BR112019024859B1

BR112019024859B1 - Composição modificadora de doçura, composição adoçada compreendendo a mesma e uso de 11-omogrosídeo v

Info

Publication number: BR112019024859B1
Application number: BR112019024859-5A
Authority: BR
Inventors: Feng Shi; Jenifer Augelli; Uwe KOHRS; Wei Yuan
Original assignee: Givaudan Sa
Priority date: 2017-06-02
Filing date: 2018-05-31
Publication date: 2023-12-12
Also published as: MX2019014119A; MX2023010420A; JP7306999B2; JP2023100633A; RU2762719C2; BR112019024859A2; CN116941752A; CN110719738A; CA3064334A1; RU2019138376A3; CO2019013524A2; EP3629764A1; WO2018220103A1; RU2019138376A; CN110719738B; JP2020521488A

Abstract

Uma composição modificadora de doçura compreendendo pelo menos um adoçante de alta intensidade escolhido de glicosídeos e/ou mogrosídeos de esteviol e pelo menos um adoçante de baixa potência escolhido de celobiose, psicose, ciclamato e/ou 11-O-mogrosídeo V, e uma composição adoçada compreendendo a referida composição modificadora de doçura e pelo menos um outro adoçante; os usos os usos das referidas composições adoçadas e composições modificadoras de doçura; métodos para preparar as referidas composições adoçadas e composições modificadoras de doçura.

Description

CAMPO TÉCNICO

[001] A presente invenção refere-se geralmente ao uso de um ou mais adoçantes de baixa potência para melhorar uma ou mais características de doçura de um ou mais adoçantes de alta intensidade. A presente invenção também se refere a composições compreendendo uma mistura de pelo menos um adoçante de alta intensidade e pelo menos um adoçante de baixa potência. A presente invenção refere-se ainda ao uso de uma combinação de pelo menos um adoçante de alta intensidade e pelo menos um adoçante de baixa potência como um modificador de doçura que é usado em combinação com pelo menos um outro adoçante e/ou como um adoçante. A presente invenção refere- se ainda ao uso de um ou mais mogrosídeos como realçador de doçura em composições adoçadas e nas referidas composições adoçadas. A presente invenção refere-se ainda a métodos de fabricação de adoçantes e composições aqui descritos.

ANTECEDENTES

[002] A doçura em produtos comestíveis, ou seja, produtos destinados a serem ingeridos por via oral, para ingestão permanente ou temporariamente para expectoração, costuma ser uma característica desejável. Tradicionalmente, a doçura é fornecida pela adição de um ou mais adoçantes, particularmente adoçantes de baixa potência e nutritivos, como a sacarose (açúcar de mesa), frutose, glicose, xilose, arabinose, ramnose, alcoóis de açúcar como eritritol, xilitol, manitol, sorbitol e inositol, bem como xaropes de açúcar, como xarope de milho com alto teor de frutose e xarope de amido. Eles proporcionam doçura considerável, sem qualquer gosto indesejável. No entanto, é desejável usar uma quantidade reduzida desses adoçantes para reduzir o valor calórico do produto comestível. Por conseguinte, é desejável proporcionar adoçantes alternativos que possam reduzir o valor calórico do produto comestível, mantendo o mesmo gosto ou o mesmo gosto adoçado.

[003] Adoçantes de alta intensidade (HIS) têm sido utilizados para esse fim. Os adoçantes de alta intensidade podem ser naturais ou artificiais e possuem uma doçura que pode ser várias centenas de vezes superior à da sacarose e, portanto, podem teoricamente substituir uma quantidade muito maior de açúcar em uma composição. Exemplos de adoçantes de alta intensidade incluem sucralose, sacarina, aspartame, acessulfame de potássio (AceK), neotame, advantame, glicosídeos esterviol, incluindo preparações de mistura de esteviosídeo, rebaudiosídeo A, rebaudiosídeo D ou esteviol glicosídeo com rebaudiosídeo A e/ou esteviosídeo como componentes predominantes. No entanto, essas substâncias geralmente têm a desvantagem de poder conferir gostos indesejáveis indesejáveis a produtos comestíveis, tipicamente gosto amargo, metálico ou alcaçuz ou uma doçura persistente e indesejável.

[004] Portanto, é desejável fornecer composição modificadora de doçura alternativa e/ou realçada e composições adoçadas para abordar um ou mais desses problemas.

SUMÁRIO

[005] De acordo com um primeiro aspecto da presente invenção, é fornecida uma composição modificadora de doçura que compreende: um ou mais adoçantes de alta intensidade selecionados do grupo que consiste em glicosídeos e/ou mogrosídeos de esteviol; e um ou mais adoçantes de baixa intensidade selecionados do grupo que consiste em celobiose, psicose, ciclamato e/ou 11-O- mogrosídeo V; em que a composição modificadora de doçura aumenta a doçura de uma composição adoçada em mais do que a doçura da composição modificadora de doçura sozinha; e/ou em que a proporção de um ou mais adoçantes de alta intensidade para um ou mais adoçantes de baixa potência varia de cerca de 2 : 1 a cerca de 12 : 1.

[006] De acordo com um segundo aspecto da presente invenção, é fornecida uma composição adoçada compreendendo: pelo menos um adoçante presente em uma quantidade com uma doçura igual ou superior a cerca de 1,5 % (p/v) de equivalência de sacarose; e uma composição modificadora de doçura de acordo com qualquer aspecto ou modalidade da presente invenção.

[007] De acordo com um terceiro aspecto da presente invenção, é fornecido um uso de um ou mais adoçantes de baixa potência selecionados do grupo que consiste em celobiose, psicose, ciclamato e/ou 11-O-mogrosídeo V para melhorar um ou mais características de doçura de uma composição adoçada que compreende um ou mais adoçantes de alta intensidade selecionados do grupo que consiste em glicosídeos e/ou mogrosídeos de esteviol, em que a concentração total de um ou mais adoçantes de baixa potência e o um ou mais adoçante (s) de alta potência usados tiver uma doçura inferior a 1,5 % (p/v) de equivalência de sacarose.

[008] De acordo com um quarto aspecto da presente invenção, é fornecido um método para aumentar a doçura de uma composição adoçada, o método compreendendo o fornecimento de uma composição de base compreendendo pelo menos um adoçante presente em uma quantidade igual ou superior ao seu limiar de reconhecimento de doçura e/ou com uma doçura igual ou superior a cerca de 1,5 % (p/v) da equivalência de sacarose e adicionando um ou mais adoçantes de alta intensidade selecionados do grupo que consiste em glicosídeos e/ou mogrosídeos de esteviol e uma ou mais de adoçantes de baixa potência selecionados do grupo que consiste em celobiose, psicose, ciclamato e/ou 11-O-mogrosídeo V, em que a proporção de um ou mais adoçantes de alta intensidade para um ou mais adoçantes de baixa potência é de aproximadamente 2 : 1 a cerca de 12 : 1; e/ou em que o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade são adicionados em uma quantidade total igual ou superior a cerca de 15 ppm e opcionalmente igual ou inferior a cerca de 50 ppm e o um ou mais adoçante (s) de baixa potência é (são) adicionados em uma quantidade total igual ou superior a cerca de 2 ppm e opcionalmente igual ou inferior a cerca de 12 ppm; e/ou em que a concentração total de um ou mais adoçantes de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa potência que é adicionado tem uma doçura menor que 1,5 % (p/v) de equivalência de sacarose.

[009] De acordo com um quinto aspecto da presente invenção, é fornecido um método para preparar uma composição modificadora de doçura de acordo com qualquer aspecto ou modalidade da presente invenção, o método compreendendo a combinação de um ou mais adoçantes de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa potência.

[0010] De acordo com um sexto aspecto da presente invenção, é fornecido um método para preparar uma composição adoçada de acordo com qualquer aspecto ou modalidade da presente invenção, o método compreendendo a combinação da composição de base, um ou mais adoçantes de alta intensidade, um ou mais adoçantes de baixa intensidade e pelo menos um outro adoçante.

[0011] De acordo com um sétimo aspecto da presente invenção, é fornecida uma composição adoçada compreendendo pelo menos um adoçante presente em uma quantidade com uma doçura igual ou superior a 1,5 % (p/v) de equivalência de sacarose; e um ou mais realçadores de doçura selecionados de mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo.

[0012] De acordo com um oitavo aspecto da presente invenção, é fornecido um uso de um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo para aumentar a doçura de uma composição adoçada. Assim, em um aspecto adicional, é fornecido um método para aumentar a doçura de uma composição adoçada, o método compreendendo o fornecimento de uma composição de base e a adição de pelo menos um adoçante e um ou mais realçadores de doçura selecionados a partir do mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo.

[0013] De acordo com um nono aspecto da presente invenção, é fornecido um método para preparar uma composição adoçada de acordo com qualquer aspecto ou modalidade da presente invenção, o método compreendendo a combinação da composição de base, um ou mais realçadores de doçura selecionados a partir de mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo e pelo menos um outro adoçante.

[0014] De acordo com um décimo aspecto da presente invenção, é fornecida uma composição adoçada compreendendo um ou mais mogrosídeos. O ou mais mogrosídeos pode, por exemplo, estar presente como um realçador de doçura e, portanto, estar presente em uma quantidade com uma doçura menor que 1,5 % (p/v) de equivalência de sacarose. A composição adoçada compreenderá ainda pelo menos um adoçante presente em uma quantidade que possui uma doçura igual ou superior a 1,5 % (p/v) de equivalência de sacarose.

[0015] De acordo com um décimo primeiro aspecto da presente invenção, é fornecida umo usouso de um ou mais mogrosídeos para aumentar a doçura de uma composição adoçada. Assim, é fornecido um método para aumentar a doçura de uma composição adoçada, o método compreendendo o fornecimento de uma composição básica e a adição de pelo menos um adoçante e um ou mais mogrosídeos.

[0016] De acordo com um décimo segundo aspecto da presente invenção, é fornecido um método para preparar uma composição adoçada de acordo com qualquer aspecto ou modalidade da presente invenção, o método compreendendo a combinação da composição de base, um ou mais mogrosídeos e pelo menos um outro adoçante.

[0017] Em certas modalidades de qualquer aspecto da presente invenção, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade pode (m) incluir ou ser mogrosídeo V e/ou um ou mais adoçantes de baixa potência podem incluir ou ser 11-O-mogrosídeo V.

[0018] Em certas modalidades de qualquer aspecto da presente invenção, a proporção de um ou mais adoçantes de alta intensidade para um ou mais adoçantes de baixa potência é de cerca de 2 : 1 a cerca de 12 : 1. Em certas modalidades de qualquer aspecto da presente invenção, a proporção de um ou mais adoçantes de alta intensidade para um ou mais adoçantes de baixa potência é de cerca de 5: 1 a cerca de 12 : 1. Em certas modalidades de qualquer aspecto da presente invenção, a proporção de um ou mais adoçantes de alta intensidade para um ou mais adoçantes de baixa potência pode ser de cerca de 6 : 1 a cerca de 10 : 1.

[0019] Em certas modalidades de qualquer aspecto da presente invenção, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade pode (m) estar presente(s) em uma quantidade total que varia de cerca de 15 ppm a cerca de 30 ppm e/ou um ou mais adoçantes de baixa potência podem estar presentes em uma quantidade total que varia de cerca de 2 ppm a cerca de 10 ppm. Em certas modalidades de qualquer aspecto da presente invenção, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade pode (m) estar presente (s) em uma quantidade total que varia de cerca de 22 ppm a cerca de 28 ppm e/ou um ou mais adoçantes de baixa potência podem estar presentes em uma quantidade total que varia de cerca de 2 ppm a cerca de 5 ppm.

[0020] Em certas modalidades do sétimo ao décimo segundo aspecto da presente invenção, o um ou mais mogrosídeo (s) ou um ou mais realçadores de doçura podem estar presentes em uma quantidade que varia de cerca de 15 ppm a cerca de 50 ppm. Em certas modalidades, o um ou mais mogrosídeo (s) ou um ou mais realçadores de doçura podem estar presentes em uma quantidade que varia de cerca de 15 ppm a cerca de 35 ppm.

[0021] Em certas modalidades de qualquer aspecto da presente invenção, a combinação de um ou mais adoçantes de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa potência sozinha pode ter uma doçura menor que cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose. Em particular, a concentração de um ou mais adoçantes de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa intensidade em uma composição adoçada pode ter uma doçura menor que cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose.

[0022] Em certas modalidades do sétimo ao décimo segundo aspecto da presente invenção, o um ou mais mogrosídeo (s) ou um ou mais realçadores de doçura podem ter uma doçura total menor que cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose. Em certas modalidades, o um ou mais realçadores de doçura aumentam a doçura de uma composição adoçada em mais do que a doçura total de um ou mais realçadores de doçura.

[0023] Em certas modalidades de qualquer aspecto da presente invenção, a combinação de um ou mais adoçantes de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa potência pode aumentar a doçura de uma composição adoçada em mais do que a doçura de a combinação sozinha. Em certas modalidades de qualquer aspecto da presente invenção, a combinação de um ou mais adoçantes de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa potência pode aumentar a doçura de uma composição igual ou superior a cerca de 1,25% (p/v) de equivalência de sacarose.

[0024] Em certas modalidades de qualquer aspecto da presente invenção, o um ou mais adoçante (s) de baixa potência enfraquecem o gosto doce persistente de uma composição adoçada compreendendo o (s) um ou mais adoçantes de alta intensidade em comparação com o gosto doce persistente da composição adoçada na ausência completa de um ou mais adoçante (s) de baixa potência.

[0025] Em certas modalidades de qualquer aspecto da presente invenção, o um ou mais adoçante (s) de baixa potência enfraquece o gosto amargo e/ou adstringente de uma composição adoçada compreendendo o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade em comparação com o gosto amargo e/ou adstringente da composição adoçada na ausência completa do um ou mais adoçantes de baixa potência.

[0026] Um ou mais (por exemplo, todos) dos adoçantes utilizados podem ser naturais ou sintéticos (artificiais). Um ou mais adoçantes podem, por exemplo, ser feitos por um processo biológico ou por um processo enzimático ou por um processo sintético.

[0027] Certas modalidades de qualquer aspecto da presente invenção podem fornecer uma ou mais das seguintes vantagens: • doçura aumentada em uma composição; • doçura realçada em uma composição que inclui pelo menos um adoçante; • diminuição da quantidade de adoçante calórico necessária para obter a doçura desejada; • melhoria de uma ou mais características de doçura para tornar o gosto doce mais semelhante ao açúcar (sacarose); • enfraquecimento da doçura persistente (por exemplo, diminuindo o tempo em que o gosto doce permanece e/ou diminuindo a intensidade do gosto doce mais rapidamente); • enfraquecimento do gosto amargo e/ou gosto adstringente e/ou gosto alcaçuz e/ou gosto metálico; • melhoria no impacto da doçura (por exemplo, aumentando a intensidade máxima do gosto doce e/ou diminuindo o tempo para que o gosto doce seja detectado) (por exemplo, diminuindo a doçura persistente).

[0028] Os detalhes, exemplos e preferências fornecidos em relação a qualquer um ou mais dos aspectos declarados da presente invenção serão descritos aqui e serão aplicados igualmente a todos os aspectos da presente invenção. Qualquer combinação das modalidades, exemplos e preferências aqui descritas em todas as variações possíveis é abrangida pela presente invenção, a menos que indicado de outra forma aqui, ou claramente contrário ao contexto.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0029] A Figura 1 mostra um cromatograma de um extrato de Luo Han Guo (extrato 2 da Tabela 1 abaixo).

[0030] A Figura 2 mostra as estruturas químicas dos mogrosídeos 1-6;

[0031] A Figura 3 mostra a análise por LC-MS de extratos comerciais de Luo Han Guo;

[0032] A Figura 4 mostra a Espectroscopia Heteronuclear de Coerência Quântica Simples - Correlação Total (HSQC-TOCSY) (hsqcgpmlph) do isomogrosídeo VI com diferentes tempos de mistura (d9). A: 10 ms de tempo de mistura. B: tempo de mistura de 30 ms. C: tempo de mistura de 60 ms. D: tempo de mistura de 100 ms. Devido à sobreposição de H-1 de Glc II e H-6a de Glc III, a intensidade da correlação HSQC-COZY de Glc II não foi analisada aqui;

[0033] A Figura 5 mostra HSQC-TOCSY (hsqcgpmlph) quantificação de intensidade de pico de glicopiranosil isomogrosídeo VI com diferentes tempos de mistura. (*sinais C-3 e C-5 no HSQC-TOCSY pareciam se sobrepor por 100 ms de tempo de mistura. A integração total de C-3 e C-5 foi, portanto, usada no gráfico de barras);

[0034] A Figura 6 mostra a estratégia para elucidar a cadeia de açúcar do mogrosídeo (*números de C-2 a C-6 apareceram sob certo tempo de mistura podem mudar levemente se o ajuste da intensidade de pico do HSQC-TOCSY. Observando a intensidade crescente de C-2 a C- 6 em diferentes experiências de tempo de mistura, a sequência de conexão ainda pode ser determinada. ** Até o momento, não há glicosilação natural no C-3 do glicopiranosil mogrosídeo. A glicosilação C-3 no glicopiranosil causaria a redução de δ76 para δ81 e pode ser facilmente determinada por Experiências HSQC-TOCSY). A sequência das etapas na Figura 6 pode ser descrita da seguinte maneira:

[0035] Na Etapa 1, a espectroscopia de correlação de ligação múltipla heteronuclear (HMBC) foi usada para determinar C-1 e H-1 anormérico do açúcar. Comece pela ligação do açúcar à aglicona. Na etapa 2, HSQC-TOCSY foi usado com tempo de mistura de 100 ms para determinar todo o grupo de C-2 a C-6. HSQC-COZY ou HSQC-TOCSY (d9 = 10 ms) para atribuir C-2. HSQC-TOCSY (d9 = 30 ms) para atribuir C-3. HSQC-TOCSY (d9 = 60 ms) para atribuir C-4. HSQC-TOCSY (d9 = 100 ms) para atribuir C-5 e C-6. Na Etapa 3, se for observado um down-shift C-2 de ~ δ75 a ~ δ81, o down-shift C-4 de ~ δ71 a ~ δ81 ou o down-shift C-6 de ~ δ62 a ~ 69 for observado, verifique o HMBC quanto à glicosilação nessas posições. **

[0036] Se um down-shift C-2 de ~ δ75 para ~ δ81, down-shift C-4 de ~ δ71 para ~ δ81 ou down-shift C-6 de ~ δ62 para ~ 69, verifique o HMBC quanto à glicosilação nessas posições. **

[0037] A Figura 7 mostra a estrutura química do isomogrosídeo VI, que tem a fórmula química C66H112O34 e uma Massa Exata de 1448,70. Essa estrutura química é designada Fórmula I; e

[0038] A Figura 8 mostra a estrutura química do 11-epi- mogrosídeoV, que tem a fórmula química C60H102O29 e uma massa exata de 1286,65. Essa estrutura química é designada Fórmula II.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0039] A presente invenção é baseada na surpreendente descoberta de que uma combinação de um ou mais adoçantes de alta intensidade (por exemplo, mogrosídeo V) e um ou mais adoçantes de baixa potência (por exemplo, 11-O-mogrosídeo V) pode agir sinergicamente com pelo menos um outro adoçante (por exemplo, sacarose) para obter uma composição com uma doçura maior que a soma da doçura dos adoçantes individuais. A presente invenção baseia- se ainda na surpreendente descoberta de que um ou mais adoçantes de baixa potência podem compensar uma ou mais características negativas de doçura de um ou mais adoçantes de alta potência. Por exemplo, a combinação de um ou mais adoçantes de alta intensidade (por exemplo, mogrosídeo V) e um ou mais adoçantes de baixa potência (por exemplo, 11-O-mogrosídeo V) pode fornecer melhores características de doçura em uma composição adoçada (ou seja, uma composição compreendendo pelo menos um outro adoçante, como sacarose, em uma quantidade acima de seu limite de reconhecimento de doçura e/ou uma quantidade igual ou superior a cerca de 1,5 % (p/v) de equivalência de sacarose) em comparação com o uso de um ou mais adoçante (s) de alta intensidade sozinho. As características de doçura podem assim, por exemplo, estar mais próximas das características de doçura da sacarose.

[0040] Assim, são aqui fornecidas várias composições que compreendem um ou mais adoçante (s) de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa potência, conforme descrito neste documento, particularmente composições adoçadas compreendendo pelo menos um adoçante em uma quantidade acima do seu limite de reconhecimento de doçura e/ou uma quantidade igual ou superior a cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose e um ou mais adoçante de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa potência. As composições adoçadas também podem ser referidas como composições comestíveis. Também são fornecidas aqui vários usos de um ou mais adoçantes de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa potência, conforme descrito aqui e métodos para preparar as várias composições aqui descritas.

[0041] A presente invenção baseia-se ainda na surpreendente descoberta de que mogrosídeos como mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo podem atuar como realçadores de doçura (isto é, podem aumentar a doçura de uma composição adoçada por mais do que a doçura do realçador de doçura sozinho).

[0042] Assim, são aqui proporcionadas várias composições, em particular composições adoçadas, compreendendo um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo.

Composições

[0043] São fornecidas aqui várias composições compreendendo pelo menos um adoçante de alta intensidade e pelo menos um adoçante de baixa potência. Também são fornecidas aqui composições compreendendo um ou mais mogrosídeos, por exemplo, um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo. Em certas modalidades, as composições são composições comestíveis.

[0044] Em certas modalidades, é fornecida uma composição modificadora de doçura que compreende, consistindo essencialmente em ou consistindo em pelo menos um adoçante de alta intensidade selecionado a partir do grupo que consiste em glicosídeos e/ou mogrosídeos de esteviol e pelo menos um adoçante de baixa potência selecionado do grupo que consiste em celobiose, psicose, ciclamato e/ou 11-O-mogrosídeo V. Em certas modalidades, a composição modificadora de doçura compreende, consiste essencialmente de ou consiste em um adoçante de alta intensidade e um adoçante de baixa potência. A composição modificadora de doçura pode, por exemplo, ser um concentrado que pode, por exemplo, ser diluído em uma composição adoçada (por exemplo, comestível) para dar à composição comestível uma doçura desejada. O termo "composição adoçada" refere-se a uma composição compreendendo pelo menos um adoçante presente em uma quantidade acima do seu limite de reconhecimento de doçura e/ou em uma quantidade com uma doçura igual ou superior a cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose.

[0045] Em certas modalidades, é fornecida uma composição adoçada (por exemplo, composição comestível) compreendendo um ou mais mogrosídeos, por exemplo, um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo. Em certas modalidades, é fornecida uma composição adoçada (por exemplo, composição comestível) compreendendo pelo menos um adoçante de alta intensidade e pelo menos um adoçante de baixa potência. A combinação do (s) adoçante (s) de alta intensidade e do (s) adoçante (s) de baixa potência pode ser referida como uma composição modificadora de doçura. O um ou mais mogrosídeo(s), por exemplo, o um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo também podem ser aqui referidos como uma composição modificadora de doçura. Assim, em certas modalidades, é fornecida uma composição adoçada compreendendo pelo menos um adoçante presente em uma quantidade acima do seu limite de reconhecimento de doçura e/ou em uma quantidade com uma doçura igual ou superior a cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose e uma composição modificadora de doçura que compreende, consistindo essencialmente em ou consistindo em pelo menos um adoçante de alta intensidade e pelo menos um adoçante de baixa potência. A composição adoçada pode, por exemplo, ser uma composição comestível.

[0046] O termo "realce" quando usado em relação a uma composição modificadora de doçura específica refere-se a um efeito adoçante sinérgico quando a composição modificadora de doçura é usada em combinação com pelo menos um outro adoçante. A composição modificadora de doçura aumenta a doçura de uma composição adoçada em mais do que a doçura da composição modificadora de doçura sozinha. Por outras palavras, a doçura de uma composição compreendendo pelo menos um adoçante e pelo menos uma composição modificadora de doçura é maior que a soma da doçura de todos os adoçantes na composição. As composições modificadoras de doçura aqui descritas são usadas em composições adoçadas (por exemplo, comestíveis) em quantidades que não têm doçura detectável ou gosto reconhecido como doce (abaixo do seu limite de reconhecimento de doçura). Tipicamente, uma composição modificadora de doçura com uma doçura abaixo de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose é aceita como “não intrinsecamente doce” pela FEMA (Flavor & Extract Manufacturers Association). Modificadores de doçura também podem ser referidos como realçadores de doçura.

[0047] A composição adoçada compreendendo a composição modificadora de doçura como aqui descrita e pelo menos um adoçante em uma quantidade acima de seu limite de reconhecimento de doçura e/ou em uma quantidade com uma doçura igual ou superior a cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose pode ter uma doçura que seja igual ou superior a cerca de 1,0% (p/v) da equivalência de sacarose maior que a doçura da composição adoçada na ausência da composição modificadora da doçura. Por exemplo, a composição adoçada pode ter uma doçura igual ou superior a cerca de 1,1% (p/v) ou igual ou superior a cerca de 1,15% (p/v) ou igual ou superior a cerca de 1,2% (p/v) ou igual ou superior a cerca de 1,25% (p/v) de equivalência de sacarose superior à doçura da composição adoçada na ausência da composição modificadora da doçura. Em outras palavras, a composição modificadora de doçura pode aumentar a doçura de uma composição adoçada em igual ou superior a cerca de 1% (p/v) ou igual ou superior a cerca de 1,1% (p/v) ou igual ou superior a cerca de 1,15% (p/v) ou igual ou superior a cerca de 1,2 % (p/v) ou igual ou superior a cerca de 1,25% (p/v) de equivalência de sacarose. A composição comparativa é idêntica à referida composição, exceto que ela não inclui a referida composição modificadora de doçura.

[0048] O termo "equivalência de sacarose" refere-se à equivalência em doçura de uma composição que contém pelo menos um adoçante sem sacarose a uma solução de sacarose de referência. Normalmente, os especialistas em painel de gosto são treinados para detectar a doçura das soluções de sacarose de referência que contêm entre 1% e 15% de sacarose (p/v). Outros adoçantes sem sacarose podem então ser degustados em uma série de diluições para determinar a concentração do adoçante sem sacarose que é tão doce (isto é, isosweet) a uma determinada referência de sacarose. O termo "Iso-sweet" refere-se a composições que têm doçura equivalente. Tipicamente, a doçura de uma dada composição é medida com referência a uma solução de sacarose. Veja " A Systematic Study of Concentration-Response Relationships of Sweeteners," G.E. DuBois, D.E. Walters, S.S. Schiffman, Z.S. Warwick, B.J. Booth, S.D. Pecore, K. Gibes, B.T. Carr, e L.M. Brands, em Sweeteners: Discovery, Molecular Design and Chemoreception, D.E. Walters, F.T. Orthoefer e G.E. DuBois, Eds., American Chemical Society, Washington, DC (1991), pp 261-276.

[0049] A combinação de um ou mais adoçantes de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa potência (por exemplo, composição modificadora de doçura) pode, por exemplo, ter uma doçura menor que cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose. Por exemplo, a combinação do (s) adoçante (s) de alta intensidade e do (s) adoçante (s) de baixa potência (por exemplo, composição modificadora de doçura) pode ter uma doçura igual ou menor que cerca de 1,45% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual para ou menos do que cerca de 1,4% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou menor que cerca de 1,35% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou menor que cerca de 1,3% (p/v) de equivalência de sacarose. Por exemplo, a combinação do (s) adoçante (s) de alta intensidade e do (s) adoçante (s) de baixa potência (por exemplo, composição modificadora de doçura) pode ter uma doçura igual ou superior a cerca de 1% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual para ou superior a cerca de 1,1% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual a ou superior a cerca de 1,15% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou superior a cerca de 1,2% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual a ou superior a cerca de 1,25% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou superior a cerca de 1,3% (p/v) de equivalência de sacarose.

[0050] O um ou mais mogrosídeo(s), por exemplo, um ou mais realçadores de doçura selecionados a partir do mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo podem, por exemplo, ter uma doçura menor que cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose. Por exemplo, o um ou mais mogrosídeo(s), por exemplo, um ou mais realçadores de doçura selecionados a partir do mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo podem ter uma doçura igual ou inferior a cerca de 1,45% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou menor que cerca de 1,4% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou menor que cerca de 1,35% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou menor que cerca de 1,3% (p/v) de equivalência de sacarose. Por exemplo, um ou mais mogrosídeos, por exemplo, um ou mais realçadores de doçura selecionados a partir do mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo podem ter uma doçura igual ou superior a cerca de 1% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou superior a cerca de 1,1% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou superior a cerca de 1,15% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou superior a cerca de 1,2% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou superior a cerca de 1,25% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou superior a cerca de 1,3% (p/v) de equivalência de sacarose.

[0051] Cada um dos adoçantes e realçadores de doçura utilizados nas composições aqui descritas pode ser um adoçante natural ou sintético (artificial). Exemplos de mogrosídeos não naturais (isto é, sintéticos) são descritos no documento WO 2017/075257, cujo conteúdo é aqui incorporado por referência. O termo "adoçante natural" refere-se a adoçantes que são obtidos da natureza, incluindo misturas que podem ter sido tratadas enzimaticamente (por exemplo, glicosilados) para formar compostos não encontrados na natureza (isso não inclui compostos purificados que foram tratados enzimaticamente). Por exemplo, um extrato modificado com uma distribuição de glicosídeo de mogrol que é diferente (por exemplo, realçada) da distribuição de glicosídeo de mogrol que ocorre naturalmente pode ser classificado como natural. Por exemplo, uma mistura de glicosídeos de esteviol glicosilados e/ou mogrosídeos glicosilados pode ser classificada como natural. Cada um dos adoçantes utilizados nas composições aqui descritas pode ser derivado de alimentos. Um produto "derivado de alimento" refere-se a um produto que é preparado sob condições típicas de cozimento, como, por exemplo, usar temperaturas semelhantes às usadas nos métodos de cozimento. Em certas modalidades, o adoçante de alta intensidade e o adoçante de baixa potência usados nas composições descritas neste documento (por exemplo, na composição modificadora de doçura descrita neste documento) são adoçantes naturais. Em certas modalidades, todos os adoçantes usados nas composições aqui descritas são naturais.

[0052] Os adoçantes aqui descritos podem ser usados na forma pura ou purificada e podem ser sintetizados quimicamente, produzidos por processos biotecnológicos (por exemplo, fermentação) ou isolados de uma fonte natural (por exemplo, uma fonte botânica que inclui, sem limitação, frutas, cana de açúcar, beterraba açucareira).

[0053] O um ou mais mogrosídeo(s), por exemplo, um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo podem, por exemplo, ser pelo menos 80% em peso puro. Por exemplo, o um ou mais mogrosídeo(s), por exemplo, um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo podem ter pelo menos cerca de 85% em peso ou pelo menos cerca de 90% em peso ou pelo menos cerca de 95% em peso ou pelo menos cerca de 98% em peso ou pelo menos cerca de 99% em peso puro. Por exemplo, o um ou mais mogrosídeo(s), por exemplo, um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo podem ter até 100% em peso ou até 99% em peso de puro.

[0054] O termo "adoçante de alta intensidade" refere-se a compostos com uma doçura que é pelo menos 100 vezes a doçura da sacarose. Em certas modalidades, o adoçante de alta intensidade tem uma doçura que é pelo menos cerca de 120 ou pelo menos cerca de 140 ou pelo menos cerca de 150 ou pelo menos cerca de 160 ou pelo menos cerca de 160 ou pelo menos cerca de 180 ou pelo menos cerca de 180 ou pelo menos cerca de 200 ou pelo menos cerca de 220 ou pelo menos pelo menos cerca de 240 ou pelo menos cerca de 250 ou pelo menos cerca de 260 ou pelo menos cerca de 280 ou pelo menos cerca de 300 ou pelo menos cerca de 320 ou pelo menos cerca de 340 ou pelo menos cerca de 340 ou pelo menos cerca de 350 ou pelo menos cerca de 360 ou pelo menos cerca de 360 ou pelo menos cerca de 380 ou pelo menos pelo menos cerca de 400 ou pelo menos cerca de 420 ou pelo menos cerca de 440 ou pelo menos cerca de 450 vezes a doçura da sacarose. O adoçante de alta intensidade pode, por exemplo, ter uma doçura que é até 1000 vezes a doçura da sacarose. Embora o adoçante de alta intensidade tenha uma doçura que seja pelo menos 100 vezes a doçura da sacarose, no contexto de seu uso em uma composição modificadora de doçura, como descrito aqui, eles serão usados em uma composição adoçada em uma quantidade que não qualquer doçura detectável ou reconhecida como doce (quantidades que proporcionam uma doçura menor que 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose, que é aceita como "não intrinsecamente doce" pela FEMA.

[0055] O um ou mais adoçantes de alta intensidade podem, por exemplo, ser um ou mais glicosídeos de esteviol e/ou um ou mais mogrosídeos. Por exemplo, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade pode ser uma mistura de glicosídeos de esteviol e mogrosídeos. Por exemplo, os um ou mais adoçantes de alta intensidade podem ser um ou mais glicosídeos de esteviol. Por exemplo, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade pode (m) ser um ou mais mogrosídeos. Em certas modalidades, os mogrosídeos podem ter um desempenho melhor que os glicosídeos de esteviol em termos de realce da doçura e redução fora da nota (por exemplo, enfraquecimento do doce persistente após gosto).

[0056] O adoçante de alta intensidade pode, por exemplo, ser um ou mais glicosídeo de esteviol. Exemplos de glicosídeos de esteviol incluem, por exemplo, esteviosídeo (CAS: 57817-89-7), rebaudiosídeo A (CAS: 58543-16-1), rebaudiosídeo B (CAS: 58543-17-2), rebaudiosídeo C (CAS: 63550 -99-2), rebaudiosídeo D (CAS: 63279-130), rebaudiosídeo E (CAS: 63279-14-1), rebaudiosídeo F (CAS: 43804589-7), rebaudiosídeo G (CAS: 127345-21 -5), rebaudiosídeo H, rebaudiosídeo I (CAS: 1220616-34-1), rebaudiosídeo J, rebaudiosídeo K, rebaudiosídeo L, rebaudiosídeo M (CAS: 1220616-44-3), rebaudiosídeo N (CAS: 1220616-46-5), rebaudiosídeo O (CAS: 1220616-48-7), dulcosídeo A (CAS: 64432-06-0), dulcosídeo B (CAS: 63550-99-2), rubusosídeo (CAS: 64849-39-4) e Diidrocalcona de Naringina (CAS: 18916-17-1).

[0057] O adoçante de alta intensidade pode, por exemplo, ser um ou mais mogrosídeos. Em certas modalidades, o adoçante de alta intensidade pode ser um ou mais dos mogrosídeos listados aqui. Em certas modalidades, o adoçante de alta intensidade pode ser um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo, neomogrosídeo e mogrosídeo V (incluindo todos os seus isômeros). Por exemplo, o adoçante de alta intensidade pode ser uma mistura de mogrosídeo IV, siamenosídeo e mogrosídeo V (incluindo todos os seus isômeros). O ou mais mogrosídeos pode, por exemplo, ser obtido ou obtido a partir de extratos de frutas de Luo Han Guo.

[0058] O termo "adoçante de baixa potência" refere-se a compostos com uma doçura inferior a 100 vezes a doçura da sacarose. Em certas modalidades, o adoçante de baixa potência possui uma doçura que é de cerca de 95 vezes ou até cerca de 90 vezes ou até cerca de 85 vezes a doçura da sacarose.

[0059] O um ou mais adoçante(s) de baixa potência é (são) selecionado(s) de um ou mais dentre celobiose, psicose, ciclamato e/ou 11-O-mogrosídeo V (CAS: 126105-11-1). Por exemplo, um ou mais adoçantes de baixa intensidade podem ser um ou mais dentre celobiose, psicose e 11-O-mogrosídeo V.

[0060] Em certas modalidades, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade inclui (em) ou é (são) um mogrosídeo de alta intensidade. Em certas modalidades, o um ou mais adoçante (s) de baixa potência inclui (em) ou é (são) um mogrosídeo de baixa potência. Em certas modalidades, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade inclui (em) ou é (são) um mogrosídeo de alta intensidade e o um ou mais adoçante (s) de baixa potência inclui (em) ou é (são) um mogrosídeo de baixa potência.

[0061] Em certas modalidades, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade inclui (em) ou é (são) mogrosídeo V. Em certas modalidades, o um ou mais adoçante (s) de baixa potência inclui (em) ou é (são) 11-O-mogrosídeo V. Em certas modalidades, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade inclui (em) ou é (são) mogrosídeo V e um ou mais adoçantes de baixa potência incluem ou são 11-O- mogrosídeo V.

[0062] Mogrosídeos são um grupo de glicosídeos triterpenos e podem ser obtidos a partir do fruto Luo Han Guo (Siraitia grosvenorii), também conhecido como fruto de arhat ou fruto de longevidade ou fruto de swingle. Mogrosídeos compõem aproximadamente 1% da polpa da fruta fresca. Através da extração, um extrato na forma de um pó contendo até 80% de mogrosídeos pode ser obtido. O extrato de mogrosídeo contém grosvenorina II, grosvenorina I, 11-O-mogrosídeo II (I), 11-O-mogrosídeo II (II), 11-O-mogrosídeo II (III), mogrosídeo II (I), mogrosídeo II (II) , mogrosídeo II (III), 11-desidróxi-mogrosídeo III, 11- O-mogrosídeo III, mogrosídeo III (I), mogrosídeo III (II), mogrosídeo IV (I) (siamenosídeo), mogrosídeo IV (II), mogrosídeo IV (III), mogrosídeo IV (IV), desoximogrosídeo V (I), desoximogrosídeo V (II), 11-O- mogrosídeo V (I), isômero mogrosídeo V, mogrosídeo V, isomogrosídeo V, 7-O-mogrosídeo V, 11-O-mogrosídeo VI, mogrosídeo VI (I), mogrosídeo VI (II), mogrosídeo VI (III) (neomogrosídeo) e mogrosídeo VI (IV). A quantidade precisa de mogrosídeo V pode variar dependendo da maturação do fruto e/ou processo de extração utilizado.

[0063] Mogrosídeo (s) inclui(em) mogrosídeo (s) que ocorrem na natureza e mogrosídeos que não ocorrem na natureza. Exemplos de mogrosídeos incluem, por exemplo, grosvenorina II, grosvenorina I, 11- O-mogrosídeo II (I), 11-O-mogrosídeo II (II), 11-O-mogrosídeo II (III), mogrosídeo II (I), mogrosídeo II (II), mogrosídeo II (III), 11-desidróxi- mogrosídeo III, 11-O-mogrosídeo III, mogrosídeo III (I), mogrosídeo III (II), mogrosídeo IIIe, mogrosídeo IIIx, mogrosídeo IV (I) (siamenosídeo), mogrosídeo IV (II), mogrosídeo IV (III), mogrosídeo IV (IV), desoximogrosídeo V (I), desoximogrosídeo V (II), 11-O-mogrosídeo V (I), isômero mogrosídeo V, mogrosídeo V, isomogrosídeo V, 7-O- mogrosídeo V, 11-O-mogrosídeo VI, mogrosídeo VI (I), mogrosídeo VI (II), mogrosídeo VI (III) (neomogrosídeo) e mogrosídeo VI (IV). O mogrosídeo (s) pode, por exemplo, ser obtido ou obtido a partir de extratos de Luo Han Guo.

[0064] O Mogrosídeo V (CAS: 88901-36-4) é um glicosídeo de um derivado de cucurbitano e possui a fórmula química C60H102O29 e a estrutura química mostrada abaixo. O Mogrosídeo V pode ser encontrado em certos extratos de plantas, como extratos da fruta Luo Han Guo (Siraitia grosvenorii). Verificou-se que o mogrosídeo puro V possui uma doçura de pelo menos 400 vezes a doçura da sacarose.

[0065] O siamenosídeo (CAS: 126105-12-2) é um cucurbitano encontrado no fruto de Siraitia grosvenorii e possui a seguinte estrutura química.

[0066] O Mogrosídeo IV (CAS: 89590-95-4) é um heterosídeo triterpênico encontrado no fruto de Siraitia grosvenorii e possui a seguinte estrutura química.

[0067] O neomogrosídeo (CAS: 189307-15-1) é um glicosídeo cucurbitano também encontrado no fruto de Siraitia grosvenorii e possui a seguinte estrutura química.

[0068] O 11-O-Mogrosídeo V (CAS: 126105-11-1) é derivado do mogrosídeo V e possui a seguinte estrutura química. Também é encontrado em extratos de plantas, como extratos da fruta Luo Han Guo (Siraitia grosvenorii). Verificou-se que o 11-O-mogrosídeo V possui uma doçura que é cerca de 84 vezes a doçura da sacarose.

[0069] A relação entre um ou mais adoçantes de alta intensidade e um ou mais adoçante (s) de baixa potência é (são) igual (is) ou superior(es) a cerca de 2 : 1. Por exemplo, a relação de um ou mais adoçantes de alta intensidade para um ou mais adoçantes de baixa potência pode ser igual ou superior a cerca de 2,5 : 1 ou igual ou superior a cerca de 3 : 1 ou igual a ou maior que cerca de 3,5 : 1 ou igual a ou maior que cerca de 4 : 1 ou igual a ou maior que cerca de 4,5 : 1 ou igual a ou maior que cerca de 5 : 1 ou igual a ou maior que cerca de 5,5 : 1 ou igual a ou maior que cerca de 6 : 1 ou igual a ou maior que cerca de 6,5 : 1 ou igual a ou maior que cerca de 7 : 1 ou igual a ou maior que cerca de 7,5 : 1 ou igual a ou maior que cerca de 8 : 1 . A relação do adoçante de alta intensidade para o adoçante de baixa potência é igual ou inferior a cerca de 12 : 1. Por exemplo, a relação de um ou mais adoçantes de alta intensidade para um ou mais adoçantes de baixa potência pode ser igual ou menor que 11,5 : 1 ou igual ou menor que 11 : 1 ou igual a ou menor que cerca de 10,5 : 1 ou igual a ou menor que cerca de 10 : 1 ou igual a ou menor que cerca de 9,5 : 1 ou igual a ou menor que cerca de 9: 1 ou igual a ou menor que cerca de 8,5 : 1. Por exemplo, a relação de um ou mais adoçantes de alta intensidade para um ou mais adoçantes de baixa potência pode variar de cerca de 5 : 1 a cerca de 11 : 1 ou de cerca de 6 : 1 a cerca de 10 : 1 ou de cerca de 6,5 : 1 a cerca de 9,5 : 1 ou de cerca de 7: 1 a cerca de 9: 1 ou de cerca de 7,5 : 1 a cerca de 8,5 : 1.

[0070] Em certas modalidades, a relação de um ou mais adoçantes de alta intensidade para um ou mais adoçantes de baixa potência é de cerca de 2 : 1 a cerca de 12 : 1 ou de cerca de 4 : 1 a cerca de 12 : 1 ou de cerca de 5 : 1 a cerca de 12 : 1 ou de cerca de 6 : 1 a cerca de 10 : 1 ou de cerca de 7: 1 a cerca de 9: 1. A relação pode ser de peso ou volume. A relação aplica-se apenas aos adoçantes de alta intensidade e adoçantes de baixa potência na composição modificadora de doçura (adoçantes de alta intensidade e baixa potência que são usados em uma composição adoçada em uma quantidade abaixo do limiar de reconhecimento de doçura ou com menos equivalência de sacarose a 1,5% (p/v)).

[0071] O um ou mais adoçante(s) de alta intensidade pode(m) estar presentes em uma composição em uma quantidade total igual ou superior a cerca de 15 ppm. Por exemplo, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade pode (m) estar presente(s) em uma composição em uma quantidade total igual ou superior a cerca de 16 ppm ou igual ou superior a cerca de 17 ppm ou igual a ou maior que cerca de 18 ppm ou igual a ou maior que cerca de cerca de 19 ppm ou igual ou superior a cerca de 20 ppm ou igual ou superior a cerca de 21 ppm ou igual ou superior a cerca de 22 ppm ou igual ou superior a cerca de 23 ppm ou igual ou superior a cerca de 24 ppm ou igual a ou superior a cerca de 25 ppm. Por exemplo, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade pode (m) estar presente(s) em uma composição em uma quantidade total igual ou inferior a cerca de 50 ppm ou igual a ou menor que cerca de 48 ppm ou igual ou inferior a cerca de 46 ppm ou igual ou inferior a cerca de 45 ppm ou igual ou inferior a cerca de 44 ppm ou igual ou inferior a cerca de 42 ppm ou igual ou inferior a cerca de 40 ppm ou igual ou inferior a cerca de 38 ppm ou igual ou inferior a superior a cerca de 36 ppm ou igual a ou inferior a cerca de 35 ppm ou igual a ou inferior a cerca de 34 ppm ou igual a ou inferior a cerca de 32 ppm ou igual a ou inferior a cerca de 30 ppm. Por exemplo, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade pode (m) estar presente(s) em uma composição em uma quantidade total que varia de cerca de 15 ppm a cerca de 50 ppm ou de cerca de 15 ppm a cerca de 45 ppm ou de cerca de 15 ppm a cerca de 40 ppm ou de cerca de 15 ppm a cerca de 35 ppm ou de cerca de 15 ppm a cerca de 30 ppm. Por exemplo, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade pode (m) estar presente(s) em uma composição em uma quantidade total que varia de cerca de 15 ppm a cerca de 30 ppm ou de cerca de 20 ppm a cerca de 30 ppm ou de cerca de 22 ppm a cerca de 28 ppm ou de cerca de 23 ppm a cerca de 27 ppm ou de cerca de 24 ppm a cerca de 26 ppm. Por exemplo, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade pode (m) estar presente(s) em uma composição em uma quantidade total de cerca de 20 ppm ou cerca de 25 ppm. A composição pode, por exemplo, ser uma composição adoçada compreendendo pelo menos um adoçante em uma quantidade com uma doçura acima do seu limite de reconhecimento de doçura e/ou igual a ou superior a cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose.

[0072] O um ou mais adoçante(s) de baixa potência pode(m) estar presente(s) em uma composição em uma quantidade total igual ou superior a cerca de 2 ppm. Por exemplo, o um ou mais adoçante (s) de baixa potência pode(m) estar presente(s) em uma composição em uma quantidade total igual ou superior a cerca de 3 ppm. Por exemplo, o um ou mais adoçante (s) de baixa potência pode(m) estar presente(s) em uma composição em uma quantidade total igual ou menor que cerca de 12 ppm ou igual ou menor que cerca de 11 ppm ou igual ou menor que cerca de 10 ppm ou igual ou inferior a cerca de 9 ppm ou igual ou inferior a cerca de 8 ppm ou igual ou inferior a cerca de 7 ppm ou igual ou inferior a cerca de 6 ppm ou igual ou inferior a cerca de 5 ppm. Por exemplo, o um ou mais adoçante (s) de baixa potência pode(m) estar presente(s) em uma composição em uma quantidade total que varia de cerca de 2 ppm a cerca de 12 ppm ou de cerca de 2 ppm a cerca de 10 ppm ou de cerca de 2 ppm a cerca de 5 ppm, por exemplo, em uma quantidade total de cerca de 3 ppm. A composição pode, por exemplo, compreender pelo menos um adoçante que não seja a combinação do adoçante de alta intensidade e o adoçante de baixa potência (por exemplo, composição modificadora de doçura), como descrito aqui. Os intervalos de concentração podem, por exemplo, ser particularmente adequados para composições líquidas, tais como bebidas ou composições que não compreendem proteínas ou gorduras. Em composições com uma base como leite e iogurte ou outras composições que compreendem proteínas e gorduras, podem ser utilizadas concentrações mais altas de um ou mais adoçantes de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa potência. Por exemplo, podem ser utilizadas concentrações que são cerca de 1,5 vezes superiores às concentrações utilizadas para composições líquidas ou composições que não compreendem proteínas ou gorduras. Por exemplo, podem ser utilizadas concentrações que são de cerca de 1,5 vezes a cerca de 3 vezes superiores às concentrações utilizadas para composições líquidas ou composições que não compreendem proteínas ou gorduras.

[0073] Portanto, por exemplo, o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade pode (m) estar presente(s) em uma composição (por exemplo, uma composição com uma base como leite e iogurte ou outras composições que compreendem proteínas e/ou gorduras) em uma quantidade total variando de cerca de 20 ppm a cerca de 75 ppm, por exemplo, de cerca de 22 ppm a cerca de 74 ppm ou de cerca de 24 ppm a cerca de 72 ppm ou de cerca de 25 ppm a cerca de 70 ppm ou de cerca de 26 ppm a cerca de 68 ppm ou de cerca de 28 ppm a cerca de 66 ppm ou de cerca de 30 ppm a cerca de 65 ppm ou de cerca de 30 ppm a cerca de 60 ppm ou de cerca de 30 ppm a cerca de 60 ppm ou de cerca de 30 ppm a cerca de 55 ppm ou de cerca de 30 ppm a cerca de 50 ppm ou de cerca de 30 ppm a cerca de 45 ppm.

[0074] Portanto, por exemplo, o um ou mais adoçante (s) de baixa potência pode(m) estar presente(s) em uma composição (por exemplo, uma composição com uma base como leite e iogurte ou outras composições que compreendem proteínas e/ou gorduras) em uma quantidade total variando de cerca de 3 ppm a cerca de 20 ppm ou de cerca de 4 ppm a cerca de 18 ppm ou de cerca de 4 ppm a cerca de 16 ppm ou de cerca de 5 ppm a cerca de 15 ppm ou de cerca de 6 ppm a cerca de 15 ppm.

[0075] Em certas modalidades, uma composição adoçada compreende pelo menos um adoçante em uma quantidade com uma doçura acima de seu limite de reconhecimento de doçura e/ou igual ou superior a cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose e uma composição modificadora de doçura que consiste em 15 ppm a cerca de 50 ppm de um ou mais adoçantes de alta intensidade, como descrito aqui e 2 ppm a 12 ppm de um ou mais adoçantes de baixa potência, como aqui descrito. Em certas modalidades, uma composição comestível compreende pelo menos um adoçante e uma composição modificadora de doçura que consiste em 15 ppm a cerca de 30 ppm de um ou mais adoçantes de alta intensidade, conforme descrito aqui e 2 ppm a 10 ppm de um ou mais adoçantes de potência, como aqui descrito. Em certas modalidades, uma composição comestível compreende pelo menos um adoçante e uma composição modificadora de doçura que consiste em 20 ppm a cerca de 30 ppm de um ou mais adoçantes de alta intensidade, conforme descrito aqui e 2 ppm a 10 ppm de um ou mais adoçantes de baixa potência, conforme descrito aqui. Em certas modalidades, uma composição comestível compreende pelo menos um adoçante e uma composição modificadora de doçura que consiste em 22 ppm a cerca de 28 ppm de um ou mais adoçantes de alta intensidade, conforme descrito aqui e 2 ppm a 5 ppm de um ou mais adoçantes de potência, como aqui descrito. Em certas modalidades, o adoçante de alta intensidade é o mogrosídeo V. Em certas modalidades, o adoçante de baixa potência é o 11-O-mogrosídeo V.

[0076] O um ou mais mogrosídeo(s), por exemplo, o ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo podem, por exemplo, estar presentes em uma composição adoçada em uma quantidade total igual ou superior a cerca de 15 ppm. Por exemplo, o um ou mais mogrosídeo(s), por exemplo, o um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo podem, por exemplo, estar presentes em uma composição adoçada em uma quantidade total igual ou superior a cerca de 16 ppm ou igual para ou maior que cerca de 17 ppm ou igual ou maior que cerca de 18 ppm ou igual ou maior que cerca de 19 ppm ou igual ou maior que cerca de 20 ppm ou igual ou superior a cerca de 21 ppm ou igual ou superior a cerca de 21 ppm 22 ppm ou igual ou superior a cerca de 23 ppm ou igual ou superior a cerca de 24 ppm ou igual ou superior a cerca de 25 ppm. Por exemplo, o um ou mais mogrosídeo(s), por exemplo, o um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo podem, por exemplo, estar presentes em uma composição adoçada em uma quantidade total igual ou inferior a cerca de 50 ppm, para exemplo igual ou inferior a 45 ppm, por exemplo, igual a ou inferior a cerca de 40 ppm, por exemplo, igual ou inferior a cerca de 35 ppm. Por exemplo, o um ou mais mogrosídeo(s), por exemplo, o ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo podem estar presentes em uma composição adoçada em uma quantidade total que varia de cerca de 15 ppm a cerca de 50 ppm ou de cerca de 15 ppm a cerca de 45 ppm ou de cerca de 15 ppm a cerca de 40 ppm ou de cerca de 15 ppm a cerca de 35 ppm ou de cerca de 20 ppm a cerca de 35 ppm ou de cerca de 20 ppm a cerca de 30 ppm.

[0077] O termo "ppm" refere-se a parte (s) por milhão em peso, por exemplo, o peso de um composto, como Mogrosídeo V (em miligramas) por quilograma do produto que contém esse composto (ou seja, mg/kg) ou o peso de um composto (por exemplo, produto consumível/comestível por via oral da presente descrição), como Mogrosídeo V (em miligramas) por litro do produto que contém esse composto (ou seja, mg/L) ou em volume, por exemplo, o volume de um composto, como Mogrosídeo V (em mililitros) por litro do produto que contém esse composto (ou seja, ml/L).

[0078] As composições modificadoras de doçura aqui descritas podem, por exemplo, compreender concentrações mais altas dos adoçantes de alta e baixa intensidade e são então diluídas em uma composição adoçada para obter as concentrações aqui citadas.

[0079] Uma composição adoçada compreende pelo menos um adoçante em uma quantidade igual ou superior ao seu limite de reconhecimento de doçura e/ou uma quantidade com uma doçura igual ou superior a cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose. O termo "limiar de reconhecimento de doçura" refere-se à menor concentração conhecida de um composto que é percebida como doce pelo senso de paladar humano. Uma doçura igual ou superior a cerca de 1,5% (p/v) da equivalência de sacarose é aceita como "intrinsecamente doce" pela FEMA.

[0080] O pelo menos um adoçante pode ser nutritivo ou não nutritivo. Os adoçantes nutritivos agregam valor calórico aos alimentos que os contêm, enquanto os adoçantes não nutritivos são muito baixos em calorias ou não contêm calorias. O aspartame, o único adoçante nutritivo de alta intensidade aprovado contém mais de 2% das calorias em uma quantidade equivalente de açúcar, em oposição aos adoçantes não nutritivos que contêm menos de 2% das calorias em uma quantidade equivalente de açúcar.

[0081] O pelo menos um adoçante pode, por exemplo, ser selecionado de um ou mais dentre sacarose, frutose, glicose, xilose, arabinose, ramnose, tagatose, alulose, trealose, isomaltulose, acessulfame de potássio (AceK), aspartame, esteviol glicosídeo sucralose, xarope de milho com alto teor de frutose, xarope de amido, sacarina, sucralose, neotame, Advantame, extrato de Luo Han Guo, neoespiridina, di-hidrocalcona, di-hidrocalcona de naringina, di- hidrocalcona de neo-hesperidina, rubusosídeo, rebaudiosídeo A, esteviosídeo, estévia eritritol, xilitol, manitol, sorbitol e inositol. Exemplos de adoçantes que podem ser utilizados nas composições adoçadas são descritos, por exemplo, no documento WO 2016/038617, cujo conteúdo é aqui incorporado por referência.

[0082] O pelo menos um adoçante pode, por exemplo, ser selecionado de um ou mais dentre sacarose, xarope de milho rico em frutose, acessulfame de potássio (AceK), aspartame, glicosídeo de esteviol e/ou sucralose.

[0083] Como adoçar consumíveis usando adoçantes em uma quantidade suficiente é bem conhecido na técnica. Dependendo do consumível, a quantidade de adoçante pode ser reduzida por adição de uma composição modificadora de doçura, como aqui descrito. Por exemplo, uma redução de cerca de 1°. a cerca de 4°. Brix ou mais pode ser alcançada.

[0084] O pelo menos um outro adoçante presente em uma quantidade igual ou superior ao seu limite de reconhecimento de doçura e/ou uma quantidade com uma doçura igual ou superior a cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose pode, por exemplo, ser utilizado em uma composição adoçada em uma quantidade igual ou superior a cerca de 0,01% (p/v). Por exemplo, o pelo menos um outro adoçante pode ser usado em uma composição adoçada em uma quantidade igual ou superior a cerca de 0,1% (p/v) ou igual ou superior a cerca de 0,5% (p/v) ou igual a ou superior a cerca de 1% (p/v) ou igual ou superior a cerca de 2% (p/v). Por exemplo, o pelo menos um outro adoçante pode ser usado em uma composição comestível em uma quantidade igual ou inferior a cerca de 20% (p/v) ou igual ou inferior a cerca de 15% (p/v) ou igual a ou inferior a cerca de 10% (p/v) ou igual ou inferior a cerca de 8% (p/v) ou igual ou inferior a cerca de 6% (p/v) ou igual ou inferior a cerca de 5% (p/v).

[0085] O pelo menos um outro adoçante presente em uma quantidade igual ou superior ao seu limiar de reconhecimento de doçura e/ou uma quantidade com uma doçura igual ou superior a cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose pode ser usado nas composições adoçadas descritas neste documento (por exemplo, composição comestível) em quantidades é de aproximadamente 2% (p/v) a cerca de 15% (p/v) de sacarose.

[0086] Em certas modalidades, é fornecida aqui uma composição modificadora de doçura consistindo em mogrosídeo V e 11-O- mogrosídeo V em uma relação que varia de cerca de 2 : 1 a cerca de 12 : 1, por exemplo, de cerca de 6 : 1 a cerca de 10 : 1. Esta composição modificadora de doçura pode, por exemplo, ser usada como realçadora ou modificadora de doçura em uma composição comestível. A composição comestível pode, por exemplo, compreender pelo menos um outro adoçante, como sacarose. O mogrosídeo V pode, por exemplo, ser usado na composição comestível em uma quantidade que varia de cerca de 15 ppm a cerca de 30 ppm ou de cerca de 20 ppm a cerca de 30 ppm (por exemplo, cerca de 20 ppm ou cerca de 25 ppm). O 11-O-mogrosídeo V pode ser usado na composição comestível em uma quantidade que varia de cerca de 2 ppm a cerca de 12 ppm ou de cerca de 2 ppm a cerca de 10 ppm (por exemplo, cerca de 8,5 ppm ou cerca de 3 ppm). O pelo menos um outro adoçante pode, por exemplo, estar presente na composição comestível em uma quantidade de açúcar de cerca de 2% (p/v) a cerca de 15% (p/v) de sacarose.

[0087] As composições podem estar em qualquer forma adequada, por exemplo, sólida (por exemplo, pó, grânulos, comprimidos) ou em solução (por exemplo, solução aquosa) ou em uma emulsão ou em uma suspensão. Por exemplo, as composições podem ainda compreender um diluente ou agente de volume, tal como fibra alimentar.

[0088] As composições comestíveis como descritas aqui incluem, por exemplo, o seguinte. - Sopas úmidas/líquidas, independentemente da concentração ou do recipiente, incluindo sopas congeladas. Para os fins desta definição, sopa (s) significa um alimento preparado a partir de carne, aves, peixes, legumes, grãos, frutas e outros ingredientes, cozido em um líquido que pode incluir pedaços visíveis de alguns ou de todos esses ingredientes. Pode ser claro (como caldo) ou grosso (como ensopado), liso, purê ou em pedaços, pronto para servir, semi- condensado ou condensado e pode ser servido quente ou frio, como primeiro prato ou como prato principal durante uma refeição ou como um lanche entre as refeições (bebido como uma bebida). A sopa pode ser usada como ingrediente na preparação de outros componentes da refeição e pode variar de caldo (consomé) a molhos (sopas à base de creme ou queijo). - Alimentos desidratados e culinários, incluindo produtos auxiliares de cozinha, tais como: pós, grânulos, pastas, produtos líquidos concentrados, incluindo caldos concentrados, caldos e caldos em cubos prensados, comprimidos ou em pó ou granulados, vendidos separadamente como produto acabado produto ou como ingrediente de um produto, molhos e misturas de receitas (independentemente da tecnologia). - Produtos de soluções para refeições, tais como: sopas desidratadas e liofilizadas, incluindo misturas de sopas desidratadas, sopas instantâneas desidratadas, sopas desidratadas prontas para cozinhar, preparações desidratadas ou ambientais de pratos prontos, refeições e pratos únicos, incluindo massas, batatas e pratos de arroz. - Produtos para embelezamento de refeições, tais como: condimentos, marinadas, molhos para salada, coberturas de saladas, molhos, panificação, misturas para massa, produtos para barrar estáveis em prateleiras, molhos para churrasco, misturas líquidas de receitas, concentrados, molhos ou molhos, incluindo misturas de receitas para salada, vendidas como um produto acabado ou como ingrediente de um produto, desidratado, líquido ou congelado. - Bebidas, incluindo misturas e concentrados de bebidas, incluindo, sem limitação, bebidas alcoólicas e não alcoólicas prontas para beber e em pó secas, bebidas carbonatadas e não carbonatadas, por exemplo, refrigerantes, sucos de frutas ou vegetais, bebidas alcoólicas e não alcoólicas. - Produtos de confeitaria, por exemplo, bolos, biscoitos, tortas, doces, gomas de mascar, gelatinas, sorvetes, sorvetes, pudins, geleias, gelatinas, molhos para saladas e outros condimentos, cereais e outros alimentos do café da manhã, frutas enlatadas e molhos de frutas e o gosto. - Laticínios, como leite, queijo, iogurte. - Composições farmacêuticas que podem, por exemplo, estar na forma de xarope, emulsão, suspensão, solução ou outra forma líquida. - Composições dentárias, incluindo, por exemplo, agentes de refrescamento da boca, agentes de gargarejo, agentes de lavagem da boca, pasta de dente, esmalte de dente, dentifrícios, sprays na boca e fio dental. - composições em gel comestíveis

[0089] As composições aqui descritas podem ainda compreender uma composição de base. Por exemplo, as composições comestíveis descritas neste documento podem ainda compreender uma composição de base comestível. Isto refere-se a todos os ingredientes necessários para a composição, exceto a combinação do adoçante de alta intensidade e adoçante de baixa potência (por exemplo, composição modificadora de doçura). A composição de base pode, por exemplo, ser uma composição de base adoçada compreendendo pelo menos um outro adoçante presente em uma quantidade igual ou superior ao seu limite de reconhecimento de doçura e/ou uma quantidade com uma doçura igual ou superior a cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose. Estes variarão naturalmente em natureza e proporção, dependendo da natureza e uso da composição, mas são bem conhecidos na arte e podem ser usados em proporções reconhecidas na arte. A formulação de tal composição de base para todos os fins concebíveis está, portanto, dentro do conhecimento comum da técnica.

[0090] Os ingredientes em uma composição de base podem incluir, mas não estão limitados a, agentes antiaglomerantes, agentes antiespumantes antioxidantes, aglutinantes, corantes, diluentes, desintegrantes, emulsificantes, agentes ou formulações encapsulantes, enzimas, gorduras, realçadores de sabor, agentes saborizantes, gomas, lubrificantes, polissacarídeos, conservantes, proteínas, solubilizantes, solventes, estabilizadores, derivados de açúcar, surfactantes, adoçantes, vitaminas, ceras e similares. Os solventes que podem ser utilizados são conhecidos dos especialistas na técnica e incluem, por exemplo, etanol, etileno glicol, propileno glicol, glicerina e triacetina. Encapsulantes e gengivas incluem maltodextrina, goma arábica, alginatos, gelatina, amido modificado e polissacarídeos.

[0091] Exemplos de aditivos, excipientes, veículos, diluentes ou solventes para compostos saborizantes ou fragrâncias podem ser encontrados por exemplo, em "Perfume and Flavour Materials of Natural Origin", S. Arctander, Ed., Elizabeth, N. J., 1960; em "Perfume and Flavor Chemicals", S. Arctander, Ed., vol. I e II, Allured Publishing Corporation, Carol Stream, EUA, 1994; em "Flavorings", E. Ziegler e H. Ziegler (ed.), Wiley-VCH Weinheim, 1998, e "CTFA Cosmetic Ingredient Handbook", JM Nikitakis (ed.), 1a ed., The Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, 1988.

[0092] A relação da combinação de um ou mais adoçantes de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa potência (por exemplo, composição modificadora de doçura) ou um ou mais realçadores de doçura selecionados a partir do mogrosídeo IV, siamenosídeo e o neomogrosídeo dependerá da natureza da composição e do grau e características da doçura desejada. A pessoa versada pode determinar facilmente a relação apropriada em todos os casos apenas com experimentação simples e não inventiva. As quantidades e proporções aqui descritas são apenas exemplificativas e o saborizante pode buscar efeitos particulares trabalhando fora desse intervalo, e deve ser considerado apenas uma indicação.

[0093] O pH da composição aqui descrita pode ser qualquer pH que não afete adversamente o gosto da mistura de adoçante. Por exemplo, o pH pode variar de cerca de 1,8 a cerca de 8 ou de cerca de 2 a cerca de 5. Uma pessoa versada na técnica seria capaz de identificar uma concentração adequada de cada adoçante para usar, dependendo do pH da composição.

[0094] O uso de um ou mais adoçantes de baixa potência com um ou mais adoçantes de alta intensidade pode, por exemplo, melhorar uma ou mais características de doçura em uma composição adoçada em comparação com o uso de um ou mais adoçante (s) de alta intensidade sozinho. Assim, as composições adoçadas aqui descritas podem, por exemplo, ter uma ou mais características de doçura realçadas em comparação com as composições adoçadas na ausência de um ou mais adoçantes de baixa potência. O uso de um ou mais realçadores de doçura selecionados de mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo pode, por exemplo, melhorar uma ou mais características de doçura de uma composição adoçada em comparação com o uso de um realçador de doçura diferente, como o extrato de Luo Han Guo em vez de um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo.

[0095] As composições adoçadas descritas neste documento podem, por exemplo, ter uma ou mais características de doçura que são mais semelhantes à sacarose em comparação com as composições adoçadas na ausência de um ou mais adoçantes de baixa potência ou comparadas às composições adoçadas que compreendem um realçador de doçura diferente.

[0096] As composições adoçadas aqui descritas podem, por exemplo, ter um gosto doce persistente enfraquecido em comparação com as composições adoçadas na ausência de um ou mais adoçantes de baixa potência ou em comparação com as composições adoçadas que compreendem um realçador de doçura diferente.

[0097] As composições adoçadas aqui descritas podem, por exemplo, ter um gosto amargo enfraquecido e/ou gosto adstringente e/ou gosto metálico e/ou gosto de alcaçuz em comparação com as composições adoçadas na ausência de um ou mais adoçantes de baixa potência ou comparado com as composições adoçadas compreendendo um realçador de doçura diferente.

[0098] As composições adoçadas aqui descritas podem, por exemplo, ter um impacto de doçura reforçada em comparação com as composições adoçadas na ausência de um ou mais adoçantes de baixa potência ou em comparação com as composições adoçadas que compreendem um realçador de doçura diferente.

[0099] A composição adoçada comparativa é idêntica, exceto que não inclui nenhum dos um ou mais adoçantes de baixa potência ou idênticos, exceto que compreende um realçador de doçura diferente no lugar de um ou mais mogrosídeos, por exemplo, um ou mais dentre mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo.

Usos

[00100] É aqui fornecido o uso de uma combinação de um ou mais adoçantes de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa potência para aumentar a doçura de uma composição compreendendo pelo menos um outro adoçante que apresenta uma quantidade igual ou superior ao seu limiar de reconhecimento de doçura e/ou uma quantidade com doçura igual ou superior a cerca de 1,5% (p/v) de sacarose equivalência. A combinação de um ou mais adoçantes de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa intensidade tem uma doçura menor que 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose. O um ou mais adoçante (s) de alta intensidade, um ou mais adoçantes de baixa potência e pelo menos um outro adoçante podem estar de acordo com qualquer modalidade aqui descrita.

[00101] É aqui fornecido o uso de um ou mais mogrosídeos, por exemplo, um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo para aumentar a doçura de uma composição compreendendo pelo menos um outro adoçante que apresenta uma quantidade igual ou superior à sua doçura limiar de reconhecimento e/ou uma quantidade com uma doçura igual ou superior a cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose.

[00102] Assim, é fornecido um método para melhorar a doçura de uma composição adoçada, o método compreendendo o fornecimento de uma composição de base compreendendo pelo menos um adoçante em uma quantidade que tem uma doçura acima do seu limite de reconhecimento de doçura e/ou uma quantidade que tem uma doçura igual ou superior a cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose e adicionar pelo menos um adoçante de baixa potência, pelo menos um adoçante de alta intensidade; ou adicionar um ou mais mogrosídeos, por exemplo, um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo. Cada componente da composição final pode ser adicionado em qualquer ordem para obter a composição final desejada. O método pode, por exemplo, compreender a mistura dos componentes.

[00103] O um ou mais adoçante de alta intensidade e/ou a combinação do um ou mais adoçante de alta intensidade e o um ou mais adoçante (s) de baixa potência (por exemplo, composição modificadora de doçura) e/ou o ou mais mogrosídeos, por exemplo, um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo podem, por exemplo, aumentar a doçura de uma composição adoçada em igual ou superior a cerca de 1,0% (p/v) de equivalência de sacarose. Por exemplo, o (s) adoçante (s) de alta intensidade e/ou a combinação do (s) adoçante (s) de alta intensidade e o (s) adoçante (s) de baixa potência e/ou o (s) mogrosídeo (s), por exemplo, um ou mais mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo podem aumentar a doçura de uma composição adoçada em igual ou superior a cerca de 1,1% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou superior a cerca de 1,15% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual igual ou superior a cerca de 1,2% (p/v) de equivalência de sacarose ou igual ou superior a cerca de 1,25% (p/v) de equivalência de sacarose. A composição pode, por exemplo, ser uma composição compreendendo pelo menos um outro adoçante.

[00104] Também é aqui fornecido o uso de um ou mais adoçantes de baixa potência para melhorar uma ou mais características de doçura de uma composição adoçada compreendendo um ou mais adoçantes de alta intensidade. O um ou mais adoçante (s) de alta intensidade e um ou mais adoçantes de baixa potência são usados em quantidades com uma doçura menor que cerca de 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose.

[00105] Assim, é fornecido um método para melhorar uma ou mais características de doçura de uma composição adoçada compreendendo um ou mais adoçantes de alta intensidade em uma quantidade com uma doçura menor que 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose, o método compreendendo fornecer uma composição compreendendo um ou mais adoçantes de alta intensidade e adicionar um ou mais adoçantes de baixa potência. Cada componente da composição final pode ser adicionado em qualquer ordem para obter a composição final desejada. O método pode, por exemplo, compreender a mistura dos componentes.

[00106] A melhoria de uma ou mais características de doçura de uma composição adoçada compreendendo um adoçante de alta intensidade pode, por exemplo, fornecer características de doçura que são mais semelhantes às características de doçura da sacarose.

[00107] As características de doçura podem se referir ao perfil de sabor (perfil de gosto), que se refere à intensidade do sabor e aos atributos perceptivos de um determinado composto. Atributos exemplares de sabor adoçado são intensidade doçura, amargura, alcaçuz preto e etc.

[00108] As características da doçura podem se referir ao perfil temporal, que se refere às mudanças na percepção da doçura ao longo do tempo. Todo adoçante exibe um tempo de aparência característico (AT) e tempo de extinção (ET). A maioria dos adoçantes de alta potência, em contraste com os adoçantes de carboidratos, exibe ET prolongado (persistente). Geralmente, a equivalência de sacarose detectada atinge um nível máximo de resposta e diminui com o tempo. Quanto mais longo o cone, maior a doçura detectada permanece em um composto.

[00109] Em certas modalidades, o um ou mais adoçante (s) de baixa potência podem ser usados para enfraquecer o gosto doce persistente da composição adoçada compreendendo um ou mais adoçantes de alta intensidade. Por outras palavras, o adoçante de baixa potência pode ser utilizado para diminuir o tempo de extinção (ET) da composição adoçada compreendendo um ou mais adoçantes de alta intensidade. Isso se refere à persistência indesejável do gosto adoçado na boca após a composição inicial ser ingerida ou expectorado. O gosto adoçado persistente pode, por exemplo, referir-se ao período de tempo que o gosto adoçado permanece após ser detectado inicialmente, a rapidez com que a intensidade do gosto adoçado diminui ou desaparece após ser detectado inicialmente e a intensidade do gosto adoçado após é detectado inicialmente. Um ou mais adoçantes de baixa potência podem, por exemplo, diminuir o período de tempo que o gosto adoçado permanece após ser detectado inicialmente e/ou aumentar a velocidade com que o gosto adoçado diminui após serem detectados inicialmente e/ou diminuir a intensidade do gosto adoçado após ser detectado inicialmente.

[00110] Em certas modalidades, o um ou mais adoçante (s) de baixa potência (s) pode ser usado para enfraquecer o gosto amargo e/ou gosto adstringente e/ou gosto metálico e/ou gosto de alcaçuz da composição adoçada que compreende a uma ou mais de alta intensidade adoçante (s). O termo "alcaçuz" refere-se a um gosto doce de um composto.

[00111] Em certas modalidades, o um ou mais adoçante (s) de baixa potência podem ser usados para fortalecer o impacto da doçura da composição adoçada compreendendo o um ou mais adoçante (s) de alta intensidade. O impacto da doçura refere-se ao período de tempo necessário para que a doçura seja detectada inicialmente e a intensidade com que a doçura é detectada inicialmente. Um ou mais adoçantes de baixa potência podem, por exemplo, diminuir a quantidade de tempo antes que a doçura seja detectada inicialmente e/ou aumentar a intensidade na qual a doçura é detectada inicialmente.

[00112] O grau de doçura e outras características de doçura descritas aqui podem ser avaliadas por um painel de degustação de especialistas treinados, por exemplo, como descrito nos exemplos abaixo.

Métodos de Fabricação

[00113] São ainda aqui fornecidos métodos para preparar as composições aqui descritas. As composições podem estar de acordo com qualquer modalidade aqui descrita.

[00114] Os métodos podem compreender a combinação de cada componente de uma composição desejada nas proporções desejadas e, opcionalmente, a mistura dos componentes. Os componentes podem ser combinados e misturados em qualquer ordem adequada.

[00115] Uma pessoa versada na técnica identificaria um método adequado para preparar a composição (por exemplo, ordem adequada para combinar ou misturar os componentes) dependendo da natureza da composição e do grau e características da doçura desejada. Os métodos podem, por exemplo, compreender o fornecimento de uma composição de base desejada e a adição dos adoçantes.

[00116] Cada um dos adoçantes aqui descritos pode ser feito por um processo sintético ou por um processo biológico (por exemplo, enzimático) ou por um processo de fermentação ou pode ser isolado de uma fonte natural, como uma planta ou fruto.

[00117] O processo pode, por exemplo, compreender o contato de pelo menos um substrato precursor de mogrol com uma enzima da via mogrosídeo. A enzima pode, por exemplo, estar presente em um lisado celular ou pode estar presente em uma célula hospedeira (por exemplo, uma célula hospedeira recombinante). A enzima pode, por exemplo, ser uma enzima UGT (UDP-glicuronosiltransferase).

[00118] Por exemplo, um composto mogrosídeo pode ser produzido pela via biossintética descrita em WO 2013/076577 ou WO 2014/086842, cujo conteúdo é aqui incorporado por referência.

[00119] Por exemplo, o mogrosídeo V pode ser produzido pela via biossintética descrita em Itkin et al., "A via biossintética do mogrosídeo adoçante V de alta intensidade e não açucarado de Siraitia grosvenorii", PNAS, 7 de novembro de 2016, E7619 - E7628 e WO 2016/038617, cujo conteúdo é aqui incorporado por referência.

[00120] Por exemplo, um composto mogrosídeo pode ser produzido modificando (por exemplo, redistribuindo o conteúdo de glicosídeo) outro composto mogrosídeo. Por exemplo, um composto mogrosídeo pode ser produzido redistribuindo o conteúdo de glicosídeo de outro composto mogrosídeo usando ácido ou enzimas, conforme descrito em WO 2014/150127, cujo conteúdo é incorporado aqui por referência.

[00121] O processo pode, por exemplo, compreender a extração de um ou mais compostos adoçantes de uma fonte natural, como uma planta ou fruto. Isso pode, por exemplo, ser seguido por uma etapa de purificação para produzir um adoçante de alta intensidade, adoçante de baixa intensidade ou mistura de adoçantes (por exemplo, mistura de adoçantes de alta intensidade, como uma mistura de mogrosídeos). O extrato pode, por exemplo, ter um conteúdo relativamente alto de mogrosídeo V e/ou 11-O-mogrosídeo V (por exemplo, pelo menos cerca de 30% em peso ou pelo menos cerca de 40% em peso). Isso pode, por exemplo, envolver fracionamento, por exemplo, por cromatografia flash. Um ou mais compostos de mogrosídeo (por exemplo, mogrosídeo V) podem ser obtidos a partir de frutos de Luo Han Guo (Siraitia grosvenorii).

[00122] Quando um processo de fermentação é usado para produzir o produto alvo (por exemplo, produto mogrosídeo alvo), o alvo pode ser extraído do meio de reação de fermentação aquoso usando um solvente apropriado (por exemplo, heptano) seguido por destilação fracionada. A composição química de cada fração pode ser medida quantitativamente por GC/MS (espectrometria de massa por cromatografia em fase gasosa). As frações podem ser combinadas para gerar a compostos mogrosídeo desejados (por exemplo, mogrosídeo V e 11-O-mogrosídeo V) para uso em sabores ou outras aplicações.

[00123] A verificação da aceitabilidade do produto final misturado pode ser realizada por comparação direta com um produto saborizante de referência de mogrosídeo (por exemplo, um produto comercial saborizante natural existente obtido de um fornecedor comercial).

EXEMPLOS Exemplo 1 Métodos

[00124] Extratos de frutas de Luo Han Guo obtidos de Blue California (Tomas, Rancho Santa Margarita, California) (extrato 4), Azile LCC (Rolling Hills Est, California) (extratos 1 e 2) e Chr. Olesen Group (Gentofte, Dinamarca) (extrato 3) foi analisado para identificar os compostos presentes no extrato.

[00125] As soluções de amostra dos extratos foram preparadas dissolvendo 16,52 μg da amostra em 25,0 mL de solvente (acetonitrila/água 20/80 v/v). A partir desta solução, 100 μL foram transferidos para um frasco de HPLC e 900 μL de solvente foram adicionados (solução de 66,1 ppm). A partir da solução da amostra, 10 μL foram transferidos para um frasco de HPLC e 990 μL de solvente foram adicionados (solução de 6,61 ppm). As soluções de 66,1 e 6,61 ppm foram injetadas duas vezes no LC-MS.

[00126] As soluções de calibração (referência) do mogrosídeo V foram feitas dissolvendo 9,22 mg de mogrosídeo V (98,5% mogrosídeo V obtido da AAPIN chemical Ltd., Oxfordshire, UK) em 10,0 mL de solvente (acetonitrila/água 20/80 v/v). A solução mão foi armazenada no freezer e usada para preparar soluções de mogrosídeo V em várias concentrações (0,11 ppm, 0,34 ppm, 1,02 ppm, 3,07 ppm e 9,22 ppm). Essas soluções também foram injetadas duas vezes na LC-MS.

[00127] 2 μL de cada solução foram injetados em uma coluna Acquity C18 BEH 1,7 μm 150 x 2,1 mm (Waters, Milford, Massachusetts, United States) a 40°C. Os compostos foram eluídos usando uma mistura de acetonitrila e ácido fórmico a 0,1% em água a partir de 20% de acetonitrila subindo para 50% de acetonitrila em 14 minutos. O gradiente voltou aos valores iniciais em 1 minuto e estabilizou por 5 minutos. O fluxo foi ajustado em 400 μL durante toda a execução.

[00128] Os compostos eluídos foram detectados usando espectrometria de massa por cromatografia líquida (LC/MS). O espectrômetro de massa estava operando no modo negativo medindo ESI 150 a 2000 Amu com uma resolução de 70000. As taxas de fluxo de gás foram bainha 60, aux 20 e varredura 3. A temperatura capilar e a temperatura do aquecedor auxiliar de gás foram ajustadas em 380°C e 400°C, respectivamente.

[00129] A % de cada componente no extrato foi calculada usando a seguinte equação e calibrada contra uma curva das várias soluções de mogrosídeo de calibração de concentração V (referência) descritas acima. relação = % de componente area = área componente na amostra (área média de 2 injeções) V = volume de solvente da amostra em litros d = diluição da amostra (da solução da amostra para o frasco) declividade = inclinação da curva de calibração do mogrosídeo V com b (interceptação) = 0 SW = peso da amostra em mg

Resultados

[00130] A Figura 1 mostra um cromatograma de um extrato de Luo Han Guo (extrato 2 da Tabela 1 abaixo).

[00131] A Tabela 1 mostra a composição de quatro extratos diferentes de Luo Han Guo. Mogrosídeo V é o mogrosídeo com a maior concentração em todos os quatro extratos (cerca de 45% em peso no extrato 1). Tabela 1.

Exemplo 2 Métodos

[00132] Um extrato de fruta de Luo Han Guo obtido da Azile LCC (Rolling Hills Est, California) (extrato 1 do Exemplo 1 acima) contendo cerca de 68% em peso de mogrosídeos foi fracionado por cromatografia de (C-18) flash de fase reversa.

[00133] Os compostos foram eluídos utilizando uma mistura de metanol (MeOH) em água a partir de 30% de MeOH, seguida de um gradiente linear de 30-80% de MeOH e, finalmente, a coluna foi lavada com 80% de MeOH. Os solventes foram introduzidos na taxa de fluxo de 30 ml/min ao longo do processo de separação. Os compostos eluídos foram visualizados com um detector de UV ajustado a 210 nm e um detector de dispersão de luz coronal. A % de cada componente no extrato foi calculada usando a equação descrita no Exemplo 1 acima.

[00134] As frações coletadas foram misturadas de acordo com a Tabela 2 abaixo e depois liofilizadas até pós. O pó correspondente a várias frações misturadas, conforme apresentado na Tabela 2 abaixo, foi dissolvido em várias concentrações sobre 5 % de sacarose. O gosto dessas amostras foi comparado por três especialistas em painel (treinados em sabor) com controles de 5 % de sacarose. Assim, foi determinado o efeito de aumento da doçura de cada fração ou conjunto de frações exibidas em sacarose a 5%.

Resultados

[00135] Os resultados estão indicados na tabela abaixo. O extrato total foi coletado em 22 frações. As frações 1-10 não contêm mogrosídeo V. Tabela 2.

[00136] As frações 1-10 e 19-22 têm um gosto desagradável, que é o caráter da fruta de Luo Han Guo, sem impacto de realce doce.

[00137] O melhor efeito de aumento da doçura foi observado nas frações 12-17, que contêm principalmente mogrosídeos. Quando as frações quase têm mogrosídeo puro V, a nota fermentada suja e persistente é mais perceptível, como as frações 14 e 15. Assim, o mogrosídeo puro V tem um gosto persistente e inato.

[00138] A fração 12 foi o doce mais limpo, mas menos inicial devido à pequena porcentagem de mogrosídeo V. A fração 13 tem melhor qualidade de doce, mas adstringência um pouco maior. 11-O- mogrosídeo V e mogrosídeo V são os dois principais mogrosídeos nessas duas frações, mas com uma relação diferente (F12 mogrosídeo V : 11-O-mogrosídeo V é 4 : 9 e F13 mogrosídeo V : 11-O-mogrosídeo V é 13 : 3).

[00139] O Mogrosídeo V era muito doce, considerado 425 vezes mais doce que a sacarose, enquanto o 11-O-mogrosídeo V é classificado como 84 vezes mais doce que a sacarose.

Exemplo 3 Métodos

[00140] Um extrato de fruta de Luo Han Guo obtido da Azile LCC (Rolling Hills Est, California) (extrato 1 do Exemplo 1 acima) contendo cerca de 68% em peso de mogrosídeos foi fracionado e a composição de cada fração determinada pelo método de cromatografia descrito acima em relação ao Exemplo 1

[00141] Cada fração foi combinada com uma solução de 5% de sacarose e o gosto dessas amostras foi comparado por três especialistas (treinados em sabor) a controles de 5% de sacarose.

Resultados

[00142] A Tabela 3 mostra a composição química das frações 11 a 20 do extrato. Tabela 3.

[00143] A Tabela 4 mostra os resultados de degustação para as frações 12 a 15. Os resultados são semelhantes aos resultados obtidos no Exemplo 2. Tabela 4.

Exemplo 4

[00144] Mogrosídeo V e 11-O-mogrosídeo V foram isolados a partir de extratos de Luo Han Guo usando o sistema HPLC preparativa Agilent 1100 com uma coluna Phenomenex Luna C18 (2) (5 μm, 210 X 21,4 mm) e combinados para formar soluções de várias concentrações.

[00145] Essas soluções foram combinadas com uma solução contendo sacarose a 5% (p/v) e ácido cítrico a 0,03% (p/v) para fornecer amostras de teste e avaliadas por um painel de paladar sensível e doce de cinco especialistas (treinados em sabor).

[00146] Os resultados são mostrados na Tabela 5 abaixo. Tabela 5.

[00147] Verificou-se surpreendentemente que a mistura de 11-O- mogrosídeo V com mogrosídeo V melhora a qualidade do doce em comparação com o mogrosídeo V sozinho. O 11-O-mogrosídeo V, em cima do mogrosídeo V, ajudou a reduzir a doçura persistente (enfraquecer o gosto posterior da doçura) e a reduzir os gostos adstringentes e amargos em comparação com o mogrosídeo V sozinho. Então, o 11-O-mogrosídeo V tornou a doçura com um gosto mais semelhante ao açúcar do que o mogrosídeo V sozinho (isto é, ajuda a fornecer um perfil temporal mais próximo do açúcar). Isso permite o uso de concentrações mais altas de mogrosídeo V para obter maior doçura, ao mesmo tempo em que elimina as desvantagens associadas ao uso de concentrações mais altas desse adoçante (por exemplo, gostos persistentes, amargos e adstringentes). Isto foi surpreendente, dado que o mogrosídeo V é o adoçante mogrosídeo mais potente e o 11-O- mogrosídeo V tem uma potência muito menor.

Exemplo 5

[00148] Um painel sensível ao gosto doce classificou a doçura das soluções de uma mistura de adoçantes ("Mistura 1") em relação às soluções de sacarose em uma variedade de concentrações para determinar a equivalência da sacarose. A mistura 1 foi uma combinação das frações 11 a 18 do Exemplo 2 e continha 8,16% em peso de 11-O- mogrosídeo V e 61,6% em peso de mogrosídeo V.

[00149] Os resultados são mostrados na Tabela 6 abaixo. Tabela 6.

[00150] Os dados demonstram que a mistura 1 tem uma doçura abaixo de 1% de equivalência de sacarose (conforme determinado por sete participantes do painel), que é aceito como "não intrinsecamente doce" pela FEMA. Portanto, a mistura 1 é adequada para uso como modificadores ou misturas de doçura nas concentrações indicadas, porque não possui doçura detectável nesses níveis.

[00151] Uma concentração da mistura 1 com um limiar iso-sweet próximo a 1% (35 ppm) foi selecionada e adicionada a soluções de sacarose a 5% (p/v). Esta solução foi então classificada contra 5, 6, 6,5 e 7% (p/v) de soluções de sacarose. Isso foi repetido para 45 ppm do extrato de Luo Han Guo. A pontuação média de cada solução foi determinada. Os resultados são mostrados na Tabela 7 abaixo. Tabela 7.

[00152] Verificou-se surpreendentemente que a mistura 1 e o extrato de Luo Han Guo atuam como realçadores de doçura, uma vez que o aumento na doçura da solução de sacarose a 5% (p/v) à qual foram adicionados foi maior que a doçura do adoçante sozinho.

[00153] O gosto de várias concentrações da mistura 1 foi testado por um painel de especialistas de três pessoas (treinados em sabor) em soluções contendo 5% de sacarose e 0,03% de ácido cítrico. O gosto foi comparado ao extrato de Luo Han Guo usado no Exemplo 2 (obtido da Azile LCC (Rolling Hills Est, California) (extrato 1 do Exemplo 1 acima) e contendo cerca de 68% em peso de mogrosídeos) (combinado com os mesmos 5% de sacarose e solução de ácido cítrico a 0,03%). Os resultados são mostrados na Tabela 8. Tabela 8.

[00154] No geral, a mistura 1 fornece uma qualidade doce melhor (menos bagagem, mais doce) do que o extrato de Luo Han Guo.

Exemplo 6

[00155] Um painel sensível ao gosto doce classificou a doçura das soluções de vários adoçantes (mogrosídeo V, mogrosídeo IV, siamenosídeo, neomogrosídeo, 11-O-mogrosídeo V) em relação às soluções de sacarose em uma variedade de concentrações para determinar a equivalência de sacarose. Os adoçantes foram obtidos usando um sistema de HPLC preparatório Agilent 1100 com uma coluna Phenomenex Luna C18 (2) (5 μm, 210 X 21,4 mm). Os resultados são mostrados nas Tabelas 9 a 13. Tabela 9. Tabela 10. Tabela 11. Tabela 12. Tabela 13.

[00156] Os dados demonstram que o mogrosídeo V (25 ppm), mogrosídeo IV (30 ppm), siamenosídeo (25 ppm), mogrosídeo V (25 ppm) em combinação com 11-O-mogrosídeo V (3 ppm) e neomogrosídeo (30 ppm) ter uma doçura abaixo de 1,5% de equivalência de sacarose (conforme determinado por sete participantes do painel), que é aceito como "não intrinsecamente doce" pela FEMA. Portanto, esses compostos e misturas são adequados para uso como modificadores de doçura nas concentrações indicadas, porque eles não apresentam doçura detectável nesses níveis.

[00157] As concentrações dos adoçantes testados foram selecionadas com um limiar iso-sweet próximo a 1% e adicionadas a soluções de sacarose a 5% (p/v). Essas soluções foram então classificadas em 5, 6, 6,5 e 7% (p/v) de soluções de sacarose. A pontuação média de cada solução foi determinada. Os resultados são mostrados na Tabela 14 abaixo. Tabela 14.

[00158] Foi surpreendentemente descoberto que o mogrosídeo V, siamenosídeo, neomogrosídeo e mogrosídeo V atuam como realçadores de doçura, uma vez que o aumento na doçura da solução de sacarose a 5% (p/v) à qual foram adicionados foi maior que a doçura do adoçante sozinho.

[00159] O gosto desses adoçantes foi testado por um painel de especialistas de três pessoas (treinados em sabor) em soluções contendo 5% de sacarose e 0,03% de ácido cítrico. O gosto foi comparado ao extrato de Luo Han Guo usado no Exemplo 2 (obtido da Azile LCC (Rolling Hills Est, California) (extrato 1 do Exemplo 1 acima) e contendo cerca de 68% em peso de mogrosídeos). Mogrosídeo IV, siamenosídeo e neomogrosídeo são melhores que o extrato de Luo Han Guo em termos de qualidade doce quando adicionados a 5% de sacarose e 0,03% de ácido cítrico. Estes 3 compostos fornecem um gosto semelhante ao açúcar, com um gosto doce menos persistente. O siamenosídeo foi descrito como tendo "um corpo mais doce, mais doce, mais redondo, com um pouco mais doce e mais duradouro". O Mogrosídeo IV foi descrito como tendo “doçura boa e semelhante ao mogrosídeo V”. O neomogrosídeo foi descrito como tendo "doçura, mas um gosto ligeiramente amargo". Os resultados para o mogrosídeo V são mostrados na Tabela 15. Tabela 15.

[00160] Em geral, os provad ores concordaram que mogrosídeo V a 80% não possui o mesmo perfil doce redondo que o extrato de Luo Han Guo. O mogrosídeo V a 80% é mais ácido quando aplicado a uma solução de açúcar/ácido/água.

Exemplo 7 Métodos

[00161] Mogrosídeo V, siamenosídeo, mogrosídeo IV e neomogrosídeo foram obtidos usando um sistema de HPLC preparativa Agilent 1100 com uma coluna Phenomenex Luna C18 (2) (5 μm, 210 x 21,4 mm).

[00162] Os mogrosídeo V, siamenosídeo, mogrosídeo IV e neomogrosídeo foram adicionados a uma solução contendo 5% de sacarose e 0,03% de ácido cítrico em uma concentração de 25 ppm (mogrosídeo V), 25 ppm (siamenosídeo), 30 ppm (mogrosídeo IV) e 30 ppm (neomogrosídeo), respectivamente.

[00163] Essas soluções teste foram provadas por um painel de especialistas de sete pessoas. Para vários aspectos do gosto doce (doce inicial, doce geral, doce persistente, adstringente e volátil), cada participante do painel pontuou as soluções teste em comparação com a solução base (solução de sacarose a 5% e ácido cítrico a 0,03%).

[00164] Uma pontuação 0 indica que o aspecto do gosto é o mesmo, 1 indica um pouco mais alto, 2 indica mais alto, 3 indica muito mais alto, -1 indica um pouco mais alto, -1 indica um pouco mais baixo, -2 indica mais baixo e -3 indica muito mais baixo. A pontuação média de cada solução teste para cada aspecto de gosto foi calculada. Os resultados são mostrados na Tabela 16 abaixo. Tabela 16.

Exemplo 8

[00165] Como mostrado acima, siamenosídeo, neomogrosídeo e mogrosídeo IV têm qualidade de gosto doce semelhante ou melhor, com 5% de sacarose e 0,03% de ácido cítrico em comparação com o mogrosídeo V. Portanto, o gosto do 11-O-mogrosídeo V com cada um desses mogrosídeos é avaliado como mostrado na Tabela 17. Tabela 17.

Exemplo 9

[00166] O gosto do mogrosídeo V com e sem o 11-O-mogrosídeo V em várias bases de leite ou iogurte é avaliado como mostrado na Tabela 18. O limiar iso-sweet para o mogrosídeo V no leite e iogurte também é avaliado.

[00167] Uma base de leite (2% de gordura) inclui leite com 2% de gordura e 5% de sacarose. Uma base de iogurte sem gordura inclui iogurte sem gordura e 5% de sacarose. Uma base de iogurte integral inclui iogurte integral e 5% de sacarose. Um nível de dose mais alto é usado para composições de leite e iogurte devido à gordura, proteína e outros ingredientes. O extrato de Luo Han Guo é usado a 75 ppm para essas aplicações. Tabela 18.

Exemplo 10 A identificação de novos glicosídeos menores de cucurbitano de Siraitia grosvenorii Introdução

[00168] Siraitia grosvenorii (Swingle) C. Jeffrey ex Lu e Z. Y. Zhang é uma videira perene herbácea da família Cucurbitaceae endêmica no sul da China e no norte da Tailândia. Os frutos de S. grosvenorii, comumente conhecido como 'luo han guo', são utilizados na medicina tradicional na China há séculos como tratamento de infecção respiratória, bronquite, gastrite, constipação etc. A pesquisa farmacológica moderna confirmou que o extrato de S. grosvenorii ou seus componentes possuem uma variedade de bioatividades, como antibacteriana, antiinflamatória, antidiabética, anticâncer e imunoestimulador [1]. Luo Han Guo tem sido usado como adoçante em alimentos e bebidas na China. É agora um dos adoçantes naturais de alta intensidade mais conhecidos em todo o mundo. Como o glicosídeo mucrosídeo V de cucurbitano foi descoberto como o princípio doce de S. grosvenorii, mais de 40 triterpenoides de cucurbitano foram relatados em S. grosvenorii até agora [1-4]. Pesquisadores da indústria de alimentos e aromas têm descoberto ativamente e adicionado mais novos compostos ao pool de mogrosídeos, a fim de encontrar novos mogrosídeos com melhor desempenho doce [5-7]. Novas moléculas sob categorias conhecidas de adoçantes naturais com melhor desempenho doce têm sido procuradas pelas indústrias de alimentos e aromas. A comercialização do rebaubiosídeo M (também conhecido como rebaubiosídeo X) é um bom exemplo. Mesmo sendo um produto natural menor de Stevia (menos de 0,1%) descoberto em 2010, o rebaubiosídeo M rapidamente progrediu para a fase de comercialização, graças à redução de custos pelo desenvolvimento de tecnologia em biologia de plantas, biologia molecular e engenharia de enzimas [8, 9]. O Rebaudiosídeo M recebeu a Carta de Não Objeção referente ao seu status Geralmente Reconhecido como Seguro (GRAS) do FDA dos EUA em 2013, 2014 e 2017 (GRN n° 473, 512 e 667) [10-12].

[00169] Temos conduzido investigações para buscar os melhores mogrosídeos de desempenho ou suas combinações usando extratos comerciais de Luo Han Guo [13]. Aqui, relatamos dois novos glicosídeos menores de cucurbitano de S. grosvenorii e enfatizamos nossa nova estratégia de elucidação de oligossacarídeos com base em experimentos HSQC-TOCSY com diferentes tempos de mistura.

Materiais e métodos Procedimentos experimentais gerais

[00170] As rotações ópticas foram medidas com um polarímetro Rudolph Autopol IV. Os espectros de RMN foram registrados nos espectrômetros Bruker DRX Avance 300 ou 500. Os desvios químicos são dados em δ (ppm), referente ao pico residual do solvente. A cromatografia de baixa pressão foi realizada no Biotage Flash System SP1. A HPLC preparativa foi realizada em um sistema Agilent 1100 HPLC preparativa com uma coluna Phenomenex Lunar C18 (2) (5 μm, 210 x 21,4 mm) ou uma TSKgel Amide-80 (5 μm, 300 x 21,5 mm) (Tosoh Bioscience LLC). A HPLC analítica foi realizada em um sistema HPLC analítica Agilent 1100 equipado com o detector ESA Corona CAD. A LC- MS foi realizada usando o micro espectrômetro Waters Q-Tof acoplado ao módulo de separação Waters 2795.

Material de planta

[00171] O extrato de Luo Han Guo (nome comercial Swingle, ~ 60% mogrosídeos) foi adquirido da Blue California Co., Ltd.

Instrumentação

[00172] Condições cromatográficas: A cromatografia foi realizada em Waters Acquity H UPLC. A separação foi realizada a 25°C usando uma coluna Acquity UPLC HSS T3 de 1,0 x 100 mm (Waters), com um tamanho de partícula de 1,8 mm, equipado com um pré-filtro de 0,2 mm. O solvente A foi água e o solvente B foi acetonitrila, ambos os solventes continham 0,1% de ácido fórmico. O volume de injeção foi ajustado em 10 μl. A taxa de fluxo de cromatografia foi de 200 μl/min. A amostra foi eluída da coluna LC utilizando o seguinte gradiente linear (curva número 6): 0-40 min: 90% A-30% A; 40-45 min: 30-10% A; 45-50 min: 10% A; 50-51 min 10% -90% A, 51-55 min 90% A para reequilíbrio.

Espectrometria de massa

[00173] O sistema U-HPLC foi acoplado a um espectrômetro de massa de tempo de vôo ortogonal quadrupolo híbrido (TOF) (SYNAPT G2 HDMS, Waters MS Technologies, Manchester, UK). O espectrômetro de massa foi operado no modo de ionização por eletrovaporização positiva (ESI +). A tensão do cone da amostra 40, a tensão capilar 0,7 kv, a temperatura da fonte 40°C, a temperatura de dessolvatação 450°C, o fluxo de gás de dessolvatação 800 L/h e o fluxo de gás cone 50 l/h foram otimizados. A encefalina de leucina foi usada como massa de bloqueio [M + H]- em m/z 556,2771. Solução de formiato de sódio foi usada para calibração externa do instrumento.

Purificação

[00174] 3 g de extrato de Luo Han Guo foram dissolvidos em 15 mL de água e carregados em um cartucho Snap C-18 pré-equilibrado (KP- C18-HS, 120 g, volume de coluna de 120 g, 132 mL). O sistema de gradiente (A: água; B: metanol) utilizado foi: 30% 2 CV, 30% ~ 80% 10 CV, 80% ~ 100% 2 CV, 100% 2 CV. A taxa de fluxo foi de 30 mL/min. As frações foram coletadas para 27 mL por tubo. Quatro cargas do total de 12 g de Luo Han Guo foram fracionadas. Todas as frações foram analisadas por HPLC analítica para localizar as frações com os mogrosídeos alvo (fase móvel isocrática: 24% de acetonitrila em água. Coluna: Luna C18 5 μm 4,6 x 150 mm). As frações 36-38 com isomogrosídeo VI e 11-epi-mogrosídeo V foram combinadas para evaporar os solventes. A purificação preparativa adicional por HPLC das frações 36-38 proporcionou isomogrosídeo VI (1, 22 mg) e 11-epi- mogrosídeo V (2, 17 mg) (24% de acetonitrila em água, 10 mL/min, tempo de retenção 13,1 min e 14,3 min, respectivamente). Os 11-oxo- mogrosídeo V (4) e o neomogrosídeo (3) estavam principalmente nas frações instantâneas 39-40, com o 11-oxo-mogrosídeo V como o componente principal. Na HPLC preparativa de fase reversa C-18, o neomogrosídeo apareceu como um tail shoulder de 11-oxo-mogrosídeo (24% de acetonitrila em água, 10 mL/min, tempo de retenção 17,0 min e 18,0 min, respectivamente). A coleta da frente do pico produziu 105 mg do composto 11-oxo-mogrosídeo V (4). A purificação adicional do shoulder neomogrosídeo (3, 15 mg) foi alcançada por HPLC preparativa em TSKgel Amide-80 (65% de acetonitrila em água, 20 mL/min, ta 15,5 min). isomogrosídeo VI (1): pó branco amorfo; [α]20D -8,2 (c 0,12, MeOH); Para dados espectroscópicos de 1H RMN e 13C, consulte as Tabelas 1; - HRESIMS: m/z 1449,7070 [M + H] - (calculado para C66H113O34, 1447,7113, Δ 2,6 ppm). epi-mogrosídeo V (2): pó branco amorfo; [α]20D +4,5 (c 0,13, MeOH); Para dados espectroscópicos de 1H RMN e 13C, consulte as Tabelas 1; HRESIMS: m/z 1287.6558 [M + H] - (calculado para C60H103O29, 1287.6585, Δ2,1 ppm).

Hidrólise ácida e determinação da configuração absoluta de açúcares

[00175] Os compostos 1 (1,2 mg) ou 2 (1,8 mg) foram incubados em 1 mL de HCl 1 M a 80°C por 3 horas. Após a hidrólise, a solução foi extraída com EtOAc (1 mL x 3). As soluções aquosas restantes foram evaporadas soprando gás nitrogênio e secadas por congelamento. A configuração absoluta do açúcar no resíduo foi determinada por análise GC-MS de seu derivado O-sililado e comparando com os derivados dos padrões D-glicose e L-glicose. Resumidamente, os resíduos de açúcar, D-glicose (2 mg) ou L-glicose (2 mg) foram dissolvidos em piridina (0,5 mL). Foi adicionado cloridrato de éster metílico de L-cisteína 0,1 M (Aldrich, Milwaukee, WI) em piridina (0,5 mL) à solução. A mistura foi mantida a 60°C durante 2 h e secada por sopro de gás nitrogênio. O resíduo foi adicionado com 1-trimetilsilimidazol (Fluka, Buchs, Suíça) (0,5 mL) e incubado a 60°C por 1 h. A mistura foi dividida adicionando n-hexano e água (1,0 mL cada). O extrato de n-hexano foi analisado por GC-MS sob as seguintes condições: coluna capilar HP-5MS (30 m x 0,25 mm x 0,25 μm, Agilent); temperatura da coluna, 180 a 230°C a uma rampa de 5°C/min; temperatura de injeção, 250°C; transportador, ele gás; relação de divisão, 20 : 1. Os derivados O-sililados de D-glicose e L-glicose apresentaram tempo de retenção em 16,02 e 16,39 min, respectivamente. Ao comparar o tempo de retenção e a co- cromatografia, os resíduos de açúcar após hidrólise ácida de 1 e 2 foram determinados como D-glicose.

Redução de 11-oxo-mogrosídeo V com NaBH4

[00176] 25 mg de 11-oxo-mogrosídeo V (4) foram dissolvidos em dioxano a 50% e adicionados com 20 mg de NaBH4 e aquecidos a 50°C por 3 dias. A mistura de reação foi analisada periodicamente por HPLC para monitorar o progresso da reação. Após a reação, a mistura foi acidificada por acetato de ácido e concentrada até a secura por sopro de gás nitrogênio. O resíduo foi redissolvido em água e passado através de uma coluna C-18 SPE pré-equilibrada. Os eluentes de metanol da coluna SPE foram concentrados. O resíduo foi então separado por HPLC semipreparativa. Os dois produtos reduzidos tiveram o mesmo tempo de retenção e peso molecular do mogrosídeo V isolado e 11-epi- mogrosídeo V por análise LC-MS e co-cromatografia em HPLC analítica. Os dados de RMN 1-D e 2-D também confirmaram que as estruturas dos dois produtos reduzidos eram mogrosídeo V e 11-epi- mogrosídeo V.

Resultados e Discussão Isolamento e Elucidação do Isomogrosídeo VI (1) e 11-epi- mogrosídeo V (2)

[00177] Durante o curso de investigação de um extrato comercial de Luo Han Guo com 60% de mogrosídeos por LC-MS, vários mogrosídeos com seis ou cinco frações de açúcar nos extratos chamaram nossa atenção (Figura 2 e 3). Como houve pouco relato sobre as propriedades doces dos isômeros do mogrosídeo V e VI, decidimos purificar e identificar esses isômeros para nossa avaliação. As concentrações de 1, 2, 3 e 4 nos extratos foram estimadas em 0,8%, 0,5%, 0,6%, 4,9%, respectivamente, de acordo com o detector universal Corona. Após fracionado no sistema de cromatografia flash e seguido de purificação por HPLC preparativa, os quatro mogrosídeos alvo 1-4 foram purificados e determinados como isomogrosídeo VI (1), 11-epi-mogrosídeo V (2), neomogrosídeo (3), 11 -oxo-mogrosídeo V (4).

[00178] A fórmula molecular de 1 foi deduzida como C66H112O34 pelos seus dados espectrais HR-ESI-MS ([M-H] - m/z, 1447.6957, calculado para C66H111O34, 1447.6957). Os dados espectrais de RMN de 1 sugeriram a estrutura de uma saponina triterpenoide hexassacarídica: 30 dos 66 carbonos foram atribuídos à aglicona triterpenoide e 36 de 66 a seis porções hexose. Os espectros 13C e 1H RMN de 1 mostraram os sinais de sete metilas terciárias em singleto, um metila secundária em dubleto e uma metina olefínica (Tabela 19), que sugeria uma típica aglicona (24R)-cucurbit-5-eno-3β,11α,24,25-tetraol mogrol. A aglicona mogrol de 1 foi ainda confirmada por uma extensa análise de seus dados de RMN 1H, 13C e 2D (COSY, TOCSY, HSQC e NOESY), bem como comparação com dados de RMN do padrão mogrosídeo V. Tabela 19. Dados espectroscópicos de 1H RMN e 13C RMN para isomogrosídeo VI e 11-epi-mogrosídeo V (1H 300 MHz e 13C 75 MHz em piridina-d5/D2O 10 : 1)

[00179] A análise por GC-MS dos produtos de hidrólise ácida solúvel em água de 1 mostrou que a D-glicose era o único monossacarídeo na estrutura de 1. Os espectros do HSQC exibiam claramente os picos cruzados anoméricos de seis glicosil: Glc-I (δC 106,8 e δH 4,73), Glc-II (δC 105,1 e δH 5,10), Glc-III (δC 103,7 e δH 4,85), Glc-IV (δC 104,6 e δH 4,78), Glc-V (δC 104,7 e δH 5,43), Glc-VI (δC 104,8 e δH 5,03). A estereoquímica de todos os seis glicopiranosil foi determinada como sendo uma configuração β a partir de suas constantes de acoplamento prótons anoméricos 3JH1, H2. Do experimento HSQC-TOCSY (hsqcgpmlph) com tempo de mistura de 100 ms, os sinais de carbono glicopranosil podem ser divididos em seis grupos (Figura 4). A elucidação de oligossacarídeos foi iniciada a partir do glicopiranosil conectado em C-3 da aglicona de cucurbitano. Determinou-se que o Glc-I se ligava à aglicona C-3 de acordo com a correlação HMBC de seu próton anomérico (δH 4,73, d, J = 7,9 Hz) com a aglicona C-3 (δC 87,6) e a correlação NOESY de Glc-I H-1 e aglicona H-3. Os sinais 13C de Glc-I (δC 75,1, 77,8, 71,4, 77,2, 70,1), conforme determinado por HSQC- TOCSY, perderam um sinal de carbono C-6 típico em torno de δC 62. O deslocamento no campo inferior de Glc-I C-6 (δC 70,1) indicou glicosilação nesta posição. Ao comparar os espectros HSQC-TOCSY (hsqcgpmlph) com o aumento do tempo de mistura de 10, 30, 60 e 100 ms, o relé de transferência de magnetização pode ser observado estendendo-se gradualmente de C-2 a C-6 (Figura 4). Como mostrado na Figura 4, o tempo de mistura do HSQC-TOCSY com menos de 10 ms exibiu a correlação de glicopiranosil H-1 e C-2. Sob um tempo de mistura de 30 ms, a correlação de H-1 e C-3 apareceu além das correlações de H-1 e C-2. Abaixo de 60 ms, a cadeia de carbono, conforme indicado pela correlação HSQC-TOCSY, se estende a C-4. A correlação completa HSQC-TOCSY de H-1 com C-2 a C-6 pode ser observada em 100 ms. Portanto, os sinais de C-2 a C-6 podem ser atribuídos sem ambiguidade. A ligação de Glc-II a Glc-I foi estabelecida pela correlação HMBC de Glc-II H-1 anomérico (δH 5,10, d, J = 7,8 Hz) a Glc-I C-6 (δC 70,1). Os sinais 13C de Glc-II (δC 75,0, 77,8, 71,5, 78,0, 62,5) não sugeriram glicosilação em Glc-II. Como resultado, a cadeia de açúcar na aglicona C-3 foi fornecida como 3-O-(β-D-glicopiranosil(1 ^ 6)-β-D-glicopiranosil.

[00180] A correlação de HMBC do próton anomérico (δH 4,85, d, J = 7,5 Hz) ao sinal de carbono da aglicona (δC 92,3) indicou a conexão de Glc-III H-1 à aglicona C-24. O padrão 13C de Glc-III (δC 81,6, 78,3, 71,4, 76,4, 70,0) sugeriu mudanças de glicosilação em C-2 e C-6. A análise do HSQC-TOCSY com tempo de mistura de 10, 30, 60 e 100 ms resultou na atribuição sequencial e confirmação dos turnos de campo abaixo C-2 e C-6. Determinou-se Glc-IV para se conectar a C-6 de Glc- III a partir de sua correlação H-H-1 (δH 4,78, d, J = 7,5 Hz) HMBC com C-6 de Glc-III (δC 70,0). Glc-IV era um glicopiranosil terminal regular sem nenhuma substituição (δC 74,5, 77,7, 71,2, 78,2, 62,4). A ligação de Glc- V a C-2 de Glc-III foi estabelecida por correlação de HMBC de Glc-V H- 1 anomérico (δH 5,43, d, J = 7,8 Hz) a Glc-III C-2 (δC 81,6). O deslocamento relativamente baixo do campo de Glc-V H-1 (δH 5,43) foi consistente com relatórios anteriores com estrutura semelhante. O desvio químico 13C de C-4 normalmente em δC 70-71 estava ausente no conjunto de sinais Glc-V (δC 104,7, 75,4, 76,4, 82,0, 76,5, 62,6), o que sugeria glicosilação em C-4. Observando o relé C-2 a C-6 do HSQC- TOCSY com tempo de mistura de 10, 30, 60 e 100 ms, δC 82.0 foi claramente atribuído a C-4 de Glc-V (Figura 4). O pico cruzado de HMBC entre C-4 de Glc-V (δC 82,0) e H-1 de Glc-VI (δH 5,03, d, J = 7,7 Hz) confirmou ainda que Glc-VI estava ligado a Glc-V nesta posição. Glc-VI era um glicopiranosil terminal sem ramo de açúcar adicional. Com base nas evidências acima, a estrutura do isomogrosídeo (1) foi atribuída como 3-O-β-D-glicopiranosil (1 ^ 6)-β-D-glicopiranosil- mogrol-24-O-β-D-glicopiranosil -(1 ^ 6-[β-D-glicopiranosil-(1 ^ 4)-β-D- glicopiranosil-(1 ^ 2)]-β-D-glicopiranosil.

[00181] Foi atribuído ao composto 2 uma fórmula molecular de C60H102O29 a partir de seus dados de HR-ESI-MS ([M-H]- m/z, 1285.6429). Os dados de RMN da porção de oligossacarídeo de 2 foram sobrepostos aos do mogrosídeo V. Experiências detalhadas de RMN em 2-D, incluindo HSQC, HMBC, NOESY, COSY e HSQC-TOCSY, confirmaram que 2 tinham as mesmas porções de açúcar que o mogrosídeo V. Atenções foram então voltadas para os dados de RMN da aglicona. A correlação de HMBC entre C-11 e H3-19 revelou um desvio significativo de C-11 (δC 72,5) em relação ao mogrosídeo V (δC 77,8). Atribuições adicionais de dados de aglicona por experimentos de RMN 2-D mostraram que as principais mudanças no deslocamento químico 13C ocorreram em C-8, C-10 e C-12 quando comparadas com os dados do mogrosídeo V (Tabela 19). Isto sugeriu β-OH em vez de α- OH em C-11. A estrutura estéreo β-OH de 2 foi ainda estabelecida por correlações NOE entre H-8 e H3-18, 19; H-10 e H3-28, H3-30; H-11 e H3-30; H-17 e H3-30. Havia um 11-β-OH cucurbitano natural e um 11-β- OH cucurbitano semissintético relatado antes [14,15]. Os dados de 13C RMN do composto 2 aglicona teve uma boa correspondência com os dados do glicosídeo semissintético 11-β-OH cucurbitano, que foi registrado em piridina-d6 [14]. Os dados de 13C RMN do 11-β-OH cucurbitano natural de Matsuda et al foram obtidos em metanol-d4 e foram bastante diferentes em termos de desvios químicos em C-11, C8, C-10 e C-12 [15]. Para confirmar ainda mais a estrutura 11-β-OH de 2, a semissíntese de 2 foi realizada por redução química do 11-oxo- mogrosídeo V (4) nos isômeros 11-β-OH e 11-α-OH do mogrosídeo V. Por análise de LC-MS, co-cromatografia por HPLC e RMN, determinou- se que o 11-epi-mogrosídeo semissintético V fosse idêntico ao 11-epi- mogrosídeo isolado de V. Portanto, a estrutura do 11-epi-mogrosídeo V (2) foi elucidada como 3-O-β-D-glicopiranosil (1 → 6)-β-D-glicopiranosil- 11β-OH-mogrol-24-O-β-D-glicopiranosil-(1 → 2)-[β-D-glicopiranosil-(1 →6)]-β-D-glicopiranosil. Para nosso melhor conhecimento, este é o primeiro relatório de mogrosídeo natural com um grupo hidroxila 11-β.

HSQC-TOCSY com diferentes tempos de mistura para elucidação da cadeia de oligossacarídeos.

[00182] Gheysen et al. investigaram experimentos TOCSY com diferentes tempos de mistura e concluíram 100 ms como o tempo ideal de bloqueio de rotação para discriminar D-glicose, D-galactose e D- manose [16]. Através de seus resultados, observamos que o tempo de bloqueio da rotação poderia afetar significativamente a eficiência da transferência de magnetização do H-1 da D-glicose. A correlação entre H-1 e H-2 a H-6 estendeu-se gradualmente a H-6 à medida que o tempo de bloqueio da rotação aumentou. Inspirados em sua investigação, levantamos a hipótese de que, ao aumentar o tempo de bloqueio de rotação do HSQC-TOCSY, poderíamos ver que as correlações da glicose H-1 com C-2 a C-6 se estendem gradualmente de C-2 a C-6 à medida que a cadeia da transferência de magnetização se estende. O HSQC-TOCSY com o aumento do tempo de bloqueio de rotação deve informar as informações da sequência de carbono, o que seria muito útil para a elucidação e atribuição de oligossacarídeos. A Figura 4 mostra HSQC-TOCSY (hsqcgpmlph) do isomogrosídeo VI com 10, 30, 60 e 100 ms de tempo de mistura. Os picos cruzados na Figura 4 foram quantificados por suas integrais e comparados na Figura 5. A intensidade de pico (conforme apresentada pelas integrais) pode ser uma indicação de sua distância do H-1 em alguns casos. Por exemplo, todos os picos C-3 eram significativamente mais fracos que os picos C2 em experimentos de tempo de mistura de 30 ms. No entanto, sob 60 ms, os picos C-3 se tornam maiores que os picos C-2. Para garantir uma elucidação correta, a sequência de carbono deve ser determinada através da visão geral de todos os espectros HSQC-TOCSY com diferentes tempos de mistura, não apenas pela intensidade do pico em um tempo de mistura.

[00183] Tradicionalmente, a elucidação por RMN e a atribuição da cadeia de açúcar das saponinas começam a partir do açúcar associado à aglicona. Por HMBC ou NOESY, os sinais anoméricos H-1 e C-1 bem resolvidos podem ser identificados. Então, através de correlações COZY e constantes de acoplamento 3J (H, H) correspondentes, os sinais de prótons do monossacarídeo podem ser atribuídos. Como uma constante de acoplamento grande (> 7 Hz) normalmente indica duas ligações C-H axiais vizinhas e uma constante de acoplamento pequena (<4 Hz) para uma ligação C-H axial-equatorial ou equatorial-equatorial, o tipo de monossacarídeo pode ser determinado. As correlações NOE são úteis para confirmação da estereoquímica das relações axial-axial, axial-equatorial ou equatorial-equatorial. Os sinais de carbono do sacarídeo (C-2 a C-6) são atribuídos de acordo com HSQC ou HMQC. As desvios químicos dos sinais de carbono, determinadas por HSQC/HMQC, são informações muito importantes para confirmar o tipo de monossacarídeo, uma vez que o padrão das desvios químicos de C1 a C-6 para diferentes tipos de monossacarídeos é característico e consistente. Através da observação de mudanças nos desvios químicos do carbono, a posição de glicosilação na cadeia de açúcar pode ser identificada e confirmada ainda mais pela correlação de HMBC. Em resumo, a maneira tradicional de elucidar o açúcar saponina é: HMBC ^ C-1, H-1 ^ COSY ^ H-2 a H-6 ^ HSQC/HMQC ^ C-2 a C-6, depois assistida e confirmada pela constante de acoplamento análise e experiência NOESY.

[00184] O experimento 1H-1H TOCSY (Espectroscopia Correlada Total, também conhecido como HOHAHA - Homonuclear Hartmann Hahn) pode ser uma grande ajuda para dividir os complicados sinais de prótons de açúcar em grupos. A transferência de magnetização durante o bloqueio de rotação TOCSY do H-1 anomérico para o final do anel furanose ou piranose dependerá da magnitude das constantes de acoplamento escalares intermediárias 3J (H, H). Prótons axial-axiais vizinhos com grande constante de acoplamento (> 7 Hz) permitem uma rápida transferência de magnetização, enquanto axial-equatorial ou equatorial-equatorial com pequena constante de acoplamento (<4 Hz) reduzirão consideravelmente a eficiência da transferência. Portanto, o experimento TOCSY não apenas pode ser usado para agrupar sinais de prótons em sistemas de spin, mas também fornece as informações estereoquímicas do sacarídeo. Por exemplo, poderemos ver o relé de magnetização da glicose através de H-1 a H-6 com o tempo certo de mistura. Para a galactose, não há relé de magnetização sobre o H-4, mesmo com 200 ms de tempo de mistura.

[00185] No entanto, para o caso de mogrosídeos com cinco ou seis conjuntos de sinais de glicopiranosil, o uso de COZY e TOCSY para conectar H-1 a H-6 pode ser bastante complicado. Os sinais de prótons dos glicopiranosil mogrosídeo têm desvios químicos muito semelhantes e aparecem aglomerados em uma pequena faixa de δH 3,8 a 4,5. É difícil estabelecer conexões COSY claras por meio de sinais de prótons mal resolvidos. Os sinais de carbono glicopiranosil também são muito próximos e os picos cruzados do HSQC se sobrepõem fortemente um ao outro, o que dificulta ainda mais a elucidação e a atribuição.

[00186] Anteriormente, o HSQC-TOCSY era aplicado na elucidação da estrutura e na atribuição de saponinas, agrupando os sinais de carbono em cada sistema de rotação [17,18]. Através de nossa investigação, demonstramos pela primeira vez que a sequência de sinal no grupo carbono glicopiranosil pode ser identificada aplicando-se diferentes tempos de mistura em experimentos com HSQC-TOCSY.

[00187] A Figura 6 resumiu a nova estratégia baseada em HSQC- TOCSY para elucidar a cadeia de mogrosídeos glicopiranosil oligossacarídeos da seguinte forma: Na Etapa 1, a espectroscopia de correlação de ligação múltipla heteronuclear (HMBC) foi usada para determinar C-1 e H-1 anorméricos. Comece pela ligação do açúcar para aglicona. Na etapa 2, HSQC-TOCSY foi usado com tempo de mistura de 100 ms para determinar todo o grupo de C-2 a C-6. HSQC-COZY ou HSQC-TOCSY (d9 = 10 ms) para atribuir C-2. HSQC-TOCSY (d9 = 30 ms) para atribuir C-3. HSQC-TOCSY (d9 = 60 ms) para atribuir C-4. HSQC-TOCSY (d9 = 100 ms) para atribuir C-5 e C-6. Na Etapa 3, se for observado um down-shift C-2 de ~ δ75 a ~ δ81, o down-shift C-4 de ~ δ71 a ~ δ81 ou o down-shift C-6 de ~ δ62 a ~ 69 for observado, verifique o HMBC quanto à glicosilação nessas posições. **Se um down-shift C2 de ~ δ75 a ~ δ81, down-shift C-4 de ~ δ71 a ~ δ81 ou down-shift C-6 de ~ δ62 a ~ 69, verifique HMBC quanto à glicosilação nessas posições. **. Dados de RMN 1-D, como constantes de acoplamento 1H, padrão de sinal de carbono 13C e experiências de RMN 2-D, como NOESY, HMBC, TOCSY, COSY e HSQC, podem auxiliar o processo e confirmar os resultados. A nova estratégia baseada no HSQC-TOCSY pode fornecer uma maneira simples, rápida e inequívoca de elucidação e atribuição de cadeias de glicopiranosil de quaisquer mogrosídeos novos ou conhecidos. A estratégia também pode ser adaptada para elucidação e atribuição de outros monossacarídeos e oligossacarídeos.

Estruturas de neomogrosídeo e mogrosídeo VI

[00188] Determinou-se que o composto 3 era neomogrosídeo por extensas análises de RMN 1-D e 2-D, bem como comparação com dados da literatura [19]. Para a elucidação da cadeia de oligossacarídeos de 3, os sinais foram atribuídos pelas experiências HSQC-TOCSY e TOCSY com diferentes tempos de mistura a 10, 30, 60, 100 ms. A ligação dos seis sacarídeos foi feita pelas correlações NOESY e HMBC. A cadeia oligossacarídica no C-3 da aglicona pode ser claramente designada como β-D-glicopiranosil-(1 ^ 2)-β-D- glicopiranosil-(1 ^ 6)-β-D-glicopiranosil. O glicopiranosil no C-24 da aglicona foi ramificado com um β-D-glicopiranosil-(1 ^ 2) e um β-D- glicopiranosil-(1 ^ 6).

[00189] O neomogrosídeo foi descoberto primeiramente por S. grosvenorii e descrito por Si et al. [19] A pesquisa de neomogrosídeo no Scifinder retornou o número CAS 189307-15-1. No entanto, a estrutura incorreta do neomogrosídeo foi apresentada em Scifinder, embora a literatura referida por Scifinder fosse o artigo de 1996 de Si et al. A estrutura incorreta de 189307-15-1 foi dada como 3-O-β-D- glicopiranosil-(1 ^ 2)-[β-D-glicopiranosil-(1 ^ 6)]-β-D-glicopiranosil- mogrol- 24-O-β-D-glicopiranosil-(1 ^ 6)-[β-D-glicopiranosil-(1 ^ 2)]-β- D-glicopiranosil (estrutura de 6 na Figura 2) no Scifinder. O relatório de neomogrosídeo de Si et al foi escrito em chinês e publicado em um periódico chinês em 1996. A acessibilidade e o mal-entendido deste artigo podem levar à estrutura incorreta do Scifinder.

[00190] No Scifinder, o neomogrosídeo e o mogrosídeo VI tinham o mesmo número CAS 189307-15-1 e a mesma estrutura. Takemoto e cols. Primeiro relataram o mogrosídeo VI de S. grosvenorii [2]. Mas referiu apenas um mogrosídeo puro com uma fórmula molecular de C66H112O34 e nenhuma estrutura foi determinada [2]. Prakash et al. relataram os dados de estrutura e RMN do mogrosídeo VI como um composto conhecido em seu artigo publicado em 2011 [6]. Em seu artigo, a estrutura do mogrosídeo VI foi atribuída como a estrutura de 6 na Figura 2. Prakash mencionou que a elucidação da estrutura do mogrosídeo VI foi feita por análise de RMN e também pela comparação com os valores da literatura. No entanto, nenhuma citação foi dada para os valores da literatura.

[00191] Para compostos conhecidos, a comparação dos dados de RMN com os dados da literatura pode ser útil para a determinação da estrutura. No entanto, a complexidade dos dados de RMN do mogrosídeo dificulta a determinação da estrutura principalmente pela comparação dos dados de RMN com os dados da literatura. Os dados de 1H RMN de mogrosídeos conhecidos em diferentes relatórios mostraram variações devido a diferentes solventes de RMN usados (a relação de piridina e D2O poderia causar alterações de sinal) ou simplesmente atribuições incorretas.

[00192] Embora os dados de 13C RMN sejam bastante consistentes e tenham melhor resolução n que dados de 1H RMN, a determinação da estrutura da cadeia oligossacarídica de mogrosídeos conhecidos não pode ser comparada diretamente comparando dados de 13C RMN com dados da literatura. Considerando o caso do neomogrosídeo, se o Glu- VI glicopiranosil-(1 ^ 2) ramificou-se em Glu-I, Glu-II, Glu-III, Glu-IV, Glu-IV ou GluV, os cinco isômeros podem ter dados de 13C RMN muito semelhantes. Em vez de comparar os dados de 13C RMN com os dados da literatura, uma extensa análise de RMN 2-D deve ser feita cuidadosamente antes que a cadeia oligossacarídica dos mogrosídeos seja inequivocamente determinada.

Exemplo 11 Intensidade doce do isomogrosídeo VI e 11-epi-mogrosídeo V Métodos

[00193] 10 mg de isomogrosídeo VI (Figura 7) foram dissolvidos em 31 mL de água para produzir 100 ppm de solução de isomogrosídeo VI. A solução de trabalho do 11-epi-mogrosídeo V (Figura 8) foi de 374 ppm (9,34 mg de 11-epi-mogrosídeo V em 25 mL de água). Uma série de soluções padrão de sacarose foi preparada (0,50, 0,75, 1,00, 1,25, 1,50%) como referência de doçura.

Resultados

[00194] Quatro painelistas sensíveis ao doce avaliaram 100 ppm de isomogrosídeo VI e 374 ppm de 11-epi-mogrosídeo V e os padrões de sacarose, e foram solicitados a fornecer concentrações de equivalência doce à sacarose. As concentrações médias de equivalência doce de cada composto foram usadas para calcular a potência do iso-sweet. Os valores de potência do iso-sweet do isomogrosídeo VI e 11-epi- mogrosídeo V foram determinados como 91 e 35 vezes a doçura da sacarose, respectivamente (100 ppm de isomogrosídeo VI equivalente a 0,91% de sacarose; 374 ppm 11-epi -mogrosídeo V doce equivalente a 1,31% de sacarose).

Exemplo 12 Métodos

[00195] Isomogrosídeo VI e 11-epi-mogrosídeo V foram obtidos como descrito no Exemplo 10. Os isomogrosídeo VI e 11-epi- mogrosídeo V foram adicionados a uma solução contendo 5% de sacarose e 0,03% de ácido cítrico em uma concentração de 25 ppm. Essas soluções teste foram provadas por um painel de especialistas de sete pessoas. Para vários aspectos do gosto doce (doce geral, doce inicial, doce persistente, adstringente e volátil), cada participante do painel pontuou as soluções teste em comparação com a solução base (solução de sacarose a 5% e ácido cítrico a 0,03%). Uma pontuação 0 indica que o aspecto do gosto é o mesmo, 1 indica um pouco mais alto, 2 indica mais alto, 3 indica muito mais alto, -1 indica um pouco mais alto, -1 indica um pouco mais baixo, -2 indica mais baixo e -3 indica muito mais baixo.

Resultados

[00196] A pontuação média de cada solução teste para cada aspecto de gosto foi calculada. Os resultados são mostrados na Tabela 20 abaixo. Tabela 20

[00197] Dois novos glicosídeos menores de cucurbitano, juntamente com 11-oxo-mogrosídeo e neomogrosídeo conhecidos, foram purificados a partir dos extratos comerciais de Luo Han Guo (Siraitia grosvenorii (Swingle) C. Jeffrey ex Lu e Z. Y. Zhang). Por extensas análises por RMN e LC-MS e síntese química, as estruturas dos dois novos compostos isomogrosídeo VI (1) e 11-epi-mogrosídeo V (2) foram elucidadas como 3-O-β-D-glicopiranosil (1 ^ 6)-β-D-glicopiranosil- mogrol-24-O-(β-D-glicopiranosil-(1 ^ 6)-[β-D-glicopiranosil-(1 ^ 4)-β- D-glicopiranosil-(1 ^ 2)]-β-D-glicopiranosil e 3-O-β-D-glicopiranosil (1 ^ 6)-β-D-glicopiranosil-11β-OH-mogrol-24-O-β-D-glicopiranosil-(1 ^ 6)-[β-D-glicopiranosil-(1 ^ 2)]-β-D-glicopiranosil, respectivamente. A potência doce do isomogrosídeo VI e 11-epi-mogrosídeo V foi avaliada como 91 e 35 vezes a doçura de sacarose, respectivamente (100 ppm de isomogrosídeo VI equivalente a 0,91% de sacarose; 374 ppm de 11- epi-mogrosídeo V equivalente a 1,31% de sacarose). Através de nosso curso de identificação dos novos e conhecidos mogrosídeos com cinco ou seis glicopiranosil, Foi desenvolvida uma nova estratégia para a elucidação e atribuição de cadeias de glicopiranosil açúcar. A nova estratégia baseada nos experimentos HSQC-TOCSY Os diferentes tempos de mistura apresentaram uma rápida e inequívoca elucidação e atribuição de cadeias de glicopiranosil oligossacarídeos. A confusão anterior sobre as estruturas do neomogrosídeo e mogrosídeo VI foi revisada e esclarecida após a confirmação da estrutura do neomogrosídeo por nossa extensa análise espectral por RMN.

[00198] O precedente descreve amplamente algumas modalidades da presente invenção sem limitação. As variações e modificações que serão facilmente aparentes para aqueles versados na técnica devem estar dentro do escopo da presente invenção, conforme definido nas e pelas reivindicações anexas. REFERENCIAS 1. Chun, L.; Li-Mei, L.; Feng, S.; Zhi-Min, W.; Hai-Ru, H.; Li, D. JIANG, T.-L. Chemistry and pharmacology of Siraitia grosvenorii: A review. Chinese journal of natural medicines, 2014, 12, 89-102. 2. Takemoto, T.; Arihara, S.; Nakajima, T. Okuhira, M. Studies on the constituents of Fructus Momordicae. I. On the sweet principle. Yakugaku Zasshi, 1983, 103, 1151-4. 3. Takemoto, T.; Arihara, S.; Nakajima, T. Okuhira, M. Studies on the constituents of Fructus Momordicae. III. Structure of mogrosídeos. Yakugaku zasshi: Journal of the Pharmaceutical Society of Japan, 1983, 103, 1167-1173. 4. Takemoto, T.; Arihara, S.; Nakajima, T. Okuhira, M. Studies on the constituents of Fructus momordicae. II. Structure of sapogenin. Yakugaku zasshi: Journal of the Pharmaceutical Society of Japan, 1983, 103, 1155. 5. Chaturvedula, V. S. P. Meneni, S. R. A New Cucurbitane Glycoside from Siraitia grosvenorii. Nat Prod Commun, 2015, 10, 15213. 6. Chaturvedula, V. S. P. Prakash, I. Cucurbitane Glycosides from Siraitia grosvenorii. J. Carbohydr. Chem., 2011, 30, 1626. 7. Patron, A.; Manam, R.; Colquitt, J.; Servant, N.; Noriega, C. E.; Hammaker, J. R. Gonsalves, N. High intensity sweeteners. Patent WO2017075257A2, May 4, 2017. 8. Prakash, I.; Markosyan, A. Bunders, C. Development of next generation estévia sweetener: rebaudiosídeo M. Foods, 2014, 3, 162-175. 9. Ohta, M.; Sasa, S.; Inoue, A.; Tamai, T.; Fujita, I.; Morita, K. Matsuura, F. Characterization of novel steviol glycosides from leaves of Stevia rebaudiana Morita. Journal of Applied Glycoscience (Japan), 2010. 10. U.S. Food and Drug Administration. https://www.accessdata.fda.gov/scripts/fdcc/?set=GRASNotices&id=51 2. (accessed May 25, 2017). 11. U.S. Food and Drug Administration. https://www.accessdata.fda.gov/scripts/fdcc/?set=grasnotices&id=667. (accessed May 25, 2017). 12. U.S. Food and Drug Administration. https://www.accessdata.fda.gov/scripts/fdcc/?set=GRASNotices&id=47 3. (accessed May 25, 2017). 13. Jia, Z. Yang, X., Novel Adoçante Isomogrosídeo V. 2008, Europe Patent EP2188300 B1. 14. Kasai, R.; Matsumoto, K.; Nie, R.-L.; Morita, T.; Awazu, A.; Zhou, J. Tanaka, O. Sweet and bitter cucurbitane glycosides from Hemsleya carnosiflora. Phytochemistry, 1987, 26, 1371-1376. 15. Matsuda, H.; Nakashima, S.; Abdel-Halim, O. B.; Morikawa, T. Yoshikawa, M. Cucurbitane-type triterpenes with anti-proliferative effects on U937 cells from an egyptian natural medicine, Bryonia cretica: structures of new triterpene glycosides, bryoniaosides A and B. Chemical and pharmaceutical bulletin, 2010, 58, 747-751. 16. Gheysen, K.; Mihai, C.; Conrath, K. Martins, J. C. Rapid identification of common hexapyranose monosaccharide units by a simple TOCSY matching approach. Chemistry-A European Journal, 2008, 14, 8869-8878. 17. Tabatadze, N.; Elias, R.; Faure, R.; Gerkens, P.; De Pauw-Gillet, M. C.; Kemertelidze, E.; Chea, A. Ollivier, E. Cytotoxic triterpenoid saponins from the roots of Cephalaria gigantea. Chemical and pharmaceutical bulletin, 2007, 55, 102-105. 18. Mshvildadze, V.; Elias, R.; Faure, R.; Rondeau, D.; Debrauwer, L.; Dekanosidze, G.; Kemertelidze, E. Balansard, G. Triterpenoid saponins from leaves of Hedera pastuchowii. Chemical and pharmaceutical bulletin, 2004, 52, 1411-1415. 19. Si, J.; Chen, D.; Chang, Q. Shen, L. Isolation and determination of cucurbitane-glycosides from fresh fruits of Siraitia grosvenorii. Zhiwu Xuebao, 1996, 38, 489-494.

Claims

1. Composição modificadora de doçura, caracterizada pelo fato de que compreende: um adoçante mogrosídeo isolado de alta intensidade selecionado do grupo consistindo em mogrosídeo III, mogrosídeo IIIx, mogrosídeo IV, siamenosídeo, neomogrosídeo, mogrosídeo V e misturas dos mesmos; e um adoçante isolado de baixa potência consistindo em 11- O-mogrosídeo V; em que a composição modificadora de doçura melhora uma ou mais característica(s) de doçura de uma composição adoçada em paração com a(s) respectiva(s) característica(s) de doçura da composição adoçada na ausência do adoçante de baixa potência na composição modificadora de doçura; em que a razão do(s) adoçante(s) de alta intensidade para o(s) adoçante(s) de baixa potência varia de cerca de 5:1 a cerca de 12:1, em que a composição modificadora de doçura é para ser usada em uma composição adoçada em uma quantidade com uma doçura menor que 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose ou abaixo do seu limiar de reconhecimento da doçura; e em que a composição adoçada compreende pelo menos um adoçante presente em uma quantidade tendo uma doçura igual ou maior do que 1,5% (w/v) de equivalência de sacarose.

2. Composição modificadora de doçura de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a razão do(s) adoçante(s) de alta intensidade e do(s) adoçante(s) de baixa potência varia cerca de 6:1 a cerca de 10:1.

3. Composição modificadora de doçura de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que um ou ambos os adoçantes de alta intensidade e o adoçante de baixa potência é/são naturais.

4. Composição modificadora de doçura de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a composição modificadora de doçura enfraquece o gosto doce persistente de uma composição adoçada em comparação com o gosto doce persistente da composição adoçada na ausência do(s) adoçante(s) de baixa potência na composição modificadora de doçura.

5. Composição modificadora de doçura de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a composição modificadora de doçura enfraquece o gosto amargo e/ou adstringente de uma composição adoçada em comparação com o respectivo gosto amargo e/ou adstringente da composição adoçada na ausência do adoçante de baixa potência na composição de modificação da doçura.

6. Composição adoçada, caracterizada pelo fato de que compreende: pelo menos um adoçante presente em uma quantidade com uma doçura igual ou superior a 1,5% (p/v) de equivalência de sacarose; e a composição modificadora de doçura como definida na reivindicação 1.

7. Composição adoçada de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o(s) adoçante(s) isolado(s) de alta intensidade mogrosídeo(s) da composição modificadora de doçura está/estão presente(s) na composição adoçada em uma quantidade total igual ou superior a cerca de 15 ppm e opcionalmente igual ou inferior a cerca de 50 ppm.

8. Composição adoçada de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o(s) adoçante(s) de alta intensidade mogrosídeo(s) da composição modificadora de doçura está/estão presente(s) na composição adoçada em uma quantidade total que varia de cerca de 15 ppm a cerca de 30 ppm.

9. Composição adoçada de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o adoçante de baixa potência da composição modificadora de doçura está presente na composição adoçada em uma quantidade total igual ou superior a cerca de 2 ppm e, opcionalmente, igual ou inferior a cerca de 12 ppm.

10. Composição adoçada de acordo com qa reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o adoçante isolado de baixa potência da composição modificadora de doçura está presente na composição adoçada em uma quantidade total que varia de cerca de 2 ppm a cerca de 10 ppm.

11. Composição adoçada de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o pelo menos um adoçante é um adoçante nutritivo ou não-nutritivo.

12. Composição adoçada de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o pelo menos um adoçante é selecionado do grupo que consiste em sacarose, xarope de milho com alto teor de frutose, acessulfame de potássio (AceK), aspartame, glicosídeos de esteviol, Di-hidrocalcona de Naringina, sucralose e misturas dos mesmos.

13. Composição adoçada de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que uma ou mais característica(s) de doçura da composição adoçada é/são melhoradas em comparação com a respectiva uma ou mais característica(s) de doçura da composição adoçada na ausência do adoçante isolado de baixa potência na composição modificadora de doçura.

14. Composição adoçada de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o gosto doce persistente da composição adoçada é menor que o gosto doce persistente da composição adoçada na ausência do adoçante isolado de baixa potência na composição modificadora de doçura.

15. Composição adoçada de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que o gosto amargo e/ou adstringente da composição adoçada é menor que o respectivo gosto amargo e/ou adstringente da composição adoçada na ausência do adoçante de baixa potência isolado na composição modificadora de doçura.

16. Composição adoçada de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que a composição adoçada é uma sopa líquida/úmida, um alimento desidratado e culinário, um produto de solução para refeições, um produto para embelezamento de refeições, uma bebida ou um produto lácteo, tal como leite, queijo e iogurte.

17. Uso de um adoçante de baixa potência isolado consistindo em 11-O-mogrosídeo V, caracterizado pelo fato de ser como um adoçante de baixa potência e para melhorar uma ou mais características de doçura de uma composição adoçada que compreende um adoçante de alta intensidade mogrosídeo isolado selecionado do grupo consistindo em mogrosídeo III, mogrosídeo IIIx, mogrosídeo IV, siamenosídeo, neomogrosídeo, mogrosídeo V e misturas dos mesmos, em que a quantidade total do(s) adoçante(s) de baixa potência e do(s) adoçante(s) de alta intensidade possui uma doçura menor que 1,5 % (p/v) de equivalência de sacarose, em que uma ou mais característica(s) da composição adoçada é melhorada em comparação com a(s) respectiva(s) característica(s) da composição adoçada na ausência do adoçante de baixa potência.

18. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que os um ou mais adoçante(s) de alta intensidade mogrosídeos isolados está/estão presente(s) na composição adoçada em uma quantidade total que varia de cerca de 15 ppm a cerca de 30 ppm.

19. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o adoçante de baixa potência isolado está presente na composição adoçada em uma quantidade total igual ou superior a cerca de 2 ppm e opcionalmente igual ou inferior a cerca de 12 ppm.

20. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o adoçante de baixa potência isolado está presente na composição adoçada em uma quantidade total que varia de cerca de 2 ppm a cerca de 10 ppm.

21. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o adoçante de baixa potência isolado e os um ou mais adoçantes mogrosídeos de alta intensidade isolados aumentam a doçura da composição adoçada em mais de cerca de 1,25% (p/v) de equivalência de sacarose.