BR112020015973A2 - Inibidores de arginase e métodos para o seu uso - Google Patents
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Abstract
A presente invenção refere-se a compostos de fórmula (Ia) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, composições farmacêuticas compreendendo compostos de fórmula (Ia) e métodos de uso das mesmas para o tratamento de câncer ou de uma doença inflamatória respiratória e inibição da arginase,
(Ia)
em que
R1 é -NHR1a;
R1a é -H ou -C(O)CH(R1b)NHR1c; e
R1b é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR1d e R1c é -H; ou
R1b e R1c, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5 membros; e
R1d é H ou -CH3.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "INIBIDORES DE ARGINASE E MÉTODOS PARA O SEU USO". Antecedentes
[0001] A arginase é uma metaloenzima de manganês que catalisa a conversão de L-arginina em ureia e L-ornitina. Existem duas isoformas: A Arginase 1 é uma enzima citosólica encontrada predominantemente em hepatócitos onde desempenha um papel crítico na remoção de amônia através da síntese de ureia, e Arginase 2, uma enzima mitocondrial altamente expressa no rim envolvida na produção de ornitina, um precursor para poliaminas e prolinas importantes para a proliferação celular e produção de colágeno, respectivamente.
[0002] Apesar de a L-arginina não ser um aminoácido essencial, uma vez que pode ser fornecida através da renovação de proteínas em adultos saudáveis, a expressão e secreção aumentadas de arginases originam níveis reduzidos de L-arginina em várias condições fisiológicas e patológicas (por exemplo, gravidez, doenças autoimunes, câncer). Células imunes, em particular, são sensíveis a níveis reduzidos de L-arginina. Células T, quando confrontadas com um microambiente pobre em L- arginina, reduzem a sua velocidade de proliferação e diminuem a expressão da cadeia CD3ζ, IFNγ, e enzimas líticas, originando capacidade de resposta enfraquecida de células T. Células dendríticas respondem a condições pobres em L-arginina reduzindo a sua capacidade para apresentar antígenos, e células matadoras naturais reduzem a proliferação e expressão de enzimas líticas.
[0003] Os tumores usam múltiplos mecanismos imunossupressores para escaparem ao sistema imune. Um destes é a redução de L-arginina através de níveis acrescidos de arginase em circulação, expressão e secreção aumentadas de arginase por células tumorais, e recrutamento de arginase expressando e secretando células supressoras derivadas de mieloide. Em conjunto, estes conduzem a uma redução de L-arginina no microambiente tumoral e a um fenótipo imunossupressor. Foi mostrado que a inibição farmacológica da atividade de arginase causa reversão da imunossupressão induzida por um teor baixo de L-arginina em modelos animais. Como tal, são necessários inibidores de arginase potentes e seletivos para reverter a imunossupressão e reativar a imunidade anticancerígena em pacientes, como agente único ou em combinação com terapias revertendo mecanismos imunossupressores adicionais. Sumário
[0004] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R1 (I), em que R1 é -NHR1a; R1a é -H ou -C(O)CH(R1b)NH2; e R1b é -CH3 ou -CH(CH3)2.
[0005] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (Ia), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R1 (Ia), em que
R1 é -NHR1a; R1a é -H ou -C(O)CH(R1b)NHR1c; e R1b é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR1d e R1c é -H; ou R1b e R1c, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5 membros; e R1d é H ou -CH3.
[0006] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (Ib), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (Ib), em que R1 é -NHR1a; R1a é -H ou -C(O)CH(R1b)NHR1c; e R1b é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR1d e R1c é -H; ou R1b e R1c, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5 membros; e R1d é H ou -CH3.
[0007] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (II), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R2 (II),
em que R2 é -OH ou -NHR2a; R2a é -H ou -C(O)CH(R2b)NH2; e R2b é -CH3 ou -CH(CH3)2.
[0008] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (IIa), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R2 (IIa), em que R2 é -OH ou -NHR2a; R2a é -H ou -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR2d e R2c é -H; ou R2b e R2c, em conjunto com os átomos aos quais estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5 membros; e R2d é -H ou -CH3.
[0009] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (IIb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (IIb), em que R2 é -OH ou -NHR2a; R2a é -H ou -C(O)CH(R2b)NHR2c;
R2b é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR2d e R2c é -H; ou R2b e R2c, em conjunto com os átomos aos quais estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5 membros; e R2d é -H ou -CH3.
[0010] Em algumas modalidades, é descrito um composto de fórmula (III), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R3 (III), em que R3 é -CH3 ou -CH(CH3)2.
[0011] Em algumas modalidades, é descrito um composto de fórmula (IIIa), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R3 (IIIa), em que R3 é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e -CH2OR3a; e R3a é -H ou -CH3.
[0012] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (IIIb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
(IIIb), em que R3 é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e -CH2OR3a; e R3a é -H ou -CH3.
[0013] Em algumas modalidades, é descrito um composto de fórmula (IV), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R4 (IV), em que R4 é -OH ou -NH2.
[0014] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (IVb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (IVb), em que R4 é -OH ou -NH2.
[0015] Em algumas modalidades, é descrito um composto de fórmula (V), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
NH2 (V).
[0016] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (Vb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (Vb).
[0017] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (VI), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (VI) em que R6a é -H ou -CH3; R6b é -C(O)C(R6cR6d)NH2; ou -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OR6e; e R6c é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OR6f; R6d é H ou -CH3; e R6e e R6f são, independentemente, -H ou -CH3.
[0018] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (VIb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
(VIb), em que R6a é -H ou -CH3; R6b é -C(O)C(R6cR6d)NH2; ou -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OR6e; e R6c é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OR6f; R6d é H ou -CH3; e R6e e R6f são, independentemente, -H ou -CH3.
[0019] Em algumas modalidades, são descritos os compostos da Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
[0020] Em algumas modalidades, são descritas composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[0021] Em algumas modalidades, são descritos métodos de tratamento de câncer compreendendo um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
[0022] Em algumas modalidades, são descritos compostos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb),
incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para o tratamento de câncer.
[0023] Em algumas modalidades, é descrito o uso de um composto de (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, na fabricação de um medicamento para uso no tratamento de câncer.
[0024] Em algumas modalidades, são descritas composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento de câncer.
[0025] Em algumas modalidades, são descritos métodos de tratamento de uma doença inflamatória respiratória compreendendo um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
[0026] Em algumas modalidades, são descritos compostos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para o tratamento de uma doença inflamatória respiratória.
[0027] Em algumas modalidades, é descrito o uso de um composto de (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, na fabricação de um medicamento para uso no tratamento de uma doença inflamatória respiratória.
[0028] Em algumas modalidades, são descritas composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento de uma doença inflamatória respiratória.
[0029] Em algumas modalidades, a doença inflamatória respiratória acima mencionada é doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) ou asma. Descrição Breve dos Desenhos
[0030] A Figura 1 mostra espectros de RMN ilustrando a conversão do composto B no composto A, em que o composto B é preparado em 100% de d6-DMSO (marcado A), 75% de D2O em d6-DMSO (marcado B), 50% de D2O em d6-DMSO (marcado C), 25% de D2O em d6-DMSO (marcado E) e 100% de D2O (marcado F).
[0031] A Figura 2 mostra o espectro de RMN (em DCl 0,1 M em D2O) do composto B, ilustrando como a acidificação origina conversão quase completa no composto A.
[0032] A Figura 3 compara espectros de RMN de material amorfo em d6-DMSO (Marcado B) com composto cristalino B em d 6-DMSO (Marcado A), mostrando que ambos os materiais têm a mesma estrutura cíclica do composto cristalino B. Descrição Detalhada Compostos
[0033] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
R1 (I) em que R1 é -NHR1a; R1a é -H ou -C(O)CH(R1b)NH2; e R1b é -CH3 ou -CH(CH3)2.
[0034] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (I). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (I).
[0035] Em algumas modalidades de fórmula (I), R1 é -NHR1a e R1a é -H.
[0036] Em algumas modalidades de fórmula (I), R1 é -NHR1a, R1a é -C(O)CH(R1b)NH2 e R1b é -CH3.
[0037] Em algumas modalidades de fórmula (I), R1 é -NHR1a, R1a é -C(O)CH(R1b)NH2 e R1b é -CH(CH3)2.
[0038] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (Ia), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R1 (Ia) em que R1 é -NHR1a; R1a é -H ou -C(O)CH(R1b)NHR1c; e R1b é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR1d; e R1c é -H;
ou R1b e R1c, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel de 5 membros; e R1d é H ou -CH3.
[0039] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (Ia). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (Ia).
[0040] Em algumas modalidades, um composto de fórmula (Ia) é representado pela fórmula (Ia1) ou (Ia2): R1 R1 (Ia1) ou (Ia2), em que R1 é igual ao definido acima.
[0041] Em algumas modalidades de fórmula (Ia), R1a é -H.
[0042] Em algumas modalidades de fórmula (Ia), R 1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é -H e R1c é -H.
[0043] Em algumas modalidades de fórmula (Ia), R 1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é CH2OR1d; R1c é -H e R1d é -H.
[0044] Em algumas modalidades de fórmula (Ia), R 1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é CH2OR1d; R1c é -H e R1d é –CH3.
[0045] Em algumas modalidades de fórmula (Ia), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é -(C1-C4) alquila e R1c é -H. Em algumas modalidades, o C1-C4 alquila é selecionado de metila, etila, isopropila, sec- butila, terc-butila e isobutila.
[0046] Em algumas modalidades de fórmula (Ia), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é metila; e R1c é -H.
[0047] Em algumas modalidades de fórmula (Ia), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é etila; e R1c é -H.
[0048] Em algumas modalidades de fórmula (Ia), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é isopropila; e R1c é -H.
[0049] Em algumas modalidades de fórmula (Ia), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é sec-butila; e R1c é -H.
[0050] Em algumas modalidades de fórmula (Ia), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é isobutila; e R1c é -H.
[0051] Em algumas modalidades de fórmula (Ia), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é terc-butila; e R1c é -H.
[0052] Em algumas modalidades de fórmula (Ia), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c e R1b e R1c, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel de 5 membros.
[0053] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (Ib), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (Ib) em que R1 é -NHR1a; R1a é -H ou -C(O)CH(R1b)NHR1c; e R1b é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR1d; e R1c é -H; ou R1b e R1c, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5 membros; e R1d é H ou -CH3.
[0054] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (Ib).
Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (Ib).
[0055] Em algumas modalidades, um composto de fórmula (Ib) é representado pela fórmula (Ib1) ou (Ib2): (Ib1) ou (Ib2), em que R1 é igual ao definido acima.
[0056] Em algumas modalidades de fórmula (Ib), R1a é -H.
[0057] Em algumas modalidades de fórmula (Ib), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é -H e R1c é -H.
[0058] Em algumas modalidades de fórmula (Ib), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é CH2OR1d; R1c é -H e R1d é -H.
[0059] Em algumas modalidades de fórmula (Ib), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é CH2OR1d; R1c é -H e R1d é –CH3.
[0060] Em algumas modalidades de fórmula (Ib), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é -(C1-C4) alquila e R1c é -H. Em algumas modalidades, o C1-C4 alquila é selecionado de metila, etila, isopropila, sec- butila, terc-butila e isobutila.
[0061] Em algumas modalidades de fórmula (Ib), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é metila; e R1c é -H.
[0062] Em algumas modalidades de fórmula (Ib), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é etila; e R1c é -H.
[0063] Em algumas modalidades de fórmula (Ib), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é isopropila; e R1c é -H.
[0064] Em algumas modalidades de fórmula (Ib), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é sec-butila; e R1c é -H.
[0065] Em algumas modalidades de fórmula (Ib), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é isobutila; e R1c é -H.
[0066] Em algumas modalidades de fórmula (Ib), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c; R1b é terc-butila; e R1c é -H.
[0067] Em algumas modalidades de fórmula (Ib), R1a é -C(O)CH(R1b)NHR1c e R1b e R1c, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel de 5 membros.
[0068] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (II), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R2 (II) em que R2 é -OH ou -NHR2a; R2a é -H ou -C(O)CH(R2b)NH2; e R2b é -CH3 ou -CH(CH3)2.
[0069] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (II). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (II).
[0070] Em algumas modalidades de fórmula (II), R2 é -OH.
[0071] Em algumas modalidades de fórmula (II), R2 é -NHR2a e R2a é -H.
[0072] Em algumas modalidades de fórmula (II), R2 é -NHR2a, R2a é -C(O)CH(R2b)NH2 e R2b é -CH3.
[0073] Em algumas modalidades de fórmula (II), R2 é -NHR2a, R2a é -C(O)CH(R2b)NH2 e R2b é -CH(CH3)2.
[0074] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (IIa), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R2 (IIa) em que R2 é -OH ou -NHR2a; R2a é -H ou -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR2d; e R2c é -H; ou R2b e R2c, em conjunto com os átomos aos quais estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5 membros; e R2d é H ou -CH3.
[0075] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (IIa). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (IIa).
[0076] Em uma modalidade de fórmula (IIa), R2 é -OH.
[0077] Em uma modalidade de fórmula (IIa), R2 é -NHR2a; e R2a é -H.
[0078] Em uma modalidade de fórmula (IIa), R2 é -NHR2a; e R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é H e R2c é H.
[0079] Em uma modalidade de fórmula (IIa), R2 é -NHR2a; e R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é -CH2OR2d; R2c é H e R2d é H.
[0080] Em uma modalidade de fórmula (IIa), R2 é -NHR2a; e R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é -CH2OR2d; R2c é H e R2d é -CH3.
[0081] Em algumas modalidades de fórmula (IIa), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é -(C1-C4) alquila e R2c é -H. Em algumas modalidades, o C1-C4 alquila é selecionado de metila, etila, isopropila, sec-butila, terc-butila, e isobutila.
[0082] Em algumas modalidades de fórmula (IIa), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é metila; e R2c é -H.
[0083] Em algumas modalidades de fórmula (IIa), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é etila; e R2c é -H.
[0084] Em algumas modalidades de fórmula (IIa), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é isopropila; e R2c é -H.
[0085] Em algumas modalidades de fórmula (IIa), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é sec-butila; e R2c é -H.
[0086] Em algumas modalidades de fórmula (IIa), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é isobutila; e R2c é -H.
[0087] Em algumas modalidades de fórmula (IIa), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é terc-butila; e R2c é -H.
[0088] Em algumas modalidades de fórmula (IIa), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c e R2b e R2c, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel de 5 membros.
[0089] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (IIb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (IIb) em que R2 é -OH ou -NHR2a; R2a é -H ou -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR2d; e R2c é -H; ou
R2b e R2c, em conjunto com os átomos aos quais estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5 membros; e R2d é -H ou -CH3.
[0090] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (IIb). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (IIb).
[0091] Em uma modalidade de fórmula (IIb), R2 é -OH.
[0092] Em uma modalidade de fórmula (IIb), R2 é -NHR2a; e R2a é -H.
[0093] Em uma modalidade de fórmula (IIb), R2 é -NHR2a; e R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é H e R2c é H.
[0094] Em uma modalidade de fórmula (IIb), R2 é -NHR2a; e R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é -CH2OR2d; R2c é H e R2d é H.
[0095] Em uma modalidade de fórmula (IIb), R2 é -NHR2a; e R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é -CH2OR2d; R2c é H e R2d é -CH3.
[0096] Em algumas modalidades de fórmula (IIb), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é -(C1-C4) alquila e R2c é -H. Em algumas modalidades, o C1-C4 alquila é selecionado de metila, etila, isopropila, sec-butila, terc-butila, e isobutila.
[0097] Em algumas modalidades de fórmula (IIb), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é metila; e R2c é -H.
[0098] Em algumas modalidades de fórmula (IIb), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é etila; e R2c é -H.
[0099] Em algumas modalidades de fórmula (IIb), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é isopropila; e R2c é -H.
[0100] Em algumas modalidades de fórmula (IIb), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é sec-butila; e R2c é -H.
[0101] Em algumas modalidades de fórmula (IIb), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é isobutila; e R2c é -H.
[0102] Em algumas modalidades de fórmula (IIb), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é terc-butila; e R2c é -H.
[0103] Em algumas modalidades de fórmula (IIb), R2 é -NHR2a; R2a é -C(O)CH(R2b)NHR2c e R2b e R2c, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel de 5 membros.
[0104] Em algumas modalidades, é descrito um composto de fórmula (III), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R3 (III) em que R3 é -CH3 ou -CH(CH3)2.
[0105] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (III). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (III).
[0106] Em algumas modalidades de fórmula (III), R3 é -CH3.
[0107] Em algumas modalidades de fórmula (III), R3 é -CH(CH3)2.
[0108] Em algumas modalidades, é descrito um composto de fórmula (IIIa), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R3 (IIIa) em que R3 é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR3a; e R3a é -H ou -CH3.
[0109] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (IIIa). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (IIIa).
[0110] Em uma modalidade de fórmula (IIIa), R3 é -H.
[0111] Em uma modalidade de fórmula (IIIa), R3 é -CH2OR3a e R3a é -H.
[0112] Em uma modalidade de fórmula (IIIa), R3 é -CH2OR3a e R3a é -CH3.
[0113] Em uma modalidade de fórmula (IIIa), R3 é -(C1-C4) alquila. Em algumas modalidades, o –(C1-C4) alquila é selecionado de metila, etila, isopropila, sec-butila e isobutila.
[0114] Em uma modalidade de fórmula (IIIa), R3 é metila.
[0115] Em uma modalidade de fórmula (IIIa), R3 é etila.
[0116] Em uma modalidade de fórmula (IIIa), R3 é isopropila.
[0117] Em uma modalidade de fórmula (IIIa), R3 é sec-butila.
[0118] Em uma modalidade de fórmula (IIIa), R3 é isobutila.
[0119] Em uma modalidade de fórmula (IIIa), R3 é terc-butila.
[0120] Em algumas modalidades, é descrito um composto de fórmula (IIIb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (IIIb) em que R3 é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e -CH2OR3a; e R3a é -H ou -CH3.
[0121] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (IIIb). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (IIIb).
[0122] Em uma modalidade de fórmula (IIIb), R3 é -H.
[0123] Em uma modalidade de fórmula (IIIb), R3 é -CH2OR3a e R3a é - H.
[0124] Em uma modalidade de fórmula (IIIb), R3 é -CH2OR3a e R3a é - CH3.
[0125] Em uma modalidade de fórmula (IIIb), R3 é -(C1-C4) alquila. Em algumas modalidades, o –(C1-C4) alquila é selecionado de metila, etila, isopropila, sec-butila e isobutila.
[0126] Em uma modalidade de fórmula (IIIb), R3 é metila.
[0127] Em uma modalidade de fórmula (IIIb), R3 é etila.
[0128] Em uma modalidade de fórmula (IIIb), R3 é isopropila.
[0129] Em uma modalidade de fórmula (IIIb), R3 é sec-butila.
[0130] Em uma modalidade de fórmula (IIIb), R3 é isobutila.
[0131] Em uma modalidade de fórmula (IIIb), R3 é terc-butila.
[0132] Em algumas modalidades, é descrito um composto de fórmula (IV), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R4 (IV) em que R4 é -OH ou -NH2.
[0133] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (IV). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (IV).
[0134] Em algumas modalidades de fórmula (IV), R4 é -OH.
[0135] Em algumas modalidades de fórmula (IV), R4 é -NH2.
[0136] Em algumas modalidades, é descrito um composto de fórmula (IVb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (IVb) em que R4 é -OH ou -NH2.
[0137] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (IVb). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (IVb).
[0138] Em algumas modalidades de fórmula (IVb), R4 é -OH.
[0139] Em algumas modalidades de fórmula (IVb), R4 é -NH2.
[0140] Em algumas modalidades, é descrito um composto de fórmula (V), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: NH2 (V).
[0141] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (V). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (V).
[0142] Em algumas modalidades, é descrito um composto de fórmula (Vb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável:
(Vb).
[0143] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (Vb). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (Vb).
[0144] Em algumas modalidades, é descrito um composto de fórmula (VI), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (VI) em que R6a é -H ou -CH3; R6b é -C(O)C(R6cR6d)NH2; ou -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OR6e; e R6c é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OR6f; R6d é H ou -CH3; e R6e e R6f são, independentemente, -H ou -CH3.
[0145] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (VI). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (VI).
[0146] Em algumas modalidades de fórmula (VI), R6a é -H ou -CH3; e R6b é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino.
[0147] Em algumas modalidades de fórmula (VI), R6a é -H ou -CH3; R6b é -C(O)C(R6cR6d)NH2; R6c é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OH; e R6d é H ou -CH3.
[0148] Em algumas modalidades, um composto de fórmula (VI) é representado pela fórmula (VIa1) ou (VIa2): (VIa1) ou (VIa2), em que R6a e R6b são iguais aos definidos acima.
[0149] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (VIa1). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (VIa1).
[0150] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (VIa2). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (VIa2).
[0151] Em uma modalidade de Fórmula (VI), R6b é -CH3 ou - CH2CH2NH2.
[0152] Em algumas modalidades, é descrito um composto de fórmula (VIb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (VIb), em que R6a é -H ou -CH3;
R6b é -C(O)C(R6cR6d)NH2; ou -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OR6e; e R6c é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OR6f; R6d é H ou -CH3; e R6e e R6f são, independentemente, -H ou -CH3.
[0153] Em uma modalidade, é descrito um composto de fórmula (VIb). Em outra modalidade, é descrito um sal farmaceuticamente aceitável do composto de fórmula (VIb).
[0154] Em uma modalidade de fórmula (VIb), R6b é -CH3 ou - CH2CH2NH2.
[0155] Em algumas modalidades de fórmula (VIb), R6a é -H ou -CH3; e R6b é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino.
[0156] Em algumas modalidades de fórmula (VIb), R 6a é -H ou -CH3; R6b é -C(O)C(R6cR6d)NH2; R6c é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OH; e R6d é H ou -CH3.
[0157] Em algumas modalidades, um composto de fórmula (VIb) é representado pela fórmula (VIb1) ou (VIb2): (VIb1) ou (VIb2), em que R6a e R6b são iguais aos definidos acima.
[0158] Em algumas modalidades, os compostos de fórmula (I), (Ia), (II), (IIa), (III), (IIIa), (IV), (V), e (VI), incluindo suas espécies, são convertidos nos compostos de fórmula (Ib), (IIb), (IIIb), (IVb), (Vb), e (VIb), incluindo suas espécies, via ciclização intramolecular, e vice-versa. O mesmo é dizer, é um processo de interconversão. Os compostos de fórmula (I), (Ia), (II), (IIa), (III), (IIIa), (IV), (V), e (VI), incluindo suas espécies, e os compostos de fórmula (Ib), (IIb), (IIIb), (IVb), (Vb), e (VIb), incluindo suas espécies, são, cada um, convertidos nos outros parcialmente ou completamente, dependendo das condições, tais como temperatura, pressão, umidade, o pH e/ou composição do meio (por exemplo, solventes), e etc. É ilustrado no esquema abaixo: , em que R1 é igual ao definido na fórmula (Ia) e (Ib) acima.
[0159] Em algumas modalidades, são descritos compostos da Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: Tabela 1 Exemplo Composto Nome 2 ácido (2R,4S)-2-(4- boronobutil)-4- hidroxipirrolidino-2-carboxílico 3 ácido (2R,4R)-2-(4- boronobutil)-4- hidroxipirrolidino-2-carboxílico 4 ácido (2S,4S)-4-amino-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
Exemplo Composto Nome
5 ácido (2R,4S)-4-amino-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
6 ácido (2S,4R)-4-amino-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
7 ácido (2R,4R)-4-amino-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
8 ácido (2R,4R)-4-((S)-2- aminopropanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
9 ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino- 3-metilbutanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
10 ácido (2R,4R)-4-((R)-2-amino- 3-metilbutanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
Exemplo Composto Nome
11 ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino- 3,3-dimetilbutanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
12 ácido (2R,4R)-2-(4- boronobutil)-4-((S)-pirrolidino- 2-carboxamido)pirrolidino-2- carboxílico
13 ácido (2R,4R)-4-(2- aminoacetamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
14 ácido (2R,4R)-4-((S)-2- aminobutanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
15 ácido (2R,4R)-4-((2S,3S)-2- amino-3-metilpentanamido)-2- (4-boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
Exemplo Composto Nome
16 ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino- 4-metil-pentanoil]amino]-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
17 ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino- 3-hidróxi-propanoil]amino]-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
18 ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino- 3-metóxi-propanoil]amino]-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
19 (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8- hidróxi-6-oxo-7-oxa-1-aza-8- boraespiro[4.7]dodecan-3-il)-3- metilbutanamida
20 ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino- 3-hidróxi-3-metil- butanoil]amino]-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
Exemplo Composto Nome
21 ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino- 2,3-dimetil-butanoil]amino]-2- (4-boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
22 ácido (2R,4R)-2-(4- boronobutil)-4-[[(2S)-2,3- diaminopropanoil]amino]pirrolid ino-2-carboxílico
23 ácido (2R,4R)-2-(4- boronobutil)-4- (metilamino)pirrolidino-2- carboxílico
24 ácido (2S,4R)-2-(4- boronobutil)-4- (metilamino)pirrolidino-2- carboxílico
25 ácido (2R,4R)-2-(4- boronobutil)-4- (dimetilamino)pirrolidino-2- carboxílico
Exemplo Composto Nome
26 ácido (2S,4R)-2-(4- boronobutil)-4- (dimetilamino)pirrolidino-2- carboxílico
27 ácido (2R,4R)-4-(2- aminoetilamino)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
28 ácido (2S,4R)-4-(2- aminoetilamino)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
29 ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino- 3-metil-butanoil]-metil-amino]- 2-(4-boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
30 ácido (2S,4R)-4-[[(2S)-2-amino- 3-metil-butanoil]-metil-amino]- 2-(4-boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
[0160] A linguagem "C1-C4 alquila" inclui frações alquila acíclicas tendo 1-4 átomos de carbono. Exemplos de frações C1-C4 alquila incluem metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, sec-butila, isobutila, e terc-butila.
[0161] A linguagem "sal farmaceuticamente aceitável" inclui sais de adição de ácido ou de adição de base que retêm a eficácia biológica e propriedades dos compostos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, e Tabela 1, e que tipicamente não são biologicamente indesejáveis ou indesejáveis de qualquer outro modo. Em muitos casos, os compostos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, e Tabela 1, são capazes de formar sais de ácido e/ou base em virtude da presença de grupos básicos e/ou carboxila ou grupos similares a estes.
[0162] Sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com ácidos inorgânicos e ácidos orgânicos, por exemplo, sais acetato, aspartato, benzoato, besilato, brometo/bromidrato, bicarbonato/carbonato, bissulfato/sulfato, canforsulfonato, cloreto/cloridrato, clorteofilonato, citrato, etanodissulfonato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hipurato, hidroiodeto/iodeto, isetionato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, palmoato, fosfato/hidrogenofosfato/di-hidrogenofosfato, poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, subsalicilato, sulfato/hidrogenossulfato, tartarato, tosilato e trifluoroacetato. Ácidos inorgânicos a partir dos quais podem ser derivados sais incluem, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e similares. Ácidos orgânicos a partir dos quais podem ser derivados sais incluem, por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido toluenossulfônico, ácido trifluoroacético, ácido sulfossalicílico e similares.
[0163] Sais de adição de bases farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com bases inorgânicas e orgânicas. Bases inorgânicas a partir das quais podem ser derivados sais incluem, por exemplo, amônia e sais de amônio e metais das colunas I a XII da tabela periódica. Em certas modalidades, os sais são derivados de sódio, potássio, amônio, cálcio, magnésio, ferro, prata, zinco e cobre; sais particularmente adequados incluem sais de amônio, potássio, sódio, cálcio e magnésio. Bases orgânicas a partir das quais podem ser derivados sais incluem, por exemplo, aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas, resinas básicas de troca iônica e semelhantes. Certas aminas orgânicas incluem isopropilamina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietilamina, lisina, meglumina, piperazina e trometamina.
[0164] Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, e Tabela 1, podem ser sintetizados a partir de uma fração básica ou ácida, por métodos químicos convencionais. Em geral, tais sais podem ser preparados por reação de formas de ácido livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base apropriada (como hidróxido, carbonato, bicarbonato de Na+, Ca2+, Mg2+, ou K+ ou similares), ou por reação de formas de base livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica do ácido apropriado. Tais reações são tipicamente levadas a cabo em água ou em um solvente orgânico ou em uma mistura dos dois. Geralmente, o uso de meios não aquosos tais como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol ou acetonitrila é desejável, quando praticável. Listas de sais adequados adicionais podem ser encontradas, por exemplo, em "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20ª edição, Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); Berge et al., "J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19 e em "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" de Stahl e Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemanha, 2002).
[0165] É pretendido que qualquer fórmula apresentada aqui também represente formas não marcadas bem como formas isotopicamente marcadas para os compostos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, e Tabela 1. Compostos isotopicamente marcados têm estruturas representadas pelas fórmulas apresentadas no presente documento com a exceção de um ou mais átomos estarem substituídos por um átomo do mesmo elemento, mas com número de massa diferente. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, e Tabela 1, e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, enxofre, flúor, cloro e iodo, tais como 2H, 3H, 11 C, 13 C, 14 C, 15 N, 35 S, 36 Cl e 125 I. Compostos isotopicamente marcados de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, e Tabela 1, podem ser genericamente preparados por técnicas convencionais conhecidas dos peritos na técnica ou por processos análogos aos descritos nos Exemplos adjuntos usando reagentes isotopicamente marcados apropriados em vez dos reagentes não marcados previamente empregues.
[0166] Os compostos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, e Tabela 1, podem ter diferentes formas isoméricas. A linguagem "isômero óptico", "estereoisômero" ou "diastereoisômero" se relaciona com quaisquer das várias configurações estereoisoméricas que podem existir para um determinado composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, e Tabela 1. É entendido que um substituinte pode ser anexado em um centro quiral de um átomo de carbono e, portanto, os compostos divulgados incluem enantiômeros, diastereômeros e racematos. O termo “enantiômero” inclui pares de estereoisômeros que são imagens de espelho não sobreponíveis uns dos outros. Uma mistura 1:1 de um par de enantiômeros é uma mistura racêmica. O termo é usado para designar uma mistura racêmica, quando apropriado. Os termos “diastereômeros” ou “diastereoisômeros” incluem estereoisômeros que têm pelo menos dois átomos assimétricos, mas que não são imagens de espelho uns dos outros. A estereoquímica absoluta é especificada de acordo com o sistema R-S de Cahn-Ingold-Prelog. Quando um composto é um enantiômero puro, a estereoquímica em cada centro quiral pode ser especificada por R ou S. Compostos resolvidos cuja configuração absoluta seja desconhecida pode ser designada (+) ou (-) dependendo da direção (dextro ou levorrotatório) na qual rodam luz polarizada plana no comprimento de onda da linha D do sódio. Alguns dos compostos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, e Tabela 1, contêm um ou mais centros ou eixos assimétricos e podem, assim, dar origem a enantiômeros, diastereômeros ou outras formas estereoisoméricas que podem ser definidas, em termos da estereoquímica absoluta, como (R) ou (S). É pretendido que a presente divulgação inclua todos de tais possíveis isômeros, incluindo misturas racêmicas, formas opticamente puras e misturas de intermediários. Isômeros (R) e (S) opticamente ativos podem ser preparados usando síntons quirais ou reagentes quirais, ou resolvidos usando técnicas convencionais bem conhecidas na técnica, como HPLC quiral.
[0167] Também são descritos aqui os Intermediários 1-48 nos Exemplos e seus sais. Composições Farmacêuticas
[0168] Em algumas modalidades, são descritas composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[0169] A linguagem "veículo farmaceuticamente aceitável" inclui compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que são adequadas, dentro do escopo de avaliação médica fundamentada, para uso em contato com tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação excessivos, como determinado pelo perito na técnica.
[0170] As composições descritas podem estar em uma forma adequada para uso oral (por exemplo, como comprimidos, pastilhas, cápsulas duras ou moles, suspensões aquosas ou oleosas, emulsões, pós ou grânulos dispersíveis, xaropes ou elixires), para uso tópico (por exemplo, como cremes, pomadas, géis ou soluções ou suspensões aquosas ou oleosas), para administração por inalação (por exemplo, como um pó finamente dividido ou um aerossol líquido), para administração por insuflação (por exemplo, como um pó finamente dividido) ou para administração parenteral (por exemplo, como uma solução aquosa ou oleosa esterilizada para dosagem intravenosa, subcutânea ou intramuscular ou como um supositório para dosagem retal).
[0171] A quantidade de ingrediente ativo que é combinada com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis para produzir uma forma de dosagem única irá necessariamente variar, dependendo do hospedeiro tratado e da via de administração particular. Para informação adicional sobre Vias de Administração e Regimes de Dosagem, o leitor é remetido para o Capítulo 25.3 no Volume 5 de Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Presidente do Conselho Editorial), Pergamon Press 1990. Utilidades Terapêuticas
[0172] Os presentes compostos são úteis como inibidores de arginase em terapias.
[0173] Em um aspecto, são descritos métodos para o tratamento de câncer em um sujeito necessitado, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
[0174] Em um aspecto, são descritos métodos para o tratamento de uma doença inflamatória respiratória em um sujeito necessitado, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
[0175] Em um aspecto, é descrito um composto de fórmula (I), (Ia),
(Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento de câncer.
[0176] Em um aspecto, é descrito um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento de uma doença inflamatória respiratória.
[0177] Em um aspecto, é descrito o uso de um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer.
[0178] Em um aspecto, é descrito o uso de um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável, na fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença inflamatória respiratória.
[0179] Em um aspecto, são descritas composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento de câncer.
[0180] Em um aspecto, são descritas composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento de uma doença inflamatória respiratória.
[0181] O termo "câncer" inclui, por exemplo, carcinoma de células renais, carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço, câncer do pulmão (por exemplo, câncer do pulmão de células pequenas (SCLC), câncer do pulmão de células não pequenas (NSCLC), mesotelioma), câncer pancreático, câncer colorretal, câncer da mama, leucemia mieloide aguda (AML), câncer da próstata, câncer gástrico, câncer da bexiga, melanoma, câncer renal e câncer do ovário. Em algumas modalidades, o câncer formou metástases. Em algumas modalidades, o câncer está associado a modulação de Arginase 1 e/ou Arginase 2.
[0182] Em algumas modalidades, o câncer está associado a níveis de Arginase 1 aumentados no plasma. Em algumas modalidades, o câncer está associado a níveis de arginina decrescidos no plasma. Em algumas modalidades, o câncer está associado a níveis de Arginase 1 aumentados no plasma e níveis de arginina decrescidos no plasma. Em algumas modalidades, o câncer associado a níveis de Arginase 1 aumentados no plasma e/ou níveis de arginina decrescidos no plasma inclui carcinoma de células renais, carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço, câncer do pulmão (por exemplo, câncer do pulmão de células pequenas (SCLC), câncer do pulmão de células não pequenas (NSCLC), mesotelioma), câncer pancreático, câncer colorretal e câncer da mama.
[0183] Em algumas modalidades, o câncer secreta Arginase 2, por exemplo, leucemia mieloide aguda e câncer da próstata.
[0184] Em algumas modalidades, o câncer está associado a células imunes se infiltrando em tumores positivos para Arginase 1, por exemplo, câncer do pulmão (câncer do pulmão de células pequenas (SCLC), câncer do pulmão de células não pequenas (NSCLC), câncer gástrico, câncer da bexiga, câncer colorretal, melanoma, carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço, câncer da mama, câncer da próstata, câncer do ovário, câncer pancreático e câncer renal.
[0185] O termo "uma doença inflamatória respiratória" se relaciona com afecções ou distúrbios inflamatórios que afetam as vias aéreas, vasculatura pulmonar, interstício pulmonar, ou uma combinação destes. Podem estar isoladas no pulmão ou envolver múltiplos órgãos. Em uma modalidade, a doença inflamatória respiratória é uma doença inflamatória do pulmão. Em outra modalidade, a doença inflamatória do pulmão não é infecciosa.
[0186] Em algumas modalidades, a doença inflamatória respiratória é asma, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), fibrose pulmonar induzida quimicamente, fibrose pulmonar idiopática, fibrose cística, ou uma combinação destes. Em algumas modalidades, a doença inflamatória respiratória é doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) ou asma.
[0187] Em um aspecto, são descritos métodos para inibir arginase em um sujeito necessitado, compreendendo administrar ao sujeito uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
[0188] Em um aspecto, é descrito um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso na inibição de arginase.
[0189] Em um aspecto, é descrito o uso de um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, na fabricação de um medicamento para inibir arginase.
[0190] Em um aspecto, são descritas composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso na inibição de arginase.
[0191] O termo "arginase" inclui enzimas contendo manganês pertencentes à família das ureo-hidrolases que catalisam o quinto passo e passo final do ciclo da ureia convertendo L-arginina em L-ornitina e ureia. O termo "arginase" inclui as duas isozimas da enzima, por exemplo, Arginase 1, que atua no ciclo da ureia, e está maioritariamente localizada no citoplasma do fígado, e Arginase 2, que está localizada nas mitocôndrias de vários tecidos do corpo e está implicada na regulação de concentrações de arginina/ornitina na célula. Em algumas modalidades, os compostos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, e Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, são seletivos para arginase 1. Em algumas modalidades, os compostos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, e Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, são seletivos para Arginase 2. Em algumas modalidades, os compostos de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, e Tabela 1, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, são inibidores de Arginase 1 e Arginase 2.
[0192] A linguagem "quantidade eficaz" inclui uma quantidade de um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, que irá induzir uma resposta biológica ou médica em um sujeito, por exemplo, a redução ou inibição da atividade enzimática ou proteica relacionada com arginase ou câncer, melhoria de sintomas de câncer ou o abrandamento ou retardamento da progressão de câncer. Em algumas modalidades, a linguagem "quantidade eficaz" inclui a quantidade de um composto de fórmula (I), (Ia), (Ib), (II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, ou Tabela 1, que, quando administrada a um sujeito, é eficaz para pelo menos parcialmente aliviar, inibir, e/ou melhorar câncer ou inibir arginase, e/ou reduzir ou inibir o crescimento de um tumor ou proliferação de células cancerosas em um sujeito.
[0193] O termo "sujeito" inclui mamíferos de sangue quente, por exemplo, primatas, cães, gatos, coelhos, ratos e camundongos. Em algumas modalidades, o sujeito é um primata, por exemplo, um humano. Em algumas modalidades, o sujeito está sofrendo de câncer. Em algumas modalidades, o sujeito necessitado de tratamento (por exemplo, o sujeito irá beneficiar biológica ou medicamente de tratamento). Em algumas modalidades, o paciente está sofrendo de câncer. Em algumas modalidades, o sujeito tem níveis de Arginase 1 aumentados no plasma. Em algumas modalidades, o sujeito tem níveis decrescidos de arginina. Em algumas modalidades, o paciente tem níveis de Arginase 1 aumentados no plasma e níveis decrescidos de arginina. Em algumas modalidades, o sujeito tem um câncer secretando Arginase 2 (por exemplo, leucemia mieloide aguda ou câncer da próstata). Em algumas modalidades, o sujeito tem células imunes se infiltrando em tumores positivos para Arginase 1.
[0194] A linguagem “inibir”, “inibição” ou “inibindo” inclui uma diminuição na atividade da linha de base de uma atividade ou processo biológico. Em algumas modalidades, os compostos de fórmula (I), (Ia), (Ib),
(II), (IIa), (IIb), (III), (IIIa), (IIIb), (IV), (IVb), (V), (Vb), (VI), (VIb), incluindo quaisquer subgêneros ou espécies dos mesmos, e Tabela 1, inibem arginase.
[0195] A linguagem "tratar", "tratando" e "tratamento" inclui a redução ou inibição da atividade enzimática ou proteica relacionada com arginase ou, em um sujeito, melhoria de um ou mais sintomas de um câncer, ou o abrandamento ou retardamento da progressão de câncer em um sujeito. A linguagem "tratar", "tratando" e "tratamento" também inclui a redução ou inibição do crescimento de um tumor ou proliferação de células cancerosas em um sujeito. Exemplos
[0196] Aspectos da presente revelação podem ser adicionalmente definidos por referência aos seguintes exemplos não limitadores, os quais descrevem em detalhe a preparação de certos compostos e intermediários da presente revelação e métodos para o uso dos compostos da presente revelação. Será evidente para os peritos na técnica que muitas modificações, tanto nos materiais como nos métodos, podem ser praticadas sem abandonar o escopo da presente revelação.
[0197] A menos que afirmado em contrário: (i) todas as sínteses foram realizadas à temperatura ambiente, isto é, na faixa de 17 a 25ºC, e sob uma atmosfera de um gás inerte, tal como nitrogênio, salvo indicação em contrário; (ii) as evaporações foram realizadas por evaporação rotativa ou usando equipamento Genevac ou um evaporador Biotage v10 in vacuo e os procedimentos de processamento foram realizados depois da remoção de sólidos residuais por filtração; (iii) as purificações por cromatografia Flash foram realizadas em um Teledyne Isco CombiFlash® Rf automático ou Teledyne Isco
CombiFlash® Companion® usando Colunas de Sílica RediSep Rf Gold™ pré-embaladas (20-40 μm, partículas esféricas), Cartuchos GraceResolv™ (sílica Davisil®) ou cartuchos Silicycle (40-63 μm). (iv) a cromatografia preparativa foi realizada em um instrumento prep HPLC Gilson com recolha de UV; alternativamente, a cromatografia preparativa foi realizada em um instrumento HPLC-MS Waters AutoPurification com recolha desencadeada por MS e UV; (v) a cromatografia preparativa quiral foi realizada em um instrumento Gilson com recolha de UV (injetor/coletor de frações 233, bombas 333 & 334, detector de UV 155) ou um instrumento Varian Prep Star (2 x bombas SD1, detector de UV 325, coletor de frações 701), bomba funcionando com injeção Gilson 305; alternativamente, cromatografia preparativa quiral foi realizada em um instrumento SFC-MS Waters Prep 100 com recolha desencadeada por MS e UV ou um instrumento SFC Thar MultiGram III com recolha de UV. (vi) os rendimentos, quando presentes, não são necessariamente os máximos alcançáveis; (vii) em geral, as estruturas de produtos finais de Fórmula (I) foram confirmadas por espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN); os valores dos desvios químicos de RMN foram medidos na escala delta [os espectros de ressonância magnética de prótons foram determinados usando um instrumento Bruker Avance III 600 (600 MHz), Bruker Avance 400 (400 MHz), Bruker Avance 300 (300 MHz) ou Bruker DRX 500 (500 MHz)]; as medições foram realizadas à temperatura ambiente, salvo especificação em contrário; as seguintes abreviaturas foram usadas: s, singleto; d, dupleto; t, tripleto; q, quarteto; m, multipleto; dd, dupleto de dupletos; ddd, dupleto de dupletos de dupletos; dt, dupleto de tripletos; bs, sinal largo.
(viii) em geral, os produtos finais de Fórmula I também foram caracterizados por espectroscopia de massa após cromatografia líquida (LCMS ou UPLC); UPLC foi realizado usando um UPLC Waters equipado com um espectrômetro de massa Waters SQ (Temp. da coluna 40 oC, UV = 220-300 nm ou 190-400 nm, Espec. de Massa = ESI com troca positivo/negativo) a uma taxa de fluxo de 1 mL/min usando um sistema solvente de 97% de A + 3% de B até 3% de A + 97% de B ao longo de 1,50 min (tempo de processamento total com equilibração de novo para as condições de partida, etc., 1,70 min), em que A = ácido fórmico 0,1% ou ácido trifluoroacético 0,05% em água (para manipulação ácida) ou hidróxido de amônio 0,1% em água (para manipulação básica) e B = acetonitrila.
Para a análise ácida, a coluna usada foi uma Waters Acquity HSS T3 (1,8 µm, 2,1x 50 mm), para a análise básica, a coluna usada foi uma Waters Acquity BEH C18 (1,7 µm, 2,1x50 mm). Alternativamente, UPLC foi realizada usando um UPLC Waters equipado com um espectrômetro de massa Waters SQ (Temp. da coluna 30 oC, UV = 210- 400 nm, Espec. de Massa = ESI com troca positivo/negativo) a uma taxa de fluxo de 1 mL/min usando um gradiente de solvente de 2 até 98% de B ao longo de 1,5 min (tempo de processamento total com equilibração de novo para as condições de partida, 2 min), em que A = ácido fórmico 0,1% em água e B = ácido fórmico 0,1% em acetonitrila (para manipulação ácida) ou A = hidróxido de amônio 0,1% em água e B = acetonitrila (para manipulação básica). Para a análise ácida, a coluna usada foi uma Waters Acquity HSS T3 (1,8 µm, 2,1x30 mm), para a análise básica, a coluna usada foi uma Waters Acquity BEH C18 (1,7 µm, 2,1x30 mm); LCMS foi realizado usando um Waters Alliance HT (2795) equipado com um espectrômetro de massa Waters ZQ ESCi e uma coluna Phenomenex Gemini-NX C18 (5 µm,110 A, 2,1x50 mm) a uma taxa de fluxo de 1,1 mL/min, 95% de A até 95% de B ao longo de 4 min com uma paragem de 0,5 min, em que A = ácido fórmico 0,1% e B = ácido fórmico 0,1% em acetonitrila (para a manipulação ácida) ou A = hidróxido de amônio 0,1% em água e B = acetonitrila (para a manipulação básica). Adicionalmente, LCMS foi realizado usando um UFLC Shimadzu equipado com um espectrômetro de massa Shimadzu LCMS-2020 e uma coluna Waters HSS C18 (1,8 µm, 2,1x50 mm) ou Shim-pack XR-ODS (2,2 µm, 3,0x50 mm) ou Phenomenex Gemini–NX C18 (3 µm, 3,0x50 mm) a uma taxa de fluxo de 0,7 mL/min (para a coluna Waters HSS C18), 1,0 mL/min (para a coluna Shim-pack XR-ODS) ou 1,2 mL/min (para Phenomenex Gemini-NX C18), 95% de A até 95% de B ao longo de 2,2 min com uma paragem de 0,6 min, em que A = ácido fórmico 0,1% ou ácido trifluoroacético 0,05% em água (para a manipulação ácida) ou hidróxido de amônio 0,1% ou carbonato de amônio 6,5 mM em água (para a manipulação básica) e B = acetonitrila.
O íon molecular relatado corresponde ao [M+H]+ a menos que especificado de outro modo; para moléculas com múltiplos padrões isotópicos (Br, Cl, etc.), o valor relatado é o obtido para a menor massa isotópica, a menos que especificado de outro modo. (ix) a purificação por troca iônica foi geralmente realizada usando um cartucho SCX-2 (Biotage). (x) a pureza de intermediários foi avaliada por análise cromatográfica de camada fina, espectroscopia de massa, LCMS, UPLC/MS, HPLC (cromatografia líquida de alto desempenho) e/ou RMN; (xi) foram usadas as seguintes abreviaturas: EtOH: etanol EtOAc: acetato de etila LDA: di-isopropilamida de lítio MeOH: metanol
TFA: ácido trifluoroacético MeCN: acetonitrila LCMS: cromatografia líquida - espectrometria de massa t.a. ou TA: temperatura ambiente aq: aquoso THF: tetra-hidrofurano KHMDS: bis(trimetilsilil)amida de potássio DCM: diclorometano DMF: dimetilformamida HATU: (Hexafluorofosfato de 3-óxido de 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5- b]piridínio) BOC: terc-butoxicarbonila DTNB: 5,5′-ditiobis(ácido 2-nitrobenzoico) TNB: ácido 2-nitro-5-tiobenzoico HEPES: (ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinoetanossulfônico) Exemplo 1: ácido (R)-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
Intermediário 1: (3S,7aR)-3-(triclorometil)tetra-hidropirrolo[1,2-c]oxazol- 1(3H)-ona
[0198] 2,2,2-Tricloroetano-1,1-diol (2,155 g, 13,03 mmols) foi adicionado a uma solução de D-prolina (1,00 g, 8,69 mmols) em CHCl3 (100 mL) sob nitrogênio. O balão reacional foi equipado com uma armadilha de Dean-Stark reversa e a mistura reacional foi aquecida para o refluxo com agitação durante 48 h. A mistura reacional foi esfriada para a temperatura ambiente, diluída com DCM (100 mL), e lavada sequencialmente com água (2 x 200 mL) e salmoura saturada (2 x 200 mL). A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e evaporada, dando origem a produto bruto. O material bruto foi purificado por cristalização a partir de EtOH, dando origem a produto (Intermediário 1, 1,13 g, 53,2% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,66 - 2,41 (4H, m), 3,05 - 3,20 (1H, m), 3,40 - 3,50 (1H, m), 4,10 - 4,20 (1H, m), 5,18 (1H, s). Intermediário 2: (3S,7aS)-7a-((E)-4-bromobut-2-enil)-3-(triclorometil)tetra- hidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona
[0199] Uma solução de LDA (2,0 M em THF/heptano/etilbenzeno, 2,05 mL, 4,09 mmols) foi adicionada gota a gota a uma solução de (3S,7aR)-3- (triclorometil)tetra-hidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona (Intermediário 1, 1,00 g, 4,09 mmols) em THF (500 mL) a -78°C sob uma atmosfera de nitrogênio. A solução resultante foi agitada a -78°C durante 20 minutos. (E)-1,4-dibromobut-2-eno (875 mg, 4,09 mmols) foi adicionado à mistura reacional gota a gota como uma solução em THF (2 mL). A mistura reacional foi agitada a -78°C durante 30 minutos e então aquecida para a temperatura ambiente com agitação durante mais 2 h. A mistura reacional foi evaporada até à secura e o resíduo resultante foi diluído em EtOAc (20 mL) e lavado sequencialmente com água (2 x 20 mL) e salmoura saturada
(2 x 20 mL). A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem ao produto (Intermediário 2, 760 mg, 49% de rendimento). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,55 - 1,75 (1H, m), 1,85 - 2,25 (3H, m), 2,52 - 2,73 (2H, m), 3,14 - 3,32 (2H, m), 3,89 - 4,10 (2H, m), 5,01 (1H, s), 5,79 - 5,99 (2H, m); m/z (ES+) [M+H]+ =378. Intermediário 3: (3S,7aS)-7a-((E)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- 2-il)but-2-enil)-3-(triclorometil)tetra-hidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona
[0200] Pd2(dba)3 (85,0 mg, 0,0928 mmol) foi adicionado a uma solução de (3S,7aS)-7a-((E)-4-bromobut-2-enil)-3-(triclorometil)tetra- hidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona (Intermediário 2, 700 mg, 1,85 mmol) e bis(pinacolato)diboro (942 mg, 3,71 mmols) em THF (30 mL) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura resultante foi aquecida para 60°C e agitada durante 5 horas. A mistura reacional foi esfriada para a temperatura ambiente e concentrada até à secura. O resíduo resultante foi diluído com EtOAc (50 mL) e lavado sequencialmente com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia em sílica gel, dando origem ao produto (Intermediário 3, 510 mg, 65% de rendimento). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,28 (12H, s), 1,58 – 1,80 (2H, m), 1,83 – 2,12 (3H, m) 2,42 – 2,65 (1H, m), 3,20 (1H, dd), 3,47 (1H, q), 3,71 (1H, t), 3,90 (1H, t), 4,98 (1H, s), 5,38 – 5,53 (1H, m), 5,64 – 5,83 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 424. Intermediário 4: (3S,7aR)-7a-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)-3-(triclorometil)tetra-hidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona
[0201] Pd/C (10% p, 125 mg, 0,12 mmol) foi adicionado a uma solução de (3S,7aS)-7a-((E)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)but-2- enil)-3-(triclorometil)tetra-hidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona
(Intermediário 3, 500 mg, 1,18 mmol) em MeOH (5 mL). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. A mistura reacional foi filtrada através de terra diatomácea e lavada com MeOH. O filtrado foi concentrado até à secura, dando origem a produto bruto (Intermediário 4, 390 mg, 78% de rendimento) que foi usado sem purificação adicional. m/z (ES+) [M+H]+ =
426. Exemplo 1: ácido (R)-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0202] HCl aquoso concentrado (1,00 mL, 12,0 mmols) foi adicionado a uma solução de (3S,7aR)-7a-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)-3-(triclorometil)tetra-hidropirrolo[1,2-c]oxazol-1(3H)-ona (Intermediário 4, 300 mg, 0,703 mmol) e ácido fenilborônico (172 mg, 1,41 mmol) em 1,4-dioxano (20 mL). A solução resultante foi aquecida para 80°C durante 15 h. A mistura reacional foi esfriada para a temperatura ambiente e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por LCMS preparativa (coluna XBridge Prep C18 OBD, sílica 5 µ, 19 x 150 mm, H2O (com TFA 0,05%/MeCN). As frações puras foram recolhidas e concentradas até à secura, dando origem a ácido (R)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 1, 85 mg, 37% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 0,63 - 0,74 (2H, m), 1,09 - 1,27 (2H, m), 1,27 - 1,37 (2H, m), 1,65 - 1,75 (1H, m), 1,77 - 2,08 (4H, m), 2,25 - 2,37 (1H, m), 3,21 - 3,37 (2H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 216.
Exemplo 2: ácido (2R,4S)-2-(4-boronobutil)-4-hidroxipirrolidino-2- carboxílico Intermediário 5: 4-(benzilóxi)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2- benzila e 1-terc-butila
[0203] Ácido (2S,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidroxipirrolidino-2- carboxílico (5,00 g, 21,6 mmols) foi dissolvido em DMF (73 mL) e a solução foi esfriada para 0°C. Hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral) (1,81 g, 45,3 mmols) foi adicionado em porções e a suspensão foi agitada a 0°C durante uma hora. Brometo de benzila (12,9 mL, 108 mmols) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada durante a noite com aquecimento lento para a TA. A mistura reacional bruta foi diluída com acetato de etila (250 mL) e lavada sequencialmente com ácido cítrico (10% aq) e água. As camadas orgânicas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura. O produto bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem ao produto como uma mistura de rotâmeros (Intermediário 5, 5,5 g, 62% de rendimento). 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,28 -1,40 (9H, s x2) rotâmeros, 2,20 (1H, dd), 2,36 - 2,45 (1H, m), 3,37 (1H, dd), 3,51 – 3,58 (1H, m), 4,14 (1H, s l),
4,33 – 4,50 (3H, m), 4,94 – 5,17 (2H, m), 7,25 – 7,32 (10H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 412. Intermediário 6: 4-(benzilóxi)-2-(but-2-enil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (4S)-2-benzila e 1-terc-butila
[0204] 4-(Benzilóxi)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 5, 2,75 g, 6,68 mmols) e brometo de crotila (1,03 mL, 10,0 mmols) foram dissolvidos em THF (45 mL) e a solução foi esfriada para - 78°C sob uma atmosfera de N2. A solução foi tratada com adição gota a gota de uma solução de KHMDS (0,5 M em tolueno, 20,1 mL, 10,0 mmols). A mistura reacional foi lentamente aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 3 horas. A mistura reacional bruta foi extinta com água e os voláteis foram removidos in vacuo. A mistura bruta foi diluída em DCM e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem ao produto como uma mistura de rotâmeros e olefinas E/Z (Intermediário 6, 2,54 g, 82% de rendimento). 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 1,20 - 1,41 (9H, s x2) rotâmeros, 1,54 - 1,62 (3H, m), 2,10 - 2,59 (3H, m), 2,67 - 2,97 (1H, m), 3,10 – 3,43 (1H, m), 3,50 – 3,78 (1H, m), 3,98 – 4,15 (1H, m), 4,34 – 4,49 (2H, m), 4,94 – 5,13 (2H, m), 5,18 – 5,30 (1H, m), 5,38 – 5,63 (1H, m), 7,25 – 7,36 (10H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 466. Intermediário 8: ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidróxi-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0205] Dicloreto de bis(1,5-ciclo-octadieno)di-irídio(I) (0,366 g, 0,550 mmol) e bis(difenilfosfino)metano (0,419 g, 1,09 mmol) foram adicionados a um balão de fundo redondo seco no forno. O balão reacional foi selado e purgado com N2. Os sólidos foram dissolvidos em DCM (31 mL) e 4,4,5,5-
tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,74 mL, 12,0 mmols) foi adicionado lentamente à solução.
A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 min. 4-(Benzilóxi)-2-(but-2-enil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (4S)-2- benzila e 1-terc-butila (Intermediário 6, 2,54 g, 5,46 mmols) foi adicionado à reação como uma solução em DCM (21 mL) e a mistura reacional foi agitada durante a noite.
A mistura reacional foi diluída com DCM e extinta com água.
As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM.
As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura.
O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a 4-(benzilóxi)- 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2- dicarboxilato de (4S)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 7, 2,0 g, 61% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros.
O material purificado foi sujeito a SFC quiral [coluna (S,S)Whelk-O1, 21,2 x 250 mm, 5 µm, Temperatura = 23°C, Fase móvel = 0-15% de MeOH:CO2, detecção UV @ 220 nm, carga = 33 mg/inj, conc = 220 ng/mL em MeOH, taxa de fluxo = 75 mL/min, Pressão na Descarga = 100 bar], dando origem a dois diastereômeros.
A estereoquímica para o isômero maioritário foi atribuída como o produto de adição anti e para o isômero minoritário foi atribuída como o produto de adição syn.
O isômero minoritário (368 mg, 0,620 mmol) foi dissolvido em acetato de etila (6,2 mL) e tratado com Pd/C (10% p, 132 mg, 0,124 mmol). O balão reacional foi equipado com um balão de H 2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente.
A mistura reacional foi filtrada através de terra diatomácea e enxaguada com metanol.
O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem a ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidróxi-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 8, 228 mg, 98% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros que foi usada sem purificação adicional. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 0,57 - 0,74 (2H, m), 1,17 (12 H, s), 1,24 - 1,47 (13H, m), 1,59 - 1,78 (1H, m), 1,78 - 1,96 (1H, m), 2,01 - 2,20 (2H, m), 2,84 - 3,09 (1H, m), 3,58 - 3,73 (1H, m), 4,14 - 4,31 (1H, m), 4,98 - 5,09 (1H, m), 12,20 - 12,60 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 414. Exemplo 2: ácido (2R,4S)-2-(4-boronobutil)-4-hidroxipirrolidino-2- carboxílico
[0206] Ácido trifluoroacético (0,65 mL, 8,4 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidróxi-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 8, 175 mg, 0,423 mmol) em DCM (4 mL). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora e então foi concentrada sob vácuo. O aminoácido bruto foi dissolvido em Et2O (3 mL) e HCl aq 1 M (3 mL). Ácido fenilborônico (103 mg, 0,847 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura reacional foi diluída com água e lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 60 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 2 M/metanol. O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18Aq, 0 até 10% até 100% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4S)- 2-(4-boronobutil)-4-hidroxipirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 2, 33 mg, 33% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400MHz, D2O) δ 0,67 - 0,78 (2H, m), 1,08 - 1,41 (4H, m), 1,81 - 2,12 (3H, m), 2,51 (1H, dd), 3,22 - 3,37 (2H, m), 4,46 - 4,56 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 232.
Exemplo 3: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-hidroxipirrolidino-2- carboxílico Intermediário 9: 4-(benzilóxi)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2- benzila e 1-terc-butila
[0207] Ácido (2S,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidroxipirrolidino-2- carboxílico (5,00 g, 21,6 mmols) foi dissolvido em DMF (73 mL) e a solução foi esfriada para 0°C. Hidreto de sódio (60% p em óleo mineral, 1,81 g, 45,4 mmols) foi adicionado em porções e a suspensão foi agitada a 0°C durante uma hora. Brometo de benzila (12,86 mL, 108,1 mmols) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada durante a noite com aquecimento lento para a TA. A mistura reacional bruta foi diluída com acetato de etila (250 mL) e lavada sequencialmente com ácido cítrico (10% aq) e água. As camadas orgânicas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a produto (Intermediário 9, 5,9 g, 66% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (300MHz, DMSO- d6) δ 1,27 - 1,39 (9H, s x2) rotâmeros, 1,95 - 2,08 (1H, m), 2,34 - 2,47 (1H,
m), 3,41 - 3,53 (2H, m), 4,17 (1H, s l), 4,28 (1H, q), 4,43 - 4,55 (2H, m), 5,06 - 5,22 (2H, m), 7,25 - 7,41 (10H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 412. Intermediário 10: 4-(benzilóxi)-2-(but-2-enil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (4R)-2-benzila e 1-terc-butila
[0208] 4-(Benzilóxi)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 9, 2,75 g, 6,68 mmols) e brometo de crotila (1,03 mL, 10,0 mmols) foram dissolvidos em THF (45 mL) e a solução foi esfriada para - 78°C sob uma atmosfera de N2. A solução foi tratada com adição gota a gota de uma solução de KHMDS (0,5 M em tolueno, 20,1 mL, 10,0 mmols). A mistura reacional foi lentamente aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 3 horA. A mistura reacional bruta foi extinta com água e os voláteis foram removidos in vacuo. A mistura bruta foi diluída em DCM e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a produto (Intermediário 10, 1,23 g, 40% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros e olefinas E/Z. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 1,25 - 1,34 (9H, s x2) rotâmeros, 1,45 - 1,63 (3H, m), 2,12 - 2,64 (2H, m), 2,64 - 3,04 (1H, m), 3,06 - 3,19 (1H, m), 3,31 - 3,45 (1H, m), 3,46 - 3,81 (1H, m), 4,03 - 4,21 (1H, m), 4,30 - 4,55 (2H, m), 4,90 - 5,16 (2H, m), 5,16 - 5,34 (1H, m), 5,38 - 5,68 (1H, m), 7,25 - 7,41 (10H, m). m/z (ES+) [M+H]+ = 466. Intermediário 12: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidróxi-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0209] Dicloreto de bis(1,5-ciclo-octadieno)di-irídio(I) (177 mg, 0,264 mmol) e bis(difenilfosfino)metano (203 mg, 0,527 mmol) foram adicionados a um balão de fundo redondo seco no forno. O balão reacional foi selado e purgado com N2. Os sólidos foram dissolvidos em DCM (15 mL) e 4,4,5,5-
tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (0,84 mL, 5,8 mmols) foi lentamente adicionado à solução.
A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 min. 4-(Benzilóxi)-2-(but-2-enil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (4R)-2- benzila e 1-terc-butila (Intermediário 10, 1,23 g, 2,64 mmols) foi adicionado à reação como uma solução em DCM (10 mL) e a mistura reacional foi agitada durante a noite.
A mistura reacional foi diluída com DCM e extinta com água.
As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM.
As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura.
O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a 4-(benzilóxi)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 11, 950 mg, 60% de rendimento). O material purificado foi sujeito a SFC quiral [coluna (S,S)Whelk-O1, 21,2 x 250 mm, 5 µm, Temperatura = 23°C, Fase móvel = 0-15% de MeOH:CO2, detecção UV @ 220 nm, carga = 33 mg/inj, conc = 220 ng/mL em MeOH, taxa de fluxo = 75 mL/min, Pressão na Descarga = 100 bar], dando origem a dois diastereômeros.
A estereoquímica para o isômero maioritário foi atribuída como o produto de adição anti e para o isômero minoritário foi atribuída como o produto de adição syn.
O isômero maioritário (385 mg, 0,649 mmol) foi dissolvido em acetato de etila (6,4 mL) e tratado com Pd/C (10% p, 138 mg, 0,130 mmol). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente.
A mistura reacional foi filtrada através de terra diatomácea e enxaguada com metanol.
O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem ao produto (Intermediário 12, 249 mg, 93% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 0,61 - 0,73 (2H, m), 0,97 - 1,11 (1H, m), 1,12 - 1,23 (12H, m), 1,25 - 1,44 (12H, m), 1,51 - 1,71
(1H, m), 1,84 - 2,04 (2H, m), 2,05 - 2,19 (2H, m), 3,12 - 3,29 (1H, m), 3,37 - 3,59 (1H, m), 4,09 - 4,23 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 414. Exemplo 3: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-hidroxipirrolidino-2- carboxílico
[0210] Ácido trifluoroacético (0,65 mL, 8,5 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-hidróxi-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 12, 197 mg, 0,179 mmol) em DCM (3 mL). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora e então foi concentrada sob vácuo. O aminoácido bruto foi dissolvido em Et2O (3 mL) e HCl aq 1 M (3 mL). Ácido fenilborônico (102 mg, 0,837 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura reacional foi diluída com água e lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 60 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 2 M/metanol. O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18Aq, 0 até 10% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4R)-2-(4- boronobutil)-4-hidroxipirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 3, 25 mg, 25% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (300MHz, D2O) δ 0,68 - 0,78 (2H, m), 1,13 - 1,43 (4H, m), 1,64 - 1,79 (1H, m), 1,94 - 2,14 (2H, m), 2,47 (1H, d), 3,39 (2H, m), 4,46 - 4,53 (1H, m). m/z (ES+) [M+H]+ = 232.
Exemplo 4: ácido (2S,4S)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico Intermediário 13: 4-azidopirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2-benzila e 1-terc-butila
[0211] Cloreto de metanossulfonila (0,71 mL, 9,2 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução de (2S,4R)-4-hidroxipirrolidino-1,2- dicarboxilato de 2-benzila e 1-(terc-butila) (2,45 g, 7,26 mmols) e trietilamina (1,27 mL, 9,15 mmols) em DCM (9,6 mL) a 0°C. A mistura reacional foi agitada a 0°C durante uma hora antes de ser aquecida para a temperatura ambiente com agitação durante mais uma hora. A mistura reacional foi diluída com diclorometano e lavada com água. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura, dando origem a (2S,4R)-4-((metilsulfonil)óxi)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2- benzila e 1-(terc-butila) (2,9 g, 95% de rendimento) que foi usado sem purificação adicional. m/z (ES+) [M+H]+ = 400. Azida de sódio (1,65 g, 25,4 mmol) foi adicionado a uma solução de (2S,4R)-4- ((metilsulfonil)óxi)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-(terc-butila)
(2,90 g, 7,26 mmols) em DMF (7,2 mL). A mistura reacional foi aquecida para 50°C e agitada durante a noite. A mistura reacional foi esfriada para a temperatura ambiente e concentrada. O resíduo resultante foi diluído com EtOAc e lavado com água. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem ao produto (Intermediário 13, 2,00 g, 80% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros. 1 H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 1,27 e 1,40 (9H, s x2) rotâmeros, 1,96 - 2,02 (1H, m), 2,53 - 2,63 (1H, m), 3,24 – 3,29 (1H, m), 3,58 - 3,66 (1H, m), 4,32 - 4,41 (2H, m), 5,06 - 5,22 (2H, m), 7,33-7,39 (5H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 347. Intermediário 14: 4-azido-2-(but-2-enil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (4S)- 2-benzila e 1-terc-butila
[0212] 4-Azidopirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2-benzila e 1- terc-butila (Intermediário 13, 1,00 g, 2,89 mmols) e brometo de crotila (0,44 mL, 4,3 mmols) foram dissolvidos em THF (20 mL) e a solução foi esfriada para -78°C sob uma atmosfera de N2. A solução foi tratada com adição gota a gota de uma solução de KHMDS (0,5 M em tolueno, 8,66 mL, 4,33 mmols). A mistura reacional foi lentamente aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 3 horas. A mistura reacional bruta foi extinta com água e os voláteis foram removidos in vacuo. A mistura bruta foi diluída em DCM e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem ao produto (Intermediário 14, 750 mg, 65% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros e olefinas E/Z. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 1,25 - 1,34 (9H, s x2) rotâmeros, 1,55 - 1,64 (3H, m), 1,99 - 2,15 (1H, m), 2,33 - 2,62 (2H, m), 2,73 - 3,10 (1H, m), 3,26
- 3,39 (1H, m), 3,52 - 3,84 (1H, m), 4,24 - 4,33 (1H, m), 5,03 - 5,21 (2H, m), 5,28 - 5,35 (1H, m), 5,49 - 5,65 (1H, m), 7,31 - 7,36 (5H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 401. Intermediário 16: 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2-benzila e 1-terc-butila e Intermediário 17: 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4S)-2-benzila e 1-terc-butila
[0213] Dicloreto de bis(1,5-ciclo-octadieno)di-irídio(I) (126 mg, 0,188 mmol) e bis(difenilfosfino)metano (144 mg, 0,375 mmol) foram adicionados a um balão de fundo redondo seco no forno. O balão reacional foi selado e purgado com N2. Os sólidos foram dissolvidos em DCM (10 mL) e 4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (0,60 mL, 4,1 mmols) foi lentamente adicionado à solução. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. 4-Azido-2-(but-2-enil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (4S)-2- benzila e 1-terc-butila (Intermediário 14, 750 mg, 1,87 mmol) foi adicionado à reação como uma solução em DCM (8 mL) e a mistura reacional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com DCM e extinta com água. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (4S)-2-benzila e 1- terc-butila (Intermediário 15, 678 mg, 68% de rendimento). O material purificado foi sujeito a SFC quiral [coluna (S,S)Whelk-O1, 21,2 x 250 mm, 5 µm, Temperatura = 23°C, Fase móvel = 0-15% de MeOH:CO2, detecção UV @ 220 nm, carga = 33 mg/inj, conc = 220 ng/mL em MeOH, taxa de fluxo = 75 mL/min, Pressão na Descarga = 100 bar], dando origem a dois diastereômeros. A estereoquímica para o isômero maioritário foi atribuída como o produto de adição anti Intermediário 16 e para o isômero minoritário o produto de adição syn Intermediário 17.
[0214] Intermediário 16 (Isômero 1, 608 mg): 4-azido-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2-benzila e 1-terc-butila. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,64 - 0,72 (2H, m), 1,04 - 1,12 (1H, m), 1,13 - 1,20 (12H, m), 1,22 - 1,39 (12H, m), 1,69 - 1,80 (1H, m), 2,01 - 2,23 (2H, m), 2,36 - 2,48 (1H, m), 3,35 - 3,42 (1H, m), 3,58 - 3,69 (1H, m), 4,33 (1H, quin), 5,05 - 5,17 (2H, m), 7,31 - 7,40 (5H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 529.
[0215] Intermediário 17 (Isômero 2, 220 mg): 4-azido-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4S)-2-benzila e 1-terc-butila. Intermediário 18: ácido (2S,4S)-4-Amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0216] 4-Azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4S)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 16, 255 mg, 0,483 mmol) foi dissolvido em acetato de etila (5 mL) e metanol (5 mL) e tratado com Pd/C (10% p, 128 mg, 0,120 mmol). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi filtrada através de terra diatomácea e enxaguada com metanol. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem ao produto (Intermediário 18, 190 mg, 95% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros que foi usada sem purificação adicional. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 0,66 (2H, t), 0,88- 1,03 (1H, m), 1,16 (12H, s), 1,24-1,38 (13H, m), 1,40 - 1,56 (1H, m), 1,80 – 1,91 (1H, m), 2,00-2,15 (2H, m), 3,17-3,28 (1H, m), 3,58 – 3,61 (1H, m), 3,80 (1H, dd), 9,01 (2H, s l); m/z (ES+) [M+H]+ = 413.
Exemplo 4: Ácido (2S,4S)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
[0217] Ácido trifluoroacético (0,71 mL, 9,2 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido (2S,4S)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 18, 190 mg, 0,461 mmol) em DCM (4 mL). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora e então foi concentrada sob vácuo. O aminoácido bruto foi dissolvido em Et2O (3 mL) e HCl aq 1 M (3 mL). Ácido fenilborônico (112 mg, 0,919 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura reacional foi diluída com água e lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 60 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 2 M/metanol. O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18Aq, 0 até 10% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2S,4S)-4-amino- 2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 4, 40 mg, 37% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (300MHz, D2O) δ 0,73 (2H, t), 1,10 - 1,42 (4H, m), 1,69 (1H, ddd), 1,86 - 1,99 (1H, m), 2,10 - 2,30 (2H, m), 3,05 (1H, dd), 3,44 (1H, dd), 3,69 (1H, quin); m/z (ES+) [M+H]+ = 231. Exemplo 5: Ácido (2R,4S)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
Intermediário 19: ácido (2R,4S)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0218] 4-Azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4S)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 17, 220 mg, 0,416 mmol) foi dissolvido em acetato de etila (5 mL) e metanol (5 mL) e tratado com Pd/C (10% p, 111 mg, 0,104 mmol). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi filtrada através de terra diatomácea e enxaguada com metanol. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem ao produto (Intermediário 19, 150 mg, 87% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros que foi usada sem purificação adicional. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 0,64-0,71 (2H, m), 1,17 (12H, s), 1,31-1,40 (15H, m), 1,49 - 1,93 (3H, m), 2,02 – 2,26 (3H, m), 3,38-3,47 (1H, m), 3,72 – 3,81 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 413. Exemplo 5: ácido (2R,4S)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
[0219] Ácido trifluoroacético (0,56 mL, 7,3 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido (2R,4S)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 19, 150 mg, 0,364 mmol) em DCM (3 mL). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora e então foi concentrada sob vácuo. O aminoácido bruto foi dissolvido em Et2O (2 mL) e HCl aq 1 M (2 mL). Ácido fenilborônico (99 mg, 0,81 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura reacional foi diluída com água e lavada com Et 2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 60 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 2 M/metanol. O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18Aq, 0 até 10% até 100% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4S)- 4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 5, 33 mg, 39% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400MHz, D2O) δ 0,72 (1H, m), 1,11 - 1,39 (3H, m), 1,46 - 1,55 (1H, m), 1,63 - 1,79 (2H, m), 1,95 - 2,05 (1H, m), 2,58 - 2,65 (1H, m), 2,87 - 2,95 (1H, m), 3,48 - 3,58 (3H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 231. Exemplo 6: ácido (2S,4R)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico Intermediário 20: 4-azidopirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-1-terc- butila e 2-metila
[0220] Cloreto de metanossulfonila (2,86 mL, 36,7 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução de 4-hidroxipirrolidino-1,2- dicarboxilato de (2S,4S)-1-terc-butila e 2-metila (7,50 g, 30,6 mmols) e trietilamina (5,11 mL, 36,7 mmols) em DCM (38 mL) a 0°C. A mistura reacional foi agitada a 0°C durante uma hora antes de ser aquecida para a temperatura ambiente com agitação durante mais uma hora. A mistura reacional foi diluída com diclorometano e lavada com água. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura, dando origem a (2S,4S)-4-((metilsulfonil)óxi)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1- (terc-butila) e 2-metila (9,9 g, 100% de rendimento) que foi usado sem purificação adicional. m/z (ES+) [M+NH4]+ = 341.
[0221] Azida de sódio (5,96 g, 91,7 mmols) foi adicionado a uma solução de (2S,4S)-4-((metilsulfonil)óxi)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1- (terc-butila) e 2-metila (9,89 g, 30,6 mmols) em DMF (30 mL). A mistura reacional foi aquecida para 50°C e agitada durante a noite. A mistura reacional foi esfriada para a temperatura ambiente e concentrada. O resíduo resultante foi diluído com EtOAc e lavado com água. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem ao produto (Intermediário 20, 5,95 g, 72% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 1,33 e 1,40 (9H, s x2) rotâmeros, 2,08 - 2,22 (1H, m), 2,26- 2,41 (1H, m), 3,41 (1H, dt), 3,48 - 3,61 (1H, m), 3,65 e 3,68 (3H, s x2) rotâmeros, 4,22 (1H, dd), 4,30 - 4,43 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 271. Intermediário 21: 4-azidopirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2-benzila e 1-terc-butila
[0222] Uma solução de hidróxido de sódio (5,28 g, 132 mmols) em água (22 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de 4- azidopirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-1-terc-butila e 2-metila (Intermediário 20, 5,95 g, 22,0 mmols) em THF (44 mL) e MeOH (22 mL) a 0°C. A mistura reacional foi agitada durante a noite com aquecimento lento para a temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos in vacuo e a camada aquosa foi acidificada para pH ~3 com HCl 5 M e extraída com
DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura, dando origem a ácido (2S,4R)-4- azido-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidino-2-carboxílico (5,64 g, 100% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros que foi usada sem purificação adicional. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 1,35 e 1,40 (9H, s x2) rotâmeros, 2,07 - 2,18 (1H, m), 2,26- 2,38 (1H, m), 3,34 - 3,44 (1H, m), 3,48 - 3,63 (1H, m), 4,09-4,17 (1H, m), 4,30 - 4,37 (1H, m); m/z (ES-) [M+HCOO]- = 301.
[0223] Brometo de benzila (2,83 mL, 23,8 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução de ácido (2S,4R)-4-azido-1-(terc- butoxicarbonil)pirrolidino-2-carboxílico (5,19 g, 19,9 mmols) e trietilamina (3,46 mL, 24,8 mmols) em DMF (60 mL) e a mistura reacional foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos in vacuo e o resíduo resultante foi dissolvido em EtOAc e lavado com água. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem ao produto (Intermediário 21, 5,09 g, 74% de rendimento). 1H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 1,26 e 1,39 (9H, s x2) rotâmeros, 2,11- 2,23 (1H, m), 2,31-2,43 (1H, m), 3,43 (1H, ddd), 3,50 - 3,59 (1H, m), 4,25-4,40 (2H, m), 5,07-5,22 (2H, m), 7,31 -7,40 (5H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 347. Intermediário 22: 4-azido-2-(but-2-enil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (4R)- 2-benzila e 1-terc-butila
[0224] 4-Azidopirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2-benzila e 1- terc-butila (Intermediário 21, 5,09 g, 14,7 mmols) e brometo de crotila (2,27 mL, 22,0 mmols) foram dissolvidos em THF (100 mL) e a solução foi esfriada para -78°C sob uma atmosfera de N2. A solução foi tratada com adição gota a gota de uma solução de KHMDS (0,5 M em tolueno, 44,1 mL, 22,0 mmols). A mistura reacional foi lentamente aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 3 horas. A mistura reacional bruta foi extinta com água e os voláteis foram removidos in vacuo. A mistura bruta foi diluída em DCM e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem ao produto (Intermediário 22, 4,6 g, 78% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros e olefinas E/Z. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 1,26 - 1,43 (9H, m), 1,59 - 1,66 (3H, m), 2,07 - 2,17 (1H, m), 2,32 - 2,48 (2H, m), 2,57 – 3,12 (2H, m), 3,35 – 3,82 (1H, m), 4,20 - 4,38 (1H, m), 5,02 - 5,22 (2H, m), 5,24 - 5,41 (1H, m), 5,46 - 5,68 (1H, m), 7,28 - 7,42 (5H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 401. Intermediário 24: 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2-benzila e 1-terc-butila e Intermediário 25: 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila
[0225] Dicloreto de bis(1,5-ciclo-octadieno)di-irídio(I) (772 mg, 1,15 mmol) e bis(difenilfosfino)metano (883 mg, 2,30 mmols) foram adicionados a um balão de fundo redondo seco no forno. O balão reacional foi selado e purgado com N2. Os sólidos foram dissolvidos em DCM (66 mL) e 4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (3,67 mL, 25,3 mmols) foi lentamente adicionado à solução. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. 4-Azido-2-(but-2-enil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (4R)-2- benzila e 1-terc-butila (Intermediário 22, 4,60 g, 11,5 mmols) foi adicionado à reação como uma solução em DCM (44 mL) e a mistura reacional foi agitada durante a noite. A mistura reacional foi diluída com DCM e extinta com água. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 23, 2,7 g, 44% de rendimento). O material purificado foi sujeito a SFC quiral (coluna Chiralpak IG, 21,2 x 250 mm, 5 µm, Temperatura = 23°C, Fase móvel = 0-7% de MeOH (com NH4OH 0,2%):CO2, detecção UV @ 220 nm, carga = 16,8 mg/inj, conc = 112,5 ng/mL em MeOH, taxa de fluxo = 70 mL/min, Pressão na Descarga = 100 bar], dando origem a dois diastereômeros. A estereoquímica para o diastereômero maioritário Intermediário 25 foi atribuída como o produto de adição anti e para o diastereômero minoritário Intermediário 24 o produto de adição syn.
[0226] Intermediário 24 (436 mg): 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2- benzila e 1-terc-butila. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 0,58 – 0,70 (2H, m), 1,17 (12H, s), 1,25 -1,40 (13 H, m), 1,74-1,83 (1H, s), 2,00 – 2,11 (2H, m), 2,38-2,47 (1H, m), 3,07 – 3,16 (1H, m), 3,81 (1H, m), 4,29 – 4,34 (1H, m), 5,04 – 5,17 (2H, m), 7,34 – 7,39 (m, 5H); m/z (ES+) [M+H]+ = 529.
[0227] Intermediário 25 (1,60 g): 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2- benzila e 1-terc-butila. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 0,56 - 0,73 (2H, m), 0,98 - 1,13 (1H, m), 1,17 (12H, s), 1,26 - 1,37 (13H, m), 1,66 - 1,79 (1H, m), 2,01 - 2,22 (2H, m), 2,34 - 2,47 (1H, m), 3,60 (1H, d ld), 4,29 - 4,35 (1H, m), 5,04 - 5,18 (2H, m), 7,31 - 7,40 (5H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 529. Intermediário 26: ácido (2S,4R)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0228] 4-Azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2S,4R)-2-benzila e 1-terc-butila
(Intermediário 24, 236 mg, 0,447 mmol) foi dissolvido em acetato de etila (4,5 mL) e tratado com Pd/C (10% p, 119 mg, 0,112 mmol). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi filtrada através de terra diatomácea e enxaguada com metanol. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem ao produto (Intermediário 26, 275 mg, 100% de rendimento) que foi usado sem purificação adicional. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 0,64 – 0,71 (2H, M), 1,17 (12H, s), 1,27 -1,40 (15H, m), 1,57 - 1,82 (4H, m), 1,98-2,08 (3H, m), 3,70 – 3,78 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 413. Exemplo 6: ácido (2S,4R)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
[0229] Ácido trifluoroacético (0,69 mL, 8,9 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido (2S,4R)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 26, 184 mg, 0,446 mmol) em DCM (4 mL). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora e então foi concentrada sob vácuo. O aminoácido bruto foi dissolvido em Et2O (2 mL) e HCl aq 1 M (2 mL). Ácido fenilborônico (109 mg, 0,894 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura reacional foi diluída com água e lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 60 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 2 M/metanol. O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18Aq, 0 até 100% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2S,4R)-4-amino- 2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 6, 38 mg, 37% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400MHz, D2O) δ 0,72 (2H,
td), 1,09 - 1,19 (1H, m), 1,22 - 1,39 (3H, m), 1,65 - 1,76 (2H, m), 1,95 - 2,04 (1H, m), 2,58 - 2,64 (1H, m), 2,87 - 2,94 (1H, m), 3,48 - 3,57 (2H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 231. Exemplo 7: ácido (2R,4R)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico Intermediário 27: ácido (2R,4R)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0230] 4-Azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil) pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 25, 688 mg, 1,30 mmol) foi dissolvido em acetato de etila (13 mL) e metanol (4 mL) e tratado com Pd/C (10% p, 346 mg, 0,325 mmol). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi filtrada através de terra diatomácea e enxaguada com metanol. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem ao produto (Intermediário 27, 500 mg, 93% de rendimento) que foi usado sem purificação adicional. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 0,67 (2H, t), 0,94- 1,00 (1H, m), 1,17 (12H, s), 1,22 -1,38 (11H, m), 1,43 - 1,53 (1H, m), 1,85 (1H, d), 2,00 - 2,15 (2H, m), 3,23 (2H, dd), 3,58 - 3,61 (1H, m), 3,80 - 3,88 (1H, m), 8,96 (2H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 413. Exemplo 7: ácido (2R,4R)-4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2- carboxílico
[0231] Ácido trifluoroacético (1,02 mL, 13,3 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido (2R,4R)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-
(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 27, 275 mg, 0,667 mmol) em DCM (4 mL). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora e então foi concentrada sob vácuo. O aminoácido bruto foi dissolvido em Et2O (2 mL) e HCl aq 1 M (2 mL). Ácido fenilborônico (163 mg, 1,34 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura reacional foi diluída com água e lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 60 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 2 M/metanol. O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18Aq, 0 até 10% até 100% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4R)- 4-amino-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 7, 53 mg, 34% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (400MHz, D2O) δ 0,76 (2H, dt), 1,10 - 1,46 (4H, m), 1,62 - 1,71 (1H, m), 1,84 - 1,96 (1H, m), 2,10 - 2,21 (1H, m), 2,22 - 2,32 (1H, m), 3,07 (1H, dd), 3,46 (1H, dd), 3,71 (1H, quin); m/z (ES+) [M+H]+ = 231. Exemplo 8: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-aminopropanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 28: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-buto- xicarbonilamino)propanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- 2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0232] Trietilamina (0,18 mL, 1,3 mmol) e HATU (213 mg, 0,560 mmol) foram adicionados sequencialmente a uma solução de Boc-Ala-OH (106 mg, 0,560 mmol) em DMF (2,4 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Ácido (2R,4R)-4-amino-1-(terc-butoxicar- bonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2- carboxílico (Intermediário 27, 210 mg, 0,509 mmol) foi adicionado à mistura reacional como uma solução em DMF (2,4 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional bruta foi concentrada e diretamente purificada por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem ao produto (Intermediário 28, 236 mg, 79% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 0,65-0,72 (2H, m), 1,11 - 1,18 (18H, m), 1,26-1,37 (20H, m), 1,63 - 1,73 (1H, m), 2,02 - 2,25 (2H, m), 3,09 - 3,20 (1H, m), 3,59 - 3,72 (1H, m), 3,83 - 3,94 (1H, m), 4,18 - 4,29 (1H, m), 6,80 (1H, s l), 7,96 (1H, s), 13,78 (1H, s l); m/z (ES+) [M+H]+ = 584. Exemplo 8: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-aminopropanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0233] Ácido trifluoroacético (0,62 mL, 8,1 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicar- bonilamino)propanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 28, 236 mg, 0,404 mmol) em DCM (4 mL). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora e então foi concentrada sob vácuo. O aminoácido bruto foi dissolvido em Et2O (2 mL) e HCl aq 1 M (2 mL). Ácido fenilborônico (99 mg, 0,81 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura reacional foi diluída com água e lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 60 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 2 M/metanol. O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa
(RediSep Rf Gold® C18Aq, 0 até 10% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4R)-4-((S)-2-aminopropanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 8, 18 mg, 15% de rendimento) como um sólido branco e mistura de rotâmeros. 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 0,69 (2H, dt), 1,05 - 1,14 (1H, m), 1,21 (3H, d), 1,23-1,35 (3H, m), 1,65 (1H, dt), 1,91-1,96 (1H, m), 2,17 (1H, dd), 2,35 (1H, dd), 3,26 (1H, dd), 3,46 - 3,57 (2H, m), 4,29 - 4,34 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 302. Exemplo 9: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 29: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0234] Trietilamina (0,21 mL, 1,5 mmol) e HATU (254 mg, 0,668 mmol) foram adicionados sequencialmente a uma solução de Boc-Val-OH (145 mg, 0,668 mmol) em DMF (2,9 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Ácido (2R,4R)-4-amino-1-(terc-butoxicarbo- nil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2- carboxílico (Intermediário 27, 250 mg, 0,606 mmol) foi adicionado à mistura reacional como uma solução em DMF (2,9 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional bruta foi concentrada e diretamente purificada por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem ao produto (Intermediário 29, 250 mg, 67% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (300MHz, DMSO-d6) δ 0,64 - 0,73 (2H, m), 0,73 - 0,85 (6H, m), 1,13 - 1,14 (1H, m),
1,17 (12H, s), 1,22 - 1,42 (22H, m), 1,56 - 1,75 (1H, m), 1,79 - 1,97 (1H, m), 2,00 - 2,26 (2H, m), 3,08 - 3,24 (1H, m), 3,54 - 3,77 (2H, m), 4,12 - 4,36 (1H, m), 6,58 (1H, t), 7,96 - 8,03 (2H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 584. Exemplo 9: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0235] Ácido trifluoroacético (0,63 mL, 8,2 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 29, 250 mg, 0,409 mmol) em DCM (4 mL). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora e então foi concentrada sob vácuo. O aminoácido bruto foi dissolvido em Et2O (2 mL) e HCl aq 1 M (2 mL). Ácido fenilborônico (99 mg, 0,81 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura reacional foi diluída com água e lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 60 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 2 M/metanol. O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18Aq, 0 até 10% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3- metilbutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 9, 28 mg, 20% de rendimento) como um sólido branco e uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (300MHz, D2O) δ 0,66 - 0,76 (2H, m), 0,85 (6H, dd), 1,07 - 1,43 (4H, m), 1,55 - 1,68 (1H, m), 1,77 - 1,97 (2H, m), 2,13 - 2,33 (2H, m), 3,07 (1H, d), 3,08 - 3,16 (1H, m), 3,37 - 3,48 (1H, m), 4,27 - 4,40 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 330.
Exemplo 10: ácido (2R,4R)-4-((R)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 30: 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila
[0236] Catalisador Lindlar (5% p, 0,275 g, 2,58 mmols) foi adicionado a uma solução de 4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 25, 1,56 g, 2,95 mmols) em THF (25 mL). A suspensão foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio (balão, balão reacional evacuado e novamente cheio com hidrogênio x3) à temperatura ambiente durante 8,5 h. A mistura reacional foi diluída com MeOH, filtrada através de terra diatomácea e o filtrado foi concentrado até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (1 até 15% de MeOH em DCM), dando origem a 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 30, 1,01 g, 68% de rendimento) como uma goma e como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500MHz, CD2Cl2) δ 0,74 (2H, q), 1,20 - 1,22 (14H, m), 1,23 - 1,29 (2H, m), 1,32 (6H, s), 1,37 - 1,42 (5H, m), 1,74 - 1,83 (1H, m), 1,83 - 1,93 (1H, m), 2,11 - 2,19 (0,6H, m), 2,21 - 2,32 (1,4H, m), 3,19 (0,4H, dd), 3,28 (0,6H, dd), 3,44 - 3,51 (1H, m), 3,63 (1H, dd), 5,07
- 5,20 (2H, m), 7,28 - 7,34 (1H, m), 7,34 - 7,41 (4H, m); m/z (ES+) [M+H]+ =
503. Intermediário 31: 4-((R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)- 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2- dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila
[0237] N,N-Di-isopropiletilamina (0,235 mL, 1,34 mmol) foi adicionado lentamente a uma solução agitada de HATU (245 mg, 0,64 mmol) e Boc- D-Val-OH (117 mg, 0,54 mmol) em DMF (2 mL) à temperatura ambiente. A solução foi agitada durante 20 minutos e então uma solução de 4-amino- 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarbo- xilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 30, 270 mg, 0,54 mmol) em DMF (2 mL) foi adicionada. A reação foi agitada durante 2,5 h, diluída com DCM (30 mL) e lavada sequencialmente com água (3 x 25 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (30 mL). A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (5 até 65% de EtOAc em hexanos), dando origem a 4-((R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbuta- namido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino- 1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 31, 239 mg, 63% de rendimento) como uma espuma incolor e como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500MHz, CD2Cl2) δ 0,74 - 0,81 (2H, m), 0,84 (3H, d), 0,87 - 0,94 (3H, m), 1,24 (12H, s), 1,26 - 1,34 (2H, m), 1,37 (5H, s), 1,40 - 1,43 (2H, m), 1,45 (4H, s), 1,46 (9H, s), 1,78 - 1,89 (1H, m), 1,95 - 2,07 (2H, m), 2,21 - 2,29 (0,6H, m), 2,31 - 2,46 (1,4H, m), 3,51 - 3,60 (1,5H, m), 3,65 (0,5H, d l), 3,72 (1H, d ld), 4,49 - 4,58 (1H, m), 5,01 (1H, d l), 5,19 - 5,29 (2H, m), 6,93 - 7,09 (1H, m), 7,36 - 7,40 (1H, m), 7,43 (4H, aparent d); m/z (ES+) [M+H]+ = 702.
Intermediário 32: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((R)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0238] Pd/C (10% p, 25 mg, 0,23 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-((R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 31, 239 mg, 0,34 mmol) em EtOAc (4 mL). A suspensão foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio (balão, balão reacional evacuado e novamente cheio com hidrogênio x3) à temperatura ambiente durante duas horas. A mistura reacional foi diluída com MeOH, filtrada através de terra diatomácea e o filtrado foi concentrado até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (2 até 15% de MeOH em DCM), dando origem a ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((R)-2-(terc-butoxicarbonilami- no)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il) butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 32, 196 mg, 94% de rendimento) como um sólido branco e como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,63 - 0,71 (2H, m), 0,75 - 0,82 (6H, m), 1,15 (12H, s), 1,21 - 1,30 (2H, m), 1,32 (6H, s), 1,36 (13H, s l), 1,61 - 1,72 (1H, m), 1,81 - 1,90 (1H, m), 1,92 - 2,05 (2H, m), 2,05 - 2,13 (0,6H, m), 2,13 - 2,28 (1,4H, m), 3,03 - 3,14 (1H, m), 3,62 (0,6H, t), 3,66 (1,4H, t), 4,18 - 4,29 (1H, m), 6,59 (1H, d), 7,99 (1H, s l), 12,48 (0,4H, s l), 12,65 (0,6H, s l); m/z (ES+) [M+H]+ = 612. Exemplo 10: ácido (2R,4R)-4-((R)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0239] Ácido trifluoroacético (0,37 mL, 4,8 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4- ((R)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetra-
metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 32, 195 mg, 0,32 mmol) em DCM (2 mL). A solução reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 22 h e então foi concentrada sob pressão reduzida.
O aminoácido bruto foi dissolvido em HCl aq 1 M (2 mL) e Et2O (2 mL). Ácido fenilborônico (117 mg, 0,96 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h.
A mistura foi diluída com Et2O (20 mL) e água (5 mL), e as camadas foram separadas.
A camada aquosa foi lavada com Et2O e a camada aquosa foi liofilizada.
O sólido resultante foi dissolvido em MeOH (3 mL) e purificado por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 20 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando uma solução de amônia 5% em MeOH (20 mL). O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18, 0 até 80% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4R)-4-((R)-2-amino-3- metilbutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 10, 46 mg, 44% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, D2O) δ 0,73 - 0,80 (2H, m), 0,90 (6H, aparent t), 1,13 - 1,25 (1H, m), 1,26 - 1,35 (1H, m), 1,40 (2H, quin), 1,68 - 1,80 (1H, m), 1,85 - 1,96 (1H, m), 2,00 (1H, td), 2,29 (1H, dd), 2,37 - 2,45 (1H, m), 3,18 (1H, d), 3,28 (1H, dd), 3,59 (1H, dd), 4,36 - 4,49 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 330.
Exemplo 11: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3,3-dimetilbutanamido)-2- (4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 33: 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,3- dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila
[0240] N,N-Di-isopropiletilamina (0,165 mL, 0,95 mmol) foi adicionado lentamente a uma solução agitada de HATU (158 mg, 0,42 mmol) e Boc- Tle-OH (92 mg, 0,40 mmol) em DMF (1,5 mL) à temperatura ambiente. A solução foi agitada durante 15 min e então uma solução de 4-amino-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 30, 190 mg, 0,38 mmol) em DMF (1,5 mL) foi adicionada. A reação foi agitada durante 3 h, diluída com EtOAc (30 mL) e lavada sequencialmente com água (3 x 25 mL), NaHCO3 aquoso saturado (30 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (30 mL). A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (5 até 65% de EtOAc em hexanos), dando origem a 4-((S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-
benzila e 1-terc-butila (Intermediário 33, 261 mg, 96% de rendimento) como um sólido branco e como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,69 (2H, q), 0,87 (9H, s), 1,17 (12H, s), 1,26 (5H, s), 1,29 - 1,32 (1H, m), 1,34 (5H, s), 1,38 (9H, s), 1,72 - 1,85 (1H, m), 1,90 - 2,08 (2H, m), 2,06 - 2,18 (1H, m), 2,22 - 2,35 (2H, m), 3,11 - 3,22 (1H, m), 3,68 - 3,81 (2H, m), 4,23 - 4,37 (1H, m), 5,06 - 5,19 (2H, m), 6,40 (1H, t), 7,31 - 7,40 (5H, m), 8,11 (1H, d); m/z (ES+) [M+Na]+ = 738. Intermediário 34: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0241] Pd/C (10% p, 25 mg, 0,23 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 33, 260 mg, 0,36 mmol) em EtOAc (4 mL). A suspensão foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio (balão, balão reacional evacuado e novamente cheio com hidrogênio x3) à temperatura ambiente durante 15 horas. A mistura reacional foi diluída com MeOH, filtrada através de terra diatomácea e o filtrado foi concentrado até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (2 até 10% de MeOH em DCM), dando origem a ácido (2R,4R)-1-(terc- butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanamido)-2- (4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 34, 207 mg, 91% de rendimento) como um sólido branco e como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,63 - 0,72 (2H, m), 0,86 (9H, s), 1,09 - 1,20 (14H, m), 1,21 - 1,30 (2H, m), 1,33 (5H, s), 1,35 - 1,38 (13H, m), 1,61 - 1,73 (1H, m), 1,89 - 2,11 (2H, m), 2,14 - 2,27 (1H, m), 3,06 - 3,14 (1H, m), 3,59 - 3,72 (1H, m), 3,72 - 3,80 (1H, m), 4,20 - 4,30 (1H, m), 6,35 (1H, d), 8,08 (1H, s l), 12,47 (0,4H, s l), 12,63 (0,6H, s l); m/z (ES+) [M+H]+ = 626.
Exemplo 11: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0242] Ácido trifluoroacético (0,38 mL, 4,9 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)- 2-(terc-butoxicarbonilamino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 34, 206 mg, 0,33 mmol) em DCM (2 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 15 horas e então foi concentrada sob pressão reduzida. O aminoácido bruto foi dissolvido em HCl aq 1 M (4 mL) e Et2O (4 mL). Ácido fenilborônico (120 mg, 0,99 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura foi diluída com Et2O (20 mL) e água (5 mL), e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O e a camada aquosa foi liofilizada. O sólido resultante foi dissolvido em MeOH (3 mL) e purificado por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 20 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando uma solução de amônia 5% em MeOH (20 mL). O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18, 2 até 50% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 11, 40 mg, 35% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, D2O) δ 0,72 (2H, td), 0,89 (9H, s), 1,10 - 1,21 (1H, m), 1,22 - 1,30 (1H, m), 1,35 (2H, quin), 1,64 - 1,75 (1H, m), 1,90 - 2,02 (1H, m), 2,22 - 2,34 (2H, m), 3,04 (1H, s), 3,22 (1H, dd), 3,56 (1H, dd), 4,41 (1H, quin); m/z (ES+) [M+H]+ = 344.
Exemplo 12: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-((S)-pirrolidino-2- carboxamido)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 35: 4-((S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidino-2-carboxamido)- 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2- dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila
[0243] N,N-Di-isopropiletilamina (0,182 mL, 1,04 mmol) foi adicionado lentamente a uma solução agitada de HATU (175 mg, 0,46 mmol) e Boc- Pro-OH (94 mg, 0,44 mmol) em DMF (1,5 mL) à temperatura ambiente. A solução foi agitada durante 20 minutos e então uma solução de 4-amino- 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2- dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 30, 210 mg, 0,42 mmol) em DMF (1,5 mL) foi adicionada. A reação foi agitada durante duas horas, diluída com EtOAc (30 mL) e lavada sequencialmente com água (3 x 25 mL), NaHCO3 aquoso saturado e cloreto de sódio aquoso saturado (30 mL). A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (5 até 100% de EtOAc em hexanos), dando origem a 4-((S)- 1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidino-2-carboxamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-
benzila e 1-terc-butila (Intermediário 35, 249 mg, 85% de rendimento) como um filme incolor e como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500MHz, CD2Cl2) δ 0,68 - 0,79 (2H, m), 1,20 (12H, s), 1,31 (5H, s), 1,36 - 1,48 (16H, m), 1,74 - 1,87 (3H, m), 1,89 - 2,10 (3H, m), 2,13 - 2,46 (2H, m), 3,27 - 3,40 (1H, m), 3,44 (2H, s l), 3,50 - 3,64 (2H, m), 3,78 - 4,05 (1H, m), 4,49 (1H, s l), 5,10 - 5,27 (2H, m), 7,10 (1H, s l), 7,30 - 7,42 (5H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 700. Intermediário 36: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-1-(terc- butoxicarbonil)pirrolidino-2-carboxamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0244] Pd/C (10% p, 25 mg, 0,23 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-((S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidino-2-carboxamido)-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 35, 249 mg, 0,36 mmol) em EtOAc (4 mL). A suspensão foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio (balão, balão reacional evacuado e novamente cheio com hidrogênio x3) à temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura reacional foi diluída com MeOH, filtrada através de terra diatomácea e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, dando origem a ácido (2R,4R)-1-(terc- butoxicarbonil)-4-((S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidino-2-carboxamido)-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 36, 207 mg, 87% de rendimento) como um filme incolor e como uma mistura de rotâmeros que foi usada sem purificação adicional. 1 H RMN (500MHz, CD2Cl2) δ 0,66 - 0,83 (2H, m), 1,21 (12H, s), 1,34 - 1,51 (21H, m), 1,63 - 1,97 (4H, m), 2,06 (1H, m), 2,11 - 2,29 (2H, m), 2,33 - 2,67 (1H, m), 3,24 - 3,52 (3H, m), 3,53 - 3,67 (1H, m), 4,15 - 4,34 (1H, m), 4,47 - 4,74 (1H, m), 6,76 - 7,23 (1H, m), 7,17 - 7,69 (1H, m), 9,74 (1H, s l); m/z (ES+) [M+H]+ = 610.
Exemplo 12: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-((S)-pirrolidino-2- carboxamido)pirrolidino-2-carboxílico
[0245] Ácido trifluoroacético (0,518 mL, 6,73 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2R,4R)-1-(terc- butoxicarbonil)-4-((S)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidino-2-carboxamido)-2- (4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 36, 205 mg, 0,34 mmol) em DCM (2 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas e então foi concentrada sob pressão reduzida. O aminoácido bruto foi dissolvido em HCl aq 1 M (4 mL) e Et2O (4 mL). Ácido fenilborônico (123 mg, 1,01 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. A mistura foi diluída com Et2O (20 mL) e água (5 mL), e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O e a camada aquosa foi liofilizada. O sólido resultante foi dissolvido em MeOH (3 mL) e purificado por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 20 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando uma solução de amônia 5% em MeOH (20 mL). O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18, 0 até 50% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-((S)-pirrolidino-2-carboxamido)pirrolidino-2- carboxílico (Exemplo 12, 89 mg, 81% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, D2O) δ 0,70 - 0,79 (2H, m), 1,11 - 1,23 (1H, m), 1,24 - 1,33 (1H, m), 1,34 - 1,42 (2H, m), 1,60 - 1,71 (1H, m), 1,81 - 1,91 (3H, m), 1,91 - 1,99 (1H, m), 2,18 (1H, dd), 2,22 - 2,29 (1H, m), 2,40 (1H, dd), 3,08 - 3,16 (1H, m), 3,16 - 3,22 (1H, m), 3,25 (1H, dd), 3,48 (1H, dd), 3,99 (1H, dd), 4,29 - 4,38 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 328.
Exemplo 13: ácido (2R,4R)-4-(2-aminoacetamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 37: 4-(2-(terc-butoxicarbonilamino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila
[0246] N,N-Di-isopropiletilamina (0,182 mL, 1,04 mmol) foi adicionado lentamente a uma solução agitada de HATU (175 mg, 0,46 mmol) e Boc- Gly-OH (77 mg, 0,44 mmol) em DMF (1,5 mL) à temperatura ambiente. A solução foi agitada durante 20 min e então uma solução de 4-amino-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 30, 210 mg, 0,42 mmol) em DMF (1,5 mL) foi adicionada. A solução reacional foi agitada durante duas horas, diluída com EtOAc (30 mL) e lavada sequencialmente com água (3 x 25 mL), NaHCO3 aquoso saturado e cloreto de sódio aquoso saturado (30 mL). A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (10 até 100% de EtOAc em hexanos), dando origem a 4-(2- (terc-butoxicarbonilamino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e
1-terc-butila (Intermediário 37, 235 mg, 85% de rendimento) como um filme incolor e como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500MHz, CD2Cl2) δ 0,70 - 0,78 (2H, m), 1,12 - 1,18 (1H, m), 1,20 (12H, s), 1,25 - 1,30 (1H, m), 1,33 (5H, s), 1,43 (15H, s), 1,74 - 1,86 (1H, m), 1,95 (0,5H, d l), 2,03 (0,5H, d l), 2,15 - 2,26 (1H, m), 2,26 - 2,37 (1H, m), 2,40 (1H, dd), 3,43 - 3,57 (3H, m), 3,57 - 3,64 (1H, m), 4,50 (1H, s l), 5,03 (0,5H, s l), 5,10 (0,5H, s l), 5,13 - 5,25 (1H, m), 7,01 (1H, dd), 7,32 - 7,37 (1H, m), 7,36 - 7,41 (4H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 660. Intermediário 38: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-(2-(terc- butoxicarbonilamino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0247] Pd/C (10% p, 25 mg, 0,23 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-(2-(terc-butoxicarbonilamino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2- benzila e 1-terc-butila (Intermediário 37, 233 mg, 0,35 mmol) em EtOAc (4 mL). A suspensão foi agitada sob uma atmosfera de hidrogênio (balão, balão reacional evacuado e novamente cheio com hidrogênio x3) à temperatura ambiente durante 6 horas. A mistura reacional foi diluída com MeOH, filtrada através de terra diatomácea e o filtrado foi concentrado até à secura, dando origem a ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-(2-(terc- butoxicarbonilamino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 38, 176 mg, 87% de rendimento) como um filme incolor e como uma mistura de rotâmeros que foi usada sem purificação adicional. 1H RMN (500MHz, CD2Cl2) δ 0,65 - 0,80 (2H, m), 1,11 - 1,18 (1H, m), 1,18 - 1,23 (12H, m), 1,25 - 1,32 (1H, m), 1,36 - 1,45 (13H, m), 1,47 (7H, s), 1,70 - 1,83 (0,4H, m), 1,84 - 1,95 (0,6H, m), 2,06 - 2,27 (2H, m), 2,33 - 2,47 (0,4H, m), 2,63 (0,6H, d l), 3,44 - 3,62 (2H, m), 3,63 - 3,82 (2H, m), 4,28 (0,6H, s l), 4,36 -
4,60 (0,4H, m), 5,26 (0,6H, s l), 5,58 - 5,90 (0,3H, m), 6,83 (0,6H, s l), 6,97 - 7,44 (0,4H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 570. Exemplo 13: ácido (2R,4R)-4-(2-aminoacetamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0248] Ácido trifluoroacético (0,476 mL, 6,18 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2R,4R)-1-(terc- butoxicarbonil)-4-(2-(terc-butoxicarbonilamino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 38, 176 mg, 0,31 mmol) em DCM (2 mL). A solução reacional foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas e então foi concentrada sob pressão reduzida. O aminoácido bruto foi dissolvido em HCl aq 1 M (4 mL) e Et2O (4 mL). Ácido fenilborônico (113 mg, 0,93 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. A mistura foi diluída com Et2O (20 mL) e água (5 mL), e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O e a camada aquosa foi liofilizada. O sólido resultante foi dissolvido em MeOH (3 mL) e purificado por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 20 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando uma solução de amônia 5% em MeOH (20 mL). O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18, 0 até 40% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4R)-4-(2-aminoacetamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 13, 62 mg, 70% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, D2O) δ 0,76 (2H, td), 1,15 - 1,25 (1H, m), 1,26 - 1,34 (1H, m), 1,36 - 1,46 (2H, m), 1,69 - 1,79 (1H, m), 2,00 (1H, ddd), 2,27 (1H, dd), 2,44 (1H, dd), 3,33 (1H, dd), 3,42 (2H, s), 3,59 (1H, dd), 4,36 - 4,45 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 288.
Exemplo 14: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-aminobutanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 39: 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)butanamido)-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila
[0249] HATU (804 mg, 2,11 mmols) foi adicionado a uma solução de Boc-Abu-OH (430 mg, 2,11 mmols) em DMF (4 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. 4-Amino-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 30, 885 mg, 1,76 mmol) foi adicionado à mistura reacional como uma solução em DMF (3 mL). N,N- Di-isopropiletilamina (0,75 mL, 4,3 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A reação foi então diluída com água (15 mL) e Et2O (10 mL). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com Et2O (2 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com cloreto de lítio aquoso 5% (10 mL), foram secas em MgSO4, filtradas, e concentradas até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-
tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 39, 766 mg, 63% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, CDCl3) δ 0,70 - 0,84 (5H, m), 1,09 - 1,19 (1H, m), 1,21 (12H, s), 1,36 - 1,46 (18H, m), 1,46 - 1,97 (7H, m), 2,12 - 2,45 (2H, m), 3,45 - 3,60 (1H, m), 3,68 (1H, d l), 3,78 - 3,94 (1H, m), 4,42 - 4,64 (1H, m), 4,73 - 5,03 (1H, m), 5,07 - 5,33 (2H, m), 7,09 (1H, d l), 7,28 - 7,40 (5H, m). m/z (ES+) [M+H]+ = 688. Intermediário 40: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaboro- lan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0250] 4-((S)-2-(terc-Butoxicarbonilamino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 39, 766 mg, 1,11 mmol) foi dissolvido em EtOAc (11 mL) e tratado com Pd/C (10% p, 119 mg, 0,11 mmol). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi filtrada através de terra diatomácea e enxaguada com EtOAc e metanol. O filtrado foi concentrado até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a ácido (2R,4R)- 1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)butanamido)-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 40, 470 mg, 70% de rendimento) como uma espuma branca. 1H RMN (500MHz, CDCl3) δ 0,67 - 0,82 (2H, m), 0,89 (3H, t l), 1,11 - 1,28 (14H, m), 1,37 - 1,51 (20H, m), 1,53 - 1,65 (1H, m), 1,65 - 1,94 (2H, m), 2,02 - 2,12 (1H, m), 2,13 - 2,31 (1H, m), 2,70 (1H, d l), 3,40 - 3,62 (2H, m), 3,88 - 4,04 (1H, m), 4,26 (1H, s l), 5,01 (1H, s l), 6,73 (1H, d l); m/z (ES+) [M+H]+ = 598.
Exemplo 14: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-aminobutanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0251] Ácido fenilborônico (192 mg, 1,57 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- 2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 40, 470 mg, 0,79 mmol) em HCl aq 2 M (5 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A reação foi diluída com água (10 mL) e Et2O (10 mL) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O (3 x 5 mL) e então liofilizada em uma espuma. A camada orgânica foi concentrada sob vácuo. O resíduo resultante foi diluído em HCl 4 M em dioxano (4 mL, 16 mmols) e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 20 horas. A reação foi diluída com água (10 mL) e Et2O (10 mL) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O (3 x 5 mL) e então liofilizada em uma espuma. As espumas destas duas operações foram combinadas e o aminoácido bruto resultante foi purificado por cromatografia de troca iônica (coluna Silicycle SiliaSep SPE-R51230B-20X 5 g). O produto desejado eluiu da coluna usando uma solução de amônia 5% em MeOH. O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18Aq, 0 até 25% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4R)-4-((S)-2- aminobutanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 14, 96 mg, 39% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, D2O) δ 0,55 - 0,82 (2H, m), 0,88 (3H, t), 1,12 - 1,48 (4H, m), 1,56 - 1,81 (3H, m), 1,86 - 2,10 (1H, m), 2,12 - 2,53 (2H, m), 3,15 - 3,37 (1H, m), 3,41 - 3,53 (1H, m), 3,62 (1H, dd), 4,35 - 4,52 (1H, m); m/z (ES+) [M-H2O+H]+ =
298.
Exemplo 15: ácido (2R,4R)-4-((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanamido)-2- (4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 41: 4-((2S,3S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3- metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila
[0252] HATU (804 mg, 2,11 mmols) foi adicionado a uma solução de Boc-Ile-OH (489 mg, 2,11 mmols) em DMF (4 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 min. 4-Amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2- benzila e 1-terc-butila (Intermediário 30, 885 mg, 1,76 mmol) foi adicionado à mistura reacional como uma solução em DMF (3 mL). N,N- Di-isopropiletilamina (0,75 mL, 4,3 mmols) foi adicionado e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A reação foi então diluída com água (15 mL) e Et2O (10 mL). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com Et2O (2 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com cloreto de lítio aquoso 5% (10 mL), foram secas em MgSO4, filtradas, e concentradas até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a 4-((2S,3S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilpentanamido)-2-
(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2- dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 41, 707 mg, 56% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, CDCl3) δ 0,79 (2H, t l), 0,83 - 1,05 (8H, m), 1,12 - 1,21 (1H, m), 1,24 (12H, s), 1,32 - 1,61 (20H, m), 1,62 - 2,02 (4H, m), 2,18 - 2,55 (2H, m), 3,49 - 3,65 (1H, m), 3,65 - 3,78 (1H, m), 3,90 (1H, s l), 4,53 - 4,72 (1H, m), 4,95 (1H, s l), 5,07 - 5,43 (2H, m), 7,16 (1H, d l), 7,30 - 7,44 (5H, m). m/z (ES+) [M+H]+ = 716. Intermediário 42: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((2S,3S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0253] 4-((2S,3S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilpentanamido)- 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2- dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 41, 707 mg, 0,99 mmol) foi dissolvido em EtOAc (10 mL) e tratado com Pd/C (10% p, 105 mg, 0,10 mmol). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi filtrada através de terra diatomácea e enxaguada com EtOAc e metanol. O filtrado foi concentrado até à secura, dando origem a ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((2S,3S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 42, 603 mg, 98% de rendimento) que foi usado sem purificação adicional. 1H RMN (500MHz, CDCl3) δ 0,68 - 0,80 (2H, m), 0,83 - 0,93 (6H, m), 1,05 - 1,14 (1H, m), 1,21 (12H, s), 1,28 - 1,36 (1H, m), 1,37 - 1,55 (22H, m), 1,71 - 1,96 (2H, m), 2,18 - 2,31 (1H, m), 2,72 (1H, d l), 3,42 - 3,51 (2H, m), 3,52 - 3,63 (1H, m), 3,86 - 4,04 (1H, m), 4,16 - 4,34 (1H, m), 4,98 (1H, d l), 6,69 (1H, s l); m/z (ES+) [M+H]+ = 626.
Exemplo 15: ácido (2R,4R)-4-((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0254] Ácido trifluoroacético (1,10 mL, 14,3 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((2S,3S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 42, 603 mg, 0,96 mmol) em DCM (6 mL). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas e então foi concentrada sob vácuo. O aminoácido bruto foi dissolvido em Et2O (10 mL) e reconcentrado sob vácuo. Este processo de redissolução e reconcentração foi repetido mais duas vezes. O aminoácido bruto foi então dissolvido em Et2O (6 mL) e HCl aq 1 M (6 mL). Ácido fenilborônico (235 mg, 1,93 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura reacional foi diluída com água e lavada com Et 2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna Silicycle SiliaSep SPE-R51230B-20X 5 g). O produto desejado eluiu da coluna usando uma solução de amônia 5% em MeOH. O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18Aq, 0 até 25% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4R)-4-((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 15, 136 mg, 41% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, D2O) δ 0,55 - 0,81 (2H, m), 0,89 (6H, dd), 1,07 - 1,52 (6H, m), 1,63 - 1,83 (2H, m), 1,86 - 2,09 (1H, m), 2,13 - 2,51 (2H, m), 3,11 - 3,40 (2H, m), 3,45 - 3,67 (1H, m), 4,39 - 4,54 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 344.
Exemplo 16: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-4-metilpentanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 43: 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-4-metilpentanamido)- 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarbo- xilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila
[0255] HATU (247 mg, 0,65 mmol) foi adicionado a uma solução de Boc-Leu-OH (125 mg, 0,54 mmol) em DCM (2 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. 4-Amino-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 30, 272 mg, 0,54 mmol) foi adicionado à mistura reacional como uma solução em DCM (2 mL). N,N- Di-isopropiletilamina (0,19 mL, 1,1 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A reação foi então diluída com DCM (20 mL) e lavada sequencialmente com água (25 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (30 mL). A camada orgânica foi seca em MgSO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a 4-((S)-2- (terc-butoxicarbonilamino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-
benzila e 1-terc-butila (Intermediário 43, 210 mg, 54% de rendimento) como uma espuma incolor e como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500MHz, CDCl3) δ 0,77 (2H, t), 0,91 (6H, d), 1,06 - 1,19 (1H, m), 1,19 - 1,24 (12H, m), 1,31 - 1,51 (20H, m), 1,50 - 1,63 (2H, m), 1,73 - 2,02 (2H, m), 2,17 - 2,55 (2H, m), 3,35 - 3,75 (2H, m), 3,84 - 4,06 (1H, m), 4,35 - 4,75 (2H, m), 5,00 - 5,46 (2H, m), 7,08 - 7,22 (1H, m), 7,28 - 7,42 (5H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 716. Intermediário 44: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0256] 4-((S)-2-(terc-Butoxicarbonilamino)-4-metilpentanamido)-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 43, 201 mg, 0,28 mmol) foi dissolvido em EtOAc (4 mL) e tratado com Pd/C (10% p, 100 mg, 0,094 mmol). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. A mistura reacional foi filtrada através de terra diatomácea e enxaguada com EtOAc e metanol. O filtrado foi concentrado até à secura, dando origem a ácido (2R,4R)-1- (terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-4- metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 44, 170 mg, 97% de rendimento) como um sólido branco e como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500MHz, CDCl3) δ 0,78 (2H, t), 0,93 (6H, d), 1,15 - 1,25 (12H, m), 1,25 - 1,31 (2H, m), 1,39 - 1,51 (19H, m), 1,55 - 1,72 (2H, m), 1,73 - 1,89 (1H, m), 2,01 - 2,11 (1H, m), 2,18 - 2,36 (1H, m), 2,47 - 2,83 (1H, m), 3,37 - 3,74 (2H, m), 3,96 - 4,10 (1H, m), 4,17 - 4,32 (1H, m), 4,82 - 5,31 (1H, m), 6,62 - 7,12 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 626.
Exemplo 16: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-4-metilpentanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0257] Ácido trifluoroacético (1,00 mL, 13,0 mmols) foi adicionado a uma solução de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 44, 170 mg, 0,27 mmol) em DCM (2 mL). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas e então foi concentrada sob vácuo. O aminoácido bruto foi então dissolvido em Et2O (5 mL) e água (4 mL). Ácido fenilborônico (66 mg, 0,54 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. A mistura reacional foi diluída com água (5 mL) e Et2O (20 mL) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 2 g), dando origem a ácido (2R,4R)-4-((S)- 2-amino-4-metilpentanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 16, 88 mg, 94% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, D2O) δ 0,46 - 0,68 (2H, m), 0,73 - 0,82 (6H, m), 1,03 - 1,13 (1H, m), 1,13 - 1,23 (1H, m), 1,23 - 1,42 (4H, m), 1,42 - 1,52 (1H, m), 1,54 - 1,66 (1H, m), 1,76 - 1,93 (1H, m), 2,07 - 2,19 (1H, m), 2,29 (1H, dd), 3,13 (1H, q), 3,34 (1H, t), 3,48 (1H, q), 4,23 - 4,40 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 344.
Exemplo 17: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-hidroxipropanamido)-2- (4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 45: 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3- hidroxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila
[0258] N,N-Di-isopropiletilamina (0,108 mL, 0,62 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de COMU (292 mg, 0,68 mmol), 4-amino-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 30, 311 mg, 0,62 mmol) e Boc-Ser-OH (133 mg, 0,65 mmol) em DMF (5 mL) à temperatura ambiente. A reação foi agitada durante 3 horas, diluída com água (80 mL) e EtOAc (15 mL). As fases foram separadas e a fase aquosa foi adicionalmente diluída com NaHCO3 aquoso saturado, então foi extraída com EtOAc (2 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaCl aquoso saturado (2 x 10 mL), foram secas em MgSO4, filtradas e concentradas até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a 4-((S)-2- (terc-butoxicarbonilamino)-3-hidroxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-
benzila e 1-terc-butila (Intermediário 45, 358 mg, 84% de rendimento) como um filme seco incolor e como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500MHz, CDCl3) δ 0,76 (2H, t), 1,16 (1H, m), 1,21 (12H, s), 1,31 (6H, s), 1,35 - 1,42 (5H, m), 1,43 (11H, s), 1,73 - 1,87 (1H, m), 1,87 - 2,02 (2H, m), 2,14 - 2,24 (1H, m), 2,29 - 2,41 (1H, m), 3,43 - 3,52 (0,4H, m), 3,52 - 3,61 (2H, m), 3,66 (0,6H, d), 3,79 - 3,92 (1H, m), 3,92 - 4,04 (1H, m), 4,51 (1H, s l), 5,06 - 5,26 (2H, m), 5,36 (1H, s l), 7,30 - 7,40 (5H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 690. Intermediário 46: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-hidroxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0259] 4-((S)-2-(terc-Butoxicarbonilamino)-3-hidroxipropanamido)-2- (4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarbo- xilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 45, 358 mg, 0,52 mmol) foi dissolvido em EtOAc (4 mL) e tratado com Pd/C (10% p, 50 mg, 0,047 mmol). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 3,5 h. A mistura reacional foi diluída com MeOH, foi filtrada através de terra diatomácea, concentrada até à secura, dando origem a ácido (2R,4R)-1-(terc- butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-hidroxipropanamido)- 2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxí- lico (Intermediário 46, 303 mg, 97% de rendimento) como um sólido branco e como uma mistura de rotâmeros, que foi usada sem purificação adicional. 1H RMN (500MHz, CD2Cl2) δ 0,67 - 0,91 (2H, m), 1,25 (14H, s), 1,41 - 1,47 (3H, m), 1,48 (9H, s), 1,53 (10H, s), 1,82 - 1,90 (2H, m), 2,06 - 2,14 (1H, m), 2,24 - 2,33 (1H, m), 2,76 - 2,91 (1H, m), 3,48 - 3,54 (1H, m), 3,59 (1H, dd), 3,70 (1H, dd), 3,93 (1H, d), 4,03 - 4,17 (1H, m), 4,29 (1H, d), 6,79 - 6,98 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 600.
Exemplo 17: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-hidroxipropanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0260] Ácido trifluoroacético (0,771 mL, 10,01 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)- 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-hidroxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetra- metil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 46, 300 mg, 0,50 mmol) em DCM (4 mL) à temperatura ambiente. Após 1,5 h, a solução foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resulta nte foi dissolvido em HCl aq 1 M (4 mL, 4,00 mmol) e Et2O (4 mL). Ácido fenilborônico (183 mg, 1,50 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. A mistura foi diluída com Et2O (20 mL) e água (5 mL) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O, as camadas foram separadas e a camada aquosa foi liofilizada. O sólido resultante foi dissolvido em MeOH (3 mL) e sujeito a cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 20 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando uma solução de amônia 5% em MeOH (20 mL). O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18, 0 até 30% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3- hidroxipropanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 17, 94 mg, 59% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, D2O) δ 0,77 (2H, td), 1,16 - 1,26 (1H, m), 1,26 - 1,35 (1H, m), 1,35 - 1,45 (2H, m), 1,76 (1H, ddd), 2,02 (1H, ddd), 2,29 (1H, dd), 2,46 (1H, dd), 3,35 (1H, dd), 3,48 (1H, t), 3,62 (1H, dd), 3,66 - 3,77 (2H, m), 4,40 - 4,50 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 318.
Exemplo 18: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-metoxipropanamido)-2- (4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 47: 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3- metoxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila
[0261] N,N-di-isopropiletilamina (0,082 mL, 0,47 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de COMU (220 mg, 0,51 mmol), 4-amino-2-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 30, 235 mg, 0,47 mmol) e N-Boc-O-metil-L-serina (108 mg, 0,49 mmol) em DMF (3 mL) à temperatura ambiente. A reação foi agitada durante 2 h, então foi diluída com água (60 mL) e DCM (15 mL). As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com DCM (2 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCO3 aquoso saturado (30 mL), NaCl aquoso saturado (2 x 10 mL), foram secas em MgSO 4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a 4-((S)-2- (terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-
benzila e 1-terc-butila (Intermediário 47, 145 mg, 44% de rendimento) como um filme seco incolor e como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500MHz, CDCl3) δ 0,78 (2H, t), 1,18 (1H, d ld), 1,22 - 1,26 (13H, m), 1,33 (6H, s), 1,44 (5H, s l), 1,46 (9H, s), 1,57 - 1,74 (1H, m), 1,74 - 1,85 (1H, m), 1,94 (0,4H, d), 2,01 (0,6H, d), 2,18 - 2,27 (0,6H, m), 2,32 - 2,47 (1,4H, m), 3,32 (3H, s), 3,39 - 3,46 (1H, m), 3,49 - 3,55 (0,4H, m), 3,60 (1H, dd), 3,65 - 3,76 (1,6H, m), 4,15 (1H, d l), 4,51 - 4,64 (1H, m), 5,06 - 5,22 (2H, m), 5,23 - 5,34 (1H, m), 7,32 - 7,39 (5H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 704. Intermediário 48: ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metoxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico
[0262] 4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxipropanamido)-2- (4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarbo- xilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 47, 145 mg, 0,21 mmol) foi dissolvido em EtOAc (2 mL) e tratado com Pd/C (10% p, 22 mg, 0,021 mmol). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura reacional foi diluída com MeOH, filtrada através de terra diatomácea, concentrada até à secura, dando origem a ácido (2R,4R)-1-(terc- butoxicarbonil)-4-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxipropanamido)-2- (4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 48, 126 mg, 100% de rendimento) como um sólido branco e como uma mistura de rotâmeros, que foi usada sem purificação adicional. 1 H RMN (500MHz, CD2Cl2) δ 0,65 - 0,80 (2H, m), 1,14 - 1,29 (14H, m), 1,35 - 1,43 (5H, m), 1,44 (7H, s), 1,46 - 1,60 (8H, m), 1,77 - 1,95 (1H, m), 2,03 - 2,14 (1H, m), 2,14 - 2,26 (1H, m), 2,68 (1H, d l), 3,33 (3H, s), 3,38 - 3,47 (1H, m), 3,47 - 3,60 (2H, m), 3,65 - 3,76 (1H, m), 4,02 - 4,15 (1H, m), 4,24 (1H, s l), 5,38 (1H, s l), 7,06 (1H, s l); m/z (ES+) [M+H]+ = 614.
Exemplo 18: ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3-metoxipropanamido)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0263] Ácido trifluoroacético (0,25 mL, 3,26 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2R,4R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)- 2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxipropanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 48, 100 mg, 0,16 mmol) em DCM (2 mL) à temperatura ambiente. Após uma hora, a solução foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em HCl aq 1 M (2 mL, 2,00 mmols) e Et2O (2 mL). Ácido fenilborônico (60 mg, 0,49 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura foi diluída com Et2O (20 mL) e água (5 mL) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O, as camadas foram separadas e a camada aquosa foi liofilizada. O sólido resultante foi dissolvido em MeOH (3 mL) e sujeito a cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 20 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando uma solução de amônia 5% em MeOH (20 mL). O material obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18, 0 até 20% de acetonitrila em água). As frações de produto foram liofilizadas e o material resultante foi novamente sujeito a cromatografia Flash de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18, 0 até 2% de acetonitrila em água). As frações de produto foram liofilizadas e o material resultante foi novamente repurificado por cromatografia Flash de fase reversa (RediSep Rf Gold® C18, 0 até 5% de acetonitrila em água), dando origem a ácido (2R,4R)-4-((S)-2-amino-3- metoxipropanamido)-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 18, 18 mg, 35% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, D2O) δ 0,77 (2H, td), 1,14 - 1,27 (1H, m), 1,27 - 1,35 (1H, m), 1,35 - 1,45 (2H, m), 1,72 - 1,81 (1H, m), 2,02 (1H, ddd), 2,30 (1H, dd), 2,41 (1H, dd),
3,31 - 3,38 (4H, m), 3,55 - 3,60 (3H, m), 3,63 (1H, dd), 4,42 - 4,51 (1H, m); m/z (ES+) [M+H]+ = 332. Exemplo 19: (S)-2-amino-N-((3R,5R)-8-hidróxi-6-oxo-7-oxa-1-aza-8- boraespiro[4.7]dodecan-3-il)-3-metilbutanamida – Composto B
[0264] O Composto B (Exemplo 19) foi obtido pela ciclização intramolecular do Exemplo 9 (Composto A) via um processo de interconversão. Além disso, interconversões entre o Composto A (Exemplo 9) e o Composto B foram observadas sob várias condições. Por exemplo, o Composto B foi convertido no Composto A na presença de água e tal conversão foi proporcional à concentração de água no solvente. Tal é demonstrado na Figura 1, onde são mostrados os espectros de RMN do composto B preparado em 100% de d6-DMSO (marcado A), 75% de D2O em d6-DMSO (marcado B), 50% de D2O em d6-DMSO (marcado C), 25% de D2O em d6-DMSO (marcado E) e 100% de D2O (marcado F). Em d6- DMSO, o composto B predomina, ao passo que ocorre um aumento proporcional do composto A com o aumento da concentração de D2O. A proporção do composto A relativamente ao composto B em 100% de D 2O alcança aproximadamente 90%. Além disso, o Composto B foi convertido no Composto A sob condição ácida. Na Figura 2, o espectro de RMN do composto B em DCl 0,1 M (em D2O) demonstra que a acidificação origina conversão quase completa no composto A. Adicionalmente, foi determinado que o Composto B cristalino e Composto B amorfo têm a mesma forma estrutural. Na Figura 3, os espectros de RMN (obtidos em d6-DMSO) demonstram que o Composto B cristalino e o Composto B amorfo têm a mesma estrutura cíclica. Exemplo 20: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-hidróxi-3-metil- butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 52: (2R,4R)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-hidróxi-3- metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-(terc-butila)
[0265] N,N-Di-isopropiletilamina (0,13 mL, 0,76 mmol) foi adicionado a uma solução de (S)-N-alfa-t-Butiloxicarbonil-3,3-dimetil-serina (106 mg, 0,454 mmol) e HATU (0,173 g, 0,454 mmol) em DMF (2,6 mL) a 0ºC e a reação foi agitada durante 15 min. Uma solução de 4-amino-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 30, 190 mg, 0,38 mmol) em DMF (1 mL) foi adicionada e a reação foi agitada durante duas horas com aquecimento lento para a temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com EtOAc (40 mL) e lavada com NH4Cl aquoso saturado (2 x 20 mL), NaHCO3 aquoso saturado (2 x 20 mL) e salmoura (20 mL). A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (0-50% de EtOAc em hexanos), dando origem a (2R,4R)-4-((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-hidróxi-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-
benzila e 1-(terc-butila) (Intermediário 52, 223 mg, 82% de rendimento) como uma espuma branca e como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500 MHz, MeOH-d4) δ 0,70 - 0,83 (m, 2 H) 1,14 - 1,27 (m, 19 H) 1,31 (s, 6 H) 1,36 - 1,42 (m, 5 H) 1,44 (s, 10 H) 1,81 - 1,93 (m, 1 H) 2,02 - 2,14 (m, 1 H) 2,14 - 2,30 (m, 1 H) 2,36 - 2,49 (m, 1 H) 3,39 - 3,48 (m, 1 H) 3,73 - 3,83 (m, 1 H) 3,87 - 3,97 (m, 1 H) 4,43 - 4,53 (m, 1 H) 5,09 - 5,25 (m, 2 H) 7,28 - 7,45 (m, 5 H); m/z (ES+) [M+H]+ = 718. Exemplo 20: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-hidróxi-3-metil- butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0266] Pd/C (10% p, 100 mg, 0,09 mmol) foi adicionado a uma solução de (2R,4R)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-hidróxi-3-metilbutanami- do)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicar- boxilato de 2-benzila e 1-(terc-butila) (Intermediário 52, 220 mg, 0,31 mmol) em EtOAc (3 mL). O balão reacional foi equipado com um balão de H 2 e a suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura reacional foi diluída com MeOH, filtrada através de terra diatomácea e concentrada até à secura. O sólido branco foi dissolvido em DCM (1 mL) e ácido trifluoroacético (0,50 mL, 6,5 mmol) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. A solução foi concentrada, e o resíduo resultante foi dissolvido em Et2O (2 mL) e HCl aq 1 M (2 mL). Ácido fenilborônico (100 mg, 0,82 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. A mistura reacional foi diluída com água e lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 20 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 5% em MeOH (20 mL), dando origem a ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-hidróxi- 3-metil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 20, 92 mg, 87% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500 MHz,
D2O) δ 0,70 (2H, t), 1,20 (4H, s), 1,28 (4H, s), 1,31 - 1,40 (2H, m), 1,77 - 1,88 (1H, m), 2,04 - 2,14 (1H, m), 2,40 - 2,47 (1H, m), 2,48 - 2,54 (1H, m), 3,40 (1H, dd), 3,74 (1H, s), 3,75 - 3,80 (1H, m), 4,47 - 4,55 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 346. Exemplo 21: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-2,3-dimetil- butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 53: (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-2,3-dimetil- butanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila
[0267] N,N-Di-isopropiletilamina (0,14 mL, 0,82 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-2,3- dimetilbutanoico (0,113 g, 0,489 mmol) e HATU (0,186 g, 0,489 mmol) em DMF (3 mL) a 0ºC e a reação foi agitada durante 15 min. Uma solução de 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino- 1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 30, 205 mg, 0,408 mmol) em DMF (1 mL) foi adicionada e a reação foi agitada durante 3 horas com aquecimento lento para a temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com EtOAc (50 mL) e lavada com NH4Cl aquoso saturado (2 x 25 mL), NaHCO3 aquoso saturado (2 x 25 mL) e salmoura (20 mL). A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (0-50% de EtOAc em hexanos), dando origem a (2R,4R)-4-
[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-2,3-dimetil-butanoil]amino]-2-[4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 53, 211 mg, 72% de rendimento) como uma espuma branca e como uma mistura de rotâmeros. 1 H RMN (500 MHz, MeOH-d4) δ 0,72 - 0,79 (2H, m), 0,80 - 0,93 (6H, m), 1,17 - 1,25 (13H, m), 1,31 (9H, d), 1,36 - 1,47 (16H, m), 1,82 - 1,92 (2H, m), 1,97 - 2,09 (1H, m), 2,15 - 2,30 (1H, m), 2,34 - 2,51 (1H, m), 3,61 - 3,75 (1H, m), 4,42 - 4,56 (1H, m), 5,08 - 5,31 (2H, m), 7,29 - 7,46 (5H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 716. Exemplo 21: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-2,3-dimetil-butanoil]amino]-2- (4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0268] Pd/C (10% p, 90 mg, 0,08 mmol) foi adicionado a uma solução de (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-2,3-dimetil-butanoil]amino]-2- [4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 53, 210 mg, 0,29 mmol) em EtOAc (4 mL). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura reacional foi diluída com MeOH, filtrada através de terra diatomácea e concentrada até à secura. O sólido branco foi dissolvido em DCM (1 mL) e ácido trifluoroacético (0,50 mL, 6,5 mmol) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. A solução foi concentrada, e o resíduo resultante foi dissolvido em Et2O (2 mL) e HCl aq 1 M (2 mL). Ácido fenilborônico (100 mg, 0,82 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. A mistura reacional foi diluída com água e lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 20 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 5% em MeOH (20 mL), dando origem a ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-2,3-
dimetil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 21, 90 mg, 89% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 0,74 - 0,78 (2H, m), 0,79 (3H, d), 0,89 (3H, d), 1,17 - 1,27 (4H, m), 1,28 - 1,35 (1H, m), 1,36 - 1,47 (2H, m), 1,70 - 1,81 (1H, m), 1,93 - 2,07 (2H, m), 2,27 (1H, dd), 2,43 (1H, dd), 3,27 - 3,39 (1H, m), 3,60 (1H, dd), 4,39 - 4,48 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 344. Exemplo 22: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-[[(2S)-2,3- diaminopropanoil]amino]pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 54: (2R,4R)-4-[[(2S)-2,3-bis(terc- butoxicarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc- butila
[0269] N,N-Di-isopropiletilamina (0,14 mL, 0,82 mmol) foi adicionado a uma solução de Boc-Dap(Boc)-OH•DCHA (0,238 g, 0,489 mmol) e HATU (0,186 g, 0,489 mmol) em DMF (3 mL) a 0ºC e a reação foi agitada durante 15 min. Uma solução de 4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de (2R,4R)-2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 30, 205 mg, 0,408 mmol) em DMF (1 mL) foi adicionada e a reação foi agitada durante 16 h com aquecimento lento para a temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com EtOAc (50 mL) e lavada com NH4Cl aquoso saturado (2 x 25 mL), NaHCO3 aquoso saturado (2 x 25 mL) e salmoura (20 mL). A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (0-50% de EtOAc em hexanos), dando origem a (2R,4R)-4-[[(2S)-2,3-bis(terc- butoxicarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc- butila (Intermediário 54, 214 mg, 66% de rendimento) como uma espuma branca e como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500 MHz, MeOH-d4) δ 0,76 (2H, q), 1,19 - 1,26 (14H, m), 1,27 - 1,34 (6H, m), 1,37 - 1,52 (24H, m), 1,76 - 1,93 (1H, m), 2,06 - 2,31 (2H, m), 2,50 (1H, s), 3,19 - 3,27 (2H, m), 3,66 - 3,84 (1H, m), 4,00 - 4,13 (1H, m), 4,35 - 4,50 (1H, m), 5,04 - 5,25 (2H, m), 7,26 - 7,50 (5H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 789. Exemplo 22: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-[[(2S)-2,3-diaminopropa- noil]amino]pirrolidino-2-carboxílico
[0270] Pd/C (10% p, 57 mg, 0,053 mmol) foi adicionado a uma solução de (2R,4R)-4-[[(2S)-2,3-bis(terc-butoxicarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 54, 210 mg, 0,27 mmol) em EtOAc (4 mL). O balão reacional foi equipado com um balão de H 2 e a suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura reacional foi diluída com MeOH, filtrada através de terra diatomácea e concentrada até à secura. O sólido branco foi dissolvido em DCM (1 mL) e ácido trifluoroacético (0,50 mL, 6,5 mmols) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. A solução foi concentrada, e o resíduo resultante foi dissolvido em Et2O (2 mL) e HCl aq 1 M (2 mL). Ácido fenilborônico (100 mg, 0,82 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura reacional foi diluída com água e lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 20 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 5% em
MeOH (20 mL), dando origem a ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-[[(2S)- 2,3-diaminopropanoil]amino]pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 22, 74 mg, 88% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 0,71 (2H, t), 1,11 - 1,24 (1H, m), 1,26 - 1,41 (3H, m), 1,75 - 1,89 (1H, m), 2,00 - 2,13 (1H, m), 2,31 - 2,48 (1H, m), 2,51 - 2,67 (1H, m), 3,39 - 3,53 (3H, m), 3,68 - 3,80 (1H, m), 4,27 (1H, t), 4,41 - 4,52 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 317. Exemplo 23: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4- (metilamino)pirrolidino-2-carboxílico
Intermediário 55: (2S,4R)-4-(terc-butoxicarbonilamino)pirrolidino-1,2- dicarboxilato de 1-terc-butila e 2-metila
[0271] Dicarbonato de di-terc-butila (4,41 g, 20,2 mmols) foi adicionado a uma solução de sal do ácido oxálico de (2S,4R)-4-aminopirrolidino-1,2- dicarboxilato de 1-(terc-butila) e 2-metila (4,50 g, 13,5 mmols) e trietilamina (5,63 mL, 40,4 mmols) em DCM (57 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante a noite sob uma atmosfera de N2. A mistura reacional bruta foi diluída com DCM (200 mL) e lavada sequencialmente com HCl 0,5 M (aq), bicarbonato de sódio saturado e salmoura. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (DCM/MeOH), dando origem a (2S,4R)-4-(terc-butoxicarbonilamino)pirrolidino-1,2- dicarboxilato de 1-terc-butila e 2-metila (Intermediário 55, 3,66 g, 79% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,29 - 1,42 (18H, m), 1,96 - 2,17 (2H, m), 3,12 - 3,17 (1H, m), 3,45 - 3,56 (1H, m), 3,62 - 3,69 (3H, m), 3,96 - 4,06 (1H, m), 4,24 - 4,34 (1H, m), 7,17 - 7,26 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 345. Intermediário 56: (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino- 1,2-dicarboxilato de 1-terc-butila e 2-metila
[0272] Hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral) (0,491 g, 12,3 mmols) foi adicionado em porções a uma solução de (2S,4R)-4-(terc- butoxicarbonilamino)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butila e 2-metila (Intermediário 55, 3,66 g, 10,7 mmols) em DMF (35 mL). Após a adição, a reação foi agitada durante 10 min, então iodeto de metila (0,715 mL, 11,4 mmols) foi adicionado e a reação foi agitada durante mais 3 h. A mistura reacional foi esfriada para 0°C e extinta com água. A mistura foi diluída com EtOAc (200 mL) e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada sequencialmente com água e salmoura, foi seca em Na2SO4,
filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a (2S,4R)-4- [terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1-terc- butila e 2-metila (Intermediário 56, 3,13 g, 82% de rendimento) como um óleo incolor. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,28 - 1,41 (18H, m), 1,87 - 2,02 (1H, m), 2,29 - 2,44 (1H, m), 2,69 (3H, s), 3,13 - 3,25 (1H, m), 3,44 - 3,57 (1H, m), 3,60 - 3,68 (3H, m), 4,23 - 4,32 (1H, m), 4,62 (1H, s l); m/z: (ES+) [M+H]+ = 359. Intermediário 57: (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino- 1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila
[0273] Uma solução de hidróxido de sódio (2,10 g, 52,4 mmols) em água (11 mL) foi adicionada a uma solução de (2S,4R)-4-[terc- butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butila e 2- metila (Intermediário 56, 3,13 g, 8,73 mmols) em THF (22 mL) e MeOH (11 mL) a 0°C. A mistura reacional foi agitada durante 3 horas com aquecimento lento para a temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e a camada aquosa foi acidificada para pH ~3 com HCl 5 M (aq) e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura, dando origem ao ácido carboxílico bruto como um sólido branco que foi usado sem purificação adicional.
[0274] Brometo de benzila (1,24 mL, 10,5 mmols) foi adicionado a uma solução do ácido carboxílico bruto, iodeto de sódio (1,737 g, 11,59 mmols) e K2CO3 (3,01 g, 21,8 mmols) em DMF (28 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 17 horas. A mistura reacional foi filtrada, e os sólidos foram enxaguados com EtOAc. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 57, 3,05 g, 81% de rendimento) como um óleo incolor. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,20 - 1,42 (18H, m), 1,91 - 2,07 (1H, m), 2,33 - 2,46 (1H, m), 2,69 (3H, s), 3,12 - 3,26 (1H, m), 3,44 - 3,57 (1H, m), 4,20 - 4,38 (1H, m), 4,66 (1H, s l), 5,07 - 5,20 (2H, m), 7,25 - 7,41 (5H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 435. Intermediário 58: (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc- butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1- terc-butila
[0275] (2S,4R)-4-[terc-Butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino-1,2- dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 57, 3,05 g, 7,02 mmol) e brometo de crotila (1,08 mL, 10,5 mmols) foram dissolvidos em THF (25 mL) e a solução foi esfriada para -78°C sob uma atmosfera de N2. Uma solução de KHMDS (0,5 M em tolueno, 21,0 mL, 10,5 mmols) foi adicionada gota a gota à mistura reacional e a reação foi agitada durante 17 horas com aquecimento lento para a temperatura ambiente. A mistura reacional bruta foi extinta com água e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. A mistura bruta foi diluída em DCM e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água, seca em Na 2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por purificação em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a (4R)-2-(but-2- enil)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2- benzila e 1-terc-butila (Intermediário 58, 1,26 g, 37% de rendimento) como um óleo amarelo e como uma mistura de diastereômeros, isômeros de olefina E/Z e rotâmeros. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,23 - 1,44 (18H, m), 1,51 - 1,70 (3H, m), 2,00 - 2,26 (2H, m), 2,38 - 2,47 (1H, m), 2,57 - 2,68 (3H, m), 2,71 - 3,00 (1H, m), 3,00 - 3,25 (1H, m), 3,40 - 3,74 (1H, m), 4,54 - 4,80 (1H, m), 5,01 - 5,27 (2H, m), 5,28 - 5,47 (1H, m), 5,49 - 5,72 (1H, m), 7,25 - 7,42 (5H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 489.
Intermediário 59: (4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2- benzila e 1-terc-butila
[0276] Dicloreto de bis(1,5-ciclo-octadieno)di-irídio(I) (269 mg, 0,400 mmol) e bis(difenilfosfino)metano (308 mg, 0,801 mmol) foram adicionados a um balão de fundo redondo seco no forno. O balão reacional foi selado e purgado com N2. Os sólidos foram dissolvidos em DCM (11 mL) e 4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,28 mL, 8,82 mmols) foi lentamente adicionado à solução. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. (4R)-2-(But-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino] pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 58, 1,96 g, 4,01 mmols) foi adicionado à reação como uma solução em DCM (7,5 mL) e a mistura reacional foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. A mistura reacional foi esfriada para 0°C e cuidadosamente extinta com MeOH e água. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia Flash em sílica (hexanos/EtOAc), dando origem a (4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc- butila (Intermediário 59, 2,5 g, 100% de rendimento) como um óleo amarelo e como uma mistura de diastereômeros e rotâmeros. O material purificado foi sujeito a SFC quiral [coluna (S,S)Whelk-O1, 30 mm x 250 mm, 5 µm, Temperatura = 20°C, Fase móvel = 0-30% de MeOH:CO2, detecção UV @ 220 nm, carga = 31 mg/inj, conc = 125 mg/mL em MeOH, taxa de fluxo = 75 mL/min, Pressão na Descarga = 100 bar], dando origem a dois diastereômeros. A estereoquímica de cada diastereômero foi atribuída retrospectivamente com base na potência enzimática do
Exemplo 23 e Exemplo 24 de modo a ser congruente com outros compostos exemplificados.
[0277] Intermediário 60 (Isômero 2, 637 mg): (2R,4R)-4-[terc- butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,58 - 0,76 (2H, m), 1,15 (12H, d), 1,21 - 1,47 (22H, m), 1,69 - 1,82 (1H, m), 1,94 - 2,23 (3H, m), 2,56 - 2,62 (3H, m), 3,19 - 3,28 (1H, m), 3,45 - 3,57 (1H, m), 4,58 - 4,79 (1H, m), 5,01 - 5,26 (2H, m), 7,26 - 7,41 (5H, m).
[0278] Intermediário 61 (Isômero 1, 860 mg): (2S,4R)-4-[terc- butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,62 - 0,71 (2H, m), 1,15 (12H, s), 1,20 - 1,42 (22H, m), 1,67 - 1,84 (1H, m), 1,92 - 2,32 (3H, m), 2,69 (3H, s), 3,04 - 3,15 (1H, m), 3,57 - 3,71 (1H, m), 4,52 - 4,73 (1H, m), 4,98 - 5,25 (2H, m), 7,24 - 7,40 (5H, m). Intermediário 62: ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc- butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil]pirrolidino-2-carboxílico
[0279] Pd/C (10% p, 165 mg, 0,155 mmol) foi adicionado a uma solução de (2R,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2- benzila e 1-terc-butila (Intermediário 60, 637 mg, 1,03 mmol) em EtOAc (7 mL). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com MeOH e filtrada através de terra diatomácea. O filtrado foi concentrado até à secura e purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-
[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaboro- lan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 62, 350 mg, 64% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,63 - 0,73 (2H, m), 1,14 - 1,19 (12H, m), 1,22 - 1,42 (21H, m), 1,63 - 1,77 (1H, m), 1,99 - 2,18 (3H, m), 2,63 - 2,67 (3H, m), 3,21 - 3,27 (2H, m), 3,41 - 3,55 (1H, m), 4,57 - 4,80 (1H, m), 12,32 - 12,75 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ =
527. Exemplo 23: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(metilamino)pirrolidino-2- carboxílico
[0280] Ácido trifluoroacético (0,51 mL, 6,7 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4- [terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaboro- lan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 62, 350 mg, 0,66 mmol) em DCM (4 mL) à temperatura ambiente. Após uma hora, a solução foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em HCl aq 1 M (5 mL) e Et2O (5 mL). Ácido fenilborônico (162 mg, 1,33 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura foi diluída com Et2O e água e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 60 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 5% em MeOH (60 mL), dando origem a ácido (2R,4R)-2- (4-boronobutil)-4-(metilamino)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 23, 140 mg, 86% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 0,72 - 0,82 (2H, m), 1,09 - 1,43 (4H, m), 1,62 - 1,77 (1H, m), 1,83 - 1,95 (1H, m), 2,23 (2H, d), 2,46 (3H, s), 3,02 - 3,11 (1H, m), 3,37 - 3,49 (1H, m), 3,49 - 3,61 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 245.
Exemplo 24: ácido (2S,4R)-2-(4-boronobutil)-4- (metilamino)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 63: ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc- butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil]pirrolidino-2-carboxílico
[0281] Pd/C (10% p, 223 mg, 0,209 mmol) foi adicionado a uma solução de (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2- benzila e 1-terc-butila (Intermediário 61, 860 mg, 1,39 mmol) em EtOAc (9,3 mL). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com MeOH e filtrada através de terra diatomácea. O filtrado foi concentrado até à secura e purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a ácido (2S,4R)-1-terc- butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 63, 520 mg, 71% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,60 - 0,75 (2H, m), 1,16 (12H, s), 1,28 - 1,45 (22H, m), 1,56 - 1,74 (1H, m), 1,84 - 1,95 (1H, m), 2,01 - 2,22 (2H, m), 2,69 (3H, s), 3,01 - 3,17 (1H, m), 3,56 - 3,70 (1H, m), 4,52 - 4,73 (1H, m), 12,35 - 12,77 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 527.
Exemplo 24: ácido (2S,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(metilamino)pirrolidino-2- carboxílico
[0282] Ácido trifluoroacético (1,23 mL, 16,0 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4- [terc-butoxicarbonil(metil)amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaboro- lan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 63, 520 mg, 0,80 mmol) em DCM (8,5 mL) à temperatura ambiente. Após uma hora, a solução foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em HCl aq 1 M (5 mL) e Et2O (5 mL). Ácido fenilborônico (196 mg, 1,60 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura foi diluída com Et2O e água e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 60 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 5% em MeOH (60 mL), dando origem a ácido (2S,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(metilamino)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 24, 163 mg, 83% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 0,70 - 0,90 (2H, m), 1,10 - 1,46 (4H, m), 1,65 - 1,77 (2H, m), 1,96 - 2,07 (1H, m), 2,43 (3H, s), 2,68 - 2,77 (1H, m), 2,96 - 3,10 (1H, m), 3,37 - 3,50 (1H, m), 3,50 - 3,60 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 245.
Exemplo 25: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4- (dimetilamino)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 64: (2R,4R)-4-aminopirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila
[0283] Trifenilfosfina (7,87 g, 30,0 mmols) e água (0,54 mL, 30,0 mmols) foram adicionados a uma solução de (2R,4R)-4-azidopirrolidino- 1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-(terc-butila) (5,20 g, 15,0 mmols) em THF (68 mL) à temperatura ambiente. A reação foi aquecida para 60°C e agitada durante 6 horas. A mistura reacional foi esfriada para a temperatura ambiente, diluída com EtOAc, e lavada sequencialmente com água (2 x 100 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (100 mL). A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (DCM/MeOH), dando origem a (2R,4R)-4-aminopirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 64, 3,2 g, 67% de rendimento) como um óleo incolor. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,20 - 1,49 (9H, m), 1,53 - 1,64 (1H, m), 1,65 - 1,79 (2H, m), 2,26 - 2,40 (1H, m), 2,85 - 3,01 (1H, m), 3,31 - 3,42 (1H, m), 3,45 - 3,56 (1H, m), 4,13 - 4,24 (1H, m), 4,99 - 5,25 (2H, m), 7,36 (5H, s); m/z: (ES+) [M+H]+ = 321. Intermediário 65: (2R,4R)-4-(dimetilamino)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila
[0284] Triacetoxiboro-hidreto de sódio (6,35 g, 29,9 mmols) foi adicionado em porções a uma solução de (2R,4R)-4-aminopirrolidino-1,2- dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 64, 3,20 g, 9,99 mmols) e formaldeído (37% p em H2O, 4,46 mL, 59,9 mmols) em MeOH (79 mL). Após a adição, a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 17 horas. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi diluído com DCM. Os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado foi concentrado até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc com NH 4OH), dando origem a (2R,4R)-4-(dimetilamino)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2- benzila e 1-terc-butila (Intermediário 65, 3,00 g, 86% de rendimento). 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,24 (9H, s), 1,53 - 1,67 (1H, m), 2,10 (6H, s), 2,40 - 2,48 (1H, m), 2,53 - 2,73 (1H, m), 2,83 - 3,06 (1H, m), 3,59 - 3,69 (1H, m), 4,15 - 4,29 (1H, m), 5,02 - 5,21 (2H, m), 7,26 - 7,42 (5H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 350. Intermediário 66: (4R)-2-(but-2-enil)-4-(dimetilamino)pirrolidino-1,2- dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila
[0285] (2R,4R)-4-(Dimetilamino)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2- benzila e 1-terc-butila (Intermediário 65, 3,00 g, 8,61 mmols) e brometo de crotila (1,33 mL, 12,9 mmols) foram dissolvidos em THF (18 mL) e a solução foi esfriada para -78°C sob uma atmosfera de N2. Uma solução de KHMDS (0,5 M em tolueno, 25,8 mL, 12,9 mmols) foi adicionada gota a gota à mistura reacional e a reação foi agitada durante 17 horas com aquecimento lento para a temperatura ambiente. A mistura reacional bruta foi extinta com água e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. A mistura bruta foi diluída em DCM e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por purificação em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a (4R)-2-(but-2-enil)-4- (dimetilamino)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 66, 1,55 g, 45% de rendimento) como um óleo amarelo e como uma mistura de diastereômeros, isômeros de olefina E/Z e rotâmeros. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,21 - 1,44 (9H, m), 1,51 - 1,70 (3H, m), 1,79 - 1,96 (1H, m), 2,05 (6H, s), 2,08 - 2,24 (1H, m), 2,31 - 2,43 (1H, m), 2,54 - 2,74 (1H, m), 2,75 - 3,08 (2H, m), 3,56 - 3,86 (1H, m), 5,00 - 5,23 (2H, m), 5,23 - 5,42 (1H, m), 5,43 - 5,73 (1H, m), 7,23 - 7,41 (5H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 403. Intermediário 67: (4R)-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc- butila
[0286] Dicloreto de bis(1,5-ciclo-octadieno)di-irídio(I) (240 mg, 0,36 mmol) e bis(difenilfosfino)metano (275 mg, 0,715 mmol) foram adicionados a um balão de fundo redondo seco no forno. O balão reacional foi selado e purgado com N2. Os sólidos foram dissolvidos em DCM (10 mL) e 4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,14 mL, 7,87 mmols) foi lentamente adicionado à solução. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. (4R)-2-(But-2-enil)-4-(dimetilamino)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 66, 1,44 g, 3,58 mmols) foi adicionado à reação como uma solução em DCM (6,7 mL) e a mistura reacional foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. A mistura reacional foi esfriada para 0°C e cuidadosamente extinta com MeOH e água. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia Flash em sílica (hexanos/EtOAc), dando origem a (4R)-4- (dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino- 1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 67, 1,5 g, 79% de rendimento) como um óleo amarelo e como uma mistura de diastereômeros e rotâmeros. O material purificado foi sujeito a SFC quiral [coluna (S,S)Whelk- O1, 30 mm x 250 mm, 5 µm, Temperatura = 20°C, Fase móvel = 0-15% de MeOH:CO2, detecção UV @ 220 nm, carga = 32 mg/inj, conc = 80 mg/mL em MeOH, taxa de fluxo = 120 mL/min, Pressão na Descarga = 100 bar], dando origem a dois diastereômeros. A estereoquímica de cada diastereômero foi atribuída retrospectivamente com base na potência enzimática do Exemplo 25 e Exemplo 26 de modo a ser congruente com outros compostos exemplificados.
[0287] Intermediário 68 (Isômero 2, 190 mg): (2R,4R)-4-(dimetil- amino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2- dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,64 - 0,71 (2H, m), 0,97 - 1,12 (1H, m), 1,13 - 1,17 (12H, m), 1,24 (13H, s), 1,57 - 1,81 (1H, m), 1,81 - 1,99 (1H, m), 2,06 (6H, s), 2,09 - 2,21 (1H, m), 2,55 - 2,74 (1H, m), 3,02 - 3,12 (1H, m), 3,59 - 3,70 (1H, m), 5,00 - 5,20 (2H, m), 7,27 - 7,41 (5H, m).
[0288] Intermediário 69 (Isômero 1, 491 mg): (2S,4R)-4-(dimetil- amino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2- dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ
0,52 - 0,72 (2H, m), 0,93 - 1,12 (1H, m), 1,12 - 1,20 (12H, m), 1,20 - 1,39 (13H, m), 1,59 - 1,74 (1H, m), 1,77 - 1,93 (1H, m), 2,06 (6H, s), 2,08 - 2,15 (1H, m), 2,53 - 2,65 (1H, m), 2,78 - 2,96 (1H, m), 3,67 - 3,82 (1H, m), 5,00 - 5,21 (2H, m), 7,27 - 7,42 (5H, m). Intermediário 70: ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-(dimetilamino)-2- [4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico
[0289] Pd/C (10% p, 57 mg, 0,054 mmol) foi adicionado a uma solução de (2R,4R)-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 68, 189 mg, 0,356 mmol) em EtOAc (2,4 mL). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com MeOH e filtrada através de terra diatomácea. O filtrado foi concentrado até à secura, dando origem a ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4- (dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil]pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 70, 150 mg, 96% de rendimento) como um sólido branco que foi usado sem purificação adicional. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,53 - 0,70 (2H, m), 1,11 - 1,20 (12H, m), 1,21 - 1,41 (14H, m), 1,56 - 1,71 (1H, m), 1,92 - 2,06 (2H, m), 2,20 (7H, s), 2,69 - 2,78 (1H, m), 3,37 - 3,51 (1H, m), 3,67 - 4,21 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 441. Exemplo 25: ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(dimetilamino)pirrolidino-2- carboxílico
[0290] Ácido trifluoroacético (0,26 mL, 3,4 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4- (dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirroli- dino-2-carboxílico (Intermediário 70, 150 mg, 0,34 mmol) em DCM (2 mL) à temperatura ambiente. Após 1 h, a solução foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em HCl aq 1 M (5 mL) e Et2O (5 mL). Ácido fenilborônico (83 mg, 0,68 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura foi diluída com Et2O e água e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 20 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 5% em MeOH (20 mL), dando origem a ácido (2R,4R)-2-(4-boronobutil)-4- (dimetilamino)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 25, 73 mg, 83% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 0,62 - 0,73 (2H, m), 1,14 - 1,36 (4H, m), 1,79 - 1,90 (1H, m), 1,99 - 2,10 (1H, m), 2,57 - 2,73 (2H, m), 2,82 - 2,90 (6H, m), 3,48 - 3,56 (1H, m), 3,89 - 3,98 (1H, m), 4,12 - 4,20 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 259. Exemplo 26: ácido (2S,4R)-2-(4-boronobutil)-4- (dimetilamino)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 71: ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-(dimetilamino)-2- [4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico
[0291] Pd/C (10% p, 148 mg, 0,139 mmol) foi adicionado a uma solução de (2S,4R)-4-(dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc- butila (Intermediário 69, 490 mg, 0,93 mmol) em EtOAc (6,7 mL). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com MeOH e filtrada através de terra diatomácea. O filtrado foi concentrado até à secura, dando origem a ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4- (dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil]pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 71, 405 mg, 99% de rendimento) como um sólido branco que foi usado sem purificação adicional. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,52 - 0,71 (2H, m), 0,83 - 1,06 (1H, m), 1,16 (12H, s), 1,32 (12H, s), 1,53 - 1,67 (1H, m), 1,75 - 1,88 (1H, m), 2,01 - 2,13 (7H, m), 2,54 - 2,69 (1H, m), 2,79 - 2,95 (1H, m), 3,66 - 3,83 (1H, m), 7,24 - 7,46 (1H, m), 11,86 - 12,88 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ =
441. Exemplo 26: ácido (2S,4R)-2-(4-boronobutil)-4-(dimetilamino)pirrolidino-2- carboxílico
[0292] Ácido trifluoroacético (1,0 mL, 13 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4- (dimetilamino)-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidi- no-2-carboxílico (Intermediário 71, 405 mg, 0,919 mmol) em DCM (5,1 mL) à temperatura ambiente. Após uma hora, a solução foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em HCl aq 1 M (5 mL) e Et2O (5 mL). Ácido fenilborônico (224 mg, 1,84 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura foi diluída com Et2O e água e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 60 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 5% em MeOH (60 mL), dando origem a ácido (2S,4R)-2-(4- boronobutil)-4-(dimetilamino)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 26, 206 mg, 87% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500 MHz, D2O)
δ 0,71 - 0,89 (2H, m), 1,12 - 1,44 (4H, m), 1,70 - 1,82 (2H, m), 1,97 - 2,11 (1H, m), 2,29 (6H, s), 2,62 - 2,71 (1H, m), 2,95 - 3,10 (2H, m), 3,61 - 3,68 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 259. Exemplo 27: ácido (2R,4R)-4-(2-aminoetilamino)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
Intermediário 72: (2S,4R)-4-[2-(terc- butoxicarbonilamino)etilamino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butila e 2-metila
[0293] Ácido acético (42 µL, 0,73 mmol) foi adicionado a uma solução de (2S,4R)-4-aminopirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1-(terc-butila) e 2-metila (7,48 g, 30,6 mmols) e (2-oxoetil)carbamato de terc-butila (4,64 g, 29,2 mmols) em MeOH (194 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A solução foi esfriada para 0°C e triacetoxiboro-hidreto de sódio (9,27 g, 43,7 mmols) foi adicionado em porções. A reação foi agitada durante a noite com aquecimento lento para a temperatura ambiente. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi diluído com DCM, lavado sequencialmente com bicarbonato de sódio saturado, água e cloreto de sódio saturado. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (DCM/EtOAc/MeOH), dando origem a (2S,4R)-4-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etilamino]pirrolidino-1,2- dicarboxilato de 1-terc-butila e 2-metila (Intermediário 72, 4,77 g, 42% de rendimento) como um óleo incolor. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,25 - 1,48 (20H, m), 1,84 - 2,07 (3H, m), 2,88 - 2,98 (2H, m), 3,02 - 3,17 (1H, m), 3,17 - 3,27 (1H, m), 3,40 - 3,51 (1H, m), 3,64 (3H, s), 4,14 - 4,24 (1H, m), 6,63 - 6,74 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 388. Intermediário 73: (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino) etil]amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butila e 2-metila
[0294] Dicarbonato de di-terc-butila (4,29 mL, 18,5 mmols) foi adicionado a uma solução de (2S,4R)-4-[2-(terc-butoxicarbonilamino) etilamino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butila e 2-metila (Intermediário 72, 4,77 g, 12,3 mmols) e N,N-di-isopropiletilamina (4,30 mL, 24,6 mmols) em DCM (53 mL) à temperatura ambiente e a reação foi agitada durante 17 horas. A mistura reacional foi diluída com DCM e lavada sequencialmente com água e cloreto de sódio aquoso saturado. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc- butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butila e 2-metila (Intermediário 73, 4,25 mg, 71% de rendimento). 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,21 - 1,27 (1H, m), 1,27 - 1,42 (27H, m), 1,99 - 2,07 (1H, m), 2,33 - 2,46 (1H, m), 2,93 - 3,14 (3H, m), 3,17 - 3,24 (1H, m), 3,48 - 3,61 (1H, m), 3,61 - 3,69 (3H, m), 4,20 - 4,44 (2H, m), 6,79 - 6,94 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 488. Intermediário 74: (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc- butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila
[0295] Uma solução de hidróxido de sódio (2,09 g, 52,3 mmols) em água (11 mL) foi adicionada a uma solução de (2S,4R)-4-[terc-butoxicar- bonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butila e 2-metila (Intermediário 73, 4,25 g, 8,72 mmols) em THF (22 mL) e MeOH (11 mL) a 0°C. A mistura reacional foi agitada durante 6 horas com aquecimento lento para a temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e a camada aquosa foi acidificada para pH ~3 com HCl 5 M (aq) e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura, dando origem ao ácido carboxílico bruto como um sólido branco que foi usado sem purificação adicional.
[0296] Brometo de benzila (1,24 mL, 10,5 mmol) foi adicionado a uma solução do ácido carboxílico bruto, iodeto de sódio (1,96 g, 13,1 mmol) e K2CO3 (3,62 g, 26,2 mmol) em DMF (28 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 17 horas. A mistura reacional foi filtrada, e os sólidos foram enxaguados com EtOAc. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino] pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 74, 3,91 g, 80% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,20 - 1,47 (27H, m), 2,00 - 2,13 (1H, m), 2,36 - 2,45 (1H, m), 2,93 - 3,01 (2H, m), 3,02 - 3,26 (3H, m), 3,48 - 3,64 (1H, m), 4,26 - 4,43 (2H, m), 5,05 - 5,22 (2H, m), 6,78 - 6,93 (1H, m), 7,25 - 7,41 (5H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 564. Intermediário 75: (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc- butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila
[0297] (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil] amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 74, 3,91 g, 6,94 mmols) e brometo de crotila (0,93 mL, 9,0 mmols) foram dissolvidos em THF (10,6 mL) e a solução foi esfriada para -78°C sob uma atmosfera de N2. Uma solução de KHMDS (0,5 M em tolueno, 34,7 mL, 17,3 mmols) foi adicionada gota a gota à mistura reacional e a reação foi agitada durante 17 horas com aquecimento lento para a temperatura ambiente. A mistura reacional bruta foi extinta com água e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. A mistura bruta foi diluída em DCM e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por purificação em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc- butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 75, 1,34 g, 31% de rendimento) como um óleo amarelo e como uma mistura de diastereômeros, isômeros de olefina E/Z e rotâmeros. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,21 - 1,45 (27H, m), 1,53 - 1,71 (3H, m), 1,91 - 2,32 (2H, m), 2,37 - 2,47 (1H, m), 2,69 - 2,86 (1H, m), 2,86 - 3,11 (4H, m), 3,46 - 3,58 (1H, m), 3,58 - 3,77 (1H, m), 4,29 - 4,57 (1H, m), 5,00 - 5,20 (2H, m), 5,28 - 5,46 (1H, m), 5,46 - 5,71 (1H, m), 6,83 - 7,00 (1H, m), 7,19 - 7,43 (5H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 618. Intermediário 76: (4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc- butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc- butila
[0298] Dicloreto de bis(1,5-ciclo-octadieno)di-irídio(I) (222 mg, 0,331 mmol) e bis(difenilfosfino)metano (254 mg, 0,661 mmol) foram adicionados a um balão de fundo redondo seco no forno. O balão reacional foi selado e purgado com N2. Os sólidos foram dissolvidos em DCM (9 mL) e 4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,05 mL, 7,26 mmols) foi lentamente adicionado à solução. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 min. (4R)-2-(But-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc- butoxicarbonilamino)etil]amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 75, 2,04 g, 3,30 mmols) foi adicionado à reação como uma solução em DCM (6,1 mL) e a mistura reacional foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. A mistura reacional foi esfriada para 0°C e cuidadosamente extinta com MeOH e água. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia Flash em sílica (hexanos/EtOAc), dando origem a (4R)-4- [terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2-
benzila e 1-terc-butila (Intermediário 76, 1,14 g, 46% de rendimento) como um óleo amarelo e como uma mistura de diastereômeros e rotâmeros. O material purificado foi sujeito a SFC quiral [coluna (S,S)Whelk-O1, 30 x 250 mm, 5 µm, Temperatura = 20°C, Fase móvel = 0-20% de IPA com NH4OH 0,2%:CO2, detecção UV @ 220 nm, carga = 18 mg/inj, conc = 46 mg/mL em MeOH, taxa de fluxo = 120 mL/min, Pressão na Descarga = 100 bar], dando origem a dois diastereômeros. A estereoquímica de cada diastereômero foi atribuída retrospectivamente com base na potência enzimática do Exemplo 27 e Exemplo 28 de modo a ser congruente com outros compostos exemplificados.
[0299] Intermediário 77 (Isômero 2, 347 mg): (2R,4R)-4-[terc- butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2- benzila e 1-terc-butila. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,60 - 0,76 (2H, m), 1,15 (12H, s), 1,21 - 1,52 (31H, m), 1,66 - 1,82 (1H, m), 1,96 - 2,19 (2H, m), 2,19 - 2,33 (1H, m), 2,83 - 3,10 (4H, m), 3,48 - 3,66 (1H, m), 4,34 - 4,53 (1H, m), 5,00 - 5,23 (2H, m), 6,83 - 6,93 (1H, m), 7,25 - 7,43 (5H, m).
[0300] Intermediário 78 (Isômero 1, 540 mg): (2S,4R)-4-[terc- butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 2- benzila e 1-terc-butila. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,61 - 0,76 (2H, m), 1,15 (12H, s), 1,21 - 1,47 (31H, m), 1,61 - 1,80 (1H, m), 1,93 - 2,24 (2H, m), 2,26 - 2,43 (1H, m), 2,89 - 3,13 (5H, m), 3,60 - 3,81 (1H, m), 4,33 - 4,49 (1H, m), 5,00 - 5,20 (2H, m), 6,86 - 6,94 (1H, m), 7,27 - 7,39 (5H, m). Intermediário 79: ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc- butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico
[0301] Pd/C (10% p, 99 mg, 0,093 mmol) foi adicionado a uma solução de (2R,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]- 2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarbo- xilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 77, 347 mg, 0,465 mmol) em EtOAc (2,3 mL). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com MeOH e filtrada através de terra diatomácea. O filtrado foi concentrado até à secura, dando origem a ácido (2R,4R)-1-terc- butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]- 2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 79, 287 mg, 94% de rendimento) como um sólido branco que foi usado sem purificação adicional. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,65 - 0,74 (2H, m), 1,14 - 1,21 (12H, m), 1,31 - 1,43 (31H, m), 1,66 - 1,76 (1H, m), 2,00 - 2,27 (3H, m), 2,96 - 3,12 (5H, m), 3,37 - 3,42 (1H, m), 3,49 - 3,61 (1H, m), 4,34 - 4,49 (1H, m), 6,84 - 6,93 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 656. Exemplo 27: ácido (2R,4R)-4-(2-aminoetilamino)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0302] Ácido trifluoroacético (0,67 mL, 8,8 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2R,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc- butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrame- til-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 79, 287 mg, 0,438 mmol) em DCM (3,7 mL) à temperatura ambiente. Após uma hora, a solução foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em HCl aq 1 M (5 mL) e Et2O (5 mL). Ácido fenilborônico (107 mg, 0,878 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura foi diluída com Et2O e água e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 20 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 5% em MeOH (20 mL), dando origem a ácido (2R,4R)-4-(2-aminoetilamino)-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 27, 106 mg, 89% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 0,63 - 0,77 (2H, m), 1,13 - 1,23 (1H, m), 1,37 (3H, d l), 1,63 - 1,76 (1H, m), 1,92 - 2,02 (1H, m), 2,06 - 2,14 (1H, m), 2,24 - 2,33 (1H, m), 2,78 (2H, s), 2,96 (2H, s), 3,08 - 3,19 (1H, m), 3,28 - 3,43 (1H, m), 3,43 - 3,51 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 274. Exemplo 28: ácido (2S,4R)-4-(2-aminoetilamino)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 80: ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc- butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico
[0303] Pd/C (10% p, 137 mg, 0,129 mmol) foi adicionado a uma solução de (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil] amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2- dicarboxilato de 2-benzila e 1-terc-butila (Intermediário 78, 480 mg, 0,64 mmol) em EtOAc (7,2 mL). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com MeOH e filtrada através de terra diatomácea. O filtrado foi concentrado até à secura e purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a ácido (2S,4R)- 1-terc-butoxicarbonil-4-[terc-butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil] amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-2-
carboxílico (Intermediário 80, 170 mg, 40% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,58 - 0,73 (2H, m), 1,15 (12H, s), 1,37 (31H, d l), 1,58 - 1,74 (2H, m), 2,18 - 2,33 (2H, m), 2,92 - 3,16 (6H, m), 3,59 - 3,73 (1H, m), 4,31 - 4,50 (1H, m), 6,84 - 6,95 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 656. Exemplo 28: ácido (2S,4R)-4-(2-aminoetilamino)-2-(4- boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0304] Ácido trifluoroacético (1,00 mL, 13,0 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2S,4R)-1-terc-butoxicarbonil-4-[terc- butoxicarbonil-[2-(terc-butoxicarbonilamino)etil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrame- til-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 80, 170 mg, 0,26 mmol) em DCM (5 mL) à temperatura ambiente. Após uma hora, a solução foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em HCl aq 1 M (5 mL) e Et2O (5 mL). Ácido fenilborônico (63 mg, 0,52 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura foi diluída com Et2O e água e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 20 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 5% em MeOH (20 mL), dando origem a ácido (2S,4R)-4-(2-aminoetilamino)-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 28, 67 mg, 95% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 0,65 - 0,77 (2H, m), 1,11 - 1,24 (1H, m), 1,25 - 1,34 (1H, m), 1,34 - 1,42 (2H, m), 1,62 - 1,79 (2H, m), 1,97 - 2,06 (1H, m), 2,61 - 2,70 (1H, m), 2,72 - 2,84 (2H, m), 2,93 (3H, s), 3,30 - 3,41 (1H, m), 3,47 - 3,55 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 274.
Exemplo 29: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-metil-butanoil]-metil- amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 81: (2S,4R)-4-(terc-butoxicarbonilamino)pirrolidino-1,2- dicarboxilato de 1-benzila e 2-metila
[0305] Dicarbonato de di-terc-butila (6,27 g, 28,8 mmols) foi adicionado a uma solução de (2S,4R)-4-aminopirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1-benzila e 2-metila (5,00 g, 18,0 mmol) e trietilamina (5,00 mL, 35,9 mmols) em DCM (78 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura reacional foi diluída com DCM e lavada sequencialmente com HCl 0,5 M (aq), bicarbonato de sódio saturado e cloreto de sódio saturado. A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (DCM/MeOH), dando origem a (2S,4R)-4-(terc-butoxicarbonilamino)
pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1-benzila e 2-metila (Intermediário 81, 5,4 g, 79% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500MHz, DMSO- d6) δ 1,31 - 1,42 (9H, m), 1,99 - 2,23 (2H, m), 3,22 - 3,28 (1H, m), 3,52 - 3,65 (4H, m), 3,96 - 4,10 (1H, m), 4,30 - 4,48 (1H, m), 4,92 - 5,13 (2H, m), 7,18 - 7,41 (5H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 379. Intermediário 82: (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino- 1,2-dicarboxilato de 1-benzila e 2-metila
[0306] Hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral) (0,423 g, 12,3 mmols) foi adicionado em porções a uma solução de (2S,4R)-4-(terc- butoxicarbonilamino)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1-benzila e 2-metila (Intermediário 81, 3,20 g, 8,46 mmols) em DMF (33 mL) a 0°C. A mistura reacional foi agitada a 0°C durante uma hora antes de ser aquecida para a temperatura ambiente com agitação durante mais uma hora. Iodeto de metila (0,63 mL, 10,2 mmols) foi adicionado e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura reacional foi esfriada para 0°C e extinta com água. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e a suspensão foi diluída com DCM (200 mL). As camadas foram separadas, e a camada orgânica foi lavada sequencialmente com água (4 x 50 mL) e cloreto de sódio aquoso saturado (2 x 50 mL). A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura, dando origem a (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino-1,2- dicarboxilato de 1-benzila e 2-metila (Intermediário 82, 2,33 g, 70% de rendimento) como um óleo incolor que foi usado sem purificação adicional. 1 H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,25 - 1,47 (9H, m), 1,89 - 2,08 (1H, m), 2,31 - 2,46 (1H, m), 2,69 (3H, d), 3,22 - 3,39 (2H, m), 3,65 (4H, s), 4,22 - 4,49 (1H, m), 4,87 - 5,17 (2H, m), 7,18 - 7,46 (5H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ =
393.
Intermediário 83: (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino- 1,2-dicarboxilato de dibenzila
[0307] Uma solução de hidróxido de sódio (1,425 g, 35,62 mmols) em água (7,5 mL) foi adicionada a uma solução de (2S,4R)-4-[terc- butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de 1-benzila e 2- metila (Intermediário 82, 2,33 g, 5,94 mmols) em THF (15 mL) e MeOH (7,5 mL) a 0°C. A mistura reacional foi agitada durante 6 h com aquecimento lento para a temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e a camada aquosa foi acidificada para pH ~3 com HCl 5 M (aq) e extraída com DCM (4 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura, dando origem ao ácido carboxílico bruto como um sólido branco que foi usado sem purificação adicional.
[0308] Brometo de benzila (0,66 mL, 5,6 mmols) foi adicionado a uma solução do ácido carboxílico bruto, iodeto de sódio (1,11 g, 7,38 mmols) e K2CO3 (1,92 g, 13,9 mmols) em DMF (28 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 17 horas. A mistura reacional foi filtrada, e os sólidos foram enxaguados com EtOAc. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de dibenzila (Intermediário 83, 2,45 g, 94% de rendimento) como um óleo amarelo pálido. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,28 - 1,45 (9H, m), 1,98 (1H, s), 2,30 - 2,46 (1H, m), 2,64 - 2,71 (3H, m), 3,30 (1H, s), 3,51 - 3,76 (1H, m), 4,48 (1H, d), 4,53 - 4,75 (1H, m), 4,88 - 5,21 (4H, m), 7,18 - 7,42 (10H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 469. Intermediário 84: (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc- butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de dibenzila
[0309] (2S,4R)-4-[terc-butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino-1,2-
dicarboxilato de dibenzila (Intermediário 83, 2,45 g, 5,23 mmols) e brometo de crotila (0,81 mL, 7,8 mmols) foram dissolvidos em THF (18 mL) e a solução foi esfriada para -78°C sob uma atmosfera de N2. Uma solução de KHMDS (0,5 M em tolueno, 15,7 mL, 7,85 mmols) foi adicionada gota a gota à mistura reacional e a reação foi agitada durante 17 horas com aquecimento lento para a temperatura ambiente. A mistura reacional bruta foi extinta com água e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. A mistura bruta foi diluída em DCM e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água, seca em Na2SO4, filtrada e concentrada até à secura. O material bruto foi purificado por purificação em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc- butoxicarbonil(metil)amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de dibenzila (Intermediário 84, 2,10 g, 86% de rendimento) como um óleo amarelo e como uma mistura de diastereômeros, isômeros de olefina E/Z e rotâmeros. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,31 - 1,40 (9H, m), 1,46 - 1,68 (3H, m), 1,99 - 2,31 (2H, m), 2,40 - 2,47 (1H, m), 2,55 - 2,68 (3H, m), 2,69 - 3,00 (1H, m), 3,30 (1H, s), 3,51 - 3,77 (1H, m), 4,55 - 4,74 (1H, m), 4,79 - 5,21 (4H, m), 5,26 - 5,41 (1H, m), 5,42 - 5,71 (1H, m), 7,16 - 7,42 (10H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 523. Intermediário 85: (4R)-2-(but-2-enil)-4-(metilamino)pirrolidino-1,2- dicarboxilato de dibenzila
[0310] Ácido trifluoroacético (3,84 mL, 50,2 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de (4R)-2-(but-2-enil)-4-[terc-butoxicarbonil(metil) amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de dibenzila (Intermediário 84, 2,10 g, 4,02 mmols) em DCM (32 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante duas horas. A mistura reacional foi concentrada até à secura, dando origem ao sal de TFA de (4R)-2-(but-2-enil)-4-(metilamino) pirrolidino-1,2-dicarboxilato de dibenzila (Intermediário 85, 2,55 g, 100%
de rendimento) como um óleo incolor que foi usado sem purificação. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1,45 - 1,74 (3H, m), 2,14 - 2,33 (1H, m), 2,34 - 2,46 (1H, m), 2,57 - 2,65 (3H, m), 2,66 - 3,07 (1H, m), 3,15 - 3,56 (1H, m), 3,66 - 3,77 (1H, m), 3,81 - 4,13 (1H, m), 4,79 - 5,22 (4H, m), 5,26 - 5,73 (2H, m), 7,20 - 7,41 (10H, m), 8,62 - 8,87 (2H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 423. Intermediário 86: (4R)-2-(but-2-enil)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)- 3-metil-butanoil]-metil-amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de dibenzila
[0311] N,N-Di-isopropiletilamina (0,70 mL, 4,0 mmols) foi adicionado a uma solução de HATU (1,52, 4,02 mmols) e Boc-Val-OH (873 mg, 4,02 mmols) em DMF (15 mL) e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. Uma solução de sal de TFA de (4R)-2-(but-2-enil)-4- (metilamino)pirrolidino-1,2-dicarboxilato de dibenzila (Intermediário 85, 2,16 g, 4,02 mmols) em DMF (15 mL) e N,N-Di-isopropiletilamina (0,70 mL, 4,0 mmols) foram adicionados e a reação foi agitada à temperatura ambiente durante mais 17 horas. A mistura reacional foi concentrada e diretamente purificada por cromatografia em sílica gel (hexanos/EtOAc), dando origem a (4R)-2-(but-2-enil)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3- metil-butanoil]-metil-amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de dibenzila (Intermediário 86, 1,97 g, 79% de rendimento) como uma mistura de rotâmeros. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 0,61 - 0,92 (6H, m), 1,35 (9H, s l), 1,62 (3H, d l), 1,79 - 1,92 (1H, m), 2,03 - 2,33 (2H, m), 2,57 - 2,76 (2H, m), 2,76 - 3,00 (3H, m), 3,30 (1H, s), 3,49 - 3,77 (1H, m), 4,04 - 4,16 (1H, m), 4,78 - 5,20 (5H, m), 5,26 - 5,72 (2H, m), 6,72 - 7,03 (1H, m), 7,17 - 7,38 (10H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 622. Intermediário 87: (4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil- butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de dibenzila
[0312] Dicloreto de bis(1,5-ciclo-octadieno)di-irídio(I) (213 mg, 0,317 mmol) e bis(difenilfosfino)metano (244 mg, 0,635 mmol) foram adicionados a um balão de fundo redondo seco no forno. O balão reacional foi selado e purgado com N2. Os sólidos foram dissolvidos em DCM (8,9 mL) e 4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,01 mL, 6,97 mmols) foi lentamente adicionado à solução. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. (4R)-2-(But-2-enil)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3- metil-butanoil]-metil-amino]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de dibenzila (Intermediário 86, 1,97 g, 3,17 mmols) foi adicionado à reação como uma solução em DCM (5,9 mL) e a mistura reacional foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. A mistura reacional foi esfriada para 0°C e cuidadosamente extinta com MeOH e água. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas em Na2SO4, filtradas e concentradas até à secura. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia Flash em sílica (hexanos/EtOAc), dando origem a (4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)- 3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de dibenzila (Intermediário 87, 1,5 g, 63% de rendimento) como um óleo amarelo e como uma mistura de diastereômeros e rotâmeros. O material purificado foi sujeito a SFC quiral [coluna (S,S)Whelk-O1, 30 x 250 mm, 5 µm, Temperatura = 20°C, Fase móvel = 0-30% de MeOH:CO2, detecção UV @ 220 nm, carga = 31 mg/inj, conc = 125 mg/mL em MeOH, taxa de fluxo = 75 mL/min, Pressão na Descarga = 100 bar], dando origem a dois diastereômeros. A estereoquímica de cada diastereômero foi atribuída retrospectivamente com base na potência enzimática do Exemplo 29 e Exemplo 30 de modo a ser congruente com outros compostos exemplificados.
[0313] Intermediário 88 (Isômero 2, 280 mg): (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-
1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de dibenzila. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,51 - 0,70 (2H, m), 0,72 - 0,93 (6H, m), 1,14 (12H, s), 1,20 - 1,52 (13H, m), 1,67 - 2,31 (5H, m), 2,54 - 2,90 (3H, m), 3,33 - 3,48 (1H, m), 3,49 - 3,85 (1H, m), 4,01 - 4,18 (1H, m), 4,71 - 5,23 (5H, m), 6,71 - 7,07 (1H, m), 7,19 - 7,33 (10H, m).
[0314] Intermediário 89 (Isômero 1, 590 mg): (2S,4R)-4-[[(2S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil- 1 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2-dicarboxilato de dibenzila. H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,49 - 0,72 (2H, m), 0,73 - 0,90 (6H, m), 1,15 (12H, s), 1,34 (13H, s l), 1,59 - 2,34 (5H, m), 2,94 (3H, s l), 3,30 (1H, s), 3,63 - 3,76 (1H, m), 3,96 - 4,17 (1H, m), 4,75 - 5,18 (5H, m), 6,71 - 7,05 (1H, m), 7,17 - 7,41 (10H, m). Intermediário 90: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3- metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil]pirrolidino-2-carboxílico
[0315] Pd/C (10% p, 99 mg, 0,093 mmol) foi adicionado a uma solução de (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil- amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2- dicarboxilato de dibenzila (Intermediário 88, 280 mg, 0,37 mmol) em EtOAc (1,8 mL). O balão reacional foi equipado com um balão de H 2 e a suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura reacional foi diluída com MeOH e filtrada através de terra diatomácea. O filtrado foi concentrado até à secura, dando origem a ácido (2R,4R)-4- [[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 90, 180 mg, 92% de rendimento) como um sólido branco que foi usado sem purificação adicional. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,59 - 0,69 (2H, m), 0,74 - 0,87 (6H, m), 1,16 (12H, s), 1,22 - 1,30 (3H, m),
1,35 (9H, s), 1,49 - 1,65 (1H, m), 1,65 - 1,82 (1H, m), 1,82 - 1,95 (2H, m), 2,15 - 2,26 (1H, m), 2,63 - 2,91 (3H, m), 2,92 - 3,21 (3H, m), 4,05 - 4,22 (1H, m), 4,80 - 5,16 (1H, m), 6,76 (1H, s), 7,56 - 8,05 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 526. Exemplo 29: ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-metil-butanoil]-metil- amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0316] Ácido trifluoroacético (0,53 mL, 6,9 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 90, 180 mg, 0,34 mmol) em DCM (10 mL) à temperatura ambiente. Após uma hora, a solução foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em HCl aq 1 M (5 mL) e Et2O (5 mL). Ácido fenilborônico (84 mg, 0,69 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura foi diluída com Et2O e água e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 60 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 5% em MeOH (60 mL), dando origem a ácido (2R,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-(4-boronobutil) pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 29, 98 mg, 86% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 0,72 - 0,83 (2H, m), 0,85 - 1,01 (6H, m), 1,10 - 1,45 (4H, m), 1,61 - 1,84 (1H, m), 1,85 - 2,03 (2H, m), 2,19 - 2,34 (1H, m), 2,34 - 2,49 (1H, m), 3,00 (3H, s), 3,16 - 3,51 (2H, m), 3,76 - 3,96 (1H, m), 4,95 - 5,10 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 344.
Exemplo 30: ácido (2S,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-metil-butanoil]-metil- amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico Intermediário 91: ácido (2S,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3- metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil]pirrolidino-2-carboxílico
[0317] Pd/C (10% p, 209 mg, 0,196 mmol) foi adicionado a uma solução de (2S,4R)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil- amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-1,2- dicarboxilato de dibenzila (Intermediário 89, 590 mg, 0,79 mmol) em EtOAc (4 mL). O balão reacional foi equipado com um balão de H2 e a suspensão foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com MeOH e filtrada através de terra diatomácea. O filtrado foi concentrado até à secura, dando origem a ácido (2S,4R)-4-[[(2S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 91, 397 mg, 96% de rendimento) como um sólido branco que foi usado sem purificação adicional. 1H RMN (500MHz, DMSO-d6) δ 0,58 - 0,67 (2H, m), 0,73 - 0,87 (6H, m), 1,16 (12H, s), 1,22 - 1,31 (3H, m), 1,35 (9H, s), 1,51 - 1,67 (1H, m), 1,68 - 1,95 (3H, m), 2,28 - 2,37 (2H, m), 2,95 (4H, s), 4,05 - 4,20 (1H, m), 4,66 - 4,79 (1H, m), 6,65 - 6,90 (1H, m), 7,85 - 8,15 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 526. Exemplo 30: ácido (2S,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-metil-butanoil]-metil- amino]-2-(4-boronobutil)pirrolidino-2-carboxílico
[0318] Ácido trifluoroacético (1,17 mL, 15,2 mmols) foi adicionado gota a gota a uma solução agitada de ácido (2S,4R)-4-[[(2S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pirrolidino-2-carboxílico (Intermediário 91, 397 mg, 0,755 mmol) em DCM (10 mL) à temperatura ambiente. Após uma hora, a solução foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em HCl aq 1 M (5 mL) e Et2O (5 mL). Ácido fenilborônico (186 mg, 1,52 mmol) foi adicionado e a solução bifásica límpida foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura foi diluída com Et2O e água e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi lavada com Et2O. A camada aquosa foi liofilizada e purificada por cromatografia de troca iônica (coluna PoraPak Rxn CX 60 cc). O produto desejado eluiu da coluna usando amônia 5% em MeOH (60 mL), dando origem a ácido (2S,4R)-4-[[(2S)-2-amino-3-metil-butanoil]-metil-amino]-2-(4-boronobutil) pirrolidino-2-carboxílico (Exemplo 30, 163 mg, 92% de rendimento) como um sólido branco. 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 0,68 - 0,78 (2H, m), 0,83 - 0,94 (6H, m), 1,10 - 1,41 (4H, m), 1,66 - 2,13 (4H, m), 2,49 - 2,68 (1H, m), 3,02 (3H, s), 3,22 - 3,30 (1H, m), 3,43 - 3,60 (1H, m), 3,70 - 3,88 (1H, m), 4,53 - 4,66 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 344. Exemplo 31: Atividade Biológica dos Exemplos 1 até 30
[0319] Os efeitos inibidores dos Exemplos 1 até 30 na atividade de Arginase 1 e Arginase 2 Humanas foram quantificados medindo a formação do grupo tiol a partir de tioarginina usando Arginase 1 ou Arginase 2 recombinante produzida a partir de E. coli. O grupo tiol foi detectado com reagente de Ellman, 5,5′-ditiobis(ácido 2-nitrobenzoico) (DTNB). O DTNB reage com o tiol, dando origem ao dissulfeto misto e ácido 2-nitro-5- tiobenzoico (TNB) que é quantificado pela absorvância do ânion (TNB2-) a 412 nm.
[0320] Os ensaios foram realizados em placas de 384 poços transparentes (Greiner cat nº: 781.101). Várias concentrações dos Exemplos 1 até 30 em 300 nL de DMSO foram distribuídas nas placas de ensaio usando um dispensador acústico Echo, imediatamente seguido de selagem das placas e centrifugação.
[0321] Duas pré-misturas foram preparadas a partir de reagentes descongelados imediatamente antes da adição às placas de ensaio. A pré- mistura um compreendeu Arginase 1 humana ou Arginase 2 humana, a uma concentração final de 5 nM e DTNB 0,5 mM em tampão de ensaio, HEPES 45 mM pH 7,5, Brij 35, 0,045% (p/v) e MnCl2 100 µM. A pré-mistura dois compreendeu tioarginina 0,5 mM descongelada de fresco em tampão de ensaio. Quinze microlitros da pré-mistura um foram distribuídos nas placas de ensaio contendo os Exemplos 1 até 30, centrifugados e incubados durante 30 minutos à temperatura ambiente antes da adição de quinze microlitros da pré- mistura dois.
[0322] As placas de ensaio foram centrifugadas antes da leitura da absorvância a 412 nm em um leitor de placas de múltiplos modos Pherastar para recolher dados no instante 0 (T0). As placas foram incubadas à temperatura ambiente durante 60 min antes de nova leitura para recolher dados no instante 1 (T1). Os dados são derivados subtraindo o sinal A412 medido em T0 (instante 0) do medido em T1 (instante 1). Os dados foram transformados na % do efeito usando a equação: % do efeito do Composto = 100*[(X-mín)/(máx-mín)], em que X representa o valor normalizado para o composto com base no controle de inibição Mín (veículo) e Máx (composto de referência).
[0323] A concentração dos Exemplos 1 até 30 que inibiu a atividade em 50% (isto é, o IC50) foi calculada representando graficamente a % do efeito versus a concentração do composto de teste e ajustando os dados usando o algoritmo Genedata Screener Smart Fit. Os resultados destes ensaios são apresentados na Tabela 2:
Tabela 2
Enzima Arginase 1 Humana Enzima Arginase 2 Exemplo IC50 (µM) Humana IC50 (µM)
1 14,69 22,98 2 26,57 21,44 3 4,55 10,40 4 41,92 74,07 5 6,41 16,63 6 3,96 10,41 7 0,01 0,02 8 0,61 0,56 9 0,32 0,33 10 3,77 4,77 11 0,21 0,20 12 0,70 0,85 13 0,43 0,63 14 0,26 0,31 15 0,31 0,26 16 0,31 0,31 17 0,20 0,23 18 0,32 0,38 19 0,22 0,28 20 0,34 0,52 21 0,48 0,68 22 0,93 1,32 23 1,14 2,12 24 <0,003 0,01 25 10,80 24,55 26 0,06 0,15 27 1,43 3,32 28 0,09 0,19 29 5,27 9,28 30 1,35 2,42
Exemplo 32: Estudos de Biodisponibilidade
[0324] Os Exemplos 8, 9, e 13 até 20 são formas de pró-fármaco do Exemplo 7. O seguinte estudo farmacocinético foi realizado para demonstrar a biodisponibilidade do Exemplo 7 a partir do Exemplo 8. O Exemplo 8 foi formulado em solução salina 0,9% p/v pH 4 (ajustado com HCl 1 M) para dosagem IV. A formulação foi doseada a 2 mg/kg por cateter femoral em dois ratos machos cada (170– 250 g). Amostras de sangue em série do cateter da veia jugular foram recolhidas às 0,033, 0,083, 0,167, 0,5, 1, 2, 4, 8 e 24 h pós-dose. Para dosagem PO, o Exemplo 8 foi formulado em água desionizada pH 4 (ajustado com HCl 1 M) e doseado a 5 mg/kg por gavagem oral em dois ratos machos cada (170–250 g). Amostras de sangue em série foram recolhidas por cateter da veia jugular às 0,25, 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 8 e 24 h pós-dose. Amostras do plasma foram geradas a partir de sangue usando centrifugação a baixa velocidade. Um único conjunto de padrões de calibração contendo o Exemplo 7 e Exemplo 8 foi preparado por enriquecimento de plasma em branco. As amostras e padrões foram extraídos por precipitação com dois volumes de acetonitrila, seguido de centrifugação. Os resultados obtidos foram usados para determinar o Cl (mL/min/kg), Vdss (L/kg), Cmáx (μM), ADC (μM h), tmáx (h), e %F para o Exemplo 7 e Exemplo 8. A biodisponibilidade absoluta foi determinada comparando a ADC normalizada para a dose PO do Exemplo 7 quando doseado tal como no Exemplo 8, versus a ADC normalizada para a dose IV do Exemplo 7 quando doseado tal como no Exemplo 7. Quando apropriado, doses medidas e não nominais foram usadas para calcular a biodisponibilidade. De um modo análogo, o mesmo procedimento foi repetido para os Exemplos 9 e 13 até 20. Os resultados são apresentados nas Tabelas 3 até 12. Estes resultados indicam que a biodisponibilidade pode ser aumentada incorporando certas frações de aminoácidos como pró-fármacos.
Tabela 3
Exemplo 8 Exemplo 7 Cl (mL/min/kg) NV # 8,90 * Vdss (L/kg) NV # 0,26 * PO Cmáx (μM) NV # 3,60 # PO ADC (μM.h) NV # 10,40 # Tmáx (h) NV # 1,00 # %F NV # 33,00 # # valor observado quando doseado como pró-fármaco * Valor observado quando doseado como carga útil.
NV Nenhum valor relatável Tabela 4
Exemplo 9 Exemplo 7 # Cl (mL/min/kg) 33,30 8,90 * # Vdss (L/kg) 0,20 0,26 * PO Cmáx (μM) 0,60 # 5,70 #
PO ADC (μM.h) 0,24 # 16,80 #
# # Tmáx (h) 0,25 1,00 # # %F 3,20 59,00 # valor observado quando doseado como pró-fármaco * Valor observado quando doseado como carga útil.
NV Nenhum valor relatável Tabela 5 Exemplo 13 Exemplo 7 # Cl (mL/min/kg) 17,90 8,90 * # Vdss (L/kg) 0,20 0,26 * PO Cmáx (μM) 0,46 # 3,30 #
PO ADC (μM.h) 0,62 # 13,30 #
# # Tmáx (h) 0,50 1,25 # # %F 3,80 40,70 # valor observado quando doseado como pró-fármaco * Valor observado quando doseado como carga útil.
NV Nenhum valor relatável
Tabela 6
Exemplo 14 Exemplo 7 Cl (mL/min/kg) NV # 8,90 * Vdss (L/kg) NV # 0,26 * PO Cmáx (μM) NV # 3,80 #
PO ADC (μM.h) NV # 8,90 #
Tmáx (h) NV # 1,00 #
%F NV # 29,90 #
# valor observado quando doseado como pró-fármaco * Valor observado quando doseado como carga útil.
NV Nenhum valor relatável Tabela 7
Exemplo 15 Exemplo 7 # Cl (mL/min/kg) 104,00 8,90 * # Vdss (L/kg) 0,46 0,26 * PO Cmáx (μM) NV # 5,70 #
PO ADC (μM.h) NV # 15,60 #
Tmáx (h) NV # 1,00 #
%F NV # 57,10 #
# valor observado quando doseado como pró-fármaco * Valor observado quando doseado como carga útil.
NV Nenhum valor relatável Tabela 8
Exemplo 16 Exemplo 7 # Cl (mL/min/kg) 585,00 8,90 * # Vdss (L/kg) 7,41 0,26 * PO Cmáx (μM) NV # 1,60 #
PO ADC (μM.h) NV # 5,80 #
Tmáx (h) NV # 1,00 #
%F NV # 17,00 #
# valor observado quando doseado como pró-fármaco * Valor observado quando doseado como carga útil.
NV Nenhum valor relatável
Tabela 9
Exemplo 17 Exemplo 7 # Cl (mL/min/kg) 40,50 8,90 * # Vdss (L/kg) 0,36 0,26 * PO Cmáx (μM) 0,43 # 4,90 #
PO ADC (μM.h) 0,38 # 18,30 #
# # Tmáx (h) 0,38 1,50 # # %F 5,80 61,90 # valor observado quando doseado como pró-fármaco * Valor observado quando doseado como carga útil.
NV Nenhum valor relatável Tabela 10
Exemplo 18 Exemplo 7 # Cl (mL/min/kg) 317,00 8,90 * # Vdss (L/kg) 0,64 0,26 * PO Cmáx (μM) NV # 4,10 #
PO ADC (μM.h) NV # 13,10 #
Tmáx (h) NV # 1,50 #
%F NV # 45,70 #
# valor observado quando doseado como pró-fármaco * Valor observado quando doseado como carga útil.
NV Nenhum valor relatável Tabela 11
Exemplo 19 Exemplo 7 # Cl (mL/min/kg) 36,80 8,90 * # Vdss (L/kg) 0,20 0,26 * PO Cmáx (μM) 0,33 # 5,70 #
PO ADC (μM.h) 0,21 # 16,80 #
# # Tmáx (h) 0,25 1,00 %F 2,50 # 59,00 #
# valor observado quando doseado como pró-fármaco * Valor observado quando doseado como carga útil.
NV Nenhum valor relatável
Tabela 12
Exemplo 20 Exemplo 7 # Cl (mL/min/kg) 8,90 8,90 * # Vdss (L/kg) 0,29 0,26 *
PO Cmáx (μM) 1,80 # 2,20 #
PO ADC (μM.h) 6,90 # 12,20 #
# # Tmáx (h) 1,00 3,50 # # %F 25,50 59,00 # valor observado quando doseado como pró-fármaco * Valor observado quando doseado como carga útil.
NV Nenhum valor relatável
Claims (24)
1. Composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R1 (I) caracterizado pelo fato de que R1 é -NHR1a; R1a é -H ou -C(O)CH(R1b)NHR1c; e R1b é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR1d e R1c é -H; ou R1b e R1c, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5 membros; e R1d é H ou -CH3.
2. Composto de fórmula (II), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R2 (II) caracterizado pelo fato de que R2 é -OH ou -NHR2a; R2a é -H ou -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR2d e R2c é -H; ou
R2b e R2c, em conjunto com os átomos aos quais estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5 membros; e R2d é -H ou -CH3.
3. Composto de fórmula (III), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R3 (III) caracterizado pelo fato de que R3 é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e -CH2OR3a; e R3a é -H ou -CH3.
4. Composto de fórmula (IV), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: R4 (IV) caracterizado pelo fato de que R4 é -OH ou -NH2.
5. Composto, caracterizado pelo fato de ter a fórmula (V), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: NH2 (V).
6. Composto de fórmula (VI), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (VI) caracterizado pelo fato de que R6a é -H ou -CH3; R6b é -C(O)C(R6cR6d)NH2; ou -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OR6e; e R6c é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OR6f; R6d é H ou -CH3; e R6e e R6f são, independentemente, -H ou -CH3.
7. Composto de fórmula (VI), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável; caracterizado pelo fato de que R6a é -H ou -CH3; e R6b é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino; ou alternativamente, R6a é -H ou -CH3; R6b é -C(O)C(R6cR6d)NH2; R6c é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OH; e R6d é H ou -CH3.
8. Composto de fórmula (Ib), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (Ib) caracterizado pelo fato de que
R1 é -NHR1a; R1a é -H ou -C(O)CH(R1b)NHR1c; e R1b é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR1d e R1c é -H; ou R1b e R1c, em conjunto com o átomo ao qual estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5 membros; e R1d é H ou -CH3.
9. Composto de fórmula (IIb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (IIb) caracterizado pelo fato de que R2 é -OH ou -NHR2a; R2a é -H ou -C(O)CH(R2b)NHR2c; R2b é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e CH2OR2d e R2c é -H; ou R2b e R2c, em conjunto com os átomos aos quais estão ligados, formam um anel heterocíclico de 5 membros; e R2d é -H ou -CH3.
10. Composto de fórmula (IIIb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (IIIb)
caracterizado pelo fato de que R3 é selecionado de -H, -(C1-C4) alquila e -CH2OR3a; e R3a é -H ou -CH3.
11. Composto de fórmula (IVb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (IVb) caracterizado pelo fato de que R4 é -OH ou -NH2.
12. Composto, caracterizado pelo fato de ter a fórmula (Vb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (Vb).
13. Composto de fórmula (VIb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável: (VIb), caracterizado pelo fato de que R6a é -H ou -CH3; R6b é -C(O)C(R6cR6d)NH2; ou -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OR6e; e
R6c é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OR6f; R6d é H ou -CH3; e R6e e R6f são, independentemente, -H ou -CH3.
14. Composto de fórmula (VIb), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado pelo fato de que R6a é -H ou -CH3; e R6b é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino; ou alternativamente, R6a é -H ou -CH3; R6b é -C(O)C(R6cR6d)NH2; R6c é -(C1-C3) alquila que está substituída com 0 ou 1 amino ou -OH; e R6d é H ou -CH3.
15. Composto ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado pelo fato de ser de acordo com a Tabela 1.
16. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
17. Método de tratamento de câncer caracterizado pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
18. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de câncer.
19. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para uso no tratamento de câncer.
20. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento de câncer.
21. Método de tratamento de uma doença inflamatória respiratória caracterizado pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
22. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de uma doença inflamatória respiratória.
23. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para uso no tratamento de uma doença inflamatória respiratória.
24. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para uso no tratamento de uma doença inflamatória respiratória.
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