BRPI0708504A2 - alvejante ativo na superfìcie e ph dinámico - Google Patents

Abstract

ALVEJANTE ATIVO NA SUPERFíCIE E pH DINáMICO A presente invenção refere-se a métodos e composições para controle de pH dinâmico, particularmente em aplicações de detergente. Em modalidades particularmente preferenciais, as composições de detergente encontram aplicação na remoção superficial de sujeiras de tecidos, incluindo roupa. Em algumas modalidades particularmente preferenciais, a presente invenção proporciona combinações de enzimas para proporcionar controle de pH dinâmico.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ALVEJANTEATIVO NA SUPERFÍCIE E pH DINÂMICO".

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a métodos e composições paracontrole de pH dinâmico, particularmente em aplicações de detergente. Emmodalidades particularmente preferenciais, as composições de detergenteencontram uso na remoção superficial de sujeiras de tecidos, incluindo rou-pa. Em algumas modalidades particularmente preferenciais, a presente in-venção proporciona combinações de enzimas para proporcionar controle depH dinâmico.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Composições de detergente e outras composições de limpezatipicamente incluem uma combinação complexa de ingredientes ativos. Porexemplo, a maioria dos produtos de limpeza inclue um sistema tensoativo,enzimas para limpeza, agentes alvejantes, builders, supressores de espumade sabão, agentes de suspensão de sujeira, agentes de liberação de sujeira,abrilhantadores óticos, agentes amaciantes, dispersantes, compostos deinibição de transferência de corantes, abrasivos, bactericidas e perfumes.Apesar da complexidade dos detergentes correntes, há muitas manchas quesão difíceis de remover completamente. Além disso, freqüentemente háformação de resíduos, que resulta em descoloração (por exemplo, amare-lamento) e diminuição da estética devido à limpeza incompleta. Estes pro-blemas são combinados pelo aumento do uso de baixas temperaturas delavagem (por exemplo, água fria) e ciclos de lavagem mais curtos. Além dis-so, muitas manchas são compostas de misturas complexas de material fi-broso, incorporando essencialmente carboidratos e derivados de carboidra-tos, fibra, e componentes da parede celular (por exemplo, material vegetal,madeira, mancha à base de lama/argila e fruta). Estas manchas apresentamdifíceis desafios para a formulação e uso de composições de limpeza.

Além disso, roupas coloridas tendem a desgastar e apresentarperdas de aspecto. Uma porção desta perda de cor é devido à abrasão noprocesso de lavar e passar roupa, particularmente em máquinas de lavageme secagem automáticas. Além disso, a perda da força de tração do tecidoparece ser um resultado inevitável de ação mecânica e química devido auso, desgaste, e/ou lavagem e secagem. Portanto, é necessário um meiopara lavar de modo eficiente e eficaz roupas coloridas de modo que estasperdas de aspecto sejam minimizadas.

Em suma, apesar de aprimoramentos nas capacidades dascomposições de limpeza, permanece a necessidade na técnica de detergen-tes que removem manchas, mantêm a cor e aspecto do tecido, e evitam atransferência de corante. Além disso, permanece a necessidade de compo-sições de detergente e/ou de tratamento de tecido que proporcionam e/ourestauram a força de tração, bem como proporcionam propriedades antien-rugamento, antiondulamento, e/ou antiencolhimento aos tecidos, bem comoproporcionam controle estático, maciez do tecido, mantêm o aspecto da cordesejado, e propriedades e benefícios antidesgaste do tecido. Em particular,permanece uma necessidade de inclusão de composições que são capazesde remover os componentes coloridos das manchas, os quais freqüente-mente permanecem fixados ao tecido que está sendo lavado. Além disso,permanece uma necessidade de métodos e composições aprimorados ade-quados para alvejamento têxtil.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção proporciona métodos e composições paracontrole de pH dinâmico, particularmente em aplicações de detergente. Emmodalidades particularmente preferenciais, as composições de detergenteencontram uso na remoção superficial de sujeiras de tecidos, incluindo rou-pa. O controle de pH dinâmico através da lavagem permite que os ingredien-tes do desempenho utilizem totalmente seu potencial na faixa de pH ade-quada para liberar benefícios de limpeza superior. Além disso, alterações depH da solução de lavagem (de pH alcalino fraco a pH acídico) também des-naturam sujeiras sobre a superfície e removem algumas sujeiras que nãosão removidas em pHs maiores.

A presente invenção proporciona adicionalmente composiçõescompreendendo uma quantidade suficiente de no mínimo uma enzima e nomínimo um substrato para a enzima, suficiente para baixar o pH de uma re-ferida solução de lavagem para no mínimo cerca de pH 7 ou menos. Emalgumas modalidades particularmente preferenciais, os métodos conformedeterminado aqui, neste requerimento de patente, (por exemplo, Exemplo 3)são usados de modo a avaliar a queda do pH. Em algumas modalidadespreferenciais, a queda do pH é até cerca de pH 6 ou menos. Em algumasmodalidades alternativas, a enzima é selecionada entre hidrolases e oxida-ses. Em algumas modalidades preferenciais, a hidrolase é selecionada entreperidrolase, carboxilato éster hidrolase, tioéster hidrolase, fosfato monoésterhidrolase, fosfato diéster hidrolase, tioéter hidrolase, a-amino-acil-peptídeohidrolase, peptidil-aminoácido hidrolase, acil-aminoácido hidrolase, dipeptí-deo hidrolase, peptidil-peptídeo hidrolase, pepsina, pepsina B, renina, tripsi-na, quimotripsina A, quimotripsina B, elastase, enteroquinase, catepsina C,papaína, quimopapaína, ficina, trombina, fibrinolisina, renina, subtilisina, as-pergilopeptidase A, colagenase, clostridiopeptidase B, calicreína, gastrisina,catepsina D, bromelina, queratinase, quimotripsina C, pepsina C, aspergilo-peptidase B, uroquinase, carboxipeptidase AeB, aminopeptidase., lipase,pectina esterase e clorofilase. Em algumas modalidades particularmentepreferenciais, a hidrolase compreende no mínimo uma enzima tendo ativi-dade de peridrolase (por exemplo, peridrolases, conforme determinado aqui,neste requerimento de patente). Em modalidades ainda adicionais, a oxida-se é selecionada entre aldose oxidase, galactose oxidase, celobiose oxida-se, piranose oxidase, substrato de sorbose compreende uma porção éster.Em algumas modalidades preferenciais, o substrato compreendendo umaporção éster é selecionado entre acetato de etila, triacetina, tributirina, éste-res de neodol, ésteres de acetato de neodol etoxilados, ácido fórmico, ácidoacético, ácido propiônico, ácido butírico, ácido valérico, ácido capróico, ácidocaprílico, ácido nonanóico, ácido decanóico, ácido dodecanóico, ácido mirís-tico, ácido palmítico, ácido esteárico, e ácido oléico. Em ainda modalidadesadicionais, o substrato compreendendo a porção éster tem a fórmulaR1Ox[(R2)m(R3)n]p, em que R1 é H ou uma porção que compreende uma por-ção amina primária, secundária, terciária ou quaternária, a porção R1 quecompreende uma porção amina sendo selecionada entre um alquila, hetero-alquila, alquenila, alquinila, arila, alquilarila, alquileteroarila, e heteroarilasubstituídas ou não substituídas; ou em que R1 compreende de 1 a 50.000átomos de carbono, de 1 a 10.000 átomos de carbono, ou ainda de 2 a 100átomos de carbono; cada R2 é uma porção alcoxilato, em um aspecto dapresente invenção cada R2 é de modo independente uma porção etoxilato,propoxilato ou butoxilato; R3 é uma porção formadora de éster tendo a fór-mula: R4CO- em que R4 pode ser H, alquila, alquenila, alquinila, arila, alqui-larila, alquileteroarila, e heteroarila substituídos ou não substituídos, em umaspecto da presente invenção, R4 pode ser uma porção substituída ou nãosubstituída alquila, alquenila, ou alquinila compreendendo de 1 a 22 átomosde carbono, uma porção substituída ou não substituída de arila, alquilarila,alquileteroarila, ou heteroarila compreendendo de 4 a 22 átomos de carbonoou R4 pode ser uma porção substituída ou não substituída C1-C22 alquila ouR4 pode ser uma porção substituída ou não substituída C1-C^ alquila; χ é 1quando R1 é H; quando R1 não é Η, χ é um inteiro que é igual a ou menor doque o número de carbonos em R1 , ρ é um inteiro que é igual a ou menor doque x, m é um inteiro de 0 a 12 ou ainda 1 a 12, e η é no mínimo 1. Em ain-da modalidades adicionais, as composições determinadas aqui, neste re-querimento de patente, compreendem, com base no peso da composiçãototal, a partir de cerca de 0,01 a cerca de 99,9 do substrato compreendendouma porção éster. Em algumas modalidades preferenciais, as composiçõescompreendem, com base no peso da composição total, a partir de cerca de0,1 a cerca de 50 do substrato compreendendo uma porção éster. Em aindamodalidades preferenciais adicionais, as composições compreendem adi-cionalmente no mínimo uma fonte de peróxido de hidrogênio e/ou peróxidode hidrogênio. Em algumas modalidades preferenciais, as composiçõescompreendem adicionalmente no mínimo um ingrediente adjunto. Em algu-mas modalidades particularmente preferenciais, o no mínimo um ingredienteadjunto é selecionado entre tensoativos, builders, agentes quelantes, agen-tes inibidores de transferência de corante, auxiliares de deposição, disper-santes, enzimas adicionais, e estabilizantes enzimáticos, materiais catalíti-cos, ativadores de alvejantes, reforçadores de alvejantes, perácidos prefor-mados, agentes dispersantes poliméricos, agentes de remoção/anti-redeposção de sujeira de argila, abrilhantadores, supressores de espuma desabão, corantes, perfumes, agentes de elastificação da estrutura, amacian-tes de tecido, veículos, hidrótropos, auxiliares de processamento e/ou pig-mentos.

A presente invenção também proporciona métodos para limpar nomínimo uma porção de uma superfície e/ou tecido compreendendo: as etapasopcionais de lavar e/ou enxaguar uma superfície e/ou tecido; contactar a super-fície e/ou tecido com no mínimo uma das composições determinadas aqui, nes-te requerimento de patente, e/ou uma referida solução de lavagem compreen-dendo no mínimo uma das composições determinadas aqui, neste requerimen-to de patente; e opcionalmente lavar e/ou enxaguar a superfície e/ou tecido. Emalgumas modalidades preferenciais, o pH da solução de lavagem cai essenci-almente de modo linear. Em ainda modalidades adicionais, a superfície e/outecido é exposta à solução de lavagem tendo um pH de menos de cerca de 6.5por um período de no mínimo cerca de 2 minutos.

A presente invenção proporciona adicionalmente métodos paralimpar no mínimo uma porção de uma superfície e/ou tecido compreenden-do: as etapas opcionais de lavar e/ou enxaguar uma superfície e/ou tecido;contactar a superfície e/ou tecido com no mínimo uma composição determi-nada aqui, neste requerimento de patente, e/ou uma referida solução delavagem compreendendo no mínimo uma composição determinada aqui,neste requerimento de patente; e opcionalmente lavar e/ou enxaguar a su-perfície e/ou tecido, em que o contato ocorre durante um ciclo de lavagem.Em algumas modalidades preferenciais, o pH da solução de lavagem caiessencialmente de modo linear. Em algumas modalidades particularmentepreferenciais, o pH da solução de lavagem cai para 6,5 ou menos dentrodos últimos 25% a 50% do ciclo de lavagem. Em modalidades adicionais, asuperfície e/ou tecido é exposta à solução de lavagem tendo um pH de me-nos de cerca de 6,5 por um período de no mínimo cerca de 2 minutos.

DESCRIÇÃO DAS FIGURASAs figuras 1A a C proporcionam gráficos mostrando os efeitosdo pH sobre o desempenho de limpeza com ácido peracético. O Painel Aproporciona resultados para camisetas, ao passo que o Painel B proporcio-na resultados para fronhas, e o Painel C proporciona resultados para man-chas de chá.

A figura 2 proporciona um gráfico mostrando a curva de titulaçãopara lastro encardido.

As figuras 3A a C proporcionam gráficos mostrando parâmetrosde substrato e enzima envolvidos na produção de um benefício de desem-penho de pH dinâmico. O Painel A proporciona um gráfico mostrando o per-fil de tratamentos de pH, ao passo que o Painel B proporciona dados paracamisetas, fronhas, contendo sujeira hidrofóbica, e a média de semelhantesdados, e o Painel C proporciona dados para vinho, chá, contendo sujeirashidrofílicas e a média de semelhantes dados.

As figuras 4A a C proporcionam gráficos mostrando resultadosde experimentos conduzidos para determinar os efeitos de substratos e de-sempenho de limpeza. O Painel A proporciona um gráfico mostrando o perfilde tratamentos de pH, ao passo que o Painel B proporciona dados para ca-misetas, fronhas, contendo sujeira hidrofóbica, e a média de semelhantesdados, e o Painel C proporciona dados para vinho, chá, contendo sujeirashidrofílicas e a média de semelhantes dados.

As figuras 5A a C proporcionam gráficos mostrando compara-ções do desempenho de limpeza de um detergente de pH dinâmico e deter-gentes comerciais. O Painel A proporciona um gráfico mostrando o perfil depH dos tratamentos, ao passo que o Painel B proporciona dados para cami-setas, fronhas, contendo sujeira hidrofóbica, e a média de semelhantes da-dos, e o Painel C proporciona dados para vinho, chá, contendo sujeiras hi-drofílicas e a média de semelhantes dados.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

A presente invenção proporciona métodos e composições paracontrole de pH dinâmico, particularmente em aplicações de detergente. Emmodalidades particularmente preferenciais, as composições de detergenteencontram uso na remoção de manchas da superfície de tecidos, incluindoroupa. Em algumas modalidades particularmente preferenciais, a presenteinvenção proporciona combinações de enzimas para proporcionar controlede pH dinâmico do início ao fim do ciclo de lavagem.

A menos que indicado de modo diverso, a prática da presenteinvenção envolve técnicas convencionais usadas comumente nos camposda biologia molecular, microbiologia, purificação de proteína, engenharia deproteína, seqüenciamento de DNA e proteína, e DNA recombinante, osquais estão dentro do conhecimento da técnica. As técnicas referidas são deconhecimento geral daqueles versados na técnica e são descritas em nume-rosos textos e trabalhos de referência (Vide, por exemplo, Sambrook et al.,Molecular Clonina: A Laboratorv Manual. 2nd ed., Cold Spring Harbor,[1989]); e Ausubel et al.. Current Protocols in Molecular Bioloqy.f19871). To-das as patentes, requerimentos de patente, artigos e publicações mencio-nados aqui, neste requerimento de patente, tanto acima quanto abaixo, sãopor este expressamente incorporados aqui, a este requerimento de patente,por meio de referência.

Além disso, os títulos proporcionados aqui, neste requerimentode patente, não são limitações dos vários aspectos ou modalidades da in-venção os quais podem ser tidos por meio de referência à especificaçãocomo um todo. Por conseguinte, os termos definidos imediatamente abaixosão mais plenamente definidos por meio de referência à especificação comoum todo. Não obstante, de modo a facilitar o entendimento da invenção,uma série de termos são definidos abaixo.

Definições

A menos que definido de modo diverso aqui, neste requerimentode patente, todos os termos técnicos e científicos usados aqui, neste reque-rimento de patente, têm o mesmo significado conforme comumente entendi-do por alguém de conhecimento regular na técnica a qual se refere esta in-venção. Por exemplo, Singleton and Sainsbury, Dictionarv of Microbioloqyand Molecular Bioloav. 2d Ed., John Wiley and Sons, NY (1994); e Hale andMarham, The Harper Collins Dictionarv of Bioloqy, Harper Perennial, NY(1991) proporcionam aos versados na técnica alguns dicionários gerais demuitos dos termos usados na invenção. Embora quaisquer métodos e mate-riais similares ou equivalente aos descritos aqui, neste requerimento de pa-tente, encontrem uso na prática da presente invenção, os métodos e materi-ais preferenciais são descritos aqui, neste requerimento de patente. Porconseguinte, os termos definidos imediatamente abaixo são mais plenamen-te descritos por meio de referência à Especificação como um todo. Alémdisso, conforme usado aqui, neste requerimento de patente, os termos sin-gulares "um", "uma," e "o", "a" incluem a referência plural a menos que ocontexto indique claramente de modo diverso. A menos que indicado demodo diverso, ácidos nucléicos são escritos da esquerda para a direnta emorientação 5' para 3'; seqüências de aminoácidos são escritas da esquerdapara a direnta em orientação amino para carbóxi, respectivamente. Deve serentendido que esta invenção não está limitada a metodologia, protocolos, ereagentes descritos em particular, uma vez que estes podem variar, depen-denddo contexto em que são usados por aqueles versados na técnica.

Pretende-se que toda limitação numérica máxima dada do inícioao fim desta especificação inclua cada limitação numérica inferior, como sesemelhantes limitações numéricas inferiores fossem expressamente escritasaqui, neste requerimento de patente. Toda limitação numérica mínima dadado início ao fim desta especificação incluirá cada limitação numérica superi-or, como se semelhantes limitações numéricas superiores fossem expres-samente escritas aqui, neste requerimento de patente. Cada faixa numéricadada do início ao fim desta especificação incluirá toda faixa numérica maisestreita que esteja dentro de semlehante faixa numérica mais ampla, comose semelhantes faixas numéricas mais estreitas fossem todas expressamen-te escritas aqui, neste requerimento de patente.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo"pH dinâmico" refere-se a uma mudança no pH de um sistema de limpezadurante a limpeza que é devido à ação de no mínimo uma enzima sobre nomínimo um substrato presente no sistema de limpeza. Em modalidades parti-cularmente preferenciais, a condição de pH dinâmico resulta em benefícios delimpeza, tais como desempenho de lavagem aprimorado dos detergentes.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo"alvejamento" refere-se a o tratamento de um material (por exemplo, tecido,lavagem de roupa, e etc.) ou superfície por uma extensão de tempo suficien-te e sob condições apropriadas de pH e temperatura para realizar um lustro(isto é, branqueamento) e/ou limpeza do material. Exemplos de produtosquímicos adequados para alvejamento incluem mas não estão limitados aCIO2, H2O2, perácidos, NO2, e etc.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo"desinfecção" refere-se à remoção de contaminantes das superfícies, bemcomo à inibição ou destruição de micróbios sobre as suferfícies de itens. Náse pretende que a presente invenção seja limitada a qualquer suferfície, i-tem, ou contaminante(s) ou micróbios a serem removidos em particular.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo"peridrolase" refere-se a uma enzima que é capaz de catalisar uma reaçãoque resulta na formação de quantidades suficientemente elevadas de perá-cido adequado para aplicações tais como limpeza, alvejamento, e desinfec-ção. Em modalidades particularmente preferenciais, as enzimas de peridro-lase da presente invenção produzem proporções de peridrólise para hidróli-se muito elevadas. As elevadas proporções de peridrólise para hidrólise des-tas enzimas distintas tornam estas enzimas adequadas para uso em umavariedade muita ampla de aplicações. Em modalidades preferenciais adicio-nais, as peridrolases da presente invenção são caracterizadas por teremseqüência de estrutura terciária e primária distinta. Em modalidades particu-larmente preferenciais, as peridrolases da presente invenção compreendemestruturas primária e terciária distintas. Em algumas modalidades particu-larmente preferenciais, as peridrolases da presente invenção compreendemestrutura quaternária distinta. Em algumas modalidades preferenciais, a pe-ridrolase da presente invenção é a peridrolase de M. smegmatis, ao passoque em modalidades alternativas, a peridrolase é uma variante desta peri-drolase, ao passo que em modalidades ainda adicionais, a peridrolase é umhomólogo desta peridrolase. Em modalidades preferenciais adicionais, umahidrolase monomérica é preparada para produzir uma enzima multiméricaque tem melhor atividade de peridrolase do que o monômero. No entanto,não se pretende que a presente invenção seja limitada a esta de peridrolasede M. smegmatis específica, variantes específicas desta peridrolase, nemhomólogos específicos da peridrolase proporcionados na US04/40438, in-corporada aqui, a este requerimento de patente, por meio de referência emsua totalidade.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "produtospara tratamento pessoal" significa produtos usados na limpeza, alvejamentoe/ou desinfecção de cabelo, pele, couro cabeludo, e dentes, incluindo, masnão limitados a xampus, loções corporais, géis para banho, umidificadorestópicos, pasta de dentes, e/ou outros limpadores tópicos. Em algumas mo-dalidades particularmente preferenciais, estes produtos são utilizados emseres humanos, ao passo que em outras modalidades, estes produtos en-contram aplicação com animais não-humanos (por exemplo, em aplicaçõesveterinárias).

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "compo-sições de limpeza" e "formulações de limpeza" refere-sem a composiçõesque encontram uso na remoção de compostos indesejados de itens a seremlimpos, tais como tecido, pratos, lentes de contato, outros substratos sólidos,cabelo (xampus), pele (sabões e cremes), dentes (enxágües bucais, pastasde dentes) e etc. O termo engloba quaisquer materiais/compostos selecio-nados para o tipo de composição de limpeza em particular desejado e aforma do produto (por exemplo, composição líquida, em gel, grânulos, ouspray), contanto que a composição seja compatível com a peridrolase e auma ou mais outras enzimas usadas na composição. A seleção específicade materiais da composição de limpeza é feita prontamente considerando asuperfície, item ou tecido a ser limpo, e a forma desejada da composiçãopara as condições de limpeza durante o uso.

Os termos refere-sem adicionalmente a qualquer composiçãoque é conveniente para limpeza, alvejamento, desinfecção, e/ou esteriliza-ção de qualquer objeto e/ou superfície. Pretende-se que os termos incluam,mas não estejam limitados a composições de detergente (por exemplo, de-tergentes líquidos e/ou sólidos para lavar roupas e detergentes para tecidosfinos; formulações para limpeza de superfícies duras, tais como para prate-leiras e janelas de vidro, madeira, cerâmica e metal; limpadores de tapetes;limpadores de forno; revigorantes de tecido; amaciantes de tecido; e "pre-spotters" para têxteis e lavanderia, bem como detergentes para louça).

Na verdade, o termo "composição de limpeza" conforme usadoaqui, neste requerimento de patente, inclui, a menos que indicado de mododiverso, agentes de lavagem em forma granular ou de pó para todos os finsou para limpeza pesada, especialmente detergentes de limpeza; agentes delavagem para todos os fins em forma líquida, em gel ou pasta, especialmen-te os chamados tipos líquidos para limpeza pesada (HDL); detergentes lí-quidos para tecidos finos; agentes para lavar louça à mão ou agentes paralavar louça para limpeza leve, especialmente aqueles do tipo de alta espu-mação; agentes para máquina de lavar louça, incluindo os vários tipos emtablete, granulares, líquidos e de auxiliares de enxágüe para uso domésticoe institucional; agentes líquidos para limpeza e desinfecção, incluindo tiposantibacterianos para lavar as mãos, barras para limpeza, enxágües bucais,limpadores dentais, xampus para carro ou tapete, limpadores de banheiro;xampus de cabelo e condicionadores de cabelo; géis de banho e banhos deespuma e limpadores de metal; bem como auxiliares de limpeza tais comoaditivos de alvejante e "bastão contra mancha" ou tipos pré-tratamento.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, os termos"composição de detergente" e "formulação de detergente" são usados emreferência a misturas as quais são pretendidas para uso em um meio de la-vagem para a limpeza de objetos sujos. Em algumas modalidades preferen-ciais, o termo é usado em referência a lavar e passar tecidos e/ou roupas(por exemplo, "detergentes para lavanderia"). Em modalidades alternativas,o termo refere-se a outros detergentes, tais como aqueles usados para Iim-par pratos, talheres, e etc. (por exemplo, "detergentes para máquina de la-var louça"). Não se pretende que a presente invenção seja limitada a qual-quer formulação ou composição de detergente em particular. Na verdade,pretende-se que além de peridrolase, o termo englobe detergentes que con-tenham tensoativos, transferase(s), enzimas hidrolíticas, oxido redutases,builders, agentes alvejantes, ativadores de alvejante, agentes de anil e co-rantes fluorescentes, inibidores de aglutinação, agentes de mascaramento,ativadores enzimáticos, antioxidantes e solubilizantes.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "desem-penho aumentado" em um detergente é definido com limpeza aumentada demanchas sensíveis a alvejante (por exemplo, grama, chá, vinho, sangue,encardido e etc.), conforme determinado por avaliação usual depois de umciclo de lavagem padrão. Em modalidades particulares, as enzimas da pre-sente invenção proporcionam desempenho aumentado na oxidação e remo-ção de manchas e sujeiras coloridas. Em modalidades adicionais, as enzi-mas da presente invenção proporcionam desempenho aumentado na remo-ção e/ou descoloração de manchas. Em ainda modalidades adicionais, asenzimas da presente invenção proporcionam desempenho aumentado naremoção de manchas e sujeiras à base de lipídeos. Em ainda modalidadesadicionais, a presente invenção proporciono desempenho aumentado naremoção de sujeiras e manchas de pratos e outros itens.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo"composição de limpeza de superfície dura," refere-se a composições dedetergente para limpar superfícies duras tais como pisos, paredes, azulejos,artefatos de banho e cozinha, e semelhantes. As composições referidas sãoproporcionadas em qualquer forma, incluindo mas não limitadas a sólidos,líquidos, emulsões, e etc.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "composi-ção para lavar louça" refere-se a todas as formas para composições para lim-peza de louça, incluindo mas não limitadas a formas granulares e líquidas.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "compo-sição de limpeza de tecido" refere-se a todas as formas de composições dedetergente para limpeza de tecidos, inclusive mas não Iimitadsa a, formasgranulares, líquidas e em barra.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "têxtil"refere-se a tecidos trançados, bem como fibras têxteis e filamentos adequa-dos para conversão para ou uso como tecidos de fios, trançados, tricotado,e não trançados. O termo engloba fios feitos de fibras naturais, bem comosintéticas (por exemplo, manufaturadas).

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "materiaistêxteis" é um termo geral para fibras, intermediários de fio, fio, tecidos, eprodutos feitos de tecidos (por exemplo, roupas e outros artigos).

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "tecido"engloba qualquer material têxtil. Portanto, pretende-se que o termo engloberoupas, bem como tecidos, fios, fibras, materiais não trançados, materiaisnaturais, materiais sintéticos, e qualquer outro material têxtil.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo"compatível," significa que os materiais da composição de limpeza não re-duzem a atividade enzimática da peridrolase em uma tal extensão que aperidrolase não é eficaz conforme desejado durante situações de uso nor-mal. Materiais de composições de limpeza específicas são exemplificadosem detalhes nas partes que se seguem.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "quanti-dade eficaz de enzima" refere-se à quantidade de enzima necessária paraobter a atividade enzimática requerida na aplicação específica. As quantida-des eficazes referidas são prontamente determinadas por uma pessoa comconhecimento regular da técnica e se baseiam em muitos fatores, tais comoa variante enzimática em particular usada, a aplicação de limpeza, a compo-sição específica da composição de limpeza, e se é requerida uma composi-ção líquida ou seca (por exemplo, granular, barra), e semelhantes.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "composi-ções de limpeza não de tecido" engloba composições de limpeza de superfíciesduras, composições para lava-louças, e composições de limpeza para trata-mento pessoal (por exemplo, composições para limpeza oral, composições paralimpeza de dentadura, composições para limpeza pessoal, e etc.).

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "compo-sições de limpeza oral" refere-se a dentifrícios, pastas de dentes, géis den-tais, pós dentais, enxágües bucais, sprays bucais, géis bucais, gomas demascar, pastilhas, sachês, comprimidos, biogéis, pastas profiláticas, solu-ções para tratamento dental, e semelhantes. Composições para tratamentooral que encontram aplicação em combinação com as peridrolases da pre-sente invenção são de conhecimento geral na técnica (Vide, por exemplo, asPatentes dos Estados Unidos Nos. 5.601.750, 6.379.653, e 5.989.526, todasas quais são incorporadas aqui, a este requerimento de patente, por meiode referência).

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "químicooxidante" refere-se a um produto químico que tem a capacidade de clarearqualquer material. O químico oxidante está presente em uma quantidade,pH e temperatura adequados para alvejamento. O termo inclui, mas não es-tá limitado a peróxido de hidrogênio e perácidos.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "acila" é onome geral para grupos ácido orgânico, os quais são os resíduos de ácidoscarboxílicos depois de remoção do grupo -OH (por exemplo, cloreto de eta-noíla, CH3CO-CI, é o cloreto de acila formado de ácido etanóico, CH3COO-H). Os nomes dos grupos acila individuais são formados substituindo o "-ico"do ácido por "-il."

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "aci-lação" refere-se à transformação química a qual substitui o grupo acila (RCO-)em uma molécula, geralmente por um hidrogênio ativo de um grupo -OH.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo"transferase" refere-se a uma enzima que catalisa a transferência de com-postos funcionais para uma série de substratos.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "grupo departida" refere-se ao nucleófilo o qual é clivado do doador de acila na substi-tuição por outro nucleófilo.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo"conversão enzimática" refere-se à modificação de um substrato para umintermediário ou à modificação de um intermediário para um subprodutocontactando o substrato ou intermediário com uma enzima. Em algumasmodalidades, é feito contato expondo diretamente o substrato ou intermediá-rio à enzima apropriada. Em outras modalidades, o contato compreende ex-por o substrato ou intermediário a um organismo que expressa e/ou excretaa enzima e/ou metaboliza o substrato e/ou intermediário desejado para ointermediário e/ou produto final desejado, respectivamente.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, a expres-são "estabilidade do detergente" refere-se à estabilidade de uma composi-ção de detergente. Em algumas modalidades, a estabilidade é avaliada du-rante o uso do detergente, ao passo que em outras modalidades, o termorefere-se à estabilidade de uma composição de detergente durante o arma-zenamento.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, a expres-são, "estabilidade para proteólise" refere-se à capacidade de uma proteína(por exemplo, uma enzima) para suportar proteólise. Não se pretende que otermo seja limitado ao uso de qualquer protease em particular para avaliar aestabilidade de uma proteína.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "estabili-dade oxidativa" refere-se à capacidade de uma proteína para funcionar sobcondições oxidativas. Em particular, o termo refere-se à capacidade de umaproteína para funcionar na presença de várias concentrações de H2C>2 e/ouperácido. Estabilidade sob várias condições oxidativas pode ser medida oupor procedimentos de rotina de conhecimento daqueles versados na técnicae/ou pelos métodos descritos aqui, neste requerimento de patente. Umamudança substancial na estabilidade oxidativa é evidenciada por no mínimoum aumento ou redução de cerca de 5% ou mais (na maioria das modalida-des, é preferencialmente um aumento) na meia-vida da atividade enzimáti-ca, comparada com a atividade enzimática presente na ausência de com-postos oxidativos.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "estabili-dade do pH" refere-se à capacidade de uma proteína para funcionar em umpH particular. Em geral, a maioria das enzimas tem uma faixa de pH limitadana qual funciona. Além de enzimas que funcionam em faixa média de pHs(isto é, em torno de pH 7), há enzimas que têm capacidade de funcionar sobcondições com pHs muito elevados ou muito baixos. A estabilidade em vá-rios pHs pode ser medida ou por procedimentos de rotina de conhecimentodaqueles versados na técnica e/ou pelos métodos descritos aqui, neste re-querimento de patente. Uma mudança substancial na estabilidade do pH éevidenciada por aumento ou redução de no mínimo cerca de 5% ou mais(na maioria das modalidades, é preferencialmente um aumento) na meia-vida da atividade enzimática, comparada com a atividade enzimática no pHótimo da enzima. No entanto, não se pretende que a presente invenção sejalimitada a qualquer nível de estabilidade de pH nem faixa de pH.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "estabili-dade térmica" refere-se à capacidade de uma proteína para funcionar emuma temperatura particular. Em geral, a maioria das enzimas tem uma faixalimitada de temperaturas na qual funcionam. Além de enzimas que funcio-nam em faixa média de temperaturas (por exemplo, temperatura ambiente),há enzimas que têm capacidade de funcionar em temperaturas muito eleva-das ou muito baixas. A estabilidade térmica pode ser medida ou por proce-dimentos conhecidos ou pelos métodos descritos aqui, neste requerimentode patente. Uma mudança substancial na estabilidade térmica é evidenciadapor um aumento ou redução de no mínimo cerca de 5% ou mais (na maioriadas modalidades, é preferencialmente um aumento) na meia-vida da ativi-dade catalítica de um mutante quando exposto a uma diferente temperatura(isto é, maior ou menor) do que temperatura ótima para atividade enzimáti-ca. No entanto, não se pretende que a presente invenção seja limitada aqualquer nível de estabilidade de temperatura nem faixa de temperatura.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo "es-tabilidade química" refere-se à estabilidade de uma proteína (por exemplo, umaenzima) para produtos químicos que afetam de modo adverso sua atividade.

Em algumas modalidades, os produtos químicos referidos incluem, mas nãosão limitados a peróxido de hidrogênio, perácidos, detergentes aniônicos, deter-gentes catiônicos, detergentes não-iônicos, quelantes, e etc. No entanto, não sepretende que a presente invenção seja limitada a qualquer nível de estabilidadequímica particular nem faixa de estabilidade química.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, a expres-são "alteração na especificidade do substrato" refere-se a alterações na es-pecificidade do substrato de uma enzima. Em algumas modalidades, umaalteração na especificidade do substrato é definida como uma diferença en-tre a proporção de Kcat/Km observada com uma enzima comparada com va-riantes enzimáticas ou outras composições de enzimas. As especificidadesdo substrato enzimático variam, dependendo do substrato testado. A especi-ficidade do substrato de uma enzima é determinada comparando as eficiên-cias catalíticas que apresenta com diferentes substratos. Estas determina-ções encontram uso particular na avaliação da eficiência de enzimas mutan-tes, uma vez que se deseja geralmente produzir enzimas variantes que a-presentem maiores proporções para substratos particulares de interesse.

Por exemplo, as enzimas peridrolase da presente invenção são mais eficien-tes na produção de perácido a partir de um substrato de éster do que as en-zimas sendo usadas atualmente em aplicações de limpeza, alvejamento edesinfecção. Outro exemplo da presente invenção é uma peridrolase comuma menor atividade na degradação de perácido comparada com o tipo sel-vagem. Outro exemplo da presente invenção é uma peridrolase com maioratividade sobre grupos acila mais hidrofóbicos do que o ácido acético. Noentanto, não se pretende que a presente invenção seja limitada a qualquercomposição de substrato em particular nem qualquer especificidade desubstrato específica.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, a expres-são "é selecionada de modo independente entre o grupo consistindo em . .significa que porções ou elementos que são selecionados entre o gruporeferido Markush podem ser os mesmos, podem ser diferentes ou qualquermistura de elements conforme indicado no seguinte exemplo:

Em referência a composições químicas, o termo "substituído"conforme usado aqui, neste requerimento de patente, significa que a com-posição orgânica ou radical ao qual o termo se aplica é:

(a) tornada insaturada pela eliminação de no mínimo um ele-mento ou radical; ou

(b) no mínimo um hidrogênio no composto ou radicai é substituí-do com uma porção contendo um ou mais átomos de (i) carbono, (ii) oxigê-nio, (iii) enxofre, (iv) nitrogênio ou (v) halogênio; ou

(c) tanto (a) quanto (b).

Porções as quais podem substituir hidrogênio conforme descritoem (b) imediatamente acima, que contêm somente átomos de carbono ehidrogênio, são porções hidrocarboneto incluindo, mas não limitadas a, gru-pamentos alquila, alquenila, alquinila, alquildienila, cicloalquila, fenila, alquilafenila, naftila, antrila, fenantrila, fluorila, esteróide, e combinações destesuns com os outros e com grupos hidrocarboneto polivalente tais como gru-pos alquilaeno, alquilaideno e alquilaidino. Porções contendo átomos de oxi-gênio que podem substituir hidrogênio conforme descrito em (b) imediata-mente acima incluem, mas não estão limitadas a, grupos contendo hidróxi,acila ou ceto, éter, epóxi, carbóxi, e éster. Porções contendo átomos de en-xofre que podem substituir hidrogênio conforme descrito em (b) imediata-mente acima incluem, mas não estão limitadas a, os grupos ácidos e ésterde ácido contendo enxofre, grupos tioéter, grupos mercapto e grupos tioce-to. Porções contendo átomos de nitrogênio que podem substituir hidrogênioconforme descrito em (b) imediatamente acima incluem, mas não estão limi-tadas a, grupos amino, o grupo nitro, grupos azo, grupos amônio, gruposamida, grupos azido, grupos isocianato, grupos ciano e grupos nitrila. Por-ções contendo átomos de halogênio que podem substituir hidrogênio con-forme descrito em (b) imediatamente acima incluem grupos cloro, bromo,flúor, iodo e quaisquer das porções previamente descritas onde um hidrogê-nio ou um grupo alquila pendente é substituído por um grupo halo para for-mar uma porção substituída estável.

É entendido que quaisquer das porções (b)(i) a (b)(v) acima podemser substituídas umas nas outras ou em uma substituição monovalente ou porperda de hidrogênio em uma substituição polivalente para formar outra porçãomonovalente que pode repor hidrogênio no composto orgânico ou radical.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, os termos"purificado" e "isolado" refere-sem à remoção de contaminantes de umaamostra. Por exemplo, uma enzima de interesse é purificada por remoçãode proteínas contaminantes e outros compostos dentro de uma solução oupreparação que não são a enzima de interesse. Em algumas modalidades,enzimas recombinantes de interesse são expressadsa em células hospedei-ras bacterianas ou fúngicas e estas enzimas recombinantes de interessesão purificadas pela remoção de outros constituintes da célula hospedeira; apercentagem de polipeptídeos da enzima recombinante de interesse é destemodo aumentada na amostra.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "proteínade interesse," refere-se a uma proteína (por exemplo, uma enzima ou "en-zima de interesse") a qual esteja sendo analisada, identificada e/ou modifi-cada. Proteínas que ocorrem naturalmente, bem como proteínas recombi-nantes encontram uso na presente invenção.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, "proteína"refere-se a qualquer composição consistindo em aminoácidos e reconhecidacomo uma proteína por aqueles versados na técnica. Os termos "proteína,""peptídeo" e polipeptídeo são usados de modo intercambiável aqui, nesterequerimento de patente. Em que um peptídeo é uma porção de uma prote-ína, os versados na técnica entendem o uso do termo no contexto.

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, proteínasfuncionalmente e/ou estruturalmente similares são consideradas como sen-do "proteínas relacionadas." Em algumas modalidades, estas proteínas sãoderivadas de um gênero e/ou espécie diferente, incluindo diferenças entreclasses de organismos (por exemplo, uma proteína bacteriana e uma proteí-na fúngica). Em algumas modalidades, estas proteínas são derivadas de umgênero e/ou espécie diferente, incluindo diferenças entre classes de orga-nismos (por exemplo, uma enzima bacteriana e uma enzima fúngica). Emmodalidades adicionais, proteínas relacionadas são proporcionadas a partirda mesma espécie. Na verdade, não se pretende que a presente invençãoseja limitada a proteínas relacionadas de qualquer fonte ou quaisquer fontesem particular. Além disso, o termo "proteínas relacionadas" engloba homó-logos estruturais terciários e homólogos de seqüência primária (por exem-plo, as enzimas da presente invenção). Em modalidades adicionais, o termoengloba proteínas que são imunologicamente reativas cruzadas. Em algu-mas modalidades o mais particularmente preferenciais, as proteínas relacio-nadas da presente invenção apresentam proporções muito elevadas de pe-ridrólise para hidrólise.

Formulações de Limpeza e de Detergente

As composições de detergente da presente invenção são pro-porcionadas em qualquer forma adequada, inclusive, por exemplo, como umdiluente líquido, em grânulos, em emulsões, em géis e pastas. Quando umacomposição de detergente sólida é empregada, o detergente é preferenci-almente formulado como grânulos. Preferencialmente, os grânulos são for-mulados para conterem adicionalmente um agente protetor (Vide, por e-xemplo, N0 de Série do Pedido de Patente dos Estados Unidos 07/642,669arquivado em 17 de janeiro de 1991, incorporado aqui, a este requerimentode patente, por meio de referência). Igualmente, em algumas modalidades,os grânulos são formulados de modo a conterem materiais para reduzir oíndice de dissolução do grânulo no meio de lavagem (Vide, por exemplo,Patente dos Estados Unidos N°. 5.254.283, incorporada aqui, a este reque-rimento de patente, por meio de referência em sua totalidade). Além disso,as enzimas peridrolase da presente invenção encontram uso em formula-ções nas quais substrato e enzima estão presentes no mesmo grânulo. Por-tanto, em algumas modalidades, a eficácia da enzima é aumentada pelaprovisão de altas concentrações locais de enzima e substrato (Vide, por e-xemplo, Publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos N°.US2003/0191033, aqui, a este requerimento de patente, incorporada pormeio de referência).

Muitas das enzimas e variantes enzimáticas que encontram usona presente invenção são úteis na formulação de várias composições dedetergente. Uma série de compostos conhecidos são tensoativos adequa-dos úteis nestas composições. Estes incluem detergentes não-iônicos, aniô-nicos, catiônicos, aniônicos ou zwiterônicos (Vide, por exemplo, a Patentesdos Estados Unidos Nos. 4.404.128 e 4.261.868). Uma formulação de deter-gente adequada que é descrita na Patente dos Estados Unidos N°.5.204.015 (previamente incorporada por meio de referência). Os versadosna técnica estão familiarizados com as diferentes formulações as quais en-contram aplicação como composições de limpeza.

Conforme indicado aqui, neste requerimento de patente, em al-gumas modalidades preferenciais, as composições de detergente da pre-sente invenção empregam um agente ativo na superfície (isto é, tensoativo)incluindo tensoativos aniônicos, não-iônicos e anfolíticos de conhecimentogeral para seu uso em composições de detergente. Alguns tensoativos ade-quados para uso na presente invenção são descritos no Pedido de PatenteBritânica N°. 2 094 826 A, incorporado aqui, a este requerimento de patente,por meio de referência. Em algumas modalidades, misturas de tensoativossão usadas na presente invenção.

Tensoativos aniônicos adequados para uso na composição dedetergente da presente invenção incluem sulfonatos de alquil benzeno linea-res ou ramificados; sulfatos de éter de alquila ou alquenila tendo grupos al-quila ou grupos alquenila lineares ou ramificados; sulfatos de alquila ou al-quenila; sulfonatos de olefina; alcano sulfonatos e semelhantes. Contra-íonsadequados para tensoativos aniônicos incluem íons de metais de álcali taiscomo sódio e potássio; íons de metais alcalino-terrosos tais como cálcio emagnésio; íon amônio; e alcanolaminas tendo 1 a 3 grupos alcanol de nú-mero de carbono 2 ou 3.

Tensoativos anfolíticos que encontram uso na presente inven-ção incluem sulfonatos de sais de amônio quaternário, tensoativos anfolíti-cos do tipo betaína, e semelhantes. Os tensoativos anfolíticos referidos têmtantos os grupos de carga positiva quanto negativa na mesma molécula.

Tensoativos não iônicos que encontram aplicação na presenteinvenção geralmente compreendem éteres de polioxialquilaeno, bem comoalcanolamidas de ácidos graxos superiores ou aduto de oxido de alquilaenodas mesmas, monoésteres de glicerina de ácidos graxos e semelhantes.

Em algumas modalidades preferenciais, o tensoativo ou misturade tensoativos incluído nas composições de detergente da presente inven-ção é proporcionado em uma quantidade a partir de cerca de 1 por cento empeso a cerca de 95 por cento em peso da composição de detergente total epreferencialmente a partir de cerca de 5 por cento em peso a cerca de 45por cento em peso da composição de detergente total. Em várias modalida-des, numerosos outros componentes são incluídos nas composições dapresente invenção. Muitos destes são descritos abaixo. Não se pretendeque a presente invenção seja limitada a estes exemplos específicos. Naverdade, é contemplado que compostos adicionais encontrarão uso na pre-sente invenção. As descrições abaixo simplesmente ilustram alguns compo-nentes opcionais.

Proteínas, particularmente a peridrolase e/ou uma ou mais ou-tras enzimas da presente invenção são tipicamente formuladsa em deter-gentes em pó e líquido conhecidos tendo pH entre 3 e 12,0, em níveis decerca de 0,001 a cerca de 5% (preferencialmente 0,1% a 0,5%) em peso.

Em algumas modalidades, estas composições de limpeza detergentes inclu-em adicionalmente outras enzimas (por exemplo, proteases, amilases, ma-nanases, peroxidases, oxido redutases, celulases, lipases, cutinases, pecti-nases, pectina liases, xilanases e/ou endoglicosidases), bem como builderse estabilizantes. Na verdade, é contemplado que qualquer enzima com ativi-dade hidrolisante encontrará uso sozinha e/ou em combinação com outrasenzimas na presente invenção.

Além de composições de limpeza típicas, é prontamente enten-dido que variantes de peridrolase da presente invenção encontram uso emqualquer propósito que a enzima nativa ou selvagem seja usada. Portanto,semelhantes variantes podem ser usadas, por exemplo, em aplicações desabão em barra e líquido, formulações para tratamento de louça, aplicaçõespara limpeza de superfície, soluções ou produtos para limpeza de lentes decontato, tratamento de resíduos, aplicações têxteis, desinfetantes, tratamen-to da pele, tratamento oral, tratamento dos cabelos, e etc. Na verdade, nãose pretende que quaisquer variantes da peridrolase da presente invençãoseja limitada a qualquer uso em particular. Por exemplo, as peridrolases va-riantes da presente invenção podem compreender, além de reduzida aler-genicidade, aumentado desempenho em uma composição de detergente(comparadas com a peridrolase selvagem ou não modificada).

A adição de proteínas a composições de limpeza convencionaisnão cria qualquer limitações de uso especiais. Em outras palavras, qualquertemperatura e pH adequado para o detergente também são adequados paraas presentes composições, contanto que o pH esteja dentro da faixa na quala uma ou mais enzimas são ativas, e a temperatura seja abaixo da tempera-tura de desnaturação protéica descrita. Além disso, as proteínas da inven-ção encontram aplicação em composições de limpeza, alvejamento, e desin-fecção sem detergentes, novamente ou sozinhas ou em combinação comuma fonte de peróxido de hidrogênio, um substrato de éster (por exemplo,quer adicionado ou inerente no sistema utilizado, tal como com manchasque contêm ésteres, que contêm ésteres e etc), outras enzimas, tensoativos,builders, estabilizantes, e etc. Na verdade não se pretende que a presenteinvenção seja limitada a qualquer formulação ou aplicação em particular.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA PRESENTE INVENÇÃO

A presente invenção proporciona métodos e composições paracontrole de pH dinâmico, particularmente em aplicações de detergente. Emmodalidades particularmente preferenciais, as composições de detergenteencontram uso na remoção da superfície de sujeiras de tecidos, incluindoroupa. Em algumas modalidades particularmente preferenciais, a presenteinvenção proporciona combinações de enzimas para proporcionar controlede pH dinâmico. Na verdade, é contemplado que qualquer enzima com ati-vidade hidrolisante ou peridrolisante encontrará uso sozinha e/ou em combi-nação com outras enzimas na presente invenção.

É bem-conhecido lavar tecidos em máquinas de lavar automáti-cas. A operação da máquina de lavar automática padrão inclui no mínimoum ciclo de lavagem, no mínimo um ciclo de centrifugação o qual removeporções significativas da solução de lavagem do ciclo de lavagem, um ciclode enxágüe final, e um ciclo de centrifugação final.

Agentes de limpeza (por exemplo, tensoativos e builders deter-gentes são comumente adicionados ao tambor da máquina de lavar duranteo ciclo de lavagem e/ou enxágüe para ajudar na remoção de sujeiras emanchas dos tecidos. No entanto, materiais adicionais, tais como agentesde benefício de tratamento do tecido (por exemplo, amaciantes, modificado-res de textura, agentes antienrugamento, e etc.), são algumas vezes adicio-nados a uma carga de lavagem durante o ciclo de enxágüe e não o ciclo delavagem, de modo a evitar interferência de componentes presentes na solu-ção de lavagem. Alguns destes materiais (por exemplo, perfumes, agentesde lustro, agentes de benefício de tratamento de tecido, e/ou agentes deliberação de sujeira) são depositados sobre o tecido, de modo a proporcio-nar benefício máximo. Em alguns casos, é desejável maximizar a deposiçãopotencial destes materiais sobre os tecidos.

O pH da solução de lavagem aquosa durante o início do ciclo delavagem é geralmente elevado, tipicamente acima de 7, e mais comumenteno mínimo 9. Na verdade, freqüentemente está na faixa de 10,5 a 12,5, ealgumas vezes é ainda maior. No entanto, em algumas modalidades da pre-sente invenção, o pH final desejado é menor do que ou igual a 6. Devido àsdiferentes naturezas dos aditivos comumente incluídos no ciclo de lavageme/ou enxágüe e à remoção da maior parte da solução de lavagem, o pH dociclo de enxágüe geralmente é menor do que o do ciclo de lavagem, masgeralmente não é menor do que 7. Embora tenham sido usados ciclos deenxágüe com pHs abaixo de pH 7, isto não é prática comum. Processos demáquina de lavar roupa automática têm requisitos especiais em que é usualincluir uma composição de detergente complexa no ciclo de lavagem e tam-bém é comum incluir uma variedade de tipos de tecido em uma carga delavagem única.

As composições para lavar roupa precisam ser tecnicamente eeconomicamente attrativas, bem como aceitáveis para o consumidor. Emparticular, a remoção de manchas de graxa e/ou manchas alvejáveis repre-senta um desafio contínuo para os formuladores de detergentes para lavan-deria. Embora esta seja uma área que precisa de aprimoramento, os tiposde componentes nas composições para lavar roupa que melhoram de modoeficaz o desempenho tendem a ser alguns dos componentes mais caros(por exemplo, alvejante). A presente invenção proporciona composições emétodos para melhorar o desempenho de detergentes de lavanderia emuma maneira com bom custo benefício.

Além disso, a presente invenção proporciona composições emétodos adequados para a limpeza eficaz de itens encardidos. Um proble-ma que ocorre com o processamento da máquina de lavar roupa automáticaenvolve a deposição gradual de resíduos sobre os tecidos durante uma sériede lavagens. Além disso, durante o uso, há quantidade significativa de sujei-ras corporais e sujeiras ambientais depositadas sobre os tecidos que poste-riormente produzem as sujeiras residuais. Estes resíduos freqüentementelevam ao descoramento de tecidos de cor escura e/ou conferem um aspecto"encardido" aos tecidos brancos e/ou outros tecidos claros coloridos. Estadeposição de resíduos também torna mais difícil a remoção de manchas dassuperfícies dos tecidos. A presente invenção encontra uso no tratamento detecidos encardidos e na limpeza dos mesmo de modo mais eficaz do que ascomposições correntes.

Como os valores de pH ótimos de diferentes ativos em deter-gentes de lavanderia variam muito, assim como o desempenho dependentede pH na limpeza de tecido sujo, são necessárias composições que possamfuncionar de modo eficaz sob uma ampla variedade de condições de pH pa-ra limpar tecido sujo. A enzima peridrolase da presente invenção usada emalgumas modalidades da presente invenção, encontra uso na produção dealvejante de perácido e ácidos redutores de pH de substratos de éster. Emalgumas modalidades, estes substratos de éster estão presentes na sujeira,ao passo que em outras modalidades, são adicionados à composição e/oucarga de lavagem. Em modalidades particularmente preferenciais, ésteresativos da superfície adsorvem ao tecido e superfície da mancha, de modo aproporcionar o alvejamento desejado. Portanto, enzimas tais como as pro-porcionadas pela presente invenção que têm grande afinidade para as su-perfícies de mancha e/ou tecido facilitam a formação de alvejante e/ou ácidolocalizado na superfície. Fórmulas que têm moderada alcalinidade possibili-tam maior atividade e solubilidade de componentes específicos (por exem-plo, perácidos), com pKas de cerca de 8.2 e tensoativos. A clivagem de és-teres hidrolase produz ácido, o qual reduz o pH, solubilizando resíduos gra-xos e melhorando o desempenho de componentes de lavanderia com ativi-dades ótimas em pHs acídicos.

Em algumas modalidades particularmente preferenciais, peridrola-se, ésteres tensoativos, triacetina, peróxido e uma base tensoativa mínima en-contram uso na limpeza de artigos sujos. Em algumas modalidades, as sujeirascompreendem essencialmente sujeiras corporais. Em algumas modalidades, otecido sujo é titulado de tal modo que um sistema de tamponamento apropriadoé proporcionado, de modo a proporcionar um pH alcalino, ainda com capacida-de suficiente para possibilitar uma queda de pH devido a produção de ácidoenzimático. Conforme indicado aqui, neste requerimento de patente, foram con-duzidos testes de desempenho em minilavadoras sob condições de lavagemmédia da América do Norte. A fórmula de alvejamento enzimático e pH dinâmi-co proporcionada pela presente invenção teve melhor desempenho do que de-tergente líquido comercial sobre artigos contendo sujeira corporal. Em algumasmodalidades mais preferenciais, a adição da enzima é retardada por 5 minutos(isto é, hidrolase foi adicionada depois de 5 minutos de um ciclo de lavagem de12 minutos), enquanto o substrato e peridrolase foram adicionados à carga delavagem no início do ciclo de lavagem.

Em algumas modalidades, a presente invenção encontra uso naprodução enzimática de perácidos a partir de substratos de éster e peróxidode hidrogênio. Em algumas modalidades preferenciais, os substratos sãoselecionados entre um ou mais dos seguintes: ácido fórmico, ácido acético,ácido propiônico, ácido butírico, ácido valérico, ácido capróico, ácido capríli-co, ácido nonanóico, ácido decanóico, ácido dodecanóico, ácido mirístico,ácido palmítico, ácido esteárico, e ácido oléico. De modo importante, a pre-sente invenção proporciona meios para limpeza, alvejamento, e desinfecçãoeficaz por amplas faixas de pH e temperatura. Em algumas modalidades, afaixa de pH utilizada nesta produção é 4 a 12. Em modalidades alternativas,a faixa de temperatura utilizada é entre 5° e 90°C. A presente invenção pro-porciona vantagens em relação aos sistemas atualmente usados (Vide, porexemplo, o Pedido de Patente Européia 87-304933.9) em que o alvejamentoé possível no pH ótimo de oxidação por perácido, bem como proporcionandoalvejamento em pH neutro, pHs acídicos, e em baixas temperaturas. Apesarda presente invenção ser descrita aqui, neste requerimento de patente, maiscompletamente com referência a lavanderia e tratamento de tecido, não sepretende que a presente invenção seja limitada a estas aplicações. Na ver-dade, a presente invenção encontra aplicação em várias situações, particu-larmente aquelas nas quais alvejamento por perácidos e/ou peróxido de hi-drogênio é desejado sob condições de pH dinâmico, incluindo mas não limi-tada a aplicações de lavanderia, tratamento de tecido, tratamento pessoal,desinfecção e limpeza de superfícies duras.

Historicamente, perborato de sódio, e mais recentemente, per-carbonato de sódio, têm sido usados como compostos de alvejamento, par-ticularmente em detergentes para lavanderia. Este composto se decompõerapidamente em solução aquosa produzindo peróxido de hidrogênio (H2O2),o qual é a espécie de alvejamento ativo. Como perborato de sódio é maisativo em temperaturas acima de 80°C, e menos ativo na faixa de temperatu-ra de 40 a 60°C (isto é, temperaturas de lavagem que se tornaramn maiscomumente preferenciais nos anos cinqüenta), ativadores de alvejamentotêm sido incorporados em detergentes de lavanderia que contêm perboratode sódio. Na verdade, a maior parte dos detergentes de lavanderia contêmativadores de alvejamento. Estes ativadores são çompstos com grupos ace-tila ligados a O ou a N que têm a capacidade de reagir com o ânion hidrope-róxi fortemente nucleofílico produzindo ácido peroxiacético. Como a espéciereagente é ânion hidroperóxi, são essenciais pHs alcalinos para a conversãoeficaz destes ativadores em perácidos. O ácido peroxiacético é decompostoem meios fracamente básicos para formar oxigênio singlet (Vide, Hofmannet al., J. Prakt. Chem., 334:293-297 [1992]).

Peróxido de hidrogênio é um alvejante particularmente eficaz emaltas temperaturas (por exemplo, >40°C) e pH (>10), condições que são tipi-camente usadas na lavagem de tecidos em algumas situações. No entanto,conforme indicado acima, a lavagem com água fria está se tornando maiscomumente usada e resulta em alvejamento menos eficaz por H2O2 do queo uso de água quente. Para superar esta desvantagem da baixa temperatu-ra, formulações de detergente tipicamente incluem reforçadores de alvejan-te, tais como TAED (Ν,Ν,Ν'Ν'-tetraacetiletilenodiamina), NOBS (sulfonato denonanoiloxibenzeno), e etc. Estes reforçadores combinam com H2O2 paraformar uma espécie perácido que é mais eficaz do que H2O2 sozinho. Embo-ra ajuda a capacidade de alvejamento do detergente, a reação de TAED ésomente aproximadamente 50% eficaz, uma vez que somente dois dos qua-tro grupos acetila em TAED são convertidos para perácidos. Adicionalmente,a conversão de TAED em ácido peracético por peróxido de hidrogênio é efi-caz somente em pHs alcalinos e altas temperaturas. Portanto, a reação deTAED não é otimizada para uso em todas as aplicações de alvejamento (porexemplo, aquelas envolvendo pHs neutros ou acídicos, e água fria). A pre-sente invenção proporciona meios para superar as desvantagens do uso deTAED. Por exemplo, a presente invenção encontra aplicação em aplicaçõesde água fria, bem como aquelas envolvendo níveis de pHs neutros ou acídi-cos. Além disso, a presente invenção proporciona meios para produção deperácido a partir de peróxido de hidrogênio, com uma alta proporção de pe-ridrólise para hidrólise.

Além disso, as enzimas peridrolase e/ou hidrolase da presenteinvenção são ativas sobre vários substratos de doadores de acila, bem co-mo são ativas em baixas concentrações de substrato, e proporcionarm mei-os para peridrólise eficaz devido à alta proporção de perácido : ácido. Naverdade, foi reconhecido que maiores proporções de peridrólise para hidróli-se são preferenciais para aplicações de alvejamento (Vide, por exemplo, asPatentes dos Estados Unidos N°. 5.352.594, 5.108.457, 5.030.240,3.974.082, e 5.296.616, todas as quais são aqui, a este requerimento depatente, incorporada por meio de referência). Em algumas modalidades pre-ferenciais, as enzimas peridrolase da presente invenção proporcionam pro-porções de peridrólise para hidrólise que são maiores do que 1. Em algumasmodalidades particularmente preferenciais, as enzimas peridrolase propor-cionam uma proporção de peridrólise para hidrólise maior do que 1 e encon-tram aplicação em alvejamento.

Além disso, foi mostrado que são ativas em formulações de de-tergente comumente usadas (por exemplo, Ariel Futur, WOB1 etc.). Portanto,a presente invenção proporciona muitas vantagens em várias situações delimpeza.

Conforme indicado acima, componentes-chave para produçãode perácido por peridrólise enzimática são enzima, substrato de éster e pe-róxido de hidrogênio. Peróxido de hidrogênio pode ou ser adicionado dire-tamente em batelada, ou ser produzido continuamente "in situ." Pós de la-vagem atuais usam adições de H2O2 em batelada, sob a forma de sais depercarbonato ou perborato que se decompõem espontaneamente paraH2O2. As enzimas peridrolase da presente invenção encontram uso nomesmo método em batelada de pó de lavagem como a fonte de H2O2. Noentanto, estas enzimas também encontram uso com qualquer outra fonte deH2O2 adequada, incluindo as geradas por meios químicos, eletroquímicos,e/ou enzimáticos. Exemplos de fontes químicas são os percarbonatos e per-boratos mencionados acima, enquanto um exemplo de uma fonte eletroquí-mica é um gás oxigênio e hidrogênio alimentado por célula de combustível,e um exemplo enzimático inclui produção de H2O2 a partir da reação de glu-cose com glucose oxidase. A seguinte equação proporciona um exemplo deum sistema acoplado que encontra uso com a presente invenção.

Glucose oxidase

Glucose + H2O..................................................-> ácido glucônico + H2O2

+

Peridrolase

H2O2 + substrato de éster........................................álcool + perácido

Este sistema produz ácido(s) que resulta(m) em uma redução dopH do sistema. Não se pretende que a presente invenção seja limitada aqualquer enzima específica, uma vez que qualquer enzima que produz H2O2e ácido com um substrato adequado encontra uso nos métodos da presenteinvenção. Por exemplo, Iactate oxidases da espécie Lactobacillus os quaisse sabe que criam H2O2 a partir de ácido lático e oxigênio encontram usocom a presente invenção. Na verdade, uma vantagem dos métodos da pre-sente invenção é que a produção de ácido (por exemplo, ácido glucônico noexemplo acima) reduz o pH de uma solução básica para a faixa de pH naqual o perácido é mais eficaz no alvejamento (isto é, em ou abaixo da pKa).Outras enzimas (por exemplo, carboidrato oxidase, álcool oxidase, etilenoglicol oxidase, glicerol oxidase, aminoácido oxidase, e etc.) que podem pro-duzir peróxido de hidrogênio também encontram uso com substratos de és-teres em combinação com as enzimas peridrolase da presente invençãopara produzir perácidos. Enzimas que produzem ácido a partir de substratossem a produção de peróxido de hidrogênio também encontram uso na pre-sente invenção. Exemplos de semelhantes enzimas incluem, mas não estãolimitados a esterases, lipases, fosfolipases, cutinases, proteases. Em algu-mas modalidades preferenciais, os substratos de ésteres são selecionadosentre um ou mais dos seguintes ácidos: ácido fórmico, ácido acético, ácidopropiônico, ácido butírico, ácido valérico, ácido capróico, ácido caprílico, áci-do nonanóico, ácido decanóico, ácido dodecanóico, ácido mirístico, ácidopalmítico, ácido esteárico e ácido oléico. Portanto, conforme descrito aqui,neste requerimento de patente, a presente invenção proporciona vantagensdefinitivas em relação aos métodos e composições correntemente usadospara formulação e uso de detergentes, bem como várias outras aplicações.

Atividade de Peridrolase

O uso de enzimas obtidas a partir de microorganismos é feito hámuito tempo. Na verdade há numerosos biocatalisadores conhecidos natécnica. Por exemplo, a Patente dos Estados Unidos N°. 5.240.835 (incorpo-rada aqui, a este requerimento de patente, por meio de referência) propor-ciona uma descrição da atividade da transacilase obtida de C. oxydans esua produção. Além disso, a Patente dos Estados Unidos N°. 3.823.070 (in-corporada aqui, a este requerimento de patente, por meio de referência)proporciona uma descrição de um Corynebacterium que produz alguns áci-dos graxos a partir de uma n-parafina. A Patente dos Estados Unidos N°.4.594.324 (incorporada aqui, a este requerimento de patente, por meio dereferência) proporciona uma descrição de um Methylcoccus capsulatus queoxidiza alquenos. Biocatalisadores adicionais são conhecidos na técnica(Vide, por exemplo, as Patentes dos Estados Unidos Nos. 4.008.125 e4.415.657; ambas as quais são aqui, a este requerimento de patente, incor-poradas por meio de referência). A patente européia N°. 0 280 232 descreveo uso de uma enzima de C. oxydans em uma reação entre um diol e um és-ter de ácido acético para produzir monoacetato. Referêncis adicionais des-crevem o uso de uma enzima de C. oxydans para preparar ácido hidroxicar-boxílico quiral a partir de um diol proquiral. Detalhes adicionais referentes àatividade da transacilase de C. oxydans, bem como à cultura de C. oxydans,preparação e purificação da enzima são proporcionados pela Patente dosEstados Unidos N°. 5.240.835. Portanto, as capacidades de transesterifica-ção desta enzima, usando principalmente ésteres de ácido acético foramconhecidas. No entanto, a determinação de que esta enzima pode realizarreação de peridrólise foi bastante inesperada. Foi ainda mais surpreendenteque estas enzimas apresentam eficiências muito elevadas em reações deperidrólise. Por exemplo, na presença de tributirina e água, a enzima ageproduzindo ácido butírico, ao passo que na presença de tributirina, água eperóxido de hidrogênio, a enzima age produzindo essencialmente ácido per-butírico e muito pouco ácido butírico. Esta alta proporção de peridrólise parahidrólise é uma propriedade única apresentada pela classe de enzimas peri-drolase da presente invenção e é uma característica única que não é apre-sentada por lipases, cutinases, nem esterases previmente descritas.

A peridrolase da presente invenção é ativa sobre uma amplafaixa de pH e temperatura e acita uma ampla gama de substratos paratransferência de acila. Aceitadores incluem água (hidrólise), peróxido de hi-drogênio (peridrólise) e álcoois (transferência de acila clássica). Para medi-ções da peridrólise, a enzima é incubada em um tampão de escolha emuma temperatura especificada com um éster de substrato na presença deperóxido de hidrogênio. Substratos típicos usados para medir a peridróliseincluem ésteres tais como acetato de etila, triacetina, tributirina, ésteres deacetato de neodol etoxilados, e outros. Além disso, a enzima selvagem hi-drolisa ésteres nitrofenílicos de ácidos de cadeia curta. Os últimos são subs-tratos convenientes para medir a concentração enzimática. Perácido e ácidoacético podem ser medidos pelos testes descritos aqui, neste requerimentode patente. Também é descrita a hidrólise de éster nitrofenílico.

Embora o exemplo primário usado durante o desenvolvimento dapresente invenção seja a peridrolase de M. smegmatis, qualquer peridrolaseobtida a partir de qualquer fonte a qual converta o éster na maioria dos peráci-dos na presença de peróxido de hidrogênio encontra aplicação na presente in-venção. Em algumas modalidades particularmente preferenciais as peridrolasesdescritas na patente dos Estados Unidos N°. US 04/040438 (WO 05/056782), aqual é incorporada por meio de referência em sua totalidade.

Em algumas modalidades preferenciais da presente invenção,ésteres compreendendo ácidos e álcoois carboxílicos alifáticos e/ou aromá-ticos são utilizados com as enzimas peridrolase e/ou hidrolase da presenteinvenção. Em algumas modalidades preferenciais, os ésteres de substratosão selecionados entre um ou mais dos seguintes ésteres de ácidos: ácidofórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido butírico, ácido valérico, ácidocapróico, ácido caprílico, ácido nonanóico, ácido decanóico, ácido dodeca-nóico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico e ácido oléico. Emmodalidades adicionais, triacetina, tributirina, ésteres de neodol, e/ou éste-res de neodol etoxilados servem como doadores de acila para formação deperácido/ácido.

Em algumas modalidades preferenciais da presente invenção,ésteres compreendendo ácidos e álcoois carboxílicos alifáticos e/ou aromá-ticos são utilizados com as enzimas peridrolase e/ou hidrolase nas formula-ções de detergente da presente invenção. Em algumas modalidades prefe-renciais, os substratos são selecionados entre um ou mais dos seguintesésteres de ácidos: ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido butí-rico, ácido valérico, ácido capróico, ácido caprílico, ácido nonanóico, ácidodecanóico, ácido dodecanóico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteá-rico, e ácido oléico. Portanto, em algumas modalidades preferenciais, sãoproporcionados detergentes compreendendo no mínimo uma peridrolasee/ou hidrolase, no mínimo uma fonte de peróxido de hidrogênio, e no míni-mo um éster de ácido.

Atividade de Hidrolase

Além da peridrolase descrita aqui, neste requerimento de paten-te, várias hidrolases encontram uso na presente invenção, incluindo masnão limitadas a carboxilato éster hidrolase, tioéster hidrolase, fosfato mono-éster hidrolase, e fosfato diéster hidrolase as quais agem sobre ligações és-ter; uma tioéter hidrolase a qual age sobre ligações éter; e a-amino-acil-peptídeo hidrolase, peptidil-aminoácido hidrolase, acil-aminoácido hidrolase,dipeptídeo hidrolase, e peptidil-peptídeo hidrolase as quais agem sobre liga-ções de peptídeo. Semelhante(s) hidrolase(s) encontra(m) uso sozinha(s) ouem combinação com peridrolase. Preferenciais entre as mesmas são carbo-xilato éster hidrolase, e peptidil-peptídeo hidrolase. Hidrolases adequadasincluem: (1) proteases pertencentes à classe peptidil-peptídeo hidrolase (porexemplo, pepsina, pepsina B, renina, tripsina, quimotripsina A, quimotripsinaB, elastase, enteroquinase, catepsina C, papaína, quimopapapaína, ficina,trombina, fibrinolisina, renina, subtilisina, aspergilopeptidase A, colagenase,clostridiopeptidase B, calicreína, gastrisina, catepsina D, bromelina, querati-nase, quimotripsina C, pepsina C, aspergilopeptidase B, uroquinase, carbo-xipeptidase A e B, e amínopeptidase); (2) carboxilato de éster hidrolase in-cluindo carboxila esterase, lipase, pectina esterase e clorofilase; e (3) enzi-mas tendo alta proporção de peridrólise para hidrólise. Especialmente efica-zes entre as mesmas são lipases, bem como esterases que apresentamaltas proporções de peridrólise para hidrólise, bem como esterases produzi-das por proteínas, cutinases e lipases, usando as características estruturaisprimárias, secundárias, terciárias, e/ou quaternárias das peridrolases dapresente invenção.

A hidrolase é incorporada na composição de detergente tantoquanto requerido de acordo com a finalidade. Preferencialmente deve serincorporada em uma quantidade de 0,00001 a 5 por cento em peso, e maispreferencialmente de 0,02 a 3 por cento em peso. Esta enzima deve ser u-sada sob a forma de grânulos feitos de enzima bruta somente ou em combi-nação com outras enzimas e/ou componentes na composição de detergen-te. Grânulos de enzima bruta são usados em uma quantidade tal que a en-zima purificada é 0,001 a 50 por cento em peso nos grânulos. Os grânulossão usados em uma quantidade de 0,002 a 20 e preferencialmente de 0,1 a10 por cento em peso. Em algumas modalidades, os grânulos são formula-dos de modo a conter um agente de proteção enzimática e um material re-tardante da dissolução (isto é, material que regula a dissoluão de grânulosdurante o uso).

No uso, a peridrolase da presente invenção está entre cerca de0,01 ppm e 100 ppm na solução de lavagem. Em algumas modalidades pre-ferenciais, a peridrolase está presente em uma concentração de entre cercade 0,1 e 10 ppm.

Atividade de Oxidase

A composição de detergente da presente invenção compreendeuma carboidrato oxidase, isto é, uma enzima a qual catalisa a oxidação desubstratos de carboidrato tais como um monômero de carboidrato, dímero,trímero, ou oligômero e reduz o oxigênio molecular produzindo peróxido dehidrogênio.

Carboidrato oxidases adequadas incluem carboidrato oxidasesselecionadas entre o grupo consistindo em aldose oxidase (classificaçãoIUPAC EC1.1.3.9), galactose oxidase (classificação IUPAC EC1.1.3.9), ce-Iobiose oxidase (classificação IUPAC EC1.1.3.25), piranose oxidase (classi-ficação IUPAC EC1.1.3.10), sorbose oxidase (classificação IUPACEC1.1.3.11) e/ou hexose oxidase (classificação IUPAC EC1.1.3.5), glucoseoxidase (classificação IUPAC EC1.1.3.4) e misturas das mesmas. Na verda-de, é contemplado que qualquer oxidase adequada (isto é, que segue a e-quação

Enzima + substrato ácido e H2O2) encontra uso na presente invenção.

O técnico versado que tem a posse de enzimas classificou comoEC 1.1.3._, EC 1.2.3._, EC 1.4.3._, e EC 1.5.3._entenderá que classes simi-lares de enzimas, com base nas recomendações do Comitê de Nomenclatu-ra da União Internacional de Bioquímica e Biologia Molecular (IUBMB), sãoúteis na presente invenção.

Em algumas modalidades, carboidrato oxidases preferenciaisincluem aldose oxidase e/ou galactose oxidase, mais preferencialmente é aaldose oxidase devido a sua especificidade de substrato mais ampla. Aldoseoxidase é ativa sobre todos os mono-, di-, tri- e oligo- carboidratos tais comoD-arabinose, L-arabinose, D-celobiose, 2-deóxi-D-galactose, 2-deóxi-D-ribose, D-frutose, L-fucose, D-galactose, D-glucose, D-glicero-D-gulo-heptose, D-lactose, D-lixose, L-lixose, D-maltose, D-manose, melezitose, L-melibiose, palatinose, D-rafinose, L-ramnose, D-ribose, L-sorbose, estaquio-se, sacarose, D-trealose, D-xilose, e L-xilose.

Em algumas modalidades particularmente preferenciais, umacarboidrato oxidase preferencial é a aldose oxidase descrita na WO99/31990, sendo um polipeptídeo produzido por Microdochium nivale CBS100236 ou tendo a seqüência de aminoácidos na mesma descrita na SEQID NO: 2 ou um análogo da mesma. Além disso, oxidases que têm especifi-cidade de substrato significantivamente mais ampla e portanto são capazesde remover carboidratos de modo mais eficaz e um espectro mais amplo decarboidratos encontram uso na presente invenção. Por exemplo: galactoseoxidase age sobre D-galactose, lactose, melibiose, rafinose e estaquiose;celobiose oxidase age sobre celobiase, e também sobre celodextrinas, lac-tose, e D-manose; piranose oxidase age sobre D-glucose, e também sobreD-xilose, L-sorbose, e D-glucose-1. 5-lactose; sorbose oxidase age sobre L-sorbose, e também sobre D-glucose, D-galactose e D-xilose; e hexose oxi-dase age sobre D-glucose, e também D-galactose, D-manose, malton, Iac-tose, e celobiose.

Hexose oxidases adequadas incluem as descritas na WO96/39851 (Vide, por exemplo, os Exemplos 1 a 6). Piranose oxidase ade-quada inclui aqueles descritos na W097/22257 (Vide, por exemplo, página1, linha 28 a página 2, linha 19; página 4, linha 13 a página 5 linha 14; e pá-gina 10, linha 35 a página 11, linha 24).

Em algumas modalidades preferenciais, as composições de lim-peza da presente invenção compreendem cerca de 0,0001% a cerca de10%, preferencialmente a partir de cerca de 0,001% a cerca de 0,2%, maispreferencialmente a partir de cerca de 0,005% a cerca de 0,1%, de enzimacarboidrato oxidase pura em peso da composição total.

Enzimas adicionais que encontram aplicação na presente inven-ção incluem galactose oxidase (Novozymes A/S), celobiose oxidase (FermcoLaboratories, Inc.), galactose oxidase (Sigma), piranose oxidase (TakaraShuzo Co.), sorbose oxidase (ICN Pharmaceuticals, Inc.), e glucose oxidase(Genencor International, Inc.).

Em modalidades adicionais, substratos incluindo compostos taiscomo açúcar, glucose e/ou galactose são adicionados à composição, demodo a reforçar mais o desempenho de alvejamento enzimático.Componentes de Formulações de Limpeza Adicionais

Componentes adicionais encontram uso nas formulações delimpeza da presente invenção. Embora não se pretenda que as formulaçõesde limpeza da presente invenção sejam assim limitadas, vários componen-tes são descritos em maiores detalhes abaixo. Na verdade, apesar de seme-lhantes componentes não serem essenciais para os fins da presente inven-ção, a lista não Iimitante de adjuntos ilustrados nas partes que se seguem éadequada para uso nas presentes composições de limpeza e pode ser in-corporada de modo desejável em algumas modalidades da invenção, porexemplo para auxiliar ou reforçar o desempenho de limpeza, para tratamen-to do substrato a ser limpo, ou para modificar o aspecto da composição delimpeza como é o caso com perfumes, colorantes, pigmentos ou semelhan-tes. Deve ser entendido que semelhantes adjuntos estão em adição das en-zimas da presente invenção, peróxido de hidrogênio e/ou fonte de peróxidode hidrogênio e material compreendendo uma porção éster. A natureza pre-cisa destes componentes adicionais, e níveis de incorporação dos mesmos,dependerá da forma física da composição e da natureza da operação delimpeza para a qual deve ser usada. Materiais adjuntos adequados incluem,mas não estão limitados a, tensoativos, builders, agentes quelantes, agentesde inibição de transferência de corante, auxiliares de deposição, dispersan-tes, enzimasis, e estabilizantes enzimáticos, materiais catalíticos, ativadoresde alvejante, reforçadores de alvejante, perácidos preformados, agentes disper-santes poliméricos, agentes de remoção/anti-redeposição de sujeira de argila,abrilhantadores, supressores de espuma de sabão, corantes, perfumes, agen-tes de elastificação da estrutura, amaciantes de tecido, veículos, hidrótropos,auxiliares do processamento e/ou pigmentos. Além da descoberta abaixo, e-xemplos adequados dos outros adjuntos e níveis de uso referidos são encon-trados nas Patentes dos Estados Unidos Nos. 5.576.282, 6.306.812, e6.326.348, aqui, neste requerimento de patente, incorporada por meio de refe-rência. Os ingredientes adjuntos mencionados acima podem constituir o restan-te das composições de limpeza da presente invenção.

Tensoativos - Em algumas modalidades, as composições delimpeza proporcionadas pela presente invenção compreendem no mínimoum tensoativo e/ou sistema tensoativo em que o tensoativo é preferencial-mente selecionado entre tensoativos não iônicos, tensoativos aniônicos,tensoativos catiônicos, tensoativos anfolíticos, tensoativos zwiterônicos, ten-soativos não iônicos semipolares, e misturas dos mesmos.

O tensoativo tipicamente está presente em um nível de a partirde cerca de 0,1% a cerca de 60%, a partir de cerca de 1% a cerca de 50%ou ainda a partir de cerca de 5% a cerca de 40% em peso da composiçãode limpeza em questão.

Tensoativos Catiônicos e Sais de Ácidos Graxos de CadeiaLonga - Em algumas modalidades da presente invenção os tensoativos cati-ônicos referidos e sais de ácidos graxos de cadeia longa, incluindo sais deácidos graxos ou saturados, sais de ácido carboxílico de éter de alquila oualquenila, sais ou ésteres de ácidos a-sulfo graxos, tensoativos do tipo ami-noácido, tensoativos de ésteres de fosfato, sais de amônio quaternário inclu-indo aqueles tendo 3 a 4 substituintes de alquila a até 1 substituinte de al-quila substituído com fenila encontram uso. Tensoativos catiônicos adequa-dos e sais de ácidos graxos de cadeia longa incluem aqueles descritos noPedido de Patente Britânica N°. 2 094 826 A, cuja descrição é incorporadaaqui, a este requerimento de patente, por meio de referência. Em algumasmodalidades, as composições compreendem a partir de cerca de 1 a cercade 20 por cento em peso de semelhantes tensoativos catiônicos e sais deácidos graxos de cadeia longa.

Builders - Em algumas modalidades da presente invenção, ascomposições compreendem a partir de cerca de 0 a cerca de 10 por centoem peso de um ou mais componentes builders selecionados entre o grupoconsistindo em sais de metais de álcali e sais de alcanolamina dos seguin-tes compostos: fosfatos, fosfonatos, fosfonocarboxilatos, sais de aminoáci-dos, aminopoliacetatos eletrólitos de alto peso molecular, polímeros não-dissociantes, sais de ácidos dicarboxílicos, e sais de aluminossilicato. E-xemplos de agentes seqüestrantes divalentes adequados são descritos noPedido de Patente Britânica N0. 2 094 826 A, cuja descrição é incorporadaaqui, a este requerimento de patente, por meio de referência.

Em modalidades adicionais, as composições da presente inven-ção contêm a partir de cerca de 0 a cerca de 10 por cento em peso, um oumais sais de metais de álcali dos seguintes compostos como os álcalis oueletrólitos inorgânicos: silicatos, carbonatos e sulfatos bem como álcalis or-gânicos tais como trietanolamina, dietanolamina, monoetanolamina e triiso-propanolamina. Em algumas modalidades, as composições de limpeza dapresente invenção compreendem um ou mais builders detergentes e/ou sis-temas builders. Quando um builder é usado, a composição de limpeza emquestão tipicamente compreende níveis relativamente baixos (por exemplo,a partir de cerca de 0% a cerca de 10% de builder por peso da composiçãode limpeza em questão).

Em várias modalidades, builders incluem, mas não estão Iimita-dos a, os sais de metais de álcali, de amônio e alcanolamônio de polifosfa-tos, silicatos de metais de álcali, carbonatos de metais de álcali e alcalino-terrosos, compostos de policarboxilato builders de aluminossilicato, hidroxi-policarboxilatos de éter, copolímeros de anidrido maléico com etileno ou étervinil metílico, ácido 1, 3, 5-triidróxi benzeno-2, 4, 6-tri-sulfônico, e ácido car-boximetiloxissuccínico, os vários sais de metais de álcali, de amônio e deamônio substituído de ácidos poliacéticos tais como ácido tetraacético dediamina de etileno e ácido nitrilatriacético, bem como policarboxilatos taiscomo ácido melítico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido oxidissuccínico,ácido polimaléico, ácido benzeno 1,3,5-tricarboxílico, ácido carboximetiloxis-succínico, e sais solúveis dos mesmos.

Agentes Quelantes - em algumas modalidades, as composiçõesde limpeza proporcionadas pela presente invenção contêm no mínimo umagente quelante. Agentes quelantes adequados incluem agentes quelantesde cobre, de ferro e/ou manganês e misturas dos mesmos.

Em algumas modalidades preferenciais que incluem no mínimo umagente quelante, as composições de limpeza compreendem a partir de cerca de0,1% a cerca de 15%, ou a partir de cerca de 0,5% a cerca de 5%, do no míni-mo um agente quelante, em peso da composição de limpeza em questão.

Auxiliares de Deposição - Em algumas modalidades adicionais,as composições de limpeza proporcionadas pela presente invenção contêmum auxiliar de deposição. Auxiliares de deposição adequados incluem polie-tileni glicol, polipropileno glicol, policarboxilato, polímeros de liberação desujeira tais como ácido politeleftálico, argilas tais como caulinita, montmori-lonita, atapulgita, ilita, bentonita, haloisita e misturas dos mesmos.

Agentes Anti-Redeposição - Em ainda modalidades adicionaisda presente invenção, as composições contêm a partir de cerca de 0,1 acerca de 5 por cento em peso de um ou mais dos seguintes compostos co-mo agentes anti-redeposição: polietileno glicol, álcool poliviníloco, polivinilpir-rolidona e carboximetilcelulose. Em algumas modalidades preferenciais,uma combinação de carboximetil-celulose e/ou polietileno glicol são utiliza-das com a composição da presente invenção como composições úteis pararemover sujeira.

Agentes de Inibição de Transferência de Corante - Em aindamodalidades adicionais, as composições de limpeza da presente invençãoincluem um ou mais agentes de inibição de transferência de corante. Agen-tes de inibição de transferência de corante poliméricos adequados incluem,mas não estão limitados a, polímeros de polivinilpirrolidona, polímeros de N-óxido de poliamina, copolímeros de N-vinilpirrolidona e N-vinilimidazol, poli-viniloxazolidonas e polivinilimidazóis ou misturas dos mesmos.Quando presentes em uma composição de limpeza em questão,os agentes de inibição de transferência de corante tipicamente estão pre-sentes em níveis a partir de cerca de 0,0001% a cerca de 10%, a partir decerca de 0,01% a cerca de 5%, ou a partir de cerca de 0,1% a cerca de 3%em peso da composição de limpeza.

Dispersantes - Em modalidades adicionais, as composições delimpeza da presente invenção contêm dispersantes. Materiais orgânicos hi-drossolúveis adequados incluem ácidos homo- ou copoliméricos ou seussais, nos quais o ácido policarboxílico compreende no mínimo dois radicaiscarboxila separados um do outro por não mais de dois átomos de carbono.

Enzimas - Em ainda modalidades adicionais, as composições delimpeza proporcionados pela presente invenção compreendem adicional-mente uma ou mais enzimas detergentes as quais proporcionam benefíciosde desempenho de limpeza e/ou tratamento de tecido. Exemplos de enzi-mas adequadas incluem, mas não estão limitados a, hemicelulases, peroxi-dases, proteases, metaloprotease, celulases, xilanases, lipases, fosfolipa-ses, esterases, cutinases, pectinases, queratinases, redutases, oxidases,fenoloxidases, lipoxigenases, ligninases, pululanases, tanases, pentosana-ses, malanases, mananases, celulases, β-glucanases, arabinosidases, hia-luronidase, condroitinase, lacase, e amilases, ou misturas dos mesmos. Emalgumas modalidades, a combinação é um coquetel de enzimas convencio-nais aplicáveis (por exemplo, protease(s), lipase(s), cutinase(s), e/ou celula-se(s), usadas em combinação com amilase(s)).

Estabilizadores Enzimáticos - Enzimas para uso em detergentespodem ser estabilizadas por várias técnicas. Em algumas modalidades dapresente invenção, enzimas empregadas aqui, neste requerimento de paten-te, são estabilizadas pela presença de fontes hidrossolúveis de íons cálcioe/ou magnésio nas composições acabadas que proporcionam semelhantesíons para as enzimas.

Complexos de Metais Catalíticos - Em modalidades adicionais,as composições de limpeza da presente invenção incluem no mínimo umcomplexo de metais catalíticos. Em algumas modalidades, catalisador dealvejante contendo metal compreendendo um sistema catalítico compreen-dendo um cátion de metal de transição de atividade catalítica de alvejantedefinida, tal como cátions de cobre, ferro, titânio, rutênio, tungstênio, molib-dênio, ou manganês, um cátion de metal auxiliar tendo pouca ou nenhumaatividade catalítica, tal como cátions zinco ou alumínio, e um seqüestradotendo constantes de estabilidade definidas para os cátions de metal catalíti-co e auxiliar, particularmente ácido tetraacético de diamina etileno, (ácidometilenofosfôonico de) diaminatetra etileno e sais hidrossolúveis dos mes-mos encontram aplicação na presente invenção (Vide, por exemplo, a pa-tente dos Estados Unidos N°. 4.430.243, por este incorporada por meio dereferência em sua totalidade).

Em algumas modalidades, as composições aqui, neste requeri-mento de patente, são catalisadas por meio de um composto de manganês.

Os compostos referidos e níveis de uso são de conhecimento geral na técni-ca e incluem (Vide, por exemplo, os catalisadores à base de manganês des-critos na patente dos Estados Unidos N°. U.S. 5.576.282, por este incorpo-rada por meio de referência em sua totalidade).

Catalisadores de alvejante de cobalto também encontram usona presente invenção. Estas composições são conhecidas na técnica (Vide,por exemplo, a patente dos Estados Unidos N°. 5.597.936 e a patente dosEstados Unidos N°. 5.595.967). Os catalisadores de cobalto referidos sãoprontamente preparados por procedimentos conhecidos (Vide, por exemplo,a patente dos Estados Unidos N°. 5.597.936, e a patente dos Estados Uni-dos N°. 5.595.967).

Em algumas modalidades, as composições da presente inven-ção incluem no mínimo um complexo de metal de transição de um Iiganterígido macropolicíclico ("MRL"). Como uma questão prática, e não a título delimitação, as composições e processos de limpeza aqui, neste requerimentode patente, são ajustáveis, de modo a proporcionar da ordem de no mínimouma parte por cem milhões da espécie de MRL ativo no meio de lavagemaquoso, e tipicamente preferencialmente proporcionam a partir de cerca de0,005 ppm a cerca de 25 ppm, mais preferencialmente a partir de cerca de0,05 ppm a cerca de 10 ppm, e o mais preferencialmente a partir de cercade 0,1 ppm a cerca de 5 ppm, do MRL na solução de lavagem.

Em algumas modalidades, metais de transição preferenciais nocatalisador de alvejante de metais de transição presente incluem manganês,ferro e cromo. Em algumas modalidades adicionais, MRLs preferenciais u-sados aqui, neste requerimento de patente, são um tipo especial de Iiganteultra-rígido que é ligado por ponte cruzada tal como 5,12-dietil-1,5,8,12-tetraazabiciclo[6.6.2] hexadecano.

MRLs de metais de transição adequados são prontamente pre-parados por procedimentos conhecidos (Vide, por exemplo, a patente mun-dial N°. WO 00/332601, e a patente dos Estados Unidos N°. U.S. 6.225.464;ambas as quais são incorporada por meio de referência em sua totalidade).

Agentes Alveiantes - Em algumas modalidades, a presente inven-ção proporciona o uso das peridrolases da presente invenção em combinaçãocom um ou mais agentes alvejantes adicionais tais como percarbonato de só-dio, perborato de sódio, aducto de sulfato de sódio/peróxido de hidrogênio eaducto de cloreto de sódio/peróxido de hidrogênio e/ou um pigmento de alveja-mento fotossensível tal como sal de zinco ou alumínio de ftalocianina sulfonadamelhora adicionalmente os efeitos detergentes. Em modalidades adicionais, asperidrolases da presente invenção são usadas em combinação com reforçado-res de alvejante (por exemplo, TAED e/ou NOBS).

Agentes de Anil e Corantes Fluorescentes - Em algumas moda-lidades da presente invenção, agentes de anil e corantes fluorescentes sãoincorporados na composição. Exemplos de agentes de anil e corantes fluo-rescentes adequados são descritos no Pedido de Patente Britânica N0. 2094 826 A, cuja descrição é incorporada aqui, a este requerimento de paten-te, por meio de referência.

Inibidores de Aglomeração - Em algumas modalidades da pre-sente invenção nas quais a composição é pulverizada ou sólida, inibidoresde aglutinação são incorporados na composição. Exemplos de inibidores deaglutinação adequados incluem sais de ácido p-toluenossulfônico, sais deácido xilenossulfônico, sais de ácido acético, sais de ácido sulfossuccínico,talco, sílica finamente pulverizada, argila, silicato de cálcio (por exemplo,Micro-Cell [Johns Manville Co.]), carbonato de cálcio e oxido de magnésio.

Antioxidantes - Em algumas modalidades adicionais, no mínimoum antioxidante é incluído nas composições da presente invenção. Em al-gumas modalidades particularmente preferenciais, os antioxidantes incluem,por exemplo, terc-butil-hidroxitolueno, 4,4'-butilidenobis(6-terc-butil-3-metilfenol), 2,2'-butilidenobis(6-tert-butil-4-metilfenol), cresol monoestirena-do, cresol diestirenado, fenol monoestirenado, fenol diestorenado e 1,1-bis(4-hidróxi-fenila)ciclohexano.

Solubilizantes - Em algumas modalidades, as composições da pre-sente invenção também incluem solubilizantes, incluindo mas não limitados aálcoois inferiores (por exemplo, etanol, sais de benzenossulfonato, e sais debenzenossulfonato de alquila inferior tais como sais de p-toluenossulfonato),glicóis tais como propileno glicol, sais de acetilbenzeno-sulfonato, acetamidas,amidas de ácido piridinadicarboxílico, sais de benzoato e uréia.

Em algumas modalidades, as composições de detergente dapresente invenção são usadas em uma ampla faixa de pH de a partir de pHacídico até alcalino. Em algumas modalidades preferenciais, a composiçãode detergente da presente invenção é usada em meio de lavagem de deter-gente moderadamente acídico, neutro ou alcalino tendo um pH de a partirde acima de cerca de 4 a não mais de cerca de 11.

Além dos ingredientes descritos acima, perfumes, tampões, pre-servantes, corantes, e semelhantes, também encontram aplicação com apresente invenção. Estes componentes são proporcionados em concentra-ções e formas conhecidas daqueles versados na técnica.

Em algumas modalidades, as bases de detergente em pó dapresente invenção são preparadas por quaisquer métodos de preparaçãoconhecidos (por exemplo, métodos de secagem por atomização e métodosde granulação). Em algumas modalidades preferenciais, são usadas basesde detergente obtidas usando o método de secagem por atomização e/ouum ou mais métodos de granulação por secagem por atomização. A basede detergente obtida pelo método de secagem por atomização não é restritacom respeito a condições de preparação. Em algumas modalidades prefe-renciais, o método de secagem por atomização produz grânulos ocos obti-dos por atomização de uma pasta semifluida aquosa de ingredientes resis-tentes ao calor, tais como agentes tensoativos e builders, dentro de um es-paço quente. Em algumas modalidades, depois da secagem por atomiza-ção, são adicionados perfumes, enzimas, agentes alvejantes, builders alca-linos inorgânicos. Em algumas modalidades utilizando bases de detergentegranular altamente densas, obtidas por métodos tais como granulação porsecagem por atomização, várias ingredientes também são adicionados de-pois da preparação da base.

Em algumas modalidades utilizando bases de detergente líqui-das, a base é uma solução homogênea, ao passo que em outras modalida-des, é uma dispersão não-homogênea.

Em algumas modalidades, as composições de detergente dapresente invenção são incubadas com tecido (por exemplo, tecidos sujos),em usos industriais e domésticos em temperaturas, tempos de reação eproporções de solução convencionalmente empregadas nestes ambientes.As condições de incubação (isto é, as condições eficazes para tratar materi-ais com composições de detergente de acordo com a presente invenção),são prontamente determináveis por aqueles versados na técnica. Por con-seguinte, as condições eficazes apropriadas para tratamento com os pre-sentes detergentes correspondem àquelas usando composições de deter-gente similares as quais incluem peridrolase selvagem.

Conforme indicado acima, em algumas modalidades, detergen-tes proporcionados pela presente invenção são formulados como uma pré-Iavagem na solução apropriada em um pH intermediário, onde existe ativi-dade suficiente para proporcionar aprimoramentos desejados, tais comoamaciamento, "depilling", prevenção de pelotamento (pilling), remoção defibras da superfície e/ou limpeza. Quando a composição de detergente éuma composição de pré-molho (por exemplo, pré-lavagem ou pré-tratamento), ou como uma composição líquida, em spray, gel ou pasta, aenzima peridrolase é geralmente empregada a partir de cerca de 0,00001%a cerca de 5% por cento em peso, com base no peso total da composiçãode pré-molho ou pré-tratamento. Em algumas modalidades de semelhantescomposições, no mínimo um tensoativo é opcionalmente empregado. Quan-do usados, os tensoativos referidos geralmente estão presentes em umaconcentração de a partir de cerca de 0,0005 a cerca de 1 por cento em pe-so, com base no peso total do pré-molho. O restante da composição com-preende componentes convencionais usados no pré-molho (por exemplo,diluente, tampões, outras enzimas (por exemplo, proteases) etc.) em suasconcentrações convencionais.

Composições de Limpeza

As composições de limpeza da presente invenção encontramuso em várias aplicações, incluindo aplicações de lavanderia, limpeza desuperfície dura, aplicações de máquina lava-louça automática, bem comoem aplicações cosméticas tais como limpeza de dentaduras, dentes, cabelo,e/ou pele. No entanto, devido às vantagens únicas de aumentada eficáciaem soluções em menores temperaturas e ao perfil de segurança da cor su-perior, as enzimas da presente invenção são idealmente adequadas paraaplicações de lavanderia tais como o alvejamento de tecidos. Além disso, asenzimas da presente invenção encontram aplicação tanto em composiçõesgranulares quanto líquidas.

As enzimas da presente invenção também encontram aplicaçãoem produtos aditivos de limpeza. Produtos aditivos de limpeza incluindo asenzimas da presente invenção são idealmente convenientes para inclusão emprocessos de lavagem onde se deseja eficácia de alvejamento adicional. Oscasos referidos incluem, mas não estão limitados a, aplicações de limpeza desolução em baixa temperatura. Em algumas modalidades, o produto aditivo é,em sua forma mais simples, uma ou mais das enzimas da presente invenção.Em algumas modalidades, um ou mais aditivos são embalados em forma dedosagem adequada para adição a um processo de limpeza onde uma fontede peroxigênio é empregada e se deseja aumento da eficácia de alvejamento.Em algumas modalidades, a forma de dosagem única é uma pílula, ao passoque em outras modalidades, é um comprimido, gelcap, ou outra unidade dedosagem única, tal como pós ou líquidos pré-medidos. Em algumas modali-dades preferenciais, no mínimo um material de enchimento ou de veículo éincluído, de modo a aumentar o volume da composição referida. Materiais deenchimento ou de veículo adequados incluem, mas não estão limitados a, vá-rios sais de sulfato, carbonato e silicato bem como talco, argila e semelhantes.

Em algumas modalidades, materiais de enchimento ou de veículo para com-posições líquidas compreendem água ou álcoois primários e secundários debaixo peso molecular incluindo polióis e dióis. Exemplos de semelhantes álco-ois incluem, mas não estão limitados a, metanol, etanol, propanol e isopropa-nol. Em algumas modalidades, as composições compreendem a partir de cer-ca de 5% a cerca de 90% de semelhantes materiais. Em algumas modalida-des, enchimentos acídicos encontram aplicação na redução do pH. Em algu-mas modalidades alternativas, o aditivo de limpeza inclui no mínimo uma fontede peroxigênio ativada e/ou ou ingredientes adjuntos conforme descrito aqui,neste requerimento de patente.

As composições de limpeza e aditivos de limpeza da presenteinvenção requerem uma quantidade eficaz das enzimas proporcionadas pelapresente invenção. Em algumas modalidades particularmente preferenciais,o nível requerido de enzima é obtido pela adição de uma ou mais espéciesda peridrolase de M. smegmatis, variantes, homólogos e/ou outras enzimasou fragmentos enzimáticos tendo a atividade das enzimas da presente in-venção. Tipicamente, as composições de limpeza da presente invençãocompreendem no mínimo 0,0001 por cento em peso, a partir de cerca de0,0001 a cerca de 1, a partir de cerca de 0,001 a cerca de 0,5, ou ainda apartir de cerca de 0,01 a cerca de 0.1 por cento em peso de no mínimo umaenzima da presente invenção.

Em algumas modalidades, as composições de limpeza da presenteinvenção compreendem um material selecionado entre o grupo consistindo emuma fonte de peroxigênio, peróxido de hidrogênio e misturas dos mesmos, afonte de peroxigênio sendo selecionada entre o grupo consistindo em:

(i) a partir de cerca de 0,01 a cerca de 50, a partir de cerca de0,1 a cerca de 20 ou ainda a partir de cerca de 1 a 10 por cento em peso deum persal, um peroxiácido orgânico, peróxido de hidrogênio de uréia e mis-turas dos mesmos;

(ii) a partir de cerca de 0,01 a cerca de 50, a partir de cerca de0,1 a cerca de 20, ou ainda a partir de cerca de 1 a 10 por cento em peso deum carboidrato e a partir de cerca de 0,0001 a cerca de 1, a partir de cercade 0,001 a cerca de 0,5, a partir de cerca de 0,01 a cerca de 0,1 por centoem peso de carboidrato oxidase; e

(iii) e misturas dos mesmos.

Persais adequados incluem os selecionados entre o grupo con-sistindo em perborato de metais de álcali, percarbonato de metais de álcali,perfosfatos de metais de álcali, persulfatos de metais de álcali e misturasdos mesmos.

Em algumas modalidades preferenciais, o(s) carboidrato(s)é/são selecionado(s) entre o grupo consistindo em monocarboidratos, dicar-boidratos, tricarboidratos, oligocarboidratos e misturas dos mesmos. Carboi-dratos adequados incluem carboidratos selecionados entre o grupo consis-tindo em D-arabinose, L-arabinose, D-celobiose, 2-deóxi-D-galactose, 2-deóxi-D-ribose, D-frutose, L-fucose, D-galactose, D-glucose, D-glicero-D-gulo-heptose, D-lactose, D-lixose, L-lixose, D-maltose, D-manose, melezito-se, L-melibiose, palatinose, D-rafinose, L-ramnose, D-ribose, L-sorbose, es-taquiose, sacarose, D-trealose, D-xilose, L-xilose e misturas das mesmas.

Carboidrato oxidases adequadas incluem carboidrato oxidasesselecionadas entre o grupo consistindo em aldose oxidase (classificaçãoIUPAC EC1.1.3.9), galactose oxidase (classificação IUPAC EC1.1.3.9), ce-lobiose oxidase (classificação IUPAC EC1.1.3.25), piranose oxidase (classi-ficação IUPAC EC1.1.3.10), sorbose oxidase (classificação IUPACEC1.1.3.11) e/ou hexose oxidase (classificação IUPAC EC1.1.3.5), Glucoseoxidase (classificação IUPAC EC1.1.3.4) e misturas das mesmas.

Em algumas modalidades preferenciais, as composições de Iim-peza da presente invenção também incluem a partir de cerca de 0,01 a cer-ca de 99,9, a partir de cerca de 0,01 a cerca de 50, a partir de cerca de 0,1 a20, ou ainda a partir de cerca de 1 a cerca de 15 por cento em peso de umamolécula compreendendo uma porção éster. Moléculas adequadas compre-endendo uma porção éster podem ter a fórmula:

<formula>formula see original document page 49</formula>

em que R1 é uma porção selecionada entre o grupo consistindo em H ou emum alquila, heteroalquila, alquenila, alquinila, arila, alquilarila, alquileteroarila,e heteroarila substituídas ou não substituídas; em um aspecto da presenteinvenção, R1 pode compreender de 1 a 50.000 átomos de carbono, de 1 a10.000 átomos de carbono, ou ainda de 2 a 100 átomos de carbono;

cada R2 é uma porção alcoxilato, em um aspecto da presenteinvenção, cada R2 é de modo independente uma porção etoxilato, propoxila-to ou butoxilato;

R3 é uma porção formadora de éster, com algumas modalidadestendo a fórmula:

R4CO- em que R4 é H, alquila, alquenila, alquinila, arila, alquilarila,alquileteroarila, e heteroarila substituída ou não substituídas, em um aspecto dapresente invenção, R4 é porção substituída ou não substituída alquila, alquenila,alquinila, compreendendo de 1 a 22 átomos de carbono, uma porção arila, al-quilarila, alquileteroarila, ou heteroarila compreendendo de 4 a 22 átomos decarbono ou R4 é porção substituída ou não substituída C1-C22 alquila ou R4 éuma porção substituída ou não substituída C1-C12 alquila;

χ é 1 quando R1 é H; quando R1 não é Η, χ é um inteiro que éigual a ou menor do que o número de carbonos em R1

ρ é um inteiro que é igual a ou menor do que χm é um inteiro de 0 a 50, um inteiro de 0 a 18, ou um inteiro de 0a 12, e

η é no mínimo 1.

Em um aspecto da presente invenção, a molécula compreen-dendo uma porção éster é um etoxilato de alquila ou propoxilato tendo afórmula R1Ox[(R2)m(R3)n]P em que:

R1 é uma porção C2-C32 substituída ou não substituída alquila ouheteroalquila;

cada R2 é de modo independente uma porção etoxilato ou pro-poxilato;

R3 é uma porção formadora de éster tendo a fórmula:R4CO- em que R4 é H, alquila, alquenila, alquinila, arila, alquilari-la, alquileteroarila, e heteroarila substituídas ou não substituídas, em umaspecto da presente invenção, R4 é uma porção substituída ou não substitu-ída alquila, alquenila, ou alquinila compreendendo de 1 a 22 átomos de car-bono, uma porção substituída ou não substituída arila, alquilarila, alquilete-roarila, ou heteroarila compreendendo de 4 a 22 átomos de carbono ou R4 éuma porção substituída ou não substituída CrC22 alquila ou R4 é uma por-ção substituída ou não substituída C1-C12 alquila;

χ é um inteiro que é igual a ou menor do que o número de car-bonos em R1

ρ é um inteiro que é igual a ou menor do que χ

m é um inteiro de 1 a 12, e

η é no mínimo 1.

Em um aspecto da presente invenção, a molécula compreen-dendo a porção éster tem a fórmula:

R1Ox[(R2)m(R3)n]p

em que R1 é H ou uma porção que compreende uma porção amina primária,secundária, terciária ou quaternária, a porção R1 que compreende uma por-ção amina sendo selecionada do grupo consistindo em alquila, heteroalquila,alquenila, alquinila, arila, alquilarila, alquileteroarila, e heteroarila substituí-das ou não substituídas em um aspecto da invenção da Requerente R1compreende de 1 a 50.000 átomos de carbono, de 1 a 10.000 átomos decarbono ou ainda de 2 a 100 átomos de carbono;

cada R2 é uma porção alcoxilato, em um aspecto da presenteinvenção cada R2 é de modo independente uma porção etoxilato, propoxila-to ou butoxilato;

R3 é uma porção formadora de áster tendo a fórmula:

R4CO- em que R4 pode ser H, alquila, alquenila, alquinila, arila,alquilarila, alquileteroarila, e heteroarila, em um aspecto da presente inven-ção, R4 pode ser uma porção substituída ou não substituída alquila, alqueni-la, ou alquinila compreendendo de 1 a 22 átomos de carbono, uma porçãosubstituída ou não substituída arila, alquilarila, alquileteroarila, ou heteroarilacompreendendo de 4 a 22 átomos de carbono ou R4 pode ser uma porçãosubstituída ou não substituída C1-C22 alquila ou R4 pode ser uma porçãosubstituída ou não substituída C1-C12 alquila;

χ é 1 quando R1 é H; quando R1 não é Η, χ é um inteiro que éigual a ou menor do que o número de carbonos em R1

ρ é um inteiro que é igual a ou menor do que χm é um inteiro de 0 a 12 ou ainda 1 a 12, eη é no mínimo 1.

Em algumas modalidades de quaisquer dos aspectos mencio-nados acima da presente invenção, a molécula compreendendo uma porçãoéster tem um peso molecular médio em peso de menos de cerca de 600.000Dáltons, menos de cerca de 300.000 Dáltons, menos de cerca de 100.000Dáltons ou ainda menos de cerca de 60.000 Dáltons.

Moléculas adequadas que compreendem uma porção éster in-cluem policarboidratos que compreendem uma porção éster.

As composições de limpeza proporcionadas aqui, neste reque-rimento de patente, são tipicamente formuladas de tal modo que, durante ouso em operações de limpeza aquosa, a água da lavagem tem um pH de apartir de cerca de 5,0 a cerca de 11,5, ou ainda a partir de cerca de 7,5 acerca de 10,5. Formulações de produto líquido são tipicamente formuladaspara terem um pH de cerca de 3,0 e cerca de 9,0. Produtos granulares paralavar roupa são tipicamente formulados para terem um pH de cerca de 9 acerca de 11. Técnicas para controlar pH em níveis de uso recomendado in-cluem o uso de tampões, álcalis, ácidos etc., e são de conhecimento geraldaqueles versados na técnica.

Em algumas modalidades, quando a(s) enzima(s) da presenteinvenção é/são empregada(s) em uma composição granular ou líquida, é de-sejável para(s) enzima(s) estar sob a forma de uma partícula encapsuladapara proteger a enzima referida contra outros componentes da composiçãogranular ou líquida durante o armazenamento. Além disso, a encapsulaçãoproporciona um meio para controlar a disponibilidade da(s) enzima(s) duranteo processo de limpeza. Em algumas modalidades, a encapsulação reforça odesempenho da(s) enzima(s). A este respeito, a(s) enzima(s) é encapsula-da(s) com qualquer material encapsulante adequado conhecido na técnica.

O material encapsulante tipicamente encapsula no mínimo parteda(s) enzima(s). Tipicamente, o material encapsulante é hidrossolúvel e/ouhidrodispersivel. Em algumas modalidades, o material encapsulante temuma temperatura de transição de vidro (Tg) de O0C ou superior (Vide, porexemplo, WO 97/11151, especialmente à página 6, linha 25, à página 7, Ii-nha 2, para mais detalhes sobre temperaturas de transição de vidro).

Em algumas modalidades, o material encapsulante é selecionadoentre o grupo consistindo em carboidratos, gomas naturais, gomas sintéticas,quitina, quitosana, celulose, derivados celulósicos, silicatos, fosfatos, boratos,álcool polivinílico, polietileno glicol, ceras de parafina, e combinações dosmesmos. Quando o material encapsulante é um carboidrato, é selecionadotipicamente entre o grupo consistindo em monossacarídeos, oligossacarídeos,polissacarídeos, e combinações dos mesmos. Em algumas modalidades pre-ferenciais, o material encapsulante é um amido (Vide, por exemplo, a patenteeuropéia 0 922 499, a patente dos Estados Unidos N°. 4.977.252, a patentedos Estados Unidos N°. 5.354.559, e a patente dos Estados Unidos N°.5.935.826, para descrições de alguns amidos adequados).

Em algumas modalidades alternativas, o material encapsulanteé uma microsfera feita de um ou mais materiais plásticos, incluindo mas nãolimitados a termoplásticos, acrilonitrilas, metacrilonitrila, poliacrilonitrila, poli-metacrilonitrila e misturas dos mesmos. Microsferas comercialmente dispo-níveis adequadas incluem EXPANCEL® (Expancel, Stockviksverken, Swe-den), PM 6545, PM 6550, PM 7220, PM 7228, EXTENDOSPHERES®,LUXSIL®, Q-CEL® e SPHERICEL® (PQ Corp., Valley Forge, PA).

Processos de Fabricação e Uso das Composições de Limpeza da PresenteInvenção

As composições de limpeza da presente invenção são formula-das em qualquer forma adequada e preparadas por qualquer processo esco-Ihido pelo formulador (Vide, por exemplo, As Patentes dos Estados UnidosNos. 5.879.584; 5.691.297; 5.574.005; 5.569.645; 5.565.422; 5.516.448;5.489.392; e 5.486.303; todas as quais são incorporadas aqui, neste reque-rimento de patente, por meio de referência, para exemplos não limitantes).

Método de Uso

As composições de limpeza descritas aqui, neste requerimentode patente, encontram uso em limpeza de tecidos e/ou superfícies. Tipica-mente no mínimo uma porção do local a ser limpo é contactada com umamodalidade da presente composição de limpeza, em forma pura ou diluídana solução de lavagem, e em seguida o local é opcionalmente lavado e/ouenxaguado. Para fins da presente invenção, lavagem inclui, mas não estálimitada a, esfregação e agitação mecânica. O tecido compreende qualquertecido adequado capaz de ser lavado em condições de uso pelo consumidornormal. As composições de limpeza da presente invenção são tipicamenteempregadas em concentrações de a partir de cerca de 500 ppm a cerca de15.000 ppm em solução. Quanto o solvente da lavagem é água, a tempera-tura da água tipicamente varia de cerca de 59C a cerca de 909C. Em moda-lidades nas quais tecido é limpo, a proporção em massa de água para tecidoé tipicamente de cerca de 1:1 a cerca de 30:1.

EXPERIMENTAL

Os exemplos seguintes são proporcionados de modo a demons-trar e ilustrar adicionalmente algumas modalidades preferenciais e aspectosda presente invenção e não devem ser considerados como limitantes doâmbito da mesma.

Na descrição experimental que se segue, se aplicam as seguin-tes abreviações: 0C (graus Centígrados); rpm (rotações por minuto); H2O(água); HCI (ácido clorídrico); aa (aminoácido); bp (par de bases); kb (par dequilobases); kD (quilodáltons); g (gramas); pg e ug (microgramas); mg (mili-gramas); ng (nanogramas); μΙ e ul (microlitros); ml (mililitros); mm (milíme-tros); nm (nanômetros); μπι e um (micrômetro); M (molar); mM (milimolar);μΜ e uM (micromolar); U (unidades); V (volts); MW (peso molecular); s (se-gundos); min(s) (minuto/minutos); h(s) (hora/horas); MgCI2 (cloreto de mag-nésio); NaCI (cloreto de sódio); OD28O (densidade ótica a 280 nm); OD6oo(densidade ótica a 600 nm); PAGE (eletroforese de gel de poliacrilamida);GC (cromatografia gasosa); EtOH (etanol); PBS (salina tamponada com fos-fato [150 mM de NaCI, IOmMde tampão de fosfato de sódio, pH 7,2]); SDS(dodecil sulfato de sódio); Tris (tris(hidroximetil)aminometano); TAED(Ν,Ν,Ν'Ν'-tetraacetiletilenodiamina); p/v (peso para volume); v/v (volume pa-ra volume); Per (peridrolase); per (gene de peridrolase); Ms (M. smegmatis);MS (espectroscopia de massa); BRAIN (BRAIN Biotechnology Research andInformation Network, AG, Zwingenberg, Alemanha); TIGR (The Institute forGenomic Research, Rockville, MD); AATCC (American Association of Textileand Coloring Chemists); WFK (wfk Testgewebe GmbH, Bruggen-Bracht, A-lemanha); Amersham (Amersham Life Science, Inc. Arlington Heights, IL);ICN (ICN Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, CA); Pierce (Pierce Biotechno-logy, Rockford, IL); Amicon (Amicon, Inc., Beverly, MA); ATCC (AmericanType Culture Collection, Manassas, VA); Amersham (Amersham Bioscien-ces, Inc., Piscataway, NJ); Becton Dickinson (Becton Dickinson Labware,Lincoln Park, NJ); BioRad (BioRad, Richmond, CA); Clontech (CLONTECHLaboratories, Palo Alto, CA); Difco (Difco Laboratories, Detroit, Ml); GIBCOBRL or Gibeo BRL (Life Technologies, Inc., Gaithersburg, MD); Novagen(Novagen, Inc., Madison, Wl); Qiagen (Qiagen, Inc., Valencia, CA); Invitro-gen (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA); Genaissance (Genaissance Pharma-ceuticals, Inc., New Haven, CT); DNA 2.0 (DNA 2.0, Menlo Park, CA); MIDI(MIDI Labs, Newark, DE) InvivoGen (InvivoGen, San Diego, CA); Sigma(Sigma Chemical Co., St. Louis, MO); Sorvall (Sorvall Instruments, uma sub-sidiária da DuPont Co., Biotechnology Systems, Wilmington, DE); Stratage-ne (Stratagene Cloning Systems, La Jolla, CA); Roche (Hoffmann La Roche,Inc., Nutley, NJ); Agilent (Agilent Technologies, Palo Alto, CA); Minolta (Ko-nica Minolta, Ramsey, NJ); Zeiss (Carl Zeiss, Inc., Thornwood, NY); Genen-cor (Genencor International, Inc., Palo Alto, CA); Expancel (Expancel, Stock-viksverken, Suécia); PQ Corp. (PQ Corp., Valley Forge, PA); BASF (BASFAktiengesellschaft, Florham Park, NJ); Monsanto (Monsanto, Co., St. Louis,MO); Novozymes (Novozymes A/S, Bagsvaerd, Dinamarca); WintershallAA

Policarboxilato

ΒΒ1ΒΒ2ΡΒ1ΡΒ4

Percarbonato

TAED

NOBS

DTPA

HEDP

(Winterschall AG., Kassel1 Alemanha); Gist-Brocades (Gist-Brocades, NV1

Ma Delfit, Países Baixos); Enichem (EniChem Américas, Inc., Houston, TX);

Huntsman (Huntsman Corp., Salt Lake City, UT); Fluka (Fluka Chemie AG,

Buchs, Switzerland); e Dow Corning (Dow Corning, Corp., Midland, Ml).

Abreviações adicionais aplicáveis a formulações de detergente

são proprcionadas na seguinte Tabela:LAS : Sulfonato de benzeno de C-) -j .13 alquila linear de sódio

TAS : Sulfato de alquila de sebo de sódio

CxyAS : Sulfato de C-|X - C-|y alquila de sódio

CxyEz Álcool primário C-|X - C-jy predominantemente linear conden-

sado com uma média de ζ moles de óxido de etilenoCxyAEzS : Sulfato de C-|X - C-|y alquila de sódio condensado com uma

média de ζ moles de óxido de etileno (nomes de moléculasadicionadas estão nos Exemplos).Não iônico : Álcool graxo etoxilado/propoxilado misto (por exemplo, Plura-

fac LF404) particularmente álcoois com um grau médio deetoxilação de 3,8 e um grau médio de propoxilação de 4,5QAS R2^(CH3)2(C2H4OH)ComR2 = C12-C14

Silicato Silicato de sódio amorfo (proporção de Si02:Na20 = 1.6-3.2:1)

Metassilicato : Metassilicato de sódio (proporção de Si02:Na20 = 1.0)

Zeólito A Aluminossilicato hidratado de fórmula Nai2(A102Si02)i2.27H20

SKS-6 Silicato em camadas cristalino de fórmula ô-Na2Si2C>5

Sulfato Sulfato de sódio anídrico

STPP Tripolifosfato de sódio

MA/AA Copolímero aleatório de acrilato/maleato a 4:1, peso molecular

médio de cerca de 70.000 a 80.000

Polímero de poliacrilato de sódio de peso molecular médio4.500

Copolímero compreendendo mistura de monômeros carboxi-Iados tais como acrilato, maleato e metilacrilato com um pesomolecular variando entre 2.000 a 80.000 (por exemplo, Soko-lan® um copolímero de ácido acrílico, de peso molecular 4.500;BASF)

Sulfonato de 3-(3,4-diidroisoquinolínio)propano1-(3,4-diidroisoquinolínio)-decano-2-sulfatoMonoidrato de perborato de sódio

Tetraidrato de perborato de sódio de fórmula nominal Na-B03.4H20

Percarbonato de sódio de fórmula nominal 2Na2C03.3H202Diamina de tetraacetil etileno

Sulfonato de nonanoiloxibenzeno sob a forma do sal de sódioÁcido de pentaacético de triamina de dietilenoÁcido difosfônico de 1,1-hidroxietanoDETPMP : Dietiltriamina penta (metileno) fosfonato (por exemplo, De-quest 2060®; Monsanto)

EDDS : ácido etilenodiamina-N,N'-dissuccínico, isômero (S1S) sob aforma de seu sal de sódio

Diamina : Dimetil aminopropil amina; 1,6-hexano diamina; 1,3-propanodiamina; 2-metil-1,5-pentano diamina; 1,3-pentanodiamina; 1-metil-diaminopropano

DETBCHD : 5, 12- dietil-1,5,8,12-tetraazabiciclo [6,6,2] hexadecano, diclo-reto, sal de Mn(II)

PAAC : Sal de de cobalto(lll) de acetato de pentaamina

Parafina : Óleo de parafina (por exemplo, Winog 70™; Wintershall)

Sulfonato de Parafina : Um óleo de parafina ou cera no qual alguns dos átomos dehidrogênio foram substituídos por grupos sulfonato

Aldose oxidase : Enzima oxidase (por exemplo, aldose oxidase; Novozymes)

Galactose oxidase : Galactose oxidase (por exemplo, da Sigma)

Protease : Enzimas proteolíticas (por exemplo, SAVINASE, ALCALASE®,EVERLASE®; Novozymes; e "Protease A" descrita em US RE34.606 nas figuras 1A, 1B, e 7, e na coluna 11, linhas 11-37;"Protease B" descrita na patente dos Estados Unidos N°. US5.955.340 e na patente dos Estados Unidos N°. US 5.700.676nas figuras 1A, 1B e 5, bem como na Tabela 1; e "Protease C"descrita na patente dos Estados Unidos N°. US 6.312.936 e napatente dos Estados Unidos N°. US 6.482.628 nas Figuras 1-3[SEQ ID 3], e na coluna 25, linha 12, "Protease D" sendo avariante 101 G/103A/1041/159D/232V/236H/245R/248D/252K(numeração BPN') descrita na WO 99/20723, e ASP descritana US04/039006; Genencor)

Amilase : Enzimas amilolíticas (por exemplo, PURAFECT® Ox Am; des-crita na WO 94/18314, e na WO 96/05295 para Genencor; eNATALASE®, TERMAMYL®, FUNGAMYL® e DURAMYL®;Novozymes)

Lipase : Enzimas lipolíticas (por exemplo, LIPOLASE®, LIPOLASE®Ultra; Novozymes; e Lipomax®; Gist-Brocades)

Celulase : Enzimas celulíticas (por exemplo, CAREZYME®, CELLUZY-ME®, ENDOLASE®; Novozymes)

Pectina Liase : PECTAWAY® e PECTAWASH® (Novozymes).

PVP : Polivinilpirrolidona com um peso molecular médio de 60.000

PVNO : Polivinilpiridina-N-Óxido, com um peso molecular médio de50.000

PVPVI : Copolímero de vinilimidazol e vinilpirrolidona, com um pesomolecular médio de 20.000

Abrilhantador 1 : 4,4'-bis(2-sulfoestiril)bifenil dissódio

Antiespuma de silicone : Controlador de espuma de polidimetilsiloxano com copolímerode siloxano-oxiaiquilaeno como agente dispersante com umaproporção do controlador de espuma para o agente dispersan-te de 10:1 a 100:1

Supressor de es- : 12% de Silicone/sílica, 18% de álcool estearílico,70% de ami-puma de sabão do em forma granular

SRP 1 : Polésteres de extremidade anionicamente capeada

PEGX : Polietileno glicol, de um peso molecular de "X"

PVP K60 ® : Homopolímero de vinilpirrolidona (peso molecular médio160.000)Jeffamine (E) ED- :2001

Isachem (E) AS :

MME PEG (2000)

DC3225C

TEPAEBTABetaínaAçúcarCFAATPKFA

Argila :

MCAEMpH da FórmulaPeridrolase

ZPB

Em alguns dos seguintes experimentos, um espectrofotômetrofoi usado para medir a absorvência dos produtos formados depois do com-pletamento das reações. Um reflectômetro foi usado para medir a reflectân-cia das amostras. A menos que indicado de modo diverso, as concentraçõesde proteína foram estimadas por Coomassie Plus (Pierce)1 usando BSA co-mo o padrão.EXEMPLO 1Análise Enzimática

Neste Exemplo, são descritos métodos para avaliar a pureza e aatividade enzimática usados nos Exemplos subseqüentes e do início ao fimda presente Especificação.Teste da Análise Enzimática (Teste de pNB)

Esta atividade foi medida por hidrólise de p-nitrofenilabutirato. Amistura da reação foi preparada adicionando 10 ul de p-nitrofenilabutirato a100 mM em dimetil sulfóxido para 990 ml de tampão de Tris-HCI a 100 mM,pH 8,0 contendo 0,1% de triton X-100. A taxa de hidrólise de fundo foi medidaantes da adição de enzima a 410 nm. A reação foi iniciada pela adição de 10

Polietileno glicol capeado (por exemplo, da Huntsman)

Um sulfato de alquila de álcool ramificado (por exemplo, daEnichem )

Polietileno glicol de éter monometílico (peso molecular 2000)(por exemplo, da Fluka).

Supressor de espuma de sabão de silicone, mistura de óleo de

silicone e sílica (por exemplo, da Dow Corning).

Etoxilato de tetreaetilenopentaamina

Benzotriazol

(CH3)3N+CH2COO'

D-glucose de grau industrial ou açúcar de grau alimentarC12-C14 alquila N-metil glucamida

C12-C14 ácidos graxos de corte total capeados "C12-C14 toppedwhole cut fatty cards")

Um silicato de alumínio hidratado em uma fórmula geral

AI2O3SiO2 XH2O (por exemplo, caulinita, montmorilonita, ata-

pulgita, ilita, bentonita, haloisita).

Esteres na fórmula de R1Ox [(R2)m (R3)rJp

Medido como uma solução a 1% em água destilada a 20°C

Enzima descrita na Patente dos Estados Unidos N°.

04/040438 incluindo selvagem (WT) e variantes (por exemplo,

S54V).

Hexametilenodiamina E24 dimetil quat, tetrassulfatosul de enzima para 990 ml da reação e a alteração da absorvência a 410 nm foimedida em temperatura ambiente (~23°C). Os resultados corrigidos pelo fun-do são reportados como ÔA410/min/ml ou ÔAWmin/mg de proteína.

Os pesos dos componentes enzimáticos proporcionados aqui,neste requerimento de patente, se baseiam na proteína ativa total. Todas aspercentagens e proporções foram calculadas por peso a menos que indica-do de modo diverso. Todas as percentagens e proporções foram calculadascom base na composição total a menos que indicado de modo diverso.

EXEMPLO 2

Efeito do pH sobre Desempenho de Limpeza de Ácido PeracéticoNeste Exemplo, são descritos experimentos conduzidos para de-terminar o efeito do pH sobre o desempenho de limpeza do ácido peracético.A. Método para Testar o desempenho do Detergente em Pequena EscalaManchas:

As manchas para experimentação foram obtidas de fornecedo-res comerciais (isto é, Testfabrics). As manchas de teste alvo foram camise-tas encardidas de consumidor, fronhas encardidas de consumidor, manchasde chá preparadas (Testfabrics, Tea for Low Temp on Cotton, STC CFT BC-3), e manchas de vinho preparadas (Testfabrics, Cotton Soiled with Wine,STC CFT CS-3). Artigos encardidos de consumidor foram usados como las-tro para completar uma carga de lavagem de 35,95 g/l (0,6 libras por 2 ga-lões). Itens de consumidor foram coletados e preparados a partir de roupasuja doada por habitantes regionais. Áreas de coloração confluente foramidentificadas e cortadas em amostras de aproximadamente 1.016 cm por1.016 cm (4 polegadas por 4 polegadas) das manchas de teste de consumi-dor encardidas alvo. Estas amostras foram em seguida cortadas na metadee etiquetadas para uso comparando dois tratamentos de lavagem.Protocolo de Lavagem de Roupa em Pequena Escala:Preparação:

30 Tipicamente, experimentos de lavagem em pequena escala

compararam cinco tratamentos diferentes de três replicatas de tratamento,com duas replicatads de cada mancha-alvo por tratamento. Portanto, duasde cada mancha preparada foram usadas em cada tratamento. Manchas deteste de consumidor foram preparadas de modo que cada tratamento conti-nha metade de uma amostra pareada para cada um dos outros tratamentos.Portanto, um teste de cinco tratamentos continha 10 pares de manchas deteste de consumidor, onde cada tratamento continha 4 metades de mancha,para proporcionar comparações pareadas. Esta disposição pareada demanchas de teste de consumidor foi feita em duplicata para todos os trata-mentos. As manchas foram combinadas e pesadas para cada tratamento, elastro encardido de consumidor foi adicionado para uma carga de lavagemfinal de 272,16 g (0,6 libras). As composições de tratamento foram pesadasou divididas em alíquotas dependendo da forma do componente. Uma solu-ção a 3:1 de cálcio para magnésio, 10.000 grãos por galão (gpg) de durezada água foi preparada dissolvendo 188,57 g de diidrato de cloreto de cálcioe 86,92 g de hexaidrato de cloreto de magnésio em água purificada até 1 L.

Procedimento de Lavagem:

1. Cinco cubas de lavadora de carga superior em pequena escala foram en-chidas com 7,57 litros (2 galões) de água deionizada a 15,5°C (60°F).

2. A dureza da água foi testada e ajustada para 6 gpg adicionando soluçãode dureza da água.

3. Os componentes do tratamento foram adicionados a suas cubas respecti-vas e foi iniciada agitação a 75 rpm.

4. O pH foi medido e ajustado com NaOH ou HCI a 1 N conforme desejado.

5. A agitação foi interrompida, manchas e lastro foram adicionados, e emseguida a agitação foi imediatamente reiniciada.

6. Manchas e artigos foram lavados por 12 minutos. O pH foi monitorado doinício ao fim da lavagem.

7. Drenar e centrifugar em uma velocidade média da máquina de lavar por 2minutos.

8. Encher as cubas de novo com 7,57 litros (2 galões) de água deionizada a-15,5°C (60°F) e ajustar a dureza da água.

9. Agitar por 2 minutos.

10. Drenare centrifugar de novo em uma velocidade média da máquina delavar por 2 minutos.

11. Remover manchas e lastro dos potes.

12. Combinar todas as manchas e secar em secadora em calor médio emum ciclo de prensa permanente por 45 minutos.

13. Lastro seco em secadora em calor elevado por 45 minutos e dispor.

14. Manchas de ferro com calor médio e arranjar para classificação.Classificação de Manchas:

Os sistemas de classificação PSU foram usados para compararprodutos, conforme descrito em maiores detalhes abaixo. As fórmulas foramtestadas no desempenho (por exemplo, mancha residual pós-lavagem).Nestes experimentos, vários tecidos foram lavados com as fómulas a seremcomparadas. As manchas foram graduadas visualmente pelos três gradua-dores separados, os quais atribuíram unidades de escore do painel (PSU)usando a escala de Sheffe de 0 a 4:

0. Sem preferência

1. Eu acho que este produto é um pouco melhor (incerto)

2. Eu sei que este produto é um pouco melhor

3. Este produto é melhor

4. Este produto é muito melhor

Manchas preparadas (por exemplo, chá e vinho), foram classifi-cadas por escolonamento round-robin, onde as manchas da replicata domesmo ciclo para todos os tratamentos foram comparadas umas com asoutras. Manchas de teste de consumidor (por exemplo, camisetas e fronhasencardidas), foram classificadas pareadas, onde foram comparadas as a-mostras manchadas que foram divididas ao meio para dois tratamentos dife-rentes. Uma média de tratamento para cada tipo de mancha para cada tra-tamento foi em seguida calculada compilando as comparações de todas asamostras para todos os tratamentos.

B. Efeito do pH sobre o desempenho de Limpeza do Perácido

O método para testar o desempenho do detergente em uma pe-quena escala foi usado para testar o efeito do pH sobre limpeza por ácidoperacético de camisetas e fronhas encardidas de consumidor, e manchas dechá preparadas. Foram conduzidas duas séries de experimentos de oito tra-tamentos de três replicatas para comparar a faixa de pH de 5 a 10 com esem ácido peracético. Foram usados tampões de baixa potência iônica, etampões que quelam íons metálicos foram evitados.

Composição (em lavagem de 7.57 litros (2 galões)):

300 ppm de C12-C13E6.5 acetato 2,25 ml de C12.Ci3E6.5 acetato+/- 0,5 mM de ácido peracético 1 ml de ácido peracético a 3,78 M (+

4M de matéria-prima de ácido acético)1 ml de ácido acético a 7,5 M (para ne-nhum ácido peracético)

5 mM de tampão 38 ml de 1 M (acetato pH 5-6, bicarbonatopH 7.5-8.5, Borato pH 9.25-10.5)

6 gpg de dureza da água até 4,5 ml de 10.000 gpg de Ca:Mg a 3:1(matéria-prima de dureza da água)

NaOH para ajustar o pH 7,75 ml de NaOH a 1N (para ajustar a adi-ção de perácido)

Desempenho:

A figura 1 mostra o efeito de ácido peracético sobre a limpezade sujeitas encardidas de consumidor e manchas de chá preparadas. Con-forme mostrado nesta figura, a limpeza total de todas as sujeiras geralmenteaumentou à medida que o pH diminuiu, tanto com quanto sem ácido peracé-tico. Observou-se que o maior benefício adicionado de ácido peracético so-bre a limpeza ocorreu em pHs 8 e 9, onde a diferença na limpeza entre ascondições com e sem ácido peracético foi maior. Este pH corresponde aopKa do ácido peracético de 8.2. O benefício de limpeza de baixo pH e o óti-mo alvejamento do ácido peracético de pH 8-9 indicam que uma composi-ção de detergente que cobre uma ampla faixa de pH proporciono desempe-nho de limpeza aprimorada.

EXEMPLO 3

Determinação de Parâmetros para Gerar um pH Dinâmico na LavagemNeste Exemplo, são descritos experimentos conduzidos paradeterminra os parâmetros envolvidos nas condições de lavagem de pH di-nâmico. Produzir um pH dinâmico na lavagem requer um entendimento demateriais tituláveis na lavagem. Enquanto os componentes podem ser de-signados para proporcionar um pH dinâmico, roupas suja e água de metró-pole mediana têm capacidades de tamponamento inerentes que são muitodifíceis de controlar. Não obstante, os experimentos foram conduzidos parafazer estas determinações.

A. Titulação de Lastro Encardido para pH Dinâmico

As cubas de carga superior em pequena escala de 7,57 litros (2galões) foram enchidas com 7,57 litros (2 galões) de água deionizada e adureza da água foi ajustada para 6 gpg usando a solução de dureza da á-gua do Exemplo 2, A. Os componentes foram adicionados para concentra-ções de lavagem de 10O ppm de LAS, 20 ppm de citrato, e 200 ppm de tria-cetina. Quantidades variáveis de PB1, e 1 ppm de peridrolase foram adicio-nados em vários tempos de modo a obter diferentes perfis de pH na Iava-gem. A agitação foi iniciada em 75 rpm e 272,16 g (0,6 libras) de artigos en-cardidos de consumidor foram em seguida adicionados. A agitação continu-ou por 20 minutos e o pH foi monitorado do início ao fim.

A figura 2 mostra os vários perfis de pH associados com adiçãode várias quantidades de perborato, várias peridrolases, e em diferentestempos. O perfil de pH desejado foi obtido com 75 ppm de PB1 e 1 ppm deuma peridrolase de elevada eficácia (S54V) com uma adição retardada em 5minutos de uma peridrolase de baixa eficácia com elevada atividade de hi-drólise (WT). O perfil de pH caiu ligeiramente de 9 para 8 nos primeiros 6minutos, enquanto a primeira enzima estava produzindo ácido peracético.

Depois de 6 minutos, o pH caiu drasticamente com a adição da enzima comelevada atividade de hidrólise.

B. Parâmetros de Substrato e Enzima Gerando um pH DinâmicoBenefício de Desempenho

O método determinado no Exemplo 2, parte A para testar o de-sempenho do detergente em pequena escala foi usado para testar parâme-tros do substrato e da enzima gerando um pH dinâmico sobre o desempe-nho de limpeza. A limpeza foi avaliada sobre camisetas e fronhas encardi-das de consumidor, e manchas de chá e vinho preparadas. Foi conduzidoum experimento de cinco tratamentos, de três replicatas, no qual adições deuma peridrolase de elevada eficácia (S54V) e uma peridrolase de elevadaatividade de hidrólise de baixa eficácia (WT) foram adicionadas em váriosmomentos do início ao fim do ciclo de lavagem. Os tratamentos foram com-parados com e normalizados contra fórmula líquida para limpeza pesada(HDL) TIDE® comercial.

Composição (em lavagem de 7,57 litros (2 galões)):

470 ul de 16100 ppm de peridrolase vari-ante S54V (16.1 mg/ml)690 ul de 11000 ppm de peridrolase WT(11 mg/ml)

1 ppm de peridrolase variante S54V1 ppm de peridrolase WT

300 ppm de Ci2-Ci5 E7 acetato

200 ppm de triacetina

2,25 mM de peróxido de hidrogênio

75 ppm de PB1

20 ppm de citrato

100 ppm de LAS

80 ppm de ZPB6 gpg de dureza

2271 mg de Ci2-Ci5-E7 acetato1514 mg de triacetina (~1,3 ml)1,94 ml de H202a30%568 mg de PB1 (0,75 mM ~pH 10)

I,01 ml ácido cítrico a 15% (0,1 mM~pH2)

3,98 ml de LAS a 19% pH 8,5 (NaOH

neutralizado)

606 mg de ZPB

até 4,5 ml de 10.000 gpg de Ca:Mg a 3:1(matéria-prima de dureza da água)

II,66 g de TIDE® HDL

Referência: 1540 ppm de TIDE® HDLDesempenho:

A figura 3 mostra os perfis de pH gerados pelas várioas condi-ções. A adição da peridrolase com elevada atividade de hidrólise (WT) foirequerida para gerar suficiente ácido para reduzir o pH abaixo de 6. Retar-dar a adição da peridrolase de elevada eficiência (S54V) somente retardoumarginalmente a queda de pH, mas teve um grande impacto sobre o de-sempenho de limpeza. Foi visto que deixando a peridrolase de elevada efi-ciência reagir com os substratos por 5 minutos, gerando ácido peracético emótimas condições de atividade, em seguida descendo o pH com uma enzimade elevada atividade de hidrólise produziu o perfil de pH desejado e melhordesempenho de limpeza sobre manchas encardidas e de vinho.

C. Otimização dos Parâmetros Enzimáticos para Ótimo desempenho

Os parâmetros de enzima e substrato foram otimizados usandoum edsquema experimental estatístico. O método determinado no Exemplo2, parte A para testar o desempenho do detergente em pequena escala foiusado para testar parâmetros do substrato e enzima sobre o desempenhode limpeza. A limpeza foi avaliada sobre camisetas e fronhas encardidas deconsumidor, e manchas de chá e vinho preparadas. Foram conduzidas qua-tro séries de experimentos de cinco tratamentos, de três replicatas compa-rando várias quantidades de uma peridrolase de elevada eficácia (S54V)com várias quantidades e atrasos na adição de triacetina. Os tratamentosforam comparados com e normalizados contra fórmula de HDL TIDE® co-mercial.

<table>table see original document page 64</column></row><table>

Composição (em lavagem de 7.57 libras (2 galões)):

0,1-1 ppm de peridrolase S54V 0,1, 0,33, 0,55, 0,78, 1 ml de 7570 ppmde peridrolase S54V

100-300 ppm de triacetina 757, 1136, 1514, 1893, 2271 mg de tria-cetina

300 ppm de Ci2-C13 E9 acetato 2271 mg de C12-C13-E9 acetato

2 mM de peróxido de hidrogênio 1,72 ml de H202 a 30%

100 ppm de PB1 757 mg de PB1 (~pH 10)

20 ppm de citrato 152 mg de ácido cítrico

100ppmdeLAS 3,98 ml de LAS a 19% pH 8,5 (NaOHneutralizado)

80 ppm de ZPB 606 mg de ZPB

6 gpg de dureza até 4,5 ml of 10.000 gpg de Ca:Mg a 3:1(matéria-prima de dureza da água)

Referência: 1540 ppm de TlDE® HDL 11,66 g de TIDE® HDLDesempenho:

Foi determinada a dependência da limpeza de sujeitas encardi-das, manchas de chá, e vinho das concentrações de enzima e triacetina. Foivisto que o uso de adições com atraso de três minutos de triacetina à com-posição durante o ciclo de lavagem não tem impacto significativo sobre alimpeza de quaisquer das manchas. A limpeza de camisetas encardidas,manchas de chá, e de vinho foi muito dependente da concentração enzimá-tica, indicando que um mínimo de 1 ppm da peridrolase altamente eficaz énecessário para converter a maioria do substratos em ácido peracético paraalvejamento e ácido para retuzir o pH. A independência da limpeza de man-chas de camisetas e chá das concentrações de triacetina indica que triaceti-na acima de 100 ppm não é usado no sistema de lavagem corrente, comsomente 1 ppm de enzima.

A dependência observada na limpeza de manchas de vinho po-de ser interpretada como um efeito cinético, no qual a enzima está gerandoácido peracético ou acético mais rápido em maiores concentrações de tria-cetina e a mancha de vinho é mais sensível mais cedo no ciclo de lavagem.EXEMPLO 3

30 Determinação de Substrato e Seu Efeito sobre o desempenho de LimpezaNeste Exemplo, são descritos experimentos conduzidos paa de-terminar o substrato ótimo. Os substratos de peridrolase na fórmula de de-tergente de pH dinâmico foram usados para gerar perácido e ácido para al-vejamento e reduzir o pH durante o curso do ciclo de lavagem.

Triacetina é um substrato hidrossolúvel, com uma elevada pro-porção de ácido molar para peso para gerar grandes quantidades de ácidoperacético e acético da solução em volume. Em outras modalidades, ésteresde tensoativo encontram uso proporcionando limpeza reforçada, uma vezque combinam propriedades tensoativas com um éster que pode ser conver-tido para ácido peracético por peridrolase durante a limpeza. Quatro ésterestensoativos foram testados para seu efeito sobre a limpeza de sujeiras de camisetas e fronhas encardidas bem como manchas de chá e vinho prepa-radas. Os quatro ésteres tensoativos consistiram de variáveis extensões decadeia alquila com variáveis extensões de cadeia oxido de etileno e um és-ter de acetato fixado ao álcool primário terminal do último etoxilato.

O C12-C13 E9 acetato é composto de uma cadeia alquila comuma distribuição de centragem de cerca de 12 a 13 carbonos, uma distribui-ção de etoxilação de centragem de cerca de 9 unidades etileno glicol, e umacetato terminal. O C12-C15 E7 acetato é composto de uma cadeia alquila de12 a 15 carbonos com 7 unidades oxido de etileno e um acetato. O C9-CnE2.5 acetato é composto de uma cadeia alquila de 9 a 11 carbonos com 2 a3 unidades oxido de etileno e um acetato. O C9-Cn E6 acetato é compostode uma cadeia alquila de 9 a 11 carbonos com 6 unidades oxido de etileno eum acetato.

O método descrito no Exemplo 2, parte A, para testar o desem-penho de detergentes em pequena escala foi usado para testar estes subs- tratos no desempenho de limpeza usando um esquema experimental decinco tratamentos, de três replicatas. Os tratamentos foram comparados enormalizados contra fórmula líquida para limpeza pesada TIDE® comercial.Composição (em lavagem de 7,57 litros (2 galões)):

1 ppm de peridrolase S54V 1 ml de 7570 ppm de peridrolase S54V300ppm de vários ésteres tensoativos 2271 mg de C12-C13-E9, C12-C15- E7, C9-

C11-E2.5, C9-C11.E6.5 acetatos200 ppm de triacetina 1514 mg de triacetina (-1,3ml)2,25 mM de peróxido de hidrogênio 1,94 ml de H202 a 30%

75 ppm de PB1 568 mg de PB1 (0,75 mM ~pH 10)

20 ppm de citrato 152 mg de ácido cítrico (0,1 mM ~pH2)

100 ppmdeLAS 3,98 ml de LAS a 19% pH 8,5 (NaOHneutralizado)

80 ppm de ZPB 606 mg ZPB

6 gpg de dureza até 4,5 ml de 10.000 gpg de Ca:Mg a 3:1(matéria-prima de dureza da água)

Referência: 1540 ppm de TIDE® HDL 11,66 g de TIDE® HDL

Desempenho:

A figura 4 mostra os perfis de pH gerados pelos vários substra-tos. Quaisquer diferenças na peridrólise ou hidrólise dos substratos pela en-zima, ou nas proporções de ácido molar para não afetam de modo significa-tivo os perfis de pH. O C12-C15-E7 acetato, no entanto, proporcionou limpezaligeiramente reforçada de camisetas e fronhas encardidas de consumidor.Os substratos menores, C9-Cn-E2.5 e C9-Cn-E6 acetatos, proporcionaramligeiramente reforçada sobre as sujeiras hidrofílicas de chá e vinho, prova-velmente devido a suas maiores proporções de perácido molar para peso.

De qualquer maneira, todos os substratos em combinação com enzima tive-ram bom desempenho na limpeza de manchas de chá e de vinho.

EXEMPLO 4

Comparação de Composição de Detergente de pH Dinâmico com MarcasComerciais

Neste Exemplo, são descritos experimentos conduzidos paracomparar composições de detergente de pH dinâmico. O método determina-do no Exemplo 2, parte A, para testar o desempenho do detergente em umapequena escala foi usado para comparar o desempenho de limpeza decomposições de detergente de pH dinâmico com marcas TIDE® comerciais.A limpeza foi avaliada sobre camisetas e fronhas encardidas de consumidor,e manchas de chá e vinho preparadas. Conduzido um experimento de cincotratamentos, de três replicatas comparando Liquid TIDE® comercial comAlvejante Alternativo, TIDE® comercial com grânulos de Alvejante, umacomposição de pH dinâmico contendo o C12-C15-E7 acetato, uma composi-ção de pH dinâmico contendo C9-Cn-E2.5 acetato, e fórmula de TIDE® HDLcomercial como a referência. Uma protease foi adicionada à composição dedetergente de pH dinâmico para equalizar qualquer vantagem de marcascomerciais sobre sujeiras contendo proteína tais como artigos encardidos deconsumidor. A peridrolase de baixa eficiência, de atividade de elevada hidró-Iise (WT) foi adicionada no ciclo de lavagem do tratamento de pH dinâmicodepois de um atraso de 5 minutos para reproduzir o perfil de pH ótimo usan-do os componentes correntes. Nestes experimentos, também foi usada umaprotease serina ASP.

Composição (em lavagem de 7.57 litros (2 galões)):

1 ppm de ASP Variante R18

1 ppm de Peridrolase S54V

1 ppm de Peridrolase WT depois de 5 min de atraso

300 ppm de vários substratos de ésteres

200 ppm de triacetina

2,25 mM de peróxido de hidrogênio

75 ppm de PB1

20 ppm de citrato

100ppm de LAS

80 ppm de ZPB

6 gpg de dureza

298 ul de 25400 ppm de ASPR18

470 ul de 16100 ppm de Peridro-lase S54V

690 ul de 11000 ppm de Peridro-lase WT a 5 minutos no ciclo delavagem

2271 mg de C9-C1 rE2.5, C12-

C15-E7 acetatos

1514 mg de triacetina (-1,3 ml)

1,94 ml de H202a30%

568 mg PB1 (0,75 mM ~pH 10)

1,01 ml de ácido cítrico a 15%

(0.1 mM ~pH2)

3,98 ml de LAS a 19% pH 8,5(NaOH neutralizado)606 mg de ZPB

até 4,5 ml de 10.000 gpg deCa:Mg a 3:1

(matéria-prima de dureza naágua)Referências: 1540 ppm de TIDE® HDL 11,66 g de TIDE® HDL

1540 ppm de TIDE® Líquido com Alvejante 11,66 g de LTBA

Alternativo (LTBA)

970 ppm de TIDE® Granular com Alvejante 7,34 g de TIDE® com Alvejante

Desempenho:

A figura 5 mostra os perfis de pH gerados pelas várias condi-ções. A composição de pH dinâmico, indendente do substrato, gerou umperfil de pH linear de pH 9 a 5,5 através do ciclo de lavagem. O perfil de pHdas formulações TIDE® comerciais caiu ligeiramente depois da adição dasmanchas de teste e lastro sujo, devido a sua inerente capacidade de tampo-namento, mas o pH permaneceu constante através de todo o ciclo de lava-gem. As formulações TIDE® líquidas mantiveram um pH de lavagem de 7,5,ao passo que o TIDE® granular com alvejante manteve um pH de lavagemde 10,25. As composições de detergente de pH dinâmico tiveram desempe-nho significativamente melhor do que as formulações líquidas TIDE® co-merciais na limpeza de camisetas e fronhas encardidas de consumidor emanchas de chá e vinho preparadas. A melhor composição de pH dinâmicocom o substrato de C12-C15-E7 acetato teve desempenho equivalente a TI-DE® granular com Alvejante tanto sobre artigos encardidos de consumidorquanto sobre manchas de chá e vinho.

EXEMPLO 5

Composições de Detergente

No Exemplo seguinte, são exemplificadas várias composiçõesde detergente. Nestas formulações, os níveis enzimáticos são expressadospor enzima pura por peso da composição total e a menos que especificadode modo diverso, os ingredientes detergentes são expressados por pesodas composições totais.

São preparadas as seguintes composições de detergente líquidopara lavar roupa da presente invenção.

_

<table>table see original document page 64</column></row><table><table>table see original document page 70</column></row><table> O pH das composições (1) a (V) é cerca de 9 a cerca de 10 e éajustado para semelhante pH adicionando hidróxido de sódio.

Além disso, são preparadas as seguintes composições de de-tergente líquido para lavar louça manualmente da presente invenção.

<table>table see original document page 70</column></row><table><table>table see original document page 71</column></row><table>

O pH das Composições (I) a (VI) é cerca de 8 a cerca de 9 e éajustado para semelhante pH adicionando hidróxido de sódio.

Também são preparadas as seguintes composições de deter-gente líquido para máquina lava-louças automática da presente invenção.

<table>table see original document page 71</column></row><table> O pH das Composições (I) a (V) é cerca de 9 a cerca de 10 e éajustado para semelhante pH adicionando hidróxido de sódio.Também são preparadas as seguintes composições para lavarroupa da presente invenção. Estas composições estão sob a forma de grâ-nulos ou tabletes em algumas modalidades preferenciais.

<table>table see original document page 72</column></row><table>

• Perfume/corante, abrilhantador/SRP1/Na carboximetilcelulose/ fotoal-vejante/MgSCVPVPVI/ supressor de espuma de sabão/PEG de alto pesomolecular/Argila.• ** MCAEM é selecionado entre o grupo consistindo em C 9-C11E2.5Acetato, [C12h25N(ch3)(ch2ch2OAc) 2]+ Cl", (Ch3)2Nch2Ch2OCh2Ch2OAc,ou misturas dos mesmos..

Também são preparadas as seguintes formulações de detergen-te líquido para lavar roupa da presente invenção.

<table>table see original document page 73</column></row><table>

O pH das Composições (I) a (V) é cerca de 9 a cerca de 10 e éajustado para o pH referido por adição de hidróxido de sódio.

São preparadas as seguintes composições de detergente paramáquina lava-louças compacta de alta densidade da presente invenção:

<table>table see original document page 74</column></row><table>

Restante até 100% de umidade/sulfato de sódio, e/ou secundários*

*Abrilhantador/corante/SRP1/Na carboximetilcelulo-se/fotoalvejante/MgSCVPVPVI/ supressor de espuma de sabão/PEG de altopeso molecular/argila.

O pH das composições (I) a (VI) é de cerca de 9,0 a cerca de 10,0.

As seguintes composições de detergente em tablete da presenteinvenção são preparadas por compressão de uma composição de detergen-te para máquina lava-louças granular em uma pressão de 13 KN/cm2 usan-do uma prensa rotatória de 12 cabeças de rotina.<table>table see original document page 75</column></row><table>

*Abrilhantador/corante/SRP1/Na carboximetilcelulose/fotoalvejante/MgSCVPVPVI/ supressor de espuma de sabão/PEG de alto peso molecular/argila.

O pH das composições (I) a T(VIIl) é de cerca de 9 a cerca de 10.

O peso do tablete das Composições 7(l) a Tr(VIII) é de cerca de20 gramas a cerca de 30 gramas.

São preparadas as seguintes composições de limpeza de deter-gente líquido para superfícies duras da presente invenção.

<table>table see original document page 76</column></row><table>

Restante até 100% de perfume/corante, e/ou água

O pH das Composições (I) a (VII) é de cerca de 8,5 a cerca de9,5 e é ajustado para semelhante pH adicionando hidróxido de sódio.

Todas as patentes e publicações mencionadas na especificaçãosão indicativas dos níveis dos versados na técnica à qual refere-se a inven-ção. Todas as patentes e publicações são aqui, a este requerimento de pa-tente, incorporadas por meio de referência na mesma extensão como secada publicação individual fosse especificamente e individualmente indicadapara ser incorporada por meio de referência.

Tendo descrito as modalidades preferenciais da presente invenção,será evidente para aqueles com versados da técnica que várias modificaçõespodem ser feitas nas modalidades reveladas, e que semelhantes modificaçõessão pretendidas como estando dentro do âmbito da presente invenção.

Os versados na técnica reconhecrão prontamente que a presen-te invenção é bem-adaptada para realizar os objetos e obter os fins e vanta-gens mencionados, bem como os inerentes na mesma. As composições emétodos descritos aqui, neste requerimento de patente, são representativosde modalidades preferenciais, são típicos, e não são pretendidos como Iimi-tações do âmbito da invenção. É prontamente evidente para uma pessoaversada na técnica que substituções e modificações variáveis podem serfeitas na invenção descrita aqui, neste requerimento de patente, sem se a-fastar do âmbito e do espírito da invenção.

A invenção descrita ilustrativamente aqui, neste requerimento depatente, pode ser praticada convenientemente na ausência de qualquer ele-mento ou elementos, limitação ou limitações os quais não sejam especificamen-te descritos aqui, neste requerimento de patente. Os termos e expressões osquais foram empregados são usados como termos de descrição e não de limi-tação, e não há intenção de que, no uso de semelhantes termos e expressões,se exclua quaisquer equivalentes das características mostradas e descritas ouporções das mesmas, mas é reconhecido que são possíveis várias modifica-ções dentro do âmbito da invenção reivindicada. Portanto, deve ser entendidoque embora a presente invenção tenha sido especificamente descrita por mo-dalidades preferenciais e características opcionais, modificação e variação dosconceitos descritos aqui, neste requerimento de patente, podem ser utilizadaspor aqueles versados na técnica, e que semelhantes modificações e variaçõessão consideradas como estando dentro do âmbito desta invenção conformedefinido pelas reivindicações anexas.

A invenção foi descrita amplamente e genericamente aqui, nesterequerimento de patente. Cada uma das espécies mais restritas e grupossubgenéricos que estejam dentro da descoberta genérica também formamparte da invenção. Isto inclui a descrição genérica da invenção com umacondição ou limitação negativa removendo qualquer assunto do gênero, in-dependente de se ou não o material excisado é especificamente menciona-do aqui, neste requerimento de patente.

Claims (21)

1. Composição compreendendo uma quantidade suficiente deno mínimo uma enzima e no mínimo um substrato para a referida enzima,suficiente para baixar o pH de uma solução de lavagem para no mínimo cer-ca de pH 7 ou menos.

2. Composição de acordo com a reivindicação 1, em que a refe-rida queda de pH é para cerca de pH 6 ou menos.

3. Composição de acordo com a reivindicação 1, em que a refe-rida enzima é selecionada entre hidrolases e oxidases.

4. Composição de acordo com a reivindicação 3, em que a refe-rida hidrolase é selecionada entre peridrolase, carboxilato éster hidrolase,tioéster hidrolase, fosfato monoéster hidrolase, fosfato diéster hidrolase, tio-éter hidrolase, α-amino-acil-peptídeo hidrolase, peptidil-aminoácido hidrola-se, acil-aminoácido hidrolase, dipeptídeo hidrolase, peptidil-peptídeo hidro-lase, pepsina, pepsina B, renina, tripsina, quimotripsina A, quimotripsina B,elastase, enterokinase, catepsina C, papaína, quimopapaína, ficina, trombi-na, fibrinolisina, renina, subtilisina, aspergilopeptidase A, colagenase, clos-tridiopeptidase B, calicreína, gastrisina, catepsina D, bromelina, queratinase,quimotripsina C, pepsina C, aspergilopeptidase B, uroquinase, carboxipepti-dase AeB, aminopeptidase, lipase, pectina esterase, e clorofilase.

5. Composição de acordo com a reivindicação 3, em que a refe-rida hidrolase compreende uma peridrolase.

6. Composição de acordo com a reivindicação 3, em que a refe-rida oxidase é selecionada entre aldose oxidase, galactose oxidase, celobio-se oxidase, piranose oxidase, sorbose oxidase, hexose oxidase, e glucoseoxidase.

7. Composição de acordo com a reivindicação 1, em que o refe-rido substrato compreende uma porção éster.

8. Composição de acordo com a reivindicação 7, em que o refe-rido substrato compreendendo a referida porção éster é selecionado entreacetato de etila, triacetina, tributirina, ésteres de neodol, ésteres de acetatode neodol etoxilados, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácidobutírico, ácido valérico, ácido capróico, ácido caprílico, ácido nonanóico, áci-do decanóico, ácido dodecanóico, ácido mirístico.. ácido palmítico, ácido es-teárico, e ácido oléico.

9. Composição de acordo com a reivindicação 7, em que o refe-rido substrato compreendendo a referida porção éster tem a fórmulaR1Ox[(R2)m(R3)n]p,em que R1 é H ou uma porção que compreende uma porção amina primária,secundária, terciária ou quaternária, a referida porção R1 que compreendeuma porção amina sendo selecionada entre alquila, heteroalquila, alquenila,alquinila, arila, alquilarila, alquileteroarila, e heteroarila; substituídas ou nãosubstituídas ou R1 compreende de 1 a 50.000 átomos de carbono, de 1 a-10.000 átomos de carbono, ou ainda de 2 a 100 átomos de carbono;cada R2 é uma porção alcoxilato, em um aspecto da presenteinvenção cada R2 é de modo independente uma porção etoxilato, propoxila-to ou butoxilato;R3 é uma porção formadora de éster tendo a fórmula: R4CO- emque R4 pode ser H, alquila, alquenila, alquinila, arila, alquilarila, alquileteroa-rila, e heteroarila substituídas ou não substituídas, em um aspecto da pre-sente invenção, R4 pode ser uma porção alquila, alquenila, ou alquinilasubstituída ou não substituída compreendendo de 1 a 22 átomos de carbo-no, uma porção arila, alquilarila, alquileteroarila, ou heteroarila substituída ounão substituída compreendendo de 4 a 22 átomos de carbono ou R4 podeser uma porção C1-C22 alquila substituída ou não substituída ou R4 pode seruma porção C1-C12 alquila substituída ou não substituída; χ é 1 quando R1 éH; quando R1 não é Η, χ é um inteiro que é igual a ou menor do que o núme-ro de carbonos em R1 , ρ é um inteiro que é igual a ou menor do que x, m éum inteiro de 0 a 12 ou ainda 1 a 12, e η é no mínimo 1.

10. Composição de acordo com a reivindicação 8, em que a re-ferida composição compreende com base no peso da composição total, apartir de cerca de 0,01 até cerca de 99,9 do referido substrato compreen-dendo uma porção éster.

11. Composição de acordo com a reivindicação 10, em que areferida composição compreende com base no peso da composição total, apartir de cerca de 0,1 até cerca de 50 do referido substrato compreendendouma porção éster.

12. Composição de acordo com a reivindicação 1, compreen-dendo adicionalmente uma fonte de peróxido de hidrogênio e/ou peróxido dehidrogênio.

13. Composição de acordo com a reivindicação 1, compreen-dendo adicionalmente no mínimo um ingrediente adjunto.

14. Composição de acordo com a reivindicação 13, em que areferida no mínimo um ingrediente adjunto é selecionado entre tensoativos,builders, agentes quelantes, agentes inibidores de transferência de corante,auxiliares de deposição, dispersantes, enzimas adicionais, e estabilizantesenzimáticos, materiais catalíticos, ativadores de alvejante, reforçadores dealvejante, perácidos preformados, agentes dispersantes poliméricos, agen- tes de remoção/anti-redeposição de sujeira de argila, abrilhantadores, su-pressores de espuma de sabão, corantes, perfumes, agentes de elastifica-ção de estrutura, amaciantes de tecido, veículos, hidrótropos, auxiliares deprocessamento e/ou pigmentos.

15. Método para limpar no mínimo uma porção de uma superfí- cie e/ou tecido compreendendo: as etapas opcionais de lavar e/ou enxaguaruma superfície e/ou tecido; contactar a referida superfície e/ou tecido com acomposição como definida na reivindicação 1 e/ou uma solução de lavagemcompreendendo composição como definida na reivindicação 1; e opcional-mente lavar e/ou enxaguar a referida superfície e/ou tecido.

16. Método de acordo com a reivindicação 15, em que o pH dareferida solução de lavagem cai essencialmente de modo linear.

17. Método de acordo com a reivindicação 15, em que a referidasuperfície e/ou tecido é exposta à referida solução de lavagem tendo um pHde menos de cerca de 6,5 por um período de no mínimo cerca de 2 minutos.

18. Método para limpar no mínimo uma porção de uma superfí-cie e/ou tecido compreendendo: as etapas opcionais de lavar e/ou enxaguaruma superfície e/ou tecido; contactar a referida superfície e/ou tecido com acomposição como definida na reivindicação 1 e/ou uma referida solução delavagem compreendendo composição como definida na reivindicação 1; eopcionalmente lavar e/ou enxaguar a referida superfície e/ou tecido, em queo referido contato ocorre durante um ciclo de lavagem.

19. Método de acordo com a reivindicação 18, em que o pH dareferida solução de lavagem cai essencialmente de modo linear.

20. Método de acordo com a reivindicação 18, em que o pH dareferida solução de lavagem cai para 6,5 ou menos dentro dos últimos 25%a 50% do referido ciclo de lavagem.

21. Método de acordo com a reivindicação 20, em que a referidasuperfície e/ou tecido é exposta à referida solução de lavagem tendo um pHde menos de cerca de 6,5 por um período de no mínimo cerca de 2 minutos.