BRPI0513133B1 - composição farmacêutica e usos de diaminooxidase - Google Patents

Abstract

composições farmacêuticas, que contêm diaminooxidase. a presente invenção refere-se às composições farmacêuticas, composições de suplemento alimentício e cosméticas abrangendo diaminooxidase e seu uso.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICAE USOS DE DIAMINOOXIDASE". A presente invenção refere-se a composições para o tratamento ou para a prevenção de doenças e estados patológicos induzidos pela his-tamina. A histamina (1 H-imidazoM-etilamina) origina-se pela descarbo-xilação enzimática de histidina e desse modo, é uma amina biogênica básica com um peso molecular de 111 Da. A histamina ocorre praticamente ubiquitária no organismo. Ela é produzida pelo próprio ser humano e é armazenada nos grânulos metacro-máticos dos mastócitos e leucócitos basófilos em forma inativa, onde está à disposição para a imediata liberação. As maiores concentrações de histamina são medidas no pulmão. Após a liberação, a histamina é um mediador extremamente potente de um sem-número de processos fisiológicos e pato-fisiológicos, muitas vezes também através da interação com citoquinas.

Além disso, a histamina também pode chegar no corpo por fora, por um lado, através da inspiração ou então, pelo processo oral, por exemplo, através da absorção de alimentos contendo histamina, tais como queijo, vinho, pescados em conserva e chucrute.

As funções e efeitos mais importantes da histamina no corpo humano ou animal são: 1) dilatação dos capilares, aumento da permeabilidade capilar e queda da pressão sangüínea. 2) Contrações da musculatura lisa, entre outras, dos músculos bronqui-ais no pulmão. 3) Indução de uma elevada secreção do ácido gástrico. 4) Aumento da freqüência cardíaca. 5) A histamina é o mediador da reação do tipo alérgico imediato, é o mediador mais importante nas doenças alérgicas, tal como rinite alérgica (febre do feno) e asma brônquica. 6) Além disso, a histamina é o desencadeador clássico de uma urticária (eczema) e tem papel importante nas alergias medicamentosas ou incompatibilidades.

Altas concentrações de histamina de livre circulação provocam efeitos indesejáveis tais como cefaléias, nariz congestionado ou escorrendo, obstruções das vias respiratórias, taquicardia bem como extrassístoles, além disso, dores estomacais e intestinais, que podem levar a fezes moles até diarréias e hipotonia. Muitas vezes também são descritos inchaços das pálpebras, eventualmente também exantemas por urticária. Além disso, podem ocorrer rubefações da pele, queda da pressão sangüínea e broncoespas-mos. A seguinte tabela mostra os sintomas em função da concentração de histamina no sangue.

No organismo de mamíferos a histamina é degradada por duas enzimas: diaminooxidase {DAO, EC 14.3.6) e histamina-N-metiltransferase (NMT, EC 2.11.8) (Mizugushi et al. 1994). A DAO catalisa a desaminação oxidativa da histamina para imidazolacetaldeído; NMT catalisa a N-metilação para N-metil-histamina.

Ambos os processos de degradação são essenciais para o organismo: a DAO remove a histamina, que por exemplo, através do alimento foi absorvida no trato gastrointestinal, a NMT controla a transmissão de sinal histaminérgico no sistema nervoso (Kitanaka et al. 2002). O principal objetivo da DAO é evitar, que a histamina absorvida através do alimento vá do intestino para a circulação sangüínea. Caso esse mecanismo de proteção falhe, pode ocorrer em caso extremo, também um choque anafilático (Taylor 1986, Niisson et al. 1996). A DAO é uma proteína de secreção e por isso, trabalha de modo extracelular, ao contrário da N-metiltransferase, que é exclusivamente ativa no citosol (Küfner et al. 2001). A DAO nativa, que além da histamina pode degradar outras aminas biogênicas, tais como por exemplo, putrescina, espermidina e cadave-rina e que é obtida, por exemplo, a partir de rim de porco, é uma glicoproteí-na que contêm cobre homodímera, na qual as subunidades estão ligadas através de pontes de dissulfeto. A DAO tem um peso molecular de cerca de 182 kDa (Kluetz and Schmidt 1997, Rinaldi et al. 1982) e uma fração de car-boidrato de cerca de 11% (Shah and Ali 1988). A enzima pertence à classe das aminooxidases que contêm cobre, as quais catalisam a desaminação oxidativa de aminas primárias para aldeídos, amoníaco e peróxido de hidrogênio de acordo com o seguinte esquema de reação geral (Bachrach 1985): RCH2NH2 + H20 + 02 => RCHO + NH3 + H20, em que o radical R contém um grupo amino.

Para as aminooxidases que contêm cobre é característico, uma topaquinona no centro ativo, que se forma pela modificação pós-translacio-nal de um radical tirosina conservado (James et al. 1992, Mu et al. 1992). A DAO é encontrada principalmente no intestino delgado, no fígado, nos rins e no sangue nas células sanguíneas brancas. Nas grávidas, a DAO é adicionalmente formada na placenta. Grávidas têm um nível de san-gue-DAO cerca de 500 até 1000 vezes maior do que não grávidas. A DAO é produzida continuamente e excretada para o lume intestinal. Por isso, no ser humano sadio, o alimento rico em histamina já é amplamente libertado da histamina no intestino. A histamina remanescente é degradada da DAO ali encontrada durante a passagem através da mucosa intestinal. A histamina é decomposta em imidazolacetaldeído e depois em ácido imidazol-acetacético. Os co-fatores da DAO são 6-hidroxidopa e provavelmente fosfato de pirido-xal, a vitamina B6. A DAO é uma enzima sensível, que pode ser inibida por diversas substâncias, tais como por outras aminas biogênicas, álcool e seu produto de degradação acetaldeído e diferentes medicamentos. Até agora não foi comprovada nenhuma atividade da DAO no tecido neuronal.

Tal como já foi citado acima, a histamina estranha ao corpo, absorvida por meio dos alimentos, mas também histamina própria do corpo, pode provocar uma variedade de distúrbios devido às reações alérgicas.

Com respeito à valorização clínica, destacam-se com isso, pelo menos três formas de uma intolerância à histamina na base de uma baixa atividade de DAO: - poucas pessoas têm uma deficiência de DAO de nascimento e também não a perdem. - Durante uma infecção da mucosa intestinal, pode ocorrer uma deficiência passageira de DAO. Após a cura da infecção, a atividade da DAO também se normaliza. - No âmbito da administração de diversas substâncias inibidoras de atividade, pode ocorrer de forma exógena uma pequena atividade de DAO. Nessa incluem-se prioritariamente álcool e seu produto de degradação acetaldeído, certos alimentos ricos em amina e muitos medicamentos.

Em todos os casos, os sintomas inicialmente descritos ocorrem de forma mais ou menos maciça e na maioria dos casos, não podem ser coordenados de maneira simples. Um breve esclarecimento da atividade funcional da enzima permite uma terapia rápida e simples e a disposição de um plano de dieta correspondente.

Um motivo freqüente para o aparecimento de intolerância à histamina é a sensibilidade da enzima perante um sem-número de substâncias químicas. Muitas dessas ocorrem em diversos medicamentos. Os inibidores de DAO mais importantes são acriflavina, diazepan, N-metil-N-formil-hidra-zina, b-aminopropionitrilas, dimaprit, O-metil-hidroxilamina, agmantina, eta-nol (10%), pargilina, aldomet, furosemida, fenamil, amilorid, guanabenz, fe-nelzin, aminoguanidina, guanfacina, fenformina, amitriptilina, guanidina, feni-prazin, amodiaquin, haloperidol, prometiazina, anserin, Hyamin 1622, pro-pranolol, aziridinilalquilaminas, hidroxicloroquin, B1 pirimidina, hidroxilamina, quinacrin, burimamid, impromidin, semicarbazida, cadaverina, derivados de imidazol, tiamina, carnosina, iproniazida, tioridazin, clorotiazid, isocarboxa-zid, tranilcipramina, clorpromazina, isoniazida, trimetoprim, cimetidina, meti-amid, triptamina, clonidina, metronidazol, tiramina, cianida, nazlinin (alcalóide), diaminas (também histamina) e Nt-metil-histamina.

No WO 02/43745 é publicado o uso sistêmico de DAO de origem vegetal para o tratamento de doenças relacionadas à histamina. A administração de DAO ou de enzimas de modo geral, que são diretamente isoladas de plantas, é muito problemática com base na freqüente ocorrência de alergênicos em plantas, principalmente considerando o fato, de que as le-guminosas publicadas no WO 02/43745 apresentam um forte potencial aler-gênico. O objetivo da presente invenção é pôr composições à disposição para o tratamento e para a prevenção de doenças e estados patológicos induzidos pela histamina, que não apresentam os efeitos colaterais dos produtos encontrados no mercado, que abrangem principalmente cortisona e afastam as desvantagens do estado da técnica citado acima. Um outro objeto da presente invenção é aumentar a concentração de diaminooxidase ativa no corpo, especialmente no trato intestinal, de um indivíduo, para assim, auxiliar ou possibilitar a degradação de histamina transportada exogeneamente (por exemplo, através de alimento).

Por conseguinte, a presente invenção refere-se às composições farmacêuticas para o tratamento de doenças induzidas pela histamina, abrangendo diaminooxidase, sendo que a composição se apresenta em uma forma de dosagem para a administração por via epidérmica, oral, peroral ou sublingual como hidrogel, péletes resistentes ao suco gástrico, gotas, especialmente colírios e gotas nasais ou comprimidos, composições de suplementos alimentícios ou comestíveis dietéticos e composições cosméticas, compreendendo diaminooxidase. A diaminooxidase apresenta-se nas composições de acordo com a invenção, essencialmente em sua forma ativa, isto é, enzimas, que por exemplo, não apresentam cobre em seu grupo pros-tético e não mostram pelo menos atividade de tipo desordenado, não são adequadas para os usos de acordo com a invenção. A composição farmacêutica de acordo com a invenção, apresenta uma forma de dosagem, que possibilita uma administração selecionada do grupo formado de epidérmico, oral, peroral e sublingual. A administração epidérmica de DAO é principalmente vantajosa nas doenças ou estados patológicos induzidos pela histamina na superfície da pele ou nas camadas externas da pele, pois com isso, podem ser tratadas eficientemente, por exemplo, reações alérgicas resultantes de um contato da pele com um aler-gênico. Do mesmo modo é impedido o prurido, que é provocado em diferentes doenças, tais como urticária, eczema atópico e similares através da liberação de histamina. Através da administração oral e perora! da composição de acordo com a invenção, é possível levar a DAO para o trato gastrointestinal de um indivíduo e ali impedir ou tratar eficientemente as doenças induzidas pela histamina por meio da degradação de histamina. Com isso, o âmbito do efeito da DAO é limitado principalmente ao trato gastrointestinal, pois o alto teor de ácido no estômago atua negativamente sobre a atividade da DAO. Por isso, na administração oral ou peroral é necessário proteger a DAO contra o ácido gástrico até alcançar o trato intestinal. Se ao contrário, a DAO é administrada por via sublingual, a enzima é rapidamente absorvida na boca pela mucosa bucal e distribuída na circulação sangüínea. Com isso, é possível transportar a DAO de modo rápido e simples para a circulação sangüínea, sem que a enzima precise ser transportada por via intravenosa ou intacta através do estômago até o intestino, o que retarda um rápido início do efeito da enzima. A composição farmacêutica é disponibilizada em uma forma de dosagem, selecionada do grupo formado de hidrogel, péletes resistentes ao suco gástrico, gotas, especialmente colírios e gotas nasais, comprimidos e cápsulas. De acordo com a presente invenção, é possível converter a DAO por métodos de processamento correspondentemente conhecidos no estado da técnica em formas de dosagem farmacêuticas. Por isso, as composições farmacêuticas, que contêm a DAO, também contêm outras substâncias constitutivas, que são usadas, por um lado, para estabilizar a enzima e por outro lado, para levar a enzima para a forma galênica correspondente. Natu-raimente, a DAO também pode ser administrada com outras substâncias ativas farmacêuticas junto em uma única forma de dosagem ou separada, conquanto a enzima não seja inibida por uma dessas substâncias ativas de modo tal, que uma atividade da enzima não desenvolva o efeito desejado.

As composições de hidrogel compreendendo DAO de acordo com a invenção, apresentam preferentemente uma viscosidade de 0,5 até 5 cm (centipoise), de modo ainda mais preferido, de 1 até 2 cp, especialmente 1,1 até 1,6 cp, com uma velocidade de cisalhamento de 41 seg'1, sendo que a medição pode ser realizada com viscosímetros conhecidos no estado da técnica. Foi verificado, que particularmente nessas faixas de viscosidade a composição de hidrogel contendo DAO apresenta características vantajosas (por exemplo, poder de espalhamento tópico, bom manuseio). Em uma viscosidade mais baixa de 0,5 cp, a composição de hidrogel comprovou-se como sendo muito líquida para possibilitar um manuseio agradável do preparado. Como formadores de gel, utilizam-se preferentemente, poliacrilatos (por exemplo, carbopol), derivados de celulose ou celulose modificada, especialmente hidroxietilcelulose (por exemplo, natrosol), metilcelulose, hidroxipro-pilmetilcelulose e hidroximetilcelulose, amido e amido modificado, borrachas naturais e sintéticas, tal como por exemplo, tragacanto, guar, carragenina, gelatina, alginato de sódio, PVP, álcool polivinílico e misturas dos mesmos. De modo particularmente preferido, utiliza-se como formador de gel a hidroxietilcelulose (por exemplo, natrosol), sendo que especialmente o natrosol do tipo 250 HHR já em baixa concentração, apresenta estabilidade particularmente boa. O pH da composição de hidrogel importa preferentemente em 7,0 até 9,0, preferentemente em 7,2 até 8,5, de modo ainda mais preferido, de 7,5 até 8,0. Essa faixa de pH é preferentemente ajustada com um tampão, especialmente com um tampão bis/tris, sendo que para a manutenção da atividade e estabilidade enzimática da DAO podem ser acrescentados outros sais (por exemplo, 20-300 mM, preferentemente 50 até 200 mM, especialmente 100 mM, de NaCI). Caso a concentração total dos sais seja inferior a 20 mM, a DAO apresenta uma pior estabilidade, que pode levar a uma perda de atividade.

Além disso, na composição de hidrogel de acordo com a invenção, também podem ser acrescentados conservantes, que impedem essencialmente o crescimento de microorganismos na composição. Neste caso, é importante selecionar os conservantes de modo tal, que as substâncias an-tímicrobianas não inibam a atividade da DAO de tal maneira, que sua ativi- dade enzimática não seja mais suficiente, para alcançar o objetivo da presente invenção (degradação de histamina). Através de testes de atividade, que são realizados com DAO e o conservante, tais substâncias podem ser identificadas. Preferentemente, utilizam-se clorhexidina, parabeno (éster de ácido para-hidroxi-benzóico, especialmente butila-, etila-, metila- ou propil-parabeno), benzoatos (por exemplo, benzoato de Na), sorbatos (por exemplo, sorbato de K), carbamatos (por exemplo, iodopropinilbutilcarbamato) e combinações dos mesmos (por exemplo, Rokosonal = mistura de benzoato de Na, sorbato de K e iodopropinilbutilcarbamato) como conservante. Particularmente, preferem-se composições de hidrogel, que compreendem natro-sol como formador de gel e Rokosonal e/ou parabenos como conservantes. Naturalmente, de acordo com a invenção, também podem ser acrescentados odorizantes e aromatizantes, que são usados, por exemplo, na indústria cosmética.

Um outro aspecto da presente invenção, refere-se à composição de suplementos alimentícios ou a um comestível dietético (DLM), que e/são adaptado(s) como pélete, gota ou infusão resistente ao suco gástrico. A administração oral de DAO por meio de um alimento, suplemento alimentar ou comestível dietético prevê, que essa enzima alcance cada região do corpo, no qual ela deve desenvolver seu efeito. Já que a histamina tem um papel significativo no trato intestinal, é necessário, que a DAO seja adaptada ou prevista de tal maneira, que ela possa passar inofensivamente pelo estômago contendo muito ácido. Preferentemente, neste caso, a DAO é processada como pélete resistente ao suco gástrico.

Pelo fato, de que a DAO com um pH abaixo de 3 é irreversivel-mente danificada (o pH no estômago encontra-se entre pH 2 e 4), é necessário, para transportar a DAO através do estômago para o trato intestinal, que a DAO esteja prevista em uma forma de dosagem correspondente (composição farmacêutica ou de suplemento alimentar ou comestível dietético). De acordo com a invenção, as cápsulas (por exemplo, cápsulas de gelatina) e especialmente péletes resistentes ao suco gástrico foram comprovados como sendo particularmente vantajosos. É vantajoso, que o efeito da DAO inicie o mais tardar em 15, preferentemente o mais tardar em 20, especialmente o mais tardar em 30 minutos após a administração.

De acordo com a invenção, designa-se como "resistente ao suco gástrico" a característica do pélete, de poder proteger a substância ativa (por exemplo, DAO) contida no mesmo na ação de um suco gástrico ou de uma solução que apresenta características comparáveis como o suco gástrico (por exemplo, ácido) durante um determinado espaço de temperatura de pelo menos 10, preferentemente de pelo menos 20, de modo ainda mais preferido, de pelo menos 30, especialmente pelo menos 60 minutos de modo tal, que a substância ativa experimente uma perda de atividade de no máximo 50%, preferentemente de no máximo 40%, de modo ainda mais preferível, de no máximo 30%, do modo mais preferido, no máximo 20%, especialmente no máximo 10%.

Preferentemente, o pélete de acordo com a invenção, libera após 20 minutos, especialmente após 30 minutos, pelo menos 60%, especialmente pelo menos 80%, da atividade DAO, que foi empregada para a formulação do pélete, no intestino. Péletes resistentes ao suco gástrico são péletes, que são envolvidos por um revestimento resistente ao suco gástrico, que se dissolvem em um pH tal como o encontrado no trato intestinal. Isto é, os revestimentos dissolvem-se desse modo, preferentemente com um pH de pelo menos 4 e no máximo 10. Eudragit, por exemplo, um revestimento resistente ao suco gástrico à base de polímeros aniônicos de ácido metacrílico e metacrilatos, contém -COOH como grupo funcional e dissolve-se na faixa de pH de 5,5 até pH 7. Alternativamente ao Eudragit, podem ser utilizados goma-laca ou amido acetilado (por exemplo, Amprac 01). Já que os revestimentos resistentes ao suco gástrico conhecidos no estado da técnica, apresentam diferentes características (por exemplo, pH no qual o revestimento se dissolve, velocidade de dissolução), os materiais dos revestimentos também podem ser combinados. Goma-laca, por exemplo, mostra uma boa resistência ao ácido, todavia, dissolve-se muito devagar no trato intestinal. Ao contrário, Amprac 01 dissolve-se rapidamente no meio intestinal, no entanto, não mostra uma resistência satisfatória ao ácido. Para compensar as desvantagens de um material, os dois materiais mencionados acima podem ser misturados, por exemplo, em uma proporção de peso de 60-95/40-5, preferentemente de 70-90/30-10, goma-laca/Amprac 01. Um outro parâmetro que influencia a velocidade de liberação da substância ativa, é a espessura de camada do pélete resistente ao suco gástrico. A espessura de camada, expressa como proporção de massa, neste caso, é de 5 até 30%, de modo ainda mais preferido, 10 até 20% da massa total do produto final. Os péletes apresentam preferentemente um diâmetro médio de 0,5 até 5 mm, especialmente de 0,7 até 2 mm. Um tal tamanho tem a vantagem, de que os péletes podem passar rapidamente pelo estômago. A fabricação dos péletes de acordo com a invenção, que são usados tanto na composição farmacêutica de acordo com a invenção, quanto também na composição do suplemento alimentar de acordo com a invenção ou no comestível dietético, é preferentemente efetuada com um extru-sor, que torna necessária uma estabilidade térmica das substâncias constitutivas da composição, especialmente da substância ativa DAO, de até 60°C (Stricker Arzneiformentwicklung, Springer Verlag 2003). Além de um revestimento resistente ao suco gástrico e da DAO, os péletes podem abranger outras substâncias aditivas farmacêuticas. Por exemplo, a celulose micro-cristalina (por exemplo, Avicel) serve como material de enchimento e material de intumescimento. A celulose é insolúvel em água, nesta forma tem frações tanto cristalinas, quanto também amorfas. Essa combinação causa uma deformabilidade plástica, isto é, que com uma força suficientemente alta, ocorre uma alteração irreversível da forma. Essa é uma condição essencial para a pelotização no extrusor e esferômetro. Na granulação úmida a celulose microcristalina absorve grandes quantidades de água e com isso, também sem adição de adesivo, torna-se uma massa coesa, comprimível. A quantidade de celulose microcristalina em um pélete pode importar de acordo com a invenção, entre 5 e 70%, preferentemente entre 10 e 60%, de modo ainda mais preferível, entre 15 e 50%. A sacarose pode ser usada como adesivo e agente de enchimento. A sacarose aumenta a solubilidade da ma- triz e com isso, auxilia a rápida liberação da enzima. De acordo com a invenção, a sacarose pode ser acrescentada a um pélete em 1 até 40%, preferen-temente 5 até 35%, de modo ainda mais preferível, de 10 até 30%. Do mesmo modo, a hidroxipropilcelulose (acrescentada em uma quantidade de pre-ferentemente 0,5 até 10%) pode ser acrescentada ao adesivo e serve para evitar pó fino. Além disso, a hidroxipropilcelulose aumenta a estabilidade do pélete e desse modo, contribui novamente para aumentar o rendimento. Amido de milho pode ser acrescentado ao pélete de acordo com a invenção, como agente de enchimento e de aspersão (em uma quantidade preferida de 1 até 30%). Como substância insolúvel em água, o amido pode absorver muita água e por isso, é um agente de aspersão ideal. Crosscarmelose (NA-CMC; Acdisol) é um agente de aspersão puro, que pode ser preferentemen-te usado em uma quantidade entre 1% e 5%. Uma fração muito grande de Acdisol leva a uma decomposição precoce dos péletes já no arredondamento e por isso, é contraproducente Crospovidone, um PVP reticulado transverso, também é insolúvel em água e do mesmo modo, serve como agente de aspersão. Com base em suas características polímeras, ele auxilia o melhor arredondamento na fabricação de péletes (pode ser preferentemente acrescentado em uma quantidade de 0,5 até 10%). Povidona é uma substância aditiva hidrossolúvel e serve como adesivo. A combinação desses diferentes agentes de enchimento, agentes de aspersão e adesivos leva a uma divisão dispersa molecular da DAO no pélete e assegura uma rápida biodisponibilidade.

Entre o revestimento resistente ao estômago e o pélete com a substância ativa pode ser prevista uma camada isoladora de glicerina e/ou talco. A glicerina serve como agente de manutenção de umidade, para impedir uma desidratação e com isso, inativação da enzima.

Alternativamente ao pélete, a DAO também pode ser transportada em cápsulas através do estômago para o trato intestinal. Neste caso, as cápsulas adequadas são por exemplo, cápsulas de gelatina ou cápsulas de amido. As cápsulas também podem conter os péletes de acordo com a invenção.

Um outro aspecto da presente invenção refere-se a uma composição cosmética, abrangendo diaminooxidase, que se apresenta em uma forma de dosagem cosmética, especialmente como hidrogel, pomada, spray ou gotas. Com maior carga de histamina ou em contato com substâncias alergênicas (por exemplo, no caso de alergias de contato ou neurodermite), podem ocorrer reações corporais em pontos visíveis do corpo, que podem ser suprimidas pela administração de DAO em composições cosméticas. Além disso, as composições cosméticas, contendo DAO, podem apresentar outras substâncias constitutivas conhecidas no estado da técnica, que são usadas na fabricação de produtos cosméticos. Composições cosméticas, que compreendem hidrogel,apresentam essencialmente as mesmas características ou contêm essenciaimente as mesmas substâncias constitutivas como hidrogéis de uma composição farmacêutica de acordo com a invenção.

Preferentemente, a diaminooxidase, que é usada nas composições de acordo com a invenção, não é de origem vegetal. O uso de DAO de origem não vegetai em composições farmacêuticas e cosméticas, bem como em suplementos alimentícios e comestíveis dietéticos tem a vantagem, de que o alergênico que ocorre em plantas não influencia negativamente a administração de DAO, pois os alergênicos promovem essencialmente a distribuição de histamina própria do corpo. Sabe-se, que principalmente substâncias vegetais são responsáveis por doenças induzidas pela histamina. A inteira remoção de substâncias constitutivas causadoras de alergias de uma preparação de DAO de origem vegetal, é possível apenas com um alto gasto preparatório, ao contrário, a DAO de acordo com a invenção, que apresenta uma origem não vegetal, é inteiramente isenta desses alergênicos vegetais.

De acordo com a presente invenção, abrangem-se por "origem não vegetal" todas as DAO, que não são obtidas de plantas, mas sim, de organismos animais ou de outros organismos não vegetais. Além disso, sob esta definição recaem de acordo com a invenção, todas as DAO, que são produzidas recombinantes em culturas de células (animais, bacterianas, leveduras e similares) ou em organismos não vegetais de qualquer gênero, sendo que o DNA para DAO de organismos vegetais e/ou animais produzida de forma recombinante é isolado por meio de métodos conhecidos no estado da técnica e é clonado e exprimido em sistemas de expressão.

Preferentemente, todas as composições publicadas na presente i invenção abrangem diaminooxidase de origem animal. Através do uso de DAO animal, é possível aduzir ao corpo humano ou animal uma enzima, que se assemelha muito à própria enzima produzida por esses indivíduos com relação à glicosilação, atividade e especificidade da DAO produzida pelo próprio indivíduo. Além disso, é possível excluir os alergênicos vegetais em i sua totalidade da produção de DAO.

Preferentemente, a diaminooxidase é obtida de rins de porcos. Rins de porcos destacam-se principalmente pelo seu alto teor de DAO. A partir do rim do porco a enzima pode ser isolada de maneira simples com os métodos conhecidos no estado da técnica, i De acordo com uma outra forma de realização preferida, as composições de acordo com a invenção, abrangem diaminooxidase de origem recombinante. Através da produção recombinante de DAO é possível produzir grandes quantidades de enzima e purificar essa enzima com um rendimento elevado. i Preferentemente, a diaminooxidase recombinante é exprimida em culturas de células procarióticas, preferentemente em bacterianas ou eucarióticas, preferentemente em animais ou de levedura e isoladas dos sistemas de expressão mencionados acima. A purificação da DAO produzida por meio desses sistemas de expressão, que ou é exprimida nas células ou é centrifugada das células durante a expressão, é realizada por métodos conhecidos no estado da técnica. Neste caso, também é possível, prover a DAO com uma seqüência de peptídeos (por exemplo, His-Tag), polipeptí-deos ou de proteína (por exemplo, GST-Tag) para simplificar a purificação. Além disso, a DAO recombinante pode ser modificada por processos genéticos de modo tal, que a atividade enzimática dessa DAO supere a atividade enzimática do tipo desordenado de DAO.

Um outro aspecto da presente invenção refere-se ao uso da di- aminooxidase de acordo com a invenção, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de urticária, especialmente de urticária crônica e aguda. Na liberação de histamina no caso da urticária, ocorre uma dilatação de pequenas veias e a permeabilidade excessiva dos capilares resultando um edema. Através da administração de DAO nas respectivas regiões da pele, é possível degradar a histamina nos respectivos locais e com isso, anular o prurido da urticária.

Um outro aspecto da presente invenção, refere-se ao uso da diaminooxidase de acordo com a invenção, para a fabricação de um medicamento para o tratamento da alergia de contato. Alergias de contato são provocadas por substâncias (aiergênicos), que através da penetração na pele causam reações alérgicas. Para degradar as histaminas espalhadas por este contato e desse modo, impedir ou atenuar as manifestações da doença induzidas pela histamina, administra-se DAO.

De acordo com um outro aspecto da presente invenção, utiliza-se uma diaminooxidase de acordo com a invenção para a fabricação de um medicamento para o tratamento de dermatite atópica. Dermatite atópica, também conhecida pelo nome neurodermite, é uma doença da pele frequente com forte prurido, na maioria das vezes em criança e adolescentes. A origem desse prurido é o espalhamento excessivo de histamina nas respectivas regiões da pele. Também neste caso, a DAO pode contribuir para a redução das histaminas nessas regiões e assim, atenuar ou impedir os sintomas da dermatite atópica.

De acordo com um outro aspecto, a presente invenção refere-se ao uso da diaminooxidase de acordo com a invenção, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de escombrotoxismo. O escombrotoxis-mo é um envenenamento de histamina após a alimentação de espécies de cavala, por exemplo, de atum. Na interrupção da cadeia refrigerante ou com o retardamento da preparação, formam-se nos scombrídeos as chamadas scombrotoxinas, que levam a um enriquecimento de histamina. As consequências deste envenenamento de histamina, são entre outros, febre, náuseas, vômito, dores abdominais e urticária. Neste caso, a DAO pode ser u- sada como desintoxicante.

Um outro aspecto da presente invenção, refere-se ao uso da diaminooxidase de acordo com a invenção, para a fabricação de um medicamento ou suplemento alimentício ou comestível dietético para a remoção ou redução de histamina do trato gastrointestinal. A redução de histamina do trato intestinal é particularmente significativa em uma elevada adução de histamina (adução exógena, por exemplo, através do alimento) para o corpo de um indivíduo ou quando por exemplo, a atividade da DAO no trato intestinal é parcialmente ou inteiramente inibida ou não existe. Desse modo, o medicamento ou o suplemento alimentício ou o comestível dietético de acordo com a invenção, serve para o transporte de DAO enzimaticamente ativa, que contribui para a degradação de histamina no trato intestinal.

Um outro aspecto da presente invenção, refere-se ao uso da diaminooxidase para a fabricação de um medicamento para a remoção de histamina do sistema brônquico. A absorção de substâncias que espalham histamina, tal como por exemplo, pólen, pelo sistema bronquial ou pelo pulmão pode levar a fortes reações alérgicas. Para degradar a histamina espalhada a DAO de acordo com a invenção, por exemplo, pode ser introduzida através de sprays de inalação e similares no sistema bronquial ou no pulmão. A invenção é ulteriormente elucidada pelos seguintes exemplos, sem no entanto, limitados aos mesmos.

EXEMPLOS

Exemplo 1 DAO é ativamente estabilizada em um pélete à base de celulose e o pélete foi revestido com uma camada resistente ao suco gástrico. No teste de dissolução foi demonstrado, que mais do que 70% da atividade é liberada dentro da primeira hora para o meio ambiente.

Exemplo 2 Além disso, a enzima foi estabilizada em um hidrogel. O armazenamento à temperatura ambiente e 37°C não mostrou nenhuma queda da atividade dentro de 4 meses. Pequenas bolhas e prurido que ocorrem na pele após estimulação com histamina desapareceram poucos minutos após a aplicação do hidrogei.

Exemplo 3 A DAO estabilizada em hidrogei foi testada ao todo em 13 pessoas. Com base em um questionário, foi diferenciado entre carga pela alergia de contato (n=5), neurodermite/dermatoses (n=6) e picadas de inseto (n=2). Em todos os alérgicos de contato e pacientes de neurodermite atestou-se um efeito positivo, no caso das picadas de inseto, 50% dos voluntários relataram um efeito positivo. O efeito do hidrogei iniciou-se dentro dos primeiros 10 minutos, sendo que o efeito perdurou em média, por mais do que uma hora.

Nenhum voluntário informou sobre efeitos desagradáveis na aplicação repetida.

Dois pacientes de neurodermite informaram, que o hidrogei de acordo com a invenção, atua melhor do que uma pomada de cortisona atualmente usada.

Exemplo 4 Péletes resistentes ao suco gástrico foram fabricados com 3% de DAO, que apresentou uma atividade de partida de 80000 U/ml, 40% de celulose microcristalina, 20% de sacarose, 22% de outros adesivos, materiais de enchimento e agentes de aspersão e 15% de revestimento resistente ao suco gástrico. A liberação de DAO dos péletes foi observada durante um período de 180 minutos por meio de um ensaio de atividade. Neste caso, verificou-se na solução, na qual os péletes foram dissolvidos, já após 10 minutos, uma atividade da DAO de 40%, após 30 minutos, de 70%, após 60 minutos, de 80% e após 180 minutos, de 100% da quantidade de DAO origi-naimente usada. A medição da atividade da DAO foi efetuada tal como descrito na AT 411688, mas sendo que para a medição da atividade enzimática utilizaram-se geralmente também outros processos conhecidos.

LITERATURA

Bachrauch U., em: B. Mondovi (Ed) (1985), Structure and Functions of Amine Oxidase, CRC Press, Boca Raton, pp 5-20x Bartholomew M.J. et ai. (1990), Câncer 66:1539-1543 James S.M., Palcic M.M., Scaman C.H., Smith A.J., Brown D.E., Dooley D.M., Mure M„ Klinman J.P. (1992), Biochemistry 31:12147-12154 James S.M., Mu D., Wemmer D., Smith A.J., Kaur S., Maltby D., Burlingame A.L., Kiinman J.P. (1990), Science 248:981-987 Keskinege A., Elgun S., Yilmaz E. (2001), Biochim Biophys Acta 25:76 Kitanaka J., Kitanaka N., Tsujimura T., Terada N., Takemura M. (2002), European Journal of Pharmacology 437:179-185 Kluetz M.D., Schmidt P.G. (1977), Biochem. Biophys. Res. Comm. 76:40-45 Küfner M.A., Ulrich P„ Raithel M„ Schwelberger H.G. (2001), In-flamm. res. 50, Supplement2,96-97 Kusche J., Menningen R., Leisten L., Krakamp B. (1988), Adv. Exp. Med. Biol. 250:745-52 Kusche J., Bieganski T., Hesterberg R., Stahlknecht C.D., Feussner K.D., Stahlenberg I., Lorenz W. (1980), Agents Actions 10:110-3 Mennigen R, Bieganski T, Elbers A, Kusche J (1989), J. Chroma-togr B Biomed Sei Appl 27:221 Mizuguchi H., Imamura I., Takemura M., Fukui H. (1994), J. Biol-chem 116:631-635 Mu D., James S. M., Smith A. J., Brown D.E., Dooley D. M., Klinman J. P. (1992), J. Biol. Chem. 267:7979-7982 Nílsson B.O., Kockum I., Rosengren E. (1996), Inflammation Res. 45:513-518 Rinaldi A., Vecchini P., Floris G. (1982), Prep. Biochem. 12:11-28 Shah Μ. A., Ali R. (1988), Biochem. J. 253:103-107 TaylorS.L. (1986), Crit. Reivindicações. Toxicol. 17:91-128.

REIVINDICAÇÕES

Claims (14)

1. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende diaminooxidase, sendo que a dita composição se apresenta em uma forma de dosagem resistente ao suco gástrico para a administração oral ou peroral.

2. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que se apresenta na forma de um pélete ou de uma cápsula resistente ao suco gástrico.

3. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a diaminooxidase não é de origem vegetal.

4. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que compreende diaminooxidase de origem animal.

5. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que a diaminooxidase provém de rim de porco.

6. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que compreende diaminooxidase de origem recombinante.

7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que compreende diaminooxidase recombinante obtida de culturas de células procarióticas, preferencial mente de bacterianas ou de eucarióticas, preferencial mente de animais ou de células de levedura.

8. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que está na forma de um suplemento alimentar ou um alimento dietético.

9. Uso de diaminooxidase, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de causadores de doenças induzidas pela histamina, sendo que o dito medicamento se apresenta em uma forma de dosagem resistente ao suco gástrico para a administração oral ou peroral.

10. Uso de diaminooxidase, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de urticária, especialmente de urticária crônica e aguda, sendo que o dito medicamento se apresenta em uma forma de dosagem resistente ao suco gástrico para a administração oral ou peroral.

11. Uso de diaminooxidase, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento da dermatite atópi-ca, sendo que o dito medicamento se apresenta em uma forma de dosagem resistente ao suco gástrico para a administração oral ou peroral.

12. Uso de diaminooxidase, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de escombrotoxi-cose, sendo que o dito medicamento se apresenta em uma forma de dosagem resistente ao suco gástrico para a administração oral ou peroral.

13. Uso de diaminooxidase, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para a remoção de histamina do trato gastrointestinal, sendo que o dito medicamento se apresenta em uma forma de dosagem resistente ao suco gástrico para a administração oral ou peroral.

14. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 13, caracterizado pelo fato de que o medicamento se apresenta como um pélete ou cápsula resistente ao suco gástrico.