BR112019022268A2

BR112019022268A2 - método para o tratamento de distúrbios pediátricos

Info

Publication number: BR112019022268A2
Application number: BR112019022268A
Authority: BR
Inventors: Rosario Maria; A Shetzline Michael; R Treem William
Original assignee: Millennium Pharm Inc
Priority date: 2017-04-28
Filing date: 2018-04-26
Publication date: 2020-05-19
Also published as: EP3615071A2; KR20190141148A; TWI811216B; CN110612120A; RU2019138312A3; WO2018200818A2; MX2019012749A; AU2018256840A1; TW202342102A; RU2019138312A; AR111491A1; CA3061320A1; WO2018200818A9; JP2023113655A; TW201842932A; JP2020517671A; WO2018200818A3; US20200179486A1

Abstract

a invenção fornece métodos para o tratamento de pacientes com doença inflamatória intestinal pediátrica usando vedolizumabe.

Description

MÉTODO PARA O TRATAMENTO DE DISTÚRBIOS PEDIÁTRICOS

PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Este pedido reivindica prioridade ao Pedido provisório LIS número 62/492.031, depositado em 28 de abril de 2017. Todo o conteúdo do pedido anterior é incorporado aqui por referência.

listagem: de sequências

[002] O presente pedido contém uma Listagem de sequências, que foi submetida eletronicamente no formato ASCII e está incorporada por meio deste a título de referência em sua totalidade. A dita cópia ASCII, criada em 25 de abril de 2018, é denominada 079259O839_SL.txt e tem 12.557 bytes de tamanho.

FUNDAMENTOS

[003] A incidência de doença inflamatória intestinal (IBD) pediátrica parece estar aumentando. De acordo com a Crohn's and Colitis Foundation of American, aproximadamente 1 milhão de americanos têm colite ulcerosa ou doença de Crohn, dos quais aproximadamente 100.000 têm menos de 21 anos.

[004] A IBD, como colite ulcerosa e doença de Crohn, por exemplo, pode ser uma doença debilitante e progressiva que envolve inflamação do trato gastrointestinal. Embora os sintomas da colite ulcerosa sejam semelhantes nas populações pediátrica e adulta, os pacientes pediátricos geralmente apresentam doença mais extensa. Para aproximadamente 25% dos pacientes com IBD, o início da doença ocorre durante a infância ou a adolescência.

[005] Os tratamentos de IBD incluem fármacos anti-inflamatórios (como corticosteroides e sulfassalazina), fármacos imunossupressores (como 6-mercaptopurina, ciclosporina e azatioprina) e cirurgia (como colectomia). Podolsky, New Engl. J. Med.325: 928-937 (1991) e Podolsky, New Engl. J. MecL, 325:1008-1016 (1991). Conforme a doença progride, o

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2/61 tratamento progride em regimes que expõem os pacientes a risco progressivo de efeitos colaterais e perda de qualidade de vida.

[006] Os receptores de integrina são importantes para regular a recirculação de linfócitos e o recrutamento para locais de inflamação (Carlos, T.M. e Harlan, J.M., Blood, 84:2068-2101 (1994)). A integrina α4β7 humana tem vários ligantes, um dos quais é a adressina vascular da mucosa MAdCAM-1 (Berlin, C., et al., Cell Ί4: 185-195 (1993); Erie, D.J., et al., J. Immunol. 153: 517-528 (1994)), que é expressa nas vênulas endoteliais altas nos linfonodos mesentéricos e nos adesivos de Peyer (Streeter, P.R., et al., Nature 331:41-46 (1998)). Como tal, a integrina α4β7 age como um receptor de endereçamento que medeia a migração de linfócitos para o tecido linfoide da mucosa intestinal (Schweighoffer, T., et al., J. Immunol. 151:717-729(1993)).

[007] Os anticorpos contra a integrina α4β7 humana, como o anticorpo monoclonal murino Act-1 (mAb Act-1), interferem com a ligação da integrina α4β7 à molécula-1 de adesão celular de adressina da mucosa (MAdCAM-1) presente nas vênulas endoteliais altas nos linfonodos da mucosa. Act-1 foi originalmente isolado por Lazarovits, A.I., et al., J. Immunol. 133:1857-1862 (1984), de camundongos imunizados com linfócitos T específicos para o toxoide tetânico humano e foi reportado como sendo um anticorpo IgGlZ/í de camundongo. A análise subsequente do anticorpo por Schweighoffer, T., et al., J. Immunol. 151: 717-729 (1993) demonstrou que ele pode se ligar a um subconjunto de linfócitos T CD4+ de memória humana que expressam seletivamente a integrina α4β7. O Entyvio™ vedolizumabe, um anticorpo monoclonal αηύ·α4β7 integrina (mAb) com características estruturais derivadas da Act-1 é indicado para o tratamento da colite ulcerosa (UC) e da doença de Crohn (CD). Estudos que reportam a atividade do vedolizumabe no tratamento desses distúrbios (Feagen et al. NEJM 369: 699-710 (2013) e Sandborn et al. NEJM 369: 711-721 (2013)) mostraram níveis variados de sucesso, dependendo do distúrbio e da natureza das terapias anteriores.

[008] Embora a falha no crescimento seja uma sequela, comum de colite ulcerosa e doença de Crohn na população pediátrica, os pacientes pediátricos com doença de Crohn parecem ter o dobro do risco de falha no crescimento em comparação com os com colite ulcerosa

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3/61 (Molil et al.. Gastroenterology 105:681-691 (1993)). Terapia nutricional e ressecção cirúrgica demonstrou melhorai' o crescimento, mas permanece uma clara necessidade de opções de tratamento mais eficazes e menos mórbidas para a população de pacientes pediátricos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[009] A invenção se refere ao tratamento de pacientes pediátricos que sofrem de doença inflamatória intestinal (IBD), por exemplo, doença de Crohn (CD) ou colite ulcerosa (UC) e uso de um antagonista da integrina α4β7 para alívio dos sintomas da IBD pediátrica. Em um aspecto, o paciente pediátrico tem UC ou CD moderada, a severamente ativas. Em um aspecto, os métodos compreendem administrar um anticorpo anti-integrina, como um anticorpo anti-a4p7, como o vedolizumabe.

[010] Em um aspecto, o paciente pediátrico com doença inflamatória intestinal tem uma resposta, inadequada, perda de resposta ou intolerância a pelo menos um dos seguintes agentes: corticosteroides, imunomoduladores e/ou terapia antagonista com fator de necrose tumoral alfa (TNF-ot).

[011] Em um aspecto, a invenção se refere a um método para tratar doença, inflamatória intestinal em um paciente pediátrico compreendendo administrar intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 100 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 100 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 100 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma sequência de região variável da cadeia pesada dos aminoácidos 20 a 140 da SEQ ID NO: 1 e uma sequência da região variável da cadeia leve dos aminoácidos 20 a 131 da SEQ ID NO: 2. O método pode ainda compreender uma quarta dose de 100 mg nas 14 semanas após a primeira dose. O método pode compreender ainda uma quarta dose de 200 mg nas 14 semanas após a primeira dose. O método pode ainda compreender uma quinta dose e subsequente de 100 mg a. cada oito semanas após a quarta dose. O método pode compreender ainda uma quinta e subsequente dose de 200 mg a cada, oito semanas após a quarta dose. A cadeia pesada do anticorpo pode compreender os aminoácidos 20 a 470 da SEQ ID NO: 1 e a cadeia leve do anticorpo pode compreender aminoácidos 20 a 238 da SEQ ID NO: 2. Cada dose pode ser

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4/61 administrada por via intravenosa como uma infusão durante cerca de 120 minutos. O paciente pediátrico pode pesar menos de 30 kg. A doença inflamatória intestinal pode ser moderada a severamente ativa. A doença inflamatória intestinal pode ser uma colite ulcerosa moderada a grave. O paciente pediátrico pode ter tido uma falta de resposta adequada, perda de resposta ou era intolerante a um antagonista do TNFa. O paciente pediátrico pode ter tido uma resposta inadequada ou perda de resposta a um corticosteroide. O paciente pediátrico pode ter tido uma resposta inadequada ou perda de resposta a um imunomodulador. Uma resposta clínica pode ser alcançada na semana 14. O paciente pediátrico pode obter remissão da doença inflamatória intestinal.

[012] Em outro aspecto, a invenção se refere a um método para tratar doença inflamatória intestinal em um paciente pediátrico compreendendo administrar intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 200 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 200 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 200 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma sequência de região variável da cadeia pesada, dos aminoácidos 20 a 140 da SEQ ID NO: 1 e uma. sequência da região variável da cadeia leve dos aminoácidos 20 a 131 da SEQ ID NO: 2. O método pode compreender ainda uma quarta dose de 200 mg nas 14 semanas após a primeira dose. O método pode compreender ainda uma quinta e subsequente dose de 200 mg a cada oito semanas após a quarta dose. A cadeia pesada do anticorpo pode compreender os aminoácidos 20 a 470 da SEQ ID NO: 1 e a cadeia leve do anticorpo pode compreender os aminoácidos 20 a 238 da SEQ ID NO:2. Cada dose pode ser administrada por via intravenosa como uma infusão durante cerca, de 120 minutos. O paciente pediátrico pode pesar menos de 30 kg. A doença inflamatória intestinal pode ser moderada a severamente ativa. A doença inflamatória intestinal pode ser uma colite ulcerosa moderada a grave. O paciente pediátrico pode ter tido uma falta de resposta adequada, perda de resposta ou era intolerante a um antagonista do TNFa. O paciente pediátrico pode ter tido uma resposta, inadequada ou perda de resposta a um corticosteroide. O paciente pediátrico pode ter tido uma resposta inadequada ou perda de resposta a um imunomodulador. Uma resposta clínica pode ser alcançada na semana 14. O paciente pediátrico pode obter remissão da doença inflamatória intestinal.

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[013] Em outro aspecto, a invenção se refere a um método para tratar doença inflamatória intestinal em um paciente pediátrico compreendendo administrai' intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 150 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 150 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 150 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma sequência de região variável da cadeia pesada dos aminoácidos 20 a 140 da SEQ ID NO: 1 e uma sequência da região variável da cadeia leve dos aminoácidos 20 a 131 da SEQ ID NO: 2. O método pode compreender ainda uma quarta dose de 150 mg nas 14 semanas após a primeira dose. O método pode compreender ainda uma quarta dose de 300 mg nas 14 semanas após a primeira dose. O método pode compreender ainda uma quinta e subsequente dose de 150 mg a cada oito semanas após a quarta dose. O método pode compreender ainda uma quinta e subsequente dose de 300 mg a cada oito semanas após a quarta dose. A cadeia pesada do anticorpo pode compreender os aminoácidos 20 a 470 da SEQ ID NO: 1 e a cadeia leve do anticorpo pode compreender os aminoácidos 20 a 238 da SEQ ID NO:2. Cada dose pode ser administrada por via intravenosa como uma infusão durante cerca de 30 minutos. O paciente pediátrico pode pesar 30 kg ou mais. A doença inflamatória intestinal pode ser moderada a severamente ativa. A doença inflamatória intestinal pode ser uma colite ulcerosa moderada a grave. O paciente pediátrico pode ter tido uma falta de resposta adequada, perda de resposta ou era intolerante a um antagonista do TNFa. O paciente pediátrico pode ter tido uma resposta inadequada ou perda de resposta a um corticosteroide. O paciente pediátrico pode ter tido uma resposta inadequada ou perda de resposta a um imunomodulador. Uma resposta clínica pode ser alcançada na semana 14. O paciente pediátrico pode obter remissão da doença inflamatória intestinal.

[014] Em outro aspecto, a invenção se refere a um método para o tratamento de doença, inflamatória intestinal em um paciente pediátrico compreendendo administrar intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 300 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, unia segunda dose de 300 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 300 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma sequência da região variável da cadeia pesada dos aminoácidos 20 a 140 da SEQ ID NO: 1 e uma região

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6/61 variável da cadeia leve sequência dos aminoácidos 20 a 131 da SEQ ID NO: 2. O método pode compreender ainda uma quarta dose de 300 mg nas 14 semanas após a primeira dose. O método pode compreender ainda uma quinta e subsequente dose de 300 mg a cada oito semanas após a quarta, dose. A cadeia pesada do anticorpo pode compreender os aminoácidos 20 a 470 da SEQ ID NO: 1 e a cadeia leve do anticorpo pode compreender os aminoácidos 20 a 238 da SEQ ID NO:2. Cada, dose pode ser administrada por via intravenosa como uma infusão durante cerca de 30 minutos. O paciente pediátrico pode pesar 30 kg ou mais. A doença inflamatória intestinal pode ser moderada a severamente ativa. A doença inílamatória intestinal pode ser uma colite ulcerosa moderada a grave. O paciente pediátrico pode ter tido uma falta de resposta adequada, perda de resposta ou era intolerante a um antagonista do TNFa. O paciente pediátrico pode ter tido uma resposta inadequada ou perda de resposta a um corticosteroide. O paciente pediátrico pode ter tido uma resposta inadequada ou perda de resposta a um imunomodulador. Uma resposta clínica pode ser alcançada na semana 14. O paciente pediátrico pode obter remissão da doença inflamatória intestinal.

[015] Em outro aspecto, a invenção se refere a um método para o tratamento de doença inflamatória intestinal em um paciente pediátrico compreendendo administrar in travenos amente a um paciente pediátrico com IB D: uma primeira dose de 100 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 100 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 100 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antígeno de origem não humana e pelo menos uma porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo α4β7, em que a região de ligação ao antígeno compreende as CDRs: Cadeia leve: CDR1 SEQ ID NO: 7, CDR2 SEQ ID NO: 8 e CDR3 SEQ ID NO: 9; e Cadeia pesada: CDR1 SEQ ID NO: 4, CDR2 SEQ ID NO: 5 e CDR3 SEQ ID NO: 6.

[016] Em outro aspecto, a invenção se refere a um método para o tratamento de doença inílamatória intestinal em um paciente pediátrico compreendendo administrar intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 200 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 200 mg do anticorpo duas semanas após a primeira, dose e uma terceira dose de 200 mg do

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7/61 anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antígeno de origem não humana e pelo menos uma porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo α4β7, em que a região de ligação ao antígeno compreende as CDRs: Cadeia leve: CDR1 SEQ ID NO: 7, CDR2 SEQ ID NO: 8 e CDR3 SEQ ID NO: 9; e Cadeia pesada: CDR1 SEQ ID NO: 4, CDR2 SEQ ID NO: 5 e CDR3 SEQ ID NO: 6.

[017] Em outro aspecto, a invenção se refere a um método para o tratamento de doença inílamatória intestinal em um paciente pediátrico compreendendo administrar intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 150 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 150 mg do anticorpo duas semanas após a primeira, dose e uma terceira dose de 150 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antígeno de origem não humana e pelo menos uma porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo ίχ4β7, em que a região de ligação ao antígeno compreende as CDRs: Cadeia leve: CDR1 SEQ ID NO: 7, CDR2 SEQ ID NO: 8 e CDR3 SEQ ID NO: 9; e Cadeia pesada: CDR1 SEQ ID NO: 4, CDR2 SEQ ID NO: 5 e CDR3 SEQ ID NO: 6.

[018] Em outro aspecto, a invenção se refere a um método para o tratamento de doença, inílamatória intestinal em um paciente pediátrico compreendendo administrar intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 300 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, unia segunda dose de 300 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 300 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antígeno de origem não humana e pelo menos uma porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo α4β7, em que a região de ligação ao antígeno compreende as CDRs: cadeia leve: CDR1 SEQ ID NO: 7, CDR2 SEQ ID NO: 8 e CDR3 SEQ ID NO: 9; e cadeia pesada: CDR1 SEQ ID NO: 4, CDR2 SEQ ID NO: 5 e CDR3 SEQ ID NO:6. Doses subsequentes do anticorpo podem ser administradas por via subcutânea. Cada dose subcutânea. pode ser 108 mg de anticorpo. A dose subcutânea pode ser administrada a cada duas ou quatro semanas a um paciente

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8/61 pediátrico que pesa 30 kg ou mais. A dose subcutânea pode ser administrada a cada três semanas, a cada quatro semanas, a cada cinco semanas, a cada seis semanas, a cada sete semanas, a cada oito semanas, a cada nove semanas ou a cada dez semanas a um paciente pediátrico que pesa de 10 a 30 kg.

[019] Em outro aspecto, a invenção se refere a um método para o tratamento de doença inflamatória intestinal (IBD) em um paciente pediátrico compreendendo administrar intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 200 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, unia segunda dose de 200 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e administrar subcutaneamente uma terceira dose de 108 mg do anticorpo seis seman as após a primeira dose e doses subsequentes de 108 mg do anticorpo a cada duas, três ou quatro semanas daí em diante, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antígeno de origem não humana e pelo menos uma porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo α4β7, em que a região de ligação ao antígeno compreende as CDRs: Cadeia leve: CDR SEQ ID NO: 7, CDR2 SEQ ID NO: 8 e CDR3 SEQ ID NO: 9; e Cadeia pesada: CDR1 SEQ ID NO: 4, CDR2 SEQ ID NO: 5 e CDR3 SEQ ID NO: 6.

[020] Em outro aspecto, a invenção se refere a um método para o tratamento de um paciente com câncer pediátrico submetido a transplante de células-tronco hematopoiéticas alogênicas (alo-HSCT), compreendendo administrar intravenosamente a um paciente pediátrico no dia anterior à alocação de HSCT uma primeira dose de 200 mg de um anticorpo que tem especificidade se ligação a integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 200 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e administração subcutânea de uma terceira dose de 108 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose e doses subsequentes de 108 mg do anticorpo a cada duas, três ou quatro semanas depois, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antígeno de origem não humana e pelo menos uma porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo α4β7, em que a região de ligação ao antígeno compreende as CDRs: cadeia leve: CDR SEQ ID NO: 7, CDR2 SEQ ID NO: 8 e CDR3 SEQ ID NO: 9; e Cadeia pesada: CDR1 SEQ ID NO: 4, CDR2 SEQ ID NO: 5 e CDR3 SEQ ID NO: 6.

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[021 ] Em outro aspecto, a invenção se refere a um método para o tratamento de um paciente pediátrico com um defeito monogênico com patologia tipo IB D compreendendo administrar intravenosamente ao paciente pediátrico: uma primeira dose de 200 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 200 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 200 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antígeno de origem não humana e pelo menos uma porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo α4β7, em que a região de ligação ao antígeno compreende as CDRs: Cadeia leve: CDR SEQ ID NO: 7, CDR2 SEQ ID NO: 8 e CDR3 SEQ ID NO: 9; e Cadeia pesada: CDR1 SEQ ID NO: 4, CDR2 SEQ ID NO: 5 e CDR3 SEQ ID NO:6. O defeito monogênico com patologia do tipo IB D pode ser a doença de armazenamento de glicogênio tipo 1b, perda da função de IL10 e mutações nos receptores IL10 ou IL10, síndrome linfoproliferativa do tipo X 2, síndrome IPEX causada por mutações no fator de transcrição FOXP3 ou granulomatosa crônica doença. O método pode ainda compreender uma dose subsequente de 200 mg a cada oito semanas depois. O método pode ainda compreender uma dose subsequente de 200 mg até o paciente pediátrico ter 30 kg ou mais.

[022] Em outro aspecto, a invenção se refere a um frasco fabricado para administrar 200 mg de anticorpo anti-a4b7 para o tratamento de um paciente pediátrico.

[023] Qualquer um dos métodos aqui descritos compreendendo uma dose de 100 mg, 200 mg ou 150 mg pode ainda compreender aumentar a dose para 300 mg após os pacientes pediátricos pesarem 30 kg ou mais.

[024] O anticorpo usado nos métodos aqui descritos pode ser um anticorpo humanizado. O anticorpo humanizado pode compreender uma sequência da região variável da cadeia pesada dos aminoácidos 20 a 140 da SEQ ID NO: 1 e uma sequência da região variável da cadeia leve dos aminoácidos 20 a 131 da SEQ ID NO: 2.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

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[025] FIG. 1 mostra um esquema do desenho do estudo. O estudo inclui um período de triagem de quatro semanas, um período de tratamento duplo cego de 22 semanas (com a última dose na semana 14 para todos os indivíduos). Após o período de triagem de quatro semanas, indivíduos com peso maior ou igual a 30 kg serão dosados nas semanas 0, 2, 6 e 14 com 300 mg ou 150 mg de vedolizumabe por via intravenosa. Indivíduos com peso inferior a 30 kg serão dosados nas semanas 0, 2, 6 e 14 com 200 mg ou 100 mg de vedolizumabe por via intravenosa. Uma consulta sem doseamento pode ser agendada a qualquer momento entre os dias 16 e 42 para coleta farmacocinética. Os indivíduos que consentem em participai' do estudo de extensão aberto (OLE) podem ser elegíveis para a dosagem do estudo OLE após a conclusão dos procedimentos na semana 22 (consulta 9). Os indivíduos que não entrarem no estudo OLE ou se retirarem antes da semana 22 também concluirão os procedimentos da consulta EP (semana 22) e uma consulta final de segurança 18 semanas após a última dose do fármaco do estudo. Os indivíduos que se retirarem antes da semana 22 também participarão de uma pesquisa de segurança de acompanhamento em longo prazo por telefone seis meses após a última dose do fármaco do estudo. Os indivíduos fornecerão consentimento informado/consentimento pediátrico para participação no estudo OLE na semana 14 do estudo ou após completá-la. Os indi víduos que não entrarem no estudo OLE concluirão a consulta final de segurança 18 semanas após a última dose do fármaco em estudo e participarão de uma pesquisa de segurança de acompanhamento em longo prazo por telefone seis meses após a última dose do fármaco em estudo.

[026] FIG. 2 é um esquema de um segundo desenho do estudo. Este estudo começará após a consulta da semana 22 para o estudo presente no Exemplo 1 e na FIG. 1. Os indivíduos que recebem a dose baixa (150 mg para, indivíduos com 30 kg ou mais; 100 mg para, indivíduos com menos de 30 kg) de vedolizumabe IV podem ser escalados para a dose alta (300 mg para indivíduos com 30 kg ou mais; 200 mg para indivíduos com menos de 30 kg), a critério do pesquisador, se o indivíduo demonstrar agravamento da doença por PUCAFPCDAI em duas consultas consecutivas. Os indivíduos que tiveram sua dose aumentada com base na não resposta devem ser dosados com base no peso no momento da não resposta no Estudo do Exemplo 1, FIG. 1.

DESCRIÇÃO DETALHADA

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[027] A invenção se refere a métodos para o tratamento com um antagonista α4β7integrina, como um anticorpo anti-oc4p7, por exemplo, vedolizumabe, de um paciente pediátrico com doença inflamatória intestinal (IBD) e métodos para manter a remissão da IBD em um paciente pediátrico. A invenção também se refere a métodos para o tratamento com um antagonista da (x4p7-integrina, como um anticorpoanti-a4p7, por exemplo, vedolizumabe, de um paciente pediátrico em risco de ter doença do enxerto versus hospedeiro (GvHD), um paciente pediátrico com um defeito monogênico com patologia do tipo IBD, um paciente pediátrico com doença de armazenamento de glicogênio tipo 1b, um paciente pediátrico com colite relacionada à perda da função da IL10 e mutações nos receptores IL10 ou IL10, um paciente pediátrico com síndrome linfoproliferativa ligada ao X 2 (defeito no Gene XIA.P), um paciente pediátrico com síndrome de IPEX causado por mutações no fator de transcrição FOXP3, um paciente pediátrico com doença inflamatória intestinal de início muito precoce (início 6 anos de idade), um paciente pediátrico com colite indeterminada (IBDU) e um pediátrico paciente com colite granulomatosa crônica associada à doença.

[028] A invenção também se refere a métodos para o tratamento com um antagonista da a4[37-integrina, como um anticorpo anti-a4p7, por exemplo, vedolizumabe, de um paciente pediátrico com um defeito monogênico com patologia do tipo IBD. O defeito monogênico pode ser qualquer um ou combinação de defeitos da barreira epitelial e da resposta epitelial (por exemplo, epidermólise bolhosa distrófica, síndrome de Kindler, displasia ectodérmica e imunodeficiência ligada ao X, deficiência de ADAM-17. diarréia familiar); neutropenia e defeitos na morte bacteriana de fagócitos (por exemplo, doença granulomatosa crônica, doença de armazenamento de glicogênio tipo lb, neutropenia congênita, deficiência de adesão de leucócitos 1); desordens hiperinflamatórias e autoinflamatórias (por exemplo, deficiência de mevalonato quinase, defeitosdefosfolipase Cj/2, febre familiar* do Mediterrâneo, linfo-histiocitose hemofagocítica familiar tipo 5, síndrome linfoproliferativa ligada ao X 2, síndrome linfoproliferativa ligada ao X 2, síndrome linfoproliferativa ligada ao X 1, síndrome de Hermansky-Pudlak); defeitos imunológicos que incluem seleção e ativação de células T e B, defeitos de células B e anticorpos (por exemplo, imunodeficiência variável comum tipo 1, imunodeficiência variável comum tipo 8, agamaglobulinemia,

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12/61 síndrome hiper-IgM, síndrome de Wiskott-Aldrich, síndrome de Omenn, síndrome de Hyper IgE, síndrome trichohepatoentérica; Síndrome do tumor hamaroma de ΡΊΈΝ, síndrome de Hoyeraal Hreidarsson); células T reguladoras e regulação imune (por exemplo, desregulação imune ligada ao X, polendocrinopatia, enteropatia, defeitos de sinalização da 1L10); e defeitos na inervação intestinal (por exemplo, doença de Hirschspring).

[029] O vedolizumabe, um anticorpo monoclonal humanizado que se liga especificamente à integrina ομβ?, é indicado para o tratamento de pacientes corn colite ulcerosa (UC) moderada a severamente ativa e doença de Crohn (CD). O vedolizumabe possui um novo mecanismo de ação seletivo ao intestino que difere do de outros agentes biológicos atualmente comercializados para o tratamento da doença inflamatória intestinal (IBD), incluindo natalizumab e antagonistas do fator de necrose tumoral α (TNF-α). Ao se ligar à integrina ουβγ expressa na superfície celular, o vedolizumabe bloqueia a interação de um subconjunto de linfócitos T com memória interna do intestino com a molécula-1 de adesão celular da mucosa do endereço na mucosa (MAdCAM-1) expressa nas células endoteliais. Consequentemente, a migração dessas células para o tecido intestinal inflamado é inibida.

[030] A eficácia e segurança, da terapia de indução e manutenção de vedolizumabe foram demonstradas em pacientes adultos com UC no estudo GEMINI 1 (número ClinicalTrials.gov, NCT00783718) e em pacientes com CD no GEMINI 2 (número ClinicalTrials.gov, NCT00783692) e GEMINI 3 (Número ClinicalTrials.gov, NCT01224171).

[031] Mais recentemente, foram concluídos estudos por várias instituições em todo o mundo usando o vedolizumabe no tratamento de pacientes pediátricos. Em um estudo, os pacientes receberam vedolizumabe por via intravenosa nas zero, duas e seis semanas e depois aproximadamente a cada oito semanas. A dose de vedolizumabe foi uma dose fixa de 300 mg para 75% dos pacientes, mas administrada em peso para os demais pacientes menores. Singh et al., Inflamm. Bowel Dis., 22 (9): 2121-2126 (2016). Em outro estudo, a doença, inflamatória intestinal pediátrica foi tratada em um estudo que incluiu crianças de 13 a 21 anos de idade. Apenas a dose adulta de 300 mg foi administrada nas 0,2 e 6 semanas, seguida por uma fase de manutenção em intervalos de 8 semanas. Pacientes com peso inferior a 40

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13/61 kg foram excluídos do estudo. Conrad et al., Inflamm Bowel Dis., 22: 2425-2431 (2016). Outro estudo divulgou a administração da dose adulta de 300 mg a 81% das crianças envolvidas, enquanto outras crianças (pesando 28,5 a 48 kg) receberam uma dose reduzida (3,6 a 10,3 mg/kg). Ledder et al., J. of Crohn’s and Colitis, 1230-1237 (2017). Assim, é evidente que há desejo de expandir o uso de vedolizumabe no tratamento de pacientes pediátricos. No entanto, existe a necessidade de desenvolver uma dose fixa adequada para pacientes pediátricos menores. Inúmeros ajustes de dose para um paciente pequeno, especialmente um paciente muito jovem, em uma fase da. vida conhecida, por crescimento rápido, são uni fardo desnecessário e unia oportunidade para erros. Uma dose pediátrica fixa para pacientes menores é fundamental para simplificar o tratamento dessa população de pacientes e evitar o potencial de erros de cálculo com base no peso.

Definições

[032] Um “paciente pediátrico”, como aqui utilizado, se refere a um paciente humano até a idade de 18 anos.

[033] Como aqui utilizado, a concentração sérica “mínima” de um anticorpo se refere à concentração imediatamente antes da próxima dose.

[034] “Remissão clínica” ou “remissão”, conforme usado aqui com referência a indivíduos com colite ulcerosa, se refere a uma pontuação Mayo completa menor ou igual a 2 pontos e nenhuma pontuação individual maior que 1 ponto. A “remissão clínica” da doença de Crohn se refere a uma pontuação no índice de atividade de doença de Crohn (CDAI) de 150 pontos ou menos ou uma pontuação no HBI de 4 ou menos. A pontuação CDAI pesa fatores que incluem o número de fezes líquidas ou muito moles, a gravidade da dor abdominal, o bemestar geral, as manifestações extraintestinais da doença, como artrite, irite, eritemia, fistula ou abscesso ou febre, seja a paciente está tomando uni fármaco antidiarreico, massa abdominal, hematócrito e peso corporal. O “índice Harvey-Bradshaw” (HBI) é uma versão mais simples do CDAI para fins de coleta de dados. Ele consiste apenas em parâmetros clínicos, incluindo bem-estar gerai, dor abdominal, número de fezes líquidas por dia, massa abdominal, hematócrito, peso corporal, fármacos para controlai' a diarréia e a presença de

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14/61 complicações e requer apenas um dia de entradas diárias. A enterografia por ressonância magnética (MREn) está sendo avaliada como um método para medir a remissão.

[035] “Remissão endoscópica”, conforme usado aqui, se refere a uma condição com uma baixa pontuação endoscópica. Um exemplo de método para avaliar a pontuação endoscópica na colite ulcerosa é a sigmoidoscopia flexível. A pontuação endoscópica na colite ulcerosa pode ser a subpontuação de Mayo. Um exemplo de método para avaliar a pontuação endoscópica na doença, de Crohn é a ileocolonoscopia. A pontuação endoscópica na doença de Crohn pode ser a pontuação endoscópica simples para a doença de Crohn (SES-CD). A SES-CD pode incluir medidas como o tamanho das úlceras, a quantidade de superfície ulcerada, a quantidade de superfície afetada e se e em que medida o canal alimentar é estreitado.

[036] Uma “resposta clínica”, conforme usado aqui, com referência a indivíduos com colite ulcerosa, se refere a uma redução na pontuação completa, de Mayo de 3 pontos ou mais e 30% ou mais a partir da linha de base (ou unia pontuação parcial de Mayo de 2 pontos ou mais e 25% ou mais maior a partir da linha de base, se a pontuação completa de Mayo não tiver sido realizada na consulta) com uma diminuição na pontuação de sangramento retal de 1 ou mais pontos (>1) ou pontuação de sangramento retal absoluto de 1 ou menos pontos (<1). Uma. “resposta clínica”, conforme usada aqui, corn referência aos indivíduos corn doença de Crohn, se refere a uma diminuição de 70 pontos ou mais na pontuação CDAI desde o início (semana 0), uma redução de 50% ou mais na pontuação SES-CD desde a linha de base ou é uma pontuação SES-CD de 0 a 2 acompanhado por uma diminuição na dor abdominal ou uma diminuição de 3 pontos ou mais em relação ao escore HBI basal. Os termos “resposta clínica” e “resposta”, por exemplo, sozinhos sem nenhum adjetivo, são usados aqui de forma intercambiável.

[037] “Resposta endoscópica”, como aqui utilizado, se refere a uma porcentagem de redução em uma pontuação endoscópica a partir da linha de base (por exemplo, na triagem ou imediatamente antes da dose inicial). Na doença de Crohn, a resposta endoscópica pode ser avaliada por uma pontuação endoscópica simples para a. doença, de Crohn (SES-CD).

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[038] “Linha de base”, conforme aqui utilizado, descreve um valor de um parâmetro que é medido antes da dose inicial de um tratamento. Pode se referir à medição de uma amostra obtida no mesmo dia, no dia anterior, durante a semana anterior ao tratamento inicial, ou seja, em um período de tempo antes da primeira dose, quando pouca alteração é esperada até depois da primeira dose e os valores da medida obtidos após a primeira dose podem ser comparados com esse valor da linha de base para representar a alteração causada pela dose.

[039] “Cicatrização da mucosa”, conforme usado aqui, como aqui utilizado, com referência a indivíduos com colite ulcerosa, se refere a uma subpontuação endoscópica de Mayo menor ou igual a 1. Em referência à doença de Crohn, a cicatrização da mucosa se refere a uma melhoria, na quantidade ou gravidade de ferimentos nas mucosas, por exemplo, no trato digestivo. Por exemplo, a cicatrização da mucosa pode se referir a uma diminuição na quantidade, tamanho ou gravidade de uma ou mais de uma úlcera, no trato digestivo. Em outro exemplo, a cicatrização da mucosa se refere a uma diminuição em um ou mais parâmetros selecionados do grupo que consiste em espessura da parede, contraste aumentado da parede intestinal, edema mural, ulceração e vascularização perientérica. Essa cicatrização da mucosa pode ser expressa como uma. pontuação SES-CD ou uma pontuação no índice de ressonância nagnética da atividade (MaRIA). A cura completa da mucosa na doença de Crohn inclui ausência de ulceração.

[040] “PUCAI” ou “índice de atividade de colite ulcerosa pediátrica”, conforme usado aqui, se refere à. coleta de 6 itens clínicos, incluindo dor abdominal, sangramento retal, consistência das fezes na maioria das fezes, número de fezes por 24 horas, fezes noturnas (qualquer episódio que cause despertar) e nível de atividade. A pontuação PUCAI varia de 0 a 85; uma pontuação inferior a dez indica remissão, 10 a 34 doenças leves, 35 a 64 doenças moderadas e 65 a 85 doenças graves. Uma resposta clinicamente significativa é definida como uma alteração PUCAI maior ou igual a 20.

[041] “Resposta clínica baseada em PUCAI”, conforme usado aqui, se refere a uma diminuição de vinte pontos ou mais em relação à linha de base na pontuação do índice de atividade de colite ulcerosa pediátrica (PUCAI). “Remissão clínica baseada em PUCAI”, conforme usado aqui, se refere a uma pontuação PUCAI inferior a 10.

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[042] “Agravamento da doença”, conforme usado aqui, se refere a um aumento no PUCAI de mais de 20 pontos em duas consultas consecutivas com pelo menos sete dias de intervalo ou o PUCAI foi superior a 35 pontos em qualquer consulta programada ou não programada (para pacientes com colite ulcerosa); ou um aumento no PCDAI superior a 15 pontos em duas consultas consecutivas com pelo menos sete dias de intervalo, ou o PCDAI era superior a 30 pontos em qualquer consulta agendada ou não agendada.

[043] “PCDAI”, conforme usado aqui, se refere a uma avaliação projetada especificamente para uso em crianças. O PCDAI inclui um item específico da criança: a variável velocidade da altura e três parâmetros laboratoriais: hematócrito (ajustado para idade e sexo), ERS e nível de albumina. A pontuação do PCDAI pode variar de 0 a 100, com pontuações mais altas significando doença mais ativa. Uma pontuação menor que dez é consistente com doença inativa, 11 a 30 indica doença leve e maior que 30 é doença moderada a grave. Uma diminuição de 12,5 pontos é tomada como evidência de melhoria. Uma remissão clínica, baseada no PDCAI é uma pontuação do PDCAI menor ou igual a 10.

[044] “Qualidade Européia de Vida -- 5 Dimensçoes (EQ-5D) escala analógica visual (VAS)”, conforme aqui utilizado, se refere a um questionário que é um instrumento validado (ahrq.gov/rice/eq5dproj.htm, “U.S. Valuation of EuroQol EQ -5D™ Health States”, acessado em 08 de agosto de 2012, Bastida et al. BMC Gastroenterology 10:26-(2010), Konig et. al. European Journal of Gastroenterology & Hepatology 14:1205-1215 (2002)) usado para medir qualidade de vida relativa a saúde geral (HRQOL) em pacientes e inclui cinco domínios - mobilidade, autocuidado, atividades usuais, dor/desconforto e ansiedade/depressão. Os pacientes escolhem o nível de problemas de saúde que têm atualmente em cada item como “Nenhum”, “Moderado” ou “Extremo” e recebem pontuação 1, 2 ou 3, respectivamente. Uma pontuação EQ-5D composta pode ser calculada a partir das pontuações individuais para avaliar a HRQOL geral. A pontuação da Escala analógica visual (VAS) de EQ-5D é uma classificação autoatribuída da saúde geral, usando uma escala visual e vertical de 20 cm, com uma pontuação de 0 como o pior e 100 como a melhor saúde possível. O EQ-5D e a VAS de EQ-5D demonstraram em muitos estudos ser instrumentos válidos e confiáveis para medir a HRQOL em pacientes com doenças gastrointestinais. Uma

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17/61 diminuição de > 0,3 ponto na pontuação EQ-5D representa uma melhora clinicamente significativa na HRQOL dos pacientes. Um aumento maior ou igual a 7 pontos na pontuação VAS de EQ-5D representa uma melhora clinicamente significativa na HRQOL dos pacientes.

[045] O “Inflammatory Bowel Disease Questionnaire” ((IBDQ) questionnaire” (Irvine Journal of Pediatric Gastroenterology & Nutrition 28:S23-27 (1999)) é usado para avaliar a qualidade de vida em pacientes adultos com doença intestinal inflamatória, colite ulcerativa ou Doença de Crohn e inclui 32 perguntas sobre quatro áreas de HRQOL: Sistemas Intestinais (10 perguntas), Função Emocional (12 perguntas), Função Social (5 perguntas) e Função Sistêmica (5 questões). Solicita-se aos pacientes que lembrem os sintomas e a qualidade de vida das últimas 2 semanas e classifiquem cada item em uma escala Likert de 7 pontos (pontuações mais altas equivalem a maior qualidade de vida). Unia pontuação total do IBDQ é calculada somando as pontuações de cada domínio; a pontuação total do IBDQ varia de 32 a 224. Uma pontuação total do IBDQ maior que 170 é característica da qualidade de vida relacionada à saúde (HRQoL) dos pacientes em remissão.

[046] Como usado neste documento, “terapia de indução” é um estágio inicial da terapia, em que um paciente recebe um regime de dosagem relativamente intensivo de um agente terapêutico. O agente terapêutico, por exemplo, anticorpo, é administrado de uma maneira que fornece rapidamente uma quantidade eficaz do agente adequada, para certos fins, como induzir tolerância imunológica ao agente ou induzir unia resposta clínica e melhorar os sintomas da doença (ver WO 2012/151247 e WO 2012/151248, aqui incorporado por referência).

[047] Como usado aqui, “terapia de manutenção” é após a terapia de indução e é administrada de uma maneira que continua a resposta alcançada pela terapia de indução com uni nível estável de agente terapêutico, por exemplo, anticorpo. Um regime de manutenção pode impedir o retorno dos sintomas ou a recidiva da doença, por exemplo, IBD (ver WO 2012/151247 e WO 2012/151248, aqui incorporado por referência). Um regime de manutenção pode proporcionar comodidade ao paciente, por exemplo, ser um regime de dosagem simples ou exigir viagens pouco frequentes para, o tratamento.

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[048] A molécula da superfície celular, “α4β7 integrina” ou “α4β7”, é um heterodímero de uma cadeia ou (CD49D, ITGA4) e uma cadeia βγ (1TGB7). Cada cadeia pode formar um heterodímero com uma cadeia de integrina alternativa, para formar (X4pi ou αεβ?. Genes cu e β? humanos (GenBank (Centro Nacional de Informações sobre Biotecnologia, Bethesda, MD) RefSeq números de acessão NM_000885 e NM_000889, respectivamente) são expressos por linfócitos B e T, particularmente linfócitos CD4+ de memória. Típico de muitas integrinas, cU$7pode existir no estado de repouso ou ativado. Os ligantes para cU$7incluem molécula de adesão celular vascular (VOAM), fibronectina e endereçamento da mucosa (MAdCAM (por exemplo, MAdCAM-1)). A integrina α4β7 medeia o tráfico de linfócitos para a mucosa GI e o tecido linfoide associado ao intestino (GALT) através da interação adesiva com a molécula de adesão celular 1 da mucosa na endereço celular (MAdCAM-1), que é expressa no endotélio dos linfonodos mesentéricos e da mucosa GI.

[049] O termo “anticorpo” aqui é usado no sentido mais amplo e abrange especificamente anticorpos monoclonais completos, imunoglobulinas, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos) formados a partir de pelo menos dois anticorpos completos, por exemplo, cada um para um antígeno ou epitopo diferente e fragmentos de ligação a antígenos individuais, incluindo dAbs, scFv, Fab, F(ab)’2, Fab', incluindo humanos, humanizados e anticorpos de espécies não humanas e formas de ligação a antígenos recombinantes, como monocorpos e diacorpos.

[050] O termo “anticorpo monoclonal”, conforme usado neste documento, se refere a um anticorpo obtido de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, isto é, os anticorpos individuais compreendendo a população são idênticos e/ou se ligam ao mesmo epitopo, exceto por possíveis anticorpos variantes que podem surgir durante a produção do anticorpo monoclonal, essas variantes geralmente estando presentes em quantidades menores. Ao contrário das preparações de anticorpo policlonal, que normalmente incluem diferentes anticorpos direcionados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo é direcionado contra uni único determinante em um antígeno. O modificador “monoclonal” indica o caráter do anticorpo como sendo obtido de uma. população substancialmente homogênea de anticorpos e não deve ser interpretado como exigindo a

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19/61 produção do anticorpo por nenhum método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais a serem utilizados de acordo com a presente invenção podem ser feitos pelo método de hibridoma descrito pela primeira vez por Kohler et al., Nature, 256:495 (1975), ou podem ser preparados por métodos de DNA recombinante (ver, por exemplo, Patente US 4.816.567). Os “anticorpos monoclonais” também podem ser isolados de bibliotecas de anticorpos em fagos utilizando as técnicas descritas em Clackson et al., Nature, 352:624628 (1991) e Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581-597 (1991), por exemplo.

[051] “Fragmentos de ligação ao antígeno” de um anticorpo compreendem pelo menos as regiões variáveis das cadeias pesada e/ou leve de um anticorpo αηΙΐ-α4β7. Por exemplo, um fragmento de ligação ao antígeno de vedolizumabe compreende os resíduos de aminoácidos 20 a 131 da sequência da cadeia leve humanizada da SEQ ID NO: 2. Exemplos de tais fragmentos de ligação ao antígeno incluem fragmentos Fab, fragmentos Fab’, fragmentos scFv e F(ab’)2 de um anticorpo humanizado conhecido na técnica. Os fragmentos de ligação ao antígeno do anticorpo humanizado da invenção podem ser produzidos por divagem enzimática ou por técnicas recombinantes. Por exemplo, a divagem de papaína ou pepsina pode ser usada para gerai^- fragmentos Fab ou F(ab’)2, respectivamente. Os anticorpos também podem ser produzidos em uma variedade de formas truncadas usando genes de anticorpos nos quais um ou mais códons de parada foram introduzidos a montante do local natural de parada. Por exemplo, uma construção recombinante que codifica, a cadeia pesada de um fragmento F(ab’)2 pode ser projetada para incluir sequências de DNA que codificam o domínio CHi e a região de dobradiça da cadeia pesada. Em um aspecto, os fragmentos de ligação ao antígeno inibem a ligação da integrina α4β7 a um ou mais de seus ligantes (por exemplo, a adressina da mucosa no MAdCAM (por exemplo, MAdCAM-1), fibronectina).

[052] Os termos “receptor Fc” ou “FcR” são usados para descrever um receptor que se liga, à região Fc de um anticorpo. Em um aspecto, o FcR é um FcR humano de sequência nativa. Em outro aspecto, o FcR é um que se liga a um anticorpo IgG (um receptor gama) e inclui receptores das subclasses FcyRI, FcyRII e FcyRIIL incluindo variantes alélicas e formas que sofreram splicing altemativamente desses receptores. Os receptores FcyRIIincluem FcyRIIA (uni “receptor de ativação”) e FcyRIIB (um “receptor de inibição”), que possuem sequências de aminoácidos semelhantes que diferem principalmente nos seus domínios citoplasmáticos.

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O receptor de ativação FcyRIIA contém um motivo de ativação à base de tirosina (ITAM) imunorreceptor em seu domínio citoplasmático. O receptor de inibição FcyRIIB contém um motivo de inibição baseado em tirosina (ITAM) imunorreceptor em seu domínio citoplasmático. (Ver revisão em M. Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)). Os FcRs são revisados em Ravetch e Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991): Capei et al., Immimomethods 4:25-34 (1994); and de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 33-41 (1995). Outros FcRs, incluindo os a serem identificados no futuro, são abrangidos pelo termo “FcR” neste documento. O termo também inclui o receptor neonatal FcRn, responsável pela transferência de IgGs maternas para o feto (Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976) e Kim et al., J. Immunol. 24: 249 (1994)) e para regular a persistência de imunoglobulina G (IgG) e albumina no soro (revisado por Rath et al., J. Clin. Immunol. 33 Suppl 1: S9-17 (2013)).

[053] O termo “região hipervariável” quando usado aqui se refere aos resíduos de aminoácidos de um anticorpo que são responsáveis pela ligação ao antígeno e são encontrados no “domínio variável” de cada cadeia. A região hipervariável geralmente compreende resíduos de aminoácidos de uma “região determinante de complementaridade” ou “CDR” (por exemplo, resíduos 24-34 (Ll), 50-56 (L2) e 89-97 (L3) no domínio variável da cadeia leve e 31-35 (Hl), 50-65 (H2) e 95-102 (H3) no domínio variável da cadeia pesada; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)) e/ou os resíduos de uma “alça hipervariável” (por exemplo, resíduos 26-32 (Ll), 50-52 (L2) e 91-96 (L3) no domínio variável de cadeia, leve e 26-32 (Hl), 53 -55 (H2) e 96-101 (H3) no domínio variável de cadeia pesada, Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 796:901-917 (1987)). Os resíduos da “Região de arcabouço” ou “FR” são os resíduos de domínio variável que não são os resíduos da região hipervariável, conforme aqui definido. A região hipervariável ou suas CDRs podem ser transferidas de uma cadeia de anticorpos para outra ou para outra proteína para conferir especificidade de ligação ao antígeno ao anticorpo (composto) resultante ou proteína de ligação.

[054] Um anticorpo “isolado” é um que foi identificado e separado e/ou recuperado de um componente de seu ambiente natural. Em determinadas modalidades, o anticorpo será purificado (1) para mais de 95% em peso de proteína, conforme determinado pelo método

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Lowry e, alternativamente, mais de 99% em peso, (2) até um grau suficiente para obter pelo menos 15 resíduos da sequência de aminoácidos N-terminal ou interna pelo uso de um sequenciador de copo giratório ou (3) até a homogeneidade por SDS-PAGE sob condições de redução ou não redução usando corante azul de Coomassie ou de prata. O anticorpo isolado inclui o anticorpo in situ nas células recombinantes, uma vez que pelo menos um componente do ambiente natural do anticorpo não estará presente. Normalmente, entretanto, anticorpo isolado será preparado por pelo menos uma etapa de purificação.

[055] “Tratamento” se refere tanto ao tratamento terapêutico quanto a medidas profiláticas ou preventivas. Os que precisam de tratamento incluem os que já estão com a doença e os em que a doença ou sua recorrência deve ser evitada. Portanto, o paciente a ser tratado neste documento pode ter sido diagnosticado como portador da doença ou pode estar predisposto ou suscetível à doença. Os termos “paciente” e “indivíduo” são usados de forma intercambiável neste documento.

[056] O termo “cerca de” se refere ao seguinte valor pode ser o ponto central de uma faixa, como +/- 5% do valor. Se o valor for um valor relativo dado em porcentagens, o termo “cerca de” também indica que o valor a seguir pode não ter um valor exato, mas é o ponto central de uma faixa que é +/- 5% do valor, pelo qual o limite superior da faixa não pode exceder um valor de 100%.

Tratamento de Sujeitos de Doença Inflamatória Intestinal Pediátrica com anticorpos anti-a4B7

[057] Em um aspecto, a invenção se refere a métodos de tratamento de IBD (por exemplo, colite ulcerosa (UC), doença de Crohn (CD)) em um indivíduo pediátrico, compreendendo administrar ao sujeito pediátrico um anticorpo 3ηίϊ-α4β7 descrito aqui em uma quantidade eficaz para tratar IBD, por exemplo, em urna criança ou adolescente. O paciente ou sujeito pediátrico pode ser um adolescente ou uma criança (por exemplo, 2 a 17 anos, inclusive). Uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo anti-a4p7 pode ser usada como aqui descrito para o tratamento de IBD em um paciente pediátrico que sofre do mesmo. O paciente pediátrico pode ter UC ou CD moderada a severamente ativo. Por exemplo, o

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22/61 paciente pediátrico pode ter uma. pontuação de Mayo completa de 6 a 12 e um total de subpontuações de Mayo de frequência das fezes e sangramento retal >4 e uma subpontuação endoscópica >2, ou tem CD moderada a severamente ativa definida como pontuação endoscópica simples para a doença de Crohn (SES-CD) >7 e os componentes do índice de atividade da doença de Crohn (CDAI) das pontuações médios diárias de dor abdominal > 1 para os 7 dias anteriores e número total de fezes líquidas/muito moles > 10 para os 7 dias anteriores à primeira dose de um tratamento aqui descrito. Em algumas modalidades, a UC sofrida pelo paciente pediátrico é proximal ao reto, por exemplo, pancolite, não limitada à proctite. Em algumas modalidades, a CD sofrida pelo paciente pediátrico envolve o íleo e/ou cólon. Em algumas modalidades, o paciente pediátrico também sofre de estruturação e penetração da doença nas mucosas. O paciente pediátrico que sofre de UC ou CD pode ter falha no crescimento.

[058] Em algumas modalidades, o paciente pediátrico que sofre de CD tem uma mutação no domínio de oligomerização de ligação a nucleotídeos contendo o gene 2 (NOD2/CARD15) (NCBI GenelD n° 64127, o número de acessão ao GenBank da isoforma mais longa é NM_022162 e a isoforma mais curta é NM_01293557) Em algumas modalidades, o paciente pediátrico que sofre de CD possui anticorpo citoplasmático antineutrófilo ou anticorpo anti-Saccharomyces cerevisiae na circulação.

[059] Em uni aspecto, o paciente pediátrico tem 18 anos de idade ou menos. Em algumas modalidades, o paciente pediátrico tem cerca de 2 a 17 anos de idade, cerca de 2 a cerca de 14 anos de idade, cerca de 2 a cerca de 10 anos de idade, cerca de 2 a cerca de 8 anos de idade, cerca de 10 a cerca de 18 anos de idade, de 8 a 14 anos de idade, cerca de 11 a cerca de 15 anos de idade ou cerca de 13 a cerca, de 17 anos de idade.

[060] O anticorpo ηηύ-α4β7 para uso nos métodos ou usos aqui fornecidos pode se ligar a um epítopo na cadeia a4 (por exemplo, MAb 21.6 humanizado (Bendig et al., Patente US 5.840.299), na cadeia β7 (por exemplo, FIB504 ou um derivado humanizado (por exemplo, Fong et al., Patente US 7.528.236)) ou a um epítopo combinatório formado pela associação da cadeia a4 com a cadeia β7. Em um aspecto, o anticorpo é específico para o complexo integrina α4β7, por exemplo, liga um epítopo combinatório no complexo α4β7, mas não liga.

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23/61 um epitopo na cadeia α4 ou na cadeia β7, a menos que as cadeias estejam associadas uma à outra. A associação de integrina a4 com integrina β7 pode criar um epitopo combinatório, por exemplo, trazendo para a proximidade resíduos presentes em ambas as cadeias que juntos compreendem o epitopo ou expondo conformacionalmente em uma cadeia, por exemplo, a cadeia integrina a4 ou β7 cadeia de integrina, um local de ligação epitópica inacessível à ligação de anticorpos na ausência do par de integrina adequado ou na ausência de ativação da integrina. Em outro aspecto, o anticorpo 3ηΙί-α4β7 se liga à cadeia de integrina cz4 e à cadeia de integrina β7 e, portanto, é específico para o complexo integrina α4β7. Os anticorpos anti-a4p7 do epitopo combinatorial podem se ligar a α4β7, mas não se ligam a α4β 1 e/ou não se ligam a αεβ7, por exemplo. Em outro aspecto, o anticorpo 3πύ··α4β7 se liga ao mesmo ou substancialmente o mesmo epitopo que o anticorpo Act-1 (Lazarovits, AI et al., J. Immunol., 133(4): 1857-1862 (1984), Schweighoffer et al., J. Immunol., 151 (2): 717-729, 1993; Bednarczyk et al., J. Biol. Chem., 269 (11): 8348- 8354, 1994). A linha de células de hibridoma de murino ACT-1, que produz o anticorpo monoclonal de murino Act1, foi depositada de acordo com as disposições do Tratado de Budapeste em 22 de agosto de 2001, em nome da Millennium Pharmaceuticals, Inc., 40 Landsdowne Street, Cambridge, Mass. 02139, EUA, na American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110-2209, EUA, sob o número de acessão PT A- 3663. Em outro aspecto, o anticorpo 3η1ϊ-α4β7 um anticorpo humano ou urna proteína de ligação α4β7 usando as CDRs fornecidas na Publicação de Pedido de Patente US 2010/0254975.

[061] Em um aspecto, o anticorpo 3ηίί-α4β7 inibe a ligação de α4β7 a um ou mais de seus ligantes (por exemplo, a adressina da mucosa, por exemplo, MAdCAM (por exemplo, MAdCAM-1), fibronectina. e/ou adressina vascular (VCAM)). Os MAdCAMs de primatas são descritos no pedido PCT WO 96/24673, cujos ensinamentos completos são aqui incorporados por esta referência. Em outro aspecto, o anticorpo anti-cz4p7 inibe a ligação de α4β7 a MAdCAM (por exemplo, MAdCAM-1) e/ou fibronectina sem inibir a ligação de VCAM. Em um aspecto, a anti-integrina, por exemplo, um anticorpo anti-cz4p7, tem a especificidade de ligação, por exemplo, compreende as regiões determinantes da complementaridade do anticorpo Act-1 de camundongo. Por exemplo, um anticorpo antiα4β7 compreende uma cadeia pesada que contém as três regiões determinantes da

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24/61 complementaridade da cadeia pesada (CDRs, CDR1, SEQ ID NO: 4, CDR2, SEQ ID NO: 5 e CDR3, SEQ ID NO: 6) do anticorpo Act-1 de camundongo e regiões de arcabouço da cadeia pesada humana adequadas; e também compreende uma cadeia leve que contém as 3 CDRs da cadeia leve (CDR1, SEQ ID NO: 7, CDR2, SEQ ID NO: 8 e CDR3, SEQ ID NO: 9) do anticorpo Act-1 de camundongo e regiões de arcabouço da cadeia leve humana. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-a4p7 é um isotipo de IgGl. Em outras modalidades, o anticorpo anti-a4p7 é um isotipo de IgG2, IgG3 ou IgG4.

[062] Em um aspecto, os anticorpos anti-a4p7 para utilização nos tratamentos são versões humanizadas do anticorpo Act-1 de camundongo. Os métodos adequados para a preparação de anticorpos humanizados são bem conhecidos na técnica. Geralmente, o anticorpo antiα4β7 humanizado conterá uma cadeia pesada que contém as três regiões determinantes da complementaridade da cadeia pesada (CDRs, CDR1, SEQ ID NO: 4, CDR2, SEQ ID NO: 5 e CDR3, SEQ ID NO: 6) do anticorpo Act-1 de camundongo e regiões de arcabouço da cadeia pesada humana adequadas; e também contém uma cadeia leve que contém as 3 CDRs da cadeia leve (CDR1, SEQ ID NO: 7, CDR2, SEQ ID NO: 8 e CDR3, SEQ ID NO: 9) do anticorpo Act-1 de camundongo e regiões de arcabouço da cadeia leve humana adequadas. O anticorpo Act-1 humanizado pode conter quaisquer regiões de arcabouço humanas adequadas, incluindo regiões de arcabouço de consenso, com ou sem substituições de aminoácidos. Por exemplo, um ou mais aminoácidos de arcabouço podem ser substituídos por outro aminoácido, como o aminoácido na posição correspondente no anticorpo Act-1 de camundongo. A região constante humana ou parte dela, se presente, pode ser derivada das cadeias leves K ou A , e/ou das cadeias pesadas de anticorpos humanos y(por exemplo, γΐ, γ2, γ3, γ4), μ, α (por exemplo, al, α2), δ ou ε, incluindo variantes alélicas. Uma região constante particular (por exemplo, IgGl), variante ou porções da mesma pode ser selecionada a fim de adaptar a função efetora. Por exemplo, uma região constante mutada (variante) pode ser incorporada a uma proteína de fusão para minimizar a ligação aos receptores F^?c e/ou a capacidade de fixar o complemento (ver, por exemplo, Winter et al., GB 2.209.757 B; Morrison et al., WO 89/07142; Morgan et al., WO 94/29351, 22 de dezembro de 1994). Versões humanizadas do anticorpo Act-1 foram descritas nas publicações PCT WO98/06248 e WO07/61679, todos os ensinamentos de cada um dos quais são aqui incorporados por esta referência.

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[063] Em um aspecto, o anticorpo anti-a4p7 é o vedolizumabe. O vedolizumabe (também chamado MLN0002, ENTYVIO™ ou KYNTELES™) é um mAb G1 da imunoglobulina humanizada (Ig), direcionado contra a integrina α4β7 de linfócitos humanos. O vedolizumabe liga-se à integrina α4β7, antagoniza sua adesão ao MAdCAM-1 e, como tal, prejudica a migração de leucócitos intestinais para a mucosa gastrointestinal. O vedolizumabe é uma antagonista do receptor de integrina indicado para pacientes adultos com UC ou CD moderada a severamente ativa que tiveram resposta inadequada, perda de resposta ou foram intolerantes a um bloqueador ou imunomodulador do fator de necrose tumoral (TNF) ou que tiveram resposta inadequada com, eram intolerantes ou demonstrou dependência de corticosteroides. Para UC, o vedolizumabe é para induzir e manter a resposta clínica, induzir e manter a remissão clínica, melhorar a aparência endoscópica da mucosa e/ou alcançar remissão livre de corticosteroides. Para CD, o vedolizumabe é para obter resposta clínica, alcançar remissão clínica e/ou alcançar remissão livre de corticosteroide. Em algumas modalidades, a remissão sem corticosteroides é alcançada através de um regime de redução gradual durante o tratamento continuado com vedolizumabe.

[064] Em outro aspecto, o anticorpo αηίί-α4β7 humanizado para uso no tratamento compreende uma região variável da cadeia pesada compreendendo os aminoácidos 20 a 140 da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve compreendendo os aminoácidos 20 a 131 da SEQ ID NO: 2 ou aminoácidos 21 a 132 da SEQ ID NO: 3. Se desejado, pode estar presente uma(s) região(s) constante(s) humana(s). Por exemplo, o anticorpo anti-a4p7 humanizado pode compreender uma cadeia pesada que compreende os aminoácidos 20 a 470 da SEQ ID NO: 1 e uma cadeia leve compreendendo os aminoácidos 21a 239 da SEQ ID NO: 3. Em outro exemplo, o anticorpo anti-«4p7 humanizado pode compreender uma cadeia pesada que compreende os aminoácidos 20 a 470 da SEQ ID NO: 1 e uma cadeia leve compreendendo os aminoácidos 20 a 238 da SEQ ID NO: 2. A cadeia leve humanizada do vedolizumabe (por exemplo, Chemical Abstract Service (CAS, American Chemical Society) número de registro 943609-66-3), com dois resíduos de camundongo trocados por resíduos humanos é mais humana que a cadeia, leve do LDP-02, outro anticorpo anti-cz4p7 humanizado. Além disso, o LDP-02 possui a alanina 114, um tanto hidrofóbica e flexível, e um local hidrofílico (Aspartato 115) que é substituído no vedolizumabe pela treonina

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26/61 contendo hidroxila ligeiramente hidrofílica 114 e resíduo hidrofóbico, potencialmente voltado para dentro, valina 115.

[065] Outras substituições à sequência de anticorpo αηί.ί-α4β7 humanizado podem ser, por exemplo, mutações nas regiões de arcabouço da cadeia pesada e leve, como uma mutação da isoleucina em valina no resíduo 2 da SEQ ID NO: 10: uma mutação de metionina para valina no resíduo 4 da SEQ ID NO: 10; uma mutação de alanina em glicina no resíduo 24 da SEQ ID NO: 11; uma mutação de arginina em lisina no resíduo 38 da SEQ ID NO: 11; uma mutação de alanina em arginina no resíduo 40 da S EQ ID NO: 11; uma mutação de metionina. em isoleucina no resíduo 48 da SEQ ID NO: 11; uma mutação de isoleucina em leucina no resíduo 69 da SEQ ID NO: 11; uma mutação de arginina em valina no resíduo 71 da SEQ ID NO: 11; uma mutação de treonina em isoleucina no resíduo 73 da SEQ ID NO: 11; ou qualquer combinação dos mesmos; e substituição das CDRs da cadeia pesada pelas CDRs (CDR1, SEQ ID NO: 4, CDR2, SEQ ID NO: 5 e CDR3, SEQ ID NO: 6) do anticorpo Act1 de camundongo; e substituição das CDRs da cadeia leve pelas CDRs da cadeia leve (CDR1, SEQ ID NO: 7, CDR2, SEQ ID NO: 8 e CDR3, SEQ ID NO: 9) do anticorpo Act1 de camundongo.

[066] Em um aspecto, o anticorpo anti-a4p7 humanizado para uso no tratamento de um paciente pediátrico é incluído em uma formulação estável que compreende uma mistura de açúcar não redutor, um anticorpo anti-a4p7 e pelo menos um aminoácido livre (isto é, não anexado a urna proteína) e a proporção molar de açúcar não redutor para anticorpo 3ηύ-α4β7 (rnokmol) é superior a 650: 1. A formulação pode ser urna formulação líquida, ou uma formulação seca (por exemplo, liofilizada). A formulação também pode conter um agente tampão. Em algumas modalidades, o açúcar não redutor é manitol, sorbitol, sacarose, trealose ou qualquer combinação dos mesmos.

[067] Em algumas modalidades, o aminoácido livre da formulação é histidina, alanina, arginina, glicina, ácido glutâmico ou qualquer combinação dos mesmos. A formulação pode compreender entre cerca de 50 mM e cerca de .175 mM de aminoácido livre. A formulação pode compreender entre cerca de 100 mM e cerca de 175 mM de aminoácido livre. A razão da razão molar de aminoácido livre para anticorpo pode ser de pelo menos 250:1 ou 200:1 a

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500:1 ou 250:1 a 400:1.

[068] A formulação também pode conter um tensoativo. O tensoativo pode ser polissorbato 20, polissorbato 80, um poloxâmero ou qualquer combinação dos mesmos. O tensoativo pode ter uma concentração de cerca de 0,2 mg/mL a 2,5 mg/mL, cerca de 0,4 mg/mL a 0,9 mg/mL, cerca de 0,5 mg/mL a 0,8 mg/mL, cerca de 1,8 mg/mL a 2,2 mg/mL. Em algumas modalidades, a concentração de tensoativo é de cerca de 0,6 nig/mL. Em algumas modalidades, a concentração de tensoativo é de cerca de 0,75 mg/mL. Em algumas modalidades, a concentração de tensoativo é de cerca de 2,0 mg/mL.

[069] Em alguns aspectos, a formulação pode minimizar a imunogenicidade do anticorpo anti-a4[37.

[070] A formulação, por exemplo, no estado seco, pode ser estável por pelo menos três meses a 40°C, 75% de umidade relativa (RH). No estado seco, a formulação liofilizada tem cerca de 0,5%' a 10%, cerca de 0,8%' a 7,5%, cerca de 1% a 5%, <5%, <4%, <3% ou <2,5% de umidade, por exemplo, conforme determinado pela análise de Karl Fisher. Na reconstituição, por exemplo, após armazenamento a 25°C, 30°C ou 2 a 8°C, uma formulação liofilizada estável compreende cerca de 0% a 10% de anticorpo anti-a4p7 agregado (por exemplo, dímeros, trímeros ou formas multiméricas de anticorpos e/ou produtos de degradação de anticorpos, conforme medido por cromatografia de exclusão por tamanho). Em algumas modalidades, a formulação liofilizada reconstituída armazenada, de anticorpo anti-a4p7 compreende cerca de 0% a 5,0%, 0% a 2%, <2%, <1% ou <0,5% de agregados.

[071] Em outro aspecto, a formulação é liofilizada e compreende pelo menos cerca de 5% a cerca de 10% p/v do anticorpo &ηίϊ-α4β7 antes da liofilização. A formulação pode conter pelo menos cerca de 6% p/v de anticorpo 3ηΗ-α4β7 antes da liofilização. A formulação pode ser reconstituída de uma formulação liofilizada. (por exemplo, reconstituída, para compreender uma. formulação líquida estável). A formulação seca de um anticorpo antiα4β7 compreende cerca de 25% a 35% p/p ou cerca de 29% a 32% p/p do anticorpo antiα4β7. A formulação seca de um anticorpo anti-a4p7 pode ainda compreender cerca de 30% a 65% p/p, cerca de 40% a 60%, cerca de 45% a 55% ou 50% a 52% p/p de anti-a4p7 não açúcar redutor, como sacarose ou trealose. A formulação seca de um anticorpo 3ηΗ-α4β7

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28/61 pode ainda compreender cerca de 5% a 20% p/p ou cerca de 10% a 15% p/p de sal de aminoácido, como cloridrato de arginina. A formulação seca pode ainda compreender cerca de 1% a 10% p/p, cerca de 2% a 7% p/p ou cerca de 4% a 6% p/p de tampão, por exemplo, histidina. Em algumas modalidades, a formulação seca compreende cerca de 30% a 31% p/p de anticorpo anti-a4[37, por exemplo, vedolizumabe, cerca de 50% a 52% p/p de sacarose, e cerca de 12%; a 14% p/p de cloridrato de arginina. As formulações secas anteriores podem ainda compreender cerca de 0,25% a 0,4% em peso, ou cerca de 0,9%' a 1,2% em peso de polissorbato 80.

[072] Em outro aspecto, a invenção se refere ao tratamento de um paciente pediátrico com uma formulação estável compreendendo uma mistura de açúcar não redutor, um anticorpo anti-a4p7 e pelo menos um aminoácido livre e a razão molar de açúcar não redutor para o anticorpo anti-a4p7 (mokmol) é maior que 650:1 e a razão de aminoácido livre para anticorpo anti-a4p7 (mokmol) é maior que 250:1.

[073] Em outro aspecto, a invenção se refere ao tratamento de um paciente pediátrico com uma formulação estável compreendendo uma. mistura de açúcar não redutor, um anticorpo anti-a4p7 e pelo menos uni aminoácido livre e a razão molar de açúcar não redutor para o anticorpo Ηηίΐ-α4β7 (mokmol) é maior que 650: 1 e a razão de aminoácido livre para anticorpo anti-a4p7 (mokmol) é maior que 250:1.

[074] Em outro aspecto, a invenção se refere ao tratamento de um paciente pediátrico com uma formulação líquida estável, por exemplo, antes da liofilização ou após a reconstituição com um solvente, compreendendo em solução aquosa com açúcar não redutor, um anticorpo anti-Oí4p7 e pelo menos uni agente livre aminoácido, em que a razão molar de açúcar não redutor para anticorpo anti-a4p7 (mokmol) é maior que 650:1. Em ainda um aspecto adicional, a invenção se refere a uma formulação líquida compreendendo pelo menos cerca de 40 mg/mL a cerca de 80 mg/mL de anticorpo 3ηίϊ-α4β7, pelo menos cerca de 50-175 mM de um ou mais aminoácidos e pelo menos cerca de 6% a pelo menos cerca de 11 % (p/v) de açúcar. A formulação líquida também pode conter um agente tampão. Um agente tampão pode ser histidina, succinato, fosfato, glicina ou citrato. Em algumas modalidades, a formulação líquida também compreende uni quelante de metal. Em algumas modalidades, a

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29/61 formulação líquida também compreende um antioxidante, como citrato. Em algumas modalidades, a concentração de citrato é de cerca de 5 mM a 40 mM, cerca de 7 mM a 10 mM ou cerca de 20 a 30 mM. Em algumas modalidades, a concentração de citrato é de cerca de 25 mM. Em algumas modalidades, a concentração de citrato é de cerca de 9,4 mM.

[075] Em outro aspecto, a invenção se refere ao tratamento de um paciente pediátrico com uma formulação líquida compreendendo pelo menos cerca de 60 mg/niL de anticorpo antiα4β7, pelo menos cerca de 10% (p/v) de açúcar não redutor e pelo menos cerca de 125 mM de um ou mais aminoácidos livres. Em algumas modalidades, a formulação líquida é de cerca de 60 mg/mL de anticorpo anti-cx4p7.

[076] Em outro aspecto, a invenção se refere ao tratamento de um paciente pediátrico corn uma formulação líquida compreendendo pelo menos cerca de 60 mg/niL de anticorpo antiα4β7, pelo menos cerca de 10% (p/v) de açúcar não redutor e pelo menos cerca de 175 mM de um ou mais aminoácidos livres.

[077] Ainda em outro aspecto, a invenção também se refere ao tratamento de um paciente pediátrico com uma formulação seca, por exemplo, liofilizada, compreendendo uma mistura de açúcar não redutor, um anticorpo αηύ-α4β7, histidina, arginina e polissorbato 80 e a razão molar de açúcar não redutor para anticorpo ηηίϊ-α4β7 (mol: mol) é maior que 650:1.

[078] Ainda em outro aspecto, a invenção se refere ao tratamento de um paciente pediátrico com uma formulação liofilizada compreendendo uma mistura de açúcar não redutor, um anticorpo ηηίί-α4β7, histidina, arginina e polissorbato 80. Nesse aspecto, a razão molar de açúcar não redutor para anticorpo anti-a4p7 (mohmol) é maior que 650:1. Além disso, a razão molar de arginina para anticorpo ηηίί-α4β7 (mohmol) na formulação é maior que 250:1 ou a razão molar de histidina e arginina para, anticorpo (mohmol) é de cerca de 200:1 a cerca de 500:1.

[079] Em outro aspecto, a invenção se refere ao tratamento de um paciente pediátrico com uma formulação farmacêutica líquida estável compreendendo unia mistura de anticorpo antiα4β7, citrato, histidina, arginina e polissorbato 80. A formulação pode estar presente em um

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30/61 recipiente, como urn frasco, cartucho, seringa ou autoinjetor. Em algumas modalidades, a formulação líquida compreende pelo menos cerca de 120 mg/mL de anticorpo anti~(x4p7, pelo menos cerca de 140 mg/mL de anticorpo anti-oc4p7, 140 mg/mL a 250 mg/mL de anticorpo anti-íx4p7, 140 mg/mL a 175 mg/mL de anticorpo anti-ot4p7 ou 150 mg/mL a 170 mg/mL de anticorpo anti-a4p7. Em outras modalidades, a formulação líquida é de cerca de 160 mg/mL de anticorpo anti-a4p7.

[080] Em um aspecto, o anticorpo 3ηύ-α4β7 humanizado para uso no tratamento de um paciente pediátrico é liofilizado e armazenado como uma dose única em um recipiente, por exemplo, uni frasco. O recipiente, por exemplo, o frasco é armazenado refrigerado, por exemplo, a cerca de 2 a 8 C ou a temperatura, ambiente, por exemplo, em cerca de 20 C a 35°C, cerca de 25°C ou cerca de 30°C, até administrado a um indivíduo em necessidade do mesmo. Um frasco pode, por exemplo, ser um frasco de 10, 20 ou 50 cc (por exemplo, para uma dose de 60 mg/ml). O recipiente, por exemplo, o frasco para injetáveis pode conter cerca de 90 a 115 mg, cerca de 95 a 105 mg, pelo menos cerca de 100 mg, cerca de 135 a 160 mg, cerca de 145 a 155 mg, em pelo menos cerca de 150 mg, cerca, de 180 a 220 mg, cerca de 190 a 210 mg, cerca de 195 a 205 mg, pelo menos cerca de 200 mg, cerca de 280 mg a 320 mg, cerca de 290 mg a 310 mg, pelo menos cerca de 300 mg, cerca de 380 a 420 mg, cerca de 390 a 410 mg, pelo menos cerca de 400 mg, cerca de 580 a 620 mg, cerca de 590 a 610 mg ou pelo menos cerca de 600 mg de anticorpo anti-C(4p7. Em um aspecto, o frasco para injetáveis contém cerca de 200 mg de anticorpo aníi-fx4[37. O frasco para injetáveis pode conter o suficiente do anticorpo 3ηίϊ-α4β7, por exemplo, vedolizumabe, para permitir a administração de, por exemplo, ser fabricado para entregar, cerca de 100 mg, cerca de 150 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg, cerca de 400 mg ou cerca de 600 mg de anticorpo 3πύ-α4β7. Por exemplo, o frasco pode conter cerca de 15%, cerca de 12%, cerca de 10% ou cerca de 8% mais anticorpo anti-a4p7 que a quantidade da dose.

[081] Em outro aspecto, o anticorpo anti-a4p7, por exemplo, vedolizumabe, para uso no tratamento de um paciente pediátrico está em uma composição farmacêutica líquida estável armazenada em um recipiente, por exemplo, um frasco, uma seringa ou cartucho, em cerca de 2 a 8°C até que seja administrado a um indivíduo em necessidade. A seringa ou cartucho

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31/61 pode ser um recipiente de 1 mL ou 2 mL (por exemplo, para uma dose de 160 mg/mL) ou mais de 2 mL, por exemplo, para uma dose mais alta (pelo menos 320 mg ou 400 mg ou mais). A seringa ou cartucho pode conter pelo menos cerca de 20 mg, pelo menos cerca de 50 mg, pelo menos cerca de 70 mg, pelo menos cerca, de 80 mg, pelo menos cerca de 100 mg, pelo menos cerca de 108 mg, pelo menos cerca de 120 mg, pelo menos cerca de 155 mg, pelo menos cerca, de 180 mg, pelo menos cerca, de 200 mg, pelo menos cerca, de 240 mg, pelo menos cerca de 300 mg, pelo menos cerca de 360 mg, pelo menos cerca de 400 mg ou pelo menos cerca de 500 mg de anticorpo αη1ϊ-α4β7. Em algumas modalidades, o recipiente, por exemplo, seringa ou cartucho pode ser fabricado para, fornecer cerca, de 20 a 120 mg, cerca de 40 mg a 70 mg, cerca de 45 a 65 mg, cerca de 50 a 57 mg ou cerca de 54 mg de anticorpo 8,ηΐί-α4β7, por exemplo, vedolizumabe. Em outras modalidades, a seringa ou cartucho pode ser fabricada para fornecer cerca de 90 a 120 mg, cerca de 95 a 115 mg, cerca, de 100 a 112 mg ou cerca de 108 mg de anticorpo anti-a4p7, por exemplo, vedolizumabe. Em outras modalidades, a seringa ou cartucho pode ser fabricada para fornecer cerca de 140 a 250 mg, cerca de 150 a 200 mg, cerca de 160 a 170 mg, cerca de 160 a 250 mg, cerca de 175 mg a 210 mg ou cerca de 160 mg, cerca de 165 mg, cerca de 180 mg ou cerca, de 200 mg de anticorpo πηίϊ-α4β7, por exemplo, vedolizumabe.

[082] A presente invenção fornece, em um primeiro aspecto, um método para o tratamento de um paciente pediátrico com doença inflamatória intestinal (IBD) com um anticorpo anti(Χ4β7, por exemplo, vedolizumabe. Nesse aspecto, o método compreende administrar uma. dose intravenosa de vedolizumabe. A dose pode ser de 100 mg, 150 mg, 200 mg ou 300 mg de anticorpo anti-a4P7. Em algumas modalidades, a dose será selecionada com base no peso do paciente. Em um aspecto, o paciente pediátrico pesa 30 kg ou mais. Em outro aspecto, o paciente pediátrico pesa menos de 30 kg. Em algumas modalidades, o paciente pediátrico que pesa 30 kg ou mais pesa cerca de 30 a 35 kg, cerca de 30 a 40 kg, cerca de 35 a 45 kg, cerca de 40 a 45 kg, cerca de 30 a 50 kg ou cerca de 40 a 50 kg. Em outras modalidades, o paciente pediátrico que pesa menos de 30 kg pesa, cerca de 5 kg a 30 kg, cerca de 10 kg a 15 kg, cerca de 15 kg a 20 kg, cerca de 10 kg a 20 kg, cerca de 12 kg a 22 kg, cerca de 10 a 25 kg, cerca de 15 a 30 kg ou cerca de 10 kg a 30 kg.

[083] Em algumas modalidades, um paciente pediátrico pesando menos de 30 kg pode

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32/61 receber uma dose de 100 mg ou 200 mg de anticorpo anti-a4p7. Em algumas modalidades, um paciente pediátrico pesando 30 kg ou mais pode receber uma dose de 150 mg ou 300 mg de anticorpo Ηηύ··α4β7.

[084] Um anticorpo anti-a4p7 é administrado em uma quantidade eficaz que inibe a ligação da integrina α4β7 um ligante do mesmo. Para a terapia, uma quantidade eficaz será suficiente para alcançar o efeito desejado de resposta ou remissão (por exemplo, conforme aqui definido). Um antagonista de α4β7, como um anticorpo anti-cx4p7 pode ser administrado em uma dose unitária ou em doses múltiplas. Exemplos de modos de administração incluem vias tópicas, como administração nasal ou inalatória ou transdérmica, vias entéricas, como através de um tubo de alimentação ou supositório e vias parenterais, como administração intravenosa, intramuscular, subcutânea, intra-arterial, intraperitoneal ou intravítrea. As dosagens adequadas para anticorpos podem variar de cerca de 0,1 mg/kg de peso corporal a cerca de 10,0 mg/kg de peso corporal, cerca de 1 mg/kg a cerca de 60 mg/kg de peso corporal, cerca de 5 mg/kg a cerca de 30 mg/kg de peso corporal, cerca de 6,5 mg/kg a cerca de 20 mg/kg de peso corporal, ou pelo menos 15 mg/kg ou pelo menos 20 mg/kg de peso corporal por tratamento.

[085] É surpreendente que a administração de uma dose fixa de 100 mg, 150 mg ou 200 mg, por exemplo, de uma forma de dosagem, por exemplo, um frasco, fabricada para administrar cerca de 95 a 110 mg, 100 mg, 108 mg, 145 mg a 155 mg, 150 mg, 155 mg a 170 mg, 190 a 210 mg ou 200 mg de um anticorpo 3η1ΐ-α4β7, por exemplo, vedolizumabe, para, um paciente pediátrico pequeno, por exemplo, 5 kg a 35 kg, 10 kg a 30 kg, ou menos de 30 kg, seja segura. Nessas modalidades, os pacientes menores podem ser administrados com pelo menos 20 mg/kg de anticorpo 3ηΐί-α4β7 um nível de dose sem precedentes no uso terapêutico de anticorpo anti-a4p7, por exemplo, vedolizumabe, em que os adultos menores são administrados em tomo de 5 a 7 mg/kg de anticorpo ηη6-α4β7 de uma forma, de dosagem de 300 mg. No entanto, o estudo com macacos jovens mostrou a segurança do anticorpo antiίχ4β7, por exemplo, vedolizumabe, em doses de até 100 mg/kg.

[086] Em algumas modalidades, o anticorpo 3ηίϊ-α4β7, como o vedolizumabe, é fornecido como uma formulação seca e liofilizada que pode ser reconstituída com um líquido, como

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33/61 água estéril, para administração. A administração de urna formulação reconstituída pode ser por injeção parenteral por unia das vias descritas anteriormente. Uma injeção intravenosa pode ser por infusão, como por diluição adicional com solução salina isotônica estéril, tampão, por exemplo, solução salina tamponada com fosfato ou solução de Ringer (lactato ou dextrose). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-a4p7 é administrado por injeção subcutânea, por exemplo, uma dose de cerca de 54 mg, 108 mg ou cerca de 165 mg ou cerca de 216 mg, a cada duas, três ou quatro semanas após o início da terapia ou após a terceira dose subsequente.

[087] Em algumas modalidades, o vedolizumabe é administrado por uma ou mais de injeção intravenosa, injeção subcutânea ou infusão. Em algumas modalidades, o vedolizumabe é administrado na dose de 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 75 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 120 mg, 125 mg, 150 mg, 200 mg, 300 mg, 450 mg, 600 mg, 45 a 125 mg, 80 a 120 mg, 125 a 250 mg ou 90 a 210 mg. Em algumas modalidades, o vedolizumabe é administrado, por exemplo, por via subcutânea, na dose de 0,5 mg/kg, 1,0 mg/kg, 1,5 mg/kg, 2,0 mg/kg, 2,5 mg/kg, 3,0 mg/kg, 4,0 mg/kg, ou 5,0 mg/kg, na dose de 54 mg, 108 mg, 216 mg, 160 mg, 165 mg, 320 mg ou 480 mg. O vedolizumabe pode ser administrado uma vez por dia, por semana, por mês ou por ano. Um regime de dosagem de vedolizumabe pode ter uma fase inicial ou de indução e unia fase de manutenção. Uma fase de indução pode ser uma ou mais de urna, por exemplo, duas, três ou quatro doses, de grandes quantidades ou sem longos períodos, como apenas uma semana, duas semanas, três semanas ou quatro semanas entre cada dose. Por exemplo, um regime de indução pode ter duas doses, uma no dia (semana) zero e uma na semana 2 (dia 14). Uma fase de manutenção, por exemplo, para manter a remissão da IBD, pode ter doses mais baixas ou mais afastadas que na fase de indução. Em algumas modalidades, a dosagem de manutenção é a cada 4 semanas, a cada 6 semanas, a cada 8 semanas, a cada 10 semanas ou a cada 12 semanas. Em algumas modalidades, o vedolizumabe é administrado em zero, duas e seis semanas (indução) e depois a cada quatro semanas ou a cada oito semanas posteriormente (manutenção). Pacientes pediátricos com IBD refratários a outras terapias podem precisai* de períodos de indução mais longos, por exemplo, 8, 10, 12 ou 14 semanas antes de iniciar a terapia de manutenção.

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[088] Em uma modalidade, o vedolizumabe é administrado por via intravenosa nas zero, duas e seis semanas e, em seguida, os indivíduos que não obtiverem resposta clínica (com base no PUCAPPCDAI) na semana 14 receberão uma dose dupla na semana 14 (por exemplo, um paciente recebendo doses de 100 mg nas semanas 0, 2 e 6, que não alcançarem resposta clínica na semana 14, receberão uma dose de 200 mg na semana 14: um paciente que receberá doses de 150 mg nas semanas 0, 2 e 6, que não atingir uma resposta clínica na semana 14, será administrado com uma dose de 300 mg na semana 14).

[089] Em uma modalidade, o vedolizumabe é administrado por via intravenosa em zero, duas, seis semanas e 14 semanas. Em algumas modalidades, o vedolizumabe é administrado por via intravenosa em zero, duas, seis e 14 semanas, depois a cada quatro ou oito semanas depois. Em algumas modalidades, o vedolizumabe é administrado por via intravenosa em zero, duas, seis, dez e 14 semanas, depois a cada quatro ou oito semanas a seguir. Em algumas modalidades, vedolizumabe é administrado uma ou mais vezes e, em seguida, pelo menos um mês, pelo menos seis meses ou pelo menos um ano depois, o vedolizumabe é novamente administrado unia ou mais vezes.

[090] Em algumas modalidades, 100 ou 150 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa em zero, duas semanas, seis semanas, catorze semanas e, em seguida, em oito semanas subsequentes, 200 ou 300 mg, respectivamente (ou seja, duas vezes a dose anterior) do vedolizumabe pode ser administrado por via intravenosa. Em algumas modalidades, 100 ou 150 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa em zero, duas semanas e seis semanas e, em seguida, em intervalos de quatro semanas ou oito semanas depois, 200 ou 300 mg, respectivamente (ou seja, duas vezes o dose anterior) de vedolizumabe podem ser administrados por via intravenosa. Em algumas modalidades, 100 ou 150 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa em zero e duas semanas e, em seis semanas, 200 ou 300 mg, respectivamente (ou seja, duas vezes a dose anterior) vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa e depois, a intervalos de quatro semanas ou oito semanas a seguir, 200 ou 300 mg de vedolizumabe podem ser administrados por via intravenosa. Em algumas modalidades, se o paciente pediátrico for tratado com vedolizumabe nas semanas zero, 2, 6 e 14 em uma dose com base em um peso inferior a 30 kg e durante o tratamento, crescer para

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35/61 kg ou mais, o paciente pediátrico pode ser tratado com uma dose baseada no peso mais alto.

[091] Em algumas modalidades, um paciente pediátrico sendo tratado com a dose baixa em relação ao tamanho (150 mg para indivíduos com 30 kg ou mais; 100 mg para indivíduos com menos de 30 kg) do anticorpo anti-(x4p7 pode ser escalado para receber a dose mais alta para o tamanho (300 mg para indivíduos com 30 kg ou mais; 200 mg para indivíduos com menos de 30 kg) se o paciente demonstrar agravamento da doença.

[092] Em algumas modalidades, 200 ou 300 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa em zero e duas semanas, 200 ou 300 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa em seis semanas e depois em intervalos de duas, três ou quatro semanas, o vedolizumabe pode ser administrado por via subcutânea, por exemplo, nas doses de 54, 108, 165 ou 216 mg. Em algumas modalidades, 100 ou 150 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa em zero e duas semanas, 200 ou 300 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa em seis semanas e em 14 semanas e então em intervalos de duas, três ou quatro semanas, o vedolizumabe pode ser administrado por via subcutânea, por exemplo, nas doses de 54, 108, 165 ou 216 mg. Em algumas modalidades, 100 ou 150 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa em zero e duas semanas, 200 ou 300 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa em seis semanas e então em intervalos de duas, três ou quatro semanas, o vedolizumabe pode ser administrado por via subcutânea, por exemplo, nas doses de 54, 108, 165 ou 216 mg.

[093] Em algumas modalidades, 100 ou 200 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa a um paciente com peso inferior a 30 kg ou 10 kg a menos de 30 kg no zero e duas semanas, 100 ou 200 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa em seis semanas e, em seguida, em intervalos de uma, duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez semanas daí em diante, o vedolizumabe pode ser administrado por via subcutânea, por exemplo, em uma dose de 54, 108, 165 ou 216 mg. Em algumas modalidades, a dose subcutânea é de 54 mg. Em outras modalidades, a dose subcutânea é de 108 mg.

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[094] Em algumas modalidades, 100 ou 200 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa a um paciente com peso inferior a 30 kg ou 10 kg a menos de 30 kg nas semanas zero e dois, 54, 108, 165 ou 216 mg de vedolizumabe podem ser administrados subcutaneamente em seis semanas e, em seguida, em intervalos de uma, duas, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez semanas daí em diante, o vedolizumabe pode ser administrado por via subcutânea, por exemplo, em uma dose de 54, 108, 165 ou 216 mg. Em algumas modalidades, a dose subcutânea é de 54 mg. Em outras modalidades, a dose subcutânea é de 108 mg.

[095] Em algumas modalidades, 300 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa a um paciente pediátrico pesando 30 kg ou mais nas zero, duas e seis semanas e, em seguida, em intervalos de uma, duas, três ou quatro semanas a seguir, o vedolizumabe pode ser administrado por via subcutânea, por exemplo, na dose de 108 mg ou 216 mg.

[096] Em algumas modalidades, 300 mg de vedolizumabe podem ser administrados por infusão intravenosa a um paciente pediátrico pesando 30 kg ou mais em zero e duas semanas e depois em seis semanas e em intervalos de uma, duas, três ou quatro semanas depois disso, o vedolizumabe pode ser administrado por via subcutânea, por exemplo, na dose de 108 mg ou 216 mg.

[097] O intervalo entre doses subcutâneas pode ser menor para pacientes pediátricos maiores, por exemplo, pesando 30 kg ou mais, para que eles recebam uma dose subcutânea em intervalos de 1 a 6 semanas e mais longo para pacientes pediátricos menores, por exemplo, pesando menos de 30 kg ou 10 kg menos de 30 kg, para que recebam uma dose subcutânea. em intervalos de 3 a 10 semanas.

[098] Em algumas modalidades, o método de tratamento, dose ou regime de dosagem reduz a probabilidade de um paciente desenvolver uma resposta HAHA ao anticorpo anti-C(4p7. O desenvolvimento de HAHA, por exemplo, conforme medido por anticorpos reativos ao anticorpo ηη6-α4β7, pode aumentar a depuração do anticorpo 3,ηΰ-α4β7, por exemplo,

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37/61 reduzir a concentração sérica do anticorpo anti-a4p7, por exemplo, diminuindo o número de anticorpos antiot4P71igados à integrina α4β7, tornando o tratamento menos eficaz. Em algumas modalidades, para evitar HAHA, o paciente pode ser tratado com um regime de indução seguido por um regime de manutenção. Em algumas modalidades, não há interrupção entre o regime de indução e o regime de manutenção. Em algumas modalidades, o regime de indução compreende administrar uma pluralidade de doses de anticorpo antiα4β7 ao paciente. Para evitar HAHA, o paciente pode ser tratado com uma dose inicial alta, por exemplo, pelo menos 1,5 mg/kg, pelo menos 2 mg/kg, pelo menos 2,5 mg/kg, pelo menos 3 mg/kg, pelo menos 5 mg/kg, pelo menos 8 mg/kg, pelo menos 10 mg/kg, cerca de 5 a 25 mg/kg, cerca de 6 a 20 mg/kg, ou cerca de 2 a cerca de 6 mg/kg, ou administrações iniciais frequentes, por exemplo, cerca de uma vez por semana, aproximadamente uma vez a cada duas semanas ou aproximadamente uma vez a cada três semanas, da dose padrão ao iniciar o tratamento com um anticorpo ηηΐί-α4β7. Em algumas modalidades, o método de tratamento mantém pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%', pelo menos 90%' ou pelo menos 95%' dos pacientes como HAHA-negativo. Em outras modalidades, o método de tratamento mantém os pacientes como HAHA-negativos por pelo menos 6 semanas, pelo menos 10 semanas pelo menos 15 semanas, pelo menos seis meses, pelo menos 1 ano, pelo menos 2 anos ou pela duração da terapia. Em algumas modalidades, os pacientes, ou pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50% ou pelo menos 60% dos pacientes que desenvolvem HAHA mantêm um título baixo, por exemplo, .-<125, de anticorpo 3ΐπΐ-α4β7. Em uma modalidade, o método de tratamento mantém pelo menos 70% dos pacientes como HAHA-negativos por pelo menos 12 semanas após o início da terapia com um anticorpo Ηη1ΐ-α4β7.

[099] A dose do anticorpo ηη1.ί-α4β7 pode ser administrada a um indivíduo (por exemplo, um humano) sozinho ou em conjunto com outro agente. Uma dose pode ser administrada antes, juntamente ou após a administração do agente adicional. Em uma modalidade, mais de uma formulação que inibe a ligação da integrina α4β7 aos seus ligantes é administrada. Em tal modalidade, um agente, por exemplo, um anticorpo monoclonal, como um antiMAdCAM (por exemplo, anti-MAdCAM-1) ou um anticorpo monoclonal anti-VCAM-1, pode ser administrado. Em outra modalidade, o agente adicional inibe a ligação de leucócitos a um ligante endotelial em uma via diferente da via. α4β7. Esse agente pode inibir a ligação,

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38/61 por exemplo, de linfócitos que expressam o receptor 9 da quimiocina (motivo CC) (CCR9) a quimiocina expressa no timo (TECK ou CCL25) ou um agente que impede a ligação do LFA-1 à molécula de adesão intercelular (ICAM). Por exemplo, um anticorpo anti-TECK ou anti-CCR9 ou um inibidor de molécula pequena CCR9, como inibidores divulgados na publicação PCT WO03/099773 ou W004/046092, ou anticorpo anti-ICAM-1 ou um oligonucleotídeo que impede a expressão de ICAM, é administrado além de uma formulação da presente invenção. Ainda em outra modalidade, um ingrediente ativo adicional (por exemplo, um composto anti-inflamatório, como sulfassalazina, azatioprina, rnetotrexato, 6mercaptopurina, ácido 5-aminosalicílico contendo anti-inflamatórios, outro composto antiinflamatório não esteroidal, um composto anti-inflamatório esteroidal ou antibióticos comumente administrados para o controle da IB D (por exemplo, ciprofloxacina, metronidazol), probióticos ou outro agente biológico (por exemplo, antagonistas do TNF alfa) podem ser administrados em conjunto com uma formulação da presente invenção.

[100] Em uma modalidade, a dose do fármaco coadministrado pode ser diminuída ao longo do tempo durante o período de tratamento com o anticorpo anti-a4p7. Por exemplo, um paciente que está sendo tratado com um esteroide (por exemplo, prednisona, prednisolona, budesonida) no início ou antes do tratamento com o anticorpo αηίϊ-α4β7 passaria, por um regime de doses decrescentes de esteroide, começando tão cedo quanto 2 semanas ou 6 semanas de tratamento com a formulação de anticorpo anti-a4p7. A dose de esteroide será reduzida em cerca de 25% dentro de 4 a 8 semanas após o início da redução gradual, em 50% em cerca, de 8 a 12 semanas e 75% em cerca de 12 a 16 semanas de redução durante o tratamento com a formulação de anticorpo anti-a4p7. Em um aspecto, por cerca de 16 a 24 semanas de tratamento com o anticorpo anti-a4p7, a dose de esteroide pode ser eliminada. Em outro exemplo, um paciente sendo tratado com um composto anti-inflamatório, como 6mercaptopurina no início ou antes do tratamento corn a formulação de anticorpo anti-a4p7, passaria por um regime de doses decrescentes de composto anti-inflamatório semelhante ao regime de redução gradual para dosagem de esteroides, conforme observado anteriormente. Em outras modalidades, uma dose de corticosteroide >20 mg/dia pode ser reduzida de 5 mg/semana até 20 mg/dia para pacientes pediátricos com 40 kg ou mais ou até 0,5 mg/dia para pacientes pediátricos com menos de 40 kg. Em outras modalidades, a dose de corticosteroide <20 mg/dia. pode ser reduzida de 5 mg/semana até 10 mg/dia para pacientes

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39/61 pediátricos com 40 kg ou mais ou até 0,25 mg/dia para pacientes pediátricos com menos de 40 kg. Em algumas modalidades, entre 6 e 14 semanas de tratamento com o anticorpo antiα4β7, o corticosteroide pode ser ainda mais reduzido em 5 mg/semana até 10 mg/dia, em seguida, em 2,5 mg/semana até zero corticosteroide.

[101] A dose de anticorpo Ηηίΐ-α4β7, por exemplo, por infusão intravenosa, pode ser administrada ao paciente pediátrico em cerca de 20 minutos, cerca de 25 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 35 minutos, cerca, de 40 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 90 minutos ou cerca de 120 minutos. Em algumas modalidades, para um paciente pediátrico pesando 20 kg ou mais, o tempo de infusão é de cerca de 30 a 60 minutos. A administração pode ser mais lenta para um paciente pediátrico com baixo peso (por exemplo, menos de 20 kg). Em algumas modalidades, para um paciente pediátrico com peso inferior a 20 kg, o tempo de infusão é de cerca de 2 horas.

[102] O regime de dosagem pode ser otimizado para, induzir uma resposta clínica e remissão clínica na doença inflamatória intestinal do paciente. Em algumas modalidades, o paciente pediátrico que sofre de UC alcança uma. resposta, clínica baseada, na. pontuação de Mayo completa na semana 6, semana 8, semana 10, semana 12, semana 14 ou semana 22 após o início do tratamento com o anticorpo anti-a4p7. Em algumas modalidades, o paciente pediátrico que sofre de CD alcança uma. resposta clínica, com base na pontuação CDAI na. semana 6, semana 8, semana 10, semana 12, semana 14 ou semana 22 após o início do tratamento com o anticorpo ηηύ-α4β7. Em algumas modalidades, o paciente pediátrico da. UC alcança uma resposta clínica de uma diminuição de 20 pontos ou mais em relação à linha, de base na pontuação PUCAI e/ou uma remissão clínica de unia pontuação PUCAI inferior a 10 na semana 6, semana 8, semana 10, semana 12, semana 14 ou semana 22, após o início do tratamento com o anticorpo anti-a4p7. Em algumas modalidades, o paciente pediátrico com CD alcança uma resposta clínica de uma diminuição de 15 pontos ou mais em relação à linha de base na pontuação PCDAI com uma PCDAI total de 30 ou menos e/ou uma remissão clínica de uma pontuação PCDAI de 10 ou menos na semana 6, semana 8, semana 10, semana 12, semana 14 ou semana 22, após o início do tratamento com o anticorpo anti<χ4β7. Em algumas modalidades, uma. medida de remissão para pacientes pediátricos com CD baseia-se nos componentes CDAI de dor abdominal, por exemplo, pontuação de 1 ou

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40/61 menos nos 7 dias anteriores, frequência de fezes, por exemplo, dez ou menos fezes nos 7 dias anteriores e pontuação do SES-CD para endoscopia, por exemplo, menor que 4, pelo menos uma redução de 2 pontos em relação à linha de base e nenhuma pontuação maior que 1 em qualquer variável individual.

[103] Em algumas modalidades, o uso de um anticorpo anti-a4p7 para o tratamento do paciente pediátrico que sofre de IBD melhora o crescimento do paciente. Por exemplo, um paciente pode ter um aumento em relação à linha de base em altura, peso e/ou índice de massa corporal. Em outro exemplo, conforme determinado pelo sistema de estagiamento de Tanner, uma medida de uma resposta clínica do paciente pediátrico ao tratamento com um anticorpo 3ηίί-α4β7 pode ser a conquista do estágio V de Tanner (Marshall e Tanner, Arch. Dis. Child. 44: 291-303 (1969) Marshall and Tanner, Arch. Dis. Child. 45:13-23 (1970)) aos 16 anos de idade (paciente do sexo feminino) ou aos 17 anos de idade (paciente do sexo masculino). Em algumas modalidades, o uso de uni anticorpo anti-a4p7 para o tratamento do paciente pediátrico que sofre de IBD resulta em cicatrização da mucosa. Em algumas modalidades, o uso de um anticorpo ηηίί-ίχ4β7 para, tratamento do paciente pediátrico que sofre de IBD reduz ou elimina a necessidade de hospitalização e/ou ressecção cirúrgica do tecido mucoso afetado, como cólon ou reto. Em algumas modalidades, o uso de corticosteroide de um anticorpo anti-a4P7 para tratamento do paciente pediátrico que sofre de IBD é reduzido até a descontinuação na semana 48 do tratamento aqui descrito. Em algumas modalidades, o uso de um anticorpo 3ηίϊ-α4β7 para o tratamento do paciente pediátrico que sofre de CD fornece cura da fistula. Em algumas modalidades, o regime de dosagem não altera, a razão de CD4 para CD8 no líquido cefalorraquidiano dos pacientes que recebem tratamento.

[104] Em alguns aspectos, uma remissão clínica durável, por exemplo, uma remissão clínica que é sustentada por pelo menos duas, pelo menos três, pelo menos quatro consultas com um médico responsável dentro de um período de seis meses ou um ano após o início do tratamento, pode ser alcançada com um regime de dosagem otimizado.

[105] Em alguns aspectos, uma resposta clínica durável, por exemplo, uma resposta clínica que é mantida por pelo menos 6 meses, pelo menos 9 meses, pelo menos um ano, após o

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41/61 início do tratamento, pode ser alcançada com um regime de dosagem otimizado.

[106] O método pode ainda compreender a medição do peso corporal do paciente. O peso corporal pode ser determinado antes do tratamento com o anticorpo αηίί-(χ4β7, por exemplo, vedolizumabe, ou seja, na linha de base, ou pode ser medido em outros momentos durante o tratamento, por exemplo, ao monitorar a resposta do paciente. Em um aspecto, a presente invenção fornece um método para o tratamento de IBD, por exemplo, colite ulcerosa ou doença de Crohn, em um paciente pediátrico de alto peso com uma dose mais alta (por exemplo, 150 mg, 300 mg) de um anticorpo 3ηίϊ-α4β7, por exemplo, vedolizumabe. Em um aspecto, a presente invenção fornece um método para o tratamento de IBD, por exemplo, colite ulcerosa ou doença de Crohn, em um paciente pediátrico de baixo peso com uma dose mais baixa (por exemplo, 100 mg, 200 mg) de um anticorpo 3ηίϊ-α4β7, por exemplo, vedolizumabe.

[107] O paciente pediátrico pode ter tido uma falta de resposta adequada, perda de resposta ou foi intolerante ao tratamento com ácido 5-aminosalicílico, ou um derivado do mesmo, um imunomodulador, um antagonista do TNF-α, um corticosteroide ou combinações dos mesmos. O paciente pediátrico pode não ter recebido tratamento com um antagonista do TNF-αantes do tratamento, como descrito aqui, por exemplo, com um anticorpo αηίί-(χ4β7. O paciente pediátrico pode ter recebido tratamento anteriormente e ter tido uma resposta inadequada ou perda de resposta a pelo menos um corticosteroide (por exemplo, prednisona ou budesonida) para a doença inflamatória intestinal. Uma resposta, inadequada, aos corticosteroides se refere a sinais e sintomas de doença persistentemente ativa, apesar de uma história de pelo menos um regime de indução de quatro semanas que incluiu uma dose equivalente a prednisona 30 mg por dia por via oral por 2 semanas ou por via intravenosa por 1 semana. Uma perda de resposta aos corticosteroides se refere a duas tentativas fracassadas de diminuir gradualmente os corticosteroides abaixo de uma. dose equivalente a prednisona 10 mg por dia, por via oral. A intolerância aos corticosteroides inclui um histórico da síndrome de Cushing, osteopenia/osteoporose, hiperglicemia, insônia e/ou infecção.

[108] O paciente pediátrico pode ter tido uma falta de resposta adequada, perda de resposta, ou foi intolerante ao tratamento com um imunomodulador. Um imunomodulador pode ser,

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42/61 por exemplo, azatioprina, 6-mercaptopurina ou metotrexato oral. Uma resposta inadequada, a uni imunomodulador se refere a sinais e sintomas de doença persistentemente ativa, apesar de um histórico de pelo menos um regime de 8 semanas ou azatioprina oral (>1,5 mg/kg), 6mercaptopurina (>0,75 mg/kg) ou metotrexato (>12,5 mg/semana). A intolerância de um imunomodulador inclui, mas não se limita a, náusea/vômito, dor abdominal, pancreatite, anormalidades de LFT, linfopenia, mutação genética e/ou infecção por TPMT.

[109] Em um aspecto, o indivíduo pode ter tido uma falta de resposta adequada com perda de resposta ou era intolerante ao tratamento de um antagonista do TNF-α. Um antagonista do TNF-α é, por exemplo, um agente que inibe a atividade biológica do TNF-α e, preferivelmente, se liga ao TNF-α, como um anticorpo monoclonal, por exemplo, REMICADE (infliximab), HUMIRA (adalimumab), CIMZIA (certolizumab pegol), SIMPONI (golimumab) ou uma proteína de fusão de receptores circulantes, como ENBREL (etanercept). Uma resposta inadequada a um antagonista do TNF-α se refere a sinais e sintomas de doença persistentemente ativa, apesar de uma história de pelo menos um regime de indução de 4 semanas de infliximabe 5 mg/kg IV, com 2 doses de pelo menos 2 semanas; uma dose subcutânea de 80 mg de adalimumab, seguida de uma dose de 40 mg com pelo menos duas semanas de intervalo; ou 400 mg por via subcutânea de certolizumab pegol, com 2 doses de pelo menos 2 semanas. Uma perda da resposta a um antagonista do TNF-α se refere à recorrência dos sintomas durante a administração de manutenção após benefício clínico prévio. A intolerância a um antagonista do TNF-α inclui, mas não está limitada a, reação relacionada à infusão, desmielinização, insuficiência cardíaca congestiva e/ou infecção.

[110] Uma perda, de manutenção da remissão, conforme usado aqui para indivíduos com colite ulcerosa, se refere a um aumento na pontuação de Mayo de pelo menos 3 pontos e na pontuação modificada de Baron de pelo menos 2.

[111] Os métodos descritos anteriormente em relação ao tratamento de um paciente pediátrico com IBD também se aplicam a métodos para o tratamento com um antagonista da integrina α4β7, como uni anticorpo anti-a4p7, por exemplo, vedolizumabe, um paciente pediátrico em risco de GvHD, um paciente pediátrico com GvHD, um paciente pediátrico

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43/61 com um defeito monogênico com patologia semelhante à IBD, um paciente pediátrico com doença de armazenamento de glicogênio tipo 1b, um paciente pediátrico com colite relacionada à perda da função da IL10 e mutações nos receptores IL10 ou IL10, um paciente pediátrico com X síndrome linfoproliferativa 2 (defeito no gene XIAP), um paciente pediátrico com síndrome IPEX causada por mutações no fator de transcrição FOXP3, um paciente pediátrico com doença inílamatória intestinal de início muito precoce (início <6 anos de idade), um paciente pediátrico com colite indeterminada (IBDU) e um paciente pediátrico com colite associada granulomatosa crônica.

[112] Alterações no método de tratamento para pacientes pediátricos com GvHD são descritas em detalhes a seguir.

Tratamento de indivíduos pediátricos para doença do enxerto versus hospedeiro (GvHD) usando um anticorpo α4β7

[113] Em um aspecto, a invenção se refere a um método de tratamento de um paciente pediátrico com risco de sofrer de GvHD, compreendendo as etapas de a. condicionai' o sistema imunológico do paciente ao transplante de células-tronco hematopoiéticas, b. administrai' uni anticorpo anti-a4p7, por exemplo, um anticorpo humanizado com especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, por exemplo, a uma dose de 100 mg ou 200 mg a pacientes pediátricos com menos de 30 kg ou a uma dose de 150 mg ou 300 mg a pacientes pediátricos com 30 kg ou mais, e. esperar pelo menos 12 horas, d. administrar células- tronco hematopoiéticas alogênicas, e. aguardar treze dias e administrar uma segunda dose do anticorpo anti-a4p7 e f. aguardar quatro semanas e administrar uma terceira dose do anticorpo anti-«4 [37.

[114] Em outro aspecto, a invenção se refere a um método de suprimir uma resposta imune em um paciente com câncer pediátrico, em que o método compreende a etapa de: administrai' a um paciente humano submetido a transplante alogênico de células-tronco hematopoiéticas (alo-HSCT), um anticorpoo ;ιηίί-α4β7, por exemplo, um anticorpo humanizado com especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, em que o anticorpo é administrado ao paciente de acordo com o seguinte regime de dosagem: a. uma dose inicial de 100 ou 200

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44/61 mg para pacientes pediátricos com menos de 30 kg ou na dose de 150 mg ou 300 mg para pacientes pediátricos com 30 kg ou mais, do anticorpo como uma infusão intravenosa no dia anterior ao alo-HSCT; b. seguido por uma segunda dose subsequente de 100 ou 200 mg para pacientes pediátricos com menos de 30 kg ou na dose de 150 mg ou 300 mg para pacientes pediátricos com 30 kg ou mais, do anticorpo como uma infusão intravenosa cerca de duas semanas após a primeira dose; c. seguido por uma terceira, dose subsequente de 100 ou 200 mg para pacientes pediátricos com menos de 30 kg ou em uma dose de 150 mg ou 300 mg para pacientes pediátricos com 30 kg ou mais, do anticorpo corno uma infusão intravenosa cerca de seis semanas após a dose inicial. Em outro aspecto, a invenção se refere a um método de tratamento de um paciente pediátrico que sofre de GvHD, por exemplo, GvHD aguda, que ocorre após o transplante alogênico de células-tronco hematopoiéticas, usando um antagonista da integrina α4β7, como um anticorpo anti-a4p7, por exemplo, vedolizumabe. Em algumas modalidades, o paciente pediátrico recebe um anticorpo antiα4β7, por exemplo, um anticorpo humanizado com especificidade de ligação para, a integrina ίχ4β7 humana, em que o anticorpo é administrado ao paciente de acordo com o seguinte regime de dosagem: a. uma. dose inicial de 100 ou 200 mg para, pacientes pediátricos com menos de 30 kg ou na dose de 150 mg ou 300 mg para pacientes pediátricos com 30 kg ou mais, seguida de outra, dose duas semanas depois, uma terceira dose seis semanas após a dose inicial, uma quarta dose dez semanas após a dose inicial e uma quinta dose catorze semanas após a dose inicial.

[115] Em algumas modalidades, após as doses relacionadas à GvHD anteriores, tratamento adicional de um paciente pediátrico, por exemplo, durante seis meses a um ano, com 100 ou 200 mg para pacientes pediátricos menores que 30 kg ou na dose de 150 mg ou 300 mg para pacientes pediátricos com 30 kg ou mais, podem manter a inibição da GvHD. Em algumas modalidades, a manutenção da inibição de GvHD pode usar dosagem subcutânea do paciente pediátrico em 54 mg, 108 mg, 160 mg, 165 mg, 216 mg ou 250 mg de anticorpo 3ηύ-α4β7 a cada 1 a 10 semanas.

Ensaios farmacocinéticos e farmacodinâmicos

[116] A concentração do anticorpo anti- α4β7, por exemplo, vedolizumabe, pode ser

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45/61 medida por qualquer meio apropriado conhecido pelos versados na técnica. Em um aspecto, a concentração de vedolizumabe é medida por um ensaio imunossorvente ligado a enzima sanduíche (ELISA). Em outro aspecto, o uso de um ensaio farmacodinâmico, a inibição da ligação de MAdCAM-l-Fc a células sanguíneas periféricas que expressam ομβ? pelo anticorpo anti- α4β7, por exemplo, o vedolizumabe no sangue é usada como uma medida da extensão da saturação de ουβ/ρείο anticorpo anti- α4β7, por exemplo, vedolizumabe.

[117] Em uma modalidade, a quantidade de anticorpo anti-a4p7, por exemplo, no soro pode ser medida em um ensaio farmacocinético. Uma fase imobilizada, como uma placa, vaso ou esfera de microtitulação é revestida com um reagente que se liga especificamente ao anticorpo anti-a4p7. O reagente imobilizado é colocado em contato com uma amostra do paciente, por exemplo, soro, que pode ou não compreender o anticorpo anti- α4β7. Após a incubação e a lavagem, o anticorpo anti- α4β7 complexado com o reagente de revestimento é colocado em contato com uni reagente que se liga ao anticorpo capturado e pode ser detectado, por exemplo, usando um rótulo como peroxidase de rábano silvestre (HRP). O reagente de ligação pode ser um anticorpo anti-humano, por exemplo, policlonal ou monoclonal, que se liga à porção Fc do anticorpo anti- α4β7. A adição de um substrato HRP, como 3,3',5,5'-tetrametilbenzidina (TMB), pode permitir o acúmulo de sinal, como o desenvolvimento da cor, que pode ser medido, por exemplo, espectrofotograficamente.

[118] Em algumas modalidades, o reagente de revestimento é um anticorpo anti-idiotípico que se liga especificamente ao anticorpo anti-a4p7, por exemplo, sua região variável ou uma porção do mesmo compreendendo um ou mais CDRs, como CDR3 de cadeia pesada, SEQ ID NO: 6. O anticorpo anti-idiotípico anti-a4p7 para uso no ensaio pode ser específico e, portanto, se ligar à porção de ligação à integrina α4β7 do anticorpo anti-(x4p7, mas não é específico para a porção Fc do anticorpo anti- (χ4β7 e, portanto, não liga a porção Fc do anticorpo anti-a4p7. O anticorpo anti-idiotípico anti-a4p7 para uso no ensaio pode ser específico para, e assim ligar, unia região variável da cadeia pesada e/ou leve do anticorpo anti- α4β7, por exemplo, selecionado do grupo que consiste nos aminoácidos 20 a 140 da SEQ ID NO: 1, aminoácidos 20 a 131 da SEQ ID NO: 2 e aminoácidos 21 a 132 da SEQ ID NO: 3. O anticorpo anti-idiotípico anti-ot4p7 para uso no ensaio pode ser específico para, e

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46/61 assim ligar, um fragmento de ligação ao antígeno do anticorpo &ηύ-α4β7. O anticorpo antiidiotípico pode ser isolado de um processo de imunização usando o anticorpo 3ηΙϊ-α4β7 ou uma porção de ligação à integrina α4β7, como um fragmento de anticorpo compreendendo um ou mais CDRs e usado como isolado ou produzido por um método recombinante. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-idiotípico αηύ-α4β7 é criado contra uni imunógeno compreendendo CDR3 de cadeia pesada, SEQ ID NO: 6. Em outras modalidades, o anticorpo anti-idiotípico &ηίΐ-(χ4β7 é criado contra um imunógeno compreendendo uma região variável da cadeia, pesada e/ou leve do anticorpo 3ηΙϊ-α4β7, por exemplo, selecionado do grupo que consiste nos aminoácidos 20 a 140 da SEQ ID NO: 1, aminoácidos 20 a 13 .1 da SEQ ID NO: 2 e aminoácidos 21 a 132 da SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-idiotípico é um anticorpo monoclonal. Em algumas modalidades, um fragmento scFv do anticorpo anti-idiotípico é usado no ensaio. Em outras modalidades, o anticorpo anti-idiotípico intacto é usado no ensaio.

[119] A geração de um anticorpo anti-idiotípico 3ηίΐ-α4β7 pode prosseguir nos seguintes métodos gerais. A imunização de um animal adequado (por exemplo, camundongo, rato, coelho ou ovelha.) corn proteína, por exemplo, anticorpo ηηί.ϊ-α4β7 ou uma porção de ligação a integrina. α4β7 do mesmo, ou proteína de fusão compreendendo a porção, pode ser realizada com o imunógeno preparado para injeção em uma. maneira de induzir uma resposta, por exemplo, com adjuvante, por exemplo, complete o adjuvante de Freund. Outros adjuvantes adequados incluem adjuvante TITERMAX GOLD® (CYTRX Corporation, Los Angeles, CA) e alúmen. Imunógenos peptídicos pequenos, como um fragmento que compreende uma. CDR, como CDR3 da cadeia pesada pode ser ligada, a uma. molécula maior, como a hemocianina de lapa. Os camundongos podem ser injetados de várias maneiras, por exemplo, subcutânea, intravenosa ou intramuscular em vários locais, por exemplo, no peritônio (i.p.), na base da cauda ou na planta do pé ou em uma combinação de locais, por exemplo, i.p. e base da cauda. As injeções de reforço podem incluir o mesmo ou uni imunógeno diferente e podem incluir adicionalmente adjuvante, por exemplo, adjuvante incompleto de Freund. Geralmente, quando um anticorpo monoclonal é desejado, um hibridoma é produzido pela fusão de uma célula, adequada de urna linha, celular imortal (por exemplo, uma linha celular de mieloma como SP2/0, P3X63Ag8.653 ou uni heteromieloma) com células produtoras de anticorpos. As células produtoras de anticorpos podem ser obtidas

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47/61 do sangue periférico ou, preferivelmente do baço ou gânglios linfáticos, de animais imunizados com o antigeno de interesse. As células que produzem anticorpos podem ser produzidas usando métodos adequados, por exemplo, fusão de uma célula produtora de anticorpos humanos e um heteromieloma ou trioma, ou imortalização de uma célula B humana ativada via infecção pelo vírus Epstein Ban*. (Ver, por exemplo, patente US 6.197.582 (Trakht); Niedbala et al., Hybridoma, 17:299-304 (1998); Zanella et al., J Immunol Methods, 156:205-215 (1992); Gustafsson et al., Hum Antibodies Hybridomas, 2:26-32 (1991).) As células produtoras de anticorpos fundidas ou imortalizadas (hibridomas) podem ser isoladas usando condições de cultura seletiva e clonadas por diluição limitante. As células que produzem anticorpos corn a especificidade desejada podem ser identificadas usando um ensaio adequado (por exemplo, ELISA (por exemplo, com imunógeno imobilizado no poço de microtitulação).

[120] O anticorpo &ηίϊ-α4β7 ou o anticorpo anti-idiotípico 3ηίΐ-α4β7 pode ser produzido pela expressão de sequências de ácidos nucleicos que codificam cada cadeia em células vivas, por exemplo, células em cultura. Uma variedade de sistemas de vetor de expressão de hospedeiro pode ser utilizada para expressai* as moléculas de anticorpo da invenção. Tais sistemas de expressão de hospedeiro representam veículos pelos quais as sequências codificadoras de interesse podem ser produzidas e subsequentemente purificadas, mas também representam células que podem, quando transformadas ou transfectadas com as sequências codificadoras de nucleotídeos apropriadas, expressar um anticorpo anti-(x4$7 in situ. Estes incluem, mas não estão limitados a, micro-organismos, tais como bactérias (por exemplo, E. coli, B. subtilis) transformadas com DNA de bacteriófago recombinante, DNA de plasmídeo ou vetores de expressão de DNA cosmídeo contendo sequências de codificação de anticorpos; levedura (por exemplo, Saccharomyces, Pichia) transformada com vetores de expressão de leveduras recombinantes contendo sequências codificadoras de anticorpos; sistemas de células de inseto infectados com vetores de expressão de vírus recombinantes (por exemplo, baculovírus) contendo sequências codificadoras de anticorpos; sistemas de células vegetais infectados com vetores de expressão de vírus recombinantes (por exemplo, vírus do mosaico de couve-flor, CaMV; vírus do mosaico do tabaco, TMV) ou transformados com vetores de expressão de plasmídeo recombinante (por exemplo, plasmídeo Ti) contendo sequências de codificação de anticorpos; ou sistemas de células de mamíferos (por exemplo.

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48/61 células COS, CHO, ΒΗΚ, 293, 3T3, NSO) que abrigam construções de expressão recombinantes contendo promotores derivados do genoma de células de mamíferos (por exemplo, promotor de metalotioneína) ou de vírus de mamíferos (por exemplo, o promotor tardio de adenovirus; promotor do vírus vaccinia 7,5K). Por exemplo, células de mamíferos, como células de ovário de hamster chinês (CHO), em conjunto com um vetor, como o principal elemento promotor de genes intermediários iniciais do citomegalovírus humano, é um sistema de expressão eficaz para anticorpos (Foecking et al., Gene 45:101 (1986); Cockett et al., Bio/Technology 8:2 (1990)).

[121] Em sistemas bacterianos, inúmeros vetores de expressão podem ser vantajosamente selecionados dependendo do uso pretendido para a molécula de anticorpo sendo expressa. Por exemplo, quando é produzida uma grande quantidade dessa proteína, para a geração de composições farmacêuticas de uma molécula de anticorpo, vetores que direcionam a expressão de altos níveis de produtos de proteínas de fusão que são prontamente purificados podem ser desejáveis. Tais vetores incluem, mas não estão limitados a, o vetor de expressão de E. coli pUR278 (Ruther et al., EMBO J. 2:1791 (1983)) no qual a sequência de codificação do anticorpo pode ser ligada individualmente ao vetor em quadro com a região de codificação lacZ de modo que uma proteína de fusão seja produzida; vetores pIN (Inouye & Inouye, Nucleic Acids Res. 13: 3101-3109 (1985); Van Heeke & Schuster, J. Biol. Chem. 24: 5503-5509 (1989)); e semelhantes. Os vetores pGEX também podem ser usados para expressar polipeptídeos estranhos como proteínas de fusão com glutationa S-transferase (GST). Em geral, essas proteínas de fusão são solúveis e podem ser facilmente purificadas a partir de células lisadas por adsorção e ligação a esferas de glutationa-agarose da matriz seguidas de eluição na presença de glutationa livre. Os vetores pGEX são projetados para incluir locais de divagem de trombina ou fator Xa protease, de modo que o produto do gene alvo clonado possa, ser liberado da porção GST. Em um sistema de insetos, o vírus da poliedrose nuclear de Autographa californica (AcNPV) é usado como vetor para expressar genes estranhos. O vírus cresce nas células de Spodoptera frugiperda. A sequência de codificação do anticorpo pode ser clonada individualmente em regiões não essenciais (por exemplo, o gene da poliedrina) do vírus e colocada sob controle de um promotor de AcNPV (por exemplo, o promotor de poliedrina).

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[122] Em outras modalidades, o reagente de revestimento é um ligante do anticorpo, como MAdCAM ou um fragmento de ligação a integrina α4β7 ou proteína de fusão compreendendo uni fragmento de ligação de integrina α4β7 de MAdCAM fundido com uma proteína não MAdCAM, como uma imunoglobulina G domínio constante. Exemplos de reagentes MAdCAM e proteínas de fusão são descritos na publicação PCT WO9624673 e Patente US 7.803.904, cujos ensinamentos completos são aqui incorporados por referência.

Ensaio HAHA

[ 123] A atividade do anticorpo anti- anti-a4$7 humano (HAHA) pode ser determinada pela detecção e/ou medição de anticorpos antifármacos (ADAs) ou anticorpos específicos para o anticorpo ηηύ-α4β7 (anticorpos anti-vedolizumabe). Existem várias opções, por exemplo, usando um ensaio de triagem e titulação, um ensaio de confirmação e um ensaio de neutralização. As amostras de soro podem ser medidas primeiro na amostra de triagem em diluições, por exemplo, 1:5 e 1:50. Amostras positivas podem ser confirmadas quanto à especificidade, tituladas e examinadas quanto à capacidade de neutralizar o anticorpo antiίχ4β7, por exemplo, atividade de vedolizumabe.

[ 124] Um ensaio de triagem pode usar um ELISA em ponte no qual a placa é revestida com o anticorpo anti- α4β7. O anticorpo 3ηύ-α4β7 imobilizado captura o ADA na amostra de teste que é ligada por um anticorpo anti-a4[37 conjugado à biotina, que é marcado pela estreptavidina marcada com peroxidase de rábano silvestre (HRP) e então detectada com uni substrato enzimático, como o TMB. Um desenvolvimento positivo da cor, por exemplo, conforme medido em um leitor de microplacas, como o Spectramax, com software analítico, como o SOFTMAX Pro3.1.2, indica, a presença de ADAs na amostra. O ponto de corte do ensaio, por exemplo, no ensaio de ligação à base de biotina-avidina-HRP, pode ser determinado usando amostras de soro humano normais como controles negativos. Os valores médios de absorbância dos 10 soros de controle negativo podem ser adicionados a 1,65 vez o desvio padrão dos controles negativos para determinar o ponto de corte. Assim, o ponto de corte pode permitir aproximadamente unia taxa de falso positivo de 5%. Na presença de 1 pg/mL de vedolizumabe, as respostas de baixa titulação são interferidas, de modo que podem se tornar indetectáveis, embora altos níveis de imunogenicidade sejam detectáveis em concentrações de vedolizumabe maiores que 1 pg/mL. Por exemplo, enquanto a

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50/61 sensibilidade padrão do ensaio pode ser de 0,44 ng/mL, na presença de 0,5 pg/mL de vedolizumabe, a sensibilidade do ensaio pode ser de 180 ng/mL. Por esses motivos, as amostras de soro podem ser coletadas por mais de 4 semanas, por mais de 8 semanas, por mais de 12 semanas ou por mais de 16 semanas após a dose final de anticorpo anti- ίχ4β7. Com um período de tempo mais longo entre a dose anterior e a amostragem, os níveis séricos de fármacos geralmente podem estar abaixo do nível de interferência.

[125] Outro método de ensaio utiliza placas revestidas com estreptavidina, anticorpo antiα4β7 marcado com biotina, ancorado em vasos, placas de grânulos revestidos com estreptavidina ou placas de microtitulação para o lado imobilizado da ponte e metal pesado, como anticorpo anti-oÁ^? marcado com rutênio, ósmio ou rênio (por exemplo, por meio de uma marca sulfo) para o outro lado da ponte. O complexo em ponte pode ser construído na placa por adições em etapas e lavagens entre ou em solução, com os dois lados da ponte em contato com a amostra de soro diluída e depois transferidos para a placa. Uni exemplo de ensaio usando esse método tem uma sensibilidade de 3,90 ng/mL de anticorpo anti-antiα4β7. A detecção do complexo de ponte marcado com metal pesado, por exemplo, um complexo marcado com rutênio, por eletroquimiluminescência (ECL), por exemplo, em um Meso Scale Discovery Sector Imager 6000 (Rockville, MD), pode ser mais sensível que um método HRP e/ou ter maior tolerância à. quantidade de anticorpo anti-a4p7 no soro. Portanto, não seria necessário aguardar uma amostra atrasada após o nível sérico do fármaco diminuir. Em algumas modalidades, o pré-tratamento da amostra de soro com ácido, por exemplo, ácido acético ou glicina de pH baixo, para, liberar o anticorpo anti-a4p7 dos anticorpos anti3ηίί-α4β7 derivados do paciente antes de entrar em contato com os anticorpos ηηύ-α4β7 em ponte pode reduzir a interferência do fármaco no soro. Por exemplo, enquanto a sensibilidade padrão do ensaio pode ser de 3,90 ng/mL, na presença de 5 pg/mL de vedolizumabe, a sensibilidade do ensaio pode ser de 10 ng/mL.

[126] Em uma modalidade, um ensaio para detectar anticorpos anti-vedolizumabe em uma. amostra de soro de um paciente compreende diluir o soro por um fator de diluição padrão, como 1:5, 1:25, 1:50 e/ou 1:125: tratamento com ácido acético; combinar a amostra diluída tratada com ácido com uma composição de ensaio que compreende um reagente de pH alto, como tampão TRIS de alta concentração para neutralização do ácido, um vedolizumabe

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51/61 marcado com bioíina e um vedolizumabe marcado com rutênio por um tempo suficiente para formai· uma ponte com soro derivado anticorpos anti-vedolizumabe entre as duas versões marcadas de vedolizumabe; transferir os complexos para unia placa revestida com estreptavidina; lavar a placa para que apenas o rutênio complexado pela ponte de anticorpos esteja presente. A detecção do complexo marcado com rutênio ligado e a medição da amostra por eletroquimiluminescência no leitor de microplacas pode ser conseguida adicionando uma solução de leitura como tripropilamina e aplicando tensão para estimular o rótulo de rutênio complexado à placa através da ponte de anticorpos.

[127] Após o teste de triagem inicial, as amostras podem ser testadas posteriormente em um teste de confirmação que utiliza excesso de anticorpo 3ηίΐ-α4β7 não marcado para demonstrar especificidade. Amostras positivas confirmadas podem ser avaliadas quanto à capacidade do HAHA de neutralizar a ligação do anticorpo 3ηίΐ-α4β7, por exemplo, vedolizumabe às células. Um ensaio competitivo baseado em citometria de fluxo foi projetado para determinar a capacidade do soro imune de inibir a ligação do vedolizumabe marcado a uma linha celular que expressa integrina cufU, RPMI8866 e detectar por citometria de fluxo.

[128] Os resultados podem indicai* categorias de estado de imunogenicidade: Negativo: nenhuma amostra HAHA positiva; Positivo: pelo menos 1 amostra HAHA positiva; Transitoriamente positivo: pelo menos 1 amostra de HAHA positiva e nenhuma amostra positiva consecutiva de HAHA; e Persistentemente positivo: pelo menos 2 ou mais amostras positivas consecutivas de HAHA. Os pacientes negativos provavelmente responderão ao anticorpo anti-a4p7 e poderão continuar sendo tratados com o anticorpo. Pacientes persistentemente positivos tendem a ter alta depuração do anticorpoanti-07^7 e podem não responder ao tratamento com anticorpo 3ηίϊ-α4β7. Pacientes positivos podem ter alta depuração do anticorpo 3ηίΐ-α4β7 e podem não responder ao anticorpo 3,ηΐί-α4β7. Pacientes positivos podem ter uma amostra adicional de soro 2, 3, 4, 5 ou 6 semanas após outra dose de anticorpo ηηίΐ-α4β7 para determinai' se são persistentemente positivos ou transitoriamente positivos. Pacientes transitoriamente positivos provavelmente responderão ao tratamento com anticorpos anti-a4|37 e o tratamento desses pacientes poderá ser continuado.

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[129] Os títulos dos níveis de imunogenicidade também podem ser determinados. As categorias de título incluem >5 (baixo), >50, >125, >625 e >3.125 (alto). Um paciente com um título alto em uma amostra positiva pode ter alta depuração do anticorpo anti-a4p7 e pode não responder ao tratamento com anticorpo anti- α4β7. Um paciente com um título baixo em uma amostra positiva pode responder ao tratamento com anticorpo 3ηίί-α4β7.

[130] A invenção será mais completamente compreendida por referência aos seguintes exemplos. Entretanto, eles não devem ser considerados como limitantes do escopo da invenção. Toda a literatura e citações de patentes são incorporadas aqui por referência.

EXEMPLIFICAÇÃO

EXEMPLO 1

[131] Uni estudo de Fase 2, randomizado, duplo cego e com variação de dose envolvendo pacientes pediátricos (masculino e feminino, 2 a 17 anos, inclusive) com UC ou CD moderada a severamente ativa será usado para avaliar a farmacocinética, eficácia, imunogenicidade, segurança e tolerabilidade do vedolizumabe IV. Os pacientes pediátricos terão demonstrado uma resposta inadequada, perda de resposta ou intolerância de pelo menos um dos seguintes agentes: corticosteroides, imunomoduladores e/ou terapia antagonista ao TNF-a. Serão inscritos aproximadamente 80 indivíduos pediátricos para garantir que 40 indivíduos com peso igual ou superior a 30 kg e 40 indivíduos com peso inferior a 30 kg, bem como um mínimo de 36 indivíduos com UC e um mínimo de 36 indivíduos com CD, sejam inscritos no estudo.

[132] Este estudo inclui um período de triagem de 4 semanas, um período de tratamento duplo cego de 22 semanas (com a última dose na semana. 14) para todos os indivíduos. Os indivíduos elegíveis podem sair do estudo na semana 22 e continuar recebendo o fármaco do estudo em um estudo de extensão aberto (OLE). Os indivíduos que não ingressarem no estudo OLE participarão de um período de acompanhamento de 18 semanas a partir da última, dose do fármaco do estudo e concluirão uma. pesquisa de acompanhamento de segurança em longo prazo por telefone seis meses após a última dose do fármaco do estudo.

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Um esquema do desenho do estudo está incluído na Figura 1.

EXEMPLO 2

[133] Será realizado um estudo de extensão em longo prazo, aberto, de fase 2b, que inclua indivíduos pediátricos do sexo masculino e feminino com UC ou CD que iniciaram o tratamento com vedolizumabe IV no estudo de fase 2 descrito no exemplo 1. O estudo avaliará o vedolizumabe com relação à segurança em longo prazo administrado por infusão IV. O estudo também avaliará o efeito do tratamento com vedolizumabe IV em longo prazo sobre os principais eventos relacionados à IBD (hospitalizações, cirurgias ou procedimentos), medições da qualidade de vida relacionada à saúde, padrões de crescimento e desenvolvimento e medidas de eficácia exploratória.

[134] Os indivíduos serão administrados com vedolizumabe IV unia vez a cada oito semanas na dose administrada na Semana 14 no Estudo descrito no Exemplo 1 (isto é, indivíduos que pesam menos de 30 kg receberão 100 ou 200 mg; indivíduos que pesam 30 kg ou mais receberão 150 ou 300 mg). Os indivíduos que sofrem de agravamento da doença ao receber a dose baixa (isto é, 100 ou 150 mg) podem ser escalados para a dose alta (200 ou 300 mg), a critério do pesquisador. Após a conclusão do estudo no Exemplo 1, os indivíduos que tiveram sua dose aumentada com base na não resposta devem ser dosados com base no peso no momento da não resposta. Amostras de sangue serão coletadas a cada 8 semanas para avaliar a farmacocinética (PK); a presença de anticorpos antivedolizumabe (AVA) será avaliada a cada 16 semanas. O estudo incluirá um período de acompanhamento de 18 semanas (consulta final de segurança) e uma pesquisa de segurança em longo prazo por telefone, 6 meses após a última dose do fármaco do estudo, para todos os indivíduos, incluindo os que descontinuam o estudo.

EXEMPLO 3

[135] Uni estudo com jovens macacos foi realizado para apoiar a segurança esperada em humanos. Os macacos se correlacionam aproximadamente a pacientes pediátricos humanos (por exemplo, humanos de 2 a 4 anos a 13 anos) e, portanto, efeitos em pacientes humanos

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54/61 com < 30 kg podem ser inferidos a partir deste estudo. O objetivo do estudo foi avaliar a toxicidade e o perfil toxicocinético do vedolizumabe (também conhecido como MLN0002), quando administrado a cada duas semanas por infusão intravenosa em macacos jovens cinomólgos por 13 semanas, além de avaliar a recuperação, persistência ou progressão de quaisquer efeitos após um período de recuperação de 12 semanas.

[136] O MLN0002 foi administrado uma vez a cada duas semanas por infusão intravenosa (aproximadamente 30 minutos) em macacos jovens cinomólgos (11 a 15 meses de idade e pesando entre 1,2 e 2,1 kg no início do estudo) por 13 semanas em água estéril para injeção como solução em 0 (controle, solução salina fisiológica a 0,9%), 10, 30 e 100 mg/kg (4/sexo/grupo). Para avaliar a resolução de quaisquer efeitos foi realizado um período de recuperação de 12 semanas (2/sexo/grupo para 0 [controle] e 100 mg/kg apenas). Os parâmetros avaliados foram: sobrevivência, observação clínica, peso corporal, consumo alimentar, oftalmologia, eletrocardiologia, parâmetros de patologia clínica (hematologia, coagulação, química clínica e exame de urina), parâmetros toxicocinéticos, anticorpos antihumanos primatas (PAHA), resposta de anticorpo dependente de células T (TDAR), análises por citometria de fluxo (para subconjuntos de linfócitos no sangue periférico, líquido espinhal cerebral, marcadores farmacodinâmicos), resultados de necropsia grave, pesos de órgãos e resultados histopatológicos.

[137] Não houve diferenças consistentes relacionadas ao gênero na exposição sérica ao MLN0002 após a administração nos dias 1 e 85. O MLN0002 foi quantificável no primeiro momento de coleta da amostra após o término da infusão (EOI) e os valores médios de tmax de 0,583 horas após o início da infusão (SOI), ou seja, 5 minutos após o EOI para todos os grupos nos dias 1 e 85; no entanto, os valores de tmax em quatro indivíduos foram 24,5 e 168,5 horas após SOI (24 e 168 horas após EOI), sugerindo possível dosagem extravascular nesses indivíduos.

[138] Aumentos na dose de MLN0002 de 10 a 30 mg/kg resultaram em aumentos aproximadamente proporcionais à dose na AUC do MLN0002 no dia 1. A proporcionalidade da dose do aumento da AUC MLN0002 no dia 85 com essas doses não pôde ser determinada no sexo masculino devido à presença de anticorpos anti-MLN0002 e foi maior que a dose

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55/61 proporcional no sexo feminino (11,1 vezes, n ----- 1 sexo feminino). Todos os animais (n ----4/sexo) no grupo da dose de 10 mg/kg e 3 animais no grupo da dose de 30 mg/kg (n = 4/sexo) foram positivos para anticorpos anti-MLN0002 168 horas após o final da infusão (EOI) no dia 85. A detecção de anticorpos nesses animais foi associada a uma diminuição acentuada da exposição ao MLN0002 na dose de 10 mg/kg e em dois dos três animais de 30 mg/kg positivos para anticorpos anti-MLN0002; no entanto, a exposição no terceiro animal de 30 mg/kg positivo para anticorpos foi semelhante à exposição nos demais animais do grupo que foi negativa para anticorpos. Aumentos no MLN0002 de 30 para 100 mg/kg resultaram em aumentos proporcionais de aproximadamente (machos) ou maiores (fêmeas) que aumentos proporcionais da dose na AUC do MLN0002 no dia 1 e no dia 85, respectivamente.

Tabela 1

Resumo dos parâmetros toxicocinéticos médios do MLN002 no soro após infusão intravenosa a cada outra semana em macacos cinomólgos jovens por 13 semanas (excluindo animais com exposição afetada pelos anticorpos anti-MLN0002)

Dose	Ύ a 1 max	Cmax	AUCo-168h
(mg/kg)	(h)	(pg/mL)	(h* pg/mL)
Dia 1:	Masc.	Femin.	Masc.	Femin.	Masc.	Femin.
0	N/A	N/A	<LLOQ	<LLOQ	<LLOQ	<LLOQ
10	0,583	0,583	253	286	22.270	22.300
30	0,583	0,583	712	675	66.100	56.600
100	0,583	0,583	2.460	3.370	209.000	259.000
Dia 85^b:	Masc.	Femin.	Masc.	Femin.	Masc.	Femin.
0	N/A	N/A	<LLOQ	<LLOQ	<LLOQ	<LLOQ
10	0,583	0,583	7,87	41,3	ND	ND
30	0,583	0,583	1.090	754	114.000	51.700
100	0,583	0,583	3.030	3.710	311.000	362.000

N/A - não aplicável; <LLOQ - abaixo do limite de quantificação; AUC()-168h = área sob a curva de concentração plasmática e tempo do tempo 0 a 168 horas; Cmax = máxima

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56/61 observada; ND - não determinado; tmax - tempo para atingir Cniax· ^a Parâmetros dependentes do tempo foram calculados usando tempos nominais após o início da infusão (SOI).

b

Os valores excluem animais que foram positivos ao anticorpo antifármaco.

[139] Todos os animais sobreviveram até o final do estudo. Não houve observações clínicas relacionadas ao artigo de teste ou efeitos sobre pesos corporais, consumo de alimentos, oftalmologia, eletrocardiologia, parâmetros de patologia clínica (hematologia, coagulação, química clínica e urinálise), resposta de anticorpos dependentes de células T (TDAR), citometria de fluxo análises (sangue periférico e líquido espinhal cerebral), resultados macroscópicos e microscópicos e pesos de órgãos.

[140] Em 10, 30 e 100 mg/kg, a ocupação dos receptores α4β7 nos linfócitos B e linfócitos T CD4+ de memória na presença, de MLN0002 foi demonstrada durante a fase de dosagem, pois houve uma redução nos valores médios de intensidade de fluorescência do MLN0002 marcado em comparação com os valores de grupo e com o grupo controle.

[141] Em conclusão, a administração de MLN0002 uma vez a cada duas semanas por infusão intravenosa foi bem tolerada em macacos jovens cinomólgos nos níveis de 10, 30 e 100 mg/kg, Não houve sinais de toxicidade em níveis de até 100 mg/kg. Assim, 100 mg/kg foi considerado o nível de efeito adverso não observado (NOAEL) neste estudo. A AUCoi68hr sérica e Cmax associadas ao NOAEL foram 311.000 e 362.000 h*pg/mL 3.030 e 3.710 pg/mL no sexo masculino e feminino, respectivamente.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método para tratar doença inflamatória intestinal em um paciente pediátrico, caracterizado pelo fato de que compreende administrar intravenosamente a um paciente pediátrico com doença inflamatório intestinal (IBD): uma primeira dose de 200 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina (χ4β7 humana, uma segunda dose de 200 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 200 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma sequência de região variável da cadeia pesada dos aminoácidos 20 a 140 da SEQ ID NO: 1 e uma sequência da região variável da cadeia leve dos aminoácidos 20 a 131 da SEQ ID NO: 2.
2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende ainda uma quarta dose de 200 mg às 14 semanas após a primeira dose.
3. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que compreende ainda doses subsequentes de 200 mg a cada oito semanas depois.
4. Método de acordo com qualquer urna das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a cadeia pesada do anticorpo compreende os aminoácidos 20 a 470 da SEQ ID NO: 1 e a cadeia leve do anticorpo compreende os aminoácidos 20 a 238 da SEQ ID NO: 2
5. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que cada dose é administrada por via intravenosa como uma infusão durante cerca de 120 minutos.
6. Método de acordo com qualquer urna das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico pesa menos de 30 kg.
7. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico pesa de 10 kg a 30 kg.

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8. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória intestinal é doença de Crohn moderada a severamente ativa.
9. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória intestinal é uma colite ulcerosa moderada a severamente ativa.
10. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico tinha uma falta de resposta adequada, perda de resposta ou era intolerante a um antagonista do TNFa.
11. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico teve uma resposta inadequada ou perda de resposta a um corticosteroide.
12. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico teve uma resposta inadequada ou perda de resposta a um imun omodu lador.
13. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que uma resposta clínica é alcançada conforme medido na semana 14.
14. Método de acordo com qualquer unia das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico alcança remissão da doença inflamatória intestinal.
15. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a dose é obtida de uni recipiente fabricado para administrar 200 mg do anticorpo.
16. Método para tratar doença inflamatória intestinal em um paciente pediátrico, caracterizado pelo fato de que compreende administrar intravenosamente a um paciente

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3/13 pediátrico com IBD: uma primeira dose de 100 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 100 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 100 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma sequência de região variável da cadeia pesada dos aminoácidos 20 a 140 da SEQ ID NO: 1 e uma sequência da região variável da cadeia leve dos aminoácidos 20 a 131 da SEQ ID NO: 2.
17. Método de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que compreende ainda uma quarta, dose de 200 mg nas 14 semanas após a primeira dose.
18. Método de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que compreende ainda uma quinta e subsequente dose de 200 mg a cada oito semanas após a quarta dose.
19. Método de acordo com qualquer unia das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que a cadeia pesada do anticorpo compreende os aminoácidos 20 a 470 da SEQ ID NO: 1 e a cadeia leve do anticorpo compreende os aminoácidos 20 a 238 da SEQ ID NO: 2.
20. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizado pelo fato de que cada dose é administrada por via intravenosa como uma infusão durante cerca de 120 minutos.
21. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 20, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico pesa menos de 30 kg.
22. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 20, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico pesa de 10 kg a 30 kg.
23. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 22, caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória intestinal é doença de Crohn moderada a severamente ativa.

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24. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 22, caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória intestinal é uma colite ulcerosa moderada a severamente ativa.
25. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 24, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico tinha uma falta de resposta adequada, perda de resposta ou era intolerante a um antagonista do TNFa.
26. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 24, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico teve uma resposta inadequada, ou perda de resposta, a um corticosteroide.
27. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 24, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico teve uma resposta inadequada ou perda de resposta a um imunomodulador.
28. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 27, caracterizado pelo fato de que uma resposta clínica é alcançada conforme medido na semana 14.
29. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 27, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico alcança remissão da doença inflamatória intestinal.
30. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 29, caracterizado pelo fato de que a dose é obtida de um recipiente fabricado para administrar 100 mg do anticorpo.
31. Método para tratar doença inflamatória intestinal em um paciente pediátrico, caracterizado pelo fato de que compreende administrai' intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 150 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 150 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 150 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma sequência de região variável da cadeia

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5/13 pesada dos aminoácidos 20 a 140 da SEQ ID NO: 1 e uma sequência da região variável da cadeia leve dos aminoácidos 20 a 131 da SEQ ID NO: 2.
32. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que compreende ainda uma quarta dose de 150 mg nas 14 semanas após a primeira dose.
33. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que compreende ainda uma quarta dose de 300 mg nas 14 semanas após a primeira dose.
34. Método de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que compreende ainda uma quinta e subsequente dose de 150 mg a cada oito semanas após a quarta dose.
35. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que compreende ainda urna quinta e subsequente dose de 300 mg a cada oito semanas após a quarta dose.
36. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 35, caracterizado pelo fato de que a cadeia pesada do anticorpo compreende os aminoácidos 20 a 470 da SEQ ID NO: 1 e a cadeia leve do anticorpo compreende os aminoácidos 20 a 238 da SEQ ID NO: 2.
37. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 36, caracterizado pelo fato de que cada dose é administrada por via intravenosa como uma infusão durante cerca de 30 minutos.
38. Método de acordo corn qualquer uma das reivindicações 31 a 37, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico pesa 30 kg ou mais.
39. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 31a 37, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico pesa de 10 kg a 30 kg.
40. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 39, caracterizado pelo

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6/13 fato de que a doença inflamatória intestinal é doença de Crohn moderada a severamente ativa.
41. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 39, caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória intestinal é uma colite ulcerosa moderada a severamente ativa.
42. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 41, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico tinha uma falta de resposta adequada, perda de resposta ou era. intolerante a um antagonista do TNFa.
43. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 41, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico teve uma resposta inadequada ou perda de resposta a um corticosteroide.
44. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 42, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico teve uma resposta inadequada ou perda de resposta a um imunomodulador.
45. Método de acordo com qualquer uma. das reivindicações 31 a 44, caracterizado pelo fato de que uma resposta clínica é alcançada conforme medido na semana 14.
46. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 31a 45, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico alcança remissão da doença inflamatória intestinal.
47. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 46, caracterizado pelo fato de que a dose é obtida de um recipiente fabricado para, administrar 150 mg do anticorpo.
48. Método para o tratamento de doença inflamatória intestinal em um paciente pediátrico, caracterizado pelo fato de que compreende administrar intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 300 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 300 mg do

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7/13 anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 300 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma sequência da região variável da cadeia pesada dos aminoácidos 20 a 140 da SEQ ID NO: 1 e uma região variável da cadeia leve sequência dos aminoácidos 20 a 131 da SEQ ID NO: 2.
49. Método de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que compreende ainda unia quarta dose de 300 mg nas 14 semanas após a primeira dose.
50. Método de acordo com a reivindicação 49, caracterizado pelo fato de que compreende ainda urna quinta e subsequente dose de 300 mg a cada oito semanas após a quarta dose.
51. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 50, caracterizado pelo fato de que a cadeia pesada do anticorpo compreende os aminoácidos 20 a 470 da SEQ ID NO: 1 e a cadeia leve do anticorpo compreende os aminoácidos 20 a 238 da SEQ ID NO: 2.
52. Método de acordo corn qualquer uma das reivindicações 48 a 51, caracterizado pelo fato de que cada dose é administrada por via intravenosa como unia infusão durante cerca de 30 minutos.
53. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 52, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico pesa 30 kg ou mais.
54. Método de acordo com qualquer unia das reivindicações 48 a 53, caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória intestinal é doença de Crohn moderada a severamente ativa.
55. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 53, caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória intestinal é uma colite ulcerosa moderada a severamente ativa.
56. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 55, caracterizado pelo

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8/13 fato de que o paciente pediátrico tinha uma falta de resposta adequada, perda de resposta ou era intolerante a um antagonista do TNFa.
57. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 55, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico teve uma resposta inadequada ou perda de resposta a um corticosteroide.
58. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 55, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico teve uma resposta inadequada ou perda de resposta a um imun om odu lador.
59. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 58, caracterizado pelo fato de que uma resposta clínica é alcançada conforme medido na semana 14.
60. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 59, caracterizado pelo fato de que o paciente pediátrico alcança remissão da doença inflamatória intestinal.
61. Método para o tratamento de doença inflamatória intestinal em um paciente pediátrico, caracterizado pelo fato de que compreende administrar intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 100 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 100 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 100 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antígeno de origem não humana e pelo menos uma porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo α4β7, em que a região de ligação ao antígeno compreende CDRs:

Cadeia leve: CDR1 SEQ ID NO: 7

CDR2 SEQ ID NO: 8 e CDR3 SEQ ID NO: 9; e Cadeia pesada: CDR1 SEQ ID NO: 4

CDR2 SEQ ID NO: 5 e

CDR3 SEQ ID NO: 6.

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62. Método para o tratamento de doença inflamatória intestinal em um paciente pediátrico, compreendendo a administração intravenosa a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 200 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 200 mg de o anticorpo duas semanas após a primeira dose e unia terceira dose de 200 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antígeno de origem não humana e pelo menos uma porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo α4β7, em que a região de ligação ao antígeno compreende as CDRs:

Cadeia leve: CDR1 SEQ ID NO: 7

CDR2 SEQ ID NO: 8 e

CDR3 SEQ ID NO: 9; e

Cadeia pesada: CDR1 SEQ ID NO: 4

CDR2 SEQ ID NO: 5 e

CDR3 SEQ ID NO: 6.
63. Método para o tratamento de doença inflamatória intestinal em um paciente pediátrico, caracterizado pelo fato de que compreende administrar intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 150 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 150 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 150 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antígeno de origem não humana e pelo menos uma porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo α4β7, em que a região de ligação ao antígeno compreende CDRs:

Cadeia leve: CDR1 SEQ ID NO: 7

CDR2 SEQ ID NO: 8 e

CDR3 SEQ ID NO: 9; e

Cadeia pesada: CDR1 SEQ ID NO: 4

CDR2 SEQ ID NO: 5 e CDR3 SEQ ID NO: 6.
64. Método para o tratamento de doença inflamatória. intestinal em um paciente

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10/13 pediátrico, caracterizado pelo fato de que compreende administrar intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 300 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 300 mg de o anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 300 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antígeno de origem não humana e pelo menos uma porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo ίχ4β7, em que a região de ligação ao antígeno compreende as CDRs: Cadeia leve: CDR1 SEQ ID NO: 7

CDR2 SEQ ID NO: 8 e

CDR3 SEQ ID NO: 9: e

Cadeia pesada: CDR1 SEQ ID NO: 4

CDR2 SEQ ID NO: 5 e CDR3 SEQ ID NO: 6.
65. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 61 a 64, caracterizado pelo fato de que doses subsequentes do anticorpo são administradas por via subcutânea.
66. Método de acordo com a reivindicação 65, caracterizado pelo fato de que cada dose subcutânea é 108 mg de anticorpo.
67. Método de acordo com a reivindicação 65 ou 66, caracterizado pelo fato de que a dose subcutânea é administrada a cada duas ou quatro semanas a um paciente pediátrico que pesa 30 kg ou mais.
68. Método de acordo com a reivindicação 65 ou 66, caracterizado pelo fato de que a dose subcutânea é administrada a cada três semanas, a cada quatro semanas, a cada cinco semanas, a cada seis semanas, a cada sete semanas, a cada oito semanas, a cada nove semanas ou a cada dez semanas a um paciente pediátrico que pesa de 10 a 30 kg.
69. Método para o tratamento de doença inflamatória intestinal (IBD) em um paciente pediátrico, caracterizado pelo fato de que compreende administrar intravenosamente a um paciente pediátrico com IBD: uma primeira dose de 200 mg de um anticorpo que tem

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11/13 especificidade de ligação à integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 200 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e subcutaneamente administrar a terceira dose de 108 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose e subsequentes doses de 108 mg do anticorpo a cada duas, três ou quatro semanas depois, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antígeno de origem não humana e pelo menos uma porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo α4β7, em que a região de ligação ao antígeno compreende CDRs:

Cadeia leve: CDR1 SEQ ID NO: 7

CDR2 SEQ ID NO: 8 e

CDR3 SEQ ID NO: 9: e

Cadeia pesada: CDR1 SEQ ID NO: 4

CDR2 SEQ ID NO: 5 e CDR3 SEQ ID NO: 6.
70. Método para o tratamento de um paciente com câncer pediátrico submetido a transplante alogênico de células-tronco hematopoiéticas (alo-HSCT), caracterizado pelo fato de que compreende administrar intraven os amente a um paciente pediátrico no dia anterior ao alo-HSCT uma primeira dose de 200 mg de um anticorpo com especificidade de ligação para integrina α4β7 humana, uma segunda dose de 200 mg do anticorpo duas semanas após a primeira dose e administrar subcutaneamente uma terceira dose de 108 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose e doses subsequentes de 108 mg do anticorpo a cada duas, três ou quatro semanas depois, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antígeno de origem não humana e pelo menos unia porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo α4β7, em que a região de ligação ao antígeno compreende as CDRs:

Cadeia leve:

Cadeia pesada:

CDR1 SEQ ID NO: 7

CDR2 SEQ ID NO: 8 e

CDR3 SEQ ID NO: 9; e

CDR1 SEQ ID NO: 4

CDR2 SEQ ID NO: 5 e

CDR3 SEQ ID NO: 6.

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71. Método para o tratamento de paciente pediátrico com um defeito monogênico corn patologia tipo IBD, caracterizado pelo fato de que compreende administrar intravenosamente a uni paciente pediátrico: unia primeira dose de 200 mg de um anticorpo que tem especificidade de ligação à integrina ίχ4β7 humana, uma segunda dose de 200 mg de o anticorpo duas semanas após a primeira dose e uma terceira dose de 200 mg do anticorpo seis semanas após a primeira dose, em que o anticorpo compreende uma região de ligação ao antigeno de origem não humana e pelo menos uma porção de um anticorpo de origem humana, em que o anticorpo tem especificidade de ligação para o complexo α4β7, em que a região de ligação ao antigeno compreende as CDRs:

Cadeia leve: CDR1 SEQ ID NO: 7

CDR2 SEQ ID NO: 8 e

CDR3 SEQ ID NO: 9; e

Cadeia pesada: CDR1 SEQ ID NO: 4

CDR2 SEQ ID NO: 5 e CDR3 SEQ ID NO: 6.
72. Frasco fabricado para administrar 200 mg de anticorpo anti-α4β7, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de um paciente pediátrico.
73. Método de acordo com a reivindicação 71, caracterizado pelo fato de que o dito defeito monogênico com patologia, do tipo IBD é selecionado do grupo que consiste na doença de armazenamento de glicogênio tipo 1b, perda da função de IL10 e mutações nos receptores IL10 ou IL10, síndrome linfoproliferativa ligada ao X 2, síndrome IPEX causada por mutações no fator de transcrição FOXP3 e doença granulomatosa crônica.
74. Método de acordo com a reivindicação 71 ou 73, caracterizado pelo fato de que compreende ainda uma dose subsequente de 200 mg a cada oito semanas depois.
75. Método de acordo com a reivindicação 71 ou 73, caracterizado pelo fato de que compreende ainda urna dose subsequente de 200 mg até o paciente pediátrico ter 30 kg ou mais.

Petição 870190107722, de 24/10/2019, pág. 92/97

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76. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, 16 a 19, 61 a 63, 71, 73 e 74, caracterizado pelo fato de que compreende ainda aumentar a dose para 300 mg após o paciente pediátrico pesar 30 kg ou mais.
77. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 61 a 64, 69 e 71, caracterizado pelo fato de que o dito anticorpo é um anticorpo humanizado.
78. Método de acordo com a reivindicação 77, caracterizado pelo fato de que o dito anticorpo humanizado compreende uma sequência da região variável da cadeia pesada dos aminoácidos 20 a 140 da SEQ ID NO: 1 e uma sequência da região variável da cadeia leve dos aminoácidos 20 a 131 da SEQ ID NO: 2.