BR9815711B1 - Composto antibiótico derivado de esteróide - Google Patents

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSTO ANTIBIÓTICO DERIVADO DE ESTERÓIDE".

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A invenção refere-se a novos derivados de esteróides e sais dos mesmos e a métodos e intermediários para sua preparação.

Sabe-se que alguns compostos que se associam fortemente com a membrana externa de bactérias Gram-negativas rompem a membra- na externa e aumentam a permeabilidade. A permeabilidade aumentada po- de levar diretamente à morte das células ou pode aumentar a suscetibilidade de bactérias Gram-negativas a outros antibióticos. Os mais estudados deste tipo de composto são os antibióticos polimixina. Para um exemplo de um estudo envolvendo a ligação de polimixina B ao constituinte primário da membrana externa de bactérias Gram-negativas (lipídeo A) ver: D.C. Morrin- son e D.M. Jacobs, Binding of Polymyxin B to The Lipid a Portion of Bacterial Lipopolysaccharides, Immunochemistry 1976, vol. 13, 813-819. Para um e- xemplo de um estudo envolvendo a ligação de um derivado de polimixina a bactérias Gram-negativas ver: M. Vaara e P. Viljanen, Binding of Polymyxin B Nonapepptide to Gram-negative Bactéria, Antimicrobial Agents and Che- motherapy, 1985, vol. 27, 548-554.

Membranas de bactérias Gram-negativas são "peneiras" mole- culares semipermeáveis que restrigem o acesso de antibióticos e moléculas de defesa hospedeiras em suas marcações na célula bacteriana. Assim, cá- tions e policátions que acessam o sistema de absorção auto-promovido são, em virtude de sua capacidade de interagir com e romper a barreira de per- meabilidade da membrana externa, capazes de aumentar a suscetibilidade de bactérias patogênicas Gam-negativas a antibióticos e moléculas de defe- sa hospedeira. Hancock e Wong demonstraram que uma ampla faixa de peptídeos pode superar a barreira de permeabilidade e inventaram o nome de "permeabilizadores" para descrever os mesmos (Hancock e Wong, Anti- microb. Agents Chemother., 26: 48, 1984).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A resente invenção descreve compostos da fórmula I em que: anéis fundidos A, B, C, e D são independentemente saturados ou completamente ou parcialmente insaturados; e Ri a R4, R6i R7, Rh, R12j R15, Ri6, e Ri7 são, cada, independentemente sele- cionados dentre o grupo consistindo em hidrogênio, hidroxila, uma (C1-C10) alquila substituída ou não-substituída, (C1-C10) hidroxialquila, (C1-C10) alquiloxi- (C1-C10) alquila, uma aminoalquila (C1-C10) substituída ou não- substituída, uma arila substituída ou não-substituída, C1-C10 haloalquila, C2-C6 alquenila, C2-C6 alquinila, oxo, um grupo de ligação fixado a um se- gundo esteróide, um (C1-C10) aminoalquiloxi substituído ou não- substituída, um (C1-C10) aminoalquilcarbóxi substituído ou não-substituído, uma (C1-C10) aminoalquilaminocarbonila substituída ou não-substituída, H2N-HC(Q5)-C(0)-0-, H2N-HC(Q5)- C(0)-N(H)-, (C1-C10) azidoalquilóxi, (C1-C10) cianoalquilóxi, P.G. -HN-C(Q5)-C(0)-0-, (C1-C10) guanidinoalquil óxi, e (C1-C10) guanidinoalquil carbóxi, onde Q5 é uma cadeia lateral de qualquer aminoácido, P.G. é um grupo de proteção amino, e R5, Rs, Rg, R10, R13 e R14 é cada independentemente: deletado quando um dos anéis fundidos A, B, C ou D é insatu- rado de modo a completar a valência do átomo de carbono neste sítio, ou selecionado dentre o grupo consistindo em hidrogênio, hidroxila, (C1-C10) alquila substituída ou não-substituída, (C1-C10) hidroxialquila, (C1-C10) alquiloxi (C1-C10) alquila, uma (C1-C10) aminoalquila substituída ou não-substituída, uma arila substituída ou não-substituída, (C1-C10) halo- alquila, C2-C6- alquenila, C2-C6- alquinila, oxo, um grupo de ligação fixado a um segundo esteróide, um (C1-C10) aminoalquiloxi substituído ou não- substituído, (C1-C10) aminoalquilcarbóxi substituído ou não-substituído, (C1-C10) aminoalquilaminocarbonila substituída ou não-substituída, H2N- HC (Q5)- C(0)-0-, H2N-HC(Q5)-C(0)-N(H)-, (C1-C10) azidoalquilóxi, (CI- CIO) cianoalquilóxi, P.G. -HN-C(Q5)-C(0)-0, (C1-C10) guanidinoalquilóxi, e (C1-C10) guanidinoalquilcarbóxi, onde Q5 é uma cadeia lateral de qualquer aminoácido, P.G. é um grupo de proteção amino, e desde que pelo menos dois dentre Ri a Ru sejam independentemente selecionados dentre o grupo consistindo em (C1-C10) aminoalquiloxi substituído ou não-substituído, (CI- CIO) aminoalquilcarbóxi substituído ou não-substituído, (C1-C10) aminoal- quilaminocarbonila substituída ou não-substituída, H2N-HC(Q5)-C(0)-0-, H2N-HC(Q5)-C(0)-N(H)-, (C1-C10) azidoalquilóxi, (C1-C10) cianoalquilóxi, P.G. -NH-C(Q5)-C(0)-0-, (C1-C10) guanidinoalquilóxi, e (C1-C10) guanidi- noalquilcarbóxi, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. O termo anel fundido usado aqui pode ser heterocíclico ou car- bocíclico, preferivelmente. O termo "saturado" usado aqui refere-se ao anel fundido da fór- mula I, tendo cada um átomo no anel fundido tanto hidrogenado como subs- tituído de modo que a valência de cada átomo é carregada. O termo "insaturado" usado aqui refere-se ao anel fundido da fórmula I, em que a valência de cada átomo do anel fundido pode não ser carregada com hidrogênio ou outros substituintes. Por exemplo, átomos de carbono adjacentes no anel fundido podem ser ligados duplamente uns aos outros. Insaturação também pode incluir deletar pelo menos um dos se- guintes pares e completar a valência dos átomos de carbono no anel nestas posições deletadas com uma ligação dupla; como R5 e R9; R8 e Ri0; e R13 e Rl4· O termo "não-substituído" usado aqui refere-se a uma porção tendo, cada uma, um átomo de carbono hidrogenado de modo que a valên- cia de cada átomo é carregada. O termo "halo" usado aqui refere-se a um átomo de halogênio como flúor, cloro, bromo ou iodo.

Exemplos de cadeias laterais de aminoácidos incluem, mas não estão limitados a H (glicina), metila (alanina), -CH2-(C=0)-NH2 (asparagina), -CH2-SH (cisteína) e -CH(OH)CH3 (treonina).

Um grupo alquila é um hidrocarboneto ramificado ou não ramifi- cado que pode ser substituído ou não-substituído. Exemplos de grupos al- quila ramificados incluem isopropila, sec-butila, isobutila, terc-butila, sec- pentila, isopentila, terc-pentila, iso-hexila. Grupos alquila substituídos po- dem ter um, dois, três ou mais substituintes, que podem ser iguais ou dife- rentes, cada um substituindo um átomo de hidrogênio. Substituintes são halogênio (por exemplo, F, Cl, Br e I), hidroxila, hidroxila protegida, amino, amino protegido, carbóxi, carbóxi protegido, ciano, metilsulfonilamino, alcó- xi, acilóxi, nitro e haloalquila inferior. O termo "substituído" usado aqui refere-se a porções tendo um, dois, três ou mais substituintes, que podem ser iguais ou diferentes, cada um substituindo um átomo de hidrogênio. Exemplos de substituintes inclu- em, mas são estão limitados a halogênio (por exemplo, F, Cl, Br e I), hidro- xila, hidroxila protegida, amino, amino protegido, carbóxi, carbóxi protegido, ciano, metilsulfonilamino, alcóxi, alquila, acrila, acilóxi, nitro e haloalquila inferior.

Um grupo arila é um anel aromático C6-C20, em que 0 anel é feito de átomos de carbono (por exemplo, grupos Ce-u, C6-io arila). Exemplos de haloalquila incluem fluorometila, diclorometila, trifluorometila, "1,1- difluoroetila e 2,2-dibromoetila.

Um grupo de ligação é qualquer porção divalente usada para ligar um composto da fórmula a outro esteróide, por exemplo, um segundo composto da fórmula I. Um exemplo de um grupo de ligação é um (C1-C10) alquilóxi-(C1-C10) alquila.

Numerosos grupos de proteção amino são bem conhecidos dos versados na técnica. Em geral, a espécie de grupo de proteção não é críti- ca, com a condição de que é estável nas condições de qualquer reação (ões) subsequentes em outras posições do composto e pode ser removida no ponto apropriado sem afetar adversamente 0 restante da molécula. Além disso, um grupo de proteção pode ser substituído por outro após transfor- mações sintéticas substantivas serem concluídas. Obviamente, quando um composto difere de um composto aqui descrito somente em que um ou mais grupos de proteção do composto descrito foi substituído com um grupo de proteção diferente, o composto está dentro da invenção. Outros exemplos e condições são encontrados em T.W. Greene, Protective Groups in Organic Chemistry, (1âed., 1981,2âed., 1991). A presente invenção inclui também métodos para sintetizar compostos da fórmula I onde pelo menos dois de Ri a R14, são indepen- dentemente selecionados dentre o grupo consistindo em um (C1-C10) ami- noalquilóxi substituído ou não-substituído. O método inclui a etapa de con- tatar um composto da fórmula IV, onde pelo menos dois de Ri a R14 são hidroxila, e as porções restantes nos anéis A, B, C e D fundidos são definidas na fórmula I, com um eletrófilo para produzir um composto de éter alquílico da fórmula IV, em que pelo menos dois de Ri a Ri4 são (C1-C10) alquilóxi. Os compostos de éter alquílico são convertidos em um composto precursor amino em que pelo menos dois de Ri a Ri4 são independentemente selecionados dentre o grupo consistindo em (C1-C10) azidoalquilóxi e (C1-C10) cianoalcóxi e o composto precursor amino é reduzido para formar um composto da fórmula I.

Os eletrófilos usados no método incluem, mas não estão limita- dos a 2-(2-bromoetil)-1,3-dioxolano, 2-iodoacetamida, 2-cloroacetamida, N- (2-bromoetil) ftalimida, N-(3-bromopropil) ftalimida e brometo de alila. O ele- trófilo preferido é brometo de alila. A invenção inclui também um método para produzir um com- posto da fórmula I onde pelo menos dois de a R14 são (C1-C10) guanido- alquilóxi. O método inclui contatar um composto da fórmula IV, onde pelo menos dois de Ri a Rm são hidroxila, com um eletrófilo para produzir um composto de éter alquílico da fórmula IV, onde pelo menos dois de R^ a R14 são (C1-C10) alquilóxi. O composto de éter alílico é convertido em um com- posto precursor amino onde pelo menos dois de Ri a Ru são independen- temente selecionados dentre o grupo consistindo em (C1-C10) azidoalquiló- xi e (C1-C10) cianoalquilóxi. O composto precursor amino é reduzido para produzir um composto de éter aminoalquílico em que pelo menos dois de Ri a Ri4 são (C1-C10) aminoalquilóxi. O composto de éter aminoalquílico é contatado com um eletrófilo produzindo quanidino para formar um composto da fórmula I. O termo "eletrófilo produzindo guanidino" usado aqui refere-se a um eletró- filo usado para produzir um composto guanidino da fórmula I. Um exemplo de um eletrófilo produzindo guanidino é HS03-C(NH)-NH2. A invenção inclui também um método para produzir um com- posto da fórmula I onde pelo menos dois de Rí a R14 são H2N-HC (Q5)- C(0)-0- e Q5 é a cadeia lateral de qualquer aminoácido. O método inclui a etapa de contatar um composto da fórmula IV, onde pelo menos dois de Ri a Ri4 são hidroxila, com um aminoácido protegido para produzir um com- posto de aminoácido protegido da fórmula IV onde pelo menos dois de pelo menos dois de Ri a Ri4 são P.G.-HN-HC(Q5)-C(0)-0- e Q5 é a cadeia late- ral de qualquer aminoácido e P.G. é um grupo de proteção amino. O grupo de proteção do composto de aminoácido protegido é removido para formar um composto da fórmula I. A presente invenção também inclui composições farmacêuticas da matéria que são utilizáveis como agentes antibacterianos, sensibilizado- res de bactérias a outros antibióticos e rompedores de membranas bacteri- anas. As composições farmacêuticas podem ser usadas para tratar huma- nos e animais tendo uma infecção bacteriana. As composições farmacêuti- cas podem incluir uma quantidade eficaz do derivado de esteróides sozinho ou em combinação com outros agentes antibacterianos.

Sem se desejar estar ligado por qualquer teoria particular, os derivados de esteróides agem como agentes bacteriostáticos e bactericidas ligando-se à membrana celular externa das bactérias. A interação entre os derivados de esteróides e a membrana bacteriana rompe a integridade da membrana celular e resulta na morte da célula bacteriana. Além disso, os compostos agem também para sensibilizar bactérias a outros antibióticos.

Em concentrações de derivados de esteróides abaixo da concentração bacteriostática mínima correspondente, os derivados fazem com que as bactérias tornem-se mais suscetíveis a outros antibióticos aumentando a permeabilidade da membrana externa das bactérias. Medições usadas para quantificar os efeitos dos derivados de esteróides nas bactérias incluem: medição das concentrações inibitórias mínimas (MICs), medição das con- centrações bactericidas mínimas (MBCs) e da capacidade dos derivados de esteróides diminuir os MICs de outros antibióticos, por exemplo, eritromicina e novobiocina.

Um versado na arte reconhecerá que os compostos aqui des- critos conservam certas características estereoquímicas e eletrônicas en- contradas nos esteróides. O termo "mesma configuração", como usado aqui, refere-se a substituintes no esteróide fundido tendo a mesma orientação estereoquímica. Por exemplo, substituintes R3, R7 e R12 são todos β- substituídos ou α-substituídos. A configuração nas porções R3, R7 e R12 substituídas em C3, C7 e C12 pode ser importante para interação com a membrana celular.

Em outro aspecto, a invenção descreve vários métodos para usar os compostos descritos acima. Por exemplo, uma quantidade eficaz de uma composição antimicrobiana compreendendo este composto é adminis- trada a um hospedeiro (incluindo um hospedeiro humano) para tratar uma infecção microbiana. O composto por si mesmo pode prover o efeito antimi- crobiano, caso em que a quantidade de composto administrada é suficiente para ser antimicrobiana. Alternativamente, uma substância antimicrobiana adicional a ser liberada nas células microbianas (por exemplo, um antibióti- co) é incluída na composição antimicrobiana. Facilitando a liberação nas células de marcação, os compostos podem melhorar a eficácia da substân- cia antimicrobiana adicional. Em alguns casos a melhoria pode ser substan- cial. Micróbios de marcação particularmente importantes são bactérias (por exemplo, geralmente bactérias gram-negativas ou bactérias que têm uma quantidade substancial (>40%) de um lipídeo A ou substância semelhante a lipídeo A na membrana externa). Outros micróbios incluindo fungos, vírus e leveduras também podem ser os organismos de marcação.

Os compostos também podem ser administrados em outros contextos para melhorar a permeabilidade das células para introduzir qual- quer um de um grande número de tipos diferentes de substâncias em uma célula, particularmente as células bacterianas acima discutidas. Além da introdução em substâncias antimicrobianas, a invenção pode ser usada para introduzir outras substâncias como macromoléculas (por exemplo, DNA isento de vetor). Além disso, os compostos de acordo com a invenção po- dem ser usados para permeabilizar uma célula de esperma. A invenção também pode ser usada para preparar composições antimicrobianas (por exemplo, desinfetantes, antissépticos, antibióticos, etc.), que compreendem um dos compostos acima. Estas composições não estão limitadas a farmacêuticos e podem ser usadas topicamente ou em contextos não terapêuticos para controlar crescimento microbiano (particu- larmente bacteriano). Por exemplo, elas podem ser usadas em aplicações que exterminam ou controlam micróbios em contato.

Ainda em um outro aspecto, a invenção descreve geralmente métodos para identificar compostos que são eficazes contra um micróbio, administrando um composto candidato e um composto de acordo com a in- venção ao micróbio e determinando se o composto candidato tem um efeito estático ou tóxico (por exemplo, um efeito antisséptico, germicida, desinfe- tante ou antibiótico) sobre o micróbio. Novamente, bactérias corno as acima discutidas são preferidas. Este aspecto da invenção permite teste útil de uma faixa extremamente ampla de antimicrobianos candidatos que sabe-se têm efeito antimicrobiano em alguns contextos, mas que ainda não mostra- ram ter qualquer efeito contra certas classes de micróbios como as bactéri- as acima discutidas. Como descrito em maior detalhe abaixo, este aspecto da invenção permite testar uma ampla faixa de antibióticos atualmente co- gitados de serem ineficazes contra bactérias gram-negativas ou semelhan- tes a lipídeo A.

Ainda em outro aspecto, a invenção descreve composições que incluem um dos compostos acima em combinação com uma substância a ser introduzida em uma célula como uma substância antimicrobiana, como descrito em maior detalhe abaixo. O composto e a substância adicional po- dem ser misturados com um veículo farmaceuticamente aceitável.

Outros aspectos ou vantagens da presente invenção serão evi- dentes da seguinte descrição detalhada das várias formas de realização, e também das reivindicações anexas. A invenção engloba derivados de esteróides que podem ser preparados pelas vias sintéticas aqui descritas, e métodos para tratar um indivíduo tendo uma condição mediada por uma infecção bacteriana admi- nistrando uma quantidade eficaz de uma composição farmacêutica contendo um composto descrito aqui ao indivíduo.

DESCRICÂO DAS FORMAS DE REALIZAÇÃO PREFERIDAS

Em geral, a presente invenção provê os compostos da fórmula I

acima descritos. Descrevem-se os métodos de preparação e o MIC e MBC dos compostos da fórmula I. A permeabilidade da membrana celular também é medida e descrita. Compostos que são utilizáveis de acordo com a inven- ção, como descrito abaixo, incluem novos derivados de esteróides que de- monstram propriedades sensibilizadoras bacteriostáticas, bactericidas e bacterianas. Os versados na técnica apreciarão que a invenção estende-se a outros compostos nas fórmulas dadas nas reivindicações abaixo, tendo as características descritas. Estas características podem ser determinadas para cada composto de teste usando os testes abaixo detalhados e em qualquer lugar na literatura.

Compostos conhecidos que são usados de acordo com a inven- ção e precursores para novos compostos de acordo com a invenção podem ser adquiridos, por exemplo, de Sigma Chemical Co., St. Louis; Aldrich, Mi- Iwaukee; Steroloids and Research Plus. Outros compostos de acordo com a invenção podem ser sintetizados de acordo com métodos conhecidos e os métodos descritos abaixo usando precursores publicamente disponíveis.

Os compostos da presente invenção incluem, mas não são li- mitados a grupos amina ou guanidina ligados covalentemente a uma cadeia principal do esteróide, por exemplo, ácido cólico. A cadeia principal pode ser usada para orientar os grupos amina ou guanidino em uma face do este- róide. Outras cadeias principais de esteróide também podem ser usadas, por exemplo, anéis fundidos de 5 membros. A atividade biológica dos compostos pode ser determinada por métodos padrão conhecidos dos versados na técnica, como o teste de "con- centração inibitória mínima (MIC)" descritos nos presentes exemplos, em que a concentração mais baixa na qual nenhuma mudança na densidade ótica (OD) é observada durante um dado período de tempo é registrada como MIC. Quando o composto sozinho é testado contra um controle que falta ao composto, o efeito antimicrobiano do composto sozinho é determi- nado.

Alternativamente, "concentração inibitória fracional (FIC)" tam- bém é utilizável para determinação da sinergia entre os compostos da in- venção, ou os compostos em combinação com antibióticos conhecidos. FICs podem ser realizados por titulações de tabuleiro dos compostos em uma dimensão de uma placa de microtitulação, e de antibióticos na outra dimen- são, por exemplo. O FIC é calculado observando o impacto de um antibióti- co no MIC do outro e vice-versa. Um FIC de um indica que a influência dos compostos é aditiva e um FIC de menos do que um indica sinergia. Preferi- velmente, um FIC de menos do que 0,5 é obtido por sinergismo. Como usa- do aqui, FIC pode ser determinado como a seguir: Este procedimento permite determinação dos efeitos sinergísti- cos do composto com outros compostos. Por exemplo, substâncias que não podem, geralmente, ser suficientemente eficazes contra certas bactérias em dosagens seguras podem tornar-se mais eficazes com o composto da in- venção, possibilitando assim o uso de substâncias contra novas categorias de infecções. Especificamente, muitos antibióticos existentes são eficazes contra algumas bactérias gram positivas, mas não são indicados atualmente para tratar infecção bacteriana gram-negativa. Em alguns casos, o antibióti- co pode ser ineficaz por si mesmo contra bactérias gram-negativas porque ele falha ao entrar na célula. Os compostos da invenção podem aumentar a permeabilidade de modo a tornar os antibióticos eficazes contra bactérias gram-negativas.

Além disso, concentração inibitória fracional também é utilizável para determinação da sinergia entre os compostos da invenção em combi- nação com outros compostos tendo atividade antibacteriana desconhecida ou em combinação com outros compostos, por exemplo, compostos que são foram testados e mostraram atividade antibacteriana. Por exemplo, com- postos da invenção podem aumentar permeabilidade de modo a tornar os compostos desprovidos de atividade antibacteriana eficazes contra bactéri- as. O FIC também pode ser usado para testar outros tipos de atividade an- teriormente não apreciados de substâncias que serão introduzidas na célula por meio de compostos de melhoria de permeabilidade de acordo com a invenção.

Apesar dos requerentes não desejarem estar ligados por qual- quer teoria específica única, e esta teoria não ser necessária para praticar a invenção, um mecanismo de ação é a interação do lipídeo A de porções múltiplas (geralmente três), que em condições fisiológicas são carregadas positivamente, por exemplo, porções amino ou guanidino. As porções se estendem do plano geral do restante da molécula, imitando assim certos aspectos da estrutura de polimixinas. A este respeito, os compostos da in- venção serão geralmente utilizáveis do modo que polimixinas são utilizá- veis. Além do mais, com respeito à administração sistêmica, os versados na técnica reconhecerão triagens de toxicidade apropriadas que permitem se- leção dos compostos que não são tóxicos em dosagens que melhoram a permeabilidade microbiana.

Como notado, a invenção também envolve aplicações tópicas bem como não terapêuticas (antissépticas, germicidas ou desinfetantes) em que os compostos são contatados com as superfícies a serem tratadas. O termo "contatar" refere-se, preferivelmente, a expor as bactérias ao com- posto de modo que o composto pode inibir, exterminar ou lisar eficazmente bactérias, ligar endotoxina (LPS) ou permeabilizar membranas externas bacterianas gram-negativas. O contato pode ser in vitro, por exemplo adici- onando o composto a uma cultura bacteriana para testar a suscetibilidade das bactérias nos compostos. O contato pode ser in vivo, por exemplo, ad- ministrando o composto a um indivíduo com um distúrbio bacteriano, como choque séptico. "Inibição" ou "quantidade eficaz de inibição" refere-se à quantidade do composto que é requerida para causar um efeito bacteriostá- tico ou bactericida. Exemplos de bactérias que podem ser inibidas incluem E. coli, P. aeruginosa, E. cloacae, S. typhimurium, M. tuberculosis e S. au- reus. O método para inibir o crescimento de bactérias pode incluir ainda a adição de antibióticos por combinação ou terapia sinergística. O antibiótico apropriado administrado dependerá tipicamente da suscetibilida- de das bactérias se as bactérias são gram-negativas ou gram-positivas, e será facilmente discernível por um versado na arte. Exemplos de classes particulares de antibióticos a serem testados para terapia sinergística com os compostos da invenção (como acima descritos) incluem aminoglicosí- deos (por exemplo, tobramicina), penicilinas (por exemplo, piperacilina), cefalosporinas (por exemplo, ceftazidime), fluoroquinolonas (por exemplo, ciprofloxacin), carbepenems (por exemplo, imipenem), tetraciclinas e macro- lídeos (por exemplo, eritromicina e claritromicina). O método para inibir o crescimento de bactérias pode incluir ainda a adição de antibióticos por combinação ou terapia sinergística. O antibiótico apropriado administrado dependerá tipicamente da suscetibilidade das bactérias se as bactérias são gram-negativas ou gram-positivas, e será facilmente discernível por um dos versados na técnica. Além dos antibióticos relacionados acima, antibióticos típicos incluem aminoglicosíeos (amicacina, gentamicina, canamicina, netil- micina, tobramicina, estreptomicina, azitromicina, claritromicina, eritromici- na, estolato/etilsuccinato/gluceptato/lactobionato/estearato de eritromicina, beta-lactamas como penicilinas (por exemplo, penicilina G, penicilina V, me- tilcilina, nafcilina, oxacilina, cloxacilina, dicloxacilina, ampicilina, amoxicilina, ticarcilina, carbenicilina, mezlocinila, azlocilina e piperacilina), ou cefalospo- rinas (por exemplo, cefalotina, cefazolina, cefaclor, cefamandol, cefoxitina, cefuroxima, cefonicida, cefmetazol, cefotetan, cefprozil, loracarbef, cefeta- met, cefoperazona, cefotaxima, ceftizoxima, ceftriaxona, ceftazidima, cefe- pima, cefixima, cefpodoxima e cefsulodin). Outras classes de antibióticos incluem carbapenems (por exemplo, imipenem), monobactamas (por exem- plo, aztreonam), quinolonas (por exemplo, fleroxacin, ácido nalidíxico, nor- floxazin, ciprofloxacin, ofloxacin, enoxacin, lomefloxacin e cinoxacin), tetra- ciclinas (por exemplo, doxiciclina, minociclina, tetraciclina), e glicopeptídeos (por exemplo, vancomicina, teicoplanin), por exemplo. Outros antibióticos incluem cloranfenicol, clindamicina, trimetoprin, sulfametoxazol, nitrofuran- toína, rifampin e mupirocin.

Administração Os compostos podem ser administrados a qualquer hospedeiro, incluindo um humano ou animal não-humano, em uma quantidade eficaz para inibir não somente o crescimento de uma bactéria, mas também de um vírus ou fungo. Estes compostos são utilizáveis como agentes antimicrobia- nos, agentes antivírus, agentes espermicidas e agentes antifungos. Os compostos podem ser administrados a qualquer hospedeiro, incluindo um humano ou animal não-humano, em uma quantidade eficaz para inibir não somente o crescimento de uma bactéria, mas também de um vírus ou fungo.

Estes compostos são utilizáveis como agentes antimicrobianos, agentes antivírus e agentes antifungos.

Os compostos da invenção podem ser administrados parente- ralmente por injeção ou por infusão gradual no tempo. Os compostos podem ser administrados topicamente, intravenosamente, intraperitonealmente, intramuscularmente, subcutaneamente, intracavidade ou transdermicamen- te. Métodos preferidos para liberação do composto incluem oralmente, por encapsulação em microesferas ou proteinóides, por liberação por aerossol aos pulmões, ou transdermicamente por eletroporação iontoforese ou trans- dérmica. Outros métodos de administração serão conhecidos dos versados na técnica.

Preparações para administração parenteral de um composto da invenção incluem soluções aquosas estéreis ou não-aquosas, suspensões e emulsões. Exemplos de solventes não-aquosos são propileno glicol, polieti- leno glicol, óleos vegetais como azeite, e ésteres orgânicos injetáveis como oleato de etila. Veículos aquosos incluem água, soluções alcoóli- cas/aquosas, emulsões ou suspensões, incluindo meios de solução salina tamponados. Veículos parenterais incluem solução de cloreto de sódio, dextrose de Ringer, dextrose e cloreto de sódio, Ringer lactado ou óleos fixados. Veículos intravenosos incluem reabastecedores de fluido e nutri- entes, reabastecedores de eletrólitos (como os baseados na dextrose Tin- ger), e outros. Conservantes e outros aditivos também podem estar pre- sentes como, por exemplo, agentes antimicrobianos, antioxidantes, quelan- tes, e gases inertes e outros. A invenção provê um método para tratar ou melhorar um distúr- bio associado com entotoxemia ou choque séptico (sepsia), ou um ou mais dos sintomas de sepsia, compreendendo administrar a um indivíduo exibin- do sintomas de sepsia ou em risco de desenvolver sepsia, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção. O termo "melhorar" refere-se a um decréscimo ou diminuição dos sintomas do distúrbio sendo tratado. Os sintomas que podem ser melhorados incluem os associados com um aumento transiente no nível sanguíneo de TNF, como febre, hipo- tensão, neutropenia, leucopenia, trombocitopenia, coagulação intravascular disseminada, síndrome respiratória de falta de ar em adultos, choque ou falha múltipla de órgãos. Pacientes que requerem este tratamento incluem os em risco de ou os sofrendo de toxemia, como endotoxemia resultante de uma infecção bacteriana gram-negativa, envenenamento ou falha hepática, por exemplo. Além disso, pacientes tendo uma infecção fúngica, viral ou bacteriana gram-positiva podem exibir sintomas de sepsia e podem benefi- ciar-se deste método terapêutico, como aqui descrito. Os pacientes que são mais particuiarmente capazes de se beneficiar do método da invenção são os que sofrem de infecção por E. coli, Haemophilus influenza B, Neisseria meningitidis, staphylococci ou pneumococci. Pacientes em risco de sepsia incluem os que sofrem de ferimento de bala, falha renal ou hepática, trau- ma, queimaduras, imunocomprometidos (HIV), neoplasias hematopoiéticas, mieloma múltiplos, doença de Castleman ou mixoma cardíaco.

Além disso, os compostos podem ser incorporados em políme- ros biodegradáveis permitindo liberação sustentada, os polímeros sendo implantados nas proximidades de onde a liberação é desejada, por exemplo, no sítio de uma infecção bacteriana. Os polímeros biodegradáveis e seu uso são descritos em detalhe em Brem et al., J. Neurosurg, 74: 441-446 (1991).

Como acima mencionado, a presente invenção provê uma for- mulação farmacêutica tendo uma quantidade eficaz de um composto da fórmula I para tratar um paciente tendo uma infecção bacteriana. Como usado aqui, uma quantidade eficaz do composto é definida como a quanti- dade do composto que, quando da administração a um paciente, inibe o crescimento das bactérias, extermina as células bacterianas, sensibiliza as bactérias a outros antibióticos, ou elimina a infecção bacteriana totalmente no paciente tratado. A dosagem da composição dependerá da condição sendo tratada, do derivado particular usado e de outros fatores clínicos como peso e condição do paciente e da via de administração do composto.

No entanto, para administração oral em seres humanos, uma dosagem de 0,01 a 100 mg/kg/dia, preferivelmente 0,01-1 mg/kg/dia, é geralmente sufici- ente. Dosagens eficazes também variarão, como reconhecido pelos versa- dos na técnica, dependentes da via de administração, do uso do excipiente e da possibilidade de co-uso com outros tratamentos terapêuticos incluindo outros agentes antibióticos.

Por exemplo, o termo "quantidade terapeuticamente eficaz", como usado aqui para tratamento de endotoxemia, refere-se à quantidade do composto usado que é de quantidade suficiente para diminuir a resposta do indivíduo a LPS e diminuir os sintomas de sepsia. O termo "terapeutica- mente eficaz" inclui, consequentemente, a quantidade de composto sufici- ente para evitar e, preferivelmente, reduzir por pelo menos 50%, e mais preferivelmente suficiente para reduzir por 90%, um aumento clinicamente significativo no nível de plasma de TNF. As faixas de dosagem para a admi- nistração do composto são grandes o suficiente para produzir o efeito de- sejado. Geralmente, a dosagem variará com a idade, condição, sexo e ex- tensão da infecção com bactérias ou outro agente, como acima descrito, no paciente e pode ser determinada por um versado na arte. A dosagem pode ser ajustada pelo clínico individual no caso de quaisquer contraindicações.

Em qualquer caso, a eficácia do tratamento pode ser determinada monito- rando o nível de LPS e de TNF em um paciente. Um decréscimo nos níveis de TNF e LPS no soro deve correlacionar-se com a recuperação do paci- ente.

Além disso, pacientes em risco de ou demonstrando os sintomas de sepsia podem ser tratados pelo método, como descrito acima, compre- endendo ainda administrar, substancialmente simultaneamente com a admi- nistração terapêutica do composto, um inibidor de TNF, um antibiótico, ou ambos. Por exemplo, intervenção no papel de TNF na sepsia, tanto direta- mente como indiretamente, como pelo uso de um anticorpo anti-TNF e/ou um antagonista de TNF, pode evitar ou melhorar os sintomas de sepsia.

Particularmente preferido é o uso de um anticorpo anti-TNF como um ingre- diente ativo, como um anticorpo monoclonal com especificidade de TNF como descrito por Tracey et al. (Nature, 330: 662, 1987).

Um paciente que demonstra os sintomas de sepsia pode ser tratado com um antibiótico em adição ao tratamento com composto. Antibió- ticos típicos incluem um aminoglicosídeo, como gentamicina ou uma beta- lactama como penicilina, ou cefalosporina ou quaisquer dos antibióticos anteriormente relacionados acima. Consequentemente, um método terapêu- tico preferido da invenção inclui administrar uma quantidade terapeutica- mente eficaz do composto catiônico substancialmente simultaneamente com a administração de uma quantidade bactericida de um antibiótico. Preferi- velmente, a administração do composto ocorre dentro de cerca de 48 horas e, preferivelmente, dentro de cerca de 2-8 horas e, mais preferivelmente, substancialmente simultaneamente com a administração do antibiótico. O termo "quantidade bactericida", como usado aqui, refere-se a uma quantidade suficiente para obter uma concentração sangüínea extermi- nando bactérias no paciente recebendo o tratamento. A quantidade bacteri- cida de antibiótico, geralmente reconhecida como segura para administra- ção a um ser humano, é bem conhecida na arte, e como é conhecido na arte, varia com o antibiótico específico e do tipo de infecção bacteriana sen- do tratada.

Devido às propriedades de antibiótico, antimicrobianas e antivi- rais dos compostos, eles também podem ser usados como conservantes ou esterilizantes de materiais suscetíveis à contaminação bacteriana ou viral.

Os compostos da invenção podem ser utilizados como agentes antimicrobi- anos de amplo espectro dirigidos para várias aplicações específicas. Estas aplicações incluem o uso dos compostos como conservantes em alimentos processados quando verificado ser eficaz contra organismos humanos in- cluindo Salmonella, Yersinia, Shigella, tanto sozinhos como em combinação com aditivos alimentícios antibacterianos como lissozimas; como um agente tópico (Pseudomonas, Streptococcus) e para exterminar micróbios que pro- duzem odor (Micrococci). A eficácia relativa dos compostos da invenção para as aplicações descritas pode ser determinada por um versado na arte, determinando a sensibilidade de qualquer organismo a um dos compostos.

Apesar de primeiramente marcada em bactérias com coloração gram-negativas cuja cápsula externa contém uma quantidade substancial de lipídeo A, também pode ser eficaz contra outros organismos com uma cáp- sula externa hidrófoba. Por exemplo, mycobacterium spp. tem um revesti- mento externo protetor ceroso, e os compostos da invenção em combinação com antibióticos podem prover eficácia melhorada contra infecção por Mycobacterial, incluindo tuberculose. Nesse caso, os compostos podem ser administrados nasalmente (aspiração), por qualquer uma das várias técni- cas conhecidas.

Fora a ação antimicrobiana, a permeabilidade provida pelos compostos pode melhorar a introdução de uma grande variedade de sub- stâncias nos micróbios. Por exemplo, os compostos podem ser usados para melhorar a introdução de macromoméculas como DNA ou RNA nos micróbi- os, particularmente bactérias gram-negativas. Nesse caso, pode não ser necessário para os vetores tradicionais (por exemplo, fagos) usados para embalar ácidos nucléicos quando transfectando os micróbios. Condições e técnicas para introduzir estas macromoléculas em micróbios usando os compostos da invenção serão, na maioria dos casos, rotina.

As formulações incluem os apropriados para administração oral, retal, nasal, tópica (incluindo bucal e sublingual), vaginal ou parenteral (in- cluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, intraocular, intratraqueal e epidural). As formulações podem ser apresentadas, conveni- entemente, na forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por téc- nicas farmacêuticas convencionais. Estas técnicas incluem a etapa de levar em associação o ingrediente ativo e o(s) excipiente (s) ou o(s) veículo(s) farmacêutico(s). Em geral, as formulações são preparadas uniformemente e levando intimamente em associação o ingrediente ativo com veículos líqui- dos ou finalmente veículos sólidos divididos ou ambos e, então, se necessá- rio, conformar o produto.

Formulações da presente invenção apropriadas para adminis- tração oral podem ser apresentadas como unidades discretas como cápsu- las, pastilhas ou comprimidos, contendo cada um uma quantidade prede- terminada do ingrediente ativo; como um pó ou grânulos como uma solução ou uma suspensão em um líquido aquoso ou um líquido não-aquoso; ou como uma emulsão líquida óleo-em-água ou uma emulsão água-em-óleo e como um bolo, etc.

Um comprimido pode ser feito por compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Comprimidos pren- sados podem ser preparados comprimindo, em uma máquina apropriada, o ingrediente ativo em uma forma isenta de escoamento como um pó ou grânulos, opcionalmente misturados com um aglutinante, lubrificante, dilu- ente inerte, conservante, tensoativo ou agente de dispersão. Comprimidos moldados podem ser feitos por moldagem, em uma máquina apropriada, uma mistura do composto em pó umedecido com um diluente líquido inerte.

Os comprimidos podem, opcionalmente, ser revestidos ou marcados e po- dem ser formulados de modo a prover uma liberação lenta ou controlada do ingrediente ativo nos mesmos.

Formulações apropriadas para administração tópica à boca in- cluem losangos compreendendo os ingredientes em uma base aromatizada, geralmente sacarose e acácia ou tragacanto; pastilhas compreendendo o ingrediente ativo em uma base inerte como gelatina e glicerina, ou sacarose e acácia; e colutórios compreendendo o ingrediente a ser administrado em um veículo líquido apropriado.

Formulações apropriadas para administração tópica à pele po- dem ser apresentadas como ungüentos, cremes, géis e pastas compreen- dendo o ingrediente a ser administrado em um veículo farmaceuticamente aceitável. Um sistema de liberação tópica preferido é um curativo transdér- mico contendo o ingrediente a ser administrado.

Formulações para administração retal podem ser apresentadas como um supositório com uma base apropriada compreendendo, por exem- plo, manteiga de cacau ou um salicilato.

Formulações apropriadas para administração nasal, em que o veículo é um sólido, incluem um pó grosseiro tendo um tamanho de partí- cula, por exemplo, na faixa de 20 a 500 mícrons, que é administrado de modo em que a aspiração é tomada, isto é, por inalação rápida através da passagem nasal de um recipiente do pó mantido obstruído no nariz. Formu- lações apropriadas, em que o veículo é um líquido, para administração, como por exemplo, um pulverizador nasal, aerossol, ou como gotas nasais, incluem soluções aquosas ou oleosas do ingrediente ativo.

Formulações apropriadas para administração vaginal podem ser apresentadas como pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações de pulverização contendo, além do ingrediente ativo, veículos como são conhecidos na arte ser apropriados.

Formulações apropriadas para administração parenteral incluem soluções de injeção estéreis aquosas e não-aquosas que podem conter an- tioxidantes, tampões, outros bacteriostatos e solutos que tornam a formula- ção isotônica com o sangue do receptor pretendido; e suspensões estéreis aquosas e não-aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes de espessamento. As formulações podem ser apresentadas em recipientes de dosagem unitária ou de múltiplas dosagens, por exemplo, frascos e am- polas selados, e podem ser armazenadas em uma condição seca por con- gelamento (liofilizada) requerendo somente a adição do veículo líquido esté- ril, por exemplo, água para injeções, imediatamente antes do uso. Soluções de injeção extemporâneas e suspensões podem ser preparadas de pós es- téreis, grânulos e comprimidos do tipo descrito anteriormente.

Formulações de dosagem unitária preferidas são as que contêm uma unidade ou dosagem diária, subdosagem diária, como descrito acima, ou uma fração apropriada das mesmas, do ingrediente administrado.

Deve ser entendido que, além dos ingredientes, particularmente mencionados acima, as formulações desta invenção podem incluir outros agentes convencionais na arte com respeito ao tipo de formulação em questão, por exemplo, os apropriados para administração oral podem incluir agentes aromatizantes. O veículo na composição farmacêutica deve ser "aceitável" no sentido de ser compatível com o ingrediente ativo da formulação (e, preferi- velmente, capazes de solubilizar o mesmo) e não prejudicial ao indivíduo a ser tratado.

Sem outra elaboração, acredita-se que a descrição acima pos- sibilitou adequadamente a presente invenção. As seguintes formas de reali- zação específicas devem, conseqüentemente, ser construídas como mera- mente ilustrativas e não limitativas do restante da descrição em qualquer modo qualquer que seja. Todas as publicações aqui citadas, incluindo pa- tentes, são incorporadas aqui por referência.

Exemplos 1-6 representam síntese típica dos compostos 1 a 48, como exemplificado no esquema 1, até o exemplo 7. O exemplo 7 repre- senta teste de MIC e MCB. Exemplo 8 representa a capacidade dos com- postos da fórmula I diminuírem os MICs de outros antibióticos. O exemplo 9 representa outros compostos da fórmula I que podem ser sintetizados usan- do materiais de partida conhecidos e esquemas de reação que são similares aos aqui descritos. Por exemplo, o grupo hidroxila em ácido cólico pode ser convertido em amina pelo método encontrado em Hsieh et al., Synthesis and DNA Binding Properties of C3- C12-, e C-24- Substituted Amino- Steroids Derived from Bile Acids, Biorganic and Medicinal Chemistry, 1995, vol. 6, 823-838.

Esquema 1. Preparação dos compostos 1,2, 4 e 5.

Reagentes (rendimentos da reação entre parênteses): a) LiAIH4, THF (98%). b) cloreto de tritila, Et3N, DMF (70%). c) brometo de alila, NaH, THF (96%).

d) 03, CH2CI2, MeOH; Me2S; NaBH4 (95%). e) 9-BBN, THF: H202, NaOH (80%). f) MsCI, CH2CI2, Et3N (78%, 82%). g) NaN3, DMSO (66% para 20, 19 conduzido diretamente a 23). h) TsOH, MeOH (94%, 94% total de 19). i) MsCI, CH2CI2, Et3N (99%, 97%). j) N-benzilmetilamina (95%, 96%). k) LiAIH4, THF (95%, 99%). I) NH2C(NH)S03H, MeOH (91%, 89%).

Esquema 2. Preparação do composto 3.

Reagentes (rendimentos da reação entre parênteses): a) KCN, DMSO; Me- OH, TsOH (92%). (b) MsCI, Et3N, CH2CI2; BnMeNH (88%). c) LiAIH4, AICI3, THF (50%).

Esauema 3. Preparação de 6 e 7.

Reagentes (rendimentos da reação entre parênteses): a) diciclo- hexilcarbodiimida, N-hidroxisuccinimida, metilfenilamina, CH2CI2, MeOH (85%), b) LaAIH4, THF (82%). c) diciclo-hexilcarbodiimida, dimetilaminopiri- dina, Boc-glicina, CH2CI2 (68%). d) diciclo-hexilcarbodiimida, dimetilaminopi- ridina, Boc-p-alanina, CH2CI2 (72%). e) HCI, dioxano (-100%, -100%).

Esquema 4. Síntese do composto 8.

Reagentes (rendimentos da reação entre parênteses): a) DIAD, pH 3P, ácido p-nitrobenzóico, THF (85%); NaOH, MeOH (85%). b) brometo de alila, NaH, THF (79%). c) 03, CH2CI2, MeOH; Me2S; NaBH4 (65%). d) MsCI, CH2CI2>

Et3N (86%). e) NaN3, DMSO (80%). f) TsOH, MeOH (94%). g) MsCI, CH2CI2, Et3N; N-benzilmetilamina (93%). g) L1AIH4, THF (94%).

Esquema 5. Síntese dos compostos 9 e 10.

Reagentes (rendimentos da reação entre parênteses): a) NaH, brometo de ocrila, DMF (80%); LiAIH4, THF (60%). b) LiAIH4, THF (60%).

Esquema 6. Síntese do composto 11.

Reagentes (rendimentos da reação entre parênteses): a) etileno glicoi, áci- do p-toluenossulfônico, benzeno; NaOH, MeOH (96%). b) brometo de alila, NaH, THF (90%). c) 9-BBN, THF; NaOH, H202, H20 (54%). d) piridínio, p- toluenossulfonato, MeOH (98%). e) cloreto de metanossulfonila. Et3, N, CH2CI2; NaN3, DMSO (88%). f) LiAIH4> THF (69%).

Esquema 7. Síntese do composto 12.

Reagentes (rendimentos da reação entre parênteses): a) cloreto de meta- nossulfonila, EN, CH2CI2; NaBr, DMF (97%). b) 23, NaH, DMF (52%). c) Li- AIH4, THF (76%). Síntese dos Compostos 1-48 Geral: Espectros de RMN 3H e 13C foram registrados em um espectrô- metro Varian Gemini 2000 (200 MHz) ou Varian Unity 300 (300 MHz) e são referenciados em CHCI3 (1H) ou CDCI3 (13C). Espectros de IV foram registra- dos em um instrumento Perkin Elmer 1600 FTIR. Dados espectrométricos de massa foram obtidos em um espectrômetro JOEL SX 102A. THF foi seco sobre Na°/benzofenona e CH2CI2 foi seco sobre CaH2 antes de serem usa- dos. Outros reagentes e solventes foram obtidos comercialmente e foram usados como recebidos.

Exemplo 1 Composto 13: A um frasco de fundo redondo de 1 I foram adicionados colato de metila (30,67 g, 72,7 mmoles) em THF seco (600 ml) e LiAIH4 (4,13 g, 109 mmoles). Após refluxar durante 48 horas, Na2S04 aquoso (100 ml) foi introduzido lentamente, e o precipitado restante foi filtrado e lavado com MeOH e THF seco. Recristalização de MeOH deu cristais incolores de 13 (28,0 g, rendimento 98%). P.f. 236,5-238°C; IV (Kbr) 3375, 2934, 1373, 1081 cm'1; 1H RMN (CDCl3/MeOH-d4, 200 MHZ) δ 3,98 (bs, 1H), 3,83 (bs, 1H), 3,60-3,46 (m, 2H), 3,38 (bs, 5H), 2,30-2,10 (m, 2H), 2,05-1,05 (séries de multipletos, 22 H), 1,03 (bs, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,71 (s, 3H); 13C RMN (CDCl3/MeOH-d4, 50 MHZ) δ 73,89, 72,44, 68,99, 63,51, 48,05, 47,12, 42,49, 40,37, 39,99, 36,62, 36,12, 35,58, 35,40, 32,77, 30,69, 30,04, 29,02, 28,43, 27,27, 23,96, 23,08, 18,00, 13,02; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Naf) 417.2992 (55,3%); cacld. 417.2981.

Composto 14: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 13 (28,2 g, 71,7 mmoles) em DMF (300 ml). Et3N (20 ml, 143,4 mmoles), cloreto de tri- tila (25,98 g, 93,2 mmoles) e DMAP (0,13 g, 1,07 mmol). A mistura foi agita- da a 50°C sob N2, durante 30 horas seguida pela introdução de água (1000 ml) e extração com EtOAc (5 x 200 ml). Os extratos combinados foram lava- dos com água e salmoura e então secos sobre MgS04. Após remoção do solvente in vacuo, o resíduo foi purificado usando cromatografia em Si02 (CH2CI2, Et20 e MeOH como eluentes) para dar 14 como um sólido amarelo claro (31,9 g, rendimento 70%). P.f. 187°C (decomposição); IV (Kbr) 3405, 2935, 1448, 1075 cm-1; 1H RMN (CDCI3, 200 MHz) δ 7,46-7,42 (m, 6H), 7,32-7,17 (m, 9H), 3,97 (bs, 1H), 3,83 (bs, 1H), 3,50-3,38 (m, 1H), 3,01 (bs, 1H), 2,94 (dd, J = 14,2, 12,2 Hz, 2H), 2,64 (bs, 1H), 2,51 (bs, 1H), 2,36-2,10 (m, 2H), 2,00-1,05 (série de multipletos, 22 H), 0,96 (d, J = 5,8 Hz, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,64 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 50 MHZ) δ 144,77, 128,93, 127,91, 127,01,86,43, 73,35, 72,06, 68,66, 64,28, 47,47, 46,53, 41,74, 41,62, 39,64, 35,57, 35,46, 34,91, 34,82, 32,40, 30,55, 28,21, 27,69, 26,80, 26,45, 23,36, 22,59, 17,83, 12,61; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na)+] 659.4069 (100%); cacld. 659.4076.

Composto 15: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 14 (20,0 g, 31,4 mmoles) em THF seco (600 ml) e NaH (60% em óleo mineral, 6,3 g, 157,2 mmoles). A mistura foi refluxada durante 30 minutos sob N2 seguido pela adição de brometo de alila (27 ml, 314 mmoles). Após 60 horas de re- fluxo, mais NaH (3 equivalentes) e brometo de alila (4 equivalentes) foram adicionados. Após mais 50 horas de refluxo, água (20 ml) foi introduzida lentamente seguida pela adição de 1 % de HCI até a camada aquosa tornar- se natural. A mistura foi então extraída com éter (3 x 100 ml) e os extratos combinados foram lavados com água (100 ml) e salmoura (2 x 100 ml). A solução de éter foi seca sobre Na2S04 anidro e, após remoção do solvente, o resíduo foi purificado usando cromatografia em Si02 (hexanos e EtO- Ac/hexanos 1:8 como eluentes) para dar 15 (22,76 g, rendimento 96%) como um vidro amarelo pálido. IV (simples) 2930, 1448, 1087 cm'1; 1H RMN (CDCIs, 200 MHz) δ 7,48-7,30 (m, 6H), 7,32-7,14 (m, 9H), 6,04-5,80 (m, 3H), 5,36-5,04 (série de multipletos, 6 H), 4,14-3,94 (m, 4H), 3,74 (td, J = 13,8, 5,8 Hz, 2H), 3,53 (bs, 1H), 3,20-2,94 (m, 3H), 3,31 (bs, 1H), 2,38-1,90 (m, 4H), 1,90-0,96 (série de multipletos, 20 H), 0,90 (d, J = 5,4 Hz, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,64 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 50 MHZ) δ 144,83, 136,27, 136,08, 128,94, 127,90, 126,98, 116,46, 115,70, 86,42, 80,94, 79,29, 74,98, 69,52, 69,39, 68,86, 64,39, 46,51, 46,42, 42,67, 42,14, 39,92, 35,63, 35,51, 35,13, 32,45, 28,98, 28,09, 27,66, 27,57, 26,72, 23,32, 23,11, 17,92, 12,69; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e ([M+Na)+] 779.5013 (86,1%); cacld. 779.5015.

Composto 16: A um frasco de fundo redondo de três gargalos foram adiciona- dos 15 (3,34 g, 4,4 mmoles) em CH2CI2 (200 ml) e metanol (100 ml). Através de solução fria (-78°C) borbulhou-se ozônio até persistir uma cor azul. Ex- cesso de ozônio foi removido com fluxo de oxigênio. A mistura foi deixada em um banho de acetona-gelo seco durante uma hora. Sulfeto de metila (2,4 ml) foi adicionado e 15 minutos depois a mistura foi tratada com NaBH4 (1,21 g, 32 mmoles) em solução de NaOH aquosa a 5% (10 ml)/metanol (10 ml) e deixada aquecer em temperatura ambiente. A mistura foi lavada com salmoura (3 x 50 ml) e a lavagem de salmoura combinada foi extraída com CH2CI2 (2 x 50 ml). A solução orgânica foi seca sobre MgS04. Após croma- tografia em Si02 (MeOH (5%) em CH2CI2), 3,30 g (rendimento 95%) de 16 foram isolados como um óleo. IV (simples) 3358, 2934, 1448, 1070 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 200 MHz) δ 7,50-7,42 (m, 6H), 7,32-7,17 (m, 9H), 3,80-2,96 (série de multipletos, 20 H), 2,25-0,96 (série de multipletos, 24 H), 0,89 (bs, 6H), 0,65 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 50 MHZ) δ 144,73, 128,88, 127,87, 126,96, 86,38, 81,05, 79,75, 76,59, 70,33, 69,66, 69,30, 64,20, 62,25, 62,16, 62,03, 46,77, 46,36, 42,63, 41,77, 39,60, 35,43, 35,23, 35,05, 34,89, 32,42, 28,91, 27,93, 27,56, 27,15, 26,68, 23,35, 22,98, 22,82, 18,15, 12,60; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na)+] 791.4860 (100%), cacld. 791.4863.

Composto 17: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 16 (1,17 g, 1,55 mmol) em THF seco (30 ml) sob N2 em banho de gelo seguido por so- lução de 9-BBN/THF (0,5 M, 10,2 ml, 5,51 mmoles). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 12 horas. NaOH aquoso (20%) (2 ml) e peró- xido de hidrogênio (30%) (2 ml) foram adicionados em seqüência. A mistura foi refluxada durante 1 hora seguido pela adição de salmoura (60 ml) e ex- tração com EtOAc (4 x 30 ml). Os extratos combinados foram secos sobre Na2S04 anidro. O produto (1,01 g, rendimento 80%) foi obtido como um óleo incolor após cromatografia em Si02 (5% de MeOH em CH2CI2). IV (simples) 3396, 2936, 1448, 1365, 1089 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 200 MHz) δ 7,50-7,42 (m, 6H), 7,34-7,16 (m, 9H), 3,90-3,56 (m, 13H), 3,50 (bs, 1H), 3,40-2,96 (sé- rie de multipletos, 6H), 2,30-0,94 (série de multipletos, 30H), 0,90 (s, 3H), 0,88 (d, J = 5,4 Hz, 3H), 0,64 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 50 MHZ) δ 144,73, 128.88, 127,85, 126,94, 86,36, 80,52, 78,90, 76,36, 66,82, 66,18, 65,77, 64,22, 61,53, 61,41, 61,34, 46,89, 46,04, 42,60, 41,59, 39,60, 35,37, 35,27, 34.88, 32,75, 32,44, 32,31, 28,82, 27,65, 27,48, 27,13, 26,77, 23,35, 22,74, 22,38, 18,08, 12,48; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + N+) m/e: ([M+Na)+] 833.5331 (100%), cacld. 833.5332.

Composto 18: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 16 (3,30 g, 4,29 mmoles) em CH2CI2 (150 ml) e NEt3 (2,09 ml, 15,01 mmoles). A mistura foi colocada em banho de gelo sob N2 seguido pela adição de cloreto de mesila (1,10 ml, 14,16 mmoles). Após 30 minutos, água (30 ml) e salmoura (200 ml) foram adicionados. A camada de CH2CI2 foi lavada com salmoura (2 x 50 ml) e seca sobre Na2S04 anidro. A mistura aquosa combinada foi extraída com EtOAc (3 x 100 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmoura e secos sobre Na2S04 anidro. O produto desejado (3,35 g, rendimento 78%) foi isolado como um óleo amarelo pálido após cromatogra- fia em Si02 (EtOAc/hexanos 1:1). IV (simples) 2937, 1448, 1352, 1174, 1120, 924 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 200 MHz) δ 7,52-7,40 (m, 6H), 7,34-7,20 (m, 9H), 4,42-4,24 (m, 6H), 3,90-3,64 (m, 4H), 3,60-3,30 (m, 4H), 3,24-3,00 (m, 3H), 3,10 (s, 6H), 3,05 (s, 3H), 2,20-1,96 (m, 3H), 1,96-1,60 (m, 8H), 1,60-0,94 (série de multipletos, 13H), 0,91 (bs, 6H), 0,65 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 50 MHZ) δ 114,68, 128,85, 127,85, 126,96, 86,37, 81,37, 79,58, 76,58, 69,95, 69,43, 69,34, 66,52, 66,31, 65,59, 64,11, 46,80, 46,20, 42,65, 41,48, 39,35, 37,82, 37,48, 35,36, 34,92, 34,73, 32,37, 28,66, 28,01, 27,44, 27,03, 26,72, 23,17, 22,91, 22,72, 18,13, 12,50; HRFAB-MS (matriz de tio- glicerol + Na+) m/e: ([M+Na]+) 1205.4176 (81,5%), cacld. 1205.4189.

Composto 19: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 17 (1,01 g, 1,25 mmol) em CH2CI2 (50 ml) e NEt3 (0,608 ml, 4,36 mmoles). A mistura foi colocada em banho de gelo sob N2 seguido pela adição de cloreto de mesila (0,318 ml, 4,11 mmoles). Após 30 minutos, água (10 ml) e depois salmoura (80 ml) foram adicionados. A camada de CH2CI2 foi lavada com salmoura (2 χ 20 ml) e seca sobre Na2S04 anidro. A mistura aquosa combinada foi ex- traída com EtOAc (3 x 40 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmoura e secos sobre Na2S04 anidro. O produto desejado (1,07 g, 82%) foi isolado como um óleo amarelado pálido após cromatografia em Si02 (EtOAc/hexanos 1:1). IV (simples) 2938, 1356, 1176, 1112 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,46-7,43, (m, 6H), 7,32-7,22 (m, 9H), 4,40-4,31 (m, 6H), 3,72-3,64 (m, 2H), 3,55 (dd, J = 6,3, 5,8 Hz, 2H), 3,51 (bs, 1H), 3,32- 3,14 (m, 3H), 3,14-2,92 (m, 3H), 3,01 (s, 3H), 3,01 (s, 3H), 3,00 (s, 3H), 2,10-1,92 (m, 10H), 1,92-1,58 (m, 8H), 1,56-0,92 (série de multipletos, 12H), 0,90 (s, 3H), 0,89 (d, J = 5,4 Hz, 3H), 0,64 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 144,67, 128,85, 127,85, 126,96, 86,42, 81,06, 79,83, 76,81, 68,12, 68,06, 68,02, 64,26, 64,06, 63,42, 46,76, 46,38, 42,73, 41,87, 39,73, 37,44, 37,32, 37,29, 35,52, 35,48, 35,32, 35,06, 32,53, 30,55, 30,28, 30,02, 29,15, 27,96, 27,69, 27,61, 26,75, 23,52, 23,02, 18,17, 12,64; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na]+) 1067.4672 (100%), cacld. 1067.4659.

Composto 20: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 18 (1,50 g, 1,50 mmol) em DMSO seco (20 ml) e NaN3 (0,976 g, 15 mmoles). A mistura foi aquecida a 80°C e agitada sob N2 durante a noite, depois diluída com água (100 ml). A mistura aquosa resultante foi extraída com EtOAc (3 x 50 ml) e os extratos combinados lavados com salmoura e secos sobre Na2S04 anidro. O produto desejado (0,83 g, rendimento 66%) foi isolado como um vidro límpido após cromatografia em Si02 (EtOAc/hexanos 1:5). IV (simples) 2935, 2106, 1448, 1302, 1114 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 200 MHz) δ 7,50-7,42 (m, 6H), 7,36-7,20 (m, 9H), 3,84-3,70 (m, 2H), 3,65 (t, J = 4,9 Hz, 2H), 3,55 (bs, 1H), 3,44-3,08 (m, 10H), 3,02 (t, J = 6,4 Η, 2H), 2,38-0,96 (série de multipletos, 24H), 0,92 (d, J = 5,6 Hz, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,65 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 50 MHZ) δ 114,84, 128,97, 127,92, 126,99, 86,42, 81,24, 80,12, 76,59, 67,84, 67,29, 66,66, 64,36, 51,67, 51,44, 51,18, 46,53, 46,23, 42,21,41,93, 39,73, 35,66, 35,36, 35,06, 34,78, 32,40, 28,95, 27,76, 27,39, 26,87, 23,45, 22,98, 22,92, 17,98, 12,53; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e [(M+Na]+) 866.5040 (100%), cacld. 866.5057.

Composto 22: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 20 (830 mg, 0,984 mmol) em MeOH (30 ml) e CH2CI2 (30 ml) e ácido p-toluenossulfônico (9,35 mg, 0,0492 mmol). A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 2,5 horas, depois NaHC03 aquoso saturado (10 ml) foi introduzido.

Salmoura (30 ml) foi adicionada, e a mistura extraída com EtOAc (4 x 20 ml).

Os extratos combinados foram secos sobre Na2S04 anidro. O produto de- sejado (0,564 g, rendimento 95%) foi isolado como um óleo amarelado páli- do após cromatografia em Si02 (EtOAc/hexanos 1:2). IV (simples) 3410, 2934, 2106, 1301, 1112 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 200 MHz) 6 3,80-3,54 (m, 7H), 3,44-3,20 (m, 10H), 2,35-0,96 (série de multipletos, 24H), 0,95 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,68 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 50 MHZ) δ 81,10, 80,01, 76,60, 67,75, 67,16, 66,56, 63,63, 51,57, 51,34, 51,06, 46,29, 46,12, 42,12, 41,81, 39,60, 35,55, 35,23, 34,94, 34,66, 31,75, 29,48, 27,72, 27,66, 27,29, 23,32, 22,86, 22,80, 17,85, 12,39; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e ([M+Na]+) 624.3965 (100%), cacld. 624.3962.

Composto 23: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 19 (1,07 g, 1,025 mmol) e NaN3 (0,666 g, 10,25 mmoles) após a introdução de DMSO seco (15 ml). A mistura foi aquecida até 80°C sob N2 durante a noite. Após a adição de H20 (100 ml), a mistura foi extraída com EtOAc (4 x 40 ml) e os extratos combinados foram lavados com salmoura (2 x 50 ml) e secos sobre Na2S04 anidro. Após remoção do solvente, o resíduo foi dissolvido em Me- OH (15 ml) e CH2CI2 (15 ml) seguido pela adição de quantidade catalítica de ácido p-toluenossulfônico (9,75 mg, 0,051 mmol). a solução foi agitada em temperatura ambiente durante 2,5 horas antes da adição da solução de NaHC03 saturada (15 ml). Após a adição de salmoura (60 ml), a mistura foi extraída com EtOAc (5 x 30 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmoura (50 ml) e secos sobre Na2S04 anidro. O produto desejado (0,617 g, rendimento de 94% durante duas etapas) foi obtido como um óleo ama- relado após cromatografia em Si02 (EtOAc/hexanos 1:2). IV (simples) 3426, 2928, 2094, 1456, 1263, 1107 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) 3,68-3,56 (m, 3Η), 3,56-3,34 (série de multipletos, 10H), 3,28-3,00 (série de multipleto, 4H), 2,20-2,00 (m, 3H), 1,98-1,55 (série de multipletos, 15H), 1,55-0,96 (sé- rie de multipleto, 13H), 0,92 (d, J = 6,6 Hz), 3,H), 0,89 (s, 3H), 0,66 (s, 3H); 13C RMN (CDCIs, 75 MHZ) δ 80,63, 79,79, 76,04, 64,99, 64,45, 64,30, 63,72, 49,01,48,94, 48,74, 46,49, 46,39, 42,70, 41,98, 39,80, 35,65, 35,42, 35,28, 35,08, 31,99, 29,78, 29,75, 29,70, 29,49, 29,06, 27,87, 27,79, 27,65, 23,53, 23,04, 22,85, 18,05, 12,59; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na]+) 666.4415 (100%), cacld. 666.4431.

Composto 24: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 22 (0,564 g, 0,938 mmol) e CH2CI2 (30 ml) e NEt3 (0,20 ml, 1,40 mmol). A mistura foi co- locada em banho de gelo sob N2 seguido pela adição de cloreto de mesila (0,087 ml, 1,13 mmol). Após 30 minutos, água (20 ml) e salmoura (100 ml) foram adicionados. A camada de CH2CI2 foi lavada com salmoura (2 x 20 ml) e seca sobre Na2S04 anidro. A mistura aquosa combinada foi extraída com EtOAc (3 x 30 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmoura e secos sobre Na2S04 anidro. O produto desejado (0,634 g, rendimento de 99%) foi isolado como um óleo amarelado pálido após cromatografia em Si02 (EtOAc/hexanos 1:2). IV (simples) 2935, 2106, 1356, 1175, 1113 cm'1; 1H RMN (CDCIs, 300 MHz) 4,20 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,80-3,75 (m, 1H), 3,70- 3,64 (m, 3H), 3,55 (bs, 1H), 3,44-3,01 (m, 10H), 3,00 (s, 3H), 2,32-2,17 (m, 3H), 2,06-2,03 (m, 1H), 1,90-0,88 (série de multipletos, 20H), 0,95 (d, J = 6,6 hz, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,68 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 80,90, 79,86, 76,43, 70,78, 67,64, 66,99, 66,48, 51,50, 51,26, 50,97, 46,05, 45,96, 42,08, 41,71, 39,51, 37,33, 35,15, 34,86, 34,60, 31,34, 28,73, 27,62, 27,59, 27,51, 25,68, 23,22, 22,80, 22,70, 17,62, 12,33; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Naf) 702.3741 (100%), cacld. 702.3737.

Composto 25: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 23 (0,617 g, 0,96 mmol) em CH2CI2 (30 ml) e NEt3 (0,20 ml, 1,44 mmol). A mistura foi co- locada em banho de gelo sob N2 seguido pela adição de cloreto de mesila (0,089 ml, 1,15 mmol). Após 30 minutos, água (20 ml) e salmoura (120 ml) foram adicionados. A camada de CH2CI2 foi lavada com salmoura (2 x 20 ml) e seca sobre Na2S04. A mistura aquosa combinada foi extraída com EtOAc (3 x 30 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmoura e secos sobre Na2S04 anidro. O produto desejado (0,676 g, rendimento de 97%) foi isolado como um óleo amarelado pálido após remoção do solvente. IV (sim- ples) 2934, 2094, 1454, 1360, 1174, 1112 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 4.17 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 3,65-3,28 (série de multipletos, 11H), 3,64-3,00 (sé- rie de multipletos, 4H), 2,97 (s, 3H), 2,18-1,96 (série de multipletos, 16H), 1,54-0,94 (série de multipletos, 11H), 0,89 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,86 (s, 3H), 0,63 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 80,47, 79,67, 75,92, 70,84, 64,90, 64,37, 64,17, 48,90, 48,86, 48,66, 46,32, 46,26, 42,63, 41,87, 39,70, 37,39, 35,34, 35,28, 35,20, 34,99, 31,61, 29,68, 29,60, 28,96, 27,78, 27,68, 27,57, 25,79, 23,41, 22,95, 22,74, 17,82, 12,50; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol) m/e: ([M+H]+) 722.4385 (22,1%), cacld. 722.4387.

Composto 26: A um frasco de fundo redondo de 50 ml foram adicionados 24 (0,634 g, 0,936 mmol) e N-benzilmetilamina (2 ml). A mistura foi aquecida sob N2 a 80°C durante a noite. Excesso de N-benzilmetilamina foi removido sob vácuo, e o resíduo submetido à cromatografia em Si02 (EtOAc/hexanos 1:2). O produto desejado (0,6236 g, rendimento 95%) foi isolado como um óleo amarelo pálido. IV (simples) 2935, 2106, 1452, 1302, 1116 cm'1; 1H RMN (CDC!3, 200 MHz) δ 7,32-7,24 (m, 5H), 3,80-3,76 (m, 1H), 3,70-3,60 (m, 3H), 3,54 (bs, 1H), 3,47 9s, 2H), 3,42-3,10 (m, 10H), 2,38-2,05 (m, 5H), 2.17 (s, 3H), 2,02-0,88 (série de multipletos, 21H), 0,93 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,91 (s, 3H), 0,66 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 50 MHZ) δ 139,60, 129,34, 128,38, 127,02, 81,22, 80,10, 76,71, 67,85, 67,29, 66,65, 62,45, 58,38, 51,65, 51,44, 51,16, 46,50, 46,21,42,40, 42,20, 41,93, 39,72, 35,80, 35,34, 35.05, 34,76, 33,65, 28,93, 27082, 27,75, 27,38, 24,10, 23,45, 22,98, 22,91, 18.05, 12,50; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+H]+) 703.4748 (0,2%), cacld. 703.4772; ([M+H]+) 705.4911 (100%), cacld. 705.4928; ([M+Naf) 727.4767 (1,5%), cacld. 727.4748.

Composto 27: A um frasco de fundo redondo de 50 ml foram adicionados 25 (0,676 g, 0,937 mmol) e N-benzilmetilamina (2 ml). A mistura foi aquecida sob N2 a 80°C durante a noite. Excesso de N-benzilmetilamina foi removido sob vácuo, e o resíduo submetido à cromatografia em Si02 (EtOAc/hexanos 1:2). O produto desejado (0,672 g, rendimento 96%) foi isolado como um óleo amarelo pálido. IV (simples) 2934, 2096, 1452, 1283, 1107 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,34-7,20 (m, 5H), 3,68-3,37 (série de multipletos, 13H), 3,28-3,04 (m, 4H), 2,33 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,20-2,00 (m, 3H), 1,96-1,56 (série de multipletos, 14H), 1,54-1,12 (m, 10H), 1,10-0,96 (m, 3H), 0,91 (d, J = 8,7 Hz, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,65 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) Ô 139,48, 129,23, 128,30, 126,96, 80,66, 79,81, 76,08, 65,00, 64,46, 64,34, 62,50, 58,37, 49,02, 48,95, 48,75, 46,65, 46,40, 42,69, 42,43, 42,00, 39,83, 35,86, 35,45, 35,30, 35,10, 33,83, 29,81, 29,78, 29,72, 29,09, 27,88, 27,81, 27,66, 24,19, 23,57, 23,06, 22,87, 18,15, 12,62; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol) m/e: ([M+H]+) 747.5406 (77,2%), cacld. 747.5398.

Composto 1: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 26 (0,684 g, 0,971 mmol) em THF seco (30 ml) e LiAIH4 (113,7 mg, 3,0 mmoles) sob N2. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 12 horas e então pó de Na2SO4.10 H20 (10 g) foi lentamente adicionado. Após a cor cinza desa- parecer, a mistura foi filtrada através de Celite e lavada com THF seco. O

produto (0,581 g, rendimento de 95%) foi obtido como um vidro incolor. IV (simples) 3372, 2937, 1558, 1455, 1362, 1102 cm'1. 1H RMN (CDCI3, 300 Mhz) δ 7,34-7,20 (m, 5H), 3,68-3,48 (m, 5H), 3,47 (s, 2H), 3,29 (bs, 1H), 3,22-3,00 (m, 3H), 2,96-2,80 (m, 6H), 2,32 (t, J = 6,8, 5,4 Hz, 2 H), 2,17 (s, 3H), 2,20-2,00 (m, 3H), 1,96-0,96 (série de multipletos, 27H), 0,93 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,67 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 139,50, 129,22, 128,31, 126,96, 80,76, 79,85, 76,10, 70,90, 70,33, 70,24, 62,48, 58,27, 46,55, 46,45, 42,72, 42,58, 42,33, 41,99, 39,77, 35,78, 35,37, 35,01, 33,73, 29,07, 27,95, 27,71, 24,06, 23,46, 22,99, 18,14, 12,55; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol) m/e: ([M+Hf) 627.5211 (100%), cacld. 627.5213.

Sal de HCI do composto 1: O composto 1 foi dissolvido em uma quantidade mínima de CH2CI2 e adicionou-se 0 excesso de HCI em éter. Solvente e excesso de HCI foram removidos in vacuo e um pó branco não cristalino foi obtido. 1H RMN (metanol-d4/15% CDCI3, 300 MHz) δ 7,61-7,57 (m, 2H), 7,50-7,48 (m, 3H), 4,84 (bs, 10H), 4,45 (bs, 1H), 4,30 (bs, 1H), 3,96-3,82 (m, 2H), 3,78- 3,69 (m, 2H), 3,66 (bs, 1H), 3,59-3,32 (série de multipletos, 4H), 3,28-3,02 (m, 8H), 2,81 (s, 3H), 2,36-2,15 (m, 4H), 2,02-1,68 (m, 8H), 1,64-0,90 (série de multipletos, 12H), 1,01 (d, J = 6,35 Hz, 3H), 0,96 (s, 3H), 0,73 (s, 3H); 13C RMN (metanol-d4/15% CDCI3, 75 MHZ) δ 132,31, 131,20 ,130,92, 130,40, 83,13, 81,09, 78,48, 65,54, 64,98, 64,11, 60,87, 57,66, 47,51,46,91, 43,52, 43,00, 41,38, 41,19, 41,16, 40,75, 40,30, 36,37, 36,08, 36,00 ,35,96, 33,77, 29,68, 29,34, 28,65, 28,37, 24,42, 24,25, 23,33, 21,51, 18,80, 13,04.

Composto 2: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 27 (0,82 g, 1,10 mmol) em THF seco (150 ml) e LiAIH4 (125 mg, 3,30 mmoles) sob N2. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 12 horas e pó de Na2SO4.10 H20 (10 g) foi adicionado lentamente. Após a cor cinza desapa- recer, a mistura foi filtrada através de uma tampa de algodão e lavada com THF seco. THF foi removido in vacuo e o resíduo dissolvido em CH2CI2 (50 ml). Após filtração, 0 produto desejado foi obtido como um vidro incolor (0,73 g, rendimento de 99%). IV (simples) 3362, 2936, 2862, 2786, 1576, 1466, 1363, 1103 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,32-7,23 (m, 5H), 3,67- 3,63 (m, 1H), 3,60-3,57 (m, 1H), 3,53 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,47 (s, 2H), 3,46 (bs, 1H), 3,24-3,17 (m, 2H), 3,12-2,99 (m, 2H), 2,83-2,74 (série de multiple- tos, 6H), 2,30 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,15 (s, 3H), 2,20-2,00 (m, 3H), 1,95-1,51 (série de multipletos, 20H), 1,51-1,08 (série de multipletos, 10 H), 1,06-0,80 (m, 3H), 0,87 (d, J = 8,1 hz, 3H), 0,86 (s, 3H), 0,61 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 139,35, 129,16, 128,22, 126,88, 80,44, 79,29, 75,96, 66,70, 66,52, 66,12, 62,45, 58,26, 46,76, 46,27, 42,69, 42,41, 42,02, 40,68, 40,10, 40,02, 39,82, 35,84, 35,47, 35,30, 35,06, 34,15, 34,09, 34,03, 33,80, 28,96, 27,96, 27,75, 27,71, 24,32, 23,53, 23,03, 22,75, 18,17, 12,58/ HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na]+) 691.5504 (38,5%), cacld. 691.5502.

Sal de HCI do composto 2: O composto 2 foi dissolvido em uma quantidade mínima de CH2CI2 e adicionou-se o excesso de HCI em éter. Remoção de solvente e excesso de HCI deram um pó branco não-cristalino. 1H RMN (metanol- d4/15% CDCIg, 300 MHz) δ 7,60-7,59 (m, 2H), 7,50-7,47 (m, 3H), 4,82 (bs, 10H), 4,43 (bs, 1H), 4,32 (bs, 1H), 3,85-3,79 (m, 1H), 3,75-3,68 (m, 1H), 3,64 (t, J = 5,74 Hz, 2H), 3,57 (bs, 1H), 3,36-3,28 (m, 2H), 3,25-3,00 (série de multipletos, 10H), 2,82 (s, 3H), 2,14-1,68 (série de multipletos, 19H), 1,65-1,15 (série de multipletos, 11H), 0,98 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,72 (s, 3H); 13C RMN (metanol-d4/15% CDCI3, 75 MHZ) δ 132,21, 131,10, 130,58, 130,28, 81,96, 80,72, 77,60, 66,84, 66,58, 66,12, 61,03, 57,60, 44,16, 42,77, 40,62, 39,57, 39,43, 36,28, 36,03, 35,96, 35,78, 33,65, 29,48, 29,27, 29,11, 29,01, 28,61, 28,56, 28,35, 24,25, 23,56, 23,30, 21,17, 18,64, 12,90.

Composto 4: Uma suspensão de 1 (79,1 mg, 0,126 mmol) e ácido aminoimi- nometanossulfônico (50,15 mg, 0,404 mmol) em metanol e clorofórmio foi agitada em temperatura ambiente durante 24 horas, e a suspensão tornou- se límpida. Uma solução de éter de HCI (1 M, 1 ml) foi adicionada seguida pela remoção do solvente com fluxo de N2. O resíduo foi dissolvido em H20 (5 ml) seguido pela adição de NaOH aquoso a 20% (0,5 ml). A mistura turva resultante foi extraída com CH2CI2 (4x5 ml).Os extratos combinados foram secos sobre Na2S04 anidro. Remoção do solvente deu o produto desejado (90 mg, 95%) como um pó branco. P.f. 111-112°C. IV (simples) 3316, 2937, 1667, 1650, 1556, 1454, 1348, 1102 cm’1; 1H RMN (5% metanol-d4/CDCI3, 300 MHz) δ 7,26-7,22 (m, 5H), 4,37 (bs, 3H), 3,71-3,51 (série de multipletos, 5H), 3,44 (s, 2H), 3,39-3,10 (série de multipletos, 10H), 2,27 (t, J = 6,83 Hz, 2H), 2,13 (s, 3H), 2,02-0,94 (série de multipletos, 33H), 0,85 (d, J = 5,62 Hz, 3H), 0,84 (s, 3H), 0,61 (s, 3H); 13C RMN (5% metanol-d4/CDCI3, 75 MHZ) δ 158,54, 158,48, 158,43, 138,27 ,129,47, 128,32, 127,19, 81,89, 80,30, 77.34, 69,02, 68,46, 67,21, 62,36, 58,00, 47,36, 46,18, 43,26, 43,00, 42,73, 42,18, 41,48, 39,32, 35,55, 34,97, 34,89, 34,67, 33,63, 28,93, 28,28, 27,53, 27,16, 23,96, 23,28, 23,16, 22,77, 18,36, 12,58; HRFAB-MS (matriz de tio- glicerol + Na+) m/e: ([M+H]+) 753.5858 (100%), cacld. 753.5867.

Sal de HCI do composto 4: O composto 4 foi dissolvido em uma quantidade mínima de CH2CI2 e MeOH seguido pela adição do excesso de Hcl em éter. O solvente e excesso foi removido por fluxo de N2 e 0 resíduo submetido a alto vácuo durante a noite. O produto desejado foi obtido como pó branco não cristali- no. 1H RMN (metanol-d4/20% CDCI3, 300 MHz) δ 7,58 (bs, 2H), 7,50-7,48 (m, 3H), 4,76 (bs, 13H), 4,45 (d, J = 12,9 Hz, 1H), 4,27 (dd, 1H, J = 12,9, 5,4 Hz), 3,82-3,00 (série de multipletos, 17H), 2,81-2,80 (m, 3H), 2,20-1,02 (sé- rie de multipletos, 27H), 0,98 (d, J = 6,59 Hz, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,72 (s, 3H); 13C RMN (metanol-d4/20% CDCI3, 75 MHz) δ 158,88, 158,72, 132,00, 131,96, 130,98, 130,15, 82,51, 81,07, 78,05, 68,50, 68,02, 67,94, 67,10, 60.87, 60,53, 57,38, 47,16, 46,91, 43,91,43,11,43,01, 42,91, 42,55, 40,28, 39.88, 39,95, 35,90, 35,73, 35,64, 33,53, 29,18, 28,35, 27,99, 24,02, 23,30, 21.35, 18,52, 18,44, 13,06.

Composto 5: Uma suspensão de 2 (113 mg, 0,169 mmol) e ácido aminoimi- nometanossulfônico (67,1 mg, 0,541 mmol) em metanol e clorofórmio foi agitada em temperatura ambiente durante 24 horas. HCI em éter (1 M, 1 ml) foi adicionado seguido pela remoção do solvente com fluxo de N2. O resíduo foi submetido a alto vácuo durante a noite e dissolvido em H20 (5 ml) segui- do pela adição de solução de NaOH a 20% (1,0 ml). A mistura resultante foi extraída com CH2CI2 (5x5 ml). Os extratos combinados foram secos sobre Na2S04 anidro. Remoção do solvente deu 0 produto desejado (90 mg, ren- dimento de 95%) como um sólido branco. P.f. 102-104°C. IV (simples) 3332, 3155, 2939, 2863, 1667, 1651, 1558, 1456, 1350, 1100 cm’1; 1H RMN (5% metanol-d4/CDCI3, 300 MHz) δ 7,35-7,24 (m, 5H), 3,75-3,64 (m, 1H), 3,57 (bs, 5H), 3,50 (s, 2H), 3,53-3,46 (m, 1H), 3,40-3,10 (série de multipletos, 14H), 2,34 (t, J = 7,31 Hz, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,13-0,96 (série de multipletos, 36Η), 0,91 (bs, 6H), 0,66 (s, 3H); 13C RMN (5% metanol-d4/CDCI3, 75 MHz) Ô 157,49, 157,31, 157,23, 138,20, 129,52, 128,34, 127,23, 81,17, 79,19, 76.42, 65,63, 65,03, 64,70, 62,36, 58,02, 47,23, 46,24, 42,89, 42,18, 41,45, 39,45, 39,40, 39,30, 38,71, 35,61, 35,55, 35,02, 34,82, 33,69, 29,87, 29,59, 29.42, 28,84, 27,96, 27,56, 23,95, 23,40, 22,82, 22,64, 18,28, 12,54; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+H]+) 795.6356 (84,3%), cacld. 795.6337.

Sal de HCI do composto 5: O composto 5 foi dissolvido na quantidade mínima de CH2CI2 e MeOH seguido pela adição do excesso de HCI em éter. O solvente e exces- so de HCI foram removidos por fluxo de N2 e o resíduo submetido a alto vá- cuo durante a noite. O produto desejado foi obtido como pó branco não- cristalino. 1H RMN (metanol-d4/10% CDCI3, 300 MHz) δ 7,62-7,54 (m, 2H), 7,48-7,44 (m, 3H), 4,84 (bs, 16H), 4,46 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 4,26 (dd, J = 12,7, 3,42 Hz, 1H), 3,78-3,56 (série de multipletos, 5H), 3,38-3,05 (série de multipletos, 13 H), 2,80 (d, 3H), 2,19-2,04 (m, 3H), 2,02-1,04 (série de multi- pletos, 30H), 0,98 (d, J = 6,35 Hz, 3H), 0,95 (s, 3H), 0,72 (s, 3H); 13C RMN (metanol-d4/10% CDCI3, 75 MHz) δ 158,75, 158,67, 132,32, 131,24, 130,83, 130,43, 82,49, 81,02, 77,60, 66,47, 65,93, 61,19, 60,85, 57,69, 47,79, 47,60, 44,29, 43,07, 40,86, 40,42, 40,19, 40,09, 39,76, 36,68, 36,50, 36,15, 35,94, 33,91, 30,75, 30,46, 29,74, 29,33, 28,71, 24,41, 24,03, 23,38, 22,21, 22,16, 18,59, 18,52, 13,09.

Exemplo 2 Composto 28: Uma suspensão de 19 (0,641 g, 0,614 mmol) e KC (0,40 g, 6,14 mmoles) em DMSO anidro (5 ml) foi agitada sob N2 a 80°C durante a noite seguido pela adição de H20 (50 ml). A mistura aquosa foi extraída com EtOAc (4 x 20 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmoura uma vez, secos sobre Na2S04 anidro e concentrados in vacuo. O resíduo foi dissolvido em CH2CI2 (3 ml) e MeOH (3 ml) e quantidade catalítica de ácido p-toluenossulfônico (5,84 mg, 0,03 mmol) foi adicionada. A solução foi agi- tada em temperatura ambiente durante 3 horas antes da introdução da solu- ção de NaHC03 saturada (10 ml). Após a adição de salmoura (60 ml), a mistura foi extraída com EtOAc (4 x 30 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmoura uma vez e secos sobre Na2S04 anidro e concentra- dos. O resíduo deu o produto desejado (0,342 g, rendimento de 92%) como óleo amarelado pálido após cromatografia de coluna (sílica gel, EtO- Ac/hexanos 2:1). IV (simples) 3479, 2936, 2864, 2249, 1456, 1445, 1366, 1348, 1108 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 3,76-3,53 (m, 7H), 3,32-3,06 (série de multipletos, 4H), 2,57-2,46 (m, 6H), 2,13-1,00 (série de multipletos, 31H), 0,93 (d, J = 6,35 Hz, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,67 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 119,91, 119,89, 80,75, 79,65, 76,29, 65,83, 65,37, 65,19, 63,63, 46,57, 46,44, 42,77, 41,79, 39,71, 35,63, 35,26, 35,02, 32,00, 29,46, 29,03, 27,96, 27,74,0 26,64, 26,42, 26,12, 23,56, 22,98, 22,95, 18,24, 14,65, 14,54, 14,30, 12,60; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Naf) 618.4247 (67,8%), cacld. 618.4247.

Composto 29 A uma solução de 28 (0,34 g, 0,57 mmol) em CH2CI2 seco (15 ml) sob N2 a 0°C foi adicionado NEt3 (119,5 μΙ, 0,857 mmol) seguido pela adição de cloreto de mesila (53,1 μΙ, 0,686 mmol). A mistura foi deixada agitar a 0°C durante 30 minutos antes da adição de H20 (6 ml). Após a in- trodução de salmoura (60 ml), a mistura aquosa foi extraída com EtOAc (4 x 20 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmoura uma vez, se- cos sobre Na2S04 anidro e concentrados. Ao resíduo foi adicionada N- benzilmetilamina (0,5 ml) e a mistura foi agitada sob N2 a 80°C durante a noite. Excesso de N-benzilmetilamina foi removido in vacuo e 0 resíduo submetido à cromatografia de coluna (sílica gel, EtOAc/hexanos 2:1 seguido por EtOAc) para dar 0 produto (0,35 g, rendimento de 88%) como um óleo amarelo-pálido. IV (simples) 2940, 2863, 2785, 2249, 1469, 1453, 1366, 1348, 1108 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,34-7,21 (m, 5H), 3,76-3,69 (m, 1H), 3,64-3,50 (m, 4H), 3,48 (s, 2H), 3,31-3,05 (série de multipletos, 4H), 2,52-2,46 (m, 6H), 2,33 (t, J = 7,32 Η, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,13-0,95 (série de multipletos, 30H), 0,91 (d, J = 6,80 H, 3Hz), 0,90 (s, 3H), 0,66 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHz) δ 139,37, 129,17, 128,26, 126,93, 119,96, 119,91, 80,73, 79,59, 76,26, 65,79, 65,35, 65,13, 62,47, 58,25, 46,74, 46,40, 42,72, 42.38, 41,76, 39,68, 35,78, 35,22, 34,98, 33,79, 28,99, 27,92, 27,71, 26,63, 26.38, 26,09, 24,21,23,54, 22,96, 22,90, 18,28, 14,62, 14,51, 14,26, 12,58; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+H]+) 699.5226 (100%), cacld. 699.5213.

Composto 3: Uma solução de 29 (0,074 g, 0,106 mmol) em THF anidro (10 ml) foi adicionada em gotas a uma mistura de AICI3 (0,1414 g, 1,06 mmol) e LiAIH4 (0,041 g, 1,06 mmol) em THF seco (10 ml). A suspensão foi agitada durante 24 horas seguido pela adição da solução aquosa de NaOH a 20% (2 ml) na temperatura do banho de gelo. Na2SC>4 anidro foi adicionado à suspensão aquosa. A solução foi filtrada e o precipitado lavado duas vezes com THF. Após remoção do solvente, o resíduo foi submetido à cromatogra- fia de coluna (sílica gel, MeOH/CH2CI2 1:1 seguido por Me- 0H/CH2CI2/NH3.H20 4:4:1) para dar o produto desejado (0,038 g, rendi- mento de 50%) como um óleo límpido. IV (simples) 3362, 2935, 2863, 2782, 1651, 1574, 1568, 1557, 1471, 1455, 1103 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,32-7,22 (m, 5H), 3,60-3,02 (série de multipletos amplos, 18H), 2,90-2,70 (m, 5H), 2,33 (t, J = 7,20 Hz, 2H), 2,24-2,04 (m, 3H), 2,18 (s, 3H), 1,96-0,96 (série de multipletos, 30H), 0,90 (d, J = 7,57 Hz, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,64 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHz) δ 139,44, 129,24, 128,31, 126,97, 80,63, 79,65, 75,97, 68,44, 68,00, 67,96, 62,54, 58,40, 46,77, 46,30, 42,73 ,42,43, 42,07, 41,92, 41,74, 41,72, 39,81, 35,82, 35,48, 35,07, 33,84, 31,04, 30,30, 30,10, 29,03, 28,11, 27,82, 27,81, 27,74, 27,67, 27,64, 24,31, 23,50, 23,50, 2304, 22,93, 18,22, 12,63; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([Μ+ΗΠ 711.6139 (100%), cacld. 711.6152; ([M+Na]+) 733.5974 (46,1%), calcd. 733.5972.

Exemplo 3 Composto 30: Ácido cólico (3,0 g, 7,3 mmoles) foi dissolvido em CH2CI2 (50 ml) e metanol (5 ml). Diciclo-hexilcarbodiimida (DCC) (1,8 g, 8,8 mmoles) foi adicionado seguido por N-hidroxissuccinimida (-100 mg) e benzilmetilamina (1,1 g, 8,8 mmoles). A mistura foi agitada durante 2 horas, depois filtrada. O filtrado foi concentrado e cromatografado (Si02, 3% MeOH em CH2CI2) para dar 3,0 g de um sólido branco (rendimento de 81%). P.f. 184-186°C; IV (simples) 3325, 2984, 1678 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 200 MHz) δ 7,21 (m, 5H), 4,51 (m, 2H), 3,87 (m, 1H), 3,74 (m, 2H), 3,36 (m, 2H), 2,84 (s, 3H), 2,48- 0,92 (série de multipletos, 28H), 0,80 (s, 3H), 0,58 (d, J= 6,5 Hz, 3H); 13C RMN (CDCI3, 50 MHz) δ 174,30, 173,94, 137,36, 136,63, 128,81, 128,46, 127,85, 127,50, 127,18, 126,28, 72,96, 71,76, 68,35, 53,39, 50,65, 48,77, 46,91, 46,33, 41,44, 39,36, 39,18, 35,76, 35,27, 34,76, 33,87, 31,54, 34,19, 31,07, 30,45, 28,11, 27,63, 26,14, 25,59, 24,92, 23,26, 17,51, 12,41; FAB- MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+H]+) 512 (100%), cacld. 512.

Composto 31: O composto 30 (2,4 g, 4,7 mmoles) foi adicionado a uma sus- pensão de L1AIH4 (0,18 g, 4,7 mmoles) em THF (50 ml). A mistura foi reflu- xada durante 24 horas, depois resfriada a 0°C. Uma solução aquosa de Na2S04 foi adicionada cuidadosamente até a cor cinza da mistura dissipar- se. Os sais foram filtrados, e 0 filtrado concentrado in vacuo para dar 2,1 g de rendimento de um sólido branco (88%). O produto provou ser de pureza suficiente para outras reações. P.f. 70-73°C; IV (simples) 3380, 2983, 1502 cm"1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,23 (m, 5H), 3,98 (bs, 2H), 3,81 (m, 3H), 3,43 (m, 3H), 2,74 (m, 2H), 2,33 (m, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,10-0,90 (série de multipletos, 24 H), 0,98 (s, 3H), 0,78 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHz) δ 135,72, 129,63, 128,21, 128,13, 125,28, 72,91, 71,63, 62,05, 60,80, 56,79, 47,00, 46,23, 41,44, 40,81, 39,41, 35,42, 35,24, 34,63, 34,02, 33,22, 31,73, 30,17, 29,33, 29,16, 28,02, 27,49, 26,17, 25,55, 23,10, 22,48, 22,33, 17,54, 12,65; FAB-MS (matriz de tioglicerol) m/e: ([M+H]+) 498 (100%), cacld. 498.

Composto 32: O composto 31 (0,36 g, 0,72 mmol) foi dissolvido em CH2CI2 (15 ml) e Bocglicina (0,51 g, 2,89 mmoles), DCC (0,67 g, 3,24 mmoles) e dime- tilaminopiridina (DMAP) (-100 mg) foram adicionados. A mistura foi agitada sob N2 durante 4 horas depois filtrada. Após concentração e cromatografia (Si02, 5% MeOH em CH2Cl2), 0 produto foi obtido como 0,47 g de um vidro límpido (68%). 1H RMN (CDCI3> 300 MHz) 7,30 (m, 5H), 5,19 (bs, 1H), 5,09 (bs, 3H), 5,01 (bs, 1H), 4,75 (m, 1H), 4,06-3,89 (m, 6H), 2,33 (m, 2H), 2,19 (s, 3H), 2,05-1,01 (série de multipletos, 26H), 1,47 (s, 9H), 1,45 (s, 18H), 0,92 (s, 3H), 0,80 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,72 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3) 75 MHz) δ 170,01, 169,86, 169,69, 155,72, 155,55, 139,90, 129,05, 128,17, 126,88, 79.86, 76,53, 75,09, 72,09, 62, 35, 57,88, 47,78, 45,3, 43,12, 42,79, 42,16, 40,81, 37,94, 35,51, 34,69, 34,57, 34,36, 33,30, 31,31, 29,66, 28,80, 28,34, 27,22, 26,76, 25,61, 24,02, 22,83, 22,47, 17,93, 12,19; FAB-MS (matriz de tioglicerol) m/e: ([M+Hf) 970 (100%), cacld. 970.

Composto 33: O composto 31 (0,39 g, 0,79 mmol) foi dissolvido em CH2CI2 (15 ml) e Boc^-alanina (0,60 g, 3,17 mmoles), DCC (0,73 g, 3,56 mmoles) e dimetilaminopiridina (DMAP) (-100 mg) foram adicionados). A mistura foi agitada sob N2 durante 6 horas depois filtrada. Após concentração e cro- matografia (Si02, 5% MeOH em CH2CI2), o produto foi obtido como 0,58 g de um vidro límpido (72%). IV (simples) 3400, 2980, 1705, 1510 cm'1; 1H RMN (CDCIs, 300 MHz) δ 7,27 (m, 5H), 5,12 (bs, 4H), 4,93 (bs, 1H), 4,71 (m, 1H), 3,40 (m, 12H), 2,59-2,48 (m, 6H), 2,28 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 2,05-1,01 (série de multipletos, 26H), 1,40 (s, 27H), 0,90 (s, 3H), 0,77 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 0,70 (s, 3H). 13C RMN (CDCI3, 75 MHz) δ 171,85, 171,50, 171,44, 155,73, 138,62, 129,02, 128,09, 126,87, 79,18, 75,53, 74,00, 70,91, 62,20, 57,67, 47,84, 44,99, 43,28, 41,98, 40,73, 37,67, 36,12, 34,94, 34,65, 34,47, 34,20, 33,29, 31,23, 29,57, 28,74, 28,31, 28,02, 27,86, 27,12, 26,73, 25,46, 24.86, 23,95, 22,77, 22,39, 17,91, 12,14; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+H]+) 1011.6619 (100%), cacld. 1011.6634.

Composto 6: O composto 32 (0,15 g, 0,15 mmol) foi agitado com excesso de HCI 4N em dioxano durante 40 minutos. O dioxano e HCI foram removidos in vacuo dando 0,12 g de um vidro límpido (-100%). 1H RMN (CD3OD, 300 MHz) δ 7,62 (bs, 2H), 7,48 (bs, 3H), 5,30 (bs, 1H), 5,11 (bs, 1H), 4,72 (bs, 1H), 4,46 (m, 1H), 4,32 (m, 1H), 4,05-3,91 (m, 4H), 3,10 (m, 2H), 2,81 (s, 3H), 2,15-1,13 (série de multipletos, 25H), 1,00 (s, 3H), 0,91 (bs, 3H), 0,82 (s, 3H). 13C RMN (CD3OD, 125 MHz) δ 166,86, 166,60, 131,09,130,18, 129,17,128,55, 76,60, 75,43, 72,61, 72,04, 70,40, 66,22, 60,07, 58,00 57,90, 54,89, 54,76, 46,44, 44,64, 43,39, 42,22, 38,56, 36,78, 34,14, 33,92, 33,84, 31,82, 30,54, 29,67, 28,79, 27,96, 26,79, 26,00, 24,99, 23,14, 22,05, 21,82, 19,91, 17,27, 11,60; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M - 4 Cl - 3 H]+) 669.4576 (100%), cacld. 669.4591.

Composto 7: O composto 33 (0,20 g, 0,20 mmol) foi agitado com excesso de HCI 4 N em dioxano durante 40 minutos. O dioxano e HCI foram removidos in vacuo dando 0,12 g de um vidro límpido (-100%). 1H RMN (CD3OD, 500 MHz) δ 7,58 (bs, 2H), 7,49 (bs, 3H), 5,21 (bs, 1H), 5,02 (bs, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,44 (m, 1H), 4,28 (m, 1H), 3,30-2,84 (m, 14H), 2,80 (s, 3H), 2,11-1,09 (série de multipletos, 25H), 0,99 (s, 3H), 0,89 (d, J = 4,1 Hz, 3H), 0,80 (s, 3H); 13C RMN (CD3OD, 125 MHz) δ 171,92, 171,56, 171,49, 132,44, 131,32, 131,02, 130,51, 78,13, 76,61, 61,45, 57,94, 46,67, 44,80, 42,36, 40,85, 39,33, 37,03, 36,89, 36,12, 36,09, 35,79, 35,63, 33,81, 33,10, 32,92, 32,43, 30,28, 28,43, 28,04, 26,65, 24,02, 22,86, 21,98, 18,70, 12,68;HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M - 4 Cl - 3 H]+) 711.5069 (43%), cacld. 711.5061.

Exemplo 4 Composto 34: Azodicarboxilato de diisopropila (DIAD) (1,20 ml, 6,08 mmoles) foi adicionado a trifenilfosfina (1,60 g, 6,08 mmoles) em THF (100 ml) a 0°C e agitado durante meia hora durante a qual a solução amarela tornou-se uma pasta. O composto 14 (2,58 g, 4,06 mmoles) e ácido p-nitrobenóico (0,81 g, 4,87 mmoles) foram dissolvidos em THF (50 ml) e adicionados à pasta. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Água (100 ml) foi adicionada e a mistura tornou-se levemente básica adicionando solução de NaHC03 seguido por extração com EtOAC (3 x 50 ml). Os extratos foram lavados com salmoura uma vez e secos sobre Na2S04. O produto desejado (2,72 g, rendimento de 85%) foi obtido como pó branco após cromatografia em S1O2 (Et20/hexanos 1:2). P.f. 207-209°C; IV (simples) 3434, 3056, 2940, 2868, 1722, 1608,1529, 1489,1448, 1345 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 8,30-8,26 (m, 2H), 8,21-8,16 (m, 2H), 7,46-7,42 (m, 6H), 7,31-7,18 (m, 9H), 5,33 (bs,. 1H), 4,02 (bs, 1H), 3,90 (bs, 1H), 3,09-2,97 (m, 2H), 2,68 (td, J = 14,95, 2,56 Hz, 1H), 2,29-2,19 (m, 1H), 2,07-1,06 (série de multipletos, 24H), 1,01 (s, 3H), 0,98 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,70 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 164,21, 150,56, 144,70, 136,79, 130,77, 128,88, 127,86, 126,98, 123,70, 86,47, 73,24, 73,00, 68,70, 64,22, 47,79, 46,79, 42,15, 39,76, 37,47, 35,52, 35,34, 34,23, 33,79, 32,46, 31,12, 28,74, 27,71, 26,85, 26,30, 25,16, 23,41, 17,98, 12,77; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na]+)808.4203 (53,8%), cacld. 808.4189. O

nitrobenzoato (2,75 g, 3,5 mmoles) foi dissolvido em CH2CI2 (40 ml) e MeOH (20 ml) e NaOH aquoso a 20% (5 ml) foram adicionados. A mistura foi aque- cida até 60°C durante 24 horas. Água (100 ml) foi introduzida e extraída com EtOAc. Os extratos combinados foram lavados com salmoura e secos sobre Na2S04 anidro. O produto desejado (1,89 g, rendimento de 85%) foi obtido como sólido branco após cromatografia em Si02 (3% MeOH em CH2CI2 como eluente). P.f. 105-106°C; IV (KBr) 3429, 3057, 2936, 1596, 1489, 1447, 1376, 1265, 1034, 704 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,46-7,42 (m, 6H), 7,32-7,19 (m, 9H), 4,06 (bs, 1H), 3,99 (bs, 1H), 3,86 (bd, J = 2,44 Hz, 1H), 3,09-2,97 (m, 2H), 2,47 (td, J = 14,03, 2,44 Hz, 1H), 2,20-2,11 (m, 1H), 2,04-1,04 (série de multipletos, 25 H), 0,97 (d, J = 6,59 Hz, 3H), 0,94 (s, 3H), 0,68 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHz) δ 144,70, 128,88, 127,86, 126,97, 86,45, 73,31,68,84, 67,10, 64,23, 47,71,46,74, 42,10, 39,70, 36,73, 36,73, 36,15, 35,53, 35,45, 34,45, 32,46, 29,93, 28,67, 27,86, 27,71, 26,87, 26,04, 23,43, 23,43, 23,16, 17,94, 12,75; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Naf) 659.4064 (100%), cacld. 659.4076.

Composto 35: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 34 (2,0 g, 3,14 mmoles), NaH (60% em óleo mineral, 3,8 g, 31,4 mmoles) e THF (150 ml). A suspensão foi refluxada durante 2 horas seguido pela adição de brometo de alila (2,72 ml, 31,4 ml). Após refluxar durante 28 horas, mais 10 equivalen- tes de NaH e brometo de alila foram adicionados. Após 72 horas, mais 10 equivalentes de NaH e brometo de alila foram adicionados- Após 115 horas, TLC mostrou quase nenhum material de partida ou intermediários. Água (100 ml) foi adicionado à suspensão cuidadosamente, seguido por extração com EtOAc (5 x 50 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmou- ra e secos sobre Na2S04. O produto desejado (1,81 g, rendimento de 79%) foi obtido como um vidro amarelado após cromatografia de Si02 (5% EtO- Ac/hexanos). IV (simples) 3060, 3020, 2938, 2865, 1645, 1596, 1490, 1448, 1376, 1076, 705 cm'1; 1 H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,46-7,42 (m, 6H), 7,31- 7,18 (m, 9H), 6,06-5,85 (m, 3H), 5,35-5,20 (m, 3H), 5,15-5,06 (m, 3H), 4,10- 4,00 (m, 2H), 3,93-3,90 (m, 2H), 3,85-3,79 (ddt, J = 13,01, 4,88, 1,59 Hz, 1H), 3,73-3,66 (ddt, J = 13,01, 5,38, 1,46 Hz, 1H), 3,58 (bs, 1H), 3,54 (bs, 1H), 3,32 (d, J = 2,93 Hz, 1H), 3,07-2,96 (m, 2H), 2,36 (td, J = 13,67, 2,68 Hz, 1H), 2,24-2,10 (m, 2H), 2,03-1,94 (m, 1H), 1,87-0,86 (série de multiple- tos, 20H), 0,91 (s, 3H), 0,90 (d, J = 6,83 Hz, 3H), 0,64 (s, 3H); 13C RMN (CDCIs, 75 MHz) δ 144,77, 136,29, 136,21, 136,13, 128,90, 127,86, 126,94, 116,13, 115,51, 115,42, 86,44, 81,11, 75,65, 73,92, 69,40, 68,81, 64,43, 46,68, 46,54, 42,93, 39,93, 36,98, 35,66, 35,14, 35,14, 32,83, 32,54, 30,48, 28,51,27,72, 27,64, 26,82, 24,79, 23,65, 23,43, 23,40, 18,07, 12,80;HRFAB- MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Hf) 757.5185 (12,9%), cacld. 757.5196.

Composto 36: Ozônio foi borbulhado através de uma solução de 35 (0,551 g, 0,729 mmol) em CH2CI2 (40 ml) e MeOH (20 ml) a -78°C até a solução tor- nar-se um azul profundo. Excesso de ozônio foi soprado com oxigênio. Sul- feto de metila (1 ml) foi adicionado seguido pela adição de NaBH4 (0,22 g, 5,80 mmoles) em solução de NaOH a 5% e metanol. A mistura resultante foi agitada durante a noite em temperatura ambiente e lavada com salmoura. A salmoura foi então extraída com EtOAc (3 x 20 ml). Os extratos combinados foram secos sobre Na2S04. O produto desejado (0,36 g, rendimento de 65%) foi obtido como um vidro incolor após cromatografia em Si02 (5% Me- OH/CH2CI2). IV (simples) 3396, 3056, 2927, 1596, 1492, 1462, 1448, 1379, 1347, 1264, 1071 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,46-7,42 (m, 6H), 7,32- 7,18 (m, 9H), 3,77-3,57 (série de multipletos, 10H), 3,48-3,44 (m, 2H), 3,36- 3,30 (m, 2H), 3,26-3,20 (m, 1H), 3,04-2,99 (m, 2H), 2,37-0,95 (série de mul- tipletos, 27H), 0,92 (s, 3H), 0,91 (d, J = 6,59 Hz, 3H), 0,67 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 144,69, 128,87, 127,84, 126,94, 86,44, 81,05, 76,86, 74,65, 69,91, 69,22, 68,77, 64,24, 62,44, 62,42, 62,26, 46,92, 46,54, 42,87, 39,73, 36,86, 35,52, 35,13, 32,82, 32,54, 30,36, 28,71, 27,61, 27,44, 26,79, 24,82, 23,51,23,38, 23,31, 18,28, 12,74; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Naf) 791.4844 (96,4%), cacld. 791.4863.

Composto 37: NEt3 (0,23 ml, 1,66 mmol) foi adicionado a uma solução de 36 (0,364 g, 0,47 mmol) em CH2CI2 seco (30 ml) a 0°C sob N2 seguido pela in- trodução de cloreto de mesila (0,12 ml, 1,56 mmol). A mistura foi agitada durante 10 minutos e H20 (10 ml) adicionada para resfriar bruscamente a reação, seguido por extração com EtOAc (3 x 30 ml). Os extratos combina- dos foram lavados com salmoura e secos sobre Na2S04 anidro. Cromato- grafia em Si02 (EtOAc/hexanos 1:1) deu 0 produto desejado (0,411 g, ren- dimento de 86%) como vidro branco. IV (simples) 3058, 3029, 2939, 2868, 1491, 1461, 1448, 1349, 1175, 1109, 1019 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,46-7,42 (m, 6H), 7,31-7,19 (m, 9H), 4,35-4,26 (m, 6H), 3,84-3,74 (m, 2H), 3,64-3,56 (m, 4H), 3,49-3,34 (m, 3H), 3,06 (s, 3H), 3,04 (s, 3H), 3,02 (s, 3H), 3,09-2,95 (m, 2H), 2,28 (bt, J = 14,89 Hz, 1H), 2,09-0,86 (série de multiple- tos, 21H), 0,92 (s, 3H), 0,90 (d, J = 6,78 Hz, 3H), 0,66 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 144,66, 128,86, 127,86, 126,97, 86,46, 81,28, 77,18, 75,00, 70,14, 69,89, 69,13, 66,49, 65,85, 65,72, 64,22, 47,06, 46,35, 42,77, 39,58, 37,81,37,64, 37,55, 36,75, 35,48, 35,02, 32,59, 32,52, 30,27, 28,43, 27,56, 27,52, 26,92, 24,62, 23,34, 23,25, 23,10, 18,24, 12,64; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Naf) 1025.4207 (100%), cacld. 1025.4189.

Composto 38: A suspensão de 37 (0,227 g, 0,227 mmol) e NaN3 (0,147 g, 2,27 mmoles) em DMSO seco (5 ml) foi agitada a 80°C durante a noite, diluído com H20 (50 ml) e extraída com EtOAc (3 x 20 ml). Os extratos foram lava- dos com salmoura uma vez e secos sobre Na2SQ4 anidro. Cromatografia em Si02 (EtOAc/hexanos 1:8) deu o produto desejado (0,153 g, rendimento de 80%) como um óleo amarelo. IV (simples) 2929, 2866, 2105, 1490, 1466, 1448, 1107, 705 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,46-7,42 (m, 6H), 7,32- 7.19 (m, 9H), 3,80-3,74 (m, 1H), 3,70-3,55 (série de multipletos, 5H), 3,41 - 3.19 (série de multipletos, 9H), 3,04-2,98 (m, 2H), 2,41 (td, J = 13,1, 2,44 Hz, 1H), 2,29-2,14 (m, 2H), 2,.04-0,86 (série de multipletos, 20H), 0,93 (s, 3H), 0,91 (d, J = 6,60 Hz, 3H), 0,66 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHz) δ 144,78, 128,93, 127,87, 126,96, 86,46, 81,30, 77,16, 75,21, 67,99, 67,44, 67,03, 64,41, 51,64, 51,57, 51,33, 46,71, 46,30, 42,35, 39,75, 36,72, 35,64, 35,20, 32,52, 32,42, 30,17, 28,63, 27,80, 27,22, 26,90, 24,80, 23,55, 23,30, 23,24, 18,23, 12,65; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na]+) 866.5049 (96,9%), cacld. 866.5057.

Composto 39: Ácido p-toluenossulfônico (1,72 mg) foi adicionado à solução de 38 (0,153 g, 0,18 mmol) em CH2CI2 (5 ml) e MeOH (5 ml), e a mistura agita- da durante 2,5 horas. Solução de NaHC03 saturada (5 ml) foi introduzida seguido pela introdução de salmoura (30 ml). A mistura aquosa foi extraída com EtOAc e os extratos combinados lavados com salmoura e secos sobre Na2S04. O produto desejado (0,10 g, rendimento de 92%) foi obtido como um óleo amarelado pálido após cromatografia em Si02. (EtOAc/hexanos 1:3). IV (simples) 3426, 2926, 2104, 1467, 1441, 1347, 1107 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) 0 3,81-3,74 (m, 1H), 3,71-3,54 (m, 7H), 3,41-3,19 (m, 9H), 2,41 (td, J = 13,61, 2,32 Hz, 1H), 2,30-2,14 (m, 2H), 2,07-1,98 (m, 1H), 1,94- 0,95 (série de multipletos, 21H), 0,95 (d, J = 6,35 Hz, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,69 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHz) δ 81,22, 77,08, 75,13, 67,94, 67,36, 66,97, 63,76, 51,59, 51,51, 51,26, 46,51, 46,24, 42,31, 39,68, 36,64, 35,58, 35,12, 32,34, 31,92, 30,11, 29,55, 28,54, 27,82, 27,16, 24,75, 23,47, 23,23, 23,18, 18,15, 12,56; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na]+) 624.3966 (54,9%), cacld. 624.3962.

Composto 40: A uma solução de 39 (0,10 g, 0,166 mmol) em CH2CI2 (8 ml) a 0°C foi adicionado NEt3 (34,8 μΙ, 0,25 mmol) sob N2 seguido pela introdução de cloreto de mesila (15,5 μΙ, 0,199 mmol). A mistura foi agitada durante 15 minutos. Adição de H20 (3 ml) e salmoura (20 ml) foi seguida por extração com EtOAc (4x10 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmou- ra uma vez e secos sobre Na2S04. Após remoção do solvente, o resíduo foi misturado com N-benzilmetilamina (0,5 ml) e aquecido a 80°C sob N2 du- rante a noite. Excesso de N-benzilmetilamina foi removido in vacuo e o resí- duo submetido à cromatografia em Si02 (EtOAc/hexanos 1:4) deu o produto (0,109 g, rendimento de 93%) como um óleo amarelo. IV (simples) 2936, 2784, 2103, 1467, 1442, 1346, 1302, 1106, 1027 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,32-7,23 (m, 5H), 3,81-3,74 (m, 1H), 3,71-3,55 (m, 5H), 3,47 (s, 2H), 3,41-3,19 (m, 9H), 2,46-2,11 (m, 5H), 2,18 (s, 3H), 2,03-0,85 (série de multi- pletos, 20H), 0,93 (s, 3H), 0,93 (d, J = 6,35 Hz, 3H), 0,67 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 139,54, 129,26, 128,32, 126,97, 81,26, 77,12, 75,17, 67,98, 67,42, 67,00, 62,50, 58,41, 51,61, 51,54, 51,29, 46,66, 46,28, 42,46, 42,32, 39,72, 36,68, 35,76, 35,16, 33,75, 32,38, 30,15, 28,59, 27,85, 27,19, 24,77, 24,15, 23,53, 23,28, 23,22, 18,28, 12,60; HRFAB-MS (matriz de tio- glicerol + Na+) m/e: ([M+H]+) 705.4929 (100%), cacld. 705.4928.

Composto 8: Uma suspensão de 40 (0,109 g, 0,155 mmol) e LiAIH4 (23,5 mg, 0,62 mmol) em THF (20 ml) foi agitada sob N2 durante a noite. Na2S04 10H2O foi adicionado cuidadosamente e agitado até nenhuma cor cinza per- sistir. Na2S04 anidro foi adicionado e o precipitado branco foi filtrado e en- xaguado com THF seco. Após remoção do solvente, o resíduo foi dissolvido em CH2CI2 mínimo e filtrado. O produto desejado (0,091 g, rendimento de 94%) foi obtido como um óleo incolor após o solvente ser removido. IV (sim- ples) 3371, 3290, 3027, 2938, 2862, 2785, 1586, 1493, 1377, 1347, 1098 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 7,31-7,21 (m, 5H), 3,65-3,53 (m, 4H), 3,47 (s, 2H), 3,42-3,34 (m, 2H), 3,30 (bs, 1H), 3,26-3,20 (m, 1H), 3,14-3,09 (m, 1H), 2,89-2,81 (m, 6H), 2,39-2,27 (m, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,15-0,88 (série de multipletos, 29H), 0,93 (d, J = 6,59 Hz, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,67 (s, 3H); 13C RMN (CDCIs, 75 MHZ) δ 139,34, 129,16, 128,24, 126,90, 80,75, 76,44, 74,29, 70,58, 69,88, 69,75, 62,47, 58,27, 46,66, 46,47, 4275, 42,63, 42,51, 42,35, 39,77, 36,87, 35,73, 35,04, 33,77, 32,90, 30,38, 28,71, 27,70, 27,32, 24,89, 24,09, 23,53, 23,36, 23,25, 18,24, 12,62; HRFAB-MS (matriz de tio- glicerol + Na+) m/e: ([M+Hf) 627.5199 (23,3%), caclc. 627.5213.

Composto 9: A uma solução de 23 (0,18 g, 0,28 mmol) em DMF seco (4 ml) foram adicionados NaH (0,224 g, 60% em óleo mineral, 5,60 mmoles) e 1- bromo octano (0,48 ml, 2,80 mmoles). A suspensão foi agitada sob N2 a 65°C durante a noite seguido pela introdução de H20 (60 ml) e extração com éter (4 x 20 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmoura e se- cos sobre Na2S04. Cromatografia em Si02 (hexanos e 5% EtOAc em hexa- nos) deu o produto desejado (0,169 g, rendimento de 80%) como um óleo amarelado pálido. IV (simples) 2927, 2865, 2099, 1478, 1462, 1451, 1350, 1264, 1105 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 3,69-3,35 (série de multiple- tos, 15H), 3,26-3,02 (série de multipletos, 4H), 2,19-2,02 (m, 3H), 1,97-1,16 (série de multipletos, 37H), 1,12-0,99 (m, 2H), 0,92-0,86 (m, 9H), 0,65 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 80,69, 79,84, 76,13, 71,57, 71,15, 65,07, 64.49, 64,39, 49,08, 48,99, 48,80, 46,68, 46,45, 42,72, 42,05, 39,88, 35,74, 35.49, 35,36, 35,14, 32,42, 32,03, 30,01, 29,85, 29,81, 29,76, 29,67, 29,48, 29,14, 27,92, 27,80, 27,70, 26,58, 26,42, 23,59, 23,09, 22,92, 22,86, 18,11, 14,31, 12,65; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na]+) 778.5685 (22,1%), cacld. 778.5683. A triazida (0,169 g, 0,224 mmol) e Li- AIH4 (0,025 g, 0,67 mmol) foram suspensos em THF anidro (10 ml) e agita- dos sob N2 em temperatura ambiente, durante a noite, seguido pela introdu- ção cuidadosa de hidrato de Na2S04. Após a cor cinza desaparecer, Na2S04 anidro foi adicionado e agitado. O precipitado branco foi removido por filtra- ção e lavados com THF. Após remoção do solvente, o resíduo foi dissolvido em ácido hidroclórico 1 M e a solução aquosa extraída com éter (5 ml) uma vez. A solução aquosa então tornou-se básica adicionando solução de NaOH aquoso a 20% seguido por extração com Et20 (4x5 ml). Os extratos combinados foram lavados, secos e concentrados. O resíduo foi submetido à cromatografia em Si02 (MeOH/CH2CI2 (1:1) seguido por Me- OH/CH2CI2/NH3.H2O (4:4:1) para dar 0 produto desejado (0,091 g, rendi- mento de 60%) como um óleo incolor. IV (simples) 3361, 2927, 2855, 1576, 1465, 1351, 1105 cm'1; 1H RMN (CD3OD, 300 MHz) Ô 4,86 (bs, 6H), 3,77- 3,72 (m, 1H), 3,70-3,61 (m, 1H), 3,57-3,53 (m, 3H), 3,43-3,38 (m, 4H), 3,34- 3,27 (m, 2H), 3,18-3,10 (m, 2H), 2,84-2,71 (m, 6H), 2,22-2,07 (m, 3H), 2,00- 1,02 (série de multipletos, 39H), 0,97-0,88 (m, 9H), 0,71 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 82,20, 81,00, 77,62, 72,52, 72,06, 68,00, 67,92, 67,39, 48,20, 47,53, 44,26, 43,40, 41,42, 41,15, 40,84, 40,35, 36,88, 36,73, 36,42, 36,11, 34,24, 34,05, 33,94, 33,67, 33,17, 30,95, 30,72, 30,62, 29,81, 29,35, 28,87, 28,79, 27,51, 24,57, 23,90, 23,83, 23,44, 18,76, 14,62, 13,07; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol) m/e: ([M+H]+) 678.6133 (100%), cacld. 678.6149.

Composto 10: Uma suspensão de 23 (0,126 g, 0,196 mmol) e LiAIH4 (0,037 g, 0,98 mmol) em THF (40 ml) foi agitada em temperatura ambiente sob N2 du- rante a noite seguido pela adição cuidadosa de Na2S04 10H2O. Após a cor cinza na suspensão desaparecer, Na2S04 anidro foi adicionado e agitado até a camada orgânica tornar-se límpida. O precipitado branco foi removido por filtração e lavado com THF duas vezes. O THF foi removido in vacuo, e o resíduo submetido à cromatografia em Si02 (Me0H/CH2CI2/NH3.H20 (4:4:1)) para dar o produto desejado (0,066 g, rendimento de 60%) como um óleo incolor. IV (simples) 3365, 2933, 2865, 1651, 1471, 1455, 1339, 1103 cm'1; 1H RMN (CDCl3/30% CD3OD, 300 MHz) δ 4,43 (bs, 7H), 3,74-3,68 (m, 1H), 3,66-3,60 (m, 1H), 3,57-3,50 (m, 5H), 3,34-3,25 (Μ, 2H), 3,17-3,06 (M, 2H), 2,84-2,74 (Μ, 6H), 2,19-2,01 (Μ, 3H), 1,97-0,96 (série de multipletos, 27H), 0,94 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,69 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 80,44, 79,27, 75,77, 66,59, 66,53, 65,86, 62,51, 46,21, 45,84, 42,55, 41,53, 40,09, 39,43, 39,31, 39,02, 35,16, 34,93, 34,86, 34,57, 32,93, 32,71, 31,57, 28,66, 28,33, 27,64, 27,22, 23,04, 22,40, 22,29, 17,60, 11,98; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+H]+) 566.4889 (8,9%), cacld. 566.4897.

Exemplo 5 Composto 42: O composto 41 foi preparado seguindo o método descrito por D.H.R. Barton, J. Wozniak, S.Z. Zard, A Short And Effícient Degradation of the Bile Acid Side Chain. Some Novel Reactions of sulphides And A- ketoesters, Tetrahedron, 1989, vol. 45, 3741-3754. Uma mistura de 41 (1,00 g, 2,10 mmoles), etileno glicol (3,52 ml, 63 mmoles) e p-TsOH (20 mg, 0,105 mmol) foi refluxada em benzeno sob N2 durante 16 horas. Água formada durante a reação foi removida por um coletor de umidade Dean-Stark. A mistura resfriada foi lavada com solução de NaHC03 (50 ml) e extraída com Et20 (50 ml, 2 x 30 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmou- ra e secos sobre Na2S04 anidro. Remoção do solvente deu o produto (1,09 g, 100%) como um vidro branco. IV (simples) 2939, 2876, 1735, 1447, 1377, 1247, 1074, 1057, 1039 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 5,10 (t, J= 2,70 Hz, 1H0, 4,92 (d, J = 2,69 Hz, 1H), 4,63-4,52 (m, 1H), 3,98-3,80 (m, 4H), 2,32 (t, J = 9,51 Hz, 1H), 2,13 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,00-1,40 (série de multipletos, 15H), 1,34-0,98 (m, 3H), 1,20 (s, 3H), 0,92 (s, 3H), 0,82 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 170,69, 170,63, 170,47, 111,38, 75,07, 74,23, 70,85, 64,95, 63,43, 49,85, 44,73, 43,39, 41,11, 37,37, 34,84, 34,80, 34,52, 31,42, 29,18, 27,02, 25,41, 24,16, 22,72, 22,57, 22,44, 21,73, 21,63, 13,40; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+H]+) 521.3106 (38.6%), cacld. 521.3114. O triacetato (1,09 g, 2,10 mmoles) foi dissolvido em MeOH (50 ml). NaOH (0,84 g, 21 mmoles) foi adicionado à solução. A suspensão foi então refluxada sob N2 durante 24 horas. MeOH então foi removido in vacuo e o resíduo dissolvido em Et20 (100 ml) e lava- do com H20, salmoura e depois seco sobre Na2S04. O produto desejado (0,80 g, rendimento de 96%) foi obtido como um sólido branco após remo- ção do solvente. P.f. 199-200°C. IV (simples) 3396, 2932, 1462, 1446, 1371, 1265, 1078, 1055 cm'1; 1H RMN (10% CD3OD em CDCI3, 300 MHz) δ 4,08- 3,83 (série de multipletos, 9H), 3,44-3,34 (m, 1H), 2,41 (t, J = 9,28 Hz, 1H), 2,22-2,10 (m, 2H), 1,96-1,50 (série de multipletos, 12H), 1,45-0,96 (série de multipletos, 4H), 1,32 (s, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,78 (s, 3H); 13C RMN (10% CD3OD em CDCI3, 75 MHZ) δ 112,11, 72,35, 71,57, 68,09, 64,54 , 63,24, 49,36, 45,90, 41,48, 41,45, 39,18, 38,79, 35,29, 34,71, 34,45, 29,90, 27,26, 26,60, 23,65, 22,54, 22,44, 22,35, 13,46; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na]+) 417.2622 (87,3%), cacld. 417.2617.

Composto 43: A um frasco de fundo redondo foram adicionados 42 (0,80 g, 2,03 mmoles) e THF seco (100 ml) seguido pela adição de NaH (60% em óleo mineral, 0,81 g, 20,3 mmoles). A suspensão foi refluxada sob N2 du- rante 30 minutos antes da adição de brometo de alila (1,75 ml, 20,3 mmo- les). Após 48 horas de refluxo, mais 10 equivalentes de NaH e brometo de alila foram adicionados. Após mais 48 horas, TLC mostrou nenhum interme- diário. Água fria (50 ml) foi adicionada à suspensão resfriada. A mistura re- sultante foi extraída com Et20 (60 ml, 2 x 30 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmoura e secos sobre Na2S04 anidro. Cromatografia de coluna em Si02 (6% EtOAc em hexanos) deu o produto desejado (0,94 g, rendimento de 90%) como um óleo amarelo pálido. IV (simples) 3076, 2933, 2866, 1645, 1446, 1423, 1408, 1368, 1289, 1252, 1226, 1206, 1130, 1080, 1057 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 6,02-5,84 (m, 3H), 5,31-5,04 (m, 6H), 4,12-4,05 (m, 2H), 4,01-3,81 (m, 7H), 3,70 (dd, J = 12,94, 5,62 Hz, 1H), 3,55 (t, J = 2,56 Hz, 1H), 3,33 (d, J = 2,93 Hz, 1H), 3,18-3,08 (m, 1H), 2,65 (t, J = 10,01 Hz, 1H), 2,32-2,14 (m, 3H), 1,84-1,45 (série de multipletos, 10 H), 1,41-1,22 (m, 3H), 1,27 (s, 3H), 1,14-0,92 (m, 2H), 0,89 (s, 3H), 0,75 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 136,38, 136,07, 136,00, 116,31, 115,54, 115.38, 112,34, 80,07, 79,22, 75,05, 69,83, 69,34, 68,82, 65,14, 63,24, 48,80, 45,96, 42,47, 42,15, 39,40, 35,55, 35,16, 35,15, 29,04, 28,22, 27,52, 24.21.23.38, 23,11,22,95, 22,58, 13,79; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na]+) 537.3549 (100%), cacld. 537.3556.

Composto 44: À solução de 43 (0,94 g, 1,83 mmol) em THF seco (50 ml) foi adicionado 9-BBN (solução 0,5 M em THF, 14,7 ml, 7,34 mmoles) e a mistu- ra foi agitada sob N2 em temperatura ambiente durante 12 horas antes da adição da solução de NaOH a 20% (4 ml) e solução de H202 a 30% (4 ml). A mistura resultante foi então refluxada durante uma hora éeguido pela adição de salmoura (100 ml) e extraída com EtOAc (4 x 30 ml). Os extratos combi- nados foram secos sobre Na2S04 anidro. Após a remoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em Si02 (EtOAc seguido por 10% de MeOH em CH2CI2) para dar o produto (0,559 g, rendimento de 54%) como um óleo incolor. IV (simples) 3410, 2933, 2872, 1471, 1446, 1367, 1252, 1086 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 4,02-3,52 (série de multipletos, 17H), 3,41-3,35 (m, 1H), 3,29 (d, J = 2,44 Hz, 1H), 3,22-3,15 (m, 3H), 2,58 (t, J = 10,01 Hz, 1H), 2,27-1,95 (m, 3H), 1,83-1,48 (série de multi- pletos, 16H), 1,40-0,93 (série de multipletos, 5H), 1,27 (s, 3H), 0,90 (s, 3H), 0,75 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 112,41, 80,09, 79,09, 76,31, 66,70, 66,02, 65,93, 64,80, 63,26, 61,53, 61,25, 60,86, 48,59, 45,80, 42,51, 41,72, 39,10, 35,36, 35,02, 34,98, 32,87, 32,52, 32,40, 28,88, 27,94, 27,21, 24,33, 23,02, 22,84 (2 C's), 22,44, 13,69; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na]+) 591.3881 (100%) cacld. 591.3873.

Composto 45: A uma solução de 50 (0,559 g, 0,98 mmol) em acetona (40 ml) e água (4 ml) foi adicionado PPTS (0,124 g, 0,49 mmol) e a solução refluxada sob N2 durante 16 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida. Água (40 ml) foi então adicionado ao resíduo e a mistura extraída com EtO- Ac (40 ml, 2 x 20 ml). Os extratos combinados foram lavados com salmoura, secos e evaporados até secura. Cromatografia de coluna em Si02 (8% de MeOH em CH2CI2) do resíduo deu o produto desejado (0,509 g, rendimento de 98%) como óleo límpido. IV (simples) 3382, 2941, 2876, 1699, 1449, 1366, 1099 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 3,83-3,72 (m, 8H), 3,66 (t, J = 5,62 Hz, 2H), 3,54 (bs, 2H), 3,43-3,28 (m, 4H), 3,24-3,12 (m, 2H), 2,26-2.00 (m, 4H), 2,08 (s, 3H), 1,98-1,50 (série de multipletos, 15H), 1,42-0.96 (série de multipletos, 6H), 0,90 (s, 3H), 0,62 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 210,49, 78,87 (2 Cs), 76,30, 66,86, 66,18, 65,69, 61,74, 61,43, 60,71, 55,31, 48,05, 43,02, 41,58, 39,53, 35,28, 35,09, 34,96, 32,77, 32,70, 32,31, 31,12, 28,72, 27,88, 27,14, 23,47, 22,75, 22,47, 22,34, 13,86; HRFAB-NS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na]+) 547.3624 (100%) cacld. 547.3611.

Composto 46: A uma solução de 45 (0,18 g, 0,344 mmol) em CH2CI2 seco (10 ml) a 0°C foi adicionado Et3N (0,168 ml, 1,20 mmol) seguido pela adição de cloreto de mesila (0,088 ml, 1,13 mmol). Após 10 minutos, H20 (3 ml) e sal- moura (30 ml) foram adicionados. A mistura foi extraída com EtOAc (30 ml, 2 x 10 ml) e os extratos foram lavados com salmoura e secos sobre Na2S04 anidro. Após remoção do solvente, o resíduo foi dissolvido em DMSO (5 ml) e NaN3 (0,233 g, 3,44 mmoles). A suspensão foi aquecida até 50°C sob N2 durante 12 horas. H20 (50 ml) foi adicionado à suspensão fria e a mistura extraída com EtOAC (30 ml, 2 x 10 ml) e os extratos lavados com salmoura e secos sobre Na2S04 anidro. Cromatografia de coluna em Si02 (EtO- Ac/hexanos 1:5) deu o produto (0,191 g, rendimento de 88% durante duas etapas) como um óleo amarelo claro. IV (simples) 2933, 2872, 2096, 1702, 1451, 1363, 1263, 1102 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 3,72-3,64 (m, 2H), 3,55-3,24 (série de multipletos, 11H), 3,18-3,02 (m, 2H), 2,22-2,02 (m, 4H), 2,08 (s, 3H), 1,95-1,46 (série de multipletos, 15H), 1,38-0,96 (série de multipletos, 6H), 0,89 (s, 3H), 0,62 (s, 3H); 13C RMN (CDCI3, 75 MHZ) δ 210,36, 79,69, 79,22, 75,98, 65,08, 64,80, 64,53, 55,31,48,93, 48,86, 48,76, 48,06, 43,03, 41,91, 39,66, 35,44, 35,31, 35,12, 31,04, 29,77, 29,69, 29,67, 28,99, 28,10, 27,65, 23,60, 22,99, 22,95, 22,50, 14,00; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Na]+) 622.3820 (100%), cacld. 622.3805.

Composto 11: O composto 46 (0,191 g, 0,319 mmol) foi dissolvido em THF seco (20 ml) seguido pela adição de LiAIH4 (60,4 mg, 1,59 mmol). A suspen- são cinza foi agitada sob N2 em temperatura ambiente durante 12 horas. Pó de Na2SO4.10H2O foi adicionado cuidadosamente. Após a cor cinza na sus- pensão desaparecer, Na2S04 anidro foi adicionado e o precipitado filtrado.

Após a remoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (sílica gel, MeOH/CH2CI2/28% de NH3.H20 3:1:1). Após a maior parte do solvente ser submetido a aparelho rotovap das frações coletadas, solu- ção de Hcl a 5% (2 ml) foi adicionada para dissolver o resíduo leitoso. A solução límpida resultante foi então extraída com Et20 (2x10 ml). Solução de NaOH a 20% foi então adicionada até a solução tornar-se fortemente básica. CH2CI2 (20 ml, 2 x 10 ml) foi usado para extrair a solução básica. Os extratos combinados foram secos sobre Na2S04 anidro e remoção do sol- vente deu o produto desejado (0,115 g, rendimento de 69%) como um óleo incolor. De 1H RMN parece que este composto foi uma mistura de dois este- reoisômeros em C2o com uma relação de aproximadamente 9:1. Os estere- oisômeros não foram separados, mas usados como recuperados. Espectros do isômero mais abundante: IV (simples) 3353, 2926, 2858, 1574, 1470, 1366, 1102 cm'1; 1H RMN (20% CDCI3, em CD3OD, 300 MHz) δ 4,69 (bs, 7H), 3,76-3,69 (m, 1H), 3,63-3,53 (m, 5H), 3,50-3,40 (m, 1H0, 3,29 (bs, 1H), 3,18-3,07 (m, 2H), 2,94-2,83 (m, 1H), 2,81-2,66 (m, 5H), 2,23-2,06 (m, 4H), 1,87-1,50 (série de multipletos, 15H), 1,39-0,96 (série de multipletos, 6H), 1,11 (d, J = 6,10 Hz, 3H), 0,93 (s, 3H), 0,75 (s, 3H); 13C RMN (20% CDCI3 em CD3OD, 75 MHZ) δ 81,46, 80,67, 77,32, 70,68, 67,90, 67,66, 67,18, 50,32, 47,17, 43,30, 43,06, 40,74, 40,64, 40,38, 40,26, 36,31, 36,28, 35,93, 34,30, 34,02, 33,29, 29,63, 29,31,28,43, 26,10, 24,67, 24,09, 23,96, 23,50, 13,30 para o isômero principal; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+H]+) 524.4431 (64,2%), cacld. 524.4427.

Exemplo 6 Composto 47: A uma solução de 23 (0,15 g, 0,233 mmol) em CH2CI2 seco (15 ml) a 0°C foi adicionado Et3N (48,8 μΙ, 0,35 mmol) seguido pela adição de CH2SO2CI (21,7 μΙ, 0,28 mmol). A mistura foi agitada durante 15 minutos antes de H20 (3 ml) ser adicionado. Solução de NaCI saturada (20 ml) foi então adicionada e a mistura extraída com EtOAc (40 ml, 2 x 20 ml). Os ex- tratos combinados foram lavados com salmoura e secos sobre Na2S04. O solvente foi tratado em aparelho rotovap e ao resíduo foram adicionados NaBr (0,12 g, 1,17 mmol) e DMF (10 ml). A suspensão foi aquecida até 80°C sob N2 durante 2 horas. DMF foi removido sob vácuo e 0 resíduo cromato- grafado em sílica (EtOAc/hexanos 1:10) para dar o produto desejado (0,191 g, rendimento de 97%) como um óleo amarelo pálido. 1H RMN (CDCI3, 300 ΜΗζ) 5 3,69-3,35 (série de multipletos, 13H), 3,28 3,02 (série de multipletos, 4H), 2,18-2,04 (m, 3H), 2,00-1,60 (série de multipletos, 16H), 1,58-0,96 (sé- rie de multipletos, 11H), 0,92 (d, J = 6,34 Hz, 3H), 0,89 (s, 3H), 0,66 (s, 3H); 13C RMN (CDCIs, 75 ΜΗΖ) 5 80,62, 79,81,76,08, 65,07, 64,50, 64,34, 49,03, 48,98, 48,79, 46,49, 46,46, 42,73, 42,02, 39,85, 35,47, 35,34, 35,12, 34,79, 34,72, 29,82, 29,80, 29,74, 29,11, 27,91, 27,78, 27,69, 23,55, 23,07, 22,88, 18,10, 12,62; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+H]+) 706.3609 (63,1%), cacld. 706.3591; 704.3616 (52,8%), cacld. 704.3611.

Composto 48: Os compostos 47 (0,191 g, 0,269 mmol) e 23 (0,295 g, 0,459 mmol) foram dissolvidos em DMF (3 ml, destilado sobre BaO a 6 mm Hg antes de ser usado) seguido pela adição de NaH (0,054 g, 60% em óleo mineral). A suspensão foi agitada sob N2 em temperatura ambiente durante 24 horas. H20 (100 ml) foi adicionado para resfriar bruscamente o excesso de NaH e a mistura então extraída com Et20 (40 ml, 3 x 20 ml) e os extratos combinados foram lavados com salmoura e secos sobre Na2S04 anidro. O produto desejado (0,177 g, rendimento de 52% baseado no composto 23) foi obtido como um óleo amarelo pálido após cromatografia em Si02 (EtOA/hexanos 1:6, depois 1:2). IV (simples) 2940, 2862, 2095, 1472, 1456, 1362, 1263, 1113 cm'1; 1H RMN (CDCI3, 300 ΜΗζ) 5 3,68-3,35 (série de multipletos, 26 H), 3,28-3,02 (série de multipletos, 8 H), 2,20-2,04 (m, 6H), 1,96-1,60 (série de multipletos, 30H), 1,52-0,98 (série de multipletos, 12H), 0,91 (d, J = 6,59 Hz, 6H), 0,89 (s, 6H), 0,65 (s, 6H);13C RMN (CDCI3, 75 ΜΗΖ) 5 80,68, 79,83, 76,13, 71,71, 65,06, 64,48, 64,39, 49,08, 48,98, 48,80, 46.64, 46,44, 42,71,42,04, 39,88, 35,73, 35,49, 35,36, 35,14, 32,41, 29,84, 29,81, 29,76, 29,14, 27,92, 27,78, 27,69, 26,58, 23,59, 23,08, 22,92, 18,12, 12.64.

Composto 12: O composto 48 (0,219 g, 0,173 mmol) foi dissolvido em THF seco (10 ml) seguido pela adição de LÍAIH4 (65 mg, 1,73 mmol). A suspen- são cinza foi agitada sob N2 em temperatura ambiente durante 12 horas. Pó de Na2SO4.10H2O foi adicionado cuidadosamente. Após a cor cinza na sus- pensão desaparecer, Na2S04 anidro foi adicionado e o precipitado filtrado.

Após a remoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (sílica gel, MeOH/CH2CI2/28% NH3.H20 2,5:2,5:1). Após a maior parte do solvente ser evaporado rotativamente das frações coletadas, solu- ção de HCI a 5% (2 ml) foi adicionada para dissolver o resíduo leitoso. A solução límpida resultante foi então extraída com Et20 (2x10 ml). Solução de NaOH a 20% foi então adicionada até a solução tornar-se fortemente básica. CH2CI2 (20 ml, 2 x 10 ml) foi usada para extrair a solução básica. Os extratos combinados foram secos sobre Na2S04 anidro e remoção do sol- vente deu o produto desejado (0,147 g, rendimento de 76%) como um vidro branco. IV (simples) 3364, 3287, 2934, 2861, 1596, 1464, 1363, 1105 cm'1; 1H RMN (20% CDCI3 em CD3OD, 500 MHz) δ 4,74 (bs, 12H), 3,75-3,70 (m, 2H), 3,65-3,61 (m, 2H), 3,57-3,52 (m, 6H), 3,40 (t, J = 3,60 Hz, 4H), 3,30 (bs, 4H), 3,16-3,10 (m, 4H), 2,84-2,73 (m, 12H), 2,18-2,07 (m, 6H), 1,97-1,61 (série de multipletos, 30 H), 1,58-0,98 (série de multipletos, 24H), 0,95 (d, J = 6,84 Hz, 6H), 0,94 (s, 6H), 0,70 (s, 6H); 13C RMN (20% CDCI3 em CD3OD, 125 MHZ) 6 81,70, 80,52, 77,09, 72,34, 67,75, (2 C's), 67,07, 47,80, 47,13, 43,76, 42,87, 41,20, 40,65, 40,58, 40,14, 36,43, 36,25, 36,08, 35,77, 34,15, 33,87 (2 C's), 33,18, 29,55, 28,92, 28,47, 28,42, 27,25, 24,27, 23,54, 23,41, 18,70 13,07; HRFAB-MS (matriz de tioglicerol + Na+) m/e: ([M+Hf) 1113.9625 (68,8%), cacld. 1113.9610.

Exemplo 7 Teste dos Compostos com Medições MIC e MBC de Bactérias Gram- neaativas Geral: Caldo de soja tríptico (TSB) foi preparado dissolvendo 27,5 g de caldo de soja tríptico sem dextrose (DIFCO Laboratories) em 1 litro de água desionizada e esterilizando a 121°C durante 15 minutos. Placas de ágar só- lidas (TSA) foram preparadas dissolvendo 6,4 g de caldo de soja tríptico e 12 g de ágar (tipo purificado, Fischer Scientific) em 800 ml de água desioni- zada e esterilizando a 121°C durante 20 minutos. Alíquotas (20 ml) da solu- ção homogênea foram despejadas em pratos petri de plástico estéreis (100 χ 15 cm, Fischer Scientific). Soluções dos compostos 1-12 foram preparadas dissolvendo o sal de HCI do composto respectivo em uma quantidade apro- priada de água desionizada e esterilizada seguido por microfiltragem.

Procedimento representativo para medir valores MIC e MBC

Preparou-se uma suspensão de E. coli (ATCC 10798) contendo ~106 CFU (unidades de formação de colônias)/ml de uma cultura incubada em TSB a 37°C durante 24 horas. Alíquotas de 1 ml da suspensão foram adicionadas a tubos de teste contendo 1 ml de TSB e concentrações incre- mentalmente variadas de 1-12 e/ou eritromicina ou novobiocina. Nas expe- riências de sensibilização, eritromicina ou novobiocina foram adicionadas 15 minutos depois de 1-12. As amostras foram submetidas a incubação estaci- onária a 37°C durante 24 horas. Turvação da amostra foi determinada me- dindo-se a absorção a 760 nm (HP 8453 UV-Visible Chemstation, Flewlett Packard). Adicionalmente, uma alíquota de cada uma das amostras mos- trando nenhuma turvação mensurável foi subcultivada em placas de TSA (alíquotas foram diluídas para prover menos do que 300 CFU). Colônias que cresceram na subcultura após incubação durante a noite foram contadas e o número de CFU/ml nas amostras foi calculado. Os valores calculados foram comparados ao número de CFU/ml no inóculo original. Valores MIC foram determinados como as concentrações dos compostos estudados, em que o número de CFU/ml permaneceu constante ou diminuiu após incubação du- rante 24 horas. Os valores MBC foram determinados como as concentra- ções mais baixas dos compostos estudados que permaneceram menos do que 0,1% da suspensão bacteriana original para sobreviver.

Resultados A estereoquímica da cadeia principal dos esteróides resulta na atividade diferente dos derivados de ácido cólico (comparar 2 e 8, tabelas 1, 2, 6 e 7). Grupos guanidina fixados ao esteróide deram valores MIC meno- res do que compostos contendo grupos amina (comparar 1, 2, 4 e 5, compa- rar tabelas 1-8). O comprimento da ligação (tether) entre os grupos amina e guanidina e a cadeia principal dos esteróides também influenciam a ativida- de (comparar 1-3, tabelas 1, 2, 6 e 7). Ligações de éster entre grupos amina e a cadeia principal de esteróide fornece compostos com valores MIC que são mais altos do que os compostos correspondentes contendo ligações de éter (comparar 1,2, 6 e 7, tabelas 1 e 2) O grupo fixado à cadeia principal em C-20 ou C-24 influencia também a atividade dos derivados de ácido cóli- co. Uma cadeia de carbono longa fixada ao esteróide via uma ligação éter em C-24 diminui o MIC do composto como comparado ao composto com um grupo hidroxila a C-24 (comparar 2, 9 e 10, tabelas 1, 2, 6 e 7). Cadeias curtas de carbono ou de oxigênio fixadas em C-20 diminuem os valores MIC dos derivados de ácido cólico (comparar 10 e 11, tabelas 1 e 2). Ligação covalente dos derivados de ácido cólico aumenta a atividade dos compostos (comparar 10 e 12, tabelas 1 e 2).

Tabela 1 Medição de valores MIC e HSP-65 micobacteriano de 1-12 com E. coli _________________________(ATCC 10798).________________________ * Valor não medido.

Tabela 2 Medição das concentrações de 1-12 requeridas para diminuir o MIC de eri- tromicina de 70 ug/ml para 1 ug/ml com E. coli (ATCC 1079¾. * Valor não medido.

Tabela 3 Medição das concentrações de 1,2, 4 e 5 requeridas para diminuir o MIC de novobiocina de > 500 ug/ml para 1 ug/ml com E. coli (ATCC 10798). * Valor não medido.

Tabela 4 Medição dos valores MIC e MBC de 1,2, 4 e 5 com £ coli (ATCC 25922) Tabela 5 Medição das concentrações de 1,2, 4 e 5 requeridas para diminuir o MIC de eritromicina de 600 pig/ml para 1 ug/ml com E. coli (ATCC 25922).

Tabela 6 Medição dos valores MIC e MBC de 1-5, 8-12 com P. aeruginosa (ATCC 27853)._________________________ * Valor não medido.

Tabela 7 Medição das concentrações de 1-5, 8-12 requeridas para diminuir o MIC de eritromicina de 240 jig/ml para 5 pg/ml com P. aureginosa (ATCC 27853). * Valor não medido.

Tabela 8 Medição das concentrações de 1,2, 4 e 5 requeridas para diminuir o MIC de novobiocina de > 500 ug/ml para 1 ug/ml com P. aureginosa (ATCC 27853).

Exemplo 8 Demonstração das Propriedades de Ruptura das Membranas dos Derivados de Ácido Cólico Usando uma técnica descrita por J.M. Shupp, S.E. Travis, L.B.

Price, R.F. Shand, P. Keim, Rapid Bacterial Permeabilization Reagent Useful For Enzyme Assays, Biotechniques, 1995, vol. 19, 18-20, as requerentes mostraram que os derivados de ácido cólico aumentam a permeabilidade da membrana externa de bactérias gram-negativas. Os valores para meia lumi- nescência máxima (indicando a permeabilização da membrana externa per- mitindo luciferina entrar na célula) para 2 é 7 ug/ml e para 10 é 33 ug/ml.

Estes valores correspondem aos MICs medidos de 2 e 10.

Exemplo 9 Os grupos R correspondem à cadeia lateral de qualquer combi- nação de aminoácidos (D ou L) Alterações na estereoquímica no esteróide (junção do anel AB neste caso) Alterações na saturação no esteróide (junção do anel AB neste caso) Alterações no número de grupos hidroxila no esteróide (OH-12, neste caso) Alterações em outros grupos no esteróide (no anel A neste caso) Os grupos R correspondem à cadeia lateral de qualquer combi- nação de aminoácidos (D ou L).

Esquemas acima descritos podem ser usados para esta trans- formação. etileno glicol, ácido, benzeno, refluxo (ou grupo de proteção apropriado) (como no exemplo) ácido Descrições dos materiais de partida de esteróides mostradas acima podem ser encontradas no Dictionary of Steroids, Hill, R.A.; Kirk, D.N.; Makin, H.L.J.; Murphy, G.M., eds., Chapman and Hall: New York, 1991.

Outras Formas de Realização Todos os aspectos descritos neste relatório podem ser combi- nados em qualquer combinação. Cada aspecto descrito neste relatório pode ser substituído por um aspecto alternativo servindo para fins iguais, equiva- lentes ou similares. Assim, salvo se expressamente descrito de outro modo, cada aspecto descrito é somente um exemplo de uma série genérica de as- pectos equivalentes ou similares. A partir da descrição acima, os versados na técnica podem dis- cernir as características essenciais da presente invenção e, sem sair do es- pírito e escopo da mesma, podem realizar várias mudanças e modificações da invenção para adaptar a mesma a vários usos e condições. Por exemplo, sais, ésteres, éteres e amidas dos novos compostos esteróides aqui des- critos estão dentro do escopo desta invenção. Assim, outras formas de rea- lização estão também nas reivindicações.

REIVINDICAÇÃO

Claims (1)

1. Composto, caracterizado pelo fato de ser selecionado do gru- po consistindo em: