BRPI0614053A2 - emulsão adjuvante de óleo-em-água, uso da referida emulsão, processo para preparação de uma composição imunogênica compreendendo pelo menos um antìgeno de vacina e uma emulsão óleo-em-água, e composição imunogênica - Google Patents

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Francois Dalencon
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Abstract

EMULSãO ADJUVANTE DE óLEO-EM-áGUA, USO DA REFERIDA EMULSãO, PROCESSO PARA PREPARAçãO DE UMA COMPOSIçãO IMUNOGENICA COMPREENDENDO PELO MENOS UM ANTìGENO DE VACINA E UMA EMULSãO óLEO-EM-áGUA, E COMPOSIçãO IMUNOGENICA. A presente invenção refere-se a uma emulsão adjuvante óleo-em-água termorreversível compreendendo pelo menos: esqualeno; um solvente aquoso; um tensoativo não jónico que toma a forma de um éter de alquila de polioxietileno; e um tensoativo não jónico hidrofóbico, em que 90% da população por volume das gotas de óleo mede menos do que 200 nm de tamanho. A invenção também refere-se a um método de preparação de uma composição imunogênica, em que pelo menos um antígeno de vacina é misturado com uma emulsão óleo-em-água. A invenção é caracterizada pelo fato de que a emulsão óleo-em-água é obtida empregando-se um método envolvendo inversão de fase por meio de variação de temperatura.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "EMULSÃOADJUVANTE DE ÓLEO-EM-ÁGUA, USO DA REFERIDA EMULSÃO,PROCESSO PARA PREPARAÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO IMUNOGÊ-NICA COMPREENDENDO PELO MENOS UM ANTÍGENO DE VACINA EUMA EMULSÃO ÓLEO-EM-ÁGUA, E COMPOSIÇÃO IMUNOGÊNICA".
A presente invenção refere-se ao campo de vacinas; mais parti-cularmente, a invenção refere-se ao campo de vacinas compreendendo umaemulsão adjuvante.
Muitas vacinas que contêm um ou mais adjuvantes existentes na técni-ca anterior. A patente U.S. 6 299 884 descreve em particular uma formulação adju-vante compreendendo uma emulsão óleo-em-água, em que o tamanho das gotícu-Ias de óleo é entre 100 e 1000 nm. Esta emulsão é obtida por meio de um homoge-neizador de pressão elevada (microfluidificador), no curso de um processo de fabri-cação empregando-se energias mecânicas elevadas a fim de obter forças de cisa-Ihamento que são suficientemente grandes para reduzir o tamanho das gotas deóleo. De acordo com este ensinamento, enquanto o valor mínimo da faixa de tama-nho das gotas obtidas é de 100 nm, o valor médio é muito maior e está, na melhordas hipóteses, na região de 170 nm, mais geralmente na região de 500 nm.
É desejável ter disponível uma formulação que é uma alternativaàquela proposta naquela patente, que pode ser obtida por meio de um proces-so mais simples (não requerendo qualquer tecnologia de cisalhamento especí-fica) que é um processo de baixa energia enquanto ao mesmo tempo sendoreproduzível e completamente seguro; além disso, a formulação adjuvante devetornar possível vacinas efetivamente adjuvantes, tornando-se possível em parti-cular aumentar a resposta imune obtida ou diminuir a dose de antígeno presen-te, enquanto ao mesmo tempo não exibindo nenhum sinal de toxicidade quedeve ser prejudicial para sua administração completamente segura.
Para alcançar este objetivo, um objeto da presente invenção éuma emulsão adjuvante óleo-em-água caracterizada pelo fato de que com-preende pelo menos:
- esqualeno,
- um solvente aquoso,
- um tensoativo não iônico hidrofílico que é um éter de alquila de polioxietile-no,
- um tensoativo não iônico hidrofóbico,
pelo fato de que é termorreversível e pelo fato de que 90 % da populaçãopor volume da gota de óleo tem um tamanho menor do que 200 nm.
De acordo com a invenção, uma tal emulsão pode ser obtida pormeio de um processo de temperatura de inversão de fase, que fornece umavantagem muito grande de um ponto de vista industrial. Um tal processo for-nece todas as garantias de segurança e de rentabilidade necessárias para aindústria farmacêutica. Além disso, em virtude deste processo, é possívelobter uma emulsão monodispersa, o tamanho da gotícula da qual é muitopequeno, o que torna a emulsão desse modo obtida particularmente estávele facilmente filtrável por meio de filtros de esterilização, o limiar de interrup-ção que é de 200 nm.
De acordo com uma característica particular, 90% da populaçãopor volume (ou d90) das gotas de óleo têm um tamanho menor do que 160nm, e ainda menor do que 150 nm.
De acordo com uma modalidade particular da invenção, a emul-são de acordo com a invenção também compreende um alditol; isto tornapossível obter uma inversão de fase em uma temperatura abaixo daquelaque deve ser necessária para a mesma composição não contendo qualqueralditol, que torna possível reduzir os custos da produção e também os riscosde desnaturação térmica dos constituintes da emulsão.
De acordo com uma modalidade particularmente vantajosa, otensoativo não iônico hidrofóbico da invenção é um éster de sorbitano ou uméster de mannide. Tais tensoativos têm a vantagem de serem capazes deser usados totalmente seguros em soluções injetáveis.
De acordo com uma modalidade particular da invenção, a emul-são também compreende um alquilpoliglicosídeo e um agente crioprotetor talcomo um açúcar, em particular dodecilmaltosídeo e/ou sacarose.
Desse modo, é possível obter uma emulsão liofilizável que, apósliofilização e reconstituição, recupera suas propriedades, em particular pro-priedades de tamanho de partícula, isto é a emulsão Iiofilizada e em seguidareconstituída é ainda monodispersa e consiste em gotículas de óleo, 90% dapopulação por volume da qual tem um tamanho menor do que 200 nm.
Isto é particularmente importante para o campo de vacinas quedeve algumas vezes, por razões de estabilidade (de certos antígenos, ou decertos adjuvantes), ser conservado em forma liofilizada.
Um objetivo da invenção é também um processo para prepara-ção de uma composição imunogênica de acordo com o qual pelo menos umantígeno de vacina é misturado com uma emulsão óleo-em-água, caracteri-zada pelo fato de que a emulsão óleo-em-água é obtida por meio de um pro-cesso de temperatura de inversão de fase.
De acordo com uma modalidade, o processo de acordo com ainvenção compreende pelo menos uma etapa de preparação da emulsãoóleo-em-água por resfriamento de uma emulsão inversa água-em-óleo, quecompreende pelo menos:
- esqualeno,
- um solvente aquoso,
- um tensoativo não iônico hidrofílico que é um éter de alquila de polioxietileno,
- um tensoativo não iônico hidrofóbico.
Em virtude de um tal processo, que é muito vantajoso de umponto de vista industrial, uma composição imunogênica estável é obtida queé muito eficaz mesmo em uma dose muito baixa de antígenos.
Além disso, em virtude do processo de preparação usado, asgotículas de óleo da emulsão são todas calibradas no mesmo tamanho mui-to pequeno; de fato, quando as propriedades de tamanho de partícula (ta-manho e distribuição de tamanho) são avaliadas, é observado que a emul-são é uma emulsão monodispersa, com uma curva de distribuição tipoGaussian, que é muito estreita e centralizada em torno de um valor baixo,geralmente em torno de 80 a 90 nm.
De acordo com uma modalidade específica do processo de a-cordo com a invenção, a emulsão inversa água-em-óleo é obtida misturan-do-se esqualeno, um solvente aquoso, um tensoativo não iônico hidrofílicoque é éter de alquila de polioxietileno, e um tensoativo não iônico hidrofóbicoa fim de obter, primeiro de todos, uma emulsão não refinada de óleo-em-água, e esta emulsão é em seguida aquecida para pelo menos a temperatu-ra de inversão de fase a fim de obter a emulsão inversa. Realizando-se oprocesso de uma tal maneira tem a vantagem de limitar o tempo durante oqual os vários constituintes da emulsão são submetidos a uma temperaturaelevada.
De acordo com outra modalidade, o processo de acordo com ainvenção compreende as seguintes etapas:
- primeiramente, a fase aquosa compreendendo o solvente aquoso e o éterde alquila de polioxietileno e, em segundo lugar, a fase oleosa compreen-dendo o esqualeno e o tensoativo hidrofóbico são aquecidas, separadamen-te, para uma temperatura pelo menos igual à temperatura de inversão defase, e em seguida
- as 2 fases são misturadas a fim de obter uma emulsão inversa água-em-óleo.
De acordo com uma modalidade específica da invenção, cadauma das fases aquosa e oleosa é aquecida separadamente, antes de mistu-rá-las, para uma temperatura abaixo da temperatura de inversão de fase. As2 fases são em seguida misturadas a fim de obter uma emulsão água-em-óleo; e o todo é em seguida aquecido para uma temperatura pelo menosigual à temperatura de inversão de fase a fim de obter a emulsão inversaágua-em-óleo.
• De acordo com uma modalidade particular, o processo de prepa-ração de acordo com a invenção também compreende uma etapa de Iiofili-zação. Desse modo, o processo de acordo com a invenção pode ser usadopara a preparação de composições imunogênicas compreendendo antíge-nos que devem ser conservados em forma Iiofilizada por razões de estabilidade.
Muitas outras vantagens da presente invenção torna-se-ão evi-dentes no curso da seguinte descrição.
Para os propósitos de descrição da invenção, os parâmetros d50e d90 mencionados no presente pedido de patente são valores relacionadosao volume; o valor d50 significa o valor de 50% da população de gota porvolume.
Para o propósito da invenção, o termo "emulsão óleo-em-água"pretende significar uma dispersão de uma fase oleosa em uma fase aquosaque pode consistir em água ou de uma solução salina, que é opcionalmentetamponada. De acordo com uma modalidade particular da invenção, a faseaquosa da emulsão consiste em um tampão, tal como soluções tamponadaspor fosfato de Dulbecco (D-PBS, sem cálcio ou magnésio).
O termo "emulsão adjuvante" pretende significar uma emulsãoimunoadjuvante, isto é uma emulsão capaz de modificar a resposta do sis-tema imune induzido durante a administração de um antígeno, comparadacom a resposta obtida na ausência da emulsão; esta resposta do sistemaimune pode ser refletida por produção de anticorpo ou por ativação de certascélulas, em particular células apresentando antígeno (por exemplo, célulasdendríticas), linfócitos T e linfócitos B. Esta ativação celular pode ser de-monstrada pela presença de marcadores de ativação na superfície das célu-las ou pela liberação dé citocinas. A modificação da resposta imune induzidapela emulsão adjuvante pode ser quantitativa em natureza, isto é um aumen-to na resposta induzida é obtido, ou qualitativa em natureza, isto é uma res-posta que é diferente em natureza ou tem uma orientação diferente é obtida,ou então uma resposta adicional é obtida.
O termo "emulsão adjuvante" é também pretendido significaruma emulsão que torna possível reduzir a quantidade de antígenos adminis-trada para a mesma resposta induzida.
Para o propósito da presente invenção, o termo "composiçãoimunogênica" é pretendido significar uma composição compreendendo pelomenos um antígeno e que pode ser administrada a seres humanos ou a a-nimais para induzir uma resposta do sistema imune. Esta resposta pode seruma resposta humoral (produção de anticorpo) ou uma resposta celular (pro-liferação e /ou ativação de células imunes). A composição imunogênica podeser uma composição para propósitos profiláticos ou para propósitos terapêu-ticos, ou os dois. A composição imunogênica obtida de acordo com a inven-ção pode ser administrada por quaisquer das rotinas normalmente emprega-das ou recomendadas para vacinas: parenteralmente ou mucosalmente, epode ser em várias formas, em particular uma forma Iiofilizada ou líquida.
Pode ser administrado por meios de uma seringa ou por meios de um injetorsem agulha para injeção intramuscular, subcutânea ou intradérmica, ou pormeios de um spray nasal.
Para o propósito da presente invenção, o termo "antígeno" é pre-tendido significar qualquer antígeno que pode ser empregado em uma vaci-na, que envolve um microorganismo inteiro ou um antígeno subunitário, in-dependente de sua natureza; o antígeno pode, de fato, ser um peptídeo,uma proteína, uma glicoproteína, um polissacarídeo, um glicolipídeo, umlipopeptídio, etc. A emulsão adjuvante de acordo com a invenção é particu-larmente adequada para os antígenos viróticos; resultados particularmentebons foram, de fato, obtidos com antígenos do citomegalovírus humano, ovírus da imunodeficiência humana, e o vírus gripe. Com respeito aos antíge-nos do vírus gripe, é possível empregar os antígenos que surgem de umaúnica cepa virótica, ou de uma mistura de várias cepas. É possível empregarantígenos derivados de vírus cultivados de um modo tradicional em ovos, ouem células. Por meios da invenção, foi notado que se para uma única cepaou para uma mistura de cepas, é possível obter uma resposta satisfatória dosistema imune enquanto ao mesmo tempo substancialmente reduzindo aquantidade de antígenos presentes na dose de vacina. Isto pode ser de inte-resse particularmente grande no caso da preparação de uma vacina contrauma influenza pandêmica, onde pode ser possível produzir, em um períodomuito curto de tempo, quantidades muito grandes de doses de vacina.
De acordo com a invenção, a emulsão de óleo-em-água com-preende o esqualeno, que é um óleo que origina-se inicialmente de fígadode tubarão; é um óleo cuja fórmula química empírica é C30H50, compreen-dendo 6 ligações duplas, este óleo é métabolizável e tem qualidades quepermitem ser empregado em um produto farmacêutico injetável. O esquale-no de origem de planta, extraído de azeite de oliva, da mesma forma existe.Bons resultados foram, em particular, obtidos empregando-se o esqualenofornecido pela companhia Fluka, que é de origem animal. As quantidades deesqualeno empregado para a preparação de uma emulsão concentrada es-tão vantajosamente entre 5 e 45%; esta emulsão concentrada é, subseqüen-temente, diluída durante a preparação das composições imunogênicas parapreparar as doses de imunização em que a quantidade de esqualeno estáentre 0,5 e 5%. Esta diluição pode ser realizada por mistura simples da e-mulsão adjuvante de acordo com a invenção e da suspensão que compreende o antígeno.
De acordo com a invenção, a emulsão compreende um tensoati-vo hidrofílico não iônico, o valor do equilíbrio hidrofílico/lipofílico ou HLB doqual é maior do que ou igual a 10 e que pertence ao grupo químico dos éte-res de alquila de polioxietileno (PAE), da mesma forma conhecidos comoéteres de álcool graxo polioxietilenados, ou éteres de polioxietileno glicol den-alquila. Estes tensoativos não iônicos são obtidos por condensação quími-ca entre um álcool graxo e oxido de etileno. Eles têm uma fórmula químicageral do tipo de CH3(CH2)x-(O-CH2-CH2)n-OH em que η denota o número deunidades de oxido de etileno e está normalmente entre 10 e 60 e χ +1 é onúmero de carbono, dependendo dos álcoois graxos empregados. Em geral,estes produtos são misturas de polímeros com de cadeias com base em hi-drocarboneto de comprimento similar. A emulsão de acordo com a invençãonormalmente compreende em um único PAE hidrofílico. Uma mistura de vá-rios PAEs é da mesma forma adequada na medida em que o valor de HLBtotal é > 10. Os éteres de álcool graxo polioxietilenados adequados para oobjeto da invenção podem ser em uma forma líquida ou sólida em tempera-tura ambiente. Entre os compostos sólidos, preferência é dada àqueles quedissolvem na fase aquosa ou que não requerem aquecimento substancial.
Na medida em que o número de unidades de óxido de etileno ésuficiente, os éteres polioxietilenados de álcoois laurila, miristila, cetila, oleílae/ou estearila são particularmente adequados para o objeto da invenção.Eles podem, em particular, ser encontrados na faixa dos produtos conheci-dos sob os nomes comerciais Brij® para os produtos comercializados pelacompanhia ICI América's Inc., Eumulgin® para os produtos comercializadospela companhia Cognis, ou Simulsol® para os produtos comercializados pe-la companhia SEPPIC.
Uma emulsão particularmente preferida de acordo com a inven-ção contém, como tensoativo hidrofílico não iônico, um éter de alquila depolioxietileno escolhido a partir do grupo consistindo em cetearete-12 (co-mercializado sob o nome Eumulgin® B1), cetearete-20 (Eumulgin® B2), es-tearete-21 (Eumulgin® S21), cetete-20 (Simulsol® 58 ou Brijs® 58), cetete-(Brij® 56), estearete-10 (Brij® 76), estearete-2Q (Brij® 78), olete-10 (Brij®10 96 ou Brij® 97), e olete-20 (Brij® 98 ou Brij® 99). O número designado a ca-da nome químico corresponde ao número de unidades de oxido de etilenona fórmula química.
Bons resultados foram obtidos com o produto BRIJ® 56. Umcomposto que é particularmente adequado e preferido devido à sua origemsemi-sintética é o éter de cetoestearila de polioxietileno (12) fornecido pelacompanhia Cognis sob o nome Eumulgin® B1. Este composto é uma misturade CH3(CH2)I5-(O-CH2-CH2)I2-OH e de CH3(CH2)17-(O-CH2-CH2)12-OH.
De acordo com a invenção, a emulsão adjuvante da mesma for-ma compreende um tensoativo não iônico hidrofóbico; deve ser um tensoati-vo que pode ser empregado na indústria farmacêutica; entre o tensoativosque são adequados neste respeito, menção pode ser feita de ésteres desorbitano e ésteres de mannide] os ésteres de sorbitano são obtidos por re-ação de um ácido graxo e de uma mistura de ésteres parciais de sorbitol eseus mona e
dianidridos; isto pode envolver um mono-, di- ou um triéster, ou ainda umamistura; estes são tensoativos hidrofóbicos dos quais o equilíbrio hidrofílico-lipofílico (HLB) é menor que 9, e preferivelmente menor que 6. Eles podemser encontrados, em particular, na faixa de tensoativos comercializados pelacompanhia ICI Américas Inc. sob o nome Span®, ou pela companhia Cognissob o nome Dehymuls®, ou pela companhia ICI sob o nome Arlacel®; comoexemplos de tensoativos que são particularmente adequados, menção podeser feita do monooleato de sorbitano, comercializado sob o nome DehymulsSMO ou Span®80. Entre o tensoativos consistindo ern ésteres de msnnide,menção pode ser feita de monooleato de mannide comercializado pela com-panhia Sigma ou pela companhia Seppic sob o nome Montanide 80®.
Devido à seleção deste tensoativos particulares entre todos ostensoativos propostos na técnica anterior para preparar emulsões, foi cons-tatado que é possível, muito vantajosamente, produzir um emulsão adjuvan-te de óleo-em-água empregando-se um processo de reversão de fase.
Para isto, as quantidades de esqualeno e cada um dentre ostensoativos empregados são vantajosamente escolhidos para obter umamistura, o diagrama de fase do qual compreende uma fase de curvatura me-diana zero (microemulsão ou tipo fase lamelar) para a qual as tensões inter-faciais são extremamente baixas.
No caso do uso do esqualeno, foi notado que as emulsões obti-das são estáveis e monodispersas, com as gotículas de óleo sendo muitopequenas no tamanho (d90 menor que 200 nm), quando o valor total de HLBde vários tensoativos empregados está entre 8,5 e 10, e mais particularmen-te 8,6 e 9,6. Para determinar as concentrações respectivas de tensoativoshidrofóbicos e hidrofílicos na composição de emulsão, a seguinte fórmulapode ser empregada:
HLBm = (HLBe χ M) + HLBpae (1-M) em que,
HLBm corresponde a HLB da mistura, que está preferivelmente
entre 8,5 e 10, e mais particularmente entre 8,6 e 9,6,
HLBe corresponde ao HLB do tensoativo hidrofóbico,M corresponde à porcentagem em massa do tensoativo hidrofó-bico na mistura que consiste no tensoativo hidrofóbico e no éter de alquila depolioxietileno (PAE),
HLBpae corresponde a HLB de PAE.
Notou-se que, empregando-se uma concentração de esqualenodentre 5 e 45%, uma emulsão cuja temperatura de reversão de fase é menor95°C é muito vantajosamente obtida.
Para uma tal emulsão, é possível empregar um éter de alquilade polioxietileno em uma concentração dentre 0,9 e 9% e um tensoativo nãoiônico hidrofóbico em uma concentração dentre 0,7 e 7%; o restante da e-mulsão que consiste em um solvente aquoso.
De acordo com uma modalidade particular da invenção, a com-posição imunogênica da mesma forma compreende um alditol tal como, emparticular, glicerol, eritritol, xilitol, sorbitol ou manitol. Bons resultados foram,em particular, obtidos com o com o manitol comercializado pela companiaRoquette Freres. As quantidades de alditol empregada no processo de pre-paração pode variar entre 1 e 10%, e mais especialmente entre 2 e 7.
De acordo com uma modalidade particular da invenção, a emul-são adjuvante da mesma forma compreende um agente crioprotetor que tor-na possível Iiofilizar a emulsão obtida; entre os agentes crioprotetores, açú-cares são particularmente preferidos, e especialmente sacarose. Além disso,a emulsão de acordo com a invenção pode compreender um alquilpoliglico-sídeo, que é um tensoativo com uma origem de açúcar; e pode, em particu-lar, ser uronato de decil-D-galactosídeo sódico, ou, de acordo com uma mo-dalidade preferida, dodecil^-maltosídeo disponível da companhia Roche.
Devido ao processo para preparação da emulsão de acordo coma invenção por uma reversão de fase obtida variando-se a temperatura, umaemulsão de óleo-em-água, o tamanho das gotículas de óleo das quais é mui-to homogêneo; é muito facilmente e muito reproduzivelmente obtida: o valorde d90 (em volume) é menor que 200 nm, preferivelmente menor que 150nm, e ainda perto de 100 nm enquanto o valor de d50 é menor que 100 nm,ou ainda 90 nm. A maioria das emulsões preparadas de acordo com o pro-cesso da invenção tornou-se possível alcançar valores de d50 em torno de80 nm, com valores de d90 em torno de 100 nm (medidas realizadas comum Coulter LS230). É, desse modo, possível realizar uma filtração esteriliza-dora da emulsão obtida, na condição que a última seja suficientemente diluída.
Tais emulsões em que o tamanho da gotas é homogêneo e mui-to pequeno são estáveis com o passar do tempo. Foi, desse modo, possívelnotar que uma emulsão preparada de acordo com a invenção e armazenadaa 4°C, conservada, depois de 2 anos, um perfil monodisperso com um valorde d50 de 90 nm e um valor de d90 de 116 nm, que prova que a emulsão émuito altamente estável.
O tamanho das gotas pode ser medido por vários meios, e emparticular por tamanhos de partícula de difração a LASER, tais como os dis-positivos Beckman Coulter da faixa de LS (em particular o LS230), ou dispo-sitivos Malvern da faixa de Mastersizer (o Mastersizer 2000, em particular).O princípio da medida destes dispositivos é baseado na análise da intensi-dade de luz dispersa pelas partículas com uma função do ângulo (detectoresde ângulo grande, médio e pequeno) quando a amostra é iluminada por umraio LASER. Esta análise é realizada por meio de modelos matemáticos es-colhidos de acordo com o tamanho e a natureza do material empregado. Nocaso de medida de tamanho de partículas de submícrons, é necessário apli-car um modelo ótico particular (teoria de Mie) levando em conta os índicesrefrativos da amostra (aqui 1,495 para o esqualeno) e de seu meio (aqui1,332 para água); é necessário também ser capaz de detectar as intensida-des fracas emitidas pelas partículas muito finas, que requer uma otimizaçãoda análise:
- uma célula de detecção adicional para a medida de dispersão diferencialde intensidade polarizada de ângulo grande (sistema de PIDS de Coulter,que permite medida de 40 nm)
- sistema de detecção que combina 2 comprimentos de onda, luz azul evermelha, de Malvern. A fonte de luz azul de comprimento de onda mais cur-to, associada a detectores de dispersão de ângulo amplo e detectores deretrodispersão, reforça os níveis de desempenho da análise na faixa submi-crônica.
De acordo com os dispositivos empregados, as medidas podemvariar ligeiramente como uma função dos componentes do dispositivo e dosoftware de processamento de dados empregado. Desse modo, a mesmaemulsão de acordo com a invenção foi analisada com os 2 dispositivos edeterminou os seguintes resultados:
- empregar de LS230, com os seguintes parâmetros: partícula de IR = 1,495;meio de IR = 1,332; valor de absorção = 0; d50 = 80 - 90 nm e d90 = 120 -130 nm;
- empregar o Mastersizer 2000, com os seguintes parâmetros: partícula deIR = 1,495; meio de IR = 1,332; valor de absorção = O; obscurecimento = 4 -7%; modelo ótico de "propósito geral"; d50 = 90 -100 nm e d90 = 140-150 nm.
O processo de acordo com a invenção pode ser realizado daseguinte maneira: uma emulsão de óleo-em-água bruta concentrada é pre-parada por incorporação da fase aquosa (solução de tampão, ao qual alditolé possivelmente adicionado, compreendendo o éter de alquila de polioxieti-leno) na fase oleosa (esqualeno, e tensoativo não tônico hidrofóbico), ou pe-lo contrário, por incorporação da fase oleosa na fase aquosa. Uma emulsãode óleo-em-água não calibrada é em seguida obtida, e rapidamente manifes-ta sua instabilidade. Esta emulsão é agitada e aquecida até que uma rever-são de fase seja obtida, isto é, uma emulsão de água-em-óleo é obtida. Atransição ou reversão de fase pode ser monitorada por condutimetria. Defato, durante a elevação de temperatura, a condutividade aumenta até a re-versão de fase ocorrer; nesse momento, uma queda relativamente abruptana condutividade é observada. A temperatura na qual a mudança de curva-tura da curva para o seguimento da condutividade ocorre reflete a passagemde um tipo de emulsão para outra; é a temperatura de reversão de fase. Defato, esta temperatura é mais exatamente uma faixa de temperatura do queum valor de ponto muito preciso; realmente, pode ser considerado que estatemperatura seja uma temperatura determinada dentro de 1 ou 2 graus deforma que a emulsão inteira sofra o fenômeno de reversão de fase. Logoque esta temperatura de reversão de fase foi alcançada, e, então, uma vezque na presença de uma emulsão de água-em-óleo, o aquecimento é inter-rompido e a mistura é resfriada. O resfriamento pode ser feito de um modopassivo, simplesmente permitindo a emulsão voltar espontaneamente àtemperatura ambiente, ou de uma maneira mais ativa, submergindo-se aemulsão, por exemplo, em um banho de gelo. Quando a temperatura passaatravés da temperatura de reversão de fase, a emulsão de água-em-óleoinverterá novamente a fim de mais uma vez produzir uma emulsão de óleo-em-água, em que o tamanho das gotículas de óleo é neste momente muitohomogêneo e pequeno; a emulsão obtida é, em seguida, muito estável. Po-de ser armazenada como está, enquanto esperando a diluição com uma so-lução que compreende o antígeno de vacina. Esta emulsão é termorreversí-vel, que significa que, se for novamente levada para uma temperatura supe-rior à temperatura de reversão de fase, tornar-se-á novamente uma emulsãode água-em-óleo. Nota-se que as curvas para seguimento da condutividadesão super-imponíveis para a mesma emulsão, independente do o número determorreversões sofridas, e que as emulsões obtidas sempre têm o mesmoperfil de tamanho de partícula.
De modo vantajoso de acordo com a invenção, a formulação daemulsão é escolhida para ter uma temperatura de reversão de fase que sejamenor que 95°C, e mais particularmente entre entre 45 e 80°C, e mais parti-cularmente ainda entre 50 e 65°C. Esta faixa de temperatura é vantajosaporque não há risco da emulsão mudar o estado se for armazenada em umatemperatura relativamente alta ( = 37°C). Além disso, como no processo pa-ra preparação da emulsão termorreversível, o aquecimento dos componen-tes não é muito severo, isto contribui para manter a integridade estruturaldos componentes. Quando a temperatura de reversão de fase da emulsão éalta, em particular, quando for maior que ou na região de 80°C, pode ser útilreduzí-la adicionando-se à composição da emulsão um alditol, que é nor-malmente escolhido entre o sorbitol, manitol, glicerol, xilitol ou eritritol.
Quando o alditol é empregado em uma faixa de concentração de 1 a 10%(p/p), e em particular em uma faixa de concentração de 2 a 7% (p/p) a tem-peratura de reversão de fase da emulsão é reduzida por aproximadamente10°C. É da mesma forma possível reduzir a temperatura de reversão de faseda emulsão, substituindo-se a fase aquosa que consiste apenas de água poruma fase aquosa de solução salina tamponada. Um tampão de Tris, ou umtampão de fosfato tal como PBS ou o tampão de PBS de Dulbecco sem Ca2+e sem Mg2+, é normalmente empregado.
Alternativas para o processo que foi há pouco descrito existem.Especificamente, é possível, como foi há pouco descrito, misturar as 2 fasesaquosa e oleosa para obter a emulsão bruta que será, em seguida, aquecidae, em seguida, resfriada. Alternativamente, as 2 fases que foram preparadaspodem ser aquecidas separadamente a uma temperatura ligeiramente supe-rior à temperatura de reversão de fase, antes de ser misturada para produziruma emulsão reversa de água-em-óleo, que será resfriada até que a emul-são submicrônica de óleo-em-água seja obtida.
É também possível aquecer ligeiramente cada fase antes de rea-lizar a mistura, que resultará em uma emulsão de óleo-em-água, e em se-guida aquecer esta emulsão até a reversão de fase antes de realizar o res-friamento.
Todas estas operações podem ser realizadas em recipientesseparados para uma preparação em batelada, mas também é possível em-pregar um processo em linha.
O processo para preparar a emulsão em linha pode notavelmen-te consistir em uma mistura, sob condições quentes, nas duas fases aquosae oleosa preparadas separadamente anteriormente, através de um mistura-dor estático regulado seguido por resfriamento em linha através de um per-mutador de calor refrigerado conectado na saída do misturador estático, eem seguida a recuperação final da emulsão de acordo com a invenção emum recipiente adequado (frasco ou reator). Um misturador estático que con-siste em uma sucessão de elementos de mistura compostos de lâminas cru-zadas inclinadas em relação ao eixo do tubo no qual elas são introduzidasfoi bem-sucedidamente empregado. A energia necessária para a mistura éfornecida pelas bombas que transportam os fluidos e a mistura é realizadasem qualquer parte móvel, através dos elementos de mistura devido à sepa-ração, deslocamento e combinação sucessiva dos constituintes da mistura.
O processo de preparação em linha é realizado da seguinte ma-neira: a fase aquosa (solução tamponada compreendendo o éter de alquilade polioxietileno) e a fase oleosa (esqualeno e tensoativo não iônico hidrofó-bico) são preparadas em dois frascos ou reatores. As duas fases são aque-cidas com agitação a uma temperatura ligeiramente superior à temperaturade reversão de fase. As duas fases são, em seguida, introduzidas em ummisturador estático regulado por meio de 2 bombas, as taxas de fluxo dasquais são reguladas a fim de obter a composição de acordo com a invenção.
A emulsão reversa de água-em-óleo é obtida durante a passagem das duasfases no misturador estático. A emulsão reversa é subseqüentemente resfri-ada passando-a em linha através de um permutador de calor refrigerado co-nectado na saída do misturador estático. A emulsão de água-em-óleo, emseguida, reverterá através do permutador de calor refrigerado para produziruma emulsão de óleo-em-água, que será coletada em um frasco ou reator, eas características das quais são idênticas àquelas da emulsão obtida por umprocesso em batelada.
A emulsão adjuvante de acordo com a invenção é em seguidaempregada para a preparação de uma composição imunogênica. Uma mo-dalidade simples consiste na mistura de uma solução que compreende pelomenos um antígeno de vacina com uma emulsão obtida de acordo com à-quela das modalidades que foram há pouco descritas. A composição imuno-gênica obtida está sob a forma de uma emulsão de óleo-em-água ou sob aforma de uma emulsão de óleo-em-água termorreversível quando a quanti-dade de esqualeno representa pelo menos 5% em massa da massa total dacomposição imunogênica. Alternativamente, é possível misturar o antígenocom a fase aquosa ou com a fase oleosa antes de preparar a emulsão. Rea-lizar o processo de uma tal maneira indica, claro, que os referidos antígenossão antígenos que são compatíveis com o processo de termorreversão.
As soluções do antígeno podem da mesma forma conter saisminerais ou um ou mais tampões, e da mesma forma qualquer outro com-posto normalmente empregado nas vacinas, tais como estabilizadores, a-gentes de conservação ou, possivelmente, da mesma forma outros adjuvantes.
Para a preparação de uma emulsão liofilizável, uma emulsãolíquida concentrada é em primeiro lugar preparada, como foi há pouco des-crita, mas preferivelmente escolhendo água em vez de uma solução tampo-nada como fase aquosa, e em seguida esta emulsão é diluída com uma so-lução que compreende um alditol, um açúcar e um alquilpoliglicosídeo, porexemplo, com uma solução que compreende manitol, sacarose e o dodecil-maltosídeo.
A emulsão obtida é, em seguida, dividida em amostras (por e-xemplo, 0,5 ml) e submetida a um ciclo de liofilização, que pode ser realiza-do da seguinte maneira:
- carregar as amostras a + 4°C,
- aproximadamente 2 horas de congelamento em uma temperatura fixada de45°C,
- 14 a 19 horas de dessecação primária em uma temperatura fixada de O0C,
- 3 horas de 30 minutos de dessecação secundária em uma temperaturafixada de + 25°C.
A emulsão obtida pode, em seguida, ser conservada até ser em-pregada para a preparação de uma composição imunogênica, isto é, até sercombinada com uma composição que compreende antígenos de vacina. Es-ta etapa para preparação da composição imunogênica pode ser realizadaapreendendo-se a emulsão Iiofilizada com uma solução aquosa que com-preende os antígenos. A composição imunogênica desse modo obtida podesubseqüentemente ser convertida no estado líquido, ou pode ser submetidaa um outro ciclo de liofilização para ser conservada na forma de um Iiofiliza-do, se a natureza dos antígenos permite isto.
Alternativamente, é possível diluir diretamente a emulsão con-centrada com uma solução aquosa que compreende ambos antígenos devacina e, da mesma forma, o alditol, o açúcar e o alquilpoliglicosídeo, e sub-seqüentemente submeter a composição obtida para a liofilização. Uma talmaneira de realizar o processo indica, claro, que os antígenos são antígenosque são compatíveis com um processo de liofilização.
Os exemplos seguintes ilustram várias modalidades da invenção.
Exemplo 1: Preparação de uma emulsão adjuvante de acordo com a invencão.
3,71 g de Eumulgin® Β1 e 33,9 g de uma solução de manitol a10% em tampão de PBS foram misturados em um béquer, e a mistura foihomogeneizada com agitação em aproximadamente 30°C. Em outro recipi-ente, 2,89 g de Dehymuls® SMO e 19,5 g de esqualeno foram magnetica-mente agitados.
Quando as fases homogêneas foram obtidas em cada um dentreos recipientes, a fase aquosa foi incorporada na fase oleosa, que foi mantidaa 30°C com agitação.
Quando a incorporação foi concluída, a emulsão bruta obtida foiaquecida até que a temperatura alcançasse 58 - 60°C, enquanto ao mesmotempo mantendo a agitação. O aquecimento foi, em seguida, interrompidomas a agitação foi mantida até que a temperatura alcançasse temperaturaambiente.
Uma emulsão de óleo-em-água foi em seguida obtida, o tama-nho das gotículas de óleo das quais foi centralizado em torno de 80 nm (me-dida realizada empregando-se um LS230), e a composição em massa daqual foi como segue:
- 32,5% de esqualeno,
- 6,18% de éter de citostearila de polioxietileno (12),
- 4,82% de monooleato de sorbitano,
- 6% de manitol
Exemplo 2: Composição de vacina contra a AIDS.
Composições de vacina que compreendem uma proteína TAT IllB destoxificada. A proteína TAT foi destoxificada por meios de uma reaçãode alquilação em um meio alcalino empregando-se iodoacetamida sob asseguintes condições: número de micromols de iodoacetamida = 200 X nú-mero de micromols de TAT + número de micromols de DTT. Esta proteínadestoxificada e o processo para prepará-la são descritos em detalhe no pe-dido W099/33346, onde é identificado sob o termo TAT carboximetilado.Este antígeno de TAT recombinante é conservado na solução, na presençade 50 mM de tampão de Tris, pH 7,5 a -70°C.
As composições de vacina a ser administradas foram prepara-das de soluções concentradas para obter doses de imunização de 200 μΙtendo as seguintes composições quantitativas:- para a composição tendo apenas o antígeno: 20 μg de TAT em 50 mM detampão de Tris, 100 mM de NaCI em pH 7,5;
- para a composição de acordo com a invenção:
• 20 μg de TAT,
5 mg de esqualeno
• 0,75 mg de Dehymuls SMO
• 0,94 mg de Eumulgin B1,
• 0,91 mg de manitol.
Dois grupos de seis camundongos BALB/ç fêmeas de 8 semanas deidade foram fornecidos, e foram injetados subcutaneamente com uma dascomposições preparadas, em uma proporção de uma dose de 200 μΙ porcamundongo; as injeções foram dadas no DO e no D21.
Amostras de sangue foram retiradas do seio retroorbital no D14 afim de avaliar a resposta primária e no D34 para a resposta secundária. Ostítulos de IgGI e lgG2a foram determinados por meios de ensaios ELISApadronizados. Os camundongos foram sacrificados no D37; seu baço foiremovido e os esplenócitos foram isolados.
Os resultados obtidos com respeito as respostas humorais são re-sumidos na tabela abaixo, em que os títulos de IgG são expressos em uni-dades de ELISA arbitrárias (log 10). Para cada grupo de camundongo, o va-lor indicado na tabela é o título geométrico médio dos valores obtidos para
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Os resultados obtidos mostram que a emulsão de acordo com a in-venção torna-se possível aumentar, a resposta humoral, total, e da mesmaforma tende a promover a resposta de T auxiliar do tipo 1 visto que a respos-ta de lgG2a é aumentada mais do que a resposta de IgGI.
Com respeito à resposta celular, foi possível demonstrar, por ensaiode ELISPOT depois da re-estimulação dos esplenócitos removidos com aproteína TAT recombinante, um aumento claro no número de células queproduzem o interferon γ quando os esplenócitos surgem de camundongosimunizados com uma preparação de acordo com a invenção (486 manchaspor 106 de células versus 39 por 106 para a preparação que contém apenaso antígeno).
Similarmente, o ensaio das citocinas nos sobrenadantes de culturamostrou a secreção maior de ambos, interferon γ (5028 pg / ml versus 1940pg/ml) e Interleucina 5 (5365 pg/ml versus 2394 pg/ml).
Exemplo 3: Preparação de uma composição de vacina contra as infec-ções por citomegalovírus humano.
As composições de vacina compreendendo, como antígeno de va-cina, uma proteína recombinante derivada de uma glicoproteína de envelopeda cepa Towne de Citomegalovírus (CMV), denominada gB, as seqüênciasde proteína e nucleotídeo das quais são descritas na patente USP5.834.307, foram preparadas. Esta proteína recombinante é produzida poruma linhagem de CHO recombinante transfectada com um plasmídeo de-nominado pPRgB27clv4 que contém um gene de gB modificado. Especifi-camente, a fim de facilitar a produção desta proteína recombinante pela li-nhagem de CHO, o gene de gB foi modificado anteriormente deletando-se aparte do gene que codifica a região de transmembrana da proteína gB cor-respondente à seqüência de aminoácido entre a Valina 677 e a Arginina 752e introduzindo-se 3 mutações pontuais tal que o sítio de clivagem existenteem gB nativa foi eliminado. De fato, a proteína recombinante produzida pelalinhagem de CHO recombinante corresponde a uma proteína de gB truncadadesprovida de sítios de clivagem e de região de transmembrana, denomina-da gBd®.
A construção do plasmídeo pPRgB27clv4 e a produção da proteínagB truncada (gBd®) pela linhagem de CHO recombinante são descritas emUS 6.100.064. A purificação da proteína gB truncada é realizada em umacoluna cromatográfica de imunoafinidade empregando o anticorpo monoclo-nal 15D8 descrito por Rasmussen L e outros (J. Virol. (1985) 55: 274-280).
A partir de uma composição de matéria-prima em 0,975 mg/ml deantígeno de gB, desse modo, obtido e mantido em tampão de fosfato, a e-mulsão de acordo com a invenção concentrada como descrito no exemplo 1,e uma emulsão da técnica anterior obtida por microfluidização, doses de 50μΙ de composições de imunização foram preparadas, tendo as seguintescomposições:
- 2 μg de gB em tampão de citrato em pH 6, ( grupo denominado gB ape-nas),
- 2 μg de gB; 1,075mg de esqualeno; 0,133 mg de Montane® VG 85 e 0,125mg de Tween® 80 em tampão de citrato em pH 6 (grupo denominado "comemulsão da técnica anterior"),
- 2 μg de gB; 1,25 mg de esqualeno; 0,185 mg de Dehymuls SMO; 0,235 mgde Eumulgin® B1 e 0,230 mg de manitol em tampão de PBS em pH 7,4.(grupo denominado "com emulsão da invenção")
Três grupos de dez camundongos Outbreds OF1 de 8 semanas deidade foram fornecidos e imunizados duas vezes, no DO e no D21, subcuta-neamente, com uma das composições indicadas acima ( a cada grupo decamundongo é dado a mesma composição ambas as vezes).
Ambas amostras foram retiradas a partir do seio retroorbital no D20e D34 e foram empregadas para determinar as concentrações de anticorpostipo IgGIs e lgG2a específicos para o antígeno de gB.
Os ensaios foram realizados por meios de ensaios ELISA; os resul-tados obtidos são dados na tabela abaixo, e são expressados como Iogiodos títulos de ELISA. Os valores indicados são os valores médios obtidospara cada grupo de camundongos.
<table>table see original document page 21</column></row><table>
Estes resultados mostram a eficácia da emulsão de acordo com ainvenção, que permitiu uma indução maior de anticorpos, tanto aqueles dotipo IgGI quanto do tipo lgG2a, com, além disso, comparados com a emul-são de acordo com a técnica anterior, a obtenção do resultado desejado re-sultou no contexto de uma vacina contra o citomegalovírus humano, que éaquele de orientar a resposta imune para uma resposta de TH1 (um indica-dor da qual é o título de lgG2a), enquanto ao mesmo tempo manter a res-posta de tipo TH2 ( um indicador da qual é o título de IgGI) em um nível su-ficiente.
Exemplo 4: Composição de vacina contra gripe.
Antígenos do vírus da gripe estavam disponíveis, obtidos de acordocom o processo descrito nos exemplos do pedido W09605294, com a exce-ção do fato que a cepa viral empregada foi a cepa A/New Caledonia H1N1.
O emprego desta preparação de antígenos, a emulsão concentradade acordo com a invenção obtida no exemplo 1, e uma suspensão de alumí-nio fornecida por REHEIS sob o nome AIOOH Rehydra, doses de imuniza-ção de 50 μl foram preparadas, as quais tiveram a composição indicada emseguida, em que as quantidades de antígenos da gripe são expressos empeso de hemaglutina HA:
-1 μg de HA em tampão de PBS,
- ou 5 μg de HA em tampão de PBS,
- ou 1 μg de HA e 60 μg de hidróxido de alumínio,
- ou 1 μg de HA; 1,25 mg de esqualeno; 0,185 mg de Dehymuls® SMO;0,235 mg de Eumulgin® B; 0,21 mg de manitol; a mistura completa em tam-pão de PBS.
Oito grupos de cinco camundongos BALB/c fêmeas de 8 sema-nas de idade foram fornecidos e foram administrados, no DO, com as com-posições preparadas de acordo com a seguinte distribuição :
um grupo recebeu a composição tendo 1 μg de HA, subcutaneamente,
um grupo recebeu a mesma composição tendo 1 μg de HA, intrader-micamente,
um grupo recebeu a composição tendo 5 μg de HA, subcutaneamente,um grupo recebeu a mesma composição tendo 5 μς de HA1 intrader-micamente,
um grupo recebeu a composição tendo 1 μg de HA e 60 μg de alumí-nio, subcutaneamente,
- um grupo recebeu a mesma composição tendo 1 μg de HA e 60 μg dealumínio, intradermicamente,
um grupo recebeu a composição tendo 1 μρ de HA e a emulsão deacordo com a invenção, subcutaneamente,
um grupo recebeu a composição tendo 1 μ9 de HA e a emulsão deacordo com a invenção, intradermicamente.
Amostras de sangue foram retiradas de cada um dos camun-dongos no D14, D28, D41, D56 e D105. Ossoros dos camundongos imuni-zados foram ensaiados, primeiramente, pela técnica de ELISA a fim de ava-liar seu conteúdo de anticorpos totais induzidos contra a cepa A/H1N1 degripe da vacina trivalente ( os títulos de anticorpo são expressos como o va-lor de IogIO de unidades de ELISA arbitrárias, com um limiar de detecção de1,3 Iog10) e, em segundo lugar, pela técnica de HAI (inibição por hemagluti-nação) a fim de determinar seu conteúdo de anticorpos funcionais contra acepa A/H1N1 de gripe. Os títulos de anticorpo são expressos como o inversoda diluição em valor aritmético, com um limiar de detecção em 5.
Os resultados obtidos são reiterados nas tabelas a seguir, nasquais os valores indicados representam a média dos títulos dos camundon-gos de cada grupo.ELISA títulos
<table>table see original document page 24</column></row><table>
HAI títulos
<table>table see original document page 24</column></row><table>
Estes resultados mostram a vantagem da presente invenção;especificamente, hidróxido de alumínio, que é um adjuvante bem conhecidoamplamente usado na técnica anterior, não tornou possível aumentar a imu-nogenicidade dos antígenos gripais com a mesma rapidez e a mesma resis-tência como da formulação de acordo com a invenção; é também observadoque a composição de acordo com a invenção foi particularmente eficaz, queradministrada subcutaneamente ou intradermicamente.Exemplo 5: Composição de vacina contra gripe.
A intenção foi avaliar, em camundongos, a vantagem da presen-te invenção diminuir a quantidade de antígeno de vacina quando a vacinaenvolvida é uma vacina contra gripe que contém, como antígenos, 3 cepasde vírus da gripe e que deve ser administrada intradermicamente.
Para esta finalidade, a emulsão concentrada do exemplo 1 foidiluída com tampão PBS a fim de obter uma emulsão de esqualeno a 5 %,que foi também diluída pela metade com uma composição compreendendoos antígenos.
Uma composição compreendendo vírus da gripe que se originade 3 cepas virais diferentes obtidas da maneira descrita no pedido de paten-te WO 96/05294 foi de fato disponibilizada, as 3 cepas sendo neste caso acepa A/New Caledonia (H1N1), a cepa A/Wyoming (H3N2) e a cepaB/Jiangsu. Uma tal composição de vacina trivalente é convencional parauma vacina de flu e corresponde à vacina vendida no hemisfério norte du-rante a campanha de flu de 2004. As quantidades de antígenos de cada dascepas virais são avaliadas através de sua quantidade de hemaglutininas HA.
As doses de imunização preparadas, tendo um volume de 50 μΙ,tiveram as composições indicadas abaixo :
0,33 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS em pH 7,4 ;
1,31 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS em pH 7,4;
5,25 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS em pH 7,4;
10,5 ug de HA de cada das cepas virais em tampão PBS em pH 7,4;
- 21 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS em pH 7,4;
0,33 μg de HA de cada das cepas virais; 1,25 mg de esqualeno; 0,185mg de Dehymuls® SMO; 0,235 mg de Eumulgin® B1 e 0,230 mg de manitolem tampão PBS em pH 7,4 ;
1,31 μg de HA de cada das cepas virais; 1,25 mg de esqualeno; 0,185mg de Dehymuls® SMO; 0,235 mg de Eumulgin® B1 e 0,230 mg de manitolem tampão PBS em pH 7,4 ;
5,25 μg de HA de cada das cepas virais; 1,25 mg de esqualeno; 0,185mg de Dehymuls® SMO; 0,235 mg de Eumulgin® B1 e 0,230 mg de manitolem tampão PBS em pH 7,4.
Oito grupos de dez camundongos BALB/c fêmeas de 6 a 8 se-manas de idade foram fornecidos e foram administrados intradermicamente(face interna do ouvido) com uma das composições preparadas, em umarelação de uma composição por grupo.
Três semanas após imunização, amostras de sangue foram reti-tadas e, para cada dos grupos, as IgGs induzidas contra cada das cepasvirais foram ensaiadas por ELISA; um ensaio de inibição de hemaglutininacontra cada cepa viral foi também realizado para cada dos grupos.
Os resultados obtidos são representados na tabela abaixo naforma de médias para cada dos grupos. Os resultados de ELISA são ex-pressos como Iogio de unidades arbitrárias, e os resultados de HAI são ostítulos aritméticos médios dos inversos das diluições.
<table>table see original document page 26</column></row><table>
Estes resultados demonstram a vantagem particular da invençãode reduzir a quantidade de antígenos; especificamente, em virtude da emul-são de acordo com a invenção, foi possível, para a mesma resposta imuneinduzida, diminuir muito substancialmente a quantidade de antígenos pre-sentes na dose de imunização.Exemplo 6: Composição de vacina trivalente contra gripe em uma populaçãonão ingênua
A intenção foi testar a eficácia da emulsão da invenção no casode uma vacina de flu que deve ser administrada a indivíduos cujo corpo jáentrou em contato com antígenos de vírus da gripe, como é freqüentementeo caso, porque os indivíduos já entraram em contato com o vírus da gripe,ou porque eles já foram previamante imunizados com uma contra da gripe.
De acordo com a informação publicada por C.W. Potter em Vac-cine, 2003, 21:940-5, é possível usar, como modelo animal para realizar esteteste, camundongos BALB/c pré-imunizados intramuscularmente com umavacina trivalente,
50 μl de doses de imunização compreendendo tampão PBS a-penas, ou vacina trivalente da campanha de 2004, isto é uma vacina com-preendendo a cepa A/New Caledonia (H1 Nl'), a cepa A/Wyoming (H3N2) e acepa B/Jiangsu, em uma proporção de 5 pg de HA de cada das cepas, emtampão PBS em pH 7,4, foram portanto preparados.
Seis grupos de sete camundongos BALB/c foram fornecidos; 3grupos foram imunizados com as doses compreendendo somente tampão, eos outros 3 com a vacina trivalente, intramuscularmente.
30 μl de doses de imunização foram também preparados a partirda emulsão concentrada do exemplo 1 e uma composição de vacina com-preendendo as 3 cepas virais da campanha de 2004 mencionadas acima,estas doses de imunização tendo as seguintes composições :
- Tampão PBS apenas,
- 0,3 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS,
- 0,3 μg de HA de cada das cepas virais; 0,75 mg de esqualeno; 0,11 mg deDehymuls® SMO; 0,143 mg de Eumulgin® B1 e 0,138 mg de manitol emtampão PBS em pH 7,4.
Cada um das composições desse modo preparadas foi usadapara imunizar, no D34 intradermicamente (na face interna do ouvido), tantoum grupo de camundongos tendo previamente recebido somente o tampãoPBS, quanto um grupo de camundongos que receberam uma dose de vaci-na trivalente.
No D56, uma amostra de sangue foi retirada de cada um doscamundongos e os anticorpos produzidos contra a cepa H1N1 (A/New Cale-donia) foram titulados por meio de um ensaio de inibição de hemaglutinina.
Os resultados obtidos foram sumarizados na tabela abaixo e re-presentam os valores médios obtidos para cada grupo de camundongostendo seguido o mesmo protocolo de imunização.
<table>table see original document page 28</column></row><table>
Estes resultados mostram quanto vantajosa é a invenção, mes-mo em indivíduos que não são ingênuos com respeito ao antígeno adminis-trado. De fato, contrário às observações por C.W. Potter quando empregan-do-se este modelo, que, sozinho, foi apenas capaz de mostrar um efeito ad-juvante fraco de Iscoms quando eles foram usados para imunizar camun-dongos pré-infectados ou pré-imunizados com antígenos da gripe, aqui ob-servou-se que a emulsão de acordo com a invenção tornou possível signifi-cantemente aumentar a resposta induzida, quer isto fosse com camundon-gos ingênuos quer com camundongos tendo já sido imunizados com contrada gripe.
Exemplo 7: Composição de vacina trivalente contra gripe compreendendobaixas doses de antígenos
30 μl de doses de imunização foram preparadas a partir da e-mulsão concentrada do exemplo 1 e uma composição de vacina compreen-dendo as 3 cepas virais da campanha de 2004 (a cepa A/New Caledonia(H1N1), a cepa A/Wyoming (H3N2) e a cepa B/Jiangsu), estas doses de i-munização tendo as seguintes composições :
0,1 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS,
0,4 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS,
- 1,6 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS,
6,3 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS,
- 0,1 μg de HA; 0,75 mg de esqualeno; 0,11 mg de Dehymuls® SMO;
0,143 mg de Eumulgin® B1 e 0,138 mg de manitol em tampão PBS em pH 7,4,
- 0,4 μg de HA; 0,75 mg de esqualeno; 0,11 mg de Dehymuls® SMO;
0,143 mg de Eumulgin® B1 e 0,138 mg de manitol em tampão PBS em pH7,4.
Seis grupos de oito camundongos BALB/c fêmeas de 8 semanasde idade foram fornecidos e foram administrados, no DO, intradermicamente(face interna do ouvido) com uma dose de 30 μΙ de uma das composiçõesindicadas abaixo (1 composição por grupo).
Em cada grupo, uma 2- dose tendo a mesma natureza como a1- dose administrada foi novamente administrada, intradermicamente, nametade dos camundongos no D29.
Amostras de sangue foram retiradas no D22 e no D43 a fim dedeterminar as quantidades de anticorpos induzidos.
Os títulos de anticorpo foram ensaiados por ELISA para os anti-corpos induzidos no D22 e no D43, com respeito a todas as cepas adminis-tradas: H1N1, H3N2 e B, e por HAI com respeito à cepa H1N1 apenas, tantono D22 quanto no D43. Os resultados obtidos foram sumarizados na tabelaabaixo, na qual os títulos expressos são as médias obtidas para cada grupode camundongos. Com referência aos resultados no D43, as médias foramdeterminadas separadamente dentro do mesmo grupo, para os camundon-gos que receberam 2 doses de vacina e aqueles tendo recebido somente uma.
<table>table see original document page 30</column></row><table>
Estes resultados mostram que, em virtude da emulsão de acordocom a invenção, mesmo com baixas doses de antígenos, respostas humo-rais muito substanciais foram obtidas. Desse modo, pode ser observado queos melhores resultados são aqueles obtidos com uma dose de 0,4 μg de HAde cada uma das cepas virais e uma emulsão de acordo com a invenção;estes resultados são, muito supreendentemente, muito melhores do que a-queles obtidos empregando-se uma dose de 6,3 μg de HA apenas. Alémdisso, é observado que, mesmo nos indivíduos não administrados com umadose de reforço, o sistema imune continua a induzir anticorpos, visto queeste não é o caso dos indivíduos administrados com os antígenos de vacinanão auxiliados.
Exemplo 8: Composição de vacina trivalente contra gripe
30 μΙ de doses de imunização foram preparadas a partir da e-mulsão concentrada do exemplo 1 e uma composição de vacina compreen-dendo as 3 cepas virais da campanha de 2004 ( a cepa A/New Caledonia(H1N1), a cepa A/Wyoming (H3N2) e a cepa B/Jjangsu), estas doses de i-munização tendo as seguintes composições :
0,1 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS,0,4 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS,1,6 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS,6,3 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS,- 0,1 μg de HA; 0,75 mg de esqualeno; 0,11 mg de Dehymuls® SMO;0,143 mg de Eumulgin® B1 e 0,138 mg de manitol em tampão PBS em pH7,4,
0,4 μg de HA; 0,75 mg de esqualeno; 0,11 mg de Dehymuls® SMO;0,143 mg de Eumulgin® B1 e 0,138 mg de manitol em tampão PBS em pH 7,4.
Seis grupos de oito camundongos C57BL/6J fêmeas de 8 sema-nas de idade foram fornecidos e foram administrados, no DO intradermica-mente (face interna do ouvido), com uma dose de 30 μΙ de uma das compo-sições indicadas abaixo (1 composição por grupo).
Amostras de sangue foram retiradas no D23 a fim de determinaras quantidades de anticorpos induzidos.
Os títulos de anticorpo foram ensaiados por ELISA e por HAIpara os anticorpos induzidos com respeito a todas as cepas administradas:H1N1, H3N2e B.
Os resultados obtidos foram sumarizados na tabela abaixo, naqual os títulos expressos são as médias obtidas para cada grupo de camun-dongos.<table>table see original document page 32</column></row><table>
Novamente, os resultados obtidos mostram a grande vantagemda emulsão de acordo com a invenção, em virtude de que é possível reduzirmuito substancialmente as quantidades de antígenos presentes. Especifica-mente, pode ser considerado, totalmente, que com apenas 0,1 μg de HAauxiliado com a emulsão de acordo com a invenção, os resultados obtidossão tão bons quanto com uma quantidade de 6,3 μg de HA.
Exemplo 9: Composição de vacina trivalente contra gripe compreendendouma emulsão de acordo com a invenção ou de acordo com a técnica anterior30 μΙ de doses de imunização foram preparadas a partir da e-mulsão concentrada do exemplo 1 e uma composição de vacina compreen-dendo as 3 cepas virais da campanha de 2004 (a cepa A/New Caledonia(H1N1), a cepa A/Wyoming (H3N2) e a cepa B/Jiangsu), estas doses de i-munização tendo as seguintes composições:
0,3 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS,- 6,3 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS,0,3 μg de HA; 0,21 mg de esqualeno; 0,031 mg de Dehymuls® SMO;0,040 mg de Eumulgin® B1 e 0,039 mg de manitol em tampão PBS em pH7,4 (emulsão a 0,7%),0,3 μg de HA; 0,75 mg de esqualeno; 0,11 mg de Dehymuls® SMO;0,143 mg de Eumulgin® B1 e 0,138 mg de manitol em tampão PBS em pH7,4 (emulsão a 2,5%),
0,3 μg de HA; 0,645 mg de esqualeno; 0,075 mg de Tween® 80; 0,075mg de Span® 85 (emulsão de acordo com a técnica anterior obtida por mi-crofluidificação).Cinco grupos de oito camundongos BALB/c fêmeas de 8 sema-nas de idade foram fornecidos e foram administrados, no DO intradermica-mente (face interna do ouvido), com uma dose de 30 μΙ de uma das compo-sições indicadas abaixo (1 composição por grupo).
Para avaliar a quantidade de anticorpos induzidos, amostras desangue foram retiradas no D21 e a atividade contra a cepa A/H1N1, a cepaA/H3N2 e à cepa B foi determinada nas referidas amostras de sangue porHAI (inibição por hemaglutinação).
Os resultados obtidos para cada grupo de camundongos sãorepresentados na tabela abaixo. Composição tes- HAI contra H1N1 HAI contra H3N2 HAI contra B tada
<table>table see original document page 33</column></row><table>
Estes resultados mostram que, com uma emulsão obtida de a-cordo com a invenção em vitude de um processo de preparação muito sim-ples consistindo de inversão de fase por meio de uma mudança na tempera-tura, um adjuvante foi obtido que é tão bom quanto, e ainda ligeiramente me-Ihor do que, a emulsão da técnica anterior obtida empregando-se taxas decisalhamento muito elevadas.
Exemplo 10: Composição de vacina trivalente contra gripe compreendendouma emulsão de acordo com a invenção em várias concentrações.
30 μΙ de doses de imunização foram preparadas a partir da e-mulsão concentrada do exemplo 1 e uma composição de vacina compreen-dendo as 3 cepas virais da campanha de 2004 (a cepa A/New Caledonia(H1N1), a cepa A/Wyoming (H3N2) e a cepa B/Jiangsu), estas doses de i-munização tendo as seguintes composições :0,3 μ9 de HA de cada das cepas virais em tampão PBS16,3 μρ de HA de cada das cepas virais em tampão PBS,0,3 μρ de HA de cada das cepas virais; 0,12 mg de esqualeno; 0,018mg de Dehymuls® SMO; 0,023 mg de Eumulgin® B1 e 0,022 mg de manitolem tampão PBS em pH 7,4 (emulsão a 0,4%),
0,3 μg de HA de cada das cepas virais; 0,299 mg de esqualeno; 0,044mg de Dehymuls® SMO; 0,057 mg de Eumulgin® B1 e 0,055 mg de manitolem tampão PBS em pH 7,4 (emulsão a 1%),
0,3 μg de HA de cada das cepas virais; 0,75 mg de esqualeno; 0,11mg de Dehymuls® SMO; 0,143 mg de Eumulgin® B1 e 0,138 mg de manitolem tampão PBS em pH 7,4 (emulsão a 2,5%).
Cinco grupos de oito camundongos BALB/c fêmeas de 8 sema-nas de idade foram fornecidos e foram administrados, no DO intradermica-mente (face interna do ouvido), com uma dose de 30 μΙ de uma das compo-sições indicadas abaixo (1 composição por grupo).
A fim de avaliar a quantidade de anticorpos induzidos, amostrasde sangue foram retiradas no D21 e os anticorpos anti-H1N1, os anticorposanti-H3N2 e os anticorpos anti-B foram determinados nestas amostras desangue por ELISA, e a atividade contra a cepa A/H1N1, a cepa A/H3N2 e acepa B foi determinada por HAI (inibição por hemaglutinação).
Os resultados obtidos são representados na tabela abaixo naforma de médias para cada dos grupos; os resultados de ELISA são expres-sos em Iogio de unidades de ELISA arbitrárias e os resultados de HAI são ostítulos aritméticos médios dos inversos de diluições.<table>table see original document page 35</column></row><table>
Estes resultados confirmam mais uma vez que, qualquer queseja a cepa avaliada, a emulsão de acordo com a invenção tornou possível,com uma dose muito baixa de antígenos, obter uma resposta do sistemaimune muito substancial.
Exemplo 11: Preparação de uma composição liofilizável
O processo foi realizado como no exemplo 1, porém empregan-do-se água em vez do tampão; a emulsão obtida foi subseqüentemente dilu-ída com uma solução aquosa compreendendo manitol, sacarose e dodecil-maltosídeo, a fim de obter uma emulsão cuja composição final foi como segue :
5% de esqualeno,
0,95% de éter de cetoestearila de polioxietileno,0,75% de monooleato de sorbitano,- 3% de manitol,
2% de dodecilmaltosídeo,6% de sacarose.
Esta emulsão foi Iiofilizada e conservada a 4°C durante 3 meses;em seguida, após reconstituição, foi observado que suas propriedades foramconservadas, em particular suas qualidades de emulsão monodispersa, comvalores d50 e d90 próximos àqueles medidos antes da liofilização.Esta emulsão foi apta a ser diluída 50/50 com uma soluçãocompreendendo antígenos de vacina a fim de obter uma composição de va-cina.
Exemplo 12: Comparação do efeito adiuvante da emulsão de acordo com ainvenção e de um tensoativo presente na emulsão
A intenção foi avaliar a atividade adjuvante da emulsão de acor-do com a invenção, comparada com aquela do tensoativo Eumulgin® B1 queestá presente na emulsão.
Para isto, um teste foi realizado nos camundongos empregando-se antígenos da gripe.
Para esta finalidade, antígenos de vírus do vírus da gripe foramdisponibilizados, obtidos de acordo com o processo descrito nos exemplosdo pedido WO 96/05294, com a exceção do fato de que a cepa viral usadafoi a cepa A/New Caledonia H1N1. Uma composição de vacina compreen-dendo as 3 cepas virais da campanha de 2004 (a cepa A/New Caledonia(H1N1), a cepa A/Wyoming (H3N2) e a cepa B/Jiangsu) foi também disponi-bilizada.
100 μl de doses de imunização foram preparadas a partir daemulsão concentrada obtida de acordo com a invenção e descrita no exem-pio 1, de Eumulgin® B1, e a partir das composições de antígeno de vírus dagripe, estas doses de imunização tendo as seguintes composições :
1 μg de HA da cepa H1N1 em tampão PBS em pH 7,4;
5 μg de HA da cepa H1N1 em tampão PBS em pH 7,4;
1 μg de HA da cepa H1N1; 2,5 mg de esqualeno; 0,37 mg de Dehy-muls® SMO; 0,48 mg de Eumulgin® B1 e 0,46 mg de manitol em tampãoPBS em pH 7,4;
1 μg de HA da cepa H1N1 e 0,48 mg de Eumulgin® B1 em tampãoPBS em pH 7,4;
- 0,33 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS em pH 7,4;
- 1,66 μg de HA de cada das cepas virais em tampão PBS em pH 7,4;
- 0,33 μg de HA de cada das cepas virais; 2,5 mg de esqualeno; 0,37mg de Dehymuls® SMO; 0,48 mg de Eumulgin® B1 e 0,46 mg de manitol emtampão PBS em pH 7,4;
0,33 μς de HA de cada das cepas virais e 0,48 mg de Eumulgin® B1em tampão PBS em pH 7,4.
Oito grupos de 8 camundongos BALB/c fêmeas foram fornecidose foram imunizados por meio de uma injeção intramuscular única no DO.Amostras de sangue foram retiradas no D21 e D35 a fim de avaliar por en-saio ELISA seu conteúdo de anticorpos totais induzidos contra a cepaΑ/Η1N1 de gripe ou contra cada das cepas da vacina trivalente. Os títulos deanticorpo, indicados na tabela abaixo, são expressos como o valor de IogIOde unidades de ELISA arbitrárias, com um limiar de detecção de 1,3 Iogl 0.
<table>table see original document page 37</column></row><table>
Os resultados obtidos neste teste confirmam aqueles anterior-mente obtidos em testes prévios, a saber que a emulsão de acordo com ainvenção torna possível grandemente reduzir a dose de antígenos para amesma resposta do sistema imune; uma melhor resposta foi de fato obtidaempregando-se a emulsão de acordo com a invenção e apenas 1 μg de HAem vez de empregar uma dose de 5 μg de HA sem adjuvante.
É também observado que o tensoativo usado realmente não exi-be qualquer efeito adjuvante quando é usado sozinho, ao passo que a emul-são de acordo com a invenção por si só produz um efeito altamente adjuvan-te com respeito a todas as cepas testadas.

Claims (31)

1. Emulsão adjuvante de óleo-em-água, caracterizada pelo fatode que compreende pelo menos:esqualeno,- um solvente aquoso,um tensoativo não iônico que é um éter de alquila de polioxietileno,um tensoativo não iônico hidrofóbico,em que a referida emulsão é termorreversível e em que 90% da populaçãopor volume das gotas de óleo têm um tamanho menor do que 200 nm.
2. Emulsão de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelofato de que 90% da população por volume das gotas de óleo têm um tama-nho menor do que 160 nm.
3. Emulsão de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizadapelo fato de que 90% da população por volume das gotas de óleo têm umtamanho menor do que 150 nm.
4. Emulsão de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-3, caracterizada pelo fato de que 50% da população por volume das gotasde óleo têm um tamanho menor do que 100 nm.
5. Emulsão de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-4, caracterizada pelo fato de que 50% da população por volume das gotasde óleo têm um tamanho menor do que 90 nm.
6. Emulsão de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-5, caracterizada pelo fato de que também compreende pelo menos um alditol.
7. Emulsão de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelofato de que o tensoativo não iônico hidrofóbico compreende um éster desorbitano ou um éster de mannide.
8. Emulsão de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-7, caracterizada pelo fato de que o éter de alquila de polioxietileno é éter decetoestearila de polioxietileno (12).
9. Emulsão de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a-8, caracterizada pelo fato de que o alditol é escolhido de glicerol, eritritol,xilitol, sorbitol e manitol.
10. Emulsão de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 9, caracterizada pelo fato de que o tensoativo não iônico hidrofóbico é mo-nooleato de sorbitano.
11. Emulsão de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 10, caracterizada pelo fato de que a quantidade de esqualeno é entre 5 e 45%.
12. Emulsão de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 11, caracterizada pelo fato de que a quantidade de tensoativo com baseem éter de alquila de polioxietileno é entre 0,9 e 9%.
13. Emulsão de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 12, caracterizada pelo fato de que a quantidade de tensoativo não iônicohidrofóbico é entre 0,7 e 7%.
14. Emulsão de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 13, caracterizada pelo fato de que compreende:- 32,5% de esqualeno,- 6,18% de éter de cetoestearila de polioxietileno (12),- 4,82% de monooleato de sorbitano,- 6% de manitol.
15. Emulsão de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 14, caracterizada pelo fato de que também compreende um alquilpoliglico-sídeo.
16. Emulsão de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 15, caracterizada pelo fato de que também compreende um agente crio-protetor.
17. Uso de uma emulsão como definida em qualquer uma dasreivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que é para a preparação deuma composição imunogênica destinada a ser administrada intramuscular-mente.
18. Uso de uma emulsão como definida em qualquer uma dasreivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que é para a preparação deuma composição imunogênica destinada a ser administrada intradermica-mente.
19. Uso de uma emulsão como definida em qualquer uma dasreivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que é para a preparação deuma composição imunogênica destinada a ser administrada subcutanea-mente.
20. Uso de uma emulsão como definida em qualquer uma dasreivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que é para a preparação deuma composição imunogênica destinada a ser administrada contra a gripe.
21. Uso de uma emulsão como definida em qualquer uma dasreivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que é para a preparação deuma composição imunogênica destinada a ser administrada contra a AIDS.
22. Uso de uma emulsão como definida em qualquer uma dasreivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que é para a preparação deuma composição imunogênica destinada a ser administrada contra patologi-as por citomegalovírus humano.
23. Processo para preparação de uma composição imunogênicacompreendendo pelo menos um antígeno de vacina e uma emulsão óleo-em-água, caracterizado pelo fato de que o óleo é esqualeno e em que a e-mulsão óleo-em-água é obtida por meio de um processo de variação datemperatura de inversão de fase.
24. Processo de acordo com a reivindicação 23, caracterizadopelo fato de que compreende pelo menos uma etapa para preparação daemulsão óleo-em-água por resfriamento de uma emulsão invertida de água-em-óleo, que compreende pelo menos:- esqualeno,um solvente aquoso,um tensoativo não iônico hidrofílico que é um éter de alquila de polio-xietileno,um tensoativo não iônico hidrofóbico.
25. Processo de acordo com a reivindicação 24, caracterizadopelo fato de que a emulsão invertida de água-em-óleo é obtida misturando-se esqualeno, um solvente aquoso, um tensoativo não iônico, que é um éterde alquila de polioxietileno, e um tensoativo não iônico hidrofóbico, a fim deobter, primeiro de tudo, uma emulsão bruta de óleo-em-água, e esta emul-são é em seguida aquecida para pelo menos a temperatura de inversão defase, a fim de se obter a emulsão invertida.
26. Processo de acordo com a reivindicação 24, caracterizadopelo fato de que:por um lado, uma fase aquosa compreendendo um solvente aquoso eum tensoativo, que é um éter de alquila de polioxietileno, e, por outro lado,uma fase oleosa compreendendo esqualeno e um tensoativo hidrofóbico, asquais são aquecidas, separadamente, para uma temperatura pelo menosigual à temperatura de inversão de fase, e em seguidaas 2 fases são misturadas, a fim de se obter uma emulsão invertidade água-em-óleo.
27. Processo de acordo com a reivindicação 24, caracterizadopelo fato de que:por um lado, uma fase aquosa compreendendo um solvente aquoso eum tensoativo, que é um éter de alquila de polioxietileno, e, por outro lado,uma fase oleosa compreendendo esqualeno e um tensoativo hidrofóbico, asquais são aquecidas, separadamente, para uma temperatura abaixo da tem-peratura de inversão de fase da emulsão,as 2 fases são em seguida misturadas, a fim de se obter uma emul-são óleo-em-águaa emulsão óleo-em-água obtida é, em seguida, aquecida para umatemperatura pelo menos igual à temperatura de inversão de fase, a fim de seobter uma emulsão invertida de água-em-óleo.
28. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações-23 a 27, caracterizado pelo fato de que a temperatura de inversão de fase éentre 45 e 80°C.
29. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicação 23a 28, caracterizado pelo fato de que a temperatura de inversão de fase éentre 50 e 65°C.
30. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações- 23 a 29, caracterizado pelo fato de que também compreende pelo menosuma etapa de liofilização.
31. Composição imunogênica, caracterizada pelo fato de quepode ser obtida por meio do processo como definido em qualquer uma dasreivindicações 23 a 30.
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Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5869744B2 (ja) 2005-03-23 2016-02-24 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム Ｃｄ４ｔ細胞および／または改善された記憶ｂ細胞応答を誘導するためのインフルエンザウイルスおよび水中油型エマルジョンアジュバントの使用
AR054822A1 (es) * 2005-07-07 2007-07-18 Sanofi Pasteur Emulsion inmuno adyuvante
US11707520B2 (en) 2005-11-03 2023-07-25 Seqirus UK Limited Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture
CA2628152C (en) 2005-11-04 2016-02-02 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture
AU2011213757B2 (en) * 2005-11-04 2013-07-25 Seqirus UK Limited Influenza vaccine with reduced amount of oil-in-water emulsion as adjuvant
WO2007052155A2 (en) * 2005-11-04 2007-05-10 Novartis Vaccines And Diagnostics Srl Influenza vaccine with reduced amount of oil-in-water emulsion as adjuvant
KR101696727B1 (ko) 2006-07-17 2017-01-16 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 인플루엔자 백신
GB0622282D0 (en) 2006-11-08 2006-12-20 Novartis Ag Quality control methods
TW200908994A (en) 2007-04-20 2009-03-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
JP2010530362A (ja) * 2007-05-31 2010-09-09 アカデミシュ ジーケンハウス ライデン ハー．オー．デー．エン． ルムク 皮内ｈｐｖペプチドワクチン接種
CN101428145B (zh) * 2007-11-05 2013-01-02 北京生泰尔生物科技有限公司 新型疫苗佐剂
US8506966B2 (en) 2008-02-22 2013-08-13 Novartis Ag Adjuvanted influenza vaccines for pediatric use
EP2589392B1 (en) 2008-03-05 2016-11-30 Sanofi Pasteur Process for stabilizing an adjuvant containing vaccine composition
EP2318044B1 (en) 2008-08-01 2015-12-02 Gamma Vaccines Pty Limited Influenza vaccines
DK2396032T3 (en) 2009-02-10 2016-12-19 Seqirus Uk Ltd Influenza vaccines with reduced amounts of squalene
PT2400951T (pt) 2009-02-25 2018-11-26 Mayne Pharma Llc Composições de espuma tópica
KR20120088721A (ko) 2009-10-09 2012-08-08 씨바이오 리미티드 샤페로닌 10 변이체
GB0919117D0 (en) 2009-10-30 2009-12-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Process
GB201009673D0 (en) * 2010-06-10 2010-07-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel process
WO2012075428A1 (en) 2010-12-03 2012-06-07 Sanofi Pasteur Limited Composition for immunization against streptococcus pneumoniae
WO2012100302A1 (en) 2011-01-27 2012-08-02 Gamma Vaccines Pty Limited Combination vaccines
EP2578974A1 (en) 2011-10-05 2013-04-10 Sanofi Pasteur Sa Process line for the production of freeze-dried particles
ES2732229T3 (es) 2012-03-23 2019-11-21 Pitney Pharmaceuticals Pty Ltd Inhibidores de cinasa para el tratamiento del cáncer
CA2875683A1 (en) 2012-06-05 2013-12-12 The Australian National University Vaccination with interleukin-4 antagonists
WO2013184900A2 (en) 2012-06-06 2013-12-12 Sanofi Pasteur Biologics, Llc Immunogenic compositions and related methods
JP2015524421A (ja) 2012-07-24 2015-08-24 サノフィ・パスツールＳａｎｏｆｉｐａｓｔｅｕｒ ワクチン組成物
SG11201500439RA (en) 2012-07-24 2015-02-27 Sanofi Pasteur Vaccine compositions for prevention against dengue virus infection
CN105496999A (zh) 2012-08-06 2016-04-20 皮特尼制药股份有限公司 治疗mTOR通路相关的疾病的化合物
CN103784953B (zh) * 2012-10-26 2018-04-10 上海医药工业研究院 作为疫苗佐剂的水包油型亚微乳及其制备方法
WO2014083194A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Sanofi Pasteur Methods for inducing antibodies
ES2727686T3 (es) 2012-12-17 2019-10-17 Newsouth Innovations Pty Ltd Tratamiento de enfermedades que implican mucina
WO2014100857A1 (en) 2012-12-24 2014-07-03 Cell Ideas Pty Ltd Vaccines for the treatment of cancer and compositions for enhancing vaccine efficacy
EP3016968B1 (en) 2013-07-01 2019-06-26 Newsouth Innovations Pty Limited Diagnosis and treatment of autoimmune diseases
CN105288614A (zh) * 2014-06-18 2016-02-03 潘皓 一种疫苗组合物及其制备方法
CA3000093C (en) 2014-07-21 2019-07-09 Sanofi Pasteur Sa Liquid feeding device for the generation of droplets
AU2016236770B2 (en) 2015-03-26 2022-03-10 Gpn Vaccines Pty Ltd Streptococcal vaccine
CN105251002B (zh) * 2015-11-13 2019-02-15 中国人民解放军第三军医大学 一种水包油型纳米乳佐剂及其mrsa纳米乳佐剂疫苗和制备方法
WO2017137085A1 (en) 2016-02-11 2017-08-17 Sanofi Pasteur Meningitidis vaccines comprising subtilinases
RU2018137034A (ru) * 2016-03-23 2020-04-23 Интервет Интернэшнл Б.В. Комбинированная вакцина против вируса pcv2 и инфекции mycoplasma hyopneumoniae
WO2018030777A1 (ko) * 2016-08-10 2018-02-15 ㈜셀트리온 항-인플루엔자 바이러스 항체의 안정한 액체 약제학적 제제
MX2019011599A (es) 2017-03-30 2019-12-19 Univ Queensland Moleculas quimericas y usos de las mismas.
WO2021231729A1 (en) 2020-05-13 2021-11-18 Sanofi Adjuvanted stabilized stem hemagglutinin nanoparticles and methods of using the same to induce broadly neutralizing antibodies against influenza
MX2023002339A (es) 2020-08-24 2023-03-22 Sanofi Pasteur Inc Vacunas contra infecciones por sars-cov-2.

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6100064A (en) 1984-04-06 2000-08-08 Chiron Corporation Secreted viral proteins useful for vaccines and diagnostics
EP0609580B1 (en) 1988-01-29 2003-07-30 Aventis Pasteur Recombinant CMV neutralising proteins
CA2017507C (en) * 1989-05-25 1996-11-12 Gary Van Nest Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion
FR2723740B1 (fr) 1994-08-16 1996-11-08 Pasteur Merieux Serums Vacc Procede de preparation d'antigenes du virus grippal, antigenes obtenus et leurs applications
US6787523B1 (en) * 1997-12-02 2004-09-07 Neuralab Limited Prevention and treatment of amyloidogenic disease
FR2773156B1 (fr) 1997-12-26 2000-03-31 Biovacs Inc Nouveaux immunogenes anti-retroviraux (toxoides), nouveaux procedes de preparation et application a la prevention et au traitement du sida
US6299848B1 (en) * 1998-09-25 2001-10-09 Hamon Research-Cottrell Process for removing sulfur dioxide out of a gas
WO2000062800A2 (en) * 1999-04-19 2000-10-26 Smithkline Beecham Biologicals Sa Adjuvant composition comprising saponin and an immunostimulatory oligonucleotide
US20030129251A1 (en) * 2000-03-10 2003-07-10 Gary Van Nest Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
WO2002076392A2 (en) * 2001-03-21 2002-10-03 Madash Llc Thermally reversible water in oil in water emulsions
AR054822A1 (es) * 2005-07-07 2007-07-18 Sanofi Pasteur Emulsion inmuno adyuvante

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Publication number Publication date
EA012376B1 (ru) 2009-10-30
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