BRPI0720863A2 - Composição, compreendendo um extrato de grãos de quinoa e a respectiva utilização dermatológica - Google Patents

Composição, compreendendo um extrato de grãos de quinoa e a respectiva utilização dermatológica Download PDF

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BRPI0720863A2
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Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSI- ÇÃO, COMPREENDENDO UM EXTRATO DE GRÃOS DE QUINOA E A RESPECTIVA UTILIZAÇÃO DERMATOLÓGICA".
A presente invenção refere-se a uma composição cosmética, dermatológica ou nutracêutica, compreendendo um excipiente apropriado e um extrato de grãos de quinoa.
O grão de quinoa é classificado dentre os pseudo-cereais em razão de considerações taxinômicas e de uma composição química que a aproxima das gramíneas. Embora a sua riqueza em proteínas e em vários minerais tenha sido reconhecida desde o começo do século XX, seu consu- mo permaneceu cantonado na Cordilheira dos Andes durante aproximada- mente 6000 anos. Na Língua Quéchua de origem Inca, a palavra quinoa sig- nifica "chisiya mama" ou "grão mãe" em espanhol. Nos séculos XVIII e XIX, os botanistas viajantes que atravessaram as regiões andinas faziam grande elogio a ela. As tentativas de culturas que fizeram na Europa levaram a pou- cas conclusões. Um agrônomo alemão afirmou, em 1917, ter feito testes, mas estes caíram no esquecimento. Em razão de um interesse nutricional revelado, numerosas pesquisas feitas nesses trinta últimos anos e da curio- sidade que ela suscita, o grão da quinoa conhece um atrativo crescente. O nome botânico da quinoa é Chenopodium quinoa Willd. Subsp. Quinoa. Seus nomes usuais e vernaculares são:
- em quéchua: quinua, kiuna (existem numerosos outros nomes locais na América do Sul);
- em espanhol: quinoa, quinua, arroz do Peru;
- em francês: quinoa, pequeno arroz, arroz do Peru;
- em inglês: quinoa, quinua.
Chenopodium quinoa é uma planta herbácea anual, medindo 0,5 a 2,1 metros de altura, segundo as condições ambientais e o genótipo (plan- tas cultivadas 1 a 1,50 metro). A raiz pivô é densamente ramificada, o que facilita sua resistência ao gel. A parte aérea aparece ramificada ou não, se- gundo as variedades. Suas folhas, alternadas, são bastante polimorfas (lan- ceoladas, deltoides ou triangulares). Elas são verdes, quando a planta é ain- da jovem, depois assumem uma cor amarela, vermelha ou púrpura com a maturidade. A inflorescência é de tipo panícula. As flores apétalas são pe- quenas e séssis.
O fruto indeiscente é um áqueno. Ele contém pequenos grãos quase esféricos, medindo de 1 a 2,0-2,6 mm de diâmetro e cujo crescimento lembra aquele da milha. Sua cor é branca, amarela, vermelha, púrpura, mar- rom ou escura. O pericarpo representa aproximadamente 8 % do grão, o embrião 60-69 %, e o perisperma aproximadamente 23 %.
Dentre o gênero Chenopodium, duas espécies selvagens, C.
hircinum e C. berlandieri, estão próximas de Chenopodium quinoa (mesmo número de cromossomas (2n = 36) e hibridações interespecíficas). Casos de hibridações foram também observados entre quinoa e quenópode branco (Chenopodium álbum L.).
As quinoas cultivadas apresentam importantes variabilidades de
cores (plantas, inflorescências, grãos), de teores em proteínas e em saponi- nas nos grãos, e de teores em beta-cianina e em oxalatos de cálcio nas fo- lhas.
A região andina, e mais particularmente à beira do lago Titicaca, se mostrou de uma grande diversidade genética de população. As principais
variedades conhecidas nessa região são as seguintes:
- no Peru: Kancolla, Cheweca, Witulla, Tahuaco, Camacani, Yo- cará, Wilacayuni, Blanca de Juli1 AmariIIa de maranganí, Pacus, Rosada, Blanca de Junin, Hualhuas, Huancayo1 Mantaro, Huacariz, Huacataz, Acos- tambo, Blanca Ayacuchana e Narino;
- na Bolívia: Sajama1 Real Blanca1 Chucapaca1 Kamiri, Huaran-
ga, Pasancalla1 Pandela, Tupiza, Jachapucu, Wila Coymini, Kellu, Uthusaya, Chullpi, Kaslali e Chillpi;
- no Equador: lnbaya, Chaucha1 INIAP-Cochasqui, Tanlahua1 Piartal1 Porotoc1 Amarga Del Chimborazo1 Amarga de Imbabura e Morada;
- na Colômbia: Dulce de Quitopampa;
- na Argentina: Blanca de Jujuy;
- no Chile: Baer, Lito, Faro e Picchaman. Um botânico boliviano descreveu, em 1968, 17 tipos, a partir de seus caracteres morfológicos. Outros botânicos propuseram quatro princi- pais eco-tipos definidos a partir de sua localização geográfica: o tipo "Vallé- e", típico de 2000 a 4000 m de altitude; o tipo "Altiplano", típico das altas ter- 5 ras localizadas acima de 4000 m; o tipo "Salé" localizado a cerca de 4000 m, mas adaptado aos elevados pH dos solos da região de Atacama; e os tipos "Nível do mar" encontrados nos vales internos da Bolívia. O quinoa selva- gem tem por origem os altos planaltos da Cordilheira dos Andes. Ele é en- contrado no Peru, na Bolívia e no extremo norte do Chile a altitudes que po- 10 dem ultrapassar 3900 metros.
Os grãos secos de quinoa são compostos de água (aproxima- damente 10 %, valor de 12,6 % reportado na literatura), de matérias minerais (valores de 2,46 a 3,4 % reportados na literatura), de glucídeos (valores de 58,5 % e de 61,2 % reportados na literatura para os grãos brutos, e de 62,8 15 % para os grãos polidos), de proteínas (valores de 12,2 a 13,8 % reportados na literatura, 14,8 e 15,7 % para quinoas açucarados e amargos respectiva- mente), lipídeos (valores que variam de aproximadamente 4,5 a aproxima- damente 10 % reportados na literatura), saponosídeos e polifenóis. As per- centagens indicadas são expressas em peso em relação ao peso total do 20 grão seco.
Como glicídeos, o grão seco de quinoa compreende fibras ali- mentares (valor 6,6 % reportado na literatura), fibras brutas (valor de 2,2 % reportado na literatura), cujas fibras solúveis na água (1,26 g/100 g a partir da literatura) e fibras insolúveis na água (5,38 g/100 g a partir da literatura). 25 A glicose (4,5 % a partir da literatura), a fructose (2,4 % a partir da literatura) e a sacarose (2,4 % a partir da literatura) são importantes. As percentagens indicadas são expressas em peso em relação ao teor total em peso de glu- cídeos no grão seco.
Como lipídeos, o grão seco de quinoa compreende ácidos gra- xos, fosfatíceos (lisofosfatidiletanolamina principalmente), tocoferóis (a- tocoferol e γ-tocoferol principlamente), hidrocarbonetos (escaleno) e este- róis. Os ácidos graxos majoritários são o ácido Iinoleico e o ácido ole- ico. O grão seco contém também quantidades significativas de ácido palmíti- co e de ácido α-linoleico. Ela pode também conter o ácido mirístico do ácido mirístico, o ácido 5-hexadecenóico, o ácido esteárico, o ácido de amendoim, 5 o eicasenóico, o ácido behênico, o ácido 9-docosenóico, o ácido tetracosse- nóico ou outros ácidos. Os grãos brutos e os grãos polidos e lavados têm proporções em ácidos graxos muito próximas.
Na literatura, foram registradas taxas de ácidos graxos livres e- levados: 18,9 % no grão inteiro; um índice de iodo de 129; um índice de sa- ponificação de 190, um teor em matéria insaponificável de 5,2 %.
A partir da literatura, os esteróis majoritários são ο Δ7- estigmasterol. Os outros esteróis que podem estar presentes são: ο Δ5,24 (28)-avenasterol, o β-sitosterol, o A7-campesterol, o estigmasterol, o coleste- rol, o campesterol, o fucostanol, o 24-etileno-A7-colesten-3p-ol.
Os saponosídeos presentes no grão de Quinoa foram muito es-
tudados há 25 anos por pesquisadores de diferentes continentes. Trata-se de saponosídeos triterpênicos. Esses constituintes ficam essencialmente situados no nível do pericarpo do grão.
As aplicações do quinoa, e de seus extratos com exceção das saponinas, são, até hoje, cantonadas ao domínio alimentar. A título de e- xemplo, pode-se citar o pedido internacional W02005/058249 que descreve um concentrado de proteínas utilizado na indústria alimentícia.
O pedido internacional W02006/053415 divulga utilizações der- matológicas de numerosos extratos de plantas, dos quais o quinoa. Os ex- 25 tratos de quinoa são obtidos por extração aquosa ou etanólica sobre plantas estressadas e não estressadas. O extrato aquoso assim obtido contém al- gumas proteínas hidrossolúveis, taninos, açúcares livres e oligossacarídeos, heterosídeos (saponinas + flavônicos). O extrato etanólico contém saponi- nas, polifenóis, lipídeos tritepênicos e alguns lipídeos. Todavia, os testes 30 feitos sobre a interleuquina IL-8 mostra que o extrato testado induz a síntese dessa interleuquina IL-8 e é preciso, portanto, concluir que esse extrato é pró-inflamatório. Assim, não é, na realidade, recomendado para uma utiliza- ção dermatológica. Nenhuma utilização dermatológica séria do quinoa e de seus extratos foi, portanto, até hoje considerada.
Ora, os inventores descobriram, de maneira surpreendente, que certos extratos de quinoa não são inflamatórios e apresentam propriedades 5 cosméticas, dermatológicas ou nutracêuticas interessantes.
A invenção tem, portanto, por objeto uma composição cosméti- ca, dermatológica ou nutracêutica compreendendo um extrato de grãos de quinoa e, se for o caso, um excipiente apropriado, caracterizada por esse extrato peptídico ou um extrato lipídico de grãos de quinoa. A composição nutracêutica pode não compreender excipiente.
A figura 1 identifica as diferentes etapas de obtenção dos diver- sos extratos Iipidicos e peptídicos. A partir de grãos de quinoa (A), o proces- so compreende uma primeira etapa (1) de extração por pressão, por solven- te, sob pressão supercrítica. Desse extrato, é valorizada seja a parte Iipidica 15 (óleo bruto B), seja a parte peptídica (bolo V). O óleo bruto é submetido a uma refinação (2) para levar a um óleo refinado (C). Esse óleo refinado (C) é submetido a uma destilação molecular (3) para levar a um óleo concentrado em sua fração insaponificável (ou concentrado; D). Esse óleo concentrado (D) é, em seguida, submetido a uma saponificação e extração (4) para levar 20 aos insaponificáveis (E). No que se refere à prática protéica, o bolo (V) é lavado com água e/ou o etanol (11), a fim de suprimir as saponinas, açúca- res solúveis, heterosídeos e polifenóis (Z). O bolo lavado é, em seguida, submetido a uma etapa de solubilização das proteínas com pH alcalino (12). A título de alternativa, o processo pode compreender uma etapa suplemen- 25 tar de tratamento enzimático a-amilases/celulases (20). O processo compre- ende, em seguida, uma etapa de centrifugação, depois uItrafiltragem (13), o que permite a eliminação dos insolúveis (Z) e leva às proteínas concentra- das (W). Essas proteínas concentradas (W) são, em seguida, submetidas a uma etapa de tratamento enzimático por proteases (14), depois por trata- 30 mento térmico, ultrafiltragem e nanofiltragem (15), o que leva aos peptídeos (X) (+ açúcares Y).
De acordo com uma primeira variante da invenção, o extrato de quinoa é um extrato lipídico de grãos de quinoa. Os óleos podem ser extraí- dos por vários processos:
- extração física tal como a pressão a frio sobre prensa mecâni- ca, a pressão sobre extrusora bi-parafuso;
- extração química com o auxílio de solventes orgânicos (alca-
nos alifáticos, alcoóis, solventes clorados, solventes fluorados);
- extração em meio supercrítico, com o auxílio do dióxido de car- bono sozinho e/ou com cossolventes.
Antes da extração do óleo, as saponinas, contidas majoritaria- mente sobre a parede externa dos grãos, são vantajosamente e previamente eliminadas por descorticação abrasiva ou por lavagem com água. Por outro lado, os grãos podem previamente ser tratados hidrotermicamente.
Para a extração de óleo bruto de quinoa, a utilização de um sol- vente químico de tipo alcano alifático, tal como o n-hexano será preferido. 15 De acordo com um modo de extração particular, os grãos, descorticados e lavados, eventualmente pré-tratados hidrotermicamente, são achatados, a fim de serem obtidos flocos, antes de serem introduzidos em um extrator contínuo de faixa, e os lipídeos são extraídos por percolação de n-hexano. A miscella coletada é evaporada sob vácuo, a fim de recuperar o óleo dessol- 20 ventado.
As especificações do óleo bruto de quinoa são dadas na tabela 1
a seguir:
Corte graxo (% em peso em relação ao peso total do óleo) C14 5 1,0 C16 5,0-12,0 C16' 5 1,0 C18 12,0 C18' 20,0-35,0 C18" 40,0-60,0 C18"' 2,0-13,0 C20 <1,0 C20' 13,0 C22 <1,0 /'■n r> λ I < 3,0 continuação
Corte graxo (% em peso em relação ao peso total do óleo) C24 5 1,0 Teor em Tocoferóis (mg/100 g) 4-300 Teor em Esteróis (g/100 g) 0 1 CO O Teor em Esqualeno (g/100 g) 0 1 cn o Teor em Insaponificável (g/100 g) 3,0-8,0 10
15
20
Tabela 1: especificações de óleo de quinoa bruto.
Esse óleo é alimentício. A esse respeito, ele pode ser consumido pelo técnico. Ele respeita, portanto, as normas CODEX. Ele não contém ou contém muito poucos ácidos graxos livres. A partir das normas em vigor, os valores máximos de índice de ácido são de 0,4 mg KOH/g de óleo, para os óleos obtidos por pressão a frio e os óleos virgens. Ele não contém subpro- dutos de oxidação ou de produtos residuais do tipo resíduos fito-sanitários e HAPs (hidrocarbonetos aromáticos policíclico).
O óleo bruto de quinoa pode ser refinado, segundo processos conhecidos do técnico, tais como a refinação física (retirada de goma na á- gua, desacidificação por desodorização à alta temperatura) e refinação quí- mica (desmucilaginação na água ou tratamento ácido, a fim de eliminar os fosfolipídeos, neutralização dos ácidos graxos livres com o auxílio de uma solução básica, descoloração, frigelização e desodorização). A refinação química será preferida, pois permite eliminar as saponinas arrastadas, quan- do da extração, assim como a forte proporção de fosfolipídeos e de ácidos graxos livres.
As especificações do óleo de quinoa refinado, de acordo com a
Corte graxo (% em peso em relação ao peso total do óleo) C14 < 1,0 C16 5,0- 12,0 C16* < 1,0 C18 <2,0 C18' 20,0-35,0 C18" 40,0-60,0 C18"' 2,0-13,0 continuação Corte graxo (% em peso em relação ao peso total do óleo) C20 <1,0 C20' <3,0 C22 <1,0 C22 < 3,0 C24 <1,0 Teor em Tocoferóis (mg/100 g) 4-200 Teor em Esteróis (g/100 g) 0,5-3,0 Teor em Esqualeno (g/100 g) 0,5-3,0 Teor em Insaponificável (g/100 g) 2,0-6,0 Tabela 2: especificações de óleo de quinoa refinado.
Esse óleo é alimentício. A esse respeito, ele pode ser consumido pelo homem. Ele respeita, portanto, as normas CODEX. Ele não contém ou 5 contém muito porcos ácidos graxos livres. A partir das normas em vigor, os valores máximos de índice de ácido são de 0,6 mg KOH/g de óleo, para os óleos refinados. Ele não contém subprodutos de oxidação ou produtos resi- duais do tipo resíduos fito-sanitários e HAPs (hidrocarbonetos aromáticos policíclicos). Ele apresenta também triglicerídeos, cuja repartição em ácidos 10 graxos é idêntico ao óleo de partida, o que Ihe permite se beneficiar da de- nominação de óleo vegetal natural.
A invenção tem também por objeto um processo de preparo de um óleo refinado de quinoa tendo especificações definidas na tabela 2, com- preendendo uma etapa de refinação química do óleo bruto de quinoa. De acordo com uma variante vantajosa, o processo compreende as etapas des- critas anteriormente.
O óleo refinado de quinoa obtida anteriormente pode ser con- centrado em sua fração insaponificável por um processo de destilação mole- cular.
O insaponificável é a fração de um corpo graxo que, após ação
prolongada de uma base alcalina, permanece insolúvel na água e pode ser extraída por um solvente orgânico. Cinco grandes grupos de substâncias estão presentes na maior parte dos insaponificáveis de óleos vegetais: hi- drocarbonetos saturados ou insaturados, alcoois alifaticos ou terperucos, esteróis, tocoferóis, os pigmentos carotenoides e xantófiios.
Essa etapa de destilação molecular é, de preferência, realizada utilizando-se um dispositivo escolhido dentre os destiladores moleculares de tipo centrífugo e os dispositivos moleculares de tipo com película raspada.
5 Os destiladores moleculares de tipo centrífugo são conhecidos
do técnico. Por exemplo, o pedido EP 493 144 descreve um destilador mole- cular desse tipo. De maneira geral, o produto a destilar é aferido em camada fina sobre a superfície aquecida (superfície quente) de um rotor cônico gira- tório à grande velocidade. O compartimento de destilação é colocado sob 10 vácuo. Nessas condições, há evaporação e não ebulição, a partir de superfí- cie quente, constituintes do óleo, tais como os insaponificáveis, a vantagem sendo que o óleo e seus constituintes, notadamente os insaponificáveis (es- ses produtos sendo reputados como frágeis) não são degradados no decor- rer da evaporação.
Os destiladores moleculares de tipo com película raspada são
também conhecidos do técnico. De maneira geral, eles compreendem uma câmara de destilação dotada de um ralador giratório, permitindo a aferição em contínuo sobre a superfície de evaporação (superfície quente) dos pro- dutos a destilar. Os vapores de produto são condensados obliquamente pelo 20 uso de um pino refrigerado, colocado no centro da câmara de destilação. Os sistemas periféricos de alimentação e de vácuo são muito próximos daque- les de um destilador centrífugo (bombas de alimentação, bombas a vácuo com palheta e com difusão de óleo, etc). A recuperação dos resíduos e dos destilados em balões em vidro é feita por escoamento gravitacional.
Ao final da etapa de fracionamento, a fração destilada rica em
insaponificáveis representa vantajosamente 5 a 15 % em peso do óleo de partida, e a fração destilada rica em triglicerídeos representa vantajosamente 85 a 95 % em peso do óleo de partida. Foi, além disso, verificado que esse processo não acarretava nenhuma modificação química ou alteração dos 30 compostos do insaponificável, e que as frações muito insaturadas estavam preservadas. Por conseguinte, a repartição em ácidos graxos do óleo de quinoa concentrada é idêntica àquela do óleo de quinoa, antes da concen- tração.
De acordo com uma variante vantajosa da invenção, o óleo de
quinoa concentrado em sua fração insaponificável apresenta as especifica- ções dadas na tabela 3 a seguir:_
Corte graxo (% em peso em relação ao peso total do óleo) C14 <1,0 C16 5,0-12,0 C16' <1,0 C18 12,0 C18' 20,0-35,0 C18" 40,0-60,0 C18’" 2,0-13,0 C20 <1,0 C20' 13,0 C22 11,0 C22' 13,0 C24 11,0 Teor em Tocoferóis (mg/100 g) 40 - 5000 Teor em Esteróis (g/100 g) 3,0-20,0 Teor em Esqualeno (g/100 g) 2,5-40,0 Teor em Insaponificável (g/100 g) 5,0-50,0 Tabela 3: especificação de um óleo refinado concentrado em
sua fração insaponificável.
Esse óleo refinado enriquecido em sua fração insaponificável é ele mesmo uma nova alimentação, objeto também da presente invenção. A esse respeito, ele pode ser consumido pelo homem. Ele respeita, portanto, 10 as normas CODEX. Ele não contém ou contém muito poucos ácidos graxos. No âmbito de um procedimento de agregação para um novo produto alimen- tar diante das instâncias competentes, valores máximos de índice de ácido serão definidos.
Além disso, ele não contém subprodutos de oxidação ou de pro- dutos residuais do tipo resíduos fito-sanitários e HAPs (hidrocarbonetos a- romáticos policíclicos). Ela apresenta também triglicerídeos, cuja repartição em ácidos graxos é idêntica ao óleo de partida, o que Ihe permite se benefi- ciar da denominação óleo vegetal natural.
Esse óleo refinado sendo enriquecido em sua fração insaponifi- cável, ele permite fornecer ao organismo, para um mesmo fornecimento em triglicerídeos que um óleo refinado, quantidades mais importantes de ele- 5 mentos nutritivos, tais como fitosteróis e vitaminas, sem fornecimento calorí- fico suplementar.
A invenção tem também por objeto um processo de preparo de um óleo de quinoa concentrado em sua fração insaponificável, compreen- dendo uma etapa de destilação molecular de um óleo refinado de quinoa. 10 Em particular, a etapa de destilação molecular é realizada, utilizando-se um dispositivo escolhido dentre os destiladores moleculares de tipo centrífugo e os dispositivos moleculares de tipo com película raspada. O processo com- preende vantajosamente as etapas descritas anteriormente.
O insaponificável de óleo de quinoa pode ser obtido por proces- 15 sos conhecidos do técnico. Por exemplo, pode ser obtido, efetuando-se uma saponificação sobre o óleo de quinoa concentrado em sua fração insaponifi- cável, depois extraindo-se esse insaponificável com o auxílio de um solvente apropriado. Esse extrato é, em seguida, lavado até eliminação completa dos sabões, depois o solvente é evaporado. Enfim, o insaponificável sofre vanta- 20 josamente uma desodorização ao vapor de água, depois stripping ao nitro- gênio, a fim de eliminar os traços de solvente.
O insaponificável de óleo quinoa apresenta vantajosamente as
Teor em Tocoferóis (mg/100 g) 1,5-3,5 Teor em Esteróis (g/100 g) 20,0-50,0 Teorem Esqualeno (g/100 g) 20,0 - 50,0 Tabela 4: especificações de um insaponificável de óleo de qui-
noa.
A invenção se refere também a um processo de preparo de um insaponificável de quinoa, compreendendo uma etapa de saponificação de um óleo de quinoa concentrado em sua fração insaponificável, depois uma extração desse insaponificável com o auxílio de um solvente apropriado. O processo compreende vantajosamente as etapas descritas anteriormente. No âmbito da invenção, o extrato iipídico de grãos de quinoa é ele próprio escolhido no grupo constituído por um óleo concentrado em sua fração insaponificável, um insaponificável ou um óleo refinado tendo as es- pecificações dadas anteriormente (tabela 2).
De acordo com uma segunda variante da invenção, o extrato de
quinoa é um extrato peptídico e osídico de grãos de quinoa.
O extrato peptídico e osídico é vantajosamente obtido por um processo que compreende as seguintes etapas:
a) a partir de grãos de quinoa, extração de um óleo bruto e de um boi, e recuperação desse bolo;
b) lavagem desse bolo pela água ou uma mistura hidroaIcoóIica para conservar apenas a parte protéica, depois
c) solubilização das proteínas;
d) concentração das proteínas, depois hidrólise dessas proteínas em peptídeos;
e) purificação e recuperação do extrato peptídico.
O extrato peptídico e osídico, de acordo com a invenção, apre- senta vantajosamente as seguintes especificações:_
% em peso em relação ao peso total do extrato peptídico Teor em peptídeos (%) 25-90 Teor em açúcares totais (%) 10-50 Tabela 5: especificações de um extrato peptídico de quinoa.
A invenção tem também por objeto um processo de preparo de
um extrato peptídico e osídico de quinoa, compreendendo as seguintes eta- pas sucessivas:
a) a partir de grãos de quinoa, extração de um óleo bruto e de um bolo e recuperação desse bolo;
b) lavagem desse bolo pela água ou uma mistura hidroalcoólica
para conservar apenas a parte protéica, depois
c) solubilização das proteínas;
d) concentração das proteínas, depois hidrólise dessas proteínas em peptídeos;
e) purificação e recuperação do extrato peptídico. Por outro lado, previamente à concentração das proteínas (etapa
d), as fibras são vantajosamente eliminadas.
Um modo de realização preferido de obtenção do extrato peptí- dico e osídico é descrito a seguir.
O bolo de grãos de quinoa obtido após dessolvatação, quando
da extração dos lipídeos, é dispersado na água ou em uma mistura eta- nol/água, a fim de extrair e de eliminar os saponosídeos, os heterosídeos e os polifenóis. Essa mistura é secada ou centrifugada, a fim de recuperar o resíduo, e o suco é afastado. O resíduo é dispersado e misturado na água, 10 com um pH alcalino compreendido entre 8 e 13, a fim de solubilizar as prote- ínas. É possível seja eliminar as fibras por uma nova centrifugação, seja pra- ticar uma hidrólise do amido e das fibras (celulose, hemicelulose, ...) com o auxílio de uma mistura de amilases e de celulases.
As proteínas solúveis são, então, concentradas seja por precipi- tação em meio ácido no ponto isoelétrico, seja por ultrafiltragem. As proteí- nas concentradas são, em seguida, hidrolisadas por enzimas, vantajosamen- te das proteases alcalinas. Um tratamento térmico permite desnaturar as enzimas em fim de reação.
O meio reacional sofre uma ultrafiltragem sobre uma membrana 20 que tem um limite de corte de 10 kDa, a fim de eliminar as proteínas residu- ais (retentado). O permeado é, em seguida, concentrado à taxa de matéria seca desejada e dessalgada por nanofiltragem com uma membrana de limite de corte 200 Da. Enfim, o produto é acondicionado após ter sido filtrado es- terilmente (0,2 pm).
A composição pode, além disso, compreender pelo menos um
composto escolhido no grupo constituído por:
- ativos classicamente utilizados em dermatologia, tais como os emolientes, os ativos hidratantes, os ativadores da síntese de queratina, os querato-reguladores, os queratolíticos, os agentes reestruturantes da barrei- 30 ra cutânea (ativadores da síntese dos lipídeos cutâneos, dos agonistas PPARs ou Peroxysome Proliferator Activated Receptor), os agonistas RXR ou LXR1 os SERM, os agonistas dos receptores na vitamina D ou nos corti- coides, os ativadores da diferenciação dos queratinócitos (retinoides, calci- done ®, o cálcio), os sebo-reguladores (os inibidores de 5-alfa reductase, notadamente o ativo 5-alfa Avocuta® comercializado pelos Laboratoires Ex- panscience),os conservantes, os agentes anti-irritantes, os agentes calman- 5 tes, os filtros e telas solares, os agentes antioxidantes;
- princípios ativos que têm uma ação terapêutico complementar, tais como os antibióticos, os pré- e probióticos, os agentes antibacterianos, os compostos antifúngicos, os agentes antivirais, os imunomodulares (tacro- Iimus ou pimecrolimus), as oxazolinas, os fatores de crescimento, os agen-
tes cicatrizantes ou as moléculas eutróficas, os medicamentos, os agentes anti-inflamatórios, os agentes pigmentadores ou hipopigmentadores, os a- gentes lipolíticos ou inibidores da lipogênese, os filtros e telas solares, mine- rais ou orgânicos pigmentares ou ultrafinos, alimentos clássicos ou funcio- nais: hiper ou hipoglicemiantes, nutrientes antigordura ou anticelulite, antico- 15 lesterol, antioxidante, energizante, reconstituinte, tendo um impacto sobre os sinais secundários da menopausa;
- extratos naturais de planta (parte de vegetais extraíveis em fa- se aquosa ou oleosa: polifenóis, flavonoides, outros peptídeos e açúca- res,...), compostos contendo insaponificáveis de óleos vegetais, insaponifi-
cáveis esterólicos ou produtos que podem conter (insaponificáveis de óleos vegetais, notadamente insaponificáveis de óleo de soja, insaponificáveis de manteigas vegetais ou de matérias butirosas e suas misturas, insaponificá- veis de ceras naturais, insaponificáveis de extratos oleosos, insaponificáveis de co-produtos oleosos industriais, insaponificáveis de extrato de corpos 25 graxos de origem animal, insaponificáveis de óleos marinhos, insaponificá- veis de extratos da matéria graxa láctica, insaponificáveis de lipídeos extra- tos de organismos unicelulares, insaponificáveis de lipídeos extraídos de algas e organismos marinhos, etc.), esteróis, estanóis, fitoesteróis, fitoesta- nóis, tocoferóis, concentrados de óleos de girassol, de colza e/ou de palma, 30 oligo-elementos, vitaminas, ácidos graxos em ômega 3, 6 ou 9, plantas hipo- glicemiantes ou hiperglicemiantes ou açucarantes.
Os ativadores da síntese de queratina que podem ser utilizados em associação são vantajosamente os retinoides, os peptídeos de tremoço comercializados pela sociedade Silab, proteínas chaves do estrato córneo granuloso (queratinas) e corneodesmossomas.
Os agentes calmantes que podem ser utilizados em associação 5 são vantajosamente o alfa bisabolol, os derivados de alcaçuz, ibuprofrno, o enoxolona. Os querato-reguladores, que podem ser utilizados, são vantajo- samente os alfa hidróxi ácidos e seus derivados. Um queratolítico que pode ser utilizado em associação é notadamente o ácido salicílico e seus deriva- dos.
Os fatores de crescimento que podem ser utilizados em associa-
ção são vantajosamente a becaplermina e o TGF-beta (Transforming Growth Factor beta), o EGF, o NGF e o VEGF.
Os antioxidantes que podem ser utilizados em associação são vantajosamente escolhidos no grupo constituído pelos oligoelementos (co- 15 bre, zinco, selênio), o ácido lipóico, sozinho ou associado à vitamina B12, as vitaminas C, as vitaminas E, os flavonoides (chá verde), o betacaroteno, o Iicopeno ou a luteína, as substâncias antiglicação, tais como a carnosina, a n-acetil-cisteína, as isoflavonas de soja, as proteínas de soja, assim como as enzimas antioxidantes ou radicalares SOD (superóxido dismutase) catalase, 20 glutação peroxidase, tiorredoxina reductase e seus agonistas.
Os agentes reestruturantes da barreira cutânea, permitindo es- timular a síntese dos lipídeos-chaves da epiderme, e podendo ser utilizados em associação, são vantajosamente concentrados de girassol, mais vantajo- samente concentrados de girassol linoleicos, tais como o ativo comercializa- 25 do pelos Laboratoires Expanscience, Soline® (cf. o pedido internacional WO 01/21150), insaponificáveis de óleo vegetal, tal como Avocadofurane® (cf. o pedido internacional WO 01/21150), agonistas PPARS (rosiglitazona, piogli- tazona), RXR, LXR.
Os compostos antifúngicos, que podem ser utilizados em asso- ciação, são vantajosamente o econazol e o quetoconazol.
Os conservantes antissépticos, que podem ser utilizados em as- sociação, são, por exemplo, o triclosan, a clorexidina, os amônios quaterná- rios.
Os antibióticos, que podem ser utilizados em associação, são vantajosamente o ácido fucídico, a penicilina, as tetraciclinas, a pristinamici- na, a eritromicina, a clindamicina, a mupirocina, a minociclina, a doxiciclina.
5 Os agentes antivirais, que podem ser utilizados em associação, são vantajo- samente o aciclovir e o valaciclovir. Os agentes anti-irritantes que podem ser utilizados em associação são vantajosamente a glicina, os açúcares e/ou peptídeos de tremoço, o Cicloceramida® (derivado de oxazolina).
Os agentes cicatrizantes, que podem ser utilizados em associa- ção, são vantajosamente a vitamina A, o pantenol, o Avocadofurano ®, o óxido de zinco, o magnésio, o silício, o ácido madecássico, ou asiático, o sulfato de dextrano a glicosamina, a condroitina sulfato e globalmente GAG, os peptídeos de soja fermentado ou não, os oligoelementos.
Os medicamentos que podem ser utilizados em associação são vantajosamente os medicamentos, apropriados para uma administração por via tópica ou oral, para a prevenção e/ou o tratamento da atopia (corticoides, imunomoduladores tópicos inibidores da calcineurina, emolientes), da acne (antibióticos, peróxido de benzoíla, retinoides, ácido azeláico, vitamina PP, vitamina B3, zinco, ciclinas), do eczema (imunomoduladores, emolientes, óleo de salmão, de borracha, os pré-bióticos) ou psoríase (corticoides, calci- potriol, calcitriol, tazaroteno, óleo de cadê, acitreína, PUVA terapia) ou medi- camentos (ou alimentos) hiperlipemiantes e/ou medicamentos (ou alimentos) hipolipemiantes. Dentre esses dois últimos tipos de medicamentos, é possí- vel citar os medicamentos à base de sulfonilureias de glinídeos, os medica- mentos à base de inibidores das alfa-glicosidases, os medicamentos à base de biguanidas (metformina), os medicamentos à base de ativadores da sen- sibilidade à insulina ou tiazolidinadionas (TZD), pioglitazona, rosiglitazona), que são agonistas PPARs, os medicamentos hipolipemiantes da família das estatinas ou da família dos fibratos (agonistas de PPARa), o orlistato (Xeni- cal) e a sibutramina (Reductil ou Sibutral).
Os nutrientes antigordura que podem ser utilizados em associa- ção são vantajosamente escolhidos no qrupo constituído por nutrientes blo- queador de absorção das gorduras, tais como quitosano, nutrientes capazes de aumentar a termogênese ("queimador de gordura"), tais como a efedrina (erva chinesa Ma Huang), a cafeína, a teína e o citrus aurantium, nutrientes capazes de regular o apetite ("corta a fome"), tais como a L-fenilalanina e a 5 L-tirosina, nutrientes capazes de regular a glicemia, tais como minerais, por exemplo, o cromo ou o vanádio ou o magnésio, ou a erva aiurvédica Gym- nema silvestre, inibidores da lipogênese, tal como o ácido hidroxicítrico ex- traído do Garcinia cambodgia e nutrientes capazes de transportar gorduras, tais como a L-carnitina.
Exemplos de alimentos ou de terapias hiperglicemiantes, para
reequilibrar a glicemia, são os anti-retrovírus, os glicocorticoides, os imuno- supressores, IFN-Alfa, os esteroides sexuais, o THS, a pílula, os hormônios de crescimento, os simpatomiméticos, os medicamentos cardiovasculares, os diuréticos, os betabloqueadores, os inibidores cálcicos, os psicotrópicos. Os agentes anti-inflamatórios, que podem ser utilizados em as-
sociação, são vantajosamente agentes anti-inflamatórios esteroidianos (AIS), tais como os corticoides, ou não esteroidianos (AINS).
Os imunomoduladores, que podem ser utilizados em associa- ção, são vantajosamente o tacrolimus, o pimecrolimus e as oxazolinas. As 20 oxazolinas que podem ser utilizadas em associação são vantajosamente as oxazolinas escolhidas no grupo constituído pela 2-undecil-4-hidroximetil-4- metil- 1,3-oxazolina, a 2-undecil-4,4 - dimetil- 1,3-oxazolina, a (E)-4,4- dime- til-2- heptadec -8-enil-1,3- oxazolina, a 4-hidroximetil -4-metil-2-heptadecil- 1,3- oxazolina, a (E)-4-hidróxi metil -A- metil-2-= heptadec -8-enil-1,3- 25 oxazolina, a 2-undecil-4- etil-4-hidróxi metil -1,3- oxazolina. De maneira ain- da mais vantajosa, essa oxazolina é a 2-undecil-4,4- dimetil-1,3- oxazolina, denominada OX-100 ou Cicloceramida®.
Os agentes hipopigmentadores que podem ser utilizados em associação são a hidroquinona, e seus derivados, a arbutina, o ácido retinói- co, o retinol, o retinaldeído, o ácido cójico, o ácido azelaico, a vitamina B3 ou PP1 os derivados do resorcinol, o resveratrol, extratos de Iicorice ou de amo- reira branca, o ácido alfa-lipóico, o ácido linoleico, quelatantes de cátions, tais como EDTA (ácido etileno diamina, tetra-acético), os extratos de soja. Pode-se também citar o Sepiwhite ® (N-undecilenoil-L-fenilalanina) comerci- alizado pela sociedade Seppic, que é um agente cosmético despigmentador.
Como exemplo de agentes pigmentadores, podem-se notada-
mente citar:
- os agentes que colorem a pele: a di-hidróxi acetona, as mela-
ninas;
- os agentes que estimulam o processo de pigmentação natural: os psolarenos (8-metoxipsolareno, 5-metoxipsolareno, 4,5', 8-trimetil psola-
reno ou extratos vegetais de Psorelea corylifolia e de Ammi majus), os caro- tenoides (licopeno, cantaxantina), os agentes eu estimulam a via do AMP cíclico (1. os análogos do AMPc, tais como o 8-bromo-AMPc, ou o dibutiril- AMPc, 2. a forskolina, 3. o isobutil-metil- xantina ou a teofilina), os ativadores das proteínas quinase C (diacilgliceróis, em particular oleil-acetil-glicerol), 15 dióis alifáticos ou cíclicos (1,2-propandiol, 5-norbomano-2,2-dimetanol, nor- bomano-2,2- dimetano), os dióis bicíclicos monoterpeno, os derivados de tirosina (L-tirosina, L-DOPA), o dimetil sulfóxido, os agentes lisomotrópicos, os dinucleotídeos timidina, os fragmentos de DNA, os análogos do hormônio estimulando os melanócitos, o 3-isobutil -1-metilxantina, os doadores de áci- 20 do nítrico (Brown1 Journal of photochemistry andphotobiology B: biology 63 (2001) (148-161);
- os extratos vegetais, em particular as algas, demonstrando uma atividade promelanogênese: Laminaria digitata (Thalitan de Codif).
Os extratos naturais de planta que podem ser utilizados em as- sociação são vantajosamente extratos de abacate, de tremoço, de soja ou de girassol, de milho e de colza até mesmo de maca. Podem-se notadamen- te citar os açúcares de abacate (Cf. o pedido internacional W02005/115421) ou os peptídeos de abacate (Cf. o pedido internacional W02005/105123).
Os compostos que contêm insaponificáveis de óleos vegetais que podem ser utilizados em associação são vantajosamente escolhidos no grupo constituído pelos lipídeos furânicos de abacate, os insaponificáveis de abacate e de soja, os concentrados de óleo de tremoço, os concentrados de óleo de girassol, de milho e de colza e suas misturas.
Os lipídeos furánicos de abacate que podem ser utilizados em associação são vantajosamente 2-alquil furanos naturais, notadamente o ativo Avocadofurano® comercializado pelos Laboratoires Expanscience, po- 5 dendo ser obtidos pelo processo descrito no pedido internacional WO 01/21605.
Os insaponificáveis de abacate e de soja, que podem ser utiliza- dos em associação, são vantajosamente uma mistura de insaponificáveis de abacate furânico e de insaponificáveis de soja, em uma relação respectiva 10 de aproximadamente 1/3-2/3. Os insaponificáveis de abacate e de soja ainda mais vantajosamente o produto Piascledina®, comercializado pelos Labora- toires Expanscience.
Os concentrados de óleo de tremoço que podem ser utilizados em associação são vantajosamente concentrados obtidos por destilação mo- Iecular de óleo de tremoço, vantajosamente de óleo de tremoço branco do- ce, tais como aqueles descritos no pedido internacional WO 98/47479. Eles contêm vantajosamente cerca de 60 % em peso de insaponificáveis.
Os concentrados de óleo de girassol que podem ser utilizados em associação são vantajosamente concentrados de girassol linoleicos, tais como o ativo comercializado pelos Laboratoires Expanscience, Soline ® (cf. o pedido internacional WO 01/21150).
Os insaponificáveis "esterólicos" são insaponificáveis cujo teor em esteróis, em metil esteróis, e em alcoóis triterpênicos está compreendido entre 20 e 95 % em peso, de preferência, 45-65 % em peso, em relação ao peso total do insaponificável.
As plantas hipoglicemiantes que podem ser utilizadas em asso- ciação são vantajosamente escolhidas no grupo constituído pelo fenugrec (Trigonella graenum), o ácido corosólico (composto ativo das folhas da árvo- re Lagestyroemia speciosa), o Gymnema Syllvestre, o suco de fruta de mo- 30 mórdico (Momormodica charantia), o eucalipto (Eucalyptus globulus), o Pa- nax ginseng, as folhas de mirtila (Vaeeinum myrtillus).
Os oliqoelementos, que podem ser utilizados em associação, são vantajosamente escolhidos no grupo constituído pelo magnésio, pelo cromo, pelo selênio, e suas misturas.
A composição, de acordo com a invenção, pode ser formulada sob a forma de diferentes preparos adaptados a uma administração tópica, a uma administração oral, retal, vaginal, nasal, auricular ou brônquica, a uma administração parenteral.
De acordo com uma primeira variante, os diferentes preparados são adaptados à administração tópica, e incluem os cremes, as emulsões, os leites, as pomadas, as loções, os óleos, as soluções aquosas ou hidroal- coólicos ou glicólicos, os pós, os adesivos, os sprays ou quaisquer outros produtos para aplicação externa.
De acordo com uma segunda variante, os diferentes preparados são adaptados a uma administração oral, o extrato de quinoa podendo entrar seja em uma composição alimentícia, seja em um complemento alimentício. 15 O complemento alimentício pode se apresentar sob a forma do extrato de quinoa como tal (por exemplo, o óleo refinado eventualmente enriquecido em sua fração insaponificável) ou sob a forma de geleias ou de cápsulas moles de gelatina ou vegetais no âmbito da presente invenção. Esse com- plemento alimentício pode, então, conter de 10 a 100 % em peso do extrato 20 de quinoa.
De acordo com essa segunda variante da presente invenção, podem-se incorporar, sem nenhuma restrição, os extratos de quinoa da pre- sente invenção na alimentação, nas bebidas e nos nutracêuticos, aí incluí- dos dentre aqueles citados abaixo:
1) os produtos leiteiros: tais como os queijos, manteiga, leite e
outras lácteas, misturas e pastas para torradas à base de produtos lácteos, cremes gelados e iogurtes;
2) os produtos à base de gordura, tais como as margarinas, pas- tas para torradas, maioneses, matérias graxas para cozimento, óleos para
fritura e vinagretes;
3) os produtos à base de cereais compostos de grãos, tais como o pão e as pastas, quer esses alimentos sejam cozidos, assados no forno ou transformados;
4) os confeitos, tais como o chocolate, os bombons, os chewing gums, as sobremesas, as coberturas, os sorvetes, os gelados, e outras co- berturas;
5 5) as bebidas alcoólicas ou não, aí incluídas as sodas e outras
bebidas não alcoólicas, sucos de frutas, complementos dietéticos, substitu- tos de refeições sob a forma de bebidas, como aqueles vendidos sob a mar- ca Boost® and Ensure® e;
6) os produtos diversos, como os ovos, os alimentos transforma- dos, como as sopas, os molhos prontos para pastas, pratos preparados e outros produtos do mesmo gênero.
A composição da presente invenção pode ser incorporada dire- tamente e sem qualquer modificação no alimento, nos nutracêuticos, nos produtos dietéticos notadamente hiperproteínas ou bebidas, e isto graças a técnicas como a mistura, a infusão, a injeção, a mistura, a absorção, o a- massamento e a pulverização.
Os modos de administração, as posologias e as formas galêni- cas ótimas dos compostos e composições, de acordo com a invenção, po- dem ser determinados, segundo critérios geralmente considerados no esta- 20 belecimento de um tratamento farmacêutico, em particular dermatológico, ou veterinário adaptado a um paciente ou a um animal como, por exemplo, a idade ou o peso corporal do paciente ou do animal, a gravidade de seu esta- do geral, a tolerância ao tratamento, os efeitos secundários constatados, de tipo pele. Em função do tempo de administração desejada, a composição 25 e/ou os compostos ativos, de acordo com a invenção, podem, além disso, compreender pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável, nota- damente dermatologicamente aceitável. Segundo a primeira variante, utiliza- se um excipiente adaptado para uma administração por via tóxica externa. A composição, de acordo com a presente invenção, pode, além disso, com- 30 preender pelo menos um adjuvante farmaceuticamente conhecido do técni- co, escolhido dentre os espessantes, os conservantes, os perfumes, os co- rantes, filtros químicos ou minerais, os agentes hidratantes, as águas ter- mais, etc.
A composição que compreende um óleo refinado de quinoa, que tem as especificações indicadas, é particularmente destinada a uma utiliza- ção cosmética, dermatológica ou alimentícia. No âmbito de uma utilização 5 cosmética ou dermatológica, a composição será vantajosamente formulada sob a forma de um preparado adaptado a uma administração tópica. No âm- bito de uma utilização alimentícia, com alcance nutritivo ou cosmético, a composição será vantajosamente formulada sob a forma de um preparado adaptado a uma administração oral. Ela poderá não compreender excipiente 10 e ser constituída, na integralidade, do óleo de quinoa refinado.
A composição que compreende um óleo refinado de quinoa en- riquecido em sua fração insaponificável é particularmente destinada a uma utilização cosmética, dermatológica ou alimentícia. No âmbito de uma utili- zação cosmética ou dermatológica, a composição será vantajosamente for- 15 mulada sob a forma de um preparo adaptado a uma administração tópica. No âmbito de uma utilização alimentícia, com alcance nutritivo ou cosmético ("cosmet-food), a composição será vantajosamente formulada sob a forma de um preparado adaptada a uma administração oral. Ela poderá não com- preender excipiente e ser constituída, na integralidade, do óleo de quinoa 20 refinado concentrado em sua fração insaponificável.
A composição que compreende um extrato peptídico é particu- larmente destinada a uma utilização cosmética ou dermatológica. A compo- sição será vantajosamente formulada sob a forma de um preparado adapta- do a uma administração tópica.
A invenção tem também por objeto a utilização de um extrato de
quinoa, escolhido dentre um extrato peptídico e osídico de quinoa ou um extrato lipídico de quinoa, esse extrato lipídico de quinoa sendo ele próprio escolhido no grupo constituído por um óleo concentrado em sua fração insa- ponificável, um insaponificável ou um óleo refinado que tem especificações 30 dadas na tabela 2, para a fabricação de uma composição dermatológica ou de um alimento funcional.
Um alimento funcional é um alimento convencional, ou que tem essa aparência, que faz parte da alimentação normal, e que tem por caracte- rística oferecer efeitos fisiológicos benéficos que ultrapassam suas funções nutricionais habituais ou reduzir o risco de doenças crônicas.
A invenção se refere a um método de tratamento cosmético, de 5 cuidado higiênico, de embelezamento e/ou um método para perfumar muco- sas e/ou peles normais, secas, oleosas, mistas desidratadas, envelhecidas, sensíveis irritadas, desconfortáveis, intolerantes, apresentando um desequi- líbrio ligado ao envelhecimento intrínseco, extrínseco ou hormonal ou rela- cionado às agressões exógenas (poluentes. UV, estresse...), com tendência 10 alérgica, apresentando distúrbios da pigmentação, que apresenta um aspec- to desprotegido, ligado à sobrecarga da massa gordurosa, caracterizado pe- lo fato de consistir em administrar uma composição ou um alimento funcio- nal, de acordo com a invenção.
A invenção se refere, por outro lado, a um método de tratamento dos fâneros (cabelos, pelos, unhas), caracterizado pelo fato de consistir em administrar uma composição ou um alimento funcional, de acordo com a in- venção.
Em particular, a composição ou o alimento funcional é destinado à prevenção e ao tratamento das reações ou patologias alérgicas, inflamató- rias, irritativas ou distúrbios da barreira ou da homoestasia
- da pele, tais como a acne, a dermatite atópica, a dermite sebor- réica, a rosácea, a psoríase, os distúrbios vasculares, a dermite de base, a impigem, as rachaduras, as picadas, as rachaduras, em particular dos seios, as queimaduras solares, as inflamações devido aos raios de todas as espé- 25 cies, as irritações ou alergias (por agentes químicos, físicos (esforço de ten- são: mulheres grávidas), bacteriológicas, fúngicas ou virais, parasitárias (pio- lhos, sarna, traças, ácaros, dermatófitos), radiológicas ou de radiação (UV, IR) ou por déficit da imunidade inata (peptídeos antimicrobianos) ou adquiri- da (celular, humorais, citoquinas), as rachaduras, e/ou 30 - mucosas (gengivites (sensíveis do recém-nascido, de higiene,
devido ao tabagismo), parodontopatia, as irritações das esferas genitais ma- chos ou fêmeas externas ou internas) e/ou - fâneros (alopecia, películas hirsutinas, dermites seborréicas) imaturos, normais ou maduros.
A composição ou alimento funcional pode também ser destina- da(o) à regeneração tissular e ao favorecimento da cicatrização ou pode 5 também ser destinada(o) a proteger e reforçar a barreira cutânea, a regular as alterações da pigmentação e a agir sobre os mecanismos de lipólise e de lipogênese.
O óleo refinado de quinoa, eventualmente concentrado em sua fração insaponificável, apresenta, além disso, as seguintes vantagens: ele 10 permite diminuir o risco de aterogênese, apresenta propriedades hipocoles- terolemiantes, ele age na prevenção de certos cânceres e das doenças car- diovasculares, no estímulo da resposta imunitária nas pessoas idosas, na redução do risco de catarata e no retardo da progressão das doenças neu- rovegetativas.
Uma outra vantagem do óleo refinado de quinoa, eventualmente
concentrado em sua fração insaponificável, é que ele pode ser utilizado em cosmética ("food-cosmético"), mais particularmente visando melhorar o as- pecto cutâneo, para hidratar a pele, manter no estado a barreira cutânea e o cimento intercorneocitário por um fornecimento em ácidos graxos essenciais 20 e em esteróis, visando a prevenir o envelhecimento cutâneo por aprisiona- mento dos radicais livres, e como agente anti-inflamatório ou protetor solar.
De acordo com uma variante preferida da invenção, o óleo refi- nado de quinoa, concentrado em sua fração insaponificável, é utilizado no tratamento das alterações ligadas ao tecido dérmico. O tecido conjuntivo 25 dérmico exerce um papel maior como suporte e sustentação a nível da pele, absorvedor de choque, a derme é notadamente responsável pela firmeza e pela flexibilidade. A degenerescência desse tecido, associada a uma altera- ção da rede colagênica (colágenos, em particular de tipo I, III, Il e V) ou elás- tica (elastina - inibição da síntese, síntese imperfeita, degradação das fibras 30 de colágeno, diminuição do número dos fibroblastos e de seu metabolis- mo...) podem, portanto, ter conseqüências importantes sobre:
- o envelhecimento cutâneo (cronológico, extrínseco, ou fotoen- velhecimento e menopáusico), notadamente caracterizado por uma diminui- ção do número e da atividade dos fibroblastos, assim como uma degradação excessiva da matriz extracelular;
- as rachaduras, atingida a célula fibroblástica caracterizada por uma inflamação, uma inibição da expressão dos genes codificando para a fibronectina, os colágenos de tipo I e Ill e da elastina, uma transformação dos fibroblastos em miofibroblastos sob o efeito das distensões mecânicas. Essa degenerescência do tecido colagênico leva à formação de uma cicatriz dérmica atrófica. Os principais fatores desencadeadores são: a inflamação e o estresse mecânico e o ambiente hormonal (quando da gravidez). As ra- chaduras atingem aproximadamente 50 % da população jovem essencial- mente feminina. Elas são absorvidas geralmente durante a gravidez (60 a 70 % das mulheres grávidas), no decorrer da puberdade (25 % das filhas para % de rapaz) ou durante certas doenças (metabólicas, endocrinianas e infecciosas). São lesões lineares, ligeiramente deprimidas, estreitas, orienta- das no sentido das linhas de tensões cutâneas e recobertas por uma epi- derme dobrada. Sua cor varia segundo o estado evolutivo: elas têm uma cor vermelha, via violina no começo, depois tomam um aspecto esbranquiçado nacarado em uma segunda etapa:
- as feridas profundas atingindo a derme, elas provocam uma alteração do tecido dérmico com uma diminuição do número dos fibroblastos e uma degradação da matriz. O mecanismo de cicatrização é colocado para reparar o tecido alterado: os fibroblastos proliferam e a matriz extracelular é remodelada: síntese dos diferentes componentes.
A invenção tem, portanto, por outro objeto a utilização desse ó- Ieo enriquecido em insaponificáveis para a prevenção e/ou o tratamento do envelhecimento cutâneo, das rachaduras e das feridas profundas. Esse óleo enriquecido em insaponificáveis pode também servir para favorecer a cicatri- zação.
De acorda com uma outra variante vantajosa da invenção, esse óleo enriquecido em insaponificáveis pode ser utilizado na prevenção e/ou no tratamento das atrofias subcutâneas da derme. As atrofias subcutâneas são um problema frequentemente encontrado em dermatologia. Elas podem ser secundárias em diferentes etiologias. De acordo com sua localização, essas lesões representam um incômodo estético menor ou, ao contrário, incomodam muito a pessoa.
5 As atrofias subcutâneas podem ter diferentes etiologias. Na pri-
meira fila figuram as atrofias cicatriciais seja pós-traumáticas (traumatismos até a derme), seja pós-inflamatórias (por exemplo, pós-acne). As cicatrizes atróficas pós-traumáticas comportam uma atrofia epitelial com uma mem- brana basal linear que testemunha o remanejamento da junção dermoepi- dérmica com uma perda do desenho papilar. Histologicamente, a espessura da derme é diminuída, as fibras de colágeno são mantidas e os fibrócitos frequentemente mais numerosos do que em uma pele normal. A atrofia dér- mica comporta também uma hipotrofia dos anexos pilo-sebáceos e, às ve- zes, sudorais. As cicatrizes oriundas de um processo inflamatório são consti- tuídas frequentemente na derme profunda e na hipoderme. Há um espes- sante da derme que é acompanhado de uma esclerose. Os constituintes da matriz extracelular são progressivamente substituídos por fibras de colágeno espessas e densas. Esse processo de esclerose é acompanhado de uma diminuição da vascularização dérmica e dos anexos. Fala-se nesse estágio de esclero-atrofia, um estado que se pode observar em uma esclerodermia localizada (morféia). Esse processo pode também atingir a hipoderme em um contexto inflamatório imunitário (lupus profundo, síndrome de Perry- Romberg), medicamentoso (triterapia, injeção de corticoides), enzimáticos (citoesteatonecroses pancreáticas) ou traumático (atrofia da hipoderme nas mulheres que usam meias até o meio da coxas).
Outras atrofias são repertoriadas: consecutiva a um tratamento local com dermocorticoides, consecutiva à menopausa e em associação ou não com o THS (tratamento hormonal substitutivo), devido a certas doenças genéticas ou não, hipoplasia, doença do tecido conjuntivo da pele do colá- 30 geno, síndrome de goltz, atrofodermia de Pasini e Pierini, queratose pilar atrofiante. Enfim, quando dos enxertos de pele, das queimaduras, das per- das de substâncias cutâneas de quaisquer origens, dos escarros. Portanto, foi proposto preencher a atrofia da derme por um tra- tamento à base de concentrado (= óleo enriquecido em insaponificáveis) de quinoa que relança a atividade protéica.
De acordo com uma variante preferida da invenção, o extrato 5 peptídico e osídico de quinoa é utilizado na cicatrização epidérmica.
Uma perturbação da integridade da pele pode sobrevir em vários contextos. A pele pode sofrer danos, quando das cirurgias, de queimaduras, de radiações, de cortes, de arranhões, de atritos e de pressões. O grau de gravidade do ferimento varia segundo certos fatores como a extensão, a pro- 10 fundidade e a natureza. A fim de manter as funções essenciais da pele, é importante repará-la, quando um acontecimento sobrevêm. A cura de uma ferida representa o conjunto dos processos que levam ao fechamento da ferida e à recuperação funcional do tecido cutâneo. A epiderme cura por re- generação ou re-epitelialização, isto é, que ela recupera sua estrutura e suas 15 funções originais. Incapaz de responder a uma lesão pela regeneração, a derme cura por reparo, isto é, o tecido de origem é substituído por um tecido conjuntivo não específico com, como resultado, a formação de uma cicatriz menos funcional (ex. resistência mecânica inferior). Esses processos impli- cam em populações celulares diferentes, compartimentos distintos (epider- 20 me e derme), diversos mediadores e interações múltiplas entre todos esses elementos, o todo variando em função do tempo.
A re-epitelialização consiste na regeneração pelos queratinócitos de um epitélio organizado, pavimentoso, estratificado, queratinizado, que recobre a ferida e que reforma uma barreira protetora contra o meio ambien- 25 te externo a fim de reduzir a mortalidade na seqüência de um ferimento. O mecanismo de re-epitelialização é feita segundo 3 etapas que se desenro- lam em paralelo, mas de maneira defasada no tempo: (1) migração dos que- ratinócitos (a migração celular pode ser influenciada por vários mecanismos, tal como a perda de inibição de contato; a presença de mediadores inflama- 30 tórios como os fatores de crescimento, ou das proteínas secretadas pelas células, mas também pelos diferentes contatos com substratos da matriz como a fibronectina e a Iaminina 5); (2) proliferação celular (uma onda mitó- tica ocorre para preencher o espaço deixado pelas células migrantes e para recobrir a lesão. A proliferação dos queratinócitos, que ocorre após 48 a 72 horas, não parece afetar a migração. Ela ocorre sob a influência de numero- sos fatores que podem ser secretados pelas células vizinhas como os fibro- 5 blastos ou pelos próprios queratinócitos: KGF (Keratinocyte growth Factor), IL-1, IL-6, IL-8, CoIonyStimuIating Factor(CSF)1 PDGF, TNF-a, IGF-1 (Insu- Iinase Growth Factor)), (3) maturação da epiderme (a maturação e diferenci- ação da epiderme são feitas simultaneamente com o fechamento da ferida e correspondem a uma retomada da função e da morfologia normal dos quera- 10 tinócitos). Os queratinócitos são ativados, adaptam sua morfologia à migra- ção, migram e proliferam sob a influência de diferentes fatores de crescimen- to para re-epitelializar a ferida. Com o avanço do recobrimento da pele, a neoepiderme começa sua maturação, a fim de reformar a camada córnea protetora.
Certos fatores de crescimento, que controlam a migração dos
queratinócitos, são também capazes de influenciar a migração. É o caso do EGF e do TGF-β que a estimulam, aumentando a expressão da integrina a2 β1 na superfície dos queratinócitos, mas também do TGF β que é um dos fatores maiores implicados na migração e que age ativando a síntese matri- ciai.
A interação célula-matriz é importante durante a cicatrização da ferida. Com efeito, a matriz extracelular contém substâncias adesivas e das fibras que orientam as células migrantes. Da mesma forma, moléculas pre- sentes no sangue podem contribuir para a migração celular. Por exemplo, a 25 fibrina e a fibronectina se ligam à matriz provisória e formam uma estrutura sobre a qual os queratinócitos podem migrar. Os queratinócitos em migração elaboram também elementos dessa matriz. Os queratinócitos sintetizam a Iaminina 5, o colágeno Veo antígeno da penfigoide bulhosa. O efeito dos diversos substratos sobre a migração dos queratinócitos é mediado por inte- 30 grinas e a secreção de proteases da matriz extracelular (MMP-1, MMP-2 e MMP-9), que Ihe permitem sucessivamente se encaixar e se liberar desses substratos. A Iaminina 5 é uma proteína específica das lâminas basais dos epitélios que têm funções de secreção ou de proteção, como as mucosas ou a pele. A Iaminina 5 é considerada como o componente-chave do complexo de ancoragem da epiderme e como sendo a proteína que contribui mais para 5 a estabilidade da membrana basal. A Iaminina 5 resulta da ligação heterotri- métrica de subunidades α3, β3 e γ2 e é sintetizada exclusivamente pelas células epiteliais sob a forma de um precursor. O papel maior da Iaminina 5 é sublinhado pela existência de doenças hereditárias ou adquiridas, resultan- tes de uma anomalia de síntese e/ou de expressão de uma de suas subuni- 10 dades constitutivas. Essas doenças, denominadas epidermólises bulhosas juncionais, levam notadamente a uma fragilidade da junção dermo- epidérmica da pele caracterizada pela formação espontânea de bolhas epi- dérmicas. Assim, a Iaminina 5 tem um papel biológico determinante, já que ela permite a aderência das células epiteliais adjacentes. Além de seu papel 15 na aderência estável, a Iaminina 5 exerce um papel importante no decorrer da migração celular, já que ela é muito expressa pelos queratinócitos mi- grantes nas fases precoces da cicatrização epidérmica. Na pele normal, não há indício da Iaminina 5 no citoplasma dos queratinócitos basais, enquanto que em uma ferida em cura, a Iaminina 5 é detectada nas células basais. A 20 forma longa da Iaminina 5 interage com as integrinas α3β1 e α2β1 que são dois receptores encontrados nas placas de adesão focal úteis para o movi- mento celular. A integrina α2β1 parece ser implicada de maneira preponde- rante na migração dos queratinócitos. No decorrer da migração, a regulagem da expressão da Iaminina 5 é mediada pelo TGF-β e a INF-γ.
A cicatrização cutânea é associada a acontecimentos de migra-
ção e de remodelagem da matriz que recorreram à ação das metaloprotea- ses matriciais (MMPs). Os queratinócitos se deslocam, portanto, através de uma matriz temporária que degradam conforme a necessidade para facilitar sua migração e que vão progressivamente modificar a composição. As 30 MMPs constituem uma família de enzimas, zinco-dependentes, de estrutura muito conservada, e que possuem a capacidade de degradar os componen- tes da matriz extracelular. Elas podem ser sintetizadas por diferentes tipos celulares a nível da pele (fibroblastos, queratinócitos, macrófagos, células endoteliais, eosinófilos, células de Langerhans,...). O papel preponderante das MMPs na remodelagem proteolítica da matriz extracelular é então cla- ramente estabelecido na cicatrização cutânea. O efeito dos diversos substra- 5 tos sobre a migração dos queratinócitos é mediado pela secreção de protea- ses da matriz extracelular: MMP-1, MMP-2 e MMP-9, que Ihe permitem su- cessivamente se encaixar e se liberar desses substratos. A MMP-9 é ex- pressa de maneira preponderante no decorrer da cicatrização cutânea e in- tervém na fase de migração e de remodelagem da matriz. Essa protease 10 seria também um elemento maior de uma cicatrização sem cicatriz.
Ora, foi mostrado que o extrato para favorecer a cicatrização, de acordo com a invenção, age diretamente sobre as 2 primeiras etapas impli- cadas na re-epitelialização (migração e proliferação celular).
Estimulação da migração dos queratinócitos:
. ação sobre a expressão dos genes codificando para as 3 ca-
deias compondo a Iaminina 5 (α3β3γ2);
. ação sobre a síntese da MMP-9 via um aumento da expressão de seu gene;
. ação sobre a migração dos queratinócitos - estimulação da proliferação dos queratinócitos:
. ação direta sobre a proliferação celular
. ação indireta dos fibroblastos: secreção de mais de KGF: fator de crescimento que ativa a divisão celular dos queratinócitos.
Assim a invenção tem por objeto a utilização de um extrato pep- 25 tídico e osídico de quinoa, tal como descrito anteriormente, para favorecer a cicatrização. Em particular, esse extrato peptídico e osídico pode ser utiliza- do para a prevenção e/ou o tratamento das cicatrizes superficiais, tais como: as cicatrizes pós-acne, as cicatrizes pós-peeling, as cicatrizes pós-laser, as cicatrizes pós-queimaduras e os arranhões. Esse extrato peptídico e osídico 30 pode também ser utilizado como cuidado (cosmético) para os lábios frágeis e as queilites. Esse extrato peptídico e osídico pode também ser utilizado na prevenção do envelhecimento cutâneo, em razão de um defeito de cicatriza- ção com a idade. Esse extrato peptídico e osídico pode também ser utilizado no tratamento e/ou na prevenção das rachaduras.
Esse extrato peptídico e osídico pode também ser utilizado para reparar a pele após picadas (mosquitos). Ele permite também uma repara- ção das abrasões da pele por mecanismos físicos (coceira, prurido, atrito mecânico, raio laser), químicos e bioquímicos (peeling, eritema das náde- gas, por exemplo). Em particular, esse extrato pode ser utilizado no trata- mento cosmético das espinhas e/ou cascas, permitindo uma reparação da pele após espinhas devido a patologias tais como a acne ou as varicelas, e/ou cascas devido a patológicos (atopia, cascas de leite).
Esse extrato peptídico e osídico encontra também uma aplica- ção no tratamento cosmético das peles frágeis e sensíveis.
Os exemplos que se seguem ilustram a invenção, mas não são
limitativos.
EXEMPLO 1: óleo refinado de quinoa (desodorizado): processo de preparo e especificações.
O óleo refinado de quinoa é obtido por extração ao solvente (n- hexano) dos grãos de quinoa (1000 kg, rendimento de 5,5 %) e obtenção do óleo bruto de quinoa (55 kg).
Esse óleo bruto é em seguida refinado (rendimento de 70 %) para levar ao óleo de quinoa refinado (38,5 kg). Obtém-se um óleo de cor amarelo turvo com depósito; não são encontrados traços de hexano.
O óleo refinado de quinoa desodorizado apresenta as seguintes especificações:
índice de peróxido: 7,3 meq/kg; índice de ácido: 0,30 mg KOH/g
Composição em ácidos graxos: C14 0,1 %; C16 8,2 %; C16'0,2 %; C18 0,8%, C18' 30,4 %l C18"47,2 %; C18'" 8,3 %; C20 0,6 %; C20’1,7 %, C22 0,7%; C22'1,6 %; C24 0,2 %.
Teor em tocoferóis totais: 4,8 mg/100 g
% relativa a-tocoferol: 22,3 %; % relativa β-tocoferol: 0,0 %; % relativa γ-tocoferol: 61,5 %; % relativo δ-tocoferol: 16,2 %
Teor em esteróis totais: 1,63 g/100 g % relativa campesterol: 1,53 %; % relativa estigmasterol: 3,19 %; % relativa β-sitosterol: 20,00 %; % relativa δ-5-avenasterol: 1,7 %; % relativa δ-7-estigmasterol: 46,35 %; % relativa δ-7-avanasterol: 8,55 %.
Teorem esqualeno: 2,5 g/100 g EXEMPLO 2: óleo refinado de quinoa concentrado em sua fração insaponifi- cável (= concentrado de óleo de quinoa): processo de preparo e especifica- ções
O óleo de quinoa refinado (desodorizado, 38,5 kg) é submetido a uma etapa de destilação molecular para levar a um óleo refinado de quinoa concentrada em sua fração insaponificável, ainda denominada concentrado de óleo de quinoa (3,85 kg, rendimento de 10 %).
O óleo refinado de quinoa desodorizado concentrado em sua fração insaponificável apresenta as seguintes especificações:
óleo de cor amarela turvo com depósito; não se encontram tra- ços de hexano
índice de peróxido: 1,43 meq/kg; índice de ácido: 3,04 mg
KOH/g
composição em ácidos graxos: C14 0,3%; C16 12,4 %; C16’0,3 %; C18 0,7%, C18' 29,4 %l C18"47,1 %; C18"' 7,7 %; C20 0,3 %; C20O,9 %, C22 0,3%; C22O,6 %; C24 0,1 %.
Teor em tocoferóis totais: 58,7 mg/100 g
% relativa a-tocoferol: 72,3 %; % relativa β-tocoferol: 0,7 %; % relativa γ-tocoferol: 23,1 %; % relativo δ-tocoferol: 4,0 %
Teor em esteróis totais: 7,73 g/100 g % relativa campesterol: 5,57 %; % relativa estigmasterol: 3,4 %;
% relativa β-sitosterol: 26,84 %; % relativa δ-5-avenasterol: 2,3 %; % relativa δ-7-estigmasterol: 39,48 %; % relativa δ-7-avanasterol: 5,97 %.
Teor em esqualeno: 16,8 g/100 g
EXEMPLO 3: extrato peptídico e osídico de quinoa: processo de preparo e especificações
Um extrato peptídico e osídico de quinoa foi preparado conforme o seguinte protocolo: 10
15
20
Matéria-prima de partida: bolo de quinoa, a 10-12 % de proteí- nas em peso em relação ao peso da matéria seca (MS = matéria seca). Es- se bolo de quinoa é submetido a uma extração alcalina (ajuste do pH em pH 10). O que flutua é em seguida submetido a uma ultrafiltragem com o auxílio de membranas minerais 8 kDa (enriquecimento em proteínas). Em seguida, o retentado é submetido a uma etapa de concentração, antes da etapa de hidrólise enzimática. A hidrólise enzimática. A hidrólise enzimática das prote- ínas é realizada com a Prolyve 1000, a uma temperatura de 55 0C, com um pH de 8. No fim da etapa de hidrólise enzimática, a enzima é desativada por um tratamento térmico. O hidrolisado é, em seguida, submetido a uma etapa de ultrafiltragem com o auxílio de membranas minerais 8 kDa (recuperação dos peptídeo no filtrado). O ultrafiltrado é concentrado, depois eventualmen- te submetido a uma filtragem esterilizante sobre 0,2 pm e/ou liofilisado.
O extrato peptídico e osídico de quinoa apresenta as seguintes especificações:
Pó de cor amarela alaranjada sem conservantes Composição em relação ao pó (5, p/p)
Nitrogênio α-aminado (OPA, equivalente leucina): 13 % + 20 % Proteínas (Biuret, equivalente BSA): 27 % + 20%
Massa molar (Da) > 3500 > 3500-1200 1200-300 300- 130 < 130 Repartição dos peptídeos (%) 2 15,5 44,5 15 23 25
Tabela 5: perfil de repartição das massas molares dos peptídeos e ácidos aminados
EXEMPLO 4: óleo refinado de quinos concentrado em sua fração insaponifi- cável (= concentrado de óleo de quinoa): atividades biológicas
Evoluiu-se o efeito do concentrado de óleo de Quinoa, obtido no exemplo 2, sobre diferentes parâmetros da matriz dérmica: (a) efeito sobre a proliferação dos fibroblastos, (b) efeito sobre a matriz extracelular da derme: expressão gênica do Colágeno I, Colágeno Ill e da Elastina, (c) efeito sobre a distensão mecânica da derme: efeito sobre as forcas isométricas desen- volvidas por fibroblastos oriundos de rachaduras vermelhas.
Material e métodos:
a. Estudo da proliferação dos fibroblastos dérmicos
O teste ao MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difenil tetrazólio bromida] é um teste colorimétrico que mede a confiabilidade celular. O MTT é um sal de tetrazólio hidrossolúvel de cor amarela; as células metabolica- mente ativas são capazes de reduzi-lo em cristais de formazan azuis,
No DO1 os fibroblastos são inseminados em meio RPMI a 1 % SVF em placa 96 poços. No D1, as células são tratadas pelo concentrado de óleo de Quinoa em meio RPMI a 1 % SVF a 0,005 % e 0,01 % de matéria seca (MS) ou por meio RPMI a 10 % SVF (controle positivo) durante 24 e 48 horas).
Em fim de tratamento, a confiabilidade é quantificada por um teste ao MTT: após 3 horas de contato com o MTT, os cristais de formazan formados são solubilizados por DMSO e a densidade óptica, proporcional à quantidade de células metabolicamente ativas, portanto vivas, é lida a 570 nm contra o branco (poço sem células)
b. Estudo do efeito dos peptídeos de Quinoa sobre a expressão dos genes codificando para o colágeno I e o colágeno Ill e a elastina por RT- PCR
b.1. Princípio da PCR Quantitativa em tempo real:
A PCR quantitativa em tempo real ou QRT-PCR (para Quantita- tive Real Time Polymerase Chain Reaction) é um método de biologia mole- cular, que permite medir de forma específica e quantitativa a expressão de 25 genes de interesse por amplificação. A quantificação é baseada na seqüên- cia da amplificação dos genes em tempo real, utilizando, como sistema re- portador, a tecnologia SYBR Green: molécula co propriedades fluorescentes que se intercala no meio do DNA de fita dupla. A PCR se desenvolve em uma sucessão de ciclos de temperatura segundo 3 etapas:
- desnaturação: separação dos 2 filamentos de DNA
- hibridação: reconhecimento de uma seqüência de DNA corres- pondente a um gene alvo, graças às atrações específicas; - extensão: da seqüência de interesse por ação de um polimera-
se.
No fim da reação, a quantificação é realizada, analisando-se o "ciclo limite" (Ct = ponto no qual o sinal de emissão de fluorescência será 5 estatisticamente e significativamente mais elevado do que o ruído de fundo). As quantidades de DNA são comparadas na parte exponencial, momento durante o qual o aumento da quantidade de DNA é proporcional à quantida- de inicial de matriz.
b.2. Protocolo:
No DO, os fibroblastos foram inseminados em placas 6 poços em
meio RPMI adicionado de 10 % SVF. No D1, os fibroblastos foram tratados pelo TGFpi a 5 ng/ml ou o concentrado de óleo de Quinoa a 0,005 % e 0,01 % MS em meio RPMO a 1% SVF durante 48 horas. No fim do tratamento das células, os RNA totais foram extraídos (kit de extração RNeasy MiniKit; 15 Qiagen), depois dosados de forma quantitativa em minichips com o auxílio do sistema Experion (kit Experion RNA StdSens; Biorad). Os RNA totais fo- ram em seguida retrotranscritos em cDNA (kit iScript cDNA Synthesis; Bio- rad). Enfim, os cDNA neossintetizados relativos aos genes de interesse (Co- lágeno I, Colágeno III, Elastina) ou aos genes de referência (HPRT, GAPDH, 20 YWHAZ, beta actin = normalizadores) foram amplificados seletivamente por PCR em tempo real (iQ5, Biorad), utilizando atrações específicas das se- quências-alvos.
A expressão dos genes de referência é analisada nas mesmas amostras que aquelas para os quais a expressão dos genes de interesse é avaliada, a fim de normalizar os resultados e se assegurar que são bem o resultado do efeito do tratamento pelo concentrado de óleo de Quinoa.
b.3. Análise de resultados:
Os resultados são normalizados em relação ao gene de referên- cia o mais estável (a partir do algoritmo geNorm): DCt = Ct gene de interes- se - Ct gene de referência o mais estável.
A variação do número de cópias do gene de interesse normali- zado pelo nível de expressão dos genes de referência nas amostras não tratadas e tratadas é obtida pela fórmula: QR = 2DDCt
c. Avaliação do efeito sobre as forças isométricas desenvolvidas por fibro- blastos oriundos de rachaduras vermelhas.
c.1. Apresentação do sistema GlaSbox®
5 A inibição mecânica da retração do gel de colágeno no qual os
fibroblastos são incluídos se traduz pela geração de uma força, denominada "força de retração" ou "força isométrica".
As látices se desenvolvem em uma caixa de cultura que é cons- tituída de 8 cubas retangulares. Em cada uma delas, mergulham duas lâmi- nas flexíveis em silício, cujas partes inferiores são constituídas de grades sobre as quais se encaixa a látice, quando de sua polimerização. A látice se desenvolve entre duas lâminas para chegar a uma forma retangular ligeira- mente estreitada no centro. Essa forma em mecânica clássica é designada como uma forma em diabolô. Essas lâminas são equipadas, a nível de sua parte superior, com um sistema de medida de esforço recoberto de fios de ouro, depositados em sua superfície. Sob a influência da força de retração desenvolvida pelos fibroblastos, as lâminas de silício se deformam. Isto se traduz por uma variação do valor de resistência elétrica da medida de esfor- ço, medida por intermédio de uma ponte de Wheatsone. Essa variação indi- ca a força desenvolvida no meio da látice, medida em tempo real indireta- mente por um cartão de aquisição PC e de um soft adaptado.
c.2. Preparo das dermes equivalentes sob tensão e medida das forças iso- métricas
Um meio de fabricação das látices é preparado, misturando-se: 25 6 volumes de meio de cultura com 3 volumes de colágeno 1 de cauda de rato (2 mg/ml) e um volume de suspensão celular (8,105 células/ml), a mistu- ra é derramada nas cubas retangulares da GlaSbox. Em alguns minutos a 37 0C, um gel se constitui. Os diferentes meios contendo ou não o princípio ativo são acrescentados. As forças isoméricas serão medidas durante 48 30 horas. No fim da manipulação, as látices de colágeno são destacadas e di- geridas em uma solução de colagenase. Após 2 horas de incubação a 37 0C, as células no meio de cada látice de colágeno são computadas. As forças são expressas em função do número de célula após 48 horas de manipula- ção.
c.3 Análise estatística: os valores são expressos pela média + erro tipo da distribuição das médias (sem). Uma análise de variância com 2 fatores foi feita.
Resultados
a. Proliferação dos fibroblastos: o tratamento dos fibroblastos pelo concentrado de óleo de Quinoa a 0,005 a 0,01 % MS, estimula de forma dose dependente e significativamente a proliferação (respectivamente: +17 e +23 % de aumento em relação ao controle sem tratamento, após um trata- mento durante 48 horas)
Tratamento 24 horas Tratamento 48 horas Média % au¬ Student t Média % au¬ Student t DO mento teste do MTT mento teste MTT Controle 0,754 100 0,675 100 Controle 0,900 119 P < 0,01 1,249 185 P < 0,01 positivo (RPMI- 19\0% SVF) Concentrado 0,769 112 P < 0,05 0,753 117 P < 0,01 de óleo de Quinoa (0,005 %) Concentrado 0,843 120 P < 0,01 0,793 125 P < 0,05 de óleo de Quinoa (0,01 %) Tabela 6: estudo da proliferação dos fibroblastos em presença de concen- trado de um óleo de Quinoa
b. Expressão do colágeno I: a análise quantitativa da cinética de expressão 15 do ARNm do colágeno I foi feita por PCR quantitativa (Q-PCR) após 48 ho- ras de incubação com o TGF-βΙ a 5 ng/ml. Os resultados obtidos indicam uma indução importante da expressão do gene colágeno I (Tabela 7). O concentrado de óleo de Quinoa estimula também de forma dose dependente a expressão do colágeno I (+58 e +67 %) Média dCt ddCt QR % de indução Controle -2,3 0,00 1,00 TGFP a 5 ng/ml -3,2 0,9 1,87 87 Concentrado de óleo de qui¬ 2,96 0,66 1,58 58 noa 0,005 % Concentrado de óleo de qui¬ -3,04 0,74 1,67 67 noa 0,01 % Tabela 7: estudo da expressão gênica do colágeno I
c. Expressão do colágeno IN: Por outro lado, o efeito do concentrado de óleo de Quinoa sobre a expressão do gene do colágeno Ill foi analisado. Os re- sultados apresentados na tabela 8 demonstram um aumento importante da expressão do gene colágeno Ill (+92 e + 62 %) __
Média dCt ddCt QR % de indução Controle 4,92 0,00 1,00 TGFp a 5 ng/ml 2,51 2,4 5,27 427 Concentrado de óleo 3,97 0,94 1,92 92 de quinoa 0,005 % Concentrado de óleo 4,22 0,69 1,61 62 de quinoa 0,01 % Tabela 8: estudo da expressão gênica do colágeno Ill
d. Expressão da elastina: colocou-se também em evidência um efeito do concentrado de óleo de Quinoa sobre a expressão do gene da elastina (ta- bela 9), com uma indução de + 96 e + 67 % em relação ao controle sem tra- tamento.
d Ct ddCt QR % de indução Controle 4,58 0,00 1,00 TGFp a 5 ng/ml 2,16 2,4 5,35 435 Concentrado de óleo de quinoa 3,61 0,97 1,96 96 0,005 % Concentrado de óleo de quinoa 3,84 0,74 1,67 67 0,01 % Tabela 9: Estudo da expressão gênica da elastina
c. Estudo do efeito do concentrado de óleo de Quinoa sobre as forças contrácteis desenvolvidas pelos fibroblastos de rachaduras vermelhas no meio de uma derme equivalente sob tensão no sistema GlaSbox® Conforme mostrado na figura 2, o acréscimo de 0,01 % de con- centrado de óleo de Quinoa no meio de cultura diminui significativamente as forças contrácteis desenvolvidas pelos fibroblastos de rachaduras vermelhas a partir de 1h30 de cultura e isto até a 36a hora. As curvas obtidas quando do estudo se compõem de 3 fases distintas:
- fase I: a força isométrica continua fraca, durante as duas pri- meiras horas de cultura. Essa fase corresponde à polimerização do gel de colágeno;
- fase II: a força isométrica aumenta quase linearmente até um máximo, situando-se em média durante as seis a oito primeiras horas de
cultura. Essa fase corresponde ao tempo necessário aos fibroblastos para se alongar e se ligar às fibras de colágenos;
- fase III: a força isométrica se mantém no decorrer do tempo de cultura. Essa fase corresponde ao remanejamento da matriz de colágeno
pelos fibroblastos e o aumento da expressão da integrina α2β1.
O concentrado de óleo de Quinoa tem um efeito relaxante que se mantém no tempo, pois ele diminui as forças isométricas desenvolvidas pelos fibroblastos oriundos de rachaduras vermelhas ao mesmo tempo du- rante a fase Ilea fase Ill da curva.
Figura 2: forças contrácteis desenvolvidas no meio de uma der-
me equivalente sob tensão no sistema GlaSbox ® durante 48 horas de cultu- ra (B) (A: detalhe das 6 primeiras horas) (média + sem) em presença ou na ausência do concentrado de óleo de Quinoa (QI102). (*p<0,05; **p < 0,01 e ***p<0,001 versus FS [fibroblastos sadios]; #p<0,05 e ##p<0,01 versus FVR [fibroblastos de rachaduras vermelhas])
Conclusão
Os estudos apresentados no caso permitiram colocar em evi- dência o papel do concentrado de óleo de Quinoa sobre a regulagem do te- cido dérmico. Com efeito, foi mostrado que o concentrado de óleo de Quinoa 30 aciona: (a) a estimulação da proliferação dos fibroblastos, (b) a indução da expressão do colágeno I, colágeno Ill e da elastina pelos fibroblastos, (c) a modificação das propriedades mecânicas dos fibroblastos de rachaduras vermelhas: efeito relaxante transitório e a longo prazo.
Estimulando a síntese dos diferentes componentes da matriz extracelular, o concentrado de óleo de Quinoa pode exercer um papel impor- tante na restauração e a regulagem da homeostasia dérmica em caso de alteração (peles idosas, agredidas, rachaduras, cicatrizes...).
Exemplo 5: extrato peptídico e osídico de quinoa (= peptídeo de quinoa): atividades biológicas
Avaliou-se a atividade dos peptídeos de Quinoa, obtidos no e- xemplo 3, sobre os dois primeiros mecanismos implicados na re-epitelização cutânea (avaliação com duas concentrações: 0,05 % MS e 0,1 % MS):
- a migração de queratinócitos: (I) avaliação do efeito sobre a expressão dos genes compondo a Iaminina 5, (II) avaliação do efeito sobre a expressão e a síntese da MMP-9 e (III) avaliação do efeito funcional sobre a migração dos queratinócitos
- a proliferação dos queratinócitos: (I) avaliação do efeito sobre a
proliferação dos queratinócitos, (II) avaliação do efeito sobre a síntese do KGF pelos fibroblastos Material e métodos
a. Estudo do efeito dos peptídeos de quinoa sobre a expressão dos genes codificando para a Iaminina 5 e a MMP-9 por RT-PCR
- princípio da PCR quantitativa em tempo real: cf. exemplo 4
- protocolo:
No D0, os queratinócitos foram inseminados em placas 24 poços em meio KGM-2. NO D1, as células foram tratadas pelo TGF β1 a 5 ng/ml 25 ou os peptídeos de quinoa a 0,05 e 0,1 % MS durante 48 horas. No fim do tratamento das células, os RNA totais foram extraídos (kit de extração RNe- asy MiniKit; Qiagen), depois dosados de forma quantitativa em minichips com o auxílio do sistema Experion (kit Experion RNA StdSens; Biorad). Os RNA totais foram em seguida retrotranscritos em cDNA (kit iScript cDNA Sin- 30 tesis; Biorad). Enfim, os cDNA neossintetizados relativos ao gene de interes- se (genes codificando para as 3 cadeias compondo a Iaminina 5: α3β3δ2 e MMP-9) ou aos genes de referência (HPRT, GAPDH, YWHAZ, beta actin = normalizadores) foram amplificados seletivamente por PCR em tempo real (iQ5, Biorad), utilizando atrações específicas das sequências-alvos.
A expressão dos genes de referência é analisada nas mesmas amostras que aquelas para os quais a expressão dos genes de interesse é 5 avaliada a fim de normalizar os resultados e se assegurar que são bem o resultado do efeito do tratamento pelos peptídeos de quinoa.
- Análise de resultados: os resultados são normalizados em rela- ção ao gene de referência o mais estável, conforme exemplo 4.
b. Estudo da migração dos queratinócitos Suportes de culturas plásticas são revestidos por colágeno I; um
suporte controle é revestido pela gelatina (a migração sobre gelatina é niti- damente menor do que sobre colágeno nativo). Os queratinócitos foram in- seminados nas caixas revestidas e nas células não aderentes foram elimi- nados após 6 horas de incubação a 37 0C e a 5 % de CO2. O meio de cultu- 15 ra foi em seguida substituído por meio contendo ou não os peptídeos de qui- noa a 0,1 %. Após uma noite de incubação, as divisões celulares foram blo- queadas por incubação durante 2 horas com uma solução de mitominina C. Uma cicatriz artificial, reprodutível foi realizada sobre os tapetes celulares e, após lavagens, o tratamento foi renovado. Após 48 horas, as células foram 20 fixadas e os núcleos marcados pelo corante fluorescente de Hoechst.
Imagens numeradas foram tiradas todos os dias. Uma análise da migração dos queratinócitos é feita entre a imagem feita no tempo DO (per- mitindo a seleção da cicatriz artificial) e a imagem "Hoechst" feita no D2, permitindo a contagem do número de células migrantes.
c. Estudo da proliferação dos queratinócitos pelo método no MTT
No DO, os queratinócitos foram inseminados em meio KGM2 em placa 96 poços. No D1, as células foram tratadas pelo ácido trans retinóico (ATRA) ao 1 μΜ ou os peptídeos de quinoa a 0,05 % e 0,1 % MS durante 24 e 48 horas. Em fim de tratamento, a confiabilidade celular foi quantificada 30 por um teste ao MTT: após 3 horas de contato com o MTT, os cristais de formazan formados foram solubilizados por DMSO e a densidade óptica, proporcional à quantidade de células metabolicamente ativas, portanto, vi- vas, foi lida a 570 nm contra o branco (depois sem células).
d. Dosagem da MMP-9 secretada pelos queratinócitos
Os queratinócitos foram inseminados em placa 24 poços; após 24 horas de incubação a 37°, 5 % de CO2, as células foram tratadas pelos 5 peptídeos de quinoa a 0,05 % e 0,1 % MS. O TGFp testado a 5 ng/ml foi uti- lizado como prova positiva. Após 48 e 72 horas de tratamento, a quantidade de MMP-9 secretado pelas células foi dosado no que flutuou de cultura com o auxílio de um kit ELISA (R&D Systems), segundo o protocolo preconizado pelo fornecedor. Em paralelo, a quantidade de células vivas por poço foi de- 10 terminada por um teste colorimétrico ao vermelho neutro: a DO, proporcional à quantidade de células vivas, foi lida em 570 nm.
A quantidade de MMP-9 foi expressa por células vivas: (ng/ml)/D0570 MTT.
e. Dosagem do KGF secretado pelos fibroblastos
Os fibroblastos foram inseminados em placa 24 poços em RPMI
a 1 % SVF; após 24 horas de incubação a 37 0C, 5 % de CO2, as células foram tratadas pelos peptídeos de quinoa a 0,05 % e 0,1 % MS. O IL1 α (Sigma) a 100 ng/ml foi utilizado como prova positiva. Após 24 e 48 horas de tratamento, quantidade do KGF reampliada pelos fibroblastos foi dosada 20 com o auxílio de um kit ELISA (R&D Systems), segundo o protocolo preconi- zado pelo fornecedor. Em paralelo, a quantidade de células vivas por poço foi determinada por um teste colorimétrico ao vermelho neutro: a Densidade Óptica (DO), proporcional à quantidade de células vivas, é lida a 570 nm. Em paralelo, a quantidade de células vivas por poço foi determinada por um tes- 25 te colorimétrico ao MTT: a DO, proporcional à quantidade de células vivas, é lida em 570 nm.
A quantidade do KGF é expressa por células vivas: pg/ml/D0570
MTT.
f. Estatísticos: a significatividade dos resultados foi avaliada por um teste t de Student.
Resultados
a. Expressão do heterotrímero α333δ2 da Iaminina 5 O controle gênico do processo de re-epitelização implica várias famílias de fatores de transcrição o de crescimento, em particular o TGF- betal que é liberado desde os primeiros instantes segundo um ferimento. Nas condições fisiológicas da re-epitelização, foi demonstrado que o TGF-βΙ 5 estimulava a expressão da laminina-5. Esse fator de crescimento é utilizado como prova positiva para estudar a expressão gênica dessa proteína, a fim de se aproximar das condições fisiológicas.
A análise quantitativa da cinética de expressão dos ARNm das diferentes cadeias comportando a Iaminina 5 foi realizada por PCR quantita- 10 tiva (Q-PCR) após 48 horas de incubação com o TGF-βΙ a 5 ng/ml. Os re- sultados obtidos indicam uma indução muito significativa da expressão dos 3 genes estudados (p < 0,01) e com fatores de indução atingindo 12 para a3 e até 17 para γ2 (tabela 10: A/B/C). O RNAm β3 foi também induzido a um nível inferior, da ordem de 5 vezes.
Estudou-se a implicação potencial dos peptídeos de quinoa na regulagem da expressão dos 3 genes que compondo a Iaminina 5. Os resul- tados obtidos demonstram que os peptídeos de quinoa estimulam, de forma significativa, e dose dependente a expressão desses genes, os fatores de indução atingem 3 para a cadeia a3, 2 para a cadeia β3 e 2,6 para a cadeia 20 v2._____
Média Desvio P ddct QR % de in¬ dCt padrão dução Controle 1,435 0,659 0,00 1,00 JGFp a 5 -0,944 0,664 P < 0,01 3,69 12,93 1193 ng/ml Concentrado 0,446 0,685 P <0,01 1,49 2,82 182 de óleo de quinoa 0,005 % Concentrado 0,466 0,578 P <0,01 1,64 3,12 212 de óleo de quinoa 0,01 % Tabela 10A: expressão gênica da cadeia a-3 da Iaminina 5 Média Desvio P Ddct QR % de d Ct padrão indução Controle 1,435 0,659 0,00 1,00 TGFp a 5 -0,944 0,664 P <0,01 2,38 5,20 420 ng/ml Concentrado 0,446 0,685 P <0,01 0,99 1,98 98 de óleo de quinoa 0,005 % Concentrado 0,466 0,578 P < 0,01 0,97 1,96 9,6 de óleo de quinoa 0,1 % Tabela 10B>: espessura
gênica da cadeia β-3 c
Média Desvio P ddct QR % de d Ct padrão indução Controle 2,225 0,418 0,00 1,00 TGFp a 5 -1,925 0,453 P < 0,01 4,15 17,76 1676 ng/ml Concentrado 1,502 0,489 P < 0,01 0,729 1,65 65 de óleo de quinoa 0,005 % Concentrado 0,839 0,336 P < 0,01 1,39 2,61 161 de óleo de quinoa 0,1 % a Iaminina 5.
10
Tabela 10C: expressão gênica da cadeia γ-2 da Iaminina 5.
Tabela 10: expressão gênica das 3 cadeias compondo a Iaminina 5.
b. Estudo da expressão da MMP-9
Dentre as proteases matriciais implicadas na re-epitelização, a MMP-9 exerce um papel particularmente importante. Ela é regulada positi- vamente pelo TGF-βΙ e citoquinas pró-inflamatórias, mas ela é expressa também sobre o local da ferida pelos queratinócitos migrantes.
Conforme mostrado na tabela 11, a análise dos resultados de Q- PCR permitiu observar uma indução precoce da expressão do gene da MMP-9 de um fator de 8 horas após 48 horas de estimulação pelo TGF β. Utilizando-se esse modelo, foi também colocado em evidência o efeito dos peptídeos de quinoa sobre a migração dos queratinócitos através de sua ação sobre a expressão do gene MMP-9. Assim, os peptídeos de quinoa 5 estimulam significativamente a expressão da MMP-9 de um fator de 2,6 em relação ao controle sem tratamento.____
Média Desvio P ddCt QR % de indução d Ct padrão Controle 6,08 0,84 0,00 1,00 TGFp a 3,07 0,55 P<0,01 3,01 8 807 5ng/ml Peptídeos 5,06 0,57 P<0,01 1,02 2 100 de quinoa 0,05 % Peptídeos 4,68 0,74 PO,01 1,4 2,63 163 de quinoa 0,1 % Tabela 11: estudo da expressão gênica da MMP-9
c. Estudo da produção da proteína MMP-9
Após ter estudado o perfil de expressão gênica da MMP-9 em 10 presença dos peptídeos de quinoa, verificou-se que a indução da expressão do gene leva também a um aumento da secreção da proteína. A influência dos peptídeos de quinoa sobre a síntese e a secreção da MMP-9 pelos que- ratinócitos, após um tratamento de 48 a 72 horas, foi, portanto, avaliada. Os resultados são apresentados na tabela 12. Assim, os peptídeos de quinoa 15 aumentam significativamente a quantidade da MMP-9 secretada por querati- nócitos (aumento que vai até 55 %).__
Tratamento 48 horas Tratamento 72 horas Quantidade % A Student t Quantidade % A Student t MMP-9* teste MMP-9* teste Controle 2,458 _j 2,207 TGFp a 11,604 372 P<0,01 14,746 568 PO,01 5ng/ml Peptídeos 2,799 14 PO,01 3,429 55 PO1OI de quinoa 0,05 % Peptidecs de 2,998 22 PO,01 3,472 57 PO,01 quinoa 0,1 % * ng/ml/DO vermelha neutra; A = aumento
Tabela 1: dosagem da proteína MMP-9 no que flutua dos queratinócitos
d. Avaliação do efeito funcional dos peptídeos de quinoa sobre a migração dos queratinócitos.
Avaliou-se o efeito funcional dos peptídeos de quinoa sobre a
migração dos queratinócitos em uma cicatriz artificial após bloqueio da proli- feração celular.
A comparação visual dos fotos representando as células trata- das pelos peptídeos de quinoa com as células não tratadas permite concluir 10 que os peptídeos de quinoa favorecem a migração celular: presença de mais de queratinócitos na cicatriz artificial das células tratadas pelos peptídeos de quinoa. Esse aumento da migração dos queratinócitos foi quantificado, com- putando-se o número de células migrantes na ferida artificial. Assim, os pep- tídeos de quinoa aumentam de +67 % a migração de queratinócitos.
c. Efeito dos peptídeos de quinoa sobre a proliferação dos queratinócitos
A fim de verificar se os peptídeos de quinoa forem associados ao processo de proliferação dos queratinócitos (= segunda etapa do meca- nismo de re-epitelialização), um teste de viabilidade celular ao MTT foi feito, para avaliar a ação direta dos peptídeos de quinoa sobre a proliferação celu- 20 lar. Conforme mostrado na tabela 13, o tratamento com o Ácido Trans- Retinóico (ATRA) = controle positivo induz uma taxa de proliferação de + 36 %. Da mesma forma, os peptídeos de quinoa testados a 0,05 e 0,1 % MS estimulam muito significativamente a proliferação dos queratinócitos, com um aumento da ordem de + 20 %.
Média D0570 Desvio % de prolifera¬ Student t tes¬ (MTT) padrão ção te Controle ne¬ 1,003 0,050 100 gativo ATRA a 1 μΜ 1,361 0,140 136 P<0,01 Peptídeos de 1,156 0,075 115 P<0,01 quinoa 0,05 % Peptídeos de 1,201 0,071 120 P<0,01 quinoa 0,1 % Tabela 13: proliferação dos queratinócitos. f. Estudo da síntese do KGF pelos fibroblastos.
No decorrer da re-epitelização, o processo de proliferação dos queratinócitos é feito sob a influência de numerosos fatores que podem ser secretados pelos queratinócitos ou pelos fibroblastos da derme: produção do 5 KGF (Kératinocyte growth Factor). Em resposta ao KGF superexpresso pe- los fibroblastos, os queratinócitos se multiplicam e recobrem assim mais ra- pidamente a lesão. O efeito dos peptídeos de quinoa sobre a secreção des- se fator pelos fibroblastos dérmicos, após um tratamento de 24 e 48 horas, foi avaliado. Na tabela 14, confirma-se que a síntese do KGF aumenta em 10 presença do IL a. Por outro lado, os peptídeos de quinoa testados a 0,05 e
0,1 % MS estimulam de maneira muito significativa a secreção do KGF pelos fibroblastos. Essa estimulação é dose dependente e muito importante a par- tir de 24 horas de tratamento (multiplicação por 5 e 7 em relação ao controle sem tratamento).__
Tratamento 24 horas Tratamento 48 horas Quantidade % A Student Quantidade % A Student MMP-9* t teste MMP-9* t teste Controle 27,853 80,884 TGFp a 147,886 431 P<0,01 352,387 336 P<0,01 5ng/ml Peptídeos 135,454 386 P<0,01 148,744 84 P<0,01 de quinoa 0,05 % Peptídeos 194,650 599 P<0,01 160,405 98 P<0,01 de quinoa 0,1 % * pg/ml/DFO vermelho neutro; A = aumento
Tabela 14: dosagem do KGF no que flutua dos fibroblastos.
Conclusão: o conjunto dos estudos apresentados, no caso, permitiu colocar em evidência o papel dos peptídeos de quinoa na cicatrização epidérmica. Estimulando os dois processos, os peptídeos de quinoa permitem uma res- tauração eficaz e rápida da integridade da pele.

Claims (21)

1. Composição cosmética, dermatológica ou nutracêutica, com- preendendo um extrato de grãos de quinoa e, se for o caso, um excipiente apropriado, caracterizada pelo fato de esse extrato ser um extrato peptídico e osídico ou um extrato Iipidico de grãos de quinoa, esse extrato lipídico de quinoa sendo ele próprio escolhido no grupo constituído por um óleo concen- trado em sua fração insaponificável, um insaponificável ou um óleo refinado, esse óleo refinado tendo as seguintes especificações: <table>table see original document page 49</column></row><table>
2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de o extrato de grãos de quinoa ser um extrato peptídico e osídico.
3. Composição, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de o extrato peptídico e osídico ser constituído de 25 a 90 % em peso de peptídeos e de 10 a 50 % em peso de açúcares, as percentagens sendo expressas em relação ao peso total desse extrato peptídico.
4. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 3, caracterizada pelo fato de o extrato peptídico e osídico ser obtido por um processo que compreende as seguintes etapas sucessivas: a) a partir de grãos de quinoa, extração de um óieo bruto e de um bolo e recuperação desse bolo; b) lavagem desse bolo pela água ou uma mistura hidroalcoólica para conservar apena a parte protéica, depois; c) solubilização das proteínas; d) concentração das proteínas, depois hidrólise dessas proteínas em peptídeos; e) purificação e recuperação do extrato peptídico.
5. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de o extrato lipídico ser um óleo concentrado em sua fração insa- ponificável, tendo as seguintes especificações: <table>table see original document page 50</column></row><table>
6. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de o extrato lipídico ser um insaponificável, tendo as seguintes es- pecificações: <table>table see original document page 50</column></row><table>
7. Processo de preparo de um extrato peptídico e osídico de quinoa, compreendendo as seguintes etapas sucessivas: a) a partir de grãos de quinoa, extração de um óleo bruto e de um bolo e recuperação desse bolo; b) lavagem desse bolo pela água ou uma mistura hidroalcoólica para conservar apenas a parte protéica, depois c) solubilização das proteínas; d) concentração das proteínas, depois hidrólise dessas proteínas em peptídeos; e) purificação e recuperação do extrato peptídico.
8. Processo, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pe- lo fato de, previamente à concentração das proteínas (etapa d), as fibras serem eliminadas.
9. Processo de preparo de um óleo refinado de quinoa que tem especificações definidas como definido na reivindicação 1, compreendendo uma etapa de refinação química do óleo bruto de quinoa.
10. Processo de preparo de um óleo de quinoa concentrado em sua fração insaponificável, compreendendo uma etapa de destilação mole- cular de um óleo refinado de quinoa.
11. Processo, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de a etapa de destilação molecular ser realizada, utilizando-se um dispositivo escolhido dentre os destiladores moleculares de tipo centrífugo e os dispositivos moleculares de tipo com película raspada.
12. Processo de preparo de um insaponificável de quinoa, com- preendendo uma etapa de saponificação de um óleo de quinoa concentrado em sua fração insaponificável, depois uma extração desse insaponificável com o auxílio de um solvente apropriado.
13. Utilização de um extrato de quinoa, escolhido dentre um ex- trato peptídico de quinoa ou um extrato lipídico de quinoa, esse extrato lipí- dico de quinoa sendo ele próprio escolhido no grupo constituído por um óleo concentrado em sua fração insaponificável, um insaponificável ou um óleo refinado tendo as seguintes especificações: <table>image see original document page 52</column></row><table> para a fabricação de uma composição dermatológica ou de um alimento fun- cional.
14. Utilização, de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de a composição dermatológica ou o alimento funcional ser desti- nado à prevenção e ao tratamento das reações ou patologias alérgicas, in- flamatórias, irritativas, ou alterações da barreira ou da homeostasia da pele e/ou das mucosas e/ou dos fâneros imaturos, normais ou maduros.
15. Alimento, compreendendo um óleo refinado de quinoa enri- quecido em sua fração insaponificável.
16. Composição, de acordo com a reivindicação 5, para sua utili- zação na prevenção e/ou no tratamento das alterações ligadas ao tecido dérmico.
17. Composição, de acordo com a reivindicação 16, na qual es- ses distúrbios são escolhidos no grupo constituído pelo envelhecimento cu- tâneo, os vergões e feridas profundas.
18. Composição, de acordo com a reivindicação 16, para favore- cer a cicatrização.
19. Composição, de acordo com a reivindicação 16, para a pre- venção e/ou o tratamento das atrofias subcutâneas da derme.
20. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 2 a 4, para favorecer a cicatrização.
21. Composição, de acordo com a reivindicação 20, para sua utilização na prevenção e/ou no tratamento das patologias ou condições es- colhidas no grupo constituído pelas cicatrizes superficiais, os lábios frágeis e as inflamações labiais, o envelhecimento cutâneo, os vergões, a pele após picadas, as abrasões da pele, empolas e/ou crostas cutâneas, e as peles frágeis e sensíveis.
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