RS51183B - Farmaceutske kompozicije koje sadrže diaminooksidazu - Google Patents

Abstract

Farmaceutska kompozicija za lečenje histaminom izazvanih bolesti, koja sadrži diaminooksidazu, naznačena time, što je kompozicija farmaceutski oblik koji je otporan na dejstvo želudačne kiseline za oralno ili peroralno davanje.Prijava sadrži još 13 patentnih zahteva.

Description

Predmetni pronalazak se odnosi na kompozicije za lečenje, odn. za prevenciju histaminom izazvanih bolesti i stanja.

Histamin (IH - imidazol- 4 - etilamin) nastaje enzimskom dekarboksilacijom histadina i zbog toga predstavlja bazični biogeni amin koji ima molekulsku težinu od 111 Da.

Histamin se pojavljuje praktično svuda u organizmu. Ljudi ga sami stvaraju, a čuva se u neaktivnom obliku u metahromatskim granulama mastocita i bazofilnim leukocitima, odakle se može brzo osloboditi. Najveće koncentracije histamina su izmerene u plućima. Posle oslobađanja histamin je visoko potentan medijator za mnoštvo fizioloških i patofizioloških procesa, često i putem interakcije sa citokinima.

Osim toga, histamin u ljudsko telo takođe može dospeti iz spoljašnje sredine, sa jedne strane, udisanjem ili oralno, sa druge strane, npr. uzimanjem prehrambenih proizvoda koji sadrže histamin, kao što su sir, vino, konzervirana riba i kiseli kupus.

Najvažnije funkcije i efekti histamina u ljudskom i životinjskom telu, respektivno, su sledeći:

1) Dilatacija kapilara, povećanje permeabilnosti kapilara i snižavanje krvnog pritiska.

2) Kontrakcije glatkih mišića, izm. ostalog bronhijalnih mišića u plućima.

3) Indukcija povećanja lučenja želudačne kiseline.

4) Povećanje frekvencije srčane radnje.

5) Histamin je medijator brzog tipa alergijske reakcije i predstavlja najvažniji medijator kod alergijskih bolesti, kao što su Rhinitis allergica (polenska kijavica) i Asthma bronchiale. 6) Pored toga, histamin je klasični pokretač urtikarije (koprivnjače) i igra važnu ulogu

u alergijama ili netolerancijama na lekove.

Visoke koncentracije slobodno cirkulišućeg histamina mogu inicirati neželjene efekte kao što su glavobolje, zapušen ili cureći nos, opstrukcija respiratornog trakta, tahikardija, kao i ekstrasistole, a pored toga i gastro - intestinalne tegobe koje mogu dovesti od grčeva do dijareje, i hipotenzija. Takođe je često oticanje očnih kapaka, a ponekad se zapažaju urtikarijalne eksanteme. Osim toga može doći i do pojave crvenila kože, pada krvnog pritiska i bronhospazama. U sledećoj tabeli su prikazani simptomi u funkciji koncentracije histamina u krvi.

U organizmima sisara histamin razgrađuju dva enzima: diaminooksidaza (DAO, EC 1.4.3.6) i histamin - N - metiltransferaza (NMT, EC 2.1.1.8) (Mizuguchi et al. 1994) . DAO katalizira oksidativnu deaminaciju histamina do imidazol acetaldehida; NMT katalizira N - metilaciju do N - metil - histamina.

Oba načina razgradnje su od suštinskog značaja za organizam: DAO odstranjuje histamin koji se u gastro - intestinalnom traktu apsorbuje iz hrane, dok NMT kontroliše transmisiju, odn. prenos histaminergijskih signala u nervnom sistemu (Kitanaka et al. 2002).

Glavni zadatak DAO je da spreči da histamin koji se unese sa hranom pređe iz creva u krvotok. Otkazivanje ovog zaštitnog mehanizma u ekstremnim slučajevima može rezultovati anafilaktičkim šokom (Tavlor 1986, Nilsson et al. 1996). DAO je sekretorni protein i zbog toga deluje ekstracelularno, dok je N - metiltransferaza isključivo aktivna u citozolu (Kiifner et al. 2001).

Prirodni DAO, koji pored histamina može razgraditi i sledeće biogene amine, kao što su npr. putrescin, spermidin i kadaverin, i koji se može dobiti npr. iz svinjskih bubrega, homodimerični je glikoprotein koji sadrži bakar, u kome su sastavne komponente povezane preko disulfidnih mostova. DAO ima molekulsku težinu od približno 182 kDa (Kluetz i Schmiđt 1997, Rinaldi et al. 1982) i ugljovodonični deo od približno 11% (Shah i Ali 1988). Ovaj enzim pripada klasi aminooksidaza koje sadrže bakar i katalizuju oksidativnu deaminaciju primarnih amina u aldehide, amonijak i vodonik peroksid prema sledećoj opštoj reakcionoj šemi (Bachrach 1985) : RCH2NH2+ H20 + 02=> RCHO + NH3+ H202, pri čemu radikal R sadrži amino grupu.

Karakteristika aminooksidaza koje sadrže bakar je topakinon u aktivnom centru koji se obrazuje posttranslacionom modifikacijom konzerviranog tirozinskog radikala Qames et al. 1990, James et al. 1992, Mu et al. 1992) .

DAO se uglavnom nalazi u tankom crevu, u jetri, u bubrezima i u krvi u belim krvnim zrncima. Kod trudnica, DAO se dodatno formira u placenti. Trudnice imaju nivo DAO u krvi koji je viši približno od 500 do 1000 puta nego kod onih koji to nisu. DAO se kontinualno stvara i izlučuje u intestinalni lumen. Zbog toga se kod zdravih ljudi hrana bogata histaminom u najvećoj meri oslobađa od histamina već u intestinalnom traktu. Preostali histamin se razgrađuje kada prolazi kroz intestinalnu mukozu zahvaljujući DAO koji je tamo prisutan. Histamin se razlaže na imidazol - acetaldehid, pa dalje na imidazol - acetosirćetnu kiselinu. Kofaktori DAO su 6 - hidroksidopa i verovatno piridoksalfosfat, vitamin B6. DAO je osetljiv enzim koji mogu inhibirati različite supstance, izm. ostalog biogeni amini, alkohol i proizvod njegove razgradnje acetaldehid, kao i različiti lekovi. U nervnom tkivu do sada se nije mogla detektovati DAO aktivnost.

Kao što je već napred navedeno, egzogeni histamin koji se unese sa hranom, ali i endogeni histamin mogu aktivirati veliki broj različitih poremećaja usled alergijskih reakcija. U pogledu kliničke vrednosti, utvrđeno je da se najmanje tri oblika histaminske netolerancije baziraju na smanjenoj DAO aktivnosti:

mali broj ljudi ima urođenu DAO deficijenciju i ne gubi je tokom života.

tokom infekcije intestinalne mukoze može se pojaviti prolazna DAO deficijencija. Kada se infekcija izleći i DAO aktivnost se vraća u normalu.

U US 2004/115189 je opisana primena histaminaze za lečenje histaminom izazvanih bolesti.

kada se daju različite supstance koje imaju inhibirajuću aktivnost, onda to može rezultovati egzogenim smanjenjem DAO aktivnosti. Među njima su to prvenstveno alkohol i proizvod

njegove razgradnje, acetaldehid, zatim izvesne vrste namirnica bogate aminima i mnogi lekovi.

U svim slučajevima napred opisani simptomi se mogu pojaviti kao manje ili više izraženi i u mnogim slučajevima ne mogu se lako klasifikovati. Brzo prepoznavanje funkcionalne aktivnosti enzima omogućava brzu i jednostavnu terapiju i određivanje odgovarajućeg dijetetskog plana.

Čest razlog za pojavu histaminske netolerancije je osetljivost enzima na veliki broj raznih hemijskih supstanci. Mnoge od njih se nalaze u različitim lekovima. Najvažniji DAO inhibitori su akriflavin, dijazepam, N - metil - N - formilhidrazin, b - aminopropionitril, dimaprit, 0 - metilhidroksilamin, agmantin, etanol (10%), pargilin, aldomet, furozemid, fenamil, amilorid, gvanabenz, fenelzin, aminogvanidin, gvanfacin, fenformin, amitriptilin, gvanidin, feniprazin, amodiakvin, haloperidol, prometiazin, anserin, hijamin 1622, propranolol, aziridinilalkilamin, hidroksihlorokvin, BI pirimidin, hidroksilamin, kvinakrin, burimamid, impromidin, semikarbazid, kadaverin, derivati imidazola, tiamin, karnosin, iproniazid, tioridazin, hlorotiazid, izokarboksazid, tranilcipramin, hlorpromazin, izoniazid, trimetoprim, cimetidin, metiamid, triptamin, klonidin, metronidazol, tiramin, cijanid, nazlinin (alkaloid), dijamin (takođe histamin) 1 Nt- metilhistamin.

U WO 02/43745 je opisana sistemska primena DAO biljnog porekla za lečenje histaminom izazvanih bolesti. Davanje DAO ili u opštem slučaju enzima koji su direktno izolovani iz biljaka predstavlja veliki problem, zbog česte pojave alergena u biljkama, a prvenstveno imajući u vidu činjenicu da leguminozne biljke koje su opisane u WO 02/43745 imaju veliki alergeni potencijal.

Cilj predmetnog pronalaska je da se realizuju kompozicije za lečenje i prevenciju hitaminom izazvanih bolesti i stanja koje ne bi imale neželjena dejstva koja inače imaju proizvodi koji se sada nalaze na tržištu i koji prevashodno sadrže kortizon, a koje bi istovremeno eliminisale nedostatke koji su uočeni kod napred navedenog stanja tehnike. Sledeći cilj predmetnog pronalaska je da se poveća koncentracija aktivne diaminooksidaze u telu, a naročito u intestinalnom traktu kod pojedinca kome je potrebna pomoć ili omogućiti, respektivno, razgradnju histamina, a naročito onoga koji se unese egzogeno (npr. sa hranom). Zbog toga se predmetni pronalazak odnosi na farmaceutske kompozicije za lečenje histaminom izazvanih bolesti koji sadrži diaminooksidazu, pri čemu je ova kompozicija pripremljena u farmaceutskom obliku za oralno ili peroralno davanje i pri čemu je ova kompozicija farmaceutski oblik koji je otporan na dejstvo želudačne kiseline.

U kompozicijama prema pronalasku diaminooksidaza se nalazi u suštini u svom aktivnom obliku, što znači da enzimi koji, na primer, ne sadrže bakar u svojoj prostetičkoj grupi i ne ispoljavaju bar prirodnu (tzv. Wild - Typ) aktivnost nisu podesni za primenu prema pronalasku.

Farmaceutska kompozicija prema pronalasku obuhvata farmaceutski oblik koji omogućava davanje koje je izabrano iz grupe koja se sastoji od oralnog i peroralnog davanja. Oralnim ili peroralnim davanjem kompozicija prema pronalasku moguće je da DAO dospe u gastro - intestinalni trakt pojedinca i da uspešno zaustavi ili izleći, respektivno, histaminom izazvane bolesti razgradnjom histamina. Obim aktivnosti DAO je uglavnom ograničen na gastro - intestinalni trakt, pošto visoki sadržaj kiseline u želucu ima negativan efekat na aktivnost DAO. Zbog toga je kada se DAO daje oralno ili peroralno neophodno zaštititi DAO od želudačne kiseline sve dok ne dospe do intestinalnog trakta.

Farmaceutska kompozicija je pripremljena u obliku za davanje izabranom iz grupe koja se sastoji od pelete, tableta i kapsula otpornih na dejstvo želudačnih sokova. Prema predmetnom pronalasku, moguće je preraditi DAO metodama prerade koje su poznate stručnjacima iz odgovarajuće oblasti tehnike u željene farmaceutske oblike za davanje. Zbog toga farmaceutske kompozicije koje sadrže DAO sadrže i druge sastojke koji se koriste za stabilizaciju enzima, sa jedne strane, i za pretvaranje enzima u odgovarajući galenski oblik, sa druge strane. Naravno da DAO može da se daje i sa drugim farmaceutski aktivnim supstancama u jednom jedinom farmaceutskom obliku ili odvojeno, osim ako sam enzim nije inhibiran jednom od tih aktivnih supstanci, tako da aktivnost enzima ne može da dovede do željenog dejstva.

Sledeći aspekt predmetnog pronalaska odnosi se na kompoziciju dodatka ishrani ili dijetetskog preparata (DP) koja je pripremljena u vidu pelete otporne na dejstvo želudačnih sokova, kapi ili infuzije. Kod oralnog davanja DAO sa hranom, dodatkom ishrani ili dijetetskim preparatom neophodno je da ovaj enzim dospe u deo tela u kome može razviti svoju aktivnost. Pošto histamin igra važnu ulogu u intestinalnom traktu, neophodno je da DAO bude adaptiran ili pripremljen na takav način da prođe neoštećen kroz želudac koji sadrži jaku kiselinu. Iz ovog razloga se DAO prvenstveno prerađuje u peletu otpornu na dejstvo želudačne kiseline.

Pošto se kada je pH ispod 3 DAO nepovratno oštećuje (pH u želucu se nalazi u opsegu između pH 2 i 4), onda je da bi se obezbedio transport DAO kroz želudac u intestinalni trakt neophodno da DAO bude pripremljen u odgovarajućem farmaceutskom obliku za davanje (farmaceutska kompozicija ili kompozicija dodatka ishrani ili dijetetskog preparata, respektivno). Kao posebno podesne prema pronalasku su se pokazale kapsule (npr. želatinske kapsule), a naročito pelete otporne na dejstvo želudačnih sokova. Poželjno je da aktivnost DAO započne najkasnije 15 minuta, a prvenstveno najkasnije 20 minuta, te naročito poželjno najkasnije 30 minuta posle davanja.

Prema pronalasku "otporan na dejstvo želudačne kiseline" predstavlja svojstvo pelete da može da zaštiti aktivnu supstancu (npr. DAO) koja je u njoj sadržana pod dejstvom želudačnih sokova ili rastvora koji ima svojstva koja odgovaraju svojstvima želudačnih sokova (npr. kiselina) u toku izvesnog vremenskog perioda od najmanje 10 minuta, a prvenstveno 20 minuta, još poželjnije 30 minuta, te najpoželjnije 60 minuta, tako da se aktivnost supstance smanji najviše za 50%, a prvenstveno najviše za 40%, poželjnije najviše za 30%, još poželjnije najviše za 20% i najpoželjnije najviše za 10%.

Prvenstveno posle 20 minuta, a naročito posle 30 minuta peleta prema pronalasku oslobodi u intestinalnom traktu najmanje 60%, a naročito 80% aktivnosti DAO koji je bio upotrebljen za formulisanje peleta.

Pelete otporne na dejstvo želudačnih sokova su pelete koje su prevučene sa prevlakom otpornom na dejstvo želudačnih sokova, koja se rastvara na pH kakva je u intestinalnom traktu. Ovo znači da se takve prevlake prvenstveno rastvaraju na pH od najmanje 4 i najviše 10. Eudragit, npr. prevlaka otporna na dejstvo želudačnih sokova koja je bazirana na anjonskim polimerima metakrilne kiseline i metakrilatima, sadrži - COOH kao funkcionalnu grupu i rastvara se na pH u opsegu od pH 5.5 do pH 7. Kao alternativa eudragitu mogu se koristiti šelak ili acetilovani škrob (npr. amprak 01). Pošto prevlake otporne na dejstvo želudačnih sokova koje su poznate iz stanja tehnike imaju različita svojstva (npr. pH na kome se prevlaka rastvara, brzina rastvaranja), materijali za prevlake se takođe mogu i kombinovati. Selak, npr. pokazuje dobru otpornost na kiseline, ali se veoma sporo rastvara u intestinalnom traktu. Sa druge strane, amprak 01 se brzo rastvara u crevnom ambijentu, ali nije dovoljno otporan na dejstvo kiseline. Sa ciljem da se kompenzuju nedostaci ovih materijala, dva napred navedena materijala mogu se mešati, npr. u težinskom odnosu 60 - 95/40 - 5, a prvenstveno od 70 - 90/30 - 10, šelak/amprak 01. Sledeći parametar koji ima uticaja na brzinu oslobađanja aktivne supstance je debljina sloja na peleti otpornoj na dejstvo želudačnih sokova. Debljina sloja, izražena kao maseni odnos, prvenstveno je 5 do 30%, još poželjnije 10 do 20% ukupne mase finalnog proizvoda. Pelete prvenstveno imaju prosečni prečnik od 0,5 do 5 mm, a naročito od 0,7 do 2 mm. Takva veličina ima tu prednost što pelete mogu brzo da prođu kroz želudac.

Priprema peleta prema pronalasku koje se mogu koristiti i u farmaceutskoj kompoziciji prema pronalasku i u kompoziciji dodatka ishrani ili dijetetskog preparata prema pronalasku, respektivno, prvenstveno se vrši pomoću ekstrudera, što zahteva termičku stabilnost sastojaka kompozicije, a naročito aktivne supstance DAO, do 60°C (Stricker Arzneiformenentwicklung, Spinger Verlag 2003). Pored prevlake otporne na dejstvo želudačnih sokova i DAO, pelete mogu sadržati dodatne farmaceutske ađitive. Na primer, mikrokristalna celuloza (npr. avicel) služi kao punilac i kao agens za bubrenje. Celuloza je nerastvorna u vodi i u ovom obliku ima i kristalne i amorfne delove. Ova kombinacija uzrokuje plastičnu deformabilnost, što znači da pri dovoljno velikoj sili dolazi do nepovratne promene oblika. Ovo je suštinski važan preduslov za peletizaciju u ekstruderu i sferonizatoru. Tokom mokre, odn. vlažne granulacije mikrokristalna celuloza apsorbuje velike količine vode i zahvaljujući tome postaje lako kompresibilna, koherentna masa, čak i bez dodavanja veziva. Prema pronalasku količina mikrokristalne celuloze u peleti može biti u opsegu između 5 i 70%, a prvenstveno između 10 i 60%, još poželjnije između 15 i 50%. Kao vezivo ili punilac može se koristiti saharoza. Saharoza povećava rastvorljivost matrice i na taj način potpomaže brzo oslobađanje enzima. Prema pronalasku peleti može biti dodata saharoza u količini od 1 do 40%, a prvenstveno od 5 do 35%, još poželjnije od 10 do 30%. Kao vezivo se takođe može dodati hidroksipropil celuloza (prvenstveno primešana u količini od 0,5 do 10%) i ona služi za sprečavanje pojave fine prašine. Pored toga, hidroksipropil celuloza povećava jačinu pelete i na taj način ponovo doprinosi poboljšanju prinosa. Peleti prema pronalasku može se dodati kukuruzni škrob kao punilac i kao agens za razbijanje (u poželjnom primeru izvođenja u količini od 1 do 30%). Pošto je vodonerastvorna supstanca, škrob zato može apsorbovati mnogo vode i na taj način predstavlja idealni agens za razbijanje. Kroskarmeloza (Na - CMC; akdisol) je čist agens za razbijanje koji se prvenstveno može koristiti u količini između 1% i 5%. Previsok udeo akdisola dovodi do rane dezintegracije pelete već tokom njenog zaobljavanja i zbog toga je kontraproduktivan. Krospovidon, unakrsno umreženi PVP je isto tako vodonerastvoran i takođe služi kao agens za razbijanje. Zbog svojih polimernih svojstava, on pomaže poboljšanje zaokrugljivanja tokom proizvodnje peleta (može se prvenstveno primešati u količini od 0,5 do 10%). Povidon je vodorastvorni aditiv i služi kao vezivo. Kombinacija ovih različitih punilaca, agenasa za razbijanje i veziva dovodi do molekulsko - dispergovane raspodele DAO u peleti i obezbeđuje brzu bioraspoloživost.

Između prevlake otporne na dejstvo želudačnih sokova i pelete sa aktivnim agensom može se nalaziti izolacioni sloj napravljen od glicerola i/ili talka. Glicerol služi kao humektant, odn. ovlaživač, tako da sprečava dehidrogenaciju, a na taj način i inaktiviranje enzima.

Kao alternativa peletama, DAO se takođe može transportovati u kapsulama kroz želudac u intestinalni trakt. Podesne kapsule su npr. želatinske kapsule ili kapsule od škroba. Kapsule takođe mogu sadržati pelete prema pronalasku.

Diaminooksidaza koja se koristi u kompozicijama prema pronalasku prvenstveno je nebiljnog porekla.

Primena DAO nebiljnog porekla u farmaceutskim i kozmetičkim kompozicijama, kao i u dodacima ishrani i dijetetskim preparatima ima tu prednost što alergeni koji se inače pojavljuju u biljkama neće negativno uticati na aplikaciju DAO budući da alergeni u suštini podstiču endogeno oslobađanje histamina. Poznato je da su biljne supstance prvenstveno odgovorne za histaminom izazvane bolesti. Kompletna eliminacija sastojaka - izazivača alergija iz DAO biljnog porekla moguća je samo uz velike troškove prerade, dok DAO prema pronalasku, koji je nebiljnog porekla, uopšte ne sadrži ove biljne alergene.

Prema predmetnom pronalasku pod "nebiljnim poreklom" se podrazumevaju svi DAO koji nisu dobijeni iz biljnih, već iz životinjskih organizama ili iz drugih nebiljnih organizama. Pored toga, prema pronalasku ova definicija obuhvata sve DAO koji su dobijeni rekombinantno iz ćelijskih kultura (životinjske, bakterijske, kvaščeve i druge) ili nebiljnih organizama bilo kog tipa, pri čemu je DNK za rekombinantno dobijanje DAO izolovana iz biljnih i/ili životinjskih organizama metodama koje su poznate iz stanja tehnike, pa je klonirana i izražena u sistemima za ekspresiju.

Sve kompozicije koje su opisane u predmetnom pronalasku prvenstveno sadrže diaminooksidazu životinjskog porekla. Korišćenjem životinjske DAO moguće je snabdeti kako ljudsko, tako i životinjsko telo, respektivno, sa enzimom koji je veoma sličan enzimu koji stvaraju same ove jedinke, a posebno u pogledu glikozilacije, aktivnosti i specifičnosti DAO koji stvaraju same ove jedinke. Pored toga, moguće je kompletno isključiti biljne alergene iz proizvodnje DAO.

Diaminooksidaza se prvenstveno dobija iz svinjskih bubrega. Svinjski bubrezi su prvenstveno karakterisani svojim visokim sadržajem DAO. Enzim se može izolovati iz svinjskih bubrega na jednostavan način metodama koje su poznate iz stanja tehnike.

Prema sledećem poželjnom primeru izvođenja kompozicije prema pronalasku sadrže diaminooksidazu rekombinantnog porekla. Rekombinantnom proizvodnjom DAO moguće je proizvesti velike količine enzima i prečistiti ovaj enzim sa visokim prinosom.

Rekombinantna diaminooksidaza se prvenstveno izražava u prokariotskim, a naročito u bakterijskim, ili u eukariotskim, a naročito u životinjskim ili kvaščevim ćelijskim kulturama i

izoluje se iz sistema za ekspresiju koji su gore navedeni. Prečišćavanje DAO koja je proizvedena pomoću ovih sistema za ekspresiju, a koja je ili izražena u ćelijama ili se izlučuje iz ćelija tokom ekspresije, vrši se metodama koje su poznate iz stanja tehnike. Na ovaj način takođe je moguće dobiti DAO sa peptidnom (npr. His - tagom), polipeptidnom ili proteinskom sekvencom (npr. GST- tagom) tako da se pomenuto prečišćavanje pojednostavljuje. Osim toga rekombinantna DAO može biti modifikovana metodama genetskog inžinjeringa, tako da enzimska aktivnost ove DAO prevazilazi enzimsku aktivnost nemodifikovane (engl. wild - tvpe) DAO.

Sledeći aspekt predmetnog pronalaska odnosi se na primenu diaminooksidaze prema pronalasku za dobijanje leka za lečenje histaminom izazvanih kliničkih slika. Poznato je daje DAO odgovoran za razgradnju histamina u ljudskom i životinjskom telu. Pošto su histaminom izazvane bolesti izazvane viškom histamina koji nastaje zbog nedostatka diaminooksidaze ili zbog inhibiranja DAO, ili zbog viška histamina koji po pravilu može biti prouzrokovan hranom, ili nekim drugim ekstrinsičkim faktorima, kao što je npr. kontakt sa alergenima, davanje DAO prema pronalasku omogućava lečenje ovih bolesti ili kliničkih slika, respektivno.

Sledeći aspekt predmetnog pronalaska odnosi se na primenu diaminooksidaze prema pronalasku za dobijanje leka za lečenje urtrikarije, a naročito hronične i akutne urtrikarije. Kod urtrikarije oslobađanje histamina izaziva širenje venola i preveliku permeabilnost kapilara što rezultuje otocima, odn. edemima. Apliciranjem DAO na pogođene zone kože moguće je razgraditi histamin na pogođenim mestima, a time zaustaviti svrab od urtrikarije.

Sledeći aspekt predmetnog pronalaska odnosi se na primenu diaminooksidaze prema pronalasku za dobijanje leka za lečenje kontaktnih alergija. Kontaktne alergije izazivaju supstance (alergeni) koje pokreću alergijske reakcije prodirući u kožu. DAO se aplicira u cilju da se razgradi histamin koji se oslobađa usled ovog kontakta, a time i da se zaustave ili ublaže, respektivno, histaminom izazvane kliničke slike.

Prema sledećem aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na primenu diaminooksidaze prema pronalasku za dobijanje leka za lečenje atopijskog dermatitisa. Atopijski dermatitis, koji je takođe poznat i pod nazivom neurodermatitis, često je kožno oboljenje koje je udruženo sa jakim svrabom, a koje se najčešće pojavljuje kod dece i mlađih odraslih osoba. Uzrok ovog svraba je prekomerno oslobađanje histamina na pogođenim mestima na koži. 1 u ovom slučaju DAO može doprineti smanjenju količine histamina u ovim oblastima i na taj način ublažiti ili sprečiti, respektivno, simptome atopijskog dermatitisa.

Prema jednom narednom aspektu predmetni pronalazak se odnosi na primenu diaminooksidaze prema pronalasku za dobijanje leka za lečenje skombrotoksizma. Skombrotoksizam je trovanje histaminom posle konzumiranja određenih vrsta skuše, npr. tune. Kada se prekine rashladni lanac ili odloži prerada, nastaju takozvani skombrotoksini u skombridima, koji dovode do njihovog obogaćivanja histaminom. Kao posledica ovog trovanja histaminom izm. ostalog se javljaju groznica, nauzeja, povraćanje, bolovi u stomaku i urtikarija (koprivnjača). U ovom slučaju DAO se može upotrebiti kao agens za detoksikaciju.

Sledeći aspekt predmetnog pronalaska odnosi se na primenu diaminooksidaze prema pronalasku za dobijanje leka ili dodatka ishrani ili dijetetskog preparata za uklanjanje histamina iz gastro - intestinalnog trakta ili njegovo smanjenje u njemu, respektivno.

Redukcija histamina u intestinalnom traktu je od posebnog značaja u slučaju povećanog dopremanja histamina (egzogeno dopremanje, npr. iz hrane) tela jedinke, ili ako je, npr. aktivnost DAO u intestinalnom traktu delimično ili u potpunosti inhibirana, ili uopšte se ne pojavljuje, respektivno. Lek ili dodatak ishrani ili dijetetski preparat prema pronalasku, respektivno, zbog toga služe za dopremanje enzimski aktivnog DAO, koji doprinosi razgradnji histamina, u intestinalni trakt.

Pronalazak će biti dalje opisan na osnovu sledećih primera, ali bez ograničavanja na njih.

PRIMERI:

Primer 1

DAO je aktivno stabilizovan u peleti baziranoj na celulozi, pa je peleta prevučena sa prevlakom otpornom na dejstvo želudačnih sokova. U testu rastvaranja moglo se pokazati daje više od 70% aktivnosti oslobođeno u okruženje u toku prvog sata.

Primer 2

Posle toga, enzim je stabilizovan u hidrogelu. Čuvanje na sobnoj temperaturi i na 37°C nije dovelo do smanjenja aktivnosti tokom 4 meseca. Vezikule i svrab na koži posle stimulacije histaminom su nestali nekoliko minuta posle aplikacije hidrogela.

Primer 3

DAO koji je stabilizovan u hidrogelu testiran je na ukupno 13 osoba. Pomoću upitnika kod njih je utvrđena pojava stanja sa kontaktnom alergijom (n = 5),

neurodermatitisom/dermatozama (n = 6) i ujedima insekata (n = 2). Kod svih pacijenata sa kontaktnim alergijama i kod svih pacijenata sa neurodermatitisom utvrđeno je pozitivno dejstvo; u slučaju ujeda insekata, 50% dobrovoljaca je moglo izvestiti o pozitivnom dejstvu.

Dejstvo hidrogela se pojavilo u toku prvih 10 minuta, pri čemu je dejstvo imalo prosečno trajanje duže od jednog sata.

Nijedan dobrovoljac nije prijavio neželjena dejstva u služajevima ponovljenog davanja.

Dva pacijenta sa neurodermatitisom su tvrdila da hidrogel prema pronalasku ima bolje dejstvo od kortizonske masti koja se danas obično upotrebljava.

Primer 4

Pelete otporne na dejstvo želudačne kiseline su pripremljene sa 3% DAO koja je imala inicijalnu aktivnost od 80000 J/ml, 40% mikrokristalne celuloze, 20% saharoze, 22% drugih veziva, punilaca i agenasa za razbijanje i sa 15% prevlake otporne na dejstvo želudačnih sokova. Pomoću testa aktivnosti uočeno je oslobađanje DAO iz peleta u periodu od 180 minuta. U tom testu u rastvoru u kome su bile rastvorene pelete već posle 10 minuta detektovana je DAO aktivnost od 40%, posle 30 minuta aktivnost od 70%, posle 60 minuta aktivnost od 80% i posle 180 minuta aktivnost od 100% količine DAO koja je originalno upotrebljena. Merenje aktivnosti DAO je opisano u AT 411688, međutim, za merenje enzimske aktivnosti se isto tako dobro mogu primeniti i druge poznate metode.

LITERATURA:

Bachrach U., in: B. Mondovi (Ed) (1985), Structure and Functions of Amine Oxidase, CRC Press, Boca Raton, pp 5-20x Bartholomew MJ. et al (1990), Cancer 66:1539 -1543 James S.M., Palcic M.M., Seaman CH., Smith A.J., Brown D.E., Dooley D.M., Mure M., Klinman J.P. (1992), Biochemistrv 31:12147 -12154

James S.M., Mu D., Wemmer D., Smith A.J., Kaur S., Maltby D., Burlingame A.L., Klinman J.P. (1990), Science 248: 981 - 987

Keskinege A., Elgun S., Yilmaz E. (2001), Biochim Biophys Acta 25: 76

Kitanaka J., Kitanaka N., Tsujimura T., Terada N., Takeraura M. (2002), European Journal of Pharmacologv 437:179 -185

Kluetz M.D., SchmidtP.G. (1977), Biochem. Biophvs. Res. Comm. 76: 40-45

Kiimer MA, Ulrich R, Raithel M., Schwelberger H.G. (2001), Inflamm, res. 50, Supplement 2,96 - 97

Kusche J., Menningen R., Leisten L., Krakamp B. (1988), Adv. Exp. Med. Biol. 250:

745 - 52

Kusche J., Bieganski T., Hesterberg R., Stahlknecht CD., Feussner K.D., Stahlenberg I., Lorenz W. (1980), Agents Actions 10:110-3

Mennigen R, BieganskiT, EibersA, Kusche J (1989), J Chromatogr B Biomed Sci Appl 27:221

Mizuguchi H., Imamura I., Takemura M., Fukui H. (1994), J. Biochem 116: 631 - 635 Mu D., James S.M., Smith A.J., Brown D.E., Dooley D.M., Klinman J.P. (1992), J. Biol.

Chem. 267: 7979 - 7982

Nilsson B.O., Kockum I., Rosengren E. (1996), Inflammation Res. 45: 513 - 518

Rinaldi A., Vecchini P., Floris G. (1982), Prep. Biochem. 12:11 - 28

Shah M. A, Ali R. (1988), Biochem. J. 253:103 -107

Taylor S.L. (1986), Crit. Rev. ToxicoL 17:91 -128

Claims (14)

1. Farmaceutska kompozicija za lečenje histaminomizazvanihbolesti, koja sadrži diaminooksidazu, naznačena time, stoje kompozicija farmaceutski oblik koji je otporan na dejstvo želudačne kiseline za oralno ili peroralno davanje.

2. Kompozicija prema zahtevu 1, naznačena time, što je u obliku pelete ili kapsule koja je otporna na dejstvo želudačne kiseline.

3. Kompozicija prema zahtevu 1 ili 2, naznačena time, što je diaminooksidaza nebiljnog porekla.

4. Kompozicija prema zahtevu 3, naznačena time, što sadrži diaminooksidazu životinjskog porekla.

5. Kompozicija prema zahtevu 4, naznačena time, što je diaminooksidaza dobijena iz svinjskih bubrega.

6. Kompozicija prema bilo kom od zahteva 1 do 4, naznačena time, što sadrži diaminooksidazu rekombinantnog porekla.

7. Kompozicija prema zahtevu 6, naznačena time, što sadrži rekombinatnu diaminooksidazu dobijenu iz prokariotskih, a prvenstveno bakterijskih, ili eukariotskih, a prvenstveno životinjskih ili kvaščevih ćelijskih kultura.

8. Primena farmaceutske kompozicije prema bilo kom od zahteva 1 do 7 kao dodatka ishrani ili dijetetskog preparata.

9. Primena diaminooksidaze za dobijanje leka za lečenje histaminom izazvanih kliničkih slika, naznačena time, što je lek farmaceutski oblik koji je otporan na dejstvo želudačne kiseline za oralno ili peroralno davanje.

10. Primena diaminooksidaze za dobijanje leka za lečenje urtikarije, a naročito hronične i akutne urtikarije, naznačena time, što je lek farmaceutski oblik koji je otporan na dejstvo želudačne kiseline za oralno ili peroralno davanje.

11. Primena diaminooksidaze za dobijanje leka za lečenje atopijskog dermatitisa, naznačena time, što je lek farmaceutski oblik koji je otporan na dejstvo želudačne kiseline za oralno ili peroralno davanje.

12. Primena diaminooksidaze za dobijanje leka za lečenje skombrotoksizma, naznačena time, što je lek farmaceutski oblik koji je je otporan na dejstvo želudačne kiseline za oralno ili peroralno davanje.

13. Primena diaminooksidaze za dobijanje leka za uklanjanje histamina iz gastrointestinalnog trakta, naznačena time, što je lek farmaceutski oblik koji je otporan na dejstvo želudačne kiseline za oralno ili peroralno davanje.

14. Primena prema bilo kom od zahteva 9 do 13, naznačena time, što je lek u obliku pelete ili kapsule koja je otporna na dejstvo želudačne kiseline.