BRPI0619578A2 - processo para preparar um 42-éster de rapamicina, composto, método para isolar o boronato do 42-éster de rapamicina bruto a partir do licor mãe, método para purificação de um boronato do 42-éster de rapamicina, e, boronato de cci-779 - Google Patents

Abstract

PROCESSO PARA PREPARAR UM 42-éSTER DE RAPAMICINA, COMPOSTO, MéTODO PARA ISOLAR O BORONATO DO 42-éSTER DE RAPAMICINA BRUTO A PARTIR DO LICOR MãE, MéTODO PARA PURIFICAçãO DE UM BORONATO DO 42-éSTER DE RAPAMICINA, E, BORONATO DE CCI-779. é provido um processo escalonável para a preparação de um 42-éster de rapamicina através da reação de um boronato do 42-éster de rapamicina com um diol e purificação do 42-éster de rapamicina bruto através de recristalização e tratamento com um diol. E também provido um método para isolar e purificar um boronato de 42-éster de rapamicina a partir de licores mãe, que compreendem substâncias contaminantes de acetona e rapamicina.

Description

"PROCESSO PARA PREPARAR UM 42-ÉSTER DE RAPAMICINA, COMPOSTO, MÉTODO PARA ISOLAR O BORONATO DO 42-ÉSTER DE RAPAMICINA BRUTO A PARTIR DO LICOR MÃE, MÉTODO PARA PURIFICAÇÃO DE UM BORONATO DO 42-ÉSTER DE RAPAMICINA, E, BORONATO DE CCI-779" FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO:

42-ésteres de rapamicina são derivados de rapamicina, um antibiótico de trieno macrolítico produzido naturalmente por Streptomyces Hygrocopicus. A rapamicina foi considerada útil em um conjunto de aplicações, com base em seus efeitos antitumor e imunosupressivos. Tais usos incluem a prevenção, a inibição ou o tratamento de rejeito de transplante, enxerto contra doença de hospedeiro, doenças autoimunes incluindo eritematose de lupus sistêmico, doenças inflamatórias incluindo inflamação ocular e pulmonar, linfoma/leucemia de célula T, tumores sólidos, infecções fungicas, e distúrbios vasculares hiperproliferativos, incluindo a proliferação celular do músculo liso e o espessamento íntimo seguindo-se à cirurgia vascular. A rapamicina e derivados de rapamicina, incluindo 42-ésteres de rapamicina, tais que o 42-éster de rapamicina com o ácido 3-hidróxi-2- (hidroximetil)-2-metilpropiônico (CCI- 779) continuam a ser estudados para o tratamento destas e de outras condições.

A preparação e o uso de 42-ésteres de rapamicina, incluindo o CCI-779, são descritos na Patente U.S.. 5. 362. 718. Uma síntese regiosseletiva de CCI-779 é descrita na Patente US 6. 277. 983. Na Publicação de Patente U.S.. US 2005- 0033046 (também Pedido de Patente U.S. 10/ 903. 062), é descrita uma síntese regiosseletiva de CCI- 779, com base na química de boronato.

O que é requerido são métodos eficientes para a preparação do 42-éster de rapamicina, incluindo um método escalonável para a purificação do 42-éster de rapamicina. SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Esta invenção provê um processo escalonável para a preparação e a purificação do 42-éster de rapamicina, incluindo o 42-éster de rapamicina com o ácido 3- hidróxi-2-(hidroximetil)-2-metil propiônico (CCI- 779), a partir de um boronato do 42-éster de rapamicina.

A preparação de um 42-éster de rapamicina bruto através da transformação de um boronato de 42-éster de rapamicina com um diol é executada em um sistema de solvente, no qual o produto cristalino é obtido. Em uma modalidade, o 42-éster bruto de rapamicina é purificado através de tratamento adicional com um diol, de modo a reduzir o subproduto indesejável, seguido por recristalização. Em uma outra modalidade, o 42-éster bruto de rapamicina produzido através de transboronação, é primeiramente recristalizado e então uma suspensão do 42-éster de rapamicina é tratada com um diol, de modo a fornecer o 42-éster de rapamicina purificado.

De modo vantajoso, o método da invenção evita o uso de tetraidrofurano (THF) como um solvente, que não pode ser inteiramente removido durante a manufatura e resulta em um sólido pegajoso, oleoso, tornando o isolamento do 42-éster de rapamicina difícil. A invenção supera o problema do isolamento associado com o uso de uma solução de acetona do diol durante a purificação de 42-ésteres de rapamicina, nos quais solventes residuais evitam a cristalização em um modo desejado e causam e problemas quanto à estabilidade e ao processamento, em especial durante o escalonamento.

Outros aspectos e vantagens da presente invenção em relação à arte anterior serão prontamente evidentes a partir da descrição detalhada da invenção.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A presente invenção provê um processo escalonável para a preparação de um 42-éster de rapamicina através da reação de um boronato do 42-éster de rapamicina com um diol e purificação do 42-éster de rapamicina bruto resultante através de recristalização e formação de uma suspensão com um diol, de modo a formar o 42-éster de rapamicina. Em uma modalidade, o 42-éster de rapamicina bruto é primeiramente reagido com um diol em solvente, de modo a formar o 42-éster de rapamicina sólido e então recristalizado, de modo a formar o 42-éster de rapamicina. Em uma outra modalidade, o 42-éster de rapamicina bruto é primeiramente recristalizado de modo a formar um 42-éster de rapamicina e então tratado com um diol, de modo a formar o 42-éster de rapamicina purificado.

O termo " um 42-éster de rapamicina" inclui ésteres do grupo hidroxila na posição-42 de rapamicina, e éteres, amidas, carbonatos, carbamatos, sulfonatos, oximas, hidrazonas, e hidroxiaminas destes 42-ésteres de rapamicina, nos quais os grupos funcionais no núcleo foram modificados, por exemplo através de redução ou oxidação de um metabólito de rapamicina, tais que vários desmetil rapamicina ou um anel rapamicina aberto (tal que secorapamicina, descrito na Patente U.S. 5. 252. 579). O termo 42-ésteres de rapamicina inclui sais farmaceuticamente aceitáveis de 42-ésteres de rapamicina, que são capazes de formar tais sais, seja em virtude de conter uma porção ácida ou básica. Como aqui usado, sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não estão limitados a clorídrico, bromídrico, iodrídico, fluorídrico, sulfurico, cítrico, maleico, acético, láctico, nicotínico, succínico, oxálico, fosfórico, malônico, salicílico, fenilacético, esteárico, de piridina, amônio, piperazina, dietilamina, nocitinamida, fórmico, uréia, sódio, potássio, cálcio, magnésio, zinco, lítio, cinâmico, metilamino, metanossulfônico, pícrico, tartárico, trietilamino, dimetilamino, e tri (hidroximetil) aminometano. Sais farmaceuticamente aceitáveis adicionais são conhecidos daqueles versados na arte.

Uma variedade de 42-ésteres de rapamicina é descrita nas patentes que se seguem: ésteres alquílicos (Patente US. N0. 4.316.885); ésteres aminoalquílicos (Patente U.S. 4.650.803); ésteres fluorados (Patente U.S.. 5.100.883); ésteres de amida (Patente U.S. 5.118.677); ésteres de carbamato (Patente U.S. 5.118.678); ésteres silílicos (Patente U.S. 5.120.842); amino ésteres (Patente U.S. 5. 130. 307); acetais (Patente U.S. 5.51.413); amino diésteres (Patente U.S. 5.162.333); ésteres de sulfonato e de sulfato (Patente U.S. 5.177.203); ésteres (Patente U.S. 5.221.670); alcóxi ésteres (Patente U.S. 5.233.036); éteres O-arila, -alquila, - alquenila e - alquinílicos (Patente U.S. 5.258.389); ésteres de carbonato (Patente U.S. 5.260.300): carbamatos de arilcarbonila e de alcoxicarbonila (Patente U.S. 5.262.423); carbamatos (Patente U.S. 5.302.584) hidróxi ésteres (Patente U.S. 5.362.718); ésteres impedidos (Patente U.S. 5.385.908); ésteres heterocíclicos (Patente U.S. 5.391.730); ésteres de carbamato (Patente U.S. 5.411.967) ésteres de carbamato (Patente U.S. 5.434.260); ésteres e amidino carbamato (Patente U.S. 5.463.048); ésteres de carbamato (Patente U.S. 5.480.988); ésteres de carbamato (Patente U.S. 5.480.989); ésteres de carbamato (Patente U.S. 5.489.680); ésteres de N-óxido impedido (Patente U.S. 5.491.231); ésteres de biotina (Patente U.S. 5.504.091); éteres O-alquílicos (Patente U.S. 5.665.772); e ésteres de PEG de rapamicina (Patente U.S. 5.780.462). Em uma modalidade, são selecionados os 42-ésteres de rapamicina com ácidos dicarboxílicos, tais que 42-hemissuccinato, 42-hemiglutarato e 42- hemiadipatos.

Em uma modalidade, o 42-éster de rapamicina possui a estrutura de núcleo:

<formula>formula see original document page 5</formula>

Em uma modalidade, R1 é -C= O-CR7R7'R7 , em que: R7R7' e R7''

são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, alquila de 1-6 átomos de carbono, alquenila de 2-7 átomos de carbono, alquinila de 2-7 átomos de carbono, -((CR12R13)fOR10, -CF3, -F, ou - CO2R10;

R10 é hidrogênio, alquila de 1-6 átomos de carbono, alquenila de 2-7 átomos de carbono, alquinila de 2-7 átomos de carbono, trifenilmetila, benzila, alcoximetila de 2-7 átomos de carbono, cloroetila, ou tetraidropiranila;

R e R 13

são cada qual, independentemente, hidrogênio, alquila de 1-6 átomos de carbono, alquenila de 2-7 átomos de carbono, alquinila de 2-7 átomos de carbono, trifluorometila, ou -F;

e f= 0-6.

Os compostos, como descritos, podem conter um ou mais centros assimétricos e, deste modo, dar origem a isômeros ópticos e a diastereômeros. Os compostos podem incluir isômeros ópticos e diastereômeros; R enanciomericamente puro racêmico e resolvido e estereoisômeros S; outras misturas dos estereoisômeros R e S; e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

O termo "alquila" é aqui usado para referir-se a grupos hidrocarboneto alifáticos saturados, tanto de cadeia reta como de cadeia ramificada. Em uma modalidade, um grupo alquila possui de 1 a cerca de 8 átomos de carbono (isto é, Ci, C2, C3, C4, C5, C6, C1 ou Cs). Em uma outra modalidade, um grupo alquila possui de 1 a cerca de 6 átomos de carbono (isto é, Ci, C2, C3, C4, C5 ou C6). Em uma modalidade adicional, um grupo alquila possui de 1 a cerca de 4 átomos de carbono (isto é, Ci, C2, C3, C4).

O termo "alquenila" é aqui usado para referir-se a grupos alquila de cadeia reta ou ramificada tendo uma ou mais ligações duplas carbono- carbono. Em uma modalidade, um grupo alquenila contém de 3 a 8 átomos de carbono (isto é, C3, C4, C5, C6, C7 ou Cs). Em uma outra modalidade, um grupo alquenila possui 1 ou 2 ligações duplas e de 3 a cerca de 6 átomos de carbono (isto é, C3, C4, C5, ou Ce).

O termo grupo "alquinila" é aqui usado para referir-se a grupos alquila de cadeia reta ou ramificada, tendo uma ou mais ligações triplas carbono- carbono. Em uma modalidade, o grupo alquinila possui de 3 a cerca de 8 átomos de carbono (isto é, C3, C4, C5, Ce, C7 ou Cs). Em uma outra modalidade, um grupo alquinila contém 1 ou 2 ligações triplas carbono- carbono e de 3 a cerca de 6 átomos de carbono (isto é, C3, C4, C5 ou Ce).

O termo "alcóxi", como aqui usado, refere-se ao grupo O(alquila), em que o ponto de ligação é através de um átomo de oxigênio e o grupo alquila pode ser substituído, como acima mencionado.

Em uma modalidade, o 42-éster de rapamicina é o 42-éster de rapamicina com o ácido 3-hidróxi-2- (hidroximetil)-2-metilpropiônico (CCI- 779)[ Patente U.S.. 5. 362. 718], e 42-0- (2-hidróxi) etil rapamicina [ Patente U.S. 5. 665. 772]. Quando a desenho, em termos de sua estereoquímica, o CCI-779 é caracterizado pela estrutura que se segue:

Em uma modalidade, o processo da invenção para a preparação do 42-éster de rapamicina a partir de boronato do 42-éster de rapamicina provê um rendimento de pelo menos 82%, pelo menos 85%, ou de pelo menos 89% (corrigido quanto a concentrações), com uma concentração de pelo menos 95% ou de pelo menos 98%, e impurezas totais de menos do que 4%, menos do que 2%, ou, de modo preferido, menos do que 1% de impurezas totais. Como aqui usado, estes rendimentos são corrigidos quanto a concentração como se segue: Rendimento (%) = [peso efetivo χ concentração (%)]/[ peso teórico χ 100% ].

Em umas outra modalidade, o 42-éster de rapamicina é o 42- éster de rapamicina com o ácido 3-hidróxi-2-(hidroximetil)-2-metil propiônico (CCI- 779). Em uma modalidade, as impurezas totais contêm menos do que 0,1% de ácido fenil borônico e, de modo preferido, menos do que 0,05% do ácido fenil borônico].

O método da invenção, devido ao fato de ser escalonável, pode prover uma quantidade de 42-éster de rapamicina purificada (isto é, como acima definido por isenção de impurezas totais) acima de 20 kg. No entanto, a invenção não está limitada a isto. O Método é também útil na obtenção de quantidades tão pequenas quanto de 20 kg, 1 kg, 100 g, 8 g, 5 g, ou menor.

De acordo com a presente invenção, o 42-éster de rapamicina bruto é preparado a partir de boronato do 42-éster de rapamicina. Em uma modalidade, o boronato do 42-éster de rapamicina usado possui a fórmula:

<formula>formula see original document page 8</formula>

em que R é: -O-C = O-CR7R8R9, em que: R é independentemente selecionado a partir do grupo, que consiste de hidrogênio, alquila de 1-6 átomos de carbono, alquenila de 2-7 átomos de carbono, alquinila de 2-7 átomos de carbono, -(CR12R13)fOR10, - CF3, -F, ou -CO2R10;

R10 é hidrogênio, alquila de 1-6 átomos de carbono, alquenila de 2-7 átomos de carbono, alquinila de 2-7 átomos de carbono, trifenilmetila, benzila, alcoximetila de 2-7 átomos de carbono, cloroetila ou tetraidropiranila;

R8 e R9 são tomados juntos para formar Χ;

X é um 2-fenil-dioxoborinano;

R12 e R13 são cada qual, independentemente, hidrogênio, alquila de 1-6 átomos de carbono, alquenila de 2-7 átomos de carbono, alquinila de 2-7 átomos de carbono, trifluorometila, ou -F;

e f = 0-6.

Como aqui usado, o 2-fenil-dioxoborinano pode ser opcionalmente substituído por 1, 2, ou 3 grupos, que são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste de hidrogênio, alquila de 1-6 átomos de carbono, alquenila de 2-7 átomos de carbono, alquinila de 2-7 átomos de carbono, - (CR^R13)iOR10, -CF3, -F ou -CO2R10. Em uma modalidade, os substituintes são um, dois ou três grupos metila. O grupo fenila do 2- fenil-dioxoborinano pode ser também opcionalmente substituído.

O termo "arila substituído" refere-se a um grupo arila (por exemplo, fenila), que é substituído por um ou mais substituintes independentemente selecionados a partir dos que incluem halogênio, CN, OH, NO2, amino, alquila, cicloalquila, alquenila, alquinila, alcóxi, perfluoroalquila C1 a C3, perfluoroalcóxi C1 a C3, arlóxi, alquilcarbonila, arila, heteroarila. De modo desejável, um grupo arila substituído (por exemplo, fenila) é substituído por de 1 a cerca de 4 substituintes. Em uma modalidade, o substituinte é um halogênio. Em uma outra modalidade, o substituinte é alquila inferior.

Em uma modalidade, o 2-fenil-dioxoborinano é selecionado a partir do grupo, que consiste de 2- fenil-4,6,6-trimetil-l,3,2-dioxoborinano, 2- fenil-l,3,2-dioxaborinan-5-ila, 2-fenil-l,3,2-dioxaborinan-4-ila, em que fenila é opcionalmente substituído como acima definido.

Em uma modalidade adicional, o boronato do 42-éster de rapamicina é um boronato do 42-éster de rapamicina com o ácido 3-hidróxi-2- (hidroximetil)-2-metil propiônico (CCI- 779). O boronato do 42-éster de rapamicina pode ser preparado para o uso no método da invenção através do uso dos métodos previamente descritos. Por exemplo, um método adequado para preparar um boronato de CCl-119 é descrito na Publicação de Patente U.S. US 2005 - 0033046 Al (também Pedido de Patente U.S. 10/ 903.062) e ilustrado no Esquema I.

Esquema I

<formula>formula see original document page 10</formula>

Através do uso de técnicas similares, aquele de habilidade na arte pode prontamente utilizar outro boronato do 42-éster do éter 31- trimetilsilílico, para preparar um boronato do 42-éster desejado. De modo típico, o grupo do éster 31-trimetilsilílico é removido. Depois disto, o boronato do éster-42 resultante pode ser purificado através de suspensão ema cetona, tal como ilustrado abaixo para o boronato de CCI- 779. Esquema II

<formula>formula see original document page 11</formula>

Fornecida esta informação, aquele de habilidade na arte pode prontamente preparar outros boronatos do 42-éster de rapamicina.

O método de preparação de um 42-éster de rapamicina através de um intermediário de boronato de 42-éster de rapamicina é uma via que elimina completamente a cromatografia a partir do processo de manufatura. O boronato do 42-éster de rapamicina é preparado a partir de rapamicina com cerca de 80- 85% de conversão; no entanto, rendimentos isolados são significativamente mais baixos após a purificação através de suspensões de acetona. Em experimentos preliminares, cerca de V2 dos materiais convertidos foram, de modo típico, isolados.

Em uma modalidade, a presente invenção provê um método aperfeiçoado para isolar o boronato do éster-042 de rapamicina e um método aperfeiçoado para a purificação do boronato de 42-éster de rapamicina para o uso na preparação de um 42-éster de rapamicina. Contudo, este método de isolamento do boronato do 42-éster de rapamicina a partir de licores mãe é, em particular, bem adaptado para o uso em conexão com o processo de manufatura descrito na US 2005/ 0033046, publicado em 10 de fevereiro de 2005.

Em resumo, este processo escalonável descreve um método, no qual um solvente (s) orgânico(s) é (são) usados nas reações, que fornecem um boronato do 42-éster de rapamicina. Tais solventes podem incluir éster dietílico, acetonitrila, acetato de etila, THF, éter t-butil metílico e cloreto de metileno podem ser selecionados. No entanto, acetona é usada, com freqüência, para formar um concentrado. No entanto, em certas modalidades, a hidrólise pode ser executada usando um sistema de solvente orgânico/ ácido aquoso de fase única. Deste modo, o solvente orgânico selecionado (por exemplo, acetona, é misturado com um ácido inorgânico diluído, tal que, por exemplo, ácido sulfurico, ácido clorídrico ou ácido fosfórico. Exemplos de concentrações de ácido inorgânico diluído adequadas estão na faixa de cerca de 0,1 N a cerca de 3 N, de cerca de 0,2 N a cerca de 2 N, ou de cerca de 0,5 N. De modo desejável, este estágio é executado em um pH de 5 a 6. De modo opcional, um tampão adequado, por exemplo acetato de sódio, ou na presença de bicarbonato de sódio e/ ou ácido acético, é adicionado à mistura, de modo a ajustar ou manter o pH na faixa desejada. No entanto, podem ser utilizados outros métodos para a produção do boronato do 42-éster de rapamicina.

O método para isolar o boronato do 42-éster de rapamicina bruta permite a separação eficiente do boronato do 42-éster de rapamicina bruta a partir dos licores mãe usados pára a produção dos mesmos. Tais licores mãe contêm, de modo típico, o boronato do 42-éster de rapamicina e substâncias contaminantes, tais que um ou mais solventes e rapamicina, a única substância contaminante maior sendo a rapamicina.

Como acima indicado, o método da invenção é particularmente bem adequado para o uso seguindo-se à suspensão de acetona acima descritas. No entanto, em um aspecto, os reatores são lavados com um solvente adequado e misturados com os licores mãe. De modo opcional, os licores mãe podem ser obtidos a partir de uma primeira suspensão de acetona, ou a partir de misturas da primeira e Segunda suspensões de acetona, ou a partir de misturas da primeira, segunda e terceira suspensões de acetona. Os licores mãe podem ser ainda misturados com os licores, que resultam a partir dos estágios de lavagem. De modo típico, a lavagem da reação é executada com um éter, por exemplo, um éter dietílico, um éter trimetílico (por exemplo, éter tri-butil metílicos), ou os similares podem ser selecionados.

O boronato do 42-éster de rapamicina bruta é isolado a partir do licor mãe através da concentração do licor mãe e de filtração. Em uma modalidade, o licor mãe é concentrado a uma suspensão antes da filtração. De modo típico, isso resulta em um rendimento mais alto, mas em um produto de qualidade mais baixa (por exemplo, cerca de 70 a 80% p/p de boronato do 42- éster de rapamicina, com menos do que ou cerca de 15 a 20% p/p de rapamicina contaminante. Esta suspensão pode apresentar uma perda quando da secagem na faixa de cerca de 15 a 30% comparada as licores mãe a partir do processo do Esquema II. Em uma outra modalidade, o licor mãe é concentrado a uma suspensão espessa e diluído com um éter (por exemplo, o éter dietílico) antes da filtração. De modo típico, a suspensão espessa resultante apresenta uma perda quando da secagem (LOD) na faixa de cerca de 30 a cerca de 40%, quando comparada aos licores mãe a partir da primeira ou da segundo suspensão de acetona quando o processo do Esquema II é utilizado. Este método resulta em um produto de qualidade mais elevada (por exemplo menos do que ou cerca de 12 a 15% p/p de rapamicina) quando comparado ao uso da suspensão menos concentrada. Em ainda uma outra modalidade, o licor mãe é concentrado a uma espuma (isto é, um conteúdo de umidade mais baixo do que a massa úmida que resulta a partir da concentração a uma suspensão espessa), e então tratado cm um éster. Esta modalidade provê um produto de alta qualidade (por exemplo, menos do que cerca de 12% p/p, de modo preferido menos do que 11% p/p, de modo mais preferido, menos do que '0% p/p de rapamicina

Em um outro aspecto, a invenção provê a purificação do boronato do 42-éster de rapamicina a partir do boronato do 42-éster de rapamicina bruto isolado. De modo desejável, a purificação reduz as substâncias contaminantes no boronato do 42-éster de rapamicina bruta em pelo menos cerca de 10 vezes. Em uma modalidade, o boronato do 42-éster de rapamicina é purificado, de tal modo que ele contenha menos do que 1 % em peso, de rapamicina, de modo preferido cera de 0,8% em peso, de rapamicina, ou menos. Em uma outra modalidade, o 42-éster de rapamicina purificado contém cerca de 07% em peso, de rapamicina, ou menos.

Em uma modalidade, o método para a purificação de um boronato do 42-éster de rapamicina bruta, que compreende o boronato do 42- éster de rapamicina, rapamicina, e possivelmente outras substâncias contaminantes (por exemplo, pelo menos um solvente) envolve aquecer a mistura compreendendo o boronato do 42-éster de rapamicina e um solvente adequado. O solvente é adicionado, de modo típico, em excesso ao boronato do 42-éster de rapamicina, em peso. Por exemplo, o solvente pode ser adicionado em uma quantidade de cerca de duas, três ou quatro vezes o peso do boronato do 42-éster de rapamicina. De modo típico, a mistura é aquecida até o refluxo e mantida neste durante pelo menos cerca de uma (1) hora. A temperatura e a extensão do tempo de manutenção podem ser variados dependendo de uma variedade de fatores, que incluem, por exemplo, o solvente selecionado e a extensão do tempo de manutenção desejada. Em uma modalidade, o solvente selecionado é acetona e a temperatura de aquecimento é de cerca de 55 a cerca de 62°C. No entanto, outras cetonas podem ser selecionadas como solventes, por exemplo, metil etil cetona. Ainda outros solventes podem incluir um éter (por exemplo, éter dietílico, éster tributilmetílico (TBME), éter trietílico, etc.) acetonitrila, ou misturas dos mesmos (por exemplo, acetona/éter em uma razão de 1:1 a 1:2).

Seguindo-se a esta mistura e ao aquecimento, a mistura é resfriada e agitada durante pelo menos cerca de 6 horas. De modo típico, a mistura é deixada resfriar à temperatura ambiente ao longo do tempo. No entanto, ela pode ser resfriada mais rapidamente através de métodos adequados.

A mistura é concentrada de modo a formar uma suspensão. Seguindo-se à remoção de pelo menos um terço a cerca de pelo menos a metade do solvente (por exemplo, acetona), um éter é adicionado à mistura, de modo típico em cerca da quantidade de solvente removido (por exemplo, cerca de 1 vez a cerca de 1,5 a cerca de 2 vezes o peso do boronato do éster- 42 de rapamicina). No entanto, quantidade maiores ou menores de solvente podem ser adicionadas. Métodos convencionais podem ser usados para remover o solvente, por exemplo destilação sob vácuo, com ou sem aquecimento. Em uma modalidade desejável, o éter é o éter dietílico. No entanto, outros éteres adequados podem ser prontamente selecionados dentre aqueles aqui descritos e bem conhecidos daqueles versados na arte. A suspensão resultante é, depois disso, filtrada, de modo a recuperar o boronato do 42-éster de rapamicina.

Uma primeira série de estágios de concentração/suspensão, cristalização, filtração resulta na pureza aperfeiçoada do boronato do 42-éster de rapamicina,. No entanto, pode ser necessário repetir o procedimento de isolamento (por exemplo, destilação, suspensão, cristalização, e filtração) e/ ou o procedimento de purificação (por exemplo, refluxo, concentração, cristalização e filtração), uma ou duas vezes, de modo a obter um produto tendo uma pureza desejada, por exemplo, um produto tendo menos do que cerca de 12% de rapamicina. Em uma modalidade, o produto é filtrado a uma perda quando da secagem de menos do que cerca de 5%, de modo preferido de menos do que cerca de 3% ou de menos do que cerca de 1% antes da repetição da mistura com o solvente. De modo opcional, o vaso, no qual uma primeira corrida de purificação foi executada pode ser lavado com acetato de etila, e os licores resultantes submetidos aos métodos de isolamento e/ ou purificação aqui descritos.

O boronato do 42-éster de rapamicina purificado resultante pode ser usado na preparação de um 42-éster de rapamicina, tal como aqui descrito.

Preparação do 42-éster de Rapamicina

O boronato do 42-éster de rapamicina é convertido ao 42-éster de rapamicina bruto, utilizando um diol em um solvente adequado, isto é, transboronação. A transboronação aqui descrita pode ser executada para todos os compostos de boronato do 42-éster de rapamicina abrangidos pela fórmula do boronato do 42-éster de rapamicina, supra. Aquele versado na arte será capaz de modificar prontamente a concentração do boronato do éster-42 de rapamicina em uma mistura de solvente, a razão de diol para o boronato do 42-éster de rapamicina, composição de solvente, temperatura da reação, e período de tempo de reação desejado, ou uma outra variável aqui descrita, com base no boronato do 42-éster de rapamicina utilizado.

Em uma modalidade, o boronato do 42-éster de rapamicina é provido a partir de cerca de 10% a cerca de 30%, de cerca de 15% a cerca de 30%, de cerca de 20% a cerca de 30%, ou de cerca de 25% a cerca de 30% em peso, de uma mistura de solvente. Em uma modalidade adicional, o boronato do éster-42 de rapamicina é provido em cerca de 30% em peso. Concentrações mais altas do boronato do 42-éster de rapamicina, por exemplo, 40%, não são preferidas, pois elas podem resultar na precipitação de sólidos pegajosos, que podem aderir à parede do reator, reduzindo o rendimento. Aquele versado na arte seria capaz de selecionar uma razão preferida, com base na composição de solvente, temperatura da reação, e período de tempo de reação desejado.

O diol é provido na mistura da reação em uma razão molar de diol para o boronato do 42-éster de rapamicina de cerca de 2:1 a cerca de 10:1. Em uma modalidade, a razão molar de diol para o boronato do 42-éster de rapamicina é de pelo menos 5:1. Em uma modalidade adicional, a razão molar de diol para o boronato do 42-éster de rapamicina é de cerca de 5: 1. Em outras modalidades, a razão molar de diol para o boronato do 42-éster de rapamicina é de cerca de 6:1, cerca de 7:1, cerca de 8:1, cerca de 9: 1, cerca de 10:1, ou qualquer incremento nestes, por exemplo de 5,1:1 ou de 8,5:1. De modo geral, quantidades aumentadas de diol promovem com que a reação seja completada. Aquele versado na arte seria capaz de selecionar uma razão preferida com base na concentração do boronato do 42-éster de rapamicina na mistura de solvente, composição de solvente, temperatura da reação, e período de tempo de reação desejado.

Uma variedade de 1,2-, 1,3-, 1,4- e 1,5-dióis pode ser usada de modo a efetuar esta transboronação. Dióis alquil substituídos são preferíveis, tais que 2-metil-2,4-pentanodiol. Em uma outra modalidade, dietanolamina ou poliestireno dietanolamina suportado com sólido (PS-DEAM) pode ser suado. A transboronação pode ser também efetuada usando reagentes de ácido carboxílicos, tais que o ácido oxálico, malônico, tartárico, itálico e salicílico.

Em uma modalidade, a mistura de solvente é composta de uma mistura de éter e heptanos. Em uma modalidade adicional, o éter é o éter dietílico. No entanto, a invenção não está limitada a isto. Em uma modalidade, a mistura de solvente contém éter e um heptano único. Em outras modalidades, a mistura de solvente contém éter e uma mistura de heptanos. Em ainda outras modalidades, solventes, tais que tolueno, éter terc-butil metílico (TBME), éter etílico, 1Pr2O, hexanos, cicloexanos, dioxano, ou misturas que incluam estes solventes podem ser usadas em lugar de heptanos. Quando faz-se aqui referência ao uso de heptanos, o uso destes solventes ou de misturas dos mesmos é também contemplado.

Como aqui usado, o termo "heptanos" abrange heptano e isômeros do mesmo. O termo também abrange preparações de heptano compostos, de modo predominante, de isômeros C7, com os constituintes remanescentes sendo primariamente isômeros Cg, por exemplo, o Fluido de Heptano EXXSOL® (Exxon Mobil Chemical). No entanto, a invenção não está limitada a isto. Outras preparações de heptano, úteis na invenção, que incluem preparações comercialmente disponíveis, seriam conhecidas daqueles versados na arte e são abrangidas pela presente invenção.

Os heptanos podem ser selecionados por aqueles versados na arte com base nas condições de reação. Além disso, a razão de éter para heptanos pode ser também ajustada. A razão de éter para heptanos pode estar na faixa de cerca de 1:1 a cerca de 3:1, ou de cerca de 1: 1 a cerca de 2:1, em peso. Enquanto que razões aumentadas de éter para heptanos promovem com que a reação seja completada, razão aumentadas, por exemplo de 4:1, resultam na precipitação de sólidos pegajosos e, portanto, não são preferidas. Em uma modalidade, a razão de éter para heptanos é de cerca de 2:1, em peso. No entanto, aquele versado na arte seria capaz de selecionar uma razão preferida, com base na razão de diol para o boronato de éster-42 de rapamicina, concentração do boronato do 42-éster de rapamicina na mistura de solvente, composição de solvente, temperatura da reação, e período de tempo de reação desejado.

A reação pode ser executada em temperaturas na faixa de cerca de 20°C a cerca de 40°C, de cerca de 25°C a cerca de 40°C, de cerca de 30°C a cerca de 40°C, ou de cerca de 35°C a cerca de 40°C, em que a temperatura aumentada promove, de modo geral, com que a reação seja completada. Em uma modalidade, a temperatura é de cerca de 3O0C a cerca de 40°C. Em uma outra modalidade, a temperatura é de cerca de 34°C a cerca de 35°C. No entanto, aquele versado na arte seria capaz de selecionar uma temperatura preferida, com base na razão de diol para o boronato do 42-éster de rapamicina, concentração do boronato do 42-éster de rapamicina na mistura de solvente, composição de solvente, e período de tempo de reação desejado.

O completamento da reação pode ser monitorado através de métodos convencionais, que são conhecidos daqueles versados na arte. Sob condições preferidas, a reação pode ser completada, de modo eficiente, dentro de três a quatro horas. Seguindo-se a que a reação seja completada, o 42-éster de rapamicina bruto produzido é resfriado a de cerca de 20 a 25°C e agitado, de modo a evitar a formação de sólidos pegajosos ou gomosos. Em uma modalidade, a mistura da reação é agitada durante cerca de 18 horas. Em uma outra modalidade, a mistura da reação é agitada durante cerca de 38 horas. Seguindo-se à agitação da mistura da reação em temperatura reduzida, o 42- éster de rapamicina bruto é precipitado através da adição de um solvente à base de carbono não-polar, ou uma mistura dos mesmos. Em uma modalidade, o solvente à base de carbono não-polar pode ser hexano, pentano e heptano, e misturas dos mesmos. Em uma modalidade adicional, o solvente à base de carbono não polar é hetpanos. Em uma modalidade, a razão de solvente à base de carbono não polar para éter é de cerca de 3: 1, em peso. Em uma modalidade, o 42-éster de rapamicina bruto precipitado resultante é filtrado e lavado com heptanos.

Purificação do 42-éster de Rapamicina

Seguindo-se à precipitação, o 42-éster de rapamicina bruto é purificado através de um processo de vários estágios, que envolve a recristalização e a reação de impurezas, por exemplo do ácido fenil borônico, com um diol. A ordem destes estágios não constitui uma limitação da invenção. Em outras palavras, em uma modalidade, o 42-éster de rapamicina bruto é primeiramente tratado com um diol e o 42-éster de rapamicina sólido é recristalizado. Em uma outra modalidade, o 42-éster de rapamicina bruto é primeiramente recristalizado e então uma suspensão do 42-éster de rapamicina é tratada com um diol.

O processo de purificação aqui descrito pode ser efetuado para todos os compostos do 42-éster de rapamicina abrangidos pela fórmula do 42- éster de rapamicina, supra. Aquele versado na arte será capaz de prontamente modifica r a concentração do 42-éster de rapamicina em um solvente, a razão de diol para o 42-éster de rapamicina bruto, a composição de solvente, a temperatura da reação, o período de tempo de reação desejado, ou outra variável aqui descrita, com base no boronato do 42-éster de rapamicina utilizado.

A quantidade de ácido fenil borônico residual no 42-éster de rapamicina bruta preparado em grande escala, por exemplo, acima de 2 kg, a partir do boronato do 42-éster de rapamicina, está entre cerca de 1,8 a 2,9%. Métodos previamente descritos de purificação através de recristalização apenas reduziram esta quantidade em cerca de metade. De modo vantajoso, o método para purificação da presente invenção reduz a quantidade total do ácido fenil borônico a menos do que 0,1 % e, em algumas modalidades, a menos do que 0,05%.

Purificação do 42-éster de Rapamicina Bruta através de DioI/ Recristalização

Nesta modalidade, quando a purificação través de tratamento com diol é executada antes da recristalização, a suspensão do 42-éster de rapamicina bruto, produzida através de transboronação, é primeiramente secada de solvente residual.

O 42-éster de rapamicina bruto é tratado com um diol em solvente. Em uma modalidade, o solvente é um éster. Em uma modalidade adicional, o solvente é o éter dietílico. Em uma modalidade, o diol é 2-metil- 2,4-pentanodiol. A razão molar de diol para o 42-éster de rapamicina está na faixa de cerca de 2:1 a cerca de 10:1. Em uma modalidade, a razão molar do 42-éster de rapamicina para diol é de cerca de 5: 1. A reação é executada em cerca de 10 a 25°C. Temperaturas mais altas, por exemplo, de 34°C, não são preferidas, pois elas podem conduzir à formação de sólidos pegajosos.

O completamento da reação, por exemplo, o desaparecimento do ácido fenil borônico, pode ser monitorado através de métodos convencionais, que são conhecidos daqueles versados na arte. Sob condições preferidas, a reação pode ser completada, de modo eficiente, dentro de cerca de cinco horas. Em uma modalidade a adicional, a reação pode ser repetida, de modo a reduzir ainda mais o conteúdo de ácido fenil borônico. Seguindo- se ao completamento da reação, o 42-éster de rapamicina purificada é secado para fornecer o 42-éster de rapamicina sólido.

O 42-éster de rapamicina parcialmente purificado sólido é dissolvido em um solvente polar. Em uma modalidade, o solvente é acetona. Em uma outra modalidade, o solvente é acetato de etila. No entanto, outros solventes polares podem ser selecionados por aquele versado na arte, assim como razões apropriadas de solvente para o 42-éster de rapamicina bruto. Em uma modalidade, a razão de solvente pára o 42-éster de rapamicina bruto é de cerca de 5: 1 a cerca de 8:1 (em peso). Em uma modalidade, o solvente é acetona e a razão de acetona para o 42-éster de rapamicina bruto é de cerca de 5: 1 (em peso). Seguindo-se à dissolução do 42-éster de rapamicina, as impurezas insolúveis são filtradas, e o filtrado é concentrado de modo a fornecer uma espuma.

A espuma é então dissolvida em éter e, após um período de tempo, o 42-éster de rapamicina purificado é cristalizado. Em uma modalidade, o éter é o éter dietílico. No entanto, outros éteres podem ser usados de modo a precipitar o 42-éster de rapamicina. Em uma modalidade, a razão do 42-éster de rapamicina para o éter é de cerca de 1: 4 a cerca de 1: 3. Em uma modalidade adicional, o 42-éster de rapamicina é de cerca de 29% a cerca de 37%, ou de cerca de 29% a cerca de 30% em peso, em éter.

Seguindo-se à recristalização do éter, a suspensão resultante do 42-éster de rapamicina em éter pode ser adicionalmente tratada com heptanos. Em uma modalidade, a razão de heptanos para o éter é de cerca de 3:1, em peso. Em uma outra modalidade, seguindo-se ao tratamento de heptano e isolamento do 42-éster de rapamicina purificado através de filtração, o 42- éster de rapamicina é lavado com uma solução de éter e heptanos, antes da secagem. Em uma modalidade adicional, a razão de éter para heptanos na lavagem é de 1:2, em volume. Seguindo-se à lavagem, o produto resultante é secado, de modo a fornecer o 42-éster de rapamicina purificado.

Purificação do 42-éster de Rapamicina Bruto através de Recristalização/ Reação de Diol

Em uma outra modalidade, o 42-éster de rapamicina bruto, resultante a partir da transboronação, é submetido primeiramente à recristalização. De modo típico, o 42-éster de rapamicina bruto é filtrado e secado através de sucção. O 42-éster de rapamicina bruto é então dissolvido em um solvente polar, por exemplo em acetona ou acetato de etila, quaisquer impurezas insolúveis são filtradas, o filtrado é secado de modo a formar uma espuma, e a espuma resultante é dissolvida em solvente polar, por exemplo, em éter. O precipitado que aparece após um período de tempo contém o 42- éster de rapamicina purificado parcialmente recristalizado.

Uma solução de diol em solvente é misturada com o 42-éster de rapamicina purificado, de modo a formar uma suspensão. Em uma modalidade, o solvente é um éter. Em uma modalidade adicional, o solvente é o éter dietílico. Em uma modalidade, o 42-éster de rapamicina parcialmente purificado é de cerca de 10% a cerca de 30% em peso, em solvente, ou de cerca de 20% a 30% em peso, em solvente. Em uma modalidade adicional, o 42-éster de rapamicina parcialmente purificado é de cerca de 30% em peso, em solvente.

Em uma modalidade, o diol é 2-metil-2,4-pentanodiol. A razão molar de diol para o 42-éster de rapamicina pode estar na faixa de cerca de 2:1 a cerca de 10: 1. Em uma modalidade, a razão molar do 42-éster de rapamicina para o diol é de cerca de 5:1. A reação é executada em de cerca de 20 a cerca de 25°C. Temperaturas mais elevadas, por exemplo, de 34°C, não são preferidas, pois elas podem conduzir à formação de sólidos pegajosos.

O completamento da reação, por exemplo, o desaparecimento do ácido fenil borônico, pode ser monitorado através de métodos convencionais, que são conhecidos daqueles versados na arte. Sob as condições preferidas, a reação pode ser completada, de modo eficiente, dentro de cerca de cinco horas. Em uma modalidade adicional, a reação pode ser repetida, de modo a reduzir, ainda mais, o conteúdo de ácido fenil borônico.

Seguindo-se ao completamento da reação, heptanos são adicionados à mistura, e a suspensão resultante é isolada através de filtração e secada para fornecer o 42-éster de rapamicina purificado cristalino.

Em uma modalidade, CCI-779 produzido de acordo com a invenção pode ser adicionalmente purificado de acordo com o Process for the Preparation of Purified Crystalline CCI-779 (Deshmukh, et al., Pedido de Patente U.S.. 60/748. 006, depositado em 7 de dezembro de 2006, na mesma data que o pedido de prioridade no United States Patent and Trademark Office, e seu pedido US e internacional correspondentes), cujo relatório e reivindicações são incorporados a este, a título referencial. A cristalinidade do CCI-779 produzido de acordo com a invenção pode ser determinada de acordo com o Method for the Measurement of Crystallinity of CCI-779 Using Differential Scanning Calorimetry (Deshmukh, et al., Pedido de Patente U.S.. 60/ 748. 005, depositado em 7 de dezembro de 2005, na mesma data que o pedido de prioridade, e seus pedidos US e internacional correspondentes), cujo relatório e especificações são incorporados a este, a título referencial.

Os exemplos que se seguem são apenas ilustrativos e não têm a intenção de

Exemplo 1-6 ilustram métodos para isolar o boronato de CCI- 779 bruto a partir do licor mãe a partir de um processo escalonável, tal que ilustrado no esquema que se segue:

Exemplo 1: Recuperação de boronato de CCI- 779 Bruto a partir do Licor Mãe

O isolamento do boronato de CCI- bruto a partir dos licores mãe foi primeiramente avaliado usando materiais parcialmente recuperados de uma primeira batelada a partir do processo de manufatura ilustrado nos Esquemas 1 e 2 com diferentes procedimentos, tal como sumariado na Tabela 1.

Tabela 1

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* Recuperação: [(boronato de CCI-779 recuperado/ boronato de CCI-779 recuperado + equilíbrio de materiais) χ 100%] ± 5%.

Como mostrado na entrada I, o boronato de CCI-779 pode ser isolado através da filtração da suspensão obtida a partir de uma concentração de uma mistura de licores mãe a partir da 2a e 3a suspensões de acetona, seguido por filtração. Estes licores mãe consistem principalmente de solventes, boronato de CCI- 779 e rapamicina. A recuperação está na faixa de 95 ± 5%. O boronato de CCI-779 isolado continha cerca de 8% de rapamicina. Devido ao fato de que o licor mãe a partir da primeira suspensão de acetona continha muito mais impurezas, três diferentes procedimentos foram testados.

A entrada II apresentou os resultados a partir da concentração do licor mãe a uma suspensão espessa, seguido por filtração. A recuperação estava na faixa de 75 ± 5%, mas a filtração foi muito lenta. Foi obtido o boronato de CCI- 779 bruto com cerca de 18% de rapamicina. O segundo procedimento (entrada III) envolveu a concentração do licor mãe a uma primeira espuma, tratamento com o éter dietílico para fornecer uma suspensão, seguido por filtração. O boronato de CCI-779 foi isolado através de filtração em 55 ± 5% de rendimento, com um conteúdo de rapamicina de 13%.

Na entrada IV, o licor mãe foi concentrado, em vez disso, a uma suspensão espessa. Após a sua diluição com o éter dietílico, o boronato de CCI- 779 bruto foi filtrado. A recuperação está em uma faixa de 35 ± 5% com um conteúdo de rapamicina de 11%.

Exemplo 2: Purificação do Boronato de CCI- bruto Recuperado a Partir do Licor Mãe

A tabela 2 sumaria os resultados da investigação quanto à purificação de boronato de CCI-779 bruto, recuperado a partir dos licores mãe. O conteúdo de rapamicina caiu de 8,0 para 0, 93% após 2 suspensões de acetona, seguindo-se o procedimento de manufatura do Esquema 1.

Para o procedimento experimental 1, os licores mãe foram aquecidos na temperatura especificada durante 1 hora, agitados em temperatura ambiente durante um mínimo de 6 horas, e então filtrados.

Para o procedimento experimental 2A, os licores mãe foram aquecidos na temperatura especificada durante 1 hora, resfriados à temperatura ambiente durante 1 hora, e então agitados, em temperatura ambiente, durante um período mínimo de 6 horas. Este processo foi repetido mais 2 vezes, e a suspensão resultante foi então filtrada.

Para o procedimento experimental 2B, os licores mãe tratados com o solvente especificado foram aquecidos na temperatura especificada durante 1 hora, resfriados à temperatura ambiente durante 1 hora, e então agitados em temperatura ambiente durante 30 minutos. Este processo foi repetido mais 2 vezes e então a suspensão resultante foi filtrada.

Para o procedimento experimental 3, os licores mãe com o solvente especificado foram aquecidos na temperatura especificada durante 6 horas, agitados em temperatura ambiente durante um período mínimo de 6 horas, e então filtrados.

Para o procedimento experimental 4, os licores mãe com o solvente especificado foram agitados em temperatura ambiente durante 24 horas e filtrados.

Tabela 2

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O conteúdo de rapamicina não foi significativamente reduzido pelo aumento do refluxo e/ ou tempos de misturação. Outros solventes podem ser também usados para purificar o boronato de CCI- 779 bruto, mas não tão eficientemente quanto a acetona. O éter pode auxiliar a remover algumas das outras impurezas a partir do boronato de CCI-779, mas não é um solvente eficiente para a remoção de rapamicina. Uma mistura de acetona /éter poderia reduzir tanto o conteúdo de rapamicina, como de outras impurezas com uma recuperação razoável. Os conteúdos de rapamicina de próximo a 8% no boronato de CCI- 779 poderiam ser reduzidos para 0,8 % ou menos (especificação = 0,8%) por 2 ou 3 suspensões. Exemplo 3: Isolamento do Boronato de CCI-779 Bruto a Partir do Licor Mãe

Os licores mãe foram concentrados e coletados. Os reatores foram então lavados com acetato de etila. Após a remoção dos solventes, os materiais obtidos a partir de acetato de etila foram combinados com os licores mãe concentrados.

As misturas combinadas foram adicionalmente concentradas a uma suspensão espessa (LOD = 32%, 48% para materiais dos licores mãe da primeira, segunda suspensão de acetona, respectivamente) antes do tratamento com éter. O boronato de CCI- 779 bruto foi então isolado através de filtração.

Tabela 3

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Exemplo 4: Purificação do Boronato de CCI-779 Bruto a Partir do Licor Mãe

Um processo para recuperar o boronato de CCI-779 foi designado e examinado usando as quantidades totais dos licores mãe gerados a partir da primeira e segunda suspensões de acetona durante a purificação de uma batelada de manufatura. O isolamento do CCI-779 bruto foi executado através da concentração do licor mãe a uma suspensão espessa, seguido pelo tratamento com éter dietílico, tal como sumariado na Tabela 4.

Mais do que 2 kg de boronato de CCI- 779 bruto com um conteúdo de rapamicina de 8,6% foi isolado a partir do licor mãe gerado durante a primeira suspensão de acetona (Entrada I). Cerca de 900 g do boronato de CCI- 779 bruto a partir do licor mãe da segunda suspensão de acetona foram obtidos com um conteúdo muito mais baixo de rapamicina (3,5%, Entrada II). O boronato de CCI-779 bruto foi purificado usando um procedimento de manufatura modificado, no qual uma suspensão do boronato de CCI- bruto em acetona é primeiramente aquecida em refluxo, de modo similar ao procedimento de manufatura. Após o resfriamento à temperatura ambiente, metade da quantidade de acetona usada na suspensão foi substituída por éter dietílico. A suspensão resultante foi agitada, em temperatura ambiente, durante um período de vezes, e foi filtrada.

Como apresentado na tabela que se segue, o boronato de CCI- 779 bruto a partir do licor mãe da primeira suspensão forneceu o boronato de CCI-779 purificado em 59% de rendimento com um conteúdo de rapamicina de 0,8% (dentro da especificação) após duas suspensões (Entrada I). A recuperação do boronato de CCI - 779 bruto a partir do licor mãe da segunda suspensão foi mais alta (70%, % Rapamicina = 0,7, Entrada II). Um total de quase 2 kg de boronato de CCI- 779 purificado pôde ser recuperado [ 2243/1239 χ 722 g (de ML da primeira suspensão) + 622 g (de ML da segunda suspensão) = 1929 g].

Tabela 4

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1. Procedimento para a purificação: I. Uma suspensão de boronato de CCI-779 bruto em acetona foi agitada em refluxo durante 1 hora, e então resfriada à temperatura ambiente. Cerca de metade das quantidades de acetona foram removidas sob vácuo. Algumas quantidades de éter dietílico foram adicionadas para finar a suspensão. Após a agitação adicional durante um período mínimo de 6 horas, boronato de CCI-779 purificado foi coletado através de filtração. II. I Repetido.

2.% de área de HPLC.

3. Rendimento Total para as Duas Purificações.

Exemplo 5: Conversão do Boronato de CCI- 779 Recuperado a CCI- 779

O boronato de CCI- 779 recuperado (a partir do licor mãe da primeira suspensão) foi adicionalmente convertido para CCI-779 usando os métodos aqui descritos. Como apresentado na Tabela 5, tanto o rendimento como a qualidade do CCI- 779 isolado foram comparáveis àqueles quando o boronato de CCI-779 de outra fonte foi usado. "Imp. Totais" refere-se a impurezas totais. "LST" refere-se a uma única impureza maior.

Tabela 5

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Exemplo 6: Isolamento e Purificação de Boronato de CCI-779 a partir de Licores Mãe

A. Experimento A

O licor mãe concentrado (8,0 kg) a partir da primeira suspensão de acetona do processo de manufatura de boronato de CCI- 779 e enxágües de acetato de etila (5, 5 Kg) foram utilizados. Os solventes foram removidos a partir dos enxágües de acetato de etila, sob vácuo, de modo a fornecer 537 g de concentrado. O concentrado foi transferido usando 750 ml de acetona em um frasco de fundo redondo de vários gargalos de 12 litros, equipado com um agitador mecânico, termômetro, e aparelho de destilação. Cerca de metade do licor mãe concentrado foi então adicionado ao frasco. Este foi destilado sob vácuo 28" Hg (94,8 kPa)) em uma temperatura de vaso de 20- 25°C, até que uma suspensão espessa fosse obtida. O resto do licor mãe concentrado foi adicionado, e então destilado novamente a uma suspensão espessa (cerca de 5 1). A mistura assim obtida, foram adicionados 4,0 kg de éter dietílico. A suspensão amarela resultante foi agitada durante 4 horas a de 20-25°C e então filtrada de modo a fornecer 2243 g de boronato de CCI-779 bruto, com um LOD de 3,84% (75°C/ 30" Hg (101,6 kPa), 2 horas) e um conteúdo de rapamicina de 8,6 % (% de área de HPLC).

Ao interior de um frasco de fundo redondo de vários gargalos de 12 litros, equipado com um agitador mecânico, termômetro, e aparelho de destilação, foram carregados 1239 g de boronato de CCI- 779 bruto e 1859 g de acetona. O volume foi marcado, e então mais 1859 g de acetona foram adicionados. A mistura foi aquecida até o refluxo (56- 59°C) e então mantida neste durante 1 hora. A suspensão foi resfriada a de 20-25°C durante 2-3 horas, e então destilada para o volume marcado sob vácuo (27" Hg (91,4 kPa)) em uma temperatura de vaso de 20-25°C. 1872 g de éter dietílico foram adicionados, agitados a de 20-25°C durante um mínimo de 6 horas, e então filtrados para fornecer 865 g de boronato de CCI- 779 bruto, com um conteúdo de rapamicina de 2,1%. Ao interior de outro frasco de fundo redondo de vários gargalos de 12 litros, equipado com um agitador mecânico, termômetro e aparelho de destilação, foram carregadas as quantidades totais do CCI- 779 bruto e 1275 g de acetona. Após o volume ser marcado, outros 1275 g de acetona foram adicionados. A mistura foi aquecida com agitação a de 56- 59°C durante 1 hora, resfriada a de 20-25°C durante 2- 3 horas, e então destilada ao volume marcado sob vácuo (27" Hg (91,4 kPa)), em uma temperatura de vaso de 20-25°C. Foram adicionados 1275 g de éter dietílico, agitados durante um mínimo de 6 horas, e então filtrados. Após a secagem sob vácuo (> 28" Hg (>94,8 kPa) a 40°C durante 5 horas, foram obtidos 727 g de boronato de CCI-779 purificado (LOD = 0,86), foram obtidos 727 g com um conteúdo de rapamicina de 0,8% (% de área de HPLC).

B. Experimento B

O licor mãe (221, 3 kg) a partir da primeira suspensão de acetona da batelada de manufatura foi destilado sob vácuo (42- 46 torr), em uma temperatura de vaso de -5 a 25°C, até que uma suspensão espessa fosse obtida (cerca de 25 L). A mistura assim obtida, foram adicionados 22,1 kg de éter dietílico. A suspensão amarela resultante foi agitada durante 4 horas, a de 19-25°C, e então filtrada para fornecer 10,1 kg do boronato de CCI- 779 bruto. A torta úmida foi combinada com o licor mãe (107,4 kg) a partir da segunda suspensão de acetona da batelada de manufatura e destilada sob vácuo (22- 45 torr) em uma temperatura de vaso de -1 a -9°C, até que uma suspensão espessa fosse obtida. A mistura assim obtida, foram adicionados 32, 9 kg de éter dietílico. A suspensão amarela resultante foi agitada durante 4 horas a de 19-25C, e então filtrada. Depois disso, foi efetuada a lavagem, duas vezes, usando éter (20 kg cada lavagem) de modo a fornecer 10,0 kg de boronato de CCI- 779 com um LOD de 0,82% (40C/30" Hg (101,6 kPa), 2 horas).

Boronato de CCI- 779 bruto (300 g) e acetona (900 g) foram carregados ao interior de um frasco. A mistura foi aquecida até o refluxo (55 a 61°C) e mantida neste durante 1 hora. A mistura foi resfriada a de 20-25C durante 2- 3 horas, e então destilada para que a acetona fosse removida sob vácuo (23- 26" Hg (88,04 kPa) em uma temperatura de vaso não excedente a de 10-18°C (volume final, 940-960 ml). O éter dietílico (450 g) foi adicionado, agitado a de 18- 25°C durante 18 horas, e então filtrado para fornecer o boronato de CCI-779 bruto (225 g, LOD = 0, 95%). O boronato de CCI- 779 bruto (224 g) e acetona (676 g) foram carregados ao interior de um frasco. A mistura foi aquecida até o refluxo (55 a 610C) e mantida neste durante 1 hora. A mistura foi resfriada a de 19-25°C durante 2- 3 horas, e então destilada para remover a acetona sob vácuo (18- 20"), em uma temperatura de vaso de 18-20°C (volume final de 620 ml). O éter dietílico (338 g) foi adicionado, agitado a de 18-25°C durante 18 horas, e então filtrado. Após a lavagem 3 vezes usando éter (250 ml cada) para fornecer o boronato de CCI- 779 em 63% de rendimento (LOD = 0, 57%, concentração = 85, 9%, impurezas totais = 1,8%, LSI = 0, 50, rapamicina =0,95%).

Os Exemplos 7-9 ilustram uma modalidade do método da invenção para a preparação de CCI-779 purificado a partir de boronato de CCI-779 purificado, tal como ilustrado no Esquema III. Esquema III

<formula>formula see original document page 32</formula>

Exemplo 7- Preparação de CCI-779

A. Preparação de CCI-779 Bruto

Ao interior de um frasco de fundo redondo de vários gargalos, de 3 litros, equipado com um agitador mecânico, termômetro, funil de adição de equalização de 500 ml, e condensador de refluxo com uma cabeça de nitrogênio, foram adicionados 199 g (0,178 moles) de boronato de CCI- 779, uma solução de 105 g de 2-metil-2,4-pentanodiol (0,891 moles) em 371 g de éter dietílico e 185 g de heptanos. A mistura foi aquecida a de 33- 37°C, sob agitação sob nitrogênio, e mantida neste durante 12 horas. O HPLC demonstrou o consumo do boronato de CCI-779 de partida (< 3%) e de ácido fenil borônico na mistura da reação abaixo da especificação de menos do que 3,0% ou de menos do que 1, 5%. A mistura da reação foi resfriada para de 20- 25°C durante 20 minutos, foram adicionados 928 g de heptanos através do funil de adição durante 1 hora, e então a mistura foi agitada a de 20-25°C, durante 1 hora. A mistura resultante foi filtrada em um funil de Buchner. Os sólidos filtrados foram lavados com duas porções de 500 ml de heptanos. Após a secagem por sucção até que essencialmente não fosse coletado mais filtrado, 174 gramas de CCI- 779 gramas foram isolados concentração = 93, 8%, impurezas totais =1, 36%, rapamicina = 0,40 % (HPLC); éter =0, 15%, heptanos - 0,26% (CG)].

B. Purificação de CCI- 779 Bruto

O CCi-779 bruto obtido foi transferido a um frasco de 2 litros, e então 1 litro de acetona foi adicionado, de modo a que fosse obtida uma solução turva. A solução foi clarificada através de um funil de Buchner com uma frita de vidro fina (4- 5,5 μm). O filtrado claro foi então carregado ao interior de um frasco de vários gargalos, de 5 litros, equipado com um agitador mecânico, termômetro, e aparelho de destilação a vácuo. O frasco de 2 litros e o funil de Buchner foram lavados com 400 ml de acetona. As lavagens de acetona foram adicionadas ao frasco de 5 litros. Após a remoção de acetona sob uma pressão reduzida a de 20-3 0°C, a espuma obtida foi dissolvida em 420 g de éter dietílico, a de 20-25°C, de modo a formar uma solução clara. Os sólidos iniciaram a precipitação após 20 minutos. Uma solução de 105, 3 g de 2-metil-2,4-pentanodiol em 52 g de éter dietílico ter sido filtrada através de um filtro de seringa de 0,45 μm, ela foi carregada ao interior do frasco de 5 litros. A mistura foi agitada durante 1 hora a de 20-25 °C. A análise de HPLC demonstrou que a quantidade de ácido fenil borônico era inferior a 0,05%. A mistura da reação, foram então adicionados 1, 272 g de heptanos através do funil de adição, durante 2 horas. Após a agitação a de 20-25°C durante 1 hora, a mistura foi filtrada em um funil de Buchner. Os sólidos coletados foram lavados com 3 porções de 500 ml de éter/heptanos (1A, v/v), e a sucção foi mantida até que o gotejamento cessasse. A torta do filtro foi secada em um forno a vácuo a 50°C, sob vácuo, durante 21 horas, de modo a fornecer 156 gramas (89%, corrigido para as concentrações) de CCI- 779 purificado (CZ- 7781- 24-2) como cristais brancos [ Concentração = 98, 4%, impurezas totais = 0,98 %, rapamicina = 0, 36%, PhB (OH)2 < 0,05% (HPLC); éter =0,21 %, heptanos =0,037%, 2-metil-2,4- petanodiol = 0,096%, boronato de 2-metil-2,4-pentanodiol = não detectado (CG) ]

<table>table see original document page 34</column></row><table>

Exemplo 8 - Preparação de CCI- 779 Purificado

Foram executados alguns estudos pilotos precoces, usando essencialmente o método descrito no Exemplo 1, mas com concentrações variáveis de boronato de CCI-779, CCI- 779 preparado através de diferentes vias, e períodos de tempo de reação diferentes.

Na tabela precedente, o código de processo 1 refere-se a: 27% (% em peso) de boronato de CCI-779 em éter/ heptanos a 2/1 (p/p) a de 34- 35°C durante de 6-12 horas, e então adicionar heptanos, filtrar. A purificação foi efetuada através de cristalização de acetona /éter, seguida por tratamento com 2-metil-2,4-pentanodiol. O código de processo 2 refere-se a: 17% (% em peso) de boronato de CCI-779 em éter/ heptanos (p/p) a 2/1 em de 34-35°C durante 15-24 horas, e então adição de heptanos, e filtrar. A purificação foi efetuada através de cristalização de acetona/éter, seguida pelo tratamento com 2-metil--2,4-pentanodiol.

Exemplo 9- Preparação de CCI- 779 Purificado, Via

Alternativa

O CCI-779 bruto foi preparado essencialmente como acima descrito a partir de boronato de CCI- 779 usando 5 equivalentes de 2-metil- 2,4-pentanodiol em uma mistura de éter/ heptanos (2:1, p/p), a 34°C, durante 6 horas. O CCI-779 bruto foi isolado através de filtração. O CCI-779 bruto foi suspenso em éter, tratado com 5 equivalentes de 2-metil-2,4-petanodiol, seguido pela adição de heptanos, filtração e secagem. O CCI- 779 parcialmente purificado, seco, é então dissolvido em acetona, clarificado, e a acetona removida. Seguindo-se a isto, o éter é então adicionar para cristalizar o produto, os heptanos são adicionados à suspensão de éter, a suspensão é filtrada e seca. O rendimento resultante é de 73% de CCI- 779, tendo uma concentração de 93,5%, impurezas totais de menos do que 4% (isto é, 3,59%), e de modo significativo, PhB(OH)2 de 0,007.

Todos os documentos aqui identificados são incorporados a título referencial. Aquele versado na arte irá reconhecer que modificações menores nas condições e técnicas descritas nas modalidades específicas aqui descritas podem ser variadas, sem que haja afastamento da presente invenção. Tais modificações e variantes menores estão dentro do escopo da invenção aqui descrito e conforme definido pelas reivindicações que se seguem.

Claims (68)

1. Processo para preparar um 42-éster de rapamicina, caracterizado pelo fato de compreender os estágios de: (a) reagir um boronato de 42-éster de rapamicina com um diol em uma mistura de solvente, de modo a prover o 42-éster de rapamicina bruto; e (b) purificar o 42-éster de rapamicina bruto através de recristalização e tratamento com um diol.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o estágio (b) compreende tratar o éster-42 de rapamicina bruto com um diol em solvente, de modo a formar o 42-éster de rapamicina sólido, e então recristalizar o sólido para formar o 42-éster de rapamicina purificado.

3. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o estágio (b) compreende recristalizar o 42-éster de rapamicina bruto, de modo a formar uma suspensão, e então tratá-lo com um diol para formar o 42-éster de rapamicina purificado.

4. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o boronato do 42-éster de rapamicina no estágio (a) é de cerca de 10% a cerca de 30% em peso, na referida mistura de solvente.

5. Processo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o boronato do 42-éster de rapamicina no estágio (a) é de cerca de 30% em peso, na referida mistura de solvente.

6. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a razão molar de diol para o boronato do -42-éster de rapamicina no estágio (a) é de cerca de 5:1 a cerca de 10:1.

7. Processo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a razão molar de diol para o boronato do 42-éster de rapamicina no estágio (a) é de cerca de 5: 1.

8. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o diol no estágio (a) é 2-metil-2,4- pentanodiol.

9. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que a mistura de solvente no estágio (a) compreende o éter dietílico e heptano.

10. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que a mistura de solvente no estágio (a) compreende o éter dietílico e uma mistura de heptanos.

11. Processo de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a razão de éter dietílico para heptanos é de cerca de 1:1 a cerca de 2:1, em peso.

12. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ali, caracterizado pelo fato de que a reação no estágio (a) é executada em cerca de 30 a 40°C.

13. Processo de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o 42-éster de rapamicina no estágio (a) é resfriado a cerca de a 25°C.

14. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o 42-éster de rapamicina bruto de (a) é precipitado através da adição de um ou mais solventes à base de carbono não- polares.

15. Processo de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o um ou mais solventes à base de carbono não-polares são selecionados a partir do grupo que consiste de hexano, pentano e heptano.

16. Processo de acordo com as reivindicações 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que o solvente é uma mistura de heptanos.

17. Processo de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a razão de heptano(s) para a mistura de solvente do estágio (a) é de cerca de 3:1, em peso.

18. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o estágio de recristalização no estágio (b) compreende os estágios de: (I) dissolver o 42-éster de rapamicina bruto em um solvente polar; e (II) filtrar a suspensão resultante e concentrar o filtrado do 42- éster de rapamicina bruto, de modo a fornecer uma espuma.

19. Processo de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o solvente polar é acetona.

20. Processo de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o solvente polar é acetato de etila.

21. Processo de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que a razão de acetona para o 42-éster de rapamicina bruto é de cerca de 5:1.

22. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 18 a 21, caracterizado pelo fato de compreender adicionalmente dissolver a espuma do estágio (II) em éter.

23. Processo de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que o éter é o éter dietílico.

24. Processo de acordo com as reivindicações 22 ou 23, caracterizado pelo fato de que a razão do 42-éster de rapamicina é de cerca de 1:4 a cerca de 1:3.

25. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 24, caracterizado pelo fato de compreender ainda a adição de heptanos.

26. Processo de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo fato de que a razão de heptanos para éter é de 3:1, em peso.

27. Processo de acordo com as reivindicações 25 ou 26, caracterizado pelo fato de compreender adicionalmente filtrar a suspensão formada e lavar o 42-éster de rapamicina bruto precipitado com éter e um ou mais heptanos.

28. Processo de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que a razão de éter para heptanos é de 1:2, em volume.

29. Processo de acordo com as reivindicações 27 ou 28, caracterizado pelo fato de compreender ainda secar o 42-éster de rapamicina isolado.

30. Processo de acordo com as reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo fato de que o tratamento com um diol no estágio (b) compreende os estágios de: (I) misturar o 42-éster de rapamicina em solvente; e (II) reagir o 42-éster de rapamicina com diol.

31. Processo de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o solvente no estágio (I) é o éter dietílico.

32. Processo de acordo com as reivindicações 30 ou 31, caracterizado pelo fato de que o 42-éster de rapamicina no estágio (I) é de cerca de 30% em peso, em solvente.

33. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações -30 a 32, caracterizado pelo fato de que o diol no estágio (II) é 2-metil-2,4- petanodiol.

34. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações -30 a 33, caracterizado pelo fato de que a razão molar de diol para o 42-éster de rapamicina no estágio (II) é de cerca de 5: 1.

35. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações -30 a 34, caracterizado pelo fato de que a reação no estágio (II) é executada em de 20 a 25°C.

36. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações -30 a 35, caracterizado pelo fato de que o 42-éster de rapamicina bruto do estágio (a) é primeiramente secado de solvente residual.

37. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 36, caracterizado pelo fato de que o boronato do 42-éster de rapamicina possui a fórmula: <formula>formula see original document page 40</formula> R7 é hidrogênio, alquila de 1-6 átomos de carbono, alquenila de 2-7 átomos de carbono, alquinila de 2-7 átomos de carbono, - (CR12R13)fOR10, -CF3,-F, ou -CO2R10; R10 é hidrogênio, alquila de 1-6 átomos de carbono, alquenila de 2-7 átomos de carbono, alquinila de 2-7 átomos de carbono, trifenilmetila, benzila, alcoximetila de 2-7 átomos de carbono, cloroetila, ou tetraidropiranila; R8e R9 são tomados juntos para formar X; X é 2-fenil-dioxoborinano ou um 2-(substituído) fenil- (substituído) dioxoborinano; R12 e R13 são, cada qual, independentemente, hidrogênio, alquila de 1-6 átomos de carbono, alquenila de 2-7 átomos de carbono, alquinila de 2-7 átomos de carbono, trifluorometila ou -F; e f = 0-6.

38. Processo de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que o 2-fenil-dioxoborinano é selecionado a partir do grupo que consiste de 2-fenil-4,6,6-trimetil-l,3,2-dioxoborinano, 2-fenil-l,3,2- dioxaborinan-5-ila, 2- fenil-l,3,2-dioxaborinan-4-ila, em que fenila pode ser opcionalmente substituído.

39. Processo de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que o boronato do 42-éster de rapamicina é um boronato de CCI- -779.

40. Composto, caracterizado pelo fato de ser 42-éster de rapamicina purificado preparado de acordo com o processo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 39.

41. Composto, caracterizado pelo fato de ser 42-éster de rapamicina purificado com o ácido 3-hidróxi-2-(hidroximetil)-2-metil propiônico (CCI-779) preparado de acordo com o processo como definido na reivindicação 39.

42. Composto, caracterizado pelo fato de ser 42-éster de rapamicina purificado com o ácido 3-hidróxi-2-(hidroximetil)-2-metil propiônico (CCI-779) tendo pelo menos 96% de pureza..

43. Composto purificado de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que o referido composto contém menos do que 1% de qualquer impureza única.

44. Composto purificado de acordo com as reivindicações 42 ou 43, caracterizado pelo fato de que o referido composto contém menos do que 0,05% do ácido fenil borônico.

45. Método para isolar o boronato do 42-éster de rapamicina bruto a partir do licor mãe, compreendendo boronato do 42-éster de rapamicina, rapamicina e um ou mais solventes, caracterizado pelo fato de compreender: - concentrar o licor mãe a uma suspensão; - filtrar o licor mãe concentrado resultante para isolar o boronato do 42-éster de rapamicina bruto.

46. Método de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que o um ou mais solventes são selecionados a partir do grupo que consiste de um ou mais de acetona, acetato de etila, e água.

47. Método de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de compreender ainda o estágio de concentrar o licor mãe que compreende é concentrado a uma espuma e tratar a espuma com éter dietílico antes da filtração.

48. Método de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de compreender adicionalmente o estágio de tratar a segunda suspensão com um solvente que compreende acetona e concentrar a mistura para formar uma terceira suspensão antes da filtração.

49. Método de acordo com a reivindicação 45, caracterizado pelo fato de que o licor mãe é concentrado a uma suspensão, e que compreende adicionalmente o estágio de diluir a suspensão com éter dietílico antes da filtração.

50. Método para purificação de um boronato do 42-éster de rapamicina bruto que compreende o boronato do 42-éster de rapamicina, rapamicina, e pelo menos um solvente, caracterizado pelo fato de compreende: (a) aquecer uma mistura, que compreende o boronato do 42- éster de rapamicina bruto e um solvente durante pelo menos cerca de 1 hora; (b) agitar a mistura de (a) durante pelo menos cerca de 6 horas, seguindo-se ao resfriamento; (c) concentrar a mistura de boronato do 42-éster de rapamicina, de modo a formar uma suspensão concentrada; (d) tratar a suspensão concentrada com um éter adequado; (e) purificar o boronato do 42-éster de rapamicina; (f) opcionalmente repetir os estágios (a) - (e).

51. Método de acordo cm a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que a mistura de (a) é deixada resfriar à temperatura ambiente.

52. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que os estágios (a) - (e) são repetidos pelo menos uma vez.

53. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que os estágios (a) - (e) são executados em um total de três vezes.

54. Método de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo fato de que seguindo-se à repetição dos estágios (a) - (e), o boronato do 42-éster de rapamicina recuperado contém menos do que 1% em peso, de rapamicina.

55. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que a suspensão (c) concentrada é formada através da remoção de pelo menos cerca de metade do solvente.

56. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de compreender adicionalmente o estágio de purificar o boronato do -42-éster de rapamicina isolado no estágio (e) através da lavagem com um éter adequado.

57. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que o solvente no estágio (a) é selecionado a partir do grupo, que consiste de acetona, metanol, acetonitrila, metil etil cetona, TBME, e éter, e misturas dos mesmos.

58. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que o solvente no estágio (a) é acetona.

59. Método de acordo cm a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que o estágio de aquecimento é executado em uma faixa de temperatura de cerca de 55 a cerca de 60°C.

60. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que o éter adequado é o éter dietílico.

61. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que o boronato do 42-éster de rapamicina é recuperado através da filtração do produto cristalizado, formado seguindo-se ao tratamento com o éter adequado.

62. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que o boronato do 42-éster de rapamicina possui a fórmula: <formula>formula see original document page 44</formula> em que R e -O-C=O.CR7R8R9, em que: R7 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste de hidrogênio, alquila de 1-6 átomos de carbono, alquenila de 2-7 átomos de carbono, alquinila de 2-7 átomos de carbono, -(CR12R13)fOR10, - CF3,-F, ou -CO2R10; R10 é hidrogênio, alquila de 1-6 átomos de carbono, alquenila de 2-7 átomos de carbono, alquinila de 2-7 átomos de carbono, trifenilmetila, benzila, alcoximetila de 2-7 átomos de carbono, cloroetila, ou tetraidropiranila; R8 e R9 são tomados juntos para formar X; X é 2-fenil-dioxoborinano; R12 e R13 são, cada qual, independentemente, hidrogênio, alquila de 1-6 átomos de carbono, alquenila de 2-7 átomos de carbono, alquinila de 2-7 átomos de carbono, trifluorometila ou -F; e f = 0-6.

63. Método para purificação de um boronato do 42-éster de rapamicina com o ácido 3-hidróxi-2- (hidroximetil)-2-metil propiônico (CCI- -779) a partir de licores mãe que compreendem o CCI-779 e pelo menos um solvente, caracterizado pelo fato de compreender: (a) aquecer até o refluxo uma mistura, que compreende o CCI- -779 bruto obtido a partir de licores mãe e um solvente, que compreende acetona; (b) permitir com que a mistura de (a) seja resfriada à temperatura ambiente; (c) agitar a mistura resfriada pelo menos durante cerca de 6 horas; (d) remover pelo menos metade do solvente, de modo a formar uma suspensão de boronato de CCI- 779 concentrada; (e) tratar a suspensão concentrada com éter dietílico; (f) recuperar o boronato de CCI-779; (g) repetir os estágios (a) - (f) pelo menos uma vez.

64. Método de acordo com a reivindicação 63, caracterizado pelo fato de que o solvente é removido sob vácuo.

65. Método de acordo com a reivindicação 63, caracterizado pelo fato de que o boronato de CCI- 779 isolado é coletado através de filtração.

66. Boronato de CCI-779, caracterizado pelo fato de ser preparado de acordo com o método da reivindicação 63, tendo um conteúdo de rapamicina de menos do que 1% p/p.

67. Boronato de CCI-779 de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelo fato de que o conteúdo de rapamicina é de 0,8% p/p.

68. Boronato de CCI-779 de acordo com a reivindicação 66, caracterizado pelo fato de que o conteúdo de rapamicina é de 0,7% p/p.