BRPI0718021A2 - Uso de mtki 1 para tratar ou prevenir câncer ósseo - Google Patents

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "USO DE MT- Kl 1 PARA TRATAR OU PREVENIR CÂNCER ÓSSEO".

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se à descoberta de que o derivado de quinazolina macrocíclico 4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5- ò][6,1,12]benzoxadiazaciclopentadecino, 17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19- octa-hidro-20-metóxi-13-metíla, descrito como composto 22 na publicação PCT n- WO 2004/105765, é útil na fabricação de um medicamento para o tratamento ou a prevenção de cânceres ósseos, e métodos para exterminar células de câncer ósseo, incluindo osteossarcomas, condrossarcomas, do- ença óssea do mieloma, e metástases ósseas osteolíticas a partir de outros sítios primários. A invenção fornece, consequentemente, métodos para tra- tar, prevenir, retardar ou mitigar câncer ósseo, ou para prevenir e tratar per- da óssea associada a metástases de câncer.

Antecedentes da Invenção

"Câncer ósseo" inclui células de câncer ósseo primário tais como células de osteossarcoma, células da família de tumores de Ewing, células de condrossarcoma, células tumorosas de células gigantes malignas, células de histiocitoma fibroso maligno e células de adamantinoma, bem como célu- las de câncer ósseo secundário que sofreram metástase a partir de outros tecidos, incluindo mama, pulmão, próstata e rim.

O osteossarcoma é um tumor maligno do osso, que é mais pre- valente em adolescentes e adultos jovens. O osteossarcoma representa a- proximadamente 5% dos tumores na infância e 80% destes tumores se ori- ginam ao redor do joelho. O prognóstico é frequentemente ruim e dentro de

1 ano depois de começar a terapia definitiva, cerca de 30% dos pacientes diagnosticados com osteossarcoma desenvolverão metástase no pulmão. O prognóstico parece ser determinado pelo sítio de metástases e capacidade de resseção cirúrgica da doença metastática, seja no diagnóstico ou depois de um período variável de quimioterapia. Os pacientes que sofreram ablação cirúrgica completa do tumor primário e metastático (quando confinado ao pulmão) depois de quimioterapia podem atingir uma sobrevida longa, embo- ra a sobrevida sem episódios permaneça sendo de cerca de 20% para paci- entes com doença metastática no diagnóstico. Os pacientes que desenvol- vem doença recorrente têm frequentemente um prognóstico ruim e morrem dentro de 1 ano depois do desenvolvimento da doença metastática.

A quimioterapia é frequentemente ineficaz, resultando em uma

alta taxa de mortalidade. Assim sendo, é importante que novas abordagens terapêuticas sejam avaliadas para esta doença maligna.

A doença óssea do mieloma é um câncer de células plasmáticas produtoras de anticorpos na medula óssea. A proliferação das células plas- 10 máticas cancerosas, referidas como células de mieloma, causa uma série de efeitos, incluindo lesões líticas (furos) no osso, menor número de eritrócitos, produção de proteínas anormais (com lesão conseqüente do rim, nervos, e outros órgãos), função do sistema imunológico reduzida, e níveis sanguí- neos elevados de cálcio (hipercalcemia).

Quando as células de mieloma estão presentes em locais es-

queléticos distintos, a doença é referida como mieloma múltiplo.

Embora responsável por apenas 1% de todos os cânceres nos Estados Unidos, com 14.600 novos casos relatados em 2002, o mieloma é o segundo câncer sanguíneo mais comum e pode estar crescendo em preva- lência, particularmente entre indivíduos com menos de 55 anos de idade (In- ternational Myeloma Foundation). Muitas opções de tratamento diferentes estão disponíveis ou em desenvolvimento, mas não há uma cura nem con- cordância sobre um esquema de controle ideal de mieloma. Os pacientes são tratados com quimioterapia bem como tratamentos específicos para os sintomas de um ou mais entre hipercalcemia, maior risco de infecção, insufi- ciência renal, anemia, hiperviscosidade do sangue, risco elevado de aciden- te vascular cerebral, destruição óssea e dor, e fraqueza muscular. Infeliz- mente, a redução dramática no número de células de mieloma não se traduz necessariamente em remissões mais longas ou tempos de sobrevida mais longos, e as terapias que foram eficazes antes de uma remissão podem não se comprovar eficazes após recidiva da doença.

Uma das características mais prevalentes e significativas do mieloma é a ativação de osteoclastos, células multinucleadas que absorvem o osso, levando ao afinamento do osso, lesões ósseas líticas, e fratura ós- sea. As lesões ósseas líticas ocorrem em 70-80% dos pacientes com mielo- ma múltiplo e estão frequentemente associadas à dor óssea severa e fratu- 5 ras patológicas. No funcionamento normal dos ossos, existe um equilíbrio entre osteoclastos, que reabsorvem o osso, e os osteoblastos, células que produzem osso. Este equilíbrio está perturbado em pacientes com mieloma, e mais osso é reabsorvido do que produzido. A reabsorção óssea osteoclás- tica aumentada ocorre adjacente às células de mieloma e não em áreas de 10 medula óssea normal, indicando que a ativação de osteoclastos ocorre por um mecanismo local. Embora esteja bem aceito que as células de mieloma ativam osteoclastos, o mecanismo preciso pelo qual isto ocorre é desconhe- cido. As células de mieloma, em cultura, produzem ou induzem a produção de vários fatores ativadores de osteoclastos (OAFs) cujos papéis específicos 15 in vivo ainda devem ser determinados. Recentemente, a proteína 1a inflama- tória de quimiocinas de macrófagos (MIP-Ia) foi implicada na ativação de osteoclastos in vitro (S. J. Choi et ai., Blood 96:671-675 (2000)). Terapias que se dedicam aos mecanismos que envolvem OAFs estão atualmente em desenvolvimento.

Atualmente, as indicações ósseas de mieloma múltiplo são tra-

tadas principalmente com bisfosfonatos, uma classe de produtos químicos que inibe a atividade de osteoclastos ou a afixação de osteoclastos à super- fície os ossos e eventualmente leva à morte de células osteoclásticas. Eles podem afetar também as células de mieloma diretamente. Os bisfosfonatos 25 são administrados por infusão. Os bisfosfonatos da terceira geração estão atualmente em desenvolvimento, mas mesmo as versões aprimoradas dos fármacos podem ter efeitos colaterais potenciais, incluindo hipocalcemia, lesão renal, e dor aumentada.

Os bisfosfonatos não bloqueiam completamente o processo de destruição óssea, e os pacientes eventualmente desenvolvem novas lesões ósseas. Uma alternativa para destruição óssea em mieloma múltiplo, que pode ser administrada por via oral, seria altamente benéfica. As metástases ósseas estão frequentemente associadas ao câncer avançado e são mais comuns com carcinomas de mama, próstata e tireóide e mieloma múltiplo (supra). As metástases ósseas estão presentes em 65-75% dos pacientes com câncer de mama (metastático) avançado. As 5 lesões ósseas metastáticas podem ser de natureza lítica ou esclerótica de- pendendo de se predomina atividade osteoclástica ou osteoblástica; caso ambos processos estejam igualmente ativos, eles são denominados lesões mistas. As metástases ósseas em pacientes com câncer de mama envolvem usualmente doença osteolítica, onde a homeostasia óssea é rompida e des- 10 viada na direção de reabsorção excessiva do osso (Coleman, R.E., Cancer Treat. Rev. 27(3): 165-76 (2001)). A lesão esquelética induzida por tumores é mediada por osteoclastos que são estimulados direta ou indiretamente para dissolver o osso por fatores locais (por exemplo, prostaglandina E, interleu- cina-1, fator de necrose tumoral e procatepsina D) liberados por células tu- 15 morosas ou células imunes associadas, ou por fatores sistêmicos, peptídeo relacionado ao hormônio paratireóide. Os sítios esqueléticos mais frequent- mente afetados são as vértebras, pélvis, costelas, fêmur e crânio.

Os pacientes com metástases ósseas experimentam morbidez considerável, incluindo dor óssea, fraturas patológicas, hipercalcemia, mobi- 20 Iidade reduzida e compressão do cordão espinhal ou da raiz nervosa. Ape- sar da importância destes problemas clínicos, existem poucos tratamentos disponíveis para perda óssea associada à metástase de câncer. Assim sen- do, permanece existindo uma necessidade de identificar novos agentes e métodos para prevenir ou tratar metástase de câncer, incluindo metástases 25 ósseas osteolíticas.

Sumário da Invenção

A invenção refere-se em parte a métodos para tratar ou prevenir câncer ósseo, e a métodos para tratar ou prevenir perda óssea associada a metástases de câncer, utilizando certos compostos descritos no documento n- WO 2004/105765, cujo teor é aqui incorporado como referência em sua totalidade.

Em uma modalidade, a presente invenção fornece o uso do deri- vado de quinazolina macrocíclico 4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5- ò][6,1,12]benzoxadiazaciclopentadecino, 17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19- octaidro-20-metóxi-13-metila, descrito como composto 22 na publicação PCT ns WO 2004/105765, na fabricação de um medicamento para o tratamento 5 ou a prevenção de cânceres ósseos e métodos para exterminar células de câncer ósseo, incluindo osteossarcomas, condrossarcomas, doença óssea do mieloma e metástases ósseas osteolíticas. Ela consequentemente forne- ce métodos para tratar, prevenir, retardar ou mitigar câncer ósseo, ou para prevenir e tratar perda óssea associada a metástases de câncer.

Em uma modalidade afim, a invenção fornece um método para

inibir disseminação metastática de um câncer para o sistema esquelético, em um indivíduo mamífero, compreendendo administrar a um indivíduo ma- mífero suspeito de ter câncer metastático um composto da invenção, em uma quantidade eficaz para inibir a disseminação metastática do câncer pa- 15 ra o sistema esquelético; e um método para tratar câncer ósseo, compreen- dendo administrar a um indivíduo mamífero diagnosticado com um câncer uma composição que compreende um composto da invenção, em uma quantidade eficaz para reduzir o crescimento ou a disseminação neoplásica do câncer ósseo. Deve-se avaliar que qualquer redução na taxa de cresci- 20 mento ou disseminação de câncer (que pode prolongar a vida e a qualidade de vida) é indicativa de tratamento exitoso. Em modalidades preferidas, o crescimento do câncer é detido completamente. Em modalidades ainda mais preferidas, os cânceres encolhem ou são erradicados inteiramente. Os indi- víduos preferidos para tratamento são indivíduos humanos, mas outros ani- 25 mais, especialmente murinos, ratos, bovinos, porcinos, primatas, e outros sistemas de modelos para tratamento de câncer, são contemplados. Os cânceres metastáticos aqui contemplados incluem uma série de cânceres que podem sofrer metástase para o osso, mas os cânceres passíveis de me- tástase mais comuns são câncer de mama, pulmão, rim, mieloma múltiplo, 30 tireóide, e próstata. A título exemplificativo, os outros cânceres que têm po- tencial para sofrer metástase incluem, porém sem-limitações, adenocarci- noma, malignidades de células sanguíneas, incluindo leucemia e linfoma; cânceres de cabeça e pescoço; cânceres gastrointestinais, incluindo câncer de estômago, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer pancreático, câncer hepático; malignidades do trato genital feminino, incluindo carcinoma ovaria- no, cânceres uterinos endometriais e câncer cervical; câncer da bexiga; cân- 5 cer de cérebro, incluindo neuroblastoma; sarcoma, osteossarcoma; e câncer de pele, incluindo melanoma maligno e câncer de células escamosas. A pre- sente invenção contempla especialmente a prevenção de tratamento de le- sões osteolíticas no osso induzidas por tumores.

Em uma variação dos métodos de tratamento precedentes, os 10 compostos são administrados junto com um segundo agente terapêutico pa- ra câncer. O segundo agente pode ser qualquer agente quimioterápico, a- gente radioativo, radiação, ácido nucléico que codifica um agente terapêutico de câncer, anticorpo, proteína, e/ou outro agente antilinfangiogênico ou a- gente antiangiogênico. O segundo agente pode ser administrado antes, de- 15 pois, ou concomitantemente com os compostos da invenção.

Em uma variação, o indivíduo a ser tratado foi diagnosticado com um tumor operável, e a etapa de administração é realizada antes, du- rante, ou depois da resseção do tumor do indivíduo. O tratamento com com- posto em conjunto com resseção do tumor pretende reduzir ou eliminar o 20 recrescimento de tumores a partir de células cancerosas que deixaram de ser extirpadas.

Dito mais genericamente, a invenção fornece um método para tratar ou prevenir câncer ósseo, e métodos para tratar ou prevenir perda ós- sea associada a metástases de câncer, compreendendo a etapa de adminis- 25 trar a um mamífero (incluindo, porém sem-limitações, seres humanos, ratos, caninos, bovinos, porcinos, e primatas) que necessita de um composto da invenção.

Breve Decrição dos Desenhos

Figura 1: Efeito do tratamento sobre o comportamento de ergui- mento espontâneo da pata traseira esquerda. Os dados estão apresentados como a porcentagem do tempo em que a pata foi erguida durante um perío- do de observação de 4 minutos. O grupo tratado com veículo recebeu a do- 10

15

20

sagem por gavagem oral, diariamente com uma solução a 20% de HPCD em pH 4,0. O composto 1 foi dosado uma vez ao dia em sua dose maxima tole- rada (MTD) de 200 mg por quilograma, Iressa também foi dosado em sua dose máxima tolerada, por gavagem oral, de 50 mg por quilograma diaria- mente por 14 dias.

Figura 2: Reconstruções representativas a partir de pCt s dos membros traseiros esquerdos ipsilaterais, ilustrando a destruição óssea os- teolítica nos animais inoculados com tumor.

Figura 3: Inibição dependente da dose do crescimento de tumor mamário em um modelo de metástase de câncer ósseo. MDA B231 Descrição Detalhada da Invenção

O documento ης W0-2004/105765 descreve a preparação, for- mulação e propriedades farmacêuticas de derivados de quinazolina macro-

cíclicos da fórmula (I) como inibidores de cinases de múltiplos alvos (MTKIs).

25

Descobriu-se agora que um composto da classe supramencio- nada, isto é, 4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5-

ò][6,1,12]benzoxadiazaciclopentadecino, 17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19- octaidro-20-metóxi-13-metila, descrito como composto 22 na publicação PCT supramencionada, aqui também referido como MTKI 1 ou Composto 1, tem atividade clínica em modelos de câncer ósseo e, consequentemente, pro- porciona o uso destes compostos para a preparação de uma composição farmacêutica para tratar câncer ósseo, incluindo cânceres ósseos primários e metástases ósseas, como aqui definido anteriormente.

A presente invenção refere-se também a um método para tratar lesões osteolíticas induzidas por tumores no osso de um mamífero, compre- endendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a invenção ao dito mamífero.

Consequentemente, em um aspecto a presente invenção forne- ce o uso de 4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5- 5 ò][6,1,12]benzoxadiazaciclopentadecino, 17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19- octaidro-20-metóxi-13-metila ou um seu sal de adição de ácido ou base far- maceuticamente aceitável, na fabricação de um medicamento para o trata- mento ou a prevenção de câncer ósseo, incluindo cânceres ósseos primários e metástases ósseas como aqui definido anteriormente.

Um outro aspecto da presente invenção refere-se a um método

para o tratamento de prevenção de câncer ósseo em um indivíduo mamífero, compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de 4,6- etanodi-ilidenopirimido[4,5-b][6,1,12]benzoxadiazaciclo-pentadecino, 17- bromo-8,9,10,11,12,13,14,19-octaidro-20-metóxi-13-metila ou um seu sal de 15 adição de ácido ou base farmaceuticamente aceitável, a um indivíduo mamí- fero que necessita de tal tratamento.

Os sais de adição de ácido ou de base farmaceuticamente acei- táveis supramencionados compreendem as formas de sais de adição de áci- dos não-tóxicos e bases atóxicas terapeuticamente ativos que MTKI 1 é ca- 20 paz de formar. As propriedades básicas podem ser convertidas em seus sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis tratando a dita forma de base com um ácido apropriado. Os ácidos apropriados compreendem, por exemplo, ácidos inorgânicos tais como ácidos halídricos, como por exemplo, ácido clorídrico ou bromídrico; ácidos sulfúrico; nítrico; fosfórico e similares; 25 ou ácidos orgânicos tais como, por exemplo, ácidos acético, propanóico, hi- dróxi-acético, lático, pirúvivo, oxálico, malônico, succínico (isto é, ácido buta- nodióico), maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, metanossulfônico, eta- nossulfônico, benzenossulfônico, p-toluenossulfônico, ciclâmico, salicílico, p-aminossalicílico, pamoico e similares.

As propriedades ácidas podem ser convertidas em seus sais de

adição de bases farmaceuticamente aceitáveis tratando a dita forma de áci- do com uma base orgânica ou inorgânica apropriada. As formas de sais de bases apropriadas compreendem, por exemplo, os sais de amônio, os sais de metais alcalinos e alcalíno-terrosos, como por exemplo, os sais de lítio, sódio, potássio, magnésio, cálcio e similares, sais com bases orgânicas, co- mo por exemplo, sais de benzatina, /V-metil-D-glicamina, hidrabamina, e sais com aminoácidos tais como, por exemplo, arginina, Iisina e similares.

O termo "sal de adição de ácido ou base" compreende também os hidratos e as formas de adição de solventes que MTKI 1 é capaz de for- mar. Os exemplos de tais formas são, por exemplo, hidratos, alcoolatos e similares.

Particularmente, a presente invenção refere-se a um uso do sal

dibromidrato de 4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5-

ifc>][6,1,12]benzoxadiazaciclopentadecino, 17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19- octaidro-20-metóxi-13-metila, isto é, dibromidrato de 17-bromo-

8,9,10,11,12,13,14,19-octaidro-20-metóxi-13-metil-4,6-etanodi- ilidenopirimido [4,5-b][6,1,12]benzoxadiazaciclopentadecino, em qualquer um dos usos supramencionados de MTKI 1.

Em outra modalidade, a presente invenção fornece o uso do MTKI 1 supramencionado para a preparação de uma composição farmacêu- tica para a prevenção e/ou tratamento de cânceres ósseos.

A presente invenção refere-se também a um método para pre-

venir e/ou tratar câncer ósseo em um mamífero, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do MTKI 1 supramen- cionado ao dito mamífero.

Em outra modalidade, a presente invenção fornece o uso de MTKI 1 para a preparação de uma composição farmacêutica para a preven- ção e/ou tratamento de perda óssea.

A presente invenção refere-se também a um método para pre- venir e/ou tratar perda óssea associada a metástases de câncer em um mamífero, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade terapeu- ticamente eficaz de MTKI 1 ao dito mamífero.

Consequentemente, em um outro aspecto, os compostos mais preferidos para uso de acordo com a presente invenção são aqueles sele- cionados no grupo que consiste em compostos que têm a seguinte estrutura:

Os compostos de acordo com a invenção podem ser preparados e formulados em composições farmacêuticas por métodos conhecidos nes- sas técnicas, e particularmente, de acordo com os métodos descritos no re- latório descrito da patente publicada ng WO 2004/105765 aqui mencionada e incorporada como referência.

Uma preparação apropriada do composto preferido usado nesta invenção, retirada do documento n-WO 2004/105765, é a seguinte:

Exemplo 1

a) Preparação de 5-[[(4-bromo-2-nitrofenil)methil]amino]-1-

pentanol (intermediário 1)

Uma solução de 4-bromo-2-nitro-benzaldeído (0,013 mol), 5- amino-1-pentanol (0,013 mol) e tetracis-(2-propanolato) de titânio (0,014 mol) em EtOH (15 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora,e de- pois a mistura reativa foi aquecida até 50 0C e agitada por 30 min. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e adicionou-se NaBH4 (0,013 mol) em porções. A mistura reativa foi agitada de um dia para o outro e depois vertida sobre água/gelo (50 mL). A mistura resultante foi agitada por 20 min, o precipitado formado foi removido porfiltração (dando o Filtrado (I)), lavado com H2O e agitado em DCM (para dissolver o produto e para removê-lo do sal de Ti). A mistura foi filtrada e depois o filtrado foi secado (MgSO4) e filtra- do, e finalmente o solvente foi evaporado. O Filtrado (I) foi evaporado até remover o EtOH e o concentrado aquoso foi extraído 2 vezes com DCM. A camada orgânica foi separada, secada (MgSO4), removida por filtração e o solvente foi evaporado, produzindo 3,8 g (93%) do intermediário 1.

Exemplo 2

a) Preparação de 5-[[(4-bromo-2-nitro-fenil)-metil]-metil-amino]-1- pentanol (intermediário 2) Uma solução do intermediário 50 (0,0047 mol), formaldeido (0,025 mol) e tetracís-(2-propanolato) de titânio (0,0051 mol) em EtOH (150 mL) foi aquecida até 50 0C e agitada por 1 hora, e depois adicionou-se Na- BH4 (0,026 mol) em porções à temperatura ambiente. A mistura reativa foi 5 agitada durante a noite inteira e depois extinguida com água (100 mL). A mistura resultante foi agitada por 1 hora; o precipitado formado foi removido por filtração e lavado. O filtrado orgânico foi concentrado, e depois o concen- trado aquoso foi extraído com DCM e secado. O solvente foi evaporado e o resíduo foi filtrado sobre sílica-gel (eluente: DCM/CH3OH de 98/2 até 95/5). 10 As frações do produto foram coletadas e o solvente foi evaporado, produzin- do 0,5 g do intermediário 2.

b) Preparação de acetato (éster) de 5-[[(4-bromo-2-nitro-fenil)- metil]-metil-amino]-1-pentanol (intermediário 3)

Uma solução do intermediário 2 (0,0015 mol) e piridina (0,015 mol) em anidrido acético (8 mL) foi agitada de um dia para o outro à tempe- ratura ambiente, e depois 0 solvente foi evaporado e coevaporado com tolu- eno, produzindo o intermediário 3.

c) Preparação do acetato (éster) de 5-[[(2-amino-4-bromo-fenil)- metil]-metil-amino]-1-pentanol (intermediário 4)

Uma mistura do intermediário 3 (0,0015 mol) em THF (50 mL) foi

hidrogenada com 5% de Pt/C (0,5 g) como catalisador na presença de solu- ção de tiofeno (0,5 mL) [H179-034], Depois da captação de H2 (3 equivalen- tes), o catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi evaporado, produ- zindo 0,5 g do intermediário 4.

d) Preparação de acetato (éster) de 4-[[2-[[[5-(acetilóxi)-pentil]-

metil-amino]-metil]-5-bromo-fenil]-amino]-7-metóxi-6-quinazolinol (intermedi- ário 5)

Uma mistura do intermediário 4 (0,0015 mol) e acetato (éster) de

4-cloro-7-metóxi-6-quinazolinol (0,0015 mol) em 2-propanol (30 mL) foi a- quecida até 80 0C e a mistura reativa foi agitada por 1 dia. O solvente foi e- vaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi usado como estava na próxi- ma etapa da reação, produzindo 0,83 g do intermediário 5. e) Preparação de 4-[[5-bromo-2-[[(5-hidróxi-pentil)-metil-amino]- metil]-fenil]-amino]-7-metóxi-6-quinazolinol (intermediário 6)

Uma solução do intermediário 5 (0,0015 mol) em metanol (25 mL) foi agitada à temperatura ambiente, e uma solução de K2CO3 (0,003 5 mol) em H2O (2,5 mL) foi adicionada, e depois a mistura reativa foi aquecida até 60 0C e agitada por 18 horas. O solvente foi evaporado e adicionou-se H2O (20 mL), e depois a mistura foi neutralizada com ácido acético, e o pre- cipitado formado foi removido por filtração. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e o concentrado foi extraído com DCM1 filtrado, e depois 10 secado (MgSO4), e a mistura foi concentrada sob pressão reduzida, produ- zindo 0,5 g (70%) do intermediário 6.

Exemplo 3

a)Preparação de 4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5-

b][6,1,12]benzoxadiazaciclo-pentadecino, 17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19- octaidro-20-metóxi-13-metila- (composto MTKI1)

Uma solução do intermediário 6 (0,0011 mol) em THF (50 mL) foi agitada à temperatura ambiente e adicionou-se tributil-fosfina (0,0016 mol), e depois adicionou-se 1,1'-(azodicarbonil)-bispiperidina (0,0016 mol), e a mistura reativa foi agitada por 2 horas. O solvente foi evaporado até 1/3 do 20 volume inicial. O precipitado resultante foi removido por filtração e lavado. O filtrado foi evaporado e o resíduo foi purificado por cromatografia líquida de alto desempenho em fase reversa. As frações do produto foram coletadas e

o solvente orgânico foi evaporado. O concentrado aquoso foi extraído 2 ve- zes com DCM e a camada orgânica foi secada (MgSO4) e depois removida por filtração. O solvente foi evaporado e o resíduo foi secado (a vácuo) a 50 °C, produzindo 0,004 g (0,8%) do composto MTKI1.

Para preparar as composições farmacêuticas supramenciona- das, uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto específico, op- cionalmente na forma de sal de adição, como ingrediente ativo, é combinada 30 em mistura íntima com um veículo farmaceuticamente aceitável, que pode assumir uma ampla série de formas dependendo da forma de preparação desejada para administração. Estas composições farmacêuticas estão dese- javelmente na forma de dosagem unitária apropriada, de preferência, para administração sistêmica, tal como administração oral, percutânea, ou paren- teral; ou administração tópica tal como por intermédio de inalação, um spray nasal, gotas oftálmicas ou um creme, gel, xampu ou similares. Por exemplo, 5 ao preparar as composições na forma de dosagem oral, qualquer um dos meios farmacêuticos usuais pode ser empregado, tal como, por exemplo, água, glicóis, óleos, álcoois e similares, e como no caso de preparações lí- quidas orais tais como suspensões (incluindo nanossuspensões), xaropes, elixires e soluções; ou veículos sólidos tais como amidos, açúcares, caulim, 10 lubrificantes, aglutinantes, agentes desintegradores, e similares no caso de pós, pílulas, cápsulas e comprimidos. Por causa da sua facilidade de admi- nistração, os comprimidos e as cápsulas representam as formas de dosa- gem unitárias orais mais vantajosas, e neste caso, veículos farmacêuticos sólidos são obviamente empregados. Para composições parenterais, o veí- 15 culo deve compreender usualmente água esterilizada, pelo menos em gran- de parte, embora outros ingredientes, por exemplo, para auxiliar na solubili- dade, possam ser incluídos. Podem ser preparadas soluções injetáveis, por exemplo, nas quais o veículo compreende solução salina, solução de glicose ou uma mistura de solução salina e de glicose. As soluções injetáveis que 20 contêm os compostos da fórmula (I) podem ser formuladas em um óleo para ação prolongada. Os óleos apropriados para este propósito são, por exem- plo, óleo de amendoim, óleo de gergelim, óleo de algodão, óleo de milho, óleo de soja, ésteres de glicerol sintéticos com ácidos graxos de cadeia lon- ga, e misturas deles e outros óleos. Podem ser preparadas também suspen- 25 sões injetáveis nas quais veículos líquidos, agentes auxiliares de suspensão apropriados e similares podem ser empregados. Nas composições apropria- das para administração percutânea, o veículo compreende opcionalmente um agente intensificador de penetração e/ou um agente umectável apropria- do, opcionalmente combinado com aditivos apropriados de qualquer nature- 30 za em proporções minoritárias, aditivos estes que não causam quaisquer efeitos prejudiciais significativos sobre a pele. Os ditos aditivos podem facili- tar a administração à pele e/ou podem ser úteis para preparar as composi- ções desejadas. Estas composições podem ser administradas de várias ma- neiras, por exemplo, como um emplastro transdérmico, como um aplicador local ou uma pomada. Na qualidade de composições apropriadas para apli- cação tópica, podem ser citadas composições empregadas usualmente para 5 administrar fármacos por via tópica, como por exemplo, cremes, géis, curati- vos, xampus, tinturas, pastas, pomadas, unguentos, pós e similares. A apli- cação das ditas composições pode ser por aerossol, por exemplo, com um propelente tal como nitrogênio, dióxido de carbono, um Freon, ou sem um propelente tal como um spray com bomba, gotas, loções, ou um semi-sólido 10 tal como uma composição espessada que pode ser aplicada por um cotone- te. Particularmente, as composições semi-sólidas tais como unguentos, cre- mes, géis, pomadas e similares devem ser usadas convenientemente.

É especialmente vantajoso formular as composições farmacêuti- cas supramencionadas em formas de dosagem unitárias para facilitar a ad- 15 ministração e a uniformidade da dosagem. O termo "forma de dosagem uni- tária", como utilizado no relatório descritivo e nas reivindicações refere-se a unidades fisicamente distintas apropriadas como dosagens unitárias, cada uma contendo uma quantidade predeterminada de ingrediente ativo, calcu- lada para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com o veí- 20 culo farmacêutico requerido. Os exemplos de tais formas de dosagem unitá- rias são comprimidos (incluindo comprimidos sulcados ou revestidos), cáp- sulas, pílulas, saquinhos de pó, wafers, soluções ou suspensões injetáveis, conteúdo de colheres de chá, conteúdo de colheres de sopa e similares, e seus múltiplos segregados.

De preferência, uma quantidade terapeuticamente eficaz da

composição farmacêutica que compreende um composto de acordo com a invenção é administrada por via oral ou parenteral. A dita quantidade tera- peuticamente eficaz é a quantidade que previne eficazmente metástase e/ou crescimento, ou reduz o tamanho de uma série de distúrbios neoplásicos ou 30 distúrbios proliferativos de células (supra) em pacientes. Baseado nos dados atuais, parece que uma composição farmacêutica que compreende um com- posto da presente invenção, e particularmente 4,6-etanodi-iiidenopirimido[4,5-ib][6,1,12]benzoxadiazaciclopen- tadecino, 17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19-octaidro-20-metóxi-13-metila (MTKI1, ou Composto 1) como o ingrediente ativo, pode ser administrada por via oral em uma quantidade entre 10 mg e vários gramas (1 a 5) diaria- 5 mente, seja como uma dose única ou subdividida em mais do que uma dose, incluindo, por exemplo, duas, três ou mesmo quatro vezes ao dia. A quanti- dade preferida fica na faixa entre 500 e 4.000 mg por dia. Uma dosagem particularmente preferida desse composto fica na faixa entre 750 mg e 3.000 mg ao dia. Deve-se avaliar que a quantidade de um composto de acordo 10 com a presente invenção, também aqui referido como ingrediente ativo, que é necessária para atingir um efeito terapêutico, evidentemente variará com a via de administração, idade e condição do recebedor, e o distúrbio ou a do- ença específica que está sendo tratada. As quantidades de dosagem ótimas e o regime podem ser determinados facilmente pelos versados nessas técni- 15 cas usando métodos convencionais e considerando as informações aqui e- nunciadas. Este tratamento pode ser dado continuamente ou intermitente- mente, incluindo, por exemplo, porém sem-limitações, em ciclos de 3-4 se- manas com o tratamento dado por 1-21 dias por ciclo ou outros cronogramas reconhecidamente eficazes e seguros.

Uma formulação ilustrativa é a seguinte:

Exemplo 4: Formulação:

O produto MTK11 pode ser preparado como uma solução oral a mg/ml_, pH 2. Ela contém um excipiente, Captisol® (nome químico: éter- β-ciclodextrina de sulfobutila, SBE-p-CD), ácido cítrico, Tween® 20, HCI, e NaOH em água purificada. A formulação pode ser estocada refrigerada (2-8 °C; 36-46 0F) e deixada aquecer até a temperatura ambiente por no máximo

1 hora antes da preparação da dose.

O produto MTKI1 pode ser preparado também como cápsulas orais com liberação imediata de 50 mg, 100 mg e 300 mg, contendo a enti- dade química ativa MTKI1, Iactose mono-hidratada (200 mesh), lauril-sulfato de sódio e estearato de magnésio em cápsulas de gelatina dura, tamanhos

3, 4 e 00, respectivamente. As cápsulas podem conter também qualquer um ou todos entre os seguintes ingredientes: gelatina, óxido de ferro vermelho e óxido de titânio.

O MTKI 1 acima pode ser usado em combinação com um ou mais outros tratamentos de câncer. Tais combinações poderiam englobar 5 qualquer terapia antitumoral estabelecida, tais como, porém sem-limitações, quimioterapias, irradiação, e terapias baseadas em alvos tais como anticor- pos e moléculas pequenas (tais como, por exemplo, bisfosfonatos, taxanos, antraciclinas, capecitabina, Herceptina, docetaxel, satraplatina, cetuximab, avastina, inibidores de aromatases e metotrexato). Estas terapias podem ser 10 combinadas em terapia sistêmica, ou instilação/administração local (por e- xemplo, por via intatecal), dependendo dos requisitos ideais de eficá- cia/segurança.

O MTKI 1 e o outro agente anticâncer podem ser administrados simultaneamente (por exemplo, em composições separadas ou unitárias) ou seqüencialmente em qualquer ordem. Neste último caso, os dois compostos devem ser administrados dentro de um período e em uma quantidade e de uma maneira suficientes para assegurar que um efeito vantajoso ou sinérgi- co seja atingido. Deve-se avaliar que o método preferido e a ordem de admi- nistração preferida e as respectivas quantidades de dosagem e regimes para cada componente da combinação dependerão do MTKI e outros agentes anticâncer específicos que estão sendo administrados, sua via de adminis- tração, o tumor específico que está sendo tratado e do hospedeiro específico que está sendo tratado. O método e a ordem de administração ideais e as quantidades e regimes de dosagem podem ser determinados facilmente pe- Ios versados nessas técnicas usando métodos convencionais e consideran- do as informações aqui enunciadas.

Dados Experimentais

As propriedades físico-químicas singulares de MTKI 1, aqui refe- ridas também como Composto 1, resultaram em um perfil de distribuição tecidual extremamente favorável, incluindo a capacidade de cruzar intacto a barreira hematoencefálica, e ao mesmo tempo, ainda retendo boa atividade celular e biodisponibilidade oral. Neste caso, demonstra-se ainda que esta distribuição tecidual preferencial para o compartimento da medula óssea re- sulta em atividade antitumoral significativa, usando modelos experimentais de metástases ósseas.

O fibrossarcoma NCTC2472 (ATCC, Rockvile1 MD, EUA) ou cé- 5 lulas de câncer de mama MDA-MB231 (Dr. Yoneda1 Universidade de Michi- gan, EUA) (variante que se aloja no osso) foram injetados dentro da tíbia de camundongos nus, o furo selado e o crescimento do tumor foram observa- dos em tempos predefinidos (Vermeirsch, H. et a!., Pharmacol. Biochem Be- hav. 79(2):243-51 (outubro de 2004)). O ‘erguimento da pata’ espontâneo foi 10 usado como um indicador de resposta de dor, enquanto que pCt e histologia foram usados para demonstrar a atividade antitumoral osteolítica e cresci- mento do tumor.

Métodos Modelo Animal

Camundongos C3H/HeNCrl machos para células de fibrossar-

coma murino NCTC2472 (20-25 g, Charles River, Sulzfeld, Alemanha) ou camundongos NMRI fêmeos nus para as células de câncer de mama huma- no MDA MB 231 (Janvier, França) foram usados. A indução de câncer ósseo foi conduzida como descrito anteriormente (Schwei et a!., 1999 1). A indução 20 de anestesia geral foi realizada sob 4% de isoflurano em uma mistura de 30% de O2 e 70% de ar (1.000 mL/min). A anestesia foi então mantida em 2,5% de isoflurano durante o procedimento cirúrgico. A pata traseira esquer- da foi despelada e desinfetada com povidona-iodo, e em seguida com etanol a 70%. Uma incisão superficial de 1 cm foi feita sobre o joelho sobreposto à 25 patela. O ligamento da patela foi cortado, expondo os côndilos do fêmur dis- tai. Uma agulha de calibre 23 foi inserida no nível do nó intercondilar e do canal intramedular do fêmur para criar uma cavidade para injeção das célu- las. As células tumorosas (2,5x106 células/20 μΙ_) foram então injetadas den- tro da cavidade óssea usando uma seringa de 0,3 mL. Para impedir 0 vaza- 30 mento das células para fora do osso, o local de injeção foi vedado com acrí- lico dental (Paladur, Heraeus Kulzer, GmbH, Wehrheim, Alemanha) e a feri- da foi fechada com pontos de sutura cutânea. No caso do grupo operado de forma simulada, foi seguido um procedimento idêntico, exceto que foi injeta- do meio sem-células.

Tratamento com Fármacos

O tratamento foi iniciado 1 dia depois da indução de células tu- 5 morosas. Os camundongos foram tratados uma vez ao dia (Q1 D) com veícu- lo (20% de hidróxi-propil-p-ciclodextrina, pH 4,0) ou veículo formulado para dar uma dose de 200 ou 50 mg/kg do Composto 1, respectivamente, por ga- vagem (peroral) administrada em um volume de 10 mL/kg de peso corporal. Os camundongos foram tratados durante até 18 dias depois da indução do 10 tumor ósseo.

Avaliação da Dor

Os comportamentos de dor (vide abaixo) foram avaliados no grupo simulado e no grupo de camundongos com tumor ósseo e foram tes- tados em seu comportamento durante um período de 2 semanas antes e 7, 15 9, 12 e 14 dias depois da inoculação do tumor. No final do experimento, al- calinoterroso o fêmur do membro traseiro esquerdo foi amostrado e usado para varredura de μΟΤ como descrito em Vermeirsh et ai, (2004)2.

Comportamento de erguimento espontâneo: Os animais foram aclimatados à sala do laboratório durante pelo menos 30 minutos em uma bureta acrílica transparente com 20 cm de diâmetro, e depois disso, obser- vados durante 4 minutos quanto ao comportamento de erguimento espontâ- neo da pata traseira esquerda.

Avaliação da Destruição Óssea:

A análise do osso foi conduzida nos membros traseiros esquer- 25 dos ipsilaterais antes e7, 12, 15e18 dias depois da injeção das células. Os membros foram fixados em formalina tamponada com 10% de fosfato e transferidos para uma cubeta de plástico enchida com etanol a 70% para varredura usando o microtomógrafo SkyScan (Skyscan 1067®, Skyscan, Aartselaar, Bélgica). Para a medição da resolução do meio, o feixe de raios 30 X foi colimado para um diâmetro de 18 mm, o espaçamento das linhas e a resolução pontual foram ajustados em 0,254 e 0,127 mm, respectivamente. Depois da reconstrução padronizada, os conjuntos de dados para cada osso foram amostrados novamente usando um software de computador (Ant, 3D- creator vs. 2.2e, Skyscan, Aartselaar, Bélgica) de tal modo que o eixo medi- ano do osso estivesse orientado centralmente para cada osso. Os escanea- mentos foram processados e uma análise morfométrica bidimensional e tri- 5 dimensional foi realizada em um segmento de osso na extremidade proximal da tróclea patelar usando um software livre (CTanalyzer vs. 1.02, Skyscan, Aartselaar, Bélgica).

1. Schwei M.J., Honore P., Rogers S.D., Salak-Johnson J.L., Finke M.P., Ramnaraine M.L., et al. "Neurochemical and cellular reorganiza-

tion of the spinal cord in a murine model of bone cancer pain", J. Neurosci. 19:10886 -97(1999).

2. Vermeirsch, H., Nuydens, R., Salmon, P.L., e Meert, T.F. Pharmacoi. Biochem. Behav. 79:243-251 (2004).

Resultados Avaliação da Dor

Os animais foram aclimatados à sala do laboratório por pelo me- nos 30 minutos em um cilindro de acrílico com 20 cm de diâmetro, e depois disso, foram observados durante 4 minutos quanto ao comportamento de erguimento espontâneo da pata traseira esquerda. Os dados estão apresen- 20 tados como a porcentagem do tempo em que a pata foi erguida durante este período de tempo. O grupo de veículo foi dosado por gavagem oral diaria- mente com uma solução de HPCD a 20% em pH 4,0. O Composto 1 foi do- sado uma vez ao dia na sua dose máxima tolerada (MTD) de 200 mg por quilograma, Iressa também foi dosado em sua dose máxima tolerada, por 25 gavagem oral de 50 mg por quilograma diariamente por 14 dias. O grupo de animais tratados com veículo apresentou comportamento de erguimento da pata detectável iniciando sete dias depois da inoculação de células tumoro- sas. A porcentagem do tempo em que as patas dos animais foram erguidas durante o período de observação aumentou nos Dias 9, 12 e 14 depois da 30 inoculação e neste tempo a pata foi erguida 80% do tempo. Dosar os ani- mais com o Composto 1 na sua dose máxima tolerada (MTD) demonstrou reduzir o tempo em que os animais não usaram suas patas esquerdas de forma bem-dramática, de tal modo que no Dia 14, o comportamento de er- guimento espontâneo da pata foi detectado apenas como ocorrendo -8% do tempo. O composto referencial usado neste estudo, Iressa, quando dosado na sua dose máxima tolerada (MTD) também levou a uma redução estatisti- 5 camente significante no comportamento de erguimento espontâneo da pata; entretanto, o efeito foi bem menos extensivo com o erguimento espontâneo da pata sendo observado mais do que 35% do tempo.

Avaliação da Destruição Óssea

Reconstruções representativas a partir das pCt s dos membros 10 traseiros esquerdos ipsilaterais, ilustrando a destruição óssea osteolítica nos animais inoculados com tumor (figura 2). Uma perda óssea considerável foi observada nos grupos tratados com veículo e Iressa, enquanto que uma destruição óssea significativamente menor pode ser observada nos animais tratados com o Composto 1. Os animais operados de forma simulada não 15 apresentaram sinais de atividade osteolítica.

Modelo Animal

No modelo de metástase de câncer ósseo, células-clone MDA B231 que se alojam no osso foram inoculadas dentro da tíbia como descrito. Depois de 42 dias, os animais foram sacrificados e as patas amputadas fo- 20 ram colocadas em fixativo. As pernas foram descalcificadas e seções foram cortadas para determinar os níveis de destruição óssea. Observou-se que os animais tratados com veículo tinham grande massa tumoral (área circulada na figura 3) que expandiu para fora do local inicial de inoculação (seta preta na figura 3) e no processo resultou em destruição significativa do osso (vide 25 figura 2). A quantidade de crescimento do tumor e a quantidade de destrui- ção óssea foram observadas como sendo reduzida de forma dependente da dose sendo a dose mais alta do Composto 1 testada neste estudo, 100mg por quilograma, peroral, todos os dias (qd) não apresentando quaisquer si- nais de células tumorosas nem quaisquer sinais de destruição óssea. Este 30 último fato é também evidente a partir de seções histológicas na figura 3. Nos animais tratados com veículo, uma grande massa tumoral se estendeu para dentro do fêmur (seta cinza), onde os animais tratados com 100 mg por quilograma, todos os dias (q.d.), de MTKI 1, o tumor detectável está dificil- mente presente (seta cinza) e perto do local da inoculação (seta preta).

Embora o relatório descritivo precedente enuncie os princípios da presente invenção com exemplos fornecidos com o propósito de ilustra- ção, deve-se entender que a prática da invenção engloba todas variações, adaptações e/ou modificações usuais, à medida que elas estejam dentro do escopo das reivindicações apensadas que se seguem e seus equivalentes.

Claims (10)

1. Método para tratar ou prevenir câncer ósseo ou metástases de câncer ósseo em um mamífero, em que o dito método compreende admi- nistrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto escolhido do grupo que consiste em 4,6-etanodi-ilidenopirimido[4,5- b][6,1,12]benzoxadiazaciclopentadecino, 17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19- octa-hidro-20-metóxi-13-metil- ou um seu sal de adição de ácido ou base farmaceuticamente aceitável; ou dibromidrato de 17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19-octa-hidro-20-metóxi-13-metil-4,6-etanodi- ilidenopirimido [4,5-b][6,1,12]benzoxadiazaciclopentadecino, a um mamífero que necessita de tal tratamento.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que o composto tem a seguinte estrutura: <formula>formula see original document page 23</formula>2 HBr

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que uma quan- tidade terapeuticamente eficaz é administrada por via oral ou parenteral.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que 4,6-etanodi- ilidenopirimido[4,5-ô][6,1,12]benzoxadiazaciclo-pentadecino, 17- bromo-8,9,10,11,12,13,14,19-octa-hidro-20-metóxo-13-metil- ou um seu sal de adi- ção de ácido ou base farmaceuticamente aceitável, é administrado em com- binação com um outro agente anticâncer.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que o outro a- gente anticâncer é selecionado do grupo que consiste em bisfosfonatos, ra- diação, taxanos, antraciclinas, capecitabina, Herceptina, docetaxel, satrapla- tina, cetuximab, avastina, inibidores de aromatases ou metotrexato.

6. Uso de um composto escolhido do grupo que consiste em 4,6- etanodi-ilidenopirimido[4,5-ò][6,1,12]benzoxadiazaciclopentadecino, 17- bromo-8,9,10,11,12,13,14,19-octa-hidro-20-metóxi-13-metil- ou um seu sal de adição de ácido ou base farmaceuticamente aceitável; ou dibromidrato de .17-bromo-8,9,10,11,12,13,14,19-octaidro-20-metóxi-13-metil-4,6-etanodi- bilidenopirimido [4,5-b][6,1,12]benzoxadiazaciclopentadecino, na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer ósseo ou metástase de câncer ósseo.

7. Uso, de acordo com a reivindicação 6, em que o composto é selecionado do grupo que consiste em compostos que têm a seguinte estru- tura: <formula>formula see original document page 24</formula>

8. Uso, de acordo com a reivindicação 6 ou 7, em que uma quantidade terapeuticamente eficaz é administrada por via oral ou parente- ral.

9. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 8, em que o composto da fórmula (I) é administrado em combinação com outro agente anticâncer.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 9, em que o outro agente anticâncer é selecionado do grupo que consiste em bisfosfonatos, radiação, taxanos, antraciclinas, capecitabina, Herceptina, docetaxel, satra- platina, cetuximab, avastina, inibidores de aromatases ou metotrexato.