BRPI0516653A2 - processo para desengomar um pano engomado contendo amido ou derivados de amido durante a manufatura de um pano - Google Patents

Abstract

PROCESSO PARA DESENGOMAR UM PANO ENGOMADO CONTENDO AMIDO OU DERIVADOS DE AMIDO DURANTE A MANUFATURA DE UM PANO. Um processo para desengomar pano engomado contendo amido ou derivados de amido durante manufatura de um pano, cujo processo compreende incubar o citado pano engomado em uma solução aquosa de tratamento possuindo um pH dentro da faixa de entre 1 e 5 cuja solução aquosa de tratamento compreende alfa-amilase.

Description

"PROCESSO PARA DESENGOMAR UM PANO ENGOMADO CONTENDO AMIDO OU DERIVADOS DE AMIDO DURANTE A MANUFATURA DE UM PANO"

REFERÊNCIA À LISTAGEM DE SEQÜÊNCIAS

Este pedido contém Listagem de Seqüências na forma legível por computador. A forma legível por computador é aqui incorporada como referência.

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a um processo de desengomar panos engomados durante a manufatura de panos especialmente novos.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

O processamento de um pano, tal como de um material celulósico, em material pronto para a manufatura de peças de roupa envolve várias etapas: fiação da fibra em um fio; construção de pano tecido ou de pano tricotado a partir do fio; e operações subseqüentes de preparação, secagem e acabamento. O processo de preparação, que pode envolver desengomação (para artigos de algodão), limpeza, e alvejamento, produz um pano adequado para tingimento ou acabamento.

Alfa-amilases alcalinas são usadas como auxiliares em processo de desengomação para facilitar a remoção de agente de engomação contendo amido que tem servido como um revestimento protetor sobre os fios durante a tecedura. Remoção completa da camada de engomação após a tecedura é importante para garantir resultados ótimos nos processos subseqüentes nos quais o pano é geralmente limpo, alvejado, tingido e/ou impresso.

Após a etapa de desengomação muitas vezes é desejável incluir uma etapa de desmineralização com o objetivo de remover íons de metal, tais como Mn2+, Fe2+/Fe3+, Cu2+ etc., que - se presentes sobre o pano - podem resultar em um alvejamento desigual em uma etapa de processo mais tarde ou pode até mesmo deixar furos finos no pano alvejado. Desmineralização é tipicamente realizada por precipitação ácida e tipicamente envolve a adição de ácidos tal como ácido acético ou ácido sulfúrico.

E desejável proporcionar processos melhorados para desengomação de panos engomados durante a manufatura de panos especialmente novos.

BREVE DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

A presente invenção é direcionada à provisão de um processo de desengomação de um pano engomado durante a manufatura de panos especialmente novos.

No primeiro aspecto a invenção refere-se a um processo para desengomar um pano engomado contendo amido ou derivados de amido durante a manufatura de um pano, cujo processo compreende incubar o citado pano engomado em uma solução aquosa de tratamento possuindo um pH dentro da faixa de entre 1 e 5 cuja solução aquosa de tratamento compreende uma alfa-amilase.

Os presentes inventores têm verificado que quando se realiza um processo de desengomação da invenção, como definido nas reivindicações, nenhuma desmineralização é necessária. A desmineralização ocorre simultaneamente e/ou após o desengomação do pano engomado na mesma solução de tratamento. Comparado com processos tradicionais envolvendo uma etapa de desengomação alcalino e uma etapa de desmineralização é evitada uma etapa de ajuste de pH. Outra vantagem da invenção é que o tempo de processo é economizado/reduzido por que o desengomação e a desmineralização são realizados simultaneamente. Até mesmo se o desengomação e a desmineralização não forem realizados como um processo de uma etapa, isto é, simultaneamente, custos de, por exemplo, ácidos e trabalho humano para adição de ácido(s) são economizados/reduzidos porque é evitada a etapa de ajuste de pH entre a etapa de desengomação alcalino tradicional e a etapa de desmineralização.

No contexto da invenção o termo "pano" é usado intercambiavelmente com o termo "têxtil" e significa, em contraste com pano "usado" de roupas de lavanderia, panos, peças roupa, fibras, fios recém- manufaturados, preferivelmente não tingidos ou outros tipos de panos processados. Panos podem ser construídos de fibras por tecedura, tricotagem ou operações de não-tecelagem. Tecedura e tricotagem requerem fio como a entrada enquanto que pano não tecido é o resultado de ligação aleatória de fibras (papel pode ser considerado como um não-pano).

Pano tecido é construído pela tecedura de fios de "enchimento" ou de trama entre fios de urdidura estirados na direção longitudinal sobre o tear. Os fios de urdidura têm que ser engomados antes da tecedura com o propósito de lubrificá-los e protegê-los da abrasão na inserção de velocidade alta dos fios de enchimento durante a tecedura. O fio de enchimento pode ser pano através dos fios de urdidura em um modo de "sobre um - sob o seguinte" (tecedura simples) ou por "sobre um - sob dois" (sarja) ou qualquer uma de outra miríade de permutações. Resistência, textura e padrão estão relacionados não apenas com o tipo / a qualidade do fio mas também com o tipo de tecedura. Geralmente, vestidos, camisas, calças, lençóis, toalhas, drapejamentos, etc. são produzidos de pano tecido.

Tricotagem é a formação de um pano pela união junta de alças entrelaçadas de fio. Em oposição à tecedura, que é construída de dois tipos de fio e possui muitas "extremidades", pano tricotado é produzido de uma única fita contínua de fio. Como com a tecedura, há muitos modos diferentes de entrelaçar os fios juntos e as propriedades do pano final são dependentes de ambos o tio e o tipo de tricô. Roupas de baixo, suéteres, meias, camisas esportivas, blusões de agasalho esportivo, etc. são derivados de panos tricotados.

Panos não tecidos são folhas de pano feitos por ligação e/ou entrelaçamento de fibras e filamentos por processos mecânicos, térmicos, químicos ou mediados por solvente. O pano resultante pode estar na forma de estruturas semelhantes à folha contínua, laminados ou filmes. Exemplos típicos sao fraldas descartáveis de bebê, toalhas, esfregões, roupas cirúrgicas, fibras para a moda "ambientalmente amigável", meios filtrantes, roupas de cama, materiais de teto, apoio para panos bidimensionais e muitos outros.

De acordo com a invenção, o processo pode ser aplicado em qualquer pano engomado conhecido na técnica (pano, tricotado, ou não-pano). O processo é aplicado em pano engomado recém-manufaturado, em oposição aos panos usados e/ou sujos a serem limpos durante lavagem em lavanderia. Em uma modalidade o pano é feito de fibras de origem natural ou sintética. Em outra modalidade o pano é feito de fibras de origem animal. Em particular, o processo da invenção pode ser aplicado aos panos celulósicos ou contendo celulose, tais como algodão, viscose, raiom, rami, linho, acetato de celulose, brim, liocel (Tencel™, por exemplo, produzido por Courtaulds Fibers), ou suas misturas, ou misturas de qualquer uma destas fibras juntas com fibras sintéticas (por exemplo, poliéster, poliamida, acrílico, ou poliuretano, náilon, poli(tereftalato de etileno) ou poli(ácido lático) ou outras fibras naturais, tais como algodão e seda, tais como misturas de viscose/algodão, misturas de liocel/algodão, misturas de viscose/lã, misturas de liocel/lã, misturas de algodão/lã; linho, rami e outros panos baseados em fibras de celulose, incluindo todas as mesclas de fibras de celulose com outras fibras tais como fibras de lã, de poliamida, acrílica e de poliéster, por exemplo, mesclas de viscose/algodão/poliéster, mesclas de lã/algodão/poliéster, mesclas de linho/algodão etc. O processo também pode ser usado em pano sintético, por exemplo, consistindo de essencialmente 100% de poliéster, poliamida, náilon, respectivamente. O termo "lã", significa qualquer produto de pêlo animal comercialmente útil, por exemplo, lã de ovelha, de camelo, de coelho, de cabra, de lhama, e conhecida como lã de merino, lã Shetland, lã de caxemira, lã de alpaca, pêlo de cabra angorá, etc. e inclui fibra de lã e pêlo animal. O processo da invenção pode ser usado com material de pêlo animal ou lã na forma de topo, fibra, fio, ou pano tricotado ou pano.

A alfa-amilase usada de acordo com o processo da invenção pode ser qualquer alfa-amilase, mas é preferivelmente de origem quer bacteriana quer fungica. Preferivelmente a alfa-amilase é uma alfa-amilase ácida, tal como uma alfa-amilase ácida derivada de um fungo filamentoso, especialmente de uma cepa dos gêneros Aspergillus, Rhizomucor ou Meripillus.

O termo "alfa-amilase ácida" significa uma alfa-amilase (E.C. 3.2.1.1) que possui uma atividade ótima em um pH dentro da faixa de 1 a 7, preferivelmente de 1 a 5 em uma temperatura de 50°C.

O termo "desengomaçao" é intencionado para ser entendido em uma maneira convencional, isto é, a degradação e/ou remoção de agentes de engomação do pano, tal como de fios de urdidura em um pano tecido.

O termo "pano contendo amido ou derivados de amido" é intencionado para indicar qualquer tipo de pano, em particular pano tecido preparado a partir de um material contendo celulose, contendo amido ou derivados de amido. O pano está normalmente não tingido e é feito de algodão, viscose, linho, e semelhante. A parte principal de amido ou derivados de amido presente sobre o pano é normalmente engomação com o qual os fios, normalmente fios de urdidura, têm sido revestidos antes da tecedura.

O termo "módulo ligante de carboidrato (CBM)", é uma seqüência de aminoácidos de polipeptídeo que se liga preferivelmente em um poli- ou oligossacarídeo (carboidrato), freqüentemente - mas não necessariamente exclusivamente - em uma sua forma insolúvel em água (incluindo forma cristalina). Até mesmo se não especificamente mencionado em conexão com o processo da invenção, é para ser entendido que a(s) enzima(s) ou o(s) agente(s) é (são) usada(o)(s) em uma "quantidade efetiva". O termo "quantidade efetiva" significa uma quantidade de, por exemplo, alfa-amilase que é capaz de proporcionar o efeito desejado, isto é, desengomação do pano, em comparação com um pano que não tem sido tratado com a(s) citada(s) enzima(s).

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Fig. 1 mostra o desempenho de desengomação de Alfa- Amilase D sobre pano Vlisco em pH 4,0.

Fig. 2 mostra o desempenho de desengomação de Alfa- Amilase C sobre pano Vlisco em pH 4,0.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A presente invenção é direcionada à provisão de um processo de desengomação de um pano engomado durante a manufatura de panos especialmente novos.

A etapa de desengomação da invenção está em uma modalidade preferida seguida por uma etapa de limpeza, preferivelmente uma etapa de limpeza enzimática, preferivelmente com uma enzima de limpeza tal como peptinase, por exemplo, uma pectato liase, uma lipase, uma protease, ou combinação das mesmas, e uma etapa de alvejamento, preferivelmente envolvendo alvejamento com peróxido de hidrogênio e/ou um agente gerador de peróxido de hidrogênio.

Processos de limpeza relevantes são descritos em Patente U.S. de No. 5.578.489, Patente U.S. de No. 5.912.407, e Patente U.S. de No. 6.630.342. Processos de alvejamento relevantes são descritos em Patente U.S. de No. 5.851.233, Patente U.S. de No. 5.752.980, e Patente U.S. de No. 5.928.380. Processos de limpeza e de alvejamento combinados relevantes são descritos em WO 2003/002810 (Novozymes) e WO 2003/002705 (Novozymes), respectivamente.

De acordo com a presente invenção, pano pode ser desengomado e desmineralizado simultaneamente na mesma soluçao aquosa de tratamento ou subseqüentemente na mesma solução aquosa de tratamento ou em duas soluções aquosas de tratamento separadas. Em uma modalidade preferida o desengomação e a desmineralização são realizados simultaneamente na mesma solução de tratamento. O processo da invenção pode ser realizado usando equipamento de engomação / desengomação tradicional, por exemplo, sistemas de impregnação, caixas-J, jatos, sacudidores, etc. Em geral, nenhum equipamento adicional de processo é necessário.

De acordo com a invenção desengomação e desmineralização simultâneos são realizados por incubação do pano engomado em uma solução aquosa de tratamento possuindo um pH dentro da faixa de entre 1 e 5 cuja solução aquosa de tratamento compreende uma alfa-amilase. Em uma modalidade preferida o pH durante a incubação está dentro da faixa de entre 1 e 4, especialmente entre pH 2 e 4.

Artigos tecidos são a forma prevalecente de construção de pano. O processo de tecedura demanda um "engomação" do fio de urdidura para protegê-lo da abrasão. Amidos, modificados e não modificados, poli(vinil-álcool) (PVA), carbóxi-metil-celulose (CMC), ceras e aglutinantes acrílicos, e suas misturas, são exemplos de agentes de engomação tipicamente usados. O agente de engomação pode de acordo com a invenção ser um agente de engomação baseado em amido ou baseado em derivado de amido, mas também pode conter um ou mais agentes de engomação de não-amido ou baseados em derivado de amido. O(s) agente(s) de engomação é (são) em geral removidos após o processo de tecedura como a primeira etapa na preparação de artigos panos.

Um ou mais outros agentes incluindo estabilizadores, tensoativos, agentes umectantes, agente dispersante, agentes seqüestrantes e agentes emulsificadores, ou suas misturas, podem estar presentes durante o processo de desengomação da invenção. O pano engomado é permitido incubar na solução aquosa de tratamento por um período de tempo suficientemente longo para realizar o desengomação do pano engomado. O período ótimo é dependente do tipo de regime de processamento e da temperatura e pode variar de cerca de 15 minutos a vários dias, por exemplo 48 horas. Um processo da invenção é preferivelmente realizado em uma temperatura dentro da faixa de 5°C a 90°C, em particular de 20°C a 90°C dependendo do regime de processamento.

O regime de processamento pode ser quer em batelada quer contínuo com o pano sendo contatado pela corrente aquosa de tratamento na forma larga aberta ou de corda.

Operações contínuas podem usar um saturador por meio do qual um peso igual aproximado de solução de tratamento por peso de pano é aplicado no pano, seguido por uma câmara de repouso aquecida onde a reação química ocorre. Uma seção de lavagem então prepara o pano para a próxima etapa de processamento. Com o propósito de garantir uma brancura alta ou uma umectabilidade boa e tingibilidade resultante, a(s) enzima(s) de desengomação e outros agentes têm que ser totalmente removidos.

Processos em batelada podem ocorrer em uma batelada (solução de tratamento) por meio da qual o pano é contatado com, por exemplo, aproximadamente 8-15 vezes seu peso de solução aquosa de tratamento. Apos um período de incubação, a solução aquosa de tratamento é drenada, o pano é enxaguado, e a próxima etapa de processamento é iniciada. Processos-PB descontínuos (isto é processos de impregnação em batelada) envolvem um saturador por meio do qual um peso aproximadamente igual de solução aquosa de tratamento por peso de pano é aplicado no pano, seguido por um período de repouso, que no caso de processo-CPB (isto é, processo de impregnação a frio em batelada) pode ser de um ou mais dias. Por exemplo, um processo-CPB pode ser realizado a de entre 20°C e 40°C por 8-24 horas ou mais em um pH dentro da faixa de entre 1 e 5, preferivelmente em um pH dentro da faixa de entre 1 e 4, especialmente entre pH 2 e 4. Em adição, um processo-PB pode ser realizado a de entre 40°C e 90°C por 1-6 horas em um pH dentro da faixa de entre ao redor de 1 e 5, preferivelmente entre cerca de pH 1 e 4, especialmente entre pH 2 e 4.

Em uma modalidade o processo de desengomação da invenção pode ser realizado usando uma quantidade efetiva de alfa-amilase, preferivelmente alfa-amilase ácida, e um ácido tal como ácido acético ou ácido sulfurico ou semelhante.

Detergentes

No contexto desta invenção, um detergente é sinônimo de um tensoativo, e pode ser em particular um tensoativo não-iônico, um tensoativo aniônico, um tensoativo catiônico, um tensoativo anfolítico, um tensoativo zwitteriônico, e um tensoativo semi-polar, ou uma sua mistura.

O tensoativo está tipicamente presente em uma composição da invenção em um nível de 0,1% a 60% em peso.

O tensoativo é preferivelmente formulado para ser compatível com os componentes enzimáticos presentes. Em composições líquidas ou geleificadas o tensoativo é mais preferivelmente formulado em uma tal maneira que ele promove, ou pelo menos não degrada, a estabilidade de qualquer enzima nestas composições.

Sistemas preferidos a serem usados de acordo com a presente invenção compreendem como um tensoativo um ou mais dos tensoativos não- iônicos e/ou aniônicos aqui descritos.

Condensados de poli(óxido de etileno), poli(óxido de propileno) e poli(óxido de butileno) de alquil-fenóis são adequados para uso como o tensoativo não-iônico dos sistemas tensoativos da presente invenção, com os condensados de poli(óxido de etileno) sendo preferidos. Estes compostos incluem os produtos de condensação de alquil-fenóis possuindo um grupo alquila contendo de cerca de 6 a cerca de 14 átomos de carbono, preferivelmente de cerca de 8 a cerca de 14 átomos de carbono, em configuração quer de cadeia linear quer de cadeia ramificada com o óxido de alquileno. Em uma modalidade preferida, o óxido de etileno está presente em uma quantidade igual a de cerca de 2 a cerca de 25 moles, com maior preferência de cerca de 3 a cerca de 15 moles, de óxido de etileno por mol de alquil-fenol.

Tensoativos não-iônicos comercialmente disponíveis deste tipo incluem Igepal™ C0-630, comercializado pela GAF Corporation; e TRITON™ X-45, X-114, X-100 e X-102, todos comercializados pela Rohm & Haas Company. Estes tensoativos são comumente referidos como alcoxilatos de alquil-fenol (por exemplo etoxilatos de alquil-fenol).

Os produtos de condensação de álcoois alifáticos primários e secundários com cerca de 1 a cerca de 25 moles de óxido de etileno são adequados para uso como o tensoativo não-iônico do sistema tensoativo não- iônico. A cadeia alquila do álcool alifático pode ser quer linear quer ramificada, primária ou secundária, e geralmente contém de cerca de 8 a cerca de 22 átomos de carbono. Preferidos são os produtos de condensação de álcoois possuindo um grupo alquila contendo de cerca de 8 a cerca de 20 átomos de carbono, com maior preferência de cerca de 10 a cerca de 18 átomos de carbono, com de cerca de 2 a cerca de 10 moles de óxido de etileno por mol de álcool. Cerca de 2 a cerca de 7 moles de óxido de etileno e mais preferivelmente de 2 a 5 moles de óxido de etileno por mol de álcool estão presentes nos citados produtos de condensação. Exemplos de tensoativos não- iônicos comercialmente disponíveis deste tipo incluem TERGITOL™ 15-S-9 (o produto de condensação de álcool linear C11-C15 com 9 moles de óxido de etileno), TERGITOL™ 24-L-6 NMW (o produto de condensação de álcool primário C12-C14 com 6 moles de óxido de etileno com uma distribuição estreita de pesos moleculares), ambos comercializados pela Union Carbide Corporation; NEODOL™ 45-9 (o produto de condensação de álcool linear C14-C15 com 9 moles de óxido de etileno), NEODOL™ 23-3 (o produto de condensação de álcool linear C12-C13 com 3,0 moles de óxido de etileno), NEODOL™ 45-7 (o produto de condensação de álcool linear C14-C15 com 7 moles de óxido de etileno), NEODOL™ 45-5 (o produto de condensação de álcool linear C14-C15 com 5 moles de óxido de etileno) comercializados pela Shell Chemical Company, KYRO™ EOB (o produto de condensação de álcool C13-C15 com 9 moles de óxido de etileno), comercializado pela The Procter & Gamble Company, e Genapol LA 050 (o produto de condensação de álcool C12-C14 com 5 moles de óxido de etileno) comercializado pela Hoechst. Faixa preferida de HLB nestes produtos é de 8-11 e mais preferida de 8-10.

Também úteis como o tensoativo não-iônico do sistema tensoativo são os alquil-polissacarídeos descritos em US 4.565.647, possuindo um grupo hidrofóbico contendo de 6 a cerca de 30 átomos de carbono, preferivelmente de cerca de 10 a cerca de 16 átomos de carbono e um polissacarídeo, por exemplo, um poliglicosídeo, grupo hidrofílico contendo de cerca de 1,3 a cerca de 10, preferivelmente de cerca de 1,3 a cerca de 3, mais preferivelmente de cerca de 1,3 a cerca de 2,7 unidades de sacarídeo. Qualquer sacarídeo redutor contendo 5 ou 7 átomos de carbono pode ser usado, por exemplo, glicose, galactose e grupos galactosila pode ser substituinte dos grupos glicosila (opcionalmente o grupo hidrofóbico é ligado nas posições 2, 3, 4, etc. dando assim uma glicose ou galactose em oposição a um glicosídeo ou galactosídeo). As ligações intersacarídeo podem estar, por exemplo, entre a posição um das unidades de sacarídeo adicionais e as posições 2, 3, 4, e/ou 6 nas unidades de sacarídeo precedentes.

Os alquil-poliglicosídeos preferidos possuem a fórmula: <formula>formula see original document page 13</formula>

na qual R2 é selecionado do grupo consistindo de alquila, alquil-fenila, hidróxi-alquila, hidróxi-alquil-fenila, e suas misturas no qual os grupos alquila contêm de cerca de 10 a cerca de 18, preferivelmente de cerca de 12 a cerca de 14, átomos de carbono; η é 2 ou 3; preferivelmente 2; t é de 0 a cerca de 10, preferivelmente 0; e χ é de cerca de 1,3 a cerca de 10, preferivelmente de cerca de 1,3 a cerca de 3, mais preferivelmente de cerca de 1,3 a cerca de 2,7. A glicosila é preferivelmente derivada de glicose. Para preparar estes compostos, o álcool ou alquil-polietóxi-álcool é formado primeiro e então reagido com glicose, ou uma fonte de glicose, para formar o glicosídeo (ligação na posição-1). As unidades glicosila adicionais podem ser então ligadas entre sua posição-1 e as unidades glicosila precedentes nas posições 2, 3, 4, e/ou 6, preferivelmente predominantemente na posição-2.

Os produtos de condensação de óxido de etileno com uma base hidrofóbica formados pela condensação de óxido de propileno com propileno- glicol também são adequados para uso como o sistema tensoativo não-iônico adicional. A porção hidrofóbica destes compostos preferivelmente possuirá um peso molecular de cerca de 1.500 a cerca de 1.800 e exibirá insolubilidade em água. A adição de grupos polioxietileno nesta porção hidrofóbica tende a aumentar a solubilidade em água da molécula como um todo, e o caráter líquido do produto é retido até o ponto no qual o conteúdo de polioxietileno é de cerca de 50% do peso total do produto condensado, o que corresponde à condensação de até cerca de 40 moles de óxido de etileno. Exemplos de compostos deste tipo incluem certos tensoativos PLURONIC™ comercialmente disponíveis, comercializados pela BASF.

Também adequados para uso como o tensoativo não-iônico do sistema tensoativo não-iônico são os produtos de condensação de óxido de etileno com o produto resultante da reação de óxido de propileno e etileno- diamina. O grupo hidrofóbico destes produtos consiste do produto de reação de etileno-diamina e excesso de óxido de propileno, e geralmente possui um peso molecular de cerca de 2.500 a cerca de 3.000. Este grupo hidrofóbico é condensado com óxido de etileno na extensão tal que o produto de condensação contém de cerca de 40% a cerca de 80% em peso de poli(óxido de etileno) e possui um peso molecular de cerca de 5.000 a cerca de 11.000. Exemplos deste tipo de tensoativo não-iônico incluem certos compostos TETRONIC™ comercialmente disponíveis, comercializados pela BASF.

Preferido para uso como o tensoativo não-iônico do sistema tensoativo são condensados de poli(óxido de etileno) de alquil-fenóis, produtos de condensação de álcoois alifáticos primários e secundários com de cerca de 1 a cerca de 25 moles de óxido de etileno, alquil-polissacarídeos, e suas misturas. Mais preferidos são etoxilatos de C8-C14 alquil-fenol possuindo de 3 a 15 grupos etoxila e etoxilatos de álcool C8-C18 (preferivelmente na média C10) possuindo de 2 a 10 grupos etoxila, e suas misturas.

Tensoativos não-iônicos elevadamente preferidos são tensoativos de amida de ácido graxo poli-hidroxilada de fórmula:

<formula>formula see original document page 14</formula>

na qual Rl é H, ou Rl é C1-4 hidrocarbila, 2-hidróxi-etila, 2-hidróxi-propila ou uma sua mistura, R2 é C5-31 hidrocarbila, e Z é uma poli-hidróxi-hidrocarbila possuindo uma cadeia hidrocarbila linear com pelo menos 3 hidroxilas diretamente conectadas na cadeia, ou um seu derivado alcoxilado. Preferivelmente, Rl é metila, R2 é cadeia C11-15 alquila linear ou C16-18 alquila ou alquenila tal como alquila de coco ou suas misturas, e Z é derivado de um açúcar redutor tal como glicose, frutose, maltose ou lactose, em uma reação de aminação redutiva.

Tensoativos aniônicos elevadamente preferidos incluem tensoativos de alquil-sulfato alcoxilado. Seus exemplos são sais ou ácidos solúveis em água de fórmula RO(A)mSO3M na qual R é um grupo C10-C24 alquila não substituído ou hidróxi-alquila possuindo um componente C10-C24 alquila. Preferivelmente uma C12-C20 alquila ou hidróxi-alquila, com maior preferência C12-C18 alquila ou hidróxi-alquila, A é uma unidade etoxila ou propoxila, m é maior do que zero, tipicamente estão entre cerca de 0,5 e cerca de 6, com maior preferência entre cerca de 0,5 e cerca de 3, e M é H ou um cátion que pode ser, por exemplo, um cátion de metal (por exemplo, sódio, potássio, lítio, cálcio, magnésio, etc.), amônio ou cátion amônio sub- substituído. Alquil-sulfatos etoxilados bem como alquil-sulfatos propoxilados são aqui contemplados. Exemplos específicos de cátions amônio substituído incluem cátions metil-, dimetil-, trimetil-amônio e cátions amônio quaternário tais como cátions tetrametil-amônio e dimetil-piridínio e aqueles derivados de alquil-aminas tais como etil-amina, dietil-amina, trietil-amina, suas misturas, e semelhantes. Tensoativos exemplares são C12-C18 alquil polietixolato (1,0) sulfato (C12-C18E(1,0)M), C12-C18 alquil polietoxilato (2,25) sulfato (C,2- C18(2,25)M, e C12-C,8 alquil polietoxilado (3,0) sulfato (C]2-C18E(3,0)M), e C12-C18 alqui polietoxilato (4,0) sulfato (C12-C]8E(4.0)M), nos quais M é convencionalmente selecionado de sódio e potássio.

Tensoativos aniônicos adequados para serem usados são tensoativos de alquil éster sulfonato incluindo ésteres lineares de ácidos C8- C20 carboxílicos (isto é, ácidos graxos) que são sulfonados com SO3 gasoso de acordo com o "The Journal of the American Oil Chemists Society", 52 (1975), pp. 323-329. Materiais iniciais apropriados incluiriam substâncias graxas naturais derivadas de sebo, óleo de palma, etc.

O tensoativo alquil éster sulfonato preferido compreende tensoativos alquil éster sulfonato de fórmula estrutural:

<formula>formula see original document page 15</formula>

na qual R3 é uma C8-C20 hidrocarbila, preferivelmente uma alquila, ou sua combinação, R4 é uma C1-C6 hidrocarbila, preferivelmente uma alquila, ou sua combinação, e M é um cátion que forma um sal solúvel em água com o alquil éster sulfonato. Cátions formadores de sal adequados incluem metais tais como sódio, potássio, e lítio, e cátions amônio substituído ou não- substituído, tais como monoetanol-amina, dietanol-amina, e trietanol-amina. Preferivelmente, R3 é C10-C16 alquila e R4 é metila, etila ou isopropila. Especialmente preferidos sã os metil éster sulfonatos nos quais R3 é C10-C16 alquila.

Outros tensoativos aniônicos adequados incluem os tensoativos de alquil sulfato que são ácidos ou sais solúveis em água de fórmula ROSO3M na qual R é preferivelmente uma C10-C24 hidrocarbila, O preferivelmente uma alquila ou hidróxi-alquila possuindo um componente C10-C20 alquila, mais preferivelmente uma C12-C18 alquila ou hidróxi-alquila, e M é H ou um cátion, por exemplo, um cátion de metal alcalino (por exemplo, sódio, potássio, lítio), ou amônio ou amônio substituído (por exemplo, cátions metil-, dimetil-, e trimetil-amônio e cátions de amônio quaternário tais como cátions tetrametil-amônio e dimetil-piperidínio e cátions de amônio quaternário derivados de alquil-aminas tais como etil- amina, dietil-amina, trietil-amina, e suas misturas, e semelhantes). Tipicamente, cadeias alquila de C12-C16 são preferidas para temperaturas de lavagem menores (por exemplo abaixo de cerca de 50°C) e cadeias C16-C18 alquila são preferidas para temperaturas de lavagem mais altas (por exemplo acima de 50°C).

Outros tensoativos aniônicos úteis para propósitos detersivos incluem sais (incluindo, por exemplo, sais de sódio, potássio, amônio, e amônio substituído tais como sais de mono-, di- e trietanol-amina) de sabão, C8-C22 alcano-sulfonatos primários ou secundários, C8-C24 olefina-sulfonato, ácidos policarboxílicos sulfonados preparados por sulfonação de produto pirolisado de citratos de metal alcalino-terroso, por exemplo, como descrito no relatório descritivo de patente britânica de número 1.082.179, C8-C24 alquil-poliglicol-éter-sulfatos (contendo até 10 moles de óxido de etileno); alquil glicerol sulfonatos, acil graxo glicerol sultonatos, oleil graxo glicerol sulfonatos, alquil fenol óxido de etileno éter sulfatos, parafina sulfonatos, alquil fosfatos, isetionatos tais como os acil isetionatos, N-acil tauratos, alquil-succinatos e sulfo-succinatos, monoésteres de sulfo-succinatos (especialmente C12-C18 monoésteres saturados e insaturados) e diésteres de sulfo-succinatos (especialmente C6-C12 diésteres saturados e insaturados), acil sarcosinatos, sulfatos de alquil-polissacarídeos tais como os sulfatos de alquil- poliglicosídeo (os compostos não-sulfatados não-iônicos sendo descritos abaixo), alquil-sulfatos primários ramificados, e alquil polietóxi carboxilatos tais como aqueles de fórmula RO(CH2CH2O)k-CH2COO-M+ na qual R é uma C8-C22 alquila, k é um número inteiro de 1 a 10, e M é um cátion formador de sal solúvel. Ácidos de resina e ácidos de resina hidrogenados também são adequados, tais como breu, breu hidrogenado, e ácidos de resina e ácidos de resina hidrogenados presentes em ou derivados de talol.

Alquil-benzeno sulfonatos são elevadamente preferidos. Especialmente preferidos são alquil-benzeno sulfonatos lineares (de cadeia linear) (LAS) nos quais o grupo alquila preferivelmente contém de 10 a 18 átomos de carbono.

Outros exemplos são descritos em " Surface Active Agents and Detergente" (Vol. I e II de Schwartz, Perrry e Berch). Um variedade de tais tensoativos também é geralmente descrita em US 3.929.678, (Coluna 23, linha 58 até Coluna 29, linha 23, aqui incorporada como referência).

Quando aqui incluídas as composições da presente invenção tipicamente compreendem cerca de 1% a cerca de 40%, preferivelmente de cerca de 3% a cerca de 20% em peso de tais tensoativos aniônicos.

As composições da presente invenção também podem conter tensoativos catiônicos, anfolíticos, zwitteriônicos, e semi-polares, bem como os tensoativos não-iônicos e/ou aniônicos diferentes daqueles já aqui descritos. Tensoativos detersivos catiônicos adequados para uso nas composições da presente invenção são aqueles possuindo um grupo hidrocarbila de cadeia longa. Exemplos de tais tensoativos catiônicos incluem os tensoativos de amônio tais como halogenetos de alquil-trimetil-amônio, e aqueles tensoativos possuindo a fórmula:

<formula>formula see original document page 18</formula>

na qual R2 é um grupo alquila ou alquil benzila possuindo de cerca de 8 a cerca de 18 átomos de carbono na cadeia alquila, cada R3 é selecionado do grupo consistindo de -CH2CH2-, - CH2CH(CH3)-, -CH2CH(CH2OH)-, - CH2CH2CH2-, e suas misturas; cada R4 é selecionado do grupo consistindo de C1-C4 alquila, C1-C4 hidróxi-alquila, estruturas de anel benzila formadas pela união de dois grupos R4, -CH2CHOHCHOHCOR6CHOHCH2OH, no qual R6 é qualquer um de hexose ou polímero de hexose possuindo um peso molecular menor do que cerca de 1.000, e hidrogênio quando y não for 0; R5 é o mesmo que R4 ou é uma cadeia alquila, na qual, o número total de átomos de carbono ou R2 mais R5 é não maior do que cerca de 18; cada y é de 0 a cerca de 10, e a soma dos valores de y é de 0 a cerca de 15; e X é qualquer ânion compatível.

Tensoativos catiônicos elevadamente preferidos são os compostos de amônio quaternário solúveis em água úteis na presente invenção possuindo a fórmula:

<formula>formula see original document page 18</formula>

na qual R1 é C8-C16 alquila, cada um de R2, R3 e R4 é independentemente C1- C4 alquila, C1-C4 hidróxi alquila, e -(C2H40)XH no qual χ possui um valor de 2 a 5, e X é um ânion. Não mais do que um de R2, R3 ou R4 deve ser benzila.

O comprimento de cadeia alquila preferido para R1 é C12-C15, particularmente onde o grupo alquila é uma mistura de comprimentos de cadeia derivados de gordura de semente de palma ou coco ou é derivado sinteticamente por construção de olefina ou síntese de OXO-álcoois. Grupos preferidos para R2R3 e R4 são grupos metila e hidróxi- etila e o ânion X pode ser selecionado de íons haleto, metossulfato, acetato e fosfato. Exemplos de compostos de amônio quaternário de fórmula (i) para uso aqui são:

brometo ou cloreto de trimetil-amônio de coco;

brometo ou cloreto de metil-di-hidróxi-etil-amônio de coco;

cloreto de decil-trietil-amônio;

brometo ou cloreto de decil-dimetil-hidróxi-etil-amônio;

brometo ou cloreto de C12-15 dimetil-hidróxi-etil-amônio;

brometo ou cloreto de dimetil-hidróxi-etil-amônio de coco;

metil-sulfato de miristil-trimetil-amônio;

brometo ou cloreto de lauril-dimetil-benzil-amônio;

brometo ou cloreto de lauril-dimetil(etenóxi)4-amônio;

ésteres de colina (compostos de fórmula (i) na qual R1 é

<formula>formula see original document page 19</formula>

dialquil imidazolinas [compostos de fórmula (i)].

Outros tensoativos catiônicos aqui úteis também são descritos em US 4.228.044 e em EP 000.224.

Quando nelas incluídos, as composições da presente invenção tipicamente compreendem de 0,2% a cerca de 25%, preferivelmente de cerca de 1% a cerca de 8% em peso de tais tensoativos catiônicos.

Tensoativos anfolíticos também são adequados para uso nas composições da presente invenção. Estes tensoativos podem ser amplamente descritos como derivados alifáticos de aminas secundárias ou terciárias, ou derivados alifáticos de aminas heterocíclicas secundárias e terciárias nas quais o radical alifático pode ser de cadeia linear ou ramificada. Um dispositivos eletrônicos orgânicos substituintes alifáticos contém pelo menos cerca de 8 átomos de carbono, tipicamente de cerca de 8 a cerca de 18 átomos de carbono, e pelo menos um contém um grupo aniônicos de solubilização em água, por exemplo, carboxila, sulfonato, sulfato. Veja US 3.929,678 (coluna 19, linhas 18-35) para exemplos de tensoativos anfolíticos.

Quando nelas incluídos, as composições da presente invenção tipicamente compreendem de cerca de 0,2% a cerca de 15%, preferivelmente de cerca de 1% a cerca de 10% em peso de tais tensoativos anfolíticos.

Tensoativos zwitteriônicos também são adequados para uso na composição da presente invenção. Estes tensoativos podem ser amplamente descritos como derivados de aminas secundárias e terciárias, derivados de aminas heterocíclicas secundárias e terciárias, ou derivados de compostos de amônio quaternário, de fosfônio quaternário ou de sulfônio quaternário. Veja US 3.929.678 (coluna 19, linha 38 até coluna 22, linha 48) para exemplos de tensoativos zwitteriônicos.

Quando nelas incluídos, as composições da presente invenção tipicamente compreendem de 0,2% a cerca de 15%, preferivelmente de cerca de 1% a cerca de 10% em peso de tais tensoativos zwitteriônicos.

Tensoativos não-iônicos semi-polares são uma categoria especial de tensoativos não-iônicos que incluem óxidos de amina solúveis em água contendo um grupo alquila de cerca de 10 a cerca de 18 átomos de carbono e 2 grupos selecionados do grupo consistindo de grupos alquila e grupos hidróxi-alquila contendo de cerca de 1 a cerca de 3 átomos de carbono; óxidos de fosfina solúveis em água contendo um grupo alquila de cerca de 10 a cerca de 18 átomos de carbono e 2 grupos selecionados do grupo consistindo de grupos alquila e grupos hidróxi-alquila contendo de cerca de 1 a cerca de 3 átomos de carbono; e sulfóxidos solúveis em água contendo um grupo alquila de cerca de 10 a cerca de 18 átomos de carbono e um grupo selecionado do grupo consistindo de grupos alquila e hidróxi- alquila de cerca de 1 a cerca de 3 átomos de carbono.

Tensoativos detergentes não-iônicos semi-polares incluem os tensoativos de óxido de amina possuindo a fórmula:

<formula>formula see original document page 21</formula>

na qual R3 é um grupo alquila, hidróxi-alquila, ou alquil fenila ou suas misturas contendo de cerca de 8 a cerca de 22 átomos de carbono; R4 é um grupo alquileno ou hidróxi-alquileno contendo de cerca de 2 a cerca de 3 átomos de carbono ou suas misturas; χ é de 0 a cerca de 3; e cada R5 é um grupo alquila ou hidróxi-alquila contendo de cerca de 1 a cerca de 3 átomos de carbono ou um grupo poli(óxido de etileno) contendo de cerca de 1 a cerca de 3 grupos óxido de etileno. Os grupos R5 podem ser ligados um no outro, por exemplo por meio de um átomo de oxigênio ou de nitrogênio, para formarem uma estrutura de anel.

Estes tensoativos de óxido de amina em particular incluem óxidos de C10-C18 alquil dimetil amina e óxidos de C8-C12 alcóxi etil di- hidróxi etil amina.

Quando incluídos nela, a composições da presente invenção tipicamente compreende de 0,2% a cerca de 15%, preferivelmente de cerca de 1% a cerca de 10% em peso de tais tensoativos não-iônicos semi-polares.

Enzimas

Alfa-amilases

A(s) alfa-amilase(s) usada(s) no processo da invenção pode(m) ser qualquer alfa-amilase, preferivelmente de origem bacteriana ou fungica. Em uma modalidade preferida a alfa-amilase é uma alfa-amilase ácida, tal como uma alfa-amilase ou alfa-amilase híbrida descrita em WO 2005/003311 que é aqui incorporada como referência.

Em uma modalidade preferida a alfa-amilase inclui um módulo ligante de carboidrato como definido em WO 2005/003311, preferivelmente a família CBM 20 como definida em WO 2005/003311.

Especialmente contemplados são os CBMs que incluem aqueles selecionados do grupo consistindo de Aspergillus kawachii descrito em SEQ ID NO: 2; Bacillus flavothermus descrito em SEQ ID NO: 5; Bacillus sp. descrito em SEQ ID NO: 6; Alcaliphilic Bacillus descrito em SEQ ID NO: 7; Hormoeonis resinae descrito em SEQ ID NO: 8; Lentinula edodes descrito em SEQ ID NO: 9; Neurospora crassa descrito em SEQ ID NO: 10; Talaromyees byssochlamydiodes descrito em SEQ ID NO: 11; Geosmithia eylindrospora descrito em SEQ ID NO: 12; Seorias spodiosa descrito em SEQ ID NO: 13; Eupenicillium ludwigii descrito em SEQ ID NO: 14; Aspergillus japonieus descrito em SEQ ID NO: 15; Penicillium cf. miezynskii descrito em SEQ ID NO: 16; Mzl Penieillium sp. descrito em SEQ ID NO: 17; Thysanospora sp. descrito em SEQ ID NO: 18; Humieola grisea var. thermoidea descrito em SEQ ID NO: 19; Aspergillus niger descrito em SEQID NO: 20; ou Althea rolfsii descrito em SEQID NO: 21.

Alfa-amilases fúngicas

Em uma modalidade a alfa-amilase füngica é de origem de levedura ou de fungo filamentoso. Em uma modalidade preferida a alfa- amilase füngica é uma alfa-amilase ácida.

Alfa-amilases preferidas incluem, por exemplo, alfa-amilases obteníveis de espécie Aspergillus, em particular de Aspergillus niger, A. oryzae, e A. awamori, A. kawachii, tal como a alfa-amilase ácida descrita em SWISSPROT P56271, ou descrita com mais detalhe WO 89/01969 (Exemplo 3). A alfa-amilase ácida madura possui a seqüência de aminoácidos mostrada como 22-511 de SEQ ID NO: 4, codificada pela seqüência de DNA mostrada em SEQ ID NO: 3, ou a seqüência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NO: 38. Também são preferidas as seqüências de alfa-amilase possuindo mais do que 50%, tal como mais do que 60%, mais do que 70%, mais do que 80% ou mais do que 90%, mais do que 95%, mais do que 96%, mais do que 97%, mais do que 98%, ou até mesmo mais do que 99% de identidade com a seqüência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NOS: 4 ou 38, respectivamente.

Em outra modalidade preferida a seqüência de alfa-amilase é derivada de uma alfa-amilase ácida de A. oryzae. Mais preferivelmente a seqüência de alfa-amilase possui mais do que 50%, tal como mais do que 60%, mais do que 70%, mais do que 80% ou mais do que 90%, mais do que 95%, mais do que 96%, mais do que 97%, mais do que 98%, ou mais do que 99% de identidade em relação à seqüência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NO: 39.

Em uma modalidade a alfa-amilase é a alfa-amilase de Aspergillus kawachii descrita em SEQ ID NO: 37, que na forma selvagem contém um domínio de ligação de carboidrato (CBD) como mostrado em SEQID NO: 2.

Em uma modalidade preferida a alfa-amilase é uma alfa- amilase possuindo mais do que 50%, tal como mais do que 60%, mais do que 70%, mais do que 80% ou mais do que 90%, mais do que 95%, mais do que 96%), mais do que 97%, mais do que 98%, ou até mesmo mais do que 99% de identidade com a seqüência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NOS: 43, 44, 46 ou 47, respectivamente.

A alfa-amilase pode estar presente em uma concentração de 1- 3.000 AFAU/kg de pano, preferivelmente 10-1.000 AFAU/kg de pano, especialmente 100-500 AFAU/kg de pano ou 13.000 AFAU/1 de solução de tratamento, preferivelmente 10-1.000 AFAU/1 de solução de tratamento, especialmente 100-500 AFAU/1 de solução de tratamento.

Alfa-amilases bacterianas

Em uma modalidade a alfa-amilase é de origem bacteriana. Em uma modalidade preferida a alfa-amilase bacteriana é uma alfa-amilase ácida.

A alfa-amilase bacteriana é preferivelmente derivada de uma cepa de Bacillust tal como Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis, ou outra Bacillus sp., tal como Bacillus sp. NCIB 12289, NCIB 12512 (WO 95/26397), NCIB 12513 (WO 95/26397), DSM 9375 (WO 95/26397), DSMZ 12648 (WO 00/60060), DSMZ 12649 (WO 00/60060), KSM AP1378 (WO 97/00324), KSM K36 ou KSM K38 (EP 1,022,334). São preferidas as alfa-amilases de Bacillus sp. descritas em WO 95/26397 como SEQ ID NOS. 1 e 2, respectivamente, a alfa-amilase AA560 descrita como SEQ ID NO: 2 em WO 00/60060 (isto é, SEQ ID NO: 40 aqui), e a alfa-amilase #707 descrita por Tsukamoto et al., Biochemical and Biophvsical Research Communications, 151 (1988), pp. 25-31.

Em uma modalidade da invenção a alfa-amilase bacteriana é a alfa-amilase SP722 descrita como SEQ ID NO: 2 em WO 95/26397 ou a alfa- amilase AA560 (SEQID NO: 40 aqui).

Em uma modalidade preferida a alfa-amilase parental possui uma ou mais deleções em posições ou correspondendo às seguintes posições: Dl 83 e Gl 84, presente descrição na qual a citada variante de alfa-amilase adicionalmente possui uma substituição na posição ou correspondendo à posição N195F (usando a numeração de SEQID NO: 40).

Em outra modalidade preferida a alfa-amilase parental possui uma ou mais das seguintes deleções/substituições ou correspondendo às seguintes deleções/substituições: Delta (R81-G182); Delta (D183-G184); Delta (D183G184)+N195F; R181Q+N445Q+K446N; Delta (D183- G184)+R181Q, Delta (D183-G184) e uma ou mais das seguintes substituições ou correspondendo a: R118K, N195F, R320K, R458K, especialmente na qual a variante possui a seguintes mutações: A(D183+G184)+R118K+N195F+R320K+R458K (usando a numeração de SEQID NO: 40).

Em outra modalidade preferida a alfa-amilase é alfa-amilase AA560 mostrada na SEQ ID NO: 40 adicionalmente compreendendo uma ou mais das seguintes substituições M9L, M202L, V214T, M323T, M382Y, E345R ou a alfa-amilase A560 como todas de seguintes substituições: M9L, M202L, V214T, M323T, M382Y ou M9L, M202L, V214T, M323T e E345R.

Produtos de alfa-amilase comercialmente disponíveis ou produtos compreendendo alfa-amilases incluem o produto vendido sobre os seguintes nomes comerciais: NATALASETM STAINZYME™ (Novozymes NS), Bioamylase - D(G), BIOAMYLASE™ 1 (Biocon índia Ltd.), KEMZYM™ AT 9000(Biozym Ges. m.b.H, Áustria), PURASTAR™ ST, PURASTAR™ HPAml, PURAFECT™ OxAm, RAPIDASE™ TEX (Genencor Int. Inc, USA), KAM (KAO, Japão)

A alfa-amilase pode estar presente em uma concentração de cerca de 0,05-150 KNU/1 de solução de tratamento, preferivelmente de 1-100 KNU/1 de solução de tratamento, especialmente 2-20 KNU/1 de solução de 15 tratamento ou 0,05-150 KNU/kg de pano, preferivelmente, 1-100 KNU/kg de pano, especialmente 2-20 KNU/kg de pano.

Enzima híbrida

A alfa-amilase pode em uma modalidade preferida ser uma alfa-amilase compreendendo um domínio de ligação de carboidrato (CBD).

Tal alfa-amilase com um CBD pode ser uma enzima de tipo selvagem (veja por exemplo, Aspergillus kawachii acima) ou uma enzima híbrida (proteína de fusão) como será descrito mais detalhadamente abaixo. As enzimas híbridas ou enzimas de tipo selvagem geneticamente modificadas como aqui referidas incluem espécies compreendendo uma seqüência de aminoácidos de uma enzima alfa-amilase (EC 3.2.1.1) ligada (isto é covalentemente ligada) em uma seqüência de aminoácidos compreendendo um domínio de ligação de carboidrato (CBD).

As enzimas híbridas contendo CBD, bem como as descrições detalhadas de suas preparação e purificação, são conhecidas na técnica [veja, por exemplo WO 90/00609, WO 94/24158 e WO 95/16782, bem como Greenwood et al. Biotechnology and Bioengineering 44 (1994) pp. 1295- 1305]. Podem ser, por exemplo, preparadas pela transformação em uma célula hospedeira de um construto de DNA compreendendo pelo menos um fragmento de DNA codificador do domínio de ligação de carboidrato ligado, com ou sem um ligador, em uma seqüência de DNA codificadora da enzima de interesse, e crescimento da célula hospedeira transformada para expressar o gene fusionado. O produto recombinante resultante (enzima híbrida) - muitas vezes referido na técnica como uma "proteína de fusão" - pode ser descrito pela seguinte fórmula geral:

A-CBD-MR-X

Na última fórmula, A-CBD é a região N-terminal ou C- terminal de uma seqüência de aminoácidos compreendendo pelo menos um domínio de ligação de carboidrato (CBD) per se. MR é a região do meio (o "ligador"), e X é a seqüência de resíduos de aminoácido de um polipeptídeo codificado por uma seqüência de DNA codificadora da enzima (ou outra proteína na qual o CBD é para ser ligado.

O grupo A pode quer estar ausente (tal como A-CBD é um CBD per se, isto é não compreende resíduos de aminoácido diferentes daqueles constituindo o CBD) quer pode ser uma seqüência de um ou mais resíduos de aminoácido (funcionando como uma extensão terminal do CBD per se), o ligador (MR) pode ser uma ligação, ou um grupo ligante curto compreendendo de cerca de 2 a cerca de 100 átomos de carbono, em particular de 2 a 40 átomos de carbono. Entretanto, MR é preferivelmente uma seqüência de cerca de 2 a cerca de 100 resíduos de aminoácido, com maior preferência de 2 a 40 resíduos de aminoácido, tal como de 2 a 15 resíduos de aminoácido.

O grupo X pode constituir a região quer N-terminal quer C- terminal da enzima híbrida total. Assim será evidente do discutido acima que o CBD em uma enzima híbrida do tipo em questão pode estar posicionado C-terminalmente, N-terminalmente ou internamente na enzima híbrida.

Seqüência de ligador

A seqüências ligador pode ser qualquer seqüência ligador adequada. Em modalidades preferidas, a seqüência ligador é derivada de glicoamilase de Athelia rolfsii, de glicoamilase de A. niger, de alfa-amilase de A. kawachii tal como uma seqüência ligador selecionada do grupo consistindo de ligador glicoamilase de A. niger: TGGTTTTATPTGSGSVTSTSKTTATASKTSTSTSSTSA (SEQ ID NO:22), ligador de alfa-amilase de A. kawachii: TTTTTTAAATSTSKATTSSSSSSAAATTSSS (SEQ ID NO:23), ligador de glicoamilase de Athelia rolfsii: GATSP G GS S G S (SEQ ID NO:24), e o ligador PEPT: PEPTP EPT (SEQ ID NO:25). Em outra modalidade preferida as enzimas híbridas possuem uma seqüência ligador que difere da seqüência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, ou SEQ ID NO:25 em não mais do que 10 posições, não mais do que 9 posições, não mais do que 8 posições, não mais do que 7 posições, não mais do que 6 posições, não mais do que 5 posições, não mais do que 4 posições, não mais do que 3 posições, não mais do que 2 posições, ou até mesmo não mais do que 1 posição.

Domínio ligante de carboidrato

Um domínio ligante de carboidrato (CBD), ou como muitas vezes referido a, um módulo ligante de carboidrato (CBM), é uma seqüência de aminoácidos de polipeptídeo que se liga preferivelmente em um poli- ou oligossacarídeo (carboidrato), freqüentemente - mas não necessariamente exclusivamente - em uma sua forma insolúvel em água (incluindo forma cristalina).

CBDs derivados de enzimas degradadoras de amido são muitas vezes referidos a domínios ligantes de amido (SBD) ou módulos ligantes de amido (SBM). SBDs são CBDs que podem ocorrer em certas enzimas amilolíticas, tais como certas glicoamilases, ou em enzimas tais como ciclo-dextrina glicotransferases, ou em alfa-amilases. Igualmente, outras sub-classes de CBDs incluiriam, por exemplo domínios ligantes de celulose (CBDs de enzimas celulolíticas), domínios ligantes de quitina (CBDs que tipicamente ocorrerem em quitinases), domínios ligantes de xilano (CBDs que tipicamente ocorrem em xilanases), domínios ligantes de manana (CBSs que tipicamente ocorrem em mananases).

CBDs são encontrados como partes integrais de proteínas ou polipeptídeos grandes consistindo de duas ou mais regiões de seqüência de aminoácidos de polipeptídeo, especialmente em enzimas hidrolíticas (hidrolases) que tipicamente compreendem um domínio catalítico contendo o sítio ativo para hidrólise de substrato e um domínio ligante de carboidrato (CBD) para se ligar no substrato carboidrato em questão. Tais enzimas podem compreender mais do que um domínio catalítico e um, dois ou três, e opcionalmente compreendem adicionalmente uma ou mais regiões de seqüência de aminoácidos de polipeptídeo ligando os CBD(s) com o(s) domínio(s) catalítico(s), uma região do último tipo sendo normalmente denotada um "ligador". Exemplos de enzimas hidrolíticas compreendendo um CBD - algumas das quais já têm sido mencionadas acima - são celulases, xilanases, mananases, arabinofuranosidases, acetilesterases e quitinases. CBDs também têm sido encontradas em algas, por exemplo, na alga vermelha Porphyra purpurea na forma de uma proteína ligante de polissacarídeo não- hidrolítica.

Em proteínas / polipeptídeos nos quais ocorrem CBDs (por exemplo enzimas, tipicamente enzimas hidrolíticas), um CBD pode estar localizado na terminação N ou C ou em uma posição interna.

Aquela parte de um polipeptídeo ou uma proteína (por exemplo enzima hidrolítica) que constitui um CDB per se tipicamente constitui mais do que cerca de 30 e menos do que cerca de 250 resíduos de aminoácido.

O "Módulo Ligante de Carboidrato de Família 20" ou um módulo CBM-20 é no contexto desta invenção definido como uma seqüência de aproximadamente 100 aminoácidos possuindo pelo menos 45% de homologia com o Módulo Ligante de Carboidrato (CBM) do polipeptídeo descrito na figura 1 por Joergensen et al (1997) em Biotechnol. Lett. 19:1027- 1031. O CBM compreende os últimos 102 aminoácidos do polipeptídeo, isto é a subseqüência do aminoácido 582 ao aminoácido 683. A numeração das Famílias de Glicosídeo Hidrolase aplicada nesta descrição segue o conceito de Coutinho, P.M. & Henrissat, B. (1999) CAZy - Carbohydrate-Active Enzymes server at URL: http://afmb.cnrs-mrs.fr/-cazv/CAZY/index.html ou alternativamente Coutinho, P.M. & Henrissat, B. 1999; "The modular structure of cellulases and other carbohydrate-active enzymes: an integrated database approach". Em "Genetics, Biochemistry and Ecology of Cellulose Degradation", K. Ohmiya, K. Hayashi, K. Sakka, Y. Kobayashi, S. Karita and T. Kimura eds., Uni Publishers Co., Tokyo, pp. 15-23, e Bourne, Y. & Henrissat, B. 2001; "Glycoside hydrolases and glycosyltransferases: families and functional modules", Current Opinion in Structural Biology 11:593-600.

Exemplos de enzimas que compreendem um CBD adequado para uso no contexto da invenção são alfa-amilases, alfa-amilases maltogênicas, celulases, xilanases, mananases, arabinofuranosidases, acetilesterases e quitinases. Outros CBDs de interesse em relação à presente invenção incluem CBDs derivados de glicoamilases (EC 3.2.1.3) ou de CGTases (EC 2.4.1.19).

CBDs derivados de fontes fiingicas, bacterianas ou de planta serão geralmente adequadas para uso no contexto da invenção. Preferidos são CBDs de origem fúngica, com maior preferência de Aspergillus sp., Bacillus sp., Klebsiella sp., ou Rhizopus sp. Nesta conexão, técnicas adequadas para isolamento de genes relevantes são bem conhecidas técnica.

Para a invenção são preferidos os CBDs de Módulo Ligante de Carboidrato de Família 20. CBDs de Carbohydrate-Binding Module Family 20. CBDs de Módulo Ligante de Carboidrato de Família 20 adequados para a invenção podem ser derivados de glicoamilases de Aspergillus awamori (SWISSPROT Q12537), Aspergillus kawachii (SWISSPROT P23176), Aspergillus niger (SWISSPROT P04064), Aspergillus oryzae (SWISSPROT P36914), de alfa-amilases de Aspergillus kawachii (EMBL:#AB008370), Aspergillus nidulans (NCBI AAFl7100.1), de beta-amilases de Bacillus cereus (SWISSPROT P36924), ou de CGTases de Bacillus circulans (SWISSPROT P43379). Preferido é um CBD da alfa-amilase de Aspergillus kawachii (EMBL:#AB008370) bem como CBDs possuindo pelo menos 50%, 60%, 70%, 80% ou até mesmo pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade com o CBD da alfa-amilase de Aspergillus kawachii (EMBL:#AB008370), isto é um CBD possuindo pelo menos 50%, 60%, 70%, 80% ou até mesmo pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade com a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO:2. Também são preferidos para a presente invenção os CBDs de Módulo Ligante de Carboidrato de Família 20 possuindo as seqüências de aminoácidos mostradas em SEQ ID N0:5, SEQ ID NO:6, e SEQID N0:7 e descritos em pedido PCT de no. PCT/DK2004/000456 (ou pedido de patente dinamarquesa PA 2003 00949) como SEQ ID NO:l, SEQ ID NO:2 e SEQ ID NO:3 respectivamente. Outros CBDs preferidos incluem os CBDs de glicoamilase de Hormoconis sp. tal como de Hormoeonis resinae (Sin. fungo de Creosoto ou Amorphotheca resinae) tal como o CBD em SW1SSPRQT:Q03045 (SEQ ID NO:8), de Lentinula sp. tal como de Lentinula edodes (cogumelo shiitake) tal como o CBD de SPtREMBL:Q9P4C5 (SEQ ID NO:9), de Neurospora sp. tal como de Neurospora crassa tal como o CBD de SW1SSPRQT:P14804 (SEQ ID NO: 10), de Talaromyces sp. tal como de Talaromyces byssochlamydioides tal como de CBD de NN005220 (SEQ ID NO:l 1), de Geosmithia sp. tal como de Geosmithia eylindrospora, tal como o CBD de NN48286 (SEQ ID NO: 12), de Scorias sp. tal como de Seorias spongiosa tal como o CBD de NN007096 (SEQ ID NO: 13), de Eupenicillium sp. tal como de Eupenicillium ludwigii tal como o CBD de NN005968 (SEQ ID NO: 14), de Aspergillus sp. tal como de Aspergillus japonicus tal como o CBD de NNOOl 136 (SEQ ID NO: 15), de Penieillium sp. tal como de Penicillium cf. miczynskii tal como o CBD de NN48691 (SEQ ID NO: 16), de Mzl Penicillium sp. tal como o CBD de NN48690 (SEQ ID NO: 17), de Thysanophora sp. tal como o CBD of NN48711 (SEQ ID NO: 18), e Humieola sp. tal como de Humieola grisea var. thermoidea tal como o CBD de SPTREMBL:Q12623 (SEQ ID NO: 19). CBDs mais preferidos incluem os CBDs de glicoamilase de Aspergillus sp. tal como de Aspergillus niger, tal como SEQ ID N0:20, e Athelia sp. tal como de Athelia rolfsii, tal como SEQ ID N0:21. Também preferidos de acordo com a invenção são qualquer CBD possuindo pelo menos 50%, 60%, 70%, 80% ou até mesmo pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade com qualquer uma das seqüências de aminoácidos de CBD mencionadas acima.

Outros CBDs disponíveis de Módulo Ligante de Carboidrato de Família 20 podem ser encontrados em URL: http://afmb.cnrs- mrs.fr/~cazv/CAZY/index.html).

Uma vez tendo sido identificada uma seqüência de nucleotídeos codificadora sa região ligante de substrato (ligante de carboidrato), quer como cDNA quer como DNA cromossômico, pode ser então manipulado em uma variedade de maneiras para fusioná-lo em uma seqüência de DNA codificadora da enzima de interesse. O fragmento de DNA codificador da seqüência de aminoácidos ligante de carboidrato e o DNA codificador da enzima de interesse são então ligados com ou sem um ligador. O DNA ligado resultante pode ser então manipulado em uma variedade de maneiras para alcançar expressão.

Em uma modalidade a alfa-amilase compreendida no híbrido é uma alfa-amilase descrita acima na seção "Alfa-amilase". Em uma modalidade preferida a alfa-amilase é de origem fúngica. Em uma modalidade mais preferida a alfa-amilase é uma alfa-amilase ácida.

Em uma modalidade preferida o domínio ligante de carboidrato e/ou a seqüência ligador é de origem fúngica. O domínio ligante de carboidrato pode ser derivado de uma alfa-amilase, mas também pode ser derivado de proteínas, por exemplo, enzimas possuindo atividade de glicoamilase.

Em uma modalidade a alfa-amilase é derivada de uma cepa de Aspergillus, ou de Athelia. Em uma modalidade a alfa-amilase é derivada de uma cepa de Aspergillus oryzae ou de Aspergillus niger. Em uma modalidade específica a alfa-amilase é a alfa-amilase ácida de A. oryzae descrita em SEQ ID NO:39. Em uma modalidade específica a seqüência ligador pode ser derivada de uma cepa de Aspergillus, tal como a alfa-amilase de A. kawachii (SEQ ID NO: 23) ou a glicoamilase de A. rolfsii (SEQ ID NO: 24). Em uma modalidade o CBD é derivado de uma cepa de Aspergillus ou de Athelia. Em uma modalidade específica o CBD é a alfa-amilase de A. kawachii mostrada em SEQID NO:l ou a glicoamilase de A. rolfsii mostrada em SEQ ID NO:21.

Preferida é a modalidade na qual a enzima híbrida compreende uma seqüência de alfa-amilase derivada de domínio de alfa-amilase ácida de A. niger possuindo a seqüência mostrada em SEQ ID NO:38, e/ou uma seqüência ligador derivada de alfa-amilase de A. kawachii mostrada em SEQ ID NO: 23 ou a glicoamilase de A. rolfsii mostrada em SEQ ID NO: 24, e/ou o CBD é derivado de alfa-amilase de A. kawachii mostrada em SEQ ID NO: 2, de glicoamilase de A. rolfsii mostrada em SEQ ID NO: 21 ou de glicoamilase de A. niger mostrada em SEQID NO: 22. Em uma modalidade preferida a enzima híbrida compreende o domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. niger possuindo a seqüência mostrada em SEQ ID NO:38, o ligador de alfa-amilase de A. kawachii mostrado em SEQ ID NO: 23, e o CBD de alfa-amilase de A. kawachii mostrado em SEQID NO:2.

Em uma modalidade específica a enzima híbrida é a parte madura da seqüência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NO: 28 (domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. niger - ligador de alfa-amilase de A. kawachii - CBD de glicoamilase de A. niger), SEQ ID N0:30 (domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. niger - ligador de alfa-amilase de A. kawachii - CBD de glicoamilase de A. rolfsii), ou SEQ ID NO:32 (domínio de alfa-amilase ácida de A. oryzae - ligador de alfa-amilase de A. kawachii - CBD de alfa-amilase de A. kawachii), ou SEQ ID NO:34 (domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. niger - ligador de glicoamilase de A. rolfsii - CBD de glicoamilase de A. rolfsii), ou SEQ ID NO: 36 (domínio catalítico de alfa- amilase ácida de A. oryzae - ligador de glicoamilase de A. rolfsii - CBD de glicoamilase de A. rolfsii) ou o híbrido consistindo de domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. niger (SEQ ID NOS: 4 ou 38, respectivamente) - ligador de glicoamilase de A. kawachii (SEQ ID NO: 23) - CBD de glicoamilase de A. kawachii (SEQ ID NO: 2) ou uma enzima híbrida que possui uma seqüência de aminoácidos possuindo pelo menos 50%, 60%, 70%, 80% ou até mesmo pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade em relação às seqüências de aminoácidos acima mencionadas.

Em outra modalidade preferida a enzima híbrida possui uma seqüência de aminoácidos que difere da seqüência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NO:28 (domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. niger - ligador de alfa-amilase de A. kawachii - CBD de glicoamilase de A. niger), SEQID N0:30 (domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. niger - ligador de alfa-amilase de A. kawachii - CBD de glicoamilase de A. rolfsii), SEQ ID NO:32 (domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. oryzae -Iigador de alfa- amilase de A. kawachii — CBD de alfa-amilase de A. kawachii), SEQ ID NO:34 (domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. niger - ligador de glicoamilase de A. rolfsii - CBD de glicoamilase de A. rolfsii) ou SEQ ID NO:36 (domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. oryzae - ligador de glicoamilase A. rolfsii - CBD de glicoamilase A. rolfsii) ou o híbrido consistindo de domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. niger (SEQ ID NOS: 4 ou 38, respectivamente) - ligador de glicoamilase de A. kawachii (SEQ ID NO: 23) - CBD de glicoamilase de A. kawachi (SEQ ID NO: 2) em não mais do que 10 posições, não mais do que 9 posições, não mais do que 8 posições, não mais do que 7 posições, não mais do que 6 posições, não mais do que 5 posições, não mais do que 4 posições, não mais do que 3 posições, não mais do que 2 posições, ou ainda em não mais do que 1 posição.

Preferivelmente a enzima híbrida compreende uma seqüência de CBD possuindo pelo menos 50%, 60%, 70%, 80% ou até mesmo pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99% de identidade em relação às seqüências de aminoácidos mostradas em SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID N0:10, SEQ ID NO:ll, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID N0:20 ou SEQ ID NO:21. Ainda mais preferido a enzima híbrida compreende uma seqüência de CBD possuindo uma seqüência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO:ll, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID N0:20 ou SEQ ID NO:21. Em ainda outra modalidade preferida a seqüência de CBD possui uma seqüência de aminoácidos que difere da seqüência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO:ll, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID N0:20 ou SEQ ID NO:21 em não mais do que 10 posições, não mais do que 9 posições, não mais do que 8 posições, não mais do que 7 posições, não mais do que 6 posições, não mais do que 5 posições, não mais do que 4 posições, não mais do que 3 posições, não mais do que 2 posições, ou ainda em não mais do que 1 posição.

Em uma modalidade mais preferida a enzima híbrida compreende um CBD derivado de uma glicoamilase de A. rolfsii, tal como a glicoamilase de A. rolfsii AHU 9627 descrita na patente US 4.727.026.

A invenção aqui descrita e reivindicada não é para ser limitada em escopo pelas modalidades específicas aqui descritas, porque estas modalidades são intencionadas como ilustrações de vários aspectos da invenção. Quaisquer modalidades equivalentes são intencionadas para estarem dentro do escopo desta invenção. De fato, várias modificações da invenção em adição àquelas aqui mostradas e descritas se tornarão evidentes para aquelas pessoas experientes na técnica a partir da descrição acima. Tais modificações também são intencionadas para caírem dentro do escopo de acordo com a reivindicações anexas. No caso de conflito, a presente descrição incluindo as definições controlará.

Várias referências são aqui citadas, cujas descrições são aqui incorporadas em suas totalidades.

Materiais & Métodos

Enzimas

- Alfa-amilase ácida A: alfa-amilase ácida de tipo selvagem derivada de Aspergillus niger descrita em SEQ ID NO: 38.

- Alfa-amilase ácida B: alfa-amilase ácida híbrida consistindo de domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. niger (SEQ ID NO: 38) - ligador de glicoamilase de A. kawachii (SEQ ID NO: 23) - CBD de glicoamilase de A. kawachii (SEQ ID NO: 2).

- Alfa-amilase C: alfa-amilase híbrida como mostrada em SEQ ID NO: 44 compreendendo um domínio catalítico (CD) de alfa-amilase de Rhizomucor pusillus possuindo um domínio ligante de carboidrato (CBD) de glicoamilase de Athelia rolfsii.

- Alfa-amilase D: alfa-amilase de tipo selvagem de Rhizomucorpusillus descrita em SEQID NO: 43.

Números de classificação de enzima (números EC) referidos no presente relatório descritivo com reivindicações são de acordo com as Recommendations (1992) of the Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistrv and Molecular Biology, Academic Press lnc, 1992.

Pano

- Pano Vlisco de Vlisco BV, NL

Tampão

Tampão citrato

Tampão citrato 10 mM (pH 4,0)

1,376 g de ácido cítrico mono-hidratado e 1,015 g de citrato de sódio di-hidratado são dissolvidos em 1 1 de água deionizada.

Métodos:

Determinação de homologia / identidade

Para os propósitos da presente invenção, o grau de homologia é determinado como o grau de identidade entre duas seqüências de aminoácidos como determinado pelo método Clustal (Higgins, 1989, CABIOS 5: 151-153) usando o programa de computador LASERGENE™ MEGAL1GN™ (DNASTAR, Inc., Madison, WI) com uma tabela de identidade e os seguintes parâmetros de alinhamento múltiplo: penalidade de lacuna de 10, e penalidade de comprimento de lacuna de 10. Parâmetros de alinhamento no modo pareado Ktuple = 1, penalidade de lacuna = 3, janelas = 5, e diagonais = 5.

Atividade de alfa-amilase ácida (ensaio de AFAU)

Quando usada de acordo com a presente invenção a atividade de qualquer alfa-amilase ácida pode ser medida em AFAU (Unidades de Alfa- Amilase Fúngica Ácida), que são determinadas em relação a um padrão enzimático. 1 FAU é definido como a quantidade de enzima que degrada 5,260 mg de matéria seca de amido por hora sob as condições padrão mencionadas.

Alfa-amilase ácida, uma endo-alfa-amilase (1,4-alfa-D-glican- glicano-hidrolase, E.C. 3.2.1.1) hidrolisa ligações alfa-1,4-glicosídicas nas regiões internas da molécula de amido para formar dextrinas e oligossacarídeos com comprimentos de cadeia diferentes. A intensidade da cor formada com iodo é diretamente proporcional à concentração de amido. Atividade de amilase é determinada usando colorimetria reversa como uma redução na concentração de amido sob as condições analíticas especificadas.

<formula>formula see original document page 37</formula>

Condições padrão / condições de reação

<table>table see original document page 37</column></row><table> Faixa de trabalho da enzima: 0,01 -0,04 AFAU/ml

Um folheto EB-SM-0259.02/01 descrevendo este método analítico em mais detalhe está disponível sob solicitação na Novozymes A/S, Dinamarca, cujo folheto é aqui incorporado como referência.

Atividade de alfa-amilase (KNU)

A atividade amilolítica pode ser determinada usando amido de batata como substrato. Este método é baseado na degradação de amido de batata modificado pela enzima, e a reação é seguida por misturação de amostras de solução de amido / enzima com uma solução de iodo. Inicialmente, uma cor azul-enegrecida é formada, mas durante a degradação do amido a cor azul torna-se mais fraca e gradualmente se transforma em uma cor marrom-avermelhada, que é comparada com um padrão vítreo colorido.

Um quilounidade de alfa-amilase Novo (KNU) como a quantidade de enzima que, sob condições padrão (isto é a 37°C ± 0,05°C; Ca2+ 0,0003 M; e pH 5,6) dextriniza 5260 mg de substrato amido seco Merck Amylum solubile.

Um folheto EB-SM-0009.02/01 descrevendo este método analítico em mais detalhe está disponível sob solicitação na Novozymes A/S, Dinamarca, cujo folheto é aqui incorporado como referência.

Determinação da atividade amilolítica ácida (FAU)

Uma unidade de alfa-amilase fúngica (FAU) é definida como a quantidade de enzima, que degrada 5,26 g de amido (Merck Amylum solubile Erg. B.6, Batelada 9947275) por hora no método padrão de Novozymes para determinação de alfa-amilase baseado nas seguintes condições padrão:

<table>table see original document page 38</column></row><table>

Uma descrição detalhada do método de Novozymes para determinar KNU e FAU está disponível sob solicitação como método padrão EB-SM-0009.02/01.

Desengomacão (método de Tegewa)

O resíduo de engomação de amido é determinado visualmente por comparação de uma amostra de pano corado com iodo com um conjunto padrão de fotos com escala de 1-9 na qual 1 é azul escuro e 9 é incolor. A solução de cor de iodo é preparada pela dissolução de 10 g de KI em 10 ml de água, e adição de 0,635 g de I2, e 200 ml de etanol em água deionizada para preparar 1 1 de solução. Uma amostra de pano é coitada e imersa na solução de iodo por 60 segundos e enxaguada em água deionizada por cerca de 5 segundos. A amostra de pano é classificada por pelo menos dois profissionais após a água em excesso na amostra ter sido removida por prensagem. Um número médio é dado. Método e escalas padrão são obteníveis na Verband TEGE WA, Karlstrasse 21, Frankfurt a. M. Alemanha.

EXEMPLOS

Exemplo 1

Desengomacão de pano de algodão com alfa-amilase A ácida de tipo selvagem

Um pano 100% de algodão (270 g/m2) foi da Borás Wãfveri Kungsfors AB, Suécia. Foi feito em 2003 com construção Cupper 3/1. O pano continha 28 filamentos/cm de fio de urdidura e 14 filamentos / cm de fio de trama. O fio de urdidura foi Ne 11 e a trama possui Ne 8. Ambos os fios foram de extremidade aberta. A captação de agente de engomação seco sobre o fio de urdidura foi 8%. O agente de engomação continha principalmente Kollotex 5, Solvitose XO, e cera de sebo bovino com emulsificador. Kollotex 5 é um éster de amido de batata de viscosidade baixa. Solvitose XO é um éter de amido de viscosidade alta com DS de cerca de 0,07. Amidos de pano foram cortados em cerca de 25 g cada.

Três tampões foram preparados para este estudo. Tampão de pH 2 foi preparado por dissolução de 11,53 g de ácido fosfórico 85% em 4,5 litros de água pura, titulação com HCl 5 N até pH 1,95, então adição de água para 5 litros. Tampão de pH 3 foi preparado pro dissolução de 11,53 g de ácido fosfórico 95% em 4,5 litros de água, titulação com NaOH 5 N até pH 2,95, então adição de água até 10 litros. Tampão de pH 4 foi preparado por dissolução de 6,005 g de ácido acético em 4,5 litros de água pura, titulação com HCl 5 N para pH 3,95, então adição de água até 10 litros. Um tensoativo não-iônico (agente umectante) a 2 g/l foi adicionado em cada tampão. Os valores de pH final medidos destes três tampões foram 2, 2,99 e 3,98, respectivamente.

Para cada tratamento, 1 1 de solução tampão foi tomado. Uma quantidade dada de alfa-amilase ácida A de tipo selvagem foi adicionada no tampão. Uma amostra de pano foi imersa na solução por 30 segundos e então impregnada através de um impregnador (Werner Mathis) para alcançar uma captação de 85%. A amostra de pano foi enrolada e vedada em um saco plástico. Foi então incubada em um forno a 50°C por 2 horas. A amostra de pano foi lavada em uma série de impregnação - vaporização (Werner Mathis) que continha quatro caixas de enxaguar pequenas. A temperatura da água nas caixas de enxaguar foi de 95°C, 95°C, 90°C, e 90°C, respectivamente.

Após a secagem durante a noite em ar, a amostra de pano foi tingida com uma solução de iodo. A amostra de pano tingida foi visualmente comparada com as fotos padrão TEGEWA com escala 1-9 na qual 1 é cor escura e 9 é incolor. Assim o número mais alto indica uma melhor remoção de amido. A avaliação visual foi feita por pelo menos três profissionais e um valor TEGEWA médio foi dado a cada amostra de pano. Os resultados são mostrados na Tabela 1. O pano tratado com alfa-amilase ácida A de tipo selvagem deu valor TEGEWA mais alto do que o pano tratado com controle sem enzima em todas as três condições de pH, indicando que a alfa-amilase ácida A hidrolisou e removeu agente de engomação de amido sobre o pano. Atividade de enzima aumentada resultou em TEGEWA mais alto indicando remoção de amido aumentada.

Exemplo 2

Desengomacão de pano de algodão com alfa-amilase ácida B

A mesma amostra de pano e os mesmos tampões foram preparados como no Exemplo 1. Alfa-amilase ácida B foi diferente da alfa- amilase ácida de tipo selvagem A usada no Exemplo 1 pelo fato de que a proteína enzimática foi construída para compreender a alfa-amilase ácida de tipo selvagem A de A. niger (Exemplo 1) ligada com um CBD de alfa-amilase ácida de Aspergillus kawachii. A enzima utilizada neste estudo teve uma atividade de 316 AFAU/g. Os mesmos tratamentos e as mesmas medições foram conduzidos como no Exemplo 1. Os resultados são apresentados na Tabela 1. Alfa-amilase ácida B com CBD deu valor TEGEWA maior do que o da alfa-amilase ácida de tipo selvagem A na mesma atividade em todas as condições, indicando que a alfa-amilase ácida B com CBD melhora o desempenho de desengomação da alfa-amilase.

Tabela 1

<table>table see original document page 41</column></row><table>

Exemplo 3

As mesmas amostras de pano foram preparadas como no Exemplo 1. Tampão de pH 3 foi preparado por dissolução de 11,53 g de ácido fosfórico 85% em 4,5 litros de água pura, titulação com NaOH 5 N para pH 2,95, então adição de água para 5 litros. Após adição de tensoativo aniônico (agente umectante) a 2 g/l no tampão, o pH do tampão foi medido como 3,05 a 25°C. A mesma enzima como no Exemplo 1 foi usada.

O tratamento de desengomação foi conduzido em um Lab-o- mat (Werner Mathis). 250 ml de solução tampão foram adicionados em cada béquer. Uma quantidade dada de enzima alfa-amilase foi adicionada. Uma amostra de pano (25 g) foi adicionada em cada béquer. O béquer foi fechado e posicionado no Lab-o-mat. Béqueres foram aquecidos a 5°C/min para 50°C por um sistema de aquecimento por infravermelho equipado dentro do Lab-o- mat. Béqueres foram girados a 30 rpm, 50°C por 45 minutos. Após o tratamento enzimático, a amostra de pano foi seqüencialmente lavada com água no mesmo béquer três vezes a 95°C, 75°C, e 40°C respectivamente.

Após secagem durante a noite em ar, a amostra foi avaliada na mesma maneira como no Exemplo 1. Os resultados são mostrados na Tabela 2. As mesmas conclusões no Exemplo 1 podem ser obtidas. Um valor TEGEWA acima de 5 foi alcançado em equipamento lab, indicando que desengomação em condição ácida é abordagem viável.

O resíduo de íons de metal sobre o pano também foi avaliado. O pano foi primeiro cortado através de uma peneira de 1 mm com um moinho Thomas-Wiley. Uma mistura de pano de 4,00 g (± 0,01 g) foi misturada com 80 ml de solução de EDTA a 1 g/l. A mistura foi incubada a 70°C e 200 rpm em um misturador (New Brunswick Scientific Co. Inc., Series 25) por 15 horas. Após esfriamento por cerca de 30 minutos, a mistura foi centrifugada a 2.500 rpm a 20°C por 10 minutos. O sobrenadante foi colhido para análise de metal com um espectrômetro de absorção atômica Perkin-Elmer.

Exemplo 4

Essencialmente o mesmo conjunto de experimentos foi conduzido na mesma maneira como no Exemplo 3, exceto que foi usada a alfa-amilase do Exemplo 2. As mesmas condições experimentais e avaliação foram realizadas. Os resultados são mostrados na Tabela 2. As mesmas conclusões como no Exemplo 2 podem ser tiradas deste exemplo. Valor TEGAWA muito maior foi obtido neste experimento, e o valor mais alto foi 5,8.

Tabela 2

<table>table see original document page 43</column></row><table>

n/a = não medido

Exemplo 5

O mesmo tipo de pano de Borâs WafVeri Kungsfors AB (Suécia) como no Exemplo 1 foi usado e a amostra foi cortada em cerca de 62 g cada. Tampão de pH 4 foi preparado por dissolução de 12,01 g de ácido acético em 4,5 litros de água pura, titulação com HCl 5 N para pH 3,95, então adição de água para 10 litros. Um tensoativo não-iônico (agente umectante) a 2 g/l foi adicionado no tampão. O valor de pH final do tampão foi 3,99.

Para cada tratamento, foram tomados 1,2 litros de solução tampão. Uma quantidade dada de enzima alfa-amilase foi adicionada no tampão. Uma amostra de pano foi imersa na solução por 30 segundos e então impregnada por meio de um impregnador (Werner Mathis) para alcançar uma captação de 90%. A amostra de pano foi cortada em duas amostras iguais. Ambas foram enroladas e vedadas em sacos plásticos. Um saco foi incubado em um forno a 40°C e o outro na temperatura ambiente (20°C). Ambas as amostras foram tratadas por 16 horas. A amostra de pano foi lavada em uma série de impregnação - vaporização (Werner Mathis) que continha quatro caixas de enxaguar pequenas. A temperatura da água nas caixas de enxaguar foi de 95°C, 95°C, 90°C, e 90°C, respectivamente.

A mesma avaliação como no Exemplo 1 foi conduzida. Os resultados são mostrados na Tabela 3. Agente de engomação de amido sobre pano de algodão foi hidrolisado por alfa-amilase e removido durante o processo de desengomação. Em pH 4, ambas as enzimas amilase foram capazes de realizar a desengomação tanto a 20°C quanto a 40°C;

Tabela 3

<table>table see original document page 44</column></row><table>

Exemplo 6

Alfa-amilase D para desengomação de pano em pH 4,0

Água deionizada foi adicionada em béqueres, até 13 cm a partir do fundo. A temperatura da água foi ajustada para 60°C. 200 ml de tampão citrato 10 mM (pH 4,0) foram adicionados em cada béquer e deixados em um Lab-o-Mat. As soluções foram aquecidas para 60°C. Quantidades diferentes de alfa-amilase D foram adicionadas no tampão. As concentrações de enzima finais foram 50 FAU/ml, 100 FAU/ml, 200 FAU/ml e 400 FAU/ml, respectivamente. Duas amostras de pano Vlisco foram fixadas em um par de fórceps e imersas no banho de impregnação por 30 segundos e então impregnadas. A imersão e a compressão foram repetidas. A captação foi de cerca de 100%.

Uma amostra foi posicionada dentro de um saco plástico de duas camadas, o ar foi removido por compressão e o saco foi deixado dentro de um banho de água a 60°C por 2 horas. A outra amostra foi posicionada em um saco plástico de duas camadas, o ar foi removido por compressão, e o saco foi mantido na temperatura ambiente por 24 horas. As amostrar foram fixadas nos fórceps, imersas em uma solução quente de enxágüe (90°C) por 30 segundos e comprimidas. A imersão e a compressão foram repetidas duas vezes.

O pano foi imerso em água de torneira fria por cerca de 60 segundos e água foi removida por compressão manualmente. As amostras foram deixadas sobre uma prateleira e secas na temperatura ambiente. O conteúdo de amido residual sobre o pano foi checado pela classificação 0 TEGEWA. O resultado dos testes é mostrado na Fig. 1.

Exemplo 7

Desengomação com alfa-amilase C em pH 4,0

O procedimento de desengomação descrito no Exemplo 6 foi repetido, exceto que foi usada alfa-amilase C. O resultado dos testes é mostrado na Fig. 2. LISTAGEM DAS SEQÜÊNCIAS

<110> Liu, Jim

Salmon, Sonja Wu, Guifang

<120> Processo de Desengomação

<130> 10692.204-W0

<160> 47

<170> PatentIn versão 3.3

<210> 1

<211> 396

<212> DNA

<213> Aspergillus kawachii <220>

<221> CDS

<222> (1)..(396)

<223> A. kawachii CBD <400> 1 act agt aca tcc aaa gcc acc acc tcc tet tet tet tet tet gct gct 48 Thr Ser Thr Ser Lys Ala Thr Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ala 1 5 10 15 gct act act tet tca tca tgc acc gea aca age acc acc CtC CCC ate 96 Ala Thr Thr Ser 20 Ser Ser Cys Thr Ala 25 Thr Ser Thr Thr Leu 30 Pro Ile acc ttc gaa gaa CtC gtc acc act acc tac ggg gaa gaa gtc tac CtC 144 Thr Phe Glu 35 Glu Leu Val Thr Thr 40 Thr Tyr Gly Glu Glu 45 Val Tyr Leu age gga tet ate tcc cag CtC gga gag tgg gat acg agt gac gcg gtg 192 Ser Gly Ser Ile Ser Gln Leu Gly Glu Trp Asp Thr Ser Asp Ala Val 50 55 60 aag ttg tcc gcg gat gat tat acc tcg agt aac ccc gag tgg tet gtt 240 Lys Leu Ser Ala Asp Asp Tyr Thr Ser Ser Asn Pro Glu Trp Ser Val 65 70 75 80 act gtg tcg ttg ccg gtg ggg acg acc ttc gag tat aag ttt att aag 288 Thr Val Ser Leu Pro 85 Val Gly Thr Thr Phe 90 Glu Tyr Lys Phe Ile 95 Lys gtc gat gag ggt gga agt gtg act tgg gaa agt gat ccg aat agg gag 336 Val Asp Glu Gly 100 Gly Ser Val Thr Trp 105 Glu Ser Asp Pro Asn 110 Arg Glu tat act gtg CCt gaa tgt ggg aat ggg agt ggg gag acg gtg gtt gat 384 Tyr Thr Val Pro Glu Cys Gly Asn Gly Ser Gly Glu Thr Val Val Asp 115 120 125 acg tgg agg tag 396 Thr Trp Arg 130 <210> 2 <211> 131 <212> PRT <213> Aspergillus kawachii <400> 2 Thr Ser Thr Ser Lys Ala Thr Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ala 1 5 10 15 Ala Thr Thr Ser 20 Ser Ser Cys Thr Ala 25 Thr Ser Thr Thr Leu 30 Pro Ile Thr Phe Glu 35 Glu Leu Val Thr Thr 40 Thr Tyr Gly Glu Glu 45 Val Tyr Leu Ser Gly Ser Ile Ser Gln Leu Gly Glu Trp Asp Thr Ser Asp Ala Val 50 55 60 Lys Leu Ser Ala Asp Asp Tyr Thr Ser Ser Asn Pro Glu Trp Ser Val 65 70 75 80 Thr Val Ser Leu Pro Val Gly Thr Thr Phe Glu Tyr Lys Phe Ile Lys 85 90 95 Val Asp Glu Gly 100 Gly Ser Val Thr Trp 105 Glu Ser Asp Pro Asn 110 Arg Glu Tyr Thr Val Pro Glu Cys. Gly Asn Gly Ser Gly Glu Thr Val Val Asp 115 120 125 Thr Trp Arg 130 <210> 3 <211> 1533 <212> DNA <213> Aspergillus niger <220> <221> CDS <222> (1) . . (1533) <223> Aspergillus niger alfa-amilase ácida <220> <221> mat peptideo <222> (64) ..(1533) <400> 3 atg aga tta tcg act tcg agt CtC ttc Ctt tcc gtg tet ctg ctg ggg 48 Met Arg Leu Ser Thr Ser Ser Leu Phe Leu Ser Val Ser Leu Leu Gly -20 -15 -10 aag ctg gcc CtC ggg ctg tcg gct gea gaa tgg cgc act cag tcg att 96 Lys Leu Ala Leu Gly Leu Ser Ala Ala Glu Trp Arg Thr Gln Ser Ile -5 -1 1 5 10 tac ttc cta ttg acg gat cgg ttc ggt agg acg gac aat tcg acg aca 144 Tyr Phe Leu Leu 15 Thr Asp Arg Phe Gly 20 Arg Thr Asp Asn Ser 25 Thr Thr gct aca tgc gat acg ggt gac caa ate tat tgt ggt ggc agt tgg caa 192 Ala Thr Cys 30 Asp Thr Gly Asp Gln 35 Ile Tyr Cys Gly Gly 40 Ser Trp Gln gga ate ate aac cat ctg gat tat ate cag ggc atg gga ttc acg gcc 240 Gly Ile Ile Asn His Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala 45 50 55 ate tgg ate tcg CCt ate act gaa cag ctg CCC cag gat act gct gat 288 Ile Trp Ile Ser Pro Ile Thr Glu Gln Leu Pro Gln Asp Thr Ala Asp 60 65 70 75 ggt gaa gct tac cat gga tat tgg cag cag aag ata tac gac gtg aac 336 Gly Glu Ala Tyr His 80 Gly Tyr Trp Gln Gln 85 Lys Ile Tyr Asp Val 90 Asn tcc aac ttc ggc act gea gat gac CtC aag tcc ctc tca gat gcg Ctt 384 Ser Asn Phe Gly 95 Thr Ala Asp Asp Leu 100 Lys Ser Leu Ser Asp 105 Ala Leu cat gcc cgc gga atg tac CtC atg gtg gac gtc gtc CCt aac cac atg 432 His Ala Arg 110 Gly Met Tyr Leu Met 115 Val Asp Val Val Pro 120 Asn His Met ggc tac gcc ggc aac ggc aac gat gta gac tac age gtc ttc gac CCC 480 Gly Tyr Ala Gly Asn Gly Asn Asp Val Asp Tyr Ser Val Phe Asp Pro 125 130 135 ttc gat tcc tcc tcc tac ttc cac cca tac tgc ctg ate aca gat tgg 528 Phe Asp Ser Ser Ser Tyr Phe His Pro Tyr Cys Leu Ile Thr Asp Trp 140 145 150 155 gac aac ttg acc atg gtc caa gat tgt tgg gag ggt gac acc ate gta 576 Asp Asn Leu Thr Met Val Gln Asp Cys Trp Glu Gly Asp Thr Ile Val 160 165 170 tet ctg cca gac cta aac acc acc gaa act gcc gtg aga aca ate tgg 624 Ser Leu Pro Asp 175 Leu Asn Thr Thr Glu 180 Thr Ala Val Arg Thr 185 Ile Trp tat gac tgg gta gcc gac ctg gta tcc aat tat tca gtc gac gga CtC 672 Tyr Asp Trp 190 Val Ala Asp Leu Val 195 Ser Asn Tyr Ser Val 200 Asp Gly Leu cgc ate gac agt gtc ctc gaa gtc gaa cca gac ttc ttc ccg ggc tac 720 Arg Ile Asp Ser Val Leu Glu Val Glu Pro Asp Phe Phe Pro Gly Tyr 205 210 215 cag gaa gea gea ggt gtc tac tgc gtc ggc gaa gtc gac aac gge aac 768 Gln Glu Ala Ala Gly Val Tyr Cys Val Gly Glu Val Asp Asn Gly Asn 220 225 230 235 CCt gcc CtC gac tgc cca tac cag aag gtc ctg gac ggc gtc etc aac 816 Pro Ala Leu Asp Cys 240 Pro Tyr Gln Lys Val 245 Leu Asp Gly Val Leu 250 Asn tat ccg ate tac tgg caa CtC CtC tac gcc ttc gaa tcc tcc age ggc 864 Tyr Pro Ile Tyr 255 Trp Gln Leu Leu Tyr 260 Ala Phe Glu Ser Ser 265 Ser Gly age ate age aat CtC tac aac atg ate aaa tcc gtc gea age gac tgc 912 Ser Ile Ser 270 Asn Leu Tyr Asn Met 275 Ile Lys Ser Val Ala 280 Ser Asp Cys tcc gat ccg aca cta CtC ggc aac ttc ate gaa aac cac gac aat ccc 960 Ser Asp Pro Thr Leu Leu Gly Asn Phe Ile Glu Asn His Asp Asn Pro 285 290 295 cgt ttc gcc tcc tac acc tcc gac tac tcg caa gcc aaa aac gtc CtC 1008 Arg Phe Ala Ser Tyr Thr Ser Asp Tyr Ser Gln Ala Lys Asn Val Leu 300 305 310 315 age tac ate ttc CtC tcc gac ggc ate ccc ate gtc tac gcc ggc gaa 1056 Ser Tyr Ile Phe Leu Ser Asp Gly Ile Pro Ile Val Tyr Ala Gly Glu 320 325 330 gaa cag cac tac tcc ggc ggc aag gtg ccc tac aac cgc gaa gcg acc 1104 Glu Gln His Tyr 335 Ser Gly Gly Lys Val 340 Pro Tyr Asn Arg Glu 345 Ala Thr tgg Ctt tca ggc tac gac acc tcc gea gag ctg tac acc tgg ata gcc 1152 Trp Leu Ser 350 Gly Tyr Asp Thr Ser 355 Ala Glu Leu Tyr Thr 360 Trp Ile Ala acc acg aac gcg ate cgc aaa cta gcc ate tca gct gac tcg gcc tac 1200 Thr Thr 365 Asn Ala Ile Arg Lys 370 Leu Ala Ile Ser Ala 375 Asp Ser Ala Tyr att acc tac gcg aat gat gea ttc tac act gac age aac acc ate gea 1248 Ile Thr Tyr Ala Asn Asp Ala Phe Tyr Thr Asp Ser Asn Thr Ile Ala 380 385 390 395 atg cgc aaa ggc acc tca ggg age caa gtc ate acc gtc etc tcc aac 1296 Met Arg Lys Gly Thr 400 Ser Gly Ser Gln Val 405 Ile Thr Val Leu Ser 410 Asn aaa ggc tcc tca gga age age tac acc ctg acc CtC age gga age ggc 1344 Lys Gly Ser Ser 415 Gly Ser Ser Tyr Thr 420 Leu Thr Leu Ser Gly 425 Ser Gly tac aca tcc gge acg aag ctg ate gaa gcg tac aca tgc aca tcc gtg 1392 Tyr Thr Ser 430 Gly Thr Lys Leu Ile 435 Glu Ala Tyr Thr Cys 440 Thr Ser Val a cc gtg gac tcg age ggc gat att ccc gtg ccg atg gcg tcg gga tta 1440 Thr Val 445 Asp Ser Ser Gly Asp 450 Ile Pro Val Pro Met 455 Ala Ser Gly Leu ccg aga gtt Ctt ctg ccc gcg tcc gtc gtc gat age tet tcg CtC tgt 1488 Pro Arg Val Leu Leu Pro Ala Ser Val Val Asp Ser Ser Ser Leu Cys 460 465 470 475 ggc ggg age gga aga aca acc acg acc aca act gct gct act agt 1533 Gly Gly Ser Gly Arg 480 Thr Thr Thr Thr Thr 485 Thr Ala Ala Thr Ser 4 90 <210> 4 <211> 511 <212> PRT <213> Aspergillus niger <400> 4 Met Arg -20 Leu Ser Thr Ser Ser -15 Leu Phe Leu Ser Val -10 Ser Leu Leu Gly Lys Leu Ala Leu Gly Leu Ser Ala Ala Glu Trp Arg Thr Gln Ser Ile -5 -1 1 5 10 Tyr Phe Leu Leu 15 Thr Asp Arg Phe Gly 20 Arg Thr Asp Asn Ser 25 Thr Thr Ala Thr Cys Asp Thr Gly Asp Gln Ile Tyr Cys Gly Gly Ser Trp Gln 30 35 40 Gly Ile Ile Asn His Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala 45 50 55 Ile Trp Ile Ser Pro Ile Thr Glu Gln Leu Pro Gln Asp Thr Ala Asp 60 65 70 75 Gly Glu Ala Tyr His Gly Tyr Trp Gln Gln Lys Ile Tyr Asp Val Asn 80 85 90 Ser Asn Phe Gly Thr Ala Asp Asp Leu Lys Ser Leu Ser Asp Ala Leu 95 100 105 His Ala Arg Gly Met Tyr Leu Met Val Asp Val Val Pro Asn His Met 110 115 120 Gly Tyr Ala Gly Asn Gly Asn Asp Val Asp Tyr Ser Val Phe Asp Pro 125 130 135 Phe Asp Ser Ser Ser Tyr Phe His Pro Tyr Cys Leu Ile Thr Asp Trp 140 145 150 155 Asp Asn Leu Thr Met Val Gln Asp Cys Trp Glu Gly Asp Thr Ile Val 160 165 170 Ser Leu Pro Asp Leu Asn Thr Thr Glu Thr Ala Val Arg Thr Ile Trp 175 180 185 Tyr Asp Trp Val Ala Asp Leu Val Ser Asn Tyr Ser Val Asp Gly Leu 190 195 200 Arg Ile Asp Ser Val Leu Glu Val Glu Pro Asp Phe Phe Pro Gly Tyr 205 210 215 Gln Glu Ala Ala Gly Val Tyr Cys Val Gly Glu Val Asp Asn Gly Asn 220 225 230 235 Pro Ala Leu Asp Cys Pro Tyr Gln Lys Val Leu Asp Gly Val Leu Asn 240 245 250 Tyr Pro Ile Tyr Trp Gln Leu Leu Tyr Ala Phe Glu Ser Ser Ser Gly 255 260 265 Ser Ile Ser Asn Leu Tyr Asn Met Ile Lys Ser Val Ala Ser Asp Cys 270 275 280 Ser Asp Pro Thr Leu Leu Gly Asn Phe Ile Glu Asn His Asp Asn Pro 285 290 295 Arg Phe Ala Ser Tyr Thr Ser Asp Tyr Ser Gln Ala Lys Asn Val Leu 300 305 310 315 Ser Tyr Ile Phe Leu Ser Asp Gly Ile Pro Ile Val Tyr Ala Gly Glu 320 325 330 Glu Gln His Tyr Ser Gly Gly Lys Val Pro Tyr Asn Arg Glu Ala Thr 335 340 345 Trp Leu Ser Gly Tyr Asp Thr Ser Ala Glu Leu Tyr Thr Trp Ile Ala 350 355 360 Thr Thr Asn Ala Ile Arg Lys Leu Ala Ile Ser Ala Asp Ser Ala Tyr 365 370 375 Ile Thr Tyr Ala Asn Asp Ala Phe Tyr Thr Asp Ser Asn Thr Ile Ala 380 385 390 395 Met Arg Lys Gly Thr Ser Gly Ser Gln Val Ile Thr Val Leu Ser Asn 400 405 410 Lys Gly Ser Ser Gly Ser Ser Tyr Thr Leu Thr Leu Ser Gly Ser Gly 415 420 425 Tyr Thr Ser Gly Thr Lys Leu Ile Glu Ala Tyr Thr Cys Thr Ser Val 430 435 440 Thr Val Asp Ser Ser Gly Asp Ile Pro Val Pro Met Ala Ser Gly Leu 445 450 455 Pro Arg Val Leu Leu Pro Ala Ser Val Val Asp Ser Ser Ser Leu Cys 460 465 470 475 Gly Gly Ser Gly Arg Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ala Ala Thr Ser

480 485 490

<210> 5

<211> 102

<212> PRT

<213> Bacillus fIavothermus <220> <221> <222>

DOMÍNIO (1)..(102)

<223> CBD <400> 5 Ile Ser Thr Thr Ser Gln Ile Thr Phe Thr Val Asn Asn Ala Thr 1 5 10 15 Val Trp Gly Gln Asn Val Tyr Val Val Gly Asn Ile Ser Gln Leu 20 25 30 Asn Trp Asp Pro Val His Ala Val Gln Met Thr Pro Ser Ser Tyr 35 40 45 Thr Trp Thr Val Thr Ile Pro Leu Leu Gln Gly Gln Asn Ile Gln 50 55 60 Lys Phe Ile Lys Lys Asp Ser Ala Gly Asn Val Ile Trp Glu Asp 65 70 75 Ser Asn Arg Thr Tyr Thr Val Pro Thr Ala Ala Ser Gly Ala Tyr 85 90 95 Ala Ser Trp Asn Val Pro 100 <210> 6 <211> 99 <212> PRT <213> Bacillus sp. <220> <221> DOMÍNIO <222> (1) . . (99) <223> CBD <400> 6 Thr Ser Asn Val Thr Phe Thr Val Asn Asn Ala Thr Thr Val Tyr 1 5 10 15 Gln Asn Val Tyr Val Val Gly Asn Ile Pro Glu Leu Gly Asn Trp 20 25 30 Ile Ala Asn Ala Ile Gln Met Thr Pro Ser Ser Tyr Pro Thr Trp 35 40 45 Thr Thr Val Ser Leu Pro Gln Gly Lys Ala Ile Glu Phe Lys Phe 50 55 60 Lys Lys Asp Ser Ala Gly Asn Val Ile Trp Glu Asn Ile Ala Asn 65 70 75 Thr Tyr Thr Val Pro Phe Ser Ser Thr Gly Ser Tyr Thr Ala Asn 85 90 95 Asn Val Pro <210> 7 <211> 102 <212> PRT <213> Alcaliphilic : Bacillus <220> <221> DOMÍNIO <222> (1) . .(102) <223> CBD <400> 7 Thr Ser Thr Thr Ser Gln Ile Thr Phe Thr Val Asn Asn Ala Thr 1 5 10 15 Val Trp Gly Gln Asn Val Tyr Val Val Gly Asn Ile Ser Gln Leu 20 25 30 Asn Trp Asp Pro Val Asn Ala Val Gln Met Thr Pro Ser Ser Tyr 35 40 45 Thr Trp Val Val Thr Val Pro Leu Pro Gln Ser Gln Asn Ile Gln 50 55 60 Lys Phe Ile Lys Lys Asp Gly Ser Gly Asn Val Ile Trp Glu Asn 65 70 75 Ser Asn Arg Thr Tyr Thr Val Pro Thr Ala Ala Ser Gly Ala Tyr 85 90 95 Ala Asn Trp Asn Val Pro 100

<210> 8

<211> 112

<212> PRT

<213> Hormoconis resinae <220>

<221> DOMÍNIO

<222> (1)..(112)

<223> CBD

<400> 8

Cys Gln Val Ser Ile Thr Phe Asn Ile Asn Ala Thr Thr Tyr Tyr Gly 1 5 10 15 Glu Asn Leu Tyr Val Ile Gly Asn Ser Ser Asp Leu Gly Ala Trp Asn 20 25 30 Ile Ala Asp Ala Tyr Pro Leu Ser Ala Ser Ala Tyr Thr Gln Asp Arg 35 40 45 Pro Leu 50 Trp Ser Ala Ala Ile 55 Pro Leu Asn Ala Gly 60 Glu Val Ile Ser Tyr Gln Tyr Val Arg Gln Glu Asp Cys Asp Gln Pro Tyr Ile Tyr Glu 65 70 75 80 Thr Val Asn Arg Thr 85 Leu Thr Val Pro Ala 90 Cys Gly Gly Ala Ala 95 Val Thr Thr Asp Asp 100 Ala Trp Met Gly Pro 105 Val Gly Ser Ser Gly Asn 110 Cys

<210> 9 <211> 95 <212> PRT

<213> Lentinula edodes <220>

<221> DOMÍNIO <222> (1)..(95) <223> CBD <400> 9

Val Ser Val Thr Phe Asn Val Asp Ala Ser Thr Leu Glu Gly Gln Asn 1 5 10 15

Val Tyr Leu Thr Gly Ala Val Asp Ala Leu Glu Asp Trp Ser Thr Asp

20 25 30

Asn Ala Ile Leu Leu Ser Ser Ala Asn Tyr Pro Thr Trp Ser Val Thr

35 40 45

Val Asp Leu Pro Gly Ser Thr Asp Val Gln Tyr Lys Tyr Ile Lys Lys

50 55 60

Asp Gly Ser Gly Thr Val Thr Trp Glu Ser Asp Pro Asn Met Glu Ile 65 70 75 80

Thr Thr Pro Ala Asn Gly Thr Tyr Ala Thr Asn Asp Thr Trp Arg 85 90 95

<210> 10 <211> 107 <212> PRT

<213> Neurospora crassa <220>

<221> DOMÍNIO <222> (1)..(107) <223> CBD <400> 10

Cys Ala Ala Asp His Glu Val Leu Val Thr Phe Asn Glu Lys Val Thr 15 10 15

Thr Ser Tyr Gly Gln Thr Val Lys Val Val Gly Ser Ile Ala Ala Leu

20 25 30

Gly Asn Trp Ala Pro Ala Ser Gly Val Thr Leu Ser Ala Lys Gln Tyr

35 40 45

Ser Ser Ser Asn Pro Leu Trp Ser Thr Thr Ile Ala Leu Pro Gln Gly

50 55 60

Thr Ser Phe Lys Tyr Lys Tyr Val Val Val Asn Ser Asp Gly Ser Val 65 70 75

Lys Trp Glu Asn Asp Pro Asp Arg Ser Tyr Ala

85 90

Ala Ser Thr Ala Thr Leu Asp Asp Thr Trp Arg 100 105

11 115 PRT

Talaromyces byssochlamydioides

Val Gly Thr Asp Cys 95

<210> <211> <212> <213> <220> <221> <222> <223> <400>

DOMÍNIO (1) .. (115) CBD 11

Thr Thr Thr Gly Ala Ala Pro Cys Thr Thr Pro 1 5 10

Thr Phe Asp Glu Ile Val Thr Thr Thr Tyr Gly

20 25

Ser Gly Ser Ile Pro Ala Leu Gly Asn Trp Asp

35 40

Ala Leu Ser Ala Val Asp Tyr Thr Ser Ser Asn

50 55

Thr Val Asn Leu Pro Ala Gly Thr Ser Phe Glu 65 70 75

Gln Gln Thr Asp Gly Thr Ile Val Trp Glu Asp

85 90

Tyr Thr Val Pro Ala Asn Cys Gly Gln Thr Thr 100 105

Ser Trp Gln 115 12 115 PRT

Geosmithia cylindrospora:

Thr Thr

Glu Thr

Thr Ser

45 Pro Leu 60

Tyr Lys Asp Pro Ala Ile

Val Ala Val 15

Val Tyr Leu

30

Ser Ala Ile

Trp Tyr Val

Phe Phe Val 80

Asn Arg Ser 95

Ile Asp Asp 110

<210> <211> <212> <213> <220> <221> <222> <223> <400>

DOMÍNIO (1)··(115) CBD 12

Thr Ser Thr Gly Ser Ala Pro Cys Thr Thr Pro 15 10

Thr Phe Asp Glu Ile Val Thr Thr Ser Tyr Gly

20 25

Ala Gly Ser Ile Ala Ala Leu Gly Asn Trp Asp

35 40

Ala Leu Ser Ala Ala Asp Tyr Thr Ser Asn Asn

50 55

Thr Val Asn Leu Ala Ala Gly Thr Ser Phe Gln 65 70 75

Lys Glu Thr Asp Ser Thr Ile Val Trp Glu Asp

85 90

Tyr Thr Val Pro Ala Asn Cys Gly Gln Thr Thr 100 105

Thr Trp Gln 115 13 139 PRT

Scorias spongiosa

Thr Thr

Glu Thr

Thr Asn 45

Asn Leu 60

Tyr Lys Asp Pro Ala Ile

Val

Val

30

Ser

Trp

Phe

Asn

Ile 110

Ala Val 15

Tyr Leu

Ala Ile

Tyr Val

Phe Val 80 Arg Ser 95

Asp Asp

<210> <211> <212> <213> <220> <221> <222> <223>

DOMÍNIO (1)..(139) CBD <400> 13

Ala Lys Val Pro Ser Thr Cys Ser Ala Ser 1 5 10

Thr Thr Ala Thr Ser Thr Phe Gly Gly Ser

20 25

Ala Thr Thr Pro Thr Leu Thr Thr Val Leu

35 40

Thr Asn Phe Gly Gln Asn Val His Leu Thr

50 55

Gly Ser Trp Asp Thr Asp Ser Ala Val Ala 65 70

Thr Ser Ser Asp Pro Leu Trp Phe Val Arg

85 90

Thr Ser Phe Gln Tyr Lys Tyr Phe Lys Lys

100 105

Ala Trp Glu Ser Asp Pro Asn Arg Ser Tyr

115 120

Ala Gly Thr Ala Thr Glu Asn Asp Thr Trp

130 135

<210> 14 126 PRT

Eupenicillium ludwigii

Ser Ala Thr Gly Thr Pro Phe Asn

Gly Ser

60

Leu Ser 75

Val Gln Asp Ser Thr Val Arg

Thr Thr

30 Glu Arg 45

Ile Ser

Ala Val

Leu Pro

Ser Asn 110 Pro Leu 125

Thr Cys 15

Ser Cys

Ala Thr

Gln Leu

Asn Tyr 80

Ala Gly 95

Ala Val Asn Cys

<211> <212> <213> <220> <221> <222> <223> <400>

DOMÍNIO (1)··(126) CBD

14

Ser Thr Thr Thr Thr Ser Thr Thr Lys Thr 1 5 10

Thr Ser Cys Thr Thr Pro Thr Ala Val Ala

20 25

Ala Thr Thr Tyr Tyr Gly Glu Asn Ile Lys

35 40

Gln Leu Gly Asp Trp Asp Thr Ser Asn Ala

50 55

Asp Tyr Thr Ser Ser Asp His Leu Trp Phe 65 70

Ala Gly Thr Val Phe Glu Tyr Lys Tyr Ile

85 90

Ser Ile Glu Trp Glu Ser Asp Pro Asn Arg

100 105

Ala Cys Ala Thr Thr Ala Val Thr Glu Asn

115 120

15

116 PRT

Aspergillus japonicus

Thr Thr Thr Ser Val Thr Ile Ala

Val Ala 60

Val Asp 75

Arg Ile Ser Tyr Asp Thr

Phe Asp

30 Gly Ser 45

Leu Ser

Ile Asp

Glu Ser

Thr Val 110 Trp Arg 125

Thr Thr 15

Leu Ile

Ile Ser

Ala Ala

Leu Pro 80

Asp Gly 95

Pro Ala

<210> <211> <212> <213> <220> <221> <222> <223> <4 00>

DOMÍNIO (1)··(116) CBD 15

Lys Thr Ser Thr Thr Thr Ser Ser Cys Ser 1 5 10

Val Thr Phe Asp Val Ile Ala Thr Thr Thr

20 25

Ile Ser Gly Ser Ile Ser Gln Leu Gly Ser

35 40

Ile Ala Leu Ser Ala Ser Gln Tyr Thr Ser

50 55

Ala Thr Val His Leu Pro Ala Gly Thr Thr 65 70

Thr Pro Thr Ser Val Ala 15

Tyr Gly Glu Asn Val Tyr 30

Trp Asp Thr Ser Ser Ala 45

Ser Asn Asn Leu Trp Tyr 60

Phe Gln Tyr Lys Tyr Ile 75 80 Arg Lys Glu Thr Asp Gly Ser Val Thr Trp Glu Ser Asp Pro Asn Arg

85 90 95

Ser Tyr Thr Val Pro Ser Ser Cys Gly Val Ser Ser Ala Thr Glu Ser

100 105 110

Asp Thr Trp Arg

115 <210> 16 <211> 133 <212> PRT

<213> Penicillium cf. miczynskii <220>

<221> DOMÍNIO <222> (1)..(133) <223> CBD <400> 16

Thr Thr Thr Gly Gly Thr Thr Thr Ser Gln Gly Ser Thr Thr Thr Thr 1 5 10 15 Ser Lys Thr Ser Thr Thr Thr Ser Ser Cys Thr Ala Pro Thr Ser Val 20 25 30 Ala Val Thr 35 Phe Asp Leu Ile Ala 40 Thr Thr Val Tyr Asp 45 Glu Asn Val Gln Leu 50 Ala Gly Ser Ile Ser 55 Ala Leu Gly Ser Trp 60 Asp Thr Ser Ser Ala Ile Arg Leu Ser Ala Ser Gln Tyr Thr Ser Ser Asn His Leu Trp 65 70 75 80 Tyr Val Ala Val Ser Leu Pro Ala Gly Gln Val Phe Gln Tyr Lys Tyr 85 90 95 Ile Arg Val Ala Ser Ser Gly Thr Ile Thr Trp Glu Ser Asp Pro Asn 100 105 110 Leu Ser Tyr 115 Thr Val Pro Val Ala 120 Cys Ala Ala Thr Ala 125 Val Thr Ile

Ser Asp Thr Trp Arg

130 <210> 17 <211> 116 <212> PRT

<213> Mzl Penicillium sp. <220>

<221> DOMÍNIO <222> (1) . . (116) <223> CBD <400> 17

Thr Lys Thr Ser Thr Ser Thr Ser Cys Thr Thr Pro Thr Ala Val Ala 1 5 10 15

Val Thr Phe Asp Leu Ile Ala Thr Thr Thr Tyr Gly Glu Asn Ile Lys

20 25 30

Ile Ala Gly Ser Ile Ala Ala Leu Gly Ala Trp Asp Thr Asp Asp Ala

35 40 45

Val Ala Leu Ser Ala Ala Asp Tyr Thr Asp Ser Asp His Leu Trp Phe

50 55 60

Val Thr Gln Ser Ile Pro Ala Gly Thr Val Phe Glu Tyr Lys Tyr Ile 65 70 75 80

Arg Val Glu Ser Asp Gly Thr Ile Glu Trp Glu Ser Asp Pro Asn Arg

85 90 95

Ser Tyr Thr Val Pro Ala Ala Cys Ala Thr Thr Ala Val Thr Glu Ser

100 105 110

Asp Thr Trp Arg

115 <210> 18 <211> 114 <212> PRT

<213> Thysanophora sp <220> <221> DOMÍNIO <222> (1)..(114) <223> CBD <400> 18

Phe Thr Ser Thr Thr Lys Thr Ser Cys Thr Thr Pro Thr Ser Val Ala 1 5 10 15

Val Thr Phe Asp Leu Ile Ala Thr Thr Thr Tyr Gly Glu Ser Ile Arg

20 25 30

Leu Val Gly Ser Ile Ser Glu Leu Gly Asp Trp Asp Thr Gly Ser Ala

35 40 45

Ile Ala Leu His Ala Thr Asp Tyr Thr Asp Ser Asp His Leu Trp Phe

50 55 60

Val Thr Val Gly Leu Pro Ala Gly Ala Ser Phe Glu Tyr Lys Tyr Ile 65 70 75 80

Arg Val Glu Ser Ser Gly Thr Ile Glu Trp Glu Ser Asp Pro Asn Arg

85 90 95

Ser Tyr Thr Val Pro Ala Ala Cys Ala Thr Thr Ala Val Thr Glu Ser 100 105 110

Asp Thr

<210> 19 <211> 111 <212> PRT

<213> Humicola grisea var. <220>

<221> DOMÍNIO <222> (1)..(111) <223> CBD <400> 19

Ala Asp Ala Ser Glu Val Tyr 1 5

Ala Trp Gly Glu Thr Ile Lys 20

Asn Trp Asp Thr Ser Lys Ala 35

Ser Asn Asp Pro Leu Trp Ser

50 55

Ser Ala Val Gln Tyr Lys Tyr 65 70

Thr Trp Glu Ser Asp Pro Asn 85

Ser Ala Gly Lys Cys Ala Ala 100

<210> 20 <211> 108 <212> PRT

<213> Aspergillus niger <220>

<221> DOMÍNIO <222> (1)..(108) <223> CBD <400> 20

Cys Thr Thr Pro Thr Ala Val 1 5

Thr Thr Tyr Gly Glu Asn Ile 20

Gly Asp Trp Glu Thr Ser Asp 35

Thr Ser Ser Asp Pro Leu Trp

50 55

Glu Ser Phe Glu Tyr Lys Phe 65 70

Glu Trp Glu Ser Asp Pro Asn

thermoidea

Val Thr Phe 10

Val Val Gly 25

Val Thr Leu 40

Ile Thr Val

Ile Lys Val

Arg Ser Ile 90

Gln Thr Val 105

Asn Glu Arg Val Asn Val Ser Ala

Pro Ile 60

Gly Thr 75

Thr Leu Asn Asp

Pro Ala

30 Ser Gly 45

Lys Ala

Asn Gly

Gln Thr

Ser Trp 110

Ser Thr 15

Leu Gly

Tyr Lys

Thr Gly

Lys Ile 80

Ala Ser

95

Arg

Ala Val Thr 10

Tyr Leu Val 25

Gly Ile Ala 40

Tyr Val Thr Ile Arg Ile Arg Glu Tyr

Phe Asp Leu Thr Ala Thr 15

Gly Ser Ile Ser Gln Leu 30

Leu Ser Ala Asp Lys Tyr 45

Val Thr Leu Pro Ala Gly 60

Glu Ser Asp Asp Ser Val 75 80

Thr Val Pro Gln Ala Cys 85 90 95

Gly Thr Ser Thr Ala Thr Val Thr Asp Thr Trp Arg 100 105

<210> 21 <211> 97 <212> PRT

<213> Althea rolfsii <220>

<221> DOMÍNIO <222> (1)..(97) <223> CBD <400> 21

Val Glu Val Thr Phe Asp Val Tyr Ala Thr Thr Val Tyr Gly Gln Asn 1 5 10 15 Ile Tyr Ile Thr Gly Asp Val Ser Glu Leu Gly Asn Trp Thr Pro Ala 20 25 30 Asn Gly Val 35 Ala Leu Ser Ser Ala 40 Asn Tyr Pro Thr Trp 45 Ser Ala Thr Ile Ala 50 Leu Pro Ala Asp Thr 55 Thr Ile Gln Tyr Lys 60 Tyr Val Asn Ile Asp Gly Ser Thr Val Ile Trp Glu Asp Ala Ile Ser Asn Arg Glu Ile 65 70 75 80 Thr Thr Pro Ala Ser Gly Thr Tyr Thr Glu Lys Asp Thr Trp Asp Glu

85 90 95

Ser

<210> 22 <211> 38 <212> PRT <213> Aspergillus niger <220> <221> DOMÍNIO <222> (1) . (38) <223> Ligador (Iigante) <400> 22 Thr Gly Gly Thr Thr Thr Thr 1 5 Thr Ser Thr Ser Lys Thr Thr 20 Thr Ser Ser Thr Ser Ala 35 <210> 23 <211> 31 <212> PRT <213> Aspergillus kawachii <220> <221> DOMÍNIO <222> (1) .. (31) <223> Ligador (Iigante) <4 00> 23 Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ala 1 5 Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser 20 <210> 24 <211> 11 <212> PRT <213> Athelia rolfsii <220> <221> DOMÍNIO <222> (1) .. (H) <223> Ligador (Iigante) <400> 24 Gly Ala Thr Ser Pro Gly Gly 1 5

<210> 25 <211> 8 <212> <213> <220> <223> <220> <221> <222> <223> <400>

Ser Ser Gly Ser 10

PRT

Artificial

Artificial

DOMÍNIO (1)··(8)

Ligador (Iigante) 25

Pro Glu Pro Thr Pro Glu Pro Thr 1 5

<210> <211> <212> <213> <220> <221> <222> <220> <221> <222> <400>

26

498

PRT

Aspergillus oryzae

SINAL (1)..(20)

mat_peptídeo (20)..(498) 26

Met Val Ala Trp Trp Ser Leu -15

Pro Ala Leu Ala Ala Thr Pro -1 1

Phe Leu Leu Thr Asp Arg Phe

15 20

Thr Cys Asn Thr Ala Asp Gln 30 35

Ile Ile Asp Lys Leu Asp Tyr 50

Trp Ile Thr Pro Val Thr Ala 65

Asp Ala Tyr His Gly Tyr Trp

80

Asn Tyr Gly Thr Ala Asp Asp 95 100

Glu Arg Gly Met Tyr Leu Met 110 115

Tyr Asp Gly Ala Gly Ser Ser 130

Ser Ser Gln Asp Tyr Phe His 145

Asp Gln Thr Gln Val Glu Asp 160

Leu Pro Asp Leu Asp Thr Thr 175 180

Asp Trp Val Gly Ser Leu Val 190 195

Ile Asp Thr Val Lys His Val 210

Lys Ala Ala Gly Val Tyr Cys 225

Ala Tyr Thr Cys Pro Tyr Gln 240

Pro Ile Tyr Tyr Pro Leu Leu 255 260

Met Asp Asp Leu Tyr Asn Met

Phe Leu

Ala Asp 5

Ala Arg

Lys Tyr

Ile Gln

Gln Leu 70

Gln Gln 85

Leu Lys

Val Asp

Val Asp

Pro Phe 150

Cys Trp 165

Lys Asp

Ser Asn

Gln Lys

Ile Gly 230 Asn Val 245

Asn Ala

Tyr Gly -10

Trp Arg

Thr Asp

Cys Gly

40 Gly Met 55

Pro Gln

Asp Ile

Ala Leu

Val Val 120 Tyr Ser 135

Cys Phe

Leu Gly

Val Val

Tyr Ser 200 Asp Phe 215

Glu Val

Met Asp Phe Lys Ile Asn Thr Val

Leu Gln

Ser Gln 10

Gly Ser 25

Gly Thr

Gly Phe

Thr Thr

Tyr Ser

90 Ser Ser 105

Ala Asn

Val Phe

Ile Gln

Asp Asn 170 Lys Asn 185

Ile Asp

Trp Pro

Leu Asp

Gly Val 250 Ser Thr 265

Lys Ser

Val Ala Ala -5

Ser Ile Tyr

Thr Thr Ala

Trp Gln Gly 45

Thr Ala Ile 60

Ala Tyr Gly 75

Leu Asn Glu

Ala Leu His

His Met Gly 125

Lys Pro Phe 140

Asn Tyr Glu 155

Thr Val Ser

Glu Trp Tyr

Gly Leu Arg 205

Gly Tyr Asn 220 Gly Asp Pro 235

Leu Asn Tyr Ser Gly Ser Asp Cys Pro 270 275 280 285 Asp Ser Thr Leu Leu Gly Thr Phe Val Glu Asn His Asp Asn Pro Arg 290 295 300 Phe Ala Ser Tyr Thr Asn Asp Ile Ala Leu Ala Lys Asn Val Ala Ala 305 310 315 Phe Ile Ile Leu Asn Asp Gly Ile Pro Ile Ile Tyr Ala Gly Gln Glu 320 325 330 Gln His Tyr Ala Gly Gly Asn Asp Pro Ala Asn Arg Glu Ala Thr Trp 335 340 345 Leu Ser Gly Tyr Pro Thr Asp Ser Glu Leu Tyr Lys Leu Ile Ala Ser 350 355 360 365 Ala Asn Ala Ile Arg Asn Tyr Ala Ile Ser Lys Asp Thr Gly Phe Val 370 375 380 Thr Tyr Lys Asn Trp Pro Ile Tyr Lys Asp Asp Thr Thr Ile Ala Met 385 390 395 Arg Lys Gly Thr Asp Gly Ser Gln Ile Val Thr Ile Leu Ser Asn Lys 400 405 410 Gly Ala Ser Gly Asp Ser Tyr Thr Leu Ser Leu Ser Gly Ala Gly Tyr 415 420 425 Thr Ala Gly Gln Gln Leu Thr Glu Val Ile Gly Cys Thr Thr Val Thr 430 435 440 445 Val Gly Ser Asp Gly Asn Val Pro Val Pro Met Ala Gly Gly Leu Pro 450 455 460 Arg Val Leu Tyr Pro Thr Glu Lys Leu Ala Gly Ser Lys Ile Cys Ser 4 65 470 475 Ser Ser <210> 27

<211> 1860 <212> DNA <213> Artificial <220>

<223> Artificial <220>

<221> CDS <222> (1) . . (1860)

<223> híbrido consistindo de domínio catalítico de alfa-amilase ácida de Aspergillus niger - ligador de alfa-amilase de Aspergillus kawachii - CBD de glicoamilase de Aspergillus niger <400> 27

Ctg tcg gct gca gaa tgg cgc act cag tcg att tac ttc Cta ttg acg 48

Leu Ser Ala Ala Glu Trp Arg Thr Gln Ser Ile Tyr Phe Leu Leu Thr 15 10 15

gat cgg ttc ggt agg acg gac aat tcg acg aca gct aca tgc gat acg 96

Asp Arg Phe Gly Arg Thr Asp Asn Ser Thr Thr Ala Thr Cys Asp Thr

20 25 30

ggt gac caa ate tat tgt ggt ggc agt tgg caa gga ate ate aac cat 144

Gly Asp Gln Ile Tyr Cys Gly Gly Ser Trp Gln Gly Ile Ile Asn His

35 40 45

Ctg gat tat ate cag ggc atg gga ttc acg gce ate tgg ate tcg cct 192

Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala Ile Trp Ile Ser Pro

50 55 60

ate act gaa cag ctg ccc cag gat act gct gat ggt gaa gct tae cat 240

Ile Thr Glu Gln Leu Pro Gln Asp Thr Ala Asp Gly Glu Ala Tyr His 65 70 75 80

gga tat tgg cag cag aag ata tac gac gtg aac tcc aac ttc ggc act 288

Gly Tyr Trp Gln Gln Lys Ile Tyr Asp Val Asn Ser Asn Phe Gly Thr

85 90 95

gca gat gac ctc aag tcc ctc tca gat gcg ctt cat gcc cgc gga atg 336

Ala Asp Asp Leu Lys Ser Leu Ser Asp Ala Leu His Ala Arg Gly Met

100 105 110

tac ctc atg gtg gac gtc gtc cct aac cao atg ggc tac gcc ggc aac 384

Tyr Leu Met Val Asp Val Val Pro Asn His Met Gly Tyr Ala Gly Asn ggc aac gat gta gac tac Gly Asn Asp Val Asp Tyr 130

tac ttc cac cca tac tgc Tyr Phe Hls Pro Tyr Cys 145 150

gtc caa gat tgt tgg gag Val Gln Asp Cys Trp Glu 165

aac acc acc gaa act gcc Asn Thr Thr Glu Thr Ala 180

gac ctg gta tcc aat tat Asp Leu Val Ser Asn Tyr 195

ctc gaa gtc gaa cca gac Leu Glu Val Glu Pro Asp 210

gtc tac tgc gtc ggc gaa Val Tyr Cys Val Gly Glu 225 230

cca tac cag aag gtc ctg Pro Tyr Gln Lys Val Leu 245

caa ctc ctc tac gcc ttc Gln Leu Leu Tyr Ala Phe 260

tac aac atg ate aaa tcc Tyr Asn Met Ile Lys Ser 275

ctc ggc aac ttc ate gaa Leu Gly Asn Phe Ile Glu 290

acc tcc gac tac tcg caa Thr Ser Asp Tyr Ser Gln 305 310

tcc gac ggc ate ccc ate Ser Asp Gly Ile Pro Ile 325

ggc ggc aag gtg ccc tac Gly Gly Lys Val Pro Tyr 340

gac acc tcc gea gag ctg Asp Thr Ser Ala Glu Leu 355

cgc aaa Cta gcc ate tca Arg Lys Leu Ala Ile Ser 370

gat gea ttc tac act gac Asp Ala Phe Tyr Thr Asp 385 390

tca ggg age caa gtc ate Ser Gly Ser Gln Val Ile 405

age age tac acc ctg acc Ser Ser Tyr Thr Leu Thr 420

aag ctg ate gaa gcg tac Lys Leu Ile Glu Ala Tyr 435

ggc gat att ccc gtg ccg Gly Asp Ile Pro Val Pro

120

age gtc ttc gac ccc ttc Ser Val Phe Asp Pro Phe 135 140

ctg ate aca gat tgg gac Leu Ile Thr Asp Trp Asp 155

ggt gac acc ate gta tet Gly Asp Thr Ile Val Ser

170

gtg aga aca ate tgg tat Val Arg Thr Ile Trp Tyr 185

tca gtc gac gga ctc cgc Ser Val Asp Gly Leu Arg 200

ttc ttc ccg ggc tac cag Phe Phe Pro Gly Tyr Gln 215 220

gtc gac aac ggc aac cct Val Asp Asn Gly Asn Pro 235

gac ggc gtc ctc aac tat Asp Gly Val Leu Asn Tyr 250

gaa tcc tcc age ggc age Glu Ser Ser Ser Gly Ser 265

gtc gea age gac tgc tcc Val Ala Ser Asp Cys Ser 280

aac cac gac aat ccc cgt Asn His Asp Asn Pro Arg 295 300

gcc aaa aac gtc ctc age Ala Lys Asn Val Leu Ser 315

gtc tac gcc ggc gaa gaa Val Tyr Ala Gly Glu Glu 330

aac cgc gaa gcg acc tgg Asn Arg Glu Ala Thr Trp 345

tac acc tgg ata gcc acc Tyr Thr Trp Ile Ala Thr 360

gct gac tcg gcc tac att Ala Asp Ser Ala Tyr Ile 375 380

age aac acc ate gea atg Ser Asn Thr Ile Ala Met 395

acc gtc ctc tcc aac aaa Thr Val Leu Ser Asn Lys 410

ctc age gga age ggc tac Leu Ser Gly Ser Gly Tyr 425

aca tgc aca tcc gtg acc Thr Cys Thr Ser Val Thr 440

atg gcg tcg gga tta ccg Met Ala Ser Gly Leu Pro

125

gat tcc tcc tcc 432

Asp Ser Ser Ser

aac ttg acc atg 480

Asn Leu Thr Met 160

ctg cca gac cta 528

Leu Pro Asp Leu 175

gac tgg gta gcc 576

Asp Trp Val Ala 190

ate gac agt gtc 624

Ile Asp Ser Val

205

gaa gea gea ggt 672

Glu Ala Ala Gly

gcc ctc gac tgc 720

Ala Leu Asp Cys 240

ccg ate tac tgg 768

Pro Ile Tyr Trp 255

ate age aat ctc 816

Ile Ser Asn Leu 270

gat ccg aca cta 864

Asp Pro Thr Leu

285

ttc gcc tcc tac 912

Phe Ala Ser Tyr

tac ate ttc ctc 960

Tyr Ile Phe Leu 320

cag cac tac tcc 1008 Gln His Tyr Ser 335

ctt tca ggc tac 1056 Leu Ser Gly Tyr 350

acg aac gcg ate 1104

Thr Asn Ala Ile

365

acc tac gcg aat 1152

Thr Tyr Ala Asn

cgc aaa ggc acc 1200

Arg Lys Gly Thr 400

ggc tcc tca gga 1248 Gly Ser Ser Gly 415

aca tcc ggc acg 1296 Thr Ser Gly Thr 430

gtg gac tcg age 1344

Val Asp Ser Ser

445

aga gtt ctt ctg 1392 Arg Val Leu Leu 450 455 460 CCC gcg tcc gtc gtc gat age tet tcg etc tgt ggc ggg age gga aga Pro Ala Ser Val Val Asp Ser Ser Ser Leu Cys Gly Gly Ser Gly Arg 465 470 475 480 aca acc acg acc aca act gct gct gct act agt aca tcc aaa gcc acc Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Thr Ser Thr Ser Lys Ala Thr 485 490 495 acc tcc tet tet tet tet tet gct gct gct act act tet tca tca tgt Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Ser Ser Ser Cys 500 505 510 acc act CCC acc gcc gtg gct gtg act ttc gat ctg aca gct acc acc Thr Thr Pro Thr Ala Val Ala Val Thr Phe Asp Leu Thr Ala Thr Thr 515 520 525 acc tac ggc gag aac ate tac ctg gtc gga tcg ate tet cag ctg ggt Thr Tyr Gly Glu Asn Ile Tyr Leu Val Gly Ser Ile Ser Gln Leu Gly 530 535 540 gac tgg gaa acc age gac ggc ata gct ctg agt gct gac aag tac act Asp Trp Glu Thr Ser Asp Gly Ile Ala Leu Ser Ala Asp Lys Tyr Thr 545 550 555 560 tcc age gac ccg CtC tgg tat gtc act gtg act ctg ccg gct ggt gag Ser Ser Asp Pro Leu Trp Tyr Val Thr Val Thr Leu Pro Ala Gly Glu 565 570 575 tcg ttt gag tac aag ttt ate cgc att gag age gat gac tcc gtg gag Ser Phe Glu Tyr Lys Phe Ile Arg Ile Glu Ser Asp Asp Ser Val Glu 580 585 590 tgg gag agt gat CCC aac cga gaa tac acc gtt CCt cag gcg tgc gga Trp Glu Ser Asp Pro Asn Arg Glu Tyr Thr Val Pro Gln Ala Cys Gly 595 600 605 acg tcg acc gcg acg gtg act gac acc tgg cgg tag Thr Ser Thr Ala Thr Val Thr Asp Thr Trp Arg 610 615 <210> 28 <211> 619 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto sintético <400> 28 Leu Ser Ala Ala Glu Trp Arg Thr Gln Ser Ile Tyr Phe Leu Leu Thr 1 5 10 15 Asp Arg Phe Gly Arg Thr Asp Asn Ser Thr Thr Ala Thr Cys Asp Thr 20 25 30 Gly Asp Gln Ile Tyr Cys Gly Gly Ser Trp Gln Gly Ile Ile Asn His 35 40 45 Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala Ile Trp Ile Ser Pro 50 55 60 Ile Thr Glu Gln Leu Pro Gln Asp Thr Ala Asp Gly Glu Ala Tyr His 65 70 75 80 Gly Tyr Trp Gln Gln Lys Ile Tyr Asp Val Asn Ser Asn Phe Gly Thr 85 90 95 Ala Asp Asp Leu Lys Ser Leu Ser Asp Ala Leu His Ala Arg Gly Met 100 105 110 Tyr Leu Met Val Asp Val Val Pro Asn His Met Gly Tyr Ala Gly Asn 115 120 125 Gly Asn Asp Val Asp Tyr Ser Val Phe Asp Pro Phe Asp Ser Ser Ser 130 135 140 Tyr Phe His Pro Tyr Cys Leu Ile Thr Asp Trp Asp Asn Leu Thr Met 145 150 155 160 Val Gln Asp Cys Trp Glu Gly Asp Thr Ile Val Ser Leu Pro Asp Leu 165 170 175 Asn Thr Thr Glu Thr Ala Val Arg Thr Ile Trp Tyr Asp Trp Val Ala 180 185 190 Asp Leu Val Ser Asn Tyr Ser Val Asp Gly Leu Arg Ile Asp Ser Val

1440

1536

1584

1776

1824

1860 195 200 205 Leu Glu Val Glu Pro Asp Phe Phe Pro Gly Tyr Gln Glu Ala Ala Gly 210 215 220 Val Tyr Cys Val Gly Glu Val Asp Asn Gly Asn Pro Ala Leu Asp Cys 225 230 235 240 Pro Tyr Gln Lys Val Leu Asp Gly Val Leu Asn Tyr Pro Ile Tyr Trp 245 250 255 Gln Leu Leu Tyr Ala Phe Glu Ser Ser Ser Gly Ser Ile Ser Asn Leu 260 265 270 Tyr Asn Met Ile Lys Ser Val Ala Ser Asp Cys Ser Asp Pro Thr Leu 275 280 285 Leu Gly Asn Phe Ile Glu Asn His Asp Asn Pro Arg Phe Ala Ser Tyr 290 295 300 Thr Ser Asp Tyr Ser Gln Ala Lys Asn Val Leu Ser Tyr Ile Phe Leu 305 310 315 320 Ser Asp Gly Ile Pro Ile Val Tyr Ala Gly Glu Glu Gln His Tyr Ser 325 330 335 Gly Gly Lys Val Pro Tyr Asn Arg Glu Ala Thr Trp Leu Ser Gly Tyr 340 345 350 Asp Thr Ser Ala Glu Leu Tyr Thr Trp Ile Ala Thr Thr Asn Ala Ile 355 360 365 Arg Lys Leu Ala Ile Ser Ala Asp Ser Ala Tyr Ile Thr Tyr Ala Asn 370 375 380 Asp Ala Phe Tyr Thr Asp Ser Asn Thr Ile Ala Met Arg Lys Gly Thr 385 390 395 400 Ser Gly Ser Gln Val Ile Thr Val Leu Ser Asn Lys Gly Ser Ser Gly 405 410 415 Ser Ser Tyr Thr Leu Thr Leu Ser Gly Ser Gly Tyr Thr Ser Gly Thr 420 425 430 Lys Leu Ile Glu Ala Tyr Thr Cys Thr Ser Val Thr Val Asp Ser Ser 435 440 445 Gly Asp Ile Pro Val Pro Met Ala Ser Gly Leu Pro Arg Val Leu Leu 450 455 460 Pro Ala Ser Val Val Asp Ser Ser Ser Leu Cys Gly Gly Ser Gly Arg 465 470 475 480 Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Thr Ser Thr Ser Lys Ala Thr 485 490 495 Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Ser Ser Ser Cys 500 505 510 Thr Thr Pro Thr Ala Val Ala Val Thr Phe Asp Leu Thr Ala Thr Thr 515 520 525 Thr Tyr Gly Glu Asn Ile Tyr Leu Val Gly Ser Ile Ser Gln Leu Gly 530 535 540 Asp Trp Glu Thr Ser Asp Gly Ile Ala Leu Ser Ala Asp Lys Tyr Thr 545 550 555 560 Ser Ser Asp Pro Leu Trp Tyr Val Thr Val Thr Leu Pro Ala Gly Glu 565 570 575 Ser Phe Glu Tyr Lys Phe Ile Arg Ile Glu Ser Asp Asp Ser Val Glu 580 585 590 Trp Glu Ser Asp Pro Asn Arg Glu Tyr Thr Val Pro Gln Ala Cys Gly 595 600 605 Thr Ser Thr Ala Thr Val Thr Asp Thr Trp Arg 610 615

<210> 29

<211> 1827

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Artificial <220>

<221> CDS

<222> (1)..(1827)

<223> híbrido consistindo de domínio catalítico de alfa-amilase ácida de Aspergillus niger - ligador de alfa-amilase de Aspergillus kawachii - CBD de glicoamilase de Athelia rolfsii <400> 29

ctg tcg gct gca gaa tgg cgc act cag tcg att tac ttc cta ttg acg 48

Leu Ser Ala Ala Glu Trp Arg Thr Gln Ser Ile Tyr Phe Leu Leu Thr 1 5 10 15 gat cgg ttc ggt agg acg gac aat tcg acg aca gct aca tgc gat acg 96 Asp Arg Phe Gly Arg Thr Asp Asn Ser Thr Thr Ala Thr Cys Asp Thr 20 25 30 ggt gac caa ate tat tgt ggt ggc agt tgg caa gga ate ate aac cat 144 Gly Asp Gln Ile Tyr Cys Gly Gly Ser Trp Gln Gly Ile Ile Asn His 35 40 45 ctg gat tat ate cag ggc atg gga ttc acg gcc ate tgg ate tcg CCt 192 Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala Ile Trp Ile Ser Pro 50 55 60 ate act gaa cag ctg CCC cag gat act gct gat ggt gaa gct tac cat 240 Ile Thr Glu Gln Leu Pro Gln Asp Thr Ala Asp Gly Glu Ala Tyr His 65 70 75 80 gga tat tgg cag cag aag ata tac gac gtg aac tcc aac ttc ggc act 288 Gly Tyr Trp Gln Gln Lys Ile Tyr Asp Val Asn Ser Asn Phe Gly Thr 85 90 95 gca gat gac CtC aag tcc ctc tca gat gcg Ctt cat gcc cgc gga atg 336 Ala Asp Asp Leu Lys Ser Leu Ser Asp Ala Leu His Ala Arg Gly Met 100 105 110 tac CtC atg gtg gac gtc gtc CCt aac cac atg ggc tac gcc ggc aac 384 Tyr Leu Met Val Asp Val Val Pro Asn His Met Gly Tyr Ala Gly Asn 115 120 125 ggc aac gat gta gac tac age gtc ttc gac CCC ttc gat tcc tcc tcc 432 Gly Asn Asp Val Asp Tyr Ser Val Phe Asp Pro Phe Asp Ser Ser Ser 130 135 140 tac ttc cac cca tac tgc ctg ate aca gat tgg gac aac ttg acc atg 480 Tyr Phe His Pro Tyr Cys Leu Ile Thr Asp Trp Asp Asn Leu Thr Met 145 150 155 160 gtc caa gat tgt tgg gag ggt gac acc ate gta tet ctg cca gac cta 528 Val Gln Asp Cys Trp Glu Gly Asp Thr Ile Val Ser Leu Pro Asp Leu 165 170 175 aac acc acc gaa act gcc gtg aga aca ate tgg tat gac tgg gta gcc 576 Asn Thr Thr Glu Thr Ala Val Arg Thr Ile Trp Tyr Asp Trp Val Ala 180 185 190 gac ctg gta tcc aat tat tca gtc gac gga ctc cgc ate gac agt gtc 624 Asp Leu Val Ser Asn Tyr Ser Val Asp Gly Leu Arg Ile Asp Ser Val 195 200 205 CtC gaa gtc gaa cca gac ttc ttc ccg ggc tac cag gaa gca gca ggt 672 Leu Glu Val Glu Pro Asp Phe Phe Pro Gly Tyr Gln Glu Ala Ala Gly 210 215 220 gtc tac tgc gtc ggc gaa gtc gac aac ggc aac CCt gcc ctc gac tgc 720 Val Tyr Cys Val Gly Glu Val Asp Asn Gly Asn Pro Ala Leu Asp Cys 225 230 235 240 cca tac cag aag gtc ctg gac ggc gtc ctc aac tat ccg ate tac tgg 768 Pro Tyr Gln Lys Val Leu Asp Gly Val Leu Asn Tyr Pro Ile Tyr Trp 245 250 255 caa CtC ctc tac gcc ttc gaa tcc tcc age ggc age ate age aat ctc 816 Gln Leu Leu Tyr Ala Phe Glu Ser Ser Ser Gly Ser Ile Ser Asn Leu 260 265 270 tac aac atg ate aaa tcc gtc gca age gac tgc tcc gat ccg aca cta 864 Tyr Asn Met Ile Lys Ser Val Ala Ser Asp Cys Ser Asp Pro Thr Leu 275 280 285 CtC ggc aac ttc ate gaa aac cac gac aat CCC cgt ttc gcc tcc tac 912 Leu Gly Asn Phe Ile Glu Asn His Asp Asn Pro Arg Phe Ala Ser Tyr 290 295 300 acc tcc gac tac tcg caa gcc aaa aac gtc ctc age tac ate ttc ctc 960 Thr Ser Asp Tyr Ser Gln Ala Lys Asn Val Leu Ser Tyr Ile Phe Leu 305 310 315 320 tcc gac ggc ate CCC ate gtc tac gcc ggc gaa gaa cag cac tac tcc 1008 Ser Asp Gly Ile Pro Ile Val Tyr Ala Gly Glu Glu Gln His Tyr Ser 325 330 335 ggc ggc aag gtg CCC tac aac cgc gaa gcg acc tgg Ctt tca ggc tac 1056 Gly Gly Lys Val Pro Tyr Asn Arg Glu Ala Thr Trp Leu Ser Gly Tyr 340 345 350 gac acc tcc gea gag ctg tac acc tgg ata gcc acc acg aac gcg ate 1104 Asp Thr Ser Ala Glu Leu Tyr Thr Trp Ile Ala Thr Thr Asn Ala Ile 355 360 365 cgc aaa cta gcc ate tca gct gac tcg gcc tac att acc tac gcg aat 1152 Arg Lys Leu Ala Ile Ser Ala Asp Ser Ala Tyr Ile Thr Tyr Ala Asn 370 375 380 gat gea ttc tac act gac age aac acc ate gea atg cgc aaa ggc acc 1200 Asp Ala Phe Tyr Thr Asp Ser Asn Thr Ile Ala Met Arg Lys Gly Thr 385 390 395 400 tca ggg age caa gtc ate acc gtc CtC tcc aac aaa ggc tcc tca gga 1248 Ser Gly Ser Gln Val Ile Thr Val Leu Ser Asn Lys Gly Ser Ser Gly 405 410 415 age age tac acc ctg acc CtC age gga age ggc tac aca tcc ggc acg 1296 Ser Ser Tyr Thr Leu Thr Leu Ser Gly Ser Gly Tyr Thr Ser Gly Thr 420 425 430 aag Ctg ate gaa gcg tac aca tgc aca tcc gtg acc gtg gac tcg age 1344 Lys Leu Ile Glu Ala Tyr Thr Cys Thr Ser Val Thr Val Asp Ser Ser 435 440 445 ggc gat att CCC gtg ccg atg gcg tcg gga tta ccg aga gtt Ctt ctg 1392 Gly Asp Ile Pro Val Pro Met Ala Ser Gly Leu Pro Arg Val Leu Leu 450 455 4 60 CCC gcg tcc gtc gtc gat age tet tcg CtC tgt ggc ggg age gga aga 1440 Pro Ala Ser Val Val Asp Ser Ser Ser Leu Cys Gly Gly Ser Gly Arg 465 470 475 480 aca acc acg acc aca act gct gct gct act agt aca tcc aaa gcc acc 1488 Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Thr Ser Thr Ser Lys Ala Thr 485 490 495 acc tcc tet tet tet tet tet gct gct gct act act tet tca tca gtc 1536 Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Ser Ser Ser Val 500 505 510 gag gtc act ttc gac gtt tac gct acc aca gta tat ggc cag aac ate 1584 Glu Val Thr Phe Asp Val Tyr Ala Thr Thr Val Tyr Gly Gln Asn Ile 515 520 525 tat ate acc ggt gat gtg agt gag ctc gge aac tgg aca CCC gcc aat 1632 Tyr Ile Thr Gly Asp Val Ser Glu Leu Gly Asn Trp Thr Pro Ala Asn 530 535 540 ggt gtt gea CtC tet tet gct aac tac CCC acc tgg agt gcc acg ate 1680 Gly Val Ala Leu Ser Ser Ala Asn Tyr Pro Thr Trp Ser Ala Thr Ile 545 550 555 560 gct CtC CCC gct gac acg aca ate cag tac aag tat gtc aac att gac 1728 Ala Leu Pro Ala Asp Thr Thr Ile Gln Tyr Lys Tyr Val Asn Ile Asp 565 570 575 ggc age acc gtc ate tgg gag gat gct ate age aat cgc gag ate acg 1776 Gly Ser Thr Val Ile Trp Glu Asp Ala Ile Ser Asn Arg Glu Ile Thr 580 585 590 acg CCC gcc age ggc aca tac acc gaa aaa gac act tgg gat gaa tet 1824 Thr Pro Ala Ser Gly Thr Tyr Thr Glu Lys Asp Thr Trp Asp Glu Ser 595 600 605 tag 1827 <210> 30 <211> 608

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Construto sintético <400> 30

Leu Ser Ala Ala Glu Trp Arg Thr Gln Ser Ile Tyr Phe Leu Leu Thr 1 5 10 15

Asp Arg Phe Gly Arg Thr Asp Asn Ser Thr Thr Ala Thr Cys Asp Thr

20 25 30

Gly Asp Gln Ile Tyr Cys Gly Gly Ser Trp Gln Gly Ile Ile Asn His

35 40 45

Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala Ile Trp Ile Ser Pro

50 55 60

Ile Thr Glu Gln Leu Pro Gln Asp Thr Ala Asp Gly Glu Ala Tyr His 65 70 75 80

Gly Tyr Trp Gln Gln Lys Ile Tyr Asp Val Asn Ser Asn Phe Gly Thr

85 90 95

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100 105 110

Tyr Leu Met Val Asp Val Val Pro Asn His Met Gly Tyr Ala Gly Asn

115 120 125

Gly Asn Asp Val Asp Tyr Ser Val Phe Asp Pro Phe Asp Ser Ser Ser

130 135 140

Tyr Phe His Pro Tyr Cys Leu Ile Thr Asp Trp Asp Asn Leu Thr Met 145 150 155 160

Val Gln Asp Cys Trp Glu Gly Asp Thr Ile Val Ser Leu Pro Asp Leu

165 170 175

Asn Thr Thr Glu Thr Ala Val Arg Thr Ile Trp Tyr Asp Trp Val Ala

180 185 190

Asp Leu Val Ser Asn Tyr Ser Val Asp Gly Leu Arg Ile Asp Ser Val

195 200 205

Leu Glu Val Glu Pro Asp Phe Phe Pro Gly Tyr Gln Glu Ala Ala Gly

210 215 220

Val Tyr Cys Val Gly Glu Val Asp Asn Gly Asn Pro Ala Leu Asp Cys 225 230 235 240

Pro Tyr Gln Lys Val Leu Asp Gly Val Leu Asn Tyr Pro Ile Tyr Trp

245 250 255

Gln Leu Leu Tyr Ala Phe Glu Ser Ser Ser Gly Ser Ile Ser Asn Leu

260 265 270

Tyr Asn Met Ile Lys Ser Val Ala Ser Asp Cys Ser Asp Pro Thr Leu

275 280 285

Leu Gly Asn Phe Ile Glu Asn His Asp Asn Pro Arg Phe Ala Ser Tyr

290 295 300

Thr Ser Asp Tyr Ser Gln Ala Lys Asn Val Leu Ser Tyr Ile Phe Leu 305 310 315 320

Ser Asp Gly Ile Pro Ile Val Tyr Ala Gly Glu Glu Gln His Tyr Ser

325 330 335

Gly Gly Lys Val Pro Tyr Asn Arg Glu Ala Thr Trp Leu Ser Gly Tyr

340 345 350

Asp Thr Ser Ala Glu Leu Tyr Thr Trp Ile Ala Thr Thr Asn Ala Ile

355 360 365

Arg Lys Leu Ala Ile Ser Ala Asp Ser Ala Tyr Ile Thr Tyr Ala Asn

370 375 380

Asp Ala Phe Tyr Thr Asp Ser Asn Thr Ile Ala Met Arg Lys Gly Thr 385 390 395 400

Ser Gly Ser Gln Val Ile Thr Val Leu Ser Asn Lys Gly Ser Ser Gly

405 410 415

Ser Ser Tyr Thr Leu Thr Leu Ser Gly Ser Gly Tyr Thr Ser Gly Thr

420 425 430

Lys Leu Ile Glu Ala Tyr Thr Cys Thr Ser Val Thr Val Asp Ser Ser

435 440 445

Gly Asp Ile Pro Val Pro Met Ala Ser Gly Leu Pro Arg Val Leu Leu

450 455 460

Pro Ala Ser Val Val Asp Ser Ser Ser Leu Cys Gly Gly Ser Gly Arg 465 470 475 480

Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Thr Ser Thr Ser Lys Ala Thr

485 490 495

Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Ser Ser Ser Val 500 505 510 Glu Val Thr 515 Phe Asp Val Tyr Ala 520 Thr Thr Val Tyr Gly 525 Gln Asn Ile Tyr Ile 530 Thr Gly Asp Val Ser 535 Glu Leu Gly Asn Trp 540 Thr Pro Ala Asn Gly Val Ala Leu Ser Ser Ala Asn Tyr Pro Thr Trp Ser Ala Thr Ile 545 550 555 560 Ala Leu Pro Ala Asp 565 Thr Thr Ile Gln Tyr 570 Lys Tyr Val Asn Ile 575 Asp Gly Ser Thr Val 580 Ile Trp Glu Asp Ala 585 Ile Ser Asn Arg Glu 590 Ile Thr Thr Pro Ala 595 Ser Gly Thr Tyr Thr 600 Glu Lys Asp Thr Trp 605 Asp Glu Ser

<210> 31 <211> 1863 <212> DNA <213> Artificial <220>

<223> Artificial <220>

<221> CDS <222> (1) . . (18 63)

<223> híbrido consistindo de domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. oryzae- ligador de alfa-amilase de A. kawachii - CBD de glicoamilase de A. kawachii

<400> 31 gca acg CCt gcg gac tgg cga tcg caa tcc att tat ttc Ctt etc acg Ala Thr Pro Ala Asp Trp Arg Ser Gln Ser Ile Tyr Phe Leu Leu Thr 1 5 10 15 gat cga ttt gca agg acg gat ggg tcg acg act gcg act tgt aat act Asp Arg Phe Ala Arg Thr Asp Gly Ser Thr Thr Ala Thr Cys Asn Thr 20 25 30 gcg gat cag aaa tac tgt ggt gga aca tgg cag ggc ate ate gac aag Ala Asp Gln Lys Tyr Cys Gly Gly Thr Trp Gln Gly Ile Ile Asp Lys 35 40 45 ttg gac tat ate cag gga atg ggc ttc aca gcc ate tgg ate acc CCC Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala Ile Trp Ile Thr Pro 50 55 60 gtt aca gcc cag ctg CCC cag acc acc gca tat gga gat gcc tac cat Val Thr Ala Gln Leu Pro Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Asp Ala Tyr His 65 70 75 80 ggc tac tgg cag cag gat ata tac tet ctg aac gaa aac tac ggc act Gly Tyr Trp Gln Gln Asp Ile Tyr Ser Leu Asn Glu Asn Tyr Gly Thr 85 90 95 gca gat gac ttg aag gcg CtC tet tcg gcc Ctt cat gag agg ggg atg Ala Asp Asp Leu Lys Ala Leu Ser Ser Ala Leu His Glu Arg Gly Met 100 105 110 tat Ctt atg gtc gat gtg gtt gct aac cat atg ggc tat gat gga gcg Tyr Leu Met Val Asp Val Val Ala Asn His Met Gly Tyr Asp Gly Ala 115 120 125 ggt age tca gtc gat tac agt gtg ttt aaa ccg ttc agt tcc caa gac Gly Ser Ser Val Asp Tyr Ser Val Phe Lys Pro Phe Ser Ser Gln Asp 130 135 140 tac ttc cac ccg ttc tgt ttc att caa aac tat gaa gat cag act cag Tyr Phe His Pro Phe Cys Phe Ile Gln Asn Tyr Glu Asp Gln Thr Gln 145 150 155 160 gtt gag gat tgc tgg cta gga gat aac act gtc tcc ttg CCt gat ctc Val Glu Asp Cys Trp Leu Gly Asp Asn Thr Val Ser Leu Pro Asp Leu 165 170 175 gat acc acc aag gat gtg gtc aag aat gaa tgg tac gac tgg gtg gga Asp Thr Thr Lys Asp Val Val Lys Asn Glu Trp Tyr Asp Trp Val Gly 180 185 190 tca ttg gta tcg aac tac tcc att gac ggc CtC cgt ate gac aca gta Ser Leu Val Ser Asn Tyr Ser Ile Asp Gly Leu Arg Ile Asp Thr Val 195 200 205

aaa cac gtc cag aag gac ttc tgg ccc ggg tac aac aaa goc gca ggc 672

Lys His Val Gln Lys Asp Phe Trp Pro Gly Tyr Asn Lys Ala Ala Gly

210 215 220

gtg tac tgt ate ggc gag gtg ctc gac ggt gat ccg gcc tac act tgt 720

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ccc tac cag aac gtc atg gac ggc gta ctg aac tat ccc att tac tat 768

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245 250 255

cca ctc ctc aac gcc ttc aag tca acc tcc ggc age atg gac gac ctc 816

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260 265 270

tac aac atg ate aac acc gtc aaa tcc gac tgt cca gac tca aca ctc 864

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275 280 285

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Leu Gly Thr Phe Val Glu Asn His Asp Asn Pro Arg Phe Ala Ser Tyr

290 295 300

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Asn Asp Gly Ile Pro Ile Ile Tyr Ala Gly Gln Glu Gln His Tyr Ala

325 330 335

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Gly Gly Asn Asp Pro Ala Asn Arg Glu Ala Thr Trp Leu Ser Gly Tyr

340 345 350

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355 360 365

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370 375 380

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405 410 415

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Asp Ser Tyr Thr Leu Ser Leu Ser Gly Ala Gly Tyr Thr Ala Gly Gln

420 425 430

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435 440 445

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450 455 460

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485 490 495

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500 505 510

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515 520 525

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595 600 605

aat ggg agt ggg gag acg gtg gtt gat acg tgg agg tag 1863

Asn Gly Ser Gly Glu Thr Val Val Asp Thr Trp Arg 610 615 620

<210> 32 <211> 620 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Construto sintético

<400> 32 Ala Thr Pro Ala Asp Trp Arg Ser Gln Ser Ile Tyr Phe Leu Leu Thr 1 5 10 15 Asp Arg Phe Ala Arg Thr Asp Gly Ser Thr Thr Ala Thr Cys Asn Thr 20 25 30 Ala Asp Gln Lys Tyr Cys Gly Gly Thr Trp Gln Gly Ile Ile Asp Lys 35 40 45 Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala Ile Trp Ile Thr Pro 50 55 60 Val Thr Ala Gln Leu Pro Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Asp Ala Tyr His 65 70 75 80 Gly Tyr Trp Gln Gln Asp Ile Tyr Ser Leu Asn Glu Asn Tyr Gly Thr 85 90 95 Ala Asp Asp Leu Lys Ala Leu Ser Ser Ala Leu His Glu Arg Gly Met 100 105 110 Tyr Leu Met Val Asp Val Val Ala Asn His Met Gly Tyr Asp Gly Ala 115 120 125 Gly Ser Ser Val Asp Tyr Ser Val Phe Lys Pro Phe Ser Ser Gln Asp 130 135 140 Tyr Phe His Pro Phe Cys Phe Ile Gln Asn Tyr Glu Asp Gln Thr Gln 145 150 155 160 Val Glu Asp Cys Trp Leu Gly Asp Asn Thr Val Ser Leu Pro Asp Leu 165 170 175 Asp Thr Thr Lys Asp Val Val Lys Asn Glu Trp Tyr Asp Trp Val Gly 180 185 190 Ser Leu Val Ser Asn Tyr Ser Ile Asp Gly Leu Arg Ile Asp Thr Val 195 200 205 Lys His Val Gln Lys Asp Phe Trp Pro Gly Tyr Asn Lys Ala Ala Gly 210 215 220 Val Tyr Cys Ile Gly Glu Val Leu Asp Gly Asp Pro Ala Tyr Thr Cys 225 230 235 240 Pro Tyr Gln Asn Val Met Asp Gly Val Leu Asn Tyr Pro Ile Tyr Tyr 245 250 255 Pro Leu Leu Asn Ala Phe Lys Ser Thr Ser Gly Ser Met Asp Asp Leu 260 265 270 Tyr Asn Met Ile Asn Thr Val Lys Ser Asp Cys Pro Asp Ser Thr Leu 275 280 285 Leu Gly Thr Phe Val Glu Asn His Asp Asn Pro Arg Phe Ala Ser Tyr 290 295 300 Thr Asn Asp Ile Ala Leu Ala Lys Asn Val Ala Ala Phe Ile Ile Leu 305 310 315 320 Asn Asp Gly Ile Pro Ile Ile Tyr Ala Gly Gln Glu Gln His Tyr Ala 325 330 335 Gly Gly Asn Asp Pro Ala Asn Arg Glu Ala Thr Trp Leu Ser Gly Tyr 340 345 350 Pro Thr Asp Ser Glu Leu Tyr Lys Leu Ile Ala Ser Ala Asn Ala Ile 355 360 365 Arg Asn Tyr Ala Ile Ser Lys Asp Thr Gly Phe Val Thr Tyr Lys Asn 370 375 380 Trp Pro Ile Tyr Lys Asp Asp Thr Thr Ile Ala Met Arg Lys Gly Thr 385 390 395 400 Asp Gly Ser Gln Ile Val Thr Ile Leu Ser Asn Lys Gly Ala Ser Gly 405 410 415 Asp Ser Tyr Thr Leu Ser Leu Ser Gly Ala Gly Tyr Thr Ala Gly Gln 420 425 430 Gln Leu Thr Glu Val Ile Gly Cys Thr Thr Val Thr Val Gly Ser Asp 435 440 445 Gly Asn Val Pro Val Pro Met Ala Gly Gly Leu Pro Arg Val Leu Tyr 450 455 460 Pro Thr Glu Lys Leu Ala Gly Ser Lys Ile Cys Ser Ser Ser Gly Arg 465 470 475 480 Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Thr Ser Thr Ser Lys Ala Thr 485 490 495 Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Ser Ser Ser Cys 500 505 510 Thr Ala Thr Ser Thr Thr Leu Pro Ile Thr Phe Glu Glu Leu Val Thr 515 520 525 Thr Thr Tyr Gly Glu Glu Val Tyr Leu Ser Gly Ser Ile Ser Gln Leu 530 535 540 Gly Glu Trp Asp Thr Ser Asp Ala Val Lys Leu Ser Ala Asp Asp Tyr 545 550 555 560 Thr Ser Ser Asn Pro Glu Trp Ser Val Thr Val Ser Leu Pro Val Gly 565 570 575 Thr Thr Phe Glu Tyr Lys Phe Ile Lys Val Asp Glu Gly Gly Ser Val 580 585 590 Thr Trp Glu Ser Asp Pro Asn Arg Glu Tyr Thr Val Pro Glu Cys Gly 595 600 605 Asn Gly Ser Gly Glu Thr Val Val Asp Thr Trp Arg 610 615 620

<210> 33 <211> 1767 <212> DNA <213> Artificial <220>

<223> Artificial <220>

<221> CDS <222> (1)..(1767)

<223> híbrido consistindo de domínio catalítico de alfa-amilase ácida de A. niger - ligador de alfa-amilase de A. rolfsii - CBD de glicoamilase de A. rolfsii <400> 33

ctg tcg gct gca gaa tgg cgc act cag tcg att tac ttc cta ttg acg 48

Leu Ser Ala Ala Glu Trp Arg Thr Gln Ser Ile Tyr Phe Leu Leu Thr 1 5 10 15

gat cgg ttc ggt agg acg gac aat tcg acg aca gct aca tgc gat acg 96

Asp Arg Phe Gly Arg Thr Asp Asn Ser Thr Thr Ala Thr Cys Asp Thr

20 25 30

ggt gac caa ate tat tgt ggt ggc agt tgg caa gga ate ate aac cat 144

Gly Asp Gln Ile Tyr Cys Gly Gly Ser Trp Gln Gly Ile Ile Asn His

35 40 45

ctg gat tat ate cag ggc atg gga ttc acg gcc ate tgg ate tcg cct 192

Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala Ile Trp Ile Ser Pro 50 55 60 ate act gaa cag ctg ccc cag gat act gct gat ggt gaa gct tac cat 240

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65 70 75 80

gga tat tgg cag cag aag ata tac gac gtg aac tcc aac ttc ggc act 288

Gly Tyr Trp Gln Gln Lys Ile Tyr Asp Val Asn Ser Asn Phe Gly Thr

85 90 95

gea gat gac ctc aag tcc ctc tca gat gcg ctt cat gcc cgc gga atg 336

Ala Asp Asp Leu Lys Ser Leu Ser Asp Ala Leu His Ala Arg Gly Met

100 105 110

tac ctc atg gtg gac gtc gtc cct aac cac atg ggc tac gcc ggc aac 384

Tyr Leu Met Val Asp Val Val Pro Asn His Met Gly Tyr Ala Gly Asn

115 120 125

ggc aac gat gta gac tac age gtc ttc gac ccc ttc gat tcc tcc tcc 432

Gly Asn Asp Val Asp Tyr Ser Val Phe Asp Pro Phe Asp Ser Ser Ser

130 135 140

tac ttc cac cca tac tgc ctg ate aca gat tgg gac aac ttg acc atg 480

Tyr Phe His Pro Tyr Cys Leu Ile Thr Asp Trp Asp Asn Leu Thr Met 145 150 155 160

gtc caa gat tgt tgg gag ggt gac acc ate gta tet ctg cca gac cta 528

Val Gln Asp Cys Trp Glu Gly Asp Thr Ile Val Ser Leu Pro Asp Leu

165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

ctc gaa gtc gaa cca gac ttc ttc ccg ggc tac cag gaa gea gea ggt 672

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210 215 220

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245 250 255

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260 265 270

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275 280 285

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290 295 300

acc tcc gac tac tcg caa gcc aaa aac gtc ctc age tac ate ttc ctc 960

Thr Ser Asp Tyr Ser Gln Ala Lys Asn Val Leu Ser Tyr Ile Phe Leu 305 310 315 320

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Ser Asp Gly Ile Pro Ile Val Tyr Ala Gly Glu Glu Gln His Tyr Ser

325 330 335

ggc ggc aag gtg ccc tac aac cgc gaa gcg acc tgg ctt tca ggc tac 1056

Gly Gly Lys Val Pro Tyr Asn Arg Glu Ala Thr Trp Leu Ser Gly Tyr

340 345 350

gac acc tcc gea gag ctg tac acc tgg ata gcc acc acg aac gcg ate 1104 Asp Thr Ser Ala Glu Leu Tyr Thr Trp Ile Ala Thr Thr Asn Ala Ile

355 360 365

cgc aaa cta gcc ate tca gct gac tcg gcc tac att acc tac gcg aat 1152

Arg Lys Leu Ala Ile Ser Ala Asp Ser Ala Tyr Ile Thr Tyr Ala Asn

370 375 380

gat gea ttc tac act gac age aac acc ate gea atg cgc aaa ggc acc 1200

Asp Ala Phe Tyr Thr Asp Ser Asn Thr Ile Ala Met Arg Lys Gly Thr 385 390 395 400 tca ggg age caa gtc ate acc gtc etc tcc aac aaa ggc tcc tca gga 1248 Ser Gly Ser Gln Val 405 Ile Thr Val Leu Ser 410 Asn Lys Gly Ser Ser 415 Gly age age tac acc ctg acc Ct c age gga age ggc tac aca tcc ggc acg 1296 Ser Ser Tyr Thr 420 Leu Thr Leu Ser Gly 425 Ser Gly Tyr Thr Ser 430 Gly Thr aag ctg ate gaa gcg tac aca tgc aca tcc gtg acc gtg gac tcg age 1344 Lys Leu Ile 435 Glu Ala Tyr Thr Cys 440 Thr Ser Val Thr Val 445 Asp Ser Ser ggc gat att CCC gtg ccg atg gcg tcg gga tta ccg aga gtt Ctt ctg 1392 Gly Asp 450 Ile Pro Val Pro Met 455 Ala Ser Gly Leu Pro 460 Arg Val Leu Leu CCC gcg tcc gtc gtc gat age tct tcg CtC tgt ggc ggg age gga aga 1440 Pro Ala Ser Val Val Asp Ser Ser Ser Leu Cys Gly Gly Ser Gly Arg 465 470 475 480 ggt gct aca age ccg ggt ggc tcc tcg ggt agt gtc gag gtc act ttc 1488 Gly Ala Thr Ser Pro 485 Gly Gly Ser Ser Gly 490 Ser Val Glu Val Thr 495 Phe gac gtt tac gct acc aca gta tat gge cag aac ate tat ate acc ggt 1536 Asp Val Tyr Ala 500 Thr Thr Val Tyr Gly 505 Gln Asn Ile Tyr Ile 510 Thr Gly gat gtg agt gag CtC ggc aac tgg aca CCC gcc aat ggt gtt gea ctc 1584 Asp Val Ser Glu Leu Gly Asn Trp Thr Pro Ala Asn Gly Val Ala Leu 515 520 525 tct tct gct aac tac CCC acc tgg agt gcc acg ate gct CtC CCC gct 1632 Ser Ser 530 Ala Asn Tyr Pro Thr 535 Trp Ser Ala Thr Ile 540 Ala Leu Pro Ala gac acg aca ate cag tac aag tat gtc aac att gac ggc age acc gtc 1680 Asp Thr Thr Ile Gln Tyr Lys Tyr Val Asn Ile Asp Gly Ser Thr Val 545 550 555 560 ate tgg gag gat gct ate age aat cgc gag ate acg acg CCC gcc age 1728 Ile Trp Glu Asp Ala 565 Ile Ser Asn Arg Glu 570 Ile Thr Thr Pro Ala 575 Ser ggc aca tac acc gaa aaa gac act tgg gat gaa tct tag 1767 Gly Thr Tyr Thr 580 Glu Lys Asp Thr Trp 585 Asp Glu Ser

<210> 34

<211> 588

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> Construto sintético

<4 00> 34

Leu Ser Ala Ala Glu Trp Arg Thr Gln Ser Ile Tyr Phe Leu Leu Thr 1 5 10 15 Asp Arg Phe Gly 20 Arg Thr Asp Asn Ser 25 Thr Thr Ala Thr Cys 30 Asp Thr Gly Asp Gln Ile Tyr Cys Gly Gly Ser Trp Gln Gly Ile Ile Asn His 35 40 45 Leu Asp 50 Tyr Ile Gln Gly Met 55 Gly Phe Thr Ala Ile 60 Trp Ile Ser Pro Ile Thr Glu Gln Leu Pro Gln Asp Thr Ala Asp Gly Glu Ala Tyr His 65 70 75 80 Gly Tyr Trp Gln Gln 85 Lys Ile Tyr Asp Val 90 Asn Ser Asn Phe Gly 95 Thr Ala Asp Asp Leu 100 Lys Ser Leu Ser Asp 105 Ala Leu His Ala Arg 110 Gly Met Tyr Leu Met Val Asp Val Val Pro Asn His Met Gly Tyr Ala Gly Asn 115 120 125 Gly Asn 130 Asp Val Asp Tyr Ser 135 Val Phe Asp Pro Phe 140 Asp Ser Ser Ser Tyr Phe His Pro Tyr Cys Leu Ile Thr Asp Trp Asp Asn Leu Thr Met

145 150 155 160 Val Gln Asp Cys Trp Glu Gly Asp Thr Ile Val Ser Leu Pro 165 170

180

195

215

280

290

310

340

360

370

390

420

450

515

520

Thr Ile Trp Tyr Asp Trp 185 190 Asp Gly Leu Arg Ile Asp 205 Pro Gly Tyr Gln Glu Ala 220 Asn Gly Asn Pro Ala Leu 235 Val Leu Asn Tyr Pro Ile 250 Ser Ser Gly Ser Ile Ser 265 270 Ser Asp Cys Ser Asp Pro 285 Asp Asn Pro Arg Phe Ala 300 Asn Val Leu Ser Tyr Ile 315 Ala Gly Glu Glu Gln His 330 Glu Ala Thr Trp Leu Ser 345 350 Trp Ile Ala Thr Thr Asn 365 Ser Ala Tyr Ile Thr Tyr 380 Thr Ile Ala Met Arg Lys 395 Leu Ser Asn Lys Gly Ser 410 Gly Ser Gly Tyr Thr Ser 425 430 Thr Ser Val Thr Val Asp 445 Ser Gly Leu Pro 4 60 Arg Val Ser Leu Cys Gly Gly Ser 475 Ser Gly Ser Val Glu Val 490 Gly Gln Asn Ile Tyr Ile 505 510 Thr Pro Ala Asn Gly Val 525 Ser Ala Thr Ile Ala Leu 540

530 535 Asp Thr Thr Ile Gln Tyr Lys Tyr Val Asn Ile Asp Gly Ser 545 550 555 Ile Trp Glu Asp Ala Ile Ser Asn Arg Glu Ile Thr Thr Pro

565 570

Gly Thr Tyr Thr Glu Lys Asp Thr Trp Asp Glu Ser

Asp Leu 175

Val Ala

Ser Val

Ala Gly

Asp Cys 240 Tyr Trp 255

Asn Leu

Thr Leu

Ser Tyr

Phe Leu 320 Tyr Ser 335

Gly Tyr

Ala Ile

Ala Asn

Gly Thr 400

Ser Gly 415

Gly Thr

Ser Ser

Leu Leu

Gly Arg 480 Thr Phe 495

Thr Gly

Ala Leu

Pro Ala

Thr Val 560 Ala Ser 575

580

<210> 35

<211> 1767

<212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Artificial <220>

<221> CDS

585

(1767) <223> híbrido consistindo de domínio catalítico de alfa-amilase de A. oryzae - ligador de glicoamilase de A. rolfsii -Iigador de glicoamilase de A rolfsii <400> 35

gca a cg CCt gcg gac tgg cga tcg caa tcc att tat ttc Ctt ctc acg 48 Ala Thr Pro Ala Asp Trp Arg Ser Gln Ser Ile Tyr Phe Leu Leu Thr 1 5 10 15 gat cga ttt gca agg acg gat ggg tcg acg act gcg act tgt aat act 96 Asp Arg Phe Ala Arg Thr Asp Gly Ser Thr Thr Ala Thr Cys Asn Thr 20 25 30 gcg gat cag aaa tac tgt ggt gga aca tgg cag ggc ate ate gac aag 144 Ala Asp Gln Lys Tyr Cys Gly Gly Thr Trp Gln Gly Ile Ile Asp Lys 35 40 45 ttg gac tat ate cag gga atg ggc ttc aca gcc ate tgg ate acc CCC 192 Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala Ile Trp Ile Thr Pro 50 55 60 gtt aca gcc cag ctg CCC cag acc acc gca tat gga gat gcc tac cat 240 Val Thr Ala Gln Leu Pro Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Asp Ala Tyr His 65 70 75 80 ggc tac tgg cag cag gat ata tac tet ctg aac gaa aac tac ggc act 288 Gly Tyr Trp Gln Gln Asp Ile Tyr Ser Leu Asn Glu Asn Tyr Gly Thr 85 90 95 gca gat gac ttg aag gcg CtC tet tcg gcc Ctt cat gag agg ggg atg 336 Ala Asp Asp Leu Lys Ala Leu Ser Ser Ala Leu His Glu Arg Gly Met 100 105 110 tat Ctt atg gtc gat gtg gtt gct aac cat atg ggc tat gat gga gcg 384 Tyr Leu Met Val Asp Val Val Ala Asn His Met Gly Tyr Asp Gly Ala 115 120 125 ggt age tca gtc gat tac agt gtg ttt aaa ccg ttc agt tcc caa gac 432 Gly Ser Ser Val Asp Tyr Ser Val Phe Lys Pro Phe Ser Ser Gln Asp 130 135 140 tac ttc cac ccg ttc tgt ttc att caa aac tat gaa gat cag act cag 480 Tyr Phe Hls Pro Phe Cys Phe Ile Gln Asn Tyr Glu Asp Gln Thr Gln 145 150 155 160 gtt gag gat tgc tgg cta gga gat aac act gtc tcc ttg cct gat ctc 528 Val Glu Asp Cys Trp Leu Gly Asp Asn Thr Val Ser Leu Pro Asp Leu 165 170 175 gat acc acc aag gat gtg gtc aag aat gaa tgg tac gac tgg gtg gga 576 Asp Thr Thr Lys Asp Val Val Lys Asn Glu Trp Tyr Asp Trp Val Gly 180 185 190 tca ttg gta tcg aac tac tcc att gac ggc ctc cgt ate gac aca gta 624 Ser Leu Val Ser Asn Tyr Ser Ile Asp Gly Leu Arg Ile Asp Thr Val 195 200 205 aaa cac gtc cag aag gac ttc tgg CCC ggg tac aac aaa gcc gca gge 672 Lys His Val Gln Lys Asp Phe Trp Pro Gly Tyr Asn Lys Ala Ala Gly 210 215 220 gtg tac tgt ate ggc gag gtg CtC gac ggt gat ccg gcc tac act tgt 720 Val Tyr Cys Ile Gly Glu Val Leu Asp Gly Asp Pro Ala Tyr Thr Cys 225 230 235 240 CCC tac cag aac gtc atg gac ggc gta ctg aac tat CCC att tac tat 768 Pro Tyr Gln Asn Val Met Asp Gly Val Leu Asn Tyr Pro Ile Tyr Tyr 245 250 255 cca CtC CtC aac gcc ttc aag tca acc tcc ggc age atg gac gac ctc 816 Pro Leu Leu Asn Ala Phe Lys Ser Thr Ser Gly Ser Met Asp Asp Leu 260 265 270 tac aac atg ate aac acc gtc aaa tcc gac tgt cca gac tca aca ctc 864 Tyr Asn Met Ile Asn Thr Val Lys Ser Asp Cys Pro Asp Ser Thr Leu 275 280 285 ctg ggc aca ttc gtc gag aac cac gac aac cca cgg ttc gct tet tac 912 Leu Gly Thr Phe Val Glu Asn His Asp Asn Pro Arg Phe Ala Ser Tyr 290 295 300 acc aac gac ata gcc CtC gcc aag aac gtc gca gca ttc ate ate ctc 960 Thr Asn Asp Ile Ala Leu Ala Lys Asn Val Ala Ala Phe Ile Ile Leu 305 310 315 320 aac gac gga ate CCC ate ate tac gcc ggc caa gaa cag cac tac gcc Asn Asp Gly Ile Pro 325 Ile Ile Tyr Ala Gly 330 Gln Glu Gln His Tyr 335 Ala ggc gga aac gac CCC gcg aac cgc gaa gea acc tgg CtC tcg ggc tac Gly Gly Asn Asp Pro Ala Asn Arg Glu Ala Thr Trp Leu Ser Gly Tyr 340 345 350 ccg acc gac age gag ctg tac aag tta att gcc tcc gcg aac gea ate Pro Thr Asp 355 Ser Glu Leu Tyr Lys 360 Leu Ile Ala Ser Ala 365 Asn Ala Ile cgg aac tat gcc att age aaa gat aca gga ttc gtg acc tac aag aac Arg Asn 370 Tyr Ala Ile Ser Lys 375 Asp Thr Gly Phe Val 380 Thr Tyr Lys Asn tgg CCC ate tac aaa gac gac aca acg ate gcc atg cgc aag ggc aca Trp Pro Ile Tyr Lys Asp Asp Thr Thr Ile Ala Met Arg Lys Gly Thr 385 390 395 400 gat ggg tcg cag ate gtg act ate ttg tcc aac aag ggt gct tcg ggt Asp Gly Ser Gln Ile Val Thr Ile Leu Ser Asn Lys Gly Ala Ser Gly 405 410 415 gat teg tat acc etc tcc ttg agt ggt gcg ggt tac aca gcc ggc cag Asp Ser Tyr Thr Leu Ser Leu Ser Gly Ala Gly Tyr Thr Ala Gly Gln 420 425 430 caa ttg acg gag gtc att ggc tgc acg acc gtg acg gtt ggt tcg gat Gln Leu Thr Glu Val Ile Gly Cys Thr Thr Val Thr Val Gly Ser Asp 435 440 445 gga aat gtg cct gtt CCt atg gea ggt ggg cta cct agg gta ttg tat Gly Asn Val Pro Val Pro Met Ala Gly Gly Leu Pro Arg Val Leu Tyr 450 455 460 ccg act gag aag ttg gea ggt age aag ate tgt agt age tcg gga aga Pro Thr Glu Lys Leu Ala Gly Ser Lys Ile Cys Ser Ser Ser Gly Arg 465 470 475 480 ggt get aca age ccg ggt ggc tcc tcg ggt agt gtc gag gtc act ttc Gly Ala Thr Ser Pro Gly Gly Ser Ser Gly Ser Val Glu Val Thr Phe 485 490 495 gac gtt tac gct acc aca gta tat ggc cag aac ate tat ate acc ggt Asp Val Tyr Ala Thr Thr Val Tyr Gly Gln Asn Ile Tyr Ile Thr Gly 500 505 510 gat gtg agt gag CtC ggc aac tgg aca CCC gcc aat ggt gtt gea ctc Asp Val Ser Glu Leu Gly Asn Trp Thr Pro Ala Asn Gly Val Ala Leu 515 520 525 tct tct gct aac tac CCC acc tgg agt gcc acg ate gct ctc CCC gct Ser Ser 530 Ala Asn Tyr Pro Thr 535 Trp Ser Ala Thr Ile 540 Ala Leu Pro Ala gac acg aca ate cag tac aag tat gtc aac att gac ggc age acc gtc Asp Thr Thr Ile Gln Tyr Lys Tyr Val Asn Ile Asp Gly Ser Thr Val 545 550 555 560 ate tgg gag gat gct ate age aat cgc gag ate acg acg CCC gcc age Ile Trp Glu Asp Ala 565 Ile Ser Asn Arg Glu 570 Ile Thr Thr Pro Ala 575 Ser ggc aca tac acc gaa aaa gac act tgg gat gaa tct tag Gly Thr Tyr Thr Glu Lys Asp Thr Trp Asp Glu Ser 580 585 <210> 36 <211> 588 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Construto sintético <400> 36 Ala Thr Pro Ala Asp Trp Arg Ser Gln Ser Ile Tyr Phe Leu Leu Thr 1 5 10 15 Asp Arg Phe Ala Arg Thr Asp Gly Ser Thr Thr Ala Thr Cys Asn Thr

1056

1200

1248

1296

1632

1680

1728

20 25 Ala Asp Gln Lys Tyr Cys Gly Gly Thr Trp Gln Gly Ile Ile Asp Lys

35 40 45

Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala Ile Trp Ile Thr Pro

50 55 60

Val Thr Ala Gln Leu Pro Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Asp Ala Tyr His 65 70 75 80

Gly Tyr Trp Gln Gln Asp Ile Tyr Ser Leu Asn Glu Asn Tyr Gly Thr

85 90 95

Ala Asp Asp Leu Lys Ala Leu Ser Ser Ala Leu His Glu Arg Gly Met

100 105 110

Tyr Leu Met Val Asp Val Val Ala Asn His Met Gly Tyr Asp Gly Ala

115 120 125

Gly Ser Ser Val Asp Tyr Ser Val Phe Lys Pro Phe Ser Ser Gln Asp

130 135 140

Tyr Phe His Pro Phe Cys Phe Ile Gln Asn Tyr Glu Asp Gln Thr Gln 145 150 155 160

Val Glu Asp Cys Trp Leu Gly Asp Asn Thr Val Ser Leu Pro Asp Leu

165 170 175

Asp Thr Thr Lys Asp Val Val Lys Asn Glu Trp Tyr Asp Trp Val Gly

180 185 190

Ser Leu Val Ser Asn Tyr Ser Ile Asp Gly Leu Arg Ile Asp Thr Val

195 200 205

Lys His Val Gln Lys Asp Phe Trp Pro Gly Tyr Asn Lys Ala Ala Gly

210 215 220

Val Tyr Cys Ile Gly Glu Val Leu Asp Gly Asp Pro Ala Tyr Thr Cys 225 230 235 240

Pro Tyr Gln Asn Val Met Asp Gly Val Leu Asn Tyr Pro Ile Tyr Tyr

245 250 255

Pro Leu Leu Asn Ala Phe Lys Ser Thr Ser Gly Ser Met Asp Asp Leu

260 265 270

Tyr Asn Met Ile Asn Thr Val Lys Ser Asp Cys Pro Asp Ser Thr Leu

275 280 285

Leu Gly Thr Phe Val Glu Asn His Asp Asn Pro Arg Phe Ala Ser Tyr

290 295 300

Thr Asn Asp Ile Ala Leu Ala Lys Asn Val Ala Ala Phe Ile Ile Leu 305 310 315 320

Asn Asp Gly Ile Pro Ile Ile Tyr Ala Gly Gln Glu Gln His Tyr Ala

325 330 335

Gly Gly Asn Asp Pro Ala Asn Arg Glu Ala Thr Trp Leu Ser Gly Tyr

340 345 350

Pro Thr Asp Ser Glu Leu Tyr Lys Leu Ile Ala Ser Ala Asn Ala Ile

355 360 365

Arg Asn Tyr Ala Ile Ser Lys Asp Thr Gly Phe Val Thr Tyr Lys Asn

370 375 380

Trp Pro Ile Tyr Lys Asp Asp Thr Thr Ile Ala Met Arg Lys Gly Thr 385 390 395 400

Asp Gly Ser Gln Ile Val Thr Ile Leu Ser Asn Lys Gly Ala Ser Gly

405 410 415

Asp Ser Tyr Thr Leu Ser Leu Ser Gly Ala Gly Tyr Thr Ala Gly Gln

420 425 430

Gln Leu Thr Glu Val Ile Gly Cys Thr Thr Val Thr Val Gly Ser Asp

435 440 445

Gly Asn Val Pro Val Pro Met Ala Gly Gly Leu Pro Arg Val Leu Tyr

450 455 460

Pro Thr Glu Lys Leu Ala Gly Ser Lys Ile Cys Ser Ser Ser Gly Arg 465 470 475 480

Gly Ala Thr Ser Pro Gly Gly Ser Ser Gly Ser Val Glu Val Thr Phe

485 490 495

Asp Val Tyr Ala Thr Thr Val Tyr Gly Gln Asn Ile Tyr Ile Thr Gly

500 505 510

Asp Val Ser Glu Leu Gly Asn Trp Thr Pro Ala Asn Gly Val Ala Leu

515 520 525

Ser Ser Ala Asn Tyr Pro Thr Trp Ser Ala Thr Ile Ala Leu Pro Ala 530 535 540

Asp Thr Thr Ile Gln Tyr Lys Tyr Val Asn Ile Asp Gly Ser Thr Val 545 550 555 560

Ile Trp Glu Asp Ala Ile Ser Asn Arg Glu Ile Thr Thr Pro Ala Ser

565 570 575

Gly Thr Tyr Thr Glu Lys Asp Thr Trp Asp Glu Ser 580 585

<210> 37 <211> 640 <212> PRT

<213> Aspergillus kawachii <220>

<221> mat_peptídeo <222> (22)..(640) <400> 37

Met Arg Val Ser Thr Ser Ser Ile Ala Leu Ala Val Ser Leu Phe Gly

-20 -15 -10

Lys Leu Ala Leu Gly Leu Ser Ala Ala Glu Trp Arg Thr Gln Ser Ile -5 -11 5 10

Tyr Phe Leu Leu Thr Asp Arg Phe Gly Arg Thr Asp Asn Ser Thr Thr

15 20 25

Ala Thr Cys Asn Thr Gly Asp Gln Ile Tyr Cys Gly Gly Ser Trp Gln

30 35 40

Gly Ile Ile Asn His Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala

45 50 55

Ile Trp Ile Ser Pro Ile Thr Glu Gln Leu Pro Gln Asp Thr Ser Asp 60 65 70 75

Gly Glu Ala Tyr His Gly Tyr Trp Gln Gln Lys Ile Tyr Tyr Val Asn

80 85 90

Ser Asn Phe Gly Thr Ala Asp Asp Leu Lys Ser Leu Ser Asp Ala Leu

95 100 105

His Ala Arg Gly Met Tyr Leu Met Val Asp Val Val Pro Asn His Met

110 115 120

Gly Tyr Ala Gly Asn Gly Asn Asp Val Asp Tyr Ser Val Phe Asp Pro

125 130 135

Phe Asp Ser Ser Ser Tyr Phe His Pro Tyr Cys Leu Ile Thr Asp Trp 140 145 150 155

Asp Asn Leu Thr Met Val Gln Asp Cys Trp Glu Gly Asp Thr Ile Val

160 165 170

Ser Leu Pro Asp Leu Asn Thr Thr Glu Thr Ala Val Arg Thr Ile Trp

175 180 185

Tyr Asp Trp Val Ala Asp Leu Val Ser Asn Tyr Ser Val Asp Gly Leu

190 195 200

Arg Ile Asp Ser Val Glu Glu Val Glu Pro Asp Phe Phe Pro Gly Tyr

205 210 215

Gln Glu Ala Ala Gly Val Tyr Cys Val Gly Glu Val Asp Asn Gly Asn 220 225 230 235

Pro Ala Leu Asp Cys Pro Tyr Gln Lys Tyr Leu Asp Gly Val Leu Asn

240 245 250

Tyr Pro Ile Tyr Trp Gln Leu Leu Tyr Ala Phe Glu Ser Ser Ser Gly

255 260 265

Ser Ile Ser Asn Leu Tyr Asn Met Ile Lys Ser Val Ala Ser Asp Cys

270 275 280

Ser Asp Pro Thr Leu Leu Gly Asn Phe Ile Glu Asn His Asp Asn Pro

285 290 295

Arg Phe Ala Ser Tyr Thr Ser Asp Tyr Ser Gln Ala Lys Asn Val Leu 300 305 310 315

Ser Tyr Ile Phe Leu Ser Asp Gly Ile Pro Ile Val Tyr Ala Gly Glu

320 325 330

Glu Gln His Tyr Ser Gly Gly Asp Val Pro Tyr Asn Arg Glu Ala Thr

335 340 345

Trp Leu Ser Gly Tyr Asp Thr Ser Ala Glu Leu Tyr Thr Trp Ile Ala 350 355 360 Thr Thr 365 Asn Ala Ile Arg Lys 370 Leu Ala Ile Ser Ala 375 Asp Ser Asp Tyr Ile Thr Tyr Lys Asn Asp Pro Ile Tyr Thr Asp Ser Asn Thr Ile Ala 380 385 390 395 Met Arg Lys Gly Thr 400 Ser Gly Ser Gln Ile 405 Ile Thr Val Leu Ser 410 Asn Lys Gly Ser Ser 415 Gly Ser Ser Tyr Thr 420 Leu Thr Leu Ser Gly 425 Ser Gly Tyr Thr Ser 430 Gly Thr Lys Leu Ile 435 Glu Ala Tyr Thr Cys 440 Thr Ser Val Thr Val 445 Asp Ser Asn Gly Asp 450 Ile Pro Val Pro Met 455 Ala Ser Gly Leu Pro Arg Val Leu Leu Pro Ala Ser Val Val Asp Ser Ser Ser Leu Cys 460 465 470 475 Gly Gly Ser Gly Asn 480 Thr Thr Thr Thr Thr 485 Thr Ala Ala Thr Ser 490 Thr Ser Lys Ala Thr 495 Thr Ser Ser Ser Ser 500 Ser Ser Ala Ala Ala 505 Thr Thr Ser Ser Ser 510 Cys Thr Ala Thr Ser 515 Thr Thr Leu Pro Ile 520 Thr Phe Glu Glu Leu 525 Val Thr Thr Thr Tyr 530 Gly Glu Glu Val Tyr 535 Leu Ser Gly Ser Ile Ser Gln Leu Gly Glu Trp His Thr Ser Asp Ala Val Lys Leu Ser 540 545 550 555 Ala Asp Asp Tyr Thr 560 Ser Ser Asn Pro Glu 565 Trp Ser Val Thr Val 570 Ser Leu Pro Val Gly 575 Thr Thr Phe Glu Tyr 580 Lys Phe Ile Lys Val 585 Asp Glu Gly Gly Ser 590 Val Thr Trp Glu Ser 595 Asp Pro Asn Arg Glu 600 Tyr Thr Val Pro Glu 605 Cys Gly Ser Gly Ser 610 Gly Glu Thr Val Val 615 Asp Thr Trp Arg

<210> 38

<211> 505

<212> PRT

<213> Aspergillus niger <220>

<221> mat_peptídeo

<222> (22)..(505)

<400> 38

Met Arg Leu Ser Thr Ser Ser Leu Phe Leu Ser Val Ser Leu Leu Gly -20 -15 -10

Lys Leu Ala Leu Gly Leu Ser Ala Ala Glu Trp Arg Thr Gln Ser Ile -5 -1 1 5 10 Tyr Phe Leu Leu Thr Asp Arg Phe Gly Arg Thr Asp Asn Ser Thr Thr 15 20 25 Ala Thr Cys Asp Thr Gly Asp Gln Ile Tyr Cys Gly Gly Ser Trp Gln 30 35 40 Gly Ile Ile Asn His Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala 45 50 55 Ile Trp Ile Ser Pro Ile Thr Glu Gln Leu Pro Gln Asp Thr Ala Asp 60 65 70 75 Gly Glu Ala Tyr His Gly Tyr Trp Gln Gln Lys Ile Tyr Asp Val Asn 80 85 90 Ser Asn Phe Gly Thr Ala Asp Asp Leu Lys Ser Leu Ser Asp Ala Leu 95 100 105 His Ala Arg Gly Met Tyr Leu Met Val Asp Val Val Pro Asn His Met 110 115 120 Gly Tyr Ala Gly Asn Gly Asn Asp Val Asp Tyr Ser Val Phe Asp Pro 125 130 135 Phe Asp Ser Ser Ser Tyr Phe His Pro Tyr Cys Leu Ile Thr Asp Trp 140 145 150 155 Asp Asn Leu Thr Met Val Gln Asp Cys Trp Glu Gly Asp Thr Ile Val 160 165 170 Ser Leu Pro Asp Leu Asn Thr Thr Glu Thr Ala Val Arg Thr Ile Trp 175 180 185 Tyr Asp Trp Val Ala Asp Leu Val Ser Asn Tyr Ser Val Asp Gly Leu 190 195 200 Arg Ile Asp Ser Val Leu Glu Val Glu Pro Asp Phe Phe Pro Gly Tyr 205 210 215 Gln Glu Ala Ala Gly Val Tyr Cys Val Gly Glu Val Asp Asn Gly Asn 220 225 230 235 Pro Ala Leu Asp Cys Pro Tyr Gln Lys Val Leu Asp Gly Val Leu Asn 240 245 250 Tyr Pro Ile Tyr Trp Gln Leu Leu Tyr Ala Phe Glu Ser Ser Ser Gly 255 260 265 Ser Ile Ser Asn Leu Tyr Asn Met Ile Lys Ser Val Ala Ser Asp Cys 270 275 280 Ser Asp Pro Thr Leu Leu Gly Asn Phe Ile Glu Asn His Asp Asn Pro 285 290 295 Arg Phe Ala Ser Tyr Thr Ser Asp Tyr Ser Gln Ala Lys Asn Val Leu 300 305 310 315 Ser Tyr Ile Phe Leu Ser Asp Gly Ile Pro Ile Val Tyr Ala Gly Glu 320 325 330 Glu Gln His Tyr Ser Gly Gly Lys Val Pro Tyr Asn Arg Glu Ala Thr 335 340 345 Trp Leu Ser Gly Tyr Asp Thr Ser Ala Glu Leu Tyr Thr Trp Ile Ala 350 355 360 Thr Thr Asn Ala Ile Arg Lys Leu Ala Ile Ser Ala Asp Ser Ala Tyr 365 370 375 Ile Thr Tyr Ala Asn Asp Ala Phe Tyr Thr Asp Ser Asn Thr Ile Ala 380 385 390 395 Met Arg Lys Gly Thr Ser Gly Ser Gln Val Ile Thr Val Leu Ser Asn 400 405 410 Lys Gly Ser Ser Gly Ser Ser Tyr Thr Leu Thr Leu Ser Gly Ser Gly 415 420 425 Tyr Thr Ser Gly Thr Lys Leu Ile Glu Ala Tyr Thr Cys Thr Ser Val 430 435 440 Thr Val Asp Ser Ser Gly Asp Ile Pro Val Pro Met Ala Ser Gly Leu 445 450 455 Pro Arg Val Leu Leu Pro Ala Ser Val Val Asp Ser Ser Ser Leu Cys 460 465 470 475 Gly Gly Ser Gly Arg 4 8 0 Leu Tyr Val Glu <210> 39 <211> 476 <212> PRT <213> Aspergillus oryzae <220> <221> mat peptídeo <222> (1) . . (476) <400> 39 Ala Thr Pro Ala Asp Trp Arg Ser Gln Ser Ile Tyr Phe Leu Leu Thr 1 5 10 15 Asp Arg Phe Ala Arg Thr Asp Gly Ser Thr Thr Ala Thr Cys Asn Thr 20 25 30 Ala Asp Gln Lys Tyr Cys Gly Gly Thr Trp Gln Gly Ile Ile Asp Lys 35 40 45 Leu Asp Tyr Ile Gln Gly Met Gly Phe Thr Ala Ile Trp Ile Thr Pro 50 55 60 Val Thr Ala Gln Leu Pro Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Asp Ala Tyr His 65 70 75 80 Gly Tyr Trp Gln Gln Asp Ile Tyr Ser Leu Asn Glu Asn Tyr Gly Thr 85 90 95 Ala Asp Asp Leu Lys Ala Leu Ser Ser Ala Leu His Glu Arg Gly Met

100 105 110 Tyr Leu Met Val Asp Val Val Ala Asn His Met Gly Tyr Asp Gly Ala

115 120 125

Gly Ser Ser Val Asp Tyr Ser Val Phe Lys Pro Phe Ser Ser Gln Asp

130 135 140

Tyr Phe His Pro Phe Cys Phe Ile Gln Asn Tyr Glu Asp Gln Thr Gln 145 150 155 160

Val Glu Asp Cys Trp Leu Gly Asp Asn Thr Val Ser Leu Pro Asp Leu

165 170 175

Asp Thr Thr Lys Asp Val Val Lys Asn Glu Trp Tyr Asp Trp Val Gly

180 185 190

Ser Leu Val Ser Asn Tyr Ser Ile Asp Gly Leu Arg Ile Asp Thr Val

195 200 205

Lys His Val Gln Lys Asp Phe Trp Pro Gly Tyr Asn Lys Ala Ala Gly

210 215 220

Val Tyr Cys Ile Gly Glu Val Leu Asp Gly Asp Pro Ala Tyr Thr Cys 225 230 235 240

Pro Tyr Gln Asn Val Met Asp Gly Val Leu Asn Tyr Pro Ile Tyr Tyr

245 250 255

Pro Leu Leu Asn Ala Phe Lys Ser Thr Ser Gly Ser Met Asp Asp Leu

260 265 270

Tyr Asn Met Ile Asn Thr Val Lys Ser Asp Cys Pro Asp Ser Thr Leu

275 280 285

Leu Gly Thr Phe Val Glu Asn His Asp Asn Pro Arg Phe Ala Ser Tyr

290 295 300

Thr Asn Asp Ile Ala Leu Ala Lys Asn Val Ala Ala Phe Ile Ile Leu 305 310 315 320

Asn Asp Gly Ile Pro Ile Ile Tyr Ala Gly Gln Glu Gln His Tyr Ala

325 330 335

Gly Gly Asn Asp Pro Ala Asn Arg Glu Ala Thr Trp Leu Ser Gly Tyr

340 345 350

Pro Thr Asp Ser Glu Leu Tyr Lys Leu Ile Ala Ser Ala Asn Ala Ile

355 360 365

Arg Asn Tyr Ala Ile Ser Lys Asp Thr Gly Phe Val Thr Tyr Lys Asn

370 375 380

Trp Pro Ile Tyr Lys Asp Asp Thr Thr Ile Ala Met Arg Lys Gly Thr 385 390 395 400

Asp Gly Ser Gln Ile Val Thr Ile Leu Ser Asn Lys Gly Ala Ser Gly

405 410 415

Asp Ser Tyr Thr Leu Ser Leu Ser Gly Ala Gly Tyr Thr Ala Gly Gln

420 425 430

Gln Leu Thr Glu Val Ile Gly Cys Thr Thr Val Thr Val Gly Ser Asp

435 440 445

Gly Asn Val Pro Val Pro Met Ala Gly Gly Leu Pro Arg Val Leu Tyr

450 455 460

Pro Thr Glu Lys Leu Ala Gly Ser Lys Ile Cys Ser 465 470 475

<210> 40 <211> 1455 <212> DNA <213> Bacillus sp. <220>

<221> CDS <222> (1) . . (1455) <223> AA560 <220>

<221> mat_peptídeo <222> (1) . . O <400> 40

cae cat aat ggt acg aac ggc aca atg atg cag tac ttt gaa tgg tat His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr 1 5 10 15

cta cca aat gac gga aac cat tgg aat aga tta agg tct gat gca agt Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser 20 25 30

aac cta aaa gat aaa ggg ate tca gcg gtt tgg att CCt cct gea tgg 144 Asn Leu Lys 35 Asp Lys Gly Ile Ser 40 Ala Val Trp Ile Pro 45 Pro Ala Trp aag ggt gcc tct caa aat gat gtg ggg tat ggt gct tat gat ctg tat 192 Lys Gly Ala Ser Gln Asn Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr 50 55 60 gat tta gga gaa ttc aat caa aaa gga acc att cgt aca aaa tat gga 240 Asp Leu Gly Glu Phe Asn Gln Lys Gly Thr Ile Arg Thr Lys Tyr Gly 65 70 75 80 acg cgc aat cag tta caa gct gea gtt aac gcc ttg aaa agt aat gga 288 Thr Arg Asn Gln Leu 85 Gln Ala Ala Val Asn 90 Ala Leu Lys Ser Asn 95 Gly att caa gtg tat ggc gat gtt gta atg aat cat aaa ggg gga gea gac 336 Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp 100 105 110 gct acc gaa atg gtt agg gea gtt gaa gta aac ccg aat aat aga aat 384 Ala Thr Glu 115 Met Val Arg Ala Val 120 Glu Val Asn Pro Asn 125 Asn Arg Asn caa gaa gtg tcc ggt gaa tat aca att gag gct tgg aca aag ttt gac 432 Gln Glu Val Ser Gly Glu Tyr Thr Ile Glu Ala Trp Thr Lys Phe Asp 130 135 140 ttt cca gga cga ggt aat act cat tca aac ttc aaa tgg aga tgg tat 480 Phe Pro Gly Arg Gly Asn Thr His Ser Asn Phe Lys Trp Arg Trp Tyr 145 150 155 160 cac ttt gat gga gta gat tgg gat cag tca cgt aag ctg aac aat cga 528 His Phe Asp Gly Val Asp Trp Asp Gln Ser Arg Lys Leu Asn Asn Arg 165 170 175 att tat aaa ttt aga ggt gat gga aaa ggg tgg gat tgg gaa gtc gat 576 Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Asp Gly Lys Gly Trp Asp Trp Glu Val Asp 180 185 190 aca gaa aac ggt aac tat gat tac cta atg tat gea gat att gac atg 624 Thr Glu Asn Gly Asn Tyr Asp Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Ile Asp Met 195 200 205 gat cac cca gag gta gtg aat gag cta aga aat tgg ggt gtt tgg tat 672 Asp His 210 Pro Glu Val Val Asn 215 Glu Leu Arg Asn Trp 220 Gly Val Trp Tyr acg aat aca tta ggc Ctt gat ggt ttt aga ata gat gea gta aaa cat 720 Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His 225 230 235 240 ata aaa tac age ttt act cgt gat tgg att aat cat gtt aga agt gea 768 Ile Lys Tyr Ser Phe 245 Thr Arg Asp Trp Ile 250 Asn His Val Arg Ser 255 Ala act ggc aaa aat atg ttt gcg gtt gcg gaa ttt tgg aaa aat gat tta 816 Thr Gly Lys Asn 260 Met Phe Ala Val Ala 265 Glu Phe Trp Lys Asn 270 Asp Leu ggt gct att gaa aac tat tta aac aaa aca aac tgg aac cat tca gtc 8 64 Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val 275 280 285 ttt gat gtt ccg ctg cac tat aac CtC tat aat gct tca aaa age gga 912 Phe Asp 290 Val Pro Leu His Tyr 295 Asn Leu Tyr Asn Ala 300 Ser Lys Ser Gly ggg aat tat gat atg agg caa ata ttt aat ggt aca gtc gtg caa aga 960 Gly Asn Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg 305 310 315 320 cat cca atg cat gct gtt aca ttt gtt gat aat cat gat tcg caa CCt 1008 His Pro Met His Ala 325 Val Thr Phe Val Asp 330 Asn His Asp Ser Gln 335 Pro gaa gaa gct tta gag tct ttt gtt gaa gaa tgg ttc aaa cca tta gcg 1056 Glu Glu Ala Leu 340 Glu Ser Phe Val Glu 345 Glu Trp Phe Lys Pro 350 Leu Ala tat gct ttg aca tta aca cgt gaa caa ggc tac CCt tct gta ttt tat 1104 Tyr Ala Leu Thr Leu Thr Arg Glu Gln Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr 355 360 365

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370 375 380

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caa aat gac tac tta gac cat cat aat ate ate ggt tgg aca cgt gaa 1248 Gln Asn Asp Tyr Leu Asp His His Asn Ile Ile Gly Trp Thr Arg Glu

405 410 415

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Gly Asn Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp

420 425 430

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Gly Ala Gly Gly Asn Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly

435 440 445

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Gln Val Trp Thr Asp Ile Thr Gly Asn Arg Ala Gly Thr Val Thr Ile

450 455 460

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<210> 41

<211> 485

<212> PRT

<213> Bacillus sp.

<400> 41

His His Asn Gly Thr Asn Gly Thr Met Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr 1 5 10 15

Leu Pro Asn Asp Gly Asn His Trp Asn Arg Leu Arg Ser Asp Ala Ser

20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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85 90 95

Ile Gln Val Tyr Gly Asp Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp

100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

Asp His Pro Glu Val Val Asn Glu Leu Arg Asn Trp Gly Val Trp Tyr

210 215 220

Thr Asn Thr Leu Gly Leu Asp Gly Phe Arg Ile Asp Ala Val Lys His 225 230 235 240

Ile Lys Tyr Ser Phe Thr Arg Asp Trp Ile Asn His Val Arg Ser Ala

245 250 255

Thr Gly Lys Asn Met Phe Ala Val Ala Glu Phe Trp Lys Asn Asp Leu 260 265 270 Gly Ala Ile Glu Asn Tyr Leu Asn Lys Thr Asn Trp Asn His Ser Val 275 280 285 Phe Asp 290 Val Pro Leu His Tyr 295 Asn Leu Tyr Asn Ala 300 Ser Lys Ser Gly Gly Asn Tyr Asp Met Arg Gln Ile Phe Asn Gly Thr Val Val Gln Arg 305 310 315 320 His Pro Met His Ala 325 Val Thr Phe Val Asp 330 Asn His Asp Ser Gln 335 Pro Glu Glu Ala Leu 340 Glu Ser Phe Val Glu 345 Glu Trp Phe Lys Pro 350 Leu Ala Tyr Ala Leu 355 Thr Leu Thr Arg Glu 360 Gln Gly Tyr Pro Ser 365 Val Phe Tyr Gly Asp 370 Tyr Tyr Gly Ile Pro 375 Thr His Gly Val Pro 380 Ala Met Lys Ser Lys Ile Asp Pro Ile Leu Glu Ala Arg Gln Lys Tyr Ala Tyr Gly Arg 385 390 395 400 Gln Asn Asp Tyr Leu 405 Asp His His Asn Ile 410 Ile Gly Trp Thr Arg 415 Glu Gly Asn Thr Ala His Pro Asn Ser Gly Leu Ala Thr Ile Met Ser Asp 420 425 430 Gly Ala Gly Gly Asn Lys Trp Met Phe Val Gly Arg Asn Lys Ala Gly 435 440 445 Gln Val 450 Trp Thr Asp Ile Thr 455 Gly Asn Arg Ala Gly 460 Thr Val Thr Ile Asn Ala Asp Gly Trp Gly Asn Phe Ser Val Asn Gly Gly Ser Val Ser 465 470 475 480 Ile Trp Val Asn Lys 485

<210> 42

<211> 1350

<212> DNA

<213> Rhizomucor pusillus <220>

<221> CDS

<222> (1)..(1350)

<400> 42

age CCt ttg CCC caa cag cag cga tat ggc aaa aga gea act tcg gat 48 Ser Pro Leu Pro Gln Gln Gln Arg Tyr Gly Lys Arg Ala Thr Ser Asp 1 5 10 15 gac tgg aaa ggc aag gcc att tat cag ctg Ctt aca gat cga ttt ggc 96 Asp Trp Lys Gly 20 Lys Ala Ile Tyr Gln 25 Leu Leu Thr Asp Arg 30 Phe Gly cgc gcc gat gac tca aca age aac tgc tet aat tta tcc aac tac tgt 144 Arg Ala Asp 35 Asp Ser Thr Ser Asn 40 Cys Ser Asn Leu Ser 45 Asn Tyr Cys ggt ggt acc tac gaa ggc att acg aag cat Ctt gac tac att tcc ggt 192 Gly Gly 50 Thr Tyr Glu Gly Ile 55 Thr Lys His Leu Asp 60 Tyr Ile Ser Gly atg ggc ttt gat gct ate tgg ata tcg cca att ccc aag aac tcg gat 240 Met Gly Phe Asp Ala Ile Trp Ile Ser Pro Ile Pro Lys Asn Ser Asp 65 70 75 80 gga ggc tac cac ggc tac tgg gct aca gat ttc tac caa cta aac age 288 Gly Gly Tyr His Gly 85 Tyr Trp Ala Thr Asp 90 Phe Tyr Gln Leu Asn 95 Ser aac ttt ggt gat gaa tee cag CtC aaa gcg etc ate cag gct gcc cat 336 Asn Phe Gly Asp Glu Ser Gln Leu Lys Ala Leu Ile Gln Ala Ala His 100 105 110 gaa cgt gac atg tat gtt atg Ctt gat gtc gta gcc aat cat gea ggt 384 Glu Arg Asp Met Tyr Val Met Leu Asp Val Val Ala Asn His Ala Gly 115 120 125 CCC acc age aat ggc tac tcg ggt tac aca ttc ggc gat gea agt tta 432 Pro Thr Ser Asn Gly Tyr Ser Gly Tyr Thr Phe Gly Asp Ala Ser Leu 130 135 140 tat cat CCt aaa tgc acc ata gat tac aat gat cag acg tct att gag 480 Tyr His Pro Lys Cys Thr Ile Asp Tyr Asn Asp Gln Thr Ser Ile Glu 145 150 155 160 caa tgc tgg gtt gct gac gag ttg CCt gat att gac act gaa aat tct 528 Gln Cys Trp Val Ala Asp Glu Leu Pro Asp Ile Asp Thr Glu Asn Ser 165 170 175 gac aac gtg gcc att CtC aac gac ate gtc tcc ggc tgg gtg ggt aac 576 Asp Asn Val Ala Ile Leu Asn Asp Ile Val Ser Gly Trp Val Gly Asn 180 185 190 tat age ttt gac ggc ate cgc att gat act gtc aag cat att cgc aag 624 Tyr Ser Phe Asp Gly Ile Arg Ile Asp Thr Val Lys His Ile Arg Lys 195 200 205 gac ttt tgg aca ggc tac gea gaa gct gcc ggc gta ttc gea act gga 672 Asp Phe Trp Thr Gly Tyr Ala Glu Ala Ala Gly Val Phe Ala Thr Gly 210 215 220 gag gtc ttc aat ggt gat ccg gcc tac gtt gga CCt tat caa aag tac 720 Glu Val Phe Asn Gly Asp Pro Ala Tyr Val Gly Pro Tyr Gln Lys Tyr 225 230 235 240 Ctg cca tct CtC ate aat tac cca atg tat tac gct ttg aac gac gtc 768 Leu Pro Ser Leu Ile Asn Tyr Pro Met Tyr Tyr Ala Leu Asn Asp Val 245 250 255 ttt gta tcc aaa age aaa gga ttc age cgc ate age gaa atg cta gga 816 Phe Val Ser Lys Ser Lys Gly Phe Ser Arg Ile Ser Glu Met Leu Gly 260 265 270 tca aat cgc aat geg ttt gag gat acc age gta Ctt aca acg ttt gta 864 Ser Asn Arg Asn Ala Phe Glu Asp Thr Ser Val Leu Thr Thr Phe Val 275 280 285 gac aac cat gac aat ccg cgc ttc ttg aac agt caa age gac aag gct 912 Asp Asn His Asp Asn Pro Arg Phe Leu Asn Ser Gln Ser Asp Lys Ala 290 295 300 CtC ttc aag aac gct etc aca tac gta ctg cta ggt gaa ggc ate cca 960 Leu Phe Lys Asn Ala Leu Thr Tyr Val Leu Leu Gly Glu Gly Ile Pro 305 310 315 320 att gtg tat tat ggt tct gag caa ggt ttc age gga gga gcg gat CCt 1008 Ile Val Tyr Tyr Gly Ser Glu Gln Gly Phe Ser Gly Gly Ala Asp Pro 325 330 335 gct aac cgt gaa gtg ctg tgg acc acc aat tat gat aca tcc age gat 1056 Ala Asn Arg Glu Val Leu Trp Thr Thr Asn Tyr Asp Thr Ser Ser Asp 340 345 350 CtC tac caa ttt ate aag aca gtc aac agt gtc cgc atg aaa age aac 1104 Leu Tyr Gln Phe Ile Lys Thr Val Asn Ser Val Arg Met Lys Ser Asn 355 360 365 aag gcc gtc tac atg gat att tat gtt ggc gac aat gct tac gcc ttc 1152 Lys Ala Val Tyr Met Asp Ile Tyr Val Gly Asp Asn Ala Tyr Ala Phe 370 375 380 aag cac ggc gat gct ttg gtt gtt etc aat aac tat gga tca ggt tcc 1200 Lys His Gly Asp Ala Leu Val Val Leu Asn Asn Tyr Gly Ser Gly Ser 385 390 395 400 aca aac caa gtc age ttc age gtt agt ggc aag ttc gat age ggc gea 1248 Thr Asn Gln Val Ser Phe Ser Val Ser Gly Lys Phe Asp Ser Gly Ala 405 410 415 age CtC atg gat att gtc agt aac att acc acc acg gtg tcc tcg gat 1296 Ser Leu Met Asp Ile Val Ser Asn Ile Thr Thr Thr Val Ser Ser Asp 420 425 430 gga aca gtc a ct ttc aac Ctt aaa gat gga Ctt ccg gct ate ttc acc 1344 Gly Thr Val Thr Phe Asn Leu Lys Asp Gly Leu Pro Ala Ile Phe Thr 435 440 445 tct gct 1350

Ser Ala 450 <210> 43 <211> 450 <212> PRT

<213> Rhizomucor pusillus <400> 43

Ser Pro Leu Pro Gln Gln Gln Arg 1 5 Asp Trp Lys Gly Lys Ala Ile Tyr 20 Arg Ala Asp Asp Ser Thr Ser Asn 35 40 Gly Gly Thr Tyr Glu Gly Ile Thr 50 55 Met Gly Phe Asp Ala Ile Trp Ile 65 70 Gly Gly Tyr His Gly Tyr Trp Ala 85 Asn Phe Gly Asp Glu Ser Gln Leu 100 Glu Arg Asp Met Tyr Val Met Leu 115 120 Pro Thr Ser Asn Gly Tyr Ser Gly 130 135 Tyr His Pro Lys Cys Thr Ile Asp 145 150 Gln Cys Trp Val Ala Asp Glu Leu 165 Asp Asn Val Ala Ile Leu Asn Asp 180 Tyr Ser Phe Asp Gly Ile Arg Ile 195 200 Asp Phe Trp Thr Gly Tyr Ala Glu 210 215 Glu Val Phe Asn Gly Asp Pro Ala 225 230 Leu Pro Ser Leu Ile Asn Tyr Pro 245 Phe Val Ser Lys Ser Lys Gly Phe 260 Ser Asn Arg Asn Ala Phe Glu Asp 275 280 Asp Asn His Asp Asn Pro Arg Phe 290 295 Leu Phe Lys Asn Ala Leu Thr Tyr 305 310 Ile Val Tyr Tyr Gly Ser Glu Gln 325 Ala Asn Arg Glu Val Leu Trp Thr 340 Leu Tyr Gln Phe Ile Lys Thr Val 355 360 Lys Ala Val Tyr Met Asp Ile Tyr 370 375 Lys His Gly Asp Ala Leu Val Val 385 390 Thr Asn Gln Val Ser Phe Ser Val 405 Ser Leu Met Asp Ile Val Ser Asn 420 Gly Thr Val Thr Phe Asn Leu Lys 435 440

Ser Ala 450 <210> 44 <211> 558

Tyr Gly Lys Arg Ala Thr Ser Asp 10 15 Gln Leu Leu Thr Asp Arg Phe Gly 25 30 Cys Ser Asn Leu Ser Asn Tyr Cys 45 Lys His Leu Asp Tyr Ile Ser Gly 60 Ser Pro Ile Pro Lys Asn Ser Asp 75 80 Thr Asp Phe Tyr Gln Leu Asn Ser 90 95 Lys Ala Leu Ile Gln Ala Ala His 105 110 Asp Val Val Ala Asn His Ala Gly 125 Tyr Thr Phe Gly Asp Ala Ser Leu 140 Tyr Asn Asp Gln Thr Ser Ile Glu 155 160 Pro Asp Ile Asp Thr Glu Asn Ser 170 175 Ile Val Ser Gly Trp Val Gly Asn 185 190 Asp Thr Val Lys His Ile Arg Lys 205 Ala Ala Gly Val Phe Ala Thr Gly 220 Tyr Val Gly Pro Tyr Gln Lys Tyr 235 240 Met Tyr Tyr Ala Leu Asn Asp Val 250 255 Ser Arg Ile Ser Glu Met Leu Gly 265 270 Thr Ser Val Leu Thr Thr Phe Val 285 Leu Asn Ser Gln Ser Asp Lys Ala 300 Val Leu Leu Gly Glu Gly Ile Pro 315 320 Gly Phe Ser Gly Gly Ala Asp Pro 330 335 Thr Asn Tyr Asp Thr Ser Ser Asp 345 350 Asn Ser Val Arg Met Lys Ser Asn 365 Val Gly Asp Asn Ala Tyr Ala Phe 380 Leu Asn Asn Tyr Gly Ser Gly Ser 395 400 Ser Gly Lys Phe Asp Ser Gly Ala 410 415 Ile Thr Thr Thr Val Ser Ser Asp 425 430 Asp Gly Leu Pro Ala Ile Phe Thr 445 <212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Hibrido <220>

<221> MISC_CARACTERÍSTICA <222> (1)..(461)

<223> alfa-amilase de Rhizomucor pussilus <220>

<221> MISC_CARACTERÍSTICA <222> (462)..(558) <223> CBD <400> 44

Ser Pro Leu Pro Gln Gln Gln Arg Tyr Gly Lys Arg Ala Thr Ser Asp 1 5 10 15

Asp Trp Lys Ser Lys Ala Ile Tyr Gln Leu Leu Thr Asp Arg Phe Gly

20 25 30

Arg Ala Asp Asp Ser Thr Ser Asn Cys Ser Asn Leu Ser Asn Tyr Cys

35 40 45

Gly Gly Thr Tyr Glu Gly Ile Thr Lys His Leu Asp Tyr Ile Ser Gly

50 55 60

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Gly Gly Tyr His Gly Tyr Trp Ala Thr Asp Phe Tyr Gln Leu Asn Ser

85 90 95

Asn Phe Gly Asp Glu Ser Gln Leu Lys Ala Leu Ile Gln Ala Ala His

100 105 110

Glu Arg Asp Met Tyr Val Met Leu Asp Val Val Ala Asn His Ala Gly

115 120 125

Pro Thr Ser Asn Gly Tyr Ser Gly Tyr Thr Phe Gly Asp Ala Ser Leu

130 135 140

Tyr His Pro Lys Cys Thr Ile Asp Tyr Asn Asp Gln Thr Ser Ile Glu 145 150 155 160

Gln Cys Trp Val Ala Asp Glu Leu Pro Asp Ile Asp Thr Glu Asn Ser

165 170 175

Asp Asn Val Ala Ile Leu Asn Asp Ile Val Ser Gly Trp Val Gly Asn

180 185 190

Tyr Ser Phe Asp Gly Ile Arg Ile Asp Thr Val Lys His Ile Arg Lys

195 200 205

Asp Phe Trp Thr Gly Tyr Ala Glu Ala Ala Gly Val Phe Ala Thr Gly

210 215 220

Glu Val Phe Asn Gly Asp Pro Ala Tyr Val Gly Pro Tyr Gln Lys Tyr 225 230 235 240

Leu Pro Ser Leu Ile Asn Tyr Pro Met Tyr Tyr Ala Leu Asn Asp Val

245 250 255

Phe Val Ser Lys Ser Lys Gly Phe Ser Arg Ile Ser Glu Met Leu Gly

260 265 270

Ser Asn Arg Asn Ala Phe Glu Asp Thr Ser Val Leu Thr Thr Phe Val

275 280 285

Asp Asn His Asp Asn Pro Arg Phe Leu Asn Ser Gln Ser Asp Lys Ala

290 295 300

Leu Phe Lys Asn Ala Leu Thr Tyr Val Leu Leu Gly Glu Gly Ile Pro 305 310 315 320

Ile Val Tyr Tyr Gly Ser Glu Gln Gly Phe Ser Gly Gly Ala Asp Pro

325 330 335

Ala Asn Arg Glu Val Leu Trp Thr Thr Asn Tyr Asp Thr Ser Ser Asp

340 345 350

Leu Tyr Gln Phe Ile Lys Thr Val Asn Ser Val Arg Met Lys Ser Asn

355 360 365

Lys Ala Val Tyr Met Asp Ile Tyr Val Gly Asp Asn Ala Tyr Ala Phe

370 375 380

Lys His Gly Asp Ala Leu Val Val Leu Asn Asn Tyr Gly Ser Gly Ser 385 390 395 400 Thr Asn Gln Val Ser Phe Ser Val Ser Gly Lys Phe Asp Ser Gly Ala 405 410 415 Ser Leu Met Asp 420 Ile Val Ser Asn Ile 425 Thr Thr Thr Val Ser 430 Ser Asp Gly Thr Val 435 Thr Phe Asn Leu Lys 440 Asp Gly Leu Pro Ala 445 Ile Phe Thr Ser Ala 450 Gly Ala Thr Ser Pro 455 Gly Gly Ser Ser Gly 4 60 Ser Val Glu Val Thr Phe Asp Val Tyr Ala Thr Thr Val Tyr Gly Gln Asn Ile Tyr Ile 465 470 475 480 Thr Gly Asp Val Ser Glu Leu Gly Asn Trp Thr Pro Ala Asn Gly Val 485 490 495 Ala Leu Ser Ser 500 Ala Asn Tyr Pro Thr 505 Trp Ser Ala Thr Ile 510 Ala Leu Pro Ala Asp 515 Thr Thr Ile Gln Tyr 520 Lys Tyr Val Asn Ile 525 Asp Gly Ser Thr Val 530 Ile Trp Glu Asp Ala 535 Ile Ser Asn Arg Glu 540 Ile Thr Thr Pro Ala Ser Gly Thr Tyr Thr Glu Lys Asp Thr Trp Asp Glu Ser 545 550 555

<210> 45

<211> 1398

<212> DNA

<213> Meripilus giganteus <220>

<221> CDS

<222> (1) . . (1398)

<400> 45

cgc CCt act gtc ttt gac gcc ggc gcg gac gea cac tcg ctg cat gcc 48 Arg Pro Thr Val Phe Asp Ala Gly Ala Asp Ala His Ser Leu His Ala 1 5 10 15 cgg gcc CCC tcc ggc age aag gat gtc ate ate cag atg ttt gag tgg 96 Arg Ala Pro Ser Gly Ser Lys Asp Val Ile Ile Gln Met Phe Glu Trp 20 25 30 aac tgg gac age gtc gct gcc gag tgc act aac ttc ate ggc CCC gcc 144 Asn Trp Asp Ser Val Ala Ala Glu Cys Thr Asn Phe Ile Gly Pro Ala 35 40 45 ggg tac ggc ttc gtg caa gtg age ccg CCC cag gag acc ate cag ggc 192 Gly Tyr Gly Phe Val Gln Val Ser Pro Pro Gln Glu Thr Ile Gln Gly 50 55 60 gcg cag tgg tgg acc gac tac cag ccg gtg tcg tac acg CtC act ggg 240 Ala Gln Trp Trp Thr Asp Tyr Gln Pro Val Ser Tyr Thr Leu Thr Gly 65 70 75 80 aag cgg ggc gac cgc tcc cag ttt gcg aac atg att act acg tgc cac 288 Lys Arg Gly Asp Arg Ser Gln Phe Ala Asn Met Ile Thr Thr Cys His 85 90 95 gcc gcg ggc gtc ggc gtg ate gtt gac acc ate tgg aac cac atg gcg 336 Ala Ala Gly Val Gly Val Ile Val Asp Thr Ile Trp Asn His Met Ala 100 105 110 ggc gtc gac tcc ggc acg ggt acc gcc ggc tcg tcc ttc acg cac tac 384 Gly Val Asp Ser Gly Thr Gly Thr Ala Gly Ser Ser Phe Thr His Tyr 115 120 125 aac tac CCC ggc ate tac caa aac cag gac ttt cac cac tgc ggc CtC 432 Asn Tyr Pro Gly Ile Tyr Gln Asn Gln Asp Phe His His Cys Gly Leu 130 135 140 gag ccg ggc gat gac ate gtc aac tac gac aac gcg gtt gag gtc cag 480 Glu Pro Gly Asp Asp Ile Val Asn Tyr Asp Asn Ala Val Glu Val Gln 145 150 155 160 acc tgc gag Ctt gtc aac etc gct gac CtC gcc acc gac acg gag tat 528 Thr Cys Glu Leu Val Asn Leu Ala Asp Leu Ala Thr Asp Thr Glu Tyr 165 170 175 gtg cgc ggt cgc Ctt gcc cag tac gga aac gac ctg ctc tcg CtC ggt 576 Val Arg Gly Arg Leu Ala Gln Tyr Gly Asn Asp Leu Leu Ser Leu Gly 180 185 190

gcc gat ggc ctg ogt Ctt gac gct tcc aaa cac att cot gtg ggc gac 624

Ala Asp Gly Leu Arg Leu Asp Ala Ser Lys His Ile Pro Val Gly Asp

195 200 205

ato gcg aac ato ctg tet cgc cto agt cgc tot gtc tac ato aoc oag 672

Ile Ala Asn Ile Leu Ser Arg Leu Ser Arg Ser Val Tyr Ile Thr Gln

210 215 220

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Glu Val Ile Phe Gly Ala Gly Glu Pro Ile Thr Pro Asn Gln Tyr Thr 225 230 235 240

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Gly Asn Gly Asp Val Gln Glu Phe Arg Tyr Thr Ser Ala Leu Lys Asp

245 250 255

gcc ttc ttg age tcg ggc ata tcc aac ctg cag gac ttc gaa aac cgt 816

Ala Phe Leu Ser Ser Gly Ile Ser Asn Leu Gln Asp Phe Glu Asn Arg

260 265 270

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Gly Trp Val Pro Gly Ser Gly Ala Asn Val Phe Val Val Asn Hls Asp

275 280 285

acc gag cgg aac ggc gcg tcg ctg aac aac aac tcg cct tcg aac acc 912

Thr Glu Arg Asn Gly Ala Ser Leu Asn Asn Asn Ser Pro Ser Asn Thr

290 295 300

tac gtc acc gcg acg ate ttc tcg ctc gea cac ccg tac ggc acg ccc 960

Tyr Val Thr Ala Thr Ile Phe Ser Leu Ala His Pro Tyr Gly Thr Pro 305 310 315 320

acg ate ctc tcc tcg tat gat ggc ttc acg aac acc gac gcc ggt gcg 1008

Thr Ile Leu Ser Ser Tyr Asp Gly Phe Thr Asn Thr Asp Ala Gly Ala

325 330 335

ccg aac aac aac gtc ggc aca tgc tcg acc ago ggt ggt gcg aac ggg 1056

Pro Asn Asn Asn Val Gly Thr Cys Ser Thr Ser Gly Gly Ala Asn Gly

340 345 350

tgg ctc tgc cag cac cgc tgg aoc gcg ate gcc ggc atg gtc ggc tto 1104

Trp Leu Cys Gln His Arg Trp Thr Ala Ile Ala Gly Met Val Gly Phe

355 360 365

cgc aac aac gtc ggc age gct gea ctc aac aac tgg cag gcc ccg cag 1152

Arg Asn Asn Val Gly Ser Ala Ala Leu Asn Asn Trp Gln Ala Pro Gln

370 375 380

tcg cag cag att gcg ttc ggt cgc ggc gea ott ggc ttc gtc gcg ato 1200

Ser Gln Gln Ile Ala Phe Gly Arg Gly Ala Leu Gly Phe Val Ala Ile 385 390 395 400

aac aac gcc gac tcg gcc tgg tet acg acg ttc acc act tcc ctc ccc 1248

Asn Asn Ala Asp Ser Ala Trp Ser Thr Thr Phe Thr Thr Ser Leu Pro

405 410 415

gat ggt tcc tac tge gat gtc ate age ggc aag gcc tcc ggc agt age 1296

Asp Gly Ser Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Lys Ala Ser Gly Ser Ser

420 425 430

tgc acc ggt tet tcg ttc ace gtc tcc ggc ggg aag ctg aoc geo acg 1344

Cys Thr Gly Ser Ser Phe Thr Val Ser Gly Gly Lys Leu Thr Ala Thr

435 440 445

gtg ccg gcg cgt age gcc ate geo gtg cac acc ggt cag aaa ggt tet 1392

Val Pro Ala Arg Ser Ala Ile Ala Val His Thr Gly Gln Lys Gly Ser

450 455 460

ggt ggt 1398

Gly Gly 465

<210> 46 <211> 466 <212> PRT

<213> Meripilus giganteus <400> 46

Arg Pro Thr Val Phe Asp Ala Gly Ala Asp Ala His Ser Leu His Ala 1 5 10 15

Arg Ala Pro Ser Gly Ser Lys Asp Val Ile Ile Gln Met Phe Glu Trp 20 25 30 Asn Trp Asp Ser Val Ala Ala Glu Cys Thr Asn Phe Ile Gly Pro Ala 35 40 45 Gly Tyr Gly Phe Val Gln Val Ser Pro Pro Gln Glu Thr Ile Gln Gly 50 55 60 Ala Gln Trp Trp Thr Asp Tyr Gln Pro Val Ser Tyr Thr Leu Thr Gly 65 70 75 80 Lys Arg Gly Asp Arg Ser Gln Phe Ala Asn Met Ile Thr Thr Cys His 85 90 95 Ala Ala Gly Val Gly Val Ile Val Asp Thr Ile Trp Asn His Met Ala 100 105 110 Gly Val Asp Ser Gly Thr Gly Thr Ala Gly Ser Ser Phe Thr His Tyr 115 120 125 Asn Tyr Pro Gly Ile Tyr Gln Asn Gln Asp Phe His His Cys Gly Leu 130 135 140 Glu Pro Gly Asp Asp Ile Val Asn Tyr Asp Asn Ala Val Glu Val Gln 145 150 155 160 Thr Cys Glu Leu Val Asn Leu Ala Asp Leu Ala Thr Asp Thr Glu Tyr 165 170 175 Val Arg Gly Arg Leu Ala Gln Tyr Gly Asn Asp Leu Leu Ser Leu Gly 180 185 190 Ala Asp Gly Leu Arg Leu Asp Ala Ser Lys His Ile Pro Val Gly Asp 195 200 205 Ile Ala Asn Ile Leu Ser Arg Leu Ser Arg Ser Val Tyr Ile Thr Gln 210 215 220 Glu Val Ile Phe Gly Ala Gly Glu Pro Ile Thr Pro Asn Gln Tyr Thr 225 230 235 240 Gly Asn Gly Asp Val Gln Glu Phe Arg Tyr Thr Ser Ala Leu Lys Asp 245 250 255 Ala Phe Leu Ser Ser Gly Ile Ser Asn Leu Gln Asp Phe Glu Asn Arg 260 265 270 Gly Trp Val Pro Gly Ser Gly Ala Asn Val Phe Val Val Asn His Asp 275 280 285 Thr Glu Arg Asn Gly Ala Ser Leu Asn Asn Asn Ser Pro Ser Asn Thr 290 295 300 Tyr Val Thr Ala Thr Ile Phe Ser Leu Ala His Pro Tyr Gly Thr Pro 305 310 315 320 Thr Ile Leu Ser Ser Tyr Asp Gly Phe Thr Asn Thr Asp Ala Gly Ala 325 330 335 Pro Asn Asn Asn Val Gly Thr Cys Ser Thr Ser Gly Gly Ala Asn Gly 340 345 350 Trp Leu Cys Gln His Arg Trp Thr Ala Ile Ala Gly Met Val Gly Phe 355 360 365 Arg Asn Asn Val Gly Ser Ala Ala Leu Asn Asn Trp Gln Ala Pro Gln 370 375 380 Ser Gln Gln Ile Ala Phe Gly Arg Gly Ala Leu Gly Phe Val Ala Ile 385 390 395 400 Asn Asn Ala Asp Ser Ala Trp Ser Thr Thr Phe Thr Thr Ser Leu Pro 405 410 415 Asp Gly Ser Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Lys Ala Ser Gly Ser Ser 420 425 430 Cys Thr Gly Ser Ser Phe Thr Val Ser Gly Gly Lys Leu Thr Ala Thr 435 440 445 Val Pro Ala Arg Ser Ala Ile Ala Val His Thr Gly Gln Lys Gly Ser 450 455 460

Gly Gly 465 <210> 47 <211> 574 <212> PRT

<213> Meripilus giganteus <220>

<221> MISC CARACTERÍSTICA <222> (1)..(477)

<223> alfa-amilase de Meripilus giganteus <220>

<221> MX SC_CARACTERÍ STICA <222> (478). . (574 ) <223> CBD <400> 47

Arg Pro Thr Val Phe Asp Ala Gly Ala Asp Ala His Ser Leu His Ala 1 5 10 15

Arg Ala Pro Ser Gly Ser Lys Asp Val Ile Ile Gln Met Phe Glu Trp

20 25 30

Asn Trp Asp Ser Val Ala Ala Glu Cys Thr Asn Phe Ile Gly Pro Ala

35 40 45

Gly Tyr Gly Phe Val Gln Val Ser Pro Pro Gln Glu Thr Ile Gln Gly

50 55 60

Ala Gln Trp Trp Thr Asp Tyr Gln Pro Val Ser Tyr Thr Leu Thr Gly 65 70 75 80

Lys Arg Gly Asp Arg Ser Gln Phe Ala Asn Met Ile Thr Thr Cys His

85 90 95

Ala Ala Gly Val Gly Val Ile Val Asp Thr Ile Trp Asn His Met Ala

100 105 110

Gly Val Asp Ser Gly Thr Gly Thr Ala Gly Ser Ser Phe Thr His Tyr

115 120 125

Asn Tyr Pro Gly Ile Tyr Gln Asn Gln Asp Phe His His Cys Gly Leu

130 135 140

Glu Pro Gly Asp Asp Ile Val Asn Tyr Asp Asn Ala Val Glu Val Gln 145 150 155 160

Thr Cys Glu Leu Val Asn Leu Ala Asp Leu Ala Thr Asp Thr Glu Tyr

165 170 175

Val Arg Gly Arg Leu Ala Gln Tyr Gly Asn Asp Leu Leu Ser Leu Gly

180 185 190

Ala Asp Gly Leu Arg Leu Asp Ala Ser Lys His Ile Pro Val Gly Asp

195 200 205

Ile Ala Asn Ile Leu Ser Arg Leu Ser Arg Ser Val Tyr Ile Thr Gln

210 215 220

Glu Val Ile Phe Gly Ala Gly Glu Pro Ile Thr Pro Asn Gln Tyr Thr 225 230 235 240

Gly Asn Gly Asp Val Gln Glu Phe Arg Tyr Thr Ser Ala Leu Lys Asp

245 250 255

Ala Phe Leu Ser Ser Gly Ile Ser Asn Leu Gln Asp Phe Glu Asn Arg

260 265 270

Gly Trp Val Pro Gly Ser Gly Ala Asn Val Phe Val Val Asn His Asp

275 280 285

Thr Glu Arg Asn Gly Ala Ser Leu Asn Asn Asn Ser Pro Ser Asn Thr

290 295 300

Tyr Val Thr Ala Thr Ile Phe Ser Leu Ala His Pro Tyr Gly Thr Pro 305 310 315 320

Thr Ile Leu Ser Ser Tyr Asp Gly Phe Thr Asn Thr Asp Ala Gly Ala

325 330 335

Pro Asn Asn Asn Val Gly Thr Cys Ser Thr Ser Gly Gly Ala Asn Gly

340 345 350

Trp Leu Cys Gln His Arg Trp Thr Ala Ile Ala Gly Met Val Gly Phe

355 360 365

Arg Asn Asn Val Gly Ser Ala Ala Leu Asn Asn Trp Gln Ala Pro Gln

370 375 380

Ser Gln Gln Ile Ala Phe Gly Arg Gly Ala Leu Gly Phe Val Ala Ile 385 390 395 400

Asn Asn Ala Asp Ser Ala Trp Ser Thr Thr Phe Thr Thr Ser Leu Pro

405 410 415

Asp Gly Ser Tyr Cys Asp Val Ile Ser Gly Lys Ala Ser Gly Ser Ser

420 425 430

Cys Thr Gly Ser Ser Phe Thr Val Ser Gly Gly Lys Leu Thr Ala Thr 435 440 445 Val Pro Ala Arg Ser Ala Ile Ala Val His Thr Gly Gln Lys Gly Ser

450 455 460 Gly Gly Gly Ala Thr Ser Pro Gly Gly Ser Ser Gly Ser Val Glu Val 465 470 475 480 Thr Phe Asp Val Tyr 485 Ala Thr Thr Val Tyr 490 Gly Gln Asn Ile Tyr 495 Ile Thr Gly Asp Val Ser Glu Leu Gly Asn Trp Thr Pro Ala Asn Gly Val 500 505 510 Ala Leu Ser 515 Ser Ala Asn Tyr Pro 520 Thr Trp Ser Ala Thr 525 Ile Ala Leu Pro Ala 530 Asp Thr Thr Ile Gln 535 Tyr Lys Tyr Val Asn 540 Ile Asp Gly Ser Thr Val Ile Trp Glu Asp Ala Ile Ser Asn Arg Glu Ile Thr Thr Pro 545 550 555 560 Ala Ser Gly Thr Tyr 565 Thr Glu Lys Asp Thr 570 Trp Asp Glu Ser

Claims (31)

1. Processo para desengomar um pano engomado contendo amido ou derivados de amido durante a manufatura de um pano, caracterizado pelo fato de compreender incubar o citado pano engomado em uma solução aquosa de tratamento possuindo um pH dentro da faixa de entre 1 e 5 cuja solução aquosa de tratamento compreende uma alfa-amilase.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o pH está dentro da faixa de entre pH 1 e 4, especialmente entre pH 2 e 4.

3. Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase é de origem bacteriana ou fúngica, tal como de origem de fungo filamentoso.

4. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações de - 1-3, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase é uma alfa-amilase ácida.

5. Processo de acordo com a reivindicação 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase é uma derivada de uma cepa de Aspergillus, preferivelmente Aspergillus niger, Aspergillus awamorii ou Aspergillus oryzae, ou uma cepa de Rhizomucor, preferivelmente Rhizomucor pusillus, ou uma cepa de Meripilus, preferivelmente uma cepa de Meripilus giganteus.

6. Processo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase de Aspergillus é a alfa-amilase ácida de Aspergillus niger descrita em SEQ ID NO: 38, ou uma sua variante.

7. Processo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase de Rhizomucor é a alfa-amilase de Rhizomucor pusillus descrita em SEQID NO: 43, ou uma sua variante.

8. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1- - 7, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase, preferivelmente uma alfa- amilase ácida está presente em uma concentração de 1-3.000 AFAU/kg de pano, preferivelmente de 10-1.000 AFAU/ kg de pano, especialmente de 100- - 500 AFAU/kg de pano ou 1-3.000 AFAU/1 de solução de tratamento, preferivelmente de 10-1.000 AFAU/1 de solução de tratamento, especialmente de 100-500 AFAU/1 de solução de tratamento.

9. Processo de acordo com as reivindicações 1-8, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase bacteriana é derivada de uma cepa do gênero Bacillus, preferivelmente derivada de uma cepa de Bacillus sp., com maior preferência de uma cepa de Bacillus licheniformis, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis, ou Bacillus sp., tal como Bacillus sp. NCIB 12289, NCIB 12512, NCIB 12513, DSM - 9375, DSMZ 12648, DSMZ 12649, KSM AP1378, KSM K36 ou KSM K38.

10. Processo de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase bacteriana é a alfa-amilase AA560 descrita como SEQID NO: 40.

11. Processo de acordo com a reivindicação 9 ou 10, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase de Bacillus possui uma ou mais deleções nas posições Dl83 e Gl84, preferivelmente no qual a citada variante de alfa-amilase de Bacillus adicionalmente possui uma substituição na posição N195F (usando a numeração da SEQ ID NO: 40).

12. Processo de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase de Bacillus possui uma ou mais deleções nas posições Dl 83 e Gl 84, preferivelmente no qual a citada alfa-amilase de Bacillus adicionalmente possui uma ou mais das seguintes substituições: R118K, N195F, R320K, R458K, especialmente no qual a variante possui as seguintes mutações: A(D183+G184)+R118K+N195F+R320K+R458K (usando a numeração da SEQID NO: 40).

13. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações - 1-12, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase está presente em uma concentração de 0,05-150 KNU/1 de solução de tratamento, preferivelmente, - 1-100 KNU/1 de solução de tratamento, especialmente 2-20 KNU/1 de solução de tratamento ou 0,05-150 KNU/kg de pano, preferivelmente,l-100 KNU/kg de pano, especialmente 2-20 KNU/kg de pano.

14. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações - 1-13, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase é uma enzima híbrida compreendendo um domínio ligante de carboidrato (CBD).

15. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações - 1-14, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase compreende um domínio ligante de amido de origem bacteriana ou fungica.

16. Processo de acordo com a reivindicação 14 ou 15, caracterizado pelo fato de que o domínio ligante de carboidrato (CBD) é derivado de uma cepa de Aspergillus, preferivelmente derivado de uma cepa de Aspergillus sp., de uma cepa de Athelia, ou de uma cepa de Talaromyces.

17. Processo de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a seqüência de aminoácidos do domínio ligante de carboidrato (CBD) é derivada de Aspergillus kawachii, tal como o CBD possuindo a seqüência de aminoácidos mostrada em SEQ ID NO: 2, ou a seqüência de aminoácidos do domínio ligante de carboidrato (CBD) é derivada de Aspergillus niger, preferivelmente o CBD possuindo a seqüência de aminoácidos mostrada em SEQID NO: 20, ou a seqüência de aminoácidos do domínio ligante de carboidrato (CBD), derivada de Athelia sp., preferivelmente de Athelia rolfsii, especialmente a seqüência de aminoácidos de CBD mostrada em SEQID NO: 21.

18. Processo de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase compreendendo um CBD compreende um ligador entre a alfa amilase e o CBD ou o domínio ligante de amido.

19. Processo de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o ligador é derivado de uma cepa de Athelia, preferivelmente um ligador de glicoamilase de Athelia rolfsii (SEQ ID NO: 24), uma cepa de Aspergillus, preferivelmente um ligador de glicoamilase de Aspergillus niger (SEQ ID NO: 22) ou um ligador de alfa-amilase de Aspergillus kawachii (SEQID NO: 23).

20. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações - 1-19, caracterizado pelo fato de que a alfa-amilase é a alfa-amilase híbrida mostrada em SEQ ID NO: 44 compreendendo um domínio catalítico (CD) de alfa-amilase de Rhizomucor pusillus possuindo um domínio ligante de carboidrato (CBD) de glicoamilase de Alhelia rolfsii.

21. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações - 1 -20, caracterizado pelo fato de ser realizado em uma temperatura dentro da faixa de 5-90°C, em particular de 20°C a 90°C.

22. Processo de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de ser realizado em uma temperatura entre 20°C e 40°C por um período de tempo adequado, preferivelmente entre 8 horas e 24 horas.

23. Processo de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de ser realizado em uma temperatura entre 40°C e 90°C por um período de tempo adequado, preferivelmente entre 1 hora e 6 horas.

24. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações - 1-23, caracterizado pelo fato de ser realizado na presença de um tensoativo, preferivelmente o tensoativo está presente em uma concentração de 0,1-10 g/l, preferivelmente ao redor de 1 g/l.

25. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações - 1-24, caracterizado pelo fato de que o pano é feito de fibras de origem natural ou sintética.

26. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações - 1-25, caracterizado pelo fato de que o pano é pano de algodão, brim, linho, rami, viscose, liocel, ou acetato de celulose.

27. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações - 1-26, caracterizado pelo fato de que o pano é feito de fibras de origem animal, em particular de seda ou de lã.

28. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações - 1-27, caracterizado pelo fato de que o pano é feito de fibras de poliéster de origem natural ou sintética, tal como poli(tereftalato de etileno) ou poli(ácido lático).

29. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações - 1-28, caracterizado pelo fato de que o pano é feito de náilon, acrílico, ou poliuretano.

30. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações - 1-29, caracterizado pelo fato de que o pano é um pano ou uma peça de roupa contendo poliéster que consiste essencialmente de 100% poliéster.

31. Processo de acordo com as reivindicações 1-30, caracterizado pelo fato de que o pano de poliéster é uma mescla de poliéster, tal como mescla de poliéster e celulose, incluindo mesclas de poliéster e algodão; uma mescla de poliéster e lã; uma mescla de poliéster e seda; uma mescla de poliéster e acrílico; uma mescla de poliéster e náilon; uma mescla de poliéster, náilon e poliuretano; uma mescla de poliéster e poliuretano, raiom (viscose), acetato de celulose e tencel.