BR112021008358A2

BR112021008358A2 - bactérias ácido-lácticas inovadoras e uso das mesmas

Info

Publication number: BR112021008358A2
Application number: BR112021008358-8A
Authority: BR
Inventors: Dong-Hyun Kim; Myung Joo Han
Original assignee: University-Industry Cooperation Group Of Kyung Hee University; Navipharm Co, Ltd
Priority date: 2017-11-02
Filing date: 2019-04-30
Publication date: 2021-08-03
Also published as: AU2021269282B2; US11554146B2; US20230181656A1; US20210260140A1; JP6964191B2; WO2019088379A1; SG11202104408UA; KR102151666B1; KR102173547B1; AU2021269282A1; CN113302279A; US20230181657A1; KR20200104848A; AU2018358456B2; EP3875576A1; CA3081210A1; JP2021501586A; CA3081210C; EP3875576A4; KR20190050294A

Abstract

BACTÉRIAS ÁCIDO-LÁCTICAS INOVADORAS E USO DAS MESMAS. A presente revelação se refere a Lactobacillus plantarum NK3 e Bifidobacterium longum NK49, que são bactérias ácido-lácticas inovadoras e, mais particularmente, a uma composição que compreende bactérias ácido-lácticas inovadoras que são úteis para a prevenção ou tratamento de distúrbios da menopausa feminina.

Description

“BACTÉRIAS ÁCIDO-LÁCTICAS INOVADORAS E USO DAS MESMAS” Campo Técnico

[0001] A presente revelação se refere a Lactobacillus plantarum NK3 e Bifidobacterium longum NK49, que são bactérias ácido-lácticas inovadoras e, mais particularmente, a uma composição que compreende bactérias ácido-lácticas inovadoras que são úteis para prevenção e tratamento de transtornos da menopausa feminina. Antecedentes

[0002] Os micróbios intestinais existentes em um corpo vivo podem ser classificados para cada indivíduo, e esses micróbios são conhecidos por estarem envolvidos em vários metabolismos nos tratos intestinais. Em particular, os micróbios intestinais relacionados à obesidade são um dos campos bem conhecidos, e foi relatado que pessoas obesas têm micróbios intestinais abundantemente envolvidos no metabolismo de carboidratos, gorduras, aminoácidos e similares. Além disso, substâncias como butirato ou acetato, que são produzidas pelo metabolismo de micróbios intestinais, são fatores importantes para a imunidade dos tratos intestinais e também são conhecidos por proteger o corpo vivo contra infecções com patógenos através da regulação da produção de células T auxiliares ou reação como o receptor de proteína G 43 (GPR43) etc. Além disso, os micróbios intestinais foram apontados como a causa de várias doenças além daquelas no intestino grosso, como doença inflamatória intestinal ou câncer de cólon.

[0003] Em um estudo recente no corpo humano, tentou-se encontrar uma correlação entre os níveis hormonais e os micróbios intestinais em mulheres na pré-menopausa e na pós- menopausa, mas o estudo simplesmente confirmou o grau de diminuição no número total de micróbios em vez de promover uma mudança específica nos micróbios.

[0004] No entanto, esse estudo indica que uma mudança hormonal causa uma mudança nos micróbios intestinais, relatando, assim, que os micróbios intestinais têm uma influência na regulação do estrogênio no corpo vivo através de circulação entero-hepática.

[0005] Um alto nível de estrogênio in vivo é conhecido por aumentar a incidência de câncer de mama, e um baixo nível de estrogênio é conhecido por aumentar a incidência de osteoporose e, assim, considera-se importante controlar um nível apropriado de estrogênio no corpo. No entanto, esse controle se torna um problema difícil na menopausa das mulheres. Consequentemente, existe uma necessidade de pesquisa para regular o estrogênio, um tipo de hormônio feminino, através da interação entre o corpo vivo e os micróbios intestinais, e também de tratar os transtornos da menopausa feminina e aliviar os sintomas da menopausa.

[0006] [Referência à Técnica Relacionada]

[0007] [Documento Não Patentário]

[0008] (Documento Não Patentário 1) Sexually Transmitted Diseases, novembro de 2006, vol 33, nº 11, 663-665.

[0009] (Documento Não Patentário 2) Bacteria and the Fate of Estrogen in the Environment 2017, vol 24, Edição 6 Descrição Detalhada da Invenção Problema Técnico

[0010] Um objetivo da presente revelação é proporcionar bactérias ácido-lácticas inovadoras, Lactobacillus plantarum e Bifidobacterium longum.

[0011] Outro objetivo da presente revelação é proporcionar uma composição para prevenir ou tratar transtornos da menopausa feminina, compreendendo bactérias ácido-lácticas inovadoras.

[0012] Ainda outro objetivo da presente revelação é proporcionar um alimento funcional para a saúde para prevenir ou melhorar transtornos da menopausa feminina, compreendendo bactérias ácido-lácticas inovadoras. Solução Técnica

[0013] Em um aspecto para alcançar os objetivos, a presente revelação proporciona Lactobacillus plantarum NK3 (instituição depositária: Centro de Cultura de Microrganismos da Coreia (KCCM - Korean Culture Center de Microorganisms), data de depósito: 04 de agosto de 2017, e número de acesso: KCCM12089P).

[0014] O Lactobacillus plantarum NK3 da presente revelação tem uma característica de ser uma bactéria ácido- láctica inovadora de Lactobacillus plantarum, que é isolada e identificada a partir de kimchi, que é um alimento fermentado tradicional.

[0015] Uma sequência de 16S rDNA para identificação e classificação de Lactobacillus plantarum NK3 da presente revelação é igual à SEQ ID NO: 1 anexada ao presente relatório descritivo. Assim, o Lactobacillus plantarum NK3 da presente revelação pode incluir a sequência de 16S rDNA de SEQ ID NO: 1.

[0016] Como resultado da análise da sequência de 16S rDNA de SEQ ID NO: 1, essa sequência era 99 % homóloga àquela de cepas de Lactobacillus plantarum geralmente conhecidas,

mostrando, assim, uma relação filogenética molecular mais elevada com Lactobacillus plantarum. Assim, a bactéria ácido-láctica foi identificada como Lactobacillus plantarum, que foi, em seguida, denominada como Lactobacillus plantarum NK3, e depositada no KCCM em 04 de agosto de 2017 (número de acesso: KCCM12089P).

[0017] O Lactobacillus plantarum NK3 da presente revelação é uma bactéria gram-positiva e uma forma celular do mesmo é bacillus. Mais especificamente, as propriedades fisiológicas do Lactobacillus plantarum NK3 podem ser analisadas de acordo com um método convencional na técnica, e seus resultados são mostrados na tabela 2 abaixo. Especificamente, o Lactobacillus plantarum NK3 pode usar os seguintes como uma fonte de carbono: L-arabinose, D-ribose, D-galactose, D-glicose, D-frutose, D-manose, manitol, sorbitol, α-metil-D-manosídeo, N-acetil-glucosamina, amigdalina, arbutina, esculina, salicina, celobiose, maltose, lactose, melibiose, sacarose, trealose, melezitose, gentiobiose, D-turanose e gluconato.

[0018] Em outro aspecto para alcançar os ditos objetivos, a presente revelação proporciona Bifidobacterium longum NK49 (instituição depositária: Centro de Cultura de Microrganismos da Coreia (KCCM - Korean Culture Center de Microorganisms), data de depósito: 04 de agosto de 2017, e número de acesso: KCCM12088P).

[0019] O Bifidobacterium longum NK49 da presente revelação tem uma característica de ser uma bactéria ácido- láctica inovadora de Bifidobacterium longum, que é isolada e identificada a partir de fezes humanas.

[0020] Uma sequência de 16S rDNA para identificação e classificação de Bifidobacterium longum NK49 da presente revelação é igual à SEQ ID NO: 2 anexada ao presente relatório descritivo. Assim, o Bifidobacterium longum NK49 da presente revelação pode incluir a sequência de 16S rDNA de SEQ ID NO: 2.

[0021] Como resultado da análise da sequência de 16S rDNA de SEQ ID NO: 2, essa sequência era 99 % homóloga àquela de cepas de Bifidobacterium longum geralmente conhecidas, mostrando, assim, uma relação filogenética molecular mais elevada com Bifidobacterium longum. Assim, a bactéria ácido- láctica foi identificada como Bifidobacterium longum, que foi, em seguida, denominada como Bifidobacterium longum NK49, e depositada no KCCM em 04 de agosto de 2017 (número de acesso: KCCM12088P).

[0022] O Bifidobacterium longum NK49 da presente revelação é uma bactéria gram-positiva e uma forma celular do mesmo é bacillus. Mais especificamente, as propriedades fisiológicas do Bifidobacterium longum NK49 podem ser analisadas de acordo com um método convencional na técnica, e seus resultados são mostrados na tabela 3 abaixo. Especificamente, o Bifidobacterium longum NK49 pode usar os seguintes como uma fonte de carbono: L-arabinose, D-ribose, D-xilose, D-galactose, D-glicose, D-frutose, manitol, sorbitol, α-metil-D-glucosídeo, esculina, salicina, maltose, lactose, melibiose, sacarose, rafinose e D-turanose.

[0023] Em outro aspecto para alcançar os objetivos, a presente revelação proporciona uma composição farmacêutica para prevenir ou tratar transtornos da menopausa feminina, compreendendo Lactobacillus plantarum NK3 KCCM12089P, Bifidobacterium longum NK49 KCCM12088P ou uma mistura dos mesmos.

[0024] Na presente revelação, "transtorno da menopausa feminina" se refere a todas as doenças que ocorrem no período da menopausa, que aparecem como um sinal da perda das funções reprodutivas femininas. Quando a menopausa chega, a quantidade ou ciclo de menstruação se torna irregular devido à perda das funções ovarianas, e a menstruação é abolida devido a uma diminuição na secreção do hormônio folicular (estrogênio) por vários meses a três anos, o que resulta na atuação no centro nervoso autônomo do interencéfalo e causa a atrofia do sistema nervoso autônomo, causando, desse modo, transtornos da menopausa. Além disso, o mau funcionamento da glândula pituitária anterior acelera as funções corticais adrenais que causam a masculinização, e a influência dos hormônios da tireoide leva à anormalidade das funções da glândula tireoide, resultando, assim, em um mau funcionamento peculiar da menopausa, como causar obesidade etc. Por exemplo, esse mau funcionamento pode levar a sintomas como um rubor quente, palpitação (batimento cardíaco mais forte do que o normal, fazendo com que o coração ressoe), tontura, zumbido, pressão sanguínea alta, problemas digestivos, dor de cabeça, perda de memória, depressão etc., bem como ganho de peso, obesidade, osteoporose etc.

[0025] Especificamente, as cepas de Lactobacillus plantarum NK3 e Bifidobacterium longum NK49 contidas na composição farmacêutica da presente revelação podem ser misturadas a uma razão de 1:1 a 4:1 unidade de formação de colônia (CFU), mas não estão limitadas à mesma.

[0026] Em um exemplo da presente revelação, confirmou-se que cada uma das cepas de Lactobacillus plantarum NK3 ou Bifidobacterium longum NK49, bem como uma mistura dessas cepas tem um efeito nos transtornos da menopausa feminina e, em particular, confirmou-se que uma mistura na qual as cepas de Lactobacillus plantarum NK3 e Bifidobacterium longum NK49 são misturadas a uma razão de 1:1 a 4:1 CFU mostra um efeito de melhora dos índices de osteoporose em um nível semelhante ao grupo de controle positivo que recebeu administração de estradiol semelhante ao estrogênio (FIGs. 1 a 3 e Tabela 4), e mostra um efeito de melhora dos índices de obesidade (FIGs. 4 a 5 e Tabela 6).

[0027] O “Lactobacillus plantarum NK3” da presente revelação é o mesmo descrito acima.

[0028] Especificamente, o Lactobacillus plantarum NK3 e Bifidobacterium longum NK49 KCCM12088P contidos na composição farmacêutica da presente revelação podem ser um corpo bacteriano vivo do mesmo, um corpo bacteriano morto do mesmo, uma cultura do mesmo, um lisado do mesmo ou um extrato do mesmo, respectivamente, mas qualquer tipo de Lactobacillus plantarum NK3 pode ser usado sem limitação, desde que possa alcançar um efeito preventivo ou terapêutico nos transtornos da menopausa feminina.

[0029] Na presente revelação, o termo “corpo bacteriano vivo” pode se referir a um corpo bacteriano que esteja vivo, e “corpo bacteriano morto” pode significar um corpo bacteriano que esteja esterilizado por tindalização, aquecimento, pressurização, tratamento com fármaco etc.

[0030] Na presente revelação, o termo “cultura” também pode se referir a um produto obtido cultivando-se bactérias ácido-lácticas em um meio líquido ou sólido geralmente conhecido, e pode ser um conceito de abranger bactérias ácido-lácticas inovadoras na presente revelação.

[0031] Na presente revelação, o termo “lisado” também pode se referir a um hidrolisado obtido modificando-se o corpo bacteriano vivo ou morto ou um produto obtido lisando- se o corpo bacteriano vivo ou morto através de força química ou física como homogeneização, sonicação ultrassônica etc.

[0032] Na presente revelação, o termo “extrato” também pode se referir a um produto obtido extraindo-se um corpo bacteriano vivo, um corpo bacteriano morto, um lisado do mesmo, uma cultura do mesmo, ou uma mistura dos mesmos através de vários métodos de extração conhecidos na técnica, e é um conceito de abranger todos os materiais que podem ser obtidos processando-se ou tratando-se o extrato resultante através de outros métodos após a extração.

[0033] O “Bifidobacterium longum NK49” da presente revelação é o mesmo descrito acima.

[0034] Especificamente, o Bifidobacterium longum NK49 contido na composição farmacêutica da presente revelação pode ser um corpo bacteriano vivo do mesmo, um corpo bacteriano morto do mesmo, uma cultura do mesmo, um lisado do mesmo, ou um extrato do mesmo, mas qualquer tipo de Lactobacillus plantarum NK3 pode ser usado sem limitação, desde que possa alcançar um efeito preventivo ou terapêutico nos transtornos da menopausa feminina.

[0035] Na presente revelação, transtornos da menopausa feminina podem incluir sintomas vasomotores como suor, rubor facial e similares; doenças mentais como depressão, ansiedade e similares; doenças urinárias como ressecamento vaginal, atrofia vaginal, incontinência urinária e similares;

doenças metabólicas como obesidade, hipertensão, diabetes e similares; envelhecimento da pele e osteoporose, e especificamente osteoporose, obesidade ou depressão, mas não estão limitadas às mesmas.

[0036] Em um exemplo da presente revelação, como resultado da administração de Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49 ou uma mistura dos mesmos a um modelo animal com osteoporose induzida, confirmou-se que o peso do útero e do fêmur é aumentado em um nível semelhante ao grupo que recebeu administração de estradiol semelhante ao estrogênio (FIGs. 1 e 2), enquanto o comprimento do fêmur voltou a ser semelhante ao grupo normal (FIG. 3). Também se confirmou que uma atividade da enzima fosfatase alcalina (AP) ocorre em um nível semelhante ao grupo que recebeu administração de estradiol, e a atividade da enzima AP, a concentração de osteocalcina, fósforo e cálcio voltou a ser semelhante ao grupo normal em comparação com o grupo de controle de um modelo animal com ovários removidos.

[0037] Além disso, em um exemplo da presente revelação, como resultado da administração de Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49 ou uma mistura dos mesmos a um modelo animal com obesidade induzida, mostrou-se que uma perda de peso ocorre em um nível semelhante ao grupo que recebeu administração de estradiol, e confirmou-se que a expressão de SREBP-1c é inibida, e a expressão de PGC-1α é induzida junto com a atividade de AMPK (FIG. 5) em comparação com o grupo de controle do modelo animal com ovários removidos, confirmando, desse modo, que a obesidade é inibida (Tabela. 6).

[0038] Além disso, em um exemplo da presente revelação,

como resultado da administração de Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49 ou uma mistura dos mesmos a um modelo animal com depressão induzida por estresse de contenção, confirmou-se que uma concentração de corticosterona, que é um hormônio induzido por estresse, é diminuída (FIG. 6), e os índices comportamentais de sintomas depressivos são melhorados (FIGs. 7 a 9), mostrando, desse modo, um efeito na depressão.

[0039] Os resultados acima sugerem que bactérias ácido- lácticas inovadoras e uma mistura das mesmas de acordo com a presente revelação têm um efeito de tratamento e melhora dos transtornos da menopausa feminina em um nível semelhante ao estrogênio.

[0040] A composição farmacêutica de acordo com a presente revelação pode ser preparada em uma forma de dosagem farmacêutica usando um método bem conhecido na técnica, de modo a proporcionar uma liberação rápida, suspensa ou prolongada de um ingrediente ativo da mesma após ser administrada em um mamífero. Durante a preparação de uma forma de dosagem, a composição farmacêutica de acordo com a presente revelação pode conter ainda um veículo farmaceuticamente aceitável, na medida em que tal veículo não suprima uma atividade de bactérias ácido-láticas inovadoras.

[0041] O veículo farmaceuticamente aceitável pode incluir aqueles usados convencionalmente, por exemplo, lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, xilitol, eritritol, maltitol, amido, goma de acácia, alginato, gelatina, fosfato de cálcio, silicato de cálcio, celulose, metilcelulose, celulose microcristalina, polivinil pirrolidona, água,

hidroxibenzoato de metila, hidroxibenzoato de propila, talco, estearato de magnésio, óleo mineral e similares, mas não está limitado aos mesmos. Além disso, a composição farmacêutica da presente revelação pode conter um diluente ou um excipiente como carga, extensor, ligante, umectante, desintegrante, tensoativo etc., ou outros aditivos farmaceuticamente aceitáveis.

[0042] Uma dosagem da composição farmacêutica de acordo com a presente revelação precisa ser uma quantidade farmaceuticamente eficaz. A “quantidade farmaceuticamente eficaz” pode se referir a uma quantidade suficiente para prevenir ou tratar transtornos da menopausa feminina em uma relação benefício/risco razoável aplicável ao tratamento médico. Um nível de dose eficaz pode ser selecionado de forma variada pelos versados na técnica dependendo de fatores como um método de formulação, condição e peso do paciente, gênero do paciente, idade e grau da doença, forma do fármaco, via e período de administração, taxa de excreção, sensibilidade da reação etc. A quantidade eficaz pode variar dependendo da via de descarte, uso do excipiente e da possibilidade de ser usado com outros fármacos, conforme reconhecido pelos versados na técnica.

[0043] No entanto, no caso de uma preparação para administração oral para obter um efeito preferido, a composição da presente revelação pode ser geralmente administrada a um adulto em uma quantidade de 0,0001 a 100 mg/kg por dia, de preferência 0,001 a 100 mg/kg por dia com base em 1 kg de peso corporal. Quando a preparação é administrada como acima, o Lactobacillus plantarum NK3, o Bifidobacterium longum NK49 ou uma mistura dos mesmos, de acordo com a presente revelação, podem ser administrados em uma quantidade de 1 x 102 CFU/kg a 1 x 1011 CFU/kg por dia. Essa administração pode ser realizada uma vez por dia ou várias vezes por dia dividindo-se a preparação. A dita dosagem não limita o escopo da presente revelação em nenhum aspecto.

[0044] A composição farmacêutica da presente revelação pode ser administrada a mamíferos como camundongos, gado, seres humanos etc. através de várias vias. Especificamente, a composição farmacêutica da presente revelação pode ser administrada de modo oral ou parenteral (por exemplo, aplicada ou injetada de modo intravenoso, subcutâneo ou intraperitoneal), mas pode ser preferencialmente administrado de modo oral. Uma preparação sólida para administração oral pode incluir pó, grânulo, comprimido, cápsula, cápsula mole, pílula, etc. Uma preparação líquida para administração oral pode incluir um agente de suspensão, um líquido para uso interno, emulsão, xarope, aerossol etc., mas também pode incluir vários excipientes, por exemplo, umectante, agente adoçante, agente aromatizante, conservante etc., além de água e parafina líquida, que são diluentes simples frequentemente usados. Uma preparação para administração parenteral pode ser usada sendo formulada em uma forma de dosagem de preparação externa e preparação injetável esterilizada como solução aquosa esterilizada, solvente líquido não aquoso, agente de suspensão, emulsão, colírio, pomada para os olhos, xarope, supositório, aerossol etc., de acordo com os respectivos métodos convencionais e preferencialmente pode ser usada preparando uma composição farmacêutica em creme, gel, adesivo, aspersão, pomada,

emplastro, loção, linimento, pomada para os olhos, colírio, pasta ou cataplasma, mas não está limitada aos mesmos. Uma preparação para administração local pode ser na forma anidra ou aquosa, dependendo de uma prescrição médica. Como o solvente não aquoso e o agente de suspensão, podem ser usados propilenoglicol, polietilenoglicol, óleo vegetal como azeite, éster injetável como oleato de etila etc. Uma base do supositório pode incluir witepsol, macrogol, tween 61, manteiga de cacau, laurinum, glicerogelatina etc.

[0045] Em outro aspecto para alcançar os objetivos, a presente revelação proporciona um método para prevenir ou tratar transtornos da menopausa feminina, compreendendo uma etapa de administrar Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49 ou uma mistura dos mesmos a um indivíduo.

[0046] Na presente revelação, os termos “Lactobacillus plantarum NK3”, “Bifidobacterium longum NK49”, “administração”, “taxa de mistura das cepas inovadoras”, “transtornos da menopausa feminina” e similares são os mesmos descritos acima.

[0047] O indivíduo pode se referir a um animal e pode ser tipicamente um mamífero, no qual o tratamento usando as bactérias ácido-lácticas inovadoras da presente revelação pode mostrar um efeito benéfico. Um exemplo preferencial desse indivíduo pode incluir primatas como seres humanos. Além disso, esses indivíduos podem incluir todos os indivíduos que tenham um sintoma de transtornos da menopausa feminina, ou que tenham um risco de ter o sintoma.

[0048] Em outro aspecto, a presente revelação proporciona um alimento funcional para a saúde para prevenir ou melhorar transtornos da menopausa feminina, contendo Lactobacillus plantarum NK3 KCCM12089P, Bifidobacterium longum NK49 KCCM12088P ou uma mistura dos mesmos.

[0049] Na presente revelação, os termos “Lactobacillus plantarum NK3”, “Bifidobacterium longum NK49”, “taxa de mistura das cepas inovadoras”, “transtornos da menopausa feminina” e similares são os mesmos descritos acima.

[0050] O alimento funcional para a saúde, que enfatiza uma função do alimento de modulação do corpo, é um alimento ao qual se dá valor agregado ao trabalho e expressão para um propósito particular usando um método físico, bioquímico ou de bioengenharia. Um ingrediente desse alimento funcional para a saúde é projetado e processado para exercer completamente uma função de modulação do corpo in vivo, que está envolvida na defesa de um corpo vivo, no ajuste do ritmo do corpo, na prevenção de uma doença e na recuperação da doença, e pode conter aditivos alimentares suplementares, adoçantes ou matérias-primas funcionais, que são aceitáveis como alimento.

[0051] No caso de usar Lactobacillus plantarum NK3 ou Bifidobacterium longum NK49 da presente revelação como um alimento funcional para a saúde (ou aditivo para bebida funcional para a saúde), as bactérias ácido-lácticas inovadoras podem ser adicionadas ao mesmo per se, usadas junto com outros alimentos ou ingredientes alimentares, ou usadas apropriadamente de acordo com um método convencional. Uma quantidade mista do Lactobacillus plantarum NK3 ou do Bifidobacterium longum NK49 pode ser apropriadamente determinada dependendo da finalidade do seu uso (prevenção, saúde, melhoria ou ação terapêutica).

[0052] O alimento funcional para a saúde pode conter vários nutrientes, vitaminas, minerais (eletrólitos), agentes aromatizantes, como agentes aromatizantes sintéticos, agentes aromatizantes naturais e similares, agentes corantes e intensificadores (queijo, chocolate etc.), ácido péctico e seus sais, ácido orgânico, espessantes coloidais de proteção, agentes de ajuste de pH, estabilizantes, conservantes, glicerina, álcool, carbonatadores usados em bebidas carbonatadas etc. Além disso, o alimento funcional para a saúde da presente revelação pode conter polpa para preparar bebidas à base de frutas e vegetais. Esses ingredientes podem ser usados em separado ou em combinação, e uma razão dos aditivos geralmente é selecionada dentro de uma faixa de 0,001 a 50 partes em peso com base no peso total da composição.

[0053] Um tipo de alimento funcional para a saúde não tem nenhuma limitação específica. O alimento, ao qual o Lactobacillus plantarum NK3 ou o Bifidobacterium longum NK49 podem ser adicionados, pode incluir salsichas, carnes, pão, chocolates, salgadinhos, doces, produtos de confeitaria, macarrão instantâneo, pizza, outros tipos de macarrão, gomas de mascar, produtos lácteos incluindo sorvetes, sopas diversas, bebidas, chás, bebidas saudáveis, bebidas alcoólicas, complexos vitamínicos e similares. No caso de ser formulado em bebidas, os ingredientes líquidos que são adicionados às bebidas além das bactérias ácido-lácticas inovadoras, podem incluir vários agentes flavorizantes, carboidratos naturais ou similares como um ingrediente adicional, tal como contido nas bebidas convencionais, mas não estão limitados aos mesmos. Os carboidratos naturais mencionados acima podem ser monossacarídeos (por exemplo, glicose, frutose etc.), dissacarídeos (por exemplo, maltose, sacarose etc.) e polissacarídeos (por exemplo, açúcar convencional, como dextrina, ciclodextrina etc.), além de álcool de açúcar como xilitol, sorbitol, eritritol etc.

[0054] Em outro aspecto, a presente revelação proporciona um uso de Lactobacillus plantarum NK3 KCCM12089P, Bifidobacterium longum NK49 KCCM12088P ou uma mistura dos mesmos na fabricação de um medicamento para tratar transtornos da menopausa feminina.

[0055] Em outro aspecto, a presente revelação proporciona uma composição para um uso no tratamento de transtornos da menopausa feminina compreendendo Lactobacillus plantarum NK3 KCCM12089P, Bifidobacterium longum NK49 KCCM12088P ou uma mistura dos mesmos.

[0056] Em outro aspecto, a presente revelação proporciona um uso de Lactobacillus plantarum NK3 KCCM12089P, Bifidobacterium longum NK49 KCCM12088P ou uma mistura dos mesmos para tratar transtornos da menopausa feminina.

[0057] Na presente revelação, os termos “Lactobacillus plantarum NK3”, “Bifidobacterium longum NK49”, “um corpo bacteriano vivo, um corpo bacteriano morto, uma cultura, um lisado ou um extrato das cepas”, “uma taxa de mistura das cepas”, “transtornos da menopausa feminina” e similares são os mesmos descritos acima.

[0058] Os valores numéricos descritos no presente relatório descritivo conforme acima devem ser interpretados como incluindo uma faixa de seus equivalentes, salvo indicação em contrário. Efeitos Vantajosos

[0059] O Lactobacillus plantarum NK3, o Bifidobacterium longum NK49, ou uma mistura dos mesmos, que é uma bactéria ácido-láctica inovadora de acordo com a presente revelação, tem um efeito terapêutico excelente nos transtornos da menopausa feminina. Assim, as bactérias ácido-lácticas inovadoras de acordo com a presente revelação podem ser usadas como uma composição para prevenir ou tratar transtornos da menopausa feminina. Breve Descrição dos Desenhos

[0060] O LP nos desenhos indica os resultados do Lactobacillus plantarum NK3, enquanto o BP indica os resultados do Bifidobacterium longum NK49.

[0061] A FIG. 1 é um gráfico mostrando um efeito de aumento do peso do útero em relação a Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49 e uma mistura dos mesmos, que são bactérias ácido-lácticas inovadoras.

[0062] A FIG. 2 é um gráfico mostrando um efeito de aumento do peso do fêmur em relação a Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49 e uma mistura dos mesmos, que são bactérias ácido-lácticas inovadoras.

[0063] A FIG. 3 é um gráfico mostrando um efeito de recuperação do comprimento do fêmur em relação a Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49 e uma mistura dos mesmos, que são bactérias ácido-lácticas inovadoras.

[0064] A FIG. 4 é um gráfico mostrando uma capacidade inibidora da obesidade em relação a Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49 e uma mistura dos mesmos, que são bactérias ácido-lácticas inovadoras.

[0065] A FIG. 5 é uma imagem mostrando um efeito de aumento da atividade de AMPK em relação a Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49 e uma mistura dos mesmos, que são bactérias ácido-lácticas inovadoras.

[0066] A FIG. 6 é um gráfico mostrando um efeito nas concentrações de corticosterona em relação a Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49 e uma mistura dos mesmos, que são bactérias ácido-lácticas inovadoras.

[0067] A FIG. 7 é um gráfico mostrando um efeito de alívio da depressão através de um experimento de labirinto em cruz elevado (LCE) em relação a Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49 e uma mistura dos mesmos, que são bactérias ácido-lácticas inovadoras.

[0068] A FIG. 8 é um gráfico mostrando um efeito de alívio de depressão através de um teste do nado forçado (TNF) em relação a Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49 e uma mistura dos mesmos, que são bactérias ácido-lácticas inovadoras.

[0069] A FIG. 9 é um gráfico mostrando um efeito de alívio de depressão através de um teste de suspensão pela cauda (TSC) em relação a Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49 e uma mistura dos mesmos, que são bactérias ácido-lácticas inovadoras. Modo para a Invenção

[0070] Doravante, a presente revelação será descrita em detalhes através dos Exemplos preferenciais para compreender melhor a presente revelação. No entanto, os seguintes Exemplos são fornecidos apenas para o propósito de ilustrar a presente revelação e, assim, a presente revelação não se limita aos mesmos. Exemplo 1: Isolamento e identificação de bactérias ácido-

lácticas (1) Isolamento de bactérias ácido-lácticas a partir de fezes humanas

[0071] Fezes humanas foram dispostas e suspensas em meio de líquido GAM (caldo GAM; Nissui Pharmaceutical, Japão). Depois disso, o sobrenadante foi retirado e transplantado em meio ágar com BL (Nissui Pharmaceutical, Japão) e, em seguida, incubado anaerobicamente a 37 ℃ por cerca de 48 horas, depois disso as cepas formadoras de colônias foram isoladas. (2) Isolamento de bactérias ácido-lácticas a partir de kimchi

[0072] O kimchi de repolho, kimchi de rabanete ou kimchi de cebola verde foram triturados respectivamente, depois disso o sobrenadante triturado foi retirado e transplantado em meio ágar com MRS (Difco, EUA) e, em seguida, incubados anaerobicamente a 37 ℃ por cerca de 48 horas, depois disso as cepas formadoras de colônias foram isoladas. (3) Identificação das bactérias ácido-lácticas isoladas

[0073] As propriedades fisiológicas e as sequências de 16S rDNA das cepas isoladas a partir de fezes humanas ou kimchi foram analisadas para identificar as espécies das cepas e, em seguida, foram atribuídos nomes às cepas. Os nomes das cepas atribuídos a bactérias ácido-lácticas são os mesmos mostrados na tabela 1 abaixo. Especificamente, as bactérias ácido-lácticas isoladas a partir de kimchi foram cinco espécies de Lactobacillus plantarum (nº 1 a 5 da tabela 1), cinco espécies de Lactobacillus brevis (nº 6 a 10 da tabela 1), cinco espécies de Lactobacillus sakei (nº 11 a 15 da tabela 1) e cinco espécies de Lactobacillus curvatus (nº 16 a 20 da tabela 1). As bactérias ácido-lácticas isoladas a partir de fezes humanas foram cinco espécies de

Lactobacillus rhamnosus (nº 21 a 25 da tabela 1), cinco espécies de Lactobacillus plantarum (nº 26 a 30 da tabela 1), cinco espécies de Lactobacillus reuteri (nº 31 a 35 da tabela 1), quatro espécies de Lactobacillus johnsonii (nº 36 a 39 da tabela 1), três espécies de Lactobacillus mucosae (nº 40 a 42 da tabela 1), três espécies de Bifidobacterium adolescentis (nº 43 a 45 da tabela 1), e cinco espécies de Bifidobacterium longum (nº 46 a 50 da tabela 1).

[0074] 【Tabela 1】 Nº Nome da Cepa Nº Nome da Cepa 1 Lactobacillus 26 Lactobacillus plantarum NK1 plantarum NK26 2 Lactobacillus 27 Lactobacillus plantarum NK2 plantarum NK27 3 Lactobacillus 28 Lactobacillus plantarum NK3 plantarum NK28 4 Lactobacillus 29 Lactobacillus plantarum NK4 plantarum NK29 5 Lactobacillus 30 Lactobacillus plantarum NK5 plantarum NK30 6 Lactobacillus 31 Lactobacillus brevis NK6 reuteri NK31 7 Lactobacillus 32 Lactobacillus brevis NK7 reuteri NK32 8 Lactobacillus 33 Lactobacillus brevis NK8 reuteri NK33 9 Lactobacillus 34 Lactobacillus brevis NK9 reuteri NK34

Nº Nome da Cepa Nº Nome da Cepa 10 Lactobacillus 35 Lactobacillus brevis NK10 reuteri NK35 11 Lactobacillus 36 Lactobacillus sakei NK11 johnsonii NK36 12 Lactobacillus 37 Lactobacillus sakei NK12 johnsonii NK37 13 Lactobacillus 38 Lactobacillus sakei NK13 johnsonii NK38 14 Lactobacillus 39 Lactobacillus sakei NK14 johnsonii NK39 15 Lactobacillus 40 Lactobacillus sakei NK15 mucosae NK40 16 Lactobacillus 41 Lactobacillus curvatus NK16 mucosae NK41 17 Lactobacillus 42 Lactobacillus curvatus NK17 mucosae NK42 18 Lactobacillus 43 Bifidobacterium curvatus NK18 adolescentis NK43 19 Lactobacillus 44 Bifidobacterium curvatus NK19 adolescentis NK44 20 Lactobacillus 45 Bifidobacterium curvatus NK20 adolescentis NK45 21 Lactobacillus 46 Bifidobacterium rhamnosus NK21 longum NK46 22 Lactobacillus 47 Bifidobacterium rhamnosus NK22 longum NK47 23 Lactobacillus 48 Bifidobacterium rhamnosus NK23 longum NK48

Nº Nome da Cepa Nº Nome da Cepa 24 Lactobacillus 49 Bifidobacterium rhamnosus NK24 longum NK49 25 Lactobacillus 50 Bifidobacterium rhamnosus NK25 longum NK50 (4) Propriedades fisiológicas da bactéria ácido-láctica inovadora Lactobacillus plantarum NK3

[0075] Das cepas descritas na tabela 1 acima, confirmou- se que o Lactobacillus plantarum NK3 (número de acesso KCCM12089P) é um bacilo gram-positivo. Além disso, mostrou- se que 16S rDNA de Lactobacillus plantarum NK3 tem uma sequência de SEQ ID NO: 1. Como resultado da comparação da sequência de 16S rDNA de Lactobacillus plantarum NK3 por meio de pesquisa BLAST, uma cepa de Lactobacillus plantarum que tem a mesma sequência de 16S rDNA não foi encontrada, e confirmou-se que a sequência é 99 % homóloga à sequência de 16S rDNA de uma cepa de Lactobacillus plantarum geralmente conhecida. Das propriedades fisiológicas de Lactobacillus plantarum NK3, a disponibilidade da fonte de carbono foi analisada com um teste de fermentação de açúcar usando um kit API 50 CHL. Os resultados do mesmo são mostrados na tabela 2 abaixo. Na tabela 2 abaixo, “+” indica que a disponibilidade da fonte de carbono é positiva, e “-” indica que a disponibilidade da fonte de carbono é negativa.

[0076] 【Tabela 2】 Fonte de carbono NK3 Fonte de carbono NK3 CONTROLE - Esculina + Glicerol - Salicina +

Fonte de carbono NK3 Fonte de carbono NK3 Eritritol - Celobiose + D-arabinose - Maltose + L-arabinose + Lactose + D-ribose + Melibiose + D-xilose - Sacarose + L-xilose - Trealose + D-adonitol - Inulina - Metil-BD- - Melezitose + xilopiranosídeo D-galactose + Rafinose - D-glicose + Amido - D-frutose + Glicogênio - D-manose + Xilitol - L-sorbose - Gentiobiose + Rhamnosus - D-turanose + Dulcitol - D-lixose - Inositol - D-tagatose - Manitol + D-fucose - Sorbitol + L-fucose - α-metil-manosídeo ± D-arabitol - α-metil-glicosídeo - L-arabitol - N-acetil-glucosamina + Gluconato ± Amigdalina + 2-ceto-gluconato - Albutina + 5-ceto-gluconato - (5) Propriedades fisiológicas da bactéria ácido-láctica inovadora Bifidobacterium longum NK49

[0077] Das cepas descritas na tabela 1 acima, confirmou-

se que o Bifidobacterium longum NK49 (número de acesso KCCM12088P) é um bacilo gram-positivo. Além disso, mostrou- se que 16S rDNA de Bifidobacterium longum NK49 tem uma sequência de SEQ ID NO: 2. Como resultado da comparação da sequência de 16S rDNA de Bifidobacterium longum NK49 por meio de pesquisa BLAST, uma cepa de Bifidobacterium longum que tem a mesma sequência de 16S rDNA não foi encontrada, e confirmou-se que a sequência é 99 % homóloga à sequência de 16S rDNA de uma cepa de Bifidobacterium longum geralmente conhecida. Das propriedades fisiológicas de Bifidobacterium longum NK49, a disponibilidade da fonte de carbono foi analisada com um teste de fermentação de açúcar usando um kit API 50 CHL. Os resultados desse são os mesmos mostrados na tabela 3 abaixo. Na tabela 3 abaixo, “+” indica que a disponibilidade da fonte de carbono é positiva, e “-” indica que a disponibilidade da fonte de carbono é negativa.

[0078] 【Tabela 3】 Fonte de carbono NK49 Fonte de carbono NK49 CONTROLE - Esculina + Glicerol - Salicina + Eritritol - Celobiose - D-arabinose - Maltose + L-arabinose + Lactose + D-ribose + Melibiose + D-xilose ± Sacarose + L-xilose - Trealose - D-adonitol - Inulina - Metil-BD- - Melezitose - xilopiranosídeo

Fonte de carbono NK49 Fonte de carbono NK49 D-galactose + Rafinose + D-glicose + Amido - D-frutose + Glicogênio - D-manose - Xilitol - L-sorbose - Gentiobiose - Rhamnosus - D-turanose ± Dulcitol - D-lixose - Inositol - D-tagatose - Manitol + D-fucose - Sorbitol + L-fucose - α-metil-manosídeo - D-arabitol - α-metil-glicosídeo ± L-arabitol - N-acetil-glucosamina - Gluconato - Amigdalina - 2-ceto-gluconato - Albutina - 5-ceto-gluconato - Exemplo 2: Efeito terapêutico de bactérias ácido-lácticas na osteoporose em modelo animal (1) Preparação de modelo animal com osteoporose e administração de bactérias ácido-lácticas

[0079] Um experimento foi realizado usando seis camundongos C57BL/6 (fêmea, 21-23 g e 6 semanas de idade) por grupo após serem aclimatados em um laboratório por uma semana. Após os camundongos serem anestesiados com isoflurano, os ovários foram removidos dos mesmos para criar um modelo animal com osteoporose. A partir de uma semana após a remoção ovariana, Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49, uma mistura 1:1 dos mesmos, ou uma mistura 4:1 dos mesmos (uma razão de LP:BL é 4:1 e o mesmo abaixo), que é uma bactéria ácido-láctica inovadora, foi administrada de modo oral em uma quantidade diária de 1x109 CFU por seis dias por semana por cinco semanas. Além disso, 17β-estradiol (PC) foi administrado de modo intraperitoneal a 10 µg/kg/dia aos animais experimentais do grupo de controle positivo, e o grupo sham e o grupo experimental com ovários removidos receberam administração oral de solução salina fisiológica em vez de fármacos.

[0080] No dia seguinte, a administração de bactérias ácido-lácticas foi completada, os animais experimentais foram sacrificados e, em seguida, o sangue, fêmur, cólon, útero e fígado foram separados dos mesmos a fim de medir os índices de osteoporose. (2) Medição dos índices de osteoporose

[0081] A osteocalcina no sangue foi medida com um Kit ELISA de sistema R&D (Mineápolis, MN, EUA); Ca e P foram medidos com Reagentes ASAN Ca-Lq e Reagentes ASAN Pi-Lq da Asan Pharmaceutical Co., Ltd, respectivamente; e a atividade de fosfatase alcalina (AP) foi medida com um kit de ensaio colorimétrico de atividade de fosfatase alcalina (Sigma, EUA). (3) Resultados experimentais

[0082] Como resultado da criação do modelo animal com ovários removidos como descrito acima por seis semanas, o modelo animal correspondente mostrou uma diminuição no peso do útero (FIG. 1), uma diminuição no peso do fêmur (FIG. 2) e um aumento no comprimento do fêmur (FIG. 3). No entanto, em relação aos grupos que receberam administração de Lactobacillus plantarum NK3 (LP), Bifidobacterium longum NK49 (BL), uma mistura 1:1 dos mesmos (M1:1) e uma mistura

4:1 dos mesmos (LP:BL = 4:1, M4:1), confirmou-se que o peso do útero e do fêmur é aumentado em um nível semelhante ao grupo que recebeu administração de estradiol semelhante ao estrogênio (FIGs. 1 e 2), e o comprimento do fêmur é recuperado (FIG. 3).

[0083] Além disso, como resultado da criação do modelo animal com ovários removidos por seis semanas conforme descrito na tabela 4 abaixo, o modelo animal correspondente tendeu a mostrar um aumento na atividade de fosfatase alcalina (AP), um aumento na concentração de fósforo (P) e osteocalcina e uma diminuição de cálcio (Ca) no sangue. Entretanto, em relação aos grupos que receberam administração de Lactobacillus plantarum NK3 (LP), Bifidobacterium longum NK49 (BL), uma mistura 1:1 dos mesmos (M1:1) e uma mistura 4:1 dos mesmos (M4:1), de acordo com a presente revelação, confirmou-se que a atividade de fosfatase alcalina (AP) e a concentração de osteocalcina, fósforo e cálcio são recuperadas em um nível semelhante ao grupo que recebeu administração de estradiol.

[0084] 【Tabela 4】 Grupo Grupo Grupo de LP NK3 BL NK49 Mistura Mistura Grupo de normal induzido controle de de controle (Nor) (Sham) (Con) bactérias bactérias positivo ácido- ácido- (PC) lácticas lácticas (M1:1) (M4:1) AP (IU/l) 170,0±3,4 174,4±5,1 282,2±10,3 217,2±8,6 218,9±5,1 215,5±6,8 213,8±8,6 220,6±10,3 Ca 6,6±0,2 6,4±0,3 6,4±0,4 6,3±0,3 6,3±0,3 6,3±0,2 6,2±0,2 6,2±0,2 (mg/dl) P 11,2±0,2 11,8±0,9 12,5±1,5 12,1±1,4 11,5±1,2 11,9±1,1 11,8±0,9 12,1±1,1 (mg/dl) Osteocalcina 0,89±0,2 0,98±0,21 1,85±0,32 1,46±0,25 1,38±0,15 1,41±0,22 1,42±0,19 1,53±0,15 (㎍/l)

[0085] Os resultados acima sugerem que bactérias ácido-

lácticas inovadoras e uma mistura das mesmas de acordo com a presente revelação têm um efeito de tratamento de osteoporose, que é um dos sintomas de transtornos da menopausa feminina, em um nível semelhante ao estrogênio. Exemplo 3: Efeito de bactérias ácido-lácticas na melhora da obesidade em modelo animal (1) Preparação de modelo animal com obesidade induzida e administração de bactérias ácido-lácticas

[0086] Um experimento foi realizado usando seis camundongos C57BL/6 (fêmea, 21-23 g e 6 semanas de idade) por grupo após serem aclimatados em um laboratório por uma semana como descrito acima em (1) do Exemplo 2. Após os camundongos serem anestesiados com isoflurano e os ovários serem removidos dos mesmos, os camundongos resultantes foram criados por seis semanas a fim de criar um modelo animal com obesidade, mostrando um ganho de peso significativo. A partir de uma semana após a remoção ovariana, Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49, uma mistura 1:1 dos mesmos ou uma mistura 4:1 dos mesmos, que é uma bactéria ácido-láctica inovadora, foi administrada de modo oral em uma quantidade diária de 1x109 CFU por seis dias por semana por cinco semanas. Além disso, 17β-estradiol (PC) foi administrado de modo intraperitoneal a 10 µg/kg/dia aos animais experimentais do grupo de controle positivo, e o grupo sham e o grupo experimental com ovários removidos receberam administração oral de solução salina fisiológica em vez de fármacos.

[0087] No dia seguinte, a administração de bactérias ácido-lácticas foi completada, os animais experimentais foram sacrificados e, em seguida, o sangue, fêmur, cólon,

útero e fígado foram separados dos mesmos a fim de medir os índices de obesidade. O peso corporal foi medido uma vez por semana. (2) Medição de atividade de AMPK

[0088] A atividade de AMPK no fígado foi medida usando um método de immunoblotting. Especificamente, o fígado isolado foi colocado em um tampão de lise de ensaio de imunoprecipitação de rádio (RIPA, Pierce, Rockford, IL, EUA), pulverizado e centrifugado a 10000 g por 10 minutos a fim de obter um sobrenadante. Esse sobrenadante foi submetido à eletroforese em gel SDS-PAGE a 10 % e transferido para uma membrana. Após reação com anticorpos de AMPK, p-AMPK e β- actina durante a noite a 4 °C, o produto resultante foi submetido a uma reação com um anticorpo secundário e lavado. Em seguida, o produto resultante foi confirmado pelo desenvolvimento de cor com um reagente de quimiluminescência aprimorada (ECL). (3) Medição de expressão de SREBP-1c e PGC-1α

[0089] Uma expressão do fator de transcrição de ligação a elemento regulador de esterol 1c (SREBP-1c) e do coativador gama 1-alfa do receptor ativado por proliferador de peroxissomo (PGC-1α) foi medida usando uma reação em cadeia de polimerase de transcrição reversa quantitativa (qPCR).

[0090] Especificamente, o mRNA foi extraído do fígado isolado do modelo animal usando um kit de extração de mRNA Qiagen e, em seguida, a qPCR foi realizada usando agentes de pré-mistura SYBER com um termociclador Takara. A termociclagem foi realizada sob as seguintes condições usando os iniciadores na tabela 5 abaixo: Uma ativação de DNA polimerase foi realizada a 95 °C por 30 segundos e, em seguida, amplificada repetidamente 40 vezes enquanto era submetida a uma reação a 95 °C em um intervalo de 15 segundos e a 60 °C em um intervalo de 30 segundos. A quantidade final de genes expressos foi calculada em comparação com β-actina.

[0091] 【Tabela 5】 SEQ ID NO Iniciador Sequência 3 direto SREBP- 5'-AGC TGT CGG GGT AGC GTC 1c TG-3' 4 reverso SREBP- 5'-GAG AGT TGG CAC CTG GGC 1c TG-3' 5 direto PGC-1α 5'-CCG CCA CCT TCA ATC CAG AG-3' 6 reverso PGC-1α 5'-CAA GTT CTC GAT TTC TCG ACG G-3' 7 direto β- 5'-TGT CCA CCT TCC AGC AGA actina TGT-3' 8 reverso β- 5'-AGC TCA GTA ACA GTC CGC actina CTA GA-3' (4) Resultados experimentais

[0092] Como resultado da criação do modelo animal com ovários removidos como descrito acima por seis semanas, o modelo animal correspondente mostrou um ganho de peso significativo. Entretanto, em relação aos grupos que receberam administração de Lactobacillus plantarum NK3 (LP), Bifidobacterium longum NK49 (BL), uma mistura 1:1 dos mesmos (M1:1), e uma mistura 4:1 dos mesmos (M4:1) de acordo com a presente revelação, confirmou-se que uma perda de peso ocorre em um nível semelhante ao grupo que recebeu administração de estradiol, que é em particular menor do que um ganho de peso do animal normal sem ovários removidos (FIG. 4).

[0093] Além disso, como resultado da criação do modelo animal com ovários removidos por seis semanas, a atividade de AMPK foi diminuída (FIG. 5), enquanto a expressão de SREBP-1c foi induzida, e a expressão de PGC-1α foi inibida conforme mostrado na tabela 6 abaixo. No entanto, em relação aos grupos que receberam administração de Lactobacillus plantarum NK3 (LP), Bifidobacterium longum NK49 (BL), uma mistura 1:1 dos mesmos (M1:1), e uma mistura 4:1 dos mesmos (M4:1) de acordo com a presente revelação, a atividade de AMPK ocorreu em um nível semelhante ao grupo que recebeu administração de estradiol (FIG. 5), que foi maior do que do grupo de controle com ovários removidos. Além disso, confirmou-se, conforme mostrado na tabela 6 abaixo, que a expressão de SREBP-1c é inibida, e a expressão de PGC-1α é induzida na presente revelação em comparação com o modelo de camundongo com ovários removidos, confirmando, desse modo que a obesidade é inibida.

[0094] 【Tabela 6】 Grupo Grupo Grupo de LP NK3 BL NK49 Mistura Mistura Grupo de normal induzido controle de de controle (Nor) (Sham) (Con) bactérias bactérias positivo ácido- ácido- (PC) lácticas lácticas (M1:1) (M4:1) SREBP-1c 1,0±0,1 1,2±0,2 4,5±0,5 2,5±0,6 2,2±0,5 2,3±0,3 2,4±0,4 2,7±0,3 PGC-1α 1,0±0,1 1,1±0,1 0,6±0,2 0,8±0,2 0,9±0,2 0,8±0,1 0,9±0,2 0,8±0,2

[0095] Os resultados acima sugerem que as bactérias ácido-lácticas inovadoras e uma mistura das mesmas de acordo com a presente revelação têm um efeito de melhora obesidade ou ganho de peso, que é um dos sintomas de transtornos da menopausa feminina, em um nível semelhante ao estrogênio. Exemplo 4: Efeito terapêutico de bactérias ácido-lácticas na depressão no modelo animal (1) Preparação de modelo de camundongo com depressão induzida por estresse de contenção

[0096] Um modelo de camundongo com depressão foi fixado a um aparelho de estresse de contenção em formato cilíndrico 3 x 10 cm, de modo que o camundongo não podia se mover de forma alguma dentro do mesmo. Em seguida, o camundongo foi submetido a estresse de contenção 12 por horas cada, por dois dias consecutivos. A partir do dia seguinte, Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49, ou uma mistura dos mesmos foi administrada (NK3, NK49, MIX: 1X109 CFU/camundongo) por cinco dias para medir os índices de comportamentos depressivos no dia após a administração final. (2) Medição de concentrações de corticosterona plasmática

[0097] Em relação ao modelo de camundongo com depressão induzida por estresse de contenção preparado conforme acima, a concentração plasmática do hormônio do estresse corticosterona foi significativamente maior do que do grupo de controle, confirmando, assim, que o modelo animal é adequado para esse experimento. No caso da administração de Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49, ou uma mistura dos mesmos (MIX), confirmou-se que a concentração plasmática de corticosterona se torna totalmente baixa (FIG. 6). (3) Experimento do labirinto em cruz elevado (LCE)

[0098] Um aparelho experimental de labirinto em cruz elevado era um aparelho de Plexiglas preto, no qual dois braços abertos (30 x 7 cm) e dois braços fechados (30 x 7 cm) com paredes de 20 cm de altura ficam 50 cm acima do chão, cada um se prolongando 7 cm de uma plataforma central. O movimento de um camundongo no labirinto em cruz elevado foi registrado após ser colocado em uma sala com uma câmera de vídeo com brilho de 20 Lux instalada no alto.

[0099] Especificamente, um camundongo C57BL/6 (macho, 19- 22 g) foi colocado no meio do labirinto em cruz elevado com a cabeça do camundongo voltada para um braço aberto. O tempo gasto nos braços abertos e fechados e o número de entradas nos mesmos foram medidos por cinco minutos. O tempo gasto nos braços abertos (OT) de um tempo total de teste foi calculado como [o tempo gasto em braços abertos / (o tempo gasto em braços abertos (OT) + o tempo gasto em braços fechados)] x 100. E as entradas nos braços abertos (OE) foram calculadas como [entradas nos braços abertos / (entradas nos braços abertos + entradas nos braços fechados)] x 100, e os resultados são mostrados na FIG. 7.

[0100] Como resultado da medição de uma razão do tempo gasto nos braços abertos (OT) e das entradas nos braços abertos (OE) conforme mostrada na FIG. 7, os grupos que receberam administração de Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49, ou uma mistura dos mesmos (MIX) mostrou um valor significativamente maior do que do grupo de camundongos com estresse de contenção induzido que não recebeu administração, confirmando, assim, que os sintomas de ansiedade são aliviados entre os camundongos que receberam administração das cepas. (4) Teste do nado forçado (TNF)

[0101] Um tanque de água com uma altura de 40 cm e um diâmetro de 20 cm foi preenchido até 30 cm com água a uma temperatura de 25 ± 1 ℃ de acordo com o método convencionalmente conhecido de Porsolt et al. (1997), depois disso, cada um dos camundongos experimentais foi colocado no tanque de água e forçado a permanecer lá por seis minutos, dos quais os primeiros dois minutos foram considerados como um tempo de adaptação sem medição e, em seguida, pelos últimos quatro minutos, um tempo de imobilidade para o animal experimental foi medido (nesse caso, a imobilidade significa um estado em que o camundongo fica em pé e flutuando na água imóvel, exceto pelo menor movimento para manter a cabeça apenas acima da água). Os resultados da medição são mostrados na FIG. 8.

[0102] Como resultado da medição de uma razão de camundongos imóveis conforme mostrado na FIG. 8, os grupos que receberam administração de Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49, ou uma mistura dos mesmos (MIX) mostrou um valor significativamente menor do que do grupo de camundongos com estresse de contenção induzido que não recebeu administração, confirmando, assim, que o súbito estado depressivo dos camundongos que desistem da sobrevivência é aliviado quando recebem administração das cepas. (5) Teste de suspensão pela cauda (TSC)

[0103] De acordo com o método convencionalmente conhecido de Steru et al. (1985), um acessório foi fixado a cerca de 1 cm da extremidade da cauda do camundongo e, em seguida, o mesmo foi pendurado 50 cm acima do chão. Em seguida, um tempo de imobilidade para o animal experimental foi medido por um total de seis minutos, e os resultados são mostrados na FIG.

9.

[0104] Como resultado da medição de uma razão de camundongos imóveis conforme mostrado na FIG. 9, os grupos que receberam administração de Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49, ou uma mistura dos mesmos (MIX) mostrou um valor significativamente menor do que do grupo de camundongos com estresse de contenção induzido que não recebeu administração, confirmando, assim, que o estado depressivo dos camundongos é aliviado quando recebem administração das cepas.

[0105] Os resultados acima sugerem que bactérias ácido- lácticas inovadoras e uma mistura das mesmas de acordo com a presente revelação têm um efeito de melhora da depressão, que é um de sintomas de transtornos da menopausa feminina. Informações de acesso de bactérias ácido-lácticas

[0106] Os presentes inventores depositaram o Lactobacillus plantarum NK3 para fins de patente no Korean Culture Center of Microorganisms (Centro Coreano de Cultura de Microrganismos), uma instituição depositária certificada (endereço: Yurim B/D, 45, Hongjenae 2 ga-gil, Seodaemun-gu, Seul, República da Coreia) em 04 de agosto de 2017, e recebeu o número de acesso de KCCM12089P.

[0107] Além disso, os presentes inventores depositaram o Bifidobacterium longum NK49 para fins de patente no Korean Culture Center of Microorganisms, uma instituição depositária certificada (endereço: Yurim B/D, 45, Hongjenae 2 ga-gil, Seodaemun-gu, Seul, República da Coreia) em 04 de agosto de 2017, e recebeu o número de acesso de KCCM12088P. Aplicação Industrial

[0108] O Lactobacillus plantarum NK3, Bifidobacterium longum NK49, ou uma mistura dos mesmos, que são bactérias ácido-lácticas inovadoras de acordo com a presente revelação, têm um efeito de tratamento de transtornos da menopausa feminina, como tratamento da osteoporose, melhora da obesidade ou alívio da depressão e, assim, podem ser usados como uma composição para prevenir ou tratar transtornos da menopausa feminina, e pode-se esperar que sejam úteis em um campo relacionado da indústria de medicamentos e alimentos.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de Bifidobacterium longum NK49 (número de acesso: KCCM12088P), Lactobacillus plantarum NK3 (número de acesso: KCCM12089P) ou uma mistura dos mesmos, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para prevenir ou tratar transtornos da menopausa feminina.

2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o transtorno da menopausa feminina é pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em onda de calor, sudorese, rubor facial, depressão, ansiedade, secura vaginal, atrofia vaginal, incontinência urinária, obesidade, hipertensão, diabetes, envelhecimento da pele e osteoporose.

3. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o transtorno da menopausa feminina é osteoporose, obesidade ou depressão.

4. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o Lactobacillus plantarum NK3 (número de acesso: KCCM12089P) e o Bifidobacterium longum NK49 (número de acesso: KCCM12088P) são um corpo bacteriano vivo do mesmo, um corpo bacteriano morto do mesmo, uma cultura do mesmo, um lisado do mesmo ou um extrato do mesmo, respectivamente.

5. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o Lactobacillus plantarum NK3 (número de acesso: KCCM12089P) compreende uma sequência de 16S rDNA de SEQ ID NO: 1.

6. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o Bifidobacterium longum NK49 (número de acesso: KCCM12088P) compreende uma sequência de 16S rDNA de SEQ ID NO: 2.

7. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que a razão de mistura de Lactobacillus plantarum NK3 (número de acesso: KCCM12089P) e o Bifidobacterium longum NK49 (número de acesso: KCCM12088P) é de 1:1 a 4:1 UFC.

8. Composição farmacêutica para uso na prevenção e tratamento de transtornos da menopausa feminina, sendo a composição caracterizada por compreender Bifidobacterium longum NK49 (número de acesso: KCCM12088P), Lactobacillus plantarum NK3 (número de acesso: KCCM12089P) ou uma mistura dos mesmos.