BR112021010714A2 - Compostos possuindo atividade inibitória de pde9a e usos farmacêuticos dos mesmos - Google Patents

Compostos possuindo atividade inibitória de pde9a e usos farmacêuticos dos mesmos Download PDF

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Chae Jo Lim
Mi Young Lee
Ju Hee Lee
Kwang-Seok Oh
Jeong Hyun Lee
Kyu Yang Yi
Nack Jeong KIM
Byung Ho Lee
Ho Won Seo
Soo Hee Kim
Junyoung Choi
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Abstract

compostos possuindo atividade inibitória de pde9a e usos farmacêuticos dos mesmos. a presente invenção refere-se a um composto possuindo uma estrutura química específica e possuindo atividade inibitória de pde9a, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. a presente invenção fornece uma composição contendo o composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. a presente invenção fornece um uso farmacêutico, para tratar ou prevenir doenças relacionadas a pde9a, do composto de acordo com a presente invenção, um sal do mesmo e uma composição contendo o composto ou sal. a presente invenção também fornece um método para tratar ou prevenir doenças relacionadas a pde9a, o método compreendendo administrar uma quantidade eficaz do composto de acordo com a presente invenção, um sal do mesmo, ou uma composição contendo o composto ou sal a um objeto em necessidade de tratamento.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSTOS POSSUINDO ATIVIDADE INIBITÓRIA DE PDE9A E USOS FARMACÊUTICOS DOS MESMOS". Campo Técnico
[001] Este pedido reivindica prioridade ao Pedido Coreano No. 10- 2018-0156038 depositado em 6 de dezembro de 2018, e todos os conteúdos divulgados no relatório descritivo e nos desenhos do pedido são incorporados neste documento por referência.
[002] A presente invenção refere-se a um grupo de compostos possuindo uma estrutura específica e excelente atividade inibitória de PDE9A. A invenção também se refere a composições farmacêuticas compreendendo tais compostos. A presente invenção refere-se a um método útil para o tratamento de doenças relacionadas a PDE9A usando estes compostos. Ou seja, a presente invenção refere-se a um uso médico dos compostos de acordo com a presente invenção para o tratamento ou prevenção de doenças relacionadas com PDE9A. Antecedentes da Técnica
[003] Fosfodiesterase 9A (PDE9A) é expressa principalmente no cérebro, particularmente no neocórtex do cerebelo e hipocampo, e é conhecida por estar associada à sinalização relacionada a regulação de cGMP, ou seja, sinais relacionados ao glutamato através de memória e aprendizado. Portanto, a inibição da fosfodiesterase 9A é conhecida por ser útil no tratamento da doença de Alzheimer, distúrbios do SNC ou distúrbios cognitivos causados por vários processos neurodegenerativos. Portanto, é reconhecido como um alvo farmacológico útil para o tratamento ou alívio de distúrbios cognitivos, como demência com degeneração do lobo frontal, incluindo demência de corpo de Lewy, síndrome de Pick, doença de Parkinson, e doença de Alzheimer com problemas de aprendizagem e memória.
[004] Além disso, além de doenças dos nervos cranianos, a superexpressão de fosfodiesterase 9A tem sido recentemente verificada em pacientes com doença cardíaca, especialmente em pacientes com insuficiência cardíaca que preserva o débito cardíaco, e a superexpressão de fosfodiesterase 9A tem sido observada em modelos animais que induzem condições patológicas do coração. Além disso, os efeitos de melhorar a função cardíaca e aliviar a hipertrofia miocárdica por meio da inibição da fosfodiesterase 9A foram relatados e, portanto, está atraindo atenção recentemente como um alvo farmacológico útil para pacientes com doenças cardiovasculares, especialmente aqueles com insuficiência cardíaca para preservação do débito cardíaco. Divulgação Problema Técnico
[005] Consequentemente, um problema a ser resolvido pela presente invenção é fornecer um composto com atividade inibitória de PDE9A, uma composição farmacêutica que compreende o composto como um ingrediente ativo e um uso médico para o tratamento ou prevenção de doenças relacionadas com PDE9A do mesmo.
[006] Outro problema a ser resolvido pela presente invenção é fornecer um método para tratar ou aliviar doenças relacionadas a PDE9A, caracterizado por inibir a atividade de PDE9A, e compreender a administração do composto de acordo com a presente invenção a um paciente em necessidade de tratamento, melhoria ou prevenção de doenças relacionadas com PDE9A. Solução Técnica
[007] A fim de resolver o problema acima, uma modalidade da presente invenção fornece um composto representado pela seguinte Fórmula Química 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Fórmula Química 1
[008] Na Fórmula Química 1,
[009] A1 é NH ou N-C1-2 alquila,
[0010] A2 é H, C1-5 alquila linear ou ramificada ou fenila,
[0011] X é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em -H, halogênio, -NO2, -CN, -SR1, C1-10 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C1-10 alcóxi linear ou ramificado não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C6-10 arila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada, e C6-10 arilóxi não substituído ou substituído por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada,
[0012] Y é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em C1-10 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C3-10 cicloalquila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios, heterocicloalquila de 6-10 membros compreendendo Heteroátomo O ou S não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C1-10 alcóxi linear ou ramificado não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C6-10 arila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada e C6-10 arilóxi não substituído ou substituído por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada,
[0013] R1 é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em C1-10 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C1-10 alcóxi linear ou ramificado não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C6-10 arila não substituída ou substituída por um ou mais halogênio ou C1-10 alquila linear ou ramificada, C1-2 alquil-C6-10 arila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada e C6-10 arilóxi não substituído ou substituído por um ou mais halogênios ou C1- 10 alquila linear ou ramificada.
[0014] Tal como aqui utilizado, os termos "halogêneo" e "halo" significam flúor, cloro, bromo ou iodo. Conforme usado aqui, o termo "C6-10 aril" significa um grupo aromático carbocíclico contendo 6 a 10 átomos no anel. Exemplos representativos incluem, mas não estão limitados a, fenila, tolila, xilila, naftila, tetra-hidronaftila, antracenila, fluorenila, indenila e azulenila. O grupo carbocíclico aromático pode ser opcionalmente substituído.
[0015] Tal como aqui utilizado, o termo "arilóxi" é RO- e R é arila como definido acima.
[0016] Tal como aqui utilizado, o termo "sal (s) farmaceuticamente aceitável (s)" refere-se a um sal preparado a partir de compostos ativos de acordo com a presente divulgação com ácidos ou bases relativamente não tóxicos, dependendo dos substituintes particulares desses compostos. Quando os compostos têm um grupo relativamente ácido, os sais adicionados à base podem ser obtidos contatando os compostos neutros com uma quantidade suficiente da base desejada e um solvente puro ou inerte. Os sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem, mas não estão limitados a sais de sódio, potássio, cálcio, alumínio, amino orgânico, magnésio e semelhantes. Quando os compostos têm um grupo relativamente básico, os sais com adição de ácido podem ser obtidos contatando os compostos neutros com uma quantidade suficiente do ácido desejado e solvente puro ou inerte. Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem sais derivados de ácidos orgânicos não tóxicos, incluindo, mas não estão limitados a, ácido acético, ácido propiônico, ácido isobutila, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malônico, ácido benzoico, ácido succínico, ácido suberico, ácido fumárico, ácido mandélico, ácido ftálico, ácido benzenossulfônico, ácido p-tolilsulfônico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido metanossulfônico e semelhantes e ácidos inorgânicos não tóxicos, incluindo, mas não estão limitados a, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido nítrico, ácido carbônico, ácido mono- hidrogenocarbonico, ácido fosfórico, ácido mono-hidrogenfosfórico, ácido di-hidrogenfosfórico, ácido sulfúrico, ácido mono- hidrogenossulfúrico, iodeto de hidrogênio, ácido fosforoso e semelhantes. Também inclui um sal de aminoácido, como arginato ou seus análogos, e também inclui análogos de ácido orgânico, como ácido glucurônico ou galacturônico. Alguns compostos específicos desta divulgação têm funcionalidade básica e ácida para a conversão de compostos de sais (adição) com uma porção básica ou ácida.
[0017] Tal como aqui utilizado, a frase "composto (s) desta/da invenção" inclui qualquer composto (s) de Fórmula Química 1, bem como clatratos, hidratos, solvatos ou polimorfos dos mesmos. E, mesmo que o termo "composto (s) da invenção" não mencione sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, o termo inclui seus sais. Em uma modalidade, os compostos desta divulgação incluem compostos estereoquimicamente puros, por exemplo, aqueles substancialmente livres (por exemplo, maior que 85% ee, maior que 90% ee, maior que 95% ee, maior que 97% ee, ou maior de 99% ee) de outros estereoisômeros. Ou seja, se os compostos de Fórmula Química 1 de acordo com a presente divulgação ou seus sais são isômeros tautoméricos e/ou estereoisômeros (por exemplo, isômeros geométricos e isômeros conformacionais), tais isômeros isolados e suas misturas também estão incluídos no escopo desta divulgação. Se os compostos da presente divulgação ou seus sais têm um carbono assimétrico em suas estruturas, seus isômeros ópticos ativos e suas misturas racêmicas também estão incluídos no escopo desta divulgação.
[0018] Conforme usado aqui, o termo "polimorfo" refere-se a formas cristalinas sólidas de um composto desta divulgação ou complexo do mesmo. Diferentes polimorfos do mesmo composto podem exibir diferentes propriedades físicas, químicas e/ou espectroscópicas. Diferentes propriedades físicas incluem, mas não estão limitadas à estabilidade (por exemplo, ao calor ou à luz), compressibilidade e densidade (importante na formulação e fabricação do produto) e taxas de dissolução (que podem afetar a biodisponibilidade). As diferenças na estabilidade podem resultar de mudanças na reatividade química (por exemplo, oxidação diferencial, de modo que uma forma de dosagem descolorir mais rapidamente quando composta de um polimorfo do que quando composta de outro polimorfo) ou características mecânicas (por exemplo, comprimidos se desintegram no armazenamento como cineticamente favorecido polimorfo se converte em polimorfo termodinamicamente mais estável) ou ambos (por exemplo, comprimidos de um polimorfo são mais suscetíveis à degradação em alta umidade). Diferentes propriedades físicas de polimorfos podem afetar seu processamento. Por exemplo, um polimorfo pode ser mais propenso a formar solvatos ou pode ser mais difícil de filtrar ou lavar livre de impurezas do que outro devido, por exemplo, à forma ou distribuição de tamanho de suas partículas.
[0019] Tal como aqui utilizado, o termo "solvato" significa um composto ou seu sal de acordo com esta divulgação que inclui ainda uma quantidade estequiométrica ou não estequiométrica de um solvente ligado por forças intermoleculares não covalentes. Os solventes preferidos são voláteis, não tóxicos e aceitáveis para administração a humanos em pequenas quantidades.
[0020] Tal como aqui utilizado, o termo "hidrato" significa um composto ou seu sal de acordo com esta divulgação que inclui ainda uma quantidade estequiométrica ou não estequiométrica de água ligada por forças intermoleculares não covalentes.
[0021] Tal como aqui utilizado, o termo "clatrato" significa um composto ou seu sal na forma de uma rede cristalina que contém espaços (por exemplo, canais) que têm uma molécula hóspede (por exemplo, um solvente ou água) presa dentro.
[0022] Em uma modalidade de acordo com a presente invenção, de preferência, entre os substituintes da Fórmula Química 1
[0023] A1 é NH ou N-C1-2 alquila,
[0024] A2 é H, C1-5 alquila linear ou ramificada ou fenila,
[0025] X é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em -H, halogênio, -NO2, -CN, -SR1, C1-5 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C 1-5 alcóxi linear ou ramificado não substituído ou substituído por um ou mais halogênios e fenila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios ou C1- 10 alquila linear ou ramificada,
[0026] Y é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em C1-6 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C3-6cicloalquila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios, heterocicloalquila com 6-8 membros compreendendo Heteroátomo O ou S não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, alcóxi linear ou ramificado C1-6 não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C6-10 arila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada e C6-10 arilóxi não substituído ou substituído por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada, e
[0027] R1 é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em C1-6 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C1-6 alcóxi linear ou ramificado não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C6-10 arila não substituída ou substituída por um ou mais halogênio ou C1-10 alquila linear ou ramificada e C6-10 arilóxi não substituído ou substituído por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada.
[0028] Em uma modalidade de acordo com a presente invenção, mais preferivelmente, entre os substituintes da Fórmula Química 1
[0029] A1 é NH ou NCH3,
[0030] A2 é H, CH3 ou fenila,
[0031] X é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em -H, -Cl, -Br, -SR1, metila, etila, t-butila, trifluorometila, metóxi, etóxi, isopropóxi, fenila, 4-fluorofenila e 4-metilfenila,
[0032] Y é fenila, 4-fluorofenila, 4,4-difluorociclo-hexila, pirano, tiopirano, isopropila ou ciclopropila, e
[0033] R1 é metila, etila, isopropila, propila, benzila, 4-metilbenzila ou 4-clorobenzila.
[0034] A fim de alcançar o objetivo acima mencionado, os presentes inventores realizaram vários experimentos de avaliação após sintetizar vários compostos, a fim de assegurar compostos com alta atividade inibitória de PDE9A e alta seletividade para eles e seu uso e, finalmente, a presente invenção foi concluída pela confirmação de que os compostos da presente invenção eram adequados para os fins da presente invenção.
[0035] Exemplos não limitativos de compostos preferidos de acordo com a presente invenção incluem os compostos da Tabela 1 abaixo e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[0036] Além disso, a presente invenção fornece, como mostrado no Esquema 1 abaixo, um método para preparar um composto representado pela Fórmula Química 1, compreendendo a etapa de obter um composto representado pela Fórmula Química 1 por meio da reação de um composto representado pela Fórmula Química 2 com um composto representado pela Fórmula Química 3. Esquema 1
[0037] No Esquema 1, A1, A2, X e Y são conforme definidos na Fórmula Química 1.
[0038] Daqui em diante, o método de fabricação representado pelo Esquema 1 de acordo com a presente invenção será descrito em detalhes.
[0039] O composto representado pela Fórmula Química 1 de acordo com a presente invenção pode ser preparado através de uma reação de condensação usando um composto de ácido carboxílico representado pela Fórmula Química 2 e um composto amina representado pela Fórmula Química 3 como materiais de partida, como mostrado no Esquema 1 acima.
[0040] No método para preparar um composto representado pela Fórmula Química 1 de acordo com a presente invenção, a Etapa 1 é uma etapa de obter um composto representado pela Fórmula Química 1 pela reação de um composto representado pela Fórmula Química 2 com um composto representado pela Fórmula Química 3. Especificamente, um composto representado pela Fórmula Química 1 pode ser preparado condensando um composto representado pela Fórmula Química 2 e um composto representado pela Fórmula Química 3 na presença de um agente de condensação. Mais especificamente,
um composto representado pela Fórmula Química 1 com uma ligação amida pode ser preparado condensando um composto de ácido carboxílico representado pela Fórmula Química 2 e um composto amina representado pela Fórmula Química 3 na presença de um agente de condensação e uma base.
[0041] Neste momento, a reação de condensação pode ser realizada através de dois métodos convencionais e exemplos específicos são os seguintes. Método de Fabricação 1-A
[0042] Pode ser preparado usando um agente de condensação com o composto representado pela Fórmula Química 2 e o composto representado pela Fórmula Química 3 no Esquema 1 na presença de uma base.
[0043] Neste momento, o agente de condensação utilizável inclui reagentes orgânicos à base de fósforo, tais como cloreto bis(2-oxo-3- oxazolidinil)fosfínico (BOP-Cl), hexafluorofosfato de benzotriazol-1- iloxitris(dimetilamino)fosfônio (BOP) e difenilfosforilazida (DPPA); reagentes baseados em carbodiimida, tais como diciclo- hexilcarbodiimida (DCC), di-isopropilcarbodiimida (DIC) e 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC); N,N-carbonildiimidazol; O- benzotriazol-N,N,N’,N'-tetrametil-uronínio-hexafluorofosfato (HBTU); hexafluorofosfato de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3- triazolo[4,5-b]piridínio 3-óxido (HATU); iodeto de 2-cloro-1-metilpiridínio (CMPI); 2-fluoro-4,6-dimetóxi-1,3,5-triazina (CDMT).
[0044] Além disso, a base é usada para acelerar a reação e aumentar o rendimento, e a base disponível inclui bases orgânicas como N,N-dimetilaminopiridina (DMAP), piridina, trietilamina, N,N-di- isopropiletilamina e 1,8-diazabiciclo[5.4.0]-7-undeceno (DBU) ou bases inorgânicas, como bicarbonato de sódio, hidróxido de sódio e hidróxido de potássio. Podem ser usados sozinhos ou em combinação, em quantidade equivalente ou em excesso.
[0045] Além disso, o solvente da reação inclui solventes de éter, tais como tetra-hidrofurano, dioxano, diclorometano e 1,2-dimetoxietano; solventes de hidrocarbonetos aromáticos, tais como benzeno, tolueno e xileno; dimetilformamida (DMF); dimetilsulfóxido; acetonitrila; e similar. Eles podem ser usados sozinhos ou em combinação. A temperatura da reação é de 0ºC ao ponto de ebulição do solvente. Método de Fabricação 1-B
[0046] Além disso, o composto de ácido carboxílico representado pela Fórmula Química 2 do Esquema 1 é convertido em um halogeneto de acila, um anidrido carboxílico ou um éster ativo (por exemplo, éster p-nitrofenílico, éster N-hidroxilsuccinimida, éster pentafluorofenílico, etc.) por um método conhecido, e então é feito reagir na presença de uma base com um composto amina representado pela Fórmula Química 3 para dar um composto representado pela Fórmula Química 1.
[0047] Neste momento, a base inclui uma base orgânica de amina terciária, como trietilamina e di-isopropiletilamina, e uma base inorgânica, como carbonato de sódio, carbonato de potássio, hidróxido de potássio, hidróxido de sódio, carbonato de césio, hidróxido de bário, etc. Estes podem ser usados sozinhos ou em combinação, em quantidade equivalente ou em excesso.
[0048] Além disso, um solvente que pode ser usado na reação inclui solventes de éter, tais como dioxano, tetra-hidrofurano e 1,2- dimetoxietano; solventes contendo halogêneo, tais como 1,2- diclorometano ou 1,2-dicloroetano; solventes de hidrocarbonetos aromáticos, tais como benzeno e tolueno, e semelhantes. Eles podem ser usados sozinhos ou em combinação. A reação pode ocorrer sem solvente. A temperatura da reação é de 0 ºC ao ponto de ebulição do solvente. Preparação do material de partida (composto representado pela
Fórmula Química 2)
[0049] O composto de Fórmula Química 2, que é o material de partida do Esquema 1, pode ser preparado por um método compreendendo uma etapa de obter um composto representado pela Fórmula Química 6 por meio da reação de um composto representado pela Fórmula Química 4 com um composto representado pela Fórmula Química 5 (Etapa 1); uma etapa de obter um composto representado pela Fórmula Química 7 por meio da reação do composto representado pela Fórmula Química 6 obtido na Etapa 1 (Etapa 2); uma etapa de obter um composto representado pela Fórmula Química 9 pela reação do composto representado pela Fórmula Química 7 obtido na Etapa 2 com um composto representado pela Fórmula Química 8 (Etapa 3); e uma etapa de obter um composto representado pela Fórmula Química 2 por meio da reação do composto representado pela Fórmula Química 9 obtido na Etapa 3 (Etapa 4), como mostrado no Esquema 2 abaixo. [Esquema 2]
[0050] No Esquema 2, Y e A2 são conforme definidos na Fórmula Química 1.
[0051] Daqui em diante, o método de fabricação representado pelo Esquema 2 será descrito em detalhes.
[0052] No método de fabricação representado pelo Esquema 2, a Etapa 1 é uma etapa de reação de um composto representado pela Fórmula Química 4 com um composto representado pela Fórmula
Química 5 para dar um composto representado pela Fórmula Química
6. Especificamente, esta é uma etapa para obter um composto representado pela Fórmula Química 6 através de uma reação de ciclização com um aldeído representado pela Fórmula Química 4 e Composto 5 chamado hidrazina em condições básicas.
[0053] Na reação acima, o composto representado pela Fórmula Química 5 pode ser um composto disponível comercialmente, e o composto químico representado pela Fórmula Química 6 pode ser um composto disponível comercialmente ou preparado por um método conhecido a partir do composto cetona correspondente.
[0054] Além disso, a piperidina é uma base representativa que pode ser usada na reação. Além disso, bases orgânicas como pirrolidina, piridina, trietilamina, N,N-di-isopropiletilamina e DBU ou bases inorgânicas como NaOH, NA2CO3, K2CO3 e Cs2CO3 podem ser usadas em uma quantidade equivalente ou em excesso.
[0055] Além disso, o solvente da reação é um solvente de éter, como tetra-hidrofurano, dioxano e 1,2-dimetoxietano, um solvente de hidrocarboneto aromático, como benzeno, tolueno e xileno, um álcool inferior, como metanol, etanol, propanol e butanol, dimetilformamida (DMF), dimetila sulfóxido (DMSO), acetonitrila, água, etc. podem ser usados sozinhos ou em combinação, e a temperatura de reação é de 0ºC ao ponto de ebulição do solvente.
[0056] No método de fabricação representado pelo Esquema 2, a Etapa 2 é uma etapa de obter um composto representado pela Fórmula Química 7 pela reação do composto representado pela Fórmula Química 6 obtido na Etapa 1. Especificamente, esta é uma etapa de preparar um composto de ácido carboxílico representado pela Fórmula Química 7 por hidrólise de um composto éster representado pela Fórmula Química 6 sob condições básicas ou ácidas.
[0057] Neste momento, a base inclui uma base inorgânica, como carbonato de sódio, carbonato de potássio, hidróxido de potássio, hidróxido de sódio, carbonato de césio e hidróxido de bário. Podem ser usados sozinhos ou em combinação, em quantidade equivalente ou em excesso. O ácido inclui ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido metanossulfônico ou semelhantes, e os ácidos podem ser usados sozinhos ou em combinação, em uma quantidade equivalente ou em excesso.
[0058] Além disso, os solventes que podem ser usados na reação incluem solventes de éter, como tetra-hidrofurano, dioxano, diclorometano e 1,2-dimetoxietano, solventes de hidrocarbonetos aromáticos, como benzeno, tolueno e xileno, solventes à base de álcool, como metanol e etanol, dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), acetonitrila, água e semelhantes. Eles podem ser usados sozinhos ou em combinação. A temperatura da reação é de 0ºC ao ponto de ebulição do solvente.
[0059] No método de fabricação representado pelo Esquema 2, a Etapa 3 é uma etapa de obter um composto representado pela Fórmula Química 9 pela reação do composto representado pela Fórmula Química 7 obtido na Etapa 2 com um tiol representado pela Fórmula Química 8. Especificamente, é uma etapa de preparar um composto éster representado pela Fórmula Química 9 substituindo um composto de pirazolopirimidinona substituído por cloro representado pela Fórmula Química 7 obtida na Etapa 2 e um tiol representado pela Fórmula Química 8 sob condições básicas.
[0060] Neste caso, a base inclui uma base inorgânica, como carbonato de sódio, carbonato de potássio, hidróxido de potássio, hidróxido de sódio, carbonato de césio e hidróxido de bário. Podem ser usados sozinhos ou em combinação, em quantidade equivalente ou em excesso.
[0061] Além disso, os solventes que podem ser usados na reação incluem solventes de éter, como tetra-hidrofurano, dioxano, diclorometano e 1,2-dimetoxietano, solventes de hidrocarbonetos aromáticos, como benzeno, tolueno e xileno, solventes à base de álcool, como metanol e etanol, dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), acetonitrila, água e semelhantes. Eles podem ser usados sozinhos ou em combinação. A temperatura da reação é de 0ºC ao ponto de ebulição do solvente.
[0062] No método de fabricação representado pelo Esquema 2, a Etapa 4 é uma etapa de obter um composto representado pela Fórmula Química 2 pela reação do composto representado pela Fórmula Química 9 obtido na Etapa 3. Especificamente, esta é uma etapa de preparar um composto de ácido carboxílico representado pela Fórmula Química 2 por hidrólise do composto éster representado pela Fórmula Química 9 em condições básicas ou ácidas.
[0063] Neste momento, a base inclui uma base inorgânica, como carbonato de sódio, carbonato de potássio, hidróxido de potássio, hidróxido de sódio, carbonato de césio e hidróxido de bário. Podem ser usados sozinhos ou em combinação, em quantidade equivalente ou em excesso. O ácido inclui ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido metanossulfônico ou semelhantes, e os ácidos podem ser usados sozinhos ou em combinação, em uma quantidade equivalente ou em excesso.
[0064] Além disso, os solventes que podem ser usados na reação incluem solventes de éter, como tetra-hidrofurano, dioxano, diclorometano e 1,2-dimetoxietano, solventes de hidrocarbonetos aromáticos, como benzeno, tolueno e xileno, solventes à base de álcool, como metanol e etanol, dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), acetonitrila, água e semelhantes. Eles podem ser usados sozinhos ou em combinação. A temperatura da reação é de 0ºC ao ponto de ebulição do solvente.
Preparação do material de partida (composto representado pela Fórmula Química 5)
[0065] O composto de Fórmula Química 5, que é o material de partida do Esquema 2, pode ser preparado pelo método de fabricação mostrado no Esquema 3 abaixo de acordo com o tipo de Y. [Esquema 3]
[0066] No Esquema 3, Y é como definido na Fórmula Química 1; R2 é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em halogênio, C1-10 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C1-10 alcóxi linear ou ramificado não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, não substituído ou substituído C6-10 arila, e C6-10 arilóxi substituído ou não substituído, em que R3 é independentemente C1-10 alquila linear ou ramificada.
[0067] Daqui em diante, o método de fabricação representado pelo Esquema 3 será descrito em detalhes.
[0068] No método de fabricação representado pelo Esquema de Reação 3, a Etapa 1 é uma etapa de obter um composto representado pela Fórmula Química 11 pela reação de um composto representado pela Fórmula Química 10. Especificamente, esta é uma etapa de preparar um composto de imina representado pela Fórmula Química 11 por reação de condensação de um composto cetona representado pela Fórmula Química 10 e um terc-butila carbazato.
[0069] Além disso, os solventes que podem ser usados na reação incluem solventes de éter, como tetra-hidrofurano, dioxano,
diclorometano e 1,2-dimetoxietano, solventes de hidrocarbonetos aromáticos, como benzeno, tolueno e xileno, solventes à base de álcool, como metanol e etanol, dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), acetonitrila, água e semelhantes. Eles podem ser usados sozinhos ou em combinação. A temperatura da reação é de 0ºC ao ponto de ebulição do solvente.
[0070] No método de fabricação representado pelo Esquema 3, a Etapa 2 é uma etapa de obter um composto representado pela Fórmula Química 12 pela reação do composto representado pela Fórmula Química 11 obtido na Etapa 1. Especificamente, esta é uma etapa de preparar um composto de hidrazina representado por Fórmula Química 12 por redução da reação de um composto de imina representado pela Fórmula Química 11 e um agente redutor de metal.
[0071] O agente redutor de metal utilizável na reação acima pode ser boro-hidreto de sódio (NaBH4), triacetoxiboro-hidreto de sódio (NaBH (OAc) 3) ou cianoboro-hidreto de sódio (NaBH3CN).
[0072] Além disso, os solventes que podem ser usados na reação incluem solventes de éter, como tetra-hidrofurano, dioxano, diclorometano e 1,2-dimetoxietano, solventes de hidrocarbonetos aromáticos, como benzeno, tolueno e xileno, solventes à base de álcool, como metanol e etanol, dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), acetonitrila, água e semelhantes. Eles podem ser usados sozinhos ou em combinação. A temperatura da reação é de 0ºC ao ponto de ebulição do solvente.
[0073] No método de fabricação representado pelo Esquema 3, a Etapa 3 é uma etapa de obter um composto representado pela Fórmula Química 5 pela reação do composto representado pela Fórmula Química 12 obtido na Etapa 2. Especificamente, esta etapa é para preparar o composto final representado por Química Fórmula 5 por remoção do grupo protetor de amina do composto de hidrazina representado pela Fórmula Química 12 através da reação de desproteção.
[0074] Na presente invenção, foram usadas condições ácidas e podem ser usados como ácido ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido metanossulfônico, ácido trifluoroacético e semelhantes.
[0075] Além disso, os solventes que podem ser usados na reação incluem solventes de éter, como tetra-hidrofurano, dioxano, diclorometano e 1,2-dimetoxietano, solventes de hidrocarbonetos aromáticos, como benzeno, tolueno e xileno, solventes à base de álcool, como metanol e etanol, dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), acetonitrila, água e semelhantes. Eles podem ser usados sozinhos ou em combinação. A temperatura da reação é de 0 ºC ao ponto de ebulição do solvente. Preparação 1 do material de partida (composto representado pela Fórmula Química 3)
[0076] O composto de Fórmula Química 3, que é o material de partida do Esquema 1, pode ser preparado pelo método de fabricação mostrado no Esquema 4 abaixo de acordo com o tipo de X. [Esquema 4]
[0077] No Esquema 4, A1 é conforme definido na Fórmula Química 1; X é SR1; L é cloro, bromo ou iodo; R1 é conforme definido na Fórmula Química 1.
[0078] Daqui em diante, o método de fabricação representado pelo Esquema 4 será descrito em detalhes.
[0079] No método de fabricação representado pelo Esquema 3, a Etapa 1 é uma etapa de obter um composto representado pela Fórmula
Química 3 pela reação de um composto representado pela Fórmula Química 13 com um composto representado pela Fórmula Química 14. Especificamente, esta é uma etapa de preparar um composto de tiadiazol amina representado pela Fórmula Química 3 realizando uma reação de substituição com um composto tiadiazol tiol representado pela Fórmula Química 13 e um halogeneto de alquila representado pela Fórmula Química 14 em condições básicas.
[0080] Neste momento, a base pode ser uma base inorgânica, como carbonato de sódio, carbonato de potássio, hidróxido de potássio, hidróxido de sódio, carbonato de césio, hidróxido de bário, etc., ou uma base orgânica, como piperidina, pirrolidina, piridina, trietilamina, N,N-di- isopropiletilamina ou DBU. Podem ser usados sozinhos ou em combinação, em quantidade equivalente ou em excesso.
[0081] Além disso, os solventes que podem ser usados na reação incluem solventes de éter, como tetra-hidrofurano, dioxano, diclorometano e 1,2-dimetoxietano, solventes de hidrocarbonetos aromáticos, como benzeno, tolueno e xileno, solventes à base de álcool, como metanol e etanol, dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), acetonitrila, água e semelhantes. Eles podem ser usados sozinhos ou em combinação. A temperatura da reação é dem 0 ºC até o ponto de ebulição do solvente. Preparação 2 do material de partida (composto representado pela Fórmula Química 3)
[0082] O composto de Fórmula Química 3, que é o material de partida do Esquema 1, pode ser preparado pelo método de fabricação mostrado no Esquema 5 abaixo de acordo com o tipo de X. [Esquema 5]
[0083] No Esquema 5, R3 é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em halogênio, C1-10 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C1-10 alcóxi linear ou ramificado não substituído ou substituído por um ou mais alcóxi, não substituído ou C6-10 arila substituído e C6-10 arilóxi substituído ou não substituído, em que R3 é independentemente C1-10 alquila linear ou ramificada.
[0084] Daqui em diante, o método de fabricação representado pelo Esquema 5 será descrito em detalhes.
[0085] No método de fabricação representado pelo Esquema 5, a Etapa 1 é uma etapa de preparar um composto representado pela Fórmula Química 3 pela reação de um composto representado pela Fórmula Química 15 com um composto representado pela Fórmula Química 16. Especificamente, nesta etapa, um ácido benzônico O composto representado pela Fórmula 15 é submetido a uma reação de ciclização com um composto de tiosemicarbazida representado pela Fórmula Química 16 na presença de um reagente de cloração para preparar um composto representado pela Fórmula Química 3.
[0086] O reagente de cloração utilizável na reação acima pode ser cloreto de tionila (SOCl2), cloreto de fosfonila (POCl3) ou semelhantes.
[0087] Como solvente de reação, um solvente solúvel em água, como água, um solvente de éter, como tetra-hidrofurano, dioxano ou 1,2-dimetoxietano e semelhantes, pode ser usado sozinho ou em combinação, e a temperatura de reação é de 0 ºC a o ponto de ebulição do solvente.
[0088] Em outra modalidade, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula Química 1 de acordo com a presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[0089] Em outra modalidade, a presente invenção fornece um método para tratar uma doença ou condição que compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula Química 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo a um indivíduo em necessidade do mesmo, em que a doença ou condição é uma fosfodiesterase Doença relacionada com 9A.
[0090] Ou seja, a presente invenção proporciona um uso médico, caracterizado pelo composto de Fórmula Química 1 de acordo com a presente invenção ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ser utilizado como ingrediente ativo. Em uma modalidade, o uso médico da presente invenção é uma doença relacionada à fosfodiesterase 9A.
[0091] Em uma modalidade, a doença relacionada à fosfodiesterase 9A é uma doença neurológica ou uma doença mental. Em uma modalidade, o distúrbio neurológico ou mental é a doença de Alzheimer, doença de Huntington, demência com corpos de Lewy ou síndrome de Pick.
[0092] Em outra modalidade, a doença relacionada à fosfodiesterase 9A é a insuficiência cardíaca, particularmente a insuficiência cardíaca que preserva o débito cardíaco e a doença falciforme.
[0093] Os compostos da presente invenção são geralmente administrados em uma quantidade terapeuticamente eficaz. Os compostos da presente invenção podem ser administrados por qualquer via adequada na forma de uma composição farmacêutica adequada para esta via e em uma dosagem eficaz para o tratamento pretendido. As dosagens eficazes são geralmente cerca de 0,001 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal/dia, de preferência cerca de 0,01 a cerca de 50 mg/kg/dia, em doses únicas ou divididas. Dependendo da idade, espécie e doença ou condição a ser tratada, os níveis de dosagem abaixo do limite inferior deste intervalo podem ser adequados. Em outros casos, doses ainda maiores podem ser usadas sem efeitos colaterais prejudiciais. Dosagens maiores podem ser divididas em várias dosagens menores, para administração ao longo do dia. Métodos para determinar uma dosagem apropriada são bem conhecidos na técnica à qual a presente invenção pertence, e por exemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Publishing Co., 20 ed., 2000 pode ser usado.
[0094] Para o tratamento das doenças ou condições referidas acima, os compostos aqui descritos ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos podem ser administrados da seguinte forma: Administração Oral
[0095] Os compostos da presente divulgação podem ser administrados por via oral, incluindo deglutição, de modo que o composto entre no trato gastrointestinal ou seja absorvido na corrente sanguínea diretamente da boca (por exemplo, administração bucal ou sublingual).
[0096] As composições adequadas para administração oral incluem formulações sólidas, líquidas, em gel ou em pó e têm uma forma de dosagem tal como comprimido, pastilha, cápsula, grânulo ou pó.
[0097] As composições para administração oral podem ser formuladas como liberação imediata ou modificada, incluindo liberação retardada ou sustentada, opcionalmente com revestimento entérico.
[0098] As formulações líquidas podem incluir soluções, xaropes e suspensões, que podem ser usadas em cápsulas duras ou moles. Essas formulações podem incluir um veículo farmaceuticamente aceitável, por exemplo, água, etanol, polietileno glicol, celulose ou um óleo. A formulação também pode incluir um ou mais agentes emulsionantes e/ou agentes de suspensão.
[0099] Em uma forma de dosagem de comprimido, a quantidade de droga presente pode ser de cerca de 0,05% a cerca de 95% em peso,
mais tipicamente de cerca de 2% a cerca de 50% em peso da forma de dosagem. Além disso, os comprimidos podem conter um desintegrante, compreendendo de cerca de 0,5% a cerca de 35% em peso, mais tipicamente de cerca de 2% a cerca de 25% da forma de dosagem. Exemplos de desintegrantes incluem, mas não estão limitados a, lactose, amido, glicolato de amido de sódio, crospovidona, croscarmelose de sódio, maltodextrina ou suas misturas.
[00100] Lubrificantes adequados, para uso em um comprimido, podem estar presentes em quantidades de cerca de 0,1% a cerca de 5% em peso e incluem, mas não estão limitados a, talco, dióxido de silício, ácido esteárico, cálcio, estearato de magnésio zinco ou, estearila fumarato de sódio e semelhantes.
[00101] Aglutinantes adequados, para uso em um comprimido, incluem, mas não estão limitados a, gelatina, polietileno glicol, açúcares, gomas, amido, polivinilpirrolidona, hidroxipropilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose e semelhantes. Diluentes adequados, para uso em um comprimido, incluem, mas não estão limitados a, manitol, xilitol, lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, celulose microcristalina e amido.
[00102] Solubilizantes adequados, para uso em um comprimido, podem estar presentes em quantidades de cerca de 0,1% a cerca de 3% em peso e incluem, mas não estão limitados a, polissorbatos, laurila sulfato de sódio, dodecila sulfato de sódio, propileno carbonato, monoetila éter de dietilenoglicol, dimetila isossorbida, polietileno glicol (natural ou hidrogenado) óleo de rícino, HCORTM (Nikkol), éster oleílico, GelucireTM, mono/diglicerídeo de ácido caprílico/caprílico, ésteres de ácido graxo de sorbitano e Solutol HSTM. Administração Parenteral
[00103] Os compostos da presente divulgação podem ser administrados diretamente na corrente sanguínea, músculo ou órgãos internos. Os meios adequados para administração parentérica incluem intravenosa, intramuscular, intra-arterial subcutânea, intraperitoneal, intratecal, intracraniana e semelhantes. Dispositivos adequados para administração parenteral incluem injetores (incluindo agulha e injetores sem agulha) e métodos de infusão.
[00104] As composições para administração parenteral podem ser formuladas como liberação imediata ou modificada, incluindo liberação retardada ou sustentada.
[00105] A maioria das formulações parenterais são soluções aquosas contendo excipientes, incluindo sais, agentes tamponantes e agentes isotônicos.
[00106] As formulações parenterais também podem ser preparadas em uma forma desidratada (por exemplo, por liofilização) ou como soluções não aquosas estéreis. Estas formulações podem ser utilizadas com um veículo adequado, como água esterilizada. Os agentes de aumento da solubilidade também podem ser usados na preparação de soluções parenterais. Administração Tópica
[00107] Os compostos da presente divulgação podem ser administrados topicamente na pele ou transdermicamente. As formulações para esta administração tópica podem incluir loções, soluções, cremes, géis, hidrogéis, pomadas, espumas, implantes, adesivos e semelhantes. Os veículos farmaceuticamente aceitáveis para formulações de administração tópica podem incluir água, álcool, óleo mineral, glicerina, polietileno glicol e semelhantes. A administração tópica também pode ser realizada por eletroporação, iontoforese, fonoforese e semelhantes.
[00108] As composições para administração tópica podem ser formuladas como liberação imediata ou modificada, incluindo liberação retardada ou sustentada.
Efeitos Vantajosos
[00109] A presente invenção fornece um composto capaz de exibir várias atividades farmacológicas por meio da inibição da atividade de PDE 9A, uma composição farmacêutica contendo o composto como um ingrediente ativo, seu uso médico (especialmente para tratar ou aliviar doenças neuropáticas e mentais) e um método para tratar ou prevenção, compreendendo a administração a um indivíduo em necessidade. Modo para Invenção
[00110] A presente invenção será descrita em mais detalhes com base nos exemplos a seguir, mas isso não se destina a limitar o escopo da presente invenção. Além disso, aqueles versados na técnica serão capazes de adicionar várias modificações e variações à presente invenção dentro do escopo não prejudicial ao espírito da presente invenção. <Exemplo de Preparação 1> Preparação de hidrogenocloreto de (4,4- difluorociclo-hexil)hidrazina Etapa 1: Preparação de terc-butila 2-(4,4-difluorociclo- hexilideno)hidrazina-1-carboxilato
[00111] 300 mg de 4,4-difluorociclo-hexanona (2,24 mmol) foram dissolvidos em 10 mL de hexano, e 296 mg de terc-butila carbazato (2,24 mmol) foram adicionados, seguido de agitação sob refluxo durante 3 horas. Após a conclusão da reação, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida para dar 550 mg do composto do título (2,24 mmol) em 100% de rendimento. Rf = 0,30 (hexano:acetato de etila = 3:1, v/v)
H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 9,72 (br s, 1H), 2,45 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,37 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 1,99-2,12 (m, 4H), 1,43 (s, 9H) Etapa 2: Preparação de terc-butila 2-(4,4-difluorociclo-hexil)hidrazina-1- carboxilato
[00112] 550 mg de terc-butila 2-(4,4-difluorociclo- hexilideno)hidrazina-1-carboxilato obtido na Etapa 1 foram dissolvidos em 10 mL de THF, e 950 mg de triacetoxiboro-hidreto de sódio (4,48 mmol) foram adicionados e agitados à temperatura ambiente durante 15 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com 100 mL de acetato de etila, lavado com 100 mL de uma solução de sal inorgânico, seco sobre sulfato de sódio anidro (NA2SO4) e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 3:1, v/v) para dar 465 mg do composto do título (1,86 mmol) em 84% de rendimento. Rf = 0,45 (hexano:acetato de etila = 3:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,20 (br s, 1H), 4,38 (br s, 1H), 2,86- 2,95 (m, 1H), 1,93-2,11 (m, 2H), 1,59-1,83 (m, 4H), 1,41-1,49 (m, 2H), 1,38 (s, 9H) Etapa 3: Preparação de hidrogenocloreto (4,4-difluorociclo- hexil)hidrazina
[00113] 465 mg de terc-butila 2-(4,4-difluorociclo-hexil)hidrazina-1- carboxilato (1,86 mmol) obtido na Etapa 2 foram dissolvidos em 10 mL de metanol, e ácido clorídrico foram adicionados e agitados a 50 ºC por 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 335 mg do composto do título (1,79 mmol) em 96% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 3,05-3,12 (m, 1H), 1,96-2,09 (m, 4H), 1,79-1,91 (m, 2H), 1,52-1,59 (m, 2H) <Exemplo de preparação 2> Preparação de ácido 2-((1-(4,4- difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acético Etapa 1: Preparação de 4,6-dicloro-1-(4,4-difluorociclo-hexil)-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidina
[00114] 340 mg de 2,4,6-tricloropirimidina-5-carbaldeído (1,61 mmol) foram dissolvidos em 6 mL de etanol e 300 mg de hidrogenocloreto (4,4- difluorociclo-hexil)hidrazina (1,61 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 1 Etapa 3 e 0,86 mL de N,N-di-isopropiletilamina (4,82 mmol) foram adicionados a -78ºC e agitados durante 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com 100 mL de acetato de etila, lavado com 100 mL de uma solução de sal inorgânico, seco sobre sulfato de sódio anidro (NA2SO4) e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 10:1, v/v) para dar 360 mg do composto do título (1,17 mmol) com 73% de rendimento. Rf = 0,35 (hexano:acetato de etila = 10: 1, v/v)
H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,57 (s, 1H), 4,97-5,04 (m, 1H), 2,13- 2,23 (m, 6H), 2,03-2,07 (m, 2H) Etapa 2: Preparação de 6-cloro-1-(4,4-difluorociclo-hexil)-1,5-di-hidro- 4H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ona
[00115] 340 mg de 4,6-dicloro-1-(4,4-difluorociclo-hexil)-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidina (1,11 mmol) preparada na Etapa 1 acima foram dissolvidos em 6 mL de THF e 1 mL de hidróxido de sódio a 2N (1,11 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada sob refluxo durante 15 horas. Após a conclusão da reação, a mistura foi acidificada com ácido clorídrico a 6N e o composto sólido precipitado foi filtrado para dar 320 mg do composto do título (1,10 mmol) em 99% de rendimento. Rf = 0,40 (diclorometano: metanol = 20: 1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,11 (s, 1H), 4,77-4,81 (m, 1H), 2,08- 2,17 (m, 6H), 1,94-2,00 (m, 2H) Etapa 3: Preparação de etila 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexanil)-4-oxo-4,5- di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato
[00116] 150 mg de 6-cloro-1-(4,4-difluorociclo-hexil)-1,5-di-hidro-4H- pirazolo[3,4-d]piridin-4-ona (0,520 mmol) preparado na Etapa 2 acima, 153 mg de carbonato de potássio (1,559 mmol) e 119 μl de tioglicolato de etila (1,091 mmol) foram dissolvidos em 3 mL de DMF, seguido de agitação a 90ºC por 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e tetra-hidrofurano e lavado com água,
ácido clorídrico a 1N e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (metanol/diclorometano = 3%, v/v) para dar 170 mg do composto do título sólido (0,457 mmol) com rendimento de 88%. Rf = 0,60 (hexano normal: acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, MeOD-d4) δ 7,95 (s, 1H), 4,68-4,80 (m, 1H), 4,21 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,09 (s, 2H), 1,92-2,38 (m, 8H), 1,26 (t, J = 7,1 Hz, 3H) Etapa 4: Preparação de ácido 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5- di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético
[00117] 162 mg de etila 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato preparado na Etapa 3 acima (0,435 mmol) foi dissolvido em 3 mL de tetra-hidrofurano e foi adicionado hidróxido de sódio a 2N, e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e 30 minutos. Após a conclusão da reação, ela foi neutralizada com ácido clorídrico a 1N, extraída com acetato de etila e tetra-hidrofurano, e lavada com água e salmoura saturada. O resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 151 mg do composto do título sólido (0,435 mmol) com rendimento de 99%. 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 12,87 (brs, 1H), 12,60(brs, 1H), 7,98 (s, 1H), 4,65-4,73 (m, 1H), 4,00 (s, 2H), 1,95-2,23 (m, 8H) Exemplo 1: Preparação de 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2- il)acetamida
Etapa 1: Preparação de 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2- il)acetamida
[00118] 40 mg de ácido 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,116 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 2, 24 mg de 5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,174 mmol), 59 mg de CMPI (0,232 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 41 μl de DIPEA (0,232 mmol) foram adicionados e agitados a 50ºC durante 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 12,6 mg do composto do título sólido (0,027 mmol) em 24% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,35 (brs, 1H), 12,63 (brs, 1H), 7,97 (s, 1H), 4,47-4,61 (m, 1H), 4,27 (s, 2H), 1,65- 2,14 (m, 8H) Exemplo de preparação 3: Preparação de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético Etapa 1: Preparação de 4,6-dicloro-1-fenil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina
[00119] 2 g de 2,4,6-tricloropirimidina-5-carbaldeído (9,44 mmol) foram dissolvidos em 30 mL de etanol e 0,9 mL de cloridrato de fenil- hidrazina (9,44 mmol) e 4,8 mL de N,N-di-isopropiletilamina (28,32 mmol) foram adicionados a -78 ºC e agitados por 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com 300 mL de acetato de etila, lavado com 200 mL de uma solução de sal inorgânico, seco sobre sulfato de sódio anidro (NA2SO4) e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 20:1, v/v) para dar 1,7 g do composto do título (6,41 mmol) com rendimento de 68%. Rf = 0,50 (hexano:acetato de etila = 10: 1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s, 1H), 8,17 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,59 (dd, J = 8,5, 7,6 Hz, 2H), 7,44 (dd, J = 7,6, 7,6 Hz, 1H) Etapa 2: Preparação de 6-cloro-1-fenil-1,5-di-hidro-4H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-4-ona
[00120] 1,9 g de 4,6-dicloro-1-fenil-1H-pirazol[3,4-d]pirimidina (8,98 mmol) preparada na Etapa 1 acima foi dissolvido em 20 mL de THF e 10 mL de hidróxido de sódio a 2N (17,96 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada sob refluxo durante 15 horas. Após a conclusão da reação, a mistura foi acidificada com ácido clorídrico a 6N e o composto sólido precipitado foi filtrado para dar 2,2 g do composto do título (8,98 mmol) em 99% de rendimento. Rf = 0,23 (diclorometano: metanol = 20: 1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,47 (br s, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,94 (d,
J = 8,0 Hz, 2H), 7,58 (dd, J = 8,0, 7,4 Hz, 2H), 7,43 (dd, J = 7,4, 7,4 Hz, 1H) Etapa 3: Preparação de etila 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato
[00121] 1 g de 6-cloro-1-fenil-1,5-di-hidro-4H-pirazolo[3,4-d]piridin-4- ona (4,054 mmol) preparado na Etapa 2 acima e 1,644 g de carbonato de potássio (12,162 mmol) foram dissolvidos em 15 mL de DMF, 930 μl de etiltioglicolato (4,514 mmol) foram adicionados, seguido por agitação a 90ºC por 3 horas e 30 minutos. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído foi realizado com acetato de etila e tetra- hidrofurano e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano normal: acetato de etila = 3:1 -> 1:1 -> metanol/diclorometano = 5%, v/v) para dar 1,117 g do composto do título sólido (3,381 mmol) com rendimento de 83%. Rf = 0,53 (hexano normal: acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, MeOD-d4) δ 8,15 (s, 1H), 8,00 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,50-7,57 (m, 2H), 7,36-7,43 (m, 1H), 4,03- 4,12 (m, 4H), 1,14 (t, J = 7,1 Hz, 3H) Etapa 4: Preparação de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético
[00122] 1,117 g de etila 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato (3,381 mmol) preparado na
Etapa 3 acima foi dissolvido em 20 mL de tetra-hidrofurano e foi adicionado hidróxido de sódio a 2N, e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Após a conclusão da reação, ela foi neutralizada com ácido clorídrico a 1N, extraída com acetato de etila e tetra-hidrofurano, e lavada com água e salmoura saturada. O resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 928 mg do composto do título sólido (3,07 mmol) com 91% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,01 (brs, 1H), 12,84 (brs, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,05 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,49-7,56 (m, 2H), 7,35-7,42 (m, 1H), 4,03 (s, 2H) Exemplo de Preparação 4: Preparação de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2- amina Etapa 1: Preparação de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina
[00123] 2 g de 5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-tiol (15,96 mmol) e 1,01 g de hidróxido de potássio (18,02 mmol) foram dissolvidos em 20 mL de álcool isopropílico e 15 mL de água, e 1,27 mL de iodoetano (15,767 mmol) foi adicionado lentamente e agitado em temperatura ambiente por 4 horas e 60ºC por 1 hora. Após a conclusão da reação, foi adicionado a 70 mL de água gelada e deixada a 0 ºC por 30 minutos. O sólido resultante foi filtrado e lavado com água para dar 1,238 g do composto do título sólido (7,678 mmol) com 48% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 5,15 (brs, 2H), 3,18 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,42 (t, J = 7,4 Hz, 3H) Exemplo 2: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro -1H-pirazol [ 3,4-d] pirimidin-6-il)tio)acetamida
Etapa 1: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00124] 28 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,093 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, 18 mg de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,111 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 4 e 36 mg de iodo de 2-cloro- 1-metil-piridínio (0,140 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e, em seguida, 24 μl de DIPEA (0,140 mmol) foram adicionados, seguido de agitação em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 21,1 mg do composto sólido alvo (0,047 mmol) em 51% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,82-13,08 (m 2H), 8,23 (s, 1H), 7,84 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,19-7,35 (m, 3H), 4,31 (s, 2H), 3,19 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,30 (t, J = 7,2 Hz, 3H) Exemplo 3: Preparação de N-(5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil- 4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00125] 50 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,165 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, 57 mg de 2-amino-5-metil-1,3,4-tiadiazol (0,496 mmol) e 63 mg de iodo de 2-cloro-1-metil-piridínio (0,248 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, 43 μl de DIPEA (0,248 mmol) foi adicionado, seguido de agitação em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água, éter etílico e acetato de etila e filtrada para dar 37 mg do composto do título sólido (0,093 mmol) em 56% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,77-12,93 (m, 2H), 8,23 (s, 1H), 7,85 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,20-7,36 (m, 3H), 4,31 (s, 2H), 2,59 (s, 3H) Exemplo 4> Preparação de 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(1,3, 4-tiadiazol-2-il)acetamida Etapa 1: Preparação de 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-6-il)tio)-N-(1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamida
[00126] 50 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,165 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, 67 mg de 2-amino-1,3,4-tiadiazol (0,660 mmol) e 84 mg de iodo de 2-cloro-1-metil-piridínio (0,330 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF. Em seguida, 58 μl de DIPEA (0,330 mmol) foram adicionados e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água, éter etílico e acetato de etila e filtrada para dar 37,4 mg do composto do título sólido (0,097 mmol) em 59% de rendimento. 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,00 (brs, 1H), 12,89 (brs, 1H), 9,16 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,83 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 7,24-7,29 (m, 2H), 7,19- 7,23 (m, 1H), 4,33 (s, 2H) Exemplo 5: Preparação de N-(5-etil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-etil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil- 4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00127] 50 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,165 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, 85 mg de 2-amino-5-etil-1,3,4-tiadiazol (0,660 mmol) e 84 mg de iodo de 2-cloro-1-metil-piridínio (0,330 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, e 58 μl de DIPEA (0,330 mmol) foram adicionados, seguido por agitação em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água, éter etílico e acetato de etila e filtrada para dar 45 mg do composto do título sólido (0,109 mmol) em 66% de rendimento. 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 12,88 (brs, 1H), 12,82 (brs, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,85 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,28-7,33 (m, 2H), 7,21-7,25 (m, 1H),
4,31 (s, 2H) Exemplo de Preparação 5: Preparação de 5-(benziltio)-1,3,4-tiadiazol- 2-amina Etapa 1: Preparação de 5-(benziltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina
[00128] 200 mg de 5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-tiol (1,240 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de etanol e hidróxido de sódio a 2N e 155 μl de brometo de benzila (1,302 mmol) foram adicionados, seguido de agitação por 16 horas e 1 hora. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (metanol/diclorometano = 2% - > 5%, v/v) para dar 254 mg do composto do título sólido (1,137 mmol) em 92% de rendimento. Rf = 0,33 (metanol/diclorometano = 5%, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,30-7,37 (m, 4H), 7,24-7,29 (m, 3H), 4,29 (s, 2H) Exemplo 6: Preparação de N-(5-(benziltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(4-oxo- 1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(benziltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00129] 50 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,165 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, 154 mg de 5-(benziltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,660 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 5 e 84 mg de iodo de 2-cloro- 1-metil-piridínio (0,330 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 58 μl de DIPEA (0,330 mmol) foram adicionados, seguido de agitação em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água, éter etílico, metanol e acetato de etila e filtrada para dar 44,8 mg do composto do título sólido (0,088 mmol) em 53% de rendimento. 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,03 (brs, 1H), 12,88 (brs, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,82 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,33-7,37 (m, 2H), 7,20-7,31 (m, 6H), 4,45 (s, 2H), 4,30 (s, 2H) Exemplo 7: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-6-il)tio)acetamida
[00130] 50 mg de ácido 4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,165 mmol) obtido no Exemplo de
Preparação 3, 119 mg de 2-amino-5-bromo-1,3,4-tiadiazol (0,660 mmol) e 84 mg de iodo de 2-cloro-1-metil-piridínio (0,330 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF. Em seguida, 58 μl de DIPEA (0,330 mmol) foram adicionados, seguido de agitação em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água, éter etílico e acetato de etila e filtrada para dar 25,1 mg do composto do título sólido (0,054 mmol) em 33% de rendimento. 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,31 (brs, 1H), 12,90 (brs, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,83 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,29-7,34 (m, 2H), 7,22-7,26 (m, 1H), 4,34 (s, 2H) Exemplo de Preparação 6: Preparação de 5-((4-clorobenzil)tio)-1,3,4- tiadiazol-2-amina Etapa 1: Preparação de 5-((4-clorobenzil)tio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina
[00131] 200 mg de 5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-tiol (1,240 mmol) e 268 mg de brometo de 4-clorobenzila (1,302 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de etanol, e hidróxido de sódio a 2N foram adicionados e agitados à temperatura ambiente durante 16 horas e 1 hora. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (metanol/diclorometano = 2% - > 5%, v/v) para dar 187 mg do composto do título sólido (0,756 mmol) em 59% de rendimento. Rf = 0,21 (metanol/diclorometano = 5%, v/v)
H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,33-7,41 (m, 4H), 7,29 (brs, 2H), 4,28 (s, 2H) Exemplo 8: Preparação de N-(5-((4-clorobenzil)tio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)- 2-(4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-((4-clorobenzil)tio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2- (4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00132] 50 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,165 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, 170 mg de 5-((4-clorobenzil)tio)-1,3,4-tiadiazol-2- amina (0,660 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 6 e 84 mg de iodo de 2-cloro-1-metil-piridínio (0,330 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, 58 μl de DIPEA (0,330 mmol) foram adicionados, seguido de agitação em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água, éter etílico, metanol e acetato de etila e filtrada para dar 27,5 mg do composto do título sólido (0,051 mmol) em 31% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,80-13,11 (m, 2H), 8,23 (s, 1H), 7,82 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,17-7,42 (m, 7H), 4,44 (s, 2H), 4,30 (s, 2H) Exemplo de Preparação 7: Preparação de 5-((4-metilbenzil)tio)-1,3,4- tiadiazol-2-amina
Etapa 1: Preparação de 5-((4-metilbenzil)tio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina
[00133] 200 mg de 5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-tiol (1,240 mmol) e 241 mg de brometo de 4-metilbenzila (1,302 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de etanol, e hidróxido de sódio a 2N foram adicionados e agitados à temperatura ambiente durante 16 horas e 1 hora. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (metanol/diclorometano = 2% - > 5%, v /v) para dar 257 mg do composto do título sólido (1,083 mmol) em 87% de rendimento. Rf = 0,20 (metanol/diclorometano = 5%, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,27 (brs, 2H), 7,23 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,12 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,25 (s, 2H), 2,27 (s, 3H) Exemplo 9:: Preparação de N-(5-((4-metilbenzil)tio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)- 2-(4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-((4-metilbenzil)tio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2- (4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00134] 50 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,165 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, 157 mg de 5-((4-metilbenzil)tio)-1,3,4-tiadiazol-2- amina (0,660 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 7 e 84 mg de iodo de 2-cloro-1-metil-piridínio (0,330 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, 58 μl de DIPEA (0,330 mmol) foram adicionados, seguido de agitação em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água, éter etílico, metanol e acetato de etila e filtrada para dar 30,6 mg do composto do título sólido (0,059 mmol) em 36% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,87-13,06 (m, 2H), 8,24 (s, 1H), 7,81 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,19-7,31 (m, 5H), 7,03 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 4,40 (s, 2H), 4,29 (s, 2H), 2,20 (s, 3H) Exemplo de preparação 8: Preparação de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanoico Etapa 1: Preparação de etila 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanoato
[00135] 150 mg de 6-cloro-1-fenil-1,5-di-hidro-4H-pirazolo[3,4- d]piridin-4-ona (0,608 mmol) preparado na Etapa 2 do Exemplo de Preparação 3 e 252 mg de carbonato de potássio (1,824 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de DMF, 165 μl de 2-mercapto propionato de etila (1,277 mmol) foram adicionados, seguido de agitação a 90ºC por 3 horas e 30 minutos. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e tetra-hidrofurano e lavado com água, ácido clorídrico a 1N e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano normal: acetato de etila = 3:1 -> 1:1 -> metanol/diclorometano = 5%, v/v) para dar 154 mg do composto do título sólido (0,447 mmol) com rendimento de 74%. Rf = 0,51 (hexano normal: acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 10,45 (brs, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,04 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,50-7,55 (m, 2H), 7,35-7,40 (m, 1H), 4,58 (q, J = 7,3 Hz, 1H), 4,17-4,25 (m, 1H), 4,06-4,13 (m, 1H), 1,71 (d, J = 7,3 Hz, 3H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 3H) Etapa 2: Preparação de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanoico
[00136] 146 mg de etila 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanoato (3,381 mmol) preparado na Etapa 1 acima foi dissolvido em 5 mL de tetra-hidrofurano, foi adicionado hidróxido de sódio a 2N, seguido de agitação à temperatura ambiente durante 4 horas. Após a conclusão da reação, ela foi neutralizada com ácido clorídrico a 1N, extraída com acetato de etila e tetra-hidrofurano, e lavada com água e salmoura saturada. Foi concentrada sob pressão reduzida para dar 134 mg do composto do título sólido (0,423 mmol) com rendimento de 99%. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,50-13,40 (m, 2H), 8,24 (s, 1H), 8,06 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,50-7,58 (m, 2H), 7,34- 7,42 (m, 1H), 4,44 (q, J = 7,5 Hz, 1H), 1,58 (d, J = 7,5 Hz, 3H) Exemplo 10: Preparação de N-(5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-
fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanamida Etapa 3: Preparação de N-(5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil- 4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanamida
[00137] 30 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanoico (0,095 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 8, 22 mg de 2-amino-5-metil-1,3,4-tiadiazol (0,190 mmol) e 48 mg de BOP-Cl (0,190 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 26 μl de TEA (0,190 mmol) foram adicionados e agitados à temperatura ambiente durante 16 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 - > metanol/diclorometano = 5%, v/v) para dar 13,6 mg do composto do título sólido (0,033 mmol) em 35% de rendimento. Rf = 0,19 (Hex: EA = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,80-12,90 (m, 2H), 8,23 (s, 1H), 7,92 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,39-7,47 (m, 2H), 7,26- 7,33 (m, 1H), 4,77 (q, J = 7,5 Hz, 1H), 2,59 (s, 3H), 1,64 (d, J = 7,5 Hz, 3H) Exemplo 11: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo- 1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol [3,4-d] pirimidin-6-il)tio)propanamida
Etapa 1: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanamida
[00138] 40 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4- d]pirimidin-6-il)tio)propanoico (0,126 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 8, 41 mg de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol -2-amina (0,253 mmol) obtida no Exemplo de Preparação 4 e 64 mg de BOP-Cl (0,253 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 35 μl de TEA (0,253 mmol) foram adicionados e agitados à temperatura ambiente durante 16 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 -> metanol/diclorometano = 5%, v/v) para dar 19,8 mg do composto do título sólido (0,043 mmol) em 34% de rendimento. Rf = 0,18 (Hex: EA = 1:1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,07 (brs, 1H), 12,87 (brs, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,89 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,39-7,44 (m, 2H), 7,27-7,31 (m, 1H), 4,76 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 3,20 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 1,64 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,31 (t, J = 7,3 Hz, 3H) Exemplo 12: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo- 1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanamida Etapa 1: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-
fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanamida
[00139] 40 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanoico (0,126 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 8, 41 mg de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,253 mmol) e 64 mg de BOP-Cl (0,253 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF. Em seguida, 35 μl de TEA (0,253 mmol) foram adicionados, seguido de agitação em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 -> metanol/diclorometano = 3%, v/v) para dar 13,1 mg do composto do título sólido (0,027 mmol) em 22% de rendimento. Rf = 0,43 (Hex: EA = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,23 (s, 1H), 7,91 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 7,41-7,49 (m, 2H), 7,27-7,34 (m, 1H), 4,71 (q, J = 7,2 Hz, 1H), 1,64 (d, J = 7,2 Hz, 3H) Exemplo 13> Preparação de N-(5-(metiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4- oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol [ 3,4-d] pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(metiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00140] 50 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,165 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, 97 mg de 5-(metiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,660 mmol) e 84 mg de iodo de 2-cloro-1-metil-piridínio (0,330 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, e 58 μl de DIPEA (0,330 mmol) foram adicionados e agitados em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 56,3 mg do composto do título sólido (0,130 mmol) em 79% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,02 (brs, 1H), 12,89 (brs, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,84 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,21-7,37 (m, 3H), 4,32 (s, 2H), 2,69 (s, 3H) Exemplo de Preparação 9> Preparação de 5-(isopropiltio)-1,3,4- tiadiazol-2-amina Etapa 1: Preparação de 5-(isopropiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina
[00141] 500 mg de 5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-tiol (3,754 mmol) e 316 mg de hidróxido de potássio (5,631 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de álcool isopropílico e 3 mL de água, e 375 μl de 2-iodopropano (3,754 mmol) foram adicionados lentamente e agitados à temperatura ambiente por 4 horas e 60ºC por 1 hora. Após a conclusão da reação, a 70 mL de água gelada foram adicionados e deixados a 0ºC por 30 minutos. O sólido resultante foi filtrado e lavado com água para dar 391 mg do composto do título sólido (2,231 mmol) com 59% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,34 (brs, 2H), 3,50 (sep, J = 6,6 Hz, 1H), 1,29 (d, J = 6,6 Hz, 6H) Exemplo 14> Preparação de N-(5-(isopropiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2- ((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol [3,4-d] pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00142] 50 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,165 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, 116 mg de 5-(isopropil)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,660 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 9 e 84 mg de iodo de 2-cloro- 1-metil-piridínio (0,330 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 58 μl de DIPEA (0,330 mmol) foram adicionados, seguido de agitação em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 40,9 mg do composto do título sólido (0,089 mmol) em 54% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,07 (brs, 1H), 12,99 (brs, 1H), 8,23
(s, 1H), 7,83 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,18-7,33 (m, 3H), 4,32 (s, 2H), 3,66- 3,78(m, 1H), 1,31 (d, J = 6,6 Hz, 6H) Exemplo de Preparação 10> Preparação de 5-(propiltio)- 1,3,4-tiadiazol-2-amina Etapa 1: Preparação de 5-(propiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina
[00143] 500 mg de 5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-tiol (3,754 mmol) e 316 mg de hidróxido de potássio (5,631 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de álcool isopropílico e 3 mL de água, 440 μl de 1-iodopropano (4,505 mmol) foi adicionado lentamente e agitado à temperatura ambiente por 4 horas e 60 ºC por 1 hora. Após a conclusão da reação, foi adicionado a 70 mL de água gelada e deixada a 0 ºC por 30 minutos. O sólido resultante foi filtrado e lavado com água para dar 530 mg do composto do título sólido (3,024 mmol) com rendimento de 81%. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,34 (brs, 2H), 3,50 (sep, J = 6,6 Hz, 1H), 1,29 (d, J = 6,6 Hz, 6H) Exemplo 15> Preparação de N-(5-(isopropiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2- ((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(isopropiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo- 1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00144] 50 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,165 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, 116 mg de 5-propil-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,660 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 10 e 84 mg de iodo de 2-cloro- 1-metil-piridínio (0,330 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 58 μl de DIPEA (0,330 mmol) foram adicionados e agitados à temperatura ambiente por 16 horas.
Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 40,9 mg do composto do título sólido (0,089 mmol) em 54% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,07 (brs, 1H), 12,99 (brs, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,83 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,18-7,33 (m, 3H), 4,32 (s, 2H), 3,66- 3,78 (m, 1H), 1,31 (d, J = 6,6 Hz, 6H) Exemplo de preparação 11: Preparação de ácido 2-((1-(4-fluorofenil)-4- oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético
Etapa 1: Preparação de etila 2-((1-(4-fluorofenil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato
[00145] 100 mg de 6-cloro-1-(4-fluorofenil)-1,5-di-hidro-4H- pirazolo[3,4-d]piridin-4-ona (0,378 mmol), 153 mg de carbonato de potássio (2,232 mmol), e 87 μl de tioglicolato de etila (0,794 mmol) foram dissolvidos em 3 mL de DMF, seguido de agitação a 90 ºC por 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e tetra-hidrofurano, seguido por lavagem com água, ácido clorídrico a 1N e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (metanol/diclorometano = 3%, v/v) para dar 106 mg do composto do título sólido (0,304 mmol) em 81% de rendimento. Rf = 0,68 (hexano normal: acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 12,86 (brs, 1H), 8,25 (s, 1H), 7,99-8,04 (m, 2H), 7,34-7,40 (m, 2H), 4,12 (s, 2H), 4,00 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 1,05 (t, J = 6,9 Hz, 3H) Etapa 2: Preparação de ácido 2-((1-(4-fluorofenil)-4-oxo-4,5-di-hidro- 1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético
[00146] 101 mg de etila 2-((1-(4-fluorofenil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato (0,290 mmol) obtido na Etapa 1 foi dissolvido em 3 mL de tetra-hidrofurano e foi adicionado hidróxido de sódio a 2N, seguido de agitação à temperatura ambiente durante 16 horas. Após a conclusão da reação, ela foi neutralizada com ácido clorídrico a 1N, extraída com acetato de etila e tetra-hidrofurano, e lavada com água e salmoura saturada. O resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 63 mg do composto do título sólido (0,197 mmol) com rendimento de 68%. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,98 (brs, 1H), 12,84 (brs, 1H), 8,25
(s, 1H), 8,01-8,09 (m, 2H), 7,30-7,39 (m, 2H), 4,02 (s, 2H) Exemplo 16: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-(4- fluorofenil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-(4- fluorofenil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
[00147] 30 mg de ácido 2-((1-(4-fluorofenil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,094 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 11, 61 mg de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,376 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, e 48 mg de CMPI (0,187 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 33 μl de DIPEA (0,187 mmol) foram adicionados e agitados em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 9,4 mg do composto do título sólido (0,020 mmol) em 22% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,82-13,04 (m, 2H), 8,23 (s, 1H), 7,65 (dd, J = 13,6, 8,8 Hz, 2H), 7,13 (dd, J = 8,8, 8,8 Hz, 2H), 4,30 (s, 2H), 3,19 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,30 (t, J = 7,1 Hz, 3H) Exemplo 17: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-(4- fluorofenil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
Etapa 1: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-(4- fluorofenil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
[00148] 30 mg de ácido 2-((1-(4-fluorofenil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,094 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 11, 68 mg de 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,376 mmol) e 48 mg de CMPI (0,187 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF. Em seguida, 33 μl de DIPEA (0,187 mmol) foram adicionados, seguido de agitação em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 9,4 mg do composto do título sólido (0,020 mmol) em 22% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,25 (brs, 1H), 12,91 (brs, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,64 (dd, J = 13,8, 8,8 Hz, 2H), 7,15 (dd, J = 8,8, 8,5 Hz, 2H), 4,33 (s, 2H) Exemplo 18: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-N-metil-2- ((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
Etapa 1: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-N-metil-2-((4- oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00149] 35 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,114 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, 60 mg de 5-(metiltio)-N-metil-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,342 mmol)) e 58 mg de iodo de 2-cloro-1-metil-piridínio (0,228 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 40 μl de DIPEA (0,228 mmol) foram adicionados, seguido de agitação em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 31,3 mg do composto do título sólido (0,068 mmol) em 60% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,92 (brs, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,73-7,80 (m, 2H), 7,22-7,29 (m, 3H), 4,68 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,19 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,30 (t, J = 7,1 Hz, 3H) Exemplo 19: Preparação de 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-6-il)tio)-N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2- il)acetamida Etapa 1: Preparação de 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2- il)acetamida
[00150] 40 mg de ácido 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-6-il)tio)acético (0,116 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 2,56 mg de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,348 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 4, e 88 mg de HATU (0,232 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 41 μl de DIPEA (0,232 mmol) foram adicionados, seguido de agitação em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 21 mg do composto do título sólido (0,043 mmol) em 22% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,09 (brs, 1H), 12,62 (brs, 1H), 7,96 (s, 1H), 4,46-4,55 (m, 1H), 4,24 (s, 2H), 3,21 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,66- 2,01 (m, 8H), 1,32 (t, J = 7,1 Hz, 3H) Exemplo de Preparação 12: Preparação de 5-(p-tolil)-1,3,4-tiadiazol-2- amina Etapa 1: Preparação de 5-(p-tolil)-1,3,4-tiadiazol-2-amina
[00151] O ácido para-toluico (500 mg, 3,67 mmol) foi dissolvido em um excesso de cloreto de fosforila e foi adicionada tiossemicarbazida (1,004 g, 11,02 mmol). Após 2 horas de reação a 75ºC, a mistura foi resfriada. Após a adição de água, ferveu-se durante 4 horas e arrefeceu- se. Após recristalização com solução aquosa de hidróxido de potássio a 50% e filtração, obteve-se 677 mg (3,52 mmol) com rendimento de 96%. Rf = 0,45 (EA: HEX = 1:10) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,83 (br s, 2H), 7,80 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,44 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 2,66 (s, 3H) Exemplo 20> Preparação de 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-(p-tolil)-1,3,4-tiadiazol-2- il)propanamida Etapa 1: Preparação de 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-6-)tio)-N-(5-(p-tolil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)propanamida
[00152] Ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-6-il)tio)propanoico (40 mg, 0,165 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 8 foi dissolvido em dimetilformamida, e 5-(p-tolil)-1,3,4- tiadiazol-2-amina (101 mg, 0,661 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 12, HATU (50 mg, 0,33 mmol), HOAT (36 mg, 0,33 mmol) e DIPEA (47 μl, 0,33 mmol) foram adicionados. Um sólido branco foi formado quando a água fria é adicionada após reagir à temperatura ambiente por mais de 12 horas. O sólido foi filtrado e depois submetido a cromatografia em coluna (MeOH/MC 5%) para dar 10 mg (0,021 mmol) em 16% de rendimento. Rf = 0,20 (EA: HEX = 2: 1)
H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,03 (br s, 1H), 12,92 (br s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,91 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,79 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,40-7,45 (m, 2H), 7,28-7,34 (m, 3H), 4,79 (q, J = 7,4 Hz, 1H), 2,35 (s, 1H), 1,65 (d, J = 7,4 Hz, 3H) Exemplo 21: Preparação de 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2- il)acetamida Etapa 1: Preparação de 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2- il)acetamida
[00153] 40 mg de ácido 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina-6-il)tio)acético (0,116 mmol) obtido no Exemplo 2, 65 mg de 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,348 mmol) e 41 mg de CDMT (0,232 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, 26 μl de NMM (0,232 mmol) foram adicionados, seguido de agitação à temperatura ambiente durante 16 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 - > metanol/diclorometano 5%) para dar 14 mg do composto do título sólido (0,028 mmol) com 24% de rendimento.
Rf = 0,47 (metanol/diclorometano = 10%, v/v) 1 H RMN (500 MHz, MeOD-d4) δ 7,94 (s, 1H), 4,57-4,62 (m, 1H), 4,24 (s, 2H), 1,74-2,19 (m, 8H) Exemplo 22: Preparação de N-(5-(terciário-butil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2- ((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(terciário-butil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4- oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00154] 40 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,132 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, 62 mg de 5-terc-butil-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,397 mmol) e 67 mg de iodo de 2-cloro-1-metil-piridínio (0,264 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, e 46 μl de DIPEA (0,264 mmol) foram adicionados e agitados em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 23,5 mg do composto do título sólido (0,053 mmol) em 40% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,77-12,92 (m, 2H). 8,23 (s, 1H), 7,84 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,17-7,31 (m, 3H), 4,29 (s, 2H), 1,37 (s, 9H) Exemplo de Preparação 13: Preparação de 5-(4-fluorofenil)-1,3,4- tiadiazol-2-amina
Etapa 1: Preparação de 5-(4-fluorofenil)-1,3,4-tiadiazol-2-amina
[00155] Após dissolução do ácido 4-fluorobenzoico (300 mg, 2,14 mmol) em um excesso de cloreto de fosforila, tiossemicarbazida (195 mg, 2,14 mmol) foi adicionada. Após 2 horas de reação a 75ºC, a mistura foi resfriada. E depois de adicionar água, a mistura foi fervida por 4 horas e resfriada. Após recristalização com solução aquosa de hidróxido de potássio a 50% e filtração, obteve-se 233 mg (1,20 mmol) com rendimento de 56%. Rf = 0,32 (EA: HEX = 3:1) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,09 (br s, 1H), 12,91 (br s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,95-7,99 (m, 2H), 7,85 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,28-7,38 (m, 4H), 7,19-7,24 (m, 1H), 4,35 (s, 2H) Exemplo 23: Preparação de N-(5-(4-fluorofenil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2- ((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(4-fluorofenil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4- oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00156] Ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-6-il)tio)acético (40 mg, 0,138 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3 foi dissolvido em dimetilformamida e 5-(4-fluorofanil)- 1,3,4-tiadiazol-2-amina (107 mg, 0,55 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 13, HATU (105 mg, 0,276 mmol), HOAT (37 mg, 0,276 mmol) e DIPEA (48 μl, 0,276 mmol) foram adicionados.
Um sólido branco foi formado quando água fria foi adicionada após reagir à temperatura ambiente por mais de 12 horas.
O sólido foi filtrado e purificado por cromatografia em coluna (EA: HEX = 3:1 -> MeOH/MC = 5%) para dar 40 mg (0,084 mmol) em 61% de rendimento.
Rf = 0,32 (EA: HEX = 3:1) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,09 (br s, 1H), 12,91 (br s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,95-7,99 (m, 2H), 7,85 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,28-7,38 (m, 4H), 7,19-7,24 (m, 1H), 4,35 (s, 2H) Exemplo 24: Preparação de 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-(p-tolil)-1,3,4-tiadiazol-2- il)acetamida
Etapa 1: Preparação de 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-(p-tolil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamida
[00157] Ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-6-il)tio)acético (40 mg, 0,138 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3 foi dissolvido em dimetilformamida, e 5-(p-tolil)-1,3,4- tiadiazol-2-amina (64 mg, 0,552 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 12, HATU (105 mg, 0,276 mmol), HOAT (37 mg, 0,276 mmol) e DIPEA (48 μl, 0,276 mmol) foram adicionados. Um sólido branco foi formado quando água fria foi adicionada após reagir à temperatura ambiente por mais de 12 horas. A filtração do sólido deu 39 mg (0,081 mmol) com 59% de rendimento. Rf = 0,35 (EA: HEX = 3:1) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,05 (br s, 1H), 12,89 (br s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,85 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,80 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,28-7,33 (m, 4H), 7,19-7,24 (m, 1H), 4,35 (s, 2H), 2,35 (s, 3H) Exemplo de Preparação 14: Preparação de 5-fenil-1,3,4-tiadiazol-2- amina Etapa 1: Preparação de 5-fenil-1,3,4-tiadiazol-2-amina
[00158] Depois de dissolver o ácido benzoico (500 mg, 4,09 mmol) em um excesso de cloreto de fosforila, tiosemicabazida (373 mg, 4,09 mmol) foi adicionada. Após 2 horas de reação a 75ºC, a mistura foi resfriada. E depois de adicionar água, a mistura foi fervida por 4 horas e resfriada. Após recristalização com solução aquosa de hidróxido de potássio a 50% e filtração, foram obtidos 300 mg (1,68 mmol) com rendimento de 41%. Rf = 0,45 (EA: HEX = 1:10) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,73 (dd, J = 1,9, 8,2 Hz, 2H), 7,40-7,46 (m, 5H) Exemplo 25: Preparação de N-(5-fenil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-fenil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil- 4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00159] Ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-6-il)tio)acético (40 mg, 0,138 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3 foi dissolvido em dimetilformamida e 5-fenil-1,3,4- tiadiazol-2-amina (42 mg, 0,413 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 14, HATU (105 mg, 0,276 mmol), HOAT (37 mg, 0,276 mmol)) e DIPEA (48 μl, 0,276 mmol) foram adicionados. Um sólido branco foi formado quando água fria foi adicionada após reagir à temperatura ambiente por mais de 12 horas. A filtração do sólido deu 48 mg (0,102 mmol) com 74% de rendimento. Rf = 0,22 (EA: HEX = 3:1)
H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,99 (br s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,84-7,91 (m, 4H), 7,50-7,52 (m, 3H), 7,28-7,31 (m, 2H), 7,19-7,22 (m, 1H), 4,34 (s, 2H) Exemplo de preparação 15: Preparação de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5- di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-2-fenilacético Etapa 1: Preparação de etila 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-2-fenilacetato
[00160] 184 mg de 6-cloro-1-fenil-1,5-di-hidro-4H-pirazolo[3,4- d]piridin-4-ona (0,744 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3 Etapa 2, 302 mg de carbonato de potássio (2,232 mmol) e 219 mg de fenila 2- mercapto-2-fenilacetato (1,116 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de DMF e agitados a 90ºC durante 16 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e tetra-hidrofurano e lavado com água, ácido clorídrico a 1N e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano normal: acetato de etila = 2:1 -> 1:1 -> metanol/diclorometano = 5%, v/v) para dar 80 mg do composto do título sólido (0,197 mmol) com rendimento de 26%. Rf = 0,54 (hexano normal:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 10,22 (brs, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,00 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,52-7,57 (m, 2H), 7,45-7,50 (m, 2H), 7,36-7,43 (m, 4H),
5,65 (s, 1H), 4,14-4,21 (m, 1H), 3,99-4,07 (m, 1H), 1,11 (t, J = 7,1 Hz, 3H) Etapa 2: Preparação de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-2-fenilacético
[00161] 73 mg de etila 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-6-il)tio)-2-fenilacetato (0,180 mmol) obtido em O passo 1 foi dissolvido em 3 mL de tetra-hidrofurano e foi adicionado hidróxido de sódio a 2N, seguido de agitação à temperatura ambiente durante 16 horas. Após a conclusão da reação, ela foi neutralizada com ácido clorídrico a 1N, extraída com acetato de etila e tetra-hidrofurano, e lavada com água e salmoura saturada. O resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 71 mg do composto do título sólido (0,180 mmol) com rendimento de 99%.
[00162] 1 H RMN (300 MHz, MeOD-d4) δ 8,16 (s, 1H), 8,03 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,48-7,59 (m, 4H), 7,35-7,44 (m, 4H), 5,63 (s, 1H) Exemplo 26: N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-2-fenilacetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-2-fenilacetamida
[00163] 28 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-2-fenilacético (0,074 mmol) obtido em Exemplo de Preparação 15, 36 mg de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,368 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 4, e 38 mg de BOP-Cl (0,148 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e, em seguida, 26 μl de DIPEA (0,148 mmol) foram adicionados, seguido por agitação em temperatura ambiente por 64 horas.
Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada.
O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 3:1 - > 1:1, v/v) para dar 5 mg do composto do título sólido (0,0096 mmol) com 13% de rendimento.
Rf = 0,45 (Hex: EA = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, MeOD-d4) δ 8,15 (s, 1H), 7,71 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,47-7,53 (m, 2H), 7,30-7,43 (m, 5H), 7,19- 7,26 (m, 1H), 5,79 (s, 1H), 3,20 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,39 (t, J = 7,5 Hz, 3H) Exemplo de preparação 16: Preparação de hidrogenocloreto de (tetra- hidro-2H-piran-4-il)hidrazina
Etapa 1: Preparação de terc-butila 2-(tetra-hidro-4H-4-ilideno)hidrazina- 1-carboxilato
[00164] 3g de tetra-hidro-4H-piran4-ona (29,96 mmol) foram dissolvidos em 60 mL de hexano, e 3,96 g de terc-butila carbazato (29,96 mmol) foi adicionado, seguido por agitação sob refluxo durante 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 6,4 g do composto do título (29,96 mmol) em 100% de rendimento. Rf = 0,19 (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 9,65 (br s, 1H), 3,69 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,60 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,41 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 2,27 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 1,43 (s, 9H) Etapa 2: Preparação de terc-butila 2-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)hidrazina- 1-carboxilato
[00165] 6,4 g de terc-butila 2-(tetra-hidro-4H-4-ilideno)hidrazina-1- carboxilato (29,96 mmol) obtido na Etapa 1 foram dissolvidos em 50 mL de THF, e 12,7 g de triacetoxiboro-hidreto de sódio (59,92 mmol) foram adicionados e agitados à temperatura ambiente durante 15 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com 500 mL de acetato de etila, lavado com 500 mL de uma solução de sal inorgânico, seco sobre sulfato de sódio anidro (NA2SO4) e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:2, v/v) para dar 6 g do composto do título (27,74 mmol) com rendimento de 92%. Rf = 0,38 (hexano:acetato de etila = 1: 2, v/v)
H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 6,24 (br s, 1H), 3,95-3,99 (m, 2H), 3,38- 3,43 (m, 2H), 3,05-3,11 (m, 1H), 1,75-1,81 (m, 2H), 1,40-1,52 (m, 11H) Etapa 3: Preparação de hidrogenocloreto de (tetra-hidro-2H-piran-4- il)hidrazina
[00166] 6 g de terc-butila 2-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)hidrazina-1- carboxilato (27,74 mmol) obtido na Etapa 2 acima foram dissolvidos em 50 mL de metanol, e ácido clorídrico foram adicionados e agitados a 50ºC durante 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 4 g do composto do título (26,21 mmol) em 94% de rendimento. Rf = 0,00 (hexano:acetato de etila = 3:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,25 (br s, 1H), 3,83-3,92 (m, 2H), 3,23- 3,31 (m, 2H), 3,08-3,18 (m, 1H), 1,84-1,95 (m, 2H), 1,41-1,54 (m, 2H) Exemplo de preparação 17: Preparação de 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H- piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidina-6-il)tio) ácido acético Etapa 1: Preparação de 4,6-dicloro-1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidina
[00167] 5,55 g de 2,4,6-tricloropirimidina-5-carbaldeído (26,21 mmol)
obtido no Exemplo de Preparação 16 foram dissolvidos em 50 mL de etanol e 4 g de hidrogenocloreto (tetra-hidro-2H-piran-4-il)hidrazina (26,21 mmol) obtido na Etapa 3 acima e 14 mL de N,N-di- isopropiletilamina (78,63 mmol) foram adicionados -78ºC e agitados durante 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com 100 mL de acetato de etila, lavado com 100 mL de uma solução de sal inorgânico, seco sobre sulfato de sódio anidro (NA2SO4) e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 5:1, v/v) para dar 6,5 g do composto do título (23,80 mmol) com 91% de rendimento. Rf = 0,20 (hexano:acetato de etila = 9: 1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,57 (s, 1H), 4,96-5,03 (m, 1H), 3,98- 4,02 (m, 2H), 3,56-3,61 (m, 2H), 2,10-2,19 (m, 2H), 1,90-1,95 (m, 2H) Etapa 2: Preparação de 6-cloro-1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-1,5-di- hidro-4H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ona
[00168] 6,5 g de 4,6-dicloro-1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidina (23,80 mmol) preparado na Etapa 1 acima foram dissolvidos em 50 mL de THF, e 25 mL de hidróxido de sódio a 2N (23,80 mmol) foram adicionados, seguido por agitação sob refluxo durante 15 horas. Após a conclusão da reação, a mistura foi acidificada com ácido clorídrico a 6N e o composto sólido precipitado foi filtrado para dar 5,4 g do composto do título (21,20 mmol) em 89% de rendimento. Rf = 0,20 (diclorometano: metanol = 20:1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,21 (br s, 1H), 8,11 (s, 1H), 4,75-4,81 (m, 1H), 3,95-3,99 (m, 2H), 3,51-3,56 (m, 2H), 2,05-2,12 (m, 2H), 1,81-
1,86 (m, 2H) Etapa 3: Preparação de etila 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5- di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidina-6-il)tio)acetato
[00169] 300 mg de 6-cloro-1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-1,5-di-hidro- 4H-pirazol[3,4-d]piridin-4-ona (1,178 mmol) obtido na Etapa 2 acima, 478 mg de carbonato de potássio (3,117 mmol) e 270 μl de tioglicolato de etila (2,474 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de DMF, seguido de agitação a 90ºC por 16 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e tetra-hidrofurano e lavado com água, ácido clorídrico a 1N e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (metanol/diclorometano 3%, v/v) para dar 374 mg do composto do título sólido (1,105 mmol) em 94% de rendimento. Rf = 0,27 (hexano normal: acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 10,71 (brs, 1H), 8,04 (s, 1H), 4,68-4,81 (m, 1H), 4,25 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,11-4,20 (m, 2H), 4,00 (s, 2H), 3,54-3,65 (m, 2H), 2,29-2,45 (m, 2H), 1,87-1,96 (m, 2H), 1,31 (t, J = 7,1 Hz, 3H) Etapa 4: Preparação de 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)ácido acético
[00170] 360 mg de etila 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato (1,064 mmol) preparado na Etapa 3 acima foram dissolvidos em 5 mL de tetra-hidrofurano e foi adicionado hidróxido de sódio a 2N e agitado à temperatura ambiente durante 16 horas. Após a conclusão da reação, ela foi neutralizada com ácido clorídrico a 1N, extraída com acetato de etila e tetra-hidrofurano, e lavada com água e salmoura saturada. Após concentração sob pressão reduzida, 277 mg do composto do título sólido (0,893 mmol) foram obtidos com rendimento de 84%. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,86 (brs, 1H), 12,54 (brs, 1H), 7,98 (s, 1H), 4,65-4,78 (m, 1H), 3,94-4,03 (m, 4H), 3,41-3,52 (m, 2H), 1,99- 2,15 (m, 2H), 1,79-1,88 (m, 2H) Exemplo 27: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo- 1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- (tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
[00171] 40 mg de ácido 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,129 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 17, 62 mg de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,387 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 4, e 66 mg de CMPI (0,258 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, e 45 μl de DIPEA (0,258 mmol) foram adicionados, seguido de agitação em temperatura ambiente por 72 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 -> metanol/diclorometano 3%, v/v) para dar 19,5 mg do composto do título sólido (0,043 mmol) em 33% de rendimento. Rf = 0,23 (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,96 (s, 1H), 4,48-4,56 (m, 1H), 4,23 (s, 2H), 3,74-3,80 (m, 2H), 3,15-3,24 (m, 4H), 1,89-1,99 (m, 2H), 1,50-1,57 (m, 2H), 1,31 (t, J = 7,3 Hz, 3H) Exemplo de preparação 18: Preparação de ácido 2-((1-(4,4- difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)propanoico Etapa 1: Preparação de etila 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexanil)-4-oxo-4,5- di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanoato
[00172] 300 mg de 6-cloro-1-(4,4-difluorociclo-hexil)-1,5-di-hidro-4H- pirazolo[3,4-d]piridin-4-ona (1,039 mmol) obtido na Etapa 2 do Exemplo de Preparação, 431 mg de carbonato de potássio (3,117 mmol) e 282 μl de 2-mercaptopropionato de etila (2,182 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de DMF e agitados a 90ºC por 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e tetra-hidrofurano e lavado com água, ácido clorídrico a 1N e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 2:1, v/v) para dar 201 mg do composto do título sólido (0,520 mmol) em 50% de rendimento. Rf = 0,65 (hexano normal: acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 10,74 (brs, 1H), 8,03 (s, 1H), 4,61-4,74 (m, 1H), 4,49 (q, J = 7,2 Hz, 1H), 4,09-4,31 (m, 2H), 2,24-2,48 (m, 4H), 1,88- 2,13 (m, 4H), 1,70 (d, J = 7,2 Hz, 3H), 1,28 (t, J = 7,1 Hz, 3H) Etapa 2: Preparação de ácido 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5- di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanoico
[00173] 200 mg de etila 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanoato (0,518 mmol) obtido na Etapa 1 foram dissolvidos em 3 mL de tetra-hidrofurano e hidróxido de sódio a 2N foram adicionados e agitados à temperatura ambiente durante 1 hora e 30 minutos. Após a conclusão da reação, ela foi neutralizada com ácido clorídrico a 1N, extraída com acetato de etila e tetra-hidrofurano, e lavada com água e salmoura saturada. O resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 166 mg do composto do título sólido (0,463 mmol) com 89% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,97 (s, 1H), 4,65-4,77 (m, 1H), 4,42 (q, J = 7,2 Hz, 1H), 1,93-2,23 (m, 8H), 1,56 (d, J = 7,2 Hz, 3H) Exemplo 28: Preparação de 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2- il)propanamida
Etapa 1: Preparação de 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2- il)propanamida
[00174] 40 mg de ácido 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,112 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 18, 54 mg de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,336 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 4, e 39 mg de CDMT (0,223 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, 25 μl de NMM (0,223 mmol) foram adicionados, seguido por agitação em temperatura ambiente por 48 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1,5:1 -> 1:1,5, v/v) para dar 28,7 mg do composto do título sólido (0,057 mmol) com rendimento de 51%. Rf = 0,24 (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 12,05-12,70 (m, 2H), 8,02 (s, 1H), 4,61- 4,80 (m, 2H), 3,24 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,13-2,41 (m, 4H), 1,91-2,02 (m, 4H), 1,78 (d, J = 7,5 Hz, 3H), 1,42 (t, J = 7,2 Hz, 3H) Exemplo de preparação 19: Preparação de hidrogenocloreto de (tetra- hidro-2H-tiopiran-4-il)hidrazina
Etapa 1: Preparação de terc-butila 2-(tetra-hidro-4H-tiopiran-4- ilideno)hidrazina-1-carboxilato
[00175] 3,3 g de tetra-hidro-4H-tiopiran-4-ona (28,40 mmol) foram dissolvidos em 60 mL de hexano, e 4,13 g de terc-butila carbazato (31,24 mmol) foram adicionados, seguido de agitação sob refluxo durante 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 6,5 g do composto do título (28,40 mmol) em 100% de rendimento. Rf = 0,15 (hexano:acetato de etila = 3:1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,67 (br s, 1H), 2,73-2,76 (m, 2H), 2,65- 2,68 (m, 2H), 2,60-2,63 (m, 2H), 2,47-2,50 (m, 2H), 1,43 (s, 9H) Etapa 2: Preparação de terc-butila 2-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4- il)hidrazina-1-carboxilato
[00176] 6,4 g de terc-butila 2-(tetra-hidro-4H-tiopiran-4- ilideno)hidrazina-1-carboxilato (28,40 mmol) obtido na Etapa 1 acima foram dissolvidos em 80 mL de THF e 12 g de triacetoxiboro-hidreto de sódio (56,80 mmol) foram adicionados e agitados à temperatura ambiente durante 15 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com 300 mL de acetato de etila, lavado com 300 mL de uma solução de sal inorgânico, seco sobre sulfato de sódio anidro (NA2SO4) e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 2:1, v/v) para dar 6,5 g do composto do título (27,97 mmol) em 98% de rendimento. Rf = 0,34 (hexano:acetato de etila = 2:1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,20 (br s, 1H), 4,28 (br s, 1H), 2,65- 2,73 (m, 3H), 2,05-2,49 (m, 2H), 1,93-1,98 (m, 2H), 1,34-1,43 (m, 1H) Etapa 3: Preparação de hidrogenocloreto de (tetra-hidro-2H-piran-4- il)hidrazina
[00177] 6,5 g de terc-butila 2-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)hidrazina-1- carboxilato (27,97 mmol) obtido na Etapa 2 foram dissolvidos em 60 mL de metanol, e ácido clorídrico foi adicionado a ele e agitado 50ºC durante 3 horas. Após a conclusão da reação, a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida para dar 4,7 g do composto do título (27,97 mmol) em 94% de rendimento. 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 2,91-2,96 (m, 1H), 2,66-2,72 (m, 2H), 2,57-2,62 (m, 2H), 2,25-2,29 (m, 2H), 1,53-1,60 (m, 2H) Exemplo de preparação 20: Preparação de ácido 2-((4-oxo-1-(tetra- hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acético Etapa 1: Preparação de 4,6-dicloro-1-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-1H- pirazol[3,4-d]pirimidina
[00178] 5,9 g de 2,4,6-tricloropirimidina-5-carbaldeído (27,97 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 19 foram dissolvidos em 60 mL de etanol e 4,7 g de hidrogenocloreto (tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)hidrazina 27,97 mmol) obtido na Etapa 3 acima e 15 mL de N,N-di- isopropiletilamina (83,91 mmol) foram adicionados a -78ºC e agitados durante 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com 200 mL de acetato de etila, lavado com 200 mL de uma solução de sal inorgânico, seco sobre sulfato de sódio anidro (NA2SO4) e a solução de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 5:1, v/v) para dar 7 g do composto do título (24,20 mmol) com rendimento de 86%. Rf = 0,41 (hexano:acetato de etila = 10: 1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,57 (s, 1H), 4,78-4,85 (m, 1H), 2,93- 2,98 (m, 2H), 2,73-2,78 (m, 2H), 2,15-2,25 (m, 4H) Etapa 2: Preparação de 6-cloro-1-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-1,5-di- hidro-4H-pirazol[3,4-d]pirimidin-4-ona
[00179] 7 g de 4,6-dicloro-1-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidina (24,20 mmol) preparado na Etapa 1 acima foram dissolvidos em 50 mL de THF, e 25 mL de hidróxido de sódio a 2N (47,60 mmol) foram adicionados e agitados sob refluxo durante 15 horas. Após a conclusão da reação, a mistura foi acidificada com ácido clorídrico 6N e o composto sólido precipitado foi filtrado para dar 5,7 g do composto do título (21,05 mmol) em 87% de rendimento. Rf = 0,31 (diclorometano: metanol = 20: 1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,20 (br s, 1H), 8,11 (s, 1H), 4,56-4,63 (m, 1H), 2,88-2,94 (m, 2H), 2,72-2,76 (m, 2H), 2,10-2,20 (m, 4H) Etapa 3: Preparação de etila 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)- 4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato
[00180] 200 mg de 6-cloro-1-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-1,5-di- hidro-4H-pirazolo[3,4-d]piridin-4-ona (0,739 mmol) obtido na Etapa 2 acima, 300 mg de carbonato de potássio (2,216 mmol) e 170 μl de tioglicolato de etila (1,552 mmol) foram dissolvidos em 4 mL de DMF, seguido de agitação a 90ºC durante 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e tetra-hidrofurano, seguido por lavagem com água, ácido clorídrico a 1N e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) para dar 196 mg do composto do título sólido (0,553 mmol) com 75% de rendimento. Rf = 0,47 (hexano normal: acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 10,08 (brs, 1H), 8,02 (s, 1H), 4,48-4,56 (m, 1H), 4,26 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,00 (s, 2H), 2,79-2,93 (m, 4H), 2,36-2,46 (m, 2H), 2,21-2,28 (m, 2H), 1,32 (t, J = 7,1 Hz, 3H) Etapa 4: Preparação de ácido 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)- 4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético
[00181] 185 mg de etila 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5- di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato (0,522 mmol) preparado na Etapa 3 acima foram dissolvidos em 5 mL de tetra- hidrofurano e foi adicionado hidróxido de sódio a 2N, seguido por agitação à temperatura ambiente durante 16 horas. Após a conclusão da reação, ela foi neutralizada com ácido clorídrico a 1N, extraída com acetato de etila e tetra-hidrofurano, e lavada com água e salmoura saturada. O resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 173 mg do composto do título sólido (0,530 mmol) com rendimento de 99%. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,97 (s, 1H), 4,45-4,58 (m, 1H), 3,98 (s, 2H), 2,69-2,88 (m, 4H), 2,07-2,21 (m, 4H) Exemplo 29: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo- 1-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- (tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
[00182] 40 mg de 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]piridmidin-6-il)tio)acético ácido (0,123 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 20, 63 mg de 5-(etiltio)-1,3,4- tiadiazol-2-amina (0,369 mmol) e 63 mg de CMPI (0,245 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 43 μl de DIPEA (0,245 mmol) foram adicionados, seguido de agitação em temperatura ambiente por 72 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 31,1 mg do composto do título sólido (0,066 mmol) em 54% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,07 (brs, 1H), 12,59 (brs, 1H), 7,95 (s, 1H), 4,28-4,40 (m, 1H), 4,24 (s, 2H), 3,21 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 2,51- 2,58 (m, 4H), 1,82-2,07 (m, 4H), 1,32 (t, J = 7,3 Hz, 3H) Exemplo 30: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil- 4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00183] 40 mg de ácido 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,132 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 3, 54 mg de 5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,397 mmol) e 58 mg de tetrafluoroborato de 2-cloro-1,3-dimetilimidazônio (0,265 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, e 46 μl de DIPEA (0,264 mmol) foram adicionados, seguido por agitação a 50ºC por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 29 mg do composto do título sólido (0,069 mmol) em 52% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,91-13,20 (m, 2H), 8,23 (s, 1H), 7,84 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,30-7,37 (m, 2H), 7,21- 7,28 (m, 1H), 4,33 (s, 2H) Exemplo 31: Preparação de 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di-
hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2- il)propanamida
[00184] Etapa 1: Preparação de 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo- 4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-bromo-1,3,4- tiadiazol-2-il)propanamida
[00185] 56 mg de ácido 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,156 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 18, 84 mg de 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,468 mmol) e 80 mg de CDMT (0,313 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 34 μl de NMM (0,313 mmol) foram adicionados, seguido por agitação a 50ºC durante 16 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) para dar 36 mg do composto do título sólido (0,069 mmol) com 44% de rendimento. Rf = 0,29 (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,39 (brs, 1H), 12,63 (brs, 1H), 7,97 (s, 1H), 4,69 (q, J = 7,2 Hz, 1H), 4,48-4,60 (m, 1H), 1,65-2,28 (m, 8H), 1,59 (d, J = 7,2 Hz, 3H) Exemplo 32: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-
1-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
[00186] Etapa 1: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2- ((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4- d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00187] 50 mg de 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético ácido (0,153 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 20, 41 mg de 5-bromo-1,3,4-tiadiazol- 2-amina (0,229 mmol) e 78 mg de CMPI (0,306 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, e 53 μl de DIPEA (0,306 mmol) foram adicionados e agitados a 50ºC por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 17,9 mg do composto do título sólido (0,037 mmol) em 24% de rendimento.
[00188] 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,37 (brs, 1H), 12,61 (brs, 1H), 7,96 (s, 1H), 4,31-3,49 (m, 1H), 4,27 (s, 2H), 2,51- 2,60 (m, 4H), 1,84-2,05 (m, 4H) Exemplo 33: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo- 1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
Etapa 1: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- (tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
[00189] 45 mg de 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro- 1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético ácido (0,145 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 17, 78 mg de 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,435 mmol) e 74 mg de CMPI (0,290 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, e 51 μl de DIPEA (0,290 mmol) foram adicionados, seguido por agitação a 50 ºC por 16 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 - > metanol/diclorometano 3%, v/v) para dar 16,1 mg do composto do título sólido (0,034 mmol) em 24% de rendimento. Rf = 0,11 (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,39 (brs, 1H), 12,64 (brs, 1H), 7,96 (s, 1H), 4,45-4,59 (m, 1H), 4,26 (s, 2H), 3,73- 3,84 (m, 2H), 3,13-3,25 (m, 2H), 1,86-2,04 (m, 2H) Exemplo de preparação 21: Preparação de ácido 2-((1-ciclo-hexil-4-oxo- 4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético
Etapa 1: Preparação de 4,6-dicloro-1-ciclo-hexil-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidina
[00190] 4,39 g de 2,4,6-tricloropirimidina-5-carbaldeído (20,71 mmol) foram dissolvidos em 50 mL de etanol e 3,12 g de hidrogenocloreto de ciclo-hexila hidrazina (20,71 mmol) e 11 mL de N,N-di-isopropiletilamina (62,13 mmol) foram adicionados a -78ºC e agitados durante 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com 200 mL de acetato de etila, lavado com 200 mL de uma solução de sal inorgânico, seco sobre sulfato de sódio anidro (NA2SO4) e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 10:1, v/v) para dar 5,2 g do composto do título (19,18 mmol) em 92% de rendimento. Rf = 0,39 (hexano:acetato de etila = 10: 1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 8,15 (s, 1H), 4,75-4,82 (m, 1H), 2,01-2,08 (m, 2H), 1,93-1,99 (m, 2H), 1,77-1,81 (m, 1H)), 1,48-1,57 (m, 2H), 1,30- 1,39 (m, 1H), 1,01-1,04 (m, 2H) Etapa 2: Preparação de 6-cloro-1-ciclo-hexil-1,5-di-hidro-4H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ona
[00191] 5 g de 4,6-dicloro-1-ciclo-hexil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (18,44 mmol) preparado na Etapa 1 acima foram dissolvidos em 12 mL de THF e 19 mL de hidróxido de sódio a 2N (36,88 mmol) foram adicionados e agitados sob refluxo durante 15 horas. Após a conclusão da reação, a mistura foi acidificada com ácido clorídrico a 6N e o composto sólido precipitado foi filtrado para dar 4,6 g do composto do título (18,20 mmol) em 98% de rendimento. Rf = 0,35 (diclorometano: metanol = 20: 1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,18 (br s, 1H0, 8,07 (s, 1H), 4,46-4,52 (m, 1H), 1,80-1,87 (m, 4H), 1,66-1,69 (m, 1H), 1,40-1,48 (m, 2H), 1,18- 1,25 (m, 1H) Etapa 3: Preparação de etila 2-((1-ciclo-hexil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato
[00192] 400 mg de 6-cloro-1-ciclo-hexil-1,5-di-hidro-4H-pirazolo[3,4- d]piridin-4-ona (1,583 mmol) obtido na Etapa 2 acima, 642 mg de carbonato de potássio (4,749 mmol))), e 363 μl de tioglicolato de etila (3,324 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de DMF e agitados a 90ºC por 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e tetra-hidrofurano, seguido por lavagem com água, ácido clorídrico a 1N e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) para dar 376 mg do composto do título sólido (1,118 mmol) com rendimento de 71%. Rf = 0,52 (hexano normal: acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 10,58 (brs, 1H), 8,00 (s, 1H), 4,45-4,57 (m, 1H), 4,25 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,99 (s, 2H), 1,89-2,04 (m, 6H), 1,69-1,80 (m, 2H), 1,35-1,53 (m, 2H), 1,31 (t, J = 7,1 Hz, 3H)
Etapa 4: Preparação de ácido 2-((1-ciclo-hexil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético
[00193] 370 mg de etila 2-((1-ciclo-hexil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato (1,118 mmol) preparado na Etapa 3 acima foram dissolvidos em 5 mL de tetra-hidrofurano e hidróxido de sódio a 2N foi adicionado, seguido de agitação em temperatura ambiente por 16 horas. Após a conclusão da reação, ela foi neutralizada com ácido clorídrico a 1N, extraída com acetato de etila e tetra-hidrofurano, e lavada com água e salmoura saturada. O resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 354 mg do composto do título sólido (1,118 mmol) com rendimento de 99%. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,85 (brs, 1H), 12,53 (brs, 1H), 7,92 (s, 1H), 4,38-4,52 (m, 1H), 3,97 (s, 2H), 1,61- 1,92 (m, 7H), 1,18-1,50 (m, 3H) Exemplo 34: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo- 1-ciclo-hexil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- ciclo-hexil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00194] 40 mg de ácido 2-((1-ciclo-hexil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,130 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 21, 63 mg de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,390 mmol) e 66 mg de CMPI (0,260 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e, em seguida, 45 μl de DIPEA (0,260 mmol) foi adicionado, seguido por agitação a 50 ºC durante 18 horas.
Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e tetra-hidrofurano, seguido por lavagem com água e salmoura saturada.
O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 -> 1: 2, v/v) para dar 13,4 mg do composto do título sólido (0,030 mmol) em 23% de rendimento.
Rf = 0,18 (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,91 (s, 1H), 4,24-4,31 (m, 1H), 4,23 (s, 2H), 3,20 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 1,47-1,77 (m, 7H), 1,31 (t, J = 7,3 Hz, 3H), 1,03-1,17 (m, 3H) Exemplo 35: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo- 1-ciclo-hexil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
Etapa 1: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- ciclo-hexil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00195] 40 mg de ácido 2-((1-ciclo-hexil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,130 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 21, 66 mg de 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,390 mmol) e 66 mg de CMPI (0,260 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 45 μl de DIPEA (0,260 mmol) foram adicionados, seguido de agitação a 50ºC durante 18 horas.
Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 9,7 mg do composto do título sólido (0,021 mmol) em 16% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,36 (brs, 1H), 12,58 (brs, 1H), 7,92 (s, 1H), 4,17-4,30 (m, 3H), 1,48-1,90 (m, 7H), 1,01-1,26 (m, 3H) Exemplo 36: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- (tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
Etapa 1: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- (tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
[00196] 40 mg de ácido 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,129 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 17, 66 mg de 5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,258 mmol) e 66 mg de CMPI (0,258 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, e 45 μl de DIPEA (0,258 mmol) foram adicionados, seguido por agitação a 50ºC por 16 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 - > metanol/diclorometano 3%, v/v) para dar 21,9 mg do composto do título sólido (0,051 mmol) em 40% de rendimento. Rf = 0,09 (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,39 (brs, 1H), 12,64 (brs, 1H), 7,99 (s, 1H), 4,47-4,60 (m, 1H), 4,26 (s, 2H), 3,75- 3,85 (m, 2H), 3,14-3,25 (m, 2H), 1,86-2,03 (m, 2H), 1,50-1,60 (m, 2H), 1,86-2,04 (m, 2H) Exemplo de preparação 22: Preparação de ácido 2-((1-isopropil-4-oxo- 4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético Etapa 1: Preparação de 4,6-dicloro-1-isopropil-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidina
[00197] 2,22 g de 2,4,6-tricloropirimidina-5-carbaldeído (10,49 mmol) foram dissolvidos em 30 mL de etanol e 1,16 g de hidrogenocloreto de isopropila hidrazina (10,49 mmol) e 5,5 mL de N,N-di-isopropiletilamina (31,47 mmol)) foram adicionados a -78ºC e agitados durante 3 horas.
Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com 200 mL de acetato de etila, lavado com 200 mL de uma solução de sal inorgânico, seco sobre sulfato de sódio anidro (NA2SO4) e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 10:1, v/v) para dar 2,1 g do composto do título (9,08 mmol) com rendimento de 87%. Rf = 0,48 (hexano:acetato de etila = 10: 1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 8,16 (s, 1H), 5,16-5,22 (m, 1H), 1,60 (d, J = 6,7 Hz, 6H) Etapa 2: Preparação de 6-cloro-1-isopropil-1,5-di-hidro-4H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-4-ona
[00198] 2 g de 4,6-dicloro-1-isopropil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidina (8,65 mmol) preparado na Etapa 1 foram dissolvidos em 12 mL de THF e 8,6 mL de hidróxido de sódio a 2N (17,13 mmol)) foram adicionados e agitados sob refluxo durante 15 horas. Após a conclusão da reação, a mistura foi acidificada com ácido clorídrico a 6N e o composto sólido precipitado foi filtrado para dar 1,7 g do composto do título (7,99 mmol) em 92% de rendimento. Rf = 0,29 (diclorometano: metanol = 20: 1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,16 (br s, 1H), 8,08 (s, 1H), 4,85-4,91 (m, 1H), 1,44 (d, J = 7,0 Hz, 6H) Etapa 3: Preparação de etila 2-((1-isopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato
[00199] 300 mg de 6-cloro-1-isopropil-1,5-di-hidro-4H-pirazolo[3,4- d]piridin-4-ona (1,411 mmol) obtido na Etapa 2, 572 mg de carbonato de potássio (4,233 mmol), e 324 μl de tioglicolato de etila (2,963 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de DMF e agitados a 90ºC por 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e tetra-hidrofurano, seguido por lavagem com água, ácido clorídrico a 1N e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 - > metanol/diclorometano = 5%, v/v) para dar 287 mg do composto do título sólido (0,968 mmol) em 69% de rendimento. Rf = 0,44 (hexano normal: acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 10,78 (brs, 1H), 8,04 (s, 1H), 4,89-5,00 (m, 1H), 4,25 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,00 (s, 2H), 1,54 (d, J = 6,9 Hz, 6H), 1,31 (t, J = 7,1 Hz, 3H) Etapa 4: Preparação de ácido 2-((1-isopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético
[00200] 287 mg de etila 2-((1-isopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato (0,968 mmol) preparado na Etapa 3 acima foram dissolvidos em 5 mL de tetra-hidrofurano e hidróxido de sódio a 2N foi adicionado, seguido de agitação à temperatura ambiente durante 16 horas. Após a conclusão da reação, ela foi neutralizada com ácido clorídrico a 1N, extraída com acetato de etila e tetra-hidrofurano, e lavada com água e salmoura saturada. O resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 252 mg do composto do título sólido (0,939 mmol) com 97% de rendimento. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,90 (brs, 1H), 12,56 (brs, 1H), 7,95 (s, 1H), 4,80-4,90 (m, 1H), 3,90 (s, 2H), 1,42 (d, J = 6,6 Hz, 6H)
Exemplo 37: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1- isopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-isopropil- 4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00201] 40 mg de ácido 2-((1-isopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,149 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 22, 36 mg de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,224 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 4 e 76 mg de CMPI (0,298 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, e 52 μl de DIPEA (0,298 mmol) foram adicionados, seguido de agitação a 50 ºC por 18 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído foi realizado com acetato de etila e tetra-hidrofurano, seguido por lavagem com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 - > metanol/diclorometano = 5%, v/v) para dar 32,3 mg do composto do título sólido (0,078 mmol) em 53% de rendimento. Rf = 0,13 (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,11 (brs, 1H), 12,61 (brs, 1H), 7,93 (s, 1H), 4,69-4,79 (m, 1H), 4,22 (s, 2H), 3,20 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,30 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,15 (d, J = 6,6 Hz, 6H) Exemplo 38: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-
isopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-isopropil- 4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00202] 40 mg de ácido 2-((1-isopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,149 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 22, 40 mg de 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,224 mmol) e 76 mg de CMPI (0,298 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 52 μl de DIPEA (0,298 mmol) foi adicionado, seguido de agitação a 50ºC durante 18 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e tetra-hidrofurano, seguido por lavagem com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 -> metanol/diclorometano = 5%, v/v) para dar 22,2 mg do composto do título sólido (0,052 mmol) em 53% de rendimento. Rf = 0,11 (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,41 (brs, 1H), 12,59 (brs, 1H), 7,93 (s, 1H), 4,68-4,79(m, 1H), 4,25 (s, 2H), 1,15 (d, J = 6,6 Hz, 6H) Exemplo 39: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- (tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
Etapa 1: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- (tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
[00203] 40 mg de ácido 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5- di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,123 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 20, 25 mg de 5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,184 mmol) e 63 mg de CMPI (0,246 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, e 43 μl de DIPEA (0,246 mmol) foram adicionados, seguido por agitação a 50ºC por 16 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 14,7 mg do composto do título sólido (0,033 mmol) em 27% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,37 (brs, 1H), 12,65 (brs, 1H), 7,96 (s, 1H), 4,31-4,41 (m, 1H), 4,26 (s, 2H), 2,53- 2,62 (m, 4H), 1,85-2,08 (m, 4H) Exemplo de preparação 23: Preparação de ácido 2-((1-ciclopropil-4- oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético Etapa 1: Preparação de 4,6-dicloro-1-ciclopropil-1H-pirazolo[3,4-
d]pirimidina
[00204] 1,95 g de 2,4,6-tricloropirimidina-5-carbaldeído (9,21 mmol) foi dissolvido em 30 mL de etanol e 1 g de hidrogenocloreto de ciclopropila hidrazina (9,21 mmol) e 4,8 mL de N,N-di-isopropiletilamina (27,63 mmol)) foram adicionados a -78ºC e agitados durante 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com 200 mL de acetato de etila, lavado com 200 mL de uma solução de sal inorgânico, seco sobre sulfato de sódio anidro (NA2SO4) e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 10: 1, v/v) para dar 950 mg do composto do título (4,15 mmol) com 45% de rendimento. Rf = 0,45 (hexano:acetato de etila = 10: 1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 8,10 (s, 1H), 3,88-3,92 (m, 1H), 1,35-1,38 (m, 2H), 1,21-1,25 (m, 2H) Etapa 2: Preparação de 6-cloro-1-ciclopropil-1,5-di-hidro-4H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ona
[00205] 930 mg de 4,6-dicloro-1-ciclopropil-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidina (4,06 mmol) preparado na Etapa 1 foram dissolvidos em 12 mL de THF, e 4 mL de hidróxido de sódio a 2N (8,12 mmol)) foram adicionados e agitados sob refluxo durante 15 horas. Após a conclusão da reação, a mistura foi acidificada com ácido clorídrico 6N e o composto sólido precipitado foi filtrado para dar 680 mg do composto do título (3,23 mmol) em 80% de rendimento.
Rf = 0,28 (diclorometano: metanol = 20: 1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,20 (br s, 1H), 8,02 (s, 1H), 3,78-3,82 (m, 1H), 1,05-1,15 (m, 4H) Etapa 3: Preparação de etila 2-((1-ciclopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato
[00206] 300 mg de 6-cloro-1-ciclopropil-1,5-di-hidro-4H-pirazolo[3,4- d]piridin-4-ona (1,424 mmol) obtido na Etapa 2, 578 mg de carbonato de potássio (4,273 mmol), e 327 μl de tioglicolato de etila (2,990 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de DMF e agitados a 90 ºC por 3 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e tetra-hidrofurano, seguido por lavagem com água, ácido clorídrico a 1N e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 - > metanol/diclorometano = 5%, v/v) para dar 345 mg do composto do título sólido (1,172 mmol) com rendimento de 82%. Rf = 0,28 (hexano normal: acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 10,91 (brs, 1H), 7,97 (s, 1H), 4,26 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,03 (s, 2H), 3,69-3,79 (m, 1H), 1,22-1,35 (m, 5H), 1,05- 1,13 (m, 2H) Etapa 4: Preparação de ácido 2-((1-ciclopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético
[00207] 336 mg de etila 2-((1-ciclopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato (1,142 mmol) preparado na Etapa 3 acima foram dissolvidos em 5 mL de tetra-hidrofurano e foi adicionado hidróxido de sódio a 2N, seguido de agitação à temperatura ambiente durante 16 horas. Após a conclusão da reação, ela foi neutralizada com ácido clorídrico a 1N, extraída com acetato de etila e tetra-hidrofurano, e lavada com água e salmoura saturada. O resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 262 mg do composto do título sólido (0,991 mmol) com rendimento de 87%. 1H MMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,89 (brs, 1H), 12,55 (brs, 1H), 7,91 (s, 1H), 4,03 (s, 2H), 3,70-3,80 (m, 1H), 0,98- 1,18 (m, 4H) Exemplo 40: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1- ciclopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol [3,4-d] pirimidin-6- il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1- ciclopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
[00208] 40 mg de ácido 2-((1-ciclopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,150 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 23, 36 mg de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,224 mmol) obtida no Exemplo de Preparação 4, e 76 mg de CMPI (0,298 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF, e 52 μl de DIPEA (0,298 mmol) foram adicionados, seguido por agitação a 50ºC por 18 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 8,5 mg do composto do título sólido (0,021 mmol) em 14% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,40-13,15 (m, 2H), 7,88 (s, 1H), 4,26 (s, 2H), 3,59-3,70 (m, 1H), 3,21 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,32 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 0,92-1,00 (m, 2H) Exemplo 41: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1- ciclopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1- ciclopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
[00209] 40 mg de ácido 2-((1-ciclopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,150 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 23, 36 mg de 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,224 mmol) e 76 mg de CMPI (0,298 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 52 μl de DIPEA (0,298 mmol) foi adicionado, seguido de agitação a 50ºC durante 18 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 27,4 mg do composto do título sólido (0,064 mmol) em 43% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,36 (brs, 1H), 12,62 (brs, 1H), 7,88 (s, 1H), 4,29 (s, 2H), 3,58-3,67 (m, 1H), 0,93- 1,00 (m, 2H), 0,73-0,81 (m, 2H) Exemplo 42: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-
ciclo-hexil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-ciclo- hexil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00210] 40 mg de ácido 2-((1-ciclo-hexil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,130 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 21, 52 mg de 5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,390 mmol) e 66 mg de CMPI (0,260 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 45 μl de DIPEA (0,260 mmol) foram adicionados e agitados a 50ºC durante 18 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 19,5 mg do composto do título sólido (0,046 mmol) em 35% de rendimento. 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,37 (brs, 1H), 12,59 (brs, 1H), 7,92 (s, 1H), 4,19-4,32 (m, 3H), 1,49-1,92 (m, 7H), 1,02-1,17 (m, 3H) Exemplo 43: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1- isopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida Etapa 1: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-isopropil-4- oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00211] 40 mg de ácido 2-((1-isopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,149 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 22, 34 mg de 5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,224 mmol) e 76 mg de CMPI (0,298 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 52 μl de DIPEA (0,298 mmol) foram adicionados e agitados a 50ºC durante 18 horas.
Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e tetra-hidrofurano, seguido por lavagem com água e salmoura saturada.
O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 -> metanol/diclorometano = 5%, v/v) para dar 31,4 mg do composto do título sólido (0,081 mmol) em 55% de rendimento.
Rf = 0,13 (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,42 (brs, 1H), 12,59 (brs, 1H), 7,93 (s, 1H), 4,69-4,78 (m, 1H), 4,25 (s, 2H), 1,16 (d, J = 6,4 Hz, 6H) Exemplo 44> Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1- ciclopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida
Etapa 1: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-ciclopropil- 4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida
[00212] 40 mg de ácido 2-((1-ciclopropil-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,150 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 23, 36 mg de 5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,224 mmol) e 76 mg de CMPI (0,298 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 52 μl de DIPEA (0,298 mmol) foram adicionados e agitados a 50ºC durante 18 horas. Após a conclusão da reação, água foi adicionada para precipitar, lavada com água e éter etílico e filtrada para dar 23,2 mg do composto do título sólido (0,060 mmol) em 43% de rendimento. 1 H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 13,37 (brs, 1H), 12,63 (brs, 1H), 7,89 (s, 1H), 4,29 (s, 2H), 3,61-3,66 (m, 1H), 0,94- 0,99 (m, 2H), 0,75-0,81 (m, 2H) Exemplo de preparação 24: Preparação de ácido 2-((1-(tetra-hidro-2H- piran-4-il)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidina-6- il)tio)propanoico Etapa 1: Preparação de etila 2-((4-oxo-1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5- di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetato
[00213] 300 mg de 6-cloro-1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-1,5-di-hidro-
4H-pirazolo[3,4-d]piridin-4-ona (1,178 mmol) oobtido no Exemplo de Preparação 17 Etapa 2, 488 mg de carbonato de potássio (3,534 mmol) e 319 μl de 2-mercaptopropionato de etila (2,474 mmol) foram dissolvidos em 5 mL de DMF, seguido de agitação a 90ºC por 5 horas e 30 minutos. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água, ácido clorídrico a 1N e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 2:1 -> 1:1, v/v) para dar 240 mg do composto do título sólido (0,681 mmol) com 58% de rendimento. Rf = 0,39 (hexano normal: acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 10,83 (brs, 1H), 8,05 (s, 1H), 4,69-4,82 (m, 1H), 4,50 (q, J = 7,4 Hz, 1H), 4,12-4,31 (m, 4H), 3,55-3,67 (m, 2H), 2,29- 2,45 (m, 2H), 1,85-1,98 (m, 2H), 1,70 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,29 (t, J = 7,0 Hz, 3H) Etapa 2: Preparação de 2-((1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio) ácido propanoico
[00214] 228 mg de etila 2-((1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanoato (0,647 mmol) preparado na Etapa 1 acima foram dissolvidos em 3 mL de tetra- hidrofurano e foi adicionado hidróxido de sódio a 2N e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e 30 minutos. Após a conclusão da reação, ela foi neutralizada com ácido clorídrico a 1N, extraída com acetato de etila e lavada com água e salmoura saturada. O resultante foi concentrado sob pressão reduzida para dar 178 mg do composto do título sólido (0,549 mmol) com 85% de rendimento.
H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,97 (brs, 1H), 12,58 (brs, 1H), 7,98 (s, 1H), 4,65-4,80 (m, 1H), 4,39 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 3,93-4,05 (m, 2H), 3,41-3,54 (m, 2H), 1,96-2,16 (m, 2H), 1,77-1,92 (m, 2H), 1,55 (d, J = 7,1 Hz, 3H) Exemplo 45: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo- 1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)propanamida Etapa 1: Preparação de N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- (tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)propanamida
[00215] 40 mg de ácido 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,123 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 24, 30 mg de 5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,185 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 4, e 54 mg de CIB (0,247 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 43 μl de DIPEA (0,247 mmol) foram adicionados, seguido de agitação a 50ºC por 16 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 -> metanol/diclorometano = 3%, v/v) para dar 25,6 mg do composto do título sólido (0,055 mmol) em 45%
de rendimento. Rf = 0,06 (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,14 (brs, 1H), 12,61 (brs, 1H), 7,97 (s, 1H), 4,66 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 4,46-4,60 (m, 1H), 3,91-4,01 (m, 1H), 3,63-3,72 (m, 1H), 3,42-3,53 (m, 1H), 3,20 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,97-3,03 (m, 1H), 1,74-2,07 (m, 3H), 1,57 (d, J = 7,1 Hz, 3H), 1,21-1,36 (m, 4H) Exemplo 46: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo- 1-(tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)propanamida Etapa 1: Preparação de N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- (tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)propanamida
[00216] 40 mg de ácido 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,123 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 24, 33 mg de 5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,185 mmol) e 54 mg de CIB (0,247 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 43 μl de DIPEA (0,247 mmol) foram adicionados, seguido por agitação a 50ºC durante 16 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 -
> metanol/diclorometano = 3%, v/v) para dar 6,8 mg do composto do título sólido (0,014 mmol) em 11% de rendimento. Rf = 0,12 (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,42 (brs, 1H), 12,63 (brs, 1H), 7,97 (s, 1H), 4,68 (q, J = 7,3 Hz. 1H), 4,49-4,62 (m, 1H), 3,92-4,02 (m, 1H), 3,68-3,78 (m, 1H), 3,42-3,54 (m, 1H), 3,03-3,15 (m, 1H), 1,75-2,07 (m, 3H), 1,58 (d, J = 7,3 Hz, 3H), 1,24-1,37 (m, 1H) Exemplo 47: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- (tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)propanamida Etapa 1: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- (tetra-hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)propanamida
[00217] 40 mg de ácido 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acético (0,123 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 24, 25 mg de 5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-amina (0,185 mmol) e 54 mg de CIB (0,247 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 43 μl de DIPEA (0,247 mmol) foram adicionados e agitados a 50ºC durante 16 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano:acetato de etila = 1:1 -> metanol/diclorometano = 3%, v/v) para dar 22,1 mg do composto do título sólido (0,05 mmol) em 41% de rendimento. Rf = 0,06 (hexano:acetato de etila = 1:1, v/v) 1 H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,41 (brs, 1H), 12,62 (brs, 1H), 7,97 (s, 1H), 4,68 (q, J = 7,4 Hz, 1H), 4,49-4,62 (m, 1H), 3,92-4,01 (m, 1H), 3,68-3,78 (m, 1H), 3,43-3,55 (m, 1H), 3,03-3,14 (m, 1H), 1,75-2,09 (m, 3H), 1,58 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,25-1,37 (m, 1H) Exemplo 48: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-(4,4- difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)propanamida Etapa 1: Preparação de N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-(4,4- difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)propanamida
[00218] 45 mg de ácido 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanoico (0,126 mmol) obtido no Exemplo de Preparação 18, 51 mg de 5-amino-2-clorotiazol (0,378 mmol) e 64 mg de iodo de 2-cloro-1-metil-piridínio (0,252 mmol) foram dissolvidos em 2 mL de DMF e 44 μl de DIPEA (0,252 mmol) foram adicionados e agitados a 50ºC durante 16 horas. Após a conclusão da reação, o resultante foi extraído com acetato de etila e lavado com água e salmoura saturada. O filtrado concentrado sob pressão reduzida foi purificado por cromatografia em coluna (hexano normal: acetato de etila = 1:1 -> metanol/diclorometano = 3%, v/v) para dar 44 mg do composto do título sólido (0,092 mmol) em 73% produção. Rf = 0,26 (metanol/diclorometano = 5%, v/v) 1 H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8,09 (s, 1H), 4,78-4,91 (m, 1H), 4,69 (q, J = 7,4 Hz, 1H), 1,99-2,46 (m, 6H), 1,75 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,24-1,30 (m, 2H)
[00219] As fórmulas estruturais químicas dos compostos preparados no Exemplo 1-48 são resumidas e mostradas na tabela 1 a seguir.
Tabela 1
[00220] A atividade inibitória dos compostos representativos de acordo com a presente invenção contra a fosfodiesterase 9A foi testada com base no ensaio de polarização (kit expresso de rastreio IMAP-FP) fornecido por MDS (MDS Analytical Technologies, Sunyvale, CA, EUA). Como solução tampão, uma solução de reação (uma solução de reação contendo Tween 20 a 0,01% fornecida por MDS foi diluída 5 vezes, em seguida, 5 mM de DTT são adicionados) e uma solução de detecção de polarização (solução de ligação A e B fornecida por MDS foram misturadas em proporção de 3:1 e foi adicionado reagente de ligação IMAP 1/600). 100 μM do substrato (substrato Fl-cGMP; MDS) foram preparados e 3,6 μg/mL da enzima PDE9A (ab54113; abcam). 3,6 μg/mL de PDE9A e 100 μM de substrato foram diluídos para 20 ng/mL (concentração de reação final: 5 ng/mL) e 400 nM (concentração de reação final: 100 nM), respectivamente. A solução tampão usada para todos os processos de diluição e preparação foi 1 × solução de reação com 1 mM de DTT adicionado, e a solução de detecção de polarização foi usada para induzir a polarização no final.
[00221] As amostras preparadas foram dispensadas em microplacas pretas (placas Multiwell 384 poços, # 3573, Corning Life Sciences, Lowell, MA, EUA) usando uma pipeta de 16 canais (multi 16 canais, Finnpipette, Thermo Scientific, Essex, UK). O volume total da reação por poço é de 20 µL. Neste momento, 10 µL de DMSO a 2%, 5 µL de solução de substrato e 5 µL de solução de reação foram usados como controle negativo e 10 µL de DMSO a 2%, 5 µL de solução de substrato e 5 µL de solução de PDE9A foram usados como um controle positivo. Como grupo experimental, 10 µL do composto preparado no exemplo, 5 µL da solução de substrato e 5 µL da solução de PDE9A foram usados. Após pré-tratamento entre o composto e a enzima ter sido realizado por cerca de 10 minutos antes da reação enzima-substrato, 5 µL de cGMP foram adicionados para induzir a reação enzimática. Durante a reação, cada composto, enzima e substrato ocuparam 50%, 25% e 25% do volume total, respectivamente, e eles foram preparados em altas concentrações de 2, 4 e 4 vezes, respectivamente, imediatamente antes da adição. Após a reação enzimática, eles foram agitados levemente por 1 minuto e a reação enzimática foi induzida em temperatura ambiente por 1 hora. Em seguida, 60 µL da solução de detecção de uma polarização preparada com antecedência foram adicionados para induzir a polarização.
[00222] Nanopartículas compostas de íons metálicos trivalentes são misturadas na solução de detecção de fluorescência, que se combina com o ácido fosfórico exposto por reação enzimática para aumentar o peso molecular e induzir polarização. Depois de deixá-lo por 2 horas em temperatura ambiente, o valor de polarização (Fluorescence Polarization, FP) foi medido usando um contador multilabel (Envision, PerkinElmer, Turku, Finlândia) (comprimento de onda de emissão: P- 535 nm, S-535 nm, comprimento de onda de excitação: 480 nm), e o resultado foi expresso como um valor IC50, que é a concentração do composto que inibiu PDE9A em 50% in vitro (Tabela 2). Tabela 2 Exemplo No. PDE9A (IC50, μM) Exemplo No. PDE9A (IC50, μM) 1 0,0004 25 0,012 2 0,010 26 0,009 3 0,34 27 0,0005 4 0,23 28 0,0001 5 0,18 29 0,0003 6 0,014 30 0,018 7 0,012 31 0,0001 8 0,019 32 0,0006 9 0,015 33 0,0004 10 0,15 34 0,001 11 0,010 35 0,001 12 0,007 36 0,0007 13 0,029 37 0,001
14 0,009 38 0,003 15 0,011 39 0,001 16 0,027 40 0,039 17 0,027 41 0,028 18 0,47 42 0,001 19 0,0006 43 0,003 20 0,019 44 0,036 21 0,0004 45 0,0001 22 0,10 46 0,0002 23 0,010 47 0,0001 24 0,041 48 0,0003

Claims (10)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é representado pela seguinte fórmula química 1, [Fórmula Química 1] em que na Fórmula Química 1, A1 é NH ou N-C1-2 alquila, A2 é H, C1-5 alquila linear ou ramificada ou fenila, X é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em -H, halogênio, -NO2, -CN, -SR1, C1-10 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C1-10 alcóxi linear ou ramificado não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C6-10 arila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada, e C6-10 arilóxi não substituído ou substituído por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada, Y é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em C1-10 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C3-10 cicloalquila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios, heterocicloalquila de 6-10 membros compreendendo heteroátomo O ou S não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C1-10 alcóxi linear ou ramificado não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C6-10 arila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada e C6-10 arilóxi não substituído ou substituído por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada,
R1 é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em C1-10 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C1-10 alcóxi linear ou ramificado não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C6-10 arila não substituída ou substituída por um ou mais halogênio ou C1-10 alquila linear ou ramificada, C1-2 alquil-C6-10 arila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada e C6-10 arilóxi não substituído ou substituído por um ou mais halogênios ou C1 -10 alquila linear ou ramificada.
2. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que A1 é NH ou N-C1-2 alquila, A2 é H, C1-5 alquila linear ou ramificada ou fenila, X é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em -H, halogênio, -NO2, -CN, -SR1, C1-5 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C1-5 alcóxi linear ou ramificado não substituído ou substituído por um ou mais halogênios e fenila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios ou C 1- 10 alquila linear ou ramificada, Y é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em C1-6 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C3-6cicloalquila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios, heterocicloalquila com 6-8 membros compreendendo Heteroátomo O ou S não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, alcóxi linear ou ramificado C1-6 não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C6-10 arila não substituída ou substituída por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada e C6-10 arilóxi não substituído ou substituído por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada, e R1 é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em C1-6 alquila linear ou ramificada não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C1-6 alcóxi linear ou ramificado não substituído ou substituído por um ou mais halogênios, C6-10 arila não substituída ou substituída por um ou mais halogênio ou C1-10 alquila linear ou ramificada e C6-10 arilóxi não substituído ou substituído por um ou mais halogênios ou C1-10 alquila linear ou ramificada.
3. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que A1 é NH ou NCH3, A2 é H, CH3 ou fenila, X é um substituinte selecionado a partir do grupo consistindo em -H, -Cl, -Br, -SR1, metila, etila, t-butila, trifluorometila, metóxi, etóxi, isopropóxi, fenila, 4-fluorofenila e 4-metilfenila, Y é fenila, 4-fluorofenila, 4,4-difluorociclo-hexila, pirano, tiopirano, isopropila ou ciclopropila, e R1 é metila, etila, isopropila, propila, benzila, 4-metilbenzila ou 4-clorobenzila.
4. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é (1) 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2- il)acetamida; (2) N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil-4,5- di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (3) N-(5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil-4,5- di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (4) 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-6-il)tio)-N-(1,3,4-tiadiazol -2-il)acetamida; (5) N-(5-etil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-
hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (6) N-(5-(benziltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(4-oxo-1-fenil- 4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (7) N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil-4,5- di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (8) N-(5-((4-clorobenzil)tio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(4-oxo- 1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (9) N-(5-((4-metilbenzil)tio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-(4-oxo- 1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (10) N-(5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil-4,5- di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanamida; (11) N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil-4,5- di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanamida; (12) N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil-4,5- di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)propanamida; (13) N-(5-(metiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil- 4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (14) N-(5-(isopropiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (15) N-(5-(propiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil- 4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (16) N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-(4-fluorofenil)- 4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (17) N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-(4-fluorofenil)- 4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (18) N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-N-metil-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (19) 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2- il)acetamida;
(20) 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d] pirimidin-6-il)tio)-N-(5-(p-tolil)-1,3,4-tiadiazol-2-il) propanamida; (22) N-(5-(terc-butil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil- 4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (23) N-(5-(4-fluorofenil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1- fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (24) N-(5-fenil-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di- hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (25) 2-((4-oxo-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-(p-tolil)-1,3,4-tiadiazol-2-il)acetamida; (26) N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil-4,5- di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-2-fenilacetamida; (27) N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-(tetra- hidro-2H-piran-4-il)-4,5 -di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida; (28) 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2- il)propanamida; (29) N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-(tetra- hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5 -di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida; (30) N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-fenil-4,5- di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (31) 2-((1-(4,4-difluorociclo-hexil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)-N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2- il)propanamida; (32) N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-(tetra- hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5-di-hidro -1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida; (33) N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-(tetra-
hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro -1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida; (34) N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-ciclo-hexil-4- oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (35) N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-ciclo-hexil-4- oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (36) N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-(tetra- hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro -1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida; (37) N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-isopropil-4- oxo-4,5-dihydro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (38) N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-isopropil-4-oxo- 4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (39) N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-(tetra- hidro-2H-tiopiran-4-il)-4,5-di-hidro -1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)acetamida; (40) N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-ciclopropil-4- oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (41) N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-ciclopropil-4- oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (42) N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-ciclo-hexil-4-oxo- 4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (43) N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-isopropil-4-oxo- 4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (44) N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-ciclopropil-4-oxo- 4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6-il)tio)acetamida; (45) N-(5-(etiltio)-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-(tetra- hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)propanamida; (46) N-(5-bromo-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-(tetra-
hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)propanamida; (47) N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((4-oxo-1-(tetra- hidro-2H-piran-4-il)-4,5-di-hidro -1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)propanamida; ou (48) N-(5-cloro-1,3,4-tiadiazol-2-il)-2-((1-(4,4- difluorociclo-hexanil)-4-oxo-4,5-di-hidro-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-6- il)tio)propanamida.
5. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende o composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
6. Composição farmacêutica para tratar ou prevenir uma doença relacionada com a Fosfodiesterase 9A, caracterizada pelo fato de que compreende o composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4 como um ingrediente ativo.
7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que a doença é uma doença neurológica ou uma doença mental.
8. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que o distúrbio neurológico ou mental é a doença de Alzheimer, doença de Huntington, demência de corpos de Lewy ou síndrome de Pick.
9. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que a doença é insuficiência cardíaca, em particular insuficiência cardíaca que preserva o débito cardíaco ou doença falciforme.
10. Uso do composto ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações
1 a 4, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de uma composição farmacêutica ou medicamento para tratar ou prevenir uma doença relacionada com a Fosfodiesterase 9A.
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