BRPI0417417B1 - Sistema de coleta de amostra de inibidor de fosfatase - Google Patents

Description

"SISTEMA DE COLETA DE AMOSTRA DE INIBIDOR DE FOSFATASE" CAMPO DA INVENçãO A invenção atual é direcionada para um método e para um dispositivo para a coleta e a estabilização de uma amostra biológica, especialmente uma amostra totalmente de sangue, diretamente de um paciente. Mais especificamente, a invenção atual refere-se a recipientes de coleta de amostras tendo um aditivo estabilizante contido na mesma, para estabilizar proteínas imediatamente na coleta de uma amostra biológica e para inibir as modificações da proteína durante a estocagem da me sma.

ANTECEDENTES DA INVENçãO 0 estudo de proteômicos tem aumentado significa- tivamente recentemente. Os proteômicos poderão abranger muitos significados, mas isto envolve a análise de proteínas, quer individualmente ou, mais tipicamente, como padrões. Por e- xemplo, os pesquisadores estão interessados nos perfis de proteínas que poderão ser efetivos em certos estados de doenças, como por exemplo, o perfil de um indivíduo saudável vs. o perfil de um indivíduo doente poderá mostrar diferenças que podem ser utilizadas como indicadores futuros de estados de doença.

Conforme é conhecido na arte, a espectrometria de massa é uma ferramenta chave utilizada para examinar tais perfis. Um desafio em tal estudo de proteínas são as muitas modificações que uma proteína sofre através do seu tempo de vida, que são gene- ricamente chamadas de modificações pós-traducionais. Consi- derando-se que o estado de uma proteína é alterado ao longo do tempo, é difícil assegurar-se que um perfil de um indivíduo seja consistente ao longo do tempo. Assim sendo, acredita-se que um perfil que seja indicativo de um estado de doença, poderá ser válido somente para condições específicas, e portanto não é repetitivo em uma base suficiente que sirva como uma ferramenta de diagnóstico. Assim sendo, seriam desejáveis dispositivos e/ou processos capazes de equacionarem esta variação.

SUMÁRIO DA INVENçãO 0 mecanismo mais comum de comunicação entre células, envolve a liberação de moléculas de sinalização, tais como os hormônios, os neurotransmissores, e os fatores de crescimento, de um tipo de célula que interage e ativa proteínas receptoras específicas na superfície das células alvo. 0 receptor ativado então gera um sinal intracelular que no final se junta a processos funcionais específicos nas células para produzir uma resposta fisiológica. Estudos dos caminhos de transdução de sinal que juntam a ativação do receptor a estas respostas fisiológicas, representam uma das áreas de pesquisa mais ativas e importantes na biologia moderna. Os estudos de transdução de sinais são fundamentais para a pesquisa de doenças, a descoberta e desenvolvimento de drogas, e para diagnósticos. A ligação reversível de fosfato com resíduos de serina, treonina e tirosina de proteínas celulares é um mecanismo de controle que tem um papel principal na maioria, se não em todos os caminhos de transdução de sinal. Dois tipos de enzimas controlam a extensão e a direção da fosforilação de uma proteína de célula específica: As proteínas quínases adicionam fosfato nas proteínas (fosforilação)'· As proteínas fosfatases removem o fosfato, (des- fosforilação) Estes efeitos de caminhos continuam a ser ativos depois que as amostras biológicas são recolhidas. Sem en- tendermos estas modificações variáveis ex-vivo, a remoção de fosfato, especialmente, pode confundir ou prejudicar os re- sultados da pesquisa. As proteínas fosfatases são classificadas com base na sua especificidade do substrato, dependência dos íons metálicos, e da sensibilidade à agentes inibidores. Uma classe de produtos químicos, inibidores de proteína fosfatase, é comumente utilizada para limitar a remoção dos grupos de fosfato (os inibidores de fosfatos de proteína são também usados para tratar doenças).

Existem centenas de inibidores disponíveis através de fornecedores de produtos químicos e alguns fornecem até um coquetel de inibidores, com algo como dois a cinco inibidores previamente misturados. Infelizmente, no momento em que a maior parte destes inibidores é aplicada, a maioria da atividade sendo estudada não é "natural" ou é um artefato ex vivo. Para certos estudos, é importante ser capaz de entender o estado das células de uma forma que seja muito proximamente representativa da fisiologia in vivo. Por essa razão, é importante que se controle a desfosforilação tão próximo quanto possível do "tempo zero" da excisão ou extração do espécime. A invenção inclui uma faixa diferente de dispositivos de coleta que contêm um ou mais inibidores de proteína fosfatase previamente dispostos, de tal forma que quando o espécime contata o dispositivo de coleta, ele imediatamente entra em contato com o inibidor e a atividade de desfosforilação é controlada.

BREVE DESCRIçãO DOS DESENHOS A Figura 1 é uma vista em perspectiva de um tubo típico de coleta de sangue. A Figura 2 é uma vista em perspectiva de uma placa de teste. A Figura 3 é uma vista em perspectiva de um conjunto de coleta de amostra, enquanto que a figura 3b é uma vista da seção do conjunto de coleta da amostra. A Figura 4 é uma vista da seção longitudinal de uma seringa. A Figura 5 é uma vista da seção longitudinal de outra realização de uma seringa. A Figura 6 é uma vista lateral de um conjunto de catéter, enquanto que a figura 6b é uma vista lateral parcial do catéter. A Figura 7 é uma vista em perspectiva de uma pipeta. A Figura 8 é uma vista em perspectiva ilustrando uma bolsa de coleta de sangue.

DESCRIçãO DETALHADA DA INVENçãO

Embora esta invenção seja justificada pelas rea- lizações em várias formas diferentes, serão descritas aqui em detalhes as realizações preferidas da invenção, com um en- tendimento de que a apresentação atual deve ser considerada como exemplo dos princípios da invenção e não se destina a limitar a invenção às realizações ilustradas e descritas. Várias modificações poderão ser feitas pelas pessoas adestradas na arte, sem se afastarem do espírito da invenção. 0 escopo da invenção será medido pelas reivindicações anexas e seus e- quivalentes. A invenção atual é direcionada para métodos e dispositivos para a estabilização de proteínas em uma amostra biológica, para permitir uma análise melhor mais adiante. Mais especialmente, a invenção atual é direcionada para métodos e dispositivos para a inibição da cascata de fosforilação em uma amostra biológica, durante a estocagem. De acordo com a invenção atual, o dispositivo é composto de um recipiente contendo uma quantidade de agente estabilizante, composto de um inibidor de fosfatase, para ser misturado com uma amostra biológica i- mediatamente no momento da coleta da amostra. Também de acordo com a invenção atual, o método compreende o fornecimento de um recipiente de coleta de amostra contendo um agente estabilizante em uma quantidade suficiente para evitar ou inibir a ativação de uma ou mais cascatas de fosforilação, através da inibição dos ativadores de fosfatase, e a adição de uma amostra biológica ao recipiente.

Apesar de ser possível utilizar-se a invenção atual com qualquer amostra biológica contendo proteína, de prefe- rência a amostra biológica é qualquer fluido do corpo retirado de um paciente. Mais de preferência, a amostra biológica é de sangue puro ou de um componente do mesmo. Exemplos de outras amostras biológicas, incluem composições contendo células, tais como concentrados de células vermelhas do sangue, concentrados de plaquetas, concentrados de leucócitos, plasma, soro, urina, aspirados de medula de osso, fluido da espinha cerebral, tecidos, células, fezes, secreções de saliva e orais, secreções nasais, fluido linfático e semelhantes. 0 sistema de coleta de amostra da invenção atual pode incluir qualquer dispositivo de coleta, incluindo, mas não limitado a tubos, tais como tubos de teste e tubos centrífugos; dispositivos de coleta de sangue de sistema fechado, tais como bolsas de coleta; seringas, especialmente seringas previamente cheias; catéteres, tais como linhas centrais; placas de mi- crotitulação e outras com poços múltiplos, séries; tubos; vasos de laboratório como frascos, frascos giratórios, garrafas rolantes, frascos pequenos, lâminas de microscópico, conjuntos de lâmina de microscópico, dispositivos de cobertura, filmes e substratos e conjuntos porosos; pipetas e ponteiras de pipeta, etc; tecidos e outros recipientes de coleta de amostra bio- lógica; e qualquer outro recipiente adequado para conter uma amostra biológica, assim como recipientes e elementos en- volvidos na transferência de amostras. Em um aspecto da in- venção, é utilizado um tubo de coleta de amostra tendo um membro separado (por exemplo, um elemento mecânico de separação, um gel ou um mecanismo de filtragem) para a separação dos componentes do sangue. Em tal aspecto, o interior do tubo e/ou o exterior do membro de separação poderão ser tratados com o agente estabilizante. De acordo com a invenção atual, o dispositivo de coleta contém um agente estabilizante para estabilizar a amostra biológica.

Plástico ou vidro com freqüência é utilizado para fabricar o dispositivo de coleta utilizado na invenção atual.

Alguns materiais preferidos usados para a fabricação do dispositivo de coleta, incluem polipropileno, polietileno, polietileno tereftalato, poliestireno, policarbonato e ce- lulósicos. Plásticos mais dispendiosos, tais como polite- trafluoretileno e outros polímeros fluoretados poderão também ser utilizados. Além dos materiais mencionados acima, exemplos de outros materiais adequados para dispositivos de coleta utilizados na invenção atual incluem o poliolefinas, polia- midas, poliésteres, silicones, poliuretanas, epóxidos, a- crílicos, poliacrilatos, polisulfonas, polimetacrilatos, PEEK, poliimida e fluorpolímeros, tais como PTFE teflon®, FEP te- flon®, Tefxel®, poli(fluoreto de vinilideno), PVDF e resinas de perfluoralcoxila. Produtos de vidro, incluindo vidro de sílica, são também utilizados para a fabricação dos dispositivos de coleta. Um produto de vidro de exemplo é o PYREX® (disponível da Corning Glass, Corning, New York). Dispositivos de coleta de cerâmica podem ser utilizados de acordo com as realizações da invenção. Produtos celulósicos, tais como papel e recipientes de papel reforçado, também podem ser utilizados, para formar os dispositivos de coleta, de acordo com a invenção. 0 agente estabilizante da invenção compreende um ou mais inibidores de fosfatase capazes de inibirem a atividade de fosforilação e a modificação associada, ou a destruição de proteínas durante a estocagem de uma amostra biológica. O agente estabiliza a amostra biológica, como uma amostra de sangue, para produzir uma composição estável que inibe ou excita a modi- ficação, degradação e/ou a fragmentação das proteínas presentes na amostra biológica. De acordo com uma realização da invenção atual, o dispositivo de coleta é previamente tratado com o agente estabilizante, de preferência pelo fabricante, e é embalado em uma forma pronta para utilização. Tipicamente o dispositivo de coleta embalado é estéril e é também embalado em materiais de embalagem estéreis. A invenção atual podería ser utilizada por companhias farmacêuticas, companhias de biotecnologia, organizações de pesquisa por contrato, pesquisadores de universidades, hos- pitais de pesquisa e qualquer instituição e indivíduo que esteja interessado no estudo de proteínas. A invenção atual permitiría que os pesquisadores protegessem e processassem convenien- temente e rapidamente amostras de proteínas para análise posterior. 0 dispositivo de coleta de acordo com a invenção atual serviría como um dispositivo de coleta de amostra antecipada auxiliando os objetivos analíticos, incluindo, mas não li- mitados aos seguintes: banco de proteínas, identificação e caracterização de proteínas, expressão de proteínas, quan- tificação de proteínas, interações proteína-proteína, de- senvolvimento de ensaios de função de proteína, descoberta e validação de proteínas visadas, toxicologia preditiva, de- terminação da ação da droga, validação da droga, análise estrutural de proteínas em 3-D e modelagem por computador. Os usos clínicos são também considerados.

De preferência, o agente estabilizante compreende ou consiste em pelo menos um inibidor de fosfatase. Exemplos adequados, incluem inibidores de serina ou treonina fosfatases (por exemplo, as famílias PPP ou PPM) e/ou tirosina fosfatases (a família PTP). Por exemplo, os inibidores da fosfatase PPI incluem a caliculina A, nodularina, NIPP-1, microcistina, LR, tautomicina, ácido ocadaico, e cantaridina. Os inibidores de PP2A incluem caliculína, microcistina LR, ácido ocadaico, fostriecina, tautomicina, cantaridina, endotal e nodularina. Os inibidores de PP2B incluem a ciclosporina A, complexos de FK 506/imunofilina, cipermetrina, deltametrina, e fenvalerato. Os inibidores de PTP incluem bpV(fen) , defostatina, mpV(pie) DMHV, e ortovanadato de sódio. As fosfatases e os inibidores são portanto conhecidos na arte, e são disponíveis comercialmente, por exemplo, da Calbiochem de San Diego, Califórnia, USA.

Combinações de inibidores de fosfatase, comumente referidos como "coquetéis" pelos fornecedores comerciais de tais inibidores, poderão também ser utilizados como o agente estabilizante. Tais "coquetéis" são geralmente vantajosos pelo fato de que eles fornecem estabilização para uma faixa de proteínas de interesse; portanto, geralmente é desejável um agente estabilizante contendo mais de 2 inibidores de fosfatase.

Além disso, poderá ser desejável incluir-se ini- bidores de proteases com o inibidor de fosfatase, para promover ainda mais a estabilidade da proteína. Exemplos incluem i- nibidores de proteases, tais como serina proteases, cisteina proteases, proteases asparticas, metaloproteases, tiol pro- teases, exopeptidases e semelhantes. Destes, os inibidores de serina e cisteina proteases são de especial interesse, com os inibidores de metaloproteases e asparticos sendo também significantes. Exemplos não limitantes de inibidores de serina proteases, incluem inibidores contra dor, aprotinina, qui- mostatina, elastatina, fluoreto de fenilmetilsulfonila (PMSF), APMSF, TLCK, TPCK, leupeptina e tripsina de soja. Os inibidores das cisteina proteases incluem, por exemplo, o IAA (ácido indoleacético) e E-64. Exemplos adequados de inibidores de proteases asparticas incluem a pepstatina e techVdLPFFVdL.

Exemplos não limitantes de inibidores de metaloproteases incluem EDTA, assim como 1, 10-fenantrolina e quefosforamodona.

Inibidores de exopeptidases incluem, por exemplo, amastatina, bestatina, diprotina A e diprotina B. Exemplos adequados adicionais de inibidores de proteases, incluem al- fa-2-macroglobulina, inibidor de tripsina de feijão de soja ou lima, inibidor de protease pancreática, ovostatina da clara do ovo e cistatina da clara do ovo. 0 agente estabilizante poderá ter qualquer forma adequada, incluindo, mas não limitado a uma solução, suspensão ou outro líquido, um pélete, um comprimido, uma cápsula, um material seco por aspersão, um material seco por congelamento, um pó, uma partícula, um gel, cristais, aditivos ligados a substratos, matriz tamponada, ou um material liofilizado. Como a meia-vida de vários inibidores é curta, o agente estabi- lizante, de preferência é introduzido no dispositivo de coleta, de tal forma que otimize a vida de prateleira do inibidor. A liofilização parece ser especialmente útil, pelo fato de que ela fornece uma boa estabilidade e também permite a esterilização posterior, ambos sendo importantes do ponto de vista de au- tomatização, standardização e implementação clínica. 0 agente estabilizante poderá ser localizado em qualquer superfície do dispositivo de coleta. 0 agente es- tabilizante poderá também ser localizado em rolhas, selos para o fechamento de tais dispositivos ou em superfícies e sub-superfícies de componentes mecânicos, ou outros, em in- serções colocadas dentro de tais dispositivos. De preferência, o agente estabilizante é localizado em qualquer parte ao longo de pelo menos uma parede interior do dispositivo de coleta, ou em qualquer lugar dentro da porção do reservatório. Além disso, alguns inibidores de fosfatase poderão apresentar sensibilidade à luz. Assim sendo, poderá ser desejável proteger-se o agente contra a luz. Para tais inibidores, o uso de um tubo opaco, por exemplo, um tubo colorido de âmbar com ou sem janela de ob- servação seria vantajoso (Kirk, Scott, consideram uma janela no tubo de âmbar em uma reivindicação independente). Alterna- tivamente, a colocação do agente em uma cápsula que protege o mesmo contra a exposição à luz, como por exemplo, na forma de pó, e então colocando a cápsula no tubo, também equacionaria este problema. 0 encapsulamento do agente poderá também evitar outras interações indesejáveis entre o agente e outros elementos no recipiente. Os materiais de cápsula que se dissolvem na coleta da amostra são bem conhecidos na arte. 0 agente estabilizante poderá ser aplicado no dispositivo de coleta por qualquer quantidade de métodos. Por exemplo, o agente de estabilização poderá ser secado por aspersão, administrado livremente ou liofilizado sobre a superfície da parede interior do dispositivo de coleta. Al- ternativamente, o agente estabilizante, quando na forma de gel ou liquida, poderá, por exemplo, ser colocado na porção do reservatório do dispositivo de coleta. Métodos tradicionais para a produção do dispositivo de coleta com o agente esta- bilizante são também possíveis. Tipicamente, com a colocação da quantidade desejada de agente dentro de um recipiente, re- constitui-se a forma sólida do agente e então fornece-se a quantidade apropriada de líquido para dentro do recipiente. 0 líquido poderá ser secado por aspersão, colocado no fundo do recipiente ou posteriormente, ser liofilizado. A quantidade e a localização do agente de estabi- lização são determinadas por várias variáveis, incluindo o modo de aplicação, o agente estabilizante especifico utilizado, o volume interno e a pressão interna do dispositivo de coleta, e o volume da amostra biológica colocada dentro do recipiente. A concentração do agente estabilizante é suficiente para estabilizar a proteína e inibir ou evitar a degradação da proteína.

Além do agente estabilizante, o dispositivo da invenção atual poderá também conter um meio de veículo (por exemplo, água ou álcool), um meio estabilizante (por exemplo, polivinilpirrolidona, manitol trealose, etc.) e/ou um ou mais aditivos diferentes, para o tratamento da amostra biológica.

Aditivos adequados incluem, mas não são limitados a fenol, misturas de fenol/clorofórmio, álcoois, aldeídos, cetonas, ácidos orgânicos, sais de ácidos orgânicos, sais alcalino metálicos de halogenetos, agentes quelantes orgânicos, corantes fluorescentes, anticorpos, agentes aglutinantes, anticoagu- lantes, tais como citrato de sódio, eparina, EDTA de potássio e semelhantes, e qualquer outro reagente ou combinação de reagentes utilizado normalmente para tratar amostras biológicas para análise. Outros aditivos em potencial, incluem antio- xidantes e agentes redutores, que poderão auxiliar a proteger a confirmação da proteína, por exemplo, proteger os acoplamentos dos grupos sulfidrila. Poderá também ser vantajoso incluir-se um agente tampão ou compostos de açúcar. Ainda outros grupos aditivos ou químicos incluem aqueles que aumentam a solubilidade do aditivo conservante ou estabilizante na matriz do espécime.

De preferência, o veículo e os aditivos não degradam as proteínas. Quando o agente estabilizante está na forma de comprimido, se desejado, poderão ser incluídos materiais farmacêuticos de desintegração do comprimido, que são co- nhecidos por aqueles adestrados na arte.

Os métodos da invenção atual incluem a obtenção de uma amostra biológica e a introdução da amostra no recipiente contendo o agente estabilizante. Em realizações preferidas, a amostra biológica é retirada do paciente diretamente para o recipiente de coleta, sem nenhuma etapa intermediária de processo. Descobriu-se que a coleta da amostra biológica diretamente do paciente, como quando se recolhe uma amostra de sangue puro, e introduzindo-se a amostra diretamente no re- cipiente contendo o agente estabilizante, reduz-se ou evita-se substancialmente a modificação, degradação e/ou fragmentação das proteínas que de outra forma ocorrem quando a amostra é estocada, antes de combinar a mesma com o agente estabilizante. O método da invenção atual é útil, tanto em sistemas de coleta abertos, como em sistemas de coleta fechados, onde a abertura é fechada por intermédio de meios de fechamento.

Em uma realização preferida, o dispositivo de coleta da invenção atual é para retirar uma amostra de sangue puro diretamente de um paciente para a estabilização das proteínas imediatamente no ponto de coleta. 0 dispositivo poderá ser um sistema de evacuação para coleta de sangue. Alternativamente, o dispositivo poderá ser um sistema parcialmente evacuado ou não evacuado para coleta de sangue. Um exemplo adequado de um sistema evacuado é um tubo fechado. Uma seringa de extração manual é um exemplo adequado, tanto de um sistema parcialmente evacuado como não evacuado. Os sistemas não evacuados poderão também incluir sistemas de extração automáticos. Os sistemas evacuados são especialmente preferidos.

Com referência aos desenhos nos quais caracteres com a mesma referência referem-se às mesmas partes em todas as diversas vistas do mesmo, a figura 1 mostra um dispositivo típico de coleta de sangue 10, que inclui um recipiente 12 que define uma câmara interna 14. Na realização ilustrada, o recipiente 12 é um tubo oco tendo uma parede lateral IS, uma extremidade de fundo fechada 18 e uma extremidade superior aberta 20. Op- cionalmente, um membro de separação 13 é fornecido dentro da câmara do recipiente 14. O membro de separação 13 serve para auxiliar a separação dos componentes da amostra, por exemplo, por centrifugação. O recipiente 12 é dimensionado para a coleta de um volume adequado de fluído biológico, de preferência, sangue. É necessário um meio de fechamento 22 para cobrir a extremidade aberta 20 para fechar o recipiente 12, quando é solicitado um produto estéril. Para tubos convencionais, uma tampa rosqueada normalmente é suficiente. Para tubos de coleta evacuados, uma tampa elastomérica de fechamento firme é muito utilizada para conter o vácuo durante os períodos requeridos de estocagera. De preferência, o fechamento 22 forma um selo capaz de fechar efetivamente o recipiente 12 e reter uma amostra biológica na câmara 14. 0 fechamento 22 poderá ser um de uma variedade de formas, incluindo, mas não limitado a, fechamento de borracha, selos metálicos, selos de borracha com banda metálica, e selos de polímeros e formas diferentes. Um escudo protetor 24 poderá cobrir o fechamento 22. 0 recipiente 12 também contém um agente estabilizante de acordo com a invenção atual. 0 recipiente 12 pode ser feito de vidro, plástico ou de outros materiais adequados. De preferência, o recipiente 12 é transparente. Exemplos não limitantes de materiais termo- plásticos transparentes adequados para o recipiente 12 são policarbonatos, polietileno, polipropileno e polietileno tereftalato. Materiais plásticos podem ser materiais imper- meáveis à oxigênio ou poderão conter uma camada impermeável ou semi-permeável a oxigênio. Alternativamente, o recipiente 12 pode ser feito de um material plástico permeável à água e ao ar. 0 agente estabilizante poderá ser fornecido para o recipiente utilizando-se qualquer meio apropriado. Em um aspecto, o agente estabilizante está em uma solução líquida e é colocado dentro do recipiente. Posteriormente, a solução poderá ser liofilizada por métodos que são conhecidos na arte tais como, por exemplo, secagem por congelamento. Por exemplo, congelando-se a solução e então aquecendo-se lentamente depois do congelamento, en- quanto simultaneamente aplica-se vácuo, um pó seco por con- gelamento permanece no tubo de coleta. Um aditivo como um excipiente, por exemplo, PVP ou trealose, poderá também ser adicionado na solução de agente estabilizante antes da secagem por congelamento, de forma que o agente estabilizante resultante seja granulado dentro do recipiente. A secagem a vácuo poderá também ser utilizada depois da adição da solução estabilizante.

Em outro aspecto, o agente estabilizante é formado como um aerossol líquido ou sólido e é aspergido em uma ou mais su- perfícies do interior do recipiente. A pressão na câmara 14 é escolhida para extrair um volume predeterminado de amostra biológica para dentro da câmara 14. De preferência, o fechamento 22 é feito de um material resistente que é capaz de manter uma pressão interna diferencial entre a pressão atmosférica e uma pressão menor do que a atmosférica. 0 fechamento 22 é tal que ele pode ser penetrado por uma agulha 26 ou outra cânula para introduzir uma amostra biológica para dentro do recipiente 12, conforme é conhecido na arte. De preferência, o fechamento 22 é reselável. Materiais adequados para o fechamento 22 incluem, por exemplo, borracha silicone, borracha natural, borracha de estireno butadieno, copolímeros de etileno - propileno e policloropreno.

Exemplos adequados de recipientes 12 incluem tubos de uma só parede e de paredes múltiplas. Um exemplo mais específico de um recipiente adequado 12 é apresentado na patente americana de número 5.860.937 para Cohen, que é incorporada aqui como referência na sua integridade.

Um processo de fabricação útil para os dispositivos de acordo com a invenção atual, envolve a obtenção de um recipiente de coleta; a adição de pelo menos um inibidor de fosfatase no recipiente; a liofilização de pelo menos um inibidor; a evacuação do recipiente; e a esterilização do recipiente. Pelo menos um inibidor poderá ser fornecido para o recipiente na forma de solução. Depois da adição do inibidor no recipiente de coleta, se desejado, poderá ser adicionado ao recipiente um membro de separação.

Conforme mencionado, o recipiente 12 poderá também conter um gel, um membro de separação diferente ou mecânico (por exemplo, um mecanismo de filtragem). Em tais casos, o agente estabilizante poderá ser secado por aspersão e/ou liofilizado em uma superfície exterior do meio de separação. 0 recipiente 12 poderá também ser um dispositivo de coleta para a preparação do plasma de sangue. Tal dispositivo de coleta compreende, além do agente estabilizante, um elemento para a separação de plasma de sangue puro humano ou animal. 0 elemento para a separação de plasma do sangue puro poderá ser um membro de separação, como uma formulação de gel, um meio mecânico ou um mecanismo de filtro. O gel, desejosamente é uma formulação de gel tixotropica polimérica. 0 gel poderá ser um homopolímero ou um copolímero e poderá incluir gels com base em silicone, tais como, por exemplo, polisiloxanos, ou gels com base em hidrocarbonetos orgânicos tais como, por exemplo, poliacrílicos, poliésteres, poliolefinas, polibutadienos cis oxidados, polibutenos, misturas de óleo de soja epoxidado e hidrocarbonetos clorados, copolímeros de diãcidos e propanodióis, ciclopentadienos hidrogenados e copolímeros de alfa olefinas com dialquilma- leatos. 0 gel desejosamente isola o plasma das células da amostra de sangue no tubo, servindo como um meio de separação de densidade. Um exemplo de um tubo de preparação de plasma adequado é apresentado na patente americana de número 5.906.744 para Carrol et al. , que é incorporada aqui como referência na sua integridade. Dessa forma, a estabilização pode ser produzida tanto antes, durante como após a centrifugação, para separar o plasma do sangue. No caso de um material de separação de gel, poderá ser desejável produzir-se uma separação física/qu£mica entre o agente estabilizante e o gel, como por exemplo, u- tilizando uma cápsula, conforme discutido acima. Por exemplo, se porções do agente são incorporadas ou reagem com o gel, a efetividade do agente poderá ser reduzida. Pelas mesmas razões, onde é utilizado um elemento de separação mecânica, o elemento desejosamente ê substancialmente inerte ao agente estabili- zante, e isto reflete uma vantagem significativa de tal se- parador. 0 fornecimento de um elemento de separação nos tubos de plasma, ao invés da centrifugaçao sem um elemento de se- paração, é especialmente vantajoso. Especificamente, como a desintegração da célula libera proteases que degradam as proteínas de interesse, quanto melhor for a separação entre as células (isto é, o sangue coagulado) e o plasma, melhor será a estabilidade das proteínas na amostra de plasma. Separadores mecânicos úteis são encontrados, por exemplo, nas patentes americanas de número 6.516.953; 6.406.671; 6.409.528; e 6.497.325, os teores das quais são incorporados aqui como referência na sua integridade. Mecanismos de filtros úteis são encontrados, por exemplo, na patente americana de número 6.506.167, o teor da qual é incorporado aqui como referência na sua integridade. Ishimito et al. apresenta um tubo de separação de sangue, incluindo um tubo a montante separado do tubo a jusante por um filtro, onde os tubos podem ser unidos e separados um do outro e são evacuados. Durante a coleta do sangue, o sangue é removido de um paciente através de punctura e é transferido para um tubo a montante por intermédio da pressão do sangue e da pressão negativa dentro do tubo. De acordo com a apresentação, supõe-se que é criado um diferencial de pressão entre o tubo a montante e o tubo a jusante, quando o sangue contata o filtro entre os dois tubos. Assim sendo, a centrifugação não é requerida para se separar o sangue puro. Vários filtros sugeridos incluem uma membrana, fibras de vidro, papel de filtro com grandes poros tendo ligados ao mesmo anticorpos anti-hemocitos, um filtro impregnado com uma substância catiônica macromolecular para agregar células, e um filtro laminado de camadas múltiplas. O recipiente 12 poderá também ser um tubo de coleta para a separação por centrifugação de linfócitos e de monócitos de fases mais pesadas de uma amostra do sangue puro compre- endendo, além do agente estabilizante, um meio líquido de gradiente de densidade e um meio para evitar a mistura do meio líquido de gradiente de densidade com uma amostra de sangue, antes da centrifugação. Um exemplo de um tubo de coleta de linfócito/monócito adequado é apresentado na patente americana de número 5.053.134 para Luderer et al. , que é incorporada aqui como referência na sua integridade.

Em outra realização, a invenção apresenta um kit, tendo pelo menos dois recipientes compreendendo um ou mais agentes estabilizantes. Por exemplo, o kit poderá ser composto de um tubo de coleta primário, por exemplo, um tubo de separação de plasma tendo um elemento de separação no mesmo, e um tubo secundário para teste, por exemplo, para derramar ou fornecer de outra maneira o plasma recolhido ao mesmo. Ambos teriam um agente estabilizante no mesmo, para assegurar que as proteínas de interesse permaneçam estáveis todo o tempo. 0 tubo poderá ter estágios onde certas proteínas são separadas ou eliminadas em um estágio e separadas em outro. Opcionalmente, o kit podería incluir um dispositivo de transferência tubo-a-tubo para evitar a necessidade de derramar e de outras práticas de transferência inseguras, em cujo caso, o tubo secundário estaria em uma pressão reduzida para aspirar o plasma. Uma pessoa que utilizasse tal kit recolhería uma amostra no tubo primário, centrifugaria, transferiría a amostra de interesse para o tubo de teste secundário, e executaria o teste. O tubo de teste secundário poderia ser de vários tamanhos, dependendo do teste desejado.

Em outra realização, o recipiente é um tubo com duas extremidades abertas, tendo tampas nas mesmas. 0 tubo permitiría a coleta de uma amostra, por exemplo, para um tubo de separação de plasma com um elemento de separação no mesmo, a amostra sendo de plasma ou uma amostra de coágulo.

Ainda em outra realização, o dispositivo de coleta da invenção atual é composto de uma placa de teste, como por exemplo, uma placa de um só ou de poços múltiplos, uma placa de microtitulação, uma placa de cultura de tecido ou semelhante.

Uma placa de teste típica geralmente é composta de um ou mais poços, que de preferência são cilíndricos. Conforme mostrado na figura 2, uma placa de teste 30 inclui uma superfície superior 32 e uma superfície inferior 34 . A placa de teste 30 inclui ainda uma quantidade de poços 36, cada um deles compreendendo uma parede lateral 38 que se estende da superfície superior 32 da placa para a superfície inferior 34 da placa. Cada poço é composto de uma porção de topo 40 e uma porção de fundo 44. A porção de topo 40 é composta de uma extremidade aberta 42 que se estende até a porção de fundo 44, que é composta de uma extremidade fechada 46. A porção de fundo 44 poderá ser plana, cônica (em ponta) ou arredondada. A capacidade de cada poço 36 tipicamente varia de vários mililitros (ml) até menos de cerca de 0,5 ml. Os poços 36 poderão, cada um deles, acomodar no mesmo um agente estabilizante de acordo com a invenção atual. 0 número de poços 36 na placa de teste 3 0 não é critico.

Poderá haver qualquer número de poços, apesar de placas de teste com 6, 12, 24, 48, e 96 poços serem comumente conhecidas e disponíveis. Na figura 2, é ilustrada uma placa de teste com 6 poços, meramente para fins de exemplo, e a invenção não depende do número de poços. A maior parte das placas standard de poços múltiplos têm os poços arrumados em fileiras e colunas or- togonais para serem capazes de identificarem claramente os poços individuais que estão sendo utilizados. Ξ claro, o arranjo dos poços na placa de teste 30 não é uma limitação essencial da invenção atual porque qualquer arranjo de poços é considerado pela invenção. A placa 30 poderá ser formada de materiais termo- plásticos, através de formatação a vácuo, moldagem de placas, moldagem por injeção ou outras técnicas semelhantes. Os ma- teriais termoplãsticos adequados incluem, mas não são limitados a, poliestireno, cloreto de polivinila, policarbonato, po- lietileno tereftalato e semelhantes. De preferência, a placa 30 é transparente.

Cercando os poços e formando a borda externa da placa de teste 30 estão as paredes laterais 38. Na realização atual, a placa de teste 30 tem seis (6) paredes laterais. Placas de teste bem conhecidas têm a forma retangular ou quadrangular, apesar de, para fins da invenção atual, a placa poder ser fabricada com qualquer configuração prática. Exemplos de placas de teste adequadas contendo uma quantidade de poços, são apresentadas na patente americana de número 5.882.922 para Tyndorf et al., na patente americana de número 5.801.055 para Henderson e na patente americana de número 5.681,743 para Brian et al., cada uma delas sendo incorporada aqui como referência na sua in- tegridade .

Ainda em outra realização, o dispositivo de coleta de acordo com a invenção poderá ser um conjunto de coleta de amostra para a coleta, transporte e fornecimento de amostras biológicas. 0 conjunto de coleta geralmente inclui uma quantidade de poços de amostras para a coleta de amostras biológicas individuais.

Os poços de amostra são suportados em uma bandeja de amostra em uma orientação de separação de espaçamento. A bandeja de amostra poderá ser suportada dentro de uma caixa, que inclui a bandeja de amostra e permite o transporte seguro e eficiente dos poços de amostra. A bandeja de amostra é acomodada de forma móvel dentro da caixa, para o movimento entre uma primeira posição, incluindo a quantidade de poços de amostra, até uma segunda posição, fazendo com que um dos poços de amostra seja acessível pelo exterior, de forma que a amostra possa ser fornecida manualmente a partir da bandeja.

Conforme mostrado nas figuras 3a e 3b, a bandeja de amostra 50 incluí uma quantidade de depressões espaçadas longitudinalmente, formando os poços de coleta de espécimes 52. A bandeja de amostra 50 poderá ser formada de um material plástico ou deformável adequado. Os poços 52 têm um fundo 54 e uma extremidade aberta 56. Considera-se que os poços de amostra poderão estar na forma de membros semelhantes a um copo com a extremidade aberta. Os poços 52 são construídos para terem uma profundidade suficiente para reterem um volume adequado de uma amostra biológica. Os poços 52 poderão, cada um deles, acomodar no mesmo um agente estabilizante de acordo com a invenção atual.

Embora a bandeja 50 da invenção atual seja mostrada tendo uma só fileira de poços 52 formada na mesma, a invenção atual considera que os poços poderão ser fornecidos em qualquer número ou em qualquer arranjo desejável para uma situação de teste especifica. 0 conjunto de coleta da amostra poderá incluir uma caixa de coleta de amostra 57. Após a coleta de uma amostra biológica para dentro dos poços 52, a bandeja de amostra 50 poderá ser inserida na extremidade aberta 58 da caixa de coleta de amostra 57 e então dentro do interior 59 da caixa de coleta de amostra 57, até que todos os poços 52 estejam dentro da mesma.

Um conjunto de coleta de amostra adequado é apresentado na patente americana de número 6.357.583 BI para Rainen, que é incorporada aqui como referência na sua integridade.

De acordo com outra realização da invenção atual, conforme detalhado na figura 4, o dispositivo de coleta é composto de uma seringa, mais de preferência, uma seringa previamente carregada com um agente estabilizante de acordo com a invenção atual. Uma seringa típica é composta de um barril geralmente cilíndrico tendo extremidades opostas proximal e distai com pelo menos uma câmara formada entre as extremidades para receber uma substância, como uma amostra biológica. Um pistão é tipicamente colocado com vedação dentro do barril e sendo móvel em relação ao mesmo, e os meios de vedação poderão ser colocados de forma vedada, próximos da extremidade distai do barril. Com referência agora à figura 4, é mostrada uma seringa 60, que inclui um barril ou cilindro alongado 62 tendo uma extremidade proximal aberta 64 e uma extremidade distai 66, com pelo menos uma câmara oca 68 formada entre as extremidades proximal e distai para receber uma amostra biológica. Na realização ilustrada, a extremidade distai 66 inclui uma proteção da agulha 70. A proteção de agulha mantém a seringa, assim como a agulha, estéril durante a estocagem. 0 barril da seringa inclui um agente estabilizante.

De preferência, o barril da seringa é previamente carregado com o agente estabilizante. Seringas previamente carregadas, conforme o termo é conhecido na arte, são seringas que são carregadas pelo fabricante e despachadas para o fornecedor de artigos para a saúde, prontas para utilização.

Um pistão 72 poderá ser localizado na extremidade proximal aberta 64. 0 pistão 72 pode ser movimentado por intermédio de uma haste do pistão 74, que é fixada ao pistão, por exemplo, através de rosca. Na mesma extremidade onde é colocado o pistão, o barril poderá ter um suporte de dedo 76, que é fixado ao barril de acordo com o princípio assim chamado de "tampa de pressão". O suporte de dedo 76, de preferência consiste em um material ligeiramente resistente, por exemplo, plástico. Em outra realização (não mostrada) o suporte de dedo é uma peça semelhante a um flange do barril projetado para fora radialmente. São possíveis, é claro, outras construções co- nhecidas por aqueles adestrados na arte.

Uma rolha 78, que fecha o barril, poderá ser lo- calizada na extremidade do barril longe do pistão. 0 pistão e a rolha de preferência são fabricados de um material elástico e, mais de preferência, de borracha de uma qualidade farma- cêutica .

Na realização ilustrada, uma agulha de injeção 80 é fixada no barril por intermédio de um suporte de agulha 82. 0 suporte de agulha tem um pescoço 84, que sustenta a agulha, um eixo 86 e um colarinho 88. 0 suporte de agulha de preferência é fabricado de material ligeiramente elástico, que tem re- sistência â deformação, como por exemplo, plásticos, e é fixado na extremidade do barril por intermédio de uma construção do tipo tampa de pressão. Alternativamente, o suporte da agulha poderá ser fixado no barril por intermédio de uma conexão rosqueada ou adesiva, quando o barril também contém um colarinho, por intermédio de um anel de aperto. Nesta última realização, o suporte de agulha poderá ser também flangeado ao redor de um colarinho do barril.

Apesar do barril de seringa ilustrado nesta rea- lização incluir um colarinho de travação do tipo Luer 88, está dentro do âmbito da invenção atual incluir barris de seringas sem um colarinho, barris de seringa tendo um orifício colocado excentricamente e várias outras estruturas semelhantes a orifícios, adaptadas para aceitar, permanentemente ou de forma removível, uma cânula de agulha ou um conjunto de cânula de agulha. Somente é requerido que exista uma abertura na ex- tremidade distai do barril da seringa em comunicação fluida com o interior do barril de seringa.

Um ou mais sulcos poderão ser feitos na parede interna do eixo 86 e na face traseira do pescoço 84. 0 sulco ou sulcos se estendem para a extremidade traseira da cânula. Na seção em corte, os sulcos poderão ser partes de um círculo, mas outras formas são também possíveis, desde que o tamanho seja tal que líquido de injeção suficiente possa ser rapidamente passado através do mesmo; isto é conseguido se o diâmetro do sulco ou a seção em corte total dos sulcos é pelo menos tão grande quanto aquela da cânula. 0 eixo 86 do suporte da agulha 82 é construído de forma que quando a rolha 78 desliza axialmente para a frente, ela é recebida, com atrito, pelo eixo; assim sendo, além dos sulcos 90 feitos no eixo, o diâmetro interno do eixo é a- proximadamente tão grande quanto aquele do barril 62. O eixo 86 do suporte da agulha 82 é ligeiramente mais comprido do que a rolha 78, de forma que a peça 92 do sulco adjacente ao barril está livre quando a rolha é movimentada para a frente contra a parede traseira do pescoço do suporte da agulha. Se desejado, a guarda da agulha 70 poderá ser construída também para servir como um eixo de pistão. Naquele caso, antes da utilização da seringa, a guarda da agulha é removida da agulha e é fixada no pistão na outra extremidade da seringa.

Geralmente, uma seringa composta de um protetor de agulha, tem um membro de segurança que indica se o protetor de agulha foi removido previamente. Tal membro de segurança na forma de uma tampa, é descrito, por exemplo, na patente americana de número 3.995.630.

Em outras realizações, a seringa não é armazenada com uma agulha colocada, isto é, é uma seringa sem a agulha, conforme é conhecido na arte. Isto é ilustrado na figura 5. Com tal seringa, antes do uso, a agulha é colocada no pescoço 84 do suporte de agulha 82 por intermédio de um cubo de agulha. É preferível que seja utilizado para esta conexão um cone chamado Luer. Nesta realização, a abertura 94 no pescoço do suporte da agulha é fechada na parte externa por uma tampa protetora 96, que assegura a esterilidade da seringa, assim como do suporte da agulha. O sulco 90 feito no suporte da agulha, é projetado para a extremidade da abertura do pescoço.

Um exemplo de uma agulha adequada é apresentado na patente americana de número 6.027.481 para Barrelle et al., que é incorporada aqui como referência na sua integridade. Outros exemplos de seringas adequadas são apresentados, por exemplo, na patente americana de número 4.964.866 para Szwarc, na patente americana de número 4.986.818 para Imbert et al., na patente americana de número 5.607.400 para Thibault et al. e na patente americana de número 6.263.641 BI para Odell et al., cada uma das quais é incorporada aqui como referência na sua integridade.

Em uma outra realização, o dispositivo de coleta da invenção atual é composto de um catéter. Conforme é conhecido na arte, os catéteres são comumente utilizados quando um paciente requer doses repetidas de medicação ou de outras substâncias. Um catéter permite a administração repetida e continua de medicação diretamente em uma corrente do sangue do paciente, ou de outra região do corpo, sem injeções repetidas.

Tipicamente, os catéteres têm um lúmen tubular oco, uma ex- tremidade proximal e uma extremidade distai. A extremidade distai do catéter, que pode ser aberta ou fechada, é inserida na veia ou artéria de um paciente. A Figura 6a ilustra um conjunto de catéter de exemplo, que inclui um catéter flexível 100 tendo uma parede lateral cilíndrica 102 descrevendo um lúmen 64 na mesma, uma extremidade proximal 106 e uma extremidade distai fechada 108 a qual, nesta realização ilustrada, tem uma superfície externa arredondada 110 para facilitar a inserção do cateter no paciente. Conforme ilustrado na figura 6b, o catéter 100 inclui uma fenda 112 através da parede lateral 102 adjacente à extremidade distai 108 e é definida por duas faces opostas 114 e 116 formadas na parede lateral. 0 catéter 100 inclui um agente estabilizante de acordo com a invenção atual, de preferência no lúmen do catéter. A extremidade proximal do catéter é ligada a uma carcaça do catéter 118 tendo um duto 120 através da mesma. 0 duto 120 na carcaça do catéter e o lúmen 104 no catéter estão em comunicação fluida. Uma peça da válvula de controle 122 tendo um canal de passagem através da mesma é ligada rotativamente à carcaça do catéter 118 de forma que o canal de passagem 124 está em comunicação fluida com o duto 120. A peça da válvula de controle 122 e a carcaça do catéter 118 são mantidas unidas em decorrência do flange proximal 126 na carcaça do catéter que encaixa a saliência rotativa 128 na peça da válvula de controle.

Esta estrutura permite que a peça da válvula de controle gire com relação à carcaça do catéter, mas evita que os dois elementos se separem. Um exemplo de um catéter adequado é apresentado na patente americana de número 4.737.152 para Alchas, que é incorporada aqui como referência na sua integridade.

Ainda em uma outra realização, o dispositivo de coleta da invenção atual é composto de uma pipeta. Em instalações de laboratório, é bem conhecido utilizar-se uma pipeta para extrair-se um certo volume de um fluido biológico de um re- cipiente e transportar e fornecer parte ou todo o volume extraído para outro recipiente. Tipicamente, as pipetas geralmente são membros tubulares ocos, que são utilizados aplicando-se sucção em uma extremidade superior aberta, ou lado da boca, para extrair ou aspirar uma quantidade de meio de fluido para dentro do tubo oco. Uma pressão diferencial mantida fechando-se a abertura do lado da boca retém o fluido dentro da pipeta, permitindo o transporte do meio do fluido para outro recipiente. Uma abertura seletiva do lado da boca permite que seja liberada uma quantidade do meio do fluido contido na pipeta. Um certo grau de precisão na quantidade de fluido liberado é fornecida pelas porções da extremidade tampada, reduzindo-se a quantidade de fluido perdido devido ao gotejamento.

Com referência agora à figura 7, é mostrada uma pipeta de exemplo 200. A pipeta 200 geralmente é um membro alongado tubular, definido por uma parede tubular 202 de espessura geralmente uniforme. Dentro da parede tubular 202, um interior de pipeta 204 é definido acomodando-se um determinado volume de meio de fluido, por exemplo, uma amostra biológica. Uma pipeta 202 inclui geralmente uma porção principal do corpo cilíndrico alongado 206 que tem o mesmo comprimento que o interior 204. 0 corpo da pipeta 206 poderá ser previamente carregado com um agente estabilizante, de acordo com a invenção atual.

Para aspirar e fornecer o fluido biológico, a pipeta 200 inclui uma porção de fornecimento 2 08 em uma extremidade do corpo 206 em um lado da boca 210 na outra extremidade. Tanto a porção de fornecimento 208 como a porção da boca 210 estão em comunicação com o interior 204 da pipeta 200 para permitir a aspiração e o fornecimento do fluido através da porção de fornecimento 208, criando-se uma pressão diferencial seletiva dentro do interior 204 da pipeta 200 utilizando-se o lado da boca 210. Tal diferencial de pressão pode ser criado manualmente, abrindo-se e fechando-se o lado da boca 210, ou poderá ser criado pelo uso de auxiliares mecânicos da pipeta. A pipeta 200 poderá ser construída de vidro ou de um material termoplãstico, como policarbonato, polietileno, poliêster, poliestireno, polipropileno, polisulfona, poliu- retana, etileno vinil acetato ou semelhante. As pipetas termoplãsticas substituíram amplamente as pipetas de vidro para vários usos. O material da pipeta 200 poderá ser transparente, translúcido ou opaco.

Exemplos de pipetas adequadas são apresentados, por exemplo, na patente americana de número 6.280.689 BI para Stevens e na patente americana de número 6.343.717 BI para Zhang et al. , ambas as quais são incorporadas aqui como referência na sua integridade. 0 dispositivo de coleta da invenção atual poderá também compreender uma bolsa de coleta adequada para manter uma amostra biológica, como por exemplo, uma bolsa de coleta de sangue, uma bolsa de plasma de sangue, uma bolsa revestida de couro, uma bolsa de plaquetas ou semelhante. Para facilidade de descrição, será agora descrita uma bolsa de coleta de sangue, com referência a figura 8. A Figura 8 ilustra uma bolsa de coleta de sangue 300 para acomodar o sangue recolhido. A bolsa de coleta de sangue 3 00 tem um corpo 3 02 formado pela superposição de um par de peças cortadas de forma idêntica de um material de folha feito de uma resina, que será descrito mais especificamente aqui poste- riormente, e possui flexibilidade e capacidade para ser fundida (isto é, fundida por calor, fundida por freqüência elevada ou semelhante} ou unida adesivamente uma com a outra na periferia da porção de selagem 304 de cada uma das peças do material da folha. É formada uma porção de acomodação do sangue 306, para acomodar o sangue colhido, em uma porção interna circundada pela porção de selagem 304 do corpo 302. A bolsa de coleta de sangue 300 de preferência contém um agente estabilizante de acordo com a invenção atual.

Uma extremidade do tubo flexível 308 é ligada com o corpo 302 em uma porção superior do mesmo. Uma agulha de coleta de sangue 310 é instalada na outra extremidade do tubo flexível 308, através de um cubo 312. Uma tampa 314, que se destina a tampar a agulha de coleta de sangue 310, poderá ser instalada no cubo 312. Duas aberturas 316 e 318, cada uma delas selada com uma cobertura removível, poderão ser formadas na porção superior do corpo 302, de forma que possam ser abertas. A composição, as características e a aparência do material das folhas que compõem o corpo 302 da bolsa de coleta de sangue 300 não são limitadas àquelas especificadas. Neste caso, como material da folha que compõe a bolsa de coleta de sangue 300, são utilizados de preferência o cloreto de po- lívinila macio ou materiais contendo o cloreto de polivinila macio, como o seu componente principal. Por exemplo, podem ser utilizados um copolímero contendo o cloreto de polivinila macio como o seu componente principal e uma pequena quantidade de material macromolecular, uma mistura polimérica, uma liga polimérica e semelhantes. Como plastificante para o cloreto de polivinila macio, de preferência podem ser utilizados dioc- tilftalato (DEHP, di(2-etilhexil)ftalato) e (DnDP, di (n-decil) f talato) . 0 teor de tal plastif icante no cloreto de polivinila, de preferência deve estar na faixa aproximada de 30 a 70 partes por peso, com base em 100 partes por peso de cloreto de polivinila.

As outras substâncias que são utilizáveis efeti- vamente para o material da folha da bolsa de coleta de sangue 300 são poliolefinas, isto é, os produtos da homopolimerização ou copolimerização de tais olefinas ou diolefinas, como etileno, propileno, butadieno e isopreno. Exemplos típicos incluem polietileno, polipropileno, copolímero de etileno e acetato de vinila (EVA), misturas polimêricas formadas entre EVA e vários elastômeros termoplásticos e combinações arbitrárias dos mesmos. Tais poliésteres, como o polietileno tereftalato (PET) , polibutileno tereftalato (PBT), poli-1,4-cicloexano dimetil tereftalato (PCHT) e cloreto de polivinilideno são também utilizáveis.

Ainda em outra realização, o dispositivo de coleta da invenção atual poderá ser um vaso de laboratório que contém o agente estabilizante. Vasos especiais que podem ser utilizados de acordo com a invenção atual incluem, por exemplo, vials, frascos, frascos giratórios, garrafas rolantes, lâminas de microscópico, conjuntos de lâminas de microscópico, câmaras de amostras para dispositivos analíticos, fitas, laminados, séries, tubulação e semelhantes. Os vasos de laboratório, de acordo com a invenção atual, têm pelo menos uma superfície operacional. Vários vasos de acordo com a invenção têm pelo menos uma parede interior, que define uma porção do recipiente para conter a amostra biológica, e pelo menos uma abertura em comunicação com a porção do recipiente.

Plástico ou vidro com freqüência é utilizado para a fabricação dos vasos de laboratório. Alguns materiais pre- feridos utilizados para a fabricação dos vasos de laboratório incluem polipropileno, polietileno, polietileno tereftalato, poliestireno, policarbonato e celulósicos. Como o polipropileno não é caro, ele é o material especialmente preferido para vasos de laboratório utilizados para o manuseio e transporte de quantidades mínimas e precisas de amostras biológicas.

Exemplos de outros materiais adequados para os vasos de laboratório da invenção atual, incluem poliolefinas, po- liamidas, poliésteres, silicones, poliuretanas, epóxidos, acrílicos, poliacrilatos, poliésteres, polisulfonas, poli- metacrilatos, PEEK, poliimidas e fluorpolímeros. Os produtos de vidro, incluindo vidro de sílica, são também utilizados para a fabricação de vasos de laboratório.

Embora tenham sido escolhidas diversas realizações para demonstrar a invenção, ficará entendido por aqueles adestrados na arte que várias modificações e adições podem ser feitas sem se afastarem do escopo da invenção, conforme definido nas reivindicações anexas.

Claims (30)

1. Aparelho para a coleta de uma amostra biológica, CARACTERIZADO pelo fato de compreender: um recipiente tendo uma porção de reservatório para o recebimento da amostra; e pelo menos um agente estabilizante de proteína compreendendo pelo menos um inibidor de fosfatase, no re- servatório do recipiente.

2. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato do recipiente ser selecionado do grupo consistindo em tubos, dispositivos de coleta de sangue em sistema fechado, bolsas de coleta, seringas, seringas pre- viamente cheias, catéteres, placas de microtitulação, dis- positivos de coleta com poços múltiplos, frascos, frascos giratórios, garrafas rolantes, vials, pipetas, ponteiras de pipetas, tecidos e outros recipientes de coleta de amostras biológicas.

3. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato do recipiente ser um tubo tendo uma primeira extremidade e uma segunda extremidade.

4. Aparelho, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO adicionalmente pelo fato de compreender um membro de separação disposto no recipiente.

5. Aparelho, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADO pelo fato do membro de separação ser um elemento de separação mecânico.

6. Aparelho, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADO pelo fato do elemento de separação mecânica ser pelo menos parcialmente revestido com pelo menos um agente estabilizante.

7. Aparelho, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADO pelo fato do elemento de separação mecânica ser substancialmente inerte com relação ao agente estabilizante.

8. Aparelho, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADO pelo fato do membro de separação ser um gel.

9. Aparelho, de acordo com a reivindicação 8, CARACTERIZADO pelo fato do membro de separação de gel ser fisicamente separado do agente estabilizante.

10. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato do agente de estabilização de proteína estar em uma forma selecionado do grupo consistindo em uma solução, suspensão ou outro líquido, um pélete, um comprimido, uma cápsula, um material secado por aspersão, um material secado por congelamento, um pó, uma partícula, um gel, cristais ou um material liofilizado.

11. Aparelho, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato do agente estabilizante de proteína ser liofilizado.

12. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de pelo menos um inibidor de fosfatase inibir pelo menos uma fosfatase selecionado do grupo consistindo em serino fosfatase, trionino fosfatase, e tirosino fosfatase.

13. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato do agente estabilizante compreender ainda pelo menos um inibidor de protease.

14. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato do agente estabilizante compreender um coquetel de inibidores de fosfatase.

15. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato do agente estabilizante compreender mais de 2 inibidores de fosfatase.

16. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO adicionalmente pelo fato de compreender um meio de veículo.

17. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO adicionalmente pelo fato de compreender um meio estabilizante.

18. Aparelho, de acordo com a reivindicação 17, CARACTERIZADO pelo fato do meio estabilizante ser trealose.

19. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO adicionalmente pelo fato de compreender pelo menos um antioxidante.

20. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO adicionalmente pelo fato de compreender pelo menos um agente redutor.

21. Aparelho, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO adicionalmente pelo fato de compreender pelo menos um agente de tamponamento.

22. Aparelho, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato da primeira extremidade ser uma ex- tremidade aberta, a segunda extremidade ser uma extremidade fechada, e compreendendo, ainda, um meio de fechamento para a selagem da primeira extremidade aberta.

23. Aparelho, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato do tubo ser parcialmente evacuado.

24. Aparelho, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato da primeira extremidade ser uma ex- tremidade aberta, a segunda extremidade ser uma extremidade aberta, e compreendendo ainda um primeiro meio de fechamento para a selagem da primeira extremidade aberta e um segundo meio de fechamento para a selagem da segunda extremidade aberta.

25. Aparelho, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato do agente estabilizador de proteína ser liofilizado.

26. Aparelho, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato do agente estabilizador de proteína compreender mais de dois inibidores de fosfatase.

27. Aparelho, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO adicionalmente pelo fato do tubo compreender um anticoagulante.

28. Aparelho, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato do anticoagulante ser secado por aspersão sobre pelo menos uma porção de uma parede interior.

29. Aparelho, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato do anticoagulante compreender um sal de EDTA.

30. Aparelho, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato do anticoagulante compreender heparina.