BRPI0609172A2

BRPI0609172A2 - inibidores de pequenas moléculas de mdm2 e usos destes

Info

Publication number: BRPI0609172A2
Application number: BRPI0609172-5A
Authority: BR
Inventors: Ke Ding; Yipin Lu; Zaneta Nikolovska-Coleska; Su Qiu; Dongguang Qin; Sanjeev Kumar; Shaomeng Wang; Guoping Wang
Original assignee: Univ Michigan
Priority date: 2005-02-22
Filing date: 2006-02-22
Publication date: 2010-02-23
Also published as: EA019566B1; CA2752738C; EP1856123B1; MX2007010272A; AU2006216780A1; JP5248866B2; CN102627649A; NO20074853L; CA2598690A1; AU2010202759B2; EA201001255A1; CA2752738A1; JP5638023B2; CN101160314B; CN102627649B; KR100944301B1; EP1856123A2; JP2012162550A; AU2010202759A1; KR20070108917A

Abstract

INIBIDORES DE PEQUENAS MOLéCULAS DE MDM2 E USOS DESTES. A invenção refere-se a pequenas moléculas que funcionam como inibidores da interação entre p53 e MDM2. A invenção refere-se também ao uso desses compostos para inibir o crescimento celular, induzir a morte celular, induzir a parada do ciclo celular e/ou sensibilizar as células a agente(s) adicional(ais).

Description

"INIBIDORES DE PEQUENAS MOLÉCULAS DE MDM2 E USOS

DESTES"

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO Campo da Invenção Esta invenção está no campo da quimica medicinal. Em particular, a invenção refere-se a pequenas moléculas que funcionam como antagonistas da interação entre p53 e MDM2 e seu uso como uma nova classe de produtos terapêuticos para o tratamento de câncer e outras doenças.

Técnica Relacionada O fenótipo de célula de câncer agressivo é o resultado de uma variedade de alterações genéticas e epigenéticas que levam à desregulação de vias de sinalização intracelular (Ponder, Nature 411:336 (2001)). O que é comum para todas as células cancerígenas, contudo, é seu fracasso em executar um programa apoptótico, e a falta de apoptose apropriada devido a defeitos no maquinario da apoptose normal é uma marca do câncer (Lowe et al. , Carcinogenesis 21:485 (2000)). A incapacidade das células cancerígenas em executar um programa apoptótico "devido ■ aos defeitos no maquinario apoptótico normal é, assim, freqüentemente, associado a um aumento da resistência , à quimioterapia, radiação, ou apoptose induzida por imunoterapia. Resistência primária ou adquirida de câncer humano de origens diferentes aos protocolos de tratamento correntes devido às falhas de apoptose é um problema principal na corrente terapia de câncer (Lowe et al. , Carcinogenese 21:485 (2000); Nicholson, Nature 407:810 (2000)) . Por conseguinte, esforços correntes`e futuros direcionados a projetar e desenvolver novas terapias anticâncer especificas para alvo molecular de modo a aperfeiçoar a sobrevivência e qualidade de vida de pacientes com câncer devem incluir estratégias que especificamente alvejem a resistência das células cancerosas à apoptose. A esse respeito, alvejar reguladores negativos cruciais que desempenham um papel central em inibir diretamente apoptose em células cancerosas representa uma estratégica terapêutica altamente promissora para novo desenho de fármaco anticâncer.0 supressor de tumor p53 desempenha um papel central no controle da progressão do ciclo celular e apoptose (Vogelstein et al. , Nature 4 08:307 (2000)) . Ele é um atraente alvo terapêutico para desenho de fármaco anticâncer porque sua atividade supressora de tumor pode ser estimulada para erradicar células tumorais (Vogelstein et al., Nature 408:307 (2000); Chene, Nat. Ver. Câncer 3:102 (2003)) . Uma nova abordagem para estimular a atividade de p53 é através da inibição de sua interação com a proteina MDM2 usando inibidores de pequena- molécula não peptideo (CHENE, Nat. Rev. Câncer 3:102 (2003); Vassilev et al., Science 303:844 (2004)). MDM2 e p54 são partes de um ciclo de realimentação auto-reguladora (Wu et al., Genes Dev. 7:1126 (1993)). MDM2 é transcricionalmente ativado por p53 e MDM2, por sua vez, inibe a atividade de p53 por pelo menos três mecanismos (Wu et al., Genes Dev. 7:1126 (1993). Primeiramente, a proteina MDM2 sé liga diretamente ao domínio de transativação de p53 e assim inibe a transa-tivação mediada por p53. Em segundo lugar, a proteína MDM2 contém uma seqüência de sinais de exportação nuclear, e mediante ligação a p53, induz a exportação nuclear de p53, impedindo que p53 se ligue aos DNAs marcados. Em terceiro lugar, a proteína MDM2 é uma 33 ubiquitina ligase e mediante ligação a p53 é capaz de promover a degradação de p53. Logo, ao funcionar como um potente inibidor celular endógeno de atividade p53, MDM2 inibe eficazmente apoptose mediada por p53, arresto de ciclo celular e reparo de DNA. Portanto, inibidores de pequenas moléculas que se ligam a MDM2 e bloqueiam a interação entre MDM2 e p53 podem promover a atividade de p53 em células com p53 funcional e estimular efeitos celulares mediados por p53 tais como arresto de ciclo celular, apoptose, ou reparo de DNA (Chene, Nat. Rev. Câncer 3:102 (2003); Vassilev et al., Science 303:84 4 (2004) ) .

Embora inibidores com base em peptideo de alta afinidade tenham sido projetados com sucesso no passado (Garcia-Echeverria et al., Med. Chem 43:3205 (2000)), estes inibidores não são moléculas -similares a fármacos devido a sua permeabilidade celular e biodisponibilidade in vivo fracas. Apesar dos esforços intensivos da indústria farmacêutica, estratégias de seleção com alto rendimento têm tido um sucesso bastante limitado na identificação de inibidores de pequenas moléculas não-peptideos potentes. Por conseguinte, existe a necessidade por inibidores de pequenas moléculas, similares a fármaco, não-peptideos, da interação entre p53-MDM2.`O desenho de inibidores de pequenas moléculas não peptideos que alvejam a interação entre p53-MDM2 está atualmente sendo buscado como uma estratégia atraente para desenho de fármaco anticâncer (Chene, Nat. Rev. Câncer 3:102 (2003) ; Vassilev et al., Science 303:844 (2004) ) . A base estrutural dessa interação tem sido estabelecida por cristalografia de raios X (Kussie et al. , Science 274 : 94 8 (1996)). A estrutura de cristal mostra que a interação entre p53 e MDM2 é principalmente mediada por três resíduos hidrofóbicos (Phel9, Trp23 e Leu26) a partir de p53 e uma fenda hidrofóbica profunda, pequena em MDM2. Essa fenda hidrofóbica é um sitio ideal para desenhar inibidores de pequenas moléculas que podem romper a interação entre p53-MDM2 (Chene, Nat. Rev. Câncer 3:102 (2003)).

SUMÁRIO DE INVENÇÃO

É geralmente aceito que a incapacidade das células cancerosas ou suas células de suporte em sofrerem apoptose em resposta a lesões genéticas ou exposições a indutores de apoptose (tais como agentes anticâncerosos e radiação) é um fator principal no inicio e progressão do câncer. Acredita-se que a indução de apoptose em células cancerosas ou suas células de suporte (por exemplo, células neovasculares na vasculatura tumoral) seja um mecanismo universal de ação para virtualmente todos os fármacos terapêuticos para câncer ou terapias de radiação eficazes no mercado ou em prática hoje. Uma razão para a incapacidade de uma célula em sofrer apoptose é um decréscimo na atividade supressora de tumor de p53, que em muitos casos se deve às ações inibidoras de MDM2no p53 em células tumorais contendo p53 funcional. A inibição da atividade de p53 resulta em alterações nas vias de apoptose, bem como na regulação do ciclo celular.`

A presente invenção contempla que a exposição de animais que sofrem de câncer a quantidades terapeuticamente eficazes de fármaco(s) (por exemplo, pequenas moléculas) que aumentam a(s) função (ões) de p53 e proteínas relacionadas a p53 (por exemplo, p63, p7 3) por inibição da interação entre p53 ou proteínas relacionadas a p53 e MDM2 e proteínas relacionadas a MDM2 (por exemplo, MDMX) inibirão completamente o crescimento de células cancerosas ou células de suporte e/ou tornarão tais células em uma população mais suscetível à atividade indutora de morte celular de fármacos terapêuticos ou terapias de radiação. Em particular, os inibidores da invenção podem prolongar a meia vida dep53 por interferência com a interação entre p53-MDM2 que promoveria normalmente a degradação de p53. A presente invenção contempla que inibidores da interação entre p53 ou proteínas relacionadas a p53 e MDM2 e proteínas relacionadas a MDM2 satisfazem uma necessidade não satisfeita para o tratamento de múltiplos tipos de câncer, tanto quando administrados como monoterapia para induzir a inibição de crescimento celular, apoptose e/ou arresto de ciclo celular em células cancerosas, como quando administrados em uma relação temporal com agente(s) adicionais, tais como outros fármacos terapêuticos para' câncer que induzem a morte celular ou rompem o ciclo celular ou terapias de radiação (terapias de combinação), de modo a fazer com que uma maior proporção decélulas cancerosas ou células de suporte fiquem suscetíveis a executar o programa de apoptose em comparação com a proporção correspondente de células em um animal tratado somente com o fármaco terapêutico para câncer ou somente com a terapia de radiação.

Em certas modalidades da invenção, o tratamento em combinação de animais com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção e um curso de um agente anticâncer ou radiação produz uma resposta tumoral e benefício clínico maiores em tais animais em comparação com aqueles tratados com o composto ou fármacos anticâncer/ radiação somente. Dito de outro modo, devido ao fato de os compostos reduzirem o limite apoptotico de todas as células, a proporção de células que executarão com sucesso o programa de apoptose em resposta à atividade indutora de apoptose de fármacos anticâncer/radiação é aumentada. Alternativamente, os compostos da presente invenção serão usados para permitir a administração de uma dose de agente anticâncer e/ou de radiação menor, menos tóxica e mais tolerável para produzir 20 a mesma resposta tumoral/benefício clínico que a dose convencional do agente anticâncer/radiação somente. Já que as doses para todos os fármacos anticâncer e tratamentos radioativos aprovados são conhecidos, a presente invenção contempla a várias combinações delas com os presentes 25 compostos. Também, já que os compostos da presente invenção podem agir pelo menos em parte simulando as atividades pró-apoptóticas ■ e/ou inibidoras de ciclo celular de p53 e de proteínas relacionadas, a exposição de células cancerosas edas células de suporte a quantidades terapeuticamente eficazes dos compostos devem estar temporariamente associadas para coincidir com as tentativas das células de executar o programa de apoptose em resposta ao agente anticâncer ou terapia de radiação. Assim, em algumas modalidades, administrar as composições da presente invenção em conexão com certas relações temporais proporciona práticas terapêuticas especialmente eficazes.

Em outras modalidades da invenção, os inibidores da interação entre p53 ou proteínas relacionadas a p53 e MDM2 e proteínas relacionadas a MDM2 podem proteger células normais (por exemplo, não hiperproliferativas) dos efeitos tóxicos de certos agentes terapêuticos e radiação, possivelmente através da capacidade dos inibidores em induzir o arresto do ciclo celular- Em particular, os inibidores da invenção podem causar o arresto do ciclo celular em células que compreendem p53 do tipo selvagem, enquanto não exercem efeito em células cancerosas que compreendem p53 mutado ou deletado. Esse efeito protetor diferencial pode possibilitar tratamento de câncer mais eficaz ao permitir o uso de doses mais altas ou tratamentos mais longos com agentes quimioterapêuticos ou tratamentos sem aumentar os efeitos colaterais tóxicos de tal tratamento.

A presente invenção refere-se a compostos que são úteis para inibir a interação entre p53 ou proteínas relacionadas a p53 e MDM2 ou proteínas relacionadas a MDM2 e aumentar a sensibilidade das células a indutores de apoptosee/ou arresto do ciclo celular. Em uma modalidade particular, os compostos têm a Fórmula I:

ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamente aceitável destes, em que: 5 X é CR, 0, N, ou S, em que Rg é ausente se X for 0

<formula>formula see original document page 9</formula>

Y é 0, S, ou NR';

Ri/ P-2, r3/ R4/ R5f Rõ e R7 são, independentemente, H ou alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, 10 alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, C02R', 0C0R', C0NR'R", NR"C0R', NR'S02R", S02NR'R", (C=NR' ) NR"R"', ou NR'R"; ou

R7 forma um grupo arila, cicloalquila, ou hetero-: ciclico com um de R5 ou R6; 15 R8 é H ou alquila opcionalmente substituída,

cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, C02R', 0C0R', C0NR'R", S02NR'R", ou (C=NR' ) NR"R'";

R9 é um a quatro grupos independentemente selecio-20 nados de H, F, Cl, Br, I, OH, N02. alquila, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, OR', C02R', OCOR', C0NR'R", NR"C0R', NR'S02R", S02NR'NR", (C=NR' ) NR"R"', ou NR'R"; ecada R, R" e R'" é, independentemente, H ou alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila, ciclo-alquenila, alquinila, arila, ou heterociclico; ou R' e R" ou R" e R'" formam um anel; ou quando um de R3 e R4 for CONRR", então um de R e R'

pode ser ainda (CH2)n-R', (CH2) n-NR'R", (CH2) n-NR'COR", (CH2) nNR'S02R", (CH2)n- NR' (C=NR") NR'", (CH2)n-COOH, (CH2)n-COOR', (CH2)n-CONR'R", (CH2)n-OR', (CH2)n-SR', (CH2)n-COR', (CH2)n-S03H, (CH2)n-SONR'R", (CH2) n-S02NR' R", (CH2CH20) n- (CH2) m-10 OH, (CH2CH20)n-(CH2)mOR', (CH2CH20) n-(CH2) m-COOR', (CH2CH20)n-(CH2)m-CONR'R", (CH2CH20)n-(CH2)m-NR'R", (CH2CH20) „- (CH2) m-

NR'COR", (CH2CH20)n-(CH2) m-NR' (C=NR")NR"', (CH2CH20) n- (CH2)m-NR'S02R", (CH2)P- (CH2CH20)n-(CH2)m-OH, (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) ra-OR', (CH2)P-(CH2CH20)n-(CH2)m-COOR', (CH2) p-(CH2CH20)n-(CH2)m-, CONR'R", (CH2)p-(CH2CH20) n- (CH2)m-NR'R", (CH2) p-(CH2CH20) n-

(CH2)m.NR'COR", (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-NR' (C=NR")NR"', (CH2)p-(CH2CH20) n-(CH2)m-NR'S02R", -CO-R', -SOR', ou -S02R'; e

n, m e p são, cada um, independentemente, 1 a 6. A invenção refere-se a compostos representados 20 pela Fórmula I, que são inibidores da interação entre p53 ou proteínas relacionadas a p53 e MDM2 ou proteínas relacionadas a MDM2. A invenção refere-se ao uso dos compostos da invenção para induzir arresto do ciclo celular e/ou apoptose em células contendo p53 funcional ou proteínas 25 relacionadas a p53. A invenção refere-se também ao uso dos compostos da invenção para sensibilizar células para agente(s) adicional(adicionais), tais como indutores de apoptose e/ou de arresto do ciclo celular, e quimioproteçãode células normais através da indução do arresto do ciclo celular antes do tratamento com agentes quimioterapêuticos. Em uma modalidade, a invenção refere-se a métodos para tornar uma célula normal resistente a agentes quimioterapêu-ticos ou tratamentos, compreendendo contatar a célula com um composto da invenção. Em uma modalidade, a invenção refere-se a métodos para proteger células normais em um animal com uma doença hiperproliferativa dos efeitos colaterais tóxicos de agentes quimioterapêuticos ou tratamentos, compreendendo administrar ao dito animal um composto da invenção. Em uma modalidade particular, a invenção é direcionada ao tratamento, atenuação ou prevenção de distúrbios, efeitos colaterais, ou condições causadas pela administração de agentes quimioterapêuticos a células não cancerosas normais por administração a um animal, que está sendo submetido à quimioterapia, de um composto da presente invenção - Exemplos de tais distúrbios e condições causados por quimioterapia incluem, sem limitação, mucosite, estomatite, xerostomia, distúrbios gastrintestinais, e alopecia.

Os compostos da invenção são úteis para o tratamento, atenuação, ou prevenção de distúrbios, tais como aqueles responsivos à indução de morte celular apoptótica, por exemplo, distúrbios caracterizados pela desregulação de apoptose, incluindo doenças hiperproliferativas, tal como câncer. Em certas modalidades, os compostos podem ser usados para tratar, atenuar, ou prevenir câncer que é caracterizado pela resistência a terapias de câncer (por exemplo, aquelas células cancerosas quimiorresistentes, resistentes àradiação, resistente a hormônio, e similares). Em outras modalidades, os compostos podem ser usados para tratar doenças hiperproliferativas caracterizadas pela expressão de p53 funcional ou de proteínas relacionadas a p53. Em outras 5 modalidades, a invenção refere-se ao uso dos compostos da invenção para proteger células normais (por exemplo, não hiperproliferativas) dos efeitos colaterais tóxicos de agentes quimioterapêuticos e tratamentos pela indução do arresto do ciclo celular naquelas células. 10 A presente invenção proporciona composições farma-

cêuticas que compreendem um composto de Fórmula I em uma quantidade terapeuticamente eficaz para induzir apoptose em células para sensibilizar células aos indutores de apoptose.

A invenção proporciona ainda kits que compreendem 1 um composto de Fórmula I e instruções para administrar o composto a um animal. Os kits podem conter, opcionalmente, outros agentes terapêuticos, por exemplo, agentes anticâncer ou agentes moduladores de apoptose.

A invenção proporciona também métodos para fabricar compostos de Fórmula I.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS/FIGURAS A Figura 1 mostra o desenho de uma nova classe de inibidores de MDM2 com base em espirotriprostanina A.

As Figuras 2A e 2B mostram o modelo de ligação previsto dos compostos la e ld para MDM2.

A Figura 3 mostra a estrutura de raios X de dimetilamida do ácido (1"R,2"S,2'R,3' R,3S,4'R)-6-cloro-4'-(3-cloro-fenil)-1'-(2-hidróxi-l,2-difenil-etil)-2"-(3-metil-`butil) -2-oxo-l,2-diidro-espiro/indol-3,3'-pirrolidina}-carbo-xílico.

A Figura 4A mostra da curva de saturação de PMDM6-F se ligando à proteina MDM2.

A Figura 4B mostra as curvas de ligação competitiva da sonda de PMDM6 fluorescente não marcada e peptideo p53 nativo à proteina MDM2.

A Figura 5 mostra as curvas de ligação competitiva e os valores Ki dos inibidores de MDM2 conforme determinados usando um ensaio de ligação com base em FP.

A Figura 6 mostra a inibição de crescimento de células em células de câncer da próstata LNCaP com p53 do tipo selvagem conforme determinada por ensaio de crescimento de células WST.

A Figura 7 mostra a inibição de crescimento de células em células de câncer da próstata PC3 com mutante p53 conforme determinada por ensaio de crescimento de células WST.

A Figura 8 mostra a inibição do crescimento de células em células epiteliais da próstata humana, normais, PrEC com p53 do tipo selvagem conforme determinada por ensaio de crescimento de células WST.

A Figura 9 mostra curvas de ligação competitiva de vários inibidores da interação entre p53-MDM2.

A Figura 10 mostra o rompimento da interação entre p53-MDM2 por Ke-43.A Figura 11 mostra a atividade de inibição de crescimento de células de Ke-43 em células de câncer do cólon com ou sem p53 do tipo selvagem e em células normais.

A Figura 12 mostra a análise Western blot da 5 expressão de p53 e seus produtos gênicos alvo MDM2 e p21 em resposta a Ke-43.

As Figuras 13A e 13B mostram a morte de células e apoptose induzida por Ke-43 e Ke-61 em células cancerosas e células normais.

A Figura 14 mostra a progressão do ciclo celular

de linhagens de células de câncer do cólon expressando p53 do tipo selvagem ou p53 do tipo mutante e células do cólon normal depois do tratamento com Ke-43 e nutlin-3.

A Figura 15 mostra a proteção de células normais 15 do tratamento com TAXOL por Ke-63.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a compostos representados pela Fórmula I, que funcionam como inibidores da interação entre p53 ou proteínas relacionadas a p53 e MDM2 ou proteínas relacionadas a MDM2. Por inibição do efeito negativo de MDM2 ou proteínas relacionadas a MDM2 em p53 ou proteínas relacionadas a p53, esses compostos sensibilizam as células aos indutores de apoptose e/ou ao arresto do ciclo celular e, em alguns casos, eles mesmos induzem a apoptose e/ou o arresto do ciclo celular. Portanto, a invenção refere-se a métodos para sensibilizar células aos indutores de apoptose e/ou ao arresto de ciclo celular e a métodos para induzir apoptose e/ou arresto do ciclo celularem células, compreendendo contatar as células com um composto de Fórmula I sozinho ou em combinação com agente (s) adicional (ais), por exemplo, um indutor de apoptose ou um interruptor do ciclo celular. A invenção refere-se ainda a métodos de tratar, atenuar, ou prevenir distúrbios em um animal, tais como aqueles que são responsivos à indução de apoptose, compreendendo administrar ao animal um composto de Fórmula I e agente(s) adicional(ais) , por exemplo, um indutor de apoptose. Tais distúrbios incluem aqueles caracterizados por uma desregulação de apoptose e aqueles caracterizados pela proliferação de células que expressam p53 funcional ou proteínas relacionadas a proteínas p53. Em outras modalidades, a invenção refere-se a métodos para proteger células normais (por exemplo, não hiperproliferativas) em um animal dos efeitos colaterais tóxicos de agentes quimioterapêuticos e tratamentos, compreendendo administrar ao animal um composto de Fórmula I.

Os termos "agente anticâncer" e "fármaco anti-câncer", como usados aqui, referem-se a quaisquer agentes terapêuticos (por exemplo, compostos quimioterapêuticos e/ou compostos terapêuticos moleculares) , terapias anti-sentido, terapias de radiação, ou intervenções cirúrgicas, usadas no tratamento de doenças hiperproliferativas, tal como câncer (por exemplo, em mamíferos).

0 termo "pró-medicamento", como usado aqui, refere-se a um derivado farmaceuticamente inativo de uma molécula de "fármaco" parente que requer biotransformação (por exemplo, tanto espontânea como enzimática) dentro dosistema fisiológico alvo para liberar ou para converter (por exemplo, de modo enzimatico, fisiológico, mecânico e eletromagnético) o pró-medicamento no fármaco ativo. Pró-medicamentos são desenhados para superar problemas asso-5 ciados à estabilidade, toxidez, carência de especificidade ou biodisponibilidade limitada. Exemplos de pró-medicamentos compreendem uma molécula de fármaco ele próprio ativo e um grupo mascarador quimico (por exemplo, um grupo que suprime reversivelmente a atividade do fármaco). Alguns dos pró-10 medicamentos preferidos são variações ou derivados de compostos que têm grupos cliváveis sob condições metabó-licas. Exemplos de pró-medicamentos tornam-se farmacêutica-mente ativos in vivo ou in vitro quando eles são submetidos à solvólise sob condições fisiológicas ou sofrem degradação 15 enzimática ou outra transformação bioquimica (por exemplo, fosforilação, hidrogenação, desidrogenação, glicosilação). Pró-medicamentos oferecem freqüentemente vantagens de solubilidade, compatibilidade tecidual, ou liberação retardada no organismo do mamifero. (Vide, por exemplo, Bundgaird, 20 Design of Prodrugs, pp. 7-9, 21-24, Elsevier, Amsterdam (1985); e Silverman, The Organic Chemístry of Drug Design and Drug Action, pp. 352-401, Academic Press, San Diego, CA (1992)). Pró-medicamentos comuns incluem derivados de ácidos tais como ésteres preparados por reação de ácidos parentes 25 com um álcool adequado (por exemplo, um alcanol inferior), amidas preparadas por reação do - composto de ácido parente com uma amina, ou grupos básicos reagidos para formar um`derivado de base acilado (por exemplo, uma alquilamida inferior).

0 termo "sal farmaceuticamente aceitável", como usado aqui, refere-se a qualquer sal (por exemplo, obtido por reação com um ácido ou uma base) de um composto da presente invenção que é fisiologicamente tolerado pelo animal alvo (por exemplo, um mamífero). Sais dos compostos da presente invenção podem ser derivados de ácidos e bases inorgânicos ou orgânicos. Exemplos de ácidos incluem, mas sem limitação, ácido clorídrico, bromidrico, sulfúrico, nitricô, perclórico, fumarico, maléico, fosfórico, glieólico, láctico, salicilico, suecinico, tolueno-p-sulfônico, tartárico, acético, citricô, metanossulfônico, etanossulfônico, fórmico, benzóico, malônico, sulfônico, naftaleno-2-sulfônico, benzenossulfônico, e similares. Outros ácidos, tal como oxálico, mesmo que eles não sejam eles próprios farmaceuticamente aceitáveis, podem ser empregados na preparação de sais úteis como intermediários na obtenção dos compostos da invenção e seus sais ide adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis.

Exemplos de bases incluem, mas sem limitação, hidróxidos de metal alcalino (por exemplo, sódio), hidróxidos de metal alcalinoterroso (por exemplo, magnésio) amônia, e compostos de fórmula NW4+, em que W é alquila Ci_4/ 25 e similares.

Exemplos de sais incluem, mas sem limitação: acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benzenossul-fonato, bissulfato, butirato, citrato, canforato, canforsul-fonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, f umarato, f lucoeptanoato, glicerof osf ato, hemissulfato, heptanoato, hexanoato, cloreto, brometo, iodeto, 2-hidroxietanossulfonato, lactato, maleato, mesilato, metanossulfonato, 2-naftalenossulfonato, nicotinato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartarato, tiocianato, tosilato, undecanoato, e similares. Outros exemplos de sais incluem anions dos compostos da presente invenção formulados com um cátion adequado tais como Na+, NH4+, e NW4+ (em que W é um grupo alquila C1-4), e similares. Para uso terapêutico, sais dos compostos da presente invenção são contemplados como sendo farmaceuticamente aceitáveis. Contudo, são de ácidos e bases que não são farmaceuticamente aceitáveis podem também ser úteis, por exemplo, na preparação ou purificação de um composto farmaceuticamente aceitável.

0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz", como usado aqui, refere-se àquela quantidade do agente terapêutico que é suficiente para resultar na atenuação de um ou mais sintomas de um distúrbio, ou prevenir 'o avanço de um distúrbio, ou causar regressão do distúrbio. Por exemplo, com respeito ao tratamento de câncer, uma quantidade terapeuticamente eficaz refere-se preferivelmente à quantidade de um agente terapêutico que reduz a taxa de crescimento do tumor, reduz a massa tumoral, diminui o número de metás-tases, aumenta o tempo para progressão do tumor, ou aumenta o tempo de sobrevivência em pelo menos 5%, preferivelmente pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 4 5%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 100%.

Os termos "sensibilizar" e "sensibilizando", como usados aqui, referem-se a fazer com que, através da administração de um primeiro agente (por exemplo, um composto de Fórmula I), um animal ou uma célula dentro de um animal fique mais suscetível, ou mais responsivo, aos efeitos biológicos (por exemplo, promoção ou retardo de um aspecto da função celular incluindo, mas sem limitação, divisão celular, crescimento de células, proliferação, invasão, angiogênese, necrose, ou apoptose) de um segundo agente. O efeito sensibilizante de um primeiro agente em uma célula alvo pode ser medido como a diferença no efeito biológico pretendido (por exemplo, promover ou retardar um aspecto da função celular incluindo, mas sem limitação, crescimento de células, proliferação, ;invasão, angiogênese, ou apoptose) observado mediante a - administração de um segundo agente com e sem administração do primeiro agente. A resposta da célula sensibilizada pode ser aumentada de pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 4 0%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 100%, pelo menos 150%, pelo menos 200%, pelo menos 250%, pelo menos 300%, pelo menos 350%, pelo menos 400%, pelo menos 450%, ou pelo menos 500% acima da resposta na ausência do primeiro agente.<formula>formula see original document page 0</formula>tumor, e são inibidas por interação com MDM2 ou proteinas relacionadas a MDM2. Exemplos de proteinas relacionadas a p53 incluem, mas sem limitação, p63 e p73.

O termo "proteina relacionada a MDM2", como usado aqui, refere-se a proteinas que têm pelo menos 25% de homologia de seqüência com MDM2, e interagem com e inibem p53 ou proteinas relacionadas a p53. Exemplos de proteinas relacionadas a MDM2 incluem, mas sem limitação, MDMX e HDM2.

O termo "doença hiperproliferativa", como usado aqui, refere-se a qualquer condição na qual uma população localizada de células proliferativas em um animal não é governada pelas limitações usuais de crescimento normal. Exemplos de distúrbios proliferativos incluem tumores, neoplasmas, linfornas e similares. Neoplasma é dito ser benigno se ele não sofre invasão ou metástase, e maligno se sofre qualquer um destes. Uma célula "metastática" significa que a célula pode invadir e destruir as estruturas corporais vizinhas. Hiperplasia é uma forma de proliferação celular envolvendo um aumento do número de células em um tecido ou órgão sem alteração signif-icante ou função. Metaplasia é uma forma de crescimento de células controlada onde um tipo de célula inteiramente diferenciada é substituto de um outro tipo de célula diferenciada.

O crescimento patológico de células linfóides ativadas resulta freqüentemente em um distúrbio auto-imune ou uma condição inflamatória crônica. Como usado aqui, o termo "distúrbio auto-imune" refere-se a qualquer condição na qual um organismo produz anticorpos ou células imunes quereconhecem as moléculas, células ou tecidos do próprio organismo. Exemplos não limitativos de distúrbios auto-imunes incluem anemia hemolitica auto-imune, hepatite auto-imune, doença de Berger ou nefropatia de IgA, espru celiaco, sindrome da fadiga crônica, doença de Crohn, dermatomiosite, fibromialgia, doença de enxerto versus hospedeiro, doença de Grave, tireoidite de Hashimoto, trombocitopenia púrpura idiopática, liquen plano, escierose múltipla, miastenia grave, psoriase, febre reumática, artrite reumática, escle-roderma, sindrome de Sjõgrens, lúpus eritematoso sistêmico, diabetes tipo 1, colite ulcerativa, vitiligo, e similares.`

0 termo "doença neoplásica", como usado aqui, refere-se a qualquer crescimento anormal de células sendo ou benigno (não canceroso) ou maligno (canceroso) .

0 termo "célula normal", como usado aqui, refere-se a uma célula que não está sofrendo crescimento ou divisão anormal. Células normais são não cancerosas e não fazem parte de qualquer doença ou distúrbio hiperproliferativo.

0 termo "a^gente anti-neoplásico", como usado aqui, refere-se a qualquer composto que retarda a proliferação, crescimento ou difusão de um neoplasma marcado (por exemplo, maligno).

Os termos "prevenir'7 e "prevenção", como usados aqui, referem-se a um decréscimo na ocorrência de células patológicas (por exemplo, células hiperproliferativas ou neoplásicas) em um animal. A prevenção pode ser completa, por exemplo, a ausência total de células patológicas em um paciente. A prevenção pode ser também parcial, de modo que aocorrência de células patológicas em um paciente é menor que aquela que teria ocorrido sem a presente invenção.`0 termo "agentes moduladores de apoptose", como usado aqui, refere-se a agentes que estão envolvidos na modulação (por exemplo, inibição, decréscimo, aumento, promoção) de apoptose. Exemplos de agentes moduladores de apoptose incluem proteínas que compreende um dominio de morte, tais como, mas sem limitação, Fas/CD95, TRAMP, TNF RI, DRI, DR2, DR3, DR4, DR5, DR6, FADD, e RIP. Outros exemplos de agentes moduladores de apoptose incluem, mas sem limitação, TNFa, ligante Faz, anticorpos para Fas/CD95 e outros receptores da familia TNF, TRAIL (também conhecido como Ligante Apo2 ou Apo2L/TRAIL), anticorpos para TRAIL-R1 ou TRAIL-R2, Bcl-2, p53, BAX, BAD, Akt, CAD, PI3 quinase, PP1, proteínas caspase. Agentes moduladores incluem amplamente agonistas e receptores da familia TNF e ligantes da familia TNF. Agentes moduladores de apoptose podem ser solúveis ou ligados a membranas (por exemplo, ligante ou receptor). Agentes moduladores de apoptose preferidos são indutores de . apoptose, tal como TNF ou um ligante relacionado a TNF, particularmente um ligante TRAMP, um ligante Fas/CD95, um ligante TNFR-1, ou TRAIL.

Os inibidores da interação entre p53 e MDM2 da presente invenção são compostos de Fórmula I:ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamente aceitável deste, em que:

X é CH, O, N, ou S, em que Rs é ausente se X for 0<formula>formula see original document page 24</formula>

Y é 0, S, ou NR' ;

Rif &2r R3, R4, R5/ e R7 são, independentemente, H ou alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, C02R', OCOR', C0NR'R", NR"C0R', NR'S02R", S02NR'R", (C=NR') NR"R'", ou NR'R"; ou

R7 forma um grupo arila, cicloalquila, ou heterociclico com um de R5 ou Re!

Rs é H ou alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, C02R', OCOR', C0NR'R", S02NR'R", ou (C=NR' )NR"R"';

R9 é um a quatro grupos independentemente selecionados de H, F, Cl, Br, I, OH, N02. alquila, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, OR', C02R', OCOR', C0NR'R", NR"C0R', NR'S02R", S02NR'NR", (C=NR') NR"R"', ou NR' R"; e`cada R, R" e R'" é, independentemente, H ou alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, ou heterocíclico; ou R' e R" ou R" e R'" formam um anel; ou quando um de R3 e R4 for CONRR", então um de R e R' pode ser ainda (CH2)n-R', (CH2) n~NR'R", (CH2) n-NR'COR", (CH2) nNR'S02R", (CH2)n- NR' (C=NR")NR"', (CH2)n-COOH, (CH2)n-COOR', (CH2)n-CONR'R", (CH2)n-OR', (CH2)n-SR', (CH2)n-COR', (CH2)n-S03H, (CH2)n-SONR'R", (CH2) n-S02NR'R", (CH2CH20) n-(CH2) m-OH, (CH2CH20)n-(CH2)mOR', (CH2CH20) n-(CH2) m-COOR', (CH2CH20)n-(CH2)m-CONR'R", (CH2CH20)n- (CH2) m-NR'R", (CH2CH20) n-(CH2) m-

NR'COR", (CH2CH20)n- (CH2) m-NR' (C=NR")NR"', (CH2CH20) n-(CH2)m-NR'S02R", (CH2)P- (CH2CH20)n-(CH2)m-OH, (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-OR', (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-COOR', (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2)m-CONR'R", (CH2)P-(CH2CH20) n- ( CH2 ) m-NR'R", (CH2) p-(CH2CH20) n-

(CH2) m-NR'COR", (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-NR' (C=NR")NR"', (CH2)p-(CH2CH20)n- (CH2)m-NR' S02R", -CO-R', -SOR', ou -S02R'; e

n, m e p são, cada um, independentemente, 1 a 6. Em uma modalidade mais particular, um de Rx e R2 é uma arila substituída ou não substituída (por exemplo, fenila), heteroarila substituída ou não substituída, cicloalquila, alquila linear ou ramificada, amida ou éster.

Em uma outra modalidade, um de R5 e R6 é um grupo alquila C3_i8, por exemplo, propila, isopropila, sec-butila, ter-butila, isopentila, ciclopentila, norbornila, ou adaman-tila, ou um grupo arila ou heteroarila de 5 ou 6 membros.Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula I têm uma estrutura estereoquimica conforme mostrada na Fórmula II ou Fórmula III:

<formula>formula see original document page 26</formula>

ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamente 5 aceitável destes.

Em uma modalidade, os compostos de Fórmula I têm a

Formula IV

<formula>formula see original document page 26</formula>IV

em que R1-R9 e Y são como definidos acima.

Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula IV têm uma estrutura estereoquimica conforme mostrada na Fórmula V ou Fórmula VI:<formula>formula see original document page 27</formula>VI

ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamente aceitável destes.

Em uma modalidade, os compostos de Fórmula I têm a Fórmula VII:

em que R1-R9 são como definidos acima.

Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula

VII têm uma estrutura estereoquimica conforme mostrada na

Fórmula VIII ou Fórmula IX:

IX<formula>formula see original document page 27</formula>ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamente aceitável deste.

Em uma modalidade, os compostos de Fórmula I têm a

Fórmula X:

em que:

Ri, R5, R7, e R9 são como definidos acima; Rio e Rn são, independentemente, H, OH ou alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, (CH2)n-R', (CH2)n-NR'R", (CH2)n-NR'COR", (CH2) nNR'S02R", (CH2)„-

NR' (C=NR")NR"', (CH2)n-COOH, (CH2) n-COOR' , (CH2) n-CONR'R", (CH2)n-OR', (CH2)n-SR', (CH2)n-COR', (CH2)n-S03H, (CH2)„-SONR'R", (CH2) n-S02NR'R", (CH2CH20) n-(CH2) m-0H, (CH2CH20)n-(CH2)mOR', (CH2CH20)n-(CH2)m-COOR', (CH2CH20) n-(CH2) m-CONR'R", (CH2CH20)n- (CH2) m-NR' R", (CH2CH20) „- (CH2) m-NR' COR", (CH2CH20)n-(CH2)ra-NR' (C=NR")NR"', (CH2CH20) n- (CH2)m-NR' S02R", (CH2)p-

(CH2CH20)n-(CH2)ra-OH, (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-OR', (CH2)p-

(CH2CH20)n- (CH2)m-COOR' , (CH2)p- (CH2CH20) „- (CH2) m-CONR' R", (CH2)p-(CH2CH20) n- (CH2)m-NR'R", (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m_NR' COR",

(CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-NR' (C=NR") NR'", (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-NR'S02R", -CO-R', -SOR', ou -S02R' ; en, m e p são, cada um, independentemente, 1 a 6 Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula têm uma das Fórmulas XI-XXVI:<formula>formula see original document page 29</formula>em que Rlr R5, R7, R9, e Ru são como definidos

acima.

Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula I têm uma das Fórmulas XXVII e XXVIII:R

10

N-Ri

XXVII

H

XXVIII

em que Ri, R5, R7, R9, Ri0, e Rn são como definidos

acima.

Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula I têm a Fórmula XXIX:

em que:

Z é OH, NH, NR', CH2, CHR' , ou CR'R". e Ri, R5, R7, R9, e Rio são como definidos acima. Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula I têm uma das Fórmulas XXX-XLV:<formula>formula see original document page 31</formula>

em que Z, Ri, R5, R7, R9/ e Ri0 são como definidos

acima.

Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula I têm a Fórmula XLVI:

<formula>formula see original document page 31</formula>XLV!

em que Ri, R5, R7/ e R9 são como definidos acima.Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula I têm a Fórmula XLVII:

em que RL, R3, R9, e R9 são como definidos acima; R12 é um a quatro grupos independentemente 5 selecionados de H, F, Cl, Br, I, OH, NO2, alquila, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, OR', C02R' , OCOR', CONR' R", NR"COR', S02NR'R", (ONR' ) NR"R'", ou NR'R",e

<formula>formula see original document page 32</formula>Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula I

têm a Fórmula XLVIII:

R9

XLVIU

em que:

Ri, R3, R4/ R5 e R9 são como definidos acima.

Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula I

têm uma das Fórmulas XLIX-LXIV:<formula>formula see original document page 33</formula>

Ri/ R3/ R4/ R5 e R9 são como definidos acima. Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula I têm uma Fórmula LXV:

LXV

<formula>formula see original document page 33</formula>

Ri, R4, R5/ R9/ Rio, e Rn são como definidos acima. Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula I têm uma das Fórmulas LXVI e LXVII:<formula>formula see original document page 34</formula>

em que:

Ri, R4, R5, R9, Rio, e Rn são como definidos acima. Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula I têm uma das Fórmulas LXVIII e LXVIX:

<formula>formula see original document page 34</formula>

em que:

Ri, R4, R5, Rg, Rn, e Z são como definidos acima.

Grupos alquila úteis incluem grupos .alquila Ci-is de cadeia linear ou ramificada, especialmente grupos metila, etila, propila, isopropila, t-butila, sec-butila, 3-pentila, adamantila, norbornila, e 3-hexila.Grupos alquenila úteis incluem grupos alquila C12-18 de cadeia reta ou ramificada, especialmente grupos etenila, propenila, isopropenila, butenila, isobutenila e hexenila.

Grupos alquinila úteis são grupos alquinila C12-18/ especialmente grupos etinila, propinila, butinila, e 2-butinila.

Grupos cicloalquila úteis são cicloalquila C3-8. Grupos cicloalquila tipicos incluem ciclopropila, ciclo-butila, ciclopentila, cicloexila, e cicloeptila.

Grupos arila úteis incluem arila C6-14, especialmente grupos fenila, naftila, fenantrenila, antracenila, indenila, azulenila, bifenila, bifenilenila, e fluorenila.

Grupos heteroarila úteis incluem tienila, benzo[b]tienila, nafto[2,3-b]tienila, tiantrenila, furila, piranila, isobenzofuranila, cromenila, xantenila, fenoxan-tenila, 2H-pirrolila, pirrolila, imidazolila, pirazolila, piridila, pirazinila, pirimidinila, piridazinila, indozi-linila, isoindolila, 3H-indolila, indolila, indazolila, purinila, 4H-quinolizinila, isoquinolila, quinolila, ftalzinila, naftiridinila, quinozalinila, cinolinila, pteridinila, carbazolila, 3-carbolinila, fenantridinila, acridinila, perimidinila, fenantrolinila, fenazinila, isotiazolila, fenotiazinila, isoxazolila, furazanila, fenoxazinila, 1,4-diidroquinoxalina-2,3-diona, 7-aminoiso-cumarina, pirido[1,2-a]pirimidin-4-ona, 1,2-benzoisoxazol-3-ila, benzimidazolila, 2-oxindolila, e 2-òxobenzimidazolila. Quando o grupo heteroarila contém um átomo de nitrogênio em um anel, tal átomo de nitrogênio pode estar na forma de umN-óxido, por exemplo, um N-óxido de piridila, N-óxido de pirazinila, N-óxido de pirimidinila, e similares.

Grupos heterocíclicos úteis incluem grupos tetrai-drofuranila, piranila, piperidinila, piperizinila, pirroli-dinila, imiazolidinila, imidazolinila, indolinila, isoin-dolinila, quinuclidinila, morfolinila, isocromanila, croma-nila, pirazolidinila, pirazolinila, tetronoíla, tetramoíla, ou tetraidroisoquinolinila, bem como grupos heterocíclicos fundidos com um anel heteroarila, por exemplo, 5,6-diidro-8H-[1, 2, 4] triazol[4,3-A]pirazinila opcionalmente substituída.

Substituintes opcionais incluem um ou mais de alquila; halo, haloalquila, cicloalquila; arila opcionalmente substituída com uma ou mais de grupos alquila inferior, alcóxi inferior, metilenodióxi, halo, haloalquila, aminossulfonila, arila, ou heteroarila; arilóxi opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila inferior, alcóxi inferior, metilenodióxi, halo, haloalquila, aminos-sulfonila, arila, ou heteroarila; aralquila; heteroarila opcionalmente substituída com um: ou mais grupos alquila inferior, alcóxi inferior, metilenodióxi, halo, haloalquila, aminossulfonila, arila, ou heteroarila; heteroarilóxi opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila inferior, alcóxi inferior, metilenodióxi, halo, haloalquila, aminossulfónila, arila, ou heteroarila; alcóxi; alquiltio; amido; amino; aminoalquila, alquilamino, acilóxi; arial-cilóxi opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila inferior, alcóxi inferior, metilenodióxi, halo, haloalquila, aminossulfonila, arila, ou heteroarila;difenilfosfinilóxi opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila inferior, alcóxi inferior, metilenodióxi, halo, haloalquila, aminossulfonila, arila, ou heterorila; heterociclo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila inferior, alcóxi inferior, metilenodióxi, halo, haloalquila, aminossulfonila, arila, heteroarila, sulfonila substituída com aminoácido, ou sulfonila substituída com derivado de aminoácido; heterociclila opcionalmente substituída com um ou mais grupos alquila inferior, alcóxi inferior, metilenodióxi, halo, haloalquila, aminossulfonila, arila, ou heteroarila; heterocicloalcóxi substituído com um ou mais grupos alquila inferior, alcóxi inferior, metilenodióxi, halo, haloalquila, aminossulfonila, arila, ou heterorila; heterocicloalquila parcialmente insaturada e opcionalmente substituída com um ou mais grupos alquila inferior, alcóxi inferior, metilenodióxi, halo, haloalquila, aminossulfonila, arila, ou heteroarila; ou heterociclo-alquilóxi parcialmente insaturados e opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquila inferior, alcóxi inferior, metilenodióxi, halo, haloalquila, aminossulfonila, arila, ou heterorila.

Certos dos compostos da presente invenção podem existir como estereoisômeros incluindo isômeros ópticos. A invenção inclui todos os estereoisômeros, ambos como preparações de estereoisômeros individuais puros e preparações enriquecidas de cada, e ambas as misturas racêmicas de tais estereoisômeros, bem como os enantiômeros individuais quepodem ser preparados de acordo com os métodos que são bemconhecidos daqueles versados na técnica.

Os compostos de processos da presente invençãoserão mais bem entendidos em conexão com os seguintes esquemas sintéticos, que ilustram os métodos pelos quais oscompostos da invenção podem ser preparados. Materiais departida podem ser obtidos de fontes comerciais ou preparadospor métodos bem estabelecidos na literatura e conhecidosdaqueles com conhecimento ordinário da técnica. Tornar-se-á prontamente aparente para aquele com conhecimento ordinárioda técnica que os compostos definidos acima podem sersintetizados por substituição dos reagentes e agentesapropriados nas sínteses mostradas abaixo.

Os compostos que têm a estrutura geral de fórmula X são sintetizados pelo uso de uma cicloadição 1,3-dipolarassimétrica como a etapa chave (Esquema 1).

Esquema 1Reagentes e condições: a) CH2C12-CH3CN, KF-A1203,microonda, ou metanol, refluxo com piperidina; v) peneirasmoleculares de 4Á, tolueno, 70°C; c) amina, temperaturaambiente; d) Pb(OAc)4, CH2Cl2-MeOH (1:1), 0°C, ou nitrato de amônio cério (IV) (CAN), CH3CN, K2C03, temperatura ambiente.

Os compostos tendo a Fórmula XXIX são preparadospelo procedimento mostrado no Esquema 2.

Esquema 2

13 XXIX

Reagentes e condições: a) peneiras moleculares de 4Á, tolueno, 70°C; b) etanol/HCl, refluxo; c) NaBH4, refluxode etanol; d) TBDMSCl, imidazol, DMF; e) cloreto detrimetilacetila, diisopropila etilamina, CH2C12, ii) HC1/acetato de etila, temperatura ambiente; f) CB4, Ph3P, CH2C12;g) RioONa (para Z = 0), ou Ri0NH2 (para Z = NH) ou outro procedimento padrão; h) Pb(OAc)4, CH2Cl2-MeOH (1:1), 0°C ouCAN, CH3CN, K2C03, temperatura ambiente; i) HCHO, NaBH3CNCH3CN (para R7 = Me) ou outro procedimento padrão.

Os compostos tendo a Fórmula XLVI podem sepreparados por uma reação de cicloadição 1,3-dipolarpublicada, conforme mostrada no Esquema 3 (Fejes et al.Tetrahedron 57:1129 (2000)).

Esquema 3<formula>formula see original document page 40</formula>

Os compostos tendo a Fórmula XLVII podem serpreparados por uma outra reação de cicloadição 1,3-dipolar,publicada, conforme mostrada no Esquema 4 (Fejes et al,Tetrahedron 57:1129 (2000)).

Esquema 4

<formula>formula see original document page 40</formula>

Os compostos tendo a Fórmula LXV são preparadospor um método similar ao da preparação da Fórmula X (Esquema5) .Esquema 5

18 LXV<formula>formula see original document page 41</formula>

Reagentes e condições: a) CH2C12-CH3CN, KF-A1203,microonda, ou metanol, refluxo com piperidina; v) peneirasmoleculares de 4Á, tolueno, 70°C; c) amina, temperaturaambiente; d) Pb(OAc)4, CH2Cl2-MeOH (1:1), 0°C, ou nitrato deamônio cério (IV) (CAN), CH3CN, K2C03, temperatura ambiente.

Um aspecto da invenção refere-se a métodos depreparar compostos inibidores de MDM2. Em uma modalidade, aintenção refere-se a um método para preparar um compostotendo a Fórmula X, compreendendo

a) condensar um composto de Fórmula 1 com umcomposto de Fórmula 2, por exemplo, em um solvente ou umamistura de solventes (por exemplo, CH2C12 e CH3CN) sobmicroonda em presença de um catalisador (por exemplo, KF-AL203) ou em presença de uma base em um solvente adequadopara formar um composto de Fórmula 3;<formula>formula see original document page 42</formula>

b) condensar o composto de Fórmula 3 com um com-posto de Fórmula 4 e um composto de Fórmula 5, por exemplo,em um solvente apoiar (por exemplo, tolueno) em presença deum agente de desidratação (por exemplo, peneira molecular de4Á) em temperatura elevada (por exemplo, cerca de 7 0°C) paraformar um composto de Fórmula 6; e

<formula>formula see original document page 42</formula>

c) tratar o composto de Fórmula 6 com uma misturade agente oxidante (por exemplo, Pb(OAc)4, nitrato de amôniocério) em um solvente ou mistura de solventes (por exemplo,CH2CI2 e MeOH, CH3CN) a uma temperatura adequada (porexemplo, cerca de 0°C ou à temperatura ambiente) para formarum composto de Fórmula X:<formula>formula see original document page 42</formula>em que

Ri e R5 são, independentemente, H ou alquilaopcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila, ciclo-alquenila, alquinila, arila, heterociclico, C02R' , OCOR',CONR'R", NR"COR', NR'S02R", S02NR'R", (C=NR' ) NR"R"', ouNR'R";

Rg é um a quatro grupos, independentemente, sele-cionados de H, F, Cl, Br, I, OH, N02, alquila, cicloalquila,alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico,OR', C02R', OCOR', CONR'R", NR"COR', NR'S02R", S02NR'R",(C=NR')NR"R"', ou NR'R";

Rio e Rn são, independentemente, H, OH ou alquilaopcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila, ciclo-alquenila, alquinila, arila, heterociclico, (CH2)n-R',(CH2)n-NR'R", (CH2)n-NR'COR", (CH2) nNR'S02R", (CH2)„-

NR' (C=NR")NR"', (CH2)n-COOH, (CH2) n-COOR', (CH2) n-CONR'R",(CH2)n-OR', (CH2)n-SR'f (CH2)n-COR', (CH2)n-S03H, (CH2)n-SONR'R", (CH2)n-S02NR'R", (CH2CH20) n- (CH2) m-0H , (CH2CH20)n-(CH2)mOR', (CH2CH20)n-(CH2)m-COOR', (CH2CH20) n- (CH2) m-CONR' R",(CH2CH20)n- (CH2)m-NR'R", (CH2CH20)n- (CH2) m-NR'COR", (CH2CH20)n-(CH2)m-NR' (C=NR")NR"', (CH2CH20) n- (CH2) m-NR' S02R", (CH2)p-

(CH2CH20)n-(CH2)m-0H, (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-0R', (CH2)p-

(CH2CH20)n-(CH2)m-COOR', (CH2) p-(CH2CH20) n-(CH2) m-CONR'R", (CH2)p-(CH2CH20) n- (CH2)m-NR'R", (CH2) p-(CH2CH20) n-(CH2) m_NR'COR",

(CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-NR' (C=NR")NR"', (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-NR'S02R", -CO-R', -SOR', ou -S02R'; e

n, m e p são, cada um, independentemente, 1 a 6;`cada R'e R" e R'" é, independentemente, H oualquila opcionalmente substituída, cicloalquila, alque-nila, cicloalquenila, alquinila, arila, ou heterocíclico;ou

R' e R", ou R" e R'", formam um anel.

Em uma outra modalidade, a invenção ser refere-se a um métodos para preparar um composto tendo a fórmulaLXV, compreendendo

a) condensar um composto de Fórmula 16 com umcomposto de Fórmula 2, por exemplo, em um solvente ou umamistura de solventes (por exemplo, CH2C12 e CH3CN) sobmicroonda em presença de um catalisador (por exemplo, KF-AI2O3) ou em presença de uma base em um solvente adequadopara formar um composto de Fórmula 17;

Ri

16 2 17

b) condensar o composto de Fórmula 17 com umcomposto de Fórmula 4 e um composto de Fórmula 5, porexemplo, em um solvente apoiar (por exemplo, tolueno) empresença de um agente de desidratação (por exemplo, peneiramolecular de 4Á) em temperatura elevada (por exemplo, cercade 70°C) para formar um composto de Fórmula 18; e<formula>formula see original document page 45</formula>

c) tratar o composto de Fórmula 18 com um agenteoxidante (por exemplo, Pb(0Ac)4/ nitrato de cério amônio) emum solvente ou mistura de solventes (por exemplo, CH2CI2 eMeOH, CH3CN) em um temperatura adequada (por exemplo, cerca5 de 0°C ou na temperatura ambiente) para formar o composto deFórmula LXV;

Em uma outra modalidade, a invenção refere-se a um10 método para preparar um composto tendo a fórmula XXIX,compreendendo

a) condensar um composto de Fórmula 3 com umcomposto de Fórmula 4 e um composto de Fórmula 5, porexemplo, em um solvente apoiar (por exemplo, tolueno) em15 presença de um agente de desidratação (por exemplo, peneiramolecular de 4Á) ou por destilação azeotrópica emtemperatura elevada (por exemplo, cerca de 70°C) para formarum composto de Fórmula 6;

<formula>formula see original document page 46</formula>

b) aquecer o composto de Fórmula 7 em presença deum ácido (por exemplo, HC1) e então adicionar um agenteredutor (por exemplo, NaBH4) para formar um composto deFórmula 8;

<formula>formula see original document page 46</formula>

c) condensar o composto de Fórmula 8 com um agentebloqueador (por exemplo, um halogeneto de trialquil sililatal como TBDMSC1) em um solvente polar (por exemplo, DMF)10 seguido por cloreto de trimetilacetila ou outros agentesprotetores em um solvente ou uma mistura de solventes (porexemplo, diisopropil etilamina, CH2C12) e então ácido (porexemplo, HC1) para formar um composto de Fórmula 10;d) tratar o composto de Fórmula 10 com um agentede halogenação (por exemplo, CBr4 e Ph3P) em um solvente(por exemplo, CH2C12) para formar um composto halo deFórmula 11;

f) tratar o composto de Fórmula 12 com um agenteoxidante (por exemplo, Pb(OAc)4, ou nitrato de amônio cério)em um solvente ou mistura de solventes (por exemplo CH2C12 e10 MeOH ou CH3CN) em uma temperatura adequada (por exemplo,cerca de 0°C à temperatura ambiente) para formar um compostode Fórmula 13; eg) alquilar o composto de Fórmula 13 com um agentealquilante (por exemplo, HCHO, NaBH3CN, e CH3CN) para formarum composto de Fórmula XXIX;

<formula>formula see original document page 48</formula>

em que Rlr R5, R7, Rg, Rio e Z são como definidos

acima.

Um aspecto importante da presente invenção é queos compostos de Fórmula I induzem o arresto do ciclo celulare/ou apoptose e também potencializam a indução do arresto dociclo celular e/ou apoptose tanto sozinhos como em resposta

a sinais de indução de apoptose adicionais. Portanto, écontemplado que esses compostos sensibilizam células àindução de arresto do ciclo celular e/ou apoptose, inclusivecélulas que são resistentes a tais estímulos indutores. Osinibidores da interação entre p53 ou proteínas relacionadas

a p53 e MDM2 ou proteínas relacionadas a MDM2 da presenteinvenção podem ser usados para induzir apoptose em qualquerdistúrbio que pode ser tratado, atenuado, ou prevenido pelaindução da apoptose. Em uma modalidade, os inibidores podemser usados para induzir apoptose em células que compreendemp53 funcional ou proteínas relacionadas a p53.

Em uma outra modalidade, a invenção pertence àmodulação de um estado associado à apoptose, que estáassociado a um ou mais agentes moduladores de apoptose.Exemplos de agentes moduladores de apoptose incluem, mas semlimitação, Fas/CD95, TRAMP, TNF RI, DR1, DR2, DR3, DR4, DR5,DR6, FADD, RIP, TNFa, .ligante Faz, TRAIL, anticorpos paraTRAIL-R1 ou TRAIL-R2, Bcl-2, p53, BAX, BAD, Akt, CAD, PI3quinase, PP1, e proteínas de caspase. Outros agentesenvolvidos na fase iniciação, decisão e degradação daapoptose são também incluídos. Exemplos de agentesmoduladores de apoptose incluem agentes, cuj a atividade,presença, ou alteração da concentração pode modular aapoptose em um paciente. Agentes moduladores de apoptosepreferidos são indutores de apoptose, tal como TNF ou umligante relacionado a TNF, particularmente um ligante TRAMP,um ligante Fas/CD95, um ligante TNFR-1, ou TRAIL. ;

Em algumas modalidades, as composições e métodosda presente invenção são usados para tratar células doentes,tecidos, órgãos, ou condições patológicas e/ou estadosmórbidos em um animal (por exemplo, um paciente mamíferoincluindo, mas sem limitação, humanos e animais veteriná-rios) . A esse respeito, várias doenças e patologias sãosuscetíveis ao tratamento ou profilaxia usando os presentesmétodos e composições. A uma lista não limitativa de exem-plos dessas doenças e condições inclui, mas sem limitação,câncer da mama, câncer da próstata, linforna, câncer de pele,câncer pancreático, câncer do cólon, melanoma, melanomamaligno, câncer do ovário, câncer do cérebro, carcinomaprimário do cérebro, câncer da cabeça e do pescoço, glioma,câncer do figado, câncer da bexiga, câncer do pulmão de nãopequena célula, carcinoma na cabeça e no pescoço, carcinomade mama, carcinoma do ovário, carcinoma pulmonar, carcinomapulmonar de pequena célula, tumor de Wilm, carcinomacervical, carcinoma testicular, carcinoma da bexiga,carcinoma pancreático, carcinoma do estômago, carcinoma docólon, carcinoma prostático, carcinoma geniturinario,carcinoma da tireóide, carcinoma esofágico, mieiorna, mieiornamúltiplo, carcinoma adrenal, carcinoma das células renais,carcinoma endometrial, carcinoma do córtex adrenal, insuli-noma pancreático maligno, carcinoma carcinóide maligno,coriocarcinoma, micose fungóide, hipercalcemia maligna,hiperplasia cervical, leucemia, leucemia linfocitica aguda,leucemia linfocitica crônica, leucemia mielógena aguda,leucemia mielógena crônica, leucemia granulocitiqa crônica,leucemia granulocitica aguda, leucemia das célulascapilares, neuroblastoma, rabdomiossarcoma, sarcoma deKaposi, policitemia vera, trombocitose essencial,, doença deHodgkin, linforna de não Hogdkin, sarcoma do tecido liso,sarcoma osteogênico, macroglobulinemia primária, eretinoblastoma, e similares, doenças auto-imunes mediadaspor células T e B; doenças inflamatórias; infecções; doençashiperproliferativas; AIDS; condições degenerativas, doençasvasculares, e similares. Em algumas modalidades, as célulascancerosas que estão sendo tratadas são metastáticas. Emoutras modalidades, as células cancerosas que estão sendotratadas são resistentes a agentes anticâncer.

Em algumas modalidades, infecções adequadas paratratamento com as composições e métodos da presente invençãoincluem, mas sem limitação, infecções causadas por virus,bactérias, fungos, micoplasma, príons, e similares.

Algumas modalidades da presente invenção propor-cionam métodos para administrar uma quantidade eficaz de umcomposto de Fórmula 1 e pelo menos um agente terapêuticoadicional (incluindo, mas sem limitação, atineoplásicosquimioterapêuticos, agentes moduladores de apoptose, agentesantimicrobianos, antivirais, antifúngicos e antiinflama-tórios) e/ou técnica terapêutica (por exemplo, intervençãocirúrgica, e/ou radioterapias).

Vários agentes anticâncer são contemplados parauso nos métodos da presente invenção. Certamente, a presenteinvenção contempla, mas sem limitação, administração devários agentes anticâncer tais como: agentes que induzemapoptose; polinucleotideos (por exemplo, anti-sentido,ribozimas, siRNA); polipeptideos (por exemplo, enzimas eanticorpos); miméticos biológicos (por exemplo, gossipol oumiméticos BH3); agentes que se ligam (por exemplo,oligomerizam ou complexam) com uma proteína da família Bcl-2tal como Bax; alcalóides; agentes alquilantes; antibióticosantitumorais; antimetabolitos; hormônios;' compostos deplatina; anticorpos monoclonais ou policlonais (por exemplo,anticorpos conj ugados com fármacos anticâncer, toxinas,defensinas), toxinas; radionuclideos; modificadores deresposta biológica (por exemplo, interferons (por exemplo,IFN-oc) e interleucinas (por exemplo, IL-2)); agentes paraimunoterapia adotiva; fatores de crescimento hematopoiético; agentes que induzem a diferenciação de células tumorais (porexemplo, ácido all-trans-retinóico); reagentes para terapiagenética (por exemplo, reagentes de terapia anti-sentido enucleotideos); vacinas para tumor; inibidores de angiogê-nese; inibidores de proteossoma; moduladores de NF-kB; compostos anti-CDK; inibidores de HDAC; e similares. Váriosoutros exemplos de compostos quimioterapêuticos e terapiasanticâncer adequados para co-administração com os compostosdescritos são conhecidos daqueles versados na técnica.

Em modalidades preferidas, agentes anticâncer compreendem agentes que induzem ou estimulam apoptose.Agentes que induzem apoptose incluem, mas sem limitação,radiação (por exemplo, raios X, raios gama, UV) ; fatoresrelacionados a fator de necrose tumoral (TNF) (por exemplo,proteínas de receptores da família TNF, ligantes da familia TNF, TRAIL, anticorpos para TRAIL-R1 ou TRAIL-R2);inibidores de quinase (por exemplo, inibidor de quinase dereceptor de fator de crescimento epidérmico (EGFR), receptorde fator de crescimento vascular (VGFR), inibidor de quinasede receptor de fator de crescimento de fibroblastos (FGFR), inibidor de quinase de receptor de fator de crescimentoderivado de plaquetas (PDGFR), e inibidores de quinase Bcr-Abl (tal como GLEEVEC)); moléculas anti-sentido; anticorpos(por exemplo, HERCEPTIN, RITUXAN, ZEVALIN E AVASTIN); anti-estrogênios (por exemplo, raloxifeno e tramoxifeno); anti-androgênios (por exemplo, flutamida, bicalutamida, finas-terida, aminoglutetamida, cetoconazol, e corticosteróides);inibidores de ciclooxigenase 2 (COX-2) (por exemplo,celecoxibe, meloxicam, NS-398, e fármacos antiinflamatóriosnão esteroidais (NSAISs); fármacos antiinflamatórios (porexemplo, butazolidina, DECADRON, DELTASONE, dexametasona,dexametasona intensol, DEXONE, HEXADROL, hidroxicloroquina,METICORTEN, ORADEXON, ORASONE, oxifembutazona, PEDIAPRED,fenilbutazona, PLAQUENIL, prednisolona, prednisona, PRELONE,e TANDEARIL); e fármacos quimioterapêuticos para câncer (porexemplo, irinotecano (CAMPTOSAR), CPT-11, fludarradina(FLUDARA), dacarbazina (DTIC), dexametasona, mitoxantrona,MYLOTARG, VP-16, cisplatina, carboplatina, oxaliplatina, 5-FU, doxorrubicina, gencitabina, bortezomibe, gefitinibe,bevacizumabe,, TAXOTERE ou TAXOL); moléculas de sinalizaçãocelular; ceramidas e citocinas; estaurosporina, e similares.

Em ainda outras modalidades, as composições emétodos da presente invenção proporcionam, um composto deFórmula I e pelo menos um agente antiproliferativo ouantineoplásico selecionado de agentes alquilantes, antimeta-bólitos (por exemplo, ervas e outra planta e/ou compostosderivados de animal).

Agentes alquilantes adequados para uso nas presen-tes composições e métodos incluem, mas sem limitação: 1)mostardas nitrogenadas (por exemplo, mecloretamina, ciclo-fosfamida, ifosfamida, melfalanô (L-sarcolisina); e cloram-bucil); 2) etileniminas e metilmelaminas (por exemplo,hexametilmelamina e tiotepa); 3) sulfonatos de alquila (porexemplo, bussulfano); 4) nitrosouréias (por exemplo,carmustina (BCNU); lomustina (CCNU); semustina (metil-CCNU) ;e estreptozocina (estreptozotocina)); e 5) triazenos (porexemplo, dacarbazina (DTIC; dimetiltriazenoimidazolcarbo-xamida).

Em algumas modalidades, antimetabólitos adequadospara uso nas presentes composições e métodos incluem, massem limitação: 1) análogos de ácido fólico (por exemplo,metotrexato (ametopterina) ) / 2) análogos de pirimidina (porexemplo, fluoruracila (5-fluoruracila; 5-FU), floxuridina(fluorode-oxirudina; FudR), e citarabina (citosina arabino-sideo)); e 3(análogos de purina (por exemplo, mercaptopurina(6-mercaptopurina; 6-MP), tioguanina (6-tioguanina; TG), epentostaina (2'-desoxicoformicina)).

Em ainda outras modalidades, agentes quimiotera-pêuticos adequados para uso nas composições e métodos dapresente invenção incluem, mas sem limitação: alcalóides davinca (por exemplo, vimblastina (VLB), vincristina); e)epipodofilotoxinas (por exemplo, etoposideo e teniposideo);3) antibióticos (por exemplo, dactinomicina (actinomicinaD), daunorrubicina (daunomicina; rubidomicina), doxorru-bicina, bleomicina, plicamicina (mitramicina) , e mitomicina(mitomicina C) ) ; 4) enzimas (por exemplo, L-asparaginase);5) modificadores de resposta biológica (por exemplo,interferon-alfa); 6) complexos coordenadores de platina (porexemplo, cisplatina (cis-DDP) e carboplatina); 7) antra-cenodionas (por exemplo, mitoxantrona); 8) uréias substi-tuidas (por exemplo, hidroxiuréia); 9) derivados demetilidrazina (por exemplo, procarbazina (N-metilidrazina;MIH)); 10) supressores adrenocorticais (por exemplo,mitotano (o,p'-DDD) e aminoglutetimida); 11) adrenocorti-costeróides (por exemplo, prednisona); 12) progestinas (porexemplo, caproato de hidroxiprogesterona, acetato demedroxiprogesterona, e acetato de megestrol) ; 13) estro-gênios (por exemplo, dietilstilbestrol e etinil estradiol) ;14) anti-estrogênios (por exemplo, tamoxifeno); 15) andro-gênios (por exemplo, propionato de testosterona e fluoxi-mesterona); 16) anti-androgênios (por exemplo, flutamida); e17) análogos de hormônio liberador de gonadotropina (porexemplo, leuprolida).

Qualquer agente oncolitico que seja rotineiramenteusado no contexto de terapia de câncer pode ser usado nascomposições e métodos da presente invenção. Por exemplo, aAgência Norte-Americana de Administração de Alimentos eFármacos (FDA) mantém um formulário de agentes oncoliticosaprovados para uso; nos E.U.A. Agências internacionais equi-valentes ao FDA norte-americano mantêm formulários simi-lares. A Tabela 1 fornece uma lista de exemplos de agentesantineoplásicos aprovados para uso nos E.U.A. Aquelesversados na técnica apreciarão que os "rótulos de produto"requeridos em todos os produtos quimioterapêuticos aprovadosnos E.U.A. descrevem indicações aprovadas, informação sobredosagens, dados de toxidez e similares, para os agentesexemplares.<table>table see original document page 56</column></row><table><table>table see original document page 57</column></row><table><table>table see original document page 58</column></row><table><table>table see original document page 59</column></row><table><table>table see original document page 60</column></row><table><table>table see original document page 61</column></row><table><table>table see original document page 62</column></row><table><table>table see original document page 63</column></row><table>Agentes anticâncer incluem ainda compostos quetenham sido identificados como tendo atividade anticâncer,mas não estão atualmente aprovados pela agência US FDA oupor outras agências equivalentes ou estão sob avaliação paranovos usos. Exemplos incluem, mas sem limitação, 3-AP, 12-0-tetradecanoilforbol-13-acetato, 17AAG, 8 52A, ABI-007, ABR-217 620, ABT-751, ADI-PEG 20, AE-941, AG-013736, AGRO100,alanosina, AMG 7 06, anticorpo G250, antineoplastons,AP2357 3, apaziquona, APC8015, atiprimode, ATN-161,atrasenteno, azacitidina, BB-10901, BCX-1777, bevacizumabe,BG0001, bicalutamida, BMS 247550, bortezomibe, briostatina-1, buserelina, calcitriol, CCI-779, CDB-2914, cefixima,cetuximabe, CG0070, cilengitida, clofarabina, fosfato decombretastatina A4, CP-675,206, CP- 724,714, CpG 7909,curcumina, decitabina, DENSPM, doxercalciferol, E7070,E7389, ecteinascidina 743, efaproxiral, eflornitina, EKB-569, enzastaurina, erlotinibe, exisulinde, fenretinida,flavopiridol, fludarabina, flutamida, fotemustina, FR901228,G 17DT, galiximabe, gefitinibe, genisteina, glufosfamida,GTI-2040, histrelina, HKI-272, homoarringtonina, HSPPC-96,proteína de fusão hul4.18-interleucina-2, HuMax-CD4,iloprosta, imiquimode, infliximabe, interleucina-12, IPI-504, irofulveno, ixabepilona, lapatinibe, lenalidomida,lestaurtinibe, leuprolida, imunotoxina LMB-9, lonafarnibe,luniliximabe, mafosfamida, MB07133, MDX-010, MLN2704,anticorpo 3F8 monoclonal, anticorpo J591 monoclonal,motexafina, MS-275, MVA-MUC1-IL2, nilutamida, nitrocamp-totecina, dicloridrato de nolatrexedo, nolvadex, NS-9, 06-benzilguanina, oblimerseno sódico, ONYX-015, oregovomabe,OSI-774, panitumumabe, paraplatina, PD-0325901, pemetrexedo,PHY906, pioglitazona, pirfenidona, pixantrona, PS-341, PSC833, PXD101, pirazolacridina, R115777, RAD001, rampirnase,análogo de rebecamicina, proteína de rhuAngiostatina, rhuMab2C4, rosiglitazona, rubitecano, S-l, S-8184, satraplatina,SB-, 15992, SGN-0010, SGN-40, sorafenibe, SR31747A, ST1571,SU011248, ácido hidroxâmico de suberoilanilida, suramina,talabostate, talampanel, tariquidar, tensirolimus, imunoto-xina TGFa-PE38, talidomida, timalfasina, tipifarnibe,tirapazamina, TLK28 6, trabectedina, glucoronato detrimetrexato, TroVax, UCN-1, ácido valpróico, vinflunina,VNP4 0101M, volociximabe, vorinostato, VX-680, ZD1839,ZD6474, zileutona, e triidrocloridrato de zosuquidar.

Para uma descrição mais detalhada de agentesanticâncer e outros agentes terapêuticos, aqueles versadosna técnica devem consultar vários manuais instrutivosincluindo, mas sem limitação, Physician's Desk Reference e"Pharmaceutical Basis of Therapeutics" de Goodman e Gilman,10a Edição, Eds. Hardman et al., 2002.

A presente invenção proporciona métodos paraadministrar um composto de Fórmula I com terapia deradiação. A invenção não é limitada pelos tipos, quanti-dades, ou sistemas de distribuição e de administração usadospara distribuir a dose de radiação terapêutica a um animal.Por exemplo, o animal pode receber radioterapia de fótons,terapia de radiação de feixe de partículas, outros tipos deradioterapias, e combinações destas. Em algumas modalidades,a radiação é distribuída ao animal usando um aceleradorlinear. Em ainda outras modalidades, a radiação é distri-buída usando uma faca gama ("gamma knife").

A fonte de radiação pode ser externa ou interna aoanimal. A terapia de radiação externa é a mais comum eenvolve direcionar um feixe de radiação de alta energia paraum sitio do tumor através da pele, usando, por exemplo, umacelerador linear. Embora o feixe de radiação esteja locali-zado no sitio do tumor, é quase impossível evitar exposição`de tecido saudável, normal. Contudo, a radiação externa éusualmente bem tolerada por animais. Terapia de radiaçãointerna envolve implantar uma fonte emissora de radiação,tais como pérolas, fios, pelotas, cápsulas, partículas, esimilares, dentro do corpo, no ou perto do sitio do tumor,incluindo o uso de sistemas de distribuição que especifi-camente alvejam células cancerosas (por exemplo, usandopartículas fixadas a ligantes de ligação de células cance-rosas) . Tais implantes podem ser removidos depois do trata-mento, ou deixados inativos no corpo. Tipos de terapia deradiação interna incluem, mas sem limitação, braquiterapia,irradiação intersticial, irradiação intracavidade, radioimu-noterapia, e similares.

0 animal pode receber opcionalmente radiossensibi-lizadores (por exemplo, metronidázol, misonidazol, intra-arterial Budr, iododesoxuridina intravenosa (IudR), nitroi-midazol, 4-nitroimidazóis 5-substituidos, 2H-isoindoldionas,[[(2-bromoetil)-aminojmetil]-nitro-lH-imidazol-l-etanol, de-rivados de nitroanilina, citoxinas seletivas de hipoxinaafinica a DNA, ligante de DNA halogenado, óxidos de 1,2,4benzotriazina, derivados de 2-nitroimidazol, derivados denitroazol contendo flúor, benzamida, nicotinamida, acridina-intercalador, derivado de 5-tiotretrazol, 3-nitro-l,2,4-triazol, derivado de 4,5-dinitroimidazol, texafrinashidroxiladas, cisplatina, mitomicina, tiripazamina, nitro-souréia, mercaptopurina, metotrexato, fluoruracila, bleomi-cina, vincristina, carboplatina, epirrubicina, doxorrubi-cina, ciclofosfamida, vindesina, etoposideo, paclitaxel,calor (hipertermia), e similares), radioprotetores (e.g.,cisteamina, diidrogenofosforotioatos de aminoalquila, ami-fostina (WR 2721), IL-1, IL-6, e similares). Radiossen-sibilizadores intensificam a destruição das células tumo-rais. Radioprotetores protegem o tecido saudável dos efeitosprejudiciais da radiação.

Qualquer tipo de radiação pode ser administrado aum animal, com a condição que a dose de reação seja toleradapelo animal sem efeitos colaterais negativos inaceitáveis.Tipos adequados de radioterapia incluem, por exemplo,radioterapia ionizante (eletromagnética) (por exemplo, raiosX e raios gama) ou terapia de radiação de feixe departículas (por exemplo, radiação de energia linear alta).Radiação ionizante é definida como a radiação compreendendopartículas ou fótons que têm energia suficiente paraproduzir ionização, i.e., ganho ou perda de elétrons(conforme descrição, por exemplo, na Patente US 5.770.581,aqui incorporada a titulo de referência em sua totalidade).Os efeitos da radiação podem ser pelo menos parcialmentecontrolados pelo clinico. A dose de radiação é preferi-velmente fracionada para máxima exposição da célula alvo ereduzida toxidez.

A dose total de radiação administrada a um animalé preferivelmente cerca de 0,01 Gy (Gray) a cerca de 100 Gy.Mais pref erivelmente cerca de 10 Gy a cerca de 65 Gy (porexemplo, cerca de 15 Gy, 20 Gy, 25 Gy, 30 Gy,'35 Gy, 40 Gy,45 Gy, 50 Gy, 55 Gy, ou 60 Gy) são administrados durante otratamento. Embora em algumas modalidades uma completa dosede radiação possa ser administrada no curso do tratamento deum dia, a dose total é idealmente fracionada e administradaem vários dias. Desejavelmente, a radioterapia é adminis-trada no curso de pelo menos cerca de 3 dias, por exemplo,pelo menos, 5, 7, 10, 14, 17, 21, 25, 28, 32, 35, 38, 42,46, 52, ou 56 dias (cerca de 1-8 semanas) . Por conseguinte,uma dose diária de radiação compreenderá aproximadamente 1-5Gy (por exemplo, cerca de 1 Gy, 1,5 Gy, 1,8 Gy, 2 Gy, 2,5Gy, 2,8 Gy, 3 Gy, 3,2 Gy, 3,5 Gy, 3,8 Gy, 4 Gy, 4,2 Gy, ou4,5 Gy) , preferivelmente 1-2 Gy (por exemplo, 1,5-2 Gy). Adose diária de radiação deve ser suficiente para induzir adestruição das células marcadas. Se o periodo é estendido, aradiação preferivelmente não é administrada todos os dias,permitindo, assim, que o animal descanse e os efeitos daterapia sejam realizados. Por exemplo, a radiação é deseja-velmente administrada em 5 dias consecutivos, e nãoadministradas em 2 dias para cada semana de tratamento,permitindo, assim, 2 dias de descanso por semana. Contudo, aradiação pode ser administrada 1 dia/seimana, 2 dias/semana,3 dias/semana, 4 dias/semana, 5 dias/semana, 6 dias/semana,ou todos os 7 dias/semana, dependendo da resposta do animale de quaisquer efeitos colaterais potenciais. A terapia deradiação é iniciada na semana 1 ou na semana 2, e éadministrada pelo tempo remanescente do periodo terapêutico.Por exemplo, a radiação é administrada nas semanas 1-6 ounas semanas 2-6 de um periodo terapêutico que compreende 6semanas para tratamento, por exemplo, um tumor sólido.Alternativamente, a radiação é administrada nas semanas 1-5ou nas semanas 2-5 de um periodo que compreende 5 semanas.Contudo, esses exemplos de esquemas de administração deradioterapia não têm o objetivo de limitar a invenção.

Agentes terapêuticos antimicrobianos podem serusados também como agentes terapêuticos na presente inven-ção . Qualquer agente, que possa matar, inibir, ou, de outromodo, atenuar a função dos organismos microbianos pode serusado, bem como qualquer agente contemplado como tendo taisatividades. Agentes antimicrobianos incluem, mas sem limi-tação, antibióticos naturais e sintéticos, anticorpos,proteínas inibidoras (por exemplo, defensinas), ácidosnucléicos anti-sentido, agentes rompedores de membrana esimilares, usados sozinhos ou em combinação. Certamente,qualquer tipo de antibiótico pode ser usado, incluindo, massem limitação, agentes antibacterianos, agentes antivirais,agentes antifúngicos, e similares.

Em algumas modalidades da presente invenção, umcomposto de Fórmula I e um ou mais agentes terapêuticos ouagentes anticâncer são administrados a um animal sob uma oumais das seguintes condições: em 'diferentes periodicidades,em durações diferentes, em concentrações diferentes, pordiferentes vias de administração, etc. Em algumas modali-dades, o composto é administrado antes do agente terapêuticoou anticâncer, por exemplo, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, ou18 horas, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 dias, ou 1, 2, 3, ou 4 semanasantes da administração do agente terapêutico ou agenteanticâncer. Em algumas modalidades, o composto é adminis-trado depois do agente terapêutico ou anticâncer, porexemplo, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, ou 18 horas, 1, 2, 3,4, 5, ou 6 dias, ou 1, 2, 3, ou 4 semanas depois daadministração do agente anticâncer. Em algumas modalidades,o composto e o agente terapêutico ou anticâncer são administrados concorrentemente, mas em diferentes esquemas,por exemplo, o composto é administrado diariamente enquantoo agente terapêutico ou anticâncer é administrado uma vez nasemana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada trêssemanas, ou uma vez a cada quatro semanas. Em outras modalidades, o composto é administrado uma vez na semana,enquanto o agente terapêutico ou anticâncer é administradodiariamente, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas,uma vez a cada três semanas, ou uma vez a cada quatrosemanas.

As composições dentro do escopo desta invenção

incluem todas as composições em que os compostos da presenteinvenção estão contidos em uma quantidade que é eficaz paraobter a finalidade pretendida. Embora as necessidades indi-viduais variem, a determinação das faixas ótimas de quanti- dades eficazes de cada componente está dentro do conhe-cimento da técnica. Tipicamente, os compostos podem seradministrados a mamíferos,- por exemplo, humanos, oralmenteem uma dose de 0, 0025 a 50 mg/kg, ou uma quantidadeequivalente do sal farmaceuticamente aceitável destes, por dia do peso corporal do mamifero que está sendo tratado,para distúrbios responsivos à indução de apoptose.Preferivelmente, cerca de 0,01 a cerca de 25 mg/kg sãooralmente administrados para tratar, atenuar, ou prevenirtais distúrbios. Para inj eção intramuscular, a dose égeralmente cerca de metade da dose oral. Por exemplo, umadose intramuscular adequada seria cerca de 0,0025 a cerca de25 mg/kg, e, mais preferivelmente, de cerca de 0,01 a cercade 5 mg/kg.

A dose de unidade oral pode compreender de cercade 0,01 a cerca de 1.000 mg, preferivelmente de cerca de 0,1a cerca de 100 mg do composto. A dose unitária pode seradministrada uma ou mais vezes diariamente como um ou maiscomprimidos ou cápsulas, cada uma contendo de cerca de 0,1 acerca de 10 mg, convenientemente de cerca de 0,25 a 50 mg docomposto ou seus solvatos.

Em uma formulação tópica, o composto pode estarpresente em uma concentração de cerca de 0,01 a 100 mg porgrama do veiculo. Em uma modalidade preferida, o compostoestá presente em uma concentração de cerca de 0,07 a 1,0mg/mL, mais preferivelmente de cerca de 0,1 a 0,5 mg/mL, demaior preferência, de cerca de 0,4 mg/mL.

Além de administrar o composto como um produtoquimico bruto, os compostos da invenção podem ser adminis-trados como parte de uma preparação farmacêutica contendoveículos farmaceuticamente adequados que compreendemexcipientes e auxiliares que facilitam o processamento doscompostos nas preparações, que podem ser usadas farmaceuti-camente . Preferivelmente, as preparações, particularmenteaquelas preparações que podem ser administradas oral outopicamente e que podem ser usadas para o tipo preferido deadministração, tais como comprimidos, drágeas, pastilhas deliberação lenta e cápsulas, enxagüatórios e higienizadoresbucais, géis, suspensões liquidas, rinsagens capilares, géiscapilares, xampus e também preparações que podem seradministradas retalmente, tais como supôsitórios, bem comosoluções adequadas para administração por infusão intra-venosa, inj eção, tópica ou oralmente, contêm de cerca de0,01 a 99%, pref erivelmente de cerca de 0,25 a 75% decomposto(s) ativo(s), juntamente com o excipiente.

As composições farmacêuticas da invenção podem seradministradas a qualquer animal que possam auferir dosefeitos benéficos dos compostos da invenção. Em primeirolugar, dentre tais animais estão mamíferos, por exemplo,humanos, embora a invenção não tenha o objetivo de ser assimlimitada. Outros animais incluem animais veterinários (vacas,carneiros, porcos, cavalos, cachorros, gatos e similares).

Os compostos e suas composições farmacêuticaspodem ser administrados por quaisquer meios que obtenham seupropósito pretendido. Por exemplo, a administração pode servia parenterál, subcutânea, intravenosa, intramuscular,intraperitonea'1, transdérmica, bucal, intratecal, intracra-niana, intranasal ou tópica. Alternativamente, ou concorren-temente, a administração pode. ser pela via oral. A dosagemadministrada dependerá da idade, saúde, e peso do paciente,tipo de tratamento concorrente, se algum, freqüência detratamento, e a natureza do efeito desejado.

As preparações farmacêuticas da presente invençãosão fabricadas de um modo que é ele próprio conhecido, pormeio de processos convencionais de misturar, granular,fabricar drágeas, dissolver, ou liofilizar. Assim, aspreparações farmacêuticas para uso oral podem ser obtidascombinando-se os compostos ativos com excipientes sólidos,opcionalmente triturar a mistura resultante e processar amistura de grânulos, depois da adição de auxiliaresadequados, se desejados ou necessários, para obter oscomprimidos ou núcleos de drágeas.`

Excipientes adequados são, em particular, cargastais como sacarideos, por exemplo, lactose ou sacarose,manitol ou sorbitol, preparações de celulose e/ou fosfatosde cálcio, por exemplo, fosfato tricálcico ou hidrogeno-fosfato de cálcio, bem como ligantes tais como pasta deamido, usando-se, por exemplo, amido de milho, amido detrigo, amido de arroz, amido de batata, gelatina, traga-canto, metil celulose, hidroxipropil metil celulose,carboximetilcelulose sódica, e/ou polivinil pirrolidona. Sedesejado, agentes desintegradores podem ser adicionados taiscomo os amidos mencionados acima e também carboximetil-amido, ipolivinil pirrolidona reticulada, ágar, ou ácidoalginicó ou um sal deste, tal como alginato de sódio.Auxiliares, são, acima de tudo, agentes reguladores de fluxoe lubrificantes, por exemplo, silica, talco, ácido esteáricoou sais deste, tal como estearato de magnésio ou estearatode cálcio, e/ou polietileno glicol. Núcleos de drágea sãoprovidos de revestimentos adequados que, se desejado, sãoresistentes aos sucos gástricos. Para essa finalidade, asoluções de sacarideos concentradas podem ser usadas, quepodem conter opcionalmente goma arábica, talco, polivinilpirrolidona, polietileno glicol e/ou dióxido de titânio,soluções de laca e solventes orgânicos ou misturas desolventes. De modo a produzir os revestimentos resistentesaos sucos gástricos, soluções de preparações de celulose adequadas tal como ftalato de acetilcelulose ou ftalato dehidroxipropil metil celulose, são usadas. Corantes oupigmentos podem ser adicionados aos comprimidos ou reves-timentos de drágeas, por exemplo, para identificação ou demodo a caracterizar as combinações de doses de composto ativo.

Outras preparações farmacêuticas que podem serusadas oralmente incluem cápsulas encaixe feitas de gelatina,bem como cápsulas vedadas moles feitas de gelatina e umplastificante tal como glicerol ou sorbitol. As cápsulas de

encaixe podem conter os compostos ativos na forma de grânu-los que podem ser misturados com cargas tal como lactose,ligantes tais como amidos, e/ou lubrificantes tal como talcoou estearato de magnésio e, opcionalmente, estabilizantes.Em cápsulas moles, os compostos ativos são, preferivelmente,

dissolvidos ou suspensos em líquidos adequados, tais comoóleos graxos, ou parafina liquida. Além disso, estabilizan-tes podem ser adicionados.

Preparações farmacêuticas possíveis, que podem serusadas retalmente, incluem, por exemplo, supôsitórios, que

consistem em uma combinação de um ou mais compostos ativoscom uma base de supositório. Bases de supositório adequadassão, por exemplo, triglicerideos sintéticos ou naturais, ouhidrocarbonetos de parafina. Ainda, é também possivel usarcápsulas retais de gelatina, que consistem em uma combinaçãodos compostos ativos com uma base. Bases materiais possíveisincluem, por exemplo, triglicerideos líquidos, polietilenoglicóis, ou hidrocarbonetos de parafina.

Formulações adequadas para administração paren-teral incluem soluções aquosas dos compostos ativos em formasolúvel em água, por exemplo, sais solúveis em água esoluções alcalinas. Além disso, suspensões dos compostosativos como suspensões para injeção oleosa apropriadas podemser administradas. Solventes lipofilicos adequados ouveículos incluem óleos graxos, por exemplo, óleo de gerge-lim, ou ésteres de ácidos graxos sintéticos, por exemplo,oleato de etila ou triglicerideos ou polietileno glicol-400.Suspensões de inj eção aquosa podem conter substâncias queaumentem a viscosidade da suspensão e incluem, por exemplo,carboximetil celulose sódica, sorbitol, e/ou dextrana.Opcionalmente, a suspensão também pode conter estabili-zantes.As composições tópicas desta invenção são formu-ladas, preferivelmente, como óleos, cremes, loções, ungüentose similares por seleção de veículos apropriados. Veículosadequados incluem óleos vegetais ou minerais, vaselina clara(parafina mole branca), gorduras de cadeia ramificada eóleos, gorduras animais e álcool de alto peso molecular(maior que C12) • Os veículos preferidos são aqueles onde oingrediente ativo é solúvel. Emulsificantes, estabilizantes,umectantes e antioxidantes podem ser também incluídos, bemcomo agentes corantes e fragrâncias, se desejado. Adicional-mente, intensificadores de penetração transdérmica podem serempregados nessas formulações térmicas. Exemplos de taisintensificadores podem ser encontrados nas Patentes US3.989.816 e US 4.444.762.`

Os cremes são preferivelmente formulados a partirde uma mistura de óleo mineral, cera de abelha auto-emulsif icante e água em cuja mistura o ingrediente ativodissolvido em uma pequena quantidade de um óleo, tal comoóleo de amêndoa, é misturado. Um exemplo tipico de tal cremeé um que inclui cerca de 4 0 partes de água, cerca de 20partes de cera de abelha, cerca de 4 0 partes de óleo minerale cerca de 1 parte de óleo de amêndoa.

Ungüentos podem ser formulados misturando-se umasolução do ingrediente ativo em um óleo vegetal tal comoóleo de amêndoa com parafina mole quente e deixando que amistura resfrie. Um exemplo tipico de tal ungüento é um queinclui cerca de 30% de óleo de amêndoa e cerca de 70% deparafina mole branca em peso.

As loções podem ser convenientemente preparadaspor dissolução do ingrediente ativo, em um álcool de altopeso molecular adequado tal como propileno glicol ou polie-tileno glicol.

Os seguintes exemplos são ilustrativos, mas nãolimitativos, do método e composições da presente invenção.Outras modificações adequadas e adaptações da variedade decondições e parâmetros normalmente encontrados em terapiaclinica e que são óbvios para aqueles versados na técnicaestão dentro do espirito e escopo da invenção.EXEMPLO

DESENHO DE INIBIDORES DE MDM2Já que muitos fármacos anticâncer são ou produtosnaturais ou contêm um farmacóforo de núcleo derivado deprodutos naturais, foi feira uma busca por produtos naturaisque pudessem proporcionar um novo scaffold para o desenho decompostos capazes de inibir a interação entre p53 e MDM2.

Estudos de atracamento ("docking") computacionalforam efetuados usando o programa GOLD (versão 2.1) com afunção de adequação ChemScore. As estruturas dos ligantesforam construídas em SYBYL 6.9 e a energia foi minimizadapor campo de força Tripos. A estrutura de MDM2 foi extraídada estrutura de cristal de MDM2 ligado com p53 (código PDB:1YCR). Hidrogênios foram adicionados à proteína usando SYBYL6.9. 0 sitio ativo foi definido para englobar todos osátomos dentro de uma esfera de raio de 12 A, cu] a origemestava localizada no centro do Trp23 do peptideo p53. 0protocolo de Algoritmo Genético padrão foi selecionado parao atracamento. Para cada composto, foram conduzidas 20corridas de atracamento individuais. As 20 soluções geradasde cada ligante foram classificadas de acordo com o escorede ChemScore. A solução mais bem classificada de cadaligante foi re-classifiçada por X-Score e usado na subse-qüente análise de modo de ligação.Espiroprostaina A representa uma classe de alca-lóides naturais isolados do caldo de fermentação deAspergillus fumigatus (Usui et ai., Biochem.J. 35:543 (1998))(Figura 1) . Estudos de atracamento computacional mostraramque a espirotriprostatina A não pode se ligar na f endahidrofóbica de MDM2, mas a estrutura de núcleo espiro(oxindol-3,3'-pirrolidina) pode ser usada como um rigidoscaffold para o desenho de uma nova classe de inibidores da interação entre p53-MDM2. A unidade de oxindol mimetizaestreitamente o residuo de Trp23 em ambas a formação deponte de hidrogênio e a interação com MDM2. 0 anelpirrolidinila proporciona um rigido scaffold com o qual doisgrupos hidrofóbicos podem ser ligados para mimetizar Phel9 e

Leu26 (Figura 2A). Vários compostos de molde foram modeladosusando diferentes grupos de substituintes com configuraçõesdiferentes. Desses, o composto la mostrou que mimetiza p53bem em sua ligação de hidrogênio e as interações hidro-fóbicas chave com MDM2 (Figura 2A) . O substituinte 6-cloro

no anel oxindol ocupa uma pequena bolsa hidrofóbica em MDM2,uma interação que mostrou ser eficaz na intensificação dasafinidades de ligação de inibidores de peptideo com base emp53 de MDM2 (Garcia-Echeverria et al., Med. Chem 43:3205(2000)).

<formula>formula see original document page 78</formula>EXEMPLO 2

ENSAIO DE LIGAÇÃO DE POLARIZAÇÃO DE FLUORESCENCIA

O composto la foi sintetizado conforme mostrado noEsquema 1 usando-se uma reação 1,3-dipolar assimétrica comoa etapa chave (Sebehar et al., J- Am. Chem. Soe. 122:5666(2000)). A estereoquimica de la e de outros análogos dese-nhados foram determinados por análise cristalográfica de umdos intermediários chave, (dimetilamida do ácido 1"R,2"S,2' R, 3' R,3S,4 ' R) 6-cloro-4'- (3-cloro-fenol)-1'-(2-hidróxi-

1,2-difenil-etil)-2'-(3-metil-butil)-2-oxo-l,2-diidro-espiro[indol-3, 3' -pirrolidina]-5'-carboxilico (Figura 3) .

Para determinar a habilidade de la em romper ainteração entre MDM2 e p53, o ensaio de ligação com base empolarização de flúorescência (FP) foi estabelecido, usandouma proteina MDM2 humana recombinante e um peptideo com baseem p53 (Garcia-Echeverria et al., J Echeverria et al., J MedChem 43:3205 (2000)) marcados com um marcador fluorescente -A sonda fluorescente, denominada PMDM6-F, tinha a seqüência(5-Fam-pAla-pAla-Phe-Met-Aib-pTyr-(6-Cl-l-Trp)-Glu-Ac3c-Leu-Asn-NH2) (SEQ ID NO:l), em que Fam é carboxifluoresceina,Aib é o ácido (3-aminoisobutirico, e Ac3c é o ácido 1-aminociclopropano-1-carboxilico. O valor de Kd da ligaçãodessa sonda desenhada para proteina MDM2 foi determinadacomo sendo 0,001p.M (lnM ± 0,09), mostrando que este peptideose liga à bolsa de superfície da proteina MDM2 com afinidadebastante alta (Figura 4A) . Especificidade através de ensaiofoi determinada por deslocamento competitivo de ligação dePMDM6-F à proteina MDM2 por um peptideo não marcado com aseqüência idêntica. Foi determinado que o peptideo PMDM6 nãomarcado correspondente (Ki = 0,7nM ± 0,1) tinha afinidade deligação significantemente mais alta que o peptideo p53 tiposelvagem (PLSQETFSDLWKLLPEN-NH2) (SEQ ID NO: 2) (K± = 6,7|iM ±1,2) (Figura 4B) . A proteína MDM2 humana recombinante(resíduos ■ 1-118) fundida ao marcador His no N-terminal eraestável e solúvel, e foi usada para o ensaio de ligação combase em FP.

Os experimentos de ligação dependente de dose foramefetuados com diluições em série dos compostos testados emDMSO. Uma amostra de 5 |iL das amostras testadas e proteínaMDM2 pré-incubada (0,010jiM) e o peptideo PMDM6-F (0,001jiM)em tampão de ensaio (fosfato de potássio lOOmM, pH 7,5; 100|ig/mL de gamaglobulina bovina; 0,02% de azida de sódio,adquirida da Invitrogen Life Technology), foram bem mistu-rados em placas de fundo redondo, pretas, de 96 poços Dynex(Fisher Scientific) para produzir um volume final de 125 faL.Para cada ensaio, o controle de peptideo ligado contendoproteína MDM2 e PMPM6-F (equivalente a 0% de inibição) econtrole de peptideo livre contendo somente PMDM6-F livre(equivalente a 100% de inibição) foram incluídos). Os valo-res de polarização foram medidos depois de 3 horas deincubação quando a ligação atingiu equilíbrio usando umULTRA READER (Tecan U.S. Inc., Research Triangle Park, NC) .Valores de IC50, a concentração de inibidor onde 50% depeptideo ligado são deslocados, foram determinados a partirde um gráfico de análise de quadrados mínimos não lineares.A montagem da curva foi realizada usando o softwareGRAPHAPAD PRISM (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA).

Para calcular as constantes de afinidade deligação (Ki) dos inibidores foi usada a seguinte equaçãopara computar os valores Ki em ensaios de ligação com baseem FP:

<formula>formula see original document page 81</formula>

na qual [1)50 denota a concentração do ligantemarcado livre em 50% de inibição, [L]50 a concentração doligante marcado livre em 50% de inibição, [P] o a concen-tração da proteína livre em 0% de inibição, e Kd a constantede dissociação do complexo de proteina-ligante. Para computarprecisamente os valores de Ki usando a equação apresentada,um procedimento computacional foi desenvolvido para computaros valores precisos de todos os parâmetros requeridos naequação (Nikolovska-Coleska et al. , Anal. Biochem. 332:2 61(2004)). Um programa de computador com base na Web foidesenvolvido também para computar os valores de Ki parainibidores em ensaios com base em FP baseados na mesmaequação.

0 peptideo p53 marcado fluorescentemente tinha umvalor de Kd de InM com MDM2, que é consistente com sua altaafinidade com MDM2 anteriormente relatada (Garcia-Echeverriaet al., Med. Chem 43:3205 (2000)). Nesse ensaio de ligação,determinou-se que um peptideo p53 natural (residuos 13-29),que foi usado como controle positivo, e la têm valores de Ki`de 6,7|iM e 8,5|iM, respectivamente (Figura 5). Logo, la é uminibidor altamente potente da interação p53-MDM2.

A análise do modelo de la ligado a MDM2 (Figura 2)sugeriu que la poderia ser ainda otimizado para melhorinteração com MDM2. Por exemplo, o anel fenila de la se ligaà bolsa de ligação hidrofóbica ocupada pela cadeia lateralde Phel9, mas há espaço adicional nesta bolsa - Similarmente,o grupo isobutila de la preenche a bolsa de ligaçãohidrofóbica ocupada por Leu26, mas um grupo hidrofóbicomaior poderia ser acomodado. Novos análogos de la foramdesenhados em um tentativa de ainda otimizar as interaçõesnesses dois sitios de ligação hidrofóbica.

Estudos de modelagem mostraram que a introdução deum átomo de cloro na posição meta do anel fenila em la podeexplorar o espaço adicional disponível nesse sitio deligação e melhorar a interação hidrofóbica. Esses estudosmostraram também que a introdução de um átomo de cloro tantona posição para como na orto do anel fenila em la podeviciar a ligação para MDM2. 0 composto 1b com um m-Cl foisintetizado e determinado ter um valor de Ki de 300nM. 'Ele éassim 20 vezes mais potente que la (Figura 5). Paraposterior combinação da predição de modelagem, o compostocom um substituinte p-Cl (lc) foi sintetizado e verificou-seque este era 26 vezes menos potente que 1b (Ki = 7,7-M).`Como indicado acima, o grupo isobutila em la não éótimo e a interação hidrofóbica neste sitio foi aindaotimizada usando lb como o molde - Estudos de modelagemmostraram que um grupo 2,2-dimetil propila pode intensificara interação hidrofóbica (Figura 2) e o composto resultanteld foi sintetizado. Verificou-se que ele tinha um valor deKi de 8 6nM e é assim um inibidor altamente . potente dainteração p53-MDM2, sendo 78 vezes mais potente que opeptideo p53 natural.Para confirmar a importância da interação hidro-fóbica nesse sitio, os compostos le e lf foram desenhados esintetizados, tendo um grupo hidrofóbico menor e maior queld, respectivamente. Estudos de modelagem sugeriram quetanto le como lf devem ser menos potentes que ld e de fato,experimentos de ligação com base em FP determinaram que le elf, com valores de Ki de 650 e 390nM, respectivamente, eramsubstancialmente menos potentes que ld (Figura 5).

EXEMPLO 3INIBIÇÃO DE CRESCIMENTO DE CÉLULASUma principal vantagem dos inibidores de pequenasmoléculas não-peptideos sobre os inibidores com base empeptideos é sua superior permeabilidade a células. É previstoque potentes inibidores não-peptideos da interação p53-MDM2tal como ld serão eficazes na inibição de crescimento edivisão de células em células cancerosas com uma forma dotipo selvagem de p53 através da estimulação da atividade dep53. Além disso, eles são prognosticados como tendo seleti-vidade em células cancerosas tanto com uma perda de p53 comocom uma forma não funcional e mutada dé p53. Para testaresses prognósticos, um ensaio de crescimento de células foidesenvolvido usando LNCaP de câncer da próstata humana (tiposelvagem de P53) e linhagens de células PC-3 (nulo de p53) .Os efeitos tóxicos dos compostos em células normais foramtambém examinados em uma linhagem de célula epitelial dapróstata normal.

As células foram semeadas em placas de cultura defundo plano de 96 poços em uma densidade de 3-4xl03células/poço e incubadas na presença dos compostos por 4dias. A taxa de inibição do crescimento de células depois dotratamento com concentrações crescentes dos compostos foideterminada usando WST-8 (sal monossódico de 2-(2-metóxi-4-nitrofenil)-3-(4-nitrofenil)-5-(2,4-dissulfenil)-2H-tetrazó-lio) (Doj indo Molecular Technologies Inc., Gaithersburg,Maryland). WST-8 foi adicionado em uma concentração final de10% a cada poço e as placas foram incubadas a 37°C por 2 a 3horas. A absorbância foi medida em 450 nm 'em uma leitora deplacas (Molecular Device-TECAN ULTRA). A concentração doscompostos que inibiram o crescimento de células em 50%(IC50) foi calculada por comparação da absorbância nascélulas não tratadas e as células tratadas com os compostos.Os compostos induziram a inibição de crescimento de célulasem um modo dependente de dose.

Como previsto, o composto ld foi altamente eficazem inibir o crescimento de células em células LNCaPcompreendendo p53 do tipo selvagem, com um valor de IC50 de0,83^M (Figura 6). Os compostos lb,i le e lf também inibirameficazmente o crescimento de células com valores IC50 de2,1, 2,7, e l,9|aM, respectivamente (Figura 6). Suasatividades na inibição do crescimento de células em célulasLNCaP estão perfeitamente correlacionadas com suasafinidades de ligação para MDM2. A seletividade celular foiavaliada em células PC-3 com uma perda de p53. Comoesperado, esses inibidores de MDM2 foram muito menospotentes em células LNCaP (Figura 7) . Por exemplo, ld, comum valor de IC50 de 22,5^M em células PC-3, foi 27 vezesmenos ativo que nas células LNCaP.

Já que as células normais têm também p53 do tiposelvagem, uma preocupação potencial no desenvolvimento deinibidores da interação p53-MDM2 como novos fármacos anti-câncer é que eles podem ser não seletivos e igualmenteativos na destruição de células normais, 0 composto ld foiavaliado em células epiteliais da próstata humana normal(PrEC) com p53 do tipo selvagem e foi determinado que ldtinha um valor de IC50 de 6, OjaM em células PrEC (Figura 8) .Logo, ld era 13 vezes menos potente em células PrEC que emcélulas LNCaP e exibe uma boa seletividade para célulasnormais.

EXEMPLO 4

3-E-BENZILIDEN0-6-CL0R0-1,3-DIIDRO-INDOL-2-QNA

Técnicas gerais: Análises elementares foram reali-zadas pelo Departamento de. Quimica da Universidade deMichigan, Ann Arbor, MI. Onde as fórmulas são dadas, ascomposições elementares foram encontradas como estandodentro de 0,3% dos valores teóricos a menos que de outromodo citado. Rotações ópticas foram determinadas em 589 nm,a 25°C, em um polarimetro Perkin-Elmer 241 (em CHCI3) .Análise de raios X de cristal simples foi realizada na NavalResearch Laboratory, Washington, DC. Os espectros de RMN 1Hforam registrados a 300 MHz e/os espectros de RMN 13C foramregistrados a 75 MHz em um espectrômetro Bruker AVANCE300.Todos os espectros de RMN foram obtidos em CDCI3 e osresultados foram registrados como partes por milhão (ppm) emcampo baixo de tetrametilsilano (TMS). As seguintes abrevia-ções foram usadas para a multiplicidade de sinais de RMN: s= singleto, d = dubleto, t = tripleto, q = quarteto, m =multipleto, dd = duplo dubleto, dt = duplo tripleto, dq =duplo quarteto, br = amplo.

Método A: A uma solução de 6-cloro-oxindol (1,67g, 10,0 mmols) em 60 mL de CH2C12:CH3CN (1:1), benzaldeido(10,0 mmols) e KF-A1203 (10 g) foram adicionados. Depois de10 minutos, à temperatura ambiente, o solvente foi removidosob vácuo, e os resíduos juntos com o frasco foram colocadosem um forno de microonda e aquecidos por 5 minutos (60 ~80W) . A extração foi efetuada com 150 mL de CH3CN, o sólidofoi filtrado, e o solvente foi removido sob vácuo paraproduzir o produto bruto, que foi usado sem posteriorpurificação.

Método B: A uma solução de 6-cloro-oxindol (1,67g, 10,0 mmols) em 60 mL de metanol, benzaldeido (10,0 mmols)e piperidina (10 g) foram adicionados e a mistura resultantefoi refluxada por 4 horas. O precipitado foi filtrado elavado com metanol gelado para render o produto puro.

RMN XR (300 MHZ, CDCI3) 5 7, 90 (br, 1H) , 7,63 (d, J= 5,67 Hz, 2H), 7,55 (d, J = 8,27 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 5,87Hz, 2H), 7,39 (d, J = 7,85 Hz, 2H) , 6,90 (s, 1H) , 6,85 (d, J = 8,22 Hz, 1H), 4,66 (s, 1H).

EXEMPLO 5

Em um procedimento similar, os seguintes compostos 5 foram preparados.

a) 3-E-Cloro-3-(3-cloro-benzilideno)-1,3-diidro-indol-2-ona

RMN 1R (300 MHZ, CDC13) ô 8,08 (br, 1H), 7,76 (s, 1H) , 7,62 ~ 7,61 (m, 1H), 7,55 ~ 7,43 (m, 4H) , 6,92 (d, J = 10 1,52 Hz, 1H), 6,89 (dd, J = 1,91, 8,18 Hz, 1H) .

b) 3-E-Benzilideno-l,3-diidro-indol-2-ona

RMN XR (300 MHZ, CDC13) ô 8,32 (br, 1H) , 7,87 (s, 1H) , 7,77 ~ 7,66 (m, 3H), 7,75 ~ 7,43 (m, 3H), 7,24 (td, J = 1,10, 7,69 Hz, 1H), 6,93 ~ 6,87 (m, 2H). 15 c) 3-E-6-Cloro-3-(4-cloro-benzilideno)-1,3-diidro

-indol-2-ona

d) 3-E-Benzilideno-6-bromo-l,3-diidro-indol-2-ona

e) 3 -E-Benzilideno-6-flúor-1,3-diidro-indol-2-ona

f) 3-:E-Benzilideno-6-trif luormetil-1, 3-diidro-in-

20 dol-2-ona

g) 3-E-6-Cloro-3-(4-bromo-benzilideno)-1,3-diidro -indol-2-ona

h) 3-E-6-Cloro-3-(4-metil-benzilideno)-1,3-diidro -indol-2-ona

25 i) 3-E-6-Cloro-3-(4-metoxil-benzilideno)-1, 3-di-

idro-indol-2-ona

j ) 3-E-6-Cloro-3-(4-trifluormetil-benzilideno)-1, 3-diidro-indol-2-onak) 3-E-6-Cloro-3-(3,4-dicloro-benzilideno)-1,3-diidro-indol-2-ona

1) 3-E-6-Cloro-3-(3,5-dicloro-benzilideno)-1,3-diidro-indol-2-ona

m) 3-E-6-bromo-3-(3-bromo-benzilideno)-1,3-dii-dro-indol-2-ona

n) 3-E-6-Cloro-3- (3,3-dimetil-butilideno)-1, 3-diidro-indol-2-ona

o) 3-E-6-Cloro-3-(3-metil-butilideno)-1,3-diidro -indol-2-ona

p) 3-E-6-Cloro-3- (2-cicloexil-etilideno)-1,3-diidro-indol-2-ona

q) S-E-6-Cloro-S-cicloexilmetileno-l,3-diidro-in-

dol-2-ona

r) 3-E-6-Cloro-3-ciclopentilmetileno-l,3-diidro-indol-2-ona

s) 3-E-6-Cloro-3-tiofen-2-ilmetileno-l,3-diidro-indol-2-ona

ti) 3-E-6-Cloro-3-piridin-2-ilmetileno-l, 3-diidro -indol-2-oria

u) 3-E-3-(6-Cloro-piridin-2-ilmetileno)-6-cloro-1,3-diidro-indol-2-ona

v) 3-E-3-(3-Cloro-2-flúor-benzilideno)-6-cloro-1,3-diidro-indol-2-ona

w) 3-E-3-(3-Cloro-4-flúor-benzilideno)-6-cloro-1,3-diidro-indol-2-ona

x) 3-E-6-Cloro-3- (3-cloro-5-flúor-benzilideno)-1,3-diidro-indol-2-onay) 3-E-3-(3-Boro-benzilideno)-1,3-diidro-indol-

<formula>formula see original document page 90</formula>

z) 3-E-3-(3-Bromo-benzilideno)-6-trifluormetil-1,3-diidro-indol-2-ona 5 EXEMPLO 6

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R,5'R)6-BROMO-4'-(3-BROMO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-29)

<formula>formula see original document page 90</formula>

Sob argônio, a um frasco de 100 mL com barra de 10 agitação foram adicionados (2S,3R)-2,3,5,6-tetraidro-2, 3-difenil-1,4-oxazin-6-ona (1,0 g, 3,96 mmols), 3-E-(3-bromo)-benzilideno-6-bromo-l,3-diidro-indol-2-ona (4,75 mmols), 2 g de peneiras moleculares de 4Á, recentemente ativadas, 3,3-dimetil-butiraldeido (4,75 mmols) e tolueno (50 mL) . A 15 mistura foi aquecida para 70°C e mantida nessa temperatura por 5 horas. A mistura foi resfriada para a temperatura ambiente e as peneiras moleculares foram filtradas. O solvente foi removido sob vácuo e o residuo foi purificado por cromatografia para produzir o produto 1,3-dipolar.O produto 1,3-dipolar (2,0 mmols) obtido foi dissolvido em THF-dimetilamina (4M, 5 mL) e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. 0 solvente foi removido sob vácuo e o residuo foi purificado 5 por cromatografia para produzir dimetilamida do ácido (1"R, 2"S, 2' R,3' R,3S,4'R) 6-bromo-4'-(3-bromo-fenil) -2' -(2,2-dimetil-propil)-1'- (2-hidróxi-l,2-difenil-etil)-2-oxo-l, 2-diidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxílico.

A 0°C, a uma solução de dimetilamida do ácido (1"R, 2"S, 2'R,3'R,3S,4' R) 6-bromo-4'-(3-bromo-fenil)-2' -(2, 2-dimetil-propil)-1'- (2-hidróxi-l,2-difenil-etil)-2-oxo-l, 2-diidro-espiro[indol-3,3'-pirrolidina]-5'-carboxilico (2,0 mmols) em CH2Cl2-MeOH (10 mL, 1:1), Pb(OAc)4 (1,34 g, 3,0 mmols) foi adicionado. A reação foi agitada a 0°C, por cerca

de 5 a 10 minutos, e a solução foi filtrada através de uma coluna de silica-gel, curta. 0 solvente foi removido sob vácuo e o residuo foi purificado por cromatograf ia para render o produto.

[a]25D 82,7 (c, 0,3 CHC13) ; 1H NMR (300 MHz, CDC13) ,

20' ô 9,15 (br, 1H) , 7, 20 - 7,28 (m, 2H) ; ] 7,18 ~ 7,03 (m, 2H) , 6,97 (s, 1H) , 6,86 (d, J = 8,00 Hz, 1H) , 6,34 (d, J = 8,08 Hz, 1H) , 4,54 (d, J = 7,50 Hz, 1H) , 3,99 (d, J = 7,49 Hz, 1H) , 3,63 (br, 1H), 3,51 (d, J = 9,13 Hz, 1H), 3,03 (s, 3H) , 2,91 (s, 3H), 1,48 (dd, J = 9,85, 14,01 Hz, 1H), 0,90 (d, J

= 13, 50 Hz, 1H) , 0,83 (s, 9H) ; 13C NMR (75 MHz, CDCI3) , ô 181,16, 170,08, 142,73, 141,20, 131,55, 130,49, 130,06, 127,52, 127,09, 126,08, 124,60, 122,58, 121,46, 113,17,68,03, 65,15, 64,49, 58,08, 43,12, 37,21, 36,19, 30,10, 29,79.

EXEMPLO 7

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (l//R,2//S,2/Ry3S,4/R,5fR) 6-CLORO-4' -5 FENIL-1'-(2-HIDRÓXI-DIFENIL-ETIL)-2'-ISOBUTIL-2-OXO-l, 2-

DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

[a]25D 82,7 (c, 0,3 CHC13) ; RMN 2H (300 MHz, CDCI3) , ô 8,25 (br, 1H) , 7,73 (d, J = 7,88 Hz, 1H), 7,42 ~ 6,93 (m, 16H) , 6,78 (s, 1H) , 5,20 (s, 1H) , 4,64 (d, J = 10,07 Hz,

1H) , 4,59 (s, 1H), 4,52 (d, J = 3,13 Hz, 1H) , 4,17 ~ 4,10 (m, 1H) , 3,50 (d, J = 10,83 Hz, 1H), 2,86 (s, 3H), 2,64 (dd, J = 12, 45, 13, 20 Hz, 1H), 1,95 (s, 3H), 1,73 ~ 1,65 (m, 1H) , 1,13 ~ 1,07 (m, 1H) , 0,85 (d, J = 6,38 Hz, 3H) , 0,54 (d, J = 6,08 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 176, 43, 174,25,

140,95, 140,55, 135,38, 133,91, 133,77, 131,39, 130,81, 129,78, 127,96, 127,81, 127,58, 126,58, 125,90, 125,36, 122,19, 110,52, 75,52, 75,10, 73,58, 64,71, 60,59, 58,45, 57,52, 37,34, 36,54, 36,30, 29,56, 28,12.EXEMPLO 8

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (1"R,2"S,2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-1'-(2-HIDRÓXI-DIFENIL-ETIL)-2'-ISOBUTIL-2-QXQ-1, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

<formula>formula see original document page 93</formula>

[ct]25D -76,0 (c, 0,3 CHC13); RMN 1H (300 MHz, CDCI3) , ô 8,15 (br, 1H) , 7,75 (d, J = 7,91 Hz, 1H) , 7,21 ~ 6,86 (m, 14H), 6,82 (d, J= 7,82 Hz, 1H), 6,73 (s, 1H) , 5,18 (s, 1H) , 4,69 (d, J = 10,28 Hz, 1H) , 4,51 (d, J = 3,45 Hz, 1H), 4,32 (br, 1H), 4,22 ~ 4,11 (m, 1H) , 3,48 (d, J = 10,99 Hz, 1H) , 2,90 (s, 3H), 2,57 (dd, J = 12,53, 13,24 Hz, 1H) , 2,06 (s, 3H), 1,85 ~ 1,56 (m, 1H), 1,10 ~ 0,95 (m, 1H) , 0,84 (d, J = 6,41 Hz, 3H) , 0,47 (d, J = 6,90 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDCI3) ô 176,06, 173,83, 140,80, 140,61, 136,27, 135,04, 134,06, 133,86, 130,81, 130,71, 129,54, 129,23, 128,09, 127,87, 127,62, 127,38, 126,70, 125,80, 125,54, 122,39, 110,60, 73,92, 72,51, 72,23, 62,55, 60,41, 56,75, 39,23, 36, 59, 26, 43, 23, 39, 21, 03.

EXEMPLO 9

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (1"R,2"S,2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(4-CLORO-FENIL)-1/-(2-HIDRÓXI-DIFENIL-ETIL)-2'-ISOBUTIL-2-QXQ-1, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO[ct]25D -93,3 (c, 0,3 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDCI3), ô 7,80 (br, 1H) , 7,74 (d, J = 8,09 Hz, 1H) , 7,34 ~ 6,90 (m, 14H), 6,91 (d, J = 8,41 Hz, 1H), 6,78 (s, 1H) , 5,18 (s, 1H) , 4,65 (d, J = 9,89 Hz, 1H) , 4,51 (d, J = 3,54 Hz, 5 1H), 4,36 (br, 1H) , 4,18 ~ 4,10 (m, 1H) , 3,48 (d, J = 10,96 Hz, 1H) , 2,89 (s, 3H) , 2,59 (dd, J = 12, 39, 12, 77 Hz, 1H) , 2,05 (s, 3H), 1,70 ~ 1,60 (m, 1H), 1,10 ~ 1,00 (m, 1H) , 0,85 (d, J = 6,28 Hz, 3H), 0,49 (d, J = 6,10 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDCI3) ô 175,72, 173,98, 140,71, 140,59, 135,08, 10 134,02, 133,80, 132,58, 130,86, 130,70, 128,25, 127,87, 127,62, 126,70, 125,80, 125,56, 122,42, 110,50, 74,54, 72,64, 72,19, 62,52, 60,59, 60,41, 56,67, 39,31, 36,58, 26,44, 23,38, 21,06.

EXEMPLO 10

(1"R, 2"S,2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-1'- (2-HIDRÓXI-l,2-DIFENIL-ETIL)-2-QXQ-l,2-DIIDRQ-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

<formula>formula see original document page 94</formula>[a]25D -92,7 (c, 0,3 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDC13), ô 7,85 (br, 1H) , 7,45 (d, J = 8,10 Hz, 2H) , 7,41 ~ 6,72 (m, 14H), 6,68 (d, J = 7,72 Hz, 1H) , 5,43 (d, J = 3,24 Hz, 1H) , 4,84 (br, 1H), 4,50 (d, J = 3,55 Hz, 1H), 4,38 (d, 5 J = 10,46 Hz, 1H), 3,98 (d, J = 10,46 Hz, 1H) , 3,65 (d, J = 9,00 Hz, 1H), 2,97 (dd, J = 9,00 Hz, 12,00 Hz, 1H), 2,86 (s, 3H), 1,94 ~ 1,85 (m, 1H) , 1,93 (s, 3H) , 0,79 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDCI3) ô 174, 32, 140, 84, 135, 61, 135, 32, 134,20, 133,71, 130,97, 129,51, 129,08, 128,16, 128,02, 127,60, 10 127,41, 126,48, 125,89, 125,17, 122,41, 110,48, 74,85, 73,82, 72,00, 62,31, 60,94, 60,41, 57,92, 42,19, 36,69, 30, 31, 29, 68.

EXEMPLO 11

\ DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (1"R,2"S,2'R,3S,4'R,5' R)6-CLORO-4'-(3-15 CLORO-FENIL)-1'-(2-HIDRÓXI-l,2-DIFENIL-ETIL)-2' -PROPIL-2-

OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5/-CARBOXÍLICO

[a]25D -73,9 (c, 0,3 CHC13) ; RMN 1H (300 MHz, CDCI3), ô 8,27 (br, 1H) , 7,66 (d, J = 8,01 Hz, 1H) , 7,63 (d, J = 6,97 Hz, 1H) , 7,42 (d, J = 6,99 Hz, 1H) , 7,32 (d, J = 20 7, 26 Hz, 1H), 7,28 ~ 6,57 (m, 14H) , 5,14 (s, 1H) , 4,60 (d, J = 10,06 Hz, 1H), 4,58 ~ 4,48 (m, 1H) , 4,48 (d, J = 3,32 Hz, 1H) , 4,17 ~ 4,10 (m, 1H) , 3,37 (d, J = 10,11 Hz, 1H) , 2,87(s, 3H) , 2,56 ~ 2,40 (m, 1H) , 1,99 (s, 3H) , 2,00 ~ 1,88 (m, 1H), 1,10 ~ 0,87 (m, 2H), 0,27 ~ 0,72 (m, 3H).

EXEMPLO 12

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (1"R,2"S, 2' R,3S,4' R,5' R)6-CLORO-4'-(3-5 CLORO-FENIL)-1'-(2-HIDRÓXI-l,2-DIFENIL-ETIL)-2'-(3-METIL-

BUTIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5/ -

CARBOXÍLICO

<formula>formula see original document page 96</formula>

[a]25D 82,7 (c, 0,3 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,68 (br, 1H), 7,63 (d, J = 7,77 Hz, 1H), 7,28 ~ 6,81 (m,

10 16H), 5,13 (s, 1H) , 4,59 (d, J = 10,12 Hz, 1H) , 4,54 (s, 1H) , 4,46 (d, J = 2,94 Hz, 1H) , 4,12 (d., J = 10,10 Hz, 1H) , 3,31 (d, J = 10,26 Hz, 1H) , 2,85 (s, 3H) , 2,60 ~ 2,45 (m, 1H), 1,99 (s, 3H), 1,95 ~ 1,84 (m, 1H), 1,48 ~ 1,42 (m, 1H) , 0,95 - 0,82 (m, 1H), 0,77 (t, J = 5,50 Hz, 6H), 0,70 ~ 0,60

15 (m, 1H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 176, 58, 173, 82, 140, 98, 140,53, 136,12, 135,21, 134,03, 133,76, 130,75, 129,43, 129,16, 128,04, 127,81, 127,59, 127,32, 126,64, 125,86, 125,30, 122,29, 110,75, 75,18, 74,99, 73,10, 62,68, 60,39, 56,99, 37,22, 36,57, 36,42, 29,19, 28,08, 22,61.EXEMPLO 13

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4 '-(3,4-DICLORO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIR0[IND0L-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-32)

Usando um método similar ao do Exemplo 6, este composto foi sintetizado.

[a]25D 128,8 (c, 0,3 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDC13), 5 8, 64 (s, 1H) , 7,35 (s, 1H) , 7,22 (d, J = 1,79 Hz, 1H), 6,97 (dd, J = 1,80, 8,30 Hz, 1H); 6,88 (d, J = 1,65 Hz, 1H), 6,78 (dd, J = 1,75, 8,10 Hz, 1H), 6,35 (d, J = 8,06 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 7,92 Hz, 1H) , 4,07 (d, J = 7,91 Hz, 1H) , 3,48 (d, J = 9,47 Hz, 1H) , 3,03 (s, 3H) , 2,91 (s, 3H) , 1,49 (dd, J = 9,88, 14,3 Hz, 1H) ; 0,90 ~ 0,88 (m, 1H) , 0,84 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180, 88, 169, 71, 142, 30, 139,07, 133,72, 132,55, 131,32, 130,41, 127,14, 126,60, 125,69, 121,99, 110,41, 68,64, 65,41, 64,20, 57,67, 43,15, 37,28, 36,16, 30,14, 29,81.

EXEMPLO 14

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-0X0-4'- ( 3-TRILFLUORMETIL-FENIL)-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-21)Usando um método similar ao do Exemplo 6, este composto foi sintetizado.

[a]25D 61,0 (c, 0,2 CHC13); RMN 2H (300 MHz, CDC13) , Ô 8,19 (br, 1H), 7,45 ~ 7,21 (m, 4H), 6,82 (d, J = 1,82 Hz, 5 1H) , 6,70 (dd, J = 1,90, 8,12 Hz, 1H), 6,39 (d, J = 8,11 Hz, 1H), 4,57 (d, J = 8,28 Hz, 1H) , 4,18 (d, J = 8,10 Hz, 1H) , 3,50 (d, J = 9,80 Hz, 1H), 2,99 (s, 3H), 2,93 (s, 3H), 1,52 (dd, J 9, 84, 14, 22 Hz, 1H), 0,96 (d, J = 14,23 Hz, 1H) , 0,90 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180, 70, 169, 84, 142, 03, 10 139,71, 133,64, 132,33, 129,09, 126,72, 125,73, 125,06, 124,09, 121,89, 110,14, 68,44, 65,05, 64,38, 58,55, 43,26, 37,02, 36,15, 30,17, 29,82; EI/MS, 508 (M++l); HRMS C26H30CIF3N3O2 ([M+H]+ requerido 508, 1979, encontrado 508,1965.

EXEMPLO 15

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(4-CLORQ-FENIL)-2'-ISOBUTIL-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-10)Usando um método similar ao do Exemplo 6, este composto foi sintetizado.

[a]25D 82,7 (c, 0,3 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,98 (br, 1H) , 7,21 (d, J = 8,18 Hz, 2H) , 7,09 (d, J = 5 8,17 Hz, 2H), 6,86 (s, 1H), 6,74 (d, J = 7,75 Hz, 1H), 6,46 (d, J = 7,78 Hz, 1H), 4,59 (d, J = 7,63 Hz, 1H), 3,99 (d, J = 7,64 Hz, 1H), 3,56 (m, 1H) , 2,96 (s, 3H) , 2,85 (s, 3H) , 1, 68 - 1, 53 (m, 2H), 0,98 ~ 0,88 (m, 1H) , 0,79 (d, J = 12,1 Hz, 3H), 0,77 (d, J = 12,0 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) 5 10 180,86, 170,40, 142,35, 136,85, 133,62, 133,28, 130,04, 128,76, 127,16, 125,73, 121,87, 110,29, 68,90, 64,35, 63,60, 59,40, 38,66, 37,24, 36,24, 25,83, 23,42, 21,76; EI/MS, 460 (M++ 1); HRMS C24H28C12N3O2 ([M+H]+) requerido 460, 1559, encontrado 460,1552. 15 EXEMPLO 16

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO ( 2' R, 3R, 4' S,5'S)6-CLORO-4'-(4-CLORQ-FENIL)-2'-ISOBUTIL-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -

PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-38)[a]25D -65,8 (c, 0,3 CHC13) ; RMN 2H (300 MHz, CDC13), 5 8, 98 (br, 1H) , 7,21 (d, J = 8,18 Hz, 2H) , 7,09 (d, J = 8,17 Hz, 2H), 6,86 (s, 1H) , 6,74 (d, J = 7,75 Hz, 1H) , 6,46 (d, J = 7,78 Hz, 1H) , 4,59 (d, J = 7,63 Hz, 1H), 3,99 5 (d, J = 7,64 Hz, 1H) , 3,56 (m, 1H) , 2,96 (s, 3H) , 2,85 (s, 3H), 1,68 ~ 1,53 (m, 2H), 0,98 ~ 0,88 (m, 1H), 0,79 (d, J = 12,1 Hz, 3H) , 0,77 (d, J = 12,0 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDCI3) ô 180,86, 170,40, 142,35, 136,85, 133,62, 133,28, 130,04, 128,76, 127,16, 125,73, 121,87, 110,29, 68,90, 10 64,35, 63,60, 59,40, 38,66, 37,24, 36,24, 25,83, 23,42, 21,76; EI/MS, 460 (M++ 1); HRMS C24H28C12N3O2 ([M+H]+) requerido 460,1559, encontrado 460,1552.<formula>formula see original document page 100</formula>EXEMPLO 17 ' DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2' R,3R,4' S,5' S)6-CLORO-4'-(3-CLORO-15 FENIL)-2'-ISOBUTIL-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -

PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-34)[a]25D -50,0 (c, 0,3 CHC13); RMN XH (300 MHz, CDCI3), ô 9,30 (br, 1H), 7,27 ~ 6,95 (m, 4H) , 6,88 (s, 1H) , 6,73 (d, J = 8,00 Hz, 1H), 6,47 (d, 8,01 Hz, 1H) , 4,61 (d, J = 7,66 Hz, 1H) , 4,00 (d, J = 7,64 Hz, 1H) , 3,58 ~ 3,54 (m, 5 1H), 2,97 (s, 3H), 2,88 (s, 3H), 1,65 ~ 1,45 (m, 2H) , 0,98 ~ 0,91 (m, 1H) , 0,78 (d, J = 6,63 Hz, 3H) , 0,76 (d, J = 6,53 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180, 98, 170,23, 142, 44, 140,40, 134,35, 133,58, 129,77, 128,68, 127,64, 126,94, 125,64, 121,75, 110,36, 68,84, 64,08, 63,59, 59,50, 38,54, 10 37,22, 36,21, 25,78, 23,38, 21,72; EI/MS, 460 (M++ 1); HRMS C24H28C12N3O2 ([M+H]+) requerido 460, 1559, encontrado 460, 1551.

EXEMPLO 18

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)| 6-CLORQ-4'-(3-CLORO-FENIL)-2'-ISOBUTIL-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -15 PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-9)[a]25D 50,0 (c, 0,3 CHC13) ; RMN *H (300 MHz, CDCI3) , ô 9,30 (br, 1H) , 7,27 ~ 6,95 (m, 4H) , 6,88 (s, 1H) , 6,73 (d, J ~ 8,00 Hz, 1H), 6,47 (d, 8,01 Hz, 1H) , 4,61 (d, J = 7,66 Hz, 1H), 4,00 (d, J = 7,64 Hz, 1H) , 3,58 ~ 3,54 (m, 1H) , 5 2,97 (s, 3H), 2,88 (s, 3H), 1,65 ~ 1,45 (m, 2H), 0,98 ~ 0,91 (m, 1H) , 0,78 (d, J = 6,63 Hz, 3H) , 0,76 (d, J = 6,53 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180, 98, 170,23, 142, 44, 140,40, 134,35, 133,58, 129,77, 128,68, 127,64, 126,94, 125,64, 121,75, 110,36, 68,84, 64,08, 63,59, 59,50, 38,54, 10 37,22, 36,21, 25,78, 23,38, 21,72; EI/MS, 460 (M++l); HRMS C24H28C12N3O2 ([M+H]+) requerido 460, 1559, encontrado 460, 1551.

EXEMPLO 19

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-2'-ISOBUTIL-2-OXO-4' -FENIL-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-15 CARBOXÍLICO (KE-5)

[a]25D 24,7 (c, 0,8 CHCI3) ; RMN XH (300 MHz, CDCI3) , ô 8,20 (br, 1H), 7,38 ~ 7,01 (m, SH), 6,80 (d, J = 1,86 Hz, 1H) , 6,66 (dd, J = 1,91,-8,10 Hz, 1H) , 6,32 (d, J = 8,13 Hz, 1H) , 4,63 (d, J = 7,12 Hz, 1H) , 3,94 (d, J = 7,18 Hz, 1H) , 20 3, 65 ~ 3,55 (m, 1H), 2,97 (s, 3H), 2,75 (s, 3H) , 1,76 ~ 1,51(m, 2H) , 0,99 ~ 0,88 (m, 1H) , 0,82 (d, J = 6,63 Hz, 3H) , 0,78 (d, J = 6,52 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180, 54, 170,75, 142,16, 138,68, 133,34, 128,78, 128,63, 128,43, 128,30, 127,56, 127,11, 125,85, 121,67, 109,86, 68,75, 64,59, 63,72, 59,87, 38,58, 37,14, 36,23, 25,85, 23,49, 21,74; EI /MS, 426 (M++l); HRMS C24H29CIN3O2 ([M+H]+) requerido 426,1948, encontrado 426,1937.

EXEMPLO 20

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'S,3R,4' S,5' S)6-CLORO-2'-ISOBUTIL-2-OXO-4'-FENIL-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-

CARBOXÍLICO (KE-4)

[a]25D -24,7 (q, 0,8 CHCI3) ; RMN XH (300 MHz, CDCI3), 5 8,20 (br, 1H) , 7,38 ~ 7,01 (m, SH) , 6,80 (d, J = 1,86 Hz, 1H), 6,66 (dd, J = 1,91, 8,10 Hz, 1H) , 6,32 (d, J = 8,13 Hz, 1H), 4,63 (d, J.= 7,12 Hz, 1H) , 3,94 (d, J = 7,18 Hz, 1H) , 3,65 ~ 3,55 (m, 1H) , 2,97 (s, 3H) , 2,75 (s, 3H) , 1,76 ~ 1,51 (m, 2H), 0,99 ~ 0,88 (m, 1H), 0,82 (d, J = 6,63 Hz, 3H) , 0,78 (d, J = 6,52 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180,54, 170,75, 142,16, ' 138,68, 133,34, 128,78, 128,63, 128,43, 128,30, 127,56, 127,11, 125,85, 121,67, 109,86, 68,75, 64,59, 63,72, 59,87, 38,58, 37,14, 36,23, 25,85,23, 49, 21, 74; EI/MS, 426 (M++l); HRMS C24H29CIN3O2 ([M+H]+) requerido 426,1948, encontrado 426,1937.

EXEMPLO 21

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2' R,3S,4' R,5' R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-5 FENIL)-2'-(3-METIL-BUTIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-

3, 3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-16)

[a]25D 25,1 (c, 0,3 CHCI3); RMN XH (300 MHz, CDC13) , õ 8,15 (br, 1H) , 7,21 ~ 7,07 (m, 4H) , 6,81 (s, 1H) , 6,76 (dd, J = 1, 85, 8, 06 Hz, 1H), 6,49 (d, J = 8,08 Hz, 1H) , 4,69

10 (d, J = 7,90 Hz, 1H), 3,96 (d, J = 7,89 Hz, 1H), 3,53 (dd, J = 8,64, 9,19 Hz, l.H), 2,97 (s, 3H) , 2,85 (s, 3H) , 1,68 ~ 1,56 (m, 1H), 1,46 f 1,36 (m, 1H) , 1,30 ~ 1,20 (m, 2H) , 1,11 ~ 0,99 (m, 1H), 0,78 (d, J = 6,46 Hz, 3H), 0,75 (d, J = 6,48 Hz, 3H); RMN 13C (75 MHz, CDC13) õ 180, 00, 170, 08, 141, 83,

15 140,20, 134,45, 133,70, 129,82, 128,73, 127,78, 127,13, 126, 93, 125, 94, 121, 98, 110, 03, 70, 69, 63, 56, 63, 33, 59, 70, 40,43, 37,21, 36,51, 27,86, 27,33, 22,54, 22,15. EI/MS, 474 (M++l); HRMS C25H3oCl2N302 ([M+H]+) requerido 474, 1715, encontrado 474,1714.EXEMPLO 22

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-2'-(2, 2-

DIMETIL-PROPIL)-4'-(3-IODO-FENIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-22)

[a]25D 84,2 (c, 04 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDC13) , Ô 8,79 (br, 1H) , 7,50 (m, 2H) , 7,15 (d, J = 7,68 Hz, 1H) , 6,96 (dd, J = 7,80, 8,10 Hz, 1H), 6,81 (s, 1H), 6,73 (dd, J = 1,59, 8,10 Hz, 1H), 6,40 (d, J = 9,10 Hz, 1H) , 4,52 (d, J = 7,50 Hz, 1H) , 3,96 (d, J = 7,50 Hz, 1H) , 3,50 (d, J = 9,96 Hz, 1H) , 2,98 (s, 3H), 2,91 (s, 3H) , 1,48 (dd, J = 9,90, 14,11 Hz, 1H) , 0, 89-0, 85 (m, 1H) , 0,84 (s, 9H) , RMN 13C (75 MHz, CDC13) :ô 181, 03, 170, 10, 142,37, 141,28, 137, 15, 136,45, 133,54, 129,98, 128,12, 126,60, 125,82, 121,75, 110,28, 94,45, 68,18, 65,17, 64,43, 60,40, 43,17, 37,23, 36, 19, 30, 13, 29, 82; EI/MS, 566 (M++l); HRMS C25H30CIM3O2 ([M+H]+) requerido 566,1071, encontrado 566,1063.

EXEMPLO 23

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2' R,3S,4' R,5'R)6-CLORO-2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-2-0X0-4'-FENIL-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-7)[a]25D 53,3 (c, 0,9 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 7,68 (br, 1H) , 7,28 ~ 7,12 (m, 5H), 6,78 (d, J = 1,84 Hz, 1H), 6,43 (dd, J = 1,88, 8,14 Hz, 1H), 6,23 (d, J = 8,13 Hz, 1H) , 4,60 (d, J = 6,81 Hz, 1H) , 3,92 (d, J = 6,84 Hz, 1H) , 5 3, 53 (d, J = 8,99 Hz, 1H) , 3,39 (br, 1H) , 2,98 (s, 3H) , 2,76 (s, 3H) , 1,48 (dd, J = 9, 64, 14,35 Hz, 1H), 0,97 ~ 0,90 (m, 1H) , 0,86 (s, 9H) , EI/MS, 440 (M} + 1); HRMS C25H30CIN3O2 ([M+H]+ requerido 440,2105, encontrado 440,2102.

EXEMPLO 24

10 DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2/R,3S,4/S,5fS)6-CLORO-2'-(2,2-

DIMETIL-PROPIL)-2-QXQ-4'-FENIL-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -\ PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-14)

[ oc] o -50,6 (c, 0,6 CHC13); CDCI3), ô 7,68 (br, 1H) , 7,28 ~ 7,12 (m,

RMN XH (300 MHz, 5H) , 6,78 (d, J =1,84 Hz, 1H) , 6,43 (dd, J = 1,88, 8,14 Hz, 1H), 6,23 (d, J = 8,13 Hz, 1H) , 4,60 (d, J = 6,81 Hz, 1H) , 3,92 (d, J = 6,84 Hz, 1H) , 3,53 (d, J = 8,99 Hz, 1H) , 3,39 (br, 1H) , 2,98 (s, 3H), 2,76 (s, 3H), 1,48 (dd, J = 9, 64, 14, 35 Hz, 1H) , 0,97 ~ 0,90 (m, 1H) , 0,86 (s, 9H) , EI/MS, 440 (M++l); HRMS C25H3oClN302 ([M+H]+) requerido 440, 2105, encontrado 440,2102.

EXEMPLO 25

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4' -(3,5-DICLORO-FENIL)-2,2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-20)

[a]25D 69,1 (c, 0,6 CHC13); RMN :H (300 MHz, CDC13) , 5 8, 03 (br, 1H) , 7,33 (d, J = 8,00 Hz, 1H) , 7,13 (s, 1H) , 7,12 (dd, J = 1, 84, 7, 95 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 1,85 Hz, 2H) , 6,80 (d, 1,84 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 8,52 Hz, 1H) , 4,48 (d, J = 8,51 Hz, 1H), 3,68 (d, J = 9,12 Hz, 1H) , 3,08 (s, 3H) , 2,96 (s, 3H), 1,44 ~ 1,22 (m, 1H), 0,99 ~ 0,89 (m, 1H), 0,84 (s, 9H) , RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 181, 07, 172, 13, 141, 75, 139,98, 134,69, 134,00, 127,69, 127,04, 126,36, 123,48, 123,11, 110,55, 66,57, 66,08, 61,65, 56,48, 43,34, 37,49, 36,32, 30,15, 29,78.EXEMPLO 2 6

(2' R, 3S, 4' R, 5' R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2' -(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5'-(4-METIL-PIPERAZINA-l-CARBONIL)-1H-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDIN]-2-ONA (KE-27)

[a]25D 88,5 (c, 0,2 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,91 (br, 1H) , 7,18 - 7,14 (m, 3H) , 7,05 ~ 7,02 (m, 1H) , 6,85 (d, J = 1,58 Hz, 1H) , 6,72 (dd, J = 1,61, 8,11 Hz, 1H) , 6,41 (d, J = 8,12 Hz, 1H), 4,50 (d, J = 7,42 Hz, 1H) , 3,99 (d, J = 7,49 Hz, 1H) , 3,68 ~ 3,35 (m, 7H) , 2,41 ~ 2,33 (m, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,47 (dd, J = 9,90, 14,15 Hz, 1H), 1,03 ~ 0,88 (m, 1H) , 0,72 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) S 181,12, 168,55, 142,42, 140,76, 134,47, 133,62, 129,89, 128,73, 127,69, 127,06, 126,42, 125,79, 121,85, 110,30, 67,99, 65,24, 64,27, 58,01, 54,57, 54,29, 45,49, 45,09, 43,08, 42,03, 30,13, 29,79.

EXEMPLO 27

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5' R)6-CLORO-2'-(4-CLORO-FENIL)-4'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5-CARBOXÍLICO (KE-39)[cc]25D 124,0 (c, 0,2 CHC13) ; RMN 1ti (300 MHz, CDCI3) , ô 8,46 (br, 1H) , 7,25 ~ 7,09 (m, 3H) , 7,02 (dd, J = 7, 85, 7, 93 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 6,75 (s, 1H) , 6,43 (d, J = 7,45 Hz, 1 H), 4,31 (s, 1H) , 4,02 (d, J = 6,82 Hz, 1 H) , 5 3, 28 (s, 1H), 3,12 ~ 3,06 (m, 1H) , 3,06 (s, 3H) , 2,96 (s, 3H) , 1,59 (dd, J = 7, 69, 7, 80 Hz, 1H) , 1,23 - 1,18 (m, 1H) , 0,55 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180, 58, 170, 44, 142,54, 137,79, 133,99, 133,84, 129,18, 129,00, 128,19, 126,32, 126,19, 124,28, 122,13, 110,61, 74,67, 66,15, 60,40, 10 50,42, 42,21, 38,88, 37,68, 30,30, 28,90.

EXEMPLO 28

(2' R, 3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-BROMO-FENIL)-6-CLORO-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5'-(MORFOLINA-4-CARBONIL)-1H-ESPIRO[INDOL-3, 3'-PIRROLIDIN]-2-ONA (KE-28)RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,36 (br, 1H) , 7,34 ~ 7,25 (m, 2H) , 7,14 ~ 7,04 (m, 2H), 6,86 (s, 1H), 6,74 (d, J = 7,87 Hz, 1H), 6,44 (d, J = 7,99 Hz, 1H), 4,45 (d, J = 7,64 Hz, 1H), 4,05 (d, J = 7,51 Hz, 1H) , 3,66 ~ 3,23 (m, 9H) 1,53 5 ~ 1,43 (m, 1H), 1,05 ~ 0,90 (m, 1H), 0,85 (s, 9H) .

EXEMPLO 2 9

(2' R, 3S, 4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5'-(MORFOLINA-4-CARBONIL)-1H-ESPIRO[INDOL-3, 3'-PIRROLIDIN]-2-ONA (KE-26)

[a]25D 56,5 (c, 0,2 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDC13) ,

ô 8,76 (br, 1H) , 7,18 ~ 7,15 (m, 3H) , 7,04 - 7,01 (m, 1H) , 6,86 (d, J = 1,86 Hz, 1H) , 6,72 (dd, J = 1,76, 8,10 Hz, 1H) , 6,42 (d, J = 8,13 Hz, 1H) , 4,46 (d, J = 7,57 Hz, 1H) , 4,04 (d, J = 7,55 Hz, 1H), 3,66 ~ 3,30 (m, 9H) , 1,46 (dd, J =

15 9,94, 14,09 Hz, 1H), 1,04 ~ 0,89 (m, 1H), 0,84 (s, 9H); RMN 13C (75 MHz, CDCI3) ô 181, 05, 168, 71, 142, 40, 140, 74, 134, 48, 133,62, 129,90, 128,66, 127,71, 127,08, 126,37, 125,75, 121,84, 110,32. 68,29, 66,78, 66,58, 65,41, 64,26, 57,97, 46,17, 43,02, 30,13, 29,80.EXEMPLO 30

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)4'-(3-BROMO-FENIL)-6-CLORO-2'-(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-23)<formula>formula see original document page 111</formula>RMN XH (300 MHz, CDCI3) , ô 8,73 (br, 1H) , 7,33 ~ 7,28 (m, 2H) , 7,14 - 7,07 (m, 2H) , 6,86 (d, J = 1,79 Hz, 1H), 6,72 (dd, J = 1,86, 8,10 Hz, 1H), 6,40 (d, J = 8,13 Hz, 1H) , 4,54 (d, J = 7,54 Hz, 1H) , 4,00 (d, J = 7,53 Hz, 1H) , 3,50 (d, J = 8,63 Hz, 1H) , 2,92 (s, 3H) , 2,87 (s, 3H) , 1,52 ~ 1,44 (m, 1H) , 0,97 ~ 0,92 (m, 1H) , 0,89 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDCI3) 5 181,49, 170,49, 142,76, 141,68, 134,00, 132,02, 130,95, 130,51, 127,96, 127,02, 126,23, 123,05, 122,24, 110,70, 62,59, 65,62, 64,85, 60,84, 58,59, 43,61, 37,66, 36,62, 30,57, 30,25. EI/MS 518 (M++l); HRMS C25H39BrClN302 ([M+H]+) requerido 518,1210, encontrado 518,1177.

EXEMPLO 31

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2-0X0-2'-PROPIL-1,2-DIIDRQ-ESPIRO[INDOL-3,2'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-30)[a]25D 42,2 (c, 1,0 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDCI3) , ô 9,39 (br, 1H) , 7,16 ~ 7,05 (m, 4H) , 6,87 (s, 1H) , 6,74 (d, J = 7,98 Hz, 1H) , 5,49 (d, J = 8,07 Hz, 1H) , 4,62 (d, J = 7,82 Hz, 1H), 4,00 (d, J = 7,81 Hz, 1H), 3,51 (dd, J = 9,15, 5 9, 27 Hz, 1H) , 2,97 (s, 3H) , 2,74 (s, 3H) , 1,65 ~ 1,44 (m, 2H) , 1,29 ~ 1,18 (m, 2H) , 0,77 (t, J = 7,15 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDCI3) ô 180,89, 170,27, 142,47, 140,30, 134,34, 133,59, 129,75, 128,67, 127,65, 127,21, 126,94, 125,73, 121, 73, 110, 34, 70, 65, 63, 85, 63, 49, 59, 66, 37, 21, 36, 21, 10 31, 92, 20,77, 14, 00; EI/MS, 446 (M++l); HRMS C23H26C12N3O2 ([M+H]+) requerido 446,1402, encontrado 446,1408.

EXEMPLO 32

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-2' -(2,2-DIMETIL-PROPIL)-4'-(3-METÓXI-FENIL)-2-QXQ-l,2-DIIDRO-15 ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-25)

OMe[a]25D 46,9 (c, 0,4 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 7,87 (br, 1H) , 7,34 (d, J = 8,02 Hz, 1H), 7,12 - 6,93 (m, 2H), 6, 74 - 6, 64 (m, 4H) , 4,87 (d, J = 8,60 Hz, 1H) , 4,34

(d, J = 8,55 Hz, 1H) , 3,79 (d, J = 9,09 Hz, 1H) , 3,63 (s, 3H), 2,97 (s, 3H), 2,96 (s, 3H), 1,68 (br, 1H), 1,37 - 1,27

(m, 1H) , 0, 92 0, 88 (m, 1H) , 0,84 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) 5 178, 33, 173,23, 159,20, 141, 99, 137, 60, 133, 54, 129,22, 127,24, 123,59, 122,63, 120,63, 114,03, 112,75, 110,15; EI/MS, 470 (M++l); HRMS C26H33CIN3O3 ([M+H]+) requerido 470,2210, encontrado 470,2222.

EXEMPLO 33

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2fR,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2-0X0-2'-PENTIL-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-19)

<formula>formula see original document page 113</formula>

[a]25D 33,0 (c, 0,3 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,23 (br, 1H) , 7, 23 - 6, 99 (m, 4H), 6,82 (d, J = 1,59 Hz, 1H), 6,76 (dd, J = 1,92, 7,86 Hz, 1H), 6,48 (d, J = 8,10 Hz, 1H) , 4,61 (d, J = 7,81 Hz, 1H) , 3,99 (d, J = 7,80 Hz, 1H) , 3,51 (dd, J = 9, 35, 9, 49 Hz, 1H) , 2,98 (s, 3H) , 2,83 (s, 3H), 1,66 ~ 1,54 (m, 1H) , 1,48 ~ 1,42 (m, 1H) , 1,26 - 1,15(m, 6H), 0,80 (t, J = 6,81 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180,13, 170,17, 140,31, 134,43, 133,65, 129,81, 128,71, 127,73, 127,19, 126,95, 125,88, 121,91, 110,06, 70,93, 63,88, 63,42, 59,71, 37,22, 36,22, 31,67, 29,82, 27,25, 22,39, 13,89; EI/MS, 474 (M++l).

EXEMPLO 34

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)-BUTIL-6-CLORO-4' -(3-CLORO-FENIL)-2-OXO-l,2-DIIDRQ-ESPIRO[INDOL-3, 3' -PIRROLIDINA]-5/-CARBOXÍLICO (KE-18)

[a]25D 20,0 (c, 0,3 CHC13); RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,03 (br, 1H), 7,24 ~ 6,88 (m, 4H) , 6,78 (s, 1H) , 6,76.

(dd, J = 1,90 Hz, 8,08 Hz, 1H) , 6,48 (d, J = 8,10 Hz, 1H),| 4,62 (d, J = 7,83 Hz, 1H) , 3,99 (d, J = 7,83 Hz, 1H) , 3,81

(dd, J = 9,19, 9,51 Hz, 1H) , 2,94 (s, 3H) , 2,84 (s, 3H) , 1,68 ~ 1,52 (m, 1H), 1,45 ~ 1,33 (m, 1H) , 1,31 ~ 1,18 (m, 4H) , 0,75 (t, J = 6,891 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) Ô. 180,30, 170,12, 141,93, 140,29, 134,43, 133,66, 129,81, 128,72, 127,74, 127,17, 126,94, 125,90, 121,93, 110,04, 70,58, 63,80, 63,37, 59,68, 37,36, 36,22, 31,57, 29,68, 22,58,13,82; EI/MS, 460 (M++l).EXEMPLO 35

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6,7-DICLORQ-2/ -ISOBUTIL-2-OXO-4'-FENIL-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-11)

[a]25D 55,7 (c, 0,6 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDC13) ,

ô 7,83 (br, 1H), 7,28 - 7,15 (m, 5H) , 6,75 (d, J = 8,15 Hz, 1H) , 6,19 (d, J = 8,15 Hz, 1H) , 4,61 (d, J = 6,97 Hz, 1H) , 3,93 (d, J = 6,97 Hz, 1H) , 3,60 ~ 3,50 (m, 1H) , 2,94 (s, 3H), 2,74 (s, 3H), 1, 80 - 1, 55 (m, 2H), 0, 90 - 0, 85 (m, 1H) ,

0, 85 (d, J = 6,80 Hz, 3H) , 0,78 (d, J = 6,53 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 179, 16, 170, 50, 140, 27, 138, 57, 131, 44, 128, 77, 128, 47, 127, 98, 127, 74, 123, 62, 122, 90, 1.13, 17, 68,92, 66,92, 65,21, 60,33, 38,51, 36,22, 35,30, 25,89, 23,53, 21,09.

EXEMPLO 36

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL) -2-0X0-2'-(2,2-DIMETILPROPIL)-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-

3, 3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-17)[a]25D 60,9 (c, 0,4 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 9,36 (br, 1H) , 7,35 ~ 6,97 (m, 4H) , 6,90 (s, 1H) , 6,69 (d, J = 8,10 Hz, 1H) , 6,38 (d, J = 8,11 Hz, 1H) , 4,54 (d, J = 47,41 Hz, 1H) , 4,00 (d, J = 7,39 Hz, 1H) , 3,50 (d, J = 9,41 5 Hz, 1H), 3,17 (br, 1H), 2,97 (s, 3H), 2,91 (s, 3H), 1,51 ~ 1,42 (m, 1H) , 0,91 ~ 0,83 (m, 1H) , 0,82 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 181, 37, 170, 16, 142, 63, 141, 05, 134, 33, 133,50, 129,78, 128,64, 128,08, 127,52, 127,04, 126,54, 125,65, 121,65, 110,41, 68,13, 65,22, 64,41, 58,08, 43,10, 10 37,21, 36,19, 30,01, 29,79; EI/MS, 474 (M++l); HRMS C25H30CI2N3O2 ([M+H]+) requerido 474, 1715, encontrado 474, 1713.

EXEMPLO 37

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(4-CLORO-FENIL)-2-0X0-2'-(2,2-DIMETILPROPIL)-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL- 3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-31)EI/MS, 474 (M++l); HRMS C25H30CI2N3O2 ([M+H]+) requerido 474,1715, encontrado 474,1703.

EXEMPLO 38

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4' R,5'R)2'-ISOBUTIL-2-OXO-4' -FENIL-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5' -CARBOXÍLICO (KE-8)

<formula>formula see original document page 117</formula>

6,98 (m,

Hz, 1H) , 6,50 (d, J = 7,41 Hz, 1H) , 4,69 (d, J = 7,47 Hz, 1H), 3,96 (d, J = 7,43 Hz, 1H) , 3,65 ~ 3,60 (m, 1H) , 3,58 (br, 1H), 2,95 (s, 3H) , 2,83 (s, 3H) , 1,67 ~ 1,56 (m, 2H) , 0,98 ~ 0,85 (m, 1H) , 0,75 (d, J = 6,94 Hz, 3H) , 0,73 (d, J = 6,90 Hz, 3H); RMN 13C (75 MHz, CDC13) ' 5 181, 18, 170, 84, 141,27, 138,59, 128,80, 128,33, 127,70, 127,51, 127,24, 124,90, 121,50, 109,39, 68,32, 64,11, 63,93, 60,04, 38,66, 37, 11, 36, 13, 25, 70, 23, 40, 21, 68.

EXEMPLO 3 9

(3-MORFOLINA-4-IL-PROPIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO^ - (3-BROMO-FENIL) -2' - (2 , 2-DIMETIL-PROPIL) -2-QXQ-l, 2-DIIDRO-ESPIRQ[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-40)RMN 1R (300 MHz, CDC13) , ô 8,45 (br, 1H) , 7,40 N 7,20 (m, 2H) , 7,15 ~ 7,00 (m, 2H) , 6,80 (s, 1H) , 6,72 (d, J = 8,34 Hz, 1H) , 6,30 ~ 6,25 (m, 1H) , 4,29 (d, J = 3,92 Hz, 1H) , 3,85 (d, J = 4,04 Hz, 1H) , 3,80 ~ 3,57 (m, 4 H) , 3,56 (d, J = 8,44 Hz, 1H) , 3, 40 - 3,20 (m, 4H), 2, 55 - 2, 35 (m, 6H) , 1,70 ~ 1,60 (m, 2H), 1,55 ~ 1,48 (m, 1H), 0,98 ~ 0,83 (m, 1H) , 0,83 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180, 44, 171,61, 142,14, 141,12, 133,79, 131,58, 130,90, 129,98, 127,50, 126,91, 126,04, 122,77, 121,91, 110,18, 67,25, 66,83, 66,75, 66,11, 63,38, 57,06, 26,78, 53,54, 43,73, 38,24, 30, 15, 29, 95, 29, 82.

EXEMPLO 4 0

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2' -CICLOEXILMETIL-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -15 PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-41)RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,98 (br, 1H) , 7,34 ~ 7,00 (m, 4H), 6,87 (d, J = 1,50 Hz, 1H), 6,73 (dd, J = 1,60, 8,08 Hz, 1H) , 6,43 (d, J = 8,09 Hz, 1H), 4,59 (d, J = 7,56 Hz, 1H) , 3,98 (d, J = 7,54 Hz, 1H) , 3,65 ~ 3,55 (m, 1H) , 2,98 (s, 3H), 2,86 (s, 3H), 1,68 ~ 1,30 (m, 7H), 1,11 ~ 0,85 (m, 4H) , 0,78 (t, J = 10,41 Hz, 1H) , 0,66 ~ 0,55 (m, 1H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180, 80, 170,29, 142, 39, 140, 63, 134,41, 133,57, 129,82, 128,72, 127,67, 126,99, 126,85, 125, 66, 121, 76, 110, 28, 68, 38, 64, 36, 63, 67, 60, 39, 59, 39, 37,22, 36,23, 35,22, 34,17, 32,52, 26,37, 26,15, 25,96.

EXEMPLO 41

(2-MOROFOLIN-4-IL-ETIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2 ' R, 3S, 4 ' R, 5' R) 6-CLORO-4'-(3-BROMO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-43)

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,44 (br, 1H) , 7,29 (d, J = 7,99 Hz, 1H) , 7,26 (s, 1H) , 7,11 ~ 6,96 (m, 3H) , 6,81 (s, 1H) , 6,72 (d, J = 8,08 Hz, 1 H) , 6,33 (d, J = 8,07 Hz, 1H), 4,32 (d, J = 7,15 Hz, 1H) , 3,86 (d, J = 7,13 Hz, 1H) , 3,65 ~ 3,50 (m, 3H), 3,56 (d, J = 9,41 Hz, 1H) , 3,40 - 3,35 (m, 2H), 2, 50 2, 40 (m, 7H) , 1,53 (dd, J = 9, 99, 14, 06 Hz, 1H), 1,28 (br, 1H), 0, 99 ~ 0, 92 (m, 1H) , 0,85 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDCI3) ô 180, 19, 171, 65, 142, 09, 141, 11, 133, 78,131,44, 130,49, 130,00, 127,49, 126,47, 125,87, 122,58, 121, 91, 110, 18, 67, 11, 66, 94, 66, 26, 63, 59, 57, 05, 56, 76, 53,18, 43,85, 35,59, 30,21, 29,88.

EXEMPLO 4 2

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-5-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3f 3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-47)

<formula>formula see original document page 120</formula>

[ct]25D 101,5 (c, 1,1 CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDCI3), ô 8,56 (br, 1H) , 6,95 ~ 6,85 (m, 3H) , 6,83 ~ 6,74 (m, 2H), 6,50 (d, J = 8,10 Hz, 1H) , 4,47 (d, J = 7,97 Hz, 1H), 4,12 (d, J = 7,81 Hz, 1 H), 3,48 (d, J = 9,83 Hz, 1H), 3,10 (s, 3H) , 2,97 (&, 3H) , 1,46 (dd, J = 6,98, 14,11 Hz, 1H), 1,05 ~ 0,98 (m, ' 1H) , 0,84 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDCI3) ô 180, 87, 169, 59, 142, 72, 142, 62, 142,29, 135,23, 133,82, 126,57, 125,61, 124,69, 122,01, 115,39, 114,37, 110,43, 68,66, 65,25, 64,22, 57,94, 43,19, 37,28, 36,18, 30, 17, 29, 84; C^H^C^F^Oz requer C, 60, 98; H, 5,73; N, 8,53; Encontrado C, 61,12; H, 6,14; N, 8,00.EXEMPLO 4 3

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2' R,3S,4' R,5'R)6-CLORQ-4'-(4-CLORO-5-FLÚOR-FENIL)-2' -(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-QXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDQL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-46)

[a]25D 58,0 (c, 0,75 CHC13) ; RMN 2H (300 MHz, CDC13), õ 9,25 (br, 1H) , 7,28 ~ 7,20 (m, 2H) , 7,04 (d, J = 7,67 Hz, 1H), 7,90 (s, 1H) , 6,69 (d, J = 7,94 Hz, 1H) , 6,41 (d, J = 2,82 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 7,60 Hz, 1H), 4,32 (d, J = 7,54 Hz, 1H), 3,48 (d, J = 9,44 Hz, 1H) , 3,02 (s, 3H) , 2,99 (s, 3H), 1,50 - 1,42 (m, 1H), 1,03 ~ 0,95 (m, 1H), 0,82 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) 8 181, 46, 169, 84, 157, 92,

142.78, 133,61,; 129,63, 128,26, 128,07, 127,46, 126,70,

124.79, 124,54, 121,67, 110,47, 68,26, 63,73, 52,27, 42,85, 37, 02, 36, 13, 30, 08, 29,76; C25H28C12FN3O2+ H20 requer C, 58,83; H, 5,92; N, 8,23; Encontrado C, 59,09; H, 5058; N, 8,16.

EXEMPLO 4 4

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]^-CARBOXÍLICO (KE-45)[cc]25d 97,4 (c, 1, CHC13) ; RMN XH (300 MHz, CDCI3) , 5 9,10 (br, 1H) , 7,18 (d, J = 6,16 Hz, 1H) , 7,01 ~ 6,90 (m, 2H) , 6,89 (d, J = 1,75 Hz, 1H), 6,75 (dd, J = 1,80, 8,10 Hz, 1H) , 6,45 (d, J = 8,11 Hz, 1H) , 4,47 (d, J = 7,73 Hz, 1H) , 5 4, 06 (d, J = 7,84 Hz, 1H), 3,49 (d, J = 9,62 Hz, 1 H) , 2,98 (s, 6H) , 1,48 (dd, J = 9,96, 14,18 Hz, 1H), 1,03 ~ 0,89 (m, 1H) , 0,83 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) 5 181, 25, 169, 85, 158,69, 142,49, 135,97, 155,65, 130,51, 128,50, 126,62, 125,62, 121,85, 121,08, 116,75, 110,50, 68,37, 65,47, 64,27, 10 57, 54, 43, 13, 37, 26, 36, 17, 30, 12, 29, 80; C25H28C12FN3O2 requer C,. 60,98; H, 5,73; N, 8,53; Encontrado C, 61,05; H, 6,26; N, 7,97.

EXEMPLO 4 5

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-15 FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-BUTIL)-2-QXQ-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-

3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-48)Ô 8,88 (br, 1H) , 7,17 ~ 7,14 (m, 3H) , 7,05 ~ 7,02 (m, 1H) , 6,88 (d, J = 1,77 Hz, 1H), 6,70 (dd, J = 1,83, 8,11 Hz, 1H) , 6,37 (d, J = 8,13 Hz, 1H) , 4,53 (d, J = 7,38 Hz, 1H) , 4,01 5 (d, J = 7,41 Hz, 1H), 3,49 (d, J = 9,41 Hz, 1H) , 2,98 (s, 3H) , 2,92 (s, 3H), 1,45 (dd, J = 9,87, 14,17 Hz, 1H) , 1,28

{ (br, 1H), 1,20 ~ 1,16 (m, 2H), 0,92 ~ 0,87 (m, 1H), 0,78 (s,

<formula>formula see original document page 123</formula>6H) , 0,62 (t, J = 7,51 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 181,18, 170,13, 142,46, 141,13, 134,39, 133,55, 129,82,

10 128,68, 127,57, 127,08, 126,54, 125,78, 121,74, 110,32, 67,90, 65,36, 64,47, 58,05, 40,79, 37,22, 36,20, 34,15, 32,57, 27,15, 26,91, 8,22.

EXEMPLO 4 6

DÍMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(6-BROMO-15 PIRIDIN-2-IL)-2' -(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-

ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-50)

BrRMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,37 (br, 1H) , 7,25 ~ 7,23 (m, 2H), 6,81 ~ 6,77 (m, 4H) , 5,04 (d, J = 8,34 Hz, 1H) , 4,17 (d, J = 8,41 Hz, 1H) , 3,67 (d, J = 9,17 Hz, 1H) , 3,09 (s, 3H), 2,96 (s, 3H) , 1,73 (br, 1H) , 1,50 (dd, J = 9,99, 14,10 Hz, 1H), 0,99 ~ 0,90 (m, 1H), 0,87 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDCI3) 5 181,25, 170, 60, 159, 68, 141, 96, 141, 14, 138,80, 133,38, 127,06, 126,98, 126,36, 123,62, 121,98, 109,88, 69,70, 64,79, 64,11, 60,08, 42,97, 37,32, 35,92, 30,19, 29,84.

EXEMPLO 4 7

1' -METIL-2'-(2-METIL-PROPENIL)-4'-FENIL-1H-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-2-ONA (KE-13)

Uma mistura de 3-E-3-benzilideno-l,3—diidro-indol-2-ona (10,0 mmols), N-metil-glicina (14 mmols) e 2-metil-but -2-enal (14 mmols) em 100 mL de tolueno foi refluxada por 6 horas. O solvente foi removido e o resíduo foi purificado em coluna de silica-gel para render o produto

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,06 (br, 1H) , 7,28 (d, J = 8,01 Hz, 1H) , 7,10 ~ 6,95 (m, 4H) , 6,74 N 6,67 (m, 4H) , 5,72 (s, 1H) , 4,15 (m, 1 H) , 3,48 (dd, J = 5,51, 12,01 Hz, 1H) , 2,71 ~ 2,61 (m, 1H), 2,32 (dd, J = 5,31, 18,54 Hz, 1H) , 2,05 (s, 3H) , 1,84 (s, 6H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) 5 180,61,143,07, 138,56, 135,89, 133,75, 128,14, 127,78, 127,55, 127,32, 127,10, 121,45, 120,85, 110,33, 67,38, 57,30, 47,31, 43,06, 34,77, 23,09, 14,19.

EXEMPLO 48

6-CLORO-l'-METIL-2'-(2-METIL-PROPENIL)-4'-FENIL-1H-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-2-QNA (KE-2)

Usando um método similar ao do Exemplo 47, este composto foi sintetizado.

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 7,56 (br, 1H) , 7,28 (d, J = 8,04 Hz, 2H) , 7,13 ~ 7,02 (m, 4H) , 6,72 ~ 6,67 (m, 3H) , 5,73 (s, 1H), 3,49 (dd, J = 5,46, 12,21 Hz, 1H), 2,65 (dd, J = 12, 64, 17, 30 Hz, 1H) , 2,32 (dd, J = 3,21, 18,31 Hz, 1H) , 2,08 (s, 6H) , 1,91 (s, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180,21, 142,86, 138,57, 135,89, 133,75, 128,17, 127,81, 127,64, 127,33, 127,11, 121,52, 120,75, 110,20, 67,40, 57,33, 47,33, 43,15, 34,74, 23,12.

EXEMPLO 4 9

ESTER TER-BUTÍLICO DO ÁCIDO 1'-METIL-2'-(2-METIL-PROPENIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3' -PIRROLIDINA]-4' -CARBOXÍLICO (KE-3)Usando um método similar ao do Exemplo 47, este composto foi sintetizado.

RMN 1H (300 MHz, CDC13) , 5 8, 53 (br, 1H) , 7,42 (d, J = 7,40 Hz, 1H) , 7,20 (td, J = 1,27, 7, 69 Hz, 1H) , 6,99 5 (td, J = 0, 97, 7, 53 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 7,66 Hz, 1H) , 4,42 (dt, J = 1, 33, 9, 32 Hz, 1H) , 3,85 (dd, J = 5,51, 9,72 Hz, 1H) , 3,66 (dd, J = 5, 49, 10, 80 Hz, 1H) , 3,58 (d, J = 9,32 Hz, 1H), 2,70 (t, J = 9,87 Hz, 1H), 2,28 (s, 3H) , 1,63 (d, J = 1,23 Hz, 3H), 1,49 (d, J = 1,20 Hz, 3H), 0,95 (s, 9H); RMN 10 13C (75 MHz, CDC13) ô 179, 44, 169, 54, 141, 21, 138, 48, 129, 20, 127,89, 126,16, 122,15, 120,52, 108,86, 80,80, 71,64, 60,95, 54,48, 49,94, 39,97, 27,17, 26,05, 18,48.

EXEMPLO 50A uma solução de éster etílico do ácido (2-oxo-1,2-diidro-indol-3-ilideno)-acético e o complexo formado por 2-bromo-l-fenil-etanona e 3,4-diidro-isoquinolina (um sal) em CH2CI2, Et3N foi adicionado. A solução resultante foi 5 agitada à temperatura ambiente durante a noite. 0 solvente foi removido e o resíduo foi purificado em coluna de sílica-gel para render o produto.

RMN XH (300 MHz, CDCI3) , ô 8,13 (br, 1H) , 8,10 (d, J = 1,47 Hz, 1H), 8,07 (d, J = 7,58 Hz, 1H), 7,63 - 7,59 (m,

1H), 7,55 ~ 7,49 (m, 2H) , 7,44 (s, 1H) , 7,32 (d, J = 7,62 Hz, 1H) , 7,21 ~ 7,16 (m, 1H) , 7,08 ~ 7,05 (m, 1H) , 6,86 ~ 6,80 (m, 2H) , 6,16 (d, J = 7,65 Hz, 1H) , 5,42 (d, J = 7,38 Hz, 1H) , 5,19 (s, 1H) , 4,27 (d, J = 7,35 Hz, 1H) , 3,89 ~ 3,76 (m, 3H) , 3,22 ~ 3,15 (m, 1H) , 2,96 (d, J = 5,14 Hz,

1H) , 2,95 (d, J = 5,83 Hz, 1H) , 0,76 (d, J = 7,15 Hz, 3H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) S 197, 64, 180,02, 169,25, 140, 69, 137,00, 134,62, 133,07, 132,50, 130,99, 128,57, 128,50, 128,33, 126,91, 126,31, 125,65, 124,68, 123,19, 109,10, 71,09, 70,71, 63,02, 60,55, 55,12, 46,76, 28,97, 26,95, 13,49.

EXEMPLO 51

<formula>formula see original document page 127</formula>Usando um método similar ao do Exemplo 50, este composto foi sintetizado.

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,25 (br, 1H) , 7,51 (d, J = 7,26 Hz, 2H), 735 ~ 7,22 (m, 3H), 7,01 ~ 6,95 (ri, 5H) , 5 6, 95 ~ 6,89 (m, 3H) , 5,15 (d, J = 3,90 Hz, 1H) , 4,18 (dd, J = 4,15, 9,09 Hz, 1H), 3,93 (d, J = 9,10 Hz, 1H) , 3,57 (s, 1H), 3,37 ~ 3,30 (m, 1H), 3,18 ~ 3,15 (m, 1H), 2,90 N 2,80 (m, 2H) , 0,78 (s, 9H) .

EXEMPLO 52

Este composto foi preparado por hidrogenação do

composto do Exemplo 50.

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 7,93 (br, 1H) , 7,57 ~ 7,42 (m, 3H), 7,35 ~ 7,23 (m, 4H), 7,11 ~ 6,93 (m, 3H), 6,76 ~ 6,67 (m, 2H) , 6,08 (d, J 7,70 Hz, 1H), 5,41 (s, 1H), 5,24

(d, J = 5,83 Hz, 1H), 4,60 (t, J ~ 5,89 Hz, 1H) , 4,10 ~ 4,03 (m, 1H) , 4,04 (q, J = 7,14 Hz, 2H) , 3,24 - 3,20 (m, 1H) , 3,12 - 3,03 (m, 1H), 2,98 (d, J = 5,88 Hz, 1H) , 2,89 ~ 2,81 (m, 1H), 2,55 ~ 2,50 (m, 1H), 0,93 (t, J = 6,40 Hz, 3H); RMN 13C (75 MHz, CDCI3) ô 178, 51, 170, 99, 141, 75, 137, 37, 134, 08,128,96, 128,29, 128,15, 127,54, 127,17, 126,34, 125,80, 125,65, 124,98, 124,43, 122,60, 109,65, 70,84, 69,22, 67,95, 61,06, 60,60, 44,58, 26,92, 22,64, 13,74.

EXEMPLO 53 5 KE-6

Este composto foi preparado por hidrogenação do Exemplo 51.

RMN 1H (300 MHz, MeOH-d6) , ô 7,65 ~ 7,42 (m, 6H) , 7,23 ~ 7,18 (m, 3H) , 6,96 ~ 6,93 (m, 2H) , 6,23 (d, J _ 7,85 10 Hz, 1H), 6,00 (s, 1H), 5,42 (d, J = 6,62 Hz, 1H), 5,28 (t, J = 6,16 Hz, 1H), 3,59 ~ 2,83 (m, 6H), 1,46 (s, 9H) .

EXEMPLO 54

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,35,4'R,5'R)6-CLORO-4'-CICLOEXIL-2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-2-0X0-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -15 PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (G-51)RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 9,05 (s, 1H) , 7,26-6,79 (m, 4H) , 3,72 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 3,26 (d, J = 8,3, 1H) , 3,11-2,95 (m, 2H), 2,89 (d, J = 4,5 Hz, 3H), 2,50 (t, J = 3,3 Hz, 1H) , 2,29 (br, 1H) , 1,93 (s, 1H) , 1,70 (s, 1H) , 1,43-1,21 (m, 5H), 1,19-0,85 (m, 3H) , 0,74 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDCI3) ô 182,36, 176,77, 142,27, 133,62, 128,30, 125,29, 122,09, 110,62, 67,30, 67,14, 61,70, 57,76, 43,20, 38, 51, 34, 61, 32, 77, 31, 54, 30, 64, 30, 02, 29, 71, 26,29, 26,02, 25,69.

EXEMPLO 55

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2/R,3S,4/R,5/R)6-CLORO-4' -CICLOPENTIL-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (G-52)

H

RMN XH (300 MHz, CDCI3) , ô 9,12 (s, 1H) , 7,26-6,97 (m, 4H), 4,13 (d, J = 7,1 Hz, 1H) , 3,68 (d, J = 7,7 Hz, 1H) , 3,11-2,95 (m, 2H), 2,97 (s, 3H), 2,62 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 1, 92-1, 86 (m, 2H) , 1,61-1,08 (m, 711), 0,75 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDCI3) ô 182,52, 174,10, 142,48, 133,71, 128,60, 125,65, 122,26, 110,57, 68,98, 66,47, 61,94, 59,09, 43,50, 41,58, 31,59, 31,45, 30,84, 30,06, 26,29, 25,48, 24,63.EXEMPLO 56

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLQRQ-4' -CICLOEXILMETIL-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l, 2-DIIDRO-ESPIR0[IND0L-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (G-53)

RMN 1H (300 MHz, CDC13) , ô 9,33 (s, 1H) , 7,10-6,85

(m, 4H) , 3,76 (s, 1H) , 3,31-2,95 (m, 10H) , 2,56 (s, 1H) , 1, 83-1, 54 (m, 6H), 1,31-1,09 (m, 6H) , 0,85 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 182,80, 170,32, 142,54, 133,86, 129,02, 121,86, 116,72, 110,48, 76,60, 63,54, 69,48, 51,01, 43,29, 37,86, 37,53, 35,96, 35,50, 32,86, 32,13, 30,09, 29,82, 26,36, 26,12.

EXEMPLO 57 ; DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-0X0-4'-PIRIDIN-2-IL-1,2-DIIDRO-

ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (G-56)<formula>formula see original document page 132</formula>

RMN 1H (300 MHz, CDC13) / ô 9,13 (s, 1H) , 8,61 (t, J

= 2,2 Hz, 1H), 7,38 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 7,07 -7,03 (m, 1H), 6,86 (d, J = 2,1 Hz, 1H) , 6,78 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 6,63-6,60 (m, 1H) , 6,50 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5,23 (d, J =7,8 Hz, 5 1H) , 4,12 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 3,51 (d, J = 9,3 Hz, 1H) , 3,0-2,92 (m, 6H), 1, 50-1, 32 (m, 1H), 0,88 (m, 1H) , 0,82 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 181, 80, 171, 13, 158, 49, 148,66, 142,33, 136,51, 133,12, 127,04, 126,30, 125,74, 124,29, 122,19, 121,56, 109,97, 68,86, 64,88, 63,77, 59,85, 10 53,41, 42,76, 37,08, 35,91, 31,55, 30,43.

EXEMPLO 58

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R) 6-CLORO-2J' -(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-0X0-4'-TIOFEN-2-IL-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (G-57)RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,38 (s, 1H) , 7,10 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6, 80-6, 35 (m, 5H), 4,48 (d, J = 7.0 Hz, 1H) , 4,27 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 3,51 (d, J = 9,3 Hz, 1H) , 2,98 (d, J = 7,8 Hz, 6H), 1, 52-1, 44 (m, 1H), 1,31-1,23 (m, 1H) , 0,84 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) 5 180, 64, 169, 93, 142, 30, 142,09, 133,58, 127,06, 126,73, 126,20, 125,34, 124,30, 121,83, 110,05, 67,69, 67,52, 64,34, 53,28, 43,05, 37,09, 36,21, 31,57, 30,15, 29,82.

EXEMPLO 59

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)4'-(3-BROMQ-FENIL)-2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, V -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (G-58)

RMN 1H (300 MHz, CDCI3) , 8 8, 75 ;(br, 1H) , 7,30 ~ 7,27 (m, 2H) , 7,08 ~ 7,03 (m, 3H) , 6,83 (d, J = 7,63 Hz, 1H), 6,74 (dd, J = 7,45, 7,49 Hz, 1H), 6,53 (d, J = 7,45 Hz, 1H) , 4,55 (d, J = 7,68 Hz, 1H) , 4,02 (d, J = 7,67 Hz, 1H) , 3,54 (d, J = 9,14 Hz, 1H) , 3,21 (br, 1H) , 2,98 (s, 3H) , 2,93 (s, 3H), 1,54 ~ 1,46 (m, 1H) , 1,03 ~ 0,92 (m, 1H) , 0,82 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 161,22, 170,23, 141, 42, 141,19, 131,61, 130,22, 129,85, 128,25, 127,75, 127,56, 124,93, 122,40, 121,75, 109,60, 68,09, 65,06, 64,65, 58,32, 43,25, 37,22, 36,14, 30,12, 29,80.`EXEMPLO 60

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-2' -(2,2-DIMETIL-PROPIL)-4'-(1-METIL-1H-PIRROL-2-IL)-2-QXQ-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (G-84)

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,33 (s, 1H) , 6,88 (s, 1H) , 6,71 (d, J = 7 Hz, 1H), 6, 38-6, 08 (m, 4H), 4,56 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 4,01 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 3,43 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 3,14 (s, 3H), 3,05 (s, 3H), 2,90 (s, 3H) , 1,41-1,27 (m, 1H) , 0,92 ~ 0,90 (m, 1H) , 0,89 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180,62, 170,48, 148,61, 133,57, 130,31, 126,26, 123,71, 122,62, 122,21, 109,66, 107,37, 106,90, 67,50, 65,41, 63,44, 48,36, 42,25, 37,25, 36,23, 34,64, 33,17, 30,09, 29,80. !

EXEMPLO 61

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-0X0-4'-PIRIDIN-4-IL-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,V -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (G-83)RMN 1R (300 MHz, CDC13) , ô 8,91 (s, 1H) , 8,39 (d, J = 10 Hz, 2H), 7,53 (d, J = 7 Hz, 1H) , 7,34 (d, J = 7 Hz, 1H) , 7,08 (d, J = 7,1 Hz, 2H) , 6,75 (s, 1H) , 4,89 (d, J = 8,10 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 8,12 Hz, 1H) , 3,75 (d, J = 9,32 Hz, 1H), 3,04 (s, 3H), 2,91 (s, 3H), 1,31-1,27 (m, 1H), 0,90 ~ 0,86 (m, 1H) , 0,85 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô (ppm) 178,60, 172,67, 149,87, 148,85, 142,78, 136,81, 134,41, 126,71, 123,92, 123,80, 123,20, 110,92, 66,75, 66,39, 61,60, 55,46, 43,84, 37,91, 36,72, 30,59, 30,22.

EXEMPLO 62

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-2'-(2 , 2-DIMETIL-PROPIL)-2-0X0-4'-PIRIDIN-3-IL-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (G-82)

RMN XH (300 MHz, CDCI3) , ô 9,08 (s, 1H), 8,45 (d, J = 7 Hz, 2H), 7,44-6,42 (m, 5H), 4,58 (d, J = 7 Hz, 1H), 4,16 (d, J = 8 Hz, 1H), 3,53 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 2,98 (d, J = 6 Hz, 6H) , 1, 53-1, 43 (m, 1H) , 0,90 ~ 0,85 (m, 1H) , 0,84 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDCI3). ô 181, 44, 170,26, 150, 07, 148, 90, 143, 03, 136, 76, 135, 03, 134, 09, 127, 09, 126, 17, 123,83, 122,27, 110,85, 68,98, 65,34, 64,07, 56,55, 43,58, 37,72, 36,60, 31,99, 30,59, 30,25.EXEMPLO 63

METILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5' R)6-CLORQ-2'-(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-4'-FURAN-3-IL-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (G-81)

(m, 5H), 6,01 (s, 1H), 4,08 (d, J = 7,50 Hz, 1H), 3,75 (d, J = 7,50 Hz, 1H) , 3,42 (d, J = 9,00 Hz, 1H) , 2,99 (s, 3H) , 1, 53-1, 43 (m, 1H) , 0,91 ~ 0,86 (m, 1H) , 0,84 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) 5 181,26, 173, 14, 143, 63, 142, 69, 140, 61, 134,18, 127,30, 126,60, 123,45, 123,41, 111,25, 110,62, 67,97, 66,08, 62,96, 48,57, 44,09, 30,57, 30,35, 26,60.

METILAMIDA DO ÁCIDO (2' R,: 3S, 4' R, 5' R) 6-CLORO-2' - (2, 2-DIMETIL-PROPIL)-A'-FURAN-2-IL-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 9,01 (s, 1H) , 7,30-6,56

EXEMPLO 64

PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (G-80)

H

RMN *H (300 MHz, CDC13) , ô 8,98 (s, 1H) , 7,43 (J = 4,8 Hz, 1H), 7,13 ~ 6,74 (m, 3H), 6,10 ~ 6,05 (m, 2H) , 4,47(d, J = 9,30 Hz, 1H) , 4,17 (d, J = 9,35 Hz, 1H) , 3,67 (d, J= 8,00 Hz, 1H) , 2,89 (d, J = 4,90 Hz, 3H) , 1, 39-1,24 (m,1H), 0,93 ~ 0,85 (m, 1H) , 0,88 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz,CDC13) ô 178,45, 173,65, 151,36, 142,40, 142,15, 134,26,5 126,04, 125,88, 122,33, 111,11, 110,49, 107,83, 65,77,65,20, 64,01, 52,45, 45,11, 32,00, 30,57, 30,36, 26,48.

EXEMPLO 65

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2' R,3S,4 ' R, 5' R)4'-(3-BROMO-FENIL)-2'-(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-6-METÓXI-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-10 3, 3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-61)

RMN 1H (300 MHz, CDC13) , 5 8, 55 (s, 1H) , 7,30 (d, J= 7,1 Hz, 2H) , 7,08 (d, J = 3,9 Hz, 2H), 6, 43-6,23 (m, 3H) ,4,50 (d, J = 6,6 ;Hz, 1 H) , 3,95 (d, J = 7,3 Hz, 1H) , 3,73(s, 3H) , 3,48 (d,- J = 8,3 Hz, 1H) , 2,97 (s, 3H) , 2,90 (s,15 3H) , 1,51-1,43 (m, 1H) , 1,28 (m, 1H) , 0,83 (s, 9H) ; RMN 13C(75 MHz, CDCI3) ô 182,11, 170,81, 159,97, 142,78, 142,25,132, 10, 130, 64, 130, 32', 128, 08, 126, 09, 122, 86, 120,31,107,33, 97,00, 68,46, 65,74, 64,75, 58,54, 55,72, 43,63,37, 64, 36, 56, 31, 99, 30, 59, 30, 30.`EXEMPLO 66

(2-MORFOLIN-4-IL-ETIL) -AMIDA DO ÁCIDO ( 2' R, 3S, 4 ' R, 5' R) 6-(CLORQ-4'-(3-CLORO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDR0-ESPIR0[IND0L-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-79)

ò

N

[a]25D 45,29 (c, 0,17 CHC13) ; RMN 1tt (300 MHz,CDC13), ô 8,33 (s, 1H) , 7,17-7,10 (m, 4H) , 6,95 (d, J = 4,4Hz, 1H) , 6,81 (dd, J, = 8 Hz, J2= 1,6 Hz, 1H), 6,70 (d, J =1,8 Hz, 1H) , 6,31 (d, J = 8 Hz, 1H) , 4,33 (d, J = 7,1 Hz,1H) , 3,88 (d, J = 7,12 Hz, 1H), 3, 67-3,60 (m, 4H) , 3,57 (d,J = 8,1 Hz, 1H), 3, 43-3, 40 (m, 2H), 2,71-2,28 (m, 7H) , 1,53-1,43 (m, 1H>, 1,29-1,21 (m, 1H) , 0,85 (s, 9H) ; RMN 13C (75MHz, CDC13): ô 180,82, 172,17, 142,67, 141,28, 134,76,134, 18, 130, 15, 128, 98, 127, 98, 127, 46, 126, 92, 126, 25,122,29, 110,66, 67,51, 67,33, 66,65, 64,03, 57,47, 57,20,53, 61, 44, 28, 36, 04, 31, 99, 30, 63, 30, 50, 30, 31; C29H30C12N4O3+ 0,5 H20 requer C, 61,26; H, 6,56; N, 9,85; Encontrado C,61,38; H, 7,08; N, 9,50.

EXEMPLO 67

(2-MORFOLIN-4-IL-PROPIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO^' - (3-CLORO-FENIL) -2' - (2, 2-DIMETIL-PROPIL) -2-OXO-l, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-78)RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,57 (s, 1H) , 7,29 (s,1H), 7,28-7,10 (m, 3H) , 6, 96-6, 93 (m, 1H), 6,80 (d, J = 1,6Hz, 1H) , 6,68 (dd, Ji = 7,3 Hz, J = 1,6 Hz, 1H) , 6,27 (d, J= 8,1 Hz, 1H) , 4,28 (d, J = 6,9 Hz, 1 H) , 3,87 (d, J = 7,35 Hz, 1H) , 3, 86-3, 67 (m, 4H) , 3,35 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 3,89-3,34 (m, 2H) , 2, 43-2, 37 (m, 6H) , 1, 72-1, 68 (m, 2H) , 1,53-1,48 (m, 1H) , 1, 29-1,26 (m, 2H) , 0,84 (s, 9H) ; RMN 13C (75MHz, CDCI3) 5 180,91, 172,08, 142,67, 141,34, 134,76,134, 19, 130, 13, 129, 08, 127, 99, 127, 49, 126, 76, 126, 31,10 122,29, 110,63, 67,79, 67,35, 66,62, 63,80, 57,47, 57,41,54,10, 44,15, 38,83, 31,99, 30,59, 30,40, 30,26.

EXEMPLO 68

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-2' -(2,2-DIMETIL-PROPIL)-4-(3-FLÚOR-FENIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-15 ESPIRO[INDOL-3,3-PIRROLIDINA]-5-CARBOXÍLICO (KE-75)

<formula>formula see original document page 139</formula>RMN 1H (300 MHz, CDC13) , ô 8,59 (s, 1H) , 7,29-7,20(m, 1H), 6, 98-6, 87 (m, 4H) , 6,68 (dd, Jx = 7,8 Hz, J2 = 1,7Hz, 1H), 6,35 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,56 (s, 1H) , 4,01 (d, J= 6,1 Hz, 1H), 3,50 (m, 1H) , 3,03 (s, 3H) , 2,91 (s, 3H) ,1,51-1,45 (m, 1H), 1,29-1,26 (ra, 2H) , 0,84 (s, 9H) ; RMN 13C(75 MHz, CDCI3) ô 180, 91, 170,20, 164, 33, 161, 06, 142, 33,141,71, 133,51, 130,20, 126,54, 125,66, 121,75, 115,74,114,49, 110,19, 68,14, 65,34, 61,36, 43,12, 37,16, 36,19,31,89, 30,13, 29,82.

EXEMPLO 69

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'S,5'R)6-CLORO-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-4-(2,3-DIFLÚOR-FENIL)-2-OXO-l, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3-PIRROLIDINA]-5-CARBOXÍLICO (KE-74)

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,21 (s, 1H) , 7,40 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,10 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,94-6,77 (m, 3H) , 4,98 (d, J = 8,45 Hz, 1H) , 4,80 (d, J = 8,6Hz, 1H), 3,78 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 3,01 (s, 3H) , 2,97 (s,3H) , 1,31-1,27 (m, 3H) , 0,84 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13)ô 178,77, 172,84, 148,09, 142,12, 134,23, 126,61, 126,54,124,72, 124,07, 116,51, 116,28, 110,47, 67,08, 66,23, 61,98,48, 40, 43, 87, 37, 77, 36, 70, 35, 0.6, 31, 99, 30, 58, 30, 21.EXEMPLO 7 0

(2-DIETILAMINO-ETIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'S,5'R)6-CLORO-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-4-(2-CLORO-3-FLÚOR-FENIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3-PIRROLIDINA]-5-CARBOXÍLICO (KE-73)

5 RMN XH (300 MHz, CDCI3) , ô 8,55 (s, 1H) , 7,50 (m,

1H) , 7,18 (t, J = 2,4 Hz, 1H) , 7,08 (t, J = 3,2 Hz, 1H) ,6,86 (s, 1H) , 6,64 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 6,26 (d, J = 3,4 Hz,1H) , 4,43 (d, J = 3,2 Hz, 1H) , 4,25 (d, J = 2,5 Hz, 1H) ,4,43 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 4,16 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 3,60-

10 3,51 (m, 2H), 3,41 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,40-2,91 (ra, 6H),1, 48-1, 43 (m, 2H), 1,19-1,14 (t, J = 6,8 Hz, 6H) , 0,79 (s,9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 181, 59, 177, 47, 172, 58,143,39, 134,01, 129,76, 127,48, 126,92, 125,51, 124,85,121,99, 110,70, 67,90, 66,56, 63,64, 53,01, 51,62, 43,60,

35,88, 31,99, 30,54, 23,26, 23,05.

EXEMPLO 71

METILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORQ-2'-(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-4-(3-CLORO-FENIL)-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3-

PIRROLIDINA]-5-CARBOXÍLICO (KE-71)RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 181,25, 170, 16, 142, 89,134,06, 133,01, 128,70, 128,49, 126,82, 125,59, 125,37,125,21, 122,21, 110,62, 68,94, 64,30, 64,09, 52,99, 43,32,37,48, 36,55, 30,58, 30,25.

EXEMPLO 72

(2-MORFOLIN-4-IL-ETIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'S,5'R)6-CLORO-4 ' -(3-BROMO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

(KE-90)

<formula>formula see original document page 142</formula>RMN 1ti (300 MHz, CDC13) , ô 7,99 (m, 1H) , 7,10-6,90(m, 4H), 6,78 (s, 1H), 3,73-3,67 (m, 4H), 3,42-3,39 (m, 3H),3,01-2,96 (m, 1H) , 2, 56-2, 49 (m, 611), 2,3-2,2 (m, 2H) ,1,51-1,47 (m, 1H), 1,27-1,18. (m, 3H) , 0,87 (s, 9H) ; RMN 13C(75 MHz, CDCI3) ô 179,40, 174,02, 142,20, 134,24, 126,74,142

125,84, 122,70, 111,22, 68,96, 67,92, 67,25, 65,40, 57,64,53,84, 49,27, 44,95, 44,58, 35,50, 30,59, 30,11, 29,90.

EXEMPLO 73

DIMETILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'S,5'R)6-CLORO-2'-(2,2- DIMETIL-PROPIL)-4-(3-BROMO-2-FLÚOR-FENIL)-2-OXO-l, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3-PIRROLIDINA]-5-CARBOXÍLICO (KE-91)

(m, 1H) , 6, 986, 90 (m, 1H) , 6,82 (s, 1H) , 6,69 (d, J = 6,5

Hz, 1H), 6,41 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 4,60-4,53 (m, 1H), 4,35

(d, J = 7,4 Hz, 1H), 3,43-3,34 (m, 1H), 3,05 (s, 3H), 3,00

(s, 3H) , 1,51-1,45 (m, 1H) , 1, 30-1,25 (m, 2H), 0,86 (s, 9H) .

(3-MORFOLIN-4-IL-PROPIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R, 3S, 4 ' S, 5' R)6-METIL-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2- OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5-CARBOXÍLICO

RMN 1H (300 MHz, CDC13), 5 7,65

(s, 1H), 7,39-7,24

EXEMPLO 74

(KE-92)

HRMN XH (300 MHz, CDCI3) , ô 7, 70-7, 00 (m, 5H) , 6,62(s, 1H) , 6,49 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 6,20 (d, J = 7. 8 Hz, 1H) , 4,40 (d, J = 7,7 Hz, 1 H) , 4,07 (d, J = 7,8 Hz, 1H) ,3,82 (m, 4H), 3, 52-3, 34 (m, 3H), 2,62 (m, 6H), 2,24 (s, 3H) ,1,85 (m, 2H), 1, 54-1, 46 (m, 1H), 0,98-0,91 (m, 2H) , 0,87 (s,9H); RMN 13C (75 MHz, CDC13) 5 181, 12, 172, 46, 141, 51,138,67, 129,71, 129,01, 128,81, 127,87, 124,71, 124,65,124,50, 123,04, 121,81, 110,73, 66,64, 66,17, 63,08, 57,03,53,74, 51,37, 43,76, 38,18, 30,56, 30,22, 30,10.

EXEMPLO 75

(3-MORFOLIN-4-IL-PROPIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2' R, 3' S, 4 ' R, 5'R) 6-CLORO-4'-2,2-DIMETIL-PROPIL-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-1, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

(KE-93)

RMN 1H (300 MHz, CDCI3) , 5 8, 53 (s, 1H) , 7,54 (m,1H) , 7,10-6,95 (m, 2H) , 6,94 (s, 1H) , 4,20-4,11 (m, 4H) ,3,43-3,15 (m, 4H) , 2, 65-2, 34 (m, 6H) , 2,29 (m, 1H) , 1,76-1,18 (m, 7H) , 0,76 (s, 9H) , 0,55 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz,CDCI3) ô 182,24, 142,81, 134,08, 129,13, 127,09, 122,46,110,81, 68,70, 67,44, 64, 53, 62,82, 57,80, 54,12, 49,41,`43,97, 43,03, 39,30, 38, 99, 31,99, 30,64, 30,52, 30,21,29,39, 25,74.

EXEMPLO 7 6

METILAMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-2,2-DIMETIL-5 PROPIL-2/ -(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-

ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-94)

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,90 (s, 1H) , 7,10-6,90(m, 3H), 3,52 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 3,25 (d, J = 7,5 Hz, 1H) ,2,88 (d, J = 4,5 Hz, 3 H), 2,54 (m, 1H), 2,30 (m, 1H), 1,64-10 1,45 (ra, 3H), 1,27 (m, 2H), 0,76 (s, 9H), 0,56 (s, 9H); RMN13C (75 MHz, CDC13) ô 182, 51, 173, 37, 142, 95, 134, 13, 129,05,127,14, 122,47, 110,96, 71,11, 68,01, 62,60, 48,92, 44,09,42,88, 39,81, 31,99, 30,60, 30,51, 30,20, 29,35, 26,43.

EXEMPLO 77

15 (3-MORFOLIN-4-IL-PROPIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'S,5'R)6—CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-BUTIL)-2-QXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5' -CARBOXÍLICO

(GM-29)RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,23 (s, 1H) , 7,39-7,21(m, 3H), 7,05 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 6,68(d, J =8,1 Hz, 1H), 6,30 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,40 (d, J = 7,90 Hz,1H) , 4,09 (d, J = - 7,6 Hz, 1H), 3,81-3,67 (m, 4H), 3,54-5 3,31 (m, 3H) , 2, 62-2, 34 (m, 6H) , 1, 75-1, 69 (m, 2H) , 1,51-,145 (m, 1H) , 1,24-1,20 (m, 2H) , 1,18-1,10 (m, 2H) , 0,76-0,70 (m, 6H), 0,57-,061 (m, 3H).

EXEMPLO 78

(3-MORFOLIN-4-IL-PROPIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4S,5'R)6- CLORO-4'—(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PENTIL)-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5' -CARBOXÍLICO

(KE-101)

RMN 1H (300 MHz, CDC13) , ô 7,89 (s, 1H) , 7,74-6,09(m, 3H) , 6,83 (s, 1H) , 6,68 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 6,27 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 4,40 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 4,08 (d, J = 7,5Hz, 1H) , 3,77 (m, 4H), 3, 50-3, 36 (m, 5H), 2,54 (m, 7H), 1,78(m, 2H), 1,51-1,47 (m, 1H), 1,27 (m, 4H), 1,12-0,76 (m, 8H);RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180,75, 171, 96, 142, 71, 141, 96,134,35, 129,99, 128,33, 127,81, 126,69, 126,65, 124,87,123, 36, 122, 30, 110, 57, 67,03, 66, 66, 66, 07, 63, 06, 57,25,53,96, 44,98, 41,69, 38,53, 33,00, 31,99, 28,05, 27,88,25,82, 23,06, 17,31, 15,32.

EXEMPLO 7 9

(3-MORFOLIN-4-IL-PROPIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R, 3S, 4S, 5'R) 6-METÓXI-4' -(3-BROMO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

(KE-102)

RMN 1H (300 MHz, CDC13) , ô 7,55 (s, 1H) , 7,41 (m,1H) , 7, 32-7, 00 (m, 3H) , 6,36 (s, 1H) , 6,26-6,17 (m, 2H) ,4,37 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 4,0 (d, J 8,2 Hz, 1H) , 3,73 (3,3H), 3,70 (m, 6H) , 3,44 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 3, 38-3, 34 (m,2H) , 2, 43-2, 38 (m, 4H) , 2,05 (m, 1H) , 1, 75-1, 69 (m, 2H) ,1,51-1,47 (m, 1H), 0,97 ~ 0,89 (m, 1H) , 0,79 (s, 9H) ; RMN13C (75 MHz, CDCI3) ô 181, 37, 160, 20, 142, 56, 129, 72, 128, 27,127,85, 125,55, 119,62, 110,05, 97,05, 70,81, 67,33, 66,65,66,16, 62,89, 57,36, 55,72, 54,11, 52,30, 51,57, 49,29,43,75, 38,60, 30,59.EXEMPLO 80

( 3-MORFOLIN-4-IL-PROPIL) -AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4R,5'R) 6-CLORO-4'-(3-CLORO-5-FLÚOR-FENIL)-2'-(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-1, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO5 (KE-103)

RMN 1H (300 MHz, CDC13) , ô 8,31 (m, 1H) , 7,42 (m,1H) , 6, 94-6, 67 (m, 5H) , 6,38 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 4,25 (d, J= 7,8 Hz, 1H) , 3,88 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 3,78 (m, 4H) , 3,53(d, J = 8,1 Hz, 1H), 3,39 (m, 2H), 2,54-2,49 (m, 6H), 1,80-10 1,74 (m, 2H) , 1,51-1,46 (m, 1H), 0, 90 - 0, 85 (m, 1H), 0,84(s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) 5 180, 31, 171, 79, 143, 02,142,37, 135,42, 126,51, 126,18, 125,16, 122,58, .115,82,115,50, 114,83, 114,54, 110,70, 67,63, 67,01, 66,79/ 63,58,57,26, 54,08, 46,38, 38,60, 33,32, 30,59, 30,35, 30,23.15 EXEMPLO 81

(3-MORFOLIN-4-IL-PROPIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4S,5'R)6-CLORO, 7-FLÚOR-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5' -

CARBOXÍLICO (KE-104)RMN *H (300 MHz, CDC13) , ô 8,23 (s, 1H), 7,43-7,01(m, 4H) , 6,87 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 6,22 (d, J = 8,6 Hz, 1H) ,4,40 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,12 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 3,70 (m,4H), 3, 56-3, 48 (m, 4H) , 2, 67-2, 60 (m, 7H) , 1, 76-1, 70 (m,2H) , 0, 90 - 0, 88 (m, 1H) , 0,86 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz,CDCI3) ô 180,62, 171,58, 138,22, 128,20, 127,92, 127,57,125,07, 125,02, 122,17, 121,93, 120,98, 120,72, 113,63,111,58, 67,43, 67,18, 66,22, 63,61, 57,42, 54,05, 51,79,43, 68, 38, 79, 32, 00, 30, 86, 30, 55, 30, 38.

EXEMPLO 82

(2-MORFOLIN-4-IL-PROPIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4S,5f R)6-CLORO, 7-FLÚOR-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-QXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5' -

CARBOXÍLICO (KE-109)<formula>formula see original document page 149</formula>

RMN XH (300 MHz, CDCI3), ô 8,53 (s, 1H), 7,23-7,10(m, 4H), 6,87 (d, J = 6 Hz, 1H) , 6,22 (d, J = 8,5 Hz, 1H) ,4,43 (d, J = 8,1 Hz, 1),4,14 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 3,68 (m,4H) , 3,46-3,41 (m, 3H) , 2, 54-2, 47 (m, 6H) , 1,51-1,46 (m,1H) , 0, 92 - 0, 89 (m, 2H) , 0,86 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz,CDC13) õ 180,83, 171,55, 158,37, 155,70, 152,47, 138,31,130,28, 128,34, 127,90, 125,08, 122,18, 120,94, 113,51,5 111,66, 67,70, 67,28, 66,15, 63,96, 57,19, 53,85, 51,76,43,66, 35,96, 31,99, 30,68, 30,27.

EXEMPLO 83

(2-PIRROLIDIN-l-IL-ETIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R, 3S, 4S, 5'R) 6-CLORO,7-FLÚOR-4,-(3-CLORO-2-FLÓOR-FENIL)-2'-(2 , 2-DIMETIL- PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5' -

CARBOXÍLICO (KE-110)

RMN 1H (300 MHz, CDC13) , ô 9,79 (s, 1H) , 8,60 (s,1H) , 7,57 (s, 1H) , 7,27-6, 87 (m, 3H) , 5,90 (d, J = 8,1 Hz,1H) , 4,51 (m, 1H), 4,23 (m, 1H) , 3,7-3,1 (m, 9H) , 2,12 (m15 3H), 1,49-1,41 (m, 4H) , 0,82 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13)ô 181,11, 174,19, 155,66, 138,77, 130,35, 127,98, 127,39,125,43, 121,79, 121,52, 121,12, 113,38, 113,06, 112,33,66,17, 64,44, 63,28, 55,27, 55,11, 49,44, 46,58, 43,89,36, 26, 30, 50, 30, 14, 23, 66.EXEMPLO 84

(2-PIPERIDIN-l-IL-ETIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4S,5'R)6-CLORO, 7-FLÚOR-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3'-PIRROLIDINA]-5' -

CARBOXÍLICO (KE-111)

RMN 1H (300 MHz, CDC13) , ô 7, 34-7,23 (m, 4H), 7,13

(m, 1H) , 6,88 (m 1H), 6,22 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,42 (d, J =8,3 Hz, 1H) , 4,15 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 3,41 (m, 3H) , 2,47(m, 7H), 1, 58- 0, 92 (m, 8H) , 0,85 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz,CDC13) ô 180,89, 171,50, 158,38, 155,69, 152,47, 130,19, 128,49, 127,88, 125,06, 122,09, 121,85, 120,60, 113,51,111,63, 67,93, 66,13, 54,04, 57,80, 54,81, 51,76, 43,61,36,14, 32,00, 30,85, 30,67, 26,25, 25,90, 24,39.

EXEMPLO 85

[2-(TETRAIDRO-PIRAN-4-IL)-ETIL]-AMIDA DO ÁCIDO (2'R, 3S, 4S,5'R)6-CLORO,7-FLÚOR-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -

PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-112)RMN 1ti (300 MHz, CDC13) , ô 8,51 (s, 1H) , 7,32-6,78(m, 3H), 6,26 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,38 (d, J = 7,8 Hz, 1H) ,4,05 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 3,90-3,78 (m, 2H), 3,54-3,22 (m,6H), 1, 65-1,25 (m, 11H) , 0,86 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz,5 CDCI3) ô 180,66, 171,92, 158,32, 152,47, 138,28, 130,36,128,09, 127,99, 127,77, 127,49, 122,19, 120,80, 111,30,111,65, 68,34, 66,96, 65,93, 63,42, 51,39, 43,76, 37,13,37,01, 33,25, 33,16, 30,56, 30,36, 30,23, 27,12.

EXEMPLO 8 6

(MORFOLIN-4-IL-ETIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4R,5'R)6-CLORO-4' -(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2f-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-1, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

(KE-115)

RMN :H (300 MHz, CDC13) , Ô 8,01 (s, 1H) , 7,13 (m, 1H), 6,94-6,70 (m, 5H), 6,42 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,30 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 3,88 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 3,68 (m, 4H), 3,56(d, J = 9,1 Hz, 1H) , 3, 43-3, 37 (m, 2H) , 2, 56-2, 40 (m, 4H),1,80 (m, 2H), 1,51-1,46 (m, 1H), 0,90 - 0,85 (m, 1H), 0,86(s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) 5 180, 17, 171, 69, 142, 97,142,28, 135,35, 134,46, 126,76, 126,13, 125,07, 122,60,115,81, 115,48, 114,47, 110,69, 67,45, 67,36, 66,93, 63,86,57,32, 57,22, 53,66, 44,27, 35,99, 30,65, 30,30.

EXEMPLO 87

[2-(TETRAIDRO-PIRAN-4-IL)-ETIL]-AMIDA DO ÁCIDO(2'R, 3S, 4S,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXQ-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-MDM2-108)

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,65 (s, 1H) , 7,33-7,20(m, 2H) , 7, 087, 03 (m, 2H) , 6,83 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 6,67(dd, Jx = 8,1 Hz, Ji'= 1,8 Hz, 1H) , 6,26 (d, J = 6 Hz, 1H) ,4,13 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 4,06 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 3,96-3,91 (m, 2H), 3,50 (d, J = 9 Hz, 1H) , 3, 38-3,29 (m, 4H) ,1,61-1,48 (m, 6H) , 1,31-1,27 (m, 2H) , 0,86 (d, J = 9 Hz,1H) , 0,82 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 181, 10, 172,29,142,98, 134,36, 130,06, 128,40, 128,21, 127,68, 126,36,125,60, 124,83, 122,25, 121,77, 110,73, 68,34, 66,54, 65,88,62, 95, 43, 82, 37, 11, 36, 88, 33,26, 33, 15, 30, 56, 30,21.EXEMPLO 88

(2-MORFOLIN-4-IL-ETIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R, 3S, 4S, 5'R) 6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-QXO-1, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

(KE-63)

[a]25D +5,8 (c, 0,9 CHC13) ; RMN 1H (300 MHz,CDCI3), ô 7,83 (br, 1H), 7,34 ~ 7,20 (m, 3H), 7,07 (t, dd, J= 7,91, 7,94 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 1,83 Hz, 1H), 6,69 (dd, J= 1,86, 8,11 Hz, 1H), 6,30 (d, J = 8,17 Hz, 1H), 4,44 (d, J= 8,05 Hz, 1H), 4,12 (d, J = 8,04 Hz, 1H), 3,68 (t, J = 4,56Hz, 4H), 3,49 ~ 3,35 (m, 3H), 2,59 ~ 2,20 (m, 7H), 1,52 (dd,J = 9,80, 14,10 Hz, 1H), 0,95 ~ 0,89 (m, 1H), 0,84 (s, 9H);RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180,34, 171, 30, 142, 16, 133, 89,129,57, 128,12, 127,93, 127,09, 126,15, 124,42, 124,36,121,93, 121,61, 110,13, 66,91, 65,63, 62,93, 56,79, 53,40,51,28, 43, 31, 35, 55, 30, 18, 30, 04, 29, 83/ C29H35Ci2FN403 + H20requer C, 58,49; H, 6,26; N, 9,41; Encontrado C, 58,70; H,6,44; N, 9,23..

EXEMPLO 89

(2-MORFOLIN-4-IL-PROPIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2' R, 3S,4S,5' R)6-CLORO-4' -(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL) -2-OXO-1, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

(KE-64)RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,40 (s, 1H), 7,31-7,20(m, 3H), 7,10-7,05 (m, 1H) , 6,83 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 6,80(dd, Ji= 8,1 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 6,30 (d, J = 8,1 Hz, 1H) ,4,44 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 4,13 (d, J = 8,1 Hz, 1 H) , 3,70-3,66 (m, 4H) , 3, 49-3, 40 (m, 3H), 3,08 (m, 2H), 2, 55-2, 46 (m,6H), 1,51-1,45 (m, 1H) , 0,95 ~ 0,85 (m, 1H) , 0,83 (s, 9H) ;RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180, 61, 171, 38, 142, 38, 133, 85,129,55, 128,09, 127,90, 127,07, 126,14, 125,08, 124,43,121,84, 121,33, 110,23, 66,83, 65,61, 62,97, 60,40, 56,77,53,18, 51,25, 43,30, 35,53, 30,16, 29,81.

EXEMPLO 90

(RACÊMICO) ESTER TER-BUTÍLICO DO ÁCIDO 6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ÉSPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

RMN 1H (300 MHz, CDC13) , ô 8,16 (s, 1H) , 7,53 (m,1H) , 7,30 (m, 1H) , 7,08 (m, 1H) , 6,93 (d, J = 1,8 Hz, 1H) ,6,72 (dd, Ji = 8,1 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 6,11 (d, J = 7,9 Hz,1H), 4,59 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 4,31 (d, J = 7,3 Hz, 1H) ,3,81-3,78 (m, 1H), 2,69 (s, 3H), 1,96-1,88 (m, 1H), 1,12 (s,9H), 0,800,89 (m, 1H), 0,63 (s, 9H).

EXEMPLO 91

(2-MORFOLINIL-4-IL-ETIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'S,3R,4'R,5'S) 6-CLORO-4' -(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO(KE-98 (63B, IMAGEM NO ESPELHO DE KE-63))

[a] d -6,5 (c, 1 CHC13) ; C29H35C12FN4O3 + H20 requerC, 58,49; H, 6,26; N, 9,41; Encontrado C, 58,73; H, 6,54; N,9,18 RMN 2H (300 MHz, CDC13) , ô 7,83 (br, 1H) , 7,34 ~ 7,20(m, 3H), 7,07 (t, dd, J = 7,91, 7,94 Hz, 1H) , 6,83 (d, J =1,83 Hz, 1H) , 6,69 (dd, J = 1,86, 8,11 Hz, 1H) , 6,30 (d, J =8,'17 Hz, 1H), 4,44 (d, J = 8,05 Hz, 1H) , 4,12 (d, J = 8,04Hz, 1H) , 3,68 (m, 4H), 3,49 ~ 3,35 (m, 3H), 2,59 ~ 2,20 (m,7H) , 1,52 (dd, J = 9,80, 14,10 Hz, 1H), 0,95 ~ 0,89 (m, 1H),0,84 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180, 34, 171, 30,142,16, 133,89, 129,57, 128,12, 127,93, 127,09, 126,15,124,42, 124,36, 121,93, 121,61, 110,13, 66,91, 65,63, 62,93,56,79, 53,40, 51,28, 43,31, 35,55, 30,18, 30,04, 29,83.EXEMPLO 92

ESTER METÍLICO DO ÁCIDO (2'R,3S,4R,5'R) 6-CLORO-4'-(3-CLORQ-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5'-METILCARBAMOIL-2-OXO-l, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (KE-66)

H

RMN 1ti (300 MHz, CDCI3) , ô 7,86 (s, 1H) , 7,70 (s,1H) , 7,27 ~ 6,95 (m, 5H) , 4,56 (d, J = 8,70 Hz, 1H) , 3,93(s, 3H), 3,87 (d, J = 9 Hz, 1H), 3, 50 3, 47 (m, 1H) , 3,05 (m,1H), 2,88 (d, J = 5,1 Hz, 3H), 1,55 - 0, 89 (m, 2H) , 0,89 (s,9H) .

EXEMPLO 93

(2-DIMETILAMINO-ETIL)-METIL-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4S,5'R)6-CLORO-4' - (3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL) -2' - (2 , 2-DIMETIL-PROPIL) -2-OXO-l, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5' -CARBOXÍLICO (KE-62)

RMN XH (300 MHz, CDC13) , 8 7, 28 ~ 7,16 (m, 3H) ,7,06 (t, dd, J = 2 (d, J = 1,83 Hz, 1H), 6,70 (dd, J = 1,86,8,11 Hz, 1H) , H) , 4,44 (d, J = 8,05 Hz, 1H) , 4,12 (d, J =8,04 Hz, 1H),3,49 ~ 3,35 (m, 3H), 2,99 (s, 3H) , 2,59 - 2,40(m, 2H) , 2,30 (s, 3H), 2,24 (s, 14,10 Hz, 1H), 0,95 - 0,89(m, 1H), 0,84 (s, 9H).

EXEMPLO 945 KE-68

RMN XH (300 MHz, CDCI3) , ô 8,28 (br, 1H) , 7,31 ~7,23 (m, 3H) , 7,14 ~ 7,07 (m, 2H) , 6,94 (d, J = 1,79 Hz,1H), 6,75 (dd, J = 1,86, 8,10 Hz, 1H), 5,30 (d, J = 12,1 Hz,1H), 4,69 (s, 2H) , 4,24 (m, 1H), 3,86 (d, J = 8,12 Hz, 1H),10 2, 92 (s, 3H) , 2,87 (s, 3H) , 1,52 ~ 1,44 (m, 1H) , 0,97 ~ 0,92(m, 1H), 0,89 (s, 9H).

EXEMPLO 95

[2-(4-METIL-PIPERAZIN-l-IL)-2-OXQ-ETIL]-AMIDA DO ÁCIDO(2' R, 3S, 4R,5'R)4'-(3-BROMO-FENIL)-6-CLORO-2'-(2,2-DIMETIL-15 PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5' -

CARBOXÍLICO (KE-67)O

<formula>formula see original document page 158</formula>RMN 1H (300 MHz, CDCI3) , ô 8,46 (br, 1H) , 7,90 (br,1H) , 7,31 7,23 (m, 2H) , 7,14 ~ 7,07 (m, 2H) , 6,94 (d, J =1,79 Hz, 1H), 6,75 (dd, J = 1,86, 8,10 Hz, 1H), 4,45 (d, J =11 Hz, 1H), 4,22 ~ 4,15 (m, 1H), 4,03 ~ 3,95 (m, 1H) , 3,87 ~3,83 (m, 1H), 3,73 ~ 3,65 (m, 3H) , 3,43 (m, 2H) , 2,44 (m,4H), 2,32 (s, 3H), 1,85 (m, 1H) , 0,97 ~ 0,92 (m, 1H) , 0,89(s, 9H) .

EXEMPLO 96

(2-PIRROLIDIN-l-IL-ETIL) -AMIDA DO ÁCIDO (2 ' R, 3S, 4S, 5'R) 6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-1, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDQL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

(MDM2-DQ-120)

RMN XH (300 MHz, CDC13) , õ 7,50 (br, 1H) , 7,41 (m,1H), 7,28 (m, 1H), 7,10 (m, 1H), 6,85 (d, J = 1,54 Hz, 1H) ,6,67 (dd, J = 1,54, 7,61 Hz, 1H) , 6,33 (d, J = 8,17 Hz, 1H) ,4,45 (d, J = 8,40 Hz, 1H) , 4,13 (dd, J = 8, 40, 1, 54 Hz, 1H) ,3,49 - 3, 35 (m, 3H), 2,78 (m, 1H), 2,67 (m, 5H), 1,80 (m, 4H) ,1,53 (dd, J= 9, 60, 14, 40 Hz, 1H), 0,93 (m, 1H), 0,81 (s, 9H) .

EXEMPLO 97

(2-PIPERIDIN-l-IL-ETIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4S,5'R)6-CLORO-4/ -(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO [INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

(MDM2-DQ-121)RMN 1H (300 MHz, CDC13) , ô 9,70 (br, 1H) , 8,50 (br,1H), 7,47 (m, 1H), 7,28 (m, 1 H) , 7,14 (m, 1H) , 6,97 (s,1H), 6,61 (d, J = 8,41 Hz, 1H) , 5,88 (d, J = 8,10 Hz, 1H) ,4,90 (br, 1H) , 4,42 (d, J = 8,14 Hz, 1H) , 4,17 (d, J = 5,45 Hz, 1H) , 3,69 (m, 2H) , 3,53 (m, 2H) , 3,33 (m, 4H) , 1,90 -\ 1,53 (m, 7H), 0,93 (m, 1H), 0,82 (s, 9H).<formula>formula see original document page 160</formula>\ EXEMPLO 98

\ ■ [2-(l-METIL-PIPERIDIN-4-IL)-ETIL]-AMIDA DO ÁCIDO

\ (2' R, 3S, 4S, 5' R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2' -(2,2-

DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3'-

PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (MDM2-DQ-122)

RMN XH (300 MHz, CDC13) , 5 7, 41-7,22 (m, 3H), 7,07(m, 2H), 6,81 (d, J = 1,82 Hz, 1H), 6,67 (dd, J = 8,10, 1,83Hz, 1H), 6,24 (d, J = 8,10 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 7,83 Hz,15 1H) , 4,05 (d, J = 7,83 Hz, 1H), 3,51 (m, 1H), 3,33 (m, 2H),2,93 (m, 2H), 2,32 (s, 3H), 2,02 (m, 3H), 1,72 (m, 2H) , 1,53(m, 3H), 1,35 (ra, 3H), 0,93 (m, 1H), 0,82 (s, 9H) .EXEMPLO 99

(2-PIPERIDIN-4-IL-ETIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4S,5'R) 6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-1, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (MDM2-DQ-123)

RMN 1n (300 MHz, CDC13) , ô 7,34 (m, 1H) , 7,20 (m,1H) , 7,07 (m, 2H), 6,80 (d, J = 1,23 Hz, 1H), 6,64 (dd, J =8,11, 1,83 Hz, 1H), 6,24 (d, J = 8,11 Hz, 1H) , 4,41 (d, J =7,81 Hz, 1H) , 4,05 (d, J = 7,81 Hz, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,32 (m, 2H), 2,86 (m, 2H), 1,92 (m, 3H), 1,48 (n, 3H), 1,28 (m,3H), 0,93 (m, 2H), 0,80 (s, 9H).

EXEMPLO 100

(4-MORFOLIN-4-IL-BUTIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R, 3S,4S,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2- OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

(MDM2-119)[a]25D 2,6 (c, 0,5 CHC13) ; RMN *H (300 MHz, CDC13) ,ô 7,82 (br, 1H), 7,34 (m, 1H), 7,24 (dt, J = 1,43, 6,901=lz,111), 7,10 ~ 7,05 (m, 2H) , 6,83 (d, J = 1,80 Hz, 1H) , 6,68

(dd, J = 1,86, 8,11 Hz, 114), 6,26 (d, J = 8,14 Hz, 1H) ,4,42 (d, J = 7,80 Hz, 1H) , 4,07 (d, J = 7,74 Hz, 1H) , 3,73

(t, J = 7,62 Hz, 4H) , 3,48 (d, J = ,9,16 Hz, 1H) , 3,34 ~3,20 (m, 2H), 2,45 - 2,31 (m, 6H) , 1,58 ~ 1,47 (m, 5H) , 0,92~ 0,88 (m, 1H) , 0,82 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDCI3) Ô180,57, 172,06, 142,60, 134,37, 130,01., 126,36, 1,25,66,122,35, 110,52, 67,33, 66,67, 65,90, 62,83, 58,89, 54,04,43, 76, 39, 53, 30, 56, 30,21, 27, 86, 24, 16.

EXEMPLO 101

(2-CICLOEXIL-ETIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4S,5'R) 6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-1, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

(MDM2-DQ-125)<formula>formula see original document page 162</formula>RMN 1H (300 MHz, CDC13) , ô 8,37 (m, 1H) , 7,35 (m,

1H), 7,23 (m, 1H), 7,06 (m, 2H), 6,86 (s, 1H), 6,68 (d, J =

8,11 Hz, 1H) , 6,30 (d, J = 8,12 Hz, 1H) , 4,46 (m, 1H) , 4,12

(m, 1H), 3,48 (m, 1H), 3,31 (m, 2H), 2,38 (m, 1 H), 1,67 (m,

5H), 1,29 (m, 3H), 1,17 (m, 4H), 0,91 (m, 2H), 0,81 (s, 9H).EXEMPLO 102

[2-(4-METIL-PIPERAZIN-l-IL)-ETIL]-AMIDA DO ÁCIDO(2'R,3S,4S,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (MDM2-DQ-126)

RMN XH (300 MHz, D20) , 5 7, 36 (m, 1H) , 7,19 (m,1H) , 7,05 (m, 2H) , 6,77 (s, 1H) , 6,50 (d, J = 7,80 Hz, 1H) ,6,26 (d, J = 7,80 Hz, 1H) , 4,46 (d, J = 7,51 Hz, 1H), 4,37(d, J = 7,50 Hz, 1H), 4,05 (m, 1 H) , 3,60 ~ 3,21 (m, 12H) ,2,90 (s, 3H), 1,83 (m, 1H), 0,98 (m, 1H), 0,89 (s, 9H).

EXEMPLO 103

<formula>formula see original document page 163</formula>

[2-(4-ETIL-PIPERAZIN-l-IL)-ETIL]-AMIDA DO ÁCIDO(2'R,3S,4S,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2' -(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DlIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3f-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (MDM2-DQ-129)

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 9,46 (br, 1H) , 7,70 (br,1H), 7,50 (m, 1 H), 7,26 (m, 1 H), 7,12 (m, 1 H), 6,94 (d, J= 1,56 Hz, 1 H), 6,61 (dd, J = 8,10, 1,80 Hz, 1 H) , 6,10 (d,J = 8,10 Hz, 1 H) , 4,51 (d, J = 6,30 Hz, 1H) , 4,12 (d, J =6,30 Hz, 1H) , 4,05 (m, 1H), 3, 53-2, 66 (m, 16H), 1,35 (t, J =7,2 Hz, 3H), 0,92 (m, 1H), 0,80 (s, 9H) .

EXEMPLO 104<formula>formula see original document page 164</formula>

[2-(4-ISOPROPIL-PIPERAZIN-l-IL)-ETIL]-AMIDA DO ÁCIDO(2' R, 3S, 4S, 5' R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-2-QXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO (MDM2-DQ-130)

RMN *H (300 MHz, CDC13) , ô 9,80 (br, 1H) , 7,88 (br,1H) , 7,52 (m, 1H) , 7,24 (m, 1 H) , 7,13 (m, 1H) , 6,97 (s,1H) , 6,61 (d, J = 8,10 Hz, 1 H) , 6,08 (d, J = 8,10 Hz, 1H) ,4,63 (m, 1 H), 4,17 (m, 1H) , 3,61 (m, 1 H) , 3, 59-2, 60 (m,14H), 1,55 (m, 1H) , 1,35 (d, J = 6,3 Hz, 6H) , 0,92 (m,í 1H) ,0,80 (s, 9H).

EXEMPLO 105

(RACÊMICO) (2-MORFOLIN-4-IL-ETIL)-AMIDA DO ÁCIDO 6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'- (2,2-DIMETIL-PROPIL)-1'-METIL-2-OXO-1, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

(KE-100)RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 7,93 ~ 7,85 (m, 2H) ,7,38 ~ 7,30 (m, 2H), 7,02 (t, J = 7,92 Hz, 1H), 6,83 (d, J =1,86 Hz, 1 H), 6,20 (dd, J = 1,91, 8,31 Hz, 1H) , 5,61 (d, J= 8,16 Hz, 1H), 4,70 (d, J = 7,86 Hz, 1H), 4,39 (d, J = 7,83 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 7,31 Hz, 1H) , 3,78 ~ 3,75 (m, 4H) ,3,34 ~ 3,24 (m, 2H), 2,74 (s, 3H), 2,52 ~ 2,48 (m, 6H), 2,01~ 1,94 (m, 1H) , 0,79 (s, 9H) , 0,71 ~ 0,67 (m, 1H) ; RMN 13C(75 MHz, CDCI3) ô 179,72, 171, 31, 142, 57, 134, 78, 130, 29,\ 127,80, 127,34, 125,74, 124,83, 123,95, 122,07, 110,53, 74,22, 67,50, 65,09, 63,32, 57,11, 53,69, 45,13, 39,55,37,30, 35,28, 30,67, 30,00.

EXEMPLO 106

(RACÊMICO) (3-MORFOLIN-4-IL-PROPIL)-AMIDA DO ÁCIDO 6-CLORO-4' -(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-1' -METIL- 2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINAJ-5'-

CARBOXÍLICO

RMN xti (300 MHz, CDC13) , ô 8,37 (s, 1H), 8,22 (t, J= 5,55 Hz, 1H) , 7,42 ~ 7,28 (m, 2H), 7,03 (t, J = 7,45 Hz,1H), 6,81 (d, J = 1,85 Hz, 1H), 6,63 (dd, J = 1,89, 8,96 Hz,1H) , 5,87 (d, J = 8,14 Hz, 1H) , 4,65 (d, J = 7,50 Hz, 1H) ,4,37 (d, J = 7,45 Hz, 1H) , 4,05 ~ 4,01 (m, 1H) , 3,77 ~. 3,74(m, 4H), 3,30 ~ 3,24 (m, 2H), 2,69 (s, 3H), 2,46 ~ 2,39 (m,6H) , 1, 89 -1, 66 (m, 2H) , 1, 42 1, 38 (m, 1H) , 0, 99 -0, 87 (m,2H) , 0,76 (d, J = 6,53 Hz, 3H) , 0,69 (d, J = 6,42 Hz, 3H) .

EXEMPLO 107

[3-(2-HIDRÓXI-ETÓXI)-PROPIL]-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'S,5' R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5' -

CARBOXÍLICO

RMN 1R (300 MHz, CDC13) , ô 8,59 (s, 1H) , 7,36-7,06(m, 4H) , 6,84 (d, J = 1,8 Hz, 1H) , 6,66 (dd, Jx = 7,5 Hz, J2= 1,5 Hz, 1H) , 6,25 (d, J = 8,1 Hz, 1H),: 4,43 (d, J = 4,8Hz, 1H), 4,10 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 3,79-3,41 (m, 11H), 1,84-1,81 (m, 2H), 1,51-1,46 (m, 1H), 0,93-0,89 (m, 1H), 0,81 (s,9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 181, 12, 171, 97, 142, 93,134,29, 129, 95, 128, 47, 127, 66, 126, 46,- 125, 57, 124, 83,124,78, 122,22, 110,71, 72,89, 70,62, 70,50, 69,73, 66,84,66,01, 63,09, 62,11, 43,74, 37,57, 30,74, 30,34, 29,43.EXEMPLO 108{2-[3-(2, 2, 2-TRIFLÚOR-ETIL)-5,6-DIIDRO-8H-[1,2, 4]TRIAZOL[4,3-A]PIRAZIN-7-IL]ETIL}-AMIDA DO ÁCIDO(2f R, 3S, 4' S, 5' R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL) -2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3, -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,98 (s, 1H) , 7,58 (m,1H), 7,29-7,03 (m, 3H), 6,89 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,02 (d, J= 8,1 Hz, 1H) , 4,42 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 4, 08-4, 03 (m, 4H),3,96 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,93-3,78 (m, 1H), 3,71-3,42 (m,2H), 3,19-3,12 (m, 1H) , 3, 02-2, 74 (m, 3H) , 2,10 (m, 2H) ,1, 54-1, 48 (m, 1H) , 1,24 (m, 1H) , 0,9^6-0,92 (m, 1H) , 0,86 (s,9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 180, 35, 173,22, 152, 60,138,67, 130,37, 128,25, 127,65, 127,32, 125,07, 125,01,113,37, 113,04, 111,81, 66,16, 65,77, 63,14, 56,24, 49,80,48,22, 44,27, 43,99, 36,89, 34,92, 31,99, 30,17, 23,06,14,54 .

EXEMPLO 109

(3, 4-DIIDRÓXI-BUTIL)-AMIDA DO ÁCIDO- (2'R,3S,3"S,4'S,5'R)6 -CLORO^ - (3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL) -2' -■ (2, 2-DIMETIL-PROPIL) -2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICORMN 1ti (300 MHz, CDCI3) , ô 8,72 (s, 1H), 7,31-7,21(m, 3H), 7, 08-6, 93 (m, 1H) , 6,83 (d, J = 1,6 Hz, 1H) , 6,66(dd, Ji = 8,1 Hz, J2 = 1,8 Hz, 1H) , 6,27 (d, J = 8,01 Hz,

1H), 4,43 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,20-4, 03 (m, 3H) , 3,583, 45(m, 5H) , 2,67 (m, 1H), 1, 75-1, 67 (m, 2H), 1, 49-1, 24 (m, 3H),

0, 78 (s, 9H) .

EXEMPLO 110

[2-(2-METÓXI-ETÓXI)-ETIL]-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'S,5'R)6-CLORO-4' -(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,64 (s, 1H) , 7,32-7,19(m, 3H) , 7,08 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 1,8 Hz, 1H),6,68 (dd, Jl = 8,1 Hz, J = 1,8 Hz, 1H) , 6,32 (d, J = 8,1 Hz,1H), 4,46 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,12-4,03 (m, 1H) , 3,62-3,41(m, 9H), 3,38 (s, 3H) , 2,85 (br, 1H) , 1, 52-1, 47 (m, 1H) ,0, 98-0, 89 (m, 1H) , 0,82 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô181,41, 171,90, 143,07, 129,94, 128,50, 127,70, 126,97,125,49, 124,85, 124,81, 123,18, 122,17, 121,94, 121,68,110,81, 72,19, 70,56, 70,16, 67,34, 66,71, 63,46, 56,39,51, 89, 43, 66, 39, 18, 30, 32, 29,29.

EXEMPLO 111

(3-MORFOLIN-4-IL-PROPIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'S,5'R)4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 7, 45-7, 04 (m, 7H) , 6,83(t, J = 7,5 Hz, 1H), 6,34 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,45 (d, J =5,8 Hz, 1H), 4,11 (d, J = 5,9 Hz, 1H) , 3, 75 -3, 69 (m, 4H) ,3,54 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,42-3,40 (m, 2H), 2,55-2,50 (m,7H) , 1, 58 -1, 53 (m, 1H) , 0,83 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz,CDCI3) ô 178, 44, 171, 32, 153, 92, 153, 58, 130, 24, 129, 61,127,56, 125,13, 124,92, 124,40, 124,14, 122,12, 111,13,110,92, 67,61, 67,33, 66,48, 62,19, 57,18, 53,83, 52,55,44,72, 35,91; 30,63, 30,40, 30,19.

EXEMPLO 112

[2-(2-METÓXI-ETÓXI)-ETIL]-AMIDA DO ÁCIDO (2' R,3S,4' S,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-V -METIL-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5' -

CARBOXÍLICOSob argônio, a uma solução do composto do Exemplo110 (1 mmol), 20 mL de CH3CN, 0,5 mL de formalina a 37% e1,1 mmol de NaBHsCN, 2 gotas de HOAc foram adicionados. Asolução resultante foi agitada, à temperatura ambiente, por2 h, então 50 mL de acetato de etila foram adicionados. Amistura resultante foi lavada com solução de NaHCC>3 esalmoura e secada sobre Na2SO,j. 0 solvente foi removido e oresíduo foi purificado por coluna (rendimento de ~90%).

RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 8,01 (br, 1H) , 7,52 (m,1H) , 7,28-7, 02 (m, 2H) , 6, 85-6, 52 (m, 3H) , 4,15 (m, 1H) ,3,87 (m, 1H), 3,72-3,51 (m, 8H), 3,44 (s, 3H), 2,96 (m, 1H) ,2,52 (s, 3H), 2,16 (m, 1H), 1,61-1,48 (m, 2H), 0,58 (s, 9H).

EXEMPLO 113

(2-MORFOLIN-4-IL-PROPIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'S,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-1' -METIL-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA] -5' -

CARBOXÍLICO<formula>formula see original document page 170</formula>O composto do Exemplo 113 foi preparado via omesmo procedimento do Exemplo 112.

RMN 1H (300 MHz, CDC13) , ô 7,97 (br, 1H) , 7,52 (m,1H), 7,14-6,98 (m, 2H) , 6, 85-6, 52 (m, 3H) , 4,17 (m, 1H) ,3, 85-3, 62 (m, 6H) , 3, 52-3, 32 (m, 3H) , 3,06 (m, 1H) , 2,55-2,25 (m, 9H), 1,61-1,48 (m, 2H), 0,57 (s, 9H).

EXEMPLO 114

(2-MORFOLIN-4-IL-ETIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,4'S,5'R)6-CLORO-4' - (3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL) -2' - (2 , 2-DIMETIL-PROPIL) -1' -METIL-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5' -

CARBOXÍLICO

O composto do Exemplo 114 foi preparado via omesmo procedimento do Exemplo 112.

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 57, 62 ~ 7,30 (m, 2H) ,7,21-6,92 (m, 3H) , 6, 92-6, 50 (m, 3H) , 4,17 (m, 1H) , 3,79-3,36 (m, 5H), 3,46 ~ 3,31 (m, 2H), 2,92 (m, 1H), 2,65 ~ 2,30(m, 8H), 1,95 (m, 1H), 1, 80 -1, 45 (m, 2H), 0,58 (s, 9H) .

EXEMPLO 115

ESTER METÍLICO DO ÁCIDO (2'R,3S,4'S,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5'-[2-(2-METÓXI-ETÓXI) -ETILCARBAMOIL]-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

ri L ^O composto do Exemplo 115 foi preparado via omesmo procedimento do Exemplo 112.

RMN 1H (300 MHz, CDC13) , ô 7,89 (s, 1H) , 7,26-7,20(m, 2H), 7, 057, 03 (m, 1H) , 6, 84-6, 82 (m, 2H) , 4, 85-4, 82 (m,5 1H) , 4,11-4,05 (m, 1H) , 3,97 (s, 3H) , 3,81 (s, 3H) , 3,58-3,47 (m, 8H), 2, 59-2, 44 (m, 3H) , 1,81-1,75 (m, 1H) , 1,34-1,30 (m, 1H) , 0,85 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 171,62,169,46, 151,15, 139,49, 138,03, 135,56, 131,03, 129,02,127,68, 125,62, 124,88, 124,82, 124,62, 116,82, 72,19,10 70, 69, 70, 16, 66, 16, 63,24, 61,27, 59, 43, 54, 71, 53, 62,43,21, 39,92, 29,79, 23,06.

EXEMPLO 116

(1"R,2"S,2'R,3S,4'S,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-1' -(2-HIDRÓXI-l,2-DIFENIL-ETIL)-5' - HIDROX1METIL-1H-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-2-ONA

Sob argônio, a um frasco de 100 mL com barra deagitação foi adicionada (2S,3R)-2,3,5,6-tetraidro-2, 3-difenil-1,4-oxazin-5-ona (1,0 g, 3,96 mmols), 3-E-(2-flúor-3-cloro)-benzilideno-6-cloro-l,3-diidro-indol-2-ona (4,75mmols), 2 g de peneiras moleculares de 4Á recentementeativadas, 3,3-dimetil-butiraldeído (4,75 mmols) e tolueno(50 mL) . A mistura foi aquecida para 70°C e mantida nessatemperatura por 5 horas. A mistura foi resfriada para atemperatura ambiente e as peneiras moleculares foramfiltradas. O solvente foi removido a vácuo e o resíduo foipurificado por cromatografia para render o produto 1,3-dipolar.

O produto 1,3-dipolar (2,0 mmols) obtido foidissolvido em etanol/HCl (10 mL) e a solução resultante foirefluxada durante a noite. O solvente foi removido sob vácuoe o resíduo foi neutralizado com NaHC03/H20 e extraído comacetato de etila. A fase orgânica foi secada sobre Na2S02. Osolvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi dissolvidoem 20 mL de etanol e 10 mmols de NaBH4 foram adicionadoscuidadosamente. A mistura resultante foi refluxada durante anoite. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foitratado com NaOH/H20 e extraído com acetato de etila. A faseorgânica foi secada sobre Na2S04. 0 solvente foi removidosob vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia pararender o produto.

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 7,60 ~ 7,34 (m, 11H) ,7,14 ~ 7,09 (m, 1H) , 7,04 ~ 6,93 (m, 2H) , 6,82 (t, J = 7,98Hz, 1H) , 6,57 (d, J = 1,82 Hz, 1H) , 5,38 (d, J = 8,61 Hz,1H), 4,47 (d, J = 8,40 Hz, 1H), 3,93 (dd, J = 2,6, 12,0 Hz,1H), 3,74 (d, J = 9,21 Hz, 1H), 3,63 (d, J = 11,30 Hz, 1H),3,11 (t, J = 9,60 Hz, 1H), 2,64 (s, 1H) , 2,37 (d, J = 9,18Hz, 1H) , 1,84 N 1,75 (m, 1H) , 1,15 (d, J = 14,44 Hz, 1H) ,0, 54 (s, 9 H) .

EXEMPLO 117

(1"R,2"S,2'R,3S,4'S,5'R)5'-(TER-BUTIL-DIMETIL-SILANILOXIMETIL)-6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2' -(2,2-DIMETIL-PROPIL)-1'- (2-HIDRÓXI-l,2-DIFENIL-ETIL)-5' -HIDROXIMETIL-1H-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-2-QNA

A uma solução do composto 116 (1,0 mmol) em DMF,TBDMSC1 (1,1 mol) e imidazol (1,1 mol) foram adicionados. Asolução resultante foi agitada à temperatura ambiente por 2horas. O solvente foi removido sob vácuo e o residuo foidissolvido com acetato de etila e a solução foi lavada comsalmoura. A fase orgânica foi secada sobre Na2S04. Osolvente foi removido sob vácuo e o residuo foi purificadopor cromatografia para render o produto.

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 7,62 (d, J = 6,98 Hz,2H) , 7,48 (d, J = 7,33 Hz, 2H) , 7,38 ~ 7,06 (m, 11H), 6,82(t, J = 8,16 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 1,78 Hz, 1H), 5,54 (d, J= 5,84 Hz, 1H), 4,54 (d, J = 5,85 Hz, 1H), 4,23 (d, J = 7,34Hz, 1H), 4,10 (s, 1H), 3,82 (d, J = 8,57 Hz, 1H), 3,73 (dd,J = 3,36, 11,10 Hz, 1H) , 3,49 (d, J = 10,23 Hz, 1H) , 3,22(d, J = 9,12 Hz, 1H) , 1,89 - 1,81 (m, 1H) , 1,34 (d, J =15,60 Hz, 1H), 0,91 (s, 9H), 0,52 (s, 9H), -0,05 (s, 3H), -0, 12 (s, 3H) .

EXEMPLO 118<formula>formula see original document page 175</formula>

ESTER 2-[6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-5'-HIDROXIMETIL-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -PIRROLIDIN]-1'-IL]-1,2-DIFENIL-ETÍLICO DO ÁCIDO(1"R,2"S,2'R,3S,4'S,5'R) 2,2-DIMETIL-PROPIÔNICO

A uma solução do composto 116 (1,0 mmol) em 10 mLde CH2CI2, cloreto de trimetil acetila (1,5 mmol) ediisopropil etilamina (2,0 mmols) foram adicionados e asolução resultante foi agitada à temperatura ambientedurante a noite. O solvente foi removido sob vácuo e oresíduo foi dissolvido com acetato de etila. HC1 (1 mL) foiadicionado à fase orgânica e a mistura resultante foiagitada à temperatura ambiente por 2 h. Então, 5 mL deNaCHC03/H20 foram adicionados e as duas fases foram separa-das. A fase orgânica foi secada sobre Na2S04. O solvente foiremovido sob vácuo e o resíduo foi purificado por cromato-grafia para render o produto.RMN 1ti (300 MHz, CDC13) , ô 7,59 ~ 7, (m, 15 H) ,

6,84 ~ 6,82 (m, 2H), 5,40 (d, J = 8,10 Hz, 1H), 4,48 (d, J =8,31 Hz, 1H), 8,18 ~ 8,10 (m, 1H), 3,94 (dd, J = 2,52, 11,87Hz, 1H) , 3,77 (d, J = 8,72 Hz, 1H) , 3,56 (d, J = 10,02 Hz,1H) , 3,16 (d, J = 11,80 Hz, 1H), 1,66 ~ 1,57 (m, 1H), 1,30 ~1,28 (m, 1H), 1,15 (s, 9H), 0,56 (s, 9H) .

ESTER 2-[5' -BROMOETIL-6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-2-0X0-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDIN]-1'-IL]-1,2-DIFENIL-ETÍLICO DO ÁCIDO(1"R,2"S,2'R,3S,4'S,5'R)2,2-DIMETIL-PROPIÔNICO

de CH2C12, CBr4 (1,5 mmol) e Ph3P (1,5 mmol) foram adicio-nados e a solução resultante foi agitada à temperaturaambiente por 6 horas. O solvente foi removido sob vácuo e oresiduo foi purificado por cromatografia para render oproduto.

2H), 7,50 (d, J = 7,20 Hz, 2H) , 7,39 ~ 6,84 (m, 13H), 5,42(d, J = 7,40 Hz, 1H), 4,53 (d, J = 6,90 Hz, 1H) , 4,19 (d, J= 9,00 Hz, 1H) , 3,79 (d, J = 8,61 Hz, 1H) , 3,63 ~ 3,58 (m,

EXEMPLO 119

A uma solução do composto 118 (1,0 mmol) em 10 mL

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 7,64 (d, J = 6,69 Hz,2H) , 3,23 (s, 1H), 1,57 w 1,54 (m, 1H), 1,36 ~ 1,30 (m, 1H) ,1,25 (s, 9H), 0,54 (s, 9H).

EXEMPLO 120

(1"R,2"S,2'R,3S,4'S,5'R)-6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL) -2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-1'-(HIDRÓXI-1,2-DIFENIL-ETIL)-5' -(2-MORFOLIN-4-IL-ETOXIMETIL)-1H-ESPIRO[INDOL-3, 3'-PIRROLIDIN] -

2-ONA

A uma solução de 2-morfolin-4-il-etanol (10 mmols)em 10 mL de THF seco, NaH (10 mmols) foi adicionado e amistura resultante foi agitada à temperatura ambiente, por 2horas. O composto 119 (1 mmol) foi então adicionado e amistura resultante foi agitada à temperatura ambientedurante a noite. O solvente foi removido sob vácuo e oresíduo foi dissolvido com acetato de etila e a solução foilavada com salmoura. A fase orgânica foi secada sobreNa2S04. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foipurificado por cromatografia para render o produto.

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 7,67 (d, J = 7,05 Hz,2H) , 7,50 (d, J = 7,38 Hz, 2H) , 7,45 N 7,07 (m, 11H) , 6,83(t, J = 7,94 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 1,79 Hz, 1H) , 5,48 (d, J= 5,68 Hz, 1H), 4,53 (d, J = 5,82 Hz, 1H) , 4,20 (d, J =10,61 Hz, 1H), 4,10 (s, 1H), 3,85 (d, J = 5,66 Hz, 1H), 3,74~ 3,40 (m, 8H) , 3,00 (dd, J = 2, 25, 9, 60 Hz, 1H) , 2,61 ~2,49 (m, 6H), 1,91 ~ 1,84 (m, 1H), 1,35 ~ 1,30 (m, 1H), 0,55(s, 9H) .

EXEMPLO 121

(2' R, 3S, 4'S,5'R)-6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-5' -(2-MORFQLIN-4-IL-ETOXIMETIL)-1H-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDIN]-2-ONA

A 0°C, a uma solução do composto 120 (2,0 mmols)em CH2Cl2-MeOH (10 mL, 1:1), Pb(OAc)4 (1,34 g, 3,0 mmols) foiadicionado. A reação foi agitada a 0°C, por cerca de 5 a 10minutos, e a solução filtrada em uma coluna de silica-gelcurta. O solvente foi removido sob vácuo e o residuo foipurificado por cromatografia para render o produto.

RMN 1H (300 MHz, CDC13) , 5 8,12 (s, 1H) , 7,39 ~6,71 (m, 6H), 4,18 3,40 (m, 11H), 2,63 ~ 2,47 (m, 7H), 1,29-1,13 (m, 2H), 0,85 (s, 9H).(2' R, 3S, 4 ' S, 5' R)-6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-1'-METIL-5'-(2-MORFOLIN-4-IL-ETOXIMETIL)-1H-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDIN]-2-ONA

N

5 O composto 122 foi obtido pelo mesmo procedimento

do Exemplo 112.

RMN 1H (300 MHz, CDC13), ô 7,50 (d, J = 8,66 Hz,1H) , 7,28 ~ 7,17 (m, 3H), 7,02 ~ 6,88 (m, 1H), 6,88 (d, J =1,80 Hz, 1H), 5,02 ~ 4,80 (m, 1H) , 3,96 (d, J = 11,15 Hz,10 1H) , 3,68 (t, J = 4,50 Hz, 4H) , 3,57 ~ 3,53 (m, 2H) , 3,40-3,32 (m, 2H) , 3,03 (d, J = 6,83 Hz, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,48~ 2,40 (m, 6H), 1,76 - 1,68 (m, 1H), 1,47 (d, J = 15,10 Hz,1H), 0,61 (s, 9H).

EXEMPLO 123

CLORIDRATO DE (3,4-DIIDRÓXI-BUTIL)-AMIDA DO ÁCIDO

(2'R, 3S,3"S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3 , 3' -

PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICORMN 1R (300 MHz, CD3OD) , ô 8,46 (br, 1H) , 7,50 ti7,38 (m, 2H), 7,30 ~ 7,14 (m, 4H), 6,92 (dd, J = 1,93, 8,13Hz, 1H) , 6,80 (d, J = 1,83 Hz, 1H) , 5,08 (d, J = 10,84 Hz,1H) , 4,30 ~ 4,26 (m, 1H), 4,20 (d, J = 10,85 Hz, 1H), 3,51 ~5 3,31 (m, 8H), 2,05 ~ 2,00 (m, 1H), 1,64 - 1,46 (m, 3H), 0,85(s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô 178, 78, 165, 54, 143, 64,135,89, 135,44, 131,84, 131,77, 130,54, 127,53, 127,18,125,57, 122,68, 122,27, 110,67, 69,67, 66,09, 63,31, 63,23,61,13, 60,58, 56,20, 41,53, 36,90, 32,66, 29,85, 28,49;10 EIMS: 580,1 (M++l).

EXEMPLO 124 =<formula>formula see original document page 180</formula>(3, 4-DIIDRÓXI-BUTIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,3"S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2' -(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO<formula>formula see original document page 181</formula>

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 9,34 (br, 1H) , 7,70 (t,

J = 6,00 Hz, 1H), 7,27 ~ 7,12 (m, 3H) , 7,00 (s, 1H) , 6,90(d, J = 7,40 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 6,10 Hz, 1H), 5,84 (d, J= 8,94 Hz, 1H) , 4,36 (d, J = 5,14 Hz, 1H) , 3,80 ~ 3,47 (m,7H) , 1,70 ~ 1,98 (m, 2H), 1,52 ~ 1,44 (m, 1H), 0,94 ;., 0,90(m, 1H), 0,83 (s, 9H); EIMS: 552,2 (M++l).

EXEMPLO 12 5

(3-HIDRÓXI-4-TRITILÓXI-BUTIL)-AMIDA DO ÁCIDO(2' R,3S,3"S,4'R,5'R) 6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2' -{2,2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

<formula>formula see original document page 181</formula>

RMN XH (300 MHz, CDC13) , 8 8, 46 (br, 1H>, 7,46 ~7,23 (m, 15H) , 7,18 - 7,09 (m, 3H) , 6,90 (d, J = 7,00 Hz,1H) , 6,80 (s, 1H), 6,69 (d, J = 7,90 Hz, 1H) , 6,19 (d, J =7,59 Hz, 1H), 4,33 (5,82 Hz, 1H), 3,88 (br, 1H), 3,83 (d, J= 6,56 Hz, 1H) , 3,65 ~ 3,55 (m, 2H) , 3,34 ~ 3,10 (m, 4H) ,2,71 (br, 1H), 1,73 ~ 1,48 (m, 3H) , 0,96 ~ 0,91 (m, 1H) ,0,84 (s, 9H).

EXEMPLO 12 6

(2' R, 3S, 4' S, 5'R)6-CLORO-4'- (3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL) -5' - (MORFOLINA-4-CARBONIL) -1H-ESPIRO [INDOL-

3, 3'-PIRROLIDIN]-2-ONA

H

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 8,39 (br, 1H) , 7,27 ~7,13 (m, 2H), 7,05 ~ 6,99 (m, 1H) , 6,87 (d, J = 1,57 Hz,1H) , 6,72 (dd, J = 1, 43, 8, 08 Hz, 1H), 6,49 (d, J = 8,05 Hz,1H) , 4,61 -4,54 (m, 1H) , 4,39 (d, J = 8,04 Hz, 1H) , 3,80 ~3,45 (m, 8H), 2,97 (m, 1H) , 1,80 (br, 1H) , 1,51 ~ 1,42 (m,1H), 0, 90 0, 87 (m, 1H) , 0,84 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13)ô 181,47, 168,74, 142,90, 134,17, 130,24, 128,44, 128,25,126,69, 125,37, 125,11, 122,38, 122,31, 110,75, 68,96,67,26, 67,17, 64,38, 63,97, 52,84, 46,62, 43,21, 31,99,30,58, 30,24.EXEMPLO 127

CLORIDRATO DE (3,4-DIIDROXIL)-AMIDA DO ÁCIDO(2' R, 3S,3"S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2' -(2, 2-DIMETIL-PROPIL)-2-OXO-l,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3, 3' -PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

RMN XH (300 MHz, CD3OD) , ô 8,46 (br, 1H) , 7,26 ~

7,15 (m, 6H), 6,92 (dd, J = 1,83, 8,13 Hz, 1H) , 6,80 (d, J =1,81 Hz, 1H) , 5,13 (br, 1H) , 5,09 (d, J = 10,71 Hz, 1H) ,4,30 ~ 4,18 (m, 2H) , 3, 50 ~ 3, 30 (m, 7H) , 2,07 ~ 2,00 (m,1H), 1,65 ~ 1,45 (m, 3H) , 0,84 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz,10 CD3OD) ô 178, 76, 165, 45, 143, 66, 135, 62, 135, 45, 134, 68,130,34, 128,88, 128,78, 127,13, 125,51, 122,28, 110,67,69,67, 66,07, 63,30, 63,21, 61,06, 60,58, 56,18, 41,49,37,05, 36,91, 32,64, 29,84, 28,48; EIMS: 534,2 (M++l).

EXEMPLO 128

(3, 4-DIIDRÓXI-BUTIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,3"S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-b' -

CARBOXÍLICORMN XH (300 MHz, DMSO-d6) , ô 10,44 (br, 1H) , 8,11(br, 1H) , 7,73 (t, J = 6,69 Hz, 1H) , 7,44 ~ 7,15 (m, 2H) ,6,88 ~ 6,82 (m, 2H), 4,29 ~ 4,28 (m, 3H), 3,94 (d, J = 9,60Hz, 1H) , 3,32 ~ 3,00 (m, 4H), 2,60 - 2, 50 (m, 1H) , 1,52 1,17(m, 3H), 0,82 (s, 9H). EIMS: 570,2 (M++l).

EXEMPLO 129

(3, 4-DIIDRÓXI-BUTIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,3"S,4'R, 5' R) 4' -(3-BROMO-FENIL)-6-CLORO-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-1, 2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO

RMN XH (300 MHz, CDC13) , ô 9,47 (br, 1H) , 7,72 (t,

J = 5,59 Hz, 1H) , 7,37 (d, J = '7,84 Hz, 1H) , 7,18 (s, 1H) ,

7,11 (t, J = 7,77 Hz, 1H) , 6,95 (d, J = 7,74 Hz, 1H) , 6,78

(d, J = 9,04 Hz, 1H), 5,85 (d, J = 8,96 Hz, 1H) , 4,60 (br,1H), 4,35 (d, J = 4,94 Hz, 1H), 3,85 ~ 3,40 (m, 8H), 1,75 ~1,65 (m, 2H), 1,51 ~ 1,43 (m, 1H), 0,90 ~ 0,88 (m, 1H) , 0,83(s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CDC13) ô, 180, 62, 174, 19, 155, 61,141,86, 138,55, 132,04, 131,33, 130,66, 127,12, 123,26,121,14, 114,20, 111,91, 70,47, 67,14, 66,98, 65,20, 63,49,55,96, 44,34, 36,97, 33,23, 30,55, 30,27.

EXEMPLO 130

(4-HIDRÓXI-BUTIL)-AMIDA DO ÁCIDO (2'R,3S,3"S,4'R,5'R)6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5' -

CARBOXÍLICOOH

RMN 1H (300 MHz,'CDCl3), ô, S 9,63 (br, 1H) , 7,84(s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,23 (t, J = 7,23 Hz, 1H) , 7,09 (t, J= 7,20 Hz, 1H) , 6,91 (s, 1H) , 6,65 (d, J = 8,07 Hz, 1H) ,6,22 (d, J = 7,25 Hz, 1H), 4,61 (m, 1H), 4,12 (m, 1H), 3,65(m, 3H), 3,48 ~ 3,25 (m, 4H) , 1,65 ~ 1,50 (m, 5H) , 0,91 ~0,90 (m, 1H), 0,86 (s, 9H).

EXEMPLO 131

(4-DIIDRÓXI-BUTIL)-AMIDA,DO ÁCIDO (2'R,3S,3"S,4'R,5'R)6 -CLORO-4' - (3-CLORO-2-FLÚOR-.FENIL) -2' - (2 , 2-DIMETIL-PROPIL) -2-OXO-1,2-DIIDRO-ESPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXÍLICO[a]25D 71,1 (c, 1,0 CHC13); RMN XH (300 MHz,CD3COCD3), ô 9,74 (s, 1H), 7,74 (t, J = 5,8 Hz, 1H) , 7,43(dd, J = 2,0, 7,1 Hz, 1H), 7, 33-6, 84 (m, 5H) , 4,42 (d, J =8,4 Hz, 1H) , 4, 05-3, 98 (m, 1H) , 3,91 (d, J = 8,1 Hz, 1H) ,3, 70-3, 33 (m, 6H) , 3,04 (br, 2H) , 1, 53-1, 45 (m, 3H) , 0,98-,091 (m, 1H) , 0,84 (s, 9H) ; RMN 13C (75 MHz, CD3COCD3) ô180,40, 172,20, 158,73, 155,46, 144,00, 136,86, 133,30,131,19, 129,97, 128,64, 126,92, 121,36, 109,91, 69,97,67,33, 67,22, 66,73, 64,40, 58,92, 44,49, 36,39, 33,63,29,40. ESIMS [M+Na] = 574,1.

EXEMPLO 132<formula>formula see original document page 186</formula>

INIBIÇAO COMPETITIVA DA INTERAÇÃO ENTRE p53 E MDM2

O ensaio de ligação FP descrito no EXEMPLO 2 foiusado para testar a habilidade de vários compostos sinte-tizados em inibir a.interação entre MDM2 e p53. Os compostosKe-43 (Exemplo 41), Ke-61 (Exemplo 65), PMDM6 (Exemplo 2), eKe-63 (Exemplo 88) foram testados contra o peptideo p53natural (Exemplo 2). Os compostos Ke-43, PMDM6, e Ke-63mostraram ser mais potentes que o peptideo p53 natural, comovalores de Ki na faixa de baixo nM para sub-nM (Figura 9).

EXEMPLO 133

ROMPIMENTO DE INTERAÇÃO ENTRE p53 E MDM2 POR INIBIDORES DE

MDM2A co-imunoprecipitação (Co-IP)/ensaios Westernblotting foram realizados para avaliar os efeitos de Ke-43na interação p53-MDM2. Depois de colher e lavar uma vez comPBS gelado, células de câncer do cólon HCT116 foram lisadaspor sonicação em tampão de Co-IP (50mM de Tris (pH 7,5),150mM de NaCl, lmM de EDTA (PH 8,0), 0,5% de NP-40) contendofluoreto de fenilmetilsulfonila lmM e coquetel de inibidoresde protease. Os usados sonicados foram então centrifugadosem 12.000xg, a 4°C, por 15 minutos. O sobrenadante contendo2 mg de proteína foi incubado em ausência ou presença de Ke-43 por 1 hora a 4°C, seguido por adição de pérolas deagarose, conjugadas ou com anticorpo anti-p53 (FL-393, SantaCruz) ou com anticorpo não especifico. Depois de misturarpor 2 horas a 4°C, a pérolas de agarose foram lavadas 3vezes com tampão de Co-IP gelado, levadas à ebulição emtampão de amostra e depois SDS-PAGE e a presença de p53 eMDM2 foi detectada por Western blotting com anticorposmonoclonais de camundongo contra p53 e proteínas MDM-2.Concentrações; crescentes de Ke-4 3 resultaram em imunopre-cipitação reduzida de MDM2 pelo anticorpo anti-p53, indi-cando que Ke-43 rompe a interação entre p53 e MDM2 (Figura10) .

EXEMPLO 134

INIBIÇÃO DE CRESCIMENTO DE CÉLULAS POR INIBIDORES DE MDM2

Linhagens de células de câncer do cólon RKO (p53do tipo selvagem), HCT116 (p53 do tipo selvagem), e HT-29(p53 mutante)" foram semeadas em placas de cultura decélulas, de fundo plano, com 96 poços, em um densidade de 3-4xl03 células/poço e incubadas em presença de compostos por4 dias. A taxa de inibição de crescimento de células depoisdo tratamento com concentrações crescentes dos compostos foideterminada usando-se sal monossódico de 2-(2-metóxi-4-nitrofenil)-3- (4-nitrofenil)-5- (2, 4-dissulfofenil)-2H-tetra-zólio WST-8 (Doj indo Molecular Technologies. Inc.,Gaithersburg, Mariland). WST-8 foi adicionado em umaconcentração final de 10% para cada poço e as placas foramincubadas a 37°C, por 2 a 3 horas. A absorbância das amostrasfoi medida a 4 50 nm em uma leitora de placas (MolecularDevice-TECAN ULTRA). A concentração dos compostos que inibi-ram o crescimento de células em 50% (IC50) foi calculada porcomparação da absorbância nas células tratadas com oscompostos com as células não tratadas. O composto Ke-4 3(Exemplo 41) mostrou uma potente atividade inibidora decrescimento para células cancerosas que expressam p53 dotipo selvagem (Figura 11) . Notavelmente, a células cance-rosas expressando p53 do tipo selvagem mostraram mais que 18vezes ;(HCT116) e mais que 13 vezes especificidade (RKO)sobre células cancerosas que expressam o p53 mutante (HT-29)(Figura 11).

EXEMPLO 35

EFEITOS DE INIBIDORES DE MDM2 SOBRE A EXPRESSÃO DE p53 ESEUS PRODUTOS GÊNICOS ALVO MDM2 E p21Células cancerosas foram tratadas com compostos deteste ou DMSO a 0,1% por 24 horas. As células foram colhidaspor tripsinização e lavadas com solução salina de tampão defosfato, gelada, pH 7, 5 (Invitrogen, Carlsbad, CA) . Ascélulas foram usadas por 30 minutos em tampão de lisegelado (50 mM de Tris (pH 7,5), 150mM de NaCl, lmM de EDTA(pH 8,0), 25mM de fluoreto de sódio, 1% de NP-40 e 0,1% deSDS) contendo 2mM de ortovanadato de sódio, lmM de fluoretode fenilmetilsulfonila e coquetel de inibidores de protease(Roche Applied Science, Indianópolis, IN).. A seguir,extratos de células foram centrifugados a 12.000xg, a 4°C,por 10 minutos para obter usados clarificados. Proteina foiestimada por corante Byo-Rad. Lisados de células contendo 35\xq de proteina foram resolvidos em um gel de tris-glicina 4-20% (Invitrogen, Carlsbad, CA) e transferidos para membranasde poli(difluoreto de vinilideno). Imunodetecção das proteí-nas na membrana de transferência foi realizada usando-seanticorpos policlonais de camundongo anti-p53 (Ab-6, OncogeneResearch Products, Boston, MA), anti-MDM2 (SMP14, Santa CruzBiotechnology, Santa Cruz, CA) e anti-p21 (BD Biosciences,San Diego, CA) . O anticorpo para |3-actina (Sigma, St Louis,MO) foi usado para avaliar a carga de proteina. Quando aslinhagens de células de câncer do cólon RKO (p53 tiposelvagem) e HT-29 (p53 mutante) foram tratadas com Ke-43(Exemplo 41) por 24 horas, Ke-43 induziu acúmulo de p53 eseus produtos gênicos alvo somente nas células RKOexpressando p53 do tipo selvagem (Figura 12).

EXEMPLO 136

MORTE CELULAR E APOPTOSE INDUZIDAS POR INIBIDORES DE MDM2

Linhagens de células de câncer do cólon RKO (p53do tipo selvagem) e HT-29 (p53 mutante) e células de fibro-blastos de cólon normal CCD-I8C0 foram tratadas com dosescrescentes de Ke-43 ou Ke-61 por 4 dias, em placas de Petride 6 poços. Ensaios de exclusão com corante azul de tripanoforam realizados para determinar a habilidade dos inibidoresem induzir a morte celular. Depois de 4 dias de tratamento,células flutuantes e aderentes foram colhidas e coloridascom solução a 0,2% de azul de tripano (Sigma, St Louis, MO).Cada tratamento foi realizado em triplicata e pelo menos 100células foram contadas. As células coloridas de azul oucélulas morfologicamente não saudáveis foram classificadascomo células mortas. Para avaliar a apoptose, o teor de DNAsub-diplóide em células tratadas com ou sem inibidores deteste foi analisado por coloração com iodeto de propidio(PI) . Depois de lavagem uma vez com PBS gelado, as célulasforam fixadas em etanol a 70% em 1 dia, a -20°C. As célulasfixadas em etanol foram então lavadas duas vezes com PBS ecoloridas com uma solução corante contendo iodeto depropidio (PI) a 50 \xg/mL e RNAse A a 100 |ug/mL em PBS, por20 minutos, no escuro, à temperatura ambiente. A aquisiçãode células e análise do teor de DNA sub-diplóide foramrealizadas por citometria de fluxo usando software CellQuest.Somente as células cancerosas expressando p53 do tiposelvagem sofreram apoptose em resposta à administração deKe-43 (Figura 13).

EXEMPLO 137

EFEITO DE INIBIDORES DE MDM2 NA PROGRESSÃO DO CICLO CELULAR

DE CÉLULAS CANCEROSAS DO CÓLONA progressão do ciclo celular foi avaliada emlinhagens de células de câncer do cólon RKO (p53 do tiposelvagem) e HT-29 (p53 mutante) e células de fibroblastos decólon normal CCD-I8C0 por determinação das células em fase Spor incorporação de bromodesoxiuridina (BrdU) seguida porcoloração do anticorpo anti-BrdU marcado com FITC e o teortotal de DNA por coloração com 7-aminoactinomicina D (7-AAD)de acordo com as instruções do fabricante (BD Biosciences,San Jose, CA) . Em resumo, células cancerosas e normais,depois de uma noite de incubação, foram tratadas com ou semcompostos de teste por 22 horas, seguido por 2 horasadicionais de incubação com 10 jaM de BrDU. As células foramcolhidas, fixadas e coloridas com anti-BrDu marcado com FITCe 7-AAD. A distribuição do ciclo celular foi analisada porcitometria de fluxo. As células foram adquiridas e os dadosanalisados pelo uso de software CellQuest (BD Biosciences).Ke-4 3 induziu uma depleção de fase S em células cancerosasRKO e em células de fibroblastos de cólon normal CCD-I8C0,em que ambas expressam p53 do tipo selvagem (Figura 14) .Contudo, Ke-43 não mostrou efeito apreciável na progressãodo ciclo celular das células HT-29 expressando p53 mutante(Figura 14). 0 inibidor de controle inativo Ke-61 não teveum efeito significante em todas as células testadas.

EXEMPLO 138

PROTEÇÃO DE CÉLULAS NORMAIS DA QUIMIOTERAPIA COM INIBIDORES

DE MDM2

Células epiteliais de próstata normal PrEc foramsemeadas em placas de 6 poços e incubadas com Ke-63 (ljaM e2,5|aM) por 24 horas, então TAXOL IjiM (paclitaxel) foiadicionado por 2 dias. Azul de tripano foi usado paradeterminar a viabilidade celular. Os dados mostraram quequando as células epiteliais de próstata normal foram pré-tratadas com células Ke-63, as células foram protegidas doTAXOL (Figura 15).

Tendo agora descrito a invenção por inteiro, seráentendido por aqueles versados na técnica que a mesma podeser realizada dentro de uma faixa ampla e equivalente decondições, formulações e outros parâmetros sem afetar oescopo da invenção ou qualquer modalidade dela. Todas aspatentes, pedidos de patente e publicações citados aquiestão integralmente incorporados a titulo de referência, emsua totalidade .

Claims

1. - Composto, CARACTERIZADO pelo fato de ter aFórmula I:ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste, em que:X é CH, 0, N, ou S, em que R8 é ausente se X for 0<formula>formula see original document page 193</formula>Y é 0, S, ou NR';Ri/ R2f R3f R5/ Re e R7 são, independentemente,H ou alquila opcionalmente substituída, cicloalquila,alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico,C02R' , OCOR' , . CONR' R",. NR"C0R' , NR' S02R", S02NR' R",(C=NR')NR"R"', ou NR' R" ; ouR7 forma um grupo arila, cicloalquila, ouheterociclico com um de R5 ou Re;R8 é H .ou alquila opcionalmente substituída,cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila,heterociclico, C02R' , OCOR', C0NR'R", S02NR'R", ou(C=NR')NR"R"';R9 é um a quatro grupos independentementeselecionados de H, F, Cl, Br, I, OH, N02. alquila,cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila,heterociclico, OR' , C02R' , OCOR', C0NR'R", NR"C0R',NR'S02R", S02NR'NR", (C=NR' ) NR"R"' , ou NR'R"; ecada R, R" e R'" é, independentemente, H oualquila opcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila,cicloalquenila, alquinila, arila, ou heterociclico; ou R' e R" ou R" e R"' formam um anel; ouquando um de R3 e R4 for CONRR", então um de R e R'pode ser ainda (CH2)n-R', (CH2) n-NR'R", (CH2) n-NR'COR",(CH2) nNR' S02R", (CH2)n- NR' (C=NR")NR"', (CH2)n-COOH, (CH2)n-COOR', (CH2)n-CONR'R", (CH2)n-OR', (CH2)n-SR', (CH2)n-COR', (CH2)n-S03H, (CH2)n-SONR'R", (CH2) n-S02NR' R", (CH2CH20) n-(CH2) m-OH, (CH2CH20)n-(CH2)mOR', (CH2CH20) n-(CH2)m-COOR', (CH2CH20)n-(CH2)m-CONR'R", (CH2CH20)n-(CH2)m-NR'R", (CH2CH20) n-(CH2) m-NR'COR", (CH2CH20)n-(CH2) m-NR' (C=NR")NR"', (CH2CH20) n- (CH2)m-NR' S02R", ( C H 2 ) p - (CH2CH20) n- (CH2) m-OH, (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m- OR', (CH2)P-(CH2CH20)n-(CH2)m-COOR', (CH2) p-(CH2CH20) n-(CH2)m-CONR'R", (CH2)p-(CH2CH20) n- ( CH2 ) m-NR'R", (CH2) p-(CH2CH20) n-(CH2)m_NR'COR", (CH2)P-(CH2CH20)n-(CH2)m-NR' (C=NR")NR"\ (CH2)p-(CH2CH20)n- (CH2)m-NR' S02R", -CO-R', -SOR', ou -S02R'; en, m e p são, cada um, independentemente, l.a 6.

2. Composto, de acordo cóm a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula II ou a Fórmula III:ReII IIIou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste.

3. Composto, cie acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula IV:ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 3,CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula V ou a Fórmula VI:<formula>formula see original document page 195</formula>ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula VII:<formula>formula see original document page 195</formula>ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 5,10 CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula VIII ou a Fórmula IX:VIIIIXou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que um de Ri e R2 é arilaopcionalmente substituída ou heteroarila.

8. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que um de Ri e R2 é cicloalquila,alquila linear ou ramificada, amida ou éster.

9. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que um de R5 e R6 é alquila C3_i8,arila, ou heteroarila.

10. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula X:N-R11 ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste, em que:Rio e Rn são, independentemente, H, OH ou alquilaopcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila,cicloalquenila, alquinila, arila,• heterociclico, (CH2)n-R' /(CH2)n-NR'R", (CH2)n-NR'COR", (CH2) nNR'S02R", (CH2)n-NR' (C=NR")NR"' , (CH2)n-COOH, (CH2) n-COOR' , (CH2) n-CONR'R",(CH2)n-OR', (CH2)n-SR', (CH2)n-COR', (CH2)n-S03H, (CH2)n-SONR'R", (CH2)n-S02NR'R", (CH2CH20) n-(CH2) m-0H, (CH2CH20)n- (CH2)mOR', (CH2CH20)n-(CH2)m-COOR', (CH2CH20) n- (CH2) m-CONR' R",(CH2CH20)n-(CH2)m-NR'R", (CH2CH20) n-(CH2) m-NR'COR", (CH2CH20)n-(CH2)m-NR' (C=NR")NR"' , (CH2CH20) n-(CH2)m-NR'S02R", (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-OH/ (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-OR', (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-COOR' , (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-CONR' R", (CH2)p- (CH2CH20) n- (CH2) m-NR'R", (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-NR' COR",(CH2)P- (CH2CH20)n- (CH2)m-NR' (C=NR")NR"', (CH2)p- (CH2CH20)n- (CH2)m-NR'S02R", -CO-R', -SOR', ou -S02R' ; en, m e p são, cada um, independentemente, 1 a 6.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de ter uma das Fórmulas XI-XXVI:XXIII XXIV XXV XXVIou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste.

12. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula XXIX: ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste, em que:Z é 0, NH, NR', CH2, CHR', ou CR'R";Rio é H, OH ou alquila opcionalmente substituída,cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, (CH2)n-R', (CH2) n-NR'R", (CH2) n-NR' COR",(CH2) nNR'S02R", (CH2)n- NR' (C=NR")NR"', (CH2)n-COOH, (CH2)n-COOR', (CH2)n-C0NR'R", (CH2)n-0R', (CH2)n-SR', (CH2)n-C0R',(CH2)n-S03H, (CH2)n-S0NR'R", (CH2) n-S02NR' R", (CH2CH20) n- (CH2) m-OH, (CH2CH20)n-(CH2)mOR', (CH2CH20) n-(CH2) m-C00R', (CH2CH20)n- (CH2)m-CONR'R", (CH2CH20)n-(CH2)m-NR'R", (CH2CH20) n-(CH2) m-NR'C0R", (CH2CH20) n-(CH2) m-NR' (C=NR")NR"', (CH2CH20) n- (CH2)m-NR'S02R", (CHz)p- (CH2CH20)n-(CH2)m-OH, (CH2) p-(CH2CH20) n-(CH2) m-OR', (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-COOR', (CH2) p- (CH2CH20)n- (CH2)ra-CONR'R", (CH2)P- (CH2CH20) n- ( CH2 ) m-NR' R", (CH2)P- (CH2CH20)n-(CH2)m-NR'COR", (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-NR' (C=NR")NR'" , (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-NR' S02R", -CO-R' , -SOR', ou -S02R'; en, m e p são, cada um, independentemente, 1 a 6.

13. Composto, de acordo com a reivindicação 12,CARACTERIZADO pelo fato de ter uma das Fórmulas XXX-XLV:XLll XLNI XUV XLVou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste.

14. Composto, de acordo com a . reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula XXVII ou a FórmulaXXVIII:<formula>formula see original document page 200</formula>ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamente- aceitável deste, em que:Rio e Rn são, independentemente, H, OH ou alquilaopcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, . alquinila, arila, heterociclico, (CH2)n-R',(CH2)n-NR'R", (CH2)n-NR'C0R", (CH2) nNR'S02R", (CH2)n-NR' (C=NR")NR"', (CH2)n-COOH, (CH2) n-COOR', (CH2) n-CONR' R",(CH2)n-OR', (CH2)n-SR', (CH2)n-COR', (CH2)n-S03H, (CH2)n-SONR'R", (CH2)n-S02NR'R", (CH2CH20) n- (CH2) m-0H, (CH2CH20)n- (CH2)m0R', (CH2CH20)n-(CH2)m-COOR', (CH2CH20) „- (CH2) m-CONR' R",(CH2CH20)n-(CH2)m-NR'R", (CH2CH20) n-(CH2) m-NR'COR", (CH2CH20)n-(CH2) m-NR' (C=NR")NR"' , (CH2CH20) n-(CH2)m-NR'S02R", (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-OH, (CH2)P-(CH2CH20)n-(CH2)m-OR', (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-COOR', (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-CONR' R", (CH2)p- (CH2CH20) n-(CH2)m-NR'R", . (CH2) p-(CH2CH20) n-(CH2) m_NR'COR",(CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-NR' (C=NR") NR"' , (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-NR'S02R", -CO-R', -SOR', ou -S02R'; en, m e p são, cada um, independentemente, 1 a 6.

15. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula XLVI:ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste.

16. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula XLVII:R3Ri.XLVII ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste, em que:R12 é um a quatro grupos independentementeselecionados de H, F, Cl, Br, I, OH, N02, alquila,cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, . heterociolico, OR' , C02R' , OCOR', CONR'R", NR"COR',S02NR'R", (C=NR' ) NR"R"' , ou NR'R",en é 0, 1, ou 2.

17. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula XLVIII:R3rk/ ntR4Rq ii i ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste.

18. Composto, de acordo com a reivindicação 17,CARACTERIZADO pelo fato de ter uma das Fórmulas XLIX-LXIV:<formula>formula see original document page 202</formula>ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste.

19. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula LXV:<formula>formula see original document page 11</formula>ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste, em que:Rio e Rn são independentemente, H, OH ou alquilaopcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila,cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, (CH2)n-R'/(CH2)n-NR'R", (CH2)n-NR'COR", (CH2) nNR'S02R", (CH2)n-NR' (C=NR")NR"', (CH2)n-COOH, (CH2) n-C00R' , (CH2) n"CONR' R",(CH2)n-OR', (CH2)n-SR', (CH2)n-C0R', (CH2)n-S03H, (CH2)n-S0NR'R", (CH2)n-S02NR'R", (CH2CH20) n-(CH2) m-0H, (CH2CH20)n-(CH2)mOR', (CH2CH20)n-(CH2)m-COOR', (CH2CH20) n- (CH2) m-CONR' R",(CH2CH20)n- (CH2)m-NR'R", (CH2CH20)n- (CH2) m-NR'COR", (CH2CH20)n-(CH2)m-NR' (C=NR")NR"', (CH2CH20) „- (CH2)m-NR' S02R", (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-OH, (CH2)P- (CH2CH20)n- (CH2)m-OR' , (CH2)p-(CH2CH20)n- (CH2)m-COOR' , (CH2)p- (CH2CH20)n- (CH2) m-CONR'R", (CH2)p-(CH2CH20) n- (CH2) m-NR'R", (CH2) p-(CH2CH20) n-(CH2) m_NR'COR",(CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-NR' (C=NR") NR'" , (CH2) p- (CH2CH20) n- {CH2) m-NR'S02R", -CO-R', -SOR', ou -S02R' ; en, m e p são, cada um, independentemente, 1 a 6.

20. Composto, de acordo com a reivindicação 19,CARACTERIZADO pelo fato de ter uma das Fórmulas LXVI e LXVII:ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste.

21. Composto, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de ter uma das Fórmulas LXVIII e LXIX:<formula>formula see original document page 203</formula>ou um sal ou pró-medicamento farmaceuticamenteaceitável deste, em que:Z é 0, NH, NR', CH2, CHR' , ou CR'R";Rn é H, OH ou alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila,heterociclico, (CH2)n-R', (CH2) n-NR'R", (CH2) n~NR' COR",(CH2) nNR' S02R", (CH2)n- NR' (C=NR") NR'" , (CH2)n-C00H, (CH2)n-COOR', (CH2)n-C0NR'R", (CH2)n-0R', (CH2)n-SR', (CH2)n-C0R',(CH2)n-S03H, (CH2)n-S0NR'R", (CH2) n~S02NR' R", (CH2CH20) n- (CH2) m- OH, (CH2CH20)n-(CH2)m0R', (CH2CH20) n- (CH2) m-C00R' , (CH2CH20)n-(CH2)m-C0NR'R", (CH2CH20)n-(CH2)m-NR'R", (CH2CH20) n- (CH2) m-NR'C0R", (CH2CH20) n-(CH2) m-NR' (C=NR")NR"', (CH2CH20) n-(CH2)m-NR'S02R", (CH2)P- (CH2CH20)n-(CH2)m-0H, (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-OR', (CH2)P-(CH2CH20)n-(CH2)m-C00R', (CH2) p-(CH2CH20) n-(CH2)m- C0NR'R", (CH2)p- (CH2CH20) n- ( CH2 ) m-NR'R", (CH2) p-(CH2CH20) n-(CH2)m_NR'C0R", (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-NR' (C=NR")NR"', (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-NR'S02R", -C0-R', -S0R' , ou -S02R'; en, m e p são, cada um, independentemente, 1 a 6.

22. Método para preparar um composto de Fórmula X, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende:a) condensar um composto de Fórmula 1 com umcomposto de Fórmula 2, para formar um composto de Fórmula 3;Rib) condensar o composto de Fórmula 3 com umcomposto de Fórmula 4 e um composto de Fórmula 5 paraformar um composto de fórmula 6; e`3 4 5 6c) tratar o composto de Fórmula 6 com um agenteoxidante para formar um composto de Fórmula X;em que: Ri e R5 são, independentemente, H ou alquilaopcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila,cicloalquenila, alquinila, arila, heterocíclico, CO2R' ,OCOR', CONR'R", NR"COR', NR'S02R", S02NR'R", (C=NR' ) NR"R"' ,ou NR'R"; R7 é H;R9 é um a quatro grupos independentementeselecionados de H, F, Cl, Br, I, OH, N02, alquila,cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila,heterociclico, OR', C02R', OCOR', CONR'R", NR"C0R', NR'S02R", S02NR'R", (C=NR')NR"R"', ou NR'R";Rio e Rn são, independentemente, H, OH ou alquilaopcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila,cicloalquenila, alquinila, arila, heterocíclico, (CH2)n-R',(CH2)n-NR'R", (CH2)n-NR'COR", (CH2) nNR'S02R", (CH2)n-NR' (C=NR")NR"', (CH2)n-C00H, (CH2) n-C00R', (CH2) n-C0NR'R",(CH2)n-OR', (CH2)n-SR', (CH2)n-COR', (CH2)n-S03H, (CH2)n- SONR'R", (CH2)n-S02NR'R", (CH2CH20) n-(CH2) m-0H, (CH2CH20)n-(CH2)mOR' , (CH2CH20)n- (CH2)m-C00R' , (CH2CH20)n- (CH2) m-CONR' R",(CH2CH20)n- (CH2)m-NR'R", (CH2CH20)n- (CH2) m-NR'COR", (CH2CH20)n-(CH2) m-NR' (C=NR")NR"', (CH2CH20) n- (CH2)m-NR' S02R", (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-OH, (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-OR', (CH2)p- (CH2CH20)n- (CH2)m-COOR' , (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-CONR' R", (CH2)p-(CH2CH20) n- (CH2)m-NR'R", (CH2) p-(CH2CH20) n-(CH2) m_NR'COR",(CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-NR' (C=NR") NR"', (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-NR'S02R", -CO-R', -SOR', ou -S02R'; e.n, m e p são, cada um, independentemente, 1 a 6; ecada R, R" e R"' é, independentemente, H oualquila opcionalmente substituída, cicloalquila, .alquenila,cicloalquenila, alquinila, arila, ou heterociclico; ouR' e R" ou R" e R"-' formam um anel.

23. Método para preparar um composto de FórmulaLXV, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende:a) condensar um composto de Fórmula 16 com umcomposto de Fórmula 2 para formar um composto de Fórmula 17;<formula>formula see original document page 0</formula>b) condensar o composto de Fórmula 17 com umcomposto de Fórmula 4 e um composto de Fórmula 5 paraformar um composto de Fórmula 18; e`17 4 5 18c) tratar o composto de Fórmula 18 com um agenteoxidante para formar um composto de Fórmula LXV;LXV<formula>formula see original document page 207</formula> em que:Ri e R5 são, independentemente, H ou alquilaopcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila,cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, CO2R' ,OCOR', CONR'R", NR"COR', NR'S02R", S02NR'R", (C=NR' ) NR"R"' , ou NR'R";R4 é H;R9 é um a quatro grupos independentementeselecionados de H, F, Cl, Br, I, OH, NO2, alquila,cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, OR', C02R', OCOR', CONR'R", NR"COR',NR'S02R", S02NR'R", (C=NR')NR"R"', ou NR'R";Rio e Rn são, independentemente, H, OH ou alquilaopcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila,cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, (CH2)n-R',(CH2)n-NR'R", (CH2)n-NR'COR", (CH2) nNR'S02R", (CH2)n-NR' (C=NR")NR"', (CH2)n-COOH, (CH2) n-COOR', (CH2) n-CONR' R",(CH2)n-OR', (CH2)n-SR', (CH2)n-COR', (CH2)n-S03H, (CH2)n-SONR'R", (CH2)n-S02NR'R", (CH2CH20) n-(CH2) m-OH, (CH2CH20)n- (CH2)mOR', (CH2CH20)n-(CH2)m-COOR', (CH2CH20) „- (CH2) m-CONR' R",(CH2CH20)n- (CH2)m-NR'R", (CH2CH20)n- (CH2) m-NR' COR", (CH2CH20)n-(CH2) m-NR' (C=NR")NR"' , (CH2CH20) n- (CH2)m-NR' S02R", (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-OH, (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-OR', (CH2)p-(CH2CH20)n- (CH2)m-COOR' , (CH2)p- (CH2CH20)n- (CH2)m-CONR' R", (CH2)p- (CH2CH20) n- (CH2) B-NR'R", (CH2) p-(CH2CH20) n-(CH2) m_NR'COR",(CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-NR' (C=NR") NR"' , (CH2) p- (CH2CH20) n- (CH2) m-NR'S02R", -CO-R', -SOR' , ou -S02R'; en, m e p são, cada um, independentemente, 1 a 6; ecada R' , R" e R'" é independentemente H ou alquila opcionalmente substituída, cicloalquila,alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, ouheterociclico; ouR' e R" ou R" e R"' formam um anel.

24. Método para preparar um composto de Fórmula XXIX, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende:a) condensar um composto de Fórmula 3 com umcomposto de Fórmula 4 e um composto de Fórmula 5 paraformar um composto de Fórmula 7;c) aquecer o composto de Fórmula 7 em presençade um ácido e então adicionar um agente redutor paraformar um composto de Fórmula 8;0;Rg~TTRfl-n-c) condensar o composto de Fórmula 8 com umagente bloqueador seguido por cloreto de trimetilacetilapara formar um composto de Fórmula 10;d) tratar o composto de Fórmula 10 com um agentede halogenação para formar um composto halo de Fórmula 11; e) deslocar o grupo halo do composto de Fórmula11 com RioONa ou Ri0NH2 para formar um composto de Fórmula 12;<formula>formula see original document page 210</formula>g) alquilar o composto de Fórmula 13 com umagente alquilante para formar um composto de Formula XXIX; em que:Ri e R5 são, independentemente, H ou alquilaopcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila,cicloalquenila, alquinila, arila, heterociclico, CO2R',OCOR' , CONR'R", NR"COR', NR'S02R", S02NR'R", (C=NR' ) NR"R"' , ou NR'R";R7 é alquila opcionalmente substituída, alquenila,alquinila, C02R', OCOR', CONR'R", S02NR'R", ou(C=NR')NR"R"';R9 é um a quatro grupos independentementeselecionados de H, F, Cl, Br, I, OH, N02, alquila,cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila,heterociclico, OR', C02R', OCOR', CONR'R", NR"COR',NR'S02R", S02NR'R", (C=NR') NR"R"' , ou NR'R";cada R', R" e R'" é independentemente H oualquila opcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila,cicloalquenila, alquinila, arila, ou heterociclico; ouR' e R" ou R" e R" e R'" formam um anel;Rio é H, OH ou alquila opcionalmente substituída,cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila,heterociclico, (CH2)n-R', (CH2) n~NR' R", (CH2) n-NR'COR",(CH2) nNR'S02R", (CH2)n- NR' (C=NR")NR"', (CH2)n-COOH, (CH2)n-COOR', (CH2)n-CONR'R", (CH2)n-OR', (CH2)n-SR', (CH2)n-COR',(CH2)n-S03H, (CH2)n-SONR'R", (CH2) n-S02NR'R", (CH2CH20) n- (CH2) m"OH, (CH2CH20)n-(CH2)mOR', (CH2CH20) n- (CH2) m-COOR' , (CH2CH20)n-(CH2)m-CONR'R", (CH2CH20)n-(CH2)m-NR'R", (CH2CH20) n-(CH2) m-NR'COR", (CH2CH20)n-(CH2) m-NR' (C=NR")NR"', (CH2CH20) n- (CH2)m-NR'S02R", (CH2)P- (CH2CH20)n-(CH2)m-OH, (CH2) p-(CH2CH20) n-(CH2) m-OR', (CH2)P-(CH2CH20)n-(CH2)m-COOR', (CH2) p- (CH2CH20)n- (CH2)m-C0NR'R", (CH2)P-(CH2CH20) n- (CH2) m-NR'R", (CH2) p- (CH2CH20) n-(CH2)m_NR'COR", (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-NR' (C=NR")NR"', (CH2)p-(CH2CH20)n-(CH2)m-NR'S02R", -CO-R', -SOR', ou -S02R' ; en, m e p são, cada um, independentemente, 1 a 6.

25. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelofato de que compreende um composto conforme definido nareivindicação 1 e um veiculo farmaceuticamente aceitável.

26. Método para inibir o crescimento e/oudivisão celular, induzir apoptose e/ou induzir a parada do ciclo celular em uma célula, CARACTERIZADO pelo fatode que compreende contatar a célula com um compostoconforme definido na reivindicação 1.

27. Método para proporcionar uma célula sensívela agente(s) adicional (ais), CARACTERIZADO pelo fato de que compreende contatar a célula com um composto conformedefinido na reivindicação 1.

28. Composto, de acordo com a reivindicação 27,CARACTERIZADO pelo fato de que compreende adicionalmentecontatar a célula com agente(s) adicional(ais).

29. Método, de acordo com a reivindicação 28,CARACTERIZADO pelo fato de que o(s) agente (s)adicional(ais) é(são) um agente quimioterapêutico.

30. Método, de acordo com a reivindicação 28,CARACTERIZADO pelo fato de que o(s) dito(s) agente (s) adicional(ais) é(são) radiação.

31. Método para tratar, atenuar, ou prevenir umdistúrbio em um animal, CARACTERIZADO pelo fato de quecompreende administrar ao dito animal uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um composto conforme definido na reivindicação 1.

32. Método, de acordo com a reivindicação 31,CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administraradicionalmente agente(s) adicional(ais).

33. Método, de acordo com a reivindicação 32,CARACTERIZADO pelo fato de que o(s) dito(s) agente (s)adicional (ais) é(são) um agente quimioterapêutico .

34. Método, de acordo com a reivindicação 32, CARACTERIZADO pelo fato de que o(s) dito(s) agente (s)adicional(ais) é(são) radiação.

35. Método, de acordo com a reivindicação 31,CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio é uma doençahiperproliferativa.

36. Método, de acordo com a reivindicação 35,CARACTERIZADO pelo fato de que a dita doençahiperproliferativa é câncer.

37. Método, de acordo com a reivindicação 32,CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto conforme definido na reivindicação 1 é administrado antes dosdito(s) agente (s) adicional(ais) .

38. Método, de acordo com a reivindicação 32,CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto conformedefinido na reivindicação 1 é administrado depois do(s) agente(s) adicional(ais).

39. Método, de acordo com a reivindicação 32,CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto conformedefinido na reivindicação 1 é administradoconcorrentemente com o(s) dito(s) agente(s) adicional (ais) .

40. Método para inibir a interação entre p53 ouas proteínas relacionadas à p53 e MDM2 ou as proteínasrelacionadas à MDM2 em uma célula, CARACTERIZADO pelofato de que compreende expor a célula a um compostoconforme definido na reivindicação 1.

41. Método para inibir o crescimento de umacélula hiperproliferativa contendo p53 funcional e proteínas relacionadas à p53, CARACTERIZADO pelo fato deque compreende expor a célula a um composto conformedefinido na reivindicação 1.

42. Método para tratar, atenuar ou prevenir umdistúrbio hiperproliferativo definido pela expressão de p53 funcional ou proteínas relacionadas à p53 em umanimal, CARACTERIZADO pelo fato de que compreendeadministrar ao dito animal uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um composto conforme definidona reivindicação 1.

43. Método para proporcionar uma célula normalresistente a agentes ou tratamentos quimioterapêuticos,CARACTERIZADO pelo fato de que compreende contatar acélula com um composto conforme definido na reivindicação 1.

44. Método, de acordo com a reivindicação 43, CARACTERIZADO pelo fato de que a dita célula normalcompreende p53 do tipo selvagem.

45. Método para proteger células normais em umanimal com uma doença hiperproliferativa proveniente dosefeitos colaterais tóxicos de agentes ou tratamentos quimioterapêuticos, CARACTERIZADO pelo fato de quecompreende administrar ao dito animal um compostoconforme definido na reivindicação 1.

46. Método, de acordo com a reivindicação 45,<formula>formula see original document page 215</formula>! CARACTERIZADO pelo fato de que as ditas células normaiscompreendem p53 do tipo selvagem.

47. Método, de acordo com a reivindicação 45,CARACTERIZADO pelo fato de que a dita doença hiperproliferativa é câncer.

48. Método, de acordo com a reivindicação 47,CARACTERIZADO pelo fato de que o dito câncer compreendeuma mutação ou deleção de p53.

49. Método para tratamento, atenuação ou prevenção de um distúrbio ou condição causada pelaadministração de um agente ou tratamentoquimioterapêutico, CARACTERIZADO pelo fato de quecompreende co-administrar um composto conforme definidona reivindicação 1 a um animal que está sendo tratado com um agente ou tratamento quimioterapêutico.

50. Método, .de acordo com a reivindicação 49,CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio ou condição émucosite, estomatite, xerostomia, distúrbiogastrintestinal ou alopecia.

51. Método, de acordo com a reivindicação 49,CARACTERIZADO pelo fato de que o dito composto conformedefinido na reivindicação 1, é administrado ao ditoanimal antes da administração do referido agente outratamento quimioterapêutico.

52. Kit, CARACTERIZADO pelo fato de quecompreende um composto conforme definido na reivindicação 1.

53. Kit, de acordo com a reivindicação 52,CARACTERIZADO pelo fato de que compreende adicionalmenteinstruções para administrar o referido composto a umanimal.

54. Kit, de acordo com a reivindicação 54,CARACTERIZADO pelo fato de que compreende tambémagente(s) adicional(ais).

55. Kit, de acordo com a reivindicação 54,CARACTERIZADO pelo fato de que o(s) dito(s) agente (s)adicional(ais) é(são) um agente quimioterapêutico.

56. Kit, de acordo com a reivindicação 53,CARACTERIZADO pelo fato de que as instruções são paraadministrar o dito composto a um animal tendo doençahiperproliferativa.

57. Kit, de acordo com a reivindicação 56,CARACTERIZADO pelo fato de que a dita doençahiperproliferativa é câncer.