CN110167926B - 聚-adp核糖聚合酶（parp）抑制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药物组合物，其包含药学上可接受的载体或稀释剂以及由以下结构式表示的化合物。本发明还涉及治疗患有可通过抑制聚(ADP‑核糖)聚合酶(PARP)而改善的疾病的受试者的方法。本文提供了变量的定义。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求于2016年12月30日提交的美国临时申请号 62/440,581的权益。上述申请的全部教导通过引用并入本文。
技术领域
本申请涉及聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂，特别是PARP-1 抑制剂，及其使用方法，例如治疗或预防一种或多种PARP相关疾病。
背景技术
核酶聚(ADP-核糖)聚合酶-1(PARP-1)是PARP酶家族的成员。这一不断发展的酶家族由PARP(例如：PARP-1、PARP-2、PARP-3 和Vault-PARP)组成。
PARP在DNA链断裂的修复中发挥作用，因此其抑制作用是癌症治疗的既定方法。当与DNA损伤治疗组合时，例如采用电离辐射或用DNA损伤剂如甲基化试剂、拓扑异构酶I抑制剂和其他化学治疗剂如顺铂和博来霉素治疗后，PARP抑制可为特别有效的。PARP 酶活性的抑制应导致肿瘤细胞对DNA损伤治疗的敏感性增强。据报道，PARP抑制剂对放射增敏(缺氧)肿瘤细胞有效，并有效预防肿瘤细胞在放射治疗后从DNA的潜在致死和亚致死损伤中恢复，可能是因为它们能够阻止DNA链断裂重新连接并影响若干DNA损伤信号通路。
PARP-2的抑制可以提供针对氧化应激的保护(参见Szanto等人， Cell Mol.LifeSci.69:4079(2012))。因此，PARP抑制剂可用于治疗以氧化应激为特征的疾病(例如，缺血-再灌注损伤、炎性疾病、烧伤、帕金森病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默氏病和毒性损伤)。
PARP-1和PARP-2是促炎性的(参见Rosado等人，Immunology 139:428(2013))。因此，它们的抑制可用于治疗例如哮喘、关节炎、结肠炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、动脉粥样硬化、心肌梗塞后贲门重塑、败血症、内毒素休克、失血性休克、移植物抗宿主病、脑脊髓炎和自身免疫性肾炎。
PARP抑制还可以防止病毒感染(参见Atasheva等人，J.Virol. 88:2116(2014)以及Virag和Szabo Pharmacol.Rev.54:375(2002))，例如，抗人免疫缺陷病毒1、委内瑞拉马脑炎病毒、单纯疱疹病毒、人乙型肝炎病毒和人巨细胞病毒感染(Virag和SzaboPharmacol.Rev. 54:375(2002))。
PARP参与葡萄糖稳态的控制(参见Bai和Canto Cell Metab. 16:290(2012)，Riffel等人，Nat.Rev.Drug Discovery 11:923(2012)和 Yeh等人，Diabetes 58:2476(2009)。例如，PARP-1抑制改善了葡萄糖处理和胰岛素敏感性(参见Bai和Canto CellMetab.16:290(2012) 和Pirinen等人，Cell Metab.19:1034(2014))。因此，PARP抑制可用于治疗疾病和病症，例如代谢综合征和II型糖尿病及其随后的并发症，例如糖尿病性神经、肾脏和眼部并发症。
因此，需要用于这些和其他治疗适应症的新的和改进的PARP抑制剂。
发明内容
申请人现已发现了作为PARP有效抑制剂的新化合物(参见实施例1-53)。特别地，它们相对于PARP-2具有针对PARP-1的选择性抑制活性(参见实施例54)。另外，已经证明这些PARP抑制剂中的某些可用于增加细胞中的NAD+的量(参见实施例55)。
在第一实施方式中，本发明提供了药物组合物，其包含药学上可接受的载体或稀释剂以及由以下结构式表示的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A为任选取代的苯基或任选取代的5-6元杂芳基；
环B为芳基，5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其各自任选地被一个或多个由R3表示的取代基取代；
“----”为不存在或为键；
当“----”为不存在时E为N或CH，或者当“-----”为键时E为 C；
每个R3独立地选自：-卤素，-CN，-NO2，-ORd，-NReRf，-S(O)iRe， -C(＝NRe)NReRf，-NReS(O)iRf，-S(O)iNReRf，-C(＝O)ORe，-OC(＝O)ORe， -C(＝S)ORe，-O(C＝S)Re，-C(＝O)NReRf，-NReC(＝O)Rf，-C(＝S)NReRf， -NReC(＝S)Rf，-NRe(C＝O)ORf，-O(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)ORf， -O(C＝S)NReRf，-NRe(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)NReRf，-C(＝S)Re， -C(＝O)Re，卤代(C1-C5)烷基和(C1-C5)烷基，其中由R3表示的所述(C1-C5) 烷基任选地被以下取代：-CN，-NO2，-ORe，-NReRf，-S(O)iRe， -NReS(O)iRf，-S(O)iNReRf，-C(＝O)ORe，-OC(＝O)ORe，-C(＝S)ORe， -O(C＝S)Re，-C(＝O)NReRf，-NReC(＝O)Rf，-C(＝S)NReRf，-NReC(＝S)Rf， -NRe(C＝O)ORf，-O(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)ORf，-O(C＝S)NReRf， -NRe(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)NReRf，-C(＝S)Re或-C(＝O)Re；
Rd为–H，卤代(C1-C5)烷基或(C1-C5)烷基，其中所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代；
每个Re独立地选自–H和(C1-C5)烷基，所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代；
每个Rf独立地选自–H，任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代的 (C1-C5)烷基，任选地被(C1-C2)烷基取代的(C3-C6)环烷基，以及任选地被(C1-C2)烷基取代的4-6元含氧杂环基；或者
–NReRf一起为任选地被(C1-C2)烷基取代的4-6元杂环基；或者
-C(＝NRe)NReRf一起为任选地被Re取代的4-6元杂环基；
R5为-H或(C1-C5)烷基；并且
i为0，1或2。
在第二实施方式中，本发明提供了根据前述实施方式的药物组合物，其中所述化合物由以下结构式表示：
或为其药学上可接受的盐，其中：
环A为任选取代的苯基或任选取代的5-6元杂芳基；
环B为芳基，5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其各自任选地被一个或多个由R3表示的取代基取代；
“----”为不存在或为键；
当“----”为不存在时E为N或CH，或者当“-----”为键时E 为C；
每个R3独立地选自-卤素，-CN，-NO2，-ORd，-NReRf，-S(O)iRe， -C(＝NRe)NReRf，-NReS(O)iRf，-S(O)iNReRf，-C(＝O)ORe，-OC(＝O)ORe， -C(＝S)ORe，-O(C＝S)Re，-C(＝O)NReRf，-NReC(＝O)Rf，-C(＝S)NReRf，-NReC(＝S)Rf，-NRe(C＝O)ORf，-O(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)ORf，-O(C＝S)NReRf，-NRe(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)NReRf，-C(＝S)Re， -C(＝O)Re，卤代(C1-C5)烷基和(C1-C5)烷基，其中由R3表示的所述(C1-C5) 烷基任选地被以下取代：-CN，-NO2，-ORe，-NReRf，-S(O)iRe， -NReS(O)iRf，-S(O)iNReRf，-C(＝O)ORe，-OC(＝O)ORe，-C(＝S)ORe， -O(C＝S)Re，-C(＝O)NReRf，-NReC(＝O)Rf，-C(＝S)NReRf，-NReC(＝S)Rf， -NRe(C＝O)ORf，-O(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)ORf，-O(C＝S)NReRf， -NRe(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)NReRf，-C(＝S)Re或-C(＝O)Re；
Rd为–H，卤代(C1-C5)烷基或(C1-C5)烷基，其中所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代；
每个Re独立地选自–H和(C1-C5)烷基，所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代；
每个Rf独立地选自–H，任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代的 (C1-C5)烷基，任选地被(C1-C2)烷基取代的(C3-C6)环烷基，以及任选地被(C1-C2)烷基取代的4-6元含氧杂环基；或者
–NReRf一起为任选地被(C1-C2)烷基取代的4-6元杂环基；或者
-C(＝NRe)NReRf一起为任选地被Re取代的4-6元杂环基，其中剩余变量(例如，i)为第一实施方式中所定义。
在第三实施方式中，本发明提供了根据第一或第二实施方式的药物组合物，其中所述化合物由以下结构式表示：
或为其药学上可接受的盐，其中：
环A为任选取代的苯基或任选取代的5-6元杂芳基；
环B为芳基，5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其各自任选地被一个或多个由R3表示的取代基取代；并且
在第四实施方式中，本发明提供了根据第一、第二或第三实施方式的药物组合物，其中所述化合物由选自以下的结构式表示：
或为其药学上可接受的盐，其中：
X1，X2，X3和X4各自独立地选自N和CH，条件是X1，X2， X3和X4中不多于两个为N；
X5为NR2，O或S；
环B为芳基，5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其各自任选地被一个或多个由R3表示的取代基取代；
每个R1独立地选自-卤素，-CN，-NO2，-ORc，-NRaRb，-S(O)iRa，-NRaS(O)iRb，-S(O)iNRaRb，-C(＝O)ORa，-OC(＝O)ORa，-C(＝S)ORa， -O(C＝S)Ra，-C(＝O)NRaRb，-NRaC(＝O)Rb，-C(＝S)NRaRb， -NRaC(＝S)Rb，-NRa(C＝O)ORb，-O(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)ORb， -O(C＝S)NRaRb，-NRa(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)NRaRb，-C(＝S)Ra， -C(＝O)Rb，卤代(C1-C5)烷基和(C1-C5)烷基，其中由R1表示的所述(C1-C5) 烷基任选地被以下取代：-CN，-NO2，-ORc，-NRaRb，-S(O)iRa，-NRaS(O)iRb，-S(O)iNRaRb，-C(＝O)ORa，-OC(＝O)ORa，-C(＝S)ORa， -O(C＝S)Ra，-C(＝O)NRaRb，-NRaC(＝O)Rb，-C(＝S)NRaRb， -NRaC(＝S)Rb，-NRa(C＝O)ORb，-O(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)ORb，-O( C＝S)NRaRb，-NRa(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)NRaRb，-C(＝S)Ra或-C(＝O)Ra；
R2为-H，C1-5烷基，苯基，-C(O)(C1-5烷基)，-C(O)(苯基)，-C(O)O(C1-5烷基)，-C(O)O(苯基)，-S(O)2(C1-5烷基)或-S(O)2(苯基)，其中由R2表示的基团中的每个烷基独立地任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素，羟基，氰基，苯基，5-6元杂芳基， (C1-C5)烷氧基和卤代(C1-C5)烷氧基，并且其中由R2表示的基团中的每个苯基独立地任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素，羟基，硝基，氰基，氨基，(C1-C5)烷基，卤代(C1-C5)烷基，(C1-C5)烷氧基和卤代(C1-C5)烷氧基；
每个Ra和每个Rb独立地选自–H和任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代的(C1-C5)烷基；
Rc为–H，卤代(C1-C5)烷基或(C1-C5)烷基，其中所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代；
i为0，1或2；并且
n为0，1或2，其中剩余变量(例如，R3)如第一、第二或第三实施方式中所定义。
在第五实施方式中，本发明提供了根据第一、第二、第三或第四实施方式的药物组合物，其中所述化合物由选自以下的结构式表示：
或为其药学上可接受的盐，其中：
环B为芳基，5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其各自任选地被一个或多个由R3表示的取代基取代；并且
在第六实施方式中，本发明提供了根据第一、第二、第三、第四或第五实施方式的药物组合物，其中环B选自
每个R4为–H，(C1-C5)烷基或羟基(C1-C5)烷基；
每个p独立地为0或1；并且
每个m为0或1或2，其中剩余变量(例如，R3)如第一、第二、第三、第四或第五实施方式中所定义。
在第七实施方式中，本发明提供了根据第六实施方式的药物组合物，其中环B选自
其中剩余变量如第一、第二、第三、第四、第五或第六实施方式中所定义。
在第八实施方式中，本发明提供了根据第四、第五、第六或第七实施方式的药物组合物，其中：
每个R1独立地为卤素，(C1-C5)烷基，卤代(C1-C5)烷基，(C1-C5) 烷氧基，卤代(C1-C5)烷氧基或氰基；
每个R3独立地选自-卤素，-CN，-C(＝NRe)NHRf，-C(＝NRd)NReRf， -S(O)iNReRf，-C(＝O)NReRf，-C(＝S)NReRf，-O(C＝O)NReRf， -O(C＝S)NReRf，-NRd(C＝O)NReRf，-NRd(C＝S)NReRf和(C1-C5)烷基，其中剩余变量如第一、第二、第三、第四、第五、第六或第七实施方式中所定义。
在第九实施方式中，本发明提供了根据第四、第五、第六、第七或第八实施方式的药物组合物，其中：
每个R1独立地为卤素或(C1-C5)烷基；
每个R3独立地选自-卤素，-CN，-C(＝NRd)NReRf，-C(＝O)NReRf， -C(＝NRe)NHRf和(C1-C5)烷基，其中剩余变量如第一、第二、第三、第四、第五、第六或第七实施方式中所定义。
在第十实施方式中，本发明提供了根据第四、第五、第六、第七或第八实施方式的药物组合物，其中：
每个R1独立地为氯，氟或甲基；
每个R3独立地选自氯，氟，-CN，-C(＝NRd)NReRf，-C(＝O)NReRf和甲基；
所述
基团任选地被甲基或羟甲基取代，其中剩余变量如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七或第八实施方式中所定义。
在第十一实施方式中，本发明提供了根据第六、第七、第八、第九或第十实施方式的药物组合物，其中每个Re和每个Rf独立地选自 -H和甲基；或者Re为-H且Rf为-(C3-C6)环烷基或4-6元含氧杂环基，其各自任选地被(C1-C2)烷基取代，其中剩余变量如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九或第十实施方式中所定义。
在第十二实施方式中，本发明提供了根据第六、第七、第八、第九或第十实施方式的药物组合物，其中每个Re和每个Rf独立地选自 -H和甲基；或者Re为-H且Rf为环丙基、环丁基或氧杂环丁烷基，其各自任选地被甲基取代，其中剩余变量如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十或第十一实施方式中所定义。
在第十三实施方式中，本发明提供了根据第六、第七、第八、第九或第十实施方式的药物组合物，其中每个R3独立地选自氯，氟，-CN，-C(O)NH(环丙基)，-C(O)NH2，-C(O)NH(CH3)，-C(O)N(CH3)2,
-C(O)NH(环丁基)，
-C(＝NH)NHCH3和甲基，其中剩余变量如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一或第十二实施方式中所定义。
在第十四实施方式中，本发明提供了根据第四实施方式的药物组合物，其中R2为–H或(C1-C5)烷基，优选地，为–H或甲基，其中剩余变量如第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二或第十三实施方式中所定义。
在第十五实施方式中，本发明提供了根据第一或第二实施方式的药物组合物，其中所述化合物为6-[(3S)-4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉 -2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈或其药学上其可接受的盐。
在第十六实施方式中，本发明提供了根据第一或第二实施方式的药物组合物，其中所述化合物为6-[(3R)-4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉 -2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈或其药学上可接受的盐。
在第十七实施方式中，本发明提供了根据第一或第二实施方式的药物组合物，其中所述化合物为6-[(3S)-4-[3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉 -2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈或其药学上可接受的盐。
在第十八实施方式中，本发明还包括示例或实施例55的表中公开的任一化合物。包括这些化合物的药学上可接受的盐和相应的化合物中性形式。
在第十九实施方式中，具有以下结构式的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1为F或甲基；且
R3为–CN，-C(＝NH)NHCH3，
或甲基。
在第二十实施方式中，本发明提供了根据第十九实施方式的化合物，其中：R1为F；且R3为–CN。
在第二十一实施方式中，本发明提供了根据第二十实施方式的化合物，其中所述化合物为6-[(3S)-4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基) 丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈或其药学上可接受的盐。
在第二十二实施方式中，本发明提供了根据第二十实施方式的化合物，其中所述化合物为6-[(3R)-4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基) 丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈或其药学上可接受的盐。
在第二十三实施方式中，本发明提供了根据第二十实施方式的化合物，其中所述化合物为6-[(3S)-4-[3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基) 丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈或其药学上可接受的盐。
术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内适用于与人和低等动物的组织接触而没有不适当的毒性、刺激性和过敏反应，并与合理的利益/风险比相称的药用盐。药学上可接受的盐在本领域中是众所周知的。例如，S.M.Berge等人在J.Pharm.Sci.，1977， 66，1–19中描述了药理学上可接受的盐。
本教导中包括本文公开的化合物的药学上可接受的盐。具有碱性基团的化合物可以与药学上可接受的酸形成药学上可接受的盐。本文所述化合物的合适的药学上可接受的酸加成盐包括无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸)和有机酸(例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、乙磺酸、甲磺酸、琥珀酸和和三氟乙酸)的盐。具有酸性基团例如羧酸的本教导的化合物可以与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。合适的药学上可接受的碱式盐包括铵盐、碱金属盐 (例如钠盐和钾盐)和碱土金属盐(例如镁盐和钙盐)。
本发明还提供了一种治疗患有可通过抑制聚(ADP-核糖)聚合酶 (PARP)而改善的疾病的受试者的方法，其包括向所述受试者施用有效量的一种或多种所公开的化合物或其药学上可接受的盐，或根据任一前述实施方式所述的药物组合物。
本文还提供了一种或多种所公开的化合物或其药学上可接受的盐，或根据任一前述实施方式所述的药物组合物用于制备用于治疗可通过抑制PARP而改善的疾病的药物的用途。
在本文提供的另一个实施方式中，所公开的化合物或其药学上可接受的盐，或根据任一前述实施方式所述的药物组合物用于治疗可通过抑制PARP而改善的疾病。
在一个实施方式中，本发明提供了一种治疗患有急性肾损伤的受试者的方法，其包括向所述受试者施用有效量的一种或多种所公开的化合物或其药学上可接受的盐，或根据任一前述实施方式所述的药物组合物。
本文还提供了一种或多种所公开的化合物或其药学上可接受的盐，或根据任一前述实施方式所述的药物组合物用于制备用于治疗急性肾损伤的药物的用途。
在本文提供的另一个实施方式中，所公开的化合物或其药学上可接受的盐，或根据任一前述实施方式所述的药物组合物用于治疗急性肾损伤。
在另一个实施方式中，本发明提供了一种治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向所述受试者施用有效量的一种或多种所公开的化合物或其药学上可接受的盐，或根据任一前述实施方式所述的药物组合物。
本文还提供了一种或多种所公开的化合物或其药学上可接受的盐，或根据任一前述实施方式所述的药物组合物用于制备用于治疗癌症的药物的用途。
在本文提供的另一个实施方式中，所公开的化合物或其药学上可接受的盐，或根据任一前述实施方式所述的药物组合物用于治疗癌症。
附图说明
图1显示PARP1抑制剂实施例29和实施例30在肾损伤的动物模型中降低24小后的血浆肌酸酐和血尿素氮(BUN)。
具体实施方式
定义
如本文所用的术语“卤代”是指卤素，并包括氯、氟、溴和碘。
单独使用或作为更大部分(例如“烷氧基”或“卤代烷基”等) 的一部分使用的术语“烷基”是指饱和脂族直链或支链一价烃基。除非另有说明，否则烷基通常具有1-5个碳原子，即，(C1-C5)烷基。如本文所用，“(C1-C5)烷基”基团是指具有呈直链或支链排列的1至5个碳原子的基团。实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基等。
术语“烷氧基”是指通过氧连接原子连接的烷基，由-O-烷基表示。例如，“(C1-C4)烷氧基”包括甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基。
术语“卤代烷基”和“卤代烷氧基”是指被一个或多个卤素原子取代的烷基或烷氧基，视情况而定。
术语“环烷基”是指单环饱和烃环系。例如，C3-6环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。除非另有说明，否则“环烷基”具有3-6 个碳原子。
单独使用或作为更大部分如“杂芳基烷基”或“杂芳基烷氧基”中的一部分使用的术语“杂芳基”、“杂芳族”、“杂芳基环”、“杂芳基基团”、“杂芳环”和“杂芳族基团”是指具有五个或六个环原子(即“5-6元”)的单环芳环基团，所述环原子选自碳以及至少一个(通常1至4个，更通常1或2个)杂原子(例如，氧、氮或硫)。
单环杂芳基的实例包括呋喃基(例如，2-呋喃基、3-呋喃基)、咪唑基(例如，N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基)、异噁唑基(例如，3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基)、噁二唑基(例如，2-噁二唑基、5-噁二唑基)、噁唑基(例如，2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基)、吡唑基(例如，3-吡唑基、4-吡唑基)、吡咯基(例如，1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基)、吡啶基(例如，2-吡啶基、 3-吡啶基、4-吡啶基)、嘧啶基(例如，2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基)、哒嗪基(例如，3-哒嗪基)，噻唑基(例如，2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基)、三唑基(例如，2-三唑基、5-三唑基)、四唑基 (例如，四唑基)、噻吩基(例如，2-噻吩基、3-噻吩基)、嘧啶基、吡啶基和哒嗪基。
术语“杂环基”是指含有4-6个环原子(即“4-6元”)的单环非芳族环基，所述环原子选自碳原子以及1或2个杂原子。每个杂原子独立地选自氮、季氮、氧化氮(例如NO)；氧；和硫，包括亚砜和砜。代表性的杂环基包括吗啉基、硫代吗啉基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、乙内酰脲基、戊内酰胺基、环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、四氢噻喃基等。“取代的杂环基”在任何一个或多个可取代的环原子上被取代，该环原子是与氢键合的环碳或环氮原子。
如本文所用，许多部分(例如，烷基、亚烷基、环烷基、亚环烷基、芳基、亚芳基、杂芳基、亚杂芳基、杂环基或亚杂环基)被称为“取代的”或“任选取代的”。当通过这些术语之一修饰某部分时，除非另有说明，否则它表示本领域技术人员已知可用于取代的该部分的任何部分可被取代，其包括一个或多个取代基。如果存在多于一个取代基，则可以独立地选择每个取代基。此种取代手段在本领域中是公知的和/或由本公开所教导。任选的取代基可以是适合与该部分连接的任何取代基。
合适的取代基是那些对化合物抑制PARP的能力没有显著不利影响的取代基。在没有具体列举合适的取代基的情况下，示例性的取代基包括但不限于：(C1-C5)烷基，(C1-C5)羟烷基，(C1-C5)卤代烷基，(C1-C5) 烷氧基，(C1-C5)卤代烷氧基，卤素，羟基，氰基，氨基，-CN，-NO2， -ORc，-NRaRb，-S(O)iRa，-NRaS(O)iRb，-S(O)iNRaRb，-C(＝O)ORa， -OC(＝O)ORa，-C(＝S)ORa，-O(C＝S)Ra，-C(＝O)NRaRb，-NRaC(＝O)Rb， -C(＝S)NRaRb， -NRaC(＝S)Rb，-NRa(C＝O)ORb，-O(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)ORb，-O( C＝S)NRaRb，-NRa(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)NRaRb，-C(＝S)Ra，-C(＝O)Ra，苯基或5-6元杂芳基。每个Ra和每个Rb独立地选自-H和(C1-C5)烷基，所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代；Rc为-H、(C1-C5) 卤代烷基或(C1-C5)烷基，其中所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3) 烷氧基取代。
本文所述的某些化合物可以各种立体异构或互变异构形式存在。立体异构体是仅在空间排列上不同的化合物。当公开的化合物通过结构命名或描述而没有表明立体化学时，应理解该名称或结构包括所有可能的立体异构体、几何异构体，包括基本上纯的立体异构体或几何异构体，及其组合。
在某些情况下，存在所公开化合物的互变异构形式，例如下面所示的互变异构结构：
应当理解，当本文的化合物由结构式表示或在本文中由化学名称表示时，该化合物可能存在的所有其他互变异构形式包括在该结构式中。
某些公开的化合物可以以各种立体异构形式存在。立体异构体是仅在空间排列方面不同的化合物。对映异构体是立体异构体对，其镜像不可重叠，最常见的是因为它们含有不对称取代的碳原子作为手性中心。“对映异构体”是指彼此呈镜像并且不可重叠的一对分子中的一个。非对映异构体是含有两个或多个不对称取代的碳原子的立体异构体。“几何异构体”是与碳-碳双键、碳环基环或桥连双环系统相关的取代基原子取向不同的立体异构体。
当通过名称或结构描绘几何异构体时，应理解，所命名或所描绘的几何异构体的几何异构体纯度为至少60％，70％，80％，90％，99 ％或99.9重量％纯。通过将混合物中所命名或所描绘的几何异构体的重量除以混合物中所有几何异构体的总重量来确定几何异构体纯度。
当通过结构命名或描绘所公开化合物的立体化学时，相对于所有其他立体异构体，所命名或所描绘的立体异构体的纯度为至少60％， 70％，80％，90％，99％或99.9重量％。相对于所有其他立体异构体的纯度重量百分比是一种立体异构体的重量与其他立体异构体的重量的比率。当通过结构命名或描绘单一对映体时，所描绘或命名的对映体为至少60％，70％，80％，90％，99％或99.9重量％的光学纯度(也称为“对映体纯的”)。光学纯度重量百分比是对映体重量与对映体重量加上其光学异构体重量的比值。
当所公开的化合物的立体化学通过结构命名或描绘，并且所命名或所描绘的结构包含多于一种立体异构体(例如，如在非对映异构体对中)时，应理解包含所涵盖的立体异构体之一或所涵盖的立体异构体的任何混合物。应进一步理解，相对于所有其它立体异构体，所命名或所描绘立体异构体的立体异构体纯度为至少60％，70％，80％， 90％，99％或99.9重量％纯。在这种情况下，通过将混合物中该名称或结构所包含的立体异构体的总重量除以混合物中所有立体异构体的的总重量来确定立体异构体纯度。
当公开的化合物通过结构命名或描述而未表明立体化学，并且该化合物具有一个手性中心时，应理解该名称或结构包括一种不含相应光学异构体的化合物对映体，该化合物的外消旋混合物以及相对于其相应光学异构体富含一种对映体的混合物。
当公开的化合物通过结构命名或描述而未表明立体化学，并且例如，该化合物具有至少两个手性中心时，应理解该名称或结构包括不含其他立体异构体的一种立体异构体，立体异构体的混合物，以及其中相对于其它立体异构体富集一种或多种立体异构体的立体异构体的混合物。例如，该名称或结构可包括一种不含其它非对映异构体的立体异构体，立体异构体的混合物，以及其中相对于其它非对映异构体富集一种或多种非对映异构体的立体异构体的混合物。
对映异构体和非对映异构体混合物可通过众所周知的方法拆分成其组分对映体或立体异构体，所述方法例如手性相气相色谱、手性相高效液相色谱、将化合物结晶为手性盐络合物或使化合物在手性溶剂中结晶。对映异构体和非对映异构体也可以通过众所周知的不对称合成方法从非对映异构或对映异构纯的中间体、试剂和催化剂中获得。
药物组合物
本文公开的化合物是PARP抑制剂(例如PARP-1抑制剂)。本发明的药物组合物包含一种或多种PARP抑制剂(例如PARP-1抑制剂)或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或稀释剂。
“药学上可接受的载体”和“药学上可接受的稀释剂”是指有助于将活性剂配制和/或施用于受试者和/或被受试者吸收，并且可以包括在本公开的组合物中而不会导致对受试者的显著不良毒理作用的物质。药学上可接受的载体和/或稀释剂的非限制性实例包括水、 NaCl、生理盐水溶液、乳酸林格氏液、普通蔗糖、普通葡萄糖、粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、包衣、甜味剂、调味剂、盐溶液(例如林格氏溶液)、醇类、油类、明胶类、碳水化合物如乳糖、直链淀粉或淀粉、脂肪酸酯、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷和颜料等。此类制剂可以灭菌，并且如果需要，可以与助剂混合，所述助剂例如润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、影响渗透压的盐、缓冲剂、着色剂和/或芳香物质等，其不会与本文提供的化合物发生有害反应或干扰其活性。本领域普通技术人员将认识到其他药物赋形剂适用于所公开的化合物。
本教导的药物组合物任选地包括一种或多种药学上可接受的载体和/或其稀释剂，例如乳糖、淀粉、纤维素和右旋糖。还可以包括其他赋形剂，如调味剂；甜味剂；防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯和丁酯。合适的赋形剂的更完整列表可以在Handbookof Pharmaceutical Excipients(第5版，Pharmaceutical Press(2005))中找到。本领域技术人员将知道如何制备适合于各种施用途径的制剂。用于选择和制备合适制剂的常规程序和成分描述于例如Remington's Pharmaceutical Sciences(2003-第20版)和1999年出版的The United States Pharmacopeia:The National Formulary(USP 24NF19)中。载体、稀释剂和/或赋形剂在与药物组合物的其他成分相容并且对其接受者无害的意义上是“可接受的”。
治疗方法
PARP参与多种细胞功能，包括DNA修复、线粒体稳态、抗氧化应激保护、炎症、代谢调节、昼夜节律、分化和衰老。参见，例如， Peter Bai，Molecular Cell 58:947(2015)。因此，PARP抑制剂具有治疗多种疾病的潜力，并且许多PARP抑制剂已被批准用于治疗癌症。
本发明提供了通过向受试者施用有效量的一种或多种所公开的化合物或其药学上可接受的盐，或相应的药物组合物来治疗患有可通过抑制PARP而改善的疾病的受试者的方法。
“受试者”是哺乳动物，优选人，但也可以是需要兽医治疗的动物，例如伴侣动物(例如，狗、猫等)、农场动物(例如，牛、羊、猪、马等)和实验室动物(例如，大鼠、小鼠、豚鼠等)。
在一个实施方式中，可以通过抑制PARP而改善的疾病是肌肉结构障碍、神经元激活障碍、肌肉疲劳障碍、肌肉质量障碍、β氧化疾病、代谢性疾病、癌症、血管疾病、眼血管疾病、肌肉性眼疾病或肾脏疾病。
在此实施方式的一个方面中，肌肉结构障碍选自Bethlem肌病、中央轴突症、先天性纤维型失衡、远端肌营养不良(MD)、Duchenne& Becke RMD、Emery-Dreifuss MD、面肩肱型MD、均质小体肌病、肢带型MD、肌肉钠通道障碍、肌强直性软骨营养不良、肌强直性营养不良、肌管肌病、杆状体病、眼咽MD和应激性尿失禁。
在该实施方式的另一个方面中，神经元激活障碍选自肌萎缩性侧索硬化症、腓骨肌萎缩症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton综合征、多发性硬化症、重症肌无力、神经损伤、周围神经病变、脊髓性肌萎缩症、迟发性尺神经麻痹和中毒性肌肉神经障碍。
在此实施方式的另一个方面中，肌肉疲劳障碍选自慢性疲劳综合征、糖尿病(I型或II型)、糖原贮积病、纤维肌痛、弗里德赖希共济失调、间歇性跛行、脂质贮积性肌病、MELAS、粘多糖贮积症、庞贝氏病或甲状腺功能亢进性肌病；
在此实施方式的另一个方面中，肌肉质量障碍为恶病质、软骨退化、脑瘫、间室症候群、危重病肌病、包涵体肌炎、肌萎缩(停用)、肌肉减少症、类固醇肌病和系统性红斑狼疮。
在此实施方式的另一个方面中，β氧化疾病选自系统性肉碱转运蛋白、肉碱棕榈酰转移酶(CPT)II缺乏症、极长链酰基辅酶A脱氢酶 (LCHAD或VLCAD)缺乏症、三功能酶缺乏症、中链酰基辅酶A脱氢酶(MCAD)缺乏症、短链酰基辅酶A脱氢酶(SCAD)缺乏症和核黄素反应性β氧化障碍(RR-MADD)。
在此实施方式的又一个方面中，代谢性疾病选自高脂血症、血脂异常、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、HDL低胆固醇血症、LDL 高胆固醇血症和/或HLD非胆固醇血症、VLDL高蛋白血症、异常脂蛋白血症、载脂蛋白A-I低蛋白血症、动脉粥样硬化、动脉硬化疾病、心血管系统疾病、脑血管病、外周血液循环疾病、代谢综合征、X综合征、肥胖症、糖尿病(I型或II型)、高血糖症、胰岛素抗性、葡萄糖耐量受损、高胰岛素血症、糖尿病并发症、心功能不全、心肌梗塞、心肌病、高血压、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)、血栓、阿尔茨海默病、神经退行性疾病、脱髓鞘疾病、多发性硬化症、肾上腺脑白质营养不良、皮炎、牛皮癣、痤疮、皮肤老化、毛发病、炎症、关节炎、哮喘、过敏性肠综合征、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病和胰腺炎。
在此实施方式的另一个方面中，血管疾病选自外周血管功能不全、外周血管疾病、间歇性跛行、外周血管疾病(PVD)、外周动脉疾病(PAD)、外周动脉闭塞性疾病(PAOD)和外周闭塞性动脉病。
在此实施方式的另一个方面中，眼血管疾病选自年龄相关性黄斑变性(AMD)、斯特格病、高血压性视网膜病、糖尿病性视网膜病、视网膜病、黄斑变性、视网膜出血和青光眼。
在此实施方式的另一个方面中，肌肉性眼疾病选自斜视、渐进性外眼肌麻痹、内斜视、外斜视、折射和适应障碍、远视、近视、散光、屈光参差症、老花眼、适应障碍和内部眼肌麻痹。
在此实施方式的最后方面中，肾脏疾病选自肾小球肾炎、肾小球硬化、肾病综合征、高血压性肾硬化、急性肾炎、复发性血尿、持续性血尿、慢性肾炎、急进性肾炎、急性肾衰竭(也称为急性肾损伤)、慢性肾衰竭、糖尿病肾病和巴特综合征。
在另一个实施方式中，可通过抑制PARP而改善的疾病包括遗传性脂肪代谢障碍、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)、肾缺血/再灌注损伤(IRI)、Duchenne&Becker肌营养不良症、糖尿病(I型或II型)、肥胖症和肌肉减少症。
在另一个实施方式中，可通过抑制PARP而改善的疾病包括阿尔珀氏病、CPEO-慢性进行性外部眼肌麻痹、Kearns-Sayra综合征(KSS)、 Leber遗传性视神经病变(LHON)、MELAS-线粒体肌病、脑肌病、乳酸酸中毒和中风样发作、MERRF-肌阵挛性癫痫和破碎红纤维病、 NARP-神经源性肌肉无力、共济失调和视网膜色素变性、皮尔森综合征、铂基化疗引起的耳毒性、Cockayne综合征、着色性干皮病A、华勒氏变性和HIV诱导的脂肪代谢障碍。在又一个实施方式中，可通过抑制PARP而改善的疾病是急性肾损伤。
在某些实施方式中，本发明提供了使用本发明化合物及其药物组合物的方法。本发明化合物及其药物组合物可用于多种治疗应用，包括例如治疗和/或减少多种疾病和病症，包括例如与衰老或应激有关的疾病或病症、糖尿病、肥胖症、神经退行性疾病、心血管疾病、血液凝固障碍、炎症、癌症和/或潮红等。该方法包括向有此需要的受试者施用药学有效量的一种或多种本发明化合物和/或其药物组合物。
在另一个实施方式中，本发明化合物及其药物组合物可用于治疗可用于移植或细胞疗法的细胞，包括例如实体组织移植物、器官移植物、细胞悬浮液、干细胞、骨髓细胞等。细胞或组织可以是自体移植物、同种异体移植物、同基因移植物或异种移植物。在施用/植入之前、与施用/植入同时和/或施用/植入受试者之后，可以使用本发明化合物及其药物组合物治疗细胞或组织。可以在从供体个体移除细胞之前、在从供体个体移除细胞或组织之后离体，或者在植入接受者之后处理细胞或组织。例如，供体或受体个体可以用本发明的烟酰胺核苷氯化物制剂或药物组合物全身治疗，或者可以具有用本发明化合物及其药物组合物局部治疗的细胞/组织的子集。在某些实施方式中，细胞或组织(或供体/受体个体)可另外地用另一种可用于延长移植物存活的治疗剂治疗，例如免疫抑制剂、细胞因子、血管生成因子等。
在其他实施方式中，本发明化合物和/或其药物组合物可用于治疗皮肤病症。可根据本文所述方法治疗的示例性皮肤病症包括与炎症、阳光损伤或自然衰老相关或由其引起的病症或疾病。例如，组合物可用于治疗接触性皮炎(包括刺激性接触性皮炎和过敏性接触性皮炎)、特应性皮炎(也称为过敏性湿疹)、光化性角化病、角化性疾病(包括湿疹)、大疱性表皮松解症(包括天疱疮)、剥脱性皮炎、脂溢性皮炎、红斑(包括多形红斑和结节性红斑)、由太阳或其他光源引起的损伤、盘状红斑狼疮、皮肌炎、牛皮癣、皮肤癌和自然衰老的影响。在另一个实施方式中，本发明化合物及其药物组合物可用于治疗创伤和/或烧伤以促进愈合，包括例如一级、二级或三级烧伤和/或热、化学或电烧伤。
本发明的化合物及其药物组合物还可以施用于受试者以治疗与细胞死亡有关的疾病，例如慢性疾病，以保护细胞免于细胞死亡。示例性的疾病包括与神经细胞死亡、神经元功能障碍或肌细胞死亡或功能障碍相关的疾病，例如帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、多发性硬化、肌萎缩侧索硬化和肌营养不良症；AIDS；暴发性肝炎；与脑退化有关的疾病，如Creutzfeld-Jakob病、色素性视网膜炎和小脑变性；骨髓增生异常如再生障碍性贫血；缺血性疾病如心肌梗塞和中风；肝脏疾病如酒精性肝炎、乙型肝炎和丙型肝炎；关节疾病如骨关节炎；动脉粥样硬化；脱发；紫外线对皮肤造成的伤害；扁平苔藓；皮肤萎缩；白内障；和移植物排斥。细胞死亡也可能由外科手术、药物治疗、化学暴露或辐射暴露引起。
本发明的化合物及其药物组合物还可以施用于患有急性疾病(例如器官或组织损伤)的受试者，例如患有中风或心肌梗塞的受试者或患有脊髓损伤的受试者。本发明的化合物及其药物组合物也可用于修复酒精肝。
在另一个实施方式中，本发明提供了通过向有此需要的受试者施用一种或多种本发明化合物和/或其药物组合物来治疗心血管疾病的方法。可使用本发明化合物及其药物组合物治疗的心血管疾病包括心肌病或心肌炎；例如特发性心肌病、代谢性心肌病、酒精性心肌病、药物诱发的心肌病、缺血性心肌病和高血压性心肌病。还可使用本文所述的组合物和方法治疗主要血管的动脉粥样化病症(大血管疾病)，所述主要血管例如主动脉、冠状动脉、颈动脉、脑血管动脉、肾动脉、髂动脉、股动脉和腘动脉。可以治疗的其他血管疾病包括与血小板聚集、视网膜小动脉、肾小球小动脉、神经滋养血管、心脏小动脉以及眼睛、肾脏、心脏以及中枢和外周神经系统的相关毛细血管床相关的血管疾病。本发明化合物及其药物组合物也可用于增加个体血浆中的 HDL水平。
施用方法和剂型
为受试者提供“有效量”的经施用化合物的精确量将取决于施用方式、癌症的类型和严重程度、以及受试者的特征，例如一般健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受性。技术人员将能够根据这些和其他因素确定合适的剂量。当与其他治疗剂组合施用时，例如当与抗癌剂组合施用时，任何另外的治疗剂的“有效量”将取决于所用药物的类型。合适的剂量对于经批准的治疗剂是已知的，并且可以由技术人员根据受试者的状况、所治疗的病症的类型以及所使用的本发明的化合物量而通过遵循例如在文献中报道以及在Physician’s Desk Reference(第57版，2003)中推荐的剂量来调节。
术语“有效量”是指当施用于受试者时产生有益或所需结果的量，所述结果包括临床结果，例如，与对照相比抑制、压制或减轻受试者中经治疗病症的症状。例如，治疗有效量可以以单位剂量形式给出(例如，每天0.1mg至约50g，或者每天1mg至约5g；或者在另一种情况下，每天10mg至1克)。
如本文所用，术语“施用”等是指可用于使组合物递送至所需生物作用位点的方法。这些方法包括但不限于关节内(关节中)、静脉内、肌肉内、瘤内、皮内、腹膜内、皮下、口服、局部、鞘内、吸入、透皮、直肠等。可与本文所述的药剂和方法一起使用的施用技术见于例如Goodman和Gilman，The Pharmacological Basis of Therapeutics，当前版本；Pergamon；和Remington’s，Pharmaceutical Sciences(当前版本)，Mack Publishing Co.，Easton，Pa。
此外，所公开的PARP抑制剂可与其他治疗剂共同施用。如本文所用，术语“共同施用”，“与......组合施用”及其语法等同物意在包括向单个受试者施用两种或更多种治疗剂，并且旨在包括其中药剂通过相同或不同的施用途径或在相同或不同的时间施用。在一些实施方式中，本文所述的一种或多种化合物将与其他药剂共同施用。这些术语包括向受试者施用两种或更多种药剂，使得药剂和/或其代谢物同时存在于受试者中。它们包括在单独的组合物中同时施用，在不同的组合物中在不同时间施用，和/或在其中存在两种药剂的组合物中施用。因此，在一些实施方式中，本文所述的化合物和其他药剂以单一组合物施用。在一些实施方式中，将本文所述的化合物和其他药剂混合在组合物中。
考虑到病例的详细情况(例如受试者、疾病、所涉及的疾病状态、特定治疗)，主治临床医生将选择特定的施用方式和给药方案。治疗可以包括每日或每日多次或少于每日(例如每周或每月等)剂量，持续数天至数月，甚至数年时间。然而，本领域普通技术人员将立即认识到使用所公开的PARP抑制剂(例如，PARP-1抑制剂)观察用于治疗PARP介导的疾病的经批准组合物的剂量的适当和/或等效剂量用于指导。
如本领域技术人员将理解的，取决于所选择的施用途径，本文教导的化合物或相应的药物组合物可以多种形式施用至患者。本教导的化合物可以例如通过口服、肠胃外、口腔、舌下、鼻、直肠、贴剂、泵或透皮施用而施用，并相应地配制药物组合物。肠胃外施用包括静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、经上皮、鼻、肺内、鞘内、直肠和局部施用方式。肠胃外施用可以通过在选定的一段时间内连续输注。
本发明的药物组合物配制成与其预期的施用途径相容。在一个实施方式中，根据常规程序将组合物配制成适合于对人类进行静脉内、皮下、肌肉内、口服、鼻内或局部施用的药物组合物。在优选的实施方式中，配制药物组合物用于静脉内施用。
通常，对于口服治疗施用，本教导的化合物可与赋形剂混合并以可摄入的片剂、口含片、锭剂、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂，圆片剂等形式使用。
通常，对于肠胃外施用，本教导的化合物的溶液通常可以在适当地与表面活性剂如羟丙基纤维素混合的水中制备。分散体也可以在甘油、液体聚乙二醇、DMSO及其与或不与醇的混合物、以及油中制备。在通常的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。
通常，对于可注射使用，用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的本文所述化合物的无菌水溶液或分散体以及无菌粉末是合适的。
实施例
示例
缩略语
Me 甲基
Et 乙基
Boc 叔丁氧羰基
Ac 乙酰基
Ph 苯基
Tf 三氟甲磺酰基
DIPEA 二异丙基乙胺
EDC 3-(3-二甲基氨基丙基)-1-乙基碳二亚胺
HOBt 1-羟基苯并三唑
DCM 二氯甲烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TMS 三甲基硅烷
TMSOTf 三氟甲磺酸三甲基硅酯
aq 水溶液
M 以mol/L表达的浓度
RT 室温
TLC 薄层色谱
HPLC 高效液相色谱
NMI 1-甲基咪唑
LCMS 液相色谱-质谱
ESI+ 质谱中的m/z值(离子化ESI)
ESI- 质谱中的m/z值(离子化ESI)
1H NMR(DMSO-d6) DMSO-d6中1H NMR中的峰的δ(ppm)
s 单峰(谱)
d 双重峰(谱)
t 三重峰(谱)
q 四重峰(谱)
dd 双双重峰(谱)
br 宽线(谱)
m 多重峰(谱)
4-ANI 4-氨基-1,8-萘二甲酰亚胺
ADP 腺苷二磷酸
CPM 每分钟计数
DNA 脱氧核糖核酸
DTT DL-二硫苏糖醇
FB 平底
mg 毫克
mM 毫摩尔
NAD 烟酰胺-腺嘌呤二核苷酸
nM 纳摩尔
ng 纳克
PARP 1 聚(ADP-核糖)聚合酶-1
SPA 闪烁迫近分析法
μCi 微居里
μL 微升
T3P 丙基膦酸酐
NMM 4-甲基吗啉
CDI 1,1’-羰基二咪唑
EtOAc 乙酸乙酯
TEMPO 2,2,6,6-四甲基-1-哌啶基氧基
MTBE 叔丁基甲基醚
HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b] 嘧啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐
IPA 异丙醇
DMA N,N-二甲基乙酰胺
BINAP 1,1′-联萘-2,2′-二基)双(二苯基膦
NMP 1-甲基-2-吡咯烷酮
Dppf 1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁
DMAP 4-(二甲基氨基)吡啶
DIEA N,N-二异丙基乙胺
实施例1–3-氯-4-(4-(3-(8-氯-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙酰基)哌嗪-1-基)-N-环丙基苯甲酰胺的合成
步骤-1:
在室温下向3-氯-2-硝基-苯甲酸(15g，0.074mol)在水(105mL)中的搅拌溶液中加入30％NH3水(6mL)和连二亚硫酸钠(52g，0.298mol) 的水溶液，并搅拌1h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用浓HCl(30mL)酸化直至pH＝3，用EtOAc(2x 500mL)萃取，用水(2x 100mL)和盐水(150mL)洗涤。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗产物，将其用Et2O(50mL)洗涤以提供灰白色固体状的2-氨基-3-氯苯甲酸(9g，70％)。
LCMS:m/z:172.3[M+H]+。
步骤-2:
将2-氨基-3-氯-苯甲酸(9g，0.052mol)和CDI(9g，0.055mol)在 DMF(180mL)中的搅拌溶液加热至70℃持续1h。然后加入30％NH3水(144mL)，维持温度为70℃并搅拌16h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物带至室温，倒入冰水(1L)中并用EtOAc(2x 250mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2x 100mL)、盐水(100mL)洗涤，经 Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗产物，将其用Et2O(2x 30mL) 洗涤以提供灰白色固体状的2-氨基-3-氯-苯甲酰胺(5.4g，60％)。
LCMS:m/z:171.3[M+H]+。
步骤:3
在0℃下，向置入密封管中的2-氨基-3-氯-苯甲酰胺(2g，11.76 mmol)溶于吡啶(15mL)中的搅拌溶液中加入DCM(5mL)中的4-溴丁酰氯(3.3g，17.64mmol)。将反应混合物加热至100℃并搅拌12h (TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物带至室温，用水(150mL)稀释并用EtOAc(2x 150mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和 NH4Cl水溶液(2x 50mL)、盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗化合物，将其用甲苯(20mL)、醚(2x10mL)洗涤以得到灰白色固体状的8-氯-2-(3-羟基丙基)-3H-喹唑啉-4-酮(600mg， 21％)。
LCMS:m/z:239.4[M+1]+。
步骤-4:
在室温下向8-氯-2-(3-羟基丙基)-3H-喹唑啉-4-酮(500mg，2.10 mmol)在ACN(10mL)中的搅拌溶液中加入TEMPO(65mg，0.414 mmol)和磷酸钠缓冲溶液(8mL，pH＝6.5)，并加热至40℃。然后在 40℃下分批加入亚氯酸钠(3.75g于15mL水中)和次氯酸钠溶液(4％于H2O中，15mL)。将反应混合物带至室温，用1N NaOH溶液碱化直至pH＝8，倒入1N Na2S2O3溶液(50mL)中，用MTBE(2x 25mL) 洗涤。将水层用1N HCl酸化直至pH＝1，并用EtOAc(3x50mL) 萃取。将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到3-(8-氯-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(250mg， 47％)，其未经任何进一步纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:253.3[M+1]+。
步骤-5:
在室温下向3-(8-氯-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(285mg，1.13 mmol)和3-氯-N-环丙基-4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(308mg，1.1mmol)在 DMF(2.6mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(432mg，2.26mmol)、 HOBt(305mg，2.26mmol)和DIPEA(0.96mL，5.65mmol)并搅拌12h (TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用冷水(50mL)稀释，用 EtOAc(3x 25mL)萃取。将合并的有机层用水(25mL)、盐水(25mL) 洗涤，经Na2SO4干燥，在减压下浓缩，并将残余物通过Teledyne-ISCO Combiflash(5-7％MeOH-DCM，4克柱芯)纯化以得到3-氯-4-(4-(3-(8- 氯-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙酰基)哌嗪-1-基)-N-环丙基苯甲酰胺(100mg，85％LCMS)，将其通过制备型HPLC进一步纯化以得到白色固体状的纯化合物(25mg，5％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]：δ12.54(brs，1H)，8.42(d，J＝ 3.9Hz，1H)，8.05-8.02(m，1H)，7.93–7.88(m，2H)，7.76(dd，J＝ 8.1，1.8Hz，1H)，7.42(t，J＝7.8Hz，1H)，7.16(d，J＝8.4Hz，1H)， 3.70(m，2H)，3.61(m，2H)，3.08–2.92(m，2H)，2.8–2.79(m，7H)， 0.71-0.62(m，2H)，0.60-0.52(m，2H)。
LCMS:m/z:514.4[M+H]+。
实施例2–3-氯-4-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺的合成
步骤-1:
在圆底烧瓶中装入3-氯-4-氟-苯甲酸(2.0g，11.4mmol)、硫酸(0.33 g，3.4mmol)、MeOH(20mL)并回流16h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物；将残余物用水(15mL)稀释并用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，40g， 10％EtOAc-己烷)纯化以得到淡黄色油状的3-氯-4-氟-苯甲酸甲酯(1.5 g，69％)。
1H NMR[300MHz，CDCl3]:δ8.08(dd，J＝6.9，2.1Hz，1H)， 7.94-7.89(m，1H)，7.18(t，J＝8.7Hz，1H)，3.90(s，3H)。
步骤-2:
将3-氯-4-氟-苯甲酸甲酯(1.5g，7.9mmol)加入密封管中，加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.48g，7.9mmol)，然后加入K2CO3(3.29g，23mmol) 和DMSO(15mL)，并在100℃下搅拌10h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物倒入冰冷水(150mL)中并用EtOAc(2x 100mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(2x 75mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，30 g，10％EtOAc-己烷)纯化以得到白色固体状的4-(2-氯-4-甲氧羰基-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.1g，74％)。
LCMS:m/z:355.4[M+H]+。
步骤-3:
向4-(2-氯-4-甲氧羰基-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2g，5.6mmol) 在THF:MeOH:H2O(10:1:1，24mL)中的搅拌溶液中加入LiOH·H2O (0.47g，11.2mmol)，在60℃下加热12h(TLC指示起始物料完全消耗)并在减压下浓缩。将残余物溶于水(30mL)中，冷却至0℃，用1NHCl酸化直至pH＝2-3。将沉淀的固体过滤并在真空中干燥以得到白色固体状的4-(4-叔丁氧羰基哌嗪-1-基)-3-氯-苯甲酸(1.4g，73％)。
LCMS:m/z:341.4[M+H]+。
步骤-4:
在氩气氛下向4-(4-叔丁氧羰基哌嗪-1-基)-3-氯-苯甲酸(0.5g，1.4 mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(0.42g，2.2 mmol)、HOBt·NH3(0.33g，2.2mmol)和DIPEA(0.75mL，4.4mmol)，并在室温下搅拌5h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物并将残余物用冰水(100mL)和EtOAc(150mL)稀释。将有机层分离，用盐水(2x 50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将粗残余物用Et2O(3x 5mL)、戊烷(3x5mL)洗涤，在高真空下干燥以得到白色固体状的4-(4-氨基甲酰基-2-氯-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.4g，80％)。
LCMS:m/z:340.4[M+H]+。
步骤-5:
向冷却至0℃的4-(4-氨基甲酰基-2-氯-苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 (0.4g，1.0mmol)在DCM(4mL)中的搅拌溶液中加入4N HCl-二噁烷 (0.4mL)，并在室温下搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物，将残余物用Et2O(3x 10mL)、戊烷(2x5mL)洗涤并在高真空下干燥以得到白色固体状的3-氯-4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(300 mg，定量)。
LCMS:m/z:240.4[M+H]+。
步骤-6:
在氩气氛下向3-氯-4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(0.1g，0.45mmol)在 DMF(1mL)中的搅拌溶液中加入3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸 (0.13g，0.50mmol)、HATU(0.26g，0.68mmol)和DIPEA(0.23mL， 1.37mmol)，并在室温下搅拌8h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物倒入冰冷水(10mL)中，在此期间沉淀出固体，将其过滤，用Et2O(3x 5mL)、戊烷(3x 5mL)、MeOH(2x 5mL)洗涤，在高真空下干燥以提供灰白色固体状的3-氯-4-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基) 丙酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(0.04g，20％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]：δ12.22(brs，1H)，8.07(dd，J ＝8.1，1.2Hz，1H)，7.98(brs，1H)，7.93(d，J＝1.8Hz，1H)，7.83-7.78 (m，2H)，7.76(d，J＝1.2Hz，1H)，7.74-7.48(m，1H)，7.47(brs， 1H)，7.44(d，J＝7.2Hz，1H),3.69-3.61(m，4H)，3.07-2.97(m，4H)，2.89(brs，4H)。
LCMS:m/z:440.4[M+H]+。
实施例3–3-氯-N-甲基-4-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪 -1-基]苯甲酰胺的合成
步骤-1:
向冷却至0℃的4-(4-叔丁氧羰基哌嗪-1-基)-3-氯-苯甲酸(0.5g， 1.4mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入CDI(0.35g，2.2mmol)，在室温下搅拌10分钟并加入甲胺溶液(1M THF溶液，1.46mL，1.4 mmol)。将反应混合物加温至室温，搅拌8h(TLC指示起始物料完全消耗)，倒入冰冷水(50mL)中并用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(50mL)、盐水(2x 50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将粗残余物用Et2O(3x 10mL)和戊烷(3x 10mL)洗涤，在高真空下干燥以提供淡棕色固体状的4-[2-氯-4-(甲基氨基甲酰基) 苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.4g，77％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]：δ8.44(br，1H)，7.88(d，J＝2.1 Hz，1H)，7.78-7.75(m，1H)，7.19(d，J＝8.4Hz，1H)，3.47(t，J＝ 4.2Hz，4H)，2.98(d，J＝4.8Hz，4H)，2.75(d，J＝4.5Hz，3H)， 1.42(s，9H)。
LCMS:m/z:354.4[M+H]+。
步骤-2:
向冷却至0℃的4-[2-氯-4-(甲基氨基甲酰基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.4g，1.0mmol)在DCM(4mL)中的搅拌溶液中加入4N HCl- 二噁烷(1.1mL)，加温至室温并搅拌5h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物，将残余物用Et2O(2x 5mL)和戊烷(2x5mL) 洗涤并在真空下干燥以得到白色固体状的3-氯-N-甲基-4-哌嗪-1-基- 苯甲酰胺(300mg，91％)。
LCMS:m/z:254.4[M+H]+。
步骤-3:
在氩气氛下向3-氯-N-甲基-4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(0.1g，0.45 mmol)在DMF(1mL)中的搅拌溶液中加入3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基) 丙酸(0.14g，0.50mmol)、HATU(0.26g，0.68mmol)和DIPEA(0.23 mL，1.37mmol)，并在室温下搅拌8h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物倒入冰水中并用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机萃取物分离，用水(30mL)、盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将粗残余物用Et2O(3x 5mL)、戊烷(3x 5mL)、10％ MeOH-DCM(3x 5mL)洗涤并在真空下干燥以得到灰白色固体状的 3-氯-N-甲基-4-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(0.04g，19％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]：δ12.21(brs，1H)，8.45-8.44(br， 1H)，8.07(dd，J＝7.8，1.2Hz，1H)，7.89(d，J＝2.1Hz，1H)，7.79-7.73 (m，2H)，7.57(d，J＝7.8Hz，1H)，7.47-7.42(m，1H)，7.18(d，J＝ 8.4Hz，1H)，3.69-3.59(m，4H)，3.07-2.97(m，4H)，2.89(br s，4H)， 2.76(d，J＝4.5Hz，3H)。
LCMS:m/z:454.4[M+H]+。
实施例4–3-氯-N-环丙基-4-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺的合成
步骤-1:
在室温和氩气氛下向3-氯-4-氟-苯甲酸(1g，5.73mmol)和环丙胺 (0.47mL，6.76mmol)在干燥DMF(10mL)中的搅拌溶液中加入 EDC·HCl(1.64g，8.56mmol)、HOBt(1.2g，8.89mmol)和NMM(3.1 mL，28.24mmol)并搅拌4h。反应完全(通过TLC监测)后，将反应混合物用冷水(25mL)稀释并搅拌15分钟。滤出所形成的固体，将其用水(50mL)洗涤并在真空下干燥以得到白色固体状的3-氯-N-环丙基 -4-氟-苯甲酰胺(0.85g，70％收率)。
LCMS:m/z:214.3[M+H]+。
步骤-2:
在室温和氩气氛下向3-氯-N-环丙基-4-氟-苯甲酰胺(3.1g，14.55 mmol)在干燥DMSO(25mL)中的搅拌溶液中加入哌嗪(6.26g，72.77 mmol)，并在120℃下搅拌30h(TLC指示起始物料完全消耗)。冷却至室温后，将反应物料用水(20mL)稀释并用10％IPA-DCM(5x 100mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物用Et2O(2x20mL)洗涤以得到白色固体状的3-氯-N-环丙基 -4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(3.9g，96％收率)。
LCMS:m/z:280.4[M+H]+。
步骤-3:
在室温和氩气氛下向3-氯-N-环丙基-4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(100 mg，0.36mmol)和3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(94mg，0.43mmol) 在干燥DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(103mg，0.54 mmol)、HOBt(73mg，0.54mmol)和DIPEA(0.2mL，1.15mmol)并搅拌4h。反应完全(通过TLC监测)后，将反应混合物用冷水(20mL)淬灭并搅拌15分钟。将形成的固体滤出，用水(50mL)然后是Et2O(2x 5mL)洗涤以得到白色固体状的化合物3-氯-N-环丙基-4-[4-[3-(4-氧代 -3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(80mg，47％收率)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]：δ12.31(brs，1H)，8.41(brs， 1H)，8.08(d，J＝8.1Hz，1H)，7.89(s，1H)，7.79-7.40(m，2H)， 7.57(d，J＝8.1Hz，1H)，7.45(t，J＝7.8Hz，1H)，7.17(d，J＝8.4Hz，1H)，3.69(s，2H)，3.62(s，2H)，3.07(s，2H)，2.97(s，2H)，2.88(s， 4H)，2.85-2.81(m，1H)，0.71-0.65(m，2H)，0.56-0.55(m，2H)。
LCMS:m/z:480.5[M+H]+。
实施例5–3-氯-N-环丁基-4-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺的合成
步骤-1:
在室温下向3-氯-4-氟-苯甲酸(500mg，2.865mmol)在DMF(5mL) 中的搅拌溶液中加入环丁烷胺盐酸盐(369mg，3.438mmol)、EDC·HCl (820mg，4.297mmol)、HOBt(580mg，4.297mmol)和NMM(1.6mL， 14.325mmol)并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用冷水(60mL)稀释并用EtOAc(3×60mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到3-氯-N- 环丁基-4-氟-苯甲酰胺(550mg，84％)，其未经任何进一步纯化即带至下一步骤。
LCMS:m/z:228.22[M+H]+。
步骤-2:
在室温下向3-氯-N-环丁基-4-氟-苯甲酰胺(550mg，2.422mmol) 在DMSO(5.5mL)中的搅拌溶液中加入哌嗪(1.04g，12.114mmol)并在 120℃下加热16h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物倒入冰冷水(40mL)中，沉淀出固体，将其在氩气氛下过滤以得到粗3-氯-N- 环丁基-4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(410mg，58％)。将粗物质未经任何纯化即带至下一步骤。
LCMS:m/z:294.39[M+H]+。
步骤-3
在室温下向3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(100mg，0.458mmol) 在DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入3-氯-N-环丁基-4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(134mg，0.458mmol)、EDC·HCl(131mg，0.687mmol)、HOBt(92 mg，0.687mmol)和DIPEA(0.16mL，0.916mmol)并搅拌16h(TLC指示起始物料完全消耗)，将反应混合物倒入冰水(20mL)中，在此期间沉淀出固体，将其过滤，用Et2O(20mL)洗涤并在真空下干燥以得到白色固体状的3-氯-N-环丁基-4-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(90mg，40％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]：δ12.2(s，1H)，8.60(d，J＝7.2 Hz，1H)，8.07(d，J＝7.7Hz，1H)，7.92(s，1H)，7.80-7.73(m，2H)， 7.56(d，J＝8.1Hz，1H)，7.45(t，J＝7.5Hz，1H)，7.17(d，J＝8.4Hz， 1H)，4.42-4.37(m，1H)，3.65(d，J＝22.5Hz，4H)，3.07(brs，2H)，2.97(brs，2H)，2.89(s，4H)，2.18(brs，2H)，2.07-1.98(m，2H)， 1.67-1.65(m，2H)。
LCMS:m/z:494.70[M+H]+。
实施例6–3-氯-N-(1-甲基环丙基)-4-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺的合成
步骤-1:
在室温下向3-氯-4-氟-苯甲酸(50mg，0.29mmol)在DMF(2mL) 中的搅拌溶液中加入1-甲基环丙胺盐酸盐(36mg，0.34mmol)、 EDC·HCl(82mg，0.429mmol)、HOBt(58mg，0.429mmol)和NMM (0.16mL，1.43mmol)并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(25mL)稀释，在此期间沉淀出固体，将其过滤。将固体用水(20mL)洗涤并在高真空下干燥以得到灰白色固体状的3-氯-4- 氟-N-(1-甲基环丙基)苯甲酰胺(50mg，78％)。
LCMS:m/z:228.19[M+H]+。
步骤-2:
将3-氯-4-氟-N-(1-甲基环丙基)苯甲酰胺(500mg，2.21mmol)和哌嗪(951mg，11.06mmol)在DMSO(5mL)中的搅拌溶液在120℃下加热16小时(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用EtOAc(200 mL)稀释，用水(1×100mL)和盐水溶液(1x 100mL)洗涤。将有机层分离，经Na2SO4干燥，在减压下除去挥发物以得到粗3-氯-N-(1-甲基环丙基)-4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(800mg)，将其未经纯化即带至下一步骤。
LCMS:m/z:294.35[M+H]+。
步骤-3:
在室温下向3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(300mg，1.37mmol) 在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入3-氯-N-(1-甲基环丙基)-4-哌嗪-1- 基-苯甲酰胺(604mg，2.06mmol)、T3P(0.87mL，2.75mmol，50％的 DMF溶液)和DIPEA(0.75mL，4.12mmol)并在室温下搅拌18小时 (TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用EtOAc(200mL)稀释，用水(1×100mL)和盐水溶液(1x 100mL)洗涤。将有机层分离，经 Na2SO4干燥，在减压下蒸发挥发物以得到粗化合物，将其通过制备型 HPLC纯化以得到白色固体状的3-氯-N-(1-甲基环丙基)-4-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(140mg，20％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]：δ12.20(brs，1H)，8.64(brs，1H)，8.07(d，J＝8.0Hz，1H)，7.87(s，1H)，7.76-7.75(m，2H)，7.57 (d，J＝8.0Hz，1H)，7.45(t，J＝8.0Hz，1H)，7.15(d，J＝8.4Hz， 1H)，3.69(brs，2H)，3.61(brs，2H)，3.06(brs，2H)，2.96(brs， 2H)，2.89(s，4H)，1.34(s，3H)，0.71(brs，2H)，0.60(brs，2H)。
LCMS:m/z:494.50[M+H]+。
实施例7–3-氯-N-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)-4-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺的合成
步骤-1:
在室温下向3-氯-4-氟-苯甲酸(500mg，2.86mmol)在DMF(5mL) 中的搅拌溶液中加入3-甲基氧杂环丁烷-3-胺盐酸盐(420mg，3.43 mmol)、EDC·HCl(820mg，4.29mmol)、HOBt(580mg，4.29mmol) 和NMM(1.6mL，14.32mmol)并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用EtOAc(200mL)稀释，用水(1×100mL)、盐水溶液(1x 100mL)洗涤。将有机层分离，经Na2SO4干燥，在减压下蒸发挥发物并将残余物通过柱色谱(100-200硅胶，7g，70％EtOAc-己烷)纯化以得到奶油色固体状的3-氯-4-氟-N-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基) 苯甲酰胺(610mg，87％)。
LCMS:m/z:244.14[M+H]+。
步骤-2:
在室温下向3-氯-4-氟-N-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)苯甲酰胺(600 mg，2.46mmol)在DMSO(6mL)中的搅拌溶液中加入哌嗪(1g，12.34 mmol)并在120℃下加热16h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用EtOAc(200mL)稀释，用水(1×100mL)、盐水溶液(1x 100 mL)洗涤。将有机层分离，经Na2SO4干燥，在减压下蒸发挥发物以得到粗3-氯-N-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)-4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(900 mg)，将其未经纯化即带至下一步骤。
LCMS:m/z:310.34[M+H]+。
步骤-3:
在室温下向3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(200mg，0.917mmol) 在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入3-氯-N-(3-甲基氧杂环丁烷-3- 基)-4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(425mg，1.37mmol)、T3P(0.58mL，1.83 mmol，50％DMF溶液)和DIPEA(0.5mL，2.75mmol)并搅拌18h(TLC 指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用EtOAc(100mL)稀释，用水(1×100mL)、盐水溶液(1x 100mL)洗涤。将有机层分离，经Na2SO4干燥，在减压下蒸发挥发物以得到粗化合物，将其通过制备型HPLC 纯化以得到白色固体状的3-氯-N-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)-4-[4-[3-(4- 氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(100mg，21％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.30(brs，1H)，8.86(brs，1H)， 8.08(dd，J＝8.1，1.2Hz，1H)，7.92(d，J＝1.8Hz,1H)，7.81-7.73(m， 2H)，7.57(d，J＝7.8Hz，1H)，7.47-7.42(m，1H)，7.19(d，J＝8.4Hz，1H)，4.69(d，J＝6.0Hz，2H)，4.36(d，J＝6.3Hz，2H)，3.70(brs，2H)，3.62(brs，2H)，3.08(brs，2H)，2.98(brs，2H)，2.90(s，4H)， 1.58(s，3H)。
LCMS:m/z:510.69[M+H]+。
实施例8–2-[3-氧代-3-(4-苯基-1-哌啶基)丙基]-3H-喹唑啉-4-酮的合成
步骤-1:
在室温和氩气氛下，在100mL烘箱干燥的双颈圆底烧瓶中装入镁屑(600mg，25mmol)和干燥THF(5mL)。向此混合物中加入碘(20 mg)，伴随剧烈搅拌加热至70℃，加入溴苯(1.57g，10mmol)在干燥 THF(5mL)中的溶液，维持温度为70℃并在氩气氛下继续1h。将反应混合物带至室温并在氩气氛下滴加至预先冷却(-50℃)的4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，5.0mmol)在干燥THF(5mL)中的溶液。使反应混合物升温至室温，搅拌1h(TLC指示起始物料完全消耗)，用饱和 NH4Cl水溶液(10mL)淬灭并用EtOAc(2x 50mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(10mL)、盐水(25mL)洗涤并经无水Na2SO4干燥。在减压下浓缩挥发物；将粗产物加入18％HCl水溶液(15mL)中并在100℃下加热3h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去溶剂并将残余物用Et2O(20mL)和EtOAc(20mL)洗涤以提供灰白色固体状的4- 苯基-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(700mg，71％)(吸湿性)。
LCMS:m/z:160.3[M+H]+。
步骤-2:
在室温和氩气氛下向4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(300mg， 1.53mmol)在MeOH(10mL)中的搅拌溶液中加入10％Pd-C(100 mg)。将反应混合物用H2冲洗(3次)并在H2气氛(气球)下搅拌4h。反应完成(通过LCMS监测)后，将反应混合物过滤通过Celite短垫并用MeOH(5mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩并将残余物用干燥醚(2x 5 mL)洗涤以得到灰白色固体状的4-苯基哌啶盐酸盐(300mg，99％)(吸湿性)。
LCMS:m/z:162.3[M+H]+。
步骤-3:
在室温和氩气氛下向3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(200mg， 0.917mmol)和4-苯基哌啶盐酸盐(217mg，1.1mmol)在干燥DMF(1.5 mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(264mg，1.375mmol)、HOBt(187 mg，1.38mmol)和Na2CO3(292mg，2.75mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18h(TLC指示起始物料完全消耗)，用冰冷水(15mL)淬灭并搅拌30分钟。将沉淀过滤，将固体用水(10mL)洗涤并在真空下干燥。将粗产物通过柱色谱(100-200硅胶，25g，5％MeOH-DCM)纯化以提供灰白色固体状的2-[3-氧代-3-(4-苯基-1-哌啶基)丙基]-3H-喹唑啉-4-酮(30mg，25％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.21(s，1H)，8.08(d，J＝6.6 Hz，1H)，7.79-7.73(m，1H)，7.57-7.52(m，1H)，7.48-7.43(m，1H)， 7.38-7.22(m，5H)，4.51(d，J＝12.6Hz，1H)，4.07(d，J＝13.8Hz， 1H)，3.14(t，J＝12.6Hz，4H)，2.94-2.81(m，3H)，2.64-2.57(m， 1H)，1.84-1.73(m，1H)，1.66-1.62(m，1H)，1.42-1.33(m，1H)。
LCMS:m/z:362.5[M+H]+。
实施例9–2-[3-氧代-3-(4-苯基哌嗪-1-基)丙基]-3H-喹唑啉-4-酮的合成
步骤-1:
在室温下向2-氨基苯甲酰胺(5g，36.76mmol)在AcOH(10mL) 中的搅拌溶液中加入琥珀酸酐(3.67g，36.76mmol)在AcOH(10mL) 中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌2h(TLC指示起始物料完全消耗)，用冷水(100mL)稀释并搅拌15分钟。将沉淀物过滤，用冷水(30mL)洗涤并在真空下干燥以得到白色固体状的4-(2-氨基甲酰基苯胺基)-4-氧代-丁酸(8g，92％)。
LCMS:m/z:237.4[M+H]+。
步骤-2:
将4-(2-氨基甲酰基苯胺基)-4-氧代-丁酸(8g，33.86mmol)和 NaOAc(2.78g，33.86mmol)在Ac2O(10mL)中的搅拌悬浮液在120℃下加热1h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物带至室温，用水(100mL)淬灭并缓慢加入1N NaOH溶液直至pH＝10。将所得混合物用EtOAc(30mL)洗涤，将水层分离并用AcOH酸化直至pH＝5，搅拌1h并过滤。将固体用己烷(3x 20mL)洗涤并在真空下干燥以得到3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(5.0g，68％)，将其未经纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:219.3[M+H]+。
步骤-3:
在室温和氩气氛下向3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(100mg， 0.458mmol)和1-苯基哌嗪(90mg，0.55mmol)在干燥DMF(1.5mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(132mg，0.687mmol)、HOBt(93mg， 0.688mmol)和Na2CO3(146mg，1.37mmol)。将反应混合物在室温和氩气下搅拌18h(TLC指示起始物料完全消耗)，用冰冷水(15mL)淬灭并搅拌30分钟。将沉淀物滤出，用水(10mL)洗涤并在真空下干燥。将粗产物通过柱色谱(100-200硅胶，50g，5％MeOH-DCM)纯化以提供灰白色固体状的2-[3-氧代-3-(4-苯基哌嗪-1-基)丙基]-3H-喹唑啉-4- 酮(33mg，20％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.21(s，1H)，8.07(dd，J＝1.2，8.1Hz，1H)，7.77-7.71(m，1H)，7.54(d，J＝7.8Hz，1H)，7.47-7.42 (m，1H)，7.23(t，J＝7.5Hz，2H)，6.92(d，J＝8.1Hz，2H)，6.81(t， J＝7.2Hz，1H)，3.67-3.57(m，4H)，3.20-3.06(m，4H)，2.89(s，4H)。
LCMS:m/z:363.5[M+H]+。
实施例10–2-[3-[4-(2-氯苯基)哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4- 酮的合成
步骤-1:
在室温和氩气氛下向1-氯-2-碘-苯(140mg，0.590mmol)和哌嗪-1- 羧酸叔丁酯(100mg，0.537mmol)在干燥甲苯(2mL)中的搅拌溶液中加入Xantphos(34mg，0.0590mmol)、Pd2(dba)3(24mg，0.0262mmol) 和Cs2CO3(261mg，0.80mmol)。将所得混合物在100℃下在CEM微波中辐照30分钟(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下蒸发溶剂并将残余物用水(20mL)稀释，用EtOAc(3x 20mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱(100-200硅胶，10g，5％EtOAc-己烷)纯化以得到灰白色固体状的4-(2-氯苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(100mg， 63％)。
1H NMR[300MHz，CDCl3]:δ7.37(dd，J＝7.8，1.2Hz，1H)， 7.22(td，J＝7.8，1.2Hz，1H)，7.02-6.96(m，2H)，3.60(t，J＝5.1Hz， 4H)，2.99(t，J＝5.1Hz，4H)，1.48(s，9H)。
步骤-2:
在0℃下向4-(2-氯苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(250mg，0.844mmol) 在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中滴加1,4-二噁烷中的4N HCl(0.9 mL，3.60mmol)。使反应混合物升温至室温并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物以得到粗化合物，将其用乙醚(2 x 20mL)洗涤，并在高真空下干燥以得到白色固体状的1-(2-氯苯基) 哌嗪盐酸盐(165mg，84％)。
步骤-3:
在室温下向1-(2-氯苯基)哌嗪盐酸盐(119mg，0.510mmol)和3-(4- 氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(111mg，0.509mmol)在干燥DMF(2mL) 中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(98mg，0.511mmol)、HOBt(69mg，0.510mmol)和DIPEA(0.18mL，1.03mmol)并搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用冷水(20mL)淬灭并搅拌15分钟。滤出所得沉淀物并将固体用Et2O(2x 5mL)洗涤以得到白色固体状的 2-[3-[4-(2-氯苯基)哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮(90mg， 44％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.20(s，1H)，8.08(dd，J＝7.8， 1.2Hz，1H)，7.76-7.73(m，1H)，7.57(d，J＝8.1Hz，1H)，7.48-7.41 (m，2H)，7.31-7.28(m，1H)，7.15-7.04(m，2H)，3.68(s，2H)，3.61 (s，2H)，3.00(s，4H)，2.89(s，4H)。
LCMS:m/z:397.30[M+H]+。
实施例11–6-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶 -3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温和氩气氛下向6-氯吡啶-3-甲腈(2g，14.43mmol)在DMA (20mL)中的搅拌溶液中加入K2CO3(3.4g，24.63mmol)、N-Boc-哌嗪(2.7g，14.50mmol)并搅拌3h。将反应混合物在60℃下加热3h(TLC 指示起始物料完全消耗)并倒入冰水(100mL)中，在此期间沉淀出固体，将其过滤，用Et2O(3x 10mL)、戊烷(3x 10mL)洗涤并干燥以得到4-(5-氰基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3g，73％)，其未经纯化即使用。
LCMS:m/z:289.3[M+H]+。
步骤-2:
向4-(5-氰基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.5g，1.736mmol)在 DCM中的搅拌溶液中滴加二噁烷中的4N HCl(0.5mL)并在室温和氩气氛下搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物在减压下浓缩以得到残余物，将其用Et2O(2x 5mL)、DCM(2x 5mL)、戊烷(2x 5mL)洗涤并在真空下干燥以得到6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(0.3g，93％收率)，其未经纯化即进行下一步骤。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ9.58(brs，2H)，8.54(d，J＝2.8 Hz，1H)，7.91-7.33(dd，J＝3.2，12.4Hz，1H)，7.02(d，J＝12.0Hz， 1H)，3.91(t，J＝6.8Hz，4H)，3.14(brs，4H)。
步骤-3:
在室温下向6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(0.2g，0.974mmol) 和3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(0.2g，0.913mmol)在DMF(2mL) 中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(0.35g，1.83mmol)、HOBt(0.24g， 1.83mmol)和DIPEA(0.8mL，4.59mmol)并搅拌8h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物倒入冰冷水(30mL)中并搅拌15分钟，在此期间沉淀出固体，将其过滤并通过柱色谱(100-200硅胶，10g，5％MeOH的DCM溶液)纯化以得到白色固体状的6-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(0.025g，20％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.02(s，1H)，8.51(d，J＝3.2 Hz，1H)，8.08-8.05(dd，J＝1.6，10.4Hz，1H)，7.90-7.86(dd，J＝3.2， 12.0Hz，1H)，7.77-7.71(m，1H)，7.54(d，J＝10.4Hz，1H)，7.47-7.41 (m，1H)，6.94(d，J＝12.0Hz，1H)，3.77-3.75(m，2H)，3.64(d，J ＝4.8Hz，4H)，3.57-3.56(m，2H)，2.89(s，4H)。
LCMS:m/z:389.61[M+H]+。
实施例12–6-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶 -3-羧酰胺的合成
在室温和氩气氛下向6-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(100mg，0.257mmol)在甲苯(1mL)中的搅拌溶液中加入H2SO4(127mg，1.285mmol)并在80℃下加热5h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物在减压下浓缩并与甲苯(3x5 mL)共蒸馏，用1N NaOH溶液碱化直至pH＝9，用10％MeOH-DCM (3x 10mL)萃取，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，15g，10％MeOH的DCM溶液)纯化以得到白色固体状的6-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基] 吡啶-3-甲酰胺(0.025g，20％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.02(s，1H)，8.63(d，J＝3.2 Hz，1H)，8.08-8.05(dd，J＝1.6,10.4Hz，1H)，8.00-7.96(dd，J＝3.2,12.0 Hz，1H)，7.79-7.71(m，2H)，7.54(d，J＝10.8Hz，1H)，7.44(t，J＝ 10.4Hz，1H)，7.17(s，1H)，6.86(d，J＝12Hz，1H)，3.69-3.64(m，4H)，3.56(s，4H)，2.89(s，4H)。
LCMS:m/z:407.5[M+H]+。
实施例13–6-[4-[3-(5-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基] 吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向2-氨基-6-甲基-苯甲酸(0.5g，3.31mmol)在DMF(5 mL)中的搅拌溶液中加入CDI(0.53g，3.31mmol)。将反应混合物在 80℃下加热2h并将氨水(25％，10mL)小心加至以上反应混合物，维持温度在80℃并继续4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物缓慢带至室温，用水(30mL)稀释并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2x 50mL)、盐水(40mL)洗涤，经 Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到将粗残余物，将其用Et2O(10mL) 洗涤并在高真空下干燥以得到白色固体状的2-氨基-6-甲基-苯甲酰胺(200mg，40％)。
LCMS(ESI+):m/z:151.09[M+H]+。
步骤-2:
在室温下向2-氨基-6-甲基-苯甲酰胺(0.2g，1.33mmol)在AcOH (3mL)中的搅拌溶液中加入琥珀酸酐并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物倒入冰冷水(5mL)中并搅拌30分钟。在此期间沉淀出固体。将固体过滤，用水(20mL)、冷丙酮(5mL)洗涤并在高真空下干燥以得到白色固体状的4-(2-氨基甲酰基-3-甲基-苯胺基)-4-氧代-丁酸(250mg，75％)。
LCMS(ESI+):m/z:251.50[M+H]+。
步骤-3:
将4-(2-氨基甲酰基-3-甲基-苯胺基)-4-氧代-丁酸(0.25g，1.0mmol) 加入2NNaOH水溶液(5mL)中并在100℃下搅拌2h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物缓慢冷却至0℃并用2N HCl水溶液酸化至pH＝3-4，在此期间沉淀出白色固体。将悬浮液在0℃下搅拌 30分钟，过滤，用水(20mL)、冷丙酮(2mL)洗涤并在高真空下干燥以提供灰白色固体状的3-(5-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(150 mg，64％)。
LCMS(ESI+):m/z:233.49[M+H]+。
步骤-4:
在室温下向3-(5-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(150mg，0.65 mmol)和6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(145mg，0.77mmol)在DMF (2mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.3mL，1.94mmol)和T3P(50％ EtOAc溶液，0.4mL，1.29mmol)并搅拌8h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(10mL)淬灭并用EtOAc(3x 40mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(3x 30mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，10g，5％MeOH-DCM)纯化以得到白色固体状的6-[4-[3-(5-甲基 -4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(60mg，27％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ11.98(brs，1H)，8.51(d，J＝2.1 Hz，1H)，7.88(dd，J＝9.0，2.1Hz 1H)，7.55(t，J＝7.8Hz，1H)， 7.34(d，J＝7.8Hz，1H)，7.16(d，J＝7.2Hz，1H)，6.93(d，J＝9.0 Hz，1H)，3.77-3.76(m，2H)，3.64-3.62(m，4H)，3.57-3.55(m，2H)， 2.88-2.83(m，4H)，2.75(s，3H)。
LCMS(ESI+):m/z:403.66[M+H]+。
实施例14–6-[4-[3-(6-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基] 吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向2-氨基-5-甲基-苯甲酸(100mg，0.66mmol)在THF(2 mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(189mg，0.99mmol)、HOBt·NH3 (149mg，0.99mmol)和DIPEA(0.35mL，1.99mmol)并搅拌1h(TLC 指示起始物料完全转化)。将反应混合物用EtOAc(1x 50mL)稀释，用水(1×20mL)和盐水溶液(1x 20mL)洗涤。将有机层分离，经 Na2SO4干燥，在减压下蒸发挥发物以得到粗残余物，将其通过 Combiflash Rf200Teledyne ISCO(100％EtOAc，12克柱芯)纯化以得到白色固体状的2-氨基-5-甲基-苯甲酰胺(70mg，70％)。
LCMS(ESI+):m/z:151.13[M+H]+。
步骤-2:
在室温下向2-氨基-5-甲基-苯甲酰胺(600mg，4.0mmol)在AcOH (6mL)中的搅拌溶液中加入琥珀酸琥珀酸酐(480mg，4.80mmol)并搅拌2h(TLC指示起始物料完全转化)。将反应混合物用冰冷水(1x 50 mL)稀释，搅拌30分钟，在此期间沉淀出固体，将其过滤，用水(1x50mL)，然后是冷丙酮(1x 20mL)洗涤，并在高真空下干燥以得到白色固体状的4-(2-氨基甲酰基-4-甲基-苯胺基)-4-氧代-丁酸(800mg， 80％)。
LCMS(ESI+):m/z:273.56[M+Na]+。
步骤-3:
将4-(2-氨基甲酰基-4-甲基-苯胺基)-4-氧代-丁酸(480mg，2.07 mmol)在2NNaOH水溶液(15mL)中的搅拌溶液在100℃下加热4h (TLC指示化合物4完全转化)。将反应混合物冷却至0℃，用AcOH 酸化直至pH＝5，在此期间沉淀出固体。将固体过滤，用水(1x80mL)，然后是冷丙酮(1x 20mL)洗涤，并在高真空下干燥以得到灰白色固体状的3-(6-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(380mg，85％)。
LCMS(ESI+):m/z:233.45[M+H]+。
步骤-4:
在室温下向3-(6-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(250mg， 1.077mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(289mg，1.293mmol)、T3P(50％DMF溶液，0.68mL，2.15 mmol)和DIPEA(0.57mL，3.23mmol)并搅拌6小时(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(1x 80mL)稀释，搅拌5分钟，此时沉淀出固体，将其过滤。将固体用水(1x 70mL)洗涤并在高真空下干燥以提供灰白色固体状的6-[4-[3-(6-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(170mg，39％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.10(brs，1H)，8.51(s，1H)， 7.90-7.87(m，2H)，7.56(d，J＝8.1Hz，1H)，7.44(d，J＝8.4Hz， 1H)，6.94(d，J＝9.3Hz，1H)，3.79-3.72(m，2H)，3.68-3.62(m，4H)， 3.59-3.54(m，2H)，2.87(s，4H)，2.41(s，3H)。
LCMS(ESI+):m/z:403.66[M+H]+。
实施例15–6-[4-[3-(7-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基] 吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向2-氨基-4-甲基-苯甲酸(300mg，1.99mmol)在THF(6 mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(569mg，2.98mmol)、HOBt·NH3 (447mg，2.98mmol)和DIPEA(1.06mL，5.96mmol)并搅拌1h(TLC 指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(30mL)稀释，用EtOAc(3 x 25mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗化合物，将其通过快速柱色谱(100-200硅胶，5g，50％EtOAc- 己烷)纯化以得到白色固体状的2-氨基-4-甲基-苯甲酰胺(190mg， 64％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ7.62(brs，1H)，7.42(d，J＝8.1 Hz，1H)，6.93(brs，1H)，6.54-6.46(m，3H)，6.30-6.27(m，1H)， 2.15(s，3H)。
步骤-2:
在室温下向2-氨基-4-甲基-苯甲酰胺(190mg，1.27mmol)在AcOH (5mL)中的搅拌溶液中加入琥珀酸酐(151mg，1.52mmol)并搅拌2h (TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(20mL)稀释，沉淀出固体，过滤并在真空下干燥以得到所需的4-(2-氨基甲酰基-5-甲基- 苯胺基)-4-氧代-丁酸(250mg，89％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.37(brs，1H)，11.88(s，1H)， 8.33(s，1H)，8.20(s，1H)，7.70(d，J＝8.1Hz，1H)，7.64(s，1H)， 6.91(d，J＝7.8Hz，1H)，2.53-2.50(m，4H)，2.31(s，3H)。
LCMS:m/z:273.50[M+Na]+。
步骤-3:
将4-(2-氨基甲酰基-5-甲基-苯胺基)-4-氧代-丁酸(250mg，1mmol) 加入2N NaOH(10mL)中并回流3h(TLC指示起始物料完全消耗)，冷却至0℃并用AcOH酸化直至pH＝4，在此期间沉淀出固体。将固体过滤并在真空下干燥以得到3-(7-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(220mg，95％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:233.45[M+H]+。
步骤-4:
在室温下向3-(7-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(150mg，0.65 mmol)和6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(173mg，0.78mmol)在DMF (4mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(185mg，0.97mmol)、HOBt(130 mg，0.97mmol)和DIPEA(0.46mL，2.58mmol)并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物倒入冷水(25mL)中，搅拌10分钟，在此期间沉淀出固体。将固体过滤，在真空下干燥，用Et2O(20mL) 和己烷(20mL)洗涤以获得灰白色固体状的6-[4-[3-(7-甲基-4-氧代 -3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(75mg，29％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.1(s，1H)，8.52(s，1H)，7.96-7.87(m，2H)，7.33(s，1H)，7.26(d，J＝8.1Hz，1H)，6.94(d， J＝9.3Hz，1H)，3.78(brs，2H)，3.65(brs，4H)，3.57(brs，2H)，2.87 (brs，4H)，2.39(s，3H)。
LCMS:m/z:403.69[M+H]+。
实施例16–6-[4-[3-(8-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基] 吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向2-氨基-3-甲基-苯甲酸(0.5g，3.31mmol)在THF(15 mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(0.948g，4.97mmol)、HOBt·NH3 (0.745g，4.97mmol)和DIPEA(1.76mL，9.93mmol)并搅拌6h(TLC 指示起始物料完全转化)。将反应混合物用水(30mL)稀释并用EtOAc (3x 100mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2x 50mL)、盐水(40mL) 洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物。将粗物料通过柱色谱(100-200硅胶，20g，50％EtOAc-己烷)纯化以得到白色固体状的2-氨基-3-甲基-苯甲酰胺(0.3g，60％)。
LCMS:m/z:151.09[M+H]+。
步骤-2:
在室温下向2-氨基-3-甲基-苯甲酰胺(0.3g，2.0mmol)在AcOH(3 mL)中的搅拌溶液中加入琥珀酸酐并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物倒入冰冷水(10mL)中并搅拌30分钟。在此期间沉淀出固体。将固体过滤，用水(20mL)、冷丙酮(5mL)洗涤并在高真空下干燥以得到白色固体状的4-(2-氨基甲酰基-6-甲基-苯胺基)-4-氧代-丁酸(280mg，56％)。
LCMS:m/z:251.48[M+H]+。
步骤-3:
将2NNaOH水溶液(5mL)中的4-(2-氨基甲酰基-6-甲基-苯胺基)-4-氧代-丁酸(0.28g，1.12mmol)在100℃下搅拌2h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物冷却至0℃并用2N HCl水溶液酸化直至pH＝3-4，在此期间沉淀出白色固体。将悬浮液在0℃下搅拌30分钟，过滤，用水(20mL)、冷丙酮(5mL)洗涤并在高真空下干燥以提供灰白色固体状的3-(8-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(180 mg，69％)。
LCMS:m/z:233.45[M+H]+。
步骤-4:
在室温下向3-(8-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(100mg，0.43 mmol)和6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(97mg，0.52mmol)在DMF(3 mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.23mL，1.29mmol)和T3P(0.27 mL，0.86mmol)并搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(10mL)淬灭并用EtOAc(3x 60mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(3x30mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物。将粗物料自乙腈(5mL)重结晶以得到白色固体状的6-[4-[3-(8-甲基-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(60mg，34％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.20(brs，1H)，8.51(d，J＝2.1 Hz，1H)，7.92-7.86(m，2H)，7.60(d，J＝6.9Hz，1H)，7.31(t，J＝ 7.5Hz，1H)，6.93(d，J＝9.0Hz，1H)，3.77-3.75(m，2H)，3.66-3.65 (m，4H)，3.59-3.57(m，2H)，2.90(s，4H)，2.46(s，3H)。
LCMS:m/z:403.68[M+H]+。
实施例17–6-[4-[3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基] 吡啶-3-甲腈的合成
在室温下向3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(250mg，1.054 mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(283mg，1.265mmol)、EDC·HCl(302mg，1.582mmol)、HOBt (213mg，1.582mmol)和DIPEA(0.56mL，3.164mmol)并搅拌7h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(1x 80mL)稀释，在室温下搅拌5分钟，在此期间沉淀出固体，将其过滤，用水(1x 70mL)洗涤，在高真空下干燥以提供淡黄色固体状的6-[4-[3-(5-氟-4-氧代-3H- 喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(120mg，23％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.20(brs，1H)，8.51(d，J＝2.1 Hz,1H)，7.88(dd，J＝9.3，2.4Hz，1H)，7.73-7.67(m，1H)，7.35(d， J＝8.1Hz，1H)7.21-7.15(m，1H)，6.94(d，J＝9.3Hz，1H)，3.81-3.74 (m，2H)，3.68-3.62(m，4H)，3.58-3.53(m，2H)，2.87(s，4H)。
LCMS:m/z:407.60[M+H]+。
实施例18–6-[4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基] 吡啶-3-甲腈的合成
在室温下向3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(100mg，0.42 mmol)和6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(95mg，0.51mmol)在DMF(2 mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.2mL，1.27mmol)和T3P(0.3mL， 0.85mmol)并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(10mL)淬灭并萃入EtOAc(3x 40mL)中。将合并的有机萃取物用冷水(3x30mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物。将粗物料通过柱色谱(100-200硅胶，10g，5％ MeOH-DCM)纯化以得到白色固体状的6-[4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(60mg，35％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.33(brs，1H)，8.51(d，J＝2.1 Hz，1H)，7.88(dd，J＝9.0，2.1Hz，1H)，7.74(d，J＝8.1Hz，1H)，7.64-7.62(m，2H)，6.93(d，J＝9.3Hz，1H)，3.77-3.56(m，8H)，2.88 (s，4H)。
LCMS:m/z:407.61[M+1]+。
实施例19–6-[4-[3-(7-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基] 吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向2-氨基-4-氟-苯甲酸(300mg，1.93mmol)在THF(6mL) 中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(553mg，2.90mmol)、HOBt·NH3(435 mg，2.90mmol)、DIPEA(1.03mL，5.79mmol)并搅拌1h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(25mL)稀释并用EtOAc(3x 20mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过快速柱色谱(100-200目硅胶，5g，50％EtOAc- 己烷)纯化以提供白色固体状的2-氨基-4-氟-苯甲酰胺(195mg，65％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ7.71(brs，1H)，7.61-7.56(m，1H)，7.07(brs，1H)，6.89(s，2H)，6.42(dd，J＝2.7，12.0Hz，1H)， 6.30-6.23(m，1H)。
步骤-2:
在室温下向2-氨基-4-氟-苯甲酰胺(195mg，1.26mmol)在AcOH (4mL)中的搅拌溶液中加入琥珀酸酐(151mg，1.51mmol)并搅拌2h (TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(20mL)稀释，在此期间沉淀出固体。将固体过滤，在真空下干燥以得到4-(2-氨基甲酰基 -5-氟-苯胺基)-4-氧代-丁酸(260mg，81％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.10(s，1H)，8.40-8.26(m， 3H)，7.92-7.87(m，1H)，7.79(brs，1H)，7.00-6.93(m，1H)，2.56-2.49 (m，4H)。
步骤-3:
将4-(2-氨基甲酰基-5-氟-苯胺基)-4-氧代-丁酸(250mg，0.98mmol) 在2N NaOH(10mL)中的搅拌溶液回流3h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物冷却至0℃，用AcOH酸化直至pH＝4，在此期间沉淀出固体。将固体过滤并在真空下干燥以得到3-(7-氟-4-氧代-3H- 喹唑啉-2-基)丙酸(210mg，90％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:237.43[M+H]+。
步骤-4:
在室温下向3-(7-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(150mg，0.63 mmol)和6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈；盐酸盐(174mg，0.76mmol)在 DMF(4mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(181mg，0.95mmol)、 HOBt(130mg，0.95mmol)和DIPEA(0.45mL，2.54mmol)并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物倒入冷水(25mL)中，在此期间沉淀出固体。将固体过滤，在真空下干燥并用Et2O(20mL)、己烷(20mL)、戊烷(20mL)、EtOAc(15mL)洗涤，并在真空下再次干燥以提供灰白色固体状的6-[4-[3-(7-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(110mg，43％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.30(s，1H)，8.51(d，J＝2.1 Hz，1H)，8.15-8.10(m，1H)，7.88(dd，J＝2.4，9.6Hz，1H)，7.33-7.27 (m，2H)，6.94(d，J＝9.0Hz，1H)，3.80-3.73(m，2H)，3.69-3.61(m，4H)，3.59-3.53(m，2H)，2.89(s，4H)。
LCMS:m/z:407.61[M+H]+。
实施例20–6-[4-[3-(8-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基] 吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向2-氨基-3-氟-苯甲酸(400mg，2.57mmol)在THF(10 mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(738mg，3.86mmol)、HOBt·NH3 (580mg，3.86mmol)和DIPEA(1.38mL，7.73mmol)并搅拌4h(TLC 指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(30mL)稀释并用EtOAc (3x 40mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗化合物，将其通过快速柱色谱(100-200目硅胶，5g，50％ EtOAc-己烷)纯化以提供白色固体状的2-氨基-3-氟-苯甲酰胺(250mg， 63％)。
LCMS:m/z:155.42[M+H]+。
步骤-2:
在室温下向2-氨基-3-氟-苯甲酰胺(250mg，1.62mmol)在AcOH (5mL)中的搅拌溶液中加入琥珀酸酐(389mg，3.89mmol)并搅拌2h (TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(20mL)稀释，在此期间沉淀出固体。将固体过滤并在真空下干燥以得到4-(2-氨基甲酰基 -6-氟-苯胺基)-4-氧代-丁酸(400mg，97％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:255.42[M+H]+。
步骤-3:
将4-(2-氨基甲酰基-6-氟-苯胺基)-4-氧代-丁酸(400mg，1.57mmol) 加入2NNaOH(10mL)中并在100℃下加热3h(TLC指示起始物料完全消耗)。反应完成后，将反应混合物冷却至0℃，用AcOH酸化直至pH＝4，在此期间沉淀出固体。将固体过滤并在真空下干燥以得到 3-(8-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(250mg，67％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:237.39[M+H]+。
步骤-4:
在室温下向3-(8-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(150mg，0.63 mmol)和6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(170mg，0.76mmol)在DMF (4mL)中的搅拌溶液中加入T3P(0.3mL，0.95mmol)和DIPEA(0.45 ml，2.54mmol)并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物倒入冷水(25mL)中，在此期间沉淀出固体。将固体过滤，在真空下干燥，用己烷(30mL)、氯仿(30mL)洗涤，并在真空下再次干燥以提供灰白色固体状的6-[4-[3-(8-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基] 哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(80mg，23％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ8.51(d，J＝2.1Hz，1H)， 7.90-7.87(m，2H)，7.65-7.59(m，1H)，7.46-7.39(m，1H)，6.93(d， J＝9.0Hz，1H)，3.77(brs，2H)，3.64(brs，4H)，3.57(brs，2H)，2.90 (s，4H)。
LCMS:m/z:407.61[M+H]+。
实施例21–6-[4-[3-(4-氧代-3H-吡啶并[3,2-d]嘧啶-2-基)丙酰基]哌嗪 -1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向3-氨基吡啶-2-甲酰胺(0.3g，2.19mmol)在AcOH(3 mL)中的搅拌溶液中加入琥珀酸酐(0.26g，2.63mmol)并搅拌4h(TLC 指示起始物料完全消耗)。将反应混合物倒入冰冷水(5mL)中并搅拌 30分钟，在此期间沉淀出固体。将固体过滤，用水(10mL)、冷丙酮 (5mL)洗涤并在高真空下干燥以提供4-[(2-氨基甲酰基-3-吡啶基)氨基]-4-氧代-丁酸(320mg，61％)，其未经任何纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:238.41[M+H]+。
步骤-2:
将4-[(2-氨基甲酰基-3-吡啶基)氨基]-4-氧代-丁酸(300mg，1.27 mmol)加入2NNaOH水溶液(5mL)中并在100℃下搅拌2h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物冷却至0℃并用2N HCl水溶液酸化至pH＝3-4，在此期间沉淀出白色固体。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟。将固体过滤，用水(10mL)、冷丙酮(4mL)洗涤，并在高真空下干燥以得到3-(4-氧代-3H-吡啶并[3,2-d]嘧啶-2-基)丙酸 (200mg，72％)，其未经任何纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:220.46[M+H]+。
步骤-3:
在室温下向3-(4-氧代-3H-吡啶并[3,2-d]嘧啶-2-基)丙酸(100mg， 0.46mmol)和6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(104mg，0.55mmol)在DMF(3mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.3mL，1.37mmol)和T3P (0.23mL，0.92mmol)并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(10mL)淬灭并用EtOAc(3x 40mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(3x20mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物。将粗物料通过柱色谱(100-200硅胶，10 g，5％MeOH-DCM)纯化以得到白色固体状的6-[4-[3-(4-氧代-3H-吡啶并[3,2-d]嘧啶-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(60mg，36％)。
1H NMR[400MHz DMSO-d6]:δ12.50(brs，1H)，8.71(dd，J＝ 4.0，1.2Hz，1H)，8.50(d，J＝2.0Hz，1H)，7.95(dd，J＝8.4， 1.6Hz，1H)，7.88(dd，J＝9.2，1.6Hz，1H)，7.73(dd，J＝8.0，4.0 Hz，1H)，6.93(d，J＝9.2Hz，1H)，3.77-3.75(m，2H)，3.66-3.63(m， 4H)，3.57-3.55(m，2H)，2.90(s，4H)。
LCMS:m/z:390.69[M+H]+。
实施例22–6-[4-[3-(4-氧代-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)丙酰基]哌嗪 -1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向3-氨基吡啶-4-甲酰胺(300mg，2.18mmol)在AcOH(6 mL)中的搅拌溶液中加入琥珀酸酐(262mg，2.62mmol)并搅拌22h (TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(20mL)稀释，在此期间沉淀出固体。将固体过滤并在真空下干燥以获得4-[(4-氨基甲酰基-3-吡啶基)氨基]-4-氧代-丁酸(430mg，83％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:238.52[M+H]+。
步骤-2:
将4-[(4-氨基甲酰基-3-吡啶基)氨基]-4-氧代-丁酸(430mg，1.81 mmol)加入2NNaOH(8.6mL)中并回流4h(TLC指示起始物料完全消耗)。反应完成后，将反应混合物冷却至0℃，用AcOH酸化直至 pH＝4，在此期间沉淀出固体。将固体过滤并在真空下干燥以提供 3-(4-氧代-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)丙酸(380mg，96％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:220.42[M+H]+。
步骤-3:
在室温下向3-(4-氧代-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)丙酸(200mg， 0.91mmol)和6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(245mg，1.09mmol)在 DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入T3P(0.87mL，1.36mmol)、DIPEA (0.64mL，3.65mmol)并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物稀释(30mL)，用EtOAc(3×15mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗化合物，将其通过柱色谱(100-200目硅胶，4g，5％MeOH-DCM)纯化以得到白色固体状的 6-[4-[3-(4-氧代-3H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3- 甲腈(45mg，13％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.55(s，1H)，8.94(s，1H)， 8.59(d，J＝4.8Hz，1H)，8.51-8.50(m，1H)，7.91-7.87(m，2H)，6.94 (d，J＝9.2Hz，1H)，3.77(brs，2H)，3.65(brs，4H)，3.56(brs，2H)， 2.92(brs，4H)。
LCMS:m/z:390.70[M+H]+。
实施例23–6-[4-[3-(4-氧代-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向2-氨基噻吩-3-甲酰胺(300mg，2.11mmol)在乙酸(3 mL)中的搅拌溶液中加入琥珀酸酐(253mg，2.53mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h(TLC指示起始物料完全消耗)。然后将反应混合物用水(20mL)稀释并形成沉淀。将混合物过滤并将获得的固体在真空下干燥以提供4-[(3-氨基甲酰基-2-噻吩基)氨基]-4-氧代-丁酸(410 mg，69％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.20(s，1H)，12.14(s，1H)， 7.89(s，1H)，7.50(brs，1H)，7.39(d，J＝5.6Hz，1H)，6.93(d，J＝ 6.0Hz，1H)，2.67(t，J＝6.4Hz，2H)，2.56(t，J＝6.8Hz，2H)。
LCMS:m/z:265.40[M+Na]+。
步骤-2:
在室温下将4-[(3-氨基甲酰基-2-噻吩基)氨基]-4-氧代-丁酸(350 mg，1.44mmol)悬浮在2N NaOH(7mL)中。将所得混合物在100℃下加热4h(TLC指示起始物料完全消耗)。反应完成后，将反应混合物冷却至0℃，用AcOH酸化(pH＝4)。形成固体，将其通过过滤收集并在真空下干燥以得到3-(4-氧代-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-2-基)丙酸 (290mg，90％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:225.38[M+H]+。
步骤-3:
在室温下向3-(4-氧代-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-2-基)丙酸(200mg， 0.89mmol)和6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(239mg，1.07mmol)在 DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入T3P(0.85mL，1.33mmol)、DIPEA (0.62mL，3.568mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物稀释(30mL)，用EtOAc(3×30mL) 萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，在减压下蒸发溶剂以得到粗化合物。将获得的粗品通过柱色谱(100-200硅胶，4g，5％MeOH-DCM) 纯化以得到白色固体状的6-[4-[3-(4-氧代-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-2-基) 丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(80mg，22％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.38(s，1H)，8.50(d，J＝2.0 Hz，1H)，7.88(dd，J＝2.4，9.2Hz，1H)，7.45(d，J＝6.0Hz，1H)， 7.32(d，J＝5.6Hz，1H)，6.93(d，J＝9.2Hz，1H)，3.77-3.74(m， 2H)，3.65-3.62(m，4H)，3.57-3.55(m，2H)，2.92-2.84(m，4H)。
LCMS:m/z:395.62[M+H]+。
实施例24–6-[4-[3-(4-氧代-3H-噻吩并[3,2-d]嘧啶-2-基)丙酰基]哌嗪 -1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
将3-氨基噻吩-2-羧酸甲酯(2g，12.72mmol)在1M氢氧化钠(14 mL，14mmol)中的搅拌溶液在100℃下加热2h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物带至室温，用1N HCl酸化直至pH＝2并用50％THF-EtOAc(2x 100mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗产物，将其用正戊烷(2x 20mL)洗涤以得到3-氨基噻吩-2-羧酸(1.4g，77％)，其未经任何纯化即用于下一步骤。
LCMS(ESI+):m/z:144.30[M+H]+。
步骤-2:
将3-氨基噻吩-2-羧酸(1g，6.99mmol)和CDI(1.24g，7.69mmol) 在THF(20mL)中的溶液在60℃下加热1h，然后加入25％氨水溶液(16mL)并在60℃下继续3h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物带至室温并用EtOAc(2x 75mL)萃取；将合并的有机萃取物用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，20g，50-75％EtOAc-己烷)纯化以提供灰白色固体状的3-氨基噻吩-2-甲酰胺(400mg，40％)。
LCMS(ESI+):m/z:143.33[M+H]+。
步骤-3:
向3-氨基噻吩-2-甲酰胺(390mg，2.74mmol)在AcOH(10mL) 中的搅拌悬浮液中加入琥珀酸酐(277mg，2.77mmol)并在室温下搅拌 2h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(40mL)淬灭，搅拌15分钟，过滤沉淀物，用水(10mL)洗涤并干燥以获得白色固体状的4-[(2-氨基甲酰基-3-噻吩基)氨基]-4-氧代-丁酸(585mg，88％)。
LCMS(ESI+):m/z:243.40[M+H]+。
步骤-4:
将4-[(2-氨基甲酰基-3-噻吩基)氨基]-4-氧代-丁酸(500mg，2.07 mmol)在2N氢氧化钠溶液(16mL，32mmol)中的溶液在80℃下搅拌2h(LCMS指示起始物料完全消耗)。将反应混合物带至室温，用 AcOH酸化直至pH＝5，过滤白色沉淀物，用水(20mL)洗涤，在减压下干燥以得到白色固体状的3-(4-氧代-3H-噻吩并[3,2-d]嘧啶-2-基)丙酸(330g，72％)。
LCMS(ESI+):m/z:225.42[M+H]+。
步骤-5:
在室温下向3-(4-氧代-3H-噻吩并[3,2-d]嘧啶-2-基)丙酸(200mg， 0.89mmol)、6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(240mg，1.07mmol)和 DIPEA(0.31mL，1.78mmol)在DMF(10mL)中的搅拌溶液中加入 50％T3PEtOAc溶液(0.85mL，1.34mmol)并搅拌3h(LCMS指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(60mL)淬灭并用DCM(2x 50mL) 萃取。将合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗产物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，20g，2-4％ MeOH-DCM)纯化以得到灰白色固体状的6-[4-[3-(4-氧代-3H-噻吩并 [3,2-d]嘧啶-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(60mg，17％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.37(s，1H)，8.50(d，J＝2.0 Hz，1H)，8.12(d，J＝5.2Hz，1H)，7.88(dd，J＝5.6，9.2Hz，1H)， 7.29(d，J＝5.2Hz，1H)，6.93(d，J＝9.2Hz，1H)，3.80-3.72(m， 2H)，3.68-3.61(m，4H)，3.59-3.55(m，2H)，2.92-2.85(m，4H)。
LCMS(ESI+):m/z:395.63[M+H]+。
实施例25–6-[(2S)-2-甲基-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪 -1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
向(3S)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，2.50mmol)和6-氯吡啶 -3-甲腈(415mg，3.0mmol)在DMSO(10mL)中的搅拌溶液中加入 K2CO3(863mg，6.25mmol)和Cu(MeCN)4PF6(18mg，0.05mmol)。将反应混合物在140℃下加热2h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物带至室温，用水(20mL)稀释并用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2x 30mL)和盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，15g，30％EtOAc-己烷)纯化以提供灰白色固体状的(3S)-4-(5-氰基-2-吡啶基)-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(260mg，34％)。
LCMS:m/z:303.60[M+H]+。
步骤-2:
向冷却至0℃的(3S)-4-(5-氰基-2-吡啶基)-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(260mg，0.86mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(5mL)。将反应混合物带至室温并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物在减压下浓缩以得到粗残余物，将其用Et2O(5mL)洗涤并在高真空下干燥以提供灰白色固体状的 6-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈盐酸盐(120mg，68％)。
LCMS:m/z:203.45[M+H]+。
步骤-3:
向冷却至0℃的6-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈盐酸盐 (100mg，0.46mmol)和3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(111mg，0.55 mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入T3P(0.3mL，0.92mmol， 50％DMF溶液)和DIPEA(0.25mL，1.38mmol)。将反应混合物加温至室温并搅拌8h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水 (20mL)淬灭并用EtOAc(3x 60mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(3x 30mL)、盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，8g，5％MeOH-EtOAc)纯化以提供白色固体状的6-[(2S)-2-甲基-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2- 基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(40mg，21％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.28(s，1H)，8.52(d，J＝1.8 Hz，1H)，8.06(d，J＝7.5Hz，1H)，7.88(dd，J＝1.8Hz，J＝9.0Hz， 1H)，7.76-7.17(m，1H)，7.51(d，J＝8.1Hz，1H)，7.44(t，J＝7.5Hz， 1H)，6.90(d，J＝9.0Hz，1H)，4.66-4.58(m，1H)，4.25-4.14(m，2H)，4.05-3.87(m，1H)，3.47(d，J＝10.5Hz，1H)，3.12-2.99(m，2H)， 2.91-2.84(m，4H)，1.20-.98(m，3H)。
LCMS:m/z:403.66[M+H]+。
实施例26–6-[(2R)-2-甲基-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪 -1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向(3R)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，2.5mmol)、 6-氯吡啶-3-甲腈(415mg，3mmol)在DMSO(10mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(690mg，5mmol)、Cu(MeCN)4PF6(18mg，0.05mmol)。将反应混合物在140℃下加热4h(TLC指示起始物料完全消耗)，带至室温，用水(30mL)稀释并用EtOAc(3x 40mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(30mL)、盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗化合物。将粗物料通过柱色谱(100-200目硅胶，7g，30％EtOAc-己烷)纯化以得到灰白色固体状的(3R)-4-(5-氰基-2-吡啶基)-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(415mg，55％)。
1H NMR[300MHz，CDCl3]:δ8.39(d，J＝2.4Hz，1H)，7.62-7.58 (m，1H)，6.54(d，J＝9.0Hz，1H)，4.51(brs，1H)，4.13-3.89(m， 3H)，3.27-3.13(m，2H)，3.00(brs，1H)，1.45(s，9H)，1.23-1.16(m， 3H)。
LCMS:m/z:247.46[M-tBu]+。
步骤-2:
向冷却至0℃的(3R)-4-(5-氰基-2-吡啶基)-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(410mg，1.35mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(1.35mL，5.43mmol)。将反应缓慢带至室温并搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物以得到粗 6-[(2R)-2-甲基哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(310mg，96％)，其未经任何纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:203.41[M+H]+。
步骤-3:
在室温下向3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(100mg，0.45mmol)、 6-[(2R)-2-甲基哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(93mg，0.45mmol)在DMF(2 mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(131mg，0.68mmol)、HOBt(92 mg，0.68mmol)和DIPEA(0.16mL，0.91mmol)并搅拌16h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用冷水(20mL)稀释并用EtOAc (3x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(1x 30mL)、盐水溶液 (40mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩得到粗化合物。将粗残余物通过柱色谱(100-200目硅胶，4g，3％的MeOH-DCM)纯化以提供淡粉色固体状的6-[(2R)-2-甲基-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(60mg，33％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.30(brs，1H)，8.52(d，J＝2.1 Hz，1H)，8.06(d，J＝7.8Hz，1H)，7.88(dd，J＝9.0，2.1Hz，1H)， 7.76–7.71(m，1H)，7.51(d,J＝8.1Hz，1H)，7.44(t，J＝7.5Hz， 1H)，6.89(d，J＝9.0Hz，1H)，4.66-4.58(m，1H)，4.24-4.14(m，2H)， 4.05-3.87(m，1H)，3.34-3.31(m，1H)，3.05-2.72(m，6H)，1.20-0.98 (m，3H)。
LCMS:m/z:403.66[M+H]+。
实施例27–6-[(3R)-3-甲基-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪 -1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
向3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(1g，4.58mmol)、(3R)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(917mg，4.58mmol)在DMF(20mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(1.3g，6.88mmol)、HOBt(928mg，6.88mmol)和 DIPEA(1.6mL，9.17mmol)并在室温下搅拌16h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用冷水(40mL)稀释并用EtOAc(3x 40mL) 萃取。将合并的有机萃取物用冷水(50mL)、盐水(40mL)洗涤，经 Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗化合物。将粗化合物通过柱色谱 (100-200目硅胶，10g，3％MeOH的DCM溶液)纯化以得到灰白色固体状的(3R)-3-甲基-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1- 羧酸叔丁酯(410mg，22％)。
LCMS:m/z:401.67[M+H]+。
步骤-2:
向冷却至0℃的(3R)-3-甲基-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基] 哌嗪-1-羧酸叔丁酯(410mg，1mmol)在1,4-二噁烷(4mL)的搅拌溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(1.0mL，4mmol)。将反应加温至室温并搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物以得到粗2-[3-[(2R)-2-甲基哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮盐酸盐(310mg，定量)，其未经任何纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:301.61[M+H]+。
步骤-3:
在室温下向2-[3-[(2R)-2-甲基哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉 -4-酮盐酸盐(200mg，0.66mmol)、6-氯吡啶-3-甲腈(110mg，0.79 mmol)在DMSO(4mL)中的搅拌溶液中加入碳酸钾(183mg，1.33 mmol)、Cu(MeCN)4PF6(5mg，0.013mmol)。将反应混合物在140℃下加热4h(TLC指示起始物料完全消耗)，缓慢带至室温，用冷水(30 ml)稀释，用EtOAc(3x40mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(30 mL)、盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗化合物。将粗物料通过柱色谱(100-200目硅胶，4g，5％MeOH-DCM) 纯化以得到灰白色固体状的6-[(3R)-3-甲基-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉 -2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(65mg，24％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.20(s，1H)，8.48(s，1H)， 8.06(d，J＝7.6Hz，1H)，7.86(d，J＝7.6Hz，1H)，7.73(brs，1H)， 7.52(m，1H),7.44(t，J＝2.0Hz，1H)，6.93(brs，1H)，4.56(brs，1H)， 4.37–4.14(m，3H)，3.52-3.31(m，2H)，2.98-2.88(m，5H)，1.20-1.00(m，3H)。
LCMS:m/z:403.62[M+H]+。实施例28–6-[(3S)-3-甲基-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪 -1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
向冷却至0℃的(2R)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.55g，2.75mmol) 和3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(0.5g，2.29mmol)在DMF(10mL) 中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(0.657g，3.44mmol)、HOBt(0.464g， 3.44mmol)和DIPEA(1.2mL，6.88mmol)。将反应混合物加温至室温，搅拌12h(TLC指示起始物料完全消耗)，用水(20mL)淬灭并用EtOAc (3x 60mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(3x 30mL)、盐水(40mL) 洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗化合物。将粗物料通过柱色谱(100-200硅胶，15g，5％MeOH-EtOAc)纯化以提供(3S)-3- 甲基-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.3g，32％)。
LCMS:m/z:401.67[M+H]+。
步骤2：
向冷却至0℃的(3S)-3-甲基-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.2g，0.5mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(5mL)。将反应混合物缓慢加温至室温并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物在真空下浓缩以得到粗残余物，将其用Et2O(5mL)洗涤并在高真空下干燥以提供灰白色固体状的2-[3-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮盐酸盐(120mg，80％)。
LCMS:m/z:301.61[M+H]+。
步骤-3:
将2-[3-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮盐酸盐(100mg，0.33mmol)、6-氯吡啶-3-甲腈(55mg，0.39mmol)、K2CO3 (138mg，0.10mmol)和Cu(MeCN)4PF6(2mg，0.006mmol)在DMSO(3 mL)中的溶液在140℃下搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物带至室温，用水(20mL)稀释并用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2x 30mL)、盐水(1x 30mL)洗涤，经 Na2SO4干燥，并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱 (100-200硅胶，10g，5％MeOH-EtOAc)纯化以得到白色固体状的6-[(3S)-3-甲基-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶 -3-甲腈(30mg，22％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.24(s，1H)，8.49(d，J＝2.1， 1H)，8.06(d，J＝7.2Hz，1H)，7.87(dd，J＝9.0，2.4Hz，1H)，7.78-7.70 (m，1H)，7.55-7.42(m，2H)，7.01-6.91(m，1H)，4.61-4.51(m，1H)， 4.38-4.15(m，2H)，3.95-3.85(d，J＝12.9Hz，1H)，3.51-3.40(m，1H)， 3.25-3.17(m，1H)，3.05-2.81(m，5H)，1.22-0.99(m，3H)。
LCMS:m/z:403.63[M+H]+。
实施例29–6-[(3S)-4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基 -哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向2-氨基-5-氟-苯甲酸(15g，96.69mmol)在THF(300 mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(27.70g，145.03mmol)、HOBt·NH3 (21.75g，145.03mmol)和DIPEA(51.0mL，290.07mmol)并搅拌6h (TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物在减压下浓缩以得到粗残余物，将其用水(150mL)稀释并用EtOAc(3x 150mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2x 100mL)、盐水(1x 100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并在减压下浓缩以得到粗残余物。将粗物料通过柱色谱(100-200 硅胶，300g，40％EtOAc-己烷)纯化以提供淡黄色固体状的2-氨基-5- 氟-苯甲酰胺(10.0g，67％)。LCMS:m/z:155.38[M+H]+。
步骤-2:
在室温下向2-氨基-5-氟-苯甲酰胺(7.0g，45.45mmol)在AcOH (35mL)中的搅拌溶液中加入琥珀酸酐(5.45g，54.54mmol)并搅拌3h (TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物倒入冰冷水(250mL)中，将沉淀出的固体在室温下搅拌30分钟，过滤，用水(50mL)、冷丙酮 (20mL)洗涤并在高真空下干燥以提供白色固体状的4-(2-氨基甲酰基 -4-氟-苯胺基)-4-氧代-丁酸(9.0g，77％)。LCMS:m/z:255.57[M+H]+。
步骤-3:
将4-(2-氨基甲酰基-4-氟-苯胺基)-4-氧代-丁酸(9.0g，35.43mmol) 在2N NaOH水溶液(100mL)中的搅拌溶液在100℃下加热3h(TLC 指示起始物料完全消耗)。将反应混合物冷却至0℃并用2N HCl水溶液酸化直至pH＝4-5，在此期间形成白色沉淀物。将悬浮液在0℃下搅拌30分钟，过滤，用水(2x 50mL)和冷丙酮(20mL)洗涤。将固体在高真空下干燥以得到灰白色固体状的3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉 -2-基)丙酸(7.0g，83％)。LCMS:m/z:237.43[M+H]+。
步骤-4:
向冷却至0oC的3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(5.0g，21.19 mmol)和(3S)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.2g，21.19mmol)在DMF(50 mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(6.06g，31.78mmol)、HOBt(4.29 g，31.78mmol)和DIPEA(11.2mL，63.56mmol)。将反应混合物加温至室温，搅拌12h(TLC指示起始物料完全消耗)，用水(100mL)淬灭并用EtOAc(3x 200mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(3x 50 mL)、盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，80g，5％MeOH-DCM)纯化以得到灰白色固体状的(3S)-4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.0g，45％)。LCMS:m/z:419.73 [M+H]+。
步骤-5:
向冷却至0℃的(3S)-4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.0g，9.57mmol)在1,4-二噁烷(20mL) 中的搅拌溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(10mL，40.0mmol)。将反应混合物带至室温并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下浓缩挥发物以得到粗残余物，将其用Et2O(10mL)洗涤，在高真空下干燥以得到6-氟-2-[3-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H- 喹唑啉-4-酮盐酸盐(2.0g，65％)，且并未经任何纯化即用于下一步骤。 LCMS:m/z:319.63[M+H]+。
步骤-6:
向6-氟-2-[3-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4- 酮盐酸盐(2.5g，7.86mmol)、6-氯吡啶-3-甲腈(1.08g，7.86mmol)和 K2CO3(3.2g，23.58mmol)在DMSO(20mL)中的搅拌溶液中加入 Cu(MeCN)4PF6(58mg，0.16mmol)并在140℃下搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物带至室温，用水(50mL)稀释并用 EtOAc(3x 150mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2x 100mL)、盐水(1x 10mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物。将粗产物通过柱色谱(100-200硅胶，40g，5％MeOH-DCM)纯化以提供白色固体状的化合物6-[(3S)-4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(1.3g，40％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.31(s，1H)，8.48(d，J＝2.4 Hz，1H)，7.86(dd，J＝8.8，2.0Hz，1H)，7.73(dd，J＝8.8，2.8Hz， 1H)，7.68-7.55(m，2H)，6.97-6.88(s，1H)，4.56-4.36(m，1H)，4.30-4.14 (m，3H)，3.51-3.44(m，1H)，3.24-3.17(m，1H)，2.98(s，1H)，2.95-2.80 (s，4H)，1.25-0.94(m，3H)。
LCMS:m/z:421.72[M+H]+。
实施例29a–6-[(3R)-4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向6-氯吡啶-3-甲腈(10g，0.06mol)和(2R)-2-甲基哌嗪 (6.35g，0.06mol)在乙腈(80mL)中的混合物中加入K2CO3(12.0g， 0.09mol)。将所得混合物在60℃下搅拌2h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应带至室温，用水(150mL)淬灭并用EtOAc(3x80mL) 萃取。将合并的有机萃取物经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱(100-200硅胶，5％MeOH-DCM)纯化以得到6-[(3R)-3-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-甲腈(10.0g，69％收率)。
步骤-2:
在10-15℃下向3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(5.0g， 21.19mmol，获得自实施例29，步骤3)在干燥DMF(40mL，～8体积) 中的搅拌溶液中加入6-[(3R)-3-甲基-哌嗪-1-基]-吡啶-3-甲腈(4.06g， 20mmol)、EDCI.HCl(6.08g，31.6mmol)、HOBt(3.43g，25.4mmol) 和DIPEA(14.5mL，84.5mol)并搅拌22h。将反应混合物用冰冷水(500 mL)淬灭并用EtOAc(3x 70mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗化合物。在室温下将粗化合物与EtOAc (50mL)一起搅拌1小时，过滤并吸干。将获得的固体再次用EtOAc 制浆。过滤该固体并用EtOAc(50mL)洗涤以得到(50mL) 6-[(3R)-4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-基] 吡啶-3-甲腈，收率为43％(3.8g)。使用手性HPLC以确认该化合物为化合物29的对映异构体。所用柱：Lux，5微米，Cellulose-4(250X 4.6 mm，5微米，流动相：50:50正己烷:(0.1％HCOOH的1:1乙醇:甲醇溶液)，流速：1.0mL/分钟，温度：25℃。R-对映体的保留时间＝12.9 分钟；化合物29的保留时间＝13.4分钟。
实施例30–6-[(3S)-4-[3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基 -哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向2-氨基-6-氟-苯甲酸(15g，96.77mmol)在THF(150 mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(27g，145.16mmol)、HOBt·NH3 (21g，145.16mmol)和DIPEA(52mL，290.32mmol)并搅拌6h(TLC 指示化合物1完全转化)。将反应混合物用EtOAc(300mL)稀释并用水(3×100mL)、盐水(1x 150mL)洗涤。将有机层分离，经Na2SO4干燥，在减压下蒸发挥发物以得到粗产物，将其用10％EtOAc-己烷(2 x 150mL)洗涤，在高真空下干燥以提供淡黄色固体状的2-氨基-6-氟- 苯甲酰胺(12.2g，80％)。
LCMS:m/z:155.42[M+H]+。
步骤-2:
在室温下向2-氨基-6-氟-苯甲酰胺(12g，77.92mmol)在AcOH (120mL)中的搅拌溶液中加入琥珀酸酐(9.3g，93.50mmol)并搅拌4h (TLC指示起始物料完全转化)。将反应混合物用冰冷水(1x 200mL) 稀释，搅拌30分钟，此时沉淀出固体。将固体过滤，用水(1x150mL)，然后是冷丙酮(1x 100mL)洗涤，并在高真空下干燥以提供灰白色固体状的4-(2-氨基甲酰基-3-氟-苯胺基)-4-氧代-丁酸(16g，81％)。LCMS: m/z:277.46[M+Na]+，238.49[M-NH2]+。
步骤-3:
将4-(2-氨基甲酰基-3-氟-苯胺基)-4-氧代-丁酸(15.5gm，6.10 mmol)在2N NaOH水溶液(160mL)中的搅拌溶液在100℃下加热4h (TLC指示起始物料完全转化)。将反应混合物冷却至0℃，用AcOH 酸化直至pH＝5，在此期间沉淀出固体。将固体过滤，用水(250mL)，然后是冷丙酮(1x 100mL)洗涤，并在高真空下干燥以得到灰白色固体状的3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(11g，80％)。
LCMS:m/z:237.47[M+H]+。
步骤-4:
在室温下向3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(5.2g，22mmol) 在DMF(52mL)中的搅拌溶液中加入(3S)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯 (6.6g，33.05mmol)、EDC·HCl(6.2g，33.05mmol)、HOBt(4.4g，33.05 mmol)和DIPEA(12mL，66.10mmol)并搅拌16h(TLC指示起始物料完全转化)。将反应混合物用冰冷水(160mL)淬灭，搅拌30分钟，此时沉淀出固体，将其过滤。将滤液用EtOAc(3x 200mL)萃取并将合并的有机萃取物用水(1x 200mL)、盐水(1x 200mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，60g，5％MeOH-DCM)纯化以得到奶油色固体状的(3S)-4-[3-(5- 氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4g， 43％)。LCMS:m/z:419.73[M+H]+。
步骤-5:
在室温下向(3S)-4-[3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6g，14.35mmol)在DCM(60mL)中的搅拌溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(60mL)并搅拌3h(TLC指示起始物料完全转化)。在减压下蒸发挥发物，将粗残余物与甲苯(2x 100mL) 共蒸馏并在高真空下干燥以得到白色固体状的5-氟-2-[3-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮盐酸盐(4.7g，94％)。LCMS: m/z:319.59[M+H]+。
步骤-6:
在室温下向加至密封管中的5-氟-2-[3-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]-3- 氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮盐酸盐(5.2g，14.73mmol)在DMSO(52 mL)中搅拌溶液中加入K2CO3(4g，29.40mmol)、6-氯吡啶-3-甲腈(2g， 14.73mmol)和六氟磷酸四(乙腈)铜(I)(109mg，0.29mmol)。将反应混合物用氩气脱气5分钟，并在110℃下搅拌3h(LCMS指示起始物料完全转化)。将反应混合物用水(300mL)淬灭并用EtOAc(3x 200 mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(1x 200mL)、盐水(1x 200mL) 洗涤，将有机层分离，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，60g，5％MeOH-DCM)纯化以得到灰白色固体，将此固体用5％MeOH-EtOAc洗涤以提供白色固体状的6-[(3S)-4-[3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1- 基]吡啶-3-甲腈(1.4g，23％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.22(s，1H)，8.47(d，J＝2.0 Hz，1H)，7.85(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，7.73-7.65(m，1H)，7.32(t， J＝8.4Hz，1H)，7.19-7.14(m，1H)，6.91(d，J＝8.0Hz，1H)，4.55-4.35 (m，1H)，4.29-4.11(m，3H)，3.48(t，J＝9.2Hz，1H)，3.26-3.18(m，1H)，3.04-2.94(m，1H)，2.91-2.84(m，4H)，1.21-0.98(m，3H)。LCMS: m/z:421.72[M+H]+。
实施例31–6-[3-(羟甲基)-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪 -1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向哌嗪-2-基甲醇二盐酸盐(100mg，0.53mmol)在DMSO (3mL)中的搅拌溶液中加入6-氯吡啶-3-甲腈(88mg，0.63mmol)、K2CO3(146mg，1.062mmol)和Cu(MeCN)4PF6(3.9mg，0.01mmol)。将反应混合物在140℃下加热12h(TLC指示起始物料完全消耗)，用水(10mL)淬灭并用EtOAc(3x 10mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱 (100-200硅胶，5g，5％MeOH-DCM)纯化以提供白色固体状的 6-[3-(羟甲基)哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈盐酸盐(50mg，32％)。LCMS:m/z: 219[M+H]+。
步骤-2:
在室温下向6-[3-(羟甲基)哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈盐酸盐(120mg， 0.55mmol)和3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(120mg，0.55mmol)在干燥DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(157mg，0.825 mmol)、HOBt(113mg，0.825mmol)和DIPEA(0.2mL，1.1mmol) 并搅拌16h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用冷水(20 mL)淬灭并用EtOAc(3x 10mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到残余物，将其通过制备型HPLC纯化以得到白色固体状的6-[3-(羟甲基)-4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(26mg，11％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.17(s，1H)，8.49(d，J＝1.6 Hz，1H)，8.08-8.06(m，1H)，7.88-7.85(m，1H)，7.74(t，J＝8Hz,1H)， 7.53(d，J＝8.4Hz，1H)，7.46-7.42(m，1H)，6.93-6.86(m，1H)，5.0-4.82 (m，2H)，4.42-3.88(m，4H)，3.56-3.47(m，2H)，2.99-2.89(m，6H)。
LCMS:m/z:419.76[M+H]+。
实施例32–6-[4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-(羟甲基) 哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈的合成
在室温下向3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(300mg，1.27 mmol)和6-[3-(羟甲基)哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(277mg，1.27mmol)在 DMF(4mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.68mL，3.81mmol)、T3P (0.8mL，2.54mmol)。将反应混合物在80℃下在CEM微波中加热 30分钟(TLC指示起始物料完全消耗)，缓慢带至室温，用水(10mL) 淬灭并用EtOAc(3x60mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(3x 30 mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物。将粗残余物通过柱色谱(100-200硅胶，15g，5-10％MeOH-DCM)纯化以提供6-[4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-(羟甲基) 哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(90％LCMS，300mg)，将其通过制备型HPLC 再纯化以得到白色固体状的纯化合物(154mg，27％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.31(brs，1H)，8.48(s，1H)， 7.85(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，7.74(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，7.66-7.61 (m，2H)，6.92-6.86(m，1H)，5.07-4.84(m，2H)，4.44-4.37(m，1H)， 4.33-4.16(m，4H)，3.94-3.86(m，1H)，3.12-2.78(m，6H)。
LCMS:m/z:437.75[M+H]+。
实施例33–6-[4-[3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-(羟甲基) 哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈的合成
在室温下向3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(400mg，1.69 mmol)和6-[3-(羟甲基)哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(369mg，1.69mmol)在 DMF(4mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.88mL，5.08mmol)，然后是T3P(1.0mL，3.39mmol)。将反应混合物在80℃下在CEM微波中加热30分钟(TLC指示起始物料完全消耗)，缓慢带至室温，用水(10 mL)淬灭并用EtOAc(3x 60mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(3 x 30mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物。将残余物通过柱色谱(100-200硅胶，15g，5-10％ MeOH-DCM)纯化以得到6-[4-[3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-(羟甲基)哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(90％LCMS，300mg)，将其通过制备型HPLC纯化以得到白色固体状的纯化合物(160mg，21％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.36(brs，1H)，8.49(s，1H)， 7.86(dd，J＝8.8，2.0Hz，1H)，7.70(q，J＝8.0Hz，1H)，7.34(d， J＝8.4Hz，1H)，7.20-7.15(m，2H)，6.93-6.86(m，1H)，5.02-4.81(m， 1H)，4.42-4.39(m，1H)，4.33-3.88(m，3H)，3.53-3.41(m，2H)，2.95-2.87 (m，6H)。
LCMS:m/z:437.75[M+H]+。
实施例34–2-[3-氧代-3-[4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基]丙基]-3H-喹唑啉-4- 酮的合成
步骤-1:
在室温下向2-氯吡啶(750mg，6.60mmol)在DMSO(10mL)中的搅拌溶液中加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.4g，7.92mmol)、K2CO3(1.8g， 13.27mmol)和Cu(MeCN)4PF6(49mg，0.132mmol)并在140℃下加热12h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(40mL)淬灭并用EtOAc(3x 60mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗化合物，将其通过快速色谱(100-200硅胶，8g， 20％EtOAc-己烷)纯化以提供黄色油状的4-(2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(350mg，20％)。
LCMS:m/z:264.55[M+H]+。
步骤-2:
在0℃和氩气氛下向4-(2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(350mg， 1.32mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(1.3mL，5.30mmol)。将反应混合物缓慢加温至室温并搅拌3h (TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物以得到粗化合物，将其用Et2O(50mL)洗涤以提供白色固体状的1-(2-吡啶基)哌嗪盐酸盐(210mg，96％)。
LCMS:m/z:164.48[M+H]+。
步骤-3:
在室温下向1-(2-吡啶基)哌嗪盐酸盐(100mg，0.609mmol)和3-(4- 氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(121mg，0.609mmol)在干燥DMF(2mL) 中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(174mg，0.913mmol)、HOBt(123mg， 0.913mmol)和DIPEA(0.2mL，1.2mmol)并搅拌16h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用冷水(20mL)淬灭，搅拌15分钟，沉淀出固体，将其过滤，用Et2O(2x 5mL)洗涤并在真空下干燥以得到白色固体状的2-[3-氧代-3-[4-(2-吡啶基)哌嗪-1-基]丙基]-3H-喹唑啉 -4-酮(55mg，24％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ12.20(s，1H)，8.13-8.11(dd， J＝4.8，1.5Hz，1H)，8.08(dd，J＝7.8，1.2Hz，1H)，7.76-7.74(m， 1H)，7.58-7.52(m，2H)，7.46-7.41(m，1H)，6.84(d，J＝8.7Hz，1H)， 6.68-6.64(m，1H)，3.62(s，2H)，3.59-3.51(m，4H)，3.46-3.46(m，2H)，2.89(brs，4H)。
LCMS:m/z:364.62[M+H]+。
实施例35–2-[3-[4-(5-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮的合成
步骤-1:
在室温下向2-氯-5-甲基-吡啶(500mg，2.68mmol)在甲苯(10mL) 中的搅拌溶液中加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(409mg，3.22mmol)、 Pd2(dba)3(122mg，0.13mmol)、BINAP(167mg，0.27mmol)和t-BuOK (903mg，8.06mmol)并在100℃下加热2h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(30mL)淬灭并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩，并将残余物通过快速色谱(100-200硅胶，8g，30％EtOAc-己烷)纯化以提供黄色油状的4-(5-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(560mg，92％)。
步骤-2:
在氩气氛下向冷却至0℃的1-(5-甲基-2-吡啶基)哌嗪；盐酸盐(560 mg，1.80mmol)在1,4-二噁烷(5ml)中的搅拌溶液中加入二噁烷中的4 N HCl(1.8ml，7.22mmol)并搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物以得到残余物，将其用Et2O(50ml)洗涤并干燥以得到白色固体状的1-(5-甲基-2-吡啶基)哌嗪盐酸盐(350mg，98％)。
1H NMR[300MHz，DMSO-d6]:δ9.64(brs，2H)，7.95(s，1H)， 7.85(d，J＝8.7Hz，1H)，7.25(d，J＝8.7Hz，1H)，3.90(m，4H)， 3.22(m，4H)，2.22(s，3H)。
步骤-3:
在室温下向1-(5-甲基-2-吡啶基)哌嗪盐酸盐(100mg,0.56mmol) 和3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(135mg，0.67mmol)在干燥DMF(2 mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(161mg，0.84mmol)、HOBt(114 mg，0.84mmol)和DIPEA(0.2mL，1.1mmol)并搅拌16h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(10mL)淬灭并用DCM(3x 10 mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩，并将残余物通过快速色谱(100-200硅胶，4g，5％MeOH-DCM)纯化以获得白色固体状的化合物2-[3-[4-(5-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-基]-3-氧代- 丙基]-3H-喹唑啉-4-酮(50mg，23％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.18(s，1H)，8.07(dd，J＝6， 0.9Hz，1H)，7.96(s，1H)，7.75-7.71(m，1H)，7.54(d，J＝6Hz， 1H)，7.46-7.38(m，2H)，6.78(d，J＝6.6Hz，1H)，3.62-3.61(m，2H)， 3.59-3.51(m，4H)，3.39-3.38(m，2H)，2.88(brs，4H)，2.14(brs，3H)。
LCMS:m/z:378.37[M+H]+。
实施例36–2-[3-[4-(3-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮的合成
步骤-1:
在室温下向2-氯-3-甲基-吡啶(500mg，2.68mmol)在甲苯(10mL) 中的搅拌溶液中加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(409mg，3.22mmol)、 Pd2(dba)3(122mg，0.13mmol)、BINAP(167mg，0.26mmol)和t-BuOK (903mg，8.06mmol)并在100℃下加热2h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(30mL)淬灭并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱(100-200硅胶，8g，30％EtOAc-己烷)纯化以提供黄色油状的4-(3-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(560mg，92％)。
步骤-2:
在氩气氛下向冷却至0℃的4-(3-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(560mg，1.80mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷中的4N HCl(1.8mL，7.2mmol)。将反应混合物缓慢加温至室温并搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物并将残余物用Et2O(50mL)洗涤以得到1-(3-甲基-2-吡啶基)哌嗪盐酸盐 (350mg，98％)，其未经任何纯化即用于下一步骤。
步骤-3:
在室温下向1-(3-甲基吡啶-2-基)哌嗪盐酸盐(100mg，0.46mmol) 和3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(135mg，0.67mmol)在干燥DMF(2 mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(161mg，0.84mmol)、HOBt(114 mg，0.84mmol)和DIPEA(0.2mL，1.1mmol)并搅拌16h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(10mL)淬灭并用EtOAc(3x 10mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到残余物，将其通过快速色谱(100-200硅胶，3g，5％MeOH-DCM) 纯化以得到白色固体状的化合物2-[3-[4-(3-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮(50mg，23％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.18(s，1H)，8.12-8.06(m， 2H)，7.77-7.73(m，1H)，7.59-7.57(m，1H)，7.53-7.51(m，1H)，7.46-7.42 (m，1H)，6.96-6.93(m，1H)，3.66(brs，2H)，3.59(brs，2H)，3.11(brs， 2H)，2.98(brs，2H)，2.89(s，4H)，2.26(s，3H)。
LCMS:m/z:378.61[M+H]+。
实施例37–2-[3-[4-(6-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮的合成
步骤-1:
在室温下向2-氯-6-甲基-吡啶(500mg，2.68mmol)在甲苯(10mL) 中的搅拌溶液中加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(409mg，3.22mmol)、 Pd2(dba)3(122mg，0.13mmol)、BINAP(167mg，0.26mmol)、tBuOK (903mg，8.06mmol)。将反应混合物在100℃下加热2h(TLC指示起始物料完全消耗)，用水(20mL)稀释，用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗化合物，将其通过快速色谱(100-200硅胶，8g，30％EtOAc-己烷)纯化以得到黄色固体状的4-(6-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(560mg，75％)。
LCMS:m/z:278.59[M+H]+。
步骤-2:
在氩气氛下向冷却至0℃的4-(6-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(560mg，1.80mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷中的4N HCl(1.8mL，7.22mmol)。将反应混合物缓慢带至室温并搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物并将残余物用Et2O(50mL)和EtOAc(50mL)洗涤以获得灰白色固体状的 1-(6-甲基-2-吡啶基)哌嗪盐酸盐(350mg，98％)。
LCMS:m/z:178.48[M+H]+。
步骤-3:
向化合物5(100mg，0.45mmol)、1-(6-甲基-2-吡啶基)哌嗪盐酸盐(81mg，0.45mmol)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl (131mg，0.68mmol)、HOBt(92mg，0.68mmol)和DIPEA(0.16ml， 0.91mmol)。将反应混合物在室温下搅拌6h(TLC指示起始物料完全消耗)，用冷水(30mL)稀释并搅拌10分钟，在此期间沉淀出固体。将固体过滤，用EtOAc(3x 10mL)洗涤并在真空下干燥以得到白色固体状的2-[3-[4-(6-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4- 酮(62mg，36％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.19(s，1H)，8.07(dd，J＝7.6， 1.2Hz，1H)，7.76-7.72(m，1H)，7.545(d，J＝8.0Hz，1H)，7.44(t， J＝7.6Hz，2H)，6.62(d，J＝8.8Hz，1H)，6.53(d，J＝7.2Hz，1H)， 3.63-3.61(m，2H)，3.57-3.53(m，4H)，3.45-3.43(m，2H)，2.89(s， 4H)，2.31(s，3H)。
LCMS:m/z:378.57[M+H]+。
实施例38–2-[3-[4-(4-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮的合成
步骤-1:
在室温下向2-氯-4-甲基-吡啶(200mg，1.07mmol)在DMSO(3mL) 中的搅拌溶液中加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(161mg，1.29mmol)、 Pd2(dba)3(49mg，0.05mmol)、BINAP(66mg，0.107mmol)和t-BuOK (360mg，3.22mmol)。将反应混合物在100℃下加热2h(TLC指示起始物料完全消耗)，用水(30mL)淬灭并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩，并将残余物通过快速色谱(100-200硅胶，10g，30％EtOAc-己烷)纯化以提供黄色油状的4-(4-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(240mg，80％)。
步骤-2:
在氩气氛下向冷却至0℃的4-(4-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(560mg，1.805mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷中的4N HCl(1.8mL，7.220mmol)。将反应混合物加温至室温并搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物，将残余物用Et2O(50ml)洗涤并干燥以获得白色固体状的1-(4-甲基-2-吡啶基)哌嗪盐酸盐(350mg，98％收率)。
步骤-3:
在室温下向1-(4-甲基-2-吡啶基)哌嗪盐酸盐(100mg，0.564mmol) 和3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(135mg，0.677mmol)在干燥DMF (2mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(161mg，0.84mmol)、HOBt(114 mg，0.84mmol)和DIPEA(0.2mL，1.1mmol)并搅拌16h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(10mL)淬灭并用DCM(3x 10mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过快速色谱(100-200硅胶，8g，5％MeOH-DCM) 纯化以得到白色固体状的2-[3-[4-(4-甲基-2-吡啶基)哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮(50mg，23％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.18(s，1H)，8.08-8.06(d，J ＝9.2Hz，1H)，7.99-7.97(d，J＝5.2Hz，1H)，7.77-7.73(m，1H)， 7.54(d，J＝8Hz，1H)，7.46-7.42(m，1H)，6.67(s，1H)，6.51(d， J＝5.2Hz，1H)，3.62-3.43(m，8H)，2.89(s，4H)，2.22(s，3H)。
LCMS:m/z:378.63[M+H]+。
实施例39–5-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡嗪 -2-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向5-溴吡嗪-2-甲腈(350mg，1.90mmol)在NMP(4mL) 中的搅拌溶液中加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(424mg，2.28mmol)、 Pd2(dba)3(35mg，0.04mmol)、X-Phos(72mg，0.152mmol)和K2CO3 (367mg，2.66mmol)。将反应混合物在200℃下加热20分钟(TLC指示起始物料完全消耗)。反应完成后，将反应混合物用EtOAc(50mL) 稀释，用冷水(2x 20mL)洗涤，将有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗化合物。将粗物料通过快速色谱(100-200硅胶，5g，30％ EtOAc-己烷)纯化以提供白色固体状的4-(5-氰基吡嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(320mg，58％)。
LCMS:m/z:290.61[M+H]+。
步骤-2:
向冷却至0℃的4-(5-氰基吡嗪-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(310mg， 1.07mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中加入1,4-二噁烷中的4 N HCl(1.07mL，4.29mmol)。将反应混合物加温至室温并搅拌4h (TLC指示起始物料完全消耗)。在真空下除去挥发物以得到粗5-哌嗪 -1-基吡嗪-2-甲腈盐酸盐(210mg，定量)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:190.46[M+H]+。
步骤-3:
在室温下向3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(200mg，0.917mmol) 和5-哌嗪-1-基吡嗪-2-甲腈盐酸盐(208mg，1.10mmol)在DMF(4mL) 中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(262mg，1.37mmol)、HOBt(185mg， 1.37mmol)和DIPEA(0.64mL，3.66mmol)并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用冷水(40mL)稀释并用EtOAc(3x 40 mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗化合物，将其通过快速色谱(100-200硅胶，5g，5％MeOH-DCM) 纯化以提供灰白色固体状的5-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基] 哌嗪-1-基]吡嗪-2-腈(70mg，20％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.19(s，1H)，8.58(d，J＝1.2 Hz，1H)，8.43(d，J＝1.2Hz，1H)，8.07(dd，J＝1.6，8.0Hz，1H)， 7.77-7.72(m，1H)，7.55(d，J＝8.0Hz，1H)，7.47-7.43(m，1H)，3.87-3.83 (m，2H)，3.76-3.66(m，4H)，3.63-3.57(m，2H)，2.90(s，4H)。
LCMS:m/z:390.68[M+H]+。
实施例40–2-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基] 噻唑-5-甲腈的合成
步骤-1:
向在氩气氛下装入微波管中的2-溴噻唑-5-甲腈(200mg，1.05 mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(800mg，4.3mmol)、磷酸三钾(260mg， 1.22mmol)、乙酸钯三聚体(40mg，0.06mmol)、四氟硼酸三叔丁基膦 (20mg，0.06mmol)在甲苯(4mL)中的搅拌溶液中，在80℃下辐照30分钟(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(10mL)稀释并用EtOAc(3x30mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(10mL) 洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将获得的粗产物通过柱色谱 (100-200硅胶，20g，10-30％EtOAc-己烷)纯化以得到白色固体状的 4-(5-氰基噻唑-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg，64％)。
LCMS(ESI+):m/z:295.60[M+H]+。
步骤-2:
在室温下向4-(5-氰基噻唑-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200g，0.680 mmol)在二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷中的4N HCl(5 mL)并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物以得到粗产物，将其用EtOAc(2x 15mL)，然后是乙醚(15mL)洗涤以得到白色固体状的2-哌嗪-1-基噻唑-5-甲腈盐酸盐(155mg，98％)。
LCMS(ESI+):m/z:195.44[M+H]+。
步骤-3:
向2-哌嗪-1-基噻唑-5-甲腈盐酸盐(155mg，0.55mmol)在无水 DMF中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.3mL，1.74mmol)、3-(4-氧代-3H- 喹唑啉-2-基)丙酸(120mg，0.67mmol)和EtOAc中的50％T3P溶液 (0.53mL，0.82mmol)并在室温下搅拌16h(LCMS指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用冰水(60mL)淬灭，用DCM(2x 50mL)萃取，将合并的有机萃取物用盐水(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将粗残余物通过柱色谱(100-200硅胶，200g，2-5％MeOH-DCM) 纯化以得到淡黄色固体状的2-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]噻唑-5-腈(50mg，23％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.18(brs，1H)，8.09-8.05(m， 2H)，7.77-7.72(m，1H)，7.55(d，J＝8.0Hz，1H)，7.45(t，J＝7.2Hz， 1H)，3.75-3.55(m，6H)，3.53-3.50(m，2H)，2.89(s，4H)。
LCMS(ESI+):m/z:395.62[M+H]+。
实施例41–6-[4-[3-(4-氧代-3H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙酰基]哌嗪 -1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向KOH(5.82g，0.104mol)在EtOH(80mL)中的搅拌溶液中加入1H-嘧啶-6-酮(10g，0.104mol)，然后是MeI(7.20mL，0.114 mol)。将反应混合物回流2h(TLC指示10-15％的未反应起始物料)。加入额外量的MeI(1.5g，0.01mol)回流1h(TLC指示起始物料完全消耗)，并缓慢带至室温。将反应混合物过滤，用DCM(100mL)洗涤，并将滤液在减压下浓缩以得到粗产物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，200g，2-5％MeOH-DCM)纯化以得到灰白色固体状的3-甲基嘧啶-4-酮(4.5g，39％)。
LCMS(ESI+):m/z:111.30[M+H]+。
步骤-2:
向冷却至10℃的硫酸(50mL)中加入3-甲基嘧啶-4-酮(5.5g，50.00mol)，然后是发烟硝酸(6.6mL，157.15mol)。将反应混合物缓慢带至室温，在100℃下加热4h(TLC指示起始物料完全消耗)，再次带至室温并倒入碎冰(500g)中；然后缓慢加入50％氢氧化钠水溶液直至pH＝5。将反应混合物用CHCl3(3x 250mL)萃取；将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗化合物，将其自 EtOH(15mL)重结晶以得到黄色固体状的3-甲基-5-硝基-嘧啶-4-酮(2 g，26％)。
LCMS(ESI+):m/z:156.36[M+H]+。
步骤-3:
在CEM微波管中加入3-甲基-5-硝基-嘧啶-4-酮(300mg，1.94 mmol)、乙酰乙酸甲酯(2.7g，23.27mmol)、醋酸铵(1.79g，23.22mmol) 和MeOH(8.0mL)并在80℃下辐照2h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物在减压下浓缩以得到粗产物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，40g，5-10％MeOH-DCM)纯化以得到4-氨基吡啶-3- 羧酸甲酯；该反应混合物分6个批次实施(各自300mg)，将后处理之后的粗物料合并并纯化以得到黄色固体状的4-氨基吡啶-3-羧酸甲酯 (900mg，51％)。
LCMS(ESI+):m/z:153.43[M+H]+。
步骤-4:
在室温下向4-氨基吡啶-3-羧酸甲酯(2g，13.15mmol)在EtOH-水 (120mL，1:1)中的搅拌溶液中加入LiOH·H2O(1.21g，28.80mmol) 并在80℃下加热2h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物以得到粗化合物，将其溶于水(30mL)中，用EtOAc(2x 25mL)洗涤以除去非极性杂质。将水层用1N HCl酸化直至pH＝1，并用 EtOAc(2x 10mL)萃取。将合并的有机萃取物在减压下浓缩以得到粗残余物，将其自MeOH(20mL)结晶以获得灰白色固体状的4-氨基吡啶-3-羧酸(1g，55％)。
LCMS(ESI+):m/z:139.31[M+H]+。
步骤-5:
在室温下向4-氨基吡啶-3-羧酸(3g，0.013mol)在THF(50mL) 中的搅拌溶液中加入SOCl2(3.6mL，0.045mol)和起催化作用的DMF (30μL)并在氩气氛下搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物以得到粗产物，将其溶于THF(30mL)中，冷却至0℃并加入7N NH3-甲醇(22mL)。将反应混合物缓慢加温至室温并搅拌4 h，过滤沉淀，将滤液在减压下浓缩以得到粗化合物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，60g，10％MeOH-10％NH4OH-DCM)纯化以提供4- 氨基吡啶-3-甲酰胺(475mg，27％)，其未经任何纯化即用于下一步骤。
LCMS(ESI+):m/z:138.33[M+H]+。
步骤-6:
在室温下向4-氨基吡啶-3-甲酰胺(500mg，3.65mmol)、4-叔丁氧基-4-氧代-丁酸(762mg，4.38mmol)、TEA(1mL，7.29mmol)在DMF (10mL)中的搅拌溶液中加入EtOAc中的50％T3P溶液(3.5mL，5.5 mmol)并搅拌12h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(50mL)淬灭并用DCM(2x 35mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水 (30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗化合物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，20g，10％MeOH-10％NH4OH-DCM)纯化以得到黄色固体状的4-[(3-氨基甲酰基-4-吡啶基)氨基]-4-氧代-丁酸叔丁酯(500mg，47％)。
1H NMR[400MHz，CDCl3]:δ11.74(s，1H)，9.07(s，1H)，8.69 (d，J＝5.2Hz，1H)，8.52(d，J＝5.2Hz，1H)，7.11(brs，1H)，5.83 (brs，1H)，2.75-2.70(m，2H)，2.68-2.63(m，2H)，1.44(s，9H)。
LCMS(ESI+):m/z:316.59[M+Na]+。
步骤-7:
在0℃下向4-[(3-氨基甲酰基-4-吡啶基)氨基]-4-氧代-丁酸叔丁酯(900mg，3.071mmol)在THF(31mL)中的搅拌溶液中加入水(0.9 mL)、LiOH·H2O(645mg，15.35mmol)。将反应混合物缓慢带至室温，搅拌2h(TLC指示起始物料完全消耗)并用EtOAc(2x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗产物，将其用戊烷(2x 15mL)洗涤以获得淡黄色固体状的3-(4-氧代-3H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙酸叔丁酯(700mg，83％)。
LCMS(ESI+):m/z:276.48[M+H]+。
步骤-8:
在室温下向3-(4-氧代-3H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙酸叔丁酯(700mg，2.545mmol)在DCM(26mL)中的搅拌溶液中加入TFA(5.7 mL，74.50mmol)并搅拌4h(LCMS指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物，将残余物与甲苯(2x 10mL)共蒸馏以得到粗产物，将其用戊烷(2x 20mL)磨碎以得到淡黄色固体状的3-(4-氧代-3H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙酸(351mg，63％)。
LCMS(ESI+):m/z:220.42[M+H]+。
步骤-9:
向3-(4-氧代-3H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙酸(250mg，1.141 mmol)、6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(256mg，1.361mmol)在DMF (2.5mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.4mL，2.325mmol)和EtOAc 中的50％T3P溶液(0.75mL，1.711mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(25mL)淬灭，用DCM(3x 30mL)萃取，将合并的有机萃取物用盐水(10mL)洗涤并经Na2SO4干燥。在减压下浓缩溶剂以得到粗产物，将其通过柱色谱 (100-200硅胶，10g，10％MeOH-5％NH4OH-DCM)纯化以得到灰白色固体状的6-[4-[3-(4-氧代-3H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-基)丙酰基]哌嗪 -1-基]吡啶-3-甲腈(45mg，10％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.57(brs，1H)，9.22(s，1H)， 8.74(d，J＝5.6Hz，1H)，8.50(d，J＝2.0Hz，1H)，7.88(dd，J＝8.8， 2.0Hz，1H)，7.45(d，J＝5.6Hz，1H)，6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，3.78-3.76 (m，2H)，3.64(t，J＝4.8Hz，4H)，3.57-3.54(m，2H)，3.31(s，4H)。
LCMS(ESI+):m/z:390.63[M+H]+。
实施例42–6-[4-[3-(4-氧代-3H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)丙酰基]哌嗪 -1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
在干冰-丙酮浴中将DIPEA(4.16mL，29.3mmol)在干燥THF(60 mL)中的溶液冷却至-78℃。在-78℃下滴加己烷中的n-BuLi(1.6M， 18.3mL，29.3mmol)并搅拌30分钟。将干燥THF(30mL)中的乙酸苄酯(3.8mL，26.6mmol)滴加至反应烧瓶，维持温度低于-78℃。当加入完成时，将烧瓶转移至干冰-Et2O浴并搅拌直至温度降至低于-90℃。将THF(30mL)中的2-溴乙酸叔丁酯(5.9mL，40.0mmol)滴加至以上溶液并在-90℃下搅拌1h。通过缓慢加入水(100mL)而将反应混合物淬灭，加温至室温并用Et2O(2x 150mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，60g，5％EtOAc-己烷)纯化以得到淡黄色油状的丁二酸苄基叔丁基酯(2.3g，27％)。
LCMS:m/z:287.6[M+Na]+。
步骤-2:
向丁二酸苄基叔丁基酯(2.3g，8.71mmol)在干燥THF(30mL)中的搅拌溶液中加入10％Pd-C(0.23g)并在H2气氛(气球)下搅拌16h (TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物过滤通过Celite并用 CHCl3(100mL)洗涤。将滤液在真空中浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，30g，35％EtOAc-己烷)纯化以得到无色油状的4-叔丁氧基-4-氧代-丁酸(0.8g，52％)。
1H NMR[400MHz，CDCl3]:δ2.65-2.61(m，2H)，2.56-2.52(m， 2H)，1.44(s，9H)。
步骤-3:
在室温下向2-氨基吡啶-3-羧酸(0.9g，6.52mmol)在THF(15mL) 中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(1.86g，9.78mmol)、HOBt·NH3(1.46 g，9.78mmol)和DIPEA(4.67mL，26.08mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5h(TLC指示起始物料完全消耗)，用水(30mL)稀释并用EtOAc(3x 75mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(2x 40mL)、盐水(40mL)洗涤，分离，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，20g，60％EtOAc-己烷)纯化以得到白色固体状的2-氨基吡啶-3-甲酰胺(0.4g，45％)。
LCMS:m/z:138.3[M+H]+。
步骤-4:
在室温下向2-氨基吡啶-3-甲酰胺(0.35g，2.55mmol)在DMF(15 mL)中的搅拌溶液中加入4-叔丁氧基-4-氧代-丁酸(0.66g，3.83mmol)、 HATU(1.45g，3.83mmol)和Et3N(0.7mL，5.04mmol)。将所得反应混合物在60℃下搅拌24h(TLC指示SM完全消耗)。将反应混合物用水(30mL)稀释并用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(2x 30mL)、盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，10g，2％ MeOH-DCM)纯化以提供淡黄色固体状的4-[(3-氨基甲酰基-2-吡啶基) 氨基]-4-氧代-丁酸叔丁酯(0.22g，26％)。
LCMS:m/z:294.6[M+H]+。
步骤-5:
在0℃下向4-[(3-氨基甲酰基-2-吡啶基)氨基]-4-氧代-丁酸叔丁酯 (0.22g，0.75mmol)在THF(8mL)和水(0.3mL)中的搅拌溶液中加入 LiOH·H2O(0.16g，3.88mmol)。将反应混合物带至室温，搅拌6h(TLC 指示起始物料完全消耗)，用水(10mL)稀释并用EtOAc(2x 75mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以提供淡黄色固体状的3-(4-氧代-3H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2- 基)丙酸叔丁酯(140mg，63％)。
LCMS:m/z:276.4[M+H]+。
步骤-6:
在室温下向3-(4-氧代-3H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)丙酸叔丁酯 (0.14g，0.50mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中加入TFA(1.1mL， 15.0mmol)并搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物在减压下浓缩以得到淡黄色液体状的3-(4-氧代-3H-吡啶并[2,3-d]嘧啶 -2-基)丙酸三氟乙酸盐(0.14g，75％)，将其未经任何纯化即带至下一步骤。
LCMS:m/z:220.3[M+H]+。
步骤-7:
在室温下向3-(4-氧代-3H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)丙酸三氟乙酸盐(0.087g，0.39mmol)和6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈盐酸盐(0.133g，0.59 mmol)在DMF(4mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.14mL，0.79 mmol)和EtOAc中的50％T3P溶液(0.5mL，0.78mmol)并搅拌2h(TLC 指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(10mL)淬灭并用DCM (3x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩以得到粗产物(150mg，54％LCMS)，将其制备性纯化以得到白色固体状的6-[4-[3-(4-氧代-3H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)丙酰基] 哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(29mg，18％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.49(brs，1H)，8.86(dd，J＝ 4.0，1.6Hz，1H)，8.50(d，J＝2.4Hz，1H)，8.45(dd，J＝7.6，1.6Hz， 1H)，7.88(dd，J＝8.8，2.0Hz，1H)，7.47(dd，J＝8.0，4.8Hz，1H)， 6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，3.83-3.77(m，2H)，3.69-3.62(m，4H)，3.58-3.53 (m，2H)，2.93(s，4H)。
LCMS:m/z:390.67[M+H]+。
实施例43–6-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丁酰基]哌嗪-1-基]吡啶 -3-甲腈的合成
步骤-1:
将粉末状KOH(6.0g，0.10mol)加至3-甲基四氢呋喃-2-酮(2.0g， 0.02mol)和溴化苄(14.0g，0.08mol)在甲苯(36mL)中的溶液中。将所得反应混合物在110℃下搅拌5h并在真空下除去甲苯以得到粗残余物，将其溶于MeOH(40mL)中。将KOH(2.0g，0.035mol)和水(20mL) 加至以上溶液并将反应混合物回流16h。将反应混合物带至室温，用 Et2O(2x50mL)洗涤，将水层用浓HCl酸化至pH＝2-3，并用DCM(3 x 50mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩以得到淡黄色油状的4-苄氧基-2-甲基-丁酸(3.4g，81％)。
1H NMR[400MHz，CDCl3]:δ7.37-7.26(m，5H)，4.53-4.50(m， 2H)，3.54(t，J＝6.4Hz，2H)，2.73-2.64(m，1H)，2.09-2.00(m，1H)， 1.76-1.68(m，1H)，1.21(d，J＝7.2Hz，3H)。
步骤-2:
在室温下向2-氨基苯甲酰胺(0.3g，2.20mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入4-苄氧基-2-甲基-丁酸(0.59g，2.83mmol)、HATU (1.25g，3.28mmol)和Et3N(0.61mL，4.35mmol)。将所得反应混合物在80℃下搅拌6h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(30mL)稀释并用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(2x 30mL)、盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，20g，30％EtOAc- 己烷)纯化以提供无色液体状的2-[(4-苄氧基-2-甲基-丁酰基)氨基]苯甲酰胺(0.63g，79％)。
LCMS:m/z:327.6[M+H]+。
步骤-3:
将2NNaOH水溶液(12mL)中的2-[(4-苄氧基-2-甲基-丁酰基)氨基]苯甲酰胺(0.63g，1.93mmol)在100℃下搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物冷却至0℃并用2N HCl水溶液酸化直至pH＝3-4，并用EtOAc(3x 50mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到2-(3-苄氧基 -1-甲基-丙基)-3H-喹唑啉-4-酮(450mg，67％)，其未经任何纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:309.5[M+H]+。
步骤-4:
向2-(3-苄氧基-1-甲基-丙基)-3H-喹唑啉-4-酮(0.55g，1.78mmol) 在THF(15mL)中的搅拌溶液中加入10％Pd-C催化剂(50％湿，1.0g) 并在H2气氛(气球)下搅拌5h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物过滤通过Celite，并用THF(30mL)洗涤。将滤液在真空中浓缩以得到灰白色固体状的2-(3-羟基-1-甲基-丙基)-3H-喹唑啉-4-酮(0.3 g，78％)。
LCMS:m/z:219.49[M+H]+。
步骤-5:
向冷却至0℃的2-(3-羟基-1-甲基-丙基)-3H-喹唑啉-4-酮(0.40g， 1.83mmol)在DCM(25mL)中的搅拌溶液中加入戴斯-马丁高碘烷 (0.85g，2.00mmol)。将反应混合物缓慢加温至室温并搅拌5h(TLC 指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用饱和Na2S2O3水溶液淬灭并用EtOAc(2x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在真空中浓缩以得到粗残余物，将其通过硅胶柱色谱(100-200硅胶，10g，15％EtOAc-己烷)纯化以提供白色固体状的 3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丁醛(220mg，56％)。
LCMS:m/z:217.5[M+H]+。
步骤-6:
在5oC下向3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丁醛(0.20g，0.92mmol) 在THF(10mL)中的搅拌溶液中加入t-BuOH(5mL)、水(1.5mL)和2- 甲基-2-丁烯(0.51g，7.28mmol)，然后加入NaClO2(0.25g，2.77mmol) 和NaH2PO4·H2O(0.43g，2.75mmol)。将反应混合物缓慢带至室温，搅拌12h，用水(15mL)稀释并用EtOAc(2x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在真空中浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，10g，10％MeOH-DCM) 纯化以提供3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丁酸(150mg，52％)，将其未经进一步纯化即带至下一步骤。
LCMS:m/z:233.4[M+H]+。
步骤-7:
在氩气氛下向3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丁酸(0.15g，0.64mmol) 和6-哌嗪-1-基吡啶-3-甲腈(0.15g，0.71mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(0.18g，0.96mmol)、HOBt(0.13g，0.96mmol) 和DIPEA(0.34mL，1.93mmol)并在室温下搅拌8h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物，将残余物用水(30mL)稀释并用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(2x 25mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物 (100mg，71％LCMS)，将其制备性纯化以提供白色固体状的 6-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丁酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(28 mg，9％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.19(brs，1H)，8.50(d，J＝2.4 Hz，1H)，8.06(d，J＝7.6Hz，1H)，7.87(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)， 7.75-7.70(m，1H)，7.53(d，J＝8.0Hz，1H)，7.43(t，J＝8.0Hz，1H)， 6.92(d，J＝9.2Hz，1H)，3.76-3.66(m，4H)，3.62-3.51(m，4H)，3.25-3.08 (m，2H)，2.64-2.59(m，1H)，1.26(d，J＝7.2Hz，3H)。
LCMS:m/z:403.7[M+H]+。
实施例44–6-[(3S)-4-[3-(5,6-二氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3- 甲基-哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈的合成
步骤-1:
将二碳酸二叔丁酯(3.0g，23.2mmol)加至干燥THF(45mL)中的 3,4-二氟苯胺(5.5g，25.2mmol)中并将所得反应混合物在室温下搅拌 12h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物并将残余物用己烷(15mL)洗涤。将获得的白色固体在高真空下干燥以得到 N-(3,4-二氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(5g，93％)，其未经任何纯化即用于下一步骤。
1H NMR[400MHz，CDCl3]:δ7.45-7.40(m，1H)，7.08-7.01(m， 1H)，6.92-6.89(m，1H)，6.45(brs，1H)，1.51(s，9H)。
LCMS:m/z:174.4[M+H-56]+。
步骤-2:
在-78℃下向N-(3,4-二氟苯基)氨基甲酸叔丁酯(1g，4.36mmol) 在THF(30mL)中的搅拌溶液中滴加t-BuLi(7.54mL，9.82mmol)并搅拌3h。在-78℃下将氯甲酸乙酯(0.48g，5.1mmol)缓慢加至反应混合物并搅拌1h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物带至0℃，经10分钟时间用饱和氯化铵水溶液(24mL)进行处理，然后加温至室温并用EtOAc(100mL)和水(50mL)稀释。分离各层并将水相用 EtOAc(2x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，经 Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，20g，2％EtOAc-己烷)纯化以提供白色固体状的 6-(叔丁氧羰基氨基)-2,3-二氟-苯甲酸乙酯(0.5g，38％)。
1H NMR[400MHz，CDCl3]:δ9.44(brs，1H)，8.11-8.08(m，1H)， 7.30-7.23(m，1H)，4.45(q，J＝6.8Hz，2H)，1.51(s，9H)，1.41(t， J＝7.2Hz，3H)。
LCMS:m/z:202.4[M+H-100]+。
步骤-3:
在室温下向6-(叔丁氧羰基氨基)-2,3-二氟-苯甲酸乙酯(0.5g，1.66 mmol)在DCM(14mL)中的搅拌溶液中滴加TFA(2.27mL)并搅拌12 h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物在减压下浓缩以得到 6-氨基-2,3-二氟-苯甲酸乙酯(0.43g，89％)，将其未经进一步纯化即带至下一步骤。
LCMS:m/z:202.3[M+H]+。
步骤-4:
向6-氨基-2,3-二氟-苯甲酸乙酯(0.43g，1.44mmol)在 THF:H2O(2:1，15mL)中的搅拌溶液中加入LiOH·H2O(0.46g，14.3 mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌18h(TLC指示起始物料完全消耗)，用1N HCl酸化直至pH＝4-5，并用EtOAc(50mL)萃取。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到6-氨基-2,3- 二氟-苯甲酸(0.2g，80％)，将其未经进一步纯化即带至下一步骤。
LCMS:m/z:174.39[M+H]+。
步骤-5:
在氩气氛下向6-氨基-2,3-二氟-苯甲酸(0.7g，4.0mmol)在THF (15mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(1.15g，6.0mmol)、HOBt·NH3 (0.91g，6.0mmol)和DIPEA(2.17mL，12.0mmol)并在室温下搅拌6h (TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物并将残余物用冷水(40mL)和EtOAc(100mL)稀释。将有机层分离，用冷水(2x 20mL)、盐水(2x 20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，20g，25％EtOAc-己烷)纯化以得到白色固体状的6-氨基-2,3-二氟-苯甲酰胺(0.45g，65％)。
LCMS:m/z:173.4[M+H]+。
步骤-6:
在室温下向6-氨基-2,3-二氟-苯甲酰胺(0.45g，2.61mmol)在 AcOH(4.5mL)中的搅拌溶液中加入琥珀酸酐(0.31g，3.13mmol)并在室温下搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物倒入冰冷水(10mL)中并在室温下搅拌30分钟。过滤沉淀的固体，用水(10mL)、冷丙酮(5mL)洗涤并在高真空下干燥以得到4-(2-氨基甲酰基-3,4-二氟-苯胺基)-4-氧代-丁酸(500mg，70％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:273.5[M+H]+。
步骤-7:
将2N NaOH水溶液(5mL)中的4-(2-氨基甲酰基-3,4-二氟-苯胺基)-4-氧代-丁酸(0.50g，1.83mmol)在100℃下搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物冷却至0℃并用2N HCl水溶液酸化直至pH＝3-4，在此期间沉淀出白色固体。将悬浮液在0℃下搅拌30分钟，过滤，用水(10mL)、冷丙酮(2mL)洗涤并在高真空下干燥以得到3-(5,6-二氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(300mg，65％)，其未经任何纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:255.46[M+H]+。
步骤-8:
向(2S)-2-甲基哌嗪(0.30g，2.1mmol)在DMA(6mL)中的搅拌溶液中加入6-氯吡啶-3-甲腈(0.29g，2.3mmol)和K2CO3。将所得反应混合物加热至60℃持续2h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用冷水(20mL)稀释并用EtOAc(3x 25mL)萃取。将合并的有机萃取物用冷水(20mL)和盐水(2x 20mL)洗涤。将有机层分离，经 Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱 (100-200硅胶，10g，10％MeOH-DCM)纯化以提供灰白色固体状的 6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(0.29g，67％)。
LCMS:m/z:203.4[M+H]+。
步骤-9:
在氩气氛下向3-(5,6-二氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(0.25g， 1.0mmol)和6-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈(0.19g，1.0mmol) 在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(0.28g，1.4mmol)、 HOBt(0.22g，1.4mmol)和DIPEA(0.5mL，2.9mmol)并在室温下搅拌24h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物并将残余物用冰水(30mL)和EtOAc(50mL)稀释。将有机层分离，用冰水(2x 15 mL)、盐水(2x 15mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物(200mg，47％LCMS)，将其制备性纯化以提供白色固体状的6-[(3S)-4-[3-(5,6-二氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪 -1-基]吡啶-3-甲腈(40mg，9％)。
1H NMR[400MHz，CDCl3]:δ12.33(brs，1H)，8.48(d，J＝2.4 Hz，1H)，7.86(dd，J＝9.2，2.4Hz，1H)，7.84-7.76(m，1H)，7.39-7.33 (m，1H)，6.95-6.91(m，1H)，4.55-4.34(m，1H)，4.30-3.86(m，3H)， 3.49-3.42(m，1H)，3.23-3.15(m，1H)，3.05-2.94(m，1H)，2.89-2.78 (m，4H)，1.20-0.98(m，3H)。
LCMS:m/z:439.7[M+H]+。
实施例45–2-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶 -5-甲腈的合成
步骤-1:
在室温下向5-溴-2-氯-嘧啶(0.5g，2.58mmol)在1,4-二噁烷(20mL) 中的溶液中加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.722g，3.88mmol)和K2CO3 (0.713g，5.17mmol)。将反应混合物回流4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物带至室温，用水(20mL)稀释并用EtOAc(3x50 mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2x 40mL)、盐水(1x 40mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过柱色谱(100-200硅胶，15g，10％EtOAc-己烷)进一步纯化以得到白色固体状的4-(5-溴嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.7g，78％)。
1H NMR[400MHz，CDCl3]:δ8.29(s，2H)，3.75(t，J＝4.8Hz， 4H)，3.47(t，J＝5.2Hz，4H)，1.47(s，9H)。
LCMS:m/z:287.44[M-tBu]+。
步骤-2:
在室温下向4-(5-溴嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.46 mmol)在DMF(15mL)中的搅拌溶液中加入Zn(CN)2(513mg，4.37 mmol)和X-phos(84mg，0.15mmol)。将反应混合物用氩气脱气20分钟，然后加入Pd(PPh3)4(168mg，0.15mmol)并在100℃下加热18h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物缓慢带至室温，用水(20 mL)稀释并用EtOAc(3x 100mL)萃取。将合并的有机萃取物用水(2x 40mL)、盐水(1x 40mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗物料。将粗物料通过柱色谱(100-200硅胶，12g，10％EtOAc-己烷)纯化以得到白色固体状的4-(5-氰基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300 mg，71％)。
LCMS:m/z:290.49[M+H]+。
步骤-3:
在0℃下向4-(5-氰基嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.5 mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷中的4N HCl(5 mL)。将反应混合物加温至室温并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物在减压下浓缩以得到粗残余物，将其用Et2O(5mL) 洗涤并在真空下干燥以提供白色固体状的2-哌嗪-1-基嘧啶-5-甲腈；盐酸盐(200mg，80％)。
LCMS:m/z:190.46[M+H]+。
步骤-4:
在室温下向2-哌嗪-1-基嘧啶-5-腈盐酸盐(130mg，0.69mmol)和 3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(100mg，0.46mmol)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.3mL，1.38mmol)和T3P(291mg，0.92 mmol)并搅拌8h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(10mL)淬灭并萃入EtOAc(3x 40mL)中。将合并的有机萃取物用冷水(3x 20mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到残余物。将粗残余物通过柱色谱(100-200硅胶，10g，5％ MeOH-DCM)纯化以提供白色固体状的2-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2- 基)丙酰基]哌嗪-1-基]嘧啶-5-甲腈(30mg，16％)。
1H NMR[400MHz DMSO-d6]:δ12.20(s，1H)，8.79(s，2H)，8.06(dd，J＝7.6，1.2Hz，1H)，7.78-7.73(m，1H)，7.57(d，J＝8.0Hz， 1H)，7.47-7.43(m，1H)，3.93(t，J＝4.4Hz，2H)，3.81(t，J＝4.4Hz， 2H)，3.66(t，J＝4.8Hz，2H)，3.57(t，J＝5.6Hz，2H)，2.90(s，4H)。
LCMS:m/z:390.67[M+H]+。
实施例46–2-甲基-5-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基] 吡唑-3-甲腈的合成
步骤-1:
将Et3N(17.3mL，0.12mol)加至丁-2-炔二酸二甲酯(8g，0.05 mmol)在MeOH(80mL)、H2O(40mL)中的溶液中并在室温下搅拌30 分钟。加入甲基肼硫酸盐(8.92g，61.9mol)并将反应混合物在70℃下搅拌22h。使溶液在室温下静置过夜并将形成的固体过滤，在高真空下干燥以得到淡棕色固体状的5-羟基-2-甲基-吡唑-3-羧酸甲酯(3.5 g，40％)。
LCMS:m/z:157.3[M+H]+。
步骤-2:
在0℃下向5-羟基-2-甲基-吡唑-3-羧酸甲酯(0.3g，1.92mmol) 在DCM(30mL)中的搅拌溶液中滴加吡啶(0.18g，2.30mmol)，然后是Tf2O(0.59g，2.11mmol)。将反应混合物缓慢加温至室温并搅拌2h (TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物缓慢用水(15mL)稀释并用DCM(2x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到2-甲基-5-(三氟甲基磺酰氧基) 吡唑-3-羧酸甲酯(580mg，93％)，将其未经进一步纯化即带至下一步骤。
LCMS:m/z:289.4[M+H]+.
步骤-3:
在密封管中装入1,4-二噁烷(40mL)中的2-甲基-5-(三氟甲基磺酰氧基)吡唑-3-羧酸甲酯(1.7g，5.90mmol)、双(频那醇合)二硼(1.64g， 6.48mmol)、KOAc(1.73g，17.6mmol)并在N2下脱气15分钟。加入 Dppf(0.15g，0.29mmol)和PdCl2(dppf).CH2Cl2(0.24g，0.29mmol)并再次在N2下脱气10分钟。将所得反应混合物在90℃下搅拌4h(TLC 指示起始物料完全消耗)，用甲苯(30mL)、水(20mL)稀释并过滤通过
床。将celite垫用甲苯(50mL)洗涤，分离合并的有机洗涤液，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其用戊烷(70mL) 磨碎并过滤。将戊烷层在减压下浓缩以得到淡黄色固体状的(5-甲氧羰基-1-甲基-吡唑-3-基)硼酸(1g，92％)。
LCMS:m/z:185.5[M+H]+。
步骤-4:
在室温下向(5-甲氧羰基-1-甲基-吡唑-3-基)硼酸(1.05g，5.64 mmol)和N-Boc-哌嗪(0.8g，4.34mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中加入吡啶(1.03g，13.03mmol)、
分子筛和Cu(OAc)2(1.57g，8.67 mmol)。将反应混合物在O2气氛(气球压力)和室温下搅拌14h(TLC 指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(10mL)稀释并用DCM(2 x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物(41％纯度)，将其通过柱色谱 (100-200硅胶，30g，15％EtOAc-己烷)纯化以提供白色固体状的4-(5- 甲氧羰基-1-甲基-吡唑-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.43g，60％LCMS)。
LCMS:m/z:325.7[M+H]+。
步骤-5:
在室温下向4-(5-甲氧羰基-1-甲基-吡唑-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 (0.43g，1.32mmol)在THF:MeOH:H2O(1:1:1，15mL)中的搅拌溶液中加入LiOH·H2O(0.27g，6.63mmol)并搅拌5h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用1N HCl酸化直至pH＝4-5并用EtOAc(2 x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水(20mL)洗涤，经无水 Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到白色固体状的5-(4-叔丁氧羰基哌嗪-1-基)-2-甲基-吡唑-3-羧酸(0.24g，58％)。
LCMS:m/z:311.4[M+H]+。
步骤-6:
在氩气氛下向5-(4-叔丁氧羰基哌嗪-1-基)-2-甲基-吡唑-3-羧酸(0.47g，1.51mmol)在THF(20mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl (0.43g，2.27mmol)、HOBt·NH3(0.34g，2.27mmol)和DIPEA(0.8mL， 4.55mmol)并在室温下搅拌6h(TLC指示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物并将残余物用水(40mL)和EtOAc(100mL)稀释。将有机层分离，用冷水(2x 20mL)、盐水(2x 20mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，20 g，2.5％MeOH-DCM)纯化以提供白色固体状的4-(5-氨基甲酰基-1-甲基-吡唑-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.40g，86％)。
LCMS:m/z:310.7[M+H]+。
步骤-7:
向冷却至0℃的4-(5-氨基甲酰基-1-甲基-吡唑-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.17g，0.55mmol)在THF(5.0mL)中的搅拌溶液中加入Et3N (0.19mL，1.37mmol)，然后是Tf2O(0.27mL，1.90mmol)。将反应混合物缓慢带至室温并搅拌1h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(10mL)稀释并用EtOAc(2x 25mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和NaHCO3溶液(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到淡黄色固体状的4-(5-氰基-1-甲基-吡唑-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.11g，68％)。
LCMS:m/z:292.5[M+H-100]+。
步骤-8:
向冷却至0℃的4-(5-氰基-1-甲基-吡唑-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 (0.11g，0.37mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷中的4N HCl(3mL)。将反应混合物带至室温，搅拌5h(TLC指示起始物料完全消耗)，在减压下浓缩以得到粗残余物，将其用Et2O(5mL) 洗涤并在高真空下干燥以得到白色固体状的2-甲基-5-哌嗪-1-基-吡唑 -3-甲腈盐酸盐(70mg，73％)。
LCMS:m/z:192.5[M+H]+。
步骤-9:
在室温下向2-甲基-5-哌嗪-1-基-吡唑-3-甲腈盐酸盐(0.06g，0.28 mmol)和3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(0.075g，0.34mmol)在DMF (2mL)中的搅拌溶液中加入EtOAc中的50％T3P(0.36mL，0.57mmol) 和DIPEA(0.1mL，0.57mmol)并搅拌4h(TLC显示起始物料完全消耗)。将反应混合物在高真空下浓缩以得到粗残余物，将其用5％ MeOH-DCM(75mL)稀释并用冷水(2x 10mL)洗涤。将有机层分离，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗残余物(110mg，37％LCMS)，将其制备性纯化以得到白色固体状的2-甲基-5-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡唑-3-甲腈(22mg，16％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.15(brs，1H)，8.07(d，J＝ 6.8，1.2Hz，1H)，7.76-7.72(m，1H)，7.53(d，J＝8.0Hz，1H)，7.44 (t，J＝7.2Hz，1H)，6.62(s，1H)，3.83(s，3H)，3.61(t，J＝4.8Hz， 2H)，3.54(t，J＝5.2Hz，2H)，3.18(t，J＝6.4Hz，2H)，3.06(t，J＝4.8Hz，2H)，2.87(s，4H)。
LCMS:m/z:392.7[M+H]+。
实施例47–3-氯-N,N-二甲基-4-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基] 哌嗪-1-基]苯甲酰胺的合成
步骤-1:
在室温下向3-氯-4-氟-苯甲酸(0.5g，2.87mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入Me2NH(0.3mL，5.74mmol，1M于THF中)和CDI (0.7g，4.31mmol)并搅拌5h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(40mL)淬灭并用EtOAc(3x 30mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下除去挥发物以得到残余物，将其用 Et2O洗涤并干燥以提供白色固体状的3-氯-4-氟-N,N-二甲基-苯甲酰胺(450mg，78％)。
LCMS:m/z:202.40[M+H]+。
步骤-2:
将3-氯-4-氟-N,N-二甲基-苯甲酰胺(0.4g，1.99mmol)和哌嗪(0.8 g，9.38mmol)在DMSO(5mL)中的溶液在氩气氛和120℃下搅拌16 h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(40mL)淬灭并用 EtOAc(3x 10mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩并将残余物用Et2O(10mL)洗涤以得到灰白色固体状的3-氯-N,N-二甲基-4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(550mg，65％)。
LCMS:m/z:268.56[M+H]+。
步骤-3:
在室温下向3-氯-N,N-二甲基-4-哌嗪-1-基-苯甲酰胺(150mg，0.55 mmol)和3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(122mg，0.55mmol)在干燥 DMF(2mL)中的搅拌溶液中加入EDC·HCl(160mg，0.83mmol)、 HOBt(113mg，0.83mmol)和DIPEA(0.2mL，1.16mmol)并搅拌16h (TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用水(20mL)淬灭并用 EtOAc(3x 10mL)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，在减压下浓缩并将残余物通过快速色谱(100-200硅胶，5g，5％ MeOH-DCM)纯化以提供白色固体状的3-氯-N,N-二甲基-4-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(80mg，43％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.20(s，1H)，8.07(dd，J＝8， 1.2Hz，1H)，7.78-7.74(m，1H)，7.57(d，J＝8Hz，1H)，7.47-7.43(m，2H)，7.36(dd，J＝8.4，2Hz，1H)，7.15(d，J＝8.4Hz，1H)，3.70(brs，2H)，3.61(brs，2H)，3.05(brs，2H)，2.94(s，8H)，2.89(s，4H)。
LCMS:m/z:468.73[M+H]+。
实施例48–N-甲基-6-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1- 基]吡啶-3-甲脒盐酸盐的合成
步骤-1:
向密封管中的2,5-二溴吡啶(2g，10.7mmol)、叔丁醇钠(1.6g， 16.6mmol)、Xantphos(400mg，0.7mmol)和甲苯(100mL)的搅拌溶液中吹扫氩气5分钟。向反应混合物中加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.4g， 14.30mmol)，然后是Pd2(dba)3(200mg，0.21mmol)，并在80℃下加热4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用EtOAc(200 mL)、水(100mL)稀释，过滤通过Celite床并用EtOAc(2x 30mL)洗涤。将合并的有机萃取物用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗产物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，50g，10-20％EtOAc-己烷)纯化以得到黄色固体状的4-(5-溴-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3g，82％)。
LCMS(ESI+):m/z:342.57[M+H]+。
步骤-2:
在室温下向4-(5-溴-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3g，8.77mmol) 在二噁烷(30mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷中的4N HCl(10mL)并搅拌4h(TLC指示起始物料完全消耗)。将EtOAc(50mL)加至反应混合物，搅拌30分钟，将固体过滤，用醚(20mL)洗涤并在减压下干燥以得到灰白色固体状的1-(5-溴-2-吡啶基)哌嗪盐酸盐(2.1g，93％)。
LCMS(ESI+):m/z:242.43[M+H]+。
步骤-3:
在室温下向1-(5-溴-2-吡啶基)哌嗪盐酸盐(2.1g，8.12mmol)在 DMF(20mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(3.8mL，22.01mmol)、3-(4- 氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(1.6g，7.34mmol)，然后是EtOAc中的50％ T3P溶液(7mL，11.00mmol)，并搅拌12h(LCMS指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用冰水(200mL)淬灭，搅拌2h，将获得的固体过滤，用水(50mL)、丙酮(20mL)洗涤并在真空下干燥以获得灰白色固体状的2-[3-[4-(5-溴-2-吡啶基)哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉 -4-酮(1.6g，50％)。
LCMS(ESI+):m/z:442.59[M+H]+。
步骤-4:
在氩气氛下向密封管中的2-[3-[4-(5-溴-2-吡啶基)哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮(1.6g，3.62mmol)在二噁烷(30mL)中的搅拌溶液中加入乙酸钾(1.1g，11.21mmol)，然后是双(频那醇合)二硼(1.3 g，5.12mmol)和Pd(dppf)Cl2(89mg，0.11mmol)。将反应在80℃下加热12h(LCMS指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用EtOAc(75 mL)稀释，过滤通过
床，用EtOAc(2x 50mL)洗涤；将合并的有机萃取物用盐水(25mL)洗涤，经硫酸钠干燥并在减压下浓缩以得到粗产物，将其用戊烷(2x 10mL)洗涤以得到2-[3-氧代 -3-[4-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-2-吡啶基]哌嗪-1-基]丙基]-3H-喹唑啉-4-酮和[6-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]硼酸二者的混合物(1.16g)，将其未经进一步纯化即用于下一反应。
LCMS(ESI+):m/z:408.69[M+H]+。(硼酸)
步骤-5:
在氩气氛下向2-[3-氧代-3-[4-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-2-吡啶基]哌嗪-1-基]丙基]-3H-喹唑啉-4-酮和[6-[4-[3-(4- 氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]硼酸的混合物 (1.16g)的搅拌溶液中加入噻吩-2-羧酸铜(I)(1.1g，5.77mmol)、THF 中的三-2-呋喃基膦(140mg，0.60mmol)、Pd2(dba)3(91mg，0.10mmol)。将反应混合物用氩气吹扫5分钟，然后在氩气氛下加入THF (18mL)中的N,N′-双(叔丁氧羰基)-S-甲基异硫脲(600mg，1.97mmol)，在此期间形成稠均相溶液。将反应混合物在65℃下加热18h(LCMS 指示16％的硼酸)，然后带至室温，加入饱和NaHCO3水溶液(20mL) 和EtOAc(30mL)。将有机层分离，用盐水(25mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到粗产物，将其通过柱色谱(100-200硅胶， 100g，2-5％MeOH-DCM)纯化以得到N-[(E)-N-叔丁氧羰基 -C-[6-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]碳亚氨酰基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(240mg，12％LCMS)，将其通过制备型HPLC再纯化以提供白色固体状的纯化合物(13mg)。
LCMS(ESI+):m/z:620.92[M+H]+。
步骤-6:
向N-[(E)-N-叔丁氧羰基-C-[6-[4-[3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]-3-吡啶基]碳亚氨酰基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(13 mg，0.021mmol)在二噁烷(0.5mL)中的搅拌溶液中加入二噁烷中的4 N HCl(0.4mL，1.744mmol)并在室温下搅拌2h(LCMS指示起始物料完全消耗)。将反应混合物在减压下浓缩以得到粗产物，将其用 EtOAc(2x 5mL)，然后是Et2O(2x 5mL)洗涤，然后在CH3CN(5mL) 和水(5mL)的混合物中冻干以得到灰白色固体状的N-甲基-6-[4-[3-(4- 氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]哌嗪-1-基]吡啶-3-甲脒盐酸盐(12mg， 99％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ8.58(brs，1H)，8.14(d，J＝7.6 Hz，2H)，7.99(brs，1H)，7.92-7.78(m，2H)，7.63-7.57(m，1H)， 7.35(brs，1H)，7.13-7.08(m，1H)，4.26(brs，5H)，3.81(s，2H)， 3.68(s，4H)，3.60(s，2H)，3.06(s，3H)。
LCMS(ESI+):m/z:420.70[M+H]+。
步骤-7:
向冷却至0℃的N-[(叔丁氧羰基氨基)-甲硫基-亚甲基]氨基己酸叔丁酯(1g，3.44mmol)在DMF(20mL)中的溶液中分批加入60％氢化钠(276mg，6.916mmol)，然后是MeI(0.32mL，5.162mmol)。将反应混合物加温至室温并搅拌3h(TLC指示起始物料完全消耗)。将反应混合物用冰水(30mL)淬灭并用EtOAc(2x 50mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下浓缩以得到残余物，将其通过柱色谱(100-200硅胶，20g，5-10％EtOAc-己烷) 纯化以提供无色油状的N-(N-叔丁氧羰基-C-甲硫基-碳亚氨酰基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(650mg，63％)。
LCMS(ESI+):m/z:305.66[M+H]+。
实施例49–2-[3-[4-[5-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)-2-吡啶基]哌嗪-1- 基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮的合成
步骤-1:
在室温下向6-氯吡啶-3-羧酸甲酯(500mg，2.91mmol)在DMF(5 mL)中的搅拌溶液中加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(720mg，3.87mmol)、 K2CO3(1.2g，8.74mmol)和DMAP(35mg，0.29mmol)。将反应混合物在CEM微波中在80℃下加热30分钟(TLC显示起始物料完全消耗)并用水(20mL)稀释，在此期间沉淀出固体。将固体过滤并溶于 EtOAc(50mL)中，经Na2SO4干燥，在减压下浓缩以得到粗化合物，将其通过快速色谱(100-200硅胶，5g，30％EtOAc-己烷)纯化以得到白色固体状的4-(5-甲氧羰基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(510mg， 54％)。
LCMS:m/z:322.63[M+H]+。
步骤-2:
向冷却至0℃的三甲基铝(1.86mL，3.73mmol，2M于甲苯中) 在甲苯(12mL)中的搅拌溶液中加入乙二胺(0.25mL，3.73mmol)。将反应混合物加温至室温，搅拌5分钟并在室温下加入甲苯(4mL)中的 4-(5-甲氧羰基-2-吡啶基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.62mmol)。将反应混合物回流3h(TLC显示起始物料完全消耗)，缓慢带至室温，用水(5mL)淬灭并溶于MeOH(15mL)和DCM(15mL)中。将反应混合物过滤通过Na2SO4；将获得的滤液在真空下蒸发以得到粗残余物。将残余物溶于EtOAc(50mL)中，在80℃下加热5分钟，过滤通过 Na2SO4并在真空下浓缩以得到粗化合物。将粗残余物通过柱色谱 (100-200硅胶，4g，10％MeOH-80％DCM-10％NH3水)纯化以得到白色固体状的4-[5-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)-2-吡啶基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(160mg，78％)。
LCMS:m/z:332.70[M+H]+。
步骤-3:
向冷却至0℃的4-[5-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)-2-吡啶基]哌嗪-1- 羧酸叔丁酯(160mg，0.48mmol)在1,4-二噁烷(3ml)中的搅拌溶液中加入1,4-二噁烷中的4N HCl(0.48mL，1.93mmol)。将反应混合物加温至室温并搅拌4h(TLC显示起始物料完全消耗)。在减压下蒸发挥发物以得到1-[5-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)-2-吡啶基]哌嗪盐酸盐(130mg，100％)，其未经进一步纯化即用于下一步骤。
LCMS:m/z:232.56[M+H]+。
步骤-4:
在室温下向3-(4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(100mg，0.458mmol) 在DMF(5mL)中的搅拌溶液中加入1-[5-(4,5-二氢-1H-咪唑-2-基)-2- 吡啶基]哌嗪盐酸盐(127mg，0.55mmol)、EDC·HCl(131mg，0.68 mmol)、HOBt(93mg，0.68mmol)和DIPEA(0.32mL，1.83mmol)并搅拌16h(TLC显示起始物料完全消耗)。在减压下除去挥发物以得到粗残余物，将其用冷水(30mL)稀释，在此期间沉淀出固体。将沉淀物过滤，在真空下干燥以得到粗产物(120mg，92％LCMS)，并通过制备型HPLC纯化以获得白色固体状的2-[3-[4-[5-(4,5-二氢-1H-咪唑 -2-基)-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-3-氧代-丙基]-3H-喹唑啉-4-酮(55mg， 28％)。
1H NMR[400MHz，DMSO-d6]:δ12.0(s，1H)，8.54(d，J＝2.0 Hz，1H)，8.07(dd，J＝1.6，8.0Hz，1H)，7.92(dd，J＝2.4，9.2Hz， 1H)，7.76-7.71(m，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H)，7.46-7.42(m，1H)，6.87(d，J＝9.2Hz，1H)，3.70-3.65(m，4H)，3.56(brs，8H)，2.89(brs，4H)。
LCMS:m/z:432.73[M+H]+。
实施例50–8-氯-2-(3-(4-(4-氟苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-3-氧代丙基)喹唑啉-4(3H)-酮的合成
步骤-1:
将2-氨基-3-氯苯甲酸(10g，58.3mmol)溶于DMF(30mL)中，然后依序加入HOBt(10.2g，75.8mmol)、EDCI(13.4g，69.9mmol)、氯化铵(12.5g，233mmol)和DIEA(40.6mL，233mmol)。将所得混合物在室温下搅拌20小时。将混合物在H2O(200mL)和EtOAc(200 mL)之间分配并分离各相。将水层用EtOAc(2x 150mL)萃取。将合并的有机萃取物用50％饱和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并过滤。将滤液浓缩以得到黄色/白色固体残余物。将固体残余物溶于DMF(10mL) 中。加入DCM(10mL)导致白色沉淀，通过过滤将其收集。再重复此过程两次以提供白色蓬松固体状的2-氨基-3-氯-苯甲酰胺(5.1g)。
LC-MS:m/z:171.1[M+H]+
步骤-2:
将2-氨基-3-氯-苯甲酰胺(500mg，2.93mmol)和琥珀酸酐(293 mg，2.93mmol)在甲苯(5mL)中的悬浮液在110℃下搅拌。混合物在1小时后变为均质。另外16小时后，形成沉淀。将混合物冷却至室温并在真空中浓缩。将1N NaOH(10mL)加至残余物并将所得混合物在110℃下加热10分钟，然后冷却至室温。加入1N HCl直至pH达到～1。形成白色沉淀，通过过滤将其收集。将固体用水(2x 5mL)洗涤并干燥以得到白色固体状的3-(8-氯-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(294 mg)。
LC-MS:m/z 253.0[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.45(s，1H)，12.20(br.s，1H)， 8.04(dd，J＝7.9，1.5Hz，1H)，7.92(dd，J＝7.8，1.4Hz，1H)，7.43 (t，J＝7.8Hz，1H)，2.89(dd，J＝10.6，3.7Hz，2H)，2.78(dd，J＝ 10.6，3.6Hz，2H)。
步骤-3:
向4-(4-氟苯基)-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐(18.6mg，0.087mmol)和 3-(8-氯-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酸(20.0mg，0.079mmol)在DMF(3 mL)中的溶液中加入HATU(33.1mg，0.087mmol)，然后是DIEA(33.9 μL，0.190mmol)。将所得混合物在室温下搅拌3小时，然后用EtOAc (40mL)稀释并用饱和NaHCO3(水性)(10mL)、50％饱和盐水(3x5 mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶快速色谱纯化以得到白色固体状的粗产物(13mg)，通过LC-MS和 NMR确认其为90％纯材料。将此固体用EtOAc(3mL)磨碎并通过倾析液体收集固体以得到白色固体状的8-氯-2-(3-(4-(4-氟苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-3-氧代丙基)喹唑啉-4(3H)-酮(1.2mg)。
LC-MS:m/z 412.1[M+H]+
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ11.08(s，1H)，8.18(d，J＝8.0Hz， 1H)，7.79(d，J＝7.7Hz，1H)，7.38–7.28(m，3H)，7.03(td，J＝8.7， 2.0Hz，2H)，5.98(d，J＝45.0Hz，1H)，4.23(d，J＝77.1Hz，2H)， 3.80(dt，J＝100.6，5.7Hz，2H)，3.17(dd，J＝13.7，7.8Hz，2H)， 3.02–2.84(m，2H)，2.65–2.48(m，2H)。
实施例51–2-(3-(4-(4-氟苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-3-氧代丙基) 喹唑啉-4(3H)-酮的合成
采用适当的起始物料，根据与针对8-氯-2-(3-(4-(4-氟苯基)-3,6- 二氢吡啶-1(2H)-基)-3-氧代丙基)喹唑啉-4(3H)-酮(实施例50)相同的顺序合成该化合物。
LC-MS:m/z 378.4[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.19(s，1H)，8.07(d，J＝7.9Hz， 1H)，7.72(ddd，J＝8.5，7.2，1.6Hz，1H)，7.53(d，J＝8.1Hz，1H)， 7.50–7.46(m，2H)，7.46–7.41(m，1H)，7.18(t，J＝8.8Hz，2H)， 6.20–6.12(m，1H)，4.24(d，J＝2.6Hz，1H)，4.09(d，J＝2.7Hz， 1H)，3.72(t，J＝5.6Hz，1H)，3.66(t，J＝5.7Hz，1H)，2.98–2.85 (m，4H)，2.58(s，1H)，2.42(s，1H)。
实施例52–2-(3-(4-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)喹唑啉-4(3H)- 酮的合成
采用适当的起始物料，根据与针对8-氯-2-(3-(4-(4-氟苯基)-3,6- 二氢吡啶-1(2H)-基)-3-氧代丙基)喹唑啉-4(3H)-酮(实施例50)相同的顺序合成该化合物。
LC-MS:m/z 381.4[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ12.18(s，1H)，8.07(dd，J＝8.0， 1.2Hz，1H)，7.77–7.71(m，1H)，7.55(d，J＝8.0Hz，1H)，7.44(ddd， J＝8.1，7.3，1.1Hz，1H)，7.10–7.04(m，2H)，7.01–6.95(m，2H)， 3.70–3.63(m，2H)，3.63–3.54(m，2H)，3.15–3.10(m，2H)，3.04 –2.98(m，2H)，2.89(s，4H)。
实施例53–2-(3-(4-(4-氟苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-3-氧代丙基)-7-甲基-3,7-二氢-4H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-酮的合成
采用适当的起始物料(2-氨基-1-甲基-1H-吡咯-32-甲酰胺，CAS No：1894093-24-3)，根据与针对8-氯-2-(3-(4-(4-氟苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)-3-氧代丙基)喹唑啉-4(3H)-酮(实施例50)相同的顺序合成该化合物。
LC-MS:m/z 381.4[M+H]+
1H NMR(500MHz，DMSO)δ11.70(s，1H)，7.48(ddd，J＝8.7， 5.6，2.1Hz，2H)，7.21–7.14(m，2H)，6.98(d，J＝3.3Hz，1H)， 6.37(d，J＝3.3Hz，1H)，6.16(t，J＝3.3Hz，1H)，4.23(d，J＝2.5Hz， 1H)，4.10(d，J＝2.6Hz，1H)，3.71(t，J＝5.6Hz，1H)，3.67(t，J＝ 5.7Hz，1H)，3.61(d，J＝6.5Hz，3H)，2.92–2.80(m，4H)，2.60– 2.54(m，1H)，2.46–2.40(m，1H)。
实施例54人PARP测定
聚(ADP-核糖)聚合酶-1(PARP-1)和聚(ADP-核糖)聚合酶 -2(PARP-2)是参与许多细胞活动(包括DNA修复)的两种核酶，并在维持DNA完整性和染色质结构中发挥关键作用。本测定旨在评估测试物质抑制PARP-1或PARP-2活性的潜力，并使用闪烁迫近测定(SPA)形式。
闪烁迫近测定(SPA)旨在使用纯化的重组PARP-1酶测量PARP 活性，并且是用于药物发现的小分子抑制剂的高通量筛选的理想选择。在此，将重组人PARP-1或PARP-2酶与底物混合物(NAD，3H-NAD和生物素化的NAD)一起孵育，并使用链霉亲和素缀合的 PVT SPA珠粒捕获[3H]和生物素标记的ADP-核糖聚合物。在没有酶抑制的情况下，获得100％信号。当PARP-1或PARP-2介导的聚-ADP 核糖聚合物形成减少时，通过信号的减少来鉴定抑制剂。
以下列出了本方案中使用的化学品和试剂，以及来源和目录号。
注：使用灵敏度为0.01mg的称重天平称量所有化学品。
仪器：Perkin Elmer；TopCount NXT
试剂和缓冲液制备
缓冲液A 4X：
Tris pH 8：100mM；MgCl2：4mM；精胺：4mM；KCl：200mM；Nonidet P-40替代物：0.04％。
每孔的测定混合物A
缓冲液A 4X:12.5μL
DTT 100mM:0.5μL
PARP-1酶:1单位/孔，体积取决于批次比活性
PARP-2酶:30ng/孔，体积取决于批次比活性
H2O:至35μL
每孔的测定混合物B
[腺嘌呤-2,8-3H]-NAD 100uCi/ml:1μL(0.1μCi/孔)
3H-NAD 100uCi/ml:2μl(0.2μCi/孔)
NAD 1.5mM:0.05μL
生物素化-NAD 2501.iM:0.03μL
活化小牛胸腺DNA:50μg
H2O:至10μL
测定混合物C
链霉亲和素-SPA珠粒：2.5mg/mL于200mM EDTA pH 8.0中(用于PARP-1测定)
链霉亲和素-SPA珠粒：2.5mg/ml dH2O(用于PARP-2测定)
测定程序
通过使用100％DMSO制备参比化合物4-氨基-1,8-萘二甲酰亚胺 (4-ANI)的10mM溶液。使用100％DMSO将10mM 4-ANI稀释至 2mM并进一步稀释至200μM。在100％DMSO中连续稀释200μM 4-ANI以获得3倍稀释的10种浓度。将5μL系列稀释液转移至95μL 水中以在测定中获得10X的最终浓度。测定中4-ANI的最高浓度为1 μM。
将先前制备的2mM 4-ANI溶液在水中稀释至100μM。将5μL 该100μM 4-ANI加至“NC”(阴性对照)孔中。“NC”孔中4-ANI 的最终浓度为10μM。将“NC”孔定义为具有最低信号的孔。
通过使用100％DMSO制备测试化合物的10mM溶液。在测定中将10mM溶液稀释至200X的所需最终浓度。在100％DMSO中连续稀释200X化合物溶液以获得3倍稀释的10种浓度。
预稀释板：将5μL系列稀释液转移至聚丙烯板中的95μL水中，以在测定中获得10X的最终所需浓度。
PARP反应开发：测定板
将来自预稀释微孔板的5μL/孔转移入96孔白色微孔板(Corning 3600)中。加入35μL/孔的测定混合物A并在室温下孵育5分钟。加入10μL/孔的测定混合物B以开始反应。将测定板在室温下孵育3小时。
测定板检测：
加入50μL/孔的测定混合物C。密封具有TOPSEAL-A 96的板。将该测定伴随轻轻摇动孵育15分钟。使用针对氚和PVT SPA珠粒优化的方案在TopCount上读取测定板。
测定条件
结果和数据分析
按CPM收集原始数据。使用4-参数非线性回归拟合浓度-响应曲线并计算IC50值。对NC、PC组的重复CPM值取平均值。从所有原始CPM计数中减去NC的平均值。然后将这些减去背景的值除以平均阳性对照以产生活性％。从100中减去活性％以产生抑制％。绘制数据并拟合至以下方程式：
实施例55基于PARP-1细胞的测定
回应于DNA损伤，作为PARP家族主要同种型的聚(ADP-核糖) 聚合酶-1(PARP-1)通过因暴露于环境试剂、癌症治疗、炎症、缺血再灌注和神经变性而发生的DNA链断裂而迅速活化。一旦活化， NAD+被消耗用于合成高度带负电的聚合物聚-ADP核糖(PAR)，其发现于包括PARP-1作为主要受体的靶核蛋白上。由于PARP活化，广泛的DNA损伤可导致细胞中NAD+的消耗，并导致细胞死亡。因此，PARP-1被认为是用于开发可用于癌症治疗、炎症、局部缺血和神经变性的各种方案的药物的有前景的靶标。
在本测定中，为了监测细胞内的PARP活性，用PARP-1抑制剂处理HeLa细胞，然后用H2O2诱导DNA损伤。通过测量从经处理和未处理细胞收集的细胞裂解物中的NAD+和NADH的水平来评估最终的PARP1活性。
材料和试剂
仪器：检测：在Envision读板仪/计数器(Perkin Elmer)中进行发光检测
试剂及培养基制备
培养基制备
DMEM培养基:1X
FBS(热灭活):10％
青霉素-链霉素(10,000U/mL):0.1mg/mL
L-谷氨酰胺:2mM
制备荧光素检测试剂
将重构缓冲液解冻。将重构缓冲液和荧光素检测试剂平衡至室温。将重构缓冲液瓶的全部内容物转移至琥珀色的冻干荧光素检测试剂瓶中。通过涡旋或倒置混合两种试剂以获得均匀的溶液。无涡流。荧光素检测试剂应在不到1分钟内轻易进入溶液。
制备NAD/NADH-GloTM检测试剂
向含有NAD+或NADH的每个样品中加入等体积的 NAD/NADH-GloTM检测试剂。
将重构的荧光素检测试剂平衡至室温。在使用前，将还原酶、还原酶底物和NAD+循环底物在室温或冰上解冻。通过添加275μL水重构NAD+循环酶。将混合物在小瓶中轻轻涡旋，并储存在冰上。通过每1mL经重构荧光素检测试剂添加5μL还原酶、5μL还原酶底物、 5μLNAD+循环酶和25μL NAD+循环底物来制备所需量的 NAD/NADH-GloTM检测试剂。将混合物轻轻倒转五次。
最终测定条件：
细胞接种及化合物处理：
将96孔细胞培养微孔板中的HeLa细胞以10,000个细胞/孔的密度接种在90μL培养基中。将板在37℃、5％CO2气氛下孵育4小时。加入在8个点上连续稀释(浓度范围：0.3-100nM)的10μL 10X化合物(5％DMSO)。将经处理板在37℃、5％CO2中孵育18小时。加入5μLH2O2在H2O中的溶液(终浓度200μM)以引起DNA损伤。将未用H2O2处理的细胞保持在阴性对照孔中。将板在37℃下孵育5 分钟，然后倒置以温和地除去培养基。向所有孔中加入50μL的1xPBS。
PARP活性测定：分别测量NAD+和NADH
本方案用于在96孔白色光度计板中测定每孔50μl PBS中的细胞。将每个细胞孔分成两份样品：一份样品用酸处理以定量NAD+，另一份用碱处理以定量NADH。当铺板时，保留板上的孔用于拆分样品。或者，在拆分样品时使用第二个板。
向50μl PBS中的每个细胞孔中加入50μl含1％DTAB的碱溶液。将板在平板振荡器上短暂混合以确保均匀性和细胞裂解。将50μl的每种样品移至空孔中进行酸处理。向这些样品中加入每孔25μl的 0.4N HCl；这些孔含有经酸处理的样品。原始样品孔是碱处理的样品。覆盖板并在60℃下孵育15分钟。然后将板在室温下平衡10分钟。向酸处理的细胞的每个孔中加入25μl的0.5M 
碱以中和酸。向含有碱处理样品的每个孔中加入50μl HCl/
溶液。如上所述制备NAD/NADH-GloTM检测试剂。向每个孔中加入等体积的 NAD/NADH-GloTM检测试剂(例如，100μl)。轻轻摇动板以混合。将板在室温下孵育30-60分钟。通过使用光度计(Envision， PerkinElmer)记录发光。收集发光值。使用非线性回归来产生剂量响应曲线并计算IC50值。
下表列出了本发明的代表性化合物对PARP1-1和PARP-2活性的抑制作用。结果表明，本发明化合物相对于PARP-2选择性地抑制 PARP1-1，并且可用于增加细胞中的NAD+量。
实施例56急性肾损伤(AKI)大鼠模型
动物、手术和给药：在这些实验中使用重约300-350g、随意获得标准饲料和水的Sprague-Dawley雄性大鼠。将大鼠用异氟烷麻醉并腹侧放置在温度受控的加热手术平台上。在背面进行皮肤切口，通过侧翼切口暴露两个肾脏。将血管夹应用于两个肾蒂并且闭塞持续45分钟。45分钟后，移除夹子，监测肾脏成功再灌注，并缝合手术部位。假手术组进行类似的外科程序，但不应用闭塞夹。将化合物配制成实施例29或实施例30的在N-甲基吡咯烷酮：PEG300：丙二醇：生理盐水(10：30：20：40)中的新鲜每日透明溶液。在手术当天再灌注后4小时，通过尾静脉以15 mg/kg(3mL/kg)IV给药化合物或媒介物。在第1天(手术后天数)，在光周期开始时向动物施用媒介物或 15mg/kg的实施例29或实施例30(3mL/kg I.V)。假手术对照动物类似地给药媒介物。
血浆收集和生物标志物测量：再灌注后24小时，在轻度异氟醚麻醉下，通过所有组的眶后出血在K2EDTA管中收集血液。通过在 4℃下以3000 rpm离心10分钟来分离血浆。使用全自动临床生化分析仪(Siemens Dimension
Xpand
Plus集成化学系统)分析血浆肌酸酐和血尿素氮(BUN)。
数据分析和统计分析：将GraphPad Prism软件6.05版用于绘图和统计测试。通过D’Agostino-Pearson综合正态性检验或Shapiro-Wilk 正态性检验测试肌酸酐和BUN在所有组中的正态分布。通过学生t 检验比较假媒介物组与IR媒介物组或IR媒介物组与化合物处理组来确定统计学显著性(p<0.05)。##p<0.01，###p<0.001，####p<0.0001 假媒介物组相比于IR媒介物组；*p<0.05，**p<0.01 IR媒介物组相比于化合物处理组(实施例29或实施例30)。
结果：在缺血再灌注后IV给药PARP1-抑制剂实施例29和实施例30减少了肾损伤。当以15mg/kg给药时，两种化合物均显著降低血浆肌酸酐和BUN(图1)。
实施例57体外和体内微核测定
本发明的某些化合物在体外和/或体内微核测定中未显示出致染色体断裂活性。
Claims (39)
1.药物组合物，其包含药学上可接受的载体或稀释剂以及由以下结构式表示的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A为任选取代的苯基或任选取代的5-6元杂芳基，其中所述苯基或5-6元杂芳基任选地被一个或多个R1取代；
环B为芳基；5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其各自任选地被一个或多个由R3表示的取代基取代；
“----”为不存在或为键；
当“----”为不存在时E为N或CH，或者当“-----”为键时E为C；
每个R1独立地选自-卤素，-CN，-NO2，-ORc，-NRaRb，-S(O)iRa，-NRaS(O)iRb，-S(O)iNRaRb，-C(＝O)ORa，-OC(＝O)ORa，-C(＝S)ORa，-O(C＝S)Ra，-C(＝O)NRaRb，-NRaC(＝O)Rb，-C(＝S)NRaRb，-NRaC(＝S)Rb，-NRa(C＝O)ORb，-O(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)ORb，-O(C＝S)NRaRb，-NRa(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)NRaRb，-C(＝S)Ra，-C(＝O)Rb，卤代(C1-C5)烷基和(C1-C5)烷基，其中由R1表示的所述(C1-C5)烷基任选地被以下取代：-CN，-NO2，-ORc，-NRaRb，-S(O)iRa，-NRaS(O)iRb，-S(O)iNRaRb，-C(＝O)ORa，-OC(＝O)ORa，-C(＝S)ORa，-O(C＝S)Ra，-C(＝O)NRaRb，-NRaC(＝O)Rb，-C(＝S)NRaRb，-NRaC(＝S)Rb，-NRa(C＝O)ORb，-O(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)ORb，-O(C＝S)NRaRb，-NRa(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)NRaRb，-C(＝S)Ra或-C(＝O)Ra；
每个Ra和每个Rb独立地选自–H和任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代的(C1-C5)烷基；
Rc为–H，卤代(C1-C5)烷基或(C1-C5)烷基，其中所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代；
每个R3独立地选自：-卤素，-CN，-NO2，-ORd，-S(O)iRe，-C(＝NRe)NReRf，-NReS(O)iRf，-S(O)iNReRf，-C(＝O)ORe，-OC(＝O)ORe，-C(＝S)ORe，-O(C＝S)Re，-C(＝O)NReRf，-NReC(＝O)Rf，-C(＝S)NReRf，-NReC(＝S)Rf，-NRe(C＝O)ORf，-O(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)ORf，-O(C＝S)NReRf，-NRe(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)NReRf，-C(＝S)Re，-C(＝O)Re，卤代(C1-C5)烷基和(C1-C5)烷基，其中由R3表示的所述(C1-C5)烷基任选地被以下取代：-CN，-NO2，-ORe，-NReRf，-S(O)iRe，-NReS(O)iRf，-S(O)iNReRf，-C(＝O)ORe，-OC(＝O)ORe，-C(＝S)ORe，-O(C＝S)Re，-C(＝O)NReRf，-NReC(＝O)Rf，-C(＝S)NReRf，-NReC(＝S)Rf，-NRe(C＝O)ORf，-O(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)ORf，-O(C＝S)NReRf，-NRe(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)NReRf，-C(＝S)Re或-C(＝O)Re；
Rd为–H，卤代(C1-C5)烷基或(C1-C5)烷基，其中所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代；
每个Re独立地选自–H和(C1-C5)烷基，所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代；
每个Rf独立地选自–H，任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代的(C1-C5)烷基，任选地被(C1-C2)烷基取代的(C3-C6)环烷基，以及任选地被(C1-C2)烷基取代的4-6元含氧杂环基；或者
–NReRf一起为任选地被(C1-C2)烷基取代的4-6元杂环基；或者
-C(＝NRe)NReRf一起为任选地被Re取代的4-6元杂环基；
R5为-H或(C1-C5)烷基；并且
i为0，1或2。
2.权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物由以下结构式表示：
或为其药学上可接受的盐，其中：
环A为任选取代的苯基或任选取代的5-6元杂芳基，其中所述苯基或5-6元杂芳基任选地被一个或多个R1取代；
环B为芳基，5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其各自任选地被一个或多个由R3表示的取代基取代；
“----”为不存在或为键；
当“----”为不存在时E为N或CH，或者当“-----”为键时E为C；
每个R1独立地选自-卤素，-CN，-NO2，-ORc，-NRaRb，-S(O)iRa，-NRaS(O)iRb，-S(O)iNRaRb，-C(＝O)ORa，-OC(＝O)ORa，-C(＝S)ORa，-O(C＝S)Ra，-C(＝O)NRaRb，-NRaC(＝O)Rb，-C(＝S)NRaRb，-NRaC(＝S)Rb，-NRa(C＝O)ORb，-O(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)ORb，-O(C＝S)NRaRb，-NRa(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)NRaRb，-C(＝S)Ra，-C(＝O)Rb，卤代(C1-C5)烷基和(C1-C5)烷基，其中由R1表示的所述(C1-C5)烷基任选地被以下取代：-CN，-NO2，-ORc，-NRaRb，-S(O)iRa，-NRaS(O)iRb，-S(O)iNRaRb，-C(＝O)ORa，-OC(＝O)ORa，-C(＝S)ORa，-O(C＝S)Ra，-C(＝O)NRaRb，-NRaC(＝O)Rb，-C(＝S)NRaRb，-NRaC(＝S)Rb，-NRa(C＝O)ORb，-O(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)ORb，-O(C＝S)NRaRb，-NRa(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)NRaRb，-C(＝S)Ra或-C(＝O)Ra；
每个Ra和每个Rb独立地选自–H和任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代的(C1-C5)烷基；
Rc为–H，卤代(C1-C5)烷基或(C1-C5)烷基，其中所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代；
每个R3独立地选自-卤素，-CN，-NO2，-ORd，-S(O)iRe，-C(＝NRe)NReRf，-NReS(O)iRf，-S(O)iNReRf，-C(＝O)ORe，-OC(＝O)ORe，-C(＝S)ORe，-O(C＝S)Re，-C(＝O)NReRf，-NReC(＝O)Rf，-C(＝S)NReRf，-NReC(＝S)Rf，-NRe(C＝O)ORf，-O(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)ORf，-O(C＝S)NReRf，-NRe(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)NReRf，-C(＝S)Re，-C(＝O)Re，卤代(C1-C5)烷基和(C1-C5)烷基，其中由R3表示的所述(C1-C5)烷基任选地被以下取代：-CN，-NO2，-ORe，-NReRf，-S(O)iRe，-NReS(O)iRf，-S(O)iNReRf，-C(＝O)ORe，-OC(＝O)ORe，-C(＝S)ORe，-O(C＝S)Re，-C(＝O)NReRf，-NReC(＝O)Rf，-C(＝S)NReRf，-NReC(＝S)Rf，-NRe(C＝O)ORf，-O(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)ORf，-O(C＝S)NReRf，-NRe(C＝O)NReRf，-NRe(C＝S)NReRf，-C(＝S)Re或-C(＝O)Re；
Rd为–H，卤代(C1-C5)烷基或(C1-C5)烷基，其中所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代；
每个Re独立地选自–H和(C1-C5)烷基，所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代；
每个Rf独立地选自–H，任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代的(C1-C5)烷基，任选地被(C1-C2)烷基取代的(C3-C6)环烷基，以及任选地被(C1-C2)烷基取代的4-6元含氧杂环基；或者
–NReRf一起为任选地被(C1-C2)烷基取代的4-6元杂环基；或者
-C(＝NRe)NReRf一起为任选地被Re取代的4-6元杂环基；并且
i为0，1或2。
3.权利要求2所述的药物组合物，其中所述化合物由以下结构式表示：
或为其药学上可接受的盐，其中：
环A为任选取代的苯基或任选取代的5-6元杂芳基，其中所述苯基或5-6元杂芳基任选地被一个或多个R1取代；
环B为芳基，5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其各自任选地被一个或多个由R3表示的取代基取代；并且
4.权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物由选自以下的结构式表示：
或为其药学上可接受的盐，其中：
X1，X2，X3和X4各自独立地选自N和CH，条件是X1，X2，X3和X4中不多于两个为N；
X5为NR2，O或S；
环B为芳基，5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其各自任选地被一个或多个由R3表示的取代基取代；
每个R1独立地选自-卤素，-CN，-NO2，-ORc，-NRaRb，-S(O)iRa，-NRaS(O)iRb，-S(O)iNRaRb，-C(＝O)ORa，-OC(＝O)ORa，-C(＝S)ORa，-O(C＝S)Ra，-C(＝O)NRaRb，-NRaC(＝O)Rb，-C(＝S)NRaRb，-NRaC(＝S)Rb，-NRa(C＝O)ORb，-O(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)ORb，-O(C＝S)NRaRb，-NRa(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)NRaRb，-C(＝S)Ra，-C(＝O)Rb，卤代(C1-C5)烷基和(C1-C5)烷基，其中由R1表示的所述(C1-C5)烷基任选地被以下取代：-CN，-NO2，-ORc，-NRaRb，-S(O)iRa，-NRaS(O)iRb，-S(O)iNRaRb，-C(＝O)ORa，-OC(＝O)ORa，-C(＝S)ORa，-O(C＝S)Ra，-C(＝O)NRaRb，-NRaC(＝O)Rb，-C(＝S)NRaRb，-NRaC(＝S)Rb，-NRa(C＝O)ORb，-O(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)ORb，-O(C＝S)NRaRb，-NRa(C＝O)NRaRb，-NRa(C＝S)NRaRb，-C(＝S)Ra或-C(＝O)Ra；
R2为-H，C1-5烷基，苯基，-C(O)(C1-5烷基)，-C(O)(苯基)，-C(O)O(C1-5烷基)，-C(O)O(苯基)，-S(O)2(C1-5烷基)或-S(O)2(苯基)，其中由R2表示的基团中的每个烷基独立地任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素，羟基，氰基，苯基，5-6元杂芳基，(C1-C5)烷氧基和卤代(C1-C5)烷氧基，并且其中由R2表示的基团中的每个苯基独立地任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素，羟基，硝基，氰基，氨基，(C1-C5)烷基，卤代(C1-C5)烷基，(C1-C5)烷氧基和卤代(C1-C5)烷氧基；
每个Ra和每个Rb独立地选自–H和任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代的(C1-C5)烷基；
Rc为–H，卤代(C1-C5)烷基或(C1-C5)烷基，其中所述(C1-C5)烷基任选地被羟基或(C1-C3)烷氧基取代；
i为0，1或2；并且
n为0，1或2。
5.权利要求4所述的药物组合物，其中所述化合物由选自以下的结构式表示：
或为其药学上可接受的盐，其中：
环B为芳基，5-6元杂芳基或5-6元杂环基，其各自任选地被一个或多个由R3表示的取代基取代；并且
6.权利要求1所述的药物组合物，其中环B选自：
其中R4为–H，(C1-C5)烷基或羟基(C1-C5)烷基；
每个p独立地为0或1；并且
每个m为0或1或2。
7.权利要求6所述的药物组合物，其中环B选自：
8.权利要求4所述的药物组合物，其中：
每个R1独立地为卤素，(C1-C5)烷基，卤代(C1-C5)烷基，(C1-C5)烷氧基，卤代(C1-C5)烷氧基或氰基；
每个R3独立地选自-卤素，-CN，-C(＝NRe)NHRf，-S(O)iNReRf，-C(＝O)NReRf，-C(＝S)NReRf，-O(C＝O)NReRf，-O(C＝S)NReRf，-NRd(C＝O)NReRf，-NRd(C＝S)NReRf和(C1-C5)烷基。
9.权利要求8所述的药物组合物，其中：
每个R1独立地为卤素或(C1-C5)烷基；
每个R3独立地选自-卤素，-CN，-C(＝O)NReRf，-C(＝NRe)NHRf和(C1-C5)烷基。
10.权利要求8所述的药物组合物，其中：
每个R1独立地为氯，氟或甲基；
每个R3独立地选自氯，氟，-CN，-C(＝NRe)NHRf，-C(＝O)NReRf和甲基；
所述
基团任选地被甲基或羟甲基取代。
11.权利要求1所述的药物组合物，其中：
每个Re和每个Rf独立地选自-H和甲基；或者Re为-H且Rf为-(C3-C6)环烷基或4-6元含氧杂环基，其各自任选地被(C1-C2)烷基取代。
12.权利要求11所述的药物组合物，其中：
每个Re和每个Rf独立地选自-H和甲基；或者Re为-H且Rf为环丙基、环丁基或氧杂环丁烷基，其各自任选地被甲基取代。
13.权利要求6所述的药物组合物，其中每个R3独立地选自氯，氟，-CN，-C(O)NH(环丙基)，-C(O)NH2，-C(O)NH(CH3)，-C(O)N(CH3)2，
-C(O)NH(环丁基)，
-C(＝NH)NHCH3和甲基。
14.权利要求4所述的药物组合物，其中R2为–H或(C1-C5)烷基。
15.权利要求14所述的药物组合物，其中R2为–H或甲基。
16.权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物为
6-[(3S)-4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈或其药学上其可接受的盐。
17.权利要求1所述的药物组合物，其中所述化合物为
6-[(3S)-4-[3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈或其药学上其可接受的盐。
18.具有以下结构式的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1为F或甲基；且
R3为–CN，-C(＝NH)NHCH3，
或甲基。
19.权利要求18所述的化合物，其中：
R1为F；且
R3为–CN。
20.一种化合物，其中所述化合物为6-[(3S)-4-[3-(6-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈或其药学上其可接受的盐。
21.一种化合物，其中所述化合物为6-[(3S)-4-[3-(5-氟-4-氧代-3H-喹唑啉-2-基)丙酰基]-3-甲基-哌嗪-1-基]吡啶-3-甲腈或其药学上其可接受的盐。
22.权利要求1-17中任一项所述的药物组合物，或权利要求18-21中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患有通过抑制聚(ADP-核糖)聚合酶而改善的疾病的受试者的药物中的用途。
23.权利要求1-17中任一项所述的药物组合物，或权利要求18-21中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患有急性肾损伤的受试者的药物中的用途。
24.权利要求1-17中任一项所述的药物组合物，或权利要求18-21中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患有癌症的受试者的药物中的用途。
25.权利要求22所述的用途，其中通过抑制聚(ADP-核糖)聚合酶而改善的疾病是肌肉结构障碍、神经元激活障碍、肌肉疲劳障碍、肌肉质量障碍、β氧化疾病、代谢性疾病、癌症、血管疾病、肌肉性眼疾病或肾脏疾病。
26.权利要求25所述的用途，其中：
所述肌肉结构障碍选自Bethlem肌病、中央轴突症、先天性纤维型失衡、远端肌营养不良、Duchenne&Becker型肌营养不良、Emery-Dreifuss型肌营养不良、面肩肱型肌营养不良、均质小体肌病、肢带型肌营养不良、肌肉钠通道障碍、肌强直性营养不良、肌管肌病、杆状体病、眼咽型肌营养不良、或应激性尿失禁；
所述神经元激活障碍选自肌萎缩性侧索硬化症、腓骨肌萎缩症、Guillain-Barre综合征、Lambert-Eaton综合征、多发性硬化症、重症肌无力、神经损伤、脊髓性肌萎缩症、迟发性尺神经麻痹、或中毒性肌肉神经障碍；
所述肌肉疲劳障碍选自慢性疲劳综合征、纤维肌痛、弗里德赖希共济失调、脂质贮积性肌病、庞贝氏病、或甲状腺功能亢进性肌病；
所述肌肉质量障碍为间室症候群、危重病肌病、包涵体肌炎、肌萎缩、肌肉减少症、或类固醇肌病；
所述β氧化疾病选自系统性肉碱转运蛋白、肉碱棕榈酰转移酶II缺乏症、极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症、三功能酶缺乏症、中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症、短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症、或核黄素反应性β氧化障碍；
所述代谢性疾病选自载脂蛋白A-I低蛋白血症、代谢综合征、X综合征、糖尿病、胰岛素抗性、葡萄糖耐量受损、高胰岛素血症、或糖尿病并发症；
所述血管疾病选自外周血管疾病或眼血管疾病、；
所述肌肉性眼疾病选自斜视、渐进性外眼肌麻痹、折射和适应障碍、远视、近视、散光、屈光参差症、老花眼、或内部眼肌麻痹；并且
所述肾脏疾病选自肾小球肾炎、肾小球硬化、肾病综合征、高血压性肾硬化、急性肾炎、复发性血尿、持续性血尿、慢性肾炎、急进性肾炎、急性肾衰竭、慢性肾衰竭、糖尿病肾病、或巴特综合征。
27.权利要求22所述的用途，其中通过抑制聚(ADP-核糖)聚合酶而改善的疾病为周围神经病变、VLDL高蛋白血症、肥胖症、高血糖症、高血压、血脂异常、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪性肝炎、外周血管功能不全、外周动脉疾病、年龄相关性黄斑变性、高血压性视网膜病变、糖尿病性视网膜病变、内斜视或外斜视。
28.权利要求22所述的用途，其中通过抑制聚(ADP-核糖)聚合酶而改善的疾病是神经退行性疾病、脱髓鞘疾病、肌强直性软骨营养不良、高脂血症、外周动脉闭塞性疾病、青光眼或斯特格病。
29.权利要求22所述的用途，其中通过抑制聚(ADP-核糖)聚合酶而改善的疾病为阿尔茨海默病、多发性硬化症、肾上腺脑白质营养不良、牛皮癣、痤疮、皮肤老化、毛发病、炎症、哮喘、过敏性肠综合征、粘多糖贮积症、恶病质、软骨退化或脑瘫。
30.权利要求22所述的用途，其中通过抑制聚(ADP-核糖)聚合酶而改善的疾病选自遗传性脂肪代谢障碍、非酒精性脂肪肝病、肾缺血/再灌注损伤、Duchenne&Becker型肌营养不良症、糖尿病、肥胖症和肌肉减少症。
31.权利要求22所述的用途，其中通过抑制聚(ADP-核糖)聚合酶而改善的疾病选自阿尔珀氏病、CPEO-慢性进行性外部眼肌麻痹、Kearns-Sayra综合征、Leber遗传性视神经病变、MELAS-线粒体肌病、脑肌病、乳酸酸中毒和中风样发作、MERRF-肌阵挛性癫痫和破碎红纤维病、NARP-神经源性肌肉无力、共济失调和视网膜色素变性、皮尔森综合征、铂基化疗引起的耳毒性、Cockayne综合征、着色性干皮病A、华勒氏变性和HIV诱导的脂肪代谢障碍。
32.权利要求26所述的用途，其中：
眼血管疾病选自视网膜病；
外周血管疾病是外周闭塞性动脉病。
33.权利要求32的用途，其中所述视网膜病选自黄斑变性或视网膜出血。
34.权利要求27所述的用途，其中所述血脂异常是高血脂症。
35.根据权利要求34的用途，其中所述高脂血症选自高胆固醇血症、HDL低胆固醇血症或高甘油三酯血症。
36.根据权利要求35的用途，其中所述高胆固醇血症是LDL高胆固醇血症。
37.根据权利要求29的用途，其中所述炎症选自皮炎、关节炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病或胰腺炎。
38.权利要求1-17中任一项所述的药物组合物或权利要求18-21中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗有烧伤的对象的药物中的用途。
39.权利要求1-17中任一项所述的药物组合物或权利要求18-21中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗有创伤的对象的药物中的用途。
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