BR112020015723A2

BR112020015723A2 - Receptores de antígeno quiméricos que se ligam a ssea4 e usos dos mesmos

Info

Publication number: BR112020015723A2
Application number: BR112020015723-6A
Authority: BR
Inventors: Lan Bo Chen
Original assignee: Cho Pharma Usa, Inc.
Priority date: 2018-03-20
Filing date: 2019-03-19
Publication date: 2020-12-08
Also published as: IL274258B; IL274258A; TW202003049A; CA3078304A1; US20190290744A1; EP3678711A4; TWI817997B; AU2019239730A1; SG11202002994SA; US10751399B2; US20200338177A1; EP3678711A1; WO2019183025A1; KR20200135760A; US11628210B2; JP2021517450A; JP7378152B2; CN111629762A

Abstract

um ácido nucleico isolado que contém uma sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de seq id no: 3. o polipeptídeo de seq id no: 3 se liga especificamente ao antígeno embrionário específico de estágio 4 (ssea4). também é divulgada uma célula recombinante compreendendo o ácido nucleico isolado descrito acima, um vetor viral contendo o ácido nucleico isolado acima, e um polipeptídeo isolado incluindo a sequência de seq id no: 3. também é provido um receptor de antígeno quimérico (car) que inclui uma fv de cadeia única tendo a sequência de seq id no: 3 e se ligando especificamente a ssea4. além disso, é divulgado um método para o tratamento de um tumor pela transdução in vitro das células t de um indivíduo tendo um tumor que expressa ssea4 com um vetor que codifica o car, expandindo as células t transduzidas, e infundindo as células t transduzidas expandidas para o indivíduo, pelo qual uma resposta de células t antitumorais é aumentada.

Description

RECEPTORES DE ANTÍGENO QUIMÉRICOS QUE SE LIGAM A SSEA4 E

USOS DOS MESMOS ANTECEDENTES

[001] A imunoterapia direcionada ao câncer, em comparação com a quimioterapia, mantém a promessa de não apenas uma melhor eficácia, tanto a curto como a longo prazo, mas também menos efeitos colaterais.

[002] Por exemplo, foram desenvolvidas vacinas anticâncer direcionadas a um antígeno de carboidrato específico de tumor, por exemplo, Globo H, antígeno embrionário específico de estágio 3 (“SSEA3”) e antígeno embrionário específico de estágio 4 (“SSEA4”) para estimular um sistema imunológico do próprio paciente para desenvolver anticorpos contra esses antígenos, o que leva a citotoxicidade celular dependente de anticorpo, fagocitose dependente de anticorpo, lise celular dependente de complemento, bem como efeitos citostáticos e/ou citotóxicos diretos.

[003] Essa abordagem geralmente perde eficácia ao longo do tempo como resultado de um ambiente inibitório no tumor. O ambiente inibitório impede que um anticorpo ou todos os anticorpos, células NK, macrófagos e complemento entrem no tumor.

[004] Recentemente, foram desenvolvidos receptores de antígeno quiméricos (“CARS”) para evitar os inconvenientes mencionados acima. Um CAR contém (i) um domínio extracelular que se liga ao antígeno do tumor e (ii) um ou mais domínios intracelulares que provêm sinais primários e cor estimuladores para as células T. As células T podem ser manipuladas in vitro para expressar CAR tendo um domínio extracelular de escolha.

[005] A abordagem do CAR provou ser eficaz, mas não sem efeitos colaterais graves. Por exemplo, a ativação de um grande número de células T que expressam o CAR causa a síndrome de liberação de citocinas. Essa síndrome, caracterizada por febre alta, hipotensão e hipóxia, pode resultar em falência de múltiplos órgãos e até morte.

[006] É necessário desenvolver terapias tumorais com base em CAR que sejam mais seguras e eficazes do que as atualmente em uso.

SUMÁRIO

[007] Para atender à necessidade discutida acima, é divulgado um ácido nucleico isolado que contém uma sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de SEQ ID NO: 3. O polipeptídeo de SEQ ID NO: 3 se liga especificamente ao antígeno embrionário específico de estágio 4 (SSEA4).

[008] Também é divulgada uma célula recombinante compreendendo o ácido nucleico isolado descrito acima, em que a célula recombinante expressa o polipeptídeo de SEQ ID NO: 2.

[009] Além disso, um vetor viral contendo o ácido nucleico isolado acima está dentro do escopo da invenção. O vetor viral é um vetor lentiviral, um vetor gama-retroviral ou um vetor viral adeno-associado.

[0010] Além disso, um polipeptídeo isolado incluindo a sequência de SEQ ID NO: 3. Novamente, o polipeptídeo isolado se liga especificamente a SSEM4.

[0011] Também é provido um receptor de antígeno quimérico (CAR) que inclui um Fv de cadeia única (scFv) tendo a sequência de SEQ ID NO: 3 e que se liga especificamente a

SSEA4, e um primeiro endodomínio de CD36 ou FceRIY

[0012] Finalmente, é divulgado um método para oO tratamento de um tumor em um indivíduo, o método incluindo as etapas de (1) obter células T de um indivíduo tendo um tumor; (ii) transdução das células T in vitro com um vetor que contém um ácido nucleico que codifica um CAR, incluindo um scFv que reconhece especificamente SSEA-4, pelo qual as células T transduzidas expressam o CAR; (iii) expansão das células T transduzidas in vitro; e (iv) infundir as células T transduzidas expandidas no indivíduo tendo um tumor, pelo qual é aumentada uma resposta de células T antitumorais. O scFv tem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e as células no tumor expressam SSEA4.

[0013] Os detalhes de uma ou mais modalidade(s) da invenção são apresentados na descrição e nos desenhos abaixo. Outro(a)s recursos, objetos e vantagens da invenção serão evidentes a partir da descrição e das reivindicações.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0014] A descrição abaixo refere-se aos desenhos anexos, dos quais: A Fig. 1 é um gráfico de barras da percentagem de lise de células alvo pelas células T efetoras indicadas em diferentes razões de efetor-alvo; A Fig. 2A é um gráfico de barras que mostra a quantidade de IL-2 liberada pelas células T efetoras indicadas após co- cultivá-las com células MCF-7 alvo em diferentes razões de efetor-alvo; e A Fig. 2B é um gráfico de barras que mostra a quantidade de IFN-y liberada pelas células T efetoras indicadas após co-cultivá-las com células alvo MCF-7 em diferentes razões de efetor-alvo.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0015] Como mencionado acima, para atender à necessidade de desenvolver terapias tumorais com base em CAR, é provido um ácido nucleico isolado que inclui uma sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de SEQ ID NO: 3. O polipeptídeo de SEQ ID NO: 3 é um scFv que se liga especificamente a SSEA4. Em um exemplo particular, o ácido nucleico isolado tem a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1.

[0016] Também dentro do escopo da invenção está uma célula recombinante que contém o ácido nucleico isolado tendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1. A célula recombinante expressa o polipeptídeo de SEQ ID NO: 2, isto é, uma construção de CAR que inclui o scFv de SEQ ID NO: 3. A célula recombinante pode ser uma célula T, por exemplo, uma célula T CD4* ou CD8*. Outras células que podem ser usadas incluem NK, iNKT, monócitos, macrófagos, microglia, células dendríticas e neutrófilos.

[0017] O ácido nucleico isolado que inclui “uma sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de SEQ ID NO: 3, por exemplo, uma construção de CAR, pode estar contido dentro de um vetor viral.

[0018] Exemplos de vetores virais incluem um vetor lentiviral, um vetor gama-retroviral e um vetor viral adeno- associado. Os vetores virais baseados em lentivírus ou retrovírus gama são apresentados em Dai et al. 2016, J. Natl. Cancer Inst. 108:1-14 (“Dai et al.”); Jin et al. 2016, EMBO Mol. Med. 8:702-711; Liechtenstein et al. 2013, Cancers 5:815-837; e Schonfeld et al. 2015, Mol. Therapy 23:330-338.

Esses vetores virais são usados para integrar o ácido nucleico que codifica o CAR no DNA genômico de células T para produzir expressão estável do CAR.

[0019] Em um exemplo particular, o vetor viral é um vetor lentiviral que inclui a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1.

[0020] Alternativamente, a construção do CAR pode ser incluída em um vetor que contém sequências para facilitar a integração genômica mediada por transposon nas células T do ácido nucleico que codifica o CAR, por exemplo, SEQ ID NO:

1. Exemplos desses vetores de expressão são os chamados vetores de expressão “PiggyBac” e “Bela Adormecida”. Ver Nakazawa et al. 2011, Mol. Ther. 19:2133-2143 e Maiti et al. 2013, J. Immunotherapy 36:112-123.

[0021] Em ainda outra alternativa, um vetor contendo a construção de CAR também contém sequências genômicas de ácido nucleico que flanqueiam a construção de CAR que permitem a inserção mediada por repetição palindrômica curta interespaçada regularmente agrupada (CRISPR) da construção de CAR no genoma das células T. Exemplos de construções de CRISPR para inserir o CAR no genoma podem ser encontrados, por exemplo, em Miura et al. 2018, Nature Protocols 13:195- 215 e He et al. 2016, Nucl. Acids Res. 44:1-14.

[0022] É ainda divulgado um polipeptídeo isolado contendo a sequência de SEQ ID NO: 3. O polipeptídeo isolado, um scFv, se liga especificamente a SSEA-4.

[0023] Adicionalmente, é provido um CAR que inclui um scFv que se liga especificamente ao antígeno embrionário específico de estágio 4. O scFv pode ter a sequência de SEQ ID NO: 3. O CAR inclui adicionalmente um primeiro endodomínio de CD36C ou FceRIf. Em um CAR de exemplo, o primeiro endodomínio é de CD3C.

[0024] O CAR também pode conter um segundo endodomínio. O segundo endodomínio pode ser, mas não está limitado a, um endodomínio de CD28, CD137, CD4, OX40 e ICOS. Se um segundo endodomínio estiver presente no CAR, o scFv é fundido ao segundo endodomínio e o segundo endodomínio é fundido ao primeiro endodomínio. Um exemplo particular de um CAR tem um segundo endodomínio de CD137. Em outro exemplo específico, o CAR tem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4.

[0025] Como mencionado acima, é provido um método de tratamento de tumores, incluindo, entre outros, a etapa de obtenção de células T de um indivíduo tendo um tumor e a etapa de transdução das células T in vitro com um vetor que contém um ácido nucleico que codifica um CAR, incluindo um scFv que reconhece especificamente o SSEA4.

[0026] Os procedimentos para obter células T são conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Kaiser et al. 2015, Cancer Gene Therapy 22:72-78 (“Kaiser et al.”). As células T podem ser células CD4*, CD8* ou NK. Em um método de exemplo, as células CD8* são obtidas do indivíduo.

[0027] As células T são transduzidas in vitro com o vetor de CAR descrito acima. A transdução de células T pode ser realizada por eletroporação, lipofecção, infecção lentiviral, infecção por retrovírus gama ou infecção por vírus adeno-associado, dependendo do tipo de vetor de CAR empregado.

[0028] Mais especificamente, se o vetor de CAR for um vetor de expressão baseado em PiggyBac, Bela Adormecida ou CRISPR, ele poderá ser transduzido nas células T por eletroporação ou lipofecção. Um vetor de expressão baseado em CRISPR é co-transfectado com um vetor que expressa um RNA guia complementar a uma sequência adjacente a um motivo adjacente ao protoespaçador em um sítio de inserção genômica pretendido nas células TT.

[0029] Se o vetor de CAR for baseado em vírus, as partículas virais são preparadas e usadas para infectar as células T.

[0030] O método de tratamento de tumores também inclui a etapa de expandir as células T transduzidas in vitro e a etapa de infusão das células T transduzidas expandidas no indivíduo tendo um tumor.

[0031] As células T transduzidas são expandidas in vitro, usando métodos conhecidos na técnica. Ver Kaiser et al. As células T expandidas são então infundidas em um lote ou em dois ou mais lotes no indivíduo tendo um tumor.

[0032] Em uma alternativa específica do método de tratamento de tumores, o método inclui adicionalmente uma etapa de pré-condicionamento que é realizada antes da etapa de infusão mencionada recentemente. A etapa de pré- condicionamento é realizada tratando o indivíduo com um fármaco que induz a linfodepleção. Exemplos desses fármacos incluem ciclofosfamida e fludarabina. Exemplos adicionais de fármacos podem ser encontrados em Dai et al. e Han et al. 2013, J. Hematol. Oncol. 6:47-53.

[0033] No método de tratamento de tumores, as células T transduzidas podem expressar adicionalmente o polipeptídeo de SEQ ID NO: 5, isto é, um domínio do receptor t do fator de crescimento epidérmico III-IV (EGFRt), além do CAR. Deste modo, as células T expandidas infundidas podem ser deletadas in vivo com um anticorpo receptor do fator de crescimento anti-epidérmico que se liga a EGFRt. Por exemplo, o cetuximab é administrado ao indivíduo para matar células T infundidas in vivo. Um ácido nucleico de exemplo que codifica o CAR juntamente com EGFRt tem a sequência de ácidos nucleicos de SEQ ID NO: 1.

[0034] O método descrito acima pode ser usado para tratar um tumor que contém células que expressam SSEA4. Os tumores que podem ser tratados incluem, mas não são limitados a tumores, de mama, cólon, gastrointestinal, de rim, de pulmão, de fígado, ovariano, pancreático, retal, de estômago, testicular, tímico, cervical, de próstata, de bexiga, de pele, nasofaríngeo, de esôfago, oral, de cabeça e pescoço, de osso, de cartilagem, de músculo, de linfonodo, de medula óssea e de cérebro.

[0035] Sem mais elaboração, acredita-se que um técnico no assunto possa, com base na divulgação dessa invenção, utilizar a presente divulgação em toda a sua extensão. Os exemplos específicos a seguir devem, portanto, ser interpretados como meramente descritivos, e não limitativos do restante da divulgação de qualquer maneira. Todas as publicações e todos os documentos de patentes citados nessa invenção são incorporados por referência na sua totalidade.

EXEMPLOS Exemplo 1: Produção de um lentivírus contendo uma construção de CAR anti-SSEA4 Construção do vetor lentiviral que codifica um CAR anti- SSEA4

[0036] Uma construção lentiviral foi preparada em E. coli usando técnicas padrão de DNA recombinante e verificada por sequenciamento de DNA. Mais especificamente, um ácido nucleico que codifica um scFv tendo a sequência de SEQ ID NO: 3 foi clonado em um vetor de plasmídeo lentiviral a jusante de um promotor alfa do EF-l e uma sequência de codificação de peptídeo sinal e a montante de uma sequência de codificação de dobradiça CD8 para criar um cassete de CAR. O cassete de CAR também codifica um domínio transmembranar de CD8, um domínio de sinalização intracelular de CD137, um endodomínio CD3C, um peptídeo auto- clivante T2A de Thosea asigna e um domínio de EGFRt III-IV. O cassete de CAR tem a sequência de ácidos nucleicos de SEQ ID NO: 1. O vetor de plasmídeo lentiviral contém sequências adicionais para facilitar a produção de partículas de lentivírus.

Acondicionamento e produção de lentivírus

[0037] O acondicionamento e a produção de lentivírus foram realizados usando técnicas estabelecidas. As células de acondicionamento, isto é, células 293T, foram plaqueadas em 5 x 10º células em 10 mL de um meio de cultura completo em uma placa de cultura de 10 cm. As células foram incubadas durante a noite a 37ºC em CO; a 5%. Um complexo de transfecção foi preparado combinando em PBS um reagente de transfecção, o vetor lentiviral descrito acima, um vetor de acondicionamento e um vetor envelope. O complexo de transfecção foi adicionado à placa de cultura contendo as células de acondicionamento e as células foram incubadas por 6 a 8 ha 37ºC em COra 5%. O meio foi substituído e as células foram incubadas por 24 h. O meio de cultura foi coletado e substituído por meio fresco. Essa incubação de 24 horas e a coleta do meio foram repetidas duas vezes. Todo o meio coletado foi combinado e passado através de um filtro de 0,45 um. O filtrado foi centrifugado a 50000 x g por 2 h para sedimentar as partículas de lentivírus. Os estoques de lentivírus foram colocados em suspensão em PBS e armazenados a -80 ºC.

Titulação do lentivírus

[0038] Os títulos de lentivírus foram determinados medindo a quantidade de DNA lentiviral integrado no genoma das células infectadas. As células 293T foram plaqueadas em placas de 24 poços a uma densidade de 50000 células/poço e incubadas durante a noite. Estoques de lentivírus concentrados foram adicionados a cada poço juntamente com polibreno a uma concentração de 6 ug/mL. A placa foi centrifugada brevemente e depois colocada em uma incubadora a 37ºC com COrz a 5% por 72 horas. O DNA genômico das células transduzidas por lentivírus foi extraído com um kit comercial.

[0039] A PCR quantitativa em tempo real (RT-QPCR) foi usada para determinar o número de cópias do DNA lentiviral presente no DNA genômico extraído. O gene da albumina também foi medido para normalizar os resultados. Os iniciadores e as sondas usados para RT-QPCR são mostrados na Tabela 1 abaixo.

Tabela 1. Iniciadores e sondas de RT-QPCR [Er [rama | 6 Sonda — de | CACGTGGCCCGAGAGCTGCATC TR? (5' -FAM-BHQ1-3") [BE erre | 9 Sonda — de | CCTGTCATGCCCACACAAATCTCTCC (5' -=FAM- 11 ALBº BHQ1-3') *ºLTR = repetição terminal longa. Estes iniciadores amplificam especificamente sequências lentivirais.

PALB = albumina. Esses iniciadores amplificam especificamente o gene da albumina.

[0040] As curvas padrão foram construídas através da amplificação de quantidades conhecidas de DNAs de plasmídeos portando as sequências do gene da albumina ou LTR usando os iniciadores de RT-QPCR descritos acima. O número de cópias do DNA lentiviral no DNA genômico foi calculado como a razão da quantidade de sequências de LTR dividida pela quantidade de sequências de albumina.

[0041] O título do lentivírus foi então calculado usando a seguinte fórmula: Título do lentivírus = número de células plaqueadas x número de cópias de lentivírus por célula volume de estoque de lentivírus adicionado

[0042] Uma preparação de exemplo de lentivírus continha 2,6 x 10º unidades de transdução/mL Exemplo 2: Preparação de células T de CAR anti-SSEA4

[0043] As células T que expressam CAR anti-SSEA4 foram produzidas usando técnicas estabelecidas. Primeiro, as células mononucleares do sangue periférico (PBMC) foram isoladas do sangue total com tubos de separação de sangue padrão e as células recolocadas em suspensão em meio de cultura completo. As células T foram isoladas das PBMC usando uma técnica padrão de separação de grânulos magnéticos.

[0044] As células T isoladas foram dispensadas em uma placa de cultura de tecidos e o meio de crescimento suplementado com 200 UI/mL (12,2 ng/ml) de IL2, 10 ng/mL de IL7, 5 ng/ml de ILI5 e 5 ng/ml de IL21 foi adicionado de modo que a densidade celular fosse de 0,5 x 10º a 1 x 105º células/mL. A placa foi incubada a 37ºC em CO; a 5% por 3 dias. Uma preparação de lentivírus produzida como descrito acima no Exemplo 1 foi adicionada às células T, e também foi adicionado polibreno a uma concentração final de 6 ug/ml. A placa foi centrifugada a 800 x g por 1 hora em temperatura ambiente, e depois incubada por 5 dias a 37ºC em CO; a 5%. Durante os 5 dias de incubação, as células T foram mantidas a uma densidade celular de 0,5 x 10º células/mL. A porcentagem de células T que expressam o CAR anti-SSEA4 foi determinada por classificação de células ativadas por fluorescência usando um anticorpo contra o domínio de EGFR III-IV.

[0045] Em uma preparação de exemplo, 45,7% das células T expressaram o CAR anti-SSEA4.

Exemplo 3: Lise de células alvo MCF-7 por células efetoras T de CAR anti-SSEA4

[0046] A capacidade das células T de CAR anti-SSEA4 para lisar as células alvo foi avaliada por um ensaio de co- cultura. As células de câncer de mama MCF-7, que expressam SSEA-4, foram usadas como células alvo. 100 ul de células- alvo MCF-7 a 5 x 10º células/mL foram transferidas para cada poço de uma placa de 96 poços e cultivados durante a noite a 37ºC em CO; a 5%. As células efetoras, isto é, células T de CAR anti-SSEAM, células T não transduzidas, e células T transduzidas com um lentivírus de controle negativo, foram colocadas em suspensão em meio RPMI1l640 livre de soro. O meio de cultura da placa de 96 poços foi removido e as células alvo lavadas uma vez com PBS. As células T foram adicionadas em poços separados nas razões de efetor-alvo (E/T) de 1:1, 2:1, 5:1 e 10:1. O volume final de meio em cada poço foi ajustado para 100 pL/poço usando RPMI1640. A co-cultura foi incubada por 6 h a 37ºC em COza 5%.

[0047] Um kit comercial (ensaio de citotoxicidade não radioativa CytoTox 9660; Promega, WI EUA) foi usado para medir a lise das células MCF-7 alvo, determinando o nível de lactato desidrogenase (LDH) liberado dessas células após a lise. Após a co-cultura, a placa de 96 poços foi centrifugada a 1200 x gq por 5 min em temperatura ambiente, e 50uL de sobrenadante de cada poço foram transferidos para uma nova placa de 96 poços. O nível de LDH em cada sobrenadante foi determinado conforme indicado pelo fabricante. Determinados poços contendo apenas células alvo foram tratados com um tampão de lise antes da etapa de centrifugação. Os sobrenadantes desses poços foram usados para determinar a quantidade máxima de LDH liberada pelas células MCF-7. Os resultados são apresentados na figura 1.

[0048] Os dados mostram que as células T de CAR anti- SSEA4 lisam significativamente mais células MCF-7 alvo em todas as razões de E/T, em comparação com células T não transduzidas e células T transduzidas por lentivírus vazias.

Exemplo 4: Liberação de citocina por células T de CAR anti-SSEA4

[0049] As células T de CAR descritas acima foram co- cultivadas com a linha de células alvo MCF7 em placas de 96 poços em diferentes razões de E/T por 24 horas em meio RPMI1640 suplementado com FBS a 10% em COza 5% a 37ºC. Os meios de cultura foram colhidos para medir a liberação de citocinas pelas células T de CAR. Resumidamente, a placa de 96 poços foi centrifugada a 1200 x gq por 5 min em temperatura ambiente, após o que 50 ul de sobrenadante de cada poço foram transferidos para uma nova placa de 96 poços. A concentração de citocinas IL-2 e IFN-y foi determinada usando um kit ELISA comercial de acordo com as instruções do fabricante. Os resultados são mostrados nas Figuras 2A e 2B. Os dados mostram que as células T de CAR específicas para SSEA4 secretaram robustamente IL-2 e IFN-y após o engajamento de células tumorais alvo e esse nível de secreção foi significativamente maior do que as células T não transduzidas ou células T transduzidas com um lentivírus sem a construção de CAR.

OUTRAS MODALIDADES

[0050] Todos os recursos divulgados nesse relatório descritivo podem ser combinados em qualquer combinação. Cada recurso divulgado nesse relatório descritivo pode ser substituído por um recurso alternativo que serve ao mesmo, equivalente ou similar objetivo. Salvo indicação expressa em contrário, cada recurso divulgado é apenas um exemplo de uma série genérica de recursos equivalentes ou similares.

[0051] A partir da descrição acima, um técnico no assunto pode determinar facilmente as características essenciais da presente invenção e, sem se afastar do espírito e do escopo, pode fazer várias alterações e modificações da invenção para adaptá-la a vários usos e condições. Assim, outras modalidades também estão dentro do escopo das reivindicações a seguir.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Ácido nucleico isolado, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica o polipeptídeo de SEQ ID NO: 3.

2. Ácido nucleico isolado, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos é SEQ ID NO: 1.

3. Célula recombinante, caracterizada pelo fato de que compreende o ácido nucleico isolado, conforme definido na reivindicação 2, em que a célula recombinante expressa o polipeptídeo de SEQ ID NO: 2.

4. Célula recombinante, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que a célula é uma célula T.

5. Vetor viral, caracterizado pelo fato de que compreende o ácido nucleico isolado, conforme definido na reivindicação 1, em que o vetor viral é um vetor lentiviral, um vetor retroviral gama ou um vetor viral adeno-associado.

6. Vetor viral, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos é SEQ ID NO: 1.

7. Polipeptídeo isolado, caracterizado pelo fato de que compreende a sequência de SEQ ID NO: 3, em que o polipeptídeo isolado se liga especificamente ao antígeno embrionário específico de estágio 4.

8. Receptor de antígeno quimérico, caracterizado pelo fato de que compreende um Fv de cadeia única (scFv) que se liga especificamente ao antígeno embrionário específico de estágio 4, e um primeiro endodomínio de CD36 ou FceRIY, em que o scFv tem a sequência de SEQ ID NO: 3.

9. Receptor de antígeno quimérico, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente um segundo endodomínio de CD28, CD137, CDA4, OX40 ou ICOS, em que o scFv é fundido ao segundo endodomínio e o segundo endodomínio é fundido ao primeiro endodomínio.

10. Receptor de antígeno quimérico, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o receptor de antígeno quimérico tem a sequência de SEQ ID NO: 4.

11. Método para tratamento de um tumor em um indivíduo, o método caracterizado pelo fato de que compreende: obter células T de um indivíduo tendo um tumor; transdução das células T in vitro com um vetor que contém um ácido nucleico que codifica um receptor de antígeno quimérico (CAR) incluindo um scFv que reconhece especificamente o antígeno embrionário específico de estágio 4 (SSEA4), pelo qual as células T transduzidas expressam o CAR; expandir as células T transduzidas in vitro; e infusão das células T transduzidas expandidas no indivíduo tendo um tumor, pelo qual uma resposta de célula T antitumoral é aumentada, em que o scFv tem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e as células no tumor expressam SSEA4.

12. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o CAR tem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4.

13. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o vetor é um lentivírus, um retrovírus gama ou um vírus adeno-associado.

14. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o tumor é um tumor de mama,

de cólon, gastrointestinal, de rim, de pulmão, de fígado, ovariano, pancreático, retal, de estômago, testicular, tímico, cervical, de próstata, de bexiga, de pele, nasofaringeal, de esôfago, oral, de cabeça e pescoço, de osso, de cartilagem, de músculo, de linfonodo, de medula óssea ou de cérebro.

15. Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que as células T transduzidas expressam adicionalmente o polipeptídeo de SEQ ID NO: 5, em que as células T expandidas infundidas podem ser excluídas in vivo com um anticorpo receptor do fator de crescimento anti-epidérmico.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o CAR tem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4.

17. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o ácido nucleico tem a sequência de SEQ ID NO: 1.

18. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o tumor é um tumor de mama, de cólon, gastrointestinal, de rim, de pulmão, de fígado, ovariano, pancreático, retal, de estômago, testicular, tímico, cervical, de próstata, de bexiga, de pele, nasofaringeal, de esôfago, oral, de cabeça e pescoço, de osso, de cartilagem, de músculo, de linfonodo, de medula óssea ou de cérebro.

19. Método, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que o tumor é um tumor de mama, de cólon, gastrointestinal, de rim, de pulmão, de fígado, ovariano, pancreático, retal, de estômago, testicular,

tímico, cervical, de próstata, de bexiga, de pele, nasofaringeal, de esôfago, oral, de cabeça e pescoço, de osso, de cartilagem, de músculo, de linfonodo, de medula óssea ou de cérebro.

20. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o tumor é um tumor de mama, de cólon, gastrointestinal, de rim, de pulmão, de fígado, ovariano, Ppancreático, retal, de estômago, testicular, tímico, cervical, de próstata, de bexiga, de pele, nasofaringeal, de esôfago, oral, de cabeça e pescoço, de osso, de cartilagem, de músculo, de linfonodo, de medula óssea ou de cérebro.