BRPI0913889B1

BRPI0913889B1 - uso de nifurtimox e composição compreendendo o referido composto para o combate da giardiose

Info

Publication number: BRPI0913889B1
Application number: BRPI0913889A
Authority: BR
Inventors: Harder Achim; Kruedewagen Eva-Maria; Greif Gisela; Petry Gabriele; Bach Thomas
Original assignee: Bayer Animal Health Gmbh
Priority date: 2008-07-02
Filing date: 2009-06-20
Publication date: 2019-02-05
Also published as: AU2009266125B2; JP2011526265A; CN102083441A; RU2011103475A; JP5627579B2; US20110105388A1; EP2310018A1; ZA201009225B; CR20110022A; DK2310018T3; IL209698A0; HK1158113A1; CO6321270A2; NZ590276A; CN102083441B; CA2729730C; KR101720805B1; NI201100008A; UA103328C2; MX2010014446A

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para USO DE NIFURTIMOX E COMPOSIÇÃO COMPREENDENDO O REFERIDO COMPOSTO PARA COMBATE DA GIARDIOSE.

[001] A presente invenção se refere ao uso de nifurtimox para o tratamento da giardiose, especialmente no cão e gato.

[002] A eficácia de compostos nitroheterocíclicos contra doenças por protozoários é conhecida (1).

[003] Nos protozoários incluem-se organismos mononucleares, cuja estrutura básica é uma célula eucariótica. Na sistemática exata há, contudo, grande diferença no modo de vida, morfologia e no metabolismo bioquímico das cepas, classes, gêneros e espécies individuais. Por isso, dependendo de seu ponto de ataque e princípio de ação, as substâncias químicas não agem convencionalmente do mesmo modo contra todos os protozoários, mas sim, contra grupos especiais de protozoários (2, 3, 4).

[004] Até agora, a eficácia de nifurtimox foi descrita somente contra espécies de protozoários do gênero tripanosoma, por exemplo, Trypanosoma brucei e Trypanosoma cruzi (5). Os tripanossomas possuem um flagelo, que se origina no corpo basal (kinetosom) e em conjunto com o corpo básico, forma uma membrana ondulada. Parasitas com esses tipos básicos morfológicos pertencem, dentro da sistemática dos protozoários, à ordem dos kinetoplastida. Os tripanossomas multiplicam-se principalmente no plasma sanguíneo e são transmitidos por artrópodes sugadores. Esses patógenos causam a doença de Chagas (tripanossoníase) do homem. Nifurtimox é atualmente quase o único composto, que é eficaz contra esses patógenos. A eficácia baseia-se provavelmente na inibição da tripanotiona reductase, uma enzima especial de tripanosomas. Essa enzima falta a outros patógenos de protozoários.

[005] Em um pedido de patente apresentado paralelamente, des

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 12/37

2/24 creve-se o efeito de nifurtimox contra Trichomonadida.

[006] No caso da giardiose trata-se de uma doença infecciosa, que é causada por parasitas flagelados, unicelulares do gênero Giardia. Esse gênero pertence à ordem dos Diplomonadida. Seu representante mais importante é Giardia lamblia (sinônimo Giardia intestinalis, Giardia duodenalis). Mundialmente, até 50%, na Europa Central 2-7% das amostras de cães e gatos são positivos. Uma infecção leva, particularmente, animais muito jovens no primeiro meio ano de vida a diarreias persistentes e, em alguns casos, a fezes sanguinolentas causadas por uma inflamação do duodeno e jejuno. Doenças crônicas podem levar a atrasos de crescimento persistente (6).

[007] Mais do que 7 genótipos (A-G) foram descritos para isolados de giárdia. Os genótipos A + B são infecciosos para o homem, que por sua vez podem ocorrer também no gato, cão, castor, ovelha, bezerro, porco e macaco. Por isso, a doença é considerada como zoonose: o homem pode infectar-se pela água de beber contaminada com cistos do cão e gato. Infecções por giárdia são amplamente incluídas nos agentes causadores mais frequentes dos chamados de ataques através da água (water-borne outbreaks) no homem (7).

[008] A infecção ocorre geralmente pela água de beber contaminada ou fezes infecciosas por via oral através da forma cística. No intestino, os chamados trofozoitos nascem do cisto. Um trofozoito mede 11-17 x 7-11 pm, contém dois núcleos e 8 flagelos. Ao contrário de outros grupos de parasitas flagelados, os trofozoitos de giárdias não penetram intracelularmente em epitélios. Os trofozoitos dispõem de um acetábulo, com cujo auxílio eles podem ancorar-se do lado externo do lúmen intestinal de homens, macacos, porcos, cães e gatos. Ali eles se multiplicam por divisão. Um ataque maciço bloqueia e modifica a superfície intestinal absorvente e em alguns casos causa diarreias sanguinolentas. No apêndice formam-se novamente cistos, que são

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 13/37

3/24 novamente excretados através das fezes com um período prepatente de 5-16 dias após a infecção primária. Cistos podem ser excretados por um período de 4-5 semanas e permanecem infecciosos por várias semanas (8,9).

[009] Morfologicamente e bioquimicamente, há grandes diferenças para a ordem dos Kinetoplastida: diplomonadidas possuem 8 flagelos e dois núcleos, mas não há quaisquer mitocôndrias e nenhum complexo de Golgi e dentro do desenvolvimento não são conhecidos quaisquer estágios intracelulares. Ao contrário dos tripanossomas, as proteínas superficiais de giárdias não possuem nenhuma âncora GPI (10).

[0010] Nos cão e gato, recomenda-se atualmente uma terapia com metronidazol (Clont®, Flagyl®, Elyzol®) em uma dosagem de 12,5-22 mg/kg de peso corporal 2 vezes ao dia durante 5 dias (11). Metronidazol e outros 5-nitroimidazóis são ativados pela enzima piruvatoferredoxina-óxido reductase para a formação de radicais nitro livres, que depois atacam o metabolismo de DNA parasitário. Por isso, os ipronidazóis (Ipropan®, 126 mg/l de água de beber durante 7 dias) bem como tinidazol (Fasigyn^®, 44 mg/kg de peso corporal durante 3 dias) também são adequados para a terapia da giardiose dos cães (12, 13).

[0011] Do grupo dos benzimidazóis recomenda-se o mebendazol, albendazol ou fenbendazol (oral durante 3 dias). Os benzimidazóis interferem na polimerização dos microtúbulos, ligando-se à subunidade da β-tubulina. Os microtúbulos são importantes elementos do citoesqueleto dos parasitas, que estabilizam de maneira particular o acetábulo dos trofozoitos.

[0012] No setor humano também são aplicados antibióticos (por exemplo, paramomicina, 25-35 mg/kg/dia em três dosagens durante 710 dias), quinacrina e furazolidona (100 mg t.i.d. ao longo de 7 dias) ou nitazoxanida (500 mg b.i.d. durante 3 dias) (14).

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 14/37

4/24 [0013] Muitas dessas classes de substâncias ativas são aplicadas há muito tempo para o tratamento da giardiose e para a maioria, foi possível detectar um desenvolvimento de resistência, que leva a fracassos do tratamento. Por isso, o desenvolvimento de novas substâncias ativas e conceitos de tratamento é obrigatoriamente necessário (15).

[0014] Surpreendentemente, encontra-se agora a eficácia de nifurtimox contra giárdias. Essa eficácia não foi descrita até agora. A eficácia está voltada contra os estágios de patógenos do intestino e previne a formação de cistos.

[0015] Consequentemente, a invenção se refere:

[0016] ao uso de nifurtimox para a produção de medicamentos para o tratamento de doenças causadas por giárdias.

[0017] Nifurtimox é o composto da fórmula (I):

[0018] Eventualmente, inclui-se também o emprego em forma de sais convencionais farmaceuticamente aceitáveis. Além disso, inclui-se eventualmente também o emprego de hidratos ou outros solvatos das substâncias ativas ou eventualmente seus sais.

[0019] A aplicação pode ser efetuada tanto profilaticamente, como também terapeuticamente. A eficácia está voltada contra diferentes estágios do patógeno, especialmente o nifurtimox age contra os estágios do patógeno do intestino e previne a formação de cistos.

[0020] Entre as giárdias é de particular importância a Giardia lamblia (sinônimo: Giardia intestinalis, Giardia duodenalis), Giardia bovis e Giardia caprae. As espécies aqui enumeradas são frequentemente enumeradas como sinônimo uma para a outra e são pouco específicas para o hospedeiro.

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 15/37

5/24 [0021] De acordo com a invenção, são tratados animais (carnívoros e animais selvagens), preferivelmente mamíferos, tais como, por exemplo, cavalos, porcos, coelhos, especialmente cães e gatos.

[0022] Entre os mamíferos de acordo com uma forma de concretização, o tratamento preferido é de animais selvagens e especialmente carnívoros (cão, gato).

[0023] O homem também é incluído para um tratamento, pois ele pode se infectar com as espécies de giárdia patogênicas para animais através da bebida contaminada.

[0024] A giardiose ocorre principalmente em animais jovens, preferivelmente na idade de 3-10 semanas e causa diarreias graves e um baixo aumento de peso.

[0025] A aplicação das substâncias ativas é efetuada diretamente ou em forma de preparações adequadas por via enteral, parenteral, dérmica.

[0026] A aplicação enteral das substâncias ativas ocorre, por exemplo, por via oral na forma de pós, supositórios, comprimidos, cápsulas, pastas, bebidas, granulados, drenos, bolos, alimento medicado ou água de beber. A aplicação dérmica ocorre, por exemplo, em forma de imersão (mergulho), pulverização (spray), banho, lavagem, infusão (pour-on e spot-on) e do polvilhamento. A aplicação parenteral ocorre, por exemplo, na forma de injeção (intramuscular, subcutânea, intravenosa, intraperitonial) ou através de implantes.

[0027] Preparações adequadas são:

[0028] soluções, tais como soluções de injeções, soluções orais, concentrados para a administração oral após diluição, soluções para o uso sobre a pele ou em cavidades corporais, formulações de infusão, géis;

[0029] emulsões e suspensões para a aplicação oral ou dérmica, bem como para a injeção; preparações semissólidas;

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 16/37

6/24 [0030] formulações, nas quais a substância ativa é incorporada em uma base de pomada em água ou em uma base de emulsão de óleo em água ou água em óleo;

[0031] preparações sólidas, tais como pós, pré-misturas ou concentrados, granulados, pellets, comprimidos, bolos, cápsulas; aerossóis e inalantes, artigos conformados contendo substância ativa.

[0032] Soluções de injeções são administradas, por exemplo, por via intravenosa, intramuscular e subcutânea.

[0033] Soluções orais são aplicadas diretamente. Concentrados são administrados por via oral após prévia diluição para a concentração de aplicação.

[0034] Soluções para o uso sobre a pele são instiladas, passadas, massageadas, pulverizadas, aspergidas ou aplicadas através de imersão (mergulho), banho ou lavagem.

[0035] Géis são aplicados sobre a pele ou passados ou introduzidos nas cavidades corporais.

[0036] Formulações de infusão são infundidas ou pulverizadas sobre áreas limitadas da pele, em que a substância ativa ou penetra na pele ou atua sistemicamente ou se distribui na superfície do corpo.

[0037] Emulsões são ou do tipo água em óleo ou do tipo óleo em água, e podem ser aplicadas por via oral, dérmica ou como injeções.

[0038] Suspensões podem ser aplicadas por via oral, dérmica ou como injeção.

[0039] Preparações semissólidas podem ser administradas por via oral ou dérmica. Elas distinguem-se das suspensões e emulsões descritas acima somente por sua maior viscosidade.

[0040] Para produzir preparações sólidas, as substâncias ativas são misturadas com excipientes adequados eventualmente com adição de substâncias auxiliares e levados para a forma desejada.

[0041] Particularmente preferida de acordo com a invenção, é a

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 17/37

7/24 aplicação oral, das formas de aplicação orais os comprimidos são particularmente preferidos.

[0042] Todas as formas farmacêuticas mencionadas acima, as substâncias aditivas e auxiliares a serem usadas, bem como a produção dessas formas farmacêuticas são fundamentalmente conhecidas pelo técnico.

[0043] As substâncias ativas podem estar presentes em combinação com sinergistas ou com outras substâncias ativas. Como outras substâncias ativas sejam mencionadas:

[0044] coccidiostáticos, tal como robenidina ou amprolium, em parte em combinação com antagonistas do ácido fólico (por exemplo, pirimetamina, epiroprim, trimetoprim); antibióticos, tais como, por exemplo, clindamicina, paramomicina ou espiramicina; sulfonamidas, tais como, por exemplo, sulfadimetoxina, sulfadimidina, sulfadiazina; antihelmínticos, tais como, por exemplo, depsipeptídeos (por exemplo, emodepsid, PF1022A), derivados de amidina (tribendimina, amidantel, Bay d 9216), praziquantel ou benzoato de benzila.

[0045] Para um efeito de tratamento prolongado recomenda-se desinfetar regularmente a produção animal como parte do tratamento.

[0046] Antihelmínticos, especialmente octadepsipeptídeos cíclicos, tal como PF1022A ou emodepsid são adequados para o combate de infecções por nematódeos no homem e animal (16). Nesse caso, todos os nematódeos economicamente importantes são mortos no canal estômago-intestino, entre outros, também em cães. Sabe-se também, que no não tratamento dos animais, a resposta imunológica GALT = gut-associated-lymphoid-tissue) está voltada contra os vermes (17). Nesse caso, fala-se de uma resposta Th2 do sistema imunológico. Normalmente, em não infecções, a resposta imunológica é equilibrada, isto é, os oponentes da resposta Th2, isto é, a resposta Th1, que está voltada contra protozoários, virus e bactérias, é tão alta quanto a resPetição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 18/37

8/24 posta Th2.

[0047] Se no respectivo animal, por exemplo, no cão, está presente uma infecção por nematódeos, por exemplo, uma infecção por ancilóstomo, oxiuro ou tricocéfalo, então o equilíbrio é afetado e o resultado é uma infecção por protozoários predominantemente no intestino, provocada, por exemplo, por giárdias. Se a infecção por nematódeos é curada, agora, através de anti-helmínticos adequados, então a defesa contra giárdias é indiretamente reforçada, em que a resposta Th1 age contra esses protozoários. Na combinação de nifurtimox com antihelmínticos, depois, o nifurtimox pode combater melhor a infecção por giárdias, visto que esta já está parcialmente mantida em limites através da resposta Th1 indiretamente reforçada pelo combate dos nematódeos, isto é, o número de parasitos no intestino já é reduzido.

[0048] De acordo com uma forma de concretização preferida, o nifurtimox é usado em combinação com anti-helmínticos.

[0049] Antihelmínticos preferivelmente usados são os ciclodepsipeptídeos com 24 membros (ciclo-octadepsipeptídeos). Como tais sejam mencionados:

[0050] compostos da fórmula (Ila) [0051] na qual [0052] Z representa hidrogênio, N-morfolinila, NH2, mono- ou dimetilamino.

[0053] Além disso, sejam mencionados compostos da seguinte fórmula (Ilb):

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 19/37

9/24

na qual

R¹, R², R³,

R⁴ independentes uns dos outros, representam [0054] [0055] hidrogênio, Ci-Cw-alquila ou arila, especialmente fenila, que são eventualmente substituídos por hidróxi, Ci-Cw-alcóxi ou halogênio.

[0056] Os compostos da fórmula geral (llb) são conhecidos e podem ser obtidos pelos processos descritos nas EP-A-382.173, DE-A 4.317.432, DE-A 4.317.457, DE-A 4.317.458, EP-A-634.408, EP-A718.293, EP-A-872.481, EP-A-685.469, EP-A-626.375, EP-A-664.297, EP-A-669.343, EP-A-787.141, EP-A-865.498, EP-A-903.347.

[0057] Nos depsipeptídeos cíclicos com 24 átomos de anel incluem-se também compostos da fórmula geral (llc)

[0058] [0059] sentam na qual

R^1a, R^2a, R^11a e R^12a independentes uns dos outros, repreCi-8-alquila, Ci-s-halogenoalquila, C3-6-cicloalquila, aralquila, arila,

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 20/37

10/24 [0060] R^3a, R^5a, R^7a, R^9a independentes uns dos outros, representam hidrogênio ou C1-8-alquila em cadeia linear ou ramificada, que pode ser eventualmente substituída por hidróxi, C1-4-alcóxi, carbóxi,

O

II (-COH)

O carboxamida, (-o-C-nh₂) imidazolila, indolila, guanidino, -SH ou C1-4-alquiltio e além disso, representam arila ou aralquila, que podem ser substituídas por halogênio, hidróxi, C1-4-alquila, C1-4-alcóxi, [0061] R^4a, R^6a, R^8a, R^10a independentes uns dos outros, representam hidrogênio, C1-5-alquila em cadeia linear, C2-6-alquenila, C3-7cicloalquila, que podem ser eventualmente substituídas por hidróxi, C14-alcóxi, carbóxi, carboxamida, imidazolila, indolila, guanidino, SH ou C1-4-alquiltio, bem como representam arila ou aralquila, que podem ser substituídas por halogênio, hidróxi, C1-4-alquila, C1-4-alcóxi, bem como seus isômeros ópticos e racematos.

[0062] Compostos preferidos da fórmula (IIc) são aqueles, nos quais [0063] R^1a, R^2a, R^11a e R^12a independentes uns dos outros, representam metila, etila, propila, isopropila, n-, s-, t-butila ou fenila, que é eventualmente substituída por halogênio, C1-4-alquila, OH, C1-4-alcóxi, bem como representam benzila ou feniletila, que podem ser eventualmente substituídas por radicais indicados na fenila;

[0064] R^3a a R^10a têm o significado indicado acima.

[0065] Compostos particularmente preferidos da fórmula (IIc) são aqueles, nos quais [0066] R^1a, R^2a, R^11a e R^12a independentes uns dos outros, representam metila, etila, propila, isopropila, n-, s-, t-butila, [0067] R^3a, R^5a, R^7a, R^9a representam hidrogênio, C1-8-alquila em cadeia linear ou ramificada, especialmente metila, etila, propila, ipropila, n-, s-, t-butila, que podem ser eventualmente substituídas por C1-4-alcóxi, especialmente metóxi, etóxi, imidazolila, indolila ou C1-4

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 21/37

11/24 alquiltio, especialmente metiltio, etiltio, além disso, representam fenila, benzila ou feniletila, que podem ser eventualmente substituídas por halogênio, especialmente cloro.

[0068] R^4a, R^6a, R^8a, R^10a independentes uns dos outros, representam hidrogênio, metila, etila, n-propila, n-butila, vinila, ciclohexila, que podem ser eventualmente substituídas por metóxi, etóxi, imidazolila, indolila, metiltio, etiltio, bem como representam isopropila, s-butila, além disso, representam fenila, benzila ou feniletila eventualmente substituída por halogênio.

[0069] Os compostos da fórmula (llc) também podem ser obtidos pelos processos descritos nas EP-A 382.173, DE-A 4.317.432, DE-A 4.317.457, DE-A 4.317.458, EP-A-634.408, EP-A-718.293, EP-A872.481, EP-A-685.469, EP-A-626.375, EP-A-664.297, EP-A-669.343, EP-A-787.141, EP-A-865.498, EP-A-903.347.

[0070] Como depsipeptídeo muito particularmente preferido pode ser mencionado o composto PF 1022 conhecido da EP-OS 382.173, trata-se do composto da fórmula (lia), na qual os dois substituintes Z representam hidrogênio. PF 1022 tem, portanto, a seguinte fórmula (lld):

[0071] Outros depsipeptídeos preferidos são compostos, que são conhecidos do pedido PCT WO 93/19053 e, na verdade, compostos da fórmula (lia), [0072] na qual [0073] Z representa N-morfolinila, NH2, mono- ou dimetilamino.

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 22/37

12/24 [0074] Desses compostos, o depsipeptídeo emodepsida (PF 1022221) é muito particularmente preferido. Trata-se do composto da fórmula (Ila), na qual os dois radicais Z representam o radical morfolinila. A emodepsida INN representa o composto com o nome sistemático: ciclo[(/?)-lactoil-A/-metil-L-leucil-(/?)-3-(p-morfolinofenil)lactoil-/\/-metil-Lleucil-(/?)-lactoil-A/-metil-L-leucil-(/?)-3-(p-morfolinofenil)lactoil-/\/-metil-Lleucila. Emodepsida é descrito no WO 93/19053 e tem a seguinte fórmula:

o.

[0075] Dependendo de sua estrutura, as substâncias ativas adequadas para a combinação mencionadas acima podem estar presentes em formas estereoisoméricas ou como misturas estereoisoméricas, por exemplo, como enantiômeros ou racematos. Tanto as misturas estereoisoméricas, como também os estereoisômeros puros, podem ser usados de acordo com a invenção.

[0076] Além disso, podem ser eventualmente usados: sais das substâncias ativas com ácidos farmaceuticamente aceitáveis ou bases e também solvatos, especialmente hidratos, das substâncias ativas ou seus sais.

[0077] A aplicação da combinação significa ou, que o nifurtimox e a segunda substância ativa, especialmente um ciclodepsipeptídeo, podem ser aplicados separadamente ou temporalmente escalonados. Neste caso, o nifurtimox e a segunda substância ativa são formulados, em cada caso, como medicamentos especiais.

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 23/37

13/24 [0078] A aplicação simultânea também é concebível. De acordo com uma forma de concretização adequada para este caso, as substâncias ativas da combinação são formuladas juntas em uma composição. Preparações prontas para o uso contêm a respectiva substância ativa geralmente em concentrações de 10 ppm a 20% em peso, preferivelmente de 0,1 a 10% em peso.

[0079] Preparações que são diluídas antes da aplicação contêm a respectiva substância ativa em concentrações de 0,5 a 90% em peso, preferivelmente de 5 a 50% em peso. Em soluções concentradas para serem dosadas na água de beber, a respectiva substância ativa está presente, por exemplo, em concentrações de 0,5 a 20% em peso, preferivelmente 1 a 15% em peso, de modo particularmente preferido, 2 a 10% em peso.

[0080] Em geral, foi provado como vantajoso, administrar quantidades de cerca de 0,05 até cerca de 400 mg, preferivelmente 0,1 a 200 mg de substância ativa por kg de peso corporal por dia para obter resultados eficazes.

[0081] Na mistura com outros cocciodiostáticos, antibióticos ou anti-helmínticos, as substâncias ativas de acordo com a invenção, estão presentes na proporção de 1 para 0,01 - 50 até 1 para 1 - 50.

[0082] As substâncias ativas também podem ser administradas aos animais junto com o alimento ou água de beber.

[0083] Rações e alimentos contêm 0,005 a 1000 ppm, preferivelmente 0,05 a 500 ppm da substância ativa em combinação com um material comestível adequado.

[0084] Uma tal ração e alimento podem ser usados tanto para fins curativos como também para fins profiláticos.

[0085] Para complementar o tratamento com nifurtimox pode ser empregado um desinfetante. Com o desinfetante, os lugares de paragem dos animais (ou do homem) são desinfetados durante o tratamen

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 24/37

14/24 to. O desinfetante cuida preferivelmente da destruição das formas císticas excretadas para uma eliminação dos estágios parasitários permanentes e com isso, previne uma reinfecção após o término do tratamento. Por isso, o desinfetante já pode ser empregado antes do tratamento com nifurtimox, contudo, via de regra, é melhor empregá-lo ao mesmo tempo ou pelo menos antes do término do tratamento com nifurtimox.

[0086] Desinfetantes são, por exemplo, aqueles à base de fenóis biocidas e/ou derivados de fenol. Por fenóis biocidas são entendidos aqueles compostos de fenol, que portam um grupo OH livre e apresentam um efeito biocida. Esses fenóis podem portar outros substituintes no anel, tais como, por exemplo, halogênios, especialmente cloro, C1-6alquila, C3-6-cicloalquila, fenila, clorofenila, benzila e/ou clorobenzila.

[0087] Fenóis biocidas não clorados são, por exemplo: 2metilfenol, 3-metilfenol, 4-metilfenol, 4-etilfenol, 2,4-dimetilfenol, 2,5dimetilfenol, 3,4-dimetilfenol, 2,6-dimetilfenol, 4-n-propilfenol, 4-nbutilfenol, 4-n-amilfenol, 4-n-hexilfenol, timol (5-metil-2-isopropilfenol), 2-fenilfenol, 4-fenilfenol, 2-benzilfenol. Como fenol biocida não clorado emprega-se preferivelmente o 2-fenilfenol.

[0088] Fenóis biocidas clorados são, por exemplo, 4-cloro-3metilfenol (PCMC, p-cloro-m-cresol), 4-cloro-3-etilfenol, 2-n-amil-4clorofenol, 2-n-hexil-4-clorofenol, 2-ciclohexil-4-clorofenol, 4-cloro-3,5xilenol (PCMX, p-cloro-m-xilenol), 2,4-dicloro-3,5-xilenol (DCMX, dicloro-p-xilenol), 4-cloro-2-fenilfenol, 2-benzil-4-clorofenol, benzil-4-clorom-cresol, 4-clorobenzildicloro-m-cresol. Fenóis biocidas clorados preferidos são 2-benzil-4-clorofenol, 4-cloro-3,5-xilenol, 2,4-dicloro-3,5xilenol, bem como especialmente 4-cloro-3-metilfenol.

[0089] Por derivados de fenol entendem-se aqui aqueles compostos derivados do fenol, cujo grupo OH é derivatizado, de maneira que eles não contêm qualquer grupo OH livre. Esses são preferivelmente éteres

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 25/37

15/24 fenólicos, especialmente com álcoois alifáticos com 1 a 6 átomos de carbono. Como exemplo preferido seja mencionado o fenoxietanol. [0090] Preferivelmente, são empregados os desinfetantes descritos no WO 2007/009606. Biocidas adequados ou combinações biocidas e ceratolíticos adequados são descritos em detalhes no WO 2007/009606, é feita referência expressa a esse documento. Exemplos

Exemplos de formulações

Exemplo 1 (formulação líquida):

[0091] Suspensões em 100 ml de glicerol formal/ricinoleato de glicerina-polietileno (Cremophor^® EL)/água na proporção de mistura de 1 : 10 com:

[0092] · 500 mg de nifurtimox [0093] · 1000 mg de nifurtimox.

Exemplo 2 (formulação líquida):

[0094] Suspensões em 100 ml de Cremophor® EL/água na proporção de mistura de 1 : 5 com:

[0095] · 500 mg de nifurtimox [0096] · 1000 mg de nifurtimox.

Exemplo 3 (formulação sólida) [0097] As substâncias ativas nas quantidades indicadas abaixo são enchidas em uma cápsula de gelatina como pó:

[0098] · 250 mg de nifurtimox.

Exemplo 4 (comprimido) [0099] Comprimidos de nifurtimox são conhecidas e estão comercialmente disponíveis, por exemplo, pelo nome comercial Lampit^® como medicamento.

Exemplos biológicos

Exemplo 1 [00100] Filhotes de Beagle com idade de 10 - 11 semanas, que an

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 26/37

16/24 tes da infecção puderam aclimatizar-se por 11 dias em um centro veterinário, foram infectados por via oral com 50.000 cistos de Giardia duodenalis. Os cistos para a infecção foram obtidos com auxílio de um gradiente de sacarose das fezes de cães que excretaram cistos de giárdia e armazenados em meio de bacto casitone por não mais do que 2 semanas a 4 graus centígrados. Do dia 10 após a infecção, os filhotes foram mantidos em gaiolas individuais e para coletar as fezes diárias totais. A determinação quantitativa da excreção de cistos foi efetuada nos 4 dias antes do tratamento (dia -3 a 0) e os filhotes foram randomizados em dois grupos com base na excreção de cistos. No dia 0 foi realizado o tratamento dos 7 filhotes do grupo de tratamento com a dose oral única de 50 mg/kg de nifurtimox (Lampit,®), enquanto os 6 cães do grupo de controle não foram tratados. Do dia 1 até o dia 8 após o tratamento, a excreção de cistos foi ulteriormente determinada de forma quantitativa.

[00101] Resultados: a eficácia foi calculada com a seguinte fórmula:

, . _ Número de cistos do grupo de controle - Número de cistos do grupo de tratamento % de Eficácia —---------------------------------------------------------------------Número de cistos do grupo de controle [00102] A eficácia calculada com dose única de nifurtimox importou em 90,4% (vide tabela 1).

[00103] Método: A determinação quantitativa da excreção de cistos foi efetuada de acordo com uma versão modificada de Hewlett (18): 4 g de fezes foram dissolvidos em 100 ml de água, peneirados e deixados sedimentar. O sedimento foi acamado em um gradiente de sacarose 1 M (peso específico 1,13) e os cistos, que se enriqueceram após a centrifugação na camada de separação de sacarose-água, foram separados por pipetação. Após um estágio de enxágue com subsequente centrifugação, os cistos no pélete foram contados. Para esse fim, uma alíquota do pélete foi contada sob o microscópio e calculado o número de cistos por g de fezes.

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 27/37

Tabela 1: Excreção de cistos de giárdia antes e após o tratamento com nifurtimox 50 mg/kg de nifurtimox no dia T0

cão	D -3	D -2	D -1	D 0	D 1	D 2	D 3	D 4	D 5	D 6	D 7	D 8
9048	22402	186750	189275	19681	0	0	0	424	0	0	191	1621
9028	5259	45672	45725	16419	2636	180	224	1451	1318	4102	4615	1768
8343	5339	28322	26163	13644	2391	0	0	193	153	6315	223	508
8329	29625	907	1306	4397	504	0	0	590	1700	3693	8881	3294
9040	1063	923	14238	8456	4928	0	0	0	1094	2000	431	517
9038	1385	5897	2264	0	152	0	0	0	0	1201	1873	14181
9020	3263	905	788	375	0	0	0	652	137	353	608	0

Σ	9762	38482	39966	8996	1516	26	32	473	629	2523	2403	3127

controle infectado, não tratado
cão	D -3	D-2	D -1	D 0	D 1	D 2	D-3	D-4	D 5	D 6	D 7	D 8
9008	65325	41925	368	0	450	179	1183	3288	4747	14232	22237	3684
8341	21150	44988	35525	3138	1332	806	23399	17739	27253	9321	2660	12901
8309	7144	34613	33688	4531	25050	13238	5547	26106	52000	5125	47365	47999
8327	21250	21485	1350	3991	5383	4520	3529	17355	6145	14298	25331	110846
8313	2975	3185	8168	1209	609	6133	8438	6739	18113	4027	7103	2645
9026	945	2813	1723	2038	3544	3366	20163	11291	6719	4621	5867	5621

Σ	19798	24835	13470	2485	6061	4707	10377	13753	19163	8604	184427	30616

D-3 a D-1: dias antes do tratamento

D 0: dia do tratamento

D 1 a D 8: dias após o tratamento

17/24

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 28/37

18/24

Tratamento	Excreção de cistos de S giárdias
	dia -3 a 0	dia 1 a 8
50 mg/kg de nifurtimox	24302	1341	90,4%
controle infectado, não tratado	15147	13963	-

Exemplo 2 [00104] Filhotes de Beagle com idade de 11 - 15 semanas, que antes da infecção puderam aclimatizar-se por pelo menos 2 semanas no centro veterinário, foram infectados antes do início do estudo com 50.000 cistos de Giardia duodenalis por via oral. Os cistos para a infecção foram obtidos com auxílio de um gradiente de sacarose das fezes de cães que excretaram cistos de giárdia e armazenados em meio de bacto casitone por não mais do que 2 semanas a 4 graus centígrados. Filhotes que excretaram 18 cistos de giárdia foram incluídos no estudo e mantidos em gaiolas individuais, para coletar as fezes diárias totais. A determinação quantitativa da excreção de cistos foi efetuada tal como no ensaio 145.717, com a modificação de que a alíquota dos péletes foi contada com auxílio de uma câmara de contagem de Fuchs-Rosentahl sob o microscópio. A determinação quantitativa da excreção de cistos foi efetuada durante 4 dias antes do tratamento (dia -3 a 0) e os filhotes foram randomizados em três grupos com base na excreção de cistos. Em três dias subsequentes (dia 0, 1 e 2), o tratamento dos 6 filhotes do grupo de tratamento 1 foi realizado pela manhã com uma dose oral de 50 mg/kg de nifurtimox (Lampit®), enquanto os 6 cães do grupo de tratamento 2 foram tratados nesses três dias pela manhã com uma dose oral de 50 mg/kg de fenbendazol (fenbendazol-tab). Os 6 cães do grupo de controle ficaram sem tratamento. Do dia 1 até o dia 8 após o tratamento, a exceção de cistos foi ulteriormente determinada de forma quantitativa.

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 29/37

19/24 [00105] Resultados: A eficácia calculada de nifurtimox importou em 98,6%, enquanto a eficácia de fenbendazol importou e 48,3% (vide tabela 2).

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 30/37

Tabela 2: Excreção de giárdia antes e após o tratamento com nifurtimox em comparação com o tratamento com fenbendazol.

50 mg/kg de nifurtimox nos dias D0, D1 e D2
cão	D -3	D -2	D -1	D 0	D 1	D 2	D 3	D 4	D 5	D 6	D 7	D 8
9300	63463	79689	91293	103442	1261	527	0	0	0	0	0	903
0136	102900	68914	59273	112084	2000	0	0	622	1299	93	0	0
0116	57571	10685	25515	60420	809	741	0	0	229	0	0	517
8553	40909	8278	3472	675	187	0	0	185	0	98	0	0
8531	4891	1618	37203	89880	974	0	0	0	0	0	87	975
0134	28773	133	8528	86	0	0	0	0	2299	1842	237	0

Σ	49751	28220	37547	61098	872	211	0	135	638	339	54	399

50 mg/kg de fenbendazol nos dias D0, D1 e D2
cão	D -3	D -2	D -1	D 0	D 1	D 2	D 3	D 4	D 5	D 6	D 7	D 8
0117	18781	47754	243143	49400	67200	0	67109	49423	3116	4635	17474	0
9320	60193	23808	56014	28559	14596	5980	7043	652	18725	7546	20780	5555
8555	44218	26526	2349	639	872	0	961	439	4432	5594	260	5968
8543	34119	18113	16328	2719	12488	3386	3075	12038	0	3691	18056	10875

20/24

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 31/37

0135	20463	7230	14744	17037	6178	490	0	0	0	0	251	0
9328	2003	10109	21360	23290	723	552	5388	14133	19057	11495	20657	6370

Σ	29963	22257	58990	20274	17010	1735	13929	12781	7555	5494	12913	4795

controle infectado, não tratado
cão	D -3	D -2	D -1	D 0	D 1	D 2	D 3	D 4	D 5	D 6	D 7	D 8
0121	112757	27324	121092	108868	153336	64620	6127	190	6879	85408	73978	50256
0138	22125	65547	60200	26964	22234	855	17893	8138	13204	3681	439	1470
9332	22346	34475	42076	24466	24360	19145	12575	1455	5712	16122	21440	12563
8529	8884	49213	12881	32105	71378	1139	6409	4739	5297	23725	11626	2835
9330	18829	4711	22120	2476	1987	0	246	2492	4472	602	2052	813
0137	4623	12238	14406	14328	2134	10156	16756	0	8170	104020	79097	55935

Σ	31594	32251	45463	34868	45905	15986	10001	2836	7289	38926	31439	20645

D-3 a D-1	: dias an	tes do tratamento

21/24

D 0, D1, D2: dias do tratamento D3 a D8: dias após o tratamento

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 32/37

22/24

Tratamento	Excreção de cistos de S giárdias	Eficácia
	dia -3 a 0	dia 3 a 8
50 mg/kg de nifurtimox	44154	261	98,6%
50 mg/kg de fenbendazol	32871	9578	48,3%
controle infectado, não tratado	36044	18523	-

Literatura (1) Raether w., Hanel H. (2003): Nitroheterocyclic drugs with broad spectrum activity Parasitol Res. 90:página 19-página 39.

(2) Harder A, Greif G., Haberkorn A. (2001a): Chemotherapeutic approaches to protozoa: Haemosporina - current level of knowledge and outlook.

(3) Harder A, Greif G., Haberkorn A. (2001b): Chemotherapeutic approaches to protozoa: Giardia, Trichomons and Entamoeba - current level of knowledge and outlook.

(4) Greif G., Harder A, Haberkorn A (2001: Chemotherapeutic approaches to protozoa: Caccidiae - current level of knowledge and outlook.

(5) Harder A, Greif G., Haberkorn A. (2001c): Chemotherapeutic approaches to protozoa: Kinetoplastida - current level of knowledge and outlook. Parasitol Res 87:778-780.

(6) Adam R.D. (2001): Biology of Giardia lamblia. Clinical Microbiology Reviews, julho: 447-475.

(7) Marshall MM, Naumovitz D., Ortega Y., Sterling CR. (1997): Waterborne Protozoan Pathogens. Clinical Microbiology Reviews Jan:67-85.

(8) Roxstrom-Lindquist, K. Palm D., Reiner D., Ringqvist

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 33/37

23/24

E., Svard SG. (2006): Giardia immunity - an update. Trends in Parasitology Vo. 22(1):26-31.

(9) Beckman L. (2003): Mucosal defences against Giardia. Parasite Immunology 25:259-270.

(10) Hülsmeier A.J., Kohler P. (2005): Giardia duodenalis: direct experimental evidence for the absence of a glycosylphosphatidylinositol anchor in a variant surface protein. Experimental Parasitology 109:49-52.

(11) Kirkpatrick, CE, Farrell JP (1984): Feline giardiasis: observations on natural and induced infections. Amer. J. Vet. Res. 45:2182-2188.

(12) Zimmer JF, Burrington DB (1986): Comparison of four protocols for the treatment of canine giardiasis. J. Amer. Anim. Hosp. Ass. 22:168-172.

(13) Abbitt B, Huey RL, Eugster AK, Syler J. (1986): Treatment of giardiasis in adult greyhounds, using ipronidazolemedicated water. J. Amer. Vet. Med. Ass. 188:67-69.

(14) Wright JM., Dunn L.A., Upcroft P., Upcroft J.A. (2003): Efficacy of antigiardial drugs. Expert Opin. Drug Saf. 2(6):529541.

(15) Escobedo A.A & Cimerman S. (2007): Giardiasis: a pharmacotherapy review. Expert Opin. Pharmacother. 8(12):18851902.

(16) Harder A. et al. (2003) Cyclooctadepsipeptides - an anthelmintically active class of compounds exhibiting a novel mode of action. Int. J. Antimicrobial Agents. 22 : 318-331.

(17) Mehlhorn (ed) (2001) Giardiasis, Man; Encyclopedic Reference of Parasitology, Diseases, treatment, Therapy, Second Edition, Springer-Verlag, página 234-235.

(18) Hewlett, E.L., Andrews, J.S.Jr., Ruffier, J., Schaefer

Petição 870180144365, de 25/10/2018, pág. 34/37

24/24

III, F.W. (1982): Experimental infection of mongrel dogs with Giardia lamblia cysts and cultured trophozoites Em: The Journal of infectious diseases, Vol. 145, No. 1, páginas 89-93.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de nifurtimox, caracterizado pelo fato de que é para produção de medicamentos para tratamento de doenças causadas por giárdias.
2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é para tratamento de doenças causadas por Giardia lamblia.
3. Composição, caracterizada pelo fato de que contém nifurtimox e um ciclo-octadepsipeptídeo anti-helmíntico.