BR112019011676A2 - inibidores de poli-adp ribose polimerase (parp) - Google Patents
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Abstract
a presente invenção está relacionada com uma composição farmacêutica que compreende um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável e um composto representado pela seguinte fórmula estrutural: (i). a presente invenção está também relacionada com um método para o tratamento de um indivíduo com uma doença que pode ser melhorada pela inibição de poli(adp-ribose)polimerase (parp). as definições das variáveis são fornecidas aqui.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para INIBIDORES DE POLI-ADP RIBOSE POLIMERASE (PARP).
REFERÊNCIAS CRUZADAS A PEDIDOS RELACIONADOS [001] Este pedido reivindica o benefício de Pedido Provisional Norte-Americano NQ. 62/440.581, depositado em 30 de dezembro de 2016. Todos os ensinamentos do pedido acima mencionado são incorporados aqui por referência.
CAMPO DA INVENÇÃO [002] Este pedido é direcionado a inibidores de poli(ADPribose)polimerase (PARP), particularmente inibidores de PARP-1, e métodos para seu uso, tal como para tratar ou prevenir uma ou mais doenças relacionadas com PARP.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [003] A enzima nuclear poli(ADP-ribose)polimerase-1 (PARP-1) é um membros da família da enzima PARP. Esta crescente família de enzimas consiste em PARPs tais como, por exemplo: PARP-1, PARP2, PARP-3 e Vault-PARP.
[004] PARP desempenha um papel no reparo de rompimentos de filamento de DNA e sua inibição é, portanto, um método estabelecido de tratamento de câncer. A inibição de PARP pode ser especialmente eficaz quando combinada com o tratamento de dano ao DNA, tal como com radiação de ionização ou após tratamento com agentes de danificação de DNA, tais como agentes de metilação, inibidores de topoisomerases I e outros agentes quimioterápicos, tais como cisplatina e bleomicina. A inibição de atividade enzimática de PARP deve levar a uma sensibilidade realçada das células tumorais aos tratamentos de dano ao DNA. Inibidores de PARP inhibiforam reportados ser eficazes em células tumorais radissensibilizantes (hipóxicas) se eficazes na prevenção de células tumorais se recuperarem de dano potencialmen
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 15/215
2/185 te letal ou subtotal de DNA após terapia de radiação, presumivelmente por sua capacidade de prevenir a nova união do rompimento de filamento de DNA e afetando diversas vias de sinalização de dano ao
DNA.
[005] A inibição de PARP-2 pode fornecer proteção contra estresse oxidative (veja Szanto, etal., Cell Mol. Life Sei. 69:4079 (2012)). Como tal, os inibidores de PARP podem ser usados para tratar doenças caracterizadas por estresse oxidative (por exemplo, dano de isquemia-reperfusão, doenças inflamatórias, queimadura, Parkinsonismo, doenças de Huntington, doença de Alzheimer e insultos tóxicos).
[006] PARP-1 e PARP-2 são pró-inflamatórios (veja Rosado et al., Immunology 139:428 (2013)). Sua inibição, como tal, pode ser usada para tratar, por exemplo, asma, artrite, colite, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), síndrome da insuficiência respiratória aguda (ARDS), aterosclerose, remodelagem cardia após infarto do miocárdio, sepse, choque endotóxico, choque hemorrágico, doença do enxerto versus hospedeiro, encefalomielite e nefrite autoimune.
[007] A inibição de PARP pode também proteger contra infecções virais (veja Atasheva et al., J. Virol. 88:2116 (2014) e Virag and Szabo Pharmacol. Rev. 54:375 (2002)), por exemplo, contra o vírus 1 da deficiência imunológica humana, Vírus da encefalite equina Venezuelana, vírus do herpes simples, vírus da hepatite B humana, e infecções por citomegalovírus humano (Virag and Szabo Pharmacol. Rev. 54275 (2002)).
[008] PARPs estão envolvidos no controle de homeostase da glicose (veja Bai and Canto Cell Metab. 16290 (2012), Riffel etal., Nat. Rev. Drug Discovery //.923 (2012) e Yeh et al., Diabetes 582476 (2009). Por exemplo, a inibição de PARP-1 melhora a eliminação de glicose e sensibilidade à insulina (veja Bai and Canto Cell Metab. 16290 (2012) e Pirinen etal., Cell Metab. /9:1034 (2014)). Como tai, a
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3/185 inibição de PARP é útil para o tratamento de doenças e condições tais como síndrome metabólica e diabetes tipo II e suas complicações subsequentes tais como complicações diabéticas, neurológicas, renais e oculares.
[009] Como tal, existe uma necessidade de novos e melhorados inibidores de PARP para estas e outras indicações terapêuticas. SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0010] A requerente descobriu atualmente novos compostos que são inibidores eficazes de PARP (veja, Exemplos 1-53). Em particular, eles têm atividades inibitórias seletivas contra PARP-1 sobre PARP-2 (veja, Exemplo 54). Adicionalmente, foi demonstrado que certos inibidores destes inibidores de PARP são úteis para aumento da quantidade de NAD+ em células (veja, Exemplo 55).
[0011] Em uma primeira modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável e um composto representado pela seguinte fórmula estrutural:
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: o Anel A é opcionalmente fenila substituída ou uma heterorila de 5 a 6 membros opcionalmente substituída;
o Anel B é arila, heteroarila de 5 a 6 membros ou heterociclila de 5 a 6 membros, cada qual opcionalmente substituída por um ou mais substituintes representados por R3;
— está ausente ou uma ligação;
E é N ou CH quando está ausente ou E é C quando — é uma ligação;
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4/185
é opcionalmente substituído por (CiCõjalquila ou hidróxi (Ci-C5)alquila;
cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em -halogênio, -CN, -NO2, -ORd, -NReRf, -S(O)iRe, -C(=NRe)NReRf, -NReS(O)iRf, -S(O)iNReRf, -C(=O)ORe, -OC(=O)ORe, -C(=S)ORe, -O(C=S)Re, -C(=O)NReRf, -NReC(=O)Rf, -C(=S)NReRf, -NReC(=S)Rf, -NRe(C=O)ORf, -O(C=O)NReRf, -NRe(C=S)ORf, -O(C=S)NReRf, -NRe(C=O)NReRf, -NRe(C=S)NReRf, -C(=S)Re, -C(=O)Re, halo(CiCõjalquila, e (Ci-C5)alquila, em que a (Ci-C5)alquila representada por R3 é opcionalmente substituída por -CN, -NO2, -ORe, -NReRf, -S(O)iRe, -NReS(O)iRf, -S(O)iNReRf, -C(=O)ORe, -OC(=O)ORe, -C(=S)ORe, -O(C=S)Re, -C(=O)NReRf, -NReC(=O)Rf, -C(=S)NReRf, -NReC(=S)Rf, -NRe(C=O)ORf, -O(C=O)NReRf, -NRe(C=S)ORf, -O(C=S)NReRf, -NRe(C=O)NReRf, -NRe(C=S)NReRf, -C(=S)Re, ou -C(=O)Re;
Rd é -H, halo(Ci-C5)alquila ou (Ci-C5)alquila, em que a (C1Cõjalquila é opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci-C3)alcóxi;
cada Re é independentemente selecionado do grupo que consiste em -H e (Ci-C5)alquila opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci-C3)alcóxi;
cada Rf é independentemente selecionado do grupo que consiste em -H, (Ci-C5)alquila opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci-C3)alcóxi, (Cs-Cejcicloalquila opcionalmente substituída por (C1C2) alquila, e heterociclila contendo oxigênio de 4 a 6 membros opcionalmente substituída por (C1-C2) alquila; ou
-NReRf tomados juntos é uma heterociclila de 4 a 6 membros, opcionalmente substituída por (C1-C2) alquila; ou
-C(=NRe)NReRf tomados juntos é uma heterociclila de 4 a 6
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5/185 membros, opcionalmente substituída por Re; R5 é -H ou (Ci-C5)alquila; e i é 0, 1, ou 2.
[0012] Em uma segunda modalidade, a invenção fornece a composição farmacêutica de acordo com a modalidade anterior, em que um composto é representado pela seguinte fórmula estrutural:
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: o Anel A é opcionalmente fenila substituída ou uma heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituída;
o Anel B é arila, heteroarila de 5 a 6 membros ou heterociclila de 5 a 6 membros, cada qual opcionalmente substituída por um ou mais substituintes representados por R3;
— está ausente ou uma ligação;
E é N ou CH quando está ausente ou E é C quando —é uma ligação;
é opcionalmente substituído por (CiCõjalquila ou hidróxi (Ci-C5)alquila;
cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em halogênio, -CN, -NO2, -ORd, -NReRf, -S(O)iRe, -C(=NRe)NReRf, -NReS(O)iRf, -S(O)iNReRf, -C(=O)ORe, -OC(=O)ORe, -C(=S)ORe, -O(C=S)Re, -C(=O)NReRf, -NReC(=O)Rf, -C(=S)NReRf, -NReC(=S)Rf, -NRe(C=O)ORf, -O(C=O)NReRf, -NRe(C=S)ORf, -O(C=S)NReRf, -NRe(C=O)NReRf, -NRe(C=S)NReRf, -C(=S)Re, -C(=O)Re, halo(Ci-C5)alquila e (Ci-C5)alquila, em que a (Ci-C5)alquila represen
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6/185 tada por R3 é opcionalmente substituída por -CN, -NO2, -ORe, -NReRf, -S(O)iRe, -NReS(O)iRf, -S(O)iNReRf, -C(=O)ORe, -OC(=O)ORe, -C(=S)ORe, -O(C=S)Re, -C(=O)NReRf, -NReC(=O)Rf, -C(=S)NReRf, -NReC(=S)Rf, -NRe(C=O)ORf, -O(C=O)NReRf, -NRe(C=S)ORf, -O(C=S)NReRf, -NRe(C=O)NReRf, -NRe(C=S)NReRf, -C(=S)Re, ou -C(=O)Re;
Rd é -H, halo(Ci-C5)alquila ou (Ci-Csjalquila, em que a (C1Csjalquila é opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci-Csjalcóxi;
cada Re é independentemente selecionado do grupo que consiste em -H e (Ci-Csjalquila opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci-Csjalcóxi;
cada Rf é independentemente selecionado do grupo que consiste em -H, (Ci-Csjalquila opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci-Csjalcóxi, (Cs-Cejcicloalquila opcionalmente substituída por (C1C2) alquila, e heterociclila contendo oxigênio de 4 a 6 membros opcionalmente substituída por (C1-C2) alquila; ou
-NReRf empregado junto é uma heterociclila de 4 a 6 membros, opcionalmente substituída por (C1-C2) alquila; ou
-C(=NRe)NReRf empregado junto é uma heterociclila de 4 a 6 membros, opcionalmente substituída por Re, em que um resto das variáveis (por exemplo, i) é definido na primeira modalidade.
[0013] Em uma terceira modalidade, a invenção fornece a composição farmacêutica de acordo com a primeira ou segunda modalidade, em que um composto é representado pela seguinte fórmula estrutural:
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
Anel A é opcionalmente fenila substituída ou uma heterorila de 5 a 6 membros opcionalmente substituída;
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7/185 o Anel Β é arila, heteroarila de 5 a 6 membros ou heterociclila de 5 a 6 membros, cada qual opcionalmente substituída por um ou mais substituintes representados por R3; e
é opcionalmente substituído por (CiCõjalquila ou hidroxi(Ci-C5)alquila, em que um resto das variáveis (por exemplo, R3) é como definido na primeira, ou segunda modalidade. [0014] Na quarta modalidade, a invenção fornece a composição farmacêutica de acordo com a primeira, segunda, ou terceira modalidade, em que um composto é representado por uma fórmula estrutural selecionada do grupo consistindo em:
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:
X1, X2, X3 e X4 são cada quais independentemente selecionados do grupo consistindo em N e CH, forneceu não mais do que dois de X1, X2, X3 e X4 é N;
X5 é NR2, O ou S;
o membros, cada qual opcionalmente substituída por um ou mais substituintes representados por R3;
é opcionalmente substituído por (CiCõjalquila ou hidroxi(Ci-C5)alquila;
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8/185 cada R1 é independentemente selecionado do grupo consitindo em halogênio, -CN, -NO2, -ORC, -NRaRb, -S(O)iRa, -NRaS(O)iRb, -S(O)iNRaRb, -C(=O)ORa, -OC(=O)ORa, -C(=S)ORa, -O(C=S)Ra, -C(=O)NRaRb, -NRaC(=O)Rb, -G(=S)NRaRb, -NRaG(=S)Rb, -NRa(C=O)ORb, -O(C=O)NRaRb, -NRa(C=S)ORb, -O(C=S)NRaRb, -NRa(C=O)NRaRb, -NRa(C=S)NRaRb, -C(=S)Ra, -C(=O)Rb, halo(Ci-C5)alquila e (C1Csjalquila, em que a (Ci-Csjalquila representada por R1 é opcionalmente substituída por -CN, -NO2, -ORC, -RaRb, -S(O)iRa, -NRaS(O)iRb, -S(O)iNRaRb, -C(=O)ORa, -OC(=O)ORa, -C(=S)ORa, -O(C=S)Ra, -C(=O)NRaRb, -NRaC(=O)Rb, -C(=S)NRaRb, -NRaC(=S)Rb, -NRa(C=O)ORb, -O(C=O)NRaRb, -NRa(C=S)ORb, -O(C=S)NRaRb, -NRa(C=O)NRaRb, -NRa(C=S)NRaRb, -C(=S)Ra ou -C(=O)Ra;
R2 é -H, C1-5 alquila, fenila, -C(O)(Ci-5 alquila), -C(O)(fenila), -C(O)O(Ci-5 alquila), -C(O)O(fenila), -S(O)2(Ci-5 alquila) ou -S(O)2(fenila), em que cada alquila nos grupos representados por R2 independentemente é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em halogênio, hidróxi, ciano, fenila, heteroarila de 5 a 6 membros, (C1-C5) alcóxi, e halo(CiCõjalcóxi, e em que cada fenila nos grupos representados por R2 independentemente é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados do grupo consistindo em halogênio, hidróxi, nitro, ciano, amino, (Ci-Csjalquila, halo(Ci-C5)alquila, (Ci-Csjalcóxi e halo(Ci-C5)alcóxi;
cada Ra e cada Rb são independentemente selecionados do grupo consistindo em -H e (Ci-Csjalquila opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci-Csjalcóxi;
Rc é -H, halo(Ci-C5)alquila ou (Ci-Csjalquila, em que a (C1Csjalquila é opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci-Csjalcóxi;
i é 0, 1 ou 2; e n é 0, 1 ou 2, em que um resto das variáveis (por exemplo,
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R3) é como definido na primeira, segunda, ou terceira modalidade.
[0015] Em uma quinta modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica de acordo com a primeira, segunda, terceira, ou quarta modalidade, em que um composto é representado por uma fórmula estrutural selecionada do grupo consistindo em:
o Anel B é arila, heteroarila de 5 a 6 membros ou heterociclila de 5 a 6 membros, cada qual opcionalmente substituída por um ou mais substituintes representados por R3; e
é opcionalmente substituído por (Ci-Csjalquila ou hidróxi (Ci-Csjalquila, em que um resto das variáveis (por exemplo, R3) é como definido na primeira, segunda, terceira, ou quarta modali dade.
[0016] Na sexta modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica de acordo com a primeira, segunda, terceira, quarta, ou
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10/185 quinta modalidade, em que Anel B é selecionado do grupo consistindo
cada R4 é-H, (Ci-Csjalquila, ou hidróxi(Ci-C5)alquila;
cada p é independentemente 0 ou 1; e cada m é 0 ou 1, ou 2, em que um resto das variáveis (por exemplo, R3) é como definido na primeira, segunda, terceira, quarta, ou quinta modalidade.
[0017] Na sétima modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica de acordo com a sexta modalidade, em que Anel B é selecionado do grupo consistindo em
, em que um resto das variáveis é como definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, ou sexta modalida de.
[0018] Em uma oitava modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica de acordo com a quarta, quinta, sexta, ou sétima modalidade, em que:
cada R1 é independentemente halogânio, (Ci-C5)alquila, halo(Ci-C5)alquila, (Ci-C5)alcóxi, halo(Ci-C5)alcóxi ou ciano;
cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em -halogênio, -CN, -C(=NRe)NHRf, -C(=NRd)NReRf, -S(O)iNReRf, -C(=O)NReRf, -C(=S)NReRf, -O(C=O)NReRf, -O(C=S)NReRf, -NRd(C=O)NReRf, -NRd(C=S)NReRf, e (Ci-C5)alquila, em que um resto das variáveis é como definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, ou sétima modalidade.
[0019] Em uma nona modalidade, a invenção fornece uma compo
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11/185 sição farmacêutica de acordo com a quarta, quinta, sexta, sétima, ou oitava modalidade, em que:
cada R1 é independentemente halogênio ou (Ci-Csjalquila;
cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em -halogênio, -CN, -C(=NRd)NReRf, -C(=O)NReRf, -C(=NRe)NHRf e (Ci-Cõjalquila, em que um resto das variáveis é como definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta ou sétima modalidade.
[0020] Em uma décima modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica de acordo com a quarta, quinta, sexta, sétima, ou oitava modalidade, em que:
cada R1 é independentemente cloro, flúor ou metila;
cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em cloro, flúor, -CN, -C(=NRd)NReRf, -C(=O)NReRf e metila;
o grupo
é opcionalmente substituído por metila ou hidroximetila, em que um resto das variáveis é como definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, ou oitava modalidade.
[0021] Em uma décima primeira modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica de acordo com a sexta, sétima, oitava, nona, ou décima modalidade, em que cada Re e cada Rf são independentemente selecionados do grupo consistindo em -H e metila; ou Re é -H e Rf é (Cs-Cejcicloalquila ou heterociclila contendo oxigênio de 4 a 6 membros cada um opcionalmente substituído por (C1-C2) alquila, em que um resto das variáveis é como definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava,nona, ou décima modalidade.
[0022] Em uma décima segunda modalidade, a invenção fornece
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uma composição farmacêutica de acordo com a sexta, sétima, oitava, nona ou décima modalidade, em que cada Re e cada Rf são independentemente selecionados do grupo consistindo em -H e metila; ou Re é -H e Rf é ciclopropila, ciclobutila ou oxetanila cada uma opcionalmente substituída por metila, em que um resto das variáveis é como definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima ou décima primeira modalidade.
[0023] Em uma décima terceira modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica de acordo com a sexta, sétima, oitava, nona ou décima modalidade, em que cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em cloro, fluoro, -CN, -C(O)NH(ciclopropila), -C(O)NH2, -C(O)NH(CH3), -C(O)N(CH3)2, , -C(O)NH(ciclobutila), h
-C(=NH)NHCH3 e metila, em que um resto das variáveis é como definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira ou décima segunda modalidade. [0024] Em uma décima quarta modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica de acordo com a quarta modalidade, em que R2 é -H ou (Ci-C5)alquila, preferivelmente, -H ou metila, em que um resto das variáveis é como definido na primeira, segunda, terceira, quarta, quinta, sexta, sétima, oitava, nona, décima, décima primeira, décima segunda, ou décima terceira modalidade.
[0025] Em uma décima quinta modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica de acordo com a primeira ou segunda modalidade, em que um composto é 6-[(3S)-4-[3-(6-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]-3-metil-piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0026] Em uma décima sexta modalidade, a invenção fornece uma composição farmacêutica de acordo com a primeira ou segunda modaPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 26/215
13/185 lidade, em que um composto é 6-[(3R)-4-[3-(6-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]-3-metil-piperazin-1 -il]piridina-3-carbonitrila ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0027] Em uma décima sétima modalidade, a invenção fornece a composição farmacêutica de acordo com a primeira ou segunda modalidade, em que um composto é 6-[(3S)-4-[3-(5-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]-3-metil-piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0028] Em uma décima oitava modalidade, a invenção também inclui qualquer um dos compostos divulgados na Exemplificação ou na Tabela no Exemplo 55. Ambos os sais farmaceuticamente aceitáveis destes compostos e as formas neutras correspondentes dos compostos estão incluídos.
[0029] Em uma décima nona modalidade, um composto da seguinte fórmula estrutural:
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R1 é F ou metila; e
ou metila.
[0030] Em uma vigésima modalidade, a invenção fornece o composto de acordo com a décima nona modalidade, em que: R1 é F; e R3 é-CN.
[0031] Em uma vigésima primeira modalidade, a invenção fornece o composto de acordo com a vigésima modalidade, em que um composto é 6-[(3S)-4-[3-(6-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]-3
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14/185 metil-piperazin-1 -il]piridina-3-carbonitrila ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0032] Em uma vigésima segunda modalidade, a invenção fornece o composto de acordo com a vigésima modalidade, em que um composto é 6-[(3R)-4-[3-(6-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]-3metil-piperazin-1 -il]piridina-3-carbonitrila ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0033] Em uma vigésima terceira modalidade, a invenção fornece o composto de acordo com a vigésima modalidade, em que um composto é 6-[(3S)-4-[3-(5-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]-3metil-piperazin-1 -il]piridina-3-carbonitrila ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0034] O termo sal farmaceuticamente aceitável se refere a um sal farmaceuticamente aceitável que se inclui no escopo de diagnóstico médico seguro, adequado para uso em contato com os tecidos de humanos e animais inferiores sem indevida toxicidade, irritação, e resposta alérgica, e é comensurado com uma relação risco/benefício razoável. Sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, S. M. Berge et al. descreve sais farmacologicamente aceitáveis em J. Pharm. Sei., 1977, 66, 1-19.
[0035] Incluídos nos presentes ensinamentos estão sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos divulgados aqui. Compostos tendo grupos básicos podem formar sais farmaceuticamente aceitáveis com ácidos farmaceuticamente aceitáveis. Sais de adição de ácidos farmaceuticamente aceitáveis adequados dos compostos descritos aqui incluem sais de ácidos inorgânicos (tais como ácido hidroclórico, hidrobrômico, fosfórico, metafosfórico, nítrico, e ácidos sulfúricos) e de ácidos orgânicos (tais como ácido acético, benzenossulfônico, benzoico, etanossulfônico, metanossulfônico, succínico, e ácido trifluoroacético). Compostos dos presentes ensinamentos com grupos acídicos
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15/185 tais como ácidos carboxílicos podem formar sais farmaceuticamente aceitáveis com bases farmaceuticamente aceitáveis. Sais básicos farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem sais de amônio, sais de metal alcalino (tais como sais de sódio e potássio) e sais de metal alcalinoterroso (tais como sais de magnésio e cálcio).
[0036] A presente invenção também fornece um método para o tratamento de um indivíduo com uma doença que pode ser melhorada por inibição de poli(ADP-ribose)polimerase (PARP), que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um ou mais compostos divulgados, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores.
[0037] É também fornecido aqui o uso de um ou mais dos compostos descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, para a preparação de um medicamento para o tratamento de uma doença que pode ser melhorada por inibição de PARP. [0038] Em outra modalidade fornecida aqui, os compostos descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores são para uso no tratamento de uma doença que pode ser melhorada por inibição de PARP.
[0039] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para o tratamento de um indivíduo com lesão renal aguda, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um ou mais compostos divulgados, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores.
[0040] É também fornecido aqui o uso de um ou mais dos compostos descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a
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16/185 composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, para a preparação de um medicamento para o tratamento de lesão renal aguda.
[0041] Em outra modalidade fornecida aqui, os compostos descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores são para uso no tratamento de lesão renal aguda.
[0042] Em outra modalidade, a presente invenção fornece um método para o tratamento de um indivíduo com câncer, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um ou mais compostos divulgados, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores.
[0043] É também fornecido aqui o uso de um ou mais dos compostos descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores, são para a preparação de um medicamento para o tratamento de câncer.
[0044] Em outra modalidade fornecida aqui os compostos descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das modalidades anteriores são para uso no tratamento de câncer.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [0045] Figura 1 mostra que inibidores de PARP1, Exemplo 29 e Exemplo 30 reduziram, após 24 horas, creatinina no plasma e nitrogênio de ureia no sangue (BUN) em um modelo animal de dano renal. DESCRIÇÃO DETALHADA
Definições [0046] O termo halo como usado aqui significa halogênio e inclui cloro, flúor, bromo e iodo.
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17/185 [0047] O termo alquila usado sozinho ou como parte de uma porção maior, tal como alcóxi ou haloalquila e similares, significa radical hidrocarboneto saturado alifático de cadeia ramificada ou linear monovalente. A menos que de outro modo especificado, um grupo alquila tipicamente tem 1 a 5 átomos de carbono, por exemplo, (CiCõjalquila. Como usado aqui, um grupo (Ci-Csjalquila significa um radical tendo de 1 a 5 átomos de carbono em um arranjo linear ou ramificado. Exemplos incluem metila, etila, n-propila, /so-propila, e similares.
[0048] O termo alcóxi significa um radical alquila ligado através de um átomo de ligação de oxigênio, representado por -O-alquila. Por exemplo, (Ci-C4)alcóxi inclui metóxi, etóxi, propóxi, e butóxi.
[0049] Os termos haloalquila e haloalcóxi significam alquila ou alcóxi, conforme o caso, substituídos por um ou mais átomos de halogênio.
[0050] O termo cicloalquila se refera a um sistema de anel de hidrocarboneto monocíclico saturado. Por exemplo, um C3-6 cicloalquila inclui ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila e ciclo-hexila. A menos que de outro modo descrito, um cicloalquila tem de três a seis átomos de carbono.
[0051] O termo heteroarila, heteroaromático, anel de heteroarila, grupo heteroarila, anel heteroaromático, e grupo heteroaromático, usado sozinho ou como parte de uma porção maior como em heteroaralquila ou heteroarilalcóxi, se refere a grupos de anéis aromáticos monocíclicos tendo cinco ou seis átomos de anel (por exemplo, 5 a 6 membros) selecionados de carbono e pelo menos um (tipicamente 1 a 4, mais tipicamente 1 ou 2) heteroátomos (por exemplo, oxigênio, nitrogênio ou enxofre).
[0052] Exemplos de grupos heteroarila monocíclicos incluem furanila (por exemplo, 2-furanila, 3-furanila), imidazolila (por exemplo, Λ/
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18/185 imidazolila, 2-imidazolila, 4-imidazolila, 5-imidazolila), isoxazolila (por exemplo, 3-isoxazolila, 4-isoxazolila, 5-isoxazolila), oxadiazolila (por exemplo, 2-oxadiazolila, 5-oxadiazolila), oxazolila (por exemplo, 2oxazolila, 4-oxazolila, 5-oxazolila), pirazolila (por exemplo, 3-pirazolila, 4-pirazolila), pirrolila (por exemplo, 1 -pirrolila, 2-pirrolila, 3-pirrolila), piridila (por exemplo, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila), pirimidinila (por exemplo, 2-pirimidinila, 4-pirimidinila, 5-pirimidinila), piridazinila (por exemplo, 3-piridazinila), tiazolila (por exemplo, 2-tiazolila, 4-tiazolila, 5tiazolila), triazolila (por exemplo, 2-triazolila, 5-triazolila), tetrazolila (por exemplo, tetrazolila), tienila (por exemplo, 2-tienila, 3-tienila), pirimidinila, piridinila e piridazinila.
[0053] O termo heterociclila se refere a urn radical de anel monocíclico não aromático contendo de 4 a 6 átomos de anel (por exemplo, 4 a 6 membros) selecionados de átomo de carbono e 1 ou 2 heteroátomos. Cada heteroátomo é independentemente selecionado de nitrogênio, nitrogênio quaternário, nitrogênio oxidado (por exemplo, NO); oxigênio; e enxofre, incluindo sulfóxido e sulfona. Grupos heterociclila representativos incluem morfolinila, tiomorfolinila, pirrolidinonila, pirrolidinila, piperidinila, piperazinila, hidantoinila, valerolactamila, oxiranila, oxetanila, tetra-hidrofuranoíla, tetra-hidropiranila, tetra-hidropirindinila, tetra-hidropirimidinila, tetra-hidrotiofenila, tetra-hidrotiopiranila e similares. Um grupo heterociclila substituído é substituído em qualquer um ou mais átomo de anel substituível, que é um átomo de carbono de anel ou de nitrogênio ligado a um hidrogênio.
[0054] Como aqui usadas, muitas porções (por exemplo, alquila, alquileno, cicloalquila, cicloalquileno, arila, arileno, heteroarila, heteroarileno, heterociclila ou heterociclileno) são referidas como sendo ou substituídas ou opcionalmente substituídas. Quando uma porção é modificada por um destes termos, a menos que de outro modo notado, isso indica que qualquer porção da porção que é conhecida por aquele
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19/185 versado na técnica como sendo disponível para substituição pode ser substituída, que inclui um ou mais substituintes. Onde se mais do que um substituinte está presente, então cada substituinte pode ser independentemente selecionado. Tais significados para substituição são bem conhecidos na técnica e/ou ensinado pela divulgação instantânea. Os substituintes opcionais podem ser quaisquer substituintes que são adequados para se ligarem à porção.
[0055] Substituintes adequados são aqueles que não têm efeito adverso significante na habilidade do composto para inibir PARP. Onde substituintes adequados não são especificamente enumerados, substituintes exemplares incluem, porém não são limitados a: (CiCõjalquila, (Ci-C5)hidroxialquila, (Ci-C5)haloalquila, (C1-C5) alcóxi, (C1C5) haloalcóxi, halogênio, hidroxila, ciano, amino, -CN, -NO2, -ORC, -NRaRb, -S(O)iRa, -NRaS(O)iRb, -S(O)iNRaRb, -C(=O)ORa, -OC(=O)ORa, -C(=S)ORa, -O(C=S)Ra, -C(=O)NRaRb, -NRaC(=O)Rb, -C(=S)NRaRb, -NRaC(=S)Rb, -NRa(C=O)ORb, -O(C=O)NRaRb, -NRa(C=S)ORb, -O(C=S)NRaRb, -NRa(C=O)NRaRb, -NRa(C=S)NRaRb, -C(=S)Ra, -C(=O)Ra, fenila, ou heteroarila de 5 a 6 membros. Cada Ra e cada Rb são independentemente selecionados de -H e (Ci-C5)alquila, opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci-C3)alcóxi; Rc é -H, (C1Cõjhaloalquila ou (Ci-C5)alquila, em que a (Ci-C5)alquila é opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci-C3)alcóxi.
[0056] Certos compostos descritos aqui podem existir em várias formas esteroisoméricas ou tautoméricas. Estereoisômeros são compostos que se diferem apenas em seu arranjo espacial. Quando um composto divulgado é denominado ou representado pela estrutura sem indicação de estereoquímica, deve ser entendido que 0 nome ou estrutura engloba todos os possíveis estereoisômeros, isômeros espaciais, incluindo estereoisômeros ou isômeros geométricos essencialmente puros, bem como combinação dos mesmos.
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20/185 [0057] Em determinados casos, formas tautoméricas dos compostos descritos existem, tais como as estruturas tautoméricas mostradas abaixo:
[0058] Deve ser entendido que quando um composto aqui é representado por uma fórmula estrutural ou designado por um nome químico aqui, todas as outras formas tautoméricas que podem existir para o composto são englobadas pela fórmula estrutural.
[0059] Certos compostos descritos podem existir em várias formas estereoisoméricas. Estereoisômeros são compostos que se diferem apenas em seu arranjo espacial. Enantiômeros são pares de estereoisômeros cujas imagens espelhadas não são sobreponíveis, mais comumente porque elas contêm um átomo de carbono assimetricamente substituído que age como um centro quiral. Enantiômero significa um par de moléculas que são imagens espelhadas uma da outra e não são sobreponíveis. Diastereômeros são estereoisômeros que contêm dois ou mais átomos de carbono assimetricamente substituídos. Isômeros geométricos são estereoisômeros que se diferem na orientação de átomos substituintes em relação à ligação dupla carbonocarbono, a um anel carbociclila, ou a um sistema bicíclico em ponte.
[0060] Quando um isômero geométrico é indicado pelo nome ou estrutura, deve ser entendido que a pureza isomérica geométrica do isômero geométrico denominado ou representado é pelo menos 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ou 99,9% puro por peso. Pureza isomérica geométrica é determinada pela divisão do peso do isômero geométrico
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21/185 denominado ou representado na mistura pelo peso total de todos os isômeros geométricos na mistura.
[0061] Quando a estereoquímica de um composto divulgado é denominada ou representada pela estrutura, o estereoisômero denominado ou representado é pelo menos 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ou 99,9% puro em peso em relação a todos os outros estereoisômeros. Puro em peso porcento em relação a todos os outros estereoisômeros é a relação do peso de um estereoisômero sobre o peso dos outros estereoisômeros. Quando um enantiômero único é denominado ou representado pela estrutura, o enantiômero representado ou denominado é pelo menos 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ou 99,9% opticamente puro em peso (também referido como enantiomericamente puro). Pureza ótica em peso porcento é a relação do peso do enantiômero sobre o peso do enantiômero mais o peso de seu isômero ótico.
[0062] Quando a estereoquímica de um composto divulgado é denominada ou representada pela estrutura, e a estrutura denominada e representada engloba mais do que um estereoisômero (por exemplo, como em um par diastereomérico), deve ser entendido que um dos estereoisômeros englobados ou qualquer mistura dos estereoisômeros englobados estão incluídos. Deve ser entendido também que a pureza estereoisomérica dos estereoisômeros denominados e representados é pelo menos 60%, 70%, 80%, 90%, 99% ou 99,9% puro em peso em relação a todos os outros estereoisômeros. A pureza estereoisomérica neste caso é determinada pela divisão do peso total na mistura dos estereoisômeros englobados pelo nome ou estrutura pelo peso total na mistura de todos os estereoisômeros.
[0063] Quando um composto divulgado é denominado ou representado pela estrutura sem indicação da estereoquímica, e o composto tem um centro quiral, deve ser entendido que o nome ou estrutura engloba um enantiômero de composto livre do isômero ótico cor
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22/185 respondente, uma mistura racêmica do composto e misturas enriquecidas em um enantiômero em relação a seu isômero ótico correspondente.
[0064] Quando um composto divulgado é denominado ou representado pela estrutura sem indicação da estereoquímica e, por exemplo, o composto tem pelo menos dois centros quirais, deve ser entendido que o nome e estrutura engloba um estereoisômero livre de outros estereoisômeros, misturas de estereoisômeros, e misturas de estereoisômeros nos quais um ou mais estereoisômeros é enriquecido em relação ao outro estereoisômero. Por exemplo, o nome ou estrutura pode englobar um estereoisômero livre de outros diastereômeros, misturas de estereoisômeros, e misturas de estereoisômeros nos quais um ou mais diastereômeros é enriquecido em relação ao outro diastereômero.
[0065] Misturas enantioméricas e diastereoméricas podem ser resolvidas em seus componentes enantiômeros ou estereoisômeros por métodos bem conhecidos, tais como cromatografia de gás de fase quiral, cromatografia de gás líquida de alto desempenho de fase quiral, cristalizando o composto como um complexo de sal quiral, ou cristalizando o composto em um solvente quiral. Enantiômeros e diastereômeros podem também ser obtidos de intermediários diastereomericamente ou enantiomericamente puros, reagentes, e catalisadores por métodos sintéticos assimétricos bem conhecidos.
Composições Farmacêuticas [0066] Os compostos descritos aqui são inibidores de PARP (por exemplo, inibidores de PARP-1). A composição farmacêutica da presente invenção compreende um ou mais inibidores de PARP (por exemplo, inibidores de PARP-1), ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
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23/185 [0067] Veículo (carrier) farmaceuticamente aceitável e diluente farmaceuticamente aceitável referem-se a uma substância que auxilia a formulação e/ou administração de um agente ativo a, e/ou absorção por um indivíduo, e pode ser incluída nas composições da presente invenção sem causar um significante efeito adverso toxicológico ao indivíduo. Exemplos não limitantes de veículos (carriers) e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis incluem água, NaCI, soluções de salina normal, de Ringer lactada, sacarose normal, glicose normal, aglutinantes, cargas, desintegrantes, lubrificantes, revestimentos, adoçantes, aromatizantes, soluções de sal (tal como solução de Ringer), álcoois, óleos, gelatinas, carboidratos tais como lactose, amilose ou amido, ésteres de ácido graxo, hidroximetilcelulose, polivinil pirrolidina, e cores, e similares. Tais preparações podem ser esterilizadas e, se desejado, misturadas com agentes auxiliares tais como lubrificantes, conservantes, estabilizantes, agentes umectantes, emulsificantes, sais para influenciar a pressão osmótica, tampões, colorantes, e/ou substâncias aromáticas e similares que não reagem deleteriamente com ou interferem com a atividade dos compostos fornecidos aqui. Alguém versado na técnica reconhecerá que outros excipientes são adequados para uso com os compostos descritos.
[0068] As composições farmacêuticas dos presentes ensinamentos opcionalmente incluem um ou mais veículos (carriers) e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis para elas, tais como lactose, amido, celulose e dextrose. Outros excipientes, tais como agentes aromatizantes; adoçantes; e conservantes, tais como metil, etil, propil e butil parabenes, podem também ser incluídos. Listagem mais complete de excipientes adequadas pode ser encontrada no Handbook of Pharmaceutical Excipients (5a Ed., Pharmaceutical Press (2005)). Uma pessoa versada na técnica saberia como preparer formulações adequadas para vários tipos de rotinas de administração. Procedimentos e ingredien
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24/185 tes convencionais para a seleção e preparação de formulações adequadas são descritas, por exemplo, em Flemington's Pharmaceutical Sciences (2003 - 20â. edição) e na The United States Pharmacopeia·. The National Formulary (USP 24 NF19) publicado em 1999. Os veículos (carriers), diluentes e/ou excipientes são aceitáveis no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da composição farmacêutica e não deletérios ao receptor das mesmas.
Métodos de Tratamento [0069] PARPs estão envolvidos em uma ampla gama de funções celulares, incluindo reparo ao DNA, homeostase mitocondrial, proteção contra estresse oxidativo, inflamação, regulação metabólica, ritmo circadiano, diferenciação e envelhecimento. Veja, por exemplo, Peter Bai, Molecular Cell 58.-947 (2015). Assim sendo, inibidores de PARP têm o potencial de tratar uma ampla gama de doenças, e diversos inibidores de PARP têm sido aprovados para o tratamento de câncer.
[0070] A presente invenção fornece um método para o tratamento de um indivíduo com uma doença que pode ser melhorada por inibição de PARP, administrando ao indivíduo uma quantidade eficaz de um ou mais compostos descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou a correspondente composição farmacêutica.
[0071] Um indivíduo é um mamífero, preferivelmente um humano, porém pode também ser um animal em necessidade de tratamento veterinário, por exemplo, animais de companhia (por exemplo, cães, gatos e similares), animais de fazenda (por exemplo, vacas, ovelhas, porcos, cavalos, e similares) e animais de laboratório (por exemplo, ratos, camundongos, cobaias, e similares).
[0072] Em uma modalidade, as doenças que podem ser melhoradas por inibição de PARP são um distúrbio de estrutura muscular, um distúrbio de ativação neuronal, um distúrbio de fadiga muscular, um distúrbio de massa muscular, uma doença de oxidação beta, uma do
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25/185 ença metabólica, um câncer, uma doença vascular, uma doença vascular ocular, uma doença ocular muscular, ou uma doença renal. [0073] Em um aspecto desta modalidade, o distúrbio de estrutura muscular é selecionado de Miopatia de Bethlem, doença do núcleo central, disproporção do tipo de fibra congênita, distrofia muscular distai (MD), Duchenne & Becker MD, Emery-Dreifuss MD, MD facioescapuloumeral, miopatia corporal de hialina, MD da cintura, um distúrbio do canal de sódio muscular, condrodistrofia miotônica, distrofia miotônica, miopatia miotubular, doença de corpo nemalínico, MD oculofaríngeo, e incontinência urinária por estresse.
[0074] Em outro aspecto da modalidade, o distúrbio de ativação neuronal é selecionado de esclerose lateral amiotrófica, Doença Charcot-Marie-Tooth, síndrome Guillain-Barre, síndrome Lambert-Eaton, esclerose múltipla, miastenia grave, lesão de nervo, neuropatia periférica, atrofia muscular espinhal, paralisia tardia do nervo ulnar, e distúrbio mioneural tóxico.
[0075] Em outro aspecto desta modalidade, o distúrbio de fadiga muscular é selecionado de síndrome da fadiga crônica, diabetes (tipo I ou II), doença de armazenagem de glicogênio, fibromialgia, Ataxia de Friedreich, claudicação intermitente, miopatia de armazenagem de lipídeo, MELAS, mucopolissacaridose, doença de Pompe, e miopatia tirotóxica;
[0076] Em outro aspecto desta modalidade, o distúrbio de massa muscular é caquexia, degeneração de cartilagem, paralisia cerebral, síndrome compartimental, miopatia de doença crítica, miosite de corpo de inclusão, atrofia muscular (disuse), sarcopenia, miopatia esteroide, lúpus eritematoso sistêmico.
[0077] Em outro aspecto desta modalidade, a doença de beta oxidação é selecionada de transportador de carnitina sistêmico, deficiência de carnitina palmitoiltransferase (CPT) II, deficiência de acil-CoA
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26/185 desidrogenase (LCHAD ou VLCAD) de cadeia muito longa, deficiência de enzima trifuncional, desificiência de acil-CoA desidrogenase de cadeia média (MCAD), deficiência de acil-CoA desidrogenase de cadeia curta (SCAD), e distúrbios responsivos à riboflavina de β-oxidação (RR
-MADD).
[0078] Ainda em outro aspecto desta modalidade, a doença metabólica é selecionada de hiperlipidemia, dislipidemia, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hipocolesterolemia de HDL, hipercolesterolemia de LDL e/ou não colesterolemia de HLD, VLDL hiperproteinemia, dislipoproteinemia, apolipoproteína A-l hipoproteinemia, aterosclerose, doença de esclerose arterial, doença de sistemas cardiovasculares, doença cerebrovascular, doença circulatória periférica, síndrome metabólica, síndrome X, obesidade, diabetes (tipo I ou II), hiperglicemia, resistência à insulina, tolerância à glicose prejudicada, hiperinsulinismo, complicação diabética, insuficiência cardíaca, infarto cardíaco, cardiomiopatia, hipertensão, Doença hepática graxa não alcoólica (NAFLD), Esteto-hepatite não alcoólica (NASH), trombo, doença de Alzheimer, doença neurodegenerativa, doença desmielinizante, esclerose múltipla, leucodistrofia adrenal, dermatite, psoríase, acne, envelhecimento da pele, tricose, inflamação, artrite, asma, síndrome do intestino hipersensível, colite ulcerativa, doença de Crohn, e pancreatite.
[0079] Em outro aspecto desta modalidade, a doença vascular é selecionada de insuficiência vascular periférica, doença vascular periférica, claudicação intermitente, doença vascular periférica (PVD), doença arterial periférica (PAD), doença oclusiva arterial periférica (PAOD), e arteriopatia obliterativa periférica.
[0080] Em outro aspecto desta modalidade, a doença vascular ocular é selecionada de degeneração macular relacionada com a idade (AMD), doença de Stargardt, retinopatia hipertensiva, retinopatia
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27/185 diabética, retinopatia, degeneração macular, hemorragia retinal, e glaucoma.
[0081] Ainda em outro aspecto desta modalidade, a doença ocular muscular é selecionada de estrabismo, oftalmoplegia externa progressiva, esotropia, exotropia, um distúrbio de refração e acomodação, hipermetropia, miopia, astigmatismo, anisometropia, presbiopia, distúrbios de acomodação, e oftalmoplegia interna.
[0082] Em um aspecto final desta modalidade, a doença renal é selecionada de glomerulonefrite, glomeruloesclerose, síndrome nefrótica, nefroesclerose hipertensiva, nefrite aguda, hematúria recorrente, hematúria persistente, nefrite crônica, nefrite rapidamente progressiva, insuficiência renal aguda (tmbém conhecida como lesão renal aguda), lesão renal crônica, nefropafia diabética, e síndrome de Bartter.
[0083] Em outra modalidade, a doença que pode ser melhorada por inibição de PARP inclui lipodistrofia genética, doença hepática graxa não alcoólica (NAFLD), esteato-hepatite não alcoólica (NASH), lesão por isquemia/reperfusão renal (IRI), Distrofia muscular de Duchenne & Becker, diabetes (tipo I ou tipo II), obesidade, e sarcopenia.
[0084] Em outra modalidade, a doença que pode ser melhorada por inibição de PARP inclui doença de Alpers, oftalmoplegia externa progressiva crônica-CPEO, Síndrome Kearns-Sayra (KSS), Neuropatia Ótica Hereditária de Leber (LHON), Miopatia MELAS-mitocondrial, encefalomiopatia, acidose lática, e episódios semelhantes ao acidente vascular cerebral, epilepsia MERRF-mioclônica e doença de fibra vermelha-esfarrapada, Fraqueza muscular neurogênica NARP, ataxia, e retinite pigmentosa, Síndrome de Pearson, ototoxicidade induzida por quimioterapia com base em platina, Síndrome de Cockayne, xeroderma pigmentoso A, Degeneração Walleriana, e Lipodistrofia induzida por HIV. Em ainda outra modalidade, a doença que pode ser melhorada por inibição de PARP é lesão renal aguda.
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28/185 [0085] Em determinadas modalidades, a invenção fornece métodos para uso dos compostos da invenção e composições farmacêuticas dos mesmos. Os compostos da invenção e composições farmacêuticas dos mesmos podem ser úteis para uma variedade de aplicações terapêuticas incluindo, por exemplo, tratar e/ou reduzir uma ampla variedade de doenças e distúrbios incluindo, por exemplo, doenças ou distúrbios relacionados com envelhecimento ou estresse, diabetes, obesidade, doença neurodegenerativas, doença cardiovascular, distúrbios de coagulação sanguínea, inflamação, câncer, e/ou eritema, etc. Os métodos compreendem administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um ou mais compostos da invenção e/ou composições farmacêuticas dos mesmos.
[0086] Em outra modalidade, os compostos da invenção e composições farmacêuticas dos mesmos podem ser usados para tratar células úteis para o transplante ou terapia celular, incluindo, por exemplo, enxertos de tecido sólido, transplantes de órgão, suspensões celulares, células-tronco, células da medula óssea, etc. As células ou tecido podem ser um asutoenxerto, um aloenxerto, um synenxerto ou um xeroenxerto. As células ou tecido podem ser tratadas usando os compostos da invenção e composições farmacêuticas dos mesmos antes da administração/implante, concomitantemente com a administração/implante, e/ou após administração/implantate em um indivíduo. As células ou tecido podem ser tratados antes da remoção das células do doador individual, ex vivo após remoção das células ou tecido do doador individual, ou após implante no receptor. Por exemplo, o doador ou receptor individual pode ser tratado sistemicamente com as preparações ou composições farmacêuticas de cloreto de robosídeo de nicotinamida da invenção, ou pode ter um subconjunto de células/tecido tratadas localmente com os compostos da invenção e composições farPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 42/215
29/185 macêuticas dos mesmos. Em determinadas modalidades, as células ou tecido (ou doador/receptor individuais) podem adicionalmente ser tratadas com outro agente terapêutico útil para prolongar a sobrevivência do enxerto, tal como, por exemplo, um agente imunosupressivo, uma citocina, um fator angiogênico, etc.
[0087] Ainda em outras modalidades, os compostos da invenção e/ou uma composição farmacêutica dos mesmos podem ser usados para tratar condições da pele. Condições da pele exemplars que podem ser tratadas de acordo com os métodos descritos aqui incluem distúrbios ou doenças associados com ou causados por inflamação, dano solar ou envelhecimento natural. Por exemplo, as compolsições encontram utilidade no tratamento de dermatite de contato (incluindo dermatite de contato irritante e dermatite de contato alérgica), dermatite atópica (também conhecida como eczema alérgico), ceratose actínica, distúrbios de ceratinização (incluindo eczema), doenças de epidermólise bolhosa (incluindo pênfigo), dermatite esfoliativa, dermatite seborreica, eritemas (incluindo eritema multiforme e eritema nodoso), dano causado pelo sol ou outras fontes de luz, lúpus eritemtoso discoide, dermatomiosite, psoríase, câncer da pele e os efeitos de envelhecimento natural. Em outra modalidade, os compostos da invenção e composições farmacêuticas dos mesmos podem ser usados para o tratamento de ferimentos e/ou queimaduras para promover cicatrização, incluindo, por exemplo, queimaduras de primeiro, segundo ou terceiro graus, e/ou queimduras térmica, química ou elétrica.
[0088] Os compostos da invenção e composições farmacêuticas dos mesmos podem também ser administrados aos indivíduos para o tratamento de doenças, por exemplo, doenças crônicas, associadas com morte celular, a fim de proteger as células de morte celular. Doenças exemplares incluem aquelas associdas com morte celular neural, disfunção neuronal, ou morte celular muscular ou disfunção, tal
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30/185 como doença de Parkinson, doença de Alzheimer, esclerose múltipla, esclerose lateral amiotrófica, e distrofia muscular; AIDS; hepatite fulminante; doenças ligadas à degeneração do cérebro, tais como Doença Creutzfeld-Jakob, retinite pigmentosa e degeneração cerebelar; mielodisplasia tal como anemia aplásica; doenças isquêmicas tal como infarto do miocárdio e acidente vascular cerebral; doenças hepáticas tal como hepatite alcoólica, hepatite B e hepatite C; doenças das articulações tal como osteoartrite; aterosclerose; alopécia; dano à pele devido à luz UV; líquen plano; atrofia da pele; catarata; e rejeições a enxerto. Morte celular pode também ser causada por cirurgia, terapia de fármaco, exposição química ou exposição à radiação.
[0089] Os compostos da invenção e composições farmacêuticas dos mesmos podem também ser administrados a um indivíduo sofrendo de uma doença aguda, por exemplo, dano a um órgão ou tecido, por exemplo, um indivíduo sofrendo de acidente vascular cerebral ou infarto do miocárdio ou um indivíduo sofrendo de uma lesão da medula espinhal. Os compostos da invenção e composições farmacêuticas dos mesmos podem também ser usados para reparar um fígado não alcoólico.
[0090] Em outra modalidade, a invenção fornece um método para o tratamento de uma doença cardiovascular administrando como um indivíduo em necessidade do mesmo, um ou mais dos compostos da invenção e/ou uma composição farmacêutica dos mesmos. Doenças cardiovasculares que podem ser tratadas usando os compostos da invenção e composições farmacêuticas dos mesmos incluem cardiomiopatia ou miocrdite; tal como cardiomiopatia idiopática, cardiomiopatia metabólica, cardiomiopatia alcoólica, cardiomiopatia induzid por fármaco, cardiomiopatia isquêmica, e cardiomiopatia hipertensiva. São também tratáveis usando composições e métodos descritos aqui, distúrbios ateromatosos dos vasos sanguíneos maiores (doença macro
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31/185 vascular) tais como a aorta, as artérias coronarianas, as artérias carótidas, as artérias cerebrovasculares, as artérias renais, as artérias ilíacas, as artérias femorais, e as artérias popliteais. Outras doenças vasculares que podem ser tratadas incluem aquelas relacionadas com agregação de plaqueta, arteríolas retinais, as arteríolas glomerulares, o vasa nervorum, arteríolas cardíacas, e leitos capilares do olho associados, os rins, o coração, e os sistemas nervosos central e periférico. Os compostos da invenção e composições farmacêuticas dos mesmos podem também ser usados para aumentar os níveis de HDL em plasma de um indivíduo.
Métodos de Administração e Formas de Dosagem [0091] A quantidade precisa de composto administrada para fornecer uma quantidade eficaz para o indivíduo dependerá do modo de administração, do tipo, e severidade do câncer, e das características do indivíduo, tal como saúde geral, idade, sexo, peso corporal, e tolerância a fármacos. O técnico versado será capaz de determinar as dosagens apropriadas dependendo destes e outros fatores. Quando administrada em combinação com outros agentes terapêuticos, por exemplo, quando administrada em combinação com um agente anticâncer, uma quantidade eficaz de qualquer agente terapêutico adicional dependerá do tipo de fármaco usado. Dosagens adequadas são conhecidas para agentes terapêuticos aprovados e podem ser ajustadas pelo técnico versado, de acordo com a condição do indivíduo, do tipo de condição(ões) sendo tratadas e a quantidade de um composto da invenção sendo usado pelas seguintes, por exemplo, dosagens reportadas na literatura e recomendadas no Physician’s Desk Reference (57a. ed., 2003).
[0092] O termo quantidade eficaz significa uma quantidade quando administrada ao indivíduo que resulta em resultados benéficos ou desejados, incluindo resultados clínicos, por exemplo, inibe, supri
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32/185 me ou reduz os sintomas da condição que está sendo tratada no indivíduo, quando comparados a um controle. Por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz pode ser dada em forma de dosagem unitária (por exemplo, 0,1 mg a cerca de 50 g por dia, alternativamente de 1 mg a cerca de 5 gramas por dia; e em outra alternativa, de 10 mg a 1 grama por dia).
[0093] Os termos administrar, administrando, administração e similares, quando aqui usados, referem-se a métodos que podem ser usados para possibilitar a liberação de composições para o sítio desejado de ação biológica. Estes métodos incluem, porém não estão limitados a, intra-articular (nas articulações), intravenoso, intramuscular, intratumoral, intradérmico, intraperitoneal, subcutâneo, oralmente, topicamente, intratecalmente, inalacionalmente, transdermicamente, retalmente e similares. Técnicas de administração que podem ser empregadas com os agentes e métodos descritos aqui são encontradas, por exemplo, em Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, edição atual; Pergamon; e Remington’s, Pharmaceutical Sciences (edição atual), Mack Publishing Co., Easton, Pa.
[0094] Além disso, os inibidores de PARP descritos podem ser coadministrados com outros agentes terapêuticos. Quando aqui usados, os termos coadministração, administrado em combinação com, e seus equivalentes gramaticais, são entendidos abranger a administração de dois ou mais agentes terapêuticos a um único indivíduo, e destinam-se a incluir regimes de tratamento nos quais os agentes são administrados pela mesma rotina ou diferentes rotinas de administração ou ao mesmo tempo ou em momentos diferentes. Em algumas modalidades, o um ou mais compostos descritos aqui será coadministrado com outros agentes. Estes termos abrangem a administração de dois ou mais agentes ao indivíduo, de modo que ambos os agentes e/ou seus metabólitos estão presentes no indivíduo ao mesmo tempo.
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Estes incluem administração simultânea em composições separadas, administração em diferentes momentos em composições separadas, e/ou administração em uma composição na qual, ambos os agentes estão presentes. Desse modo, em algumas modalidades, os compostos descritos aqui e o(s) outro(s) agente(s) é(são) administrado(s) em uma única composição. Em algumas modalidades, os compostos descritos aqui e o(s) outro(s) agente(s) é(são) misturado(s) na composição.
[0095] O modo particular de administração e o regime de dosagem serão selecionados pelo médico assistente, levando em consideração as particularidades do caso (por exemplo, o indivíduo, a doença, o estado de doença envolvido, o tratamento particular). O tratamento pode envolver doses diárias ou várias vezes ao dia, ou menos que uma vez ao dia (tal como semanalmente ou mensalmente, etc.) durante um período de tempo de alguns dias a meses, ou mesmo anos. Entretanto, uma pessoa versada na técnica imediatamente reconhecería doses apropriadas e/ou equivalentes observando dosagens de composições aprovadas para o tratamento de uma doença mediada por PARP, usando os inibidores de PARP descritos (por exemplo, inibidores de PARP-1) para orientação.
[0096] Os compostos ou as correspondentes composições farmacêuticas instruídas aqui podem ser administrados a um paciente de uma variedade de formas, dependendo da rotina de administração selecionada, como será entendido por aqueles versados na técnica. Os compostos dos presentes ensinamentos podem ser administrados, por exemplo, por administração oral, parenteral, bucal, sublingual, nasal, retal, emplastro, bomba ou transdérmica e as composições farmacêuticas formuladas consequentemente. A administração parenteral inclui modos de administração intravenoso, intraperitoneal, subcutâneo, intramuscular, transepitelial, nasal, intrapulmonar, intratecal, retal e tópi
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34/185 co. Administração parenteral pode ser por infusão contínua durante um período de tempo selecionado.
[0097] A composição farmacêutica da invenção é formulada para ser compatível com sua rotina de administração pretendida. Em uma modalidade, a composição é formulada de acordo com os procedimentos de rotina como uma composição farmacêutica adaptada para administração intravenosa, subcutânea, intramuscular, oral, intranasal, ou tópica a seres humanos. Em modalidades preferidas, a composição farmacêutica é formulada para administração intravenosa.
[0098] Tipicamente, para administração terapêutica oral, um composto dos presentes ensinamentos pode ser incorporado com excipiente e usado na forma de comprimidos ingeríveis, comprimidos bucais, trociscos, cápsulas, elixires, suspensões, xaropes, wafers e similares.
[0099] Tipicamente para administração parenteral, soluções de um composto dos presentes ensinamentos podem geralmente ser preparadas em água adequadamente misturada com um tensoativo, tal como, hidroxipropilcelulose. As dispersões podem também ser preparadas em glicerol, polietilenoo glicóis líquidos, DMSO e misturas dos mesmos, com ou sem álcool, e em óleos. Sob as condições normais de armazenagem e uso, estas preparações contém um conservante para prevenir o crescimento de micro-organismos.
[00100] Tipicamente, para uso injetável, soluções aquosas estéreis ou dispersão de, e pós estéreis de um composto descrito aqui para a preparação extemporânea de soluções injetáveis estéreis ou dispersões são apropriados.
EXEMPLIFICAÇÃO
Abreviações
Me metila
Et etila
Boc terc-butiloxicarbonila
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| Ac | acetila |
| Ph | fenila |
| Tf | trifluorometanossulfonila |
| DIPEA | di-isopropiletilamina |
| EDC | 3-(3-dimetilaminopropil)-1-etilcarbodi-imida |
| HOBt | 1 -hidroxibenzotriazol |
| DCM | diclorometano |
| DMF | N,N-dimetilformamida |
| DMSO | dimetilsulfóxido |
| TFA | ácido trifluoroacético |
| THF | tetra-hidrofurano |
| TMS | trimetil silano |
| TMSOTf | trimetilsilil trifluorometanossulfonato |
| aq M | aquoso concentração expressa em mol/L |
| RT | temperatura ambiente |
| TLC | cromatografia de camada fina |
| HPLC | cromatografia líquida de alto desempenho |
| NMI | 1-metil imidazol |
| LCMS | cromatografia líquida - espectrometria de massa |
| ESI+ | m/z valores em espectroscopia de massa (lonização ESI) |
| ESI- | m/z valores em espectroscopia de massa (lonização ESI) |
1H RMN (DMSO-cfe) δ (ppm) de pico em 1H RMN em DMSO-rf6
| s | singleto (espectro) |
| d | dubleto (espectro) |
| t | tripleto (espectro) |
| q dd | quarteto (espectro) duplo dubleto (espectro) |
| br | linha ampla (espectro) |
| m | multipleto (espectro). |
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| 4-ANI | 4-Amino-1,8-naftalimida |
| ADP | difosfato de adenosina |
| CPM | contagens por minuto |
| DNA | Ácido deoxiribonucleico |
| DTT | DL-Ditiotreitol |
| FB | Base plana |
| mg mM | miligrama mili molar |
| NAD | Dinucleotídeo de Nicotinamida-Adenina |
| nM | nano molar |
| ng PARP 1 | nano grama Poli (ADP-ribose) polimerase-1 |
| SPA | Ensaio de proximidade de cintilação |
| pCi pL T3P | micro curie microlitro anidrido propilfosfônico |
| NMM | 4-metilmorfolina |
| CDI | 1,1 ’-carbonildi-imidazol |
| EtOAc | acetato de etila |
| TEMPO | 2,2,6,6-Tetrametil-1 -piperidinilóxi |
| MTBE | terc-butil metil éter |
| HATU | hexafluorofosfato de 3-óxido de 1- |
[bis(dimetilamino)metileno]-1/-/-1,2,3-triazolo[4,5-ò]piridínio
| IPA | álcool de isopropila |
| DMA | A/,A/-dimetilacetamida |
| BINAP | (1,1'-binaftaleno-2,2'-di-il)bis(difenilfosfina) |
| NMP | 1 -metil-2-pirrolidinona |
| Dppf DMAP | 1,1 ’-bis(difenilfosfino)ferroceno 4-(dimetilamino)piridina |
| DIEA | A/,A/-di-isopropiletilamina |
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Exemplo 1 - Síntese de 3-cloro-4-(4-(3-(S-cloro-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-2-il)propanoil)piperazin-1-il)-N-ciclopropilbenzamida
Etapa 1:
Eiaca 1 [00101] A uma solução agitada de ácido 3-cloro-2-nitro-benzoico (15 g, 0,074 mol) em água (105 mL), NH3 aquoso a 30% (6 mL) e solução aquosa de ditionito de sódio (52 g, 0,298 mol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante uma hora (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi acidificada com HCI concentrado (30 mL) até o pH = 3, extraída com EtOAc (2 x 500 mL), lavada com água (2 x 100 mL) e salmoura (150 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi lavado com Et3O (50 mL) para fornecer o ácido 2-amino-3clorobenzoico (9 g, 70%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS: m/z: 172,3 [M+H]+.
Etapa 2:
CO?K CONHj·
..L Nlb
H J Assess Ní A 1? h b í
A'-1 [00102] A solução agitada de ácido 2-amino-3-cloro-benzoico (9g, 0,052 mol) e CDI (9 g, 0,055 mol) em DMF (180 mL) foi aquecida para 70°C durante uma hora. Em seguida, NH3 aquoso a 30% (144 mL) foi adicionado mantendo a temperatura a 70°C e agitado durante 16 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente, despejada em água
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38/185 gelada (1 L) e extraída com EtOAc (2 x 250 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (2 x 100 mL), salmoura (100 mL), secados sobre Na2SC>4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi lavado com Et2O (2 x 30 mL) para fornecer 2-amino-3-cloro-benzamida (5,4 g, 60%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS: m/z: 171,3 [M+H]+.
Etapa 3
A
Cl·' íH h, Et.a?3-2 [00103] A uma solução agitada de 2-amino-3-cloro-benzamida (2 g, 11,76 mmols) dissolvida em piridina (15 mL), recolhida em um tubo selado, cloreto de 4-bromobutanoíla (3,3 g, 17,64 mmols) em DCM (5 mL) foi adicionado a 0°C. A mistura de reação foi aquecida para 100°C e agitada durante 12 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente, diluída com água (150 mL) e extraída com EtOAc (2 x 150 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com solução de NH4CI aquosa saturada (2 x 50 mL), salmoura (50 mL), secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer 0 composto bruto que foi lavado com tolueno (20 mL), éter (2x10 mL) para dar origem a 8-cloro-2-(3-hidroxipropil)-3H-quinazolin-4-ona (600 mg, 21%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS: m/z: 239,4 [M+1]+.
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39/185
Etapa 4:
[00104] A uma solução agitada de 8-cloro-2-(3-hidroxipropil)-3Hquinazolin-4-ona (500 mg, 2,10 mmols) em ACN (10 mL), TEMPO (65 mg, 0,414 mmol) e solução de tampão de fosfato de sódio (8 mL, pH = 6,5) foram adicionados em temperatura ambiente e aquecidos para 40°C. Em seguida, clorito de sódio (3,75 g em 15 mL de água) e solução de clorito de sódio (4% em H2O, 15 mL) foram adicionados porção a porção a 40°C. A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente, basificada com solução de NaOH a 1 N até o pH = 8, vertida em solução de Na2S20s a 1 N (50 mL), lavada com MTBE (2 x 25 mL). A camada aquosa foi acidificada com HCI a 1 N até o pH = 1 e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL), secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o ácido 3-(8-cloro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (250 mg, 47%) que foi usado para etapa seguinte sem qualquer outra purificação.
LCMS: m/z: 253,3 [M+1]+.
Etapa 5:
[00105] A uma solução agitada de ácido 3-(8-cloro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (285 mg, 1,13 mmol) e 3-cloro-N-ciclopropil4-piperazin-1-il-benzamida (308 mg, 1,1 mmol) em DMF (2,6 mL),
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EDC-HCI (432 mg, 2,26 mmols), HOBt (305 mg, 2,26 mmols) e DIPEA (0,9 6 mL, 5,65 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 12 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água fria (50 mL), extraída com EtOAc (3 x 25 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (25 mL), salmoura (25 mL), secadas sobre Na2SO4, concentradas sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por Teledyne-ISCO Combiflash (5-7% de MeOH-DCM, cartucho de 4 gm ) para obter 3-cloro-4-(4-(3-(8-cloro-4-oxo-3,4-di-hidroquinazolin-2il)propanoil)piperazin-1-il)-A/-ciclopropilbenzamida (100 mg, 85% de LCMS) que foi novamente purificado por HPLC preparativa para dar origem ao composto puro (25 mg, 5%) como um sólido branco.
[00106] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,54 (brs, 1H), 8,42 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 8,05 -8,02 (m, 1H), 7,9 3-7,88 (m, 2H), 7,76 (dd, J= 8,1, 1,8 Hz, 1H), 7,42 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,70 (m, 2H), 3,61 (m, 2H), 3,08-2,9 2 (m, 2H), 2,8-2,79 (m, 7H), 0,71-0,62 (m, 2H), 0,60-0,52 (m, 2H).
LCMS: m/z: 514,4 [M+H]+.
Exemplo 2 - Síntese de 3-cloro-4-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il) propanoil] piperazin-1-il]benzamida
Etapa 1:
Oi Ϊ [00107] Um frasco de base redonda foi carregado com ácido 3cloro-4-fluoro-benzoico (2,0 g, 11,4 mmols), ácido sulfúrico (0,33 g, 3,4 mmols), MeOH (20 mL) e refluxado durante 16 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida; o resíduo foi diluído com água (15 mL) e
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41/185 extraído com EtOAc (3 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados em vácuo para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 40 g, 10% de EtOAc-hexano) para dar origem a metil 3-cloro-4-fluoro-benzoato (1,5 g, 69%) como um óleo amarelo claro.
[00108] 1H RMN [300 MHz, CDCh]: <5 8,08 (dd, J = 6,9, 2,1 Hz, 1H), 7,9 4-7,89 (m, 1H), 7,18 (t, J= 8,7 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H).
Etapa 2:
[00109] Metil 3-cloro-4-fluoro-benzoato (1,5 g, 7,9 mmols) foi colocado em um tubo selado, terc-butil éster de ácido piperazina-1carboxílico (1,48 g, 7,9 mmols) seguido por K2CO3 (3,29 g, 23 mmols) e DMSO (15 mL) foram adicionados e agitados a 100°C durante 10 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi vertida em água gelada (150 mL) e extraída com EtOAc (2 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (2 x 75 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 30 g, 10% de EtOAc-hexano) para dar origem a terc-butil 4-(2-cloro-4metoxicarbonil-fenil)piperazina-1-carboxilato (2,1 g, 74%) como um sólido branco.
LCMS: m/z·. 355,4 [M+H]+.
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42/185
Etapa 3:
[00110] A uma solução agitada de terc-butil 4-(2-cloro-4metoxicarbonil-fenil) piperazina-1-carboxilato (2 g, 5,6 mmols) em THF: MeOH : H2O (10:1:1,24 mL), LÍOH-H2O (0,47 g, 11,2 mmols) foi adicionado, aquecido a 60°C durante 12 horas (TLC indicou completo consumo do material de partida) e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em água (30 mL), resfriado para 0°C, acidificado com HCI a 1 N até o pH = 2-3. O sólido precipitado foi filtrado e secado sob vácuo para dar origem a ácido 4-(4-terc-butoxicarbonilpiperazin-1il)-3-cloro-benzoico (1,4 g, 73%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 341,4 [M+H]+.
Etapa 4:
[00111] A uma solução agitada de ácido 4-(4-tercbutoxicarbonilpiperazin-1-il)-3-cloro-benzoico (0,5 g, 1,4 mmol) em THF (5 mL), EDC-HCI (0,42 g, 2,2 mmols), HOBt-NH3 (0,33 g, 2,2 mmols) e DIPEA (0,75 mL, 4,4 mmols) foram adicionados sob atmosfera de argônio e agitados em temperatura ambiente durante 5 horas (TLC indicou o completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi diluído com água gelada (100 mL) e EtOAc (150 mL). A camada orgânica foi sepaPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 56/215
43/185 rada, lavada com salmoura (2 x 50 mL), secada sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi lavado com Et2O (3 x 5 mL), pentano (3x5 mL), secado sob vácuo elevado para dar origem a terc-butil 4-(4-carbamoil-2-cloro-fenil)piperazina-1-carboxilato (0,4 g, 80%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 340,4 [M+H]+.
Etapa 5:
[00112] A uma solução agitada de terc-butil 4-(4-carbamoil-2-clorofenil) piperazina-1-carboxilato (0,4 g, 1,0 mmol) em DCM (4 mL), resfriada para 0°C, HCI a 4 N - dioxano (0,4 mL) foi adicionado e agitado em temperatura ambiente durante 3 horas (TLC indicou o completo consumo do material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com Et2O (3x10 mL), pentano (2x5 mL) e secado sob vácuo elevado para dar origem a 3-cloro-4piperazin-1-il-benzamida (300 mg, quant.) como um sólido branco. LCMS: m/z: 240,4 [M+H]+.
Etapa 6:
[00113] A uma solução agitada de 3-cloro-4-piperazin-1-ilbenzamida (0,1 g, 0,45 mmol) em DMF (1 mL), ácido 3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (0,13 g, 0,50 mmol), HATU (0,26 g, 0,68 mmol) e DIPEA (0,23 mL, 1,37 mmol) foram adicionados sob atmosfePetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 57/215
44/185 ra de argônio e agitados em temperatura ambiente durante 8 horas (TLC indicou o completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi vertida em água gelada (10 mL) durante o qual precipitou sólido que foi filtrado, lavado com Et2Ü (3x5 mL), pentano (3x5 mL), MeOH (2x5 mL), secado sob vácuo elevado para fornecer 3-cloro-4[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]benzamida (0,04 g, 20%) como um sólido esbranquiçado.
[00114] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,22 (brs, 1H), 8,07 (dd, J = 8,1, 1,2 Hz, 1H), 7,9 8 (brs, 1H), 7,9 3 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,83-7,78 (m, 2H), 7,76 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 7,74-7,48 (m, 1H), 7,47 (brs, 1H), 7,44 (d, J= 7,2 Hz, 1H),3,69-3,61 (m, 4H), 3,07-2,9 7 (m, 4H), 2,89 (brs, 4H).
LCMS: m/z: 440,4 [M+H]+.
Exemplo 3 - Síntese de 3-cloro-N-metil-4-[4-[3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il) propanoil]piperazin-1-il]benzamida
Etapa 1:
[00115] A uma solução agitada de ácido 4-(4-tercbutoxicarbonilpiperazin-1-il)-3-cloro-benzoico (0,5 g, 1,4 mmol) em DMF (5 mL), CDI (0,35 g, 2,2 mmols) foi adicionado, resfriado para 0c°C, agitado em temperatura ambiente durante 10 minutos e solução de metilamina (solução a 1 M em THF, 1,46 mL, 1,4 mmol) foi adicionada. A mistura de reação foi aquecida para RT, agitada durante 8 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida), vertida em água resfriada (50 mL) e extraída em EtOAc (2 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (50 mL), salmoura (2 x
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45/185 mL), secados sobre Na2SC>4 e concentrados sob pressão reduzida.
O resíduo bruto foi lavado com Et2Ü (3x10 mL) e pentano (3x10 mL), secado sob vácuo elevado para fornecer terc-butil 4-[2-cloro-4(metilcarbamoil)fenil]piperazina-1-carboxilato (0,4 g, 77%) como um sólido marrom claro.
[00116] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 8,44 (br, 1H), 7,88 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,78-7,75 (m, 1H), 7,19 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,47 (t, J = 4,2 Hz, 4H), 2,9 8 (d, J= 4,8 Hz, 4H), 2,75 (d, J= 4,5 Hz, 3H), 1,42 (s, 9H). LCMS: m/z: 354,4 [M+H]+.
Etapa 2:
[00117] A uma solução agitada de terc-butil 4-[2-cloro-4(metilcarbamoil)fenil]piperazina-1-carboxilato (0,4 g, 1,0 mmol) em DCM (4 mL), resfriada para 0°C, HCI a 4 N - dioxano (1,1 mL) foi adicionado, aquecido para temperatura ambiente e agitado durante 5 horas (TLC indicou o completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com Et2Ü (2x5 mL) e pentano (2x5 mL) e secado sob vácuo para fornecer 3-cloro-N-metil-4-piperazin-1-il-benzamida (300 mg, 91%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 254,4 [M+H]+.
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Etapa 3:
[00118] A uma solução agitada de 3-cloro-N-metil-4-piperazin-1-ilbenzamida (0,1 g, 0,45 mmol) em DMF (1 mL), ácido 3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (0,14 g, 0,50 mmol), HATU (0,26 g, 0,68 mmol) e DI PEA (0,23 mL, 1,37 mmol) foram adicionados sob atmosfera de argônio e agitados em temperatura ambiente durante 8 horas (TLC indicou o completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi vertida em água gelada e extraída com EtOAc (2 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram separados, lavados com água (30 mL), salmoura (50 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi lavado com Et2O (3x5 mL), pentano (3x5 mL), 10% de MeOH-DCM (3x5 mL) e secado sob vácuo para dar origem a 3-cloro-N-metil-4-[4-[3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]benzamida (0,04 g, 19%) como um sólido esbranquiçado.
[00119] 1H RMN [300 MHz, DMSO-de]: ó 12,21 (brs, 1H), 8,45-8,44 (br, 1H), 8,07 (dd, J = 7,8, 1,2 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,797,73 (m, 2H), 7,57 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 7,47-7,42 (m, 1H), 7,18 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,69-3,59 (m, 4H), 3,07-2,9 7 (m, 4H), 2,89 (br s, 4H), 2,76 (d, J=4,5 Hz, 3H).
LCMS: m/z\ 454,4 [M+H]+.
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Exemplo 4 - Síntese de 3-cloro-N-ciclopropil-4-[4-[3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]benzamida
Etapa 1:
ΌΗ
EDC.KC1. HOBt. NMM.
DMF, RT, 4 h [00120] A uma solução agitada de ácido 3-cloro-4-fluoro-benzoico (1 g, 5,73 mmols) e ciclopropanamina (0,47 mL, 6,76 mmols) em DMF seco (10 mL), EDC-HCI (1,64 g, 8,56 mmols), HOBt (1,2 g, 8,89 mmols) e NMM (3,1 mL, 28,24 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente sob atmosfera de argônio e agitados durante 4 horas. Após conclusão da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi diluída com água fria (25 mL) e agitada durante 15 minutos. O sólido formado foi filtrado o que foi lavado com água (50 mL) e secado sob vácuo para dar origem a 3-cloro-N-ciclopropil-4-fluoro-benzamida (0,85 g, 70% de produção) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 214,3 [M+H]+.
Etapa 2:
o
| Λ | |
| < Ν’ Γ 0^80,120¾. 30 h | d J h |
| .A,,J H + «J ..........y;........;...........* F γ ' H | Γ 'ΤΓ K J Cf |
| Cl 3 4 | 5 |
[00121] A uma solução agitada de 3-cloro-N-ciclopropil-4-fluorobenzamida (3,1 g, 14,55 mmols) em DMSO seco (25 mL), piperazina (6,26 g, 72,77 mmols) foi adicionada em temperatura ambiente sob atmosfera de argônio e agitada a 120°C durante 30 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Após resfriar para temperaPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 61/215
48/185 tura ambiente, a massa de reação foi diluída com água (20 mL) e extraída com 10% de IPA-DCM (5 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi lavado com Et2Ü (2 x 20 mL) para dar origem a 3-cloro-N-ciclopropil-4-piperazin-1-il-benzamida (3,9 g, 96% de produção) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 280,4 [M+H]+.
Etapa 3:
[00122] A uma solução agitada de 3-cloro-N-ciclopropil-4-piperazin1-il-benzamida (100 mg, 0,36 mmol) e ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (94 mg, 0,43 mmol) em DMF seco (2 mL), EDC-HCI (103 mg, 0,54 mmol), HOBt (73 mg, 0,54 mmol) e DIPEA (0,2 mL, 1,15 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente sob atmosfera de argônio e agitados durante 4 horas. Após conclusão da reação (monitorada por TLC), a mistura de reação foi resfriada bruscamente com água fria (20 mL) e agitada durante 15 minutos. O sólido formado foi filtrado, lavado com água (50 mL) seguida por Et2Ü (2x5 mL) para fornecer composto 3-cloro-N-ciclopropil-4-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il]benzamida (80 mg, 47% de produção) como um sólido branco.
[00123] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,31 (brs, 1H), 8,41 (brs, 1H), 8,08 (d, J = 8,1 Hz , 1H), 7,89 (s, 1H), 7,79-7,40 (m, 2H), 7,57 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,45 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,69 (s, 2H), 3,62 (s, 2H), 3,07 (s, 2H), 2,9 7 (s, 2H), 2,88 (s, 4H), 2,85-2,81 (m, 1H), 0,71-0,65 (m, 2H), 0,56-0,55 (m, 2H).
LCMS: m/z\ 480,5 [M+H]+.
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49/185
Exemplo 5 - Síntese de 3-cloro-N-ciclobutil-4-[4-[3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]benzamida
Etapa 1:
[00124] A uma solução agitada de ácido 3-cloro-4-fluoro-benzoico (500 mg, 2,865 mmols) em DMF (5 mL), cloridrato de ciclobutanamina (369 mg, 3,438 mmols), EDC-HCI (820 mg, 4,297 mmols), HOBt (580 mg, 4,297 mmols) e NMM (1,6 mL, 14,325 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água fria (60 mL) e extraída com EtOAc (3 χ 60 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (50 mL), secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para dar origem a 3-cloro-N-ciclobutil-4-fluoro-benzamida (550 mg, 84%) que foi levada para a etapa seguinte sem qualquer outra purificação.
LCMS: m/z: 228,22 [M+H]+.
Etapa 2:
4 [00125] A uma solução agitada de 3-cloro-N-ciclobutil-4-fluorobenzamida (550 mg, 2,422 mmols) em DMSO (5,5 mL), piperazina (1,04 g, 12,114 mmols) foi adicionada em temperatura ambiente e aquecida a 120°C durante 16 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi vertida em água gelada
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50/185 (40 mL), o sólido foi precipitado que foi filtrado sob atmosfera de argônio para dar origem a 3-cloro-N-ciclobutil-4-piperazin-1-il-benzamida bruto (410 mg, 58%). O material bruto foi levado para a etapa seguinte sem qualquer purificação.
LCMS: m/z: 294,39 [M+H]+.
Etapa 3
[00126] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (100 mg, 0,458 mmol) em DMF (2 mL), 3-cloro-Nciclobutil-4-piperazin-1-il-benzamida (134 mg, 0,458 mmol), EDC-HCI (131 mg, 0,687 mmol), HOBt (92 mg, 0,687 mmol) e DIPEA (0,16 mL, 0,9 16 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 16 horas (TLC indicou completo consumo do material de partida). A mistura de reação foi vertida em água gelada (20 mL) durante o que o sólido foi precipitado que foi filtrado, lavado com Et2O (20 mL) e secado sob vácuo para obter 3-cloro-N-ciclobutil-4-[4-[3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]benzamida (90 mg, 40%) como um sólido branco.
[00127] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,2 (s, 1H), 8,60 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,07 (d, J= 7,7 Hz, 1H), 7,9 2 (s, 1H), 7,80-7,73 (m, 2H), 7,56 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,45 (t, J= 7,5 Hz, 1H), 7,17 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 4,42-4,37 (m, 1H), 3,65 (d, J= 22,5 Hz, 4H), 3,07 (brs, 2H), 2,9 7 (brs, 2H), 2,89 (s, 4H), 2,18 ( brs, 2H), 2,07-1,9 8 (m, 2H), 1,67-1,65 (m, 2H).
LCMS: m/z: 494,70 [M+H]+.
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Exemplo 6 - Síntese de 3-cloro-N-(1-metilciclopropil)-4-[4-[3-(4oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]benzamida
Etapa 1:
TA \Δ
EDC.HCI.. HO8Í
DWF,
[00128] A uma solução agitada de ácido 3-cloro-4-fluoro-benzoico (50 mg, 0,29 mmol) em DMF (2 mL), cloridrato de 1metilciclopropanamina (36 mg, 0,34 mmol), EDC-HCI (82 mg, 0,429 mmol), HOBt (58 mg, 0,429 mmol) e NMM (0,16 mL, 1,43 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (25 mL) durante o que precipitou o sólido que foi filtrado. O sólido foi lavado com água (20 mL) e secado sob vácuo elevado para dar origem a 3-cloro-4-fluoro-N-(1metilciclopropil)benzamida (50 mg, 78%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS: m/z: 228,19 [M+H]+.
Etapa 2:
[00129] A solução agitada de 3-cloro-4-fluoro-N-(1metilciclopropil)benzamida (500 mg, 2,21 mmols) e piperazina (951 mg, 11,06 mmols) em DMSO (5 mL) foi aquecida a 120°C durante 16 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com EtOAc (200 mL), lavada com água (1 χ
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100 mL) e solução de salmoura (1 x 100 mL). A camada orgânica foi separada, secada sobre Na2SC>4, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para dar origem ao 3-cloro-N-(1-metilciclopropil)-4piperazin-1-il-benzamida bruto (800 mg) que foi levado para a etapa seguinte sem purificação.
LCMS: m/z: 294,35 [M+H]+.
Etapa 3:
I I S- ... ,ν.ν -N- - ·' X-·’
HN J C: Λ I?
steca-a C:
[00130] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (300 mg, 1,37 mmol) em DMF (5 mL), 3-cloro-N-(1metilciclopropil)-4-piperazin-1-il-benzamida (604 mg, 2,06 mmols), T3P (0,87 mL, 2,75 mmols, 50% em DMF) e DIPEA (0,75 mL, 4,12 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados em temperatura ambiente durante 18 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com EtOAc (200 mL), lavada com água (1 χ 100 mL) e solução de salmoura (1 x 100 mL). A camada orgânica foi separada, secada sobre Na2SC>4, os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida para dar origem ao composto bruto que foi purificado por HPLC preparativa para dar origem a 3-cloro-N-(1metilciclopropil)-4-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1il]benzamida (140 mg, 20%) como um sólido branco.
[00131] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,20 (brs, 1H), 8,64 (brs, 1H), 8,07 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,76-7,75 (m, 2H), 7,57 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,45 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,15 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 3,69 (brs, 2H), 3,61 (brs, 2H), 3,06 (brs, 2H), 2,9 6 (brs, 2H), 2,89 (s, 4H), 1,34 (s, 3H), 0,71 (brs, 2H), 0,60 (brs, 2H).
LCMS: m/z: 494,50 [M+H]+.
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Exemplo 7 - Síntese de 3-cloro-N-(3-metiloxetan-3-il)-4-[4-[3-(4oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]benzamida
Etapa 1:
[00132] A uma solução agitada de ácido 3-cloro-4-fluoro-benzoico (500 mg, 2,86 mmols) em DMF (5 mL), cloridrato de 3-metiloxetan-3amina (420 mg, 3,43 mmols), EDC-HCI (820 mg, 4,29 mmols), HOBt (580 mg, 4,29 mmols) e NMM (1,6 mL, 14,32 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 4 horas (TLC indicou completo consumo do material de partida). A mistura de reação foi diluída com EtOAc (200 mL), lavada com água (1 χ 100 mL), solução de salmoura (1 x 100 mL). A camada orgânica foi separada, secada sobre Na2SO4, os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 7 g, 70% de EtOAc-Hexano) para dar origem a 3-cloro-4-fluoroN-(3-metiloxetan-3-il)benzamida (610 mg, 87%) como um sólido de cor creme.
LCMS: m/z: 244,14 [M+H]+.
Etapa 2:
[00133] A uma solução agitada de 3-cloro-4-fluoro-N-(3-metiloxetan3-il)benzamida (600 mg, 2,46 mmols) em DMSO (6 mL), piperazina (1 g, 12,34 mmols) foi adicionada em temperatura ambiente e aquecida a
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120°C durante 16 horas (TLC indicou completo consumo do material de partida). A mistura de reação foi diluída com EtOAc (200 mL), lavada com água (1 χ 100 mL), solução de salmoura (1 x 100 mL). A camada orgânica foi separada, secada sobre Na2SC>4, os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida para dar origem a 3-cloro-N-(3metiloxetan-3-il)-4-piperazin-1-il-benzamida bruto (900 mg) que foi levado para a etapa seguinte sem purificação.
LCMS: m/z: 310,34 [M+H]+.
Etapa 3:
[00134] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (200 mg, 0,9 17 mmols) em DMF (5 mL), 3-cloro-N-(3metiloxetan-3-il)-4-piperazin-1-il-benzamida (425 mg, 1,37 mmol), T3P (0,58 mL, 1,83 mmol, 50% de solução em DMF) e DIPEA (0,5 mL, 2,75 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 18 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com EtOAc (100 mL), lavada com água (1 χ 100 mL), solução de salmoura (1 x 100 mL). A camada orgânica foi separada, secada sobre Na2SO4, os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida para dar origem ao composto bruto que foi purificado por HPLC preparativa para dar origem a 3-cloro-N-(3-metiloxetan-3-il)4-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]benzamida (100 mg, 21%) como um sólido branco.
[00135] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,30 (brs, 1H), 8,86 (brs, 1H), 8,08 (dd, J= 8,1, 1,2 Hz, 1H), 7,9 2 (d, J= 1,8 Hz,1H), 7,81-7,73 (m, 2H), 7,57 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 7,47-7,42 (m, 1H), 7,19 (d, J= 8,4
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Hz, 1H), 4,69 (d, J= 6,0 Hz, 2H), 4,36 (d, J= 6,3 Hz, 2H), 3,70 (brs,
2H), 3,62 (brs, 2H), 3,08 (brs, 2H), 2,9 8 (brs, 2H), 2,9 0 (s, 4H), 1,58 (s, 3H).
LCMS: m/z: 510,69 [M+H]+.
Exemplo 8 - Síntese de 2-[3-oxo-3-(4-fenil-1-piperidil)propil]-3Hquinazolin-4-ona
Etapa 1:
[00136] O frasco de base redonda de dois gargalos seco ao forno de 100 mL foi carregado com torneamentos de magnésio (600 mg, 25 mmols) e THF seco (5 mL) em temperatura ambiente sob atmosfera de argônio. A esta mistura, iodo (20 mg) foi adicionado, aquecido para 70°C com vigorosa agitação e uma solução de bromobenzeno (1,57 g, 10 mmols) em THF seco (5 mL) foi adicionada mantendo a temperatura a 70°C e continuada durante uma hora sob atmosfera de argônio. A mistura de reação foi trazida para temperatura ambiente e adicionada gota a gota a uma solução pré-resfriada (-50°C) de terc-butil 4oxopiperidina-1-carboxilato (1 g, 5,0 mmols) em THF seco (5 mL) sob atmosfera de argônio. A mistura de reação foi deixada aquecer para temperatura ambiente, agitada durante uma hora (TLC indicou completo consumo do material de partida), resfriada bruscamente com solução de NH4CI aquosa saturada (10 mL) e extraída com EtOAc (2 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (10 mL), salmoura (25 mL) e secados sobre Na2SO4 anidroso. Os voláteis foram concentrados sob pressão reduzida; 0 produto bruto foi apreenPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 69/215
56/185 dido em 18% de solução de HCl aquosa (15 mL) e aquecido a 100°C durante 3 horas (TLC indicou completo consumo do material de partida). O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com Et2O (20 mL) e EtOAc (20 mL) para fornecer cloridrato de 4fenil-1,2,3,6-tetra-hidropiridina (700 mg, 71%) como um sólido esbranquiçado (higroscópico).
LCMS: m/z: 160,3 [M+H]+.
Etapa 2:
[00137] A uma solução agitada de cloridrato de 4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (300 mg, 1,53 mmol) em MeOH (10 mL), Pd-C a 10% (100 mg) foi adicionado em temperatura ambiente sob atmosfera de argônio. A mistura de reação foi inundada com H2 (3 vezes) e agitada sob atmosfera de H2 (balão) durante 4 horas. Após conclusão da reação (monitorada por LCMS), a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada curta de celita e lavada com MeOH (5 mL). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com éter seco (2 x 5 mL) para fornecer cloridrato de 4-fenilpiperidina (300 mg, 99%) como um sólido esbranquiçado (higroscópico).
LCMS: m/z: 162,3 [M+H]+.
Etapa 3:
[00138] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (200 mg, 0,9 17 mmol) e cloridrato de 4-fenilpiperidina
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57/185 (217 mg, 1,1 mmol) em DMF seco (1,5 mL), EDC-HCI (264 mg, 1,375 mmol), HOBt (187 mg, 1,38 mmol) e Na2COs (292 mg, 2,75 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente sob atmosfera de argônio. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida), resfriada bruscamente com água resfriada (15 mL) e agitada durante 30 minutos. O precipitado foi filtrado e o sólido foi lavado com água (10 mL) e secado sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 25 g, 5% de MeOHDCM) para fornecer o 2-[3-oxo-3-(4-fenil-1-piperidil)propil]-3Hquinazolin-4-ona (30 mg, 25%) como um sólido esbranquiçado. [00139] 1H RMN [300 MHz, DMSO-de]: ó 12,21 (s, 1H), 8,08 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,79-7,73 (m, 1H), 7,57-7,52 (m, 1H), 7,48-7,43 (m, 1H), 7,38-7,22 (m, 5H), 4,51 (d, J= 12,6 Hz, 1H), 4,07 (d, J= 13,8 Hz, 1H), 3,14 (t, J= 12,6 Hz, 4H), 2,9 4-2,81 (m, 3H), 2,64-2,57 (m, 1H), 1,841,73 (m, 1H), 1,66-1,62 (m, 1 H), 1,42-1,33 (m, 1H).
LCMS: m/z·. 362,5 [M+H]+.
Exemplo 9 - Síntese de 2-[3-oxo-3-(4-fenilpiperazin-1-il)propil]-3Hquinazolin-4-ona
Etapa 1:
[00140] A uma solução agitada de 2-aminobenzamida (5 g, 36,76 mmols) em AcOH (10 mL), uma solução de anidrido succínico (3,67 g, 36,76 mmols) em AcOH (10 mL) foi adicionada em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante duas horas (TLC indicou completo consumo do material de partida),
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58/185 diluída com água fria (100 mL) e agitada durante 15 minutos. O precipitado foi filtrado, lavado com água fria (30 mL) e secado sob vácuo para dar origem a ácido 4-(2-carbamoilanilino)-4-oxo-butanoico (8 g,
92%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 237,4 [M+H]+.
Etapa 2:
O
[00141] Uma suspensão agitada de ácido 4-(2-carbamoilanilino)-4oxo-butanoico (8 g, 33,86 mmols) e NaOAc (2,78 g, 33,86 mmols) em AC2O (10 mL) foi aquecida a 120°C durante uma hora (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente, resfriada bruscamente com água (100 mL) e solução de NaOH a 1 N foi adicionada lentamente até 0 pH = 10. A mistura resultante foi lavada com EtOAc (30 mL), a camada aquosa foi separada e acidificada com AcOH até 0 pH = 5, agitada durante uma hora e filtrada. O sólido foi lavado com hexanos (3 x 20 mL) e secado sob vácuo para dar origem a ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (5,0 g, 68%) que foi usado para a etapa seguinte sem purificação.
LCMS: m/z: 219,3 [M+H]+.
Etapa 3:
5 [00142] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 72/215
59/185 il)propanoico (100 mg, 0,458 mmol) e 1-fenilpiperazina (90 mg, 0,55 mmol) em DMF seco (1,5 mL), EDC-HCI (132 mg, 0,687 mmol), HOBt (93 mg, 0,688 mmol) e Na2COs (146 mg, 1,37 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente sob atmosfera de argônio. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas sob argônio (TLC indicou completo consumo de material de partida), resfriada bruscamente com água resfriada (15 mL) e agitada durante 30 minutos. O precipitado foi filtrado, lavado com água (10 mL) e secado sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 50 g, 5% de MeOH-DCM) para fornecer 2-[3-oxo-3-(4-fenilpiperazin-1 -il)propil]-3H-quinazolin-4-ona (33 mg, 20%) como um sólido esbranquiçado.
[00143] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,21 (s, 1H), 8,07 (dd, J = 1,2, 8,1 Hz, 1H), 7,77-7,71 (m, 1H), 7,54 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,477,42 (m, 1H), 7,23 (t, J= 7,5 Hz, 2H), 6,9 2 (d, J= 8,1 Hz, 2 H), 6,81 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 3,67-3,57 (m, 4H), 3,20-3,06 (m, 4H), 2,89 (s, 4H). LCMS: m/z: 363,5 [M+H]+.
Exemplo 10 - Síntese de 2-[3-[4-(2-clorofenil)piperazin-1-il]-3-oxopropil]-3H-quinazolin-4-ona
Etapa 1:
Τ' 2 3: [00144] A uma solução agitada de 1-cloro-2-iodo-benzeno (140 mg, 0,590 mmol) e terc-butil piperazina-1-carboxilato (100 mg, 0,537 mmol) em tolueno seco (2 mL), xantphos (34 mg, 0,0590 mmol), Pd2(dba)s (24 mg, 0,0262 mmol) e Cs2COs (261 mg , 0,80 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente sob atmosfera de argônio. A mistura resultante foi irradiada a 100°C durante 30 minutos em um aparelho de
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Micro-ondas CEM (TLC indicou o completo consumo de material de partida). O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi diluído com água (20 mL), extraído com EtOAc (3 x 20 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL), secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrados em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 10 g, 5% de EtOAc-hexano) para dar origem a terc-butil 4-(2clorofenil)piperazina-1-carboxilato (100 mg, 63%) como um sólido esbranquiçado.
[00145] 1H RMN [300 MHz, CDCh]: <5 7,37 (dd, J= 7,8, 1,2 Hz, 1H), 7,22 (td, J = 7,8, 1,2 Hz, 1H), 7,02-6,9 6 (m, 2H), 3,60 (t, J = 5,1 Hz, 4H), 2,9 9 (t, J = 5,1 Hz, 4H), 1,48 (s, 9H).
Etapa 2:
[00146] A uma solução agitada de terc-butil 4-(2clorofenil)piperazina-1-carboxilato (250 mg, 0,844 mmol) em 1,4dioxano (2 mL), HCI a 4 N em 1,4-dioxano (0,9 mL, 3,60 mmols) foi adicionado gota a gota a 0°C. A mistura de reação foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e agitada durante 4 horas (TLC indicou o completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer o composto bruto, que foi lavado com dietil éter (2 x 20 mL), e secado sob vácuo elevado para dar origem a cloridrato de 1-(2-clorofenil)piperazina (165 mg, 84%) como um sólido branco.
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Etapa 3:
tsps·
HCI 4 agitada de cloridrato de 1-(2uma solução [00147] A clorofenil)piperazina (119 mg, 0,510 mmol) e ácido 3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (111 mg, 0,509 mmol) em DMF seco (2 mL) EDC-HCI (98 mg, 0,511 mmol), HOBt (69 mg, 0,510 mmol) e DIPEA (0,18 mL, 1,03 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 3 horas (TLC indicou o completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água fria (20 mL) e agitada durante 15 minutos. O precipitado resultante foi filtrado e o sólido foi lavado com Et2Ü (2x5 mL) para dar origem a 2-[3-[4-(2-clorofenil)piperazin-1-il]-3-oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona (90 mg, 44%) como um sólido branco.
[00148] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,20 (s, 1H), 8,08 (dd, J = 7,8, 1,2 Hz, 1H), 7,76-7,73 (m, 1H), 7,57 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,487,41 (m, 2H), 7,31-7,28 (m, 1H), 7,15-7,04 (m, 2H), 3,68 (s, 2H), 3,61 (s, 2H), 3,00 (s, 4H), 2,89 (s, 4H).
LCMS: m/z: 397,30 [M+H]+.
Exemplo 11 - Síntese de 6-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
'N'
K2CO3, DMA, se Y h
Ν' N í!
[00149] A uma solução agitada de 6-cloropiridina-3-carbonitrila (2 g,
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14,43 mmols) em DMA (20 mL), K2CO3 (3,4 g, 24,63 mmols), N-Bocpiperazina (2,7 g, 14,50 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente sob atmosfera de argônio e agitados durante 3 horas. A mistura de reação foi aquecida a 60°C durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida) e vertida em água gelada (100 mL) durante 0 que precipitou 0 sólido que foi filtrado, lavado com Et2Ü (3x10 mL), pentano (3x10 mL) e secado para dar origem a terc-butil 4-(5-ciano-2-piridil)piperazina-1-carboxilato (3 g, 73%) que foi usado sem purificação.
LCMS: m/z: 289,3 [M+H]+.
Etapa 2:
Λ 1 ,j sa . í J l'' 'Ν'' N 4s -748^ J —T™* HÚ, J .
na [00150] A uma solução agitada de terc-butil 4-(5-ciano-2piridil)piperazina-1-carboxilato (0,5 g, 1,736 mmol) em DCM, HCI a 4 N em dioxano (0,5 mL) foi adicionado gota a gota e agitado em temperatura ambiente durante 4 horas sob atmosfera de argônio (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo que foi lavado com Et2O (2x5 mL), DCM (2x5 mL), pentano (2x5 mL) e secado sob vácuo para dar origem a cloridrato de 6-piperazin-1 -ilpiridina3-carbonitrila (0,3 g, 93% de produção) que foi levado para a etapa seguinte sem purificação.
[00151] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 9,58 (brs, 2H), 8,54 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,9 1-7,33 (dd, J=3,2, 12,4 Hz, 1H), 7,02 (d, J= 12,0 Hz, 1H), 3,9 1 (t, J= 6,8 Hz, 4H), 3,14 (brs, 4H).
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Etapa 3:
Etefs-i [00152] A uma solução agitada de cloridrato de 6-piperazin-1ilpiridina-3-carbonitrila (0,2 g, 0,9 74 mmols) e ácido 3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il) propanoico (0,2 g, 0,9 13 mmols) em DMF (2 mL), EDC-HCI (0,35 g, 1,83 mmol), HOBt (0,24 g, 1,83 mmol) e DIPEA (0,8 mL, 4,59 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 8 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi vertida em água gelada (30 mL) e agitada durante 15 minutos durante o que precipitou o sólido que foi filtrado e purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílicagel, 10 g, 5% de MeOH em DCM) para dar origem a 6-[4-[3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1 -il]piridina-3-carbonitrila (0,025 g, 20%) como um sólido branco.
[00153] 1H RMN [300 MHz, DMSO-de]: ó 12,02 (s, 1H), 8,51 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 8,08-8,05 (dd, J = 1,6, 10,4 Hz, 1H), 7,9 0-7,86 (dd, J = 3,2, 12,0 Hz, 1H), 7,77-7,71 (m, 1H), 7,54 (d, J= 10,4 Hz, 1H), 7,477,41 (m, 1H), 6,9 4 (d, J= 12,0 Hz, 1H), 3,77-3,75 (m, 2H), 3,64 (d, J = 4,8 Hz, 4H), 3,57-3,56 (m, 2H), 2,89 (s, 4H).
LCMS: m/z: 389,61 [M+H]+.
Exemplo 12 - Síntese de 6-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carboxamida
[00154] A uma solução agitada de 6-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2
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64/185 il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila (100 mg, 0,257 mmol) em tolueno (1 mL), H2SO4 (127 mg, 1,285 mmol) foi adicionado em temperatura ambiente sob atmosfera de argônio e aquecido a 80°C durante 5 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e codestilada com tolueno (3x5 mL), basificada com solução de NaOH a 1 N até 0 pH = 9, extraída com 10% de MeOH-DCM (3x10 mL), secada sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 15 g, 10% de MeOH em DCM) para dar origem a 6[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3carboxamida (0,025 g, 20%) como um sólido branco.
[00155] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,02 (s, 1H), 8,63 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 8,08-8,05 (dd, J= 1,6,10,4 Hz, 1H), 8,00-7,9 6 (dd, J = 3,2,12,0 Hz, 1H), 7,79-7,71 (m, 2H), 7,54 (d, J= 10,8 Hz, 1H), 7,44(t, J = 10,4 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 6,86 (d, J= 12 Hz, 1H), 3,69-3,64 (m, 4H), 3,56 (s, 4H), 2,89 (s, 4H).
LCMS: m/z·. 407,5 [M+H]+.
Exemplo 13 - Síntese de 6-[4-[3-(5-metil-4-oxo-3H-quinazolin-2-il) propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
I <0, nh3.. dmf. í 9
ΓΥ%« t 2 [00156] A uma solução agitada de ácido 2-amino-6-metil-benzoico (0,5 g, 3,31 mmols) em DMF (5 mL) em temperatura ambiente, CDI (0,53 g, 3,31 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida a 80°C durante duas horas e amônia aquosa (25%, 10 mL) foi adicionada cuidadosamente à mistura de reação acima mantendo a temperatura a 80°C e continuada durante 4 horas (TLC indicou completo
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65/185 consumo de material de partida). A mistura de reação foi lentamente trazida para a temperatura ambiente, diluída com água (30 mL) e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (2 x 50 mL), salmoura (40 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para dar origem ao resíduo bruto que foi lavado com Et2Ü (10 mL) e secado sob vácuo elevado para dar origem a 2-amino-6-metil-benzamida (200 mg, 40%) como um sólido branco.
LCMS (ESI+): m/z: 151,09 [M+H]+.
Etapa 2:
[00157] A uma solução agitada de 2-amino-6-metil-benzamida (0,2 g, 1,33 mmol) em AcOH (3 mL), anidrido succínico foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi vertida em água resfriada (5 mL) e agitada durante 30 minutos durante o que sólido precipitou. O sólido foi filtrado, lavado com água (20 mL), acetona fria (5 mL) e secado sob vácuo elevado para dar origem a ácido 4-(2carbamoil-3-metil-anilino)-4-oxo-butanoico (250 mg, 75%) como um sólido branco.
LCMS (ESI+): m/z: 251,50 [M+H]+.
Etapa 3:
[ |I 2 retao, 2íy
EtapB-3
..<L .ohA
Q ·- 'y fi.u
C [00158] Ácido 4-(2-carbamoil-3-metil-anilino)-4-oxo-butanoico (0,25
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66/185 g, 1,0 mmol) foi apreendido em NaOH aquoso a 2 N (5 mL) e agitado a 100°C durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi lentamente resfriada para 0°C e acidificada para pH = 3-4 com HCl aquoso a 2 N durante o que sólido branco precipitou. A suspensão foi agitada a 0°C durante 30 minutos, filtrada, lavada com água (20 mL), acetona fria (2 mL) e secada sob vácuo elevado para fornecer ácido 3-(5-metil-4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (150 mg, 64%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS (ESI+): m/z: 233,49 [M+H]+.
Etapa 4:
[00159] A uma solução agitada de ácido 3-(5-metil-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (150 mg, 0,65 mmol) e cloridrato de 6piperazin-1-ilpiridina-3-carbonitrila (145 mg, 0,77 mmol) em DMF (2 mL), DIPEA (0,3 mL, 1,9 4 mmols) e T3P (50% de solução em EtOAc, 0,4 mL, 1,29 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 8 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (10 mL) e extraída com EtOAc (3 x 40 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (3 x 30 mL), salmoura (20 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 10 g, 5% de MeOH-DCM) para dar origem a 6-[4-[3-(5-metil-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1 il]piridina-3-carbonitrila (60 mg, 27%) como um sólido branco.
[00160] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 11,9 8 (brs, 1H), 8,51 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,88 (dd, J = 9,0, 2,1 Hz 1H), 7,55 (t, J = 7,8 Hz, 1H),
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7,34 (d, J =7,8 Hz, 1H), 7,16 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,9 3 (d, J =9,0 Hz,
1H), 3,77-3,76 (m, 2H), 3,64-3,62 (m, 4H), 3,57-3,55 (m, 2H), 2,88-2,83 (m, 4H), 2,75 (s, 3H).
LCMS (ESI+): m/z: 403,66 [M+H]+.
Exemplo 14 - Síntese de 6-[4-[3-(6-metil-4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
h2n.
ô
2-amino-5-metil-benzoico
EDC. HCL HO8tNHs,
Γ Ο DIPEA. THFJTA, 1 h HO. ~ [00161] A uma solução agitada de ácido (100 mg, 0,66 mmol) em THF (2 mL), EDC-HCI (189 mg, 0,9 9 mmols), HOBt-NHs (149 mg, 0,9 9 mmols) e DIPEA (0,35 mL, 1,9 9 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante uma hora (TLC indicou completa conversão do material de partida). A mistura de reação foi diluída com EtOAc (1 x 50 mL), lavada com água (1 x 20 mL) e solução de salmoura (1 x 20 mL). A camada orgânica foi separada, secada sobre Na2SO4, os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por Combiflash Rt 200 Teledyne ISCO (100% de EtOAc, cartucho de 12 gm) para dar origem a 2-amino-5-metil-benzamida (70 mg, 70%) como um sólido branco.
LCMS (ESI+): m/z: 151,13 [M+H]+.
Etapa 2:
[00162] A uma solução agitada de 2-amino-5-metil-benzamida (600
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mg, 4,0 mmols) em AcOH (6 mL), anidrido succinico (480 mg, 4,80 mmols) foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante duas horas (TLC indicou completa conversão de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água resfriada (1 x 50 mL), agitada durante 30 minutos durante o que sólido foi precipitado que foi filtrado, lavado com água (1 x 50 mL), seguida por acetona fria (1 x 20 mL) e secado sob vácuo elevado para fornecer ácido 4-(2-carbamoil-4-metilanilino)-4-oxo-butanoico (800 mg, 80%) como um sólido branco. LCMS (ESI+): m/z: 273,56 [M+Na]+.
Etapa 3:
X „Q Ma-ú-H. a 2V
HiJ 'S'· „ j reajxs, 4 ti , l-Mí I A eta{SB-3 =- γ'· [00163] A solução agitada de ácido 4-(2-carbamoil-4-metil-anilino)4-oxo-butanoico (480 mg, 2,07 mmols) em NaOH a 2 N aquoso (15 mL) foi aquecida a 100°C durante 4 horas (TLC indicou completa conversão de composto 4). A mistura de reação foi resfriada para 0°C, acidificada com AcOH até o pH = 5 durante o que sólido precipitou-se. O sólido foi filtrado, lavado com água (1 x 80 mL), seguida por acetona fria (1 x 20 mL) e secado sob vácuo elevado para fornecer ácido 3-(6metil-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoico (380 mg, 85%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS (ESI+): m/z: 233,45 [M+H]+.
Etapa 4:
Eiapa-4
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69/185 [00164] A uma solução agitada de ácido 3-(6-metil-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (250 mg, 1,077 mmol) em DMF (5 mL) em temperatura ambiente, cloridrato de 6-piperazin-1-ilpiridina-3carbonitrila (289 mg, 1,293 mmol), T3P (50% em DMF, 0,68 mL, 2,15 mmols) e DIPEA (0,57 mL, 3,23 mmols) foram adicionados e agitados durante 6 horas (TLC indicou completo consumo do material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (1 x 80 mL), agitada durante 5 minutos quando sólido precipitou-se 0 qual foi filtrado. O sólido foi lavado com água (1 x 70 mL) e secado sob vácuo elevado para fornecer 6-[4-[3-(6-metil-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1il]piridina-3-carbonitrila (170 mg, 39%) como um sólido esbranquiçado.
[00165] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,10 (brs, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,9 0-7,87 (m, 2H), 7,56 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,9 4 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 3,79-3,72 (m, 2H), 3,68-3,62 (m, 4H), 3,59-3,54 (m, 2H), 2,87 (s, 4H), 2,41 (s, 3H).
LCMS (ESI+): m/z: 403,66 [M+H]+.
Exemplo 15 - Síntese de 6-[4-[3-(7-metil-4-oxo-3H-quinazolin2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
ESC.HO
HOBt.NHj, DIFEA, THF,
TA, 1 h
.....;..................»
Eiapa-1
[00166] A uma solução agitada de ácido 2-amino-4-metil-benzoico (300 mg, 1,9 9 mmols) em THF (6 mL), EDC-HCI (569 mg, 2,9 8 mmols), HOBt-NHs (447 mg, 2,9 8 mmols) e DIPEA (1,06 mL, 5,9 6 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante uma hora (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (30 mL), extraída com EtOAc (3 x 25 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre
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Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o composto bruto que foi purificado por cromatografia de coluna rápida (100-200 malhas de sílica-gel, 5 g, 50% de EtOAc-Hexano) para dar origem a 2amino-4-metil-benzamida (190 mg, 64%) como um sólido branco. [00167] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 7,62 (brs, 1H), 7,42 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,9 3 (brs, 1H), 6,54-6,46 (m, 3H), 6,30- 6,27 (m, 1H), 2,15 (s, 3H).
Etapa 2:
[00168] A uma solução agitada de 2-amino-4-metil-benzamida (190 mg, 1,27 mmol) em AcOH (5 mL), anidrido succínico (151 mg, 1,52 mmol) foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (20 mL), o sólido foi precipitado, filtrado e secado sob vácuo para obter o requerido ácido 4-(2carbamoil-5-metil-anilino)-4-oxo-butanoico (250 mg, 89%) que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação.
[00169] 1H RMN [300 MHz, DMSO-de]: ó 12,37 (brs, 1H), 11,88 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,70 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 6,9 1 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 2,53-2,50 (m, 4H), 2,31 (s, 3H).
LCMS: m/z: 273,50 [M+Na]+.
Etapa 3:
& fiaOH,
Pefliixc·. 3 ·
Etspa-3
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71/185 [00170] Ácido 4-(2-carbamoil-5-metil-anilino)-4-oxo-butanoico (250 mg, 1 mmol) foi apreendido em NaOH a 2 N (10 mL) e refluxado durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida), resfriado para 0°C e acidificado com AcOH até o pH = 4 durante o que sólido precipitou-se. O sólido foi filtrado e secado sob vácuo para dar origem a ácido 3-(7-metil-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoico (220 mg, 95%) que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS: m/z: 233,45 [M+H]+.
Etapa 4:
[00171] A uma solução agitada de ácido 3-(7-metil-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (150 mg, 0,65 mmol) e cloridrato de 6piperazin-1-ilpiridina-3-carbonitrila (173 mg, 0,78 mmol) em DMF (4 mL), EDC-HCI (185 mg, 0,9 7 mmol), HOBt (130 mg, 0,9 7 mmols) e DIPEA (0,46 mL, 2,58 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi vertida em água fria (25 mL), agitada durante 10 minutos, durante o que sólido foi precipitado. O sólido foi filtrado, secado sob vácuo, lavado com Et2Ü (20 mL) e hexano (20 mL) para obter 6-[4-[3-(7-metil-4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila (75 mg, 29%) como um sólido esbranquiçado.
[00172] 1H RMN [300 MHz, DMSO-de]: ó 12,1 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 7,9 6-7,87 (m, 2H), 7,33 (s, 1H), 7,26 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 6,9 4 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 3,78 (brs, 2H), 3,65 (brs, 4H), 3,57 (brs, 2H), 2,87 (brs, 4H), 2,39 (s, 3H).
LCMS: m/z: 403,69 [M+H]+.
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Exemplo 16 - Síntese de 6-[4-[3-(8-metil-4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
[00173] A uma solução agitada de ácido 2-amino-3-metil-benzoico (0,5 g, 3,31 mmols) em THF (15 mL), EDC-HCI (0,9 48 g, 4,9 7 mmols), HOBt-NHs (0,745 g, 4,9 7 mmols) e DIPEA (1,76 mL, 9,9 3 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 6 horas (TLC indica completa conversão de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (30 mL) e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (2 x 50 mL), salmoura (40 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 20 g, 50% de EtOAc-Hexano) para dar origem a 2-amino-3metil-benzamida (0,3 g, 60%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 151,09 [M+H]+.
Etapa 2:
[00174] A uma solução agitada de 2-amino-3-metil-benzamida (0,3 g, 2,0 mmols) em AcOH (3 mL), anidrido succínico foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi vertida em
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73/185 água gelada (10 mL) e agitada durante 30 minutos durante o que o sólido precipitou-se. O sólido foi filtrado, lavado com água (20 mL), acetona fria (5 mL) e secado sob vácuo elevado para dar origem a ácido 4-(2-carbamoil-6-metil-anilino)-4-oxo-butanoico (280 mg, 56%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 251,48 [M+H]+.
Etapa 3:
o
s [00175] Ácido 4-(2-carbamoil-6-metil-anilino)-4-oxo-butanoico (0,28 g, 1,12 mmol) em NaOH aquoso a 2 N (5 mL) foi agitado a 100°C durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada para 0°C e acidificada com HCI aquoso a 2 N até o pH = 3-4 durante o que sólido branco precipitou-se. A suspensão foi agitada a 0°C durante 30 minutos, filtrada, lavada com água (20 mL), acetona fria (5 mL) e secada sob vácuo elevado para fornecer ácido 3-(8-metil-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoico (180 mg, 69%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS: m/z: 233,45 [M+H]+.
Etapa 4:
NH
[00176] A uma solução agitada de ácido 3-(8-metil-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (100 mg, 0,43 mmol) e cloridrato de 6piperazin-1 -ilpiridina-3-carbonitrila (97 mg, 0,52 mmol) em DMF (3 mL),
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74/185
DIPEA (0,23 mL, 1,29 mmol) e T3P (0,27 mL, 0,86 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (10 mL) e extraída com EtOAc (3 x 60 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (3 x 30 mL), salmoura (20 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo bruto. O material bruto foi recristalizado de acetonitrila (5 mL) para dar origem a 6-[4-[3(8-metil-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3carbonitrila (60 mg, 34%) como um sólido branco.
[00177] 1H RMN [300 MHz, DMSO-cfe]: δ 12,20 (brs, 1H), 8,51 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,9 2-7,86 (m, 2H), 7,60 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,31 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 6,9 3 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 3,77-3,75 (m, 2H), 3,66-3,65 (m, 4H), 3,59-3,57 (m, 2H), 2,9 0 (s, 4H), 2,46 (s, 3H).LCMS: m/z: 403,68 [M+H]+.
Exemplo 17 - Síntese de 6-[4-[3-(5-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il) propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
[00178] A uma solução agitada de ácido 3-(5-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (250 mg, 1,054 mmol) em DMF (5 mL), cloridrato de 6-piperazin-1-ilpiridina-3-carbonitrila (283 mg, 1,265 mmol), EDC-HCI (302 mg, 1,582 mmol), HOBt (213 mg, 1,582 mmol) e DIPEA (0,56 mL, 3,164 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 7 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (1 x 80 mL), agitada durante 5 minutos em temperatura ambiente durante 0 que sólido foi precipitado que foi filtrado, lavado com água (1 x 70 mL), secado sob vácuo elevado para fornecer 6-[4-[3-(5-fluoro-4-oxo-3H-quinazolinPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 88/215
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2-il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila (120 mg, 23%) como um sólido amarelo pálido.
[00179] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,20 (brs, 1H), 8,51 (d, J = 2,1 Hz,1H), 7,88 (dd, J =9,3, 2,4 Hz, 1H), 7,73-7,67 (m, 1H), 7,35 (d, J= 8,1 Hz, 1H) 7,21-7,15 (m, 1H), 6,9 4 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 3,81-3,74 (m, 2H), 3,68-3,62 (m, 4H), 3,58-3,53 (m, 2H), 2,87 (s, 4H).
LCMS: m/z: 407,60 [M+H]+.
Exemplo 18 - Síntese de 6-[4-[3-(6-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
[00180] A uma solução agitada de ácido 3-(6-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (100 mg, 0,42 mmol) e cloridrato de 6piperazin-1 -ilpiridina-3-carbonitrila (95 mg, 0,51 mmol) em DMF (2 mL), DIPEA (0,2 mL, 1,27 mmol) e T3P (0,3 mL, 0,85 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 4 horas (TLC indica completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (10 mL) e extraída em EtOAc (3 x 40 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (3 x 30 mL), salmoura (20 mL), secados sobre Na3SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer resíduo bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 10 g, 5% de MeOH-DCM) para dar origem a 6-[4-[3-(6-fluoro-4-oxo3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1 -il]piridina-3-carbonitrila (60 mg, 35%) como um sólido branco.
[00181] 1H RMN [400 MHz, DMSO-de]: δ 12,33 (brs, 1H), 8,51 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,88 (dd, J= 9,0, 2,1 Hz, 1H), 7,74 (d, J= 8,1 Hz, 1H), 7,647,62 (m, 2H), 6,9 3 (d, J= 9,3 Hz, 1H), 3,77-3,56 (m, 8H), 2,88 (s, 4H). LCMS: m/z: 407,61 [M+1]+.
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Exemplo 19 - Síntese de 6-[4-[3-(7-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
EDC.HG
O
V DIFEA.THF. K (Ι'Υ'-'ΟΗ JMÍ............... f F NHz tov. ,-síL.,., Etap-a-1 F‘ [00182] A uma solução agitada de ácido 2-amino-4-fluoro-benzoico (300 mg, 1,9 3 mmols) em THF (6 mL), EDC-HCI (553 mg, 2,9 0 mmol), HOBt-NHs (435 mg, 2,9 0 mmol), DIPEA (1,03 mL, 5,79 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante uma hora (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (25 mL) e extraída com EtOAc (3 x 20 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para obter o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna rápida (100-200 malhas de sílica-gel, 5 g, 50% de EtOAc-Hexano) para fornecer 2-amino4-fluoro-benzamida (195 mg, 65%) como um sólido branco.
[00183] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 7,71 (brs, 1H), 7,61-7,56 (m, 1H), 7,07 (brs, 1H), 6,89 (s, 2H), 6,42 (dd, J= 2,7, 12,0 Hz, 1H), 6,30-6,23 (m, 1H).
Etapa 2:
CS
[00184] A uma solução agitada de 2-amino-4-fluoro-benzamida (195 mg, 1,26 mmol) em AcOH (4 mL), anidrido succínico (151 mg, 1,51 mmol) foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mis
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77/185 tura de reação foi diluída com água (20 mL) durante o que sólido foi precipitado. O sólido foi filtrado, secado sob vácuo para obter ácido 4(2-carbamoil-5-fluoro-anilino)-4-oxo-butanoico (260 mg, 81%) que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação.
[00185] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,10 (s, 1H), 8,40-8,26 (m, 3H), 7,9 2-7,87 (m, 1H), 7,79 (brs, 1H), 7,00-6,9 3 (m, 1H), 2,562,49 (m, 4H).
Etapa 3:
4 X' [00186] A solução agitada de ácido 4-(2-carbamoil-5-fluoro-anilino)4-oxo-butanoico (250 mg, 0,9 8 mmols) em NaOH a 2 N (10 mL) foi refluxada durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada para 0°C, acidificada com AcOH até o pH = 4 durante o que sólido foi precipitado. O sólido foi filtrado e secado sob vácuo para dar origem a ácido 3-(7-fluoro-4-oxo3H-quinazolin-2-il)propanoico (210 mg, 90%) que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação.
LCMS: m/z: 237,43 [M+H]+.
Etapa 4:
[00187] A uma solução agitada de ácido 3-(7-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (150 mg, 0,63 mmol) e cloridrato de 6piperazin-1-ilpiridina-3-carbonitrila (174 mg, 0,76 mmol) em DMF (4 mL), EDC-HCI (181 mg, 0,9 5 mmols), HOBt (130 mg, 0,9 5 mmols) e DIPEA (0,45 mL, 2,54 mmols) foram adicionados em temperatura amPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 91/215
78/185 biente e agitados durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi vertida em água fria (25 mL) durante o que sólido foi precipitado. O sólido foi filtrado, secado sob vácuo e lavado com Et2O (20 mL), hexano (20 mL), pentano (20 mL), EtOAc (15 mL) e novamente secado sob vácuo para fornecer 6[4-[3-(7-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]piridina3-carbonitrila (110 mg, 43%) como um sólido esbranquiçado.
[00188] 1H RMN [300 MHz, DMSO-de]: ó 12,30 (s, 1H), 8,51 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,15-8,10 (m, 1H), 7,88 (dd, J= 2,4, 9,6 Hz, 1H), 7,337,27 (m, 2H), 6,9 4 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 3,80-3,73 (m, 2H), 3,69-3,61 (m, 4H), 3,59-3,53 (m, 2H), 2,89 (s, 4H).
LCMS: m/z: 407,61 [M+H]+.
Exemplo 20 - Síntese de 6-[4-[3-(8-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il) propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
EDC HCÍ
[00189] A uma solução agitada de ácido 2-amino-3-fluoro-benzoico (400 mg, 2,57 mmols) em THF (10 mL), EDC-HCI (738 mg, 3,86 mmols), HOBt-NHs (580 mg, 3,86 mmols) e DIPEA (1,38 mL, 7,73 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (30 mL) e extraída com EtOAc (3 x 40 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para obter o composto bruto que foi purificado por cromatografia de coluna rápida (100-200 malhas de sílica-gel, 5 g, 50% de EtOAc-Hexano) para fornecer 2amino-3-fluoro-benzamida (250 mg, 63%) como um sólido branco. LCMS: m/z: 155,42 [M+H]+.
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Etapa 2:
[00190] A uma solução agitada de 2-amino-3-fluoro-benzamida (250 mg, 1,62 mmol) em AcOH (5 mL), anidrido succínico (389 mg, 3,89 mmols) foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante duas horas (TLC indicou completo consumo do material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (20 mL) durante o que sólido foi precipitado. O sólido foi filtrado e secado sob vácuo para obter ácido 4-(2-carbamoil-6-fluoro-anilino)-4-oxo-butanoico (400 mg, 97%) que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação.
LCMS: m/z: 255,42 [M+H]+.
Etapa 3:
[00191] Ácido 4-(2-carbamoil-6-fluoro-anilino)-4-oxo-butanoico (400 mg, 1,57 mmol) foi apreendido em NaOH a 2 N (10 mL) e aquecido a 100°C durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Após conclusão da reação, a mistura de reação foi resfriada para 0°C, acidificada com AcOH até o pH = 4 durante o que sólido foi precipitado. O sólido foi filtrado e secado sob vácuo para dar origem a ácido 3-(8-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoico (250 mg, 67%) que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação. LCMS: m/z: 237,39 [M+H]+.
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80/185
Etapa 4:
[00192] A uma solução agitada de ácido 3-(8-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (150 mg, 0,63 mmol) e cloridrato de 6piperazin-1-ilpiridina-3-carbonitrila (170 mg, 0,76 mmol) em DMF (4 mL), T3P (0,3 mL, 0,9 5 mmols) e DIPEA (0,45 ml, 2,54 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi vertida em água fria (25 mL) durante 0 que 0 sólido foi precipitado. O sólido foi filtrado, secado sob vácuo, lavado com hexano (30 mL), clorofórmio (30 mL) e novamente secado sob vácuo para fornecer 6-[4-[3-(8-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1il]piridina-3-carbonitrila (80 mg, 23%) como um sólido esbranquiçado.
[00193] 1H RMN [300 MHz, DMSO-de]: ó 8,51 (d, J=2,1 Hz, 1H), 7,9 0-7,87 (m, 2H), 7,65-7,59 (m, 1H), 7,46-7,39 (m, 1H), 6,9 3 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,77 (brs, 2H), 3,64 (brs, 4H), 3,57 (brs, 2H), 2,9 0 (s, 4H). LCMS: m/z: 407,61 [M+H]+.
Exemplo 21 - Síntese de 6-[4-[3-(4-oxo-3H-pirido[3,2-d]pirimidin-2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
Λ o AeSH. TA.
4h............„
[00194] A uma solução agitada de 3-aminopiridina-2-carboxamida (0,3 g, 2,19 mmols) em AcOH (3 mL), anidrido succínico (0,26 g, 2,63 mmols) foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante 4
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81/185 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi vertida em água resfriada (5 mL) e agitada durante 30 minutos durante o que o sólido precipitou-se. O sólido foi filtrado, lavado com água (10 mL), acetona fria (5 mL) e secado sob vácuo elevado para fornecer ácido 4-[(2-carbamoil-3-piridil)amino]-4-oxobutanoico (320 mg, 61%) que foi usado para a etapa seguinte sem qualquer purificação.
LCMS: m/z: 238,41 [M+H]+.
Etapa 2:
o
G
Eíap®-2
SHNafM
WG SC( 3 h
[00195] Ácido 4-[(2-carbamoil-3-piridil)amino]-4-oxo-butanoico (300 mg, 1,27 mmol) foi apreendido em NaOH aquoso a 2 N (5 mL) e agitado a 100°C durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada para 0°C e acidificada com HCI aquoso a 2 N para pH = 3-4 durante o que o sólido branco precipitou-se. A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 30 min. O sólido foi filtrado, lavado com água (10 mL), acetona fria (4 mL) e secado sob vácuo elevado para dar origem a ácido 3-(4-oxo-3Hpirido[3,2-d]pirimidin-2-il)propanoico (200 mg, 72%) que foi usado para a etapa seguinte sem qualquer purificação.
LCMS: m/z: 220,46 [M+H]+.
Etapa 3:
[00196] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-pirido[3,2d]pirimidin-2-il)propanoico (100 mg, 0,46 mmol) e cloridrato de 6
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82/185 piperazin-1-ilpiridina-3-carbonitrila (104 mg, 0,55 mmol) em DMF (3 mL), DIPEA (0,3 mL, 1,37 mmol) e T3P (0,23 mL, 0,9 2 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 4 horas (TLC indica completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (10 mL) e extraída com EtOAc (3 x 40 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (3 x 20 mL), salmoura (20 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 10 g, 5% de MeOH-DCM para dar origem a 6-[4-[3(4-oxo-3H-pirido[3,2-d]pirimidin-2-il)propanoil]piperazin-1 -il]piridina-3carbonitrila (60 mg, 36%) como um sólido branco.
[00197] 1H RMN [400 MHz DMSO-d6]: δ 12,50 (brs, 1H), 8,71 (dd, J = 4,0, 1,2 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,9 5 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1H), 7,88 (dd, J = 9,2, 1,6 Hz, 1H), 7,73 (dd, J = 8,0, 4,0 Hz, 1H), 6,9 3 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 3,77-3,75 (m, 2H ), 3,66-3,63 (m, 4H ), 3,57-3,55 (m, 2H), 2,9 0 (s, 4H).
LCMS: m/z: 390,69 [M+H]+.
Exemplo 22 - Síntese de 6-[4-[3-(4-oxo-3H-pirido[3,4-d]pirimidin-2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
[00198] A uma solução agitada de 3-aminopiridina-4-carboxamida (300 mg, 2,18 mmols) em AcOH (6 mL), anidrido succínico (262 mg, 2,62 mmols) foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante 22 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (20 mL) durante 0 que sólido
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83/185 foi precipitado. O sólido foi filtrado e secado sob vácuo para obter ácido 4-[(4-carbamoil-3-piridil)amino]-4-oxo-butanoico (430 mg, 83%) que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação.
LCMS: m/z: 238,52 [M+H]+.
Etapa 2:
[00199] Ácido 4-[(4-carbamoil-3-piridil)amino]-4-oxo-butanoico (430 mg, 1,81 mmol) foi apreendido em NaOH a 2 N (8,6 mL) e refluxado durante 4 horas (TLC indicou completo consumo do material de partida). Após conclusão da reação, a mistura de reação foi resfriada para 0°C, acidificada com AcOH até 0 pH = 4, durante 0 que sólido foi precipitado. O sólido foi filtrado e secado sob vácuo para fornecer ácido 3(4-oxo-3H-pirido[3,4-d]pirimidin-2-il)propanoico (380 mg, 96%) que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação.
LCMS: m/z: 220,42 [M+H]+.
Etapa 3:
A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-pirido[3,4[00200]
d]pirimidin-2-il)propanoico (200 mg, 0,9 1 mmol) e cloridrato de 6piperazin-1-ilpiridina-3-carbonitrila (245 mg, 1,09 mmol) em DMF (5 mL), T3P (0,87 mL, 1,36 mmol), DIPEA (0,64 mL, 3,65 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 4 horas (TLC indicou completo consumo do material de partida). A mistura de reação foi diluída (30 mL), extraída com EtOAc (3x15 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados
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84/185 sob pressão reduzida para fornecer o composto bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 4 g, 5% de MeOH-DCM) para dar origem a 6-[4-[3-(4-oxo-3H-pirido[3,4d]piri midi n-2-il) propanoil]piperazi n-1 -il]piridi na-3-carbonitrila (45 mg,
13%) como um sólido branco.
[00201] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,55 (s, 1H), 8,9 4 (s,
1H), 8,59 (d, J= 4,8 Hz, 1H), 8,51-8,50 (m, 1H), 7,9 1-7,87 (m, 2H), 6,9 4 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 3,77 (brs, 2H), 3,65 (brs, 4H), 3,56 (brs, 2H), 2,9 2 (brs, 4H).
LCMS: m/z: 390,70 [M+H]+.
Exemplo 23 - Síntese de 6-[4-[3-(4-oxo-3H-thieno[2,3-d]pirimidin-
2-il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
2 3 [00202] A uma solução agitada de 2-aminotiofeno-3-carboxamida (300 mg, 2,11 mmols) em ácido acético (3 mL) foi adicionado anidrido succínico (253 mg, 2,53 mmols) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi em seguida diluída com água (20 mL) e a precipitação foi formada. A mistura foi filtrada e o sólido obtido foi secado sob vácuo para fornecer ácido 4-[(3-carbamoil-2-tienil)amino]-4-oxo-butanoico (410 mg, 69%), que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação.
[00203] 1H RMN [400 MHz, DMSO-de]: ó 12,20 (s, 1H), 12,14 (s,
1H), 7,89 (s, 1H), 7,50 (brs, 1H), 7,39 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 6,9 3 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 2,67 (t, J= 6,4 Hz, 2H), 2,56 (t, J= 6,8 Hz, 2H).
LCMS: m/z: 265,40 [M+Na]+.
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85/185
Etapa 2:
[00204] Ácido 4-[(3-carbamoil-2-thienil)amino]-4-oxo-butanoico (350 mg, 1,44 mmol) foi suspenso em NaOH a 2 N (7 mL) em temperatura ambiente. A mistura resultante foi aquecida a 100°C durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Após conclusão da reação, a mistura de reação foi resfriada para 0°C, acidificada com AcOH (pH = 4). Os sólidos foram formados, coletados por filtração e secados sob vácuo para dar origem a ácido 3-(4-oxo-3H-tieno[2,3d]pirimidin-2-il)propanoico (290 mg, 90%), que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação.
LCMS: m/z: 225,38 [M+H]+.
Etapa 3:
u HCI 5 [00205] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-tieno[2,3d]pirimidin-2-il)propanoico (200 mg, 0,89 mmol) e cloridrato de 6piperazin-1-ilpiridina-3-carbonitrila (239 mg, 1,07 mmol) em DMF (5 mL), foram adicionados T3P (0,85 mL, 1,33 mmol), DIPEA (0,62 mL, 3,568 mmols) em temperatura ambiente. Agitada a mistura de reação em temperatura ambiente durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída (30 mL), extraída com EtOAc (3 χ 30 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4, evaporado 0 solvente sob pressão reduzida para obter composto bruto. O bruto obtido foi purificado por
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86/185 cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 4 g, 5% de
MeOH-DCM) para dar origem a 6-[4-[3-(4-oxo-3H-tieno[2,3-d]pirimidin2-il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila (80 mg, 22%) come um sólido branco.
[00206] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,38 (s, 1H), 8,50 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,88 (dd, J= 2,4, 9,2 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,32 (d, J =5,6 Hz, 1H), 6,9 3 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 3,77-3,74 (m, 2H), 3,65-3,62 (m, 4H), 3,57-3,55 (m, 2H), 2,9 2-2,84 (m, 4H).
LCMS: m/z: 395,62 [M+H]+.
Exemplo 24 - Síntese de 6-[4-[3-(4-oxo-3H-tieno[3,2-d]pirimidin-2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
0 MaOH
„. XoH
A k. Elaps-1Y K f» [00207] A solução agitada de metil 3-aminotiofeno-2-carboxilato (2 g, 12,72 mmols) em hidróxido de sódio a 1 M (14 mL, 14 mmols) foi aquecida a 100°C durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente, acidificada com HCI a 1 N até o pH = 2 e extraída com 50% de THF-EtOAc (2 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi lavado com n-pentano (2 x 20 mL) para dar origem a ácido 3-aminotiofeno-2-carboxílico (1,4 g, 77%) que foi usado para a etapa seguinte sem qualquer purificação.
LCMS (ESI+): m/z: 144,30 [M+H]+.
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87/185
Etapa 2:
b Z 1
C ·\ ' :···· ' ''<^ z
[00208] Uma solução de ácido 3-aminotiofeno-2-carboxílico (1 g, 6,9 9 mmols) e CDI (1,24 g, 7,69 mmols) em THF (20 mL) foi aquecida a 60°C durante uma hora, em seguida solução de amônia aquosa a 25% (16 mL) foi adicionada e continuada a 60°C durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente e extraída com EtOAc (2 x 75 mL); os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (40 mL), secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 20 g, 50-75% de EtOAcHexano) para fornecer 3-aminotiofeno-2-carboxamida (400 mg, 40%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS (ESI+): m/z: 143,33 [M+H]+.
Etapa 3:
[00209] A uma suspensão agitada de 3-aminotiofeno-2carboxamida (390 mg, 2,74 mmols) em AcOH (10 mL), anidrido succínico (277 mg, 2,77 mmols) foi adicionado e agitado em temperatura ambiente durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (40 mL), agitada durante 15 minutos, o precipitado foi filtrado, lavado com água (10 mL) e secado para obter ácido 4-[(2-carbamoil-3tienil)amino]-4-oxo-butanoico (585 mg, 88%) como um sólido branco. LCMS (ESI+): m/z: 243,40 [M+H]+.
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88/185
Etapa 4:
[00210] Uma solução de ácido 4-[(2-carbamoil-3-tienil)amino]-4-oxobutanoico (500 mg, 2,07 mmols) em solução de hidróxido de sódio a 2 N (16 mL, 32 mmols) foi agitada a 80°C durante duas horas (LCMS indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente, acidificada com AcOH até o pH = 5, precipitado branco foi filtrado, lavado com água (20 mL), secado sob pressão reduzida para fornecer ácido 3-(4-oxo-3H-tieno[3,2d]pirimidin-2-il)propanoico (330 g, 72%) como um sólido branco.
LCMS (ESI+): m/z: 225,42 [M+H]+.
Etapa 5:
[00211] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-tieno[3,2d]pirimidin-2-il)propanoico (200 mg, 0,89 mmol), cloridrato de 6piperazin-1-ilpiridina-3-carbonitrila (240 mg, 1,07 mmol) e DIPEA (0,31 mL, 1,78 mmol) em DMF (10 mL), solução de T3P a 50% em EtOAc (0,85 mL, 1,34 mmol) foi adicionada em temperatura ambiente e agitada durante 3 horas (LCMS indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (60 mL) e extraída com DCM (2 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 0 produto bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílicagel, 20 g, 2-4% de MeOH-DCM) para dar origem a 6-[4-[3-(4-oxo-3HPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 102/215
89/185 tieno[3,2-d]pirimidin-2-il)propanoil]piperazin-1 -il]piridina-3-carbonitrila (60 mg, 17%) como um sólido esbranquiçado.
[00212] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,37 (s, 1H), 8,50 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,12 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,88 (dd, J = 5,6, 9,2 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 6,9 3 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 3,80-3,72 (m, 2H), 3,68-3,61 (m, 4H), 3,59-3,55 (m, 2H), 2,9 2-2,85 (m, 4H).
LCMS (ESI+): m/z: 395,63 [M+H]+.
Exemplo 25 - Síntese de 6-[(2S)-2-metil-4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-
2-il) propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
[00213] A uma solução agitada de terc-butil (3S)-3-metilpiperazina1-carboxilato (500 mg, 2,50 mmols) e 6-cloropiridina-3-carbonitrila (415 mg, 3,0 mmols) em DMSO (10 mL), K2CO3 (863 mg, 6,25 mmols) e Cu(MeCN)4PF6 (18 mg, 0,05 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi aquecida a 140°C durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente, diluída com água (20 mL) e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (2 x 30 mL) e salmoura (40 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílicagel, 15 g, 30% de EtOAc-Hexano) para fornecer terc-butil (3S)-4-(5ciano-2-piridil)-3-metil-piperazina-1-carboxilato (260 mg, 34%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS: m/z: 303,60 [M+H]+.
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90/185
Etapa 2:
f' Tf TF .ÁfXk ,-CM
TÂ,4h
Etapa-3 [00214] A uma solução agitada de terc-butil (3S)-4-(5-ciano-2piridil)-3-metil-piperazina-1 -carboxilato (260 mg, 0,86 mmol) em DCM (5 mL), resfriada para 0°C, HCI a 4 N em dioxano (5 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente e agitada durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi lavado com Et2Ü (5 mL) e secado sob vácuo elevado para fornecer cloridrato de 6-[(2S)-2-metilpiperazin1 -il]piridina-3-carbonitrila (120 mg, 68%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS: m/z: 203,45 [M+H]+.
Etapa 3:
[00215] A uma solução agitada de cloridrato de 6-[(2S)-2metilpiperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila (100 mg, 0,46 mmol) e ácido
3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoico (111 mg, 0,55 mmol) em DMF (5 mL), resfriada para 0°C, T3P (0,3 mL, 0,9 2 mmols, 50% em DMF) e DIPEA (0,25 mL, 1,38 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 8 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (20 mL) e extraída com EtOAc (3 x 60 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados
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91/185 com água fria (3 x 30 mL), salmoura (40 mL), secados sobre Na2SÜ4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílicagel, 8 g, 5% de MeOH-EtOAc) para fornecer 6-[(2S)-2-metil-4-[3-(4oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila (40 mg, 21%) como um sólido branco.
[00216] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,28 (s, 1H), 8,52 (d, J =
1,8 Hz, 1H), 8,06 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,88 (dd, J = 1,8 Hz, J = 9,0 Hz,
1H), 7,76-7,17 (m, 1H), 7,51 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,44 (t, J = 7,5 Hz,
1H), 6,9 0 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 4,66-4,58 (m, 1H), 4,25-4,14 (m, 2H), 4,05-3,87(m, 1H), 3,47 (d, J= 10,5 Hz, 1H), 3,12-2,9 9 (m, 2H), 2,9 12,84 (m, 4H), 1,20-,9 8 (m, 3H).
LCMS: m/z: 403,66 [M+H]+.
Exemplo 26 - Síntese de 6-[(2R)-2-metil-4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin2-il) propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
XN : J ---------------------------------------------------X- X- <N·X'-· to Cu(yeCN)4PFç J.
2 K2C0s. DMF.
140 Í:C. 4 h 4
Etspa-2 [00217] A uma solução agitada de terc-butil (3R)-3-metilpiperazina1-carboxilato (500 mg, 2,5 mmols), 6-cloropiridina-3-carbonitrila (415 mg, 3 mmols) em DMSO (10 mL), carbonato de potássio (690 mg, 5 mmols), Cu (MeCN^PFe (18 mg, 0,05 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação foi aquecida a 140°C durante 4 horas (TLC indicou completo consumo dos materiais de partida), trazida para a temperatura ambiente, diluída com água (30 mL) e extraída com EtOAc (3 x 40 mL). Os extratos orgânicos combinados
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92/185 foram lavados com água (30 mL), salmoura (40 mL), secados sobre Na2SC>4 e concentrados sob pressão reduzida para dar origem ao composto bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 7 g, 30% de EtOAc-hexano) para dar origem a terc-butil (3R)-4-(5-ciano-2-piridil)-3-metil-piperazina-1carboxilato (415 mg, 55%) como um sólido esbranquiçado.
[00218] 1H RMN [300 MHz, CDCh]: δ 8,39 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,627,58 (m, 1H), 6,54 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 4,51 (brs, 1H), 4,13-3,89 (m, 3H), 3,27-3,13 (m, 2H), 3,00 (brs, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,23-1,16 (m, 3H). LCMS: m/z: 247,46 [M-tBu]+.
Etapa 2:
[00219] A uma solução agitada de terc-butil (3R)-4-(5-ciano-2piridil)-3-metil-piperazina-1-carboxilato (410 mg, 1,35 mmol) em 1,4dioxano (4 mL), resfriada para 0°C, HCI a 4 N em dioxano (1,35 mL, 5,43 mmols) foi adicionado. A reação lentamente trazida para a temperatura ambiente e agitada durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer o 6-[(2R)-2-metilpiperazin-1-il]piridina-3carbonitrila bruto (310 mg, 96%) que foi usado para a etapa seguinte sem qualquer purificação.
LCMS: m/z: 203,41 [M+H]+.
Etapa 3:
s
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93/185 [00220] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (100 mg, 0,45 mmol), 6-[(2R)-2-metilpiperazin-1il]piridina-3-carbonitrila (93 mg, 0,45 mmol) em DMF (2 mL), EDC-HCI (131 mg, 0,68 mmol), HOBt (92 mg, 0,68 mmol) e DIPEA (0,16 mL, 0,9 1 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 16 horas (TLC indicou completo consumo de material de partidas). A mistura de reação foi diluída com água fria (20 mL) e extraída com EtOAc (3 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (1 x 30 mL), solução de salmoura (40 mL), secados sobre Na2SÜ4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o composto bruto. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 4 g, 3% de MeOH-DCM) para fornecer 6-[(2R)-2-metil-4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila (60 mg, 33%) como um sólido rosa pálido.
[00221] 1H RMN [300 MHz, DMSO-cfe]: δ 12,30 (brs, 1H), 8,52 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,06 (d, J= 7,8 Hz, 1H), 7,88 (dd, J= 9,0, 2,1 Hz, 1H), 7,76 - 7,71 (m, 1H), 7,51 (d , J = 8,1 Hz, 1H), 7,44 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,66-4,58 (m, 1H), 4,24-4,14 (m, 2H), 4,053,87 (m, 1H), 3,34-3,31 (m, 1H), 3,05-2,72 (m, 6H), 1,20-0,9 8 (m, 3H). LCMS: m/z: 403,66 [M+H]+.
Exemplo 27 - Síntese de 6-[(3R)-3-metil-4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin2-il) propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
[00222] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (1 g, 4,58 mmols), terc-butil (3R)-3-metilpiperazina-1carboxilato (917 mg, 4,58 mmols) em DMF (20 mL), EDC-HCI (1,3 g,
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6,88 mmols), HOBt (928 mg, 6,88 mmols) e DIPEA (1,6 mL, 9,17 mmols) foram adicionados e agitados em temperatura ambiente durante 16 horas (TLC indicou completo consumo de materiais de partida). A mistura de reação foi diluída com água fria (40 mL) e extraída com EtOAc (3 x 40 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (50 mL), salmoura (40 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o composto bruto. O composto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 10 g, 3% de MeOH em DCM) para dar origem a terc-butil (3R)-3-metil-4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazina-1-carboxilato (410 mg, 22%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS: m/z: 401,67 [M+H]+.
Etapa 2:
o
[00223] A uma solução agitada de terc-butil (3R)-3-metil-4-[3-(4oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazina-1-carboxilato (410 mg, 1 mmol) em 1,4-dioxano (4 mL), resfriada para 0°C, HCI a 4 N em dioxano (1,0 mL, 4 mmol) foi adicionado. A reação foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer o cloridrato de 2-[3-[(2R)-2metilpiperazin-1-il]-3-oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona bruto (310 mg, quantitativo) que foi usado para a etapa seguinte sem qualquer purificação.
LCMS: m/z: 301,61 [M+H]+.
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Etapa 3:
[00224] A uma solução agitada de cloridrato de 2-[3-[(2R)-2metilpiperazin-1-il]-3-oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona (200 mg, 0,66 mmol), 6-cloropiridina-3-carbonitrila (110 mg, 0,79 mmol) em DMSO (4 mL), carbonato de potássio (183 mg, 1,33 mmol), Cu(MeCN)4PF6 (5 mg, 0,013 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação foi aquecida a 140°C durante 4 horas (TLC indicou completo consumo dos materiais de partida), lentamente trazida para a temperatura ambiente, diluída com água fria (30 ml), extraída com EtOAc (3 x 40 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (30 mL), salmoura (40 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para dar origem ao composto bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 4 g, 5% de MeOH-DCM) para dar origem a 6[(3R)-3-metil-4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1il]piridina-3-carbonitrila (65 mg, 24%) como um sólido esbranquiçado.
[00225] 1H RMN [400 MHz, DMSO-cfe]: δ 12,20 (s, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,06 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,73 (brs, 1H), 7,52 (m, 1 H),7,44 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 6,9 3 (brs, 1H), 4,56 (brs, 1H), 4,37 4,14 (m, 3H), 3,52-3,31 (m, 2H), 2,9 8-2,88 (m, 5H), 1,20-1,00 (m, 3H). LCMS: m/z·. 403,62 [M+H]+.
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Exemplo 28 - Síntese de 6-[(3S)-3-metil-4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin2-il) propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
Vtífec:
â
em w:
TA, 12 h
Etaps-2
[00226] A uma solução agitada de terc-butil (2R)-2-metilpiperazina1-carboxilato (0,55 g, 2,75 mmols) e ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (0,5 g, 2,29 mmols) em DMF (10 mL), resfriada para 0°C, EDC-HCI (0,657 g, 3,44 mmols), HOBt (0,464 g, 3,44 mmols) e DIPEA (1,2 mL, 6,88 mmols) foram adicionados. A mistura de reação foi aquecida para a temperatura ambiente, agitada durante 12 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida), resfriada bruscamente com água (20 mL) e extraída com EtOAc (3 x 60 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (3 x 30 mL), salmoura (40 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o composto bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 15 g, 5% de MeOH-EtOAc) para fornecer terc-butil (3S)-3-metil-4-[3-(4-oxo3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazina-1-carboxilato (0,3 g, 32%). LCMS: m/z: 401,67 [M+H]+.
Etapa 2:
TA, 4 h
EiS:p3-3 q s 5 § í [00227] A uma solução agitada de terc-butil (3S)-3-metil-4-[3-(4 oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazina-1-carboxilato (0,2 g, 0,5 mmol) em DCM (5 mL), resfriada para 0°C, HCI a 4 N em dioxano (5
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97/185 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi lentamente aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi concentrada sob vácuo para fornecer o resíduo bruto que foi lavado com Et2Ü (5 mL) e secado sob vácuo elevado para fornecer cloridrato de 2-[3[(2S)-2-metilpiperazin-1 -il]-3-oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona (120 mg, 80%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS: m/z: 301,61 [M+H]+.
Etapa 3:
[00228] Uma solução de cloridrato de 2-[3-[(2S)-2-metilpiperazin-1il]-3-oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona (100 mg, 0,33 mmol), 6cloropiridina-3-carbonitrila (55 mg, 0,39 mmol), K2CO3 (138 mg, 0,10 mmol) e Cu(MeCN)4PFe (2 mg, 0,006 mmol) em DMSO (3 mL) foi agitada a 140°C durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente, diluída com água (20 mL) e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (2 x 30 mL), salmoura (1 x 30 mL), secados sobre Na2SO4, e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 10 g, 5% de MeOH-EtOAc) para fornecer 6-[(3S)-3-metil-4-[3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1 -il]piridi na-3-carbonitrila (30 mg, 22%) como um sólido branco.
[00229] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,24 (s, 1H), 8,49 (d, J = 2,1, 1H), 8,06 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,87 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1H), 7,78Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 111/215
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7,70 (m, 1H), 7,55-7,42 (m, 2H), 7,01-6,9 1 (m, 1H), 4,61-4,51 (m, 1H),
4,38-4,15 (m, 2H), 3,9 5-3,85 (d, J= 12,9 Hz, 1H), 3,51-3,40 (m, 1H),
3,25-3,17 (m, 1H), 3,05 -2,81 (m, 5H), 1,22-0,9 9 (m, 3H).
LCMS: m/z: 403,63 [M+H]+.
Exemplo 29 - Síntese de 6-[(3S)-4-[3-(6-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il) propanoil]-3-metil-piperazin-1-il]piridina-3carbonitrila
Etapa 1:
' Ύ ΌΜ TA. Sh re·' 'M'k Etapa-1
2 [00230] A uma solução agitada de ácido 2-amino-5-fluoro-benzoico (15 g, 96,69 mmols) em THF (300 mL), EDC-HCI (27,70 g, 145,03 mmols), HOBt-NHs (21,75 g, 145,03 mmols) e DIPEA (51,0 mL, 290,07 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 6 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi diluído com água (150 mL) e extraído com EtOAc (3 x 150 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (2 x 100 mL), salmoura (1 x 100 mL), secados sobre Na2SO4, e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100200 malhas de sílica-gel, 300 g, 40% de EtOAc-Hexano) para fornecer 2-amino-5-fluoro-benzamida (10,0 g, 67%) como um sólido amarelo pálido. LCMS: m/z: 155,38 [M+H]+.
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Etapa 2:
D [00231] A uma solução agitada de 2-amino-5-fluoro-benzamida (7,0 g, 45,45 mmols) em AcOH (35 mL), anidrido succínico (5,45 g, 54,54 mmols) foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi vertida em água resfriada (250 mL), sólido precipitado foi agitado durante 30 minutos em temperatura ambiente, filtrado, lavado com água (50 mL), acetona fria (20 mL) e secado sob vácuo elevado para fornecer ácido 4-(2-carbamoil-4-fluoro-anilino)-4-oxobutanoico (9,0 g, 77%) como um sólido branco. LCMS: m/z: 255,57 [M+H]+.
Etapa 3:
.[ ~ reta. 3 h
........................... ii i J
Sapa-3 TF y'
x.,' y £ õ
§ [00232] A solução agitada de ácido 4-(2-carbamoil-4-fluoro-anilino)-
4-oxo-butanoico (9,0 g, 35,43 mmols) em NaOH aquoso a 2 N (100 mL) foi aquecido a 100°C durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada para 0°C e acidificada com HCI aquoso a 2 N até pH = 4-5 durante o que precipitado branco foi formado. A suspensão foi agitada a 0°C durante 30 minutos, filtrada, lavada com água (2 x 50 mL) e acetona fria (20 mL). O sólido foi secado sob vácuo elevado para dar origem a ácido 3(6-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoico (7,0 g, 83%) como um sólido esbranquiçado. LCMS: m/z: 237,43 [M+H]+.
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Etapa 4:
[00233] A uma solução agitada de ácido 3-(6-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (5,0 g, 21,19 mmols) e terc-butil (3S)-3metilpiperazina-1-carboxilato (4,2 g, 21,19 mmols) em DMF (50 mL), resfriada para 0°C, EDC-HCI (6,06 g, 31,78 mmols), HOBt (4,29 g, 31,78 mmols) e DIPEA (11,2 mL, 63,56 mmols) foram adicionados. A mistura de reação foi aquecida para a temperatura ambiente, agitada durante 12 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida), resfriada bruscamente com água (100 mL) e extraída com EtOAc (3 x 200 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (3 x 50 mL), salmoura (50 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílicagel, 80 g, 5% de MeOH-DCM) para fornecer terc-butil (3S)-4-[3-(6fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il) propanoil]-3-metil-piperazina-1carboxilato (4,0 g, 45%) como um sólido esbranquiçado. LCMS: m/z: 419,73 [M+H]+.
Etapa 5:
H CÍ a «h 0
[00234] A uma solução agitada de terc-butil (3S)-4-[3-(6-fluoro-4oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]-3-metil-piperazina-1-carboxilato (4,0 g, 9,57 mmols) em 1,4-dioxano (20 mL), resfriada para 0°C, HCI a 4 N em dioxano (10 mL, 40,0 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente e agitada durante 4 horas
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101/185 (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi lavado com Et2O (10 mL), secado sob vácuo elevado para dar origem a cloridrato de 6-fluoro-2-[3-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]-3oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona (2,0 g, 65%) e usado para a etapa seguinte sem qualquer purificação. LCMS: m/z: 319,63 [M+H]+.
Etapa 6:
Í43 &C, 4 h
........................
Etapa -6
[00235] A uma solução agitada de cloridrato de 6-fluoro-2-[3-[(2S)-2metilpiperazin-1-il]-3-oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona (2,5 g, 7,86 mmols), 6-cloropiridina-3-carbonitrila (1,08 g, 7,86 mmol), e K2COs (3,2 g, 23,58 mmols) em DMSO (20 mL), Cu(MeCN)4PFe (58 mg, 0,16 mmol) foi adicionado e agitado a 140°C durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente, diluída com água (50 mL) e extraída com EtOAc (3 x 150 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (2 x 100 mL), salmoura (1x10 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100200 malhas de sílica-gel, 40 g, 5% de MeOH-DCM) para fornecer composto 6-[(3S)-4-[3-(6-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]-3-metilpiperazin-1 -il]piridina-3-carbonitrila (1,3 g, 40%) como um sólido branco. [00236] 1H RMN [400 MHz, DMSO-de]: ó 12,31 (s, 1H), 8,48 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,86 (dd, J= 8,8, 2,0 Hz, 1H), 7,73 (dd, J= 8,8, 2,8 Hz, 1H), 7,68-7,55 (m, 2H), 6,9 7-6,88 (s, 1H), 4,56-4,36 (m, 1H), 4,30-4,14 (m, 3H), 3,51-3,44 (m, 1H), 3,24-3,17 (m, 1H), 2,9 8 (s, 1H), 2,9 5-2,80 (s, 4H), 1,25-0,9 4 (m, 3H).
LCMS: m/z: 421,72 [M+H]+.
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Exemplo 29a - Síntese de 6-[(3R)-4-[3-(6-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il) propanoil]-3-metil-piperazin-1 -i I] pi rid i na-3 carbonitrila
Etapa 1:
[00237] A uma mistura de 6-cloropiridina-3-carbonitrila (10 g, 0,06 mol) e (2R)-2-metilpiperazina (6,35 g, 0,06 mol) em acetonitrila (80 mL), K2CO3 (12,0 g, 0,09 mol) foi adicionado em temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada a 60°C durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A reação foi trazida para a temperatura ambiente, resfriada bruscamente com água (150 mL) e extraída com EtOAc (3 x 80 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 5% de MeOH-DCM) para dar origem a 6-[(3R)-3-metil-piperazina-1-il]-piridina-3-carbonitrila (10,0 g, 69% de produção).
Etapa 2:
TA, 22 h
Elap3-2
[00238] A uma solução agitada de ácido 3-(6-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (5,0 g, 21,19 mmols, obtida de Exemplo 29, etapa 3) em DMF seco (40 mL, ~ 8 vol), 6-[(3R)-3-metil-piperazina-1il]-piridina-3-carbonitrila (4,06 g, 20 mmols), EDCIHCI (6,08 g, 31,6
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103/185 mmols), HOBt (3,43 g, 25,4 mmols) e DIPEA (14,5 mL, 84,5 mol) foram adicionados a 10 a 15°C e agitados durante 22 horas. A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água resfriada (500 mL) e extraída com EtOAc (3 x 70 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SC>4 anidroso e concentradas sob pressão reduzida para obter composto bruto. Composto bruto foi agitado com EtOAc (50 mL) durante uma hora em temperatura ambiente, filtrado e secado sob vácuo. O sólido obtido foi novamente tornado suspensão com EtOAc. Filtrado o sólido e lavado com EtOAc (50 mL) para dar origem a (50 mL) 6-[(3R)-4-[3-(6-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]-3-metil-piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila em 43% de produção (3,8 g). HPLC quiral foi usado para confirmar que o composto é o enantiômero de composto 29. Coluna usada: Lux, 5 microns, Celulose-4 (250 X 4,6 mm, 5 microns, Fase móvel: 50:50 de n-hexano: (0,1% de HCOOH em 1:1 de etanokmetanol), Taxa de fluxo: 1,0 mL/min, Temperatura: 25°C. Tempo de retenção para enantiômero R = 12,9 min; Tempo de retenção para composto 29 = 13,4 min.
Exemplo 30 - Síntese de 6-[(3S)-4-[3-(5-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il) propanoil]-3-metil-piperazin-1-il]piridina-3carbonitrila
Etapa 1:
EDC.HQ
DÉPEA.THF.
TA. 6 h
[00239] A uma solução agitada de ácido 2-amino-6-fluoro-benzoico (15 g, 96,77 mmols) em THF (150 mL), EDC-HCI (27 g, 145,16 mmols), HOBt-NHs (21 g, 145,16 mmols), e DIPEA (52 mL, 290,32 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 6 horas (TLC indicou completa conversão de composto 1). A mistura
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104/185 de reação foi diluída com EtOAc (300 mL) e lavada com água (3 χ 100 mL), salmoura (1 x 150 mL). A camada orgânica foi separada, secada sobre Na2SC>4, os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida para dar origem ao produto bruto que foi lavado com 10% de EtOAchexanos (2 x 150 mL), secado sob vácuo elevado para fornecer 2amino-6-fluoro-benzamida (12,2 g, 80%) como um sólido amarelo pálido.
LCMS: m/z: 155,42 [M+H]+.
Etapa 2:
[00240] A uma solução agitada de 2-amino-6-fluoro-benzamida (12 g, 77,9 2 mmols) em AcOH (120 mL), anidrido succínico (9,3 g, 93,50 mmols) foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante 4 horas (TLC indicou completa conversão de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água resfriada (1 x 200 mL), agitada durante 30 minutos quando o sólido foi precipitado. O sólido foi filtrado, lavado com água (1 x 150 mL), seguida por acetona fria (1 x 100 mL) e secado sob vácuo elevado para fornecer ácido 4-(2-carbamoil-3-fluoroanilino)-4-oxo-butanoico (16 g, 81%) como um sólido esbranquiçado. LCMS: m/z: 277,46 [M+Na]+, 238,49 [M-NH2]+.
Etapa 3:
[00241] Uma solução agitada de ácido 4-(2-carbamoil-3-fluoroanilino)-4-oxo-butanoico (15,5 gm, 6,10 mmols) em NaOH a 2 N aquo
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105/185 so (160 mL) foi aquecida a 100°C durante 4 horas (TLC indicou completa conversão de material de partida). A mistura de reação foi resfriada para 0°C, acidificada com AcOH até o pH = 5 durante o que sólido precipitou-se. O sólido foi filtrado, lavado com água (250 mL), seguida por acetona fria (1 x 100 mL) e secado sob vácuo elevado para dar origem a ácido 3-(5-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoico (11 g, 80%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS: m/z: 237Al [M+H]+.
Etapa 4:
'EDC HCI HOS1
DIPEA.. DMF,
TA, 16 h
[00242] A uma solução agitada de ácido 3-(5-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (5,2g, 22 mmols) em DMF (52 mL), terc-butil (3S)-3-metilpiperazina-1-carboxilato (6,6 g, 33,05 mmols), EDC-HCI (6,2g, 33,05 mmols), HOBt (4,4g, 33,05 mmols) e DIPEA (12 mL, 66,10 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 16 horas (TLC indica completa conversão de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água resfriada (160 mL), agitada 30 minutos quando o sólido foi precipitado que foi filtrado. O filtrado foi extraído com EtOAc (3 x 200 mL) e os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (1 x 200 mL), salmoura (1 x 200 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 60 g, 5% de MeOHDCM) para dar origem a terc-butil (3S)-4-[3-(5-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]-3-metil-piperazina-1-carboxilato (4 g, 43%) como um sólido de cor creme. LCMS: m/z: 419,73 [M+H]+.
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Etapa 5:
g HCI a «toam® A £08,TA, 3 h ^H Z^nm t A Á A J .....................................* A <=* xR v ’s' Y Eiaps-S u ;
Ò = 8 ° ' /
[00243] A uma solução agitada de terc-butil (3S)-4-[3-(5-fluoro-4oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]-3-metil-piperazina-1 -carboxilato (6 g, 14,35 mmols) em DCM (60 mL), HCI a 4 N em dioxano (60 mL) foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante 3 horas (TLC indicou completa conversão de material de partida). Os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida, o resíduo bruto foi codestilado com tolueno (2 x 100 mL) e secado sob vácuo elevado para dar origem a cloridrato de 5-fluoro-2-[3-[(2S)-2-metilpiperazin-1 -il]-3-oxo-propil]-3Hquinazolin-4-ona (4,7 g, 94%) como um sólido branco. LCMS: m/z: 319,59 [M+H]+.
Etapa 6:
lute seiaào
Etapa-6 [00244] A uma solução agitada de cloridrato de 5-fluoro-2-[3-[(2S)2-metilpiperazin-1-il]-3-oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona (5,2 g, 14,73 mmols) em DMSO (52 mL), apreendido em um tubo selado, K2CO3 (4 g, 29,40 mmols), 6-cloropiridina-3-carbonitrila (2 g, 14,73 mmols) e hexafluorofosfato de tetracis(acetonitrila)cobre (I) (109 mg, 0,29 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação foi desgaseificada com argônio durante 5 minutos e agitada a 110°C durante 3 horas (LCMS indicou completa conversão de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (300 mL) e extraída com EtOAc (3 x 200 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (1 x 200 mL), salmoura (1 x 200
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107/185 mL), camada orgânica foi separada, secada sobre Na2SÜ4 e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 60 g, 5% de MeOH-DCM) para fornecer sólido esbranquiçado. Este sólido foi lavado com 5% de MeOH-EtOAc para fornecer 6-[(3S)-4-[3-(5fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]-3-metil-piperazin-1-il]piridina-
3-carbonitrila (1,4 g, 23%) como um sólido branco.
[00245] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,22 (s, 1H), 8,47 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,85 (dd, J= 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,73-7,65 (m, 1H), 7,32 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 7,19-7,14 (m, 1H), 6,9 1 (d, J=8,0 Hz, 1H), 4,55-4,35 (m, 1H), 4,29-4,11 (m, 3H), 3,48 (t, J= 9,2 Hz, 1H), 3,26-3,18 (m, 1H), 3,04-2,9 4 (m, 1H), 2,9 1 -2,84 (m, 4H), 1,21 -0,9 8 (m, 3H). LCMS: m/z: 421,72 [M+H]+.
Exemplo 31 - Síntese de 6-[3-(hidroximetil)-4-[3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila Etapa 1:
[00246] A uma solução agitada de dicloridrato de piperazin-2ilmetanol (100 mg, 0,53 mmol) em DMSO (3 mL), 6-cloropiridina-3carbonitrila (88 mg, 0,63 mmol), K2COs (146 mg, 1,062 mmol) e Cu(MeCN)4PF6 (3,9 mg, 0,01 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação foi aquecida a 140°C durante 12 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida), resfriada bruscamente com água (10 mL) e extraída com EtOAc (3x10 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel,
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108/185 g, 5% de MeOH-DCM) para fornecer cloridrato de 6-[3(hidroximetil)piperazin-l-il]piridina-3-carbonitrila (50 mg, 32%) como um sólido branco. LCMS: m/z: 219 [M+H]+.
Etapa 2:
[00247] A uma solução agitada de cloridrato de 6-[3(hidroximetil)piperazin-l-il]piridina-3-carbonitrila (120 mg, 0,55 mmol) e ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoico (120 mg, 0,55 mmol) em DMF seco (2 mL), EDC-HCI (157 mg, 0,825 mmol), HOBt (113 mg, 0,825 mmol) e DIPEA (0,2 mL, 1,1 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 16 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água fria (20 mL) e extraída com EtOAc (3x10 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo que foi purificado por HPLC preparativa para dar origem a 6-[3-(hidroximetil)-
4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3carbonitrila (26 mg, 11%) como um sólido branco.
[00248] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,17 (s, 1H), 8,49 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8,08-8,06 (m, 1H), 7,88-7,85 (m, 1H), 7,74 (t, J = 8 Hz,1H), 7,53 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 7,46-7,42 (m, 1H), 6,9 3-6,86 (m, 1H), 5,0-4,82 (m, 2H), 4,42-3,88 (m, 4H), 3,56-3,47 (m, 2H), 2,9 9-2,89 (m, 6H).
LCMS: m/z: 419,76 [M+H]+.
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 122/215
109/185
Exemplo 32 - Síntese de 6-[4-[3-(6-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]-3-(hidroximetil)piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
[00249] A uma solução agitada de ácido 3-(6-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (300 mg, 1,27 mmol) e 6-[3(hidroximetil)piperazin-l-il]piridina-3-carbonitrila (277 mg, 1,27 mmol) em DMF (4 mL), DIPEA (0,68 mL, 3,81 mmols), T3P (0,8 mL, 2,54 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação foi aquecida a 80°C em micro-ondas CEM durante 30 minutos (TLC indicou completo consumo do material de partida), lentamente trazida para a temperatura ambiente, resfriada bruscamente com água (10 mL) e extraída com EtOAc (3 x 60 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (3 x 30 mL), salmoura (20 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo bruto. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 15 g, 5 a 10% de MeOH-DCM) para fornecer 6-[4-[3-(6-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]-3-(hidroximetil)piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila (90% LCMS, 300 mg) que foi novamente purificado por HPLC preparativa para dar origem ao composto puro (154 mg, 27%) como um sólido branco.
[00250] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,31 (brs, 1H), 8,48 (s,
1H), 7,85 (dd, J = 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,74 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1H), 7,667,61 (m, 2H), 6,9 2-6,86 (m, 1H), 5,07-4,84 (m, 2H), 4,44-4,37 (m, 1H), 4,33-4,16 (m, 4H), 3,9 4-3,86 (m, 1H), 3,12-2,78 (m, 6H).
LCMS: m/z: 437,75 [M+H]+.
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 123/215
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Exemplo 33 - Síntese de 6-[4-[3-(5-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]-3-(hidroximetil)piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
| I 1 A J zVw + r>T >r | η?. DÍPEA. -C·^ LW, ?.í Λ·' | F A | |
| í I. s A 3 v. g: v.. | Etapa-5 | ||
| [00251] A uma solução | agitada de | ácido | 3-(5-fluoro-4-oxo-3H- |
| quinazolin-2-il)propanoico | (400 mg, | 1,69 | mmol) e 6-[3- |
(hidroximetil)piperazin-l-il]piridina-3-carbonitrila (369 mg, 1,69 mmol) em DMF (4 mL) em temperatura ambiente, DIPEA (0,88 mL, 5,08 mmols) seguido por T3P (1,0 mL, 3,39 mmols) foram adicionados. A mistura de reação foi aquecida a 80°C durante 30 minutos em microondas CEM (TLC indicou completo consumo do material de partida), lentamente trazida para a temperatura ambiente, resfriada bruscamente com água (10 mL) e extraída com EtOAc (3 x 60 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (3 x 30 mL), salmoura (20 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 15 g, 5 a 10% de MeOH-DCM) para fornecer 6-[4-[3-(5-fluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]-3-(hidroximetil)piperazin-1 -il]piridina-3-carbonitrila (90% LCMS, 300 mg) que foi purificado por HPLC preparativa para dar origem ao composto puro (160 mg, 21%) como um sólido branco.
[00252] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,36 (brs, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,86 (dd, J = 8,8, 2,0 Hz, 1H), 7,70 (q, J = 8,0 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,20-7,15 (m, 2H), 6,9 3-6,86 (m, 1H), 5,02-4,81 (m, 1H), 4,42-4,39 (m, 1H), 4,33-3,88 (m, 3H), 3,53-3,41 (m, 2H), 2,9 5-2,87 (m, 6H).
LCMS: m/z: 437,75 [M+H]+.
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 124/215
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Exemplo 34 - Síntese de 2-[3-oxo-3-[4-(2-piridil)piperazin-1il]propil]-3H-quinazolin-4-ona
Etapa 1:
%co:i | J f 'Woe OMSÜ US'C. Í2 it if *· EtaiSÃ-ΐ Μ K y
3 zfít3õc [00253] A uma solução agitada de 2-cloropiridina (750 mg, 6,60 mmols) em DMSO (10 mL), terc-butil piperazina-1-carboxilato (1,4 g, 7,9 2 mmols), K2CO3 (1,8 g, 13,27 mmols) e Cu(MeCN)4PFe (49 mg, 0,132 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e aquecidos a 140°C durante 12 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (40 mL) e extraída com EtOAc (3 x 60 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer 0 composto bruto que foi purificado por cromatografia rápida (100-200 malhas de sílica-gel, 8 g, 20% de EtOAchexanos) para fornecer terc-butil 4-(2-piridil)piperazina-1-carboxilato (350 mg, 20%) como um óleo amarelo.
LCMS: m/z: 264,55 [M+H]+.
Etapa 2:
HC' a 4Ú ST:
.,.--¾¾. 1 ,.4-dtaxsn®, y %
1,4-ítacarKí. 3 h Is -T.
x rC% ·-·> ----------------------------* Ί ó Etepa-2 HU [00254] A uma solução agitada de terc-butil 4-(2-piridil)piperazina-1 carboxilato (350 mg, 1,32 mmol) em 1,4-dioxano (4 mL), HCI a 4 N em dioxano (1,3 mL, 5,30 mmols) foi adicionado a 0°C sob atmosfera de argônio. A mistura de reação foi lentamente aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob presPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 125/215
112/185 são reduzida para fornecer o composto bruto que foi lavado com Et2Ü (50 mL) para fornecer cloridrato de 1-(2-piridil)piperazina (210 mg,
96%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 164,48 [M+H]+.
Etapa 3:
[00255] A uma solução agitada de cloridrato de 1-(2piridil)piperazina (100 mg, 0,609 mmol) e ácido 3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (121 mg, 0,609 mmol) em DMF seco (2 mL), EDC-HCI (174 mg, 0,9 13 mmols), HOBt (123 mg, 0,9 13 mmols) e DlPEA (0,2 mL, 1,2 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 16 horas (TLC indicou o completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água fria (20 mL), agitada durante 15 minutos, o sólido precipitado, que foi filtrado, lavado com Et2Ü (2x5 mL) e secado sob vácuo para fornecer 2-[3-oxo-3-[4-(2-piridil)piperazin-1-il]propil]-3H-quinazolin-4ona (55 mg, 24%) como um sólido branco.
[00256] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 12,20 (s, 1H), 8,13-8,11 (dd, J = 4,8, 1,5 Hz, 1H), 8,08 (dd, J = 7,8, 1,2 Hz, 1H), 7,76-7,74 (m, 1H), 7,58-7,52 (m, 2H), 7,46-7,41 (m, 1H), 6,84 (d, J= 8,7 Hz, 1H), 6,68-6,64 (m, 1H), 3,62 (s, 2H), 3,59-3,51 (m, 4H), 3,46-3,46 (m, 2H), 2,89 (brs, 4H).
LCMS: m/z: 364,62 [M+H]+.
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 126/215
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Exemplo 35 - Síntese de 2-[3-[4-(5-metil-2-piridil)piperazin-1 -il]-3oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona
Etapa 1:
[00257] A uma solução agitada de 2-cloro-5-metil-piridina (500 mg,
2,68 mmols) em tolueno (10 mL), terc-butil piperazina-1-carboxilato (409 mg, 3,22 mmols), Pd2(dba)3 (122 mg, 0,13 mmol), BINAP (167 mg, 0,27 mmol) e í-BuOK (903 mg, 8,06 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e aquecidos a 100°C durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (30 mL) e extraída com EtOAc (3 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia rápida (100-200 malhas de sílica-gel, 8 g, 30% de EtOAc-hexanos) para fornecer terc-butil 4-(5-metil-2piridil)piperazina-1-carboxilato (560 mg, 92%) como um óleo amarelo.
Etapa 2:
HCI a « eni
1,4-ítoafis, 3h
-----------------------------------Etapa-2
[00258] A uma solução agitada de cloridrato de 1-(5-metil-2piridil)piperazina (560 mg, 1,80 mmol) em 1,4-dioxano (5 ml), resfriada para 0°C, HCI a 4 N em dioxane (1,8 ml, 7,22 mmols) foi adicionado sob atmosfera de argônio e agitado durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer o resíduo que foi lavado com
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Et2O (50 ml) e secado para fornecer cloridrato de 1-(5-metil-2piridil)piperazina (350 mg, 98%) como um sólido branco.
[00259] 1H RMN [300 MHz, DMSO-d6]: δ 9,64 (brs, 2H), 7,9 5 (s,
1H), 7,85 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 3,9 0 (m, 4H),
3,22 (m, 4H), 2,22 (s, 3H).
Etapa 3:
[00260] A uma solução agitada de cloridrato de 1-(5-metil-2piridil)piperazina (100 mg, 0,56 mmol) e ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin2-il)propanoico (135 mg, 0,67 mmol) em DMF seco (2 mL), EDC-HCI (161 mg, 0,84 mmol), HOBt (114 mg, 0,84 mmol) e DIPEA (0,2 mL, 1,1 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 16 horas (TLC indicou o completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (10 mL) e extraída com DCM (3x10 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia rápida (100-200 malhas de sílicagel, 4 g, 5% de MeOH-DCM) para obter composto 2-[3-[4-(5-metil-2piridil)piperazin-1-il]-3-oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona (50 mg, 23%) como um sólido branco.
[00261] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6] : δ 12,18 (s, 1H), 8,07 (dd, J = 6, 0,9 Hz, 1H), 7,9 6 (s, 1H), 7,75-7,71 (m, 1H), 7,54 (d, J = 6 Hz, 1H), 7,46-7,38 (m, 2H), 6,78 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 3,62-3,61 (m, 2H), 3,59-3,51 (m, 4H), 3,39-3,38 (m, 2H), 2,88 (brs, 4H), 2,14 (brs, 3H). [00262] LCMS: m/z: 378,37 [M+H]+.
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Exemplo 36 - Síntese de 2-[3-[4-(3-metil-2-piridil)piperazin-1 -il]-3oxo-propil]-3H-quinazolin-4-on
Etapa 1:
swap,
ΜΜίΟΚ. T«Jbhs®, | Ί .s. A tao *o. 2 hsf * I ttess^'1 1' :75
2L [00263] A uma solução agitada de 2-cloro-3-metil-piridina (500 mg,
2,68 mmols) em tolueno (10 mL), terc-butil piperazina-1-carboxilato (409 mg, 3,22 mmols), Pd2(dba)s (122 mg, 0,13 mmol), BINAP (167 mg, 0,26 mmol) e t-BuOK (903 mg, 8,06 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e aquecidos a 100°C durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (30 mL) e extraída com EtOAc (3 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo que foi purificado por cromatografia rápida (100-200 malhas de sílica-gel, 8 g, 30% de EtOAc-Hexano) para fornecer terc-butil 4-(3metil-2-piridil)piperazina-1 -carboxilato (560 mg, 92%) como um óleo amarelo.
Etapa 2:
HCl a 414 ets
t..4-to®no,.
1.4-^íssans. s; Άγ'·''
I 1 TA. 3 h t À A
.......'.....................> 'Ν' Ó’ 3 Etapa-2 * HCl [00264] A uma solução agitada de terc-butil 4-(3-metil-2piridil)piperazina-1-carboxilato (560 mg, 1,80 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL), resfriada para 0°C, HCl a 4 N em dioxano (1,8 mL, 7,2 mmols) foi adicionado sob atmosfera de argônio. A mistura de reação foi lentamente aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 3 hoPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 129/215
116/185 ras (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com
Et2O (50 mL) para fornecer cloridrato de 1-(3-metil-2-piridil)piperazina (350 mg, 98%) que foi usado para a etapa seguinte sem qualquer purificação.
Etapa 3:
[00265] A uma solução agitada de cloridrato de 1-(3-metilpiridin-2il)piperazina (100 mg, 0,46 mmol) e ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (135 mg, 0,67 mmol) em DMF seco (2 mL), EDC-HCI (161 mg, 0,84 mmol), HOBt (114 mg, 0,84 mmol) e DIPEA (0,2 mL, 1,1 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 16 horas (TLC indicou o completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (10 mL) e extraída com EtOAc (3x10 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo que foi purificado por cromatografia rápida (100-200 malhas de sílica-gel, 3 g, 5% de MeOH-DCM) para dar origem a composto 2-[3-[4-(3-metil-2-piridil)piperazin-1 -il]-3-oxo-propil]-3Hquinazolin-4-ona (50 mg, 23%) como um sólido branco.
[00266] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,18 (s, 1H), 8,12-8,06 (m, 2H), 7,77-7,73 (m, 1H), 7,59-7,57 (m, 1H), 7,53-7,51 (m, 1H), 7,467,42 (m, 1H), 6,9 6-6,9 3 (m, 1H), 3,66 (brs, 2H), 3,59 (brs, 2H), 3,11 (brs, 2H), 2,9 8 (brs, 2H), 2,89 (s, 4H), 2,26 (s, 3H).
LCMS: m/z: 378,61 [M+H]+.
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 130/215
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Exemplo 37 - Síntese de 2-[3-[4-(6-metil-2-piridil)piperazin-1 -il]-3oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona
Etapa 1:
Ptla(dba);3. BtNAP, ffiuGK: toSSS». W0*C.
..................................
Etapa-1
[00267] A uma solução agitada de 2-cloro-6-metil-piridina (500 mg,
2,68 mmols) em tolueno (10 mL), terc-butil piperazina-1-carboxilato (409 mg, 3,22 mmols), Pd2(dba)s (122 mg, 0,13 mmol), BINAP (167 mg, 0,26 mmol), tBuOK (903 mg, 8,06 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação foi aquecida a 100°C durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida), diluída com água (20 mL), extraída com EtOAc (3 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o composto bruto que foi purificado por cromatografia rápida (100-200 malhas de sílica-gel, 8 g, 30% de EtOAc-Hexano) para fornecer terc-butil 4-(6-metil-2piridil)piperazina-1-carboxilato (560 mg, 75%) como um sólido amarelo.
LCMS: m/z: 278,59 [M+H]+.
Etapa 2:
H C: a 4ί·ί
1,4-íífexam,
1,4^0X300,
TA, 3 ri Wa'2 HCI [00268] A uma solução agitada de terc-butil 4-(6-metil-2 piridil)piperazina-1-carboxilato (560 mg, 1,80 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL), resfriada para 0°C, HCI a 4 N em dioxano (1,8 mL, 7,22 mmols)
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 131/215
118/185 foi adicionado sob atmosfera de argônio. A mistura de reação foi lentamente trazida para a temperatura ambiente e agitada durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com Et2O (50 mL) e EtOAc (50 mL) para obter cloridrato de 1-(6-metil-2piridil)piperazina (350 mg, 98%) como um sólido esbranquiçado. LCMS: m/z: 178,48 [M+H]+.
Etapa 3:
[00269] A uma solução agitada de composto 5 (100 mg, 0,45 mmol), cloridrato de 1-(6-metil-2-piridil)piperazina (81 mg, 0,45 mmol) em DMF (2 mL), EDC-HCI (131 mg, 0,68 mmol), HOBt (92 mg, 0,68 mmol) e DIPEA (0,16 ml, 0,9 1 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 6 horas (TLC indicou o completo consumo de material de partida), diluída com água fria (30 mL) e agitada durante 10 minutos durante o que sólido foi precipitado. O sólido foi filtrado, lavado com EtOAc (3x10 mL) e secado sob vácuo para dar origem a 2-[3-[4-(6-metil-2-piridil)piperazin-1-il]-3oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona (62 mg, 36%) como um sólido branco. [00270] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,19 (s, 1H), 8,07 (dd, J = 7,6, 1,2 Hz, 1H), 7,76-7,72 (m, 1H), 7,545 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,44 (t, J =7,6 Hz, 2H), 6,62 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,53 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,633,61 (m, 2H), 3,57-3,53 (m, 4H), 3,45-3,43 (m, 2H), 2,89 (s, 4H), 2,31 (s, 3H).
LCMS: m/z: 378,57 [M+H]+.
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 132/215
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Exemplo 38 - Síntese de 2-[3-[4-(4-metil-2-piridil)piperazin-1 -il]-3oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona
Etapa 1:
í Ί ;
N Q ' sy' -|4' \ tta&a-l ' 7 j
12’ 3 [00271] A uma solução agitada de 2-cloro-4-metil-piridina (200 mg, 1,07 mmol) em DMSO (3 mL), terc-butil piperazina-1-carboxilato (161 mg, 1,29 mmol), Pd2(dba)s (49 mg, 0,05 mmol), BINAP (66 mg, 0,107 mmol) e í-BuOK (360 mg, 3,22 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação foi aquecida a 100°C durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida), resfriada bruscamente com água (30 mL) e extraída com EtOAc (3 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia rápida (100-200 malhas de sílica-gel, 10 g, 30% de EtOAcHexano) para fornecer terc-butil 4-(4-metil-2-piridil)piperazina-1 carboxilato (240 mg, 80%) como um óleo amarelo.
Etapa 2:
HCi a em i 1,4-ííiaxsrsD, [
.............................* V k £ts^-2 5 4 [00272] A uma solução agitada de terc-butil 4-(4-metil-2piridil)piperazina-1-carboxilato (560 mg, 1,805 mmol) em 1,4-dioxano (5 mL), resfriada para 0°C, HCl a 4 N em dioxano (1,8 mL, 7,220 mmols) foi adicionado sob atmosfera de argônio. A mistura de reação foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 133/215
120/185 foram removidos sob pressão reduzida, o resíduo foi lavado com Et2Ü (50 ml) e secado para obter cloridrato de 1-(4-metil-2-piridil)piperazina (350 mg, 98% de produção) como um sólido branco.
Etapa 3:
[00273] A uma solução agitada de cloridrato de 1-(4-metil-2piridil)piperazina (100 mg, 0,564 mmol) e ácido 3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (135 mg, 0,677 mmol) em DMF seco (2 mL), EDC-HCI (161 mg, 0,84 mmol), HOBt (114 mg, 0,84 mmol) e DIPEA (0,2 mL, 1,1 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 16 horas (TLC indicou o completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (10 mL) e extraída com DCM (3x10 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia rápida (100-200 malhas de sílica-gel, 8 g, 5% de MeOH-DCM) para dar origem a 2-[3-[4-(4-metil-2-piridil)piperazin-1-il]-3-oxo-propil]-3Hquinazolin-4-ona (50 mg, 23%) como um sólido branco.
[00274] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,18 (s, 1H), 8,08-8,06 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,9 9-7,9 7 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,77-7,73 (m, 1H), 7,54 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,46-7,42 (m, 1H), 6,67 (s, 1H), 6,51 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 3,62-3,43 (m, 8H), 2,89 (s, 4H), 2,22 (s, 3H).
LCMS: m/z: 378,63 [M+H]+.
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121/185
Exemplo 39 - Síntese de 5-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il]pirazina-2-carbonitrila
Etapa 1:
Pü3íííisafc:
KjCQx, N». .. «N sssaoo, k Ty
F ' 253 eC. 20 m«i a 1 J
...................:.............:.....«· p' Tf N
Elapa-1 StsrN ...v >
3 [00275] A uma solução agitada de 5-bromopirazina-2-carbonitrila (350 mg, 1,9 0 mmol) em NMP (4 mL), terc-butil piperazina-1carboxilato (424 mg, 2,28 mmol), Pd2(dba)s (35 mg, 0,04 mmol), XPhos (72 mg, 0,152 mmol) e K2COs (367 mg, 2,66 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação foi aquecida a 200°C durante 20 minutos (TLC indicou completo consumo do material de partida). Após conclusão da reação, a mistura de reação foi diluída com EtOAc (50 mL), lavada com água fria (2 x 20 mL), a camada orgânica foi secada sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o composto bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia rápida (100-200 malhas de sílica-gel, 5 g, 30% de EtOAc-Hexano) para fornecer terc-butil 4-(5-cianopirazin-2-il)piperazina-1carboxilato (320 mg, 58%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 290,61 [M+H]+.
Etapa 2:
[00276] A uma solução agitada de terc-butil 4-(5-cianopirazin-2il)piperazina-1-carboxilato (310 mg, 1,07 mmol) em 1,4-dioxano (4 mL), resfriada para 0°C, HCI a 4 N em 1,4-dioxano (1,07 mL, 4,29 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida para a temperatura
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 135/215
122/185 ambiente e agitada durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob vácuo para fornecer cloridrato de 5-piperazin-1-ilpirazina-2-carbonitrila bruto (210 mg, quantitativo) que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação.
LCMS: m/z: 190,46 [M+H]+.
Etapa 3:
4 [00277] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (200 mg, 0,9 17 mmol) e cloridrato de 5-piperazin-1ilpirazina-2-carbonitrila (208 mg, 1,10 mmol) em DMF (4 mL), EDC-HCI (262 mg, 1,37 mmol), HOBt (185 mg, 1,37 mmol) e DIPEA (0,64 mL, 3,66 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água fria (40 mL) e extraída com EtOAc (3 x 40 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o composto bruto que foi purificado por cromatografia rápida (100200 malhas de sílica-gel, 5 g, 5% de MeOH-DCM) para fornecer 5-[4[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]pirazina-2carbonitrila (70 mg, 20%) como um sólido esbranquiçado.
[00278] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,19 (s, 1H), 8,58 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,43 (d, J= 1,2 Hz, 1H), 8,07 (dd, J= 1,6, 8,0 Hz, 1H), 7,77-7,72 (m, 1H), 7,55 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,47-7,43 (m, 1H), 3,873,83 (m, 2H), 3,76-3,66 (m, 4H), 3,63-3,57 (m, 2H), 2,9 0 (s, 4H). LCMS: m/z: 390,68 [M+H]+.
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Exemplo 40 - Síntese de 2-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il]tiazol-5-carbonitrila
Etapa 1:
Bí\ $
I>CN +
..--•-x™ Pd(0Ac)5< PíABsjKHBF4, | ’ K3PO4f PhMe, 80 1JC; 16 h
N....
[00279] Uma solução agitada de 2-bromotiazol-5-carbonitrila (200 mg, 1,05 mmol), terc-butil piperazina-1-carboxilato (800 mg, 4,3 mmols), fosfato de potássio tribásico (260 mg, 1,22 mmol), trímero de acetato de paládio (40 mg, 0,06 mmol), tetrafluoroborato de tri-tercbutilfosfina (20 mg, 0,06 mmol) em tolueno (4 mL), apreendida em um frasco de micro-ondas sob atmosfera de argônio, foi irradiada durante 30 minutos a 80°C (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (10 mL) e extraída com EtOAc (3 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida. O produto bruto obtido foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 20 g, 10 a 30% de EtOAcHexano) para dar origem a terc-butil 4-(5-cianotiazol-2-il)piperazina-1carboxilato (200 mg, 64%) como um sólido branco.
LCMS (ESI+): m/z: 295,60 [M+H]+.
Etapa 2:
HC: s A; em
TA. 4 h í 1
[00280] A uma solução agitada de terc-butil 4-(5-cianotiazol-2 il)piperazina-1-carboxilato (200 g, 0,680 mmol) em dioxano (10 mL), HCI a 4 N em dioxano (5 mL) foi adicionado em temperatura ambiente
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 137/215
124/185 e agitado durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi lavado com EtOAc (2x15 mL), seguido por dietil éter (15 mL) para dar origem a cloridrato de 2-piperazin-1iltiazol-5-carbonitrila (155 mg, 98%) como um sólido branco.
LCMS (ESI+): m/z: 195,44 [M+H]+.
Etapa 3:
CN
ΗΗ -''Xj , Μ T3ÉS. E3IFKA. W, jT % „ PP hüí jjf Λ—-Ν ' N |f ttapa-3 XN' N--· γ ô .--i e
[00281] A uma solução agitada de cloridrato de 2-piperazin-1iltiazol-5-carbonitrila (155 mg, 0,55 mmol) em DMF anidroso, DIPEA (0,3 mL, 1,74 mmol), ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoico (120 mg, 0,67 mmol) e 50% de solução de T3P em EtOAc (0,53 mL, 0,82 mmol) foram adicionados, agitados em temperatura ambiente durante 16 horas (LCMS indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água gelada (60 mL), extraída com DCM (2 x 50 mL), os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (25 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 200 g, 2-5% de MeOH-DCM) para dar origem a 2-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il]tiazol-5-carbonitrila (50 mg, 23%) como um sólido amarelo pálido.
[00282] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,18 (brs, 1H), 8,09-8,05 (m, 2H), 7,77-7,72 (m, 1H), 7,55 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,45 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 3,75-3,55 (m, 6H), 3,53-3,50 (m, 2H), 2,89 (s, 4H).
LCMS (ESI+): m/z: 395,62 [M+H]+.
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Exemplo 41 - Síntese de 6-[4-[3-(4-oxo-3H-pirido[4,3-d]pirimidin-2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
O KOH, EiCt-i ®o (í Mel, jeS-ss:·. tÜ
------------------------------------0 * ' ' Ί J Etapa-1U? >
23 2 [00283] A uma solução agitada de KOH (5,82 g, 0,104 mol) em EtOH (80 mL), 1 H-pirimidin-6-ona (10 g, 0,104 mol) seguido por Mel (7,20 mL, 0,114 mol) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação foi refluxada durante duas horas (TLC indicou 10 a 15% de material de partida não reagido). Quantidade adicional de Mel (1,5 g, 0,01 mol) foi adicionada, refluxada durante uma hora (TLC indicou completo consumo do material de partida) e lentamente trazida para temperatura ambiente. A mistura de reação foi filtrada, lavada com DCM (100 mL) e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 200 g, 2 a 5% de MeOH-DCM) para fornecer 3-metilpirimidin-4-ona (4,5 g, 39%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS (ESI+): m/z: 111,30 [M+H]+.
Etapa 2:
q Ht;C\- HjSCij C v II 500¾. 7 h v Jk ,ΝΟ·» v i-------* I r ' %·< Eí3c«~2 [00284] Ao ácido sulfúrico (50 mL), resfriado para 10°C, 3metilpirimidin-4-ona (5,5 g, 50,00 rnols) seguido por ácido nítrico fumegante (6,6 mL, 157,15 rnols) foram adicionados. A mistura de reação foi lentamente trazida para a temperatura ambiente, aquecida a 100°C durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partiPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 139/215
126/185 da), novamente trazida para a temperatura ambiente e vertida em gelo esmagado (500 g); em seguida solução de hidróxido de sódio aquosa a 50% foi adicionada lentamente até o pH = 5. A mistura de reação foi extraída com CHCh (3 x 250 mL); os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SC>4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o composto bruto que foi recristalizado de EtOH (15 mL) para dar origem a 3-metil-5-nitro-pirimidin-4-ona (2 g, 26%) como um sólido amarelo.
LCMS (ESI+): m/z: 156,36 [M+H]+.
Etapa 3:
,,X ,.··^ N J ββ SC; W. 3 h [00285] Em um frasco de micro-ondas CEM, 3-metil-5-nitropirimidin-4-ona (300 mg, 1,9 4 mmols), acetoacetato de metila (2,7 g, 23,27 mmols), acetato de amônio (1,79 g, 23,22 mmols) e MeOH (8,0 mL) foram adicionados e irradiados a 80°C durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 40 g, 5 a 10% de MeOH-DCM) para dar origem a metil 4aminopiridina-3-carboxilato; esta mistura de reação foi realizada em 6 bateladas (300 mg cada), o material bruto após preparação foi combinado e purificado para dar origem a metil 4-aminopiridina-3-carboxilato (900 mg, 51%) como um sólido amarelo.
LCMS (ESI+): m/z: 153,43 [M+H]+.
Etapa 4:
NH,. LíOH: IHPí-rC'.
M 4
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127/185 [00286] A uma solução agitada de metil 4-aminopiridina-3carboxilato (2 g, 13,15 mmols) em EtOH-água (120 mL, 1:1), LiΟΗΉ2Ο (1,21 g, 28,80 mmols) foi adicionado em temperatura ambiente e aquecido a 80°C durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer 0 composto bruto que foi dissolvido em água (30 mL), lavado com EtOAc (2 x 25 mL) para remover as impurezas não polares. A camada aquosa foi acidificada com HCI a 1 N até 0 pH = 1, e extraída com EtOAc (2 x 10 mL). Os extratos orgânicos combinados foram concentrados sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo bruto que foi cristalizado de MeOH (20 mL) para obter ácido 4aminopiridina-3-carboxílico (1 g, 55%) como um sólido esbranquiçado. LCMS (ESI+): m/z: 139,31 [M+H]+.
Etapa 5:
SOCb. THF,
NH- 7M Wis em ídsOH °
Λ .CQOH 7Â, Th f Ύ ...................................- ’L l ‘
Eiãp-s·:;· [00287] A uma solução agitada de ácido 4-aminopiridina-3carboxílico (3 g, 0,013 mol) em THF (50 mL), SOCI2 (3,6 mL, 0,045 mol) e DMF catalítico (30 pL) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 3 horas sob atmosfera de argônio (TLC indicou completo consumo do material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer 0 produto bruto que foi dissolvido em THF (30 mL), resfriado para 0°C e NH3 a 7 N-metanol (22 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi lentamente aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 4 horas, 0 precipitado foi filtrado, 0 filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer 0 composto bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 60 g, 10% de MeOH-10% de NH4OHDCM) para fornecer 4-aminopiridina-3-carboxamida (475 mg, 27%)
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128/185 que foi usado para a etapa seguinte sem qualquer purificação.
LCMS (ESI+): m/z: 138,33 [M+H]+.
Etapa 6:
[00288] A uma solução agitada de 4-aminopiridina-3-carboxamida (500 mg, 3,65 mmols), ácido 4-íerc-butóxi-4-oxo-butanoico (762 mg, 4,38 mmols), TEA (1 mL, 7,29 mmols) em DMF (10 mL), 50% de solução de T3P em EtOAc (3,5 mL, 5,5 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 12 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (50 mL) e extraída com DCM (2 x 35 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (30 mL), secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 20 g, 10% de MeOH-10% de NH4OHDCM) para dar origem a terc-butil 4-[(3-carbamoil-4-piridil)amino]-4oxo-butanoato (500 mg, 47%) como um sólido amarelo.
[00289] 1H RMN [400 MHz, CDCh]: δ 11,74 (s, 1H), 9,07 (s, 1H), 8,69 (d, J= 5,2 Hz, 1H), 8,52 (d, J= 5,2 Hz, 1H), 7,11 (brs, 1H), 5,83 (brs, 1H), 2,75-2,70 (m, 2H), 2,68-2,63 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).
LCMS (ESI+): m/z: 316,59 [M+Na]+.
Etapa 7:
[00290] A uma solução agitada de terc-butil 4-[(3-carbamoil-4
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129/185 piridil)amino]-4-oxo-butanoato (900 mg, 3,071 mmols) em THF (31 mL), água (0,9 mL), LiOH-H2O (645 mg, 15,35 mmols) foram adicionados a 0°C. A mistura de reação foi lentamente trazida para a temperatura ambiente, agitada durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida) e extraída com EtOAc (2 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (30 mL), secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi lavado com pentano (2x15 mL) para obter terc-butil 3-(4-oxo-3H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il)propanoato (700 mg, 83%) como um sólido amarelo pálido.
LCMS (ESI+): m/z: 276,48 [M+H]+.
Etapa 8:
[00291] A uma solução agitada de terc-butil 3-(4-oxo-3H-pirido[4,3d]pirimidin-2-il)propanoato (700 mg, 2,545 mmols) em DCM (26 mL), TFA (5,7 mL, 74,50 mmols) foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante 4 horas (LCMS indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida, o resíduo foi codestilado com tolueno (2x10 mL) para fornecer o produto bruto que foi triturado com pentano (2 x 20 mL) para fornecer ácido 3(4-oxo-3H-pirido[4,3-d]pirimidin-2-il)propanoico (351 mg, 63%) como um sólido amarelo pálido.
LCMS (ESI+): m/z: 220,42 [M+H]+.
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130/185
Etapa 9:
[00292] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-pirido[4,3d]pirimidin-2-il)propanoico (250 mg, 1,141 mmol), cloridrato de 6piperazin-1-ilpiridina-3-carbonitrila (256 mg, 1,361 mmol) em DMF (2,5 mL), DIPEA (0,4 mL, 2,325 mmols) e 50% de solução de T3P em EtOAc (0,75 mL, 1,711 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (25 mL), extraída com DCM (3 x 30 mL), os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 mL) e secados sobre Na2SC>4. O solvente foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer 0 produto bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 10 g, 10% de MeOH5% de NH4OH-DCM) para dar origem a 6-[4-[3-(4-oxo-3H-pirido[4,3d]piri midi n-2-il) propanoil]piperazi n-1 -il]piridi na-3-carbonitrila (45 mg, 10%) como um sólido esbranquiçado.
[00293] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,57 (brs, 1H), 9,22 (s, 1H), 8,74 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,88 (dd, J = 8,8, 2,0Hz, 1H), 7,45 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 6,9 4 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 3,783,76 (m, 2H), 3,64 (t, J= 4,8 Hz, 4H), 3,57-3,54 (m, 2H), 3,31 (s, 4H). LCMS (ESI+): m/z: 390,63 [M+H]+.
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131/185
Exemplo 42 - Síntese de 6-[4-[3-(4-oxo-3H-pirido[2,3-d]pirimidin-2il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
[00294] Uma solução de DIPEA (4,16 mL, 29,3 mmols) em THF seco (60 mL) foi resfriada para -78°C em um banho de acetona-gelo seco. /?-BuLi em hexanos (1,6 M, 18,3 mL, 29,3 mmols) foi adicionado gota a gota a -78°C e agitado durante 30 min. Acetato de benzila (3,8 mL, 26,6 mmols) em THF seco (30 mL) foi adicionado gota a gota ao frasco de reação, mantendo a temperatura abaixo de -78°C. Quando a adição for concluída, o frasco foi transferido para um banho de Et20gelo seco e agitado até a temperatura cair abaixo de -90°C. terc-Butil 2-bromoacetato (5,9 mL, 40,0 mmols) em THF (30 mL) foi adicionado gota a gota à solução acima e agitado durante uma hora a -90°C. A mistura de reação foi resfriada bruscamente por lenta adição de água (100 mL), aquecida para a temperatura ambiente e extraída com Et2Ü (2 x 150 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, filtrados, e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100200 malhas de sílica-gel, 60 g, 5% de EtOAc-Hexano) para dar origem a benzil terc-butil butanodioato (2,3 g, 27%) como um óleo amarelo pálido.
LCMS: m/z: 287,6 [M+Na]+.
Etapa 2:
, A _____________» zx
4 [00295] A uma solução agitada de benzil terc-butil butanodioato (2,3
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 145/215
132/185 g, 8,71 mmols) em THF seco (30 mL), Pd-C a 10% (0,23 g) foi adicionado e agitado sob atmosfera de H2 (balão) durante 16 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi filtrada através de celita e lavada com CHCh (100 mL). O filtrado foi concentrado em vácuo para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 30 g, 35% de EtOAc-Hexano) para dar origem a ácido 4-íerc-butóxi-4oxo-butanoico (0,8 g, 52%) como um óleo incolor.
[00296] 1H RMN [400 MHz, CDCh]: δ 2,65-2,61 (m, 2H), 2,56-2,52 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).
Etapa 3:
O BJC.HCt. O
L V Etsp.a-3 L
Ή*' 'ΉΗς V' 'NU.;
S í» [00297] A uma solução agitada de ácido 2-aminopiridina-3carboxílico (0,9 g, 6,52 mmols) em THF (15 mL), foram adicionados EDC-HCI (1,86 g, 9,78 mmols), HOBt-NHs (1,46 g, 9,78 mmols) e DlPEA (4,67 mL, 26,08 mmols) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 5 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida), diluída com água (30 mL) e extraída com EtOAc (3 x 75 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (2 x 40 mL), salmoura (40 mL), separados, secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 20 g, 60% de EtOAc-Hexano) para dar origem a 2-aminopiridina-3-carboxamida (0,4 g, 45%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 138,3 [M+H]+.
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133/185
Etapa 4:
ο
a
HAW, N OlW <30%. 24
Etapa-4
Ã
1.0.2
[00298] A uma solução agitada de 2-aminopiridina-3-carboxamida (0,35 g, 2,55 mmols) em DMF (15 mL), ácido 4-íerc-butóxi-4-oxobutanoico (0,66 g, 3,83 mmols), HATU (1,45 g, 3,83 mmols) e EtsN (0,7 mL, 5,04 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada a 60°C durante 24 horas (TLC indicou completo consumo de SM). A mistura de reação foi diluída com água (30 mL) e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (2 x 30 mL), salmoura (30 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 10 g, 2% de MeOH-DCM) para fornecer terc-butil 4-[(3-carbamoil-2-piridil)amino]-4-oxo-butanoato (0,22 g, 26%) como um sólido amarelo pálido.
LCMS: m/z: 294,6 [M+H]+.
Etapa 5:
THRHgG, δ'0-TA. 6 h
OTi.i
[00299] A uma solução agitada de terc-butil 4-[(3-carbamoil-2piridil)amino]-4-oxo-butanoato (0,22 g, 0,75 mmol) em THF (8 mL) e água (0,3 mL) a 0°C, LiOH-H2O (0,16 g, 3,88 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente, agitada durante 6 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida), diluída com água (10 mL) e extraída com EtOAc (2 x 75 mL). Os extraPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 147/215
134/185 tos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer terc-butil 3-(4-oxo-3H-pirido[2,3-d]pirimidin-2-il) propanoato (140 mg, 63%) como um sólido amarelo pálido.
LCMS: m/z: 276,4 [M+H]+.
Etapa 6:
[00300] A uma solução agitada de terc-butil 3-(4-oxo-3H-pirido[2,3d]pirimidin-2-il)propanoato (0,14 g, 0,50 mmol) em DCM (5 mL), TFA (1,1 mL, 15,0 mmol) foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer sal de ácido trifluoroacético de ácido 3-(4-oxo-3H-pirido[2,3d]pirimidin-2-il)propanoico (0,14 g, 75%), que foi levado para a etapa seguinte sem outra purificação como um líquido amarelo pálido. LCMS: m/z: 220,3 [M+H]+.
Etapa 7:
[00301] A uma solução agitada de sal de ácido trifluoroacético de ácido 3-(4-oxo-3H-pirido[2,3-d]pirimidin-2-il)propanoico (0,087 g, 0,39 mmol) e cloridrato de 6-piperazin-1-ilpiridina-3-carbonitrila (0,133 g, 0,59 mmol) em DMF (4 mL), DIPEA (0,14 mL, 0,79 mmol) e 50% de solução de T3P em EtOAc (0,5 mL, 0,78 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante duas horas (TLC indicou
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135/185 completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (10 mL) e extraída com DCM (3 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (10 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados para fornecer o produto bruto (150 mg, 54% LCMS) que foi purificado para dar origem a 6[4-[3-(4-oxo-3H-pirido[2,3-d]pirimidin-2-il)propanoil]piperazin-1 il]piridina-3-carbonitrila (29 mg, 18%) como um sólido branco.
[00302] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,49 (brs, 1H), 8,86 (dd, J = 4,0, 1,6 Hz, 1H), 8,50 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,45 (dd, J = 7,6, 1,6 Hz, 1H), 7,88 (dd, J= 8,8, 2,0 Hz, 1H), 7,47 (dd, J= 8,0, 4,8 Hz, 1H), 6,9 4 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 3,83-3,77 (m, 2H), 3,69-3,62 (m, 4H), 3,58-3,53 (m, 2H), 2,9 3 (s, 4H).
LCMS: m/z: 390,67 [M+H]+.
Exemplo 43 - Síntese de 6-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)butanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
KOH, SnSr, Tcfeena, rsfta®. 5 h Λ ií) KOtt, MeOH, ffeO, & 18 h refiuxo« x ...................................*, gso Λ A
Yy- Etapa-t2| í2 [00303] KOH em pó (6,0 g, 0,10 mol) foi adicionado a uma solução de 3-metiltetra-hidrofurano-2-ona (2,0 g, 0,02 mol) e brometo de benzila (14,0 g, 0,08 mol) em tolueno (36 mL). A mistura de reação resultante foi agitada a 110°C durante 5 horas e tolueno foi removido sob vácuo para fornecer o resíduo bruto que foi dissolvido em MeOH (40 mL). KOH (2,0 g, 0,035 mol) e água (20 mL) foram adicionados à solução acima e a mistura de reação foi refluxada durante 16 horas. A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente, lavada com Et2Ü (2 x 50 mL), a camada aquosa foi acidificada para pH = 2-3 com HCI concentrado, e extraída com DCM (3 x 50 mL). Os extratos orgâPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 149/215
136/185 nicos combinados foram secados sobre Na2SO4, filtrados, e concentrados sob vácuo para dar origem a ácido 4-benzilóxi-2-metil-butanoico (3,4 g, 81%) como um óleo amarelo pálido.
[00304] 1H RMN [400 MHz, CDCh]: δ 7,37-7,26 (m, 5H), 4,53-4,50 (m, 2H), 3,54 (t, J= 6,4 Hz, 2H), 2,73-2,64 (m, 1H), 2,09-2,00 (m, 1H), 1,76-1,68 (m, 1H), 1,21 (d, J = 7,2 Hz, 3H).
Etapa 2:
0il
1 HATH. EW, + [í Ύ'| J *
I '-«s5L.p,**
Etapa-3s
34 «A.
ü· γ [00305] A uma solução agitada de 2-aminobenzamida (0,3 g, 2,20 mmols) em DMF (5 mL), ácido 4-benzilóxi-2-metil-butanoico (0,59 g, 2,83 mmols), HATU (1,25 g, 3,28 mmols) e EtsN (0,61 mL, 4,35 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação resultante foi agitada a 80°C durante 6 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (30 mL) e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (2 x 30 mL), salmoura (30 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 20 g, 30% de EtOAchexanos) para fornecer 2-[(4-benzilóxi-2-metilbutanoil)amino]benzamida (0,63 g, 79%) como um líquido incolor. LCMS: m/z: 327,6 [M+H]+.
Etapa 3:
o Λ JL ,. 2N NaOH, O g Ύ retas, 3 ft ,-·ΐχ l J ...................g ''T TÍH
5
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137/185 [00306] 2-[(4-Benzilóxi-2-metil-butanoil)amino]benzamida (0,63 g, 1,9 3 mmols) em NaOH aquoso a 2 N (12 mL) foi agitado a 100°C durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada para 0°C e acidificada com HCI aquoso a 2 N até pH = 3-4 e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (30 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 2-(3-benzilóxi-1-metil-propil)-3H-quinazolin-4-ona (450 mg, 67%) que foi usado para a etapa seguinte sem qualquer purificação.
LCMS: m/z: 309,5 [M+H]+.
Etapa 4:
PcJ/C, Hg> ΊΉΡ.
$ [00307] A uma solução agitada de 2-(3-benzilóxi-1-metil-propil)-3Hquinazolin-4-ona (0,55 g, 1,78 mmol) em THF (15 mL), catalisador de Pd-C a 10% (50% úmidos, 1,0 g) foi adicionado e agitado sob atmosfera de H2 (balão) durante 5 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi filtrada através de celita, e foi lavada com THF (30 mL). O filtrado foi concentrado em vácuo para dar origem a 2-(3-hidróxi-1-metil-propil)-3H-quinazolin-4-ona (0,3 g, 78%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS: m/z: 219,49 [M+H]+.
Etapa 5:
?
[00308] A uma solução agitada de 2-(3-hidróxi-1-metil-propil)-3Hquinazolin-4-ona (0,40 g, 1,83 mmol) em DCM (25 mL), resfriada para 0°C, periodinano Dess-Martin (0,85 g, 2,00 mmol) foi adicionado. A
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138/185 mistura de reação foi lentamente aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 5 horas (TLC indicou completo consumo do material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com Na2S2O3 aquoso saturado e extraída com EtOAc (2 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (25 mL), secados sobre Na3SO4 e concentrados em vácuo para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel (100200 malhas de sílica-gel, 10 g, 15% de EtOAc-Hexano) para fornecer 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)butanal (220 mg, 56%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 217,5 [M+H]+.
Etapa 6:
ItaCIG-j.,
[00309] A uma solução agitada de 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)butanal (0,20 g, 0,9 2 mmols) em THF (10 mL), a 5°C, t-BuOH (5 mL), água (1,5 mL) e 2-metil-2-buteno (0,51 g, 7,28 mmols) foram adicionados seguidos por NaCIC>2 (0,25 g, 2,77 mmols) e NaH2PO4-H2O (0,43 g, 2,75 mmols). A mistura de reação foi lentamente trazida para a temperatura ambiente, agitada durante 12 horas, diluída com água (15 mL) e extraída com EtOAc (2 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (25 mL), secados sobre Na3SO4 e concentrados em vácuo para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílicagel, 10 g, 10% de MeOH-DCM) para fornecer ácido 3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il) butanoico (150 mg, 52%) que foi levado para a etapa seguinte sem outra purificação.
LCMS: m/z: 233,4 [M+H]+.
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139/185
Etapa 7:
ΚΟδΤ DÍPEA.
TÀt 8 h
Eta^-8
[00310] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)butanoico (0,15 g, 0,64 mmol) e 6-piperazin-1 -ilpiridina-3-carbonitrila (0,15 g, 0,71 mmol) em DMF (5 mL), EDC-HCI (0,18 g, 0,9 6 mmols), HOBt (0,13 g, 0,9 6 mmol) e DIPEA (0,34 mL, 1,9 3 mmol) foram adicionados sob atmosfera de argônio e agitados em temperatura ambiente durante 8 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi diluído com água (30 mL) e extraído com EtOAc (3 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (2 x 25 mL), salmoura (20 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto (100 mg, 71% de LCMS), que foi purificado para fornecer 6-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il) butanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila (28 mg, 9%) como um sólido branco.
[00311] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,19 (brs, 1H), 8,50 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,06 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 7,87 (dd, J= 8,8, 2,4 Hz, 1H), 7,75-7,70 (m, 1H), 7,53 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,43 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 6,9 2 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 3,76-3,66 (m, 4H), 3,62-3,51 (m, 4H), 3,25-3,08 (m, 2H ), 2,64-2,59 (m, 1H), 1,26 (d, J= 7,2 Hz, 3H).
LCMS: m/z: 403,7 [M+H]+.
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140/185
Exemplo 44 - Síntese de 6-[(3S)-4-[3-(5,6-difluoro-4-oxo-3H-quinazolin2-il)propanoil]-3-metil-piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila
Etapa 1:
r Bsx: A. THF,
TA, 12 o «LA * ι „1 x- RHg Etapa-1
2 [00312] Di-terc-butil dicarbonato (3,0 g, 23,2 mmols) foi adicionado a 3,4-difluoroanilina (5,5 g, 25,2 mmols) em THF seco (45 mL) e a mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 12 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com hexanos (15 mL). O sólido branco obtido foi secado sob vácuo elevado para dar origem a terc-butil N-(3,4-difluorofenil)carbamato (5 g, 93%) que foi usado para a etapa seguinte sem qualquer purificação. [00313] 1H RMN [400 MHz, CDCh]: δ 7,45-7,40 (m, 1H), 7,08-7,01 (m, 1H), 6,9 2-6,89 (m, 1H), 6,45 (brs, 1H), 1,51 (s, 9H).
LCMS: m/z: 174,4 [M+H-56]+.
Etapa 2:
t-BiiLi, cbrafcrmiate r rie tneWa.
THF, -7UC, 5 h ϊ A ------- 'NHBw Eta^2
[00314] A uma solução agitada de terc-butil N-(3,4difluorofenil)carbamato (1 g, 4,36 mmols) em THF (30 mL) a -78°C, tBuLi (7,54 mL, 9,82 mmols) foi adicionado gota a gota e agitado durante 3 horas. Cloroformiato de etila (0,48 g, 5,1 mmols) foi adicionado lentamente à mistura de reação a -78°C e agitado durante uma hora (TLC indicou completo consumo do material de partida). A mistura de reação foi trazida para 0°C, tratada com solução de cloreto de amônio
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141/185 aquosa saturada (24 mL) durante urn periodo de 10 minutos, em seguida aquecida para a temperatura ambiente e diluída com EtOAc (100 mL) e água (50 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL), secados sobre Na2SO4, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 20 g, 2% de EtOAc-Hexano) para fornecer etil 6(terc-butoxicarbonilamino)-2,3-difluoro-benzoato (0,5 g, 38%) como um sólido branco.
[00315] 1H RMN [400 MHz, CDCh]: δ 9,44 (brs, 1H), 8,11-8,08 (m, 1H), 7,30-7,23 (m, 1H), 4,45 (q, J = 6,8 Hz, 2H), 1,51 (s, 9H), 1,41 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
LCMS: m/z: 202,4 [M+H-100]+.
Etapa 3:
F o TFA, DCM(. f
TA, 12 h ’ΞΖΪ.......* ú ϊ 'a·'·' NWBb« TFA -<' ’
[00316] A uma solução agitada de etil 6-(terc-butoxicarbonilamino)2,3-difluoro-benzoato (0,5 g, 1,66 mmol) em DCM (14 mL), TFA (2,27 mL) foi adicionado gota a gota em temperatura ambiente e agitado durante 12 horas (TLC indicou completo consumo do material de partida). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para dar origem a etil 6-amino-2,3-difluoro-benzoato (0,43 g, 89%), que foi levado para a etapa seguinte sem outra purificação.
LCMS: m/z: 202,3 [M+H]+.
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142/185
Etapa 4:
[00317] A uma solução agitada de etil 6-amino-2,3-difluorobenzoato (0,43 g, 1,44 mmol) em THF:H2O(2:1, 15 mL), LiΟΗΉ2Ο (0,46 g, 14,3 mmols) foi adicionado. A mistura de reação resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas (TLC indicou completo consumo do material de partida), acidificada com HCI a 1 N até 0 pH = 4-5 e extraída com EtOAc (50 mL). A camada orgânica foi separada, secada sobre Na2SO4 anidroso e concentrada sob pressão reduzida para dar origem a ácido 6-amino-2,3-difluorobenzoico (0,2 g, 80%) que foi levado para a etapa seguinte sem outra purificação.
LCMS: m/z: 174,39 [M+H]+.
Etapa 5:
S.
[00318] A uma solução agitada de ácido 6-amino-2,3-difluorobenzoico (0,7 g, 4,0 mmols) em THF (15 mL), EDC-HCI (1,15 g, 6,0 mmols), HOBt-NHs (0,9 1 g, 6,0 mmols) e DIPEA (2,17 mL, 12,0 mmols) foram adicionados sob atmosfera de argônio e agitados em temperatura ambiente durante 6 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e 0 resíduo foi diluído com água fria (40 mL) e EtOAc (100 mL). A camada orgânica foi separada, lavada com água fria (2 x 20 mL), salmoura (2 x 20 mL), secada sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo bruto que foi purificado por
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143/185 cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 20 g, 25% de
EtOAc-Hexano) para fornecer 6-amino-2,3-difluoro-benzamida (0,45 g,
65%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 173,4 [M+H]+.
Etapa 6:
[00319] A uma solução agitada de 6-amino-2,3-difluoro-benzamida (0,45 g, 2,61 mmols) em AcOH (4,5 mL) em temperatura ambiente, anidrido succinico (0,31 g, 3,13 mmols) foi adicionado e agitado em temperatura ambiente durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi vertida em água resfriada (10 mL) e agitada durante 30 minutos em temperatura ambiente. O sólido precipitado foi filtrado, lavado com água (10 mL), acetona fria (5 mL) e secado sob vácuo elevado para dar origem a ácido 4(2-carbamoil-3,4-difluoro-anilino)-4-oxo-butanoico (500 mg, 70%) que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação.
LCMS: m/z: 273,5 [M+H]+.
Etapa 7:
2LíhíaOH. A £>
refluas®. 3 h F„ Ã Jl
Y X NH
τ.........;........- l .1 Λ
S [00320] Ácido 4-(2-carbamoil-3,4-difluoro-anilino)-4-oxo-butanoico (0,50 g, 1,83 mmol) em NaOH aquoso a 2 N (5 mL) foi agitado a 100°C durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada para 0°C e acidificada com HCl
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144/185 aquoso a 2 N até o pH = 3-4 durante o que sólido branco precipitou-se. A suspensão foi agitada a 0°C durante 30 minutos, filtrada, lavada com água (10 mL), acetona fria (2 mL) e secada sob vácuo elevado para dar origem a ácido 3-(5,6-difluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoico (300 mg, 65%) que foi usado para a etapa seguinte sem qualquer purificação.
LCMS: m/z: 255,46 [M+H]+.
Etapa 8:
i2 [00321] A uma solução agitada de (2S)-2-metilpiperazina (0,30 g, 2,1 mmols) em DMA (6 mL), 6-cloropiridina-3-carbonitrila (0,29 g, 2,3 mmols) e K2CO3 foram adicionados. A mistura de reação resultante foi aquecida para 60°C durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água fria (20 mL) e extraída com EtOAc (3 x 25 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (20 mL) e salmoura (2 x 20 mL). A camada orgânica foi separada, secada sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 10 g, 10% de MeOH-DCM) para fornecer 6-[(3S)-3-metilpiperazin-1-il] piridina-3-carbonitrila (0,29 g, 67%) como um sólido esbranquiçado. LCMS: m/z: 203,4 [M+H]+.
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145/185
Etapa 9:
ttãp3-S :‘i ‘Y
ΤΑ 24 &
[00322] A uma solução agitada de ácido 3-(5,6-difluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (0,25 g, 1,0 mmol) e 6-[(3S)-3metilpiperazin-1 -il]piridina-3-carbonitrila (0,19 g, 1,0 mmol) em DMF (5 mL), EDC-HCI (0,28 g, 1,4 mmol), HOBt (0,22 g, 1,4 mmol) e DIPEA (0,5 mL, 2,9 mmols) foram adicionados sob atmosfera de argônio e agitados em temperatura ambiente durante 24 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi diluído com água gelada (30 mL) e EtOAc (50 mL). A camada orgânica foi separada, lavada com água gelada (2x15 mL), salmoura (2x15 mL), secada sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto (200 mg, 47% de LCMS) que foi purificado para fornecer 6-[(3S)-4-[3(5,6-difluoro-4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]-3-metil-piperazin-1il]piridina-3-carbonitrila (40 mg, 9%) como um sólido branco.
[00323] 1H RMN [400 MHz, CDCh]: δ 12,33 (brs, 1H), 8,48 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,86 (dd, J= 9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,84-7,76 (m, 1H), 7,397,33 (m, 1H), 6,9 5-6,9 1 (m, 1H), 4,55-4,34 (m, 1H), 4,30-3,86 (m, 3H), 3,49-3,42 (m, 1H), 3,23-3,15 (m, 1H), 3,05-2,9 4 (m, 1H), 2,89-2,78 (m, 4H), 1,20-0,9 8 (m, 3H).
LCMS: m/z: 439,7 [M+H]+.
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Exemplo 45 - Síntese de 2-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il]pirimidina-5-carbonitrila
Etapa 1:
'1,4-δΚΚΒΓΚί, retas,
Sr itapa-1 [00324] A uma solução de 5-bromo-2-cloro-pirimidina (0,5 g, 2,58 mmols) em 1,4-dioxano (20 mL), terc-butil piperazina-1-carboxilato (0,722 g, 3,88 mmols) e K2CO3 (0,713 g, 5,17 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação foi refluxada durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiente, diluída com água (20 mL) e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (2 x 40 mL), salmoura (1 x 40 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo. O resíduo foi também purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 15 g, 10% de EtOAc-Hexano) para dar origem a terc-butil 4-(5-bromopirimidin-2il)piperazina-1-carboxilato (0,7 g, 78%) como um sólido branco.
[00325] 1H RMN [400 MHz, CDCI3]: δ 8,29 (s, 2H), 3,75 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 3,47 (t, J= 5,2 Hz, 4H), 1,47 (s, 9H).
LCMS: m/z: 287,44 [Μ-ιΒυ]+.
Etapa 2:
PíKPPfeii. B»F,
[00326] A uma solução agitada de terc-butil 4-(5-bromopirimidin-2 il)piperazina-1-carboxilato (500 mg, 1,46 mmol) em DMF (15 mL),
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Zn(CN)2 (513 mg, 4,37 mmols) e X-phos (84 mg, 0,15 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação foi desgaseificada com gás de argônio durante 20 minutos, em seguida Pd(PPh3)4 (168 mg, 0,15 mmol) foi adicionado e aquecido a 100°C durante 18 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi lentamente trazida para a temperatura ambiente, diluída com água (20 mL) e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água (2 x 40 mL), salmoura (1 x 40 mL), secados sobre Na2SC>4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o material bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílicagel, 12 g, 10% de EtOAc-Hexano) para fornecer terc-butil 4-(5cianopirimidin-2-il)piperazina-1-carboxilato (300 mg, 71%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 290,49 [M+H]+.
Etapa 3:
5 [00327] A uma solução agitada de terc-butil 4-(5-cianopirimidin-2il)piperazina-1-carboxilato (300 mg, 0,5 mmol) em DCM (5 mL) a 0°C, HCI a 4 N em dioxano (5 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi lavado com Et2Ü (5 mL) e secado sob vácuo para fornecer cloridrato de 2-piperazin-1 -ilpirimidina-5-carbonitrila (200 mg, 80%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 190,46 [M+H]+.
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Etapa 4:
[00328] A uma solução agitada de cloridrato de 2-piperazin-1ilpirimidina-5-carbonitrila (130 mg, 0,69 mmol) e ácido 3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (100 mg, 0,46 mmol) em DMF (2 mL), DlPEA (0,3 mL, 1,38 mmol) e T3P (291 mg, 0,9 2 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 8 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (10 mL) e extraída em EtOAc (3 x 40 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água fria (3 x 20 mL), salmoura (20 mL), secados sobre Na3SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 10 g, 5% de MeOH-DCM) para fornecer 2-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil]piperazin-1-il] pirimidina-5-carbonitrila (30 mg, 16%) como um sólido branco.
[00329] 1H RMN [400 MHz DMSO-d6]: δ 12,20 (s, 1H), 8,79 (s, 2H), 8,06 (dd, J = 7,Q, 1,2 Hz, 1H), 7,78-7,73 (m, 1H), 7,57 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,47-7,43 (m, 1H), 3,9 3 (t, J = 4,4 Hz, 2H), 3,81 (t, J= 4,4 Hz, 2H), 3,66 (t, J= 4,8 Hz, 2H), 3,57 (t, J= 5,6 Hz, 2H), 2,9 0 (s, 4H). LCMS: m/z: 390,67 [M+H]+.
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Exemplo 46 - Síntese de 2-metil-5-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il) propanoil]piperazin-1-il]pirazol-3-carbonitrila [00330] Etapa 1:
‘'W2 mõK/MjÔ. ?0 BC, 22% } Etapa-1
OH
[00331] EtsN (17,3 mL, 0,12 mol) foi adicionado a uma solução de dimetil but-2-inodioato (8 g, 0,05 mmol) em MeOH (80 mL), Η2Ο (40 mL) e agitado em temperatura ambiente durante 30 minutos. Sulfato de hidrazina de metila (8,9 2 g, 61,9 mois) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 70°C durante 22 horas. A solução foi deixada descansar em temperatura ambiente durante a noite e 0 sólido formado foi filtrado, secado sob vácuo elevado para dar origem a metil 5hidróxi-2-metil-pirazol-3-carboxilato (3,5 g, 40%) como um sólido marrom pálido.
LCMS: m/z: 157,3 [M+H]+.
Etapa 2:
pH TÇO; mss». km ,PTí
FÍ Ρ++ΪΪ..........
<TY í Y
3 [00332] A uma solução agitada de metil 5-hidróxi-2-metil-pirazol-3carboxilato (0,3 g, 1,9 2 mmols) em DCM (30 mL) a 0°C, piridina (0,18 g, 2,30 mmols) seguida por Tf2O (0,59 g, 2,11 mmols) foram adicionados gota a gota. A mistura de reação foi lentamente aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante duas horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi len
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150/185 tamente diluída com água (15 mL) e extraída com DCM (2 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (25 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para dar origem a metil 2-metil-5-(trifluorometilsulfonilóxi)pirazol-3carboxilato (580 mg, 93%), que foi levado para a etapa seguinte sem outra purificação.
LCMS: m/z: 289,4 [M+H]+.
Etapa 3:
HO
ÔTf s ? KGAc,8 -OH
-X N + I Μ Γ ..............................................................i.J O w o-' „r w
I ' ' ttapa-;sq
45 [00333] Um tubo selado foi carregado com metil 2-metil-5(trifluorometilsulfonilóxi)pirazol-3-carboxilato (1,7 g, 5,90 mmols), bis(pinacolato)diboro (1,64 g, 6,48 mmols), KOAc (1,73 g, 17,6 mmols) em 1,4-dioxano (40 mL) e desgaseificado sob N2 durante 15 minutos.
Dppf (0,15 g, 0,29 mmol) e PdCi2(dppf).CH2CI2 (0,24 g, 0,29 mmol) foram adicionados e novamente desgaseificados sob N2 durante mais 10 min. A mistura de reação resultante foi agitada a 90°C durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida), diluída com tolueno (30 mL), água (20 mL) e filtrada através de leito de celita®. A almofada de celita foi lavada com tolueno (50 mL), as lavagens orgânicas combinadas foram separadas, secadas sobre Na2SC>4 e concen tradas sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi triturado com pentano (70 mL) e filtrado. A camada de pentano foi concen trada sob pressão reduzida para dar origem a ácido (5-metoxicarbonil-
1-metil-pirazol-3-il)borônico (1 g, 92%) como um sólido amarelo pálido. LCMS: m/z: 185,5 [M+H]+.
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NBíK í 5 / n o i
Etapa 4:
., _ N-Boc- pipsfasina, bon.
/ PiHíUna. ÜGM, ú«..; TA,
Me(\ ' ΜΛ*.
/7 N Etapa-4
OI [00334] A uma solução agitada de ácido (5-metoxicarbonil-1-metilpirazol-3-il)borônico (1,05 g, 5,64 mmols) e A/-Boc-piperazina (0,8 g, 4,34 mmols) em DCM (20 mL) em temperatura ambiente, piridina (1,03 g, 13,03 mmols), peneiras moleculares 4 Á e Cu(OAc)2 (1,57 g, 8,67 mmols) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada sob atmosfera de O2 (pressão de balão) em temperatura ambiente durante 14 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (10 mL) e extraída com DCM (2 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer 0 resíduo bruto (41% de pureza) que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 silica, 30 g, 15% de EtOAc-Hexano) para fornecer terc-butil 4-(5-metoxicarbonil-1-metil-pirazol3-il)piperazina-1-carboxilato (0,43 g, 60% LCMS) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 325,7 [M+H]+.
Etapa 5:
UOKHA W\ fvtaOH. HjO ta
.....................>
EtapasS
[00335] A uma solução agitada de terc-butil 4-(5-metoxicarbonil-1 metil-pirazol-3-il)piperazina-1-carboxilato (0,43 g, 1,32 mmol) em THF :
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MeOH : H2O (1:1:1, 15 mL), LÍOH-H2O (0,27 g, 6,63 mmols) foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante 5 horas (TLC indicou completo consumo do material de partida). A mistura de reação foi acidificada com HCI a 1 N até o pH = 4-5 e extraída com EtOAc (2 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (20 mL), secados sobre Na2SO4 anidroso e concentrados sob pressão reduzida para dar origem a ácido 5-(4-terc-butoxicarbonilpiperazin-1il)-2-metil-pirazol-3-carboxílico (0,24 g, 58%) como um sólido branco. LCMS: m/z: 311,4 [M+H]+.
Etapa 6:
\ / EDC.HCÍ, HOBtNH3,\
4’“' D FE A. DMF. TA. ShH'—'
7'^p™/ ^íM,. .A // N'N'
O ]Ο í [00336] A uma solução agitada de ácido 5-(4-tercbutoxicarbonilpiperazin-1-il)-2-metil-pirazol-3-carboxílico (0,47 g, 1,51 mmol) em THF (20 mL), EDC-HCI (0,43 g, 2,27 mmols), HOBt-NHs (0,34 g, 2,27 mmols) e DIPEA (0,8 mL, 4,55 mmols) foram adicionados sob atmosfera de argônio e agitados em temperatura ambiente durante 6 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi diluído com água (40 mL) e EtOAc (100 mL). A camada orgânica foi separada, lavada com água fria (2 x 20 mL), salmoura (2 x 20 mL), secada sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 20 g, 2,5% de MeOH-DCM) para fornecer tercbutil 4-(5-carbamoil-1-metil-pirazol-3-il)piperazina-1-carboxilato (0,40 g,
86%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 310,7 [M+H]+.
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Etapa 7:
/-ΝΒοε
N- Tf2O_. B?N THF. 0 °C-
[00337] A uma solução agitada de terc-butil 4-(5-carbamoil-1-metilpirazol-3-il)piperazina-1-carboxilato (0,17 g, 0,55 mmol) em THF (5,0 mL), resfriada para 0°C, Et3N (0,19 mL, 1,37 mmol) seguido por Tf2O (0,27 mL, 1,9 0 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi lentamente trazida para a temperatura ambiente e agitada durante 1 hora (TLC indicou completo consumo do material de partida). A mistura de reação foi diluída com água (10 mL) e extraída com EtOAc (2 x 25 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com solução de NaHCO3 saturada (10 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para dar origem a terc-butil 4-(5-ciano-1-metilpirazol-3-il)piperazina-1-carboxilato (0,11 g, 68%) como um sólido amarelo pálido.
LCMS: m/z: 292,5 [M+H-100]+.
Etapa 8:
pNP /~NH ja .·Ζ MC1i-’i\ „P TA.N-.· //¾ ----------------------------------f—<·HCf NCPn^
3IO [00338] A uma solução agitada de terc-butil 4-(5-ciano-1-metilpirazol-3-il)piperazina-1-carboxilato (0,11 g, 0,37 mmol) em 1,4dioxano (5 mL), resfriada para 0°C, HCI a 4 N em dioxano (3 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi trazida para a temperatura ambiPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 167/215
154/185 ente, agitada durante 5 horas (TLC indica completo consumo de material de partida), concentrada sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi lavado com Et2Ü (5 mL) e secado sob vácuo elevado para dar origem a cloridrato de 2-metil-5-piperazin-1-il-pirazol-3carbonitrila (70 mg, 73%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 192,5 [M+H]+.
Etapa 9:
[00339] A uma solução agitada de cloridrato de 2-metil-5-piperazin-
1- il-pirazol-3-carbonitrila (0,06 g, 0,28 mmol) e ácido 3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (0,075 g, 0,34 mmol) em DMF (2 mL) em temperatura ambiente, 50% de T3P em EtOAc (0,36 mL, 0,57 mmol) e DIPEA (0,1 mL, 0,57 mmol) foram adicionados e agitados durante 4 horas (TLC mostrou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi concentrada sob vácuo elevado para fornecer o resíduo bruto que foi diluído com 5% de MeOH-DCM (75 mL) e lavado com água fria (2x10 mL). A camada orgânica foi separada, secada sobre Na2SC>4 e concentrada sob pressão reduzida para fornecer resíduo bruto (110 mg, 37% de LCMS) que foi purificado para dar origem a
2- metil-5-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]pirazol-
3- carbonitrila (22 mg, 16%) como um sólido branco.
[00340] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,15 (brs, 1H), 8,07 (d, J = 6,8, 1,2 Hz, 1H), 7,76-7,72 (m, 1H), 7,53 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,44 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,61 (t, J= 4,8 Hz, 2H), 3,54 (t, J= 5,2 Hz, 2H), 3,18 (t, J= 6,4 Hz, 2H), 3,06 (t, J= 4,8 Hz, 2H), 2,87 (s, 4H).
LCMS: m/z: 392,7 [M+H]+.
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Exemplo 47 - Síntese de 3-cloro-N,N-dimetil-4-[4-[3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]benzamida
Etapa 1:
[00341] A uma solução agitada de ácido 3-cloro-4-fluoro-benzoico (0,5 g, 2,87 mmols) em THF (5 mL), Μβ2ΝΗ (0,3 mL, 5,74 mmols, 1 M em THF) e CDI (0,7 g, 4,31 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 5 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (40 mL) e extraída com EtOAc (3 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer o resíduo que foi lavado com Et2Ü e secado para fornecer 3-cloro-4-fluoro-N,N-dimetilbenzamida (450 mg, 78%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 202,40 [M+H]+.
Etapa 2:
[00342] A solução de 3-cloro-4-fluoro-N,N-dimetil-benzamida (0,4 g, 1,9 9 mmols) e piperazina (0,8 g, 9,38 mmols) em DMSO (5 mL) foi agitada sob atmosfera de argônio a 120°C durante 16 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (40 mL) e extraída com EtOAc (3 x
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156/185 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre
Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida e o resíduo foi lavado com Et2O (10 mL) para fornecer 3-cloro-N,N-dimetil-4-piperazin-1-ilbenzamida (550 mg, 65%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS: m/z: 268,56 [M+H]+.
Etapa 3:
o
[00343] A uma solução agitada de 3-cloro-N,N-dimetil-4-piperazin-1 il-benzamida (150 mg, 0,55 mmol) e ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (122 mg, 0,55 mmol) em DMF seco (2 mL), EDC-HCI (160 mg, 0,83 mmol), HOBt (113 mg, 0,83 mmol) e DIPEA (0,2 mL, 1,16 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 16 horas (TLC indicou o completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água (20 mL) e extraída com EtOAc (3x10 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados sobre Na2SO4, concentrados sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia rápida (100-200 malhas de sílica-gel, 5 g, 5% de MeOH-DCM) para fornecer 3-cloro-N,Ndimetil-4-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1il]benzamida (80 mg, 43%) como um sólido branco.
[00344] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,20 (s, 1H), 8,07 (dd, J = 8, 1,2 Hz, 1H), 7,78-7,74 (m, 1H), 7,57 (d, J= 8 Hz, 1H), 7,47-7,43 (m, 2H), 7,36 (dd, J = 8,4, 2 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,70 (brs, 2H), 3,61 (brs, 2H), 3,05 (brs, 2H), 2,9 4 (s, 8H), 2,89 (s, 4H).
LCMS: m/z: 468,73 [M+H]+.
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Exemplo 48 - Síntese de cloridrato de N-metil-6-[4-[3-(4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carboxamidina
Etapa 1:
Xãniphos, pdgdbãj.
f-BuGNíL PlWíL feb© sela<fo, 80 SC, 4 h
Etapa-1
[00345] A uma solução agitada de 2,5-dibromopiridina (2 g, 10,7 mmols), terc-butóxido de sódio (1,6 g, 16,6 mmols), xantphos (400 mg, 0,7 mmol) e tolueno (100 mL) em tubo selado, argônio foi purgado durante 5 minutos. À mistura de reação, terc-butil piperazina-1carboxilato (3,4 g, 14,30 mmols) seguido por Pd2(dba)s (200 mg, 0,21 mmol) foram adicionados e aquecidos a 80°C durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com EtOAc (200 mL), água (100 mL), filtrada através de leito de celita e lavada com EtOAc (2 x 30 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 50 g, 10 a 20% de EtOAc-hexanos) para dar origem a terc-butil 4-(5-bromo-2-piridil) piperazina-1-carboxilato (3 g, 82%) como um sólido amarelo.
LCMS (ESI+): m/z: 342,57 [M+H]+.
Etapa 2:
HC1 a4fâ ii J Di&xano, TA, 4 h .1. ,.-.1
--------------------------------------------------ΊΜ'
J, l ' Etapas u&i J βόίΐΝ z..-j HCI
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158/185 [00346] A uma solução agitada de terc-butil 4-(5-bromo-2piridil)piperazina-1-carboxilato (3 g, 8,77 mmols) em dioxano (30 mL), HCl a 4 N em dioxano (10 mL) foi adicionado em temperatura ambiente e agitado durante 4 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). EtOAc (50 mL) foi adicionado à mistura de reação, agitado durante 30 minutos, o sólido foi filtrado, lavado com éter (20 mL) e secado sob pressão reduzida para dar origem a cloridrato de 1-(5bromo-2-piridil)piperazina (2,1 g, 93%) como um sólido esbranquiçado. LCMS (ESI+): m/z: 242,43 [M+H]+.
Etapa 3:
[00347] A uma solução agitada de cloridrato de 1-(5-bromo-2piridil)piperazina (2,1 g, 8,12 mmols) em DMF (20 mL), DIPEA (3,8 mL, 22,01 mmols), ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoico (1,6 g, 7,34 mmols) seguido por 50% de solução de T3P em EtOAc (7 mL, 11,00 mmols) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 12 horas (LCMS indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água gelada (200 mL), agitada durante duas horas, o sólido obtido foi filtrado, lavado com água (50 mL), acetona (20 mL) e secado sob vácuo para obter 2-[3-[4-(5-bromo-2-piridil)piperazin-1-il]-3-oxo-propil]-3Hquinazolin-4-ona (1,6 g, 50%) como um sólido esbranquiçado.
LCMS (ESI+): m/z: 442,59 [M+H]+.
Etapa 4:
Exrã-te £$e wcsi li Γ I 12 h ,·-χ Λ..
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159/185 [00348] A uma solução agitada de 2-[3-[4-(5-bromo-2piridil)piperazin-1-il]-3-oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona (1,6 g, 3,62 mmol) em dioxano (30 mL) em um tubo selado, acetato de potássio (1,1 g, 11,21 mmols) foi adicionado sob atmosfera de argônio seguido por bis(pinacolato)diboro (1,3 g, 5,12 mmol) e Pd(dppf)CÍ2 (89 mg, 0,11 mmol). A reação foi aquecida a 80°C durante 12 horas (LCMS indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi diluída com EtOAc (75 mL), filtrada através de leito de celita®, lavada com EtOAc (2 x 50 mL); os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (25 mL), secados sobre sulfato de sódio e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi lavado com pentano (2x10 mL) para dar origem a uma mistura de ambos 2-[3-oxo-3-[4-[5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2piridil]piperazin-1-il]propil]-3H-quinazolin-4-ona e ácido [6-[4-[3-(4-oxo3H-quinazolin-2-il)propanoil] piperazin-1-il]-3-piridil]borônico (1,16 g), que foi usada na reação seguinte sem outra purificação.
LCMS (ESI+): m/z: 408,69 [M+H]+.(ácido borônico)
Etapa 5:
[00349] A uma solução agitada de uma mistura de 2-[3-oxo-3-[4-[5(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-2-piridil]piperazin-1-il]propil]3H-quinazolin-4-ona e ácido [6-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoil] piperazin-1-il]-3-piridil]borônico (1,16 g), tiofeno-2carboxilato de cobre (I) (1,1 g, 5,77 mmols), tri-2-furil fosfina (140 mg, 0,60 mmol) em THF sob atmosfera de argônio, Pd2(dba)3 (91 mg, 0,10 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi purgada com argônio durante 5 minutos, em seguida A/,/V-Bis(íerc-butoxicarbonil)-S
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160/185 metilisotioureia (600 mg, 1,9 7 mmols) em THF (18 mL) foi adicionado sob atmosfera de argônio durante o que solução homogênea espessa foi formada. A mistura de reação foi aquecida a 65 °C durante 18 horas (LCMS indicou 16% de ácido borônico), em seguida trazida para a temperatura ambiente, solução de NaHCO3 aquosa saturada (20 mL) e EtOAc (30 mL) foram adicionados. A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura (25 mL), secada sobre Na2SO4 e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 100 g, 2 a 5% de MeOH-DCM) para dar origem a terc-butil N-[(E)-N-tercbutoxicarbonil-C-[6-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il) propanoil]piperazin-
1-il]-3-piridil]carbonimidoil]-N-metil-carbamato (240 mg, 12% LCMS), que foi novamente purificado por HPLC preparativa para fornecer composto puro (13 mg) como um sólido branco.
LCMS (ESI+): m/z: 620,9 2 [M+H]+.
Etapa 6:
[00350] A uma solução agitada de terc-butil N-[(E)-N-tercbutoxicarbonil-C-[6-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoil]piperazin1-il]-3-piridil]carbonimidoil]-N-metil-carbamato (13 mg, 0,021 mmol) em dioxano (0,5 mL), HCI a 4 N em dioxano (0,4 mL, 1,744 mmol) foi agitado em temperatura ambiente durante duas horas (LCMS indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi lavado com EtOAc (2x5 mL), seguido por Et3O (2x5 mL), em seguida liofilizada em uma mistura de CH3CN (5 mL) e água (5 mL) para
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161/185 dar origem a cloridrato de N-metil-6-[4-[3-(4-oxo-3H-quinazolin-2-il) propanoil]piperazin-1-il]piridina-3-carboxamidina (12 mg, 99%) como um sólido esbranquiçado.
[00351] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 8,58 (brs, 1H), 8,14 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,9 9 (brs, 1H), 7,9 2-7,78 (m, 2H), 7,63-7,57 (m, 1H), 7,35 (brs, 1H), 7,13-7,08 (m, 1H), 4,26 (brs, 5H), 3,81 (s, 2H), 3,68 (s, 4H), 3,60 (s, 2H), 3,06 (s, 3H).
LCMS (ESI+): m/z: 420,70 [M+H]+.
Etapa 7:
BóCsn Mel. NaH. DMF. Bocn . Soe- 1.
P ) a' [00352] A uma solução de terc-butil N-[(terc-butoxicarbonilamino)metilsulfanil-metileno]carbamato (1 g, 3,44 mmols) em DMF (20 mL), resfriada para 0°C, hidreto de sódio a 60% (276 mg, 6,9 16 mmols) foi adicionado porção a porção seguido por Mel (0,32 mL, 5,162 mmols). A mistura de reação foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 3 horas (TLC indicou completo consumo de material de partida). A mistura de reação foi resfriada bruscamente com água gelada (30 mL) e extraída com EtOAc (2 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (30 mL), secados sobre Na2SO4 e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o resíduo que foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílica-gel, 20 g, 5 a 10% de EtOAc-hexanos) para fornecer terc-butil N-(Nterc-butoxicarbonil-C-metilsulfanil-carbonimidoil)-N-metil-carbamato (650 mg, 63%) como um óleo incolor.
LCMS (ESI+): m/z: 305,66 [M+H]+.
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Exemplo 49 - Síntese de 2-[3-[4-[5-(4,5-di-hidro-1 H-imidazol-2-il)-2piridil] piperazin-1 -il]-3-oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona
Etapa 1:
2 dw; í^w.
SC. míts. ' X/9
............ .................*. 0í>cLi IH—f7—<{
Etapa 1 Ll—·'Q— [00353] A uma solução agitada de metil 6-cloropiridina-3-carboxilato (500 mg, 2,9 1 mmol) em DMF (5 mL), terc-butil piperazina-1carboxilato (720 mg, 3,87 mmols), K2CO3 (1,2 g, 8,74 mmols) e DMAP (35 mg, 0,29 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente. A mistura de reação foi aquecida em um micro-ondas CEM a 80°C durante 30 minutos (TLC mostrou 0 completo consumo de material de partida) e diluída com água (20 mL) durante 0 que sólido foi precipitado. O sólido foi filtrado e dissolvido em EtOAc (50 mL), secado sobre Na2SO4, concentrado sob pressão reduzida para fornecer 0 composto bruto que foi purificado por cromatografia rápida (100-200 malhas de sílica-gel, 5 g, 30% de EtOAc-Hexano) para dar origem a terc-butil 4(5-metoxicarbonil-2-piridil)piperazina-1-carboxilato (510 mg, 54%) como um sólido branco.
LCMS: m/z: 322,63 [M+H]+.
Etapa 2:
..... MH-s
N
........ n AIÍCHa)-Y. Tateas. .../ / \ \\ y xN reftísí©,3hi
V_.^7 b- *
Etspa 2I I bodK ,3 [00354] A uma solução agitada de trimetil alumínio (1,86 mL, 3,73 mmols, 2 M em tolueno) em tolueno (12 mL), resfriada para 0°C, etilenodiamina (0,25 mL, 3,73 mmols) foi adicionado. A mistura de reação
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163/185 foi aquecida para a temperatura ambiente, agitada durante 5 minutos e terc-butil 4-(5-metoxicarbonil-2-piridil)piperazina-1-carboxilato (200 mg, 0,62 mmol) em tolueno (4 mL) foi adicionado em temperatura ambiente. A mistura de reação foi refluxada durante 3 horas (TLC mostrou o completo consumo de material de partida), lentamente trazida para a temperatura ambiente, resfriada bruscamente com água (5 mL) e dissolvida em MeOH (15 mL) e DCM (15 mL). A mistura de reação foi filtrada através de Na2SO4; o filtrado obtido foi evaporado sob vácuo para obter o resíduo bruto. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (50 mL), aquecido a 80°C durante 5 minutos, filtrado através de Na2SO4 e concentrado sob vácuo para fornecer o composto bruto. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia de coluna (100-200 malhas de sílicagel, 4 g, 10% de MeOH-80% de DCM-10% de NH3 aquoso) para dar origem a terc-butil 4-[5-(4,5-di-hidro-1 H-imidazol-2-il)-2piridil]piperazina-1 -carboxilato (160 mg, 78%) como um sólido branco. LCMS: m/z: 332,70 [M+H]+.
Etapa 3:
4fí HC1 sm 1,4- \ f Ύ h ....................:............. , Λ J H 't/V' f Ή' ' s [00355] A uma solução agitada de terc-butil 4-[5-(4,5-di-hidro-1Himidazol-2-il)-2-piridil]piperazina-1 -carboxilato (160 mg, 0,48 mmol) em 1,4-dioxano (3 ml), resfriada para 0°C, HCI a 4 N em 1,4-dioxano (0,48 mL, 1,9 3 mmols) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 4 horas (TLC mostrou o completo consumo de material de partida). Os voláteis foram evaporados sob pressão reduzida para fornecer cloridrato de 1 -[5-(4,5-di-hidro1 H-imidazol-2-il)-2-piridil]piperazina (130 mg, 100%) que foi usado para a etapa seguinte sem outra purificação.
LCMS: m/z: 232,56 [M+H]+.
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Etapa 4:
[00356] A uma solução agitada de ácido 3-(4-oxo-3H-quinazolin-2il)propanoico (100 mg, 0,458 mmol) em DMF (5 mL), cloridrato de 1-[5(4,5-di-hidro-1 H-imidazol-2-il)-2-piridil]piperazina (127 mg, 0,55 mmol), EDC-HCI (131 mg, 0,68 mmol), HOBt (93 mg, 0,68 mmol) e DIPEA (0,32 mL, 1,83 mmol) foram adicionados em temperatura ambiente e agitados durante 16 horas (TLC mostrou o completo consumo de material de partida). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer o resíduo bruto que foi diluído com água fria (30 ml) durante o que sólido foi precipitado. O precipitado foi filtrado, secado sob vácuo para obter produto bruto (120 mg, 92% LCMS) e purificado por HPLC preparativa para obter 2-[3-[4-[5-(4,5-di-hidro-1 H-imidazol-2-il)-
2-piridil]piperazin-1-il]-3-oxo-propil]-3H-quinazolin-4-ona (55 mg, 28%) como um sólido branco.
[00357] 1H RMN [400 MHz, DMSO-d6]: δ 12,0 (s, 1H), 8,54 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,07 (dd, J = 1,6, 8,0 Hz, 1H), 7,9 2 (dd, J = 2,4, 9,2 Hz, 1H), 7,76-7,71 (m, 1H), 7,54 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,46-7,42 (m, 1H), 6,87(d, J=9,2 Hz, 1H), 3,70-3,65 (m, 4H), 3,56 (brs, 8H), 2,89 (brs, 4H).
LCMS: m/z: 432,73 [M+H]+.
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Exemplo 50 - Síntese de 8-cloro-2-(3-(4-(4-fluorofenil)-3,6-dihidropiridin-1(2H)-il)-3-oxopropil)quinazolin-4(3H)-ona
Etapa 1:
C! Cf [00358] Ácido 2-amino-3-clorobenzoico (10 g, 58,3 mmols) foi dissolvido em DMF (30 mL) e seguido por adição de HOBt (10,2 g, 75,8 mmols), EDCI (13,4 g, 69,9 mmols), cloreto de amônio (12,5 g, 233 mmols) e DIEA (40,6 mL, 233 mmols) nessa ordem. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 20 horas. A mistura foi dividida entre H2O (200 mL) e EtOAc (200 mL) e as fases foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 150 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com 50% de salmoura saturada, secados (MgSO4), e filtrados. O filtrado foi concentrado para fornecer um resíduo de sólido branco/amarelo. O resíduo sólido foi dissolvido em DMF (10 mL). Adição de DCM (10 mL) levou a uma precipitação branca, que foi coletada por filtração. Este processo foi repetido mais duas vezes para fornecer 2-amino-3-cloro-benzamida (5,1 g) como um sólido fofo branco.
LC-MS: m/z: 171,1 [M+H]+
Etapa 2:
p
[00359] Uma suspensão de 2-amino-3-cloro-benzamida (500 mg,
2,9 3 mmols) e anidrido succínico (293 mg, 2,9 3 mmols) em tolueno (5
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166/185 mL) foi agitada a 110°C. A mistura tornou-se homogênea após 1 hora. Após mais 16 horas, a precipitação foi formada. A mistura foi resfriada para a temperatura ambiente e concentrada em vácuo. NaOH a 1 N (10 mL) foi adicionado ao resíduo e a mistura resultante foi aquecida a 110 °C durante 10 minutos, em seguida resfriada para a temperatura ambiente. HCI a 1 N foi adicionado até pH atingir ~ 1. Uma precipitação branca formou-se e foi coletada por filtração. Os sólidos foram lavados com água (2 x 5mL) e secados para fornecer o ácido 3-(8-cloro4-oxo-3H-quinazolin-2-il)propanoico (294 mg) como um sólido branco. LC-MS: m/z 253,0 [M+H]+ [00360] 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 12,45 (s, 1H), 12,20 (br.s, 1H), 8,04 (dd, J = 7,9 , 1,5 Hz, 1H), 7,9 2 (dd, J = 7,8, 1,4 Hz, 1H), 7,43 (t, J=7,8 Hz, 1H), 2,89 (dd, J= 10,6, 3,7 Hz, 2H), 2,78 (dd, J= 10,6,
3,6 Hz, 2H).
Etapa 3:
[00361] A uma solução de cloridrato de 4-(4-fluorofenil)-1,2,3,6tetra-hidropiridina (18,6 mg, 0,087 mmol) e ácido 3-(8-cloro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoico (20,0 mg, 0,079 mmol) em DMF (3 mL) foi adicionado HATU (33,1 mg, 0,087 mmol), seguido por DIEA (33,9 pL, 0,190 mmol). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas, em seguida diluída com EtOAc (40 mL) e lavada com NaHCOs saturado (aq) (10 mL)., 50% de salmoura saturada (3x5 mL), secada (MgSO4), filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia rápida de sílica-gel para fornecer produto bruto (13 mg) como um sólido branco que é material 90% puro por LCMS e RMN. Este sólido foi triturado com EtOAc (3 mL) e os sólidos coPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 180/215
167/185 letados por decantar líquido para fornecer 8-cloro-2-(3-(4-(4fluorofenil)-3,6-di-hidropiridin-1 (2H)-il)-3-oxopropil)quinazolin-4(3H)ona (1,2 mg) como um sólido branco.
[00362] LC-MS: m/z 412,1 [M+H]+ [00363] 1H RMN (500 MHz, CDCI3) δ 11,08 (s, 1H), 8,18 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,38 - 7,28 (m, 3H), 7,03 (td, J = 8,7, 2,0 Hz, 2H), 5,9 8 (d, J= 45,0 Hz, 1H), 4,23 (d, J= 77,1 Hz, 2H), 3,80 (dt, J= 100,6, 5,7 Hz, 2H), 3,17 (dd, J= 13,7, 7,8 Hz, 2H), 3,02-2,84 (m, 2H), 2,65-2,48 (m, 2H).
Exemplo 51 - Síntese de 2-(3-(4-(4-fluorofenil)-3,6-di-hidropiridin1(2H)-il)-3-oxopropil)quinazolin-4(3H)-ona [00364] O composto foi sintetizado de acordo com a mesma sequência para 8-cloro-2-(3-(4-(4-fluorofenil)-3,6-di-hidropiridin-1 (2H)-il)-
3-oxopropil)quinazolin-4(3H)-ona (Exemplo 50) com apropriado material de partida.
LC-MS: m/z 378,4 [M+H]+ [00365] 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 12,19 (s, 1H), 8,07 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,72 (ddd, J=8,5, 7,2, 1,6 Hz, 1H), 7,53 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,50-7,46 (m, 2H), 7,46-7,41 (m, 1H), 7,18 (t, J=8,8 Hz, 2H), 6,20-6,12 (m, 1H), 4,24 (d, J= 2,6 Hz, 1H), 4,09 (d, J= 2,7 Hz, 1H), 3,72 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,66 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 2,9 8 - 2,85 (m, 4H), 2,58 (s, 1H), 2,42 (s, 1H).
Exemplo 52 - Síntese de 2-(3-(4-(4-fluorofenil)piperazin-1-il)-3oxopropil) quinazolin-4(3H)-ona o
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168/185 [00366] O composto foi sintetizado de acordo com a mesma sequência para 8-cloro-2-(3-(4-(4-fluorofenil)-3,6-di-hidropiridin-1 (2H)-il)3-oxopropil)quinazolin-4(3H)-ona (Exemplo 50) com apropriado material de partida.
LC-MS: m/z 381,4 [M+H]+ [00367] 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 12,18 (s, 1H), 8,07 (dd, J = 8,0, 1,2 Hz, 1H), 7,77 - 7,71 (m, 1H), 7,55 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,44 (ddd, J= 8,1,7,3, 1,1 Hz, 1H), 7,10-7,04 (m, 2H), 7,01 -6,9 5 (m, 2H), 3,70 - 3,63 (m, 2H), 3,63 - 3,54 (m, 2H), 3,15 - 3,10 (m, 2H), 3,04 - 2,9 8 (m, 2H), 2,89 (s, 4H).
Exemplo 53 - Síntese de 2-(3-(4-(4-fluorofenil)-3,6-di-hidropiridin1(2H)-il)-3-oxopropil)-7-metil-3,7-di-hidro-4H-pirrolo[2,3d]pirimidin-4-ona [00368] O composto foi sintetizado de acordo com a mesma sequência para 8-cloro-2-(3-(4-(4-fluorofenil)-3,6-di-hidropiridin-1 (2H)-il)3-oxopropil) quinazolin-4(3H)-ona (Exemplo 50) com apropriado material de partida (2-amino~1~metíl-1 H-pírrol-32-carboxamída, CAS No: 1894093-24-3).
[°°369] LC-MS: m/z 381,4 [M+H]+ [00370] 1H RMN (500 MHz, DMSO) δ 11,70 (s, 1H), 7,48 (ddd, J = 8,7, 5,6, 2,1 Hz, 2H), 7,21 -7,14 (m, 2H), 6,9 8 (d, J= 3,3 Hz, 1H), 6,37 (d, J= 3,3 Hz, 1H), 6,16 (t, J= 3,3 Hz, 1H), 4,23 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 4,10 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 3,71 (t, J=5,6 Hz, 1H), 3,67 (t, J=5,7 Hz, 1H), 3,61 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 2,9 2 - 2,80 (m, 4H), 2,60 - 2,54 (m, 1H), 2,46-2,40 (m, 1H).
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Exemplo 54. Ensaio de PARP Humano [00371] Poli (ADP-ribose) polimerase-1 (PARP-1) e Poli (ADPribose) polimerase-2 (PARP-2) são duas enzimas nucleares envolvidas em muitas das atividades celulares, incluindo reparo ao DNA e desempenham um papel chave na manutenção da integridade de DNA e estrutura de cromatina. Este ensaio é designado para avaliar o potencial de uma substância teste para inibir a atividade de PARP-1 ou PARP-2 e usa o formado de ensaio de proximidade por cintilação (SPA).
[00372] O ensaio de proximidade por cintilação (SPA) é designado para medir a atividade de PARP usando enzima PARP-1 recombinante purificada e é ideal para triagem de alto rendimento de inibidores moleculares pequenos para descoberta de fármaco. Aqui, enzima PARP1 ou PARP-2 humana recombinante foi incubada com mistura de substrato (NAD, 3H-NAD e NAD biotinilado) e o [3H] e polímeros de ADPribose marcados com biotina foram capturados usando contas SPA de PVT conjugado à estreptavidina. Na ausência de inibição de enzima, 100% de sinal foram obtidos. Inibidores são identificados por um decréscimo em sinal quando a formação de polímero de poli-ADP ribose mediado por PARP-1 ou PARP-2 é reduzida.
[00373] Produtos químicos e reagentes usados neste protocolo são listados abaixo com a fonte e números de catálogo.
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| SI. N2. | Material & Reagentes | Fornecedor | Catálogo N2. |
| 1 | Enzima PARP-1 humana recombinante (Atividade Específica Elevada) | Trevigen | 4668-500-01 |
| 2 | Enzima rh-PARP-2, 1Opg/vial | BPS Bioscience | 80502 |
| 3 | Microplaca de 96 cavidades, branca, FB | Corning | 3600 ou CLS3600-100EA |
| 4 | Microplaca de 96 cavidades, polipropileno, clear | Corning | 3365 ou P070 |
| 5 | DNA de Timo de Bezero Ativado | Amersham Biosciences | 27-4575 |
| 6 | Nicotinamida-Adenina Dinucleotídeo | Sigma | N1511-250MG |
| 7 | NAD Biotinilado (6-biotina-17-NAD) | Trevigen | 4670-500-01 |
| 8 | [Adenina-2,8-3H]-NAD, 250 pCi/vial | Perkin Elmer | NET443H250UC |
| 9 | Contas de Estreptavidina-SPA | Perkin Elmer | RPNQ 0007 |
| 10 | DL-Ditiotreitol | Sigma | 43815-1G |
| 11 | Base Trizma® | Sigma | T6791-100G |
| 12 | Cloreto de magnésio | Sigma | 449172-10G |
| 13 | Espermina | Sigma | 85590-5G |
| 14 | Cloreto de potássio | Sigma | 746436-500G |
| 15 | NONIDET® P-40 Substituto | Am resco | M158 |
| 16 | Reagente de Dimetil sulfóxido ACS, >99,9 % | Sigma | 472301-500 mL |
| 17 | 4-Amino-1,8-Naftalimida (4-ANI) | Alfa Aesar | J64358 |
| 18 | TOPSEAL-A 96 | Perkin Elmer | 6005185 |
| 19 | Pipetas | Eppendorf | |
| Nota: Pesar todos os produtos químicos usando balança d | e pesagem |
com sensibilidade de 0,01 mg.
[00374] Instrumentos: Perkin Elmer; TopCount NXT [00375] Preparação de Reagentes & Tampão [00376] Tampão A 4X:
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171/185 [00377] Tris pH 8 : 100 mM; MgCI2: 4 mM; Espermina: 4 mM; KCI:
200 mM; Nonidet Substituinte P-40: 0,04%.
Mistura A de Ensaio por cavidade
Tampão A 4X
DTT 100mM
Enzima PARP-1 : 12,5 pL : 0,5 μΙ_ : 1 unidade/cavidade, o volume depende [00378] [00379] [00380] da atividade específica do lote [00381] Enzima PARP-2 : 30 ng/cavidade, o volume depende da atividade específica do lote [00382] H2O : para 35 pL
Mistura B de Ensaio por cavidade [00383] [Adenina-2,8-3H]-NAD 100 uCi/ml : 1 pl_ (0,1 pCi/cavidade) [00384] 3H-NAD 100 uCi/ml : 2 μΙ (0,2 pCi/cavidade) [00385] NAD 1,5 mM : 0,05 pL [00386] Biotinylated-NAD 2501.ÍM : 0,03 pL [00387] DNA de Ti mo de Bezero Ativado : 50 pg [00388] H2O:para10pL
Mistura C de Ensaio [00389] Contas de Estreptavidina-SPA: 2,5 mg/mL em EDTA a 200 mM, pH 8,0 (para ensaio de PARP-1) [00390] Contas de Estreptavidina-SPA: 2,5 mg/ml dH2O (para ensaio de PARP-2)
Procedimento de Ensaio [00391] Uma solução a 10 mM de composto de referência, 4-amino1,8-naftalimida (4-ANI) foi preparada usando 100% de DMSO. O 4-ANI a 10 mM foi diluído para 2 mM e novamente diluído para 200 pM usando 100% de DMSO. Diluição serial de 4-ANI a 200 μΜ em 100% de DMSO foi realizada para obter diluição de 3 vezes, dez concentrações. 5 μΙ_ de diluições seriais foram transferidos para 95 μΙ_ de água
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172/185 para obter 10X de concentração final em ensaio. Concentração máxima de 4-ANI no Ensaio foi de 1 μΜ.
[00392] Uma solução de 4-ANI a 2 mM preparada anteriormente foi diluída para 100 μΜ em água. 5 μΙ_ deste 4-ANI a 100 μΜ foram adicionados às cavidades NC (controle negativo). Concentração final de 4-ANI em cavidades NC foi de 10 μΜ. Cavidades NC são definidas como as cavidades que têm o menor sinal.
[00393] Uma solução a 10 mM de composto teste foi preparada usando 100% de DMSO. A solução a 10 mM foi diluída para 200X da concentração final desejada em ensaio. Diluição serial de 200X a solução de composto em 100% de DMSO foi realizada para obter diluição de 3 vezes, dez concentrações.
[00394] Placa de Pré-diluição: 5 μΙ_ de diluições seriais foram transferidos para 95 μΙ_ de água em uma placa de polipropileno para obter 10X de concentração desejada final em ensaio.
Desenvolvimento de Reação de PARP: Placa de Ensaio [00395] 5 pL/cavidade da microplaca de pré-diluição foram transferidos para microplaca branca de 96 cavidades (Corning 3600). 35 pl_/cavidade de Mistura A de Ensaio foram adicionados e incubados durante 5 minutos em temperatura ambiente. 10 pL/cavidade de Mistura B de ensaio foram adicionados para iniciar a reação. A placa de ensaio foi incubada durante 3 horas em temperatura ambiente.
Detecção de Placa de Ensaio :
[00396] 50 pl_/cavidade de Mistura C de Ensaio foram adicionados. A placa com TOPSEAL-A 96 foi lacrada. O ensaio foi incubado durante 15 minutos com suave agitação. A placa de ensaio foi lida em TopCount usando um protocolo otimizado para contas de Trítio e SPA de PVT.
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| Condições de Ensaio: | |
| • TRIS pH 8 | 25 mM |
| • MgCI2 | 1 mM |
| • Espermina | 1 mM |
| • KCI | 50 mM |
| • Nonidet P-40 | 0,01% |
| • DTT | 1 mM |
| • PARP-1 | 1 unidade/cavidade |
| • PARP-2 | 20-30 ng (dependendo da atividade |
| de cada lote) | |
| • Timo de bezerro ativado | 1 ug/ml |
| • NAD frio | 1,5 uM |
| • NAD Biotinilado | 150 nM |
| • 3H-NAD | 0,2 uCi |
| • Contas de Estreptavidina-SPA | 1,25 mg/ml |
Resultados e Análise de Dados:
[00397] Os dados brutos foram coletados como CPM. Uma regressão não linear 4-Paramétrica foi usada para ajustar uma curva de concentração-resposta e para calcular os valores IC50. Os valores CPM duplicados para NC, grupos PC foram calculados. A média de NC foi subtraída de todas as contagens de CPM bruto. Estes valores subtraídos de base foram então divididos pelo Controle Positivo Médio para gerar a % de Atividade. A % de Atividade foi subtraída de 100 para gerar a % de Inibição. Os dados foram plotados e ajustados à seguinte equação :
Exemplo 55. Ensaio com base em célula PARP-1 [00398] Em resposta ao dano ao DNA, poli-(ADP-ribose) polimera
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174/185 se-1 (PARP-1), que é a principal isoforma da família PARP, é rapidamente ativada por rompimentos de filamento de DNA que ocorrem a partir da exposição a agentes ambientais, terapia de câncer, inflamação, isquemia-reperfusão e neurodegeneração. Assim que ativado, NAD+ é consumido para a Síntese da poli-ADPribose (PAR) polímera altamente negativamente carregada, que é encontrada em proteínas nucleares alvo incluindo PARP-1 como um maior aceptor. Como uma consequência de ativação de PARP, extensor dano ao DNA pode levar à depleção de NAD+ na célula, e levar à morte celular. Portanto, PARP-1 é considerado como um alvo promissor para o desenvolvimento de fármacos úteis em vários regimes de terapia de câncer, inflamação, isquemia e neurodegeneração.
[00399] Neste ensaio, para monitorar a atividade de PARP dentro das células, células HeLa foram tratadas com inibidores de PARP-1 seguido por indução de dano ao DNA com H2O2. A atividade final de PARP1 foi estimada medindo-se os níveis de NAD+ e NADH nos lisados celulares coletados das células tratadas e não tratadas.
Materiais & Reagentes
| itii | |||
| 1 | Células HeLa | ATCC | ATCC® CCL-2TM |
| 2 | Soro Bovino Fetal, HI | Invitrogen | 10438-026 |
| 3 | Penicilina-Estreptomicina (10,000 U/mL), 100 mL | Invitrogen | 15140-122 |
| 4 | DMEM, Glicose Elevada, Piruvato, 6 x 1,000 mL | Invitrogen | 11995-065 |
| 5 | 0,25% de Tripsina-EDTA (1X), Vermelho Fenol, 100 ml | Invitrogen | 25200-056 |
| 6 | 175 cm2, Frasco de Cultura de Tecido, 100/caso | Corning | CLS431306-84EA |
| 7 | 1X PBS, pH 7,4, 500 mL | Invitrogen | 10010-023 |
| 8 | 96-cavidades, branca, base plana, estéril, 100/case | Corning | CLS3917-100EA |
| 9 | Microplaca de 96 cavidades, polipropileno, clara | Corning | P070 |
| 10 | Reagente ACS de Dimetil sulfóxido ACS, >99,9 % | Sigma | 472301-500 mL |
| 11 | Universal tips, Clara, 0,5-1 OUL, 1000/pacote | Axygen | T-300 |
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| itiii | |||
| 12 | Universal tips, CLEAR, 1-200UL, 1000/Pack | Axygen | T-200-C |
| 13 | NAD/NADH Glo Kit | Promega | G9072 |
| 14 | Brometo de Dodeciltrimetilamônio | Sigma | D5047-5G |
| 15 | NaOH | Sigma | S8045-500G |
| 16 | Bicarbonato de sódio | Sigma | S5761-500G |
| 17 | Carbonato de sódio | Sigma | S7795-500G |
| 18 | Nicotinamida | Sigma | N5535-100G |
| 19 | TritonX-100 | Sigma | T9284-100 mL |
| 20 | Base Trizma® | Sigma | 93362-250G |
| 21 | Ácido clorídrico | Sigma | H1758-100 mL |
| 22 | Olaparibe | Medchem Express | HY-10162 |
| 23 | Leitora de Placa Envision | Perkin Elmer | 2104 |
| 24 | umidificante de Incubadora de CO2 | Thermo Scientific | |
| 25 | Pipetas/Pipetas sorológicas | Eppendorf/ Corning |
[00400] Instrumentos: Detecção: Detecção de Luminescência em Leitora de Placa Envision/TopCount (Perkin Elmer) [00401] Reagente & Preparação Média [00402] Preparação de Meio de Cultura [00403] MeioDMEM : 1X [00404] FBS (Inativado por calor) : 10% [00405] Pen-Strep (10,000 U/mL) :0,1mg/mL [00406] L-Glutamina : 2 mM
Preparação do Reagente de Detecção de Luciferina [00407] O tampão de reconstituição foi descongelado. O tampão de reconstituição e reagente de detecção de luciferina foram equilibrados para a temperatura ambiente. Todo o teor do frasco de tampão de rePetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 189/215
176/185 constituição foi transferido para o frasco âmbar de reagente de detecção de luciferina liofilizada. Os dois reagentes foram misturados por turbilhonamento ou inversão para obter uma solução uniforme. Nenhum vórtice. O reagente de detecção de luciferina deve entrar na solução facilmente em menos de 1 minuto.
Preparação do Reagente de Detecção NAD/NADH-GloTM [00408] Um volume igual de Reagente de Detecção de NAD/NADHGloTM foi adicionado a cada amostra contendo NAD+ ou NADH.
[00409] O reagente de detecção de luciferina reconstituído foi equilibrado para a temperatura ambiente. A redutase, substrato de redutase e substrato de ciclização de NAD+ foram descongelados em temperatura ambiente ou sobre gelo exatamente antes do uso. A enzima de ciclização de NAD+ foi reconstituída adicionando 275 μΙ_ de água. A mistura foi suavemente turbilhonada no frasconete, e armazenada sobre gelo. A quantidade requerida de reagente de detecção de NAD/NADH-GloTM foi preparada adicionando 5 μΙ_ de redutase, 5 μΙ_ de substrato de redutase, 5 μΙ_ de enzima de ciclização de NAD+ e 25 μΙ_ de substrato de ciclização de NAD+ por 1 mL de reagente de detecção de luciferina reconstituído. A mistura foi suavemente invertida cinco vezes.
Condições de Ensaio Final:
| Volume de Ensaio | : 100 pL |
| Tipo Celular | : Células HeLa |
| Densidade de Semeadura celular | : 10,000 células/cavidade |
| 'Meio | : DMEM, 10% de FBS, 0,1 mg/mLde Pen-Strep, L-Glutamina a 2 mM |
| Concentração de DMSO | : 0,5% |
| Placa de Ensaio | : 96 cavidades brancas, TC, estéril, com tampa |
| Tempo de Incubação do Composto | : 18 horas |
| Nível de CO2 | : 5% |
| Umidade | : 95% |
| Temperatura | : 37°C |
| de H2O2 | : 200 μΜ |
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Semeadura Celular & Tratamento do Composto:
[00410] Células HeLa em microplaca de cultura celular de 96 cavidades foram semeadas em uma densidade de 10.000 células/cavidade em 90 μΙ_ de meio de cultura. As placas foram incubadas durante 4 horas a 37°C sob atmosfera de CO2 a 5%. 10 pL de 10X compostos (DMSO a 5%) com diluições seriais em oito pontos (faixa de concentração: 0,3-100 nM) foram adicionados. As placas tratadas foram incubadas durante 18 horas a 37°C em CO2 a 5%. 5 pL de solução de H2O2 em H2O (concentração final de 200 pM) foram adicionados para provocar dano ao DNA. Células não tratadas com H2O2 foram mantidas em cavidades de controle negativo. A placa foi incubada a 37°C durante 5 minutos, e em seguida foi invertida para suavemente remover 0 meio. 50 pL de 1xPBS foram adicionados a todas as cavidades.
Determinação de Atividade de PARP: medida de NAD+ e NADH separadamente.
[00411] Este protocolo é para 0 ensaio de células em 50 pl de PBS por cavidade em placas luminômetro brancas de 96 cavidades. Cada cavidade de células foi dividida em duas amostras: Uma amostra foi tratada com ácido para quantificar NAD+, e a outra foi tratada com base para quantificar NADH. Quando semeando células, as cavidades sobre a placa foram reservadas para dividir as amostras. Alternativamente, usar uma segunda placa quando dividindo as amostras.
[00412] 50 pl de solução de base com DTAB a 1% foram adicionados a cada cavidade de células em 50 pl de PBS. A placa foi brevemente misturada em uma agitadora de placa para garantir a homogeneidade e lise celular. 50 pl de cada amostra foram removidos para uma cavidade vazia para tratamento com ácido. A estas amostras, 25 pl de HCI a 0,4 N por cavidade foram adicionados; estas cavidades continham as amostras tratadas com ácido. As cavidades da amostra original são as amostras tratadas com a base. A placa foi coberta e incubada durante
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178/185 minutos a 60°C. A placa foi em seguida equilibrada durante 10 minutos em temperatura ambiente. 25 pl de base Trizma® a 0,5 M foram adicionados a cada cavidade de células tratadas com ácido para neutralizar o ácido. 50 μΙ de solução HCI/Trizma® foram adicionados a cada cavidade contendo amostras tratadas com a base. Reagente de Detecção NAD/NADH-GloTM foi preparado como descrito acima. Um volume igual de Reagente de Detecção NAD/NADH-GloTM (por exemplo, 100 μΙ) foi adicionado a cada cavidade. A placa foi suavemente agitada para mistura. A placa foi incubada durante 30 a 60 minutos em temperatura ambiente. A luminescência foi registrada usando um luminômetro (Envision, PerkinElmer). Os valores de luminescência foram coletados. Uma regressão não linear foi usada para gerar as curvas de doseresposta e para calcular os valores IC50.
[00413] A Tabela abaixo lista os efeitos inibitórios de compostos representativos da presente invenção contra as atividades PARP1-1 e PARP-2. Os resultados indicam que os compostos da presente invenção seletivamente inibiram PARP1-1 mais que PARP-2 e são úteis para aumentar a quantidade de NAD+ em células.
| Exemplo N2. | Estrutura | PARP-1 média ICgo (cone, máx. 10 uM) (nM) | PARP-2 média ICgo (cone, máx. 10 uM) (nM) | Ensaio celular de H2O2 NAD* HeLa ECso(nM) |
| Ex. 1 | O A o /V1** ύ' Cl o | 27 | 181 | 909 |
| Ex. 2 | o 0 |^|| NHj Cl O | 7 | 69 |
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| Ex. 3 | 0 η JL J H ci 0 | 16 | 196 | 1322 |
| Ex. 4 | 0 Λ o r^r ii L IJ H |Af NH éi 0 | 26 | 1658 | |
| Ex. 5 | Ο Γ~7 o iiz’!»r‘N-^' _ A 1 J H Cl H S | 51 | 1096 | |
| Ex. 6 | O \A o A JL J H ci H 0 | 29 | 1271 | |
| Ex. 7 | \£j o if^r^N^~J 1 JI J H ii1 ci H S | 30 | 2630 | |
| Ex. 8 | 4ΑΝΑχγΝΑ O | 325 | ||
| Ex. 9 | Â jlXi [j^Y^NH O | 160 | ||
| Ex. 10 | j? n LAnA-ynA ci o | 180 | ||
| Ex. 11 | r. ^s^CN X /. it <<Ύ^νη <^Ν^ΓΤ ο | 6 | 338 | 50 |
| Ex. 12 | Ο 0 0 | 25 |
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| Ex. 13 | 1S /. jfjT Μ-Α/γΝχΧ O | 54 | ||
| Ex. 14 | r. /\PN jfr 0 | 23 | 974 | |
| Ex. 15 | n /\PN _ jfy [j^/^NH -------- AAN^---rN^j 0 | 196 | ||
| Ex. 16 | „ /\^CN 0 In U^^SS/^NH f—N-^rr ^-|^Ν^χ/·'γΝχ/1 | 7 | 40 | 163 |
| Ex. 17 | ^CN ϊΐ [ρ*γ^·ΝΗ I'^ir^hr ο | 8 | 215 | 16 |
| Ex. 18 | η νΎ f JL II Π^Ι Ν Η \ Ν—Ν 0 | 7 | 216 | 24 |
| Ex. 19 | . jfy (|ψ^Ν Η f Ν --- ο | 83 | ||
| Ex. 20 | ^^zCN 0 \η iJ^’ss/^NH [^Ν^Ν·^ F Ο | 12 | 288 | |
| Ex. 21 | π Γϊ ν JL ___ κ y f? </^ΝΗ f^N— --- Ο | 99 | ||
| Ex. 22 | Λ χ-χΛ /- jTí (/’’ss/^nh I'^'tr^rr νΆνΑ/ύ-/1 ο | 395 |
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| Ex. 23 | n s _ ΧΎ ^-j/^NH f—N—tr 0 | 35 | 10294 | 552 |
| Ex. 24 | n _____CN s Ϊ /- ΧΎ o | 11 | 1591 | 341 |
| Ex. 25 | >*N -Λ '-Cf 0 | 70 | ||
| Ex. 26 | -J. Ργ NH f---N---hT Μ-ΝΑ/γΝ·^Α 0 | 47 | 770 | |
| Ex. 27 | -S.N /y* h f—rr^tr UAyJ o * | 94 | ||
| Ex. 28 | -Ji /^Ss/^N H 0 - | 10 | 910 | 138 |
| Ex. 29 | -g.N x- XT η ι^νΎ | 12 | 611 | 156 |
| Ex. 30 | J^N I j? Xj |^f*N H f^N^tr ^AnA/yS^ o s | 12 | 624 | 110 |
| Ex. 31 | jTX [ϋ’^Υ^ΝΗ ι-'^Ν'^ΚΓ Μ-ΝΑ^γΝ^ ° kOH | 6 | 42 | 440 |
| Ex. 32 | Fx^s /- XX | 5 | 1232 |
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| Ex. 33 | x j? ίΎ ° X>H | 7 | 2736 | |
| Ex. 34 | U^I^NH M-NÂs/γΝ^ O | 54 | ||
| Ex. 35 | rj^SZ^NH <-—N^fT ΊΑΑ^Νχχΐ o | 35 | 562 | |
| Ex. 36 | rj^Z^NH [^N---hT o | 120 | ||
| Ex. 37 | |^N---N'X o | 359 | ||
| Ex. 38 | xJi Z^SZ^NH ------IST o | 129 | ||
| Ex. 39 | n xN^N X JI rj^P N H [<^N— o | 14 | 468 | 754 |
| Ex. 40 | CN £ 1Λ [^’S^NH i^N-^N o | 53 | 1502 | |
| Ex. 41 | « ^5S^CN ✓J. XX N^fZ^NH |^N---N' ’LAAz^jzNxxI O | 97 | ||
| Ex. 42 | jfx f—N—tr 0 | 58 | 12271 |
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| Ex. 43 | -jN rj^SZ^NH |^N— I o | 42 | 3817 | 440 |
| Ex. 44 | Γ- „ f it jy rir NH 0 5 | 11 | 345 | |
| Ex. 45 | O N<?Sj|zZ^ UA^/J 0 | 92 | ||
| Ex. 46 | CN O psX Π jL n— n H ^n-^n CAna^.n^j o | 278 | ||
| Ex. 47 | o o Pi NZ ci o | 922 | ||
| Ex. 48 | NH o if'^r'N^ u JL J H L £ JL n J CIH —tr—γ— | 30 | 7564 | |
| Ex. 49 | HN^k ° ίόι N' o | 36 | 22383 | |
| Ex. 50 | 0 iTVF <y^nh | 255 | ||
| Ex. 51 | ^£ ^OrF 0 | 83 | 339 |
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| Ex. 52 | 0 | 68 | 999 | |
| Ex. 53 | â xyF NH ' O | 189 |
Exemplo 56. Modelo de Rato de Lesão Renal Aguda (AKI) Animais, cirurgia e dosagem:
[00414] Ratos machos Sprague-Dawley pesando aproximadamente 300-350 g, com acesso ad libitum à alimentação padrão e água foram usados nestes experimentos. Os ratos foram anestesiados com isoflurano e colocados ventralmente sobre uma plataforma cirúrgica aquecida com temperatura controlada. Uma incisão da pele foi feita sobre a superfície dorsal, expondo ambos os rins através de incisões do flaco. Clipes vasculares foram aplicados a ambos os pedículos renais e a oclusão permaneceu por 45 minutos. Após os 45 minutos, os clipes foram removidos, os rins foram monitorados quanto à reperfusão bemsucedida, e os sítios cirúrgicos foram suturados. O grupo operado por simulação foi submetido a procedimentos cirúrgicos similares, exceto que o grampo de oclusão não foi aplicado. Os compostos foram formulados como uma solução clara fresca diariamente de Exemplo 29 ou Exemplo 30 em A/-metil pirrolidona: PEG300: Propileno glicol: salina normal (10: 30: 20: 40). Compostos ou veículo foram dosados IV por meio de veia caudal a 15 mg/kg (3 mL/kg) 4 horas após a reperfusão no dia da cirurgia. No dia 1 (dia após a cirurgia) os animais foram administrados com o veículo ou 15 mg/kg de Exemplo 29 ou Exemplo 30 (3 mL/kg I.V) no início do ciclo de luz. Os animais de controle de cirurgia simulada foram similarmente dosados com o veículo.
Coleta de Plasma e medição de biomarcador:
[00415] Vinte e quarto (24) horas após a reperfusão, o sangue foi
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 198/215
185/185 coletado em tubos K2 EDTA por sangramento retro-orbital de todos os grupos sob anestesia suave com isoflurano. Plasma foi separado por centrifugação a 3000 rpm durante 10 minutos a 4°C. Creatinina plasmática e nitrogênio de ureia sanguínea (BUN) foram analisados usando um analisador de bioquímica clínica totalmente automatizado (Siemens Dimension® Xpand® Plus Integrated Chemistry System)
Análise de Dados e Análise Estatística:
[00416] O software GraphPad Prism, Versão 6,05 foi usado para gráficos e testes estatísticos. Creatinina e BUN foram testados quanto à distribuição normal em todos os grupos por meio de um teste de normalidade D’Agostino-Pearson omnibus ou um teste de normalidade Shapiro-Wilk. Significância estatística (p<0,05) foi determinada por um teste t de Student comparando o veículo de simulação ao veículo IR ou veículo IR ao grupo tratado com o composto. ##p<0,01, ###p<0,001, ####p<0,0001 Simulação versus veículo IR; *p<0,05, **p<0,01 veículo IR versus grupo tratado com o composto (Exemplo 29 ou Exemplo 30).
[00417] Resultados: Inibidores de PARP1 Exemplo 29 e Exemplo 30, dosados IV após isquemia-reperfusão, lesão renal reduzida. Ambos os compostos significantemente reduziram a creatinina plasmática e BUN quando dosados a 15 mg/kg (Figura 1).
Exemplo 57. Ensaio de micronúcleo in vitro e in vivo [00418] Determinados compostos desta invenção não mostraram nenhuma atividade clastogênica no ensaio de micronúcleo in vitro e/ou in vivo.
Claims (27)
- REIVINDICAÇÕES1. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável e um composto representado pela seguinte fórmula estrutural:ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: o Anel A é opcionalmente fenila substituída ou uma heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituída;o Anel B é arila, heteroarila de 5 a 6 membros ou heterocichia de 5 a 6 membros, cada qual opcionalmente substituída por um ou mais substitutes representados por R3;está ausente ou uma ligação;E é N ou CH quando está ausente ou E é C quando — é uma ligação;é opcionalmente substituído por (CiCs)alquila ou hidróxi (Ci~Cs)alqu!la;cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em -halogênio, -CN, -NO2, -ORd, -NReRf, -S(O)iRe, -C(-NR®)NReRf, -NReS(O)iRf, -S(O)iNReRf, -C(-O)ORe, -OC(-O)ORe, -C(-S)ORT -O(C>S)Re, ~C(”O)NReRf, -NReC(^O)Rf, -C(-S)NReRf, -NReC(-S)Rf, -NRe(C-C))ORf, -O(C^O)NReRf, -NRe(C=S)ORf, -O(C-S)NReRf, -NRe(C“O)NReRf! -NRe(C-S)NReRf, -C(-S)Re, -C(-O)Re, halo(Ci-C5)alquila, e (Ci-C5)alquila, em que a (Ci-Cs)alquila representada por R3 é opcionalmente substituída por -CN, -NO2i -OR®, -NR®Rf, -S(O)iRe, -NReS(O>Rí, -S(O)iNReRf, -C(-O)ORe, -OC(-O)ORe,Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 200/215
- 2/14-C(-S)ORe, -O(C=S)Re, -C(-O)NReRf, -NReC(-O)Rf, -C(=S)NReRf,-NReC(-S)Rf, -NRe(C-O)ORf, -0(00)NReRf, -NRe(C=S)ORf, “O(C”S)NReRf, -NRe(C~O)NReRf, -NRe(C-S)NReRf, -C(^S)Re, ou-C(-O)Re;Rd é -H, halo(CiC5)alquHa ou (Ci-Csjaiquila, em que a (CiCs)a!quiia é opcionalmente substituída com hidroxila ou (Ci-Csjalcóxi;cada Re é independentemente selecionado do grupo que consiste em -H e (Ci-Cs)alquila opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci-C3)alcóxi;cada Rf é independentemente selecionado do grupo que consiste em -H, (Ci-Cs)alquila opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci-C3)alcóxi, (Cs-Cejcicloalquila opcionalmente substituída por (CiC2) alquila, e heterociclila contendo oxigênio de 4 a 6 membros opcionalmente substituída por (C1-C2) alquila; ou ™NReRf empregado junto é uma heterociclila de 4 a 6 membros, opcionalmente substituída por (C1-C2) alquila; ou-C(-NRe)NR®Rf empregado junto é uma heterociclila de 4 a 6 membros, opcionalmente substituída por Re;R5 é -H ou (Ci-Cs)alquila; e i é 0, 1, ou 2,2. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que um composto é representado pela seguinte fórmula estrutural:
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:0 Anel A é opcionalmente fenila substituída ou uma heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituída;Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 201/215 - 3/14 o Anel Β é arila, heteroarila de 5 a 6 membros ou heterociclila de 5 a 6 membros, cada qual opcionalmente substituída por um ou mais substituintes representados por R3;está ausente ou uma ligação;E é N ou CH quando está ausente ou E é C quando — é uma ligação;é opcionalmente substituído por (CiCsjalquila ou hidróxi (Ci-Csjalquila;cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em -halogênio, -CN, -NO2, -ORd, -NReRf, ~S(O)-Re, -C(-NRe)NReRf, “NReS(O)iRf, -S(O)iNReRf, -C(-O)ORe, -QC(O)0Re, ”C(“S)ORe, -O(C>S)Re, C(“O)NReRf, -NReC(-O)Rf, -C(^S)NReRf, -NReC(-S)Rf, -NRe(C~O)ORf, ~O((>O)NReRf, -MRe(C>S)ORf, O(CS)NReRf, -NRe(C^O)NReRf, -NRe(CS)NReRf, -C(^S)Re, -C(“O)Re, halo(Ci-C5)alquila e (Ci-Csjalquila, em que a (Ci-Csjalquila representada por R3 é opcionalmente substituída por -CN, -NO2, -OR®, -NReRf, -S(O)iRe, -NReS(O)iRf, -S(O)iNReRf, -C(-O)ORe, -QC(O)0Re, -C(-S)ORe, -O(C>S)Re, C(“O)NReRf, ~NReC(-O)Rf, -C(^S)NReRf, -NReC(-S)Rf, -NRe(C~O)ORf, -O(C-O)NReRf, -MRe(C>S)ORf, O(CS)NReRf, NRe(CO)NReRf, -NRe(C^S)NReRf, -C(-S)Re, ou -C(“O)Re;Rd é -H, halo(Ci-C5)alquila ou (Ci-Csjalquila, em que a (C1Cejalquila é opcionalmente substituída com hidroxila ou (Ci-C3)alcóxi;cada Re é independentemente selecionado do grupo que consiste em -H e (Ci-Cs)alquila opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci~C3)alcóxi;cada Rf é independentemente selecionado do grupo que consiste em -H, (Ci-Csjalquila opcionalmente substituída por hidroxilaPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 202/215
- 4/14 ou (Ci-C3)alcóxi, (Cs-Cejcicloalquila opcionalmente substituída por (Ci62)alquila, e heterociclila contendo oxigênio de 4 a 6 membros opcionalmente substituída por (61-62) alquila; ou-NReRf empregado junto é uma heterociclila de 4 a 6 membros, opcionalmente substituída por (61-62) alquila; ou ~6(”NRe)NReRf empregado junto é uma heterociclila de 4 a6 membros, opcionalmente substituída por Re; e i é 0, 1, ou 2.3. 6omposição farmacêutica de acordo com a reivindica- ção 2, caracterizada pelo fato de que um composto é representado pela seguinte fórmula estrutural:ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: 0 Anel A é opcionalmente fenila substituída ou uma heteroarila de 5 a 6 membros opcionalmente substituída;0 Anel B é arila, heteroarila de 5 a 6 membros ou heterociclila de 5 a 6 membros, cada qual opcionalmente substituída por um ou mais substituintes representados por R3; e é opcionalmente substituído por (616s)alquila ou hídróxí(Ci-Cs)alquila.4. 6omposição farmacêutica de acordo com a reivindicação1, 2 ou 3, caracterizada pelo fato de que um composto é representado por uma fórmula estrutural selecionada do grupo que consiste em:Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 203/215
- 5/14
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:X1, X2, X3 e X4 são cada qual independentemente selecionado do grupo que consiste em N e CH, contanto que não mais do que dois de X1, X2, X3 e X4 seja N;X5 é NR2, O, ou S;o Anel B é arila, heteroarila de 5 a 6 membros ou heterociclila de 5 a 6 membros, cada qual opcionalmente substituída por um ou mais substituintes representados por R3;
é opcionalmente substituído por (CiCsjalquila ou hidr0xi(Ci-Co)alquila;cada R1 é independentemente selecionado do grupo que consiste em -halogênio, -CN, -NCA, -ORC, -NRaRb, -S(O)iRa, -NRaS(O)iRb, -S(O)iNRaRb, -C(=O)ORa, -0C(=0)0R3, -C(=S)ORa, -O(C=S)Ra, -C(=0)NR3Rb, -NR3C(=0)Rb, -CL-S)NRaRb, -NRaC(-S)Rb, -NRa(O0)0Rb, -0(O0)NRaRb, -NRa(OS)ORb, -0(OS)NRaRb, ~NRa(C™O)NRaRb! -NRa(OS)NRaRb, C(~S)Ra, -CC-OjRh, halo(Ci“C5)alquila e (Ci-Csjalquila, em que a (CiCs)alquila representada por R1 é opcionalmente substituída por ~CN, -NO2, -ORc, ”NRaRb, -S(O)iRa, -NRaS(O>Rb, -S(O)iNRaRb, -C(-O)OPA OC(O)ORa, -C(S)ORa, -O(C-S)Ra, -C(-O)NRaRb, -NRaC(-O)Rb, -C(“S)NRaRb, -NRaC(-S)Rb, -NRa(O0)0Rb, -0(O0)NRaRb, NRa(OS)ORb, -O(C~S)NRaRb, -NRa(O0)NRaRb, -NRa(C™S)NRaRbsPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 204/215 - 6/14-C(-S)Ra, ou -C(-O)Ra;R2 é -Η, Ci-5 alquila, fenila, -C(O)(Ci-5 alquila), -C(O)(fenila), -C(O)O(Ci-5 alquila), -C(O)O(fenila), -S(O)2(Ci-5 alquila) ou S(O)2(fenila), em que cada alquila nos grupos representados por R2 independentemente é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halogênio, hidróxi, ciano, fenila, heteroarila de 5 a 6 membros, (C1-C5) alcóxi, e halo(CiCsjalcóxi, e em que cada fenila nos grupos representados porR2 independentemente é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em halogênio, hidróxi, nitro, ciano, amino, (Ci-Csjalquila, halo(Ci-C5)alquila, (Ci-Cs)alcóxi e halo(Ci-C5)alcóxi;cada Ra e cada Rb são independentemente selecionados de -H e (Ci-Csjalquila opcionalmente substituída por hidroxila ou (Ci~ Csjalcóxi;Rc é -H, halo(Ci-C5)alquila ou (Ci-Csjalquila, em que a (C-iCs)alquila é opcionalmente substituída com hidroxila ou (Ci-Cs)alcóxi;i é 0, 1, ou 2; e n é 0, 1 ou 2.5. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação4, caracterizada pelo fato de que um composto é representado por uma fórmula estrutural selecionada do grupo que consiste em:
Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 205/215 - 7/14
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: o Anel B é arila, heteroarila de 5 a 6 membros ou heterocl· clila de 5 a 6 membros, cada qual opcionalmente substituída por um ou mais substituintes representados por R3; e
é opcionalmente substituído por (CrCsjalquila ou hidróxi(Ci”C5)alquila.6. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que o Anel B é se(R3), lecionado do grupo que consiste em
(R3),
cada R4 é -H, (Ci-Csjalquila, ou hidróxi (Ci-Csjalquila;cada p é independentemente 0 ou 1; e cada m é 0 ou 1, ou 2.7. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação6, caracterizada pelo fato de que o Anel B é selecionado do grupo que
- 8. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 7, caracterizada pelo fato de que:Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 206/2158/14 cada R1 é independentemente halogênio, (Ci-Csjalquila, halo(Ci“C5)alquila, (Ci-Csjalcóxi, halo(Ci-C5)alcóxi ou ciano;cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em -halogênio, -CN, -C(=NRe)NHRf, -C(=NRci)NReRí, -S(O)iNReRf, -C(“O)NReRf, -C(=S)NReRf, <XC-O)NReR; -O(C=S)NReRf, -NRd(O0)NReR;: NRd(C”S)NReRf, e (Ci-C5)alquila.
- 9. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 8, caracterizada pelo fato de que:cada R1 é independentemente halogênio ou (Ci-Csjalquila;cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em -halogênio, -CN, -C(=NRd)NReRf, -C(=O)NReRf, -C(=NRe)NHRf e (Ci-Cs)alquila.
- 10. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 8, caracterizada pelo fato de que:cada R1 é independentemente cloro, flúor ou metila;cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em cloro, fluoro, -CN, ~C(~NRd)NReRf, ~C(~O)NReRf e metila;
o grupo é opcionalmente substituído por metila ou hidroximetila. - 11. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 10, caracterizada pelo fato de que:cada R® e cada Rf são independentemente selecionados do grupo que consiste em ~H e metila; ou Re é -H e Rf é -(CaCejcicloalquila ou heterociclila contendo oxigênio de 4 a 6 membros cada qual opcionalmente substituída por (C1-C2) alquila.
- 12. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 10, caracterizada pelo fato de que:cada R® e cada Rf são independentemente selecionados doPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 207/2159/14 grupo que consiste em -H e metila; ou Re é -H e Rf é ciclopropila, ciclobutila ou oxetanila cada qual opcionalmente substituída por metila.
- 13. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 10, caracterizada pelo fato de que cada R3 é independentemente selecionado do grupo que consiste em cloro, fluoro, -CN, -C(O)NH(ciclopropila), -C(O)NH2, -C(O)NH(CH3), -C(O)N(CH3)2, , C(O)NH(ciclobuti-C(~NH)NHCH3, e metila.
- 14. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que R2 é -H ou (Ci-C5)alquila, preferivelmente, -H ou metila.
- 15. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o composto é6-[(3S)-4-[3-(6-fluoro~4~oxo~3H~quinazolin-2-il)propanoil]~3~ metil-piperazin-1 -il]piridina-3-carbonitrila ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
- 16. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o composto é6-[(3S)-4-[3-(5-fluoro-4-oxO“3H-quinazolin-2-il)propanoil]“3“ metil-piperazin-l -il]piridina-3-carbonitrila ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
- 17. Composto, caracterizado pelo fato de que é da seguinte fórmula estrutural:ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que:Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 208/21510/14R1 é F ou metila; e
- 18. Composto de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que:R1 é F; e R3é-CN.
- 19. Composto de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o composto é 6-[(3S)~4~[3~(6-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]-3-metil-piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
- 20. Composto de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o composto é 6-[(3S)-4-[3-(5-fluoro-4-oxo-3Hquinazolin-2-il)propanoil]-3-metil-piperazin-1-il]piridina-3-carbonitrila ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
- 21. Método para o tratamento de um indivíduo com uma doença que pode ser melhorada por inibição de poli(ADP~ ribose)polimerase (PARP), caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz da composição farmacêutica como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 17 a 20.
- 22. Método para o tratamento de um indivíduo com lesão renal aguda, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz da composição farmacêutica como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 17 a 20.
- 23. Método para o tratamento de um indivíduo com câncer, caracterizado peto fato de que compreende administrar ao indivíduoPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 209/21511/14 uma quantidade eficaz da composição farmacêutica como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, ou composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 17 a 20.
- 24. Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que a doença que pode ser melhorada por inibição de PARP é um distúrbio de estrutura muscular, um distúrbio de ativação neuronal, um distúrbio de fadiga muscular, um distúrbio de massa muscular, uma doença de oxidação beta, uma doença metabólica, um câncer, uma doença vascular, uma doença vascular ocular, uma doença ocular muscular, ou uma doença renal.
- 25. Método de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que:o distúrbio de estrutura muscular é selecionado de Miopatia de Bethlem, doença do núcleo central, disproporção do tipo de fibra congênita, distrofía muscular distai (MD), Duchenne & Becker MD, Emery-Dreifuss MD, MD facioescapuloumeral, miopatia corporal de hialina, MD da cintura, um distúrbio do canal de sódio muscular, condrodistrofia miotônica, distrofía miotônica, miopatia miotubular, doença de corpo nemalínico, MD oculofaríngeo, e incontinência urinária por estresse;o distúrbio de ativação neuronal é selecionado de esclerose lateral amiotrófica, Doença Charcot-Marie-Tooth, síndrome GuillainBarre, síndrome Lambert-Eaton, esclerose múltipla, miastenia grave, lesão de nervo, neuropatia periférica, atrofia muscular espinhal, paralisia tardia do nervo ulnar, e distúrbio mioneural tóxico;o distúrbio de fadiga muscular é selecionado de síndrome da fadiga crônica, diabetes (tipo I ou II), doença de armazenagem de glicogênio, fibromialgia, Ataxia de Friedreich, claudicação intermitente, miopatia de armazenagem de lipídeo, MELAS, mucopolissacaridose,Petição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 210/21512/14 doença de Pompe, e miopatia tirotóxica;o distúrbio de massa muscular é caquexia, degeneração de cartilagem, paraHsia cerebral, sindrome compartimental, miopatia de doença crítica, miosite de corpo de inclusão, atrofia muscular (disuse), sarcopenia, miopatia esteroide, lúpus eritematoso sistêmico;a doença de beta oxidação é selecionada de transportador de carnitina sistêmico, deficiência de carnitina palmitoiltransferase (CPT) II, deficiência de acil-CoA desidrogenase (LCHAD ou VLCAD) de cadeia muito longa, deficiência de enzima trifuncional, desificiência de acil-CoA desidrogenase de cadeia média (MCAD), deficiência de acil-CoA desidrogenase de cadeia curta (SCAD), e distúrbiosriboflavina-responsivos de β-oxidação (RR-MADD);a doença metabólica é selecionada de hiperlipidemia, dislipidemia, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hipocolesterolemia de HDL, hipercolesterolemia de LDL e/ou não colesterolemia de HLD, VLDL hiperproteinemia, dislipoproteinemia, apolipoproteins A-l hypoproteinemia, aterosclerose, doença de esclerose arterial, doença de sistemas cardiovasculares, doença cerebrovascular, doença circulatória periférica, síndrome metabólica, sindrome X, obesidade, diabetes (tipo I ou II), hiperglicemia, resistência à insulina, tolerância à glicose prejudicada, hiperinsulinismo, complicação diabética, insuficiência cardíaca, infarto cardíaco, cardiomiopatia, hipertensão, doença hepática graxa não alcoólica (NAFLD), Esteato-hepatite não alcoólica (NASH), trombo, doença de Alzheimer, doença neurodegenerativa, doença desmielinizante, esclerose múltipla, leucodistrofia adrenal, dermatite, psoríase, acne, envelhecimento da pele, tricose, inflamação, artrite, asma, síndrome do intestino hipersensível, colite ulcerativa, doença de Crohn, e pancreatite;a doença vascular é selecionada de insuficiência vascular periférica, doença vascular periférica, claudicação intermitente, doençaPetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 211/21513/14 vascular periférica (PVD), doença arterial periférica (PAD), doença oclusiva arterial periférica (PAOD), e arteriopatia obliterativa periférica;a doença vascular ocular é selecionada de degeneração macular relacionada com a idade (AMD), doença de Stargardt, retinopatia hipertensiva, retinopatia diabética, retinopatia, degeneração macular, hemorragia retinal, e glaucoma;a doença ocular muscular é selecionada de estrabismo, oftalmoplegia externa progressiva, esotropia, exotropia, um distúrbio de refração e acomodação, hipermetropia, miopia, astigmatismo, anisometropia, presbiopia, distúrbios de acomodação, e oftalmoplegia interna; e a doença renal é selecionada de glomerulonefrite, glomeruloesclerose, síndrome nefrótica, nefroesclerose hipertensiva, nefrite aguda, hematúria recorrente, hematúria persistente, nefrite crônica, nefrite rapidamente progressiva, insuficiência renal aguda, lesão renal crônica, nefropafia diabética, e síndrome de Bartter.
- 26. Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que a doença que pode ser melhorada por inibição de PARP é selecionada de lipodistrofia genética, doença hepática graxa não alcoólica (NAFLD), esteato-hepatite não alcoólica (NASH), lesão por isquemia/reperfusão renal (IRI), Distrofia muscular de Duchenne & Becker, diabetes (tipo I ou tipo II), obesidade, e sarcopenia.
- 27. Método de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que a doença que pode ser melhorada por inibição de PARP é selecionada de doença de Alpers, oftalmoplegia externa progressiva crônica-CPEO, Síndrome Kearns-Sayra (KSS), Neuropatia Ótica Hereditária de Leber (LHON), Miopatia MELAS-mitocondrial, encefalomiopatia, acidose lática, e episódios semelhantes ao acidente vascular cerebral, epilepsia MERRF-mioclônica e doença de fibra vermelha-esfarrapada, Fraqueza muscular neurogênica NARP, ataxia, ePetição 870190052975, de 11/06/2019, pág. 212/21514/14 retinite pigmentosa, Síndrome de Pearson, ototoxicidade induzida por quimioterapia com base em platina, Síndrome de Cockayne, xeroderma pigmentoso A, Degeneração Walleriana, e Lipodistrofia induzida por HIV.
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