BR112021004063A2 - amidas heterocíclicas com 5 a 7 membros como inibidores de jak - Google Patents

Abstract

A invenção oferece compostos de fórmula (I): (I) onde as variáveis são definidas nas especificações, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, que são úteis como inibidores da JAK quinase. A invenção também oferece composições farmacêuticas compreendendo estes compostos e métodos de uso destes compostos para tratar doenças respiratórias.

Description

PATENTE Pauta do Advogado No.: P-343-PCT Número do Cliente: 27038 AMIDAS HETEROCÍCLICAS COM 5 A 7 MEMBROS COMO

INIBIDORES DE JAK

HISTÓRICO DA INVENÇÃO Campo da invenção

[001] A invenção é dirigida a compostos úteis como inibidores de JAK quinase. A invenção é também dirigida a composições farmacêuticas compreendendo estes compostos e métodos de uso destes compostos para tratar doenças respiratórias.

Estado da técnica

[002] A asma é uma doença crônica das vias respiratórias para a qual não há prevenção ou cura. A doença é caracterizada por inflamação, fibrose, hiperresponsividade e remodelagem das vias respiratórias, todos os quais contribuem para a limitação do fluxo de ar. Estima-se que 300 milhões de pessoas em todo o mundo sofram de asma, e é estimado que o número de pessoas com asma crescerá em mais de 100 milhões até 2025. Nos Estados Unidos, a asma aflige cerca de 6% a 8% da população, fazendo dela uma das doenças crônicas mais comuns no país. Ainda que a maioria dos pacientes atinja um controle dos sintomas da asma com o uso de corticosteroides inalados que podem ser combinados com um modificador dos leucotrienos e/ou um agonista beta de ação prolongada, permanece um subconjunto de pacientes com asma severa, cuja doença não é controlada com terapias convencionais. A asma severa persistente é definida como a doença que permanece sem controle em doses altas de corticosteroides inalados. Ao mesmo tempo que os asmáticos graves são estimados em aproximadamente 5% de todos os asmáticos, eles apresentam um alto risco de morbidade e mortalidade e são responsáveis por uma parcela desproporcional da utilização de recursos de saúde entre os asmáticos. Permanece a necessidade de novas terapias para tratar estes pacientes.

[003] As citocinas são moléculas sinalizadoras intercelulares que incluem quimiocinas, interferons, interleucinas, linfocinas e fator de necrose de tumores. As citocinas são essenciais para o crescimento celular normal e imunorregulação, mas também guiam doenças imunomediadas e contribuem para o crescimento de células malignas. Níveis elevados de muitas citocinas têm sido implicados na patologia da inflamação da asma. Por exemplo, as terapias baseadas em anticorpos direcionadas às interleucinas (IL)-5 e 13 demonstraram oferecer benefícios clínicos em subconjuntos de pacientes com asma grave. Entre as citocinas implicadas na inflamação da asma, muitas agem por meio de vias de sinalização dependentes da família Janus de tirosina quinases (JAKs), que sinalizam por meio da família de fatores de transcrição do Transdutor e Ativador de Transcrição de Sinal (STAT). As citocinas implicadas na inflamação da asma que sinalizam através da via JAK-STAT incluem IL-2, IL-3 IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-l1, IL-13, IL-23, IL- 31, IL-27, linfopoietina estromal tímica (TSLP), interferon- y (IENy) e fator estimulador de colônia de granulócitos-macrófagos (GM-CSF).

[004] A família JAK compreende quatro membros, JAK1, JAK2, JAK3 e tirosina quinase 2 (TYK2). A ligação da citocina a um receptor de citocina dependente de JAK induz a dimerização do receptor, o que resulta na fosforilação de resíduos de tirosina na JAK quinase, efetivando a ativação de JAK. JAKs fosforilados, por sua vez, ligam e fosforilam várias proteínas STAT que dimerizam, internalizam no núcleo da célula e modulam diretamente a transcrição do gene, levando, entre outros efeitos, aos efeitos posteriores associados à doença inflamatória. JAKs geralmente se associam a receptores de citocinas em pares como homodímeros ou heterodímeros. Citocinas específicas estão associadas a emparelhamentos JAK específicos. Cada um dos quatro membros da família JAK está implicado na sinalização de pelo menos uma das citocinas associadas à inflamação da asma. Consequentemente, um inibidor químico com atividade pan contra todos os membros da família JAK poderia modular uma ampla gama de vias pró-inflamatórias que contribuem para a asma grave.

[005] No entanto, o amplo efeito anti-inflamatório destes inibidores pode suprimir a função normal das células imunes, levando potencialmente a um risco aumentado de infecção. Foi observada evidência de risco aumentado de infecção com o inibidor de JAK tofacitinibe, que é administrado por via oral para o tratamento da artrite reumatoide. Na asma, a inflamação está localizada no trato respiratório. A inflamação das vias respiratórias é característica de outras doenças respiratórias além da asma. Doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), fibrose cística

(FC), pneumonite, doenças pulmonares intersticiais (incluindo fibrose pulmonar idiopática), lesão pulmonar aguda, síndrome do desconforto respiratório agudo, bronquite, enfisema e sarcoidose também são doenças do trato respiratório em que se acredita que a fisiopatologia esteja relacionada às citocinas de sinalização de JAK. A administração local de um inibidor de JAK por inalação para os pulmões oferece o potencial de ser terapeuticamente eficaz ao entregar um agente anticitocina potente diretamente no local de ação, limitando a exposição sistêmica e, portanto, limitando o potencial de imunossupressão sistêmica adversa. Permanece a necessidade de um inibidor potente de JAK adequado para administração local nos pulmões para tratamento de doenças respiratórias.

[006] As citocinas de sinalização de JAK também desempenham um papel importante na ativação das células T, um subtipo de células imunológicas que é fundamental para muitos processos imunológicos. A ativação patológica das células T é essencial na etiologia de várias doenças respiratórias. As células T autorreativas desempenham um papel na bronquiolite obliterante em pneumonia em organização (também denominada COS). Semelhante à COS, a etiologia das rejeições do transplante de pulmão está ligada a uma ativação aberrante das células T do receptor pelo pulmão doador transplantado. As rejeições do transplante pulmonar podem ocorrer precocemente como disfunção primária do enxerto (PGD), pneumonia em organização (OP), rejeição aguda (AR) ou bronquiolite linfocítica (BL) ou podem ocorrer anos após o transplante pulmonar como disfunção crônica do aloenxerto pulmonar (CLAD). A CLAD era anteriormente conhecida como bronquiolite obliterante (BO), mas agora é considerada uma síndrome que pode ter diferentes manifestações patológicas, incluindo BO, CLAD restritiva (rYrCLAD ou RAS) e disfunção de aloenxerto neutrofílico.

A disfunção crônica do aloenxerto pulmonar (CLAD) é um grande desafio no manejo de longo prazo de receptores de transplante de pulmão, pois faz com que um pulmão transplantado perca progressivamente a funcionalidade (Gauthier et al., Curr.

Transplant.

Rep., 2016, 3(3), 185-191). A CLAD é pouco responsiva ao tratamento; portanto, permanece a necessidade de compostos eficazes capazes de prevenir ou tratar esta condição.

Várias citocinas dependentes de JAK, como IFNÍJ e IL-5, são reguladas positivamente na CLAD e na rejeição de transplante de pulmão (Berastegui et al, Clin.

Transplant. 2017, 31, el2898). Além disso, altos níveis pulmonares das quimiocinas CXCR3, como CXCL9 e CXCL10, que estão a jusante da sinalização IFN dependente de JAK, estão ligados a piores resultados em pacientes de transplante de pulmão (Shino et al, PLOS One, 2017, 12 (7), e0180281). A inibição sistêmica de JAK demonstrou ser eficaz na rejeição de transplante renal (Vicenti et al., American Journal of Transplantation, 2012, 12, 2446-56). Portanto, os inibidores de JAK têm potencial para serem eficazes no tratamento ou prevenção da rejeição do transplante de pulmão e CLAD.

Os eventos de ativação das células T semelhantes, conforme descrito como a base para a rejeição do transplante de pulmão, também são considerados o principal fator de doença do enxerto pulmonar contra hospedeiro (GVHD), que pode ocorrer após os transplantes de células-tronco hematopoiéticas. Semelhante à CLAD, a GVHD pulmonar é uma condição crônica progressiva com resultados extremamente ruins e nenhum tratamento está aprovado presentemente. Um estudo retrospectivo multicêntrico de pesquisa de 95 pacientes com GVHD aguda ou crônica refratária a esteroides que receberam o inibidor de JAK sistêmico ruxolitinibe como terapia de resgate demonstrou resposta completa ou parcial ao ruxolitinibe na maioria dos pacientes, incluindo aqueles com GVHD pulmonar (Zeiser et al, Leucemia, 2015, 29, 10, 2062-68). Como a inibição sistêmica de JAK está associada a eventos adversos graves e a um pequeno índice terapêutico, permanece a necessidade de um inibidor de JAK não sistêmico inalado e direcionado aos pulmões para prevenir e/ou tratar a rejeição de transplante de pulmão ou GVHD de pulmão.

RESUMO DA INVENÇÃO

[007] Em um aspecto, a invenção oferece novos compostos com atividade como inibidores da JAK quinase.

Assim, a invenção oferece um composto de fórmula (1): HO.

| O »

H (1) caracterizado por:

[008] A ser um anel heterociclil monocíclico de 6 a 7 membros contendo dois átomos de nitrogênio, caracterizado por A estar conectado ao grupo carbonil em (1) através de um átomo de nitrogênio, A ser substituído por 1 a 3 grupos R?

e, opcionalmente, dois grupos R2 formarem um anel em ponte —-(CH2)- com A; ou

[009] À ser pirrolidinilo, caracterizado pelo pirrolidinilo estar ligado ao grupo carbonilo em (1) através de um átomo de azoto e caracterizado pelo pirrolidinilo ser substituído por NRºRº; R!' ser Ci-3zalquil; cada Rº ser independentemente Ci 3alquil, substituído opcionalmente por -OH; R? ser Ci-3zalquil; e Rº ser Ci-3alquil; ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

[0010] À invenção também oferece uma composição farmacêutica que compreende um composto da invenção e um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

[0011] A invenção também oferece um método de tratamento de doenças respiratórias, em especial asma ou CLAD, em um mamífero, o método compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ou de uma composição farmacêutica da invenção.

[0012] A invenção também oferece um composto da invenção como aqui descrito para uso em terapia médica, bem como o uso de um composto da invenção na fabricação de uma fórmula ou medicamento para o tratamento de doenças respiratórias em um mamífero.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0013] En uma modalidade, a invenção oferece novos compostos com atividade como inibidores da JAK quinase. Assim, a invenção oferece um composto de fórmula (1):

HO.

O . no MOÇO

H (1) caracterizado por:

[0014] A ser um anel heterociclil monocíclico de 6 a 7 membros contendo dois átomos de nitrogênio, caracterizado por A estar conectado ao grupo carbonil em (1) através de um átomo de nitrogênio, A ser substituído por 1 a 3 grupos R? e, opcionalmente, dois grupos R2 formarem um anel em ponte -(CH27)- com A; ou

[0015] À ser pirrolidinilo, caracterizado pelo pirrolidinilo estar ligado ao grupo carbonilo em (1) através de um átomo de azoto e caracterizado pelo pirrolidinilo ser substituído por NRºRº; R!' ser Ci-3zalquil; cada Rº ser independentemente Ci 3alquil, substituído opcionalmente por -OH; R?º ser Ci3alquil; e Rº ser Ci3alquil; ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

[0016] Em algumas modalidades, o composto (1I) tem a fórmula (1'): Ho.

O »

AN MOÇO H . (1)

[0017] Em algumas modalidades, R' é selecionado do grupo que consiste em metil, propil e isopropil.

[0018] Em algumas modalidades, A é selecionado a partir do grupo que consiste em piperazinil, 2,57 diazabiciclo[2.2.1]heptanil e 1,4-diazacicloheptanil, cada um dos quais é substituído por 1 ou 2 grupos R?, caraterizado por cada Rº ser independentemente Ci-zalquil substituído opcionalmente por -OH, ou A ser pirrolidinil substituído por NR?Rº, caracterizado por R? ser Ci-3zalquil e Rº ser Ci-zalquil.

[0019] Em algumas modalidades, A é selecionado do grupo que consiste em: Ow NO Ah —N ' NC) LON gq LON

A LON. pz Av NRºRº DN. e AS caracterizado por Rº ser C17;3 alquil substituído opcionalmente por -OH, R?º ser Ci-3zalquil e Rº ser Ci3zalquil.

[0020] Em outra modalidade, a invenção oferece um composto de fórmula: HO. Q g

O N N 9 < | N o, HN-NO ON . ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

[0021] En outra modalidade, a invenção oferece um composto de fórmula:

HO. O o Q ms 1 ué ne N No ng . ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

[0022] En outra modalidade, a invenção oferece um composto de fórmula:

HO Ç o

OQ OS 1

N nn N No LL NR

H ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

[0023] En outra modalidade, a invenção oferece um composto de fórmula: HO. O (9

NA

N N / < N HN-| N

NON YT ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

[0024] Em outra modalidade, a invenção oferece um composto de fórmula: HO. Y Q be

N N ( MOC, HN-N N >

H ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

[0025] Em outra modalidade, a invenção oferece um composto de fórmula:

HO.

À o N— O 5 / À | N HN-) N nd r ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

[0026] Em outra modalidade, a invenção oferece um composto de fórmula (II): HO. Ç o Q » // < N HN-N N "Ri H (11) caracterizado por: R!' ser Ci-3zalquil; A! é selecionado do grupo que consiste em: Ah A Nº Nº W R? e Ly Rº, caracterizado por Rº ser Ci-3alquil, substituído opcionalmente por -OH; ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

[0027] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (II) tem a fórmula (1I1'): HO. O o Q ,

DAN HN-| N RI N H . (11)

[0028] Em algumas modalidades, R' é selecionado do grupo que consiste em metil e propil.

[0029] Em algumas modalidades, A' é selecionado do grupo que consiste em:

NO A LON on e CON, .

[0030] Em algumas modalidades, A' é selecionado do grupo que consiste em: MS “ UN MoH e LON, ; e R' é selecionado do grupo que consiste em metil e propil.

[0031] Em outra modalidade, a invenção oferece um composto de fórmula (III): HO. ! A 8 O

HNÁ MOÇO

H (III) caracterizado por: R' ser Ci3alquil; A? é selecionado do grupo que consiste em: ! Ow A Ás NRºRº EN LON ge ND. e e! , caracterizado por R?º ser independentemente C;-;3 alquil substituído opcionalmente por -OH, R? ser Ci-3alquil e Rº ser Ci-3zalquil. ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

[0032] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (III) tem a fórmula (I1I1'):

HO. A ÃO

HNÁ MOÇO H . (II1')

[0033] Em algumas modalidades, R' é selecionado do grupo que consiste em metil, isopropil e propil.

[0034] Em algumas modalidades, A? é selecionado do grupo que consiste em: 2 V DO Ou Bs EN) LON Mon Nº EN :

[0035] Em algumas modalidades, R' é selecionado do grupo que consiste em metil, isopropil e propil, e A? é selecionado do grupo que consiste em: ONO q A q e ' “ON "ON EN LON on D e AS :

[0036] Em outra modalidade, a invenção oferece um composto de fórmula (IV): HO. !

A XE no MOÇO

H (IV) caracterizado por: R!' ser Ci-3zalquil; A? é selecionado do grupo que consiste em:

; ow A o Ah EN LON ge DP. LON ga e NRºRº Fo , caracterizado por R?º ser independentemente C;-; alquil substituído opcionalmente por -OH, R? ser Ci 3zalquil e Rº ser Ci-zalquil. ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

[0037] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula (IV) tem a fórmula (IV'): HO.

A ÃO

HNÁ OO H . (1V")

[0038] Em algumas modalidades, R' é selecionado do grupo que consiste em metil, isopropil e propil.

[0039] Em algumas modalidades, A? é selecionado do grupo que consiste em: ONO) ó q Ah NO hos ND. LON, e

V N— A

[0040] Em algumas modalidades, R' é selecionado do grupo que consiste em metil, isopropil e propil, e A? é selecionado do grupo que consiste em:

ON A ; q q h i—N Na 2 N EN LON Mon No LON,

À N— A

[0041] Além disso, a porção imidazo da parte tetrahidroimidazopiridina existe em formas tautoméricas, ilustradas abaixo para um fragmento dos compostos da divulgação A 4x" OQ, tor

HN N BN N A B

[0042] De acordo com a convenção IUPAC, essas representações dão origem a diferentes numerações dos átomos da porção de imidazole: (1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7- tetrahidro-lH-imidazo[4,5-c]piridina (estrutura A) versus (1H-indazol-3-yl)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5- cl]lpiridina (estrutura B). Deve-se compreender que, embora as estruturas sejam apresentadas ou nomeadas, em uma forma particular, a invenção também inclui seu tautômero.

[0043] Os compostos da divulgação podem conter um ou mais centros quirais; portanto, estes compostos (e seus intermediários) podem existir como misturas racêmicas, estereoisômeros puros (isto é, enantiômeros ou diastereômeros), misturas enriquecidas com estereoisômeros e semelhantes. Os compostos quirais mostrados ou nomeados aqui sem uma estereoquímica definida em um centro quiral destinam-se a incluir qualquer ou todas as variações de estereoisômero possíveis no estereocentro indefinido, salvo indicação em contrário. A representação ou nomeação de um estereoisômero particular significa que o estereocentro indicado tem a estereoquímica designada com o entendimento de que pequenas quantidades de outros estereoisômeros também podem estar presentes, salvo indicação em contrário, desde que a utilidade do composto representado ou nomeado não seja eliminada pela presença de outro estereoisômero.

[0044] Os compostos da divulgação também podem conter vários grupos básicos (por exemplo, grupos amino); portanto, tais compostos podem existir como a base livre ou em várias formas de sal, como uma forma de sal monoprotonado, uma forma de sal diprotonado, uma forma de sal triprotonado ou suas misturas. Todas estas formas estão incluídas no escopo desta invenção, salvo indicação em contrário.

[0045] Esta invenção também inclui compostos marcados isotopicamente de fórmula (1), (1'"), (II), (11'), (IIL), (III), (IV) e (IV), ou seja, compostos de fórmula (1), (1), (II), (11), (III), (II11'), (IV) e (IV), onde um ou mais átomos foram substituídos ou enriquecidos com um átomo tendo o mesmo número atômico, mas uma massa atômica diferente da massa atômica que predomina na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados em um composto de fórmula (1), (1), (II), (11º), (III), (I111'), (IV) e (IV!) incluem, mas não estão limitados a, ºH, ?H, UC, VC, 4“C, *N, N, DO, VO e !º0. Interessam particularmente os compostos de fórmula (1), (1), (II), (I1'), (III), (III), (IV) e (IV enriquecidos em trítio ou carbono-l4, quais compostos podem ser usados, por exemplo, em estudos de distribuição de tecidos. Também interessam particularmente os compostos de fórmula (1), (1), (II), (I1'), (III), (111), (IV) e (IV) enriquecidos em deutério especialmente em um local do metabolismo, cujos compostos devem ter maior estabilidade metabólica. Adicionalmente, são de interesse particular os compostos de fórmula (1), (1"), (11), (II), (III), (I1I1'), (IV) e (IV!) enriquecidos em um isótopo emissor de pósitrons, tais como "UC, "O e "N, cujos compostos podem ser usados, por exemplo, em estudos de tomografia por emissão de pósitrons (PET).

Definições

[0046] Ao descrever esta invenção incluindo seus vários aspectos e modalidades, os seguintes termos têm os seguintes significados, salvo indicação em contrário.

[0047] O termo "alquil" significa um grupo hidrocarboneto saturado monovalente, que pode ser linear ou ramificado ou suas combinações. Salvo definição em contrário, estes grupos alquil contêm geralmente de 1 a 10 átomos de carbono. Os grupos alquil representativos incluem, a título de exemplo, metil (Me), etil (Et), n-propil (n-Pr) ou (nPr), isopropil (i-Pr) ou (iPr), n-butil (n-Bu) ou ( nBu), sec-butil, isobutil, terc-butil (t-Bu) ou (tBu), n- pentil, n-hexil, 2,2-dimetilpropil, 2-metilbutil, 3-metilbutil, 2-etilbutil, 2,27 dimetilpentil, 2-propilpentil e semelhantes.

[0048] Quando um número específico de átomos de carbono é destinado para um termo específico, o número de átomos de carbono é mostrado antes do termo. Por exemplo, o termo "C1- zalquil" significa um grupo alquil tendo de 1 a 3 átomos de carbono caracterizado pelos átomos de carbono estarem em qualquer configuração quimicamente aceitável, incluindo configurações lineares ou ramificadas.

[0049] O termo "cicloalquilo" significa um grupo carbocíclico saturado monovalente, que pode ser monocíclico ou multicíclico. Salvo definição em contrário, estes grupos cicloalquil contêm geralmente de 3 a 10 átomos de carbono. Os grupos cicloalquil representativos incluem, a título de exemplo, ciclopropil (cPr), ciclobutil (cBu), ciclopentil, ciclohexil, cicloheptil, ciclooctil, adamantil e semelhantes.

[0050] O termo "cpropilo" significa ciclopropilo.

[0051] O termo "heterociclil", "heterociclo", "heterocíclico" ou "anel heterocíclico" significa um grupo monovalente saturado ou parcialmente insaturado cíclico não aromático, tendo de 3 a 10 átomos de anel totais, caracterizado pelo anel conter de 2 a 9 carbono átomos no anel e de 1 a 4 heteroátomos no anel selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio e enxofre. Os grupos heterocíclicos podem ser monocíclicos ou multicíclicos (ou seja, fundidos ou em ponte). Os grupos heterociclil representativos incluem, a título de exemplo, pirrolidinil, piperidinil, piperazinil, imidazolidinil, morfolinil, tiomorfolil, indolin-3-il, 2-imidazolinil, tetra-hidropiranil, 1,2,3,4- tetra-hidroisoquinolin-2-il, quinuclidinil, Tr il, azanorbornanil, nortropanil e semelhantes, caracterizado pelo ponto de ligação estar em qualquer átomo de carbono ou nitrogênio disponível no anel. Quando o contexto torna evidente o ponto de ligação do grupo heterocíclico, tais grupos podem, alternativamente, ser referidos como uma espécie não valente, ou seja, pirrolidina, piperidina, piperazina, imidazol, tetra-hidropirano, etc.

[0052] O termo "halo" significa flúor, cloro, bromo ou iodo.

[0053] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" significa uma quantidade suficiente para efetuar o tratamento quando administrada a um paciente com necessidade de tratamento.

[0054] O termo "tratar" ou "tratamento" significa prevenir, melhorar ou suprimir a condição médica, doença ou distúrbio sendo tratados (por exemplo, uma doença respiratória) em um paciente (especificamente um humano) ou aliviar os sintomas da condição médica, doença ou distúrbio.

[0055] O termo "sal aceitável do ponto de vista farmacêutico" significa um sal que é aceitável para administração a um paciente ou mamífero, como um ser humano (por exemplo, sais com segurança aceitável para mamíferos para um determinado regime de dosagem). Os sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutico representativos incluem sais de acético, ascórbico, benzenossulfônico, benzoico, canforsulfônico, cítrico, etanossulfônico, edisílico, fumárico, gentísico, glucônico, glucorônico, glutâmico, hipúrico, bromídrico, clorídrico, isetionico, lático, lactobiônico, maleélico , metanossulfônico, muco, naftalenossulfônico, naftaleno-1,5-dissulfônico, naftaleno- 2,6-dissulfônico, nicotínico, nítrico, orótico, pamoico, pantotênico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, p- toluenossulfônico e ácido xinafoico e semelhantes.

[0056] O termo "sal deste" significa um composto formado quando o hidrogênio de um ácido é substituído por um cátion, como um cátion metálico ou um cátion orgânico e semelhantes. Por exemplo, o cátion pode ser uma forma protonada de um composto de fórmula (1), (1"), (IL), (II), (III), (IIT') (IV) ou (IV'!), isto é, uma forma em que um ou mais grupos amino foram protonados por um ácido. Normalmente, o sal é um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico, embora isto não seja necessário para sais de compostos intermediários não destinados à administração a um paciente.

Procedimentos sintéticos gerais

[0057] Os compostos desta invenção e seus intermediários podem ser preparados de acordo com os seguintes métodos e procedimentos gerais, usando materiais de partida e reagentes comercialmente disponíveis ou preparados rotineiramente. Os substituintes e variáveis (por exemplo, A, R', R, R? etc.) usados nos seguintes esquemas têm os mesmos significados que aqueles definidos em outro lugar neste documento, salvo indicação em contrário. Além disso, os compostos com um átomo ácido ou básico ou grupo funcional podem ser usados ou podem ser produzidos como um sal, salvo indicação em contrário (em alguns casos, o uso de um sal em uma reação particular exigirá a conversão do sal em uma forma de não sal, por exemplo, uma base livre, usando procedimentos de rotina antes de realizar a reação).

[0058] Embora uma modalidade particular da presente invenção possa ser mostrada ou descrita nos procedimentos a seguir, os especialistas na técnica reconhecerão que outras modalidades ou aspectos da presente invenção também podem ser preparados usando estes procedimentos ou usando outros métodos, reagentes e materiais de partida conhecidos dos especialistas na técnica. Em especial, será percebido que os compostos da invenção podem ser preparados por uma variedade de vias de processo nas quais os reagentes são combinados em ordens diferentes para fornecer diferentes intermediários no caminho para a produção de produtos finais.

[0059] É ilustrado um método geral de preparação de compostos finais da invenção no Esquema a seguir.

2 TX o TR o Tanto DAE — AIC — BA Ke es (O)

[0060] O composto K-18 é feito reagir com uma cetona ou aldeído na presença de um agente redutor para fornecer o composto de fórmula K-19. O composto K-19 é então colocado para reagir com a amina A sob condições típicas de formação de ligação amida para entregar o composto (1). Normalmente, o ácido carboxílico é posto em contato com entre cerca de 1 e cerca de 4 equivalentes de amina A na presença de um excesso de base. A reação de formação de ligação amida pode utilizar agentes de acoplamento, tais como hexafluorofosfato de N,N,N',N"”-tetrametil-O- (7-azabenzotriazol-l-il)urônio (HATU) ou outros agentes de acoplamento de amida conhecidos na técnica. A hidrazina pode ser adicionada para clivar subprodutos indesejados. A reação é geralmente conduzida à temperatura ambiente durante cerca de 5 minutos a cerca de 24 horas ou até que a reação esteja substancialmente completa.

Composições farmacêuticas

[0061] Os compostos da invenção e seus sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutico são geralmente usados na forma de uma composição ou formulação farmacêutica. Essas composições farmacêuticas podem ser administradas vantajosamente a um paciente através de inalação. Além disso, as composições farmacêuticas podem ser administradas por qualquer via de administração aceitável incluindo, mas não se limitando a, modos de administração oral, retal, nasal, tópico (incluindo transdérmico) e parenteral.

[0062] Consequentemente, em um de seus aspectos de composição, a invenção é direcionada a uma composição farmacêutica compreendendo um carreador ou excipiente aceitável do ponto de vista farmacêutico e um composto de fórmula (1), (1º), (11), (11º), (111), (I1I11'), (IV) ou (I1V'), onde, conforme definido acima, “composto de fórmula (1), (1), (11), (11), (IILI), (III), (IV) ou (IV')” significa um composto de fórmula (1), (1"), (11), (I1'), (III), (I11'), (IV) ou (IV!) ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste. Opcionalmente, estas composições farmacêuticas podem conter outros agentes terapêuticos e/ou de formulação, se desejado. Ao discutir as composições e seus usos, o “composto da invenção” também pode ser referido neste documento como o “agente ativo”. Como utilizado neste documento, o termo “composto da invenção” pretende incluir todos os compostos abrangidos pela fórmula (1), assim como as espécies incorporadas na fórmula (1) e seus sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutico

[0063] As composições farmacêuticas da invenção contêm geralmente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção. Os especialistas na técnica reconhecerão, no entanto, que uma composição farmacêutica pode conter mais do que uma quantidade terapeuticamente eficaz, ou seja, composições a granel, ou menos do que uma quantidade terapeuticamente eficaz, ou seja, doses unitárias individuais projetadas para administração múltipla para atingir uma quantidade terapeuticamente eficaz.

[0064] Normalmente, tais composições farmacêuticas conterão desde cerca de 0,01 a cerca de 95% em peso do agente ativo; incluindo, por exemplo, desde cerca de 0,05 a cerca de 30% em peso; e desde cerca de 0,1% a cerca de 10% em peso do agente ativo.

[0065] Qualquer carreador ou excipiente convencional pode ser usado nas composições farmacêuticas da invenção. A escolha de um carreador ou excipiente especial ou combinações de carreadores ou excipientes dependerá do modo de administração a ser usado para tratar um paciente particular ou tipo de condição médica ou estado de doença. A este respeito, a preparação de uma composição farmacêutica adequada para um modo particular de administração está bem dentro do escopo dos especialistas nas técnicas farmacêuticas. Além disso, os carreadores ou excipientes usados nas composições farmacêuticas desta invenção estão comercialmente disponíveis. Por meio de outra ilustração, as técnicas de formulação convencionais estão descritas em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20º? edição, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); e

H.C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7º edição, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).

[0066] Os exemplos representativos de materiais que podem servir como veículos aceitáveis do ponto de vista farmacêutico incluemy mas não estão limitados a, os seguintes: açúcares, tais como lactose, glicose e sacarose; amidos, como amido de milho e amido de batata; celulose, como celulose microcristalina, e seus derivados, como carboximetilcelulose de sódio, etilcelulose e acetato de celulose; tragacanta em pó; malte; gelatina; talco; excipientes, como manteiga de cacau e ceras para supositórios; óleos, como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de cártamo, óleo de sésamo, azeite, óleo de milho e óleo de soja; glicóis, como propilenoglicol; polióis, como glicerina, sorbitol, manitol e polietilenoglicol; ésteres, como oleato de etil e laurato de etil; ágar; agentes tamponantes, como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; ácido algínico; água apirogênica; solução salina isotônica; solução de Ringer; álcool etílico; soluções tampão de fosfato e outras substâncias compatíveis não tóxicas utilizadas em composições farmacêuticas.

[0067] As composições farmacêuticas são geralmente preparadas misturando completa e estreitamente ou combinando o agente ativo com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico e um ou mais ingredientes opcionais. A mistura resultante uniformemente combinada pode então ser moldada ou carregada em comprimidos, cápsulas, pílulas e semelhantes usando procedimentos e equipamentos convencionais.

[0068] Em uma modalidade, a composição farmacêutica é adequada para administração inalada. As composições farmacêuticas para administração inalada estão geralmente na forma de um aerossol ou um pó. Essas composições são geralmente administradas usando dispositivos de entrega de inalador, como um inalador de pó seco (DPI), um inalador de dose medida (MDI), um inalador de nebulizador ou um dispositivo de entrega semelhante.

[0069] En uma modalidade particular, a composição farmacêutica é administrada por inalação usando um inalador de pó seco. Estes inaladores de pó seco administram geralmente a composição farmacêutica como um pó de fluxo livre que é disperso na corrente de ar do paciente durante a inspiração. Para obter uma composição de pó de fluxo livre, o agente terapêutico é geralmente formulado com um excipiente adequado, como lactose, amido, manitol, dextrose, ácido polilático (PLA), poli(ácido lático-co-ácido glicólico) (PLGA) ou suas combinações. Normalmente, o agente terapêutico é micronizado e combinado com um carreador adequado para formar uma composição adequada para inalação.

[0070] Uma composição farmacêutica representativa para uso em um inalador de pó seco compreende lactose e um composto da invenção na forma micronizada. Esta composição de pó seco pode ser feita, por exemplo, combinando lactose moída a seco com o agente terapêutico e em seguida misturando a seco os componentes. Em seguida, a composição é geralmente colocada em um distribuidor de pó seco ou em cartuchos de inalação ou cápsulas para uso com um dispositivo de distribuição de pó seco.

[0071] Os dispositivos de distribuição de inalador de pó seco adequados para administração de agentes terapêuticos por inalação são descritos na técnica e exemplos destes dispositivos estão disponíveis comercialmente. Por exemplo, dispositivos ou produtos de administração de inalador de pó seco incluem Aeolizer (Novartis); Airmax (IVAX); ClickHaler (Innovata Biomed); Diskhaler (GlaxoSmithKline); Diskus/Accuhaler (GlaxoSmithKline); Ellipta (GlaxoSmithKline); Easyhaler (Orion Pharma); Eclipse (Aventis); FlowCcaps (Hovione); Handihaler (Boehringer Ingelheim); Pulvinal (Chiesi); Rotahaler (GlaxoSmithKline); SkyeHaler/Certihaler (SkyePharma); Twisthaler (Schering- Plough); Turbuhaler (Astrazeneca); Ultrahaler (Aventis) e semelhantes.

[0072] En outra modalidade particular, a composição farmacêutica é administrada por inalação usando um inalador dosificado. Estes inaladores dosificados normalmente descarregam uma quantidade medida de um agente terapêutico usando um gás propulsor comprimido. Consequentemente, as composições farmacêuticas administradas usando um inalador dosificado geralmente compreendem uma solução ou suspensão do agente terapêutico em um propulsor liquefeito. Qualquer propelente liquefeito adequado pode ser empregado, incluindo hidrofluoroalcanos (HFA), como 1,1,1,2-tetrafluoroetano (HFA 134a) e 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoro-n-propano, (HFA 227), e clorofluorocarbonos, como CC1L3F. Em uma modalidade particular, o propelente são hidrofluoroalcanos. Em algumas modalidades, a formulação de hidrofluoroalcano contém um cossolvente, como etanol ou pentano, e/ou um surfactante,

como trioleato de sorbitano, ácido oleico, lecitina e glicerina.

[0073] Uma composição farmacêutica representativa para uso em um inalador de dose medida compreende de cerca de 0,01% a cerca de 5% em peso de um composto da invenção, de cerca de 0% a cerca de 20% em peso de etanol e de cerca de 0% a cerca de 5% em peso de surfactante, com o restante sendo um propelente HFA. Tais composições são geralmente preparadas "adicionando hidrofluoroalcano resfriado Ou pressurizado a um recipiente adequado contendo o agente terapêutico, etanol (se presente) e o surfactante (se presente). Para preparar uma suspensão, o agente terapêutico é micronizado e depois combinado com o propulsor. A composição é então carregada em uma lata de aerossol, que normalmente forma uma porção de um dispositivo inalador dosificado.

[0074] Dispositivos inaladores dosificados adequados para administrar agentes terapêuticos por inalação são descritos na técnica e exemplos de tais dispositivos estão disponíveis comercialmente. Por exemplo, dispositivos Ou produtos inaladores de dose medida representativos incluem AeroBid Inhaler System (Forest Pharmaceuticals); aerossol de inalação Atrovent (Boehringer Ingelheim); Flovent (GlaxoSmithKline); Maxair Inhaler (3M); Proventil Inhaler (Schering); Serevent Inhalation Aerosol (GlaxoSmithKline) e semelhantes.

[0075] En outra modalidade específica, a composição farmacêutica é administrada por inalação usando um inalador nebulizador. Estes dispositivos nebulizadores normalmente produzem uma corrente de ar de alta velocidade que faz com que a composição farmacêutica seja pulverizada como uma névoa, transportada para o trato respiratório do paciente. Consequentemente, quando formulado para uso em um inalador nebulizador, o agente terapêutico pode ser dissolvido em um carreador adequado para formar uma solução. Alternativamente, o agente terapêutico pode ser micronizado ou nanomoído e combinado com um carreador adequado para formar uma suspensão.

[0076] Uma composição farmacêutica representativa para uso em um inalador nebulizador compreende uma solução ou suspensão compreendendo de cerca de 0,05 ug/mL a cerca de 20 mg/mL de um composto da invenção e excipientes compatíveis com formulações nebulizadas. Em uma modalidade, a solução tem um pH de cerca de 3 a cerca de 8.

[0077] Dispositivos nebulizadores adequados para administrar agentes terapêuticos por inalação são descritos na técnica e exemplos de tais dispositivos estão disponíveis comercialmente. Por exemplo, dispositivos ou produtos nebulizadores representativos incluem o Respimat Softmist Inhalaler (Boehringer Ingelheim); o AERx Pulmonary Delivery System AERxXx (Aradigm Corp.); o PARI LC Plus Reusable Nebulizer (Pari GmbH) e semelhantes.

[0078] Ainda em outro aspecto, as composições farmacêuticas da invenção podem, alternativamente, ser preparadas em uma forma de dosagem destinada a administração oral. As composições farmacêuticas adequadas para administração oral podem estar na forma de cápsulas, comprimidos, pílulas, pastilhas, drágeas, pós, grânulos,

como uma solução ou suspensão em um líquido aquoso ou não aquoso, como uma emulsão líquida óleo-em-água ou água-em- óleo ou como um elixir ou xarope e semelhantes; cada um contendo uma quantidade predeterminada de um composto da presente invenção como ingrediente ativo.

[0079] Quando previstas para administração oral em uma forma de dosagem sólida, as composições farmacêuticas da invenção irão compreender geralmente o agente ativo e um ou mais veículos aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, como citrato de sódio ou fosfato dicálcico. De maneira opcional ou alternativa, estas formas de dosagem sólidas também “podem compreender enchimentos ou extensores, aglutinantes, umectantes, agentes retardadores de solução, aceleradores de absorção, agentes umectantes, absorventes, lubrificantes, corantes e agentes tamponantes. Agentes de liberação, agentes umectantes, agentes de revestimento, agentes adoçantes, aromatizantes e perfumantes, conservantes e antioxidantes também podem estar presentes nas composições farmacêuticas da invenção.

[0080] As formulações alternativas também podem incluir formulações de liberação controlada, formas de dosagem líquidas para administração oral, adesivos transdérmicos e formulações parenterais. Excipientes convencionais e métodos de preparação de tais formulações “alternativas são descritos, por exemplo, na referência de Remington, supra.

[0081] Os seguintes exemplos não limitativos ilustram composições farmacêuticas “representativas da presente invenção.

Composição de pó seco

[0082] Un composto micronizado de fórmula (1) (19) é misturado com lactose moída (25 g). Esta mistura combinada é então carregada em blisters individuais de uma embalagem de blister destacável em uma quantidade suficiente para fornecer entre cerca de 0,1 mg a cerca de 4 mg do composto da fórmula I por dose. O conteúdo dos blisters é administrado com um inalador de pó seco.

Composição de pó seco

[0083] Um composto micronizado de fórmula (1) (19) é misturado com lactose moída (20 g) para formar uma composição em massa, tendo uma razão entre o peso de composto para lactose moída de 1:20. A composição combinada é embalada em um dispositivo de inalação de pó seco capaz de fornecer entre cerca de 0,1 mg a cerca de 4 mg do composto de fórmula I por dose.

Composição do inalador dosificado

[0084] Um composto micronizado de fórmula (1) (10 g) é disperso em uma solução preparada por dissolução de lecitina (0,29) em água desmineralizada (200 mL). A suspensão resultante é seca por pulverização e, em seguida, micronizada para formar uma composição micronizada compreendendo partículas com um diâmetro médio inferior a cerca de 1,5 um. A composição micronizada é então carregada em cartuchos de inalador de dose medida contendo 1,1,1,2-tetrafluoroetano pressurizado em uma quantidade suficiente para fornecer cerca de 0,1 mg a cerca de 4 mg do composto de fórmula I por dose quando administrado pela dose medida inalador.

Composição do nebulizador

[0085] Um composto de fórmula (1) (25 mg) é dissolvido numa solução contendo 1,5 a 2,5 equivalentes de ácido clorídrico, seguido pela adição de hidróxido de sódio para ajustar o pH para 3,5 a 5,5 e 3% em peso de glicerol. A solução é bem agitada até que todos os componentes estejam dissolvidos. A solução é administrada usando um dispositivo nebulizador que oferece cerca de 0,1 mg a cerca de 4 mg do composto de fórmula (1) por dose.

Utilidade

[0086] Os inibidores de JAK da invenção foram projetados para o tratamento de doenças inflamatórias e fibróticas do trato respiratório. Em especial, os compostos foram concebidos para permitir a distribuição de um agente anticitocina potente diretamente no local de ação da doença respiratória no pulmão, enquanto limita a exposição sistêmica.

[0087] Os compostos da invenção mostraram ser inibidores potentes da família de enzimas JAK: JAKl, JAK2, JAK3 e TYK2. Além disso, os compostos demonstraram inibição potente de citocinas pró-inflamatórias e pró-fibróticas. Foi reconhecido que o amplo efeito anti-inflamatório destes inibidores de JAK pode suprimir a função normal das células imunes, levando potencialmente a um risco aumentado de infecção. Os presentes compostos foram, portanto, otimizados para limitar a absorção do pulmão para o plasma, minimizando assim o risco de imunossupressão.

[0088] Conforme descrito na seção experimental abaixo, a absorção e distribuição de compostos típicos foram traçadas em ensaios pré-clínicos. Os compostos 1 a 6 foram testados em camundongos e mostraram 5 horas após a dosagem alta concentração no tecido pulmonar e baixa absorção no plasma. Os compostos da invenção mostraram inibir um efeito da citocina pró-inflamatória IL-l13 no tecido pulmonar de camundongo. Especificamente, os compostos demonstraram inibição da fosforilação induzida por IL-13 de STAT6 no tecido pulmonar, o que oferece evidência de envolvimento local do pulmão JAK alvo in vivo. Este efeito foi observado quando a citocina pró-inflamatória IL-13 é administrada 4 horas após a administração do composto de teste, proporcionando evidência adicional de retenção significativa no pulmão.

[0089] Foi demonstrado que os compostos testados exibem uma potente atividade inibidora ao nível celular e uma retenção significativa no tecido pulmonar. A investigação extensiva pelos presentes inventores determinou que embora seja possível identificar compostos que são potentes no nível celular ou compostos que mostram retenção significativa no pulmão, é muito mais difícil descobrir compostos que exibam ambas as características desejáveis ao mesmo tempo.

[0090] A atividade anti-inflamatória dos inibidores de JAK foi amplamente demonstrada em modelos pré-clínicos de asma (Malaviya et al., Int. Immunopharmacol., 2010, 10, 829, -836; Matsunaga et al., Biochem. and Biophys. Res. Commun., 2011, 404, 261-267; Kudlacz et al., Eur. J. Pharmacol., 2008, 582, 154-161). As citocinas implicadas na inflamação da asma que sinalizam através da via JAK-STAT incluem IL-2, IL-3 IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-l1, IL-13, IL-23, IL- 31, IL-27, linfopoietina estromal tímica (TSLP), interferon- y (IENy)

e fator estimulador de colônia de granulócitos-macrófagos (GM-CSF). Consequentemente, espera-se que os compostos da invenção sejam úteis para o tratamento de distúrbios respiratórios “inflamatórios, em especial, a asma. A inflamação e fibrose do pulmão são características de outras doenças respiratórias além da asma, como doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), fibrose cística (FC), pneumonite, doenças pulmonares intersticiais (incluindo fibrose pulmonar idiopática), lesão pulmonar aguda, respiração aguda síndrome de angústia, bronquite, enfisema, bronquiolite obliterante e sarcoidose. Os presentes compostos, portanto, também devem ser úteis para o tratamento de doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose cística, pneumonite, doenças pulmonares intersticiais (incluindo fibrose pulmonar idiopática), lesão pulmonar aguda, síndrome da dificuldade respiratória aguda, bronquite, enfisema, bronquiolite obliterante e sarcoidose.

[0091] Quando comparados com os correspondentes análogos de flúor (compostos C-1, C-2, C-3, C-4, C-5 e C-6), os compostos 1 a 6 mostraram ter atividade JAK semelhante. No entanto, eles têm a vantagem de dar origem a um metabolismo de sulfatação significativamente menor, conforme demonstrado no Ensaio 5. Isto é significativo, pois o metabolismo da sulfatação ocorre nos pulmões, o que pode levar a uma rápida diminuição da exposição ao composto original ativo.

[0092] Os compostos da divulgação demonstraram inibição de citocinas associadas à inflamação. Portanto, os compostos da divulgação são provavelmente úteis para o tratamento de certas doenças respiratórias específicas, conforme detalhado abaixo.

[0093] A inflamação eosinofílica das vias respiratórias é uma característica de doenças denominadas coletivamente como doenças pulmonares eosinofílicas (Cottin et al., Clin. Chest. Med., 2016, 37(3), 535-56). As doenças eosinofílicas têm sido associadas à sinalização de IL-4, IL-13 e IL-5. As doenças pulmonares eosinofílicas incluem infecções (especialmente infecções helmínticas), pneumonite induzida por medicamentos (induzida, por exemplo, por medicamentos terapêuticos, como antibióticos, fenitoína ou l-triptofano), pneumonite induzida por fungos (por exemplo, aspergilose broncopulmonar alérgica), pneumonite de hipersensibilidade e granulomatose poliangiofílica (conhecida anteriormente como síndrome de Churg-Strauss). As doenças pulmonares eosinofílicas de etiologia desconhecida incluem pneumonia eosinofílica aguda idiopática , pneumonia eosinofílica crônica idiopática, síndrome hipereosinofílica e síndrome de Lóffler.

[0094] Un polimorfismo no gene IL-6 foi associado a níveis elevados de IL-6 e a um risco aumentado de desenvolver hipertensão arterial pulmonar (PAH) (Fang et al., JJ. Am. Soc. Hypertens., 2017, 11(3), 171-177). Corroborando o papel da IL-6 na HAP, a inibição da cadeia gpl130 do receptor da IL-6 melhorou a doença em um modelo de HAP em rato (Huang et al., Can. J. Cardiol., 2016, 32(11), 1356.e1-1356.e10).

[0095] Citocinas como IFNy , IL-12 e IL-6 foram implicadas em uma variedade de doenças pulmonares não alérgicas, como sarcoidose e linfangioleiomiomatose (El-

Hashemite et al., Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol., 2005, 33, 227-230, e El-Hashemite et al., Cancer Res., 2004, 64, 3436- 3443). Os compostos da invenção também têm mostrado inibir a sinalização IFNy.

[0096] Bronquiectasia e doenças pulmonares infiltrativas são doenças associadas à inflamação neutrofílica crônica.

[0097] A ativação patológica das células T é essencial na etiologia de várias doenças respiratórias. As células T autorreativas desempenham um papel na bronquiolite obliterante em pneumonia em organização (também denominada COS). Semelhante à COS, a etiologia das rejeições do transplante de pulmão está ligada a uma ativação aberrante das células T do receptor pelo pulmão doador transplantado. As rejeições do transplante pulmonar podem ocorrer precocemente como disfunção primária do enxerto (PGD), pneumonia em organização (OP), rejeição aguda (AR) Ou bronquiolite linfocítica (BL) ou podem ocorrer anos após o transplante pulmonar como disfunção crônica do aloenxerto pulmonar (CLAD). A CLAD era anteriormente conhecida como bronquiolite obliterante (BO), mas agora é considerada uma Síndrome que pode ter diferentes manifestações patológicas, incluindo BO, CLAD restritiva (rCLAD ou RAS) e disfunção de aloenxerto neutrofílico. A disfunção crônica do aloenxerto pulmonar (CLAD) é um grande desafio no manejo de longo prazo de receptores de transplante de pulmão, pois faz com que um pulmão transplantado perca progressivamente a funcionalidade (Gauthier et al., Curr Transplant Rep., 2016, 3(3), 185- 191). A CLAD é pouco responsiva ao tratamento; portanto,

permanece a necessidade de compostos eficazes capazes de prevenir ou tratar esta condição.

Várias citocinas dependentes de JAK, como IFN]) e IL-5, são reguladas positivamente na CLAD e na rejeição de transplante de pulmão (Berastegui et al, Clin.

Transplant. 2017, 31, e12898). Além disso, altos níveis pulmonares das quimiocinas CXCR3, como CXCL9 e CXCL1I0, que estão a jusante da sinalização IFN dependente de JAK, estão ligados a piores resultados em pacientes de transplante de pulmão (Shino et al, PLOS One, 2017, 12 (7), e0180281). A inibição sistêmica de JAK demonstrou ser eficaz na rejeição de transplante renal (Vicenti et al., American Journal of Transplantation, 2012, 12, 2446-56). Portanto, os inibidores de JAK têm potencial para serem eficazes no tratamento ou prevenção da rejeição do transplante de pulmão e CLAD.

Os eventos de ativação das células T semelhantes, conforme descrito como a base para a rejeição do transplante de pulmão, também são considerados o principal fator de doença do enxerto pulmonar contra hospedeiro (GVHD), que pode ocorrer após os transplantes de células-tronco hematopoiéticas.

Semelhante à CLAD, a GVHD pulmonar é uma condição crônica progressiva com resultados extremamente ruins e nenhum tratamento está aprovado presentemente.

Um estudo retrospectivo multicêntrico de pesquisa de 95 pacientes com GVHD aguda ou crônica refratária a esteroides que receberam o inibidor de JAK sistêmico ruxolitinibe como terapia de resgate demonstrou resposta completa ou parcial ao ruxolitinibe na maioria dos pacientes, incluindo aqueles com GVHD pulmonar (Zeiser et al, Leucemia, 2015, 29, 10, 2062-68). Como a inibição sistêmica de JAK está associada a eventos adversos graves e a um pequeno índice terapêutico, permanece a necessidade de um inibidor de JAK não sistêmico inalado e direcionado aos pulmões para prevenir e/ou tratar a rejeição de transplante de pulmão ou GVHD de pulmão. Os compostos da divulgação têm as características necessárias para satisfazer esta necessidade. Mais recentemente, a pneumonite induzida por inibidor do ponto de verificação imunológico, outra doença pulmonar mediada por célula T, emergiu com o uso aumentado de inibidores do ponto de verificação imunológico. Em pacientes oncológicos tratados com estes agentes estimulantes de células T, é possível o desenvolvimento de pneumonite fatal.

[0098] Em uma modalidade, portanto, a invenção fornece um método de tratamento de uma doença respiratória em um mamífero (por exemplo, um humano), o método compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da divulgação ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, ou de uma composição farmacêutica compreendendo um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico e um composto da invenção ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste.

[0099] Em uma modalidade, a doença respiratória é asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose cística, pneumonite, doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), fibrose cística (FC), pneumonite, doenças pulmonares intersticiais (incluindo fibrose pulmonar idiopática), lesão pulmonar aguda, síndrome da dificuldade respiratória aguda, bronquite, enfisema, bronquiolite obliterante ou sarcoidose.

Em outra modalidade, a doença respiratória é asma ou doença pulmonar obstrutiva crônica.

[00100] Em uma modalidade, a doença respiratória é uma infecção pulmonar, uma doença eosinofílica, uma infecção helmíntica, hipertensão arterial pulmonar, sarcoidose, linfangioleiomiomatose, bronquiectasia, uma doença pulmonar infiltrativa, pneumonite induzida por drogas, pneumonite induzida por fungos, broncopulmonar aspergilose alérgica, pneumonite por hipersensibilidade , granulomatose eosinofílica com poliangiite, pneumonia eosinofílica aguda idiopática, pneumonia eosinofílica crônica idiopática, síndrome hipereosinofílica, síndrome de Lóffler, bronquiolite obliterante pneumonia em organização, rejeições de transplante pulmonar aguda e crônica (incluindo PGD, OP, BL, AR e CLAD restrito, BO, disfunção do aloenxerto neutrofílico), doença do enxerto contra o hospedeiro pulmonar, bronquiolite obliterante com pneumonia em organização, hipertensão arterial pulmonar, bronquiectasia ou pneumonite induzida por inibidor de checkpoint imunológico.

[00101] A invenção fornece um método de tratamento da asma em um mamífero, o método compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da divulgação ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, ou de uma composição farmacêutica compreendendo um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico e um composto da divulgação ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste.

[00102] Quando usados para tratar asma, os compostos da divulgação serão geralmente administrados em uma única dose diária ou em múltiplas doses por dia, embora outras formas de administração possam ser usadas. A quantidade de agente ativo administrado por dose ou a quantidade total administrada por dia será geralmente determinada por um médico, à luz das circunstâncias relevantes, incluindo a condição a ser tratada, a via de administração escolhida, o composto real administrado e sua atividade relativa, a idade, peso e resposta do paciente individual, a gravidade dos sintomas do paciente e semelhantes.

[00103] A invenção fornece um método de tratamento de uma doença respiratória (incluindo, mas não se limitando à doença aqui descrita) em um mamífero, o método compreendendo a administração ao mamífero de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da divulgação ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, ou de uma composição farmacêutica compreendendo um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico e um composto da divulgação ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste.

[00104] Quando usados para tratar uma doença respiratória (incluindo, mas não se limitando à doença aqui descrita), os compostos da divulgação serão geralmente administrados em uma única dose diária ou em múltiplas doses por dia, embora outras formas de administração possam ser usadas. A quantidade de agente ativo administrado por dose ou a quantidade total administrada por dia será geralmente determinada por um médico, à luz das circunstâncias relevantes, incluindo a condição a ser tratada, a via de administração escolhida, o composto real administrado e sua atividade relativa, a idade, peso e resposta do paciente individual, a gravidade dos sintomas do paciente e semelhantes.

[00105] Como “inibidores de JAK, os compostos da divulgação também podem ser úteis para uma variedade de outras doenças. Os compostos da divulgação podem ser úteis para uma variedade de indicações inflamatórias gastrointestinais que incluem, mas não estão limitadas a, doença inflamatória do intestino, colite ulcerativa (proctosigmoidite, pancolite, proctite ulcerativa e colite do lado esquerdo), doença de Crohn, colite colagenosa, colite linfocítica, doença de Behçet, doença celíaca, colite induzida por inibidor do ponto de controle imunológico, ileíte, esofagite eosinofílica, colite relacionada à doença do enxerto versus hospedeiro e colite infecciosa. Colite ulcerativa (Reimund et al., J. Clin. Immunology, 1996, 16, 1144-150), doença de Crohn (Woywodt et al., Eur. J. Gastroenterology Hepatology, 1999, 11, 267-276), colite colagenosa (Kumawat et al., Mol. Immunology, 2013, 55, 355- 364), colite linfocítica (Kumawat et al., 2013), esofagite eosinofílica (Weinbrand-Goichberg et al., Immunol. Res., 2013, 56, 249-260), colite relacionada à doença do enxerto contra hospedeiro (Coghill et al., Blood, 2001, 117, 3268- 3276), colite infecciosa (Stallmach et al., Int. J. Colorectal Dis., 2004, 19, 308-315), doença de Behçet (Zhou et al., Autoimmun. Rev., 2012, 11, 699-704), doença celíaca (de Nitto et al., World J. Gastroenterol., 2009, 15, 4609-

4614), colite induzida por inibidor de checkpoint (p. ex., colite induzida por inibidor de CTLA-4; (Yano et al., JU. Translation Med., 2014, 12, 191), colite induzida por inibidor de PD-l1- ou PD-Ll1) e ileíte (Yamamoto et al., Dig. Liver Dis., 2008, 40, 253-259) são caracterizadas pela elevação dos níveis de certas citocinas pró-inflamatórias. Como muitas citocinas pró-inflamatórias sinalizam através da ativação de JAK, os compostos descritos nesta solicitação podem ser capazes de aliviar a inflamação e fornecer alívio dos sintomas. Em especial, os compostos da divulgação podem ser úteis para a indução e manutenção da remissão da colite ulcerosa e para o tratamento da doença de Crohn, colite induzida por inibidor do ponto de verificação imunológico e os efeitos adversos gastrointestinais na doença do enxerto versus hospedeiro. Em uma modalidade, portanto, a divulgação fornece um método de tratamento de uma doença inflamatória gastrointestinal em um mamífero (por exemplo, um humano), o método compreendendo a administração ao mamífero de um composto da divulgação ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, ou de uma composição farmacêutica compreendendo um carreador aceitável do ponto de vista farmacêutico e um composto da divulgação, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste.

[00106] À dermatite atópica e outras doenças inflamatórias da pele foram associadas à elevação de citocinas pró-inflamatórias que dependem da via JAK-STAT. Portanto, os compostos da divulgação, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, podem ser benéficos em uma série de condições inflamatórias dérmicas ou pruriginosas que incluemy mas não estão limitadas a, dermatite atópica, alopecia areata, vitiligo, psoríase, dermatomiosite, linfoma cutâneo de células T (Netchiporouk et al., Cell Cycle, 2014; 13, 3331-3335) e subtipos (síndrome de Sézary, micose fungoide, reticulose pagetoide, pele flácida granulomatosa, papulose linfomatoide, pitiríase liquenoide crônica, pitiríase liquenoide varioliforme aguda, linfoma cutâneo de células T CD30+, linfoma cutâneo secundário de células grandes CD30 +, linfoma cutâneo de grandes células T CD30- fungoide não micose, linfoma pleomórfico de células T, linfoma de Lennert, linfoma subcutâneo de células T, linfoma angiocêntrico, linfoma blástico de células NK), prurigo nodular, líquen plano, amiloidose cutânea primária localizada, penfigoide bolhoso, manifestações cutâneas da doença do enxerto contra hospedeiro, penfigoide, lúpus discoide, granuloma anular, líquen simples crônico, prurido vulvar/escrotal/perianal, líquen escleroso, coceira de neuralgia pós-herpética, líquen planopilar e foliculite decalvante.

Em especial, dermatite atópica (Bao et al., JAK-STAT, 2013, 2, e24137), alopecia areata (Xing et al., Nat.

Med. 2014, 20, 1043-1049), vitiligo (Craiglow et al, JAMA Dermatol. 2015, 151, 1110-1112), prurigo nodularis (Sonkoly et al., J.

Allergy Clin.

Immunol. 2006, 117, 411-417), líquen plano (Welz-Kubiak et al., JU.

Immunol.

Res. 2015, ID:854747), amiloidose cutânea primária localizada (Tanaka et al., Br.

J.

Dermatol. 2009, 161, 1217- 1224), penfigoide bolhoso (Feliciani et al., Int. dj.

Immunopathol.

Pharmacol. 1999, 12, 55-61) e manifestações cutâneas da doença de enxerto contra hospedeiro (Okiyama et al., J. Invest. Dermatol. 2014, 134, 992-1000) são caracterizados pela elevação de certas citocinas que sinalizam via ativação de JAK. Consequentemente, os compostos da divulgação, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico destes, podem ser capazes de aliviar a inflamação dérmica associada ou o prurido provocado por essas citocinas. Em especial, os compostos da divulgação, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico destes, podem ser esperados para serem úteis para o tratamento de dermatite atópica e outras doenças inflamatórias da pele. Em uma modalidade, portanto, a divulgação oferece um método de tratamento de uma doença inflamatória da pele em um mamífero (por exemplo, um humano), o método compreendendo a aplicação de uma composição farmacêutica compreendendo um composto da divulgação ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste e um produto farmacêutico carreador para a pele do mamífero. Em uma modalidade, a doença inflamatória da pele é dermatite atópica.

[00107] Foi demonstrado que muitas doenças oculares estão associadas a elevações de citocinas pró-inflamatórias que dependem da via JAK-STAT. Os compostos da divulgação, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, portanto, podem ser úteis para o tratamento de uma série de doenças oculares que incluem, mas não estão limitadas a, uveíte, retinopatia diabética, edema macular diabético, doença do olho seco, degeneração macular associada à idade e ceratoconjuntivite atópica. Em especial, uveíte (Horai and Caspi, J. Interferon Cytokine Res., 2011, 31, 733-744), retinopatia diabética (Abcouwer, J. Clin. Cell. Immunol.,

2013, Suppl 1, 1-12), edema macular diabético (Sohn et al., American Journal of Opthamology, 2011, 152, 686-694), doença do olho seco (Stevenson et al, Arch. Ophthalmol., 2012, 130, 90-100) e degeneração macular associada à idade (Knickelbein et al, Int. Ophthalmol. Clin., 2015, 55 (3), 63-78) são caracterizados pela elevação de certas citocinas pró- inflamatórias que sinalizam através da via JAK-STAT. Consequentemente, os compostos da divulgação, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, podem ser capazes de aliviar a inflamação ocular associada e reverter a progressão da doença ou fornecer alívio dos sintomas. Em uma modalidade, portanto, a divulgação oferece um método de tratamento de uma doença ocular em um mamífero, o método compreendendo a administração de uma composição farmacêutica compreendendo um composto da divulgação ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste e um carreador farmacêutico para o olho do mamífero. Em uma modalidade, a doença ocular é uveíte, retinopatia diabética, edema macular diabético, doença do olho seco, degeneração “macular associada à idade ou ceratoconjuntivite atópica. Em uma modalidade, o método compreende a administração do composto da divulgação, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, por injeção intravítrea. Os compostos da divulgação, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico destes, também podem ser usados em combinação com um ou mais compostos úteis para doenças oculares.

[00108] Os compostos da divulgação, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, também podem ser úteis para tratar outras doenças, como outras doenças inflamatórias, doenças autoimunes ou cânceres. Os compostos da divulgação, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, podem ser úteis para tratar um ou mais dentre artrite, artrite reumatoide, artrite reumatoide juvenil, rejeição de transplante, xeroftalmia, artrite psoriática, diabetes, diabetes dependente de insulina, doença do neurônio motor, síndrome mielodisplásica, dor, sarcopenia, caquexia, choque séptico, lúpus eritematoso sistêmico, leucemia, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielocítica crônica, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mieloide aguda, espondilite anquilosante, mielofibrose, linfoma de células B, linfoma de células B, carcinoma hepatocelular câncer, mieloma múltiplo, melanoma, linfoma não Hodgkin, câncer de pulmão de células não pequenas, carcinoma de células claras do ovário, tumor de ovário, tumor de pâncreas, policitemia vera, Síndrome de Sjoegrens, sarcoma de tecidos moles, sarcoma, esplenomegalia, linfoma de células T e talassemia major.

Terapia combinada

[00109] Os compostos da divulgação ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico destes podem ser usados em combinação com um ou mais agentes que atuam pelo mesmo mecanismo ou por diferentes mecanismos para tratar uma doença. Os diferentes agentes podem ser administrados sequencialmente ou simultaneamente, em composições separadas ou na mesma composição. As classes úteis de agentes para terapia de combinação incluem, mas não estão limitadas a, um agonista do receptor adrenérgico beta 2, um antagonista do receptor muscarínico, um agonista de glucocorticoide, um antagonista do receptor 44 acoplado à proteína G, um antagonista do leucotrieno D4, um antagonista do receptor M3 muscarínico, um antagonista do receptor Hl de histamina, um antagonista de imunoglobulina E, um inibidor de PDE 4, um antagonista de IL-A4, um antagonista de receptor Ml muscarínico, um antagonista de receptor de histamina, um antagonista de IL-13, um antagonista de IL-5, um inibidor de 5-lipoxigenase, um agonista beta adrenoceptor, um antagonista de quimiocina CCR3, um estimulador CFTR, um modulador de imunoglobulina, um inibidor de ligante de interleucina 33, um inibidor de PDE 3, um inibidor de fosfoinositídeo-3 quinase delta, um antagonista de tromboxano A2, um inibidor de elastase, um inibidor de tirosina quinase Kit, um antagonista de leucotrieno E4, um antagonista de leucotrieno, um antagonista de PGD2, um inibidor de ligante de TNF alfa, um agente de ligação de TNF, um inibidor de cascata de complemento, um inibidor de ligante de eotaxina, um inibidor da glutationa redutase, um antagonista do receptor da histamina H4, um antagonista da IL-6, um estimulador do gene IL2, um modulador IIB do receptor Fc de gamaglobulina, um ligante gama do interferon, um inibidor do ligante da interleucina 13, um inibidor do ligante da interleucina 17, um antagonista de L-selectina, um inibidor de elastase de leucócitos, um antagonista de leucotrieno C4, um inibidor de sintase de leucotrieno C4, um inibidor de membrana de aminoxidase com cobre, um inibidor de metaloprotease-l12, um inibidor de metaloprotease-9, um modulador de alérgeno de ácaros, um modulador de receptor muscarínico, um agonista de receptor de acetilcolina nicotínico, um inibidor de fator nuclear kappa B, um antagonista de p-Selectina, um inibidor de PDE 5, um antagonista de receptor de PDGF, um inibidor de fosfoinositídeo-3 quinase gama, um agonista de TLR-7, um antagonista de TNF, um inibidor de quinase tirosina Abl, um antagonista de receptor de acetilcolina, um inibidor de quitinase de mamífero ácido, um agonista de receptor ACTH, um modulador de polimerização de actina, um antagonista de receptor de adenosina Al, um estimulador de adenilato ciclase, um antagonista de adrenoceptor, um ligante de hormônio adrenocorticotrófico, um inibidor de álcool desidrogenase 5, um estimulador de alfa 1 antitripsina, um inibidor de alfa 1 proteinase, um modulador de receptor de andrógeno, um estimulador de enzima conversora de angiotensina 2, um agonista de ANP, um inibidor da proteína Bcr, um antagonista do adrenoceptor beta 1, um antagonista do adrenoceptor beta 2, um modulador do adrenoceptor beta 2, um modulador do beta amiloide, um inibidor do gene BMP10, um inibidor do gene BMP15, um inibidor do canal de cálcio, um inibidor da catepsina G, um inibidor de gene CCL26, um modulador de quimiocina CCR3, um antagonista de quimiocina CCR4, um inibidor de molécula de adesão celular, um estimulador de chaperonina, um inibidor de quitinase, um antagonista de colágeno I, um inibidor de complemento C3, um antagonista de CSF-1, um antagonista de quimiocina CXCR2, um modulador de cadeia beta comum de receptor de citocina, um estimulador de proteína 4 de linfócito T citotóxico, um estimulador de desoxirribonuclease I, um estimulador de desoxirribonuclease, um dipeptídeo inibidor de il peptidase

I, um inibidor de DNA girase, um modulador de receptor de prostanoide DP, um antagonista de E-selectina, um inibidor de receptor de tirosina quinase da família EGFR, um modulador de elastina, um antagonista de endotelina ET-A, um antagonista de endotelina ET-B, um epóxido inibidor da hidrolase, um antagonista do receptor FGF3, um inibidor da tirosina quinase Fyn , um inibidor do fator de transcrição GATA 3, um modulador da glucosilceramidase, um modulador do receptor de glutamato, um inibidor do ligante GM-CSF, um estimulador da Guanilato ciclase, um inibidor da H + K + ATPase, uma hemoglobina modulador, um agonista de heparina, um inibidor de histona desacetilase, um estimulador de histona desacetilase-2, um inibidor de HMG CoA redutase, um inibidor de I-kappa B quinase beta, um inibidor do gene ICAM1, um antagonista de IL-17, um modulador de receptor de IL-17 , um antagonista de IL-23, um modulador de receptor de IL-4, um modulador de imunoglobulina G, um agonista de imunoglobulina Gl, um modulador de imunoglobulina Gl, um antagonista de receptor IA de imunoglobulina épsilon Fc, uma imunoglobulina n antagonista do receptor Fc gama IIB, um modulador de imunoglobulina kappa, um sensibilizador de insulina, um ligante beta de interferon, um antagonista de receptor semelhante a interleucina 1, um inibidor de ligante de interleucina 18, um antagonista de receptor de interleucina 17A, um inibidor de ligante beta de interleucina-l, um inibidor do ligante da interleucina -5, um inibidor do ligante da interleucina-6, um inibidor do canal 3 de potássio controlado por voltagem KCNA, um inibidor do ligante, um agonista da laminina-5, um antagonista do receptor leucotrieno CysLTl, um antagonista do receptor leucotrieno CysLT2, um inibidor do gene LOXL2 , um inibidor de tirosina quinase de Lyn, um inibidor de proteína MARCKS, um inibidor de proteína 4 associado a MDR, um modulador de metaloprotease-2, um modulador de metaloprotease-9, um antagonista do receptor de mineralocorticoide, um antagonista do receptor muscarínico M2, um antagonista do receptor muscarínico M4, um muscarínico antagonista do receptor M5, um agonista do receptor A do peptídeo natriurético, um modulador do receptor de células exterminadoras naturais, um estímulo da subunidade alfa 7 do receptor ACh nicotínico ator, um modulador de receptor de células NK, um modulador de fator nuclear kappa B, um agonista de receptor de fator de crescimento opioide, um inibidor de P-glicoproteína, um antagonista de purinoceptor P2X3, um inibidor de p38 MAP quinase, um modulador de peptidase 1, um inibidor de fosfolipase A2, um inibidor da fosfolipase C, um inibidor do ativador do plasminogênio 1, um antagonista do receptor do fator ativador de plaquetas, um agonista do PPAR gama, um agonista da prostaciclina, um inibidor da proteína tirosina quinase, um inibidor da proteína tirosina quinase, um estimulador da fosfatase 1 inositol do domínio SH2, um inibidor da transdução de sinal, um inibidor do canal de sódio, um modulador STAT-3, um inibidor de antígeno-l de células-tronco, um modulador de superóxido dismutase, um inibidor de glicoproteína CD28 de superfície de células T, um inibidor de glicoproteína CD8 de superfície de células T, um agonista TGF beta, um antagonista beta de TGF, uma sintetase de tromboxano inibidor, um inibidor de ligante de linfoproteína do estroma tímico, um agonista de timosina, um ligante de timosina beta 4, um agonista de TLR-8, um agonista de TLR-9, um estimulador de gene TLR9, um inibidor de topoisomerase IV, um estimulador do músculo esquelético rápido da Troponina I, um estimulador do músculo esquelético rápido da troponina T, um antagonista do receptor da IL-1 tipo I, um modulador do receptor TNF do tipo II, um modulador do canal iônico, um estimulador da uteroglobina e um agonista VIP.

[00110] Os agentes específicos que podem ser usados em combinação com os presentes compostos inibidores de JAK incluem, mas não estão limitados a, acetato de rosiptor, brometo de umeclidínio, secucinumabe, acetato de metenquefalina, acetato de tridecactida, propionato de fluticasona, sulforafano estabilizado por alfa- ciclodextrina, tezepelumabe, furoato de mometasona, BI- 1467335, dupilumabe, aclidínio, formoterol, AZD-1419, HI- 1640V, rivipansel, CMP-001, manitol, ANB-020, omalizumabe, tregalizumabe, Mitizax, benralizumabe, golimumabe, roflumilast, imatinibe, REGN-3500, masitinibe, apremilast, RPL-554, Actimmune, adalimumab, rupatadina, parogrelil, MK- 1029, dipropionato de beclometasona, fumarato de formoterol, mogamulizumabe, seratrodast, UCB-4144, nemiralisibe, CK- 2127107, fevipipratant, danirixina, bosentan, abatacept, EC- 18, duvelisibe, dociparstate, ciprofloxacina, salbutamol HFA, erdosteína, PrEP-001, nedocromil, CDX-0158, salbutamol, enobosarmo, R-TPR-022, lenzilumabe, furoato de fluticasona, trifenolato de vilanterol, propionato de fluticasona, salmeterol, PT -007, PRS-060, remestemcel-L, citrulina, RPC-

4046, óxido nítrico, DS-102, gerilimzumabe, Actair, furoato de fluticasona, umeclidínio, vilanterol, AG-NPP709, Gamunex, infliximabe, Ampion, acumapimod, canacinumabe, INS-1007, CYP-001, sirukumab, propionato de fluticasona, mepolizumabe, pitavastatina, solitromicina, etanercept, ivacaftor, anakinra, MPC-300-IV, brometo de glicopirrônio, brometo de aclidínio, FP-025, risankoterizumabe, glicopirrônio, fumarato de formoterol, Adipocell, YPL-001, brometo de tiotrópio, brometo de glicopirrônio, maleato de indacaterol, andecaliximabe, olodaterol, esomeprazol, vacina contra ácaros da poeira, vacina de alérgeno de pólen de artemísia, vamorolona, gefapixant, revefenacina, gefitinib, ReJoin, tipelukast, SCM-CGH, SCM-652, RNS-60, brodalumabe, BIO- 11006, brometo de umeclidínio, trifenatato de vilanterol, brometo de ipratrópio, tralokinumabe, PUR-1800, VX-561, VX- 371, olopatadina, tulobuterol, fumarato de formoterol, acetonida de triancinolona, reslizumabe, xinafoato de salmeterol, propionato de fluticasona, dipropionato de beclometasona, fumarato de formoterola, brometo de tiotrópio, ligelizumab, RUTI, bertilimumab, Oomalizumab, brometo de glicopirrônio, SENS-111, dipropionato de beclometasona, CHF-5992, LT-4001, indacaterol, brometo de glicopirrônio, furoato de mometasona, fexofenadina, brometo de glicopirrônio, azitromicina, AZD-7594, formoterol, CHF- 6001, batefenterol, OATD-01, olodaterol, CJIM-112, rosiglitazona, salmeterol, setipiprant, interferon beta inalado, AZD-8871, plecanatida, fluticasona, salmeterol, monoglicerídeos de ácido eicosapentaenoico, lebrikizumab, RG-6149, QBKPN, mometasona, indacaterol, AZD-9898, piruvato de sódio, zileuton, CG-201, imidafenacina, CNTO-6785, CLBS- 03, mometasona, RGN-137, procaterol, formoterol, CCI-15106, POL-6014, indacaterol, beclometasona, MV-130, GC-1112, depósito de Allergovac, MEDI-3506, QBW-251, ZPL-389, udenafil, GSK-3772847, levocetirizina, AXP-1275, ADC-3680 timapiprant, abediterol, AZD-7594, brometo de ipratrópio, sulfato de salbutamol, tadekinig alfa, ACT-774312, dornase alfa, iloprost, batefenterol, furoato de fluticasona, Alicaforsen, ciclesonida, emeramida, arformoterol, SB-010, Ozagrel, BTT-1023, Dectrekumab, levalbuterol, pranlukast, ácido hialurônico, GSK-2292767, formoterol, NOV-14, lucinactant, salbutamol, prednisolona, ebastina, cipecilato de dexametasona, GSK-2586881, BI-443651, GSK-2256294, VR- 179, VR-096, hdm-ASIT +, budesonida, GSK-2245035, VTX-1463, emedastina, dexpramipexol, levalbuterol, N-6022, fosfato de dexametasona sódica, PIN-201104, OPK-0018, TEV-48107, suplatast, BI-1060469, Gemilukast, gama interferon, dalazatida, bilastina, propionato de fluticasona, xinafoato de salmeterol, RP-3128, brometo de bencicloquídio, reslizumab, PBF-680, antagonista CRTH2, Pranlukast, xinafoato de salmeterol, propionato de fluticasona, brometo de tiotrópio monohidratado, masilucaste, RG-7990, doxofilina, abediterol, brometo de glicopirrônio, TEV-46017, ASM-024, propionato de fluticasona, brometo de glicopirrônio, xinafoato de salmeterol, salbutamol, TA-270, flunisolida, cromoglicato de sódio, Epsi-gam, ZPL-521, salbutamol, aviptadil, TRN-157, Zafirlukast, Stempeucel, pemirolaste de sódio, nadolol, propionato de fluticasona + xinafoato de salmeterol, RV-1729, sulfato de salbutamol,

dióxido de carbono + brometo de perfluorooctilo, APL-1, dectrekumab + VAK-694, acetilsalicilato de lisina, zileuton, TR-4, terapia de células progenitoras mesenquimais humanas alogênicas derivadas de tecido adiposo, MEDI-9314, PL-3994, HMP-301, TD-5471, NKTT-120, pemirolast, dipropionato de beclometasona, trantinterol, alfa luminol monossódico, IMD- 1041, AM-211, TBS-5, ARRY-502, seratrodast, midismase recombinante, ASM-8, deflazacort, bambuterol, RBx-10017609, ipratrópio + fenoterol, fluticasona + formoterol, epinastina, WIN-901X, VALERGEN-DS, OligoG-COPD-5/20, tulobuterol, oxis Turbuhaler, DSP-3025, ASM-024, mizolastina, budesonida + salmeterol, LH-011, AXP-E, imunoglobulina humana de histamina, YHD-001, teofilina, ambroxol + erdosteína, ramatroban, montelucaste, pranlukast, AG-1321001, tulobuterol, ipratrópio + salbutamol, tranilast, suleptanato de metilprednisolona, colforsin daropate, repirinast e doxofilina.

[00111] Também é fornecida, neste documento, uma composição farmacêutica que compreende um composto da divulgação ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste e um ou mais outros agentes terapêuticos. O agente terapêutico pode ser selecionado da classe de agentes especificada acima e da lista de agentes específicos descritos acima. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é adequada para entrega aos pulmões. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é adequada para administração inalada ou nebulizada. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é um pó seco ou uma composição líquida.

[00112] Além disso, em um aspecto de método, a divulgação oferece um método de tratamento de uma doença ou distúrbio em um mamífero, compreendendo a administração ao mamífero de um composto da divulgação ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico do mesmo e um ou mais outros agentes terapêuticos.

[00113] Quando usados em terapia de combinação, os agentes podem ser formulados em uma única composição farmacêutica ou os agentes podem ser fornecidos em composições separadas que são administradas simultaneamente ou em momentos separados, pela mesma ou por diferentes vias de administração. Estas composições podem ser embaladas separadamente ou podem ser embaladas em kit como um kit. Os dois ou mais agentes terapêuticos no kit podem ser administrados pela mesma via de administração Ou por diferentes vias de administração.

EXEMPLOS

[00114] Os seguintes exemplos sintéticos e biológicos são oferecidos para ilustrar a invenção e não devem ser interpretados de forma alguma como limitando o escopo da invenção. Nos exemplos abaixo, as seguintes abreviaturas têm os seguintes significados, salvo indicação em contrário. Abreviaturas não definidas abaixo têm seus significados geralmente aceitos.

ACN = acetonitrila DCM = diclorometano DIPEA = N, N-diisopropiletilamina DMF = N, N-dimetilformamida EtOAc = acetato de etila h = hora(s) HATU = hexafluorofosfato de N, N, N ', N'”-tetrametil- O- (7-azabenzotriazol-1-il)urônio IPA = álcool isopropílico IPAc = acetato de isopropila MeOH = metanol min. = minuto(s) Pd(PPh3), = tetraquis (trifenilfosfina)paládio(0 TA = temperatura ambiente TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano bis (pinacolato)diboro = 4,4,5,5,4',4",5'",5'"-octametil- [2,2" bi [[1, 3, 2] dioxaborolanil]

[00115] Os reagentes e solventes foram adquiridos de fornecedores comerciais (Aldrich, Fluka, Sigma, etc.) e usados sem purificação adicional. O progresso das misturas de reação foi monitorado por cromatografia em camada fina (TLC), cromatografia líquida analítica de alto desempenho (análise HPLC) e espectrometria de massa. As misturas de reação foram elaboradas conforme descrito especificamente em cada reação; comumente eles eram purificados por extração e outros métodos de purificação, como temperatura e cristalização dependente de solvente e precipitação. Além disso, as misturas de reação foram rotineiramente purificadas por cromatografia em coluna ou por HPLC preparativa, normalmente usando embalagens de coluna C18 ou BDS e eluentes convencionais. AS condições típicas preparativas de HPLC são descritas abaixo.

[00116] A caracterização dos produtos da reação foi rotineiramente realizada por espectrometria de massa e !'H-NMR. Para análise de NMR, as amostras foram dissolvidas em solvente deuterado (como CD;OD, CDCl3; ou d;-DMSO) e os espectros de 'H-NMR foram adquiridos com um instrumento Varian Gemini 2000 (400 MHz) sob condições de observação padrão. A identificação de compostos por espectrometria de massa foi realizada por um método de ionização por eletrospray (ESMS) com um instrumento Applied Biosystems (Foster City, CA) modelo API 150 EX ou um instrumento 3100 Waters (Milford, MA), acoplado a sistemas de autopurificação.

Condições preparativas de HPLC

[00117] Coluna: C18, 5 (Om. 21,2 x 150 mm ou C18, 5 [Om 21 x 250 ou Cl4, 5 Om 21x150 mm Temperatura da coluna: Temperatura ambiente Quociente de vazão: 20,0 mL/min.

Fases móveis: A =Água + 0,05% TFA B = ACN + 0,05% TFA, Volume de injeção: (100-1500 ul) Comprimento de onda do detector: 214 nm

[00118] Os compostos brutos foram dissolvidos em 1:1 de água:ácido acético em cerca de 50 mg/ml. Uma corrida de 4 minutos de escala analítica de teste foi realizada usando uma coluna C18 de 2,1 x 50 mm, seguida de uma corrida de escala preparativa de 15 ou 20 minutos usando injeção de 100 OL com o gradiente baseado na % de retenção de B da corrida da escala analítica de teste. []Os gradientes precisos dependiam da amostra. Amostras com impurezas com tempos de retenção próximos foram verificadas com uma coluna C18 21 x 250 mm e/ou coluna C14 21 x 150 mm para melhor separação. As frações com o produto desejado foram identificadas por análise de espectrometria de massa.

Preparação 1: 4-(benziloxi)-2-etilfenil)trifluoro-1n*- borano, sal de potássio I-5 —. — TD s H 2 3 “CO BnO. ——> —— Re sx o 4 15 (a) 1- (benziloxi)-3-etilbenzeno (1-2)

[00119] A uma solução agitada de 3-etilfenol (1-1) (25,0 g, 204,0 mmol) em ACN (250 mL, 10 vol) foi adicionado carbonato de potássio (42,0 g, 306 mmol) à temperatura ambiente. A massa de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos, seguida pela adição de brometo de benzil (24,0 mL, 204 mmol) gota a gota. A mistura de reação resultante foi agitada durante 6 horas em temperatura ambiente. Após a conclusão da reação (monitoramento por TLC), a massa de reação resultante foi vertida em água (1,0 L) seguida pela extração do composto com EtOAc (2 x 2 L). Os orgânicos combinados foram lavados com água fria, solução de salmoura e secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados sob pressão reduzida. O produto bruto foi então purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (100-200 M) usando eluentes 2% de EtOAc em hexano para obter o produto desejado (I-2) como um composto oleoso amarelo claro (35,0 g, 81%). 'H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) 5 7,46-7,44 (m, 2H), 7,39 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,34-7,31 (m, 1H), 7,21 (t, J= 7,6 Hz) , 6,86-6,80 (m, 3H), 5,07 (s, 2H), 2,64 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,24 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

(b) 4- (benziloxi)-l-bromo-2-etilbenzeno (1-3)

[00120] A uma solução gelada agitada de 1- (benziloxi)- 3-etilbenzeno (1-2) (35,0 g, 164 mmol) em ACN (525 mL, 15 vol) foi adicionada N-bromossuccinimida (32,0 g 181 mmol) em porções durante um período de 15 minutos. A mistura foi agitada pela 1 hora seguinte em temperatura ambiente. Após a conclusão da reação (monitoramento por TLC), a massa de reação resultante foi vertida em água gelada (1,50 L) seguida pela extração do composto com EtOAc (2 x 1 L). Os orgânicos combinados foram lavados com água e secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados sob pressão reduzida para obter o produto bruto. Foi adicionado n-hexano (250 mL) ao material bruto, resultando em uma pasta, seguida por filtração através de um funil sinterizado. O licor-mãe foi evaporado sob pressão reduzida para obter o produto desejado I-3 como um composto oleoso amarelo claro (42,0 g, 87%). 'H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) 5 7,52-7,29 (m, 7H), 6,88 (s, 1H), 6,68 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,04 (s, 2H), 2,69 (q, JIJ = 7,6 Hz, 2H), 1,20 (t, J = 7,5 Hz, 3H).

(c) 2- (4- (Benziloxi)-2-etilfenil)-4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolano (1-4)

[00121] Uma solução agitada de 4- (benziloxi) -1l-bromo- 2-etilbenzeno (1-3) (42,0 g, 144 mmol), bis (pinacolato) diboro (44,0 gq, 173 mmol) e acetato de potássio (28 g, 288 mmol) em dioxano (440 mL) foi desgaseificada por purga de N2 (g) durante 15 minutos seguido pela adição de complexo PdCl2 (dppf) .DCM (11,0 g, 15 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 80 ºC pelas 16 horas seguintes. Após a conclusão da reação (monitoramento por TLC), a massa de reação foi filtrada através de leito de celite e o licor-mãe foi evaporado sob pressão reduzida para obter o produto bruto. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (100-200 M) usando eluentes 1% de EtOAc em hexano para obter o produto desejado (I-4) como um composto oleoso amarelo claro (32,0 g, 66%). 'H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) 5 7,74 (df, J = 8,4 Hz, 1H), 7,45-7,36 (m, 5H), 6,84-6,78 (m, 2H), 5,08 (s, 2H), 2,91 ( q, JIJ = 7,6 Hz), 1,33 (s, 12H), 1,19 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

(d) (4- (benziloxi)-2-etilfenil)trifluoro-Ai-borano, sal de potássio (1-5)

[00122] A uma solução agitada do composto 2-(4- (benziloxi) -2-etilfenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolano (1-4) (20 g, 59,0 mmol), em acetona:metanol (200 mL, proporção 1:1, 10 vol), foi adicionada uma solução 3M de fluoreto de hidrogênio de potássio (23,0 g, 295 mmol, dissolvido em 98,0 mL de água). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 16 horas. Após a conclusão da reação (monitoramento por TLC), a massa de reação resultante foi evaporada sob pressão reduzida. O sólido assim obtido foi retomado em água (100 mL) e agitado à temperatura ambiente durante 30 min. A massa de reação resultante foi filtrada através de um funil sinterizado, lavada com n-hexano e seca sob pressão reduzida para fornecer o produto desejado (I-5) como um sólido branco (14,0 g, 74%). 'H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) 5 7,43 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,37 (t, J= 7,5 Hz, 2H), 7,30 (t, J=7,1 Hz, 1H), 7,22 (d , J=8,0 Hz), 6,58 (s, 1H), 6,53 (d, J=7,9 Hz, 1H), 5,00 (s, 2H), 2,65 (q, J=7,5 Hz, 2H), 1,07 (t, J = 7,4 Hz, 3H). Preparação 2: 6-benzil 5-(terc-butil) (S)-3-benzil- 3,4,6,T7-tetra-hidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6- dicarboxilato (I-11) o o o o ET > OG DO EX Y > N NH sê A nBoc Bol “Boc 6 7 8 rs o o

EO EO N “Boc e Boc 110 rn (a) Ácido (8) -4, 5,6, T-tetrahidro-3H-imidazo[4,5- c]lpiridina-6-carboxílico, cloridrato (1-7)

[00123] A uma suspensão gelada agitada de L-histidina (1-6) (5,0 kg, 32,14 mol) em água (40 L, 8 vol.) foi adicionado ácido clorídrico concentrado (3,93 L, 33,75 mol), seguido pela adição de formaldeído (5,50 L, 67,5 mol, solução aq. 37%) gota a gota. A solução resultante foi agitada durante 30 minutos à mesma temperatura e depois aquecida a 80 ºC durante 8 horas. O progresso da reação foi monitorado por LCMS. A água foi removida sob pressão reduzida para obter o produto bruto e o produto bruto resultante foi agitado durante 2 horas em tolueno (20 L). Os orgânicos foram removidos sob pressão reduzida para remover o excesso de água e o composto foi seco azeotropicamente. O material resultante foi então tomado em éter dietílico (20 L) e agitado durante 2 horas. O material sólido foi então filtrado e seco ao ar para obter o produto desejado (1-7) como um sólido esbranquiçado (6,50 Kg, 85%). 'H NMR (400 MHz, D20) 5 8,69 (s, 1H), 4,56 (dy, J = 15,4 Hz, 1H), 4,42 (df, J = 15,5 Hz, 1H), 4,20 (dd, J=5,5, 5,2Hz, 1H), 3,42 (dd, J= 5,0, 17,0 Hz, 1H), 3,11 (dd, J = 10,2, 16,8 Hz, 1H).

(b) Ácido (S) -3, 5-bis (terc-butoxicarbonil)-4,5,6,7- tetra-hidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico (1-8)

[00124] Para uma solução gelada agitada de dicloridrato de ácido (S)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina- 6-carboxílico (I-7) (6,10 Kg, 25,40 mol) em 1,4-dioxano (48 L, 8 vol) e água (48 L, 8 vol) foi adicionada trietilamina (12,36 L, 89 mol) gota a gota seguida pela adição de di- terc-butil dicarbonato (18,07 L , 78,74 mol, dissolvido em L de 1,4-dioxano) ao longo de um período de 30 minutos. A mistura de reação resultante foi agitada à temperatura ambiente durante as 16 horas seguintes. Após a conclusão da reação (monitoramento de TLC e LCMS), a mistura de reação amarelada foi diluída com água (10 L) e lavada sucessivamente com éter dietílico (2 x 10 L) e EtOAc (2 x 7,50 L). A fase orgânica foi descartada. A camada aquosa foi resfriada e levada a pH -3 com solução de HCl 6N; a fase aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 10 L). Os orgânicos combinados foram lavados com solução de salmoura, secos sobre sulfato de sódio e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo oleoso foi cristalizado a partir de 30% de EtOAc:hexanos para dar o produto desejado (1-8) como um sólido esbranquiçado (5,1 Kg, 55%). (m/z): [M+H]+ calculado para 368,18 de Ci7HosN30s foi encontrado 368,21.

(c) 6-benzil 3,5-di-terc-butil (S)-6,7-di-hidro-3H- imidazo[4,5-c]piridina-3,5,6(4H)-tricarboxilato (1-9)

[00125] A uma solução gelada de ácido (S)-3,5-bis(terc- butoxicarbonil)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5- c]lpiridina-6-carboxílico (I- 8) (5,1 Kg, 13,88 mol) em DCM (51 L, 10 vol) foram adicionados sequencialmente bicarbonato de sódio aquoso saturado (41,0 L, 8 vol), iodeto de tetra- butil amônio (5,13 Kg, 13,88 mol) e brometo de benzila (2,47 L, 20,82 mol). A mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente pelas 16 horas seguintes. Após a conclusão da reação (monitoramento de TLC e LCMS), a solução bifásica foi separada. A camada aquosa foi extraída com DCM (3 x 10 L). Os orgânicos combinados foram lavados com solução de salmoura, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para obter o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna através de gel de sílica (100-200 M) usando eluentes 40% de EtOAc em hexano para obter o produto desejado (1-9) como óleo viscoso (4,50 Kg, 72%). (m/z): [M+H]+ calculado para 458,22 de CaoaH31N306 foi encontrado 458,60.

(d) 6-benzil 5-(terc-butil) (S)-3,4,6,7-tetra-hidro- SH-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato (I-10)

[00126] A uma solução gelada de 6-benzil 3,5-di-terc- butil (S)-6,7-di-hidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-3,5,6(4H)- tricarboxilato (1-9) (4,50 Kg, 9,84 mol) em IPA (45 L, 10 vol) foi adicionado hidróxido de amônio (36 L, 8 vol) gota a gota. A mistura de reação resultante foi agitada adicionalmente em temperatura ambiente pelas 16 horas seguintes. Após a conclusão da reação (monitoramento de TLC e LCMS), a mistura resultante foi diluída com água (25 L) seguida de extração com EtOAc (3 x 20 L) Os orgânicos combinados foram lavados com solução de salmoura, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para produzir o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna através de gel de sílica (100- 200M) usando eluentes 2% de MeOH em DCM para obter o produto desejado (I-10) como um óleo viscoso espesso (2,70 Kg, 77%). (m/z): [M+H]+ calculado para 358,17 de CisHa3N30, foi encontrado 358,33.

(e) 6-benzil 5- (terc-butil) (S) -3-benzi1-3,4,6,7- tetra-hidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato (I- 11)

[00127] A uma solução gelada de 6-benzil 5-(terc-butil (8) -3,4,6,T7T-tetra-hidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6- dicarboxilato (I- 10) (2,70 kg, 7,55 mol) em DCM (32,4 L, 12 vol) foi adicionado hidróxido de sódio 1N aquoso (24,3 L, 9 vol) seguido pela adição em sequência de iodeto de tetra- butil amônio (2,80 Kg, 7,55 mol) e brometo de benzila (0,99 L, 8,31 mol). A mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente pelas 2 horas seguintes. Após a conclusão da reação (monitoramento de TLC e LCMS), a solução bifásica foi separada. A camada aquosa foi extraída com DCM (3 x 10 L). Os orgânicos combinados foram lavados com solução de salmoura, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para produzir o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (100-200M) usando eluentes 40% de EtOAc em hexano para obter o produto desejado (I-11) como um óleo viscoso espesso (1,70 Kg, 63%). (m/z): [M+H]+ calculado para 448,22 de CosHooN304 foi encontrado 448,20.

Preparação 3: 6-benzil 5-(terc-butil) (S)-3-benzil-2- (6- (4- (benziloxi)-2-etilfenil)-lH-indazol-3-il)-3,4,6,7- tetrahidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato (I- 16) o Ni Ãosn o ro ro e Neoc é O Ida. isa mm NO NB Br Ê Br Z o 2 ns 8 . x 4 Bno, BIO A, = = O Ss o, A 2? 'oBn si Hs 16 (a) Cloreto de 4-bromo-2-fluorobenzoil (I1-13)

[00128] A uma solução gelada agitada de ácido 4-bromo- 2-fluorobenzoico (1-12) (1,25 Kg, 5,71 mol) em DCM (12,5 L, vol), foi adicionado cloreto de oxalil (0,98 L, 11,42 mol) gota a gota. A mistura de reação resultante foi agitada durante 10 min. à mesma temperatura. DMF (150 mL) foi então adicionado gota a gota à mistura de reação. A massa da reação resultante pôde ser aquecida à temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. Após a conclusão da reação (por monitoramento de TLC), o excesso de cloreto de oxalil foi removido sob pressão reduzida sob uma atmosfera de nitrogênio para obter o produto bruto (I1I-13) (1,08 Kg, 80%), que foi usado na próxima etapa sem mais purificação.

(b) 6-benzil 5-(terc-butil) (S)-3-benzil-2-(4-bromo- 2-fluorobenzoil)-3,4,6,7-tetrahidro-5H-imidazo[4,5- c]lpiridina-5,6-dicarboxilato (I-14)

[00129] Para uma solução agitada de 6-benzil 5-(terc- butil) (S) -3-benzil-3,4,6,7-tetra-hidro-5H-imidazo[4,5- c]lpiridina-5,6-dicarboxilato (I-11) (1,70 Kg, 3,80 mol) em ACN (13,6 L, 8 vol) foi adicionada trietilamina (2,11 L, 15,2 mol) seguida pela adição de cloreto de 4-bromo-2- fluorobenzoil (1I-13) (1,08 Kg, 4,56 mol em 3,4 L ACN, 2 vol) à temperatura ambiente. Após a conclusão da adição, a cor da mistura de reação resultante tornou-se marrom a partir do amarelo claro. A mistura de reação resultante foi agitada à mesma temperatura durante 30 min. e o progresso da reação foi monitorado por TLC. A mistura de reação resultante foi extinta com água gelada (10 L), seguida por extração com EtOAc (3 x 5 L) e os orgânicos combinados foram lavados com solução de salmoura. Os orgânicos foram secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para produzir o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (100-200M) usando eluentes 20% de EtOAc em hexano para obter o produto desejado (I-14) (1,74 Kg, 71%). %). (m/z): [M+H]+ calculado para 648,14 de C33H31BrYrFN305 foi encontrado 648,20.

(Cc) 6-benzil 5-(terc-butil) (S)-3-benzil-2-(6-bromo- lH-indazol-3-il)-3,4,6,7-tetra-hidro-5H-imidazo[4,5- c]lpiridina-5,6-dicarboxilato (I-15)

[00130] Para uma solução agitada de 6-benzil 5-(terc- butil) (S) -3-benzil-2- (4-bromo-2-fluorobenzoil)-3,4,6,7- tetra-hidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato (I-

14) (1,74 Kg, 2,68 mol) em THF (26,0 L, 15 vol) foi adicionado hidrato de hidrazina (0,705 L, 13,4 mol) à temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi aquecida a 60 ºC durante 3 horas. Após a conclusão da reação (monitoramento por TLC), a massa de reação resultante foi vertida em água gelada (10 L) seguida pela extração do composto com EtOAc (3 x 10 L). Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura e secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados sob pressão reduzida para produzir o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (100-200M) usando eluentes 20% de EtOAc em hexano para obter o produto desejado (I-15) como um sólido esbranquiçado (1,12 kg, 65%). (m/z): [M+H]+ calculado para 642,16 de C33H32BrNsO. foi encontrado 642,21.

(d) 6-benzil 5- (terc-butil) (S) -3-benzil-2-(6-(4- (benziloxi)-2-etilfenil)-lH-indazol-3-11)-3,4,6,7- tetrahidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato (I- 16)

[00131] Bis (pinacolato)diboro (250 g, 984 mmol) foi carregado em um frasco de parede única de 3 gargalos de 5 L previamente gravado usando química de fluoreto, junto com propan-2-o0l (1,882 L, 2,46E + 04 mmol) e a mistura foi agitada até estar totalmente dissolvida. A dissolução foi endotérmica (-4 ºC). Em um frasco Erlenmeyer de 4 L, previamente gravado usando química de fluoreto, hidrofluoreto de fluoreto de potássio (538 g, 6891 mmol) foi dissolvido em água (2,306 L, 1,28E + 05 mmol) para formar uma solução 3M. A dissolução foi endotérmica (-12 ºC). A solução foi então filtrada para remover uma pequena quantidade de material insolúvel do hidrofluoreto de fluoreto de potássio.

Uma vez que ambas as soluções foram completamente dissolvidas, o conteúdo do frasco Erlenmeyer foi carregado no frasco de parede única em porções durante 15 minutos.

Foi observada exotermia moderada (+10 ºC). A solução tornou-se uma pasta cinzenta semiopaca espessa e translúcida durante a adição e a agitação foi aumentada para manter o conteúdo bem misturado.

A mistura foi agitada durante 1,5 h e, em seguida, filtrada através de um funil de frita de vidro grosso (4 L, previamente gravado). A filtração demorou 30-45 minutos para ser concluída.

O filtrado bifásico límpido foi rejeitado.

Os sólidos brancos foram secos durante minutos no filtro (observou-se a quebra do bolo). Os sólidos foram transferidos de volta para um frasco de parede única de 3 gargalos de 5 L limpo e novamente suspenso com água (1,33 L, 7,38E + 04 mmol). A pasta foi agitada durante 2 h, tempo após o qual formou um hidrogel homogêneo límpido.

A solução foi agitada por mais 1 h, após o que os sólidos/gel foram filtrados usando um funil de vidro grosso de 4 L (previamente gravado). Os sólidos foram deixados secar no filtro por 30 minutos.

Os sólidos foram transferidos de volta para um frasco de parede única de 3 tubuladuras de 5 L limpo e novamente suspensos em acetona (1,084 L, 1,48E + 04 mmol). A pasta branca/cinza foi agitada durante 1 h e foi então filtrada em um funil de vidro grosso de 4 L (previamente gravado). A filtração levou 20 minutos para ser concluída e foi então seca no funil por mais 1 hora.

Durante este tempo, os sólidos foram ocasionalmente agitados para garantir uma secagem homogênea.

Permaneceu um pó branco claro após a secagem no filtro. Os sólidos foram secos por 20h a 55 "C sob vácuo com uma sangria lenta de nitrogênio para obter um sólido branco fofo (200,3 g foram coletados).

[00132] Para uma solução agitada de 6-benzil 5-(terc- butil) (S) -3-benzil-2- (6-bromo-lH-indazol-3-il1)-3,4,6,7- tetra-hidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato (I- 15) (10,0 g, 16,0 mmol) em 2-metil tetra-hidrofurano (100 mL, 10 vol) foi adicionado (4- (benziloxi)-2- etilfenil)trifluoro-A'-borano, sal de potássio (1-5) (8,0 g, mmol) e o sólido branco fofo obtido acima (0,20 g). A mistura de reação resultante foi desgaseificada com gás nitrogênio durante 30 minutos. A esta solução, foi adicionada uma solução aquosa preparada de carbonato de césio (20,0 g, 62,0 mmol em 60 mL de água, 6 vol). A mistura de reação resultante foi desgaseificada adicionalmente por 15 minutos seguido pela adição de bis (di-terc-butil (4- dimetilaminofenil)fosfina)dicloropaládio(II) (0,66 g, 0,93 mmol) e a mistura de reação foi evacuada sob vácuo e lavada por nitrogênio. A mistura de reação resultante foi aquecida a 110 ºC durante 20 horas. Após a conclusão da reação (monitoramento de TLC e LCMS), a mistura de reação resultante foi resfriada à temperatura ambiente e filtrada através de um leito de celite, em seguida, lavada com EtOAc (3 x 0,5 L). Os orgânicos combinados foram lavados com solução de hidróxido de sódio 1N (3 x 0,5 L). Os orgânicos combinados foram então lavados com salmoura e secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados sob pressão reduzida para produzir o produto bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica (100-200M) usando eluentes 20% de EtOAc em hexano para obter o produto desejado (I-16) (como uma mistura de regioisômeros de N-benzila) como um sólido amarelo claro (8,0 g, 66%). (m/z): [M+H]+ calculado para 774,36 de CasHa7N5Os foi encontrado 774,59.

Preparação 4: Ácido (S)-2-(6-(2-etil-4-hidroxifenil)- lH-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5- c]piridina-6-carboxílico, cloridrato (1-18) BA PA *%S (a) benzil (S) -3-benzil-2-(6-(4- (benziloxi)-2- etilfenil)-lH-indazol-3-il1)-4,5,6,7-tetrahidro-3H- imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxilato, cloridrato (I-17)

[00133] 6-Benzil 5-(terc-butil) (S) -3-benzil-2-(6- (4- (benziloxi)-2-etilfenil)-lH-indazol-3-11)-3,4,6,7- tetrahidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato (I- 16) (1,0 g, 1,292 mmol) foi dissolvido em dioxano (8 mL) e água (1,5 mL), então solução de cloreto de hidrogênio, 4 M em dioxano (7 mL, 28,0 mmol) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas (progresso da reação monitorado por LCMS). A mistura de reação foi então congelada e liofilizada e o produto bruto (I-17) foi usado diretamente na próxima reação (rendimento quantitativo foi presumido). (m/z): [M+H]+ calculado para 674,31 de Ca3H3a9N503 foi encontrado 674,3.

(b) Ácido (S) -2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina- 6-carboxílico, cloridrato (I1-18)

[00134] Benzil (S) -3-benzil-2-(6-(4- (benziloxi)-2- etilfenil)-lH-indazol-3-il1)-4,5,6,7-tetrahidro-3H- imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxilato, cloridrato (1-17) (0,918 g, 1,292 mmol) foi dissolvido em 2-propanol (15 mL), solução de cloreto de hidrogênio, 5 M em água (0,258 mL, 1,292 mmol) e água (0,25 mL) a 50 ºC; em seguida, paládio, 10% em peso sobre carbono, foi adicionado 50% de água (0,138 g, 0,065 mmol). O balão de reação foi então purgado com nitrogênio, um balão de hidrogênio foi anexado e a mistura de reação foi agitada a 50 ºC por 4 dias com o balão de hidrogênio sendo reabastecido conforme necessário (progresso da reação monitorado por LCMS). Todos os sólidos foram então removidos por filtração e a solução resultante foi concentrada. O resíduo foi dissolvido em 1:1 ACN/Água, congelado e liofilizado. O pó resultante (I-18) foi usado sem purificação adicional (rendimento quantitativo foi presumido). (m/z): [M+H]+ calculado para 404,17 de Co2Ho1NsO3 foi encontrado 404,2.

Preparação 5: de Ácido (S) -2- (6- (2-etil-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-isopropil-4,5,6,7- tetrahidro-3H-imidazo[ 4,5-c]piridina-6-carboxílico (1-19) HO,

JD é» o y OO HN- | N N

E 119

[00135] Ácido (8) -2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[ 4,57 c]lpiridina-6-carboxílico, HCl (I-18) (0,25 g, 0,568 mmol) foi suspenso em DMF (2,5 mL) e acetona (2,5 mL); em seguida, foram adicionados ácido acético (0,098 mL, 1,705 mmol) e cianoborohidreto de sódio (0,179 g, 2,84 mmol) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). A mistura de reação foi concentrada, então o produto bruto foi purificado por cromatografia de fase reversa (5-70% ACN/gradiente de água, 50 g coluna Cl8aq) para fornecer o sal de TFA do composto do título (149 mg, 47% de rendimento). (m/z): [M+H]+ calculado para 446,21 de CosHoNs5O03z foi encontrado 446,3.

Preparação 6: Ácido (S)-2-(6-(2-etil-4-hidroxifenil)- lH-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H- imidazo[4,5- c]piridina-6-carboxílico (1-20) HO.

O o Tod ms

BN LL 1-20

[00136] Ácido (8) -2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina- 6-carboxílico, HCl (1-18) (0,160 dg, 0,364 mmol) e propionaldeído (0,039 mL, 0,546 mmol) foram dissolvidos em metanol (3,0 mL), então cianoborohidreto de sódio (0,069 g, 1,091 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). A mistura de reação foi concentrada e o produto bruto foi purificado por cromatografia de fase reversa (5-70% ACN/gradiente de água, 50 g coluna C18) para fornecer o sal de TFA do composto do título (78 mg, 38% de rendimento). (m/z): [M+H]+ calculado para 446,21 de CosHo;N503 foi encontrado 446,3.

Preparação 7: Ácido (S)-2-(6-(2-etil-4-hidroxifenil)- lH-indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5- c]piridina-6-carboxílico (1-21) HO.

O o Tot

N CAN

HAN ON 1-21

[00137] Ácido (8) -2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina- 6-carboxílico, HCl (1I-18) (0,160 g, 0,364 mmol) e solução de formaldeído, 37% em peso em água (0,032 mL, 0,436 mmol) foram dissolvidos em metanol (3,0 mL), então cianoborohidreto de sódio (0,069 g, 1,091 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). Borohidreto de sódio (14 mg, 0,364 mmol) foi adicionado para extinguir o excesso de formaldeído e, em seguida, a mistura de reação foi concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia de fase reversa (5-70% ACN/gradiente de água, 50 g coluna C18) para fornecer o sal de TFA do composto do título (110 mg, 57% de rendimento). (m/z): [M+H]+ calculado para 418,18 de C>3H23N503 foi encontrado 418,2.

Preparação 8: (R)-2-(3-metilpiperazin-l-il)etan-l1-ol, dicloridrato (1-24)

Bee PN >» AN LONA LUNA ou UN ou 1-22 1-23 1-24 (a) terc-butil (R) -4- (2-hidroxietil)-2- metilpiperazina-l-carboxilato (1-23)

[00138] (R)-l1-boc-2-metil-piperazina (0,2 g, 0,999 mmol), DIPEA (0,698 mL, 3,99 mmol) e 2-bromoetanol (0,085 mL, 1,198 mmol) foram dissolvidos em DMF (5 mL) e a mistura de reação foi agitada a 60 ºC durante 16 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). A mistura de reação foi concentrada e, em seguida, 10 mL de éter dietílico foram adicionados ao resíduo. A solução foi sonicada até o gel residual ter desaparecido e um sólido se formado. A solução de éter foi então decantada do sólido. O sólido foi então usado diretamente na próxima reação (o rendimento quantitativo foi presumido). (m/z): [M+H]+ calculado para 245,18 de Ci2HoaN203 foi encontrado 245,4.

(b) (R) -2- (3-metilpiperazin-l1-il)etan-l1-ol, dicloridrato (1-24)

[00139] Terc-butil (R) -4- (2-hidroxietil)-2- metilpiperazina-l-carboxilato (0,244 g, 0,999 mmol) foi dissolvido em dioxano (3,0 mL) e água (0,5 mL), em seguida solução de cloreto de hidrogênio, 4 M em dioxano (2,0 mL, 65,8 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). A mistura de reação foi congelada e liofilizada e o produto resultante foi utilizado sem purificação (o rendimento quantitativo foi presumido).

(m/z): [M+H]+ calculado para 145,13 de C;HiN27O foi encontrado 145,4.

Exemplo 1: (S) - (2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo [4,5- c]piridina-6-il) (4- (2-hidroxietil)piperazin-l1-il)metanona HO.

O o Na Pocos HN-N H 1

[00140] Ácido (8) -2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo [4,5- c]lpiridina-6-carboxílico, TFA (I-20) (40 mg, 0,071 mmol), n- (2-hidroxietil) piperazina (0,018 mL, 0,143 mmol) e DIPEA (0,025 mL, 0,143 mmol) foram dissolvidos em DMF (1,5 mL), em seguida, HATU (40,8 mg, 0,107 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). Hidrazina (0,011 mL, 0,357 mmol) foi adicionada para clivar os subprodutos indesejados e, em seguida, a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. A mistura de reação foi então concentrada e o produto bruto foi purificado por HPLC preparativa (5-70% ACN/gradiente de água, coluna C18) para fornecer o sal de TFA do composto do título (31 mg, 56% de rendimento). (m/z): [M+H]+ calculado para 558,31 de C31H39N;703 foi encontrado 558,3. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 13,10 (s, 1H), 12,27 (d, J = 48,92 Hz, 1H), 9,40 (s, 1H), 8,28 (t, J = 8,10 Hz, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,04 (m, 2H), 6,71 (d, J = 2,46 Hz, 1H), 6,64 (dd, J = 2,50, 8,23

Hz, 1H), 4,44 (t, J = 5,31 Hz, 1H) , 4,11 (q, 9 = 5,26, 28), 3,96 (m, 1H), 3,86-3,52 (m, 6H), 3,49 (q, J = 6,01 Hz, 2H), 2,95 (m, 2H), 2,48 (q, JI=7,48 Hz, 2H), 2,42-2,21 (m, 4H), 2,37 (t, J = 6,20 Hz, 2H), 1,42 (m, 2H), 1,00 (t, J = 7,52 Hz, 3H), 0,81 (m, 3H).

Exemplo 2: ((S) -2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5- c]piridina-6-il) ((18,4S) -5-metil-2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptan-2-il)metanona HO. O o

XV STO ”

ENO ON LL 2

[00141] Ácido (8) -2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5- c]lpiridina-6-carboxílico, TFA (1I-20) (40 mg, 0,071 mmol), di-hidrobrometo de (18,48) -5-Metil-2,5-diazabiciclo [2.2.1] heptano (29,4 mg, 0,107 mmol) e DIPEA (0,062 mL, 0,357 mmol) foram dissolvidos em DMF (1,5 mL); em seguida, HATU (40,8 mg, 0,107 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). Hidrazina (0,011 mL, 0,357 mmol) foi adicionada para clivar os subprodutos indesejados e, em seguida, a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. A mistura de reação foi então concentrada e o produto bruto foi purificado por HPLC preparativa (5-70% ACN/gradiente de água, coluna C18) para fornecer o sal de TFA do composto do título (32 mg, 59% de rendimento). (m/z): [M+H]+ calculado para 540,30 de C31H37N;702 foi encontrado 540,3.

Exemplo 3: ((S) -2, 4-dimetilpiperazin-1-il) ((S)-2-(6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7- tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-il)metanona Não o HO A, Ho ses pe x “i “O 2 o TRAD , (a) Terc-butil (S) -4- ((S) -2- (6- (2-etil1-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7- tetrahidro- 3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carbonil)-3-metilpiperazina-l1- carboxilato (1-25)

[00142] Ácido (8) -2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5- c]lpiridina-6-carboxílico, TFA (1I-21) (55 mg, 0,103 mmol), (S) -A-n-boc-2-metilpiperazina (41,5 mg, 0,207 mmol) e DIPEA (0,036 mL, 0,207 mmol) foram dissolvidos em DMF (1,5 mL), em seguida, HATU (59,0 mg, 0,155 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). Hidrazina (0,016 mL, 0,517 mmol) foi adicionada para clivar os subprodutos indesejados e, em seguida, a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. A mistura de reação foi concentrada em seguida e o produto bruto foi purificado por cromatografia de fase reversa (5- 70% ACN/gradiente de água, 50 g coluna C18) para fornecer o sal de TFA do composto do título (54 mg, 72% de rendimento).

(m/z): [M+H]+ calculado para 600,33 de C33H41N;0,s foi encontrado 600,3.

(b) ( (8) -2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3- il) -5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6- il) ((S)-2-metilpiperazin-l-il)metanona (1-26)

[00143] Terc-butil (S) -4- ((S) -2- (6- (2-etil-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-tetrahidro- 3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carbonil)-3-metilpiperazina-l1- carboxilato, TFA (1-25) (0,126 g, 0,177 mmol) foi dissolvido em dioxano (1,5 mL) e água (0,3 mL), em seguida, solução de cloreto de hidrogênio, 4 M em dioxano (1,5 mL, 6,00 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). A mistura de reação foi congelada e liofilizada e o pó resultante foi usado diretamente na próxima reação (rendimento quantitativo foi presumido). (m/z): [M+HH]+ calculado para 500,27 de CogH33N;0r foi encontrado 500,3.

(c) ((S) -2, 4-dimetilpiperazin-1-il) ((S)-2-(6- (2-etil- 4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7- tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-il)metanona

[00144] ((S)-2- (6-(2-etil-4-hidroxifenil)-lH-indazol- 3-il) -5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina- 6-il) ((S) -2-metilpiperazin-l1-il)metanona, dicloridrato (0,101 g, 0,176 mmol) e solução de formaldeído, 37% em peso em água (0,016 mL, 0,212 mmol) foram dissolvidos em metanol (3,0 mL), em seguida, cianoborohidreto de sódio (0,055 g, 0,882 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). Borohidreto de sódio (7 mg, 0,176 mmol) foi adicionado para extinguir qualquer formaldeído remanescente. A mistura de reação foi concentrada e o produto bruto em seguida foi purificado por HPLC preparativa (5-60% ACN/gradiente de água, coluna C18) para fornecer o sal de TFA do composto do título (28 mg, 21% de rendimento). (m/z): [M+H]+ calculado para 514,29 de CosH35N;02 foi encontrado 514,3.

Exemplo 4: (S) - (2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-5-isopropil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5 -c]piridina-6-il) (4-metil-1,4-diazepan-1-il)metanona HO. O o NO — SW, | No No 4

[00145] Ácido (8) -2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo [4,5- c]lpiridina-6-carboxílico, TFA (I-19) (50 mg, 0,089 mmol), 1- metilhomopiperazina (0,022 mL, 0,179 mmol) e DIPEA (0,031 mL, 0,179 mmol) foram dissolvidos em DMF (1,5 mL), em seguida, HATU (51,0 mg, 0,134 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). Hidrazina (0,014 mL, 0,447 mmol) foi adicionada para clivar os subprodutos indesejados e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. A mistura de reação foi então concentrada e o produto bruto foi purificado por HPLC preparativa (2-70% ACN/gradiente de água, coluna C18)

para fornecer o sal de TFA do composto do título (29 mg, 42% de rendimento). (m/z): [M+H]+ calculado para 542,32 de C31H39N;702 foi encontrado 542,3. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 13,08 (s, 1H), 12,21 (dy, J = 29,9 Hz, 1H), 9,40 (s, 1H), 8,27 (d, J = 8,33 Hz, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,04 (t, J = 8,05, 2H), 6,71 (dy, J =2,53 Hz, 1H), 6,64 (dd, J = 2,54, 8,23 Hz, 1H), 4,11 (m, 3H), 3,91-3,52 (my, 6H), 2,97 (mM, 1H), 2,91- 2,53 (m, 4H), 2,49 (q, J = 7,46, 2H), 2,23 (df, J = 13,9 Hz, 3H), 1,76 ( m, 2H), 1,0 (m, 9H).

Exemplo 5: ((S) -2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo|[ 4,5- c]piridina-6-il) ((R) -4- (2-hidroxietil)-2-metilpiperazina-l1- yl)metanona HO. O o z Pontos

TAN eNCKO ON

[00146] Ácido (8) -2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5- c]lpiridina-6-carboxílico, TFA (1I-21) (55 mg, 0,103 mmol), (R) -2- (3-metilpiperazina-l-il)etan-l-0ol, dicloridrato (I- 24) (33,7 mg, 0,155 mmol) e DIPEA (0,090 mL, 0,517 mmol) foram dissolvidos em DMF (1,5 mL) e em seguida, HATU (59,0 mg, 0,155 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). Hidrazina (0,016 mL, 0,517 mmol) foi adicionada para clivar os subprodutos indesejados e, em seguida, a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. A mistura de reação foi então concentrada e o produto bruto foi purificado por HPLC preparativa (5-70% ACN/gradiente de água, coluna C18) para fornecer o sal de TFA do composto do título (22 mg, 28% de rendimento). (m/z): [M+H]+ calculado para 544,30 de C309H3;N;03 foi encontrado 544,3.

Exemplo 6: ((S)-3-(dimetilamino)pirrolidina-l-yl) ((S)- 2-(6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-yl)-5-isopropil- 4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-il)metanona HO O o | Pat DA

NON meo NO 6

[00147] Ácido (8) -2- (6- (2-etil-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-5-isopropil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo [4,5- c]piridina-6-carboxílico, TFA (1I-19) (50 mg, 0,089 mmol), (S)-(-)-3-(dimetilamino)pirrolidina (0,023 mL, 0,179 mmol) e DIPEA (0,031 mL, 0,179 mmol) foram dissolvidos em DMF (1,5 mL), em seguida, HATU (51,0 mg, 0,134 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). Hidrazina (0,014 mL, 0,447 mmol) foi adicionada para clivar os subprodutos indesejados e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. A mistura de reação foi então concentrada e o produto bruto foi purificado por HPLC preparativa (5-70% ACN/gradiente de água, coluna C18) para fornecer o sal de TFA do composto do título (37 mg, 53% de rendimento). (m/z): [M+H]+ calculado para 542,32 de C31H39N;O02r foi encontrado 542,3.

Preparação 9: 2-(4-(Benziloxi) -2-etil-5-fluorofenil)- 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano

F F F HO BnO BnO. — — o (a) 1- (Benziloxi) -4-bromo-5-etil-2-fluorobenzeno

[00148] À uma solução de 4-bromo-5-etil-2-fluorofenol (20 g, 910,32 mmol) em ACN (250 mL) foi adicionado K2CO; (31,55 g, 228,3 mmol) seguido por gota a gota de brometo de benzil (13,10 mL, 109,58 mmol). A mistura de reação resultante foi agitada a 80 ºC durante 2h. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (três vezes), combinada e lavada com salmoura. A camada orgânica foi seca sobre Na7;SO, e evaporada sob pressão reduzida para fornecer o intermediário do título como um líquido oleoso amarelo pálido (25 g, 89% de rendimento). 'H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) 5 7,48 - 7,30 (my, 5H), 7,27 (dy, J = 10,5 Hz, 1H), 6,87 (dy, J = 8,7 Hz, 1H), 5,12 (s, 2H) , 2,66 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,5 Hz, 3H).

(b) 2- (4- (Benziloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolano

[00149] A uma solução do produto da etapa anterior (12,5 g, 40,45 mmol) em dioxano (100 mL) foi adicionado bis (pinacolato)diboron (15,40 g, 60,67 mmol) e KOAc (11,9 g, 121,35 mmol). A mistura de reação foi purgada com nitrogênio por 15 minutos seguido pela adição de [1,1'-

bis (difenilfosfino) ferroceno]dicloropaládio(I11I), complexo com diclorometano (1,65 g, 2,023 mmol). A mistura de reação resultante foi agitada e aquecida a 110 ºC durante 3 h, filtrada através de Celite e o resíduo lavado com EtOAc. O filtrado foi diluído com excesso de EtOAc (200 mL) e lavado com água (100 mL) seguido por salmoura (100 mL), seco sobre sulfato de sódio e concentrado em vácuo para obter o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna (100- 200) sílica gel, eluída com 3-5% de EtOAc: hexano para proporcionar o produto desejado como um sólido esbranquiçado (9,50 g, rendimento de 66%). 'H NMR (400 MHz, clorofórmio-d 7,54 - 7,27 (my, 6H), 6,81 (dy, J = 7,9 Hz, 1H), 5,16 (s, 2H), 2,84 (q, J = 7,5 Hz, 2H) , 1,32 (s, 12H), 1,14 (t, J = 7,5 Hz, 3H). Preparação 10: 6-(4- (benziloxi)-2-etil-5-fluorofenil)- 1- (tetra-hidro-2H-piran-2-il)-3-(trimetilestanil)-lHA- indazol AA 2 Y co ol o) Bno. THP O O Px Q / o No HN-N THP'

F Bro À Bo. À Brno Õ O O, — — Pa = Q St HAN NA ' Hp "No THP' (a) 6- (4- (benziloxi) -2-etil-5-fluorofenil)-1l-(tetra- hidro-2H-piran-2-il)-lH-indazol

[00150] A uma solução de 6-bromo-l-(tetrahidro-2H- piran-2-il) -lH-indazol (50 gq, 178,57 mmol) e 2-(4- (benziloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolano (76,3 g, 214,29 mmol) em DMF:H;O (480:120 mL) foi adicionado K;PO, (94,64 g, 446,86 mmol). A mistura de reação foi desgaseificada com nitrogênio por 15 minutos, em seguida, catalisador Pd (PPh3) 2Cl2 (6,26 g, 8,93 mmol) foi adicionado e a mistura foi novamente desgaseificada com nitrogênio por 5 minutos, agitada e aquecida a 100-110 ºC por 5 h. A mistura de reação foi filtrada através de Celite e o resíduo foi lavado com EtOAc. O filtrado foi diluído com EtOAc, lavado com água fria e salmoura, seco sobre sulfato de sódio e concentrado em vácuo para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna flash para proporcionar o intermediário do título como um sólido branco (65 g, rendimento de 86%). (m/z): [M+H]* calculado para 431,21 de Co;Ho;FN202 foi encontrado 431,46. 'H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) 5 8,06 - 7,98 (m, 2H), 7,70 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,51 - 7,32 (my, 5H), 7,08 (dd, J = 809,6, 8,3 Hz, 1H), 7,03 (df, J= 11,9 Hz, 1H), 6,95 (dy, J = 8,5 Hz, 1H), 5,76 - 5,64 (my, 1H), 5,20 (s, 2H), 4,04 (dy, J = 10,1 Hz, 1H), 3,72 (t, J = 9,7 Hz, 1H), 2,52 (q, J = 7,5 Hz, 2H), 2,22 - 2,02 (m, 3H), 1,80 - 1,71 (m, 3H), 1,06 (t, J=7,5 Hz, 3H).

(b) 6-(4- (benziloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-lH-indazol

[00151] A uma solução do produto da etapa anterior (65 g, 151,16 mmol) em metanol (700 mL) foi adicionado HCl conc. HCl (120 mL) e a solução resultante foi aquecida a 60-65 ºC durante 3 horas, resfriada à temperatura ambiente e concentrada em vácuo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc e lavado com solução aquosa saturada de NaHCO; e água. A camada orgânica foi seca sobre Na;SO, anidro e concentrada in vacuo para proporcionar o intermediário do título como um sólido branco (52 g, 99% (em bruto)). W'H NMR (400 MHz, clorofórmio- d) 5 8,13 (s, 1H), 7,77 (df, J= 8,3 Hz, 1H), 7,59 - 7,30 (m, 6H), 7,10 (dy, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,01 (df, J = 11,8 Hz, 1H), 6,96 (dy, J = 8,4 Hz, 1H), 5,21 (s, 2H), 2,53 (q, J= 7,5 Hz, 2H), 1,05 (t, J = 7,5 Hz, 3H).

(Cc) 6- (4- (benziloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-3-iodo-1H- indazol

[00152] A uma solução de 6-(4-(benziloxi)-2-etil-5- fluorofenil)-lH-indazol (56 g, 161,18 mmol) em DMF (400 mL) foi adicionado KOH (36,2 g, 647,39 mmol) e a mistura foi agitada durante 5 min. Uma solução de iodo (82,2 g, 323,69 mmol) em DMF (100 mL) foi adicionada lentamente a O ºC e agitada à TA por 30 minutos, diluída com água (3 x 150 mL) e extraída com EtOAc (3 x 200 mL). A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de metabissulfito de sódio (3 x 200 mL) e água (400 mL), seca sobre Na;SO0, anidro e concentrada sob pressão reduzida para obter o produto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna flash para proporcionar o intermediário do título como um semissólido acastanhado (64 g, rendimento de 84%). 'H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) 5 10,49 (s, 1H), 7,57 - 7,32 (my, 7H), 7,16 (dy, J = 8,3 Hz, 1H), 7,04 - 6,91 (m, 2H), 5,20 ( s, 2H), 2,51 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,04 (t, J = 7,5 Hz, 3H).

(d) 6- (4- (Benziloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-3-iodo-l1- (tetra-hidro-2H-piran-2-il)-lH-indazol

[00153] A uma solução gelada do produto da etapa anterior (60 g, 127,12 mmol) em DCM (700 mL) foi adicionado ácido p-toluenossulfônico (4,84 g, 25,423 mmol) seguido por 3,4-dihidro-2H-pirano (17,43 mL, 190,68 mmol) gota a gota. A mistura de reação foi agitada à TA durante a noite, diluída com DCM e lavada com solução aquosa saturada de NaHCO; e salmoura. A camada orgânica foi seca sobre Na;SO4 anidro e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia flash (sílica gel) para obter o intermediário do título como um sólido esbranquiçado (64 g, 91% de rendimento). (m/z): [M+H]* calculado para 557,10 de C>;H2;FIN270, foi encontrado 557,30. 'H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) 5 7,56 - 7,31 (m, 7H), 7,14 (dy, J = 8,3 Hz, 1H), 7,01 (df, J = 11,8 Hz, 1H), 6,95 (dy, OT = 8,5 Hz, 1H), 5,68 (dy, J = 9,3 Hz, 1H), 5,20 (s, 2H), 4,08 - 3,99 (m, 1H), 3,77 - 3,64 (m, 1H), 2,50 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,23 - 1,97 (m, 3H), 1,81 - 1,68 (m, 3H), 1,06 (t, J = 7,4 Hz, 3H).

(e) 6- (4- (benziloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-1-(tetra- hidro-2H-piran-2-il)-3-(trimetilestanil)-lH-indazol

[00154] A uma solução de 6-(4-(benziloxi)-2-etil-5- fluorofenil)-3-iodo-1l (tetrahidro-2H-piran-2-il)-lH-indazol (20 g, 35,97 mmol) em tolueno (150 mL) foi adicionada hexametilditina (9,2 mL, 43,17 mmol). A mistura de reação foi desgaseificada com nitrogênio por 20 min. seguido pela adição de tetraquis (2,0 g, 1,80 mmol) e, em seguida, agitada a 100 ºC por 2 h, resfriada à TA, filtrada através de Celite e resíduo lavado com EtOAc. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna (sobre alumina neutra), eluída com 2-5%. EtOAc:hexano para proporcionar o composto do título (17,50 g, rendimento de 82%). (m/z): [M+H]* calculado para 595,17, 593,17 de C30oH3sEFN2O0,Sn foi encontrado 595,49, 593,55. 'H NMR (400 MHz, clorofórmio- d) 5 7,68 (dy, J = 8,0 Hz, 1H), 7,57 - 7,29 (m, 6H), 7,13 - 7,00 (m, 2H), 6,96 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,81 - 5,68 (m, 1H), 5,21 (s, 2H), 4,13 - 4,00 (m, 1H), 3,81 - 3,66 (m, 1H), 2,54 (q, JT = 7,3 Hz, 2H), 2,23 - 2,00 (my, 2H), 1,87 - 1,59 (m, 4H), 1,08 (t, J = 7,5 Hz, 3H), 0,47 (s, 9H).

Preparação 11: 5- (terc-butil) 6-metil (S)-2-iodo-3-((2- trimetilsilil)etoxi)metil)-3,4,6,7-tetra--5H-imidazo[4,5- c]piridina-5,6-dicarboxilato o o 9

P o o 9

PA N O — POA — SO H oe H oe SEM (a) Ácido (S) -4, 5,6, T-tetrahidro-3H-imidazo[4,5- c]lpiridina-6-carboxílico

[00155] A uma suspensão agitada de L-histidina (50 g, 322,24 mmol) em água (420 mL) foi adicionado conc. HCl (29 mL) gota a gota a O ºC seguido por formaldeído (55 mL, 676,72 mmol) em uma porção a O ºC. A mistura de reação resultante foi agitada por 30 minutos e, em seguida, aquecida a 75 ºC por 6 h e concentrada. O produto bruto resultante foi agitado durante 2 h com éter dietílico, filtrado e lavado com IPA:THF (100:300 mL) para fornecer o sal de HCl do intermediário do título como um sólido esbranquiçado (75 g 99% de rendimento

(bruto)). (m/z): [M+H]* calculado para 168,07 de C;HoN307 foi encontrado 168,17.

(b) (8) -4, 5,6, T-tetra-hidro-3H-imidazo[4,5-c] piridina-6-carboxilato de metil

[00156] A uma solução agitada do produto da etapa anterior (75,0 g, 312,5 mmol) em metanol (1500 mL) foi adicionado SOCl; (45,6 mL, 625 mmol) gota a gota a 0 ºC e agitado à TA por 16 h, depois aquecido até refluxo (70 ºC) por 1 h. O solvente foi removido por destilação e o produto bruto foi triturado com metanol seguido por éter dietílico para fornecer o sal de HCl em bruto do intermediário do título como um sólido esbranquiçado (80 g em bruto). 'H NMR (400 MHz, DMSO-d.;) 5 9,05 (s, 1H), 4,71 (dd, J = 9,4, 5,2 Hz, 1H), 4,36 (dy, J = 15,5 Hz, 1H), 4,30 (dy, J = 15,6 Hz, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,44 - 3,21 (m, 2H).

(c) 5- (terc-Butil) 6-metil (S)-3,4,6,7-tetrahidro-5H- imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato

[00157] A uma solução agitada do produto da etapa anterior (80,0 g, 314,96 mmol) em metanol (1000 mL) foi adicionado DIPEA (282 mL, 1574 mmol) seguido por di-terc- butil dicarbonato (172 mL, 787,48 mmol) em O ºC. A mistura de reação foi agitada à TA por 16 h e, em seguida, NH; líquido (150 mL, 25% em água) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada novamente por 16 h à TA, o metanol foi removido por destilação e o resíduo foi extraído em DCM (3 x 200 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre NazSO. anidro, concentrados e purificados por cromatografia flash (100-200 mesh gel de sílica), eluídos com 5% de MeOH: DCM para fornecer o intermediário do título (41 g, 46% de rendimento). (m/z): [M+H]* calculado para 282,14 de C13H19N304s foi encontrado 282,21. 'H NMR (400 MHz, DMSO-ds) 5 11,85 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 5,18 (dd, J = 49,3, 5,1 Hz, 1H), 4,51 (t, J = 14,2 Hz, 1H) , 4,09 (dd, J = 43,9, 16,1 Hz, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,08 (dy, J = 15,5 Hz, 1H), 2,94 (dy, J = 15,1 Hz, 1H), 1,45 (s, 9H).

(d) 5-(terc-Butil) 6-metil (S)-2-iodo-3,4,6,7-tetra- hidro-5SH-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato

[00158] A uma solução do produto da etapa anterior (41,0 g, 145,9 mmol) em THF (500 mL) foi adicionada N- iodosuccinimida (66,0 g, 291,8 mmol) a O ºC e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente por 4 h, diluída com água e extraída com acetato de etilo. A porção orgânica foi lavada com solução de tiossulfato de sódio a 10% (3 x 200 mL). A camada orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada para fornecer o composto do título 60 g (em bruto), que foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional. (m/z): [M+H]* calculado para 408,03 de C13Hi8IN30s foi encontrado 408,31. 'H NMR (400 MHz, DMSO-ds) 5 12,48 (s, 1H), 5,34 - 4,97 (m, 1H), 4,67 - 4,35 (my, 1H), 4,12 - 3,95 (my, 1H), 3,60 (s, 3H ), 3,14 - 2,82 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).

(e) 5- (terc-butil) 6-metil (S) -2-iodo-3-((2- trimetilsilil)etoxi) metil)-3,4,6,7-tetra--5H-imidazo[4,5- c]lpiridina-5,6-dicarboxilato

[00159] Para uma solução agitada de 5-(terc-butil) 6- metil (S) -2-iodo-3,4,6,7-tetrahidro-5H-imidazo[4,5- c]lpiridina-5,6-dicarboxilato (40 g, 0,098 mol) em DMF (150 mL) foi adicionado DIPEA (35,1 mL, 0,19 mol) a O ºC. A mistura de reação foi agitada durante 10 min., em seguida, cloreto de 2-(trimetilsilil)-etoximetil (19,1 mL, 0,10 mol) foi adicionado gota a gota a O ºC. A mistura de reação resultante foi agitada por 3 h a TA. Após 4 h, foi adicionada água gelada e a mistura de reação foi extraída com EtoOAc (2 x 200 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio anidro, concentrada e purificada por cromatografia em coluna flash, eluída com 20-35% de EtOAc: Hexano, para fornecer o produto do título como um líquido viscoso amarelo pálido (27 g). (m/z): [M+H]* calculado para 538,12 de Ci9H32IN30sSi foi encontrado 538,42. !'H NMR (400 MHz, DMSO-d.) 5 5,33 - 5,04 (m, 3H), 4,79 - 4,56 (my, 1H), 4,54 - 4,14 (my, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,47 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 3,31 - 3,16 (my, 1H), 2,97 (t, J = 18,9 Hz, 1H), 1,44 (s, 9H), 0,92 - 0,74 (m, 2H), -0,03 (s, 9H).

Preparação 12: Ácido (6S)-5-(terc-butoxicarbonil)-2- (6- (2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-l-(tetrahidro-2H-piran- 2-il) -lH-indazol-3-il)-3-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)- 4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico

F BnO. Ô OQ ! À sã. BnO. ; | O

ANN N o” THP' o A DO) > N o N “Boc TÁ | N SEM NN N “Boc

THP SEM

E F BnO. BnO. O O o 9 — N N oH 2 oBn “1 / N NNW ON “ ANN N “Boc ú Boc ThPp — sEM THP = SEM (a) 5-(terc-Butil) 6-metil (6S)-2-(6-(4-(benziloxi)-2- etil-5-fluorofenil)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-l1H- indazol-3-il)-3-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-3,4,6,7- tetrahidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato

[00160] Para uma solução agitada de 5-(terc-butil) 6- metil (S) -2-iodo-3- ((2-trimetilsilil)etoxi)metil)-3,4,6,7- tetra-hidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato (17,0 g, 31,65 mmol) em tolueno (500 mL) foi adicionado 6- (4- (benziloxi)-2-etil-5-fluorofenil)-1-(tetrahidro-2H- piran-2-il)-3-(trimetilestanil)-lH-indazol (20 g, 34,82 mmol). A mistura de reação foi purgada com argônio por 15 minutos, Pd (PPh3). (3,6 g, 3,16 mmol) e iodeto de cobre (1,20 g, 6,33 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi agitada a 120 ºC por 16 h. A mistura de reação foi filtrada através de Celite, o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (coluna Redisep 80 g, eluída com DCM por 10 minutos e então 15-20% de EtOAc em hexano para fornecer o intermediário do título como um sólido amarelo (15,10 g, rendimento de 58%). (m/z): [M+H]* calculado para 840,41 de CasHsgFN5O;Si foi encontrado 840,54. 'H NMR (400 MHz, clorofórmio-d) 5 8,43 (s, 1H), 7,54 - 7,33 (m, 6H), 7,20 (s, 1H), 7,05 (dy, J = 11,4 Hz, 1H), 6,95 (dy, J = 8,5 Hz, 1H), 6,09 - 5,69 (m, 3H), 5,59 - 5,36 (m, 1H), 5,20 (s, 2H), 4,97 - 4,80 (m, 1H), 4,12 - 3,90 (m, 1H) , 3,68 (s, 3H), 3,57 - 3,47 (m, 2H), 3,40 (d, 1H), 3,21 - 3,05 (m, 1H), 2,74 - 2,34 (m, 4H), 2,25 - 2,07 (m, 2H) , 1,94 - 1,65 (m, 4H), 1,54 (s, 9H), 1,12 - 0,99 (m, 3H), 0,91 - 0,75 (m, 2H), -0,12 (s, 9H).

(b) 6-Benzil 5-(terc-butil) (6S)-2-(6-(4-(benziloxi)- 2-etil-5-fluorofenil)-1-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-l1H- indazol-3-il)-3-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-3,4,6,7- tetrahidro-5H-imidazo[4,5-c]piridina-5,6-dicarboxilato

[00161] A um balão de fundo redondo foi adicionado o produto da etapa anterior (15,0 g, 17,85 mmol) em tolueno (400 mL), álcool benzílico (46,3 mL) e Ti (OEt). (7,15 mL, 35,70 mmol) e a mistura de reação foi submetida a refluxo vigoroso (140 ºC) por 48 h, diluído com água e extraído com DCM. A suspensão foi filtrada, o filtrado foi seco sobre Na2SOs, concentrado sob pressão reduzida e purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (coluna Redisep 80 g, 0-5% de EtOAc em hexanos) por 20 min para remover o excesso de álcool benzílico, em seguida eluído com 10- 15% de EtOAc em hexano) para fornecer o intermediário do título. 'H NMR consistente com a estrutura. (m/z): [M+H]* calculado para 916,44 de Cs2H.2FNsO;Si foi encontrado 916,86.

(c) Ácido (6S)-5-(terc-butoxicarbonil)-2-(6-(2-etil-5- fluoro-4-hidroxifenil)-l-(tetrahidro-2H-piran-2-il) -1H- indazol-3-il)-3-((2-(trimetilsilil)etoxi)metil)-4,5,6,7- tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico

[00162] A uma solução agitada do produto da etapa anterior (21,0 g, 22,92 mmol) em 1:1 IPA:THF (400 mL) foi adicionado Pd(OH); (5,0 g). A mistura de reação foi agitada à TA por 16 h sob um balão de hidrogênio, filtrada através de Celite, concentrada sob pressão reduzida e purificada por cromatografia em coluna de gel de sílica (coluna Redisep 80 g, eluída com 25-40% de EtOAc em hexano) para fornecer o composto do título (6,1 g, 8,29 mmol) como um sólido esbranquiçado). (m/z): [M+H]* calculado para 736,35 de C3gHs9oFN5O0;Si foi encontrado 736,5. 'H NMR consistente com a estrutura. (m/z): [M+H]* calculado para 736,35 de C3gHs9oFN5O;Si foi encontrado 736,5. 'H NMR (400 MHz, DMSO-dk;) 12,94 (s, 1H), 9,86 (s, 1H), 8,34 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,20 (dy, J = 8,7 Hz, 1H), 7,03 (df, J = 11,8 Hz, 1H), 6,93 (dy, J= 9,1 Hz, 1H), 6,11 - 5,77 (my, 3H), 5,33 - 5,06 (my, 1H), 4,87 - 4,56 (m, 1H), 4,52 - 4,14 (my, 18), 3,97 - 3,69 (m, 2H), 3,53 - 3,40 (m, 2H), 3,23 - 3,11 (mM, 1H), 3,11 - 2,93 (my, 1H), 2,47 - 2,44 (m, 2H), 2,13 - 1,96 (m, 2H), 1,68 (dy, J = 70,9 Hz, 4H), 1,48 (Ss, 9H), 1,02 (t, J=7,5 Hz, 3H), 0,86 - 0,68 (m, 2H), -0,17 (s, 9H).

Preparação 13: Ácido (S)-2-(6- (2-etil-5-fluoro-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H- imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico

F

HO O o Po nt " / À NH

HNCKO ON

[00163] Para uma solução agitada de ácido (6S)-5-(terc- butoxicarbonil)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-l- (tetrahidro-2H-piran-2-il) -lH-indazol-3-1i1l1)-3-((2- (trimetilsilil)etoxi)metil)-4,5,6,7-tetrahidro-3H- imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico (5,7 g, 7,75 mmol) em 5:1 dioxano:água (60 mL) foi adicionado HCl conc. (20 mL) gota a gota a O ºC. A mistura de reação foi aquecida e agitada a 90 ºC durante 16 h e destilada sob vácuo para fornecer o resíduo em bruto, que em sequência foi triturado com éter dietílico resfriado e acetonitrila para fornecer o sal de HCl do composto do título (3,6 g. 95% de rendimento) como um sólido castanho claro. (m/z): [M+H]* calculado para 422,16 de CooHaoFNsO3 foi encontrado 422,24. 'H NMR (400 MHz, D2O / DMSO-ds) 5 8,22 (d, J =8,4 Hz, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,19 (dy, J = 8,1 Hz, 1 H), 6,99 (dy, J=11,9 Hz, 1 H), 6,91 (d, J=9,0 Hz, 1H), 4,56 - 4,51 (my, 1H), 4,36 (dy, J = 15,5 Hz, 1H), 4,30 (dy, J = 15,5 Hz, 1H), 3,35 - 3,25 (my, 18), 3,15 - 3,05 (my, 1H), 2,4 - 2,55 (my, 2H), 0,97 (t, J=7,5 Hz, 3H).

Preparação 14: Ácido (S)-2-(6- (2-etil-5-fluoro-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro- 3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico

F

HO O o

OQ OO —N N A

[00164] A uma solução de ácido (S)-2-(6- (2-etil-5- fluoro-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro- 3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, HCl (400 mg, 0,874 mmol) e propionaldeído (0,095 mL, 1,310 mmol) em DMF (7 mL), foi adicionado cianoborohidreto de sódio (165 mg, 2,62 mmol) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Foi adicionado borohidreto de sódio (33 mg, 0,874 mmol), a solução foi concentrada e purificada por HPLC preparativa para fornecer o sal de TFA do composto do título (179 mg, 37% de rendimento). (m/z): [M+H]* calculado para 464,20 de CosHosgENs5O3z foi encontrado 464,5.

Preparação 15: Ácido (S) -2- (6- (2-etil-5-fluoro-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-isopropil-4,5,6,7- tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico

F

HO > o

A NA

[00165] A uma solução de ácido (S)-2-(6-(2-etil-5- fluoro-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro- 3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, HCl (400 mg, 0,874 mmol), acetona (0,192 mL, 2,62 mmol) e ácido acético (0,150 mL, 2,62 mmol) em DMF (7 mL) foi adicionado cianoborohidreto de sódio (274 mg, 4,37 mmol) e a mistura de reação foi agitada à TA durante a noite. Foi adicionado borohidreto de sódio (33 mg, 0,874 mmol), a solução foi concentrada e purificada por HPLC preparativa para fornecer o sal de TFA do composto do título (115 mg, 23% de rendimento). (m/z): [M+H]* calculado para 464,20 de CosHosENsO;z foi encontrado 464,5.

Preparação 16: Ácido (S) -2- (6- (2-etil-5-fluoro-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-tetrahidro- 3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico

F

HO O o —N N

[00166] A uma solução de (S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-4,5,6,7-tetrahidro-3H- imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, HCl (8) (300 mg, 0,655 mmol) e 37 % em peso de formaldeído em água (0,059 mL, 0,786 mmol) DMF (5 mL), foi adicionado cianoborohidreto de sódio (165 mg, 2,62 mmol) e a mistura de reação foi agitada à TA durante a noite. Borohidreto de sódio 25 mg, 0,655 mmol) foi adicionado, a solução foi concentrada e purificada por cromatografia flash (coluna de 100 g, 5-75% ACN/água), para fornecer o sal de TFA do composto do título (85 mg, rendimento de 24% ). (m/z): [M+H]* calculado para 436,17 de Cao3H22FN503 foi encontrado 436,45.

Exemplo 7: (S) - (2- (6- (2-etil-5-fluoro-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro- 3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-1il) (4- (2- hidroxietil)piperazina-l1-il)metanona C-1

F Ho O : O » HAN “ N mon

RL c-1

[00167] A uma solução de ácido (S)-2-(6-(2-etil-5- fluoro-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7- tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, TFA (30 mg, 0,052 mmol), 2-(piperazin-l-il)etanol, 2HCl (0,19 mL, 0,156 mmol) e DIPEA (0,027 mL, 0,156 mmol) em DMF (1,5 mL), foi adicionado HATU (29,6 mg, 0,078 mmol) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Hidrazina (5 eq) foi adicionada, a mistura de reação foi concentrada e purificada por HPLC preparativa para fornecer o sal de TFA do composto do título (15,4 mg, 37% de rendimento). (m/z): [M+H]* calculado para 576,30 de C31H3gFN703 foi encontrado 576,2.

Exemplo 8: ((S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)- lH-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-tetrahidro-3H- imidazo[4,5-c]piridina-6-il) ((1S8,4S) -5-metil-2,5- diazabiciclo- [2.2.1] heptan-2-il)metanona C-2

F HO.

O N N un os DD.

PC c-2

[00168] A uma solução de ácido (S)-2-(6-(2-etil-5- fluoro-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7-

tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, TFA (30 mg, 0,052 mmol), di-hidrobrometo de (1S, 4S)-5-metil-2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptano (42,7 mg, 0,156 mmol) e DIPEA (0,064 mL, 0,364 mmol) em DMF (1,5 mL), foi adicionado HATU (29,6 mg, 0,078 mmol) e a mistura de reação foi agitada à TA durante a noite. Hidrazina (5 eq) foi adicionada, a mistura de reação foi concentrada e purificada por HPLC preparativa para fornecer o sal de TFA do composto do título (27 mg, 66% de rendimento). (m/z): [M+H]* calculado para 558,29 de C31H36FN702 foi encontrado 558,3. 'H NMR (400 MHz, Metanol-d) 8,17 (dt, 1H), 7,59 - 7,50 (my, 1H), 7,32 (dd, 1H), 6,95 (dy, 1H), 6,90 (d, 1H), 5,03 - 4,91 (m, 2H), 4,56 — 4,34 (Mm, 2H), 4,30 - 3,88 (m, 4H), 3,76 - 3,55 (m, 1H), 3,28 - 3,10 (m, 1H), 3,10 - 2,96 (m, 4H), 2,81 - 2,62 (m, 2H), 2,53 (q, 2H), 2,47 - 2,33 (my, 1H), 2,31 - 2,14 (my, 1H), 1,79 - 1,57 (m, 2H), 1,07 (t, 3H), 0,97 (td, 3H).

Exemplo 9: ((S)-2,4-dimetilpiperazina-l1-il) ((S)-2-(6- (2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-metil- 4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-il)metanona c-3

F F A 3 “Á 9 Ú. dd

F "O 3) es (a) Terc-butil (8) -4- ((S) -2- (6- (2-etil-5-fluoro-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-tetrahidro- 3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carbonil)-3-metilpiperazina-l1- carboxilato

[00169] Ácido (S) -2- (6- (2-etil-5-fluoro-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-tetrahidro- 3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, (0,120 g, 0,276 mmol), (S)-4-n-boc-2-metilpiperazina (0,110 g, 0,551 mmol) e DIPEA (0,096 mL, 0,551 mmol) foram dissolvidos em DMF (3,0 mL), em seguida, HATU (0,157 g, 0,413 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). Hidrazina (0,043 mL, 1,378 mmol) foi adicionada para clivar os subprodutos indesejados e, em seguida, a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. A mistura de reação foi concentrada em seguida e o produto bruto foi purificado por cromatografia de fase reversa (5-70% ACN/gradiente de água, 50 g coluna C18) para fornecer o sal de TFA do composto do título (126 mg, 62% de rendimento). (m/z): [M+H] + calculado para 618,32 de C33Ha9FN704 foi encontrado 618,3.

(b) ((S8) -2- (6- (2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-lH- indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5- c]lpiridina-6-1il) ((S) -2-metilpiperazina-l-il)metanona

[00170] Terc-butil (S)-4-((S)-2-(6-(2-etil-5-fluoro-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-tetrahidro- 3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carbonil)-3-metilpiperazina-l1- carboxilato, TFA (0,126 g, 0,172 mmol) foi dissolvido em dioxano (1,5 mL) e água ( 0,3 ml), em seguida, ácido clorídrico, 4 M em dioxano (1,5 mL, 49,4 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). A mistura de reação foi congelada e liofilizada e o pó resultante foi usado diretamente na próxima reação (rendimento quantitativo foi presumido). (m/z): [M+H] + calculado para 518,26 de CogH32FN;O07, foi encontrado 518,3.

(cc) ((S) -2, 4-dimetilpiperazin-1-il) ((S)-2-(6- (2-7 etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-metil- 4,5,6,7T-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-il)metanona

[00171] ((S)-2- (6-- (2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)- lH-indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5- c]lpiridina-6-il) ((S) -2-metilpiperazin-l1-il)metanona, dicloridrato (0,102 g, 0,173 mmol) e solução de formaldeído, 37% em peso em água (0,015 mL, 0,207 mmol) foram dissolvidos em metanol (3,0 mL), em seguida, cianoborohidreto de sódio (0,054 g, 0,864 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas (o progresso da reação foi monitorado por LCMS). Borohidreto de sódio (7 mg, 0,173 mmol) foi adicionado para extinguir qualquer formaldeído remanescente. A mistura de reação foi concentrada e o produto bruto em seguida foi purificado por HPLC preparativa (5-60% ACN/gradiente de água, coluna C18) para fornecer o composto do título como o sal de TFA (59 mg, 45% de rendimento). (m/z): [M+H]+ calculado para 532,28 de CaosH34FN702 foi encontrado 532,3.

Exemplo 10: (S) - (2- (6- (2-etil-5-fluoro-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-yl)-5-isopropil-4,5,6,7- tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-il) (4-metil-1,4- diazepan-1-il)metanona C-4

F

HO O o

TN N N N— 1 / | N NO HN-N N r

H c-4

[00172] Para uma solução de ácido (9S)-2-(6-(2-etil-5- fluoro-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-isopropil- 4,5,6,7T-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, TFA (30 mg, 0,052 mmol), l-metilhomopiperazina (0,019 mL, 0,156 mmol) e DIPEA (0,036 mL, 0,208 mmol) em DMF (1 mL), foi adicionado HATU (29,6 mg, 0,078 mmol) e a mistura de reação foi agitada à TA durante 3 h. Foi adicionada hidrazina (5 eq), a mistura de reação foi agitada à TA durante 10 min., concentrada e purificada por HPLC preparativa para fornecer o sal de TFA do composto do título (26,9 mg, rendimento de 66%). (m/z): [M+H]* calculado para 560,31 de C3 H3gFN;O7, foi encontrado 560,2.

Exemplo 11: ((S) -2- (6- (2-etil-5-fluoro-4- hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-tetrahidro- 3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-1il) ((R) -4- (2-hidroxietil)-2- metil-piperazina-l-il)metanona C-5

F

HO O O o z

N NÓ 1 7 IO (ON/7oH HN-N N

H c-5

[00173] Para uma solução de ácido (9S)-2-(6-(2-etil-5- fluoro-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-metil-4,5,6,7-

tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, TFA (30 mg, 0,052 mmol), (R)-2-(3-metilpiperazina-l-il)etanol, 2 HCl (35,6 mg, 0,164 mmol) e DIPEA (0,057 mL, 0,328 mmol) em DMF (1 mL), foi adicionado HATU (31,1 mg, 0,082 mmol) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Hidrazina (8,57 pL, 0,273 mmol) foi adicionada, a mistura de reação foi concentrada e purificada por HPLC preparativa para fornecer o sal de TFA do composto do título (15,6 mg, 36% de rendimento). (m/z): [M+H]* calculado para 562,29 de C39H36FN703 foi encontrado 562,2.

Exemplo 12: ((S)-3-(dimetilamino)pirrolidin-1-il) ((S)- 5-etil-2-(6- (2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenyl)-lH-indazol-3- il) -4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6- il)metanona C-6

F HO. O o Pagto / “ N > HNN ON Tr c-6

[00174] A uma solução de ácido (S)-2-(6-(2-etil-5- fluoro-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-propil-4,5,6,7- tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, TFA (179 mg, 0,310 mmol), (S) -N,N-dimetilpirrolidin-3-amina (0,079 mL, 0,620 mmol) e DIPEA (0,162 mL, 0,930 mmol) em DMF (4 mL), foi adicionado HATU (177 mg, 0,465 mmol) e a mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Hidrazina (5 eq) foi adicionada, a mistura de reação foi concentrada e purificada por HPLC preparativa para fornecer o sal de TFA do composto do título (107 mg, 44% de rendimento). (m/z): [M+H]* calculado para 560,31 de C31H3gFN702 foi encontrado 560,2. 'H NMR (400 MHz, Metanol-d)

8.21 (d, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,26 (d, 1H), 6,94 (d, 1H), 6,90 (d, 1H), 4,83 - 4,66 (m, 1H), 4,48 - 4,25 (m, 2H), 4,23 — 4,12 (m, 1H), 4,12 - 3,93 (m, 2H), 3,93 - 3,63 (m, 3H), 3,62 - 3,48 (m, 1H), 3,26 - 3,09 (m, 1H), 2,98 (d, 6H), 2,67 - 2,57 (my, 1H), 2,53 (q, 2H), 2,44 - 2,12 (my, 1H), 1,41 (t, 3H), 1,31 (d, 3H), 1,05 (t, 38).

Exemplo 13: (S)-(3-(dimetilamino)azetidin-1-il) (2-(6- (2-etil-5-fluoro-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-1il)-5- isopropil-4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridin-6- il)metanona D-l1

F

HO OQ g

O MOO HNK ON À

H D-1

[00175] A uma solução de ácido (S)-2-(6-(2-etil-5- fluoro-4-hidroxifenil)-lH-indazol-3-il)-5-ispropil-4,5,6,7- tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridina-6-carboxílico, TFA (179 mg, 0,310 mmol), N,N-dimetilazetidin-3-amina, 2 HCl (107 mg, 0,465 mmol) e DIPEA (0,162 mL, 0,930 mmol) em DMF (4 mL), foi adicionado HATU (177 mg, 0,465 mmol) e a mistura de reação foi agitada à TA durante a noite. Hidrazina (5 eq) foi adicionada, a mistura de reação foi concentrada e purificada por HPLC preparativa para fornecer o sal de TFA do composto do título (63 mg, 26% de rendimento). (m/z): [M+H]* calculado para 546,29 de C3oH3kEN;O0, foi encontrado 546,7. 'H NMR (400 MHz, DMSO-ds;) 5 9,90 (s, 1H), 8,29 (dd, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,07 (df, 1H), 7,01 (d, 1H), 6,89 (d, 1H), 4,35 - 4,18 (m, 1H), 4,11 - 3,94 (m, 1H), 3,94 - 3,73 (m, 3H), 3,70 - 3,57 (m, 2H), 3,06 - 2,94 (m, 2H) 2,87 - 2,66 (m, 2H), 2,48 - 2,40 (m, 2H), 2,13 - 2,00 (m, 6H), 1,07 (t, 3H), 1,03 - 0,93 (m, 6H).

Ensaios biológicos

[00176] Os compostos da invenção foram caracterizados em um ou mais dos seguintes ensaios biológicos.

[00177] Ensaio 1: Ensaios bioquímicos de JAK quinase

[00178] Un painel de quatro ensaios bioquímicos LanthaScreen JAK (JAKl, 2, 3 e Tyk2) foi realizado em um tampão de reação de quinase comum (HEPES 50 mM, pH 7,5, Brij- 0,01%, MgCl>; 10 mM e EGTA 1 mM). Enzimas JAK marcadas com GST recombinantes e um substrato peptídico STAT1 marcado com GFP foram obtidos da Life Technologies.

[00179] Os compostos diluídos em série foram pré- incubados com cada uma das quatro enzimas JAK e o substrato em microplacas brancas de 384 poços (Corning) à temperatura ambiente durante 1 h. ATP foi subsequentemente adicionado para iniciar as reações de quinase em um volume total de 10 uL, com DMSO a 1%. As concentrações finais da enzima para JAKI, 2, 3 e Tyk2 são 4,2 nM, 0,1 nM, 1 nM e 0,25 nM, respectivamente; as concentrações de Km ATP correspondentes usadas são 25 uM, 3 uM, 1,6 UM e 10 UM; enquanto a concentração de substrato é 200 nM para todos os quatro ensaios. As reações de quinase foram autorizadas a prosseguir durante 1 hora à temperatura ambiente antes de uma preparação de 10 ul de EDTA (concentração final de 10 mM) e anticorpo

Tb-anti-pSTAT1 (pTyr701) (Life Technologies, concentração final de 2 nM) em tampão de diluição TR-FRET (Life Technologies) foi adicionado. As placas foram incubadas à temperatura ambiente por 1 hora antes de serem lidas no leitor EnVision (Perkin Elmer). Os sinais da taxa de emissão (520 nm/495 nm) foram registrados e utilizados para calcular os valores de inibição percentual com base em DMSO e controles de fundo.

[00180] Para a análise de dose-resposta, os dados de inibição percentual foram representados graficamente em relação às concentrações do composto e os valores de ICs,º foram determinados a partir de um modelo de ajuste robusto de 4 parâmetros com o software Prism (GraphPad Software). Os resultados foram expressos como pICso (logaritmo negativo de ICso) e subsequentemente convertidos em pKi (logaritmo negativo da constante de dissociação, Ki) usando a equação de Cheng-Prusoff.

[00181] Os compostos de teste com um valor de K; inferior ou valor de pK; superior em cada um dos quatro ensaios de JAK mostram maior inibição da atividade de JAK.

Ensaio 2: Inibição de pSTAT5 estimulado por IL-2 em células T Tall-1

[00182] A potência dos compostos de teste para a inibição da fosforilação de STATS estimulada por interleucina-2 (IL-2) foi medida na linha de células T humanas Tall-l1 (DSMZ) usando AlphaLisa. Como a IL-2 sinaliza por meio da JAK1I/3, este ensaio fornece uma medida de potência celular de JAK1/3.

[00183] O STATS fosforilado foi medido através do kit AlphaLISA SureFire Ultra pSTATS (Tyr694/699) (PerkinElmer).

[00184] Células T humanas da linha de células Tall-1l foram cultivadas em 37 ºC, em incubadora umidificada com 5% de CO, em RPMI (Life Technologies) suplementado com 15% de soro fetal bovino inativado por calor (FBS, Life Technologies), 2mM de Glutamax (Life Technologies), HEPES 25 mM (Life Technologies) e 1X Pen/Strep (Life Technologies). Os compostos foram diluídos em série em DMSO e dispensados acusticamente em poços vazios. Meio de ensaio (DMEM sem vermelho de fenol (Life Technologies) suplementado com 10% de FBS (ATCC)) foi dispensado (4 uL/poço) e as placas agitadas a 900 rpm por 10 minutos. As células foram semeadas a 45.000 células/poço em meio de ensaio (4 unL/poço) e incubadas a 37 ºC, 5% de CO, por 1 hora, seguido pela adição de IL-2 (R&D Systems; concentração final 300 ng/ml) em meio de ensaio pré-aquecido (4 ul) por 30 minutos. Após a estimulação com citocinas, as células foram lisadas com 6 ul de tampão de lise 3x AlphaLisa (PerkinElmer) contendo 1x PhosStop e comprimidos Complete (Roche). O lisado foi agitado a 900 rpm durante 10 minutos à temperatura ambiente (TA). STATS fosforilado foi medido através do kit pSTAT5 AlphaLisa kit (PerkinElmer). A mistura de pérolas aceptoras recém- preparadas foi distribuída no lisado (5 pl) sob luz verde filtrada <100 lux. As placas foram agitadas a 900 rpm durante 2 minutos, giradas levemente e incubadas durante 2 horas a TA no escuro. As pérolas doadoras foram distribuídas (5 ul) sob luz verde filtrada <100 lux. As placas foram agitadas a 900 rpm durante 2 minutos, giradas levemente e incubadas durante a noite a TA no escuro. A luminescência foi medida com excitação a 689 nm e emissão a 570 nm usando um leitor de placas EnVision (PerkinElmer) sob luz verde filtrada <100 lux.

[00185] Para determinar a potência inibitória dos compostos de teste em resposta a IL-2, foi medida a intensidade de emissão mediana das células ligadas a pSTAT5 em uma linhagem celular T humana. Os valores de ICs, foram determinados a partir da análise das curvas de inibição da intensidade do sinal versus concentração do composto. Os dados foram expressos em pICso (logaritmo decádico negativo ICso) valores (médiatdesvio padrão).

Resultados do ensaio in vitro Tabela 1 J J Ta Número do | AKI AK2 J T |11-1 exemplo P P |AK3 pKi |yk2 pK: pI K: K: Cc50 ces 1 0,2 0,3 ro 8 Res c-1 0,2 0,5 17 1 7 Coe 0,3 0,2 ,º 4 see: c-2 0,3 0,8 15 6 cobEs 3 0,2 0,4 0,2 3 8 so eta LL c-3 0,2 0,5 17 3 7 eos 0,1 0,4 0,1 o 6 o eta LL CL c-4 0,0 0,6 3 7 cos 0,3 0,5 0,1 12 8 so ce LL c-5 0,1 0,7 15 6 codes 0,2 0,4 0,0 o 7 so tech CL c-6 0,2 0,7 3 6 Ensaio 3: Modelo murino (camundongo) de indução de pPSTAT6 induzida por IL-13 no tecido pulmonar

[00186] A IL-13 é uma importante citocina subjacente à fisiopatologia da asma (Kudlacz et al. Eur. JJ. Pharmacol, 2008, 582,154-161). A IL-13 se liga a receptores de superfície celular ativando membros da família Janus de quinases (JAK) , que então fosforilam STAT6 e, subsequentemente, ativa outras vias de transcrição. No modelo descrito, uma dose de IL-13 foi administrada localmente nos pulmões de camundongos para induzir a fosforilação de STAT6 (pSTAT6), que é então medida como o ponto final.

[00187] Foram usados camundongos Balb/c adultos da Harlan no ensaio. No dia do estudo, os animais foram ligeiramente anestesiados com isoflurano e administrados com veículo ou composto de teste (1 mg/mL, volume total de 50 uL em várias respirações) por meio de aspiração oral.

Os animais foram colocados em decúbito lateral após a dose e monitorados para recuperação total da anestesia antes de serem devolvidos à sua gaiola.

Quatro horas depois, os animais foram novamente anestesiados brevemente e desafiados com veículo ou IL-13 (0,03 ug de dose total administrada, 50 pL de volume total) por meio de aspiração oral antes de serem monitorados para recuperação da anestesia e retornados à sua gaiola.

Uma hora após a administração de veículo ou IL-13, o sangue total e os pulmões foram coletados para detecção de pSTAT6 em homogenatos de pulmão usando um kit de ensaio Perkin Elmer AlphaLISAO SureFireo Ultra "” HV p-STAT6 (Tyr641) e para análise de concentração total de droga em ambos pulmão e plasma.

As amostras de sangue foram centrifugadas (centrífuga Eppendorf, 5804R) por 4 minutos a aproximadamente 12.000 RPM a 4 ºC para coletar o plasma.

Os pulmões foram enxaguados em DPBS (solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco), secos com enchimento, congelados rapidamente, pesados e homogeneizados a uma diluição de 1:3 em ácido fórmico a 0,1% em água para HPLC.

Os níveis plasmáticos e pulmonares do composto de teste foram determinados por análise LC-MS contra padrões analíticos construídos em uma curva padrão na matriz de teste.

Uma proporção de pulmão para plasma foi determinada como a proporção da concentração de pulmão em ng9g/g para a concentração de plasma em ng/ml em 5 horas.

[00188] A atividade no modelo é evidenciada por uma diminuição no nível de pSTAT6 presente nos pulmões dos animais tratados em 5 horas em comparação com os animais de controle desafiados com IL-13 tratados com veículo.

A diferença entre os animais de controle que foram tratados com veículo, desafiados com IL-13, e os animais de controle que foram tratados com veículo, desafiados com veículo, ditou o efeito inibidor de 0% e 100%, respectivamente, em qualquer experimento.

Os compostos testados no ensaio exibiram inibição da fosforilação de STAT6 5 horas após o desafio com IL-13 como documentado abaixo.

Tabela 2: Inibição de pSTAT6 e exposição de plasma/pulmão observada Concen Concen Prop tração tração orção de Inib Comp | pulmonar plasmática pulmão ição de osto (ng/g) em 5| (ng/ml) em 5 |para pSTAT6 em horas horas plasma em|5 horas horas 13000+ 10,3+3 1 1262 67 5720 2º 23450t+ 17,5+2 2 1340 72 12528 5 6330+1 3 15,4+7 411 76 131 17350+ 22,0+2 788 67 6625 3 5445+1 13,0+3 418 73 862 17

Concen Concen Prop tração tração orção de Inib Comp | pulmonar plasmática pulmão ição de osto (ng/g) em 5| (ng/ml) em 5 |para pSTAT6 em horas horas plasma em|5 horas horas ESPN: 1026 37 4682 17

[00189] A observação de concentração significativa em compostos testados no pulmão de camundongo confirmou que a inibição observada da indução de pSTAT6 induzida por IL-13 foi um resultado da atividade do composto de teste. A proporção de pulmão para plasma em 5 horas mostrou que os compostos 1 a 6 exibiram significativamente mais exposição no pulmão do que a exposição no plasma em camundongos. Ensaio 4: Inibição da liberação de TARC evocada por TSLP em células mononucleares do sangue periférico humano

[00190] A linfopoietina estromal tímica (TSLP) e o timo e a quimiocina regulada por ativação (TARC) são superexpressos nas vias aéreas asmáticas e se correlacionam com a gravidade da doença. Nos pulmões, a TSLP pode ser liberada pelas células epiteliais brônquicas em resposta a alérgenos e infecções virais. A TSLP sinaliza através de um heterodímero IL-7R a/TSLPR encontrado em uma ampla gama de tecidos e tipos de células, incluindo células epiteliais, células endoteliais, neutrófilos, macrófagos e mastócitos. A ligação de TSLP ao seu receptor induz uma mudança conformacional que ativa JAKl e JAK2 para fosforilar vários fatores de transcrição, incluindo STAT3 e STATS. Em células imunes, isso desencadeia uma cascata de eventos intracelulares que resultam em proliferação celular, anti- apoptose, migração de células dendríticas e produção de citocinas Th2 e quimiocinas. Nas células mononucleares do sangue periférico (PBMC), a TSLP tem um efeito pró- inflamatório ao ativar as células dendríticas mieloides para atrair e estimular as células T, um processo mediado pelo TARC quimioatraente.

[00191] Neste ensaio, foi demonstrado que a estimulação de TSLP induz a liberação de TARC de PBMCs e que esta resposta é atenuada de uma maneira dependente da dose após o tratamento com o composto. As potências dos compostos de teste foram medidas para a inibição da liberação de TARC.

[00192] Alíquotas de PBMC (previamente isoladas de sangue total e congeladas em alíquotas a -80 ºC) de 3 a 5 doadores foram descongeladas a 37 “C e adicionadas gota a gota a 40 mL de meio RPMI completo pré-aquecido, filtrado estéril e em tubos Falcon de 50 mL. As células foram sedimentadas e novamente suspensas em meio completo a 2,24x10º células/mL. As células foram semeadas a 85 [OL (190.000 células) por poço em uma microplaca de fundo plano de 96 poços tratada com cultura de tecidos. As células descansaram durante 1 hora a 37 ºC com 5% de CO,;.

[00193] Os compostos foram recebidos como soluções estoque 10 mM em DMSO. Diluições em série de 3,7 vezes foram realizadas para gerar 9 concentrações de composto de teste em DMSO a 300X a concentração de teste do ensaio final. Diluições intermediárias de 150 vezes foram realizadas em meio completo para gerar composto a 2X a concentração de teste do ensaio final com DMSO a 0,2%. Após o período de descanso de 1 hora, 95 []L de 2X composto foram adicionados a cada poço de PBMC, para uma faixa de concentração de ensaio final de 33,33 [M a 0,95 [M. 95 []L de 0,2% de DMSO em meio completo foram adicionados aos poços de controle não tratados. As células foram pré-tratadas com o composto durante 1 hora a 37 ºC com 5% de CO, antes da estimulação.

[00194] A proteína TSLP humana recombinante foi reconstituída a 10 (lg/mL em DPBS estéril com BSA a 0,1% e armazenada em alíquotas a -20 ºC. Imediatamente antes do uso, uma alíquota foi descongelada e preparada a 20X a concentração final do ensaio em meio completo. 10 []L de 20X TSLP foram adicionados a cada poço de PBMC, para uma concentração de ensaio final de 10 ng/ml. 10 (]L de meio completo foram adicionados a poços de controle não estimulados. As células foram estimuladas na presença do composto durante 48 horas a 37 ºC com 5% de CO,;.

[00195] Após a estimulação, os sobrenadantes da cultura celular foram colhidos e os níveis de TARC foram detectados por ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA), usando o kit Human CCL17/TARC Quantikine ELISA (R&D Systems tDDNO0O0) de acordo com as instruções do fabricante.

[00196] Para a análise de resposta à dose, o log [composto de teste (M)] foi traçado versus os valores de resposta percentual para cada doador e os valores de ICs, foram determinados usando uma análise de regressão não linear com GraphPad Prism Software usando o algoritmo sigmoidal de resposta à dose de 4 parâmetros com inclinação variável. Os dados são expressos como valores médios de pICso (logaritmo decádico ICso negativo) calculados a partir dos valores de pICso de doadores individuais e arredondados para uma casa decimal. Os valores de potência para inibição por compostos originais e seus análogos des-fluoro modificados estão resumidos na Tabela 3.

Tabela 3: Valores de potência de compostos de teste para inibição da liberação de TARC evocada por TSLP em células mononucleares do sangue periférico humano a Rea Ls ses os = Resr | Ensaio 5: Metabolismo pulmonar S9

[00197] A estabilidade metabólica in vitro dos compostos 1-6 e C-1 a C-6 foi avaliada na fração S9 do pulmão humano (composto 1 UM; proteína S9 1 mg/mL). As amostras de tempo 0, 15, 30 e 60 minutos foram analisadas quanto ao composto original por LC-MS/MS de alta resolução.

As frações de pulmão S9 de humanos (lote 1410245) foram adquiridas na XenoTech LLC (Lenexa, KS). NADPH (Sigma Aldrich, N1630) e 3-fosfoadenosina S5-fosfosulfato (PAPS) (Sigma Aldrich, Al651) foram adquiridos da Sigma Aldrich (St.

Louis, MO). A acetonitrila e a água foram obtidas na VWR (Radnor, PA) e eram de grau HPLC ou superior.

O raloxifeno e o ácido fórmico foram adquiridos da Sigma Aldrich (St.

Louis, MO). As incubações Lung S9 foram realizadas em banho-maria a 37 “C em uma placa de polipropileno de 96 poços.

As soluções Lung S9 consistiam em fosfato de potássio 100 mM tamponado a pH 7,4 (BD Biosciences, Woburn, MA) suplementado com NADPH 1 mM (Sigma-Aldrich, St.

Louis, MO), cloreto de magnésio 3 mM (Sigma Aldrich, M1028) e na presença de cofator 100 ÀuM PAPS (Sigma-Aldrich, St.

Louis, MO), com concentrações finais de proteína de incubação de 1 mg/mL.

Estoques de DMSO 10 mM de raloxifeno (n=1) e composto (n=1) foram diluídos em tampão e adicionados às incubações para produzir concentrações de substrato de 1 puM (0,001% DMSO v/v). Os volumes de incubação consistiram em 400 1uL e os pontos de tempo foram medidos a 0, 15, 30 e 60 minutos pela remoção de uma alíquota de 70 uL e diluição em 140 pl de acetonitrilo (ácido fórmico 0%). Todas as amostras foram centrifugadas a 2.250 g durante 10 minutos a 5 ºC.

O sobrenadante (50 ul) foi retirado das amostras centrifugadas e diluído em 100 1yL de água para HPLC contendo padrão interno.

As amostras foram executadas em um amostrador Dionex Ultimate 3000 Auto e analisadas usando um espectrômetro de massa de alta resolução Thermo Q-Exactive (Thermo, Waltham, MA) no modo Full Scan em kit com uma coluna

Atlantis T3 3pM - 2,1 x 50 mm (Waters Inc., 186003717). A fase móvel A consistia em água + 0,2% de ácido fórmico e a fase móvel B consistia em acetonitrila + 0,2% de ácido fórmico. A integração de pico foi realizada usando o software Gubbs GMSU (Gubbs Inc., Alpharetta, GA). Para cada amostra, as razões da área do pico foram calculadas dividindo a área do pico do analito pela área do pico do padrão interno. Para cada incubação, as razões de área de pico dos analitos em cada t0 foram definidas para 100%, e as razões de áreas de pico das amostras de 60 minutos foram convertidas em porcentagens restantes em relação ao t0O correspondente. A determinação da formação do metabólito de sulfato foi feita qualitativamente pela observação do pico de eluição precoce no canal de íon parental que, com base em dados internos históricos, correspondia ao metabólito O-sulfato de cada composto parental. Os resultados do ensaio estão resumidos na tabela 4 (n=2 réplicas).

Tabela 4: Estabilidade metabólica na fração S9 do pulmão humano Les TT faatea LE Compost Aparênci o o restante em o a do sulfato (VL/min./mg) 60 min. (%)

EN so a o | sm | a a Ds | sm | es ssa a sm | os dao = sm | es | ar sm | os da Bo sm |

[00198] Quando comparados aos seus análogos de flúor correspondentes (compostos C-1l a C-6), os compostos 1 a 6 dão origem a um metabolismo de sulfatação significativamente menor na fração S9 do pulmão.

Ensaio 6: Farmacocinética em plasma e pulmão em camundongos

[00199] As concentrações plasmáticas e pulmonares dos compostos de teste e suas proporções foram determinadas da seguinte maneira. Camundongos BALB/c de Charles River Laboratories foram usados no ensaio. Os compostos de teste foram formulados individualmente em 20% de propilenoglicol em tampão de citrato de pH 4 a uma concentração de 0,2 mg/mL e 50 ul da solução de dosagem foram introduzidos na traqueia de um camundongo por aspiração oral. Em vários pontos de tempo (normalmente 0,167, 2, 6, 24 horas) após a dosagem, as amostras de sangue foram removidas por punção cardíaca e os pulmões intactos foram excisados dos camundongos. As amostras de sangue foram centrifugadas (centrífuga Eppendorf, 5804R) por 4 minutos a aproximadamente 12.000 RPM a 4 ºC para coletar o plasma. Os pulmões foram secos, pesados e homogeneizados na diluição de 1:3 em água estéril. As concentrações plasmáticas e pulmonares do composto de teste foram determinadas por análise LC-MS contra padrões analíticos construídos em uma curva padrão na matriz de teste. Uma razão de pulmão para plasma foi determinada como a razão da AUC do pulmão em pg hr/g para a AUC do plasma em ug hr/mL, onde AUC é convencionalmente definida como a área sob a curva da concentração do composto de teste vs. tempo.

Tabela 5: Exposição ao plasma e ao tecido pulmonar após uma única administração por aspiração oral de compostos de teste Plasma Tecido Tecido AUC (0-24) pulmonar pulmonar: Composto (pg AUC (09-24) relação AUC h/mL) (vg h/g) |do plasma

CPF EA a [ss [as | Ensaio 7: Ensaio de sobrevivência de eosinófilos mediado por IL-5

[00200] À potência dos compostos de teste para a sobrevivência de eosinófilos mediada por IL-5 pode ser medida em eosinófilos humanos isolados de sangue total humano (AllCells). Como a IL-5 sinaliza por meio da JAK, este ensaio fornece uma medida de potência celular de JAK.

[00201] Os eosinófilos humanos são isolados de sangue total humano fresco (AllCells) de dadores saudáveis. O sangue é misturado com 4,5% de Dextran (Sigma-Aldrich) em uma solução de cloreto de sódio 0,9% (Sigma-Aldrich). Os glóbulos vermelhos são deixados para sedimentar por 35 minutos. A camada superior rica em leucócitos é removida e colocada sobre Ficoll-Paque (GE Healthcare) e centrifugada a 600 g por 30 minutos. O plasma e as camadas de células mononucleares são removidos antes que a camada de granulócitos seja lisada com água para remover quaisquer glóbulos vermelhos contaminantes. Os eosinófilos são posteriormente purificados usando um kit de isolamento de eosinófilos humanos (Miltenyi Biotec). Uma fração dos eosinófilos purificados é incubada com anti-CDl6 FITC (Miltenyi Biotec) por 10 minutos a 4 ºC no escuro. À pureza é analisada usando um citômetro de fluxo LSRII (BD Biosciences).

[00202] As células são cultivadas em 37 “ºC, em incubadora umidificada com 5% de CO, em RPMI 1640 (Life Technologies) suplementado com 10% de soro fetal bovino inativado por calor (FBS, Life Technologies), 2mM de Glutamax (Life Technologies), 25mM HEPES (Life Technologies) e 1X Pen/Strep (Life Technologies). As células são semeadas a

10.000 células/poço em meio (50 uL). A placa é centrifugada a 300g durante 5 minutos e os sobrenadantes removidos. Os compostos são diluídos em série em DMSO e então diluídos mais 500 vezes para uma concentração de ensaio final 2x no meio. Os compostos de teste (50 nuL/poço) são adicionados às células e incubados a 37 ºC, 5% de CO, durante 1 hora, seguido pela adição de IL-5 (R&D Systems; concentrações finais de 1 ng/mL e 10 pg/mL) em meio de ensaio pré-aquecido (50 uL) por 72 horas.

[00203] Após a estimulação com citocinas, as células são centrifugadas a 300 g durante 5 min. e lavadas duas vezes com DPBS frio (Life Technologies). Para acessar a viabilidade e apoptose, as células são incubadas com iodeto de propídio (Thermo Fisher Scientific) e APC Anexina V (BD Biosciences) e analisadas usando um citômetro de fluxo LSRII (BD Biosciences). Os valores de ICs, foram determinados a partir da análise das curvas de viabilidade da viabilidade celular de porcentagem versus concentração do composto. Os dados foram expressos como valores pICso (logaritmo decádico negativo ICso9).

Ensaio 8: Inibição de quimiocinas CXCL9 e CXCL10 induzidas por IFNy e IL-27 em culturas de vias respiratórias 3D humanas

[00204] As culturas de tecidos EpiAirway podem ser obtidas na Mattek (AIR-100). As culturas são derivadas de doadores asmáticos. Em uma inserção de cultura de células, células epiteliais traqueais/brônquicas derivadas de humanos são cultivadas e diferenciadas em um suporte de membrana porosa, permitindo uma interface ar-líquido com meio de cultura aquecido abaixo das células e uma atmosfera de teste gasosa acima. Os tecidos são cultivados em meio de manutenção (Mattek, AIR-100-MM) em 37 ºC, em incubadora umidificada com 5% de CO2. Quatro doadores podem ser testados. No Dia 0, as culturas de tecidos são tratadas com compostos de teste a 10 uM, 1 uM e/ou 0,l pM. Os compostos são diluídos em dimetilsulfóxido (DMSO, Sigma) para uma concentração final de 0,1%. É possível usar DMSO a 0,1% como um controle de veículo. Os compostos de teste são incubados com culturas por 1 hora a 37 ºC, 5% de CO», seguido pela adição de meio pré-aquecido contendo IFNy (R&D Systems) ou IL-27 (R&D Systems) em uma concentração final de 100ng/mL. As culturas de tecidos são mantidas por 8 dias. O meio é substituído a cada 2 dias por meio fresco contendo compostos e IFNy ou IL-

27. No Dia 8, culturas de tecidos e sobrenadantes são coletados para análise. As amostras de sobrenadante são testadas para CXCL10 (IP-10) e CXCL9 (MIG) usando análise luminex (EMD Millipore). Os dados são expressos como % de inibição +/- desvio padrão (t+ STDV). A inibição percentual é determinada pela potência inibidora do composto contra a secreção de CXCL10 ou CXCL9 induzida por IFNy ou IL-27 em comparação com células tratadas com veículo. Os dados são a média de 3 ou 4 doadores.

Ensaio 9: Ensaio de potência celular de JAK : inibição de IFNy estimulado por IL-2/anti-CD3 em PBMCs humanos

[00205] A potência dos compostos de teste para a inibição de interleucina-2 (Il1-2)/gama interferon estimulado por anti-CD3 (IFNy) pode ser medida em células mononucleares de sangue periférico humano (PBMCs) isoladas de sangue total humano (Stanford Blood Center). Como a IL-2 sinaliza por meio da JAK, este ensaio fornece uma medida de potência celular de JAK.

(1) Células mononucleares de sangue periférico humano (PBMC) são isoladas de sangue total humano de dadores saudáveis usando um gradiente de Ficoll. As células são cultivadas em 37 ºC, em incubadora umidificada com 5% de CO, em RPMI (Life Technologies) suplementado com 10% de soro fetal bovino inativado por calor (FBS, Life Technologies), 2 mM de Glutamax (Life Technologies), 25 mM HEPES (Life Technologies) e 1X Pen / Strep (Life Technologies). As células são semeadas a 200.000 células/poço em meio (50 uL)

e cultivadas por 1 h. Os compostos são diluídos em série em DMSO e depois diluídos mais 500 vezes (para uma concentração de ensaio final 2x) no meio. Os compostos de teste (100 uL/poço) são adicionados às células e incubados a 37 ºC, 5% de CO, por 1 h, seguido pela adição de IL-2 (R&D Systems; concentração final de 100 ng/mL) e anti-CD3 (BD Biosciences; concentração final 1 pg/ml) em meio de ensaio pré-aquecido (50 uL) por 24 h.

(2) Após estimulação com citocinas, as células são centrifugadas a 500 g por 5 min. e os sobrenadantes removidos e congelados a -80 ºC. Para determinar a potência inibidora do composto de teste em resposta a IL-2/anti-CD3, as concentrações de IFNy no sobrenadante são medidas via ELISA (R&D Systems). Os valores de ICso foram determinados a partir da análise das curvas de concentração de IFNy versus concentração do composto. Os dados foram expressos como valores pICso (logaritmo decádico negativo ICso).

Ensaio 10: Ensaio de potência celular de JAK : inibição de pSTAT5 estimulado por IL-2 em células T CD4+

[00206] A potência dos compostos de teste para a inibição da fosforilação de STATS estimulada por interleucina-2 (IL-2)/anti-CD3 pode ser medida em células T CD4-positivas (CD4+) em células mononucleares de sangue periférico humano (PBMCs) isoladas de sangue total humano (Stanford Blood Center) usando citometria de fluxo. Como a IL-2 sinaliza por meio da JAK, este ensaio fornece uma medida de potência celular de JAK.

[00207] As células T CD4+ são identificadas usando um anticorpo anti-CD4 conjugado com ficoeritrobilina (PE)

(clone RPA-T4, BD Biosciences), enquanto um anticorpo anti- pSTAT5S conjugado com Alexa Fluor 647 (pY694, clone 47, BD Biosciences) é usado para detectar STATS fosforilação.

(1) O protocolo do Ensaio 9 parágrafo (1) é seguido, com a exceção de que a estimulação de citocina com anti-CD3 é realizada por 30 min. em vez de 24 h.

(2) Após a estimulação de citocinas, as células são fixadas com solução de correção pré-aquecida (200 pL; BD Biosciences) por 10 min. a 37 ºC, 5% de CO,, lavadas duas vezes com tampão DPBS (1 mL, Life Technologies) e novamente suspensas em tampão de Perm III gelado (1000 pnL, BD Biosciences) durante 30 min. a 4 ºC. As células são lavadas duas vezes com FBS a 2% em DPBS (tampão FACS) e, em seguida, novamente suspensas em tampão FACS (100 1uL) contendo PE anti- CD4 (diluição 1:50) e anti-CD3 anti-CD3Alexa Fluor 647 (diluição 1:5) por 60 min. em temperatura ambiente no escuro. Após a incubação, as células são lavadas duas vezes em tampão FACS antes de serem analisadas usando um citômetro de fluxo LSRII (BD Biosciences). Para determinar a potência inibitória dos compostos de teste em resposta a IL-2/anti- CD3, foi medida a intensidade fluorescente mediana (MFI, em inglês) de pSTATS em células CD4+ T. Os valores de ICs, são determinados a partir da análise das curvas de inibição de MFI versus concentração do composto. Os dados foram expressos como valores pICso (logaritmo decádico negativo ICso).

Ensaio 11: Ensaio de potência celular de JAK : inibição de pSTAT6 estimulado por IL-4 em células T CD3+

[00208] A potência dos compostos de teste para a inibição da fosforilação de STAT6 estimulada por interleucina-4 (IL-4) pode ser medida em células T CD3- positivas (CD3+) em células mononucleares de sangue periférico humano (PBMCs) isoladas de sangue total humano (Stanford Blood Center) usando citometria de fluxo. Como a IL-4 sinaliza por meio da JAK, este ensaio fornece uma medida de potência celular de JAK.

[00209] As células T CD3+ são identificadas usando um anticorpo anti-CD3 conjugado com ficoeritrobilina (PE) (clone UCHT1, BD Biosciences), enquanto um anticorpo anti- pSTAT6 conjugado com Alexa Fluor 647 (pY641, clone 18/P, BD Biosciences) é usado para detectar fosforilação de STAT6.

[00210] Células mononucleares de sangue periférico humano (PBMC) são isoladas de sangue total humano de doadores saudáveis como nos Ensaios 9 e 10. As células são semeadas a 250.000 células/poço em meio (200 uL), cultivadas por 1 h e, em seguida, novamente suspensas em meio de ensaio (50 uL) (RPMI suplementado com albumina de soro bovino 0,1% (Sigma), Glutamax 2mM, HEPES 25mM e Penstrep 1X) contendo várias concentrações de compostos de teste. Os compostos são diluídos em série em DMSO e então diluídos mais 500 vezes para uma concentração de ensaio final 2x no meio do ensaio. Os compostos de teste (50 1uL) são incubados com células a 37 ºC, 5% de CO, por 1 h, seguido pela adição de IL-4 (50 uL) (RED Systems; concentração final de 20 ng/ml) em meio para ensaio pré-aquecido por 30 min. Após a estimulação de citocinas, as células são fixadas com solução de correção pré-aquecida (100 pL; BD Biosciences) por 10 min. a 37 “ºC, 5% de CO,, lavadas duas vezes com tampão DPBS (1 mL, Life Technologies) e novamente suspensas em tampão de Perm III gelado (1000 pL, BD Biosciences) durante 30 min. a 4 ºC. As células são lavadas duas vezes com FBS a 2% em DPBS (tampão FACS) e, em seguida, novamente suspensas em tampão FACS (100 nuL) contendo PE anti-CD3 (diluição 1:50) e anti-pSTAT6 Alexa Fluor 647 (diluição 1:5) por 60 min. em temperatura ambiente no escuro. Após a incubação, as células são lavadas duas vezes em tampão FACS antes de serem analisadas usando um citômetro de fluxo LSRII (BD Biosciences).

[00211] Para determinar a potência inibitória dos compostos de teste em resposta a IL-4, foi medida a intensidade fluorescente mediana (MFI, em inglês) de pSTAT6 em células CD3+ T. Os valores de ICs, são determinados a partir da análise das curvas de inibição de MFI versus concentração do composto. Os dados foram expressos em pICso (logaritmo decádico negativo ICso).

Ensaio 12: Ensaio de potência celular de JAK : inibição de pSTAT3 estimulado por IL-6 em células T CD3+

[00212] Um protocolo análogo ao do Ensaio 11 pode ser usado para determinar a potência do composto de teste para a inibição da fosforilação de STAT3 estimulada por interleucina-6 (IL-6). Um anticorpo anti-pSTAT3 conjugado com Alexa Fluor 647 (pY705, clone 4/P, BD Biosciences) é usado para detectar a fosforilação de STAT3.

Ensaio 13: Modelo murino de inflamação eosinofílica induzida por Alternaria alternata do pulmão

[00213] A eosinofilia das vias respiratórias é uma marca registrada da asma humana. Alternaria alternata é um aeroalérgeno fúngico que pode exacerbar a asma em humanos e induz inflamação eosinofílica nos pulmões de camundongos

(Havaux et al. Clin Exp Immunol. 2005 fev.;139(2):179-88). Em camundongos, foi demonstrado que a alternaria ativa indiretamente células linfoides inatas do tipo 2 residentes no tecido no pulmão, que respondem (por exemplo, IL-2 e IL- 7) e liberam citocinas dependentes de JAK (por exemplo, IL- e IL-13) e coordenam a inflamação eosinofílica (Bartemes et al. J Immunol. 2012 1º de fev;188(3):1503-13).

[00214] É possível usar camundongos C57 machos de sete a nove semanas de idade da Taconic no estudo. No dia do estudo, os animais foram ligeiramente anestesiados com isoflurano e administrados com veículo ou composto de teste (0,03- 1,0 mg/mL, volume total de 50 []L em várias respirações) por meio de aspiração orofaríngica. Os animais são colocados em decúbito lateral após a dose e monitorados para recuperação total da anestesia antes de serem devolvidos à sua gaiola. Uma hora depois, os animais são novamente anestesiados brevemente e desafiados com veículo ou extrato de alternária (200 ug de extrato total entregue, 50 [L de volume total) por meio de aspiração orofaríngea antes de serem monitorados para recuperação da anestesia e retornados à sua gaiola. Quarenta e oito horas após a administração de alternaria, o fluido de lavagem broncoalveolar (BALF) é coletado e os eosinófilos são contados no BALF usando o Advia 120 Hematology System (Siemens). A atividade no modelo é evidenciada por uma diminuição no nível de eosinófilos presentes no BALF dos animais tratados em quarenta e oito horas em comparação com os animais de controle desafiados com alternaria tratados com veículo. Os dados são expressos como a inibição percentual da resposta de eosinófilos BALF tratada com veículo e desafiada por alternaria. Para calcular a inibição percentual, o número de eosinófilos BALF para cada condição é convertido em percentagem do veículo médio tratado, eosinófilos BALF desafiados com alternaria e subtraído de cem por cento.

Ensaio 14: Ensaio de potência celular de JAK : inibição de pSTAT1 induzido por IFNy

[00215] A potência dos compostos de teste para a inibição da fosforilação de STAT1I estimulada por gama interferon (IFNy) foi medida em monócitos CDl4-positivos (CD14+) derivados de sangue total humano (Stanford Blood Center) usando citometria de fluxo. Como IFNy sinaliza por meio da JAK, este ensaio oferece uma medida de potência celular de JAK.

[00216] Os monócitos foram identificados usando um anticorpo anti-CDl4 conjugado com isotiocianato de fluoresceína (FITC) (clone RMO52, Beckman Coulter) e um anticorpo anti-pSTATl conjugado com Alexa Fluor 647 (pY701, clone 4a, BD Biosciences) para detectar a fosforilação de STAT1.

[00217] Células mononucleares de sangue periférico humano (PBMC) são isoladas de sangue total humano de dadores saudáveis usando um gradiente de Ficoll. As células são cultivadas em 37 ºC, em incubadora umidificada com 5% de CO, em RPMI (Life Technologies) suplementado com 10% de soro fetal bovino inativado por calor (FBS, Life Technologies), 2 mM de Glutamax (Life Technologies), 25 mM HEPES (Life Technologies) e 1X Pen/Strep (Life Technologies). As células foram semeadas a 250.000 células/poço em meio (200 uL),

cultivadas por 2 h e novamente suspensas em meio de ensaio (50 1L) (RPMI suplementado com 0,1% de albumina de soro bovino (Sigma), Glutamax 2 mM, HEPES 25 mM e 1X Penstrep) contendo várias concentrações do composto de teste. O composto foi diluído em série em DMSO e depois diluído mais

1.000 vezes em meio para trazer a concentração final de DMSO para 0,1%. As diluições do composto do teste foram incubadas com as células a 37 ºC, 5% de CO, durante 1 h, seguida pela adição de IFNy pré-aquecido (R&D Systems) nos meios (50 ul) a uma concentração final de 0,6 ng/ml durante 30 minutos. Após a estimulação com citocinas, as células foram fixadas com solução de fixação pré-aquecida (100 nl) (BD Biosciences por 10 minutos a 37 ºC, 5% de CO,, lavadas duas vezes com tampão FACS (1 ml) (1% de BSA em PBS), novamente suspensas em 1:10 de FITC anti-CDl4:tampão FACS (100 nl), e incubadas a 4 ºC durante 15 min. As células foram lavadas uma vez e, em seguida, novamente suspensas em tampão Perm III gelado (BD Biosciences) (100 pl) durante 30 minutos a 4 “C. As células foram lavadas duas vezes com tampão FACS e novamente suspensas em 1:10 de Alexa Fluor 647 anti-pSTAT1:tampão FACS (100 nl) por 30 minutos em TA no escuro, lavadas duas vezes em tampão FACS e analisadas através de um citômetro de fluxo LSRII (BD Biosciences).

[00218] Para determinar a potência inibidora do composto de teste, a intensidade fluorescente média (MFI) de pSTAT1 foi medida em monócitos CDl4+. Os valores de ICs foram determinados a partir da análise das curvas de inibição de MFI versus concentração do composto. Os dados foram expressos como valores pICso (logaritmo decádico negativo ICs.). O

Composto 1 exibiu um valor de pICs, de 7,5 neste ensaio. O Composto 4 exibiu um valor de pICs, de 7,3 neste ensaio.

Ensaio 15: Ensaio de potência celular de JAK : inibição de pSTAT5 induzido por GM- CSF

[00219] A potência dos compostos de teste para a inibição da fosforilação de STATS estimulada pelo fator estimulador de colônias de granulócitos macrófagos (GM-CSF) foi medida em monócitos CDl4-positivos (CDl4+) derivados de sangue total humano (Stanford Blood Center) usando citometria de fluxo. Como a GM-CSF sinaliza por meio da JAK, este ensaio oferece uma medida de potência celular de JAK.

[00220] Os monócitos foram identificados usando um anticorpo anti-CDl4 conjugado com isotiocianato de fluoresceína (FITC) (clone RMO52, Beckman Coulter) e um anticorpo anti-pSTAT5S conjugado com Alexa Fluor 647 (pY694, BD Biosciences) para detectar a fosforilação de STATS.

[00221] Células mononucleares de sangue periférico humano (PBMC) são isoladas de sangue total humano de dadores saudáveis usando um gradiente de Ficoll. As células são cultivadas em 37 ºC, em incubadora umidificada com 5% de CO, em RPMI (Life Technologies) suplementado com 10% de soro fetal bovino inativado por calor (FBS, Life Technologies), 2 mM de Glutamax (Life Technologies), 25 mM HEPES (Life Technologies) e 1X Pen/Strep (Life Technologies). As células foram semeadas a 250.000 células/poço em meio (200 uL), cultivadas por 2 h e novamente suspensas em meio de ensaio (50 uL) (RPMI suplementado com 0,1% de albumina de soro bovino (Sigma), Glutamax 2 mM, HEPES 25 mM e 1X Penstrep) contendo várias concentrações dos compostos de teste. O composto foi diluído em série em DMSO e depois diluído mais

1.000 vezes em meio para trazer a concentração final de DMSO para 0,1%. As diluições do composto do teste foram incubadas com as células a 37 ºC, 5% de CO, durante 1 h, seguida pela adição de GM-CSF pré-aquecido (R&D Systems) nos meios (50 ul) a uma concentração final de 0,3 ng/ml durante 15 minutos. Após a estimulação com citocinas, as células foram fixadas com solução de fixação pré-aquecida (100 pl) (BD Biosciences) por 10 minutos a 37 ºC, 5% de CO,, lavadas duas vezes com tampão FACS (1 ml) (1% de BSA em PBS), novamente suspensas em 1:10 de FITC anti-CDl4:tampão FACS (100 nl), e incubadas a 4 ºC durante 15 min. As células foram lavadas uma vez e, em seguida, novamente suspensas em tampão Perm III gelado (BD Biosciences) (100 pl) durante 30 minutos a 4 “C. As células foram lavadas duas vezes com tampão FACS e novamente suspensas em 1:10 de Alexa Fluor 647 anti-pSTAT1:tampão FACS (100 nl) por 30 minutos em TA no escuro, lavadas duas vezes em tampão FACS e analisadas através de um citômetro de fluxo LSRII (BD Biosciences).

[00222] Para determinar a potência inibidora do composto de teste, a intensidade fluorescente média (MFI) de pSTAT5 foi medida em monócitos CDl4+. Os valores de ICs, foram determinados a partir da análise das curvas de inibição de MFI versus concentração do composto. Os dados foram expressos como valores pICso (logaritmo decádico negativo ICs6.). O Composto 1 exibiu um valor de pICs, de 6,7 neste ensaio. O Composto 4 exibiu um valor de pICs, de 6,7 neste ensaio.

Ensaio 16: Ensaio de potência celular de JAK : inibição de pSTAT4 induzido por IL-12

[00223] A potência dos compostos de teste para a inibição da fosforilação de STAT4 estimulada por interleucina-l12 (IL-12) foi medida em células T CD3- positivos (CD3+) derivados de sangue total humano (Stanford Blood Center) usando citometria de fluxo. Como a IL-12 sinaliza por meio da JAK, este ensaio fornece uma medida de potência celular de JAK.

[00224] As células T CD3+ são identificadas usando um anticorpo anti-CD3 conjugado com ficoeritrina (PE) (clone UCHT1, BD Biosciences), enquanto um anticorpo anti-pSTAT4 conjugado com Alexa Fluor 647 (clone 38/p-Stat4, BD Biosciences) é usado para detectar a fosforilação de STATA4.

[00225] Células mononucleares de sangue periférico humano (PBMC) são isoladas de sangue total humano de dadores saudáveis usando um gradiente de Ficoll. As células foram cultivadas em RPMI (Life Technologies) suplementado com 10% de Soro Fetal Bovino (FBS, Life Technologies), 2 mM Glutamax (Life Technologies), 25 mM HEPES (Life Technologies), 1X Pen/Strep (Life Technologies), placa ligada anticorpo anti- CD3 purificado (5 pg/ml, clone UCHT1, BD Biosciences) e anticorpo anti-CD28 solúvel (1 pg/ml, clone CD28.2, BD Biosciences) por 3 dias em uma incubadora umidificada a 37 ºC, 5% COr. As células foram colhidas, lavadas com meio e em seguida novamente suspensas em meio contendo interleucina-2 (IL-2, 10 ng/ml, R&D Systems). As células foram cultivadas durante 3 dias numa incubadora umidificada com CO; a 5% a 37 ºC. As células foram colhidas, lavadas com RPMI e semeadas a 250.000 células/poço em meio (200 uL), cultivadas por 2 h e novamente suspensas em meio de ensaio (50 unL) (RPMI suplementado com 0,1% de albumina de soro bovino (Sigma), Glutamax 2 mM, HEPES 25 mM e 1X Penstrep) contendo várias concentrações dos compostos de teste.

O composto foi diluído em série em DMSO e depois diluído mais 1.000 vezes em meio para trazer a concentração final de DMSO para 0,1%. As diluições do composto do teste foram incubadas com as células a 37 ºC, 5% de CO, durante 1 h, seguida pela adição de IL-12 pré-aquecido (R&D Systems) nos meios (50 unL) a uma concentração final de 10 ng/ml durante 30 minutos.

Após a estimulação com citocinas, as células foram fixadas com solução de fixação pré-aquecida (100 pl) (BD Biosciences) por 10 minutos a 37 ºC, 5% de CO,, lavadas duas vezes com tampão FACS (1 mL) (1% de BSA em PBS), novamente suspensas em tampão Perm III gelado (BD Biosciences) (1000 pl) durante minutos a 4 ºC.

As células foram lavadas duas vezes com tampão FACS e novamente suspensas em tampão FACS (100 punl) contendo anti-CD3 PE (diluição de 1:50) e Alexa Fluor 647 anti-pSTAT4 (diluição de 1:10) por 45 minutos em temperatura ambiente no escuro.

Após a incubação, as células foram lavadas duas vezes em tampão FACS antes de serem analisadas usando um citômetro de fluxo MACSQuant (Miltenyi). Para determinar a potência inibidora do composto de teste, a intensidade fluorescente média (MFI) de pSTAT4 foi medida em célula T CD3+. Os valores de ICso foram determinados a partir da análise das curvas de inibição de MFI versus concentração do composto.

Os dados foram expressos como valores PpICso (logaritmo decádico negativo ICso). O Composto 1 exibiu um valor de pICso de 6,2 neste ensaio.

O Composto 4 exibiu um valor de pICs, de 6,0 neste ensaio.

Estrutura de cristal

[00226] Foi obtida uma estrutura de cocristal do composto D-1 ligado a JAK1l humano a uma resolução de 2,28 À. Observou-se que o ligante se ligava ao local de ligação de ATP. Sete interações de ligações de hidrogênio específicas foram identificadas com base em uma distância de 3,5 À ou menos entre os átomos doadores e aceitadores. De nota particular, uma interação de ligação de hidrogênio foi identificada entre o carbonil da amida exocíclica do composto D-l1 e a cadeia lateral de Arg879 de JAKl. Uma interação semelhante pode ser esperada para os compostos da invenção. Em estudos de modelagem anteriores, esta interação foi proposta como uma forma de fornecer seletividade para JAK1 sobre outras tirosina quinases, uma vez que quinases intimamente relacionadas (por exemplo, TRKA, VEGFR, ABLI1) não possuíam um resíduo de arginina no local equivalente. Os resultados observados da interação da ligação de hidrogênio na estrutura cristalina e a melhora da seletividade do cinoma em comparação com as séries que não possuem a amida exocíclica validam esta hipótese de projeto.

[00227] Embora a presente invenção tenha sido descrita com referência a aspectos específicos ou modalidades desta, será entendido por aqueles versados na técnica que várias alterações podem ser feitas ou equivalentes podem ser substituídos sem se afastar do verdadeiro espírito e escopo da invenção. Além disso, na medida do permitido pelos estatutos e regulamentos de patentes aplicáveis, todas as publicações, patentes e pedidos de patentes citados neste documento são incorporados por referência em sua totalidade na mesma medida como se cada documento tivesse sido incorporado individualmente por referência neste documento.

O QUE É REIVINDICADO É:

1. Um composto de fórmula (1): HO.

O » HN-N N R (1) caracterizado por: A ser um anel heterociclil monocíclico de 6 a 7 membros contendo dois átomos de nitrogênio, caracterizado por A estar conectado ao grupo carbonil em (1) através de um átomo de nitrogênio, A ser substituído por 1 a 3 grupos Rº e, opcionalmente, dois grupos R2 formarem um anel em ponte - (CH2)- com A; ou A ser pirrolidinilo, caracterizado pelo pirrolidinilo estar ligado ao grupo carbonilo em (1) através de um átomo de azoto e caracterizado pelo pirrolidinilo ser substituído por NRºRi; R' ser Ci3alquil; cada Rº ser independentemente Ci 3alquil, substituído opcionalmente por -OH; R?º ser Ci3alquil; e Rº ser Ci3alquil; ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

2. O composto da Reivindicação 1, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, caracterizado por ter a fórmula (1'):

Claims (1)

1. HO.

   A . no MOÇO

   H (1).

   3. O composto de quaisquer das Reivindicações 1 ou 2, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, caracterizado por R! ser selecionado do grupo consistindo em metil, propil e isopropil.

   4, O composto de quaisquer das Reivindicações 1 a 3, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, caracterizado pelo grupo consistindo em piperazinil, 2,5- diazabiciclo[2.2.1]heptanil e 1,4-diazacicloheptanil, cada um dos quais é substituído por 1 ou 2 grupos Rº, caraterizado por cada Rº ser independentemente Ci zalquil substituído opcionalmente por -OH, ou A ser pirrolidinil substituído por NRºRi, caracterizado por R? ser Ci-3zalquil e Rº ser Ci3zalquil.

   5. O composto de quaisquer das Reivindicações 1 a 4, ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico deste, caracterizado por A ser selecionado do grupo consistindo em:

   NAS NO A —N ' Co) LON ga LON ga

   AS LON ge “RP | So N. 2 e —N caracterizado por Rº ser C1r;3 alquil substituído opcionalmente por -OH, R? ser Ci-3zalquil e Rº ser Ci3zalquil.

   6. Um composto de fórmula caracterizado por:

   HO. ê Q í

   N N // MOO, HN-N N .

   H ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

   7. Um composto de fórmula caracterizado por: HO. O o

   O N N 1 ué ne N No nd k ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

   8. Um composto de fórmula caracterizado por: Ho. Ç o OQ 0 1

   N HENKO ON ns

   H ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

   9. Um composto de fórmula caracterizado por: HO. O (9

   NA

   N N / < N HN-| N

   NON YT ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

   10. Um composto de fórmula caracterizado por: HO. Y Q be

   N N / MOC, HN-N N >

   H ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

   11. Um composto de fórmula caracterizado por:

   HO.

   O o N— A ros HN-N N r ou um sal aceitável do ponto de vista farmacêutico.

   12. Uma composição farmacêutica caracterizada por qualquer uma das Reivindicações 1 a 11 e um carreador farmacêutico aceitável.

   13. Um composto de qualquer uma das Reivindicações 1 a l1, caracterizado pelo uso no tratamento de uma doença respiratória em um mamífero.

   14. O composto da Reivindicação 13, caracterizado pela doença respiratória ser selecionada do grupo consistindo em asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose cística, pneumonite, fibrose pulmonar idiopática, lesão pulmonar aguda, síndrome do desconforto respiratório agudo, bronquite, enfisema, bronquiolite obliterante, sarcoidose, doença eosinofílica, infecção helmíntica, hipertensão arterial pulmonar, linfangioleiomiomatose, bronquiectasia, doença pulmonar infiltrativa, pneumonite induzida por drogas, pneumonite induzida por fungos, aspergilose broncopulmonar alérgica, pneumonite por hipersensibilidade, granulomatose eosinofílica com poliangiite, pneumonia eosinofílica aguda idiopática, pneumonia eosinofílica crônica idiopática, síndrome hipereosinofílica, Síndrome de Lóffler, bronquiolite obliterante com pneumonia em organização, doença do enxerto de pulmão contra hospedeiro e pneumonite induzida por inibidor de checkpoint imunológico.

   15. O composto da Reivindicação 13, caracterizado pela doença respiratória ser asma ou doença pulmonar obstrutiva crônica.

   16. Um composto de qualquer uma das Reivindicações 1 a 11, caracterizado pela utilização no tratamento da rejeição de transplante de pulmão em um mamífero.

   17. O composto da Reivindicação 16, caracterizado pela rejeição do transplante de pulmão ser selecionada a partir do grupo que consiste em disfunção do enxerto primário, pneumonia em organização, rejeição aguda, bronquiolite linfocítica e disfunção crônica do aloenxerto pulmonar.

   18. O composto da Reivindicação 16, caracterizado pela rejeição do transplante de pulmão ser a rejeição aguda do transplante de pulmão.

   19. O composto da Reivindicação 16, caracterizado pela rejeição do transplante de pulmão ser uma disfunção crônica do aloenxerto pulmonar.

   20. O composto da Reivindicação 16, caracterizado pela rejeição do transplante de pulmão ser selecionada a partir do grupo consistindo em bronquiolite obliterante, disfunção de aloenxerto pulmonar crônica restritiva e disfunção de aloenxerto neutrofílica.

   21. Uso de um composto de qualquer uma das Reivindicações 1 a 11, caracterizado pela produção de um medicamento para o tratamento de uma doença respiratória em um mamífero.

   22. O uso da Reivindicação 21, caracterizado pela doença respiratória ser selecionada do grupo consistindo em asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose cística,

   pneumonite, fibrose pulmonar idiopática, lesão pulmonar aguda, síndrome do desconforto respiratório agudo, bronquite, enfisema, bronquiolite obliterante, sarcoidose, doença eosinofílica, infecção helmíntica, hipertensão arterial pulmonar, linfangioleiomiomatose, bronquiectasia, doença pulmonar infiltrativa, pneumonite induzida por drogas, pneumonite induzida por fungos, aspergilose broncopulmonar alérgica, pneumonite por hipersensibilidade, granulomatose eosinofílica com poliangiite, pneumonia eosinofílica aguda idiopática, pneumonia eosinofílica crônica idiopática, síndrome hipereosinofílica, Síndrome de Lóffler, bronquiolite obliterante com pneumonia em organização, doença do enxerto de pulmão contra hospedeiro e pneumonite induzida por inibidor de checkpoint imunológico.

   23. O uso da Reivindicação 21, caracterizado pela doença respiratória ser asma ou doença pulmonar obstrutiva crônica.

   24. Uso de um composto de qualquer uma das Reivindicações 1 a 11, caracterizado pela produção de um medicamento para o tratamento da rejeição de transplante de pulmão em um mamífero.

   25. O uso da Reivindicação 24, caracterizado pela rejeição do transplante de pulmão ser selecionada a partir do grupo que consiste em disfunção do enxerto primário, pneumonia em organização, rejeição aguda, bronquiolite linfocítica e disfunção crônica do aloenxerto pulmonar.

   26. O uso da Reivindicação 24, caracterizado pela rejeição do transplante de pulmão ser a rejeição aguda do transplante de pulmão.

   27. O uso da Reivindicação 24, caracterizado pela rejeição do transplante de pulmão ser uma disfunção crônica do aloenxerto pulmonar.

   28. O uso da Reivindicação 24, caracterizado pela rejeição do transplante de pulmão ser selecionada a partir do grupo consistindo em bronquiolite obliterante, disfunção de aloenxerto pulmonar crônica restritiva e disfunção de aloenxerto neutrofílica.

   29. Um método de tratamento de uma doença respiratória em um mamífero, o método compreendendo a administração ao mamífero de uma composição farmacêutica caracterizado por compreender um composto de qualquer uma das Reivindicações 1 a 11 e um carreador aceitável do ponto de vista farmacêutico.

   30. O método da Reivindicação 29, caracterizado pela doença respiratória ser selecionada do grupo consistindo em asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose cística, pneumonite, fibrose pulmonar idiopática, lesão pulmonar aguda, síndrome do desconforto respiratório agudo, bronquite, enfisema, bronquiolite obliterante, sarcoidose, doença eosinofílica, infecção helmíntica, hipertensão arterial pulmonar, linfangioleiomiomatose, bronquiectasia, doença pulmonar infiltrativa, pneumonite induzida por drogas, pneumonite induzida por fungos, aspergilose broncopulmonar alérgica, pneumonite por hipersensibilidade, granulomatose eosinofílica com poliangiite, pneumonia eosinofílica aguda idiopática, pneumonia eosinofílica crônica idiopática, síndrome hipereosinofílica, síndrome de Lóffler, bronquiolite obliterante com pneumonia em organização, doença do enxerto de pulmão contra hospedeiro e pneumonite induzida por inibidor de checkpoint imunológico.

   31. O método da Reivindicação 29, caracterizado pela doença respiratória ser asma ou doença pulmonar obstrutiva crônica.

   32. Um método de tratamento de rejeição de transplante de pulmão em um mamífero, o método compreendendo a administração ao mamífero de uma composição farmacêutica caracterizado por compreender um composto de qualquer uma das Reivindicações 1 a 11 e um carreador aceitável do ponto de vista farmacêutico.

   33. O método da Reivindicação 32, caracterizado pela rejeição do transplante de pulmão ser selecionada a partir do grupo que consiste em disfunção do enxerto primário, pneumonia em organização, rejeição aguda, bronquiolite linfocítica e disfunção crônica do aloenxerto pulmonar.

   34. O método da Reivindicação 32, caracterizado pela rejeição do transplante de pulmão ser a rejeição aguda do transplante de pulmão.

   35. O método da Reivindicação 32, caracterizado pela rejeição do transplante de pulmão ser uma disfunção crônica do aloenxerto pulmonar.

   36. O método da Reivindicação 32, caracterizado pela rejeição do transplante de pulmão ser selecionada a partir do grupo consistindo em bronquiolite obliterante, disfunção de aloenxerto pulmonar crônica restritiva e disfunção de aloenxerto neutrofílica.