BR112021006747A2 - composições injetáveis de micropartícula de naltrexona de longa ação - Google Patents

Abstract

COMPOSIÇÕES INJETÁVEIS DE MICROPARTÍCULA DE NALTREXONA DE LONGA AÇÃO. A presente revelação se refere a sistemas de entrega de micropartícula de liberação sustentada de naltrexona para o tratamento de doenças melhoradas por naltrexona. O sistema de entrega de micropartícula injetável inclui naltrexona encapsulada em micropartículas biodegradáveis administradas em um veículo farmaceuticamente aceitável.

Description

RELATÓRIO DESCRITIVO “COMPOSIÇÕES INJETÁVEIS DE MICROPARTÍCULA DE NALTREXONA DE LONGA AÇÃO” Campo Técnico

[0001] Este pedido reivindica prioridade sob o título 35 U.S.C §119(e) para o Pedido n° US 62/745.805 depositado em 15 de outubro de 2018, cujo pedido é incorporado a título de referência no presente documento.

[0002] A presente revelação se refere a sistemas de entrega de micropartícula de liberação sustentada de naltrexona para o tratamento de doenças melhoradas por naltrexona. O sistema de entrega de micropartícula injetável inclui naltrexona encapsulada em micropartículas biodegradáveis administradas em um veículo farmaceuticamente aceitável. Técnica Antecedente

[0003] A toxicodependência é uma doença que permanece prevalente em toda a sociedade. Tipicamente, considerando uma questão da área central da cidade como era durante a epidemia de heroína das décadas de 60 e 70, a questão de abuso de opioide se tornou mais prevalente em todo o país, espalhando-se das áreas centrais da cidade a comunidades rurais. O número de toxicodependentes aumentou dramaticamente nas últimas décadas, especificamente, em relação a drogas à base de opioide, tanto formulações farmacêuticas quanto drogas ilícitas de rua.

[0004] Embora a administração diária oral de naltrexona seja eficaz, seu principal problema consiste na aderência muito baixa ou nenhuma aderência. A exigência de administração mensal mostrou ter altas taxas de mortalidade (25-36 %) após 60 dias de iniciação de tratamento [Garbutt et al., Efficacy and tolerability of long-acting injectable naltrexone for alcohol dependence; a randomized controlled trial. JAMA. 293(13): 1617-1625, 2005; Hulse Improving clinical outcomes for naltrexone as a management of problem alcohol use. Br. J. Clin. Pharmacol. 76(5) 632-641, 2013.] Assim, espera-se que uma formulação de naltrexona de ação mais longa aprimore a aderência do paciente, reduza a recaída e produza resultados de paciente mais estáveis ao longo do tempo.

[0005] Várias micropartículas carregadas de naltrexona de liberação lenta foram caracterizadas. Ehrich (documento US 7.919.499, Naltrexone long acting formulation and methods of use) e Brittain et al. (documento US 7.279.579 B2, Polymorphic forms of naltrexone) ensinam formulações de naltrexona de longa ação em poli(lactídeo-co-glicolídeo) (PLGA) compreendendo cerca de 310 mg a cerca de 480 mg que liberam naltrexona por um período de quatro semanas. Tice et al. (documento US 6.306.425 B1, Injectable naltrexone microsphere compositions and their use in reducing consumption of heroin and alcohol) ensinou formulações injetáveis de naltrexona de liberação lenta em uma matriz de poli(D,L-lactídeo) (PDLL) que libera cerca de 10-40 % por semana da quantidade de naltrexona inicial em um período de 4 semanas. Nuwayser (documento US 7.157.102 B1, Multi-layered microcapsules and method of preparing same) ensina multicápsulas com múltiplas camadas com alta carga de naltrexona (>40 % p/p) para entrega de um mês. Todas as formulações de micropartícula à base de naltrexona reveladas mostraram perfis de liberação máxima de cerca de 4 semanas ou um mês. Assim, há uma necessidade na técnica de preparar formulações de micropartícula de longa ação para entrega superior a 4 semanas ou um mês.

[0006] Foram desenvolvidos sistemas de entrega de longa ação com base em implante de naltrexona de liberação lenta que entregam por mais de 4 semanas ou um mês. Kuo e Kuzma (documento US 8.343.528, Long term drug delivery devices with polyurethane based polymers and their manufacture), Saxena e Saxena (documento WO/2017/033208, Implantable naltrexone tablets) e O'Neil e Liu (documento US 7.914.804, Slow release pharmaceutical preparation and method of administering the same), todos revelam sistemas de entrega com base em implante de naltrexona de longa ação. Essas formulações com base em implante exigem tipicamente um procedimento cirúrgico ambulatorial para colocar o implante. Embora esses sistemas possam demonstrar perfis de liberação mais longa que formulações de naltrexona à base de micropartícula em alguns casos, o procedimento cirúrgico exigido e os riscos de autorremoção de paciente podem compensar os benefícios.

[0007] Vivitrol® (Alkermes, Inc.) é descrito atualmente para a prevenção de recaída à dependência de opioide após a desintoxicação de opioide de cerca de 7-10 dias. A dose recomendada é 380 mg entregue por via intramuscular a cada 4 semanas ou uma vez por mês. A injeção consiste em micropartículas poliméricas suspensas em um diluente (um veículo aquoso) injetado com uma agulha de calibre 20 (G). A agulha 20 G é exigida devido ao fato de a injeção ser por via intramuscular na região glútea, a quantidade de micropartículas e diluente e, finalmente, o tamanho de micropartícula e distribuição de tamanho. As micropartículas foram relatadas como tendo um d50,volume de 108,49 µm e d50,população de 58,46 µm (Andhariya et al., Accelerated in vitro release testing method of naltrexone loaded PLGA microspheres Int. J. Pharm. 520 (1-2) 79-85, 2017), em que d50,volume é onde 50 % das partículas em volume têm um diâmetro maior que 108,49 µm e 50 % das partículas em volume têm um diâmetro menor que 108,49 µm. Um valor de d50,população de 58,46 indica que 50 % das partículas em número têm diâmetro maior que 58,46 µm e 50 % das partículas em números em número têm um diâmetro menor que 58,46 µm. Assim, há uma necessidade no estado da técnica de preparar micropartículas carregadas de naltrexona com tamanhos de micropartícula menores em um esforço de fornecer aos pacientes um diâmetro de agulha inferior ou agulha de calibre superior com propósitos de administração.

[0008] Níveis de naltrexona sérica de 2,8 ng/ml foram mostrados como sendo suficientes para bloquear doses de diamorfina pura tão altas quanto 500 mg em dois pacientes (C. Brewer. Serum naltrexone and 6-beta-naltrexol levels from naltrexone implants can block very large amounts of heroin: a report of two cases. Addict. Biol., 7:321-323, 2002), 2,4 ng/ml antagonizaram completamente 25 mg de heroína (Verebey et al., Naltrexone: Disposition, metabolism, and effects after acute and chronic dosing. Clin. Pharmacol. Ther., 20:315-328, 1976), e níveis de 1-2 ng/ml foram alvejados como sendo suficientes para oferecer proteção contra dosagem excessiva de opioide fatal (Hulse et al., Reducing hospital presentations for opioid overdose in patients treated with sustained release naltrexone implants. Drug Alcohol Depend., 79:351-357, 2005 e Comer et al. Depot naltrexone: Long-lasting antagonism of the effects of heroin in humans. Psychopharmacology, 159:351- 360, 2002). Em um estudo de Vivitrex® piloto, antes da segunda injeção, a concentração de naltrexona plasmática mínima foi 1,23 ng/ml (±0,83 ng/ml), e essa permaneceu relativamente constante pelo restante do estudo; o nível de naltrexona mínimo médio foi 1,33 ng/ml (±1,74 ng/ml) (Johnson et al., A pilot evaluation of the safety and tolerability of repeat dose administration of long-acting injectable naltrexone (Vivitrex®) in patients with alcohol dependence. Alcohol Clin Exp Res. 28:1356-1361, 2004). No modelo de rato, uma concentração de naltrexona plasmática de ~1-2 ng/ml foi mostrada como sendo eficaz em um "teste de placa quente de analgesia induzida por morfina" (The preclinical development of Medisorb Naltrexone, a once a month long-acting injection for the treatment of alcohol dependence. Frontiers in Bioscience 10: 643-655, 2005). Assim, há necessidade no estado da técnica de fornecer níveis terapêuticos rápidos de naltrexona, com uma liberação rápida inicial mínima, com uma concentração máxima minimizada, fornecendo, desse modo, níveis terapêuticos mais estáveis de naltrexona, por mais de um mês, e como uma forma de dosagem em um formato injetável.

[0009] Doses de naltrexona inferiores, chamadas de naltrexona de dose baixa (LDN) (1 a 5 mg orais diariamente), naltrexona de dose muito baixa (VLDN) (1 mg a 1 mg), e naltrexona de dose ultrabaixa (ULDN) (menos de 1 mg)

mostraram respostas farmacodinâmicas diferentes da dose classicamente prescrita de 50 mg orais diariamente (Toljan and Vrooman, Low-dose naltrexone (LDN) - Review of therapeutic utilization, Med Sci. 6, 82, 2018). LDN atua como um modulador glial, fornecendo benefícios potenciais a condições, como fibromialgia, doença de Crohn, esclerose múltipla, síndrome complexa de dor regional e câncer. O mecanismo de ULDN parece estar relacionado a uma resposta celular bimodal a opioides, em que o mesmo foi usado em controle pós-operatório de analgesia, reduzindo a quantidade total de opioides. Assim, há uma necessidade no estado da técnica de fornecer concentrações terapêuticas estáveis de níveis de naltrexona de baixa dose (como LDN, VLDN, ULDN, etc.).

[0010] Muitas restrições são impostas em formulações que têm propriedades desejáveis: a liberação de fármaco precisa ocorrer por um período de tempo estendido, a carga de fármaco precisa ser suficiente, a matriz polimérica precisa ser biodegradável e biocompatível, produtos químicos residuais e solventes devem estar abaixo do nível aceitável máximo e as microesferas precisam ser pequenas o suficiente e têm capacidade de passar por agulhas seguras ao paciente, dentre outros. As propriedades físico-químicas das micropartículas são sensíveis às propriedades do fármaco, propriedades de matriz polimérica, as propriedades de modificadores de liberação, bem como as etapas de processamento nas quais as micropartículas são preparadas.

[0011] Revelou-se uma variedade de métodos sobre como encapsular compostos na forma de micropartículas. Nesses métodos, o fármaco ou outros compostos ativos são, em geral,

dissolvidos, dispersados ou emulsificados usando agitadores, homogeneizadores ou outros elementos de mistura dinâmicos em um solvente, usualmente, um solvente orgânico, para formar uma solução contendo o material de matriz. O solvente orgânico é, então, removido, do material de matriz de fármaco durante as etapas de extração e/ou lavagem adicionais e o produto de micropartícula é obtido posteriormente. Muitos parâmetros usados na preparação de micropartícula afetam as propriedades das micropartículas obtidas.

[0012] Há uma necessidade na técnica de um método para preparar micropartículas que podem liberar naltrexona por mais de um mês. A presente revelação, cuja descrição é descrita completamente abaixo, soluciona a necessidade de formulações que fornecem liberação de naltrexona por mais de um mês. Breve Descrição dos Desenhos

[0013] A FIG. 1 mostra um diagrama de fluxo que ilustra uma modalidade de um método para preparar micropartículas.

[0014] A FIG. 2 ilustra o perfil de liberação in vitro (FIG. 2A) e os perfis farmacocinéticos in vivo (FIG. 2B) de formulações do Exemplo 1.

[0015] A FIG. 3 ilustra a liberação in vitro de naltrexona das formulações com cargas de fármaco que variam de 37~40 % (p/p) do Exemplo 5.

[0016] A FIG. 4 ilustra os perfis farmacocinéticos in vivo de Formulações 12-3 (FIG. 4A), 12-4 (FIG. 4B), 12-5 (FIG. 4C) e 12-7 (FIG. 4D) da Tabela 10 no Exemplo 12. Modo para a Invenção

[0017] A presente revelação se refere a formulações de micropartícula de naltrexona de liberação controlada (ou liberação sustentada) e injetável compreendendo naltrexona e um polímero biodegradável, como poli(lactídeo-co- glicolídeo), também conhecido como poli(ácido lático-co- glicólico) (PLGA), por mais de um mês. As micropartículas (microesferas) podem ser injetadas prontamente por via subcutânea ou intramuscular. Mais particularmente, a presente revelação se refere a um método para preparar micropartículas injetáveis que têm perfis de liberação única de naltrexona por mais de 4 semanas, preferencialmente, cerca de 8 semanas a cerca de 12 semanas, mais preferencialmente, até 100 dias. As micropartículas são preparadas por extração/evaporação de solvente de uma emulsão de óleo em água, a fase oleosa dispersada sendo soluções formadas por uso de um solvente orgânico, incluindo principalmente naltrexona e polímero biocompatível e biodegradável.

[0018] Modalidades da revelação são descritas em detalhes, incluindo certas modalidades opcionais e preferenciais, de modo que vários aspectos da revelação das mesmas possam ser entendidos e observados mais completamente. São reveladas no presente documento formulações de micropartícula de naltrexona injetáveis que fornecem liberação controlada de agente ativo por mais de 4 semanas, particularmente, cerca de 8 semanas a cerca de 12 semanas (ou 100 dias).

[0019] Formulações de longa ação podem ser preparadas através de secagem por aspersão, técnicas com base em emulsão, extrusão, técnicas com base em microfabricação, coacervação e outros processos para fabricar micropartículas poliméricas de fármaco que possuem propriedades de liberação controlada.

[0020] Em uma modalidade, um método é fornecido para formar micropartículas para uso como um sistema de entrega de liberação controlada. O método para preparar uma formulação de micropartícula injetável compreende: (a) misturar uma primeira fase compreendendo poli(álcool vinílico)(PVA) e um primeiro solvente, e uma segunda fase compreendendo um polímero biodegradável, naltrexona e um segundo solvente para preparar uma mistura; e (b) realizar um processo de extração na mistura com água ou uma solução aquosa para obter micropartículas. Preferencialmente, o método compreende um processo de secagem nas micropartículas após o processo de extração. Em outra modalidade, o método compreende opcionalmente (c) realizar um processo de extração adicional na micropartícula com uma solução aquosa etanólica após (b) realizar o processo de extração. Quando o método compreende o processo de extração adicional, o processo de secagem nas micropartículas é realizado antes e/ou após o processo de extração adicional. Por exemplo, a secagem das partículas é realizada após (b) realizar o processo de extração, após (c) realizar o processo de extração adicional ou após cada um dentre (b) e (c).

[0021] Os métodos de acordo com as modalidades da presente invenção são descritos em detalhes com referência à FIG. 1. Na presente revelação, pretende-se apenas que o uso do termo "primeiro" ou "segundo" explique a presente revelação mais convenientemente, mas esses termos não representam ou implicam que há uma ordem ou grau particular de importância entre os mesmos. Além disso, uma forma singular de expressão ao longo da presente revelação inclui um significado plural também, salvo se estiver contextualmente claro que há uma diferença.

[0022] A mistura da primeira fase e da segunda fase é realizada em qualquer ordem. Em um aspecto, porém sem limitação, a primeira fase pode ser adicionada ao topo da segunda fase e, então, misturada para preparar a mistura. Esse processo pode ser a emulsificação, e a mistura é uma emulsão de óleo em água de polímero, naltrexona e um ou mais solventes. Partículas oleosas na mistura (emulsão) se tornam micropartículas através de um processo de acompanhamento da presente revelação. A mistura pode ser um processo para formar micropartículas de faixa de tamanho desejada, que podem depender das condições de mistura, como velocidade de rotação, potência e similares.

[0023] A primeira fase também pode ser chamada de uma fase contínua na presente revelação. A primeira fase compreende poli(álcool vinílico) e o primeiro solvente, em que o primeiro solvente compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em água, diclorometano (DCM), álcool benzílico (BA) e acetato de etila (EA). Em um aspecto, o primeiro solvente precisa compreender água. Por exemplo, o primeiro solvente pode ser água e a primeira fase pode ser formada por adição de PVA em água.

[0024] Em outro aspecto, o primeiro solvente pode compreender adicionalmente um solvente orgânico, que é pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em diclorometano, álcool benzílico e acetato de etila. Quando o primeiro solvente compreende água e um ou mais solventes orgânicos, o solvente orgânico poderia ser misturado com poli(álcool vinílico) e água ao preparar a primeira fase. Em outros aspectos, quando o primeiro solvente compreende água e um ou mais solventes orgânicos, o solvente orgânico poderia ser misturado com uma solução incluindo poli(álcool vinílico) e água imediatamente após misturar poli(álcool vinílico) e água ao preparar a primeira fase. Em outro aspecto, quando o primeiro solvente compreende água e um ou mais solventes orgânicos, o solvente orgânico poderia ser misturado com a solução compreendendo poli(álcool vinílico) e água imediatamente antes de misturar a primeira fase com a segunda fase. Preferencialmente, um ou mais solventes orgânicos podem ser misturados com uma solução compreendendo poli(álcool vinílico)e água imediatamente antes de misturar com a segunda fase.

[0025] Em um aspecto, a fase contínua (primeira fase) compreende cerca de poli(álcool vinílico)(PVA) a 0,1~5 % (p/v) em água. Em outro aspecto, a fase contínua pode compreender adicionalmente diclorometano (DCM) a 0 a 1,8 % (p/v) e/ou álcool benzílico a 0 a 3,3 % (p/v).

[0026] A segunda fase também pode ser chamada de uma fase orgânica na presente revelação. A segunda fase compreende polímero biodegradável, naltrexona e o segundo solvente, em que o segundo solvente compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em diclorometano, álcool benzílico e acetato de etila. Em um aspecto, o segundo solvente compreende diclorometano e álcool benzílico, acetato de etila ou combinação dos mesmos. Em outro aspecto, para a preparação das micropartículas, a segunda fase compreende cerca de polímero biodegradável a 1~40 % (p/p) dissolvido em um solvente orgânico, como diclorometano (DCM), também conhecido como cloreto de metileno, e naltrexona a 1~50 % (p/p) dissolvida em outro solvente orgânico, como álcool benzílico. A naltrexona poderia ser usada no método na forma de base livre, sal, solvato, cocristal ou combinações dos mesmos.

[0027] O polímero biodegradável biocompatível pode ser um homopolímero, copolímero ou terpolímero ou unidades monoméricas de repetição ligadas por grupos, como grupos éster. O polímero pode ser um poliéster que pode ser composto de unidades de cerca de um ou mais resíduos de ácido hidroxicarboxílico, em que a distribuição de unidades pode ser aleatória, bloqueada, emparelhada ou distribuída sequencialmente. Quando o polímero biodegradável é um poliéster, os poliésteres incluem polilactídeo, poliglicolídeo e PLGA. Em um aspecto, o polímero biodegradável é um polilactídeo, PLGA ou combinações dos mesmos. Preferencialmente, o poliéster biodegradável adequado tem a razão (molar) de lactídeo:glicolídeo (L:G) de 50:50 a 100:0, preferencialmente, 65:35 a 90:10, mais preferencialmente, 75:25 a 85:15. Preferencialmente, o poliéster biodegradável adequado é uma razão de 60:40 a 95:5 de PLGA. Mais preferencialmente, o poliéster biodegradável adequado é um PLGA de razão de 70:30 a 90:10. Ainda mais preferencialmente, o poliéster biodegradável é um PGLA de razão de 75:25 a 85:15. Com máxima preferência, o poliéster biodegradável é um PLGA de razão de 85:15. Em um aspecto, o polímero biodegradável tem um peso molecular médio de 50.000 a 150.000 Daltons.

[0028] A mistura (emulsão) é submetida a um processo de extração de solvente apropriado para obter as micropartículas, diminuindo finalmente os níveis de solvente para um nível aceitável. Os termos "extrair", "que extrai" e "extração" na presente revelação se referem a colocar a mistura ou emulsão compreendendo poli(álcool vinílico), o polímero biodegradável, naltrexona e um ou mais solventes em contato com uma fase de extração. Um ou mais solventes orgânicos são removidos de partículas oleosas da mistura (emulsão) durante o processo de extração de solvente, e as micropartículas compreendendo polímero e naltrexona são obtidas consequentemente.

[0029] O processo de extração de solvente compreende pelo menos um processo de extração. O processo de extração (primeiro) é realizado na mistura (emulsão) com uma fase de extração para obter as micropartículas, em que a fase de extração é água ou uma solução aquosa. A solução aquosa pode compreender pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em poli(álcool vinílico), diclorometano, álcool benzílico e acetato de etila. Preferencialmente, a fase de extração pode ser água com 0 a 3 % (p/v) de pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em álcool polivinílico, diclorometano, álcool benzílico e acetato de etila. Mais preferencialmente, a fase de extração pode ser água com poli(álcool vinílico) a 0~2 % (p/v), diclorometano a 0~1,8 % (p/v), álcool benzílico a 0~2 % (p/v) ou acetato de etila a 0~3 % (p/v).

[0030] Quando o processo de extração de solvente compreende dois processo de extração, o processo de extração adicional (segundo) pode ser realizado nas micropartículas com uma solução aquosa etanólica (A mesma também é chamada de uma fase de extração etanólica ou solução de etanol na presente revelação). A fase de extração etanólica é uma solução aquosa de cerca de etanol a 1~50 % (v/v).

[0031] As temperaturas de cada processo de extração podem estar na faixa de cerca de 4~30 °C. Preferencialmente, o primeiro processo de extração (aquoso) pode ser realizado na faixa de temperatura de cerca de 4 a 10 °C. Preferencialmente, o segundo processo de extração (etanólico) pode ser realizado na faixa de temperatura de cerca de 20 a 30 °C. O tempo de extração pode estar na faixa de cerca de 2 a 8 horas.

[0032] Em um aspecto, após realizar o processo de extração de solvente, a secagem das micropartículas é realizada opcionalmente. A secagem pode ocorrer a vácuo na faixa de temperatura de cerca de 4~30 °C ou outros processos de secagem, como liofilização. Quando o processo de extração de solvente compreende dois processos de extração, um processo de secagem adicional pode ser realizado opcionalmente entre dois processos de extração. A secagem intermediária pode ser realizada a vácuo na faixa de temperatura de cerca de 4~30 °C.

[0033] Antes de cada processo de secagem, o método compreende um processo de coleta para coletar as micropartículas da mistura (emulsão), solução, dispersão, etc. O processo de coleta é realizado com peneiras que têm vários tamanhos de poro. Os tamanhos de poro das peneiras estão na faixa de 10-200 µm.

[0034] O método também pode compreender opcionalmente um processo de lavagem após o processo de extração de solvente. Quando o método compreende o processo de coleta, o processo de lavagem pode ser realizado após coleta, mas antes de secagem. O processo de lavagem pode ser um processo de remoção de resíduos, como solventes, substâncias não reagidas, etc., na presente revelação.

[0035] Em uma modalidade, uma formulação de micropartícula injetável é fornecida. Em um aspecto, a formulação de micropartícula injetável é preparada de acordo com o método da presente invenção.

[0036] A formulação de micropartícula injetável da presente revelação compreende micropartículas incluindo naltrexona e o polímero biodegradável. A micropartícula tem perfis de liberação sustentada de naltrexona. Em um aspecto, a liberação sustentada de naltrexona tem duração de mais de 4 semanas e até 100 dias. Em outro aspecto, a liberação sustentada de naltrexona tem cerca de 8 semanas a cerca de 12 semanas. A micropartícula compreende cerca de 20-40 % (p/p) de naltrexona. A naltrexona pode estar na forma de base livre, sal, solvato, cocristal ou combinações dos mesmos.

[0037] O polímero biodegradável compreende um polilactídeo, poli(lactídeo-co-glicolídeo) ou combinações dos mesmos. Preferencialmente, a razão (molar) de lactídeo:glicolídeo (L:G) (molar) do polímero biodegradável pode ser 50:50 a 100:0, preferencialmente, 65:35 a 90:10, mais preferencialmente, 75:25 a 85:15. O peso molecular do polímero biodegradável pode ser 50.000 Dalton a 150.000 Daltons.

[0038] Em uma modalidade preferencial, as micropartículas de naltrexona injetáveis compreendem naltrexona em um PLGA de razão de 85:15 com um peso molecular de pelo menos 50.000 Daltons como aquelas descritas abaixo nos exemplos. Preferencialmente, o peso molecular de PLGA é 50.000 Dalton a 150.000 Daltons.

[0039] Em uma modalidade preferencial, a naltrexona está presente na formulação de longa ação na quantidade de pelo menos cerca de 20 % em peso, preferencialmente, pelo menos cerca de 30 % em peso, mais preferencialmente, pelo menos cerca de 35 % em peso, como cerca de 40 % em peso de naltrexona do peso total da formulação. Em um aspecto, a naltrexona está presente na formulação de longa ação na quantidade de cerca de 20-40 % (p/p).

[0040] As micropartículas podem ser preparadas em uma faixa de distribuição de tamanho adequada para injeção subcutânea e/ou intramuscular usando agulhas mais finas que 20 G. O diâmetro, o formato, a morfologia e a porosidade de partícula podem ser manipulados de modo a controlar as características de liberação e permitir a passagem por uma seringa e agulha. As micropartículas carregadas de naltrexona podem ter uma distribuição de tamanho de partícula com a faixa de 1 a 200 µm. Mais preferencialmente, a distribuição de tamanho de partícula pode ter uma faixa de cerca de 10~125 µm. Ainda mais preferencialmente, a distribuição de tamanho de partícula pode ter uma faixa de cerca de 25~100 µm. Em um aspecto, as micropartículas têm um tamanho de partícula médio na faixa de 25 a 125 µm.

[0041] Em uma modalidade, é fornecido um método de injeção das micropartículas biodegradáveis. O método inclui injetar uma composição passível de fluidez incluindo as micropartículas biodegradáveis em um veículo aceitável (biocompatível). O veículo aceitável (biocompatível) inclui um veículo à base de água, um veículo à base de óleo ou combinação dos mesmos. Preferencialmente, o veículo aceitável é um sistema à base de água. Esse sistema à base de água compreende um agente de tonicidade, como cloreto de sódio, um agente melhorador de viscosidade, como carboximetilcelulose sódica, um agente umectante, como polissorbato ou combinações dos mesmos. Em um aspecto, o sistema à base de água pode ser composto de agentes umectantes, como polissorbato 20 e agentes melhoradores de viscosidade, como carboximetilcelulose sódica, ácido hialurônico e similares. Outro veículo aceitável pode ser um veículo à base de óleo que também pode atuar como um limitador de taxa de absorção de água e/ou barreira de difusão, alterando, assim, a taxa de liberação ao limitar a liberação inicial ou ao diminuir a taxa de estado estacionária. O veículo oleoso biocompatível compreende óleo de amendoim, óleo de rícino, óleo de gergelim, óleo de girassol, óleo de soja, óleo de milho, óleo de semente de algodão ou qualquer combinação dos mesmos. Em um aspecto, o veículo aceitável adequado pode ser uma combinação do veículo à base de água e do veículo à base de óleo. As micropartículas podem ser administradas por via subcutânea ou intramuscular.

[0042] Em uma modalidade, a formulação de liberação controlada fornece quantidades terapeuticamente benéficas de naltrexona ao indivíduo por um período de pelo menos 4 semanas, preferencialmente, pelo menos 6 semanas, mais preferencialmente, pelo menos 8 ou mais semanas.

[0043] Em uma modalidade preferencial, a duração de ação de naltrexona usando a mesma dose (380 mg de naltrexona) como usado em Vivitrol fornece quantidades terapeuticamente benéficas de naltrexona por mais de 4 semanas, preferencialmente, 6 semanas, mais preferencialmente, 8 semanas e, ainda mais preferencialmente, 12 semanas.

[0044] Em uma modalidade, é fornecido um método de tratamento ou prevenção de doenças relacionadas ao abuso ou dosagens excessivas de opioide, dependência de álcool ou dor por naltrexona ou um metabólito. O método inclui administrar a um paciente (indivíduo) em necessidade de tal tratamento ou prevenção uma quantidade eficaz da micropartícula compreendendo naltrexona, a formulação de micropartícula compreendendo a micropartícula, ou composição compreendendo a micropartícula ou a formulação de micropartícula.

[0045] Em outra modalidade, uma composição compreendendo a formulação de micropartícula injetável é fornecida. A composição pode compreender um veículo biocompatível, em que o veículo biocompatível inclui o veículo à base de água, o veículo à base de óleo ou ambos. Em um aspecto, a composição é formulada como injeção (ou injeções).

[0046] Em uma modalidade, é fornecida uma composição compreendendo a formulação de micropartícula injetável para uso em tratamento ou prevenção de doenças relacionadas ao abuso ou dosagens excessivas de opioide, dependência de álcool ou dor. A composição pode compreender um veículo biocompatível, em que o veículo biocompatível inclui o veículo à base de água, o veículo à base de óleo ou ambos. Em um aspecto, a composição é formulada como injeção (ou injeções).

[0047] Em outras modalidades, é fornecido um uso da formulação de micropartícula injetável para tratar ou prevenir doenças relacionadas ao abuso ou dosagens excessivas de opioide, dependência de álcool ou dor.

[0048] Em outra modalidade, é fornecido um uso da formulação de micropartícula injetável na preparação de um medicamento para tratar ou prevenir doenças relacionadas ao abuso ou dosagens excessivas de opioide, dependência de álcool ou dor.

[0049] O perfil de liberação pode variar dependendo da razão de L:G, peso molecular, grupo final e polidispersidade do polímero de PLGA biocompatível biodegradável, o teor de solvente residual, metodologia de fabricação, dentre outros fatores. Em segundo lugar, o perfil de liberação pode variar entre condições in vitro e in vivo, devido a tais fatores como diferenças de temperatura entre experimentos in vitro e in vivo, meios de liberação versus diferenças de fluido intersticial e/ou veículo usado para administração.

[0050] Ao fornecer micropartículas que têm capacidades de liberação de mais de 4 semanas, em particular, cerca de 8 a 12 semanas (ou 100 dias), indivíduos receberão menos injeções e exigirão menos visitas a consultórios médicos. As micropartículas da presente revelação mostram uma liberação sustentada exemplificativa de naltrexona em condições tanto in vivo quanto in vitro. Para fornecer melhor aderência de paciente, o tamanho das micropartículas e/ou quantidade de naltrexona podem ser modificados.

[0051] Os exemplos a seguir são fornecidos a título de ilustração e não devem ser interpretados a título de limitação.

EXEMPLOS Exemplo 1 Efeito de Processamento de PLGA de razão de 75:25

[0052] A fase contínua foi preparada ao pesar 40 g de poli(álcool vinílico)(PVA) (Mowiol 40-88, Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EUA) e misturar com 4 l de água deionizada. A fase orgânica consistiu em 500 mg de PLGA 75:25 (Resomer RG756S) e 267 mg de base livre de naltrexona (Tecoland Corporation, Irvine, CA, EUA) dissolvidos em 1,333 g de diclorometano (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) e 623 mg de álcool benzílico (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) em um recipiente de cintilação de 20 ml ou 500 mg de PLGA de razão de 75:25 (Resomer RG756S) e 294 mg de base livre de naltrexona (Tecoland Corporation, Irvine, CA, EUA) dissolvidos em 1,333 g de diclorometano (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) e 623 mg de álcool benzílico (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) em um recipiente de cintilação de 20 ml. 10 ml da fase contínua foram adicionados ao topo da fase orgânica e homogeneizados a 7.000 RPM por 60 segundos com um homogeneizador IKA T25 com gerador S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC, EUA). A mistura foi, então, transferida em uma fase de extração, que é 380 ml de 1 % (p/v) de PVA em água e agitada a 4 °C por 8 h. Micropartículas foram, então, coletadas com uma peneira de 25 µm. O produto retido pela peneira foi desidratado por 15 min a 22 °C e seco a vácuo por cerca de 16 h. As micropartículas foram, então, suspensas e lavadas em 200 ml de uma solução de etanol a

25 % (v/v) por 8 h a 22 °C para remover o agente emulsificante (PVA) e quaisquer solventes residuais das micropartículas. As micropartículas lavadas foram, então, coletadas em uma peneira de 25 µm e secas a vácuo por 48 h.

[0053] Essas duas formulações foram avaliadas em estudos farmacocinéticos com ratos Sprague-Dawley em uma dose de 38 mg/kg.

[0054] A carga de fármaco resultante e o teor de álcool benzílico residual são mostrados na Tabela 1. Ambas as formulações forneceram cerca de 90 % de eficiências de encapsulamento, mas com liberação de apenas aproximadamente 4-5 semanas, com a carga de fármaco superior resultando em cinética mais rápida. Observa-se uma correlação in vitro-in vivo de nível A na FIG. 2 para F.1-1, enquanto o teste in vitro prevê uma resposta in vivo mais rápida que aquela observada para F.1-2.

[0055] Tabela 1. Sumário de formulação para o Exemplo 1 Formulação Peso de Carga de BA Residual EE (%) (F) Naltrexona Fármaco (% (% p/p) Inicial (mg) p/p) F.1-1 267 31,2 1,31 89,7 F.1-2 294 33,5 1,51 90,6

[0056] A carga de fármaco (% p/p) indica a quantidade de naltrexona contida nas micropartículas, e EE (%) indica a quantidade final de naltrexona restante em comparação à naltrexona inicial ao preparar as micropartículas. Exemplo 2 Efeito de Fornecedor e Peso Molecular de PLGA de Razão de 75:25

[0057] A fase contínua foi preparada ao pesar 40 g de poli(álcool vinílico)(PVA) (Mowiol 40-88, Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EUA) e misturar com 4 l de água deionizada. A fase orgânica consistiu em 500 mg de PLGA de razão de 75:25 e 267 mg de base livre de naltrexona (Tecoland Corporation, Irvine, CA, EUA) dissolvidos em 1,333 g de diclorometano (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) e 623 mg de álcool benzílico (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) em um recipiente de cintilação de 20 ml. 10 ml da fase contínua foram adicionados ao topo da fase orgânica e homogeneizados a 7.000 RPM por 60 segundos com um homogeneizador IKA T25 com gerador S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC, EUA). A mistura foi, então, transferida em uma fase de extração, que é 380 ml de água deionizada e agitada a 4 °C por 8 h. Micropartículas foram, então, coletadas com uma peneira de 25 µm. O produto retido pela peneira foi desidratado por 15 min a 22 °C e seco a vácuo por cerca de 16 h. As micropartículas foram, então, suspensas e lavadas em 200 ml de uma solução de etanol a 25 % (v/v) por 8 h a 22 °C para remover o agente emulsificante (PVA) e quaisquer solventes residuais das micropartículas. As micropartículas lavadas foram, então, coletadas em uma peneira de 25 µm e secas a vácuo por 48 h.

[0058] A carga de fármaco resultante e o teor de álcool benzílico residual são mostrados na Tabela 2.

[0059] Resomer RG 750 e 756 resultaram em cargas de fármaco e perfis de liberação similares, provavelmente devido à viscosidade inerente similar, com RG 750 tendo uma faixa mais ampla. Resomer RG 755 e Lactel B6007-1 com especificações de viscosidade inerente quase similares também resultaram em cargas de fármaco e perfis de liberação similares. Embora resultem em cargas de fármaco similares como os outros PLGAs testados, Lactel B6007-2 resultou em um perfil de liberação com cinética muito mais rápidas. As formulações F.2-1 a F.2-5 forneceram perfis de liberação de fármaco de cerca de 30-35 dias.

[0060] Tabela 2. Sumário de formulação para formulações feitas com PLGA de razão de 75:25 Formulação PLGA Viscosidade Carga de BA EE(%) (F) Inerente Fármaco (% Residual (dl/g) p/p) (% p/p) F.2-1 Resomer 0,8-1,2 29,2 2,86 83,8 RG 750 F.2-2 Resomer 0,5-0,7 28,9 1,73 83,0 RG 755 F.2-3 Resomer 0,71-1,0 29,6 2,73 85,0 RG 756 F.2-4 Lactel 0,55-0,75 29,3 1,95 84,2 B6007-1 F.2-5 Lactel 0,8-1,2 29,6 1,70 85,0 B6007-2 Exemplo 3 Preparação de Micropartículas de Naltrexona: Formulação 3

[0061] A fase contínua foi preparada ao pesar 40 g de poli(álcool vinílico)(PVA) (Mowiol 40-88, Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EUA) e misturar com 4 l de água deionizada. A fase orgânica consistiu em 500 mg de PLGA de razão de 85:15 (Resomer RG 858S Evonik Cyro, Parsippany, NJ, EUA) e 294 mg de base livre de naltrexona (Tecoland Corporation, Irvine,

CA, EUA) dissolvidos em 2,0 g de diclorometano (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) e 467 mg de álcool benzílico (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) em um recipiente de cintilação de 20 ml. A fase contínua foi misturada adicionalmente com DCM, e 10 ml da fase contínua com 1,8 % (p/v) de DCM foram adicionados ao topo da fase orgânica e homogeneizados a 7.000 RPM por 60 segundos com um homogeneizador IKA T25 com gerador S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC, EUA). A mistura foi, então, transferida em uma fase de extração, que é 380 ml da água com DCM a 0,5 % p/v e agitada a 4 °C por 8 h. Micropartículas foram coletadas com uma peneira de 25 µm. O produto retido pela peneira foi desidratado por 15 min a 22 °C e seco a vácuo por cerca de 16 h. As micropartículas foram, então, suspensas e lavadas em 200 ml de uma solução de etanol a 25 % (v/v) por 8 h a 22 °C para remover o agente emulsificante (PVA) e quaisquer solventes residuais das micropartículas. As micropartículas lavadas foram, então, coletadas em uma peneira de 25 µm e secas a vácuo por 48 h.

[0062] As cargas de fármaco resultantes foram 28,1 % (75,9 % de EE) e álcool benzílico residual foi 0,55 %. O perfil de liberação de fármaco in vitro resultou na cinética de liberação de ordem próxima a zero por aproximadamente 50 dias. Exemplo 4 Preparação de Micropartículas de Naltrexona: Formulação 4

[0063] A fase contínua foi preparada ao pesar 40 g de PVA e misturar com 4 l de água deionizada. A fase orgânica consistiu em 500 mg de PLGA de razão de 85:15 (Resomer RG

858S) e 294 mg de base livre de naltrexona (Tecoland Corporation, Irvine, CA, EUA) dissolvidos em 2,0 g de DCM e 623 mg de álcool benzílico em um recipiente de cintilação de 20 ml. A fase contínua foi misturada adicionalmente com DCM, e 10 ml da fase contínua com 1,8 % (p/v) de DCM foram adicionados ao topo de fase orgânica e homogeneizados a

7.000 RPM por 60 segundos com um homogeneizador IKA T25 com gerador S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC, EUA). A mistura foi, então, misturada em uma fase de extração, que é 380 ml de água com DCM a 0,66 % (p/v) a 4 °C. Permitiu-se, então, que as micropartículas fossem agitadas por 8 h e, então, coletadas com peneira de 23 µm. O produto retido pela peneira foi desidratado por 15 min a 22 °C e seco a vácuo por cerca de 16 h. As micropartículas foram, então, suspensas e lavadas em 200 ml de uma solução de etanol a 25 % (v/v) por 8 h a 22 °C para remover o agente emulsificante (PVA) e quaisquer solventes residuais das micropartículas. As micropartículas lavadas foram, então, passadas por uma peneira de 125 µm, coletadas em uma peneira de 23 µm, e secas a vácuo por 48 h.

[0064] A carga de fármaco resultante foi 21,7 % (58,6 % de EE) e álcool benzílico residual foi 0,83 %. Uma quantidade maior (0,66 % (p/v) de DCM na fase de extração e teores de álcool benzílico iniciais superiores na fase orgânica diminuem bastante a carga de fármaco da formulação. O perfil de liberação de fármaco in vitro resultou na cinética de liberação de ordem próxima a zero por aproximadamente 60 dias. Exemplo 5 Preparação de Micropartículas de Naltrexona: Efeito de

Solvente em Meios de Emulsificação

[0065] A fase contínua foi preparada ao pesar 40 g de PVA e misturar com 4 l de água deionizada. A fase orgânica consistiu em 1,0 g de PLGA de razão de 85:15 (Resomer RG 858S) e 818 mg de base livre de naltrexona (SpecGx, LLC) dissolvidos em 4,0 g de DCM e 1,908 g de álcool benzílico em um recipiente de cintilação de 20 ml ou 1,0 g de PLGA de razão de 85:15 (Resomer RG 858S) e 818 mg de base livre de naltrexona (SpecGx, LLC) dissolvidos em 4,0 g de DCM e 1,04 g de álcool benzílico em um recipiente de cintilação de 20 ml. 15 ml da fase contínua ou da fase contínua adicionalmente misturada com DCM ou álcool benzílico (BA) (descrita na Tabela 3) foram adicionados ao topo da fase orgânica e homogeneizados a 7.000 RPM por 60 segundos com um homogeneizador IKA T25 com gerador S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC, EUA). A mistura foi, então, transferida em 760 ml de uma fase de extração (descrita na Tabela 3) e agitada a 4 °C por 4 h. Micropartículas foram, então, coletadas com uma peneira de 25 µm. O produto retido pela peneira foi desidratado por 15 min a 22 °C e seco a vácuo por cerca de 16 h. As micropartículas foram, então, suspensas e lavadas em 400 ml de uma solução de etanol a 25 % (v/v) por 8 h a 22 °C para remover o agente emulsificante (PVA) e quaisquer solventes residuais das micropartículas. As micropartículas lavadas foram, então, passadas por uma peneira de 125 µm e coletadas em uma peneira de 23 µm e secas a vácuo por 48 h.

[0066] A carga de fármaco resultante e o teor de álcool benzílico residual podem ser encontrados na Tabela 3. Um aumento em álcool benzílico residual é observado com quantidade inicial maior de álcool benzílico. Eficiências de encapsulamento de 80~90 % podem ser obtidas. Diclorometano nos meios de extração resulta nos teores de álcool benzílico residual mais baixos para esse exemplo, apesar de a naltrexona também ser perdida nesse processo. As curvas de liberação de fármaco não parecem mostrar diferenças em liberação entre BA a 3,3 % (álcool benzílico) em PVA a 1 % versus PVA 1 % sozinho. O DCM a 1,8 % em PVA a 1 % mostra inicialmente uma taxa de liberação levemente inferior, potencialmente, devido à carga de fármaco inferior.

[0067] Tabela 3. Efeitos das composições de fase contínua e fase de extração sobre a carga de fármaco resultante, álcool benzílico (BA) residual e eficiência de encapsulamento (EE). Formulação Fase Contínua BA Carga de BA EE (F) (p/v)/ Fase de Inicial Fármaco Residual (%) Extração (p/v) (g) (% p/p) (% p/p) F.5-1 DCM a 1,8 % em PVA 1,908 37,0 1,44 82,2 a 1 % em água/DCM a 0,5 % em água F.5-2 BA a 3,3 % em PVA a 1,908 39,5 2,43 87,8 1 % em água /H2O F.5-3 PVA a 1 % em 1,908 39,8 2,26 88,5 água/H2O F.5-4 DCM a 1,8 % em PVA 1,04 37,8 0,96 84,0 a 1 % em água/DCM a 0,5 % em água

Formulação Fase Contínua BA Carga de BA EE (F) (p/v)/ Fase de Inicial Fármaco Residual (%) Extração (p/v) (g) (% p/p) (% p/p) F.5-5 BA a 3,3 % em PVA a 1,04 39,4 1,92 87,6 l % em água /H2O F.5-6 PVA a 1 % em 1,04 39,8 1,02 88,5 água/H2O Exemplo 6 Preparação de Micropartículas de Naltrexona: Efeito de Razão de Óleo/Água

[0068] A fase contínua foi preparada ao pesar 40 g de PVA e misturar com 4 l de água deionizada. A fase orgânica consistiu em 0,630 g de PLGA de razão de 85:15 (Resomer RG 858S) e 370 mg de base livre de naltrexona (SpecGx, LLC) dissolvidos em 3,15 g de acetato de etila (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) e 1,17 g de álcool benzílico em um recipiente de cintilação de 20 ml. A fase contínua foi misturada adicionalmente com acetato de etila, e 20 ml da fase contínua com acetato de etila a 6,525 % (p/v) foram emulsificados com a fase orgânica a 4.000 ou

7.000 RPM por 30 segundos com um homogeneizador IKA T25 com gerador S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC, EUA). A mistura foi, então, transferida em uma fase de extração, que é 250 ml de acetato de etila a 2,5 % (p/v) em água e agitada a 4 °C por 2 ou 4 h. As micropartículas foram, então, coletadas com uma peneira de 10 µm e secas a 4 °C a vácuo por cerca de 16 h. Micropartículas foram, então, suspensas e lavadas em 150 ml de uma solução de etanol a

25 % (v/v) por 8 h a 22 °C para remover o agente emulsificante (PVA) e quaisquer solventes residuais das micropartículas. As micropartículas lavadas foram, então, passadas por uma peneira de 150 µm e coletadas em uma peneira de 10 µm e secas a vácuo por 48 h.

[0069] A carga de fármaco resultante e o teor de álcool benzílico residual podem ser encontrados na Tabela 4.

[0070] As eficiências de encapsulamento parecem ser inferiores a formulações preparadas em condições similares com diclorometano. Diferenças mínimas são observadas nos perfis de liberação in vitro das três formulações, com todas as formulações que são levemente mais longas que aproximadamente 55 dias.

[0071] Tabela 4. Efeitos de razão de O/W, velocidade de homogeneização e tempo de extração de solvente sobre a carga de fármaco resultante, álcool benzílico (BA) residual e eficiência de encapsulamento (EE). Formulação razão Velocidade de Tempo de Carga BA EE(%) (F) de O/W Homogeneização Extração de Residual (v/v) (RPM) de Fármaco (% p/p) Solvente (% p/P) (h) F.6-1 1/2,82 4.000 4 27,5 0,72 74,3 F.6-2 1/4,35 4.000 2 25,0 0,43 67,6 F.6-3 1/4,35 7.000 4 23,2 0,17 62,7 Exemplo 7. Determinação de Peso Molecular de PLGA com um Detector Quaternário de Cromatografia de Permeação em Gel

[0072] Amostras de Resomer RG 858S e Lactel B6006-2P foram dissolvidas em acetona em uma concentração de aproximadamente 2,5 mg/ml, filtradas através de um filtro de PTFE de 0,22 µm, e coletadas em um recipiente de autoamostrador de HPLC para injeção. As amostras foram analisadas usando GPC-4D. O sistema de GPC-4D consistiu em um HPLC Agilent 1260 Infinity II conectado a Dawn Heleos II (MALLS) acoplado a Dynapro Nanostar DLS através de cabo óptico, Optilab T-rEX (detector de RI) e Viscômetro Viscostar III operado por software Astra 7. A análise de GPC foi realizada por injeção de 50,0 µl da solução polimérica. A separação foi realizada com uma coluna de gradiente linear (Tosoh Bioscience LLC, TSKgel GMHHR-L, 7,8 mm x 30 cm) em fluxo de acetona de 0,6 ml/min com um tempo de execução de 60 minutos. Os pesos moleculares das amostras poliméricas são mostrados na Tabela 5.

[0073] Tabela 5. Mn (peso molecular médio numérico), Mw (peso molecular ponderado médio), Mz (peso molecular médio superior), Mmédio (peso molecular médio) e polidiversidade Excipiente Polímero Número de Mn Mw Mz Mmédio Polidiversidade (E) Lote (kDa) (kDa) (kDa) (kDa) (Mw/Mn) E.7-1 Resomer RG D161000568 120,15 141,07 171,75 121,95 1,17 858S E.7-2 Lactel A17-028 66,01 78,19 94,40 65,41 1,19 B6006-2P Exemplo 8. Preparação de Micropartículas de Naltrexona: Efeito de Peso Molecular e Tempo de Extração na razão de 85:15

[0074] A fase contínua foi preparada ao pesar 40 g de PVA e misturar com 4 l de água deionizada. A fase orgânica consistiu em 500 mg de PLGA de razão de 85:15 (Resomer RG 858S (IV 1,3 - 1,7 dl/g, Número de Lote D161000568, Evonik

Cyro, Parsippany, NJ, EUA) ou Lactel B6006-2P (IV 0,76 - 0,85 dl/g, Número de Lote A17-068, Durect, Cupertino, CA, EUA)) e 267 mg de base livre de naltrexona (SpecGx, LLC) dissolvidos em 2,0 g de DCM e 623 mg de álcool benzílico em um recipiente de cintilação de 20 ml. A fase contínua foi misturada adicionalmente com DCM, e 10 ml da fase contínua contendo DCM a 1,8 % (p/v) foram adicionados à fase orgânica e emulsificados a 7.000 RPM por 60 segundos com um homogeneizador IKA T25 com gerador S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC, EUA). A mistura foi, então, transferida em uma fase de extração (380 ml de diclorometano a 0,5 % (p/v) em água) e agitada a 4 °C por 2, 4 ou 7 h. As micropartículas foram, então, coletadas com uma peneira de 25 µm e secas a 4 °C a vácuo por cerca de 16 h. Micropartículas foram, então, suspensas e lavadas em 200 ml de uma solução de etanol a 25 % (v/v) por 8 h a 22 °C para remover PVA e quaisquer solventes residuais das micropartículas. As micropartículas lavadas foram, então, passadas por uma peneira de 125 µm e coletadas em uma peneira de 25 µm e secas a vácuo por 48 h.

[0075] As cargas de fármaco resultantes, teor de álcool benzílico residual e eficiência de encapsulamento podem ser encontrados na Tabela 6. Efeitos mínimos de tempo de extração foram observados entre os dois tipos de PLGA e sua respectiva carga de fármaco. O álcool benzílico residual parece ser levemente superior para bateladas de Lactel vs bateladas de Resomer. O tempo de extração não parece ter um efeito sobre a taxa de liberação, enquanto ficam evidentes as diferenças no perfil de liberação entre os polímeros. As bateladas de Resomer parecem ter uma fase de retardamento mais curta versus as bateladas de Lactel, resultando em uma liberação de estado mais estacionário por 60 dias in vitro em comparação às bateladas de Lactel.

[0076] Tabela 6. Efeitos de PLGA e tempo de extração sobre a carga de fármaco resultante, álcool benzílico (BA) residual e eficiência de encapsulamento (EE). Formulação PLGA Tempo de Carga de BA EE (%) (F) Extração Fármaco (% Residual (h) p/p) (% p/p) F.8-1 Resomer RG 2 28,0 0,88 80,5 F.8-2 858S 4 27,7 0,88 79,6 F.8-3 7 28,6 0,89 82,2 F.8-4 2 27,5 1,16 79,0 Lactel F.8-5 4 28,1 1,06 80,7 B6006-2 F.8-6 7 28,5 1,12 81,9 Exemplo 9. Preparação de Micropartículas de Naltrexona: Efeito de Nenhuma Lavagem com Etanol versus Lavagem com Etanol a 25 %

[0077] A fase contínua foi preparada ao pesar 40 g de PVA e misturar com 4 l de água deionizada. A fase orgânica consistiu em 500 mg de PLGA de razão de 85:15 (Resomer RG 858S) e 267 mg de base livre de naltrexona (SpecGx, LLC) dissolvidos em 2,0 g de DCM e 623 mg de álcool benzílico em um recipiente de cintilação de 20 ml. A fase contínua foi misturada adicionalmente com DCM, e 10 ml da fase contínua contendo DCM a 1,8 % (p/v) foram adicionados à fase orgânica e emulsificados a 7.000 RPM por 60 segundos com um homogeneizador IKA T25 com gerador S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC, EUA). A mistura foi, então, transferida em uma fase de extração (380 ml de DCM a 0,5 %

(p/v) em água) e agitada a 4 °C por 2 h. Micropartículas foram, então, coletadas com uma peneira de 25 µm e secas a vácuo a 4 °C por cerca de 16 h. As micropartículas foram, então, suspensas e lavadas em 200 ml de uma solução de etanol a 25 % (v/v) por 8 h a 22 °C para remover PVA e quaisquer solventes residuais das micropartículas ou passadas por uma peneira de 125 µm e secas a vácuo por 48 h. As micropartículas lavadas foram, então, passadas por uma peneira de 125 µm e coletadas em uma peneira de 25 µm e secas a vácuo por 48 h.

[0078] As cargas de fármaco resultantes, teor de álcool benzílico residual e eficiência de encapsulamento podem ser encontrados na Tabela 7. A lavagem com etanol resultou em micropartículas que tiveram um teor de álcool benzílico residual inferior e carga de fármaco superior, provavelmente, devido à extração de álcool benzílico. Os 10 dias iniciais de liberação são similares entre as partículas lavadas e não lavadas, mas a taxa após 10 dias é mais rápida para as partículas não lavadas versus partículas lavadas.

[0079] Tabela 7. Efeitos de PLGA e tempo de extração sobre a carga de fármaco resultante, álcool benzílico (BA) residual e eficiência de encapsulamento (EE). Formulação Processo Carga de BA Residual EE (%) (F) Fármaco (% (% p/p) p/p) F.9-1 Nenhuma 27,9 1,71 80,2 Lavagem com Etanol

Formulação Processo Carga de BA Residual EE (%) (F) Fármaco (% (% p/p) p/p) F.9-2 Lavagem com 28,3 0,86 81,3 Etanol a 25 % Exemplo 10. Preparação de Micropartículas de Naltrexona: Efeito de Concentração de Lavagem de Etanol

[0080] A fase contínua foi preparada ao pesar 40 g de PVA e misturar com 4 l de água deionizada. A fase orgânica consistiu em 500 mg de PLGA de razão de 85:15 (Resomer RG 858S) e 305 mg de base livre de naltrexona (SpecGx, LLC) dissolvidos em 2,0 g de DCM e 467 mg de álcool benzílico em um recipiente de cintilação de 20 ml. A fase contínua foi misturada adicionalmente com DCM, e 10 ml da fase contínua com DCM a 1,8 % (p/v) foram adicionados à fase orgânica e emulsificados a 7.000 RPM por 60 segundos com um homogeneizador IKA T25 com gerador S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC, EUA). A mistura foi, então, transferida em uma fase de extração (380 ml com DCM a 0,33 % (p/v) em água) e agitada a 4 °C por 8 h. As micropartículas foram, então, coletadas com uma peneira de 25 µm e secas a vácuo a 4 °C por cerca de 16 h. Micropartículas foram, então, suspensas e lavadas em 200 ml de uma solução de etanol a 6,25, 12,5, 25 ou 50 % (v/v) por 8 h a 22 °C para remover PVA e quaisquer solventes residuais das micropartículas. As micropartículas lavadas foram, então, passadas por uma peneira de 125 µm e coletadas em uma peneira de 25 µm e secas a vácuo por 48 h.

[0081] As cargas de fármaco resultantes, teor de álcool benzílico residual e eficiência de encapsulamento podem ser encontrados na Tabela 8. As cargas de fármaco para 6,25, 12,5 e 25 % (v/v) não resultaram em quaisquer diferenças significativas ou tendência. O teor de álcool benzílico residual diminui com um aumento na concentração de lavagem com etanol para essa condição. Em 50 % (v/v), uma quantidade significativa de naltrexona é perdida durante a lavagem e a liberação de naltrexona foi muito mais rápida para a condição de 6,25, 12,5 e 25 %.

[0082] Tabela 8. Efeitos de concentração de lavagem com etanol sobre a carga de fármaco resultante, álcool benzílico (BA) residual e eficiência de encapsulamento (EE). Formulação Concentração Carga de BA EE (%) (F) de Lavagem Fármaco (% Residual com Etanol (% p/p) (% p/p) v/v) F.10-1 6,25 29,5 0,77 77,8 F.10-2 12,5 29,2 0,67 77,0 F.10-3 25 29,4 0,41 77,5 F.10-4 50 23,9 0,00 63,1 Exemplo 11. Preparação de Micropartículas de Naltrexona: Efeito de Temperatura de Lavagem com Etanol

[0083] A fase contínua foi preparada ao pesar 40 g de PVA e misturar com 4 l de água deionizada. A fase orgânica consistiu em 500 mg de PLGA 85:15 (Resomer RG 858S) e 294 mg de base livre de naltrexona (SpecGx, LLC) dissolvidos em

2,0 g de DCM e 467 mg de álcool benzílico (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) em um recipiente de cintilação de 20 ml. A fase contínua foi misturada adicionalmente com diclorometano, e 10 ml da fase contínua com diclorometano a 1,8 % (p/v) foram adicionados à fase orgânica e emulsificados a 7.000 RPM por 60 segundos com um homogeneizador IKA T25 com gerador S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC, EUA). A mistura foi, então, transferida em uma fase de extração (380 ml de PVA a 1 % (p/v) em água) e agitada a 4 °C por 8 h. Micropartículas foram, então, coletadas com uma peneira de 25 µm e secas a vácuo a 4 °C por cerca de 16 h. As micropartículas foram, então, suspensas e lavadas em 200 ml de uma solução de etanol a 25 % (v/v) por 8 h a 4 °C ou 22 °C para remover o agente emulsificante (PVA) e quaisquer solventes residuais das micropartículas. As micropartículas lavadas foram, então, passadas por uma peneira de 125 µm e coletadas em uma peneira de 25 µm e secas a vácuo por 48 h. As cargas de fármaco resultantes, teor de álcool benzílico residual e eficiência de encapsulamento podem ser encontrados na Tabela 9.

[0084] A lavagem com etanol a 22 °C resultou em micropartículas que tiveram um teor de álcool benzílico residual inferior e carga de fármaco superior, provavelmente, devido à extração de álcool benzílico. A liberação de naltrexona de micropartículas lavadas a 22 °C resultou em uma taxa de liberação mais rápida até 10 dias. A liberação de naltrexona de micropartículas a 4 °C resultou em uma taxa de liberação mais rápida após os 10 dias iniciais e durou apenas aproximadamente 35 dias in vitro, enquanto as partículas lavadas a 22 °C forneceram uma liberação de naltrexona por aproximadamente 50 dias.

[0085] Tabela 9. Efeitos de concentração de lavagem com etanol sobre a carga de fármaco resultante, álcool benzílico (BA) residual e eficiência de encapsulamento (EE). Formulação Temperatura Carga de BA EE (%) (F) de Lavagem Fármaco Residual com Etanol (% p/p) (% p/v) (°C) F.11-1 4 32,1 1,61 86,6 F.11-2 22 32,9 0,76 88,9 Exemplo 12. Resposta de Formulações in vivo

[0086] Sete formulações com cargas de naltrexona (base livre) de ~20 % a ~40 % foram avaliadas em estudos farmacocinéticos com ratos Sprague-Dawley. Dentre as sete formulações, cada uma dentre F.12-1, F.12-2, F.12-4 e F.12- 6 foi preparada da mesma maneira que F.3-5, F.4-1, F.8-6 e F.5-4, enquanto F.12-3, F.12-5 e F.12-7 foram preparadas como descrito abaixo. F.12-3

[0087] A fase contínua foi preparada ao pesar 40 g de poli(álcool vinílico)(PVA) (Mowiol 40-88, Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EUA) e misturar com 4 l de água deionizada. A fase orgânica consistiu em 500 mg de PLGA de razão de 85:15 (Resomer RG858S) e 294 mg de base livre de naltrexona (Tecoland Corporation, Irvine, CA, EUA) dissolvidos em 2,0 g de diclorometano (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) e 467 mg de álcool benzílico (Fisher Scientific, Fair

Lawn, NJ, EUA. 10 ml da fase contínua foram adicionados ao topo da fase orgânica e homogeneizados a 7.000 RPM por 60 segundos com um homogeneizador IKA T25 com gerador S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC, EUA). A mistura foi, então, transferida em uma fase de extração, que é 380 ml de 1 % (p/v) de PVA em água e agitada a 4 °C por 8 h. Micropartículas foram, então, coletadas com uma peneira de 25 µm. O produto retido pela peneira foi desidratado por 15 min a 22 °C e seco a vácuo por cerca de 16 h. As micropartículas foram, então, suspensas e lavadas em 200 ml de uma solução de etanol a 25 % (v/v) por 8 h a 22 °C para remover o agente emulsificante (PVA) e quaisquer solventes residuais das micropartículas. As micropartículas lavadas foram, então, coletadas em uma peneira de 25 µm e secas a vácuo por 48 h. F.12-5

[0088] A fase contínua foi preparada ao pesar 40 g de poli(álcool vinílico)(PVA) (Mowiol 40-88, Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EUA) e misturar com 4 l de água deionizada. A fase orgânica consistiu em 500 mg de PLGA de razão de 85:15 (Resomer RG858S) e 409 mg de base livre de naltrexona (Tecoland Corporation, Irvine, CA, EUA) dissolvidos em 2,0 g de diclorometano (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) e 623 mg de álcool benzílico (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) em um recipiente de cintilação de 20 ml. A fase contínua foi misturada adicionalmente com diclorometano, e 10 ml da fase contínua com DCM a 1,8 % (p/v) foram adicionados ao topo da fase orgânica e homogeneizados a 7.000 RPM por 60 segundos com um homogeneizador IKA T25 com gerador S25N - 10G (IKA Works,

Inc. Wilmington, NC, EUA). A mistura foi, então, transferida em uma fase de extração, que é 380 ml de DCM a 0,5 % (p/v) em água e agitada a 4 °C por 4 h. Micropartículas foram, então, coletadas com uma peneira de 25 µm. O produto retido pela peneira foi desidratado por 15 min a 22 °C e seco a vácuo por cerca de 16 h. As micropartículas foram, então, suspensas e lavadas em 200 ml de uma solução de etanol a 25 % (v/v) por 8 h a 22 °C para remover o agente emulsificante (PVA) e quaisquer solventes residuais das micropartículas. As micropartículas lavadas foram, então, coletadas em uma peneira de 25 µm e secas a vácuo por 48 h. F.12-7

[0089] A fase contínua foi preparada ao pesar 40 g de poli(álcool vinílico)(PVA) (Mowiol 40-88, Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EUA) e misturar com 4 l de água deionizada. A fase orgânica consistiu em 500 mg de PLGA de razão de 85:15 (Resomer RG858S) e 267 mg de base livre de naltrexona (Tecoland Corporation, Irvine, CA, EUA) dissolvidos em 2,0 g de diclorometano (DCM) (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) e 623 mg de álcool benzílico (Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ, EUA) em um recipiente de cintilação de 20 ml. A fase contínua foi misturada adicionalmente com diclorometano, e 10 ml da fase contínua com DCM a 1,8 % (p/v) foram adicionados ao topo da fase orgânica e homogeneizados a 7.000 RPM por 60 segundos com um homogeneizador IKA T25 com gerador S25N - 10G (IKA Works, Inc. Wilmington, NC, EUA). A mistura foi, então, transferida em uma fase de extração, que é 380 ml de DCM a 0,5 % (p/v) em água e agitada a 4 °C por 7 h.

Micropartículas foram, então, coletadas com uma peneira de 25 µm. O produto retido pela peneira foi desidratado por 15 min a 22 °C e seco a vácuo por cerca de 16 h. As micropartículas foram, então, suspensas e lavadas em 200 ml de uma solução de etanol a 25 % (v/v) por 8 h a 22 °C para remover o agente emulsificante (PVA) e quaisquer solventes residuais das micropartículas. As micropartículas lavadas foram, então, coletadas em uma peneira de 25 µm e secas a vácuo por 48 h.

[0090] O efeito de carga de fármaco, sistema de solvente e concentração de solvente sobre a liberação de naltrexona foi avaliado. A amostra com carga de fármaco mais baixo (F.12-2) resultou no que parece ser a maior liberação rápida em relação à liberação de estado estacionário de formulações. À medida que a carga de fármaco aumentou de aproximadamente 28 % para 38 %, concentrações superiores de cerca do dia 2 ao dia 20 foram observadas, mas, nas formulações, foram observadas concentrações plasmáticas de estado estacionário similares após o dia 20 entre aproximadamente 1,5 a 4 ng/ml até aproximadamente o dia 60. A concentração de naltrexona de 0,5 ng/ml foi mantida por cerca de 100 dias.

[0091] Tabela 10. Sumário de formulação para formulações caracterizadas in vivo Formulação PLGA Concentração Sistema Nível Carga EE(%) (F) Concentração de de de Dose de em DCM ou EA Naltrexona Solvente (mg/Kg) Fármaco (% p/p) em de Fase (% p/p) BA (% p/p) Orgânica F.12-1 20,0 38,6 DCM/BA 76 28,1 80,7

Formulação PLGA Concentração Sistema Nível Carga EE(%) (F) Concentração de de de Dose de em DCM ou EA Naltrexona Solvente (mg/Kg) Fármaco (% p/p) em de Fase (% p/p) BA (% p/p) Orgânica F.12-2 20,0 32,1 DCM/BA 76 21,7 58,6 F.12-3 20,0 38,6 DCM/BA 50 34,2 92,4 F.12-4 15,0 24,0 EA/BA 50 28,5 77,0 F.12-5 20,0 39,6 DCM/BA 50 36,1 80,2 F.12-6 20,0 44,0 DCM/BA 50 37,8 84,0 F.12-7 20,0 30,0 DCM/BA 50 27,8 79,9

[0092] A carga de Fármaco (% p/p) tem como base o peso de micropartícula.

PROCEDIMENTOS DE TESTE Liberação in vitro de Naltrexona das Formulações de Teste

[0093] O meio, 20 ml de solução salina tamponada com fosfato de pH 7,4 com Tween 20 a 0,05 % (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EUA) e ascorbato de sódio a 0,0625 % (p/v) (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, EUA) e aproximadamente 5 mg de artigo de teste foram colocados em um frasco do tipo Erlenmeyer de 50 ml com rolha e colocados em um banho de água a 37 °C a 100 RPM. Amostras foram tomadas em vários pontos de tempo e substituídas com meio de liberação fresco. O teor de naltrexona em tampão foi medido através de Cromatografia Líquida de Alto Desempenho (HPLC). HPLC de Fase Reversa para a Quantificação de Naltrexona

[0094] A HPLC teve as condições a seguir: Fase Móvel: tampão de metanol:fosfato de potássio de razão 65:35, pH 6,6; taxa de fluxo: 1,0 ml/min; temperatura de autoamostrador: temperatura ambiente; temperatura de coluna: 30 °C; detecção: 210 nm (UV); tempo de execução total: 7 min; volume de injeção: 10 µl; coluna: Zorbax SB- C18 150×4,6 mm, 5 µm; tempo de retenção aproximado de naltrexona: 4,8 min. Estudos Farmacocinéticos In vivo

[0095] Todos os estudos pré-clínicos de rato foram conduzidos em ratos Sprague-Dawley. Três a cinco ratos por formulação de teste foram injetados por via subcutânea na nuca atrás do pescoço ou na região escapular com uma dosagem de naltrexona que varia de 50 mg/kg a 100 mg/kg em 1 ml de um veículo à base de água, composto de cloreto de sódio a 0,9 %, Tween 20 a 0,02 % e carboximetilcelulose sódica a 0,5 %.

[0096] Durante o curso do estudo, os animais foram observados para toxicidade evidente e quaisquer anormalidades de local de teste, incluindo vermelhidão, inchaço, sangramento, secreção e hematomas no local da injeção. Além disso, pesos corporais foram medidos e registrados na administração e na conclusão do estudo.

[0097] Nos pontos de tempo selecionados, ratos foram anestesiados e sangrados (aproximadamente 250 µl) através da cauda ou veia submandibular. Sangue foi coletado em tubos de ácido etilenodiaminatetra-acético de potássio identificados. O sangue foi centrifugado por 10 min a 4.000 rpm a 4 °C. A fração plasmática foi transferida para tubos de plástico de 1 ml identificados e armazenada a -80 °C antes da análise.

Claims (21)

REIVINDICAÇÕES

1. Formulação de micropartícula injetável caracterizada por compreender uma micropartícula incluindo naltrexona e um polímero biodegradável, em que a liberação sustentada de naltrexona tem duração de mais de 4 semanas e até 100 dias.

2. Formulação de micropartícula, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a liberação sustentada de naltrexona tem duração de cerca de 8 semanas a cerca de 12 semanas.

3. Formulação de micropartícula, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a naltrexona está na forma de base livre, sal, solvato, cocristal ou combinações dos mesmos.

4. Formulação de micropartícula, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a naltrexona tem cerca de 20-40 % (p/p) da micropartícula.

5. Formulação de micropartícula, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o polímero biodegradável compreende um polilactídeo, poli(lactídeo-co- glicolídeo) ou combinações dos mesmos.

6. Formulação de micropartícula, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que uma razão de lactídeo:glicolídeo do polímero biodegradável é 50:50 a 100:0.

7. Formulação de micropartícula, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que uma razão de lactídeo:glicolídeo do polímero biodegradável é 65:35 a 90:10.

8. Formulação de micropartícula, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que uma razão de lactídeo:glicolídeo do polímero biodegradável é 75:25 a 85:15.

9. Formulação de micropartícula, de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o polímero biodegradável tem um peso molecular médio numérico de

50.000 a 150.000 Daltons.

10. Formulação de micropartícula, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a micropartícula é administrada em um veículo biocompatível, incluindo um veículo à base de água, um veículo à base de óleo ou combinação dos mesmos.

11. Formulação de micropartícula, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que o veículo à base de água compreende um agente de tonicidade, como cloreto de sódio, um agente melhorador de viscosidade, como carboximetilcelulose sódica, um agente umectante, como polissorbato ou combinações dos mesmos.

12. Formulação de micropartícula, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que o veículo à base de óleo compreende óleo de amendoim, óleo de gergelim, óleo de semente de algodão ou combinações dos mesmos.

13. Formulação de micropartícula, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que as micropartículas têm tamanho de partícula na faixa de 25 a 125 µm.

14. Método para tratar ou prevenir doenças relacionadas ao abuso ou dosagens excessivas de opioide,

dependência de álcool ou dor caracterizado por compreender administrar uma quantidade eficaz da formulação de micropartícula injetável conforme definida na reivindicação 1, a um indivíduo em necessidade de tal tratamento ou prevenção.

15. Método para preparar a formulação de micropartícula injetável, de acordo com a reivindicação 1, sendo o método caracterizado por compreender: (a) misturar uma primeira fase compreendendo álcool polivinílico e um primeiro solvente, e uma segunda fase compreendendo um polímero biodegradável, naltrexona e um segundo solvente para preparar uma mistura; e (b) realizar um processo de extração na mistura com água ou uma solução aquosa para obter micropartículas.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o primeiro solvente compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em água, diclorometano, álcool benzílico e acetato de etila.

17. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o segundo solvente compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em diclorometano, álcool benzílico e acetato de etila.

18. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que a solução aquosa compreende pelo menos um selecionado a partir do grupo que consiste em álcool polivinílico, diclorometano, álcool benzílico e acetato de etila.

19. Método, de acordo com a reivindicação 15,

caracterizado pelo fato de que o polímero biodegradável compreende um polilactídeo, poli(lactídeo-co-glicolídeo) ou combinações dos mesmos, em que uma razão de lactídeo:glicolídeo do polímero biodegradável é 50:50 a 100:0.

20. Método, de acordo com a reivindicação 15, sendo o método caracterizado por compreender adicionalmente (c) realizar um processo de extração adicional nas micropartículas com uma solução aquosa etanólica após (b) realizar o processo de extração.

21. Método, de acordo com a reivindicação 20, sendo o método caracterizado por compreender adicionalmente secar as micropartículas, em que a secagem é realizada após (b) realizar o processo de extração, após (c) realizar o processo de extração adicional, ou após cada um dentre (b) e (c).