BRPI0617654A2 - composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, composição farmacêutica, uso de um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, métodos para produzir um efeito inibitório de hdac e do ciclo celular (anti-proliferação celular) e para tratar o cáncer em um animal de sangue quente, e, processo para preparar um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo - Google Patents

composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, composição farmacêutica, uso de um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, métodos para produzir um efeito inibitório de hdac e do ciclo celular (anti-proliferação celular) e para tratar o cáncer em um animal de sangue quente, e, processo para preparar um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo Download PDF

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Abstract

<B>COMIPOSTO OU UM SAL FARMACEUTICAMENTE ACEITáVEL DO MESMO, COMPOSIçãO FARMACêUTICA, USO DE UM COMPOSTO OU UM SAL FARMACEUTICAMENTE ACEITáVEL DO MESMO, MéTODOS PARA PRODUZIR UM EFEITO IMBITóRIO DE HDAC E DO CICLO CELULAR (ANTI-PROLIFERAçãO CELULAR) E PARA TRATAR O CáNCER EM UM ANIMAL DE SANGUE QUENTE, E, PROCESSO PARA PREPARAR UM COMPOSTO OU UM SAL FARMACEUTICAMENTE ACEITáVEL DO MESMO <D>A invenção diz respeito aos compostos de benzamida da fórmula (1), em que R^ 1^ é um anel de pirazol ligado a C, o qual é opcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de alquila C~ 1-4~, cicloalquila C~ 3-4~, alcóxi C~ 1-4~ e cicloalcóxi C~ 3-4~; ou na forma de um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitável dos mesmos. A invenção também diz respeito aos processos para a preparação de tais compostos, às composições farmacêuticas que os contenham ao uso destes na fabricação de um medicamento para o uso como um agente anti-proliferativo na prevenção ou tratamento de tumores ou outras condições proliferativas, as quais são sensíveis à inibição da histona desacetilase (UDAC).

Description

"COMPOSTO OU UM SAL FARMACEUTICAMENTE ACEITÁVEL DOMESMO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, USO DE UM COMPOSTOOU UM SAL FARMACEUTICAMENTE ACEITÁVEL DO MESMO,MÉTODOS PARA PRODUZIR UM EFEITO INIBITÓRIO DE HDAC EDO CICLO CELULAR (ANTI-PROLIFERAÇÃO CELULAR) E PARATRATAR O CÂNCER EM UM ANIMAL DE SANGUE QUENTE, E,PROCESSO PARA PREPARAR UM COMPOSTO OU UM SALFARMACEUTICAMENTE ACEITÁVEL DO MESMO"
Esta invenção diz respeito à certos novos compostos debenzamida, ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, os quais sãoinibidores potentes da enzima desacetilase histona (HDAC). A invençãotambém diz respeito aos processos para a fabricação destes novos compostosde benzamida, às composições farmacêuticas que os contenham e ao seu usoem método terapêuticos, por exemplo na fabricação de medicamentos parainibir HDAC em um animal de sangue quente, tal como o ser humano.
A atividade de HDAC foi associada com vários estados dedoença, tais como câncer (Marks et ai, Nature Reviews, 1, 194 a 202,(2001)), fibrose cística (Li, S. et al, J. Biol. Chem., 274, 7803 a 7815, (1999)),Coréia de Hungtingon (Steffan, J. S. et al, Nature, 413, 739 a 743, (2001)) eanemia de célula falciforme (Gabbianelli, M. et al, Blood, 95, 3555 a 3561,(2000)). Portanto, a invenção também prolonga-se aos métodos de tratarqualquer uma das doença acima mencionadas usando os compostos debenzamida da presente invenção, bem como ao uso destes compostos debenzamida na fabricação de um medicamento para o tratamento destesestados de doença.
Na célula eucariótica, o DNA é rotineiramente compactadopara prevenir a acessibilidade ao fator de transcrição. Quando a célula éativada, este DNA compactado é tornado disponível para as proteínas queligam ao DNA, deste modo permitindo a indução da transcrição genética(Beato, M., J. Med. Chem., 74, 711 a 724 (1996); Wolffe, A. P., Nature, 387,16 a 17 (1997)). O DNA nuclear associa-se com as proteínas nuclearesconhecidas como histonas para formar um complexo chamado de cromatina.A histonas nucleares, chamadas de H2A, H2B, H3 e H4, são circundadas por146 pares de base de DNA para formar a unidade fundamental da cromatina, eque é conhecida como o nucleossomo. As caudas dos terminais N dashistonas nucleares contêm resíduos de lisina que são os sítios para a acetilaçãopós-transcricional. A acetilação do grupo amino terminal na cadeia lateral delisina neutraliza o potencial da cadeia lateral para formar uma carga positiva,e é pensada impactar na estrutura de cromatina.
As desacetilase histonas (HDACs) são enzimas que contêmzinco que catalizam a remoção dos grupos acetila a partir dos terminais ε-amino dos resíduos de lisina ramificados próximo aos terminais amino dashistonas nucleossômicas. As HDACs podem ser divididas em duas classes, aprimeira (HDAC 1, 2, 3 e 8) representada por proteínas semelhantes a Rpd3de levedura, e a segunda (HDAC 4, 5, 6, 7, 9 e 10) representadas porproteínas semelhantes a Hdal de leveduras. O processo reversível deacetilação é conhecido ser importante na regulação transcricional e progressãode ciclo celular. Além disso, a desregulação da HDAC foi associada comvários cânceres e os inibidores de HDAC, tal como Tricostatina A (umproduto natural isolado de Streptomyces hygroscopicus), foi mostradoapresentar uma inibição de crescimento celular significante e efeitos anti-tumores (Meinke, P. T., Current Medicinal Chemistry, 8, 211-235 (2001)). AYoshida et al, (Exper. Cell Res., 177, 122-131 (1988)) ensina que aTricostatina A causa a captura de fibroblastos de ratos nas fases Gl e G2 dociclo celular, por meio disso implicando o papel das HDAC na regulação dociclo celular. Além disso, a Tricostatina A mostrou induzir o diferenciamentoterminal, inibir crescimento celular, e prevenir a formação de tumores emcamundongos (Finnin et al, Nature, 401, 188-193 (1999)).E conhecido dos Pedidos de Patente Internacional PublicadosNúmeros WO 03/087057 e WO 03/092686 que certos derivados debenzamida são inibidores de HDAC. Um composto particular divulgado naWO 03/087057 é N-(2-aminofenil)-4-[l-(pirid-2- il-metil)piperidin-4-il]-benzamida [1] (estrutura a qual é mostrada abaixo)
<formula>formula see original document page 4</formula>
Foi verificado agora, que certos derivados de benzamida quecarregam um grupo pirazol opcionalmente substituído ao invés do grupopiridila são inibidores potentes de HDAC. Além disso, os compostosparticulares da presente invenção também foram verificados possuir outraspropriedades farmacêuticas favoráveis, incluindo uma potência celular ou invivo vantajosa, propriedades de DMPK vantajosas (por exemplo, um perfil dedisponibilidade favorável e/ou níveis de plasma livre favoráveis e/ou umameia-vida favorável e/ou um volume de distribuição favorável), bem comosolubilidade boa ou melhorada. Além disso, os derivados de benzamida dapresente invenção no geral mostram uma atividade particularmente baixa emum Ensaio de Inibição do Canal de Potássio Codificado por hERG, que é umindicador dos efeitos colaterais cardiovasculares indesejáveis e sérios naprática clínica.
De acordo com a presente invenção é fornecido um compostoda fórmula (I):
<formula>formula see original document page 4</formula>
em que R1 é um anel de pirazol ligado a carbono, que éopcionalmente substituído por um ou mais grupos selecionados de alquila Ci.4, cicloalquila C3.4, alcóxi Ci_4 e cicloalcóxi C3-4; ou um salfarmaceuticamente aceitável do mesmos.
Deve ser entendido que certos compostos da fórmula (I)definida acima pode apresentar o fenômeno do tautomerismo. Deve serentendido que a presente invenção inclui em sua definição qualquer tal formatautomérica, ou uma mistura destes, que possui a atividade acimamencionada, e não deve ser meramente limitada a qualquer uma formatautomérica utilizada dentro dos desenhos das fórmulas ou nomeados nos
Exemplos.
Onde os substituíntes opcionais são selecionados de "um oumais" grupos substituíntes deve ser entendido que esta definição inclui todossubstituíntes sendo escolhidos de um dos grupos especificados ou ossubstituíntes sendo escolhidos de dois ou mais dos grupos especificados.
Os substituíntes opcionais adequados para R1 podem estarpresentes em quaisquer átomos de carbono ou nitrogênio dentro do anel depirazol.
R1 adequadamente carrega de 1 a 3 grupos substituíntes.Alternativamente, R1 é não substituído.
Como aqui usado, o termo "alquila" se refere a cadeias retasou ramificadas. O termo "cicloalquila" inclui estrutura de anel, mas podemadicionalmente incluir as cadeias na forma de grupos cicloalquil-alquila. Poranalogia, os termos "alcóxi" e "cicloalcóxi" compreendem alquila,cicloalquila ou grupos cicloalquil-alquila ligados através de um átomo deoxigênio.
Os substituíntes alquila C1-4 ou cicloalquila C3-4 adequadospara R1 incluem metila, etila, propila, ciclopropila, ciclobutila, ouciclopropilmetila.
Os substituíntes alcóxi C 1-4 e cicloalcóxi C3-4 adequados paraR1 incluem metóxi, etóxi, propóxi, ciclopropóxi, ciclobutóxi, oumetilciclopropóxi.
Em uma forma de realização particular da invenção, R1 é umanel de pirazol ligado a carbono, que é opcionalmente substituído por 1, 2 ou3 grupos selecionados de alquila Cm ou alcóxi Cm.
Em uma outra forma de realização da invenção, R1 é um anelde pirazol ligado a carbono, que é opcionalmente substituído por 1, 2 ou 3grupos selecionados de alquila C1-2 ou alcóxi C1-2.
Os exemplos de grupos R1 incluem pirazol-3-ila, pirazol-4-ila,l-metilpirazol-4-ila, 3-etilpirazol-4-ila, l,3-dimetilpirazol-5-ila, 1,3-dimetilpirazol-4-ila, 1,3,5-trimetilpirazol-4-ila, 1,3-dimetil-5-metóxi-pirazol-4-ila, l,5-dimetilpirazol-4-ila, l-etil-5-metilpirazol-4-ila, l-etil-pirazol-4-ila, el-etil-3-metilpirazol-4-ila (submetido ao tautomerismo onde possível).
Em uma outra forma de realização da invenção, os compostosda fórmula (I) compreendem os compostos da fórmula (IA)
<formula>formula see original document page 6</formula>
onde R2 é hidrogênio, alquila Cm ou cicloalquila C3-4, e
R3 e R5 são independentemente selecionados de hidrogênio,alquila C1-4, cicloalquila C3-4, alcóxi Cm ou cicloalcóxi C3-4.
Será apreciado que os átomos do anel da porção de pirazol damolécula da fórmula (IA) são no geral numerados como mostrado nodiagrama acima. Contudo, a molécula é submetida ao tautomerismo no casoonde R2 é hidrogênio, onde a troca dos grupos de hidrogênio a partir de umnitrogênio do anel de pirazol ao outro, significa que os pirazóis substituídos,onde pelo menos um dos R3 ou R5 é outro que não hidrogênio, sãoinevitavelmente as misturas de cada tautômero, e que Rj e R são portantojulgados ser permutáveis.
Em uma forma de realização alternativa, a invenção forneceum composto da fórmula (IB)
<formula>formula see original document page 7</formula>
onde R2, R3 e R5 são como definidos acima em relação àfórmula (IA)
Novamente, será apreciado que a porção de pirazol damolécula da fórmula (IB) é no geral numerada de acordo com aqueladelineada no diagrama acima. Contudo, como para os compostos da fórmula(IA) divulgados acima, a molécula também é submetida ao tautomerismoquando R2 é hidrogênio.
Os exemplos particulares de R incluem hidrogênio, metila,etila, propila, ciclopropila, metilciclopropila ou ciclobutila.
Por exemplo, R é hidrogênio, metila, etila, propila ouciclopropila.
Em uma forma de realização particular, R é hidrogênio,metila ou etila.
Em uma outra forma de realização, R é hidrogênio ou metila.
Os exemplos particulares dos grupos R3 e R5 são hidrogênio metila, etila, propila, ciclopropila, ciclopropilmetila, metóxi, etóxi, propóxi ouciclopropóxi.
Os exemplos particulares dos grupos R3 ou R5 incluemhidrogênio, metila, etila ou metóxi.
Adequadamente, não mais do que um grupo R3 ou R5 é umalcóxi C1-4.
Em uma forma de realização particular, pelo menos um, epreferivelmente dois grupos RjReR são outro que não hidrogênio.
Em uma forma de realização particular da invenção, os compostos têm a fórmula estrutural (IA) mostrada acima em que R éhidrogênio ou alquila C1-4, e R3 e R5 são cada um independentementeselecionados de hidrogênio, alquila C1-4, ou alcóxi C1-4.
Em uma outra forma de realização, os compostos têm afórmula estrutural (IA) mostrada acima em que R2 é hidrogênio, metila ou etila, e R3 e R5 são cada um independentemente selecionados de hidrogênio,metila, etila ou metóxi.
Em uma outra forma de realização, os compostos têm afórmula estrutural (IA) mostrada acima em que R2 é hidrogênio ou metila, eR3 e R5 são cada um independentemente selecionados de hidrogênio, metila, etila ou metóxi.
Em uma outra forma de realização, os compostos têm afórmula estrutural (IA) mostrada acima em que R é hidrogênio ou metila, eR3 e R5 são cada um independentemente selecionados de hidrogênio, metilaou metóxi.
Em uma outra forma de realização, os compostos têm afórmula estrutural (IA) mostrada acima em que R é hidrogênio ou metila, eR3 e R5 são cada um independentemente selecionados de hidrogênio oumetila.
Em uma forma de realização particular da invenção, os compostos têm a fórmula estrutural (IB) mostrada acima em que R2 éhidrogênio ou alquila C1-4, e R3 e R5 são cada um independentementeselecionados de hidrogênio, alquila C1-4, ou alcóxi C1-4.
Em uma outra forma de realização, os compostos têm afórmula estrutural (IB) mostrada acima em que R é hidrogênio, metila ouetila, e R3 e R5 são cada um independentemente selecionados de hidrogênio,metila, etila ou metóxi.
Em uma outra forma de realização, os compostos têm afórmula estrutural (IB) mostrada acima em que R2 é hidrogênio ou metila, e
R3 e R5 são cada um independentemente selecionados de hidrogênio, metila,etila ou metóxi.
Em uma outra forma de realização, os compostos têm afórmula estrutural (LB) mostrada acima em que R2 é hidrogênio ou metila, e
R3 e R5 são cada um independentemente selecionados de hidrogênio, metilaou metóxi.
Os compostos particulares da invenção incluem qualquer umdo seguinte:
N-(2-aminofenil)-4- [ 1 -(1 H-pirazol-3 -ilmetil)piperidin-4-il] -benzamida;
N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(5 -metóxi-1,3 -dimetil-1 H-pirazol-4-il)metil]piperidin-4-il} benzamida;
N-(2-aminofenil)-4- {1 -[(3-etil-1 H-pirazol-4-il)metil]-piperidin-4-il} benzamida;
N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)metil] -piperidin-4-il} benzamida;
N-(2-aminofenil)-4-{l-[(l,3-dimetil-lH-pirazol-5-il)metil]-piperidin-4-il} benzamida;
N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(1,3 -dimetil-1 H-pirazol-4-il)metil] -piperidin-4- il} benzamida;
N-(2-aminofenil)-4-{ l-[(l,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-il)-metil]piperidin-4-il} benzamida;
N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(1,5 -dimetil-1 H-pirazol-4-il)metil] -piperidin-4-il} benzamida;
N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(1 -etil-5 -metil-1 H-pirazol-4-il)-metil]piperidin-4-il}benzamida;
N-(2-aminofenil)-4- {1 -[(1 -etil-1 H-pirazol-4-il)metil] -piperidin-4-il} benzamida;
N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(1 -etil-3 -metil-1 H-pirazol-4-il)-metil]piperidin-4- il}benzamida;
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmos.
Deve ser entendido que certos compostos da fórmula I acimapodem existir nas formas não solvatadas bem como formas solvatadas, taiscomo, por exemplo, formas hidratadas. Deve ser entendido que a presenteinvenção abrange todas tais formas solvatadas que possuem atividadeantiproliferativa.
Também deve ser entendido que certos compostos da FórmulaI podem apresentar polimorfismo, e que a presente invenção abrange todastais formas que possuem atividade antiproliferativa.
Um sal farmaceuticamente aceitável adequado de umcomposto da Fórmula I é, por exemplo, um sal de adição de ácido de umcomposto da Fórmula I, por exemplo um sal de adição de ácido com um ácidoorgânico ou inorgânico tais como ácido clorídrico, bromídrico, sulfurico,trifluoroacético, cítrico ou maléfico; ou, por exemplo, um sal de um compostoda Fórmula I que é suficientemente ácido, por exemplo um sal de metalalcalino ou alcalino terroso tal como um sal de cálcio ou magnésio, ou um salde amônio. UM outro sal farmaceuticamente aceitável adequado de umcomposto da Fórmula I é, por exemplo, um sal formado dentro do corpohumano ou animal após a administração de um composto da Fórmula I.
Os compostos da invenção podem ser administrados na formade uma pró-droga que é um composto que é decomposto no corpo humano ouanimal para liberar um composto da invenção. Uma pró-droga pode ser usadapara alterar as propriedades físicas e/ou as propriedades farmacocinéticas deum composto da invenção. Uma pró-droga pode ser formada quando ocomposto da invenção contem um grupo adequado ou substituinte ao qual umgrupo de propriedade modificante pode ser ligado. Os exemplos de pró-drogas incluem derivados de amida cliváveis in vivo que podem ser formadosem um grupo amino em um composto da Fórmula I.
Portanto, a presente invenção inclui aqueles compostos daFórmula I como definido mais acima quando tornado disponível pela sínteseorgânica e quando tornado disponível dentro do corpo humano ou animal porintermédio de clivagem de uma pró-droga destes. Portanto, a presenteinvenção inclui aqueles compostos da Fórmula I que são produzidos pormeios orgânicos sintéticos e também tais compostos que são produzidos nocorpo humano ou animal por intermédio do metabolismo de um compostoprecursor, que é um composto da Fórmula I pode ser um composto produzidode modo sintético ou um composto produzido de modo metabólico.
Uma pró-droga farmaceuticamente aceitável adequada de umcomposto da Fórmula I é aquele que é fundamentado no julgamento médicorazoável como sendo adequado para a administração ao corpo humano ouanimal sem atividades farmacológicas indesejáveis e sem toxicidade indevida.
Várias formas de pró-droga foram descritas, por exemplo nosseguintes documentos: a) Methods in Enzvmology, Vol. 42, p. 309 a 396, editado por
K. Widder, et al. (Academic Press, 1985);
b) Design of Pro-drugs, editado por H. Bundgaard, (Elsevier,1985);
c) A Textbook of Drug Design and Development, editado porKrogsgaard-Larsen e H. Bundgaard, Capítulo 5 "Design and Application of
Pro-drugs", por H. Bundgaard ρ. 113 a 191 (1991);
d) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1 a 38(1992);
e) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences,77, 285 (1988);
f) Ν. Kakeya, et ai, Chem. Pharm. Bull., 32, 692 (1984);
g) T. Higuchi e V. Stella, "Pro-drugs as Novel DeliverySystems", A.C.S. Symposium Series, Volume 14; e
h) E. Roche (editor), "Bioreversible Carriers in Drug Design",Pergamon Press, 1987.
Uma pró-droga farmaceuticamente aceitável adequada de umcomposto da Fórmula I é, por exemplo, um derivado de amida clivável in vivodeste. As amidas farmaceuticamente aceitáveis adequadas formadas a partirde um grupo amino inclui, por exemplo uma amida formada com os gruposalcanoíla (1 a 10 C) tais como uma acetila, benzoíla, fenilacetila e gruposbenzoíla e fenilacetila substituído. Os exemplos de substituíntes no anel nosgrupos fenilacetila e benzoíla incluem aminometila, N-alquilaminometila,Ν,Ν-dialquilaminometila, morfolinometila, piperazin-l-ilmetil e 4-(l-4C)alquilpiperazin-1 -il-metila.
Os efeitos in vivo de um composto da Fórmula I podem serexercidas em parte por um ou mais metabólitos que são formados dentro docorpo humano ou animal após a administração de um composto da Fórmula I.Como determinado mais acima, os efeitos in vivo de um composto daFórmula I também podem ser exercidos por intermédio do metabolismo deum composto precursor (uma pró-droga).Preparação dos Compostos da Fórmula I
Será apreciado por uma pessoa habilitada na técnica que podeser necessário/desejável para proteger quaisquer grupos sensíveis noscompostos em alguns dos processos/reações aqui mencionados. Os exemplosonde a proteção é necessária ou desejável, e os métodos adequados parafornecer tal proteção são conhecidos àqueles habilitados na técnica. Os gruposde proteção convencionais podem ser usados de acordo com a técnica padrão(para ilustração ver T.W. Green & P.G.M. Wuts, Protective Groups inOrganic Syntesis, 3â edição, John Wiley and Sons, 1999). Deste modo, se osreagentes incluem os grupos tais como amino, carbóxi ou hidróxi pode serdesejável proteger o grupo em algumas das reações aqui mencionadas.
Quaisquer grupos de proteção utilizados nos processos aquidescritos podem ser no geral escolhidos a partir de qualquer um dos gruposdescritos na literatura ou conhecidos ao químico habilitado como apropriadopara a proteção do grupo em questão e podem ser introduzidos através demétodos convencionais. Os grupos de proteção podem ser removidos porqualquer método conveniente como descrito na literatura ou conhecido aoquímico habilitado como apropriado para a remoção do grupo de proteção emquestão, tais métodos sendo escolhidos assim como efetuar a remoção dogrupo de proteção com distúrbio mínimo de grupos em outra parte namolécula.
Os exemplos específicos dos grupos e proteção são dadosabaixo por causa da conveniência, em que "inferior", como em, por exemplo,alquila inferior, significa que o grupo ao qual é aplicado preferivelmente temde 1 a 4 átomos de carbono. Será entendido que estes exemplos não sãoexaustivos. Onde os exemplos específicos dos métodos para a remoção dosgrupos de proteção são dados abaixo estes não são similarmente exaustivos. Ouso dos grupos de proteção e métodos de desproteção não especificamentemencionado está naturalmente dentro do escopo da invenção.
Um grupo de proteção adequado para um grupo amino oualquilamino é, por exemplo, um grupo acila, por exemplo um grupo alcanoílatal como acetila, um grupo alcoxicarbonila, por exemplo um grupometoxicarbonila, etoxicarbonila ou t-butoxicarbonila, um grupoarilmetoxicarbonila, por exemplo benziloxicarbonila, ou um grupo aroíla, porexemplo benzoíla. As condições de desproteção para os grupos de proteçãomencionados necessariamente variam com a escolha do grupo de proteção.
Deste modo, por exemplo, um grupo acila tal como um grupo alcanoíla oualcoxicarbonila ou um grupo aroíla podem ser removidos por exemplo,através da hidrólise com uma base adequada tal como um hidróxido de metalalcalino, por exemplo hidróxido de lítio ou sódio. Alternativamente um grupoacila tal como um grupo t-butoxicarbonila pode ser removido, por exemplo,através do tratamento com um ácido adequado como ácido clorídrico,sulfurico ou fosfórico ou ácido trifluoroacético e um grupoarilmetoxicarbonila tal como um grupo benziloxicarbonila pode ser removido,por exemplo, através da hidrogenação em um catalisador tal como paládio-em-carbono, ou através do tratamento com um ácido de Lewis por exemplotris(trifluoroacetato) de boro. Um grupo de proteção alternativo adequadopara um grupo amino primário é, por exemplo, um grupo ftaloíla que pode serremovido através do tratamento com uma alquilamina, por exemplodimetilaminopropilamina, ou com hidrazina.
Um grupo de proteção adequado para um grupo hidróxi é, porexemplo, um grupo acila, por exemplo um grupo alcanoíla tal como acetila,um grupo aroíla, por exemplo benzoíla, ou um grupo arilmetila, por exemplobenzila. As condições de desproteção para os grupos de proteção acimanecessariamente variarão com a escolha do grupo de proteção. Deste modo,por exemplo, um grupo acila tal como um grupo alcanoíla ou aroíla pode serremovido, por exemplo, através da hidrólise com uma base adequada tal comoum hidróxido de metal alcalino, por exemplo hidróxido de lítio ou sódio.Alternativamente um grupo de arilmetila tal como um grupo benzila pode serremovido, por exemplo, através da hidrogenação em um catalisador tal comopaládio-em-carbono.
Um grupo de proteção adequado para um grupo carbóxi é, porexemplo, um grupo de esterificação, por exemplo um grupo metila ou umgrupo etila que podem ser removidos, por exemplo, através da hidrólise comuma base tal como hidróxido de sódio, ou por exemplo um grupo t-butila quepode ser removido, por exemplo, através do tratamento com um ácido, porexemplo um ácido orgânico tal como ácido trifluoroacético, ou por exemploum grupo benzila que pode ser removido, por exemplo, através dahidrogenação em um catalisador tal como paládio-em-carbono.
Os grupos de proteção podem ser removidos em qualquerestágio conveniente na síntese usando técnicas convencionais bem conhecidasna técnica química.
Em um outro aspecto, a presente invenção fornece umprocesso para preparar um composto da fórmula (I) ou um salfarmaceuticamente aceitável do mesmo, cujo processo compreende:(a) a reação de um composto da fórmula (II)
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em que a porção de anilina pode ser apropriadamenteprotegida; com um composto da Fórmula (III)
R1CHO
(III)
onde R1 é como aqui definido, na presença de um agente deredução, e em seguida, se necessário, remover quaisquer grupos de proteçãoresiduais que podem estar presentes.
Um agente de redução adequado para o processo (a) inclui, porexemplo, um sal de boroidreto inorgânico tal como boroidreto de sódio,triacetoxiboroidreto de sódio ou cianoboroidreto de sódio e hidrogênio. Aaminação redutiva usando hidrogênio é opcionalmente realizada na presençade um catalisador adequado, tal como, por exemplo, Pd/C, Pd(OH)2/C, Pt/C,PtO2 ou Rh em alumínio, e também pode ser realizada sob pressão, porexemplo de 1 a 10 bar em uma faixa de temperaturas, por exemplo de O a150° C.O processo (a) pode ser realizado na presença de um ácidoadequado. Um ácido adequado para o processo (a), inclui um ácido deBronsted tal como, por exemplo ácido fórmico, ácido acético, ácidotrifluoroacético, ácido clorídrico, ácido sulfurico, ácido para-toluenossulfônico ou ácido canforsulfônico; ou um ácido de Lewis da fórmulaMQz, em que M é um metal, Q é um grupo reativo tal como, por exemplo, umgrupo halo ou um sulfonilóxi, por exemplo um grupo cloro, bromo, iodo,metanossulfonilóxi, trifluorometanossulfonilóxi ou tolueno-4-sulfonilóxi, e ζé na faixa de 1 a 6 e o valor de ζ dependerá do metal M. Os exemplos típicosde ácidos de Lewis adequados incluem trifluoreto de boro,trifluorometanossulfonato de escândio (III), cloreto de estanho (VI),isopropóxido de titânio (IV) ou cloreto de zinco (II).
Alternativamente, os compostos da fórmula (I) podem serpreparados pela
(b) reação de um composto da fórmula (II),
<formula>formula see original document page 16</formula>
em que a anilina pode ser apropriadamente reagida; com umcomposto da Fórmula (IV)
<formula>formula see original document page 16</formula>
na presença de uma base adequada;
em que X é um grupo reativo;
e em seguida, se necessário, remover quaisquer grupos deproteção residuais que podem estar presentes.
Um grupo reativo X adequado é, por exemplo, um halogênioou grupo sulfonilóxi, por exemplo um grupo cloro, bromo, iodo,metanossulfonilóxi, trifluorometanossulfonilóxi ou tolueno-4-sulfonilóxi.
Uma base adequada para o uso no processo (b) acima é, porexemplo, uma base de amina orgânica tal como, por exemplo, piridina, 2,6-lutidina, colidina, 4-dimetilaminopiridina, trietilamina, morfolina,diisopropiletilamina (DEPEA), N-metilmorfolina ou diazabiciclo[5,4,0]-undec-7-eno, ou, por exemplo, um carbonato ou hidróxido de metal alcalinoou alcalino terrosos, por exemplo carbonato de sódio, carbonato de potássio,carbonato de cálcio, hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio, ou, porexemplo, um hidreto de metal alcalino, por exemplo hidreto de sódio, umhidrogenocarbonato de metal alcalino terroso tal como hidrogenocarbonato desódio, ou um alcóxido metálico tal como etóxido de sódio.
Um grupo de proteção adequado para a porção de anilina ou oanel de piperidina pode ser um carbamato tal como terc-butóxi-carbonila oubenziloxicarbonila.
Os exemplos particulares de grupos R1 são como descritos acima.
As reações definidas nos processos (a) e (b) sãoconvenientemente realizadas na presença de um solvente ou diluente inerteadequado, por exemplo um alcanol ou éster tal como metanol, etanol,isopropanol ou acetato de etila, um solvente halogenado tal como cloreto demetileno, clorofórmio ou tetracloreto de carbono, um éter tal comotetraidrofurano, 1,2-dimetoxietano ou 1,4-dioxano, um solvente aromático talcomo tolueno, ou um solvente aprótico dipolar tal como N,N-dimetilformamida, N,N-dimetilacetamida, N-metilpirrolidin-2-ona ousulfóxido de dimetila.
Preparação dos materiais de partida
Preparação do Composto da fórmula II
O composto da fórmula II acima pode ser preparado porqualquer um dos seguintes processos:(c) A reação de um composto da Fórmula (V), em que aanilina pode ser apropriadamente protegida,
<formula>formula see original document page 18</formula>
em que X é um grupo reativo como definido mais acima, comum composto da Fórmula (VI) na presença de uma base adequada
<formula>formula see original document page 18</formula>
em que M é um metal, L é um ligando, o número inteiro z é de0 a 3, e o anel de tetraidropiridina pode ser protegido; ou
a reação de um composto da Fórmula (VII), em que a anilina ea tetraidropiridina podem ser apropriadamente protegidas e M, L e ζ são comodefinidos acima,
<formula>formula see original document page 18</formula>
(VII)
com um composto da fórmula (VIII):
<formula>formula see original document page 18</formula>
na presença de uma base adequada;
em que X é um grupo reativo como definido mais acima, e emseguida, se necessário, e em qualquer ordem ou combinação adequadas:remover quaisquer grupos de proteção a partir datetraidropiridina, e/ou
redução da tetraidropiridina a piperidina e/ouremover quaisquer grupos de proteção residuais presentes.
Um grupo de proteção adequado para o anel detetraidropiridina é um grupo tal como terc-butoxicarbonila (também aquireferido como "BOC") ou benziloxicarbonila. Um grupo de proteçãoadequado para a porção de anilina também pode ser um carbamato tal comoBOC ou benziloxicarbonila.
Uma base adequada para o processo (c) é, por exemplo, umabase de amina orgânica tal como, por exemplo, piridina, 2,6-lutidina, colidina,4-dimetilaminopiridina, trietilamina, morfolina, N-metil-morfolina oudiazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno, ou, por exemplo, um metal alcalino oucarbonato ou hidróxido alcalinos terrosos, por exemplo carbonato de sódio,carbonato de potássio, carbonato de cálcio, carbonato de césio, hidróxido desódio ou hidróxido de potássio, ou, por exemplo, um hidreto de metalalcalino, por exemplo hidreto de sódio, ou um hidrogenocarbonato de metalalcalino tal como hidrogenocarbonato de sódio, ou um alcóxido metálico talcomo etóxido de sódio.
A reação definida no processo (c) acima é convenientementerealizada na presença de um solvente ou diluente inerte adequado, porexemplo um alcanol ou éster tal como metanol, etanol, isopropanol ou acetatode etila, um solvente halogenado tal como cloreto de metileno, clorofórmio outetracloreto de carbono, um éter tal como tetraidrofurano, 1,2-dimetoxietanoou 1,4-dioxano, um solvente aromático tal como tolueno, ou um solventedipolar aprótico tal como N,N-dimetil-formamida, Ν,Ν-dimetilacetamida, N-metilpirrolidin-2-ona ou sulfóxido de dimetila. As reações sãoconvenientemente realizadas em uma temperatura na faixa de, por exemplo,10 a 250° C, preferivelmente na faixa de 40 a 80° C;O metal M pode ser qualquer metal que é conhecido naliteratura para formar compostos organometálicos que sofrem reações deligação cruzada catalíticas. Os exemplos de metais adequados incluem boro,estanho, zinco, e magnésio.
Um valor adequado para o número inteiro z é dependente dometal M, mas é usualmente na faixa de O a 3.
Os valores adequados para o ligando L, quando presente,inclui, por exemplo, um hidróxi, um halo, ligando de alcóxi (1-4C) ou alquila(1-6C), por exemplo um ligando de hidróxi, bromo, cloro, flúor, iodo, metóxi,etóxi, propóxi, isopropóxi, butóxi, metila, etila, propila, isopropila ou butilaou, onde número inteiro ζ é 2 e M é boro, os dois ligandos presentes podemser ligados tal que, juntos com o átomo de boro a que estes são ligados, estesformam um anel. Adequadamente, o grupo ML, é um grupo da Fórmula -BL1L2 , onde B é boro e L1 e L2 são como definidos para o ligando L acima.Em particular, os ligandos LeL podem ser ligados tal que, juntos com oátomo de boro a que estes são ligados, formam um anel. Por exemplo, L1 e L2podem juntos definir um grupo óxi-alquileno (2-4C)-óxi, por exemplo umoxietilenóxi, pinacolato (-O-C(CH3)2C(CH3)2-O-) ou grupo óxi-propileno-óxital que, junto com o átomo de boro a que estes são ligados, formam um grupoéster do ácido boróico cíclico.
Um catalisador adequado para o processo (c) inclui, porexemplo, um catalisador metálico tal como um catalisador de paládio (0),paládio (II), níquel (0) ou níquel (II), por exemplo tetracis(trifenil-fosfino)paládio (0), cloreto de paládio (II), paládio(II) brometo, cloreto debis(trifenilfosfino)paládio (II), tetracis(trifenilfosfino)níquel (0), cloreto deníquel (II), brometo de níquel (II), cloreto de bis(trifenilfosfino)níquel (II) oudicloro[l-r-bis(difenilfosfino)-ferroceno]paládio (II). Além disso, uminiciador de radical livre pode ser convenientemente adicionado, por exemploum composto azo tal como azo(bisisobutironitrila).Adequadamente o anel de tetraidropirídina é reduzido a umanel de piperidina no processo (c) acima através da hidrogenação. Ahidrogenação é opcionalmente realizada na presença de um catalisadoradequado, tal como, por exemplo, Pd/C, Pd(OH)2/C, Pt/C, PtO2 ou Rh emalumina, e também pode ser realizada sob pressão, por exemplo de 1 a 10 bar.A hidrogenação também é adequadamente realizada na presença de um ácidoadequado, por exemplo ácido bromídrico, ácido clorídrico, ácido cítrico,ácido acético e ácido metanossulfônico, e em um solvente apropriado oumistura de solvente tal como, por exemplo, água, etanol, tetraidrofurano(THF), metanol, acetonitrila ou propan-2-ol.
d) A reação de um composto da fórmula (IX), em que Qi é -OH, -Cl, ou -O" Q2+ (em que Q2+ é um cátion)
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adequado e em que um dos grupos aminos no composto da fórmula (X) podeser protegido;
<formula>formula see original document page 21</formula>
para formar um composto da fórmula (XI)<formula>formula see original document page 22</formula>
em que a anilina pode ser protegida;
e em seguida:
converter o composto da fórmula (XI) a um composto dafórmula (II) reduzindo-se o anel de pirindin-4-ila a um anel de piperidina-4-ila usando um agente de redução adequado e/ou condições de reduçãoadequadas; e
opcionalmente remover quaisquer grupos de proteção residuais
presentes.
Uma valor adequado para Q1 é -O" Na+ (isto é -O" Q2+, em queQ2+ é Na+). Adequadamente, um dos grupos aminos do composto da fórmula(X) é protegido por um grupo de proteção amino adequado como mais acimadefinido, tal como um grupo BOC.
Adequadamente, a anilina é protegida por um grupo deproteção amino como mais acima definido, tal como um grupo BOC, nocomposto da fórmula (XI).
Qualquer solvente adequado, tal como aqueles previamenteaqui mencionados, podem ser usados para a reação dos compostos IX e X.
O composto da fórmula (XI) convertido em um composto dafórmula (II) usando um agente de redução adequado e/ou condições deredução adequadas. Um processo adequado é a hidrogenação. A hidrogenaçãoé opcionalmente realizada na presença de um catalisador adequado, tal como,por exemplo, Pd/C, Pd(OH)2/C, Pt/C, PtO2 ou Rh em alumina, e também podeser realizada sob pressão, por exemplo de 1 a 10 bar. A hidrogenação tambémé adequadamente realizada na presença de um ácido adequado, por exemploácido bromídrico, ácido clorídrico, ácido cítrico, ácido acético e ácidometanossulfônico, e em um solvente apropriado ou mistura de solventes talcomo, por exemplo, água, etanol, tetraidrofurano (THF), metanol, acetonitrilaou propan-2-ol.
Um método adequado para a preparação do composto dafórmula (XI) compreende a conversão do composto (EX) em um derivadoreativo do ácido carboxílico (que pode ser produzido in situ e é nãonecessariamente isolado), seguido pela reação subseqüente com um compostoda fórmula (X).
Um derivado reativo adequado de um ácido carboxílico é, porexemplo, um haleto de acila, por exemplo um cloreto de acila formado pelareação do ácido e um cloreto de ácido inorgânico, por exemplo cloreto detionila; um anidreto misturado, por exemplo um anidreto formado pela reaçãodo ácido e um cloroformiato tal como cloroformiato de isobutila; um ésterativo; o produto da reação do ácido e uma carbodiimida tal comodicicloexilcarbodiimida; ou o produto da reação de um ácido com cloreto de4-(4,6-dimetoxil,3,5-triazinil-2-il)-4-metilmorfolinio (DMTMM), ou oproduto da reação de um ácido com 1,1'-carbonildiimidazola (CDI).
Os compostos das fórmulas (III) e (IV) são obteníveis defontes comerciais, por exemplo Flurochem Ltd, Old Glossop, DerbyshireSKl 3 7RY, UK, ou podem ser sintetizados usando os métodos que sãoconhecidos àqueles habilitados na técnica e/ou reportados na literatura, porexemplo Makino, K.; Kim, H.S e Kurasawa Y; J. Heterocyclic Chem. 1998,35, 489 a 497 e referências nestes contidas.
Ensaios
Os seguintes ensaios de (a) a (c) podem ser usados para mediros efeitos de um ou mais dos compostos da presente invenção comoinibidores de HDAC, como inibidores in vitro de HDACl humanorecombinante produzido em células de insetos Hi5, e como indutores in vitroe in vivo de acetilação de Histona H3 em células e tumores integrais. Estestambém avaliam a capacidade de tais compostos para inibir a proliferação decélulas tumorais humanas.
a) Ensaio Enzimático In Vitro de HDACl recombinante
Os inibidores de HDAC foram triados contra HDAClrecombinante humano produzido na células de inseto H15. A enzima foiclonada com um rótulo FLAG no terminal C do gene purificado por afinidadeusando Anti-FLAG M2 agarose da SIGMA (A2220).
Os ensaios de desacetilase foram realizados em uma reação de50 μl. HDACl (75 ng de enzima) diluída em 15 μΐ de tampão de reação (25mM de TrisHCl (pH 8), 137 mM de NaCl, 2,7 mM de KCl5 1 mM de MgCl2)foi misturada com tampão sozinho (10 μl) ou um composto contendo otampão (10 μΐ) por 30 minutos na temperatura ambiente. 25 μΜ de peptídeohistona H4 acetilado (Kl 174 Biomol) diluídos em 25 μΐ de tampão foramdepois adicionados à reação e incubadas por uma hora na temperaturaambiente. A reação foi interrompida pela adição de um volume igual (50 μl)de revelador de Fluor de Lys (Biomol) contendo Tricostatina A a 2 μΜ. Areação foi deixada desenvolver por 30 minutos na temperatura ambiente edepois a fluorescência foi medida a um comprimento de onda de excitação de360 nM e um comprimento de onde de emissão de 465 nM. Os valores IC50para os inibidores da enzima HDAC foram determinados realizando-se ascurvas de resposta de dose com os compostos individuais e determinando aconcentração do inibidor produzindo cinqüenta porcento de diminuição nosinal máximo (controle de diluente).
b) Ensaio In Vitro da inibição da proliferação em células integrais
A inibição da proliferação em células integrais foi ensaiadausando o ensaio de proliferação aquosa de 96 títulos celulares Promega(Promega #G5421). As células HCTl 16 foram cultivadas em placas de 96reservatórios a 1 χ 10 células/reservatório, e deixadas aderir durante a noite.Estas foram tratadas com inibidores por 72 horas. 20 μl do corante tetrazólioMTS foi adicionado a cada reservatório e as placas foram re-incubadas por 3horas. A absorvência foi depois medida em um leitor de placas de 96reservatórios a 490 nM. Os valores IC50 para os inibidores de HDAC foramdeterminados realizando-se as curvas de resposta de dose com os compostosindividuais e determinando a concentração do inibidor que produz cinqüentaporcento de diminuição no sinal máximo (controle de diluente).(c) Ensaio Enzimático In Vitro da Atividade de Desacetilase Histona emcélulas integrais
A acetilação de histona H3 em células integrais foi medidausando imunoistoquímica e análise usando o exame de formação Cellomics.As células A549 ou HCTl 16 foram cultivadas em placas de 96 reservatórios a1 χ 10^4 células/reservatório, e deixadas aderir durante a noite. Estas foramtratadas com os inibidores por 24 horas e depois fixadas em 1,8 % deformaldeído em tris tamponado salino (TBS) por uma hora. As células forampermeabilizadas com metanol gelado por 5 minutos, lavadas em TBS e depoisbloqueadas em leite seco desnatado em TBS a 3 % por 90 minutos. As célulasforam depois incubadas com anticorpos policlonais específicos para a histonaH3 acetilada (Upstate #06599) 1 diluídas em 500 em leite em TBS a 3 % poruma hora. As células foram lavadas três vezes em TBS e depois incubadascom anti-corpos secundários de fluoresceína conjugados (Molecular Probes#A11008) & Hoechst 333542 (1 μ^πιΐ) (Molecular Probes #H3570) em TBSmais 1 % de albumina de soro bovino (Sigma #B6917) por uma hora. O anti-corpo livre foi removido através de três lavagens com TBS e após a lavagemfinal 100 μl de TBS foram adicionados às células e as placas foram lacradas eanalisadas usando o exame de formação Cellomics.
Os valores EC5O para os inibidores de HDAC foramdeterminados realizando-se as curvas de resposta de dosagem com oscompostos individuais e depois determinando a concentração do inibidor queproduz cinqüenta porcento do sinal máximo (controle do composto dereferência - Tricostatina A (Sigma)).
A atividade e solubilidade de hERG dos compostos dainvenção também podem ser avaliados usando os ensaios de (d) a (f)apresentados abaixo:
d) Ensaio de Inibição do Canal de Potássio codificado por hERG
Cultura celular
Células Ovarianas de Hamster Chinês (CHO) que expressam ocanal codificado por hERG foram desenvolvidas até a semi-confluência a 37°C em um ambiente umidificado (CO2 a 5 %) em meio F-12 Ham contendo L-glutamina, 10 % Soro de bezerro fetal (FCS) e 0,6 mg/ml Higromicina (todosda Sigma). Antes do uso a monocamada foi lavada usando uma alíquota de 3ml pré aquecida (37° C) de Versene 1:5,000 (Invitrogen). Após a aspiraçãodesta solução, o frasco foi incubado a 37° C em uma incubadora com outros 2ml de Versene 1:5,000 por um período de 6 minutos. As células foram depoisseparadas do fundo do frasco gentilmente punçando-se 10 ml de cálciocontendo PBS da Dulbecco (0,9 mM) e magnésio (0,5 mM) (PBS)(Invitrogen) foi depois adicionado ao frasco e aspirado em um tubo decentrífuga de 15 ml antes da centrifugação (50 g, por 4 minutos).
O sobrenadante resultante foi descarregado e a pelotagentilmente ressubmetida à suspensão em uma alíquota de 3 ml de PBS. Umaalíquota de 0,5 ml da suspensão celular foi removida para a contagem celularautomatizada (Innovatis Cedex) e o volume da suspensão celular final foiajustado com PBS para fornecer a concentração celular final desejada.Eletrofisiologia
Os princípios e operação deste dispositivo foram previamentedescritos (Schroeder et al., Journal of Biomolecular Screening (2003) 8(1),50-64). Resumidamente, a tecnologia é fundamentada em uma placa de um384 reservatórios (PatchPlate®) em que um registro é obtido em cadareservatório usando-se a sucção para tentar posicionar e manter uma célulaem um pequeno buraco separando duas câmaras fluidas isoladas. Uma vezque o lacramento ocorreu, a solução no lado inferior da PatchPlate® é mudadapara um que contêm a anfotericina B (Sigma). Isto permeabiliza o caminho damembrana celular cobrindo o buraco em cada reservatório e de fato permiteum registro da cinta de curativo da célula integral perfurada a ser obtido emcada reservatório.
Para cada série de IonWorks® HT este foi operado da seguintemaneira na temperatura ambiente (-21° C). O "bote" na posição do "Tampão"foi carregado com 4 ml de PBS e que na posição das "Células" com asuspensão celular CHO-hERG descrita acima. Uma placa de 96 reservatórios(fundo em V, Greiner Bio-one) que contem os compostos a ser testados (3 Xsua concentração final de teste) foi colocada na posição "Placa 1" e umPatchPlate® foi colocada no dispositivo e mantida na posição usando a tampaPatchPlate®.
Cada placa de composto foi disposta para permitir que dez,curvas de concentração-efeito de 8 pontos sejam construídas; as duas colunasrestantes na placa foram retiradas com um veículo (0,33 % DMSO), paradefinir a linha de base do ensaio, e uma concentração de bloqueio supra-máxima de cisaprida (10 μΜ), para definir o nível de inibição a 100%. OFluidics-head (F-Head) da IonWorks® HT depois adicionado 3,5 μΐ de PBS acada reservatório e PatchPlate® e seu lado inferior foi aspergido com umasolução "Interna" a qual tinha a seguinte composição (em mM): K-Gluconato100, KC140, MgCl2 3,2, EGTA 3 e HEPES 5 (todos da Sigma) (pH de 7,25 a7,30 usando 10 M de KOH). Após revestir e desborbulhar, o Electronics-head(E-head) depois moveu em círculos a PatchPlate® para fazer um teste deorifício (isto é aplicar um pulso de voltagem para determinar se o orifício decada reservatório foi aberto). A F-head foi depois dispensada em 3,5 μΐ dasuspensão celular descrita acima em cada reservatório da PatchPlate® e àscélulas foram dados 200 segundos para alcançar o orifício de lacrar em cadareservatório. A E-head depois moveu circularmente a PatchPlate® paradeterminar a resistência do lacre obtido em cada reservatório.
A solução no lado inferior da PatchPlate® foi depois mudadapara "Avaliar" a solução que tema seguinte composição (em mM): KCl 140,EGTA 1, MgCl2 1 e HEPES 20 (todos da Sigma) (pH de 7,25 a 7,30 usando10 M de KOH) mais 100 μg/ de anfotericina B. Após 9 minutos para permitirque a perfuração da cinta ocorra, a E-head depois moveu circularmente todosos 384 reservatórios da placa da cinta para obter as medidas atuais do pré-composto hERG. A F-head depois adicionou 3,5 μΐ de solução a partir de cadareservatório da placa de compostos a 4 reservatórios na PatchPlate®. Esta foiprogramada iniciar com o reservatório mais diluído na placa de composto emovimento para o reservatório mais concentrado para minimizar o impacto dequalquer triagem sobrecarregada.
Após aproximadamente três minutos e meio de incubação, a E-head depois movem circularmente todos os 384 reservatórios da PatchPlate®para obter as medições atuais do pós composto hERG. Deste modo, as curvasde efeito de concentração não acumulativas podem ser produzidas onde,fornecendo os critérios de aceitação foram obtidas em uma porcentagemsuficiente de reservatórios (ver abaixo), o efeito de cada concentração docomposto de teste foi fundamentado no registrador entre 1 e 4 células.
Os critérios de aceitação para cada reservatório foram:resistência de lacre pré-escaneada >60 ΜΩ, amplitude atual da extremidadede pré-escaneada >0,15 nA; resistência do lacre pós-escaneado >60 ΜΩ. Opré- e pós-composto hERG atual foi evocado por um pulso de voltagem queconsiste de 20 segundos fixo a -70 mV, uma etapa de 160 ms a -60 mV, umaetapa de 100 ms novamente para -70 mV, uma etapa de 1 segundo a +40 mV,uma etapa de 2 segundos a -30 mV e finalmente uma etapa de 500 ms to -70mV. Entre os pulsos de voltagem do pré- e pós composto não houvegrampeamento do potencial da membrana.e) Avaliação da Solubilidade Aquosa.
O composto de teste (de 1 a 1,6 mg) é pesado em um frasco e1 ml de 0,1 M de tampão de fosfato (pH 7,4) é adicionado. Entre 1,0 e 1,6 mgde composto de teste é concorrentemente dissolvido em 1,8 ml de DMSO emum frasco, para ouso como uma solução de calibração. Ambas as soluções sãoagitadas por 24 horas a 25° C. A solução saturada aquosa e a solução decalibração de DMSO são depois transferidas em placas de 96 reservatórioprofundas. A placa de solução tampão saturada é centrifugada em uma forçacentrífuga relativa de 4310 g e depois o sobrenadante aquoso é transferido emuma segunda placa de reservatório profunda e centrifugado. Após uma outratransferência do sobrenadante aquoso e 50 % de diluição com tampão, a placade amostra final e a placa de calibração de DMSO são analisadas usandoHPLC-UV-MS. A quantificação da solubilidade da amostra é em comparaçãoda amostra e áreas de pico UK da calibração a 250 nm (comprimento de ondaalternativo selecionado se 250 nm não é adequado) com a confirmação MS daid do composto.
f) Avaliação da solubilidade aquosa em tampões e fluido intestinal simulado.
A solubilidade é testada no seguinte meio nas temperaturasespecificadas:
Fluido Intestinal Simulado (Em jejum) FaSSIF (Galia e Dressman et al,Pharms Res, 15(5), 1998, p698).
Taurocolato de Sódio (3 mM); Leticina do ovo (0,75 mM);KH2PO4 (0,03 M); KCl (0,1 M); NaOH (para ajustar o pH até 6,5). Medido a37° C
Tampão fosfatado de Sorensen (Handbook of Biochemistry, pg 234-237).Solução A Fosfato de monopotássio 0,067 MSolução B Fosfato de dissódio 0,067 MMedido a 25° C e 37° C.
As quantidades apropriadas (determinadas a partir do teste desolubilidade (f) acima e/ou da curva de solubilidade de pH prognosticado) docomposto sob a investigação são exatamente pesadas em duplicata em frascosde vidro de 2 dracmas (120 gramas).
A cada conjunto de frascos replicados, um mínimo de 1,50 mldo meio apropriado que é adicionado ao Tampão fosfatado de Sorensen no pH6,8 ou FaSSIF. Todas as pesagens devem ser suficientes para saturar o meioem cada caso.
Um seguidor magnético revestido com PTFE é adicionado acada frasco antes destes serem lacrados e colocados em um Variegam bloco magnético agitador de reação Variegam (camba). Os blocos agitadores sãomantidos na temperatura apropriada (ver acima), cobertos em uma folha dealumínio para reduzir a exposição à luz e agitados em direções alternadas a800 R.P.M.
Cada frasco é amostrado no ponto de tempo prescrito para omeio ser testado. Primeiro o pH e depois o teor ativo em cada amostra sãodeterminados em cada ponto de tempo da seguinte maneira.pH
Usando uma medida de pH adequada (Hydrus 400 - Fisher), ostampões de pH de eletrodo e padrão, calibrar o instrumento no pH 4,01 e 7,00na temperatura ambiente.
Colocando-se o eletrodo em cada amostra replicada,determinar o pH na temperatura ambiente e comunicar o resultado a um localdecimal. O elétrodo é lavado com água deionizada e enxugado entre asdeterminações.
Teor ativo por HPLC
De cada amostra, uma alíquota de 0,4 ml é transferida a umtubo de ultracentrífuga de policarbonato (Beckman). As amostras sãorotacionadas a 40.000 R.P.M. por 15 minutos na temperatura apropriada parao meio ser testado usando a TL Optima Ultracentrifuge (Beckman). Osobrenadante de cada tubo de ultracentrífuga é transferido a um segundo tubode ultracentrífuga e rotacionado uma vez mais sob as mesmas condições.
O sobrenadante de cada amostra é analisado sob o método deHPLC otimizado para o composto sob investigação e o teor ativo foideterminado contra um padrão externo. O sobrenadante pode requererdiluição com um solvente adequado para trazer a concentração dentro da faixalinear do método de HPLC. Isto pode ser normalmente estimado a partir dacurva de solubilidade de pH prognosticado aquoso e no caso dos co-solventesa partir de uma quantidade do composto que foi adicionado.
Embora as propriedades farmacológicas dos compostos daFórmula I variam com a mudança estrutural como esperado, no geral aatividade possuída pelos compostos da Fórmula I, pode ser demonstrada nasseguintes concentrações ou doses em um ou mais dos testes (a), (b), (c) ou (d)acima:-
Teste (a):- IC50 na faixa de, por exemplo, 100 nM ou menos;
Teste (b):- IC50 na faixa de, por exemplo, 1 μΜ ou menos;
Teste (c):- IC50 na faixa de, por exemplo, 1 μΜ ou menos;
Teste (d): - IC50 de, por exemplo, maior do que 30 μΜ.
Por via de exemplo, usando o Teste (a) para a inibição deHDACl e o teste (b) para a inibição da proliferação em células integrais, ocomposto descrito no composto 4 forneceu os resultados de IC50 mostradosabaixo na Tabela A abaixo. A tabela também inclui o resultadocorrespondente para N-(2-aminofenil)-4-( 1 -(pirid-2-ilmetil)-piperidin-4-il)benzamida (Composto [1] acima):
Tabela A
<table>table see original document page 31</column></row><table>
Nenhuma toxicidade fisiologicamente inaceitável foiobservada no Teste (d) na dose eficaz para os compostos testados da presenteinvenção. Portanto nenhum efeito toxicológico adverso é esperado quando umcomposto da fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, éadministrado nas faixas de dosagem em seguida definidas.
Além disso, embora a solubilidade dos compostos da fórmula Iinevitavelmente variarão com a mudança estrutural como esperado, oscompostos da fórmula I, no geral, possuem uma solubilidade medida peloteste (e) acima de, por exemplo, maior do que 100 μΜ.
De acordo com um outro aspecto da invenção é fornecido umacomposição farmacêutica, que compreende um composto da Fórmula (I), ouum sal farmaceuticamente aceitável ou pró-droga deste, como definido maisacima em associação com um diluente ou carreador farmaceuticamenteaceitáveis.
As composições da invenção podem estar em uma formaadequada para o uso oral (por exemplo como tabletes, pastilhas, e cápsulasduras ou moles, suspensões aquosas ou oleosas, emulsões, pós ou grânulosdispersáveis, xaropes ou elixires), para o uso tópico (por exemplo comoremes, ungüentos, géis, soluções ou suspensões aquosas ou oleosas), para aadministração através da inalação (por exemplo como um pó finamentedividido ou um aerossol líquido), para a administração por insuflação (porexemplo como um pó finamente dividido) ou para a administração parenteral(por exemplo como uma solução aquosa estéril ou oleosa para a dosagemintravenosa, subcutânea, intramuscular ou intramuscular ou como umsupositório para a dosagem retal).
As composições da invenção podem ser obtidas através deprocedimentos convencionais usando excipientes farmacêuticosconvencionais, conhecidos na técnica. Deste modo, as composiçõesintencionadas para o uso oral podem conter, por exemplo, um ou mais agentesde coloração, adoçamento, sabor e/ou conservantes.Os excipientes farmaceuticamente aceitáveis para umformulação de tablete incluem, por exemplo, diluentes inertes tais comolactose, carbonato de sódio, fosfato de cálcio ou carbonato de cálcio, agentesde granulação e desintegrantes tais como amido de milho ou ácido algênico;agentes de ligação tais como amido; agentes de lubrificação tais comoestearato de magnésio, ácido esteárico ou talco; agentes conservantes taiscomo p-hidroxibenzoato de etila ou propila, e anti-oxidantes, tais como ácidoascórbico. As formulações de tablete podem ser não revestidas ou revestidaspara modificar sua desintegração e a absorção subseqüente do ingredienteativo dentro do trato gastrintestinal, ou para melhorar sua capacidade e/ouaparência, em cada caso, usando os agentes de revestimento convencionais eos procedimentos conhecidos na técnica.
As composições par ao uso oral podem estar na forma decápsulas de gelatina dura em que o ingrediente ativo é misturado com umdiluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio oucaulim, ou como cápsulas de gelatina macias em que o ingrediente ativo émisturado com água ou um óleo tal como óleo de amendoim, parafina líquida,óleo de soja, óleo de coco, ou preferivelmente óleo de oliveira, ou qualqueroutro veículo aceitável.
As suspensões aquosas geralmente contêm o ingrediente ativona forma empoada finamente dividida junto com um ou mais agentes desuspensão, tais como carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose,hidroxipropilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinil-pirrolidona, gomatragacanto e goma acácia; agentes de dispersão ou umectação tais comolecitina ou produtos de condensação de um óxido de alquileno com ácidosgraxos (por exemplo estearato de polióxi-etileno), ou produtos decondensação de óxido de etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, porexemplo heptadecaetilenoxicetanol, ou produtos de condensação de óxido deetileno com ésteres parciais derivados a partir dos ácidos e um hexitol talcomo monoletato de polioxietileno sorbitol, ou produtos de condensação deóxido de etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemploheptadecaetilenoxicetanol, ou produtos de condensação de óxido de etilenocom ésteres parciais derivados de ácidos graxos e um hexitol tal comomonooleato de polioxietileno sorbitol, ou produtos de condensação de óxidode etileno com ésteres parciais derivados a partir de ácidos graxos e anidretosde hexitol, por exemplo monoleato de polietileno sorbitano. As suspensõesaquosas também podem conter um ou mais conservantes (tais como p-hidroxibenzoato de etila ou propila, anti-oxidantes (tais como ácidoascórbico), agentes de coloração, agentes de sabor, e/ou agentes adoçantes(tais como sacarose, sacarina ou aspartame).
As suspensões oleosas podem ser formuladas colocando-se emsuspensão o ingrediente ativo em um óleo vegetal (tal como óleo deamendoim, óleo de oliveira, óleo de gergelim ou óleo de coco) ou em um óleomineral (tal como parafina líquida). As suspensões oleosas também podemconter um agente de engrossamento tal como cera de abelhas, parafina duraou álcool cetílico. Os agentes de adoçamento tais como aqueles indicadoacima, e os agentes de sabor podem ser adicionados para fornecer umapreparação oral agradável ao paladar. Estas composições podem serpreservada pela adição de um anti-oxidante tal como ácido ascórbico.
Os pós ou grânulos liofilisados ou dispersáveis adequados paraa preparação de uma suspensão ou solução aquosas pela adição de águageralmente contêm o ingrediente ativo junto com um agente de dispersão oude umectação, um agente de suspensão e um ou mais conservantes. Osagentes de dispersão ou umectação adequados são exemplificados por aquelesjá mencionados acima. Os excipientes adicionais tais como agentes deadoçamento, de sabor e de coloração, também podem estar presentes.
As composições farmacêuticas da invenção também podemestar na forma de emulsões de óleo em água. A fase oleosa pode ser um óleovegetal, tal como óleo de oliveira ou óleo de amendoim, ou um óleo mineral,tal como por exemplo parafina líquida ou uma mistura de qualquer um destes.Os agentes emulsificantes adequados podem ser, por exemplo, gomas deocorrência natural tais como goma acácia ou goma tragacanto, fosfatídeos deocorrência natural tais como soja, lecitina, um éster ou derivados de ésteresparciais a partir de ácidos graxos e anidretos de hexitol (por exemplomonoleato de sorbitano) e produtos de condensação dos ditos ésteres parciaiscom óxido de etileno tal como monoleato de polioxietileno sorbitano. Asemulsões também podem conter agentes de adoçamento, sabor econservantes.
Os xaropes e os elixires podem ser formulados com os agentesadoçantes tais como glicerol, propileno glicol, sorbitol, aspartame ousacarose, e também podem conter um agente demulcente, conservante, desabor e/ou de coloração.
As composições farmacêuticas também podem estar na formade uma suspensão aquosa ou oleosa estéril injetável ou, soluções, emulsões ousistemas particulares, que podem ser formulados de acordo com osprocedimentos conhecidos usando um ou mais dos agentes de dispersão ouumectação apropriados e agentes de suspensão, que foram mencionadosacima. Uma preparação injetável estéril também pode ser uma solução oususpensão injetável estéril em um diluente ou solvente não tóxicoparenteralmente aceitável, por exemplo uma solução em polietileno glicol.
As formulações de supositório podem ser preparadasmisturando-se o ingrediente ativo com um excipiente adequado não irritanteque é sólido em temperaturas comuns mas líquido na temperatura retal eportanto fundirá no reto para liberar a droga. Os excipientes adequadosincluem, por exemplo, manteiga de cacau e polietileno glicóis.
As formulações tópicas, tais como cremes, ungüentos, géis esoluções ou suspensões aquosas ou oleosas, podem no geral ser obtidasformulando-se um ingrediente ativo com um veículo ou diluenteconvencional, topicamente aceitável, usando um procedimento convencionalconhecido na técnica.
As composições para a administração através de insuflaçãopodem ser na forma de um pó finamente dividido que contem partículas dediâmetro médio de, por exemplo, 30 μm ou muito menos preferivelmente 5μm ou menos e mais preferivelmente entre 5 μm e 11 μm, o pó por si quecompreende o ingrediente ativo sozinho ou diluído com um ou maiscarreadores fisiologicamente aceitáveis tais como lactose. O pó parainsuflação é depois convenientemente retido em uma cápsula que contem, porexemplo, de 1 a 50 mg de ingrediente ativo para o uso com um dispositivo deinalação turbo, tal como é usado para a insuflação do agente de cromoglicatode sódio conhecido.
As composições para a administração através da inalaçãopodem estar na forma de um aerossol pressurizado convencional configuradopara dispensar o ingrediente ativo como um aerossol que contem sólidofinamente dividido ou gotícuias líquidas. Os propulsores de aerossolconvencionais tais como hidrocarbonetos fluorinados voláteis ouhidrocarbonetos podem ser usados e o dispositivo de aerossol éconvenientemente arranjado para dispensar uma quantidade medida deingrediente ativo.
Para outra informação na formulação o leitor é dirigido aoCapítulo 25,2 no Volume 5 da Comprehensive Medicinal Chemistry (CorwinHansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990.
No geral, as composições acima podem ser preparadas em umamaneira convencional usando excipientes convencionais.
O composto da fórmula (I) será normalmente administrado aum animal de sangue quente em uma dose única dentro da faixa de 5 a 5000mg/m de área corporal do animal, isto é aproximadamente de 0,1 a 100mg/kg, e isto normalmente fornece uma dose terapeuticamente eficaz. Umaforma de dosagem única tal como um tablete ou cápsula usualmente conterá,por exemplo de 1 a 250 mg de ingrediente ativo. Preferivelmente uma dosediária na faixa de 1 a 50 mg/kg é utilizada. Contudo a dosagem diária seránecessariamente variada dependendo do paciente tratado, da via deadministração particular, e da gravidade da doença sendo tratada. Portanto adosagem ótima pode ser determinada pelo médico que vai tratar qualquerpaciente particular.
Foi verificado que os compostos definidos na presenteinvenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmos; são eficazescomo inibidores do ciclo celular (agentes anti-proliferação celular), e estapropriedade é acreditada surgir da sua atividade inibidora de HDAC.Acredita-se também que os compostos da presente invenção podem serenvolvidos na inibição da angiogênese, ativação e diferenciamento daapoptose. Portanto os compostos da presente invenção são esperados ser úteisno tratamento de doenças ou condições médicas mediadas sozinhas ou emparte pelas enzimas HDAC, isto é os compostos podem ser usados paraproduzir um efeito inibidor de HDAC em um animal de sangue quente emnecessidade de tal tratamento. Deste modo, os compostos da presenteinvenção fornecem um método para tratar a proliferação de células malignascaracterizadas pela inibição das enzimas de HDAC, isto é, os compostospodem ser usados para produzir um efeito anti-proliferativo mediado sozinhoou em parte pela inibição das HDACs.
De acordo com um outro aspecto da presente invenção éfornecido um composto da Fórmula (I), ou um sal ou pró-drogafarmaceuticamente aceitáveis destes, como definido mais acima para o usoem um método de tratamento do corpo humano ou animal através da terapia.
Deste modo, de acordo com um outro aspecto da invenção éfornecido um composto da Fórmula (I), ou um sal ou pró-drogafarmaceuticamente aceitáveis deste; como definido mais acima para o usocomo uma droga.
De acordo com um outro aspecto da invenção é fornecido ouso de um composto da Fórmula (I), ou um sal ou pró-drogafarmaceuticamente aceitáveis deste; como definido mais acima na fabricaçãode uma droga para o uso na produção de um efeito inibidor de HDAC em umanimal de sangue quente tal como o ser humano.
De acordo com uma outra característica deste aspecto dainvenção é fornecido um método para produzir um efeito inibidor de HDACem um animal de sangue quente, tal como o ser humano, em necessidade detal tratamento que compreende administrar ao dito animal uma quantidadeeficaz de um composto da Fórmula (I), ou um sal ou pró-drogafarmaceuticamente aceitáveis deste; como definido mais acima.
De acordo com um outro aspecto da invenção é fornecido ouso de um composto da Fórmula (I), ou um sal ou pró-drogafarmaceuticamente aceitáveis deste; como definido mais acima na fabricaçãode um medicamento para o uso na produção de um ciclo de efeito de inibiçãocelular (anti-proliferação celular) em um animal de sangue quente tal como oser humano.
De acordo com uma outra característica deste aspecto dainvenção é fornecido um método para produzir um efeito de ciclo de inibiçãocelular (anti-proliferação celular) em um animal de sangue quente, tal como oser humano, em necessidade de tal tratamento que compreende administrar aodito animal uma quantidade eficaz de um composto da Fórmula (I), ou um salou pró-droga farmaceuticamente aceitáveis deste, como definido mais acima.
De acordo com uma característica adicional deste aspecto dainvenção é fornecido um método de tratar o câncer em um animal de sanguequente, tal como o ser humano, em necessidade de tal tratamento quecompreende administrar ao dito animal uma quantidade eficaz de umcomposto da Fórmula (I), ou um sal ou pró-droga farmaceuticamenteaceitáveis deste, como definido mais acima.
De acordo com uma outra característica da invenção éfornecido um composto da Fórmula (I)5 ou um sal ou pró-drogafarmaceuticamente aceitáveis deste, como definido mais acima na fabricaçãode um medicamento para o uso no tratamento do câncer. De acordo com umcaracterística adicional deste aspecto da invenção é fornecido um compostoda Fórmula (I), ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitáveis deste,como definido mais acima, para o uso no tratamento do câncer.
De acordo com um característica adicional deste aspecto dainvenção é fornecido o uso de um composto da Fórmula (I), ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitáveis deste, como definido mais acima, para ouso na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.
Em um outro aspecto da presente invenção é fornecido o usode um composto da Fórmula (I), ou um sal ou pró-droga farmaceuticamenteaceitáveis deste, como definido mais acima, na fabricação de ummedicamento para o uso no câncer de pulmão, câncer colorrectal, câncer demama, câncer da próstata, linfoma e/ou leucemia.
Em um outro aspecto da presente invenção é fornecido ummétodo de tratar câncer de pulmão, câncer colorretal, câncer de mama, câncerda próstata, linfoma ou leucemia, em um animal de sangue quente, tal como oser humano, em necessidade de tal tratamento que compreende administrar aodito animal uma quantidade eficaz de um composto da Fórmula (I), ou um salou pró-droga farmaceuticamente aceitáveis deste, como definido mais acima.
Os cânceres que são sensíveis ao tratamento com a presenteinvenção incluem câncer do esôfago, mieloma, câncer hepatocelular,pancreático e cervical, tumor de Ewings, neuroblastoma, sarcoma de capose,câncer no ovário, câncer de mama, câncer colorretal, câncer da próstata,câncer na bexiga, melanoma, câncer de pulmão [incluindo câncer da célulapulmonar não pequena (NSCLC) e câncer da célula pulmonar pequena(SCLC)], câncer gástrico, câncer de cabeça e pescoço, câncer no cérebro,câncer renal, linfoma e leucemia.
A atividade inibidora de HDAC definida mais acima pode seraplicada como uma terapia única ou pode envolver, além de um composto dainvenção, uma ou mais outras substâncias e/ou tratamentos. Tal tratamentoem conjunto pode ser obtido por intermédio da administração simultânea,seqüencial ou separada dos componentes individuais do tratamento. Nocampo da oncologia médica é uma prática normal usar uma combinação dediferentes formas de tratamento para tratar cada paciente com câncer. Naoncologia médica o(s) outro(s) componente(s) de tal tratamento conjuntoalém do tratamento de inibição do ciclo celular definido mais acima pode ser:cirurgia, radioterapia ou quimioterapia. Tal quimioterapia pode incluir uma oumais das seguintes categorias de agentes anti-tumor:
(i) drogas antiproliferativas/antineoplásticas e combinaçõesdestes, como usado na oncologia médica, tais como agentes de alquilação (porexemplo cis-platina, carboplatina, ciclofosfamida, nitrogênio mostarda,melfalano, clorambucila, bussulfano e nitro-souréias); antimetabólitos (porexemplo antifolatos tais como fluoropirimidinas como 5-fluorouracila etegafiir, raltitrexed, metotrexato, citosina arabinoside e hidróxiuréia;antibióticos anti-tumor (por exemplo adriamicina semelhantes a antraciclinas,bleomicina, doxorubicina, daunomicina, epirubicina, idarubicina, mitomicina-C, dactinomicina e mitramicina); agentes antimitóticos (por exemplo vincaalcalóides como vincristina, vinblastina, vindesina e vinorelbina e taxóidescomo taxol e taxotero); e os inibidores de topoisomerase (por exemploepipodofilotoxinas como etopósido e tenipósido, ansacrina, topotecano ecamptotecina);
(ii) agentes citoestáticos tais como antioestrógenos (porexemplo tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno e iodoxifeno),reguladores do receptor de estrogeno (por exemplo fulvestranto),antiandrógenos (por exemplo bicalutamida, flutamida, nilutamida e acetato deciproterona), antagonistas de LHRH ou agonistas de LHRH (por exemplogoserelina, leuprorelina e buserelina), progestogenas (por exemplo acetato demegestrol), inibidores de aromatase (por exemplo como anastrozol, letrozol,vorazol e exemestano) e inibidores de 5oc-redutase tal como finasterida;
(iii) Agentes que inibem a invasão da célula cancerosa (porexemplo inibidores de metaloproteinase como marimastat e inibidores dafunção receptora do ativador de plasminogeno uroquinase);
(iv) inibidores da função do fator de crescimento, por exemplotais inibidores incluem anticorpos do receptor do fator de crescimento, (porexemplo o anticorpo trastuzumab anti-erbb2 [Herceptin®] e o anti-corpo anti-erbbl cetuximab [C225]), inibidores de famesil transferase, inibidores deMEK, inibidores de tirosina quinase e inibidores de serina/treonina quinase,por exemplo inibidores da família de fator de crescimento epidérmico (porexemplo inibidores de tirosina quinase da família EGFR tal como N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7- metóxi-6-(3-morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina(gefitinib), N-(3-etinilfenil)- 6,7-bis(2-metoxietoxi)quinazolin-4-amina(erlotinib, OSI-774) e 6-acril-amido-N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-(3-morfolinopropóxi)quinazolin-4-amina (Cl 1033)), por exemplo inibidores dafamília do fator de crescimento derivado de plaquetas e por exemploinibidores da família do fator de crescimento hepatócito;
(v) agentes antiangiogênicos tais como aqueles que inibem osefeitos do fator de crescimento vascular endotelial, (por exemplo o anticorpode fator de crescimento celular anti-vascular endotelial [Avastin®], compostostais como aqueles divulgados nos Pedidos de Patente Internacionais WO97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 e WO 98/13354) e compostos quetrabalham através de outros mecanismos (por exemplo linomida, inibidores dafunção integrina ανβ3 e angiostatina);(vi) agentes de dano celular tais como Combretastatina A4 e oscompostos divulgados nos Pedidos de Patente Internacionais WO 99/02166,W000/40529, WO 00/41669, W001/92224, W002/04434 e W002/08213;
(vii) terapias anti-sentido, por exemplo aquelas que sãodirecionadas aos alvos listados acima, tais como ISIS 2503, um anti-sentidoanti-rás;
(viii) caminho de terapia de gene, incluindo por exemplocaminhos para substituir genes aberrantes tais como p53 aberrante ou BRCAlou BRCA2 aberrantes, GDEPT (terapia de pró-droga enzimática direcionadaao gene) caminhos tais como aqueles que usam citosina desaminase, timidinaquinase ou uma enzima de nitrorreductase bacteriana e caminhos paraaumentar a tolerância do paciente à quimioterapia ou radioterapia tais comoterapia de resistência de gene multi-drogas;
(ix) caminhos de imunoterapia, incluindo por exemplocaminhos ex-vivo e in-vivo para aumentar a imunogenicidade das célulastumorais do paciente, tais como transfecção com citocinas tal comointerleucina 2, interleucina 4 ou fator que estimula a colônia de granulócito-macrófago, caminhos para diminuir a energia da célula T, caminhos que usamcélulas imune transfectadas tais como células dendríticas transfectadas comcitocina, caminhos que usam linhas de células tumorais transfectadas comcitocina e caminhos que usam anti-corpos anti-idiotípicos;
(x) inibidores do ciclo celular incluindo por exemplo osinibidores de CDK (por exemplo, flavopiridol) e outros inibidores dos pontosde checagem do ciclo celular (por exemplo, ponto de chegarem de quinase);
inibidores de aurora quinase e outras quinases envolvidas na regulação demitose e citoquinase (por exemplo, quinases mitóticas); e outros inibidores dedesacetilase histona; e
(xi) agentes de diferenciamento (por exemplo ácido retinóico evitamina D).De acordo com este aspecto da invenção é fornecido umacomposição farmacêutica que compreende um composto da Fórmula (I) comodefinido mais acima e uma substância anti-tumor adicional como definidomais acima para o tratamento em conjunto do câncer.
Além disso é fornecido um composto da Fórmula (I), ou umsal ou pró-droga farmaceuticamente aceitáveis deste, como definido maisacima, para o uso em um método de tratar as doenças inflamatórias, doençasautoimune e doenças alérgicas/atópicas.
Em particular um composto da Fórmula (I), ou um sal.farmaceuticamente aceitável do mesmo, como definido mais acima, éfornecido para o uso em um método de tratar a inflamação da junta(especialmente artrite reumatóide, osteoartríte e gota), inflamação do tratogastro-intestinal (especialmente doença do intestino inflamatório, coliteulcerativa e gastrite), inflamação da pele (especialmente psoríase, eczema,dermatite), esclerose múltipla, ateroesclerose, espondiloartropatias(espondilite ankilosing, artrite psoriática, artrite conectada à colite ulcerativa),neuropatias relacionadas à AIDS, lupus eritematoso sistêmico, asma, doençaspulmonares obstrutivas crônicas, bronquite, pleurite, síndrome de afliçãorespiratória adulta, sépse, e hepatite aguda e crônica (viral, bacteriana outóxica).
Além disso é fornecido um composto da Fórmula (I), ou umsal ou pró-droga farmaceuticamente aceitáveis deste, como definido maisacima, para o uso como um medicamento no tratamento de doençasinflamatórias, doenças autoimune e doenças alérgicas/atópicas em um animalde sangue quente tal como o ser humano.
Em particular um composto da Fórmula (I), ou um sal ou pró-droga farmaceuticamente aceitáveis deste, como definido mais acima, éfornecido para o uso como um medicamento no tratamento de inflamação dajunta (especialmente artrite reumatóide, osteoartríte e gota), inflamação dotrato gastro-intestinal (especialmente doença do intestino inflamatório, coliteulcerativa e gastrite), inflamação da pele (especialmente psoríase, eczema,dermatite), esclerose múltipla, aterosclerose, espondiloartropatias (espondiliteankilosing, artrite psoriática, artrite conectada à colite ulcerativa), neuropatiasrelacionadas à AIDS, lupus eritematoso sistêmico, asma, doenças pulmonaresobstrutivas crônicas, bronquite, pleuritie, síndrome de aflição respiratóriaadulta, sépse, e hepatite aguda e crônica (viral, bacteriana ou tóxica).
Além disso é fornecido o uso de um composto da Fórmula (I),ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como definido mais acima,na fabricação de um medicamento para o uso no tratamento de doençasinflamatórias, doenças autoimune e alérgicas/atópicas doenças em um animalde sangue quente tal como o ser humano.
Como determinado acima o tamanho da dose necessária para otratamento terapêutico ou profilático de uma doença de proliferação celularem particular será necessariamente variada dependendo do paciente tratado,da via de administração e da severidade da doença sendo tratada. Uma doseúnica na faixa de, por exemplo, 1 a 100 mg/kg, preferivelmente de 1 a 50mg/kg é considerada.
Além dos eu uso na medicina terapêutica, os compostos dafórmula (I) e seus sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, também sãoúteis como ferramentas farmacológicas no desenvolvimento e padronizaçãodos sistemas de teste in vitro e in vivo para a avaliação dos efeitos dosinibidores da atividade do ciclo celular em animais de laboratório tais comogatos, cães, coelhos, macacos, ratos e camundongos, como parte da pesquisapara novos agentes terapêuticos.
A invenção será agora ilustrada nos seguintes Exemplos emque, no geral:
(i) as operações foram realizadas na temperatura ambiente, istoé na faixa de 17 a 25° C e sob uma atmosfera de um gás inerte tal comoargônio a menos que de outro modo indicado;
(ii) as evaporações foram realizadas através da evaporaçãorotatória no vácuo e os procedimentos de trabalho foram realizados após aremoção dos sólidos residuais através da filtração;
(iii) cromatografia de coluna (pelo procedimento cintilante) ecromatografia líquida de pressão média (MPLC) foram realizadas em sílica daMerck Kieselgel (Art. 9385) ou Merck Lichroprep RP-18 (Art. 9303) sílica defase reversa obtida da E. Merck, Darmstadt, Alemanha ou usando cartuchosde sílica de fase normal de propriedade pré-acondicionada, por exemplo1cartuchos de cromatografia disponíveis Redisep® obtidos da Presearch Ltd.,Hitchin, Reino Unido, ou cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) foirealizada em sílica de fase reversa C18, por exemplo em uma colunapreparativa de fase reversa Dynamax C-18 60A;
(iv) os rendimentos, onde presentes, não são necessariamente o máximo obtenível;
(v) no geral, as estruturas dos produtos finais da Fórmula (I)foram confirmados através de ressonância magnética nuclear (RMN) e/outécnicas de massa espectral; bombardeio de átomo fixo (FAB) dadosespectrais de massa foram obtidos usando um espectrômetro Platform e, ondeapropriado, dados de íon positivo ou dados de íon negativo foram coletados;Os valores de grupos químicos de RMN foram medidos na ressonânciamagnética protônica de escala delta, os espectros foram determinados usandoum espectrômetro Jeol JNM EX 400 operando a uma força de campo de 400MHz, espectrômetro Varian Gemini 2000 operando a uma força de campo de300 MHz, Bruker DPX-400 operando a 400 MHz ou um espectrômetroBruker AM300 operando a uma força de campo de 300 MHz - as mediçõesforam tomadas na temperatura ambiente a menos que de outro modoespecificado;
(vi) intermediários não foram no geral completamentecaracterizados e a pureza foi avaliada por HPLC cromatográfico de camadafina, infra-vermelho (IR) e/ou análise de RMN;
(vii) os pontos de fusão são incorretos e foram determinadosusando um dispositivo de ponto de fusão automático Mettler SP62 ou umdispositivo de banho em óleo; os pontos de fusão para os produtos finais daFórmula (I) foram determinados após a cristalização a partir de um solventeorgânico convencional tais como etanol, metanol, acetona, éter ou hexano,sozinho ou em mistura;
(viii) As seguintes abreviações foram usadas:
DMSO sulfóxido de dimetila
THF tetraidrofurano
DIPEA N,N-diisopropiletilamina
IPAálcool isopropílico
Boc/BOC terc-butiloxicarbonila
HCl ácido clorídrico
Cbz/CBZ benziloxicarbonila
Tf trifluorometilsulfonila
LiHMDS hexametildisilazida de lítio
PhNTf2 N-fenil-bis(trifluorometanossulfonimida)
DME 1,2-dimetoxietano
CDMT 2-cloro-4,6-dimetóxi-l ,3,5-triazina
Exemplo 1
N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)metil} -piperidin-4-illbenzamida
<formula>formula see original document page 46</formula>
A um recipiente de reação carregado com 1-metil-lH-pirazol-4-carboxaldeído (84,5 mg, 0,77 mmol) foi adicionada uma solução de 2-[(4-piperidin-4-ilbenzoil)amino]fenilcarbamato de terc-butila (preparado comodescrito no Método 1 abaixo; 300 mg, 0,76 mmol) em diclorometano (7 ml) eN,N-dimetilformamida (0,5 ml). 2-[(4-piperidin-4-il-benzoil)amino]fenilcarbamato de terc-butila também pode ser preparado de acordo com oprocesso descrito no Método 4 abaixo. O ácido acético (50 μΐ 0,87 mmol) foiadicionado e a mistura de reação deixada agitar na temperatura ambiente por45 minutos. Triacetoxiboroidreto de sódio (250 mg, 1,18 mmol) foi depoisadicionado e as reações deixadas agitar por outras 76 horas, antes de serdiluída com metanol e vertida diretamente em um cartucho SCX-2 (10 g). ocartucho foi lavado através de metanol (80 ml) antes de eluir os produtos comuma solução 2 M de amônia em metanol (50 ml). As frações relevantes foramevaporadas até a secura e o resíduo resultante foi redissolvido emdiclorometano (3 ml) e tratado com ácido trifluoroacético (1 ml). Esta misturafoi agitada na temperatura ambiente por 2 horas antes de diluir comdiclorometano e verter em um cartucho SCX-2 (5 g). o cartucho foi lavadocom metanol (20 ml) depois os produtos foram eluídos com uma solução 2 Mde amônia em metanol (20 ml). A fração de amônia foi evaporada até a securae o resíduo resultante foi purificado por cromatografia cintilante em sílica,eluindo com 10 % de metanol em diclorometano, para produzir o compostodo título (117 mg, 40 %); Espectro de RMN: (DMSO Cl6) δ 1,70 (m, 4H), 2,01(t, 2H), 2,57 (m, 1H), 2,95 (m, 2 H), 3,38 (s, 2 H), 3,81 (s, 3H), 4,86 (s, 2H),6,60 (m, 1H), 6,78 (m, 1H), 6,97 (m, 1H), 7,18 (m, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,37 (d,2H), 7,57 (s, 1H), 7,91 (d, 2H), 9,56 (s, 1H); Espectro de Massa: M+H+ 390.
Exemplo 2
Usando um procedimento análogo àquele descrito no Exemplo1, 2-[(4-piperidin-4-ilbenzoil)amino]fenilcarbamato de terc-butila foi reagidocom o material de partida (SM) pirazolcarbaldeído apropriado 5 para forneceros compostos descritos na Tabela 1Tabela 1
<formula>formula see original document page 48</formula>
<table>table see original document page 48</column></row><table>
Exemplo 3
N-(2-aminofenil)-4-[1-(1H-pirazol-3-ilmetil)piperidin-4-il]-benzaminda
<formula>formula see original document page 48</formula>
2-[(4-piperidin-4-ilbenzoil)amino]fenilcarbamato de terc-butila (preparado como descrito no Método 1 abaixo; 200 mg, 0,51 mmol) elH-pirazol-3-carbaldeído (50,7 mg, 0,53 mmol) foram agitados natemperatura ambiente em diclorometano (5 ml) por 1 hora.Triacetoxiboroidreto de sódio (150 mg, 0,71 mmol) foi adicionado e a misturafoi agitada na temperatura ambiente por 48 horas. A solução resultante foiabsorvida em uma coluna SCX-2, que foi lavada com metanol (coluna de 2volumes) e depois o produto foi eluído com uma solução 2 M de amônia emmetanol (coluna de 2 volumes) para fornecer uma espuma. Esta foi dissolvidaem 1,4-dioxano (2 ml), uma solução 4 M de cloreto de hidrogênio em 1,4-dioxano (2 ml) foi adicionada e a solução foi agitada na temperatura ambientepor 48 horas. O produto foi filtrado e lavado com éter dietílico e secado comar. O sólido resultante foi dissolvido em água, basificado com 2 N dehidróxido de sódio e o sólido resultante foi filtrado, lavado com água e secadosob vácuo para fornecer o composto do título (61 mg, 44 %). Espectro deRMN: 1H RMN (DMSO d6) δ 1,71 (m, 4H), 2,07 (m, 2H), 2,56 (m, 1H), 2,95(m, 2H), 3,53 (s, 2H), 4,86 (s, 2H), 6,16 (s, 1H), 6,60 (m, 1H), 6,78 (d, 1H),6,97 (t, 1H), 7,18 (d, 1H), 7,37 (d, 2H), 7,64 (m, 1H), 7,91 (d, 2H), 9,55 (s,1H), 12,59 (m, 1H); Espectro de Massa: M+H+ 376.
Exemplo 4
N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(5 -metóxi-1,3 -dimetil-1 H-pirazol-4-il)metil]piperidin-4-il} benzamida
<formula>formula see original document page 49</formula>
Usando um procedimento análogo àquele descrito no Exemplo3, 2-[(4-piperidin-4-ilbenzoil)amino]fenilcarbamato de terc-butila (preparadocomo descrito no Método 1 abaixo; 200 mg, 0,51 mmol) foi reagido com 5-metóxi-l,3-dimetil-lH-pirazol-4-carbaldeído (92,6 mg, 0,60 mmol) parafornecer o composto do título (68 mg, 36 %); Espectro de RMN: (DMSO dó)δ 1,63 (m, 2H), 1,78 (m, 2H), 2,00 (m, 2H), 2,06 (s, 3H), 2,57 (m, 1H), 2,94(m, 2H), 3,25 (s, 2H), 3,50 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 4,86 (br s, 2H), 6,60 (m, 1H),6,78 (d, 1H), 6,97 (m, 1H), 7,17 (d, 1H), 7,37 (d, 2H), 7,91 (d, 2H), 9,55 (s,1H); Espectro de Massa: M+ET 434.
Exemplo 5
N-(2-aminofenil)-4-{l-[(3-etil-lH-pirazol-4-il)metil]-piperidin-4-il} benzamida2-[(4-piperidin-4-ilbenzoil)amino]fenilcarbamato de terc-butila (preparado como descrito no Método 1 abaixo; 395 mg, 1,0 mmol) e 3-etil-lH-pirazol-4-carbaldeído (149 mg, 1,2 mmol) foram agitados natemperatura ambiente em diclorometano (10 ml) por 1 hora.Triacetoxiboroidreto de sódio (297 mg, 1,4 mmol) foi adicionado e a misturafoi agitada na temperatura ambiente por 24 horas. A solução resultante foiabsorvida em uma coluna SCX-2 que foi lavada com metanol (coluna de 2volumes) e depois o produto foi eluído com uma solução 2 M de amônia emmetanol (coluna de 2 volumes) para fornecer o produto como uma espumabranca. Esta foi purificada através de cromatografia em sílica eluindo com 10% de metanol em diclorometano. O resíduo foi dissolvido em diclorometano(4 ml) e ácido trifluoroacético (1 ml) foi adicionado e a mistura foi agitadapor 3 horas na temperatura ambiente. A solução resultante foi absorvida emuma coluna SCX-2 que foi lavada com metanol (coluna de 2 volumes) edepois o produto eluído com uma solução 2 M de amônia em metanol (colunade 2 volumes) para fornecer o composto do título (232 mg, 75 %). Espectrode RMN: (DMSO d6) δ 1,18 (t, 3H), 1,65 (m, 2H), 1,77 (m, 2H), 2,00 (m,2H), 2,57 (m, 3H), 2,95 (m, 2H), 3,34 (s, 2H), 4,86 (br s, 2H), 6,60 (m, 1H),6,78 (d, 1H), 6,97 (m, 1H), 7,17 (d, 1H), 7,29 (br s, 1H), 7,37 (d, 2H), 7,91 (d,2H), 9,55 (s, 1H), 12,39 (s, 1H); Espectro de Massa: M+H" 404.
Exemplo 6
N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(1,3,5-trimetil-1 H-pirazol-4-il)-metil]piperidin-4-il}benzamida<formula>formula see original document page 51</formula>
Usando um procedimento análogo àquele descrito no Exemplo5, terc-butil 2-[(4-piperidin-4- ilbenzoil)amino]fenilcarbamato (preparadocomo descrito no Método 1 abaixo; 200 mg, 0,51 mmol) foi reagidowithl,3,5-trimetil-lH-pirazol-4-carbaldeído (83,5 mg, 0,60 mmol) parafornecer o composto do título (70 mg, 56 %); Espectro de RMN: (DMSO d6)8 1,65 (m, 2H), 1,77 (m, 2H), 1,98 (m, 2H), 2,09 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,57(m, 1H), 2,92 (m, 2H), 3,24 (s, 2H), 3,63 (s, 3H), 4,86 (br s, 2H), 6,60 (m,1H), 6,78 (d, 1H), 6,97 (m, 1H), 7,17 (d, 1H), 7,37 (d, 2H), 7,91 (d, 2H), 9,55(s, 1H); Espectro de Massa: Μ+ΕΓ 418.Exemplo 7A
N-(2-aminofenil)-4-{l-[(l,3-dimetil-lH-pirazol-4-il)metil]-piperidin-4-il}benzamida
<formula>formula see original document page 51</formula>
(2- {[4-( 1 - {1,3 -dimetil-1 H-pirazol-4-ilmetil} piperidin-4-il)-benzoil]amino}fenil)carbamato de terc-butila (preparado como descrito noMétodo 6 abaixo; 7,61 g, 15,11 mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano (70 ml)e resinado até 0o C, usando um banho de água e gelo. Uma solução 4 M decloreto de hidrogênio em 1,4-dioxano (150 ml, 600 mmol) foi depoislentamente adicionada. A suspensão resultante foi deixada aquecer até atemperatura ambiente e dividida pela agitação com uma haste de vidro. Amistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 18 horas. Amistura foi filtrada, sob sucção. O sólido obtido foi dissolvido em água (200ml), e a solução foi ajustada ao pH 12 pela adição lenta de uma soluçãoaquosa 2 M de hidróxido de sódio. A mistura obtida foi extraída comdiclorometano (300 ml) e os orgânicos foram separados. A fase aquosa foinovamente extraída com diclorometano (200 ml) e os extratos combinadosforam lavados com salmoura, secados em sulfato de magnésio, filtrados eevaporados para fornecer uma goma clara. A goma foi retirada em éterdietílico e re-evaporada até a secura para produzir o composto do título (5,69g, 93 %); Espectro de RMN (CDCU) δ 1,81 (m, 4H), 2,07 (m, 2H), 2,25 (s,3H), 2,56 (m, 1H), 3,04 (m, 2H), 3,39 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,85 (s, 2H), 6,84(m, 2H), 7,08 (m, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,33 (m, 3H), 7,82 (m, 3H).
Espectro de Massa: M+H^ 404.
Exemplo 7B:
N-(2-aminofenil)-4-{l-[(l,3-dimetil-4H-pirazol-4-il)metil]piperidin-4-il}benzamida
(2- {[4-( 1 - {1,3-dimetil-1 H-pirazol-4-ilmetil}piperidin-4-il)-benzoil]amino}fenil)carbamato (Método 6 abaixo; 92,3 g, 183,3 mmol) foiconvertido em pasta fluida em metanol (754 ml) e água (141 ml) e resfriadode 0 a 5 o C. Acido clorídrico concentrado foi adicionado mantendo atemperatura abaixo de 20° C. A mistura de reação foi agitada por 20 horas natemperatura ambiente. A reação foi resinada de 0 a 5o C e uma solução dehidróxido de sódio aquosa foi adicionada mantendo a temperatura a abaixo de20° C até um pH de 12 a 14 ser obtido. A mistura de reação foi aquecida atétemperatura de refluxo por 30 minutos antes de resfriar até 20° C por cerca de4 horas. O produto foi coletado por filtração e lavado com metanol aquosoantes de ser secado no vácuo a 45° C em um peso constante para fornecer ocomposto do título (63,3 g 86 %). Espectro de RMN (DMSO d6), 1,65 (m,2H), 1,73 (m, 2H), 1,96 (t, 2H), 2,08 (s, 3H), 2,55 (m, 1H), 2,92 (d, 2H), 3,28(s, 2H), 3,75 (s, 3H), 4,87 (s, 2H), 6,59 (m, 1H), 6,77(m, 1H), 6,96 (m, 1H),7,2 (d, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,44 (s, 1H), 7,90 (d, 2H), 9,56 (s, 1H). Espectro deMassa: Μ+ΕΓ 404.Exemplo 8
N-(2-aminofenil)-4- {1 -[(1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)metil]-piperidin-4-iljbenzamida
<formula>formula see original document page 53</formula>
{2- [(4- {1 - [(1,5-dimetil-1 H-pirazol-4-il)metil]piperidin-4-il]benzoil)amino]fenil}carbamato de terc-butila (preparado como descrito noMétodo 7; 308 mg, 0,61 mmol) foi retirado em diclorometano (2 ml) e ácidotrifluoroacético (1 ml) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada natemperatura ambiente por 1 hora antes de ser vertida em um cartucho SCX-3(5 g). o cartucho foi lavado com diclorometano (50 ml) e metanol (50 ml),antes de eluir o produto com uma solução 2 M de amônia em metanol (50 ml).A fração de amônia foi evaporada para produzir um sólido branco (182 mg)que foi purificado por HPLC preparativo de fase reversa para produzir ocomposto do título (134 mg, 55 %); Espectro de RMN: (DMSO d6) δ 1,70 (m,4H), 2,01 (m, 2H), 2,22 (s, 3H), 2,57 (m, 1H), 2,95 (m, 2H), 3,28 (s, 2H), 3,71(s, 3H), 4,86 (s, 2H), 6,60 (m, 1H), 6,78 (m, 1H), 6,97 (m, 1H), 7,17 (m, 1H),7,23 (s, 1H), 7,37 (d, 2H), 7,90 (d, 2H), 9,55 (s, 1H); Espectro de Massa:M+H" 404.
Exemplo 9
N-(2-aminofenil)-4- {1 -[(1 -etil-5 -metil-1 H-pirazol-4-il)-metil]piperidin-4-il}benzamida
<formula>formula see original document page 53</formula>
Uma solução de 1-etil-5-metil-lH-pirazol-4-carbaldeído (141mg, 1,02 mmol) em diclorometano (1 ml) foi adicionada a uma solução de 2-[(4-piperídin-4-ilbenzoil)amino]fenilcarbamato de terc- butila (preparadocomo descrito no Método 1 abaixo; 300 mg, 0,76 mmol) em diclorometano(6,5 ml). Acido acético (0,79 mmol) foi adicionado e mistura de reação foiagitada por 4 horas. Ν,Ν-dimetilformamida (1 ml) foi depois adicionado e aagitação foi continuada por outros 30 minutos antes da adição detriacetoxiboroidreto de sódio (245 mg, 1,16 mmol) como um sólido. Amistura de reação foi depois deixada agitar na temperatura ambiente por 18horas (durante a noite). A mistura de reação foi diluída ao dobro do volumepela adição de metanol e diretamente vertida em um cartucho pré-lavado(com metanol) cartucho SCX-2 (10 g). O cartucho foi lavado com metanol(60 ml) antes de eluir os produtos com uma solução 2 M de amônia emmetanol (50 ml). O eluente de amônia foi evaporado para fornecer uma gomaincolor (420 mg), que foi retirada em diclorometano (5 ml) e tratada comácido trifluoroacético (2 ml). A mistura foi deixada agitar por 2 horas antes dediluir com diclorometano (10 ml) e vertida em um cartucho SCX-2 pré-lavado(com metanol) (10 g). o cartucho foi lavado completamente comdiclorometano (40 ml), metanol (50 ml) e depois produtos eluído com umasolução 2 M de amônia em metanol (50 ml). A evaporação da fração deamônia produziu uma goma amarelo claro (300 mg), que foi purificada porHPLC preparativo de fase reversa para produzir o composto do título (172mg, 54%); Espectro de RMN: (DMSO (I6) δ 1,27 (t, 3H), 1,66 (m, 4H), 1,98(m, 2H), 2,21 (s, 3H), 2,56 (m, 1H), 2,92 (m, 2H), 3,29 (s, 2H), 4,02 (q, 2H),4,85 (s, 2H), 6,59 (m, 1H), 6,77 (m, 1H), 6,95 (m, 1H), 7,16 (m, 1H), 7,23 (s,1H), 7,35 (d, 2H), 7,89 (d, 2H), 9,54 (s, 1H); Espectro de Massa: M+H* 418.Exemplos IOell
Usando um procedimento análogo àquele descrito no Exemplo9, 2-[(4-piperidin-4-ilbenzoil)amino]fenilcarbamato de terc-butila (preparadocomo descrito no Método 1 abaixo) foi reagido com o material de partida depirazolecarbaldeído apropriado para fornecer os compostos descritos naTabela 2.
<formula>formula see original document page 55</formula>
<table>table see original document page 55</column></row><table>
Seção do Método - Preparação dos Materiais de Partida
Método 1
{2- [(4-piperidin-4-ilbenzoildiamino] fenil} carbamato
A uma solução de 4-{4-[({2-[(terc-butoxicarbonil)amino]fenil]amino)carbonilifenil]-3,6-diidropiridina-1 -(2H)-carboxilato de benzila(269 g, 524 mmol; preparada como descrito no Método 2 abaixo) em metanol(3000 ml) foi adicionado paládio em carvão vegetal al0%(10g). A misturade reação foi colocada sob uma pressão de 5 bar de gás hidrogênio e aquecidaaté 50° C por 1 hora. A mistura de reação foi resfriada até a temperaturaambiente, filtrada através de uma almofada de celite e o solvente foievaporado sob pressão reduzida. A espuma resultante foi triturada sob éterdietílico e filtrada para fornecer um sólido branco. Este produto foi finamentemoído e agitado com 95:5 de éter dietílico/acetato de etila e depois coletadopor filtração de sucção. Este sólido foi lavado com éter dietílico, hexano esecado no vácuo para produzir o composto do título (167 g, 81 %); Espectrode RMN: (DMSO-dO 1,45 (s, 9H), 1,57 (m, 2H), 1,72 (m, 2H), 2,61 (t, 2H),2,69 (m, 1H), 3,07 (m, 2H), 7,18 (m, 2H), 7,40 (d, 2H), 7,53 (d, 2H), 7,91 (d,2H), 8,70 (br s, 1H), 9,82 (br s, 1H); Espectro de Massa: M+lf 396.Método 2
4- { 4[( { 24(terc-butoxicarbonil)amino] fenil} amino)carbonil]-fenil} -3,6-diidropiridina-l(2H)-carboxilato de benzila
Tetracis(trifenilfosfino)paládio (0) (8,0 g, 6,92 mmol) foiadicionado a uma suspensão agitada de N-(2-t-butoxicarbonilamino-fenil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2,-dioxaborolan-2-il)benzamida (288 g, 657 mmol;preparado como descrito no Pedido de Patente Internacional número WO03/087057, Método 13, página 60) e 4-{[(trifluorometil)-sulfonil]óxi}-3,6-diidropiridina-1 (2H)-carboxilato de benzila (240 g, 657 mmol; preparadocomo descrito no Método 3 abaixo) em 1,2-dimetoxietano (3000 ml) esolução de bicarbonato de sódio saturada aquosa (3000 ml). A mistura dereação foi aquecida até 80° C por 7 horas, antes de ser deixada resfriar até atemperatura ambiente, com agitação. A mistura de reação foi depois vertidaem água (2000 ml) e extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicosforam depois secados em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados até asecura para fornecer o produto bruto como um sólido verde. Esta foipurificada através de cromatografia de coluna cintilante em sílica, eluindocom acetato de etila/hexano (30:70 v/v) para produzir o composto do título(279 g, 82 %); Espectro de RMN: (DMSO-tU δ 1,44 (s, 9H), 2,56 (m, 2H),3,66 (m, 2H), 4,14 (m, 2H), 5,13 (s, 2H), 6,34 (m, 1H), 7,18 (m, 2H), 7,33 (m,1H), 7,40 (m, 4H), 7,54 (m, 2H), 7,62 (d, 2H), 7,94 (d, 2H), 8,64 (br s, 1H),9,81 (br s, 1H); Espectro de Massa: MNa+ 550.
Método 3
4- {[(trifluorometil)sulfonil] óxi} -3,6-diidropiridina-1 (2H)-carboxilato debenzila.
<formula>formula see original document page 57</formula>
foi dissolvido em tetraidrofurano (500 ml), sob uma atmosfera de nitrogênio.Esta solução foi adicionada, às gotas por 2 horas, a uma solução agitada dehexametildisilazida de lítio (solução a 20 % em tetraidrofurano, 556 ml, 662mmol) sob nitrogênio mantendo a reação em uma temperatura abaixo de -70°C. A mistura de reação foi deixada agitar a -75 ° C por mais 1 hora antes daadição às gotas por 2 horas, de uma solução de N-fenil-bis(trifluorometanossulfonimida) (236 g, 661 mmol) em tetraidrofurano(950 ml) novamente mantendo a reação em uma temperatura abaixo de -70°C. A reação foi depois deixada aquecer até a temperatura ambiente durante anoite seguido pela adição às gotas de solução 2 M de hidróxido de sódioaquosa (800 ml). As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavadacom outra solução 2M de hidróxido de sódio aquoso (600 ml), antes daevaporação até a secura. O sólido resultante foi dissolvido em éter dietílico elavado com água. A camada orgânica foi depois filtrada através de celite,secada em sulfato de sódio e evaporada até a secura para produzir o compostodo título (140 g, 61 %), que foi retirado inteiramente para a etapa seguintesem outra purificação.
Método 4{2-[(4-piperidin-4-ilbenzoil)amino]fenil}carbamato de terc-butila (métodoalternativo)
<formula>formula see original document page 58</formula>
A {2-[4-pirid-4-ilbenzoil)amino]fenil}carbamato de terc-butila(20 g, 51,35 mmol; preparado como descrito no Método 5A ou 5B abaixo),paládio em carvão vegetal a 10 % (3,17 g) e ácido cítrico (4,75 g, 24,65mmol) foi adicionado água (80 ml) e IPA (80 ml). A mistura de reação foicolocada sob uma pressão de gás de hidrogênio de 4 bar e aquecida até 70° Cpor 5 horas. A mistura de reação foi resfriada até 50° C e filtrada através deum almofada de Celite. A mistura foi aquecida até 70° C antes de 20 % p/puma solução de hidróxido de sódio aquosa foi adicionada (15 ml) em 10minutos ao pH de 10 a 11. Além disso, água (30 ml) foi adicionada e depois amistura foi resfriada até 40° C durante 1 hora, depois re-aquecida até 60° Cpor 30 minutos antes de resfriar novamente até a temperatura ambiente. Oprecipitado resultante foi coletado por filtração, lavado com água (2 χ 20 ml)e secado no vácuo, a 50° C, para produzir o composto do título (17,6 g, 84%);
Espectro de RMN: (DMSO-d6) δ 1,45 (s, 9H), 1,53 (m, 2H),1,70 (m, 2H), 2,58 (m, 1H), 2,66 (m, 2H), 3,03 (m, 2H), 3,31 (br s, 1H), 7,17(m, 2H), 7,35 (d, 2H), 7,54 (m, 2H), 7,89 (d, 2H), 8,65 (br s, 1H), 9,75 (br s,1H). Espectro de Massa: M+H+ 396.
Método 5A
{2-[4-pirid-4-ilbenzoil)aminofenil]carbamato de terc-butila<formula>formula see original document page 59</formula>
A 4-(4-piridil)benzoato de sódio (55,2 g, 236,2 mmol), boc o-fenileno diamina (45,7 g, 217,6 mmol) e N-metilmorfolina (24 ml) emacetonitrila (300 ml) foi adicionada uma solução tríada de 2-cloro-4,6-dimetóxi-l,3,5-triazina (48,5 g, 270,5 mmol) em acetonitrila (152 ml) durante3 horas. A mistura foi agitada por 22 horas antes de água (460 ml) seradicionada. O precipitado resultante foi coletado por filtração, lavado comacetonitrila aquosa a 50 % (3 χ 100 ml) e secado no vácuo, a 50° C, paraproduzir o composto do título (75,6 g, 90 %); Espectro de RMN: (DMSOd6):δ 1,45 (s, 9H), 7,17 (m, 2H), 7,56 (m, 2H), 7,81 (d, 2H), 7,99 (d, 2H), 8,11 (d,2H), 8,69 (d, 2H), 9,94 (br s, 1H). Espectro de Massa: M+H" 390.Método 5B
{2-[4-pirid-4-ilbenzoil)amino]fenil}carbamato de terc-butila
<formula>formula see original document page 59</formula>
4-(4-piridil)benzoato de sódio (10 g, 45,2 mmol) emacetonitrila (60 ml) foi aquecido até 70° C depois cloreto de tionila (6,6 ml,90,4 mmol) foi adicionado. A reação foi aquecida até a temperatura de refluxopor 5 horas antes de ser resinada até a temperatura ambiente. Trietilamina(12,6 ml, 90,4 mmol) foi adicionada cuidadosamente seguido por umasolução aquecida de Boc o-fenileno diamina (9,42 g, 45,2 mmol) emacetonitrila (15 ml) sendo adicionada durante 10 minutos. Uma solução dehidróxido de sódio (8,6g, 109 mmol) em água (60 ml) foi adicionada e osólido resultante foi coletado através de filtração, lavada com águo (20 ml) esecado no vácuo, a 50° C, para produzir o composto do título (12,6 g, 68 %).
Espectro de RMN: (DMSOd6): δ 1,45 (s, 9H), (7,17 (m, 2H),7,56 (m, 2H), 7,81 (d, 2H), 7,99 (d, 2H), 8,11 (d, 2H) 8,69 (d, 2H), 9,94 (br s,1H). Espectro de Massa: M+H^ 390.
Método 6A
(2-{[4-(l-{l,3 -dimetil-1 H-pirazol-4-ilmetil} piperidin-4-il)benzoil]amino}fenil)carbamato de terc-butila
<formula>formula see original document page 60</formula>
2-[(4-piperidin-4-ilbenzoil)amino]fenilcarbamato de terc-butila (6,83 g, 17,3 mmol) e 1,3-dimetil-lH-pirazol-4-carbaldeído (3,0 g, 24,2mmol) foram dissolvidos em diclorometano (150 ml). Ácido acético (996 μL,17,3 mmol) foi depois adicionado e a mistura de reação foi deixada agitar natemperatura ambiente por quatro horas. Triacetoxiboroidreto de sódio (5,49 g,25,9 mmol) foi depois adicionado e a mistura de reação foi agitada por mais18 horas. Uma solução de bicarbonato de sódio saturada aquosa (300 ml) foidepois cuidadosamente adicionada seguido por diclorometano (100 ml). Acamada orgânica foi separada e a camada aquosa foi re-extraída com maisdiclorometano (150 ml). Os extratos orgânicos combinados foram secados emsulfato de magnésio, filtrados e evaporados até a secura. O resíduo obtido foipurificado por cromatografia cintilante em sílica, eluindo com uma solução a5 % (v/v) de metanol em diclorometano seguido por um gradiente de enxágüede 5 a 10 % (v/v) de metanol em diclorometano para produzir uma gomaclara, que foi retirada em éter dietílico e evaporada até a secura para produziro composto do título (7,61 g, 87 %); Espectro de RMN: ÍDMSO d6) δ 1,43 (s,9H), 1,69 (m, 4H), 1,98 (m, 2H), 2,10 (s, 3H), 2,56 (m, 1H), 2,92 (m, 2H),3,26 (s, 2H), 3,70 (s, 3H), 7,15 (m, 2H), 7,40 (m, 3H), 7,52 (m, 2H), 7,87 (d,2H), 8,60 (s, 1H), 9,73 (s, 1H); Espectro de Massa: IVH-Hf 504.
Método 6B
(2- {[4-( 1 - {1,3 -dimetil-1 H-pirazol-4-ilmetil }piperidin-4-il)benzoil]-amino}fenil)carbamato de terc-butila
2-[(4-piperidin-4-ilbenzoil)amino]fenilcarbamato de terc-butila (preparado como descrito no Método 4 acima; 108,1 g, 273,3 mmol),1,3-dimetil-lH-pirazol-4-carbaldeído (35,6 g, 287 mmol) e paládio em carvãovegetal (3,09g, 1,37 mmol) foram carregados a uma recipiente de pressãoadequado. Tetraidrofurano (920 ml), água (54 ml) e ácido acético (32,8 g,546,7 mmol) foram carregados e a mistura agitada foi aquecida até 60° C sob3 bar de hidrogênio até a reação ser considerada completa. A mistura foi depois resfriada até 40° C e uma solução 2 M de hidróxido de sódio (410 ml,820 mmol) foi adicionada. No resfriamento até 25° C a mistura foi filtradapara remover o catalisador antes de tetraidrofurano (650 ml) ser adicionada ea fase orgânica ser separada. A fase orgânica foi parcialmente concentradaatravés de destilação antes de tolueno (575 ml) ser adicionado. A destilação foi continuada enquanto mantendo o volume da reação com outra adição detolueno (690 ml). A mistura de reação foi deixada resfriar até a temperaturaambiente por cerca de 3 horas enquanto o produto cristalizava. O sólido foicoletado através de filtração, lavado com tolueno (460 ml), e depois acetatode etila (230 ml) antes de ser secado no vácuo a 45° C a um peso constantepara fornecer o composto do título (114,9 g, 83 %). Espectro: (DMSO d6), δ1,434 (s, 914), 1,70 (m, 414), 1,98 (m, 2H), 2,11 (s, 3H), 2,56 (m, 1H), 2,93(m, 2H), 3,28 (s, 2H), 3,71 (s, 3H), 7,16 (m, 2H), 7,40 (m, 3H), 7,52 (m, 2H),7,87 (d, 2H), 8,60 (s, 1H), 9,73 (s, 114); Espectro de Massa: M-I-H+ 504.Método 7{ 2- [(4-11 - [(1,5 -dimetil-1 H-pirazol-4-3 4)metil]piperidin-4-il}benzoil)amino]fenil}carbamato de terc-butila
adicionado a uma solução de 2-[(4-piperidin-4-ilbenzoil)amino]fenil-carbamato de terc-butila (289 mg, 0,73 mmol) em diclorometano (6 ml)seguido por ácido acético (50 μΐ, 0,87 mmol). A mistura de reação foi deixadaagitar sob nitrogênio por 2,5 horas. Triacetoxiboroidreto de sódio (233 mg,1,10 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi deixada agitar, natemperatura ambiente, por 18 horas (durante a noite). Uma solução debicarbonato de sódio saturado aquoso (10 ml) foi depois adicionada à reação edeixada agitar por 15 minutos. A fase orgânica foi separada e a fase aquosare-extraída com diclorometano (10 ml). Os orgânicos combinados foramlavados com água, secados em sulfato de magnésio e evaporados até a securapara produzir o produto como uma goma incolor (308 mg, 84%), que foiusado sem outra purificação; Espectro de Massa: M+H* 504.

Claims (21)

1. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável domesmo, caracterizado pelo fato de que é da fórmula (I):<formula>formula see original document page 63</formula>(I)em que R1 é um anel de pirazol ligado a carbono, o qual é opcionalmentesubstituído por um ou mais grupos selecionados de alquila C 1.4, cicloalquilaC3-4, alcóxi C1-4e cicloalcóxi C3-4.
2. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmode acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é da fórmula(IA)<formula>formula see original document page 63</formula>(IA)em que R é hidrogênio, alquila C1-4 ou cicloalquila C3-4, e R eR5 são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila C1-4,cicloalquila C3-4, alcóxi Cm ou cicloalcóxi C3-4.
3. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmode acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é da fórmula(IB):<formula>formula see original document page 63</formula>em que R2, R3 e R5 são como definidos na reivindicação 2.
4. Composto de acordo com as reivindicações 2 ou 3,caracterizado pelo fato de que R2 é hidrogênio, metila, etila, propila,ciclopropila, metilciclopropila ou ciclobutila.
5. Composto de acordo com as reivindicações 2 ou 3,caracterizado pelo fato de que R é hidrogênio, metila ou etila.
6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesde 2 a 5, caracterizado pelo fato de que R3 e R5 são independentementeselecionados de hidrogênio metila, etila, propila, ciclopropila,metilciclopropila, metóxi, etóxi, propóxi ou ciclopropóxi.
7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesde 2 a 5, caracterizado pelo fato de que R3 e R5 são independentementeselecionados de hidrogênio, metila, etila ou metóxi.
8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicaçõesde 2 a 7, caracterizado pelo fato de que pelo menos um grupo selecionado deR2, R3 e R5 é outro que não hidrogênio.
9. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmode acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionadode qualquer um dos seguintes:N-(2-aminofenil)-4-[l-(lH-pirazol-3-ilmetil)piperidin-4-il]benzamida;N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(5 -metóxi-1,3 -dimetil-1 H-pirazol-4-il)metil]piperidin-4-il} benzamida;N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(3 -etil-1 H-pirazol-4-il)metil] -piperidin-4-il}benzamida;N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)metil]-piperidin-4-il}benzamida;N-(2-aminofenil)-4- {1 -[(1,3-dimetil- lH-pirazol-5-il)metil]-piperidin-4-il}benzamida;N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(1,3-dimetil-1 H-pirazol-4-il)metil] -piperidin-4-il}benzamida;N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(1,3,5 -trimetil-1 H-pirazol-4-il)-metil]piperidin-4-il}benzamida;N-(2-aminofenil)-4-{l-[(l,5-dimetil-lH-pirazol-4-il)metil]-piperidin-4-il}benzamida;N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(1 -etil-5 -metil-1 H-pirazol-4-il)-metil]piperidin-4-il}benzamida;N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(1 -etil-1 H-pirazol-4-il)metil] -piperidin-4-il}benzamida;N-(2-aminofenil)-4- {1 - [(1 -etil-3 -metil-1 H-pirazol-4-il)-metil]piperidin-4-il}benzamida.
10. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de quecompreende um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, em associaçãocom um diluente ou carreador farmaceuticamente aceitáveis.
11. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável domesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9,caracterizado pelo fato de que é para o uso como um medicamento.
12. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável domesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9,caracterizado pelo fato de que é para o uso no tratamento do câncer.
13. Uso de um composto ou um sal farmaceuticamenteaceitável do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações de 1a 9, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamentopara o uso na produção de um efeito inibitório de HDAC em um animal desangue quente, tal como no ser humano.
14. Método para produzir um efeito inibitório de HDAC emum animal de sangue quente, tal como um ser humano, em necessidade de taltratamento, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao ditoanimal uma quantidade eficaz de um composto como definido em qualqueruma das reivindicações de 1 a 9.
15. Uso de um composto ou um sal farmaceuticamente aceitáveldo mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 9,caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o usona produção de um efeito inibitório do ciclo celular (anti-proliferação celular) emum animal de sangue quente, tal como um ser humano.
16. Método para produzir um efeito inibitório do ciclo celular(anti-proliferação celular) em um animal de sangue quente, tal como um serhumano, em necessidade de tal tratamento, caracterizado pelo fato de quecompreende administrar ao dito animal uma quantidade eficaz de umcomposto como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, ou umsal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
17. Método para tratar o câncer em um animal de sanguequente, tal como um ser humano, em necessidade de tal tratamento,caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao dito animal umaquantidade eficaz de um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável domesmo como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 9.
18. Uso de um composto ou um sal farmaceuticamenteaceitável do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações de 1a 9, como definido mais acima, caracterizado pelo fato de ser na fabricação deum medicamento para o uso no tratamento do câncer.
19. Processo para preparar um composto ou um salfarmaceuticamente aceitável do mesmo como definido em qualquer uma dasreivindicações de 1 a 9, caracterizado pelo fato de que compreendeadicionalmente:(a) a reação de um composto da fórmula (II)<formula>formula see original document page 67</formula>em que a porção anilina pode ser apropriadamente protegida;com um composto da fórmula (III)<formula>formula see original document page 67</formula>na presença de um agente de redução, em que R1 é comodefinido na reivindicação 1; ou(b) a reação de um composto da fórmula (II) como definidoacima com um composto da fórmula (IV)<formula>formula see original document page 67</formula>na presença de uma base adequada;em que R1 é como definido na reivindicação 1 e X é um gruporeativo;e em seguida, se necessário, remover quaisquer grupos deproteção residuais que podem estar presentes.
20. Processo para preparar um composto da fórmula (II):<formula>formula see original document page 67</formula>caracterizado pelo fato de que compreende:(i) a reação, na presença de uma base adequada, de umcomposto da fórmula (V),<formula>formula see original document page 68</formula>em que a anilina pode ser apropriadamente protegida e X é umgrupo reativo,com um composto da fórmula (VI)<formula>formula see original document page 68</formula>em que M é um metal, L é um ligando, ζ é um número inteirode 0 a 3, e o anel tetraidropiridina pode ser protegido; ou(ii) a reação, na presença de uma base adequada, de umcomposto da fórmula (VII), em que a anilina e a tetraidropiridina podem serapropriadamente protegidas e M, L e ζ são como definidos acima,<formula>formula see original document page 68</formula>com um composto da Fórmula (VIII):<formula>formula see original document page 68</formula>em que X é um grupo reativo;e em seguida, se necessário, e em qualquer ordem oucombinação adequadas:(a) remover quaisquer grupos desproteção da tetraidropiridina,e/ou(b) redução da tetraidropiridina a piperidina e/ou(c) remover quaisquer grupos de proteção residuais presentes.
21. Processo para preparar um composto da fórmula (II):<formula>formula see original document page 69</formula>caracterizado pelo fato de que compreende:a reação, na presença de um solvente adequado, de umcomposto da fórmula (IX), em que Qi é -OH, -Cl, ou -0" Q2+ (em que Q2+ é umcátion)<formula>formula see original document page 69</formula>com um composto da fórmula (X)<formula>formula see original document page 69</formula>e em que um dos grupos amino no composto da fórmula (X)pode ser desprotegido;para formar um composto da fórmula (XI)<formula>formula see original document page 69</formula>em que a anilina pode ser desprotegida;e em seguida:converter o composto da fórmula (XI) a um composto dafórmula (II) reduzindo-se o anel piridin-4-il a um anel piperidina-4-il usandoum agente de redução adequado e/ou condições de redução adequadas; eopcionalmente remover quaisquer grupos de proteção residuaispresentes.
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