BR112021001188A2 - composição que contém vacina contra a influenza - Google Patents

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Abstract

"COMPOSIÇÃO QUE CONTÉM VACINA CONTRA A INFLUENZA". A presente invenção refere-se ao fornecimento de uma composição que compreende um antígeno de vacina universal contra a influenza e um adjuvante de vacina.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÃO QUE CONTÉM VACINA CONTRA A INFLUENZA". Campo Técnico
[001] A presente invenção refere-se a uma composição que compreende um adjuvante de vacina e um antígeno de vacina universal contra a influenza. Antecedentes da Técnica
[002] As vacinas de componentes que compreendem proteínas derivadas de vírus ou peptídeos parciais dos mesmos são mais seguras do que vacinas vivas ou vacinas de partícula inteira inativadas. No entanto, as vacinas de componentes tendem a ter baixa eficácia imunoestimulante. Portanto, a fim de aumentar a imunogenicidade do epítopo e melhorar a atividade imunoestimulante das vacinas, foram investigados métodos que usam um adjuvante e um antígeno em combinação. Os adjuvantes são um aditivo para aumentar as respostas imunes humorais e/ou celulares aos antígenos, e o Alúmen, saponina e assim por diante têm sido usados como adjuvantes de vacina.
[003] Recentemente, descobriu-se que o Receptor Toll-like (TLR) desempenha um papel importante na ativação da imunidade inata, a qual é um dos mecanismos de defesa em organismos vivos contra micro-organismos, e que o monofosforil lipídio A (MPL), um oligodesoxinucleotídeo que contém uma sequência de citidil guanosila (CpG) não metilada (CpG ODN), etc., têm efeitos imunoestimulantes via TLR. Diz-se que, dos treze TLRs conhecidos identificados em seres humanos, cinco TLRs (TLRs 1, 2, 4, 5, 6) estão envolvidos no reconhecimento de componentes bacterianos, e quatro TLRs (TLR 3, 7, 8, 9) estão envolvidos em reconhecimento de ácidos nucleicos virais (Documento Não Patente 1). Como um agonista (ativador) de TLR7 e TLR8, são conhecidas pequenas moléculas que mimetizam um RNA fita simples viral, o qual é um ligante natural. Por exemplo, compostos sintéticos, tais como compostos de pirimidina (Documentos de Patente 1 e 2) e compostos de imidazoquinolina (Documento de Patente 3), foram relatados.
[004] A ativação de TLR7 e/ou TLR8 com seus agonistas ativa as células dendríticas (DCs) via TLR e a via de sinalização dependente do fator de diferenciação mieloide 88 (MyD 88). Como um resultado, a expressão das moléculas coestimulatórias de células T (CD80, CD86, CD40) é aumentada e são produzidas citocinas inflamatórias, incluindo interferon de tipo I (especialmente IFNα), TNFα, IL-6 ou IL-12.
[005] Além da ativação de DCs, sabe-se que os agonistas de TLR7 e/ou TLR8 (ativadores) ativam células T e B e estimulam ainda mais as células NK para promover a produção de IFNγ e, portanto, espera-se que tenham uma atividade adjuvante de vacina. Na verdade, a atividade adjuvante de agonistas de TLR7 e/ou TLR8, tais como o Resiquimode e o Imiquimode, foi relatada (Documento Não Patente 2).
[006] Os seguintes complexos de agonistas de TLR7 e/ou TLR 8 com outras substâncias são conhecidos: adjuvantes de vacina nos quais ácidos graxos e compostos de imidazoquinolina estão covalentemente ligados (Documentos de Patente 4, 5, 6 e Documento Não Patente 4), compostos conjugados de fosfolipídios e compostos de adenina (Documentos de Patente 7, 8 e 9), compostos conjugados de ácidos graxos e compostos de adenina (Documento Não Patente 5), compostos conjugados de glicerídeos de ácidos graxos ou fosfolipídios e compostos de adenina via polietileno glicol (Documento de Patente 10), compostos conjugados de esqualenos e compostos de adenina (Documento de Patente 11) e compostos conjugados de esqualenos e compostos de pirimidina (Documento de Patente 12).
[007] As vacinas de hemaglutinina de influenza (daqui em diante também abreviadas como "HA") atuais, as quais também são denominadas de vacinas fragmentadas de HA de influenza, induzem a um anticorpo anti-HA, deste modo, exercendo um efeito protetor contra a infecção. O anticorpo anti-HA se liga a uma porção de um vírus denominada "região de cabeça" na hemaglutinina exposta externamente a partir de uma membrana viral. Esta região sofre alterações estruturais com mais frequência em uma cepa viral. Portanto, em alguns casos, o anticorpo anti-HA pode falhar ao se ligar a um vírus que causa variação antigênica e é diferente da cepa da vacina, e a vacina não pode exercer o efeito protetor contra a infecção.
[008] Recentemente, foi revelado que anticorpos que se ligam a uma região de haste na hemaglutinina, que é menos provável de causar variação antigênica (anticorpo anti-haste), incluem anticorpos protetores contra infecção (Documento de Patente 13). A fim de induzir de forma eficiente ao anticorpo anti-haste, uma proteína de haste de HA que tem uma porção de haste estabilizada foi desenvolvida e seu ensaio clínico em seres humanos foi realizado: a porção de haste, a qual é originalmente instável, foi estabilizada por meio de variação artificial na hemaglutinina ou ligação de ligantes à hemaglutinina. Entretanto, na aplicação prática da proteína de haste de HA, ainda persistem problemas na melhoria da imunogenicidade e no processo de produção.
[009] Foi relatado que a capacidade dos anticorpos anti-haste de proteger contra a infecção depende não apenas de suas propriedades de ligação a antígeno e dos níveis de anticorpos, mas também fortemente da subclasse dos anticorpos IgG induzidos (Documento Não Patente 3). Especificamente, foi demonstrado que os anticorpos IgG2 anti-haste são funcionais e possuem reatividade cruzada e as vacinas que induzem fortemente a anticorpos IgG2 anti-haste são eficazes na proteção contra uma ampla variedade de infecções pela influenza. No entanto, nenhum método para aumentar efetivamente a capacidade das vacinas de induzir a anticorpos IgG2 anti-haste foi encontrado. Documentos do Estado da Técnica
Documentos de Patente
[010] Documento de Patente 1: WO 00/12487
[011] Documento de Patente 2: WO 2009/067081
[012] Documento de Patente 3: Publicação de Pedido de Patente dos EUA No 4689338
[013] Documento de Patente 4: WO 2005/001022
[014] Documento de Patente 5: WO 2005/018555
[015] Documento de Patente 6: WO 2012/024284
[016] Documento de Patente 7: WO 2010/048520
[017] Documento de Patente 8: WO 2011/017611
[018] Documento de Patente 9: WO 2011/139348
[019] Documento de Patente 10: WO 2010/093436
[020] Documento de patente 11: WO 2017-061532
[021] Documento de Patente 12: WO 2017-056494
[022] Documento de patente 13: JP 2016-516090 A
[023] Documento de Patente 14: WO 2016/109792 Documentos Não Patente
[024] Documento Não Patente 1: Iwasaki, A., Nat. Immunol. 2004, 5, 987
[025] Documento Não Patente 2: Vaccine 2011, 29, 3341 ･MA Tomai et al., Exp. Rev. Vaccine, 6, 835
[026] Documento Não Patente 3: DiLillo, DJ., Nat. Medicine 2014, 20, 143
[027] Documento Não Patente 4: Vaccine. 26 de julho de 2011; 29 (33): 5434-42
[028] Documento Não Patente 5: Bioconjugate Chem. 20, 1194- 1200 de 2009
[029] Documento Não Patente 6: Curr Opin Virol. 2016, 17, 95-103
[030] Documento Não Patente 7: Nat Med. 2015, 21, 1065-70
[031] Documento Não Patente 8: Science. 2015, 349, 1301-6
Sumário da Invenção Problema Técnico
[032] Um objetivo do presente pedido é encontrar uma vacina fragmentada de HA de influenza que produza efetivamente um anticorpo que se liga a uma região de haste de HA que é menos provável de sofrer variação antigênica, de um vírus da influenza, e fornecer um método para melhorar a capacidade da vacina de induzir a um anticorpo IgG2. Solução Para o Problema
[033] Os presentes inventores estudaram intensamente para resolver os problemas acima e descobriram que, ao submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza atual a um tratamento ácido, a região de haste da hemaglutinina é exposta ao exterior e a vacina fragmentada de HA de influenza, após o tratamento ácido, pode produzir um anticorpo de reação cruzada capaz de se ligar à alfa hélice longa (Long Alpha Helix, LAH) na região de haste de HA e, portanto, pode servir como um antígeno de vacina universal contra a influenza. Além disso, os presentes inventores descobriram que, ao adicionar um composto que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 à vacina fragmentada de HA de influenza após o tratamento ácido, o composto funciona como um adjuvante de vacina e a capacidade de indução de anticorpos IgG2 da vacina é aprimorada e, assim, alcançaram a presente invenção.
[034] Especificamente, a presente invenção refere-se ao seguinte. Item 1
[035] Uma composição que compreende (1) e (2) a seguir:
[036] (1) um antígeno de vacina universal contra a influenza; e
[037] (2) um adjuvante de vacina. Item 2
[038] A composição de acordo com o Item 1, em que o antígeno de vacina universal contra a influenza é um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza que produz um anticorpo que se liga a uma LAH de uma região de haste de HA. Item 3
[039] A composição de acordo com o Item 2, em que o antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza tem uma região de haste de HA exposta ao exterior. Item 4
[040] A composição de acordo com o Item 1, em que o antígeno de vacina universal contra a influenza é um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza em que a região de haste de HA, a qual é exposta ao exterior, aumenta a antigenicidade da LAH da região de haste de HA e a vacina fragmentada de HA de influenza é capaz de produzir um anticorpo que se liga à LAH da região de haste de HA. Item 5
[041] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 1 a 4, em que o antígeno de vacina universal contra a influenza é produzido ao submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza a um tratamento ácido. Item 6
[042] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 1 a 5, em que o antígeno de vacina universal contra a influenza é produzido ao submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza que não foi submetida a um tratamento com formalina a um tratamento ácido. Item 7
[043] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 1 a 6, em que o antígeno de vacina universal contra a influenza é produzido por um processo de produção que inclui: submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza a um tratamento ácido; e posteriormente, submeter a vacina fragmentada de HA de influenza a um tratamento com formalina.
Item 8
[044] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 1 a 7, em que o antígeno de vacina universal contra a influenza é produzido ao submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza de um único subtipo de HA a um tratamento ácido. Item 9
[045] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 1 a 7, em que o antígeno de vacina universal contra a influenza é um antígeno de vacina que compreende dois ou mais tipos de antígenos de vacina fragmentada de HA de influenza, cada um dos quais é produzido ao submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza de um único subtipo de HA a um tratamento ácido. Item 10
[046] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 1 a 9, em que o adjuvante de vacina é uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR. Item 11
[047] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 1 a 10, em que o adjuvante de vacina é uma substância que aumenta a atividade fisiológica de um ou mais TLRs selecionados a partir do grupo que consiste em TLR7, TLR8 e TLR9. Item 12
[048] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 1 a 11, em que o adjuvante de vacina é uma substância que aumenta a atividade fisiológica pelo menos do TLR7. Item 13
[049] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 1 a 12, em que o adjuvante de vacina é uma substância que aumenta a atividade fisiológica pelo menos do TLR8. Item 14
[050] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 1 a 13, em que o adjuvante de vacina é uma substância que aumenta a atividade fisiológica pelo menos do TLR9. Item 15
[051] A composição de acordo com os Itens 11 ou 12, em que a substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 é um composto de baixo peso molecular que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 ou um composto conjugado no qual um composto de baixo peso molecular que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 e um lipídio são quimicamente ligados através de um espaçador. Item 16
[052] A composição de acordo com o Item 15, em que o composto de baixo peso molecular que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 ou o composto de baixo peso molecular que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 compreendido no composto conjugado tem um peso molecular de 200 a 600 e tem um esqueleto de adenina, um esqueleto de pirimidina, um esqueleto de imidazoquinolina, um esqueleto de imidazopiridina ou um esqueleto de quinazolina. Item 17
[053] A composição de acordo com o Item 16, em que o composto de baixo peso molecular que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 ou o composto de baixo peso molecular que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 compreendido no composto conjugado tem um esqueleto de pirimidina, um esqueleto de adenina ou um esqueleto de imidazoquinolina. Item 18
[054] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 15 a 17, em que o lipídio é um lipídio derivado de esqualeno ou esqualano. Item 19
[055] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 15 a 18,
em que o composto que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 é um composto conjugado no qual um composto de baixo peso molecular que tem um esqueleto de adenina e um lipídio derivado de esqualeno ou esqualano são quimicamente ligados através de um espaçador ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Item 20
[056] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 15 a 18, em que o composto que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 é um composto conjugado no qual um composto de baixo peso molecular que tem um esqueleto de pirimidina e um lipídio derivado de esqualeno ou esqualano são quimicamente ligados através de um espaçador ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Item 21
[057] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 15 a 18 e 20, em que o composto que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 é um composto representado pela Fórmula (1) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
[058] em que
[059] X representa metileno,
[060] R1 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono os quais podem ser substituídos por um grupo hidróxi,
[061] R2 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila que tem 1 a 6 átomos de carbono,
[062] R3 representa um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono,
[063] R4 representa um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio, um grupo hidróxi, um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono ou um grupo alcóxi que tem 1 a 3 átomos de carbono,
[064] Y1 representa uma ligação simples ou metileno,
[065] Y2 representa uma ligação simples ou -C(O)-,
[066] L representa um alquileno de cadeia reta que tem 2 ou 3 átomos de carbono,
[067] R5 e R6 representam, independentemente, um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono ou R5 e R6 são tomados juntos para formar um heterociclo saturado que contém nitrogênio de 5 a 8 elementos substituído ou não substituído contanto que, quando o heterociclo saturado que contém nitrogênio de 5 a 8 elementos é substituído, ele seja substituído pelos mesmos ou diferentes 1 a 4 substituintes selecionados a partir de um grupo hidróxi e um átomo de halogênio, e
[068] m representa 0 ou 1,
[069] são todos ligações duplas.. Item 22
[070] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 15 a 18, 20 e 21, em que o composto conjugado é:
[071] (4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-amino-4-{[(3S)-1-hidroxi- hexan-3-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]benzil}(metil)amino]etil}- 4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexanamida;
[072] (4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-amino-4-{[(2S)-1- hidroxipentan-2-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]-3- metoxibenzil}piperazin-1-il)-4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa- 4,8,12,16,20,24-hexaen-1-ona;
[073] (4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-amino-4-{[(2S)-1- hidroxipentan-2-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]-3-
metoxibenzoil}piperazin-1-il)-4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa- 4,8,12,16,20,24-hexaen-1-ona;
[074] 4-[(2-amino-4-{[(2S)-1-hidroxipentan-2-il]amino}-6- metilpirimidin-5-il)metil]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25- hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexaenoil]amino}etil)-3- metoxibenzamida;
[075] 4-[(2-amino-4-{[(2S)-1-hidroxipentan-2-il]amino}-6- metilpirimidin-5-il)metil]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25- hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexaenoil](metil)amino}etil)-3- metoxibenzamida; ou
[076] um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. Item 23
[077] A composição de acordo com qualquer um dos Itens 15 a 18, e 20 a 22, em que o composto que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 é:
[078] (4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-amino-4-{[(3S)-1-hidroxi- hexan-3-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]benzil}(metil)amino]etil}- 4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexanamida;
[079] 4-[(2-amino-4-{[(2S)-1-hidroxipentan-2-il]amino}-6- metilpirimidin-5-il)metil]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25- hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexaenoil]amino}etil)-3- metoxibenzamida; ou
[080] um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. Item 24
[081] Uma vacina contra a influenza que compreende a composição de acordo com qualquer um dos Itens 1 a 23. Item 25
[082] Um método para a prevenção de influenza que compreende administrar a um animal de sangue quente que precisa uma quantidade profilaticamente eficaz da composição de acordo com qualquer um dos
Itens 1 a 23. Item 26
[083] Um método para a prevenção de influenza que compreende administrar a um animal de sangue quente que precisa uma quantidade profilaticamente eficaz de um antígeno de vacina universal contra a influenza e uma quantidade profilaticamente eficaz de um adjuvante de vacina (por exemplo, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7). Item 27
[084] Um kit para a prevenção de influenza que compreende um antígeno de vacina universal contra a influenza e um adjuvante de vacina (por exemplo, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7). Item 28
[085] Um adjuvante de vacina (por exemplo, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7) para uso na prevenção da influenza em combinação com um antígeno de vacina universal contra a influenza. Item 29
[086] Um antígeno de vacina universal contra a influenza para uso na prevenção da influenza em combinação com um adjuvante de vacina (por exemplo, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7). Item 30
[087] O uso de um adjuvante de vacina (por exemplo, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7) na fabricação de uma composição para a prevenção de influenza que compreende um antígeno de vacina universal contra a influenza. Item 31
[088] O uso de um antígeno de vacina universal contra a influenza na fabricação de uma composição para a prevenção de influenza que compreende um adjuvante de vacina (por exemplo, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7). Item 32
[089] O método de acordo com o Item 25 ou 26, o kit de acordo com o Item 27, o adjuvante de vacina de acordo com o Item 28 ou o antígeno de acordo com o Item 29, em que o antígeno de vacina universal contra a influenza e o adjuvante de vacina (por exemplo, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7) são administrados simultânea ou separadamente. Item 32-1
[090] O método de acordo com o Item 25 ou 26, o kit de acordo com o Item 27, o adjuvante de vacina de acordo com o Item 28 ou o antígeno de acordo com o Item 29, em que o antígeno de vacina universal contra a influenza é administrado antes, após ou concomitantemente com a administração do adjuvante de vacina (por exemplo, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7). Item 33
[091] Um método para produzir uma composição que compreende um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza e um adjuvante de vacina (por exemplo, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7) que compreende as seguintes etapas:
[092] produzir um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza que produz um anticorpo que se liga a uma LAH de uma região de haste de HA ao submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza que não foi submetida a um tratamento com formalina a um tratamento ácido; e
[093] misturar o antígeno de vacina obtido na etapa a) com o adjuvante de vacina. Item 34
[094] Um método para produzir uma composição que compreende um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza e um adjuvante de vacina (por exemplo, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7) que compreende as seguintes etapas:
[095] a) submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza a um tratamento ácido,
[096] b) em seguida, conduzir um tratamento com formalina para obter um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza que produz um anticorpo que se liga a uma LAH de uma região de haste de HA; e
[097] c) misturar o antígeno de vacina obtido na etapa b) com o adjuvante de vacina. Item 35
[098] Um método para a produção de um kit que compreende um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza e um adjuvante de vacina (por exemplo, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7) que compreende as seguintes etapas:
[099] produzir um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza que produz um anticorpo que se liga a uma LAH de uma região de haste de HA ao submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza que não foi submetida a um tratamento com formalina a um tratamento ácido; e
[100] combinar a vacina obtida na etapa b) com o adjuvante de vacina para formar um kit. Item 36
[101] Um método para a produção de um kit que compreende um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza e um adjuvante de vacina (por exemplo, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7) que compreende as seguintes etapas:
[102] submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza a um tratamento ácido,
[103] em seguida, conduzir um tratamento com formalina para obter um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza que produz um anticorpo que se liga a uma LAH de uma região de haste de HA; e
[104] combinar a vacina obtida na etapa b) com o adjuvante de vacina para formar um kit. Efeitos da Invenção
[105] De acordo com a presente invenção, é fornecido um antígeno de vacina universal contra a influenza e sua atividade de vacina pode ser aprimorada ao adicionar um adjuvante de vacina. Breve Descrição dos Desenhos
[106] A Figura 1 é um diagrama esquemático que ilustra um vírus da influenza.
[107] A Figura 2 é um gráfico que mostra um aumento na titulação de um anticorpo anti-LAH em soros de camundongos inoculados com uma vacina fragmentada de HA de H3N2 de tipo fusão de membrana.
[108] A Figura 3 é um gráfico que mostra uma melhoria na capacidade de proteção cruzada de camundongos inoculados com a vacina fragmentada de HA de H3N2 de tipo fusão de membrana contra uma variante antigênica.
[109] A Figura 4 é um gráfico que mostra um aumento na titulação de um anticorpo anti-LAH em soros de camundongos inoculados com uma vacina fragmentada de HA de H1N1 de tipo fusão de membrana.
[110] A Figura 5 é um gráfico que mostra uma melhoria na capacidade de proteção cruzada de camundongos inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana contra uma variante antigênica.
[111] A Figura 6 mostra gráficos, cada um indicando que um anticorpo monoclonal de ligação à LAH se liga mais fortemente a uma vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana do que a uma vacina fragmentada de HA atual.
[112] A Figura 7 mostra gráficos, cada um mostrando a atividade de indução de IgG2c de reação cruzada de vacinas fragmentadas de HA de tipo fusão de membrana suplementadas com A-1, A-2 ou CpG.
[113] A Figura 8 mostra gráficos, cada um mostrando a atividade de indução de IgG1 de reação cruzada das vacinas fragmentadas de HA de tipo fusão de membrana suplementadas com A-1, A-2 ou CpG.
[114] A Figura 9 mostra gráficos, cada um mostrando a proporção de IgG2c/IgG1 de reação cruzada das vacinas fragmentadas de HA de tipo fusão de membrana suplementadas com A-1, A-2 ou CpG.
[115] A Figura 10 mostra gráficos, cada um mostrando a atividade de indução de IgG2c de reação cruzada de vacinas fragmentadas de HA de tipo fusão de membrana suplementadas com A-1, A-3 ou AddaVax(TM).
[116] A Figura 11 mostra gráficos, cada um mostrando a atividade de indução de IgG1 de reação cruzada das vacinas fragmentadas de HA de tipo fusão de membrana suplementadas com A-1, A-3 ou AddaVax(TM).
[117] A Figura 12 mostra gráficos, cada um mostrando a proporção de IgG2c/IgG1 de reação cruzada das vacinas fragmentadas de HA de tipo fusão de membrana suplementadas com A-1, A-3 ou AddaVax(TM).
[118] A Figura 13 é um gráfico que mostra a capacidade de proteção cruzada de camundongos inoculados com as vacinas fragmentadas de HA de tipo fusão de membrana suplementadas com A-1, A-3 ou AddaVax(TM) contra uma variante antigênica.
[119] A Figura 14 é um gráfico que mostra o efeito supressor das vacinas fragmentadas de HA H3N2 de tipo fusão de membrana suplementadas com A-1, A-3 ou AddaVax(TM) na perda de peso de camundongos em virtude de infecção pela variante antigênica.
[120] A Figura 15 mostra gráficos, cada um indicando que o anticorpo monoclonal de ligação à LAH se liga fortemente a uma vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana que foi submetida a um tratamento com formalina após um tratamento ácido.
[121] A Figura 16 é um gráfico que mostra um aumento na titulação de um anticorpo anti-LAH em soros de camundongos inoculados com vacinas fragmentadas de HA de tipo fusão de membrana ((Pre-fix) e (Post-fix)).
[122] A Figura 17 mostra gráficos, cada um mostrando a atividade de indução de IgG2c de reação cruzada das vacinas fragmentadas de HA de tipo fusão de membrana suplementadas com A-1, A-3 ou AddaVax(TM).
[123] A Figura 18 mostra gráficos, cada um mostrando a atividade de indução de IgG1 de reação cruzada das vacinas fragmentadas de HA de tipo fusão de membrana suplementadas com A-1, A-3 ou AddaVax(TM).
[124] A Figura 19 mostra gráficos, cada um mostrando a proporção de IgG2c/IgG1 de reação cruzada das vacinas fragmentadas de HA de tipo fusão de membrana suplementadas com A-1, A-3 ou AddaVax(TM).
[125] A Figura 20 é um gráfico que mostra a capacidade de proteção cruzada de camundongos inoculados com vacinas fragmentadas de HA de tipo fusão de membrana contra H1N1 suplementadas com A-1, A-3 ou AddaVax(TM) contra uma variante antigênica.
[126] A Figura 21 é um gráfico que mostra o efeito supressor das vacinas fragmentadas de HA de tipo fusão de membrana contra H1N1 suplementadas com A-1, A-3 ou AddaVax(TM) na perda de peso de camundongos em virtude de infecção pela variante antigênica. Descrição de Modalidades
[127] As modalidades da presente invenção serão descritas em detalhes abaixo. As modalidades se destinam a facilitar a compreensão do princípio da presente invenção e o escopo da invenção não está limitado às modalidades a seguir. Outras modalidades, nas quais a configuração das modalidades a seguir foram apropriadamente substituídas por aqueles versados na técnica, também estão incluídas no escopo da presente invenção.
[128] Conforme usado no presente documento, o termo "adjuvante de vacina" significa uma substância que tem um efeito de intensificação da imunidade ou uma preparação que contém o mesmo, o qual aumenta a imunogenicidade de um antígeno ao ser adicionado ao antígeno.
[129] Os adjuvantes de vacinas no presente documento incluem alúmen, emulsões (por exemplo, adjuvante de Freund, MF59, AddaVax(TM), AS03, etc.), substâncias que aumentam a atividade fisiológica dos receptores NOD, substâncias que aumentam a atividade fisiológica de receptores RIG-I, substâncias que aumentam a atividade fisiológica dos receptores de lectina de tipo C, substâncias que aumentam a atividade fisiológica dos receptores de DNA citosólicos, substâncias que aumentam a atividade fisiológica de STING, substâncias que aumentam a atividade fisiológica de TLR e assim por diante.
[130] Os adjuvantes de vacinas no presente documento incluem, de preferência, substâncias que aumentam a atividade fisiológica de TLR.
[131] Conforme usado no presente documento, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR refere-se a um agonista de TLR que tem uma atividade agonista do receptor de TLR e não está particularmente limitada, contanto que a substância aumente a função do(s) receptor(es) de TLR.
[132] Exemplos das substâncias que aumentam a atividade fisiológica de TLR, conforme usado no presente documento, incluem monofosforil lipídio A e derivados do mesmo, compostos de adenina, compostos de pirimidina, compostos de imidazoquinolina, compostos de benzapina, compostos de imidazopiridina, compostos de quinazolina, compostos de guanina, compostos de di-hidropteridina, CpG ODN, e assim por diante.
[133] As substâncias que aumentam a atividade fisiológica de TLR, conforme usado no presente documento incluem, de preferência, substâncias que aumentam a atividade fisiológica de um ou mais TLRs selecionados a partir do grupo que consiste em TLR7, TLR8 e TLR9 e, mais preferivelmente, incluem substâncias que aumentam a atividade fisiológica pelo menos do TLR7.
[134] Conforme usado no presente documento, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 refere-se a um agonista de TLR7 que tem uma atividade agonista do receptor de TLR7 e não está particularmente limitada, contanto que a substância aumente a função do receptor de TLR7.
[135] Conforme usado no presente documento, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR8 refere-se a um agonista de TLR8 que tem uma atividade agonista do receptor de TLR8 e não está particularmente limitada, contanto que a substância aumente a função do receptor de TLR8.
[136] Conforme usado no presente documento, uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR9 refere-se a um agonista de TLR9 que tem atividade agonista do receptor de TLR9 e não está particularmente limitada, contanto que a substância aumente a função do receptor de TLR9.
[137] Exemplos de substâncias que aumentam a atividade fisiológica de TLR7 no presente documento incluem substâncias que aumentam a atividade fisiológica de TLR7 ou substâncias que aumentam a atividade fisiológica de TLR7 e TLR8.
[138] As substâncias que aumentam a atividade fisiológica de TLR7, conforme usado no presente documento incluem, de preferência, agonistas seletivos de TLR7. Conforme usado no presente documento, o termo "seletivo para TLR7" significa que a atividade agonista do receptor de TLR7 diferente de TLR7 é mais fraca do que a atividade agonista do receptor de TLR7 e inclui, por exemplo, o caso onde a atividade agonista do receptor de TLR7 é mais forte do que a atividade agonista do receptor de TLR8 (o ligante endógeno de TLR8 é um RNA com uma única cadeia), mais especificamente, o caso onde a atividade agonista do receptor de TLR7 (valor de EC50) é 10 vezes ou mais da atividade agonista do receptor de TLR8.
[139] Exemplos de substâncias que aumentam a atividade fisiológica de TLR7 no presente documento incluem compostos de baixo peso molecular que aumentam a atividade fisiológica de TLR7 e compostos conjugados nos quais (um) composto(s) de baixo peso molecular que aumenta(m) a atividade fisiológica de TLR7 e (um) lipídio(s) são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es).
[140] Exemplos específicos dos compostos de baixo peso molecular que aumentam a atividade fisiológica de TLR7 no presente documento incluem aqueles que têm um peso molecular de 200 a 600, de preferência um peso molecular de 250 a 500 e, mais preferivelmente, um peso molecular de 300 a 500.
[141] Os compostos de baixo peso molecular que aumentam a atividade fisiológica de TLR7 no presente documento incluem, de preferência, compostos que têm (um) esqueleto(s) de adenina, (um) esqueleto(s) de pirimidina, (um) esqueleto(s) de imidazoquinolina, (um) esqueleto(s) de imidazopiridina, (um) esqueleto(s) de quinazolina, (um) esqueleto(s) de guanina ou (um) esqueleto(s) de di-hidropteridina e, mais preferivelmente, incluem compostos que têm um esqueleto(s) de adenina, (um) esqueleto(s) de pirimidina, (um) esqueleto(s) de imidazoquinolina.
[142] Exemplos de compostos que têm (um) esqueleto(s) de adenina incluem compostos que têm um esqueleto de 4-amino-8-oxo- purina (8-oxoadenina), tais como compostos que têm um esqueleto de 4-amino-8-oxo-purina na qual a posição 9 é substituída por um grupo alquila (por exemplo, grupo alquila de cadeia linear que tem 1 a 6 átomos de carbono) que pode ser substituído por um anel carbocíclico aromático de 5 a 6 elementos, um anel heterocíclico aromático de 5 a 6 elementos ou um anel heterocíclico que contém nitrogênio alifático de 4 a 7 elementos. Exemplos específicos incluem os compostos descritos em Med. Chem. Comm. 2011, 2, 185, tais como GSK-2245035 [6- amino-2-{[(1S)-1-metilbutil]oxi}-9-[5-(1-piperidinil)pentil]-7,9-di-hidro- 8H-purina-8-ona], PF-4171455[4-amino-1-benzil-6-trifluorometil-1,3-di- hidroimidazo[4,5-c]piridina-2-ona] e assim por diante, e compostos descritos nos documentos WO 98/01448, WO 99/28321, WO 02/085905, WO 2008/114008, WO 2008/114819, WO 2008/114817, WO 2008/114006, WO 2010/018131, WO 2010/018134, WO 2008/101867, WO 2010/018133, WO 2009/005687, WO 2012/080730 e assim por diante.
[143] Os compostos que têm (um) esqueleto(s) de adenina incluem, de preferência, os seguintes compostos ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos:
[144] 6-amino-9-({6-[2-(dimetilamino)etoxi]piridin-3-il}metil)-2- etoxi-7,9-di-hidro-8H-purina-8-ona;
[145] 6-amino-2-(butilamino)-9-({6-[2-(dimetilamino)etoxi]piridin-3- il}metil)-7,9-di-hidro-8H-purina-8-ona;
[146] N-(4-{[6-amino-2-(butilamino)-8-oxo-7,8-di-hidro-9H-purin-9- il]metil}benzoil)glicina;
[147] (3-{[[3-(6-amino-2-butoxi-8-oxo-7,8-di-hidro-9H-purin-9- il)propil](3-morfolin-4-ilpropil)amino]metil}fenil)acetato de metila; ou
[148] (4-{[[3-(6-amino-2-butoxi-8-oxo-7,8-di-hidro-9H-purin-9- il)propil](3-piperidin-1-ilpropil)amino]metil}fenil)acetato de metila.
[149] Exemplos de compostos que têm (um) esqueleto(s) de pirimidina incluem compostos que têm um esqueleto de 2,4- diaminopirimidina, tal como 2,4-diaminopirimidina na qual a posição 6 pode ser opcionalmente substituída por um grupo alquila ou similar e a posição 5 é substituída por um grupo alquila (por exemplo, um grupo alquila de cadeia linear que tem 1 a 6 átomos de carbono) que pode ser substituído por um anel carbocíclico aromático de 5 a 6 elementos, um anel heterocíclico aromático de 5 a 6 elementos ou um anel heterocíclico que contém nitrogênio alifático de 4 a 7 elementos. Exemplos mais específicos dos compostos incluem os compostos descritos nos documentos WO 00/12487, WO 2010/133885, WO 2013/172479 ou WO 2012/136834.
[150] Exemplos de compostos que têm (um) esqueleto(s) de imidazoquinolina incluem compostos que têm um esqueleto de 4-amino-1H- imidazo[4,5-c]quinolina, tais como Imiquimode, Resiquimode ou 852A [N- [4-(4-amino-2-etil-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-1-il)butil]metanossulfonamida], tal como 4-amino-1H[4,5-c]quinolina, na qual a posição 1 é substituída por um grupo C1-6 alquila ou um grupo C1-6 alcóxi e a posição 2 é substituída por um grupo C1-6 alquila ou um grupo C1-6 alcóxi. Exemplos mais específicos dos compostos incluem compostos descritos nos documentos WO 2010/48520, WO 2008/135791, US4689338, US 4698348 ou WO 2007/030777. Exemplos preferidos de compostos que têm (um) esqueleto(s) de imidazoquinolina incluem Imiquimode.
[151] Exemplos de compostos que têm (um) esqueleto(s) de imidazopiridina incluem compostos que têm um esqueleto de 4-amino- 1,3-di-hidro-2H-imidazo[4,5-c]piridina-2-ona, tais como compostos que têm um esqueleto de 4-amino-1,3-di-hidro-2H-imidazo[4,5-c]piridina-2- ona, na qual a posição 6 ou a posição 7 é substituída por um grupo
C1-6 alquila ou um grupo C1-6 alcóxi, cada um deles podendo ser opcionalmente substituído por um átomo de halogênio, e a posição 1 é substituída por um grupo alquila (por exemplo, um grupo alquila de cadeia linear que tem 1 a 4 átomos de carbono) opcionalmente substituído por um anel carbocíclico aromático de 5 a 6 elementos, um anel heterocíclico aromático de 5 a 6 elementos ou um anel heterocíclico que contém nitrogênio alifático de 4 a 7 elementos. Exemplos mais específicos dos compostos incluem os compostos descritos no documento WO 2007/93901 e PF-4171455 [4-amino-1-benzil-6- (trifluorometil)-1,3-di-hidro-2H-imidazo[4,5-c]piridina-2-ona].
[152] Exemplos de compostos que têm (um) esqueleto(s) de quinazolina incluem derivados que têm um esqueleto de 2,4- diaminoquinazolina, tais como compostos que têm um esqueleto de 2,4- diaminoquinazolina, na qual a posição 4 é substituída por um grupo alquila (por exemplo, um grupo alquila de cadeia linear ou ramificada que tem 1 a 8 átomos de carbono) opcionalmente substituído por um grupo hidroxila, um átomo de halogênio e assim por diante. Exemplos específicos incluem os compostos descritos nos documentos WO 2012/156498 ou WO 2014/76221.
[153] Exemplos de compostos que têm (um) esqueleto(s) de guanina incluem compostos que têm um esqueleto de 2-amino-6- oxopurina e, especificamente, Loxoribina.
[154] Exemplos de compostos que têm (um) esqueleto(s) de di- hidropteridina incluem compostos que têm um esqueleto de 4-amino- 7,8-di-hidropteridina-6(5H)-ona, especificamente Vesatolimode [4- amino-2-butoxi-8-[[3-[(pirrolidin-1-il)metil]fenil]metil]-7,8-di- hidropteridina-6(5H)-ona].
[155] Outros exemplos de compostos de baixo peso molecular que são agonistas de TLR7 incluem Isatoribina, ANA-773 e os compostos descritos no documento WO 2010/077613.
[156] Exemplos de lipídios nos compostos conjugados nos quais (um) composto(s) de baixo peso molecular que aumenta(m) a atividade fisiológica de TLR7 e (um) lipídio(s) são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es), conforme usado no presente documento, incluem: ácidos graxos saturados ou insaturados que têm menos de 100 átomos de carbono; diglicerídeos de ácidos graxos saturados ou insaturados que têm 10 a 30 átomos de carbono e glicerina; fosfolipídios que incluem ácidos fosfatídicos nos quais um ácido fosfórico está adicionalmente ligado a um diglicerídeo de ácidos graxos saturados ou insaturados que tem 10 a 30 átomos de carbono e glicerol; e assim por diante. De preferência, ácidos graxos saturados ou insaturados que têm 18 a 30 átomos de carbono são exemplificados e, mais preferivelmente, ácidos graxos derivados de esqualeno ou esqualano são exemplificados.
[157] Exemplos de ácidos graxos derivados de esqualeno incluem ácido (4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa- 4,8,12,16,20,24-hexaenoico e assim por diante. Exemplos de ácidos graxos derivados de esqualano incluem ácido 4,8,12,17,21,25- hexametil-hexacosanoico e assim por diante. Um composto derivado de esqualeno ou esqualano pode ser ligado a um espaçador para fornecer um composto conjugado por meio de métodos bem conhecidos por aqueles versados na técnica, conforme apropriado.
[158] Exemplos das partes dos compostos de baixo peso molecular que aumentam a atividade fisiológica de TLR7 nos compostos conjugados nos quais (um) composto(s) de baixo peso molecular que aumenta(m) a atividade fisiológica de TLR7 e (um) lipídio(s) são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es), conforme usado no presente documento, incluem os compostos de baixo peso molecular supracitados que aumentam a atividade fisiológica de TLR7.
[159] Exemplos dos compostos conjugados nos quais (um)
composto(s) de baixo peso molecular que aumenta(m) a atividade fisiológica de TLR7 e (um) lipídio(s) são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es), conforme usado no presente documento, incluem adjuvantes de vacina nos quais (um) ácido(s) graxo(s) e (um) composto(s) de imidazoquinolina são covalentemente ligados (Documentos de Patente 4, 5, 6 e Documento Não Patente 4), compostos conjugados de (um) fosfolipídio(s) e (um) composto(s) de adenina (Documentos de Patente 7, 8, 9), compostos conjugados de (um) ácido(s) graxo(s) e (um) composto(s) de adenina (Documento Não Patente 5), compostos conjugados de (um) glicerídeo(s) de ácido(s) graxo(s) e (um) composto(s) de adenina através de um polietileno glicol (Documento de Patente 10), compostos conjugados de (um) esqualeno(s) e (um) composto(s) de adenina (Documento de Patente 11), compostos conjugados de (um) esqualeno(s) e (um) composto(s) de pirimidina (Documento de Patente 12) e assim por diante.
[160] Exemplos preferidos dos compostos conjugados nos quais (um) composto(s) de baixo peso molecular que aumenta(m) a atividade fisiológica de TLR7 e (um) lipídio(s) são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es), conforme usado no presente documento, incluem compostos conjugados nos quais (um) composto(s) de baixo peso molecular que tem/têm(um) esqueleto(s) de adenina e (um) lipídio(s) derivado(s) de esqualeno ou esqualano são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es), compostos conjugados nos quais (um) composto(s) de baixo peso molecular que tem/têm (um) esqueleto(s) de pirimidina) e (um) lipídio(s) derivado(s) de esqualeno ou esqualano são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es) e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[161] Exemplos preferidos dos compostos conjugados nos quais (um) composto(s) de baixo peso molecular que tem/têm (um) esqueleto(s) de adenina e (um) lipídio(s) derivado(s) de esqualeno ou esqualano são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es) incluem os compostos descritos no Documento de Patente 11.
[162] Exemplos preferidos dos compostos conjugados nos quais (um) composto(s) de baixo peso molecular que tem/têm (um) esqueleto(s) de pirimidina e (um) lipídio(s) derivado(s) de esqualeno ou esqualano são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es) incluem os compostos descritos no Documento de Patente 12. Mais preferivelmente, os compostos representados pela fórmula (1) ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são exemplificados.
[163] em que:
[164] X representa metileno,
[165] R1 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono os quais podem ser substituídos por um grupo hidróxi,
[166] R2 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila que tem 1 a 6 átomos de carbono,
[167] R3 representa um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono,
[168] R4 representa um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio, um grupo hidróxi, um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono ou um grupo alcóxi que tem 1 a 3 átomos de carbono,
[169] Y1 representa uma ligação simples ou metileno,
[170] Y2 representa uma ligação simples ou -C(O)-,
[171] L representa um alquileno de cadeia reta que tem 2 ou 3 átomos de carbono,
[172] R5 e R6 representam, independentemente, um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono ou R5 e R6 são tomados juntos para formar um heterociclo saturado que contém nitrogênio de 5 a 8 elementos substituído ou não substituído contanto que, quando o heterociclo saturado que contém nitrogênio de 5 a 8 elementos é substituído, ele seja substituído pelos mesmos ou diferentes 1 a 4 substituintes selecionados a partir de um grupo hidróxi e um átomo de halogênio,
[173] m representa 0 ou 1,
[174] são todos ligações duplas.
[175] O "átomo de halogênio" inclui um átomo de flúor, um átomo de cloro, um átomo de bromo e um átomo de iodo e, de preferência, inclui um átomo de flúor ou um átomo de cloro.
[176] Exemplos de "um alquileno de cadeia linear que tem 2 ou 3 átomos de carbono" incluem, porém sem limitações, etileno e n- propileno.
[177] O termo "um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono" inclui um grupo alquila linear ou ramificado que tem 1 a 3 átomos de carbono. Exemplos incluem, porém sem limitações, metila, etila, propila, e iso-propila.
[178] O termo "um grupo alcóxi que tem 1 a 3 átomos de carbono" inclui um grupo alcóxi linear ou ramificado que tem 1 a 3 átomos de carbono. Exemplos incluem, porém sem limitações, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi.
[179] O termo "heterociclo saturado que contém nitrogênio de 5 a 8 elementos" inclui um heterociclo saturado que contém nitrogênio de 5 a 8 elementos que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir de 2 ou 3 átomos de nitrogênio, 0 ou 1 átomo de oxigênio e 0 ou 1 átomo de enxofre, em que pelo menos dois átomos de nitrogênio estão contidos no anel. Exemplos específicos incluem pirrolidina, piperidina, per-hidroazepina, imidazolidina, piperazina, morfolina, tiomorfolina, per-
hidro-1,4-diazepina e assim por diante.
[180] Exemplos do grupo substituinte para o heterociclo saturado que contém nitrogênio incluem, de preferência, um grupo metila, um grupo etila, um grupo propila, um grupo hidroximetila, um grupo hidroxietila, um grupo carbonila, um grupo hidróxi e um átomo de halogênioe, mais preferivelmente, um grupo hidróxi e um átomo de halogênio. O heterociclo saturado que contém nitrogênio pode ser substituído por 1 a 4 grupos substituintes iguais ou diferentes.
[181] Exemplos mais preferidos dos compostos conjugados nos quais (um) composto(s) de baixo peso molecular que tem/têm (um) esqueleto(s) de pirimidina e (um) lipídio(s) derivado(s) de esqualeno ou esqualano são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es) incluem:
[182] (4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-amino-4-{[(3S)-1-hidroxi- hexan-3-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]benzil}(metil)amino]etil}- 4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexanamida (Documento de Patente 12, composto do Exemplo 1, Fórmula (2) conforme abaixo);
[183] (4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-amino-4-{[(2S)-1- hidroxipentan-2-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]-3- metoxibenzil}piperazin-1-il)-4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa- 4,8,12,16,20,24-hexaen-1-ona (Documento de Patente 12, composto do Exemplo 2);
[184] (4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-amino-4-{[(2S)-1- hidroxipentan-2-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]-3- metoxibenzoil}piperazin-1-il)-4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa- 4,8,12,16,20,24-hexaen-1-ona (Documento de Patente 12, composto do Exemplo 3);
[185] 4-[(2-amino-4-{[(2S)-1-hidroxipentan-2-il]amino}-6- metilpirimidin-5-il)metil]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-
hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexaenoil]amino}etil)-3- metoxibenzamida (Documento de Patente 12, composto do Exemplo 4, Fórmula (3) conforme abaixo);
[186] 4-[(2-amino-4-{[(2S)-1-hidroxipentan-2-il]amino}-6- metilpirimidin-5-il)metil]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25- hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexaenoil](metil)amino}etil)-3- metoxibenzamida (Documento de Patente 12, composto do Exemplo 5); e
[187] sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[188] Exemplos mais preferidos dos compostos conjugados nos quais (um) composto(s) de baixo peso molecular que tem/têm (um) esqueleto(s) de pirimidina e (um) lipídio(s) derivado(s) de esqualeno ou esqualano são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es) incluem:
[189] (4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-amino-4-{[(3S)-1-hidroxi- hexan-3-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]benzil}(metil)amino]etil}- 4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexanamida (Documento de Patente 12, composto do Exemplo 1, Fórmula (2) conforme abaixo),
[190] 4-[(2-amino-4-{[(2S)-1-hidroxipentan-2-il]amino}-6- metilpirimidin-5-il)metil]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25- hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexaenoil]amino}etil)-3- metoxibenzamida (Documento de Patente 12, composto do Exemplo 4, Fórmula (3) conforme abaixo), e
[191] sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[192] Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis, conforme usado no presente documento, incluem sais de adição de ácido ou sais de adição de base. Exemplos do sal de adição de ácido incluem sais de adição de ácido com ácidos inorgânicos ou orgânicos, tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido trifluoroacético, ácido cítrico e ácido maleico. Exemplos do sal de adição de base incluem sais de metal alcalino, tais como sal de sódio e sal de potássio, sais de metal alcalino-terroso, tais como sal de cálcio e sal de amônio.
[193] Conforme usado no presente documento, um antígeno de vacina universal contra a influenza refere-se a um antígeno de vacina contra a influenza que induz a um anticorpo que pode proteger amplamente contra a influenza, incluindo vírus variantes (por exemplo, um anticorpo de proteção cruzada).
[194] O antígeno de vacina universal contra a influenza inclui, por exemplo, antígenos em partículas que compreendem uma proteína derivada do vírus da influenza descrita no Documento de Patente 14 e antígenos HA de influenza descritos nos Documentos Não Patentes 6, 7 e 8.
[195] O exemplo preferido do antígeno de vacina universal contra a influenza inclui "um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza que produz um anticorpo que se liga a uma LAH de uma região de haste de HA". Mais preferivelmente, "um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza, em que a região de haste de HA é exposta ao exterior, capaz de produzir um anticorpo que se liga a uma LAH de uma região de haste de HA" (daqui em diante denominada como a vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção) é exemplificado, o qual pode ser fabricado, por exemplo, por meio de um método que compreende uma etapa de aplicar um tratamento ácido descrito abaixo.
[196] Uma vez que a vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção induz a um anticorpo que se liga à LAH na região de haste da hemaglutinina que é menos provável de causar variação antigênica, a vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção pode ser eficaz contra um vírus da influenza no qual um sítio antigênico, o qual está localizado na região de cabeça da hemaglutinina, que se liga a um anticorpo induzido por uma vacina fragmentada de HA de influenza convencional, sofreu mutação.
[197] Em uma modalidade preferida, a vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção se liga a um anticorpo monoclonal de ligação à LAH mais fortemente do que uma vacina fragmentada de HA atual. Por exemplo, a vacina fragmentada de HA de influenza se liga ao anticorpo monoclonal de ligação à LAH pelo menos 1,05 vezes, de preferência pelo menos 1,1 vezes, mais preferivelmente pelo menos 1,5 vezes e, ainda mais preferivelmente, pelo menos duas vezes mais fortemente do que a vacina fragmentada de HA atual. Neste contexto, "a vacina fragmentada de HA de influenza se liga pelo menos 1,05 vezes, pelo menos 1,1 vezes, pelo menos 1,5 vezes ou pelo menos duas vezes mais fortemente do que a vacina fragmentada de HA atual" significa, por exemplo, que o recíproco da concentração de anticorpo no momento em que uma absorbância determinada por meio de regressão é 0,7 é pelo menos 1,05 vezes, pelo menos 1,1 vezes, pelo menos 1,5 vezes ou pelo menos duas vezes o recíproco da concentração de anticorpo da vacina fragmentada de HA atual. Em uma modalidade preferida, a capacidade de ligação da vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção ao anticorpo monoclonal de ligação à LAH é superior àquela da vacina fragmentada de HA atual. Embora o limite máximo não seja particularmente limitado, a capacidade de ligação pode estar em uma faixa, por exemplo, a partir de 1,05 a 200 vezes, 1,1 a 150 vezes, 1,5 a 100 vezes ou 2 a 50 vezes. Alternativamente, a faixa da capacidade de ligação da vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção ao anticorpo monoclonal de ligação à LAH comparado com aquela da vacina fragmentada de HA atual pode ser indicada por uma combinação do valor limite mínimo selecionado a partir de 1,05, 1,1, 1,5, 2, 3, 4 e 5 e o valor limite máximo selecionado a partir de 200, 150, 100, 50, 30 e 20. Para medição da capacidade de ligação da vacina fragmentada de HA de influenza ao anticorpo monoclonal de ligação à LAH, qualquer método pode ser usado sem limitações particulares, e um método comum conhecido por aqueles versados na técnica pode ser empregado. Por exemplo, a capacidade de ligação pode ser medida através de um método descrito nos exemplos do presente pedido.
[198] No presente pedido, o "anticorpo monoclonal de ligação à LAH" significa um anticorpo monoclonal que se liga à LAH. Para a produção do anticorpo monoclonal, qualquer método pode ser usado sem limitações particulares, e um método comum conhecido por aqueles versados na técnica pode ser empregado. Na medição da capacidade de ligação da vacina fragmentada de HA de influenza ao anticorpo monoclonal de ligação à LAH, assume-se que o anticorpo monoclonal de ligação à LAH é capaz de se ligar a um peptídeo correspondente em pelo menos uma porção de LAH de um vírus da influenza do qual a vacina fragmentada de HA de influenza é derivada.
[199] No presente pedido, a "vacina fragmentada de HA atual"
significa uma vacina da qual os componentes lipídicos que se tornam pirogênios são removidos através de um tratamento da vacina de vírus inteiro com éter e pode ser produzida por meio de um método descrito no Exemplo 1 do presente pedido, por exemplo. A vacina fragmentada de HA atual também pode ser uma vacina fragmentada de HA de influenza produzida sem ser submetida a um tratamento ácido, em contraste com a vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção preparada por meio de um método que inclui o tratamento ácido subsequente.
[200] Um exemplo do método para a produção da vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção é descrito abaixo. O método para produzir uma vacina fragmentada de HA de influenza inclui uma etapa de submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza a um tratamento ácido.
[201] Uma vacina fragmentada de HA de influenza é preparada por meio do tratamento de uma vacina de vírus inteiro com éter para remover os componentes lipídicos que se tornam pirogênicos. A vacina fragmentada de HA de influenza tem a proteína HA como ingrediente principal porque a vacina fragmentada de HA de influenza é produzida pela coleta da proteína HA, a qual é necessária para a imunização, das superfícies das partículas virais por meio de centrifugação em gradiente de densidade.
[202] A glicoproteína denominada "proteína de pico" se projeta da superfície de um vírus da influenza (Figura 1). Um vírus da influenza A tem dois tipos de proteínas de pico, a saber, HA e NA (neuraminidase), as quais ajudam o vírus a causar a infecção. A HA se liga a uma célula a ser infectada e ajuda a entrada do vírus na célula. A HA frequentemente causa variação antigênica. A NA desassocia a célula infectada da HA e serve para liberar os vírus replicados da célula.
[203] Um tratamento ácido da vacina fragmentada de HA de influenza altera a estrutura da proteína HA para uma estrutura denominada de tipo fusão de membrana. Na proteína HA de tipo fusão de membrana, a região de haste é exposta ao exterior da membrana viral em vez da região de cabeça, com uma grande alteração estrutural na conformação da haste antigênica. Os presentes inventores descobriram que, quando a proteína HA de tipo de fusão de membrana in vivo é usada como uma vacina, um anticorpo que se liga a uma LAH da região de haste é induzido e que este anticorpo tem um efeito protetor contra uma cepa viral que causa variação antigênica.
[204] O tratamento ácido não está particularmente limitado e pode ser realizado em um pH, por exemplo, de 3,0 a 6,5, de preferência 4,0 a 6,0 e, mais preferivelmente, 4,4 a 5,8. O ácido para uso no tratamento ácido não está particularmente limitado e pode ser, por exemplo, ácido fosfórico, ácido cítrico, ácido maleico ou qualquer outro ácido adequado.
[205] A produção da vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção pode incluir realizar um tratamento com formalina. Em uma modalidade preferida, o tratamento ácido da vacina fragmentada de HA de influenza é realizado antes do tratamento com formalina. Na preparação de um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção (um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza capaz de produzir um anticorpo que se liga à LAH da região de haste de HA), uma fração de HA para uso para a vacina fragmentada de HA de influenza atual é submetida a um tratamento ácido e, depois, a um tratamento com formalina. Isto torna possível obter um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza que produz um anticorpo de reação cruzada mais eficaz e, portanto, é mais preferível como um antígeno de vacina universal contra a influenza. Isto é, em uma modalidade preferida do presente pedido, uma fração de HA da qual os solventes de gordura são removidos através de um tratamento das partículas virais com éter ou qualquer outro agente apropriado é submetida a um tratamento ácido e, depois, a um tratamento com formalina.
[206] Em uma modalidade preferida do presente pedido, a vacina fragmentada de HA de influenza antes de tratamento ácido é uma vacina fragmentada que não foi submetida ao tratamento com formalina.
[207] A vacina de HA de influenza disponível no mercado (nome comercial) já foi submetida a um tratamento com formaldeído ou uma substância com ação equivalente após o vírus ser decomposto por éter ou quaisquer outros agentes apropriados e solventes de gordura serem removidos, conforme descrito em Biological Products Standards (30 de março, 2004, Notificação Ministerial Nº 155 do Ministério da Saúde, Trabalho e Bem-Estar, revisão mais recente em 30 de novembro de 2018, Notificação Ministerial Nº 409). É preferível não usar a vacina de HA de influenza disponível no mercado (nome comercial), a qual é uma das vacinas fragmentadas de HA de influenza, para a produção da vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção, uma vez que ela já foi tratada com formaldeído ou quaisquer outros agentes apropriados.
[208] A concentração de formalina em uma solução de tratamento com formalina para uso no tratamento com formalina da vacina fragmentada de HA de influenza após o tratamento ácido é, por exemplo, 0,0005 % v/v a 10 % v/v, de preferência 0,001 % v/v a 1 % v/v, mais preferivelmente 0,003 % v/v a 0,5 % v/v e, ainda mais preferivelmente, 0,005 % v/v a 0,1 % v/v. É preferível usar formalina de grau médico.
[209] Com base nas diferenças de antigenicidade, a HA do vírus da influenza A é classificada em 18 subtipos (H1 a H18) e a NA em 9 subtipos (N1 a N9). A vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção é aplicável a todos estes subtipos. Além disso, o método para produzir a vacina fragmentada de HA de influenza de acordo com a presente invenção pode produzir uma vacina que é eficaz não apenas contra o vírus da influenza A, mas também contra o vírus da influenza B que tem HA. Assim, vacinas contra o vírus da influenza A e o vírus da influenza B estão dentro do escopo da vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção.
[210] Exemplos preferidos das vacinas fragmentadas de HA de influenza da presente invenção incluem aquelas derivadas do vírus da influenza H3N2 e do vírus da influenza H1N1.
[211] No presente pedido, uma "vacina fragmentada de HA de influenza de um único subtipo de HA" refere-se a uma vacina fragmentada de HA de influenza de um único subtipo de HA que é selecionado a partir dos 18 subtipos (H1 a H18) do vírus da influenza A ou do vírus da influenza B. Assim como com o subtipo de HA único, os subtipos de NA podem ser idênticos ou diferentes. Os subtipos de HA preferidos incluem H1, H3 e B.
[212] Para produzir uma vacina mista que contém dois ou mais subtipos de HA, vacinas fragmentadas de HA de influenza, cada uma das quais é de um único subtipo de HA, são submetidas a um tratamento ácido e uma pluralidade (duas ou mais) de vacinas fragmentadas de HA de influenza assim obtidas podem ser misturadas juntas. Alternativamente, uma vacina mista também pode ser produzida ao realizar um tratamento ácido em uma vacina fragmentada de HA de influenza previamente preparada pela mistura de vacinas de dois ou mais subtipos de HA. Para inocular a vacina como uma vacina que inclui dois ou mais subtipos, a vacina inclui, de preferência, um a três subtipos selecionados a partir do grupo que consiste em H1, H3 e B.
[213] A vacina fragmentada de HA de influenza de acordo com a presente invenção produz um anticorpo que se liga a uma LAH que é menos provável de causar variação. Portanto, a vacina pode ter proteção cruzada contra um vírus da influenza que é conhecido como uma variante antigênica, contanto que o vírus tenha o mesmo subtipo de HA. Além disso, a vacina fragmentada de HA de influenza obtida por meio do método de produção de acordo com a presente invenção pode ter reatividade cruzada entre subtipos de HA que têm sequências de aminoácidos de LAH similares (por exemplo, H3 e H7).
[214] A vacina fragmentada de HA de influenza obtida por meio do método de produção acima tem um efeito protetor contra uma cepa viral que causa variação antigênica. Por exemplo, se uma vacina fragmentada de HA atual for preparada a partir de partículas virais de influenza H3N2 (A/Fujian/411/02 (H3N2)) e submetida a um tratamento ácido, a vacina pode ter um efeito protetor contra a infecção não apenas por A/Fujian/411/02 (H3N2), mas também A/Guizhou/54/89 (H3N2), A/OMS/5389/88 (H3N2), A/Beijing/32/92 (H3N2), A/Inglaterra/427/88 (H3N2), A/Johannesburg/33/94 (H3N2), A/Leningrado/360/86 (H3N2), A/Mississippi/1/85 (H3N2), A/Filipinas/2/82 (H3N2), A/Shangdong/9/93 (H3N2), A/Shanghai/16/89 (H3N2), A/Shanghai/24/90 (H3N2), A/Sichuan/2/87 (H3N2), A/Kitakyushyu/159/93 (H3N2), A/Akita/1/94 (H3N2), A/Panamá/2007/99 (H3N2), A/Wyoming/03/03 (H3N2), A/New York/55/2004 (H3N2) ou A/Hiroshima/52/2005 (H3N2), por exemplo. Além disso, por exemplo, se uma vacina fragmentada de HA atual for preparada a partir de partículas virais de influenza H1N1 (A/Porto Rico/8/34 (H1N1)) e submetida a um tratamento ácido, a vacina também pode ter um efeito protetor contra a infecção não apenas por A/Porto Rico/8/34 (H1N1), mas também A/Narita/1/09 (H1N1), A/Beijing/262/95 (H1N1), A/Brasil/11/78 (H1N1), A/Chile/1/83 (H1N1), A/New Jersey/8/76 (H1N1), A/Taiwan/1/86 (H1N1), A/Yamagata/32/89 (H1N1), A/New Caledonia/20/99 (H1N1), A/Ilhas Salomão/3/2006 (H1N1), A/Brisbane/59/2007 (H1N1) ou A/México/4108/2009 (H1N1), por exemplo.
[215] A vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção tem uma capacidade aumentada de induzir a anticorpos IgG2 anti-haste através de combinação com um composto que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 e exibe excelente atividade de vacina.
[216] Uma modalidade da combinação de um antígeno de vacina universal contra a influenza e um adjuvante de vacina no presente documento inclui uma combinação de (um) antígeno(s) de vacina universal(s) selecionado(s) a partir de antígenos em partículas que compreendem uma proteína derivada do vírus da influenza descrita no Documento de Patente 14, antígenos HA de influenza descritos nos Documentos Não Patente 6, 7 e 8 e antígenos da vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana; e (um) adjuvante(s) de vacina selecionado(s) a partir de alúmen, emulsões (por exemplo, adjuvante de Freund, MF59, AddaVax(TM), AS03, etc.), substâncias que aumentam a atividade fisiológica de receptores NOD, substâncias que aumentam a atividade fisiológica de receptores RIG-I, substâncias que aumentam a atividade fisiológica dos receptores de lectina de tipo C, substâncias que aumentam a atividade fisiológica dos receptores citosólicos de DNA, substâncias que aumentam a atividade fisiológica de STING e substâncias que aumentam a atividade fisiológica de TLR.
[217] Outra modalidade da combinação de um antígeno de vacina universal contra a influenza e um adjuvante de vacina inclui uma combinação de (um) antígeno(s) de vacina fragmentada de HA de influenza que produz um anticorpo que se liga a uma LAH de uma região de haste de HA; e (uma) substância(s) que aumenta(m) a atividade fisiológica de TLR.
[218] Outra modalidade da combinação de um antígeno de vacina universal contra a influenza e um adjuvante de vacina inclui uma combinação de (um) antígeno(s) de vacina fragmentada de HA de influenza, em que a região de haste de HA é exposta ao exterior, capaz de produzir um anticorpo que se liga a uma LAH de uma região de haste de HA; e (uma) substância(s) que aumenta(m) a atividade fisiológica de TLR7 selecionada(s) a partir de compostos de baixo peso molecular que aumentam a atividade fisiológica de TLR7 e compostos conjugados, em que (um) composto(s) de baixo peso molecular que aumenta(m) a atividade fisiológica de TLR7 e (um) lipídio(s) são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es).
[219] Outra modalidade da combinação de um antígeno de vacina universal contra a influenza e um adjuvante de vacina inclui uma combinação de (um) antígeno(s) de vacina fragmentada de HA de influenza, em que a região de haste de HA é exposta ao exterior, capaz de produzir um anticorpo que se liga a uma LAH de uma região de haste de HA; e (um) composto(s) conjugado(s), em que (um) composto(s) de baixo peso molecular que aumenta(m) a atividade fisiológica de TLR7 e (um) lipídio(s) são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es), tem um peso molecular de 200 a 600 e tem (um) esqueleto(s) de adenina, (um) esqueleto(s) de pirimidina, (um) esqueleto(s) de imidazoquinolina, (um) esqueleto(s) de imidazopiridina ou (um) esqueleto(s) de quinazolina.
[220] Outra modalidade da combinação de um antígeno de vacina universal contra a influenza e um adjuvante de vacina inclui uma combinação de (um) antígeno(s) de vacina fragmentada de HA de influenza, em que a região de haste de HA, a qual é exposta ao exterior, aumenta a antigenicidade da LAH da região de haste de HA, é capaz de produzir um anticorpo que se liga à LAH da região de haste de HA; e (um) composto(s) conjugado(s), em que (um) composto(s) de baixo peso molecular que tem/têm (um) esqueleto(s) de pirimidina e (um) lipídio(s) derivado(s) de esqualeno ou esqualano são quimicamente ligados através de (um) espaçador(es).
[221] Outra modalidade da combinação de um antígeno de vacina universal contra a influenza e um adjuvante de vacina inclui uma combinação de (um) antígeno(s) de vacina fragmentada de HA de influenza, em que a região de haste de HA, a qual é exposta ao exterior, aumenta a antigenicidade da LAH da região de haste de HA, é capaz de produzir um anticorpo que se liga à LAH da região de haste de HA; e (um) composto(s) que aumenta(m) a atividade fisiológica de TLR7 representado(s) pela Fórmula (1) ou (um) sal(is) farmaceuticamente aceitável(is) do(s) mesmo(s):
[222] em que:
[223] X representa metileno,
[224] R1 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono os quais podem ser substituídos por um grupo hidróxi,
[225] R2 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila que tem 1 a 6 átomos de carbono,
[226] R3 representa um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono,
[227] R4 representa um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio, um grupo hidróxi, um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono ou um grupo alcóxi que tem 1 a 3 átomos de carbono,
[228] Y1 representa uma ligação simples ou metileno,
[229] Y2 representa uma ligação simples ou -C(O)-,
[230] L representa um alquileno de cadeia reta que tem 2 ou 3 átomos de carbono,
[231] R5 e R6 representam, independentemente, um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono ou R5 e R6 são tomados juntos para formar um heterociclo saturado que contém nitrogênio de 5 a 8 elementos substituído ou não substituído contanto que, quando o heterociclo saturado que contém nitrogênio de 5 a 8 elementos é substituído, ele seja substituído pelos mesmos ou diferentes 1 a 4 substituintes selecionados a partir de um grupo hidróxi e um átomo de halogênio,
[232] m representa 0 ou 1,
[233] são todos ligações duplas.
[234] Outra modalidade da combinação de um antígeno de vacina universal contra a influenza e um adjuvante de vacina inclui uma combinação de (um) antígeno(s) de vacina fragmentada de HA de influenza, em que a região de haste de HA, a qual é exposta ao exterior, aumenta a antigenicidade da LAH da região de haste de HA, é capaz de produzir um anticorpo que se liga à LAH da região de haste de HA; e (um) composto(s) que aumenta(m) a atividade fisiológica de TLR7 selecionado(s) a partir dos seguintes compostos:
[235] (4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-amino-4-{[(3S)-1-hidroxi- hexan-3-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]benzil}(metil)amino]etil}- 4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexanamida;
[236] (4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-amino-4-{[(2S)-1- hidroxipentan-2-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]-3- metoxibenzil}piperazin-1-il)-4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa- 4,8,12,16,20,24-hexaen-1-ona;
[237] (4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-amino-4-{[(2S)-1- hidroxipentan-2-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]-3- metoxibenzoil}piperazin-1-il)-4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa- 4,8,12,16,20,24-hexaen-1-ona;
[238] 4-[(2-amino-4-{[(2S)-1-hidroxipentan-2-il]amino}-6- metilpirimidin-5-il)metil]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25- hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexaenoil]amino}etil)-3- metoxibenzamida;
[239] 4-[(2-amino-4-{[(2S)-1-hidroxipentan-2-il]amino}-6- metilpirimidin-5-il)metil]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25- hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexaenoil](metil)amino}etil)-3- metoxibenzamida; e
[240] um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[241] Outra modalidade da combinação de um antígeno de vacina universal contra a influenza e um adjuvante de vacina inclui uma combinação de (um) antígeno(s) de vacina fragmentada de HA de influenza, em que a região de haste de HA, a qual é exposta ao exterior, aumenta a antigenicidade da LAH da região de haste de HA, é capaz de produzir um anticorpo que se liga à LAH da região de haste de HA; e (um) composto(s) que aumenta(m) a atividade fisiológica de TLR7 selecionado(s) a partir dos seguintes compostos:
[242] (4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-amino-4-{[(3S)-1-hidroxi- hexan-3-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]benzil}(metil)amino]etil}- 4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexanamida;
[243] 4-[(2-amino-4-{[(2S)-1-hidroxipentan-2-il]amino}-6- metilpirimidin-5-il)metil]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25- hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexaenoil]amino}etil)-3- metoxibenzamida; e
[244] um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[245] Outra modalidade da combinação de um antígeno de vacina universal contra a influenza e um adjuvante de vacina inclui uma combinação de (um) antígeno(s) de vacina contra a influenza HA capaz de produzir um anticorpo que se liga a uma LAH de uma região de haste de HA produzido ao submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza a um tratamento ácido; e (um) composto(s) que aumenta(m) a atividade fisiológica de TLR7 selecionado(s) a partir dos seguintes compostos:
[246] (4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-amino-4-{[(3S)-1-hidroxi-
hexan-3-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]benzil}(metil)amino]etil}- 4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexanamida;
[247] 4-[(2-amino-4-{[(2S)-1-hidroxipentan-2-il]amino}-6- metilpirimidin-5-il)metil]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25- hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexaenoil]amino}etil)-3- metoxibenzamida; e
[248] um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[249] Conforme usado no presente documento, o termo "uma quantidade profilaticamente eficaz" é a quantidade de antígeno de vacina universal contra a influenza e/ou adjuvante de vacina necessária para conferir um benefício na prevenção da influenza.
[250] No presente pedido, o antígeno de vacina universal contra a influenza e o adjuvante de vacina podem estar contidos juntos em uma composição e podem ser formulados em composições separadas, porém, da perspectiva de reduzir a carga para o paciente, é preferível que o antígeno de vacina universal contra a influenza e o adjuvante de vacina estejam contidos em uma composição de modo que possam ser administrados simultaneamente.
[251] Quando o antígeno de vacina universal contra a influenza e o adjuvante de vacina são formulados em composições separadas, as vias de administração da composição do antígeno de vacina universal contra a influenza e da composição do adjuvante de vacina podem ser iguais ou diferentes. No presente pedido, o antígeno de vacina e o adjuvante de vacina podem ser administrados simultaneamente ou com uma diferença de tempo, ou seja, a composição do antígeno de vacina e a composição do adjuvante de vacina podem ser administradas simultânea ou separadamente (por exemplo, a composição do adjuvante de vacina é administrada antes ou após administração da composição do antígeno de vacina). A composição do antígeno de vacina universal contra a influenza e a composição do adjuvante de vacina podem ser fornecidas como um kit que compreende as mesmas.
[252] Conforme usado no presente documento, as composições que compreendem um antígeno de vacina universal contra a influenza e/ou um adjuvante de vacina podem ser preparadas por meio de um método usual, com a adição de um ou mais diluentes ou carreadores farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, na forma de agentes orais, tais como comprimidos, cápsulas, grânulos, pós, trociscos, xaropes, emulsões, suspensões e assim por diante, ou agentes parentéricos, tais como agentes externos, supositórios, injeções, colírios, agentes intranasais, agentes pulmonares e assim por diante. Exemplos preferidos das formulações incluem soluções injetáveis ou intranasais ou formulações liofilizadas preparadas por meio de liofilização das ditas soluções.
[253] Exemplos das soluções injetáveis incluem emulsões e lipossomas que compreendem uma solução aquosa e composições oleaginosas, formulações de solução aquosa ou formulações de suspensão aquosa nas quais o antígeno de vacina universal contra a influenza e/ou o adjuvante de vacina (por exemplo, compostos representados pela fórmula (1) ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos) são dissolvidos ou dispersos em água ou formulações de solução oleaginosa ou formulações de suspensão oleaginosa nas quais o antígeno de vacina universal contra a influenza e/ou o adjuvante de vacina (por exemplo, compostos representados pela fórmula (1) ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos) são dissolvidos ou dispersos em óleo.
[254] Exemplos de soluções aquosas, formulações de solução aquosa ou formulações de suspensão aquosa incluem soluções aquosas ou suspensões aquosas, etc., as quais compreendem água destilada para injeção e que compreendem opcionalmente tampões, reguladores de pH, estabilizantes, agentes de isotonicidade e/ou emulsificantes.
[255] Exemplos das composições oleaginosas, das formulações de solução oleaginosa ou das formulações de suspensão oleaginosa incluem composições que contêm óleos e gorduras vegetais, óleos e gorduras animais, hidrocarbonetos, ésteres de ácidos graxos, fosfolipídios, etc. e, mais especificamente, uma composição que contém esqualeno, esqualano, etc.
[256] Exemplos de emulsificantes incluem tensoativos hidrofílicos e tensoativos hidrofóbicos.
[257] A composição no presente documento pode compreender um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis selecionados a partir do grupo que consiste em sacarose, sucralose, trealose, manitol, glicina, metionina, ácido cítrico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido acético, ácido trifluoroacético e um regulador de pH.
[258] O método de administração da composição, kit ou similar no presente pedido pode ser apropriadamente selecionado de acordo com condições tais como o tipo de doença, a condição do indivíduo e o local alvo. Exemplos do método de administração incluem administração parentérica, especificamente administração intravascular (por exemplo, intravenosa), subcutânea, intradérmica, intramuscular, transnasal e transdérmica.
[259] No presente pedido, as doses do adjuvante de vacina e do antígeno de vacina não estão particularmente limitadas e são apropriadamente selecionadas de acordo com o método de administração, o indivíduo, a idade do indivíduo, a forma de dosagem, a via de administração, etc.
[260] Por exemplo, quando o adjuvante de vacina é um composto da fórmula (1) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, o composto da fórmula (1) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser administrado a um animal de sangue quente em uma dose unitária a qual, em geral, varia a partir de 5 a 5000 mg/m2 de área de superfície corporal, ou seja, cerca de 0,1 ng/kg a 100 mg/kg, o que geralmente fornece uma dose profilaticamente eficaz. Formas de dosagem unitária, tais como injeções, comprimidos ou cápsulas geralmente contêm, por exemplo, 1 ng a 250 mg de um composto de fórmula (1) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e, de preferência, são usadas em uma dose que varia a partir de 1 ng a 50 mg/kg por dia. No entanto, a dose diária pode variar dependendo do hospedeiro a ser tratado, da via de administração e da gravidade da doença a ser tratada. Assim, a dose ideal pode ser determinada por um médico que trata o paciente individual ou animal de sangue quente. Se o adjuvante de vacina for administrado concomitantemente com o antígeno de vacina universal contra a influenza, o adjuvante de vacina é administrado, por exemplo, de acordo com o cronograma de administração do antígeno de vacina universal contra a influenza a seguir. Mesmo quando o adjuvante de vacina é administrado separadamente do antígeno de vacina universal contra a influenza, ele pode ser administrado, por exemplo, levando em conta o seguinte cronograma de administração do antígeno de vacina universal contra a influenza.
[261] No presente pedido, a dosagem do antígeno de vacina universal contra a influenza (por exemplo, vacinas fragmentadas de HA de influenza da presente invenção), a forma de dosagem da composição, o número de doses, o tempo necessário para uma única administração e assim por diante podem ser apropriadamente selecionados dependendo das condições, tais como a idade do indivíduo e o local de destino. Os antígenos de vacina universais contra a influenza (por exemplo, vacinas fragmentadas de HA de influenza da presente invenção) podem ser administrados em uma dose única ou podem ser administrados em uma dose inicial e uma dose de reforço que é administrada após um período de tempo predeterminado após a dose inicial, por exemplo. O período desde a vacinação inicial até a vacinação de reforço não está particularmente limitado, mas é, por exemplo, a partir de 20 dias a 3 anos, de preferência a partir de 3 meses a 2 anos e, mais preferivelmente, a partir de 6 meses a 1 ano. As quantidades de um antígeno de vacina universal contra a influenza para uma vacinação primária e uma vacinação de reforço não estão particularmente limitadas, mas são, por exemplo, 1 μg a 200 μg por dose, de preferência 10 μg a 30 μg por dose e, mais preferivelmente, 15 μg por dose. Por exemplo, uma dose é de 0,5 mL. As quantidades de uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 em uma vacinação primária e uma vacinação de reforço são, em geral, 0,0001 mg a 1000 mg, de preferência 0,001 mg a 1000 mg e, mais preferivelmente, 0,1 mg a 10 mg. Para uma vacinação primária e uma vacinação de reforço, o método de administração não está particularmente limitado, mas pode ser, por exemplo, administração nasal, subcutânea, intradérmica, transdérmica, intraocular, mucosa ou oral, de preferência administração intramuscular.
[262] Conforme usado no presente documento, "animal de sangue quente" inclui seres humanos e animais não humanos. Animais não humanos incluem, porém sem limitações, por exemplo, mamíferos, tais como primatas não humanos, ovelhas, cães, gatos, cavalos e gado. Dentre os animais de sangue quente, ser humanos, especialmente seres humanos que precisam de prevenção contra a influenza, são preferíveis.
[263] Uma modalidade do método para a prevenção de influenza no presente documento inclui um método que compreende administrar uma composição que compreende o(s) antígeno(s) de vacina universal(is) contra a influenza e (um) adjuvante(s) de vacina descritos acima. Outra modalidade inclui um método que compreende administrar uma composição de antígeno de vacina universal contra a influenza e uma composição de adjuvante de vacina. Exemplos
[264] Daqui em diante, a presente invenção será descrita em detalhes por Exemplos, porém, a presente invenção não está limitada aos mesmos. Exemplo 1: Vacina fragmentada de HA de influenza da presente invenção Preparação da Vacina Fragmentada de HA
[265] Tween 80 foi adicionado a partículas do vírus da influenza H3N2 (cepa X31) ou partículas do vírus da influenza H1N1 (cepa A/Porto Rico/8/34) suspensas em solução salina tamponada com fosfato em uma concentração final de 0,1 % v/v e suspensas nas mesmas. Éter dietílico foi adicionado e suspenso e a suspensão foi deixada em repouso até que a camada aquosa e a camada de éter dietílico se separassem completamente e, então, a camada de éter dietílico foi removida. Após repetir esta extração com éter, o éter dietílico remanescente na camada aquosa recuperada foi destilado em pressão normal para obter uma vacina fragmentada de HA.
2. Tratamento Ácido
[266] A vacina fragmentada de HA foi suspensa em solução salina tamponada com fosfato e um tratamento ácido foi, então, realizado ao adicionar tampão de citrato a 0,15 M (pH de 3,5) para levar o pH para 5,0.
[267] Depois de permanecer em temperatura ambiente durante 30 minutos, foi adicionado tampão de Tris a 1 M (pH de 8,0) para que o pH voltasse para 7,3. Depois disto, centrifugação foi realizada para obter uma vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana. Formalina foi adicionada à vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana assim preparada para uma concentração final de 0,05 % v/v e deixada em repouso por vários dias.
[268] Uma vacina fragmentada de HA atual foi preparada da mesma maneira conforme descrito em 1 acima, exceto que nenhum tratamento ácido foi fornecido.
3. Medição da Titulação de Anticorpo Anti-LAH por ELISA 3-1. Inoculação da Vacina Contra a Influenza H3N2
[269] Camundongos BALB/c (fêmeas, de 6 a 12 semanas de idade) foram intraperitonealmente inoculados com a vacina fragmentada de HA de H3N2 atual ou a vacina fragmentada de HA de tipo de fusão de membrana (10 μg de vacina + adjuvante AddaVax (InvivoGen) a 10 % v/v dissolvido em solução salina tamponada com fosfato para um volume líquido de 200 μl). Vinte e oito dias após a inoculação inicial, os camundongos foram inoculados intraperitonealmente com a vacina de HA de tipo fusão de membrana (10 μg dea vacina apenas foram dissolvidos em solução salina tamponada com fosfato para um volume líquido de 200 μl). Pelo menos 14 dias após a inoculação adicional, o sangue foi coletado dos camundongos inoculados com a vacina, dos quais foram coletados os soros. 3-2. Medição por ELISA
[270] A concentração do anticorpo anti-LAH no soro de camundongos BALB/c intraperitonealmente inoculados com a vacina fragmentada de HA de H3N2 atual ou a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana foi medida por ELISA (Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay) da seguinte maneira.
[271] Especificamente, um peptídeo sintético (H3; Ac-
RIQDLEKYVEDTKIDLWSYNAELLVALENQHTIDLTDSEMNKLFEKTR RQLRENADYKDDDDKC) (SEQ ID NO: 1) que corresponde a uma parte (alfa hélice longa) da porção da haste foi dissolvido em solução salina tamponada com fosfato a 10 μg (pH de 7,3) e adicionado a placas com
96 cavidades a 100 μl cada. Depois de repousar durante a noite a 4 °C, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato e foram adicionados 150 μl de solução salina tamponada com fosfato que contém albumina sérica bovina a 1 % v/v. Depois de permanecer em temperatura ambiente durante duas horas, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato. Em seguida, 100 μl de um soro de camundongo diluído em série com tampão de fosfato que contém Tween 20 a 0,05 % v/v e albumina sérica bovina a 1 % v/v e 100 μl de um anticorpo monoclonal padrão de concentração conhecida (H3; nome do clone V15- 5) foram adicionados a cada cavidade. Depois de permanecer em temperatura ambiente por duas horas, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato (que contém Tween 20 a 0,05 % v/v) e 100 μl de um anticorpo IgG anti-camundongo marcado com peroxidase (Southern Biotech) diluído com solução salina tamponada com fosfato que contém Tween 20 a 0,05 % v/v e albumina sérica bovina a 1 % v/v foi adicionada a cada cavidade. Após permanecer em temperatura ambiente durante duas horas, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato (que contém Tween 20 a 0,05 % v/v). Em seguida, 30 mg de comprimido de o-fenilenodiamina (Sigma) e 24 μl de solução de peróxido de hidrogênio a 30 % (30 % p/p; Sigma) foram adicionados a 60 ml de tampão de citrato (pH de 5,0) como substrato e 100 μl do resultante foram adicionado a cada cavidade. Após desenvolvimento da cor, 50 μl de ácido sulfúrico a 1 mol/L (Wako Pure Chemical Industries, Ltda.) foram adicionados para interromper a reação e um valor de absorbância a 490 nm foi medido usando um Leitor de Microplaca 450 (Biorad).
[272] Conforme mostrado na Figura 2, a titulação do anticorpo anti- LAH no soro dos camundongos BALB/c intraperitonealmente inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana foi significativamente maior do que a titulação do anticorpo anti-LAH no soro de camundongos BALB/c intraperitonealmente inoculados com a vacina fragmentada de HA atual.
4. Proteção Cruzada Contra Variantes Antigênicas
[273] Em um experimento de proteção contra a infecção com o vírus H3N2, 200 μl de um soro coletado de camundongos não inoculados, 200 μl de um soro coletado de camundongos inoculados com a vacina fragmentada de HA de H3N2 atual ou 200 μl de um soro coletado de camundongos inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana foram administrados intraperitonealmente a camundongos BALB/c (fêmeas, 6 a 12 semanas de idade).
[274] Três horas após a administração do soro, outro vírus da influenza H3N2 (A/Guizhou/54/89) com antigenicidade diferente da cepa da vacina foi administrado por via intranasal em 5X a dose letal a 50 camundongos (cinco vezes a quantidade de vírus letal para 50 % dos camundongos) sob anestesia.
[275] Os camundongos foram pesados e observados diariamente durante 21 dias a partir da infecção viral para estudar a alteração no peso corporal e a taxa de sobrevivência. O parâmetro para seres humanos foi definido em uma perda de peso corporal de 25 %.
[276] Conforme mostrado na Figura 3, em relação aos camundongos BALB/c inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana, a diminuição na taxa de sobrevivência foi significativamente contida em e após o nono dia após a infecção com o outro vírus da influenza H3N2 de antigenicidade diferente.
5. Medição da Titulação do Anticorpo Anti-LAH por ELISA 5-1. Partículas do Vírus da Influenza H1N1
[277] Camundongos C57BL/6 (fêmeas, 6 a 12 semanas de idade) foram inoculados intraperitonealmente com uma vacina fragmentada de HA de H1N1 atual ou uma vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana (10 μg de vacina + 10 μg de CpG-ODN 1760 suspenso em solução salina tamponada com fosfato e misturado com um volume igual de adjuvante incompleto de Freund (ROCKLAND) para um volume líquido de 200 μl). Vinte e oito dias após a inoculação inicial, os camundongos foram inoculados intraperitonealmente com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana (10 μg de vacina + 10 μg de CpG-ODN suspenso em solução salina tamponada com fosfato e misturado com um volume igual de adjuvante incompleto de Freund (ROCKLAND) para um volume líquido de 200 μl, da mesma forma que a inoculação inicial). Pelo menos 14 dias após a inoculação adicional, o sangue foi coletado dos camundongos inoculados com a vacina, dos quais foram coletados os soros. 5-2. Medição por ELISA
[278] A concentração do anticorpo anti-LAH no soro de camundongos C57BL/6 intraperitonealmente inoculados com a vacina fragmentada de HA de H1N1 atual ou a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana foi medida por ELISA da seguinte maneira.
[279] A medição foi realizada da mesma maneira conforme descrito acima, exceto que um peptídeo sintético (H1; Ac-
RIENLNKKVDDGFLDIWTYNAELLVLLENERTLDYHDSNVKNLYEKVR SQLKNNADYKDDDDKC) (SEQ ID NO: 2) que corresponde a uma parte (alfa hélice longa) de uma porção de haste monoclonal padrão foi usado e foi usada uma concentração conhecida (H1; nome do clone F2).
[280] Conforme mostrado na Figura 4, a titulação do anticorpo anti- LAH no soro dos camundongos C57BL/6 intraperitonealmente inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana foi significativamente maior do que a titulação do anticorpo anti-LAH no soro de camundongos C57BL/6 inoculados intraperitonealmente com a vacina fragmentada de HA atual.
6. Proteção Cruzada contra Variantes Antigênicas
[281] Em um experimento de proteção contra infecção pelo vírus H1N1, 200 μl de um soro coletado de camundongos não inoculados, 200 μl de um soro coletado de camundongos inoculados com a vacina fragmentada de HA de H1N1 atual ou 200 μl de um soro coletado de camundongos inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana foram administrados intraperitonealmente a camundongos C57BL/6 (fêmeas, 6 a 12 semanas de idade).
[282] Três horas após a administração do soro, outro vírus da influenza H1N1 (A/Narita/1/09) com antigenicidade diferente da cepa da vacina foi administrado por via intranasal em 5X a dose letal a 50 camundongos (cinco vezes a quantidade de vírus letal para 50 % dos camundongos) sob anestesia.
[283] Os camundongos foram observados diariamente durante 20 dias a partir da infecção viral para estudar a taxa de sobrevivência. Conforme mostrado na Figura 5, em relação aos camundongos C57BL/6 inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana, a diminuição na taxa de sobrevivência foi significativamente contida em e após o nono dia após a infecção com o outro vírus da influenza H1N1 de antigenicidade diferente.
7. Capacidade de Ligação do Anticorpo ao Epítopo de LAH
[284] A ligação de anticorpos monoclonais anti-LAH (#1 a #5 na Figura 6) preparados a partir de sangue periférico humano ou de murino infectado com a cepa X31 como uma vacina fragmentada de HA atual ou uma vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana foi medida por ELISA (Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay). A vacina fragmentada de HA atual ou vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana de um vírus da influenza H3N2 (cepa X31) foi dissolvida em solução salina tamponada com fosfato (pH de 7,3) e adicionada a uma placa com 96 cavidades a 50 μl cada. Depois de repousar durante a noite a 4 °C, cada cavidade foi lavadao três vezes com solução salina tamponada com fosfato e foram adicionados 150 μl de solução salina tamponada com fosfato que contém albumina sérica bovina a 1 % v/v. Depois de permanecer em temperatura ambiente por duas horas, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato (que contém Tween 20 a 0,05 % v/v) e 50 μl do anticorpo monoclonal de ligação à LAH diluído em série com tampão de fosfato que contém albumina sérica bovina a 1 % v/v foram adicionados. Depois de repousar durante a noite a 4 °C, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato (que contém Tween 20 a 0,05 % v/v) e 100 μl de um anticorpo IgG anti-camundongo marcado com peroxidase (Southern Biotech) diluído com solução salina tamponada com fosfato que contém Tween 20 a 0,05 % v/v e albumina sérica bovina a 1 % v/v foram adicionados a cada cavidade. Após permanecer em temperatura ambiente durante duas horas, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato (que contém Tween 20 a 0,05 % v/v). Em seguida, 30 mg de comprimido de o-fenilenodiamina (Sigma) e 24 µl de solução de peróxido de hidrogênio a 30 % (30 % p/p; Sigma) foram adicionados a 60 ml de tampão de citrato (pH de 5,0) como substrato e 50 µl do resultante foram adicionados a cada cavidade. Após o desenvolvimento da cor, 25 µL de ácido sulfúrico a 1 mol/L (Wako Pure Chemical Industries, Ltda.) foram adicionados para interromper a reação e um valor de absorbância a 490 nm foi medido usando o Microplate Reader 450 (Biorad). A alteração na capacidade de ligação foi calculada a partir dos valores de absorbância medidos em relação à vacina fragmentada de HA atual ou à vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana.
[285] Conforme mostrado na Figura 6, a capacidade de ligação do anticorpo monoclonal de ligação de LAH à vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana foi 1,05 a 21 vezes maior do que a capacidade de ligação à vacina fragmentada de HA atual. Os resultados mostram que um tratamento ácido da vacina fragmentada de HA aumenta a capacidade de ligação do anticorpo ao epítopo de LAH. Exemplo 2: Composição que Compreende Agonista de TLR e Vacina Fragmentada de HA de Influenza da Presente Invenção Preparação da Composição Adjuvante que Contém o Composto que Aumenta a Atividade Fisiológica de TLR7 Método de Preparação de A-1
[286] Dois vírgula noventa e seis gramas (2,96 g) de dimiristoil fosfatidil colina (DMPC), 2,04 g de fosfatidil glicerol de gema de ovo (EPG) e 0,5 g de agonista de TLR7 ((4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2- amino-4-{[(3S)-1-hidroxi-hexan-3-il]amino}-6-metilpirimidin-5- il)metil]benzil}(metil)amino]etil}-4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa- 4,8,12,16,20,24-hexanamida) (daqui em diante denominado como composto A) foram pesados e 20 g de ciclo-hexano e 0,4 g de etanol foram adicionados aos mesmos para dissolvê-los. Após filtração usando um filtro com membrana de 0,2 μm, o filtrado foi liofilizado. O sólido resultante foi disperso em solução aquosa de sacarose a 9 % v/v. A mistura foi submetida a uma extrusora para fornecer um lipossoma líquido. O lipossoma líquido que passou por um filtro de 0,22 μm foi liofilizado. Água destilada para injeção foi adicionada ao sólido resultante no momento de uso. Método de Preparação de A-2
[287] Quatro miligramas (4 mg) de agonista de TLR7 (cloridrato de (4-{[[3-(6-amino-2-butoxi-8-oxo-7,8-di-hidro-9H-purin-9-il)propil](3- piperidin-1-ilpropil)amino]metil}fenil)acetato de metila) (daqui em diante denominado como composto B) foram pesados e suspensos em 1 mL de solução salina tamponada com fosfato a 0,6 % v/v que contém Tween 80 a 0,1 % v/v (pH de 6). Método de Preparação de A-3
[288] O agonista de TLR7 (Composto A) foi dissolvido em componentes oleosos (esqualano, trioleato de sorbitano e α-tocoferol) de modo que a proporção em peso de Composto A, esqualano, trioleato de sorbitano, α-tocoferol fosse de 1:225:25:25. Os componentes aquosos (sacarose, polissorbato 80 e ascorbato de sódio) foram dissolvidos em água para injeção. A mistura resultante e a composição oleaginosa acima foram preliminarmente misturadas. Nesta mistura, a proporção em peso de Composto A, ascorbato de sódio, polissorbato 80, sacarose era de 1:10:25:500. A mistura foi emulsificada e dispersa usando um dispersor de emulsificação de pressão ultra alta. Após filtração em um filtro estéril de 0,2 μm, frascos de vidro foram enchidos com 1 mL da mistura, seguido de liofilização. Água destilada para injeção foi adicionada ao sólido resultante no momento de uso.
2. Administração da Composição da Presente Invenção que Compreende uma Vacina Fragmentada de HA de Influenza e Um Composto que Aumenta a Atividade Fisiológica de TLR7
[289] A vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana derivada da cepa X31 (10 μ g); e solução salina tamponada com fosfato; A-1 que contém 50 μ g de agonista de TLR7 (Composto A); A-2 que contém 200 μg de agonista de TLR7 (Composto B); A-3 que contém 10 μg de agonista de TLR7 (Composto A); Adjuvante AddaVax (InvivoGen) cujo volume era igual ao líquido da vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana derivada da cepa X31; ou uma mistura de 10 μg de CpG-ODN1760 suspensos em solução salina tamponada com fosfato e um volume igual de adjuvante incompleto de Freund (da Rockland); foram misturados para dar cada composição. Camundongos C57BL/6 (fêmeas, 6 a 12 semanas de idade) foram inoculados por via intradérmica nas coxas ou intramuscularmente nas coxas (50 μl em cada coxa, 100 μl no total) com a composição acima. Após 3 semanas, os mesmos camundongos receberam reforço com o mesmo antígeno e sob as mesmas condições. Duas semanas após o reforço, o sangue foi coletado, do qual o soro foi coletado.
3. Medição por ELISA
[290] A concentração de anticorpo anti-HA no soro dos camundongos foi medida por ELISA da seguinte maneira.
[291] Uma proteína HA recombinante (cepa X31 ou A/Uruguai/716/2007 do vírus da influenza H3N2) foi dissolvida em solução salina tamponada com fosfato (pH de 7,3) para 10 μg/ml e adicionada a placas com 96 cavidades a 100 μl cada. Depois de repousar durante a noite a 4 °C, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato e foram adicionados 150 μl de solução salina tamponada com fosfato que contém albumina sérica bovina a 1 % v/v. Depois de permanecer em temperatura ambiente durante duas horas, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato. Em seguida, 100 μl de um soro de camundongo diluído em série com tampão de fosfato que contém Tween 20 a 0,05 % v/v e albumina sérica bovina a 1 % v/v e 100 μl de um anticorpo monoclonal padrão de concentração conhecida (H3; nome do clone V15-5) foram adicionados a cada cavidade. Depois de permanecer em temperatura ambiente durante duas horas, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato (que contém Tween 20 a 0,05 % v/v) e 100 μl de um anticorpo IgG1 anti-camundongo marcado com peroxidase ou anticorpo IgG2c (Southern Biotech) diluído com solução salina tamponada com fosfato que contém Tween 20 a 0,05 % v/v e albumina sérica bovina a 1 % v/v foram adicionados a cada cavidade. Depois de permanecer em temperatura ambiente durante duas horas, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato (que contém Tween 20 a 0,05% v/v). Em seguida, 30 mg de comprimido de o- fenilenodiamina (Sigma) e 24 μl de solução de peróxido de hidrogênio a 30 % (30 % p/p; Sigma) foram adicionados a 60 ml de tampão de citrato
(pH de 5,0) como substrato e 100 μl do resultante foram adicionados a cada cavidade. Após o desenvolvimento da cor, 50 μl de ácido sulfúrico a 1 mol/L (Wako Pure Chemical Industries, Ltda.) foram adicionados para interromper a reação e um valor de absorbância a 490 nm foi medido usando o Microplate Reader 450 (Biorad).
[292] Conforme mostrado na Figura 7, as titulações de IgG2c contra HA derivada da cepa X31 de todos os grupos inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana com um adjuvante foram significativamente maiores do que aquelas do grupo inoculado com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana sem adjuvante. A titulação de IgG2c contra HA derivada da cepa X31 do grupo que recebeu A-1 foi superior àquela do grupo que recebeu CpG-ODN1760/adjuvante incompleto de Freund (CpG/IFA). Dentre os grupos, o grupo que recebeu A-1 induziu à maior titulação de IgG2c contra HA derivada da cepa X31. Além disso, para HA derivada de Urg, resultados similares de reatividade foram observados. Assim, estes resultados mostram a indução de anticorpos IgG2 de reação cruzada, os quais são altamente eficazes na proteção contra infecções, através de inoculação com a composição do presente pedido.
[293] Conforme mostrado na Figura 8, as titulações de IgG1 contra HA derivada da cepa X31 de todos os grupos inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana com um adjuvante foram significativamente maiores do que aquelas do grupo inoculado com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana sem adjuvante. Dentre os grupos, o grupo que recebeu CpG- ODN1760/adjuvante incompleto de Freund (CpG/IFA) induziu à titulação de IgG1 mais alta contra HA derivada da cepa X31. Além disso, para HA derivada de Urg, foram observados resultados de reatividade exatamente similares. Assim, estes resultados mostram a indução de anticorpos de reação cruzada através de inoculação com a composição do presente pedido.
[294] Conforme mostrado na Figura 9, a proporção de anticorpos IgG2c/IgG1 anti-HA derivada da cepa X31 do grupo que recebeu A-1- foi maior do que aquela do grupo que recebeu CpG-ODN1760/adjuvante incompleto de Freund (CpG/IFA). Além disso, para HA derivada de Urg, foram observados resultados exatamente similares para a proporção de anticorpos IgG2c/IgG1 anti-HA. Assim, estes resultados mostram a indução de anticorpos de reação cruzada, os quais são altamente eficazes na proteção contra infecções, através de inoculação com a composição do presente pedido.
[295] Conforme mostrado na Figura 10, as titulações de IgG2c contra HA derivada da cepa X31 de todos os grupos inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana com um adjuvante foram significativamente maiores do que aquelas do grupo inoculado com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana sem adjuvante. A titulação de IgG2c contra HA derivada da cepa X31 do grupo que recebeu A-1 e do grupo que recebeu A-3 foi superior àquela do grupo que recebeu adjuvante AddaVax. Além disso, para HA derivada de Urg, foram observados resultados de reatividade exatamente similares. Assim, estes resultados mostram a indução de anticorpos IgG2 de reação cruzada, os quais são altamente eficazes na proteção contra infecções, através de inoculação com a composição do presente pedido.
[296] Conforme mostrado na Figura 11, as titulações de IgG1 contra HA derivada da cepa X31 de todos os grupos inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana com um adjuvante foram significativamente maiores do que aquelas do grupo inoculado com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana sem adjuvante. Dentre os grupos, o grupo que recebeu A-3 e o grupo que recebeu AddaVax induziram a uma titulação de IgG1 mais alta contra HA derivada da cepa X31. Além disso, para HA derivada de Urg, foram observados resultados de reatividade exatamente similares. Assim, estes resultados mostram a indução de anticorpos de reação cruzada através de inoculação com a composição do presente pedido.
[297] Conforme mostrado na Figura 12, as proporções de anticorpos IgG2c/IgG1 anti-HA derivada da cepa X31 do grupo que recebeu A-1 e do grupo que recebeu A-3 foram maiores do que aquelas do grupo que recebeu adjuvante AddaVax. Além disso, para HA derivada de Urg, foram observados resultados exatamente similares para a proporção de anticorpos IgG2c/IgG1 anti-HA. Assim, estes resultados mostram a indução de anticorpos de reação cruzada, os quais são altamente eficazes na proteção contra infecções, através de inoculação com a composição do presente pedido.
4. Proteção Cruzada Contra Variantes Antigênicas
[298] Três semanas após o reforço, outro vírus da influenza H3N2 (A/Guizhou/54/89) com antigenicidade diferente da cepa da vacina foi administrado por via intranasal em 5X a dose letal a 50 camundongos (cinco vezes a quantidade de vírus letal para 50 % dos camundongos) sob anestesia. Os camundongos foram pesados e observados diariamente durante 14 dias a partir da infecção viral para estudar a alteração no peso corporal e a taxa de sobrevivência. O parâmetro para seres humanos foi definido em uma perda de peso corporal de 25 %.
[299] Conforme mostrado na Figura 13, em relação a todos os grupos de camundongos inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana com um adjuvante, a diminuição nas taxas de sobrevivência foi significativamente contida em e após sete dias após a infecção com o outro vírus da influenza H3N2 de antigenicidade diferente. Dentre eles, o grupo que recebeu A-1 e o grupo que recebeu A-3 mostraram 100 % de sobreviventes e o maior efeito de proteção contra a infecção.
[300] Conforme mostrado na Figura 14, em relação a todos os grupos de camundongos inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana com um adjuvante, as perdas de peso corporal em virtude de infecção com outro vírus da influenza H3N2 de antigenicidade diferente foram suprimidas. Dentre os grupos, o grupo que recebeu A-3 mostrou um efeito maior na supressão da perda de peso corporal do que o grupo que recebeu adjuvante AddaVax.
5. Administração da Composição da Presente Invenção que Compreende Uma Vacina Fragmentada de HA de Influenza e Um Composto que Aumenta a Atividade Fisiológica de TLR7
[301] A vacina fragmentada de HÁ de tipo fusão de membrana derivada da cepa PR8 do vírus da influenza H1N1 (10 μg) e: solução salina tamponada com fosfato; A-1 que contém 50 μg de agonista de TLR7 (Composto A); A-3 que contém 10 μg de agonista de TLR7 (Composto A); ou o adjuvante AddaVax (InvivoGen), cujo volume era igual ao líquido da vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana derivada da cepa PR8, foram misturados para dar cada composição. Camundongos C57BL/6 (fêmeas, 6 a 12 semanas de idade) foram inoculados por via intradérmica nas coxas ou intramuscularmente nas coxas (50 μl em cada coxa, 100 μl no total) com a composição acima. Após 3 semanas, os mesmos camundongos receberam um reforço com o mesmo antígeno e sob as mesmas condições. Duas semanas após o reforço, o sangue foi coletado, do qual o soro foi coletado.
6. Medição por ELISA
[302] A concentração do anticorpo anti-HA no soro dos camundongos foi medida por ELISA da seguinte maneira. Uma proteína HA recombinante (cepa PR8 ou A/Narita/1/09 do vírus da influenza H1N1) foi dissolvida em solução salina tamponada com fosfato (pH de 7,3) para 10 μg/ml e adicionada a placas com 96 cavidades a 100 μl cada. Depois de repousar durante a noite a 4 °C, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato e foram adicionados 150 μl de solução salina tamponada com fosfato que contém albumina sérica bovina a 1 % v/v. Depois de permanecer em temperatura ambiente durante duas horas, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato. Em seguida, 100 μl de soro de camundongo diluído em série com tampão de fosfato que contém Tween 20 a 0,05 % v/v e albumina sérica bovina a 1 % v/v e 100 μl de um anticorpo monoclonal padrão de concentração conhecida (H1; nome do clone F2) foram adicionados a cada cavidade. Depois de permanecer em temperatura ambiente durante duas horas, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato (que contém Tween 20 a 0,05 % v/v) e 100 μl de um anticorpo IgG1 anti-camundongo marcado com peroxidase ou anticorpo IgG2c (Southern Biotech) diluído com solução salina tamponada com fosfato que contém Tween 20 a 0,05 % v/v e albumina sérica bovina a 1 % v/v foram adicionados a cada cavidade. Após permanecer em temperatura ambiente durante duas horas, cada cavidade foi lavada três vezes com solução salina tamponada com fosfato (que contém Tween 20 a 0,05 % v/v). Em seguida, 30 mg de comprimido de o-fenilenodiamina (Sigma) e 24 μl de solução de peróxido de hidrogênio a 30 % (30 % p/p; Sigma) foram adicionados a 60 ml de tampão de citrato (pH de 5,0) como substrato e 100 μl do resultante foram adicionados a cada cavidade. Após o desenvolvimento da cor, 50 μl de ácido sulfúrico a 1 mol/L (Wako Pure Chemical Industries, Ltda.) foram adicionados para interromper a reação e um valor de absorbância a 490 nm foi medido usando um Microplate Reader 450 (Biorad).
[303] Conforme mostrado na Figura 17, as titulações de IgG2c contra HA derivada da cepa PR8 de todos os grupos inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana com um adjuvante foram significativamente maiores do que aquelas do grupo inoculado com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana sem adjuvante. A titulação de IgG2c contra HA derivada da cepa PR8 do grupo que recebeu A-1 foi superior àquela do grupo que recebeu adjuvante AddaVax. Dentre os grupos, o grupo que recebeu A-3 induziu à maior titulação de IgG2c contra HA derivada da cepa PR8. Além disso, para HA derivada de A/Narita/1/09, foram observados resultados de reatividade exatamente similares. Assim, estes resultados mostram a indução de anticorpos IgG2 de reação cruzada, os quais são altamente eficazes na proteção contra infecções, através de inoculação com a composição do presente pedido.
[304] Conforme mostrado na Figura 18, as titulações de IgG1 contra HA derivada da cepa PR8 de todos os grupos inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana com um adjuvante foram significativamente maiores do que aquelas do grupo inoculado com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana sem adjuvante. Dentre os grupos, o grupo que recebeu A-3 induziu à maior titulação de IgG1 contra HA derivada da cepa PR8. Além disso, para HA derivada de A/Narita/1/09, foram observados resultados de reatividade exatamente similares. Assim, estes resultados mostram a indução de anticorpos de reação cruzada através de inoculação com a composição do presente pedido.
[305] Conforme mostrado na Figura 19, as proporções de anticorpos IgG2c/IgG1 anti-HA derivada da cepa PR8 do grupo que recebeu A-1 e do grupo que recebeu A-3 foram maiores do que aquelas do grupo que recebeu adjuvante AddaVax. Além disso, para HA derivada de A/Narita/1/09, foram observados resultados exatamente similares para a proporção de anticorpos IgG2c/IgG1 anti-HA. Assim, estes resultados mostram a indução de anticorpos de reação cruzada, os quais são altamente eficazes na proteção contra infecções, através de inoculação com a composição do presente pedido.
7. Proteção Cruzada Contra Variantes Antigênicas
[306] Quatro semanas após o reforço, outro vírus da influenza H1N1 (A/Narita/1/09) com antigenicidade diferente da cepa da vacina foi administrado por via intranasal em 5X a dose letal a 50 camundongos (cinco vezes a quantidade de vírus letal para 50 % dos camundongos) sob anestesia. Os camundongos foram pesados e observados diariamente durante 14 dias a partir da infecção viral para estudar a alteração no peso corporal e a taxa de sobrevivência. O parâmetro para seres humanos foi definido em uma perda de peso corporal de 25 %.
[307] Conforme mostrado na Figura 20, em relação aos grupos de camundongos inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana com adjuvante A-1 ou adjuvante A-3, a diminuição nas taxas de sobrevivência foram significativamente contidas em e após sete dias após a infecção com o outro vírus da influenza H1N1 de antigenicidade diferente, a qual mostrou um forte efeito de proteção contra infecções.
[308] Conforme mostrado na Figura 21, em relação a todos os grupos de camundongos inoculados com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana com um adjuvante, as perdas de peso corporal em virtude de infecção com o outro vírus da influenza H1N1 de antigenicidade diferente foram suprimidas. Dentre os grupos, o grupo que recebeu A-1 e o grupo que recebeu A-3 mostraram efeitos de supressão da perda de peso corporal maiores do que o grupo que recebeu o adjuvante AddaVax. Exemplo 3: Influência da Ordem de Tratamento com Formalina Sobre a Capacidade de Ligação do Anticorpo e Indutibilidade do Anticorpo Preparação de Vacina Fragmentada de HA Pré-tratada com Formalina
[309] A partículas do vírus da influenza H3N2 (cepa X31)
suspensas em solução salina tamponada com fosfato, Tween 80 foi adicionado e suspenso em uma concentração final de 0,1 % v/v. Éter dietílico foi adicionado e suspenso e a suspensão foi deixada em repouso até que a camada aquosa e a camada de éter dietílico se separassem completamente e, então, a camada de éter dietílico foi removida.
[310] Depois de repetir esta extração com éter, o éter dietílico remanescente na camada aquosa recuperada foi destilado em pressão normal. Além disso, formalina foi adicionada em uma concentração final de 0,05 % v/v e a mistura foi deixada em repouso durante vários dias para obter uma vacina fragmentada de HA pré-tratada com formalina.
2. Tratamento Ácido da Vacina Fragmentada de HA Pré-tratada com Formalina
[311] A vacina fragmentada de HA pré-tratada com formalina foi suspensa em solução salina tamponada com fosfato e, em seguida, um tratamento ácido foi realizado mediante adição de tampão de citrato a 0,15 M (pH de 3,5) para levar o pH para 5,0. Depois de permanecer em temperatura ambiente durante 30 minutos, foi adicionado tampão de Tris a 1 M (pH de 8,0) para que o pH voltasse para 7,3. Depois disto, centrifugação foi realizada.
3. Capacidade de Ligação do Anticorpo ao Epítopo de LAH
[312] A capacidade de ligação do anticorpo ao epítopo de LAH foi medida da mesma maneira conforme descrito no Exemplo 1 e a alteração na capacidade de ligação foi calculada. Aqui, os mesmos anticorpos que #2, #4 e #5 mostrados na Figura 6 foram usados como os anticorpos monoclonais e o anticorpo monoclonal #6 que se liga à região de cabeça da HA foi usado como um controle.
4. Medição da Titulação de Anticorpo Anti-LAH por ELISA 4-1. Inoculação da Vacina Contra a Influenza H3N2
[313] Camundongos BALB/c (fêmeas, de 6 a 12 semanas de idade) foram intraperitonealmente inoculados com a vacina fragmentada de HA de H3N2 atual ou a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana (10 μg vacina + adjuvante AddaVax a 10 % v/v (InvivoGen) dissolvido em solução salina tamponada com fosfato para um volume líquido de 200 μl). Pelo menos 12 dias após a inoculação, foi coletado sangue dos camundongos inoculados com as vacinas, de onde foram coletados os soros. 4-2. Medição por ELISA
[314] A titulação do anticorpo anti-LAH foi medida da mesma maneira conforme descrito em 3-2 no Exemplo 1 acima.
[315] Conforme mostrado na Figura 15, o anticorpo monoclonal de ligação à LAH se ligou à vacina (Pós-correção) que foi submetida ao tratamento com formalina após o tratamento ácido no processo de preparação da vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana mais fortemente do que a vacina (Pré-fix) que foi submetida ao tratamento com formalina antes do tratamento ácido. Os resultados indicam que quando realizar o tratamento com formalina tem influência sobre o aumento da capacidade de ligação do anticorpo ao epítopo de LAH obtido através de tratamento ácido da vacina fragmentada de HA e que o tratamento com formalina é, desejavelmente, realizado após o tratamento ácido. Nas Figuras 15 e 16, uma vacina obtida ao submeter a vacina fragmentada de HA ao tratamento ácido após o tratamento com formalina da mesma maneira conforme descrito no Exemplo 3 é denominada como "uma vacina fragmentada de tipo fusão de membrana (Pre-fix)". Além disso, de acordo com o procedimento do Exemplo 1, uma vacina obtida ao submeter a vacina fragmentada de HA ao tratamento com formalina após o tratamento ácido da mesma maneira conforme descrito no Exemplo 1 é denominada como "uma vacina fragmentada de tipo fusão de membrana (Post-fix)."
[316] Conforme mostrado na Figura 16, a titulação do anticorpo anti-LAH no soro dos camundongos BALB/c inoculados intraperitonealmente com a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana foi maior do que a titulação do anticorpo anti-LAH no soro dos camundongos BALB/c inoculados intraperitonealmente com a vacina fragmentada de HA atual. Além disso, a vacina fragmentada de HA de tipo fusão de membrana (Post-fix) exibiu uma titulação mais alta de anticorpos anti-LAH do que a vacina fragmentada de tipo de fusão de membrana (Pre-fix). Aplicabilidade Industrial
[317] A presente invenção pode ser usada no campo de desenvolvimento ou produção de vacinas contra a influenza. Texto Livre de Listagem de Sequências
[318] SEQ ID NO: 1, 2: Peptídeo Sintético

Claims (30)

REIVINDICAÇÕES
1. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende (1) e (2) a seguir: (1) um antígeno de vacina universal contra a influenza; e (2) um adjuvante de vacina.
2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o antígeno de vacina universal contra a influenza é um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza que produz um anticorpo que se liga a uma LAH de uma região de haste de HA.
3. Composição, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza tem uma região de haste de HA exposta ao exterior.
4. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o antígeno de vacina universal contra a influenza é um antígeno de vacina fragmentada de HA de influenza em que a região de haste de HA, a qual está exposta ao exterior, aumenta a antigenicidade da LAH da região de haste de HA e a vacina fragmentada de HA contra a influenza é capaz de produzir um anticorpo que se liga à LAH da região de haste de HA.
5. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o antígeno de vacina universal contra a influenza é produzido ao submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza a um tratamento ácido.
6. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que o antígeno de vacina universal contra a influenza é produzido por meio de um processo de produção que inclui: submeter uma vacina fragmentada de HA de influenza a um tratamento ácido; e posteriormente, submeter a vacina fragmentada de HA de influenza a um tratamento com formalina.
7. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que o adjuvante de vacina é uma substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR.
8. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que o adjuvante de vacina é uma substância que aumenta a atividade fisiológica de um ou mais TLRs selecionados a partir do grupo que consiste em TLR7, TLR8 e TLR9.
9. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o adjuvante de vacina é uma substância que aumenta a atividade fisiológica pelo menos do TLR7.
10. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que o adjuvante de vacina é uma substância que aumenta a atividade fisiológica pelo menos do TLR8.
11. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que o adjuvante de vacina é uma substância que aumenta a atividade fisiológica pelo menos do TLR9.
12. Composição, de acordo com a reivindicação 8 ou 9, caracterizada pelo fato de que a substância que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 é um composto de baixo peso molecular que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 ou um composto conjugado em que um composto de baixo peso molecular que aumenta a atividade de TLR7 e um lipídio são quimicamente ligados através de um espaçador.
13. Composição, de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que o composto de baixo peso molecular que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 ou o composto de baixo peso molecular que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 compreendido no composto conjugado tem um peso molecular de 200 a 600 e tem um esqueleto de adenina, um esqueleto de pirimidina, um esqueleto de imidazoquinolina, um esqueleto de imidazopiridina ou um esqueleto de quinazolina.
14. Composição, de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que o composto de baixo peso molecular que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 ou o composto de baixo peso molecular que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 compreendido no composto conjugado tem um esqueleto de pirimidina, um esqueleto de adenina ou um esqueleto de imidazoquinolina.
15. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 14, caracterizada pelo fato de que o lipídio é um lipídio derivado de esqualeno ou esqualano.
16. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 15, caracterizada pelo fato de que o composto que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 é um composto conjugado no qual um composto de baixo peso molecular que tem um esqueleto de adenina e um lipídio derivado de esqualeno ou esqualano são quimicamente ligados através de um espaçador ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
17. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 15, caracterizada pelo fato de que o composto que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 é um composto conjugado no qual um composto de baixo peso molecular que tem um esqueleto de pirimidina e um lipídio derivado de esqualeno ou esqualano são quimicamente ligados através de um espaçador ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
18. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 15 e 17, caracterizada pelo fato de que o composto que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 é um composto representado pela Fórmula (1) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
em que: X representa metileno, R1 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono os quais podem ser substituídos por um grupo hidróxi, R2 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila que tem 1 a 6 átomos de carbono, R3 representa um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono, R4 representa um átomo de hidrogênio, um átomo de halogênio, um grupo hidróxi, um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono ou um grupo alcóxi que tem 1 a 3 átomos de carbono, Y1 representa uma ligação simples ou metileno, Y2 representa uma ligação simples ou -C(O)-, L representa um alquileno de cadeia reta que tem 2 ou 3 átomos de carbono, R5 e R6 representam, independentemente, um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila que tem 1 a 3 átomos de carbono ou R5 e R6 são tomados juntos para formar um heterociclo saturado que contém nitrogênio de 5 a 8 elementos substituído ou não substituído contanto que, quando o heterociclo saturado que contém nitrogênio de 5 a 8 elementos é substituído, ele seja substituído pelos mesmos ou diferentes 1 a 4 substituintes selecionados a partir de um grupo hidróxi e um átomo de halogênio, e m representa 0 ou 1, são todos ligações duplas.
19. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 15, 17 e 18, caracterizada pelo fato de que o composto conjugado é: (4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-amino-4-{[(3S)-1-hidroxi- hexan-3-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]benzil}(metil)amino]etil}- 4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexanamida; (4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-amino-4-{[(2S)-1- hidroxipentan-2-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]-3- metoxibenzil}piperazin-1-il)-4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa- 4,8,12,16,20,24-hexaen-1-ona; (4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-amino-4-{[(2S)-1- hidroxipentan-2-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]-3- metoxibenzoil}piperazin-1-il)-4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa- 4,8,12,16,20,24-hexaen-1-ona; 4-[(2-amino-4-{[(2S)-1-hidroxipentan-2-il]amino}-6- metilpirimidin-5-il)metil]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25- hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexaenoil]amino}etil)-3- metoxibenzamida; 4-[(2-amino-4-{[(2S)-1-hidroxipentan-2-il]amino}-6- metilpirimidin-5-il)metil]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25- hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexaenoil](metil)amino}etil)-3- metoxibenzamida; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
20. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 15 e 17 a 19, caracterizada pelo fato de que o composto que aumenta a atividade fisiológica de TLR7 é: (4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-amino-4-{[(3S)-1-hidroxi- hexan-3-il]amino}-6-metilpirimidin-5-il)metil]benzil}(metil)amino]etil}-
4,8,12,17,21,25-hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexanamida; 4-[(2-amino-4-{[(2S)-1-hidroxipentan-2-il]amino}-6- metilpirimidin-5-il)metil]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25- hexametil-hexacosa-4,8,12,16,20,24-hexaenoil]amino}etil)-3- metoxibenzamida; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
21. Vacina contra a influenza, caracterizada pelo fato de que compreende a composição, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 20.
22. Método para a prevenção de influenza, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um animal de sangue quente que precisa uma quantidade profilaticamente eficaz da composição, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 20.
23. Método para a prevenção de influenza, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um animal de sangue quente que precisa uma quantidade profilaticamente eficaz de um antígeno de vacina universal contra a influenza e uma quantidade profilaticamente eficaz de um adjuvante de vacina.
24. Kit para prevenção da influenza, caracterizado pelo fato de que compreende um antígeno de vacina universal contra a influenza e um adjuvante de vacina.
25. Vacina adjuvante, caracterizada pelo fato de que é para uso na prevenção da influenza em combinação com um antígeno de vacina universal contra a influenza.
26. Antígeno de vacina universal contra a influenza, caracterizado pelo fato de que é para uso na prevenção da influenza em combinação com um adjuvante de vacina.
27. Uso de um adjuvante de vacina, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de uma composição para a prevenção de influenza, compreendendo um antígeno de vacina universal contra a influenza.
28. Uso de um antígeno de vacina universal contra a influenza, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de uma composição para a prevenção de influenza, compreendendo um adjuvante de vacina.
29. Método, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, kit como definido na reivindicação 24, adjuvante de vacina como definido na reivindicação 25 ou antígeno como definido na reivindicação 26, caracterizados pelo fato de que o antígeno de vacina universal contra a influenza e o adjuvante de vacina são administrados simultânea ou separadamente.
30. Método, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, kit como definido na reivindicação 24, adjuvante de vacina como definido na reivindicação 25 ou antígeno como definido na reivindicação 26, caracterizados pelo fato de que o antígeno de vacina universal contra a influenza é administrado antes, após ou simultaneamente com a administração do adjuvante de vacina.
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7403733B2 (ja) 2017-09-04 2023-12-25 国立感染症研究所長 インフルエンザｈａスプリットワクチンの製造方法
CA3121613A1 (en) * 2018-12-26 2020-07-02 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Preparation including vaccine adjuvant
KR20210135261A (ko) * 2019-03-04 2021-11-12 국립감염증연구소장이 대표하는 일본국 인플루엔자 ha 스플릿 백신의 제조 방법
CN115666632A (zh) * 2020-03-27 2023-01-31 帕斯公司 疟疾传播阻断疫苗
EP4171630A1 (en) * 2020-06-29 2023-05-03 Path Pre-erythrocytic malaria vaccines

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ZA848968B (en) 1983-11-18 1986-06-25 Riker Laboratories Inc 1h-imidazo(4,5-c)quinolines and 1h-imidazo(4,5-c)quinolin-4-amines
IL73534A (en) 1983-11-18 1990-12-23 Riker Laboratories Inc 1h-imidazo(4,5-c)quinoline-4-amines,their preparation and pharmaceutical compositions containing certain such compounds
WO1998001448A1 (fr) 1996-07-03 1998-01-15 Japan Energy Corporation Nouveaux derives de purine
DE69817393T2 (de) 1997-11-28 2004-06-17 Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd. Neue heterozyklische verbindungen
WO2000012487A1 (fr) 1998-08-27 2000-03-09 Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd. Derives de pyrimidine
WO2002085905A1 (fr) 2001-04-17 2002-10-31 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited Nouveaux derives d'adenine
JP2007514644A (ja) 2003-04-10 2007-06-07 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー 免疫反応を向上させる方法および組成物
PL1653959T3 (pl) 2003-08-14 2015-10-30 3M Innovative Properties Co Modyfikatory odpowiedzi immunologicznej modyfikowane lipidami
JP4689338B2 (ja) 2005-04-26 2011-05-25 キヤノン株式会社 シート処理装置、及び画像形成装置
ZA200803029B (en) 2005-09-09 2009-02-25 Coley Pharm Group Inc Amide and carbamate derivatives of alkyl substituted /V-[4-(4-amino-1H-imidazo[4,5-c] quinolin-1-yl)butyl] methane-sulfonamides and methods
BRPI0707945A2 (pt) 2006-02-17 2011-05-17 Pfizer Ltd derivados de 3-deazapurina como modulares de tlr7
AR065372A1 (es) 2007-02-19 2009-06-03 Smithkline Beecham Corp Derivados de purina
PT2132209E (pt) 2007-03-19 2014-04-15 Astrazeneca Ab Compostos de 8-oxo-adenina substituídos na posição 9, como moduladores do recetor de tipo ¿toll¿ (tlr7)
WO2008114006A1 (en) 2007-03-19 2008-09-25 Astrazeneca Ab 9-substituted-8-oxo-adenine compounds as toll-like receptor (tlr7) modulators
PE20081887A1 (es) 2007-03-20 2009-01-16 Dainippon Sumitomo Pharma Co Nuevo compuesto de adenina
EP2138497A4 (en) * 2007-03-20 2012-01-04 Dainippon Sumitomo Pharma Co NEW ADENINE CONNECTION
PL2155743T3 (pl) 2007-05-08 2013-01-31 Astrazeneca Ab Imidazochinoliny o właściwościach immunomodulacyjnych
PT2170888E (pt) 2007-06-29 2015-08-21 Gilead Sciences Inc Purina derivados e sua utilização como moduladores de recetor de tipo toll 7
PE20091236A1 (es) 2007-11-22 2009-09-16 Astrazeneca Ab Derivados de pirimidina como immunomoduladores de tlr7
CN102203095A (zh) 2008-08-11 2011-09-28 葛兰素史密丝克莱恩有限责任公司 用于治疗变应性疾病、炎性疾病和感染性疾病的嘌呤衍生物
EP2320905B1 (en) 2008-08-11 2017-06-28 Glaxosmithkline LLC Novel adenine derivatives
UA103195C2 (uk) 2008-08-11 2013-09-25 Глаксосмитклайн Ллк Похідні пурину для застосування у лікуванні алергій, запальних та інфекційних захворювань
NO2341933T3 (pt) 2008-10-24 2018-04-21
PT2364314E (pt) 2008-12-09 2014-06-09 Gilead Sciences Inc Moduladores de recetores toll-like
BRPI1008383A2 (pt) 2009-02-11 2016-02-23 Univ California composto, composição farmacêutica, método para prevenir, inibir ou tratar uma condição, e, uso de um composto
SG175796A1 (en) 2009-05-21 2011-12-29 Astrazeneca Ab Novel pyrimidine derivatives and their use in the treatment of cancer and further diseases
SG178237A1 (en) 2009-08-07 2012-03-29 Glaxosmithkline Biolog Sa Lipidated oxoadenine derivatives
US20130202629A1 (en) 2010-04-30 2013-08-08 The Regents Of The University Of California Uses of phospholipid conjugates of synthetic tlr7 agonists
ES2943385T3 (es) 2010-08-17 2023-06-12 3M Innovative Properties Company Compuesto modificador de la respuesta inmunitaria lipidada y su uso médico
ES2627433T3 (es) 2010-12-17 2017-07-28 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Derivados de purina
EP3590928B1 (en) 2011-04-08 2021-06-09 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Pyrimidine derivatives for the treatment of viral infections
NO2709989T3 (pt) 2011-05-18 2018-05-19
WO2013173256A2 (en) * 2012-05-16 2013-11-21 Kj Biosciences, Llc New and improved influenza vaccines
MX2014014031A (es) 2012-05-18 2015-02-12 Sumitomo Dainippon Pharma Co Ltd Compuestos de acido carboxilico.
AU2013346793B2 (en) 2012-11-16 2018-03-08 Janssen Sciences Ireland Uc Heterocyclic substituted 2-amino-quinazoline derivatives for the treatment of viral infections
KR20140118682A (ko) * 2013-03-29 2014-10-08 (주)셀트리온 2 이상의 인플루엔자 ａ 바이러스 중화 결합 분자를 포함하는 조성물
IL294189A (en) * 2014-12-31 2022-08-01 Us Health New vaccines based on multivalent nanoparticles
DK3355933T3 (da) * 2015-09-29 2020-07-20 Sumitomo Dainippon Pharma Co Ltd Adeninkonjugatforbindelser og deres anvendelse som vaccineadjuvanser
EP3360864B1 (en) * 2015-10-07 2021-04-28 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Pyrimidine compound

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