CN113164593A - 兽用抗il4受体抗体 - Google Patents

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Abstract

提供了涉及与犬IL4R结合的抗IL4R抗体的各种实施方案。在各种实施方案中，此类抗IL4R抗体可以用于治疗伴侣动物诸如犬和猫的IIL4/IL13诱导的病症诸如特应性皮炎、过敏性皮炎、瘙痒、哮喘、银屑病、硬皮病和湿疹的方法中。还提供了涉及用于制备抗体或双特异性抗体的伴侣动物物种的变体IgG Fc多肽和变体轻链恒定区的各种实施方案。

Description

兽用抗IL4受体抗体
技术领域
本发明涉及分离的抗IL4受体(IL4R)抗体，其例如与犬或猫IL4R结合并且减少与IL4或IL13结合；以及使用所述抗体例如治疗例如伴侣动物(诸如犬和猫)的IL4诱导和/或IL13诱导的病症或降低细胞的IL4或IL13信号传导功能的方法。
背景技术
白细胞介素4(IL4)是一种细胞因子，其诱导幼稚T辅助细胞分化为Th2细胞。IL4还可以刺激激活的B细胞和T细胞增殖，并且诱导B细胞类别转换为IgE。IL13对免疫细胞的作用与IL4相似。这两种细胞因子都与过敏相关。
IL4受体也称为IL4Rα或IL4R。IL4R可以与普通γ链受体配对，并且特异性结合IL4。IL4R也可以与IL13Ra1配对，并且它们可以一起结合IL4或IL13。因此，阻断IL4R上的结合位点可以潜在地减少IL4和/或IL13的结合，并且降低这两种细胞因子的信号传导作用。
伴侣动物(诸如猫、狗和马)患有许多类似于人类皮肤病的皮肤病，包括特应性皮炎和过敏性病症。因此，仍然需要可以特异性地用于阻断伴侣动物IL4/IL13以治疗IL4诱导和/或IL13诱导的病症并且降低IL4/IL13信号传导的方法和化合物。
发明内容
实施方案1.一种与犬IL4R或猫IL4R结合的分离的抗体，其中所述抗体与包含LX10FMGSENX11T(SEQ ID NO:85)的氨基酸序列的表位结合，其中X10是D或N，并且X11是H或R。
实施方案2.一种与犬IL4R或猫IL4R结合的分离的抗体，其中所述抗体与包含RLSYQLX10FMGSENX11TCVPEN(SEQ ID NO:86)的氨基酸序列的表位结合，其中X10是D或N，并且X11是H或R。
实施方案3.根据实施方案2所述的分离的抗体，其中所述抗体与包含LX10FMGSENX11T(SEQ ID NO:85)的氨基酸序列的表位结合，其中X10是D或N，并且X11是H或R。
实施方案4.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与包含SEQ ID NO:88或SEQ ID NO:91的氨基酸序列的表位结合。
实施方案5.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与包含SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:92的氨基酸序列的表位结合。
实施方案6.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与包含SMX12X13DDX14VEADVYQLX15LWAGX16Q(SEQ ID NO:87)的氨基酸序列的表位结合，其中X12是P或L，X13是I或M，X14是A或F，X15是D或H，并且X16是Q或T。
实施方案7.一种与犬IL4R或猫IL4R结合的分离的抗体，其中所述抗体与包含SMX1 2X13DDX14VEADVYQLX15LWAGX16Q(SEQ ID NO:87)的氨基酸序列的表位结合，其中X12是P或L，X13是I或M，X14是A或F，X15是D或H，并且X16是Q或T。
实施方案8.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与包含SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:93的氨基酸序列的表位结合。
实施方案9.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与犬IL4R或猫IL4R结合，如通过生物层干涉法所测量的，解离常数(Kd)为小于5x 10-6M、小于1x10-6M、小于5x 10-7M、小于1x 10-7M、小于5x10-8M、小于1x 10-8M、小于5x 10-9M、小于1x 10- 9M、小于5x 10-10M、小于1x 10-10M、小于5x 10-11M、小于1x 10-11M、小于5x 10-12M或小于1x10-12M。
实施方案10.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中如通过免疫印迹分析或生物层干涉法所确定的，所述抗体与犬IL4R或猫IL4R结合。
实施方案11.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其中如通过生物层干涉法所测量的，所述抗体减少犬和/或猫IL4多肽和/或犬和/或猫IL13多肽与犬IL4R和/或猫IL4R的结合。
实施方案12.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与单克隆克隆B或克隆I抗体竞争结合至犬IL4R或猫IL4R。
实施方案13.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
实施方案14.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是犬、犬源化、猫、猫源化或嵌合抗体。
实施方案15.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是包含一个或多个鼠可变重链框架区或一个或多个鼠可变轻链框架区的嵌合抗体。
实施方案16.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)CDR-H1序列，其与GYTFTSYVMH(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-H2序列，其与以下氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性：YINPX1NDGTFYNGX2X3X4G(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列，其中X1是K或A，X2是K或A，X3是F或V，并且X4是K或Q，或YINPX1NDGT(SEQ ID NO:268)的氨基酸序列，其中X1是K或A；和
c)CDR-H3序列，其与FX5YGX6AY(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性，其中X5是N或Y，并且X6是I或F。
实施方案17.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)CDR-H1序列，其与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:269、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:271或SEQ ID NO:273的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
实施方案18.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；
b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:269、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:271或SEQ ID NO:272的氨基酸序列；和
c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
实施方案19.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)CDR-L1序列，其与RASQEISGYLS(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与AASX7X8DX9(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性，其中X7是T或N，X8是R或L，并且X9是S或T；和
c)CDR-L3序列，其与VQYASYPWT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
实施方案20.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:37的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
实施方案21.根据前述实施方案中任一项所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；
b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:37的氨基酸序列；和
c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
实施方案22.根据实施方案16至21中任一项所述的抗体，其还包含以下中的一项或多项：(a)SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:32的可变区重链框架1(HC-FR1)序列；(b)SEQ IDNO:11或SEQ ID NO:33的HC-FR2序列；(c)SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:270、SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:273的HC-FR3序列；(d)SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:35的HC-FR4序列；(e)SEQ IDNO:17或SEQ ID NO:39的可变区轻链框架1(LC-FR1)序列；(f)SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:40的LC-FR2序列；(g)SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:41的LC-FR3序列；或(h)SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:42的LC-FR4序列。
实施方案23.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
a.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:43的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ IDNO:22或SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列；或
b.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQ IDNO:64或SEQ ID NO:274的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:275的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列；或
c.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:69的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ IDNO:68或SEQ ID NO:70的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列。
实施方案24.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:69的氨基酸序列。
实施方案25.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:70的氨基酸序列。
实施方案26.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
a)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:43的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:44的氨基酸序列；
b)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ IDNO:63、SEQ ID NO:64或SEQ ID NO:274的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:275的氨基酸序列；或
c)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:69的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:70的氨基酸序列。
实施方案27.一种与犬IL4R或猫IL4R结合的分离的抗体，其中所述抗体与包含SEQID NO:354的氨基酸序列的表位结合。
实施方案28.根据实施方案27所述的分离的抗体，其中所述抗体与犬IL4R或猫IL4R结合，如通过生物层干涉法所测量的，解离常数(Kd)为小于5x 10-6M、小于1x 10-6M、小于5x 10-7M、小于1x 10-7M、小于5x 10-8M、小于1x 10-8M、小于5x 10-9M、小于1x 10-9M、小于5x 10-10M、小于1x 10-10M、小于5x 10 11M、小于1x 10 11M、小于5x 10-12M或小于1x 10-12M。
实施方案29.根据实施方案27或实施方案28所述的抗体，其中如通过免疫印迹分析或生物层干涉法所确定的，所述抗体与犬IL4R或猫IL4R结合。
实施方案30.根据实施方案27至29中任一项所述的分离的抗体，其中如通过生物层干涉法所测量的，所述抗体减少犬和/或猫IL4多肽和/或犬和/或猫IL13多肽与犬IL4R和/或猫IL4R的结合。
实施方案31.根据实施方案27至30中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与单克隆M3抗体竞争结合至犬IL4R或猫IL4R。
实施方案32.根据实施方案27至31中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
实施方案33.根据实施方案27至32中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是犬、犬源化、猫、猫源化或嵌合抗体。
实施方案34.根据实施方案27至33中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是包含一个或多个鼠可变重链框架区或一个或多个鼠可变轻链框架区的嵌合抗体。
实施方案35.根据实施方案27至34中任一项所述的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)CDR-H1序列，其与SEQ ID NO:278的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:279的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:280的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
实施方案36.根据实施方案27至35中任一项所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:285的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:286的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:287的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
实施方案37.根据实施方案27至36中任一项所述的分离的抗体，其还包含以下中的一项或多项：(a)SEQ ID NO:281的可变区重链框架1(HC-FR1)序列；(b)SEQ ID NO:282的HC-FR2序列；(c)SEQ ID NO:283的HC-FR3序列；(d)SEQ ID NO:284的HC-FR4序列；(e)SEQID NO:288的可变区轻链框架1(LC-FR1)序列；(f)SEQ ID NO:289的LC-FR2序列；(g)SEQ IDNO:290的LC-FR3序列；或(h)SEQ ID NO:291的LC-FR4序列。
实施方案38.根据实施方案27至37中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：
a.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:292的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:293的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列；或
b.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:342或SEQID NO:343的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ IDNO:344的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列。
实施方案39.根据实施方案27至38中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:292、SEQ ID NO:342或SEQ ID NO:343的氨基酸序列。
实施方案40.根据实施方案27至39中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:293或SEQ ID NO:344的氨基酸序列。
实施方案41.根据实施方案27至40中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：
a)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:292的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:293的氨基酸序列；和/或
b)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:342或SEQ ID NO:343的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:344的氨基酸序列。
实施方案42.一种分离的抗体，其包含：
a)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:292的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:293的氨基酸序列；或
b)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:342或SEQ ID NO:343的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:344的氨基酸序列。
实施方案43.一种与犬IL4R或猫IL4R结合的分离的抗体，其中所述抗体与包含SEQID NO:355的氨基酸序列的表位和/或包含SEQ ID NO:356的氨基酸序列的表位结合。
实施方案44.根据实施方案43所述的分离的抗体，其中所述抗体与犬IL4R或猫IL4R结合，如通过生物层干涉法所测量的，解离常数(Kd)为小于5x 10-6M、小于1x 10-6M、小于5x 10-7M、小于1x 10-7M、小于5x 10-8M、小于1x 10-8M、小于5x 10-9M、小于1x 10-9M、小于5x 10-10M、小于1x 10-10M、小于5x 10 11M、小于1x 10 11M、小于5x 10-12M或小于1x 10-12M。
实施方案45.根据实施方案43或实施方案44所述的抗体，其中如通过免疫印迹分析或生物层干涉法所确定的，所述抗体与犬IL4R或猫IL4R结合。
实施方案46.根据实施方案43至45中任一项所述的分离的抗体，其中如通过生物层干涉法所测量的，所述抗体减少犬和/或猫IL4多肽和/或犬和/或猫IL13多肽与犬IL4R和/或猫IL4R的结合。
实施方案47.根据实施方案43至46中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与单克隆M8抗体竞争结合至犬IL4R或猫IL4R。
实施方案48.根据实施方案43至47中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
实施方案49.根据实施方案43至48中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是犬、犬源化、猫、猫源化或嵌合抗体。
实施方案50.根据实施方案43至49中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是包含一个或多个鼠可变重链框架区或一个或多个鼠可变轻链框架区的嵌合抗体。
实施方案51.根据实施方案43至50中任一项所述的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)CDR-H1序列，其与SEQ ID NO:310的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:311的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:312的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
实施方案52.根据实施方案43至51中任一项所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:317的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:318的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:319的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
实施方案53.根据实施方案43至52中任一项所述的分离的抗体，其还包含以下中的一项或多项：(a)SEQ ID NO:313的可变区重链框架1(HC FR1)序列；(b)SEQ ID NO:314的HC-FR2序列；(c)SEQ ID NO:315的HC-FR3序列；(d)SEQ ID NO:316的HC-FR4序列；(e)SEQID NO:320的可变区轻链框架1(LC-FR1)序列；(f)SEQ ID NO:321的LC FR2序列；(g)SEQ IDNO:322的LC FR3序列；或(h)SEQ ID NO:323的LC-FR4序列。
实施方案54.根据实施方案43至53中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：
(a)可变重链序列，其与SEQ ID NO:324的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
(b)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:325的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或
(c)如(a)中的可变重链序列和如(b)中的可变轻链序列。
实施方案55.根据实施方案43至54中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:324的氨基酸序列。
实施方案56.根据实施方案43至55中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:325的氨基酸序列。
实施方案57.根据实施方案43至56中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:324的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:325的氨基酸序列。
实施方案58.一种分离的抗体，其包含：可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQID NO:324的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:325的氨基酸序列。
实施方案59.一种与犬IL4R结合的分离的抗体，其中所述抗体与包含SEQ ID NO:357的氨基酸序列的表位结合。
实施方案60.根据实施方案59所述的分离的抗体，其中所述抗体与犬IL4R结合，如通过生物层干涉法所测量的，解离常数(Kd)为小于5x 10-6M、小于1x 10-6M、小于5x 10-7M、小于1x 10-7M、小于5x 10-8M、小于1x10-8M、小于5x 10-9M、小于1x 10-9M、小于5x 10-10M、小于1x 10-10M、小于5x 10 11M、小于1x 10 11M、小于5x 10-12M或小于1x 10-12M。
实施方案61.根据实施方案58或实施方案59所述的抗体，其中如通过免疫印迹分析或生物层干涉法所确定的，所述抗体与犬IL4R结合。
实施方案62.根据实施方案58至61中任一项所述的分离的抗体，其中如通过生物层干涉法所测量的，所述抗体减少犬IL4多肽和/或犬IL13多肽与犬IL4R的结合。
实施方案63.根据实施方案58至62中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与单克隆M9抗体竞争结合至犬IL4R。
实施方案64.根据实施方案58至63中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
实施方案65.根据实施方案58至64中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是犬、犬源化、猫、猫源化或嵌合抗体。
实施方案66.根据实施方案58至65中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是包含一个或多个鼠可变重链框架区或一个或多个鼠可变轻链框架区的嵌合抗体。
实施方案67.根据实施方案58至66中任一项所述的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)DR-H1序列，其与SEQ ID NO:326的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:327的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:328的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
实施方案68.根据实施方案58至67中任一项所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)DR-L1序列，其与SEQ ID NO:333的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:334的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:335的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
实施方案69.根据实施方案58至68中任一项所述的分离的抗体，其还包含以下中的一项或多项：(a)SEQ ID NO:329的可变区重链框架1(HC FR1)序列；(b)SEQ ID NO:330的HC-FR2序列；(c)SEQ ID NO:331的HC-FR3序列；(d)SEQ ID NO:332的HC-FR4序列；(e)SEQID NO:336的可变区轻链框架1(LC-FR1)序列；(f)SEQ ID NO:337的LC FR2序列；(g)SEQ IDNO:338的LC FR3序列；或(h)SEQ ID NO:339的LC-FR4序列。
实施方案70.根据实施方案58至69中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：
a.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:340的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:341的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列；或
b.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:345或SEQ ID NO:346的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQID NO:347的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列。
实施方案71.根据实施方案58至70中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:340、SEQ ID NO:345或SEQ ID NO:346的氨基酸序列。
实施方案72.根据实施方案58至71中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:341或SEQ ID NO:347的氨基酸序列。
实施方案73.根据实施方案58至72中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：
a)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:340的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:341的氨基酸序列；和/或
b)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:345或SEQ ID NO:346的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:347的氨基酸序列。
实施方案74.一种分离的抗体，其包含：
a)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:340的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:341的氨基酸序列；或
b)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:345或SEQ ID NO:346的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:347的氨基酸序列。
实施方案75.一种与犬IL4R结合的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)DR-H1序列，其与SEQ ID NO:294的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:295的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:296的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
实施方案76.一种与犬IL4R结合的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)DR-L1序列，其与SEQ ID NO:301的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:302的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:303的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
实施方案77.根据实施方案75所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)DR-L1序列，其与SEQ ID NO:301的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:302的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:303的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
实施方案78.根据实施方案75至77中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与犬IL4R结合，如通过生物层干涉法所测量的，解离常数(Kd)为小于5x 10-6M、小于1x 10-6M、小于5x 10-7M、小于1x 10-7M、小于5x10-8M、小于1x 10-8M、小于5x 10-9M、小于1x 10-9M、小于5x 10-10M、小于1x 10-10M、小于5x 10 11M、小于1x 10 11M、小于5x 10-12M或小于1x 10-12M。
实施方案79.根据实施方案75至78中任一项所述的抗体，其中如通过免疫印迹分析或生物层干涉法所确定的，所述抗体与犬IL4R结合。
实施方案80.根据实施方案75至79中任一项所述的分离的抗体，其中如通过生物层干涉法所测量的，所述抗体减少犬IL4多肽和/或犬IL13多肽与犬IL4R的结合。
实施方案81.根据实施方案75至80中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与单克隆M5抗体竞争结合至犬IL4R。
实施方案82.根据实施方案75至81中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
实施方案83.根据实施方案75至82中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是犬、犬源化、猫、猫源化或嵌合抗体。
实施方案84.根据实施方案75至83中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是包含一个或多个鼠可变重链框架区或一个或多个鼠可变轻链框架区的嵌合抗体。
实施方案85.根据实施方案75至84中任一项所述的分离的抗体，其还包含以下中的一项或多项：(a)SEQ ID NO:297的可变区重链框架1(HC FR1)序列；(b)SEQ ID NO:298的HC-FR2序列；(c)SEQ ID NO:299的HC-FR3序列；(d)SEQ ID NO:300的HC-FR4序列；(e)SEQID NO:304的可变区轻链框架1(LC-FR1)序列；(f)SEQ ID NO:305的LC FR2序列；(g)SEQ IDNO:306的LC FR3序列；或(h)SEQ ID NO:307的LC-FR4序列。
实施方案86.根据实施方案75至85中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：
(a)可变重链序列，其与SEQ ID NO:308的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
(b)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:309的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或
(c)如(a)中的可变重链序列和如(b)中的可变轻链序列。
实施方案87.根据实施方案75至86中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:308的氨基酸序列。
实施方案88.根据实施方案75至87中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:309的氨基酸序列。
实施方案89.根据实施方案75至88中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:308的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:309的氨基酸序列。
实施方案90.一种分离的抗体，其包含：可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQID NO:308的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:309的氨基酸序列。
实施方案91.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含野生型或变体犬或猫IgG Fc多肽。
实施方案92.根据实施方案91所述的抗体，其中所述IgG Fc多肽是野生型或变体犬IgG-A Fc多肽；野生型或变体犬IgG-B Fc多肽；野生型或变体IgG-C Fc多肽；野生型或变体IgG-D Fc多肽；野生型或变体猫IgG1a Fc多肽；野生型或变体猫IgG1b Fc多肽；或野生型或变体猫IgG2 Fc多肽。
实施方案93.根据实施方案91或实施方案92所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽相对于野生型IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的对蛋白质A的结合亲和力；相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对C1q的结合亲和力；和/或相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对CD16的结合亲和力。
实施方案94.根据实施方案91至93中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽相对于野生型IgG Fc多肽的对铰链区包含至少一个氨基酸修饰，其中如在还原和/或非还原条件下通过SDS-PAGE分析所确定的，所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的重组产生和/或增加的铰链二硫化物形成。
实施方案95.根据实施方案91至94中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:162的位置21、23、25、80、205和/或207的位置处的至少一个氨基酸取代；
b)在对应于SEQ ID NO:163的位置5、38、39、94、97和/或98的位置处的至少一个氨基酸取代；
c)在对应于SEQ ID NO:165的位置5、21、23、24、38、39、93、97和/或98的位置处的至少一个氨基酸取代；
d)在对应于SEQ ID NO:167的位置21、23、25、80和/或207的位置处的至少一个氨基酸取代；
e)在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置16和/或198的位置处的至少一个氨基酸取代；和/或
f)在对应于SEQ ID NO:207的位置14和/或16的位置处的至少一个氨基酸取代。
实施方案96.根据实施方案91至95中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:162的位置21、23、25、80、205和/或207处的至少一个氨基酸取代；
b)在SEQ ID NO:163的位置5、38、39、94、97和/或98处的至少一个氨基酸取代；
c)在SEQ ID NO:164的位置5、21、23、24、38、39、93、97和/或98处的至少一个氨基酸取代；
d)在SEQ ID NO:165的位置21、23、25、80和/或207处的至少一个氨基酸取代；
e)在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置16和/或198处的至少一个氨基酸取代；和/或
f)在SEQ ID NO:207的位置14和/或16处的至少一个氨基酸取代。
实施方案97.根据实施方案91至96中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:162的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:162的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:162的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:162的位置80的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:162的位置205的位置处的丙氨酸、和/或在对应于SEQ ID NO:162的位置207的位置处的组氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:163的位置5的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:163的位置38的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:163的位置39的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:163的位置93的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:163的位置97的位置处的异亮氨酸、和/或在对应于SEQ ID NO:163的位置98的位置处的甘氨酸；
c)在对应于SEQ ID NO:164的位置5的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置24的位置处的异亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置38的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置39的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置93的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置97的位置处的异亮氨酸、和/或在对应于SEQ ID NO:164的位置98的位置处的甘氨酸；
d)在对应于SEQ ID NO:165的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:165的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:165的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:165的位置80的位置处的甘氨酸、和/或在对应于SEQ ID NO:165的位置207的位置处的组氨酸；
e)在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置16的位置处的脯氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置198的位置处的丙氨酸；和/或
f)在对应于SEQ ID NO:207的位置14的位置处的半胱氨酸和/或在对应于SEQ IDNO:207的位置16的位置处的脯氨酸。
实施方案98.根据实施方案91至97中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:162的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:162的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:162的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:162的位置80处的甘氨酸、在SEQID NO:162的位置205处的丙氨酸、和/或在SEQ ID NO:162的位置207处的组氨酸；
b)在SEQ ID NO:163的位置5处的脯氨酸、在SEQ ID NO:163的位置38处的甘氨酸、在SEQ ID NO:163的位置39处的精氨酸、在SEQ ID NO:163的位置93处的精氨酸、在SEQ IDNO:163的位置97处的异亮氨酸、和/或在SEQ ID NO:163的位置98处的甘氨酸；
c)在SEQ ID NO:164的位置5处的脯氨酸、在SEQ ID NO:164的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:164的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:164的位置24处的异亮氨酸、在SEQID NO:164的位置38处的甘氨酸、在SEQ ID NO:164的位置39处的精氨酸、在SEQ ID NO:164的位置93处的精氨酸、在SEQ ID NO:164的位置97处的异亮氨酸、和/或在SEQ ID NO:164的位置98处的甘氨酸；
d)在SEQ ID NO:165的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:165的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:165的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:165的位置80处的甘氨酸、和/或在SEQ ID NO:165的位置207处的组氨酸；
e)在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置16处的脯氨酸和/或在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置198处的丙氨酸；和/或
f)在SEQ ID NO:207的位置14处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:207的位置16处的脯氨酸。
实施方案99.根据实施方案91至98中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，其相对于野生型犬或猫IgG CH1区包含至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ ID NO:237的位置24和/或位置30的位置处的至少一个氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:238的位置24和/或位置29的位置处的至少一个氨基酸取代。
实施方案100.一种包含变体IgG Fc多肽的抗体，所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，其相对于野生型犬或猫IgG CH1区包含至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ ID NO:237的位置24和/或位置30的位置处的至少一个氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:238的位置24和/或位置29的位置处的至少一个氨基酸取代。
实施方案101.根据实施方案27至36中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，其相对于野生型犬或猫IgG CH1区包含至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ IDNO:237的位置24和/或位置30处的至少一个氨基酸取代；或
b)在SEQ ID NO:238的位置24和/或位置29处的至少一个氨基酸取代。
实施方案102.根据实施方案97至101中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，其相对于野生型犬或猫IgG CH1区包含至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ ID NO:237的位置24的位置处的亮氨酸和/或在对应于位置30的位置处的天冬酰胺；或
b)在对应于SEQ ID NO:238的位置24的位置处的亮氨酸和/或在对应于位置29的位置处的天冬酰胺。
实施方案103.根据实施方案91至102中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，其相对于野生型犬或猫IgG CH1区包含至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ IDNO:237的位置24处的亮氨酸和/或位置30处的天冬酰胺；或
b)在SEQ ID NO:238的位置24处的亮氨酸和/或位置29处的天冬酰胺。
实施方案104.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含野生型或变体犬或猫轻链恒定区。
实施方案105.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含野生型或变体犬或猫轻链κ恒定区。
实施方案106.根据实施方案104或实施方案105所述的抗体，其中所述变体轻链恒定区相对于野生型犬或猫轻链κ恒定区包含至少一个氨基酸修饰，所述氨基酸修饰包含：
a)在对应于SEQ ID NO:235的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:241的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代。
实施方案107.一种包含变体轻链恒定区的抗体，所述变体轻链恒定区相对于野生型犬或猫轻链κ恒定区包含至少一个氨基酸修饰，所述氨基酸修饰包含：
a)在对应于SEQ ID NO:235的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:241的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代。
实施方案108.根据实施方案104至107中任一项所述的抗体，其中所述变体轻链恒定区相对于野生型猫或犬轻链κ恒定区包含至少一个氨基酸修饰，所述氨基酸修饰包含：
a)在对应于SEQ ID NO:235的位置11的位置处的丙氨酸和/或在对应于位置22的位置处的精氨酸；或
b)在对应于SEQ ID NO:241的位置11的位置处的丙氨酸和/或在对应于位置22的位置处的精氨酸。
实施方案109.根据实施方案104至108中任一项所述的抗体，其中所述变体轻链恒定区相对于野生型猫或犬轻链κ恒定区包含至少一个氨基酸修饰，所述氨基酸修饰包含：
a)在SEQ ID NO:235的位置11处的丙氨酸和/或位置22处的精氨酸；或
b)在SEQ ID NO:241的位置11处的丙氨酸和/或位置22处的精氨酸。
实施方案110.根据实施方案104至109中任一项所述的抗体，其中所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:235、236、241和/或242的氨基酸序列。
实施方案111.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体是双特异性抗体。
实施方案112.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体是双特异性抗体，其包含：
i)第一变体犬IgG Fc多肽，其相对于第一野生型犬IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，和第二变体犬IgG Fc多肽，其相对于第二野生型犬IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，其中：
a)所述第一变体犬IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138、SEQ IDNO:163的位置137、SEQ ID NO:165的位置137或SEQ ID NO:167的位置138的位置处的氨基酸取代，和/或
b)所述第二变体犬IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138和/或位置140、SEQ ID NO:163的位置137和/或位置139、SEQ ID NO:165的位置137和/或位置139或SEQ ID NO:167的位置138和/或位置140的位置处的氨基酸取代；或
ii)第一变体猫IgG Fc多肽，其相对于第一野生型猫IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，和第二变体猫IgG Fc多肽，其相对于第二野生型猫IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，其中：
a)所述第一变体猫IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154的位置处的氨基酸取代，和/或
b)所述第二变体猫IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154和/或位置156的位置处的氨基酸取代。
实施方案113.一种抗体或双特异性抗体，其包含：
i)第一变体犬IgG Fc多肽，其相对于第一野生型犬IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，和第二变体犬IgG Fc多肽，其相对于第二野生型犬IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，其中：
a)所述第一变体犬IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138、SEQ IDNO:163的位置137、SEQ ID NO:165的位置137或SEQ ID NO:167的位置138的位置处的氨基酸取代，和/或
b)所述第二变体犬IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138和/或位置140、SEQ ID NO:163的位置137和/或位置139、SEQ ID NO:165的位置137和/或位置139或SEQ ID NO:167的位置138和/或位置140的位置处的氨基酸取代；
ii)第一变体猫IgG Fc多肽，其相对于第一野生型猫IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，和第二变体猫IgG Fc多肽，其相对于第二野生型猫IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，其中：
a)所述第一变体猫IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154的位置处的氨基酸取代，和/或
b)所述第二变体猫IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154和/或位置156的位置处的氨基酸取代；或
iii)第一变体马IgG Fc多肽，其相对于第一野生型马IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，和第二变体马IgG Fc多肽，其相对于第二野生型马IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，其中：
a)所述第一变体马IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQID NO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130的位置处的氨基酸取代，和/或
b)所述第二变体马IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQID NO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130和/或位置132的位置处的氨基酸取代。
实施方案114.根据实施方案112或实施方案113所述的抗体，其中：
a)所述第一变体犬IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138、SEQ IDNO:163的位置137、SEQ ID NO:165的位置137或SEQ ID NO:167的位置138的位置处的色氨酸；
b)所述第二变体犬IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置140的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:163的位置137的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置139的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:165的位置137的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置139的位置处的丙氨酸、或在对应于SEQ IDNO:167的位置138的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置140的位置处的丙氨酸；
c)所述第一变体猫IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154的位置处的色氨酸；
d)所述第二变体猫IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置156的位置处的丙氨酸；
e)所述第一变体马IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQID NO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130的位置处的色氨酸；和/或
f)所述第二变体马IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQID NO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置132的位置处的丙氨酸。
实施方案115.根据实施方案112至114中任一项所述的抗体，其中：
a)所述第一变体犬IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:162的位置138、SEQ ID NO:163的位置137、SEQ ID NO:165的位置137或SEQ ID NO:167的位置138处的氨基酸取代；
b)所述第二变体犬IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:162的位置138和/或位置140处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:163的位置137和/或位置139处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:165的位置137和/或位置139处的氨基酸取代，或在SEQ ID NO:167的位置138和/或位置140处的氨基酸取代；
c)所述第一变体猫IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ IDNO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154处的氨基酸取代；
d)所述第二变体猫IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ IDNO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154和/或位置156处的氨基酸取代；
e)所述第一变体马IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ IDNO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130处的氨基酸取代；和/或
f)所述第二变体马IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ IDNO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130和/或位置132处的氨基酸取代。
实施方案116.根据实施方案112至115中任一项所述的抗体，其中：
a)所述第一变体犬IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:162的位置138、SEQ ID NO:163的位置137、SEQ ID NO:165的位置137或SEQ ID NO:167的位置138处的色氨酸；
b)所述第二变体犬IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:162的位置138处的丝氨酸和/或位置140处的丙氨酸、在SEQ ID NO:163的位置137处的丝氨酸和/或位置139处的丙氨酸、在SEQ ID NO:165的位置137处的丝氨酸和/或位置139处的丙氨酸、或在SEQ ID NO:167的位置138处的丝氨酸和/或位置140处的丙氨酸；
c)所述第一变体猫IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ IDNO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154处的色氨酸；
d)所述第二变体猫IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ IDNO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154处的丝氨酸和/或位置156处的丙氨酸；
e)所述第一变体马IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ IDNO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130处的色氨酸；和/或
f)所述第二变体马IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ IDNO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130处的丝氨酸和/或位置132处的丙氨酸。
实施方案117.根据实施方案112至116中任一项所述的抗体，其中所述第一野生型IgG Fc多肽和所述第二野生型IgG Fc多肽来自相同IgG亚型。
实施方案118.根据实施方案112至117中任一项所述的抗体，其中所述第一野生型IgG Fc多肽和所述第二野生型IgG Fc多肽来自不同IgG亚型。
实施方案119.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含IgG Fc多肽，所述IgG Fc多肽包含SEQ ID NO:162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、237、238、239、240、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266和/或267的氨基酸序列。
实施方案120.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
a.(i)SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:47的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:26或SEQID NO:48的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列；
b.(i)SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:55的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:52或SEQID NO:56的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列；
c.(i)SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:276的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:277的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列；
d.(i)SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82或SEQ ID NO:83的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:84的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列；或
e.(i)SEQ ID NO:243的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:244的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列。
实施方案121.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体是双特异性抗体，其结合IL4R和选自以下的一种或多种抗原：IL17、IL31、TNFα、CD20、CD19、CD25、IL4、IL13、IL23、IgE、CD11α、IL6R、α4-整合素、IL12、IL1β或BlyS。
实施方案122.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含(i)SEQID NO:245的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:246的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列。
实施方案123.根据前述实施方案中任一项所述的抗体，其中所述抗体是抗体片段，诸如Fv、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2或Fab'-SH片段。
实施方案124.一种分离的核酸，其编码根据前述实施方案中任一项所述的抗体。
实施方案125.一种宿主细胞，其包含根据实施方案124所述的核酸。
实施方案126.一种宿主细胞，其表达根据实施方案1至123中任一项所述的抗体。
实施方案127.一种生产抗体的方法，其包括培养根据实施方案125或实施方案126所述的宿主细胞并且分离所述抗体。
实施方案128.一种药物组合物，其包含根据实施方案1至123中任一项所述的抗体和药学上可接受的载体。
实施方案129.一种治疗具有IL4/IL13诱导的病症的伴侣动物物种的方法，所述方法包括向所述伴侣动物物种施用治疗有效量的根据实施方案1至123中任一项所述的抗体或根据实施方案128所述的药物组合物。
实施方案130.根据实施方案129所述的方法，其中所述伴侣动物物种是犬科动物、猫科动物或马科动物。
实施方案131.根据实施方案129或实施方案130所述的方法，其中所述IL4/IL13诱导的病症是瘙痒性病症或过敏性病症。
实施方案132.根据实施方案129至131中任一项所述的方法，其中所述IL4/IL13诱导的病症选自特应性皮炎、过敏性皮炎、瘙痒、哮喘、银屑病、硬皮病和湿疹。
实施方案133.根据实施方案129至132中任一项所述的方法，其中所述抗体或所述药物组合物是肠胃外施用的。
实施方案134.根据实施方案129至133中任一项所述的方法，其中所述抗体或所述药物组合物是通过肌内途径、腹膜内途径、脑脊髓内途径、皮下途径、动脉内途径、滑膜内途径、鞘内途径或吸入途径施用的。
实施方案135.根据实施方案129至134中任一项所述的方法，其中所述方法包括与所述抗体或所述药物组合物组合施用Jak抑制剂、PI3K抑制剂、ERK抑制剂。
实施方案136.根据实施方案129至135中任一项所述的方法，其中所述方法包括与所述抗体或所述药物组合物组合施用选自以下的一种或多种抗体：抗IL17抗体、抗IL31抗体、抗TNFα抗体、抗CD20抗体、抗CD19抗体、抗CD25抗体、抗IL4抗体、抗IL13抗体、抗IL23抗体、抗IgE抗体、抗CD11α抗体、抗IL6R抗体、抗α4-整合素抗体、抗IL12抗体、抗IL1β抗体和抗BlyS抗体。
实施方案137.一种降低细胞中IL4和/或IL13信号传导功能的方法，所述方法包括在允许根据实施方案1至123中任一项所述的抗体与细胞外IL4和/或IL13结合的条件下向所述细胞暴露所述抗体或根据实施方案64所述的药物组合物，从而降低IL4和/或IL13与IL4R受体的结合和/或降低所述细胞的IL4和/或IL13信号传导功能。
实施方案138.根据实施方案137所述的方法，其中将所述细胞离体暴露于所述抗体或所述药物组合物。
实施方案139.根据实施方案138所述的方法，其中将所述细胞在体内暴露于所述抗体或所述药物组合物。
实施方案140.根据实施方案137至139中任一项所述的方法，其中所述细胞是犬细胞、猫细胞或马细胞。
实施方案141.根据实施方案137至140中任一项所述的方法，其中如通过STAT6磷酸化的减少所确定的，所述抗体降低所述细胞中的IL4和/或IL13信号传导。
实施方案142.根据实施方案137至141中任一项所述的方法，其中所述细胞是犬DH82细胞。
实施方案143.一种用于检测来自伴侣动物物种的样品中的IL4R的方法，所述方法包括在允许根据实施方案1至123中任一项所述的抗体与IL4R结合的条件下，使所述样品与所述抗体或根据实施方案128所述的药物组合物接触。
实施方案144.根据实施方案141所述的方法，其中所述样品是从犬、猫或马获得的生物样品。
实施方案145.一种筛选抑制IL4和/或IL13信号传导功能的分子的方法，所述方法包括将所述分子暴露于犬DH82细胞，并且检测STAT6磷酸化是否降低。
实施方案146.根据实施方案145所述的方法，其中所述分子包含抗IL4R抗体或IL4R的小分子拮抗剂。
实施方案147.根据实施方案145或实施方案146所述的方法，其中所述分子包含抗IL13R抗体或IL13R的小分子拮抗剂。
实施方案148.根据实施方案145至147中任一项所述的方法，其中所述分子包含抗IL4抗体或IL4的小分子拮抗剂。
附图说明
图1是克隆B和克隆I小鼠单克隆抗体克隆的重链和轻链氨基酸序列的比对。
图2A和图2B是用克隆B随后是克隆I(图2A)和用克隆I随后是克隆B的犬IL4R竞争性表位结合分析的图。
图3A、3B、3C和3D是用克隆B或克隆I随后是犬IL4(图3A)；用克隆B或克隆I随后是犬IL13(图3B)；用犬IL4随后是克隆B或克隆I(图3C)；以及用犬IL13随后是克隆B或克隆I(图3D)的犬IL4R竞争性结合分析的图。
图4A和4B是在非还原(-DTT，左图)和还原(+DTT，右图)条件下，用克隆I(图4A)和作为对照的抗人Fc抗体(图4B)探测的猫、马、鼠、人和犬IL4R ECD多肽的免疫印迹。
图5A是用于犬IL4R表位作图分析的犬/人IL4R ECD杂合多肽的图示。图5B和5C是用克隆I(图5B)和作为对照的抗人Fc抗体(图5C)探测的在5A中展示的犬IL4R ECD、人IL4RECD、各种犬/人IL4R ECD杂合多肽的免疫印迹。
图6A是用于另外的犬IL4R表位作图分析的犬/人IL4R ECD杂合多肽的图示。图6B和6C是用克隆I(图6B)和作为对照的抗人Fc抗体(图6C)探测的在6A中展示的犬IL4R ECD、人IL4R ECD和各种犬/人IL4R ECD杂合多肽的免疫印迹。
图7A鉴定了表1中进一步描述的犬IL4R ECD丙氨酸突变多肽，其用于另外的犬IL4R表位作图分析。图7B和7C是用克隆I(图7B)和作为对照的抗人Fc抗体(图7C)探测的人IL4R ECD、犬IL4R ECD和各种犬IL4R ECD丙氨酸突变多肽的免疫印迹。
图8是犬IL4、犬IL4R ECD和犬IL13R ECD的复合物的三维模型。第一表位由箭头指示。
图9A是用于犬IL4R表位作图分析的犬/人IL4R ECD杂合多肽的图示。图9B总结了用M3、M8和M9抗体探测的犬IL4R ECD、人IL4R ECD和各种犬/人IL4R ECD杂合多肽的蛋白质印迹分析。
序列说明
表1提供了本文引用的某些序列的列表。
Figure BDA0003056881480000281
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具体实施方式
提供了结合犬IL4R和/或猫IL4R的抗体。还提供了能够形成结合IL4R的抗体的抗体重链和轻链。另外，提供了包含一个或多个特定互补决定区(CDR)的抗体、重链和轻链。提供了编码针对犬或猫IL4R的抗体的多核苷酸。还提供了产生或纯化针对犬或猫IL4R的抗体的方法。提供了使用针对犬和/或猫IL4/IL13的抗体的治疗方法。此类方法包括但不限于治疗伴侣动物物种的IL4诱导的病症和/或IL13-诱导的病症的方法。提供了检测来自伴侣动物物种的样品中的可溶性IL4R的方法。还提供了筛选抑制IL4和/或IL13信号传导功能的分子(例如，抗IL4R、抗IL13R、抗IL4和抗IL13抗体以及IL4R、IL13R、IL4和IL13的小分子拮抗剂)的方法。
还提供了来自伴侣动物(诸如犬和猫)的变体IgG Fc多肽，其具有增加的与蛋白质A的结合、减少的与C1q的结合、减少的与CD16的结合、增加的稳定性、增加的重组产生和/或增加的铰链二硫化物形成，其可以用于本文提供的犬或猫IL4R抗体的上下文中。另外，本文提供了用于制备双特异性抗体(包括抗IL4R抗体)的来自伴侣动物(诸如犬、猫和马)的变体IgG Fc多肽和变体轻链恒定区。在一些实施方案中，抗IL4R抗体或抗体片段包含变体IgGFc多肽或变体轻链恒定区。提供了用于制备掺入变体IgG Fc多肽的抗IL4R抗体和双特异性抗体的方法。
提供了针对IL4R的新型抗体，例如与犬IL4R和/或猫IL4R结合的抗体。本文提供的抗IL4R抗体包括但不限于单克隆抗体、小鼠抗体、嵌合抗体、犬源化抗体、猫源化抗体和双特异性抗体。在一些实施方案中，抗IL4R抗体是分离的小鼠单克隆抗体，诸如克隆B、克隆I、M3、M5、M8或M9。
在使用标准杂交瘤技术用犬IL4R免疫小鼠后获得杂交瘤克隆。在酶联免疫吸附测定(ELISA)筛选、结合亲和力测定和体外中和测定后，选择单克隆抗体克隆B、克隆I、M3、M5、M8和M9用于进一步研究。对克隆B和克隆I的重链和轻链进行测序，并且通过序列比对进行分析(图1；SEQ ID NO:27(克隆B HC)、SEQ ID NO:28(克隆B LC)、SEQ ID NO:49(克隆I HC)和SEQ ID NO:50(克隆I LC))。还对M3、M5、M8和M9的可变重(VH)和可变轻(VL)链进行测序(SEQ ID NO:292(M3 VH)、SEQ ID NO:293(M3 VL)、SEQ ID NO:308(M5 VH)、SEQ ID NO:309(M5 VL)、SEQ ID NO:324(M8 VH)、SEQ ID NO:325(M8 VL)、SEQ ID NO:340(M9 VH)和SEQID NO:341(M9 VL)。
本文还提供了单克隆抗体克隆B和克隆I的氨基酸序列。示例性共有CDR序列被鉴定为CDR-H1：GYTFTSYVMH(SEQ ID NO:1)、CDR-H2：YINPX1NDGTFYNGX2X3X4G(SEQ ID NO:2)，其中X1是K或A，X2是K或A，X3是F或V，并且X4是K或Q，或YINPX1NDGT(SEQ ID NO:268)，其中X1是K或A；CDR-H3：FX5YGX6AY(SEQ ID NO:3)，其中X5是N或Y，并且X6是I或F，CDR-L1：RASQEISGYLS(SEQ ID NO:4)；CDR-L2：AASX7X8DX9(SEQ ID NO:5)，其中X7是T或N，X8是R或L，并且X9是S或T；和CDR-L3：VQYASYPWT(SEQ ID NO:6)。
另外，例如，提供了单克隆抗体克隆B的可变重链CDR(SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:269和SEQ ID NO:9)、可变轻链CDR(SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16)、可变区重链框架序列(SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:270和SEQ ID NO:13)和可变区轻链框架序列(SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQID NO:20)。单克隆抗体克隆B的可变重链和可变轻链的氨基酸序列提供有和未提供有前导序列(SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24)。克隆B的重链和轻链的氨基酸序列提供有和未提供有前导序列(SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28)。
作为另一个例子，提供了单克隆抗体克隆I的可变重链CDR(SEQ ID NO:29、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:271、SEQ ID NO:272和SEQ ID NO:31)、可变轻链CDR(SEQ ID NO:36、SEQID NO:37和SEQ ID NO:38)、可变区重链框架序列(SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ IDNO:34、SEQ ID NO:273和SEQ ID NO:35)和可变区轻链框架序列(SEQ ID NO:39、SEQ IDNO:40、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42)。单克隆抗体克隆I的可变重链和可变轻链的氨基酸序列提供有和未提供有前导序列(SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45和SEQ IDNO:46)。克隆I的重链和轻链的氨基酸序列提供有和未提供有前导序列(SEQ ID NO:47、SEQID NO:48、SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50)。
作为另一个例子，提供了M3的可变重链CDR(SEQ ID NO:278、SEQ ID NO:279、SEQID NO:280)、可变轻链CDR(SEQ ID NO:285、SEQ ID NO:286和SEQ ID NO:287)、可变区重链框架序列(SEQ ID NO:281-284)和可变区轻链框架序列(SEQ ID NO:288-291)。
作为另一个例子，提供了M5的可变重链CDR(SEQ ID NO:294、SEQ ID NO:295、SEQID NO:296)、可变轻链CDR(SEQ ID NO:301、SEQ ID NO:302和SEQ ID NO:303)、可变区重链框架序列(SEQ ID NO:297-300)和可变区轻链框架序列(SEQ ID NO:304-307)。
本文进一步例示了M8的可变重链CDR(SEQ ID NO:310、SEQ ID NO:311、SEQ IDNO:312)、可变轻链CDR(SEQ ID NO:317、SEQ ID NO:318和SEQ ID NO:319)、可变区重链框架序列(SEQ ID NO:313-316)和可变区轻链框架序列(SEQ ID NO:320-323)。
本文还例示了M9的可变重链CDR(SEQ ID NO:326、SEQ ID NO:327、SEQ ID NO:328)、可变轻链CDR(SEQ ID NO:333、SEQ ID NO:334和SEQ ID NO:335)、可变区重链框架序列(SEQ ID NO:329-332)和可变区轻链框架序列(SEQ ID NO:336-339)。
本文还提供了来源于单克隆抗体克隆B、克隆I、M3、M5、M8和M9的嵌合、犬源化和猫源化抗体。在一些实施方案中，提供了来源于克隆B的嵌合抗体的氨基酸序列，诸如SEQ IDNO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54，在一些实施方案中，提供了来源于克隆I的嵌合抗体的氨基酸序列，诸如SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57和SEQ IDNO:58。在一些实施方案中，提供了犬源化克隆B的氨基酸序列，诸如SEQ ID NO:59、SEQ IDNO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73和SEQID NO:74。在一些实施方案中，提供了犬源化克隆I的氨基酸序列，诸如SEQ ID NO:63、SEQID NO:64、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:276、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:277。在一些实施方案中，提供了来源于克隆B的猫源化抗体的氨基酸序列，诸如SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:68、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81。在一些实施方案中，提供了来源于克隆I的猫源化抗体的氨基酸序列，诸如SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:82、SEQ IDNO:83和SEQ ID NO:84。在一些实施方案中，提供了来源于M3的犬源化抗体的氨基酸序列，诸如SEQ ID NO:342、SEQ ID NO:343、SEQ ID NO:344、SEQ ID NO:348、SEQ ID NO:349和SEQ ID NO:350。在一些实施方案中，提供了来源于M9的犬源化抗体的氨基酸序列，诸如SEQID NO:345、SEQ ID NO:346、SEQ ID NO:347、SEQ ID NO:351、SEQ ID NO:352和SEQ ID NO:353。
如本文所用，诸如Kd的数字术语是基于科学测量计算的，因此受到适当的测量误差的影响。在一些情况下，数字术语可以包括化整到最接近的有效数字的数值。
如本文所用，“一种/个(a或an)”意指“至少一种/个”或“一种/个或多种/个”，除非另外说明。如本文所用，术语“或”意指“和/或”，除非另外说明。在多项从属权利要求的上下文中，当引用其他权利要求时，“或”的使用以非择一的方式引用那些权利要求。
本文的术语“抗体”以最广泛的含义使用并且包括各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体(诸如双特异性T细胞衔接器)和三特异性抗体)和抗体片段(诸如Fab、F(ab')2、ScFv、微型抗体、双抗体、三抗体和四抗体)，只要它们表现出所希望的抗原结合活性即可。犬、猫和马类物种具有许多哺乳动物共有的不同种类(类别)的抗体。
术语抗体包括但不限于能够结合抗原的片段，诸如Fv、单链Fv(scFv)、Fab、Fab'、二-scFv、sdAb(单结构域抗体)和F(ab')2(包括化学连接的F(ab')2)。抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合片段，被称为“Fab”片段，每个“Fab”片段都有单个抗原结合位点；和残留的“Fc”片段，其名称反映了其容易结晶的能力。胃蛋白酶处理产生F(ab')2片段，其具有两个抗原组合位点并且仍然能够交联抗原。术语抗体还包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体和各种物种(诸如小鼠、人、食蟹猴、犬、猫、马等)的抗体。此外，对于本文提供的所有抗体构建体，还考虑了具有来自其他生物的序列的变体。因此，如果公开了鼠形式的抗体，则本领域技术人员将想到如何将基于鼠序列的抗体转化为猫、狗、马等序列。抗体片段还包括单链scFv、串联二-scFv、双抗体、串联三-sdcFv、微型抗体等的取向。抗体片段还包括纳米抗体(sdAb，具有单个单体结构域的抗体，诸如一对重链可变结构域，没有轻链)。在一些实施方案中，抗体片段可以被称为特定物种(例如，小鼠scFv或犬scFv)。这表示至少部分非CDR区的序列，而不是构建体的来源。在一些实施方案中，抗体包含标记或与第二部分缀合。
术语“标记”和“可检测标记”意指与抗体或其分析物附接的部分，以使特异性结合对的成员之间的反应(例如，结合)可检测。特异性结合对的经标记的成员被称为“被可检测地标记”。因此，术语“标记的结合蛋白”是指掺入了标记的蛋白质，所述标记提供用于鉴定结合蛋白。在一些实施方案中，标记是可以产生可通过视觉或仪器手段检测的信号的可检测标记物，例如，掺入放射性标记的氨基酸或将生物素基部分附接到多肽，所述生物素基部分可以通过加标记的亲和素检测(例如，含有可以通过光学方法或比色法检测的荧光标记物或酶活性的链霉亲和素)。用于多肽的标记的例子包括但不限于以下：放射性同位素或放射性核素(例如，3H、14C、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I、177Lu、166Ho或153Sm)；色原、荧光标记(例如，FITC、罗丹明、镧系磷光体)、酶标记(例如，辣根过氧化物酶、萤光素酶、碱性磷酸酶)；化学发光标记物；生物素基团；由第二报道分子识别的预定多肽表位(例如，亮氨酸拉链对序列、第二抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签)；和磁性剂，诸如钆螯合物。通常用于免疫测定的标记的代表性例子包括产生光的部分，例如吖啶鎓化合物；和产生荧光的部分，例如荧光素。在这方面，所述部分本身可以未被可检测地标记，但在与又另一种部分反应时可能变得可检测。
术语“单克隆抗体”是指基本上同质的抗体群体中的抗体，即构成群体的单独抗体是相同的，除了可以少量存在的可能天然存在的突变之外。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原位点。此外，与典型地包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。因此，单克隆抗体样品可以与抗原上的相同表位结合。修饰语“单克隆”指示抗体的特征是从基本上同质的抗体群体获得，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，单克隆抗体可以通过Kohler和Milstein,1975,Nature 256:495首次描述的杂交瘤方法制备，或者可以通过诸如美国专利号4,816,567中所述的重组DNA方法制备。例如，也可以从使用McCafferty等人,1990,Nature 348:552-554中描述的技术产生的噬菌体文库中分离单克隆抗体。
在一些实施方案中，单克隆抗体是选自克隆B、克隆I、M3、M5、M8和M9的分离的小鼠抗体。
“氨基酸序列”意指肽或蛋白质中的氨基酸残基序列。术语“多肽”和“蛋白质”可互换使用以指氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。氨基酸残基的此类聚合物可以含有天然或非天然氨基酸残基，并且包括但不限于氨基酸残基的肽、寡肽、二聚体、三聚体和多聚体。所述定义涵盖全长蛋白质及其片段两者。所述术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化等。此外，用于本公开文本的目的，“多肽”是指相对于天然序列包含修饰(诸如缺失、添加和取代)的蛋白质(通常在本质上是保守的)，只要所述蛋白质保持所希望的活性即可。这些修饰可能是故意的(如通过定点诱变)，或者可能是偶然的(诸如通过产生蛋白质的宿主的突变或由于PCR扩增引起的错误)。
如本文所用，关于肽、多肽或抗体序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同源性”定义为在用以实现最大百分比序列同一性并且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分而比对序列和引入缺口(如果需要)后，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以以本领域熟知的多种方式来实现，例如，使用公众可获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALINETM(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适当参数，包括在所比较序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。
在一些实施方案中，在比对序列和引入缺口(如果需要)以实现最大百分比序列同一性并且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分后，变体与参考核酸分子或多肽具有至少约50％序列同一性。此类变体包括，例如这样的多肽，其中在所述多肽的N-末端或C-末端添加、缺失一个或多个氨基酸残基。在一些实施方案中，变体与参考核酸或多肽的序列具有至少约50％序列同一性、至少约60％序列同一性、至少约65％序列同一性、至少约70％序列同一性、至少约75％序列同一性、至少约80％序列同一性、至少约85％序列同一性、至少约90％序列同一性、至少约95％序列同一性、至少约97％序列同一性、至少约98％序列同一性或至少约99％序列同一性。
“点突变”是涉及单个氨基酸残基的突变。所述突变可能是氨基酸的损失、一个氨基酸残基取代另一个氨基酸残基、或另外的氨基酸残基的插入。
“氨基酸取代”是指将多肽中的一个氨基酸用另一种氨基酸替代。在一些实施方案中，氨基酸取代是保守取代。表2示出了非限制性的示例性保守氨基酸取代。可以将氨基酸取代引入目的分子中，并且筛选产物以得到所希望的活性，例如，保留/改善的抗原结合、减少的免疫原性、改善的ADCC或CDC、改善的重组产生和/或增强的药代动力学。
表2
Figure BDA0003056881480000721
Figure BDA0003056881480000731
可以根据常见的侧链特性将氨基酸分组：
(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：His、Lys、Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；
(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe。
非保守取代将需要将这些类别之一的成员与另一类别交换。
如本文所用，“氨基酸衍生物”是指任何氨基酸、修饰的氨基酸和/或氨基酸类似物，而不是在人类中发现的20种常见的天然氨基酸之一。示例性氨基酸衍生物包括未在人类中发现的天然氨基酸(例如，可能在一些微生物中发现的硒代半胱氨酸和吡咯赖氨酸)和非天然氨基酸。示例性氨基酸衍生物包括但不限于通过化学产品制造商可商购的氨基酸衍生物(例如，于2017年5月6日访问的sigmaaldrich.com/chemistry/chemistry-products.html？T ablePage＝16274965，将其通过引用并入本文)。可以使用利用宿主细胞、来源于真细菌合成酶的正交氨酰基-tRNA合成酶、正交tRNA和氨基酸衍生物的翻译系统在特定位置处将一种或多种氨基酸衍生物掺入多肽中。有关进一步说明，参见例如，美国专利号9,624,485。
在一些实施方案中，多肽包含用氨基酸衍生物的氨基酸取代。在一些实施方案中，所述氨基酸衍生物是丙氨酸衍生物、半胱氨酸衍生物、天冬氨酸衍生物、谷氨酸衍生物、苯丙氨酸衍生物、甘氨酸衍生物、组氨酸衍生物、异亮氨酸衍生物、赖氨酸衍生物、亮氨酸衍生物、蛋氨酸衍生物、天冬酰胺衍生物、脯氨酸衍生物、谷氨酰胺衍生物、精氨酸衍生物、丝氨酸衍生物、苏氨酸衍生物、缬氨酸衍生物、色氨酸衍生物或酪氨酸衍生物。
如本文所用，“IL4R”是包含与IL4结合的IL4受体亚基α的整体或片段的多肽。
例如，除非另有指示，否则“IL4R”是指来自任何脊椎动物来源的IL4R多肽，所述脊椎动物包括哺乳动物诸如灵长类动物(例如，人和食蟹猴)、啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)以及伴侣动物(例如，狗、猫和马)。所述术语还包括IL4R的天然存在的变体，例如剪接变体或等位变体；或IL4R的人造变体，例如标记的IL4R多肽。在一些实施方案中，IL4R是结合IL4的细胞外结构域片段。在一些此类实施方案中，IL4R可以被称为IL4R细胞外结构域(ECD)。在一些实施方案中，IL4R包含SEQ ID NO:94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116或117的氨基酸序列。
如本文所用，“IL4”是包含与IL4R结合的IL4的整体或片段的多肽。
例如，除非另有指示，否则IL4是指来自任何脊椎动物来源的IL4多肽，所述脊椎动物包括哺乳动物诸如灵长类动物(例如，人和食蟹猴)、啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)以及伴侣动物(例如，狗、猫和马)。所述术语还包括IL4的天然存在的变体，例如剪接变体或等位变体；或IL4的人造变体，例如标记的IL4多肽。在一些实施方案中，IL4包含SEQ ID NO:118、119、120、121、122或123的氨基酸序列或其加工形式。在一些实施方案中，IL4包含SEQ IDNO:124、125、126、127、128、129、130或131的氨基酸序列。
如本文所用，“IL13”是包含与IL4R结合的IL13的整体或片段的多肽。
例如，除非另有指示，否则IL13是指来自任何脊椎动物来源的IL13多肽，所述脊椎动物包括哺乳动物诸如灵长类动物(例如，人和食蟹猴)、啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)以及伴侣动物(例如，狗、猫和马)。所述术语还包括IL13的天然存在的变体，例如剪接变体或等位变体；或IL13的人造变体，例如标记的IL13多肽。在一些实施方案中，IL13包含SEQ IDNO:154或155的氨基酸序列或其加工形式。在一些实施方案中，IL31包含SEQ ID NO:156、157、158或159的氨基酸序列。
如本文所用，“IL13R”或“IL13Ra1”是包含IL13R的整体或片段的多肽，所述整体或片段与IL4R配对以结合IL4或IL13。
如本文所用，“γC受体”是包含常见γ链受体的整体或片段的多肽，所述整体或片段与IL4R配对以结合IL4。
术语抗体的“IL4R结合结构域”意指由抗IL4R抗体的轻链和重链形成的结合结构域，所述结合结构域结合IL4R。
在一些实施方案中，IL4R结合结构域以比其结合人IL4R更大的亲和力结合犬IL4R。在一些实施方案中，IL4R结合结构域结合猫IL4R。
如本文所用，“IL4/IL13信号传导功能”是指当IL4结合至与IL13R或γC受体配对的IL4R时或当IL13结合至与IL13R配对的IL4R时产生的任何细胞效应。细胞效应可以包括STAT6磷酸化、T辅助细胞分化为Th2细胞、B细胞和/或T细胞增殖的激活、和/或诱导B细胞类别转换为IgE。
如本文所用，术语“表位”是指抗原结合分子(例如，抗体、抗体片段或含有抗体结合区的支架蛋白)结合到靶分子(例如，抗原，诸如蛋白质、核酸、碳水化合物或脂质)上的位点。表位通常包括诸如氨基酸、多肽或糖侧链的分子的化学活性表面分组，并且具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。表位可以由靶分子的连续或并置的非连续残基(例如，氨基酸、核苷酸、糖、脂质部分)形成。由连续残基(例如，氨基酸、核苷酸、糖、脂质部分)形成的表位通常在暴露于变性溶剂时保留，而通过三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理时丢失。表位可包括但不限于至少3个、至少5个或8-10个残基(例如，氨基酸或核苷酸)。在一些例子中，表位长度为少于20个残基(例如，氨基酸或核苷酸)、少于15个残基或少于12个残基。如果两种抗体显示对一种抗原的竞争性结合，则它们可以结合所述抗原内的相同表位。在一些实施方案中，表位可以通过与抗原结合分子上的CDR残基的一定最小距离来鉴定。在一些实施方案中，表位可以通过上述距离鉴定，并且进一步限于参与抗体残基与抗原残基之间的键(例如，氢键)的那些残基。表位也可以通过各种扫描来鉴定，例如丙氨酸或精氨酸扫描可以指示抗原结合分子可以与之相互作用的一个或多个残基。除非明确指出，否则作为表位的一组残基不排除其他残基作为特定抗体的表位的一部分。相反，这样一组的存在表示表位的最小系列(或物种组)。因此，在一些实施方案中，鉴定为表位的一组残基表示与抗原相关的最小表位，而不是抗原上表位的残基的排他列表。
在一些实施方案中，表位在犬IL4R ECD(SEQ ID NO:99)或猫IL4R ECD(SEQ IDNO:100)的L41和T50内，诸如在R36和N55内。例如，表位可以包含SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92的氨基酸序列。在一些实施方案中，表位包含氨基酸序列LX10FMGSENX11T，其中X10是D或N并且X11是H或R(SEQ ID NO:85)。在一些实施方案中，表位包含氨基酸序列RLSYQLX10FMGSENX11TCVPEN，其中X10是D或N并且X11是H或R(SEQ ID NO:86)。
在一些实施方案中，表位在犬IL4R ECD(SEQ ID NO:99)或猫IL4R ECD(SEQ IDNO:100)的氨基酸S64和Q85内。例如，表位可以包含SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，表位包含氨基酸序列SMX12X13DDX14VEADVYQLX15LWAGXQ，其中X12是P或L，X13是I或M，X14是A或F，X15是D或H，并且X16是Q或T(SEQ ID NO:87)。
在一些实施方案中，表位在犬IL4R ECD(SEQ ID NO:99)的氨基酸D65和N78内。例如，表位可以包含SEQ ID NO:354的氨基酸序列。
在一些实施方案中，第一表位在犬IL4R ECD(SEQ ID NO:99)的氨基酸G24和A56内，并且第二表位在犬IL4R ECD的氨基酸R79和I90内。例如，第一表位可以包含SEQ ID NO:355的氨基酸序列，并且第二表位可以包含SEQ ID NO:356的氨基酸序列。
在一些实施方案中，表位在犬IL4R ECD(SEQ ID NO:99)的氨基酸R79和V98内。例如，表位可以包含SEQ ID NO:357的氨基酸序列。
术语“CDR”意指如通过本领域技术人员的至少一种鉴定方式定义的互补决定区。在一些实施方案中，CDR可以根据Chothia编号方案、Kabat编号方案、Kabat和Chothia的组合、AbM定义、接触定义或者Kabat、Chothia、AbM或接触定义的组合来定义。抗体内的各种CDR可以通过其适当的数目和链类型来表示，包括但不限于CDR-H1、CDR-H2、CDR-HC3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。本文使用的术语“CDR”还包括“高变区”或HVR，包括高变环。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含重链，所述重链包含(a)包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:29的氨基酸序列的CDR-H1；(b)包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:269、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:271或SEQ ID NO:272的氨基酸序列的CDR-H2；或(c)包含SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:31的氨基酸序列的CDR-H3。在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含轻链，所述轻链包含(a)包含SEQ ID NO:4、SEQID NO:14或SEQ ID NO:36的氨基酸序列的CDR-L1；(b)包含SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR-L2；或(c)包含SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:16或SEQ IDNO:38的氨基酸序列的CDR-L3。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含重链，所述重链包含(a)CDR-H1序列，其与SEQID NO:1、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性；(b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:269、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:271或SEQ ID NO:272的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性；或(c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性。在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含轻链，所述轻链包含(a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:36的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性；(b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:15或SEQ IDNO:37的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性；或(c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:38的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％或至少98％序列同一性。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含重链，所述重链包含：a)CDR-H1序列，其与SEQID NO:278的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:279的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:280的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。在一些实施方案中，IL4R抗体包含轻链，所述轻链包含：a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:285的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:286的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:287的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含重链，所述重链包含：a)CDR-H1序列，其与SEQID NO:310的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:311的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:312的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。在一些实施方案中，IL4R抗体包含轻链，所述轻链包含：a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:317的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:318的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:319的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含重链，所述重链包含：a)CDR-H1序列，其与SEQID NO:326的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:327的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:328的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。在一些实施方案中，IL4R抗体包含轻链，所述轻链包含：a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:333的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:334的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:335的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含重链，所述重链包含：a)CDR-H1序列，其与SEQID NO:294的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:295的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:296的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含轻链，所述轻链包含：a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:301的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:302的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:303的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
如本文所用，术语“可变区”是指包含至少三个CDR的区域。在一些实施方案中，可变区包含三个CDR和至少一个框架区(“FR”)。术语“重链可变区”或“可变重链”可互换使用，是指包含至少三个重链CDR的区域。术语“轻链可变区”或“可变轻链”可互换使用，是指包含至少三个轻链CDR的区域。在一些实施方案中，可变重链或可变轻链包含至少一个框架区。在一些实施方案中，抗体包含选自HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3和HC-FR4的至少一个重链框架区。在一些实施方案中，抗体包含选自LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3和LC-FR4的至少一个轻链框架区。框架区可以并置在轻链CDR之间或重链CDR之间。例如，抗体可以包含具有以下结构的可变重链：(HC-FR1)-(HC-CDR1)-(HC-FR2)-(HC-CDR2)-(HC-FR3)-(HC-CDR3)-(HC-FR4)。抗体可以包含具有以下结构的可变重链：(HC-CDR1)-(HC-FR2)-(HC-CDR2)-(HC-FR3)-(HC-CDR3)。抗体还可以包含具有以下结构的可变轻链：(LC-FR1)-(LC-CDR1)-(LC-FR2)-(LC-CDR2)-(LC-FR3)-(LC-CDR3)-(LC-FR4)。抗体还可以包含具有以下结构的可变轻链：(LC-CDR1)-(LC-FR2)-(LC-CDR2)-(LC-FR3)-(LC-CDR3)。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含以下中的一项或多项：(a)SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:32的可变区重链框架1(HC-FR1)序列，(b)SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:33的HC-FR2序列，(c)SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:270、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:273的HC-FR3序列，(d)SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:35的HC-FR4序列，(e)SEQ ID NO:17或SEQ ID NO:39的可变区轻链框架1(LC-FR1)序列，(f)SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:40的LC-FR2序列，(g)SEQ IDNO:19或SEQ ID NO:41的LC-FR3序列，或(h)SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:42的LC-FR4序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含：
a.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:43的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ IDNO:22或SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列；或
b.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63或SEQ IDNO:64或SEQ ID NO:274的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、或SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:275的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列；或
c.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:69的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ IDNO:68或SEQ ID NO:70的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:67或SEQ IDNO:69的可变重链序列和/或(a)SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:70的可变轻链序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ IDNO:74、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82或SEQ ID NO:83的重链序列和/或SEQID NO:26、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:73、SEQID NO:74、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:277、SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:84的轻链序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含：
a.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:292的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:293的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列；或
b.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:342或SEQID NO:343的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ IDNO:344的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含：
a)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:292的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:293的氨基酸序列；或
b)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:342或SEQ ID NO:343的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:344的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含SEQ ID NO:292、SEQ ID NO:342或SEQ IDNO:343的可变重链序列和/或(a)SEQ ID NO:293或SEQ ID NO:344的可变轻链序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含SEQ ID NO:348或SEQ ID NO:349的重链序列和/或SEQ ID NO:350的轻链序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含：(a)可变重链序列，其与SEQ ID NO:324的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(b)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:325的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(c)如(a)中的可变重链序列和如(b)中的可变轻链序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含SEQ ID NO:324的可变重链序列和/或(a)SEQID NO:325的可变轻链序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含SEQ ID NO:348或SEQ ID NO:349的重链序列和/或SEQ ID NO:350的轻链序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含：
a.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:340的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:341的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列；或
b.(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:345或SEQID NO:346的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ IDNO:347的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含SEQ ID NO:340、SEQ ID NO:345或SEQ IDNO:346的可变重链序列和/或(a)SEQ ID NO:341或SEQ ID NO:347的可变轻链序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含SEQ ID NO:348或SEQ ID NO:349的重链序列和/或SEQ ID NO:350的轻链序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含：根据权利要求75至85中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：(a)可变重链序列，其与SEQ ID NO:308的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(b)可变轻链序列，其与SEQ IDNO:309的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(c)如(a)中的可变重链序列和如(b)中的可变轻链序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含SEQ ID NO:308的可变重链序列和/或(a)SEQID NO:341或SEQ ID NO:309的可变轻链序列。
如本文所用，术语“恒定区”是指包含至少三个恒定结构域的区域。术语“重链恒定区”或“恒定重链”可互换使用，是指包含至少三个重链恒定结构域CH1、CH2和CH3的区域。非限制性示例性重链恒定区包括γ、δ、α、ε和μ。每个重链恒定区对应于抗体同种型。例如，包含γ恒定区的抗体是IgG抗体，包含δ恒定区的抗体是IgD抗体，包含α恒定区的抗体是IgA抗体，包含μ恒定区的抗体是IgM抗体，以及包含ε恒定区的抗体是IgE抗体。某些同种型可以进一步细分为子类。例如，IgG抗体包括但不限于IgG1(包含γ1恒定区)、IgG2(包含γ2恒定区)、IgG3(包含γ3恒定区)和IgG4(包含γ4恒定区)抗体；IgA抗体包括但不限于IgA1(包含α1恒定区)和IgA2(包含α2恒定区)抗体；并且IgM抗体包括但不限于IgM1和IgM2。术语“轻链恒定区”或“恒定轻链”可互换使用，是指包含轻链恒定结构域CL的区域。非限制性的示例性轻链恒定区包括λ和κ(例如，SEQ ID NO:235或241)。除非另有表示，否则结构域内的非功能改变的缺失和改变包括在术语“恒定区”的范围内。犬、猫和马具有诸如IgG、IgA、IgD、IgE和IgM的抗体类别。在犬IgG抗体类别中有IgG-A、IgG-B、IgG-C和IgG-D。在猫IgG抗体类别中有IgG1a、IgG1b和IgG2。在马IgG抗体类别中有IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6和IgG7。
“片段可结晶多肽”或“Fc多肽”是抗体分子的与效应分子和细胞相互作用的部分。它包含免疫球蛋白重链的C-末端部分。如本文所用，Fc多肽包括具有整个Fc多肽的一种或多种生物活性的Fc结构域片段。在一些实施方案中，Fc多肽的生物活性是结合FcRn的能力。在一些实施方案中，Fc多肽的生物活性是结合C1q的能力。在一些实施方案中，Fc多肽的生物活性是结合CD16的能力。在一些实施方案中，Fc多肽的生物活性是结合蛋白质A的能力。Fc多肽的“效应子功能”是由任何抗体响应于刺激而全部或部分执行的作用或活性，并且可以包括补体固定和/或ADCC(抗体依赖性细胞毒性)诱导。
术语“IgX Fc”意指Fc区源自特定抗体同种型(例如，IgG、IgA、IgD、IgE、IgM等)，其中“X”表示抗体同种型。因此，“IgG Fc”表示γ链的Fc区，“IgA Fc”表示α链的Fc区，“IgDFc”表示δ链的Fc区，“IgE Fc”表示ε链的Fc区，“IgM Fc”表示μ链的Fc区等。在一些实施方案中，所述IgG Fc区包含CH1、铰链、CH2、CH3和CL1。“IgX-N-Fc”表示Fc区源自抗体同种型的特定子类(诸如犬IgG子类A、B、C或D；猫IgG子类1、2a或2b；或马IgG子类IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6或IgG7等)，其中“N”表示子类。
在一些实施方案中，IgX Fc多肽或IgX-N-Fc多肽来源于伴侣动物，诸如狗、猫或马。在一些实施方案中，IgG Fc多肽分离自犬γ重链，诸如IgG-A、IgG-B、IgG-C或IgG-D。在一些情况下，IgG Fc多肽分离自猫γ重链，诸如IgG1、IgG2a或IgG2b。在其他情况下，IgG Fc多肽分离自马γ重链，诸如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6或IgG7。
除非另有说明，否则术语“IgX Fc”和“IgX Fc多肽”包括野生型IgX Fc多肽和变体IgX Fc多肽。
“野生型”是指天然存在的多肽或其片段的未突变的形式。可以重组产生野生型多肽。
在一些实施方案中，野生型IgG Fc多肽包含SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:163、SEQID NO:164、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248、SEQID NO:249、SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253的氨基酸序列。
“变体”是通过单个或多个非天然氨基酸取代、缺失和/或添加而不同于参考多肽的多肽。在一些实施方案中，变体保留参考多肽(例如，野生型多肽)的至少一种生物活性。
如本文所用的“变体IgG Fc多肽”是这样的IgG Fc多肽，其与参考IgG Fc多肽的不同之处在于单个或多个氨基酸取代、缺失和/或添加并且基本上保留了参考IgG Fc多肽的至少一种生物活性。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含伴侣动物物种的变体IgG Fc多肽。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含变体犬IgG Fc多肽、变体马IgG Fc多肽或猫IgG Fc多肽。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽(例如，变体犬IgG-A Fc多肽、变体犬IgG-C Fc多肽、变体犬IgG-D Fc多肽、变体猫IgG1a Fc多肽、变体猫IgG1b Fc多肽或变体猫IgG2 Fc多肽)具有参考(例如野生型)多肽基本上缺乏的活性。例如，在一些实施方案中，变体犬IgG-AFc多肽、变体犬IgG-C Fc多肽或变体犬IgG-D Fc多肽结合蛋白质A。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽具有经修饰的蛋白质A结合亲和力。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽对蛋白质A具有增加的结合亲和力。在一些实施方案中，变体IgGFc多肽可以使用蛋白质A柱色谱法纯化。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽具有经修饰的CD16结合亲和力。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽具有降低的对CD16的结合亲和力。在一些实施方案中，变体IgG Fc可以具有降低的ADCC免疫应答。在一些实施方案中，变体IgGFc多肽具有经修饰的C1q结合亲和力。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽具有降低的对C1q的结合亲和力。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽可以具有降低的补体固定。在一些实施方案中，变体IgG Fc可以具有降低的补体介导的免疫应答。
“铰链”是指Fc多肽或变体Fc多肽的富含脯氨酸，包含至少一个半胱氨酸残基并且位于重链恒定区的CH1与CH2之间的任何部分。
在一些实施方案中，铰链能够在同一铰链区内(同一Fc多肽内)与单独Fc多肽的铰链区或与单独Fc多肽形成二硫键。在一些实施方案中，铰链包含至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或至少十个脯氨酸残基。
在一些实施方案中，变体猫IgG Fc多肽相对于野生型猫IgG Fc多肽具有至少一个另外的链间二硫键，诸如在铰链区中。在一些实施方案中，相对于野生型猫IgG Fc多肽，具有至少一个另外的链间二硫键的变体猫IgG2Fc多肽具有增加的链间稳定性。在一些实施方案中，变体IgG多肽相对于野生型IgG Fc多肽(诸如野生型猫IgG Fc多肽)具有对铰链区的至少一个氨基酸修饰。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含来自不同同种型的IgG Fc多肽的铰链区或铰链区的一部分。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽(诸如犬IgG2 Fc多肽)包含来自野生型猫IgG1a或IgG1b Fc多肽的铰链区。在一些实施方案中，相对于野生型IgG Fc多肽，变体IgG Fc多肽具有增加的重组产生和/或增加的铰链二硫化物形成。在一些实施方案中，所述增加的重组产生和/或增加的铰链二硫化物形成可以在还原和/或非还原条件下通过SDS-PAGE分析来确定。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含：a)在对应于SEQ ID NO:162的位置21、23、25、80、205和/或207的位置处的至少一个氨基酸取代；b)在对应于SEQ ID NO:163的位置5、38、39、94、97和/或98的位置处的至少一个氨基酸取代；c)在对应于SEQ ID NO:165的位置5、21、23、24、38、39、93、97和/或98的位置处的至少一个氨基酸取代；d)在对应于SEQID NO:167的位置21、23、25、80和/或207的位置处的至少一个氨基酸取代；e)在对应于SEQID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置16和/或198的位置处的至少一个氨基酸取代；和/或f)在对应于SEQ ID NO:207的位置14和/或16的位置处的至少一个氨基酸取代。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含：a)在SEQ ID NO:162的位置21、23、25、80、205和/或207处的至少一个氨基酸取代；b)在SEQ ID NO:163的位置5、38、39、94、97和/或98处的至少一个氨基酸取代；c)在SEQ ID NO:164的位置5、21、23、24、38、39、93、97和/或98处的至少一个氨基酸取代；d)在SEQ ID NO:165的位置21、23、25、80和/或207处的至少一个氨基酸取代；e)在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置16和/或198处的至少一个氨基酸取代；和/或f)在SEQ ID NO:207的位置14和/或16处的至少一个氨基酸取代。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:162的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于位置23的位置处的亮氨酸、在对应于位置25的位置处的丙氨酸、在对应于位置80的位置处的甘氨酸、在对应于位置205的位置处的丙氨酸和/或在对应于位置207的位置处的组氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:163的位置5的位置处的脯氨酸、在对应于位置38的位置处的甘氨酸、在对应于位置39的位置处的精氨酸、在对应于位置93的位置处的精氨酸、在对应于位置97的位置处的异亮氨酸和/或在对应于位置98的位置处的甘氨酸；
c)在对应于SEQ ID NO:164的位置5的位置处的脯氨酸、在对应于位置21的位置处的苏氨酸、在对应于位置23的位置处的亮氨酸、在对应于位置24的位置处的异亮氨酸、在对应于位置38的位置处的甘氨酸、在对应于位置39的位置处的精氨酸、在对应于位置93的位置处的精氨酸、在对应于位置97的位置处的异亮氨酸和/或在对应于位置98的位置处的甘氨酸；
d)在对应于SEQ ID NO:165的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于位置23的位置处的亮氨酸、在对应于位置25的位置处的丙氨酸、在对应于位置80的位置处的甘氨酸和/或在对应于位置207的位置处的组氨酸；
e)在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置16的位置处的脯氨酸和/或在对应于位置198的位置处的丙氨酸；和/或
f)在对应于SEQ ID NO:207的位置14的位置处的半胱氨酸和/或在对应于位置16的位置处的脯氨酸。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:162的位置21处的苏氨酸、位置23处的亮氨酸、位置25处的丙氨酸、位置80处的甘氨酸、位置205处的丙氨酸和/或位置207处的组氨酸；
b)在SEQ ID NO:163的位置5处的脯氨酸、位置38处的甘氨酸、位置39处的精氨酸、位置93处的精氨酸、位置97处的异亮氨酸和/或位置98处的甘氨酸；
c)在SEQ ID NO:164的位置5处的脯氨酸、位置21处的苏氨酸、位置23处的亮氨酸、位置24处的异亮氨酸、位置38处的甘氨酸、位置39处的精氨酸、位置93处的精氨酸、位置97处的异亮氨酸和/或位置98处的甘氨酸；
d)在SEQ ID NO:165的位置21处的苏氨酸、位置23处的亮氨酸、位置25处的丙氨酸、位置80处的甘氨酸和/或位置207处的组氨酸；
e)在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置16处的脯氨酸和/或位置198处的丙氨酸；和/或
f)在SEQ ID NO:207的位置14处的半胱氨酸和/或位置16处的脯氨酸。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含SEQ ID NO:168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、208、209、210、211、212、213、214、215或216的氨基酸序列。
双特异性抗体对两种不同的表位或靶分子具有结合特异性。在一些实施方案中，双特异性抗体结合相同靶分子的两个不同表位。双特异性抗体可以是全长抗体或抗体片段。
在一些实施方案中，抗体包含含有“杵”突变的第一变体IgG Fc多肽和含有“臼”突变的第二变体IgG Fc多肽。非限制性示例性杵和臼突变描述于例如Merchant,A.M.等人Anefficient route to human bispecific IgG.Nat Biotechnol,16(7):677-81(1998)中。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含杵突变。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138；SEQ ID NO:163的位置137、SEQ ID NO:165的位置137；SEQ ID NO:167的位置138；SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154；或者SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253的位置130的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:162的位置138；SEQID NO:163的位置137；SEQ ID NO:165的位置137；SEQ ID NO:167的位置138；SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154；或者SEQID NO:247、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253的位置130处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138；SEQ ID NO:163的位置137；SEQ ID NO:165的位置137；SEQ ID NO:167的位置138，或者SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ IDNO:206或SEQ ID NO:207的位置154；或者SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253的位置130的位置处的色氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:162的位置138；SEQ ID NO:163的位置137；SEQ ID NO:165的位置137；SEQ ID NO:167的位置138；SEQ ID NO:203、SEQID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154；或SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253的位置130处的色氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含SEQ IDNO:195、196、197、198、217、218、219、220、221、254、255、256、257、258、259或260的氨基酸序列。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含臼突变。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138和/或位置140；SEQ ID NO:163的位置137和/或位置139；SEQ ID NO:165的位置137和/或位置139；SEQ ID NO:167的位置138和/或位置140；SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154和/或位置156；和/或SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253的位置130和/或位置132的位置处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:162的位置138和/或位置140；SEQ ID NO:163的位置137和/或位置139；SEQ ID NO:165的位置137和/或位置139；SEQ ID NO:167的位置138和/或位置140；SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154和/或位置156；或者SEQ ID NO:247、SEQ IDNO:248、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253的位置130和/或位置132处的氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置140的位置处的丙氨酸；在对应于SEQ ID NO:163的位置137的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置139的位置处的丙氨酸；在对应于SEQ ID NO:165的位置137的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置139的位置处的丙氨酸；在对应于SEQ ID NO:167的位置138的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置140的位置处的丙氨酸；在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ IDNO:206或SEQ ID NO:207的位置154的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置156的位置处的丙氨酸；或在对应于SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:250、SEQID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253的位置130的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置132的位置处的丙氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:162的位置138处的丝氨酸和/或位置140处的丙氨酸；在SEQ ID NO:163的位置137处的丝氨酸和/或位置139处的丙氨酸；在SEQ ID NO:165的位置137处的丝氨酸和/或位置139处的丙氨酸；在SEQ ID NO:167的位置138处的丝氨酸和/或位置140处的丙氨酸；在SEQ ID NO:203、SEQID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154处的丝氨酸和/或位置156处的丙氨酸；或者在SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:249、SEQ ID NO:250、SEQ ID NO:251、SEQ ID NO:252或SEQ ID NO:253的位置130处的丝氨酸和/或位置132处的丙氨酸。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含SEQ ID NO:199、200、201、202、222、223、224、225、226、261、262、263、264、265、266或267的氨基酸序列。
此外，为了促进重链与其预期的轻链的特异性配对，CH1与轻链之间的界面氨基酸可以突变为在形状和电荷-电荷相互作用方面是互补的。
在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含CH1区域，其包含在对应于SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ ID NO:237的位置24和/或位置30的位置处的至少一个氨基酸取代；或在对应于SEQ ID NO:238的位置24和/或位置29的位置处的至少一个氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含CH1区域，其包含在SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ ID NO:237的位置24和/或位置30处的至少一个氨基酸取代；或在SEQ ID NO:238的位置24和/或位置29处的至少一个氨基酸取代。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含CH1区域，其包含在对应于SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ ID NO:237的位置24的位置处的亮氨酸和/或在对应于位置30的位置处的天冬酰胺；或在对应于SEQ ID NO:238的位置24的位置处的亮氨酸和/或在对应于位置29的位置处的天冬酰胺。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含CH1区域，其包含在SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ ID NO:237的位置24处的亮氨酸和/或位置30处的天冬酰胺；或在SEQ ID NO:238的位置24处的亮氨酸和/或位置29处的天冬酰胺。在一些实施方案中，变体IgG Fc多肽包含CH1区域，其包含SEQ ID NO:231、232、233、234、239或240的氨基酸序列。
在一些实施方案中，互补变体轻链恒定区包含在对应于SEQ ID NO:235或SEQ IDNO:241的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代。在一些实施方案中，变体轻链恒定区包含在SEQ ID NO:235或SEQ ID NO:241的位置11和/或位置22处的至少一个氨基酸取代。在一些实施方案中，变体轻链恒定区包含在对应于SEQ ID NO:235或SEQ ID NO:241的位置11的位置处的丙氨酸和/或在对应于位置22的位置处的精氨酸。在一些实施方案中，变体轻链恒定区包含在SEQ ID NO:235或SEQ ID NO:241的位置11处的丙氨酸和/或位置22处的精氨酸。在一些实施方案中，变体轻链恒定区包含SEQ ID NO:236或242的氨基酸序列。
术语“嵌合抗体”或“嵌合”是指这样的抗体，其中重链或轻链的一部分源自特定来源或物种，而重链或轻链的其余部分的至少一部分是源自不同的来源或物种。在一些实施方案中，嵌合抗体是指包含来自第一物种(诸如小鼠、大鼠、食蟹猴等)的至少一个可变区和来自第二物种(诸如人、狗、猫、马等)的至少一个恒定区的抗体。在一些实施方案中，嵌合抗体包含至少一个小鼠可变区和至少一个犬恒定区。在一些实施方案中，嵌合抗体包含至少一个小鼠可变区和至少一个猫恒定区。在一些实施方案中，嵌合抗体的所有可变区均来自第一物种，并且所述嵌合抗体的所有恒定区来自第二物种。在一些实施方案中，嵌合抗体包含来自伴侣动物的恒定重链区或恒定轻链区。在一些实施方案中，嵌合抗体包含小鼠可变重链和轻链和伴侣动物恒定重链和轻链。例如，嵌合抗体可以包含小鼠可变重链和可变轻链以及犬恒定重链和恒定轻链；嵌合抗体可以包含小鼠可变重链和可变轻链和猫恒定重链和恒定轻链；或嵌合抗体可以包含小鼠可变重链和可变轻链以及马恒定重链和恒定轻链。
“犬嵌合”或“犬嵌合抗体”是指具有源自狗的至少一部分重链或一部分轻链的嵌合抗体。“猫嵌合”或“猫嵌合抗体”是指具有源自猫的至少一部分重链或一部分轻链的嵌合抗体。在一些实施方案中，犬嵌合抗体包含小鼠可变重链和可变轻链以及犬恒定重链和恒定轻链。在一些实施方案中，猫嵌合抗体包含小鼠可变重链和可变轻链以及猫恒定重链和恒定轻链。在一些实施方案中，抗体是嵌合抗体，其包含鼠可变重链框架区或鼠可变轻链框架区。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含嵌合抗体，所述嵌合抗体包含：(i)SEQ IDNO:51或SEQ ID NO:55的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:56的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列。
如本文所用，“犬抗体”包括犬中产生的抗体；在非犬动物中产生包含犬免疫球蛋白基因或包含犬免疫球蛋白肽的抗体；或者使用诸如噬菌体展示等的体外方法选择的抗体，其中所述抗体库基于犬免疫球蛋白序列。术语“犬抗体”表示作为犬序列的序列属别。因此，所述术语不表示抗体产生的过程，而是表示相关序列的属别。
“犬源化抗体”意指这样的抗体，其中非犬可变区的一部分中的至少一个氨基酸已被来自犬可变区的相应氨基酸替代。在一些实施方案中，犬源化抗体包含至少一个犬恒定区(例如，γ恒定区、α恒定区、δ恒定区、ε恒定区、μ恒定区等)或其片段。在一些实施方案中，犬源化抗体是诸如Fab、scFv、(Fab')2等的抗体片段。术语“犬源化”还表示作为嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或含有非犬免疫球蛋白的最小序列的其片段(诸如抗体的Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或其他抗原结合序列)的非犬(例如鼠)抗体的形式。犬源化抗体可以包括犬免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自接受者的CDR的残基被来自诸如小鼠、大鼠或兔的非犬物种(供体抗体)的具有所希望的特异性、亲和力和能力的CDR的残基取代。在一些情况下，犬免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被相应的非犬残基替代。此外，犬源化抗体可以包含既不在受体抗体中也不在导入的CDR或框架序列中发现的残基，但包括在内以进一步改善和优化抗体性能。
在一些实施方案中，小鼠可变重链或小鼠可变轻链的一部分中的至少一个氨基酸残基已被来自犬可变区的相应氨基酸替代。在一些实施方案中，所述被修饰的链与犬恒定重链或犬恒定轻链融合。在一些实施方案中，抗IL4R抗体是犬源化抗体，其包含SEQ ID NO:59、60、63或64的可变重链氨基酸序列和/或SEQ ID NO:61、62、65或66的可变轻链氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含选自IgG-A、IgG-B、IgG-C和IgG-D恒定区的犬重链恒定区。在一些实施方案中，抗IL4R抗体包括野生型或变体犬IgG-A、IgG-B、IgG-C或IgG-D Fc多肽，如本文所述。在一些实施方案中，抗IL4R抗体包括包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的犬IgG-A Fc多肽；包含SEQ ID NO:163或164的氨基酸序列的犬IgG-B Fc多肽；(c)包含SEQ ID NO:165或166的氨基酸序列的犬IgG-C Fc多肽；或(d)包含SEQ ID NO:167的氨基酸序列的犬IgG-D Fc多肽。在一些实施方案中，抗IL4R抗体包括包含SEQ ID NO:168、169、195或199的氨基酸序列的变体犬IgG-A Fc多肽；包含SEQ ID NO:170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、196或200的氨基酸序列的变体犬IgG-B Fc多肽；(c)包含SEQ ID NO:180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、197或201的氨基酸序列的变体犬IgG-C Fc多肽；或(d)包含SEQ ID NO:194、198或202的氨基酸序列的变体犬IgG-D Fc多肽。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含犬轻链恒定区，诸如犬κ轻恒定区。在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含野生型犬κ轻恒定区(例如，SEQ ID NO:235)或变体犬κ轻恒定区(例如，SEQ ID NO:236)。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含克隆B、克隆I、M3、M5、M8或M9的犬源化可变重链和变体犬IgG Fc多肽，诸如SEQ ID NO:71、72、75、76、276、348、349、351或352。在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含克隆B、克隆I、M3、M5、M8或M9的犬源化可变轻链和野生型犬κ轻链恒定区，诸如SEQ ID NO:73、74、77、78、277、350或352。
如本文所用，“猫抗体”包括猫中产生的抗体；在非猫动物中产生包含猫免疫球蛋白基因或包含猫免疫球蛋白肽的抗体；或者使用诸如噬菌体展示等的体外方法选择的抗体，其中所述抗体库基于猫免疫球蛋白序列。术语“猫抗体”表示作为猫序列的序列属别。因此，所述术语不表示抗体产生的过程，而是表示相关序列的属别。
“猫源化抗体”意指这样的抗体，其中非猫可变区的一部分中的至少一个氨基酸已被来自猫可变区的相应氨基酸替代。在一些实施方案中，猫源化抗体包含至少一个猫恒定区(例如，γ恒定区、α恒定区、δ恒定区、ε恒定区、μ恒定区等)或其片段。在一些实施方案中，猫源化抗体是诸如Fab、scFv、(Fab')2等的抗体片段。术语“猫源化”还表示作为嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或含有非猫免疫球蛋白的最小序列的其片段(诸如抗体的Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或其他抗原结合序列)的非猫(例如鼠)抗体的形式。猫源化抗体可以包括猫免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自接受者的CDR的残基被来自诸如小鼠、大鼠或兔的非猫物种(供体抗体)的具有所希望的特异性、亲和力和能力的CDR的残基取代。在一些情况下，猫免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被相应的非猫残基替代。此外，猫源化抗体可以包含既不在受体抗体中也不在导入的CDR或框架序列中发现的残基，但包括在内以进一步改善和优化抗体性能。
在一些实施方案中，小鼠可变重链或小鼠可变轻链的一部分中的至少一个氨基酸残基已被来自猫可变区的相应氨基酸替代。在一些实施方案中，所述被修饰的链与猫恒定重链或猫恒定轻链融合。在一些实施方案中，抗IL4R抗体是包含SEQ ID NO:67或69的可变重链氨基酸序列和/或SEQ ID NO:68或70的可变轻链氨基酸序列的猫源化抗体。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含选自IgG1a、IgG1b和IgG2恒定区的猫重链恒定区。在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含野生型或变体猫IgG1a、IgG1b或IgG2 Fc多肽，如本文所述。在一些实施方案中，抗IL4R抗体包括包含SEQ ID NO:203或204的氨基酸序列的猫IgG1a Fc多肽；包含SEQ ID NO:205或206的氨基酸序列的猫IgG1b Fc多肽；或(c)包含SEQ ID NO:207的氨基酸序列的猫IgG2 Fc多肽。在一些实施方案中，抗IL4R抗体包括包含SEQ ID NO:208、209、210、217、218、222或223的氨基酸序列的变体猫IgG1a Fc多肽；包含SEQ ID NO:211、212、213、219、220、224或225的氨基酸序列的变体猫IgG1b Fc多肽；或(c)包含SEQ ID NO:214、215、216、221或226的氨基酸序列的变体猫IgG2 Fc多肽。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含猫轻链恒定区，诸如猫κ轻恒定区。在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含野生型猫κ轻恒定区(例如，SEQ ID NO:241)或变体猫κ轻恒定区(例如，SEQ ID NO:242)。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含克隆B或克隆I的猫源化可变重链和变体猫IgG Fc多肽，诸如SEQ ID NO:79、80、82或83。在一些实施方案中，抗IL4R抗体包含克隆B或克隆I的猫源化可变轻链和猫κ轻链恒定区，诸如SEQ ID NO:81或84。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体是对IL4R和不同靶分子(诸如IL17、IL31、TNFα、CD20、CD19、CD25、IL4、IL13、IL23、IgE、CD11α、IL6R、α4-整合素、IL12、IL1β或BlyS)具有结合特异性的双特异性抗体。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含犬源化或猫源化克隆B或克隆I可变重链和可以与变体κ恒定区配对的“杵”变体犬或猫IgG Fc多肽(例如，SEQ ID NO:243)。在一些实施方案中，双特异性抗体包含针对不同靶分子(例如，犬或猫IL31)的可变重链和“臼”变体犬或猫IgG Fc多肽(例如，SEQ ID NO:245)。在一些实施方案中，双特异性抗体包含犬源化或猫源化克隆B或克隆I可变轻链和可以与杵Fc多肽配对的可变κ恒定区(例如，SEQ ID NO:244)。在一些实施方案中，双特异性抗体包含针对不同靶分子(例如，犬或猫IL31)的可变轻链和可以与臼Fc多肽配对的野生型κ恒定区(例如，SEQ ID NO:246)。
可以制备其他双特异性抗体排列。例如，在一些实施方案中，双特异性抗体包含犬源化或猫源化克隆B或克隆I可变重链和可以与变体κ恒定区配对的“臼”变体犬或猫IgG Fc多肽。在一些实施方案中，双特异性抗体包含针对不同靶分子(例如，犬或猫IL31)的可变重链和“杵”变体犬或猫IgG Fc多肽。在一些实施方案中，双特异性抗体包含犬源化或猫源化克隆B或克隆I可变轻链和可以与臼Fc多肽配对的可变κ恒定区。在一些实施方案中，双特异性抗体包含针对不同靶分子(例如，犬或猫IL31)的可变轻链和可以与杵Fc多肽配对的野生型κ恒定区。
术语“亲和力”意指在分子(例如抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以由解离常数(KD)表示。亲和力可以通过本领域已知的诸如例如免疫印迹、ELISA KD、KinEx A、生物层干涉法(BLI)或表面等离子体共振装置的常规方法测量。
术语“KD”、“Kd”、“Kd”或“Kd值”可互换使用，指抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。在一些实施方案中，使用诸如
Figure BDA0003056881480000952
系统(Pall ForteBio LLC,费利蒙,加利福尼亚州)的生物传感器根据供应商说明书通过使用生物层干涉测定来测量抗体的Kd。简言之，将生物素化的抗原与传感器尖端结合，并且监测抗体缔合持续90秒，并且监测解离持续600秒。用于稀释和结合步骤的缓冲液是20mM磷酸盐、150mM NaCl，pH 7.2。减去仅空白曲线的缓冲液以校正任何漂移。使用ForteBio数据分析软件将数据拟合至2:1结合模型以确定缔合速率常数(kon)、解离速率常数(koff)和Kd。平衡解离常数(Kd)通过koff/kon的比率计算。术语“kon”是指抗体与抗原缔合的速率常数，而术语“koff”是指抗体与抗体/抗原复合物解离的速率常数。
术语“结合”抗原或表位是本领域熟知的术语，并且确定这种结合的方法也是本领域熟知的。如果分子与特定细胞或物质反应、缔合或具有亲和力，则称其表现出“结合”，并且所述反应、缔合或亲和力可通过本领域已知一种或多种方法(诸如例如免疫印迹、ELISAKD、KinEx A、生物层干涉法(BLI)、表面等离子体共振装置等)检测。
“表面等离子体共振”表示光学现象，其允许通过检测生物传感器基质内蛋白质浓度的变化来分析实时生物特异性相互作用，例如使用BIAcoreTM系统(BIAcoreInternational AB,GE Healthcare公司,乌普萨拉,瑞典以及皮斯卡塔韦,新泽西州)。有关进一步说明，参见Jonsson等人(1993)Ann.Biol.Clin.51:19-26。
“生物层干涉法”是指光学分析技术，其分析在生物传感器尖端和内部参考层上从固定化蛋白质层反射的光的干涉图案。与生物传感器尖端结合的分子的数量的变化引起可以实时测量的干涉图案的偏移。用于生物层干涉法的非限制性示例性装置是
Figure BDA0003056881480000951
系统(Pall ForteBio LLC)。参见例如，Abdiche等人,2008,Anal.Biochem.377:209-277。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体与犬IL4R或猫IL4R结合，如通过生物层干涉法所测量的，解离常数(Kd)为小于5x 10-6M、小于1x 10-6M、小于5x 10-7M、小于1x 10-7M、小于5x10-8M、小于1x 10-8M、小于5x 10-9M、小于1x 10-9M、小于5x 10-10M、小于1x 10-10M、小于5x10-11M、小于1x 10-11M、小于5x 10-12M或小于1x 10-12M。在一些实施方案中，抗IL4R抗体与犬IL4R或猫IL4R结合，如通过生物层干涉法所测量的，Kd在5x10-6M与1x 10-6M之间、在5x 10- 6M与5x 10-7M之间、在5x 10-6M与1x 10-7M之间、在5x 10-6M与5x 10-8M、在5x 10-6M与1x 10- 8M之间、在5x 10-6M与5x 10-9M之间、在5x 10-6M与1x 10-9M之间、在5x 10-6M与5x 10-10M之间、在5x 10-6M与1x 10-10M之间、在5x 10-6M与5x 10-11M之间、在5x 10-6M与1x 10-11M之间、在5x 10-6M与5x 10-12M之间、在5x 10-6M与1x 10-12M之间、在1x 10-6M与5x 10-7M之间、在1x10-6M与1x 10-7M之间、在1x 10-6M与5x 10-8M、在1x 10-6M与1x 10-8M之间、在1x 10-6M与5x10-9M之间、在1x 10-6M与1x 10-9M之间、在1x 10-6M与5x 10-10M之间、在1x 10-6M与1x 10-10M之间、在1x 10-6M与5x 10-11M之间、在1x 10-6M与1x 10-11M之间、在1x 10-6M与5x 10-12M之间、在1x 10-6M与1x 10-12M之间、在5x 10-7M与1x 10-7M之间、在5x 10-7M与5x 10-8M、在5x10-7M与1x 10-8M之间、在5x 10-7M与5x 10-9M之间、在5x 10-7M与1x 10-9M之间、在5x 10-7M与5x 10-10M之间、在5x 10-7M与1x 10-10M之间、在5x 10-7M与5x 10-11M之间、在5x 10-7M与1x10-11M之间、在5x 10-7M与5x 10-12M之间、在5x 10-7M与1x 10-12M之间、在1x 10-7M与5x 10- 8M、在1x 10-7M与1x 10-8M之间、在1x 10-7M与5x 10-9M之间、在1x 10-7M与1x 10-9M之间、在1x 10-7M与5x 10-10M之间、在1x 10-7M与1x 10-10M之间、在1x 10-7M与5x 10-11M之间、在1x10-7M与1x 10-11M之间、在1x 10-7M与5x 10-12M之间、在1x 10-7M与1x 10-12M之间、在5x 10-8M与1x 10-8M之间、在5x 10-8M与5x 10-9M之间、在5x 10-8M与1x 10-9M之间、在5x 10-8M与5x10-10M之间、在5x 10-8M与1x 10-10M之间、在5x 10-8M与5x 10-11M之间、在5x 10-8M与1x 10- 11M之间、在5x 10-8M与5x 10-12M之间、在5x 10-8M与1x 10-12M、在1x 10-8M与5x 10-9M之间、在1x 10-8M与1x 10-9M之间、在1x 10-8M与5x 10-10M之间、在1x 10-8M与1x 10-10M之间、在1x10-8M与5x 10-11M之间、在1x 10-8M与1x 10-11M之间、在1x 10-8M与5x 10-12M之间、在1x 10-8M与1x 10-12M之间、在5x 10-9M与1x 10-9M之间、在5x 10-9M与5x 10-10M之间、在5x 10-9M与1x10-10M之间、在5x 10-9M与5x 10-11M之间、在5x 10-9M与1x 10-11M之间、在5x 10-9M与5x 10- 12M之间、在5x 10-9M与1x 10-12M之间、在1x10-9M与5x 10-10M之间、在1x 10-9M与1x 10-10M之间、在1x 10-9M与5x10-11M之间、在1x 10-9M与1x 10-11M之间、在1x 10-9M与5x 10-12M之间、在1x 10-9M与1x 10-12M之间、在5x 10-10M与1x 10-10M之间、在5x 10-10M与5x 10-11M、在1x 10- 10M与5x 10-11M、在1x 10-10M与1x 10-11M之间、在1x 10-10M与5x 10-12M之间、在1x 10-10M与1x10-12M之间、在5x 10-11M与1x 10-12M之间、在5x 10-11M与5x 10-12M之间、在5x 10-11M与1x10-12M之间、在1x 10-11M与5x 10-12M、或在1x 10-11M与1x 10-12M之间。在一些实施方案中，如通过免疫印迹分析所测定的，抗IL4R抗体与犬IL4R或猫IL4R结合。
在一些实施方案中，提供了抗IL4R抗体，其与本文所述的抗IL4R抗体(诸如克隆B或克隆I)竞争结合至IL4R。在一些实施方案中，可以制备或使用与本文提供的任何抗体竞争结合的抗体。在一些实施方案中，提供了抗IL4R抗体，其与单克隆克隆B或克隆I抗体竞争结合至犬IL4R或猫IL4R。
术语“载体”用于描述可以被工程化为含有一种或多种克隆的多核苷酸的可以在宿主细胞中繁殖的多核苷酸。载体可以包括一种或多种以下元件：复制起点、调节目的多肽表达的一种或多种调节序列(诸如例如，启动子或增强子)、或一种或多种选择性标记基因(诸如例如，抗生素抗性基因和可以用于比色测定的基因，例如β-半乳糖苷酶)。术语“表达载体”是指用于在宿主细胞中表达目的多肽的载体。
“宿主细胞”是指可以是或已经是载体或分离的多核苷酸的受体的细胞。宿主细胞可以是原核细胞或真核细胞。示例性的真核细胞包括哺乳动物细胞，诸如灵长类动物或非灵长类动物细胞；真菌细胞，诸如酵母；植物细胞；和昆虫细胞。非限制性示例性哺乳动物细胞包括但不限于NS0细胞、PER.
Figure BDA0003056881480000971
细胞(Crucell)、293细胞和CHO细胞，及其衍生物，诸如293-6E、DG44、CHO-S和CHO-K细胞。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，并且由于天然的、偶然的或故意的突变，所述后代可能不一定与原始亲本细胞完全相同(在形态方面或在基因组DNA互补序列方面)。宿主细胞包括在体内用编码本文提供的一个或多个氨基酸序列的一个或多个多核苷酸转染的细胞。
如本文所用，术语“分离的”是指已经与典型地在自然界中发现或产生的至少一些组分分离的分子。例如，当多肽与产生它的细胞的至少一些组分分离时，称其为“分离的”。当多肽在表达后由细胞分泌时，将含有所述多肽的上清液与产生它的细胞物理分离被认为是“分离”所述多肽。类似地，当多核苷酸不是典型地在自然界中发现的较大的多核苷酸的一部分时(诸如例如，在DNA多核苷酸的情况下的基因组DNA或线粒体DNA)，或例如在RNA多核苷酸的情况下与产生它的细胞的至少一些组分分离时，多核苷酸被称为“分离的”。因此，包含在宿主细胞内的载体中的DNA多核苷酸可以被称为“分离的”。在一些实施方案中，使用色谱法(诸如尺寸排阻色谱法、离子交换色谱法、蛋白质A柱色谱法、疏水相互作用色谱法和CHT色谱法)纯化抗IL4R抗体。
术语“伴侣动物物种”是指适合作为人类伴侣的动物。在一些实施方案中，伴侣动物物种是诸如犬科动物、猫科动物、狗、猫、马、兔、雪貂、豚鼠、啮齿动物等小型哺乳动物。在一些实施方案中，伴侣动物物种是诸如马、牛、猪等农场动物。
“降低”或“抑制”意指与参考相比使活性、功能或量减少、降低或停滞。在一些实施方案中，“降低”或“抑制”意指导致总体减少20％或更多的能力。在一些实施方案中，“降低”或“抑制”意指导致总体减少50％或更多的能力。在一些实施方案中，“降低”或“抑制”意指引起总体减少75％、85％、90％、95％或更高的能力。在一些实施方案中，在相同的时间段内，相对于对照剂量(诸如安慰剂)，上述量在一段时间内被抑制或减少。如本文所用，“参考”是指用于比较目的的任何样品、标准或水平。可以从健康或非患病样品中获得参考。在一些例子中，从伴侣动物的未患病或未处理样品中获得参考。在一些例子中，从特定物种的一种或多种健康动物而不是被测试或治疗的动物获得参考。
如本文所用，术语“显著降低”表示在数值与参考数值之间的足够高的降低程度，使得本领域技术人员将认为在由所述值测量的生物学特征的背景下这两个值之间的差异具有统计学显著性。在一些实施方案中，与参考值相比，显著降低的数值降低大于约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或100％中的任何一个。
术语“药物配制品”和“药物组合物”是指呈使得一种或多种活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对所述配制品所给予的受试者具有不可接受的毒性的其他组分的制剂。
“药学上可接受的载体”是指本领域常规的无毒固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封材料、配制辅助剂或载体，其与共同包含用于给予受试者的“药物组合物”的治疗剂一起使用。药学上可接受的载体在使用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且与配制品的其他成分相容。药学上可接受的载体适合于所用配制品。药学上可接受的载体的例子包括氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；诸如人血清白蛋白、犬科动物或其他动物白蛋白等的血清蛋白；诸如磷酸盐、柠檬酸盐、氨丁三醇或HEPES缓冲液等的缓冲液；甘氨酸；山梨酸；山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；盐或诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅或三硅酸镁等的电解质；聚乙烯吡咯烷酮，纤维素基物质；聚乙二醇；蔗糖；甘露糖醇；或包括但不限于精氨酸的氨基酸。
所述药物组合物可以以冻干形式储存。因此，在一些实施方案中，制备方法包括冻干步骤。然后可以在施用于狗、猫或马之前，将冻干的组合物重新配制，典型地作为适用于肠胃外施用的水性组合物。在其他实施方案中，特别是当抗体对热变性和氧化变性而言高度稳定时，药物组合物可以作为液体储存，即作为水性组合物储存，其可以直接或在适当稀释的情况下施用于狗、猫或马。可以用无菌注射用水(WFI)重构冻干的组合物。可以包括抑菌试剂，诸如苯甲醇。因此，本发明提供了呈固体或液体形式的药物组合物。
当施用时，药物组合物的pH可以在从约pH 5至约pH 8的范围内。如果它们用于治疗目的，则本发明的组合物是无菌的。无菌可以通过本领域已知的几种手段中的任何一种来实现，包括通过无菌过滤膜(例如0.2微米膜)过滤。可以使用或不使用抗细菌剂来维持无菌。
本发明的抗体或包含所述抗体的药物组合物可以用于治疗IL4/IL13诱导的病症。如本文所用，“IL4/IL13诱导的病症”意指与IL4/IL13浓度升高的水平或改变的梯度相关、由其引起或表征的疾病。此类IL4/IL13诱导的病症包括但不限于瘙痒性疾病或过敏性疾病。在一些实施方案中，IL4/IL13诱导的病症是特应性皮炎、过敏性皮炎、瘙痒、哮喘、银屑病、硬皮病或湿疹。IL4/IL13诱导的病症可以表现在伴侣动物中，所述伴侣动物包括但不限于犬或猫。
如本文所用，“治疗”是用于获得有益的或希望的临床结果的途径。如本文所用，“治疗”包括针对哺乳动物(包括伴侣动物)的疾病，治疗剂的任何施用或应用。出于本公开文本的目的，有益或希望的临床结果包括但不限于以下中的任何一个或多个：减轻一种或多种症状，降低疾病程度，预防或延迟疾病的传播，预防或延迟疾病的复发，延迟或减缓疾病的进展，改善疾病状态，抑制疾病或疾病进展，抑制或减缓疾病或疾病进展，停滞疾病发展和缓解(无论是部分还是全部)。“治疗”还涵盖降低增殖性疾病的病理后果。本文提供的方法考虑了这些治疗方面中的任何一个或多个。与以上一致，术语治疗不需要百分之百地去除障碍的所有方面。
在一些实施方案中，可以根据本文的方法使用抗IL4R抗体或包含抗IL4R抗体的药物组合物来治疗IL4/IL13诱导的病症。在一些实施方案中，将抗IL4R抗体或包含抗IL4R抗体的药物组合物施用于伴侣动物(诸如犬或猫)，以治疗IL4/IL13诱导的病症。
物质/分子、激动剂或拮抗剂的“治疗有效量”可以根据诸如待治疗的疾病类型，疾病状态，疾病的严重程度和病程，治疗目的的类型，任何既往治疗，临床病史，对先前治疗的反应，主治兽医的判断，动物的年龄、性别和体重，以及物质/分子、激动剂或拮抗剂在动物中引起希望反应的能力等因素而变化。治疗有效量也是治疗有益效果超过物质/分子、激动剂或拮抗剂的任何毒性或有害作用的量。治疗有效量可以按一次或多次施用来递送。治疗有效量是指在必要的剂量和时间段的情况下能有效实现所希望的治疗或预防结果的量。
在一些实施方案中，抗IL4R抗体或包含抗IL4R抗体的药物组合物是肠胃外施用的，通过皮下施用、静脉输注或肌内注射进行。在一些实施方案中，抗IL4R抗体或包含抗IL4R抗体的药物组合物按团注或连续输注施用一段时间。在一些实施方案中，抗IL4R抗体或包含抗IL4R抗体的药物组合物是通过肌内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、动脉内、滑膜内、鞘内或吸入途径施用的。
本文所述的抗IL4R抗体可以以每剂0.1mg/kg体重至100mg/kg体重范围内的量施用。在一些实施方案中，抗IL4R抗体可以以每剂0.5mg/kg体重至50mg/kg体重范围内的量施用。在一些实施方案中，抗IL4R抗体可以以每剂1mg/kg体重至10mg/kg体重范围内的量施用。在一些实施方案中，抗IL4R抗体可以以0.5mg/kg体重至100mg/kg体重范围内、1mg/kg体重至100mg/kg体重范围内、5mg/kg体重至100mg/kg体重范围内、10mg/kg体重至100mg/kg体重范围内、20mg/kg体重至100mg/kg体重范围内、50mg/kg体重至100mg/kg体重范围内、1mg/kg体重至10mg/kg体重范围内、5mg/kg体重至10mg/kg体重范围内、0.5mg/kg体重至10mg/kg体重范围内、或在5mg/kg体重至50mg/kg体重范围内的量施用。
可以一次或在一系列治疗中将抗IL4R抗体或包含抗IL4R抗体的药物组合物施用于伴侣动物。例如，抗IL4R抗体或包含抗IL4R抗体的药物组合物可以施用至少一次、多于一次、至少两次、至少三次、至少四次或至少五次。
在一些实施方案中，将所述剂量每周施用一次，持续至少连续两周或三周，并且在一些实施方案中，该治疗周期重复两次或更多次，任选地穿插有一周或多周未治疗。在其他实施方案中，将所述治疗有效剂量每天施用一次，持续连续二至五天，并且在一些实施方案中，该治疗周期重复两次或更多次，任选地穿插有一天或多天或一周或多周未治疗。
与一种或多种其他治疗剂“组合”施用包括以任何顺序同时(并行)和连续或顺序施用。术语“并行”在本文中用于指两种或更多种治疗剂的施用，其中至少部分施用在时间上重叠或者一种治疗剂的施用相对于另一种治疗剂的施用在很短的时间内发生。例如，所述两种或更多种治疗剂以不超过约指定分钟数的时间间隔施用。术语“顺序地”在本文中用于指两种或更多种治疗剂的施用，其中在中断施用一种或多种药剂后继续施用一种或多种其他药剂，或者其中在施用一种或多种药剂之前施用一种或多种其他药剂。例如，以超过约指定分钟数的时间间隔施用所述两种或更多种治疗剂。如本文中所用，术语“与......结合”是指除了另一种治疗模态之外还施用一种治疗方式。因此，“与......结合”是指在向动物施用另一种治疗模式之前、期间或之后施用一种治疗模式。
在一些实施方案中，所述方法包括与抗IL4R抗体或包含抗IL4R抗体、Jak抑制剂、Tyk2抑制剂、PI3K抑制剂、ERK抑制剂的药物组合物组合施用。在一些实施方案中，所述方法包括与抗IL4R抗体或包含抗IL4R抗体、抗IL31抗体、抗IL17抗体、抗TNFα抗体、抗CD20抗体、抗CD19抗体、抗CD25抗体、抗IL4抗体、抗IL13抗体、抗IL23抗体、抗IgE抗体、抗CD11α抗体、抗IL6R抗体、抗α4-整合素抗体、抗IL12抗体、抗IL1β抗体和抗BlyS抗体的药物组合物组合施用。
本文提供了在允许抗体与IL4R结合的条件下向细胞暴露抗IL4R抗体或包含抗IL4R抗体的药物组合物的方法。在一些实施方案中，所述细胞是犬细胞、猫细胞、或马细胞。在一些实施方案中，所述细胞是犬DH82细胞。在一些实施方案中，所述细胞离体暴露于所述抗体或药物组合物。在一些实施方案中，所述细胞在体内暴露于所述抗体或药物组合物。在一些实施方案中，将细胞暴露于抗IL4R抗体。在一些实施方案中，在允许抗体与细胞外IL4R结合的条件下，将细胞暴露于所述抗IL4R抗体或所述药物组合物。在一些实施方案中，细胞可以通过本文所述的任何一种或多种施用方法体内暴露于所述抗IL4R抗体或所述药物组合物，包括但不限于腹膜内、肌内、静脉注射到所述受试者体内。在一些实施方案中，通过将细胞暴露于包含所述抗体或所述药物组合物的培养基，可以将细胞离体暴露于所述抗IL4R抗体或所述药物组合物。在一些实施方案中，在将细胞暴露于包含所述抗体或所述药物组合物的培养基之前，可以使用本领域技术人员理解的任何数量的方法(诸如电穿孔细胞或将细胞暴露于含有氯化钙的溶液)影响细胞膜的渗透性。
本文提供了使用所述抗IL4R抗体、多肽和多核苷酸用于检测、诊断和监测IL4R诱导的病症的方法。本文提供了确定伴侣动物是否将对抗IL4R抗体疗法有反应的方法。在一些实施方案中，所述方法包括使用抗IL4R抗体检测动物是否具有表达IL4R的细胞。在一些实施方案中，所述检测方法包括使样品与抗体、多肽或多核苷酸接触，并且确定结合水平是否不同于参考或对照样品(诸如对照)的结合水平。在一些实施方案中，所述方法可以用于确定本文所述的抗体或多肽是否是对受试动物而言适当的治疗。
在某些实施方案中，所述样品是生物样品。术语“生物样品”意指来自活物或曾经的活物的物质的量。在一些实施方案中，所述生物样品是细胞或细胞/组织裂解物。在一些实施方案中，所述生物样品包括但不限于血液(例如，全血)、血浆、血清、尿液、滑液和上皮细胞。
在一些实施方案中，使细胞或细胞/组织裂解物与抗IL4R抗体接触，并且确定抗体与细胞之间的结合。当测试细胞与相同组织类型的参考细胞相比显示出结合活性时，它可以指示受试者将受益于用抗IL4R抗体的治疗。在一些实施方案中，测试细胞来自伴侣动物的组织。
可以使用本领域已知的用于检测特异性抗体-抗原结合的各种方法。可以进行的示例性免疫测定包括荧光偏振免疫测定(FPIA)、荧光免疫测定(FIA)、酶免疫测定(EIA)、比浊法抑制免疫测定(NIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)和放射免疫测定(RIA)。可以将指示剂部分或标记基团附接到主题抗体上并且进行选择以便满足所述方法的通常由测定设备的可用性和相容的免疫测定程序决定的各种应用的需要。适当的标记包括但不限于放射性核素(例如125I、131I、35S、3H或32P)、酶(例如，碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、萤光素酶或β-半乳糖苷酶)、荧光部分或蛋白质(例如，荧光素、罗丹明、藻红蛋白、GFP或BFP)或发光部分(例如，由Quantum Dot Corporation,Palo Alto，加利福尼亚州，提供的QdotTM纳米颗粒)。用于进行上述各种免疫测定的一般技术是本领域普通技术人员已知的。
出于诊断目的，可以用可检测部分标记所述多肽(包括抗体)，所述可检测部分包括但不限于放射性同位素、荧光标记和本领域已知的各种酶-底物标记。将标记与抗体缀合的方法是本领域已知的。在一些实施方案中，不需要标记抗IL4R抗体，并且可以使用与第一抗IL4R抗体结合的第二标记抗体检测其存在。在一些实施方案中，抗IL4R抗体可以用于任何已知的测定方法，诸如竞争性结合测定、直接和间接夹心测定和免疫沉淀测定。Zola,Monoclonal Antibodies:A Manual of Techniques,第147-158页(CRC Press,Inc.1987)。抗IL4R抗体和多肽也可以用于体内诊断测定，诸如体内成像。通常，用放射性核素(诸如111In、99Tc、14C、131I、125I、3H或任何其他放射性核素标记(包括本文概述的那些))标记抗体或多肽，使得可以用免疫显像定位目的细胞或组织。使用本领域熟知的技术，所述抗体还可以用作病理学中的染色试剂。
在一些实施方案中，第一抗体用于诊断，并且第二抗体用作治疗剂。在一些实施方案中，第一抗体与第二抗体是不同的。在一些实施方案中，第一抗体和第二抗体均可以通过结合单独的表位而同时结合抗原。
本文提供了筛选抑制IL4和/或IL13信号传导功能的分子的方法，所述方法包括将所述分子暴露于犬DH82细胞，并且检测STAT6磷酸化是否降低。在一些实施方案中，所述分子包含抗IL4R抗体或IL4R的小分子拮抗剂。在一些实施方案中，所述分子包含抗IL4R抗体或IL13R的小分子拮抗剂。在一些实施方案中，所述分子包含抗IL4R抗体或IL4的小分子拮抗剂。在一些实施方案中，所述分子包含抗IL4R抗体或IL13的小分子拮抗剂。
以下实施例说明了本公开文本的具体方面，并不旨在以任何方式限制本公开文本。
实施例
实施例1
IL4和IL4R ECD试剂的制备
合成编码融合蛋白的核苷酸序列，并且将其克隆到单独的哺乳动物表达质粒中，所述融合蛋白包含：(1)全长犬IL4R(SEQ ID NO:94)、犬、猫、马、鼠或人IL4R ECD(SEQ IDNO:99、100、101、102或103)，或犬、猫或马IL4(SEQ ID NO:121、122或123)，(2)一个或多个His6、人Fc和/或FLAG标签，(3)一个或多个接头序列，和(4)前导序列。将质粒单独地转染到293细胞中，培养，并且单独地收集和过滤含有分泌的IL4R ECD或IL4融合多肽的上清液。使用Ni-NTA柱(GE Healthcare Life Sciences)亲和纯化多-His融合蛋白，并且使用
Figure BDA0003056881480001042
蛋白质A亲和树脂(Repligen)亲和纯化人Fc融合蛋白。纯化的融合蛋白通过SDS-PAGE分析证实(数据未示出)。融合蛋白(在加工之前和之后)总结在下表3中。
表3.。
Figure BDA0003056881480001041
Figure BDA0003056881480001051
实施例2
与犬IL4R结合的小鼠单克隆抗体的鉴定
在用纯化的犬IL4R-ECD_C-His6(SEQ ID NO:107)作为免疫原进行标准免疫后，鉴定小鼠单克隆抗体。在免疫期间使用不同的佐剂(Akesobio,Inc，中国)，并且通过标准杂交瘤技术获得单克隆抗体。
显影酶联免疫吸附测定(ELISA)以筛选产生IL4R结合抗体的克隆。首先，将生物素化的IL4R-ECD_C-His6(SEQ ID NO:107)引入链霉亲和素包被的孔中。然后将免疫的血清添加到孔中，随后用HRP缀合的抗小鼠抗体洗涤和检测。犬IL4R结合抗体的存在显露了阳性信号。鉴定超过121种ELISA阳性的顶部克隆。
通过ELISA筛选所述121种抗体克隆阻断犬IL4与犬IL4R ECD之间的相互作用的能力。将犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6(SEQ ID NO:109)固定到包被有抗人Fc的孔中。添加杂交瘤上清液，随后添加生物素化的犬IL4_C-His6(SEQ ID NO:127)，并且然后添加链霉亲和素-HRP。信号减弱表明犬IL4R ECD与犬IL4之间的相互作用降低。鉴定出11种克隆，并且将其指定为克隆A、B、C、D、E、F、G、H、I、J和K。进一步培养每种克隆，并且使用标准蛋白质A亲和色谱法纯化所产生的IgG抗体。
通过生物传感器测定(Forte Bio Octet)证实每种克隆与犬IL4R ECD的结合。首先，将生物素化的犬IL4R-ECD_C-His6(SEQ ID NO:107)与链霉亲和素传感器尖端结合。然后，评估11种抗体克隆中的每种与结合犬IL4R-ECD的传感器尖端的结合。
实施例3
克隆B和克隆I抗体阻断IL4与犬IL4R的结合
通过生物传感器测定(Forte Bio Octet)评估这11种抗体的抗体-IL4R ECD复合物降低配体犬IL4结合的能力。在链霉亲和素传感器尖端上捕获生物素化的犬IL4R-ECD_C-His6(SEQ ID NO:107)。将结合IL4R ECD的尖端分别暴露于20μg/mL的11种鼠抗体(克隆A、B、C、D、E、F、G、H、I、J和K)中的每种，以形成IL4R ECD-抗体二元复合物。然后将复合物结合尖端暴露于高浓度(240μg/mL)的犬IL4_C-His6(SEQ ID NO:127)。克隆B和克隆I的犬IL4RECD-抗体复合物未能与犬IL4结合，表明克隆B和克隆I两者均是中和抗体。
实施例4
编码单克隆抗体的VH和VL的DNA序列的鉴定
使杂交瘤克隆B和I沉淀，并且提取总RNA。使用标准技术，使用用于扩增小鼠免疫球蛋白(Ig)可变结构域的寡核苷酸引物来获得cDNA。对每种克隆的重链和轻链进行测序，并且通过序列比对进行分析(分别为图1A和图1B)。克隆B的示例性CDR序列被鉴定为SEQ IDNO 7-9和14-16，并且克隆I的示例性CDR序列被鉴定为SEQ ID NO 29-31和36-38。示例性共有CDR序列被鉴定为CDR-H1：GYTFTSYVMH(SEQ ID NO:1)、CDR-H2：YINPX1NDGTFYNGX2X3X4G(SEQ ID NO:2)，其中X1是K或A，X2是K或A，X3是F或V，并且X4是K或Q，或YINPX1NDGT，其中X1是K或A(SEQ ID NO:268)；CDR-H3：FX5YGX6AY(SEQ ID NO:3)，其中X5是N或Y，并且X6是I或F，CDR-L1：RASQEISGYLS(SEQ ID NO:4)；CDR-L2：AASX7X8DX9(SEQ ID NO:5)，其中X7是T或N，X8是R或L，并且X9是S或T；和CDR-L3：VQYASYPWT(SEQ ID NO:6)。
实施例5
抗IL4R-mAb克隆B和I的表达和纯化
化学合成编码具有前导序列的全长克隆B和I重链和轻链多肽(SEQ ID NO 27、28、49和50)的核苷酸序列，并且将其克隆到适用于转染到CHO宿主细胞中的单独的表达载体中。将克隆B和克隆I载体转染到单独的CHO宿主细胞中并且培养。通过单步蛋白质A柱色谱法从培养基中纯化克隆B和克隆I抗体。
通过差示扫描荧光测定法(DSF)测量克隆B和I抗体的热稳定性随pH的变化。在不同pH下每种抗体的熔解温度(Tm)列出于下表4中。将缓冲液和12μg抗体与1X蛋白热转移染料(Applied Biosystem，目录号4461146)混合在一起。用StepOne实时PCR系统(AppliedBiosystem，目录号4376357)进行熔解曲线分析。根据制造商的说明，以1％的斜坡速率使温度从25℃升高至99℃。通过蛋白质热ShiftTM软件v1.0(Applied Biosystem，目录号4466038)分析数据以确定Tm，其被计算为从取蛋白质解链曲线的一阶导数得出的最高值。
表4。
测试的pH 测定缓冲液 克隆B Tm(℃) 克隆I Tm(℃)
4.5 0.1M NaAc 58.5 59.2
6 0.1M NaPO<sub>4</sub> 65.1 65.6
7.5 0.1M NaPO<sub>4</sub> 66.5 67.8
9 0.1M TrisHCl 66.7 67.1
实施例6
犬IL4R结合活性的证明
克隆B和I抗体各自表现出对犬IL4R的亲和力，其动力学对于治疗活性潜在地是足够的。使用Octet生物传感器如下进行结合分析。简言之，通过胺化学对犬IL4R-ECD_C-His6(SEQ ID NO:107)进行生物素化。通过广泛的透析去除游离的未反应的生物素。在链霉亲和素传感器尖端上捕获生物素化的犬IL4R-ECD_C-His6。监测克隆B或I抗体与犬IL4R-ECD_C-His6(25μg/mL)的缔合，持续600秒。监测解离，持续600秒。减去仅缓冲液空白曲线以校正任何漂移。使用ForteBioTM数据分析软件将数据拟合至1:1结合模型以确定kon、koff和Kd。用于稀释和所有结合步骤的缓冲液是：20mM磷酸盐，150mM NaCl，pH 7.2。克隆B抗体与犬IL4R-ECD_C-His6的Kd是2.03x10-9M，并且克隆I抗体与犬IL4R-ECD_C-His6的Kd是1.79x 10-9M。
还使用Octet生物传感器进行替代结合测定。在抗人Fc结合的传感器尖端上捕获犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6(SEQ ID NO:109)。监测克隆B或I抗体与犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6的缔合，持续600秒。监测解离，持续600秒。用于稀释和所有结合步骤的缓冲液是：20mM磷酸盐，150mM NaCl，pH 7.2。克隆B抗体与犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6的Kd是约10-10M，并且克隆I抗体与犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6的Kd是2.75x 10-10M。用第二种测定观察到的增加的亲和力可能是由于相对于犬IL4R-ECD_C-His6，克隆B和I抗体对犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6的亲合力增加。另外，胺缀合可能影响犬IL4R-ECD_C-His6与克隆B和I抗体相互作用的亲和力。
实施例7
克隆B和I抗体竞争相同的IL4R表位组
使用Octet生物传感器进行表位结合分析。在抗人Fc结合的传感器尖端上捕获犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6(SEQ ID NO:109)。监测克隆B抗体(50μg/mL)与犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6的缔合，持续600秒。短暂洗涤复合物结合的尖端，并且然后将其暴露于克隆I抗体(50μg/mL)。在洗涤步骤和暴露于克隆I抗体之后，没有观察到对犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6的进一步缔合(图2A)，这表明克隆B和I抗体与相同的表位组结合。还进行相反的结合测定。监测克隆I抗体(50μg/mL)与在抗人Fc结合的传感器尖端上捕获的犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6之间的缔合，持续600秒。短暂洗涤复合物结合的尖端，并且然后将其暴露于克隆B抗体(50μg/mL)。在洗涤步骤和暴露于克隆B抗体之后，没有观察到对犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6的进一步缔合(图2B)，这再次表明克隆B和克隆I抗体与相同的表位组结合。
实施例8
克隆B和克隆I抗体阻断IL4和IL13与IL4R的结合
使用Octet生物传感器进行克隆B、克隆I、犬IL4和犬IL13配体与犬IL4R的各种结合分析。在抗人Fc结合的传感器尖端上捕获犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6(SEQ ID NO:109)。监测克隆B或克隆I抗体(25μg/mL)与犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6的缔合，持续600秒。短暂洗涤复合物结合的尖端，并且然后将其暴露于犬IL4_C-His6(SEQ ID NO:127；50μg/mL)或犬IL13_C-His6(SEQ ID NO:157；50μg/mL)并且监测600秒。观察到犬IL4(图3A)或犬IL13(图3B)几乎没有结合，这表明克隆B和I抗体阻断了犬IL4和犬IL13与犬IL4R的结合。
还进行相反的结合测定。监测犬IL4_C-His6(SEQ ID NO:127；50μg/mL)或犬IL13_C-His6(SEQ ID NO:157；50μg/mL)与在抗人Fc结合传感器尖端上捕获的犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6之间的缔合，持续600秒。短暂洗涤复合物结合的尖端，并且然后将其暴露于克隆B抗体(50μg/mL)或克隆I抗体(50μg/mL)，并且监测600秒。在IL4和IL13与IL4R结合之后(分别为图3C和图3D)，观察到与克隆B或克隆I的进一步缔合。这些结果表明，克隆B和克隆I各自具有比犬IL4或犬IL13更高的对IL4R的亲和力。
实施例9
通过Western分析克隆B和I抗体对IL4R的免疫反应性
通过蛋白质印迹(Western blot)研究克隆B和I抗体识别犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6(SEQ ID NO:109)的能力。在还原条件(存在DTT)或非还原条件(不存在DTT)下，通过SDS-PAGE分离纯化的犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6。将蛋白质转移至PVDF膜，并且使用克隆B或I抗体，随后使用山羊抗小鼠IgG-HRP进行探测。仅在非还原条件下在样品中观察到克隆B和I抗体的免疫反应阳性信号，这表明二硫化物结合对于维持表位构象可能是重要的，并且克隆B和I抗体的表位可能是不连续的或构象的。
还研究克隆I抗体与猫、马、鼠和人IL4R的交叉反应性。在还原(+DTT)或非还原(-DTT)条件下，通过SDS-PAGE分别分离犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6(SEQ ID NO:109)、猫IL4R-ECD_C-HuFc_His6(SEQ ID NO:111)、马IL4R-ECD_C-HuFc_His6(SEQ ID NO:113)、鼠IL4R-ECD_C-HuFc_His6(SEQ ID NO:115)和人IL4R-ECD_C-HuFc_His6(SEQ ID NO:117)(0.1μg/泳道)。将蛋白质转移至PVDF膜，并且用克隆I抗体(0.3μg/mL)探测印迹，并且通过山羊抗小鼠IgG-HRP进行可视化(图4A)。作为对照，将印迹剥离并且用山羊抗人IgG Fc-HRP探测，以可视化IL4R-ECD蛋白的存在(图4B)。在非还原条件下，使克隆I抗体与犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6免疫反应，并且在较小程度上与猫IL4R-ECD_C-HuFc_His6免疫反应(图4A，分别为泳道5和1)。用马、鼠和人IL4R-ECD_C-HuFc_His6融合多肽观察到低背景反应性(图4A，分别为泳道2、3和4)。
实施例10
猫IL4R结合亲和力
免疫印迹测定检测到，与克隆I与犬IL4R-ECD_C-HuFc_His6之间的结合相比，克隆I与猫IL4R-ECD_C-HuFc_His6之间的结合略有降低。此发现与通过Octet生物传感器测量的体外结合亲和力一致。在链霉亲和素传感器尖端上捕获生物素化的猫IL4R-ECD_C-HuFc_His6(SEQ ID NO:111)。监测克隆I抗体(25μg/mL)与猫IL4R-ECD_C-HuFc_His6的缔合，持续600秒。监测解离，持续600秒。减去仅缓冲液空白曲线以校正任何漂移。使用ForteBioTM数据分析软件将数据拟合至1:1结合模型以确定kon、koff和Kd。用于稀释和所有结合步骤的缓冲液是：20mM磷酸盐，150mM NaCl，pH 7.2。克隆I抗体与猫IL4R-ECD_C-HuFc_His6的Kd是1.1x10-9M。
实施例11
对于克隆I抗体的犬IL4R结合表位的鉴定
研究被克隆I抗体(并且推测也被克隆B抗体)识别的犬IL4R表位。由于克隆I抗体表现出与人IL4R-ECD的低背景交叉反应性，因此将犬IL4R ECD(SEQ ID NO:99)和人IL4RECD(SEQ ID NO:103)序列的许多杂合蛋白设计为具有前导序列(SEQ ID NO:132)和C-末端人Fc-His6标签，以便于犬IL4R表位作图。将犬和人ECD序列分成三个区段(A、B和C)，并且基于这些区段以A至C的顺序制备六种不同的杂合多肽构建体(参见下图5A和表5)。
表5.。
Figure BDA0003056881480001101
将含有编码杂合体1-6多肽中的每种的核苷酸序列的质粒构建体瞬时转染到293细胞中，并且将上清液浓缩3倍。在非还原(-DTT)条件下，通过SDS-PAGE分离每种融合多肽，并且将蛋白质转移至PVDF膜。使用克隆I抗体(图5B)或作为对照的抗人Fc抗体(图5C)探测印迹。犬IL4R ECD区段A和B两者的存在给出了最强的信号(杂合体4，图5B，泳道6)。犬IL4RECD区段A单独(杂合体1，图5B，泳道3)或与区段C一起(杂合体6，图5B，泳道8)给出了明显的信号，这表明区段A可能含有主要表位。而区段B单独(杂合体2，图5B，泳道4)或与区段C一起(杂合体5，图5B，泳道7)给出了较弱的信号，这表明区段B可能含有辅助(或次要)表位。
基于此信息，将犬IL4R ECD(SEQ ID NO:99)和人IL4R ECD(SEQ ID NO:103)序列的另外的杂合蛋白设计为具有前导序列(SEQ ID NO:132)和C-末端人Fc-His6标签，以进一步定位一个或多个犬IL4R表位。进一步划分犬和人ECD序列的区段A和B，并且基于增加犬或人序列的氨基酸残基数目制备另外的八种杂合多肽构建体(杂合体7-14)(参见下图6A和表6)。
表6。
Figure BDA0003056881480001111
将含有编码杂合体7-14多肽中的每种的核苷酸序列的质粒构建体瞬时转染到293细胞中，并且将上清液浓缩3倍。在非还原(-DTT)条件下，通过SDS-PAGE分离每种杂合多肽，并且将蛋白质转移至PVDF膜。使用克隆I抗体(图6B)或作为对照的抗人Fc抗体(图6C)探测印迹。区段A的C-末端半部分和区段B的中央部分两者的存在给出了最强的信号(图6B；杂合体7、11和13；分别为泳道3、7和9)。
为了进一步鉴定由克隆I识别的犬IL4R表位的氨基酸残基，将基于SEQ ID NO:99的携带丙氨酸突变的多个突变体犬IL4 ECD序列设计为具有前导序列(SEQ ID NO:132)和C-末端人Fc-His6标签，并且在293细胞中表达。将细胞上清液浓缩3倍，在非还原(-DTT)条件下通过SDS-PAGE分离，并且转移至PVDF膜。使用克隆I抗体(图7B)或作为对照的抗人Fc抗体(图7C)探测印迹。精细表位作图的结果总结在下表7中。结果表明，犬IL4R ECD(SEQ IDNO:95)的氨基酸M44和G45参与表位结合。
表7。
Figure BDA0003056881480001121
构建犬IL4(SEQ ID NO:121)、犬IL4R ECD(SEQ ID NO:99)和犬IL13R ECD(SEQ IDNO:161)的复合物的三维模型(图8)。在图8中鉴定了犬IL4R表位1。对上述研究结果的分析和三维蛋白质建模分析表明，克隆B和I与位于犬IL4R ECD(SEQ ID NO:99)或猫IL4R ECD(SEQ ID NO:100)的L41和T50内(诸如在R36和N55内)的第一表位结合。例如，第一表位可以包含SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:92的氨基酸序列。在一些实施方案中，第一表位包含氨基酸序列LX10FMGSENX11T，其中X10是D或N并且X11是H或R(SEQ IDNO:85)。在一些实施方案中，第一表位包含氨基酸序列RLSYQLX10FMGSENX11TCVPEN，其中X10是D或N并且X11是H或R(SEQ ID NO:86)。
对研究结果和三维蛋白质建模的分析还表明，克隆B和I与犬IL4R ECD(SEQ IDNO:99)或猫IL4R ECD(SEQ ID NO:100)的氨基酸S64和Q85内的第二表位结合。例如，第二表位可以包含SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，第二表位包含氨基酸序列SMX12X13DDX14VEADVYQLX15LWAGXQ，其中X12是P或L，X13是I或M，X14是A或F，X15是D或H，并且X16是Q或T(SEQ ID NO:87)。
实施例12
嵌合、犬源化和猫源化抗体的表达和纯化
克隆B或I可变重链多肽可以与不同动物物种的重链恒定区融合，所述重链恒定区诸如野生型犬IgG-A、IgG-B、IgG-C或IgG-D或者野生型猫IgG-1a、IgG-1b或IgG-2Fc多肽(例如，包含SEQ ID NO:162、163、164、165、166、167、203、204、205、206、207、227、228、229、230、237、238、239或240的IgG Fc多肽)，或此类IgG Fc多肽的变体(例如，包含SEQ ID NO:168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、231、232、233、234、239或240的变体IgG Fc多肽)。嵌合重链的示例性氨基酸序列包括SEQ ID NO:51(克隆B可变HC和犬IgG-B)和SEQ ID NO:55(克隆I可变HC和犬IgG-B)。另外，克隆B或I可变轻链多肽可以与伴侣动物物种的轻链恒定区融合，所述轻链恒定区诸如野生型犬或猫轻链恒定区(例如，SEQ ID NO:235或241)或此类多肽的变体(例如，SEQ ID NO:236或242)。嵌合轻链的示例性氨基酸序列包括SEQ ID NO:52(克隆B可变LC和犬κ轻链恒定区)和SEQ ID NO:56(克隆I可变LC和犬κ轻链恒定区)。
通过搜索和选择合适的犬和猫种系抗体氨基酸序列作为用于CDR移植的模板，对克隆B和I可变重链和可变轻链进行犬源化和猫源化。使用3维结构建模进一步优化序列。所设计的克隆B和I可变重链和可变轻链多肽的犬源化和猫源化变体的例子包括SEQ ID NO59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:274、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQID NO:69和SEQ ID NO:70。
犬源化或猫源化重链多肽可以与以下的重链恒定区融合：野生型犬IgG-A、IgG-B、IgG-C或IgG-D或者野生型猫IgG-1a、IgG-1b或IgG-2Fc多肽(例如，包含SEQ ID NO:162、163、164、165、166、167、203、204、205、206、207、227、228、229、230、237、238、239或240的IgGFc多肽)，或此类IgG Fc多肽的变体(例如，包含SEQ ID NO:168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、231、232、233、234、239或240的变体IgG Fc多肽)。犬源化或猫源化可变重链和变体IgG Fc多肽的示例性氨基酸序列包括SEQ ID NO:71、72、75、76、79、80、82和83。
犬源化或猫源化轻链多肽可以与伴侣动物物种的轻链恒定区融合，所述轻链恒定区诸如野生型犬或猫轻链恒定区(例如，SEQ ID NO:235或241)或此类多肽的变体(例如，SEQ ID NO:236或242)。犬源化或猫源化可变轻链和κ轻链恒定区的示例性氨基酸序列包括SEQ ID NO:73、74、77、78、81和84。
合成编码与犬或猫IgG融合的克隆B和I可变重链以及与犬或猫恒定轻链融合的克隆B和I可变轻链的嵌合多肽的核苷酸序列，并且将其克隆到适用于转染到CHO宿主细胞中的表达载体中。还合成编码犬源化和猫源化克隆I多肽的核苷酸序列，并且将其克隆到表达载体中。将每对HC和LC核苷酸序列转染到CHO宿主细胞中。培养细胞并且通过蛋白质A柱色谱法从培养基中纯化克隆B、克隆I、嵌合B和嵌合I抗体。
还可以使用FreestyleMaxTM转染试剂(Life Technologies)，将载体用于在CHO-S细胞中进行中试转染。通过澄清条件培养基收获上清液。可以用单程蛋白质A色谱法步骤纯化抗体，并且用于进一步研究。
可以将纯化的抗体制剂与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合，并且通过过滤灭菌以制备本发明的药物组合物。可以以治疗有效量将示例性抗体制剂或药物组合物施用于患有IL4R诱导的病症(诸如特应性皮炎、过敏性皮炎、瘙痒、哮喘、银屑病、硬皮病或湿疹)的狗或猫。
实施例13
变体犬IgG Fc多肽，用于增加的蛋白质A结合和/或减少的补体结合和/或减少的CD16结合。
使用蛋白质A亲和力纯化抗体是成熟的过程。然而，在犬IgG的四种亚型中，仅IgG-B Fc(例如，SEQ ID NO:163或SEQ ID NO:164)具有蛋白质A结合亲和力。犬IgG-A Fc(例如，SEQ ID NO:162)、IgG-C Fc(例如，SEQ ID NO:165或SEQ ID NO:166)和IgG-D Fc(例如，SEQID NO:167)具有弱的或不可测量的蛋白质A结合亲和力。设计变体犬IgG-A Fc、IgG-C Fc和IgG-D Fc多肽，用于改变的蛋白质A结合。
另外，犬IgG-B Fc和IgG-C Fc具有补体活性并且与C1q结合，而犬IgG-A Fc和IgG-D Fc对C1q具有弱的或不可测量的结合亲和力。为了潜在地降低C1q结合和/或潜在地降低补体介导的免疫应答，设计变体犬IgG-B Fc和IgG-C Fc多肽。
此外，犬IgG-B Fc和IgG-C Fc具有CD16结合活性。为了潜在地降低CD16与IgG-BFc和IgG-C Fc的结合和/或潜在地降低ADCC，设计变体犬IgG-B Fc和IgG-C Fc多肽。
下表8总结了犬IgG Fc亚型的蛋白质A和C1q结合特征。值得注意的是，没有野生型犬IgG Fc亚型缺乏C1q结合并且结合蛋白质A。
表8。
Figure BDA0003056881480001151
(-)表示低的或不可测量的结合活性。
将两种方法用于设计变体犬IgG-A、IgG-C和IgG-D Fc多肽，用于增加的蛋白质A结合。对于第一种方法，将变体犬IgG-A、IgG-C和IgG-D Fc多肽设计为具有与犬IgG-B Fc相同的蛋白质A结合基序序列(例如，分别为SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:165和SEQ ID NO:167)。对于第二种方法，将变体犬IgG-A Fc I(21)T/Q(207)H(SEQ ID NO:169)、变体犬IgG-C FcI(21)T(SEQ ID NO:181)和变体犬IgG-D Fc I(21)T/Q(207)H(SEQ ID NO:194)设计为在蛋白质A结合区中具有一个或两个氨基酸取代以对应于犬IgG-B Fc序列。
另外，可以制备具有增加的蛋白质A结合的变体犬IgG-A Fc、IgG-C Fc和IgG-D Fc多肽，其具有表9中列出的一个或多个氨基酸取代。
表9。
Figure BDA0003056881480001152
*所列出的氨基酸位置相对于所指示的SEQ ID NO。
为了潜在地降低C1q与犬IgG-B Fc和IgG-C Fc的结合和/或潜在地降低补体介导的免疫应答，可以制备变体犬IgG-B Fc和IgG-C Fc多肽，其分别在对应于SEQ ID NO:163或SEQ ID NO:165的位置93的氨基酸位置处具有Lys被除了Lys之外的任何氨基酸进行的氨基酸取代。与据了解未表现出补体活性的犬IgG-A Fc和IgG-D Fc相比，分析犬IgG-B Fc和IgG-C Fc的蛋白质序列和3-D结构建模后，鉴定这些氨基酸取代。例如，可以制备变体犬IgG-B Fc K(93)R(SEQ ID NO:170)和变体犬IgG-C Fc K(93)R(SEQ ID NO:182)。当与包含野生型犬IgG-B Fc的融合蛋白相比时，观察到人C1q与包含变体犬IgG-B Fc K(93)R的融合蛋白之间的结合降低。
为了潜在地降低CD16与IgG-B Fc和IgG-C Fc的结合和/或潜在地降低ADCC，可以制备具有表10中列出的一个或多个氨基酸取代的变体犬IgG-B Fc和IgG-C Fc多肽。与据了解未表现出ADCC活性的IgG-A和IgG-D，分析犬IgG-B和IgG-C的蛋白质序列和3-D结构建模后，鉴定一个或多个氨基酸取代。
表10。
Figure BDA0003056881480001161
*所列出的氨基酸位置相对于所指示的SEQ ID NO。
由于野生型犬IgG-C Fc缺乏蛋白质A结合并且具有C1q结合，可以通过将表9中列出的一个或多个氨基酸取代与K(93)R取代或K(93)X取代(其中X是除了Lys之外的任何氨基酸)组合来制备结合蛋白质A并且具有降低的与C1q的结合的双变体犬IgG-C Fc。可以通过将表10中列出的一个或多个氨基酸取代与K(93)R取代或K(93)X取代(其中X是除了Lys之外的任何氨基酸)组合来制备与C1q的结合降低并且与CD16的结合降低的双变体犬IgG-B Fc或双变体犬IgG-C Fc。可以通过将表9中列出的一个或多个氨基酸取代和表10中列出的一个或多个氨基酸取代与K(93)R取代或K(93)X取代(其中X是除了Lys之外的任何氨基酸)组合来制备结合蛋白质A并且具有降低的与C1q和CD16的结合的三变体犬IgG-C Fc。
可以确定任何变体犬IgG Fc与蛋白质A、CD16和/或C1q的结合，并且将其与另一种IgG Fc(例如，对应的野生型犬IgG Fc、另一种野生型或变体犬IgG Fc、或另一种伴侣动物的野生型或变体IgG Fc等)与蛋白质A、CD16和/或C1q的结合进行比较。
可以使用Octet生物传感器进行结合分析。简言之，可以将靶分子(例如，蛋白质A、C1q、CD16等)生物素化并且除去游离的未反应的生物素(例如，通过透析)。在链霉亲和素传感器尖端上捕获生物素化的靶分子。监测靶分子与各种浓度(例如，10μg/mL)的IgG Fc多肽的缔合，持续一段指定的时间或直至达到稳定状态。监测缔合，持续一段指定的时间或直至达到稳定状态。可以减去仅缓冲液的空白曲线以校正任何漂移。使用ForteBioTM数据分析软件将数据拟合至1:1结合模型以确定kon、koff和Kd。
用于增加的蛋白质A结合(例如，为了易于纯化)、减少的C1q结合(例如，为了降低补体介导的免疫应答)、降低的CD16结合(例如，降低的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性)和/或增加的稳定性的示例性变体犬IgG多肽包括SEQ ID NO:169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193和194。此类变体犬IgG多肽可以与以上实施例中所述的克隆B或I可变重链序列、犬源化克隆B或I可变重链序列或CDR序列结合。
实施例14
变体猫IgG Fc多肽，用于减少的补体结合和/或增强的铰链二硫化物形成和/或增强的重组产生
猫IgG、IgG1a Fc(SEQ ID NO:203或SEQ ID NO:204)、IgG1b Fc(SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206)和IgG2 Fc(SEQ ID NO:207)的三种亚型中的每一种均具有蛋白质A结合亲和力。然而，仅猫IgG2 Fc具有弱的或不可测量的与C1q的结合亲和力，而猫IgG1a Fc、IgG1bFc与C1q结合。为了潜在地降低C1q结合和/或潜在地降低补体介导的免疫应答，设计变体猫IgG1a Fc和IgG1b Fc多肽。
下表11总结了猫IgG Fc亚型的蛋白质A和C1q结合特征。值得注意的是，没有野生型马IgG Fc亚型缺乏C1q结合并且结合蛋白质A。
表11。
Figure BDA0003056881480001181
(-)表示低的或不可测量的结合活性。
为了潜在地降低C1q与猫IgG1a Fc和IgG1b Fc的结合和/或潜在地降低补体介导的免疫应答，可以制备变体猫IgG1a Fc和IgG1b Fc多肽，其在对应于SEQ ID NO:203、SEQID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置198的氨基酸位置处具有Pro被除了Pro之外的任何氨基酸进行的氨基酸取代。与据了解未表现出补体活性的猫IgG2 Fc相比，分析猫IgG1a Fc和IgG1b Fc的蛋白质序列和3-D结构建模后，鉴定这些氨基酸取代。例如，可以制备变体猫IgG1 Fc多肽P(198)A(SEQ ID NO:209、210、212和213)。
可以确定任何变体猫IgG Fc与C1q的结合，并且将其与另一种IgG Fc(例如，对应的野生型猫IgG Fc、另一种野生型或变体猫IgG Fc、或另一种伴侣动物的野生型或变体IgGFc等)与C1q的结合进行比较。可以使用实施例13中描述的结合测定。
将若干种直系同源铰链结构的三维蛋白质建模分析用于修饰猫IgG铰链以增强二硫化物形成。为了增强在猫IgG铰链处的二硫化物形成，可以通过在对应于猫IgG1a(SEQ IDNO:203或SEQ ID NO:204)(例如，K16P)、猫IgG1b(SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206)或猫IgG2(SEQ ID NO:207)(例如，K(16)P)的位置16的位置处用脯氨酸取代赖氨酸来修饰铰链序列。具有经修饰的铰链的变体猫IgG多肽的氨基酸序列的例子包括SEQ ID NO:208、SEQID NO:211和SEQ ID NO:215。
为了增加在猫IgG2铰链处的二硫化物形成，可以通过用半胱氨酸取代氨基酸来修饰铰链序列。例如，通过在对应于SEQ ID NO:207的位置14的氨基酸位置处用Cys取代Gly来制备具有经修饰的铰链的变体猫IgG2 Fc(SEQ ID NO:214)。
将三维蛋白质建模用于设计猫变体IgG Fc多肽，所述多肽包含来自不同IgG同种型的铰链区的序列，以增强重组产生和改善铰链二硫化物形成。可以制备包含来自猫IgG1a或IgG1b的铰链区的序列(例如，SEQ ID NO:216)的变体猫IgG2 Fc多肽。可以确定变体IgGFc多肽的重组产生的水平和/或铰链二硫化物形成的水平，并且将其在还原和非还原条件下通过SDS-PAGE分析与另一种IgG Fc(例如，相同或不同同种型的对应野生型IgG Fc，或另一种伴侣动物的野生型或变体IgG Fc等)的水平进行比较。
用于减少的C1q结合(例如，用于降低的补体介导的免疫应答)和/或增强的铰链二硫化物形成和/或增强的重组产生的示例性变体猫IgG多肽包括SEQ ID NO:208、209、210、211、212、213、214、215和216。此类变体猫IgG多肽可以与以上实施例中所述的克隆B或I可变重链序列、猫源化克隆B或I可变重链序列或CDR序列结合。
实施例15
用于双特异性抗体的变体犬、猫和马IgG Fc多肽
为了能够使用杵臼(knob-in-hole)异源二聚化方法制备双特异性犬、猫或马抗体，研究变体犬IgG Fc多肽、变体猫IgG Fc多肽和变体马IgG Fc多肽的配对。双特异性抗体组合了两种抗体针对两种不同靶标的特异性。首先，通过引入CH3接口突变来设计重链配对，使得一条链包含大体积的氨基酸(杵)，并且另一条链在相同的一般位置(臼)中包含较小的氨基酸。此外，为了促进重链与其预期的轻链的特异性配对，CH1与轻链之间的界面氨基酸可以突变为在形状和电荷-电荷相互作用方面是互补的。
可以作为杵引入在对应于犬IgG-A(SEQ ID NO:162)的位置138的位置处、在对应于犬IgG-B Fc(SEQ ID NO:163)的位置137的位置处、在对应于犬IgG-C Fc(SEQ ID NO:165)的位置137的位置处、或在对应于犬IgG-D Fc(SEQ ID NO:167)的位置138的位置处色氨酸对酪氨酸的氨基酸取代(T138W或T137W)。第一变体犬IgG-A Fc、IgG-B Fc、IgG-C Fc和IgG-D Fc的氨基酸序列的例子分别是SEQ ID NO:195、SEQ ID NO:196、SEQ ID NO:197和SEQ ID NO:198。
可以作为臼引入在对应于犬IgG-A(SEQ ID NO:162)或IgG-D(SEQ ID NO:167)的位置138的位置处苏氨酸对丝氨酸以及在对应于位置140的位置处亮氨酸对丙氨酸的氨基酸取代(T138S、L140A)，或者在对应于犬IgG-B Fc(SEQ ID NO:163)或IgG-C(SEQ ID NO:165)的位置137的位置处苏氨酸对丝氨酸以及在对应于位置139的位置处亮氨酸对丙氨酸的氨基酸取代(T137S、L139A)。第二变体犬IgG-A Fc、IgG-B Fc、IgG-C Fc和IgG-D Fc的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:199、SEQ ID NO:200、SEQ ID NO:201和SEQ ID NO:202。
可以引入在对应于犬IgG-A CH1(SEQ ID NO:227)、犬IgG-B CH1(SEQ ID NO:228)、犬IgG-C CH1(SEQ ID NO:229)或犬IgG-D CH1(SEQ ID NO:230)的位置24的位置处丙氨酸对亮氨酸以及在对应于位置30的位置处丝氨酸对天冬酰胺的氨基酸取代(A24L、S30D)。变体犬IgG-A CH1、IgG-B CH1、IgG-C CH1和IgG-D CH1的氨基酸序列的例子是SEQID NO:231、SEQ ID NO:232、SEQ ID NO:233和SEQ ID NO:234。
可以引入在对应于犬κ恒定区(SEQ ID NO:235)的位置11的位置处苯丙氨酸对丙氨酸以及在对应于位置22的位置处丝氨酸对精氨酸的氨基酸取代(F11A、S22R)。变体犬κ恒定区的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:236。
可以作为杵引入在对应于猫IgG1a Fc(SEQ ID NO:203或SEQ ID NO:204)、猫IgG1b Fc(SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206)或猫IgG2(SEQ ID NO:207)的位置154的位置处苏氨酸对色氨酸的氨基酸取代(T154W)。第一变体猫IgG2 Fc、IgG1a Fc和IgG1b Fc的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:217、SEQ ID NO:218、SEQ ID NO:219、SEQ ID NO:220和SEQID NO:221。
可以作为臼引入在对应于猫IgG1a(SEQ ID NO:203或SEQ ID NO:204)、猫IgG-bFc(SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206)或猫IgG2 Fc(SEQ ID NO:207)的位置154的位置处苏氨酸对丝氨酸以及在对应于位置156的位置处亮氨酸对丙氨酸的氨基酸取代(T154S、L156A)。第二变体猫IgG2 Fc、IgG1a Fc和IgG1b Fc的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:222、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:225和SEQ ID NO:226。
可以引入在对应于猫IgG1 CH1(SEQ ID NO:237)的位置24的位置处丙氨酸对亮氨酸以及在对应于位置30的位置处丝氨酸对天冬酰胺的氨基酸取代，或者在对应于猫IgG2CH1(SEQ ID NO:238)的位置24的位置处丙氨酸对亮氨酸以及在对应于位置29的位置处丝氨酸对天冬酰胺的氨基酸取代。变体猫IgG1 CH1和IgG2 CH1的氨基酸序列的例子是SEQ IDNO:239和SEQ ID NO:240。
可以引入在对应于猫κ恒定区(SEQ ID NO:241)的位置11的位置处苯丙氨酸对丙氨酸以及在对应于位置22的位置处丝氨酸对精氨酸的氨基酸取代(F11A、S22R)。变体猫κ恒定区的氨基酸序列的例子是SEQ ID NO:242。
可以作为杵引入在对应于马IgG1 Fc(SEQ ID NO:247)、马IgG2Fc(SEQ ID NO:248)、马IgG3 Fc(SEQ ID NO:249)、马IgG4 Fc(SEQ ID NO:250)、马IgG5 Fc(SEQ ID NO:251)、马IgG6 Fc(SEQ ID NO:252)或马IgG7Fc(SEQ ID NO:253)的位置130的位置处苏氨酸对色氨酸的氨基酸取代(T130W)。第一变体马IgG1 Fc、IgG2 Fc、IgG3 Fc、IgG4 Fc、IgG5Fc、IgG6Fc和IgG7 Fc的氨基酸序列的例子分别是SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ IDNO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259和SEQ ID NO:260。
可以作为臼引入在对应于马IgG1 Fc(SEQ ID NO:247)、马IgG2Fc(SEQ ID NO:248)、马IgG3 Fc(SEQ ID NO:249)、马IgG4 Fc(SEQ ID NO:250)、马IgG5 Fc(SEQ ID NO:251)、马IgG6 Fc(SEQ ID NO:252)或马IgG7Fc(SEQ ID NO:253)的位置130的位置处苏氨酸对丝氨酸以及在对应于位置132的位置处亮氨酸对丙氨酸的氨基酸取代(T130W)。第二变体马IgG1Fc、IgG2 Fc、IgG3 Fc、IgG4 Fc、IgG5 Fc、IgG6 Fc和IgG7 Fc的氨基酸序列的例子分别是SEQ ID NO:261、SEQ ID NO:262、SEQ ID NO:263、SEQ ID NO:264、SEQ ID NO:265、SEQID NO:266和SEQ ID NO:267。
上述方法可以用于制备针对IL4R和其他靶标的双特异性抗体，所述其他靶标诸如IL17、IL31、TNFα、CD20、CD19、CD25、IL4、IL13、IL23、IgE、CD11α、IL6R、α4-整合素、IL12、IL1β或BlyS。例如，可以制备针对犬IL4R和犬IL31的双特异性抗体，其具有氨基酸序列SEQ IDNO:243(具有双特异性杵的犬源化克隆I可变HC v2和变体IgG-B Fc C1q-、CD16-)、SEQ IDNO:244(犬源化克隆I可变LC v2和可变犬κ恒定区)、SEQ ID NO:245(具有双特异性臼的犬源化抗犬IL31克隆M14可变HC和变体犬IgG-B Fc C1q-、CD16-)和SEQ ID NO:246(犬源化抗犬IL31克隆M14可变LC和犬κ恒定区)。
实施例16
与犬IL4R结合的另外的小鼠单克隆抗体的鉴定
使用由293细胞产生的犬IL4R细胞外结构域作为免疫原，使用标准免疫鉴定小鼠单克隆抗体。在免疫期间使用不同的佐剂(Antibody Solutions,桑尼维尔(Sunnyvale),加利福尼亚州)，并且通过标准杂交瘤技术获得单克隆抗体。显影酶联免疫吸附测定(ELISA)以筛选产生犬IL4R结合抗体的克隆。首先将犬IL4R生物素化，并且然后将其引入链霉亲和素包被的孔中。然后将免疫的血清添加到孔中，随后用HRP缀合的抗小鼠抗体洗涤和检测。犬IL4R结合抗体的存在显露了阳性信号。鉴定出具有高结合信号的超过100种ELISA阳性克隆。
此外，进行中和(犬IL4阻断)ELISA。鉴定出四种克隆，它们与犬IL4R的结合可以被犬IL4抑制。犬IL4与犬IL4R的结合被四种克隆抑制：M3、M5、M8和M9。
从杂交瘤细胞培养物中纯化所述四种小鼠抗体，并且使用生物传感器(ForteBioOctetRed)测量它们与犬IL4R的亲和力。生物素化的犬IL4R与链霉亲和素传感器尖端结合。所述4种候选物的Kd均小于10nM。
实施例17
M3、M5、M8和M9的VH和VL序列的鉴定
沉淀产生M3、M5、M8和M9的杂交瘤细胞。提取RNA，并且使用标准技术，使用用于扩增小鼠免疫球蛋白(Ig)可变结构域的寡核苷酸引物来获得cDNA。确定所述四种克隆中的每一种的可变重链(VH)和可变轻链(VL)(SEQ ID NO:292(M3 VH)、SEQ ID NO:293(M3 VL)、SEQ ID NO:308(M5 VH)、SEQ ID NO:309(M5 VL)、SEQ ID NO:324(M8 VH)、SEQ ID NO:325(M8 VL)、SEQ ID NO:340(M9 VH)、SEQ ID NO:341(M9
VL)。
实施例18
鼠-犬嵌合抗体从CHO细胞的表达和纯化
设计编码嵌合抗体的DNA序列以用于将鼠VH和鼠VL融合至犬恒定重链IgG-B和犬恒定轻链(k)。化学合成核苷酸序列并且插入适用于转染到CHO宿主细胞中的表达载体中。转染到CHO细胞中后，从细胞中分泌轻链蛋白或重链蛋白或两者。通过单步蛋白质A柱色谱法纯化所有四种嵌合犬IgG-B。使用生物传感器(ForteBio OctetRed)证实它们与犬IL4R的亲和力<10nM。
实施例19
从CHO细胞的犬源化和表达
通过搜索和选择合适的犬种系抗体序列作为用于CDR移植的模板，随后进行蛋白质建模，对鼠(M3、M9)VH和VL进行犬源化。将犬源化可变轻链M3(SEQ ID NO:344)和犬源化可变轻链M9(SEQ ID NO:347)与犬CLκ融合(分别产生SEQ ID NO:350和353)。将M3的犬源化可变重链(SEQ ID NO:342和SEQ ID NO:343)和M9的犬源化可变重链(SEQ ID NO:344和SEQID NO:345)与变体犬IgG-B融合，从而分别产生SEQ ID NO348、SEQ ID NO:349、SEQ ID NO:351和SEQ ID NO:352)。所述重链和轻链易于表达，并且用蛋白质A柱在单步中纯化。
犬源化抗体表达良好，并且维持与犬IL4R的结合亲和力≤1nM。
实施例20
基于犬IL4R细胞的信号传导测定的开发
从ATCC(CRL10389)购买犬DH82细胞(一种来源于恶性组织细胞增生症的犬巨噬细胞样细胞系)，将其以10e5个细胞/孔接种在96孔板中，并且在37℃、5％CO2下孵育过夜(在如ATCC推荐的15％FBS D-MEM中)。通过用在不含FBS的D-MEM中的连续稀释的抗IL4R或杂交瘤上清液制剂在5％CO2、37℃下替换每个孔中的培养基持续1小时来完成细胞的血清饥饿和抗体预孵育。然后，在5％CO2、37℃下将犬IL4细胞因子(RnD AF754)以1ng/mL(最终浓度)添加至每个孔中，持续15分钟。每个孔添加20微升停止溶液(M-per Thermo Fisher#78501)。通过抗磷酸化STAT6(RnD MAB3717)蛋白质印迹法测定每个孔中的IL4诱导的STAT6磷酸化。
如通过抗磷酸化STAT6蛋白质印迹所评估的，M3、M8和M9小鼠抗体抑制了STAT6磷酸化。
实施例21
M3、M8和M9犬IL4R结合表位的鉴定
由于基于蛋白质印迹，M3、M8和M9不识别人IL4R，但对犬IL4R有强烈反应，因此制备并且表达组合嵌合犬-人IL4R融合分子，以鉴定每种抗体结合的一个或多个最小犬区段。
图9A展示了用于犬IL4R表位作图分析的犬/人IL4R ECD杂合多肽(在以上实施例11的表位作图中使用相同的杂合构建体)。图9B总结了用M3、M8和M9抗体探测犬IL4R ECD、人IL4R ECD和不同犬/人IL4R ECD杂合多肽的蛋白质印迹分析。表中的NR表示在相应的蛋白质印迹中抗体与杂合IL4R ECD无反应，表明被人IL4R序列替代的犬IL4R序列对于抗体结合(表位)是重要的。
确定了M3结合具有序列DFMGSENHTCVPEN(SEQ ID NO:354)的表位。确定了M8与具有序列GSVKVLHEPSCFSDYISTSVCQWKMDHPTNCSA(SEQ ID NO:355)的第一表位和具有序列REDSVCVCSMPI(SEQ ID NO:356)的第二表位结合。确定了M9与具有序列REDSVCVCSMPIDDAVEADV(SEQ ID NO:357)的表位结合。

Claims (149)

1.一种与犬IL4R或猫IL4R结合的分离的抗体，其中所述抗体与包含LX10FMGSENX11T(SEQID NO:85)的氨基酸序列的表位结合，其中X10是D或N，并且X11是H或R。
2.一种与犬IL4R或猫IL4R结合的分离的抗体，其中所述抗体与包含RLSYQLX10FMGSENX11TCVPEN(SEQ ID NO:86)的氨基酸序列的表位结合，其中X10是D或N，并且X11是H或R。
3.根据权利要求2所述的分离的抗体，其中所述抗体与包含LX10FMGSENX11T(SEQ ID NO:85)的氨基酸序列的表位结合，其中X10是D或N，并且X11是H或R。
4.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与包含SEQ ID NO:88或SEQ ID NO:91的氨基酸序列的表位结合。
5.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与包含SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:92的氨基酸序列的表位结合。
6.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与包含SMX12X13DDX14VEADVYQLX15LWAGX16Q(SEQ ID NO:87)的氨基酸序列的表位结合，其中X12是P或L，X13是I或M，X14是A或F，X15是D或H，并且X16是Q或T。
7.一种与犬IL4R或猫IL4R结合的分离的抗体，其中所述抗体与包含SMX12X13DDX14VEADVYQLX15LWAGX16Q(SEQ ID NO:87)的氨基酸序列的表位结合，其中X12是P或L，X13是I或M，X14是A或F，X15是D或H，并且X16是Q或T。
8.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与包含SEQ ID NO:90或SEQ ID NO:93的氨基酸序列的表位结合。
9.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与犬IL4R或猫IL4R结合，如通过生物层干涉法所测量的，解离常数(Kd)为小于5x10-6M、小于1x10-6M、小于5x10- 7M、小于1x10-7M、小于5x10-8M、小于1x10-8M、小于5x10-9M、小于1x10-9M、小于5x10-10M、小于1x10-10M、小于5x10-11M、小于1x10-11M、小于5x10-12M或小于1x10-12M。
10.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中如通过免疫印迹分析或生物层干涉法所确定的，所述抗体与犬IL4R或猫IL4R结合。
11.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中如通过生物层干涉法所测量的，所述抗体减少犬和/或猫IL4多肽和/或犬和/或猫IL13多肽与犬IL4R和/或猫IL4R的结合。
12.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与单克隆克隆B或克隆I抗体竞争结合至犬IL4R或猫IL4R。
13.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
14.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是犬、犬源化、猫、猫源化或嵌合抗体。
15.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是包含一个或多个鼠可变重链框架区或一个或多个鼠可变轻链框架区的嵌合抗体。
16.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)CDR-H1序列，其与GYTFTSYVMH(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-H2序列，其与以下氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性：YINPX1NDGTFYNGX2X3X4G(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列，其中X1是K或A，X2是K或A，X3是F或V，并且X4是K或Q，或YINPX1NDGT(SEQ ID NO:268)的氨基酸序列，其中X1是K或A；和
c)CDR-H3序列，其与FX5YGX6AY(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性，其中X5是N或Y，并且X6是I或F。
17.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)CDR-H1序列，其与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:269、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:271或SEQ ID NO:272的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:31的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
18.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；
b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:269、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:271或SEQID NO:272的氨基酸序列；和
c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
19.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)CDR-L1序列，其与RASQEISGYLS(SEQ ID NO:4)的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与AASX7X8DX9(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性，其中X7是T或N，X8是R或L，并且X9是S或T；和
c)CDR-L3序列，其与VQYASYPWT(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
20.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:37的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
21.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；
b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:37的氨基酸序列；和
c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
22.根据权利要求16至21中任一项所述的抗体，其还包含以下中的一项或多项：(a)SEQID NO:10或SEQ ID NO:32的可变区重链框架1(HC-FR1)序列；(b)SEQ ID NO:11或SEQ IDNO:33的HC-FR2序列；(c)SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:270、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:273的HC-FR3序列；(d)SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:35的HC-FR4序列；(e)SEQ ID NO:17或SEQ IDNO:39的可变区轻链框架1(LC-FR1)序列；(f)SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:40的LC-FR2序列；(g)SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:41的LC-FR3序列；或(h)SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:42的LC-FR4序列。
23.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
a(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:43的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列；或
b(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64或SEQ ID NO:274的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:275的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列；或
c(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:69的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:70的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列。
24.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:69的氨基酸序列。
25.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:275、SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:70的氨基酸序列。
26.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
a)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:43的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:44的氨基酸序列；
b)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64或SEQ ID NO:274的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66或SEQ ID NO:275的氨基酸序列；或
c)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:69的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:70的氨基酸序列。
27.一种与犬IL4R或猫IL4R结合的分离的抗体，其中所述抗体与包含SEQ ID NO:354的氨基酸序列的表位结合。
28.根据权利要求27所述的分离的抗体，其中所述抗体与犬IL4R或猫IL4R结合，如通过生物层干涉法所测量的，解离常数(Kd)为小于5x10-6M、小于1x10-6M、小于5x10-7M、小于1x10-7M、小于5x10-8M、小于1x10-8M、小于5x10-9M、小于1x10-9M、小于5x10-10M、小于1x10-10M、小于5x10-11M、小于1x10-11M、小于5x10-12M或小于1x10-12M。
29.根据权利要求27或权利要求28所述的抗体，其中如通过免疫印迹分析或生物层干涉法所确定的，所述抗体与犬IL4R或猫IL4R结合。
30.根据权利要求27至29中任一项所述的分离的抗体，其中如通过生物层干涉法所测量的，所述抗体减少犬和/或猫IL4多肽和/或犬和/或猫IL13多肽与犬IL4R和/或猫IL4R的结合。
31.根据权利要求27至30中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与单克隆M3抗体竞争结合至犬IL4R或猫IL4R。
32.根据权利要求27至31中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
33.根据权利要求27至32中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是犬、犬源化、猫、猫源化或嵌合抗体。
34.根据权利要求27至33中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是包含一个或多个鼠可变重链框架区或一个或多个鼠可变轻链框架区的嵌合抗体。
35.根据权利要求27至34中任一项所述的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)CDR-H1序列，其与SEQ ID NO:278的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:279的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:280的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
36.根据权利要求27至35中任一项所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:285的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:286的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:287的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
37.根据权利要求27至36中任一项所述的分离的抗体，其还包含以下中的一项或多项：(a)SEQ ID NO:281的可变区重链框架1(HC-FR1)序列；(b)SEQ ID NO:282的HC-FR2序列；(c)SEQ ID NO:283的HC-FR3序列；(d)SEQ ID NO:284的HC-FR4序列；(e)SEQ ID NO:288的可变区轻链框架1(LC-FR1)序列；(f)SEQ ID NO:289的LC-FR2序列；(g)SEQ ID NO:290的LC-FR3序列；或(h)SEQ ID NO:291的LC-FR4序列。
38.根据权利要求27至37中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：
a(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:292的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:293的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列；或
b(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:342或SEQ ID NO:343的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ IDNO:344的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列。
39.根据权利要求27至38中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:292、SEQ ID NO:342或SEQ ID NO:343的氨基酸序列。
40.根据权利要求27至39中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:293或SEQ ID NO:344的氨基酸序列。
41.根据权利要求27至40中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：
a)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:292的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:293的氨基酸序列；和/或
b)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:342或SEQ ID NO:343的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:344的氨基酸序列。
42.一种分离的抗体，其包含：
a)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:292的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:293的氨基酸序列；或
b)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:342或SEQ ID NO:343的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:344的氨基酸序列。
43.一种与犬IL4R或猫IL4R结合的分离的抗体，其中所述抗体与包含SEQ ID NO:355的氨基酸序列的表位和/或包含SEQ ID NO:356的氨基酸序列的表位结合。
44.根据权利要求43所述的分离的抗体，其中所述抗体与犬IL4R或猫IL4R结合，如通过生物层干涉法所测量的，解离常数(Kd)为小于5x10-6M、小于1x10-6M、小于5x10-7M、小于1x10-7M、小于5x10-8M、小于1x10-8M、小于5x10-9M、小于1x10-9M、小于5x10-10M、小于1x10-10M、小于5x10-11M、小于1x10-11M、小于5x10-12M或小于1x10-12M。
45.根据权利要求43或权利要求44所述的抗体，其中如通过免疫印迹分析或生物层干涉法所确定的，所述抗体与犬IL4R或猫IL4R结合。
46.根据权利要求43至45中任一项所述的分离的抗体，其中如通过生物层干涉法所测量的，所述抗体减少犬和/或猫IL4多肽和/或犬和/或猫IL13多肽与犬IL4R和/或猫IL4R的结合。
47.根据权利要求43至46中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与单克隆M8抗体竞争结合至犬IL4R或猫IL4R。
48.根据权利要求43至47中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
49.根据权利要求43至48中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是犬、犬源化、猫、猫源化或嵌合抗体。
50.根据权利要求43至49中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是包含一个或多个鼠可变重链框架区或一个或多个鼠可变轻链框架区的嵌合抗体。
51.根据权利要求43至50中任一项所述的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)CDR-H1序列，其与SEQ ID NO:310的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:311的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:312的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
52.根据权利要求43至51中任一项所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:317的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:318的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:319的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
53.根据权利要求43至52中任一项所述的分离的抗体，其还包含以下中的一项或多项：(a)SEQ ID NO:313的可变区重链框架1(HC-FR1)序列；(b)SEQ ID NO:314的HC-FR2序列；(c)SEQ ID NO:315的HC-FR3序列；(d)SEQ ID NO:316的HC-FR4序列；(e)SEQ ID NO:320的可变区轻链框架1(LC-FR1)序列；(f)SEQ ID NO:321的LC-FR2序列；(g)SEQ ID NO:322的LC-FR3序列；或(h)SEQ ID NO:323的LC-FR4序列。
54.根据权利要求43至53中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：
(a)可变重链序列，其与SEQ ID NO:324的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
(b)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:325的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或
(c)如(a)中的可变重链序列和如(b)中的可变轻链序列。
55.根据权利要求43至54中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:324的氨基酸序列。
56.根据权利要求43至55中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:325的氨基酸序列。
57.根据权利要求43至56中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:324的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:325的氨基酸序列。
58.一种分离的抗体，其包含：可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:324的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:325的氨基酸序列。
59.一种与犬IL4R结合的分离的抗体，其中所述抗体与包含SEQ ID NO:357的氨基酸序列的表位结合。
60.根据权利要求59所述的分离的抗体，其中所述抗体与犬IL4R结合，如通过生物层干涉法所测量的，解离常数(Kd)为小于5x10-6M、小于1x10-6M、小于5x10-7M、小于1x10-7M、小于5x10-8M、小于1x10-8M、小于5x10-9M、小于1x10-9M、小于5x10-10M、小于1x10-10M、小于5x10-11M、小于1x10-11M、小于5x10-12M或小于1x10-12M。
61.根据权利要求58或权利要求59所述的抗体，其中如通过免疫印迹分析或生物层干涉法所确定的，所述抗体与犬IL4R结合。
62.根据权利要求58至61中任一项所述的分离的抗体，其中如通过生物层干涉法所测量的，所述抗体减少犬IL4多肽和/或犬IL13多肽与犬IL4R的结合。
63.根据权利要求58至62中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与单克隆M9抗体竞争结合至犬IL4R。
64.根据权利要求58至63中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
65.根据权利要求58至64中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是犬、犬源化、猫、猫源化或嵌合抗体。
66.根据权利要求58至65中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是包含一个或多个鼠可变重链框架区或一个或多个鼠可变轻链框架区的嵌合抗体。
67.根据权利要求58至66中任一项所述的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)CDR-H1序列，其与SEQ ID NO:326的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:327的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:328的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
68.根据权利要求58至67中任一项所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:333的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:334的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:335的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
69.根据权利要求58至68中任一项所述的分离的抗体，其还包含以下中的一项或多项：(a)SEQ ID NO:329的可变区重链框架1(HC-FR1)序列；(b)SEQ ID NO:330的HC-FR2序列；(c)SEQ ID NO:331的HC-FR3序列；(d)SEQ ID NO:332的HC-FR4序列；(e)SEQ ID NO:336的可变区轻链框架1(LC-FR1)序列；(f)SEQ ID NO:337的LC-FR2序列；(g)SEQ ID NO:338的LC-FR3序列；或(h)SEQ ID NO:339的LC-FR4序列。
70.根据权利要求58至69中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：
a(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:340的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:341的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列；或
b(i)可变重链序列，其与SEQ ID NO:345或SEQ ID NO:346的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；(ii)可变轻链序列，其与SEQ IDNO:347的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或(iii)如(i)中的可变重链序列和如(ii)中的可变轻链序列。
71.根据权利要求58至70中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:340、SEQ ID NO:345或SEQ ID NO:346的氨基酸序列。
72.根据权利要求58至71中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:341或SEQ ID NO:347的氨基酸序列。
73.根据权利要求58至72中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：
a)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:340的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:341的氨基酸序列；和/或
b)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:345或SEQ ID NO:346的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:347的氨基酸序列。
74.一种分离的抗体，其包含：
a)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:340的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:341的氨基酸序列；或
b)可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:345或SEQ ID NO:346的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:347的氨基酸序列。
75.一种与犬IL4R结合的分离的抗体，其包含重链，所述重链包含：
a)CDR-H1序列，其与SEQ ID NO:294的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-H2序列，其与SEQ ID NO:295的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-H3序列，其与SEQ ID NO:296的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
76.一种与犬IL4R结合的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:301的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:302的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:303的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
77.根据权利要求75所述的分离的抗体，其包含轻链，所述轻链包含：
a)CDR-L1序列，其与SEQ ID NO:301的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
b)CDR-L2序列，其与SEQ ID NO:302的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；和
c)CDR-L3序列，其与SEQ ID NO:303的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
78.根据权利要求75至77中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与犬IL4R结合，如通过生物层干涉法所测量的，解离常数(Kd)为小于5x10-6M、小于1x10-6M、小于5x10-7M、小于1x10-7M、小于5x10-8M、小于1x10-8M、小于5x10-9M、小于1x10-9M、小于5x10-10M、小于1x10-10M、小于5x10-11M、小于1x10-11M、小于5x10-12M或小于1x10-12M。
79.根据权利要求75至78中任一项所述的抗体，其中如通过免疫印迹分析或生物层干涉法所确定的，所述抗体与犬IL4R结合。
80.根据权利要求75至79中任一项所述的分离的抗体，其中如通过生物层干涉法所测量的，所述抗体减少犬IL4多肽和/或犬IL13多肽与犬IL4R的结合。
81.根据权利要求75至80中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与单克隆M5抗体竞争结合至犬IL4R。
82.根据权利要求75至81中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
83.根据权利要求75至82中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是犬、犬源化、猫、猫源化或嵌合抗体。
84.根据权利要求75至83中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是包含一个或多个鼠可变重链框架区或一个或多个鼠可变轻链框架区的嵌合抗体。
85.根据权利要求75至84中任一项所述的分离的抗体，其还包含以下中的一项或多项：(a)SEQ ID NO:297的可变区重链框架1(HC-FR1)序列；(b)SEQ ID NO:298的HC-FR2序列；(c)SEQ ID NO:299的HC-FR3序列；(d)SEQ ID NO:300的HC-FR4序列；(e)SEQ ID NO:304的可变区轻链框架1(LC-FR1)序列；(f)SEQ ID NO:305的LC-FR2序列；(g)SEQ ID NO:306的LC-FR3序列；或(h)SEQ ID NO:307的LC-FR4序列。
86.根据权利要求75至85中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：
(a)可变重链序列，其与SEQ ID NO:308的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；
(b)可变轻链序列，其与SEQ ID NO:309的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性；或
(c)如(a)中的可变重链序列和如(b)中的可变轻链序列。
87.根据权利要求75至86中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:308的氨基酸序列。
88.根据权利要求75至87中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:309的氨基酸序列。
89.根据权利要求75至88中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含：可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:308的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:309的氨基酸序列。
90.一种分离的抗体，其包含：可变重链序列，所述可变重链序列包含SEQ ID NO:308的氨基酸序列，和可变轻链序列，所述可变轻链序列包含SEQ ID NO:309的氨基酸序列。
91.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含野生型或变体犬或猫IgG Fc多肽。
92.根据权利要求91所述的抗体，其中所述IgG Fc多肽是野生型或变体犬IgG-A Fc多肽；野生型或变体犬IgG-B Fc多肽；野生型或变体IgG-C Fc多肽；野生型或变体IgG-D Fc多肽；野生型或变体猫IgG1a Fc多肽；野生型或变体猫IgG1b Fc多肽；或野生型或变体猫IgG2Fc多肽。
93.根据权利要求91或权利要求92所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽相对于野生型IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgGFc多肽具有增加的对蛋白质A的结合亲和力；相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对C1q的结合亲和力；和/或相对于所述野生型IgG Fc多肽具有降低的对CD16的结合亲和力。
94.根据权利要求91至93中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽相对于野生型IgG Fc多肽的对铰链区包含至少一个氨基酸修饰，其中如在还原和/或非还原条件下通过SDS-PAGE分析所确定的，所述变体IgG Fc多肽相对于所述野生型IgG Fc多肽具有增加的重组产生和/或增加的铰链二硫化物形成。
95.根据权利要求91至94中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:162的位置21、23、25、80、205和/或207的位置处的至少一个氨基酸取代；
b)在对应于SEQ ID NO:163的位置5、38、39、94、97和/或98的位置处的至少一个氨基酸取代；
c)在对应于SEQ ID NO:165的位置5、21、23、24、38、39、93、97和/或98的位置处的至少一个氨基酸取代；
d)在对应于SEQ ID NO:167的位置21、23、25、80和/或207的位置处的至少一个氨基酸取代；
e)在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置16和/或198的位置处的至少一个氨基酸取代；和/或
f)在对应于SEQ ID NO:207的位置14和/或16的位置处的至少一个氨基酸取代。
96.根据权利要求91至95中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:162的位置21、23、25、80、205和/或207处的至少一个氨基酸取代；
b)在SEQ ID NO:163的位置5、38、39、94、97和/或98处的至少一个氨基酸取代；
c)在SEQ ID NO:164的位置5、21、23、24、38、39、93、97和/或98处的至少一个氨基酸取代；
d)在SEQ ID NO:165的位置21、23、25、80和/或207处的至少一个氨基酸取代；
e)在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置16和/或198处的至少一个氨基酸取代；和/或
f)在SEQ ID NO:207的位置14和/或16处的至少一个氨基酸取代。
97.根据权利要求91至96中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:162的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:162的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:162的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:162的位置80的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:162的位置205的位置处的丙氨酸、和/或在对应于SEQ ID NO:162的位置207的位置处的组氨酸；
b)在对应于SEQ ID NO:163的位置5的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:163的位置38的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:163的位置39的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:163的位置93的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:163的位置97的位置处的异亮氨酸、和/或在对应于SEQ ID NO:163的位置98的位置处的甘氨酸；
c)在对应于SEQ ID NO:164的位置5的位置处的脯氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置24的位置处的异亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置38的位置处的甘氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置39的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置93的位置处的精氨酸、在对应于SEQ ID NO:164的位置97的位置处的异亮氨酸、和/或在对应于SEQ ID NO:164的位置98的位置处的甘氨酸；
d)在对应于SEQ ID NO:165的位置21的位置处的苏氨酸、在对应于SEQ ID NO:165的位置23的位置处的亮氨酸、在对应于SEQ ID NO:165的位置25的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:165的位置80的位置处的甘氨酸、和/或在对应于SEQ ID NO:165的位置207的位置处的组氨酸；
e)在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置16的位置处的脯氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQID NO:206的位置198的位置处的丙氨酸；和/或
f)在对应于SEQ ID NO:207的位置14的位置处的半胱氨酸和/或在对应于SEQ ID NO:207的位置16的位置处的脯氨酸。
98.根据权利要求91至97中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:162的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:162的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:162的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:162的位置80处的甘氨酸、在SEQ IDNO:162的位置205处的丙氨酸、和/或在SEQ ID NO:162的位置207处的组氨酸；
b)在SEQ ID NO:163的位置5处的脯氨酸、在SEQ ID NO:163的位置38处的甘氨酸、在SEQ ID NO:163的位置39处的精氨酸、在SEQ ID NO:163的位置93处的精氨酸、在SEQ IDNO:163的位置97处的异亮氨酸、和/或在SEQ ID NO:163的位置98处的甘氨酸；
c)在SEQ ID NO:164的位置5处的脯氨酸、在SEQ ID NO:164的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:164的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:164的位置24处的异亮氨酸、在SEQ IDNO:164的位置38处的甘氨酸、在SEQ ID NO:164的位置39处的精氨酸、在SEQ ID NO:164的位置93处的精氨酸、在SEQ ID NO:164的位置97处的异亮氨酸、和/或在SEQ ID NO:164的位置98处的甘氨酸；
d)在SEQ ID NO:165的位置21处的苏氨酸、在SEQ ID NO:165的位置23处的亮氨酸、在SEQ ID NO:165的位置25处的丙氨酸、在SEQ ID NO:165的位置80处的甘氨酸、和/或在SEQID NO:165的位置207处的组氨酸；
e)在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置16处的脯氨酸和/或在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205或SEQ ID NO:206的位置198处的丙氨酸；和/或
f)在SEQ ID NO:207的位置14处的半胱氨酸和/或在SEQ ID NO:207的位置16处的脯氨酸。
99.根据权利要求91至98中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，其相对于野生型犬或猫IgG CH1区包含至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ IDNO:237的位置24和/或位置30的位置处的至少一个氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:238的位置24和/或位置29的位置处的至少一个氨基酸取代。
100.一种抗体，所述抗体包含变体IgG Fc多肽，所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，其相对于野生型犬或猫IgG CH1区包含至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ IDNO:237的位置24和/或位置30的位置处的至少一个氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:238的位置24和/或位置29的位置处的至少一个氨基酸取代。
101.根据权利要求91至100中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，其相对于野生型犬或猫IgG CH1区包含至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ ID NO:237的位置24和/或位置30处的至少一个氨基酸取代；或
b)在SEQ ID NO:238的位置24和/或位置29处的至少一个氨基酸取代。
102.根据权利要求91至101中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，其相对于野生型犬或猫IgG CH1区包含至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在对应于SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ IDNO:237的位置24的位置处的亮氨酸和/或在对应于位置30的位置处的天冬酰胺；或
b)在对应于SEQ ID NO:238的位置24的位置处的亮氨酸和/或在对应于位置29的位置处的天冬酰胺。
103.根据权利要求91至102中任一项所述的抗体，其中所述变体IgG Fc多肽包含CH1区，其相对于野生型犬或猫IgG CH1区包含至少一个氨基酸修饰，其中所述变体IgG Fc多肽包含：
a)在SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:229、SEQ ID NO:230或SEQ ID NO:237的位置24处的亮氨酸和/或位置30处的天冬酰胺；或
b)在SEQ ID NO:238的位置24处的亮氨酸和/或位置29处的天冬酰胺。
104.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含野生型或变体犬或猫轻链恒定区。
105.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含野生型或变体犬或猫轻链κ恒定区。
106.根据权利要求104或权利要求105所述的抗体，其中所述变体轻链恒定区相对于野生型犬或猫轻链κ恒定区包含至少一个氨基酸修饰，所述氨基酸修饰包含：
a)在对应于SEQ ID NO:235的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:241的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代。
107.一种抗体，所述抗体包含变体轻链恒定区，所述变体轻链恒定区相对于野生型犬或猫轻链κ恒定区包含至少一个氨基酸修饰，所述氨基酸修饰包含：
a)在对应于SEQ ID NO:235的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代；或
b)在对应于SEQ ID NO:241的位置11和/或位置22的位置处的至少一个氨基酸取代。
108.根据权利要求104至107中任一项所述的抗体，其中所述变体轻链恒定区相对于野生型猫或犬轻链κ恒定区包含至少一个氨基酸修饰，所述氨基酸修饰包含：
a)在对应于SEQ ID NO:235的位置11的位置处的丙氨酸和/或在对应于位置22的位置处的精氨酸；或
b)在对应于SEQ ID NO:241的位置11的位置处的丙氨酸和/或在对应于位置22的位置处的精氨酸。
109.根据权利要求104至108中任一项所述的抗体，其中所述变体轻链恒定区相对于野生型猫或犬轻链κ恒定区包含至少一个氨基酸修饰，所述氨基酸修饰包含：
a)在SEQ ID NO:235的位置11处的丙氨酸和/或位置22处的精氨酸；或
b)在SEQ ID NO:241的位置11处的丙氨酸和/或位置22处的精氨酸。
110.根据权利要求104至109中任一项所述的抗体，其中所述轻链恒定区包含SEQ IDNO:235、236、241和/或242的氨基酸序列。
111.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体是双特异性抗体。
112.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体是双特异性抗体，所述双特异性抗体包含：
i)第一变体犬IgG Fc多肽，其相对于第一野生型犬IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，和第二变体犬IgG Fc多肽，其相对于第二野生型犬IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，其中：
a)所述第一变体犬IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138、SEQ ID NO:163的位置137、SEQ ID NO:165的位置137或SEQ ID NO:167的位置138的位置处的氨基酸取代，和/或
b)所述第二变体犬IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138和/或位置140、SEQ ID NO:163的位置137和/或位置139、SEQ ID NO:165的位置137和/或位置139或SEQ IDNO:167的位置138和/或位置140的位置处的氨基酸取代；或
ii)第一变体猫IgG Fc多肽，其相对于第一野生型猫IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，和第二变体猫IgG Fc多肽，其相对于第二野生型猫IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，其中：
a)所述第一变体猫IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ IDNO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154的位置处的氨基酸取代，和/或
b)所述第二变体猫IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ IDNO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154和/或位置156的位置处的氨基酸取代。
113.一种抗体或双特异性抗体，其包含：
i)第一变体犬IgG Fc多肽，其相对于第一野生型犬IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，和第二变体犬IgG Fc多肽，其相对于第二野生型犬IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，其中：
a)所述第一变体犬IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138、SEQ ID NO:163的位置137、SEQ ID NO:165的位置137或SEQ ID NO:167的位置138的位置处的氨基酸取代，和/或
b)所述第二变体犬IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138和/或位置140、SEQ ID NO:163的位置137和/或位置139、SEQ ID NO:165的位置137和/或位置139或SEQ IDNO:167的位置138和/或位置140的位置处的氨基酸取代；
ii)第一变体猫IgG Fc多肽，其相对于第一野生型猫IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，和第二变体猫IgG Fc多肽，其相对于第二野生型猫IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，其中：
a)所述第一变体猫IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ IDNO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154的位置处的氨基酸取代，和/或
b)所述第二变体猫IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ IDNO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154和/或位置156的位置处的氨基酸取代；或
iii)第一变体马IgG Fc多肽，其相对于第一野生型马IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，和第二变体马IgG Fc多肽，其相对于第二野生型马IgG Fc多肽包含至少一个氨基酸修饰，其中：
a)所述第一变体马IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ IDNO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130的位置处的氨基酸取代，和/或
b)所述第二变体马IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ IDNO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130和/或位置132的位置处的氨基酸取代。
114.根据权利要求112或权利要求113所述的抗体，其中：
a)所述第一变体犬IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138、SEQ ID NO:163的位置137、SEQ ID NO:165的位置137或SEQ ID NO:167的位置138的位置处的色氨酸；
b)所述第二变体犬IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:162的位置138的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置140的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:163的位置137的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置139的位置处的丙氨酸、在对应于SEQ ID NO:165的位置137的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置139的位置处的丙氨酸、或在对应于SEQ ID NO:167的位置138的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置140的位置处的丙氨酸；
c)所述第一变体猫IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ IDNO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154的位置处的色氨酸；
d)所述第二变体猫IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ IDNO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置156的位置处的丙氨酸；
e)所述第一变体马IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ IDNO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130的位置处的色氨酸；和/或
f)所述第二变体马IgG Fc多肽包含在对应于SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ IDNO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130的位置处的丝氨酸和/或在对应于位置132的位置处的丙氨酸。
115.根据权利要求112至114中任一项所述的抗体，其中：
a)所述第一变体犬IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:162的位置138、SEQ ID NO:163的位置137、SEQ ID NO:165的位置137或SEQ ID NO:167的位置138处的氨基酸取代；
b)所述第二变体犬IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:162的位置138和/或位置140处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:163的位置137和/或位置139处的氨基酸取代、在SEQ ID NO:165的位置137和/或位置139处的氨基酸取代，或在SEQ ID NO:167的位置138和/或位置140处的氨基酸取代；
c)所述第一变体猫IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154处的氨基酸取代；
d)所述第二变体猫IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154和/或位置156处的氨基酸取代；
e)所述第一变体马IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130处的氨基酸取代；和/或
f)所述第二变体马IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130和/或位置132处的氨基酸取代。
116.根据权利要求112至115中任一项所述的抗体，其中：
a)所述第一变体犬IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:162的位置138、SEQ ID NO:163的位置137、SEQ ID NO:165的位置137或SEQ ID NO:167的位置138处的色氨酸；
b)所述第二变体犬IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:162的位置138处的丝氨酸和/或位置140处的丙氨酸、在SEQ ID NO:163的位置137处的丝氨酸和/或位置139处的丙氨酸、在SEQID NO:165的位置137处的丝氨酸和/或位置139处的丙氨酸、或在SEQ ID NO:167的位置138处的丝氨酸和/或位置140处的丙氨酸；
c)所述第一变体猫IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154处的色氨酸；
d)所述第二变体猫IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:206或SEQ ID NO:207的位置154处的丝氨酸和/或位置156处的丙氨酸；
e)所述第一变体马IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130处的色氨酸；和/或
f)所述第二变体马IgG Fc多肽包含在SEQ ID NO:254、SEQ ID NO:255、SEQ ID NO:256、SEQ ID NO:257、SEQ ID NO:258、SEQ ID NO:259或SEQ ID NO:260的位置130处的丝氨酸和/或位置132处的丙氨酸。
117.根据权利要求112至116中任一项所述的抗体，其中所述第一野生型IgG Fc多肽和所述第二野生型IgG Fc多肽来自相同IgG亚型。
118.根据权利要求112至117中任一项所述的抗体，其中所述第一野生型IgG Fc多肽和所述第二野生型IgG Fc多肽来自不同IgG亚型。
119.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含IgG Fc多肽，所述IgGFc多肽包含SEQ ID NO:162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、237、238、239、240、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266和/或267的氨基酸序列。
120.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
a(i)SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:47的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:26或SEQ IDNO:48的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列；
b(i)SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:55的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:52或SEQ IDNO:56的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列；
c(i)SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76或SEQ ID NO:276的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78或SEQID NO:277的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列；
d(i)SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:82或SEQ ID NO:83的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:81或SEQ ID NO:84的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列；
e(i)SEQ ID NO:243的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:244的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列；
f(i)SEQ ID NO:348或SEQ ID NO:349的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:350的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链；或
g(i)SEQ ID NO:351或SEQ ID NO:352的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:253的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列。
121.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体是双特异性抗体，其结合IL4R和选自以下的一种或多种抗原：IL17、IL31、TNFα、CD20、CD19、CD25、IL4、IL13、IL23、IgE、CD11α、IL6R、α4-整合素、IL12、IL1β或BlyS。
122.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含(i)SEQ ID NO:245的重链氨基酸序列；(ii)SEQ ID NO:246的轻链氨基酸序列；或(iii)如(i)中的重链氨基酸序列和如(ii)中的轻链序列。
123.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体是抗体片段，诸如Fv、scFv、Fab、Fab'、F(ab')2或Fab'-SH片段。
124.一种分离的核酸，其编码根据前述权利要求中任一项所述的抗体。
125.一种宿主细胞，其包含根据权利要求124所述的核酸。
126.一种宿主细胞，其表达根据权利要求1至123中任一项所述的抗体。
127.一种生产抗体的方法，其包括培养根据权利要求125或权利要求126所述的宿主细胞并且分离所述抗体。
128.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至123中任一项所述的抗体和药学上可接受的载体。
129.一种治疗患有IL4/IL13诱导的病症的伴侣动物物种的方法，所述方法包括向所述伴侣动物物种施用治疗有效量的根据权利要求1至123中任一项所述的抗体或根据权利要求128所述的药物组合物。
130.根据权利要求129所述的方法，其中所述伴侣动物物种是犬、猫或马。
131.根据权利要求129或权利要求130所述的方法，其中所述IL4/IL13诱导的病症是瘙痒性病症或过敏性病症。
132.根据权利要求129至131中任一项所述的方法，其中所述IL4/IL13诱导的病症选自特应性皮炎、过敏性皮炎、瘙痒、哮喘、银屑病、硬皮病和湿疹。
133.根据权利要求129至132中任一项所述的方法，其中所述抗体或所述药物组合物是肠胃外施用的。
134.根据权利要求129至133中任一项所述的方法，其中所述抗体或所述药物组合物是通过肌内途径、腹膜内途径、脑脊髓内途径、皮下途径、动脉内途径、滑膜内途径、鞘内途径或吸入途径施用的。
135.根据权利要求129至134中任一项所述的方法，其中所述方法包括与所述抗体或所述药物组合物组合施用Jak抑制剂、PI3K抑制剂、ERK抑制剂。
136.根据权利要求129至135中任一项所述的方法，其中所述方法包括与所述抗体或所述药物组合物组合施用选自以下的一种或多种抗体：抗IL17抗体、抗IL31抗体、抗TNFα抗体、抗CD20抗体、抗CD19抗体、抗CD25抗体、抗IL4抗体、抗IL13抗体、抗IL23抗体、抗IgE抗体、抗CD11α抗体、抗IL6R抗体、抗α4-整合素抗体、抗IL12抗体、抗IL1β抗体和抗BlyS抗体。
137.一种降低细胞中IL4和/或IL13信号传导功能的方法，所述方法包括在允许根据权利要求1至123中任一项所述的抗体与细胞外IL4和/或IL13结合的条件下向所述细胞暴露所述抗体或根据权利要求64所述的药物组合物，从而降低IL4和/或IL13与IL4R的结合和/或降低所述细胞的IL4和/或IL13信号传导功能。
138.根据权利要求137所述的方法，其中将所述细胞离体暴露于所述抗体或所述药物组合物。
139.根据权利要求137所述的方法，其中将所述细胞在体内暴露于所述抗体或所述药物组合物。
140.根据权利要求137至139中任一项所述的方法，其中所述细胞是犬细胞、猫细胞、或马细胞。
141.根据权利要求137至140中任一项所述的方法，其中如通过STAT6磷酸化的减少所确定的，所述抗体降低所述细胞中的IL4和/或IL13信号传导功能。
142.根据权利要求137至141中任一项所述的方法，其中所述细胞是犬DH82细胞。
143.一种用于检测来自伴侣动物物种的样品中的IL4R的方法，所述方法包括在允许根据权利要求1至123中任一项所述的抗体与IL4R结合的条件下，使所述样品与所述抗体或根据权利要求64所述的药物组合物接触。
144.根据权利要求141所述的方法，其中所述样品是从犬、猫或马获得的生物样品。
145.一种筛选抑制IL4和/或IL13信号传导功能的分子的方法，所述方法包括将所述分子暴露于犬DH82细胞，并且检测STAT6磷酸化是否降低。
146.根据权利要求145所述的方法，其中所述分子包含抗IL4R抗体或IL4R的小分子拮抗剂。
147.根据权利要求145或权利要求146所述的方法，其中所述分子包含抗IL13R抗体或IL13R的小分子拮抗剂。
148.根据权利要求145至147中任一项所述的方法，其中所述分子包含抗IL4抗体或IL4的小分子拮抗剂。
149.根据权利要求145至148中任一项所述的方法，其中所述分子包含抗IL13抗体或IL13的小分子拮抗剂。
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