KR20080067656A

KR20080067656A - 히스톤 데아세틸라제 억제제로서 유용한 벤즈아미드 화합물

Info

Publication number: KR20080067656A
Application number: KR1020087011411A
Authority: KR
Inventors: 데이빗 마이클 앤드루즈; 일레인 소피 엘리자베스 스토크스; 앤드루 터너; 마이클 제임스 워링
Original assignee: 아스트라제네카 아베
Priority date: 2005-10-19
Filing date: 2006-10-17
Publication date: 2008-07-21
Also published as: RS52881B; UA98757C2; IL190429A0; RU2448965C2; SI1954690T1; BRPI0617654A2; KR101464004B1; EP1954690B1; HRP20130683T1; ME01595B; GB0521244D0; PT1954690E; ECSP088457A; WO2007045844A1; BRPI0617654B8; US8207202B2; NZ566944A; CA2625970C; US8735429B2; MY145569A

Abstract

본 발명은, 하기 화학식 (I)의 벤즈아미드 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그 형태에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 화합물의 제조 방법, 이를 함유하는 약학적 조성물, 그리고 히스톤 데아세틸라제(histone deacetylase; HDAC)의 억제에 민감한, 다른 증식성 조건 또는 종양의 예방 또는 치료에서 항증식제로 사용하기 위한 약제의 제조에서의 이들의 용도에 관한 것이다:

상기 화학식에서, R¹은 C₁ _- ₄알킬, C₃ _- ₄시클로알킬, C₁ _- ₄알콕시 및 C₃ _- ₄시클로알콕시에서 선택되는 하나 이상의 기로 임의로 치환되는 탄소 결합 피라졸 고리이다.

Description

히스톤 데아세틸라제 억제제로서 유용한 벤즈아미드 화합물{BENZAMIDE COMPOUNDS USEFUL AS HISTONE DEACETYLASE INHIBITORS}

본 발명은, 효소 히스톤 데아세틸라제(histone deacetylase; HDAC)의 유효한 억제제인, 특정한 신규 벤즈아미드 화합물 또는 이의 약학적 허용 염에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 이러한 신규 벤즈아미드 화합물의 제조 방법, 이를 함유하는 약학적 조성물, 그리고 치료법, 예를 들어 인간과 같은 온혈 동물에서 HDAC를 억제하기 위한 약제의 제조에서의 이들의 용도에 관한 것이다.

HDAC 활성은 다수의 질환 상태, 예컨대 암(Marks et al., Nature Reviews , 1, 194-202, (2001)), 낭포성 섬유증(Li, S. et al, J. Biol . Chem., 274, 7803-7815, (1999)), 헌팅턴 무도병(Steffan, J. S. et al., Nature, 413, 739-743, (2001)) 및 겸상 적혈구 빈혈증(Gabbianelli, M. et al., Blood, 95, 3555-3561, (2000))과 연관되어 있다. 따라서, 본 발명은 또한 본 발명의 벤즈아미드 화합물을 사용하여 임의의 전술한 질환을 치료하는 방법, 게다가 상기 질환 상태의 치료용 약제의 제조에서의 이 벤즈아미드 화합물의 용도에까지도 연장된다.

진핵 세포에서, DNA는 전사 인자의 접근을 막기 위해서 일반적으로 압축되어 있다. 세포가 활성화되면, 이 압축된 DNA가 DNA 결합 단백질에 이용 가능한 상태가 되어, 유전자 전사를 유도한다(Beato, M., J. Med . Chem ., 74, 711-724 (1996); Wolffe, A. P., Nature, 387, 16-17 (1997)). 핵 DNA는 히스톤으로 알려진 핵 단백질과 결합하여 염색질로 일컬어지는 복합체를 형성한다. H2A, H2B, H3 및 H4으로 일컬어지는 코어 히스톤은 DNA의 146개의 염기쌍으로 둘러싸여 염색질의 기본 단위를 형성하며, 이는 뉴클레오솜으로 알려져 있다. 코어 히스톤의 N-말단 꼬리는 전사후 아세틸화 부위인 리신 잔기를 함유한다. 리신 측쇄 상의 말단 아미노기의 아세틸화는, 이 측쇄가 양전하를 형성할 가능성을 없애서 염색질 구조에 영향을 주는 것으로 생각된다.

히스톤 데아세틸라제(HDAC)는, 뉴클레오솜 히스톤의 아미노 말단 부근에 모여있는 리신 잔기의 ε-아미노 말단으로부터 아세틸기의 제거를 촉진시키는 아연 함유 효소이다. HDAC는 2개의 부류, 즉 효모 Rpd3형 단백질에 의해 나타나는 제1 부류(HDAC 1, 2, 3 및 8) 및 효모 Hda1형 단백질에 의해 나타나는 제2 부류(HDAC 4, 5, 6, 7, 9 및 10)로 나눌 수 있다. 아세틸화의 가역적 과정은 전사 조절 및 세포 주기 진행에 중요한 것으로 알려져 있다. 또한, HDAC 탈조절(deregulation)은 몇몇 암에 연관되어 있으며, 트리코스타틴 A[스트렙토마이세스 히그로스코피커스(Streptomyces hygroscopicus)로부터 분리된 천연 생성물]와 같은 HDAC 억제제는 현저한 세포 성장 억제 및 항암 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다(Meinke, P. T., Current Medicinal chemistry, 8, 211-235 (2001)). Yoshida 등(Exper . Cell Res., 177, 122-131 (1988))은, 트리코스타틴 A가 세포 주기 중 G1기 및 G2기에서 래트 섬유아세포의 정지를 유발하여, 세포 주기 조절에 HDAC를 연루시킨다고 교시 한다. 또한, 트리코스타틴 A는 마우스에서 말단 분화를 유도하고, 세포 성장을 억제하며, 종양의 형성을 방지하는 것으로 밝혀졌다(Finnin et al., Nature, 401, 188-193 (1999)).

국제 특허 출원 공개 공보 WO 03/087057호 및 WO 03/092686호로부터, 특정 벤즈아미드 유도체가 HDAC의 억제제인 것으로 알려져 있다. WO 03/087057호에 개시된 한 가지 특정한 화합물은 N-(2-아미노페닐)-4-[1-(피리드-2-일메틸)피페리딘-4-일]벤즈아미드[1](이의 구조는 하기에 도시함)이다:

본 발명자들은, 피리딜기 대신에 임의로 치환된 피라졸기를 갖는 특정 벤즈아미드 유도체가 유효한 HDAC 억제제임을 발견하였다. 또한, 본 발명의 특정 화합물은 유리한 세포 또는 생체내 효능, 유리한 DMPK 특성[예를 들어, 유리한 생체이용률 프로필 및/또는 유리한 유리 혈장 수준 및/또는 유리한 반감기 및/또는 유리한 분포 용적(volume of distribution)] 및 양호 또는 증대된 용해도를 비롯한 다른 유리한 약학적 특성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 또한, 본 발명의 벤즈아미드 유도체는 일반적으로 hERG 코딩 칼륨 채널 억제 시험에서 특히 낮은 활성을 보이며, 이는 임상에서 바람직하지 않고 심한 심혈관 부작용의 척도이다.

본 발명에 따르면, 하기 화학식 (I)의 화합물이 제공된다:

상기 화학식에서, R¹은 C₁ _- ₄알킬, C₃ _- ₄시클로알킬, C₁ _- ₄알콕시 및 C₃ _- ₄시클로알콕시에서 선택되는 하나 이상의 기로 임의로 치환된 탄소 결합 피라졸 고리 또는 이의 약학적 허용 염이다.

상기 정의된 화학식 (I)의 특정 화합물이 호변이성 현상을 나타낼 수 있음이 이해되어야 한다. 본 발명이 그의 정의에, 전술한 활성을 갖는 임의의 이러한 호변이성 형태 또는 이의 혼합물을 포함하며, 이들은 단지 화학식 도면에 도시되거나 실시예에서 명명된 임의의 한가지 호변이성 형태로 한정되는 것이 아님이 이해되어야 한다.

임의의 치환기가 "하나 이상의" 치환기에서 선택되는 경우, 이 정의는 명시된 기 중 하나에서 선택되는 모든 치환기 또는 둘 이상의 명시된 기에서 선택되는 치환기를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

R¹에 적합한 임의의 치환기는 피라졸 고리 내의 임의의 이용 가능한 탄소 또는 질소 원자에 존재할 수 있다.

R¹은 적합하게는 1∼3개의 치환기를 보유한다. 다르게는, R¹은 비치환되어 있다.

본원에서 사용한 바와 같이, 용어 "알킬"은 직쇄 또는 분지쇄를 가리킨다. 용어 "시클로알킬"은 고리 구조를 포함할 수 있으나, 시클로알킬-알킬 기 형태의 쇄를 추가로 포함할 수도 있다. 유추하여, 용어 "알킬옥시" 및 "시클로알콕시"는 산소 원자를 통해 결합된 알킬, 시클로알킬 또는 시클로알킬-알킬 기를 포함한다.

R¹에 적합한 C₁ _- ₄알킬 또는 C₃ _- ₄시클로알킬 치환기는 메틸, 에틸, 프로필, 시클로프로필, 시클로부틸 또는 시클로프로필메틸을 포함한다.

R¹에 적합한 C₁ _- ₄알콕시 및 C₃ _- ₄시클로알콕시 치환기는메톡시, 에톡시, 프로폭시, 시클로프로폭시, 시클로부톡시 또는 메틸시클로프로폭시를 포함한다.

본 발명의 특정 구체예에서, R¹은 C₁ _- ₄알킬 또는 C₁ _- ₄알콕시에서 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 임의로 치환된 탄소 결합 피라졸 고리이다.

본 발명의 추가의 구체예에서, R¹은 C₁ _- ₂알킬 또는 C₁ _- ₂알콕시에서 선택되는 1, 2 또는 3개의 기로 임의로 치환된 탄소 결합 피라졸 고리이다.

R¹ 기의 예로 피라졸-3-일, 피라졸-4-일, 1-메틸피라졸-4-일, 3-에틸피라졸-4-일, 1,3-디메틸피라졸-5-일, 1,3-디메틸피라졸-4-일, 1,3,5-트리메틸피라졸-4-일, 1,3-디메틸-5-메톡시피라졸-4-일, 1,5-디메틸피라졸-4-일, 1-에틸-5-메틸피라졸-4-일, 1-에틸피라졸-4-일, 및 1-에틸-3-메틸피라졸-4-일(가능한 경우 호변이성체화함)이 있다.

본 발명의 추가의 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 ( IA )의 화합물을 포함한다:

상기 화학식에서, R²는 수소, C₁ _- ₄알킬 또는 C₃ _- ₄시클로알킬이고,

R³　및 R⁵는 수소, C₁ _- ₄알킬, C₃ _- ₄시클로알킬, C₁ _- ₄알콕시 또는 C₃ _- ₄시클로알콕시로부터 독립적으로 선택된다.

화학식 ( IA )의 분자의 피라졸 부분의 고리 원자는, 일반적으로 상기 화학식에 표시된 바와 같이 번호가 매겨짐이 이해될 것이다. 그러나, 분자는 R²가 수소인 경우에 호변이성체화되며, 이때 수소기가 피라졸 고리의 한 질소에서 다른 것으로 치환되는 것은, 치환된 피라졸(여기서 하나 이상의 R³ 또는 R⁵는 수소 이외의 것임)이 각각의 호변이성체의 혼합물이고, 따라서 R³ 및 R⁵는 치환할 수 있는 것으로 간주됨을 의미한다.

대안적인 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 (IB)의 화합물을 제공한다:

상기 화학식에서 R², R³ 및 R⁵는 상기 화학식 (IA)에 관련하여 정의된 바와 같다.

다시, 화학식 ( IB )의 분자의 피라졸 부분이 일반적으로 상기 그림에 도시된 것에 따라 번호가 매겨짐을 인식하게 될 것이다. 그러나, 전술한 화학식 (IA)의 화합물에 관해서는, R²가 수소인 경우에 분자가 역시 호변이성체화된다.

R²의 특정 예로 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 시클로프로필, 메틸시클로프로필 또는 시클로부틸이 있다.

예를 들면, R²는 수소, 메틸, 에틸, 프로필 또는 시클로프로필이다.

특정 구체예에서, R²는 수소, 메틸 또는 에틸이다.

추가의 구체예에서, R²는 수소 또는 메틸이다.

기 R³ 및 R⁵의 특정 예는 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 시클로프로필, 시클로프로필메틸, 메톡시, 에톡시, 프로폭시 또는 시클로프로폭시이다.

기 R³ 또는 R⁵의 특정 예는 수소, 메틸, 에틸 또는 메톡시를 포함한다.

적합하게는, 한 개 이하의 기 R³ 또는 R⁵가 C₁ _- ₄알콕시이다.

특정 구체예에서, 하나 이상 및 바람직하게는 2개의 기 R², R³ 및 R⁵는 수소 이외의 것이다.

본 발명의 특정 구체예에서, 화합물은 상기에 도시된 구조식 (IA)를 가지며, 여기서 R²는 수소 또는 C₁ _- ₄알킬이고, R³ 및 R⁵는 수소, C₁ _- ₄알킬 또는 C₁ _- ₄알콕시에서 각각 독립적으로 선택된다.

추가의 구체예에서, 화합물은 상기에 도시된 구조식 (IA)를 가지며, 여기서 R²는 수소, 메틸 또는 에틸이고, R³ 및 R⁵는 수소, 메틸, 에틸 또는 메톡시에서 각각 독립적으로 선택된다.

추가의 구체예에서, 화합물은 상기에 도시된 구조식 (IA)를 가지며, 여기서 R²는 수소 또는 메틸이고, R³ 및 R⁵는 수소, 메틸, 에틸 또는 메톡시에서 각각 독립적으로 선택된다.

추가의 구체예에서, 화합물은 상기에 도시된 구조식 (IA)를 가지며, 여기서 R²는 수소 또는 메틸이고, R³ 및 R⁵는 수소, 메틸 또는 메톡시에서 각각 독립적으로 선택된다.

추가의 구체예에서, 화합물은 상기에 도시된 구조식 (IA)를 가지며, 여기서 R²는 수소 또는 메틸이고, R³ 및 R⁵는 수소 또는 메틸에서 각각 독립적으로 선택된다.

본 발명의 특정 구체예에서, 화합물은 상기에 도시된 구조식 (IB)를 가지며, 여기서 R²는 수소 또는 C₁ _- ₄알킬이고, R³ 및 R⁵는 수소, C₁ _- ₄알킬 또는 C₁ _- ₄알콕시에서 각각 독립적으로 선택된다.

추가의 구체예에서, 화합물은 상기에 도시된 구조식 (IB)를 가지며, 여기서 R²는 수소, 메틸 또는 에틸이고, R³ 및 R⁵는 수소, 메틸, 에틸 또는 메톡시에서 각각 독립적으로 선택된다.

추가의 구체예에서, 화합물은 상기에 도시된 구조식 (IB)를 가지며, 여기서 R²는 수소 또는 메틸이고, R³ 및 R⁵는 수소, 메틸, 에틸 또는 메톡시에서 각각 독립적으로 선택된다.

추가의 구체예에서, 화합물은 상기에 도시된 구조식 (IB)를 가지며, 여기서 R²는 수소 또는 메틸이고, R³ 및 R⁵는 수소, 메틸 또는 메톡시에서 각각 독립적으로 선택된다.

본 발명의 특정 화합물은

N-(2-아미노페닐)-4-[1-(1H-피라졸-3-일메틸)피페리딘-4-일]벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(5-메톡시-1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(3-에틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1-메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1,3-디메틸-1H-피라졸-5-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1,3,5-트리메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1-에틸-5-메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1-에틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

중 임의의 것 또는 이의 약학적 허용 염을 포함한다.

상기 화학식 I의 특정 화합물이 비용매화물의 형태뿐만 아니라, 예를 들어 수화물 형태와 같은 용매화물의 형태로도 존재할 수 있음이 이해되어야 한다. 본 발명이 항증식성 활성을 갖는 이러한 모든 용매화물의 형태를 포함함이 이해되어야 한다.

또한, 화학식 I의 특정 화합물이 다형체를 나타낼 수 있고, 본 발명이 항증식성 활성을 갖는 모든 이러한 형태를 포함함이 이해되어야 한다.

화학식 I의 화합물의 적합한 약학적 허용 염은, 예를 들어, 화학식 I의 화합물의 산 첨가 염, 예를 들어 무기산 또는 유기산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 트리플루오로아세트산, 시트르산 또는 말레산으로의 산 첨가 염; 또는, 예를 들어 충분히 산성인 화학식 I의 화합물의 염, 예를 들어 알칼리 또는 알칼리 토금속 염, 예컨대 칼슘 또는 마그네슘 염 또는 암모늄 염이다. 화학식 I의 화합물의 추가의 적합한 약학적 허용 염은, 예를 들어 화학식 I의 화합물을 투여한 후 인간 또는 동물의 체내에서 형성된 염이다.

본 발명의 화합물은, 인간 또는 동물의 체내에서 분해되어 본 발명의 화합물을 방출하는 화합물인 프로드러그의 형태로 투여할 수 있다. 프로드러그는 본 발명의 화합물의 물리적 특성 및/또는 약물 동태학적 특성을 변화시키는 데 사용할 수 있다. 프로드러그는 본 발명의 화합물이 특성을 변화시키는 기가 부착될 수 있는 치환기 또는 적합한 기를 함유하는 경우에 형성될 수 있다. 프로드러그의 예로 화학식 I의 화합물 중의 아미노기에서 형성될 수 있는 생체내 분해 가능한 아미드 유도체가 있다.

따라서, 본 발명은 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물들을, 유기 합성에 의해 이용 가능하게 되는 경우 및 이의 프로드러그의 분해에 의해 인간 또는 동물의 체내에서 이용 가능하게 되는 경우에 포함한다. 따라서, 본 발명은 유기 합성 수단에 의해 생성되는 화학식 I의 화합물, 그리고 인간 또는 동물의 체내에서 전구체 화합물의 물질 대사에 의해 생성되는 화합물을 포함하며, 즉 화학식 I의 화합물은 합성으로 생성된 화합물 또는 물질 대사로 생성된 화합물일 수 있다.

화학식 I의 화합물의 적합한 약학적 허용 프로드러그는, 합리적인 의학적 판단 하에 인체 또는 동물 신체에 투여하기에 적합한 것이고, 바람직하지 않은 약물학적 활성과 과도한 독성이 없는 것이다.

다양한 형태의 프로드러그가, 예를 들어 하기의 문헌들에 기술되어 있다:

a) Methods in Enzymology, Vol. 42, p. 309-396, edited by K. Widder, et al. (Academic Press, 1985);

b) Design of Pro-Drugs, edited by H. Bundgaard, (Elsevier, 1985);

c) A Textbook of Drug Design and Development, edited by Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, Chapter 5 "Design and Application of Pro-drugs" by H. Bundgaard p. 113-191 (1991);

d) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38 (1992);

e) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988);

f) N. Kakeya, et al., Chem . Pharm . Bull ., 32, 692 (1984);

g) T. Higuchi and V. Stella, "Pro-Drugs as Novel Delivery Systems", A.C.S. Symposium Series, volume 14; 및

h) E. Roche(editor), "Bioreversible Carriers in Drug Design", Pergamon Press, 1987.

화학식 I의 화합물의 적합한 약학적 허용 프로드러그는, 예를 들어, 화학식 I의 화합물의 생체내 분해 가능한 아미드 유도체이다. 아미노기로부터 형성된 적합한 약학적 허용 아미드는, 예를 들어 (1-10C)알카노일 기, 예컨대 아세틸, 벤조일, 페닐아세틸 및 치환된 벤조일 및 페닐아세틸 기로 형성된 아미드를 포함한다. 페닐아세틸 및 벤조일 기의 고리 치환기의 예로 아미노메틸, N-알킬아미노메틸, N,N-디알킬아미노메틸, 모르폴리노메틸, 피페라진-1-일메틸 및 4-(1-4C)알킬피페라진-1-일메틸이 있다.

화학식 I의 화합물의 생체내 효과는, 화학식 I의 화합물의 투여 후 인간 또는 동물의 체내에서 형성되는 하나 이상의 대사 산물에 의해 부분적으로 발휘될 수 있다. 전술한 바와 같이, 화학식 I의 화합물의 생체내 효과는 전구체 화합물(프로드러그)의 물질 대사에 의해 발휘될 수도 있다.

화학식 I의 화합물의 제조

당업자는 본원에 언급된 공정/반응 중 일부에서는 화합물 중의 임의의 민감한 기를 보호하는 것이 필요하거나 바람직할 수 있음을 인식할 것이다. 보호가 필요하거나 바람직한 실례, 및 이러한 보호를 제공하는 적합한 방법은 당업자에게 알려져 있다. 통상적인 보호기는 관행[예시를 위해 문헌(T.W. Green & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd edition, John Wiley and Sons, 1999)을 참고하라]에 따라 사용할 수 있다. 따라서, 반응물이 아미노, 카르복시 또는 히드록시와 같은 기를 포함하는 경우, 본원에 언급된 반응 중 일부에서는 이 기를 보호하는 것이 바람직할 수 있다.

본원에 기술된 공정에서 활용되는 임의의 보호기는 일반적으로, 해당 기의 보호에 적절한 것으로 문헌에 기술되거나 숙련된 화학자에게 알려진 임의의 기에서 선택될 수 있고, 종래의 방법으로 도입될 수 있다. 보호기는 해당 보호기의 제거에 적절한 것으로 문헌에 기술되거나 숙련된 화학자에게 알려진 임의의 편리한 방법으로 제거할 수 있으며, 이러한 방법은 분자의 다른 부위의 기에 대한 방해를 최소로 하면서 보호기를 효과적으로 제거하도록 선택된다.

편의를 위해 보호기의 구체적인 예를 하기에 제시하며, 여기서, 예를 들어 '저급 알킬'에서와 같은 "저급"은, 이 표현이 사용되는 기가 바람직하게는 1∼4개의 탄소 원자를 가짐을 의미한다. 이 예들이 총망라한 것이 아님을 이해하게 될 것이다. 보호기를 제거하는 방법의 구체적인 예들이 하기에 주어지는 경우, 이것들도 마찬가지로 총망라한 것이 아니다. 구체적으로 언급되지 않은 보호기의 용도 및 탈보호 방법도 물론 본 발명의 범위 내이다.

아미노기 또는 알킬아미노기에 적합한 보호기는, 예를 들어, 아실기, 예를 들어 알카노일기, 예컨대 아세틸, 알콕시카르보닐기, 예를 들어 메톡시카르보닐, 에톡시카르보닐 또는 t-부톡시카르보닐 기, 아릴메톡시카르보닐기, 예를 들어 벤질옥시카르보닐, 또는 아로일 기, 예를 들어 벤조일이다. 상기 보호기를 위한 탈보호 조건은 보호기의 선택에 따라 필연적으로 변화한다. 따라서, 예를 들어 아실기, 예컨대 알카노일 또는 알콕시카르보닐 기 또는 아로일 기는, 예를 들어, 적합한 염기, 예컨대 알칼리 금속 수산화물, 예를 들어 수산화리튬 또는 수산화나트륨으로 가수분해하여 제거할 수 있다. 대안으로, t-부톡시카르보닐기와 같은 아실기는, 예를 들어 염산, 황산 또는 인산 또는 트리플루오로아세트산과 같은 적합한 산으로 처리하여 제거할 수 있고, 벤질옥시카르보닐기와 같은 아릴메톡시카르보닐기는 예를 들어, 탄소 담지 팔라듐과 같은 촉매로 수소화하거나, 루이스산, 예를 들어 붕소 트리스(트리플루오로아세테이트)로 처리하여 제거할 수 있다. 1차 아미노기에 적합한 대안적인 보호기는, 예를 들어, 디메틸아미노프로필아민과 같은 알킬아민으로 처리하거나 히드라진으로 처리하여 제거할 수 있는 프탈로일기이다.

히드록시기에 적합한 보호기는, 예를 들어, 아실기, 예를 들어 알카노일기, 예컨대 아세틸, 아로일 기, 예를 들어 벤조일, 또는 아릴메틸 기, 예를 들어 벤질이다. 상기 보호기의 탈보호 조건은 보호기의 선택에 따라 필연적으로 변화할 것이다. 따라서, 예를 들어 알카노일기 또는 아로일기와 같은 아실기는, 예를 들어, 알칼리 금속 수산화물, 예컨대 수산화리튬 또는 수산화나트륨과 같은 적합한 염기로 가수분해하여 제거할 수 있다. 대안으로, 벤질기와 같은 아릴메틸기는, 예를 들어 탄소 담지 팔라듐과 같은 촉매로 수소화하여 제거할 수 있다.

카르복시기에 적합한 보호기는, 예를 들어 수산화나트륨과 같은 염기로 가수 분해하여 제거할 수 있는, 예컨대 에스테르화기, 예를 들어 메틸 또는 에틸 기, 또는 예를 들어 산, 예컨대 트리플루오로아세트산과 같은 유기산으로 처리하여 제거할 수 있는, 예컨대 t-부틸기, 또는 예를 들어 탄소 담지 팔라듐과 같은 촉매로 수소화하여 제거할 수 있는, 예컨대 벤질기이다.

보호기는, 합성 중 임의의 편리한 단계에서 화학 업계에 잘 알려진 종래의 기법을 사용하여 제거할 수 있다.

추가의 양상에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염의 제조 방법을 제공하며, 이 방법은

(a) 환원제의 존재 하에 하기 화학식 (II)의 화합물과 하기 화학식 (III)의 화합물을 반응시키는 공정, 및

그 후, 필요할 경우, 존재할 수 있는 임의의 잔류 보호기를 제거하는 단계

를 포함한다:

(상기 화학식에서, 아닐린 부분은 적절히 보호될 수 있음)

(상기 화학식에서, R¹은 본원에 정의된 바와 같음).

공정 (a)에 적합한 환원제는, 예를 들어 무기 보로히드라이드 염, 예컨대 나트륨 보로히드라이드, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드 또는 나트륨 시아노보로히드라이드 및 수소를 포함한다. 수소를 사용하는 환원성 아민화는, 예를 들어 알루미나 상의 Pd/C, Pd(OH)₂/C, Pt/C, PtO₂ 또는 Rh와 같은 적합한 촉매의 존재 하에 임의로 실시하며, 예를 들어 0∼150℃의 온도 범위에 걸쳐, 예를 들어 1∼10 bar의 압력 하에 실시할 수도 있다.

공정 (a)는 적합한 산의 존재 하에 실시할 수 있다. 공정 (a)에 적합한 산은, 예를 들어 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 염산, 황산, 파라톨루엔 술폰산 또는 캄포르 술폰산과 같은 브뢴스테드산; 또는 화학식 MQ_z의 루이스산(여기서 M은 금속이고, Q는 반응기, 예를 들어 할로 또는 술포닐옥시 기, 예를 들어 클로로, 브로모, 요오도, 메탄술포닐옥시, 트리플루오로메탄술포닐옥시 또는 톨루엔-4-술포닐옥시 기이며, z는 1∼6의 범위 내이고, z 값은 금속 M에 좌우됨)을 포함한다. 적합한 루이스산의 전형적인 예로, 붕소 트리플루오라이드, 스칸듐(III) 트리플루오로메탄술포네이트, 주석(VI) 클로라이드, 티타늄(IV) 이소프로폭시드 또는 아연(II) 클로라이드가 있다.

대안으로, 화학식 (I)의 화합물은

(b) 적합한 염기의 존재 하에 하기 화학식 (II)의 화합물과 하기 화학식 (IV)의 화합물을 반응시키는 공정, 및

로 제조할 수 있다:

(상기 화학식에서, 아닐린은 적절히 보호될 수 있음(

(상기 화학식에서, X는 반응기임).

적합한 반응기 X는, 예를 들어 할로게노 또는 술포닐옥시 기, 예컨대 클로로, 브로모, 요오도, 메탄술포닐옥시, 트리플루오로메탄술포닐옥시 또는 톨루엔-4-술포닐옥시 기이다.

상기 공정 (b)에서 사용하기에 적합한 염기는, 예를 들어, 유기 아민 염기 예컨대 피리딘, 2,6-루티딘, 콜리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 트리에틸아민, 모르폴린, 디이소프로필에틸아민(DIPEA), N-메틸모르폴린 또는 디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, 또는 예를 들어 알칼리 또는 알칼리 토금속 탄산염 또는 수산화물, 예를 들어 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산칼슘, 수산화나트륨 또는 수산화칼륨, 또는 예를 들어 알칼리 금속 수소화물, 예를 들어 수소화나트륨, 알칼리 토금속 수소탄산염, 예컨대 수소탄산나트륨, 또는 금속 알콕시드, 예컨대 나트륨 에톡시드이다.

아닐린 부분 또는 피페리딘 고리에 적합한 보호기는 카르바메이트, 예컨대 tert-부톡시카르보닐 또는 벤질옥시카르보닐일 수 있다.

기 R¹의 특정 예는 상기 기술한 바와 같다.

공정 (a) 및 (b)에서 정의된 반응은, 적합한 비활성 용매 또는 희석제, 예를 들어 알칸올 또는 에스테르, 예컨대 메탄올, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세트산에틸, 할로겐화 용매, 예컨대 메틸렌 클로라이드, 클로로포름 또는 탄소 테트라클로라이드, 에테르, 예컨대 테트라히드로푸란, 1,2-디메톡시에탄 또는 1,4-디옥산, 방향족 용매, 예컨대 톨루엔, 또는 이극성 비양성자성 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리딘-2-온 또는 디메틸술폭시드의 존재 하에, 편리하게 실시된다.

출발 물질의 제조

화학식 II의 화합물의 제조

상기 화학식 II의 화합물은 하기의 공정들 중 어느 것으로로도 제조할 수 있다:

(c) 적합한 염기의 존재 하에, 아닐린이 적절히 보호될 수 있는 하기 화학식 (V)의 화합물과 하기 화학식 (VI)의 화합물을 반응시키는 공정, 또는

적합한 염기의 존재 하에 아닐린 및 테트라히드로피리딘이 적절히 보호될 수 있는 하기 화학식 (VII)의 화합물과 하기 화학식 (VIII)의 화합물을 반응시키는 공정, 및

그 후, 필요할 경우, 임의의 적합한 순서 또는 조합으로

임의의 보호기를 테트라히드로피리딘으로부터 제거하는 공정, 및/또는

테트라히드로피리딘을 피페리딘으로 환원시키는 공정, 및/또는

존재하는 임의의 잔류 보호기를 제거하는 공정:

(상기 화학식에서, 아닐린은 적절히 보호될 수 있고, X는 상기 정의된 바와 같은 반응기임)

(상기 화학식에서, M은 금속이고, L은 리간드이고, 정수 z는 0∼3이고, 테트라히드로피리딘 고리는 보호될 수 있음)

(상기 화학식에서, 아닐린 및 테트라히드로피리딘은 적절히 보호될 수 있고, M, L 및 z는 상기 정의된 바와 같음)

(상기 화학식에서, X는 상기 정의된 바와 같은 반응기임).

테트라히드로피리딘 고리에 적합한 보호기는 tert-부톡시카르보닐(본원에서 "BOC"로도 일컬음) 또는 벤질옥시카르보닐과 같은 기이다. 또한 아닐린 부분에 적합한 보호기는 카르바메이트, 예컨대 BOC 또는 벤질옥시카르보닐일 수 있다.

공정 (c)에 적합한 염기는, 예를 들어 유기 아민 염기, 예컨대 피리딘, 2,6-루티딘, 콜리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 트리에틸아민, 모르폴린, N-메틸모르폴린 또는 디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔, 또는 예를 들어, 알칼리 또는 알칼리 토금속 탄산염 또는 수산화물, 예를 들어 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산칼슘, 탄산세슘, 수산화나트륨 또는 수산화칼륨, 또는 예를 들어 알칼리 금속 수소화물, 예를 들어 수소화나트륨, 또는 알칼리성 금속 수소탄산염, 예컨대 수소탄산나트륨, 또는 금속 알콕시드, 예컨대 나트륨 에톡시드이다.

상기 공정 (c)에 정의된 반응은, 적합한 비활성 용매 또는 희석제, 예를 들어 알칸올 또는 에스테르, 예컨대 메탄올, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세트산에틸, 할로겐화 용매, 예컨대 메틸렌 클로라이드, 클로로포름 또는 탄소 테트라클로라이드, 에테르, 예컨대 테트라히드로푸란, 1,2-디메톡시에탄 또는 1,4-디옥산, 방향족 용매, 예컨대 톨루엔, 또는 이극성 비양성자성 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리딘-2-온 또는 디메틸술폭시드의 존재 하에 편리하게 실시된다. 상기 반응은, 예를 들어 10∼250℃, 바람직하게는 40∼80℃ 범위의 온도에서 편리하게 실시된다.

금속 M은 촉매 교차 커플링 반응을 겪는 유기금속 화합물을 형성하기 위한, 문헌에 알려져 있는 임의의 금속일 수 있다. 적합한 금속의 예로 붕소, 주석, 아연 및 마그네슘이 있다.

정수 z에 적합한 값은 금속 M에 좌우되나, 통상적으로 0∼3 범위이다.

리간드 L로 적합한 것은, 존재할 경우, 예를 들어 히드록시, 할로, (1-4C)알콕시 또는 (1-6C)알킬 리간드, 예를 들어 히드록시, 브로모, 클로로, 플루오로, 요오도, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필 또는 부틸 리간드이며, 또는 정수 z가 2이고 M이 붕소인 경우에는, 존재하는 두 리간드가 연결되어 이들이 부착되는 붕소 원자와 함께 고리를 형성할 수 있다. 적합하게는, 기 ML_z는 화학식 -BL¹L²(여기서 B는 붕소이고 L¹ 및 L²는 상기에 리간드 L에 대해 정의된 바와 같음)의 기이다. 특히, 리간드 L¹ 및 L²는 연결되어 이들이 부착되는 붕소 원자와 함께 고리를 형성할 수 있다. 예를 들어, L¹ 및 L²는 함께 옥시-(2-4C)알킬렌-옥시 기, 예를 들어 옥시에틸렌옥시, 피나콜라토(-O-C(CH₃)₂C(CH₃)₂-O-) 또는 옥시프로필렌옥시 기를 정의하여, 그들이 부착되는 붕소 원자와 함께 환형 보론산(boronic acid) 에스테르기를 형성할 수 있다.

공정 (c)에 적합한 촉매는 예를 들어, 금속 촉매, 예컨대 팔라듐(0), 팔라듐(II), 니켈(0) 또는 니켈(II) 촉매, 예를 들어 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0), 팔라듐(II) 클로라이드, 팔라듐(II) 브롬화물, 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 클로라이드, 테트라키스(트리페닐포스핀)니켈(0), 니켈(II) 클로라이드, 니켈(II) 브롬화물, 비스(트리페닐포스핀)니켈(II) 클로라이드 또는 디클로로[1-1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐(II)을 포함한다. 또한, 자유 라디칼 개시제, 예를 들어 아조(비스이소부티로니트릴)과 같은 아조 화합물이 편리하게 첨가될 수 있다.

적합하게는, 테트라히드로피리딘 고리는 상기 공정 (c)에서 수소화에 의해 피페리딘 고리로 환원된다. 수소화는, 예를 들어 알루미나 상의 Pd/C, Pd(OH)₂/C, Pt/C, PtO₂ 또는 Rh와 같은 적합한 촉매의 존재 하에 임의로 실시하며, 예를 들어 1∼10 bar의 압력 하에 실시할 수도 있다. 또한, 수소화는 적합하게는, 적합한 산, 예를 들어 브롬화수소산, 염산, 시트르산, 아세트산 및 메탄술폰산의 존재 하에, 그리고 적절한 용매 또는 용매 혼합물, 예컨대 물, 에탄올, 테트라히드로푸란(THF), 메탄올, 아세토니트릴 또는 프로판-2-올에서 실시한다.

d) 적합한 용매의 존재 하에 하기 화학식 (IX)의 화합물과 하기 화학식 (X)의 화합물을 반응시켜 하기 화학식 (XI)의 화합물을 형성하는 공정,

및 그 후:

적합한 환원제 및/또는 적합한 환원 조건을 사용하여 피리딘-4-일 고리를 피페리딘-4-일 고리로 환원시킴으로써 화학식 (XI)의 화합물을 화학식 (II)의 화합물로 전환하는 공정; 및

임의로, 존재하는 임의의 잔류 보호기를 제거하는 공정:

(상기 화학식에서, Q₁은 -OH, -Cl 또는 -O^-Q₂ ⁺(여기서 Q₂ ⁺는 양이온임)임)

(상기 화학식에서, 아미노기 중 하나는 보호될 수 있음)

(상기 화학식에서, 아닐린은 보호될 수 있음).

Q₁으로 적합한 것은 -O^-Na⁺(즉 -O^-Q₂ ⁺, 여기서 Q₂ ⁺는 Na⁺)이다. 적합하게는, 화학식 (X)의 화합물의 아미노기 중 하나는 상기에 정의된 바와 같은 적합한 아미노 보호기, 예컨대 BOC 기에 의해 보호된다.

적합하게는, 아닐린은 화학식 (XI)의 화합물에서, 상기에 정의된 바와 같은 아미노 보호기, 예컨대 BOC 기에 의해 보호된다.

임의의 적합한 용매, 예컨대 본원에서 전술한 것들이 화합물 IX와 X의 반응에 사용될 수 있다.

화학식 (XI)의 화합물은, 적합한 환원제 및/또는 적합한 환원 조건을 이용하여 화학식 (II)의 화합물로 전환한다. 적합한 공정은 수소화이다. 수소화는, 예를 들어 알루미나 상의 Pd/C, Pd(OH)₂/C, Pt/C, PtO₂ 또는 Rh와 같은 적합한 촉매의 존재 하에 임의로 실시하고, 예를 들어 1∼10 bar의 압력 하에서도 실시할 수 있다. 또한, 수소화는 적합하게는, 적합한 산, 예를 들어 브롬화수소산, 염산, 시트르산, 아세트산 및 메탄술폰산의 존재 하에, 그리고 적절한 용매 또는 용매 혼합물, 예컨대 물, 에탄올, 테트라히드로푸란(THF), 메탄올, 아세토니트릴 또는 프로판-2-올에서 실시한다.

화학식 (XI)의 화합물의 적합한 제조 방법은, 화합물(IX)를 카르복실산의 반응성 유도체(계내에서 생성될 수 있고 반드시 분리되지는 않음)로 전환시키는 단계, 이어서 이후에 화학식 (X)의 화합물과 반응시키는 단계를 포함한다.

카르복실산의 적합한 반응성 유도체는, 예를 들어, 할로겐화아실, 예를 들어 산과 무기산 클로라이드, 예컨대 염화티오닐의 반응에 의해 형성된 아실 클로라이드; 혼합된 무수물, 예를 들어 산과 클로로포르메이트, 예컨대 이소부틸 클로로포르메이트의 반응에 의해 형성된 무수물; 활성 에스테르; 산과 카르보디이미드, 예컨대 디시클로헥실카르보디이미드의 반응 생성물; 또는 산과 4-(4,6-디메톡시-1,3,5-트리아지닐-2-일)-4-메틸모르폴리늄 클로라이드(DMTMM)의 반응 생성물, 또는 산과 1,1'-카르보닐디이미다졸(CDI)의 반응 생성물이다.

화학식 (III) 및 (IV)의 화합물은, 상업적 공급원, 예를 들어 Flurochem Ltd(Old Glossop, Derbyshire SK13 7RY, UK)로부터 얻을 수 있거나, 당업자에게 알려진 방법 및/또는 문헌, 예를 들어 문헌(Makino, K.; Kim, H.S and Kurasawa Y; J. Heterocyclic Chem. 1998, 35, 489- 497) 및 이의 참고 문헌에 기재된 방법을 사용하여 합성할 수 있다.

분석 시험

하기의 분석 시험 (a)∼(c)는, 전체 세포 및 종양에서, HDAC 억제제, Hi5 곤충 세포에서 생성되는 재조합 인간 HDAC1의 시험관내 억제제 및 히스톤 H3 아세틸화의 시험관내 및 생체내 유도 물질로서의, 하나 이상의 본 발명의 화합물의 효과를 측정하는 데 이용될 수 있다. 상기 시험으로, 인간 종양 세포의 증식을 억제하는 상기 화합물의 능력을 평가할 수도 있다.

(a) 재조합 HDAC1 의 시험관내 효소 분석 시험

HDAC 억제제를 Hi5 곤충 세포에서 제조된 재조합 인간 HDAC1에 대하여 스크리닝하였다. SIGMA로부터의 항-FLAG M2 아가로스(A2220)를 사용하여 정제된 친화성 및 유전자의 C-말단에서 FLAG 태그로 효소를 클로닝하였다.

데아세틸라제 분석 시험은 50 ㎕ 반응물에서 실시하였다. 15 ㎕의 반응 완충제[25 mM TrisHCl(pH 8), 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1 mM MgCl₂]에 희석된 HDAC1(75 ng의 효소)을 다른 완충제(10 ㎕)와 단독으로 또는 화합물을 함유하는 완충제(10 ㎕)와 상온에서 30분간 혼합하였다. 이어서, 25 ㎕의 완충제에 희석된 25 μM 아세틸화 히스톤 H4 펩티드(KI 174 Biomol)를 반응물에 첨가하고, 상온에서 1시간 동안 항온 처리하였다. 트리코스타틴 A를 함유하는 동일한 부피(50 ㎕)의 Fluor de Lys 현색제(developer)(Biomol)를 2 μM 첨가하여 반응을 중지시켰다. 반응물이 상온에서 30분간 발색 반응을 전개하게 한 다음, 360 nM의 여기 파장 및 465 nM의 방출 파장에서 형광을 측정하였다. HDAC 효소 억제제의 IC₅₀ 값은, 개개의 화합물로 용량 반응 곡선을 작도하고 최대 신호(희석제 대조군)가 50% 감소하는 억제제 농도를 측정함으로써 구하였다.

(b) 전체 세포에서의 증식 억제의 시험관내 분석 시험

Promega 세포 역가 96 수성 증식 분석 시험(Promega #G5421)을 이용하여 전체 세포에서의 증식 억제를 분석 시험하였다. HCT116 세포를 96 웰 플레이트에 1 × 10³ 세포/웰로 시딩하고, 하룻밤 동안 유착하게 하였다. 이를, 억제제로 72 시간 동안 처리하였다. 20 ㎕의 테트라졸리움 염료 MTS를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 3시간 동안 다시 항온 처리하였다. 이어서, 96 웰 플레이트 판독기에서 490 nM로 흡광도를 측정하였다. HDAC 억제제의 IC₅₀ 값은, 개개의 화합물로 용량 반응 곡선을 작도하고 최대 신호(희석제 대조군)가 50% 감소하는 억제제 농도를 측정함으로써 구하였다.

(c) 전체 세포에서의 히스톤 데아세틸라제 활성의 시험관내 효소 분석 시험

전체 세포에서의 히스톤 H3 아세틸화를 Cellomics 어레이스캔(arrayscan)을 사용하는 분석 및 면역 조직 화학법을 이용하여 측정하였다. A549 또는 HCT116 세포를 96 웰 플레이트에 1 × 10⁴ 세포/웰로 시딩하고, 하룻밤 동안 유착하게 하였다. 이를, 억제제로 24시간 동안 처리한 다음, 트리스 완충 염수(TBS) 중 1.8% 포름알데히드에 1시간 동안 고정시켰다. 세포를 빙냉 메탄올로 5분간 투과화하고, TBS에서 씻어낸 다음, TBS 3% 저지방 분유에서 90분간 블록킹하였다. 이어서, 세포를 TBS 3% 밀크에 500 대 1로 희석된 아세틸화 히스톤 H3(Upstate #06-599)에 특이적인 다클론성 항체와 함께 1시간 동안 항온 처리하였다. 세포를 TBS로 3회 씻어낸 다음, 1% 우혈청 알부민(Sigma #B6917)을 함유한 TBS 중 플루오레세인 접합 2차 항체(Molecular Probes #A11008)와 Hoechst 333542(1 ㎍/㎖)(Molecular Probes #H3570)와 함께 1시간 동안 항온 처리하였다. 결합되지 않은 항체를 TBS로 3회 씻어내어 제거하고, 마지막 씻어냄 후에는 100 ㎕의 TBS를 세포에 첨가하고, 플레이트를 밀봉하고, Cellomics 어레이스캔을 이용하여 분석하였다.

HDAC 억제제의 EC₅₀ 값은, 개개의 화합물로 용량 반응 곡선을 실시한 다음, 최대 신호[기준 화합물 대조군 - 트리코스타틴 A (Sigma)]의 50%를 생성하는 억제제 농도를 측정함으로써 구하였다.

또한, 본 발명의 화합물의 hERG 활성 및 용해도는 하기에 기재된 분석 시험 (d)∼(f)를 이용하여 구할 수 있다:

(d) hERG 코딩 칼륨 채널 억제 시험

세포 배양

hERG 코딩 채널을 발현하는 중국 햄스터 난소(Chinese Hamster Ovary; CHO) 세포를, L-글루타민, 10% 우태 혈청(Foetal Calf Serum; FCS) 및 0.6 mg/㎖ 히그로마이신(Hygromycin)[전부 Sigma사]을 함유하는 F-12 Ham 배지에서 37℃ 및 습한 환경(5% CO₂) 하에 반 융합 상태로 배양하였다. 사용에 앞서, 단일층을 미리 가온한(37℃) 3 ㎖ 분액의 Versene 1:5,000(Invitrogen)을 사용하여 세정하였다. 이 용액의 흡인 후, 플라스크를 항온 처리기에서 37℃로 추가의 2 ㎖의 Versene 1:5,000을 사용하여 6분간 항온 처리하였다. 이어서, 세포를 플라스크 바닥에서 가볍게 두드려서 떼어낸 다음, 칼슘(0.9 mM) 및 마그네슘(0.5 mM)을 함유하는 Dulbecco's-PBS 10 ㎖(Invitrogen)를 플라스크에 첨가하고, 원심 분리(50 g, 4분)에 앞서 15　㎖ 원심분리기 튜브에 흡인시킨다.

생성된 상청액을 버리고, 펠릿을 3　㎖ 분액의 PBS에서 온건히 재현탁하였다. 0.5 ㎖ 분액의 세포 현탁액을 자동 세포 계수(Innovatis Cedex)를 위해 제거하고, 최종 세포 현탁액 부피를 PBS로 조절하여 소정의 최종 세포 농도를 얻었다.

전기 생리학

이 장치의 원리 및 조작은 이전에 기술되었다[Schroeder et al., Journal of Biomolecular Screening (2003) 8(1), 50-64]. 간단히 말해, 기법은 384웰 플레이트(PatchPlate^TM)를 기초로 하며, 여기서 기록은, 2개의 분리된 유체 챔버를 분리하는 작은 구멍에 세포를 배치 및 유지하도록 하기 위해 흡인을 사용하여 각각의 웰에 시도된다. 밀봉되면, PatchPlate^TM 바닥의 용액이 암포테리신 B(Sigma)를 함유하는 것으로 변화된다. 이는 각각의 웰의 구멍을 덮는 세포막의 팻치를 투과화하고, 사실상 천공의 전체-세포 팻치 클램프 기록이 각각의 웰에서 시도되도록 한다.

IonWorks^TM HT의 각각의 실행을 위해, 실온(∼21℃)에서 하기의 방식으로 조작하였다. "완충제" 위치의 "보트"는 4 ㎖의 PBS로 장입하고, "세포" 위치의 "보트"는 전술한 CHO-hERG 세포 현탁액으로 장입하였다. 시험할 화합물(최종 시험 농도의 3배 농도)을 함유하는 96웰 플레이트(V-바닥, Greiner Bio-one)를 "플레이트 1" 위치에 두고, PatchPlate^TM을 장치에 두며, PatchPlate^TM 커버를 사용하여 위치에 유지시켰다.

각각의 화합물 플레이트를 진열하여 10개의 8-퐁(pont) 농도 효과 곡선이 작도될 수 있게 하였고, 플레이트 상에 잔존하는 두 컬럼을 비히클(0.33% DMSO)로 흡수시켜 분석 시험 기준선을 정의하고, 시사프리드(10 μM)의 극최대 블록킹 농도로 100% 억제 수준을 정의하였다. 이어서, IonWorks^TM HT의 유체 공학-헤드(F-헤드)가 3.5 ㎕의 PBS를 PatchPlate^TM의 각각의 웰에 첨가하고, 그 바닥에는 하기의 조성물(mM 단위)를 갖는 "내부" 용액이 살포되었다: K-Gluconate 100, KCl 40, MgCl₂ 3.2, EGTA3 및 HEPES 5(전부 Sigma사)(10 M KOH를 사용하여 pH는 7.25∼7.30). 프라이밍 및 소포 처리한 후, 이어서 전자 공학-헤드(E-헤드)가 PatchPlate^TM 주변으로 이동하여 구멍 시험을 하였다(즉, 전압 펄스를 가하여 각각의 웰의 구멍이 개방되었는지 확인함). 이어서 F-헤드가 전술한 3.5 ㎕의 세포 현탁액을 PatchPlate^TM의 각각의 웰에 분배하였으며, 세포가 각각의 웰의 구멍에 도달하게 200초를 주고, 이를 밀봉하였다. 이어서, E-헤드가 PatchPlate^TM 주변으로 이동하여, 각각의 웰에서 얻어진 밀봉 저항을 측정하였다.

이어서, PatchPlate^TM 하측의 용액을 하기의 조성(mM 단위)을 갖는 "유입" 용액으로 교체하였다: KCl 140, EGTA 1, MgCl₂ 1 및 HEPES 20(전부 Sigma사)(10 M KOH를 사용하여 pH는 7.25∼7.30) 그리고 100 ㎍/㎖의 암포테리신 B. 팻치 천공이 일어나게 한지 9분 후, 이어서 E-헤드를 팻치 플레이트의 모든 384웰 주변으로 이동시켜 전-화합물 hERG 전류 측정치를 구하였다. 이어서, F-헤드가 화합물 플레이트의 각각의 웰의 용액 3.5 ㎕를 PatchPlate^TM 상의 4 웰에 첨가하였다. 이것은, 화합물 플레이트 상의 가장 희석된 웰에서 출발하고 가장 농축된 웰로 이동함으로써 임의의 이월 유출의 영향을 최소화하도록 프로그램되었다.

대략 3.5분의 항온 처리 후, E-헤드를 PatchPlate^TM의 모든 384웰 주위로 이동시켜, 후-화합물 hERG 전류 측정치를 구하였다. 이 방식으로, 비누적 농도 효과 곡선(non-cumulative concentration-effect curve)이 작제할 수 있었으며, 여기서, 충분한 비율의 웰에서 허용 기준의 제공이 달성되었고(하기 참조), 시험 화합물의 각각의 농도의 효과는 1∼4개 세포로부터의 기록을 기준으로 하였다.

각각의 웰에 대한 허용 기준은, 전-주사 밀봉 저항 > 60 MΩ, 전-주사 hERG 테일 전류 진폭 > 0.15 nA 및 후-주사 밀봉 저항 > 60 MΩ이었다. 전-화합물 및 후-화합물 hERG 전류는, -70 mV에서의 20 s 기간 유지, -60 mV로의 160 ms 단계, 다시 -70 mV으로의 100 ms 단계, +40　mV으로의 1 s 단계, -30 mV로의 2 s 단계 및 최종적으로 -70mV으로의 500 ms 단계로 이루어진 전압 펄스에 의해 발생하였다. 전-화합물 및 후-화합물 전압 펄스간에는, 막 전위의 클램핑(clamping)이 없었다.

e) 수성 용해도의 평가

시험 화합물(1∼1.6 mg)을 바이알에 칭량하고, 1 ㎖의 0.1 M 인산염 완충제(pH 7.4)를 첨가한다. 1.0 mg 내지 1.6 mg의 시험 화합물을, 보정 용액으로 사용하기 위해서 바이알 중의 1.8 ㎖ DMSO에 동시에 용해시킨다. 두 용액 모두를 25℃에서 24시간 동안 교반한다. 이어서, 포화 수용액 및 DMSO 보정 용액을 깊은 96웰 플레이트에 옮긴다. 포화 완충제 용액 플레이트를 4310 g의 상대 원심력으로 원심분리한 다음, 수성 상청액을 제2의 깊은 웰 플레이트에 옮기고, 원심분리한다. 수성 상청액 및, 완충제를 사용한 50% 희석액을 더 옮긴 후, 최종 샘플 플레이트 및 DMSO 보정 플레이트를 HPLC-UV-MS를 사용하여 분석한다. 샘플 용해도의 정량화는, 250 nm(250 nm이 부적합한 경우에 선택되는 대안적인 파장)에서의 보정 UK 피크 영역 및 샘플을 화합물 id의 MS 확인과 비교함으로써 실시한다.

f) 완충제 및 모의 장액에서의 수성 용해도 평가

하기의 배지에서 명시된 온도로 용해도를 시험하였다:

모의 장액( Fasted ) FaSSIF ( Galia and Dressman et al , Pharms Res , 15(5), 1998, p698 ).

타우로콜산나트륨(3 mM); 난황 레시틴(0.75 mM); KH₂PO₄(0.03 M); KCl(0.1 M); NaOH(pH 6.5로 조절하기 위한 것). 37℃에서 측정.

쇠렌센 인산염 완충제 ( Handbook of Biochemistry , pg 234-237).

용액 A 0.067 M 인산일칼륨

용액 B 0.067 M 인산이나트륨

25℃ 및 37℃에서 측정.

연구 하의 화합물의 적절한 양[상기 용해도 시험(f) 및/또는 예상되는 pH 용해도 곡선으로부터 결정]은, 2-드램 유리 바이알에 2회 정확히 칭량된다.

각각의 세트의 복제 바이알에, pH 6.8 쇠렌센 인산염 완충제 또는 FaSSIF가 첨가된 1.50 ㎖ 이상의 적절한 배지를 사용하였다. 모든 칭량치는 각각의 경우에서 배지를 포화시키기에 충분해야 한다.

PTFE 코팅된 자기 추적자를 각각의 바이알에 첨가한 후, 이들을 밀봉하고 Variomag 자기 반응 교반기 블록(CamLab)에 배치한다. 상기 교반기 블록은 적절한 온도(상기 참조)에서 유지하고, 알루미늄 호일로 덮어 빛에 대한 노출을 줄이고, 교호 방향으로 800 r.p.m에서 교반한다. 시험할 배지를 위해 소정의 시점에서 각각의 바이알을 샘플링한다. 우선, pH 및 그 다음 각각의 샘플 중의 활성 함량을 각각의 시점에서 하기의 방식으로 측정한다.

pH

적합한 pH 계측기(Hydrus 400 - Fisher), 전극 및 표준 pH 완충제를 사용하여, 상온에서 기계를 pH 4.01 및 pH 7.00으로 조정한다.

전극을 각각의 복제 샘플에 두어, 상온에서의 pH를 측정하고 그 결과를 첫번째 소수 자리까지 기록한다. 상기 전극은 탈이온수로 씻어내고, 측정 사이마다 닦아서 건조한다.

HPLC 에 의한 활성 함량

각각의 샘플로부터, 0.4 ㎖ 분액을 폴리카르보네이트 초원심분리기 튜브(Beckman)에 옮긴다. 시험할 배지를 위해, TL Optima 초원심분리기(Beckman)를 사용하여 샘플을 적절한 온도에서 40,000 r.p.m.으로 15분간 회전시킨다.

각각의 초원심분리기 튜브로부터의 상청액을 제2의 초원심분리기 튜브로 옮기고, 동일한 조건 하에서 한번 더 회전시킨다.

각각의 샘플로부터의 상청액을, 연구중인 화합물 및 외부 표준에 대해 측정된 활성 함량에 최적화된 HPLC 방법으로 분석한다. 상기 상청액은, HPLC 방법의 직선 범위 내의 농도를 얻기 위해, 적합한 용매로 희석해야할 수 있다. 이는 보통, 수성의 예상되는 pH 용해도 곡선으로부터 예측할 수 있으며, 공용매의 경우에는 첨가된 화합물의 양으로부터 예측할 수 있다.

화학식 I의 화합물의 약물학적 특성이 예상한 바와 같이 구조에 따라 변화하긴 하나, 일반적으로 화학식 I의 화합물이 갖는 활성은, 하기의 농도 또는 투여량으로, 상기 시험 (a), (b), (c) 또는 (d) 중 하나 이상에서 입증될 수 있다:

시험 (a):- 예를 들어 100 nM 이하 범위의 IC₅₀;

시험 (b):- 예를 들어 1 mM 이하 범위의 IC₅₀;

시험 (c):- 예를 들어 1 mM 이하 범위의 IC₅₀;

시험 (d):- 예를 들어 30 mM 초과의 IC₅₀.

예를 들어, HDAC1의 억제에는 시험 (a)를, 전체 세포에서의 증식 억제에는 시험 (b)를 이용하며, 본원의 실시예 4에 기술된 화합물은 하기 표에 나타낸 IC₅₀ 결과를 보인다. 하기 표는 N-(2-아미노페닐)-4-(1-(피리드-2-일 메틸)피페리딘-4-일)벤즈아미드(상기 화합물 [1])에 대한 해당 결과도 포함한다:

실시예의 화합물	IC ₅₀ 시험 (a) ( HDAC1 의 억제에 대한 시험관내 분석 시험)	IC ₅₀ 시험 (b) (전체 세포 증식 억제에 대한 시험관내 분석 시험)
4	0.081 μM	0.508 μM
비교 화합물 1	0.1 μM	1.433 μM

본 발명의 시험된 화합물에 유효한 투여량으로는, 시험 (d)에서, 생리학적으로 허용할 수 없는 독성은 관찰되지 않았다. 따라서 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적 허용 염을 하기에 정의된 투여량 범위로 투여하는 경우에는, 바람직하지 않은 독물학적 영향이 예상되지 않는다.

또한, 화학식 I의 화합물의 용해도가 예상되는 바와 같이 구조 변화에 따라 불가피하게 변화할 것이긴 하나, 화학식 I의 화합물은 일반적으로 상기 시험 (e)로 측정한 용해도가, 예를 들어 100 μM초과이다.

본 발명의 추가의 양상에 따라, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그를 약학적 허용 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.

본 발명의 조성물은, 경구용(예를 들어 정제, 로젠지, 경질 캡슐 또는 연질 캡슐, 수성 현탁액 또는 유성 현탁액, 에멀션, 분산 가능한 분말 또는 과립, 시럽 또는 엘릭시르로서), 국소용(예를 들어 크림, 연고, 겔, 또는 수성 용액이나 유성 용액 또는 현탁액으로서), 흡입 투여(예를 들어 미분 분말 또는 액상 에어로졸로서), 통기 투여(예를 들어 미분 분말로서) 또는 비경구 투여(예를 들어 정맥내, 피하, 근육내 또는 근육내 투약용 살균 수성 용액이나 살균 유성 용액으로서 또는 직장 투약용 좌약으로서)에 적합한 형태일 수 있다.

본 발명의 조성물은, 당업계에 잘 알려진 종래의 약학적 부형제를 사용하여 통상적인 절차로 얻을 수 있다. 따라서, 경구용으로 의도된 조성물은, 예를 들어 하나 이상의 착색제, 감미제, 향미제 및/또는 보존제를 함유할 수 있다.

정제 제제에 적합한 약학적 허용 부형제, 예를 들어 비활성 희석제, 예컨대 락토스, 탄산나트륨, 인산칼슘 또는 탄산칼슘, 과립화제 및 붕해제, 예컨대 옥수수 전분 또는 알겐산(algenic acid); 결합제, 예컨대 전분; 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 탈크; 보존제, 예컨대 에틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트, 및 항산화제, 예컨대 아스코르브산을 포함한다. 정제 제제는, 위장관 내에서의 그들의 분해 및 이후 활성 성분의 흡수를 변화시키거나 그들의 안정성 및/또는 외관을 개선하기 위해, 코팅하거나 코팅하지 않을 수 있으며, 어느 경우에서든 당업계에 잘 알려진 통상적인 코팅제와 절차를 사용한다.

경구용 조성물은 경질 젤라틴 캡슐의 형태일 수 있고, 이 캡슐에서 활성 성분이 비활성 고체 희석제, 예를 들어 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린과 혼합되며, 아니면 연질 젤라틴 캡슐에서는 활성 성분이 물 또는 오일, 예컨대 낙화생유, 액상 파라핀, 콩기름, 코코넛오일, 또는 바람직하게는 올리브 오일, 또는 임의의 다른 허용 가능한 비히클과 혼합된다.

수성 현탁액은 일반적으로, 미세분말형의 활성 성분을, 하나 이상의 현탁제, 예컨대 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 알긴산나트륨, 폴리비닐-피롤리돈, 검 트래거캔스 및 아라비아 고무; 분산제 또는 습윤제, 예컨대 레시틴 또는 알킬렌 산화물과 지방산의 축합 생성물(예를 들어 스테아르산폴리옥시에틸렌), 또는 에틸렌 산화물과 장쇄 지방족 알콜, 예를 들어 헵타데카에틸렌옥시세탄올의 축합 생성물, 또는 에틸렌 산화물과 지방산 및 헥시톨로부터 유도된 부분 에스테르의 축합 생성물, 예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레이트, 또는 에틸렌 산화물과 장쇄 지방족 알콜, 예를 들어 헵타데카에틸렌옥시세탄올의 축합 생성물, 또는 에틸렌 산화물과 지방산 및 헥시톨로부터 유도된 부분 에스테르의 축합 생성물, 예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레이트, 또는 에틸렌 산화물과 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유도된 부분 에스테르의 축합 생성물, 예를 들어 폴리에틸렌 소르비탄 모노올레이트와 함께 함유한다. 또한, 수성 현탁액은 하나 이상의 보존제(예컨대 에틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트), 항산화제(예컨대 아스코르브산), 착색제, 향미제 및/또는 감미제(예컨대 수크로스, 사카린 또는 아스파탐)를 함유할 수 있다.

유성 현탁액은, 활성 성분을 식물성 유지(예컨대 낙화생유, 올리브 오일, 참기름 또는 코코넛오일) 또는 광유(예컨대 액상 파라핀)에 현탁하여 제형화할 수 있다. 또한, 유성 현탁액은 증점제, 예컨대 밀랍, 경질 파라핀 또는 세틸 알콜을 함유할 수 있다. 감미제, 예컨대 상기에 기재된 것들, 및 향미제는, 풍미 좋은 경구용 제제를 제공하기 위해 첨가될 수 있다. 이 조성물들은 항산화제, 예컨대 아스코르브산의 첨가로 보존할 수 있다.

물을 첨가하여 수성 현탁액 또는 수용액을 제조하기에 적합한, 분산 가능하거나 냉동 건조된 분말 및 과립은 일반적으로 활성 성분을 분산제 또는 습윤제, 현탁제 및 하나 이상의 보존제와 함께 함유한다. 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제는 이미 전술한 것들로 예시된다. 추가의 부형제, 예컨대 감미제, 향미제 및 착색제도 역시 존재할 수 있다.

또한, 약학적 본 발명의 조성물은 수중유 에멀션의 형태일 수 있다. 유상은 식물성 유지, 예컨대 올리브 오일 또는 낙화생유, 또는 광유, 예컨대 액상 파라핀 또는 이들의 임의의 혼합물일 수 있다. 적합한 유화제는, 예를 들어 천연 발생 검, 예컨대 아라비아 고무 또는 검 트래거캔스, 천연 발생 인지질, 예컨대 대두, 레시틴, 에스테르 또는 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유도된 부분 에스테르(예를 들어 소르비탄 모노올레이트) 및 상기 부분 에스테르와 에틸렌 산화물의 축합 생성물, 예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트일 수 있다. 또한, 에멀션은 감미제, 향미제 및 보존제를 함유할 수 있다.

시럽 및 엘릭시르는 감미제, 예컨대 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 소르비톨, 아스파탐 또는 수크로스와 함께 제형화할 수 있으며, 완화제, 보존제, 향미 및/또는 착색제도 함유할 수 있다.

또한, 약학적 조성물은 살균한 주사 가능한 수성 또는 유성 현탁액, 용액, 에멀션 또는 특정 시스템의 형태일 수 있으며, 이는 전술한, 적절한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제 중 하나 이상을 사용하여, 알려진 절차에 따라 제형화할 수 있다. 또한, 살균한 주사 가능한 제제는 무독성의 비경구 투여 가능한 희석제 또는 용매 중의 살균한 주사 가능한 용액 또는 현탁액, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 중의 용액일 수 있다.

좌약 제제는 활성 성분을, 상온에서 고체이나 직장 온도에서는 액상이라서 직장에서 용융되어 약물을 방출하게 되는 적합한 무자극성 부형제와 혼합하여 제조할 수 있다. 적합한 부형제는, 예를 들어 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.

국소용 제제, 예컨대 크림, 연고, 겔 및 수성 용액이나 유성 용액 또는 현탁액은 일반적으로, 당업계에 잘 알려진 통상적인 절차를 이용하여 활성 성분을 종래의 국소적으로 허용 가능한 비히클 또는 희석제와 함께 제형화하여 얻을 수 있다.

통기 투여용 조성물은, 평균 직경이 예를 들어 30 ㎛ 이하, 바람직하게는 5 ㎛ 이하, 더 바람직하게는 5 ㎛∼1 ㎛인 입자를 함유하는 미분 분말의 형태일 수 있으며, 이 분말 자체는 활성 성분을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 생리학적으로 허용 가능한 담체, 예컨대 락토스로 희석된 것으로 포함한다. 알려진 제제인 나트륨 크로모글리케이트의 통기에 이용되는 바와 같이 터보-흡입 장치를 이용하기 위해, 통기용 분말을, 예를 들어 1∼50 mg의 활성 성분을 함유하는 캡슐에 편리하게 보존한다.

흡입 투여용 조성물은 미분 고체를 함유하는 에어로졸 또는 액상 비말로서 활성 성분을 분배하기 위해 조절된 통상적인 가압 에어로졸의 형태일 수 있다. 통상적인 에어로졸 추진제, 예컨대 휘발성 플루오르화 탄화수소 또는 탄화수소가 사용될 수 있으며, 에어로졸 장치는 활성 성분의 계측된 양을 분배하기 위해 편리하게 조절된다.

제제에 대한 추가의 정보를 얻기 위해서는, 문헌[Chapter 25.2 in Volume 5 of Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990]을 참조할 수 있다.

일반적으로 상기 조성물은 통상적인 부형제를 사용하여 종래 방식으로 제조할 수 있다.

화학식 (I)의 화합물은 보통, 온혈 동물에게 이 동물의 체표면적(m²)당 5∼5000 mg, 즉 대략 kg당 0.1∼100 mg 내의 단위 투여량으로 투여할 것이며, 이는 보통 치료상으로 유효한 투여량을 제공한다. 단위 제형, 예컨대 정제 또는 캡슐은 통상적으로, 예를 들어 1∼250 mg의 활성 성분을 함유할 것이다. 바람직하게는 1∼50 mg/kg 범위의 1일 투여량이 사용된다. 그러나 1일 투여량은 치료받는 대상, 특정한 투여 경로 및 치료할 병의 중증도에 따라 필연적으로 달라질 것이다. 따라서 최적의 투여량은, 임의의 특정 환자를 치료하는 의사가 결정할 수 있다.

본 발명자들은, 본 발명에 정의된 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이 유효한 세포 주기 억제제(항-세포 증식제)임을 발견하였으며, 이 특성은 이들의 HDAC 억제 활성으로부터 발생하는 것으로 생각된다. 또한 본 발명자들은, 본 발명의 화합물이 신생혈관형성의 억제, 세포자멸의 활성화 및 분화에 관여할 수 있다고 생각된다. 따라서 본 발명의 화합물은 HDAC 효소에 의해 단독으로 또는 부분적으로 매개된 의학 조건 또는 질환의 치료에서 유용할 것으로 기대되며, 즉 화합물은 이러한 치료가 필요한 온혈 동물에서 HDAC 억제 효과를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 HDAC 효소의 억제를 특징으로 하는 악성 세포의 증식을 치료하는 방법을 제공하며, 즉 화합물은 HDAC의 억제에 의해 단독으로 또는 부분적으로 매개된 항증식 효과를 생성하기 위해 사용될 수 있다.

본 발명의 다른 양상에 따라, 치료법에 의해 인체 또는 동물 신체의 치료 방법에 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그가 제공된다.

이렇게 본 발명의 추가의 양상에 따라, 약제로서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그가 제공된다.

본 발명의 추가의 양상에 따라, 인간과 같은 온혈 동물에서 HDAC 억제 효과의 생성시 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그의 용도가 제공된다.

본 발명의 이 양상의 추가의 특징에 따라, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 치료가 필요한 인간과 같은 온혈 동물에서, HDAC 억제 효과를 생성하는 방법이 제공된다.

본 발명의 추가의 양상에 따라, 인간과 같은 온혈 동물에서 세포 주기 억제(항-세포 증식) 효과의 생성시 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그의 용도가 제공된다.

본 발명의 이 양상의 추가의 특징에 따라, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 치료가 필요한 인간과 같은 온혈 동물에서 세포 주기 억제(항 세포 증식) 효과를 생성하는 방법이 제공된다.

본 발명의 이 양상의 추가의 특징에 따라, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 치료가 필요한 인간과 같은 온혈 동물에서 암을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 추가의 특징에 따라, 암 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그가 제공된다.

본 발명의 이 양상의 추가의 특징에 따라, 암치료에 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그가 제공된다.

본 발명의 이 양상의 추가의 특징에 따라, 암 치료용 약제의 제조에 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그의 용도가 제공된다.

본 발명의 추가의 양상에서, 폐암, 결장암, 유방암, 전립선암, 림프종 및/또는 백혈병에 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그의 용도가 제공된다.

본 발명의 추가의 양상에서, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 치료가 필요한 인간과 같은 온혈 동물에서, 폐암, 결장암, 유방암, 전립선암, 림프종 또는 백혈병을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명에 따른 치료를 적용할 수 있는 암에는 식도암, 골수종, 간암, 췌장암, 자궁경부암, 유윙 종양, 신경아 세포종, 카포지 육종, 난소암, 유방암, 결장암, 전립선암, 방광암, 흑색종, 폐암[비소 세포 폐암(non small cell lung cancer; NSCLC) 및 소세포성 폐암(small cell lung cancer; SCLC) 포함], 위암, 두경부암, 뇌종양, 신장암, 림프종 및 백혈병이 있다.

상기에 정의된 HDAC 억제 활성은 유일한 치료법으로 이용될 수 있거나, 본 발명의 화합물 외에 하나 이상의 다른 물질 및/또는 치료를 포함할 수 있다. 이러한 병용 치료는 개개의 치료 성분을 동시에, 순차적으로 또는 별개로 투여하는 방식으로 달성할 수 있다. 의과 종양학(medical oncology) 분야에서는, 각각의 암환자의 치료에 상이한 형태의 치료를 병용하는 것이 보통의 관례이다. 의과 종양학에서, 상기에 정의된 바와 같은 세포 주기 억제 치료 이외에 이러한 병용 치료의 다른 구성요소(들)는 외과 수술, 방사선 요법 또는 화학 요법일 수 있다. 이러한 화학 요법은 하기의 범주들의 항암제 중 하나 이상을 포함할 수 있다:

(i) 의과 종양학에서 사용되는 바와 같은 항증식성/항종양성 약물 및 이의 배합물, 예컨대 알킬화제(예를 들어 시스-플라틴, 카르보플라틴, 시클로포스파미드, 질소 머스터드, 멜팔란, 클로람부실, 부술판 및 니트로소우레아); 대사길항 물질(예를 들어 항엽산제, 예컨대 플루오로피리미딘 형태의 5-플루오로우라실 및 테가푸르, 랄티트렉세드, 메토트렉세이트, 시토신 아라비노사이드 및 히드록시우레아; 항종양 항생 물질(예를 들어 안트라시클린 형태의 아드리아마이신, 블레오마이신, 독소루비신, 다우노마이신, 에피루비신, 이다루비신, 마이토마이신-C, 닥티노마이신 및 미스라마이신); 항분열제(예를 들어 빈카 알칼로이드 형태의 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신 및 비노렐빈, 그리고 탁소이드 형태의 택솔 및 택소테르); 및 토포이소메라제 억제제(예를 들어 에피포도필로톡신 형태의 에토포시드 및 테니포시드, 암사크린, 토포테칸 및 캄프토테신);

(ii) 세포 증식 억제제, 예컨대 항에스트로겐(예를 들어 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜, 드롤록시펜 및 요오독시펜), 에스트로겐 수용체 하조절제(down regulator)(예를 들어 풀베스트란트), 항안드로겐(예를 들어 비칼루트아미드, 플루트아미드, 닐루트아미드 및 시프로테론 아세테이트), LHRH 길항제 또는 LHRH 작용제(예를 들어 고세렐린, 류프로렐린 및 부세렐린), 황체 호르몬제(예를 들어 메게스트롤 아세테이트), 아로마타제 억제제(예를 들어 아나스트로졸, 레트로졸, 보라졸 및 엑스메스탄) 및 5α-환원 효소의 억제제, 예컨대 피나스테리드;

(iii) 암세포 전이를 억제하는 제제(예를 들어 메탈로프로테이나제 억제제 형태의 마리마스타트 및 우로키나제 플라스미노젠 활성제 수용체 기능 억제제);

(iv) 성장 인자 작용 억제제, 예를 들어 성장 인자 항체, 성장 인자 수용체 항체(예를 들어 항-erbb2 항체 트라스투주맙[Herceptin^TM] 및 항-erbb1 항체 세툭시맙[C225]), 파르네실 전이효소 억제제, MEK 억제제, 티로신 키나제 억제제 및 세린/트레오닌 키나제 억제제, 예를 들어 표피 성장 인자 일족의 억제제[예를 들어 EGFR 일족 티로신 키나제 억제제, 예컨대 N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-메톡시-6-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린-4-아민(게피티닙), N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-4-아민(에르롤티닙, OSI-774) 및 6-아크릴아미도-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린-4-아민(CI 1033)], 예를 들어 혈소판 유래 성장 인자 일족의 억제제 및 예를 들어 간세포 성장 인자 일족의 억제제;

(v) 혈관신생제, 예컨대 혈관 내피 성장 인자의 효능을 억제하는 것들(예를 들어 항-혈관 내피 세포 성장 인자 항체 베바시주맙[Avastin^TM] 화합물, 예컨대 국제 특허 출원 WO　97/22596호, WO 97/30035호, WO 97/32856호 및 WO 98/13354호에 개시된 것들) 및 다른 기작으로 작용하는 화합물(예를 들어 리노미드, 인테그린 avb3 기능 억제제 및 안지오스타틴);

(vi) 혈관 손상제, 예컨대 콤브레타스타틴 A4 및 국제 특허 출원 WO 99/02166호, WO 00/40529호, WO　00/41669호, WO 01/92224호, WO02/04434호 및 WO02/08213호에 개시된 화합물;

(vii) 안티센스 치료법, 예를 들어 상기에 열거된 표적에 지정되는 것들, 예컨대 ISIS 2503, 항-라스 안티센스;

(viii) 유전자 치료법 접근, 예를 들어 이상형 유전자, 예컨대 이상형 p53 또는 이상형 BRCA1 또는 BRCA2를 교체하기 위한 접근, GDEPT(유전자-지정 효소 프로드러그 치료법) 접근, 예컨대 시토신 데아미나제, 티미딘 키나제 또는 세균성 니트로리덕타제 효소를 사용하는 것들 및, 화학 요법 또는 방사선 요법, 예컨대 다중 약물 저항 유전자 치료법에 대한 환자 내성을 증가시키기 위한 접근을 포함함;

(ix) 면역 요법 접근, 예를 들어 환자 종양 세포의 면역원성을 증가시키기 위한 생체외 및 생체내 접근, 사이토카인, 예컨대 인터루킨　2, 인터루킨 4 또는 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자로의 형질 감염, T-세포 아네르기를 감소시키기 위한 접근, 형질 감염된 면역 세포, 예컨대 사이토카인-형질 감염된 수지상 세포를 사용한 접근, 사이토카인-형질 감염된 종양 세포주를 사용한 접근 및 항-유전형 항체를 사용하는 접근을 포함함;

(x) 세포 주기 억제제, 예를 들어 CDK 억제제(예컨대 플라보피리돌) 및 세포 주기 점검점의 다른 억제제(예컨대 점검점 키나제); 아우로라 키나제 및 유사 분열과 세포질 분열 조절에 관련된 다른 키나제(예컨대 유사 분열 키네신)의 억제제; 및 다른 히스톤 데아세틸라제 억제제를 포함함; 및

(xi) 분화제(예를 들어 레티노산 및 비타민 D).

본 발명의 이 양상에 따라, 병용 치료를 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 및 상기에 정의된 바와 같은 추가의 항암 물질을 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.

염증 질환, 자가면역 질환 및 알레르기/아토피 질환을 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그가 더 제공된다.

특히, 관절의 염증(특히 류머티즘성 관절염, 골관절염 및 통풍), 위장관의 염증(특히 염증성 장질환, 궤양성 대장염 및 위염), 피부의 염증(특히 건선, 습진, 피부염), 다발성 경화증, 동맥 경화증, 척추관절증(강직성 척추염, 건선 관절염, 궤양성 대장염에 결부된 관절염), AIDS 관련 신경 장애, 전신 홍반성 루프스, 천식, 만성 폐색성 폐질환, 기관지염, 늑막염, 성인 호흡 장애 증후군, 패혈증, 및 급성 간염과 만성 간염(바이러스성, 세균성 또는 독성)을 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이 제공된다.

인간과 같은 온혈 동물에서 염증 질환, 자가면역 질환 및 알레르기/아토피 질환의 치료에 약제로 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그가 더 제공된다.

특히, 관절의 염증(특히 류머티즘성 관절염, 골관절염 및 통풍), 위장관의 염증(특히 염증성 장질환, 궤양성 대장염 및 위염), 피부의 염증(특히 건선, 습진, 피부염), 다발성 경화증, 동맥 경화증, 척추관절증(강직성 척추염, 건선 관절염, 궤양성 대장염에 결부된 관절염), AIDS 관련 신경 장애, 전신 홍반성 루프스, 천식, 만성 폐색성 폐질환, 기관지염, 늑막염, 성인 호흡 장애 증후군, 패혈증, 및 급성 감염과 만성 간염(바이러스성, 세균성 또는 독성)의 치료에서 약제로 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염이나 프로드러그가 제공된다.

인간과 같은 온혈 동물에서 염증 질환, 자가면역 질환 및 알레르기/아토피 질환의 치료시 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염의 용도가 더 제공된다.

전술한 바와 같이, 특정 세포-증식 질환의 치료 또는 예방에 필요한 투여량은, 치료받는 대상, 투여 경로 및 치료할 병의 중증도에 따라 필연적으로 변화될 것이다. 예를 들어 1∼100 mg/kg, 바람직하게는 1∼50 mg/kg 범위의 단위 투여량이 예견된다.

치료 약제에서의 용도 외에도, 화학식 (I)의 화합물 및 이의 약학적 허용 염은, 신규한 치료제의 연구의 일부로서 고양이, 개, 토끼, 원숭이, 래트 및 마우스와 같은 실험 동물에서의 세포 주기 활성 억제제의 효과를 평가하기 위한 시험관내 및 생체내 시험 시스템의 개발 및 표준화에서 약물학적 도구로서도 유용하다.

이제 본 발명을 하기의 실시예에서 예시할 것이며, 실시예들에서는 일반적으로:

(i) 달리 언급하지 않은 한, 조작은 상온, 즉 17∼25℃ 범위에서 및 비활성 기체, 예컨대 아르곤의 분위기 하에서 실시하였고;

(ii) 증발은 진공에서 회전 증발로 실시하였으며, 워크업 절차는 여과로 잔류 고체를 제거한 후 실시하였고;

(iii) 컬럼 크로마토그래피(속성 절차에 의함) 및 중압 액체 크로마토그래피(medium pressure liquid chromatography; MPLC)는 E. Merck(Darmstadt, Germany)로부터 입수하는 Merck Kieselgel 실리카(Art. 9385) 또는 Merck Lichroprep RP-18(Art. 9303) 역상 실리카에서, 또는 독점적 패키지 순상 실리카 카트리지, 예를 들어 Presearch Ltd.(Hitchin, UK)로부터 입수하는 Redisep(TM) 일회용 크로마토그래피 카트리지를 사용하여 실시하거나, 고압 액체 크로마토그래피(high pressure liquid chromatography; HPLC)는 C18 역상 실리카, 예를 들어 Dynamax C-18 60Å 분취 역상 컬럼에서 실시하였으며;

(iv) 수율은, 존재할 경우, 반드시 도달할 수 있는 최대는 아니고;

(v) 일반적으로, 화학식 (I)의 최종 생성물의 구조는 핵 자기 공명(nuclear magnetic resonance, NMR) 및/또는 질량 스펙트럼 기법으로 확인하였으며; 고속 원자 충돌법(fast-atom bombardment; FAB) 질량 스펙트럼 데이터는 Platform 분광계를 사용하여 구하였고, 적절한 경우, 양이온 데이터 또는 음이온 데이터를 구하였으며; NMR 화학적 이동 값은 델타 스케일(delta scale)로 측정하였고 양성자 자기 공명 스펙트럼은 400 MHz의 장 세기에서 작동하는 Jeol JNM EX 400 분광계, 300MHz의 장 세기에서 작동하는 Varian Gemini 2000 분광계, 400MHz에서 작동하는 Bruker DPX-400 또는 300MHz의 장 세기에서 작동하는 Bruker AM300 분광계를 사용하여 측정하였으며, 측정은 달리 명시하지 않은 한 상온에서 실시하였고;

(vi) 중간체는 일반적으로 완전히 특성화하였으며, 순도는 박막 크로마토그래피, HPLC, 적외선(infra-red; IR) 및/또는 NMR 분석으로 사정하였고;

(vii) 융점은 정정되지 않으며, Mettler SP62 자동 융점 장치 또는 유욕 장치를 사용하여 측정하였고; 화학식 (I)의 최종 생성물의 융점은 통상적인 유기 용매, 예컨대 에탄올, 메탄올, 아세톤, 에테르 또는 헥산의 단독물 또는 혼합한 것으로부터의 결정화 후 측정하였으며;

(viii) 하기의 약어를 사용하였다:

DMSO 디메틸술폭시드

THF 테트라히드로푸란

DIPEA N,N-디이소프로필에틸아민

IPA 이소프로필알콜

Boc/BOC tert 부틸옥시카르보닐

HCl 염산

Cbz/CBZ 벤질옥시카르보닐

Tf 트리플루오로메틸술포닐

LiHMDS 리튬 헥사메틸디실아지드

PhNTf₂ N-페닐-비스(트리플루오로메탄술폰이미드)

DME 1,2-디메톡시에탄

CDMT 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진

실시예 1

N -(2- 아미노페닐 )-4-{1-[(1- 메틸 -1 H - 피라졸 -4-일) 메틸 ]피페리딘-4-일} 벤즈아 미드

1-메틸-1H-피라졸-4-카르복스알데히드(84.5 mg, 0.77 mmol)로 충전된 반응 용기에 디클로로메탄(7 ㎖) 및 N,N-디메틸포름아미드(0.5 ㎖) 중 tert-부틸 2-[(4-피페리딘-4-일벤조일)아미노]페닐카르바메이트(하기 방법 1에 기술된 바와 같이 제조함; 300 mg, 0.76 mmol)의 용액을 첨가하였다. 또한, tert-부틸 2-[(4-피페리딘-4-일벤조일)아미노]페닐카르바메이트는 하기 방법 4에 기술된 방법에 따라 제조할 수 있다. 아세트산(50 ㎖, 0.87 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 상온에서 45분간 교반시켰다. 이어서, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(250 mg, 1.18 mmol)를 첨가하고, 반응물을 추가의 76시간 동안 교반시키고, 메탄올로 희석하고, SCX-2 카트리지(10 g)에 바로 부었다. 카트리지를 메탄올(80 ㎖)로 세정한 후, 생성물을 메탄 올(50 ㎖) 중 암모니아 2 M 용액으로 용리하였다. 해당 분획을 건조할 때까지 증발시키고, 생성된 잔류물을 디클로로메탄(3 ㎖)에 재용해시키고, 트리플루오로아세트산(1 ㎖)로 처리하였다. 이 혼합물을 상온에서 2시간 동안 교반한 후, 디클로로메탄으로 희석하고, SCX-2 카트리지(5 g)에 부었다. 이 카트리지를 메탄올(20 ㎖)로 세정한 다음, 생성물을 메탄올(20 ㎖) 중 암모니아 2 M 용액으로 용리하였다. 암모니아 분획을 건조할 때까지 증발시키고, 생성된 잔류물을 실리카에서 속성 크로마토그래피로 정제하고, 디클로로메탄 중 10% 메탄올로 용리하여 표제 화합물(117 mg, 40%)을 얻었다; NMR 스펙트럼: (DMSO d₆) δ 1.70 (m, 4H), 2.01 (t, 2H), 2.57 (m, 1H), 2.95 (m, 2H), 3.38 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 4.86 (s, 2H), 6.60 (m, 1H), 6.78 (m, 1H), 6.97 (m, 1H), 7.18 (m, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.37 (d, 2H), 7.57 (s, 1H), 7.91 (d, 2H), 9.56 (s, 1H) ; 질량 스펙트럼: M+H⁺390.

실시예 2

실시예 1에 기술된 것과 유사한 절차를 이용하여, tert-부틸 2-[(4-피페리딘-4-일벤조일)아미노]페닐카르바메이트를 적절한 피라졸카르브알데히드 출발 물질(SM)과 반응시켜 표 1에 기술된 화합물을 얻었다.

실시예 3

N -(2- 아미노페닐 )-4-[1-(1 H - 피라졸 -3- 일메틸 )피페리딘-4-일] 벤즈아미드

tert-부틸 2-[(4-피페리딘-4-일벤조일)아미노]페닐카르바메이트(하기 방법 1에 기술된 바와 같이 제조함; 200 mg, 0.51 mmol) 및 1H-피라졸-3-카르브알데히드(50.7 mg, 0.53 mmol)를 상온에서 디클로로메탄(5 ㎖) 중에 1시간 동안 교반하였다. 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(150 mg, 0.71 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 상온에서 48시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 SCX-2 컬럼에 흡수시키고, 이를 메탄올(2 컬럼 부피)로 세정한 다음, 생성물을 메탄올(2 컬럼 부피) 중 암모니아 2 M 용액으로 용리하여 발포체를 얻었다. 이를 1,4-디옥산(2 ㎖)에 용해시키고, 1,4-디옥산(2 ㎖) 중 염화수소 4 M 용액을 첨가하고, 용액을 상온에서 48시간 동안 교반한다. 생성물을 여과하고, 디에틸 에테르로 세정하고, 공기로 건조시킨다. 생성된 고체를 물에 용해시키고, 2 N 수산화나트륨으로 염기화하고, 생성된 고체를 여과하고, 물로 세정하고, 진공 하에 건조하여 표제 화합물(61 mg, 44%)을 얻었다. NMR 스펙트럼: ¹H NMR (DMSO d₆) δ 1.71 (m, 4H), 2.07 (m, 2H), 2.56 (m, 1H), 2.95 (m, 2H), 3.53 (s, 2H), 4.86 (s, 2H), 6.16 (s, 1H), 6.60 (m, 1H), 6.78 (d, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.37 (d, 2H), 7.64 (m, 1H), 7.91 (d, 2H), 9.55 (s, 1H), 12.59 (m, 1H); 질량 스펙트럼: M+H⁺ 376.

실시예 4

N -(2- 아미노페닐 )-4-{1-[(5- 메톡시 -1,3-디메틸-1 H - 피라졸 -4-일) 메틸 ]피페리딘-4-일} 벤즈아미드

실시예 3에 기술된 것과 유사한 절차를 이용하여, tert-부틸 2-[(4-피페리딘-4-일벤조일)아미노]페닐카르바메이트(하기 방법 1에 기술된 바와 같이 제조함; 200 mg, 0.51 mmol)를 5-메톡시-1,3-디메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드(92.6 mg, 0.60 mmol)와 반응시켜 표제 화합물(68 mg, 36%)을 얻었다; NMR 스펙트럼: (DMSO d₆) δ 1.63 (m, 2H), 1.78 (m, 2H), 2.00 (m, 2H), 2.06 (s, 3H), 2.57 (m, 1H), 2.94 (m, 2H), 3.25 (s, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.99 (s, 3H), 4.86 (br s, 2H), 6.60 (m, 1H), 6.78 (d, 1H), 6.97 (m, 1H), 7.17 (d, 1H), 7.37 (d, 2H), 7.91 (d, 2H), 9.55 (s, 1H); 질량 스펙트럼: M+H⁺ 434.

실시예 5

N -(2- 아미노페닐 )-4-{1-[(3-에틸-1 H - 피라졸 -4-일) 메틸 ]피페리딘-4-일} 벤즈아 미드

tert-부틸 2-[(4-피페리딘-4-일벤조일)아미노]페닐카르바메이트(하기 방법 1에 기술된 바와 같이 제조함; 395 mg, 1.0 mmol) 및 3-에틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드(149 mg, 1.2 mmol)를 상온에서 디클로로메탄(10 ㎖) 중에 1시간 동안 교반하였다. 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(297 mg, 1.4 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 상온에서 24시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 SCX-2 컬럼에 흡수시키고, 메탄올(2 컬럼 부피)로 세정한 다음, 생성물을 메탄올(2 컬럼 부피) 중 암모니아 2 M 용액으로 용리하여, 생성물을 백색 발포체로 얻었다. 이를 실리카에서 크로마토그래피로 정제하면서 디클로로메탄 중 10% 메탄올로 용리하였다. 잔류물을 디클로로메탄(4 ㎖)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(1 ㎖)을 첨가하고, 혼합물을 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 용액을 SCX-2 컬럼에 흡수시키고, 이를 메탄올(2 컬럼 부피)로 세정한 다음, 생성물을 메탄올(2 컬럼 부피) 중 암모니아 2 M 용액으로 용리하여 표제 화합물(232 mg, 75%)을 얻었다. NMR 스펙트럼: (DMSO d₆) δ 1.18 (t, 3H), 1.65 (m, 2H), 1.77 (m, 2H), 2.00 (m, 2H), 2.57 (m, 3H), 2.95 (m, 2H), 3.34 (s, 2H), 4.86 (br s, 2H), 6.60 (m, 1H), 6.78 (d, 1H), 6.97 (m, 1H), 7.17 (d, 1H), 7.29 (br s, 1H), 7.37 (d, 2H), 7.91 (d, 2H), 9.55 (s, 1H), 12.39 (s, 1H); 질량 스펙트럼: M+H⁺ 404.

실시예 6

N -(2- 아미노페닐 )-4-{1-[(1,3,5- 트리메틸 -1 H - 피라졸 -4-일) 메틸 ]피페리딘-4-일} 벤즈아미드

실시예 5에 기술된 것과 유사한 절차를 이용하여, tert-부틸 2-[(4-피페리딘-4-일벤조일)아미노]페닐카르바메이트(하기 방법 1에 기술된 바와 같이 제조함; 200 mg, 0.51 mmol)를 1,3,5-트리메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드(83.5 mg, 0.60 mmol)와 반응시켜 표제 화합물(70 mg, 56%)을 얻었다; NMR 스펙트럼: (DMSO d₆) δ 1.65 (m, 2H), 1.77 (m, 2H), 1.98 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.57 (m, 1H), 2.92 (m, 2H), 3.24 (s, 2H), 3.63 (s, 3H), 4.86 (br s, 2H), 6.60 (m, 1H), 6.78 (d, 1H), 6.97 (m, 1H), 7.17 (d, 1H), 7.37 (d, 2H), 7.91 (d, 2H), 9.55 (s, 1H); 질량 스펙트럼: M+H⁺ 418.

실시예 7A

N -(2- 아미노페닐 )-4-{1-[(1,3-디메틸-1 H - 피라졸 -4-일) 메틸 ]피페리딘-4-일} 벤 즈아미드

tert-부틸 (2-{[4-(1-{1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일메틸}피페리딘-4-일)벤조일]아미노}페닐)카르바메이트(하기 방법 6에 기술된 바와 같이 제조함; 7.61 g, 15.11 mmol)를 1,4 디옥산(70 ㎖)에 용해시키고, 빙수조를 사용하여 0℃까지 냉각시켰다. 이어서, 1,4 디옥산(150 ㎖, 600 mmol) 중 염화수소 4 M 용액을 서서히 첨가하였다. 생성된 현탁액을 실온으로 가온시키고, 덩어리를 유리 막대로 휘저어 분해시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 흡인 하에 여과하였다. 얻은 고체를 물(200 ㎖)에 용해시키고, 그 용액에 수산화나트륨 2 M 수용액을 서서히 첨가하여 pH를 12까지 조절하였다. 얻은 혼합물을 디클로로메탄(300 ㎖)으로 추출하고, 유기물을 분리하였다. 수성상을 디클로로메탄(200 ㎖)으로 더 추출하고, 조합된 추출물을 염수로 세정하고, 황산마그네슘으로 건조하고, 여과하고, 증발시켜 투명한 검을 얻었다. 이 검을 디에틸 에테르에 흡수시키고, 건조할 때까지 재증발시키켜 표제 화합물(5.69 g, 93%)을 얻었다; NMR 스펙트럼 (CDCl₃) δ 1.81 (m, 4H), 2.07 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.56 (m, 1H), 3.04 (m, 2H), 3.39 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 6.84 (m, 2H), 7.08 (m, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.33 (m, 3H), 7.82 (m, 3H).

질량 스펙트럼: M+H⁺404.

실시예 7B

tert-부틸 (2-{[4-(1-{1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일메틸}피페리딘-4-일)벤조일]아미노}페닐)카르바메이트(하기 방법 6; 92.3 g, 183.3 mmol)를 메탄올(754 ㎖) 및 물(141 ㎖)에서 슬러리로 만들고, 0∼5℃로 냉각시켰다. 진한 염산을 첨가하면서 온도를 20℃ 이하로 유지하였다. 반응 혼합물을 상온에서 20시간 동안 교반하였다. 반응물을 0∼5℃까지 냉각시키고, 온도를 20℃ 이하로 유지하면서 12∼14의 pH가 얻어질 때까지 수산화나트륨 수용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 온도까지 30분간 가열한 후, 약 4시간에 걸쳐 20℃까지 냉각시켰다. 생성물을 여과로 수거하고, 메탄올 수용액으로 세정한 후, 진공에서 45℃로 일정한 중량까지 건조하여표제 화합물(63.3 g 86%)을 얻었다.

NMR 스펙트럼 (DMSO d₆), 1.65 (m, 2H), 1.73 (m, 2H), 1.96 (t, 2H), 2.08 (s, 3H), 2.55 (m, 1H), 2.92 (d, 2H), 3.28 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 4.87 (s, 2H), 6.59 (m, 1H), 6.77(m, 1H), 6.96 (m, 1H), 7.2 (d, 1H), 7.35 (d, 2H), 7.44 (s, 1H), 7.90 (d, 2H), 9.56 (s, 1H).

질량 스펙트럼: M+H⁺404.

실시예 8

N -(2- 아미노페닐 )-4-{1-[(1,5-디메틸-1 H - 피라졸 -4-일) 메틸 ]피페리딘-4-일} 벤 즈아미드

tert-부틸 {2-[(4-{1-[(1,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤조일)아미노]페닐}카르바메이트(방법 7에 기술된 바와 같이 제조; 308 mg, 0.61 mmol)를 디클로로메탄(2 ㎖)에 흡수시키고, 트리플루오로아세트산(1 ㎖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 상온에서 1시간 동안 교반한 후, 이를 SCX-3 카트리지(5 g)에 부었다. 카트리지를 디클로로메탄(50 ㎖) 및 메탄올(50 ㎖)로 세정한 후, 그 생성물을 메탄올(50 ㎖) 중 암모니아 2 M 용액으로 용리하였다. 암모니아 분획을 증발시켜 백색 고체(182 mg)를 얻고, 이를 역상 분취 HPLC로 정제하여 표제 화합물(134 mg, 55%)을 얻었다; NMR 스펙트럼: (DMSO d₆) δ 1.70 (m, 4H), 2.01 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.57 (m, 1H), 2.95 (m, 2H), 3.28 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 4.86 (s, 2H), 6.60 (m, 1H), 6.78 (m, 1H), 6.97 (m, 1H), 7.17 (m, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.37 (d, 2H), 7.90 (d, 2H), 9.55 (s, 1H); 질량 스펙트럼: M+H⁺404.

실시예 9

N -(2- 아미노페닐 )-4-{1-[(1-에틸-5- 메틸 -1 H - 피라졸 -4-일) 메틸 ]피페리딘-4-일} 벤즈아미드

디클로로메탄(1 ㎖) 중 1-에틸-5-메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드(141 mg, 1.02 mmol)의 용액을, 디클로로메탄(6.5 ㎖) 중 tert-부틸 2-[(4-피페리딘-4-일벤조일)아미노]페닐카르바메이트(하기 방법 1에서 기술된 바와 같이 제조함; 300 mg, 0.76 mmol)의 용액에 첨가하였다. 아세트산(45 ㎕, 0.79 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 이어서, N,N-디메틸포름아미드(1 ㎖)를 첨가하고, 교반을 추가의 30분간 지속한 후, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(245 mg, 1.16 mmol)를 고체로 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 상온에서 18시간 동안(하룻밤 동안) 교반시켰다. 반응 혼합물을 두 배의 부피까지 메탄올을 첨가하여 희석하고, 이를 미리 세정한(메탄올로 세정함) SCX-2 카트리지(10 g)에 직접 부었다. 카트리지를 메탄올(60 ㎖)로 세정한 후, 그 생성물을 메탄올(50 ㎖) 중 2M 암모니아 용액으로 용리하였다. 암모니아 용리액을 증발시켜 무색의 검(420 mg)을 얻고, 이를 디클로로메탄(5 ㎖)에 흡수시키고, 트리플루오로아세트산(2 ㎖)으로 처리하였다. 혼합물울 2시간 동안 교반시킨 후, 디클로로메탄(10 ㎖)으로 희석하고, 미리 세정한(메탄올로 세정함) SCX-2 카트리지(10 g)에 부었다. 카트리지를 디클로로메탄(40 ㎖)으로 세정하고, 메탄올(50 ㎖)로 세정한 다음, 생성물을 메탄올(50 ㎖) 중 암모니아 2 M 용액으로 용리하였다. 암모니아 분획을 증발시켜, 담황색 검(300 mg)을 얻고, 이를 역상 분취 HPLC로 정제하여 표제 화합물(172 mg, 54%)을 얻었다; NMR 스펙트럼: (DMSO d₆) δ 1.27 (t, 3H), 1.66 (m, 4H), 1.98 (m, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.56 (m, 1H), 2.92 (m, 2H), 3.29 (s, 2H), 4.02 (q, 2H), 4.85 (s, 2H), 6.59 (m, 1H), 6.77 (m, 1H), 6.95 (m, 1H), 7.16 (m, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.35 (d, 2H), 7.89 (d, 2H), 9.54 (s, 1H); 질량 스펙트럼: M+H⁺418.

실시예 10 및 11

실시예 9에 기술한 것과 유사한 절차를 이용하여, tert-부틸 2-[(4-피페리딘-4-일벤조일)아미노]페닐카르바메이트(하기 방법 1에서 기술된 바와 같이 제조함)를 적절한 피라졸카르브알데히드 출발 물질과 반응시켜 하기 표 2에 기술된 화합물을 얻었다:

방법 섹션 - 출발 물질의 제조

방법 1

tert -부틸 {2-[(4-피페리딘-4- 일벤조일 )아미노] 페닐 } 카르바메이트

메탄올(3000 ㎖) 중 벤질 4-{4-[({2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]페닐}아미노)카르보닐]페닐}-3,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트(269 g, 524 mmol; 하기 방법 2에 기술된 바와 같이 제조함)의 용액에 목탄(10 g) 상의 10% 팔라듐을 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 기체의 5 bar 압력 하에 두고, 50℃까지 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀리트의 패드를 통해 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 생성된 발포체를 디에틸 에테르 하에 배수처리하고, 여과하여 백색 고체를 얻었다. 이 생성물을 미분하고, 95:5 디에틸 에테르/아세트산에틸과 함께 교반한 다음, 흡인 여과로 수거하였다. 이 고체를 디에틸 에테르로 세정하고, 이소헥산으로 세정하고, 진공에서 건조하여 표제 화합물(167 g, 81%)을 얻었다; NMR 스펙트럼: (DMSO-d₆) 1.45 (s, 9H), 1.57 (m, 2H), 1.72 (m, 2H), 2.61 (t, 2H), 2.69 (m, 1H), 3.07 (m, 2H), 7.18 (m, 2H), 7.40 (d, 2H), 7.53 (d, 2H), 7.91 (d, 2H), 8.70 (br s, 1H), 9.82 (br s, 1H); 질량 스펙트럼 : M+H⁺ 396.

방법 2

벤질 4-{4-[({2-[( tert - 부톡시카르보닐 )아미노]페닐}아미노)카르보닐] 페 닐}-3,6-디 히드로피 리딘-1(2 H )- 카르복실레이트

테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)(8.0 g, 6.92 mmol)을 1,2-디메톡시에탄 3000 ㎖) 및 중탄산나트륨 포화 수용액(3000 ㎖) 중 N-(2-t-부톡시카르보닐아미노페닐)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2,-디옥사보롤란-2-일) 벤즈아미드(288 g, 657 mmol; 국제 특허 공개 번호 WO 03/087057의 방법 13, 60 페이지에 기술된 바와 같이 제조함) 및 벤질 4-{[(트리플루오로메틸)술포닐]옥시}-3,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트(240 g, 657 mmol; 하기 방법 3에 기술된 바와 같이 제조함)의 교반 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃까지 7시간 동안 가열한 후, 교반하면서 상온까지 냉각되게 두었다. 이어서, 반응 혼합물을 물(2000 ㎖)에 붓고, 아세트산에틸로 추출하였다. 이어서, 유기 추출물을 황산마그네슘으로 건조하고, 여과하고, 건조할 때까지 증발시켜 미정제 생성물을 회색 고체로 얻었다. 이를 실리카에서 속성 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 아세트산에틸/헥산(30:70 v/v)으로 용리하여 표제 화합물(279 g, 82%)을 얻었다; NMR 스펙트럼: (DMSO-d₆) δ 1.44 (s, 9H), 2.56 (m, 2H), 3.66 (m, 2H), 4.14 (m, 2H), 5.13 (s, 2H), 6.34 (m, 1H), 7.18 (m, 2H), 7.33 (m, 1H), 7.40 (m, 4H), 7.54 (m, 2H), 7.62 (d, 2H), 7.94 (d, 2H), 8.64 (br s, 1H), 9.81 (br s, 1H); 질량 스펙트럼: MNa⁺ 550.

방법 3

벤질 4-{[( 트리플루오로메틸 ) 술포닐 ] 옥시 }-3,6- 디히드로피리딘 -1(2 H )- 카르복 실레이트

벤질 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트(147 g, 630 mmol)를 질소 분위기 하에 테트라히드로푸란(500 ㎖)에 용해시켰다. 이 용액을, 반응 온도를 -70℃ 이하로 유지하면서 질소 하에 리튬 헥사메틸디실아지드(테트라히드로푸란 중 20% 용액, 556 ㎖, 662 mmol)의 교반 용액에 2시간에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 -75℃에서 추가의 1시간 동안 교반시킨 후, 반응 온도를 -70℃ 이하로 유지하면서 다시 테트라히드로푸란(950 ㎖) 중 N-페닐-비스(트리플루오로메탄술폰이미드)의 용액(236 g, 661 mmol)을 2시간에 걸쳐 적가하였다. 이어서, 반응물을 실온까지 하룻밤 동안 가온한 다음, 2 M 수산화나트륨 수용액(800 ㎖)을 일부분씩 첨가하였다. 층들을 분리하고, 유기층을 추가의 2 M 수산화나트륨 수용액(600 ㎖)으로 세정한 후, 건조할 때까지 증발시켰다. 생성된 고체를 디에틸 에테르에 용해시키고, 물로 세정하였다. 이어서, 유기층을 셀리트로 여과하고, 황산나트륨으로 건조하고, 건조할 때까지 증발시켜 표제 화합물(140 g, 61%)을 얻고, 이를 더 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.

방법 4

tert -부틸 {2-[(4-피페리딘-4- 일벤조일 )아미노] 페닐 } 카르바메이트 (대안적인 방법)

tert-부틸 {2-[4-피리드-4-일벤조일)아미노]페닐}카르바메이트(20 g, 51.35 mmol; 하기 방법 5A 또는 5B에 기술된 바와 같이 제조함)에, 목탄(3.17 g) 상의 10% 팔라듐 및 시트르산(4.75 g, 24.65 mmol)을 첨가하고, 물(80 ㎖) 및 IPA(80 ㎖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 4 bar 압력의 수소 기체 하에 두고, 70℃까지 5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 50℃까지 냉각시키고, 셀리트의 패드로 여과하였다. 혼합물을 70℃까지 가열한 후, 20% w/w 수산화나트륨 수용액(15 ㎖)을 pH 10∼11까지 10분에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 추가의 물(30 ㎖)을 첨가하고, 혼합물을 40℃까지 1시간에 걸쳐 냉각시킨 다음, 60℃까지 30분간 재가열한 다음, 다시 상온까지 냉각시켰다. 생성된 침전물을 여과로 수거하고, 물(2 × 20 ㎖)로 세정하고, 50℃에서 진공 건조하여 표제 화합물(17.6 g, 84%)을 얻었다;

NMR 스펙트럼: (DMSO-d₆) δ 1.45 (s, 9H), 1.53 (m, 2H), 1.70 (m, 2H), 2.58 (m, 1H), 2.66 (m, 2H), 3.03 (m, 2H), 3.31 (br s, 1H), 7.17 (m, 2H), 7.35 (d, 2H), 7.54 (m, 2H), 7.89 (d, 2H), 8.65 (br s, 1H), 9.75 (br s, 1H).

질량 스펙트럼: M+H⁺ 396.

방법 5A

tert - 부틸 {2-[4- 피리드 -4- 일벤조일 )아미노] 페닐 } 카르바메이트

아세토니트릴(300 ㎖) 중 나트륨 4-(4-피리딜)벤조에이트(55.2 g, 236.2 mmol), boc o-페닐렌 디아민(45.7 g. 217.6 mmol) 및 N-메틸모르폴린(24 ㎖)에, 아세토니트릴(152 ㎖) 중 2-클로로-4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진(48.5 g, 270.5 mmol)의 스크리닝한 용액을 3시간에 걸쳐 첨가하였다. 혼합물을 22시간 동안 교반한 후, 물(460 ㎖)을 첨가하였다. 생성된 침전물을 여과로 수거하고, 50% 수성 아세토니트릴(3 × 100 ㎖)로 세정하고, 50℃에서 진공 건조하여 표제 화합물(75.6 g, 90%)을 얻었다;

NMR 스펙트럼: (DMSO-d₆): δ 1.45 (s, 9H), 7.17 (m, 2H), 7.56 (m, 2H), 7.81 (d, 2H), 7.99 (d, 2H), 8.11 (d, 2H), 8.69 (d, 2H), 9.94 (br s, 1H).

질량 스펙트럼: M+H⁺390.

방법 5B

tert -부틸 {2-[4- 피리드 -4- 일벤조일 )아미노] 페닐 } 카르바메이트

아세토니트릴(60 ㎖) 중 나트륨 4-(4-피리딜)벤조에이트(10 g, 45.2 mmol)를 70℃까지 가열한 다음, 염화티오닐(6.6 ㎖, 90.4 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 환류 온도에서 5시간 동안 가열한 후, 상온까지 냉각시켰다. 트리에틸아민(12.6 ㎖, 90.4 mmol)을 조심스럽게 첨가한 다음, 아세토니트릴(15 ㎖) 중 Boc o-페닐렌 디아민(9.42 g, 45.2 mmol)의 가온된 용액을 10분에 걸쳐 첨가하였다. 물(60 ㎖) 중 수산화나트륨(8.6 g, 109 mmol)의 용액을 첨가하고, 생성된 고체를 여과로 수거하고, 물(20 ㎖)로 세정하고, 50℃에서 진공 건조하여 표제 화합물(12.6 g, 68%)을 얻었다.

NMR 스펙트럼: (DMSO-d₆): δ 1.45 (s, 9H), (7.17 (m, 2H), 7.56 (m, 2H), 7.81 (d, 2H), 7.99 (d, 2H), 8.11 (d, 2H) 8.69 (d, 2H), 9.94 (br s, 1H).

질량 스펙트럼: M+H⁺390.

방법 6A

tert -부틸 (2-{[4-(1-{1,3-디메틸-1 H - 피라졸 -4- 일메틸 }피페리딘-4-일) 벤조 일]아미노} 페닐 ) 카르바메이트

tert-부틸 2-[(4-피페리딘-4-일벤조일)아미노]페닐카르바메이트(6.83 g, 17.3 mmol) 및 1,3-디메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드(3.0 g, 24.2 mmol)를 디클로로메탄(150 ㎖)에 용해시켰다. 이어서, 아세트산(996 ㎖, 17.3 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(5.49 g, 25.9 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 추가의 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 중탄산나트륨 포화 수용액(300 ㎖)을 주의 깊게 첨가한 다음, 디클로로메탄(100 ㎖)을 첨가하였다. 유기층을 분리하고, 수성층을 더 많은 디클로로메탄(150 ㎖)으로 재추출하였다. 조합된 유기 추출물을 황산마그네슘으로 건조하고, 여과하고, 건조할 때까지 증발시켰다. 얻은 잔류물을 실리카에서 속성 크로마토그래피로 정제하면서, 디클로로메탄 중 메탄올 5% (v/v) 용액으로 용리한 다음, 디클로로메탄 중 5∼10% (v/v) 메탄올의 구배를 증가시켜 투명한 검을 얻고, 이를 디에틸 에테르에 흡수시킥, 건조할 때까지 증발시켜 표제 화합물(7.61 g, 87%)을 얻었다; NMR 스펙트럼: (DMSO d₆) δ 1.43 (s, 9H), 1.69 (m, 4H), 1.98 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 2.56 (m, 1H), 2.92 (m, 2H), 3.26 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 7.15 (m, 2H), 7.40 (m, 3H), 7.52 (m, 2H), 7.87 (d, 2H), 8.60 (s, 1H), 9.73 (s, 1H); 질량 스펙트럼: M+H⁺504.

방법 6B

tert-부틸 2-[(4-피페리딘-4-일벤조일)아미노]페닐카르바메이트(상기 방법 4에 기술된 바와 같이 제조함; 108.1 g, 273.3 mmol), 1,3-디메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드(35.6 g, 287 mmol) 및 목탄(3.09 g, 1.37 mmol) 상의 팔라듐을 적합한 압력 용기에 주입하였다. 테트라히드로푸란(920 ㎖), 물(54 ㎖) 및 아세트산(32.8 g, 546.7 mmol)을 주입하고, 교반된 혼합물을 3 bar의 수소 하에 반응이 완료된 것으로 여겨질 때까지 60℃까지 가열하였다. 이어서, 혼합물을 40℃까지 냉각시키고, 2 M 수산화나트륨 용액(410 ㎖, 820 mmol)을 첨가하였다. 25℃까지 냉각시키면서, 혼합물을 여과하여 촉매를 제거한 후, 테트라히드로푸란(650 ㎖)을 첨가하고, 유기상을 분리하였다. 유기상을 증류로 부분적으로 농축시킨 후, 톨루엔(575 ㎖)을 첨가하였다. 톨루엔(690 ㎖)을 더 첨가하여 반응 부피를 유지하면서 증류를 지속하였다. 반응 혼합물을 3시간에 걸쳐 상온까지 냉각시키는 동안에, 생성물이 결정화되었다. 고체를 여과로 수거하고, 톨루엔(460 ㎖)으로 세정한 다음, 아세트산에틸(230 ㎖)로 세정한 후, 일정한 중량까지 45℃에서 진공 건조하여 표제 화합물(114.9 g, 83%)을 얻었다.

스펙트럼: (DMSO d₆), δ 1.434(s, 9H), 1.70 (m, 4H), 1.98 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.56 (m, 1H), 2.93 (m, 2H), 3.28 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 7.16 (m, 2H), 7.40 (m, 3H), 7.52 (m, 2H), 7.87 (d, 2H), 8.60 (s, 1H), 9.73 (s, 1H); 질 량 스펙트럼: M+H⁺504.

방법 7

tert -부틸 {2-[(4-{1-[(1,5-디메틸-1 H - 피라졸 -4-일) 메틸 ]피페리딘-4-일} 벤조일 )아미노] 페닐 } 카르바메이트

1,5-디메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드(114 mg, 0.92 mmol)를 디클로로메탄(6 ㎖) 중 tert-부틸 2-[(4-피페리딘-4-일벤조일)아미노]페닐카르바메이트(289 mg, 0.73 mmol)의 용액에 첨가하고, 아세트산(50 ㎕, 0.87 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 2.5시간 동안 교반하였다. 나트륨 트리아세톡시보로히드라이드(233 mg, 1.10 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 상온에서 상온에서 18시간 동안(하룻밤 동안) 교반하였다. 이어서, 중탄산나트륨 포화 수용액(10 ㎖)을 반응물에 첨가하고, 15분간 교반하였다. 유기상을 분리하고, 수성상을 디클로로메탄(10 ㎖)으로 재추출하였다. 조합된 유기물을 물로 세정하고, 황산마그네슘으로 건조하고, 건조할 때까지 증발시켜, 생성물을 무색의 검(308 mg, 84%)으로 얻고, 이를 더 정제하지 않고 사용하였다; 질량 스펙트럼: M+H⁺504.

Claims

하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염:

상기 화학식에서, R¹은 C₁ _- ₄알킬, C₃ _- ₄시클로알킬, C₁ _- ₄알콕시 및 C₃ _- ₄시클로알콕시에서 선택되는 하나 이상의 기로 임의로 치환되는 탄소 결합 피라졸 고리이다.
제1항에 있어서, 하기 화학식 (IA)로 표시되는 것인 화합물 또는 이의 약학적 허용 염:

상기 화학식에서, R²는 수소, C₁ _- ₄알킬 또는 C₃ _- ₄시클로알킬이고,

R³　및 R⁵는 수소, C₁ _- ₄알킬, C₃ _- ₄시클로알킬, C₁ _- ₄알콕시 또는 C₃ _- ₄시클로알콕시로부터 독립적으로 선택된다.
제1항에 있어서, 하기 화학식 (IB)로 표시되는 것인 화합물 또는 이의 약학적 허용 염:

상기 화학식에서, R², R³ 및 R⁵는 제2항에 정의된 바와 같다.
제2항 또는 제3항에 있어서, R²는 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 시클로프로필, 메틸시클로프로필 또는 시클로부틸인 화합물.
제2항 또는 제3항에 있어서, R²는 수소, 메틸 또는 에틸인 화합물.
제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R³ 및 R⁵는 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 시클로프로필, 메틸시클로프로필, 메톡시, 에톡시, 프로폭시 또는 시클로프로폭시에서 독립적으로 선택되는 것인 화합물.
제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R³ 및 R⁵는 수소, 메틸, 에틸 또는 메톡시에서 독립적으로 선택되는 것인 화합물.
제2항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R², R³　및 R⁵에서 선택되는 하나 이상의 기는 수소 이외의 것인 화합물.
제1항에 있어서,

N-(2-아미노페닐)-4-[1-(1H-피라졸-3-일메틸)피페리딘-4-일]벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(5-메톡시-1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(3-에틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1-메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1,3-디메틸-1H-피라졸-5-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1,3,5-트리메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4- 일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1,5-디메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1-에틸-5-메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1-에틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드;

N-(2-아미노페닐)-4-{1-[(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-일)메틸]피페리딘-4-일}벤즈아미드

중 어느 하나에서 선택되는 것인 화합물 또는 이의 약학적 허용 염.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적 허용 염을, 약학적 허용 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 약학적 조성물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 약제로 사용하기 위한 것인 화합물 또는 이의 약학적 허용 염.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 암 치료에 사용하기 위한 것인 화합물 또는 이의 약학적 허용 염.
인간과 같은 온혈 동물에서 HDAC 억제 효과의 생성에 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적 허용 염의 용도.
치료가 필요한 인간과 같은 온혈 동물에서 HDAC 억제 효과를 생성하는 방법으로서, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 유효량을 상기 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법.
인간과 같은 온혈 동물에서 세포 주기 억제(항 세포 증식) 효과의 생성에 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적 허용 염의 용도.
치료가 필요한 인간과 같은 온혈 동물에서 세포 주기 억제(항 세포 증식) 효과를 생성하는 방법으로서, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염의 유효량을 상기 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법.
치료가 필요한 인간과 같은 온혈 동물에서 암을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적 허용 염의 유효량을 상기 동물에 투여하는 것을 포함하는 방법.
암 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적 허용 염의 용도.
(a) 환원제의 존재 하에, 하기 화학식 (II)의 화합물과 하기 화학식 (III)의 화합물을 반응시키는 공정, 또는

(b) 적합한 염기의 존재 하에, 하기 화학식 (II)의 화합물과 하기 화학식 (IV)의 화합물을 반응시키는 공정, 및

그 후, 필요할 경우, 존재할 수 있는 임의의 잔류 보호기를 제거하는 공정

을 포함하는, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적 허용 염의 제조 방법:

(상기 화학식에서, 아닐린 부분은 적절히 보호될 수 있음)

(상기 화학식에서, R¹은 제1항에 정의된 바와 같음)

(상기 화학식에서, R¹은 제1항에 정의된 바와 같고, X는 반응기임).
(i) 적합한 염기의 존재 하에, 하기 화학식 (V)의 화합물과 하기 화학식 (VI)의 화합물을 반응시키는 공정, 또는

(ii) 적합한 염기의 존재 하에, 하기 화학식 (VII)의 화합물과 하기 화학식 (VIII)의 화합물을 반응시키는 공정, 및

그 후, 필요할 경우, 임의의 적합한 순서 또는 조합으로

(a) 테트라히드로피리딘으로부터 임의의 보호기를 제거하는 공정, 및/또는

(b) 테트라히드로피리딘을 피페리딘으로 환원시키는 공정, 및/또는

(c) 존재하는 임의의 잔류 보호기를 제거하는 공정

을 포함하는, 하기 화학식 (II)의 화합물의 제조 방법:

(상기 화학식에서, 아닐린은 적절히 보호될 수 있고, X는 반응기임)

(상기 화학식에서, M은 금속이고, L은 리간드이며, 정수 z는 0∼3이고, 테트 라히드로피리딘 고리는 보호될 수 있음)

(상기 화학식에서, 아닐린 및 테트라히드로피리딘은 적절히 보호될 수 있고, M, L 및 z는 상기 정의된 바와 같음)

(상기 화학식에서, X는 반응기임).
적합한 용매의 존재 하에, 하기 화학식 (IX)의 화합물과 하기 화학식 (X)의 화합물을 반응시켜, 하기 화학식 (XI)의 화합물을 형성하는 공정, 및

그 후

적합한 환원제 및/또는 적합한 환원 조건을 이용하여, 피리딘-4-일 고리를 피페리딘-4-일 고리로 환원시켜 하기 화학식 (XI)의 화합물을 하기 화학식 (II)의 화합물로 전환하는 공정, 및

임의로, 존재하는 임의의 잔류 보호기를 제거하는 공정

을 포함하는, 하기 화학식 (II)의 화합물의 제조 방법:

(상기 화학식에서, Q₁은 -OH, -Cl 또는 -O^-Q₂ ⁺(여기서 Q₂ ⁺는 양이온임)임)

(상기 화학식에서, 아미노기 중 하나는 보호될 수 있음)

(상기 화학식에서, 아닐린은 보호될 수 있음).