BRPI0615354A2 - conjugado de liberação de fármaco de ligação de receptor, composição farmacêutica que o compreende, bem como seu uso - Google Patents

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Abstract

CONJUGADO DE LIBERAçãO DE FáRMACO DE LIGAçãO DE RECEPTOR, COMPOSIçãO FARMACêUTICA QUE O COMPREENDE, BEM COMO SEU USO A presente invenção refere-se aos compostos, composições farmacêuticas e métodos para tratar populações de células patogênicas em um paciente. Os compostos descritos aqui incluem conjugados de uma piu- ralidade de fármacos citotóxicos e ligantes de ligação de receptor de vitamina. A pluralidade de fármacos pode ser os mesmos ou diferentes. Similarmente, os ligantes de ligação de receptor de vitamina podem ser os mesmos ou diferentes. Os conjugados também incluem um ligante que é formado de um ou mais ligantes espaçadores, ligantes de heteroátomo, e ligantes liberáveis.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "CONJUGADODE LIBERAÇAO DE FARMACO DE LIGAÇAO DE RECEPTOR, COMPOSI-ÇÃO FARMACÊUTICA QUE O COMPREENDE, BEM COMO SEU USO".
REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS DE PATENTE RELACIONADOS
Este pedido de patente reivindica o benefício sob 35 U.S.C.§ 119(e) do Pedido de Patente Provisório U.S. N0 60/709.950, depositadoem 19 de agosto de 2005, e Pedido de Patente Provisório U.S. N060/787.558, depositado em 30 de março de 2006, a totalidade das descri-ções dos mesmos é aqui incorporada por referência.
CAMPO TÉCNICO
A presente invenção se refere às composições e métodos para ouso em liberação de fármaco alvejada. Em particular, a invenção se refereaos conjugados de Iigante incluindo dois ou mais fármacos, e análogos ederivados dos mesmos, como conjugados de compostos de ligação de re-ceptor de vitamina e dois ou mais fármacos.
ANTECEDENTES
O sistema imune mamífero provê um meio para o reconhecimen-to e eliminação de células tumorais, outras células patogênicas, e patógenosestranhos invasores. Embora o sistema imune normalmente forneça umalinha forte de defesa, há muitas circunstâncias onde as células de câncer,outras células patogênicas, ou agentes infecciosos evadem uma respostaimune do hospedeiro e proliferam ou persistem com a patogenicidade con-comitante do hospedeiro. Agentes quimioterapêuticos e terapias de radiaçãoforam desenvolvidos para eliminar, por exemplo, neoplasmas replicativos.Porém, muitos dos agentes quimioterapêuticos correntemente disponíveis eregimes de terapia de radiação têm efeitos colaterais adversos porque elesnão só trabalham para destruir células patogênicas, mas também afetamcélulas normais do hospedeiro, como células do sistema hematopoético. Osefeitos colaterais adversos dos mesmos fármacos anticânceres da mesma-cam a necessidade pelo desenvolvimento de novas terapias seletivas para po-pulações de células patogênicas e com toxicidade do hospedeiro reduzida.
Investigadores desenvolveram protocolos terapêuticos para des-truir células patogênicas alvejando compostos citotóxicos para tais células.Muitos dos mesmos protocolos utilizam toxinas conjugadas com anticorposque ligam a antígenos únicos ou sobreexpressos pelas células patogênicasem uma tentativa para minimizar liberação da toxina em células normais.
Usando este método, certas imunotoxinas foram desenvolvidas consistindoem anticorpos direcionados para antígenos específicos em células patogêni-cas, os anticorpos que são ligados às toxinas como ricina, exotoxina dePseudomonas, toxina de Diptheria, e fator de necrose tumoral. Estas imuno-toxinas marcam células patogênicas, como células tumorais, carregando osantígenos específicos reconhecidos pelo anticorpo (Olsnes, S., Immunol.Today, 10, páginas. 291-295, 1989; Melby, E.L., Câncer Res., 53(8), pági-nas. 1755-1760, 1993; Better, M. D., Publicação Internacional de PCT NsWO 91/07418, publicado em 30 de maio de 1991).
Outro método para alvejar populações de células patogênicas,como células de câncer ou patógenos estranhos, em um hospedeiro é inten-sificar a resposta imune do hospedeiro contra as células patogênicas paraevitar a necessidade por administração de compostos que podem tambémexibir toxicidade independente do hospedeiro. Uma estratégia reportada pa-ra imunoterapia é ligar anticorpos, por exemplo, anticorpos multiméricos ge-neticamente modificados, à superfície de células tumorais para exibir a regi-ão constante dos anticorpos na superfície das células e assim induzir mortedas células tumorais através de vários processos mediados pelo sistemaimune (De Vita, V. T., Biologic Therapy of Câncer, 2- ed. Filadélfia, Lippin-cott, 1995; Soulillou, J. P., Patente U.S. Ns 5.672.486). Porém, estes méto-dos foram complicados pelas dificuldades em definir antígenos tumor-específicos.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Conjugados de Iigante de fármacos, e análogos e derivados dosmesmos, são descritos aqui. Os conjugados incluem Iigantes de ligação dereceptor celular que são covalentemente ligados a dois ou mais fármacosque podem ser alvejados para células. Os conjugados descritos aqui podemtambém incluir um Iigante polivalente para ligar os Iigantes aos fármacos.Em uma modalidade, um conjugado de liberação de fármaco deligação de receptor é descrito. O conjugado de liberação de fármaco com-preende um Iigante de um receptor de superfície celular, dois ou mais fár-macos, ou análogos ou derivados dos mesmos, e opcionalmente um Iigantepolivalente que pode ser em geral representado pela fórmula
(B)-(L)-(D)n
em que (B) representa uma porção de ligação de receptor; (D) representaum fármaco, ou análogo ou derivado do mesmo, a ser marcado para umacélula pela porção de ligação de receptor; (L) representa um Iigante poliva-lente, e η é um número inteiro maior que 1. O Iigante polivalente (L) podecompreender Iigantes múltiplos covalentemente ligados entre si. Por exem-plo, o Iigante polivalente (L) pode compreender um ou mais Iigantes espaça-dores (Is), e/ou Iigantes liberáveis (Ir), cada um conectado ao outro, e ao Ii-gante e ao fármaco, por um ou mais Iigantes de hèteroátomo (Ih). Estes vá-rios Iigantes podem ser selecionados e colocados em qualquer ordem paraconstruir o Iigante polivalente (L). Ilustrativamente, o Iigante polivalente (L)pode ser construído de um ou mais dos Iigantes bivalentes a seguir:
-(L)--(Ir)c--(Is)a--(Is)a-(Ir)c--(Ir)c-(Is)a--(Ih)b-(Ir)c--(Ir)c-(Ih)b--(lH)d-(lr)C-(lH)e--(Is)a-(IH)b-(Ir)c--(Ir)c-(In)b-(Is)a--(lH)d-(ls)a-(lr)C-(lH)e--(lH)d-(lr)C-(lS)a-(lH)e--(lH)d-(ls)a-(lH)b-(lr)C-(lH)e--(lH)d-(lr)C-(lH)b-(ls)a-(lH)e--(ls)a-(lr)C-(lH)b-<formula>formula see original document page 5</formula>
em que a, b, c, d, e e são números inteiros, como números inteiros na faixade 0 a cerca de 4, e (Is), (Ih), e (Ir) são Iigantes espaçadores, Iigantes liberá-veis, Iigantes de heteroátomo, respectivamente. Exemplos ilustrativos adi-cionais de Iigantes bivalentes que podem ser usados para construir os Iigan-tes polivalentes descritos aqui são descritos no Pedido de Patente U.S. N910/765.336 (também encontrado como publicação do Pedido de PatenteU.S. Ns US 2005/0002942 A1) e publicação internacional de PCT no.WO 2006/012527, a totalidade das revelações dos mesmos é aqui incorpo-rada por referência.
É para ser entendido que os Iigantes polivalentes podem conec-tar a porção de ligação de receptor aos dois ou mais fármacos em uma vari-edade de configurações estruturais, incluindo mas não limitadas às fórmulasgerais ilustrativas a seguir:
<formula>formula see original document page 5</formula>
onde B é o Iigante de ligação de receptor, cada um de (L1)1 (L2), e (L3) é umligante polivalente construído de um ou mais Iigantes espaçadores, liberá-veis, e/ou de heteroátomo, e cada um de (D1), D2, e D3 é um fármaco, ou umanálogo ou derivado do mesmo. Outras variações, incluindo fármacos adi-cionais, ou análogos ou derivados dos mesmos, Iigantes adicionais, e confi-gurações adicionais do arranjo de cada um de (B), (L), e (D), são tambémcontemplados aqui.
Em uma variação, mais de um Iigante de ligação de receptor éincluído nos conjugados de liberação de fármaco descritos aqui, incluindomas não limitados às fórmulas gerais ilustrativas a seguir:<formula>formula see original document page 6</formula>
onde cada B é um ligante de ligação de receptor, cada um de (L1), (L2), e(L3) é um ligante polivalente construído de um ou mais ligantes espaçadores,liberáveis, e/ou de heteroátomo, e cada um de (D1), D2, e D3 é um fármaco,ou um análogo ou derivado do mesmo. Outras variações, incluindo fármacosadicionais, ou análogos ou derivados dos mesmos, ligantes adicionais, econfigurações adicionais do arranjo de cada um de (B), (L), e (D), é tambémcontemplado aqui. Em uma variação, os ligantes de ligação de receptor sãopara o mesmo receptor, e em outra variação, os Iigantes de ligação de re-ceptor são para receptores diferentes.
Em uma modalidade ilustrativa dos conjugados de liberação defármaco descritos aqui, o ligante polivalente inclui pelo menos um liganteliberável (Ir). Em outra modalidade ilustrativa dos conjugados de liberação defármaco descritos aqui, o ligante polivalente inclui pelo menos dois ligantesliberáveis (lr)2- Em outro aspecto ilustrativo, o Iigante polivalente (L) incluipelo menos uns Iigantes liberáveis (Ir) que não seja um Iigante liberável dedissulfeto. Em outro aspecto ilustrativo, o ligante polivalente (L) tem pelomenos dois ligantes liberáveis (Ir) onde um ligante liberável não seja umligante liberável de dissulfeto. É apreciado que, quando mais de um Iiganteliberável for incluído no ligante polivalente, aqueles ligantes liberáveis podemser adjacentes. É também apreciado, que quando dois ligantes liberáveisforem adjacentes no ligante polivalente, os dois ligantes liberáveis podemcooperar para causar liberação do fármaco.
Em outra modalidade, o Iigante polivalente inclui pelo menos umligante espaçador que é um peptídeo formado de aminoácidos. Em um as-pecto, o peptídeo inclui aminoácidos de ocorrência natural, e estereoisôme-ros dos mesmos. Em outro aspecto, o peptídeo é formado apenas de ami-noácidos de ocorrência natural, e estereoisômeros dos mesmos.
Os Iigantes descritos aqui em geral incluem Iigantes de recepto-res de superfície celular. Ligantes ilustrativos úteis nos conjugados descritosaqui incluem, mas não são limitados a, vitaminas, e outras porções que Ii-gam a um receptor de vitamina, transportador, ou outra proteína apresenta-da na superfície que especificamente liga vitaminas, ou análogos ou deriva-dos das mesmas, Iigantes de peptídeo identificados de triagem de biblioteca,peptídeos específicos para célula tumoral, aptâmeros específicos para célulatumoral, carboidratos específicos para célula tumoral, anticorpos monoclo-nais ou policlonais específicos para célula tumoral, fragmentos de anticorposde Fab ou scFv (isto é, uma região variável de cadeia simples) como, porexemplo, um fragmento de Fab de um anticorpo especificamente direciona-do para EphA2 ou outras proteínas expressas ou exclusivamente acessíveisem células cancerosas metastáticas, moléculas orgânicas pequenas deriva-das de bibliotecas combinatórias, fatores de crescimento, como EGF, FGF,insulina, e fatores de crescimento semelhantes à insulina, e polipeptídeoshomólogos, somatostatina e seus análogos, transferrina, complexos de Iipo-proteína, sais biliares, selectinas, hormônios de esteróide, peptídeos con-tendo Arg-Gly-Asp, retinóides, várias Galectinas, Iigantes de receptor de δ-opióide, Iigantes de receptor de colecistocinina A, Iigantes específicos parareceptores de AT1 ou de AT2 de angiotensina, Iigantes de receptor λ ativa-dos por proliferador de peroxissoma, antibióticos de β-lactama como penici-lina, moléculas orgânicas pequenas incluindo fármacos antimicrobianos, eoutras moléculas que especificamente ligam de preferência a um receptorexpresso na superfície de células tumorais ou em um organismo infeccioso,fármacos antimicrobianos e outros projetados para ajustar na bolsa de liga-ção de um receptor particular com base na estrutura de cristal do receptorou outra proteína de superfície de célula, Iigantes de antígenos de tumor ououtras moléculas expressas preferencialmente na superfície de células tu-morais, ou fragmentos de quaisquer das mesmas moléculas. Antígenos tu-mor-específicos que funcionariam como um sítio de ligação para conjugadosde ligante-fármaco incluem epítopos extracelulares dos membros da famíliade proteínas Ephrin, como EphA2. Expressão de EphA2 é restrita às junçõesde célula-célula em células normais, mas EphA2 é distribuída na superfícieda célula inteira em células tumorais metastáticas. Desse modo, EphA2 emcélulas metastáticas seria acessível ligar, por exemplo, a um fragmento deFab de um anticorpo conjugado com um fármaco, ou análogo ou derivado domesmo, enquanto que a proteína não seria acessível para ligar ao fragmentode Fab em células normais, resultando em um conjugado de ligante-fármacoespecífico para células cancerosas metastáticas.
Os fármacos, e vários análogos e derivados dos mesmos, des-critos aqui são em geral fármacos para eliminar, matar, interferir, e/ou dimi-nuir o crescimento de uma população de células patogênicas, incluindo a-gentes infecciosos, cânceres, tumores, e similares. Também, os fármacos, eos vários análogos e derivados dos mesmos, úteis nos conjugados descritosaqui podem ter uma ampla variedade de mecanismos de ação, incluindomas não limitada a agentes de alquilação, inibidores de microtúbulo, incluin-do aqueles que estabilizam e/ou desestabilizam a formação de microtúbulo,incluindo agentes de beta-tubulina, inibidores dependentes de ciclina cinase(CDK) como CDKNIa. CDKNIb, e outros, inibidores de topoisomerase, ini-bidores de síntese protéica, inibidores de proteína cinase, incluindo Ras,Raf, PKC, PI3K, e inibidores semelhantes, inibidores de transcrição, antifola-tos, bloqueadores de proteína de choque térmico, e similares.
Em outra modalidade, uma composição farmacêutica é descrita.A composição farmacêutica compreende um conjugado de liberação de fár-maco descrito aqui em combinação com um veículo, excipiente, e/ou diluen-te farmaceuticamente aceitável para este.
Em outra modalidade, um método para eliminar uma populaçãode células patogênicas em um animal hospedeiro que abriga a população decélulas patogênicas é descrito. Em um aspecto ilustrativo, os membros dapopulação de célula patogênica têm um sítio de ligação acessível para umaporção de ligação de receptor, ou o análogo ou derivado do mesmo, e cujosítio de ligação é exclusivamente expresso, sobreexpresso, ou preferencial-mente expresso pelas células patogênicas. O método inclui a etapa de ad-ministrar ao hospedeiro um conjugado de liberação de fármaco descrito a-qui, ou uma composição farmacêutica do mesmo, como descrita aqui.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
Figura 1A mostra a afinidade de ligação relativa do Exemplo 9(0,24) versus ácido fólico (·, 1,0) em receptores de ácido fólico.
Figura 1B mostra a atividade do Exemplo 9 na incorporação de3H-timidina em células KB com (o) e sem (·) ácido fólico em excesso; IC50 doExemplo 9 é cerca de 58 nM.
Figura 2 mostra a afinidade de ligação relativa para o Exemplo11 (0,21) versus ácido fólico (·, 1,0) em receptores de ácido fólico.
Figura 3 mostra a atividade do Exemplo 11 (conjugado de multi-fármaco) na incorporação de 3H-timidina com (o) e sem (·) ácido fólico emexcesso; IC5O do Exemplo 11 = 5 nM.
Figura 4 mostra a atividade citotóxica in vitro do Exemplo 11 (a)em três linhagens de células tumorais diferentes (KB, 4T-1cl2, e ID8-cl15)comparadas ao Exemplo 11 + ácido fólico em excesso (b).
Figura 5A mostra a atividade do Exemplo 11 em 1 μηιοΙ/kg deTIW (6 doses) (·), e 2 μηΊθΙ/kg de TIW (6 doses) (T) em tumores de M109FR-positivos em camundongos Balb/c versus controles sem tratar .
Figura 5B mostra a ausência de um efeito pelo Exemplo 11 a 1μηιοΙ/kg de TIW (6 doses) (·), e 2 μπιοΙε/Ι^ de TIW (6 doses) (T) no pesode camundongos Balb/c versus controles sem tratar ().
Figura 6 mostra a atividade do Exemplo 11 a 1 pmol/kg de TIWdurante 2 semanas (6 doses) em tumores de KB FR-positivos com ( ) e sem(■) 40 μηΊθΙ/kg de EC20 (complexo rênio) versus controles sem tratar (·);Exemplo 11 sozinho mostrou 5/5 respostas completas; Exemplo 11 + EC20mostrou 0/5 respostas completas.Figura 7 mostra a ausência de um efeito através do Exemplo 11a 1 μιηοΙ/kg de TIW durante 2 semanas (6 doses) no peso de camundongosnu/nu com ( ) e sem (■) 40 μmols/kg de EC20 (complexo de rênio) versuscontroles sem tratar (·).
Figura 8 mostra a atividade do Exemplo 11 a 1 μmol/kg de TIWdurante 2 semanas (6 doses) em s.c. tumores de KB humano de xenoenxer-to implantados em camundongos desprotegidos com (b) e sem (c) 40 μ/nols/kg de EC20 (complexo de rênio) versus controles sem tratar (a); Exemplo 11sozinho mostrou 5/5 respostas completas; Exemplo 11 + EC20 mostrou 0/5respostas completas.
Figura 9 mostra a ausência de um efeito através do Exemplo 11a 1 μιηοΙ/kg de TIW durante 2 semanas (6 doses) no peso de camundongosdesprotegidos com (b) e sem (c) 40 μιτιοίε^ de EC20 (complexo de rênio)versus controles sem tratar (a).
Figura 10 mostra a atividade do Exemplo 11 a 2 μηιο^^ deTIW (e) em tumores humanos positivos de receptor de folato em camundon-gos desprotegidos quando comparado a uma mistura dos fármacos de basenão-conjugada, mitomicina C e monoidrazida de desacetilvinblastina, a 0,5μmol/kg de TIW (b), 1 μmol/kg de TIW (c), e 2 μmols/kgde TIW (d), e com-parado aos controles sem tratar (a).
Figura 11 mostra a ausência de um efeito através do Exemplo11 a 2 μmol/kg de TIW durante 2 semanas (e) no peso de camundongosdesprotegidos comparados aos controles (a). Perda de peso ocorreu em to-das as três doses da mistura dos fármacos de base não-conjugada, mitomi-cina C e monoidrazida de desacetilvinblastina (0,5 μmol/kg de TIW (b),1 μmol/kg de TIW (c), 2 μιτιοΙ/kg de TIW (d)). A dose alta (d) foi descontinua-da antes do dia 20.
Figura 12 mostra a atividade do Exemplo 11 em três tamanhosde tumores de KB grandes, 250 mm3 (b), 500 mm3 (c), e 750 mm3 (d) emcamundongos nu/nu a 2 μmols/kg de TIW durante 2 semanas comparadosaos controles (a).
Figura 13 mostra a atividade do Exemplo 11 (e) comparada aosconjugados de apenas a mitomicina de fármaco simples C (b), monoidrazidade desacetilvinblastina (c), ou uma mistura daqueles dois conjugados defármaco simples (d), comparados aos controles (a).
Figura 14 mostra a ausência da atividade do Exemplo 11 (b) a 2μmοls/kg de TIW durante duas semanas de tratamento em tumores de 4T1negativo de receptor de folato em camundongos Bablb/c, comparados aoscontroles (a). Os dados na figura 14 mostram que o Exemplo 11 (b) não temefeito nos tumores comparados aos controles (a) devido à ausência de re-ceptores de folato naqueles tumores.
Figura 15 mostra a atividade do Exemplo 12 na incorporação de3H-timidina em células de HB FR-positivas
DESCRIÇÃO DETALHADA
Conjugados de Iigante de fármacos, e análogos e derivados dosmesmos, são descrito aqui. Os conjugados incluem Iigantes de ligação dereceptor celular, incluindo Iigantes de receptores de superfície de célula quesão covalentemente ligados a dois ou mais fármacos que podem ser marca-dos para células, incluindo células patogênicas. Os conjugados descritosaqui podem também incluir um Iigante polivalente para ligar os Iigantes aosfármacos.
Conjugados de liberação de fármaco de Iigante de receptorcompreendendo uma porção de ligação de receptor (B), um Iigante poliva-lente (L), e dois ou mais fármacos, ou análogos de fármaco ou derivados defármaco, (D) são descritos, onde η é maior ou igual a 2. Nos conjugados deliberação descritos aqui, a porção de ligação de receptor (B) e os dois oumais fármacos (D)n são cada um ligados ao Iigante polivalente (L), atravésde um Iigante de heteroátomo independentemente selecionado (lH). O Iigantepolivalente (L) compreende um ou mais Iigantes espaçadores, Iigantes deheteroátomo, e Iigantes liberáveis, e combinações dos mesmos, em qual-quer ordem.
Em uma modalidade, um conjugado de liberação de fármaco deligação de receptor é descrito. O conjugado de liberação de fármaco com-preende um Iigante1 como um Iigante de um receptor de superfície de célula,dois ou mais fármacos, ou análogos ou derivados dos mesmos, e opcional-mente um Iigante polivalente que pode ser em geral representado pela fór-mula
(B)-(L)-(D)n
em que (B) representa uma porção de ligação de receptor; (D) representaum fármaco, ou análogo ou derivado do mesmo, a ser marcado para umacélula pela porção de ligação de receptor; (L) representa um ligante poliva-lente, e η é um número inteiro maior que 1. O ligante polivalente (L) podecompreender ligantes múltiplos covalentemente ligados entre si. Por exem-plo, o ligante polivalente (L) pode compreender um ou mais Iigantes espaça-dores (Is), e/ou ligantes liberáveis (Ir), cada um conectado ao outro, e ao li-gante e ao fármaco, por um ou mais Iigantes de heteroátomo (lH). Estes vá-rios ligantes podem ser selecionados e colocados em qualquer ordem paraconstruir o Iigante polivalente (L).
Ilustrativamente, o ligante polivalente (L) pode ser construído deum ou mais dos ligantes bivalentes a seguir:
-(L)--(Ir)c--(Is)a-
-(ls)a-(lr)c--(Ir)C-(Is)a-
-(lH)b-(lr)C--(lr)c-(lH)b--(lH)d-(lr)C-(lH)e--(ls)a-(lH)b-(lr)C--(lr)C-(lH)b-(ls)a--(lH)d-(ls)a-(lr)C-(lH)e--(lH)d-(lr)C-(ls)a-(lH)e--(lH)d-(ls)a-(lH)b-(lr)C-(lH)e--(lH)d-(lr)C-(lH)b-(ls)a-(lH)e-
em que a, b, c, d, e e são números inteiros, como números inteiros na faixade O a cerca de 4, e (Is), (lH), e (Ir) são os ligantes espaçadores, ligantes Iibe-ráveis, Iigantes de heteroátomo, respectivamente. Exemplos ilustrativos adi-cionais de Iigantes bivalentes que podem ser usados para construir os Iigan-tes polivalentes descritos aqui são descritos no Pedido U.S. Ns 10/765.336(também encontrado como publicação de pedido de Patente U.S. NeUS 2005/0002942 A1) e publicação internacional de PCT Ne W02006/012527, a totalidade das revelações dos mesmos é aqui incorporada porreferência.
Será entendido que os Iigantes polivalentes podem conectar aporção de ligação de receptor a dois ou mais fármacos em uma variedadede configurações estruturais, incluindo, mas não limitadas às fórmulas geraisilustrativas a seguir:
<formula>formula see original document page 13</formula>
onde B é o Iigante de ligação de receptor, cada um de (L1), (L2)1 e (L3) é umligante polivalente construído de um ou mais Iigantes espaçadores, liherá-veis, e/ou de heteroátomo, e cada um de (D1), D2, e D3 é um fármaco, ou umanálogo ou derivado do mesmo. Outras variações, incluindo fármacos adi-cionais, ou análogos ou derivados dos mesmos, Iigantes adicionais, e confi-gurações adicionais do arranjo de cada um de (B), (L), e (D), são tambémcontemplados aqui.
Em uma variação, mais de um Iigante de ligação de receptor sãoinclusos nos conjugados de liberação de fármaco descritos aqui, incluindomas não limitados às fórmulas gerais ilustrativas a seguir:<formula>formula see original document page 14</formula>
onde cada B é um ligante de ligação de receptor, cada um de (L1)1 (L2)1 e(L3) é um ligante polivalente construído de um ou mais ligantes espaçadores,liberáveis, e/ou de heteroátomo, e cada um de (D1), D2, e D3 é um fármaco,ou um análogo ou derivado do mesmo. Outras variações, incluindo fármacosadicionais, ou análogos ou derivados dos mesmos, ligantes adicionais, econfigurações adicionais do arranjo de cada um de (B), (L), e (D), são tam-bém contempladas aqui. Em uma variação, os ligantes de ligação de recep-tor são para o mesmo receptor, e em outra variação, os ligantes de ligaçãode receptor são para receptores diferentes. É apreciado, e como mostradonas fórmulas acima que mais que um ligante polivalente pode ser incluídonos conjugados de liberação de fármaco descritos aqui. É entendido que emum aspecto, o número de ligantes é selecionado dependendo da configura-ção dos ligantes de ligação de receptor, e dos fármacos.
Por exemplo, em uma modalidade ilustrativa da maneira em queligantes são covalentemente montado para formar o ligante polivalente, ouparte do ligante polivalente, ligantes de heteroátomo, ligantes espaçadores,e ligantes liberáveis são conectados para formar um grupo polivalente dafórmula:
<formula>formula see original document page 14</formula>onde a fórmula pode também ser representada como
<formula>formula see original document page 15</formula>
em que (Is)1 é o tripeptídeo Asp-Asp-Asp, (Is) é Cys, (Ir)1 é S-S1 (ls>3 éCH2CH2, (Ih)1 é O, (Ir)2 é C(O)NHNH1 (Is)4 é ω-Lys, (Is)5 é C(O)CH2CH2, (Ir)3 éS-S1 e (Is)6 é CH2CH2.
Os ligantes de receptores de superfície de célula úteis nos con-jugados descritos aqui incluem, mas não são limitados a, vitaminas, e outrasporções que ligam a um receptor de vitamina, transportador, ou outra proteí-na apresentada na superfície que especificamente liga vitaminas, ou análo-go ou derivado das mesmas, Iigantes de peptídeo identificados das triagensde biblioteca, peptídeos específicos para célula tumoral, aptâmeros específi-cos para célula tumoral, carboidratos específicos para célula tumoral, anti-corpos monoclonais ou policlonais específicos para célula tumoral, fragmen-tos de Fab ou scFv (isto é, uma região variável de cadeia simples) de anti-corpos como, por exemplo, um fragmento de Fab de um anticorpo especifi-camente direcionado para EphA2 ou outras proteínas expressas ou exclusi-vamente acessíveis em células cancerosas metastáticas, moléculas orgâni-cas pequenas derivadas de bibliotecas combinatórias, fatores de crescimen-to, como EGF, FGF, insulina, e fatores de crescimento semelhantes à insuli-na, e polipeptídeos homólogos, somatostatina e seus análogos, transferrina,complexos de lipoproteína, sais biliares, selectinas, hormônios de esteróide,peptídeos contendo Arg-Gly-Asp, retinóides, vários Galectinas, Iigantes dereceptor δ-opióide, Iigantes de receptor de colecistocinina A, Iigantes especí-ficos para receptores de AT1 ou AT2 de angiotensina, Iigantes de receptor λativado por proliferador de peroxissoma, antibióticos de β-lactama como pe-nicilina, moléculas orgânicas pequenas incluindo fármacos antimicrobianos,e outras moléculas que especificamente ligam preferencialmente a um re-ceptor expresso na superfície de células tumorais ou em um organismo in-feccioso, fármacos antimicrobianos e outros projetados para ajustar na bolsade ligação de um receptor particular com base na estrutura de cristal do re-ceptor ou outra proteína de superfície de célula, Iigantes de antígenos detumor ou outras moléculas expressas preferencialmente na superfície defragmentos de células tumorais de quaisquer das mesmas moléculas. Umexemplo de um antígeno tumor-específico que poderia funcionar como umsítio de ligação para conjugados de ligante-fármaco, ou análogo ou derivadodo mesmo, incluem epítopos extracelulares de um membro da família dasproteínas de Ephrin, como EphA2. Expressão de EphA2 é restrita às junçõesde célula-célula em células normais, mas EphA2 é distribuída na superfíciecelular inteira em células tumorais metastáticas. Desse modo, EphA2 emcélulas metastáticas seria acessível para ligar, por exemplo, um fragmentode Fab de um anticorpo conjugado a um fármaco, ou análogo ou derivadodo mesmo, enquanto que a proteína não seria acessível para ligar ao frag-mento de Fab em células normais, resultando em um conjugado de ligante-fármaco específico para células cancerosas metastáticas.
Em uma modalidade, a porção de ligação de receptor é uma vi-tamina, ou um análogo ou derivado de ligação de receptor de vitamina damesma, como vitaminas e análogos e derivados dos mesmos que são capa-zes de ligar receptores de vitamina.
As vitaminas que podem ser usadas de acordo com os métodose compostos descritos aqui incluem carnitina, inositol, ácido lipóico, piridoxal,ácido ascórbico, niacina, ácido pantotênico, ácido fólico, riboflavina, tiamina,biotina, vitamina B12, vitaminas A, D, E e K, outras moléculas de vitaminarelacionadas, análogos e derivados das mesmas, e combinações das mes-mas. Estas vitaminas, e seus análogos e derivados de ligação de "receptor,constituem entidades alvejantes ilustrativas que podem ser acopladas comos compostos de fármaco, ou seus análogos ou derivados, pelos Iigantespolivalentes (L) descritos aqui para fazer conjugados de liberação de fárma-co.
Em um aspecto ilustrativo, a vitamina pode ser ácido fólico, umanálogo de ácido fólico, ou outra molécula de ligação de receptor de folato.Exemplares de análogos de folato que podem ser usados incluem ácido folí-nico, ácido pteroilpoliglutâmico, ácido pteróico e outros derivados de amino-ácido dos mesmos, e pteridinas de ligação de receptor de folato como tetrai-dropterinas, diidrofolatos, tetraidrofolatos, e seus análogos de deaza e dide-aza. Os termos análogos de "deaza" e "dideaza" referem-se aos análogosreconhecidos na técnica que têm um átomo de carbono substituído por umou dois átomos de nitrogênio na estrutura do ácido fólico de ocorrência natu-ral. Por exemplo, os análogos de deaza incluem os análogos de 1-deaza, 3-deaza, 5-deaza, 8-deaza, é 10-deaza. Os análogos de dideaza incluem, porexemplo, análogos de 1,5-dideaza, 5,10-dideaza, 8,10-dideaza, e 5,8-didea-za. Os análogos de ácido fólico anteriores são convencionalmente denomi-nados "folatos", refletindo sua capacidade para ligar aos receptores de fola-to. Outros análogos de ligação de receptor de folato incluem aminopterina,ametopterina (metotrexato), N10-metilfolato, 2-deamino-hidroxifolato, análo-gos de deaza como 1-deazametopterina ou 3-deazametopterina, e ácido3',5'-dicloro-4-amino-4-deóxi-N10-metilpteroilglutâmico (diclorometotrexato).Outros Iigantes adequados capazes de ligar a receptores de folato para ini-ciar transporte endocitótico mediado por receptor do conjugado de liberaçãode fármaco incluem anticorpos para o receptor de folato. Conseqüentemen-te, em um aspecto ilustrativo, um composto de vinca no complexo com umanticorpo para um receptor de folato pode ser usado para desencadeartransporte de transmembrana do complexo.
Modalidades ilustrativas de análogos e/ou derivados de vitaminatambém incluem análogos e derivados de biotina como biocitina, sulfóxidode biotina, oxibiotina e similares compostos de ligação de receptor de bioti-na, e outros. É apreciado que análogos e derivados das outras vitaminasdescritas aqui são também contemplados aqui.
Qualquer forma dos conjugados descritos é contemplada aqui, eé determinada pela maneira em que os fármacos, porção de ligação de re-ceptor, e vários Iigantes polivalentes estão conectados. Em um aspecto, aforma tridimensional geral dos conjugados aqui descritos é linear. Em outroaspecto, a forma tridimensional geral dos conjugados aqui descritos é emforma de "Y" ou "T". Em outro aspecto, a forma tridimensional geral dos con-jugados aqui descritos é em forma de "X" ou em forma de cruz. Em outra.Em uma modalidade ilustrativa dos conjugados de liberação defármaco descritos aqui, o Iigante polivalente inclui pelo menos um Iiganteliberável (Ir). Em outra modalidade ilustrativa dos conjugados de liberação defármaco descritos aqui, o Iigante polivalente inclui pelo menos dois Iigantesliberáveis (Ir)2. Em outro aspecto ilustrativo, o Iigante polivalente (L) incluipelo menos uns Iigantes liberáveis (Ir) que não seja um Iigante liberável dedissulfeto. Em outro aspecto ilustrativo, o Iigante polivalente (L) tem pelomenos dois Iigantes liberáveis (Ir)2 onde um Iigante liberável não seja umligante liberável de dissulfeto. É apreciado que, quando mais de um Iiganteliberável forem incluídos no Iigante polivalente, aqueles Iigantes liberáveispodem ser adjacentes. E também apreciado que quando dois Iigantes libe-ráveis forem adjacentes no Iigante polivalente, os dois Iigantes liberáveispodem cooperar para causar liberação do fármaco.
O termo "ligante liberável" como aqui usado, e também conheci-do como ligante clivável, refere-se a um ligante que inclui pelo menos umaligação que pode ser quebrada sob condições fisiológicas (por exemplo,uma ligação pH-lábil, ácido-lábil, oxidativamente-lábil, ou enzima-lábil). De-veria ser apreciado que tais condições fisiológicas que resultam na quebrade ligação incluem reações de hidrólise química padrões que ocorrem, porexemplo, em pH fisiológico, ou como resultado de compartimentalização emuma organela celular como um endossoma tendo um pH inferior que pH ci-tosólico.
É entendido que uma ligação clivável pode conectar dois átomosadjacentes dentro do ligante liberável e/ou conectar outros Iigantes ou (B)e/ou (D), como descritos aqui, a qualquer uma ou ambas as extremidadesdo ligante liberável. No caso onde uma ligação clivável conectar dois átomosadjacentes dentro do ligante liberável, seguindo quebra da ligação, o liganteliberável é quebrado em dois ou mais fragmentos. Alternativamente, no casoonde uma ligação clivável estiver entre o ligante liberável e outra porção,como um ligante de heteroátomo, um ligante espaçador, outro ligante liberá-vel, o fármaco, ou análogo ou derivado do mesmo, ou a vitamina, ou análo-go ou derivado do mesmo, seguindo quebra da ligação, o ligante liberável éseparado da outra porção.
A Iabilidade da ligação clivável pode ser ajustada, por exemplo,por alterações substitucionais na ou próxima da ligação clivável, como inclu-indo ramificação alfa adjacente a uma ligação de dissulfeto clivável, aumen-tando a hidrofobicidade dos substituintes em silício em uma porção tendouma ligação de silício-oxigênio que pode ser hidrolisada, grupos alcóxi dehomologação que formam parte de um cetal ou acetal que pode ser hidroli-sado, e similares.
Mecanismos ilustrativos para clivagem dos Iigantes bivalentesdescritos aqui incluem os seguintes mecanismos de fragmentação 1,4 e 1,6
<formula>formula see original document page 19</formula>
onde X é um nucleófilo exógeno ou endógeno, glutationa, ou agente biorre-dutor, e similares, e qualquer um de Z ou Z' é a vitamina, ou análogo ou de-rivado da mesma, ou o fármaco, ou análogo ou derivado do mesmo, ou umaporção de vitamina ou de fármaco junto com outras porções do Iigante poli-valente. É para ser entendido que embora os mecanismos de fragmentaçãoacima sejam descritos como mecanismos combinados, qualquer número deetapas distintas pode ocorrer para realizar a última fragmentação do Iigantepolivalente para os produtos finais mostrados. Por exemplo, é apreciado quea clivagem de ligação pode também ocorrer por eliminação catalisada porácido da porção de carbamato, que pode ser anquimericamente assistidapela estabilização fornecida pelo grupo arila do enxofre beta ou dissulfetoilustrado nos exemplos acima. Naquelas variações da mesma modalidade, oIigante liberável é a porção de carbamato. Alternativamente, a fragmentaçãopode ser iniciada por um ataque nucleofílico no grupo dissulfeto, fazendo aclivagem formar um tiolato. O tiolato pode intermolecularmente deslocar umácido carbônico ou porção de ácido carbâmico e formar o tiaciclopropanocorrespondente. No caso dos Iigantes polivalentes contendo benzila, se-guindo um rompimento ilustrativo da ligação de dissulfeto, o fragmento detiolato de fenila resultante pode também liberar um ácido carbônico ou por-ção de ácido carbâmico formando um intermediário estabilizado por resso-nância. Em qualquer um dos mesmos casos, a natureza liberável dos Iigan-tes polivalentes ilustrativos descritos aqui pode ser percebida por qualquermecanismo que possa ser relevante às presentes condições químicas, me-tabólicas, fisiológicas, ou biológicas.
Outros mecanismos ilustrativos para clivagem de ligação do Ii-gante liberável incluem clivagem assistida com oxônio como segue:onde Z é a vitamina, ou análogo ou derivado da mesma, ou o fármaco, ouanálogo ou derivado do mesmo, ou cada um é uma porção de vitamina oude fármaco junto com outras porções do Iigante polivalente, como um fárma-co ou porção de vitamina incluindo um ou mais Iigantes espaçadores, Iigan-tes de heteroátomo, e/ou outros Iigantes liberáveis. Nesta modalidade, elimi-nação catalisada por ácido do carbamato conduz à liberação de CO2 e aporção contendo nitrogênio ligada a Z, e a formação de um cátion de benzilaque pode ser capturado através de água ou qualquer outra base de Lewis.
Outro mecanismo ilustrativo envolve um arranjo dos Iigantes Ii-beráveis, espaçadores e de heteroátomo em um tal modo que subseqüenteà clivagem de uma ligação no Iigante polivalente, os grupos funcionais libe-rados quimicamente ajudam na quebra ou clivagem das ligações adicionais,também denominada clivagem ou quebra assistida anquimérica. Uma moda-lidade ilustrativa de um tal Iigante polivalente ou porção do mesmo incluicompostos tendo a fórmula:<formula>formula see original document page 21</formula>onde X é um heteroátomo, como nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, que η éum número inteiro selecionado de 0, 1, 2, e 3, R é hidrogênio, ou um substi-tuinte, incluindo um substituinte capaz de estabilizar uma carga indutivamen-te positiva ou por ressonância no anel de arila, como alcóxi, e outros, equalquer um de Z ou Z' é a vitamina, ou análogo ou derivado da mesma, ouo fármaco, ou análogo ou derivado do mesmo, ou uma porção de vitaminaou de fármaco junto com outras porções do Iigante polivalente. É apreciadoque outros substituintes podem estar presentes no anel de arila, no carbonode benzila, no nitrogênio de carbamato, no ácido alcanóico, ou na ligação demetileno, incluindo mas não limitados a hidróxi, alquila, alcóxi, alquiltio, halo,e similares. Clivagem assistida pode incluir mecanismos que envolvem in-termediários de benzílio, intermediários de benzina, ciclização de lactona,intermediários de oxônio, beta-eliminação, e similares. É também apreciadoque, além da fragmentação subseqüente à clivagem do Iigante liberável, aclivagem inicial do Iigante liberável pode ser facilitada por um mecanismoanquimericamente assistido.
Nesta modalidade, o ácido hidroxialcanóico, que pode ciclizar,facilita a clivagem da ligação em ponte de metileno, por exemplo, por um íonde oxônio, e facilita a clivagem de ligação ou fragmentação subseqüenteapós clivagem de ligação do Iigante liberável. Alternativamente, clivagemassistida com íon de oxônio catalisada por ácido da ligação em ponte de me-tileno pode começar uma cascata de fragmentação do mesmo Iigante poliva-lente ilustrativo, ou fragmento do mesmo. Alternativamente, hidrólise catali-sada por ácido do carbamato pode facilitar a eliminação beta do ácido hidro-xialcanóico que pode cicliza e facilita a clivagem de ligação em ponte de me-tileno, por exemplo, por um íon de oxônio. É apreciado que outros mecanis-mos químicos de quebra de ligação ou clivagem sob as condições metabóli-cas, fisiológicas, ou celulares descritas aqui podem iniciar uma tal cascatade fragmentação. É apreciado que outros mecanismos químicos de quebrade ligação ou clivagem sob as condições metabólicas, fisiológicas, ou celula-res descritas aqui podem iniciar uma tal cascata de fragmentação.
Em uma modalidade, os ligantes polivalentes descritos aqui sãocompostos das fórmulas a seguir
<formula>formula see original document page 22</formula>
onde η é um número inteiro selecionado de 1 a cerca de 4; Ra e Rb são cadaum independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio ealquila, incluindo alquila inferior como C1-C4 alquila que é opcionalmente ra-mificada; ou Ra e Rb são considerados juntos com o átomo de carbono liga-do para formar um anel carbocíclico; R é um grupo alquila opcionalmentesubstituída, um grupo acila opcionalmente substituída, ou um grupo de pro-teção de nitrogênio adequadamente selecionado; e (*) indica pontos de liga-ção para o fármaco, vitamina, agente de imageamento, agente diagnóstico,outros ligantes polivalentes, ou outras partes do conjugado.
Em outra modalidade, os ligantes polivalentes descritos aqui in-cluem compostos das fórmulas a seguir
<formula>formula see original document page 22</formula>
onde m é um número inteiro selecionado de 1 a cerca de 4; R é um grupoalquila opcionalmente substituída, um grupo acila opcionalmente substituída,ou um grupo de proteção de nitrogênio adequadamente selecionado; e (*)indica pontos de ligação para o fármaco, vitamina, agente de imageamento,agente diagnóstico, outros ligantes polivalente, ou outras partes do conjugado.
Em outra modalidade, os ligantes polivalentes descritos aqui in-cluem compostos das fórmulas a seguir<formula>formula see original document page 23</formula>
onde m é um número inteiro selecionado de 1 a cerca de 4; R é um grupoalquila opcionalmente substituída, um grupo acila opcionalmente substituída,ou um grupo de proteção de nitrogênio adequadamente selecionado; e (*)indica pontos de ligação para o fármaco, vitamina, agente de imageamento,agente diagnóstico, outros Iigantes polivalente, ou outras partes do conjuga-do.
Em outra modalidade, os Iigantes liberáveis, espaçadores, e deheteroátomo podem ser dispostos em um tal modo que subseqüente à cliva-gem de uma ligação no Iigante polivalente, os grupos funcionais liberadosquimicamente ajudam na quebra ou clivagem de ligações adicionais, tam-bém denominada clivagem ou quebra assistida anquimérica. Uma modalida-de ilustrativa de um tal Iigante polivalente ou porção do mesmo inclui com-postos tendo a fórmula:
<formula>formula see original document page 23</formula>
onde X é um heteroátomo, como nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, que η éum número inteiro selecionado de O, 1, 2, e 3, R é hidrogênio, ou um substi-tuinte, incluindo um substituinte capaz de estabilizar uma carga indutivamen-te positiva ou por ressonância no anel de arila, como alcóxi, e outros, e osímbolo O indica pontos de ligação para Iigantes espaçadores, de heteroá-tomo, ou liberáveis adicionais que formam o Iigante polivalente, ou alternati-vãmente para ligação do fármaco, ou análogo ou derivado do mesmo, ou davitamina, ou análogo ou derivado da mesma. É apreciado que outros substi-tuintes podem estar presentes no anel de arila, no carbono de benzila, noácido alcanóico, ou na ligação de metileno, incluindo mas não limitados ahidróxi, alquila, alcóxi, alquiltio, halo, e outros. Clivagem assistida pode inclu-ir mecanismos que envolvem intermediários de benzílio, intermediários debenzina, ciclização de lactona, intermediários de oxônio, beta-eliminação, eoutros. É também apreciado que, além da fragmentação subseqüente à cli-vagem do Iigante liberável, a clivagem inicial do Iigante liberável pode serfacilitada por um mecanismo anquimericamente assistido.
Em outra modalidade, o ligante polivalente inclui ligantes de he-teroátomo, Iigantes espaçadores, e ligantes liberáveis conectados para for-mar um grupo 3-tiossuccinimid-1-ilalquiloximetilóxi polivalente, ilustrado pelafórmula a seguir,
onde η é um número inteiro de 1 a 6, o grupo alquila é opcionalmente substi-tuído, e o metila é opcionalmente substituído com um grupo alquila ou arilaadicional opcionalmente substituído, cada um do mesmo é representado porum grupo independentemente selecionado R. Os símbolos (*) indicam pon-tos de ligação do fragmento de Iigante polivalente às outras partes dos con-jugados descritos aqui.
Em outra modalidade, o Iigante polivalente inclui Iigantes de he-teroátomo, Iigantes espaçadores, e Iigantes liberáveis conectados para for-mar um grupo 3-tiossuccinimid-1-ilalquilcarbonila polivalente, ilustrado pelafórmula a seguir,
<formula>formula see original document page 24</formula>
onde η é um número inteiro de 1 a 6, e o grupo alquila é opcionalmentesubstituído. Os símbolos (*) indicam pontos de ligação do fragmento de Ii-gante polivalente às outras partes dos conjugados descritos aqui. Em outramodalidade, o Iigante polivalente inclui Iigantes de heteroátomo, Iigantes es-paçadores, e Iigantes liberáveis conectados para formar um grupo 3-tioalquilsulfonilalquil(silila dissubstituída)óxi polivalente onde a silila dissubs-tituída é substituída com grupos alquila e/ou aril opcionalmente substituídos.
Em outra modalidade, o Iigante polivalente inclui ligantes de he-teroátomo, Iigantes espaçadores, e Iigantes liberáveis conectados para for-mar um grupo ditioalquilcarbonilidrazida polivalente, ou um 3-tiossuccinimid-1 -ilalquilcarbonilidrazida polivalente, ilustrado pelas fórmulas a seguir,
<formula>formula see original document page 25</formula>
onde η é um número inteiro de 1 a 6, o grupo alquila é opcionalmente substi-tuído, e a hidrazida forma uma hidrazona com (B), (D), ou outra parte do li-gante polivalente (L). Os símbolos (*) indicam pontos de ligação do fragmen-to de ligante polivalente às outras partes dos conjugados descritos aqui.
Em outra modalidade, o ligante polivalente inclui ligantes de he-teroátomo, ligantes espaçadores, e ligantes liberáveis conectados para for-mar um grupo 3-tiossuccinimid-1-ilalquiloxialquiloxialquilideno polivalente,ilustrado pela fórmula a seguir,
onde cada η é um número inteiro independentemente selecionado de 1 a 6,cada grupo alquila é independentemente selecionado e opcionalmente subs-tituído, como com alquila ou arila opcionalmente substituídas, e onde o alqui-lideno forma uma hidrazona com (B), (D), ou outra parte do ligante polivalen-te (L). Os símbolos (*) indicam pontos de ligação do fragmento de Iigantepolivalente às outras partes dos conjugados descritos aqui.
Em outra modalidade, o ligante polivalente inclui ligantes de he-teroátomo, ligantes espaçadores, e ligantes liberáveis conectados para for-mar um grupo 3-tio ou 3-ditioarilalquiloxicarbonila polivalente, grupo 3-tio ou3-ditioarilalquilaminocarbonila, uma 3-tio ou 3-ditioalquiloxicarbonila poliva-lente, ou uma 3-tio ou 3-ditioalquilaminocarbonila polivalente, onde a carbo-nila de alquila forma um carbonato, um carbamato, ou uréia com (B), (D), ououtra parte do ligante polivalente (L). Ilustrativamente, o grupo alquila é etila.
Em outra modalidade, o ligante polivalente inclui ligantes de he-teroátomo, ligantes espaçadores, e ligantes liberáveis conectados para for-mar um grupo 3-ditioalquilamino polivalente onde o amino forma uma amidaviniloga (B), (D), ou outra parte do Iigante polivalente (L). Ilustrativamente, ogrupo alquila é etila.Em outra modalidade, o Iigante polivalente inclui Iigantes de he-teroátomo, Iigantes espaçadores, e Iigantes liberáveis conectados para for-mar um grupo 1-alcoxicicloalquilenóxi polivalente, um grupo alquilenoamino-carbonil(dicarboxilarileno)carboxilato polivalente, um grupo 3-ditioalquilo-xicarbonila polivalente, um grupo 3-ditioalquiloxicarbonilidrazida polivalente,um polivalente.
Em outra modalidade, o Iigante polivalente inclui pelo menos umIigante espaçador que é um peptídeo formado de aminoácidos. Em um as-pecto, o peptídeo inclui aminoácidos de ocorrência natural, e estereoisôme-ros dos mesmos. Em outro aspecto, o peptídeo é formado apenas de ami-noácidos de ocorrência natural, e estereoisômeros dos mesmos.
Exemplos ilustrativos adicionais de Iigantes espaçadores e libe-ráveis são mostrados na Tabela 1 e 2, onde o (*) indica o ponto de ligação aoutro ligante, para o alcalóide de vinca, ou análogo ou derivado do mesmo,ou para a porção de ligação de receptor.
Tabela 1. Ligantes espaçadores e de heteroátomo contempla-dos, e combinações dos mesmos.
<table>table see original document page 26</column></row><table><table>table see original document page 27</column></row><table>
Tabela 2. Ligantes liberáveis e de heteroátomo contemplados, ecombinações dos mesmos.
<table>table see original document page 27</column></row><table><table>table see original document page 28</column></row><table>
Qualquer variedade de fármacos pode ser incluída nos conjuga-dos de liberação de fármaco descritos aqui. Em uma modalidade ilustrativa,os fármacos são selecionados com base na atividade contra uma ou maispopulações de células patogênicas. Em um-aspecto, aquelas células pato-gênicas são células de câncer, incluindo tumores sólidos.
Em outra modalidade ilustrativa, os fármacos são selecionadoscom base na atividade contra uma ou mais populações de células patogêni-cas com um mecanismo particular de ação. Mecanismos ilustrativos de açãoincluem agentes de alquilação, inibidores de microtúbulo, incluindo aquelesque estabilizam e/ou desestabilizam a formação de microtúbulo, incluindoagentes de beta-tubulina, inibidores dependentes de ciclina cinase (CDK),inibidores de topoisomerase, inibidores de síntese de proteína, inibidores deproteína cinase, incluindo Ras, Raf, PKC, PI3K, e inibidores parecidos, inibi-dor de transcrição, antifolatos, bloqueadores de proteína de choque térmico,e similares.Agentes de alquilação ilustrativos incluem, mas não são limita-dos a, mitomicinas CBI, e similares. Inibidores dependentes de ciclina cinase(CDK) ilustrativos incluem, mas não são limitados a, CYC202, seliciclib, R-roscovitina, AGM-1470, e outros. Inibidores de topoisomerase ilustrativosincluem, mas não são limitados a, doxorrubicina, outras antraciclinas, e ou-tros. Inibidores de síntese de proteína ilustrativos incluem, mas não são limi-tados a, bruceantina, e similares. Inibidores de proteína cinase ilustrativos,incluindo Ras, Raf1 PKC, PI3K, e inibidores parecidos, incluem mas não sãolimitados a, L-779,450, R115777, e similares/Inibidores de transcrição ilustra-tivos incluem, mas não são limitados a, α-amanatina, actinomicina, e outros.Antifolatos ilustrativos incluem, mas não são limitados a, metotrexato, e ou-tros. Bloqueadores de proteína de choque térmico ilustrativos incluem, masnão são limitados a, geldanamicina, e outros.
Inibidores de microtúbulo ilustrativos, incluindo aqueles que es-tabilizam e/ou desestabilizam a formação de microtúbulo, incluindo agentesde β-tubulina, venenos de microtúbulo, e outros. Venenos de microtúbuloilustrativos que ligam aos receptores selecionados incluem, mas não sãolimitados a, inibidores Iigante ao sítio de ligação de vinca como arenastatina,dolastatina, halicondrina B, maytansina, fomopsina A, rizoxina, ustíloxina,vinblastina, vincristina, e similares, estabilizantes que ligam ao sítio de liga-ção de taxol como discodermalida, epotilona, taxol, paclitaxol, e similares,inibidores que ligam ao sítio de ligação de colquicina como, colquicina, com-bretastatina, curacina A, podofilotoxina, esteganacina, e outros, e outros Ii-gante a sítios indefinidos como criptoficina, tubulisinas, e similares.
Em uma modalidade dos conjugados de liberação de fármacodescritos aqui, pelo menos um dos fármacos é um inibidor de microtúbulo,ou um análogo ou derivado do mesmo. Em outra modalidade, pelo menosum dos fármacos é um agente de alquilação de DNA. Em outra modalidade,pelo menos um dos fármacos é um agente de alquilação de DNA, e pelomenos um outro dos fármacos é um inibidor de microtúbulo. Alcalóides des-critos aqui incluem todos os membros da família de alcalóides de vinca in-dol-diidroindol, como mas não limitados a vindesina, vinblastina, vincristina,catarantina, vindolina, leurosina, vinorelbina, imidocarb, sibutramina, toltra-zurila, ácido vinblastinóico, e outros, e análogos e derivados dos mesmos.
Em outra modalidade dos conjugados de liberação de fármacodescritos aqui, pelo menos um dos fármacos é um inibidor de P-glico-proteína (PGP). Em outra modalidade, pelo menos um dos fármacos inclu-sos nos conjugados de liberação de fármaco descritos aqui é um inibidor dePGP, e pelo menos um outro dos fármacos inclusos nos conjugados de libe-ração de fármaco é um substrato de PGP. Ilustrativamente nesta modalida-de posterior, o substrato de PGP é um agente de alquilação de DNA. Refe-rindo-se a esta modalidade, é apreciado que pareamento de um inibidor dePGP com um substrato de PGP, como um agente de alquilação de DNA in-cluindo, mas não limitado a, qualquer uma das mitomicinas como mitomicinaC, mitomicina A, e outras, pode melhorar o desempenho geral do fármacoque é do contrário um substrato de PGP. Nos conjugados liberáveis descri-tos aqui, o inibidor fármaco de PGP e o fármaco de substrato de PGP foramambos liberados na célula após endocitose. Naquela maneira, o fármacoinibidor de PGP pode melhorar a eficácia geral e/ou potência do fármaco desubstrato de PGP. Além disso, o inibidor de PGP pode reduzir a expressãode PGP que por sua vez diminuirá o efluxo de um ou mais dos fármacos in-clusos nos conjugados de multifármacos descritos aqui da célula patogênica.E apreciado que as mitomicinas, ou análogos ou derivados da mesma, comomitomicina C, podem operar como um inibidor de PGP, ou sub-regulador dePGP. É também apreciado que o alcalóide de vinca, ou análogo ou derivadodo mesmo, como análogos de vinblastina e derivados, pode ser um substra-to de PGP que é protegido do efluxo da célula patogênica pelo inibidor ousub-regulador de PGP.
Em outra modalidade dos conjugados de liberação de fármacodescritos aqui, pelo menos um dos fármacos é um alcalóide de vinca, ou umanálogo ou derivado dos mesmos. Alcalóides de vinca descritos aqui inclu-em todos os membros da família de alcalóides de vinca indol-diidroindol,como mas não limitados a vindesina, vinblastina, vincristina, catarantina,vindolina, leurosina, vinorelbina, imidocarb, sibutramina, toltrazurila, ácidovinblastinóico, e similares, e análogos e derivados dos mesmos.
Como referido aqui, os fármacos de vinca usáveis nos conjuga-dos descritos aqui incluem todos os membros da família de alcalóides devinca indol-diidroindol, como vindesina, vinblastina, vincristina, catarantina,vindolina, leurosina, vinorelbina, imidocarb, sibutramina, toltrazurila, ácidovinblastinóico, e similares, e análogos e derivados dos mesmos. Ilustrativa-mente, tais análogos e derivados incluem as 3-carboxazidas descritas naPatente U.S. Ne 4.203.898; os outros derivados de N2-alquila e 4-desacetil-vinblastina-3-carboxhidrazida descritos na Patente U.S. N9 4.166.810; hidra-zida de leurosina descritos em Neuss et al. Tetrahedron Lett. 783 (1968); osderivados de hidrazida descritos em Barnett et al. J. Med. Chem. 21:88(1978); os derivados de C-4 éster descritos nas Patentes U.S. Nes 3.392.173e 3.387.001; os derivados de ácido dicarboxílico resultantes de oxidaçãodescritos em Langone et al. Anal. Biochem. 95:214 (1979); e as hidrazidasde vinca descritas na EP 0 247 792 A2. Cada uma das patentes anteriores epublicações são incorporadas aqui por referência para tudo aquilo que reve-la com relação às vias sintéticas, e condições de reação para preparar oscompostos de vinca.
Em uma modalidade ilustrativa, os fármacos de vinca são com-postos da fórmula
<formula>formula see original document page 31</formula>
em que:
um de R1 e R2 é H, e o outro é etila, e R3 é H, ou R1 é etila, R2, eR3 são considerados juntos para formar -O-;
R4, R7, e R8 são cada um independentemente selecionados deH, alquila, e acila
R5 e R6 são cada um independentemente selecionados de alqui-la;
R9 é um grupo -NHNHR onde R é H, alquila, ou acila;
R10 é H ou acila; e
R11 é etila.
Em um aspecto, os fármacos de vinca são compostos da fórmu-la acima em que R4 e R8 são cada um H; e R51 R6, R9, e R10 são cada ummetila.
Em outra modalidade, uma ligação de receptor conjugado deliberação de fármaco é descrita compreendendo uma porção de ligação dereceptor, um Iigante polivalente (L), um fármaco de alcalóide de vinca, ouanálogo ou derivado do mesmo, e outro fármaco, ou análogo ou derivado domesmo, em que a porção de ligação de receptor, o alcalóide de vinca, e ooutro fármaco é cada um ligado ao Iigante polivalente (L), através de um Ii-gante de heteroátomo (lH). O Iigante polivalente (L) compreende um ou maisligantes espaçadores, Iigantes de heteroátomo, e Iigantes liberáveis, e com-binações dos mesmos, em qualquer ordem.
Em outra modalidade, pelo menos um dos fármacos inclusosnos conjugados de liberação de fármaco descritos aqui é uma aclamicina, ouum análogo ou derivado da mesma. Pode ser que as aclamicinas e análogose derivados das mesmas sejam substratos de bomba de efluxo de PGP. Emum aspecto, pelo menos um outro dos fármacos inclusos nos conjugados deliberação de fármaco descritos aqui é um agente de alquilação de DNA, co-mo uma mitomicina ou um análogo ou derivado da mesma.
Em outra modalidade, pelo menos um dos fármacos inclusosnos conjugados de liberação de fármaco descritos aqui é um inibidor de sín-tese de DNA, ou um análogo ou derivado do mesmo. Em outra modalidade,pelo menos um dos fármacos inclusos nos conjugados de liberação de fár-maco descritos aqui é um inibidor de formação de fuso, ou um análogo ouderivado do mesmo. Em um aspecto, pelo menos um dos fármacos inclusosnos conjugados de liberação de fármaco descritos aqui é um inibidor de sín-tese de DNA, ou um análogo ou derivado do mesmo, e pelo menos um outrodos fármacos inclusos nos conjugados de liberação de fármaco descritosaqui é um inibidor de formação de fuso, ou um análogo ou derivado domesmo.
Em outra modalidade, pelo menos um dos fármacos inclusosnos conjugados de liberação de fármaco descritos aqui é um agente estabili-zante de microtúbulo, ou um análogo ou derivado do mesmo. Em outra mo-dalidade, pelo menos um dos fármacos inclusos nos conjugados de libera-ção de fármaco descritos aqui é um inibidor de síntese de microtúbulo, ouum análogo ou derivado do mesmo. Em outra modalidade, pelo menos umdos fármacos inclusos nos conjugados de liberação de fármaco descritosaqui é um agente desestabilizante de microtúbulo, ou um análogo ou deriva-do do mesmo.
Em outra modalidade, pelo menos um dos fármacos inclusosnos conjugados de liberação de fármaco descritos aqui é um agente indutorde apoptose, ou um análogo ou derivado do mesmo. Em outra modalidade,pelo menos um dos fármacos inclusos nos conjugados de liberação de fár-maco descritos aqui é um taxol, ou um análogo ou derivado do mesmo. Emoutra modalidade, pelo menos um dos fármacos inclusos nos conjugados deliberação de fármaco descritos aqui é um antifolato, ou um análogo ou deri-vado do mesmo. Em outra modalidade, pelo menos um dos fármacos inclu-sos nos conjugados de liberação de fármaco descritos aqui é um metotrexa-to, ou um análogo ou derivado do mesmo. Em um aspecto, pelo menos umdos fármacos inclusos nos conjugados de liberação de fármaco descritosaqui é um antifolato, ou um análogo ou derivado do mesmo, como metotre-xato, e pelo menos um outro dos fármacos inclusos nos conjugados de Iibe-ração de fármaco descritos aqui é um taxol, ou um análogo ou derivado domesmo.
Em outra modalidade, pelo menos um dos fármacos inclusosnos conjugados de liberação de fármaco descritos aqui é um folato, ou umanálogo ou derivado do mesmo. Em outra modalidade, pelo menos um dosfármacos inclusos nos conjugados de liberação de fármaco descritos aqui éum inibidor de receptor-2 de fator de crescimento epidérmico humano (HER-2), ou um análogo ou derivado do mesmo. Em outra modalidade, pelo me-nos um dos fármacos inclusos nos conjugados de liberação de fármaco des-critos aqui é um agente de quimioterapia radiomarcado, como cisplatina, eoutros. Em um aspecto, pelo menos um dos fármacos inclusos nos conjuga-dos de liberação de fármaco descritos aqui é um antifolato, ou um análogoou derivado do mesmo, como metotrexato, e pelo menos um outro dos fár-macos inclusos nos conjugados de liberação de fármaco descritos aqui é umfolato, ou um análogo ou derivado do mesmo. Em outro aspecto, pelo menosum dos fármacos inclusos nos conjugados de liberação de fármaco descritosaqui e um taxol, ou um análogo ou derivado do mesmo, e peio menos umoutro dos fármacos inclusos nos conjugados de liberação de fármaco descri-tos aqui é um inibidor de HER-2, ou um análogo ou derivado do mesmo. Emoutro aspecto, pelo menos um dos fármacos inclusos nos conjugados deliberação de fármaco descritos aqui é um taxol, ou um análogo ou derivadodo mesmo, pelo menos um outro dos fármacos inclusos nos conjugados deliberação de fármaco descritos aqui é um agente de quimioterapia radiomar-cado, como cisplatina, e pelo menos um outro dos fármacos inclusos nosconjugados de liberação de fármaco descritos aqui é um inibidor de HER-2,ou um análogo ou derivado do mesmo.
Os conjugados de liberação de fármaco descritos aqui podemser preparados através de métodos sintéticos convencionais. Os métodossintéticos são escolhidos dependendo da seleção dos Iigantes de heteroá-tomo, e dos grupos funcionais presentes nos Iigantes espaçadores e nosIigantes liberáveis. Em geral, as reações de formação de ligação relevantessão descritas em Richard C. Larock, "Comprehensive Organic Transformati-ons, a guide to functional group preparations", VCH Publishers, Inc. NewYork (1989), e em Theodora E. Greene & Peter G.M. Wuts, "ProtectiveGroups ion Organic Synthesis", 2- edição, John Wiley & Sons, Inc. New York(1991), as descrições das mesmas em sua totalidade são incorporadas aquipor referência. Vias sintéticas adicionais e condições de reação são descri-tas na publicação do pedido de Patente U.S. Nq US 2005/0002942 A1.
Ilustrativamente, os conjugados de liberação de fármaco descri-tos aqui podem ser preparados usando rotas sintéticas lineares e conver-gentes. Intermediários ilustrativos utilizáveis em tais rotas incluem intermedi-ários que compreendem um ligante polivalente que inclui um grupo de aco-plamento em cada extremidade adequada para ligação covalente à porçãode ligação do receptor, ou análogo ou derivado do mesmo, e o alcalóide devinca, ou análogo ou derivado do mesmo. Outros intermediários ilustrativosutilizáveis em tais rotas incluem intermediários que compreendem uma por-ção de ligação de receptor, ou análogo ou derivado do mesmo, ligada a umligante polivalente que inclui um grupo de acoplamento. Outros intermediá-rios ilustrativos utilizaveis em tais rotas incluem intermediarios que compre-endem um alcalóide de vinca, ou análogo ou derivado do mesmo, ligado aum ligante polivalente que inclui um grupo de acoplamento. Em qualquercaso, o grupo de acoplamento pode ser um nucleófilo, um eletrófilo, ou umprecursor dos mesmos.
Em uma modalidade ilustrativa intermediários sintéticos, o grupode acoplamento é um aceptor de Michael, e o ligante polivalente inclui umligante liberável tendo a fórmula -C(O)NHN=, -NHC(O)NHN=, ou -CH2C(O)NHN=.Em um aspecto ilustrativo, o grupo de acoplamento e o ligante polivalentesão considerados juntos para formar um composto tendo a fórmula:
<formula>formula see original document page 35</formula>
ou um derivado protegido do mesmo, onde (D) é o alcalóide de vinca, ou umanálogo ou um derivado do mesmo, capaz de formar uma hidrazona comoilustrada aqui; e n é um número inteiro como 1, 2, 3, ou 4. Em outro aspectoilustrativo do intermediário conjugado de liberação de fármaco de ligação dereceptor descrito aqui, um segundo ligante é covalentemente ligado à fórmu-la acima através de um nucleófilo de alquiltiol incluído no segundo ligante.Em outro aspecto ilustrativo, a porção de ligação de receptor, ou análogo ouderivado da mesma, é covalentemente ligada à fórmula acima através de umnucleófilo de alquiltiol incluído naquela porção.
Em outra modalidade ilustrativa, o grupo de acoplamento é umheteroátomo, como nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, e o ligante polivalenteinclui um ou mais ligantes de heteroátomo e um ou mais ligantes espaçado-res covalentemente conectando a porção de ligação de receptor ao grupo deacoplamento. Em um aspecto ilustrativo, o intermediário aqui descrito incluium composto tendo a fórmula:
<formula>formula see original document page 36</formula>
ou um derivado protegido do mesmo, onde X é oxigênio, nitrogênio, ou en-xofre, e m é um número inteiro como 1, 2, ou 3, e onde (B), Is, e Ih são comodefinidos aqui. Em um aspecto ilustrativo, Ih é -NH-, e m é 1. Em outro as-pecto ilustrativo, Ih é -NH-, m é 1, e X é -S-.
Em outra modalidade ilustrativa, o intermediário descrito aquiinclui um composto tendo a fórmula:
<formula>formula see original document page 36</formula>
ou um derivado protegido do mesmo, onde Y é H ou um substituinte, ilustra-tivamente um substituinte de extração de elétrons, incluindo mas não limita-do a nitro, ciano, halo, alquilsulfonila, um derivado de ácido carboxílico, eoutros, e onde (B) e Is são como definidos aqui.
Em outra modalidade ilustrativa do intermediário descrito aqui, ogrupo de acoplamento é um aceitante de Michael, e o Iigante polivalente in-clui um ou mais Iigantes de heteroátomo e um ou mais Iigantes espaçadorescovalentemente conectando a porção de ligação de receptor ao grupo deacoplamento. Em um aspecto ilustrativo, o grupo de acoplamento e o Iigantepolivalente são considerados juntos para formar um composto tendo a fór-mula:
<formula>formula see original document page 36</formula>
ou um derivado protegido do mesmo, onde X é oxigênio, nitrogênio, ou en-xofre, e m e η são independentemente selecionados de números inteiros,como 1, 2, ou 3, e onde (B), Is, e Ih são como definidos aqui. Em outro as-pecto ilustrativo, o alcalóide de vinca, ou análogo ou derivado do mesmo, écovalentemente ligado à fórmula acima através de um nucleófilo de alquiltiolincluído no alcalóide de vinca.Em outro aspecto ilustrativo, o intermediário inclui compostostendo as fórmulas:
<formula>formula see original document page 37</formula>
ou derivados protegidos dos mesmos, onde AA é um ou mais aminoácidos,ilustrativamente selecionados dos aminoácidos de ocorrência natural, ouestereoisômeros dos mesmos, X é nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, Y é hi-drogênio ou um substituinte, ilustrativamente um substituinte de extração deelétrons, incluindo mas não limitado a nitro, ciano, halo, alquilsulfonila, umderivado de ácido carboxílico, e outros, nem são independentemente sele-cionados de números inteiros, como 1, 2, ou 3, e ρ é um número inteiro co-mo 1, 2, 3, 4, ou 5.
AA pode também ser qualquer outro aminoácido, como qualqueraminoácido tendo a fórmula geral:
-N(R)-(CRf-Rn)t-C(O)-
onde R é hidrogênio, alquila, acila, ou um grupo de proteção de nitrogênioadequado, R' e R" são hidrogênio ou um substituinte, cada um do mesmo éindependentemente selecionado em cada ocorrência, e t é um número intei-ro como 1, 2, 3, 4, ou 5. Ilustrativamente, R' e/ou R" independentemente cor-respondem, mas não são limitados a, hidrogênio, ou as cadeias laterais pre-sentes em aminoácidos de ocorrência natural, como metila, benzila, hidroxi-metila, tiometila, carboxila, carboxilmetila, guanidinopropila, e outros, e deri-vados e derivados protegidos dos mesmos. A fórmula acima descrita incluitodas as variações estereoisoméricas. Por exemplo, o aminoácido pode serselecionado de asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutâmico, lisina,glutamina, arginina, serina, ornitina, treonina, e outros. Em outro aspectoilustrativo do intermediário conjugado de liberação de droga de ligação dereceptor de vitamina descrito aqui, o fármaco, ou um análogo ou um deriva-do do mesmo, inclui um nucleófilo de alquiltiol.
Cada um dos intermediários acima podem ser preparados usan-do rotas sintéticas convencionais. Rotas sintéticas e condições de reaçãoadicionais são descritas na publicação do pedido de Patente U.S. №US 2005/0002942 A1 e publicação internacional de PCT Ns WO 2006/012527.
As modalidades ilustrativas anteriores são intencionadas ser i-Iustrativas da invenção descrita aqui, e não deveriam ser interpretadas ouentendidas como limitando a invenção de qualquer forma como descrita a-qui. Por exemplo, compostos em geral representados pelo intermediário con-jugado de vitamina-fármaco ilustrativo a seguir estarão inclusos na invençãocomo descritos aqui
<formula>formula see original document page 38</formula>
onde R1 e R2 são cada um independentemente hidrogênio ou alquila, comometila; e Ih é um heteroátomo, como oxigênio, enxofre, nitrogênio substituídoopcionalmente, ou nitrogênio protegido opcionalmente, e similares. Dois oumais fármacos, e Iigantes de ligação de receptor opcionalmente adicionais,como folatos e análogos e derivados dos mesmos, podem ser covalente-mente ligados a este intermediário ilustrativo a (lH), ou a outros grupos fun-cionais presentes, como o nitrogênio de amida ou carbonila, o carboxilato deácido, ou o grupo amino de guanidina.
Em outra modalidade, um intermediário de Iigante de folato édescrito tendo a fórmula a seguir
<formula>formula see original document page 38</formula>
em que m, n, e q são números inteiros que são independentemente selecio-nados da faixa de 0 a cerca de 8; AA é um aminoácido, R1 é hidrogênio, al-quila, ou um grupo de proteção de nitrogênio, e fármacos são opcionalmenteligados nos átomos (*). Em um aspecto, AA é um aminoácido de ocorrêncianatural ou de configuração natural ou antinatural. Em outro aspecto, um oumais de AA no fragmento (-NH-AA-C(0)-)n é um aminoácido hidrófilo. Emoutro aspecto, um ou mais de AA no fragmento (-NH-AA-C(0)-)n é Asp e/ouArg. Em outro aspecto, o número inteiro o é 1 ou maior. Em outro aspecto, onúmero inteiro m é 2 ou maior. Os fármacos, ou análogos ou derivados dosmesmos, e Iigantes opcionalmente adicionais e Iigantes de ligação de recep-tor adicionais podem ser conectados à fórmula acima nas cadeias laterais deNH livre dos fragmentos de ácido 2,co-diaminoalcanóico, ou no carboxilatoterminal como neles indicado pelas valências livres.
Em outra modalidade, um intermediário de Iigante de folato édescrito tendo a fórmula a seguir
<formula>formula see original document page 39</formula>
em que m, n, q, e p são números inteiros que são independentemente sele-cionados da faixa de O a cerca de 8; AA é um aminoácido, R1 é hidrogênio,alquila, ou um grupo de proteção de nitrogênio, e fármacos são opcional-mente ligados nos átomos (*). Em um aspecto, AA é como um aminoácidode ocorrência natural ou de configuração natural ou antinatural. Em outroaspecto, um ou mais de AA no fragmento (-NH-AA-C(0)-)n é um aminoácidohidrófilo. Em outro aspecto, um ou mais de AA no fragmento (-NH-AA-C(0)-)n éAsp e/ou Arg. Em outro aspecto, os números inteiros o e p são 1 ou maior.Em outro aspecto, o número inteiro m é 2 ou maior. Os fármacos, ou análo-gos ou derivados dos mesmos, e Iigantes opcionalmente adicionais e Iigan-tes de ligação de receptor adicionais podem ser conectados à fórmula acimanas cadeias laterais de NH livre dos fragmentos de ácido 2,a>diami-noalcanóico, nos grupos tiol de citeinila, ou no carboxilato terminal, comoneles indicado pelas valências livres.
Em outra modalidade, um intermediário de Iigante de folato édescrito tendo a fórmula a seguir:
<formula>formula see original document page 39</formula>em que m, η, q, ρ, e r são números inteiros que são independentemente se-lecionados da faixa de 0 a cerca de 8; AA é um aminoácido, R1 é hidrogênio,alquila, ou um grupo de proteção de nitrogênio, e fármacos são opcional-mente ligados nos átomos (*). Em um aspecto, AA é como um aminoácidode ocorrência natural ou de configuração natural ou antinatural. Em outroaspecto, um ou mais de AA no fragmento (-NH-AA-C(0)-)n é um aminoácidohidrófilo. Em outro aspecto, um ou mais de AA no fragmento (-NH-AA-C(0)-)n éAsp e/ou Arg. Em outro aspecto, os números inteiros o, p, e r são 1 ou mai-or. Em outro aspecto, o número inteiro m é 2 ou maior. Os fármacos, ou aná-logos ou derivados dos mesmos, e ligantes opcionalmente adicionais e Ii-gantes de ligação de receptor adicionais podem ser conectados à fórmulaacima nas cadeias laterais de NH livre dos fragmentos de ácido 2,codiami-noalcanóico, nos grupos tiol de citeinila, nos grupos hidróxi de serinila, ou nocarboxilato terminal, como neles indicado pelas valências livres.
Em outra modalidade, um intermediário de ligante de folato édescrito que inclui mitomicina como um dos fármacos e tendo a fórmula aseguir
<formula>formula see original document page 40</formula>
em que m, n, e q são números inteiros que são independentemente selecio-nados da faixa de O a cerca de 8; e AA é um aminoácido. Em um aspecto,AA é como um aminoácido de ocorrência natural ou de configuração naturalou antinatural. Em outro aspecto, um ou mais de AA no fragmento (-NH-AA-C(O)-) η é um aminoácido hidrófilo. Em outro aspecto, um ou mais de AA nofragmento (-NH-AA-C(0)-)n é Asp e/ou Arg. Em outro aspecto, o número in-teiro o é 1 ou maior. Em outro aspecto, o número inteiro m é 2 ou maior. Osfármacos, ou análogos ou derivados dos mesmos, e ligantes opcionalmenteadicionais e Iigantes de ligação de receptor adicionais podem ser conecta-dos à fórmula acima nas cadeias laterais de NH livre adicionais dos frag-mentos de ácido 2,(o-diaminoalcanóico, ou no carboxilato terminal, comoneles indicado pelas valências livres.
Em outra modalidade, um conjugado de multifármaco de Iigantede folato que inclui uma mitomicina e um vinca alcalóide é descrito e tendo afórmula a seguir
<formula>formula see original document page 41</formula>
Em outra modalidade, um conjugado de multifármaco de ligantede folato que inclui uma mitomicina, uma aclamicina, e um vinca alcalóide édescrito e tendo a fórmula a seguir:
<formula>formula see original document page 41</formula>
Em outra modalidade, uma composição farmacêutica é descrita.A composição farmacêutica compreende um conjugado de liberação de fár-maco descrito aqui em combinação com um veículo, excipiente, e/ou diluen-te farmaceuticamente aceitável para este.
Em outra modalidade, um método para eliminar uma populaçãode células patogênicas em um animal hospedeiro que abriga a população decélulas patogênicas é descrito. Em um aspecto ilustrativo, os membros dapopulação de célula patogênica têm um sítio de ligação acessível a umaporção de ligação de receptor, ou o análogo ou derivado do mesmo, e cujosítio de ligação é exclusivamente expresso, sobreexpresso, ou preferencial-mente expresso pelas células patogênicas. O método inclui a etapa de ad-ministrar ao hospedeiro um conjugado de liberação de fármaco descrito a-qui, ou uma composição farmacêutica do mesmo, como descrita aqui.
Populações de células patogênicas que podem ser tratadas u-sando os métodos descritos aqui incluem, mas não são limitadas a, cânce-res, como cânceres epiteliais do ovário, glândula mamária, cólon, pulmão,nariz, garganta, cérebro, e outros tipos de célula tumoral, agentes infeccio-sos, macrófagos ativados, monócitos ativados, e similares.
Os conjugados de liberação de fármaco descritos aqui podemser usados para aplicações de medicina clínica humana e veterinária. Dessemodo, o animal hospedeiro que abriga a população de células patogênicas etratado com os conjugados de liberação de fármaco pode ser um ser huma-no ou, no caso de aplicações veterinárias, pode ser um animal de laborató-rio, agrícola, doméstico, ou selvagem. Os conjugados de liberação de fár-maco descritos aqui podem ser administrados aos animais hospedeiros in-cluindo, mas não limitados a, seres humanos, animais de laboratório taiscomo roedores (por exemplo, camundongos, ratos, hamsters, etc.), coelhos,macacos, chimpanzés, animais domésticos como cachorros, gatos, e coe-lhos, animais agrícolas como vacas, cavalos, porcos, ovelhas, cabras, e a-nimais selvagens em cativeiro como ursos, pandas, leões, tigres, leopardos,elefantes, zebras, girafas, gorilas, golfinhos, e baleias.
Os conjugados de liberação de fármaco descritos aqui podemser usados para tratar uma variedade de patologias e células patogênicasem animais hospedeiros. Como aqui usado, "células patogênicas" significamcélulas de câncer, agentes infecciosos como bactérias e vírus, células infec-tadas por bactérias ou vírus, macrófagos ativados capazes de causar umestado de doença, e qualquer outro tipo de células patogênicas que exclusi-vamente expressam, preferencialmente expressam, ou sobreexpressam re-ceptores de ligante, como receptores de vitamina ou receptores que ligamanálogos ou derivados de vitaminas. Células patogênicas podem tambémincluir qualquer célula que cause um estado de doença para.o qual o trata-mento com os conjugados de liberação de fármaco resulta em redução dossintomas da doença. As células patogênicas podem também ser células dohospedeiro que são patogênicas sob algumas circunstâncias, como célulasdo sistema imune que são responsáveis por doença de enxerto versus hos-pedeiro, mas não patogênicas sob outras circunstâncias.
Desse modo, a população de células patogênicas pode ser umapopulação de célula de câncer que é tumorigênica, incluindo tumores benig-nos e tumores malignos, ou pode ser não-tumorigênica. A população de cé-lula de câncer pode surgir espontaneamente ou por tais processos comomutações presentes na linhagem germinal do animal hospedeiro ou muta-ções somáticas, ou pode ser induzida por química, vírus ou radiação. A in-venção pode ser utilizada para tratar tais cânceres como carcinomas, sar-comas, linfomas, doença de Hodgekin, melanomas, mesoteliomas, Iinfomade Burkitt, carcinomas nasofaringeano, leucemias, e mielomas. A populaçãode célula de câncer pode incluir, mas não é limitada a, cânceres oral, da ti-reóide, endócrino, pele, gástrico, esofagiano, laríngeo, pancreático, cólon,bexiga, osso, ovariano, cervical, uterino, mama, testicular, próstata, retal,rim, fígado, e pulmão.
Em modalidades onde a população de célula patogênica for umapopulação de célula de câncer, o efeito da administração de conjugado deliberação de fármaco é uma resposta terapêutica medida por redução oueliminação de massa de tumor ou de inibição de proliferação de célula tumo-ral. No caso de um tumor, a eliminação pode ser uma eliminação de célulasdo tumor primário ou de células tendo sido submetidas à metástase ou queestão no processo de dissociar-se do tumor primário. Um tratamento profilá-tico com o conjugado de liberação de fármaco para impedir retorno de umtumor após sua remoção por qualquer método terapêutico incluindo remoçãocirúrgica do tumor, terapia de radiação, quimioterapia, ou terapia biológica, étambém contemplado. O tratamento profilático pode ser um tratamento inici-al com o conjugado de liberação de fármaco, como tratamento em um regi-me diário de dose múltipla, e/ou pode ser um tratamento adicional ou sériede tratamentos após um intervalo de dias ou meses seguindo o(s) tratamen-to(s) inicial(is). Conseqüentemente, eliminação de quaisquer das populaçõesde células patogênicas descritas acima inclui redução no número de célulaspatogênicas, inibição de proliferação de células patogênicas, um tratamentoprofilático que impede o retorno de células patogênicas, ou um tratamentode células patogênicas que resultam em redução dos sintomas da doença.
Em casos onde as células de câncer estão sendo eliminadas, ométodo descrito aqui pode ser usado em combinação com remoção cirúrgicade um tumor, terapia de radiação, quimioterapia, ou terapias biológicas co-mo outras imunoterapias incluindo, mas não limitadas a, terapia de anticorpomonoclonal, tratamento com agentes imunomoduladores, transferência ado-tiva de células efetoras imunes, tratamento com fatores de crescimento he-matopoéticos, citocinas e vacinação.
O método descrito aqui é também aplicável a populações de cé-lulas patogênicas que causam uma variedade de doenças infecciosas. Porexemplo, a presente invenção é aplicável a tais populações de células pato-gênicas como bactérias, fungos, incluindo leveduras, vírus, células infetadascom vírus, micoplasma, e parasitas. Organismos infecciosos que podem sertratados com os conjugados de liberação de fármaco descritos aqui sãoquaisquer organismos infecciosos reconhecidos na técnica que causam pa-togênese em um animal, incluindo tais organismos como bactérias que sãococos ou bacilos gram-negativos ou gram-positivos. Por exemplo, espéciesde Proteus1 espécies de Klebsiella, espécies de Providencia, espécies deYersinia, espécies de Erwinia, espécies de Enterobacter, espécies de Sal-monelia, espécies de Serratia, espécies de Aerobacter, espécies de Esche-richia, espécies de Pseudomonas, espécies de Shigella, espécies de Vibri-on, espécies de Aeromonas, espécies de Campilobacter, espécies de Strep-tococcus, espécies de Staphylococcus, espécies de Lactobacillus, espéciesde Micrococcus, espécies de Moraxella, espécies de Bacillus, espécies deCiostridium, espécies de Corinabacterium, espécies de Eberthella, espéciesde Micrococcus, espécies de Mycobacterium, espécies de Neisseria, espé-cies de Haemophilus, espécies de Bacteroides, espécies de Listería, espé-cies de Erysipelothrix, espécies de Acinetobacter, espécies de Brucella, es-pécies de Pasteurella, espécies de Vibrion, espécies de Flavobacterium, es-pécies de Fusobacterium, espécies de Streptobacillus, espécies de Calym-matobacterium, espécies de Legionella, espécies de Treponema, espéciesde Borrelia, espécies de Leptospira, espécies de Actinomyces, espécies deNocardia, espécies de Rickettsia, e qualquer outra espécie bacteriana quecause doença em um animal hospedeiro podem ser tratadas com os conju-gados de liberação de fármaco descritos aqui.
De interesse particular são bactérias que são resistentes a anti-bióticos como espécies de Estreptococos e espécies de Estafilococos resis-tentes a antibiótico e, ou bactérias que são suscetíveis a antibióticos, mascausam infecções recorrentes tratadas eventualmente com antibióticos deforma que organismos resistentes se desenvolvem. Bactérias que são sus-cetíveis a antibióticos, mas causam infecções recorrentes tratadas eventu-almente com antibióticos de forma que organismos resistentes se desenvol-vem, podem ser tratadas com os conjugados dê liberação de fármaco des-critos aqui na ausência de antibióticos, ou em combinação com doses inferi-ores de antibióticos que normalmente serão administradas a um animal hos-pedeiro, para evitar o desenvolvimento das mesmas cepas bacterianas re-sistentes a antibiótico.
Doenças causadas por vírus, como vírus de DNA e de RNA, po-dem também ser tratadas com os conjugados de liberação de fármaco des-critos aqui. Tais vírus incluem, mas não são limitados a, vírus de DNA comovírus de papiloma, parvovírus, adenovírus, herpesvírus e vírus de vacínia, evírus de RNA, como arenavírus, coronavírus, rinovírus, vírus sinciciais respi-ratórios, vírus influenza, picornavírus, paramixovírus, rinovírus, retrovírus,lentivírus, e rhabdovírus.
Os conjugados de liberação de fármaco descritos aqui podemtambém ser usados para tratar doenças causadas por qualquer fungo, inclu-indo leveduras, espécies de micoplasma, parasitas, ou outros organismosinfecciosos que causam doença em animais. Exemplos de fungos que po-dem ser tratados com o método e conjugados de liberação de fármaco des-critos aqui incluem fungos que crescem como mofos ou são parecidos comlevedura, incluindo, por exemplo, fungos que causam doenças como Iombri-ga, histoplasmose, blastomicose, aspergilose, criptococose, esporotricose,cocidioidomicose, paracoccidio-idomicose, mucormicose, cromoblastomico-se, dermatofitose, prototecose, fusariose, pitiríase, micetoma, paracoccidioi-domicose, faoifomicose, pseudal-lesqueríase, esporotricose, tricosporose,infecção de pneumociste, e candidíase.
Os conjugados de liberação de fármaco descritos aqui podemtambém ser usados para tratar infecções parasitárias incluindo, mas nãolimitadas a, infecções causadas por solitária, como espécies de Taenia, Hy-menolepsis, Diphillobothrium, e de Echinococcus, ferro, como espécies deFasciolopsis, Heterophyes, Metagonimusl Clonorchis, Fasciola, Paragoni-mus, e Schitosoma, vermes, como espécies de Enterobius, Trichuris, Asca-ris, Ancilostoma, Necator, Strongiloides, Trichinella, Wuchereria, Brugia, LoaOnchocerca, e Dracunculus, ameba, como espécies de Naegleria e Aean-thamoeba, e protozoários, como espécies de Plasmodium, Trypanosoma,Leishmania, Toxoplasma, Entamoeba, Giardia, lsospora, Cryptosporidium, eEnterocytozoon.
As células patogênicas às quais os conjugados de liberação defármaco são direcionados podem também ser células que abrigam patóge-nos endógenos, como células infetadas por vírus, micoplasma, parasita oubactéria, se estas células preferencialmente expressarem receptores de li-gante, como receptores para vitaminas, ou análogos ou derivados das mesmas.
Em uma modalidade, os conjugados de liberação de fármacopodem ser internalizadas nas células patogênicas alvejadas sob ligação doligante a um receptor, transportador, ou outra proteína apresentada na su-perfície que especificamente liga o ligante e que é expressa preferencial-mente nas células patogênicas. Tal internalização pode ocorrer, por exem-plo, através de endocitose mediada por receptor. Se o conjugado de libera-ção de fármaco contiver um ligante liberável, o ligante e o composto de vincapodem dissociar intracelularmente e o vinca pode agir em seu alvo intracelu-lar.
Em outra modalidade ilustrativa, o Iigante do conjugado de libe-ração de fármaco pode ligar à célula patogênica que coloca o composto devinca em associação íntima com a superfície da célula patogênica. O com-posto de vinca pode depois ser liberado por clivagem do Iigante liberável.Por exemplo, o composto de vinca pode ser liberado por uma proteína dis-sulfeto isomerase se o Iigante liberável for um grupo dissulfeto. O compostode vinca pode depois ser absorvido pela célula patogênica a qual o conjuga-do de liberação de fármaco de ligação de receptor está ligado, ou o compos-to de vinca pode ser transportado por esta para outra célula patogênica emproximidade íntima. Alternativamente, o composto de vinca poderia ser libe-rado por uma proteína dissulfeto isomerase dentro da célula onde o Iiganteliberável é um grupo dissulfeto. O composto de vinca pode também ser libe-rado por um mecanismo hidrolítico, como hidrólise catalisada por ácido, co-mo descrito acima para certos mecanismos de eliminação beta, ou por umaclivagem anquimericamente assistida através de um mecanismo produtor deíon de oxônio ou íon de lactônio. A seleção do Iigante ou Iigantes liberáveisditará o mecanismo pelo qual o composto de vinca é liberado do conjugado.É apreciado que uma tal seleção pode ser predefinida pelas condições sobas quais o conjugado de liberação de fármaco será usado.
Em outra modalidade ilustrativa, onde o Iigante não compreendeum Iigante liberável, a porção de Iigante do conjugado de liberação de fár-maco pode ligar à célula patogênica que coloca o composto de vinca na su-perfície da célula patogênica para alvejar a célula patogênica para ataqueatravés de outras moléculas capazes de se ligar ao composto de vinca. Al-ternativamente, nesta modalidade, os conjugados de liberação de fármacopodem ser internalizados nas células alvejadas ao ligar, e a porção de Iigan-te e o composto de vinca podem permanecer intracelularmente associadoscom o composto de vinca que exibe seus efeitos sem dissociação da porçãode ligante.
Em ainda outra modalidade, ou em combinação com as modali-dades acima descritas onde o conjugado de liberação de fármaco ligar umreceptor de vitamina ou outro receptor de ligante, o conjugado pode se ligaraos receptores de vitamina solúvel presentes no soro ou às proteínas séri-cas, como albumina, resultando em circulação prolongada dos conjugadoscom relação ao composto de vinca não-conjugado, e em atividade aumenta-da dos conjugados para a população de célula patogênica com relação aocomposto de vinca não-conjugado.
O sítio de ligação para o ligante, como uma vitamina, pode inclu-ir receptores para o ligante capazes de especificamente se ligar ao liganteem que o receptor ou outra proteína é expressa exclusivamente, sobreex-pressa, ou preferencialmente expressa por uma população de células pato-gênicas. Uma proteína apresentada na superfície expressa exclusivamente,sobreexpressa, ou preferencialmente expressa pelas células patogênicas étipicamente um receptor que não está presente ou está presente em concen-trações inferiores em células não-patogênicas provendo um meio para elimi-nação seletiva das células patogênicas. Os conjugados de liberação de fár-maco podem ser capazes de ligação com afinidade alta aos receptores emcélulas de câncer ou outros tipos de células patogênicas. A ligação de afini-dade alta pode ser inerente ao ligante ou a afinidade de ligação pode serintensificada pelo uso de um ligante quimicamente modificado.
Os conjugados de liberação de fármaco descritos aqui podemser administrados em uma terapia de combinação com qualquer outro fár-maco conhecido se ou não o fármaco adicional for alvejado. Fármacos adi-cionais ilustrativos incluem, mas não são limitados a, peptídeos, oligopeptí-deos, oligopeptídeos retroinversos, proteínas, análogos de proteína em quepelo menos uma ligação de não-peptídeo substitui uma ligação de peptídeo,apoproteínas, glicoproteínas, enzimas, coenzimas, inibidores de enzima,aminoácidos e seus derivados, receptores e outras proteínas de membrana,antígenos e anticorpos para estes, haptenos e anticorpos para estes, hor-mônios, lipídios, fosfolipídeos, lipossomas, toxinas, antibióticos, analgésicos,broncodilatadores, beta-bloqueadores, agentes antimicrobianos, agentesanti-hipertensivos, agentes cardiovasculares incluindo antiarrítmicos, glicosí-deos cardíacos, antianginais, vasodilatadores, agentes do sistema nervosocentral incluindo estimulantes, psicotrópicos, antimaníacos, e depressivos,agentes antivirais, anti-histamínicos, fármacos de câncer incluindo agentesquimioterapêuticos, tranqüilizantes, antidepressivos, antagonistas de H-2,anticonvulsivos, antinauseantes, prostaglandinas e análogos de prostaglan-dina, relaxantes musculares, substâncias antiinflamatórias, estimulantes,descongestionantes, antieméticos, diuréticos, antiespasmódicos, antiasmáti-cos, agentes de anti-Parkinson, expectorantes, suppressores de tosse, mu-colíticos, e aditivos mineral e nutricional.
Em outro aspecto ilustrativo, o fármaco adicional pode ser sele-cionado de um composto capaz de estimular uma resposta imune endógena.Compostos adequados incluem, mas não são limitados a, citocinas ou fato-res de crescimento de célula imunes como interleucinas 1-18, fator de célu-las-tronco, FGF básico, EGF, G-CSF, GM-CSF, Iigante de FLK-2, HILDA,MIP-Ia1 TGF-a, TGF-β, M-CSF, IFN-a, IFN-β, IFN-γ, CD23 solúvel, LlF, ecombinações dos mesmos.
Combinações terapeuticamente eficazes dos mesmos fatoresimunoestimulantes podem ser usadas. Em uma modalidade, por exemplo,quantidades terapeuticamente eficazes de IL-2, por exemplo, em quantida-des que variam de cerca de 0,1 MIU/m2/dose/dia a cerca de 15 MIU/m2/ do-se/dia em um regime diário de dose múltipla, e IFN-α, por exemplo, emquantidades que variam de cerca de 0,1 MIU/m2/dose/dia a cerca de 7,5MIU/m2/dose/dia em um regime diário de dose múltipla, pode ser usado juntocom os conjugados de liberação de fármaco para eliminar, reduzir, ou neu-tralizar células patogênicas em um animal hospedeiro abrigando as célulaspatogênicas (MIU = milhões de unidades internacionais; m2 = área de super-fície do corpo aproximada de um ser humano médio). Em outra modalidade,IL-12 e IFN -a podem ser usados nas quantidades terapeuticamente eficazesacima descritas para interleucinas e interferonas, e em ainda outra modali-dade IL-15 e IFN-α podem ser usados nas quantidades terapeuticamenteeficazes acima descritas para interleucinas e interferonas. Em uma modali-dade alternada IL-2, IFN-α ou IFN-γ, e GM-CSF podem ser usados em com-binação nas quantidades terapeuticamente eficazes acima descritas. Qual-quer outra combinação eficaz de citocinas incluindo combinações de outrasinterleucinas e interferonas e fatores estimulantes de colônia pode tambémser usada.
Também, o fármaco adicional pode ser qualquer fármaco conhe-cido na técnica que seja citotóxico ou citoestático, intensifique a permeabili-dade de tumor, iniba proliferação de célula tumoral, promova apoptose, di-minua atividade antiapoptótica em células alvas, seja usado para tratar do-enças causadas por agentes infecciosos, intensifique uma resposta imuneendógena direcionada para células patogênicas, ou seja útil para tratar umestado de doença causado por qualquer tipo de célula patogênica. Fárma-cos adicionais adequados exemplares incluem adrenocorticóides e corticos-teróides, agentes de alquilação, antiandrogênios, antiestrogênios, andróge-no, aclamicina e derivados de aclamicina, estrogênios, antimetabólitos comoarabinosídeo de citosina, análogos de purina, análogos de pirimidina, e me-totrexato, bussulfano, carboplatina, clorambucila, cisplatina e outros compos-tos de platina, tamoxifeno, taxol, paclitaxel, derivados de paclitaxel, Taxote-re®, ciclofosfamida, daunomicina, rizoxina, toxina T2, alcalóides de planta,prednisona, hidroxiuréia, teniposida, mitomicinas, discodermolidas, inibido-res de microtúbulo de não-vinca, epotilonas, tubulisina, benz[e]indolona deciclopropila, benz[e]indolona de e-ciclopropila, benz[e]indolona de O-Ac-seco-ciclopropil, bleomicina e qualquer outro antibiótico, mostardas de nitro-gênio, nitrosuréia, colquicina, derivados de colquicina, alocolquicina, tiocol-quicina, cisteína de tritila, Halicondrina B, dolastatinas como dolastatina 10,amanitinas como α-amanitina, camptotecina, irinotecan, e outros derivadosde camptotecina dos mesmos, geldanamicina e derivados de geldanamicina,estramustina, nocodazol, MAP4, colcemid, vindesina, vinblastina, vincristina,catarantina, vindolina, leurosina, vinorelbina, imidocarb, sibutramina, toltra-zurila, ácido vinblastinóico, maytansinas e análogos e derivados das mes-mas, gencitabina, agentes inflamatórios e pró-inflamatórios, inibidores detransdução de sinal de peptídeo e peptidomimético, e qualquer outro fárma-co reconhecido na técnica ou toxina. Outros fármacos que podem ser usa-dos em terapias de combinação incluem penicilinas, cefalosporinas, vanco-micina, eritromicina, clindamicina, rifampina, cloramfenicol, antibióticos deaminoglicosídeo, gentamicina, anfotericina B, aciclovir, trifluridina, ganciclo-vir, zidovudina, amantadina, ribavirina, é qualquer outro composto antimicro-biano reconhecido na técnica. Análogos ou derivados de quaisquer dos fár-macos adicionais acima descritos podem também ser usados em terapias decombinação.
Em outra modalidade ilustrativa, composições farmacêuticas sãofornecidas. As composições farmacêuticas compreendem uma quantidadede um conjugado de liberação de fármaco eficaz para eliminar uma popula-ção de células patogênicas em um animal hospedeiro quando administradoem uma ou mais doses. O conjugado de liberação de fármaco é preferivel-mente administrado parenteralmente ao animal hospedeiro, por exemplo,intradérmica, subcutânea, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, ou in-tratecalmente. Alternativamente, o conjugado de liberação de fármaco podeser administrado ao animal hospedeiro através de outros processos medi-calmente úteis, como oralmente, e qualquer dose eficaz e forma de dosa-gem terapêutica adequada, incluindo formas de dosagem de liberação pro-longada, pode ser usada. Excipientes exemplares úteis para formas de do-sagem orais incluem, mas não são limitados a, amido de milho, gelatina, Iac-tose, estearato de magnésio, bicarbonato de sódio, derivados de celulose, eglicolato de amido de sódio.
Exemplos de formas de dosagem parenterais incluem soluçõesaquosas do agente ativo, em uma solução salina isotônica, 5% de glicose ououtros veículos líquidos farmaceuticamente aceitáveis bem-conhecidos co-mo alcoóis líquidos, glicóis, ésteres, e amidas. A forma de dosagem parente-ral de acordo com esta invenção pode ser na forma de um Iiofilizado recons-tituível que compreende a dose do conjugado de liberação de fármaco. Emum aspecto da modalidade presente, qualquer uma de várias formas de do-sagem de liberação prolongada conhecidas na técnica pode ser administra-da como, por exemplo, as matrizes de carboidratos biodegradáveis descritasnas patentes U. S. Nos. 4.713.249; 5.266.333; e 5.417.982, cujas descriçõessão aqui incorporadas por referência, ou, alternativamente, uma bomba lenta(por exemplo, uma bomba osmótica) pode ser usada.
O fármaco adicional na terapia de combinação pode ser admi-nistrado ao animal hospedeiro antes, após, oü ao mesmo tempo que os con-jugados de liberação de fármaco e o fármaco adicional pode ser administra-do como parte da mesma composição contendo o conjugado de liberação defármaco ou como parte de uma composição diferente que o conjugado deliberação de fármaco. Qualquer tal terapia de combinação em uma dose efi-caz do fármaco adicional pode ser usada.
Em outro aspecto ilustrativo, pode ser usado mais de um tipo deconjugado de liberação de fármaco. Por exemplo, o animal hospedeiro podeser tratado em um protocolo de co-doseamento com conjugados com Iigan-tes diferentes como, por exemplo, conjugados de foíato-vinca e vitamina Bi2-vinca em combinação, e similares. Em outra modalidade ilustrativa, o animalhospedeiro pode ser tratado com conjugados compreendendo mais de umligante como, por exemplo, folatos múltiplos ou moléculas de vitamina Bi2múltiplas em um conjugado, ou combinações de Iigantes no mesmo conju-gado como um composto de vinca conjugado com ambos Iigantes de folatoe de vitamina B12. Além disso, conjugados de liberação de fármaco podemser usados com tipos diferentes de compostos de vinca em conjugados deliberação de fármaco separados.
A dosagem diária unitária do conjugado de liberação de fármacopode variar, dependendo significativamente da condição do hospedeiro, doestado de doença sendo tratado, do peso molecular do conjugado, sua viade administração e distribuição de tecido, e da possibilidade de co-uso deoutros tratamentos terapêuticos como terapia de radiação ou fármacos adi-cionais em terapias de combinação. A quantidade eficaz a ser administradaem um animal hospedeiro é com base na área de superfície do corpo, peso,e avaliação médica da condição do paciente. Doses eficazes podem variar,por exemplo, de cerca de 1 ng/kg a cerca de 1 mg/kg, de cerca de 1 μg/kg acerca de 500 μg/kg, e de cerca de 1 pg/kg a cerca de 100 μg/kg.
Qualquer regime eficaz para administrar os conjugados de Iibe-ração de fármaco pode ser usado. Por exemplo, os conjugados de liberaçãode fármaco podem ser administrados como doses únicas, ou podem ser di-vididos e administrados como um regime diário de múltiplas doses. Tam-bém, um regime em estágios, por exemplo, um a três dias por semana podeser usado como uma alternativa para o tratamento diário, e para o propósitode definir esta invenção é considerado que tal regime diário intermitente ouem estágios é equivalente ao tratamento diário e é contemplado. Em umamodalidade ilustrativa, o animal hospedeiro é tratado com injeções múltiplasdo conjugado de liberação de fármaco para eliminar a população de célulaspatogênicas. Em uma modalidade, o hospedeiro é injetado múltiplas vezes(preferivelmente cerca de 2 até cerca de 50 vezes) com o conjugado de libe-ração de fármaco, por exemplo, em intervalos de 12-72 horas ou em interva-los de 48-72 horas. Injeções adicionais do conjugado de liberação de fárma-co podem ser administradas ao animal hospedeiro em um intervalo de diasou meses após a(s) injeção(ões) inicial(is) e as injeções adicionais podemimpedir recorrência do estado de doença causada pelas células patogêni-cas.
Em um aspecto ilustrativo, vitaminas, ou análogos ou derivadosdas mesmas, que podem ser usados nos conjugados de liberação de fárma-co incluem aqueles que se ligam aos receptores especificamente expressosem macrófagos ativados, como o receptor de folato que liga folato, ou umanálogo ou derivado do mesmo. Os conjugados ligados a folato, por exem-plo, podem ser usados para matar ou suprimir a atividade de macrófagosativados que causam estados de doença no hospedeiro. Tais conjugados dealvejamento de macrófagos, quando administrados a um animal hospedeirosofrendo de um estado de doença mediado por macrófago ativado, traba-lham para concentrar e associar os compostos de vinca conjugados na po-pulação de macrófagos ativados para matar os macrófagos ativados ou su-primir a função dos macrófagos. Eliminação, redução, ou desativação dapopulação de macrófagos ativados trabalha para parar ou reduzir a caracte-rística da patogênese mediada por macrófagos ativados do estado de doen-ça sendo tratado. Exemplares de doenças conhecidas por serem mediadasatravés de macrófagos ativados incluem artrite reumatóide, colite ulcerativa,doença de Crohn, psoríase, osteomielite, esclerose múltipla, aterosclerose,fibrose pulmonar, sarcoidose, esclerose sistêmica, rejeição de transplante deórgão (GVHD) e inflamações crônicas. Administração do conjugado de libe-ração de fármaco é tipicamente continuada até os sintomas do estado dedoença serem reduzidos ou eliminados.
Os conjugados de liberação de fármaco administrados para ma-tar macrófagos ativados ou suprimir a função dos macrófagos ativados po-dem ser administrados parenteralmente ao animal hospedeiro, por exemplo,intradérmica, subcutânea, intramuscular, intraperitoneal, ou intravenosamen-te em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável. Alternati-vamente, os conjugados de liberação de fármaco podem ser administradosao animal hospedeiro por outros procedimentos medicalmente úteis e doseseficazes podem ser administradas em formas de dosagem de liberação pa-drão ou prolongadas. O método terapêutico pode ser usado sozinho ou emcombinação com outros métodos terapêuticos reconhecidos para tratamentode estados de doença mediados por macrófagos ativados.
As seguintes modalidades exemplificadas ilustrativas não sãointencionadas e não deveriam ser interpretadas como limitativas. Por exem-plo, em cada composto apresentado aqui, a estereoquímica de aminoácidosusada na formação do ligante pode ser opcionalmente selecionada da confi-guração natural L, ou da configuração não-natural D. Cada Exemplo foi ca-racterizado por espectroscopia de RMN, MS, e/ou de UV, e/ou HPLC comoindicado; sinais característicos selecionados são observados como apropri-ado.
EXEMPLOS DO MÉTODO
EXEMPLO DO MÉTODO 1. Inibição de Crescimento de Tumorem Camundongos. A atividade antitumor dos compostos descritos aqui,quando administrados intravenosamente (i.v.) em animais portadores de tu-mor, foi avaliada em camundongos Balb/c portando tumores subcutâneos deM109. Aproximadamente 11 dias pós inoculação de tumor na subcútis daaxila direita com 1 χ 106 células de M109 (volume de tumor médio em t0 = 60mm3), camundongos (5/grupo) foram injetados i.v. três vezes por semana(TIW), durante 3 semanas com 1500 nmols/kg do conjugado de liberação defármaco ou com um volume de dose equivalente de PBS (controle). Cresci-mento de tumor foi medido usando calibradores em intervalos de 2 dias ou 3dias em cada grupo de tratamento. Os volumes de tumor foram calculadosusando a equação V = a χ b*/2, onde "a" é o comprimento do tumor e "b" é alargura expressa em milímetros.
EXEMPLO DO MÉTODO 2. Inibição de Crescimento de Tumorem Camundongos. A atividade antitumor dos compostos descritos aqui,quando administrados intravenosamente (i.v.) em animais portadores de tu-mor, foi avaliada em camundongos nu/nu portando tumores subcutâneos deKB. Aproximadamente 8 dias pós inoculação de tumor na subcútis da axiladireita com 1 χ 106 células de KB (volume de tumor médio em t0 = 50-100mm3), camundongos (5/grupo) foram injetados i.v: três vezes por semana(TIW), durante 3 semanas com 5 μηιοΙε/Ι^ do conjugado de liberação defármaco ou com um volume de dose equivalente de PBS (controle). Cresci-mento do tumor foi medido usando calibradores em intervalos de 2 dias ou 3dias em cada grupo de tratamento. Os volumes de tumor foram calculadosusando a equação V = a χ b2/2, onde "a" é o comprimento do tumor e "b" é alargura expressa em milímetros.
EXEMPLO DO MÉTODO 3. Inibição da Síntese de DNA CelularOs compostos descritos aqui foram avaliados usando um ensaiode citotoxicidade in vitro que prognostica a habilidade do fármaco para inibiro crescimento de células de KB positivas de receptor de folato. Os compos-tos foram compreendidos de folato ligado a um respectivo fármaco quimiote-rapêutico, como preparado de acordo com os protocolos descritos aqui. Ascélulas de KB foram expostas a até 7 h a 37SC às concentrações indicadasde conjugado de folato-fármaco na ausência ou presença de pelo menos umexcesso de 100 vezes de ácido fólico. As células foram depois enxaguadasuma vez com meio de cultura fresco e incubadas em meio de cultura frescodurante 72 horas a 379 C. Viabilidade celular foi avaliada usando um ensaiode incorporação de 3H-timidina.Como mostrado nas figuras aqui, citotoxicidade dose-depen-dente foi mensurável, e na maioria dos casos, os valores de IC50 (concentra-ção de conjugado de fármaco requerida para reduzir incorporação de 3H-timidina em DNA recentemente sintetizado em 50%) ficaram na faixa baixade nanomolar. Além disso, as citotoxicidades dos mesmos conjugados foramreduzidas na presença em excesso de ácido fólico livre, indicando que mortecelular observada foi mediada mediante ligação ao receptor de folato.
EXEMPLO DO MÉTODO 4. Ensaio de Afinidade Relativa. A afi-nidade para receptores de folato (FRs) com relação a folato foi determinadade acordo com um método previamente descrito (Westerhof, G. R., J. H. S-chornagel, et al. (1995) Mol. Pharm. 48: 459-471) com modificação suave.Brevemente, as células de KB FR-positivas foram pesadamente semeadasem placas de cultura de célula de 24 cavidades e deixadas aderir ao plásticopor 18 h. Meios de incubação usados foram substituídos em cavidades de-signadas com RPMI livre de folato (FFRPMI) suplementado com 100 nM deácido 3H-fólico na ausência e presença de concentrações crescentes de arti-go de teste ou ácido fólico. As células foram incubadas por 60 min a 37eC edepois enxaguadas 3 vezes com PBS, pH 7,4. Quinhentos microlitros de 1%de SDS em PBS, pH 7,4, foram adicionados por cavidade. Lisados de célulaforam depois colhidos e adicionados a frascos individuais contendo 5 ml decoquetel de cintilação, e depois contados para radioatividade. Tubos de con-trole negativos continham apenas o ácido 3H-fólico em FFRPMI (nenhumcompetidor). Tubos de controle positivos continham uma concentração finalde 1 mM de ácido fólico, e CPMs medidas nestas amostras (representandoligação não-específica de marcação) foram subtraídas de todas as amos-tras. Notavelmente, afinidades relativas foram definidas como a razão molarinversa de composto requerido para deslocar 50% de ácido 3H-fólico ligado aFR em células de KB, e a afinidade relativa do ácido fólico para FR foi esti-pulada em 1.
EXEMPLO DO MÉTODO 5. Ensaio de Volume de Tumor de 4T-
1. Camundongos de seis a sete semanas de idade (cepa de Balb/c fêmea)foram obtidos de Harlan, Inc., Indianapolis, IN. Os camundongos foram man-tidos na comida livre de folato de Harlan para um total de três semanas an-tes do princípio e durante este experimento. Células tumorais de 4T-1 recep-tor-negativas de folato (1 χ 106 células por animal) foram inoculadas na sub-cútis da axila direita. Aproximadamente 5 dias após a inoculação do tumorquando o volume médio de tumor de 4T-1 estava -100 mm3, os camundon-gos (5/grupo) foram injetados i.v. três vezes por semana (TIW)1 durante 3semanas com 3 μmols/kg de conjugado de liberação de fármaco ou com umvolume de dose equivalente de PBS (controle). Crescimento de tumor foimedido usando calibradores em intervalos de 2 dias ou 3 dias em cada gru-po de tratamento. Os volumes de tumor foram calculados usando a equaçãoV = a χ b2/2, onde "a" é o comprimento do tumor e "b" é a largura expressaem milímetros.
EXEMPLO DO MÉTODO 6. Determinação de peso. A alteraçãode peso de porcentagem dos camundongos foi determinada em camundon-gos (5 camundongos/grupo) nos dias indicados após a inoculação do tumor(PTI) como mostrado no gráfico para as amostras descritas no ensaio devolume de tumor relacionado.
EXEMPLO DO MÉTODO 7. Preparação Geral de Folato-Peptídeos. Ligantes descritos aqui que incluem um peptídeo são preparadosatravés de método seqüencial suportado por polímero usando métodos pa-drão, como a estratégia de Fmoc em uma resina de Fmoc-AA-Wang sensí-vel a ácido. Ilustrativamente1 o fragmento de peptidila contendo folato Pte-GIu-(AA)n-NH(CHR2)CO2H (3) é preparado pelo método mostrado no Es-quema 1 de aminoácidos suportados em resina de Wang e síntese de ami-noácido protegida por Fmoc.ESQUEMA 1
<formula>formula see original document page 58</formula>
(a) 20 % de piperidina/DMF; (b) Fmoc-AA-OH, PyBop, DIPEA, DMF; (c)Fmoc-Glu-O-f-Bu ou Fmoc-Glu(y-0-í-Bu)-OH, PyBop, DIPEA, DMF; (d)N10(TFA)-Pte-OH; PyBop1 DIPEA, DMSO; (e) TFAA, (CH2SH)2, /-Pr3SiH; (f)NH4OH, pH 9-10.
Nesta modalidade ilustrativa dos processos descritos aqui, R1 éFmoc, R2 é a cadeia lateral de aminoácido apropriadamente protegida dese-jada, Wang é uma 2-clorotritil-resina, e DIPEA é diisopropiletilamina. Proce-dimentos de acoplamento padrão, como PyBOP e outros descritos aqui ouconhecidos na técnica são usados, onde o agente de acoplamento é ilustra-tivamente aplicado como o reagente ativador para assegurar acoplamentoeficiente. Grupos de proteção de Fmoc foram removidos em cada etapa deacoplamento sob condições padrão, como em tratamento com piperidina,fluoreto de tetrabutilammônio (TBAF), e similares. Blocos de construção deaminoácido apropriadamente protegidos, como Fmoc-Glu-OBu, N10-TFA-Pte-OH, e similares, são usados, como descrito no Esquema 1, e represen-tados na etapa (b) por Fmoc-AA-OH. Desse modo, AA refere-se a qualquermaterial de partida de aminoácido que é apropriadamente protegido. É paraser entendido que o termo aminoácido como aqui usado pretende se referira qualquer reagente tendo um grupo funcional de amina e um de ácido car-boxílico separado por um ou mais carbonos, e inclui os alfa e beta aminoáci-dos de ocorrência natural, como também derivados de aminoácido e análo-gos dos mesmos aminoácidos. Em particular, aminoácidos tendo cadeiaslaterais que são protegidas, como serina protegida, treonina, cisteína, aspar-tato, e similares podem também ser usados na síntese de folato-peptídeodescrita aqui. Também, gama, delta, ou aminoácidos homólogos mais lon-gos podem também ser incluídos como materiais de partida na síntese defolato-peptídeo descrita aqui. Também, análogos de aminoácido que têmcadeias laterais homólogas, ou estruturas de ramificação alternadas, taiscomo norleucina, isovalina, treonina de β-metila, cisteína de β-metila, cisteí-na de β,β-dimetila, e similares, podem também ser incluídas como materiaisde partida na síntese de folato-peptídeo descrita aqui.
A seqüência de acoplamento (etapas (a) & (b)) envolvendo ami-noácidos Fmoc-protegidos (AA) da fórmula Fmoc-AA-OH é executada "n"vezes para preparar peptídeo de suporte sólido (2), onde η é um númerointeiro e pode ser igual a O a cerca de 100. Seguindo a última etapa de aco-plamento, o grupo de Fmoc restante é removido (etapa (a)), e o peptídeo éacoplado seqüencialmente a um derivado de glutamato (etapa (c)), despro-tegido, e acoplado a ácido pteróico TFA-protegido (etapa (d)). Subseqüen-temente, o peptídeo é clivado do suporte polimérico sob tratamento com áci-do trifluoroacético, etanoditiol, e triisopropilsilano (etapa (e)). Estas condi-ções de reação resultam na remoção simultânea dos grupos de proteção t-Bu, f-Boc, e Trt que podem formar parte da cadeia lateral de aminoácido a-propriadamente protegida. O grupo de proteção de TFA é removido sob tra-tamento com base (etapa (f)) para fornecer o fragmento de peptidila conten-do folato (3).
EXEMPLOS DE COMPOSTOEXEMPLO 1
<formula>formula see original document page 59</formula>De acordo com o procedimento geral do Exemplo do Método 7(Esquema 1), Cys-NH2 protegido com 4-metoxitritila (MTT) ligado em resinade Wang foi reagido de acordo com a seqüência a seguir: 1) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 2) a. Fmoc-Asp (Ot-Bu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 3) a. Fmoc-Arg(Pbf)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 4) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH,PyBOP1 DIPEA; b. 20 % de Piperidina/DMF; 5) a. Fmoc-GIu-OtBu, PyBOP1DIPEA; b. 20 % de Piperidina/DMF; 6) ácido N10-TFA-pteróico, PyBOP, DI-PEA. Os grupos de proteção de MTT, tBu e de Pbf foram removidos comTFA/H20/TIPS/EDT (92,5:2,5:2,5:2,5), e o grupo de proteção de TFA foi re-movido com NH4OH aquoso a pH = 9,3. 1H RMN selecionada (D2O) δ (ppm)8,68 (s, 1H, FA H-7), 7,57 (d, 2H, J = 8,4 Hz, FA H-12 &16), 6,67 (d, 2H, J =9 Hz, FA H-13 &15), 4,40-4,75 (m, 5H), 4,35 (m, 2H), 4,16 (m, 1H), 3,02 (m,2H), 2,55-2,95 (m, 8H), 2,42 (m, 2H), 2,00-2,30 (m, 2H), 1,55-1,90 (m, 2H),1,48 (m, 2H); MS (ESI, m+H+) 1046.
EXEMPLO 2
De acordo com o procedimento geral do Exemplo do Método 7(Esquema 1), Cys-NH2 protegido com 4-metoxitritila (MTT) ligado em resinade Wang foi reagido de acordo com a seqüência a seguir: 1) a. Fmoc-β-aminoalanina(NH-MTT)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 2)a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 3) a.Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 4) a.Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 5) a.Fmoc-GIu-OtBu, PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 6) ácido N10-TFA-pteróico, PyBOP, DIPEA. Os grupos de proteção de MTT, tBu e de TFAforam removidos com a. 2% de hidrazina/DMF; b. TFA/H20/TIPS/EDT(92,5:2,5:2,5:2,5).
Os reagentes mostrados na tabela a seguir foram usados napreparação:
<table>table see original document page 60</column></row><table><table>table see original document page 61</column></row><table>
A etapa de acoplamento foi executada como segue: em um vasode síntese de peptídeo adicionar a resina, adicionar a solução de aminoáci-do, DIPEA, e PyBOP. Borbulhar argônio por 1 hora e lavar 3X com DMF eIPA. Usar 20 % de piperidina em DMF para desproteção de Fmoc, 3X (10min), antes de cada acoplamento de aminoácido. Continuar até completartodas as 6 etapas de acoplamento. No final, lavar a resina com 2 % de hi-drazina em DMF 3X (5 min) para clivar o grupo de proteção de TFA em áci-do Pteróico.
Clivar o peptídeo análogo da resina usando o reagente a seguir,92,5% (50 ml) de TFA, 2,5 % (1,34 ml) de H2O, 2,5 % (1,34 ml) de Triisopro-pilsilano, 2,5 % (1,34 ml) de etanoditiol, a etapa de clivagem foi executadacomo segue: adicionar 25 ml de reagente de clivagem e borbulhar por 1,5hora, escoar, e lavar 3X com reagente restante. Evaporar para cerca de 5 mle precipitar em éter etílico. Centrifugar e secar. Purificação foi executadacomo segue: Coluna - Waters NovaPak C18 300x19mm; Tampão A = 10mM de Acetatode Amônio, pH 5; B = CAN; 1% de B a 20 % de Bem 40 mi-nutos a 15 ml/min, para 350 mg (64 %); HPLC-RT 10,307 minutos, 100 %puro, espectro de 1H RMN consistente com a estrutura atribuída, e MS (ES-):1624,8, 1463,2, 1462,3, 977,1, 976,2, 975,1, 974,1, 486,8, 477,8.
EXEMPLO 3
<formula>formula see original document page 61</formula>De acordo com o procedimento geral do Exemplo do Método 7(Esquema 1), Cys-NH2 protegido com 4-metoxitritila (MTT) ligado em resinade Wang foi reagido de acordo com a seqüência a seguir: 1) a. Fmoc-β-aminoalanina(NH-lvDde)-OH, PyBOP1 DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 2)a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% de Píperidina/DMF; 3) a.Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 4) a.Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 5) a.Fmoc-GIu-OtBu, PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 6) ácido N10-TFA-pteróico, PyBOP, DIPEA. Os grupos de proteção de MTT, tBu e de TFAforam removidos com a. 2% de hidrazina/DMF; b. TFA/H20/TIPS/EDT(92,5:2,5:2,5:2,5).
Os reagentes mostrados na tabela a seguir foram usados napreparação:
<table>table see original document page 62</column></row><table>
A etapa de acoplamento foi executada como segue: em um vasode síntese de peptídeo adicionar a resina, adicionar a solução de aminoáci-do em DMF, DIPEA, e PyBOP. Borbulhar argônio por 1 hora e lavar 3X10 mlcom DMF e IPA. Usar 20 % de piperidina em DMF para desproteção deFmoc, 3X10 ml (10 min), antes de cada acoplamento de aminoácido. Conti-nuar até completar 6 etapas de acoplamento. No final, lavar a resina com2% de hidrazina em DMF 3X10 ml (5 min) para clivar o grupo de proteção deTFA em ácido Pteróico e grupo de proteção de IvDde em β-aminoalanina.Por fim, acoplar a amina livre da β-aminoalanina com o ácido Fmoc-tio-propiônico em DMF usando DIPEA e PyBop. Borbulhar argônio por 1 h. elavar 3X10 ml com DMF e IPA. Secar a resina sob argônio por 30 min.
Clivar o análogo de peptídeo da resina usando o reagente a se-guir, 92,5 % (50 ml) de TFA, 2,5 % (1,34 ml) de H2O, 2,5 % (1,34 ml) de Trii-sopropilsilano, 2,5 % (1,34 ml) de etanoditiol, a etapa de clivagem foi execu-tada como segue: Adicionar 25 ml de reagente de clivagem e borbulhar por1,5 h, escoar, e lavar 3X com reagente restante. Evaporar para cerca de 5ml e precipitar em éter etílico. Centrifugar e secar. Purificação foi executadacomo segue: Coluna-Waters NovaPak C18 300x19mm; Tampão A = 10 mMde Acetato de Amônio, pH 5; B = CAN; 1 % de B a 20 % de B em 40 minutosa 15 ml/min, para 450 mg (65 %); espectro de 1H RMN consistente com aestrutura atribuída.
EXEMPLO 4
<formula>formula see original document page 63</formula>
De acordo com o procedimento geral do Exemplo do Método 7(Esquema 1), Cys-NH2 protegido com MTT ligado em resina de Wang foireagido de acordo com a seqüência a seguir: 1) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH,PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 2) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Py-BOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 3) a. Fmoc-Arg(Pbf)-OH, PyBOP,DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 4) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, Dl-ΡΕΑ; b. 20% de Piperidina/DMF; 5) a. Fmoc-GIu(Y-OtBu)-OH, PyBOP, DI-PEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 6) ácido N10-TFA-pteróico, PyBOP, DIPEA.
Os grupos de proteção de MTT, tBu e de Pbf foram removidos comTFA/H20/TIPS/EDT (92,5:2,5:2,5:2,5), e o grupo de proteção de TFA foi re-movido com NH4OH aquoso em pH = 9,3. O espectro de 1H RMN foi consis-tente com a estrutura atribuída.
EXEMPLO 5
<formula>formula see original document page 63</formula>De acordo com o procedimento geral do Exemplo do Método 7(Esquema 1), Cys-NH2 protegido com MTT ligado em resina de Wang foireagido de acordo com a seqüência a seguir: 1) a. Fmoc-D-Asp(OtBu)-OH,PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 2) a. Fmoc-D-Asp(OtBu)-OH,PyBOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 3) a. Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, Py-BOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 4) a. Fmoc-D-Asp(OtBu)-OH, Py-BOP, DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 5) a. Fmoc-D-GIu-OtBu, PyBOP,DIPEA; b. 20% de Piperidina/DMF; 6) ácido N10-TFA-pteróico, PyBOP, DI-PEA. Os grupos de proteção de MTT, tBu e de Pbf foram removidos comTFA/H20/TIPS/EDT (92,5:2,5:2,5:2,5), e o grupo de proteção de TFA foi re-movido com NH4OH aquoso a pH = 9,3. O espectro de 1H RMN foi consis-tente com a estrutura atribuída.
EXEMPLO 6
<formula>formula see original document page 64</formula>
HCl de 2-[(Benzotriazol-1 -il-(oxicarbonilóxi)-etildisulfanil]-piridina(601 mg) e 378 μΙ de DIPEA foram adicionados seqüencialmente a uma so-lução de hidrazida de vinblastina de desacetila (668 mg) em 5 ml de DCM a0°C. A reação foi deixada aquecer até a temperatura ambiente e agitada du-rante 3 horas. TLC (15 % de MeOH em DCM) mostrou conversão completa.A mistura foi purificada através de cromatografia de sílica-gel (1:9 Me-OH/DCM). As frações combinadas foram evaporadas, redissolvidas emDCM e lavadas com 10% de Na2CO3, salmoura, secadas (MgSO4), e evapo-radas a 550 mg (80%); HPLC-RT 12,651 min., 91% puro, espectro de 1HRMN consistente com a estrutura atribuída, e MS (ESI+): 984,3, 983,3,982,4, 492,4, 491,9, 141,8. Detalhes adicionais do mesmo procedimento sãodescritos na publicação do pedido de patente U.S. № US 2005/0002942 A1,incorporada aqui em sua totalidade por referência.
EXEMPLO 7
Ácido propiônico de dissulfeto de C-etila de mitomicina foi prepa-rado de acordo com o esquema a seguir
<formula>formula see original document page 65</formula>
(a) diisopropiletilamina (DIPEA), MeOH.
A uma solução do ácido propiônico de aminoetildissulfeto (81mg, 0,372 mmol) em 2 ml de metanol (MeOH) foi adicionado DIPEA (0,13ml, 0,746 mmol). A esta solução foi lentamente adicionada mitomicina-A(100 mg, 0,286 mmol) em MeOH (3,0 ml). A solução resultante foi deixadaagitar por 3 h. Análise de TLC (20% de MeOH em CHCl3) indicou que a rea-ção estava completa. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o re-síduo foi purificado usando uma coluna de sílica. Eluição de gradiente (10%a 20% de MeOH em CHCl3/0,5% de TEA deu frações puras do produto (110mg, 77 %). Sinais selecionados de 1H RMN (CDCl3) δ (ppm) 3,50 (d, 1H),3,56 (dd, 1H), 3,90 (t, 2H), 4,15 (d, 1H), 4,25 (t, 1H), 4,68 (dd, 1H).
EXEMPLO 8
<formula>formula see original document page 65</formula>
Preparado de acordo com o processo do Exemplo 7.
EXEMPLO 9
<formula>formula see original document page 65</formula>
Em uma garrafa de centrífuga de polipropileno, Exemplo 2 (82mg, 0,084 mmol) foi dissolvido em 5 ml de água e borbulhado com argôniopor 10 min. Em outro frasco, uma solução a 0,1 N de NaHCO3 foi borbulhadacom argônio durante 10 minutos. O pH da solução ligantea foi ajustado emcerca de 6,9 usando a solução a 0,1 N de NaHCO3. O derivado de hidrazidade vinblastina (Exemplo 6, 91 mg, 0,092 mM) em 5 ml de tetraidrofurano(THF) foi adicionado lentamente à solução acima. A solução clara resultantefoi agitada sob argônio por 15 min a 1h. Progresso da reação foi monitoradopor HPLC analítica (10 mM de acetato de amônio, pH = 7,0 e acetonitrila).THF foi evaporado, e a solução aquosa foi filtrada e injetada em uma colunade prep-HPLC (Coluna XTerra, 19 X 300 mM). Eluição com 1 mM de fosfatode sódio pH = 7,0 e acetonitrila resultou em frações puras contendo o produ-to, que foi isolado após secagem por congelação por 48 h (78 mg, 50%);C83HioaNi9O26S2; massa exata: 1845,68; MW: 1846,95; HPLC-RT 15,113min., 100 % puro, espectro de 1H RMN consistente com a estrutura atribuí-da, e MS (ES-): 1846,6, 1845,5, 933,3, 924,2, 923,3, 922,5, 615,6, 614,7,525,0.
Figuras 21A e 21B mostram a afinidade de ligação relativa parafolato versus Exemplo 9, e os efeitos do Exemplo 9 na incorporação de 3H-timidina, a IC50 do conjugado (58 nM), e que folato compete com o conjuga-do para se ligar ao receptor de folato demonstrando a especificidade de liga-ção do conjugado. Os ensaios foram conduzidos de acordo com os Exem-plos do Método 4 e 3, respectivamente.
Figura 1B mostra a atividade do Exemplo 9 na incorporação de3H-timidina em KB células com (o) e sem (·) ácido fólico em excesso; IC50 doExemplo 9 é cerca de 58 nM.
EXEMPLO 10
Em uma garrafa de centrífuga de polipropileno, Exemplo 3 (56mg) foi dissolvido em 7,5 ml de água e borbulhado com argônio por 10 min.Em outro frasco, uma solução a 0,1 N de NaHCO3 foi borbulhada com argô-nio por 10 min. O pH da solução do Exemplo 3 foi ajustado em 6,9 usando asolução a 0,1 N de NaHCO3. Exemplo 6 (44 mg) em 7,5 ml de tetraidrofura-no (THF) foi adicionado lentamente à solução do Exemplo 3. A solução clararesultante foi agitada sob argônio por 15 min a 1 h. Progresso da reação foimonitorado por HPLC analítica (10 mM de acetato de amônio, pH = 7,0 eacetonitrila). THF foi evaporado e a solução aquosa foi filtrada e purificadaatravés de prep-HPLC. Eluição com 1 mM de fosfato de sódio pH = 7,0 eacetonitrila resultou em frações puras que foram agrupadas, evaporadas emtemperatura ambiente, e a solução aquosa resultante foi ajustada em pH 4,0usando 0,1 N de HCI. Exemplo 10 foi isolado após secagem por congelaçãopor 48 h (61 mg, 64 %). Espectro de 1H RMN e dados de LCMS consistentescom a estrutura atribuída.
EXEMPLO 11
<formula>formula see original document page 67</formula>
Método A. Exemplo 11 foi preparado de acordo com o processo a seguir:
<formula>formula see original document page 67</formula>
Exemplo 9
(a) é DCC, DIPEA, THF; e (b) é água/THF em pH 8,5.Ácido propiônico de dissulfeto de C-etila de mitomicina (34,4 mg,0,069 mmol) foi dissolvido em THF seco (1 ml) sob argônio. N-hidróxi succi-namida (7,9 mg, 0,069 mmol) seguido por dicicloexil carbodiimida (14,2 mg,0,069 mmol) foi adicionada. Diisopropiletilamina (0,024 ml, 0,138 mmol) foiadicionada e a mistura resultante foi agitada por 3 h. Em uma garrafa decentrífuga de polipropileno, folato de vinblastina (Exemplo 9, 26 mg, 0,014 mmol)foi dissolvido em 3 ml de água. O pH da solução foi lentamente ajustado em8,5 usando a 0,1 N NaHCO3. O derivado de mitomicina C ativada preparadocomo descrito aqui foi adicionado à solução de folato como uma solução de3 ml de THF. A solução resultante foi agitada sob argônio por 15 min a 1 h,onde o progresso da reação foi monitorado por HPLC analítica (10 mM deacetato de amônio e acetonitrila, pH = 7,0). O THF foi removido sob pressãoreduzida e a solução aquosa foi filtrada e injetada sobre uma coluna deprep-HPLC (Coluna de X-terra, 19 X 300 mm). Eluição com 1 mM de fosfatode sódio (pH = 7,0) e acetonitrila resultou em frações puras que foram eva-poradas e secadas por congelação por 48 h a 12 mg (50%, com base nomaterial de partida restabelecido). Dados espectrais de 1H RMNe de massasuportaram aquela estrutura atribuída como mostrado nas figuras 9 e 10 res-pectivamente. Ci03Hi27N23O32S4; Massa Exata 2325,79; MW 2327,51, HPLC-RT 20,054 min., 99% puro, espectro de 1H RMN consistente com a estruturaatribuída, e MS (ES+): 1552,5, 116,0, 1165,3, 1164,3, 1148,4, 744,9, 746,4,745,6.
Método B: DMF anidra (4,5 ml) foi injetada em uma mistura doExemplo 10 (103 mg, 48,7 pmols) e Exemplo 8 (NO2-PySSCH2CH2-MMC,33,4 mg, 1,25 eq) em temperatura ambiente sob argônio. À solução resultan-te foram colocados na seringa DIPEA (84,9 μΙ, 10 eq) e DBU (72,9 μΙ, 10 eq)em tandem. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente sobargônio durante 20 minutos, depois transferida para um éter dietílico de agi-tação (50 ml). A suspensão resultante foi centrifugada, o precipitado foi la-vado com éter dietílico (15 ml χ 2), depois dissolvida em tampão de fosfato(9 ml, 1,25 mM, pH 6,8) e foi submetida a uma HPLC preparativa (Coluna:Waters XTerra RP18, 7 pm, 19x300 mm; Fases Móveis: A= 1,25 mM detampão de fosfato, pH 6,8, B = acetonitrila; Método: 10 % de B a 40% de Bpor 25 min a 25 mLymin). As frações de 11,72-13,88 minutos foram colhidase secadas por congelação para fornecer 105,8 mg de material, contendo99,2 mg e 6,6 mg de sais de fosfato.
Método C. Exemplo 11 foi preparado de acordo com o processoa seguir em 34% de rendimento:(a) NHS1 DCC-resina, DlΡΕΑ, THF; (b) Exemplo 7, DIPEA, DMSO.
Figura 2 mostra a afinidade de ligação relativa por ácido fólico (·,1,0) versus Exemplo 11 (0,21). Os dados na figura 2 mostram que o con-jugado tem ligação relativa alta com o receptor de folato. O ensaio foi con-duzido de acordo com o Exemplo do Método 4.
Figuras 1B e 3 mostram os efeitos dos Exemplos 9 (tendo umfármaco simples) e 11 (tendo um par de fármacos), respectivamente, sobincorporação de 3H-timidina, a IC50 dos conjugados do Exemplo 9 (58 nM) edo Exemplo 11 (5 nM). Os dados nas figuras 1B e 3 também mostram queácido fólico compete com os conjugados para a ligação ao receptor de folatoque demonstra a especificidade de ligação do conjugado. Os ensaios foramconduzidos de acordo com o Exemplo do Método 3. Além disso, Exemplo 11tendo dois fármacos mostrou mais de 10 vezes de potência no receptor defolato que o Exemplo 9 tendo apenas um fármaco simples.
Figura 4 mostra a atividade citotóxica /n vitro do Exemplo 11 (a)em três linhagens de células tumorais diferentes (KB, 4T-1cl2, e ID8-CI15).Além disso, figura 4 mostra que a atividade citotóxica do Exemplo 11 reduziuna presença de ácido fólico em excesso (b), indicando que o Exemplo 11está agindo no receptor de folato.
Figuras 5A e 5B mostram a atividade do Exemplo 11 em duasdoses diferentes (1 pmol/kg & 2 μπιοΙε/Ι^) contra tumores de câncer do pul-mão de M109 em camundongos Balb/c e no peso de camundongos Balb/c(camundongos Balb/c foram usados para o ensaio de volume de tumor deM109). Os ensaios foram executados de acordo com os Exemplos do Méto-do 1 e 6, respectivamente. Exemplo 11 inibiu o crescimento dos tumoressólidos, mas teve pouco efeito no peso dos camundongos em ambas as do-ses. Além disso, a dose mais alta (2 μι-nols/kg) mostrou inibição forte decrescimento de tumor, até mesmo após o doseamento ter terminado no dia20. A linha vertical corresponde ao último dia de doseamento (Dia 20). Cincoanimais foram testados, e na dose mais alta de 2 μιτιοΙ/kg, todos os cincoanimais mostraram uma resposta completa.
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Figura 6 mostra a atividade do Exemplo 11 em 1 μιτιοΙ/kg de TIWdurante 2 semanas em tumores de KB FR-positivos com (b) e sem (c) 40μηιοίε^ de EC20 (complexo de rênio), comparado aos controles (a). A linhapontilhada vertical indica o último dia de doseamento. As figuras mostramque o Exemplo 11 inibe o crescimento de tumores sólidos, e que efeito inibi-dor é impedido (competiu) pelo complexo de rênio de EC20. Além disso, asfiguras mostram que o tratamento com Exemplo 11 não afetou o peso doanimal de teste significativamente dos controles. EC20 (complexo de rênio)é o composto da fórmula
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quelado para Rênio. A preparação de EC20 é descrita na publicação do pe-dido de patente U.S. Ns US 2004/0033195 A1, a descrição do procedimentosintético da mesma é incorporada aqui por referência. O ensaio foi executa-do de acordo com o Exemplo do Método 2. EC20 age como um competidordo Exemplo 11 nos receptores de folato, e os resultados mostram a especifi-cidade dos efeitos do Exemplo 11.
Figura 8 mostra a atividade do Exemplo 11 em 1 pmol/kg de TIWem tumores de KB de xenoenxerto humano implantado s.c positivo de re-ceptor de folato com (b) e sem (c) adicionou-se 40 μιηοΙβ/Ι^ de EC20 (com-plexo de rênio) em camundongos desprotegidos. Os dados na figura 8 mos-tram que o Exemplo 11 inibe o crescimento de tumores sólidos, e que o efei-to inibidor é impedido (competido contra) pelo complexo de rênio de EC20,(b) versus (c). Além disso, os dados na figura 8 mostram que o tratamentocom o Exemplo 11 não afetou significativamente o peso do modelo animalde camundongos desprotegidos testados comparados aos controles (a).Figura 10 mostra a atividade do Exemplo 11 em 2 pmols/kg deTIW (e) em tumores humanos positivos de receptor de folato em camundon-gos desprotegidos comparados a uma mistura dos fármacos de base não-conjugada, mitomicina C e monoidrazida de desacetilvinblastina, a 0,5 μηιοΙ/kg de TIW (b), 1 μηιοΙ/kg de TIW (c), e 2 μηιοίε^ de TIW (d), comparadosaos controles sem tratar (a). Os dados na figura 10 mostram que o Exemploinibe o crescimento de tumores sólidos e dá uma resposta completa emcinco dos cinco animais de teste. Em contraste, tratamento com a mistura defármacos de base a 0,5 pmol/kg de TIW (b), ou a 1 μΓτιοΙ/kg de TIW (c) nãomostra uma resposta completa em quaisquer dos cinco animais de teste. Adose alta da mistura de fármacos de base em 2 μηιοίε^ de TIW (d) foi des-continuada antes do dia 20 devido à toxicidade observada, como mostradona figura 11 mostrando o efeito dos fármacos de base e Exemplo 11 no pesodos animais de teste.
Figura 11 mostra que o Exemplo 11 (e) não afetou o peso dosanimais de teste significativamente durante o tratamento de controles (a).Em contraste com o Exemplo 11, os dados na figura 11 mostram que trata-mento prolongado com as doses inferiores da mistura dos fármacos de basenão-conjugada, mitomicina C e monoidrazida de desacetilvinblastina, a (0,5μιτιοΙ/kg de TIW (b) e 1 μηιοΙ/kg de TIW (c)) causou perda de peso nos ani-mais de teste que foram significativos comparados aos controles (a). Alémdisso, a dose alta (2 μηιοίε^ de TIW (d)) da mistura dos fármacos de basenão-conjugada causou a maior perda de peso, levando à terminação daque-le teste.
Os compostos descritos aqui podem ser úteis no tratamento detumores grandes ou estabelecidos. Ilustrativamente, o Exemplo 11 é eficazem tumores grandes, figura 12 mostra a atividade do Exemplo 11 em 2 μηιοίε^de TIW, 2 semanas em tumores grandes de KB (250 mm3, 500 mm3, e 750mm3) s.c. Tratamento com o Exemplo 11 foi iniciado quando os tumores al-cançaram um dos três volumes alvos, como indicado pelas setas verticaisque correspondem ao volume de tumor. Os dados na figura 12 mostram queo Exemplo 11 inibe o crescimento de tumores grandes e dá uma respostacompleta em animais de teste.
Figura 13 mostra a atividade do Exemplo 11 (e) em 1 μηιοΙ/kg deTIW durante duas semanas de tratamento em tumores de KB estabelecidoss.c, comparados aos controles (a); os conjugados de cada fármaco simplessozinho, conjugado de mitomicina C (b) e conjugado de monoidrazida dedesacetilvinblastina (c), ou uma mistura daqueles conjugados de fármacosimples (d). Cada conjugado de fármaco foi dosado no mesmo nível de 1μmols/kg de TIW durante duas semanas de tratamento. A figura mostra que oExemplo 11 funciona melhor que qualquer conjugado de fármaco simples ouuma mistura de ambos os conjugados de fármaco simples. Surpreendente-mente, a mistura de conjugados de fármaco simples não funcionou significa-tivamente melhor que os conjugados de fármaco dosados simples individu-almente, e nenhum dos regimes de doseamento conjugado de fármaco sim-ples foi estatisticamente significativo dos controles. Apenas o composto doExemplo 11 foi superior aos controles. Além disso, estes dados sugerem umefeito sinergístico de ter um fármaco de vinca e um fármaco de mitomicinano conjugado simples.
EXEMPLOS 12 a 14
Preparados de acordo com os processos e condições descritosaqui, incluindo os processos descritos mais acima para o Exemplo 11. Deta-lhes adicionais para a preparação dos derivados requeridos de vinblastinaativada por tiossulfonato ou piridilditio, e vinblastina ativada por maleimidasão descritos na publicação do pedido de patente U.S. Ne US 2005/ 0002942A1. Detalhes adicionais para a preparação dos derivados de mitomicina re-queridos são descritos na publicação do pedido de patente U.S. NeUS 2005/0165227 A1, cuja descrição da mesma é aqui incorporada por refe-rência.EXEMPLO 12
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FIGURA 15 mostra a atividade do Exemplo 12 a 100 nM na in-corporação de 3H-timidina em células de HB FR-positivas versus o tempo depulso. O ensaio foi executado de acordo com o Exemplo do Método 3.
EXEMPLO 13
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EXEMPLO 14
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Claims (51)

1. Conjugado de liberação de fármaco de ligação de receptor,caracterizado pelo fato de que compreende:(a) uma porção de ligação de receptor;(b) um Iigante polivalente; e(c) dois ou mais fármacos, ou análogos ou derivados dosmesmos;em que a porção de ligação de receptor é covalentemente ligadaao ligante polivalente;os dois ou mais fármacos, ou análogos ou derivados dos mes-mos, são covalentemente ligados ao Iigante polivalente; eo ligante polivalente compreende um ou mais componentes se-lecionados do grupo consistindo em Iigantes espaçadores, Iigantes liberá-veis, e ligantes de heteroátomo, e combinações dos mesmos,desde que o Iigante polivalente inclua pelo menos um Iiganteliberável.
2. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivindi-cação 1, caracterizado pelo fato de que o Iigante polivalente compreendepelo menos um Iigante espaçador, em que o Iigante espaçador compreendeum peptídeo.
3. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivindi-cação 1, caracterizado pelo fato de que o Iigante polivalente compreendepelo menos um Iigante espaçador em que o Iigante espaçador compreendeum ou mais aminoácidos selecionados do grupo consistindo em asparagina,ácido aspártico, ácido glutâmico, glutamina, beta amino alanina, ornitina,lisina, arginina, serina, treonina, cisteína e combinações dos mesmos.
4. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivindi-cação 1, caracterizado pelo fato de que o Iigante polivalente compreendeuma pluralidade de Iigantes espaçadores selecionados do grupo consistindonos aminoácidos de ocorrência natural e estereoisômeros dos mesmos.
5. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivindi-cação 1, caracterizado pelo fato de que o Iigante polivalente compreendepelo menos um ligante espaçador para cada um dos dois ou mais fármacosou análogos ou derivados dos mesmos.
6. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivindi-cação 1, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Iigante de heteroá-tomo é um átomo de nitrogênio, oxigênio, ou enxofre, ou é selecionado dogrupo das fórmulas que consistem em -NHR1NHR2-, -S0-, -S(O)2-, e -NR3O-em que R1, R2, e R3 são cada um independentemente selecionados dogrupo consistindo em hidrogênio, alquila, arila, arilalquila, arila substituída,arilalquila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, e alcoxialquila.
7. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivindi-cação 1, caracterizado pelo fato de que pelo menos um ligante espaçador éselecionado do grupo consistindo em carbonila, tionocarbonila, alquileno,cicloalquileno, alquilenocicloalquila, alquilenocarbonila, cicloalquilenocarboni-la, carbonilalquilcarbonila, 1-alquilenossuccinimid-3-ila, l-(carbonilalquil)succinimid-3-ila, alquilenossulfoxila, sulfonilalquila, alquilenossulfoxilalquila,alquilenossulfonilalquila, carboniltetraidro-2H-piranila, carboniltetraidrofurani-la, 1-(carboniltetraidro-2H-piranil)succinimid-3-ila, e 1-(carboniltetraidro-furanil)succinimid-3-ila, em que cada um dos ditos ligantes espaçadores éopcionalmente substituído por um ou mais substituintes X1;em que cada substituinte X1 é independentemente selecionadodo grupo consistindo em alquila, alcóxi, alcoxialquila, hidróxi, hidroxialquila,amino, aminoalquila, alquilaminoalquila, dialquilaminoalquila, halo, haloalqui-la, sulfidrilalquila, alquiltioalquila, arila, arila substituída, arilalquila, arilalquilasubstituída, heteroarila, heteroarila substituída, carbóxi, carboxialquila, car-boxilato de alquila, alcanoato de alquila, guanidinoalquila, R4-Carbonila, R5-carbonilalquila, R6-acilamino, e R7-acilaminoalquila, em que R4 e R5 são ca-da um independentemente selecionados do grupo consistindo em um ami-noácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo, e em que R6 e R7 sãocada um independentemente selecionados do grupo consistindo em um a-minoácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo.
8. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivindi-cação 7, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Iigante de heteroá-tomo é nitrogênio, e em que o substituinte X1 e o Iigante de heteroátomo sãoconsiderados juntos com o Iigante espaçador ao qual eles estão ligados paraformar um heterociclo.
9. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivindi-cação 8, caracterizado pelo fato de que o heterociclo é selecionado do grupoconsistindo em pirrolidinas, piperidinas, oxazolidinas, isoxazolidinas, tiazoli-dinas, isotiazolidinas, pirrolidinonas, piperidinonas, oxazolidinonas, isoxazo-lidinonas, tiazolidinonas, isotiazolidinonas, e succinimidas.
10. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 7, caracterizado pelo fato de que a porção de ligação de receptor éfolato que inclui um nitrogênio, e pelo menos um ligante espaçador é sele-cionado do grupo consistindo em alquilenocarbonila, cicloalquilenocarbonila,carbonilalquilcarbonila, e 1-(carbonilalquil)succinimid-3-ila, em que o liganteespaçador é ligado ao nitrogênio de folato para formar uma imida ou umaalquilamida.
11. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 10, caracterizado pelo fato de que cada substituinte X1 é indepen-dentemente selecionado do grupo consistindo em alquila, hidroxialquila, a-mino, aminoalquila, alquilaminoalquila, dialquilaminoalquila, sulfidrilalquila,alquiltioalquila, arila, arila substituída, arilalquila, arilalquila substituída, car-bóxi, carboxialquila, guanidinoalquila, R4-Carbonila, R5-Carbonilalquila, R6-acilamino, e R7-acilaminoalquila, em que R4 e R5 são, cada um, independen-temente selecionados do grupo consistindo em um aminoácido, um derivadode aminoácido, e um peptídeo, e em que R6 e R7 são, cada um, independen-temente selecionados do grupo consistindo em um aminoácido, um derivadode aminoácido, e um peptídeo.
12. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 7, caracterizado pelo fato de que pelo menos um ligante de heteroá-tomo é nitrogênio, e o ligante espaçador é selecionado do grupo consistindoem alquilenocarbonila, cicloalquilenocarbonila, carbonilalquilcarbonila, e 1-(carbonilalquil)succinimid-3-ila, em que cada um dos ditos ligantes espaça-dores é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes X1 e o Iigan-te espaçador é ligado ao nitrogênio para formar uma amida.
13. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 7, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Iigante de heteroá-tomo é enxofre, e o Iigante espaçador é selecionado do grupo consistindoem alquileno e cicloalquileno, em que cada um dos ditos Iigantes espaçado-res é opcionalmente substituído por carbóxi, e o Iigante espaçador é ligadoao enxofre para formar um tiol.
14. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 7, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Iigante de heteroá-tomo é enxofre, e o Iigante espaçador é selecionado do grupo consistindoem 1-alquilenossuccinimid-3-ila e 1-(carbonilalquil)succinimid-3-ila, e o Iigan-te espaçador é ligado ao enxofre para formar um succinimid-3-iltiol.
15. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que pelo menosum ligante liberável é selecionado do grupo consistindo em metileno, 1-alcoxialquileno, 1-alcoxicicloalquileno, 1-alcoxialquilenocarbonila, 1-alcoxi-cicloalquilenocarbonila, carbonilarilcarbonila, carbonil(carboxiaril)carbonila,carbonil(biscarboxiaril)carbonila, haloalquilenocarbonila, alquileno(dialquil-silila), alquileno(alquilarilsilila), alquileno(diarilsilila), (dialquilsilil)arila, (alquila-rilsilil)arila, (diarilsilil)arila, oxicarbonilóxi, oxicarboniloxialquila, sulfonilalquila,iminoalquilidenila, carbonilalquilideniminila, iminocicloalquilidenila, carbonilci-cloalquilideniminila, alquilenossulfonila, alquilenotio, alquilenoariltio, e carbo-nilalquiltio, em que cada um dos ditos Iigantes liberáveis é opcionalmentesubstituído por um ou mais substituintes X2; em que cada substituinte X2 é independentemente selecionadodo grupo consistindo em alquila, alcóxi, alcoxialquila, hidróxi, hidroxialquila,amino, aminoalquila, alquilaminoalquila, dialquilaminoalquila, halo, haloalqui-la, sulfidrilalquila, alquiltioalquila, arila, arila substituída, arilalquila, arilalquilasubstituída, heteroarila, heteroarila substituída, carbóxi, carboxialquila, car-boxilato de alquila, alcanoato de alquila, guanidinoalquila, R4-Carbonila, R5-carbonilalquila, R6-acilamino, e R7-acilaminoalquila, em que R4 e R5 são ca-da um independentemente selecionados do grupo consistindo em um ami-noácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo, e em que R6 e R7 são,cada um, independentemente selecionados do grupo consistindo em um a-minoácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo.
16. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 15, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Iigante de hetero-átomo é nitrogênio, e em que o substituinte X2 e o Iigante de heteroátomosão considerados juntos com o ligante liberável ao qual eles estão ligadospara formar um heterociclo.
17. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 16, caracterizado pelo fato de que o heterociclo é selecionado dogrupo consistindo em pirrolidinas, piperidinas, oxazolidinas, isoxazolidinas,tiazolidinas, isotiazolidinas, pirrolidinonas, piperidinonas, oxazolidinonas, iso-xazolidinonas, tiazolidinonas, isotiazolidinonas, e succinimidas.
18. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que pelo menosum ligante de heteroátomo é nitrogênio, e em que pelo menos um liganteliberável e o Iigante de heteroátomo são considerados juntos para formar umradical divalente compreendendo alquilenoaziridin-1-ila, alquilenocarbonilazi-ridin-1-ila, carbonilalquilaziridin-1-ila, alquilenossulfoxilaziridin-1-ila, sulfoxi-lalquilaziridin-1-ila, sulfonilalquilaziridin-1-ila, ou alquilenossulfonilaziridin-1-ila, em que cada um dos ditos Iigantes liberáveis é opcionalmente substituídopor um ou mais substituintes X2;em que cada substituinte X2 é independentemente selecionadodo grupo consistindo em alquila, alcóxi, alcoxialquila, hidróxi, hidroxialquila,amino, aminoalquila, alquilaminoalquila, dialquilaminoalquila, halo, haloalqui-la, sulfidrilalquila, alquiltioalquila, arila, arila substituída, arilalquila, arilalquilasubstituída, heteroarila, heteroarila substituída, carbóxi, carboxialquila, car-boxilato de alquila, alcanoato de alquila, guanidinoalquila, R4-Carbonila, R5-carbonilalquila, R6-acilamino, e R7-acilaminoalquila, em que R4 e R5 são, ca-da um, independentemente selecionados do grupo consistindo em um ami-noácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo, e em que R6 e R7 são,cada um, independentemente selecionados do grupo consistindo em um a-minoácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo.
19. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 18, caracterizado pelo fato de que o Iigante de heteroátomo é nitro-gênio, e o Iigante liberável e o Iigante de heteroátomo são considerados jun-tos para formar um radical divalente compreendendo alquilenoaziridin-1-ila,carbonilalquilaziridin-1-ila, sulfoxilalquilaziridin-1-ila, ou sulfonilalquilaziridin--1-ila.
20. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que pelo menosum ligante espaçador é selecionado do grupo consistindo em carbonila, tio-nocarbonila, alquilenocarbonila, cicloalquilenocarbonila, carbonilalquilcarbo-nila, e 1-(carbonilalquil)succinimid-3-ila, em que cada um dos ditos Iigantesespaçadores é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes X1;em que cada substituinte X1 é independentemente selecionadodo grupo consistindo em alquila, alcóxi, alcoxialquila, hidróxi, hidroxialquila,amino, aminoalquila, alquilaminoalquila, dialquilaminoalquila, halo, haloalqui-la, sulfidrilalquila, alquiltioalquila, arila, arila substituída, arilalquila, arilalquilasubstituída, heteroarila, heteroarila substituída, carbóxi, carboxialquila, car-boxilato de alquila, alcanoato de alquila, guanidinoalquila, R4-Carbonila, R5-carbonilalquila, R6-acilamino, e R7-acilaminoalquila, em que R4 e R5 são, ca-da um, independentemente selecionados do grupo consistindo em um ami-noácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo, e em que R6 e R7 são,cada um, independentemente selecionados do grupo consistindo em um a-minoácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo;e em que o Iigante espaçador está ligado ao Iigante liberável pa-ra formar uma amida de aziridina.
21. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que pelo menosum dos fármacos, ou análogos ou derivados dos mesmos é um alcalóide devinca selecionado do grupo consistindo em vinblastina, desacetilvinblastina,vindesina, tiovindesina, e análogos e derivados dos mesmos; uma mitomici-na ou análogo ou derivado da mesma; uma epotilona ou um análogo ou de-rivado da mesma; ou uma tubulisina ou um análogo ou derivado da mesma.
22. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que pelo menosum fármaco é um fármaco ou derivado de fármaco do mesmo que inclui umátomo de nitrogênio duplamente ligado, em que pelo menos um Iigante Iibe-rável é selecionado do grupo consistindo em alquilenocarbonilamino e 1-(alquilenocarbonilamino)succinimid-3-ila, e em que o Iigante liberável é liga-do ao nitrogênio de fármaco para formar uma hidrazona.
23. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que pelo menosum fármaco é um fármaco ou derivado de fármaco do mesmo que inclui umátomo de enxofre, pelo menos um Iigante liberável é selecionado do grupoconsistindo em alquilenotio e carbonilalquiltio, e em que o Iigante liberável éligado ao enxofre de fármaco para formar um dissulfeto.
24. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 15, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Iigante de hetero-átomo é oxigênio, e o Iigante liberável é selecionado do grupo consistindoem metileno, 1-alcoxialquileno, 1-alcoxicicloalquileno, 1-alcoxialquileno-carbonila, e 1-alcoxicicloalquilenocarbonila, em que cada um dos ditos Iigan-tes liberáveis é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes X2, eo ligante liberável é ligado ao oxigênio para formar um acetal ou cetal.
25. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 15, caracterizado pelo fato de que pelo menos um Iigante de hetero-átomo é oxigênio, e o Iigante liberável é metileno, em que o dito metileno ésubstituído por uma arila opcionalmente substituída, e o Iigante liberável éligado ao oxigênio para formar um acetal ou cetal.
26. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 15, caracterizado pelo fato de que pelo menos um fármaco é umfármaco ou derivado de fármaco do mesmo que inclui um átomo de nitrogê-nio, pelo menos um Iigante de heteroátomo é nitrogênio, e o Iigante liberávelé selecionado do grupo consistindo em carbonilarilcarbonila, carbo-nil(carboxiaril)carbonila, carbonil(biscarboxiaril)carbonila, e o Iigante liberávelé ligado ao nitrogênio de ligante de heteroátomo para formar uma amida, etambém ligado ao nitrogênio do fármaco para formar uma amida.
27. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 15, caracterizado pelo fato de que pelo menos um fármaco é umfármaco ou derivado de fármaco do mesmo que inclui um átomo de oxigênio,pelo menos um ligante de heteroátomo é nitrogênio, e o ligante liberável éselecionado do grupo consistindo em carbonilarilcarbonila, carbo-nil(carboxiaril)carbonila, carbonil(biscarboxiaril)carbonila, e o ligante liberávelé ligado ao nitrogênio de ligante de heteroátomo para formar uma amida, etambém ligado ao oxigênio do fármaco para formar um éster.
28. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 15, caracterizado pelo fato de que pelo menos um ligante de hetero-átomo é nitrogênio, e o ligante liberável é selecionado do grupo consistindoem iminoalquilidenila, carbonilalquilideniminila, iminocicloalquilidenila, e car-bonilcicloalquilideniminila, em que cada um dos ditos ligantes liberáveis éopcionalmente substituído por um ou mais substituintes X2, e o ligante libe-rável é ligado ao nitrogênio para formar uma hidrazona.
29. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 15, caracterizado pelo fato de que pelo menos um ligante de hetero-átomo é oxigênio, e o ligante liberável é selecionado do grupo consistindoem alquileno(dialquilsilila), alquileno(alquilarilsilila), alquileno(diarilsilila), (di-alquilsilil)arila, (alquilarilsilil)arila, e (diarilsilil)arila, em que cada um dos ditosIigantes liberáveis é opcionalmente substituído por um ou mais substituintesX2, e o ligante liberável é ligado ao oxigênio para formar um silanol.
30. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que pelo menosum fármaco é um fármaco ou derivado de fármaco do mesmo que inclui umátomo de nitrogênio, e pelo menos um ligante liberável é haloalquilenocar-bonila, opcionalmente substituída por um ou mais substituintes X2;em que cada substituinte X2 é independentemente selecionadodo grupo consistindo em alquila, alcóxi, alcoxialquila, hidróxi, hidroxialquila,amino, aminoalquila, alquilaminoalquila, dialquilaminoalquila, halo, haloalqui-la, sulfidrilalquila, alquiltioalquila, arila, arila substituída, arilalquila, arilalquilasubstituída, heteroarila, heteroarila substituída, carbóxi, carboxialquila, car-boxilato de alquila, alcanoato de alquila, guanidinoalquila, R4-Carbonila, R5-carbonilalquila, R6-acilamino, e R7-acilaminoalquila, em que R4 e R5 são, ca-da um, independentemente selecionados do grupo consistindo em um ami-noácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo, e em que R6 e R7 são,cada um, independentemente selecionados do grupo consistindo em um a-minoácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo;e o ligante liberável é ligado ao nitrogênio do fármaco ou do de-rivado do fármaco para formar uma amida.
31. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que pelo menosum fármaco é um fármaco ou derivado de fármaco do mesmo que inclui umátomo de oxigênio, e pelo menos um Iigante liberável é alquilenooxicarbonilaou haloalquilenocarbonila, opcionalmente substituída por um ou mais substi-tui ntes X2;em que cada substituinte X2 é independentemente selecionadodo grupo consistindo em alquila, alcóxi, alcoxialquila, hidróxi, hidroxialquila,amino, aminoalquila, alquilaminoalquila, dialquilaminoalquila, halo, haloalqui-la, sulfidrilalquila, alquiltioalquila, arila, arila substituída, arilalquila, arilalquilasubstituída, heteroarila, heteroarila substituída, carbóxi, carboxialquila, car-boxilato de alquila, alcanoato de alquila, guanidinoalquila, R4-Carbonila, R5-carbonilalquila, R6-acilamino, e R7-acilaminoalquila, em que R4 e R5 são, ca-da um, independentemente selecionados do grupo consistindo em um ami-noácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo, e em que R6 e R7 são,cada um, independentemente selecionados do grupo consistindo em um a-minoácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo;e o Iigante liberável é ligado ao oxigênio do fármaco ou do deri-vado do fármaco para formar um carbonato ou um éster.
32. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que pelo menosum Iigante de heteroátomo é oxigênio, pelo menos um Iigante espaçador é- 1-alquilenossuccinimid-3-ila, opcionalmente substituída por um ou maissubstituintes X11 e pelo menos um ligante liberável é selecionado do grupoconsistindo em metileno, 1-alcoxialquileno, 1-alcoxicicloalquileno, 1-alcoxi-alquilenocarbonila, 1-alcoxicicloalquilenocarbonila, em que cada um dos di-tos ligantes liberáveis é opcionalmente substituído por um ou mais substitu-intes X2;em que cada substituinte X2 é independentemente selecionadodo grupo consistindo em alquila, alcóxi, alcoxialquila, hidróxi, hidroxialquila,amino, aminoalquila, alquilaminoalquila, dialquilaminoalquila, halo, haloalqui-la, sulfidrilalquila, alquiltioalquila, arila, arila substituída, arilalquila, arilalquilasubstituída, heteroarila, heteroarila substituída, carbóxi, carboxialquila, car-boxilato de alquila, alcanoato de alquila, guanidinoalquila, R4-Carbonila, R5-carbonilalquila, R6-acilamino, e R7-acilaminoalquila, em que R4 e R5 são, ca-da um, independentemente selecionados do grupo consistindo em um ami-noácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo, e em que R6 e R7 são,cada um, independentemente selecionados do grupo consistindo em um a-minoácido, um derivado de aminoácido, e um peptídeo;e em que o ligante espaçador e o ligante liberável são, cada um,ligados ao Iigante de heteroátomo para formar um succinimid-1-ilalquila ace-tal ou cetal.
33. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente compreende um ligante de heteroátomo, um ligante espaçador, e umligante liberável considerados juntos para formar 3-tiossuccinimid-1-ilalquiloximetilóxi, em que a metila é opcionalmente substituída por alquila ouarila substituída.
34. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o ligante poli-valente compreende um ligante de heteroátomo, um Iigante espaçador, e umligante liberável considerados juntos para formar 3-tiossuccinimid-1-ilalquilcarbonila, em que a carbonila forma uma acilaziridina com o fármaco,ou análogo ou derivado do mesmo.
35. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente compreende um Iigante de heteroátomo, um Iigante espaçador, e umIigante liberável considerados juntos para formar 1-alcoxicicloalquilenóxi.
36. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente compreende um Iigante espaçador, um Iigante de heteroátomo, e umligante liberável considerados juntos para formar alquilenoaminocarbo-nil(dicarboxilarileno)carboxilato.
37. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente compreende um Iigante liberável, um Iigante espaçador, e um Iiganteliberável considerados juntos para formar ditioalquilcarbonilidrazida, em quea hidrazida forma uma hidrazona com pelo menos um fármaco, ou análogoou derivado do mesmo.
38. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente compreende um Iigante de heteroátomo, um Iigante espaçador, e umligante liberável considerados juntos para formar 3-tiossuccinimid-1-ilalquilcarbonilidrazida, em que a hidrazida forma uma hidrazona com pelomenos um fármaco, ou análogo ou derivado do mesmo.
39. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente compreende um Iigante de heteroátomo, um Iigante espaçador, umligante de heteroátomo, um Iigante espaçador, e um Iigante liberável consi-derados juntos para formar 3-tioalquilsulfonilalquil(silil dissubstituído)óxi, emque a silila dissubstituída é substituída por alquila ou arila opcionalmentesubstituída.
40. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente compreende um Iigante liberável, um Iigante espaçador, e um Iiganteliberável considerados juntos para formar 3-ditioalquiloxicarbonila, em que acarbonila forma um carbonato com pelo menos um fármaco, ou análogo ouderivado do mesmo.
41. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente compreende um Iigante liberável, um Iigante espaçador, e um Iiganteliberável considerados juntos para formar 3-ditioarilalquiloxicarbonila, em quea carbonila forma um carbonato com pelo menos um fármaco, ou análogo ouderivado do mesmo, e a arila é opcionalmente substituída.
42. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente compreende um Iigante de heteroátomo, um Iigante espaçador, umligante liberável, um Iigante espaçador, e um Iigante liberável consideradosjuntos para formar 3-tiossuccinimid-1-ilalquiloxialquiloxialquilideno, em que oalquilideno forma uma hidrazona com pelo menos um fármaco, ou análogoou derivado do mesmo, cada alquila é independentemente selecionada, e ooxialquilóxi é opcionalmente substituído por alquila ou arila opcionalmentesubstituída.
43. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente compreende um Iigante liberável, um Iigante espaçador, e um Iiganteliberável considerados juntos para formar 3-ditioalquiloxicarbonilidrazida.
44. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente compreende um Iigante liberável, um Iigante espaçador, e um Iiganteliberável considerados juntos para formar 3-ditioalquilamino, em que o aminoforma uma amida viniloga com pelo menos um fármaco, análogo de fárma-co, ou derivado de fármaco.
45. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 44, caracterizado pelo fato de que a alquila é etila.
46. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente compreende um Iigante liberável, um Iigante espaçador, e um Iiganteliberável considerados juntos para formar 3-ditioalquilaminocarbonila, emque a carbonila forma um carbamato com pelo menos um fármaco, análogode fármaco, ou derivado de fármaco.
47. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com a reivin-dicação 46, caracterizado pelo fato de que a alquila é etila.
48. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente compreende um Iigante liberável, um Iigante espaçador, e um Iiganteliberável considerados juntos para formar 3-ditioarilalquiloxicarbonila, em quea carbonila forma um carbamato ou uma carbamoilaziridina com pelo menosum fármaco, análogo de fármaco, ou derivado de fármaco.
49. Conjugado de liberação de fármaco de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o Iigante poli-valente inclui pelo menos um Iigante liberável que seja diferente de um dis-sulfeto.
50. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de quecompreende um conjugado de liberação de fármaco, como definido emqualquer uma das reivindicações 1 a 14, e um veículo, diluente, ou excipien-te farmaceuticamente aceitável para este ou uma combinação dos mesmos.
51. Uso de um conjugado de liberação de fármaco, como defini-do em qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato deser para a preparação de uma composição farmacêutica para eliminar umapopulação de células patogênicas em um animal hospedeiro abrigando apopulação de células patogênicas em que os membros da população de cé-lulas patogênicas têm um sítio de ligação acessível a uma vitamina, ou umanálogo ou um derivado da mesma, e em que o sítio de ligação é exclusiva-mente expresso, sobreexpresso, ou preferencialmente expresso pelas célu-las patogênicas.
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