BR112019011835A2

BR112019011835A2 - aminopirazóis como inibidores seletivos de janus quinase

Info

Publication number: BR112019011835A2
Application number: BR112019011835A
Authority: BR
Inventors: Brubaker Jason; R Young Jonathan; H Fuller Peter
Original assignee: Intervet Int Bv
Priority date: 2016-12-14
Filing date: 2017-12-13
Publication date: 2019-10-22
Also published as: PL3555074T3; CN117756789A; CN110062754A; US10875847B2; CN110062754B; EP3555074A1; US20200115367A1; AU2017376398A1; EP4095135A1; CA3045951A1; ES2926545T3; DK3555074T3; AU2017376398B2; RU2019121667A; JP2020503288A; WO2018108969A1; JP7116063B2; RU2757218C2; RU2019121667A3; EP3555074B1

Abstract

a presente invenção provê compostos de fórmula i que são inibidores seletivos de jak, e como tal são úteis para o tratamento de doenças mediadas por jak, tais como dermatite atópica, artrite e câncer.

Description

AMINOPIRAZÓIS COMO INIBIDORES SELETIVOS DE JANUS QUINASE

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO [001] As proteínas quinases são um grupo de enzimas que regulam a atividade de suas proteínas alvo pela adição de grupos fosfato ao substrato proteico. As quinases podem ser subdivididas pelo seu alvo em serina/treonina quinases e tirosina quinases e desempenham um papel essencial em muitos processos fisiológicos, incluindo divisão celular, diferenciação, homeostase celular e transdução de sinal.

[002] A família Janus quinase (JAK) de mamíferos de tirosina quinases não receptoras tem quatro membros; JAK1, JAK2, JAK3 e TYK2. A família JAK está envolvida na transdução de sinal intracelular de > 70 citocinas diferentes. As citocinas ligam-se aos seus receptores de superfície celular, resultando na dimerização do receptor e subsequente ativação/fosforilação das tirosinas quinases de JAK. Os resíduos específicos de tirosina no receptor são então fosforilados por JAKs ativadas e servem como sítio de ancoragem para proteínas STAT. Os STATs são fosforilados pelas JAKs, dimerizam e translocam ao núcleo, onde se ligam a elementos específicos do DNA e ativam a transcrição gênica. A JAK1 sinaliza em conjunto com todas as isoformas de JAK de um modo dependente da citocina.

[003] As JAKs são essenciais para múltiplas funções fisiológicas. Isto é evidenciado por estudos utilizando modelos de camundongos geneticamente modificados que são deficientes em JAKs específicas (K. Ghoreschi, A. Laurence, J. J. O'Shea, Immunol. Rev. 228, 273 (2009)), e a identificação de mutações nas enzimas JAK que foram associadas a doenças em humanos. (J. J. O'Shea, M. Pesu, D. C. Borie, P. S. Changelian, Nat. Rev. Drug Discov. 3, 555 (2004)). (Y. Minegishi etal., Immunity. 25, 745 (2006)).

[004] Estes dados genéticos de camundongos e humanos ligam a via

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Jak/STAT a várias doenças e distúrbios incluindo, mas não limitados, a distúrbios hiperproliferativos e câncer tais como leucemia e linfomas, distúrbios imunológicos e inflamatórios tais como rejeição de transplantes, asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, alergias, artrite reumatoide, dermatite alérgica e atópica, diabetes tipo I, esclerose lateral amiotrófica e esclerose múltipla.

[005] WO 2013/041042 descreve pirazol carboxamidas como Inibidores de Janus Quinase que são úteis para o tratamento de artrite reumatoide, asma, COPD e câncer. Os compostos desta descrição são da seguinte fórmula

[006] W02013/040863 descreve cicloalquilnitrila pirazol carboxamidas substituídas que são inibidores de Janus quinase 1 úteis para o tratamento de, por exemplo, asma, doenças obstrutivas das vias aéreas, artrite, enfisema, câncer, miastenia gravis, doença de Graves e doença de Alzheimer.

[007] WO2014/146490 descreve compostos de 2-(3-amino-4-oxo-4,5-dihidro-pirazol(4,3-c)piridin-l-il)-ciclobutanocarbonitrila substituídos que são inibidores de Janus quinase utilizados para tratar, por exemplo, artrite reumatoide, asma crônica, obstrução crônica, doença pulmonar, diabetes.

[008] As citocinas que utilizam a via de sinalização JAK-STAT tem sido envolvida na patogênese e manutenção de dermatite alérgica e atópica. Essas incluem as IL-4 e IL-6, e IL-13 pró-inflamatórias [Carmi-Levy et al., Clinic Rev Allerg Immunol (2011), 41:245), Ong and Leung, Curr. Allergy Asthma Rep. (2006), 6(5):384)], citocinas envolvidas na resposta alérgica, bem como IL-31,

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3/42 uma citocina envolvida no desencadeamento de prurido [Dillon et al., Nat. Immunol. (2004), 5(7): 752]. De maneira importante, os receptores dessas citocinas acima mencionadas envolvidas na dermatite atópica e alérgica utilizam JAK1, complexada com JAK2, JAK3 ou Tyk2, para gerar sinalização intracelular e desencadear efeitos biológicos [Yamaoka K, Saharinen P, Pesu M, Holt VE 3rd, Silvennoinen O, O'Shea JJ., Genome Biol. 2004;5(12):253].

[009] Em cães com dermatite alérgica ou atópica, a administração de oclacitinib, um inibidor de JAK com seletividade modesta para JAK1, produz uma melhora rápida do prurido e reduz as lesões [Cosgrove et al., Vet. Derm. (2013), 24:479; Cosgrove et al., Vet. Derm. (2013), 24:587]. Em doses mais elevadas, o oclacitinib produz uma redução nas contagens de hematócrito, hemoglobina e reticulócitos, presumivelmente devido à inibição da JAK2 [FOI Summary NADA 141-345; Gonzales et al., J. Vet. Pharmacol. Therapeut. (2014), 37:317]. Coletivamente, esses dados sugerem fortemente que a inibição de JAK1 é um tratamento eficaz para dermatite alérgica e atópica em cães, e que um composto com maior seletividade por JAK1 sobre as outras enzimas JAK conferirá um índice terapêutico melhorado.

[010] Apoquel® é um fármaco para animais cujo princípio ativo é o oclacitinib, que é autorizado para o controle do prurido associado à dermatite atópica e o controle da dermatite atópica em cães com pelo menos 12 meses de idade (ver FOI Summary for NADA 141-345, May 14, 2013). Ver também as Patentes dos EUA números 6.890.929; 7.687.507; 8.133.899 e 8.987.283.

[011] A segurança do Apoquel® foi avaliada em um estudo pivotal de segurança de 6 meses usando Boas Práticas de Laboratórios (BPL). O produto foi administrado oralmente, duas vezes por dia durante 6 semanas, seguido de uma vez por dia durante 20 semanas, em cães com 1, 3 e 5 vezes a dose máxima de exposição de 0,6 mg/kg (a dose clínica recomendada é de 0,4 mg/kg) por um

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4/42 total de 26 semanas (6 meses). Embora o produto tenha sido geralmente bem tolerado em todas as doses, houve efeitos de artigos de teste em todos os grupos consistentes com a ação farmacológica da classe do fármaco. Estes incluíram: papilomas (considerados relacionados com os artigos de teste, mas não relacionados com a dose); cistos interdigitais (pododermatite, etc.) (provavelmente relacionados à dose); diminuições na massa de glóbulos vermelhos; diminuições na albumina sérica; diminuição da celularidade do tecido linfoide associado ao intestino (GALT), baço e linfonodos cervicais/mesentéricos; diminuição da celularidade da medula óssea esternal e femoral. A maioria destes efeitos foi leve e pareceu ser não progressivo (ver relatório de avaliação do CVMP para APOQUEL (EMEA/V/C/002688/0000); EMA/481054/2013).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [012] A presente invenção provê novos compostos que são inibidores de JAKs. A invenção também provê um método para o tratamento e prevenção de doenças e distúrbios mediados por JAK utilizando os novos compostos, bem como composições farmacêuticas contendo os compostos.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [013] A Figura 1 mostra os resultados do Composto 1 quando testado no Modelo de Coceira Induzida por IL-31.

[014] A Figura 1 A mostra a comparação do Composto 1 com o placebo e o Apoquel.

[015] A Figura 1 B mostra o efeito de três doses diferentes do Composto 1. DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [016] A presente invenção provém compostos de Fórmula I ou sais farmaceuticamente aceitáveis ou esteroisômeros dos mesmos:

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[017] Em uma modalidade, o composto da Fórmula I é

[018] Em uma modalidade, os compostos da presente invenção são inibidores seletivos de JAK1 em relação à JAK2 e JAK3. Em uma modalidade, os compostos da presente invenção são inibidores seletivos de JAK1 em relação à JAK2 ou JAK3. A determinação da seletividade relativa para um determinado composto de inibição de JAK1 é definida como a razão relativa do (valor de ICso de JAK2/valor de ICso de JAK1) sendo pelo menos 2. Além disso, a razão relativa do (valor de ICso de JAK3/valor de ICso de JAK1) é pelo menos 500.

[019] Em ainda outra modalidade, para um dado composto, as razões relativas do (valor de ICso de JAK2/valor de ICso de JAK1) é pelo menos 5 ou é pelo menos 10. Em outra modalidade, a razão relativa do (valor de ICso de JAK3/valor de ICso de JAK1) é pelo menos 500 ou é pelo menos 750 ou é pelo menos 1000.

[020] Outra modalidade da invenção é uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável, ou um estereoisômero do mesmo e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[021] Outra modalidade é um método para o tratamento de uma doença mediada por JAK-1, compreendendo a administração a um mamífero em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou

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6/42 uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I.

[022] Uma modalidade adicional é um método de tratamento em que a doença mediada por JAK-1 é aquela que pode ser melhorada pela inibição seletiva de uma Janus quinase JAK1 em relação à JAK 2 e JAK 3.

[023] Em outra modalidade, a doença é selecionada a partir de dermatite alérgica, dermatite atópica, artrite, ceratoconjuntivite seca, doenças ou distúrbios autoimunes e câncer.

[024] Em outra modalidade, a doença é dermatite atópica.

[025] Em outra modalidade, a doença é uma doença ou distúrbio autoimune.

[026] Em uma modalidade, a doença é artrite.

[027] Em outra modalidade, o mamífero é um animal mamífero de estimação.

[028] Em outra modalidade, o animal de estimação é um cachorro, um gato ou um cavalo.

[029] Em uma modalidade, a doença é a ceratoconjuntivite seca.

[030] Em uma modalidade adicional, a administração é oral, parentérica ou tópica.

[031] Em outra modalidade, a inibição seletiva é de Janus quinase JAK1 em relação à JAK 2.

[032] Em outra modalidade, a inibição seletiva é de Janus quinase JAK1 em relação à JAK 3.

[033] Em uma modalidade adicional, a razão de JAK2(IC50)/JAKl(IC50) é de pelo menos 5, pelo menos 10, pelo menos 12.

[034] Em outra modalidade, a razão de JAK3(IC50)/JAKl(IC50) é de pelo menos 1000 ou pelo menos 750 ou pelo menos 500.

[035] Em outra modalidade, a dose diária do composto é de cerca de 0,001

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7/42 mg/kg a cerca de 100 mg/kg ou cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 10 mg/kg ou cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 3,0 mg/kg ou cerca de 0,2 mg/kg a cerca de 1,0 mg/kg de peso corporal.

[036] Evidências que dão suporte à inibição e seletividade de JAK1 [037] Resultados de ensaios clínicos com vários inibidores de JAKTofacitinib (JAK1/JAK2/JAK3) (Kremer et al., Arthritis and Rheumatism 2009 The safety and efficacy of a JAK inhibitor in patients with active RA, Fleishman et al, Arthritis and Rheumatism 2010 Tofacitinib in patients with active RA, Fleishman et al, NEJM 2012 Placebo controlled trial of Tofacitinib monotherapy in RA) e Baricitinibe (JAK1/JAK2) (Greenwald et al, ACR annual meeting Nov 2010 A randomized dose-ranmging, PBO-controlled study of TNCB028050, a selective JAK1 and JAK2 inhibitor, in subjects with active RA) dão suporte à hipótese de que altos níveis de eficácia podem ser alcançados tendo como alvo a inibição de JAK. No entanto, os efeitos adversos limitantes da dose limitaram a eficácia e o uso desses agentes. Foram observados EAs hematopoiéticos significativos, especificamente anemia, em doentes recebendo Tofacitinib e Baricitinib, com uma maior incidência e gravidade em doses mais elevadas. Pode ser previsto que isso se deve à inibição da sinalização de EPO, um fator de crescimento crítico para o desenvolvimento de eritrócitos que sinaliza a via de JAK2. A inibição de EPO também leva a uma incapacidade de se recuperar da anemia de doença crônica. Aproximadamente 40% dos pacientes com RA sofrem de anemia de doença crônica (Masson. Joint Bone Spine 2011 Rheumatopid Anemia, Han et al, J Rheumatology 2007 Association of anemia and physical disability among patients with RA). O atual paradigma de tratamento é tratar a inflamação que causa esta anemia, no entanto, o tratamento com multi-inibidores de JAK que também inibem a sinalização de EPO anula os benefícios nos níveis de hemoglobina do tratamento da inflamação. Os inibidores de JAK1 específicos

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8/42 não afetariam a sinalização de EPO, não seriam limitados pelos EAs da anemia e permitiríam que os níveis de hemoglobina se recuperassem após a reversão da inflamação.

[038] A evidência clínica adicional que dá suporte à hipótese de que JAK1 vem do Tocilizumabe, um anticorpo que tem como alvo o receptor de IL-6 (a IL6 sinaliza através de JAK1 e JAK2). Altos níveis de eficácia são alcançados com este agente biológico sem induzir anemia, e a anemia da inflamação é revertida com sucesso (Emery et al, Ann Rheum Dis 2008 IL-6 receptor inhibition with tocilizumab improves treatment outcomes in patients with RA refractory to antiTNF biologicals: results of a 24-week multicenter randomized placebo-controlled trial·', Mashizume et al, Rheumatol Int. 2010 Tocilizumab, a humanized anti-IL6 receptor antibody, improved anemia in monkey arthritis by suppressing IL-6 induced hepcidin production).

[039] Paciente, tal como é aqui utilizado, refere-se a um mamífero que foi objeto de tratamento, observação ou experimento.

[040] Mamífero significa animais mamíferos. O mamífero pode ser macho ou fêmea. O mamífero pode ser um ou mais selecionados do grupo que consiste em seres humanos, bovinos (por exemplo, vacas), suínos (por exemplo, porcos), ovinos (por exemplo, ovelhas), caprinos (por exemplo, cabras), equinos (por exemplo, cavalos), caninos (por exemplo, cães domésticos), felinos (por exemplo, gatos domésticos), lagomorfos (coelhos), roedores (por exemplo, ratos ou camundongos), Procyon lotor (por exemplo, guaxinins). Em modalidade particulares, o mamífero é um animal doméstico (por exemplo, canino, felino ou equino).

[041] Quantidade terapeuticamente eficaz significa a quantidade de um fármaco ou agente farmacêutico que desencadeia a resposta biológica ou médica de um tecido, sistema, animal ou humano que está sendo buscada por

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9/42 um pesquisador, veterinário, médico ou outro clínico.

[042] O termo tratamento ou tratar inclui aliviar, melhorar, atenuar ou reduzir os sinais e sintomas associados a uma doença ou distúrbio.

[043] O termo composição, como em composição farmacêutica, destinase a abranger um produto que compreende o(s) ingrediente(s) ativo(s), e o ingrediente(s) inerte(s) (excipientes farmaceuticamente aceitáveis) que forma(m) o veículo, assim como qualquer produto que resulte, direta ou indiretamente, da combinação, complexação ou agregação de quaisquer dois ou mais dos ingredientes, ou da dissociação de um ou mais dos ingredientes, ou de outros tipos de reações ou interações de um ou mais dos ingredientes. Consequentemente, as composições farmacêuticas da presente invenção abrangem qualquer composição feita por mistura de um composto de fórmula I e excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

Isômeros Ópticos - Diastereômeros - Isômeros Geométricos - Tautômeros [044] Os compostos de fórmula I contêm um ou mais centros assimétricos e podem assim ocorrer como racematos e misturas racêmicas, enantiômeros únicos, misturas diastereoméricas e diastereômeros individuais. A presente invenção destina-se a compreender todas essas formas isoméricas dos compostos de fórmula I, como espécies únicas ou misturas das mesmas.

[045] Alguns dos compostos aqui descritos contêm ligações duplas olefínicas e, a menos que especificado de outro modo, pretende incluir os isômeros geométricos E como Z.

[046] As modalidades específicas da presente invenção incluem um composto que é selecionado a partir do grupo que consiste dos compostos objetos dos exemplos aqui ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[047] Os compostos da presente invenção podem conter um ou mais centros assimétricos e podem assim ocorrer como estereoisômeros incluindo

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10/42 racematos e misturas racêmicas, misturas enantioméricas, enantiômeros únicos, misturas diastereoméricas e diastereômeros individuais. Cada tal centro assimétrico produzirá independentemente dois isômeros ópticos e pretende-se que todos os possíveis isômeros ópticos e diastereômeros em misturas e como compostos puros ou parcialmente purificados estejam incluídos no escopo desta invenção. A presente invenção destina-se a compreender todas essas formas isoméricas destes compostos. Quando as ligações ao carbono quiral são representados como linhas retas nas Fórmulas da invenção, entende-se que ambas as configurações (R) e (S) de carbono quiral, e, portanto, ambos os enantiômeros e misturas dos mesmos, estão abrangidos no escopo da Fórmula. Por exemplo, a Fórmula I mostra a estrutura da classe de compostos sem estereoquímica específica. Quando os compostos da presente invenção contêm um centro quiral, o termo estereoisômero inclui ambos os enantiômeros e misturas de enantiômeros, tais como a mistura específica 50:50 referida como misturas racêmicas.

[048] As misturas diastereoméricas podem ser separadas nos seus diastereômeros individuais com base nas suas diferenças físico-químicas por métodos bem conhecidos dos especialistas na técnica, tais como, por exemplo, por cromatografia e/ou cristalização fracionada. Os enantiômeros podem ser separados convertendo a mistura enantiomérica em uma mistura diastereomérica por reação com um composto opticamente ativo apropriado (por exemplo, auxiliar quiral tal como um álcool quiral ou cloreto de ácido de Mosher), separando os diastereômeros e convertendo (por exemplo, hidrolisando) os diastereômeros individuais aos enantiômeros puros correspondentes. Os enantiômeros podem também ser separados por utilização de coluna de HPLC quiral.

[049] Os centros quirais da presente invenção podem ter a configuração S

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11/42 ou R conforme definido pelas Recomendações IUPAC 1974. O uso dos termos sal, solvato, éster, pró-fármaco e semelhantes, destina-se a serem aplicados igualmente ao sal, solvato, éster e pró-fármaco de enantiômeros, estereoisômeros, rotâmeros, tautômeros, isômeros posicionais, racematos ou pró-fármacos dos compostos da invenção.

Sais [050] O termo sais farmaceuticamente aceitáveis refere-se a sais preparados a partir de bases não tóxicas farmaceuticamente aceitáveis incluindo bases inorgânicas e bases orgânicas. Os sais derivados de bases inorgânicas incluem sais de alumínio, amônio, cálcio, cobre, férrico, ferroso, lítio, magnésio, mangânico, manganoso, potássio, sódio, zinco e semelhantes. Os sais derivados de bases orgânicas não tóxicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas e resinas de troca iônica básicas, tais como arginina, betaína, cafeína, colina, Ν,Ν'-dibenziletilenodiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenodiamina, N-etil-morfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina e semelhantes.

[051] Quando o composto da presente invenção é básico, os sais podem ser preparados a partir de ácidos não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis, incluindo ácidos inorgânicos e orgânicos. Tais ácidos incluem ácido acético, benzenossulfônico, benzoico, canforsulfônico, cítrico, etanossulfônico, fumárico, glucônico, glutâmico, bromídrico, clorídrico, isetiônico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanossulfônico, mucíco, nítrico, pamoico, pantotênico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, p-toluenossulfônico e

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[052] Será entendido que, salvo indicação em contrário, as referências ao composto de fórmula I, assim como os compostos específicos, devem também incluir os sais farmaceuticamente aceitáveis.

[053] Além disso, algumas das formas cristalinas para os compostos da presente invenção podem existir como polimorfos e, como tal, todas as formas destinam-se a ser incluídas na presente invenção. Além disso, alguns dos compostos da presente invenção podem formar solvatos com água (hidratos) ou solventes orgânicos comuns. Tais solvatos estão abrangidos no escopo desta invenção.

Compostos marcados [054] Nos compostos de Fórmula I genérica, os átomos podem exibir sua abundância isotópica natural, ou um ou mais dos átomos pode ser artificialmente enriquecido em um isótopo particular, tendo o mesmo número atômico, mas com uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa predominantemente encontrado na natureza. A presente invenção está destinada a incluir todas as variações isotópicas adequadas dos compostos da Fórmula I genérica. Por exemplo, formas isotópicas diferentes de hidrogênio (H) incluem prótio (1H) e deutério (2H). O prótio é o isótopo de hidrogênio predominante encontrado na natureza. O enriquecimento para deutério pode proporcionar certas vantagens terapêuticas, tais como aumentar a meia-vida in vivo ou reduzir os requisitos de dosagem, ou pode fornecer um composto útil como padrão para caracterização de amostras biológicas. Os compostos isotopicamente enriquecidos da Fórmula I genérica podem ser preparados sem experimentação indevida através de técnicas convencionais bem conhecidas dos especialistas na técnica ou por processos análogos aos descritos nos Esquemas e Exemplos aqui apresentados, utilizando

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13/42 reagentes e/ou intermediários apropriados isotopicamente enriquecidos.

Utilidades [055] O composto de fórmula I ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis e composições farmacêuticas podem ser utilizados para tratar ou prevenir uma variedade de condições ou doenças mediadas por Janus quinases, em particular doenças ou condições que podem ser melhoradas pela inibição de uma Janus quinase tal como JAK1, JAK2 ou JAK3. Tais condições e doenças incluem, mas não estão limitados a:

[056] (1) artrite, incluindo artrite reumatoide, artrite juvenil e artrite psoriática; (2) asma e outras doenças obstrutivas das vias aéreas, incluindo asma crônica, asma tardia, hiperresponsividade das vias aéreas, bronquite, asma brônquica, asma alérgica, asma intrínseca, asma extrínseca, asma de poeira, obstrução recorrente das vias aéreas e doença pulmonar obstrutiva crônica, incluindo enfisema; (3) doenças ou distúrbios autoimunes, incluindo aquelas designadas como doenças autoimunes do tipo órgão único ou célula única, por exemplo, tireoidite autoimune, anemia hemolítica autoimune, gastrite atrófica autoimune de anemia perniciosa, encefalomielite autoimune, orquite autoimune, trombocitopenia autoimune, oftalmia simpática, miastenia gravis, doença de Graves, cirrose biliar primária, hepatite agressiva crônica, colite ulcerativa e glomerulopatia membranosa, aquelas designadas como envolvendo distúrbio autoimune sistêmico, por exemplo, lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide, sindrome semelhante a Sjogren, polimiosite e dermatomiosite, esclerose sistêmica, poliarterite nodosa e pênfigo, e doenças autoimunes adicionais, que podem ser baseadas em células B (humorais) ou em células T, incluindo espondilite anquilosante, granulomatose de Wegener, alopecia autoimune, diabetes tipo I ou de início juvenil e tireoidite; (4) os cânceres ou tumores, incluindo câncer alimentar/do trato gastrointestinal,

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14/42 câncer de cólon, câncer de fígado, câncer de pele, incluindo tumor de células mastro e carcinoma de células escamosas, câncer de mama e mamário, câncer de ovário, câncer de próstata, linfoma, leucemia, incluindo a leucemia mielogênica aguda e leucemia mieloide crônica, câncer renal, câncer de pulmão, câncer dos músculos, câncer de osso, câncer da bexiga, câncer cerebral, melanoma, incluindo melanoma oral e metastático, sarcoma de Kaposi, mielomas incluindo o mieloma múltiplo, distúrbios mieloproliferativas, retinopatia diabética proliferativa, e distúrbios associados angiogênicos incluindo tumores sólidos; (5) diabetes, incluindo diabetes tipo I e complicações do diabetes; (6) doenças, distúrbios ou condições oculares incluindo doenças autoimunes do olho, ceratoconjuntivite, conjuntivite vernal, uveíte e uveíte induzida por lente, ceratite, ceratite herpética, ceratite cônica, distrofia epitelial da córnea, ceratoleucoma, pênfigo ocular, esclerite, Síndrome do tipo VogtKoyanagi-Harada, ceratoconjuntivite seca (olho seco), flictênula, iridociclite, sarcoidose, oftalmopatia endócrina, oftalmite simpática, conjuntivite alérgica e neovascularização ocular; (7) alergias, condições ou inflamações intestinais, incluindo doença de Crohn e/ou a colite ulcerativa, doença inflamatória do intestino, doença celíaca, proctite, gastroenterite eosinofílica, e mastocitose; (8) doenças neurodegenerativas, incluindo a doença do neurônio motor, síndrome de disfunção cognitiva, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, isquemia cerebral, ou doença neurodegenerativa causada por lesão traumática, ataque, neurotoxicidade do glutamato ou hipóxia; lesão isquêmica/reperfusão, em acidente vascular cerebral, isquemia miocárdica, isquemia renal, ataques de coração, hipertrofia cardíaca, aterosclerose e arteriosclerose, hipóxia dos órgãos, e agregação de plaquetas; (9) doenças, condições ou distúrbios de pele, incluindo dermatite atópica, eczema, psoríase, esclerodermia, prurido e outras condições pruriginosas; (10) reações alérgicas incluindo anafilaxia, rinite

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15/42 alérgica, dermatite alérgica, urticária alérgica, angioedema, asma alérgica ou reação alérgica a picadas de insetos, alimentos, fármacos ou pólen; (11) rejeição de transplante, incluindo rejeição de transplante de ilhotas de pâncreas, rejeição de transplante de medula óssea, doença de enxerto contra hospedeiro, rejeição de órgãos e células transplantadas, como medula óssea, cartilagem, córnea, coração, disco intervertebral, ilhota, rim, membro, fígado, pulmão, músculo, mioblastos, nervos, pâncreas, pele, intestino delgado ou traqueia e xenotransplante.

[057] Por conseguinte, outro aspecto da presente invenção provê um método para o tratamento ou prevenção de uma doença ou distúrbio mediado por JAK compreendendo a administração a um mamífero em necessidade do mesmo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula I. Em uma modalidade, tais doenças incluem asma e artrite reumatoide. Em outra modalidade, a doença é dermatite atópica.

[058] Outro aspecto da presente invenção provê o uso de um composto de fórmula I na fabricação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença ou distúrbio mediado por JAK.

Faixas de doses [059] A grandeza da dose profilática ou terapêutica de um composto de fórmula I variará, naturalmente, com a natureza e a gravidade da condição a ser tratada e com o composto particular de fórmula I e a sua via de administração. Também variará de acordo com uma variedade de fatores, incluindo idade, peso, estado geral de saúde, sexo, dieta, tempo de administração, taxa de excreção, combinação de fármacos e resposta do paciente individual. Em geral, a dose diária varia entre cerca de 0,001 mg e cerca de 100 mg por kg de peso corporal de um mamífero, preferencialmente entre 0,01 mg e cerca de 10 mg por kg. Em outra modalidade, a dose diária é de cerca de 0,2 mg por kg a cerca de 1,0 mg/kg

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16/42 de peso corporal de um mamífero. Em outra modalidade, a dose diária é de cerca de 0,1 mg por kg a cerca de 3,0 mg/kg de peso corporal de um mamífero. Por outro lado, pode ser necessário usar dosagens fora desses limites em alguns casos.

[060] A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com os materiais carreadores para produzir uma forma de dosagem única irá variar dependendo do hospedeiro tratado e do modo particular de administração. Por exemplo, uma formulação destinada à administração oral pode conter de 0,05 mg a 5 g de agente ativo composto com uma quantidade apropriada e conveniente de material carreador que pode variar de cerca de 5 a cerca de 99,95 por cento da composição total. As formas unitárias de dosagem contêm geralmente entre cerca de 0,1 mg e cerca de 0,4 g de um ingrediente ativo, tipicamente 0,5 mg, 1 mg, 2 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg ou 400 mg.

Composições farmacêuticas [061] Outro aspecto da presente invenção provê composições farmacêuticas compreendendo um composto de fórmula I com um veículo farmaceuticamente aceitável. Os veículos e excipientes de formulação fisiologicamente aceitáveis são conhecidos na técnica e são descritos por exemplo em Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20a Edição, 2000). Todos esses ingredientes, veículos e excipientes devem ser substancialmente farmaceuticamente ou veterinariamente puros e não tóxicos nas quantidades usadas e devem ser compatíveis com os ingredientes farmaceuticamente ativos (isto é, o composto de Fórmula I). Para o tratamento de qualquer uma das doenças, o composto de fórmula I pode ser administrado oralmente, por spray de inalação, topicamente, parentericamente ou rectalmente em formulações de dosagem unitária contendo veículos, adjuvantes

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17/42 e carreadores convencionais não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis. O termo parentérico, tal como aqui utilizado, inclui injeções subcutâneas, intravenosas, intramusculares, injeção intraesternal ou técnicas de infusão. Além do tratamento de animais de sangue quente, tais como camundongos, ratos, cavalos, gado, ovelhas, cães, gatos, etc., o composto da invenção é eficaz no tratamento de humanos.

[062] As composições farmacêuticas contendo o ingrediente ativo podem estar em uma forma adequada para utilização oral, por exemplo, como comprimidos, trociscos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós ou grânulos dispersíveis, emulsões, cápsulas duras ou moles, ou xaropes ou elixires. As composições destinadas para uso oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica para a fabricação de composições farmacêuticas e tais composições podem conter um ou mais agentes selecionados a partir do grupo que consiste de agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes corantes e agentes conservantes, para prover preparações farmaceuticamente refinadas e saborosas. Os comprimidos contêm o ingrediente ativo em mistura com excipientes não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis que são adequados para a fabricação de comprimidos. Estes excipientes podem ser, por exemplo, diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, por exemplo, amido de milho, ou ácido algínico; agentes aglutinantes, por exemplo amido, gelatina ou acácia, e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos por técnicas conhecidas para retardar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e, assim, prover uma ação sustentada durante um período mais longo. Por exemplo, pode ser utilizado um material retardante, tal como monoestearato de

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18/42 gliceril ou diestearato de gliceril. Eles podem também ser revestidos pela técnica descrita na Patente dos EUA 4.256.108; 4.166.452; e 4.265,.874 para formar comprimidos terapêuticos osmóticos para liberação controlada.

[063] As formulações para uso oral também podem ser apresentadas como cápsulas duras de gelatina em que o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulino, ou como cápsulas de gelatina mole em que os ingredientes ativos são misturados com solventes miscíveis em água tais como propilenoglicol, PEG e etanol, ou um meio de óleo, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida ou óleo de oliva.

[064] As suspensões aquosas contêm o material ativo em mistura com excipientes adequados para a fabricação de suspensões aquosas. Tais excipientes são agentes de suspensão, por exemplo carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto e goma de acácia; agentes dispersantes ou umidificantes podem ser um fosfatídeo de ocorrência natural, por exemplo lecitina, ou produtos de condensação de um óxido de alquileno com ácidos graxos, por exemplo estearato de polioxietileno, ou produtos de condensação de óxido de etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo heptadecaetilenoxicetanol ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e um hexitol tal como mono-oleato de polioxietileno sorbitol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, mono-oleato de polietileno sorbitano. As suspensões aquosas também podem conter um ou mais conservantes, por exemplo etil, ou n-propil, phidroxibenzoato, um ou mais agentes corantes, um ou mais agentes aromatizantes, e um ou mais agentes edulcorantes, tais como sacarose, sacarina

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19/42 ou aspartame.

[065] Suspensões oleosas podem ser formuladas suspendendo o ingrediente ativo em um óleo vegetal, por exemplo óleo de amendoim, óleo de oliva, óleo de sésamo ou óleo de coco, ou em óleo mineral tal como parafina líquida. As suspensões oleosas podem conter um agente espessante, por exemplo cera de abelha, parafina dura ou álcool cetílico. Os agentes edulcorantes tais como os apresentados acima, e agentes aromatizantes podem ser adicionados para prover uma preparação oral saborosa. Estas composições podem ser conservadas pela adição de um antioxidante tal como o ácido ascórbico.

[066] Os pós e grânulos dispersíveis adequados para a preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água proveem o ingrediente ativo em mistura com um agente dispersante ou umidificante, agente de suspensão e um ou mais conservantes. Os agentes dispersantes ou umidificantes e agentes de suspensão adequados são exemplificados pelos já mencionados acima. Excipientes adicionais, por exemplo agentes edulcorantes, aromatizantes e corantes, podem também estar presentes.

[067] As composições farmacêuticas da invenção podem também estar na forma de uma emulsão de óleo em água. Afase oleosa pode ser um óleo vegetal, por exemplo óleo de oliva ou óleo de amendoim, ou um óleo mineral, por exemplo parafina líquida ou misturas dos mesmos. Agentes emulsionantes adequados podem ser fosfatídeos de ocorrência natural, por exemplo soja, lecitina e ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo mono-oleato de sorbitano, e produtos de condensação dos ditos ésteres parciais com óxido de etileno, por exemplo mono-oleato de polioxietileno sorbitano. As emulsões podem também conter agentes edulcorantes e aromatizantes.

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20/42 [068] Os xaropes e elixires podem ser formulados com agentes edulcorantes, por exemplo glicerol, propilenoglicol, sorbitol ou sacarose. Tais formulações podem também conter um demulcente, um conservante, e agentes aromatizantes e corantes. As composições farmacêuticas podem estar na forma de uma suspensão aquosa ou oleaginosa injetável estéril. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida utilizando os agentes dispersantes ou umidificantes adequados e agentes de suspensão que foram mencionados acima. A preparação injetável estéril pode também ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente não tóxico parentericamente aceitável, por exemplo, como uma solução em 1,3butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser utilizados estão a água, solução de Ringer e solução isotônica de cloreto de sódio. Também podem ser utilizados co-solventes, tais como etanol, propilenoglicol ou polietilenoglicóis. Além disso, os óleos fixos estéreis são convencionalmente utilizados como solvente ou meio de suspensão. Para este fim, qualquer óleo fixo brando pode ser utilizado incluindo mono ou diglicerídeos sintéticos. Além disso, ácidos graxos como o ácido oleico são utilizados na preparação de injetáveis.

[069] Os compostos de fórmula I podem também ser administrados na forma de supositórios para administração retal do fármaco.

[070] Para uso tópico, são utilizados cremes, pomadas, géis, soluções ou suspensões, etc., contendo o composto de fórmula I. (Para fins desta aplicação, a aplicação tópica deve incluir enxaguantes bucais e gargarejos). As formulações tópicas podem geralmente ser constituídas por um veículo farmacêutico, cosolvente, emulsificante, intensificador de penetração, sistema conservante e emoliente.

[071] Em uma modalidade alternativa, as composições da presente

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21/42 invenção podem ser formuladas para administração oftálmica.

Combinações com Outros Fármacos [072] Para o tratamento e prevenção de doenças mediadas por JAK, o composto de fórmula I pode ser coadministrado com outros agentes terapêuticos. Assim, em outro aspecto, a presente invenção provê composições farmacêuticas para o tratamento de doenças mediadas por JAK compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula I e um ou mais outros agentes terapêuticos. Em particular, para o tratamento das doenças inflamatórias de artrite reumatoide, psoríase, doença inflamatória intestinal, COPD, asma e rinite alérgica de um composto de fórmula I podem ser combinados com agentes tais como: (1) inibidores de TNF-α tais como Remicade® e Enbrel®); (2) inibidores de COX-I / COX-2 não seletivos (tais como piroxicam, diclofenac, ácidos propiônicos tais como naproxeno, flubiprofeno, fenoprofeno, cetoprofeno e ibuprofeno, fenamatos tais como ácido mefenâmico, indometacina, sulindac, apazona, pirazolonas tais como fenilbutazona, salicilatos tais como aspirina); (3) inibidores de COX-2 (tais como meloxicam, celecoxibe, rofecoxibe, valdecoxibe e etoricoxibe); (4) outros agentes para o tratamento de artrite reumatoide, incluindo metotrexato de dose baixa, lefunomida, ciclesonida, hidroxicloroquina, d-penicilamina, auranofina ou ouro parentérico ou oral; (5) inibidor da biossíntese do leucotrieno, inibidor da 5-lipoxigenase (5-LO) ou antagonista da proteína ativadora de 5-lipoxigenase (FLAP) tal como zileuton; (6) antagonista do receptor de LTD4 tal como zafirlucaste, montelucaste e pranlukast; (7) inibidor de PDE4 tal como roflumilaste; (8) antagonistas do receptor H1 anti-histamínico tais como cetirizina, loratadina, desloratadina, fexofenadina, astemizol, azelastina e clorfeniramina; (9) agente simpaticomimético vasoconstritor agonista de oil- e a2-adrenoceptores, tais como propil-hexedrina, fenilefrina, fenilpropanolamina,

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22/42 pseudoefedrina, cloridrato de nafazolina, cloridrato de oximetazolina, cloridrato de tetrahidrozolina, cloridrato de xilometazolina e cloridrato de etilnorepinefrina; (10) agentes anticolinérgicos, tais como brometo de ipratrópio, brometo de tiotrópio, brometo de oxitrópio, brometo de aclidínio, glicopirrolato, pirenzepina, e telenzepina; (11) agonistas de β-adrenoceptores, tais como metaproterenol, isoproterenol, isoprenalina, albuterol, salbutamol, formoterol, salmeterol, terbutalina, orciprenalina, mesilato de bitolterol e pirbuterol, ou metilxantaninas incluindo teofilina e aminofilina, cromoglicato de sódio; (12) mimético de fator de crescimento semelhante à insulina tipo 1 (IGFI); (13) glicocorticoide inalado com efeitos secundários sistêmicos reduzidos, tais como prednisona, prednisolona, flunisolida, triamcinolona acetonida, dipropionato de beclometasona, budesonida, propionato de fluticasona, ciclesonida e furoato de mometasona.

MÉTODOS DE SÍNTESE

ESQUEMAS E EXEMPLOS [073] As abreviaturas usadas aqui têm os seguintes significados tabulados. As abreviaturas não tabuladas abaixo têm seus significados como comumente usados, a menos que especificamente indicado de outra forma.

ACN	Acetonitrila
SFC quiral	cromatografia fluida supercrítica quiral
DBU	l,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno
DCM	Diclorometano
DMSO	dimetilsulfóxido
DTT	Treo-l,4-dimercapto-2,3-butanodiol (reagente de Cleland)
EtOAc	acetato de etila
GST	Glutationa S-transferase

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23/42

HEPES	Ácido 4-(2-hidroxietil)piperazina-l- etanossulfônico, N-(2-hidroxietil)piperazina-N'(ácido 2-etanossulfónico)
HTRF	fluorescência resolvida no tempo homogênea
HPLC	cromatografia líquida de alta eficiência
LCMS	cromatografia líquida com espectrômetro de massa
MPLC	cromatografia líquida de média eficiência
Na2SÜ4	sulfato de sódio
NaOMe	Metóxido de sódio
Pd2(dba)3	tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (0)
POCb	oxicloreto de fósforo(V)
t-BuOH	terc-butanol
THF	tetra-hidrofurano
X-Phos	2-diciclo-hexilfosfino-2',4',6'-tri- isopropilbifenil
MeYBu-X-Phos	di-terc-butil[3,4,5,6-tetrametil-2^,,4^,,6^l- tri(propan-2-il)bifenil-2-il]fosfano
RMN	ressonância magnética nuclear
TLC	cromatografia em camada fina
TMS	Trimetilsilano
TRF	fluorescência resolvida no tempo

Abreviações do Grupo Alquil

Me	Metil
Et	Etil

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24/42

n-Pr	propil normal
i-Pr	Isopropil
n-Bu	Butil normal
i-Bu	Isobutil
s-Bu	Butil secundário
t-Bu	Butil terciário
c-Pr	Ciclopropil
c-Bu	Ciclobutil
c-Pen	Ciclopentil
c-Hex	Ciclo-hexil

MÉTODOS DE SÍNTESE [074] Os compostos da presente invenção podem ser preparados de acordo com os seguintes esquemas gerais utilizando materiais apropriados, e são adicionalmente exemplificados pelos exemplos específicos subsequentes. Os compostos ilustrados nos exemplos não devem ser interpretados como formando o único gênero que é considerado como a invenção. Os Exemplos ilustrativos abaixo, portanto, não estão limitados pelos compostos listados ou por quaisquer substituintes particulares utilizados para fins ilustrativos. A numeração de substituintes tal como mostrada nos esquemas não se correlaciona necessariamente com a utilizada nas reivindicações e muitas vezes, para clareza, é apresentado um único substituinte ligado ao composto onde múltiplos substituintes são permitidos sob as definições da presente invenção aqui acima.

[075] Os especialistas na técnica entenderão prontamente que variações conhecidas das condições e processos dos procedimentos preparativos seguintes podem ser usadas para preparar estes compostos. A invenção será agora ilustrada nos seguintes Exemplos não limitativos nos quais, salvo indicação

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25/42 em contrário:

[076] Todas as reações foram agitadas (mecanicamente, barra de agitação/placa de agitação, ou balançadas) e conduzidas sob uma atmosfera inerte de nitrogênio ou argônio, salvo indicação em contrário.

[077] Todas as temperaturas são graus Celsius (°C), salvo indicação em contrário.

[078] A temperatura ambiente é de 15-25°C.

[079] A maioria dos compostos foram purificados por HPLC preparativa de fase reversa, MPLC em silica gel, recristalização e/ou swish (suspensão em um solvente seguido de filtração do sólido).

[080] O curso das reações foi acompanhado por cromatografia em camada fina (TLC) e/ou LCMS e/ou RMN e os tempos de reação são dados apenas para ilustração.

[081] Todos os produtos finais foram analisados por RMN e LCMS.

[082] Os intermediários foram analisados por RMN e/ou TLC e/ou LCMS.

Método 1

MATERIAIS COMERCIALMENTE DISPONÍVEIS/ANTERIORMENTE DESCRITOS [083] A tabela seguinte lista fontes comerciais e vias sintéticas descritas anteriormente para materiais químicos empregues na síntese de intermediários, e Exemplos da presente invenção. A lista não pretende ser exaustiva, exclusiva ou limitadora de qualquer forma.

Estrutura	Nome IUPAC	Fornecedor
0		J&W
	tetra-hidro-2/-/-piran-3carbaldeído	Pharmlab
' o^z		LLC

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26/42

H \ \ ° O--/

tetra-hidro-2/-/-piran-4- ilacetaldeído

Maybridge

INTERMEDIÁRIOS [084] Os seguintes procedimentos experimentais detalham a preparação de materiais químicos utilizados na síntese de Exemplos da presente invenção. Os procedimentos exemplificados são apenas para fins ilustrativos e não pretendem limitar o escopo da presente invenção de qualquer forma.

Esquema da Síntese:

_____________OCM____________j

POCh, Plddina

ftsâns.. tsc<íww)

SFC

Cwmstogrsfe

(trsm, qtífrôí)

Intermediário 2: 3,6-Di-hidro-2H-pirano-4-carbonitrila

[085] A uma solução de cianeto de trimetilsilil (28,0 g, 288 mmol) em diclorometano (100 mL) adicionou-se sequencialmente tetra-hidro-4H-piran-4 ona 1 (24 g, 243 mmol) e triflato de trimetilsilil (1,6 g, 7,2 mmol) a 0°C. A solução

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27/42 resultante foi agitada a 0°C durante 1 hora antes da adição de piridina (300 mL) e cloreto de fosforil (110 g, 719 mmol). A mistura foi submetida a refluxo durante 12 horas e depois vertida para uma mistura de solução aquosa de ácido clorídrico 2 N (600 mL), gelo triturado (180 mL) e éter (600 mL) a 0°C. A mistura foi agitada vigorosamente durante 15 minutos e depois extraída com éter (3x1 L). Toda a solução orgânica foi lavada com salmoura (2x300 mL), seca sobre sulfato de sódio anidro e concentrada a vácuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash com 1-2% de acetato de etila em hexano para produzir o composto do título como um óleo amarelo. RMN ^XH (300 MHz, CDCh) δ 6,62 - 6,59 (m, 1H), 4,29 - 4,21 (m, 2H), 3,78 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 2,34 - 2,30 (m, 2H).

Intermediário 5: 3-Amino-l-((3/?,4S) ou (3S,4/?)-4-ciano-tetra-hidro-2Hpirano-3-il)-lH-pirazol-4-carboxamida h₂n [086] Uma mistura de 3-amino-lH-pirazol-4-carboxamida 4 (804 g, 4,59 mol), 3,6-di-hidro-2H-pirano-4-carbonitrila 2 (1000 g, 9,17 mol) e DBU (2435 g, 16 mol) em etanol (800 mL) foi agitada a 70°C durante a noite sob nitrogênio, e depois concentrada a vácuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de silica gel com metanol a 2-5% em diclorometano para produzir uma mistura racêmica do composto do título e o seu enantiômero como um sólido amarelo (269 g, 25% de rendimento).

[087] Separação quiral: 380 g do composto racêmico foram dissolvidos em ACN/MeOH (1:1) a uma concentração de 25 mg/mL. Injeções de 16 mL foram feitas em uma SFC preparativa Thar 350 (Coluna: ChiralPak IC-10 μΜ, 300x50mm; Fase móvel: 45% 2-propanol, 55% CO2; Vazão: 220 mL/min; Temperatura da coluna: 38 °C). Após separação, as frações foram secas por

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28/42 evaporação rotativa. O segundo pico (eluição mais lenta) foi usado para preparar os seguintes compostos.

[088] RMN ^XH (500 MHz, DMSO-d₆) δ 8,03 (s, 1H), 7,36 (brs, 1H), 6,80 (brs, 1H), 5,36 (s, 2H), 4,86-4,31 (td, J = 10,5, 4,5 Hz, 1H), 3,91-3,88 (dd, J = 11,5, 4,5 Hz 1H), 3,86 - 3,83 (m, 1H), 3,53-3,50 (m, 2H), 3,39-3,33 (td, J = 11,5, 2 Hz, 1H), 2,10-2,07 (m, 1H), 1,95-1,87 (m, 1H). LRMS (ESI) calculado para C10H14N5O2 [M+H]⁺: 236, encontrado: 236.

Intermediário 10: 2,6-difluoro-4-hidrazinilpiridina h₂n

HN [089] A um balão de fundo redondo seco no forno com barra de agitação magnética, sob uma atmosfera de N2 2,4,6-trifluoropiridina 9 (7 g, 52,6 mmol, 1 equiv.), THF (52,6 mL, 1 M), e hidrazina (5,1 mL, 105 mmol, 2 equiv.) foram adicionados. A mistura reacional foi aquecida a 50°C durante 2 h e depois resfriada à temperatura ambiente. O material bruto foi triturado com água (2 x 25 mL) e hexanos (25 mL) e, depois, seco a vácuo, durante a noite. O sólido resultante foi recristalizado em EtOAc para dar 2,6-difluoro-4-hidrazinilpiridina 10 (4,5 g, 31 mmol). RMN ^XH (500 MHz, DMSO-d₆) δ 8,42 (s, 1H), 6,16 (brs, 2H),

4,46 (s, 2H).

Intermediário 11: 4-bromo-2,6-difluoropiridina

Br [090] A um balão de fundo redondo seco no forno com barra de agitação magnética, sob uma atmosfera de N2 2,6-difluoro-4-hidrazinilpiridina 10 (13,24 g, 91 mmol), e clorofórmio (97 mL, 0,78 M) foram adicionados seguido por

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29/42 adição gota a gota (através de funil de adição) de bromo (9,40 mL, 182 mmol, 2 equiv.) à temperatura ambiente. A mistura reacional foi aquecida em refluxo durante 6 h e depois resfriada até a temperatura ambiente e filtrada através de Celite. O filtrado foi lavado com solução sal. aq. de NazCCh (25 mL), salmoura (25 mL), seco sob NazSCU, e depois filtrado através de celite e concentrado a vácuo. A 4-bromo-2,6-difluoropiridina 11 bruta (11,8 g, 60,8 mmol) foi utilizada sem purificação adicional. RMN ^XH (500 MHz, CDCh) δ 7,04 (s, 2H).

Intermediário 8: 4-bromo-2-fluoro-6-metoxipiridina

OMe

F [091] A um balão de fundo redondo seco no forno com barra de agitação magnética, sob uma atmosfera de N2, 4-bromo-2,6-difluoropiridina 11 (10,8 g,

55,7 mmol) e metanol (111 mL, 0,5 M) foram adicionados seguidos por metóxido de sódio (10,83 g, 50,1 mmol, 0,9 equiv.) à temperatura ambiente. A mistura reacional foi aquecida a 40 °C durante lhe depois resfriada à temperatura ambiente. A suspensão foi particionada entre EtAOc (100 mL) e água (50 mL). Os compostos orgânicos foram lavados com salmoura (25 mL), secos sobre Na2SÜ4, filtrados através de celite, e concentrados a vácuo. O resíduo bruto foi purificado utilizando cromatografia em coluna (0-100% de EtOAc em hexano, gradiente), para produzir 4-bromo-2-fluoro-6-metoxipiridina 8 (7,29 g, 35,4 mmol). RMN ^XH (500 MHz, CDCb) δ 7,77 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 3,86 (2, 3H).

Exemplo 1: 1-((3R,4S) ou (3S,4/?)-4-cianotetra-hidro-2H-pirano-3-il)-3-((2fluoro-6-metoxipiridin-4-il)amino)-lH-pirazol-4-carboxamida

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30/42 [092] Um balão de 3 bocas de 500 mL foi equipado com um condensador de refluxo e termopar J-KEM, em seguida, carregado com 3-amino-l-((3R,4S)-4cianotetra-hidro-2H-piran-3-il)-lH- pirazol-4-carboxamida 5 (10,0 g, 42,5 mmol),

4-bromo-2-fluoro-6-metoxipiridina 8 (14,1 g, 63,7 mmol), acetato de potássio (6,26 g, 63,8 mmol) e 2-propanol (150 ml). A mistura reacional foi aspergida com gás de dinitrogênio durante 20 min, em seguida, Pd2(dba)₃ (1,95 g, 2,13 mmol) e

2- di-terc-butilfosfino-2',4^,,6^,-tri-isopropilbifenil (2,00 g, 4,71 mmol) foram adicionados. A mistura reacional foi então aquecida a 80 °C durante 16,5 h. Após o resfriamento a 23° C, adicionou-se acetona (150 mL) e a mistura foi agitada durante 10 min, depois filtrada através de celite com eluição com acetona. O filtrado foi concentrado em silica gel a vácuo e purificado por meio de cromatografia em coluna flash (cartucho ISCO 220 g, eluição de gradiente com

3- 6% de metanol-dicolorometano). As frações contendo o produto foram concentradas para se obter 1-((3R, 4S) ou (3S,4R)-4-cianotetra-hidro-2H-piran-3il)-3-((2-fluoro-6-metoxipiridin-4-il)amino)-lH-pirazol-4-carboxamida como um sólido amarelo brilhante.

[093] RMN ¹H (600 MHz, DMSO-d6): δ 9,63 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,29 (s, 1H),

7,28 (s, 1H), 6,66 (d, 2H), 4,59 (m, 1H), 4,00 (m, 1H), 3,87 (m, 1H), 3,76 (s, 3H),

3,65 - 3,58 (m, 2H), 3,46 (m, 1H), 2,12 (m, 1H), 1,94 (m, 1H). LRMS (ESI) calculado para CieHiyFNeCh [M+H]⁺: 361, encontrado: 361.

ENSAIOS BIOLÓGICOS

Procedimentos experimentais

Protocolo de Ensaio Bioquímico de Enzima em HTRF de Jak [094] A capacidade dos compostos para inibir a atividade catalítica de JAK1, JAK2, JAK3 e TYK2 foi quantificada usando um domínio catalítico purificado de GST-marcado recombinante para cada uma das enzimas (InVitrogen/ Life Technologies/ ThermoFisher, n°s de catálogo: JAK1, #M4290; JAK2, #M4290;

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JAK3, #M4290; TYK2 #M4290) em ensaio bioquímico em formato HTRF. As reações empregaram um substrato peptídico comum, LCBEQEDEPEGDYFEWLW-NH2 (Merck). O protocolo básico do ensaio é o seguinte: Primeiro, 50 nL de compostos diluídos em DMSO foram distribuídos nos poços de uma placa de ensaio de 384 poços seca (Perkin Elmer Opti-plate, número de catálogo 6007290) usando um dispensador acústico Labcyte Echo 555. Adições subsequentes de reagentes empregaram um manipulador automatizado de líquidos Agilent Bravo. Em seguida, 18 μΙ_ de enzima 1,11X, adicionados na concentração mais baixa possível para se obter 10 vezes mais de um controle de fundo que manteve a reação na velocidade inicial durante o curso da reação (ver tabela abaixo) e substrato 1,11X em tampão de ensaio IX (tampão de quinase Invitrogen # PV3189, DTT 2 mM, 0,05% BSA) foram adicionados aos poços, agitados e depois incubados durante 30 minutos à temperatura ambiente para permitir a ligação do composto e atingir o equilíbrio. Após esta etapa, 2 μΙ de 10X ATP em tampão de ensaio IX foram adicionados para iniciar a reação de quinase, mantendo a concentração de ATP em uma concentração igual à Km aparente calculada para cada preparação de enzima (ver tabela abaixo) e as placas foram agitadas e depois incubadas a 23 °C durante 80 minutos. No final da incubação, foram adicionados 20 μΙ_ de tampão de paragem 2X (estreptavidina-Dylight 650 (ThermoFisher # 84547B/100mL), anticorpo pY20 marcado com Európio (Perkin Elmer # AD0067), EDTA, HEPES e Triton) para resfriar bruscamente a reação. As placas foram agitadas e centrifugadas e em seguida incubadas 60 minutos à temperatura ambiente e em seguida lidas em um Perkin Elmer Envision (Ãex = 337 nm, Ãem = 665 e 615 nm, tempo de atraso TRF = 20 qs). sinal de HTRF = 10.000 * 665 nm de leitura / 615 nm de leitura. Após a normalização para controles não tratados, foi calculada a porcentagem de inibição do sinal de HTRF em cada concentração de composto. O gráfico da

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32/42 porcentagem de inibição versus o valor de log da concentração do composto foi realizado como descrito acima para os ensaios celulares para calcular os valores de IC50. As condições da reação final foram:

Enzima	[E] (nM)	[peptídeo] (μΜ)	[ATP] (μΜ)	[EupY20] (nM)	[SA- Dylight] (nM)
JAK1	1,0	0,75	30,1	9	312,5
JAK2	0,0075	0,75	7,0	9	312,5
JAK3	0,015	0,75	1,7	9	312,5
Tyk2	2,0	0,75	9,3	9	312,5

[095] As concentrações dos compostos testadas foram 1496, 499, 175,

49,9, 18,7, 6,2, 2,1, 0,75, 0,24, 0,075 e 0,0125 nM. A [DMSO] final foi ajustada em 0,25%.

Desempenho do ensaio e controle de qualidade de dados:

[096] O desempenho dos ensaios enzimáticos foi rastreado calculando os valores da razão significativa mínima (MSR) ao longo dos ensaios para as moléculas de referência de JAK seletiva e pan-JAK:

Composto de referência	Estrutura	Nome	Fonte
A	Cl / Φ \ rt NH< ] / \__/ \^V,nh₂ 0	3-[(4-clorofenil)amino]-l[(1S,2S,4S ou lR,2R,4R)-2ciano-4-(dimetilamino)ciclohexil]-l/7-pirazol-4carboxamida	W02013/04086 3, página 225, composto 28117
B	.í . o	(15,2S)-2-(3-{[4- (metilsulfonil)fenil]amino}4-oxo-4,5-di-hidro-l/7pirazol [4,3-c] piridin-1-	WO2014/14649 0, página 163, composto 3-5

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il)ciclo-hexanocarbonitrila

[097] As potências para o Composto de Referência N° 1, um seletivo de aJAKl, foram: IC50 de JAK1 = 1,47 nM +/- 0,40, N=392; IC50 de JAK2 = 19,04 +/-

4,15 nM, N = 393; IC50 de JAK3 = 1351,45 nM +/-129,93, N = 398 e IC50 de TYK2 = 13,96 nM+/- 3,17, N = 394.

[098] As potências para o Composto de Referência N° 2, um pan-inibidor de JAK1, foram: IC50 de JAK1 = 0,17 nM +/- 0,06, N=399; IC50 de JAK2 = 1,00 +/0,29 nM, N = 400; IC50 de JAK3 = 21,95 nM +/- 6,08, N = 404 e IC50 de TYK2 = 0,28 nM +/- 0,09, N = 401.

Ensaios de JAK de envolvimento na via celular:

[099] A inibição da atividade de JAK1 e JAK2 quinases em células intactas foi quantificada no modo antagonista usando a tecnologia de repórter transcricional CellSensor® (Life Technologies/ ThermoFisher: https://www.thermofisher.com/us/en/home/industrial/pharmabiopharma/drug-discovery- development/target-and-lead-identification-andvalidation/pathwav-biologv/cellular-pathwav-analysis/cellsensor-celllines.html), em duas linhas celulares independentes manipuladas para detectar a sinalização de IL4, IL6 e EPO. Em resumo, as linhas celulares CellSensor® (ver detalhes abaixo para cada ensaio) transportando um gene repórter β-Lactamase estavelmente integrado sob controle de elementos de STAT cis-reguladores específicos que respondem à via sendo monitorada foram pré-tratadas com compostos de teste diluídos em série em DMSO (ver preparação e dosagem de compostos e seção de citocinas agonistas). Após a incubação com compostos, IL6, ou EPO foram adicionados a cada linha celular cognata em uma concentração igual à dose necessária para atingir 80% da resposta máxima (EC80). Após estimulação de citocinas, os níveis celulares de atividade de βLactamase foram detectados in situ usando LiveBLAzer™ Loading Kit (substrato

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LiveBLAzer™-FRET B/G, CCF4-AM da Life Technologies), onde a fluorescência do substrato (fluorescência de emissão a 405 nm) e produto clivado (fluorescência de emissão a 488 nm) foram quantificadas em um leitor Acumen Explorer ex3 (TTP Labtech). Os valores de fluorescência normalizados que relatam a porcentagem de inibição dos poços tratados com os compostos de teste foram plotados contra o valor de log da concentração de cada uma das dez doses selecionadas para construir uma curva de dose-resposta (DRC) usando uma equação de dose-resposta de ajuste de 4 parâmetros para calcular a concentração necessária para atingir 50% de inibição da atividade máxima (IC50, ou valor de potência) no software Assay Data Analyzer (Merck Frosst Canada & Co - 2003). A porcentagem de inibição foi calculada em função dos níveis de beta lactamase medidos em poços tratados com controle de DMSO, 0% de inibição, versus níveis de β-Lactamase em poços tratados com uma dose de inibidor de pan-JAK suficiente para atingir 100% de bloqueio da produção de β-Lactamase. Incubação com compostos, citocinas e LiveBLAzer™ foi realizada a 37°C em uma incubadora de cultura de tecidos mantida a 90% de umidade e 5% de CO2.

[0100] Os pares de linhas celulares e agonistas utilizados para quantificar a inibição funcional das vias reguladas de JAK foram as seguintes:

[0101] Via Interleucina 6 (IL6) - JAK1/JAK2 - STAT4: Células CelISensor™ SIEbla ME-180 portadoras de um gene repórter β-Lactamase estavelmente integrado sob 0 controle do Elemento induzido por Sis (SIE).

[0102] Via Eritropoetina (EPO) - JAK2 - STAT5: Célula CelISensor irfl-bla TF1 portam um gene repórter de β-Lactamase estavelmente integrado sob 0 controle dos Elementos de Resposta de STAT5 presentes no promotor do gene do Fator Regulador de Interferon I (IRF1).

[0103] Preparação e dosagem de compostos e citocinas: As soluções estoque do composto estoque 10 mM preparadas em DMSO foram diluídas em

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35/42 série 1:3 dez vezes, em DMSO usando um manipulador de líquido automatizado Tecan Freedom EVO-2 200 em uma microplaca de 384 poços de propileno Echo Qualified (384PP), fundo plano, transparente (Labcyte, Cat# P-05525). Sessenta nL de cada dose de composto foram dispensados utilizando um Dispensador Acústico 550 ECHO (Labcyte) em microplacas secas tratadas com TC de poliestireno pretas com fundo plano transparente de 384 cavidades (Corning Cat # 3712). Cada linha celular CelISensor® foi subsequentemente revestida de acordo com as instruções do fornecedor (30.000 células em 32 pL/poço) e misturada com o composto. Após uma incubação de 60 minutos, as células foram subsequentemente estimuladas por adição de 8 μΐ de citocina cognata (dose EC80 de IL6 e EPO) e incubadas por mais 3 horas, antes da adição do substrato LiveBLAzer™-FRET B/G. As doses finais do composto testado foram: 14977; 4992; 1664; 554; 184; 61,6; 20,5; 6,8; 2,3 e 0,76 nM. A concentração final de DMSO foi mantida em 0,15%.

[0104] Desempenho do ensaio e controle de qualidade de dados: Três parâmetros foram usados para validar a qualidade de cada ensaio individual e para garantir o desenvolvimento da relação de atividade-estrutura (SAR) estreita, que permitiu discernir diferenças entre compostos cuja potência variou de 3 a 4 vezes:

(A) Para verificar se a estimulação com citocina estava dentro da dose aceitável de +/- 5% da dose necessária para atingir 80% de estimulação, EC80, uma curva de dose-resposta (DRC) agonista de 16 pontos foi incluída em cada placa e esta DRC foi usada para retrocalcular o nível de estimulação alcançado através da placa. As principais doses das DRCs foram: 500 ng/mL para IL6 e 100 ng/mL para EPO.

(B) DRCs para dois compostos de referência foram incluídas em cada placa de ensaio contendo um total de 32 compostos por placa:

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36/42 [0105] Composto de referência N° A, uma molécula seletiva de JAK1, doze vezes mais potente no ensaio IL6 CellSensor: IC50 = 51,9 +/- 23,6 nM, N = 627 relação ao ensaio EPO CellSensor: IC50 = 623,5 +/-132,3 nM, N = 617. A atividade no ensaio IL4 CellSensor foi: IC50 = 25,7 +/- 8,4 nM, N = 307 [0106] Composto de referência N° B, um inibidor de pan-JAK, que exibiram potência dentro de dois a três vezes em ambos os ensaios. Ensaio de IL/JAK1JAK2: IC50 = 21+/-9,1 nM, N = 652 e ensaio EP0/JAK2: IC50 = 39,5+/-12,4 nM, N = 626 (C) A reprodutibilidade do ensaio ao longo de placas replicadas e execuções independentes foi monitorada calculando uma razão significativa mínima (MSR, ver Eastwood et al., Journal of Biomolecular Screening 11(X); 2006) rastreando os valores de potência IC50 para ambos os compostos de referência.

DADOS BIOLÓGICOS [0107] Exemplos da presente invenção foram avaliados em ensaios de ligação in vitro de JAK1, JAK2 e JAK3, e ensaios de envolvimento na via celular de IL-6 e EPO, como descrito acima. A Tabela 1 lista os valores de IC50 da presente invenção no JAK1, JAK2, e JAK3 nos ensaios de ligação in vitro, e os ensaios de envolvimento da via celular de IL-6 e EPO, bem como a razão entre os IC50s de JAK2/JAK1, IC50s de JAK3/JAK1 e os IC50s de EPO/IL-6. A Tabela 2 lista os parâmetros farmacocinéticos da presente invenção no cão após administração

IV. A Tabela 3 mostra dados comparáveis para outros compostos de JAK1.

Tabela 1.

Composto

IC50 de JAK1 (nM)

IC50 de JAK2 (nM)

IC50 de JAK3 (nM)

Razão JAK2/ 1

Razão JAK3/ 1

IC50 de IL-6 (nM)

IC50 de EPO (nM)

Razão EPO/IL -6

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1	nh₂ ⁰ p-0 HN^^N H nc	0,43	5,89	1130	14	2628	41,8	459,7	11
Enantiômero de 1	wA h₂n 1 HN N \—N F	17,7	215,9	>124 9	12,2	>70	2444, 5	9484,8	3,9

Tabela 2

Farmacocinética (PK) do Composto 1 em Cães

Parâmetro PK	Valor
Dose (mg/kg I.V.)	0,25
AUC(pM.h)	1,29
CL (mL/min/kg)	9,42
Vdss (L/kg)	1,95
Tl/2(h)	4,38

Exemplos comparativos

Tabela 3

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	Composto	JAK1 IC50 (nM)	JAK2 IC50 (nM)	JAK2/1	IL-6 IP (nM)	EPO IP (nM)	EPO/IL- 6
Tofacitinib	Chiral	1.35		lx	96		0.7x
Baricitinib	CjO>	0.47		0.4x	40		0.43x
Oclacitinib	Chiral 1 T .1 J ° π ™ H	3.4		2.0X	230		2.4X
JAKAFI	03	1		0.7x	40		0.2x
INCB39110	/¹ —F ^_Ν^*—~N	0.3		lOx	97		5x

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	Composto	JAK1 IC50 (nM)	JAK2 IC50 (nM)	JAK2/1	IL-6 IP (nM)	EPO IP (nM)	EPO/IL- 6
GLPG0634	[ « ]l G Λ B	0.63		4.8x	40		5x
Composto de referência A	/ \ X— õ ^f	1.67		.11.4x	57		llx

Estudo de segurança para o composto 1.

[0108] Foi conduzido um estudo piloto de segurança em animal alvo de 6 semanas para o Composto 1. O fármaco foi administrado por via oral, como comprimido compactado, duas vezes por dia durante 6 semanas em cães a 1, 3 e 5 vezes a dose máxima de exposição de 0,5 mg/kg, ou uma vez por dia durante 6 semanas em cães a 5 vezes a dose máxima de exposição de 1 mg/kg. Não foram observados efeitos relacionados com artigos de teste em observações clínicas, observações fecais, peso corporal, alteração do peso corporal, consumo de alimentos, parâmetros de exame físico, pressão arterial, oftalmologia ou cardiologia. Não foram observados efeitos relacionados com artigos de teste em avaliações post-mortem, incluindo pesos de órgãos e achados macroscópicos e

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40/42 microscópicos. Com base nos resultados deste estudo, o nível de efeito adverso não observado (NOAEL) é de 5,0 mg/kg/dia como uma dose uma vez por dia ou

2,5 mg/kg duas vezes por dia. A hipótese da seletividade de JAK-1 do Composto 1 foi hipotetizada para prover uma maior margem de segurança em comparação com um composto menos seletivo, tal como o oclacitinib (Apoquel®). Estes dados do estudo piloto de segurança em animal alvo proveem evidências para esta hipótese, e sugerem que o Composto 1 pode eficazmente tratar a dermatite atópica canina com uma margem de segurança melhorada.

Composto 1 no modelo de coceira induzida por IL-31 [0109] Como uma medida da inibição de JAK-1 in vivo, e por extensão da eficácia clínica antecipada do Composto 1, avaliou-se o Composto 1 em um modelo farmacodinâmico relevante e uma referência clínica foi incluída. Foi demonstrado que a interlucina-31 canina (clL-31) está envolvida no prurido associado à dermatite atópica e alérgica em cães [Gonzales et al., Vet Dermatol 2013; 24: 48-el2 ], e a IL-31 pode ativar as moléculas de sinalização de JAK-1 e JAK-2 após ligação ao seu complexo receptor [Zhang et al., Cytokine & Growth Factor Reviews 19 (2008) 347-356]. A administração de clL-31 em cães Beagle produz uma resposta pruriginosa robusta que pode ser inibida por tratamento prévio com o inibidor de JAK oclacitinib [Gonzales et al., Vet Dermatol 2016; 27: 34-elO]. Utilizando um delineamento de estudo cruzado, randomizado, não cego, o Composto 1 (1 mg/kg de peso corporal), Apoquel® ou placebo foi administrado a cães Beagle de laboratório 2 h antes de um desafio com clL-31 (Tmax aproximado do Composto 1 e Apoquel®). Os cães foram observados durante 2 h após o desafio com clL-31, e o tempo em que os animais se envolveram em comportamentos pruriginosos foi registrado. Neste estudo, o Composto 1 suprimiu significativamente o prurido induzido por clL-31; a magnitude foi semelhante ao Apoquel. Em um segundo estudo utilizando um

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41/42 delineamento cruzado, randomizado, não cego, foram avaliadas diversas doses do Composto 1 (0,5, 0,1 e 0,05 mg/kg de peso corporal); os tratamentos com Apoquel® e placebo também foram incluídos. O composto 1 suprimiu significativamente o prurido na dose de 0,5 mg/kg de peso corporal, mas não nas doses de 0,1 e 0,5 mg/kg de peso corporal. A magnitude do efeito foi semelhante entre 0,5 mg/kg de Composto 1 e Apoquel®. Ver Figuras IA e 1B.

Referências [0110] Zhang Q., P. Putheti, Q. Zhou, Q. Liu, W. Gao. Structures and biological functions of IL-31 and IL-31 receptors. Cytokine & Growth Factor Reviews 19 (2008) 347-356.

[0111] Gonzales, A., W.R. Humphrey, J.E. Messamore, TJ. Fleck, GJ. Fici, J.A. Shelly, J.F. Teel, G.F. Bammert, S.A. Dunham, TE. Fuller and R.B. McCall. Interleukin-31: its role in canine pruritus and naturally occurring canine atopic dermatitis. Vet Dermatol 2013; 24: 48-el2.

[0112] Gonzales, A, TJ. Fleck, W.R. Humphrey, B. A. Galvan, M.M. Aleo, S.P. Mahabir, J.-K. Tena, K.G. Greenwood and R.B. McCall. IL-31-induced pruritus in dogs: a novel experimental model to evaluate nti-pruritic effects of canine therapeutics. Vet Dermatol 2016; 27: 34-elO.

[0113] Avaliação Clínica: O composto está sendo avaliado em um estudo de prova de conceito mascarado e randomizado em cães com diagnóstico de dermatite atópica. O objetivo deste estudo é avaliar a eficácia e tolerabilidade do composto contra a dermatite atópica em cães pertencentes a clientes. O composto é administrado em duas doses e comparado a um controle com placebo. Os cães recebem doses por via oral duas vezes ao dia por até 14 dias, seguidos por uma vez ao dia por até 28 dias, e são avaliados quanto a prurido e lesões cutâneas utilizando as ferramentas de pontuação Escala Visual Analógica de Prurido (PVAS) e o índice de Gravidade e Extensão de Dermatite Atópica

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Canina (CADESI-4), respectivamente.

[0114] A CADESI-4 é uma escala de gravidade usada para classificar lesões cutâneas em ensaios clínicos para tratamento de cães com dermatite atópica (AD). Três tipos de lesões (eritema, liquenificação e alopecia/escoriação) são pontuados de 0 a 3 em cada um dos 20 locais do corpo, para uma pontuação máxima de 180, com referências propostas para lesões cutâneas leves, moderadas e graves de 10, 35 e 60, respectivamente. A PVAS é uma escala analógica visual que contém características da gravidade da coceira e comportamentos associados à coceira. É comumente usada para determinar a gravidade do prurido em ensaios clínicos para tratamento de cães com AD.

[0115] CADESI-4: Thierry, O., Manolis, S., Nuttall, T., Bensignor, E., Griffin,

C., Hill, P., for the International Committee on Allergic Diseases of Animals (ICADA). Validation of the Canine Atopic Dermatitis Extent and Severity Index (CADESI)-4, a simplified severity scale for assessing skin lesions of atopic dermatitis in dogs. Vet, Dermatol. 25:77-e25, 2014 [0116] PVAS: Hill, P.B., Lau, P., and Rybnicek, J. Development of an ownerassessed scale to measure the severity of pruritus in dogs. Vet. Dermatol. 18:301-308, 2007.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável ou estereoisômero do mesmo:

Fórmula I.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é
3. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto definido na reivindicação 1 ou 2 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou um estereoisômero do mesmo e um veículo farmaceuticamente aceitável.
4. Uso de um composto definido na reivindicação 1 ou 2 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ou de uma composição farmacêutica definida na reivindicação 3, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença mediada por JAK-1 em um mamífero.
5. Uso, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a doença mediada por JAK-1 é aquela que pode ser melhorada pela inibição seletiva de uma Janus quinase JAK 1 em relação à JAK 2 e JAK 3.
6. Uso, de acordo com a reivindicação 4 ou 5, caracterizado pelo fato de que a doença é selecionada a partir de dermatite alérgica, dermatite atópica,

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2/3 artrite, ceratoconjuntivite seca, doenças ou distúrbios autoimunes e câncer.
7. Uso, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a doença é dermatite atópica.
8. Uso, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a doença é um distúrbio ou doença autoimune.
9. Uso, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a doença é artrite.
10. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 9, caracterizado pelo fato de que o mamífero é um mamífero animal de estimação.
11. Uso, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o animal de estimação é um cachorro, um gato ou um cavalo.
12. Uso, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a doença é ceratoconjuntivite seca.
13. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 12, caracterizado pelo fato de que o medicamento é formulado para administração oral, parentérica ou tópica.
14. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 13, caracterizado pelo fato de que a inibição seletiva é de Janus quinase JAK1 em relação à JAK 2.
15. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 13, caracterizado pelo fato de que a inibição seletiva é de Janus quinase JAK1 em relação à JAK 3.
16. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a razão de JAK2(IC50)/JAK1 (IC50) é de pelo menos 5, pelo menos 10, pelo menos

12.
17. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 16, caracterizado pelo fato de que a dose diária do composto é de cerca de 0,001

Petição 870190053511, de 11/06/2019, pág. 211/212

3/3 mg/kg a cerca de 100 mg/kg ou cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 10 mg/kg ou cerca de 0,1 mg/kg a cerca de 3,0 mg/kg ou cerca de 0,2 mg/kg a cerca de 1,0 mg/kg de peso corporal.
18. Uso, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que a razão de JAK3(IC50)/JAKl(IC50) é de pelo menos 1000 ou pelo menos 750 ou pelo menos 500.
19. Invenção de produto, processo, sistema ou uso, caracterizada pelo fato de que compreende um ou mais elementos descritos no presente pedido de patente.