BR112021004689A2 - conjugados glp-1 liberáveis - Google Patents

Abstract

Apresente invenção refere-se a compostos de Fórmula (I), ou ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que D é um resíduo de um polipeptídeo de GLP ou um análogo do mesmo, que sofre hidrólise sob condições fisiológicas para liberar o polipeptídeo de GLP ou análogo do mesmo e que são úteis no tratamento de distúrbios que poderiam ser tratados de forma benéfica com o polipeptídeo GLP ou análogo do mesmo. (I)

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “CONJUGADOS GLP-1 LIBERÁVEIS”.

REIVINDICAÇÃO DE PRIORIDADE

[001] Este pedido reivindica a prioridade do Pedido de Patente Provisório U.S. 62 / 730.341, depositado em 12 de setembro de 2018, do Pedido de Patente Provisório U.S. 62 / 730.935, depositado em 13 de setembro de 2018, e do Pedido de Patente Provisório U.S. 62 /

771.972, depositado em 27 de novembro de 2018, todo o conteúdo do qual é incorporado por meio deste por referência.

CAMPO TÉCNICO

[002] A presente invenção refere-se a conjugados de um peptídeo semelhante ao glucagon (GLP), por exemplo, um polipeptídeo do peptídeo semelhante ao glucagon 1 (GLP-1) ou análogos dos mesmos (por exemplo, análogos do GLP-1) ligado direta ou indiretamente a um polímero alifático (por exemplo, polietileno glicol), em que o polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos pode ser liberado do conjugado in vivo. Esses conjugados são referidos neste documento como "conjugados de GLP-1 liberáveis". Este documento inclui ainda métodos e materiais para fazer e usar tais conjugados de GLP-1 liberáveis.

ANTECEDENTES

[003] A Organização Mundial da Saúde estimou que em 2014 mais de 400 milhões de adultos viviam com diabetes, em comparação com 108 milhões em 1980 (1). Noventa por cento dessas pessoas têm diabetes tipo 2. Isso não está apenas relacionado ao crescimento populacional, já que o diabetes padronizado por idade cresceu de 4,7% para 8,5% da população adulta. Muito disso está relacionado a ganhos de riqueza em países em desenvolvimento, incluindo China e Índia, gastos em dietas que causam diabetes (por exemplo, consumo de bebidas ricas em açúcar) que também levam ao aumento de peso e outros problemas médicos, como doenças cardiovasculares. As complicações cardiovasculares são a principal causa de morbidade e mortalidade nessas pessoas (2). Novos tratamentos para diabetes são necessários para combater esta doença e suas complicações.

[004] Em geral, o tratamento do diabetes e da insulina pode estar associado ao ganho de peso, enquanto os agonistas do receptor do peptídeo semelhante ao glucagon 1 (GLP-1R) estão frequentemente associados à perda de peso. Isso desencadeou um maior interesse no uso de agonistas de GLP-1R para tratamento de ganho de peso, bem como para diabetes. Pelo menos um agonista do GLP-1R (Liraglutida) foi aprovado para o tratamento de diabetes tipo 2 e obesidade. Quase um terço da população mundial (mais de 2 bilhões de pessoas) pode ser considerada obesa ou com sobrepeso significativo (7). Mais de 340 milhões de crianças e adolescentes (5-19 anos) estavam com sobrepeso ou obesidade em 2016 (7). Embora a obesidade possa frequentemente ser tratada com modificação da dieta, algumas condições agudas, com risco de rapidamente levar ao diabetes e doenças graves, podem se beneficiar do tratamento de suporte farmacêutico.

[005] As propriedades farmacocinéticas das proteínas podem ser controladas pela sua conjugação com certos polímeros, por exemplo, polietileno glicol (PEG) (Fee e Van Alstine, Chemical Engineering Science, 61:924-934 (2006)). Várias abordagens para PEGuilação de moléculas biologicamente ativas foram descritas. No entanto, em alguns casos, a presença do PEG (polímero hidrofílico) "bloqueia" a "área de superfície" significativa do conjugado e dificulta significativamente as propriedades do conjugado, como a solubilidade (Fee and Van Alstine, Bioconjugate Chemistry, 2004 (15), 1304-1313. Isso pode afetar negativamente e compensar qualquer aumento no tempo de vida da circulação, diminuição na proteólise inespecífica ou outras propriedades intensificadas resultantes da PEGuilação. Um exemplo em relação ao peptídeo semelhante ao glucagon 1 (GLP-1) é descrito em Lee et al., Bioconjugate Chem., 2006 (16), 377-382. Neste exemplo, os autores foram capazes de ligar covalentemente PEG 2000 a GLP-1 por meio de grupos amino reativos no terminal amino do polipeptídeo, onde ocorre a proteólise natural e a inibição de PEG de tal proteólise seria benéfica, e em vários resíduos de lisina. Os conjugados de GLP-1 modificado com PEG-lys tinham atividade insulinotrópica semelhante ao GLP-1 nativo, enquanto os conjugados de GLP-1 modificado com PEG-aminoterminal exibiam potência reduzida. Métodos para projetar, preparar e usar os conjugados liberáveis são fornecidos neste documento.

SUMÁRIO

[006] São fornecidos aqui conjugados de um peptídeo semelhante a glucagon (GLP), por exemplo, polipeptídeo de peptídeo semelhante a glucagon 1 (GLP-1) ou análogos dos mesmos (por exemplo, análogos de GLP-1) ligados indiretamente (por exemplo, embora uma porção de ligação) a um polímero alifático (por exemplo, polietileno glicol, PEG), em que o polipeptídeo GLP ou análogos dos mesmos podem ser liberados do conjugado in vivo. Em algumas modalidades, o polipeptídeo GLP ou análogo do mesmo é um polipeptídeo GLP-1 ou análogo do mesmo. Esses conjugados são referidos neste documento como "conjugados de GLP-1 liberáveis". Este documento inclui ainda métodos e materiais para fazer e usar tais conjugados de GLP liberáveis.

[007] Os conjugados liberáveis fornecidos neste documento são baseados na descoberta de que grupos fosfotriéster 3' de um ribonucleosídeo são instáveis na presença de porções hidroxila 2' vicinais livres e podem se decompor após ataque nucleofílico intramolecular de uma porção hidroxila 2' no grupo fosfotriéster 3'.

Acredita-se que a reação de decomposição subsequente é controlada pela geometria do nucleófilo de ataque e do átomo de fósforo, com a configuração vicinal sendo a espécie mais reativa e arabino- geometrias analógicas sendo praticamente não reativas. Os conjugados aqui fornecidos proporcionam vantajosamente a liberação de um polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos a partir de um PEG ou conjugado contendo polímero hidrofílico semelhante com pouco ou nenhum traço do ligante previamente existente e sistema de polímero no polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos. Um exemplo é mostrado no Esquema 1 da seguinte forma: Esquema 1 Polietilenoglicol Droga Polietilenoglicol Droga

[008] Neste exemplo, a clivagem do grupo E, a porção desencadeadora, resulta em um ataque nucleofílico de hidroxila liberado no átomo de fósforo, levando à formação de um fosfotriéster cíclico, meteto de quinona, dióxido de carbono (CO2) e o polipeptídeo GLP-1 ou análogo do mesmos. O fosfotriéster cíclico pode ser posteriormente hidrolisado em pH fisiológico, resultando na abertura do anel de 5 membros e na formação de ambos os fosfodiésteres isoméricos. O meteto de quinona também pode ser hidrolisado adicionalmente (por exemplo, reagindo com água) em pH fisiológico para formar 4-(hidroximetil)fenol.

[009] Tal sistema oferece várias vantagens sobre os conjugados alternativos para liberação de drogas. Por exemplo, o sistema é modificável e a clivagem pode ser alterada com base na identidade da porção desencadeadora "E", conforme exemplificado acima. Por exemplo, E pode conter um grupo lábil à enzima, uma funcionalidade lábil ao ácido ou um grupo funcional lábil ao pH (por exemplo, lábil à base). Além disso, como o grupo E não está ligado diretamente ao polímero (por exemplo, polietileno glicol), a necessidade de modificar extensivamente cada E para cada conjugado é evitada, pois a forma básica (não derivatizada) de qualquer porção E pode ser anexada aos conjugados conforme descrito aqui. Além disso, o uso de grupos desencadeadores não substituídos oferece o potencial para um melhor controle sobre a cinética de desintegração da pró-droga e liberação da molécula biologicamente ativa livre in vivo. Finalmente, os conjugados liberáveis fornecidos neste documento exibem liberdade sintética substancial. Por exemplo, olhando para o Esquema 1 acima, não é necessário ter a porção E introduzida seletivamente na hidroxila 2' junto com a introdução do fosfotriéster no hidroxila 3' da porção ligante. Na verdade, a colocação oposta se comporta de forma semelhante, tornando ambos os isômeros posicionais, sozinhos ou em combinação, adequados e úteis como conjugados liberáveis.

[0010] É fornecido aqui um composto de Fórmula (I)

Fração alifática (I),

[0011] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:

[0012] a porção alifática é selecionada de um polímero, RP, e um grupo selecionado de:

[0013] polímero-L-(CH2)m- e polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-;

[0014] RP é selecionado de C1-6 alquila opcionalmente substituída, C1-3 alquil-O-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m- opcionalmente substituído, e C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída;

[0015] L é um grupo de ligação;

[0016] m e p são, cada um, independentemente um número inteiro de 1 a 10;

[0017] D compreende um resíduo de um polipeptídeo GLP-1 ou um análogo do mesmo;

[0018] Z1 é selecionado de O, S e N(RN);

[0019] Z3 é selecionado de O e N(RN),ou Z3 está ausente;

[0020] A é O ou N, em que quando A é O então R3 está ausente;

[0021] RN é selecionado de H e C1-6 alquila opcionalmente substituída;

[0022] R3 é selecionado de H e C1-6 alquila, ou

[0023] R3 e R1, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcionalmente substituído; ou

[0024] R3 e R2, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, e o átomo de carbono ao qual R2 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído;

[0025] MA é um grupo autoimolativo com qualquer uma das fórmulas (a) - (i): (a); (b); (c);

O O x R7 O

C O C 8 y R (d); (e); (f); (g); (h); (i);

[0026] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3;

[0027] R1 e R2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substituída, C6-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;

[0028] ou R1e R2 são unidos com os átomos de carbono aos quais estão ligados para formar um anel C3-7 cicloalquila, um anel heterocíclico alifático opcionalmente substituído de 4 a 7 membros, uma C6-10 arila opcionalmente substituída ou uma heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;

[0029] ou R1 e R2 são unidos para formar um sistema de anel de ribose;

[0030] R7 e R8 são independentemente selecionados de H e C1-6 alquila;ila; e

[0031] E é uma porção clivável.

[0032] Também é fornecido neste documento um composto de

Fórmula (II): Fração alifática (II),

[0033] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:

[0034] a porção alifática é selecionada de um polímero, RP, e um grupo selecionado de:

[0035] polímero-L-(CH2)m- e polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-;

[0036] RP é selecionado de C1-6 alquila opcionalmente substituída, C1-3 alquil-O-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m- opcionalmente substituído, e C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída;

[0037] L é um grupo de ligação;

[0038] m e p são, cada um, independentemente um número inteiro de 1 a 10;

[0039] D compreende um resíduo de uma droga biologicamente ativa;

[0040] Z1 é selecionado de O, S e N(RN);

[0041] Z3 é selecionado de O e N(RN),ou Z3 está ausente;

[0042] Z4 é selecionado de O e S;

[0043] A é selecionado de O e N(RN);

[0044] RN é selecionado de H e C1-4 alquila opcionalmente substituída;

[0045] MA é um dirradical selecionado de:

[0046] um grupo autoimolativo com qualquer uma das fórmulas (a)-(i): (a); (b); (c);

O O x R7 O

C O C R8 y (d); (e); (f); (g); (h); (i); e

[0047] ii. um dirradical estável selecionado de qualquer uma das fórmulas (j)-(l): (j); (k); e (l),

[0048] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3;

[0049] R1 e R2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substituída, C6-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;

[0050] ou R1e R2 são unidos com os átomos de carbono aos quais estão ligados para formar um anel C3-7 cicloalquila, um anel heterocíclico alifático opcionalmente substituído de 4 a 7 membros, uma C6-10 arila opcionalmente substituída ou um heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;

[0051] ou R1 e R2 são unidos para formar um sistema de anel de ribose;

[0052] R7 e R8 são independentemente selecionados de H, C1-6 alquila, amino, (C1-6 alquil)amino, di-(C1-6 alquil)amino, acilamino, e um grupo amino protegido; e

[0053] E é uma porção clivável.

[0054] É ainda fornecida neste documento uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um transportador farmaceuticamente aceitável.

[0055] Esta divulgação também fornece um método de tratamento de uma doença ou condição em um indivíduo em necessidade do esmo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica como aqui descrito. Em algumas modalidades, a doença ou condição é selecionada de diabetes e obesidade.

[0056] A divulgação também fornece um método para fazer um composto de fórmula: Fração alifática ,

[0057] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que a porção alifática R1, R2, A, E, e D são aqui descritas.

[0058] A menos que definido em de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados têm o mesmo significado como comumente compreendido por um versado na técnica à qual o presente pedido pertence. Métodos e materiais são aqui descritos para uso no presente pedido; outros métodos e materiais adequados conhecidos na técnica também podem ser usados. Os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não pretendem ser limitativos. Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes, sequências, entradas de banco de dados e outras referências mencionadas neste documento estão incorporadas por referência em suas totalidades. Em caso de conflito, o presente relatório descritivo, incluindo definições, servirá de base para controle.

[0059] Outras características e vantagens do presente pedido serão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada e figuras, e das reivindicações.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0060] A FIGURA 1 é uma tabela que ilustra as isoformas de liraglutida observadas após digestão com a enzima proteolítica dipeptidila peptidase IV DPP-IV.

[0061] A FIGURA 2 mostra o espectro de liraglutida 2,67 μM e composto 7 após 15 h de digestão com 50 mU / mL DPP-IV em 10 mM Na2HPO4 pH 7.6 a 37°C.

[0062] A FIGURA 3 mostra dados exemplificativos dos traços de cromatograma de íons extraídos (EIC) de liraglutida de tamanho completo e fragmentos de liraglutida em liraglutida de amostra após 96 h de digestão com DPP-IV a 37°C e pH 7,4.

[0063] A FIGURA 4 é um gráfico linear da concentração de liraglutida mostrada em unidades arbitrárias para liraglutida e composto 7 após digestão com 50 mU/mL DPP-IV em 10 mM Na2HPO4 pH 7,4 a 37°C.

[0064] A FIGURA 5 é um gráfico linear da concentração de fragmentos de liraglutida mostrados em unidades arbitrárias para liraglutida após digestão com 50 mU/mL DPP-IV em 10 mM Na2HPO 4 pH 7,4 a 37°C.

[0065] A FIGURA 6 é um gráfico linear da concentração de fragmentos de liraglutida mostrada em unidades arbitrárias para o composto 7 após digestão com 50 mU/mL DPP-IV em 10 mM Na2HPO4 pH 7,4 a 37°C.

[0066] A FIGURA 7 é um gráfico linear da concentração da soma de todos os fragmentos de liraglutida observados mostrados em unidades arbitrárias para liraglutida e composto 7 após digestão com 50 mU/mL DPP-IV em 10 mM Na2HPO4 pH 7,4 at 37°C.

[0067] A FIGURA 8 fornece exemplos não limitativos de análogos de GLP-1.

[0068] A FIGURA 9 é um gráfico que representa a quantidade de atividade biológica de liraglutida detectada para as quantidades indicadas de liraglutida (SEQ ID NO: 3) e composto 7.

[0069] A FIGURA 10 é um gráfico que representa a quantidade de atividade biológica de liraglutida liberada do composto 7 por incubação em plasma de rato nos tempos indicados.

[0070] A FIGURA 11 contém gráficos que representam a quantidade (ng / mL) de liraglutida detectada em amostras agrupadas coletadas nos tempos indicados de ratos administrados com liraglutida (SEQ ID NO: 3; Grupo 1) ou composto 7 (Grupo 2).

[0071] A FIGURA 12 contém gráficos que representam a quantidade (nmol / L) de liraglutida ativa detectada em amostras coletadas nos tempos indicados de ratos administrados com liraglutida (SEQ ID NO: 3; Grupo 1) ou composto 7 (Grupo 2). A meia-vida de cada um é fornecida.

DESCRIÇÃO DETALHADA DEFINIÇÕES

[0072] O termo “Cn-m alquil” inclui grupos alquila de cadeia linear (por exemplo, metila, etila, propila, butila, pentila, hexila, heptila, octila, nonila, decila etc.) e grupos alquila de cadeia ramificada (por exemplo, isopropila, terc-butila, isobutila, etc.). Em certas modalidades, um alquila de cadeia linear ou de cadeia ramificada tem doze ou menos átomos de carbono em sua estrutura (por exemplo, C1-12 para cadeia linear; C3-12 para cadeia ramificada). Por exemplo, o termo C1-12 inclui grupos alquila contendo de 1 a 12 átomos de carbono.

[0073] Como utilizado neste documento, o termo “Cn-m alquileno”, usado sozinho ou em combinação com outros termos, refere-se a um grupo de ligação alquila divalente tendo n a m carbonos. Exemplos de grupos alquileno incluem, mas não estão limitados a, etan-1,1-di-ila, etan-1,2-di-ila, propan-1,1,-di-ila, propan-1,3-di-ila, propan-1,2-di-ila, butano-1,4-di-ila, butan-1,3- di-ilo, butan-1,2-di-ila, 2-metil-propan-1,3- di-ila e semelhantes. Em algumas modalidades, a porção alquileno contém 2 a 6, 2 a 4, 2 a 3, 1 a 6, 1 a 4 ou 1 a 2 átomos de carbono.

[0074] Como utilizado neste documento, “Cn-m alquenil” refere-se a um grupo alquila tendo uma ou mais ligações duplas carbono- carbono e tendo n a m carbonos. Exemplos de grupos alquenila incluem, mas não estão limitados a, etenila, n-propenila, isopropenila, n-butenila, sec-butenila, e semelhantes. Em algumas modalidades, a porção alquenila contém 2 a 6, 2 a 4 ou 2 a 3 átomos de carbono. O termo “Cn-m alquenileno” refere-se a grupos de ligação alquenila divalentes.

[0075] Como utilizado neste documento, o termo “Cn-m alcóxi”, usado sozinho ou em combinação com outros termos, refere-se a um grupo de fórmula -O-alquila, em que o grupo alquila tem n a m carbonos. Exemplos de grupos alcóxi incluem, mas não estão limitados a, metóxi,óxi, etóxi,óxi, propóxi (por exemplo, n-propóxi e isopropóxi), butóxi (por exemplo, n-butóxi e terc-butóxi), e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo alquila tem 1 a 6, 1 a 4 ou 1 a 3 átomos de carbono.

[0076] Conforme usado neste documento, o termo “Cn-m alquilamino” refere-se a um grupo de fórmula -NH (alquil), em que o grupo alquila tem de n a m átomos de carbono. Em algumas modalidades, o grupo alquila tem 1 a 6, 1 a 4 ou 1 a 3 átomos de carbono. Exemplos de grupos alquilamino incluem, mas não estão limitados a, N-metilamino, N-etilamino, N-propilamino (por exemplo, N- (n-propil)amino e N-isopropilamino), N-butilamino (por exemplo, N-(n- butil)amino e N-(terc-butil)amino) e semelhantes.

[0077] Conforme usado neste documento, o termo “di(Cn-m-

alquil)amino” refere-se a um grupo de fórmula -N(alquil)2, em que os dois grupos alquila cada um tem, independentemente, n a m átomos de carbono. Em algumas modalidades, cada grupo alquila independentemente tem 1 a 6, 1 a 4 ou 1 a 3 átomos de carbono.

[0078] Como utilizado neste documento, o termo "tio" refere-se a um grupo de fórmula SH.

[0079] Conforme usado neste documento, o termo "amino" se refere a um grupo de fórmula –NH2.

[0080] Como utilizado neste documento, o termo "carbóxi” ou "caroxil" refere-se a um grupo -C(O)OH.

[0081] Como utilizado neste documento, "halo" ou "halogênio" refere-se a F, Cl, Br ou I. Em algumas modalidades, um halo é F, Cl, ou Br. Em algumas modalidades, halo é F ou Cl.

[0082] O termo "n-membros", onde n é um número inteiro, tipicamente descreve o número de átomos formadores de anel em uma porção onde o número de átomos formadores de anel é n. Por exemplo, piperidinila é um exemplo de um anel heterocicloalquila de 6 membros, pirazolila é um exemplo de um anel heteroarila de 5 membros, piridila é um exemplo de um anel heteroarila de 6 membros e 1,2,3,4-tetra-hidro-naftaleno é um exemplo de um grupo cicloalquila de 10 membros.

[0083] Como utilizado neste documento, "cicloalquila" refere-se a hidrocarbonetos cíclicos não aromáticos, incluindo grupos alquila e / ou alquenila ciclizados. Os grupos cicloalquila podem incluir grupos mono ou policíclicos (por exemplo, tendo 2, 3 ou 4 anéis fundidos) e espirociclos. Os átomos de carbono formadores de anel de um grupo cicloalquila podem ser opcionalmente substituídos por oxo ou sulfido (por exemplo, C (O) ou C (S)). Também estão incluídos na definição de cicloalquila as porções que possuem um ou mais anéis aromáticos fundidos (isto é, tendo uma ligação em comum com) ao hidrocarboneto cíclico não aromático, por exemplo, derivados benzo ou tienila de ciclopentano, ciclo-hexano e semelhantes. Um grupo cicloalquila contendo um anel aromático fundido pode ser ligado através de qualquer átomo formador de anel incluindo um átomo formador de anel do anel aromático fundido. Os grupos cicloalquila podem ter 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 átomos formadores de anel. Em algumas modalidades, a cicloalquila é uma cicloalquila monocíclico ou bicíclico de 3-12 membros. Em algumas modalidades, a cicloalquila é um C3-7 cicloalquila monocíclico. Exemplos de grupos cicloalquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-heptila, ciclopentenila, ciclo-hexenila, ciclo-hexadienila, ciclo-heptatrienila, norbornila, norpinila, norcarnila, ciclo-octila, ciclo-octenila e semelhantes. Em algumas modalidades, cicloalquila é ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-octila ou ciclo-octenila. Em algumas modalidades, a cicloalquila é um anel ciclo-octenila fundido com 1 ou 2 anéis de benzeno. Em algumas modalidades, a cicloalquila é um grupo cicloalquila monocíclico de 3-8 membros ou 3-7 membros (por exemplo, C3-8 ou C3-7 cicloalquila). Em algumas modalidades, a cicloalquila é uma cicloalquila bicíclico de 8-12 membros. Em algumas modalidades, a cicloalquila é uma cicloalquila bicíclico ou tricíclico de 8-16 membros (por exemplo, C8-16 cicloalquila).

[0084] Como utilizado neste documento, "heteroarila" refere-se a um heterociclo aromático monocíclico ou policíclico com pelo menos um membro de anel de heteroátomo selecionado de enxofre, oxigênio e nitrogênio. Em algumas modalidades, o anel heteroarila tem 1, 2, 3 ou 4 membros do anel heteroátomo independentemente selecionados de nitrogênio, enxofre e oxigênio. Em algumas modalidades, qualquer N formador de anel em uma porçãa heteroarila pode ser um N-óxido. Em algumas modalidades, a heteroarila é um heteroarila monocíclico ou bicíclico de 5-10 membros com 1, 2, 3 ou 4 membros de anel de heteroátomo independentemente selecionados de nitrogênio, enxofre e oxigênio. Em algumas modalidades, a heteroarila é um heteroarila monocíclico de 5-6 membros com 1 ou 2 membros do anel de heteroátomo selecionados independentemente de nitrogênio, enxofre e oxigênio. Em algumas modalidades, a heteroarila é um anel heteroarila de cinco membros ou seis membros. Um anel heteroarila de cinco membros é um heteroarila com um anel tendo cinco átomos de anel em que um ou mais (por exemplo, 1, 2 ou 3) átomos de anel são independentemente selecionados de N, O e S. Heteroaris de anel de cinco membros exemplificativos são tienila, furila, pirrolila, imidazolila, tiazolila, oxazolila, pirazolila, isotiazolila, isoxazolila, 1,2,3- triazolila, tetrazolila, 1,2,3-tiadiazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,2,4- triazolila, 1,2,4-tiadiazolila, 1,2,4-oxadiazolila, 1,3,4-triazolila, 1,3,4- tiadiazolila e 1,3,4-oxadiazolila. Um anel heteroarila de seis membros é um heteroarila com um anel tendo seis átomos de anel em que um ou mais (por exemplo, 1, 2 ou 3) átomos de anel são independentemente selecionados de N, O e S. Heteroaris de seis membros exemplificativos são piridila, pirazinila, pirimidinila, triazinila e piridazinila. O termo "heteroarileno" refere-se a um grupo de ligaçãa heteroarila divalente.

[0085] O termo "aromático" refere-se a um carbociclo ou heterociclo com um ou mais anéis poli-insaturados com caráter aromático (isto é, tendo (4n + 2) elétrons π (pi) deslocalizados onde n é um inteiro).

[0086] O termo "alifático" refere-se a compostos orgânicos (incluindo polímeros) em que átomos de carbono e heteroátomos formam cadeias abertas e que não contêm anéis poli-insaturados com caráter aromático. Os compostos alifáticos podem ser lineares ou cíclicos, saturados ou insaturados, de cadeia linear ou ramificada.

[0087] Como utilizado neste documento, o termo "polímero" se refere a uma macromolécula contendo uma pluralidade de subunidades repetidas.

[0088] O termo "aril", usado sozinho ou em combinação com outros termos, refere-se a um grupo de hidrocarboneto aromático, que pode ser monocíclico ou policíclico (por exemplo, tendo 2, 3 ou 4 anéis fundidos). O termo “Cn-m aril” refere-se a um grupo arila possuindo de n a m átomos de carbono do anel. Os grupos arila incluem, por exemplo, fenila, naftila, antracenila, fenantrenila, indanila, indenila e semelhantes. Em algumas modalidades, os grupos arila têm de 6 a cerca de 20 átomos de carbono, de 6 a cerca de 15 átomos de carbono ou de 6 a cerca de 10 átomos de carbono. Em algumas modalidades, o grupo arila é fenila. O termo "arileno" refere-se a um grupo de ligação de arila divalente.

[0089] Como utilizado neste documento, "heterocicloalquil" ou "heterociclo alifático" refere-se a heterociclos monocíclicos ou policíclicos não aromáticos com um ou mais heteroátomos formadores de anel selecionados de O, N ou S. Incluídos em heterocicloalquila estão grupos heterocicloalquila monocíclicos de 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 membros. Os grupos heterocicloalquila também podem incluir espirociclos. Exemplos de grupos heterocicloalquila incluem pirrolidin- 2-ona, 1,3-isoxazolidin-2-ona, piranila, tetra-hidropurano, oxetanila, azetidinila, morfolino, tiomorfolino, piperazinila, tetra-hidrofuranila, tetra-hidrotienila, piperidinila, isoxi-zolidinila, pirrolidinila, isoxazolidinila, isotiazolidinila, pirazolidinila, oxazolidinila, tiazolidinila, imidazolidinila, azepanila, benzazapeno e semelhantes. Os átomos de carbono formadores de anel e heteroátomos de um grupo heterocicloalquila podem ser opcionalmente substituídos por grupos oxo ou sulfido (por exemplo, C(O), S(O), C(S), ou S(O)2, etc.). O grupo heterocicloalquila pode estar ligado através de um átomo de carbono formador de anel ou um heteroátomo formador de anel. Em algumas modalidades, o grupo heterocicloalquila contém de 0 a 3 ligações duplas.

Em algumas modalidades, o grupo heterocicloalquila contém de 0 a 2 ligações duplas.

Também incluídos na definição de heterocicloalquila estão as porções que possuem um ou mais anéis aromáticos fundidos (isto é, tendo uma ligação em comum com) ao heterociclo não aromático, por exemplo, derivados de benzo ou tienila de piperidina, morfolina, azepina, etc.

Um grupo heterocicloalquila contendo um anel aromático fundido pode ser ligado através de qualquer átomo formador de anel incluindo um átomo formador de anel do anel aromático fundido.

Em algumas modalidades, o heterocicloalquila é um heterocicloalquila monocíclico de 4-6 membros com 1 ou 2 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre e com um ou mais membros de anel oxidados.

Em algumas modalidades, o heterocicloalquila é um heterocicloalquila monocíclico ou bicíclico de 4- 10 membros tendo 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos selecionados independentemente de nitrogênio, oxigênio ou enxofre e tendo um ou mais membros de anel oxidados.

Em algumas modalidades, o heterocicloalquila é um heterocicloalquila de 8-12 membros (por exemplo, heterocicloalquila bicíclico). Em algumas modalidades, o heterocicloalquila é um heterocicloalquila de 8-16 membros (por exemplo, heterocicloalquila bicíclico ou tricíclico). Em algumas modalidades, o heterocicloalquila bicíclico de 8-12 membros é um grupo heterocicloalquilarila fundido de 8-12 membros ou um grupo heterocicloalquil-heteroarila fundido de 8-12 membros.

Em algumas modalidades, o heterocicloalquila é um heterocicloalquila bicíclico de 9-12 membros.

Em algumas modalidades, o heterocicloalquila bicíclico de 9-10 membros é um grupo heterocicloalquilarila fundido de 9-10 membros ou um grupo heterocicloalquil-heteroarila fundido de 9-10 membros.

O termo "heterocicloalquileno" refere-se a um grupo de ligação heterocicloalquila divalente.

[0090] Como usado neste documento, o termo "indivíduo" ou "paciente", usado de forma intercambiável, refere-se a qualquer animal, incluindo mamíferos, de preferência camundongos, ratos, outros roedores, coelhos, cães, gatos, suínos, gado, ovelhas, cavalos ou primatas, e mais preferencialmente humanos.

[0091] Como usado neste documento, a frase "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade de composto ativo ou agente farmacêutico que elicia a resposta biológica ou medicinal em um tecido, sistema, animal, indivíduo ou humano que está sendo buscada por um pesquisador, veterinário, médico ou outro clínico.

[0092] Como utilizado neste documento, o termo "tratar" ou "tratamento" refere-se a 1) inibir a doença; por exemplo, inibir uma doença, condição ou distúrbio em um indivíduo que está experimentando ou exibindo a patologia ou sintomatologia da doença, condição ou distúrbio (isto é, interromper o desenvolvimento posterior da patologia e / ou sintomatologia), e/ou 2) melhorar a doença ; por exemplo, melhorar uma doença, condição, distúrbio ou sintoma em um indivíduo que está experimentando ou exibindo a patologia ou sintomatologia da doença, condição ou distúrbio (isto é, reverter a patologia e / ou sintomatologia).

[0093] Os termos "grupo de proteção" e "grupo protetor" referem- se a uma porção que modifica quimicamente de forma reversível um grupo funcional a fim de obter quimiosseletividade ou a fim de reduzir a degradação em uma ou mais reações químicas subsequentes. Os grupos de proteção adequados são bem conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York, N.Y., 1999, que é incorporado aqui por referência na sua totalidade).

[0094] O termo "grupo de saída", como utilizado neste documento, refere-se a uma molécula ou fragmento molecular (por exemplo, um ânion) que é deslocado em uma reação química como uma espécie estável levando consigo os elétrons de ligação. Exemplos de grupos de saída incluem um grupo arilsulfonilóxi ou um grupo alquilsulfonilóxi,óxi, como um grupo mesilato ou tosilato. Grupos de saída aniônicos comuns também incluem haletos como Cl−, Br− e I−.

[0095] Como utilizado neste documento, o termo "sistema de anel de ribose" refere-se a, por exemplo, um sistema de anel de ribofuranose, arabinofuranose, xilofuranose ou lixofuranose opcionalmente substituída com a seguinte estrutura geral: .

[0096] Em algumas modalidades, o sistema de anel de ribose compreende uma parte de um ribonucleosídeo opcionalmente substituído com a seguinte estrutura: .

[0097] Em outras modalidades, o sistema de anel de ribose compreende uma parte de um lixonucleosídeo opcionalmente substituído com a seguinte estrutura: .

[0098] Em algumas modalidades, o sistema de anel de ribose compreende uma parte de um arabinonucleosídeo opcionalmente substituído com a seguinte estrutura:

.

[0099] Em algumas modalidades, o sistema de anel de ribose compreende uma parte de um xilonucleosídeo opcionalmente substituído com a seguinte estrutura: .

[00100] Em algumas modalidades, a nucleobase em um ribonucleosídeo, arabinonucleosídeo, xilonucleosídeo ou um lixonucleosídeo é adenina, citosina, guanina, timina ou uracila covalentemente ligada ao anel de ribose / lixose na posição 1'.

[00101] Conforme usado neste documento, o termo "autoimolativo" refere-se a uma porção ou resíduo que fornece formação de ligação estável entre dois grupos de um composto ou conjugado, mas que se torna lábil após a ativação (por exemplo, ataque nucleofílico) levando à rápida clivagem da porção ou resíduo e separação dos dois grupos. A química de grupos autoimolativos é descrita, por exemplo, em Alouane, A. et al., “Self-immolative spacers: kinetic aspects, structure– property relationships, and applications”, Angew. Chem. Int. Ed., 2015, 54, 7492 – 7509 and Kolakowski, R. V. et al., “The methylene alkoxy carbamate self-immolative unit: Utilization of the targeted delivery of alcohol-containing payloads with antibody-drug conjugates”, Angew. Chem. Int. Ed., 2016, 55, 7948 – 7951.

[00102] Como utilizado neste documento, o termo "opcionalmente substituído" refere-se a um grupo (por exemplo, grupo alquila, grupo cicloalquila, grupo alquileno, grupo arila, grupa heteroarila e semelhantes), onde um ou mais hidrogênios no átomo designado,

geralmente um carbono, átomo de oxigênio ou nitrogênio pode ser substituído por um substituinte designado, desde que a valência normal do átomo designado não seja excedida e que a substituição resulte em um composto estável. Quando um substituinte é ceto ou oxo (isto é, = O), então 2 hidrogênios no átomo são substituídos. O um ou mais substituintes podem ser selecionados independentemente de C1-6 alquila, C1-4 haloalquila, C3-7 cicloalquila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila, C6-10 arila, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, heteroarila de 5 a 14 membros substituído, halo, CN, NO2, ORa, SRa, C(O)Ra, C(O)NRaRa, C(O)ORa, OC(O)Ra, OC(O)NRaRa, N3, NHRa, NRaRa, NRaC(O)Ra, NRaC(O)ORa, NRaC(O)NRaRa, NRaS(O)2Ra, S(O)2Ra, e S(O)2NRaRa, em que cada Ra é independentemente selecionado de H, C1-6 alquila, C3-7 cicloalquila, C6-10 arila, heterocicloalquila de 4 a 7 membros, heteroarila de 5 a 14 membros substituído, C1-4 haloalquila, C2-6 alquenila e C2-6 alquinila.

[00103] Em algumas modalidades, o um ou mais substituintes opcionais são selecionados de C1-6 alquila, C1-4 haloalquila, OH, NO2, CN. e acetila.

[00104] Em algumas modalidades, o substituinte opcional é SH.

[00105] Em algumas modalidades, o substituinte opcional é uma azida (N3).

[00106] Em algumas modalidades, o substituinte opcional é um grupo de fórmula: .

[00107] Em algumas modalidades, o substituinte opcional é uma maleimida de fórmula: .

[00108] Em algumas modalidades, o substituinte opcional é um ciclo-octila, como é o dibenzociclo-octina (DBCO), difluorobenzociclooctyne (DIFBO), biarilazaciclo-octinona (BARAC), dibenzociclo-octina (DIBO), ciclo-octina difluorada (DIFO), ciclo-octila monofluorado (MOFO), dimetoxiazaciclo-octina (DIMAC) ou octina sem arila (ALO), cada um dos quais é opcionalmente substituído por 1, 2, 3, 4 ou 5 substituintes opcionais aqui descritos.

[00109] Em algumas modalidades, o substituinte opcional é uma ciclo-octina selecionada do grupo que consiste em: , ,e .

[00110] Conforme usado neste documento, o termo "cerca de" se destina a contabilizar variações devido a erro experimental. Conforme aqui utilizado, as formas singulares "um", "uma", "o" e "a" incluem as formas do plural referentes, a menos que o contexto indique claramente o contrário.

COMPOSTOS Compostos de Fórmula (I)

[00111] Em um aspecto geral, o presente pedido fornece um composto de Fórmula (I): Fração alifática (I),

[00112] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:

[00113] a porção alifática é selecionada de um polímero, RP, e um grupo selecionado de:

[00114] polímero-L-(CH2)m- e polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-;

[00115] RP é selecionado de C1-6 alquila opcionalmente substituída, C1-3 alquil-O-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m- opcionalmente substituído, e C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída;

[00116] L é um grupo de ligação;

[00117] m e p são, cada um, independentemente um número inteiro de 1 a 10;

[00118] D compreende um resíduo de um polipeptídeo GLP-1 ou um análogo do mesmo;

[00119] Z1 é selecionado de O, S e N(RN);

[00120] Z3 é selecionado de O e N(RN),ou Z3 está ausente;

[00121] A é O ou N, em que quando A é O então R3 está ausente;

[00122] RN é selecionado de H e C1-6 alquila opcionalmente substituída;

[00123] R3 é selecionado de H e C1-6 alquila, ou

[00124] R3 e R1, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcionalmente substituído; ou

[00125] R3 e R2, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, e o átomo de carbono ao qual R2 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído;

[00126] MA é um grupo autoimolativo com qualquer uma das fórmulas (a) - (i): (a); (b); (c);

O O x R7 O

C O C R8 y (d); (e); (f); (g);

(h); (i);

[00127] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3;

[00128] R1 e R2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substituída, C6-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;

[00129] ou R1e R2 são unidos com os átomos de carbono aos quais estão ligados para formar um anel C3-7 cicloalquila, um anel heterocíclico alifático opcionalmente substituído de 4 a 7 membros, um C6-10 arila opcionalmente substituída ou um heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;

[00130] ou R1 e R2 são unidos para formar um sistema de anel de ribose;

[00131] R7 e R8 são independentemente selecionados de H e C1-6 alquila;ila; e

[00132] E é uma porção clivável.

[00133] Em algumas modalidades da Fórmula (I), RP, L, m, p, D, Z1, Z3, A, RN, MA, R1, R2, R7, R8 e E são como aqui descritos para um composto da Fórmula (I), e R3 é selecionado de H e C1-6 alquila, ou

[00134] R3 e R1, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcionalmente substituído; ou

[00135] R3 e R2, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, e o átomo de carbono ao qual R2 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído.

[00136] Em algumas modalidades da Fórmula (I), A é N. Em outras modalidades, A é O.

[00137] Em algumas modalidades da Fórmula (I), A é NR3.

[00138] Em algumas modalidades da Fórmula (I), quando A é NR3, R3 e R1, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcionalmente substituído. Em alguns aspectos dessas modalidades, o anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros é selecionado do grupo que consiste em: ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ;e ,

[00139] em que x denota um ponto de ligação a E, e y denota um ponto de ligação ao átomo de carbono ao qual R1 está ligado.

[00140] Em algumas modalidades da Fórmula (I), quando A é NR3, R3 e R2, t junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, e o átomo de carbono ao qual R2 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído.

[00141] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (I) tem qualquer uma das seguintes fórmulas: Fração alifática (I-1);

Polietilenoglicol (I-2);

Polietilenoglicol

(I-3);

Polietilenoglicol

(I-4);

(I-5);

Fração alifática

(I-6);

Polietilenoglicol (I-7); (I-8); e Polietilenoglicol (I-9),

[00142] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00143] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (I) é qualquer um dos compostos de Fórmula (II) aqui descritos. Compostos de Fórmula (II)

[00144] Em um aspecto geral, o presente pedido fornece um composto de Fórmula (II): Fração alifática (II),

[00145] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:

[00146] a porção alifática é selecionada de um polímero, RP, e um grupo selecionado de:

[00147] polímero-L-(CH2)m- e polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-;

[00148] RP é selecionado de C1-6 alquila opcionalmente substituída C1-3 alquil-O-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-, e C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída;

[00149] L é um grupo de ligação;

[00150] m e p são, cada um, independentemente um número inteiro de 1 a 10;

[00151] D compreende um resíduo de um polipeptídeo GLP-1 ou análogo do mesmo;

[00152] Z1 é selecionado de O, S e N(RN);

[00153] Z3 é selecionado de O e N(RN),ou Z3 está ausente;

[00154] Z4 é selecionado de O e S;

[00155] A é selecionado de O e N(RN);

[00156] RN é selecionado de H e C1-4 alquila opcionalmente substituída;

[00157] MA é um dirradical selecionado de: um grupo autoimolativo com qualquer uma das fórmulas (a)-(i): (a); (b); (c);

O O x R7 O

C O C R8 y (d); (e); (f); (g); (h); (i)

[00158] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3; e

[00159] um dirradical estável selecionado de qualquer uma das fórmulas (j)-(l):

(j); (k); e (l),

[00160] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3;

[00161] R1 e R2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substituída, C6-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;

[00162] ou R1 e R2 são unidos com os átomos de carbono aos quais estão ligados para formar um anel C3-7 cicloalquila, um anel heterocíclico alifático opcionalmente substituído de 4 a 7 membros, um C6-10 arila opcionalmente substituída ou um heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;

[00163] ou R1 e R2 são unidos para formar um sistema de anel de ribose;

[00164] R7 e R8 são independentemente selecionados de H, C1-6 alquila, amino, (C1-6 alquil)amino, di-(C1-6 alquil)amino, acilamino, e um grupo amino protegido; e

[00165] E é uma porção clivável.

[00166] Em algumas modalidades de Fórmula (I) ou Fórmula (II), em que a porção alifática é selecionada a partir de um polímero, RP, e um grupo de fórmula polímero-L-(CH2)m-; RP é selecionado de C1-6 alquila opcionalmente substituída e C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída; e m é um número inteiro de 1 a 10.

[00167] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), D compreende um resíduo de qualquer um dos polipeptídeos GLP-1 ou análogos dos mesmos aqui descritos (por exemplo, D compreende um resíduo de liraglutida). Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), D é um resíduo de qualquer um dos polipeptídeos GLP-1 ou análogos dos mesmos aqui descritos (por exemplo, D é um resíduo de liraglutida).

[00168] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), a porção alifática é um grupo da fórmula: polímero-L-(CH2)m-. Em alguns aspectos dessas modalidades, L é um grupo de ligação compreendendo um heterocicloalquileno ou um heteroarileno. Por exemplo, L é um grupo de ligação compreendendo uma succinimida ou um triazol. Em algumas modalidades, L é um grupo de ligação de qualquer uma das seguintes fórmulas: e ,

[00169] em que indica um ponto de ligação do grupo de ligação ao polímero ou ao grupo CH2 .

[00170] Em algumas modalidades, o grupo de ligação L é um grupo de ligação de fórmulas: ,

[00171] em que indica um ponto de ligação do grupo de ligação ao polímero ou ao grupo CH2 .

[00172] Em algumas modalidades, L compreende um grupo de fórmula (L1): (L1),

[00173] em que o anel C é selecionado a partir do grupo que consiste em um C8-16 cicloalquila opcionalmente substituída e um heterocicloalquila de 8-16 membros opcionalmente substituído e indica um ponto de ligação do grupo de ligação ao polímero ou ao grupo CH2 . Em alguns aspectos dessas modalidades, C8-16 cicloalquila é um ciclo-octenila que é opcionalmente fundido com 1 ou 2 anéis de benzeno. Em outros aspectos dessas modalidades, C8-16 cicloalquila é um ciclo-octenila que é opcionalmente substituído por 1, 2 ou 3 substituintes selecionados de halogênio, OH, C1-3 alquila e C1-3 alquila. Por exemplo, ciclo-octenila pode ser substituído por 1 ou 2 fluoro, ou com 1 ou 2 grupos metóxi.

[00174] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L1) é selecionado de qualquer uma das seguintes fórmulas: , , ,e .

[00175] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L1) é ou .

[00176] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L1) é ou .

[00177] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L1) é .

[00178] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L1) é ou .

[00179] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L1) é ou .

[00180] Em algumas modalidades, o grupo de fórmula (L1) é ou .

[00181] Em algumas modalidades, m é um número inteiro de 1 a 6. Por exemplo, m é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, m é um número inteiro de 1 a 4.

[00182] Em algumas modalidades, a porção alifática é qualquer uma das seguintes fórmulas: Polímero Polímero ; ; Polímero Polímero ;e .

[00183] Em algumas modalidades, a porção alifática é qualquer uma das seguintes fórmulas:

Polímero Polímero e .

[00184] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), a porção alifática é um polímero (por exemplo, qualquer um dos polímeros aqui descritos). O polímero na porção alifática pode ser selecionado de poli(alquileno glicol), poli(poliol oxietilado), poli(álcool olefínico), poli(-hidroxiácido), poli(álcool vinílico), polioxazolina ou copolímeros dos mesmos. Em algumas modalidades, o polímero na porção alifática é polietileno glicol. Por exemplo, a porção alifática compreende um polietileno glicol linear ou um polietileno glicol ramificado.

[00185] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), a porção alifática é RP. Em algumas modalidades, RP é um C1-6 aquila opcionalmente substituída ou um C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída. Por exemplo, RP é selecionado de C1-6 alquila, C1-6 cianoalquila e C3-7 cicloalquila. Quando a porção alifática é RP, a porção alifática pode ser C1-6 alquila (por exemplo, metila, etila, propila, isopropila, n-butila, isobutila, terc-butila, amila ou hexila). Por exemplo, a porção alifática pode ser cianoetila. Em algumas modalidades, a porção alifática pode ser 2-cianoetila. Em outras modalidades, a porção alifática é C3-7 cicloalquila (por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou ciclo-hexila). Em algumas modalidades, RP é isopropila. Em algumas modalidades, RP é cianoetila.

[00186] Em algumas modalidades, RP é selecionado do grupo de qualquer uma das seguintes fórmulas: alquileno alquileno alquileno ; alquil ; ;

alquileno alquileno alquileno ; ; , alquileno alquileno ,e .

[00187] Em algumas modalidades, RP é selecionado do grupo de qualquer uma das seguintes fórmulas: alquileno alquileno alquileno , ,e .

[00188] Em algumas modalidades, RP é um C1-6 alquila substituído de fórmula: , ou ,

[00189] em que p é um número inteiro de 1 a 6. Por exemplo, p é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em algumas modalidades, p é um número inteiro de 1 a 4.

[00190] Em algumas modalidades, RP é selecionado de qualquer uma das seguintes fórmulas: alquileno alquileno alquileno , ,e .

[00191] Em algumas modalidades, RP é selecionado de qualquer uma das seguintes fórmulas: alquileno , alquileno ,

alquileno alquileno ,e .

[00192] Em algumas modalidades, RP é alquileno .

[00193] Em algumas modalidades, RP é ,

[00194] em que p é um número inteiro de 1 a 6.

[00195] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), Z1 é selecionado de O, S e N(RN). Em algumas modalidades, Z1 é O. Em algumas modalidades, Z1 é NH. Em algumas modalidades, Z1 é N(C1-6 alquila). Em algumas modalidades, Z1 é S.

[00196] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), Z3 é selecionado de O e N(RN). Em algumas modalidades, Z3 está ausente. Em algumas modalidades, Z3 é O. Em algumas modalidades, Z3 é NH. Em algumas modalidades, Z3 é N(C1-6 alquila).

[00197] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), Z1 é O e Z3 é NH. Em algumas modalidades, Z1 é NH e Z3 é O. Em algumas modalidades, Z1 é O e Z3 está ausente. Em algumas modalidades, Z1 é O e Z3 é O. Em algumas modalidades, Z1 é NH e Z3 é NH. Em algumas modalidades, Z1 é NH e Z3 está ausente. Em algumas modalidades, Z1 é S e Z3 é O. Em algumas modalidades, Z1 é S e Z3 é NH. Em algumas modalidades, Z1 é S e Z3 está ausente.

[00198] Em algumas modalidades da Fórmula (I), Z4 é O. Em outras modalidades da Fórmula (I), Z4 é S.

[00199] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), MA é um diradical caracterizado por, sozinho ou junto com Z1, após ataque nucleofílico ao átomo de fósforo na Fórmula (I) ou Fórmula (II), MA (junto com Z3-D) cria um grupo de saída melhor do que qualquer uma das porções alifáticas aqui descritas. Por exemplo, como mostrado no Esquema 2 abaixo, após ataque nucleofílico ao átomo de fósforo pelo grupo 2' hidroxila da unidade de ribose, ambos os fragmentos de 2-hidróxi propionato e de polietileno glicol criam grupos de saída igualmente bons e a reação de substituição nucleofílica é não seletiva. Esquema 2 Proteína Proteína Proteína

[00200] Em contraste, em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), conforme descrito neste documento, um grupo que compreende o fragmento –Z1-MA- é um grupo de saída melhor do que a porção alifática (por exemplo, um polietileno glicol), tal que sob condições semelhantes em comparação com o Esquema 2, após o ataque nucleofílico ao átomo de fósforo pelo grupo 2' hidroxila da unidade de ribose, o fragmento de polietileno glicol permanece covalentemente ligado ao átomo de fósforo, enquanto o grupo que compreende o fragmento –Z1-MA- é clivado seletivamente.

[00201] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), MA é um diradical caracterizado por, sozinho ou junto com Z1, após ataque nucleofílico ao átomo de fósforo na Fórmula (I) ou Fórmula (II), MA (junto com Z3-D) cria um grupo de saída melhor do que o polietileno glicol. Em algumas modalidades, o ácido conjugado da porção Z1-MA-Z3-D, representado pela fórmula HZ1-MA-Z3-D, tem um valor de pKa mais baixo do que o ácido conjugado da porção alifática que é conjugado a um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II). Em algumas modalidades, o grupo HZ1-MA-Z3D tem um valor pKa mais baixo do que um polietileno glicol ou um álcool. Em alguns aspectos dessas modalidades, Z1 é oxigênio e MA compreende uma porção aromática (por exemplo, MA compreende um fenileno). Em algumas modalidades, Z1 é nitrogênio e MA compreende uma porção aromática (por exemplo, MA compreende um fenileno), e a base conjugada do composto de fórmula HZ1-MA-Z3-D é um grupo de saída melhor do que qualquer uma das porções alifáticas descritas neste documento devido à deslocalização do par solitário de elétrons no átomo de nitrogênio de Z1 para o anel aromático de MA.

[00202] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) compreende uma única funcionalidade imolativa. Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), MA é um grupo autoimolativo. Em algumas modalidades, MA é qualquer um dos grupos autoimolativos descritos, por exemplo, em Alouane, A. et al., “Self-immolative spacers: kinetic aspects, structure–property relationships, and applications”, Angew. Chem. Int. Ed., 2015, 54, 7492 – 7509. Em outras modalidades, MA é qualquer um dos grupos autoimolativos descritos, por exemplo, em Kolakowski, R. et al., “The Methylene Alkoxy Carbamate Self-Immolative Unit: Utilization for the Targeted Delivery of Alcohol-Containing Payloads with Antibody–Drug Conjugates”, Angew. Chem. Int. Ed., 2016, 55 (28), 7948–7951.

[00203] Em algumas modalidades, MA é um grupo autoimolativo com qualquer uma das fórmulas (a) - (i):

(a); (b); (c);

O O x R7 O

C O C R8 y (d); (e); (f); (g); (h); (i)

[00204] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3.

[00205] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), o grupo autoimolativo é caracterizado pelo fato de que a clivagem da ligação P-Z1 gera uma cascata de reações de decomposição (por exemplo, uma cascata de hidrólise como aqui descrito), em última análise, levando a:

1. liberação da base conjugada do composto HZ3-D quando Z3 está presente; ou

2. liberação da base conjugada do composto HO-(C=O)-D quando Z3 está ausente.

[00206] Em algumas modalidades, a base conjugada do composto de fórmula HZ3-D é uma porção de fórmula ˉZ3-D. Em algumas modalidades, a base conjugada do composto de fórmula HO-(C=O)-D é uma porção de fórmula ˉO-(C=O)-D.

[00207] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), Z3 está presente (por exemplo, Z3 é O ou NH) e MA é um grupo autoimolativo. Em algumas modalidades, o grupo autoimolativo é caracterizado pelo fato de que a clivagem da ligação P-Z1 gera uma cascata de reações de decomposição levando, em última análise, à liberação da base conjugada do composto HZ3-D.

[00208] Em alguns aspectos dessas modalidades, a clivagem da ligação P-Z1 resulta na formação de Z1=MA’, CO2 ae a base conjugada do composto HZ3-D, onde MA’ é um fragmento de um grupo autoimolativo (por exemplo, grupo autoimolativo de qualquer uma das fórmulas (a)-(g)) que carece de uma porção da fórmula: .

[00209] Em um exemplo, MA é um grupo autoimolativo de fórmula (b), e MA' é um fragmento de fórmula: ,

[00210] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3.

[00211] Em um exemplo, MA é um grupo autoimolativo de fórmula (b), e MA' é um fragmento de fórmula: (b),

[00212] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3.

[00213] Em um exemplo, MA é um grupo autoimolativo de fórmula (d), e MA' é um fragmento de fórmula: ,

[00214] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3.

[00215] Em algumas modalidades, no composto Z1=MA’, a segunda ligação Z1 e MA’ conecta Z1 e qualquer um dos átomos do grupo MA’ . Por exemplo, quando MA é um grupo autoimolativo de fórmula (a), a segunda ligação entre Z1 e MA’ conecta Z1 e o átomo de carbono de fórmula (a) que estava na posição β a Z1 antes da reação de decomposição: .

[00216] Em outro exemplo do composto Z1=MA’, quando MA é um grupo autoimolativo de fórmula (b-1), a segunda ligação entre Z1 e MA’ conecta Z1 e o átomo de carbono em MA’ ao qual Z1 está ligado, e as ligações restantes em MA’ são deslocalizadas: .

[00217] Em outros aspectos das modalidades acima, a clivagem da ligação P-Z1 resulta na formação da base conjugada do composto HZ3- D e um composto de fórmula: .

[00218] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), Z3 está ausente e MA é um grupo autoimolativo. Em algumas modalidades, o grupo autoimolativo é caracterizado pelo fato de que a clivagem da ligação P-Z1 gera uma cascata de reações de decomposição, levando à liberação da base conjugada do composto HO-(C=O)-D. Em alguns aspectos dessas modalidades, a clivagem da ligação P-Z1 resulta na formação de Z1=MA’ (como aqui descrito) e na base conjugada do composto HO-(O=C)-D.

[00219] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), Z1 é S e MA é um grupo autoimolativo da Fórmula (a):

[00220] (a),

[00221] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3.

[00222] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), o grupo autoimolativo da fórmula (b) tem a fórmula (b-1):

[00223] (b-1),

[00224] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3.

[00225] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), o grupo autoimolativo da fórmula (b) tem a fórmula (b-2):

[00226] (b-2),

[00227] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3.

[00228] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), o grupo autoimolativo da fórmula (c) tem a fórmula (c-1):

[00229] (c-1),

[00230] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3.

[00231] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), o grupo autoimolativo da fórmula (d) tem a fórmula (d-1):

[00232] (d-1),

[00233] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3.

[00234] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), Z1 é O ou NH e MA é um grupo autoimolativo de qualquer uma das Fórmulas (b)-(i). Em algumas modalidades, Z1 é O ou NH, Z3 está ausente, e MA é um grupo autoimolativo de qualquer um da fórmula (b)-(i).

[00235] Em algumas modalidades de Fórmula (I) ou Fórmula (II), Z1 é O ou NH, Z3 está ausente, e MA é um grupo autoimolativo de fórmula (b), em que R7 e R8 são cada C1-6 alquila, ou uma fórmula (b-2).

[00236] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), Z1 é O, Z3 é NH ou ausente, e MA é um grupo autoimolativo da fórmula (b), em que R7 e R8 são, cada um, H, ou uma fórmula (b-1).

[00237] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), Z1 é O, Z3 é O, e MA é um grupo autoimolativo da fórmula (h-1): (h-1),

[00238] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3.

[00239] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), Z1 é O, Z3 é O, e MA é um grupo autoimolativo da fórmula (i-1): (i-1),

[00240] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3.

[00241] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), Z1 é NH, Z3 é O, e MA é um grupo autoimolativo da fórmula (h-1). Em algumas modalidades, em que Z1 é NH, Z3 é O, e MA é um grupo autoimolativo de fórmula (i-1).

[00242] Em algumas modalidades da Fórmula (I), MA é um dirradical estável. Por exemplo, o diradical estável não é um grupo autoimolativo (por exemplo, após ataque nucleofílico ao átomo de fósforo na Fórmula (I), o dirradical estável não leva à clivagem da ligação Z1-MA , ou a ligação MA-Z3 ). Em algumas modalidades, o dirradical estável é caracterizado pelo fato de que a clivagem da ligação P-Z1 gera uma base conjugada do composto de fórmula HZ1- MA-Z3-D, que é estável e não sofre a reação de decomposição.

[00243] Em algumas modalidades, MA é um dirradical estável tendo qualquer uma das fórmulas (j)-(l): (j); (k); e (l),

[00244] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3. Em alguns aspectos dessas modalidades, Z1 e Z3 são independentemente O ou NH (por exemplo, Z1 é O e Z3 é NH). Em algumas modalidades, quando MA é um dirradical estável de fórmula (j), Z1 é O. Em algumas modalidades, quando MA é um dirradical estável de fórmula (j), Z1 é NH.

[00245] Em algumas modalidades da Fórmula (I), MA é um dirradical estável com a fórmula (m): (m),

[00246] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3. Em alguns aspectos dessas modalidades, Z1 e Z3 são independentemente O ou NH (por exemplo, Z1 é O e Z3 é NH). Em algumas modalidades, quando MA é um dirradical estável de fórmula (m), Z1 é O e R7 e R8 são cada um hidrogênio.

[00247] Em algumas modalidades de Fórmula (I) ou Fórmula (II), R7 e R8 são independentemente selecionados de H, C1-6 alquila, amino, (C1-6 alquil)amino, di-(C1-6alquil)amino, acilamino e um grupo amino protegido (por exemplo, o grupo de proteção para o grupo amino pode ser selecionado de qualquer um dos grupos de proteção de amino descritos, por exemplo, em Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York, N.Y., 1999). Em algumas modalidades, R7 e R8 são independentemente selecionados de H, metila, amino e acilamino. Em algumas modalidades de Fórmula (I) ou Fórmula (II), R7 e R8 são independentemente selecionados de H e C1-6 alquila. Em algumas modalidades, R7 e R8 são independentemente selecionados de H e metila. Em algumas modalidades, R7 e R8 são cada H.

[00248] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), R7 é selecionado de C1-6 alquila, C3-7 cicloalquila, amino, acilamino, e um grupo amino protegido, e R8 é H. Em algumas modalidades, R8 é selecionado de C1-6 alquila, C3-7 cicloalquila, amino, acilamino, e um grupo amino protegido, e R7 é H.

[00249] Em algumas modalidades de Fórmula (I) ou Fórmula (II), R8 é H e R7 é C1-6 alquila (por exemplo, metila, etila, propila, isopropila ou terc-butila). Em algumas modalidades, R7 é H e R8 é C1-6 alquila (por exemplo, metila, etila, propila, isopropila ou terc-butila). Em algumas modalidades, R7 e R8 são ambos H. Em algumas modalidades, R7 e R8 são ambos C1-6 aquila. Em outro exemplo, R7 e R8 são ambos metila. Em outro exemplo, R7 é metila, e R8 é etila. Em algumas modalidades, R7 e R8 são ambos C3-7 cicloalquila (por exemplo, ciclopropila ou ciclobutila).

[00250] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), R7 e R8 são cada um independentemente H ou acilamino (por exemplo, acetilamino, propionilamino ou butiramino). Em algumas modalidades, R7 é amino ou acetilamino. Em algumas modalidades, R8 é amino ou acetilamino. Em algumas modalidades, R7 é acetilamino e R8 é H. Em algumas modalidades, R7 é H. Em algumas modalidades, R8 é H.

[00251] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), MA é um grupo autoimolativo de qualquer uma das fórmulas (b), (c) ou

(d), e R7 e R8 são ambos C1-6 alquila (por exemplo, metila, etila, propila, isopropila ou terc-butila). Em algumas modalidades, MA é um dirradical estável de fórmula (k) ou fórmula (l), e R7 e R8 são independentemente selecionados de H ou acilamino (por exemplo, acetilamino, propionilamino ou butiramino).

[00252] Em algumas modalidades da Fórmula (I), o dirradical estável da fórmula (k) tem a fórmula (k-1): (k-1),

[00253] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3.

[00254] Em algumas modalidades de Fórmula (I) ou Fórmula (II), R1 e R2 são independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substituída, C6-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída. Em algumas modalidades, R1 e R2 são, cada um, hidrogênio. Em algumas modalidades, R1 e R2 juntos formam uma ligação química (isto é, uma ligação dupla carbono-carbono é formada entre o carbono ao qual R1 está ligado e o átomo de carbono ao qual R2 está ligado).

[00255] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), R1e R2 são unidos com os átomos de carbono aos quais estão ligados para formar um anel C3-7 cicloalquila, um anel heterocíclico alifático opcionalmente substituído de 4 a 7 membros, um C6-10 arila opcionalmente substituída ou um heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída. Em algumas modalidades,R1 and R2 juntos formam um anel C3-7 cicloalquila (por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila e ciclo-hexila). Em algumas modalidades, R1 e R2 juntos formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros (por exemplo,

pirrolidina, piperidina, tetra-hidrofurano e tetra-hidropirano).

[00256] Em algumas modalidades de Fórmula (I) ou Fórmula (II), R1 e R2 são unidos para formar um sistema de anel de ribose (por exemplo, adenosina, guanosina, 5-metiluridina, uridina, 5-metilcitidina, citidina, inosina, xantosina e wibutosina, cada um dos quais é substituído como aqui descrito). Em algumas modalidades, o ribonucleosídeo é uridina. Em algumas modalidades, R1 e R2 juntos formam um sistema de anel de ribose de fórmula: ,

[00257] em que a representa um ponto de ligação a O e b representa um ponto de ligação a A, ou a representa um ponto de ligação a A e b representa um ponto de ligação a O, e em que W é selecionado do grupo que consiste em H, um grupo acila e um grupo de proteção (por exemplo, um grupo de proteção diferente de acila). Sem estar limitado por qualquer teoria, acredita-se que um nucleotídeo à base de lixofuranose tem reatividade semelhante quando comparado aos análogos da ribofuranose aqui descritos.

[00258] Da mesma forma, em um exemplo, é possível assumir que o 5'-OH pode estar envolvido no ataque intramolecular a um fosfotriéster, mesmo se ele estiver localizado a 3 carbonos de distância. Isso é mais exigente do que a interação de distância de 2 carbonos típica aqui descrita, mas este lixo-isômero poderia facilitar a reação ao inverter a orientação do 3'OH. Assim, os nucleosídeos 2'- desóxi,óxi, 3'-xila são uma alternativa adequada a um arcabouço de ribose de ribonucleotídeo descrito acima para uso na unidade clivável.

[00259] Em algumas modalidades de Fórmula (I) ou Fórmula (II), a nucleobase é selecionada do grupo que consiste em adenina, citosina, guanina, timina, uracila e outras nucleobases naturais e não naturais.

[00260] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), a nucleobase pode ser fornecida em sua forma quimicamente protegida (por exemplo, benzoila ou acila graxo).

[00261] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), a nucleobase é uracila. Em algumas modalidades, a nucleobase é selecionada do grupo que consiste em adenina, citosina, guanina, timina e uracila. Em algumas modalidades, a nucleobase é selecionada do grupo que consiste em 5-metilcitosina, pseudouridina, di-hidrouridina, inosina, 7-metilguanosina, hipoxantina e xantina.

[00262] Em algumas modalidades de Fórmula (I) ou Fórmula (II), a nucleobase compreende um grupo fluorescente (por exemplo, um fluoróforo tradicional). Em algumas modalidades, a nucleobase é um análogo fluorescente de adenina, citosina, guanina, timina ou uracila.

[00263] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), R1 e R2 juntos formam um sistema de anel de ribose de qualquer uma das seguintes fórmulas: ; ; ; NH2

NH N O

W O O a b ; ou ,

[00264] em que a representa um ponto de ligação a O e b representa um ponto de ligação a A, ou a representa um ponto de ligação a A e b representa um ponto de ligação a O, e em que W é selecionado do grupo que consiste em H, um grupo acila e um grupo de proteção (por exemplo, um grupo de proteção diferente de acila).

[00265] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), R1 e R2 juntos formam um sistema de anel de ribose de qualquer uma das seguintes fórmulas: Polímero Polietilenoglicol ; ; ou ,

[00266] em que a representa um ponto de ligação a O e b representa um ponto de ligação a A, ou a representa um ponto de ligação a A e b representa um ponto de ligação a O, e em que W é selecionado do grupo que consiste em H, um grupo acila e um grupo de proteção (por exemplo, um grupo de proteção diferente de acila).

[00267] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), R1 e R2 juntos formam um sistema de anel de ribose da seguinte fórmula: Grupo fluorescente ,

[00268] em que a representa um ponto de ligação a O e b representa um ponto de ligação a A, ou a representa um ponto de ligação a A e b representa um ponto de ligação a O, e em que W é selecionado do grupo que consiste em H, um grupo acila e um grupo de proteção (por exemplo, um grupo de proteção diferente de acila).

Em alguns aspectos das modalidades acima, a porção alifática é RP. Por exemplo, RP é C1-6 alquila (por exemplo, etila ou isopropila). Em outro exemplo, RP é cianoetila. Em outros aspectos das modalidades acima, a porção alifática é um polímero (por exemplo, polietileno glicol). Em outros aspectos das modalidades acima, a porção alifática é um grupo de fórmula: polímero-L-(CH2)m-.

[00269] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), W é um grupo de proteção. Por exemplo, W pode ser um grupo de proteção de hidroxila, tal como éter metoximetílico (MOM), éter benziloximetílico (BOM), éter benzílico, éter p-metoxibenzílico (PMB), éter tritílico, éter silílico (por exemplo, TMS, TIPS), ou qualquer dos grupos de proteção de hidroxila descritos, por exemplo, em P. G. M. Wuts and T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed., Wiley & Sons, Inc., New York (2006), que é aqui incorporado por referência na sua totalidade. Em algumas modalidades, W é um grupo de proteção de álcool selecionado do grupo que consiste em t- butildimetilsilila, dietilisopropilsilila, trifenilsilila, formato, metoximetilcarbonato, t-butilcarbonato, 9-fluorenilmetilcarbonato, N- fenilcarbamato, 4,4′-dimetoxitritila, monotritila, e pixila.

[00270] Em algumas modalidades, W é hidrogênio.

[00271] Em algumas modalidades, W é um grupo acila.

[00272] Em alguma modalidade de Fórmula (I) ou Fórmula (II), W é qualquer um dos grupos acila aqui descritos (por exemplo, W é um grupo acila selecionado de formila, acetila, propionila, acrilila, pivaloila e benzoila). Em algumas modalidades, W é pivaloila ou benzoila. Em algumas modalidades, W e E são iguais (por exemplo, W e E são, cada um, um grupo acila). Em algumas modalidades, W é um grupo acila e E é um grupo clivável diferente de um grupo acila. Em algumas modalidades, um grupo acila é hidrolisável na presença de qualquer uma das numerosas enzimas hidrolase existentes in vivo.

[00273] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), A é selecionado de O e N(RN). Em algumas modalidades, A é O. Em algumas modalidades, A é N(RN). Em algumas modalidades, A é NH. Em algumas modalidades, A é N(C1-6 alquila). Em algumas modalidades, A é N(CH3). Em algumas modalidades, A é N(CH2CH3).

[00274] Em algumas modalidades, quando A é N(RN), RN e R1, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcionalmente substituído. Em alguns aspectos dessas modalidades, o anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros é selecionado do grupo que consiste em: ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ;e ,

[00275] em que x denota um ponto de ligação a E, e y denota um ponto de ligação ao átomo de carbono ao qual R1 está ligado.

[00276] Em algumas modalidades, RN e R2, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, e o átomo de carbono ao qual R2 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído.

[00277] Em algumas modalidades, quando A compreende N, a porção:

[00278] é um 2-amino álcool que não é serina ou um derivado do mesmo, treonina ou um derivado do mesmo, ou cis-amino indanol ou um derivado do mesmo. Em algumas modalidades, o 2-amino álcool não é aminoetanol.

[00279] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-1a):

H R1

A E R2

H

O O aliphatic moiety Fração alifática O P O CH2 O Z3 D O (II-1a),

[00280] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00281] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-1b): (II-1b),

[00282] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00283] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-1c):

Fração alifática (II-1c),

[00284] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00285] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-2a): Polietilenoglicol (II-2a),

[00286] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00287] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-2b): Polietilenoglicol (II-2b),

[00288] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00289] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-3a):

Polietilenoglicol (II-3a),

[00290] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00291] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-3b): Polietilenoglicol (II-3b),

[00292] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00293] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-4a): (II-4a),

[00294] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00295] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-4b): Polietilenoglicol (II-4b),

[00296] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00297] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem qualquer uma das seguintes Fórmulas (II-5) a (II-7): Polietilenoglicol Droga (II-5); Polietilenoglicol Droga (II-6); e

Polietilenoglicol Droga (II-7), em que para (II-7), A é O,

[00298] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00299] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-8): (II-8),

[00300] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00301] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-9): (II-9),

[00302] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00303] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-10): Fração alifática (II-10),

[00304] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00305] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-10a): Fração alifática (II-10a),

[00306] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00307] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-11a): Polietilenoglicol (II-11a),

[00308] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00309] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-11):

Polietilenoglicol (II-11),

[00310] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00311] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-12a): (II-12a),

[00312] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00313] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-12b): (II-12b),

[00314] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00315] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-13): Polietilenoglicol (II-13),

[00316] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00317] Em algumas modalidades, em que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-14):

O NH N O W O O O A E

O Polietilenoglicol Polyethyleneglycol O P O CH2 CH

HN D O R7 (II-14),

[00318] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00319] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-15): (II-15),

[00320] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00321] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-16): (II-16),

[00322] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em alguns aspectos dessas modalidades, RP é um C1-6 alquila opcionalmente substituída (por exemplo, isopropila ou cianoetila).

[00323] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-17): Polímero (II-17),

[00324] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00325] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-18):

Polímero (II-18),

[00326] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00327] Em algumas modalidades, RN é H. Em algumas modalidades, RN é C1-6 alquila (por exemplo, metila, etila, propila, isopropila).

[00328] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-19a): Polímero Droga (II-19a),

[00329] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00330] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) não é: liraglutida ;

[00331] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que U é uracila. E-grupos cliváveis

[00332] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), E é uma porção clivável que, após a clivagem, libera um grupo AH livre, onde H é hidrogênio. A porção clivável E pode incluir, por exemplo:

[00333] Uma porção clivável E por qualquer uma das seguintes enzimas: Esterases

[00334] Todos os ésteres, carbonatos e metilóxi ésteres podem ser hidrolisados por uma enzima esterase. A reatividade desses grupos funcionais na reação enzimática pode ser modulada pela seleção de um componente de ácido carboxílico do grupo funcional éster contendo diferentes grupos doadores de elétrons ou tornando o éster estericamente impedido. Tanto o componente ácido como o componente álcool do éster podem ser estericamente impedidos. Redutases

[00335] Metil-ditioéteres, grupo metila azido e carbonatos de 2- oximetilenantraquinona (MAQC) são exemplos de porções cliváveis E, em que ambos podem ser clivados por uma enzima redutase. Por exemplo, uma porção E clivável por uma redutase é um grupo metila azido, ou a porção E pode ter as seguintes fórmulas: . Glicosidases

[00336] Se A-E representa um heteroátomo substituído por um resíduo de açúcar formando uma ligação glicosídica com o resto do composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II), então uma ação de uma glicosidase in vivo pode clivar E e liberar o A-H livre.

[00337] 2) Porções E cliváveis por bases, mas em pH fisiológico, por meio do mecanismo de eliminação β (por exemplo, um gatilho eliminativo β).

[00338] Por exemplo, a porção E pode ser um ativador do tipo fluorenilmetilcarbamida com a seguinte fórmula: ,

[00339] em que R é selecionado de H, C1-10 alquila, OH, NO2, CN, halogênio e acetila. A introdução de substituintes R que retiram elétrons pode aumentar a taxa de eliminação β e liberação de AH livre. Em outro exemplo, a seguinte porção E possui o grupo SO2- que retira elétrons: .

[00340] Carbamatos e carbonatos de β-fenilsulfoniletila substituídos: ,

[00341] em que R é selecionado de H, C1-10 alquila, OH, NO2, CN, halogênio e acetila. Estes grupos funcionais clivam através de um mecanismo de eliminação β em cerca de pH 7,4 e a taxa deste processo pode ser controlada pelo substituinte R no anel fenila.

[00342] Em algumas modalidades, E é clivável por uma enzima selecionada do grupo que consiste em uma esterase, uma peptidase específica ou não específica, uma redutase, uma oxidase, uma glicosidase, uma hidrolase, uma glicosila transferase, e uma transaminase. Em algumas modalidades, E é clivável por uma enzima selecionada do grupo que consiste em uma esterase, uma redutase, uma oxidase, um glicosídeo, uma hidrolase e glicosila transferase.

[00343] 3) Porções cliváveis com ácido.

[00344] Qualquer grupo de proteção de álcool clivável com ácido pode ser usado como porção clivável E. Por exemplo, acetais, orto- ésteres e éteres substituídos por fenila podem ser usados. Exemplos de tais porções cliváveis incluem grupos de proteção, tais como THF, MTHP ou MDMP, e também acetais mais lábeis, tais como metóxi isopropila acetal ou metóxi ciclo-hexenila acetal. Outros exemplos de porções cliváveis E deste tipo que são clivadas em um ambiente acídico incluem grupos dimetoxitritila, trimetoxitritila e pixila.

[00345] Em algumas modalidades, E contém um grupo ditio, clivável por um tiol biogênico. Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), a porção E é clivável por uma glutationa.

[00346] Em algumas modalidades, E é um grupo de qualquer uma das seguintes fórmulas: e ,

[00347] em que RE é selecionado do grupo que consiste em C1-6 alquila e benzila. Em algumas modalidades, RE é C1-6 alquila. Em algumas modalidades, RE é benzila.

[00348] Em algumas modalidades, A é O e E é um grupo de fórmula: .

[00349] Em alguns aspectos dessas modalidades, A é NH e E é um grupo de fórmula: .

[00350] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), E é clivável por uma enzima selecionada do grupo que consiste em uma esterase, uma redutase, uma oxidase e uma glicosidase ou glicosila transferase. Em outras modalidades, E é clivável não enzimaticamente em pH acídico ou fisiológico. Em algumas modalidades, E é um grupo acila, um grupo O-metil-acila, um grupo metila azido, um resíduo de açúcar, um acetal protegido ou um éster carbonato. Em algumas dessas modalidades, A é O. Em outras modalidades, A é NH.

[00351] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), um grupo acila é selecionad do grupo que consiste em formila, acetila, cloroacetila, dicloroacetila, tricloroacetila, cianoacetila, mono-metila malonato, mono-etila malonato, metoxiacetila, etoxiacetila, t- butoxiacetila, fenoxiacetila, t-butilfenoxiacetila, glicolato, acetilglicolato, propionato, 2-cloropropionato, 3-cloropropionato, 2-cianopropionato, 3- cianopropionato, N-acetil-glicinato, N-trifluoroacetila glicinato, N-acetila alanilato, N-trifluoroacetila alanilato, N-acetila fenilalanilato, N- trifluoroacetila fenilalanilato, N-acetila valinilato, N-trifluoroacetila valinilato, N-cetiretil-fenilalanilato, pivalominato de óxido de nitrato, pivalutilato de óxido de citrunilinato, isobalutato de pivalutinato, mono- etiloxalato, mono-metila succinato, mono-etila succinato, hidroxila butirato, acetoxibutirato, acetilbutirato, hexanoato, palmitato, estearato, benzoato, cloro-benzoato, dicloro-benzoato, pentaclorobenzoato, ciano-benzoato, aminobenzoato, acetamino-benzoato, mono-metil- ftalato, mono-etil-ftalato, metoxi-benzoato, trimetoxibenzoato, trifluorometilbenzoato, dimetilaminobenzoato e metilsulfonilbenzoato. Em algumas modalidades, E é um grupo acila selecionado de formila, acetila, propionila, acrilila, pivaloila e benzoila.

[00352] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), E é clivável por uma enzima esterase. Por exemplo, E é um grupo acila (por exemplo, qualquer um dos grupos acila aqui descritos), um éster carbonato ou um éster O-metil-acílico.

[00353] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), E é clivável por uma redutase.

[00354] Em alguns aspectos dessas modalidades, A é O e E é um grupo de fórmula: .

[00355] Em alguns aspectos dessas modalidades, A é NH e E é um grupo de fórmula: N3 .

[00356] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), E é clivável por uma glutationa. Em alguns aspectos dessas modalidades, A é NH. Em outros aspectos dessas modalidades, E é uma porção da fórmula: .

[00357] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), E é clivável por uma glicosidase. Em alguns aspectos dessas modalidades, E é um resíduo de um açúcar (por exemplo, glicose, galactose ou manose).

[00358] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), E é clivável em pH fisiológico por meio do mecanismo de eliminação β. Por exemplo, E é selecionado do grupo de qualquer uma das seguintes fórmulas: ; ; ou ,

[00359] em que R é selecionado de H, C1-10 alquila, OH, NO2, CN,

halogênio e acetila. Em outro exemplo de porções cliváveis em pH fisiológico, E é um grupo acila (por exemplo, qualquer um dos grupos acila aqui descritos, como pivaloila ou benzoila).

[00360] Em outro exemplo de porções cliváveis em pH fisiológico por meio do mecanismo de eliminação β, A é NRN ou NR3 e E é uma porção clivável de fórmula: ,

[00361] em que:

[00362] R9 é selecionado de H, um C6-10 arila opcionalmente substituída, e um C1-6 alquila opcionalmente substituída;

[00363] R10 e R11 são, cada um, independentemente selecionados de H, CN, NO2, COR12, SOR12 ou SO2R12, um C1-6 alquila opcionalmente substituída, um C6-10 arila opcionalmente substituída, e um heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída; ou

[00364] R10 e R11 juntamente com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados formam um anel C3-7 cicloaquila opcionalmente substituída que é fundido com um ou mais anéis C6-10 arila opcionalmente substituídas;

[00365] R12 é selecionado de um C1-6 alquila opcionalmente substituída e um C6-10 arila opcionalmente substituída. Em alguns aspectos dessas modalidades, A é NH e R9 é selecionado de H e um C6-10 arila opcionalmente substituída.

[00366] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), E é uma porção clivável de qualquer uma das seguintes fórmulas (E-1) a (E-12), (E-37) e (E-39) para (E-41):

(E-1), (E-2), (E-3), (E-4), (E-5), (E-6), (E-7),

O O O O O O S

S O O CH3 (E-8), (E-9), (E-10),

O

O O (E-11) (E-12), (E-37), (E-39), (E-40), (E-41),

[00367] em que qualquer um dos anéis de fenila nas fórmulas (E-1)

a (E-12), (E-37) e (E-39) a (E-41) é opcionalmente substituído por 1, 2, 3, 4 , ou 5 substituintes selecionados de C1-10 alquila, C1-10 haloalquila, C1-10 alcóxi,óxi, OH, NO2, CN, halogênio e acila. Em alguns aspectos dessas modalidades, E é uma porção clivável de qualquer uma das fórmulas (E-1) a (E-12). Em algumas modalidades, os substituintes nos anéis de fenila das fórmulas (E-1) a (E-12), (E-37) e (E-39) a (E- 41) modificam a estabilidade e a labilidade para os grupos cliváveis. Em um exemplo, a porção clivável E pode ser um tipo fluorenilmetila carbamida tendo a seguinte fórmula: (E-6a).

[00368] Em um exemplo, a porção clivável E pode ser um tipo fluorenilmetila carbamida tendo a seguinte fórmula: (E-6b).

[00369] A introdução de substituintes R que retiram elétrons, tais como, por exemplo, ciano, halogênio, nitro, sulfonila ou acila, pode aumentar a taxa de eliminação β e liberação de AH livre. Em contraste, a introdução de substituintes R doadores de elétrons, tais como, por exemplo, C1-6 alquila ou silila pode estabilizar a porção E contra a eliminação β.

[00370] Carbamatos e carbonatos de β-fenilsulfoniletila substituídos, tais como grupos (4-X-fenil)sulfoniletoxicarbonila (PSEC ou XPSEC), são exemplos dessas porções úteis: (E-4a),

[00371] em que o substituinte X é selecionado do grupo que consiste em H, C1-10 alquila, C1-10 haloalquila, C1-10 alcóxi,óxi, OH, NO2, CN, halogênio e acila. Em algumas modalidades, X é selecionado de H, Cl e metóxi.

[00372] Em algumas modalidades, o grupo PSEC é um grupo de fórmula: (cloro-PSEC) ou (E-38).

[00373] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), qualquer um dos anéis de fenila nas fórmulas (E-1) a (E-12), (E-37) ou (E-39) a (E -41) é opcionalmente substituído por 1, 2, 3 ou substituintes selecionados de F, Cl, CN, acetila, NO2 e CF3. Por exemplo, (E-1) pode ser substituído por F para resultar na fórmula (E- 42): .

[00374] Em algumas modalidades da Fórmula (I) e da Fórmula (II), E não é (E-38).

[00375] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), E é clivável em pH acídico. Por exemplo, E é uma porção selecionada de um acetal, um orto-éster e um trifenila metiléter substituído. Em um outro exemplo de porções E cliváveis em pH acídico, E pode ser selecionado de tetra-hidrofuranila, 4-metoxitetra-hidropiran-4-ila, 1,5- dicarbo-metoxipentanila, metóxi isopropila acetal, metóxi ciclo-hexenila acetal, dimetoxitritila, trimetoxitritila.

[00376] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), uma porção E que é clivável por bases em pH fisiológico por meio do mecanismo de eliminação β, ou é clivável de uma maneira autocatalítica que começa com a desprotonação do grupo amino mais básico no grupo E. Em um exemplo, tal porção E é uma oligoamida (por exemplo, diamida ou triamida). Em alguns aspectos dessas modalidades, A é nitrogênio (por exemplo, A é NH). Por exemplo, E é qualquer uma das oligoamidas descritas na Publicação U.S. US 2015/0057221, Publicação U.S. US 2014/0249093, Patente U.S.

8.377.917, Patente U.S. 8.906.847, Patente U.S. 9.173.953 ou Patente U.S. 9.062.094, todas aqui incorporadas por referência. Em um exemplo, E é uma porção clivável selecionada de qualquer uma das seguintes fórmulas (E-13) a (E-36): (E-13); (E-14); (E-15); (E-16); (E-17); (E-18); (E-19); (E-20); (E-21); (E-22); (E-23); (E-24); (E-25); (E-26);

(E-27); (E-28); (E-29); (E-30); (E-31); (E-32); (E-33);

H N NH

N (E-34); O O (E-35); e (E-36),

[00377] em que R é conforme descrito neste documento.

[00378] Em algumas modalidades de Fórmula (I) ou Fórmula (II), uma porção E que é clivável em pH fisiológico, por exemplo, através do mecanismo de eliminação β, é qualquer uma da porção eliminativa β descrita, por exemplo, na Patente U.S. 9.387.245 ou Patente U.S.

8.754.190, ambas aqui incorporadas por referência.

[00379] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), uma porção E é ligada a A usando um grupo da Fórmula (LE): (LE),

[00380] em que a denota um ponto de ligação a A e b denota um ponto de ligação a E. Em alguns aspectos dessas modalidades, A é O.

Em outros aspectos dessas modalidades, após a clivagem da porção E, o grupo de fórmula LE sofre reação de decomposição para produzir CO2 e um composto de fórmula: ,

[00381] liberando assim um grupo Aˉ livre, que pode então sofrer um ataque nucleofílico no átomo de fósforo no composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II). O grupo Aˉ também pode ser protonado para produzir o grupo AH antes do ataque nucleofílico.

[00382] Em um exemplo, no composto de Fórmula (II-8a), a porção clivável de cloro-PSEC E é ligada a A usando o grupo de fórmula LE. Quando a porção cloro-PSEC no composto (II-8a) é clivada não enzimaticamente através do mecanismo de eliminação β, a decomposição resultante da porção LE pode ocorrer, por exemplo, como mostrado no Esquema 3. Esquema 3 Fórmula

[00383] Em algumas modalidades, qualquer uma das porções cliváveis (E-1) a (E-36) pode ser ligada a A usando uma porção de fórmula (LE).

[00384] Em algumas modalidades, uma porção E pode ser clivada por meio de catálise enzimática, através de um mecanismo de eliminação β em pH fisiológico, ou pode ser hidrolisada em um pH acídico. Por exemplo, quando um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) é submetido a condições enzimáticas em pH fisiológico, o grupo E no composto pode ser clivado pela enzima ou clivado por eliminação β, ou ambos, dependendo de qual reação é cineticamente favorável nas condições dadas. Em outro exemplo, quando um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) é submetido a condições enzimáticas em pH acídico, o grupo E no composto pode ser clivado pela enzima ou hidrolisado, ou ambos, dependendo da diferença em energia de ativação para a reação de hidrólise enzimática e a reação de hidrólise acídica. Polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos

[00385] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), D compreende um resíduo de qualquer um do polipeptídeo do peptídeo semelhante ao glucagon 1 (GLP-1) ou análogos dos mesmos aqui descritos. O resíduo de um polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos na Fórmula (I) ou Fórmula (II) pode ser mostrado como "D" ou "Droga", cujos símbolos são usados aqui indistintamente.

[00386] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), HZ3- pode representar um grupo amino ou um grupo hidroxila da cadeia lateral de um aminoácido dentro da espinha dorsal de polipeptídeo (por exemplo, lisina), e D representa o resto da espinha dorsal de polipeptídeo. Por exemplo, HZ3- pode ser um grupo ε-amino de uma lisina. Em outro exemplo, HZ3- pode ser um grupo OH- de uma serina.

[00387] Em algumas modalidades da Fórmula (I) ou Fórmula (II), HZ3- pode representar um grupo amino ou um grupo hidroxila do terminal da espinha dorsal de polipeptídeo (por exemplo, a amina terminal da histidina), e D representa o resto da espinha dorsal de polipeptídeo. Por exemplo, HZ3- pode ser o grupo amina N-terminal do aminoácido N-terminal (por exemplo, histidina). Em outro exemplo, HZ3- pode ser um grupo OH- do ácido carboxílico C-terminal do aminoácido terminal do polipeptídeo.

[00388] Em algumas modalidades de um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II), quando Z3 está ausente, antes de ser conjugado para formar o composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II), o polipeptídeo GLP- 1 ou análogos dos mesmos podem ser descritos como um composto de fórmula H2N-D. Neste exemplo, a porção de fórmula: ,

[00389] no grupo autoimolativo, MA de qualquer uma das fórmulas (a)-(g) representa a parte da droga, após a droga ser conjugada para formar o composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II). Nesta porção, x representa um ponto de ligação a MA’ (conforme descrito neste documento) do grupo autoimolativo, ou ao H- da droga H2N-D antes da conjugação, e y representa um ponto de ligação a D.

[00390] Em algumas modalidades de um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II), quando Z3 está ausente, antes de ser conjugado para formar o composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II), o polipeptídeo GLP- 1 ou análogos dos mesmos podem ser descritos como um composto de fórmula H2N-D. Neste caso, quando o polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos tem a fórmula H2N-D, a porção H2N- representa um grupo amina terminal do polipeptídeo GLP-1 ou análogo do mesmo, e D compreende um resíduo do polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos.

[00391] Em um exemplo, antes de ser conjugado para formar um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II), como aqui descrito, o polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos podem ser descritos como um composto de fórmula HZ3D, em que HZ3- representa um grupo amino ou hidroxila reativo do polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos (quando Z3 é nitrogênio ou oxigênio, respectivamente) e D compreende um resíduo do polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos. Em um exemplo, antes de ser conjugado para formar um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II), como aqui descrito, o polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos podem ser descritos como um composto de Fórmula HZ3D, em que HZ3- representa um grupo amino- ou hidroxil- do polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos (quando Z3 é nitrogênio ou oxigênio, respectivamente), e D é um resíduo do polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos.

[00392] Exemplos não limitativos de polipeptídeos GLP-1 ou análogos dos mesmos incluem:

[00393] GLP-1 (1-37):

[00394] HDEFERHAEGTFTSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVKGR G (SEQ ID NO:1)

[00395] GLP-1 (7-37):

[00396] HAEGTFTSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVKGR G (SEQ ID NO:2)

[00397] em que esta sequência corresponde aos aminoácidos 7-37 da sequência de polipeptídeo GLP-1 (1-37).

[00398] Liraglutida (VICTOZA®; K26 liraglutide) é um análogo de polipeptídeo GLP-1 com uma cadeia de ácido graxo C16 (palmítico) via um espaçador de glutamila fora do resíduo de lisina e é representada como:

[00399] HAEGTFTSDV SSYLEGQAAK(γ-Glu-palmitoil) EFIAWLVRGR G (SEQ ID NO:3)

[00400] em que esta sequência é um análogo dos aminoácidos 7- 37 da sequência de polipeptídeo GLP-1 (1-37).

[00401] Fragmento de liraglutida 1:

[00402] HAEGTFTSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVRGR G (SEQ ID NO:4)

[00403] Fragmento de liraglutida 2:

[00404] EGTFTSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVRGR G (SEQ ID NO:5)

[00405] Fragmento de liraglutida 3:

[00406] TSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVRGR G (SEQ ID NO:6)

[00407] Fragmento de liraglutida 4:

[00408] AK EFIAWLVRGR G (SEQ ID NO:7)

[00409] Dulaglutida (LY2189265, TRULICITY®), que é uma molécula que consiste em duas cadeias idênticas, ligadas por dissulfeto, cada uma contendo uma sequência análoga de GLP-1 humana covalentemente ligada a um fragmento de cadeia pesada de imunoglobulina G4 (IgG4) humana modificado (Fc) por um pequeno peptídeo ligante.

[00410] A sequência análogo do GLP-1 é representada como:

[00411] HGEGTFTSDV SSYLEEQAAK EFIAWLVKGG G (SEQ ID NO:8)

[00412] A sequência de imunoglobulina é representada como:

[00413] ESK YGPPCPPCPA PEAAGGPSVF LFPPKPKDTL

MISRTPEVTC VVVDVSQEDP EVQFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQFNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPSS IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSQEEMTKN QVSLTCLVKG

FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSRLT VDKSRWQEGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSLG (SEQ ID NO:9)

[00414] O pequeno ligante de peptídeo é representado como:

[00415] GGGGSGGGG SGGGGSA (SEQ ID NO:10)

[00416] A sequência completa para um monômero de Dulaglutida (LY2189265, TRULICITY®) é representada como:

[00417] HGEGTFTSDV SSYLEEQAAK EFIAWLVKGG

GGGGGSGGGG SGGGGSAESK YGPPCPPCPA PEAAGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSQEDPEVQFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQFNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPSS IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSQEEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD

GSFFLYSRLT VDKSRWQEGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSLG (SEQ ID NO:11)**Locais de pontes dissulfeto:55-55′ 58-58′ 90- 150 90′-150′ 196-254 196′-254′

[00418] Exenatida (BYETTA®, BYDUREON, Exendina-4) e Exenatida LAR (a porção de GLP-1 é a mesma):

[00419] HGEGTFTSDL SKQMEEEAVR LFIEWLKNGG PSSGAPPPS (SEQ ID NO:12)

[00420] Taspoglutida:

[00421] HXEGTFTSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVKXR (SEQ ID NO:13)

[00422] em que X é 2-metila alanina

[00423] Lixisenatida (LYXUMIA®):

[00424] HGEGTFTSDL SKQMEEEAVR LFIEWLKNGG PSSGAPPSKK KKKK (SEQ ID NO:14)

[00425] em que T é treonina e I é isoleucina

[00426] Albiglutida (TANZEUM®) é um polipeptídeo que consiste em 645 aminoácidos proteinogênicos com 17 pontes dissulfeto. Os aminoácidos 1–30 e 31–60 constituem duas cópias do GLP-1 humano modificado.

[00427] O fragmento GLP1 é representado por:

[00428] HGEGTFTSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVKGR (SEQ ID NO:15)

[00429] A sequência completa de albiglutida é representada como:

[00430] HGEGTFTSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVKGR

HGEGTFTSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVKGR DAHKSEVAHR FKDLGEENFK ALVLIAFAQY LQQCPFEDHV KLVNEVTEFA KTCVADESAE NCDKSLHTLF GDKLCTVATL RETYGEMADC CAKQEPERNE CFLQHKDDNP NLPRLVRPEV DVMCTAFHDN EETFLKKYLY EIARRHPYFY APELLFFAKR YKAAFTECCQ AADKAACLLP KLDELRDEGK ASSAKQRLKC ASLQKFGERA FKAWAVARLS QRFPKAEFAE VSKLVTDLTK

[00431] VHTECCHGDL LECADDRADL AKYICENQDS

ISSKLKECCE KPLLEKSHCI AEVENDEMPA DLPSLAADFV ESKDVCKNYA EAKDVFLGMF LYEYARRHPD YSVVLLLRLA KTYETTLEKC CAAADPHECY AKVFDEFKPL VEEPQNLIKQ NCELFEQLGE YKFQNALLVR YTKKVPQVST PTLVEVSRNL GKVGSKCCKH PEAKRMPCAE DYLSVVLNQL CVLHEKTPVS DRVTKCCTES

[00432] LVNRRPCFSA LEVDETYVPK EFNAETFTFH

ADICTLSEKE RQIKKQTALV ELVKHKPKAT KEQLKAVMDD FAAFVEKCCK ADDKETCFAE EGKKLVAASQ AALGL (SEQ ID NO:16)

[00433] Semaglutida (OZEMPIC®):

[00434] H-Aib-EGTFTSDV SSYLEGQAAK(AEEAc-AEEAc-γ-Glu- 17-carboxi-heptadecanoil) EFIAWLVRGR G (SEQ ID NO:17)

[00435] em que Aib é ácido α-aminoisobutírico.

[00436] Ilustrações de uma seleção de análogos de GLP-1 são fornecidas na Figura 8. See also Dods, R. L. and Donnelly, D. Bioscience Reports 36(1) e2085 (Jan. 15, 2016); e Li, Y et al. Reviews in Neurosciences 27(7): 689-711 (2016).

[00437] Em algumas modalidades, um peptídeo semelhante ao glucagon 2 (GLP-2) ou análogos dos mesmospodem ser usados no lugar do polipeptídeo GLP-1 e análogos dos mesmos aqui descritos. Exemplos não limitativos do polipeptídeo GLP-2 e análogos dos mesmos incluem:

[00438] GLP-2:

[00439] HADGSFSDEM NTILDNLAAR DFINWLIQTK ITD (SEQ ID

NO:18)

[00440] Teduglutida (GATTEX®):

[00441] HGDGSFSDEM NTILDNLAAR DFINWLIQTK ITD (SEQ ID NO:19)

[00442] FE203799:

[00443] HGDGSFSDENle[d-Phe]TILDLLAARDFINWLIQTKITD (SEQ ID NO:20)

[00444] Glepaglutida (ZP1848):

[00445] HGEGTFSSEL ATILDALAAR DFIAWLIATK ITD-KKKKKK (SEQ ID NO:21)

[00446] Elsiglutida (ZP1846):

[00447] HGEGSFSSELSTILDALAARDFIAWLIATKITDKKKKKK (SEQ ID NO:22)

[00448] Qualquer uma das sequências acima pode estar presente em polipeptídeos com pelo menos 80% de identidade de sequência com qualquer uma das sequências acima. Por exemplo, um composto fornecido aqui pode compreender um polipeptídeo com pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 88%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% de identidade de sequência com a sequência recitada. Por exemplo, D compreende um resíduo de um polipeptídeo GLP-1 ou um análogo do mesmo, em que o polipeptídeo GLP-1 ou análogo do mesmo tem pelo menos 80% de identidade de sequência (por exemplo, pelo menos 85%, pelo menos 88%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%) para um polipeptídeo GLP-1 ou análogo do mesmo, conforme fornecido aqui.

[00449] Em algumas modalidades, o polipeptídeo tem 30 a 100 aminoácidos de comprimento. Por exemplo, 31 a 100 aminoácidos de comprimento, 35 a 100 aminoácidos de comprimento, 40 a 100 aminoácidos de comprimento, 50 a 100 aminoácidos de comprimento, 60 a 100 aminoácidos de comprimento, 70 a 100 aminoácidos de comprimento , 80 a 100 aminoácidos de comprimento, 90 a 100 aminoácidos de comprimento, 30 a 90 aminoácidos de comprimento, 30 a 80 aminoácidos de comprimento, 30 a 70 aminoácidos de comprimento, 30 a 60 aminoácidos de comprimento, 30 a 50 aminoácidos de comprimento, 30 a 40 aminoácidos de comprimento, 40 a 60 aminoácidos de comprimento, 50 a 70 aminoácidos de comprimento, 31 a 41 aminoácidos de comprimento ou 31 a 50 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o polipeptídeo tem menos de 50 aminoácidos de comprimento. Por exemplo, menos de 45 aminoácidos de comprimento, menos de 40 aminoácidos de comprimento ou menos de 35 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o polipeptídeo tem 30 a 300 aminoácidos de comprimento. Por exemplo, 31 a 300 aminoácidos de comprimento, 50 a 300 aminoácidos de comprimento, 80 a 300 aminoácidos de comprimento, 90 a 300 aminoácidos de comprimento, 100 a 300 aminoácidos de comprimento, 150 a 300 aminoácidos de comprimento , ou 200 a 300 aminoácidos de comprimento.

[00450] A percentagem de identidade de sequência entre um ácido nucleico particular ou sequência de aminoácidos e uma sequência referenciada por um número de identificação de sequência particular é determinada como se segue. Em primeiro lugar, uma sequência de ácido nucleico ou aminoácido é comparada com a sequência estabelecida em um número de identificação de sequência particular usando o programa BLAST 2 Sequences (B12seq) da versão autônoma de BLASTZ contendo BLASTN versão 2.0.14 e BLASTP versão 2.0.14 Esta versão independente do BLASTZ pode ser obtida online em fr.com/blast ou em ncbi.nlm.nih.gov. As instruções que explicam como usar o programa B12seq podem ser encontradas no arquivo leia-me que acompanha o BLASTZ.

O B12seq realiza uma comparação entre duas sequências usando o algoritmo BLASTN ou BLASTP.

BLASTN é usado para comparar sequências de ácido nucleico, enquanto BLASTP é usado para comparar sequências de aminoácidos.

Para comparar duas sequências de ácido nucleico, as opções são definidas da seguinte forma: -i é definido como um arquivo que contém a primeira sequência de ácido nucleico a ser comparada (por exemplo, C:\seql.txt); -j é definido como um arquivo contendo a segunda sequência de ácido nucleico a ser comparada (por exemplo, C: seq2.txt); -p é definido como blastn; -o é definido com qualquer nome de arquivo desejado (por exemplo, C:\output.txt); -q é definido como -1; -r é definido como 2; e todas as outras opções são deixadas em suas configurações padrão.

Por exemplo, o seguinte comando pode ser usado para gerar um arquivo de saída contendo uma comparação entre duas sequências: C:\B12seq -i c:\seql.txt -j c:\seq2.txt -p blastn -o c:\output.txt -q -1 -r 2. Para comparar duas sequências de aminoácidos, as opções de B12seq são definidas da seguinte forma: -i é definido como um arquivo que contém a primeira sequência de aminoácidos a ser comparada (por exemplo, C:\seql.txt); -j é definido como um arquivo que contém a segunda sequência de aminoácidos a ser comparada (por exemplo, C:\seq2.txt); -p é definido como blastp; -o é definido com qualquer nome de arquivo desejado (por exemplo, C:\output.txt); e todas as outras opções são deixadas em suas configurações padrão.

Por exemplo, o seguinte comando pode ser usado para gerar um arquivo de saída contendo uma comparação entre duas sequências de aminoácidos: C:\B12seq -i c:\seql.txt -j c:\seq2.txt -p blastp -o c:\output.txt.

Se as duas sequências comparadas compartilham homologia, o arquivo de saída designado apresentará essas regiões de homologia como sequências alinhadas.

Se as duas sequências comparadas não compartilham homologia, o arquivo de saída designado não apresentará sequências alinhadas.

[00451] Uma vez alinhado, o número de correspondências é determinado contando o número de posições onde um nucleotídeo idêntico ou resíduo de aminoácido é apresentado em ambas as sequências. A identidade de sequência percentual é determinada dividindo o número de correspondências pelo comprimento da sequência estabelecida na sequência identificada (por exemplo, SEQ ID NO: 1), ou por um comprimento articulado (por exemplo, 100 nucleotídeos consecutivos ou resíduos de aminoácidos de uma sequência estabelecida em uma sequência identificada), seguido pela multiplicação do valor resultante por 100. Por exemplo, uma sequência de aminoácidos que tem 25 correspondências quando alinhada com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 1 é 95,6 por cento idêntica à sequência apresentada na SEQ ID NO: 1 (ou seja, 25/31 x 100 = 80,6) . É de notar que o valor de identidade de sequência percentual é arredondado para o décimo mais próximo. Por exemplo, 75,11, 75,12, 75,13 e 75,14 são arredondados para 75,1, enquanto 75,15, 75,16, 7,17, 75,18 e 7,19 são arredondados para 7,2. Observe também que o valor do comprimento sempre será um número inteiro.

[00452] Os análogos aqui fornecidos incluem variantes polipeptídicas tendo, por exemplo, uma ou mais substituições, deleções ou inserções de aminoácidos. Em algumas modalidades, a variante tem pelo menos uma substituições, deleções ou inserções de aminoácidos. Em algumas modalidades, a variante tem pelo menos duas substituições, deleções ou inserções de aminoácidos. Em algumas modalidades, a variante tem pelo menos três substituições, deleções ou inserções de aminoácidos. Análogos, conforme fornecidos neste documento, incluem fragmentos. Como utilizado neste documento, "fragmento", conforme aplicado a um polipeptídeo, normalmente terá pelo menos 10 resíduos, mais tipicamente pelo menos 20 resíduos e, de preferência, pelo menos 30 (por exemplo, 50) resíduos de comprimento, mas menos do que a totalidade, da sequência intacta. Análogos (por exemplo, variantes e fragmentos) podem ser gerados por métodos conhecidos pelos versados na técnica, por exemplo, por digestão enzimática de proteína de ocorrência natural ou recombinante, por técnicas de DNA recombinante usando um vetor de expressão que codifica um fragmento definido, ou por síntese química.

[00453] Em algumas modalidades, os polipeptídeos GLP-1 ou análogos dos mesmos, incluindo aqueles de SEQ ID NO: 1 - SEQ ID NO: 22, são biologicamente inativos ou apenas fracamente biologicamente ativos quando conjugados a uma porção alifática (por exemplo, PEG) como na Fórmula (I) ou Fórmula (II), em comparação com as formas livres não conjugadas dos polipeptídeos. Os polipeptídeos podem recuperar sua atividade biológica após a liberação da porção alifática (por exemplo, porção PEG) do composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II). Por exemplo, o composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) tem a capacidade de funcionar como uma pró-droga em mamíferos (por exemplo, humanos); permanecer inativo em comparação com o polipeptídeo GLP-1 não conjugado ou um análogo do mesmo, até que o polipeptídeo GLP-1 ou um análogo do mesmo seja liberado da porção alifática (por exemplo, porção PEG) de Fórmula (I) ou Fórmula (II). Em alguns casos, como mostrado na Figura 9, o composto 7 (onde o polipeptídeo liraglutida é conjugado a uma porção de PEG) permanece inativo em comparação com a liraglutida não conjugada, até que a liraglutida seja liberada da porção alifática (por exemplo, uma porção de PEG) do composto 7 (Veja os resultados experimentais e a discussão no Exemplo 11). Polímeros

[00454] Em algumas modalidades, a porção alifática pode ser um polímero. Um polímero, conforme descrito neste documento, pode ser ramificado ou linear. Por exemplo, um polímero pode ter de 2 a 100 terminais (por exemplo, 2 a 80, 2 a 75, 2 a 60, 2 a 50, 2 a 40, 2 a 35, 2 a 25, 2 a 10, 2 a 5 , 4 a 20, 5 a 25, 10 a 50, 25 a 75, 3 a 6, 5 a 15 terminais). Em algumas modalidades, um polímero pode ter de 2 a 5, 4 a 6, 5 a 6 ou 3 a 6 terminais. Em algumas modalidades, um polímero é linear e, portanto, tem 2 terminais. Em algumas modalidades, um terminal de um polímero é covalentemente ligado à estrutura de qualquer uma das fórmulas fornecidas neste documento.

[00455] Um polímero pode ser, por exemplo, poli(alquileno glicol), poli(poliol oxietilado), poli(álcool olefínico), poli(β-hidróxi ácido), poli(álcool vinílico), polioxazolina ou um copolímero do mesmo. Um polialquileno glicol inclui poliéter polióis poliméricos lineares ou ramificados. Esses polialquileno glicóis incluem, mas não estão limitados a, polietileno glicol (PEG), polipropileno glicol, polibutileno glicol e derivados dos mesmos. Outras modalidades exemplificativas são listadas, por exemplo, em catálogos de fornecedores comerciais, como o catálogo da Shearwater Corporation “Polyethylene glycol and Derivatives for Biomedical Applications” (2001).

[00456] Em algumas modalidades, esses poliéter polióis poliméricos têm pesos moleculares médios entre cerca de 0,1 kDa a cerca de 100 kDa. Por exemplo, tais polióis poliéter poliméricos incluem, mas não estão limitados a, entre cerca de 500 Da e cerca de 100.000 Da ou mais. O peso molecular do polímero pode estar entre cerca de 500 Da e cerca de 100.000 Da. Por exemplo, um polímero usado aqui pode ter um peso molecular de cerca de 100.000 Da, 95.000 Da, 90.000 Da,

85.000 Da, 80.000 Da, 75.000 Da, 70.000 Da, 65.000 Da, 60.000 Da,

55.000 Da, 50.000 Da, 45.000 Da, 40.000 Da, 35.000 Da, 30.000 Da,

25.000 Da, 20.000 Da, 15.000 Da, 10.000 Da, 9.000 Da, 8.000 Da,

7.000 Da, 6.000 Da, 5.000 Da, 4.000 Da, 3.000 Da, 2.000 Da, 1.000

Da, 900 Da , 800 Da, 700 Da, 600 Da e 500 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do polímero está entre cerca de 500 Da e cerca de 50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do polímero está entre cerca de 500 Da e cerca de 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do polímero está entre cerca de 1.000 Da e cerca de 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do polímero está entre cerca de 5.000 Da e cerca de 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do polímero está entre cerca de 10.000 Da e cerca de 40.000 Da.

[00457] Em algumas modalidades, um polímero é um poli(etilenoglicol) linear ou ramificado.

[00458] Em algumas modalidades, a molécula de poli(etilenoglicol) é um polímero linear. O PEG linear pode ser alquilado (por exemplo, metilado ou etilado), em um terminal, mas eles podem ser incorporados ao conjugado de qualquer uma das fórmulas aqui divulgadas usando o terminal livre na forma de hidroxila não derivatizada. O peso molecular do PEG de cadeia linear pode estar entre cerca de 1.000 Da e cerca de

100.000 Da. Por exemplo, um PEG de cadeia linear usado aqui pode ter um peso molecular de cerca de 100.000 Da, 95.000 Da, 90.000 Da,

85.000 Da, 80.000 Da, 75.000 Da, 70.000 Da, 65.000 Da, 60.000 Da,

55.000 Da, 50.000 Da, 45.000 Da, 40.000 Da, 35.000 Da, 30.000 Da,

25.000 Da, 20.000 Da, 15.000 Da, 10.000 Da, 9.000 Da, 8.000 Da, 7.000 Da, 6.000 Da, 5.000 Da, 4.000 Da, 3.000 Da, 2.000 Da e 1.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG de cadeia linear está entre cerca de 1.000 Da e cerca de 50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG de cadeia linear está entre cerca de 1.000 Da e cerca de 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG de cadeia linear está entre cerca de 5.000 Da e cerca de 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG de cadeia linear está entre cerca de 5.000 Da e cerca de 20.000 Da.

[00459] Em algumas modalidades, a molécula de poli(etilenoglicol) é um polímero ramificado. Por exemplo, o PEG ramificado pode estar em forma de V ou em forma de T, dependendo do método pelo qual o PEG foi sintetizado. O peso molecular do PEG de cadeia ramificada pode estar entre cerca de 1.000 Da e cerca de 100.000 Da. Por exemplo, um PEG de cadeia ramificada usado aqui pode ter um peso molecular de cerca de 100.000 Da, 95.000 Da, 90.000 Da, 85.000 Da, 80.000 Da,

75.000 Da, 70.000 Da, 65.000 Da, 60.000 Da, 55.000 Da, 50.000 Da,

45.000 Da, 40.000 Da, 35.000 Da, 30.000 Da, 25.000 Da, 20.000 Da,

15.000 Da, 10.000 Da, 9.000 Da, 8.000 Da, 7.000 Da, 6.000 Da, 5.000 Da, 4.000 Da, 3.000 Da, 2.000 Da e 1.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG de cadeia ramificada está entre cerca de 1.000 Da e cerca de 50.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG de cadeia ramificada está entre cerca de 1.000 Da e cerca de 40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG de cadeia ramificada está entre cerca de 5.000 Da e cerca de

40.000 Da. Em algumas modalidades, o peso molecular do PEG de cadeia ramificada está entre cerca de 5.000 Da e cerca de 20.000 Da.

[00460] Em algumas modalidades, o polietileno glicol (linear ou ramificado) tem um peso molecular médio de cerca de 500 Da a cerca de

40.000 Da, de cerca de 1.000 Da a cerca de 30.000 Da, de cerca de

1.000 Da a cerca de 20.000 Da, de cerca de 5.000 Da a cerca de 20.000 Da.

[00461] Em algumas modalidades, o polímero (por exemplo, o polietileno glicol), conforme fornecido neste documento, tem a seguinte fórmula estrutural: .

[00462] Em algumas modalidades, n é um número inteiro de 1 a

1.000, de 1 a 800, de 1 a 300 ou de 1 a 100. Em algumas modalidades, n é selecionado de 10, 20, 50, 100, 200, 250, 300, 500, 600 e 1000.

[00463] Outros exemplos de polímeros adequados podem ser encontrados, por exemplo, em Chen. S. et al. Polymer 51 (2010) 5283- 5293, que é incorporado neste documento por referência em sua totalidade. Compostos Exemplificativos

[00464] Exemplos não limitativos dos compostos fornecidos neste documento incluem: Liraglutida Liraglutida Liraglutida

Liraglutida

Liraglutida

Liraglutida

Liraglutida

Liraglutida Liraglutida Liraglutida

[00465] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liragludida é o resíduo de liragludida; e Ura é uracila. Sais farmaceuticamente aceitáveis

[00466] Em algumas modalidades, um sal de um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) divulgado aqui é formado entre um ácido e um grupo básico do composto, tal como um grupo funcional amino, ou uma base e um grupo acídico do composto, tal como um grupo funcional carboxila. De acordo com outra modalidade, o composto é um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável.

[00467] Em algumas modalidades, os ácidos comumente usados para formar sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) divulgados neste documento incluem ácidos inorgânicos, tais como bissulfeto de hidrogênio, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido iodídrico, ácido sulfúrico e ácido fosfórico, bem como ácidos orgânicos, como ácido para-toluenossulfônico, ácido salicílico, ácido tartárico, ácido bitartárico, ácido ascórbico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido glucônico, ácido glucurônico, ácido fórmico, ácido glutâmico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido lático, ácido oxálico, ácido para-bromofenilsulfônico, ácido carbônico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzoico e ácido acético, bem como ácidos inorgânicos e orgânicos relacionados. Tais sais farmaceuticamente aceitáveis incluem gluconato, pirossulfato, bissulfato, sulfito, bissulfito, fosfato, mono-hidrogenofosfato, di-hidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, cloreto, brometo, iodeto, acetato, propionato, decanoato, caprilato, formato, isobutirato, caprilato, heptanoato, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, sebacato, fumarato, maleato, butino- 1,4-dioato, hexino-1,6-dioato, benzoato, clorobenzoato, metilbenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, ftalato, tereftalato, sulfonato, sulfonato de xileno, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, β-hidroxibutirato, glicolato, maleato, tartarato, metanossulfonato, propanossulfonato, naftaleno-1-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, mandelato e outros sais. Em uma modalidade, os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles formados com ácidos minerais, como ácido clorídrico e ácido bromídrico, e especialmente aqueles formados com ácidos orgânicos, como ácido maleico.

[00468] Em algumas modalidades, as bases comumente usadas para formar sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) divulgados aqui incluem hidróxidos de metais alcalinos, incluindo sódio, potássio e lítio; hidróxidos de metais alcalino-terrosos, como cálcio e magnésio; hidróxidos de outros metais, como alumínio e zinco; amoníaco, aminas orgânicas, tais como mono-, di- ou tri-alquilaminas não substituídas ou substituídas por hidroxila, diciclo-hexilamina; tributila amina; piridina; N-metila, N-

etilamina; dietilamina; trietilamina; mono-, bis- ou tris-(2-OH-(C1-C6)- alquilamina), tal como N,N-dimetil-N-(2-hidroxietil)amina ou tri-(2- hidroxietil)amina; N-metil-D-glucamina; morfolina; tiomorfolina; piperidina; pirrolidina; e aminoácidos, tais como arginina, lisina e semelhantes.

[00469] Em algumas modalidades, os compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) divulgados neste documento, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, são substancialmente isolados.

[00470] Em algumas modalidades, o presente pedido fornece compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) divulgados neste documento, ou sais farmaceuticamente aceitáveis, preparados por qualquer um dos processos descritos neste documento.

CASCATA DE HIDRÓLISE

[00471] Os conjugados fornecidos aqui proporcionam vantajosamente a liberação de um polipeptídeo GLP-1 ou análogo do mesmo. Em algumas modalidades, a liberação da droga ocorre em condições fisiológicas. Em algumas modalidades, o composto sofre clivagem seletiva de uma ou mais ligações químicas. Sem estar limitado por qualquer teoria particular, acredita-se que os conjugados podem fornecer a liberação do polipeptídeo GLP-1 ou análogo do mesmo de acordo com qualquer um dos mecanismos descritos nos seguintes Esquemas. Esquema 4

Clivagem do grupo E Fração alifática Fração alifática Fórmula (A) está ausente) Fração alifática

[00472] Os compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) podem sofrer uma cascata de hidrólise e liberar a droga biologicamente ativa HZ3-D ou HO-(C=O)-D conforme descrito no Esquema 4. Com referência ao Esquema 4, quando o composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) é submetido a pH fisiológico, pH acídico ou condições enzimáticas como aqui descrito, a porção E é clivada seletivamente, deixando o composto 2a-1 com um grupo nucleofílico reativo –AH (por exemplo, - OH), que, por sua vez, reage com o átomo de fósforo levando à formação de um composto cíclico 2a-2 e o composto 2a-5 compreendendo o grupo autoimolativo MA. A quebra do grupo autoimolativo no composto 2a-5 leva à formação do composto 2a-4 que compreende o grupo MA’, e uma droga biologicamente ativa HZ3-D or HO-(C=O)-D. O fosfotriéster cíclico 2a-2 pode ser ainda hidrolisado em pH fisiológico, resultando na abertura do anel de 5 membros e formação de ambos os fosfodiésteres isoméricos: Fração alifática Fração alifática e .

[00473] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) pode sofrer uma cascata de hidrólise e liberar a droga biologicamente ativa conforme descrito no Esquema 5.

Esquema 5 A) Hidrólise enzimática Proteína B) Hidrólise dependente de pH Proteína Proteína

[00474] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) pode sofrer uma cascata de hidrólise e liberar o polipeptídeo GLP-1 ou análogo do mesmo, conforme descrito no Esquema 6. Esquema 6 1) Isto representa o caso quando Z¹ e Z² são oxigênios e Z³está ausente. 2) O grupo funcional que está presente em D é um carboxil. 3) O éster secundário ou terciário assim formado é substancialmente mais estável para hidrólise que benzoil – cinética de liberação é dependente de cinética de hidrólise de Bz.

[00475] Em algumas modalidades, quando MA é a Fórmula (I) ou a Fórmula (II) é um grupo da fórmula (i), a cascata de liberação pode ocorrer de acordo com o mecanismo mostrado no Esquema 7: Esquema 7

[00476] Em algumas modalidades, quando MA é a Fórmula (I) é um dirradical estável da fórmula (l), a cascata de liberação pode ocorrer de acordo com o mecanismo mostrado no esquema 8: Esquema 8

O O NH NH N O N O

HO O HO O O +

H O O O O R O OH D N O P O D N O P O H H

HN O HN O aliphatic moiety aliphatic moiety O Fração alifática O Fração alifática

O D N OH H HN O MÉTODOS EXEMPLIFICATIVOS PARA ESTUDOS DE RAZÕES DE REAÇÃO DE CLIVAGEM

[00477] Métodos exemplificativos para estudar a extensão da liberação de uma droga biologicamente ativa a partir de conjugados contendo grupos acila cliváveis são mostrados nos seguintes esquemas. Em algumas modalidades de qualquer um dos compostos representados nos esquemas, U é um uracila opcionalmente substituída. Esquema 9 A) Hidrólise alcalina Acil B) Hidrólise enzimática

[00478] Com referência ao esquema 9, a clivagem do fosfotriéster é seguida por separação por HPLC de fase reversa (RP) e quantificação do álcool DMTr-hidroxibenzílico liberado. Esquema 10 Acil A) Hidrólise alcalina Não fluorescente Acil B) Hidrólise enzimática Fluorescente

[00479] Com referência ao Esquema 10, o progresso da reação de liberação pode ser monitorado pela observação da fluorescência de umbeliferrona em desenvolvimento. Esquema 11. Acil U Acyl-O O

HO O

U CH2 H O O O-Acyl Acil Fluoresceína Fluorescein N A) Hidrólise alcalina A) Alkaline hydrolysis OH

N O O P O O Fluoresceína

O H

O -O P O + + CO2 + Fluorescein B) Enzymatic hydrolysis O PEG B) Hidrólise enzimática O

PEG

[00480] Com referência ao Esquema 11, o desaparecimento da fluorescência do material de partida de alto MW e a formação de produto fluorescente de baixo MW podem ser monitorados usando cromatografia de permeação em gel com detecção de fluorescência.

MÉTODOS DE FABRICAÇÃO Compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II)

[00481] Os compostos fornecidos neste documento podem ser preparados usando métodos semelhantes aos descritos em PCT / IB2018 / 051579 (WO 2018/163131), que é aqui incorporado por referência em sua totalidade.

[00482] Métodos sintéticos exemplificativos para a preparação de compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) da presente divulgação são descritos abaixo. Esquema 12

Etapa 1 Etapa 2 Etapa 3 Polímero Etapa 4 Polímero Etapa 5 Conversão direta para PG¹ = DMTr Polímero Polímero Etapa 6

[00483] Em algumas modalidades, o presente pedido fornece um método de preparação de um composto de Fórmula (II): Fração alifática (II),

[00484] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,

[00485] compreendendo reagir um composto de Fórmula (II-IV): Fração alifática (II-IV)

[00486] com uma droga biologicamente ativa de fórmula HZ3-D,

[00487] em que R1, R2, Z1, Z3, D, MA, A, E, E1, LG, e a porção alifática são como aqui descritos.

[00488] Em algumas modalidades, a reação é realizada em um solvente aquoso.

[00489] Em algumas modalidades, a reação é realizada em um tampão de fosfato 0,1 a 0,5 M, HEPES (ácido 4-(2-hidroxietil)-1- piperazinoetanossulfônico) ou tampão de carbonato. Em algumas modalidades, a reação é realizada em pH de cerca de 7,2 a cerca de 8,5, de cerca de 0°C a cerca da temperatura ambiente, de cerca de 30 min a cerca de 12 h. Em algumas modalidades, a reação é realizada à temperatura ambiente.

[00490] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II-IV) é preparado por um método que compreende:

[00491] desproteger um composto de Fórmula (II-Va): Fração alifática (II-Va)

[00492] para obter um composto de Fórmula (II-Vb): Fração alifática (II-Vb), e

[00493] reagir o composto de Fórmula (II-Vb) com um composto que compreende um grupo de saída para preparar um composto de Fórmula (II-IV).

[00494] Em algumas modalidades, a desproteção compreende tratar o composto de Fórmula (II-Va) com um ácido.

[00495] Em algumas modalidades, o composto que compreende um grupo de saída é um carbonato ativado. Por exemplo, o carbonato ativado tem a Fórmula (Vc) ou Fórmula (Vd), conforme descrito neste documento: (Vc) ou (Vd).

[00496] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II-Va) é preparado por um método que compreende reagir um composto de Fórmula (II-VIa): (II-VIa)

[00497] com uma porção alifática (por exemplo, polímero) compreendendo um grupo hidroxila reativo.

[00498] Em algumas modalidades, a reação é realizada na presença de um reagente de ativação (por exemplo, um reagente que reage estequiometricamente com fosfato formando um anidrido misto, que, por sua vez, é convertido em, por exemplo, um metilimidazolida, que finalmente reage com o grupo OH do polímero). Em algumas modalidades, o reagente de ativação é cloreto de mesitileno sulfonila, mesitileno sulfonila nitro triazol (MSNT) ou cloreto de tosila.

[00499] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II-VIa) é preparado desprotegendo o composto de Fórmula (II-VIb):

(II-VIb).

[00500] Em algumas modalidades, a desproteção é realizada de modo que o grupo de proteção de fosfato PG1 seja removido seletivamente para produzir o composto de Fórmula (II-VIa).

[00501] Em algumas modalidades, a desproteção é realizada na presença de uma base. Em algumas modalidades, a base é di- isopropiletilamina ou 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) ou trietilamina.

[00502] Em algumas modalidades, em que o composto de Fórmula (II-VIb) é preparado por um método que compreende reagir um composto de Fórmula (II-VIIa): (II-VIIa),

[00503] com um composto de Fórmula (II-VIIb): (VIIb),

[00504] em que cada R é independentemente um C1-C6-alquila, ou os dois grupos R em conjunto formam um anel de 5 ou 6 membros com o N ao qual eles estão ligados. Em algumas modalidades, cada R é isopropila. Em algumas modalidades, os dois grupos R juntos formam um anel de morfolina.

[00505] Em algumas modalidades, a reação é realizada na presença de um reagente de ativação. Por exemplo, o reagente de ativação é selecionado do grupo que consiste em: tetrazol, 2- etiltiotetrazol, 2-beziltiotetrazol, 4,5-dicianoimidazol, ativador 42, cloridrato de piridínio e trifluoroacetato de piridínio.

[00506] Em algumas modalidades, a etapa 2 desta reação é realizada na presença de um reagente oxidante. Por exemplo, o reagente oxidante oxida o átomo de fósforo do estado de oxidação P+3 para o estado de oxidação P+5. Exemplos de agentes oxidantes incluem iodo, peróxido de hidrogênio, peróxido de t-butila hidrogênio ou peróxido de acetona.

[00507] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II-VIIa) é preparado por um método que compreende reagir um composto de Fórmula (II-VIIIa): (II-VIIIa)

[00508] com um composto de Fórmula (VIIIb): (II-VIIIb),

[00509] em que Hal é um átomo de halogênio (por exemplo, Cl, Br ou I) e R é como aqui descrito. Em algumas modalidades, Hal é Cl.

[00510] Em algumas modalidades, a reação é realizada na presença de uma base.

[00511] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) quando Z3 está ausente pode ser preparado a partir do composto de fórmula (II-Vb), por exemplo, de acordo com o Esquema 13: Esquema 13

Fração alifática Fração alifática

[00512] Em algumas modalidades, os compostos de Fórmula (II) podem ser preparados conforme descrito no Esquema 14: Esquema 14

N H R1 R1 H

N A E N N A E

H H R1 N H N P N R2 R2

A E N

H N O O HZ1 Ph CH2 O PG1 O R2 N N N P N - O P Z1 Ph CH2 O PG1 OH step Etapa11 N N O step2 2 Etapa O Etapa 3 step 3 R1 H R1 H

A E A E

H H R2 R2

O O step 4 Fração alifática aliphatic Fração moiety O P Z1 alifática Ph CH2 OH Etapa 4 aliphatic moiety O P Z1 Ph CH2 O PG1 O Tr O 1 = DM

PG for O on step 5 rsi ve LG LG con l2 ec t C dir Conversão COPG¹ = DMTr direta para Etapa 5 1 H R1 H

R A E A E

H H R2 R2

O O O O aliphatic moiety O P Z1 Ph CH2 O LG moiety O P Z1 Fração alifática aliphatic Ph CH2 O Z3 D Fração alifática step6 Etapa 6

O O

[00513] Em algumas modalidades, os compostos de Fórmula (II) podem ser preparados conforme descrito no Esquema 15: Esquema 15

Vários reagentes alternativos oxidação Etapa 1 Etapa 2 Etapa 3 Etapa 4 Fração alifática Fração alifática r

MT 1 =D

P G f or on rs i ve on ec tc Cl 2 dir CO Conversão direta para PG¹ = DMTr Etapa 5 Fração alifática Fração alifática Etapa 6

[00514] Em algumas modalidades, os compostos de Fórmula (II) podem ser preparados conforme descrito no Esquema 16: Esquema 16

H R1 H N H N R1

A E H A E

H H R2 R2

O O O O Polymer O P Z1 Ph CH2 O H Polímero LG Polymer Polímero O P Z1 Ph CH2 O N step 6 N O Etapa 6

O H O

LG O D HO D R1 H

A E

H R2

O O O Polímero H Polymer O P Z1 Ph CH2 O N O D

N O H

[00515] Em algumas modalidades, quando MA é um dirradical estável de fórmula (k-1), os compostos de Fórmula (II) podem ser preparados conforme descrito no Esquema 17: Esquema 17

O O NH NH

N O O N O ativador DMTr DMTr i) activator O O

O O O N ii) t-ButOOH O O

O HN

OH + O

O O O O R O O N R O O P O

O P N(iprop)2 O-CE O HN O

CE O

TEA TEA dry seco

O HO NH O

N O O DMTr NH

O O O O n O CH3 N O O DMTr

O O O O O R N O

O O P O O p-Tol-SO2Cl

HN O O O O O R N O O P O O O O HN OH

O O n O CH3

[00516] Em algumas modalidades, este documento fornece um método de preparação de um composto de Fórmula (I) ou (II) tendo a fórmula: Fração alifática ,

[00517] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que a porção alifática, R1, R2, A, E, e D são conforme descrito neste documento, o método compreendendo:

[00518] reagir um composto de fórmula: Fração alifática ,

[00519] em que LG é um grupo de saída como aqui descrito, com um polipeptídeo GLP-1 ou um análogo do mesmo de fórmula HZ3-D como aqui descrito.

[00520] Em algumas modalidades, o composto é de fórmula: Fração alifática

[00521] é obtido por um método que compreende: (i) desproteger um composto de fórmula: Fração alifática ,

[00522] em que PG1 é um grupo de proteção conforme descrito aqui, para obter um composto de fórmula: Fração alifática ,e

[00523] (ii) reagir o composto obtido na etapa (i) com um composto que compreende um grupo de saída conforme descrito aqui.

[00524] Em algumas modalidades, o composto é de fórmula: Fração alifática

[00525] é obtido por um método que compreende: (i) reduzir um composto de fórmula: Fração alifática

[00526] para obter um composto de fórmula:

Fração alifática ,e

[00527] (ii) reagir o composto obtido na etapa (i) com um composto que compreende um grupo de saída conforme descrito aqui. Exemplos adequados de reagentes para realizar a redução da etapa (i) incluem, sem limitação, NaBH4 e LiAlH4.

[00528] Métodos sintéticos adequados de materiais de partida, intermediários e produtos podem ser identificados por referência à literatura, incluindo fontes de referência, tais como: Advances in Heterocyclic Chemistry, Vols. 1-107 (Elsevier, 1963-2012); Journal of Heterocyclic Chemistry Vols. 1-49 (Journal of Heterocyclic Chemistry, 1964-2012); Carreira, et al. (Ed.) Science of Synthesis, Vols. 1-48 (2001-2010); Katritzky et al. (Ed.); Comprehensive Organic Functional Group Transformations II (Elsevier, 2nd Edition, 2004); Smith et al., March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 6th Ed. (Wiley, 2007); Trost et al. (Ed.), Comprehensive Organic Synthesis (Pergamon Press, 1991).

[00529] A preparação dos compostos fornecidos neste documento pode envolver a proteção e desproteção de vários grupos químicos. A química dos grupos de proteção pode ser encontrada, por exemplo, em P. G. M. Wuts and T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed., Wiley & Sons, Inc., New York (2006). A estratégia química e de grupo de proteção relacionada aos nucleosídeos e nucleotídeos pode ser encontrada em Methods in Molecular Biology – Oligonucleotide Synthesis, edited by Piet Herdewijn, Humana Press Inc. 2005 e também em Protocols for oligonucleotide conjugate, editado por Sudhir Agrawal, Humana Press Inc. 1994. Os materiais de partida e intermediários adequados estão disponíveis em várias fontes comerciais.

MÉTODOS DE USO DOS COMPOSTOS DA PRESENTE

DIVULGAÇÃO Métodos de tratamento de uma doença ou condição

[00530] Em algumas modalidades, a divulgação fornece um método para o tratamento de uma doença, distúrbio ou condição em um mamífero (por exemplo, um ser humano em necessidade de tal tratamento), compreendendo a etapa de administrar ao mamífero um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) divulgado neste documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica compreendendo o mesmo.

[00531] Por exemplo, os compostos da divulgação são úteis no tratamento de uma doença ou condição tratada de forma benéfica por administração de um polipeptídeo GLP-1 ou análogos dos mesmos conforme descrito neste documento a um indivíduo.

[00532] Em algumas modalidades, os compostos da divulgação são úteis para diminuir a ingestão de alimentos pelo indivíduo, por exemplo, controlando ou suprimindo o apetite do indivíduo.

[00533] Em algumas modalidades, a doença ou condição é a obesidade.

[00534] Em algumas modalidades, a doença ou condição é diabetes, que inclui diabetes tipo 1, tipo 2, gestacional, induzida cirurgicamente e induzida quimicamente e diabetes autoimune latente em adultos (LADA ou diabetes tipo 1.5). Terapias de Combinação

[00535] Um ou mais agentes farmacêuticos ou métodos de tratamento adicionais podem ser usados em combinação com qualquer um dos conjugados aqui descritos para o tratamento das doenças, distúrbios ou condições aqui descritas. Os agentes farmacêuticos podem ser combinados com os presentes compostos em uma forma de dosagem única, ou os agentes podem ser administrados simultaneamente ou sequencialmente como formas de dosagem separadas.

[00536] Os agentes farmacêuticos adicionais adequados contemplados para uso em combinação com os compostos da presente divulgação podem compreender qualquer um dos polipeptídeos GLP-1 ou análogos aqui descritos.

[00537] Exemplos não limitativos de agentes adicionais incluem insulina (por exemplo, insulina de ação rápida (tendo efeito dentro de alguns minutos e durando 2-4 horas); insulina regular ou de ação curta (tendo efeito dentro de 30 minutos e durando 3-6 horas) ; insulina de ação intermediária (com efeito em 1-2 horas e duração de até 18 horas); insulina de ação prolongada (efeito em 1-2 horas e duração além de 24 horas); insulina de ação ultra-longa (efeito em 1-2 horas e com duração de 42 horas)); AFREZZA® (insulina inalada); TRESIBA® (insulina degludec); RYZODEG® 70/30 (injeção de insulina degludec e insulina aspártica); LEVEMIR® (insulina detemir); LANTUS® (insulina glargina); BYETTA® (exenatida, exenden-4); VICTOZA® (liraglutida); SAXENDA® (liraglutida); ALBIGLUTIDE® (tanzum, eperzan); TRULICITY® (duraglutida); OZEMPIC® (semaglutida); drogas que aumentam a produção de insulina pelo pâncreas, incluindo clorpropamid (DIABINESE®), glimepiride, (AMARYL®), glipizida (GLUCOTROL®), gliburida (DIABETA®, GLYNASE®), nateglinida (STARLIX®), e repaglinida (PRANDIN®); drogas que diminuem a absorção de açúcar pelo intestino, como acarbose (PRECOSE®) emiglitol (GLYSET®); medicamentos que melhoram a forma como o corpo usa a insulina, como a pioglitazona (ACTOS®) e rosiglitazona (AVANDIA®); drogas que diminuem a produção de açúcar pelo fígado e melhoram a resistência à insulina, como a metformina (GLUCOPHAGE®); drogas que aumentam a produção de insulina pelo pâncreas ou seus níveis sanguíneos e / ou reduzem a produção de açúcar do fígado, incluindo a alogliptina (NESINA®), dulaglutida (TRULICITY®), linagliptina (TRADJENTA®), exenatida (BYETTA®, BYDUREON®), liraglutida (VICTOZA®), lixisenatida (ADLYXIN®), saxagliptina (ONGLYZA®), sitagliptina (JANUVIA®), e semaglutida (OZEMPIC®); drogas que bloqueiam a reabsorção de glicose pelo rim e aumentam a excreção de glicose na urina, chamadas de cotransportadoras de sódio-glicose 2 (SGLT2) inibidores incluindo canagliflozina (INVOKANA®), dapagliflozina (FARXIGA®), e empagliflozina (JARDIANCE®); pramlinitida (SYMLIN®); empagliflozina/linagliptina (GLYXAMBI®); orlistat (XENICAL®); lorcaserina (BELVIQ®); topiramato de fentermina (QSYMIA®); naltrexona-bupropiona (CONTRAVE®) fentermina; benzfetamina; dietilpropiona; e fendimetrazina.

[00538] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos neste documento podem incluir mais de um composto fornecido neste documento em combinação. Por exemplo, os dois compostos podem ter perfis de liberação diferentes (por exemplo, um T1/2 mais longo e um T1/2 mais curto).

[00539] Os métodos para a administração segura e eficaz da maioria desses agentes farmacêuticos são conhecidos dos versados na técnica. Além disso, sua administração é descrita na literatura padrão. Por exemplo, a administração de muitos dos agentes farmacêuticos é descrita em “Physicians’ Desk Reference” (PDR, e.g., 1996 edition, Medical Economics Company, Montvale, NJ), cuja divulgação é aqui incorporada por referência como se fosse definida em sua totalidade.

COMPOSIÇÕES E FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS

[00540] O presente pedido também fornece composições farmacêuticas compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de qualquer uma da Fórmula (I) ou Fórmula (II) aqui divulgada, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e um transportador farmaceuticamente aceitável. O(s) transportador(es) são "aceitáveis" no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da formulação e, no caso de um transportador farmaceuticamente aceitável, não são deletérios para o receptor do mesmo em uma quantidade usada no medicamento.

[00541] Os transportadores, adjuvantes e veículos farmaceuticamente aceitáveis que podem ser usados nas composições farmacêuticas do presente pedido incluem, mas não estão limitados a, trocadores de íons, alumina, estearato de alumínio, lecitina, proteínas séricas, como albumina sérica humana, substâncias tampão como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potássio, misturas parciais de glicerídeos de ácidos graxos de vegetais saturados, água, sais ou eletrólitos, como sulfato de protamina, hidrogenofosfato dissódico, hidrogenofosfato de potássio, cloreto de sódio, sais de zinco, sílica coloidal, trissilicato de magnésio, polivinila pirrolidona, substâncias à base de celulose, polietileno glicol, carboximetilcelulose de sódio, poliacrilatos, ceras, polímeros em bloco de polietileno-polioxipropileno, polietileno glicol e gordura de lã.

[00542] As composições ou formas de dosagem podem conter um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) aqui descrito na faixa de 0,005% a 100% com o equilíbrio feito a partir de excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados. As composições contempladas podem conter 0,001% -100% de um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) aqui fornecido, em uma modalidade 0,1- 95%, em outra modalidade 75-85%, em uma outra modalidade 20- 80%, em que o equilíbrio pode ser feito de qualquer excipiente farmaceuticamente aceitável aqui descrito, ou qualquer combinação desses excipientes. Vias de administração e formas de dosagem

[00543] As composições farmacêuticas do presente pedido incluem aquelas adequadas para qualquer via de administração aceitável. As vias de administração aceitáveis incluem, mas não estão limitadas a, bucal, cutânea, endocervical, endosinusial, endotraqueal, enteral, epidural, intersticial, intra-abdominal, intra-arterial, intrabronquial, intrabursal, intracerebral, intracisternal, intracoronário, intradérmico, intraductal, intraduodenal, intradural, intraepidérmica, intraesofágica, intragástrica, intragingival, intraileal, intralinfático, intramedular, intrameníngeo, intramuscular, intranasal, intraovariana, intraperitoneal, intraprostática, intrapulmonar, intrasinal, intraespinal, intrassinovial, intratesticular, intratecal, intratubular, intratumoral, intrauterino, intravascular, intravenosa, nasal, nasogástrica, oral, parenteral, percutânea, peridural, retal, respiratória (inalação), subcutânea, sublingual, submucosa, tópica, transdérmica, transmucosa, transtraqueal, ureteral, uretral e vaginal.

[00544] As composições e formulações aqui descritas podem ser convenientemente apresentadas em uma forma de dosagem unitária, por exemplo, comprimidos, cápsulas de liberação sustentada e em lipossomas, e podem ser preparadas por quaisquer métodos bem conhecidos na técnica de farmácia. Ver, por exemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD (20th ed. 2000). Tais métodos preparativos incluem a etapa de associar ingredientes à molécula a serem administrados, como o transportador que constitui um ou mais ingredientes acessórios. Em geral, as composições são preparadas associando uniformemente e intimamente o ingrediente ativo com transportadores líquidos, lipossomas, ou transportadores sólidos finamente divididos ou ambos e, em seguida, se necessário, moldando o produto.

[00545] Em algumas modalidades, os compostos de Fórmula (I) ou Fórmula (II) divulgados neste documento são administrados por via oral.

As composições do presente pedido adequadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades distintas, tais como cápsulas, saquetas, grânulos ou comprimidos, cada um contendo uma quantidade predeterminada (por exemplo, quantidade eficaz) do ingrediente ativo; um pó ou grânulos; uma solução ou suspensão num líquido aquoso ou não aquoso; uma emulsão líquida de óleo-em-água; uma emulsão líquida de água em óleo; embalado em lipossomas; ou como um bolo, etc.

As cápsulas de gelatina mole podem ser úteis para conter tais suspensões, que podem aumentar beneficamente a taxa de absorção do composto.

No caso de comprimidos para uso oral, os transportadores comumente usados incluem lactose, sacarose, glicose, manitol e ácido silícico e amidos.

Outros excipientes aceitáveis podem incluir: a) enchimentos ou extensores, como amidos, lactose, sacarose, glicose, manitol e ácido silícico, b) aglutinantes, tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidinona, sacarose e acácia, c) umectantes, como glicerol, d) agentes desintegrantes, como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, certos silicatos e carbonato de sódio, e) agentes retardantes de solução, como parafina, f) aceleradores de absorção, como compostos de amônio quaternário, g) agentes umectantes, como, por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicerol, h) absorventes, tais como caulim e argila bentonita, e i) lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, laurila sulfato de sódio, e misturas dos mesmos.

Para administração oral na forma de cápsula, os diluentes úteis incluem lactose e amido de milho seco.

Quando as suspensões aquosas são administradas por via oral, o ingrediente ativo é combinado com emulsionantes e agentes de suspensão.

Se desejado, certos agentes adoçantes e / ou aromatizantes e / ou corantes podem ser adicionados.

As composições adequadas para administração oral incluem pastilhas que compreendem os ingredientes em uma base aromatizada, geralmente sacarose e acácia ou tragacanto; e pastilhas compreendendo o ingrediente ativo em uma base inerte, como gelatina e glicerina, ou sacarose e acácia.

[00546] As composições adequadas para administração parenteral incluem soluções de injeção estéreis aquosas e não aquosas ou soluções de infusão que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostáticos e solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do receptor pretendido; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes. As formulações podem ser apresentadas em recipientes de dose unitária ou multidose, por exemplo, ampolas e frascos vedados, e podem ser armazenadas em uma condição liofilizada (liofilizada) exigindo apenas a adição do transportador líquido estérila, por exemplo, água para injeções, solução salina ou solução de dextrose a 5%, imediatamente antes do uso. Soluções e suspensões para injeção extemporânea podem ser preparadas a partir de pós, grânulos e comprimidos estéreis. As soluções de injeção podem estar na forma, por exemplo, de uma suspensão aquosa ou oleaginosa injetável estérila. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com técnicas conhecidas na técnica usando dispersantes ou umectantes e agentes de suspensão adequados. A preparação injetável estérila pode também ser uma solução injetável estérila ou suspensão em um diluente ou solvente parenteralmente aceitável não tóxica, por exemplo, como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos aceitáveis e os solventes que podem ser utilizados estão manitol, água, solução de Ringer, e solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, óleos fixos e estéreis são convencionalmente usados como um meio solvente ou de suspensão. Para este fim qualquer óleo fixo brando pode ser usado incluindo mono- ou diglicerídeos sintéticos. Os ácidos graxos, como o ácido oleico e seus derivados glicerídeos, são úteis na preparação de injetáveis, assim como os óleos naturais farmaceuticamente aceitáveis, como o azeite ou o óleo de rícino, especialmente em suas versões polioxietiladas. Estas soluções ou suspensões de óleo também podem conter um diluente ou dispersante de álcool de cadeia longa.

[00547] As composições farmacêuticas do presente pedido podem ser administradas na forma de supositórios para administração retal. Estas composições podem ser preparadas misturando um composto do presente pedido com um excipiente não irritante adequado que é sólido à temperatura ambiente mas líquido à temperatura retal e, portanto, derreterá no reto para liberar os componentes ativos. Tais materiais incluem, mas não estão limitados a, manteiga de cacau, cera de abelha e polietileno glicóis.

[00548] As composições farmacêuticas do presente pedido podem ser administradas por aerossol nasal ou inalação. Tais composições são preparadas de acordo com técnicas bem conhecidas na técnica de formulação farmacêutica e podem ser preparadas como soluções em solução salina, usando álcool benzílico ou outros conservantes adequados, promotores de absorção para intensificar a biodisponibilidade, fluorocarbonos e / ou outros agentes solubilizantes ou dispersantes conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Patente U.S.

6.803.031. Formulações e métodos adicionais para administração intranasal são encontrados em Ilium, L., J Pharm Pharmacol, 56:3-17, 2004 and Ilium, L., Eur J Pharm Sci 11:1-18, 2000.

[00549] As composições tópicas da presente divulgação podem ser preparadas e usadas na forma de um spray aerossol, creme, emulsão, sólido, líquido, dispersão, espuma, óleo, gel, hidrogel, loção, mousse, unguento, pó, adesivo, pomada, solução, spray de bomba, bastão,

toalhete, sabonete ou outras formas comumente usadas na técnica de administração tópica e / ou formulação cosmética e para cuidados da pele. As composições tópicas podem estar na forma de emulsão. A administração tópica das composições farmacêuticas do presente pedido é especialmente útila quando o tratamento desejado envolve áreas ou órgãos facilmente acessíveis por aplicação tópica. Em algumas modalidades, a composição tópica compreende uma combinação de um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) divulgados neste documento e um ou mais ingredientes, transportadores, excipientes ou diluentes adicionais, incluindo, mas não se limitando a, absorventes, anti-irritantes, agentes anti-acne, conservantes, antioxidantes, corantes / pigmentos, emolientes (hidratantes), emulsificantes, formadores de filme / agentes de retenção, fragrâncias, esfoliantes leave-on, drogas prescritas, conservantes, agentes esfoliantes, silicones, agentes idênticos à pele / reparadores, agentes deslizantes, ativos de proteção solar, agentes de limpeza tensoativos / detergentes, intensificadores de penetração e espessantes.

[00550] Os compostos do presente pedido podem ser incorporados em composições para revestir um dispositivo médico implantável, como próteses, válvulas artificiais, enxertos vasculares, stents ou cateteres. Os revestimentos adequados e a preparação geral de dispositivos implantáveis revestidos são conhecidos na técnica e são exemplificados nas Patentes U.S. 6.099.562; 5.886.026; e 5.304.121. Os revestimentos são tipicamente materiais poliméricos biocompatíveis, tais como um polímero de hidrogel, polimetildisiloxano, policaprolactona, polietileno glicol, ácido polilático, acetato de vinila etileno e misturas dos mesmos. Os revestimentos podem, opcionalmente, ser ainda cobertos por um revestimento superior adequado de fluorosilicone, polissacarídeos, polietileno glicol, fosfolipídeeos ou combinações dos mesmos para conferir características de liberação controlada na composição. Os revestimentos para dispositivos invasivos devem ser incluídos na definição de transportador, adjuvante ou veículo farmaceuticamente aceitável, conforme esses termos são usados aqui.

[00551] De acordo com outra modalidade, o presente pedido fornece um dispositivo implantável de liberação de droga impregnado com ou contendo um composto, ou uma composição compreendendo um composto do presente pedido, de modo que o referido composto seja liberado do referido dispositivo e é terapeuticamente ativo. Dosagens e regimes

[00552] Nas composições farmacêuticas do presente pedido, um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) aqui divulgado está presente em uma quantidade eficaz (por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz).

[00553] As doses eficazes podem variar dependendo das doenças tratadas, da gravidade da doença, da via de administração, do sexo, da idade e do estado geral de saúde do indivíduo, do uso de excipientes, da possibilidade de co-uso com outros tratamentos terapêuticos, como o uso de outros agentes e o julgamento do médico assistente.

[00554] Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II) divulgada aqui pode variar, por exemplo, de cerca de 0,001 mg/Kg a cerca de 500 mg/Kg (e,g,, de cerca de 0,001 mg/Kg a cerca de 200 mg/Kg; de cerca de 0,01 mg/Kg a cerca de 200 mg/Kg; de cerca de 0,01 mg/Kg a cerca de 150 mg/Kg; de cerca de 0,01 mg/Kg a cerca de 100 mg/Kg; de cerca de 0,01 mg/Kg a cerca de 50 mg/Kg; de cerca de 0,01 mg/Kg a cerca de 10 mg/Kg; de cerca de 0,01 mg/Kg a cerca de 5 mg/Kg; de cerca de 0,01 mg/Kg a cerca de 1 mg/Kg; de cerca de 0,01 mg/Kg a cerca de 0,5 mg/Kg; de cerca de 0,01 mg/Kg a cerca de 0,1 mg/Kg; de cerca de 0, 1 mg/Kg a cerca de 200 mg/Kg; de cerca de 0, 1 mg/Kg a cerca de 150 mg/Kg; de cerca de 0, 1 mg/Kg a cerca de 100 mg/Kg; de cerca de 0,1 mg/Kg a cerca de 50 mg/Kg; de cerca de 0, 1 mg/Kg a cerca de 10 mg/Kg; de cerca de 0, 1 mg/Kg a cerca de 5 mg/Kg; de cerca de 0, 1 mg/Kg a cerca de 1 mg/Kg; de cerca de 0, 1 mg/Kg a cerca de 0,5 mg/Kg).

[00555] As dosagens anteriores podem ser administradas diariamente (por exemplo, em dose única ou em duas ou mais doses divididas, por exemplo, uma vez ao dia, duas vezes ao dia, três vezes ao dia) ou não diariamente (por exemplo, dia sim dia não, a cada dois dias, a cada três dias, uma vez por semana, duas vezes por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez por mês).

KITS

[00556] A presente invenção também inclui kits farmacêuticos úteis, por exemplo, no tratamento de distúrbios, doenças e condições aqui referidas, que incluem um ou mais recipientes contendo uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente divulgação. Tais kits podem incluir, ainda, se desejado, um ou mais de vários componentes convencionais de kit farmacêutico, tais como, por exemplo, recipientes com um ou mais transportadores farmaceuticamente aceitáveis, recipientes adicionais, etc. Instruções, ou como bulas ou como rótulos, indicando quantidades dos componentes a serem administrados, diretrizes para administração, e/ou diretrizes para misturar os componentes, também podem ser incluídas no kit.

EXEMPLOS

[00557] Salvo indicação em contrário, todos os reagentes foram obtidos de fornecedores comerciais conhecidos. Salvo indicação em contrário, foram usados procedimentos laboratoriais e analíticos padrão.

Exemplo 1 - Síntese de conjugado de liraglutida à base de FMOC NH-(His)Liraglutida-CO2H Etapa 1. Método para reação de FMOC-Cl com aminouridina para dar carbamato 1

[00558] 2'-aminouridina (1 mol eq.) foi dissolvida em água (10 ml / mmol) e uma mistura de NaHCO3 aquoso 1M (3 mol eq.) com cerca de 20% de dioxano foi adicionado e a mistura foi resfriada a 0°C. O cloroformato de fluorenilmetila (2 mol eq.) foi dissolvido em dioxano seco e adicionado gota a gota à solução resfriada. A solubilidade da mistura de reação foi ajustada por adição de dioxano. Após agitação durante 1 hora, foi adicionado cloroformato (1 mol eq.) e a mistura agitada durante mais uma hora. O resfriamento foi removido e a mistura de reação aquosa foi extraída três vezes com 10% de MeOH / DCM. A fase orgânica foi evaporada à secura. O resíduo foi cromatografado através de sílica gel 60A usando gradiente de MeOH- DCM (2-4-6%) para isolar a 2'-N-(Fluorenilmetilcarbamoil)uridina (2'-N- (FMOC)uridina) como um sólido branco (rendimento 65-75%). Etapa 2. O método para 5'-O-pivaloilação de uridina 2'-N-carbamato 1 para dar o 5'-O-pivaloiluridina-2'-N-carbamato 2

[00559] O Composto 1 (1 mol eq.) foi seco por coevaporação com piridina seca e o resíduo dissolvido em piridina seca (2,5 mL / mmol) e resfriado a 0 oC. Cloreto de pivaloila (1,2 mol eq.) foi dissolvido em diclorometano (2,5 mL / mmol) e adicionado lentamente à solução de piridina. Após adição completa, a mistura foi agitada à TA durante 15 horas (durante a noite). A reação foi extinta com MeOH e, após alguns minutos, a mistura foi dividida entre fosfato 0,2 M, pH 7,0 e diclorometano. O resíduo oleoso foi submetido a evaporação cromatografada da fase orgânica e coevaporação com tolueno através de gel de sílica 60A usando um gradiente de DCM / MeOH (0-2-3-4% MeOH / DCM, o produto vem em 3-4% MeOH) para obter o produto 2 na forma de uma espuma branca (rendimento 70-80%). Etapa 3. Método para preparação do composto fosfodiéster 3 Preparação de 4-(4,4'-dimetoxitritiloximetil)fenol

[00560] Um método semelhante ao publicado em Iyer, R.P. et al. Tetrahedron Letters, 2001, 42, 3669-3672, foi usado para produzir o composto 3. Resumidamente, álcool 4-hidroxibenzílico (1 mol eq.) foi dissolvido em piridina seca (10 mL / mol). Cloreto de 4,4'-dimetoxitritila (1,1 mol eq.) foi dissolvido em DCM seco (ca. 5 mL / mmol) e esta solução foi adicionada gota a gota de um funila de gotejamento à solução de piridina com agitação. Após adição completa, a solução de reação foi agitada à TA durante pelo menos 16 horas.

[00561] Tratamento e purificação: a reação foi interrompida pela adição de MeOH e, após agitação por um curto período, os solventes foram evaporados. O resíduo foi dissolvido em DCM e a fase orgânica extraída com NaHCO3aquoso saturado. A fase aquosa foi extraída mais duas vezes com DCM. As fases de DCM combinadas foram evaporadas à secura e o resíduo coevaporado com tolueno. O resíduo foi cromatografado através de sílica gel 60A usando um gradiente de acetato de etila (EtAc) / éter de petróleo (PetEt) (20 – 30 –

50%EtAc/PetEt + 0,1% de piridina, eluído em 30 - 50% de EtAc) para obter o produto fenol em alto rendimento. 1H-RMN, 500MHz (CDCl3): 7,51-6,80 (m, 17H), 4,61 (br, s, 1H) OH, 4,07 (br s, 2H) CH2, 3,78 (s, 6H) 2 x OMe. Sal de trietilamônio do composto fosfodiéster 3.

[00562] Uma solução de (4-(4,4'-dimetoxitritiloximetil)fenol (1,0 mol eq.) em MeCN seco (7 mL / mmol) mais piridina seca (3,5 mL / mmol) foi adicionada lentamente gota a gota sob nitrogênio a um solução vigorosamente agitada de 0,2 M de tristriazolida de fósforo (1,1 mol eq.) em MeCN seco. A solução resultante foi agitada à TA durante cerca de 1-1½ horas sob nitrogênio.

[00563] Uma solução do composto 2 (0,95 mol eq.) em MeCN seco (9 mL / mmol) foi adicionada gota a gota à mistura e a nova mistura resultante foi agitada à TA durante ca. 2 horas. A reação foi extinta com hidrogenocarbonato de trietilamônio 1 M (escala de ~ 8 mL / mmol) e a mistura concentrada em um evaporador rotativo. O concentrado remanescente foi vertido em hidrogenocarbonato de trietilamônio 1 M e extraído três vezes com DCM. A solução foi evaporada. O resíduo foi cromatografado através de sílica gel 60A usando um gradiente de DCM / EtOH (0-4-8-10-15-20% de EtOH / DCM + 0,1% de piridina, o produto eluído em 8-15% de EtOH) para dar o O-aril-O- alquilfosfodiéster 3 como um sal de trietilamônio (rendimento 50-65%). Etapa 4. Método para a preparação do composto fosfotriéster MeOPEG 4.

[00564] O fosfodiéster 3 (1 mol eq.), mPEG-OH (3 mol eq.) e N- metilimidazol (24 mol eq.) foram dissolvidos em MeCN seco e evaporados até a secura. O resíduo foi coevaporado com MeCN seco mais uma vez e concentrado até menos de 5 mL / mmol de MeCN (semi-viscoso). A solução viscosa foi agitada enquanto uma solução concentrada de MeCN (1,25 mL / mmol) de cloreto de 1-mesitileno sulfonila (12 mol eq.) foi adicionada gota a gota. Após a adição, a solução foi girada no frasco redondo (para garantir que todo o material do interior da parede do frasco participasse da reação. Pode-se também usar um dispositivo de agitação) em TA por 66-72 horas.

[00565] A mistura de reação foi extinta com MeOH e a mistura evaporada até a secura em um evaporador rotativo. O resíduo foi recristalizado de isopropanol (ca. 13 mL / g de PEG usado. Manter a mistura a 55oC dissolveu o material sólido e o material peguilado cristalizou quando resfriado a TA). A massa sólida foi recristalizada num filtro de vidro sinterizado P3 ou P4, lavada com isopropanol frio e finalmente lavada com éter dietílico e seca sob vácuo.

[00566] O sólido bruto foi analisado por C18 RP-HPLC para verificar a presença do produto triéster 4. O principal produto secundário de UV-Vis era o mPEG mesitilenosulfonilado que tinha um Ta mais curto do que o produto triéster 4. Temos razões para acreditar que todos os hidroxis livres do mPEG foram consumidos por fosforilação ou por sulfonilação. Dependendo do tamanho da coluna C18 RP HPCL disponível para o químico orgânico, pode-se separar em lote o triéster 4 dos produtos colaterais com as seguintes misturas de solvente e gradiente:

[00567] Diluente de amostra: 20% MeCN em água

[00568] Tampão A: 5% de MeCN em 0,1 M de acetato de trietilamônio / água.

[00569] Tampão B: 100% MeCN

[00570] Gradiente: 30 - 60% B ao longo de 60 minutos

[00571] Monitoramento: 270 nm

[00572] As porções coletadas foram agrupadas e evaporadas até à secura e o resíduo mantido sob alto vácuo durante algumas horas. O resíduo gomoso (rendimento 45-55%) foi usado na etapa 5. Etapa 5. Método para a preparação do composto de bloco de hidroxila fosfotriéster MeOPEG 5

[00573] Dissolver o 4-(4,4'-dimetoxitritiloximetil)fenil-fosfotriéster composto 4 (1 mol eq.) em 80% de ácido acético (~ 350 mL / mmol) e a solução foi mantida a TA por 2 horas. Os materiais voláteis foram evaporados e o resíduo coevaporado com tolueno. O resíduo foi recristalizado a partir de isopropanol conforme descrito na Etapa 4 para dar o O-alquil-O-(mpegil)-O-[(4-hidroximetil)fenil]fosfo-triéster 5 e foi usado diretamente na próxima etapa 6. Etapa 6. Método para a preparação do composto de carbonato de fosfotriéster NHS de MeOPEG 6

[00574] O bloco de hidroxila acima (1 mol eq.) foi dissolvido em DCM seco (140 μL / μmol) e, em seguida, 15% em peso de fosgênio (190 mol eq.) foi adicionado e a solução agitada por 2-3 horas à TA. Os materiais voláteis foram evaporados e o resíduo foi então coevaporado várias vezes com tolueno.

[00575] O cloroformato bruto (1 mol eq.) foi dissolvido em THF seco (6 mL / mmol) e DCM seco (1,2 mL / mmol). N-hidroxissuccinimida (75 mol eq.) foi então adicionada, seguida pela adição de piridina seca (100 mol eq.) e a mistura foi agitada durante 2 horas a TA. A mistura foi evaporada até à secura e o resíduo coevaporado com tolueno (pelo menos três vezes) e depois o resíduo triturado com éter dietílico, o sobrenadante foi decantado e o sólido foi seco sob vácuo. Isto forneceu o O-alquil-O- mpegil-O-[4-(NHS-caboniloxi-metil)fenil]fosfotriéster 6. A análise de C18 RP-HPLC mostrou um pico amplo e homogêneo correspondente ao produto 6. Outro pico único na frente do cromatograma era o excesso de NHS.

[00576] Diluente de amostra: 20% MeCN em água

[00577] Tampão A: 5% de MeCN em 0,1% de TFA / água.

[00578] Tampão B: 0,1% de TFA em MeCN

[00579] Gradiente: 30 - 60% B ao longo de 60 minutos (para tamanho de coluna 250 x 10 mm)

[00580] Monitoramento: 270 nm (se canal paralelo, também 254 nm) Etapa 7. Método para preparação de conjugado liberável MeOPEG- liraglutida 7 (mPEG-liraglutida)

[00581] Liraglutida (1 mg, 0,27 μmol; SEQ ID NO: 3) foi dissolvida em tampão HEPES 0,3 M pH 7,4 (400 μL) e MeCN (20 μL) em um frasco de tampa de plástico de 2 mL. O composto sólido 6 (24 mg, 0,81 μmol) foi então adicionado e o sólido dissolvido por sonicação ocasional (1-2 s por vez, aproximadamente 3-4 vezes) e a solução agitada por 2-2½ horas a TA.

[00582] Etapa final: a mistura de reação foi diluída até 1 mL com água desionizada (ou destilada) e extinta por acidificação com 80% de AcOH (pH 3-4). Se necessário, a solução foi diluída através de filtros de disco de 0,45 μm antes da injeção na coluna de HPLC. Usando a coluna (RP 250 x 10 mm) e o sistema de gradiente como na Etapa 6, o conjugado foi identificado como um pico largo na região de 50-55 minutos. A liraglutida que não reagida eluiu cerca de 60 minutos. Todos os outros ingredientes eluíram antes de 45 minutos.

[00583] As porções do produto foram coletadas, agrupadas e evaporadas. O resíduo vítreo foi então dissolvido em um pequeno volume de 20% MeCN / água e liofilizado (94 nmol, 35%).

[00584] No seguinte experimento, o T½ em pH 8 é calculado como sendo de aprox. 11 h, o que se traduz em 44 h em pH 7,4 (fator 4X). ~ 1 mg de conjugado foi dissolvido em um volume de 20% de MeCN em água. Uma quantidade apropriada de azidotimidina (AZT) foi adicionada como uma referência interna e a hidrólise foi iniciada pela adição de um volume de solução tampão de TRIS 0,3 M a pH 8,0. A mistura de reação foi então mantida a 37°C. Alíquotas de 30 μL foram retiradas em cada ponto de tempo e acidificadas pela adição de 20 μL de AcOH 1 M antes da injeção no HPLC. Exemplo 2 - Conjugado de liraglutida à base de CPSEC 8

[00585] Usando métodos semelhantes aos descritos no Exemplo 1, o conjugado de liraglutida baseado em CPSEC 8 foi preparado.

8 NH-(His)Liraglutida-CO2H

[00586] Em tampão Tris a pH 8, 37 °C, o composto 8 tem um T½ disparado por pH de ~ 2,5 h (medido como no método descrito no Exemplo 1). Exemplo 3 - Conjugado de liraglutida à base de derivado de FMOC (1-fluoreniletoxicarbonil) 9

[00587] Utilizando métodos semelhantes aos descritos no Exemplo 1, foi preparado conjugado de liraglutida à base de derivado de FMOC (1-fluoreniletoxicarbonil) 9 .

NH-(His)Liraglutida-CO2H 9

[00588] Em tampão Tris a pH 7,4, 37 °C, estima-se que o composto 9 tenha um T½ disparado por pH de ~ 36 dias. Esta estimativa é baseada na hidrólise (processo descrito no Examinador 1) do composto 1 (grupo FEC). Isso resultou em um T½ em pH 8, que acabou sendo próximo a 1 mês (27 dias). Multiplicando por um fator de quatro (fator 4X) dá 4 meses (2560 h) em pH 7,4. Em experimentos anteriores, foi observado que há um fator aproximado 3X entre o T½ dos compostos de aminouridina como 1 e o T½ do conjugado final (isso talvez seja devido à influência do grupo fosfotriéster), então 2560 h / 3 = 854 h (36 dias). Exemplo 4 - Conjugado de liraglutida à base de DPEC 10

[00589] Usando métodos semelhantes aos descritos no Exemplo 1, o conjugado de liraglutida baseado em DPEC 10 foi preparado.

NH-(His)Liraglutida-CO2H 10

[00590] A hidrólise do composto 1 deu um T½ de 12 dias a pH 8 e com base nos cálculos detalhados no Exemplo 3 resultou em um T½ estimado de 16 dias para o composto 10 a pH 7,4. Exemplo 5 - Conjugado de liraglutida à base de FPEC (fluorenilfeniletoxicarbonil) 11

[00591] Utilizando métodos semelhantes aos descritos no Exemplo 1, foi preparado conjugado de liraglutida à base de FPEC (fluorenilfeniletoxicarbonil) 11 .

NH-(His)Liraglutida-CO2H Exemplo 6 - Conjugado de liraglutida à base de DFDPEC 12

[00592] Usando métodos semelhantes aos descritos no Exemplo 1, o conjugado de liraglutida baseado em DFDPEC 12 foi preparado.

NH-(His)Liraglutida-CO2H 12

Exemplo 7 - Conjugado de liraglutida à base de DTBFMOC 13

[00593] Usando métodos semelhantes aos descritos no Exemplo 1, o conjugado de liraglutida à base de DTBFMOC 13 foi preparado.

NH-(His)Liraglutida-CO2H 13 Exemplo 8 - Preparação de conjugados de liraglutida usando metodologia de fosfodicloridato para síntese de reagente PEG Liraglutida Etapas 1-2. As etapas 1 e 2 são realizadas de acordo com os métodos e procedimentos semelhantes aos do Exemplo 1. Etapa 3. Método para a preparação do N3-benzoilado 5'-O- pivaloiluridina-2'-N-carbamato 8-2.

[00594] O Composto 2 (1 eq.) foi dissolvido em piridina seca (7 mL / mmol). Adicionou-se clorotrimetilsilano (TMS-Cl, 3 eq.) à solução de piridina à temperatura ambiente e agitou-se a mistura durante 1 hora à temperatura ambiente. Em seguida, foi adicionado cloreto de benzoila (2 eq.) e a mistura foi agitada durante 2 dias. A mistura de reação foi extinguida com metanol e, após 15 minutos, foi concentrada em rotavapor e repartida entre bicarbonato de sódio aquoso saturado e diclorometano. Após evaporação da fase orgânica, o óleo remanescente foi coevaporado com tolueno para remover vestígios de piridina. O resíduo foi dissolvido em 80% de AcOH (10 mL / mmol) e agitado durante 10 minutos a fim de clivar o sililéter, seguido por evaporação à secura em rotavapor e coevaporação com tolueno. O resíduo foi cromatografado através de sílica gel 60A usando gradiente (0-2-4%) de MeOH em DCM para dar o produto 8-2 como um sólido branco. O rendimento isolado foi geralmente de cerca de 80%. Etapa 4. Método para a preparação do sal de trietilamônio do composto fosfodiéster 3.

[00595] Uma solução de 4-formilfenilfosforodicloridato (2 eq.), preparada de acordo com Engberts, J. B. F. N. et al. Langmuir 1996, 12, 5773-5780 e usada em bruto sem destilação, foi dissolvida em MeCN seco (1 mL / mmol) e adicionada gota a gota ao composto 8-2 (1 eq.) dissolvido em piridina seca (4 mL / mmol). A mistura resultante foi então agitada em temperatura ambiente por cerca de 2 horas. A reação foi extinta por hidrogenocarbonato de trietilamônio 1 M e extraída três vezes com DCM. A fase orgânica foi evaporada e seca por coevaporação com tolueno, e o resíduo foi cromatografado através de sílica gel 60A usando um gradiente de DCM / MeOH (0-2-4-6-8%

MeOH / DCM + 0,1% piridina. O produto foi eluído com 4-6% de MeOH para dar o O-aril-O-alquilfosfodiéster 3 como um sal de trietilamônio (rendimento isolado 50-65%). Etapa 5. Método para preparação de aldeído fosfotriéster MeOPEG 4.

[00596] O fosfodiéster 3 (1 eq.), mPEG-OH pré-seco (3 eq.) e N- metilimidazol (24 eq.) foram dissolvidos em MeCN seco e evaporados até a secura. O resíduo foi coevaporado com MeCN seco mais uma vez e concentrado até uma solução semi-viscosa de MeCN. A esta solução, uma solução de cloreto de 1-mesitilenosulfonila (12 eq.) em uma quantidade mínima de MeCN seco foi adicionada em uma porção. Após a adição, a mistura de reação no frasco de fundo redondo foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas.

[00597] A mistura de reação foi extinta com MeOH e evaporada até a secura em um evaporador rotativo. O resíduo foi recristalizado a partir de isopropanol (40 mL / 3 g mPEG). A mistura foi aquecida a 55°C para dissolver a matéria sólida. Os materiais peguilados cristalizaram quando resfriados à temperatura ambiente. O material cristalizado foi filtrado em um filtro de vidro sinterizado, lavado com isopropanol frio, seguido por éter dietílico, e seco sob vácuo (rendimento geralmente próximo à quantidade de mPEG-OH usada na reação).

[00598] O sólido bruto foi analisado por C18 RP-HPLC para verificar a presença do produto fosfotriéster 4. O produto apareceu geralmente como o maior pico no cromatograma, com uma amplitude característica típica para todos os materiais contendo PEG. O material bruto foi levado diretamente para a próxima etapa. Não foi purificado nesta etapa devido ao risco de ser convertido em um hidrato em contato com a água. Etapa 6. Método para a preparação do composto de bloco de hidroxila fosfotriéster MeOPEG 5.

[00599] O fosfotriéster de aldeído bruto 4 (3,5 g, 0,059 mmol) foi dissolvido em MeCN (15 mL) e a solução foi vertida em água (70 mL) em um copo de vidro com agitação. A barra de vidro de um medidor de pH foi mantida mergulhada na solução resultante. Em seguida, imediatamente, NaBH4 (5 eq.) foi adicionado em porções com uma espátula, e o aumento do pH foi monitorado. A evolução do gás também foi iniciada. Após a adição completa, o pH atingiu cerca de 8,9 em poucos minutos. Nesta altura, foi adicionado ácido cítrico 1 M gota a gota para baixar o pH para cerca de 6,5-6,6.

[00600] A solução límpida resultante foi evaporada com adição de algum n-butanol como agente antiespumante. O resíduo foi dissolvido em MeCN e agitado durante 5 minutos, e a suspensão fina foi filtrada através de Celite. O filtrado límpido foi então evaporado e dissolvido em solução de acetonitrila / água a 30%.

[00601] A RP HPLC preparativa (Lichrospher 100 RP-18) separou o triéster 5 dos produtos colaterais usando as seguintes misturas de solvente e gradiente:

[00602] Tampão A: acetato de trietilamônio 0,1 M em 5% de MeCN / água.

[00603] Tampão B: 100% MeCN

[00604] Gradiente: 30 - 60% B ao longo de 60 minutos

[00605] Monitoramento: 270 nm

[00606] As porções coletadas foram agrupadas juntas e evaporadas até à secura e o resíduo mantido sob alto vácuo durante algumas horas. O resíduo gomoso do composto 5 puro e tampão de acetato de trietilamônio residual foi dissolvido em isopropanol quente (55°C) e o composto 5 foi cristalizado após resfriamento como um sólido branco. O rendimento foi de 60%. Etapa 7-9.

[00607] A conversão do composto 5 em seu derivado de carbonato

NHS 6 e sua conjugação com liraglutida para produzir o conjugado final 14 procederam de forma análoga às etapas apropriadas apresentadas no Exemplo 1. A mistura de conjugação final contendo tampão HEPES 0,3 M foi diluída com água (10 ×) e aplicada em uma coluna de troca aniônica (OptioBio 40Q 10x100 - Bio-Works, Uppsala Suécia) equilibrada em tampão fosfato 20 mM pH 7,0. A separação foi realizada começando em condições isocráticas e usando tampão A - tampão fosfato 20 mM pH 7,0. Continuou durante 15 minutos até o excesso não carregado de reagente de peguilação ser eluído, seguido por um gradiente linear de Tampão A para Tampão B (tampão fosfato 20 mM pH 7,0 + NaCl 1,0 M.

A porção B - representando o conjugado de liraglutida - foi coletada, concentrada 10x por evaporação em um evaporador rotativo e acidificada até pH 5 por adição de ácido acético 1M.

Este material foi ainda purificado em coluna Superdex 200 Aumentar 10/300 SEC usando tampão fosfato 0,01 M pH 7,4 contendo NaCl 0,14 M operando a fluxo de 0,5 mL / minuto à temperatura ambiente.

Amostras tão grandes quanto 2,5 mL foram injetadas sem diminuição substancial da resolução do pico.

As porções coletadas contendo o conjugado puro foram armazenadas pela adição de 2 volumes de tampão citrato 0,3 M, pH 4. Liraglutida pura - conjugado PEG 14 obtido durante a separação SEC.

No mesmo sistema, a liraglutida livre exibiu um tempo de retenção de 29 minutos.

Exemplo 9 - Preparação de conjugados de liraglutida com proteção lipofílica de uracila.

Condições Mitsunobu Liraglutida

[00608] O conjugado 15 foi obtido de acordo com os métodos e procedimentos semelhantes aos descritos no Exemplo 8. Exemplo 10 - Preparação de conjugado de liraglutida com grupo 5'-DMTr hidrofóbico.

Liraglutida

[00609] O conjugado 16 foi obtido de acordo com os métodos e procedimentos semelhantes aos descritos no Exemplo 8.

Exemplo 11 - Estabilidade proteolítica e atividade biológica do composto 7

[00610] A análise da estabilidade proteolítica da liraglutida e do composto 7 na presença da protease dipeptidila peptidase IV (DPP-IV) foi analisada por LC-ESI-MS.

[00611] Liraglutida (SEQ ID NO: 3) foi dissolvida em 10 mM Na2HPO4 pH 7,4 a uma concentração de 10 mg / mL. O Composto 7 foi dissolvido em tampão de acetato de amônio 50 mM pH 4,5 a uma concentração de 10 mg / mL.

[00612] Ambas as amostras foram diluídas com 10 mM Na2HPO 4 pH 7,4 para uma concentração de proteína de 2,67 μM e digeridas na presença de 50 mU / mL DPP-IV (de rim porcino, Merck) a 37°C. As amostras foram retiradas 9-5 após 2 h, 10 h, 24 h, 34 h, 48 h, 72 h e 96 h. Para interromper a reação, 57 μL de amostra foram acidificados com 3 μL de TFA a 10% e armazenados a -20°C até que as medições fossem feitas.

[00613] As amostras foram separadas em um sistema LaChrom Ultra HPLC (VWR) usando uma coluna de fase reversa (MAbPac RP 4 μm 2,1 × 100 mm, Thermo Scientific). Os eluentes foram 0,1% FA em água e 0,1% FA em acetonitrila. A análise espectrométrica de massa foi realizada com um micrOTOF-Q II (Bruker Daltonik).

[00614] Os espectros de LC-ESI-MS registrados foram recalibrados internamente com base na massa teórica de liraglutida. Cromatogramas de íons extraídos (EIC) foram gerados para os compostos mostrados na FIGURA 1. Os compostos observados no EIC foram integrados e a intensidade foi normalizada para um composto observado em 382,86 m / z (desconhecido, específico para digestão, pois não foi observado na medição em branco). A intensidade relativa de cada composto é mostrada em unidades arbitrárias.

[00615] A digestão da liraglutida e do composto 7 com DPP-IV conduziu à geração de diferentes fragmentos de liraglutida (FIGURA 1): liraglutide AA9-37 EGTFTSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVRGR G (SEQ ID NO:5); liraglutida AA13-37 ((TSDV SSYLEGQAAK EFIAWLVRGR G (SEQ ID NO:6)); e liraglutida AA25-37 (AK EFIAWLVRGR G (SEQ ID NO:7)). A Figura 2 mostra os resultados de um primeiro teste, uma digestão realizada a pH 7,6 com 50 mU / mL DPP-IV após 15 h a 37°C. Aqui, já foram observados dois fragmentos de liraglutida, a liraglutida AA9-37 e a liraglutida AA13-37. Um terceiro fragmento (liraglutida AA25-37) ainda não foi observado nesta amostra. Para o experimento final, o pH foi reduzido para 7,4 para diminuir a liberação de PEGuilação do composto 7.

[00616] A estabilidade proteolítica da liraglutida e do composto 7 foi medida com sucesso por LC-ESI-MS. A Figura 3 mostra dados exemplificativos dos traços de cromatograma de íons extraídos (EIC) de liraglutida de tamanho completo e fragmentos de liraglutida em liraglutida de amostra após 96 h de digestão com DPP-IV a 37 C e pH 7,4. Os picos observados no EIC foram integrados, normalizados e relatados em unidades arbitrárias.

[00617] A Figura 4 mostra a concentração de liraglutida não PEGuilada após digestão com DPP-IV para as duas amostras. Observou- se o seguinte:

[00618] A liraglutida apresentou meia-vida de aproximadamente 25- 35 horas.

[00619] O Composto 7 mostrou um aumento de liraglutida não PEGuilada nas primeiras 34 horas que é gerado pela liberação de PEGuilação devido ao pH ligeiramente alcalino.

[00620] Após 34 horas, a liraglutida liberada na amostra do composto 7 apresentou um declínio mais lento na concentração em comparação com a liraglutida nas primeiras 34 horas. Isso pode ser parcialmente explicado por um declínio da atividade enzimática após a incubação a 37°C; no entanto, o estudo de controle com liraglutida não modificado indica que a atividade enzimática significativa ainda deveria estar presente. Portanto, os resultados parecem indicar que a clivagem proteolítica do PEG-liraglutida foi reduzida.

[00621] Os resultados indicam uma estabilidade proteolítica muito maior do composto 7 em comparação com a liraglutida.

[00622] A Figura 5 mostra a concentração de fragmentos de liraglutida após digestão de liraglutida com DPP-IV. Aparentemente, a liraglutida foi digerida pela primeira vez em liraglutida AA9-37 e liraglutida AA13-37. Mais tarde, durante a digestão, um terceiro fragmento de liraglutida (liraglutida AA25-37) foi gerado a partir da digestão dos dois primeiros fragmentos de liraglutida que apresentou um declínio após 25-35 horas.

[00623] A Figura 6 mostra a concentração de fragmentos de liraglutida após digestão do composto 7 com DPP-IV. Aqui, principalmente a liraglutida AA9-37 foi gerada por digestão com DPP- IV. Esta observação sugere que o composto 7 foi digerido de forma diferente da liraglutida. A geração de liraglutida AA13-37 e liraglutida AA25-37 foi significativamente reduzida aqui.

[00624] A Figura 7 mostra a concentração da soma de todos os fragmentos de liraglutida detectados após digestão da liraglutida e do composto 7 com DPP-IV (ver, também, as Tabelas 1 e 2). O declínio aparente dos produtos da digestão na amostra de liraglutida após 34 horas é muito provavelmente devido aos fragmentos de liraglutida sendo digeridos em fragmentos menores que não foram detectados pelo método. A maior estabilidade proteolítica do composto 7 é altamente significativa durante as primeiras 24 horas. Após 24 horas, a liraglutida mostra aproximadamente cinco vezes mais produtos de digestão do que uma amostra equimolar do composto 7. Após 96 horas, o composto 7 mostra uma concentração mais elevada de produtos de digestão observados. Provavelmente, isso se deve ao fato de que a liraglutida da amostra foi digerida em fragmentos menores que não foram analisados pelo método. A concentração real dos produtos da digestão foi provavelmente significativamente maior na amostra de liraglutida. Isto foi apoiado pelo fato de que a liraglutida mostrou significativamente menos liraglutida em tamanho real após 96 horas, como mostrado na FIGURA 4.

[00625] Tabela 1. Concentração de liraglutida e soma de todos os fragmentos de liraglutida observados em unidades arbitrárias para liraglutida (SEQ ID NO: 3; PQ001-2018-001) e Composto 7 (PEG- liraglutida; PQ001-2018-003) após digestão com 50 mU / mL DPP -IV em Na2HPO4 10 mM, pH 7,4 a 37°C. Concentração de Concentração de Concentração de Concentração de todos liraglutida de tamanho liraglutida de tamanho todos os fragmentos os fragmentos de Hora real para liraglutida real para PEG- de liraglutida para liraglutida para PEG- [h] (PQ001-2018-001) liraglutida (PQ001- liraglutida (PQ001- liraglutida [AU] 2018-0030 [AU] 2018-001) [AU] (PQ001-2018-003) [AU] 2 13,40 0,34 0,44 0,00 10 10,70 2,51 1,17 0,00 24 7,64 7,56 1,95 0,40 34 5,58 14,52 2,14 1,09 48 3,96 12,28 1,72 1,05 72 2,56 11,06 1,90 1,50 96 1,41 10,79 1,67 2,55

[00626] Tabela 2. Concentração de liraglutida em unidades arbitrárias para liraglutida (SEQ ID NO: 3; PQ001-2018-001) e Composto 7 (PEG-liraglutida; PQ001-2018-003) após digestão com 50 mU / mL DPP-IV em 10 mM Na2HPO4 pH 7,4 a 37 °C.

Concentração Concentração Concentração Concentração Concentração Concentração de liraglutida de liraglutida de liraglutida de liraglutida de liraglutida de liraglutida AA13-37 para AA25-37 para AA9-37 para AA9-37 para AA13-37 para AA25-37 para Hora PEG- PEG- liraglutida liraglutida liraglutida liraglutida [h] liraglutida liraglutida (PQ001- (PQ001- (PQ001- (PQ001- (PQ001- (PQ001- 2018-001) 2018-003) 2018-001) 2018-001) 2018-003) 2018-003 [AU] [AU] [AU] [AU] [AU] [AU] 2 0,21 0,00 0,23 0,00 0,00 0,00 10 0,65 0,00 0,52 0,00 0,00 0,00 24 0,88 0,40 0,85 0,00 0,21 0,00 34 0,85 0,69 1,09 0,39 0,20 0,00 48 0,85 1,05 0,67 0,00 0,20 0,00 72 0,79 1,50 0,69 0,00 0,42 0,00 96 0,68 2,55 0,50 0,00 0,49 0,00

[00627] A estabilidade proteolítica do composto 7 foi significativamente maior do que a estabilidade da liraglutida. Após 24 horas, a liraglutida mostrou aproximadamente cinco vezes mais produto de digestão do que uma amostra equimolar do composto 7. Com o aumento do tempo, o composto 7 mostrou perda de PEGuilação e, em consequência, também aumentou a geração de produtos de digestão. Após 96 horas, o composto 7, no entanto, ainda apresentava aproximadamente sete a oito vezes mais liraglutida nas condições descritas.

[00628] Em outro experimento, a liraglutida (SEQ ID NO: 3) e o composto 7 foram digeridos com sucesso in vitro com pepsina e analisados por espectrometria de massa com MALDI-TOF-MS. Os espectros para o composto 7 digerido com pepsina foram comparados com o composto 7 intacto e a liraglutida (SEQ ID NO: 3) digerido com pepsina. A partir dessas comparações, o terminal N de liraglutida foi determinado como o sítio de PEGuilação para o composto 7. Além disso, uma intensidade significativamente mais baixa para os peptídeos N-terminais para o composto 7 confirmou que o N-terminal está protegido por peguilação.

[00629] Em suma, o composto 7 fornece estabilidade proteolítica aumentada e meia-vida mais longa de liraglutida em comparação com conjugados de liraglutida com modificação de acila graxo padrão (por exemplo, modificação de γ-Glu-palmitoila liraglutida, SEQ ID NO: 3). Em contraste com a modificação γ-Glu-acila graxo, o composto 7 mostra degradação plasmática mecanicamente diferente (proteólise), pois o sítio de PEGuilação no composto 7 está na viscinidade do sítio de proteólise plasmática normal de liraglutida, que não é "protegido" ou “Protegido” da proteólise em qualquer outra forma de liraglutida. Na verdade, para que o composto 7 forneça estabilidade proteolítica aumentada do polipeptídeo, a modificação da cauda acila γ-Glu não é necessária (embora os polipeptídeos GLP modificados com acila ainda possam ser usados nos conjugados da presente divulgação). O polipeptídeo GLP (por exemplo, liraglutida) sem a cauda de acila, após a liberação do conjugado, está em sua forma nativa, o que vantajosamente leva ao aumento da hidrofilicidade, melhor solubilidade aquosa e redução dos efeitos colaterais associados à modificação de acila graxo. Portanto, os conjugados fornecidos neste documento são capazes de liberar uma forma nativa ("biobetter") do GLP.

[00630] Além disso, quando o composto 7 foi analisado por RP- HPLC, a pureza foi determinada como sendo cerca de 97%.

[00631] Em outro experimento, a atividade biológica de várias quantidades de liraglutida (SEQ ID NO: 3) e composto 7 foi avaliada usando um ensaio de bioatividade baseado em células (cAMP Hunter™ Liraglutide Bioassay Kit; DiscoverX). Quantidades crescentes de liraglutida (SEQ ID NO: 3) resultaram na detecção de aumento da atividade biológica, enquanto a atividade biológica do composto 7 permaneceram baixas, pois as quantidades de composto 7 aumentaram (Figura 9). Em outra experiência, o composto 7 foi incubado em plasma de rato a 37°C (pH 7,4) por zero, 6, 24, 48 e 76 horas. Após cada ponto de tempo, o material foi testado quanto à atividade biológica de qualquer liraglutida liberada do composto 7 usando o ensaio de bioatividade baseado em células (cAMP Hunter™ Liraglutide Bioassay Kit; DiscoverX). A liraglutida biologicamente ativa liberada do composto 7 foi detectada (Figura 10). Esses resultados demonstram que o composto 7 tem a capacidade de atuar como uma pró-droga em mamíferos (por exemplo, humanos); permanecendo inativa em comparação com a liraglutida (SEQ ID NO: 3) até que a liraglutida seja liberada da porção de PEGuilação do composto 7. Exemplo 12 - Desempenho in vivo do composto 7

[00632] A solução estoque de liraglutida (SEQ ID NO: 3) foi preparada dissolvendo liraglutida em 10 mM Na2HPO4 (pH 7,4) a uma concentração de 10 mg / mL. A solução estoque do composto 7 foi preparada dissolvendo o composto 7 em 50 mM de tampão de acetato de amônio (NH4Ac) (pH 4,5) a uma concentração de 10 mg / mL. Antes de dosar os animais, as soluções estoque foram dissolvidas em PBS (pH 7,4) até a concentração final (5,8 nmol / kg).

[00633] Foram usados dois grupos de seis ratos Sprague Dawley cada. O primeiro grupo (Grupo 1) recebeu liraglutida (SEQ ID NO: 3) na dose de 5,8 nmol / kg administrada por via intravenosa em um volume de 1 mL / kg. O segundo grupo (Grupo 2) recebeu o composto 7 em uma dose de 5,8 nmol / kg administrada por via intravenosa em um volume de 1 mL / kg. Todas as injeções foram injeções em bolus na veia da cauda durante 15 segundos

[00634] Amostras de sangue foram coletadas da veia sublingual para frascos pré-revestidos com EDTA. Oito amostras de sangue contendo 200 μL de sangue foram coletadas de cada rato durante um período de 48 horas (pré-dose, 0,08, 1, 3, 6, 24, 30 e 48 horas). As amostras foram centrifugadas a 4500g por cinco minutos e 100 μL do plasma foram transferidos para um novo frasco de 1,5 mL. Um volume fixo de acetato de amônio 0,5 M foi adicionado para atingir um pH de 5,5 no plasma. Após a acidificação, as amostras foram armazenadas a -80°C até serem analisadas. Os níveis de liraglutida no plasma de ambos os grupos foram determinados usando um kit GLP-1 ELISA de alta sensibilidade (Merck EZGLPHS-35K), enquanto um ensaio de bioatividade baseado em células foi usado para medir a quantidade de liraglutida ativa nas amostras.

[00635] As quantidades de liraglutida medidas nas amostras combinadas para cada ponto de tempo do Grupo 1 por ELISA foram representadas graficamente em comparação com as quantidades de liraglutida total e liraglutida livre medidas por ELISA nas amostras combinadas para cada ponto de tempo do Grupo 2 (Figura 11). Da mesma forma, a concentração de liraglutida ativa (nmol / L) medida em amostras individuais pelo ensaio de atividade para o Grupo 1 foi comparada com as medidas para o Grupo 2 (Figura 12). Estes resultados demonstram que o composto 7 é mais estável do que a liraglutida (SEQ ID NO: 3), tem uma meia-vida mais longa do que a liraglutida (SEQ ID NO: 3) (7,3 horas para o composto 7 vs. 2,9 horas para liraglutida não peguilada), e pode funcionar como uma pró-droga. Estes resultados também confirmam a atividade biológica da liraglutida liberada do composto 7 e demonstram que o composto 7 pode ser usado como um tratamento uma vez por semana em pacientes com diabetes tipo 2.

[00636] Tomados em conjunto, os resultados aqui fornecidos demonstram que as drogas (por exemplo, liraglutida) ligadas ao PEG como aqui descritas podem ser formuladas em pró-drogas com pouca ou nenhuma atividade biológica até que a droga seja liberada do PEG. Isso pode permitir efeitos colaterais adversos mais baixos no tratamento medicamentoso devido à menor variação nas concentrações plasmáticas durante o intervalo de dosagem. Os resultados fornecidos neste documento também demonstram que as drogas (por exemplo, liraglutida) podem ser ligadas ao PEG conforme descrito neste documento para aumentar a estabilidade da droga contra a degradação por enzimas como a dipeptidila peptidase IV (DPP-IV). Além disso, os resultados fornecidos neste documento demonstram que as drogas (por exemplo, liraglutida) podem ser ligadas ao PEG, conforme descrito neste documento, para fornecer uma liberação controlada da droga com plena atividade biológica. Os ligantes fornecidos neste documento podem permitir que se selecione um tempo de liberação desejado ou meia-vida desejada para uma droga administrada. Exemplo 13. Avaliação de vários grupos cliváveis

[00637] A clivagem em várias etapas da ligação fosfotriéster e a liberação da droga livre começa com a hidrólise do grupo funcional E. Esta é geralmente a etapa de limitação de taxa, pois todas as etapas subsequentes são muito mais rápidas. Neste exemplo, carbamatos obtidos a partir de 2'-aminouridina e cloroformatos de diferentes grupos de proteção β-eliminativos, conforme apresentado no Exemplo 15, foram dissolvidos em acetonitrila e 200 µL dessa solução foram adicionados a tampão TRIS 0,3 M (PBS) pH 8,0 (1,8 mL). Seguiu-se rapidamente a adição de 3'-azido timidina, usada como substância de referência do padrão interno de HPLC, e a amostra foi incubada a 37°C. Amostras desta mistura, retiradas em diferentes momentos, foram analisadas, monitorando o desaparecimento do carbamato inicial e a formação de 2'- amino uridina. Os resultados obtidos em pH 8,0 podem ser simplesmente recalculados para pH 7,4 (condições fisiológicas), pela multiplicação por 4 (ou seja, a diminuição na concentração de OH-).

[00638] Os resultados desses estudos são apresentados na tabela a seguir. a a

(calculado)

(calculado)

(calculado)

(calculado)

(calculado)

(real)

(real)

(real)

(real)

dias dias (calculado)

Estável Estável

CERTAS MODALIDADES

[00639] Em algumas modalidades, este documento fornece os compostos de Fórmula (I) e Fórmula (II), bem como composições farmacêuticas e métodos de uso desses compostos, conforme descrito nos parágrafos 1-126. Composto de Fórmula (I) Fração alifática (I)

[00640] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:

[00641] a porção alifática é selecionada de um polímero, RP, e um grupo selecionado de:

[00642] polímero-L-(CH2)m- e polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-;

[00643] RP é selecionado de C1-6 alquila opcionalmente substituída, C1-3 alquil-O-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m- opcionalmente substituído, e C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída;

[00644] L é um grupo de ligação;

[00645] m e p são, cada um, independentemente um número inteiro de 1 a 10;

[00646] D é um resíduo de um polipeptídeo GLP-1 ou um análogo do mesmo;

[00647] Z1 é selecionado de O, S e N(RN);

[00648] Z3 é selecionado de O e N(RN),ou Z3 está ausente;

[00649] A é O ou N, em que quando A é O então R3 está ausente;

[00650] RN é selecionado de H e C1-6 alquila opcionalmente substituída;

[00651] R3 é selecionado de H e C1-6 alquila, ou

[00652] R3 e R1, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcionalmente substituído; ou

[00653] R3 e R2, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, e o átomo de carbono ao qual R2 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído;

[00654] MA é um grupo autoimolativo com qualquer uma das fórmulas (a) - (i): (a); (b); (c);

O O x R7 O

C O C R8 y (d); (e); (f); (g); (h); (i);

[00655] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3;

[00656] R1 e R2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substituída, C6-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;

[00657] ou R1e R2 são unidos com os átomos de carbono aos quais estão ligados para formar um anel C3-7 cicloalquila, um anel heterocíclico alifático opcionalmente substituído de 4 a 7 membros, um C6-10 arila opcionalmente substituída ou um heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;

[00658] ou R1 e R2 são unidos para formar um sistema de anel de ribose;

[00659] R7 e R8 são independentemente selecionados de H e C1-6 alquila;ila; e

[00660] E é uma porção clivável.

[00661] Composto de Fórmula (II): Fração alifática (II),

[00662] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:

[00663] a porção alifática é selecionada de um polímero, RP, e um grupo selecionado de:

[00664] polímero-L-(CH2)m- e polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-;

[00665] RP é selecionado de C1-6 alquila opcionalmente substituída, C1-3 alquil-O-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m- opcionalmente substituído, e C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída;

[00666] L é um grupo de ligação;

[00667] m e p são, cada um, independentemente um número inteiro de 1 a 10;

[00668] D é um resíduo de uma droga biologicamente ativa;

[00669] Z1 é selecionado de O, S e N(RN);

[00670] Z3 é selecionado de O e N(RN),ou Z3 está ausente;

[00671] Z4 é selecionado de O e S;

[00672] A é selecionado de O e N(RN);

[00673] RN é selecionado de H e C1-4 alquila opcionalmente substituída;

[00674] MA é um dirradical selecionado de: um grupo autoimolativo com qualquer uma das fórmulas (a)-(i): (a); (b); (c);

O O x R7 O

C O C R8 y (d); (e); (f); (g); (h); (i); e

[00675] ii. um dirradical estável selecionado de qualquer uma das fórmulas (j)-(l): (j); (k); e (l),

[00676] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3;

[00677] R1 e R2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substituída, C6-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;

[00678] ou R1e R2 são unidos com os átomos de carbono aos quais estão ligados para formar um anel C3-7 cicloalquila, um anel heterocíclico alifático opcionalmente substituído de 4 a 7 membros, um C6-10 arila opcionalmente substituída ou um heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;

[00679] ou R1 e R2 são unidos para formar um sistema de anel de ribose;

[00680] R7 e R8 são independentemente selecionados de H, C1-6 alquila, amino, (C1-6 alquil)amino, di-(C1-6 alquil)amino, acilamino, e um grupo amino protegido; e

[00681] E é uma porção clivável.

[00682] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a porção alifática é selecionada de um polímero, RP, e um grupo de fórmula:

[00683] polímero-L-(CH2)m-;

[00684] RP é seleciona do C1-6 alquila opcionalmente substituída C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída; e m é um número inteiro de 1 a 10.

[00685] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a porção alifática é um grupo de fórmula: polímero-L-(CH2)m-.

[00686] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que L é um grupo de ligação compreendendo um heterocicloalquileno ou um heteroarileno.

[00687] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que L é um grupo de ligação compreendendo uma succinimida ou um triazol.

[00688] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que L é um grupo de ligação de qualquer uma das seguintes fórmulas: e ,

[00689] em que indica um ponto de ligação do grupo de ligação ao polímero ou ao grupo CH2 .

[00690] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o grupo de ligação L é um grupo de ligação de fórmulas: ,

[00691] em que indica um ponto de ligação do grupo de ligação ao polímero ou ao grupo CH2 .

[00692] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o grupo de ligação L compreende um grupo de fórmula (L1): (L1),

[00693] em que o anel C é selecionado a partir do grupo que consiste em um C8-16 cicloalquila opcionalmente substituída e um heterocicloalquila de 8-16 membros opcionalmente substituído e indica um ponto de ligação do grupo de ligação ao polímero ou ao grupo CH2 .

[00694] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o grupo de fórmula (L1) é selecionado de qualquer uma das seguintes fórmulas: , , ,e .

[00695] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que m é um número inteiro de 1 a 6.

[00696] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que m é um número inteiro de 1 a 4.

[00697] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a porção alifática é um polímero.

[00698] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o polímero é selecionado do grupo que consiste em poli(alquilenoglicol), poli(poliol oxietilado), poli(álcool olefínico), poli(α- hidroxiácido), poli(vinila álcool), polioxazolina e copolímeros do mesmos.

[00699] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o polímero é um polietilenoglicol.

[00700] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o polietileno glicol é linear.

[00701] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o polietileno glicol é ramificado.

[00702] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o polietileno glicol tem um peso molecular médio de cerca de 500 Da a cerca de 40.000 Da.

[00703] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o polietileno glicol tem um peso molecular médio de cerca de

1.000 Da a cerca de 30.000 Da.

[00704] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o polietileno glicol tem um peso molecular médio de cerca de

1.000 Da a cerca de 20.000 Da.

[00705] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o polietileno glicol tem um peso molecular médio de cerca de

5.000 Da a cerca de 20.000 Da.

[00706] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o polietileno glicol tem a seguinte fórmula estrutural:

[00707] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que n é um número inteiro de 1 a 1.000.

[00708] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que n é um número inteiro de 1 a 800.

[00709] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que n é um número inteiro de 1 a 300.

[00710] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que n é um número inteiro de 1 a 100.

[00711] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que n é selecionado de 10, 20, 50, 100, 200, 250, 300, 500, 600 e

1000.

[00712] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a porção alifática é RP.

[00713] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que RP é um C1-6 alquila opcionalmente substituída.

[00714] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que RP é isopropila.

[00715] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que RP é cianoetila.

[00716] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que RP é selecionado do grupo de qualquer uma das seguintes fórmulas: alquileno alquileno alquileno alquil ; ; ; alquileno alquileno ; ; alquileno , alquileno alquileno ,e .

[00717] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que RP é selecionado do grupo de qualquer uma das seguintes fórmulas: alquileno alquileno alquileno , ,e .

[00718] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que RP é selecionado de qualquer uma das seguintes fórmulas: alquileno alquileno alquileno , ,e .

[00719] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que Z1 é S e MA é grupo autoimolativo de fórmula (a): (a),

[00720] em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3.

[00721] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que R7 e R8 são independentemente selecionados de H e metila.

[00722] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que R1 e R2 são, cada um, hidrogênio.

[00723] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que R1 e R2 juntos formam anel C3-7 cicloalquila.

[00724] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o anel C3-7 cicloalquila é selecionado do grupo que consiste em ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila e ciclo-hexila.

[00725] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que R1 e R2 juntos formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros.

[00726] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros é selecionado do grupo que consiste em pirrolidina, piperidina, tetra-hidrofurano e tetra- hidropirano.

[00727] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que R1 e R2 juntos formam um sistema de anel de ribose de um ribonucleosídeo.

[00728] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que R1 e R2 juntos formam um sistema de anel de ribose de fórmula: ,

[00729] em que a representa um ponto de ligação a O e b representa um ponto de ligação a A, a representa um ponto de ligação a A e b representa um ponto de ligação a O, e em que W é selecionado do grupo que consiste em H, um grupo acila e um grupo de proteção.

[00730] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a nucleobase é selecionada do grupo que consiste em adenina, citosina, guanina, timina, uracila e outras nucleobases naturais e não naturais.

[00731] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a nucleobase é selecionada do grupo que consiste em adenina, citosina, guanina, timina e uracila.

[00732] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a nucleobase é selecionada do grupo que consiste em 5- metilcitosina, pseudouridina, di-hidrouridina, inosina, 7-metilguanosina, hipoxantina e xantina.

[00733] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a nucleobase compreende um grupo fluorescente.

[00734] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a nucleobase compreende um polímero.

[00735] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que R1 e R2 juntos formam um sistema de anel de ribose de fórmula:

polimero .

[00736] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que R1 e R2 juntos formam um sistema de anel de ribose de fórmula: .

[00737] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que A é O.

[00738] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que A é NR3.

[00739] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que R3 e R1, juntamente com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático opcionalmente substituído de 4 a 7 membros.

[00740] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros é selecionado do grupo que consiste em: ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ;

; ; ; ; ;e ,

[00741] em que x denota um ponto de ligação a E, e y denota um ponto de ligação ao átomo de carbono ao qual R1 está ligado.

[00742] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que R3 e R2, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, e o átomo de carbono ao qual R2 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído.

[00743] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que A é NH.

[00744] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que A é N(C1-6 alquila).

[00745] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é clivável por uma enzima selecionada do grupo que consiste em uma esterase, uma peptidase específica ou não específica, uma redutase, uma oxidase, uma glicosidase, uma hidrolase, uma glicosila transferase, e uma transaminase.

[00746] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é clivável por uma enzima selecionada do grupo que consiste em uma esterase, uma redutase, uma oxidase, um glicosídeo, uma hidrolase e glicosila transferase.

[00747] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é não enzimaticamente clivável em pH acídico ou fisiológico.

[00748] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é um grupo acila, um grupo O-metil-acila, um grupo metila azido, um resíduo de açúcar, um acetal protegido ou um éster carbonato.

[00749] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é clivável por uma enzima redutase.

[00750] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que A é O e E é um grupo de fórmula: .

[00751] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E contém um grupo ditio que é clivável por um tiol biogênico.

[00752] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é clivável por uma glutationa.

[00753] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é um grupo de qualquer uma das seguintes fórmulas: e ,

[00754] em que RE é selecionado do grupo que consiste em C1-6 alquila e benzila.

[00755] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que A é O e E é um grupo de fórmula: .

[00756] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é clivável pela enzima glicosídeo hidrolase.

[00757] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é um resíduo de um açúcar selecionado de glicose, galactose, manose e ácido glucurônico.

[00758] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é clivável por uma enzima esterase.

[00759] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é selecionado de um grupo acila, um éster carbonato e um éster

O-metil-acílico.

[00760] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é clivável por hidrólise em pH fisiológico.

[00761] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é um grupo acila.

[00762] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que A é NRN ou NR3, e E é uma porção clivável de fórmula: ,

[00763] em que:

[00764] R9 é selecionado de H, um C6-10 arila opcionalmente substituída, e um C1-6 alquila opcionalmente substituída;

[00765] R10 e R11 são, cada um, independentemente selecionados de H, CN, NO2, COR12, SOR12 ou SO2R12, um C1-6 alquila opcionalmente substituída, um C6-10 arila opcionalmente substituída, e um heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída; ou

[00766] R10 e R11 juntamente com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados formam um anel C3-7 cicloaquila opcionalmente substituída que é fundido com um ou mais anéis C6-10 arila opcionalmente substituídas;

[00767] R12 é selecionado de um C1-6 alquila opcionalmente substituída e um C6-10 arila opcionalmente substituída.

[00768] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que A é NH, e R9 é selecionado de H e um C6-10 arila opcionalmente substituída.

[00769] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é uma porção clivável de qualquer uma das seguintes fórmulas (E-1) a (E-12) e (E-37) a (E-42):

(E-1), (E-2), (E-3), (E-4), (E-5), (E-6), (E-7), (E-

O O O O O O S

S O O CH3 8), (E-9), (E-10),

O

O O (E-11), (E-12), (E-37), (E-38), (E-39), (E-40), (E-41), (E-42);

[00770] em que qualquer um dos anéis de fenila nas fórmulas (E-1)

a (E-12), (E-37) ou (E-39) a (E-41) é opcionalmente substituído por 1, 2, 3, 4 , ou 5 substituintes selecionados de C1-10 alquila, C1-10 haloalquila, C1-10 alcóxi,óxi, OH, NO2, CN, halogênio e acila.

[00771] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é uma porção clivável de qualquer uma das seguintes fórmulas (E-1) a (E-12), (E-37), ou (E-39) a (E-41).

[00772] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que qualquer um dos anéis de fenila nas fórmulas (E-1) a (E-12), (E- 37) ou (E-39) a (E-41) é opcionalmente substituído por 1, 2, 3 ou 4 substituintes selecionados de F, Cl, CN, acetila, NO2 e CF3.

[00773] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é um grupo de qualquer uma das seguintes fórmulas (E-13) a (E-36): (E-13); (E-14); (E-15); (E-16); (E-17); (E-18); (E-19); (E-20); (E-21); (E-22); (E-23); (E-24); (E-25);

(E-26); (E-27); (E-28); (E-29); (E-30); (E-31); (E-32); (E-34);

H N NH

N O O (E-35); e (E-36),

[00774] em que R é C1-6 alquila.

[00775] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é clivável em pH acídico.

[00776] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é um grupo selecionado de um acetal, um orto-éster e trifenila metiléteres substituídos.

[00777] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E é selecionado de tetra-hidrofuranila, 4-metoxitetra-hidropiran-4- ila, 1,5-dicarbo-metoxipentanila, metóxi isopropila acetal, metóxi ciclo- hexenila acetal, dimetoxitritila, trimetoxitritila e pixila.

[00778] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que uma porção clivável E é anexada a A usando um grupo de fórmula (LE):

(LE),

[00779] em que a denota um ponto de ligação a A e b denota um ponto de ligação a E.

[00780] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que D é um resíduo de um polipeptídeo GLP-1.

[00781] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que D é um resíduo de um análogo de polipeptídeo GLP-1.

[00782] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o análogo do polipeptídeo GLP-1 é liraglutida.

[00783] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (I) tem qualquer uma das seguintes fórmulas: Fração alifática (I-1); Polietilenoglicol (I-2); Polietilenoglicol (I-3);

Polietilenoglicol

(I-4);

(I-5);

Fração alifática

(I-6);

Polietilenoglicol (I-7);

(I-8);

Polietilenoglicol (I-9),

[00784] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00785] Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 87, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-1): Fração alifática (II-1),

[00786] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00787] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-2): Polietilenoglicol (II-2),

[00788] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00789] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-3):

Polietilenoglicol (II-3),

[00790] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00791] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-4): Polietilenoglicol (II-4),

[00792] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00793] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem qualquer uma das seguintes Fórmulas (II-5) a (II-7):

Polietilenoglicol Droga (II-5); Polietilenoglicol Droga (II-6); e Polietilenoglicol Droga (II-7),

[00794] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,

[00795] em que quando o composto tem a Fórmula II-7, A é O.

[00796] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-8):

(II-8),

[00797] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00798] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem qualquer uma das seguintes Fórmulas: (II-9) e Pivaloil (II-9b),

[00799] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00800] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-10a): Fração alifática (II-10a),

[00801] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00802] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-10): Fração alifática (II-10),

[00803] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00804] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-11a): Polietilenoglicol (II-11a),

[00805] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00806] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-11):

Polietilenoglicol (II-11),

[00807] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00808] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-12): (II-12),

[00809] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00810] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-14):

Polietilenoglicol (II-14),

[00811] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00812] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-15): (II-15),

[00813] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00814] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-16): (II-16),

[00815] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00816] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que RP é C1-6 alquila.

[00817] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que RP é isopropila.

[00818] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que RP é cianoetila.

[00819] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (I) é: Liraglutida ,

[00820] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

[00821] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (I) é: Liraglutida ,

[00822] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

[00823] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (I) é: Liraglutida ,

[00824] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

[00825] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (I) é: Liraglutida ,

[00826] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

[00827] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (I) é:

Liraglutida ,

[00828] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

[00829] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (I) é: Liraglutida ,

[00830] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

[00831] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto de Fórmula (I) é:

Liraglutida ,

[00832] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

[00833] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto não é: Liraglutida

[00834] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que U é uracila.

[00835] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que E não é (E-38).

[00836] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto é Liraglutida ,

[00837] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00838] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto é Liraglutida ,

[00839] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00840] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que o composto é Liraglutida ,

[00841] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00842] O composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que a Droga (por exemplo, liraglutida, um polipeptídeo GLP-1 ou um análogo do mesmo) é inativo ou fracamente biologicamente ativo quando conjugado no composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II), em comparação com a forma livre não conjugada da Droga, e recupera sua atividade biológica após a droga ser liberada do composto de Fórmula (I) ou Fórmula (II).

[00843] Uma composição farmacêutica que compreende o composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um transportador farmaceuticamente aceitável.

[00844] Um método de tratamento de uma doença ou condição em um indivíduo em necessidade, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de qualquer um dos parágrafos anteriores, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica do parágrafo

116.

[00845] O método do parágrafo 117, em que a doença ou condição é selecionada de diabetes e obesidade.

[00846] Um método para fazer um composto de qualquer um dos parágrafos anteriores tendo a fórmula: Fração alifática ,

[00847] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, o método compreendendo: (i) reagir um composto de fórmula: Fração alifática ,

[00848] em que LG é um grupo de saída, com o polipeptídeo GLP-1 ou um análogo do mesmo de fórmula HZ3-D.

[00849] O método do parágrafo acima, em que o composto de fórmula: Fração alifática

[00850] é obtido pelo método que compreende:

[00851] desproteger um composto de fórmula:

Fração alifática ,

[00852] em que PG1 é um grupo de proteção, para obter um composto de fórmula: Fração alifática ,e

[00853] (ii) reagir o composto obtido na etapa (i) com um composto que compreende um grupo de saída.

[00854] O método do parágrafo acima, em que o composto de fórmula: Fração alifática é obtido pelo método que compreende:

[00855] reduzir um composto de fórmula: Fração alifática para obter um composto de fórmula: Fração alifática ,e

[00856] reagir o composto obtido na etapa (i) com um composto que compreende um grupo de saída.

[00857] O método de qualquer um dos parágrafos anteriores, em que D é um resíduo de liraglutida.

OUTRAS MODALIDADES

[00858] Deve ser entendido que, embora o presente pedido tenha sido descrito em conjunto com a descrição detalhada do mesmo, a descrição anterior se destina a ilustrar e não limitar o escopo do presente pedido, que é definido pelo escopo das reivindicações anexas. Outros aspectos, outras vantagens e outras modificações estão dentro do escopo das reivindicações seguintes.

Claims (70)

REIVINDICAÇÕES

1. Colmposto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (I) fração alifática (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: a porção alifática é selecionada de um polímero, RP, e um grupo selecionado de: polímero-L-(CH2)m- e polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-; RP é selecionado de C1-6 alquila opcionalmente substituída, C1-3 alquil-O-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m- opcionalmente substituído, e C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída; L é um grupo de ligação; m e p são, cada um, independentemente um número inteiro de 1 a 10; D é um resíduo de um polipeptídeo GLP-1 ou um análogo do mesmo; Z1 é selecionado de O, S e N(RN); Z3 é selecionado de O e N(RN),ou Z3 está ausente; A é O ou N, em que quando A é O então R3 está ausente; RN é selecionado de H e C1-6 alquila opcionalmente substituída; R3 é selecionado de H e C1-6 alquila, ou R3 e R1, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 7 membros opcionalmente substituído; ou

R3 e R2, junto com A e o átomo de carbono ao qual R1 está ligado, e o átomo de carbono ao qual R2 está ligado, formam um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros opcionalmente substituído; MA é um grupo autoimolativo com qualquer uma das fórmulas (a) - (i): (a); (b); (c);

O O x R7 O

C O C R8 y (d); (e); (f); (g); (h); (i); em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3; R1 e R2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substituída, C6-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída; ou R1e R2 são unidos com os átomos de carbono aos quais estão ligados para formar um anel C3-7 cicloalquila, um anel heterocíclico alifático opcionalmente substituído de 4 a 7 membros, um C6-10 arila opcionalmente substituída ou uma heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída; ou R1 e R2 são unidos para formar um sistema de anel de ribose; R7 e R8 são independentemente selecionados de H e C1-6 alquila; e

E é uma porção clivável.

2. Composto de Fórmula (II): fração alifática (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que: a porção alifática é selecionada de um polímero, RP, e um grupo selecionado de: polímero-L-(CH2)m- e polímero-L-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m-; RP é selecionado de C1-6 alquila opcionalmente substituída, C1-3 alquil-O-(CH2-CH2-O)p-(CH2)m- opcionalmente substituído, e C3-7 cicloalquila opcionalmente substituída; L é um grupo de ligação; m e p são, cada um, independentemente um número inteiro de 1 a 10; D é um resíduo de uma droga biologicamente ativa; Z1 é selecionado de O, S e N(RN); Z3 é selecionado de O e N(RN),ou Z3 está ausente; Z4 é selecionado de O e S; A é selecionado de O e N(RN); RN é selecionado de H e C1-4 alquila opcionalmente substituída; MA é um dirradical selecionado de: a) um grupo autoimolativo com qualquer uma das fórmulas (a)-(i):

(a); (b);

O O x R7 O

C O C R8 y (c); (d); (e); (f); (g); (h); (i); e b) um dirradical estável selecionado de qualquer uma das fórmulas (j)-(l): (j); (k); e (l), em que x representa um ponto de ligação a Z1 e y representa um ponto de ligação a Z3; R1 e R2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, C1-6 alquila opcionalmente substituída, C6-10 arila opcionalmente substituída e heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída; ou R1e R2 são unidos com os átomos de carbono aos quais estão ligados para formar um anel C3-7 cicloalquila, um anel heterocíclico alifático opcionalmente substituído de 4 a 7 membros, um C6-10 arila opcionalmente substituída ou uma heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituída;

ou R1 e R2 são unidos para formar um sistema de anel de ribose; R7 e R8 são independentemente selecionados de H, C1-6 alquila, amino, (C1-6 alquil)amino, di-(C1-6 alquil)amino, acilamino, e um grupo amino protegido; e E é uma porção clivável.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a porção alifática é um polímero.

4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o polímero é selecionado do grupo que consiste em poli(alquilenoglicol), poli(poliol oxietilado), poli(álcool olefínico), poli(α-hidroxiácido), poli(vinil álcool), polioxazolina e copolímeros do mesmos.

5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o polímero é um polietileno glicol.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o polietileno glicol é linear.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o polietileno glicol é ramificado.

8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 7, caracterizado pelo fato de que o polietileno glicol tem um peso molecular médio de cerca de 500 Da a cerca de 40.000 Da.

9. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 7, caracterizado pelo fato de que o polietileno glicol tem um peso molecular médio de cerca de 1.000 Da a cerca de 30.000 Da.

10. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 7, caracterizado pelo fato de que o polietileno glicol tem um peso molecular médio de cerca de 1.000 Da a cerca de 20.000 Da.

11. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 7, caracterizado pelo fato de que o polietileno glicol tem um peso molecular médio de cerca de 5.000 Da a cerca de 20.000 Da.

12. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 11, caracterizado pelo fato de que o polietileno glicol tem a seguinte fórmula estrutural: .

13. Composto, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que n é um número inteiro de 1 a 1.000.

14. Composto, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que n é um número inteiro de 1 a 800.

15. Composto, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que n é um número inteiro de 1 a 300.

16. Composto, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que n é um número inteiro de 1 a 100.

17. Composto, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que n é selecionado de 10, 20, 50, 100, 200, 250, 300, 500, 600 e 1000.

18. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que R7 e R8 são independentemente selecionados de H e metila.

19. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizado pelo fato de que R1 e R2 juntos formam um sistema de anel de ribose de um ribonucleosídeo.

20. Composto, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que R1 e R2 juntos formam um sistema de anel de ribose de fórmula: , em que a representa um ponto de ligação a O e b representa um ponto de ligação a A, a representa um ponto de ligação a A e b representa um ponto de ligação a O, e em que W é selecionado do grupo que consiste em H, um grupo acila e um grupo protetor.

21. Composto, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a nucleobase é selecionada do grupo que consiste em adenina, citosina, guanina, timina, uracil e outras nucleobases naturais e não naturais.

22. Composto, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a nucleobase é selecionada do grupo que consiste em adenina, citosina, guanina, timina e uracila.

23. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo fato de que A é O.

24. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo fato de que A é NR3.

25. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo fato de que A é NH.

26. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo fato de que A é N(C1-6 alquila).

27. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que E é clivável por uma enzima selecionada do grupo que consiste em uma esterase,

uma peptidase específica ou não específica, uma redutase, uma oxidase, uma glicosidase, uma hidrolase, uma glicosil transferase, e uma transaminase.

28. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que E é clivável por uma enzima selecionada do grupo que consiste em uma esterase, uma redutase, uma oxidase, um glicosídeo, uma hidrolase e glicosil transferase.

29. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que E é clivável não enzimaticamente em pH acídico ou fisiológico.

30. Composto, de acordo com a reivindicação 28 ou 29, caracterizado pelo fato de que E é um grupo acila, um grupo O- metil-acila, um grupo metil azido, um resíduo de açúcar, um acetal protegido ou um éster carbonato.

31. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que E é clivável por uma enzima redutase.

32. Composto, de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que A é O e E é um grupo de fórmula: .

33. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que E é clivável pela enzima glicosídeo hidrolase.

34. Composto, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que E é um resíduo de um açúcar selecionado de glicose, galactose, manose e ácido glucurônico.

35. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que E é clivável por uma enzima esterase.

36. Composto, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que E é selecionado de um grupo acila, um éster carbonato e um éster O-metil-acílico.

37. Composto, de acordo com a reivindicação 1 a 26, caracterizado pelo fato de que E é clivável por hidrólise em pH fisiológico.

38. Composto, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que E é um grupo acila.

39. Composto, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que é NRN ou NR3, e E é uma porção clivável de fórmula: , em que: R9 é selecionado de H, uma C6-10 arila opcionalmente substituída, e uma C1-6 alquila opcionalmente substituída; R10 e R11 são, cada um, independentemente selecionados de H, CN, NO2, COR12, SOR12 ou SO2R12, uma C1-6 alquila opcionalmente substituída, uma C6-10 arila opcionalmente substituída, e uma heteroarila de 5 a 14 membros opcionalmente substituído; ou R10 e R11 juntamente com o átomo de carbono ao qual eles estão ligados formam um anel C3-7 cicloaquila opcionalmente substituída que é fundido com um ou mais anéis C6-10 arila opcionalmente substituídas; R12 é selecionado de uma C1-6 alquila opcionalmente substituída e uma C6-10 arila opcionalmente substituída.

40. Composto, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que A é NH, e R9 é selecionado de H e uma C6-10 arila opcionalmente substituída.

41. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que E é uma porção clivável de qualquer uma das seguintes fórmulas (E-1) a (E-12) e (E- 37) a (E-42): (E-1), (E-2), (E-3), (E-4), (E-5), (E-6), (E-7),

O O

O

S O CH3 (E-8), (E-9),

O O O

O

S O

O (E-10), O (E-11), (E-12), (E-37), (E-38), (E-39),

(E-40), (E-41), (E-42); em que qualquer um dos anéis de fenila nas fórmulas (E-1) a (E-12), (E-37) ou (E-39) a (E-41) é opcionalmente substituído por 1, 2, 3, 4 , ou 5 substituintes selecionados de C1-10 alquila, C1-10 haloalquila, C1-10 alcóxi, OH, NO2, CN, halogênio e acila.

42. Composto, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que E é uma porção clivável de qualquer uma das seguintes fórmulas (E-1) a (E-12), (E-37) ou (E-39) a (E-41).

43. Composto, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que qualquer um dos anéis de fenil nas fórmulas (E-1) a (E-12), (E-37) ou (E-39) a (E-41) é opcionalmente substituído por 1, 2, 3 ou 4 substituintes selecionados de F, Cl, CN, acetila, NO2 e CF3.

44. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que E é um grupo de qualquer uma das seguintes fórmulas (E-13) a (E-36): (E-13); (E-14); (E-15); (E-16); (E-17);

(E-18); (E-19); (E-20); (E-21); (E-22); (E-23); (E-24); (E-25); (E-26); (E-27); (E-28); (E-29); (E-30); (E-31); (E-32); (E-34); (E-35); e (E-36), em que R é C1-6 alquila.

45. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 44, caracterizado pelo fato de que D é um resíduo de um polipeptídeo GLP-1.

46. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 44, caracterizado pelo fato de que D é um resíduo de um análogo de polipeptídeo GLP-1.

47. Composto, de acordo com a reivindicação 46, caracterizado pelo fato de que o análogo do polipeptídeo GLP-1 é liraglutida.

48. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2 a 47, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) tem qualquer uma das seguintes fórmulas: fração alifática (I-1) Polietilenoglicol (I-2); Polietilenoglicol (I-3);

Polietilenoglicol

(I-4);

(I-5);

fração alifática

(I-6);

Polietilenoglicol (I-7);

(I-8);

Polietilenoglicol (I-9), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

49. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 47, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-2): Polietilenoglicol (II-2), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

50. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 47, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (II) tem a Fórmula (II-4): Polietilenoglicol (II-4), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

51. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 47, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é:

Liraglutida ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

52. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 47, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é: Liraglutida ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

53. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 47, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é:

Liraglutida , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

54. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 47, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é: Liraglutida , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

55. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 47, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é:

Liraglutida , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

56. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 47, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é: Liraglutida , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

57. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 47, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula (I) é:

Liraglutida , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que liraglutida é o resíduo de liraglutida.

58. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o composto não é liraglutida,, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que U é uracila.

59. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que E não é (E-38).

60. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 47, caracterizado pelo fato de que o composto tem a fórmula: Liraglutida,, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

61. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 47, caracterizado pelo fato de que o composto tem a fórmula: Liraglutida, , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

62. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 47, caracterizado pelo fato de que o composto tem a fórmula: Liraglutida,, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

63. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 62, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo GLP-1 ou um análogo do mesmo da Fórmula (I) é inativo ou fracamente biologicamente ativo quando conjugado no composto de Fórmula (I), em comparação com a forma livre, não conjugada do polipeptídeo GLP-1 ou um análogo do mesmo de Fórmula (I), e recupera sua atividade biológica após o polipeptídeo GLP-1 ou um análogo do mesmo de Fórmula (I) ser liberado do composto de Fórmula (I).

64. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 63, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um transportador farmaceuticamente aceitável.

65. Método de tratamento de uma doença ou condição em um indivíduo em necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 63, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farmacêutica das reivindicações 64.

66. Método, de acordo com a reivindicação 65, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é selecionada de diabetes e obesidade.

67. Método de preparação de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 63, caracterizado pelo fato de que tem a fórmula: fração alifática , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, o método compreendendo: (i) reagir um composto de fórmula: fração alifática , em que LG é um grupo de saída, com o polipeptídeo GLP-1 ou um análogo do mesmo de fórmula HZ3-D.

68. Método, de acordo com a reivindicação 67, caracterizado pelo fato de que o composto de fórmula:

fração alifática é obtido pelo método que compreende: (i) desproteger um composto de fórmula: fração alifática , em que PG1 é um grupo protetor, para obter um composto de fórmula: fração alifática ,e (ii) reagir o composto obtido na etapa (i) com um composto que compreende um grupo de saída.

69. Método, de acordo com a reivindicação 67, caracterizado pelo fato de que o composto de fórmula: fração alifática é obtido pelo método que compreende: (i) reduzir um composto de fórmula: fração alifática para obter um composto de fórmula:

fração alifática ,e (ii) reagir o composto obtido na etapa (i) com um composto que compreende um grupo de saída.

70. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 67 a 69, caracterizado pelo fato de que D é um resíduo de liraglutida.