BR112020003743A2

BR112020003743A2 - composições anestésicas de liberação sustentada e métodos de preparação dos mesmos

Info

Publication number: BR112020003743A2
Application number: BR112020003743-5A
Authority: BR
Inventors: Keelung Hong; Hao-Wen Kao; Yi-Yu Lin; Luke S.S. GUO
Original assignee: Tlc Biopharmaceuticals, Inc.; Taiwan Liposome Co., Ltd.
Priority date: 2017-08-28
Filing date: 2018-08-28
Publication date: 2020-09-01
Also published as: EP3675816A1; MX2020002231A; US20240000764A1; PL3675816T3; PT3675816T; LT3675816T; AU2018323436A1; JP2020531540A; CY1126137T1; TW201919598A; JP7173615B2; RS64297B1; CA3073734A1; CN111182889A; HUE062202T2; SI3675816T1; EP3675816B1; AU2023266253A1; US20200188374A1; AU2018323436B2

Abstract

  É fornecida uma composição anestésica para administrar localmente um anestésico tipo amida em um indivíduo em necessidade do mesmo. A composição anestésica possui vesículas multilamelares com anestésico tipo amida aprisionado preparado hidratando-se uma estrutura lipídica altamente aprisionada compreendendo um anestésico tipo amida e uma mistura lipídica com uma solução tampão aquosa a um pH superior a 5,5. Também é fornecido um método para preparar uma composição anestésica usando um processo mais simples e mais viável para fabricação em larga escala e para fornecer uma alta razão molar de anestésico tipo amida para conteúdo fosfolipídico em comparação com a técnica anterior. Esta composição anestésica tem uma duração prolongada de eficácia adaptada para administração de fármaco.

Description

“COMPOSIÇÕES ANESTÉSICAS DE LIBERAÇÃO SUSTENTADA E MÉTODOS DE PREPARAÇÃO DOS MESMOS”

[0001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade ao Pedido Provisório dos EUA Nº 62/550,983, depositado em 28 de agosto de 2017, e Pedido Provisório dos EUA Nº 62/621,730, depositado em 25 de janeiro de 2018, cada um dos quais é incorporado por referência em sua totalidade.

FUNDAMENTOS Campo da Técnica

[0002] A presente invenção refere-se a um sistema de administração de fármaco para liberação de um método de preparar de liberação sustentada. A presente invenção refere-se a um método de preparar o sistema de liberação por arraste. A presente invenção também refere-se a uma composição farmacêutica de liberação sustentada adaptada a um sistema de administração de fármaco, que tem uma duração prolongada de eficácia.

Descrição da Técnica Relacionada

[0003] Várias abordagens para desenvolvimento anestésicos locais de liberação sustentada foram relatadas, incluindo 1) preparar anestésicos locais lipossômicos multilamelares usando um método de desidratação-reidratação (Patente dos EUA Nº 6.926.905), 2) preparar anestésicos locais lipossômicos multivesiculares gigantes (GMV) usando um gradiente de sulfato de amônio, procedimento de carregamento (Patente dos EUA Nº 7.357.944), e 3) preparar anestésicos locais lipossômicos multivesiculares (MVL) usando um procedimento de água em óleo (Patente dos EUA Nº

8.182.835).

[0004] Para preparar anestésicos locais lipossômicos multilamelares pelo método de desidratação- reidratação, fosfolipídio e colesterol dissolvidos em terc- butanol são liofilizados e, em seguida, hidratados para formar vesículas multilamelares (MLVsS) e as MLVs são homogeneizadas para obter pequenas vesículas unilamelares (SUVS). Um anestésico local, por exemplo, bupivacaína é, em seguida, dissolvido na solução de SUV, seguido por liofilização, hidratação, e lavagem com solução salina hiperosmótica para remover bupivacaína livre.

[0005] Para preparar anestésicos locais lipossômicos de GMV, um filme lipídico fino é obtido dissolvendo-se lipídio em um solvente, removendo o solvente, e hidratando com uma solução de sulfato de amônio para formar as MLVsS. As MLVS são, em seguida, homogeneizadas para obtenção. As SUVs, que são congelados- descongelados para produzir GMVs. O meio lipossômico externo é substituído para criar um gradiente, um anestésico, por exemplo, bupivacaína, é carregado ativamente nas GMVs, e bupivacaína não encapsulada é removida.

[0006] Para preparar anestésicos locais de MVL, bupivacaína, por exemplo, é convertida em uma forma de sal adequado de modo que possa ser facilmente dissolvida em uma solução aquosa e, em seguida, a solução aquosa de bupivacaína é misturada com um componente lipídico em um solvente orgânico com turbulência mecânica para formar uma emulsão de água em óleo. A emulsão de água em óleo é, em seguida, dispersa em uma segunda fase aquosa para formar esférulas de solvente. Finalmente, um anestésico local de

MVL é obtido depois de remover o solvente orgânico.

[0007] Em 1991, Legros et al. (Patente dos EUA Nº 5.244.678) divulgou a preparação de bupivacaína lipossômica de MLV compreendendo L-a-fosfatidilcolina (EPC) e colesterol em uma razão molar de 4:3. Posteriormente, esse grupo divulgou a preparação de anestésicos lipossômicos fazendo um filme lipídico composto de FPC e um anestésico apolar, seguido por hidratação do filme lipídico com um tampão controlado por pH em que o anestésico apolar permanece em uma forma não carregada (Patente dos EUA Nº

6.149.937). Por exemplo, na preparação da bupivacaína lipossômica, o filme lipídico é preferencialmente hidratado com um tampão de pH 8,1 (o pKa de bupivacaína é 8,1), que mantém 50 % da bupivacaína em uma forma não carregada. Legros et al. também divulgou um processo para preparar composições de fármaco anfifílico encapsulados em lipossomo seco congelado (WO1997042936), que são obtidas produzindo- se um filme fino compreendendo componentes lipídicos e uma composição de fármaco anfofílico, particularmente bupivacaína, hidratando o filme fino com uma solução tampão de pH 8,1 para formar bupivacaína encapsulada em lipossomo, secagem por congelamento a bupivacaína encapsulada em lipossomo junto com o sorbitol como um estabilizador de membrana e, em seguida, reidratar antes de usar para obter bupivacaína lipossômica de MLV.

[0008] Alguns dos exemplos acima mencionados da técnica anterior não conseguem alcançar alto aprisionamento de um fármaco, isto é, uma razão de lipídio para fármaco alta. Ainda que alguns dos exemplos da técnica anterior ilustram uma formulação com uma suposta razão de lipídio para fármaco alta, fabricar essas formulações envolve procedimentos tediosos e altos custos de produção. Existe, portanto, uma necessidade não atendida de processos de fabricação melhorados e simplificados para fabricar anestésicos locais lipossômicos de liberação sustentada.

SUMÁRIO

[0009] A presente invenção fornece um método de preparação de liberação sustentada usando liofilização em uma etapa para obter uma estrutura lipídica altamente aprisionada (HELS) compreendendo um anestésico local e uma mistura lipídica incluindo um ou mais fosfolipídios e/ou colesterol e, em seguida, hidratar a HELS com uma solução tampão controlada por pH para formar as vesículas multilamelares (MLV) com anestésico local aprisionado e opcionalmente anestésico local não aprisionado. Esse método de preparação de liberação sustentada fornece um início rápido de anestesia e uma duração prolongada de anestesia local com toxicidade mínima. Em algumas modalidades, o anestésico local é um anestésico tipo amida.

[0010] Um anestésico local exemplificativo de acordo com a presente invenção é um anestésico tipo amida, como ropivacaína. Outros anestésicos locais que podem ser usados incluem lidocaína, bupivacaína, e levobupivacaína. Em algumas modalidades, a HELS de acordo com a presente invenção é preparada dissolvendo-se ropivacaína apolar, fosfolipídico, e colesterol em um sistema solvente, por exemplo, terc-butanol sozinho ou um co-solvente de terc- butanol/água, seguido pela remoção do sistema solvente usando uma técnica de liofilização. Em algumas modalidades, uma composição de ropivacaína é formada hidratando-se a

HELS com uma solução tampão farmaceuticamente aceitável a um pH superior a 5,5. A ropivacaína teoricamente não carregada é 0,8 % de ropivacaína disponível a pH 6,0 com base no cálculo de pKa (o pKa de ropivacaína é 8,1). Entretanto, quando um tampão de pH 6,0 é selecionado como uma solução de hidratação, a eficiência da associação (AE) da composição anestésica resultante é maior do que 64 &%, que demonstra que a porcentagem de anestésico não carregado tipo amida não contribui de forma crítica para a AE.

[0011] O valor de pH de uma solução tampão farmaceuticamente aceitável pode não obstante ser selecionado para ajustar a razão de anestésico aprisionado para anestésico não aprisionado nas MLVs de uma composição anestésica. Em certas modalidades, a razão molar de anestésico tipo amida para fosfolipídio (MOl fármaco ' MOlfosfo1ipiadio) na MLV com anestésico tipo amida aprisionado da composição anestésica é pelo menos 0,5:1, e pode fornecer uma quantidade suficiente do anestésico tipo amida a um indivíduo em necessidade dos mesmos para prolongar a duração da anestesia após a administração local in vivo. Além disso, limitar a quantidade de anestésico não aprisionado tipo amida pode obter início rápido da anestesia com plasma máximo minimizado, exposição da concentração (Cnax)-

[0012] Outros objetivos, vantagens e novos recursos da invenção se tornarão mais evidentes a partir da descrição detalhada a seguir, quando tomados em conjunto com os desenhos anexos.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0013] A Figura 1 é um gráfico que mostra a concentração plasmática de ropivacaína em ratos após a injeção subcutânea (SC) de uma composição de ropivacaína (hidratada com uma solução de histidina de pH 5,5, quadrado fechado; hidratada com uma solução de histidina de pH 6,0, triângulo fechado; e hidratada com uma solução de histidina de pH 6,5, círculo fechado) ou após a injeção SC de ropivacaína não formulada (diamante aberto) (todos os dados são mostrados como média + de desvio padrão(SD));

[0014] As Figuras 2A e 2B são uma série de gráficos que representam o efeito após a administração SC de uma composição de ropivacaína (círculo), ropivacaína (quadrado) e veículo (triângulo) em limiares de retirada da pata de camundongo em estímulos mecânicos (todos os dados são mostrados como erro padrão médio da média (SEM)); A Figura 2A é uma representação gráfica de tempo versus oO limiar de retirada (g); A Figura 2B é uma representação gráfica de tempo versus a mudança em limiar mecânico (%); e

[0015] As Figuras 3A e 3B são uma série de gráficos que representam o efeito anestésico com o passar do tempo após a injeção intracutânea única (IC) de uma composição de ropivacaína em comparação com à mesma dosagem de ropivacaína (todos os dados são mostrados como média t+ SEM); A Figura 3A ilustra o efeito anestésico no coorte de porquinho-da-índia dosado a 3,0 mg por pápula IC da composição de ropivacaína (quadrado fechado) ou ropivacaína (quadrado aberto); A Figura 3B ilustra o efeito anestésico no coorte de porquinho-da-índia dosado a 1,5 mg por pápula IC da composição de ropivacaína (triângulo fechado) ou ropivacaína (triângulo aberto).

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES PREFERÍVEIS

[0016] Conforme empregado acima e ao longo da divulgação, os seguintes termos, a menos que indicado de outra forma, devem ser entendidos como tendo os seguintes significados.

[0017] Como usado aqui, a forma singular “um”, “uma”, “o” e “a” incluem a referência plural a menos que o contexto indique claramente o contrário.

[0018] Todos os números aqui podem ser entendidos como modificados por “cerca de,” que, quando, referindo-se a um valor mensurável como uma quantidade, um duração temporal, e semelhantes, é significado abranger variações de + 10 %, preferencialmente + 5 &%, mais preferencialmente + 1 %, e ainda mais preferencialmente + 0,1 % a partir do valor especificado, como tais variações são apropriadas para obter uma quantidade desejada de fármaco, a menos que outro especificado.

[0019] “Eficiência da associação” (AE) representa a quantidade de substância de fármaco capturada pelas vesículas multilamelares (MLVSs) em uma composição anestésica e é calculada pela razão da quantidade de substância de fármaco aprisionada em MLVs para a quantidade de substância de fármaco na composição anestésica original. A MLV com fármaco aprisionado pode ser obtida pelos métodos conhecidos na técnica de acordo com as propriedades físicas da MLV e o conhecimento geral no campo da técnica. Preferencialmente, a MLV com substância de fármaco aprisionada pode ser obtida separando-se o fármaco não aproveitado de uma composição anestésica usando métodos de centrifugação, por exemplo, centrifugação tradicional,

centrifugação por gradiente de densidade, centrifugação diferencial, ou por métodos de filtração, por exemplo, diafiltração, filtração em gel, filtração por membrana.

Vesícula multilamelar

[0020] O termo “vesícula multilamelar (MLV)” ou “vesículas multilamelares (MLVs)” como usado aqui refere-se a uma partícula caracterizada por ter um espaço interior aquoso sequestrado de um meio externo por uma membrana de uma ou mais bicamadas formando uma vesícula As membranas bicamada de vesículas multilamelares são tipicamente formadas por lipídios, isto é, moléculas anfifílicas de origem sintética ou natural que compreendem domínios hidrofóbicos e hidrofílicos espacialmente separados. Em certas modalidades da presente invenção, uma vesícula multilamelar se forma por mais de uma camada de bicamada lipídica membrana.

[0021] Em geral, as membranas de bicamada do MLV compreendem uma mistura lipídica tipicamente incluindo lipídeos da cadeia dialifática, como fosfolipídios, diglicerídeos, glicolipídeos dialifáticos, lipídios únicos como esfingomielina e glicosfingolípido, esteróides como colesterol e derivados e combinações dos mesmos. Exemplos de fosfolípidos de acordo com a presente invenção incluem, mas não estão limitados, 1,2-dilauroil-sn-glicero-3- fosfocolina (DLPC), 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3- fosfocolina (DMPC), 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3- fosfocolina (DPPC), 1l-palmitoil-2-estearoil-sn-glicero-3- fosfocolina (PSPC), l1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3- fosfatidilcolina (POPC), 1,2-distearoil-sn-glicero-3- fosfocolina (DSPC), 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfocolina

(DOPC), fosfatidilcolina de soja hidrogenada (HSPC), 1,2- dimiristoil-glicero-3-fosfo-(1'" -rac-glicerol) (sal de sódio) (DMPG), 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfo-(1'-rac- glicerol) (sal de sódio) (DFPG), l-palmitoil-2-estearoil- sn-glicero-3-fosfo- (1' -rac-glicerol) (sal de sódio) (PSPG), 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfo-(1'-rac-glicerol) (sal de sódio) (DSPO), 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfo- (1' -rac- glicerol) (DOPG), 1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfo-L- serina (sal de sódio) (DMPS), 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3- fosfo-L-serina (sal de sódio) (DPPS), 1,2-distearoil-sn- glicero-3-fosfo-L-serina (sal de sódio) (DSPS), 1,2- dioleoil-sn-glicero-3-fosfo-L-serina (DOPS), 1,2- dimiristoil-sn-glicero-3-fosfato (sal de sódio) (DMPA), 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfato (sal de sódio) (DPPA), 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfato (sal de sódio) (DSPA), 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfato (sal de sódio) (DOPA), 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DPPE), 1- palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (POPE), 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DSPE), 1,2- dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (DOPE), 1,2- dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfo-(1'”-mio-inositol) (sal de amônio) (DPPI), 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfoinositol (sal de amônio) (DSPI), 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfo- (1º"-mio-inositol) (sal de amônio) (DOPI), cardiolipina, L- a-fosfatidilcolina (EPC), e L-a-fosfatidiletanolamina (EPE).

Anestésicos locais

[0022] O termo “anestésicos locais” refere-se a um ou mais grupos de substâncias que causam perda de sensação em uma área circunscrita de um sujeito causada por depressão da excitação nas terminações nervosas ou inibição do processo de condução nos nervos periféricos. Em algumas modalidades, os anestésicos locais são anestésicos do tipo amida. A estrutura anestésica típica do tipo amida contém uma parte lipofílica e uma parte hidrofílica que se conectam por uma ligação ------ NHCO ------ perto do centro da molécula. Anestésicos do tipo amida adequados incluem, mas não estão limitados a, lidocaína, bupivacaína, levobupivacaince ropivacaína, mepivacaína, pirrocaína, articaína e prilocaína. Em certas modalidades, o anestésico do tipo amida é a base de ropivacaína.

Estrutura lipídica altamente aprisionada

[0023] O termo “estrutura lipídica altamente aprisionada” (HELS) refere-se a uma massa liofilizada em fase sólida ou seco pó contendo uma mistura lipídica e um ou mais anestésicos tipo amida, que podem ser fabricados, armazenados a longo prazo para prolongar o prazo de validade da composição e hidratado imediatamente antes do uso clínico. A mistura lipídica descrita acima pode compreender um ou mais fosfolipídios sem colesterol ou pode compreender um ou mais fosfolipídios com uma porcentagem em mol de colesterol de não mais do que 50 % em relação à quantidade da mistura lipídica total. Alternativamente, a porcentagem em mol de colesterol na base da mistura lipídica é de cerca de O % a cerca de 50 %, e opcionalmente de cerca de 33 % a cerca de 40 %. Em algumas modalidades da presente invenção, o(s) fosfolipídio(s) e colesterol estão em uma razão molar de 1:1 a 3:1.

[0024] A HELS pode ser preparada por 1) dissolver uma mistura lipídica e um ou mais anestésicos tipo amida em um sistema solvente para formar uma estrutura líquida compreendendo um ou mais solventes para formar uma solução homogênea, e 2) remover os solventes para solidificar a formulação da mistura lipídica e o(s) anestésico(s) tipo amida. A remoção do solvente pode ser realizada usando técnicas conhecidas como secagem por congelamento (liofilização) ou secagem por pulverização. Exemplos de sistemas de solventes adequados para secagem por congelamento incluem, mas não são limitados a, sistemas de terc-butanol e co-solvente de terc-butanol/água com ou sem outros solventes não aquosos como acetona, acetonitrila, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, metanol, diclorometano, dimetil sulfóxido, e carbono tetracloreto. Exemplos de sistema de solventes adequado para secagem por pulverização incluem, mas não são limitados a, água, etanol, metanol, clorofórmio, diclorometano, éter dietílico, tetracloreto de carbono, acetato de etila, e dioxano.

Composição anestésica

[0025] O termo “composição anestésica” refere- se a um produto de vesícula multilamelar (MLV) adequado para administração local. Em certas modalidades, uma composição anestésica compreende uma estética do tipo amida e aprisionada por MLVs, bem como anestésico não aprisionado tipo amida. O termo “aprisionar” ou “aprisionamento” refere-se à membrana bicamada de MLVs encapsulando, incorporando, ou associando com uma substância de fármaco alvo. As MLVSs com anestésico tipo amida aprisionado podem ser obtidas por métodos conhecidos na técnica, preferencialmente, separando-se o anestésico não aprisionado tipo amida da composição anestésica usando métodos de centrifugação, por exemplo, centrifugação tradicional, centrifugação por gradiente de densidade, centrifugação diferencial, ou por métodos de filtração, por exemplo, diafiltração, filtração em gel, filtração por membrana. A distribuição de tamanho das MLVs com anestésico tipo amida aprisionado de acordo com a presente invenção pode ser determinada por vários métodos conhecidos na técnica. Um tamanho de partícula exemplificativo de MLVsS com, anestésico tipo amida aprisionado não é menos do que 1 um; e opcionalmente, é mais do que 5 um, como em uma faixa de 5 um a 50 um, ou de 10 pum a 25 um. Alternativamente, o diâmetro médio (D50) das MLVS com anestésico tipo amida aprisionado da composição anestésica não é menos do que 1 um; e, opcionalmente, é mais do que 5 um, como em uma faixa de 5 um a 50 um, ou de 10 um a 25 um.

[0026] Para preparar a composição anestésica para o uso, a HBLS é hidratada com uma solução tampão aquosa a um valor de pH superior a 5,5. Em algumas modalidades, a solução tampão aquosa está em uma faixa de pH de 5,5 a 8,0, e opcionalmente de 6,0 a 7,5.

[0027] As soluções tampão aquosas adequadas de acordo com à presente invenção incluem, mas não estão limitadas a, citrato, acetato, malato, piperazina, succinato, ácido de 2-(N-morfolino) etanossulfônico (MES), histidina, bis-tris, fosfato, etanolamina, ácido de N-(2- acetamido) iminodiacético (ADA), carbonato, ácido de N- (2- acetamido) -2-aminoetanossulfônico (ACES), ácido de 1,4- piperazinedietanossulfônico (PIPES), ácido de 3-morfolino- 2-hidroxipropanossulfônico (MOPSO), imidazol, ácido de N,

N-bis (2-hidroxietil)-2-aminoetanossulfônico (BES), ácido de 4-(2-hidroxietil) piperazina-l-etanossulfônico (HEPES), trietanolamina, lisina, tris, e glicilglicina. A quantidade de anestésico não aprisionado tipo amida na composição pode ser ajustada com base no coeficiente de distribuição do anestésico selecionando um valor de pH apropriado para a solução tampão aquosa com base na indicação clínica e na dose total de injeção.

[0028] Em algumas modalidades, a solução tampão aquosa compreende histidina em uma concentração variando de 1 mM a 200 mM, de 10 mM a 150 mM, ou de 40 mM a 120 mM.

[0029] A quantidade de anestésico não aprisionado tipo amida é uma função da eficiência da associação (AE) da composição anestésica, que é determinada por um método de centrifugação. Matematicamente, a quantidade de anestésico não aprisionado tipo amida é expressada como a seguir: Anão aprisionado = Atotai * (1 - AE) em que Anão aprisionado É a quantidade de anestésico não aprisionado tipo amida; Atotaa É à quantidade total de anestésico tipo amida na composição anestésica; e a AE é obtida dividindo-se a quantidade de anestésico tipo amida aprisionada em MLVs pela quantidade total de anestésico tipo amida na composição anestésica. A AE de acordo com a presente invenção é pelo menos 60 %, e, opcionalmente, de 70% a595 %.

[0030] A razão molar de anestésico tipo amida para fosfolipídio (mOolfármaco! MOlfosfolipídios D:PL) das MLVS com anestésico tipo amida aprisionado é preferencialmente pelo menos 0,5:1, incluindo mas não limitado a 0,7:1, 0,9:1, 1,2:1, ou 1,4:1, e o diâmetro médio (D50) das MLVS com anestésico tipo amida aprisionado é preferencialmente não menos do que 1 um, por exemplo, não menos do que 5 um; e, opcionalmente, dentro de uma faixa de 5 um a 20 um, ou de 5 um a 1,5 um.

[0031] A concentração anestésica do tipo amida da composição anestésica deve ser maior que 2 mg/mL para alcançar um benefício terapêutico clínico. As concentrações anestésicas adequadas do tipo amida incluem, mas não estão limitadas a, 2 mg/mL a 30 mg/mL e 10 mg/mL a 20 mg/mL. A quantidade restrita de anestésico não aprisionado nas composições anestésicas da invenção pode fornecer o benefício de alcançar uma dosagem de tolerância máxima mais alta (dependendo da concentração de anestésico no plasma que causa toxicidade no sistema nervoso central e no sistema cardiovascular) e pode ser usada para fornecer início rápido eficácia. Em algumas modalidades, a Cnax após a administração de uma composição de ropivacaína é 16,7 8% daquela após a administração de ropivacaína não formulada, o que indica que uma dosagem clínica aprovada 6 vezes maior pode ser usada dentro da janela de segurança deste anestésico.

[0032] Para uso clínico, a EA em certas modalidades da invenção varia de 70 % a 95 %. As MLVs remanescentes com anestésico aprisionado do tipo amida atuam como um depósito para liberar o anestésico do tipo amida no ambiente local gradualmente de maneira a manter a dosagem terapeuticamente eficaz no local. Em algumas modalidades, a meia-vida da ropivacaína derivada de uma única administração SC de uma composição de ropivacaína de acordo com a invenção é prolongada pelo menos 10 vezes em comparação com a da ropivacaína não formulada. A duração do efeito anestésico após a administração da composição de ropivacaína da invenção se estende significativamente além da da ropivacaína não formulada.

[0033] A divulgação será ainda descrita com referência aos seguintes exemplos específicos e não limitativos.

EXEMPLOS

[0034] os exemplos a seguir ilustram a preparação e as propriedades de certas modalidades da presente invenção.

Exemplo 1 Preparação de composições de ropivacaína

[0035] HSPC e DMPC foram adquiridas de NOF Corporation. Colesterol foi adquirido de Sigma-Aldrich e ropivacaína foi adquirido de. Apollo Scientific ou Dishman. Todos os outros produtos químicos foram adquiridos de Sigma-Aldrich.

[0036] Para preparar várias HELSs, diferentes misturas lipídicas com ropivacaína nas seguintes razões molares; HSPC:colesterol:ropivacaína = 1,5:1:2,2, HSPC:colesterol :ropivacaína = 2:1:2,9, DMPC: colesterol:ropivacaína = 2:1:2,9, e DMPC: DPPG:colesterol:ropivacaína = 1,85:0,15:1:2,9 foram usadas. Os lipídios e ropivacaína foram misturados e, em sequida, dissolvidos em terc-butanol ou um sistema de co- solvente de terc-butanol/água (1/1, vol/vol) para formar as estruturas líquidas. Cada amostra de estrutura líquida foi congelada por 30 a 60 minutos e, em seguida, foi liofilizada durante a noite para obter HELS em uma forma de massa liofilizada.

[0037] Para preparar as estruturas lipídicas para o controle do veículo, uma mistura lipídica com uma razão molar de DMPC:colesterol = 2:1 foi pesada e, em seguida, dissolvida em terc-butanol. A amostra resultante foi congelada por 60 minutos e, em seguida, foi liofilizada durante a noite para obter uma massa liofilizada do veículo.

[0038] As massas liofilizadas foram hidratadas com diferentes tampões em diferentes valores de pH em temperaturas adequadas (por exemplo, superior a 25 ºC/temperatura ambiente (AT) para DMPC e superior a 60 ºC para HSPC) por 2 a 10 minutos para formar composições de ropivacaína e composições do veículo, respectivamente.

Exemplo 2 Caracterização das composições de ropivacaína

[0039] A eficiência da associação (AE) de cada preparação acima descrita foi determinada como a seguir. Duzentos microlitros de cada composição de ropivacaína foram transferidos para uma centrífuga e agitados por 5 mm a 3000 x g a 4 “ºC. Após a decantação do sobrenadante, as MLVS com ropivacaína aprisionada foram obtidas e recolocadas em suspensão a um volume final de 200 uL. Um padrão de absorvância de referência foi estabelecido para cada substância de fármaco (por exemplo, ropivacaína) com base em soluções da substância de fármaco de teste de concentração conhecida. As quantidades de fármaco tanto da composição de ropivacaína original quanto das MLVS com ropivacaína aprisionada foram medidas usando um espectrofotômetro .“ultravioleta/visível (UV/Vis). A AE representa a razão da quantidade de fármaco nas MLVsS com ropivacaína aprisionada à quantidade de fármaco na composição de ropivacaína. A D:PL das MLVS com ropivacaína aprisionada foi calculada multiplicando-se a D:PL da HELS pela AF. Um resumo dos resultados é mostrado na Tabela 1.

[0040] o tamanho de partícula de cada composição de ropivacaína foi medido usando um analisador de difração a laser (LA-950V2, Horiba). O diâmetro médio (D50) das MLVS com ropivacaína aprisionada formado hidratando-se as HELS (DMPC:colesterol = 2:1) com tampão de histidina 50 mM (pH 6,5) foi 11,1 + 0,3 um (n = 3).

[0041] Tabela 1. A AE e razão molar calculada de anestésico tipo amida para fosfolipídio (D:PL) de várias formulações

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Exemplo 3 Estudo farmacocinético de composições de ropivacaína

[0042] os ratos Sprague-Dawley fêmeas canulados na veia jugular (JVC) foram utilizados para um estudo farmacocinético (PK). Os ratos foram alojados em uma sala de espera que opera em um ciclo circadiano escuro de 12 horas/12 horas e que fornece acesso gratuito à água e alimentos. As composições de ropivacaína foram preparadas de acordo com o Exemplo 1, em que as HELSSs de DMP:colesterol:ropivacaína = 2:1:2,9 foram hidratados com tampões de histidina 50 mM a pH 5,5, 6,0 e 6,5, respectivamente. A ropivacaína não formulada foi preparada dissolvendo o cloridrato de ropivacaína monohidratado em NaCl a 0,9 % até 24,0 mg/mL. Os perfis de PK in vivo das respectivas composições lipossômicas de ropivacaína e de ropivacaína não formulada administrada a grupos de ratos (n = 3 ou 4 por grupo) foram comparados após a injeção subcutânea (SC) na dose de 20,0 mg/kg de ropivacaína. As amostras de sangue foram coletadas aos 15 min, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 8 horas, 24 horas, 48 horas e 72 horas após a injeção. As amostras de plasma foram obtidas por centrifugação e mantidas congeladas a -80 ºC até a análise. Os dados de farmacocinética obtidos a partir das amostras foram analisados usando um modelo não-compartimental (software WinNonlin”). Os parâmetros de PK derivados deste modelo são mostrados na Tabela 2.

[0043] Tabela 2. Os parâmetros de PK derivados de ratos após única administração SC das composições de ropivacaína ou ropivacaína não formulada

Composição de Ropivacaína histidina a pH 5,5 histidina a pH 6,0 histidina a pH 6,5 nn 4 3 4 4 Tio (6) ESPE) 33.924 BIRS169 94160 Cr ngêml) 80182080 44474740 284,5 +61.3 133,54 34,8 Tuas Uh) L$05 17406 LS+06 15406 AUCombXngmlb) 2035632 MISSI2O O 3246 26652930

[0044] A Crax da composição de ropivacaína foi menor quando o valor de pH da solução de hidratação foi mais alcalino. Comparado ao grupo de ropivacaína não formulado, à Cnmax foi de 55,5 % para a composição de ropivacaína hidratada com solução de histidina a pH 5,5, 35,5 % para a composição de ropivacaína hidratada com solução de histidina a pH 6,0 e 16,7 % para a composição de ropivacaína hidratada com solução de histidina a pH 6,5. A meia-vida (T1/2) das três composições de ropivacaína foi significativamente prolongada em comparação com a da ropivacaína não formulada. Com base na área sob a curva (AUCo-1), 84,6 % a 90,8 % da ropivacaína foram liberados 72 horas após a injeção da composição da ropivacaína. Os resultados do estudo PK são mostrados na Figura l. Após a administração da mesma dosagem, a ropivacaína no plasma pode ser detectada até 72 horas em todos os grupos de composição de ropivacaína, no entanto, a ropivacaína não pode ser detectada no plasma após 24 horas no grupo ropivacaína não formulado.

Exemplo 4 Efeito anestésico em um modelo de rato com incisão de pata

[0045] Os camundongos machos C57/BL6 do tipo selvagem (8 semanas de idade, Envigo) foram utilizados para avaliar a eficácia anestésica após a incisão da pata,

conforme descrito em Anestesiologia. Outubro de 2003; 99 (4) :1023-7 e J. Neurosci Methods. 1994 Jul; 53 (1):55-63. A sala de espera do camundongo opera em um ciclo circadiano claro de 12 horas/12 horas para garantir que as luzes não sejam usadas e que pesquisadores e técnicos não entrem na sala do camundongo durante o ciclo escuro. A composição e o veículo da ropivacaína foram preparados de acordo com o Exemplo 1, em que uma HELS de DMPC:colesterol:ropivacaína = 2:1:2,9 e a estrutura lipídica do veículo de DMPC:colesterol = 2:1 foram hidratados com tampão de histidina 50 mM a pH 6.0 A ropivacaína não formulada foi preparada dissolvendo a ropivacaína em uma solução de sacarose a 9,4 % contendo HCl 0,1 N a 18,3 mg/mL. O estudo de eficácia in vivo da composição de ropivacaína, ropivacaína não formulada e veículo (n = 8 por grupo) foi comparado após a injeção de SC após a incisão na pata na dose de 0,18 mg de ropivacaína por incisão.

[0046] Os limiares mecânicos da linha de base (T = -2 horas) (von Frey) de 32 camundongos foram obtidos antes da cirurgia; os limiares da linha de base foram medidos na pata traseira esquerda do camundongo. Todos os 32 ratos receberam uma incisão plantar (5 mm de comprimento e 5 mm de profundidade) na pata traseira esquerda. Duas horas após a cirurgia (T = O hora), o limiar mecânico de cada camundongo foi reavaliado e a presença de alodinia mecânica em cada camundongo foi confirmada. Trinta e dois ratos foram randomizados em 4 grupos (8 ratos por grupo). Enquanto anestesiados com anestesia com isoflurano a 2,5%, cada camundongo recebeu a injeção SC do veículo (10 uL), composição de ropivacaína (10 1npL de 18,3 mg/mL) ou ropivacaína não formulada (10 uL de 18,3 mag/mL). O limiar de retirada da pata de 50% de cada camundongo foi obtido usando o método para cima para baixo no ponto de linha de base (-2) e os pontos de tempo designados (0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8 e 24 horas) após o tratamento com injeção SC.

[0047] A eficácia anestésica da composição de ropivacaína (círculo), ropivacaína não formulada (quadrado) e veículo (triângulo) após a incisão da pata é mostrada nas Figuras 2A e 2B. O limiar de retirada médio de 50 % para cada grupo de tratamento foi representado graficamente; os dados apresentados como um limiar de retirada (9) foram plotados contra o tempo (Figura 2A). Para explicar a variabilidade entre as sensibilidades mecânicas basais de camundongos individuais, os limiares de retirada de pata de 50 % de cada rato após a cirurgia e o tratamento foram normalizados para seu próprio limiar de retirada de 50% da linha de base (T = -2 horas). O limiar de retirada médio normalizado de 50 % para cada grupo de tratamento foi representado graficamente; os dados apresentados como uma variação do percentual do limiar mecânico em relação aos limiares da linha de base foram plotados em função do tempo (Figura 2B). O tempo de início da composição da ropivacaína e da anestesia não formulada com ropivacaína após a administração foi semelhante, com o limiar de retirada aumentado de 0,04 gq para 0,26 g e 0,22 q, respectivamente, no primeiro momento (T = 1 hora). O grupo de composição de ropivacaína produziu a maior ação analgésica (-88 %) e a mais longa (pelo menos 5 horas), e o grupo de ropivacaína não formulado também produziu algum grau de analgesia em comparação com o grupo veículo.

Exemplo 5 O efeito de anestesia em porquinhos-da-índia usando um modelo de picada de pápula modificado por IC

[0048] os porquinhos-da-índia machos (8 semanas de idade, cerca de 500 g, Charles River Laboratories) foram empregados para avaliar a eficácia anestésica, conforme descrito em J. Pharmacol Exp Ther., 1945; 85:78-84. Todas as cobaias foram alojadas em gaiolas de grupo com 2 animais por gaiola, com comida de cobaia (Healthy Petº) e água ad libitum para garantir nutrição e enriquecimento adequados. A condição do alojamento foi controlada a 65 a 75 ºF (-18 a 23 ºC) com um ciclo circadiano de 12 horas de luz/12 horas de escuro. Após um período inicial de aclimatação às condições laboratoriais por 12 dias, os porquinhos-da-índia foram designados aleatoriamente como Nº 1 a Nº 8. A composição de ropivacaína foi preparada de acordo com o Exemplo 1, em que uma HBLS de DMPC:colesterol:ropivacaína = 2:1:2,9 foi hidratado com tampão de histidina 50 mM a pH 6,0. A ropivacaína não formulada foi preparada dissolvendo o cloridrato de ropivacaína monohidratado em água ultrapura até 20,5 ma/mL.

[0049] Este estudo de eficácia in vivo dos porquinhos-da-índia (n = 4 ou 6 por grupo) comparou a composição de ropivacaína e a ropivacaína não formulada após a injeção intracutânea (IC), na dose de 3,0 mg de ropivacaína por pápula CI e 1,5 mg de ropivacaína por pápula CI, respectivamente. As costas das cobaias foram raspadas um dia antes do experimento. No dia experimental, quatro áreas foram desenhadas nas costas antes da administração do medicamento e a sensibilidade dessas áreas foi determinada por uma picada. Cada animal recebeu quatro formulações designadas nas costas, que criaram 4 pápulas, respectivamente. A reação às picadas no local da injeção foi testada em O mm, 15 min, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 8 horas, 10 horas, 12 horas e 23 horas após a injeção da formulação. As picadas foram aplicadas primeiro a uma área de controle fora da pápula em cada momento. Depois de observar a reação normal do animal à picada fora da pápula, seis picadas foram aplicadas dentro da pápula, e as picadas às quais a cobaia não reagiu foram registradas como não respostas. Os animais que apresentaram uma resposta de 100 % para todas as picadas não foram monitorados em outros momentos.

[0050] Os efeitos anestésicos do grupo de composição de ropivacaína em comparação com o grupo de ropivacaína não formulado na mesma dosagem foram determinados e os resultados estão representados nas Figuras 3A e 3B. O início da anestesia para a composição de ropivacaína e para a ropivacaína não formulada nas doses de 3,0 mg (Figura 3A) e 1,5 mg de ropivacaína (Figura 3B) foi observado no primeiro momento, em 15 minutos. O grupo de composição de ropivacaína exibiu efeitos anestésicos sustentados em comparação com o que foi observado no grupo de ropivacaína não formulado para ambas as dosagens. Para uma dosagem de 3 mg de ropivacaína por pápula IC, um efeito anestésico significativamente mantido foi observado 10 horas e 12 horas após a injeção (p < 0,05) para o grupo de composição de ropivacaína em comparação com o grupo de ropivacaína não formulado. Para uma dosagem de 1,5 mg de ropivacaína por pápula IC, o efeito anestésico também foi mantido por mais tempo no grupo de composição de ropivacaína em comparação com o grupo de ropivacaína não formulado, e diferenças significativas (p < 0,05) foram observadas em 2 horas, 4 horas e 5 horas após a injeção.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método de preparar um composição anestésica de liberação sustentada, compreendendo: criar um estrutura lipídica altamente aprisionada (HELS) compreendendo: pelo menos um anestésico tipo amida, e uma mistura lipídica incluindo pelo menos um fosfolipídio, e hidratar a HELS com um tampão de solução aquosa a um pH de 5,5 a 8,0; em que hidratar a HELS forma vesículas multilamelares (MLVs) com anestésico tipo amida aprisionado; o diâmetro médio das MLVS com anestésico tipo amida aprisionado é pelo menos 1 um; e a razão molar do anestésico tipo amida para fosfolipídio nas MLVs com anestésico local aprisionado é pelo menos 0,5:1.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que a HELS é em uma forma de uma massa, pó, sólido a granel não filme, ou uma combinação dos mesmos.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que o método de criar a HELS compreende: dissolver a mistura lipídica e o pelo menos um anestésico tipo amida em um sistema de solvente para formar uma estrutura líquida; e remover o sistema de solvente a partir da estrutura líquida.

4, Método, de acordo com a reivindicação 3, em que a etapa a remover o sistema de solvente inclui liofilizar ou secar por pulverização a estrutura líquida.

5. Método, de acordo com a reivindicação 3, em que o sistema de solvente inclui terc-butanol ou um co-solvente de terc-butanol/água.

6. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que a mistura lipídica compreende colesterol.

7. Método, de acordo com a reivindicação 6, em que a porcentagem em mol de colesterol na mistura lipídica não é superior a 50 %.

8. Método, de acordo com a reivindicação 6, em que o pelo menos um fosfolipídio e colesterol estão em uma razão molar de 1:0,01 a 1:1.

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, em que o pelo menos um anestésico tipo amida é lidocaína, bupivacaína, levobupivacaína, ropivacaína, mepivacaína, pirrocaína, articaína, ou prilocaína.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 em que o pelo menos um anestésico tipo amida é a base de ropivacaína.

11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, em que o tampão de solução aquosa compreende histidina em uma concentração variando de 1 mM a 200 mM.

12. Composição anestésica de liberação sustentada para administrar localmente um anestésico local a um indivíduo em necessidade do mesmo, em que a composição é preparado pelo método de acordo com qualquer um de reivindicações 1 a 8; o diâmetro médio das MLVS com anestésico tipo amida aprisionado na composição anestésica é pelo menos 1 um; e a razão molar de anestésico tipo amida para fosfolipídio nas MLVs com anestésico local aprisionado é pelo menos 0,5:1.

13. Composição anestésica de liberação sustentada, de acordo com a reivindicação 12, em que o pelo menos um anestésico tipo amida é a base de ropivacaína.

14. Composição anestésica de liberação sustentada, de acordo com a reivindicação 12, em que o tampão de solução aquosa compreende histidina em uma concentração variando de 1 mM a 200 mM.