下投与で2mLを鼻腔内投与でワクチン接種された。グループ2は10頭の動物からなり、調査0日目及び14日目に、2mLのM.ボビス生ワクチンIを皮下投与でワクチン接種された。グループ3は、0日目及び14日目に、M.ボビス生ワクチンIでワクチン接種された9頭の子牛から構成されていた。グループ3は、2mLを鼻腔内投与でワクチン接種された。グループ4はコントロールであり、ワクチンを投与されなかった。グループ5は、M.ボビス生IIワクチンでワクチン接種された子牛2頭から構成されていた。グループ5は、0日目及び14日目に、2mLを皮下投与で2mLを鼻腔内投与でワクチン接種した。グループ6は、M.ボビス生ワクチンIIIを投与した子牛2頭から構成されていた。グループ6の子牛は、0日目及び14日目に、2mLを皮下投与で2mLを鼻腔内投与で投与された。その後、120mLのチャレンジ材料を用いて全てのグループをチャレンジした。全ての動物は28日目にチャレンジされた。
表8に記載するように、0日目、14日目、27日目、35日目及び41日目に、全ての子牛から鼻を綿棒でぬぐったものを採取した。死体解剖時に、全ての子牛から扁桃を綿棒でぬぐったものを採取した。臨床的異常を有する動物から、関節を綿棒でぬぐったものを取った。また、部位病変を示す特定の動物の他の部位からサンプルを採取した。0日目、14日目、27日目、35日目及び41日目に全ての子牛から血液を採取した。血液は、各子牛の頸静脈から無菌条件で採取された。死体解剖後、肺病変について肺を採点した。
<チャレンジ前の臨床兆候>
−1日目〜28日目まで、チャレンジ前の臨床的評価を行った。この調査期間中に見られた臨床的観察は、緩い/水っぽい排泄物、眼漏、鬱病及び嗜眠であり、いずれもワクチン接種の効果に起因するものではなかった。注入部位の観察をしたところ、14日目に1回目の注入部位で腫れを示した6134の子牛(グループ6)を除いて、有害な部位反応は見られなかった。
<チャレンジ後の臨床兆候>
28日目〜42日目まで、臨床的観察を行った。この調査期間中に見られた臨床的観察は、咳、努力性呼吸、鬱病、関節腫脹、跛行、及び垂れ耳であった。臨床兆候は、マイコプラズマ・ボビス感染に特有な3タイプ(呼吸器、関節及びその他)に分けられた。呼吸兆候には、咳、多呼吸/努力性呼吸、及び鼻汁が含まれた。関節兆候には、関節腫脹及び跛行が含まれた。他の兆候には、垂れ耳、頭位傾斜、鬱病及び食欲不振が含まれた。下記の表9に個々の結果を示す。
1:咳
2:多(努力性)呼吸
3:鼻汁
4:関節腫脹
5:跛行
6:垂れ耳
7:頭位傾斜
8:鬱病
9:食欲不振
A:下痢
B:眼漏
C:脚の裂傷(Leg Laceration)
黒色の枠=調査から除かれた動物
死体解剖で肺を採取し、M.ボビス感染と関連する病変の有無を観察した。動物は、硬化や結節形成などの多様な病理学的特徴を示した。M.ボビス感染に関連する肉眼で見える病変を有する肺全部の割合を反映するスコアリングシステムを用いて、肺病変の結果をパーセントとして表した。いくつかのケースでは、癒着や病変の非定型性質により肺の割合が決定できなかった。下記は、肺病変の量及びパーセント範囲/平均パーセント肺病変を示す個々の割合を有する表である。
死体解剖で、肉眼で見える病変の有無について、過去に臨床症状(腫れ及び/又は跛行)を示した動物の関節を調べた。感染部位は動物によって異なり、手根関節、飛節、膝関節、球節及び/又は肘関節を含み得る。動物は、肉眼で見える腫れ、滑液の増加、異常な体液発生及び関節包の肥厚を示した。より重篤に感染した子牛では、フィブリンと関節表面のびらんが存在していた。関節液のサンプル及び/又は表面を綿棒でぬぐったものにM.ボビスが存在するか否かを、培養及びPCRにより検査した。弱毒化生ワクチンのいずれかをワクチン接種すると、感染した子牛の合計数が成功裏に減少した。
注意:PCR及び/又は培養がM.ボビスに陽性を示した場合に、サンプルを実験的に確認されたものとして報告した。
0日目、14日目、27日目、35日目及び41日目若しくは死体解剖の日に、各動物から綿棒で鼻孔をサンプリングした。また、死体解剖の間、綿棒で扁桃のサンプルを取り、代表的な肺組織を採取した。一般的なM.ボビスのマーカー(uvrC)を標的とするリアルタイムPCRを用いた検出頻度を下記表に示す。また、M.ボビスチャレンジ分離株では見つからず、全てのワクチン候補で見つかるマーカーを標的とする近年開発されたエンドポイントPCRアッセイを用いて、扁桃及び肺組織を分析した。予想通り、PCTにより、鼻の綿棒サンプル中にM.ボビスワクチン及び/又はチャレンジ微生物が検出された。
注意:一般的なM.ボビスマーカー(uvrC)を標的とするリアルタイムPCRによるPCR検出。
注意:一般的=一般的M.ボビスマーカー(uvrC)を標的とするリアルタイムPCRによるPCR検出;非チャレンジ=M.ボビスチャレンジ分離株中には見られず全てのワクチン候補には見られるマーカーを標的とするエンドポイントPCRによるPCR検出。
M.ボビスに対する血清学的反応をモニターするために、BiovetのM.ボビスELISAで全てのサンプルを検査した。陽性度ODのグループ化された乗数に従って、セロコンバージョンを採点した。下記の表において、0日目、14日目、27日目、35日目及びポスト(ポストとは、特定の動物が早期除去されるため、37日目から41日目までの調査日を意味する)において、各グループから検出された平均血清学的スコアを示す。ワクチン接種後に見られるセロコンバージョンは、これらの新しいワクチンが、子牛などのワクチン接種された動物において速やかな発現と長期持続を有する適切な免疫応答を引き起こすという結論を強固にする(図4参照)。
この調査の目的は、標的種において、14日間間隔をあけた様々な2mL投与方法(皮下、鼻腔内、皮下+鼻腔内)と双対チャレンジモデル用いて、ワクチン(05−2823 P106)(PTA−8694)を含む3種の新規且つ実験的な生マイコプラズマ・ボビスワクチンの有効性を評価することである。当該チャレンジモデルは、気道を介した投与と非経口投与を用いた。また、2つの異なる生ワクチン候補(05−249 P102 (PTA−8696)及び05−1902−1 P106 (PTA−8695))については、皮下投与と鼻腔内投与と組み合わせてのみを用いて有効性を評価した。
チャレンジ及びワクチン候補のM.ボビス分離株は、異なる自然感染した飼育場を起源とした。合計120mLのチャレンジ分離株を用いる手法は、投与すると、実験的チャレンジ中に肺病変と関節疾患の両方を引き起こすことが過去に示されており、混合分離株チャレンジ研究において主流であった。生ワクチン候補は、元々は診断用試料に由来する高代継代した分離株である。当該ワクチン候補の高代継代は、マイコプラズマ好適培地への連続制限希釈関与により行われた。高代継代のワクチン候補05 2823 P106はいくつかのマイコプラズマ選択的寒天調合物上で増殖が制限されていたのに対し、低代継代の親分離株(parent isolate)は同様の特性を示さなかった。また、チャレンジ及びワクチン候補の遺伝子型は(フィンガープリンティング法で求められるように)異なっていることが示された。
これらのデータは、一般的に、本発明により製造され様々な投与方法により与えられた新規の弱毒化された生M.ボビスワクチンは、野生型の病原性M.ボビスに感染することにより生じる様々な疾患兆候を予防・低減するための子牛のワクチン接種用免疫学的組成物として、安全且つ効果的であり、迅速に発現し、予防効果が長期持続するという結論を支持する。
この実施例では、WO2008−030619に開示された方法とプライマーを用いてDNAを単離、増幅及び検出することによりM.ボビス株を区別するために用いられるDNAフィンガープリンティング方法について記載する。
<<材料及び方法>>
マイコプラズマ属をこの調査に用いた。分離株は、社内にあったもの(in−house sources)から得られた分離株か、感染動物から得られた野外分離株であった。分離株を、マイコプラズマ選択的寒天及びブロスの組み合わせを用いて1〜7日間培養した。DNAを単離するために、ブロス培養を回転させてペレット化した。その後、ペレットからDNAを抽出した(Qiagen DNeasy Tissue Kitを用い、分子細胞学グレードの水に再懸濁した)。ゲノムDNAをPicogreen(Invitrogen)を用いて定量化した。細菌ゲノム(マイコプラズマ・ボビス)に存在する公知の挿入配列(転移因子)を基にプライマーを設計した。このプライマーは、WO2008−030619に開示されている。55〜58℃のTmでエレメントエンド(末端反復領域を除く)から外側対向プライマーを手作業で選択した。その後、マルチプレックスPCRマスターミックス(Qiagen Multiplex PCR Kit)を用いてPCR反応を実行した。該反応には、1×のマスターミックス、300nMの各プライマー及び1ngのテンプレートDNAが含まれていた。サーマルサイクル条件は、95℃で15分加熱した後、94℃30秒、56.1℃90秒及び72℃2分のサイクルを35回繰り返し、72℃4分で最終伸張させた後、4℃に保った。増幅産物を、エチジウムブロマイド入りの4%アガロースゲル(Invitrogen E−gel)上で分離し、室温で50分泳動し、UV光下で撮影した。
結果として、本明細書中で用いられる分離株は各々特有のフィンガープリントを有していた。しかしながら、実施例2に示すように、各分離株は効果的な弱毒化された生培養ワクチンでもあり、ワクチン候補のいずれとも異なるフィンガープリントを有するチャレンジ分離株に対する交差防御を提供するという点で効果的であった。3種の野外分離株である05−2823 P106(PTA−8694)、05−249 P102(PTA−8696)及び05−1902−1−P106(PTA−8695)を培養し、前記プロトコルに従ってDNAを単離した。WO2008−030619に開示されたシークエンスID番号1〜8として特定されたISプライマー4セットを複合的に用いて、前記プロトコルに従って各分離株から得た2〜5ngのDNAを増幅した。増幅された産物を、(製造業者に従って)エチジウムブロマイド入りのInvitrogen E−gel4%アガロースゲル上で50分間分離し、UV光下で視覚化した。全ての分離株が固有のパターンを作り出した。当該パターンは、サンプルPCR反応条件下、独立した一定分量を用いて再度作り出すことが出来た。
Claims (21)
- 受入番号PTA−8694、PTA8695又はPTA8696でATCCに寄託されている弱毒化マイコプラズマ・ボビス細菌株、及び、そのあらゆる弱毒化子孫マイコプラズマ・ボビス細菌株からなる群から選択される、弱毒化された非病原性のマイコプラズマ・ボビス細菌株の生細菌を含有する免疫原性組成物。
- さらに医薬的に許容できる担体を含有する、請求項1に記載の免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物が1投与当たり前記弱毒化された非病原性のマイコプラズマ・ボビス細菌の生細菌を少なくとも10E3CFU含有することを特徴とする、請求項1又は2に記載の免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物が1投与当たり前記弱毒化された非病原性のマイコプラズマ・ボビス細菌の生細菌を10E3〜10E10CFU含有することを特徴とする、請求項3に記載の免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物が1投与当たり前記弱毒化された非病原性のマイコプラズマ・ボビス細菌の生細菌を10E6〜10E10CFU含有することを特徴とする、請求項3に記載の免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物の1回投与が1又は2mLに調剤されることを特徴とする、請求項1〜5のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物が、単回投与後14日以内に免疫発現を刺激するのに効果的であることを特徴とする、請求項1〜6のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物が、その免疫原性組成物の単回投与後少なくとも42日間の免疫持続を刺激するのに効果的であることを特徴とする、請求項1〜7のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物が、動物に投与されると免疫応答を引き起こす又は誘発することを特徴とする、請求項1〜8のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 前記免疫原性組成物がワクチンであることを特徴とする請求項1〜9のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 弱毒化された非病原性のマイコプラズマ・ボビス株の生細菌を医薬的に許容できる担体と混合する工程を有することを特徴とする、請求項1〜10のいずれか1項に記載の免疫原性組成物を製造する方法であって、
前記弱毒化された非病原性のマイコプラズマ・ボビス株が、受入番号PTA−8694、PTA8695又はPTA8696でATCCに寄託されている弱毒化マイコプラズマ・ボビス細菌株、及び、そのあらゆる弱毒化子孫マイコプラズマ・ボビス細菌株からなる群から選択される、前記方法。 - 請求項1〜10のいずれか1項に記載の免疫原性組成物の有効量を動物(人間を除く)に投与する工程を有する、マイコプラズマ・ボビスによって引き起こされる感染を治療又は予防する方法。
- 請求項1〜10のいずれか1項に記載の免疫原性組成物の有効量を動物(人間を除く)に投与する工程を有する、マイコプラズマ・ボビス感染の兆候を減少させる方法。
- 請求項1〜10のいずれか1項に記載の免疫原性組成物の有効量を動物(人間を除く)に投与する工程を有する、マイコプラズマ・ボビス感染の臨床兆候の重症度又はその発症を減少させる方法。
- 前記動物(人間を除く)に1回だけ投与することを特徴とする、請求項12〜14のいずれか1項に記載の方法。
- 前記免疫原性組成物を生後1日以上の動物(人間を除く)に投与することを特徴とする、請求項12〜14のいずれか1項に記載の方法。
- 前記免疫原性組成物を生後1日から生後16週までの動物(人間を除く)に投与することを特徴とする、請求項16に記載の方法。
- 前記動物(人間を除く)に2回投与することを特徴とする、請求項12〜14のいずれか1項に記載の方法。
- 2回目の投与が1回目の投与の10日後以降に行われることを特徴とする、請求項18に記載の方法。
- 2回目の投与が、1回目の投与の14日後から28日後の間に行われることを特徴とする、請求項19に記載の方法。
- 前記動物が牛であることを特徴とする、請求項12〜20のいずれか1項に記載の方法。
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