BR112021004723A2 - anticorpos de receptor anti-il4 para uso veterinário - Google Patents

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BR112021004723A2
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Shyr Jiann Li
Lam Nguyen
Richard Chin
Hangjun Zhan
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Abstract

A presente invenção refere-se a várias modalidades relacionadas a anticorpos anti-IL4R que se ligam a IL4R canino. Em várias modalidades, tais anticorpos anti-IL4R podem ser usados em métodos para tratar condições induzidas por IL4/IL13, tais como dermatite atópica, dermatite alérgica, prurido, asma, psoríase, esclerodermia e eczema, em animais de companhia, tal como caninos e felinos. Também são fornecidas várias modalidades relacionadas a polipeptídeos Fc de IgG variantes e regiões constantes de cadeia leve variante de espécies de animal de companhia para a preparação de anticorpos ou anti-corpos biespecíficos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTICOR- POS DE RECEPTOR ANTI-IL4 PARA USO VETERINÁRIO".
CAMPO
[0001] A presente invenção refere-se a anticorpos anti-receptor de IL4 (IL4R) isolados, por exemplo, ligação a IL4R canino ou felino e re- dução da ligação a IL4 ou IL13, e métodos de uso dos mesmos, por exemplo, tratamento de condições induzidas por IL4 e/ou IL13 ou re- dução da função de sinalização de IL4 ou IL13 em células, por exem- plo em animais de companhia, como caninos e felinos.
ANTECEDENTES
[0002] A interleucina 4 (IL4) é uma citocina que induz células T auxiliares virgens a se diferenciarem em células Th2. IL4 pode tam- bém estimular a proliferação de células B e células T ativadas e induzir a mudança de classe de célula B para IgE. IL13 tem efeito similar so- bre as células imunes como IL4. Ambas as citocinas estão associadas com as alergias.
[0003] O receptor de IL4 é conhecido como IL4R alfa ou IL4R. IL4R pode emparelhar com um receptor de cadeia gama comum e es- pecificamente se ligar a IL4. ILAR pode também emparelhar com IL13Ra1 e, juntos, eles podem ligar-se a IL4 ou I1L13. Desse modo, o bloqueio de sítios de ligação em IL4R pode reduzir potencialmente a ligação de IL4 e/ou IL13 e reduzir o efeito de sinalização dessas duas citocinas.
[0004] Animais de companhia, como gatos, cães e cavalos, sofrem de muitas doenças de pele similares às doenças de pele humana, in- cluindo dermatite atópica e condições alérgicas. Permanece uma ne- cessidade, portanto, de métodos e compostos que podem ser usados especificamente para bloquear IL4 e/ou IL13 de animais de companhia para o tratamento de condições induzidas por IL4 e/ou induzidas por IL13 e para reduzir a sinalização de IL4 / IL13.
SUMÁRIO
[0001] Modalidade 1. Um anticorpo isolado que se liga a IL4R ca- nino ou IL4R felino, em que o anticorpo se liga a um epítopo compre- endendo a sequência de aminoácido de LXioFMGSENX11T (SEQ ID NO: 85), em que X1o é Dou Ne X1 é HouR.
[0002] Modalidade 2. Um anticorpo isolado que se liga a IL4R canino ou IL4R felino, em que o anticorpo se liga a um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de RLSYQLX:oFMGSENX:TCVPEN (SEQ ID NO: 86), em que X1vé Dou Ne X1 é HouR.
[0003] Modalidade 3. O anticorpo isolado de modalidade 2, em que o anticorpo se liga a um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de LX1oFMGSENX11T (SEQ ID NO: 85), em que X:o é D ou NeX1éHouR.
[0004] Modalidade 4. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o anticorpo se liga a um epítopo com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 88 ou SEQ ID NO: 91.
[0005] Modalidade 5. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o anticorpo se liga a um epítopo com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 89 ou SEQ ID NO: 92.
[0006] Modalidade 6. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o anticorpo se liga a um epítopo com- preendendo a sequência de aminoácido de SMX12X13DDX14a VEAD- VYQLX:sLWAGX:6sQ (SEQ ID NO: 87), em que X12 é P ou L, X13 é | ou M, X14 É A ou F, X15 É D ou H, e XKi6 É QouT.
[0007] Modalidade 7. Um anticorpo isolado que se liga a IL4R canino ou IL4R felino, em que o anticorpo se liga a um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de SMX:2X13DDX:VEADVYQLX:s LWAGX16 Q (SEQ ID NO: 87), em que X12 é P ou L, X13 É l ou M, Xu é A ou F,
Xi5 é D ou H, e X1w6 é Q ou T.
[0008] Modalidade 8. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o anticorpo se liga a um epítopo com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 90 ou SEQ ID NO: 93.
[0009] Modalidade 9. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o anticorpo se liga a IL4R canino ou IL4R felino com uma constante de dissociação (Kd) de menos do que x 106 M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 107 M, menos do que 1 x 107 M, menos do que 5 x 108 M, menos do que 1 x 108 M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10? M, ou menos do que 1 x 10º 12 M, como medido por interferometria de biocamada.
[0010] Modalidade 10. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo se liga a ILAR canino ou ILAR felino como determinado por análise immunoblot ou interferometria de biocamada.
[0011] Modalidade 11. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o anticorpo reduz ligação de um poli- peptídeo IL4 canino e/ou felino e/ou um polipeptídeo IL13 canino e/ou felino a ILA4R canino e/ou IL4R felino, como medido por interferometria de biocamada.
[0012] Modalidade 12. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o anticorpo compete com anticorpo monoclonal Clone B ou Clone | em ligação a IL4R canino ou IL4R feli- no.
[0013] Modalidade 13. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o anticorpo é um anticorpo monoclo- nal.
[0014] Modalidade 14. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o anticorpo é um anticorpo canino, caninizado, felino, felinizado ou quimérico.
[0015] Modalidade 15. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, em que o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo uma ou mais de estrutura de cadeia pesada variável murina ou uma ou mais de estrutura de cadeia leve variável murina.
[0016] Modalidade 16. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo uma cadeia pesada compre- endendo: a) uma sequência de CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de GYTFTSYVMH (SEQ ID NO: 1); b) uma sequência de CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de YINPX:NDGTFYNGX, X3X41G (SEQ ID NO: 2), em que X: é Kou A, XoKou A, Xg é FouV, e Xa é K ou Q, ou YINPX:NDGT (SEQ ID NO: 268), em que Xt é Kou A; e c) uma sequência de CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de FXsYGXAY (SEQ ID NO: 3), em que Xs é Nou Y, e Xsé lou F.
[0017] Modalidade 17. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo uma cadeia pesada compre- endendo: uma sequência de CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1; uma sequência de CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 271, ou SEQ ID NO: 273;e uma sequência de CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 9 ou SEQ ID NO: 31.
[0018] Modalidade 18. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo uma cadeia pesada compre- endendo: um CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1; um CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 271, ou SEQ ID NO: 272; e um CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 9 ou SEQ ID NO: 31.
[0019] Modalidade 19. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo uma cadeia leve compreen- dendo: a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de RASQEISGYLS (SEQ ID NO: 4); b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de AASX7Xs8DXs (SEQ ID NO: 5), em que X; é Tou N, Xgé RouL, e Xgé SouT;e uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de VQYASYPWT (SEQ ID NO: 6).
[0020] Modalidade 20. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo uma cadeia leve compreen- dendo: a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 4; b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 15 ou SEQ ID NO: 37; e c) uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 6.
[0021] Modalidade 21. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades anteriores, compreendendo uma cadeia leve compreen- dendo: a) uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoáci- do de SEQ ID NO: 4; b) uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoáci- do de SEQ ID NO: 15 ou SEQ ID NO: 37; e c) uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoáci- do de SEQ ID NO: 6.
[0022] Modalidade 22. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 16 a 21, também compreendendo um ou mais de (a) uma se- quência de estrutura 1 de cadeia pesada de região variável (HC-FR1) de SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 32; (b) uma sequência de HC-FR2 de SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 33; (c) uma sequência de HC-FR3 de SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 270, SEQ ID NO: 34, ou SEQ ID NO: 273; (d) uma sequência de HC-FR4 de SEQ ID NO: 13 ou SEQ ID NO: 35; (e) uma sequência de estrutura 1 de cadeia leve de região variável (LC-FR1) de SEQ ID NO: 17 ou SEQ ID NO: 39; (f) uma sequência de LC-FR2 de SEQ ID NO: 18 ou SEQ ID NO: 40; (g) uma sequência de LC-FR3 de SEQ ID NO: 19 ou SEQ ID NO: 41; ou (h) uma sequência de LC-FR4 de SEQ ID NO: 20 ou SEQ ID NO: 42.
[0023] Modalidade 23. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo compreende: a. (1) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 21 ou SEQ ID NO: 43; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 22 ou SEQ ID NO: 44; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequên- cia de cadeia leve variável como em (ii); ou b. (i) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, ou SEQ ID NO: 274; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, ou SEQ ID NO: 275; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii); ou C. (i) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou
100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 67 ou SEQ ID NO: 69; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 68 ou SEQ ID NO: 70; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequên- cia de cadeia leve variável como em (ii).
[0024] Modalidade 24. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo compreende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 274, SEQ ID NO: 67, ou SEQ ID NO: 69.
[0025] Modalidade 25. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo compreende uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 275, SEQ ID NO: 68, ou SEQ ID NO: 70.
[0026] Modalidade 26. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo compreende: a) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 21 ou SEQ ID NO: 43, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 22 ou SEQ ID NO: 44; b) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, ou SEQ ID NO: 274 e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66,
SEQ ID NO: 275; ou c) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 67 ou SEQ ID NO: 69 e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 68 ou SEQ ID NO: 70.
[0027] Modalidade 27. Um anticorpo isolado que se liga a ILAR canino ou IL4R felino, em que o anticorpo se liga a um epítopo com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 354.
[0028] Modalidade 28. O anticorpo isolado de modalidade 27, em que o anticorpo se liga a IL4R canino ou IL4R felino com uma constan- te de dissociação (Kd) de menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x M, menos do que 5 x 107 M, menos do que 1 x 107 M, menos do que 5 x 108 M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 107º M, menos do que 5 x 10? M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10? M, ou menos do que 1 x 10? M, como medido por interferometria de biocamada.
[0029] Modalidade 29. O anticorpo de modalidade 27 ou modali- dade 28, em que o anticorpo se liga a IL4R canino ou IL4R felino como determinado por análise immunoblot ou interferometria de biocamada.
[0030] Modalidade 30. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 27 a 29, em que o anticorpo reduz a ligação de um poli- peptídeo IL4 canino e/ou felino e/ou um polipeptídeo IL13 canino e/ou felino a ILA4R canino e/ou IL4R felino, como medido por interferometria de biocamada.
[0031] Modalidade 31. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 27 a 30, em que o anticorpo compete com anticorpo mo- noclonal M3 em ligação a IL4R canino ou IL4R felino.
[0032] Modalidade 32. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 27 a 31, em que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
[0033] Modalidade 33. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 27 a 32, em que o anticorpo é um anticorpo canino, cani- nizado, felino, felinizado ou quimérico.
[0034] Modalidade 34. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 27 a 33, em que o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo uma ou mais de estrutura de cadeia pesada variável murina ou uma ou mais de estrutura de cadeia leve variável murina.
[0035] Modalidade 35. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 27 a 34, compreendendo uma cadeia pesada compreen- dendo: a) uma sequência de CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 278; b) uma sequência de CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 279; e c) uma sequência de CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 280.
[0036] Modalidade 36. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 27 a 35, compreendendo uma cadeia leve compreenden- do: a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 285; b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 286; e c) uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 287.
[0037] Modalidade 37. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 27 a 36, também compreendendo um ou mais de (a) uma sequência de estrutura | de cadeia pesada de região variável (HC- FR1) de SEQ ID NO: 281; (b) uma sequência de HC-FR2 de SEQ ID NO: 282; (c) uma sequência de HC-FR3 de SEQ ID NO: 283; (d) uma sequência de HC-FR4 de SEQ ID NO: 284; (e) uma sequência de es- trutura 1 de cadeia leve de região variável (LC-FR1) de SEQ ID NO: 288; (f) uma sequência de LC-FR2 de SEQ ID NO: 289; (g) uma se- quência de LC-FR3 de SEQ ID NO: 290; ou (h) uma sequência de LC- FR4 de SEQ ID NO: 291.
[0038] Modalidade 38. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 27 a 37, em que o anticorpo compreende: a. (1) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 292; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 293; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii); ou b. (i) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 342 ou SEQ ID NO: 343; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 344; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia le- ve variável como em (ii).
[0039] Modalidade 39. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 27 a 38, em que o anticorpo compreende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 292, SEQ ID NO: 342, ou SEQ ID NO: 343.
[0040] Modalidade 40. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 27 a 39, em que o anticorpo compreende uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 293 ou SEQ ID NO: 344.
[0041] Modalidade 41. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 27 a 40, em que o anticorpo compreende: a) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 292, e uma se- quência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 293; e/ou b) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 342 ou SEQ ID NO: 343, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 344.
[0042] Modalidade 42. Um anticorpo isolado compreendendo: a) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 292, e uma se- quência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 293; ou b) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 342 ou SEQ ID NO: 343, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 344.
[0043] Modalidade 43. Um anticorpo isolado que se liga a ILAR canino ou IL4R felino, em que o anticorpo se liga a um epítopo com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 355 e/ou um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO:
356.
[0044] Modalidade 44. O anticorpo isolado de modalidade 43, em que o anticorpo se liga a IL4R canino ou IL4R felino com uma constan- te de dissociação (Kd) de menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x M, menos do que 5 x 107 M, menos do que 1 x 107 M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º Y, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 107º M, menos do que 5 x 10? M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10? M, ou menos do que 1 x 10? M, como medido por interferometria de biocamada.
[0045] Modalidade 45. O anticorpo de modalidade 43 ou modali- dade 44, em que o anticorpo se liga a IL4R canino ou IL4R felino como determinado por análise immunoblot ou interferometria de biocamada.
[0046] Modalidade 46. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 43 a 45, em que o anticorpo reduz a ligação de um poli- peptídeo IL4 canino e/ou felino e/ou um polipeptídeo IL13 canino e/ou felino a ILA4R canino e/ou IL4R felino, como medido por interferometria de biocamada.
[0047] Modalidade 47. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 43 a 46, em que o anticorpo compete com anticorpo M8 monoclonal em ligação a IL4R canino ou IL4R felino.
[0048] Modalidade 48. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 43 a 47, em que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
[0049] Modalidade 49. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 43 a 48, em que o anticorpo é um anticorpo canino, cani- nizado, felino, felinizado ou quimérico.
[0050] Modalidade 50. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 43 a 49, em que o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo uma ou mais de estrutura de cadeia pesada variável murina ou uma ou mais de estrutura de cadeia leve variável murina.
[0051] Modalidade 51. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 43 a 50, compreendendo uma cadeia pesada compreen- dendo: a) uma sequência de CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 310; b) uma sequência de CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 311; e c) uma sequência de CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 312.
[0052] Modalidade 52. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 43 a 51, compreendendo uma cadeia leve compreenden- do: a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 317; b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 318; e c) uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 319.
[0053] Modalidade 53. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 43 a 52, também compreendendo um ou mais de (a) uma sequência de estrutura | de cadeia pesada de região variável (HC- FR1) de SEQ ID NO: 313; (b) uma sequência de HC-FR2 de SEQ ID NO: 314; (c) uma sequência de HC-FR3 de SEQ ID NO: 315; (d) uma sequência de HC-FR4 de SEQ ID NO: 316; (e) uma sequência de es- trutura 1 de cadeia leve de região variável (LC-FR1) de SEQ ID NO: 320; (f) uma sequência de LC-FR2 de SEQ ID NO: 321; (g) uma se- quência de LC-FR3 de SEQ ID NO: 322; ou (h) uma sequência de LC- FR4 de SEQ ID NO: 323.
[0054] Modalidade 54. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 43 a 53, em que o anticorpo compreende: (a) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 324; (b) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo me- nos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 325; ou (c) uma sequência de cadeia pesada variável como em (a) e uma sequência de cadeia leve variável como em (b).
[0055] Modalidade 55. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 43 a 54, em que o anticorpo compreende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 324.
[0056] Modalidade 56. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 43 a 55, em que o anticorpo compreende uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 325.
[0057] Modalidade 57. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 43 a 56, em que o anticorpo compreende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 324, e uma sequência de cadeia leve variável compre- endendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 325.
[0058] Modalidade 58. Um anticorpo isolado compreendendo: uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 324, e uma sequência de cadeia leve vari- ável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 325.
[0059] Modalidade 59. Um anticorpo isolado que se liga a ILAR canino, em que o anticorpo se liga a um epítopo compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 357.
[0060] Modalidade 60. O anticorpo isolado de modalidade 59, em que o anticorpo se liga a IL4R canino com uma constante de dissocia- ção (Kd) de menos do que 5 x 10-6 M, menos do que 1 x 10-6 M, me- nos do que 5 x 107 M, menos do que 1 x 107 M, menos do que 5 x 10º 8 M, menos do que 1 x 108 M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, me- nos do que 5 x 10? M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10? M, ou menos do que 1 x 10? M, como medido por interferometria de biocamada.
[0061] Modalidade 61. O anticorpo de modalidade 58 ou modali- dade 59, em que o anticorpo se liga a IL4R canino como determinado por análise de immunoblot ou interferometria de biocamada.
[0062] Modalidade 62. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 58 a 61, em que o anticorpo reduz a ligação de um poli- peptídeo IL4 canino e/ou um polipeptídeo IL13 canino a IL4R canino, como medido por interferometria de biocamada.
[0063] Modalidade 63. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 58 a 62, em que o anticorpo compete com anticorpo M9 monoclonal em ligação a IL4R canino.
[0064] Modalidade 64. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 58 a 63, em que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
[0065] Modalidade 65. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 58 a 64, em que o anticorpo é um anticorpo canino, cani- nizado, felino, felinizado ou quimérico.
[0066] Modalidade 66. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 58 a 65, em que o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo uma ou mais de estrutura de cadeia pesada variável murina ou uma ou mais de estrutura de cadeia leve variável murina.
[0067] Modalidade 67. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 58 a 66, compreendendo uma cadeia pesada compreen- dendo: a) uma sequência de CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 326; b) uma sequência de CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 327; e c) uma sequência de CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 328.
[0068] Modalidade 68. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 58 a 67, compreendendo uma cadeia leve compreenden- do: a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 333; b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida-
de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 334; e c) uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 335.
[0069] Modalidade 69. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 58 a 68, também compreendendo um ou mais de (a) uma sequência de estrutura | de cadeia pesada de região variável (HC- FR1) de SEQ ID NO: 329; (b) uma sequência de HC-FR2 de SEQ ID NO: 330; (c) uma sequência de HC-FR3 de SEQ ID NO: 331; (d) uma sequência de HC-FR4 de SEQ ID NO: 332; (e) uma sequência de es- trutura 1 de cadeia leve de região variável (LC-FR1) de SEQ ID NO: 336; (f) uma sequência de LC-FR2 de SEQ ID NO: 337; (g) uma se- quência de LC-FR3 de SEQ ID NO: 338; ou (h) uma sequência de LC- FR4 de SEQ ID NO: 339.
[0070] Modalidade 70. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 58 a 69, em que o anticorpo compreende: a. (1) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 340; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 341; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii); ou b. (i) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 345 ou SEQID NO: 346; (ii) uma sequência de cadeia le- ve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%,
pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 347; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii).
[0071] Modalidade 71. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 58 a 70, em que o anticorpo compreende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 340, SEQ ID NO: 345, ou SEQ ID NO: 346.
[0072] Modalidade 72. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 58 a 71, em que o anticorpo compreende uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 341 ou SEQ ID NO: 347.
[0073] Modalidade 73. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 58 a 72, em que o anticorpo compreende: a) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 340, e uma se- quência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 341; e/ou b) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 345 ou SEQ ID NO: 346, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 347.
[0074] Modalidade 74. Um anticorpo isolado compreendendo: a) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 340, e uma se- quência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 341; ou b) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 345, ou SEQ ID NO: 346 e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 347.
[0075] Modalidade 75. Um anticorpo isolado que se liga a ILAR canino, compreendendo uma cadeia pesada compreendendo: a) uma sequência de CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 294; b) uma sequência de CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 295; e c) uma sequência de CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 296.
[0076] Modalidade 76. Um anticorpo isolado que se liga a ILAR canino, compreendendo uma cadeia leve compreendendo: a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 301; b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 302; e c) uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 303.
[0077] Modalidade 77. O anticorpo isolado de modalidade 75, compreendendo uma cadeia leve compreendendo: a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 301;
b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 302; e c) uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 303.
[0078] Modalidade 78. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 75 a 77, em que o anticorpo se liga a ILAR canino com uma constante de dissociação (Kd) de menos do que 5 x 10º M, me- nos do que 1 x 106 M, menos do que 5 x 107 M, menos do que 1 x 10 7? M, menos do que 5 x 108 M, menos do que 1 x 108 M, menos do que x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1x10*! M, menos do que 5 x 102? M, ou menos do que 1 x 102? M, como me- dido por interferometria de biocamada.
[0079] Modalidade 79. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 75 a 78, em que o anticorpo se liga a IL4R canino como deter- minado por análise immunoblot ou interferometria de biocamada.
[0080] Modalidade 80. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 75 a 79, em que o anticorpo reduz a ligação de um poli- peptídeo IL4 canino e/ou um polipeptídeo IL13 canino a IL4R canino, como medido por interferometria de biocamada.
[0081] Modalidade 81. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 75 a 80, em que o anticorpo compete com anticorpo M5 monoclonal em ligação a IL4R canino.
[0082] Modalidade 82. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 75 a 81, em que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
[0083] Modalidade 83. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 75 a 82, em que o anticorpo é um anticorpo canino, cani-
nizado, felino, felinizado ou quimérico.
[0084] Modalidade 84. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 75 a 83, em que o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo uma ou mais de estrutura de cadeia pesada variável murina ou uma ou mais de estrutura de cadeia leve variável murina.
[0085] Modalidade 85. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 75 a 84, também compreendendo um ou mais de (a) uma sequência de estrutura | de cadeia pesada de região variável (HC- FR1) de SEQ ID NO: 297; (b) uma sequência de HC-FR2 de SEQ ID NO: 298; (c) uma sequência de HC-FR3 de SEQ ID NO: 299; (d) uma sequência de HC-FR4 de SEQ ID NO: 300; (e) uma sequência de es- trutura 1 de cadeia leve de região variável (LC-FR1) de SEQ ID NO: 304; (f) uma sequência de LC-FR2 de SEQ ID NO: 305; (g) uma se- quência de LC-FR3 de SEQ ID NO: 306; ou (h) uma sequência de LC- FR4 de SEQ ID NO: 307.
[0086] Modalidade 86. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 75 a 85, em que o anticorpo compreende: a) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 308; b) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 309; ou c) uma sequência de cadeia pesada variável como em (a) e uma sequência de cadeia leve variável como em (b).
[0087] Modalidade 87. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 75 a 86, em que o anticorpo compreende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 308.
[0088] Modalidade 88. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 75 a 87, em que o anticorpo compreende uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 309.
[0089] Modalidade 89. O anticorpo isolado de qualquer uma das modalidades 75 a 88, em que o anticorpo compreende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 308, e uma sequência de cadeia leve variável compre- endendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 309.
[0090] Modalidade 90. Um anticorpo isolado compreendendo: uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 308, e uma sequência de cadeia leve vari- ável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 309.
[0091] Modalidade 91. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo compreende um polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem ou uma variante canina ou felina.
[0092] Modalidade 92. O anticorpo de modalidade 91, em que o polipeptídeo Fc de IgG é um polipeptídeo IgG-A Fc tipo selvagem ou variante canina; um polipeptídeo IgG-B Fc tipo selvagem ou variante canina; um polipeptídeo Fc de IgG-C tipo selvagem ou variante; um polipeptídeo Fc de IgG-D tipo selvagem ou variante; um polipeptídeo Fc de IgG1a tipo selvagem ou variante felina; um polipeptídeo Fc de IgG1b tipo selvagem ou variante felina; ou um polipeptídeo Fc de I9gG2 tipo selvagem ou variante felina.
[0093] Modalidade 93. O anticorpo da modalidade 91 ou modali- dade 92, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante tem afinidade de ligação aumentada para Proteína A em relação ao polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem; afinidade de ligação reduzida para C1iq em relação ao polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem; e/ou afinidade de ligação reduzida para CD16 em relação ao polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem.
[0094] Modalidade 94. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 91 a 93, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende pelo menos uma modificação de aminoácido para uma região de arti- culação em relação a um polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante tem produção recombinante aumentada e/ou formação de dissulfeto de articulação aumentada em relação ao polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem, como determinado por análise SDS-PAGE sob condições de redução e/ou não redução.
[0095] Modalidade 95. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 91 a 94, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 21, 23, 25, 80, 205, e/ou 207 de SEQ ID NO: 162; b) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 5, 38, 39, 94, 97, e/ou 98 de SEQ ID NO: 163; c) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 5, 21, 23, 24, 38, 39, 93, 97, e/ou 98 de SEQ ID NO: 165; d) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 21, 23, 25, 80, e/ou 207 de SEQ ID NO: 167; e) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 16 e/ou 198 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206; e/ou f) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po-
sição que corresponde à posição 14 e/ou 16 de SEQ ID NO: 207.
[0096] Modalidade 96. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 91 a 95, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 21,23, 25, 80, 205, e/ou 207 de SEQ ID NO: 162; b) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 5, 38, 39, 94, 97, e/ou 98 de SEQ ID NO: 163; c) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 5, 21, 23, 24, 38, 39, 93, 97, e/ou 98 de SEQ ID NO: 164; d) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 21,23, 25, 80, e/ou 207 de SEQ ID NO: 165; e) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 16 e/ou 198 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206; e/ou f) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 14 e/ou 16 de SEQ ID NO: 207.
[0097] Modalidade 97. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 91 a 96, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) uma treonina em uma posição que corresponde à posi- ção 21 de SEQ ID NO: 162, uma leucina em uma posição que corres- ponde à posição 23 de SEQ ID NO: 162, uma alanina em uma posição que corresponde à posição 25 de SEQ ID NO: 162, uma glicina em uma posição que corresponde à posição 80 de SEQ ID NO: 162, uma alanina em uma posição que corresponde à posição 205 de SEQ ID NO: 162, e/ou uma histidina em uma posição que corresponde à posi- ção 207 de SEQ ID NO: 162; b) uma prolina em uma posição que corresponde à posição de SEQ ID NO: 163, uma glicina em uma posição que corresponde à posição 38 de SEQ ID NO: 163, uma arginina em uma posição que corresponde à posição 39 de SEQ ID NO: 163, uma arginina em uma posição que corresponde à posição 93 de SEQ ID NO: 163, uma iso- leucina em uma posição que corresponde à posição 97 de SEQ ID NO: 163, e/ou uma glicina em uma posição que corresponde à posição 98 de SEQ ID NO: 163;
c) uma prolina em uma posição que corresponde à posição de SEQ ID NO: 164, uma treonina em uma posição que corresponde à posição 21 de SEQ ID NO: 164, uma leucina em uma posição que corresponde à posição 23 de SEQ ID NO: 164, uma isoleucina em uma posição que corresponde à posição 24 de SEQ ID NO: 164, uma glicina em uma posição que corresponde à posição 38 de SEQ ID NO: 164, uma arginina em uma posição que corresponde à posição 39 de SEQ ID NO: 164, uma arginina em uma posição que corresponde à posição 93 de SEQ ID NO: 164, uma isoleucina em uma posição que corresponde à posição 97 de SEQ ID NO: 164, e/ou uma glicina em uma posição que corresponde à posição 98 de SEQ ID NO: 164;
d) uma treonina em uma posição que corresponde à posi- ção 21 de SEQ ID NO: 165, uma leucina em uma posição que corres- ponde à posição 23 de SEQ ID NO: 165, uma alanina em uma posição que corresponde à posição 25 de SEQ ID NO: 165, uma glicina em uma posição que corresponde à posição 80 de SEQ ID NO: 165, e/ou uma histidina em uma posição que corresponde à posição 207 de SEQ ID NO: 165;
e) uma prolina em uma posição que corresponde à posição 16 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206 e/ou uma alanina em uma posição que corresponde à po- sição 198 de SSEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206; e/ou f) uma cisteína em uma posição que corresponde à posição 14 de SEQ ID NO: 207 e/ou uma prolina em uma posição que corres- ponde à posição 16 de SEQ ID NO: 207.
[0098] Modalidade 98. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 91 a 97, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) uma treonina na posição 21 de SEQ ID NO: 162, uma leucina na posição 23 de SEQ ID NO: 162, uma alanina na posição 25 de SEQ ID NO: 162, uma glicina na posição 80 de SEQ ID NO: 162, uma alanina na posição 205 de SEQ ID NO: 162, e/ou uma histidina na posição 207 de SEQ ID NO: 162; b) uma prolina na posição 5 de SEQ ID NO: 163, uma glici- na na posição 38 de SEQ ID NO: 163, uma arginina na posição 39 de SEQ ID NO: 163, uma arginina na posição 93 de SEQ ID NO: 163, uma isoleucina na posição 97 de SEQ ID NO: 163, e/ou uma glicina na posição 98 de SEQ ID NO: 163; c) uma prolina na posição 5 de SEQ ID NO: 164, uma treo- nina na posição 21 de SEQ ID NO: 164, uma leucina na posição 23 de SEQ ID NO: 164, uma isoleucina na posição 24 de SEQ ID NO: 164, uma glicina na posição 38 de SEQ ID NO: 164, uma arginina na posi- ção 39 de SEQ ID NO: 164, uma arginina na posição 93 de SEQ ID NO: 164, uma isoleucina na posição 97 de SEQ ID NO: 164, e/ou uma glicina na posição 98 de SEQ ID NO: 164; d) uma treonina na posição 21 de SEQ ID NO: 165, uma leucina na posição 23 de SEQ ID NO: 165, uma alanina na posição 25 de SEQ ID NO: 165, uma glicina na posição 80 de SEQ ID NO: 165, e/ou uma histidina na posição 207 de SEQ ID NO: 165; e) uma prolina na posição 16 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206 e/ou uma alanina na posição 198 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206; e/ou f) uma cisteína na posição 14 de SEQ ID NO: 207 e/ou uma prolina na posição 16 de SEQ ID NO: 207.
[0099] Modalidade 99. O anticorpo de qualquer uma das modali-
dades 91 a 98, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende uma região CH1 compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região CH1 de IgG tipo selvagem cani- no ou felino, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 24 e/ou posição 30 de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou b) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 24 e/ou posição 29 de SEQ ID NO:
238.
[00100] — Modalidade 100. Um anticorpo compreendendo um polipep- tídeo Fc de IgG variante compreendendo uma região CH1 compreen- dendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região CH1 de IgG tipo selvagem canino ou felino, em que o polipeptí- deo Fc de IgG variante compreende: a) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 24 e/ou posição 30 de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou b) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 24 e/ou posição 29 de SEQ ID NO:
238.
[00101] “Modalidade 101. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 27 a 36, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende uma região CH1 compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região CH1 de IgG tipo selvagem cani- no ou felino, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 24 e/ou posição 30 de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO:
229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou b) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 24 e/ou posição 29 de SEQ ID NO: 238.
[00102] “Modalidade 102. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 97 a 101, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreen- de uma região CH1 compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região CH1 de IgG tipo selvagem cani- no ou felino, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) uma leucina em uma posição que corresponde à posição 24 e/ou uma asparagina em uma posição que corresponde à posição de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou b) uma leucina em uma posição que corresponde à posição 24 e/ou uma asparagina em uma posição que corresponde à posição 29 de SEQ ID NO: 238.
[00103] “Modalidade 103. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 91 a 102, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreen- de uma região CH1 compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região CH1 de IgG tipo selvagem cani- no ou felino, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) uma leucina na posição 24 e/ou uma asparagina na po- sição 30 de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou b) uma leucina na posição 24 e/ou uma asparagina na po- sição 29 de SEQ ID NO: 238.
[00104] “Modalidade 104. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo compreende uma região cons- tante de cadeia leve tipo selvagem ou uma variante canina ou felina.
[00105] Modalidade 105. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo compreende uma região cons-
tante «x de cadeia leve tipo selvagem ou uma variante canina ou felina.
[00106] Modalidade 106. O anticorpo de modalidade 104 ou moda- lidade 105, em que a região constante de cadeia leve variante com- preende pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região constante « de cadeia leve tipo selvagem canina ou felina compreendendo: a) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 11 e/ou posição 22 de SEQ ID NO: 235; ou b) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 11 e/ou posição 22 de SEQ ID NO:
241.
[00107] “Modalidade 107. Um anticorpo compreendendo uma região constante de cadeia leve variante compreende pelo menos uma modi- ficação de aminoácido em relação a uma região constante « de cadeia leve tipo selvagem canina ou felina compreendendo: a) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 11 e/ou posição 22 de SEQ ID NO: 235; ou b) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 11 e/ou posição 22 de SEQ ID NO:
241.
[00108] “Modalidade 108. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 104 a 107, em que a região constante de cadeia leve variante compreende pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região constante « de cadeia leve tipo selvagem canina ou feli- na compreendendo: a) uma alanina em uma posição que corresponde à posição 11 e/ou uma arginina em uma posição que corresponde à posição 22 de SEQ ID NO: 235; ou b) uma alanina em uma posição que corresponde à posição 11 e/ou uma arginina em uma posição que corresponde à posição 22 de SEQ ID NO: 241.
[00109] “Modalidade 109. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 104 a 108, em que a região constante de cadeia leve variante compreende pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região constante « de cadeia leve tipo selvagem canina ou feli- na compreendendo: a) uma alanina na posição 11 e/ou uma arginina na posição 22 de SEQ ID NO: 235; ou b) uma alanina na posição 11 e/ou uma arginina na posição 22 de SEQ ID NO: 241.
[00110] Modalidade 110. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 104 a 109, em que a região constante de cadeia leve compre- ende uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 235, 236, 241, e/ou 242.
[00111] Modalidade 111. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo é um anticorpo biespeciífico.
[00112] “Modalidade 112. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo é um anticorpo biespecífico compreendendo: i) um primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um primeiro polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem canino e um segun- do polipeptídeo Fc de IgG variante canina compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um segundo polipeptí- deo Fc de IgG tipo selvagem canino, em que: a) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 138 de SEQ ID NO: 162, posição 137 de SEQ ID NO:
163, posição 137 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 de SEQ ID NO: 167, e/ou b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 162, posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 163, posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 167; ou ii) um polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreenden- do pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um pri- meiro polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem felino e um segundo poli- peptídeo Fc de IgG variante felina compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um segundo polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem felino, em que: a) o polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreende uma substituição de aminoácido em uma posição que corresponde à posi- ção 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207, e/ou b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante felina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 154 e/ou posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207.
[00113] “Modalidade 113. Um anticorpo ou um anticorpo biespecífico compreendendo: i) um primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um primeiro polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem canino e um segun- do polipeptídeo Fc de IgG variante canina compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um segundo polipeptí- deo Fc de IgG tipo selvagem canino, em que:
a) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 138 de SEQ ID NO: 162, posição 137 de SEQ ID NO: 163, posição 137 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 de SEQ ID NO: 167, e/ou b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 162, posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 163, posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 167;
ii) um polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreenden- do pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um pri- meiro polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem felino e um segundo poli- peptídeo Fc de IgG variante felina compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um segundo polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem felino, em que:
a) o polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreende uma substituição de aminoácido em uma posição que corresponde à posi- ção 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207, e/ou b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante felina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 154 e/ou posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; ou iii) um polipeptídeo Fc de IgG variante equina compreen- dendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um primeiro polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem equino e um segundo polipeptídeo Fc de IgG variante equina compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um segundo polipeptí-
deo Fc de IgG tipo selvagem equino, em que: a) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 130 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260, e/ou b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 130 e/ou posição 132 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260.
[00114] “Modalidade 114. O anticorpo de modalidade 112 ou moda- lidade 113, em que: a) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende um triptofano em uma posição que corresponde à posição 138 de SEQ ID NO: 162, posição 137 de SEQ ID NO: 163, posição 137 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 de SEQ ID NO: 167; b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma serina em uma posição que corresponde à posição 138 e/ou uma alanina em uma posição que corresponde à posição 140 de SEQ ID NO: 162, uma serina em uma posição que corresponde à po- sição 137 e/ou uma alanina em uma posição que corresponde à posi- ção 139 de SEQ ID NO: 163, uma serina em uma posição que corres- ponde à posição 137 e/ou uma alanina em uma posição que corres- ponde à posição 139 de SEQ ID NO: 165, ou uma serina em uma po- sição que corresponde à posição 138 e/ou uma alanina em uma posi- ção que corresponde à posição 140 de SEQ ID NO: 167; c) o polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreende um triptofano em uma posição que corresponde à posição 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou
SEQ ID NO: 207; d) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante felina com- preende uma serina em uma posição que corresponde à posição 154 e/ou uma alanina em uma posição que corresponde à posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; e) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende um triptofano em uma posição que corresponde à posição 130 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260; e/ou f) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende uma serina em uma posição que corresponde à posição 130 e/ou uma alanina em uma posição que corresponde à posição 132 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260.
[00115] “Modalidade 115. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 112 a 114, em que: a) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma substituição de aminoácido na posição 138 de SEQ ID NO: 162, posição 137 de SEQ ID NO: 163, posição 137 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 de SEQ ID NO: 167; b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma substituição de aminoácido na posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 162, uma substituição de aminoácido na posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 163, uma substituição de ami- noácido na posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 165, ou uma substituição de aminoácido na posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 167; c) o polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreende uma substituição de aminoácido na posição 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ
ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; d) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante felina com- preende uma substituição de aminoácido na posição 154 e/ou posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; e) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende uma substituição de aminoácido na posição 130 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260; e/ou f) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende uma substituição de aminoácido na posição 130 e/ou posição 132 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260.
[00116] Modalidade 116. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 112 a 115, em que: a) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende um triptofano na posição 138 de SEQ ID NO: 162, posição 137 de SEQ ID NO: 163, posição 137 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 de SEQ ID NO: 167; b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma serina na posição 138 e/ou uma alanina na posição 140 de SEQ ID NO: 162, uma serina na posição 137 e/ou uma alanina na posição 139 de SEQ ID NO: 163, uma serina na posição 137 e/ou uma alanina na posição 139 de SEQ ID NO: 165, ou uma serina na posição 138 e/ou uma alanina na posição 140 de SEQ ID NO: 167; c) o polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreende um triptofano na posição 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; d) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante felina com- preende uma serina na posição 154 e/ou uma alanina na posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; e) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende um triptofano na posição 130 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260; e/ou f) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende uma serina na posição 130 e/ou uma alanina na posição 132 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260.
[00117] “Modalidade 117. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 112 a 116, em que o primeiro polipeptídeo Fc de IgG tipo selva- gem e o segundo polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem são do mesmo subtipo de IgG.
[00118] Modalidade 118. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades 112 a 117, em que o primeiro polipeptídeo Fc de IgG tipo selva- gem e o segundo polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem são de um di- ferente subtipo de IgG.
[00119] “Modalidade 119. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo compreende um polipeptídeo Fc de IgG compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 237, 238, 239, 240, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, e/ou 267.
[00120] Modalidade 120. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo compreende:
a. (i) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 25 ou SEQ ID NO: 47; (ii) uma sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 26 ou SEQ ID NO: 48; ou (iii) uma se- quência de aminoácido de cadeia pesada como em (i) e uma sequên- cia de cadeia leve como em (ii); b. (i) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 51 ou SEQ ID NO: 55; (ii) uma sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 52 ou SEQ ID NO: 56; ou (iii) uma se- quência de aminoácido de cadeia pesada como em (i) e uma sequên- cia de cadeia leve como em (ii); Cc. (i) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, ou SEQ ID NO: 276; (ii) uma sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, ou SEQ ID NO: 277; ou (iii) uma sequência de aminoácido de cadeia pe- sada como em (i) e uma sequência de cadeia leve como em (ii); d. (i) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82, ou SEQ ID NO: 83; (ii) uma sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 81 ou SEQ ID NO: 84; ou (iii) uma sequência de aminoácido de cadeia pesa- da como em (i) e uma sequência de cadeia leve como em (ii); ou e. (i) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 243; (ii) uma sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 244; ou (iii) uma sequência de aminoácido de cadeia pe- sada como em (i) e uma sequência de cadeia leve como em (ii).
[00121] Modalidade 121. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo é um anticorpo biespecífico que se liga a ILAR e um ou mais antígenos selecionados de IL17, IL31, TNFa, CD20, CD19, CD25, ILA4, I1L13, 1123, IgE, CD11a, IL6R, o4- Intergrina, I1L12, IL1B, ou BIyS.
[00122] “Modalidade 122. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo compreende (i) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 245; (ii) uma se- quência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 246; ou (iii) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada como em (i) e uma se- quência de cadeia leve como em (ii).
[00123] “Modalidade 123. O anticorpo de qualquer uma das modali- dades anteriores, em que o anticorpo é um fragmento de anticorpo, tal como um fragmento Fv, scFv, Fab, Fab', F(ab')2, ou Fab'-SH.
[00124] “Modalidade 124. Um ácido nucleico isolado codificando o anticorpo de qualquer uma das modalidades anteriores.
[00125] “Modalidade 125. Uma célula hospedeira compreendendo o ácido nucleico da modalidade 124.
[00126] Modalidade 126. Uma célula hospedeira que expressa o anticorpo de qualquer uma das modalidades 1 a 123.
[00127] “Modalidade 127. Um método de produção de um anticorpo compreendendo cultivar a célula hospedeira da modalidade 125 ou modalidade 126 e isolar o anticorpo.
[00128] “Modalidade 128. Uma composição farmacêutica compreen- dendo o anticorpo de qualquer uma das modalidades 1 a 123 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[00129] “Modalidade 129. Um método de tratamento de uma espécie de animal de companhia tendo uma condição induzida por IL4/I1L13, o método compreendendo administrar à espécie de animal de compa- nhia uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo de qualquer uma das modalidades 1 a 123 ou a composição farmacêutica da mo- dalidade 128.
[00130] “Modalidade 130. O método da modalidade 129, em que a espécie de animal de companhia é canina, felina, ou equina.
[00131] “Modalidade 131. O método da modalidade 129 ou modali-
dade 130, em que a condição induzida por IL4/IL13 é uma condição prurítica ou alérgica.
[00132] “Modalidade 132. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 129 a 131, em que a condição induzida por IL4/IL13 é selecionada de dermatite atópica, dermatite alérgica, prurido, asma, psoríase, esclerodermia, e eczema.
[00133] Modalidade 133. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 129 a 132, em que o anticorpo ou a composição far- macêutica é administrado parenteralmente.
[00134] “Modalidade 134. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 129 a 133, em que o anticorpo ou a composição farma- cêutica é administrado por uma via intramuscular, uma via intraperitoneal, uma via intracerebroespinhal, uma via subcutânea, uma via intra-arterial, uma via intrasinovial, uma via intratecal, ou uma via inalatória.
[00135] “Modalidade 135. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 129 a 134, em que o método compreende adminis- trar em combinação com o anticorpo ou a composição farmacêutica um inibidor de Jak, um inibidor de PI3K, um inibidor de ERK.
[00136] Modalidade 136. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 129 a 135, em que o método compreende adminis- trar em combinação com o anticorpo ou a composição farmacêutica um ou mais anticorpos selecionados de um anticorpo anti-IL17, um anticorpo anti-IL31, um anticorpo anti-TNFa, um anticorpo anti-CD20, um anticorpo anti-CD19, um anticorpo anti-CD25, um anticorpo anti- IL4, um anticorpo anti-IL13, um anticorpo anti-IL23, um anticorpo anti- IgE, um anticorpo anti-CD11a, anticorpo anti-IL6R, anticorpo anti-a4- Intergrina, um anticorpo anti-IL12, um anticorpo anti-IL1B, e um anti- corpo anti-BlyS.
[00137] “Modalidade 137. Um método de redução de função de sina- lização de IL4 e/ou IL13 em uma célula, o método compreendendo ex-
por para a célula o anticorpo de qualquer uma das modalidades 1 a 123 ou a composição farmacêutica da modalidade 64 sob condições permissivas para ligação do anticorpo a IL4 e/ou IL13 extracelular, re- duzindo, assim, ligação de IL4 e/ou IL13 ao receptor de IL4R e/ou re- duzindo função de sinalização de IL4 e/ou IL13 pela célula.
[00138] Modalidade 138. O método da modalidade 137, em que a célula é exposta ao anticorpo ou à composição farmacêutica ex vivo.
[00139] “Modalidade 139. O método da modalidade138, em que a célula é exposta ao anticorpo ou à composição farmacêutica in vivo.
[00140] “Modalidade 140. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 137 a 139, em que a célula é uma célula canina, uma célula felina, ou uma célula equina.
[00141] “Modalidade 141. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 137 a 140, em que o anticorpo reduz sinalização de IL4 e/ou IL13 na célula, como determinado por uma redução na fosfori- lação de STATG6.
[00142] “Modalidade 142. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 137 a 141, em que a célula é uma célula DH82 canina.
[00143] “Modalidade 143. Um método para detecção de IL4Rem uma amostra de uma espécie de animal de companhia compreenden- do contatar a amostra com o anticorpo de qualquer uma das modali- dades 1 a 123 ou a composição farmacêutica da modalidade 128 sob condições permissivas para ligação do anticorpo a IL4R.
[00144] “Modalidade 144. O método da modalidade 141, em que a amostra é uma amostra biológica obtida de um canino, um felino, ou um equino.
[00145] Modalidade 145. Um método de análise para uma molécula que inibe função de sinalização de IL4 e/ou IL13 compreendendo ex- por a uma célula DH82 canina a molécula e detectat se há uma redu- ção na fosforilação de STAT6.
[00146] Modalidade 146. O método de modalidade 145, em que a molécula compreende um anticorpo anti-IL4R ouantagonista de molé- cula pequena de IL4R.
[00147] “Modalidade 147. O método de modalidade 145 ou modali- dade 146, em que a molécula compreende um anticorpo anti-IL13R ou antagonista de molécula pequena de ILI13R.
[00148] Modalidade 148. O método de acordo com qualquer uma das modalidades 145 a 147, em que a molécula compreende um anti- corpo anti-IL4 ou antagonista de molécula pequena de ILA.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[00149] AFIG.1é um alinhamento de sequências de aminoácidos de cadeia pesada e leve dos clones de anticorpo monoclonal de ca- mundongo Clone B e Clone |.
[00150] AFIG.2Ae FIG. 2B são gráficos de análises de ligação ao epítopo competitivo de IL4R canino com o Clone B seguido pelo Clone | (FIG. 2A) e com o Clone | seguido pelo Clone B.
[00151] As FIGS. 3A, 3B, 3C e 3D são gráficos de análises de ligação competitiva de ILA4R canino com o Clone B ou Clone | seguido por IL4 canino (FIG. 3A); com Clone B ou Clone | seguido por IL13 ca- nino (FIG. 3B); com IL4 canino seguido pelo Clone B ou Clone | (FIG. 3C); e com IL13 canino seguido pelo Clone B ou Clone | (FIG. 3D).
[00152] As FIGS. 4A e 4B são immunomanchas de polipeptídeos ECD de IL4R felinos, equinos, murinos, humanos e caninos sondados com o Clone | (FIG. 4A) e o anticorpo Fc anti-humano como um con- trole (FIG. 4B) sob condições de não redução (-DTT, painel esquerdo) e de redução (+DTT, painel direito).
[00153] A FIG. 5A é uma ilustração de polipeptídeos híbridos de ECD de IL4R caninos / humanos usados para análises de mapeamen- to de epítopo de IL4R canino. As FIGS. 5B e 5C são imunomanchas de ECD de IL4R canino, ECD de IL4R humano, os vários polipeptíde-
os híbridos de ECD de IL4R canino / humano ilustrados em 5A son- dados com Clone | (FIG. 5B) e anticorpo Fc anti-humano como um controle (FIG. 5C).
[00154] FIG.6A é uma ilustração de polipeptídeos híbridos de ECD de IL4R canino / humano usados para análises adicionais de mapea- mento de epítopo de IL4R canino. FIGS. 6B e 6C são imunomanchas de ECD de IL4R canino, ECD de IL4R humano e os vários polipep- tídeos híbridos de ECD de IL4R canino / humano ilustrados em 6A sondados com Clone | (FIG. 6B) e anticorpo anti-Fc humano como um controle (FIG. 6C).
[00155] As FIG. 7A identifica polipeptídeos mutantes de alanina ECD de IL4R caninos descritos também na Tabela 1, que foram usa- dos para análises de mapeamento de epítopo IL4R canino adicionais. As FIGS. 7B e 7C são imunomanchas de ECD de IL4R humano, ECD de IL4R canino e os vários polipeptídeos mutantes de alanina ECD de IL4R caninos sondados com o Clone | (FIG. 7B) e anticorpo Fc anti- humano como um controle (FIG. 7C).
[00156] AFIG.8é um modelo tridimensional de um complexo de IL4 canino, ECD de IL4R canino e ECD de IL13R canino. Um primeiro epítopo é identificado pela seta.
[00157] A FIG. 9A é uma ilustração de polipeptídeos híbridos de ECD de IL4R canino/humano usados para análises de mapeamento de epítopo de IL4R canino. A FIG. 9B resume a análise de western blotting de ECD de IL4R canino, ECD de ILA4R humano e vários polipeptídeos híbridos de ECD de IL4R canino/humano sondados com anticorpos M3, M8 e M9.
DESCRIÇÃO DE CERTAS SEQUÊNCIAS
[00158] A Tabela 1 fornece uma listagem de certas sequências ref- erenciadas neste documento.
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DESCRIÇÃO DE CERTAS MODALIDADES
[00159] — Anticorpos que ligam IL4R canino e/ou IL4R felino são for- necidos. As cadeias pesadas e leves de anticorpos que são capazes de formar anticorpos que se ligam a IL4R também são fornecidas. Além disso, são fornecidos anticorpos, cadeias pesadas e cadeias le- ves compreendendo uma ou mais regiões determinantes de comple- mentaridade (CDRs) particulares. São fornecidos polinucleotídeos que codificam anticorpos para IL4R canino ou felino. Métodos de produção ou purificação de anticorpos para IL4R canino ou felino também são fornecidos. Métodos de tratamento usando anticorpos para IL4/IL13 canino e/ou felino são fornecidos. Tais métodos incluem, mas não es- tão limitados a, métodos de tratamento de condições induzidas por IL4 e/ou condições induzidas por IL13 em espécies de animais de compa- nhia. Métodos de detecção de IL4R solúvel em uma amostra de uma espécie de animal de companhia são fornecidos. Métodos de triagem de moléculas que inibem a função de sinalização de IL4 e/ou IL13 (por exemplo, anticorpos anti-IL4R, anti-IL13R, anti-IL4 e anti-|IL13 e anta- gonistas de moléculas pequenas de IL4R, ILI13R, IL4 e I1L13) são tam- bém fornecidos.
[00160] Também são fornecidos polipeptídeos IgG Fc variantes de animais de companhia, como caninos e felinos, tendo ligação aumen- tada à Proteína A, ligação diminuída a C1qg, ligação diminuída a CD16, estabilidade aumentada, produção recombinante aumentada e/ou for- mação de dissulfeto de articulação aumentado que pode ser usada no contexto dos anticorpos IL4R caninos ou felinos aqui fornecidos. Além disso, são fornecidos aqui polipeptídeos IgG Fc variantes e regiões constantes de cadeia leve variantes de animais de companhia, tal co- mo caninos, felinos e equinos, para a preparação de anticorpos bies- pecíficos, incluindo anticorpos anti-ILAR. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-|IL4R ou fragmentos de anticorpos compreendem um polipeptídeo IgG Fc variante ou uma região constante de cadeia leve variante. Métodos para a preparação de anticorpos anti-IL4R e anti- corpos biespecíficos incorporando polipeptídeos IgG Fc variantes são fornecidos.
[00161] Novos anticorpos direcionados contra IL4R são fornecidos, por exemplo, anticorpos que se ligam a IL4R canino e/ou IL4R felino. Os anticorpos anti-IL4R fornecidos aqui incluem, mas não estão limita- dos a, anticorpos monoclonais, anticorpos de camundongo, anticorpos quiméricos, anticorpos caninizados, anticorpos felinizados e anticorpos biespecíficos. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|IL4R é um anticorpo monoclonal de camundongo isolado, como o Clone B, Clone |, M3, M5, M8 ou M9.
[00162] Os clones de hibridoma foram obtidos após imunização de camundongos com IL4R canino usando tecnologia de hibridoma pa- drão. O anticorpo monoclonal Clone B, Clone |, M3, M5, M8 e M9 fo- ram selecionados para investigação adicional após análise de ensaio imunoenzimático (ELISA), ensaios de afinidade de ligação e ensaio de neutralização in vitro. As cadeias pesadas e leves do Clone B e Clone | foram sequenciadas e analisadas por alinhamento de sequência (Fi- gura 1; SEQ ID NO: 27 (Clone B HC), SEQ ID NO: 28 (Clone B LC), SEQ ID NO: 49 (Clone | HC), e SEQ ID NO: 50 (Clone | LC)). As ca- deias variável pesada (VH) e variável leve (VL) de M3, M5, M8 e M9 também foram sequenciadas (SEQ ID NO: 292 (M3 VH), SEQ ID NO: 293 (M3 VL), SEQ ID NO: 308 (M5 VH), SEQ ID NO: 309 (M5 VL), SEQ ID NO: 324 (M8 VH), SEQ ID NO: 325 (M8 VL), SEQ ID NO: 340 (M9 VH) e SEQ ID NO : 341 (M9 VL).
[00163] Também são fornecidas aqui sequências de aminoácidos do anticorpo monoclonal Clone B e Clone |. Sequências de CDR de consenso exemplares foram identificadas como CDR-H1: GYTFTSYV MH (SEQ ID NO: 1), CDR-H2: YINPXINDGTFYNGX2X3X4G (SEQ ID
NO: 2), em que X: é Kou A, XoKouA, X3 é F ou V, e Xa é Kou Q, ou YINPX:NDGT (SEQ ID NO: 268), em que X; é K ou A,; CDR-H3: FXsYGXsAY (SEQ ID NO: 3), em que Xs é N ou Y, e Xs é | ou F, CDR- L1: RASQEISGYLS (SEQ ID NO: 4); CDR-L2: AASX7;XgDX,s (SEQ ID NO: 5), em que X; é Tou N, Xgé RouL,e Xsé S ou T; e CDR-L3: VQYASYPWT (SEQ ID NO: 6).
[00164] Além disso, por exemplo, CDRs de cadeia pesada variável (SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 269 e SEQ ID NO: 9), CDRs de cadeia leve variável (SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 e SEQ ID NO: 16), sequências estruturais da cadeia pesada da região variá- vel (SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 270 e SEQ ID NO : 13), e as sequências estruturais da cadeia leve da re- gião variável (SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 e SEQ ID NO: 20) para o anticorpo monoclonal Clone B são fornecidas. As sequências de aminoácidos da cadeia pesada variável e da cadeia le- ve variável do anticorpo monoclonal Clone B são fornecidas com e sem sequência líder (SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 e SEQ ID NO: 24) . As sequências de aminoácidos da cadeia pesada e da cadeia leve do Clone B são fornecidas com e sem sequência líder (SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 e SEQ ID NO: 28).
[00165] “Como outro exemplo, CDRs de cadeia pesada variável (SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 271, SEQ ID NO: 272 e SEQ ID NO: 31), CDRs de cadeia leve variável (SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37 e SEQ ID NO: 38), sequências estruturais da cadeia pesada da região variável (SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 273, e SEQ ID NO: 35), e as sequências estruturais da cadeia leve da região variável (SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41 e SEQ ID NO: 42) para o anticorpo monoclonal Clone | são fornecidas. As sequências de aminoácidos da cadeia pesada variável e da cadeia leve variável do anticorpo monoclonal Clone | são forneci-
das com e sem sequência líder (SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45 e SEQ ID NO: 46) . As sequências de aminoácidos da ca- deia pesada e da cadeia leve do Clone | são fornecidas com e sem sequência líder (SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49 e SEQ ID NO: 50).
[00166] Como outro exemplo, CDRs de cadeia pesada variável (SEQ ID NO: 278, SEQ ID NO: 279, SEQ ID NO: 280), CDRs de ca- deia leve variável (SEQ ID NO: 285, SEQ ID NO: 286, e SEQ ID NO: 287), sequências estruturais da cadeia pesada da região variável (SEQ ID NOs: 281-284) e sequências estruturais da cadeia leve da região variável (SEQ ID NOs: 288-291) para M3 são fornecidas.
[00167] Como outro exemplo, CDRs da cadeia pesada variável (SEQ ID NO: 294, SEQ ID NO: 295, SEQ ID NO: 296), CDRs da cadeia leve variável (SEQ ID NO: 301, SEQ ID NO: 302 e SEQ ID NO: 303), as sequências estruturais da cadeia pesada da região variável (SEQ ID NOs: 297-300) e as sequências estruturais da cadeia leve da região variável (SEQ ID NOs: 304-307) para M5 são fornecidas.
[00168] Ainda são exemplificados neste documento CDRs de cadeia pesada variável (SEQ ID NO: 310, SEQ ID NO: 311, SEQ ID NO: 312), CDRs de cadeia leve variável (SEQ ID NO: 317, SEQ ID NO: 318 e SEQ ID NO: 319), sequências de estrutura de cadeia pe- sada de região variável (SEQ ID NOs: 313-316) e sequências de estru- tura de cadeia leve de região variável (SEQ ID NOs: 320-323) para MB.
[00169] Também são exemplificados neste documento CDRs de cadeia pesada variável (SEQ ID NO: 326, SEQ ID NO: 327, SEQ ID NO: 328), CDRs de cadeia leve variável (SEQ ID NO: 333, SEQ ID NO: 334 e SEQ ID NO: 335), sequências de estrutura de cadeia pe- sada de região variável (SEQ ID NOs: 329-332) e sequências de estru- tura de cadeia leve de região variável (SEQ ID NOs: 336-339) para
M9.
[00170] Também são fornecidos aqui anticorpos quiméricos, canini- zados e felinizados derivados do anticorpo monoclonal Clone B, Clone |, M3, M5, M8 e M9. Em algumas modalidades, as sequências de ami- noácidos de anticorpos quiméricos derivados do Clone B são forneci- das, tais como SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53 e SEQ ID NO: 54. Em algumas modalidades, as sequências de aminoácidos de anticorpos quiméricos derivados do Clone | são fornecidas, tais como SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57 e SEQ ID NO:
58. Em algumas modalidades, as sequências de aminoácidos do Clo- ne B caninizado são fornecidas, tais como SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73 e SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, as sequências de aminoácidos do Clone | caninizado são fornecidas, tais como SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 274, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 275, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 276, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, e SEQ ID NO: 277. Em algumas modalidades, as sequências de aminoácidos de anticor- pos felinizados derivados do Clone B são fornecidas, tais como SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80 e SEQ ID NO: 81. Em algumas modalidades, as sequências de aminoácidos de anticorpos felinizados derivados de Clone | são fornecidas, tais como SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83 e SEQ ID NO: 84. Em algumas modalidades, sequências de aminoáci- dos de anticorpos caninizados derivados de M3 são fornecidas, tais como SEQ ID NO: 342, SEQ ID NO: 343, SEQ ID NO: 344, SEQ ID NO: 348, SEQ ID NO: 349 e SEQ ID NO: 350. Em algumas modalida- des, as sequências de aminoácidos de anticorpos caninizados deriva- dos de M9 são fornecidas, tais como SEQ ID NO: 345, SEQ ID NO: 346, SEQ ID NO: 347, SEQ ID NO: 351, SEQ ID NO: 352, e SEQ ID
NO: 353.
[00171] Conforme aqui usado, os termos numéricos tal como Kd são calculados com base em medições científicas e, portanto, estão sujeitos a erros de medição apropriados. Em alguns casos, um termo numérico pode incluir valores numéricos que são arredondados para o algarismo significativo mais próximo.
[00172] Conforme aqui usado, "um" ou "uma" significa "pelo menos um" ou "um ou mais", a menos que especificado de outra forma. Con- forme usado neste documento, o termo "ou" significa "e/ou", a menos que especificado de outra forma. No contexto de uma reivindicação dependente múltipla, o uso de "ou" quando se referir a outras reivindi- cações se refere a essas reivindicações apenas como alternativa.
[00173] O termo "anticorpo" aqui é usado no sentido mais amplo e abrange várias estruturas de anticorpos, incluindo, mas não se limitan- do a, anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos mul- tiespecíficos (por exemplo, biespecíficos (tal como envolventes de células T bi-específicas) e anticorpos triespecíficos) e fragmentos de anticorpos (tais como Fab, F(ab') 2, ScFv, minicorpo, diacorpo, triacor- po e tetracorpo), desde que exibam a atividade de ligação ao antígeno desejada. As espécies caninas, felinas e equinas têm diferentes var- iedades (classes) de anticorpos que são compartilhados por muitos mamíferos.
[00174] O termo anticorpo inclui, mas não está limitado a, fragmen- tos que são capazes de se ligar a um antígeno, tal como Fv, Fv de ca- deia única (scFv), Fab, Fab', di-scFv, sdAb (anticorpo de domínio úni- co) e (Fab')2 (incluindo um F(ab')2 quimicamente ligado). A digestão de anticorpos com papaína produz dois fragmentos de ligação ao antí- geno idênticos, chamados fragmentos "Fab", cada um com um único sítio de ligação ao antígeno e um fragmento "Fc" residual, cujo nome reflete sua capacidade de cristalizar prontamente. O tratamento com pepsina produz um fragmento F(ab')2 que tem dois sítios de combina- ção de antígeno e ainda é capaz de reticular o antígeno. O termo anti- corpo também inclui, mas não está limitado a, anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados e anticorpos de várias espécies, tais como camundongo, humano, macaco cinomolgos, canino, felino, equino, etc. Além disso, para todos as construções de anticorpos fornecidos aqui, variantes com as sequências de outros organismos também são con- templadas. Assim, se uma versão murina de um anticorpo for divulga- da, alguém versado na técnica apreciará como transformar o anticorpo baseado em sequência murina em uma sequência de gato, cachorro, cavalo, etc. Os fragmentos de anticorpos também incluem a orientação de scFvs de cadeia única, di-scFv tandem, diacorpos, tri-sdcFv tan- dem, minicorpos, etc. Os fragmentos de anticorpos também incluem nanocorpos (sdAb, um anticorpo com um único domínio monomérico, como um par de variáveis domínios de cadeias pesadas, sem uma ca- deia leve). Um fragmento de anticorpo pode ser referido como sendo uma espécie específica em algumas modalidades (por exemplo, scFv de camundongo ou um scFv canino). Isso denota as sequências de pelo menos parte das regiões não CDR, em vez da fonte da constru- ção. Em algumas modalidades, os anticorpos compreendem um mar- cador ou são conjugados a uma segunda porção.
[00175] Os termos "marcador" e "marcador detectável" significam uma porção ligada a um anticorpo ou seu analito para tornar detectá- vel uma reação (por exemplo, ligação) entre os membros do par de ligação específico. O membro marcado do par de ligação específico é referido como "marcador de forma detectável". Assim, o termo "proteí- na de ligação marcada" refere-se a uma proteína com um marcador incorporado que fornece a identificação da proteína de ligação. Em algumas modalidades, o marcador é um marcador detectável que po- de produzir um sinal detectável por meios visuais ou instrumentais, por exemplo, incorporação de um aminoácido radiomarcado ou ligação a um polipeptídeo de porções de biotinila que podem ser detectadas por avidina marcada (por exemplo, estreptavidina contendo um marcador fluorescente ou atividade enzimática que pode ser detectada por mé- todos ópticos ou colorimétricos). Exemplos de marcadores para poli- peptídeos incluem, mas não estão limitados aos seguintes: radioisóto- pos ou radionuclídeos (por exemplo, 3H, *4C, %S, ºY, Tc, in, 1251, 131), 1771 u, 1686Ho, ou *SSm); cromógenos, marcadores fluorescentes (por exemplo, FITC, rodamina, fósforos de lantanídeos), marcadores enzimáticos (por exemplo, peroxidase de rábano, luciferase, fosfatase alcalina); marcadores quimioluminescentes; grupos biotinila; epítopos polipeptídicos predeterminados reconhecidos por um repórter secun- dário (por exemplo, sequências de pares de zíper de leucina, sítios de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação de metal, marcadores de epítopo); e agentes magnéticos, tal como quelatos de gadolínio. Exemplos representativos de marcadores comumente em- pregados para imunoensaios incluem porções que produzem luz, por exemplo, compostos de acridínio, e porções que produzem fluores- cência, por exemplo, fluoresceína. A este respeito, a própria porção pode não ser marcada de forma detectável, mas pode se tornar detec- tável após a reação com ainda outra porção.
[00176] Otermo "anticorpo monoclonal" refere-se a um anticorpo de uma população substancialmente homogênea de anticorpos, isto é, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos, exceto para possíveis mutações de ocorrência natural que podem es- tar presentes em quantidades menores. Os anticorpos monocilonais são altamente específicos, sendo direcionados contra um único sítio antigênico. Além disso, em contraste com as preparações de anticor- pos policlonais, que normalmente incluem diferentes anticorpos direci- onados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal é direcionado contra um único determinante no antígeno. Assim, uma amostra de anticorpos monoclionais pode se ligar ao mesmo epítopo no antígeno. O modificador "monoclonal" indica o cará- ter do anticorpo como sendo obtido de uma população substancial- mente homogênea de anticorpos e não deve ser interpretado como requerendo a produção do anticorpo por qualquer método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais podem ser feitos pelo método de hibridoma primeiro descrito por Kohler e Milstein, 1975, Nature 256: 495, ou podem ser feitos por métodos de DNA recombinante, como descrito na Patente Norte Americana No. 4.816.567. Os anticorpos monoclonais também podem ser isolados de bibliotecas de fagos ge- radas usando as técnicas descritas em McCafferty et. al., 1990, Nature 348: 552-554, por exemplo.
[00177] Em algumas modalidades, o anticorpo monoclonal é um anticorpo de camundongo isolado selecionado a partir do Clone B, Clone |, M3, M5, M8 e M9.
[00178] "Sequência de aminoácidos" significa uma sequência de resíduos de aminoácidos em um peptídeo ou proteína. Os termos "po- lipeptídeo" e "proteína" são usados indistintamente para se referir a um polímero de resíduos de aminoácidos e não estão limitados a um comprimento mínimo. Esses polímeros de resíduos de aminoácidos podem conter resíduos de aminoácidos naturais ou não naturais e in- cluem, mas não estão limitados a, peptídeos, oligopeptídeos, dímeros, trímeros e multímeros de resíduos de aminoácidos. Ambas as proteí- nas de comprimento total e seus fragmentos são abrangidos pela defi- nição. Os termos também incluem modificações pós-expressão do po- lipeptídeo, por exemplo, glicosilação, sialilação, acetilação, fosforilação e semelhantes. Além disso, para os fins da presente invenção, um "po- lipeptídeo" refere-se a uma proteína que inclui modificações, tais como deleções, adições e substituições (geralmente de natureza conserva-
dora), na sequência nativa, desde que a proteína mantenha a ativida- de desejada. Essas modificações podem ser deliberadas, como por meio de mutagênese dirigida ao sítio, ou podem ser acidentais, tal co- mo por meio de mutações de hospedeiros que produzem as proteínas ou erros devido à amplificação por PCR.
[00179] Tal como aqui utilizado, "porcentagem (%) de identidade de sequência de aminoácidos" e "homologia" com respeito a um peptídeo, polipeptídeo ou sequência de anticorpo são definidas como a porcen- tagem de resíduos de aminoácidos em uma sequência candidata que são idênticas ao resíduos de aminoácidos no peptídeo específico ou sequência polipeptídica, após o alinhamento das sequências e a intro- dução de lacunas, se necessário para atingir a porcentagem máxima de identidade de sequência, e não considerando quaisquer substitui- ções conservativas como parte da identidade de sequência. O alinha- mento para fins de determinação de identidade de sequência de ami- noácidos percentual pode ser alcançado de várias maneiras que estão dentro da perícia na técnica, por exemplo, usando software de compu- tador disponível publicamente, como software BLAST, BLAST-2, ALIGN ou MEGALINE '“ (DNASTAR). Os versados na técnica podem determinar os parâmetros apropriados para medir o alinhamento, inclu- indo quaisquer algoritmos necessários para atingir o alinhamento má- ximo ao longo de todo o comprimento das sequências sendo compa- radas.
[00180] Em algumas modalidades, uma variante tem pelo menos cerca de 50% de identidade de sequência com a molécula de ácido nucleico de referência ou polipeptídeo após alinhar as sequências e introduzir lacunas, se necessário, para atingir a porcentagem máxima de identidade de sequência e não considerar quaisquer substituições conservativas como parte da identidade da sequência. Tais variantes incluem, por exemplo, polipeptídeos em que um ou mais resíduos de aminoácidos são adicionados, deletados, no terminal N ou C do poli- peptídeo. Em algumas modalidades, uma variante tem pelo menos cerca de 50% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 60% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 65% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 70% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 75% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 80% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 85% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 90% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 95% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 97% de identidade de sequência, pelo menos cerca de 98% de identidade de sequência ou pelo menos cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência do ácido nucleico ou polipeptídeo de referência.
[00181] Uma "mutação pontual" é uma mutação que envolve um único resíduo de aminoácido. A mutação pode ser a perda de um ami- noácido, a substituição de um resíduo de aminoácido por outro ou a inserção de um resíduo de aminoácido adicional.
[00182] Uma "substituição de aminoácido" refere-se à substituição de um aminoácido em um polipeptídeo por outro aminoácido. Em al- gumas modalidades, uma substituição de aminoácido é uma substitui- ção conservadora. Substituições de aminoácidos conservativas exem- plares não limitantes são mostradas na Tabela 2. As substituições de aminoácidos podem ser introduzidas em uma molécula de interesse e os produtos selecionados para uma atividade desejada, por exemplo, ligação de antígeno retida/melhorada, imunogenicidade diminuída, ADCC ou CDC melhorado, produção recombinante e/ou farmacociné- tica aprimorada. Tabela 2
[00183] Os aminoácidos podem ser agrupados de acordo com pro- priedades comuns da cadeia lateral: (1) hidrofóbico: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, lle; (2) hidrofílico neutro: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) ácidos: Asp, Glu; (4) básico: His, Lys, Arg; (5) resíduos que influenciam a orientação da cadeia: Gly, Pro; (6) aromático: Trp, Tyr, Phe.
[00184] As substituições não conservadoras implicarão na troca de um membro de uma dessas classes por outra classe.
[00185] Um "derivado de aminoácido", tal como aqui utilizado, refe- re-se a qualquer aminoácido, aminoácido modificado e/ou análogo de aminoácido, que não é um dos 20 aminoácidos naturais comuns en- contrados em humanos. Derivados de aminoácidos exemplares inclu- em aminoácidos naturais não encontrados em humanos (por exemplo, seleno cisteína e pirrolisina, que podem ser encontrados em alguns microrganismos) e aminoácidos não naturais. Derivados de aminoáci- dos exemplares incluem, mas não estão limitados a, derivados de aminoácidos comercialmente disponíveis através de fabricantes de produtos químicos (por exemplo, sigmaaldrich.com/chemistry/ chemis- try-products.html?TablePage=16274965, acessado em 6 de maio de 2017, que é incorporado neste documento por referência). Um ou mais derivados de aminoácidos podem ser incorporados em um polipeptí- deo em um sítio específico usando um sistema de translação que utili- za células hospedeiras, aminoacil-RNA sintetases ortogonais deriva- das de sintetases eubacterianas, tRNAs ortogonais e um derivado de aminoácido. Para mais descrições, veja, por exemplo, Patente Norte Americana No. 9.624.485.
[00186] Em algumas modalidades, um polipeptídeo compreende uma substituição de aminoácido por um derivado de aminoácido. Em algumas modalidades, o derivado de aminoácido é um derivado de alanina, um derivado de cisteína, um derivado de ácido aspártico, um derivado de ácido glutâmico, um derivado de fenilalanina, um derivado de glicina, um derivado de histidina, um derivado de isoleucina, um derivado de lisina, um derivado de leucina , um derivado de metionina, um derivado de asparagina, um derivado de prolina, um derivado de glutamina, um derivado de arginina, um derivado de serina, um deriva- do de treonina, um derivado de valina, um derivado de triptofano ou um derivado de tirosina.
[00187] "IL4R", tal como aqui utilizado, é um polipeptídeo que com-
preende a totalidade ou um fragmento da subunidade alfa do receptor de IL4 que se liga a ILA4.
[00188] Por exemplo, "IL4R" refere-se a um polipeptídeo IL4R de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos como primatas (por exemplo, humanos e macacos cinomolgos), roedores (por exem- plo, camundongos e ratos) e animais de companhia (por exemplo, cães, gatos e equinos), a menos que indicado de outra forma. O termo também inclui variantes de ocorrência natural de IL4R, por exemplo, variantes de emenda ou variantes alélicas, ou variantes artificiais de IL4R, por exemplo, polipeptídeos IL4R marcados. Em algumas moda- lidades, ILA4R é um fragmento de domínio extracelular que se liga a IL4. Em algumas dessas modalidades, o IL4R pode ser referido como um domínio extracelular ILAR (ECD). Em algumas modalidades, ILAR compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, ou 117.
[00189] "IL4", tal como aqui utilizado, é um polipeptídeo que com- preende a totalidade ou um fragmento de IL4 que se liga a IL4R.
[00190] Por exemplo, IL4 se refere a um polipeptídeo IL4 de qual- quer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos como primatas (por exemplo, humanos e macacos cinomolgos), roedores (por exemplo, camundongos e ratos) e animais de companhia (por exemplo, cães, gatos e equino), a menos que indicado de outra forma. O termo tam- bém inclui variantes de ocorrência natural de IL4, por exemplo, varian- tes de emenda ou variantes alélicas, ou variantes artificiais de IL4, por exemplo, polipeptídeos de IL4 marcados. Em algumas modalidades, IL4 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 118, 119, 120, 121, 122 ou 123, ou uma versão processada da mesma. Em algumas modalidades, IL4 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130 ou 131.
[00191] "IL13", tal como aqui utilizado, é um polipeptídeo que com- preende a totalidade ou um fragmento de IL13 que se liga a IL4R.
[00192] Por exemplo, ILI3 se refere a um polipeptídeo IL13 de qualquer fonte de vertebrados, incluindo mamíferos como primatas (por exemplo, humanos e macacos cinomolgos), roedores (por exem- plo, camundongos e ratos) e animais de companhia (por exemplo, cães, gatos, e equino), a menos que indicado de outra forma. O termo também inclui variantes de ocorrência natural de I1L13, por exemplo, variantes de emenda ou variantes alélicas, ou variantes artificiais de IL13, por exemplo, polipeptídeos IL13 marcados. Em algumas modali- dades, IL13 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 154 ou 155, ou uma versão processada da mesma. Em algumas mo- dalidades, IL31 compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 156, 157, 158 ou 159.
[00193] "“"ILI3R" ou "ILI3Ra”", tal como aqui utilizado, é um polipep- tídeo que compreende a totalidade ou um fragmento de ILI13R que emparelha com IL4R para se ligar a IL4 ou IL13.
[00194] “Receptor gama C", como aqui utilizado, é um polipeptídeo que compreende a totalidade ou um fragmento do receptor de cadeia gama comum que emparelha com IL4R para se ligar a ILA.
[00195] O termo "domínio de ligação de IL4R" de um anticorpo sig- nifica o domínio de ligação formado por uma cadeia leve e uma cadeia pesada de um anticorpo anti-IL4R, que se liga a IL4R.
[00196] Em algumas modalidades, o domínio de ligação IL4R liga IL4R canino com maior afinidade do que liga IL4R humano. Em algu- mas modalidades, o domínio de ligação IL4R liga-se a IL4R felino.
[00197] “Função de sinalização IL4/I1L13", tal como aqui utilizado, refere-se a qualquer efeito celular que resulta quando IL4 se liga a IL4R emparelhado com IL13R ou receptor Gamma C, ou quando IL13 se liga a ILAR emparelhado com ILI13R. Os efeitos celulares podem incluir fosforilação de STATG6, diferenciação de células T auxiliares em células Th2, ativação de células B e/ou proliferação de células T e/ou indução de mudança de classe de células B para IgE.
[00198] Conforme aqui usado, o termo "epítopo" refere-se a um sí- tio em uma molécula alvo (por exemplo, um antígeno, tal como uma proteína, ácido nucleico, carboidrato ou lipídio) ao qual uma molécula de ligação ao antígeno (por exemplo, um anticorpo, fragmento de anti- corpo ou proteína de estrutura contendo regiões de ligação de anticor- po) se liga. Os epítopos geralmente incluem um agrupamento de mo- léculas de superfície quimicamente ativa, tal como aminoácidos, poli- peptídeos ou cadeias laterais de açúcar e têm características estrutu- rais tridimensionais específicas, bem como características de carga específicas. Os epítopos podem ser formados a partir de resíduos con- tíguos ou não contíguos justapostos (por exemplo, aminoácidos, nu- cleotídeos, açúcares, porção lipídica) da molécula alvo. Os epítopos formados a partir de resíduos contíguos (por exemplo, aminoácidos, nucleotídeos, açúcares, porção de lipídios) normalmente são retidos na exposição a solventes desnaturantes, enquanto os epítopos forma- dos por duplicação terciária normalmente são perdidos no tratamento com solventes desnaturantes. Um epítopo pode incluir, mas não está limitado a pelo menos 3, pelo menos 5 ou 8 a 10 resíduos (por exem- plo, aminoácidos ou nucleotídeos). Em alguns exemplos, um epítopo tem menos de 20 resíduos (por exemplo, aminoácidos ou nucleotí- deos) de comprimento, menos de 15 resíduos ou menos de 12 resí- duos. Dois anticorpos podem se ligar ao mesmo epitopatogênio com um antígeno se exibirem uma ligação competitiva para o antígeno. Em algumas modalidades, um epítopo pode ser identificado por uma certa distância mínima para um resíduo de CDR na molécula de ligação ao antígeno. Em algumas modalidades, um epítopo pode ser identificado pela distância acima e ainda limitado aos resíduos envolvidos em uma ligação (por exemplo, uma ligação de hidrogênio) entre um resíduo de anticorpo e um resíduo de antígeno. Um epítopo pode ser identificado por várias varreduras também, por exemplo, uma varredura de alanina ou arginina pode indicar um ou mais resíduos com os quais a molécula de ligação ao antígeno pode interagir. A menos que explicitamente de- notado, um conjunto de resíduos como um epítopo não exclui outros resíduos de fazerem parte do epítopo de um determinado anticorpo. Em vez disso, a presença de tal conjunto designa uma série mínima (ou conjunto de espécies) de epítopos. Assim, em algumas modalida- des, um conjunto de resíduos identificados como um epítopo designa um epítopo mínimo de relevância para o antígeno, em vez de uma lista exclusiva de resíduos para um epítopo em um antígeno.
[00199] Em algumas modalidades, o epítopo está dentro de L41 e T50 de ECD de IL4R canino (SEQ ID NO: 99) ou ECD de IL4R felino (SEQ ID NO: 100), como em R36 e N55. Por exemplo, o epítopo pode compreender a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 91 ou SEQ ID NO: 92. Em algumas modalidades, o epítopo compreende a sequência de aminoácidos LXioFMGSENX1T, em que X1:º é D ou N e X1; é H ou R (SEQ ID NO: 85). Em algumas modalidades, o epítopo compreende a sequência de aminoácidos RLSYQLXwoFMGSENX,TCVPEN, em que X1º é D ou Ne X1 é Hou R (SEQ ID NO: 86).
[00200] Em algumas modalidades, o epítopo está dentro dos ami- noácidos S64 e Q85 de ECD de IL4R canino (SEQ ID NO: 99) ou ECD de IL4R felino (SEQ ID NO: 100). Por exemplo, o epítopo pode com- preender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 90 ou SEQ ID NO: 93. Em algumas modalidades, o epítopo compreende a sequência de aminoácidos SMX12X:32DDX:aVEADVYQLX:sLWAGXOQ, wherein X12 é P ou L, X13 é | ou M, X é A ou F, X15 é D ou H, e X16 é Q ou T (SEQ ID NO: 87).
[00201] Em algumas modalidades, o epítopo está dentro dos ami- noácidos D65 e N78 de ECD de IL4R canino (SEQ ID NO: 99). Por exemplo, o epítopo pode compreender a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 354.
[00202] Em algumas modalidades, um primeiro epítopo está dentro dos aminoácidos G24 e A56 de ECD de IL4R canino (SEQ ID NO: 99) e um segundo epítopo está dentro dos aminoácidos R79 e 190 de ECD de IL4R canino. Por exemplo, o primeiro epítopo pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 355 e o segundo epítopo pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 356.
[00203] Em algumas modalidades, o epítopo está dentro dos ami- noácidos R79 e V98 do ECD de IL4R canino (SEQ ID NO: 99). Por ex- emplo, o epítopo pode compreender a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 357.
[00204] O termo "CDR" significa uma região determinante de com- plementaridade conforme definida por pelo menos uma maneira de identificação para um versado na técnica. Em algumas modalidades, os CDRs podem ser definidos de acordo com qualquer um dos es- quemas de numeração Chothia, o esquema de numeração Kabat, uma combinação de Kabat e Chothia, a definição ADM, a definição de con- tato ou uma combinação de Kabat, Chothia, ADM ou definições de contato. Os vários CDRs dentro de um anticorpo podem ser designa- dos por seu número apropriado e tipo de cadeia, incluindo, sem lim- itação, CDR-H1, CDR-H2, CDR-HC3, CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3. O termo "CDR" é usado neste documento para também abranger uma "região hipervariável" ou HVR, incluindo alças hipervariáveis.
[00205] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|L4R com- preende uma cadeia pesada que compreende (a) um CDR-H1 com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 7, ou SEQ ID NO: 29; (b) a CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 268, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 271, ou SEQ ID NO: 272; ou (c) a CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 9, ou SEQ ID NO: 31. Em algumas modal- idades, um anticorpo anti-|LAR compreende uma cadeia leve que compreende (a) um CDR-L1 compreendendo a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 14, ou SEQ ID NO: 36; (b) a CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 15, ou SEQ ID NO: 37; ou (c) um CDR-L3 com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 16, ou SEQ ID NO: 38.
[00206] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|L4R compre- ende uma cadeia pesada que compreende (a) um sequência CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 98% identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 7, ou SEQ ID NO: 29; (b) uma sequên- cia CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 98% identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 268, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 271, ou SEQ ID NO: 272; ou (c) uma sequencia CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo me- nos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 98% identidade de se- quência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 9, ou SEQ ID NO: 31. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LAR compreende uma cadeia leve que compreende (a) uma se- quência CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo me- nos 95%, ou pelo menos 98% identidade de sequência com a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 14, ou SEQ ID NO: 36; (b) uma sequência CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 98% identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 15, ou SEQ ID NO: 37; ou (c) uma sequência CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 98% identi- dade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 16, ou SEQ ID NO: 38.
[00207] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma cadeia pesada que compreende: a) uma sequência CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 278; b) uma sequência CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 279; e c) uma sequência CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO: 280. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LAR compreende uma cadeia leve que compreende: a) uma se- quência CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 285; b) uma se- quência CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 286; e c) uma se- quência CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 287.
[00208] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma cadeia pesada que compreende: a) uma sequência CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequên-
cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 310; b) uma sequência CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 311; e c) uma sequência CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO: 312. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LAR compreende uma cadeia leve que compreende: a) uma se- quência CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 317; b) uma se- quência CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 318; e c) uma se- quência CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 319.
[00209] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma cadeia pesada que compreende: a) uma sequência CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 326; b) uma sequência CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 327; e c) uma sequência CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO: 328. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LAR compreende uma cadeia leve compreendendo a) uma se- quência CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 333; b) uma se- quência CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 334; e c) uma se- quência CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 335.
[00210] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma cadeia pesada compreendendo: a) uma sequência CDR- H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 294; b) uma sequência CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO: 295; e c) uma sequência CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 296. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-ILAR compreende uma cadeia leve que compreende: a) uma sequência CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 301; b) uma sequência CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 302; e c) uma sequência CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO: 303.
[00211] O termo "região variável", conforme usado neste documen-
to, refere-se a uma região que compreende pelo menos três CDRs. Em algumas modalidades, a região variável inclui os três CDRs e pelo menos uma região estrutural ("FR"). Os termos "região variável de ca- deia pesada" ou "cadeia pesada variável" são usados indistintamente para se referir a uma região que compreende pelo menos três CDRs de cadeia pesada. Os termos "região variável de cadeia leve" ou "ca- deia leve variável" são usados indistintamente para se referir a uma região que compreende pelo menos três CDRs de cadeia leve. Em al- gumas modalidades, a cadeia pesada variável ou cadeia leve variável compreende pelo menos uma região estrutural. Em algumas modali- dades, um anticorpo compreende pelo menos uma região estrutural da cadeia pesada selecionada de HC-FR1, HC-FR2, HC-FR3 e HC-FRA4. Em algumas modalidades, um anticorpo compreende pelo menos uma região estrutural da cadeia leve selecionada de LC-FR1, LC-FR2, LC- FR3 e LC-FRA4. As regiões estruturais podem ser justapostas entre CDRs de cadeia leve ou entre CDRs de cadeia pesada. Por exemplo, um anticorpo pode compreender uma cadeia pesada variável com a seguinte estrutura: (HC-FR1)-(HC-CDR1)-(HC-FR2)-(HC-CDR2)-(HC- FR3)-(HC-CDR3)-(HC-FR4). Um anticorpo pode compreender uma cadeia pesada variável com a seguinte estrutura: (HC-CDR1)-(HC- FR2)-(HC-CDR2)-(HC-FR3)-(HC-CDR3). Um anticorpo também pode compreender uma cadeia leve variável com a seguinte estrutura: (LC FR1) - (LC-CDR1) - (LC-FR2) - (LC-CDR2) - (LC-FR3) - (LC-CDR3) - ( LC-FR4). Um anticorpo também pode compreender uma cadeia leve variável com a seguinte estrutura: (LC-CDR1)-(LC-FR2)-(LC-CDR2)- (LC-FR3)-(LC-CDR3).
[00212] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende um ou mais de (a) uma sequência de estrutura 1 de cadeia pesada de região variável (HC FR1) de SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 32, (b) uma sequência HC-FR2 da SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID
NO: 33, (c) uma sequência HC-FR3 da SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 270, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 273, (d) uma sequência HC-FR4 de SEQ ID NO: 13 ou SEQ ID NO: 35, (e) uma sequência de estrutura 1 de cadeia leve de região variável (LC-FR1) de SEQ ID NO: 17 ou SEQ ID NO: 39, (f) uma sequência LC FR2 da SEQ ID NO: SEQ ID NO: 18 ou SEQ ID NO: 40, (g) uma sequência LC FR3 da SEQ ID NO: 19 ou SEQ ID NO: 41, ou (h) uma sequência LC-FR4 da SEQ ID NO: 20 ou SEQ ID NO: 42.
[00213] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende: a. (i) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 21 ou SEQ ID NO: 43; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 22 ou SEQ ID NO: 44; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii); ou b. (i) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 63, ou SEQ ID NO: 64, ou SEQ ID NO: 274; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 65, ou SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 275; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii); ou Cc. (i) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 67 ou SEQ ID NO: 69; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 68 ou SEQ ID NO: 70; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii).
[00214] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma sequência de cadeia pesada variável de SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 274, SEQ ID NO: 67, ou SEQ ID NO: 69 e/ou uma sequência de cadeia leve variável de (a) SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 275, SEQ ID NO: 68, ou SEQ ID NO: 70.
[00215] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|L4R com- preende uma sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82, ou SEQ ID NO: 83 e/ou uma sequên- cia de cadeia leve de SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 277, SEQ ID NO: 81 ou SEQ ID NO: 84.
[00216]Em algumas modalidades, um anticorpo anti-IL4R compreende: a. (1) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 292; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 293; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii); ou b. (i) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 342 ou SEQ ID NO: 343; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 344; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii).
[00217] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende: a) uma sequência de cadeia pesada variável com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 292, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 293; ou b) uma sequência de cadeia pesada variável com- preendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 342 ou SEQ ID NO: 343, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 344.
[00218] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma sequência de cadeia pesada variável de SEQ ID NO: 292, SEQ ID NO: 342, ou SEQ ID NO: 343 e/ou uma sequência de cadeia leve variável de (a) SEQ ID NO: 293 ou SEQ ID NO: 344.
[00219] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: SEQ ID NO: 348 ou SEQ ID NO: 349 e/ou uma sequência de cadeia leve de
SEQ ID NO: 350.
[00220] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende: (a) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 324; (b) uma sequência de cadeia leve variável tendo pe- lo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 325; ou (c) uma sequência de cadeia pesada variável como em (a) e uma sequência de cadeia leve variável como em (b).
[00221] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma sequência de cadeia pesada variável de SEQ ID NO: 324 e/ou uma sequência de cadeia leve variável de (a) SEQ ID NO:
325.
[00222] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: SEQ ID NO: 348 ou SEQ ID NO: 349 e/ou uma sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 350.
[00223] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende: a. (1) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 340; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 341; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii); ou b. (i) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou
100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 345 ou SEQ ID NO: 346; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 347; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii).
[00224] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma sequência de cadeia pesada variável de SEQ ID NO: 340, SEQ ID NO: 345, ou SEQ ID NO: 346 e/ou uma sequência de cadeia leve variável de (a) SEQ ID NO: 341 ou SEQ ID NO: 347.
[00225] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma sequência de cadeia pesada de SEQ ID NO: SEQ ID NO: 348 ou SEQ ID NO: 349 e/ou uma sequência de cadeia leve de SEQ ID NO: 350.
[00226] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|L4R compre- ende: anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 75 a 85, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende: (a) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo me- nos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 308; (b) uma sequência de cadeia leve variável tendo pe- lo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 309; ou (c) uma sequência de cadeia pesada variável como em (a) e uma sequência de cadeia leve variável como em (b).
[00227] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma sequência de cadeia pesada variável de SEQ ID NO: 308 e/ou uma sequência de cadeia leve variável de (a) SEQ ID NO: 341 ou SEQ ID NO: 309.
[00228] O termo "região constante", tal como aqui utilizado, refere- se a uma região que compreende pelo menos três domínios constan- tes.
Os termos "região constante de cadeia pesada" ou "cadeia pesada constante" são usados indistintamente para se referir a uma região que compreende pelo menos três domínios constantes de cadeia pe- sada, CH1, CH2 e CH3. As regiões constantes de cadeia pesada exemplares não limitativas incluem y, 5, a, e e un.
Cada região constan- te da cadeia pesada corresponde a um isotipo de anticorpo.
Por exemplo, um anticorpo compreendendo uma região constante y é um anticorpo IgG, um anticorpo compreendendo uma região constante 5 é um anticorpo IgD, um anticorpo compreendendo uma região constante a é um anticorpo IgA, um anticorpo compreendendo uma região cons- tante py é um anticorpo IgM , e um anticorpo compreendendo uma regi- ão constante e é um anticorpo IgE.
Certos isotipos podem ser subdivi- didos em subclasses.
Por exemplo, os anticorpos IgG incluem, mas não estão limitados a, anticorpos IgG1 (compreendendo uma região constante y1), IgG2 (compreendendo uma região constante y2), IgG3 (compreendendo uma região constante y3) e IgG4 (compreendendo uma região constante vs) ; os anticorpos IgA incluem, mas não estão limitados a, anticorpos IgA1 (compreendendo uma região constante a1) e IgA2 (compreendendo uma região constante a2); e anticorpos IgM incluem, mas não estão limitados a IgM1 e IgM2. Os termos "região constante de cadeia leve" ou "cadeia leve constante" são usados indis- tintamente para se referir a uma região que compreende um domínio constante de cadeia leve, CL.
As regiões constantes de cadeia leve exemplares não limitantes incluem À e K (por exemplo, SEQ ID NO: 235 ou 241). Deleções e alterações que não alteram a função dentro dos domínios são englobadas no escopo do termo "região constante", a menos que designado de outra forma.
Caninos, felinos e equinos têm classes de anticorpos como IgG, IgA, IgD, IgE e IgM.
Dentro da classe de anticorpos IgG caninos estão IgG-A, IgG-B, IgG C e IgG-D. Dentro da classe de anticorpos IgG felinos estão IgG1a, IgG1b e I1gG2. Dentro da classe de anticorpos IgG equinos estão I9G1, IgG2, 1gG3, IgG4, IgG5, IgG6 e 19G7.
[00229] Um "fragmento de polipeptídeo cristalizável" ou "polipeptí- deo Fc" é a porção de uma molécula de anticorpo que interage com moléculas e células efetoras. Compreende as porções C terminais das cadeias pesadas de imunoglobulina. Tal como aqui utilizado, um poli- peptídeo Fc inclui fragmentos do domínio Fc com uma ou mais ativi- dades biológicas de um polipeptídeo Fc completo. Em algumas moda- lidades, uma atividade biológica de um polipeptídeo Fc é a capacidade de se ligar a FCRn. Em algumas modalidades, uma atividade biológica de um polipeptídeo Fc é a capacidade de se ligar a C19g. Em algumas modalidades, uma atividade biológica de um polipeptídeo Fc é a capa- cidade de se ligar a CD16. Em algumas modalidades, uma atividade biológica de um polipeptídeo Fc é a capacidade de se ligar à proteína A. Uma "função efetora" do polipeptídeo Fc é uma ação ou atividade realizada no todo ou em parte por qualquer anticorpo em resposta a um estímulo e pode incluir fixação de complemento e/ou indução de ADCC (citotoxicidade celular dependente de anticorpo).
[00230] O termo "lgX Fc" significa que a região Fc é derivada de um isotipo de anticorpo particular (por exemplo, IgG, IgA, 1gD, IgE, IgM, etc.), onde "X" denota o isotipo de anticorpo. Assim, "IgG Fc" denota a região Fc de uma cadeia y, "IgA Fc" denota a região Fc de uma cadeia qa, "lgD Fc" denota a região Fc de uma cadeia õ, "IgE Fc" denota a re- gião Fc de uma cadeia £, "!gM Fc" denota a região Fc de uma cadeia u, etc. Em algumas modalidades, a região IgG Fc compreende CH1, articulação, CH2, CH3 e CL1. "|gX-N-Fc" denota que a região Fc é de- rivada de uma subclasse particular de isotipo de anticorpo (tal como IgG canina subclasse A, B, C ou D; IgG felina subclasse 1, 2a ou 2b;
ou subclasse IgG equina Ig9G1, IgG2, I19G3, I9gG4, IgG5, IgG6 ou 1967, etc.), onde "N" denota a subclasse.
[00231] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgX Fc ou polipeptídeo IgX-N-Fc é derivado de um animal de companhia, como um cão, um gato ou um cavalo. Em algumas modalidades, os polipep- tídeos IgG Fc são isolados de cadeias pesadas y caninas, tal como IgG-A, IgG-B, IgG-C ou IgG-D. Em alguns casos, os polipeptídeos IgG Fc são isolados de cadeias pesadas y felinas, tal como IgG1, IgG2a ou IgG2b. Em outros casos, os polipeptídeos IgG Fc são isolados de cadeias pesadas y equinas, tal como IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 1gG5, IgG6 ou IgG7.
[00232] Os termos "lgX Fc" e "polipeptídeo IgX Fc" incluem polipep- tídeos IgX Fc de tipo selvagem e polipeptídeos IgX Fc variantes, a menos que indicado de outra forma.
[00233] "Tipo selvagem" refere-se a uma versão não mutada de um polipeptídeo que ocorre na natureza, ou um fragmento do mesmo. Um polipeptídeo de tipo selvagem pode ser produzido de forma recom- binante.
[00234] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc de tipo selvagem compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 166, SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, SEQ ID NO: 207, SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 252, ou SEQ ID NO: 253.
[00235] Uma "variante" é um polipeptídeo que difere de um polipep- tídeo de referência por uma ou várias substituições, deleções e/ou adições de aminoácidos não nativos. Em algumas modalidades, uma variante retém pelo menos uma atividade biológica do polipeptídeo de referência (por exemplo, polipeptídeo de tipo selvagem).
[00236] Um "polipeptídeo IgG Fc variante", tal como aqui utilizado, é um polipeptídeo IgG Fc que difere de um polipeptídeo IgG Fc de referência por substituições, deleções e/ou adições de aminoácidos simples ou múltiplas e retém substancialmente pelo menos uma ativid- ade biológica do polipeptídeo IgG Fc de referência.
[00237] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende um polipeptídeo IgG Fc variante de uma espécie de ani- mal de companhia. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende um polipeptídeo IgG Fc canino variante, um polipeptídeo IgG Fc variante equino ou um polipeptídeo IgG Fc felino. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante (por ex- emplo, um polipeptídeo IgG-A Fc canino variante, um polipeptídeo IgG-C Fc canino variante, um polipeptídeo I9gG-D Fc canino variante, polipeptídeo IgG1a Fc felino variante, polipeptídeo Fc IgG1b felino var- iante , ou polipeptídeo IgG2 Fc felino variante) tem uma atividade que o polipeptídeo de referência (por exemplo, tipo selvagem) substan- cialmente carece. Por exemplo, em algumas modalidades, um polipep- tídeo IQG-A Fc canino variante, um polipeptídeo IgG-C Fc canino vari- ante ou um polipeptídeo IgG-D Fc canino variante se liga a Proteína A.
[00238] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante modificou a afinidade de ligação à Proteína A. Em algumas modalida- des, um polipeptídeo IgG Fc variante tem afinidade de ligação aumen- tada para a Proteína A. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante pode ser purificado usando cromatografia em coluna de Proteína A. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc vari- ante modificou a afinidade de ligação de CD16. Em algumas modali- dades, um polipeptídeo IgG Fc variante diminuiu a afinidade de ligação ao CD16. Em algumas modalidades, uma IgG Fc variante pode ter uma resposta imune ADCC reduzida. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante modificou a afinidade de ligação de C1q.
Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante tem afini- dade de ligação reduzida para C1g. Em algumas modalidades, um po- lipeptídeo IgG Fc variante pode ter fixação de complemento reduzida. Em algumas modalidades, uma IgG Fc variante pode ter uma resposta imune mediada por complemento reduzida.
[00239] "Articulação" refere-se a qualquer porção de um polipep- tídeo Fc ou polipeptídeo Fc variante que é rico em prolina, com- preende pelo menos um resíduo de cisteína e está localizado entre CH1 e CH2 de uma região constante de cadeia pesada.
[00240] Em algumas modalidades, uma articulação é capaz de for- mar uma ligação dissulfeto dentro da mesma região de articulação, dentro do mesmo polipeptídeo Fc, com uma região de articulação de um polipeptídeo Fc separado ou com um polipeptídeo Fc separado. Em algumas modalidades, uma articulação compreende pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis, pelo menos sete, pelo menos oito, pelo menos nove ou pelo menos dez resíduos de prolina.
[00241] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc felino variante tem pelo menos uma ligação dissulfeto intercadeia adicional em relação ao polipeptídeo IgG Fc felino de tipo selvagem, tal como na região de articulação. Em algumas modalidades, um polipeptídeo I9G2 Fc felino variante com pelo menos uma ligação de dissulfeto inter- cadeia adicional aumentou a estabilidade intercadeia em relação ao polipeptídeo IgG Fc felino de tipo selvagem. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG variante tem pelo menos uma modificação de aminoácido para uma região de articulação em relação a um polipep- tídeo IgG Fc de tipo selvagem, tal como um polipeptídeo IgG Fc felino de tipo selvagem.
[00242] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende uma região de articulação ou uma porção de uma região de articulação de um polipeptídeo de IgG Fc de um isotipo diferente. Em algumas modalidades, o polipeptídeo IgG Fc variante, tal como um polipeptídeo I9G2 Fc canino, compreende uma região de articulação de um polipeptídeo IgG1a ou IgG1b Fc felino de tipo selvagem. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante aumentou a produção recombinante e/ou aumentou a formação de dissulfeto de articulação em relação ao polipeptídeo IgG Fc de tipo selvagem. Em algumas modalidades, o aumento da produção recombinante e/ou o aumento da formação de dissulfeto de articulação podem ser determi- nados por análise de SDS-PAGE sob condições redutoras e/ou não redutoras.
[00243] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende: a) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma posição correspondente à posição 21, 23, 25, 80, 205, e/ou 207 de SEQ ID NO: 162;b) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma posição correspondente à posição 5, 38, 39, 94, 97, e/ou 98 de SEQ ID NO: 163; c) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma posição correspondente à posição 5, 21, 23, 24, 38, 39, 93, 97, e/ou 98 de SEQ ID NO: 165; d) pelo menos uma substituição de ami- noácido em uma posição correspondente à posição 21, 23, 25, 80, e/ou 207 de SEQ ID NO: 167; e) pelo menos uma substituição de ami- noácido em uma posição correspondente à posição 16 e/ou 198 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206; e/ou f) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma posi- ção correspondente à posição 14 e/ou 16 de SEQ ID NO: 207.
[00244] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende: a) pelo menos uma substituição de aminoácido na posi- ção 21, 23, 25, 80, 205, e/ou 207 de SEQ ID NO: 162; b) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 5, 38, 39, 94, 97, e/ou 98 de SEQ ID NO: 163; c) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 5, 21, 23, 24, 38, 39, 93, 97, e/ou 98 de SEQ ID NO: 164; d) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 21, 23, 25, 80, e/ou 207 de SEQ ID NO: 165; e) pelo menos uma substituição de ami- noácido na posição 16 e/ou 198 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206; e/ou f) pelo menos uma substi- tuição de aminoácido na posição 14 e/ou 16 de SEQ ID NO: 207.
[00245] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende: a) uma treonina em uma posição correspondente à posição 21, uma leucina em uma posição correspondente à posição 23, uma alanina em uma posição correspondente à posição 25, uma glicina em uma posição correspondente à posição 80, uma alanina em uma posição correspondente à posição 205, e/ou uma histidina em uma posição correspondente à posição 207 da SEQ ID NO: 162; b) uma prolina em uma posição correspondente à posição 5, uma glicina em uma posição correspondente à posição 38, uma ar- ginina em uma posição correspondente à posição 39, uma arginina em uma posição correspondente à posição 93, uma isoleucina em uma posição correspondente à posição 97, e/ou uma glicina em uma posição correspondente à posição 98 da SEQ ID NO: 163; c) uma prolina em uma posição correspondente à posição 5, uma treonina em uma posição correspondente à posição 21, uma leucina em uma posição correspondente à posição 23, uma isoleucina em uma posição correspondente à posição 24, uma glicina em uma posição correspondente à posição 38, uma arginina em uma posição correspondente à posição 39, uma arginina em uma posição corre- spondente à posição 93, uma isoleucina em uma posição correspond- ente à posição 97 e/ou uma glicina em uma posição correspondente à posição 98 de SEQ ID NO: 164; d) uma treonina em uma posição correspondente à posição
21, uma leucina em uma posição correspondente à posição 23, uma alanina em uma posição correspondente à posição 25, uma glicina em uma posição correspondente à posição 80 e/ou uma histidina em uma posição correspondente para a posição 207 da SEQ ID NO: 165; e) uma prolina em uma posição correspondente à posição 16 e/ou uma alanina em uma posição correspondente à posição 198 da SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205 ou SEQ ID NO: 206; e/ou f) uma cisteína em uma posição correspondente à posição 14 e/ou uma prolina em uma posição correspondente à posição 16 da SEQ ID NO: 207.
[00246] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende: a) uma treonina na posição 21, uma leucina na posição 23, uma alanina na posição 25, uma glicina na posição 80, uma alanina na posição 205 e/ou uma histidina na posição 207 de SEQ ID NO: 162; b) uma prolina na posição 5, uma glicina na posição 38, uma arginina na posição 39, uma arginina na posição 93, uma isoleu- cina na posição 97 e/ou uma glicina na posição 98 de SEQ ID NO: 163; c) uma prolina na posição 5, uma treonina na posição 21, uma leucina na posição 23, uma isoleucina na posição 24, uma glicina na posição 38, uma arginina na posição 39, uma arginina na posição 93, uma isoleucina na posição 97 e/ou uma glicina na posição 98 da SEQ ID NO: 164; d) uma treonina na posição 21, uma leucina na posição 23, uma alanina na posição 25, uma glicina na posição 80 e/ou uma histi- dina na posição 207 de SEQ ID NO: 165; e) uma prolina na posição 16 e/ou uma alanina na posição 198 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205 ou SEQ
ID NO: 206; e/ou f) uma cisteína na posição 14 e/ou uma prolina na posição 16 de SEQ ID NO: 207.
[00247] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 208, 209, 210, 211,212, 213, 214, 215, ou 216.
[00248] Um anticorpo biespecífico tem uma especificidade de ligação para dois epítopos ou moléculas alvo diferentes. Em algumas modalidades, um anticorpo biespecífico se liga a dois epítopos diferentes da mesma molécula alvo. Os anticorpos biespecíficos po- dem ser anticorpos de comprimento total ou fragmentos de anticorpos.
[00249] Em algumas modalidades, um anticorpo compreende um primeiro polipeptídeo IgG Fc variante compreendendo uma mutação de "botão" e um segundo polipeptídeo IgG Fc variante compreendendo uma mutação de "buraco". Mutações de botão e buraco exemplifica- tivas não limitativas são descritas, por exemplo, em Merchant, A. M. et. al. An efficient route to human bispecific IgG. Nat Biotechnol, 16 (7): 677-81 (1998).
[00250] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende uma mutação de botão. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende uma substituição de amino- ácido em uma posição correspondente à posição 138 de SEQ ID NO: 162; posição 137 de SEQ ID NO: 163, posição 137 de SEQ ID NO: 165; posição 138 de SEQ ID NO: 167; posição 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; ou posição 130 de SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 252, ou SEQ ID NO: 253. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende uma substituição de aminoácido na posição 138 de SEQ ID NO: 162; posição 137 de SEQ ID NO: 163; posição 137 de SEQ ID NO: 165; posição 138 de SEQ ID NO: 167; posição 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; ou posição 130 de SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 252, ou SEQ ID NO: 253. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende um triptofano em uma posição corres- pondente a posição 138 de SEQ ID NO: 162; posição 137 de SEQ ID NO: 163; posição 137 de SEQ ID NO: 165;posição 138 de SEQ ID NO: 167, ou posição 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; ou posição 130 de SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 252, ou SEQ ID NO: 253. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende um tripto- fano na posição 138 de SEQ ID NO: 162; posição 137 de SEQ ID NO: 163; posição 137 de SEQ ID NO: 165; posição 138 de SEQ ID NO: 167; posição 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; ou posição 130 de SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 252, ou SEQ ID NO: 253. Em algumas modali- dades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 195, 196, 197, 198, 217, 218, 219, 220, 221, 254, 255, 256, 257, 258, 259, ou 260.
[00251] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende uma mutação de buraco. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende uma substituição de amino- ácido em uma posição correspondente à posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 162; posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 163; posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 165; posição
138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 167; posição 154 e/ou posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; e/ou posição 130 e/ou posição 132 de SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 252, ou SEQ ID NO: 253. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende uma subs- tituição de aminoácido na posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 162; posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 163; posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 165; posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 167; posição 154 e/ou posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; ou posição 130 e/ou posição 132 de SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 252, ou SEQ ID NO: 253. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende uma serina em uma po- sição correspondente à posição 138 e/ou uma alanina em uma posi- ção correspondente à posição 140 de SEQ ID NO: 162; uma serina em uma posição correspondente à posição 137 e/ou uma alanina em uma posição correspondente à posição 139 de SEQ ID NO: 163; uma seri- na em uma posição correspondente à posição 137 e/ou uma alanina em uma posição correspondente à posição 139 de SEQ ID NO: 165; uma serina em uma posição correspondente à posição 138 e/ou uma alanina em uma posição correspondente à posição 140 de SEQ ID NO: 167; uma serina em uma posição correspondente à posição 154 e/ou uma alanina em uma posição correspondente à posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; ou uma serina em uma posição correspondente à posição 130 e/ou uma alanina em uma posição correspondente à po- sição 132 de SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 252, ou SEQ ID NO:
253.Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante com- preende uma serina na posição 138 e/ou uma alanina na posição 140 de SEQ ID NO: 162; uma serina na posição 137 e/ou uma alanina na posição 139 de SEQ ID NO: 163; uma serina na posição 137 e/ou uma alanina na posição 139 de SEQ ID NO: 165; uma serina na posição 138 e/ou uma alanina na posição 140 de SEQ ID NO: 167; uma serina na posição 154 e/ou uma alanina na posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; ou uma serina na posição 130 e/ou uma alanina na posição 132 de SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 248, SEQ ID NO: 249, SEQ ID NO: 250, SEQ ID NO: 251, SEQ ID NO: 252, ou SEQ ID NO: 253. Em al- gumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 199, 200, 201, 202, 222, 223, 224, 225, 226, 261, 262, 263, 264, 265, 266, ou 267.
[00252] Além disso, para facilitar uma cadeia pesada para emparel- har especificamente com sua cadeia leve pretendida, os aminoácidos de interface entre CH1 e a cadeia leve podem ser mutados para serem complementares em forma e interação carga-carga.
[00253] Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende uma região CH1 que compreende pelo menos uma subs- tituição de aminoácido em uma posição correspondente à posição 24 e/ou posição 30 de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou pelo menos uma substi- tuição de aminoácido em uma posição correspondente à posição 24 e/ou posição 29 de SEQ ID NO: 238. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende uma região CH1 que com- preende pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 24 e/ou posição 30 de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou pelo menos uma substi- tuição de aminoácido na posição 24 e/ou posição 29 de SEQ ID NO:
238. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante com- preende uma região CH1 que compreende uma leucina em uma posi- ção correspondente à posição 24 e/ou uma asparagina em uma posi- ção correspondente a posição 30 de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou uma leucina em uma posição correspondente à posição 24 e/ou uma aspa- ragina em uma posição correspondente a posição 29 de SEQ ID NO:
238. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante com- preende uma região CH1 que compreende uma leucina na posição 24 e/ou uma asparagina na posição 30 de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou uma leucina na posição 24 e/ou uma asparagina na posição 29 de SEQ ID NO: 238. Em algumas modalidades, um polipeptídeo IgG Fc variante compreende uma região CH1 compreendendo a sequência de amino- ácido de SEQ ID NO: 231, 232, 233, 234, 239, ou 240.
[00254] Em algumas modalidades, uma região constante de cadeia leve de variante complementar compreende pelo menos uma substitu- ição de aminoácido em uma posição correspondente à posição 11 e/ou posição 22 de SEQ ID NO: 235 ou SEQ ID NO: 241. Em algumas modalidades, uma região constante da cadeia leve variante com- preende pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 11 e/ou posição 22 de SEQ ID NO: 235 ou SEQ ID NO: 241. Em algumas modalidades, uma região constante de cadeia leve variante compre- ende uma alanina em uma posição correspondente à posição 11 e/ou uma arginina em uma posição correspondente a posição 22 de SEQ ID NO: 235 ou SEQ ID NO: 241. Em algumas modalidades, uma regi- ão constante de cadeia leve variante compreende uma alanina na po- sição 11 e/ou uma arginina na posição 22 de SEQ ID NO: 235 ou SEQ ID NO: 241. Em algumas modalidades, uma região constante de ca- deia leve variante compreende a sequência de aminoácido de SEQ ID
NO: 236 ou 242.
[00255] O termo "anticorpo quimérico" ou "quimérico" refere-se a um anticorpo no qual uma porção da cadeia pesada ou da cadeia leve é derivada de uma fonte ou espécie particular, enquanto pelo menos uma parte do restante da cadeia pesada ou a cadeia leve é derivada de uma fonte ou espécie diferente. Em algumas modalidades, um anti- corpo quimérico se refere a um anticorpo que compreende pelo menos uma região variável de uma primeira espécie (como camundongo, ra- to, macaco cinomolgus, etc.) e pelo menos uma região constante de uma segunda espécie (tal como humano, cachorro, gato, equino, etc.). Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico compreende pelo menos uma região variável de camundongo e pelo menos uma região constante canina. Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico compreende pelo menos uma região variável de camundongo e pelo menos uma região constante felina. Em algumas modalidades, todas as regiões variáveis de um anticorpo quimérico são de uma primeira espécie e todas as regiões constantes do anticorpo quimérico são de uma segunda espécie. Em algumas modalidades, um anticorpo quimé- rico compreende uma região de cadeia pesada constante ou região de cadeia leve constante de um animal de companhia. Em algumas mo- dalidades, um anticorpo quimérico compreende cadeias pesadas e le- ves variáveis de camundongo e cadeias pesadas e leves constantes de um animal de companhia. Por exemplo, um anticorpo quimérico pode compreender cadeias pesadas e leves variáveis de camundongo e cadeias pesadas e leves constantes caninas; um anticorpo quimérico pode compreender cadeias pesadas e leves variáveis de camundongo e cadeias pesadas e leves constantes felinas; ou um anticorpo quimé- rico pode compreender cadeias pesadas e leves variáveis de camun- dongo e cadeias pesadas e leves constantes equinas.
[00256] Um "quimérico canino" ou "anticorpo quimérico canino" re-
fere-se a um anticorpo quimérico com pelo menos uma porção de uma cadeia pesada ou uma porção de uma cadeia leve derivada de um cão. Um "quimérico felino" ou "anticorpo quimérico felino" refere-se a um anticorpo quimérico com pelo menos uma porção de uma cadeia pesada ou uma porção de uma cadeia leve derivada de um gato. Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico canino compreende cadeias pesadas e leves variáveis de camundongo e cadeias pesadas e leves constantes caninas. Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico felino compreende cadeias pesadas e leves variáveis de camundongo e cadeias pesadas e leves constantes felinas. Em algu- mas modalidades, o anticorpo é um anticorpo quimérico compreen- dendo regiões de estrutura de cadeia pesada variável de murino ou regiões de estrutura de cadeia leve variável de murino.
[00257] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende um anticorpo quimérico que compreende: (i) uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada de SEQ ID NO: 51 ou SEQ ID NO: 55; (ii) uma sequência de aminoácidos de cadeia leve de SEQ ID NO: 52 ou SEQ ID NO: 56; ou (iii) uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada como em (i) e uma sequência de cadeia leve como em (ii).
[00258] “Um "anticorpo canino", tal como aqui utilizado, abrange an- ticorpos produzidos em um canino; anticorpos produzidos em animais não caninos que compreendem genes de imunoglobulina canina ou compreendem peptídeos de imunoglobulina canina; ou anticorpos se- lecionados usando métodos in vitro, tais como exibição de fago, em que o repertório de anticorpos é baseado em uma sequência de imu- noglobulina canina. O termo "anticorpo canino" denota o gênero de sequências que são sequências caninas. Assim, o termo não designa o processo pelo qual o anticorpo foi criado, mas o gênero de sequên- cias que são relevantes.
[00259] Um "anticorpo caninizado" significa um anticorpo em que pelo menos um aminoácido em uma porção de uma região variável não canina foi substituído pelo aminoácido correspondente de uma região variável canina. Em algumas modalidades, um anticorpo canini- zado compreende pelo menos uma região constante canina (por exemplo, uma região constante y, uma região constante a, uma região constante ôõ, uma região constante e, uma região constante u, ou etc.) ou fragmento da mesma. Em algumas modalidades, um anticorpo ca- ninizado é um fragmento de anticorpo, como Fab, scFv, (Fab')2, etc. O termo "caninizado" também denota formas de anticorpos não caninos (por exemplo, murinos) que são imunoglobulinas quiméricas, cadeias de imunoglobulina, ou fragmentos das mesmas (tais como Fv, Fab, Fab', F(ab')2 ou outras sequências de anticorpos de ligação ao antíge- no) que contêm a sequência mínima de imunoglobulina não canina. Os anticorpos caninizados podem incluir imunoglobulinas caninas (anti- corpo receptor) em que os resíduos de um CDR do receptor são subs- tituídos por resíduos de um CDR de uma espécie não canina (anticor- po doador), tal como camundongo, rato ou coelho tendo a especifici- dade, afinidade desejada, e capacidade. Em alguns casos, os resíduos da região estrutural (FR) de Fv da imunoglobulina canina são substitu- ídos por resíduos não caninos correspondentes. Além disso, o anticor- po caninizado pode compreender resíduos que não são encontrados nem no anticorpo receptor nem na CDR importada ou sequências es- truturais, mas são incluídos para refinar e otimizar ainda mais o de- sempenho do anticorpo.
[00260] Em algumas modalidades, pelo menos um resíduo de ami- noácido em uma porção de uma cadeia pesada variável de camun- dongo ou uma cadeia leve variável de camundongo foi substituído pelo aminoácido correspondente de uma região variável canina. Em algu- mas modalidades, a cadeia modificada é fundida a uma cadeia pesada constante canina ou uma cadeia leve constante canina. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-IL4R é um anticorpo caninizado que compreende uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada variável de SEQ ID NO: 59, 60, 63 ou 64 e/ou uma sequência de ami- noácidos de cadeia leve variável de SEQ ID NO: 61 , 62, 65 ou 66.
[00261] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|L4R compre- ende uma região constante da cadeia pesada canina selecionada de uma região constante IgG-A, IgG-B, IgG-C e IgG-D. Em algumas mo- dalidades, um anticorpo anti-|IL4R compreende um polipeptídeo IgG-A, IgG-B, IgG-C ou IgG-D Fc canino de tipo selvagem ou variante, como aqui descrito. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|IL4R com- preende um polipeptídeo IgG-A Fc canino compreendendo a sequên- cia de aminoácido de SEQ ID NO: 162; um polipeptídeo IgG-B Fc ca- nino compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 163 ou 164; (c) um polipeptídeo IgG C Fc canino compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 165 ou 166; ou (d) um polipep- tídeo IQgG-D Fc canino compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 167. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-ILAR compreende um polipeptídeo IgG-A Fc canino variante compreenden- do a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 168, 169, 195, ou 199; um polipeptídeo IgG-B Fc canino variante compreendendo a sequên- cia de aminoácido de SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 196, ou 200; (c) um polipeptídeo I9gG-C Fc canino vari- ante compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 197, ou 201; ou (d) um polipeptídeo IgG-D Fc canino variante compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 194, 198, ou 202.
[00262] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma região constante da cadeia leve canina, tal como a região constante da luz « canina. Em algumas modalidades, um anti-
corpo anti-|LAR compreende uma região constante de luz « canina de tipo selvagem (por exemplo, SEQ ID NO: 235) ou região constante de luz « canina variante (por exemplo, SEQ ID NO: 236).
[00263] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|L4R compre- ende uma cadeia pesada variável caninizada do Clone B, Clone |, M3, M5, M8 ou M9 e um polipeptídeo IgG Fc canino variante, tal como SEQ ID NO: 71, 72, 75, 76, 276, 348, 349, 351, ou 352. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|L4R compreende uma cadeia leve variável caninizada do Clone B, Clone |, M3, M5, M8 ou M9 e uma região constante da cadeia leve K canina de tipo selvagem, tal como SEQ ID NO: 73 , 74, 77, 78, 277, 350 ou 352.
[00264] Um "anticorpo felino", tal como aqui utilizado, abrange anti- corpos produzidos em um felino; anticorpos produzidos em animais não felinos que compreendem genes de imunoglobulina felina ou compreendem peptídeos de imunoglobulina felina; ou anticorpos se- lecionados usando métodos in vitro, tais como exibição de fago, em que o repertório de anticorpos é baseado em uma sequência de imu- noglobulina felina. O termo "anticorpo felino" denota o gênero de se- quências que são sequências felinas. Assim, o termo não designa o processo pelo qual o anticorpo foi criado, mas o gênero de sequências que são relevantes.
[00265] Um "anticorpo felinizado" significa um anticorpo no qual pe- lo menos um aminoácido em uma porção de uma região variável não felina foi substituído pelo aminoácido correspondente de uma região variável felina. Em algumas modalidades, um anticorpo felinizado compreende pelo menos uma região constante felina (por exemplo, uma região constante y, uma região constante a, uma região constante õ, uma região constante e, uma região constante 4, ou etc.) ou frag- mento da mesma. Em algumas modalidades, um anticorpo felinizado é um fragmento de anticorpo, tal como Fab, scFv, (Fab')>, etc.. O termo
"felinizado" também denota formas de anticorpos não felinos (por exemplo, murinos) que são imunoglobulinas quiméricas, cadeias de imunoglobulinas ou seus fragmentos (tais como Fv, Fab, Fab', F(ab')2 ou outras sequências de anticorpos de ligação ao antígeno) que con- têm uma sequência mínima de imunoglobulina não felina. Os anticor- pos felinizados podem incluir imunoglobulinas felinas (anticorpo recep- tor) em que os resíduos de um CDR do receptor são substituídos por resíduos de um CDR de uma espécie não felina (anticorpo doador), tal como camundongo, rato ou coelho com a especificidade, afinidade de- sejada, e capacidade. Em alguns casos, os resíduos da região estrutu- ral Fv (FR) da imunoglobulina felina são substituídos por resíduos não felinos correspondentes. Além disso, o anticorpo felinizado pode com- preender resíduos que não são encontrados nem no anticorpo recep- tor nem na CDR importada ou nas sequências estruturais, mas são incluídos para refinar e otimizar ainda mais o desempenho do anticor- po.
[00266] Em algumas modalidades, pelo menos um resíduo de ami- noácido em uma porção de uma cadeia pesada variável de camun- dongo ou uma cadeia leve variável de camundongo foi substituído pelo aminoácido correspondente de uma região variável felina. Em algumas modalidades, a cadeia modificada é fundida a uma cadeia pesada constante felina ou uma cadeia leve constante felina. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|ILAR é um anticorpo felinizado com- preendendo uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada variável de SEQ ID NO: 67 ou 69 e/ou uma sequência de aminoácidos de cadeia leve variável de SEQ ID NO: 68 ou 70.
[00267] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|L4R compre- ende uma região constante da cadeia pesada felina selecionada a par- tir de uma região constante de IgG1a, IgG1b e IgG2. Em algumas mo- dalidades, um anticorpo anti-|L4R compreende um polipeptídeo IgG1a,
IgG1b ou IgG2Fc felino de tipo selvagem ou variante, conforme des- crito neste documento. Em algumas modalidades, um anticorpo anti- ILA4R compreende um polipeptídeo IgG1aFc felino compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 203 ou 204; um polipeptídeo IgG1bFc felino compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 205 ou 206; ou (c) um polipeptídeo IgG2Fc felino compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 207.Em algumas modali- dades, um anticorpo anti-|LAR compreende um polipeptídeo IgG1aFc felino variante compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 208, 209, 210 , 217, 218, 222 ou 223; um polipeptídeo IgG1bFc felino variante compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 211, 212, 213, 219, 220, 224 ou 225; ou (c) um polipeptídeo IgG2Fc felino variante compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 214, 215, 216, 221 ou 226.
[00268] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma região constante de cadeia leve felina, como uma região constante de luz « felina. Em algumas modalidades, um anticorpo anti- ILA4R compreende uma região constante de luz « felina de tipo sel- vagem (por exemplo, SEQ ID NO: 241) ou região constante de luz K felina variante (por exemplo, SEQ ID NO: 242).
[00269] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma cadeia pesada variável felinizada do Clone B ou Clone | e um polipeptídeo IgG Fc felino variante, tal como SEQ ID NO: 79, 80, 82 ou 83. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|LA4R com- preende uma cadeia leve variável felinizada do Clone B ou Clone | e uma região constante de cadeia leve « felina, tal como SEQ ID NO: 81 ou 84.
[00270] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|IL4R é um an- ticorpo biespecífico com uma especificidade de ligação para IL4R e uma molécula alvo diferente, tal como IL17, IL31, TNFa, CD20, CD19,
CD25, ILA4, I1L13, 11.23, IgE, CD11a, IL6R, a4-Intergrina, 1112, ILIB ou BIyS. Em algumas modalidades, um anticorpo biespecífico compreen- de uma cadeia pesada variável caninizada ou felinizada do Clone B ou do Clone | e um polipeptídeo IgG Fc canino ou felino variante de "bo- tão" que pode emparelhar com uma região constante K« variante (por exemplo, SEQ ID NO: 243). Em algumas modalidades, um anticorpo biespecífico compreende uma cadeia pesada variável dirigida a uma molécula alvo diferente (por exemplo, IL31 canina ou felina) e um poli- peptídeo IgG Fc canino ou felino variante de "buraco" (por exemplo, SEQ ID NO: 245). Em algumas modalidades, um anticorpo biespecifi- co compreende uma cadeia leve variável do Clone B ou Clone | cani- nizada ou felinizada e uma região constante variável x que pode em- parelhar com o polipeptídeo Fc de botão (por exemplo, SEQ ID NO: 244). Em algumas modalidades, um anticorpo biespecífico compreen- de uma cadeia leve variável dirigida a uma molécula alvo diferente (por exemplo, IL31 canina ou felina) e uma região constante « de tipo sel- vagem que pode emparelhar com o polipeptídeo Fc de buraco (por exemplo, SEQ ID NO: 246.
[00271] Outros arranjos de anticorpos biespecíficos podem ser pre- parados. Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo bies- pecífico compreende uma cadeia pesada variável caninizada ou felini- zada do Clone B ou do Clone | e um polipeptídeo IgG Fc canino ou felino variante de "buraco" que pode emparelhar com uma região cons- tante « variante. Em algumas modalidades, um anticorpo biespecífico compreende uma cadeia pesada variável direcionada a uma molécula alvo diferente (por exemplo, IL31 canina ou felina) e um polipeptídeo IgG Fc canino ou felino variante "botão". Em algumas modalidades, um anticorpo biespecífico compreende uma cadeia leve variável do Clone B ou do Clone | caninizada ou felinizada e uma região constante variá- vel « que pode emparelhar com o polipeptídeo Fc de buraco. Em al-
gumas modalidades, um anticorpo biespecífico compreende uma ca- deia leve variável direcionada a uma molécula alvo diferente (por exemplo, IL31 canina ou felina) e uma região constante k de tipo sel- vagem que pode emparelhar com o polipeptídeo Fc de botão.
[00272] O termo "afinidade" significa a força da soma total de in- terações não covalentes entre um único sítio de ligação de uma molécula (por exemplo, um anticorpo) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). A afinidade de uma molécula X por seu parcei- ro Y geralmente pode ser representada pela constante de dissociação (Kp). A afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica, tais como, por exemplo, imunomancha, ELISA KD, KinEx A, interferometria de biocamada (BLI), ou dispositivos de ressonância de plasmônio de superfície.
[00273] Os termos "Kp," "Ka," "Kd" ou "valor Kd" como usado indis- tintamente para se referir à constante de dissociação de equilíbrio de uma interação anticorpo-antígeno. Em algumas modalidades, o Ka do anticorpo é medido usando ensaios de interferometria de biocamada usando um biossensor, tal como um sistema Octetº (Pall ForteBio LLC, Fremont, CA) de acordo com as instruções do fornecedor. Re- sumidamente, o antígeno biotinilado é ligado à ponta do sensor e a associação do anticorpo é monitorada por noventa segundos e a dis- sociação é monitorada por 600 segundos. O tampão para diluições e etapas de ligação é fosfato a 20 mM, NaCl a 150 mM, pH 7,2. Uma curva vazia apenas de tampão é subtraída para corrigir qualquer des- vio. Os dados são ajustados a um modelo de ligação 2:1 usando o sof- tware de análise de dados ForteBio para determinar a constante da taxa de associação (Kon), constante da taxa de dissociação (Kot) e o Ka. A constante de dissociação de equilíbrio (Ka) é calculada como a razão de ko / Kin. O termo "kon" se refere à constante de taxa para associa- ção de um anticorpo a um antígeno e o termo "koff' se refere à cons-
tante de taxa para dissociação de um anticorpo do complexo anticor- po/antígeno.
[00274] O termo "se liga" a um antígeno ou epítopo é um termo que é bem compreendido na técnica e os métodos para determinar tal ligação também são bem conhecidos na técnica. Diz-se que uma molécula exibe "ligação" se ela reage, se associa com, ou tem afini- dade para uma célula ou substância particular e a reação, associação ou afinidade é detectável por um ou mais métodos conhecidos na téc- nica, tais como, por exemplo , imunomancha, ELISA KD, KinEx A, in- terferometria de biocamada (BLI), dispositivos de ressonância de plasmônio de superfície ou etc.
[00275] “Ressonância de plasmônio de superfície" denota um fenô- meno óptico que permite a análise de interações bioespecíficas em tem- po real pela detecção de alterações nas concentrações de proteínas dentro de uma matriz biossensora, por exemplo, usando o sistema BIAcore'Y (BlAcore International AB, uma GE Healthcare company, Uppsala, Suécia e Piscataway, NJ). Para obter mais descrições, con- sulte Jonsson et. a/. (1993) Ann. Biol. Clin. 51: 19-26.
[00276] "“Interferometria de biocamada" refere-se a uma técnica analítica óptica que analisa o padrão de interferência da luz refletida de uma camada de proteína imobilizada em uma ponta de biossensor e uma camada de referência interna. Mudanças no número de molécu- las ligadas ao biossensor causam mudanças no padrão de interferên- cia que pode ser medido em tempo real. Um dispositivo exemplar não limitante para interferometria de biocamada é um sistema Octet& (Pall ForteBio LLC). Ver, por exemplo, Abdiche et. a/., 2008, Anal. Biochem. 377: 209-277.
[00277] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-IL4R se liga a IL4R canino ou IL4R felino com uma constante de dissociação (Kd) de menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 106 M, menos do que 5 x
107 M, menos do que 1 x 107 M, menos do que 5 x 108 M, menos do que 1 x 108 M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5x 10 M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10? M, ou menos do que 1 x 10? M, conforme medido por interferometria de bi- ocamada.
Em algumas modalidades, um anticorpo anti-IL4R se liga a IL4R canino ou IL4R felino com um Kd entre 5 x 10º Me 1x 10º M, entre 5x 106º Me 5x 107 M, entre 5x 106º Me 1x 107 M, entre 5x 10º Me 5x10º M, 5x 10º Me 1x10º M, entre 5x 10º M e 5x 10º M, entre 5 x 106 M e 1 x 10º M, entre 5x 106 M e 5x 10º M, entre 5 x 1086 M e 1 x 10º M, entre 5x 106º M e 5x 10 M, entre 5x 10º M e 1x 10 M, entre 5x 10º M e 5x 10? M, entre 5x 10º M e 1 x 10? M, entre 1x 10º Me 5x 107 M, entre 1 x 10º Me 1 x 107 M, entre 1 x 106º Me5x108M, 1x106Me1x108M, entre 1x 10º Me5x10º M, entre 1 x 106 M e 1 x 10º M, entre 1 x 106 M e 5x 10º M, entre 1 x 10º M e 1x 10º M, entre 1 x 10º M e 5x 10 M, entre 1 x 10º Me 1x 10! M, entre 1 x 106º M e 5x 102 M, entre 1 x 106º M e 1 x 1072 M, entre 5 x 107 M e 1x 107 M, entre 5x 107 Me 5x 108 M, 5x 107 M e 1x 10º M, entre 5x 107 M e 5x 10º M, entre 5x 107 Me 1x10º M, entre 5x 107 M e 5x 10º M, entre 5x 107 M e 1x 10º M, entre 5 x 107 Me5x10*'M, entre 5x 107 Me 1x10*M, entre 5x107 Me 5x 1072 M, entre 5x 107 M e 1 x 10º M, entre 1x 107 Me 5x10ºM, 1x107 Me1x108M, entre 1 x107 Me5x10ºM, entre 1x10º Me 1x 10º M, entre 1 x 107 Me 5x 10º M, entre 1x 107 Me 1x10*ºM, entre 1 x 107 M e 5x 10 M, entre 1 x 107 M e 1x 10º M, entre 1 x 107 Me 5x 10º? M, entre 1 x 107 M e 1x 10? M, entre 5x 10º M e 1x 108 M, entre 5x 108 M e 5x 10º M, entre 5x 108º Me 1x 10º M, entre 5 x 108 M e 5x 10º M, entre 5x 10º M e 1 x 10º M, entre 5 x 108 M e 5x 10! M, entre 5x 108 M e 1x 10º M, entre 5x 108º M e 5x 10? M, entre 5x 108º Me 1 x 10º M, 1x 10º Me 5x 10º M, entre
1x108 Me1x10ºM, entre 1 x 10º M e 5x 10º M, entre 1 x 10º M e 1x 10º M, entre 1x 108 M e 5x 10 M, entre 1 x 108 Me 1x10" M, entre 1 x 108 M e 5x 102 M, entre 1 x 10º M e 1 x 102º M, entre 5 x 10º M e 1x 10º M, entre 5x 10º M e 5x 107º M, entre 5x 10º Me 1x 10º M, entre 5x 10º M e 5x 10 M, entre 5x 10º Me 1x 10! M, entre 5x 10º M e 5x 10? M, entre 5x 10º M e 1x 10? M, entre 1 x 10º M e 5x 10º M, entre 1 x 10º M e 1x 10º M, entre 1 x 10º Me 5x 10 M, entre 1 x 10º Me 1x 10 M, entre 1x 10º Me 5x 10? M, entre 1 x 10º M e 1 x 107? M, entre 5x 10º M e 1 x 10º M, entre 5x10*º Me 5x 10” M, entre 1x 10º Me5x10 M,1x10”ºMe 1x 10º M, entre 1 x 10º M e 5x 102? M, entre 1 x 10º Me 1x 10? M, entre 5x 10º Me 1 x 10? M, entre 5x 10º Me 5x 10? M, entre 5x 10º Me 1x 10? M, entre 1 x 10º Me 5x10?M, ou entre 1x10 Me1x10?M, medida por interferometria de biocamada. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-IL4R se liga a ILA4R canino ou IL4R felino, conforme determinado por análise de imunomancha.
[00278] Em algumas modalidades, é fornecido um anticorpo anti- IL4R que compete com um anticorpo anti-IL4R aqui descrito (como o Clone B ou Clone |) pela ligação ao ILAR. Em algumas modalidades, um anticorpo que compete com a ligação com qualquer um dos anti- corpos fornecidos aqui pode ser feito ou usado. Em algumas modali- dades, é fornecido um anticorpo anti-|L4R que compete com o anticor- po monoclonal Clone B ou Clone | na ligação a IL4R canino ou ILAR felino.
[00279] O termo "vetor" é usado para descrever um polinucleotídeo que pode ser projetado para conter um polinucleotídeo clonado ou polinucleotídeos que podem ser propagados em uma célula hospedei- ra. Um vetor pode incluir um ou mais dos seguintes elementos: uma origem de replicação, uma ou mais sequências regulatórias (como, por exemplo, promotores ou potencializadores) que regulam a expressão do polipeptídeo de interesse, ou um ou mais genes marcadores se- lecionáveis (tais como, por exemplo, genes de resistência a antibióti- cos e genes que podem ser usados em ensaios colorimétricos, por ex- emplo, B-galactosidase). O termo "vetor de expressão" refere-se a um vetor que é usado para expressar um polipeptídeo de interesse em uma célula hospedeira.
[00280] Uma "célula hospedeira" refere-se a uma célula que pode ser ou foi recipiente de um vetor ou polinucleotídeo isolado. As células hospedeiras podem ser células procarióticas ou células eucarióticas. Células eucarióticas exemplares incluem células de mamíferos, tais como células de animais primatas ou não primatas; células fúngicas, como levedura; células de plantas; e células de insetos. Células exemplares não limitantes de mamíferos incluem, mas não estão limi- tadas a, células NSO, células PER.C60 (Crucell), células 293 e células CHO e seus derivados, tais como células 293-6E, DG44, CHO-S e CHO-K. As células hospedeiras incluem a progênie de uma única célu- la hospedeira, e a progênie pode não ser necessariamente completa- mente idêntica (em morfologia ou em complemento de DNA genômico) à célula-mãe original devido a mutação natural, acidental ou delibera- da. Uma célula hospedeira inclui células transfectadas in vivo com uns polinucleotídeos que codificam umas sequências de aminoácidos aqui fornecidas.
[00281] O termo "isolado", tal como aqui usado, refere-se a uma molécula que foi separada de pelo menos alguns dos componentes com os quais é tipicamente encontrada na natureza ou produzida. Por exemplo, um polipeptídeo é referido como "isolado" quando é separa- do de pelo menos alguns dos componentes da célula na qual foi pro- duzido. Quando um polipeptídeo é secretado por uma célula após a expressão, separar fisicamente o sobrenadante contendo o polipeptí- deo da célula que o produziu é considerado "isolar" o polipeptídeo. Da mesma forma, um polinucleotídeo é referido como "isolado" quando não faz parte do polinucleotídeo maior (tal como, por exemplo, DNA genômico ou DNA mitocondrial, no caso de um polinucleotídeo de DNA) no qual é tipicamente encontrado na natureza, ou é separado de pelo menos alguns dos componentes da célula na qual foi produzido, por exemplo, no caso de um polinucleotídeo de RNA. Assim, um poli- nucleotídeo de DNA que está contido em um vetor dentro de uma célu- la hospedeira pode ser referido como "isolado". Em algumas modali- dades, o anticorpo anti-|IL4R é purificado usando cromatografia, tal como cromatografia de exclusão de tamanho, cromatografia de troca iônica, cromatografia em coluna de proteína A, cromatografia de inte- ração hidrofóbica e cromatografia CHT.
[00282] O termo "espécie de animal de companhia" refere-se a um animal adequado para ser um companheiro para os humanos. Em al- gumas modalidades, uma espécie de animal de companhia é um pe- queno mamífero, tal como um canino, felino, cachorro, gato, cavalo, coelho, furão, porquinho da índia, roedor, etc. Em algumas modali- dades, uma espécie de animal de companhia é um animal de fazenda, tal como um cavalo, vaca, porco, etc.
[00283] "Reduzir" ou "inibir" significa diminuir, reduzir ou interromper uma atividade, função ou quantidade em comparação com uma refe- rência. Em algumas modalidades, por "reduzir" ou "inibir" entende-se a capacidade de causar uma diminuição geral de 20% ou mais. Em al- gumas modalidades, por "reduzir" ou "inibir" entende-se a capacidade de causar uma diminuição geral de 50% ou mais. Em algumas modali- dades, por "reduzir" ou "inibir" entende-se a capacidade de causar uma diminuição geral de 75%, 85%, 90%, 95% ou mais. Em algumas modalidades, a quantidade observada acima é inibida ou diminuída ao longo de um período de tempo, em relação a uma dose de controle (tal como um placebo) durante o mesmo período de tempo. Uma "referên-
cia", conforme usado neste documento, refere-se a qualquer amostra, padrão ou nível que é usado para fins de comparação. Uma referência pode ser obtida de uma amostra saudável ou não doente. Em alguns exemplos, uma referência é obtida de uma amostra não doente ou não tratada de um animal de companhia. Em alguns exemplos, uma refe- rência é obtida de um ou mais animais saudáveis de uma espécie par- ticular, que não é o animal sendo testado ou tratado.
[00284] O termo "substancialmente reduzido", tal como aqui utiliza- do, denota um grau suficientemente alto de redução entre um valor numérico e um valor numérico de referência, de modo que um versado na técnica consideraria a diferença entre os dois valores como sendo estatístico significado dentro do contexto da característica biológica medida pelos ditos valores. Em algumas modalidades, os valores nu- méricos substancialmente reduzidos são reduzidos em mais de cerca de 10%, 15% 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, ou 100% em comparação com o valor de referência.
[00285] Os termos "formulação farmacêutica" e "composição far- macêutica" referem-se a uma preparação que está em uma forma que permite que a atividade biológica do(s) ingrediente(s) ativo(s) seja efi- caz e que não contém componentes adicionais que sejam inaceit- avelmente tóxicos a um indivíduo ao qual a formulação seria admin- istrada.
[00286] Um "veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a um enchimento não tóxico sólido, semissólido ou líquido, diluente, material de encapsulamento, formulação auxiliar ou veículo convencional na técnica para uso com um agente terapêutico que, em conjunto, com- preende uma "composição farmacêutica" para administração a um in- divíduo. Um veículo farmaceuticamente aceitável não é tóxico para os destinatários nas dosagens e concentrações utilizadas e é compatível com outros ingredientes da formulação. O veículo farmaceuticamente aceitável é apropriado para a formulação utilizada. Exemplos de veícu- los farmaceuticamente aceitáveis incluem alumina; estearato de alu- mínio; lecitina; proteínas do soro, tais como albumina de soro humano, albumina canina ou outra albumina animal; tampões tais como tam- pões fosfato, citrato, trometamina ou HEPES; glicina; ácido sórbico; sorbato de potássio; misturas de glicerídeos parciais de ácidos graxos vegetais saturados; agua; sais ou eletrólitos, tais como sulfato de pro- tamina, hidrogenofosfato dissódico, hidrogenofosfato de potássio, clo- reto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal ou trissilicato de magnésio; polivinilpirrolidona, substâncias à base de celulose; polietileno glicol; sacarose; manitol; ou aminoácidos incluindo, mas não se limitando a, arginina.
[00287] A composição farmacêutica pode ser armazenada na forma liofilizada. Assim, em algumas modalidades, o processo de preparação inclui uma etapa de liofiização. A composição liofilizada pode então ser reformulada, tipicamente como uma composição aquosa adequada para administração parenteral, antes da administração ao cão, gato ou cavalo. Em outras modalidades, particularmente onde o anticorpo é altamente estável à desnaturação térmica e oxidativa, a composição farmacêutica pode ser armazenada como um líquido, isto é, como uma composição aquosa, que pode ser administrada diretamente, ou com diluição apropriada, ao cão, gato, ou cavalo. Uma composição liofiliza- da pode ser reconstituída com Água para Injeção estéril (WFI). Rea- gentes bacteriostáticos, tal como álcool benzílico, podem ser incluídos. Assim, a invenção proporciona composições farmacêuticas na forma sólida ou líquida.
[00288] O pH da composição farmacêutica pode estar na faixa de cerca de pH 5 a cerca de pH 8, quando administrado. As composições da invenção são estéreis se forem utilizadas para fins terapêuticos. À esterilidade pode ser alcançada por qualquer um de vários meios conhecidos na técnica, incluindo por filtração através de membranas de filtração estéreis (por exemplo, membranas de 0,2 mícron). A es- terilidade pode ser mantida com ou sem agentes antibacterianos.
[00289] Os anticorpos ou composiçãos farmacêuticas com- preendendo os anticorpos da invenção podem ser úteis para o trata- mento de uma condição induzida por IL4/IL13. Tal como aqui utilizado, uma "condição induzida por IL4/I1L13" significa uma doença associada a, causada por, ou caracterizada por, níveis elevados ou gradientes alterados de concentração de IL4/IL13. Tais condições induzidas por IL4/I1L13 incluem, mas não estão limitadas a, uma doença pruriginosa ou alérgica. Em algumas modalidades, a condição induzida por IL4/I1L13 é dermatite atópica, dermatite alérgica, prurido, asma, pso- ríase, esclerodermia ou eczema. Uma condição induzida por IL4/I1L13 pode ser exibida em um animal de companhia, incluindo, mas não se limitando a, canino ou felino.
[00290] Conforme aqui usado, "tratamento" é uma abordagem para obter resultados clínicos benéficos ou desejados. "Tratamento", tal como aqui utilizado, cobre qualquer administração ou aplicação de um agente terapêutico para doenças em um mamífero, incluindo um ani- mal de companhia. Para os fins desta invenção, os resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, mas não estão limitados a, qualquer um ou mais dos seguintes: alívio de um ou mais sintomas, diminuição da extensão da doença, prevenção ou retardamento da propagação da doença, prevenção ou retardo da recorrência de doença, atraso ou de- saceleração da progressão da doença, melhora do estado da doença, inibição da doença ou progressão da doença, inibição ou desacelera- ção da doença ou sua progressão, interrompendo seu desenvolvimen- to e remissão (seja parcial ou total). Também englobado por "trata- mento" está uma redução das consequências patológicas de uma do- ença proliferativa. Os métodos fornecidos neste documento contem-
plam qualquer um ou mais desses aspectos do tratamento. Em linha com o acima, o termo tratamento não requer a remoção de cem por cento de todos os aspectos do distúrbio.
[00291] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|L4R ou uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo anti-|IL4R pode ser utilizado de acordo com os métodos aqui descritos para tratar condições induzidas por IL4/I1L13. Em algumas modalidades, um anti- corpo anti-|L4R ou uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo anti-|IL4R é administrado a um animal de companhia, tal co- mo um canino ou felino, para tratar uma condição induzida por IL4/I1L13.
[00292] Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" de uma subs- tância/molécula, agonista ou antagonista pode variar de acordo com fatores como o tipo de doença a ser tratada, o estado da doença, a gravidade e o curso da doença, o tipo de finalidade terapêutica, qual- quer terapia anterior, a história clínica, a resposta ao tratamento ante- rior, a discrição do veterinário responsável, idade, sexo e peso do ani- mal e a capacidade da substância/molécula, agonista ou antagonista de induzir uma resposta desejada no animal. Uma quantidade terapeu- ticamente eficaz é também aquela em que quaisquer efeitos tóxicos ou prejudiciais da substância/molécula, agonista ou antagonista são supe- rados pelos efeitos terapeuticamente benéficos. Uma quantidade tera- peuticamente eficaz pode ser entregue em uma ou mais administra- ções. Uma quantidade terapeuticamente eficaz refere-se a uma quan- tidade eficaz, nas dosagens e durante os períodos de tempo necessá- rios, para atingir o resultado terapêutico ou profilático desejado.
[00293] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-|L4R ou com- posição farmacêutica compreendendo um anticorpo anti-IL4R é admi- nistrado por via parenteral, por administração subcutânea, infusão in- travenosa ou injeção intramuscular. Em algumas modalidades, um an-
ticorpo anti-IL4R ou composição farmacêutica compreendendo um an- ticorpo anti-|ILAR é administrado como uma injeção em bolus ou por infusão contínua ao longo de um período de tempo. Em algumas mo- dalidades, um anticorpo anti-|L4R ou composição farmacêutica com- preendendo um anticorpo anti-IL4R é administrado por via intramuscu- lar, intraperitoneal, intracerebrospinal, subcutânea, intra-arterial, in- trassinovial, intratecal ou por inalação.
[00294] Os anticorpos anti-|L4R descritos neste documento podem ser administrados em uma quantidade na faixa de 0,1 mg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modali- dades, os anticorpos anti-|LAR podem ser administrados em uma quantidade na faixa de 0,5 mg/kg de peso corporal a 50 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-IL4R podem ser administrados em uma quantidade na faixa de 1 mg/kg de peso corporal a 10 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-|LAR podem ser administrados em uma quantidade na faixa de 0,5 mg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal, na faixa de 1 mg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal, na faixa de 5 mg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal, na faixa de 10 mg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal, na faixa de 20 mg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal, na faixa de 50 mg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal, na faixa de 1 mg/kg de peso corporal a 10 mg/kg de peso corporal, na faixa de 5 mg/kg de peso corporal a 10 mg/kg de pe- so corporal, na faixa de 0,5 mg/kg de peso corporal a 10 mg/kg de pe- so corporal, ou na faixa de 5 mg/kg de peso corporal a 50 mg/kg de peso corporal.
[00295] Um anticorpo anti-|L4R ou uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo anti-IL4R pode ser administrado a um animal de acompanhamento em um momento ou ao longo de uma série de tratamentos. Por exemplo, um anticorpo anti-IL4R ou uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo anti-|IL4R pode ser administrado pelo menos uma vez, mais de uma vez, pelo menos duas vezes, pelo menos três vezes, pelo menos quatro vezes, ou pelo menos cinco vezes.
[00296] Em algumas modalidades, a dose é administrada uma vez por semana durante pelo menos duas ou três semanas consecutivas e, em algumas modalidades, este ciclo de tratamento é repetido duas ou mais vezes, opcionalmente intercalado com uma ou mais semanas sem tratamento. Em outras modalidades, a dose terapeuticamente efi- caz é administrada uma vez por dia durante dois a cinco dias consecu- tivos e, em algumas modalidades, este ciclo de tratamento é repetido duas ou mais vezes, opcionalmente intercalado com um ou mais dias ou semanas sem tratamento.
[00297] A administração "em combinação com" um ou mais outros agentes terapêuticos inclui a administração simultânea (concorrente) e consecutiva ou sequencial em qualquer ordem. O termo "simultanea- mente" é usado neste documento para se referir à administração de dois ou mais agentes terapêuticos, onde pelo menos parte da adminis- tração se sobrepõe ao tempo ou quando a administração de um agen- te terapêutico cai dentro de um curto período de tempo em relação à administração do outro agente terapêutico. Por exemplo, os dois ou mais agentes terapêuticos são administrados com uma separação de tempo de não mais do que cerca de um número especificado de minu- tos. O termo "sequencialmente" é usado neste documento para se re- ferir à administração de dois ou mais agentes terapêuticos, onde a administração de um ou mais agentes continua após a interrupção da administração de um ou mais outros agentes, ou em que a administra- ção de um ou mais agentes começa antes da administração de um ou mais outros agentes. Por exemplo, a administração de dois ou mais agentes terapêuticos é administrada com uma separação de tempo de mais do que cerca de um número especificado de minutos. Como usa- do aqui, "em conjunto com" refere-se à administração de uma modali- dade de tratamento além de outra modalidade de tratamento. Como tal, "em conjunto com" refere-se à administração de uma modalidade de tratamento antes, durante ou após a administração da outra moda- lidade de tratamento ao animal.
[00298] Em algumas modalidades, o método compreende a admin- istração em combinação com um anticorpo anti-|LAR ou uma com- posição farmacêutica que compreende um anticorpo anti-|IL4R, um in- ibidor de Jak, um inibidor de Tyk2, um inibidor de PI3SK, um inibidor de ERK. Em algumas modalidades, o método compreende a admin- istração em combinação com um anticorpo anti-|LAR ou uma com- posição farmacêutica compreendendo um anticorpo anti-|IL4R, um an- ticorpo anti-IL31, um anticorpo anti-IL17, um anticorpo anti-TNFa, um anticorpo anti-CD20, um anticorpo anti-CD19, um anticorpo anti-CD25, um anticorpo anti-IL4, um anticorpo anti-IL13, um anticorpo anti-IL23, um anticorpo anti-IgE, um anticorpo anti-CD11a, anticorpo anti-IL6R, Anticorpo anti-a4-Intergrina, um anticorpo anti-IL12, um anticorpo anti- IL1B ou um anticorpo anti-BlyS.
[00299] São fornecidos aqui métodos de exposição a uma célula de um anticorpo anti-|L4R ou uma composição farmacêutica que compre- ende um anticorpo anti-|L4R sob condições permissivas para a ligação do anticorpo a ILA4R. Em algumas modalidades, a célula é uma célula canina, uma célula felina ou uma célula equina. Em algumas modali- dades, a célula é uma célula DH82 canina. Em algumas modalidades, a célula é exposta ao anticorpo ou composição farmacêutica ex vivo. Em algumas modalidades, a célula é exposta ao anticorpo ou compo- sição farmacêutica in vivo. Em algumas modalidades, uma célula é exposta ao anticorpo anti-|L4R. Em algumas modalidades, uma célula é exposta ao anticorpo anti-|LA4R ou à composição farmacêutica sob condições permissivas para a ligação do anticorpo ao IL4R extracelu- lar. Em algumas modalidades, uma célula pode ser exposta in vivo ao anticorpo anti-IL4R ou à composição farmacêutica por qualquer um ou mais dos métodos de administração aqui descritos, incluindo, mas não se limitando a, injeção intraperitoneal, intramuscular e intravenosa no indivíduo. Em algumas modalidades, uma célula pode ser ex vivo ao anticorpo anti-|IL4R ou à composição farmacêutica expondo a célula a um meio de cultura que compreende o anticorpo ou a composição farmacêutica. Em algumas modalidades, a permeabilidade da mem- brana celular pode ser afetada pelo uso de qualquer número de méto- dos compreendidos por aqueles versados na técnica (tal como eletro- poração das células ou exposição das células a uma solução contendo cloreto de cálcio) antes de expor a célula a um meio de cultura com- preendendo o anticorpo ou a composição farmacêutica.
[00300] São fornecidos aqui métodos de uso de anticorpos, polipep- tídeos e polinucleotídeos anti-IL4R para detecção, diagnóstico e moni- toramento de uma condição induzida por IL4R. São fornecidos aqui métodos para determinar se um animal de companhia responderá à terapia com anticorpo anti-|LAR. Em algumas modalidades, o método compreende detectar se o animal tem células que expressam IL4R usando um anticorpo anti-ILAR. Em algumas modalidades, o método de detecção compreende contatar a amostra com um anticorpo, poli- peptídeo ou polinucleotídeo e determinar se o nível de ligação difere daquele de uma amostra de referência ou de comparação (tal como um controle). Em algumas modalidades, o método pode ser útil para determinar se os anticorpos ou polipeptídeos aqui descritos são um tratamento apropriado para o indivíduo animal.
[00301] Em algumas modalidades, a amostra é uma amostra bio- lógica. O termo "amostra biológica" significa uma quantidade de uma substância de um ser vivo ou anteriormente vivo. Em algumas modali- dades, a amostra biológica é uma célula ou lisado de célula/tecido. Em algumas modalidades, a amostra biológica inclui, mas não está limita- da a, sangue (por exemplo, sangue total), plasma, soro, urina, fluido sinovial e células epiteliais.
[00302] Em algumas modalidades, as células ou lisado de célu- la/tecido são colocados em contato com um anticorpo anti-|ILA4R e a ligação entre o anticorpo e a célula é determinada. Quando as células de teste mostram atividade de ligação em comparação com uma célula de referência do mesmo tipo de tecido, isso pode indicar que o indi- víduo se beneficiaria do tratamento com um anticorpo anti-|ILAR. Em algumas modalidades, as células de teste são de tecido de um animal de companhia.
[00303] Vários métodos conhecidos na técnica para a detecção de ligação específica de anticorpo-antígeno podem ser usados. Os imu- noensaios exemplares que podem ser realizados incluem imunoensaio de polarização de fluorescência (FPIA), imunoensaio de fluorescência (FIA), imunoensaio enzimático (EIA), imunoensaio de inibição nefelo- métrica (NIA), ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) e ra- dioimunoensaio (RIA). Uma porção indicadora, ou grupo de marcador, pode ser anexado aos anticorpos em questão e é selecionada de mo- do a atender às necessidades de vários usos do método que são fre- quentemente ditados pela disponibilidade de equipamento de ensaio e procedimentos de imunoensaio compatíveis. Marcadores apropriados incluem, sem limitação, radionuclídeos (por exemplo 1251, 131, 35S, 3H, ou ??P), enzimas (por exemplo, fosfatase alcalina, peroxidase de rába- no picante, luciferase ou B galactosidase), porções fluorescentes ou proteínas (por exemplo, fluoresceína, rodamina, ficoeritrina, GFP ou BFP) ou porções luminescentes (por exemplo, nanopartículas Qdot Ty fornecidas por a Quantum Dot Corporation, Palo Alto, Califórnia). As técnicas gerais a serem utilizadas na realização dos vários imunoen- saios observados acima são conhecidas por aqueles versados na téc- nica.
[00304] Para fins de diagnóstico, o polipeptídeo incluindo anticorpos pode ser marcado com uma porção detectável incluindo, mas não se limitando a radioisótopos, marcadores fluorescentes e vários marcado- res enzima-substrato conhecidos na técnica. Os métodos de conjuga- ção de marcadores a um anticorpo são conhecidos na técnica. Em al- gumas modalidades, os anticorpos anti-IL4R não precisam ser marca- dos e a presença dos mesmos pode ser detectada usando um segun- do anticorpo marcado que se liga ao primeiro anticorpo anti-|LAR. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-|IL4R pode ser empregado em qualquer método de ensaio conhecido, tal como ensaios de ligação competitiva, ensaios de sanduíche diretos e indiretos e ensaios de imunoprecipitação. Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Tech- niques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987). Os anticorpos e polipep- tídeos anti-IL4R também podem ser usados para ensaios de di- agnóstico in vivo, tais como imagens in vivo. Geralmente, o anticorpo ou o polipeptídeo é marcado com um radionuclídeo (tal como “In, Tc, 14C, 1811, 1251, 3H, ou qualquer outro marcador de radionuclídeo, incluindo aqueles aqui delineados) de modo que as células ou tecido de interesse possam ser localizados usando imunoscintiografia. O an- ticorpo também pode ser usado como reagente de coloração em pato- logia usando técnicas bem conhecidas na técnica.
[00305] Em algumas modalidades, um primeiro anticorpo é usado para um diagnóstico e um segundo anticorpo é usado como um agente terapêutico. Em algumas modalidades, o primeiro e o segundo anti- corpos são diferentes. Em algumas modalidades, o primeiro e o se- gundo anticorpos podem se ligar ao antígeno ao mesmo tempo, ligan- do-se a epítopos separados.
[00306] São fornecidos aqui métodos para a triagem de uma molé- cula que inibe a função de sinalização de IL4 e/ou IL13, compreen- dendo expor a uma célula DH82 canina a molécula e detectar se há uma redução na fosforilação de STAT6. Em algumas modalidades, a molécula compreende um anticorpo anti-|L4R ou antagonista de pe- quena molécula de IL4R. Em algumas modalidades, a molécula com- preende um anticorpo anti-|IL4R ou antagonista de pequena molécula de ILI13R. Em algumas modalidades, a molécula compreende um anti- corpo anti-|IL4R ou antagonista de molécula pequena de IL4. Em al- gumas modalidades, a molécula compreende um anticorpo anti-IL4R ou antagonista de molécula pequena de IL13.
[00307] Os exemplos a seguir ilustram aspectos particulares da in- venção e não se destinam de forma alguma a limitar a invenção.
EXEMPLOS Exemplo 1 Preparação de reagentes ECD de IL4 e ILAR
[00308] Sequências de nucleotídeos que codificam proteínas de fusão compreendendo (1) IL4R canino de comprimento total (SEQ ID NO: 94), um ECD de IL4Rs canino, felino, equino, murino ou humano (SEQ ID NO: 99, 100, 101, 102 , ou 103), ou um IL4 canino, felino ou equino (SEQ ID NOs: 121, 122 ou 123), (2) um ou mais His6, Fc hu- mano, e/ou marcador FLAG, (3) um ou mais sequências de ligantes e (4) uma sequência líder foi sintetizadas e clonadas em plasmídeos de expressão separados em mamíferos. Os plasmídeos foram transfecta- dos separadamente em células 293, cultivados e os sobrenadantes contendo ECD de IL4R segregado ou polipeptídeos de fusão de IL4 foram recolhidos e filtrados separadamente. As proteínas de fusão po- li-His foram purificadas por afinidade usando coluna Ni NTA (GE Heal- thcare Life Sciences) e proteínas de fusão Fc humanas foram purifica- das por afinidade usando CaptivAG Protein A Affinity Resin (Repligen).
As proteínas de fusão purificadas foram confirmadas por análise SDS- PAGE (dados não mostrados). As proteínas de fusão (antes e depois do processamento) estão resumidas na Tabela 3, abaixo.
Tabela 3.
Exemplo 2 Identificação de anticorpos monocilonais de camundongo que se ligam ao IL4R canino
[00309] — Anticorpos monoclonais de camundongo foram identifica- dos após imunização padrão com ILA4R-ECD C-His6 canino purifica- do(SEQ ID NO: 107) como imunógeno. Diferentes adjuvantes foram usados durante as imunizações (Akesobio, Inc, China) e os anticorpos monoclonais foram obtidos por meio de tecnologia de hibridoma pa- drão.
[00310] O ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) foi desen- volvido para a triagem de clones que produzem anticorpos de ligação a IL4R. Primeiro, ILAR-ECD C-His6 biotinilado (SEQ ID NO: 107) foi introduzido em poços revestidos com estreptavidina. O soro imunizado foi então adicionado aos poços seguido de lavagem e detecção com anticorpos anti-camundongo conjugados com HRP. A presença de an- ticorpos caninos de ligação a IL4R desenvolveu um sinal positivo. Mais de 121 clones de topo positivos para ELISA foram identificados.
[00311] Os 121 clones de anticorpo foram selecionados quanto à capacidade de bloquear a interação entre IL4 canino e ECD de IL4R canino por ELISA. O IL4R-ECD C-HuFc His6 canino (SEQ ID NO: 109) foi imobilizado em poços revestidos com Fc anti-humano. O so- brenadante de hibridoma foi adicionado, seguido por IL4 C His6 cani- no biotinilado (SEQ ID NO: 127) e, em seguida, estreptavidina-HRP. O sinal diminuído sugeriu interação reduzida entre o ECD de IL4R canino e o IL4 canino. Onze clones foram identificados e designados como Clones A, B, C, D, E, F, G, H, |, J e K. Cada um dos clones foi posteri- ormente cultivado e os anticorpos IgG produzidos foram purificados usando cromatografia de afinidade de proteína A padrão.
[00312] A ligação de cada clone ao ECD de IL4R canino foi confir- mada por ensaio de biossensor (Forte Bio Octet). Primeiro, o IL4R-
ECD C-His6 canino biotinilado (SEQ ID NO: 107) foi ligado às pontas do sensor de estreptavidina. Em seguida, a ligação de cada um dos onze clones de anticorpo à ponta do sensor ligada a ILAR-ECD canino foi avaliada. Exemplo 3 Os anticorpos do clone B e do clone | bloqueiam a ligação de IL4 ao IL4R canino
[00313] Os onze anticorpos foram avaliados por ensaio de biossen- sor (Forte Bio Octet) para a capacidade de um complexo anticorpo- ECD de IL4R para reduzir a ligação do ligante IL4 canino. O IL4R- ECD C-His6 canino biotinilado (SEQ ID NO: 107) foi capturado nas pontas do sensor de estreptavidina. As pontas ligadas ao ECD de ILAR foram expostas separadamente a cada um dos onze anticorpos murinos (clones A, B, C, D, E, F, G, H, 1,J e K) a 20 ug/mL para formar os complexos binários ECD de IL4R-anticorpo. As pontas ligadas ao complexo foram então expostas ao canino IL4 C His6 (SEQ ID NO: 127) em uma alta concentração (240 ug/mL). Os complexos ECD de IL4R canino-anticorpo dos Clones B e | não se ligaram ao IL4 canino, sugerindo que ambos os clones B e | são anticorpos neutralizantes. Exemplo 4 Identificação de sequências de DNA codificando VH e VL de anti- corpos monoclonais
[00314] Clones Bel de Hibridoma foram peletizados, e RNA total foi extraído. Iniciadores de oligonucleotídeo para amplificar domínios variáveis de imunoglobulina (Ig) de camundongo foram usados para obter cDNA usando técnicas padrão. As cadeias pesada e leve de cada clone foram sequenciadas e analisadas por alinhamento de sequência (FIG. 1A e FIG. 1B, respectivamente). Sequências CDR exemplares de Clone B foram identificadas como SEQ ID NOs 7-9 e 14-16 e de Clone | foram identificadas como SEQ ID NOs 29-31 e 36-38. Sequências CDR de consenso exemplares foram identificadas como CDR-H1: GYTFTSYVMH
(SEQ ID NO: 1), CDR-H2: YINPXINDGTFYNGX2X3Xa4G (SEQ ID NO: 2), em que X1 é Kou A, XoK ou A, Xg é FouV, e X é KoudQ, ou YINPX:NDGT, em que X, é K ou A (SEQ ID NO: 268); CDR-H3: FXsYGXsAY (SEQ ID NO: 3), em que Xs é N ou Y, e Xs s | ou F, CDR- L1: RASQEISGYLS (SEQ ID NO: 4); CDR-L2: AASX7;XgDX,s (SEQ ID NO: 5), em que X; é Tou N, Xgé RouL,e Xs é S ou T; e CDR-L3: VQYASYPWT (SEQ ID NO: 6). Exemplo 5 Expressão e purificação de anti-|LAR-mMAb Clone Be |
[00315] Sequências de nucleotídeo codificando polipeptídeos de cadeia pesada e leve de Clones B e | de tamanho natural com se- quências líderes (SEQ ID NOs 27, 28, 49, e 50) foram quimicamente sintetizadas e clonadas em vetores de expressão separados ade- quados para transfecção em uma célula hospedeira CHO. Vetores de Clone B e Clone | foram transfectados em células hospedeiras CHO separadas e cultivados. Anticorpos de Clone B e Clone | foram purifi- cados do meio de cultura por cromatografia de coluna de Proteína À de única etapa.
[00316] Termoestabilidade de anticorpos de Clone B e | como uma função de pH foi medida por fluorimetria de varredura diferencial (DSF). A temperatura de fusão (Tm) de cada anticorpo no pHs diferentes é listada na Tabela 4, abaixo. Tampão e 12 ug de anticorpo foram misturados entre si com 1X Pigmento de deslocamento térmico de proteína (Ap- plied Biosystem, Catálogo No. 4461146). Uma curva de fusão foi real- izada com StepOne Real Time PCR System (Applied Biosystem, Catálogo No. 4376357). A temperatura foi aumentada de 25 ºC a 99 ºC com uma taxa de inclinação de 1% de acordo com as instruções do fabricante. Os dados foram analisados pelo Protein Thermal Shift"M Software v1.0 (Applied Biosystem, Catálogo No. 4466038) para deter- minar a Tm, que foi calculada como o maior valor derivado da tomada do primeiro derivado da curva de fusão de proteína. Tabela 4. Es sr as E eso er er Exemplo 6 Demonstração de atividade de ligação do ILAR
[00317] Anticorpos de clone B e | cada um exibiu afinidade para IL4R canino com cinéticas potencialmente suficientes para atividade terapêutica. A analise de ligação foi realizada usando um Biosensor de octeo como segue. Em síntese, ILA4R canino-ECD C-His6 (SEQ ID NO: 107) foi biotinilado por química de amina. A biotina não reagida livre foi removida por diálise extensa. ILAR canino-ECD C-His6 bio- tinilado foi capturado nas pontas de sensor de estreptavidina. A associ- ação de anticorpo de Clone B ou | e ILAR-ECD C-His6 canino (25 Vpg/mML) foi monitorado por 600 segundos. A dissociação foi monitorada por 600 segundos. Uma curva em branco apenas de Tampão foi sub- traída para corrigir qualquer desvio. Os dados foram ajustados a um modelo de ligação 1: 1 usando o software de análise de dados ForteBio TM para determinar à Kon, Kos, e a Kd. O Tampão para diluições e todas as etapas de ligação foram fosfato a 20 mM, NaCl a 150 mM, pH 7,2. A Kd de anicorpo de Clone B e ILAR-ECD C His6 canino foi 2,08x10ºM e de anticorpo de Clone | e ILA4R canino-ECD C-His6 foi 1,79x10º M.
[00318] Um ensaio de ligação alternativo foi realizado também usando um biossensor de octeto. ILAR-ECD C-HuFc His6 canino (SEQ ID NO: 109) foi capturado em pontas de sensor de ligação a Fc anti-humano. A associação do anticorpo de Clone B ou | e IL4R- ECD C-HuFc His6 canino foi monitorada por 600 segundos. A disso-
ciação foi monitorada por 600 segundos. O Tampão para diluições e todas as etapas de ligação foram fosfato a 20 mM, NaCl a 150 mM, pH 7,2. A Kd do anticorpo de Clone B e IL4R canino-ECD C HuFc His6 foi de cerca de 10º M e do anticorpo Clonel e IL4R-ECD C- HuFc His6 canino canino foi de 2,75x10º M. A afinidade aumentada observada com o segundo ensaio pode ser devido ao aumento da avidez dos anticorpos CloneB e | para ILAR-ECD C-HuFc His6 HuFc His6 canino sobre ILAR-ECD C-His6 canino. Além disso, a con- jugação de amina pode afetar a afinidade do ILA4R canino-ECD C-His6 canino para interagir com os anticorpos Clone B e |. Exemplo 7 Anticorpos de Clone B e | competem para o mesmo grupo de epítopo ILAR
[00319] A análise de ligação do epítopo foi realizada usando um biossensor de octeto. ILAR-ECD C-HuFc His6 canino (SEQ ID NO: 109) foi capturado em pontas de sensor ligadas a Fc anti-Humano. A associação de anticorpo de Clone B (50 ug / mL) e ILAR-ECD C HuFc His6 canino foi monitorada por 600 segundos. As pontas ligadas ao complexo foram lavadas rapidamente e, em seguida, expostas ao anticorpo Clone | (50 ug / mL). Após a etapa de lavagem e exposição ao anticorpo de Clone |, nenhuma outra associação para ILAR-ECD C HuFc His6 canino foi observada (FIG.2A), sugerindo que os anticor- pos de clone B e | se ligam ao mesmo grupo de epítopos. O ensaio de ligação oposto também foi realizado. A associação entre o anticorpo de Clone | (50 ug / mL) e ILAR-ECD C-HuFc His6 canino capturados nas pontas de sensor ligado a Fc anti-Humano foi monitorada por 600 segundos. As pontas ligadas ao complexo foram lavadas rapidamente e, em seguida, expostas ao anticorpo de Clone B (50 ug / mL). Após a etapa de lavagem e exposição ao anticorpo do Clone B, nenhuma ou- tra associação a ILAR-ECD C HuFc His6 canino foi observada (FIG.
2B), novamente sugerindo que os anticorpos de Clone B e Clone | se ligam ao mesmo grupo de epítopos. Exemplo 8 Anticorpo de Clone B e Clone | bloqueiam a ligação de IL4 e IL13 a ILA4R
[00320] Várias análises de ligação do Clone B, Clone |, canino ILA, e ligantes IL13 canino a IL4R canino foram realizadas usando um Oc- tetBiosensor. ILAR-ECD C-HuFc His6 canino (SEQ ID NO: 109) foi capturado em pontas de sensor ligadas a Fc anti-Humano. A associ- ação do anticorpo CloneB ou Clone | (25 ug / mL) e ILAR-ECD C- HuFc His6 canino foi monitorada por 600 segundos. As pontas ligadas ao complexo foram lavadas rapidamente e, em seguida, expostas a IL4 C-His6 canino (SEQ ID NO: 127; 50 ug / mL) ou IL13 C-His6 ca- nino (SEQ ID NO: 157; 50 ug / mL) e monitoradas por 600 segundos. Foi observada pouca ou nenhuma ligação de IL4 canino (FIG. 3A) ou IL13 canino (FIG. 3B), sugerindo que o clone B e | bloqueia a ligação de IL4 canino e IL13 canino a IL4R canino.
[00321] O ensaio de ligação oposto também foi realizado. A associ- ação entre IL4 C-His6 canino (SEQ ID NO: 127; 50 ug / mL) ou IL13 C-His6 canino (SEQ ID NO: 157; 50 ug / mL) e ILAR-ECD C- HuFc His6 canino capturado nas pontas do sensor ligadas a Fc anti- humano foi monitorada por 600 segundos. As pontas ligadas ao com- plexo foram lavadas rapidamente e, em seguida, expostas ao anticor- po Clone B (50 ug / mL) ou anticorpo Clone | (50 ug / mL) e monito- radas por 600 segundos. Após a ligação de IL4 e IL13 a IL4R (FIG. 3C e FIG. 3D, respectivamente), foi observada outra associação com o Clone B ou Clone |. Esses resultados sugerem que cada clone B e clone | tem uma afinidade maior para IL4R do que IL4 canino ou IL13 canino.
Exemplo 9 Imunorreatividade de anticorpos de Clone B e | a ILAR por análise de Western
[00322] A capacidade do clone B e | de reconhecer ILAR-ECD C- HuFc His6 canino (SEQ ID NO: 109) por Western blot foi investigada. O ILA4R-ECD C-HuFc His6 canino purificado foi separado por SDS- PAGE sob condições de redução (na presença de DTT) ou em con- dições não redutoras (ausência de DTT). As proteínas foram trans- feridas para uma membrana de PVDF e testadas usando o anticorpo Clone B ou | seguido por I9gG-HRP anti-camundongo de cabra. Sinais imunorreativos positivos com anticorpos de Clone B e | foram apenas observados com amostras em condições não redutoras, sugerindo que a ligação de dissulfeto pode ser importante para manter a con- formação do epítopo e que o epítopo para anticorpos de Clone B e | pode ser descontínuo ou conformacional.
[00323] Reatividade cruzada de anticorpo de Clone | para IL4R fe- lino, equino, murine, e humano foi também invetigado. IL4AR-ECD C- HuFc His6 canino (SEQ ID NO: 109), ILAR-ECD C-HuFc His6 felino (SEQ ID NO: 111), ILAR-ECD C-HuFc His6 equino (SEQ ID NO: 113), ILAR-ECD C-HuFc His6 murino (SEQ ID NO: 115), e ILAR-ECD C- HuFc His6 humano (SEQ ID NO: 117) (0,1 ug/lane) foram cada sep- arados por SDS-PAGE sob condições de redução (+ DTT) ou não redu- toras (+ DTT). As proteínas foram transferidas para membranas de PVDF e as manchas foram sondadas com anticorpo de Clone | (0,3 ug/mL) e visualizadas por I9gG-HRP anti-camundongo de cabra (FIG. 4A). Como controle, o blot foi retirado e sondado com IgG Fc-HRP de cabra anti- Humano para visualizar a presença das proteínas ILAR-ECD (FIG. 4B). Anticorpo do clone | imunorreagiu com ILAR-ECD C-HuFc His6 cani- no e em menor extensão com IL4R-ECD C-HuFc His6 felino sob condições não redutoras (FIG. 4A, faixas 5 e 1, respectivamente). À baixa reatividade de base foi observada com polipeptídeos de fusão ILAR-ECD C-HuFc His6 equino, murino e humano (FIG. 4A, faixas 2, 3, e 4, respectivamente). Exemplo 10 Afinidade de ligação ao IL4R felino
[00324] O ensaio de imunomancha detectou ligeira redução na ligação entre o Clone | e ILAR-ECD C-HuFc His6 felino em com- paração com a ligação entre o Clone | e ILAR-ECD C-HuFc His6 ca- nino. Esta descoberta foi consistente com a afinidade de ligação in vitro medida pelo Octet Biosensor. ILAR-ECD C-HuFc His6 felino bio- tinilado (SEQ ID NO: 111) foi capturado nas pontas de sensor de es- treptavidina. A associação do anticorpo Clone | (25 ug / mL) e IL4R- ECD C-HuFc His6 felino foi monitorada por 600 segundos. A dissoci- ação foi monitorada por 600 segundos. Uma curva em branco apenas de tampão foi subtraída para corrigir qualquer desvio. Os dados foram ajustados a um modelo de ligação 1: 1 usando o software de análise de dados ForteBio"Y para determinar à Kon, Ko e o Kd. O Tampão para diluições e todas as etapas de ligação foram fosfato a 20 mM, NaCl a 150 mM, pH 7,2. O anticorpo Kd de Clone | e ILAR-ECD C HuFc His6 felino foi de 1,1 x 10º M. Exemplo 11 Identificação de epítopo de ligação de IL4R canino para anticorpo de Clone |
[00325] O epítopo canino ILA4R que é reconhecido pelo anticorpo Clone | (e presumivelmente também pelo anticorpo Clone B) foi inves- tigado. Uma vez que o anticorpo Clone | exibiu uma baixa base de rea- tividade cruzada com ECD de IL4R humano, numerosas proteínas híbridas de sequências ECD de IL4R canino (SEQ ID NO: 99) e ECD de IL4R humano (SEQ ID NO: 103) foram designadas com uma se- quência líder (SEQ ID NO: 132) e uma marcação Fc-His6 Humana C-
terminal para facilitar o mapeamento de epítopo de IL4R canino. As sequências de ECD canino e humano foram divididas em três segmen- tos (A, B, e C) e seis diferentes construções de polipeptídeo híbrido foram preparados com base nesses segmentos na ordem de A a C (ver FIG.5A e Tabela 5, abaixo).
Tabela 5.
IL4R Híbrido | SEQ segmento(s) de ECD | segmento(s) de ECD | Fig4 Faixa ID NO: | de ILAR canino de IL4R humano Híbrido 2 134 B (R56-H109) AeC 4 (G1-N55, T110-H209) [persa 115 TaemorADO emos — ls Híbrido 6 138 A e C (G1-N55, P110- | B(N56-H109) P204)
[00326] Construções de plasmídeo contendo Sequências de nucle- otídeo codificando cada um dos polipeptídeos híbridos 1-6 foram tran- sitoriamente transfectados em células 293 e os sobrenadantes con- centrados 3 vezes. Cada polipeptídeo de fusão foi separado por SDS- PAGE sob condições não redutoras (-DTT) e as proteínas transferidas para uma membrana de PVDF. A mancha foi sondada usando o anti- corpo de Clone | (FIG.5B) ou anticorpo Fc anti-humano como um con- trole (FIG.5C). A presença de ambos os segmentos de ECD de IL4R canino A e B produziu o sinal mais forte (Híbrido 4, FIG.5B, faixa 6). O segmento A sozinho de ECD de IL4R canino (Híbrido 1, Figura 5B, faixa 3) ou com segmento C (Híbrido 6, FIG.5B, faixa 8) produziu um sinal apreciável, sugerindo que o segmento A pode conter o epítopo principal. Enquanto o segmento B sozinho (Híbrido 2, Figura 5B, faixa 4) ou com o segmento C (Híbrido 5, FIG.5B, faixa 7) produziu um sinal mais fraco, sugerindo que o segmento B pode conter um epítopo acessório (ou menor).
[00327] Com base nesta informação, proteínas híbridas adicionais de sequências de ECD de IL4R canino (SEQ ID NO: 99) e ECD de IL4R humano (SEQ ID NO: 103) foram designadas com uma sequên- cia líder (SEQ ID NO: 132) e marcador de Fc-His6 humano C-terminal para ainda localizar epítopos de IL4R canino. Os segmentos A e B de sequências ECD caninas e humanas foram ainda divididos e mais oito construções de polipeptídeo híbrido (Híbridos 7 a 14) foram prepara- dos com base no aumento do número de resíduos de aminoácidos de sequências caninas ou humanas (ver FIG. 6A e Tabela 6, abaixo). Tabela 6. ILA4R Híbrido | SEQ ID | Segmentos de ECD de | Segmentos de ECD | Fig 5 Faixa NO: IL4R canino de ILAR humano [Fat Te Tenma vers — [ez mo Tones sm [EE TE AI EE n—
[00328] Construções de plasmídeo contendo sequências de nucle- otídeo codificando cada um dos polipeptídeos híbridos 7 a 14 foram transitoriamente transfectados em células 293 e os sobrenadantes concentrados 3 vezes. Cada polipeptídeo híbrido foi separado por SDS-PAGE em condições não redutoras (-DTT) e as proteínas trans- feridas para uma membrana de PVDF. A mancha foi sondada usando anticorpo de Clone | (FIG.6B) ou anticorpo Fc anti-humano como um controle (FIG.6C). A presença da metade do terminal do segmento A e da parte central do segmento B produziu os sinais mais fortes (FIG.6B; Híbridos 7, 11, e 13; faixas 3, 7, e 9, respectivamente).
[00329] Para identificar ainda resíduos de aminoácidos dos epítopos canino IL4R reconhecidos pelo Clone |, múltiplas sequências de ECD IL4 canino mutante transportando mutações de alanina com base na SEQ ID NO: 99 foram designadas com uma sequência líder (SEQ ID NO: 132) e marcador Fc-His6 humano C-terminal e expressas em células 293. Os sobrenadantes celulares foram concentrados 3 vezes, separados por SDS-PAGE em condições não redutoras (- DTT), e transferidos para uma membrana de PVDF. A mancha foi sondada usando anticorpo de Clone | (FIG.7B) ou anticorpo Fc anti- humano como um controle (FIG.7C). Os resultados do mapeamento de epítopos finos estão resumidos na Tabela 7, abaixo. Os resultados sugerem que os aminoácidos M44 e G45 de ECD de IL4R canino (SEQ ID NO: 95) estão envolvidos na ligação ao epítopo.
Tabela 7.
de IL4R canino sinal diminuído? peer e ee e ee re e e EE qe em e
[00330] Um modelo tridimensional de um complexo de IL4 canino (SEQ ID NO: 121), ECD de IL4R canino (SEQ ID NO: 99) e ECD de IL13R canino(SEQ ID NO: 161) foi construído (FIG. 8). O epítopo 1 de IL4R canino é identificado na FIG. 8. A análise dos resultados do estu- do descrito acima, e a análise de modelagem tridimensional da proteína sugere que os clones B e | se ligam a um primeiro epítopo residindo em L41 e T50 de ECD de IL4R canino (SEQ ID NO: 99) ou ECD de IL4R felino (SEQ ID NO: 100), tal como em R36 e N55. Por Ex- emplo, o primeiro epítopo pode compreender a sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 91, ou SEQ ID NO:
92. Em algumas modalidades, o primeiro epítopo compreende a sequên-
cia de aminoácidos LX10FMGSENX11T, em que X10 é Dou Ne X11 é H ou R (SEQ ID NO: 85). Em algumas modalidades, o primeiro epítopo compreende a sequência de aminoácidos RLSYQLX10FMGSENX11 TCVPEN, em que X10 é D ou Ne X11 é H ou R (SEQ ID NO: 86).
[00331] A análise dos resultados do estudo e modelagem tridimen- sional da proteína também sugere que os clones B e | se ligam a um segundo epítopo dentro dos aminoácidos S64 e Q85 do ECD de IL4R canino (SEQ ID NO: 99) ou ECD de IL4R felino (SEQ ID NO: 100). Pa- ra o Exemplo, o segundo epítopo pode compreender a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 90 ou SEQ ID NO: 93. Em algumas modalidades, o segundo epítopo compreende a sequência de ami- noácidos SMX12X13DDX14VEADVYQLX15LWAGXQ, em que X12 é P ou L, X1I3 é l ou M, XI4 é AouF, XI5é DouH,e X16 é QouT (SEQ ID NO: 87). Exemplo 12 Expressão e purificação de anticorpos quiméricos, caninizados, e felinizados
[00332] Os polipeptídeos de cadeia pesada variável de clone B ou | podem ser fundidos à região constante de cadeia pesada de uma diferente espécie animal, tal como um polipeptídeo IgG-A, IgG-B, IgG- C, ou IgG-D canino de tipo selvagem ou um IgG-1a, IgG-1b, ou I1gG- 2Fc felino de tipo selvagem (por exemplo, polipeptídeos Fc de IgG compreendendo SEQ ID NO: 162, 163, 164, 165, 166, 167, 203, 204, 205, 206, 207, 227, 228, 229, 230, 237, 238, 239, ou 240), ou vari- antes de tais polipeptídeos Fc de IgG (por exemplo, polipeptídeos Fc de IgG variates compreendendo SEQ ID NO: 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 231, 232, 233, 234, 239, ou 240).
Sequências de aminoácidos exemplares de cadeias pesadas quiméri- cas incluem SEQ ID NO: 51 (HC variável Clone B e IgG-B canino) e SEQ ID NO: 55 (HC variável de Clone | e IQgG-B canino). Além disso, os polipeptídeos de cadeia leve variável do Clone B ou | podem ser fundidos à região constante da cadeia leve de uma espécie de animal de companhia, como uma região constante da cadeia leve de canino ou felino de tipo selvagem (por exemplo, SEQ ID NO: 235 ou 241), ou variantes de tais polipeptídeos (por exemplo, SEQ ID NO: 236 ou 242). Sequências de aminoácidos exemplares de cadeias leves quiméricas incluem SEQ ID NO: 52 (LC variável de Clone B e região constante da cadeia leve k canino) e SEQ ID NO: 56 (LC variável de Clone | e região constante da cadeia leve canino K«).
[00333] Cadeias pesada variável e leve variável de Clones B e | foram caninizadas e felinizadas por pesquisa e seleção sequências de aminoácido de anticorpo de linha germinativa caninas e felinas apro- priadas como um padrão para enxerto de CDR. As sequências foram também otimizadas usando modelagem estrutural 3-dimensional. Ex- emplos de variantes caninizadas e felinizadas de polipeptídeos de cadeia pesada variável e leve variável de Clone B e | SEQ ID NO 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 274, SEQ que foram designados incluem ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 275, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, e SEQ ID NO: 70.
[00334] Polipeptídeos de cadeia pesada caninizados ou felinizados podem ser fundidos à região constante de cadeia pesada de um polipeptídeo Fc de IgG A, IgG-B, IgG-C, ou IgG-D canino tipo sel- vagem ou IgG-1a, IgG-1b, ou IgG-2 felino tipo selvagem (por exemplo, polipeptídeos Fc de IgG compreendendo SEQ ID NO: 162, 163, 164, 165, 166, 167, 203, 204, 205, 206, 207, 227, 228, 229, 230, 237, 238, 239, ou 240), ou variantes de tais polipeptídeos Fc de IgG (por exem-
plo, polipeptídeos Fc de IgG variante compreendendo SEQ ID NO: 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 231, 232, 233, 234, 239, ou 240). Sequências de aminoácido exemplares de cadeia pesada variável caninizada ou felinizada e um polipeptídeo Fc de IgG variante incluem SEQ ID NOs: 71, 72, 75, 76, 79, 80, 82, e 83.
[00335] —Polipeptídeos de cadeia leve caninizados ou felinizados po- dem ser fundidos à região constante de cadeia leve de uma espécie de animal de companhia, tal como uma região constante de cadeia leve canina ou felina tipo selvagem (por exemplo, SEQ ID NO: 235 ou 241), ou variantes de tais polipeptídeos (por exemplo, SEQ ID NO: 236 ou 242). Sequências de aminoácido exemplares de uma região con- stante de cadeia leve variável caninizada ou felinizada e uma região constante da cadeia leve « incluem SEQ ID NOs: 73, 74, 77, 78, 81, e
84.
[00336] Sequências de nucleotídeo codificando polipeptídeos qui- méricos de cadeia pesada variável de Clone B e | fundidos à cadeia leve variável de IgG canino ou felino e Clone B e | fundidos à cadeia leve costante canino ou felino foram sintetizados e clonados em ve- tores de expressão adequados para transfecção em uma célula hospedeira CHO. Sequências de nucleotídeo codificando polipeptíde- os caninizados e felinizados de Clone | foram também sintetizadas e clonadas em vetores de expressão. Cada par de sequências de nucle- otídeo de HC e LC foi transfectado em célula hospedeira CHO. As células foram cultivadas e anticorpos de Clone B, Clone |, B quimérico, e | quimérico foram purificados do meio de cultura por cromatografia de coluna de proteína A.
[00337] Vetores podem também ser usados para realizar trans-
fecção de escala piloto em células CHO-S usando o reagente usando o reagente de transfecção FreestyleMax'Y (Life Technologies). O so- brenadante é colhido por clarificação do meio condicionado. Os anti- corpos podem ser purificados com uma etapa de cromatografia de proteína A de únnica passage e usados para outra investigação.
[00338] As preparações de anticorpos purificadas podem ser misturadas com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis e esterilizados por filtração para preparar uma composição farmacêuti- ca da invenção. Preparações de anticorpos ou composições far- macêuticas exemplares podem ser administradas a um cão ou gato com uma condição induzida por IL4R, tal como dermatite atópica, dermatite alérgica, prurido, asma, psoríase, esclerodermia ou eczema em uma quantidade terapeuticamente eficaz. Exemplo 13 Polipeptídeos Fc de IgG canino variante para ligação de Proteína A aumentada e/ou ligação de complemento diminuída e/ou ligação de CD16 diminuída.
[00339] Purificação de antibodies usando Afinidade de Proteína A é um processo bem desenvolvido. No entanto, entre quatro subtipos de IgG canino, apenas Fc de IgG-B (por exemplo, SEQ ID NO: 163 ou SEQ ID NO: 164) tem fraca ou nenhuma afinidade de ligação de Proteína A mensurável. Fc de IgG-A canino (por exemplo, SEQ ID NO: 162), Fc de IgG-C (por exemplo, SEQ ID NO: 165 ou SEQ ID NO: 166), e Fc IgG-D (por exemplo, SEQ ID NO: 167) têm fraca ou nenhu- ma afinidade de ligação com a Proteína A. Polipeptídeos Fc de Fc de IgG-A, Fc de IgG-C, e Fc de IgG-D caninos variantes foram designa- dos para ligação de Proteína A alterada.
[00340] Além disso, Fc de IgG-B canino e Fc de IgG-C Fc têm ati- vidade de complemento e ligação a C1g9, enquanto Fc de IgG-A canino e Fc de IgG-D têm fraca ou nenhuma afinidade de ligação mensurável a C1q. Para potencialmente reduzir a ligação a C1qg e/ou potencialmente reduzir respostas imunes mediadas por complemento, HC de IgG-B ca- nino variante e polipeptídeos de Fc de IgG-C foram designados.
[00341] Além disso, Fc de IgG-B canino e Fc de IgG-C têm ativida- de de ligação de CD16. Para potencialmente reduzir a ligação de CD16 a IgG-B Fc e IgG-C Fc, e/ou potencialmente reduzir os polipep- tídeos de ADCC, HC de IgG-B canino variante e Fc de I9gG-C foram designados.
[00342] A Tabela8, abaixo resume as características de ligação de Proteína A e C1iq de subtipos de Fc de IgG canino. Notavelmente, nenhum dos subtipos de Fc de IgG canino tipo selvage tem falta de ligação a C1qg e liga-se à Proteína A. Tabela 8. selvagem Proteína À a Ciq [RSA RE | Es MD O
E A (—) denota baixa ou nenhuma atividade de ligação mensurável.
[00343] Dois métodos foram usados para designar os polipeptídeos variantes de Fc de IgG-A, IgG-C, e IgG-D canino para ligação aumen- tada de Proteína A. Para o primeiro método, os polipeptídeos variantes Fc de IgG-A, IgG-C, e IgG-D canino foram designados ter as mesmas sequências do motif de ligação à Proteína A tal como Fc de IgG-B ca- nino (por exemplo, SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 165, e SEQ ID NO: 167, respectivamente). Para o segundo método, Fc | de IgG-A canino variante (21)T/Q (207)H (SEQ ID NO: 169), Fc | de I9gG-C canino vari- ante (21) T (SEQ ID NO: 181), e Fc | de IQgG-D canino variante (21) T/ Q (207) H (SEQ ID NO: 194) foram designados com uma ou duas sub- stituições de aminoácidos na região de ligação da Proteína A para cor-
responder com a sequência Fc de IgG-B canino.
[00344] Além disso, polipeptídeos caninos variantes de Fc de IgG- A, Fc de IgG-C, e Fc de IgG-D com ligação aumentada de Proteína À podem ser preparados tendo uma ou mais das substituições de ami- noácidos listadas na Tabela 9. Tabela 9.
(SEQ ID NO: 162) (SEQ ID NO: 165) (SEQ ID NO: 167) e eres Fe A * As posições de aminoácido listadas são relativas à SEQ ID NO. indi- cadas.
[00345] Para reduzir potencialmente a ligação de C1q a IgG-B cani- no Fc e IgG-C Fc, e / ou potencialmente reduzir as respostas imunes mediadas pelo complemento, polipeptídeos HC de IgG-B canino vari- ante e IgG-C Fc podem ser preparados com um aminoácido substitui- ção de Lys por qualquer aminoácido exceto Lys em uma posição de aminoácido correspondente à posição 93 da SEQ ID NO: 163 ou da SEQ ID NO: 165, respectivamente. Estas substituições de aminoáci- dos foram identificadas após a análise da sequência de proteína e modelagem da estrutura 3-D de IgG-B canino Fc e IgG-C Fc em com- paração com canino IgG A Fc e IgG-D Fc, que se entende não exibir atividade do complemento. Para o Exemplo, HC de IgG-B canino vari- ante K (93) R (SEQ ID NO: 170) e variante canino IgG C Fc K (93) R (SEQ ID NO: 182) podem ser preparados. Ligação reduzida entre Hu- mano C19q e a fusão compreendendo HC de IgG-B canino variante K (93) R foi observada quando comparada a uma fusão compreendendo
IgG-B de tipo selvagem Fc canino.
[00346] Para potencialmente reduzir a ligação de CD16 a Fc de IgG-B e Fc de IgG-C, e/ou potentialmente reduzir ADCC, HC de IgG-B canino e Fc de IgG-C variante polipeptídeos podem ser preparados tendo uma ou mais substituições de aminoácidos listadas na Tabela
10. As substituições de aminoácidos foram identificadas após análise da sequência de proteína e modelagem da estrutura 3-D de IgG-B ca- nino e IgG-C em comparação com IgG-A e IgG-D, que são entendidos não exibir atividade de ADCC. Tabela 10. Fc de IgG-B Canino Fc de IgG-C canino Substituições (SEQ ID NO: 163) (SEQ ID NO: 165) Met (5) Leu (5) Qualquer aminoácido exceto resíduo original, tal como Pro Asp (38) Asp (38) Qualquer aminoácido exceto resíduo original, tal como Gly Pro (39) Pro (39) Qualquer aminoácido exceto resíduo original, tal como Arg Lys (97) Lys (97) Qualquer aminoácido exceto resíduo original, tal como lle Ala (98) Ala (98) Qualquer aminoácido exceto resíduo original, tal como Gly * As posições de aminoácido listadas são com relação à SEQ ID NO. indicada.
[00347] Visto que o Fc de IgG-C canino tipo selvagem não tem a ligação à Proteína A e tem a ligação a C1ig, um Fc de IgG-C canino variante duplo que se liga à Proteína A e tem ligação reduzida a C1q pode ser preparado combinando uma ou mais das substituições lista- das na Tabela 9 com uma substituição de K(93)R ou substituição de K(93)X, em que X é qualquer aminoácido exceto Lys. Um HC de IgG-B canino duplo variante ou Fc de IgG-C canino variante duplo com ligação reduzida a C1q e ligação reduzida a CD16 pode ser preparado combinando uma ou mais das substituições listadas na Tabela 10 com uma substituição de K(93)R ou substituição de K(93)X, em que X é qualquer aminoácido exceto Lys. Um Fc de IgG-C canino variante triplo que se liga à Proteína A e tem ligação reduzida a C1q e CD16 pode ser preparados combinando uma ou mais das substituições lista- das na Tabela 9 e uma ou mais das subsituições de aminoácido lita- das na Tabela 10 com uma substituição de K(93)R ou substituição de K(93)X, em que X é qualquer aminoácido exceto Lys.
[00348] A ligação de qualquer Fc de IgG canino variante à Proteína A, CD16, e/ou C1q pode ser determinada e comparada à ligação de outro Fc de IgG à Proteína A, CD16, e/ou C1q (por exemplo, o corre- spondente Fc de IgG canino tipo selvagem, outro Fc de IgG canino tipo selvagem ou canino, ou um Fc de IgG tipo selvagem ou variante de outro animal de companhia, etc.).
[00349] A análise de ligação pode ser realizada usando um Octet biosensor. Em síntese, a molécula alvo (por exemplo, Proteína A, C1q, CD16, etc.) pode ser biotinilada e a biotina não reagida removida (por exemplo, por diálise). A molécula alvo biotinilada é capturada em pontas sensoras de estreptavidina. Associação da molécula alvo com várias concentrações (por exemplo, 10 ug/mL) de polipeptídeo de Fc de IgG é monitorada durante um tempo específico ou até o estado constante ser atingido. A dissociação é monitorada durante um tempo específico ou até o estado constante ser atingido. Uma curva vazia de apenas tampão pode ser subtraída para corrigir qualquer desvio. Os dados são ajustados para um modelo de ligação 1:1 | usando o soft- ware de análise de dados ForteBio"Y data analysis software para de- terminar a kKon, Koft, e a Ka.
[00350] —Polipeptídeos de IgG variante canino exemplares para au- mento da ligação da Proteína A (por exemplo, para facilidade de purifi- cação), diminuição da ligação de C1iq (por exemplo, para respostas imunes mediadas por complemento reduzidas), ligação de CD16 re- duzida (por exemplo, citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos reduzida ), e/ou estabilidade aumentada inclui SEQ ID NOs: 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, e 194.
Tais polipeptídeos de IgG canino variante podem ser incorporados com sequências de cadeia pesada do Clone B ou | variável, sequênci- as de cadeia pesada do Clone B caninizado ou | variável, ou sequên- cias de CDR descritas nos Exemplos acima.
Exemplo 14 Polipeptídeos de Fc de IgG felino variante para ligação de com- plemento diminuída e/ou formação de dissulfeto de articulação realçada e/ou produção recombinante realçada.
[00351] “Cada um dos três subtipos de IgG felino, Fc de IgG1a (SEQ ID NO: 203 ou SEQ ID NO: 204), Fc de (SEQ ID NO: 205 ou SEQ ID NO: 206), e Fc de IgG2 (SEQ ID NO: 207) afinidade de ligação de Proteína A. No entanto, apenas Fc de IgG2 felino tem afinidade de ligação mensurável fraca ou nenhuma para C1iqg, enquanto Fc de IgG1a felino, Fc de IgGb liga-se a C1qg. Para potencialmente reduzir a ligação de C1ig e/ou potencialmente reduzir respostas imunes medi- adas por complemento, polipeptídeos Fc de IgG1a felino variante e Fc de Fc de IgG1b foram designados.
[00352] A Tabela 11, abaixo resume as características de ligação à Proteína A e C1iq de subtipos de Fc de IgG felino. Notavelmente, nenhum dos subtipos de Fc de IgG equino tipo selvagem tem ausência de ligação a C1q e liga-se à Proteína A.
Tabela 11.
(—) denota baixa e nenhuma atividade de ligação mensurável.
[00353] Para potencialmente reduzir uma ligação de C1iq a Fc de
IgG1ia e Fc de IgG1b felino, e/ou potencialmente reduzir respostas imunes mediadas por complemento, polipeptídeos Fc de IgG1a felino variante e Fc de Fc de IgG1b podem ser preparados tendo uma substi- tuição de aminoácido de Pro com qualquer aminoácido exceto Pro em uma posição de aminoácido que corresponde à posição 198 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206. Estas substituições de aminoácido foram identificadas após análise da sequência de proteína e modelagem da estrutura 3-D de Fc de IgG1a e Fc de IgG1b felino em comparação com o Fc de IgG2 felino, que é entendido não exibir atividade de complemento. Por exemplo, polipep- tídeos Fc de I9gG1 felino variante P(198)A (SEQ ID NOs: 209, 210, 212, e 213) podem ser preparados.
[00354] A ligação de qualquer Fc de IgG felino variante à C1q pode ser determinada e comparada à ligação de outro Fc de IgG à C1q (por exemplo, o correspondente Fc de IgG felino tipo selvagem, outro Fc IgG felino tipo selvagem ou variante, ou um Fc de IgG tipo selvagem ou variante de outro animal de companhia, etc.). O ensaio de ligação descrito no Exemplo 13 pode ser usado.
[00355] —Análisede modelagem de proteína tridimensional de diver- sas estruturas de articulação ortóloga foi usada para modificar articu- lações de IgG felino para realçar a formação de dissulfeto. Para realçar a formação de dissulfeto na articulação de IgG felino, a se- quência de articulação pode ser modificada por substituição de lisina por prolina em uma posição que corresponde à posição 16 de IgG1a felino (SEQ ID NO: 203 ou SEQ ID NO: 204) (por exemplo, K16P), IgG1b felino (SEQ ID NO: 205 ou SEQ ID NO: 206), ou IgG2 felino (SEQ ID NO: 207) (por exemplo, K(16)P). Exemplos de sequências de aminoácido de polipeptídeos de IgG felino variante tendo uma articu- lação modificada incluem SEQ ID NO: 208, SEQ ID NO: 211, e SEQ ID NO: 215.
[00356] Para aumentar a formação de dissulfeto na articulação de IgG2 felino, a sequência de articulação pode ser modificada por substi- tuição de um aminoácido por cisteína. Por exemplo, um Fc de I9G2 felino variante (SEQ ID NO: 214) tendo uma articulação modificada foi preparado por substituição de Gly por Cys em uma posição de ami- noácido que corresponde à posição 14 de SEQ ID NO: 207.
[00357] “Modelagem de proteína tridimensional foi usada para designar polipeptídeos Fc de IgG felino variante compreendendo se- quências da região de articulação de um isótipo de IgG diferente para produção recombinante realçada e formação de dissulfeto de articu- lação melhorada. Polipeptídeos Fc de IgG2 felino variante podem ser preparados que compreendem sequências da região de articulação de IgG1a ou IgG1b felino (por exemplo, SEQ ID NO: 216). Os níveis de produção recombinante depolipeptídeos Fc de IgG variante e/ou níveis de formação de dissulfeto de articulação podem ser determinados e comparados àquele de outro Fc de IgG por análise de SDS-PAGE sob condições de redução e não redução (por exemplo, o correspondente Fc de IgG tipo selvagem do mesmo ou diferente isótipo, ou um Fc de IgG tipo selvagem ou variante de outro animal de companhia, etc.).
[00358] Polipeptídeos de IgG felino variante exemplares para ligação diminuída de C1q (por exemplo, para respostas imunes medi- adas por complemento reduzidas) e/ou formação de dissulfeto de ar- ticulação realçada e/ou produção recombinante realçada incluem SEQ ID NOs: 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, e 216. Tais polipep- tídeos de IgG felino variantes podem ser incorporados com Sequênci- as de cadeia pesada variável de Clone B ou |, Sequências de cadeia pesada variável de Clone B ou | felinizado, ou sequências CDR descri- tos nos Exemplos acima.
Exemplo 15 Polipeptídeos de Fc de IgG canino, felino e equino variantes para anticorpos biespecíficos
[00359] Para possibilitar a preparação de um anticorpo biespecífico canino, felino ou equino usando um método de heterodimerização nó- em-buraco, foi investigado o emparelhamento de polipeptídeos Fc de IgG canino variante, polipeptídeos de Fc de IgG felino variante, e polipeptídeos de Fc de IgG equino variante. Os anticorpos biespeciífi- cos combinam as especificidades de dois anticorpos contra dois alvos diferentes. Em primeiro lugar, o emparelhamento da cadeia pesada foi projetado pela introdução de mutações de interface CH3 de modo que uma cadeia compreende um aminoácido volumoso (botão) e a outra cadeia compreende aminoácidos menores na mesma localização geral (buraco). Além disso, para facilitar uma cadeia pesada para emparel- har especificamente com sua cadeia leve pretendida, os aminoácidos de interface entre CH1 e a cadeia leve podem ser mutados para serem complementares em forma e interação carga-carga.
[00360] Uma substituição de aminoácido de triptofano por tirosina em uma posição que corresponde à posição 138 do IgG-A canino (SEQ ID NO: 162), em uma posição que corresponde à posição 137 de Fc de IgG-B canino (SEQ ID NO: 163), em uma posição que corre- sponde à posição 137 de Fc de IgG-C canino (SEQ ID NO: 165), ou em uma posição que corresponde à posição 138 de Fc de IgG D cani- no (SEQ ID NO: 167) (T138W ou T137W) pode ser introduzido como um botão. Exemplos de sequências de aminoácido de um primeiro Fc de IgG-A, Fc de IgG-B, Fc de IgG-C, e Fc de IgG-D caninos variantes são SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 196, SEQ ID NO: 197, e SEQ ID NO: 198, respectivamente.
[00361] “Uma substituição de aminoácido de treonina por serina em uma posição que corresponde à posição 138 e de leucina por alanina em uma posição que corresponde à posição 140 de IgG-A canino (SEQ ID NO: 162) ou de IgG-D (SEQ ID NO: 167) (T138S, L140A), ou de treonina por serina em uma posição que corresponde à posição 137 e de leucina por alanina em uma posição que corresponde à posição 139 de Fc de IgG-B canino (SEQ ID NO: 163) ou de IgG-C (SEQ ID NO: 165) (T1378S, L139A) pode ser introduzida como um bu- raco. Exemplos de sequências de aminoácido de um segundo Fc de IgG-A, Fc de IgG-B, Fc de IgG-C, e Fc de I9gG-D são SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 200, SEQ ID NO: 201, e SEQ ID NO: 202.
[00362] “Uma substituição de aminoácido de alanina por leucina em uma posição que corresponde à posição 24 e de serina por asparagina em uma posição que corresponde à posição 30 de um CH1 de IgG-A canino (SEQ ID NO: 227), CH1 de IgG-B canino (SEQ ID NO: 228), CH1 de IgG-C canino (SEQ ID NO: 229), ou CH1 de IgG-D canino (SEQ ID NO: 230) (A24L, S30D) pode ser introduzida. Exemplos de sequências de aminoácido de um CH1 de IgG-A canino variante, CH1 de IgG-B, CH1 de IgG-C, e CH1 de IgG-D são SEQ ID NO: 231, SEQ ID NO: 232, SEQ ID NO: 233, e SEQ ID NO: 234.
[00363] Uma substituição de aminoácido de uma fenilalanina por alanina em uma posição que corresponde à posição 11 e de serina por arginina em uma posição que corresponde à posição 22 de uma região constante k canina (SEQ ID NO: 235) (F11A, S22R) pode ser intro- duzida. Um exemplo de uma sequência de aminoácido de uma região constante k canina variante é SEQ ID NO: 236.
[00364] Uma substituição de aminoácido de treonina por triptofano em uma posição que corresponde à posição 154 de Fc de IgG1a felino (SEQ ID NO: 203 ou SEQ ID NO: 204), Fc de IgG1b felino (SEQ ID NO: 205 ou SEQ ID NO: 206), ou de IgG2 felino (SEQ ID NO: 207) (T154W) pode ser introduzida como um botão. Exemplos de sequênci- as de aminoácido de um primeiro Fc de IgG2 felino variante, Fc de
IgG1a, e Fc de IgG1b são SEQ ID NO: 217, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 220, e SEQ ID NO: 221.
[00365] “Uma substituição de aminoácido de treonina por serina em uma posição que corresponde à posição 154 e de leucina por alanina em uma posição que corresponde à posição 156 de IgG1a felino (SEQ ID NO: 203 ou SEQ ID NO: 204), de IgG1b felino (SEQ ID NO: 205 ou SEQ ID NO: 206), ou de IgG2 felino (SEQ ID NO: 207) (T1548S, L156A) pode ser introduzida como um buraco. Exemplos de sequências de aminoácido de um segundo Fc de IgG2, Fc de IgG1a, e Fc de I9G1b felino variante são SEQ ID NO: 222, SEQ ID NO: 223, SEQ ID NO: 224, SEQ ID NO: 225, e SEQ ID NO: 226.
[00366] Uma substituição de aminoácido de alanina por leucina em uma posição que corresponde à posição 24 e de serina por asparagina em uma posição que corresponde à posição 30 de CH1 de IgG1 felino (SEQ ID NO: 237), ou uma substituição de aminoácido de alanina por leucina em uma posição que corresponde à posição 24 e de serina por asparagina em uma posição que corresponde à posição 29 de CH1 de IgG2 felino (SEQ ID NO: 238) pode ser introduzida. Exemplos de se- quências de aminoácido de um CH1 de IgG1 felino variante e CH1 de IgG2 são SEQ ID NO: 239 e SEQ ID NO: 240.
[00367] Uma substituição de aminoácido de uma fenilalanina por alanina em uma posição que corresponde à posição 11 e de serina por arginina em uma posição que corresponde à posição 22 de uma região constante k felina (SEQ ID NO: 241) (F11A, S22R) pode ser intro- duzida. Um exemplo de uma sequência de aminoácido de um região constante k felina variante é SEQ ID NO: 242.
[00368] “Uma substituição de aminoácido de treonina por triptofano em uma posição que corresponde à posição 130 de Fc de IgG1 equino (SEQ ID NO: 247), de Fc de IgG2 equino (SEQ ID NO: 248), de Fc de IgG3 equino (SEQ ID NO: 249), de Fc de IgG4 equino (SEQ ID NO:
250), de Fc de IgG5 equino (SEQ ID NO: 251), de Fc de IgG6 equino (SEQ ID NO: 252), ou de Fc de IgG7 equino (SEQ ID NO: 253)(T130W) pode ser introduzida como um botão. Exemplos de se- quências de aminoácido de um primeiro Fc de IgG1 equino variante, Fc de IgG2, Fc de IgG3, Fc de IgG4, Fc de IgG5, Fc de IgG6, e Fc de IgG7 são SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, e SEQ ID NO: 260, re- spectivamente.
[00369] “Uma substituição de aminoácido de treonina por serina em uma posição que corresponde à posição 130 e de leucina por alanina em uma posição que corresponde à posição 132 de Fc de I9gG1 equino (SEQ ID NO: 247), de Fc de IgG2 equino (SEQ ID NO: 248), de Fc de IgG3 equino (SEQ ID NO: 249), de Fc de IgG4 equino (SEQ ID NO: 250), de Fc de IgG5 equino (SEQ ID NO: 251), de Fc de IgG6 equino (SEQ ID NO: 252), ou de Fc de IgG7 equino (SEQ ID NO: 253)(T130W) pode ser introduzida como um buraco. Exemplos de se- quências de aminoácido de um segundo Fc de IgG1, Fc de IgG2, Fc de IgG3, Fc de IgG4, Fc de IgG5, Fc de IgG6, e Fc de I9G7 equinos variantes são SEQ ID NO: 261, SEQ ID NO: 262, SEQ ID NO: 263, SEQ ID NO: 264, SEQ ID NO: 265, SEQ ID NO: 266, e SEQ ID NO: 267, respectivamente.
[00370] O método acima descrito pode ser usado para preparar anticorpos biespecíficos contra IL4R e outros alvos, tal como IL17, IL31, TNFa, CD20, CD19, CD25, ILA4, IL13, 1123, IgE, CD11a, IL6R, ad4-Intergrina, I1L12, ILIB, ou BIyS. Por exemplo, um anticorpo biespecífico contra IL4R canino e IL31 canino pode ser preparados com as sequências de aminoácido de SEQ ID NO: 243 (HC v2 variável de Clone 1 caninizado e C1qg- de Fc de IgG-B variante, CD16- com botão biespecífico), SEQ ID NO: 244 (LC v2 variável de Clone 1 caninizado e região constante k canina variável), SEQ ID NO: 245 (HC variável de Clone M14 de IL31 anti-canino caninizado e C19- de HC de IgG-B canino variante, CD16- com buraco biespecífico), e SEQ ID NO: 246 (LC variável de Clone M14 de IL31 anti-canino caninizado e região constante k canina). Exemplo 16 Identificação de anticorpos monoclonais de camundongo adi- cionais que se ligam a IL4R canino
[00371] Anticorpos monoclonais de camundongo foram identifica- dos usando imunização padrão usando domínios extracelulares de IL4R canino produzidos por células 293 como o imunógeno. Diferentes adjuvantes foram usados durante imunizações (Soluções de Anticorpo, Sunnyvale, CA) e anticorpos monoclonais foram obtidos através de tecnologia de hibridoma. Ensaio imunoabsorvente ligado à enzima (ELISA) foi desenvolvido para analisar os clones que produzem anti- corpos de ligação a IL4R canino. Primeiro IL4R canino foi biotinilado e em seguida foi introduzido a cavidades revestidas por estreptavidina. Soro imunizado foi em seguida adicionado às cavidades seguido por lavagem e detecão com anticorpos anti-camundongo conjugados à HRP. A presença de anticorpos de ligação a ILA4R canino desenvolveu um sinal positivo. Mais de 100 clones positivos para ELISA com sinal de ligação elevada foram identificados.
[00372] Além disso, foi realizado um ELISA de neutralização (bloqueio de I1L4 canino). Quatro clones foram identificados que sua ligação a IL4R canino pode ser inibida por IL4 canino. A ligação do IL4 canino ao IL4R canino foi inibida por quatro clones: M3, M5, M8 e M9.
[00373] Os quatro anticorpos de camundongo foram purificados a partir de culturas de células de Híbridoma e suas afinidades para ILAR canino foram medidas usando biossensor (ForteBio OctetRed). O ILAR canino biotinilado foi ligado à ponta do sensor de estreptavidina. Os Kds dos 4 candidatos eram todos inferiores a 10 nM.
Exemplo 17 Identificação de sequências de VH e VL de M3, M5, M8, e M9
[00374] Células de hibridoma que produzem M3, M5, M8 e M9 foram peletizadas. RNA foi extraído e iniciadores de oligonucleotídeo para amplificar domínios variáveis de imunoglobulina (Ig) de camun- dongo foram usados para obter cDNA usando técnicas padrão. À cadeia pesada variável (VH) e cadeia leve variável (VL) de cada um dos quatro clones foram determinados (SEQ ID NO: 292 (M3 VH), SEQ ID NO: 293 (M3 VL), SEQ ID NO: 308 (M5 VH), SEQ ID NO: 309 (M5 VL), SEQ ID NO: 324 (M8 VH), SEQ ID NO: 325 (M8 VL), SEQ ID NO: 340 (M9 VH), SEQ ID NO: 341 (M9 VL). Exemplo 18 Expressão e purificação de anticorpos quiméricos murinos — ca- ninos de células CHO
[00375] Sequências de DNA codificando um anticorpo quimérico foram designadas para uma fusão de VH murina e VL murina para IgG-B de cadeia pesada constante canina e cadeia leve constante ca- nina (kappa). As sequências de nucleotídeo foram sintetizadas quimi- camente e inseridas em um vetor de expressão adequado para trans- fecção em uma célula hospedeira CHO. Após a transfecção em célu- las CHO, a proteína de cadeia leve ou cadeia pesada ou ambas foram secretadas pela célula. Todos os quatro IgG-B caninos quiméricos foram purificados por cromatografia de coluna de Proteína A de única etapa. Suas afinidades com IL4R canino foram confirmadas como sendo < 10 nM usando o biossensor (ForteBio OctetRed). Exemplo 19 Caninização e Expressão de células CHO
[00376] VHeVL Murinas (M3, M9) foram caninizadas por pesquisa e seleção adequadas de sequências de anticorpos de linha germinati- va caninas como um padrão para enxerto de CDR, seguido pela mod-
elagem de proteína. M3 de cadeia leve variável caninizada (SEQ ID NO: 344) e M9 de cadeia leve variável caninizada (SEQ ID NO: 347) foram fundidas a CL canino kappa (resultando em SEQ ID NOs: 350 e 353, respectivamente). Cadeias pesadas variáveis caninizadas de M3 (SEQ ID NO: 342 e SEQ ID NO: 343) e cadeias pesadas variáveis caninizadas de M9 (SEQ ID NO: 344 e SEQ ID NO: 345) foram fundid- as a IgG-B canino variante resultando em SEQ ID NOs 348, SEQ ID NO: 349, SEQ ID NO: 351, e SEQ ID NO: 352, respectivamente). As cadeias pesadas e leves foram prontamente expressas e purificadas em uma única etapa com a coluna de proteína A.
[00377] Os anticorpos caninizados bem expressos e mantida a af- inidade de ligação a IL4R canino de < 1nM. Exemplo 20 Desenvolvimento de ensaio de sinalização com base em célula de IL4R canino
[00378] Células DH82 caninas, uma linhagem de célula tipo macrófago canina derivada de histiocitose maligna foram adquiridas de ATCC (CRL10389), foram semeadas a 10e5 células/cavidade em placas de 96 cavidades e incubadas a 37ºC, CO»? a 5% durante a noite (em 15% de FBS D-MEM como recomendado por ATCC). A inanição sérica e a pré-incubação das células com anticorpos foram feitas sub- stituindo o meio em cada cavidade por anti-IL4R diluído em série ou preparações de sobrenadantes de Híbridoma em D-MEM sem FBS por 1 hora a 5% de CO2, 37ºC. Em seguida, uma citocina de IL4 canino (RnD AF754) foi adicionada a 1 ng / mL (concentração final) a cada cavidade por 15 minutos a 5% de CO2, 37ºC. Vinte microlitros de solução de interrupção (M-per Thermo Fisher * 78501) foram adicio- nados a cada cavidade. A fosforilação de STAT6 induzível por IL4 em cada cavidade foi testada por western blotting anti-fosfo-STAT6 (RnD MAB3717).
[00379] — Anticorpos de camundongo M3, M8 e M9 inibiram a fosfori- lação de STAT6 como testado por Western blot de STAT6 anti-fosfo. Exemplo 21 Identificação de epítopos de ligação caninos a IL4R de M3, M8 e M9 IL4R canino
[00380] Uma vez que M3, M8 e M9 não reconheceram IL4R hu- mano com base no Western blot, mas reagem fortemente a IL4R cani- no, combinações de moléculas de fusão de IL4R quimérico canino - humano foram feitas e expressas para identificar os segmentos cani- nos mínimos aos quais cada anticorpo liga-se.
[00381] A Figura 9 ilustra os polipeptídeos híbridos de ECD de ILA4R canino/humano usados para análises de mapeamento de epítopo de IL4R canino (as mesmas construções híbridas usados no mapeamento de epítopo do Exemplo 11, acima). A FIG. 9B resume a análise de Western blotting em que ECD de IL4R canino, ECD de IL4R humano e os diferentes polipeptídeos híbridos de ECD de IL4R cani- nos/humanos foram sondados com anticorpos M3, M8, e M9. NR na tabela representa que o anticorpo não foi reativo ao ECD de ILAR híbrido no respectivo western blot indicando que as sequências de IL4R canino substituídas por sequências ILA4R humano são im- portantes para a ligação do anticorpo (epítopos).
[00382] MB3 foi determinado ligar-se a um epítopo tendoa sequência DFMGSENHTCVPEN (SEQ ID NO: 354). M8 foi determinado ligar-se a um primeiro epítopo tendo a sequência GSVKVLHEPSCFSDY- ISTSVCQWKMDHPTNCSA (SEQ ID NO: 355) e um segundo epítopo tendo a sequência REDSVCVCSMPI (SEQ ID NO: 356). M9 foi deter- minado ligar-se a um epítopo tendo a sequência REDSVCVCSMPID- DAVEADV (SEQ ID NO: 357).

Claims (149)

REIVINDICAÇÕES
1. Anticorpo isolado que se liga a IL4R canino ou IL4R feli- no, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de LXioFMGSENX1T (SEQ ID NO: 85), em que X1o é D ou Ne X1; é HouR.
2. Anticorpo isolado que se liga a IL4R canino ou IL4R feli- no, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de RLSYQLX.oFMGSENX,, TCVPEN (SEQ ID NO: 86), em que X1o é DouNe X é HouR.
3. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 2, ca- racterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo compre- endendo a sequência de aminoácido de LXioFMGSENX11T (SEQ ID NO: 85), em que X1o é Dou Ne X1 é HouR.
4. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 88 ou SEQ ID NO: 91.
5. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 89 ou SEQ ID NO: 92.
6. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de SMX12X13DDX1aVEADVYQLX:sLWAGX16Q (SEQ ID NO: 87), em que X12é P ou L, X13 é | ou M, Xu é A ou F, X15 é Dou H, e X16 É QouT.
7. Anticorpo isolado que se liga a IL4R canino ou IL4R feli- no, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de SMX12X:3DDX14 VEAD- VYQLX:sLWAGX1sQ (SEQ ID NO: 87), em que X12 é P ou L, X13 é | ou M, X14 É A ou F, X15 É D ou H, e XK16 É QouT.
8. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 90 ou SEQ ID NO: 93.
9. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a ILA4R canino ou IL4R felino com uma constante de dissociação (Kd) de menos do que 5 x 106º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 107 M, menos do que 1 x 107 M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 108 M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10? M, ou menos do que 1 x 10? M, como medido por interferometria de biocamada.
10. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a IL4R canino ou IL4R felino como determinado por análise immunoblot ou interferometria de biocamada.
11. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo reduz a ligação de um polipeptídeo IL4 canino e/ou felino e/ou um po- lipeptídeo I1L13 canino e/ou felino a ILA4R canino e/ou IL4R felino, como medido por interferometria de biocamada.
12. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compete com anticorpo monoclonal Clone B ou Clone | em ligação a IL4R canino ou IL4R felino.
13. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
14. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo canino, caninizado, felino, felinizado ou quimérico.
15. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo uma ou mais de estrutura de cadeia pesada variável murina ou uma ou mais de estrutura de cadeia leve variável murina.
16. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada compreendendo: a) uma sequência de CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de GYTFTSYVMH (SEQ ID NO: 1); b) uma sequência de CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo me- nos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de YINPXINDGTFYNGX2X3 X4G (SEQ ID NO: 2), em que X, é Kou A, X2K ou A, Xgé Fou V,e X é K ou Q, ou YINPX.NDGT (SEQ ID NO: 268), em que Xx é Kou A; e c) uma sequência de CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de FXsYGXAY (SEQ ID NO: 3), em que Xs é Nou Y, e Xsé lou F.
17. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada compreendendo: a) uma sequência de CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1; b) uma sequência de CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 271, ou SEQ ID NO: 272;€ c) uma sequência de CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 9 ou SEQ ID NO: 31.
18. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada compreendendo: a) uma CDR-H1 compreendendo a sequência de aminoáci- do de SEQ ID NO: 1; b) uma CDR-H2 compreendendo a sequência de aminoáci- do de SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 269, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 271, ou SEQ ID NO: 272; e c) uma CDR-H3 compreendendo a sequência de aminoáci- do de SEQ ID NO: 9 ou SEQ ID NO: 31.
19. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia leve compreendendo: a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de RASQEISGYLS (SEQ ID NO: 4); b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de AASX7Xs8DXs (SEQ ID NO: 5), em que X; é Tou N, Xgé RouL, e Xgé SouT;e c) uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de VQYASYPWT (SEQ ID NO: 6).
20. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia leve compreendendo: a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 4; b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 15 ou SEQ ID NO: 37; e c) uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 6.
21. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia leve compreendendo: a) uma CDR-L1 compreendendo a sequência de aminoáci- do de SEQ ID NO: 4; b) uma CDR-L2 compreendendo a sequência de aminoáci- do de SEQ ID NO: 15 ou SEQ ID NO: 37; e c) uma CDR-L3 compreendendo a sequência de aminoáci- do de SEQ ID NO: 6.
22. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 16 a 21, caracterizado pelo fato de que ainda compreende um ou mais de (a) uma sequência de estrutura 1 de cadeia pesada de região variável (HC-FR1) de SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 32; (b) uma se- quência de HC-FR2 de SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 33; (c) uma sequência de HC-FR3 de SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 270, SEQ ID NO: 34, SEQ ID ID NO: 273; (d) uma sequência de HC-FR4 de SEQ ID NO: 13 ou SEQ ID NO: 35; (e) uma sequência de estrutura 1 de cadeia leve de região variável (LC-FR1) de SEQ ID NO: 17 ou SEQ ID NO: 39; (f) uma sequência de LC-FR2 de SEQ ID NO: 18 ou SEQ ID NO: 40; (g) uma sequência de LC-FR3 de SEQ ID NO: 19 ou SEQ ID NO: 41; ou (h) uma sequência de LC-FR4 de SEQ ID NO: 20 ou SEQ ID NO: 42.
23. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compre- ende: a. (1) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 21 ou SEQ ID NO: 43; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 22 ou SEQ ID NO: 44; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequên- cia de cadeia leve variável como em (ii); ou b. (i) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, ou SEQ ID NO: 274; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 275; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii); ou
Cc. (i) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 67 ou SEQ ID NO: 69; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 68 ou SEQ ID NO: 70; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequên- cia de cadeia leve variável como em (ii).
24. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compre- ende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 274, SEQ ID NO: 67, ou SEQ ID NO: 69.
25. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compre- ende uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 275, SEQ ID NO: 68, ou SEQ ID NO: 70.
26. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compre- ende: a) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 21 ou SEQ ID NO: 43, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 22 ou SEQ ID NO: 44; b) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60,
SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, ou SEQ ID NO: 274 e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, ou SEQ ID NO: 275; ou c) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 67 ou SEQ ID NO: 69 e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 68 ou SEQ ID NO: 70.
27. Anticorpo isolado que se liga a IL4R canino ou IL4R fe- lino, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 354.
28. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a ILAR canino ou IL4R felino com uma constante de dissociação (Kd) de menos do que x 106 M, menos do que 1 x 106 M, menos do que 5 x 107 M, menos do que 1 x 107 M, menos do que 5 x 108 M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 107º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10? M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10? M, ou menos do que 1 x 10º 12 M, como medido por interferometria de biocamada.
29. Anticorpo, de acordo com reivindicação 27 ou 28, carac- terizado pelo fato de que o anticorpo se liga a IL4R canino ou IL4R fe- lino como determinado por análise immunoblot ou interferometria de biocamada.
30. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 27 a 29, caracterizado pelo fato de que o anticorpo reduz a ligação de um polipeptídeo IL4 canino e/ou felino e/ou um polipeptí- deo I1L13 canino e/ou felino a IL4R canino e/ou IL4R felino, como me- dido por interferometria de biocamada.
31. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei-
vindicações 27 a 30, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- pete com anticorpo monoclonal M3 em ligação a IL4R canino ou ILA4R felino.
32. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 27 a 31, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
33. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 27 a 32, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo canino, caninizado, felino, felinizado ou quimérico.
34. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 27 a 33, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo uma ou mais de estrutura de ca- deia pesada variável murina ou uma ou mais de estrutura de cadeia leve variável murina.
35. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 27 a 34, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada compreendendo: a) uma sequência de CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 278; b) uma sequência de CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 279; e c) uma sequência de CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 280.
36. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 27 a 35, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia leve compreendendo:
a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 285; b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 286; e c) uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 287.
37. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 27 a 36, caracterizado pelo fato de que ainda compreende um ou mais de (a) uma sequência de estrutura 1 de cadeia pesada de região variável (HC-FR1) de SEQ ID NO: 281; (b) uma sequência de HC-FR2 de SEQ ID NO: 282; (c) uma sequência de HC-FR3 de SEQ ID NO: 283; (d) uma sequência de HC-FR4 de SEQ ID NO: 284; (e) uma sequência de estrutura 1 de cadeia leve de região variável (LC- FR1) de SEQ ID NO: 288; (f) uma sequência de LC-FR2 de SEQ ID NO: 289; (g) uma sequência de LC-FR3 de SEQ ID NO: 290; ou (h) uma sequência de LC-FR4 de SEQ ID NO: 291.
38. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 27 a 37, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende: a. (1) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 292; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 293; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii); ou b. (i) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 342 ou SEQ ID NO: 343; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 344; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia le- ve variável como em (ii).
39. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 27 a 38, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 292, SEQ ID NO: 342, ou SEQ ID NO: 343.
40. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 27 a 39, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 293 ou SEQ ID NO: 344.
41. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 27 a 40, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende: a) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 292, e uma se- quência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 293; e/ou b) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 342 ou SEQ ID NO: 343, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 344.
42. Anticorpo isolado, caracterizado pelo fato de que com- preende: a) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 292, e uma se- quência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 293; ou b) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 342 ou SEQ ID NO: 343, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 344.
43. Anticorpo isolado que se liga a IL4R canino ou IL4R fe- lino, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 355 e/ou um epítopo compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 356.
44. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a ILAR canino ou IL4R felino com uma constante de dissociação (Kd) de menos do que x 106 M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 107 M, menos do que 1 x 107 M, menos do que 5 x 108 M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 107º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10? M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10? M, ou menos do que 1 x 10º 12 M, como medido por interferometria de biocamada.
45. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 43 ou 44, ca- racterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a IL4R canino ou ILAR felino como determinado por análise immunoblot ou interferometria de biocamada.
46. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 43 a 45, caracterizado pelo fato de que o anticorpo reduz a ligação de um polipeptídeo IL4 canino e/ou felino e/ou um polipeptí- deo I1L13 canino e/ou felino a IL4R canino e/ou IL4R felino, como me- dido por interferometria de biocamada.
47. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 43 a 46, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- pete com anticorpo M8 monoclional em ligação a IL4R canino ou ILA4R felino.
48. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 43 a 47, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
49. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 43 a 48, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo canino, caninizado, felino, felinizado ou quimérico.
50. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 43 a 49, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo uma ou mais de regiões de estru- tura de cadeia pesada variável murina ou uma ou mais de regiões de estrutura de cadeia leve variável murina.
51. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 43 a 50, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada compreendendo: a) uma sequência de CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 310; b) uma sequência de CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 311; e c) uma sequência de CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida-
de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 312.
52. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 43 a 51, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia leve compreendendo: a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 317; b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 318; e c) uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 319.
53. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 43 a 52, caracterizado pelo fato de que ainda compreende um ou mais de (a) uma sequência de estrutura 1 de cadeia pesada de região variável (HC-FR1) de SEQ ID NO: 313; (b) uma sequência de HC-FR2 de SEQ ID NO: 314; (c) uma sequência de HC-FR3 de SEQ ID NO: 315; (d) uma sequência de HC-FR4 de SEQ ID NO: 316; (e) uma sequência de estrutura 1 de cadeia leve de região variável (LC- FR1) de SEQ ID NO: 320; (f) uma sequência de LC-FR2 de SEQ ID NO: 321; (g) uma sequência de LC-FR3 de SEQ ID NO: 322; ou (h) uma sequência de LC-FR4 de SEQ ID NO: 323.
54. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 43 a 53, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende: (a) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de
SEQ ID NO: 324; (b) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo me- nos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 325; ou (c) uma sequência de cadeia pesada variável como em (a) e uma sequência de cadeia leve variável como em (b).
55. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 43 a 54, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 324.
56. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 43 a 55, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 325.
57. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 43 a 56, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 324, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 325.
58. Anticorpo isolado, caracterizado pelo fato de que com- preende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 324, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 325.
59. Anticorpo isolado que se liga a IL4R canino, caracteri- zado pelo fato de que o anticorpo se liga a um epítopo compreenden- do a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 357.
60. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 59,
caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a ILAR canino com uma constante de dissociação (Kd) de menos do que 5 x 10º M, me- nos do que 1 x 106 M, menos do que 5 x 107 M, menos do que 1 x 10 7 M, menos do que 5 x 108 M, menos do que 1 x 108 M, menos do que x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10? M, menos do que 1 x 10! M, menos do que 5 x 102? M, ou menos do que 1 x 102? M, como me- dido por interferometria de biocamada.
61. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 58 ou 59, ca- racterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a ILAR canino como determinado por análise immunoblot ou interferometria de biocamada.
62. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 58 a 61, caracterizado pelo fato de que o anticorpo reduz a ligação de um polipeptídeo IL4 canino e/ou um polipeptídeo IL13 ca- nino a ILA4R canino, como medido por interferometria de biocamada.
63. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 58 a 62, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- pete com anticorpo M9 monoclional em ligação a IL4R canino.
64. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 58 a 63, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
65. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 58 a 64, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo canino, caninizado, felino, felinizado ou quimérico.
66. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 58 a 65, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo uma ou mais de estrutura de ca- deia pesada variável murina ou uma ou mais de estrutura de cadeia leve variável murina.
67. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei-
vindicações 58 a 66, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada compreendendo: a) uma sequência de CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 326; b) uma sequência de CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 327; e c) uma sequência de CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 328.
68. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 58 a 67, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia leve compreendendo: a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 333; b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 334; e c) uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 335.
69. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 58 a 68, caracterizado pelo fato de que ainda compreende um ou mais de (a) uma sequência de estrutura 1 de cadeia pesada de região variável (HC-FR1) de SEQ ID NO: 329; (b) uma sequência de HC-FR2 de SEQ ID NO: 330; (c) uma sequência de HC-FR3 de SEQ
ID NO: 331; (d) uma sequência de HC-FR4 de SEQ ID NO: 332; (e) uma sequência de estrutura 1 de cadeia leve de região variável (LC- FR1) de SEQ ID NO: 336; (f) uma sequência de LC-FR2 de SEQ ID NO: 337; (g) uma sequência de LC-FR3 de SEQ ID NO: 338; ou (h) uma sequência de LC-FR4 de SEQ ID NO: 339.
70. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 58 a 69, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende: a. (1) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 340; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 341; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia leve variável como em (ii); ou b. (i) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 345 ou SEQ ID NO: 346; (ii) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 347; ou (iii) uma sequência de cadeia pesada variável como em (i) e uma sequência de cadeia le- ve variável como em (ii).
71. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 58 a 70, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 340, SEQ ID NO: 345, ou SEQ ID NO: 346.
72. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 58 a 71, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 341 ou SEQ ID NO: 347.
73. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 58 a 72, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende: a) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 340, e uma se- quência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 341; e/ou b) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 345 ou SEQ ID NO: 346, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 347.
74. Anticorpo isolado, caracterizado pelo fato de que com- preende: a) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 340, e uma se- quência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de ami- noácido de SEQ ID NO: 341; ou b) uma sequência de cadeia pesada variável compreen- dendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 345, ou SEQ ID NO: 346 e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 347.
75. Anticorpo isolado que se liga a IL4R canino, caracteri- zado pelo fato de que compreende uma cadeia pesada compreenden- do: a) uma sequência de CDR-H1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida-
de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 294; b) uma sequência de CDR-H2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 295; e c) uma sequência de CDR-H3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 296.
76. Anticorpo isolado que se liga a IL4R canino, caracteri- zado pelo fato de que compreende uma cadeia leve compreendendo: a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 301; b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 302; e c) uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 303.
77. Anticorpo isolado, de acordo com a reivindicação 75, caracterizado pelo fato de que compreende uma cadeia leve compre- endendo: a) uma sequência de CDR-L1 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 301; b) uma sequência de CDR-L2 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 302; e c) uma sequência de CDR-L3 tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identida- de de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 303.
78. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 75 a 77, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a IL4R canino com uma constante de dissociação (Kd) de menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 107 M, menos do que 1 x 107 M, menos do que 5 x 108 M, menos do que 1 x 108 M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1 x 10º M, menos do que 5 x 10º M, menos do que 1x10* M, menos do que 5 x 10? M, ou menos do que 1 x 10? M, como medido por interferometria de biocamada.
79. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 75 a 78, caracterizado pelo fato de que o anticorpo se liga a ILA4R canino como determinado por análise immunoblot ou interferometria de biocamada.
80. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 75 a 79, caracterizado pelo fato de que o anticorpo reduz a ligação de um polipeptídeo IL4 canino e/ou um polipeptídeo IL13 ca- nino a ILA4R canino, como medido por interferometria de biocamada.
81. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 75 a 80, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- pete com anticorpo M5 monoclional em ligação a IL4R canino.
82. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 75 a 81, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
83. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 75 a 82, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo canino, caninizado, felino, felinizado ou quimérico.
84. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei-
vindicações 75 a 83, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo uma ou mais de regiões de estru- tura de cadeia pesada variável murina ou uma ou mais de regiões de estrutura de cadeia leve variável murina.
85. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 75 a 84, caracterizado pelo fato de que ainda compreende um ou mais de (a) uma sequência de estrutura 1 de cadeia pesada de região variável (HC-FR1) de SEQ ID NO: 297; (b) uma sequência de HC-FR2 de SEQ ID NO: 298; (c) uma sequência de HC-FR3 de SEQ ID NO: 299; (d) uma sequência de HC-FR4 de SEQ ID NO: 300; (e) uma sequência de estrutura 1 de cadeia leve de região variável (LC- FR1) de SEQ ID NO: 304; (f) uma sequência de LC-FR2 de SEQ ID NO: 305; (g) uma sequência de LC-FR3 de SEQ ID NO: 306; ou (h) uma sequência de LC-FR4 de SEQ ID NO: 307.
86. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 75 a 85, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende: (a) uma sequência de cadeia pesada variável tendo pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 308; (b) uma sequência de cadeia leve variável tendo pelo me- nos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98%, ou 100% de identidade de sequência para a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 309; ou (c) uma sequência de cadeia pesada variável como em (a) e uma sequência de cadeia leve variável como em (b).
87. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 75 a 86, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 308.
88. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 75 a 87, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a se- quência de aminoácido de SEQ ID NO: 309.
89. Anticorpo isolado, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 75 a 88, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 308, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 309.
90. Anticorpo isolado, caracterizado pelo fato de que com- preende uma sequência de cadeia pesada variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 308, e uma sequência de cadeia leve variável compreendendo a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 309.
91. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compre- ende um polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem ou uma variante canina ou felina.
92. Anticorpo, de acordo com reivindicação 91, caracteriza- do pelo fato de que o polipeptídeo Fc de IgG é um polipeptídeo I9gG-A Fc tipo selvagem ou variante canina; um polipeptídeo IgG-B Fc tipo selvagem ou variante canina; um polipeptídeo Fc de IgG-C tipo selva- gem ou variante; um polipeptídeo Fc de IgG-D tipo selvagem ou vari- ante; um polipeptídeo Fc de IgG1a tipo selvagem ou variante felina; um polipeptídeo Fc de IgG1b tipo selvagem ou variante felina; ou um polipeptídeo Fc de IgG2 tipo selvagem ou variante felina.
93. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 91 ou 92, ca- racterizado pelo fato de que o polipeptídeo Fc de IgG variante com-
preende pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante tem afinidade de ligação aumentada por Proteína A em relação ao polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem; afinidade de ligação reduzida por C1g em relação ao polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem; e/ou afinidade de ligação reduzida por CD16 em relação ao polipeptí- deo Fc de IgG tipo selvagem .
94. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 91 a 93, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende pelo menos uma modificação de aminoácido por uma região de articulação em relação a um polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante tem produção re- combinante aumentada e/ou formação de dissulfeto de articulação aumentada em relação ao polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem, como determinado por análise SDS-PAGE sob condições de redução e/ou não redução.
95. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 91 a 94, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 21, 23, 25, 80, 205, e/ou 207 de SEQ ID NO: 162; b) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 5, 38, 39, 94, 97, e/ou 98 de SEQ ID NO: 163; c) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 5, 21, 23, 24, 38, 39, 93, 97, e/ou 98 de SEQ ID NO: 165; d) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 21, 23, 25, 80, e/ou 207 de SEQ ID
NO: 167; e) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 16 e/ou 198 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206; e/ou f) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 14 e/ou 16 de SEQ ID NO: 207.
96. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 91 a 95, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 21,23, 25, 80, 205, e/ou 207 de SEQ ID NO: 162; b) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 5, 38, 39, 94, 97, e/ou 98 de SEQ ID NO: 163; c) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 5, 21, 23, 24, 38, 39, 93, 97, e/ou 98 de SEQ ID NO: 164; d) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 21,23, 25, 80, e/ou 207 de SEQ ID NO: 165; e) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 16 e/ou 198 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206; e/ou f) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 14 e/ou 16 de SEQ ID NO: 207.
97. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 91 a 96, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) uma treonina em uma posição que corresponde à posi- ção 21 de SEQ ID NO: 162, uma leucina em uma posição que corres- ponde à posição 23 de SEQ ID NO: 162, uma alanina em uma posição que corresponde à posição 25 de SEQ ID NO: 162, uma glicina em uma posição que corresponde à posição 80 de SEQ ID NO: 162, uma alanina em uma posição que corresponde à posição 205 de SEQ ID NO: 162, e/ou uma histidina em uma posição que corresponde à posi- ção 207 de SEQ ID NO: 162;
b) uma prolina em uma posição que corresponde à posição de SEQ ID NO: 163, uma glicina em uma posição que corresponde à posição 38 de SEQ ID NO: 163, uma arginina em uma posição que corresponde à posição 39 de SEQ ID NO: 163, uma arginina em uma posição que corresponde à posição 93 de SEQ ID NO: 163, uma iso- leucina em uma posição que corresponde à posição 97 de SEQ ID NO: 163, e/ou uma glicina em uma posição que corresponde à posição 98 de SEQ ID NO: 163;
c) uma prolina em uma posição que corresponde à posição 5 de SEQ ID NO: 164, uma treonina em uma posição que corresponde à posição 21 de SEQ ID NO: 164, uma leucina em uma posição que corresponde à posição 23 de SEQ ID NO: 164, uma isoleucina em uma posição que corresponde à posição 24 de SEQ ID NO: 164, uma glicina em uma posição que corresponde à posição 38 de SEQ ID NO: 164, uma arginina em uma posição que corresponde à posição 39 de SEQ ID NO: 164, uma arginina em uma posição que corresponde à posição 93 de SEQ ID NO: 164, uma isoleucina em uma posição que corresponde à posição 97 de SEQ ID NO: 164, e/ou uma glicina em uma posição que corresponde à posição 98 de SEQ ID NO: 164;
d) uma treonina em uma posição que corresponde à posi- ção 21 de SEQ ID NO: 165, uma leucina em uma posição que corres- ponde à posição 23 de SEQ ID NO: 165, uma alanina em uma posição que corresponde à posição 25 de SEQ ID NO: 165, uma glicina em uma posição que corresponde à posição 80 de SEQ ID NO: 165, e/ou uma histidina em uma posição que corresponde à posição 207 de SEQ ID NO: 165;
e) uma prolina em uma posição que corresponde à posição
16 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206 e/ou uma alanina em uma posição que corresponde à po- sição 198 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206; e/ou f) uma cisteína em uma posição que corresponde à posição 14 de SEQ ID NO: 207 e/ou uma prolina em uma posição que corres- ponde à posição 16 de SEQ ID NO: 207.
98. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 91 a 97, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) uma treonina na posição 21 de SEQ ID NO: 162, uma leucina na posição 23 de SEQ ID NO: 162, uma alanina na posição 25 de SEQ ID NO: 162, uma glicina na posição 80 de SEQ ID NO: 162, uma alanina na posição 205 de SEQ ID NO: 162, e/ou uma histidina na posição 207 de SEQ ID NO: 162; b) uma prolina na posição 5 de SEQ ID NO: 163, uma glici- na na posição 38 de SEQ ID NO: 163, uma arginina na posição 39 de SEQ ID NO: 163, uma arginina na posição 93 de SEQ ID NO: 163, uma isoleucina na posição 97 de SEQ ID NO: 163, e/ou uma glicina na posição 98 de SEQ ID NO: 163; c) uma prolina na posição 5 de SEQ ID NO: 164, uma treo- nina na posição 21 de SEQ ID NO: 164, uma leucina na posição 23 de SEQ ID NO: 164, uma isoleucina na posição 24 de SEQ ID NO: 164, uma glicina na posição 38 de SEQ ID NO: 164, uma arginina na posi- ção 39 de SEQ ID NO: 164, uma arginina na posição 93 de SEQ ID NO: 164, uma isoleucina na posição 97 de SEQ ID NO: 164, e/ou uma glicina na posição 98 de SEQ ID NO: 164; d) uma treonina na posição 21 de SEQ ID NO: 165, uma leucina na posição 23 de SEQ ID NO: 165, uma alanina na posição 25 de SEQ ID NO: 165, uma glicina na posição 80 de SEQ ID NO: 165,
e/ou uma histidina na posição 207 de SEQ ID NO: 165; e) uma prolina na posição 16 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206 e/ou uma alanina na posição 198 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, ou SEQ ID NO: 206; e/ou f) uma cisteína na posição 14 de SEQ ID NO: 207 e/ou uma prolina na posição 16 de SEQ ID NO: 207.
99. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 91 a 98, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende uma região CH1 compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região CH1 de IgG tipo selvagem canino ou felino, em que o polipeptídeo Fc de IgG vari- ante compreende: a) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 24 e/ou posição 30 de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou b) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 24 e/ou posição 29 de SEQ ID NO:
238.
100. Anticorpo, caracterizado pelo fato de que compreende um polipeptídeo Fc de IgG variante compreendendo uma região CH1 que compreende pelo menos uma modificação de aminoácido em re- lação a região CH1 de IgG tipo selvagem canino ou felino, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 24 e/ou posição 30 de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou b) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po-
sição que corresponde à posição 24 e/ou posição 29 de SEQ ID NO:
238.
101. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 91 a 100, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende uma região CH1 compreendendo pelo me- nos uma modificação de aminoácido em relação a uma região CH1 de IgG tipo selvagem canino ou felino, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 24 e/ou posição 30 de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou b) pelo menos uma substituição de aminoácido na posição 24 e/ou posição 29 de SEQ ID NO: 238.
102. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 91 a 101, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende uma região CH1 compreendendo pelo me- nos uma modificação de aminoácido em relação a uma região CH1 de IgG tipo selvagem canino ou felino, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) uma leucina em uma posição que corresponde à posição 24 e/ou uma asparagina em uma posição que corresponde à posição de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou b) uma leucina em uma posição que corresponde à posição 24 e/ou uma asparagina em uma posição que corresponde à posição 29 de SEQ ID NO: 238.
103. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 91 a 102, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende uma região CH1 compreendendo pelo me- nos uma modificação de aminoácido em relação a uma região CH1 de
IgG tipo selvagem canino ou felino, em que o polipeptídeo Fc de IgG variante compreende: a) uma leucina na posição 24 e/ou uma asparagina na po- sição 30 de SEQ ID NO: 227, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 229, SEQ ID NO: 230, ou SEQ ID NO: 237; ou b) uma leucina na posição 24 e/ou uma asparagina na po- sição 29 de SEQ ID NO: 238.
104. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende uma região constante de cadeia leve tipo selvagem ou uma variante canina ou felina.
105. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende uma região constante « de cadeia leve tipo selvagem ou uma variante canina ou felina.
106. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 104 ou 105, caracterizado pelo fato de que a região constante de cadeia leve vari- ante compreende pelo menos uma modificação de aminoácido em re- lação a uma região constante « de cadeia leve tipo selvagem canina ou felina compreendendo: a) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 11 e/ou posição 22 de SEQ ID NO: 235; ou b) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 11 e/ou posição 22 de SEQ ID NO:
241.
107. Anticorpo, caracterizado pelo fato de que compreende uma região constante de cadeia leve variante que compreende pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região constante K de cadeia leve tipo selvagem canina ou felina compreen-
dendo: a) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 11 e/ou posição 22 de SEQ ID NO: 235; ou b) pelo menos uma substituição de aminoácido em uma po- sição que corresponde à posição 11 e/ou posição 22 de SEQ ID NO:
241.
108. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 104 a 107, caracterizado pelo fato de que a região constante de cadeia leve variante compreende pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região constante « de cadeia leve tipo selvagem canina ou felina compreendendo: a) uma alanina em uma posição que corresponde à posição 11 e/ou uma arginina em uma posição que corresponde à posição 22 de SEQ ID NO: 235; ou b) uma alanina em uma posição que corresponde à posição 11 e/ou uma arginina em uma posição que corresponde à posição 22 de SEQ ID NO: 241.
109. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 104 a 108, caracterizado pelo fato de que a região constante de cadeia leve variante compreende pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a uma região constante « de cadeia leve tipo selvagem canina ou felina compreendendo: a) uma alanina na posição 11 e/ou uma arginina na posição 22 de SEQ ID NO: 235; ou b) uma alanina na posição 11 e/ou uma arginina na posição 22 de SEQ ID NO: 241.
110. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 104 a 109, caracterizado pelo fato de que a região constante de cadeia leve compreende uma sequência de aminoácido de SEQ ID
NO: 235, 236, 241, e/ou 242.
111. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo biespeciífico.
112. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo biespecífico compreendendo: i) um primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em rela- ção a um primeiro polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem canino e um segundo polipeptídeo Fc de IgG variante canina compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um segundo po- lipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem canino, em que: a) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 138 de SEQ ID NO: 162, posição 137 de SEQ ID NO: 163, posição 137 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 de SEQ ID NO: 167, e/ou b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 162, posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 163, posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 167; ou ii) um polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreen- dendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um primeiro polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem felino e um se- gundo polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um segundo polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem felino, em que:
a) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante felina compre- ende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207, e/ou b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante felina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 154 e/ou posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207.
113. Anticorpo ou um anticorpo biespecífico, caracterizado pelo fato de que compreende: i) um primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em rela- ção a um primeiro polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem canino e um segundo polipeptídeo Fc de IgG variante canina compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um segundo po- lipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem canino, em que: a) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 138 de SEQ ID NO: 162, posição 137 de SEQ ID NO: 163, posição 137 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 de SEQ ID NO: 167, e/ou b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 162, posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 163, posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 167; ii) um polipeptídeo Fc de IgG variante felina compre- endendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um primeiro polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem felino e um segundo polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um segundo polipeptí- deo Fc de IgG tipo selvagem felino, em que: a) o polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreende uma substituição de aminoácido em uma posição que corresponde à posi- ção 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207, e/ou b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante felina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 154 e/ou posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; ou iii) um polipeptídeo Fc de IgG variante equina compre- endendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um primeiro polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem equino e um segun- do polipeptídeo Fc de IgG variante equina compreendendo pelo menos uma modificação de aminoácido em relação a um segundo polipeptí- deo Fc de IgG tipo selvagem equino, em que: a) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 130 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260, e/ou b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende uma substituição de aminoácido em uma posição que corres- ponde à posição 130 e/ou posição 132 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260.
114. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 112 ou 113, caracterizado pelo fato de que: a) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina com-
preende um triptofano em uma posição que corresponde à posição 138 de SEQ ID NO: 162, posição 137 de SEQ ID NO: 163, posição 137 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 de SEQ ID NO: 167;
b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma serina em uma posição que corresponde à posição 138 e/ou uma alanina em uma posição que corresponde à posição 140 de SEQ ID NO: 162, uma serina em uma posição que corresponde à po- sição 137 e/ou uma alanina em uma posição que corresponde à posi- ção 139 de SEQ ID NO: 163, uma serina em uma posição que corres- ponde à posição 137 e/ou uma alanina em uma posição que corres- ponde à posição 139 de SEQ ID NO: 165, ou uma serina em uma po- sição que corresponde à posição 138 e/ou uma alanina em uma posi- ção que corresponde à posição 140 de SEQ ID NO: 167;
c) o polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreende um triptofano em uma posição que corresponde à posição 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207;
d) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante felina com- preende uma serina em uma posição que corresponde à posição 154 e/ou uma alanina em uma posição que corresponde à posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207;
e) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende um triptofano em uma posição que corresponde à posição 130 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260; e/ou f) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende uma serina em uma posição que corresponde à posição 130 e/ou uma alanina em uma posição que corresponde à posição 132 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257,
SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260.
115. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 112 a 114, caracterizado pelo fato de que: a) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma substituição de aminoácido na posição 138 de SEQ ID NO: 162, posição 137 de SEQ ID NO: 163, posição 137 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 de SEQ ID NO: 167; b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma substituição de aminoácido na posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 162, uma substituição de aminoácido na posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 163, uma substituição de ami- noácido na posição 137 e/ou posição 139 de SEQ ID NO: 165, ou uma substituição de aminoácido na posição 138 e/ou posição 140 de SEQ ID NO: 167; c) o polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreende uma substituição de aminoácido na posição 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; d) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante felina com- preende uma substituição de aminoácido na posição 154 e/ou posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; e) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende uma substituição de aminoácido na posição 130 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260; e/ou f) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende uma substituição de aminoácido na posição 130 e/ou posição 132 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260.
116. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi-
cações 112 a 115, caracterizado pelo fato de que: a) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende um triptofano na posição 138 de SEQ ID NO: 162, posição 137 de SEQ ID NO: 163, posição 137 de SEQ ID NO: 165, ou posição 138 de SEQ ID NO: 167; b) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante canina com- preende uma serina na posição 138 e/ou uma alanina na posição 140 de SEQ ID NO: 162, uma serina na posição 137 e/ou uma alanina na posição 139 de SEQ ID NO: 163, uma serina na posição 137 e/ou uma alanina na posição 139 de SEQ ID NO: 165, ou uma serina na posição 138 e/ou uma alanina na posição 140 de SEQ ID NO: 167; c) o polipeptídeo Fc de IgG variante felina compreende um triptofano na posição 154 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; d) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante felina com- preende uma serina na posição 154 e/ou uma alanina na posição 156 de SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206, ou SEQ ID NO: 207; e) o primeiro polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende um triptofano na posição 130 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260; e/ou f) o segundo polipeptídeo Fc de IgG variante equina com- preende uma serina na posição 130 e/ou uma alanina na posição 132 de SEQ ID NO: 254, SEQ ID NO: 255, SEQ ID NO: 256, SEQ ID NO: 257, SEQ ID NO: 258, SEQ ID NO: 259, ou SEQ ID NO: 260.
117. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 112 a 116, caracterizado pelo fato de que o primeiro polipeptí- deo Fc de IgG tipo selvagem e o segundo polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem são do mesmo subtipo de IgG.
118. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações 112 a 117, caracterizado pelo fato de que o primeiro polipeptí- deo Fc de IgG tipo selvagem e o segundo polipeptídeo Fc de IgG tipo selvagem são de um diferente subtipo de IgG.
119. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende um polipeptídeo Fc de IgG compreendendo uma sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 237, 238, 239, 240, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, e/ou 267.
120. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende: a. (i) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 25 ou SEQ ID NO: 47; (ii) uma sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 26 ou SEQ ID NO: 48; ou (iii) uma se- quência de aminoácido de cadeia pesada como em (i) e uma sequên- cia de cadeia leve como em (ii); b. (1) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 51 ou SEQ ID NO: 55; (ii) uma sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 52 ou SEQ ID NO: 56; ou (iii) uma se- quência de aminoácido de cadeia pesada como em (i) e uma sequên- cia de cadeia leve como em (ii); Cc. (i) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, ou SEQ ID NO: 276; (ii) uma sequência de aminoácido de cadeia leve de
SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, ou SEQ ID NO: 277; ou (iii) uma sequência de aminoácido de cadeia pe- sada como em (i) e uma sequência de cadeia leve como em (ii); d. (i) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82, ou SEQ ID NO: 83; (ii) uma sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 81 ou SEQ ID NO: 84; ou (iii) uma sequência de aminoácido de cadeia pesa- da como em (i) e uma sequência de cadeia leve como em (ii); e. (i) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 243; (ii) uma sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 244; ou (iii) uma sequência de aminoácido de cadeia pe- sada como em (i) e uma sequência de cadeia leve como em (ii); f. (1) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 348 ou SEQ ID NO: 349; (ii) uma sequência de aminoáci- do de cadeia leve de SEQ ID NO: 350; ou (iii) uma sequência de ami- noácido de cadeia pesada como em (i) e uma sequência de cadeia leve como em (ii); ou g. (i) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 351 ou SEQ ID NO: 352; (ii) uma sequência de aminoáci- do de cadeia leve de SEQ ID NO: 253; ou (iii) uma sequência de ami- noácido de cadeia pesada como em (i) e uma sequência de cadeia leve como em (ii).
121. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo biespecífico que se liga a IL4R e um ou mais antígenos sele- cionados de IL17, IL31, TNFa, CD20, CD19, CD25, ILA4, I1L13, 1L23, IgE, CD114a, IL6R, a4-Intergrina, I1L12, ILIB, ou BIyS.
122. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo com- preende (i) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ
ID NO: 245; (ii) uma sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 246; ou (iii) uma sequência de aminoácido de cadeia pesada como em (i) e uma sequência de cadeia leve como em (ii).
123. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindi- cações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um fragmento de anticorpo, tal como um fragmento Fv, scFv, Fab, Fab', F(ab')2, ou Fab”-SH.
124. Ácido nucleico isolado, caracterizado pelo fato de que codifica o anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindica- ções precedentes.
125. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende o ácido nucleico, como definido na reivindicação 124.
126. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que ex- pressa o anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1a123.
127. Método de produção de um anticorpo, caracterizado pelo fato de que compreende cultivar a célula hospedeira, como defi- nida na reivindicação 125 ou 126 e isolar o anticorpo.
128. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo, como definido em qualquer uma das rei- vindicações 1 a 123 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
129. Método de tratamento de uma espécie de animal de companhia tendo uma condição induzida por IL4/IL13, o método carac- terizado pelo fato de que compreende administrar à espécie de animal de companhia uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 123 ou da composição farmacêutica, como definida na reivindicação 128.
130. Método, de acordo com a reivindicação 129, caracteri- zado pelo fato de que a espécie de animal de companhia é canina, fe- lina, ou equina.
131. Método, de acordo com a reivindicação 129 ou 130, caracterizado pelo fato de que a condição induzida por IL4/IL13 é uma condição prurítica ou alérgica.
132. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 129 a 131, caracterizado pelo fato de que a condição induzida por IL4/IL13 é selecionada de dermatite atópica, dermatite alérgica, prurido, asma, psoríase, esclerodermia, e eczema.
133. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 129 a 132, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou a com- posição farmacêutica é administrado parenteralmente.
134. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 129 a 133, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou a com- posição farmacêutica é administrado por uma via intramuscular, uma via intraperitoneal, uma via intracerebroespinhal, uma via subcutânea, uma via intra-arterial, uma via intrasinovial, uma via intratecal, ou uma via inalatória.
135. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 129 a 134, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar em combinação com o anticorpo ou a composição farma- cêutica um inibidor de Jak, um inibidor de PISK, um inibidor de ERK.
136. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 129 a 135, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar em combinação com o anticorpo ou a composição farma- cêutica ou mais anticorpos selecionados de um anticorpo anti-IL17, um anticorpo anti-IL31, um anticorpo anti-TNFa, um anticorpo anti-CD20, um anticorpo anti-CD19, um anticorpo anti-CD25, um anticorpo anti- IL4, um anticorpo anti-IL13, um anticorpo anti-IL23, um anticorpo anti- IgE, um anticorpo anti-CD11a, anticorpo anti-IL6R, anticorpo anti-a4- Intergrina, um anticorpo anti-IL12, um anticorpo anti-IL1B, e um anti- corpo anti-BlyS.
137. Método de redução da função de sinalização de IL4 e/ou IL13 em uma célula, o método caracterizado pelo fato de que compreende expor para a célula o anticorpo, como definido em qual- quer uma das reivindicações 1 a 123 ou a composição farmacêutica, como definida na reivindicação 64 sob condições permissivas para |i- gação do anticorpo a IL4 e/ou IL13 extracelular, reduzindo, assim liga- ção de IL4 e/ou IL13 a IL4R e/ou redução de função de sinalização de IL4 e/ou IL13 pela célula.
138. Método, de acordo com a reivindicação 137, caracteri- zado pelo fato de que a célula é exposta ao anticorpo ou a composição farmacêutica ex vivo.
139. Método, de acordo com a reivindicação 137, caracteri- zado pelo fato de que a célula é exposta ao anticorpo ou a composição farmacêutica in vivo.
140. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 137 a 139, caracterizado pelo fato de que a célula é uma célula canina, uma célula felina, ou uma célula equina.
141. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 137 a 140, caracterizado pelo fato de que o anticorpo reduz fun- ção de sinalização de IL4 e/ou IL13 na célula, como determinado por uma redução na fosforilação de STAT6.
142. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 137 a 141, caracterizado pelo fato de que a célula é uma célula DH82 canina.
143. Método para detecção de ILA4R em uma amostra de uma espécie de animal de companhia, caracterizado pelo fato de que compreende contatar a amostra com o anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 123 ou a composição farmacêuti- ca, como definida na reivindicação 64 sob condições permissivas para ligação do anticorpo para IL4R.
144. Método, de acordo com a reivindicação 141, caracteri- zado pelo fato de que a amostra é uma amostra biológica obtida de um canino, um felino, ou um equino.
145. Método de análise para uma molécula que inibe fun- ção de sinalização de IL4 e/ou IL13, caracterizado pelo fato de que compreende expor a uma célula DH82 canina a molécula e detectar se há uma redução na fosforilação de STAT6.
146. Método, de acordo com a reivindicação 145, caracteri- zado pelo fato de que a molécula compreende um anticorpo anti-IL4R ou antagonista de molécula pequena de IL4R.
147. Método, de acordo com a reivindicação 145 ou 146, caracterizado pelo fato de que a molécula compreende um anticorpo anti-IL13R ou antagonista de molécula pequena de IL13R.
148. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 145 a 147, caracterizado pelo fato de que a molécula compreen- de um anticorpo anti-IL4 ou antagonista de molécula pequena de ILA.
149. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 145 a 148, caracterizado pelo fato de que a molécula compreen- de um anticorpo anti-IL13 ou antagonista de molécula pequena de IL13.
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