BR112017022857B1 - Composto, método para preparar o composto, uso de uma composição - Google Patents

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Abstract

composto, método para preparar o composto, composição. trata-se de derivados de pirrolidina carboxamido, isômeros ópticos dos mesmos e sais dos mesmos que têm a capacidade de prevenir, melhorar e/ou tratar afecções inflamatórias, incluindo doença inflamatória intestinal, e métodos para preparar e usar os mesmos.

Description

CAMPO DA TÉCNICA
[0001] A presente invenção se refere a derivados de pirrolidina carboxamido, isômeros ópticos dos mesmos ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos e métodos para preparar e usar os mesmos.
ANTECEDENTES DA TÉCNICA
[0002] Vários compostos/composições/métodos incluindo, porém, sem limitação, fármacos imunossupressivos (por exemplo, infliximab), ácidos aminossalicílicos (por exemplo, sulfassalazina) e esteroides foram propostos como meios para reduzir citocinas e/ou quimiocinas para prevenir e/ou tratar várias doenças incluindo, porém, sem limitação, indicações inflamatórias, cânceres e indicações oftálmicas (Expert opinion on emerging drugs (2015) 20(3):349 a 352; Cell. (2010) 19 de março; 140(6): 883 a 899; Progress in Retinal and Eye Research 37(2013) 68e89, que são incorporados ao presente documento a título de referência). Os mesmos são, entretanto, insatisfatórios pelo menos devido ao fato de que são custosos e/ou envolvem efeitos colaterais e/ou mostram baixa eficácia terapêutica (P&T 41 (2016), 6 de junho; Gut 56(2007)725 a 732; World J Gastroenterol (2005);11 (16):2.462 a 2.466, que são incorporados ao presente documento a título de referência). Portanto, permanece uma necessidade de um novo composto, composição e/ou um método.
SUMÁRIO
[0003] A presente invenção se baseia na revelação de que determinados derivados de pirrolidina carboxamido têm a capacidade de suprimir a expressão e a atividade de citocinas inflamatórias (por exemplo, IL-6) e/ou quimiocinas e têm a capacidade de permanecer a uma concentração suficientemente alta em um tecido/célula-alvo enquanto são menos expostos ao sangue. A presente invenção também se baseia na revelação de que determinados derivados de pirrolidina carboxamido têm a capacidade de inibir a atividade de NF-KB pela estabilização de IKB. A presente invenção se baseia adicionalmente na revelação de que determinados derivados de pirrolidina carboxamido têm a capacidade de interromper a formação do complexo de transdução de sinal inflamatório mediado pelo gene 88 de resposta primária de diferenciação mieloide (MyD88) e/ou pela proteína de interação com receptor 1 (RIP1) que atuam a jusante da trajetória de sinalização envolvendo o receptor do tipo toll 2/4 e IL-1β.
[0004] Em um aspecto, a presente invenção fornece compostos representados pela Fórmula 1 a seguir, isômero ópticos dos mesmos ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. [FÓRMULA 1]
[0005] em que: n é 0, 1 ou 2; A é -a1- que é um aminoácido independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em alanina, (Ala, A), arginina (Arg, R), asparagina (Asn, N), ácido aspártico (Asp, D), cisteína (Cis, C), ácido glutâmico (Glu, E), glutamina (Gin, Q), glicina (Gli, G), histidina (His, H), isoleucina (Ile, I), leucina (Leu, L), lisina (Lis, K), metionina (Met, M), fenilalanina (Phe, F), prolina (Pro, P), serina (Ser, S), treonina (Thr, T), triptopfano (Trp, W), tirosina (Tir, i) e valina (Val, V), sendo que ambas as extremidades terminais dos aminoácido são ligadas a um grupo carbonila ou um grupo amina por uma ligação de amida; e R1 é uma alquila C1-36 de cadeia linear ou ramificada, uma alquenila C2-36 de cadeia linear ou ramificada incluindo pelo menos uma ligação dupla ou uma alquinila C2-36 de cadeia linear ou ramificada incluindo pelo menos uma ligação tripla.
[0006] Em outro aspecto, a presente invenção fornece métodos para preparar os compostos, os isômeros ópticos e os sais.
[0007] Em ainda outro aspecto, a presente invenção fornece composições para prevenir, melhorar e tratar várias doenças (por exemplo, indicações inflamatórias, cânceres e indicações oftálmicas). As composições compreendem, cada uma, como um componente ativo, pelo menos um dos compostos, pelo menos um dos isômeros ópticos ou pelo menos um dos sais.
[0008] Em ainda outro aspecto, a presente invenção fornece métodos para prevenir, melhorar ou tratar várias doenças (por exemplo, indicações inflamatórias, cânceres e indicações oftálmicas). Os métodos compreendem, cada um, administrar a um indivíduo em necessidade uma composição que contém, como um componente ativo, pelo menos um dos compostos, pelo menos um dos isômeros ópticos ou pelo menos um dos sais.
[0009] Os compostos de acordo com determinadas modalidades da presente invenção podem inibir a decomposição de IKB na trajetória de sinalização de inflamação mediada por MyD88 (complexo de myddosome) e/ou RIP 1, impedindo, assim, NF-KB de ser transportado para o núcleo de uma célula, resultando na supressão da expressão de citocinas e quimiocinas (por exemplo, G-CSF, IL-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-9, MCP-1, MIP-3α, IL12p40/70, MIG, TNF-α e VCAM-1) e prevenindo a reação de inflamação que poderia ser causada, de outro modo, pela expressão das mesmas.
[0010] Outros aspectos e vantagens da presente invenção se tornarão evidentes ao versado na técnica a partir de uma consideração da descrição detalhada e dos desenhos.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0011] A Figura 1 A é um resultado de eletroforese que mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção suprimem a expressão de IL-6.
[0012] A Figura 1 B é um gráfico que mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção suprimem a expressão de IL-6.
[0013] A Figura 2 mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção suprimem a expressão de citocinas e quimiocinas em uma linhagem de células RAW 264.7.
[0014] A Figura 3 mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção suprimem a expressão de IL-6 em um hospedeiro em uma linhagem de células RAW 264.7.
[0015] A Figura 4 mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção inibem a atividade de NF-kB.
[0016] A Figura 5 mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção suprimem NF-KB.
[0017] A Figura 6 shows que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção inibem a atividade de NF-KB enquanto que não afetam a transmissão de sinal de TGF-β e BMP.
[0018] A Figura 7 é um resultado de imunoprecipitação que mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção inibem a formação do complexo de proteína de trajetória de sinalização de inflamação mediado por IRAK-1, MyD88 e/ou RIP1 e que mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção alteram a concentração de IkB.
[0019] A Figura 8 é um resultado de imunoprecipitação que mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção podem interromper a formação do complexo de proteína de trajetória de sinalização de inflamação mediado por IRAK-1, MyD88 e/ou RIP1.
[0020] A Figura 9 mostra que a alteração na concentração de pré-tratamento dos compostos de acordo com as modalidades da presente invenção altera a concentração de IKB em células macrófagos RAW 264.7 e células BMDM.
[0021] A Figura 10 é um gráfico que indica pontuações de índice de atividade de doença em um modelo animal com colite crônica induzida por DSS de acordo com a dose dos compostos de acordo com as modalidades da presente invenção em caso da administração oral dos mesmos.
[0022] A Figura 11A mostra pontuações de índice de atividade de doença que representam a capacidade dos compostos de acordo com as modalidades da presente invenção de suprimir colite aguda em um modelo animal com colite aguda induzida por DSS.
[0023] A Figura 11B mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção afetam a quantidade de expressão de quimiocinas (CCL2, CCL20 e CXCL1) em um modelo de camundongo com colite crônica induzida por DSS.
[0024] As Figuras 12 a 16 são imagens que mostram os formatos de vilosidades do intestino grosso de um grupo não tratado, um grupo de modelo de colite crônica induzida por DDS e um grupo tratado com os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção.
[0025] A Figura 17 é um gráfico que mostra o nível de recuperação da parede do intestino grosso em um grupo não tratado, um grupo de modelo de colite crônica induzida por DDS, um grupo tratado com compostos de acordo com as modalidades da presente invenção e um grupo tratado com sulfassalazina.
[0026] A Figura 18 é um gráfico que mostra as alterações na concentração sanguínea ao longo do tempo dos compostos de acordo com as modalidades da presente invenção por meio de administração intravenosa.
[0027] A Figura 19 é um gráfico que mostra as alterações na concentração sanguínea ao longo do tempo dos compostos de acordo com as modalidades da presente invenção por meio de administração oral.
[0028] A Figura 20A é uma imagem de Western blot que confirma se os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção inibem a trajetória de sinalização MAPK/ERK.
[0029] A Figura 20B é um diagrama que representa a trajetória de sinalização de receptores do tipo toll.
[0030] A Figura 21 é uma imagem de Western blot que confirma se os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção inibem a trajetória de sinalização MAPK/ERK.
[0031] A Figura 22A e a Figura 22B mostram o nível de inibição da ativação de NF-KB pelos compostos de acordo com as modalidades da presente invenção e um inibidor de IRAK1/4, respectivamente.
[0032] A Figura 23 é uma imagem de immunoblot que confirma se os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção e um inibidor de IRK1/4 alteram a concentração de IKB.
[0033] A Figura 24A e a Figura 24B são uma imagem e um gráfico, respectivamente, que comparam a capacidade dos compostos de acordo com as modalidades da presente invenção de inibir a trajetória de sinalização MAPK/ERK e a capacidade de um inibidor de IRAK1/4 de inibir a trajetória de sinalização MAPK/ERK.
[0034] A Figura 25A é uma imagem de Western blot que confirma se os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção suprimem, em ARPE-19, a expressão de Nox-4, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, Ang-2, EPO e EPOR e podem aumentar a expressão de Ang-1 e Tie2.
[0035] A Figura 25B é uma imagem de qRT-PCR que confirma se os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção suprimem a expressão de VEGF em HRMEC.
[0036] A Figura 26 é uma imagem que mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção suprimem a formação de tubo em HRMEC.
[0037] As Figuras 27A e 27B são imagens que mostram que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção suprimem o oxigênio ativado aumentado em um modelo de camundongo com retinopatia diabética tipo 1 induzida por STZ.
[0038] A Figura 28A é um gráfico que mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção têm um efeito terapêutico em camundongos com EAE induzida por MOG. A Figura 28B é um gráfico que mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção alteram o peso de camundongos com EAE induzida por MOG.
[0039] A Figura 29 é um gráfico que mostra que os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção têm um efeito terapêutico em um modelo de ligação cecal e punção (CLP).
DESCRIÇÃO DETALHADA 1) . DEFINIÇÕES
[0040] A não ser que definido de outro modo, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o significado comumente compreendido por um versado na técnica a qual pertence esta revelação. As referências a seguir, que são incorporadas ao presente documento a título de referência, fornecem a um versado na técnica uma definição geral de muitos dos termos usados nesta invenção: The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988); The Glossary of Genetics, 5a Edição, R. Rieger et. al. (eds.), Springer Verlag (1991); e Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991). Conforme usado no presente documento, os termos a seguir têm os significados atribuídos aos mesmos abaixo, a não ser que especificado de outro modo.
[0041] A não ser que especificamente determinado ou óbvio a partir do contexto, conforme usado no presente documento, o termo "ou" é entendido como sendo inclusivo.
[0042] A não ser que especificamente determinado ou óbvio a partir do contexto, conforme usado no presente documento, os termos "um", "uma", "o" e "a" são entendidos como sendo singulares ou plurais. Assim, por exemplo, a referência a "um composto" inclui misturas de tais compostos; a referência a "um carreador" inclui misturas de dois ou mais carreadores; e similares.
[0043] A não ser que especificamente determinado ou óbvio a partir do contexto, conforme usado no presente documento, o termo "cerca de" é entendido como estando dentro de uma faixa de tolerância normal na técnica, por exemplo, dentro de 2 desvios padrão da média. "Cerca de" pode ser entendido como dentro de 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1 %, 0,5%, 0,1%, 0,05% ou 0,01% do valor declarado. A não ser que esteja, de outro modo, claro a partir do contexto, todos os valores numéricos fornecidos no presente documento são modificados pelo termo "cerca de".
[0044] Os termos "agente ativo", "fármaco" e "agente farmacêutico" são usados de forma intercambiável no presente documento para se referir a um material ou composto químico que, quando administrado a um sujeito (por exemplo, qualquer animal incluindo um ser humano ou animal não humano) por quaisquer meios e/ou vias, induz um efeito farmacológico (por exemplo, tal como uma redução da inflamação).
[0045] O termo "aditivo" conforme usado no presente documento pode se referir a quaisquer componentes adicionais que podem ser adicionados às composições descritas no presente documento. Por exemplo, os aditivos podem incluir excipientes (por exemplo, um ou mais excipientes), antioxidantes (por exemplo, um ou mais antioxidantes), estabilizantes (por exemplo, um ou mais estabilizantes), conservantes (por exemplo, um ou mais conservantes), agentes de ajuste de pH e/ou de tamponamento (por exemplo, um ou mais agentes de ajuste de pH e/ou de tamponamento), agentes de ajuste de tonicidade (por exemplo, um ou mais agentes de ajuste de tonicidade), agentes espessantes (por exemplo, um ou mais agentes espessantes), agentes de suspensão (por exemplo, um ou mais agentes de suspensão), agentes de ligação (por exemplo, um ou mais agentes de ligação), agentes de aumento de viscosidade (por exemplo, um ou mais agentes de aumento de viscosidade) e similares, desde que os componentes adicionais sejam farmaceuticamente aceitáveis para a afecção particular a ser tratada. Os aditivos podem também incluir agentes de processamento e modificadores e intensificadores de entrega de fármaco, tais como, por exemplo, fosfato de cálcio, estearato de magnésio, talco, monossacarídeos, dissacarídeos, amido, gelatina, celulose, metil celulose, carboximetil celulose sódica, dextrose, hidroxipropil-beta-ciclodextrina, polivinilpirrolidinona, ceras de baixo ponto de fusão, resinas de troca de íons e similares, assim como combinações de quaisquer dois ou mais dos mesmos. Outros excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados são descritos em "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Pub. Co., New Jersey (1991), e "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", Lippincott Williams & Wilkins, Filadélfia, 20a edição (2003) e 21a edição (2005), que são incorporados ao presente documento a título de referência. Os aditivos descritos no presente documento podem ser usados em quaisquer quantidades adequadas.
[0046] Conforme usado no presente documento, o termo "administrar" significa administração oral, administração como um supositório, contato tópico, administração intravenosa, parenteral, intraperitoneal, intramuscular, intralesional, intratecal, intranasal ou subcutânea ou a implantação de um dispositivo de liberação lenta, por exemplo, uma bomba miniosmótica, a um sujeito. A administração é por qualquer via, incluindo parenteral e transmucosal (por exemplo, vias orais, nasais, pulmonares, retais, bucais, vaginais, oculares e transdérmicas).
[0047] Os termos "derivado" e 'análogo" são usados no presente documento de forma intercambiável e se referem a um composto que possui o mesmo núcleo que um composto progenitor, mas se difere do composto progenitor em ordem de ligação, na ausência ou presença de um ou mais átomos e/ou grupos de átomos e combinações dos mesmos. O derivado pode se diferir do composto progenitor, por exemplo, em um ou mais substituintes presentes no núcleo que podem incluir um ou mais átomos, grupos funcionais ou subestruturas. O derivado pode também se diferir do composto progenitor na ordem de ligação entre os átomos dentro do núcleo. Em geral, um derivado pode ser imaginado para ser formado, pelo menos teoricamente, a partir do composto progenitor por meio de processos químicos e/ou físicos.
[0048] Conforme usado no presente documento, "antioxidantes" podem se referir a substâncias artificiais ou naturais que podem impedir ou atrasar alguns tipos de danos celulares e/ou oxidação. Antioxidantes são encontrados em muitos alimentos, incluindo frutas e vegetais. Os mesmos estão também disponíveis como suplementos dietários. Os antioxidantes exemplificativos podem incluir: peta-caroteno, Luteína, Licopeno, Selênio, Vitamina A, Vitamina C e Vitamina E. Outros antioxidantes conhecidos por um versado na técnica podem também ser usados. Os antioxidantes descritos no presente documento podem ser usados em qualquer quantidade adequada.
[0049] Por "coadministrar", entende-se que um composto ou composição descrita no presente documento é administrada ao mesmo tempo, logo antes ou logo após a administração de terapias ou agentes ativos ou aditivos adicionais descritos no presente documento. O composto ou a composição da revelação pode ser administrada sozinha ou pode ser coadministrada a um sujeito em necessidade. A coadministração se destina a incluir administração simultânea ou sequencial do composto individualmente ou em combinação (mais de um composto ou agente). As preparações podem ser também combinadas, quando desejado, com outras substâncias ativas.
[0050] Nessa revelação, "compreende", "que compreende", "que contém" e "que tem" e similares podem ter o significado atribuído aos mesmos na lei de patentes dos EUA e podem significar " inclui", "que inclui" e similares; "que consiste essencialmente em" ou "consiste essencialmente" tem igualmente o significado atribuído na lei de patentes dos EUA, e o termo é aberto, permitindo a presença de mais do que é citado contanto que características básicas ou inovadoras do que é citado não sejam alteradas pela presença de mais do que é citado, mas excluam as modalidades da técnica anterior.
[0051] Conforme usado no presente documento, "administração concomitante" inclui a sobreposição na duração pelo menos em parte. Por exemplo, quando dois agentes (por exemplo, qualquer um dos agentes ou classe de agentes descrita no presente documento que tem bioatividade) são administrados concomitantemente, sua administração ocorre dentro de um determinado tempo desejado. A administração dos agentes pode começar e terminar no mesmo dia. A administração de um agente pode também preceder a administração de um segundo agente em dia (dias) contanto que ambos os agentes sejam tomados no mesmo dia pelo menos uma vez. Similarmente, a administração de um agente pode se estender além da administração de um segundo agente contanto que ambos os agentes sejam tomados no mesmo dia pelo menos uma vez. O agente (ou agentes) ativo não tem que ser tomado ao mesmo tempo cada dia para incluir administração concomitante.
[0052] Conforme usado no presente documento, uma "quantidade eficaz" ou "quantidade terapeuticamente eficaz" é essa quantidade suficiente para afetar um efeito biológico desejado, tais como resultados benéficos, incluindo resultados clínicos. Como tal, uma "quantidade eficaz" depende do contexto em que a mesma está sendo aplicada. Uma quantidade eficaz pode variar de acordo com fatores conhecidos na técnica, tal como o estado da doença, idade, sexo e peso do indivíduo sendo tratado. Diversas doses divididas podem ser administradas diariamente, ou a dose pode ser proporcionalmente reduzida conforme indicado por exigências da situação terapêutica. Adicionalmente, os compostos, composições ou formulações desta revelação podem ser administrados tão frequentemente quanto necessário para alcançar uma quantidade terapêutica.
[0053] O termo "gel" conforme usado no presente documento pode se referir a um material que não é um líquido prontamente fluidificável e não é um sólido, isto é, semissólido. Géis podem ser formados a partir de materiais de ocorrência natural ou sintéticos. Os géis podem ser não ordenados a ligeiramente ordenados mostrando alguma birrefringência, caráter de cristal líquido. Géis podem ser administrados topicamente.
[0054] O termo "doença inflamatória intestinal" conforme usado no presente documento tem seu significado médico usual e se refere a um grupo de indicações/afecções inflamatórias de um cólon e intestino delgado. As doenças inflamatórias intestinais exemplificativas podem incluir, porém, sem limitação, doença de Crohn, colite ulcerativa, doença de Johne, síndrome de Behget, colite colagenosa, colite de derivação, colite indeterminada, colite infecciosa, colite isquêmica, colite linfocítica e doenças e distúrbios estreitamente relacionados do trato gastrointestinal.
[0055] O termo "inibir", conforme usado no presente documento, significa prevenir, diminuir, retardar ou interromper. Em uma modalidade, um composto, composição ou formulação pode ser considerada como inibindo a viabilidade de pelo menos uma proteína (por exemplo, G-CSF, IL-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-9, MCP-1, MIP- 3a, IL12p40/70, MIG, TNF-a, VCAM-1 e NF-KB) quando a quantidade ou a taxa do processo ou reação que ocorre na presença do composto, composição ou formulação é diminuída em pelo menos cerca de 10% em comparação à quantidade ou taxa na ausência do composto, composição ou formulação. Em outra modalidade, um composto, composição ou formulação pode ser considerada como inibindo um processo ou reação quando a quantidade ou a taxa do processo ou reação que ocorre na presença do composto, composição ou formulação é diminuída em pelo menos cerca de 20% em comparação à quantidade ou taxa na ausência do composto, composição ou formulação. Em outras modalidades, um composto, composição ou formulação pode ser considerado como inibindo a viabilidade de uma ou mais proteínas (por exemplo, G-CSF, IL-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-9, MCP-1, MIP-3α, IL12p40/70, MIG, TNF-α, VCAM-1 e NF-KB) quando a quantidade ou taxa de viabilidade que ocorre na presença do composto, composição ou formulação é diminuída em pelo menos cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 40%, cerca de 50%, cerca de 60%, cerca de 70%, cerca de 75% ou cerca de 80% em comparação à quantidade ou taxa na ausência do composto, composição ou formulação. Em ainda outras modalidades, um composto, composição ou formulação pode ser considerada como inibindo a viabilidade de uma ou mais proteínas, isto é, interrompendo seu desenvolvimento.
[0056] Conforme usado no presente documento, "administração intermitente" inclui a administração de um agente ativo por um período de tempo (que pode ser considerado um "primeiro período de administração"), seguido por um tempo durante o qual o agente não é tomado ou é tomado a uma dose de manutenção mais baixa (que pode ser considerado "período de pausa") seguido por um período durante o qual o agente é administrado novamente (que pode ser considerado um "segundo período de administração"). Geralmente, durante a segunda fase de administração, o nível de dosagem do agente corresponderá àquele administrado durante o primeiro período de administração, mas pode ser aumentado ou diminuído conforme medicamente necessário.
[0057] "Geleia" de acordo com a presente revelação é uma classe de géis que são sistemas semissólidos que consistem em suspensões constituídas ou de pequenas partículas inorgânicas ou grandes moléculas orgânicas interpenetradas por um líquido, em que a matriz coerente estrutural contém uma alta porção de líquido, usualmente água.
[0058] "Líquido" conforme usado no presente documento é uma forma de dosagem que consiste em uma composição em seu estado líquido. Um líquido é vertível; o mesmo flui e se conforma a seu recipiente à temperatura ambiente. Os líquidos exibem comportamento de fluxo Newtoniano ou pseudoplástico. Nas modalidades, um "semilíquido" conforme usado no presente documento pode ter propriedades tanto de um líquido quanto de outra formulação (isto é, uma suspensão, uma emulsão, uma solução, um creme, um gel, uma geleia e similares).
[0059] "Gene 88 de resposta primária de diferenciação mieloide" ou "MYD88" é uma proteína que, em seres humanos, é codificada pelo gene MYD88. MyD88 desempenha um papel central na resposta imunológica inata e adaptativa. Essa proteína funciona como um transdutor de sinal essencial nas trajetórias de sinalização de receptor do tipo Toll e interleucina-1. Essas trajetórias regulam essa ativação de inúmeros genes pró- inflamatórios. A proteína codificada consiste em um domínio de morte N-terminal e um domínio de receptor do tipo Toll- interleucina1 C-terminal.
[0060] Conforme usado no presente documento, o termo "pomada" pode se referir a um líquido altamente viscoso ou formulação semilíquida que pode ser usada para tratamento terapêutico de uma doença, síndrome ou afecção (por exemplo, doença inflamatória intestinal).
[0061] Conforme usado no presente documento, “carreador farmaceuticamente aceitável” inclui quaisquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos e de atraso de absorção e similares que são fisiologicamente compatíveis. O tipo de carreador pode ser selecionado com base na via de administração pretendida. Os carreadores farmaceuticamente aceitáveis incluem soluções ou dispersões aquosas estéreis e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões tópicas estéreis O uso de tais meios e agentes para substâncias farmaceuticamente ativas é bem conhecido na técnica. Exceto na medida em que qualquer meio ou agente convencional é incompatível com a composição (por exemplo, a Fórmula I conforme descrito no presente documento, derivados/análogos de Fórmula I ou um sal, solvente, hidrato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável dos mesmos), o uso do mesmo nas composições oftálmicos para a revelação é contemplada.
[0062] "Carreadores farmacêuticos" ou "carreadores" conforme usado no presente documento podem incluir adicionalmente carreadores, excipientes ou estabilizantes farmaceuticamente aceitáveis que são não tóxicos à célula ou mamífero que é exposto aos mesmos nas dosagens e concentrações empregadas. Frequentemente, o carreador fisiologicamente aceitável é uma solução aquosa com pH tamponado. Os exemplos de carreadores fisiologicamente aceitáveis incluem tampões, tal como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, incluindo ácido ascórbico; polipeptídeo com baixo peso molecular (menos que cerca de 10 resíduos); proteínas, tal como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tal como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tal como glicina, glutamina, asparagina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose, ou dextrinas; agentes quelantes, tal como EDTA; álcoois de açúcar, tal como manitol ou sorbitol; contraíons formadores de sal, tal como sódio; e/ou tensoativos não iônicos, tal como Tween™, polietileno glicol (PEG) e Pluronics™.
[0063] Adicionalmente, “farmaceuticamente aceitável” significa aprovado por uma agência reguladora do governo federal ou estadual ou a agência correspondente em países fora os Estados, ou que que está listado na Farmacopeia Americana ou outra farmacopeia reconhecida de modo geral para uso em animais e, mais particularmente, em seres humanos.
[0064] Os termos "agente de pH" ou "agente de tamponamento" conforme usado no presente documento podem se referir a compostos ou tampões úteis como reguladores de pH. Os mesmos incluem, porém, sem limitação, tampões de glicerol, tampões de citrato, tampões de borato, tampões de acetato, tampões de gluconato, tampões de fosfato ou tampões de ácido cítrico-fosfato. O agente de pH ou agente de tamponamento pode ser usado em qualquer quantidade adequada. O termo "conservante" conforme descrito no presente documento pode se referir a uma substância ou produto químico que impedir alterações químicas indesejáveis do composto ou composições ou fórmulas descritas no presente documento. Os conservantes adequados podem incluir, por exemplo, cloreto de benzalcônio, timerosal, clorobutanol, metil parabeno, propil parabeno, álcool feniletílico, ácido sórbico de edetato dissódico, Onamer M Polyquat, brometo de cetila, cloreto de cetil piridínio, brometo de benzila, EDTA, nitrato de fenilmercúrio, acetato de fenilmercúrio, timerosal, merthiolate, acetato e borato de fenilmercúrio, sulfato de polimixina B, metil e propil parabenos, cloreto de amônio quaternário, benzoato de sódio, proprionato de sódio e perborato de sódio e outros agentes conhecidos por aqueles versados na técnica ou uma combinação dos mesmos. O conservante pode ser usado em qualquer quantidade adequada.
[0065] Os termos "prevenir", "que previne" ou "prevenção" e outros equivalentes gramaticais, conforme usado no presente documento, incluem impedir de desenvolver, ocorrer, retardar ou evitar uma doença ou sintomas de afecção assim como diminuir a ocorrência dos sintomas. A prevenção pode ser completa (isto é, sem sintomas detectáveis) ou parcial, de modo que menos sintomas sejam observados do que provavelmente ocorreria sem tratamento. Os termos incluem adicionalmente um benefício profilático. Para uma doença ou afecção a ser prevenida, as composições podem ser administradas a um paciente em risco de desenvolver uma doença particular ou a um paciente que relata um ou mais dos sintomas fisiológicos de uma doença, embora um diagnóstico dessa doença possa não ter sido feito.
[0066] As faixas fornecidas no presente documento são entendidas como sendo uma forma abreviada para todos os valores dentro da faixa. Por exemplo, uma faixa de 1 a 50 é entendida como incluindo qualquer número, combinação de números ou subfaixa do grupo que consiste em 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50 assim como todos os valores decimais intervenientes entre os números inteiros anteriormente mencionados tais como, por exemplo, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8 e 1,9. Em relação às subfaixas, "subfaixas aninhadas" que se estendem de cada ponto de extremidade da faixa são especificamente contempladas. Por exemplo, uma subfaixa aninhada de uma faixa exemplificativa de 1 a 50 pode compreender 1 a 10, 1 a 20, 1 a 30 e 1 a 40 em uma direção ou 50 a 40, 50 a 30, 50 a 20 e 50 a 10 na outra direção. As faixas podem ser expressas no presente documento como de "cerca de" um valor particular e/ou a "cerca de" outro valor particular. Quando tal faixa é expressa, outro aspecto inclui de um valor particular e/ou ao outro valor particular. De modo similar, quando os valores são expressos como aproximações, pelo uso do antecedente “cerca de”, entende-se que o valor particular forma outro aspecto. É adicionalmente entendido que os pontos de extremidade de cada uma das faixas são significativos tanto em relação ao outro ponto de extremidade quanto independentemente do outro ponto de extremidade. É também entendido que há vários valores revelados no presente documento, e que cada valor é também revelado no presente documento como "cerca" desse valor particular adicionalmente ao próprio valor. É também entendido que por todo o pedido, dados são fornecidos em vários formatos diferentes e que esses dados representam pontos de extremidade e pontos de partida e faixas para qualquer combinação dos pontos de dados. Por exemplo, se um ponto de dados particular "10" e um ponto de dados particular "15" forem revelados, entende-se que maior do que, maior ou igual a, menor do que, menor ou igual a e igual a 10 e 15 são considerados revelados assim como entre 10 e 15. É entendido que cada unidade entre duas unidades particulares é também revelada. Por exemplo, se 10 e 15 foram revelados, então, 11, 12, 13 e 14 são também revelados.
[0067] "Proteína de interação com receptor" ou "RIP1" conforme usado no presente documento descreve uma proteína quinase que é um regulador crucial da morte e sobrevivência da célula. RIP1 e RIP2 também possuem um domínio C-terminal que pertence à superfamília de domínio de morte, permitindo o recrutamento de complexos de proteínas grandes que iniciam diferentes trajetórias de sinalização.
[0068] Conforme usado no presente documento, "sais" ou "forma de sal" ou "sais farmaceuticamente aceitáveis" pode incluir sais de adição básicos (formados com carboxila livre ou outros grupos aniônicos) que são derivados de bases inorgânicas tais como, por exemplo, hidróxidos de sódio, potássio, amônio, cálcio ou férricos, e tais bases orgânicas como isopropilamina, trietilamina, 2-etilamino-etanol, histidina, procaína e similares. Tais sais são formados como sais de adição ácidos com quaisquer grupos catiônicos livres e são geralmente formados com ácidos inorgânicos tais como, por exemplo, ácidos clorídricos, sulfúricos ou fosfóricos ou ácidos orgânicos tais como acético, cítrico, p-toluenossulfônico, ácido metanossulfônico, oxálico, tartárico, mandélico e similares. Os sais da revelação podem incluir sais de amina formados pela protonação de um grupo amino com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido iodídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico e similares. Os sais da revelação também incluem sais de amina formados pela protonação de um grupo amino com ácidos orgânicos adequados, tais como ácido p-toluenossulfônico, ácido acético e similares. Os excipientes adicionais que são contemplados para uso na prática da presente revelação são aqueles disponíveis àquelas pessoas de habilidade comum na técnica, por exemplo, aqueles encontrados na Farmacopeia dos Estados Unidos Volume XXII e Formulário Nacional Volume XVII, Convenção de Farmacopeia dos EUA, Inc., Rockville, Md. (1989), o conteúdo relevante dos quais é incorporado ao presente documento a título de referência.
[0069] O "gel semissólido" de acordo com a presente revelação é um semissólido. A viscosidade aparente de formulação semissólida pode aumentar com a concentração.
[0070] Conforme usado no presente documento, "administração sequencial" inclui que a administração de dois agentes (por exemplo, os compostos ou composições descritas no presente documento) ocorre separadamente no mesmo dia ou não ocorrem em um mesmo dia (por exemplo, ocorre em dias consecutivos).
[0071] "Solução" de acordo com a presente revelação pode ser uma forma de dosagem líquido homogênea transparente que contém uma ou mais substâncias químicas dissolvidas em um solvente ou mistura de solventes mutualmente miscíveis. Uma solução é uma preparação líquida que contém uma ou mais substâncias químicas dissolvidas em um solvente adequado ou mistura de solventes mutualmente miscíveis. Como moléculas de uma substância farmacêutica em solução são uniformemente dispersas, o uso de soluções como formas de dosagem geralmente fornece garantia de uma dosagem uniforma mediante administração e boa precisão quando a solução é diluída ou misturada de outro modo.
[0072] O termo "solvente", conforme usado no presente documento, se refere a um solvente líquido ou aquoso ou não aquoso. A seleção do solvente depende, de forma notável, da solubilidade da composição, do dito solvente e do modo de administração. O solvente aquoso pode consistir apenas em água ou pode consistir em água mais um ou mais solventes miscíveis e pode conter solutos dissolvidos tais como açúcares, tampões, sais ou outros excipientes. Os solventes não aquosos mais comumente usados são os álcoois orgânicos de cadeia curta, tais como, metanol, etanol, propanol, cetonas de cadeia curta, tal como acetona, e poliálcoois, tal como glicerol. O solvente pode estar presente em qualquer quantidade adequada.
[0073] Por "sujeito" ou "paciente", entende-se ou um ser humano ou animal não humano, tal como um mamífero. "Sujeito" pode incluir qualquer animal, incluindo cavalos, cães, gatos, porcos, cabras, coelhos, hamsters, macacos, porquinhos-da-índia, ratos, camundongos, lagartos, cobras, ovelhas, gado, peixes e pássaros. Um sujeito humano pode ser denominado um paciente.
[0074] "Suspensão" conforme usado no presente documento é uma forma de dosagem líquida que contém partículas sólidas dispersas em um veículo líquido.
[0075] Conforme usado no presente documento, o termo "síndrome" pode se referir a um grupo de sintomas que ocorrem consistentemente m conjunto ou uma afecção caracterizada por um conjunto de sintomas associados. Uma síndrome (por exemplo, síndrome do intestino inflamatório) pode ser um conjunto de sinais médicos e sintomas que são correlacionados um ao outro e são frequentemente correlacionados a uma doença específica. Uma doença, por outro lado, pode ser uma condição de saúde que tem uma razão claramente definida por trás da mesma. Uma síndrome (da palavra grega que significa 'que ocorre em conjunto'), entretanto, pode produzir vários sintomas sem uma causa identificável. Os mesmos podem sugerir a possibilidade de uma doença subjacente ou até mesmos as chances de desenvolver uma doença.
[0076] Os termos "tratar", "que trata" ou "tratamento" e outros equivalentes gramáticos, conforme usado no presente documento, incluem aliviar, diminuir, atenuar ou prevenir uma doença, afecção (por exemplo, doença inflamatória intestinal) ou sintomas, prevenir sintomas adicionais, atenuar ou prevenir as causas metabólicas subjacentes dos sintomas, inibir a doença ou afecção, por exemplo, interromper o desenvolvimento da doença ou afecção, aliviar a doença ou afecção, causar a regressão da doença ou afecção, aliviar uma condição causada pela doença ou afecção ou parar os sintomas da doença ou afecção e se destinam a incluir a profilaxia. Os termos incluem adicionalmente alcançar um benefício terapêutico e/ou um benefício profilático. Por benefício terapêutico entende-se a erradicação ou melhora do distúrbio subjacente sendo tratado. Também, um benefício terapêutico é alcançado com a erradicação ou atenuação de um ou mais dos sintomas fisiológicos associados ao distúrbio subjacente de modo que uma melhora seja observada no paciente, não obstante, o paciente pode ainda ser afligido com o distúrbio subjacente.
[0077] Conforme usado no presente documento, "viscosidade" se refere a uma resistência a fluir do fluido. Os agentes de viscosidade podem ser usados no presente documento e incluem, por exemplo, álcool polivinílico, polivinil pirrolidona, metil celulose, hidroxi propil metilcelulose, hidroxietil celulose, carboximetil celulose, hidroxi propil celulose, outros agentes conhecidos por aqueles versados na técnica ou uma combinação dos mesmos.
[0078] O termo "por cento em peso" ou "% (em p/p)" se refere a uma porcentagem de um componente em uma solução que é calculada com base no peso para o componente e o solvente. Por exemplo, uma solução de 1% (em p/p) de um componente teria 1 g do componente dissolvido em 100 g de solvente. O termo "por cento em volume" ou "% (em v/v)" se refere a uma porcentagem de um componente em uma solução que é calculada com base no volume para o componente e o solvente. Por exemplo, uma solução de 1% (em v/v) de um componente teria 1 ml do componente dissolvido em 100 ml de solvente. O termo "por cento em peso/volume" ou "% (em p/v)" se refere a uma porcentagem de um componente em uma solução que é calculada com base no peso para o componente e com base no volume para o solvente. Por exemplo, uma solução de 1,0% (em p/v) de um componente teria 1 g do componente dissolvido em 100 ml de solvente.
2) COMPOSTOS
[0079] Conforme discutido acima, um aspecto da presente invenção fornece um composto representado pela Fórmula 1 a seguir, um isômero óptico do mesmo ou a um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. [FÓRMULA 1]
[0080] em que: n é 0, 1 ou 2; A é -a1- que é um aminoácido independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em alanina, (Ala, A), arginina (Arg, R), asparagina (Asn, N), ácido aspártico (Asp, D), cisteína (Cis, C), ácido glutâmico (Glu, E), glutamina (Gin, Q), glicina (Gli, G), histidina (His, H), isoleucina (Ile, I), leucina (Leu, L), lisina (Lis, K), metionina (Met, M), fenilalanina (Phe, F), prolina (Pro, P), serina (Ser, S), treonina (Thr, T), triptopfano (Trp, W), tirosina (Tir, i) e valina (Val, V), sendo que ambas as extremidades terminais dos aminoácido são ligadas a um grupo carbonila ou um grupo amina por uma ligação de amida; e R1 é uma alquila C1-36 de cadeia linear ou ramificada, uma alquenila C2-36 de cadeia linear ou ramificada incluindo pelo menos uma ligação dupla ou uma alquinila C2-36 de cadeia linear ou ramificada incluindo pelo menos uma ligação tripla.
[0081] O termo "composto da presente invenção", e expressões equivalentes, se destina a abranger o composto da Fórmula conforme descrito anteriormente neste documento, cuja expressão inclui os sais farmaceuticamente aceitáveis e os solvatos, por exemplo, hidratos, e os solvatos dos sais farmaceuticamente aceitáveis quando o contexto assim permitir.
[0082] Em conformidade com algumas modalidades da invenção, a1 pode ser, e R1 pode ser uma alquila C1-36 de cadeia linear ou de cadeia ramificada.
[0083] Os exemplos não limitantes dos compostos incluem os seguintes compostos:
[0084] Os compostos de acordo com as modalidades da presente invenção são eficazes para prevenir ou tratar várias doenças incluindo indicações inflamatórias, cânceres e indicações oftálmicas. Mais particularmente, os compostos são eficazes para suprimir a expressão de citocinas e/ou quimiocinas (por exemplo, G-CSF, IL-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-9, MCP-1, MIP-3α, IL12p40/70, MIG, TNF-α e VCAM-1). Os compostos são também eficazes para inibir a decomposição de IKB na trajetória de sinalização de inflamação mediada por MyD88 (complexo de myddosome) e/ou RIP1, impedindo, assim, NF-KB de ser transportado para o núcleo de uma célula. Adicionalmente, a concentração eficaz dos compostos em uma célula/tecido direcionado permanece por um tempo suficiente.
3) MÉTODOS DE PREPARAÇÃO
[0085] Outro aspecto da presente invenção fornece um método para preparar o composto representado pela Fórmula 1. O método, conforme ilustrado pelo Esquema de Reação 1 mostrado abaixo, compreende: reagir um composto 2 com um composto 3 para preparar um composto 4 (etapa 1); hidrolisar o composto 4 na presença de uma base para preparar um composto 5 (etapa 2); reagir o composto 5 com um composto 6 para preparar um composto 7 (etapa 3); hidrolisar o composto 7 na presença de uma base para preparar um composto 8 (etapa 4); reagir o composto 8 com um composto 9 para preparar um composto 10 (etapa 5); hidrolisar o composto 10 na presença de uma base para preparar o composto de Fórmula I (etapa 6). [ESQUEMA DE REAÇÃO 1]
[0086] em que A, R1 e n são os mesmos definidos na reivindicação 1, e R2 é uma alquila C1-5 de cadeia linear ou de cadeia ramificada.
[0087] Em algumas modalidades, na etapa 1, o composto 2 pode ser ligado ao composto 3 na presença de 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodi-imida (EDCI), hidroxibenzotriazol (HOBt) e uma base. A base pode ser uma base orgânica ou inorgânica. Os exemplos não limitantes da base orgânica incluem piridina, trietilamina (TEA), N,N-di-isopropiletilamina (DIPEA) e 1,8-diazabiciclo[5.4.0]unde-7-eno (DBU). Os exemplos não limitantes da base inorgânica incluem hidróxido de sódio, carbonato de sódio, carbonato de potássio, carbonato de césio e hidreto de sódio. Os mesmos podem ser usados estequiométricos ou em excesso, sozinhos ou em combinação. Os exemplos não limitantes do solvente que pode ser usado para reagir o composto 2 com o composto 3 incluem um éter (por exemplo, tetra-hidrofurano (tF), dioxano, éter etílico e 1,2-dimetoxietano), um álcool (por exemplo, metanol, etanol, propanol e butanol), dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), diclorometano (DCM), dicloroetano, água, acetona, benzenossulfonato, toluenossulfonato, clorobenzenossulfonato, xilenossulfonato, etilacetato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, hidroxibutirato, glicolato, maleato, tartrato, metanossulfonato, propanossulfonato, naftalen-1-sulfonato, naftalen-2-sulfonato e mandelato. O solvente pode ser usado sozinho ou em combinação.
[0088] A base na etapa 2 pode ser uma base orgânica ou inorgânica. Igualmente, os exemplos não limitantes da base orgânica que podem ser usados na etapa 2 incluem piridina, trietilamina, N,N-di-isopropiletilamina (DIPEA) e 1,8- diazabiciclo[5.4.0]unde-7-eno (DBU). Os exemplos não limitantes da base inorgânica incluem hidróxido de sódio, carbonato de sódio, carbonato de potássio, carbonato de césio e hidreto de sódio. Os mesmos podem ser usados estequiométricos ou em excesso, sozinhos ou em combinação. Os exemplos não limitantes do solvente que pode ser usado para reagir o composto 4 com o composto 5 incluem um éter (por exemplo, tetra-hidrofurano (tF), dioxano, éter etílico e 1,2-dimetoxietano), um álcool (por exemplo, metanol, etanol, propanol e butanol), dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), diclorometano (DCM), dicloroetano, água, acetona, benzenossulfonato, toluenossulfonato, clorobenzenossulfonato, xilenossulfonato, etilacetato, fenilacetato, fenilpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, hidroxibutirato, glicolato, mandelato, tartrato, metanossulfonato, propanossulfonato, naftalen-1-sulfonato, naftalen-2-sulfonato e mandelato. O solvente pode ser usado sozinho ou em combinação.
[0089] A etapa 3 e a etapa 5 podem ser realizadas de maneira idêntica ou similar à etapa 1. A etapa 4 e a etapa 6 podem ser realizadas de maneira idêntica ou similar à etapa 2.
PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 2
[0090] Os exemplos do composto 2 representado pela Fórmula 2 a seguir, que é o material de partida do Esquema de Reação 1, podem ser preparados, por exemplo, pelo Método de Preparação A descrito abaixo. [FÓRMULA 2]
[0091] em que n é 0, 1 ou 2; A é -a1- que é um aminoácido independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em alanina, (Ala, A), arginina (Arg, R), asparagina (Asn, N), ácido aspártico (Asp, D), cisteína (Cis, C), ácido glutâmico (Glu, E), glutamina (Gin, Q), glicina (Gli, G), histidina (His, H), isoleucina (Ile, I), leucina (Leu, L), lisina (Lis, K), metionina (Met, M), fenilalanina (Phe, F), prolina (Pro, P), serina (Ser, S), treonina (Thr, T), triptopfano (Trp, W), tirosina (Tir, i) e valina (Val, V), sendo que ambas as extremidades terminais dos aminoácido são ligadas a um grupo carbonila ou um grupo amina por uma ligação de amida; e R1 é uma alquila C1-36 de cadeia linear ou ramificada, uma alquenila C2-36 de cadeia linear ou ramificada incluindo pelo menos uma ligação dupla ou uma alquinila C2-36 de cadeia linear ou ramificada incluindo pelo menos uma ligação tripla.
[MÉTODO DE PREPARAÇÃO A]
[0092] Um composto representado pela Fórmula a mostrada abaixo é ligado a um aminoácido selecionado a partir do grupo que consiste em alanina, (Ala, A), arginina (Arg, R), asparagina (Asn, N), ácido aspártico (Asp, D), cisteína (Cis, C), ácido glutâmico (Glu, E), glutamina (Gin, Q), glicina (Gli, G), histidina (His, H), isoleucina (Ile, I), leucina (Leu, L), lisina (Lis, K), metionina (Met, M), fenilalanina (Phe, F), prolina (Pro, P), serina (Ser, S), treonina (Thr, T), triptopfano (Trp, W), tirosina (Tir, i) e valina (Val, V) na presença de 1-etil- 3-(3-dimetilaminopropil)carbodi-imida, hidroxibenzotriazol e uma base para formar uma ligação de amida, preparando, assim, o composto 2. [FÓRMULA A] (R1 é conforme definido na Fórmula 2).
4) . COMPOSIÇÕES/FORMULAÇÕES
[0093] Ainda outro aspecto da presente invenção fornece uma composição para prevenir, melhorar e tratar várias doenças (por exemplo, indicações inflamatórias, cânceres e indicações oftálmicas), tal composição compreende, como um componente ativo, pelo menos um dos compostos, pelo menos um dos isômeros ópticos ou pelo menos um dos sais.
[0094] As composições em conformidade com algumas modalidades podem suprimir a expressão de citocinas e/ou quimiocinas incluindo G-CSF, IL-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, IL- 1α, IL-1β, IL-6, IL-9, MCP-1, MIP-3a, IL12p40/70, MIG, TNF-a e VCAM-1. As composições em conformidade com outras modalidades podem suprimir a atividade de NF-KB. As composições em conformidade com outras modalidades podem inibir a formação de um complexo de transdução de sinal inflamatório mediado por MyD88. As composições em conformidade com outras modalidades podem inibir a formação de um complexo de transdução de sinal inflamatório mediado por RIP1. As composições em conformidade com outras modalidades podem inibir a formação de um complexo de transdução de sinal inflamatório mediado por Pellino-1.
[0095] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece uma composição para prevenir, melhorar e tratar uma doença inflamatória intestinal (incluindo distúrbios estreitamente relacionados) que compreende, como um componente ativo, pelo menos um dos compostos, pelo menos um dos isômeros ópticos ou pelo menos um dos sais. A doença inflamatória intestinal pode incluir, porém, sem limitação, colite ulcerativa, doença de Behcet e doença de Crohn. A composição pode compreender adicionalmente um aditivo.
[0096] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece uma composição para prevenir, melhorar ou tratar esclerose múltipla, psoríase, sepse, atrofia geográfica, doença macular relacionada à idade úmida, doença macular relacionada à idade seca, retinopatia diabética, doenças pulmonares infecciosas, pneumonia bacteriana, pneumonia viral, linfoma difuso de grandes células B, infecção viral, doença autoimune, câncer de sangue incluindo linfoma e tumores em órgãos internos que compreende, como um componente ativo, pelo menos um dos compostos, pelo menos um dos isômeros ópticos ou pelo menos um dos sais.
[0097] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece uma composição para prevenir, melhorar ou tratar alopecia caracterizada pelo fato de que compreende, como um componente ativo, pelo menos um dos compostos, pelo menos um dos isômeros ópticos ou pelo menos um dos sais, em que o componente ativo inibe a expressão de 1L-6 em folículos capilares e no couro cabeludo.
[0098] A presente invenção abrange formulações adequadas para a administração dos compostos descritos no presente documento. Os compostos descritos no presente documento podem estar em formulações (incluindo composições farmacêuticas) com aditivos tais como excipientes (por exemplo, um ou mais excipientes), antioxidantes (por exemplo, um ou mais antioxidantes), estabilizantes (por exemplo, um ou mais estabilizantes), conservantes (por exemplo, um ou mais conservantes), agentes de ajuste de pH e/ou de tamponamento (por exemplo, um ou mais agentes de ajuste de pH e/ou de tamponamento), agentes de ajuste de tonicidade (por exemplo, um ou mais agentes de ajuste de tonicidade), agentes espessantes (por exemplo, um ou mais agentes espessantes), agentes de suspensão (por exemplo, um ou mais agentes de suspensão), agentes de ligação (por exemplo, um ou mais agentes de ligação), agentes de aumento de viscosidade (por exemplo, um ou mais agentes de aumento de viscosidade) e similares, desde que os componentes adicionais sejam farmaceuticamente aceitáveis para a afecção particular a ser tratada. Em algumas modalidades, a formulação pode incluir combinações de dois ou mais componentes adicionais conforme descrito no presente documento (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ou mais componentes adicionais). Em algumas modalidades, os aditivos incluem agentes de processamento e modificadores e intensificadores de entrega de fármaco, tais como, por exemplo, fosfato de cálcio, estearato de magnésio, talco, monossacarídeos, dissacarídeos, amido, gelatina, celulose, metil celulose, carboximetil celulose sódica, dextrose, hidroxipropil- beta-ciclodextrina, polivinilpirrolidinona, ceras de baixo ponto de fusão, resinas de troca de íons e similares, assim como combinações de quaisquer dois ou mais dos mesmos. Outros excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados são descritos em "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Pub. Co., New Jersey (1991), e "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", Lippincott Williams & Wilkins, Filadélfia , 20a edição (2003) e 2∑a edição (2005), que são incorporados ao presente documento a título de referência.
[0099] Formulações das composições farmacêuticas apropriadas para administração por quaisquer meios medicamente aceitáveis estão incluídas na invenção. As formulações farmacêuticas podem compreender um carreador farmaceuticamente aceitável apropriado para o meio de administração e um composto (composição) farmaceuticamente aceitável. Por exemplo, as formulações da composição descrita no presente documento podem ser adequadas para administração oral. As mesmas podem ser formadas em várias formas incluindo soluções, suspensões, semilíquidos, semissólidos, géis, emulsões, pomadas, tabletes e cremes. As formas de tablete podem incluir um ou mais dentre lactose, sacarose, manitol, sorbitol, fosfatos de cálcio, amido de milho, amido de batata, celulose microcristalina, gelatina, dióxido de silício coloidal, talco, estearato de magnésio, ácido esteárico e outros excipientes, colorantes, cargas, ligantes, diluentes, agentes de tamponamento, agentes de hidratação, conservantes, agentes flavorizantes, corantes, agentes de desintegração e carreadores farmaceuticamente aceitáveis.
[00100] As composições (formulações) podem ser administradas por meio de muitas vias incluindo, porém, sem limitação, vias orais, nasais, pulmonares, retais, bucais, vaginais oculares e transdérmicas. O modo, a frequência e a quantidade eficaz de administração das composições (formulações) podem ser decididos de acordo com os métodos conhecidos na técnica e/ou os métodos descritos no presente documento (por exemplo, administração oral, 0,1 a 1.000 mg/dia, uma vez ao dia). Por exemplo, os mesmos podem ser administrados sozinhos ou em combinação. Por exemplo, os mesmos podem ser concomitantemente administrados, coadministrados e/ou intermitentemente administrados.
5) . MÉTODOS PARA USAR COMPOSTOS, COMPOSIÇÕES OU FORMULAÇÕES
[00101] Um aspecto adicional da presente invenção fornece um método para prevenir, melhorar ou tratar várias doenças (por exemplo, indicações inflamatórias, cânceres e indicações oftálmicas) que compreende administrar a um sujeito em necessidade a composição (ou composto ou formulação descrita no presente documento).
[00102] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para prevenir, melhorar ou tratar uma doença inflamatória intestinal que compreende administrar a composição (ou composto ou formulação descrita no presente documento) a um sujeito em necessidade uma composição que contém, como um componente ativo, pelo menos um dos compostos, pelo menos um dos isômeros ópticos ou pelo menos um dos sais.
[00103] Em outra modalidade, a presente invenção fornece um método para prevenir, melhorar ou tratar uma doença ou síndrome, tal método compreende administrar a um sujeito em necessidade uma composição que contém, como um componente ativo, pelo menos um dos compostos, pelo menos um dos isômeros ópticos ou pelo menos um dos sais. A doença ou síndrome pode envolver a formação de um complexo de transdução de sinal inflamatório induzido por Pellino-1 contendo MyD88, RIP1 ou ambos. A doença ou síndrome pode incluir, porém, sem limitação, esclerose múltipla, psoríase, sepse, atrofia geográfica, doença macular relacionada à idade úmida, doença macular relacionada à idade seca, retinopatia diabética, doenças pulmonares infecciosas, pneumonia bacteriana, pneumonia viral, linfoma difuso de grandes células B, infecção viral, doença autoimune, câncer de sangue incluindo linfoma e tumores em órgãos internos (por exemplo, fígado, pulmão, intestino, próstata, pâncreas e similares).
[00104] Em ainda outra modalidade, a presente invenção fornece um método para prevenir, melhorar ou tratar atrofia geográfica, doença macular relacionada à idade úmida, doença macular relacionada à idade seca ou retinopatia diabética, tal método compreende administrar a um sujeito em necessidade uma composição que contém, como um componente ativo, pelo menos um dos compostos, pelo menos um dos isômeros ópticos ou pelo menos um dos sais. O composto (ou compostos), o isômero (ou isômeros) óptico e o sal (ou sais) pode ter um efeito farmacêutico nas células do epitélio do pigmento da retina. Nas células do epitélio do pigmento da retina, os mesmos podem inibir a expressão de pelo menos uma proteína selecionada a partir do grupo que consiste em Nox-4, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, Ang2, EPO e EPOR. Nas células do epitélio do pigmento da retina, os mesmos podem aumentar a expressão de Ang 1, Tie2, ou ambos.
EXEMPLOS
[00105] A presente invenção será explicada em mais detalhes com os exemplos a seguir. Os exemplos são apresentados apenas para o propósito de ilustração da presente invenção, e a presente invenção não se limitará aos exemplos. EXEMPLO 1: PREPARAÇÃO DOS COMPOSTOS EXEMPLO 1.1: ÁCIDO (S)-3-(4-HIDROXIFENIL)-2-(2-((S)-1-((S)-1- 2-CARBONIL)PIRROLIDINA-2- CARBOXAMIDO)ACETAMIDO)PROPANOICO (PAL-PPGY-OH)
ETAPA 1: PREPARAÇÃO DE 1-((S)-1-PALMITOILPIRROLIDINA-2- CARBONIL)PIROLIDINA-2—CARBOXILATO DE (S)-METILA
[00106] Uma solução de mistura foi produzida misturando-se ácido (S)-1-palmitoilpirrolidina-2-carboxílico (10,0 g, 28,3 mmoles) preparado na etapa 2 do Exemplo 1.2, EDCI (5,96 g, 31,1 mmoles), HOBt (4,20 g, 31,1 mmoles) e trietilamina (11,8 ml, 84,9 mmoles) em diclorometano. Cloridrato de éster metílico de prolina (5,15 g, 31,1 mmoles) foi adicionado à solução de mistura. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, concentrada sob pressão reduzida, diluída com solução aquosa de bicarbonato de sódio e extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi lavada com solução salina e lavada com HCI a 1 N três vezes. O resultante foi lavado com solução salina, seco com sulfato de magnésio anidro e concentrado sob pressão reduzida para obter 1-((S)-1- palmitoilpirrolidina-2-carbonil)pirrolidina-2-carboxlato de (S)-metila (11,4 g, rendimento 87%).
[00107] RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 4,69-4,65 (m, 1 H), 4,544,58 (m, 1 H), 3,83-3,93 (m, 1 H), 3,58-3,72 (m,5H), 3,45-3,53 (m, 1 H), 1,89-2,31 (m, 10 H), 1,60-1,64 (m, 2 H), 1,25 (m, 24 H), 0,88 (t, J = 6,87Hz, 3 H)
[00108] MS (ESI), calculado para C27H48N2O4464,4, encontrado m/z465,2 (M + H+).
ETAPA 2: PREPARAÇÃO DE ÁCIDO (S)-1-((S)-1-PALMITOILPIRROLIDINA- 2-CARBONIL)PIRROLIDINA—2— CARBOXÍLICO
[00109] 1-((S)-1-palmitoilpirrolidina-2-carbonil)pirrolidina- 2-carboxilato de (S)-metila (15,0 g, 32,3 mmoles) preparado na etapa 1 foi misturado com tetra-hidrofurano. Solução aquosa de hidróxido de sódio (2,58 g, 64,6 mmoles) foi adicionada à solução de mistura. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e concentrada. HCI a 1 N foi adicionado para ajustar o pH a 1,0. A camada aquosa do mesmo foi extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi seca com sulfato de magnésio anidro e concentrada para obter ácido (S)-1-((S)-1-palmitoilpirrolidina-2- carbonil)pirrolidina-2-carboxílico (13,2 g, rendimento 91%) como um sólido branco.
[00110] MS (ESI), calculado para C26H46N2O4450,3, encontrado m/z 451,1 (M + H+).
ETAPA 3: PREPARAÇÃO DE 2-((S)-1-((S)-1-PALMITOILPIRROLIDINA-2- CARBONIL)PIRROLIDINA-2-CARBOXAMIDO)ACETATO DE ETILA
[00111] Ácido (S)-1 -((S)-1-palmitoilpirrolidina-2- carbonil)pirrolidina-2-carboxílico (12 g, 26,6 mmoles) preparado na etapa 2 foi misturado com diclorometano. Cloridrato de éster etílico de glicina (4,09 g, 29,3 mmoles), EDCI (5,62 g, 29,3 mmoles), HOBt (3,96 g, 29,3 mmoles) e trietilamina (11,1 ml, 79,8 mmoles) foram adicionados à solução de mistura. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, concentrada sob pressão reduzida, diluída com solução aquosa de carbonato de sódio e extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi lavada com solução salina e lavada com HCI a 1 N três vezes. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca com sulfato de magnésio anidro e concentrada para obter 2-((S)-1-((S)-1-palmitoilpirrolidina- 2-carbonil)pirrolidina-2-carboxiamido)acetato de etila (11,1 g, rendimento 78%). MS (ESI), calculado para C30H53N3O5535,4, encontrado m/z 536,5 (M + H+).
ETAPA 4:PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 2-((S)-1-((S)-1- PALMITOILPIRROLIDINA-2-CARBONIL)PIRROLIDINA-2- CARBOXAMIDO)ACÉTICO
[00112] 2-((S)-1-((S)-1-palmitoilpirrolidina-2- carbonil)pirrolidina-2- carboxiamido)acetato de etila (12 g, 22,4 mmoles) preparado na etapa 3 foi misturado com tetra- hidrofurano. Solução aquosa de hidróxido de sódio (1,79 g, 44,8 mmoles) foi adicionada à solução de mistura. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e concentrada. HCI a 1 N foi adicionado para ajustar o pH a 1,0. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi seca com sulfato de magnésio anidro e concentrada para obter ácido 2-((S)-1-((S)-1- palmitoilpirrolidina-2-carbonil)pirrolidina-2- carboxamido)acético (9,5 g, rendimento 84%).
[00113] MS (ESI), calculado para C28H49N3O5507,4, encontrado m/z 508,2 (M + H+).
ETAPA 5: PREPARAÇÃO DE 3-(4-HIDROXIFENIL)-2-(2-((S)-1-((S)-1- PALMITOILPIRROLIDINA-2-CARBONIL)PIRROLIDINA-2- CARBOXAMIDO)ACETAMIDO)PROPANOATO DE (S)-METILA
[00114] Ácido 2-((S)-1-((S)-1-palmitoilpirrolidina-2- carbonil)pirrolidina-2-carboxamido)acético (10 g, 19,7 mmoles) preparado na etapa 4 foi misturado com diclorometano. Éster metílico de tirosina (4,23 g, 21,7 mmoles), EDCI (4,16 g, 21,7 mmoles), HOBt (21,7 g, 21,7 mmoles) e trietilamina (8,19 ml, 59,1 mmoles) foram adicionados à solução de mistura. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, concentrada sob pressão reduzida, diluída com solução aquosa de bicarbonato de sódio e extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi lavada com solução salina e lavada com HCI a 1 N três vezes. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca com sulfato de magnésio anidro, concentrada e purificada com MPLC para obter 3-(4-hidroxifenil)- 2-(2-((S)-1-((S)-1-palmitoilpirrolidina-2- carbonil)pirrolidina-2-carboxamido)acetamido)propanoato de (S)- metila (8,4 g, rendimento 62%).
[00115] MS (ESI), calculado para C37H60N4O7684,4, encontrado m/z 685,2 (M + H+).
ETAPA 6: PREPARAÇÃO DE ÁCIDO (S)-3-(4-HIDROXIFENIL)-2-(2-((S)- 1-((S)-1-PALMITOILPIRROLIDINA-2-CARBONIL)PIRROLIDINA-2- CARBOXAMIDO)ACETAMIDO)PROPANOICO
[00116] 3-(4-hidroxifenil)-2-(2-((S)-1-((S)-1- palmitoilpirrolidina-2-carbonil)pirrolidina-2- carboxamido)acetamido)propanoato de (S)-metila (4,9 g, 7,16 mmoles) preparado na etapa 5 foi misturado com tetra- hidrofurano. Solução aquosa de hidróxido de sódio (0,86 g, 21,5 mmoles) foi adicionada à solução de mistura. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e concentrada. HCI a 1N foi adicionado para ajustar o pH a 1,0. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi seca com sulfato de magnésio anidro e concentrada para obter ácido (S)-3-(4-hidroxifenil)-2-(2-((S)- 1-((S)-1-palmitoilpirrolidina-2-carbonil)pirrolidina-2- carboxamido)acetamido)propanoico (4,5 g, rendimento 93%).
[00117] RMN de 1H (300 MHz, MeOD) δ 7,04 (d, J = 8,31 Hz, 2 H) 6,70 (d, J = 8,37 Hz,2 H), 4,38-4,68 (m,3 H), 3,44-4,04 (m, 6 H), 2,91 -3,13 (m, 2 H), 1,81 -2,38 (m, 10 H), 1,54-1,60 (m, 2 H), 1,30 (m, 24 H), 0,88 (t, J = 6,63 Hz, 3 H),
[00118] MS (ESI), calculado para C37H58N4O7670,4, encontrado m/z 671,3 (M + H+). EXEMPLO 1.2: ÁCIDO (S)-3-(4-HIDROXIFENIL)-2-(2-((S)-1- PALMITOILPIRROLIDINA-2-CARBOXAMIDO)ACETAMIDO)PROPANOICO (PAL- PGY-OH)
ETAPA 1: 1-PALMITOILPIRROLIDINA-2-CARBOXILATO DE (S)-METILA
[00119] Ácido palmítico (7 g, 27,3 mmoles), EDCI (5,78 g, 30,0 mmoles), HOBt (4,05 g, 30,0 mmoles) e trietilamina (11,4 ml, 81,9 mmoles) foram misturados com diclorometano. Cloridrato de éster metílico de prolina (4,97 g, 30,0 mmoles) foi adicionado à solução de mistura. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, concentrada sob pressão reduzida, diluída com solução aquosa de carbonato de sódio e extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi lavada com solução salina e lavada com HCI a 1 N três vezes. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca com sulfato de magnésio anidro e concentrada sob pressão reduzida para obter 1-palmitoilpirrolidina-2- carboxilato de (S)-metila (9,6 g, rendimento 96%) como um líquido viscoso.
[00120] RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 4,46-4,50 (m, 1 H), 3,473,75 (m,5 H), 1,90-2,36 (m, 6 H), 1,59-1,69 (m, 2 H), 1,25(m, 24 H), 0,88 (t, J = 6,84 Hz, 3H)
[00121] MS (ESI), calculado para C22H41NO3367,3, encontrado m/z 368 (M + H+). ETAPA 2: PREPARAÇÃO DE ÁCIDO (S)-1—PALMITOILPIRROLIDINA—2- CARBOXÍLICO 1-Palmitoilpirrolidina-2-carboxilato de (S)-metila (10,0 g, 27,2 mmoles) preparado na etapa 1 foi misturado com tetra- hidrofurano. Solução aquosa de hidróxido de sódio (3,26 g, 81,6 mmoles) foi adicionada à solução de mistura. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e concentrada. HCI a 1 N foi adicionado para ajustar o pH a 1,0. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi seca com sulfato de magnésio anidro e concentrada para obter ácido (S)-1-palmitoilpirrolidina-2- carboxílico (8,6 g, rendimento 89%) como um sólido branco. RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 4,59-62 (m, 1 H), 3,42-3,59 (m,2H), 2,46-2,53 (m, 1 H), 2,33-2,38 (m, 2 H), 1,93-2,01 (m, 3 H), 1,621,69 (m, 2 H), 1,25 (m, 24 H), 0,88 (t, J = 6,90 Hz, 3 H) MS (ESI), calculado para C21H39NO3353.3, encontrado m/z354.2 (M + H+). ETAPA 3: PREPARAÇÃO DE 2-(1-PALMITOILPIRROLIDINA-2- CARBOXAMIDO)ACETATO DE (S)-ETILA Ácido (S)-1-palmitoilpirrolidina-2-carboxílico (10 g, 28,3 mmoles) preparado na etapa 2, cloridrato de éster etílico de glicina (4,34 g, 31,1 mmoles), EDCI (5,76 g, 31,1 mmoles), HOBt (4,20 g, 31,1 mmoles) e trietilamina (15,7 ml, 113 mmoles) foram misturados com diclorometano. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, concentrada sob pressão reduzida, diluída com solução aquosa de carbonato de sódio e extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi lavada com solução salina e lavada com HCI a 1 N três vezes. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca com sulfato de magnésio anidro e concentrada para obter 2- (1-palmitoilpirrolidina-2-carboxamido)acetato de (S)-etila (10,7 g, rendimento 86%).
[00122] MS (ESI), calculado para C25H46N2O4438,3, encontrado m/z 439,1 (M + H+).
ETAPA 4: PREPARAÇÃO DE ÁCIDO (S)-2-(1-PALMITOILPIRROLIDINA-2- CARBOXAMIDO)ACÉTICO
[00123] 2-(1-palmitoilpirrolidina-2-carboxamido)acetato de (S)-etila (12 g, 27,4 mmoles) preparado na etapa 3 foi misturado com tetra-hidrofurano. Solução aquosa de hidróxido de sódio (2,20 g, 54,7 mmoles) foi adicionada à solução de mistura. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e concentrada. HCI a 1 N foi adicionado para ajustar o pH a 1,0. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi seca com sulfato de magnésio anidro e concentrada para obter ácido (S)-2-(1- palmitoilpirrolidina-2-carboxamido)acético (10,2 g, rendimento 91%) como um sólido branco.
[00124] MS (ESI), calculado para C23H42N2O4410,3, encontrado m/z 411,3 (M + H+).
ETAPA 5: PREPARAÇÃO DE 3-(4-HIDROXIFENIL)-2-(2-((S)-1- PALMITOILPIRROLIDINA-2-CARBOXAMIDO)ACETAMIDO)PROPANOATO DE (S)- METILA
[00125] Ácido (S)-2-(1-palmitoilpirrolidina-2- carboxamido)acético (7 g, 27,3 mmoles) preparado na etapa 4 foi misturado com diclorometano. Éster metílico de tirosina (5,86 g, 30,0 mmoles), EDCI (5,78 g, 30,0 mmoles), HOBt (4,05 g, 30,0 mmoles) e trietilamina (11,4 ml, 81,9 mmoles) foram adicionados à solução de mistura. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, concentrada sob pressão reduzida, diluída com solução aquosa de bicarbonato de sódio e extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi lavada com solução salina e lavada com HCI a 1 N três vezes. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca com sulfato de magnésio anidro, concentrada e purificada com MPLC para obter 3-(4-hidroxifenil)-2-(2-((S)-1- palmitoilpirrolidina-2-carboxamido)acetamido)propanoato de (S)- metila (9,8 g, rendimento 61%).
[00126] RMN de 1H (300 MHz, CDCI3) δ 7,25-7,50 (m, 3 H), 6,93 (d, J = 8,34 Hz, 2 H) 6,70 (d, J = 8,34 Hz,2 H), 4,70-4,77 (m,1 H), 4,39-4,43 (m, 1 H), 3,95-4,21 (m, 1 H), 3,41 -3,72 (m, 5 H), 2,92-3,1 2 (m, 2 H), 1,91 -2,35 (m, 7 H), 1,57-1,61 (m, 2 H), 1,25 (m, 24 H), 0,88 (t, J = 6,87 Hz, 3 H)
[00127] MS (ESI), calculado para C33H53N3O6587,4, encontrado m/z 588,1 (M + H+).
ETAPA 6: PREPARAÇÃO DE ÁCIDO (S)-3-(4-HIDROXIFENIL)-2-(2-((S)- 1-PALMITOILPIRROLIDINA-2-CARBOXAMIDO)ACETAMIDO)PROPANOICO
[00128] 3-(4-Hidroxifenil)-2-(2-((S)-1-palmitoilpirrolidina- 2-carboxamido)acetamido)propanoato de (S)-metila (2,85 g, 4,85 mmoles) preparado na etapa 5 foi misturado com tetra- hidrofurano. Solução aquosa de hidróxido de sódio (0,58 g, 14,6 mmoles) foi adicionada à solução de mistura. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e concentrada. HCI a 1 N foi adicionado para ajustar o pH a 1,0. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi seca com sulfato de magnésio anidro e concentrada para obter ácido (S)-3-(4-hidroxifenil)-2-(2-((S)- 1-palmitoilpirrolidina-2-carboxamido)acetamido)propanoico (2,2 g, rendimento 79%) como um sólido branco.
[00129] RMN de 1H (300 MHz, MeOD) δ 7,03 (d, J = 8,40 Hz,2 H) 6,70 (d, J = 8,40 Hz,2 H), 4,58-4,61 (m,1 H), 4,33-4,56 (m, 1 H), 3,58-4,37 (m, 4 H), 2,96-3,15 (m, 2 H), 1,92-2,39 (m, 6 H), 1,55-1,62 (m, 2 H), 1,29 (m, 24 H), 0,91 (t, J = 6,87 Hz, 3 H)
[00130] MS (ESI), calculado para C32H51N3O6573,4, encontrado m/z 574,2(M + H+). EXEMPLO 1.3: PALMITOIL-L-ALANIL-L-PROLILGLICIL-L-TIROSINA (PAL- APGY-OH) O COMPOSTO FOI PREPARADO DE ACORDO COM O ESQUEMA DE REAÇÃO 2 A SEGUIR. [ESQUEMA DE REAÇÃO 2]
[00131] O composto (1) (10 g, 46,5 mmoles), o composto (2) (7,15 g, 51,2 mmoles), EDCI-HCI (9,82 g, 51,2 mmoles), HOBt (6,92 g, 51,2 mmoles) e trietilamina (19,4 ml, 140 mmoles) foram misturados com diclorometano. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, concentrada sob pressão reduzida, diluída com solução aquosa de carbonato de sódio e extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi lavada com solução salina e lavada com HCI a 1 N três vezes. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca com sulfato de magnésio anidro e concentrada sob pressão reduzida para obter o composto (3) (rendimento 91%) como um líquido viscoso.
[00132] LC-MS (ESI): calculado para C14H24N2O5300,2, encontrado m/z 301,2 (M + H+).
[00133] O composto (3) (12 g, 40 mmoles) foi misturado com tetra-hidrofurano. Solução aquosa de hidróxido de sódio (6,40 g, 160 mmoles) foi adicionada à solução de mistura. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e concentrada. HCI a 1 N foi adicionado para ajustar o pH a 1,0. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi seca com sulfato de magnésio anidro e concentrada para obter o composto (4) (rendimento 96%) como um sólido branco.
[00134] LC-MS (ESI): calculado para C12H20N2O5 272,1, encontrado m/z 273,1 (M + H+).
[00135] O composto (4) (6,25 g, 23 mmoles), o composto (5) (4,85 g, 25,3 mmoles), EDCI-HCI (4,85 g, 25,3 mmoles), HOBt (43,42 g, 25,3 mmoles) e trietilamina (TEA, 12,8 ml, 96 mmoles) foram misturados com diclorometano. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, concentrada sob pressão reduzida, diluída com solução aquosa de carbonato de sódio e extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi lavada com solução aquosa de bicarbonato de sódio duas vezes, lavada com solução salina e lavada com HCI a 1 N três vezes. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca com sulfato de magnésio anidro e concentrada para obter o composto (6) (rendimento 87%) como um sólido branco.
[00136] LC-MS (ESI): calculado para C22H31N3O7449,2, encontrado m/z 450,2 (M + H+).
[00137] O composto (6) (8 g, 17,8 mmol) foi dissolvido em acetato de etila. Uma quantidade em excesso de HCI a 4 N em dioxano foi adicionada à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 4 horas e concentrada sob pressão reduzida para obter o composto (7) como um sólido branco.
[00138] LC-MS (ESI): calculado para C17H23N3O5349,2, encontrado m/z 350,2 (M + H+).
[00139] O composto (7) (0,25 g, 0,65 mmol), o composto (8) (Boc-alanina, 0,12 g, 0,65 mmol), EDCI.HCI (0,25 g, 1,30 mmol), HOBt (0,18 g, 1,30 mmol) e trietilamina (0,36 ml, 2,60 mmoles) foram misturados com diclorometano. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, concentrada sob pressão reduzida, diluída com solução aquosa de carbonato de sódio e extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi lavada com solução aquosa de bicarbonato de sódio duas vezes, lavada com solução salina e lavada com HCI a 1 N três vezes. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca com sulfato de magnésio anidro, concentrada e purificada com o uso de MPLC (diclorometano/2- propanol) para obter o composto (9) (rendimento 3%).
[00140] LC-MS (ESI): calculado para C25H36N4O8520,3, encontrado m/z 520,7 (M + H+).
[00141] O composto (9) (0,11 g, 0,21 mmol) foi dissolvido em acetato de etila. Uma quantidade em excesso de HCI a 4 N em dioxano foi adicionada à temperatura ambiente e agitada à temperatura ambiente por 4 horas. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida para obter o composto (10) como um sólido branco.
[00142] LC-MS (ESI): calculado para C20H28N4O6420,2, encontrado m/z 420,6 (M + H+).
[00143] A uma solução de ácido palmítico (0,02 g, 0,08 mmol) em diclorometano foi adicionado o composto (10) (0,04 g, 0,09 mmol), EDCI.HCI (0,03 g, 0,16 mmol), HOBt (0,02 g, 0,16 mmol) e trietilamina (0,04 ml, 0,32 mmol). O resultante foi agitado à temperatura ambiente de um dia para o outro, concentrado sob pressão reduzida, diluído com solução aquosa de carbonato de sódio e extraído com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi lavada com solução salina e lavada com HCI a 1 N três vezes. A camada orgânica foi lavada com solução salina, seca com sulfato de magnésio anidro, concentrada e purificada com o uso de MPLC (diclorometano/2-propanol) para obter o composto (11) (rendimento 58%).
[00144] LC-MS (ESI): calculado para C36H58N4O7658,4, encontrado m/z 659,1 (M + H+)
[00145] O composto (11) (0,03 g, 0,05 mmol) foi misturado com tetra-hidrofurano. Solução aquosa de hidróxido de sódio (0,008 g, 0,20 mmol) foi adicionada. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro e concentrada. HCI a 1 N foi adicionado para ajustar o pH a 1,0. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila três vezes. A camada orgânica inteira foi seca com sulfato de magnésio anidro e concentrada para obter o composto (12) (rendimento 93%) como um sólido branco.
[00146] RMN de 1H (500 MHz, CD3OD) δ 7,05 (d, J = 8,50 Hz, 2 H), 6,70 (d, J = 8,50 Hz, 2 H), 4,59-4,65 (m, 2 H), 4,39-4,41 (m, 1 H), 3,96-3,99 (m, 1 H), 3,84-3,89 (m, 1 H), 3,65-3,76 (m, 2 H), 3,10-3,14 (m, 1 H), 2,97-3,01 (m, 1 H), 2,20-2,24 (m, 3 H), 2,09-2,14 (m, 1 H), 1,96-2,03 (m, 2 H), 1,58-1,60 (m, 3 H), 1,31 -1,36 (m, 30 H), 0,92 (t, J = 7,15 Hz, 3 H). LC- MS (ESI): calculado para C35H56N4O7644,4, encontrado m/z 644,6 (M + H+).
[00147] Os compostos dos Exemplos 1.4 a 1.15 foram preparados da mesma maneira que a descrita no Exemplo 1.3, com o uso do composto (7) como o material de partida. Os dados de RMN desses compostos são mostrados abaixo.
EXEMPLO 1.4: PALMITOILGLICIL-L-PROLILGLICIL-L-TIROSINA (PAL- GPGY-OH) RMN DE 1H
[00148] (500 MHz, CD3OD) δ 7,03 (d, J = 8,50 Hz, 2 H), 6,70 (d, J = 8,50 Hz, 2 H), 4,58-4,63 (m, 1 H), 4,39-4,42 (m, 1 H), 3,90-4,08 (m, 4 H), 3,59-3,74 (m, 3 H), 3,09-3,12 (m, 1 H), 2,963,00 (m, 1 H), 1,99-2,31 (m, 7 H), 1,56-1,66 (m, 3 H), 1,24-1,35 (m, 26 H), 0,92 (t, J = 7,05 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calculado para C34H54N4O7 630,4, encontrado m/z 630,8 (M + H+).
EXEMPLO 1.5:( (9Z,12Z) -OCTADECA-9, 12-DIENOIL) GLICIL-L- PROLILGLICIL-L-TIROSINA (LINOLEIL-GPGY—OH)
[00149] RMN de 1H (500 MHz, CD3OD) δ 7,03 (d, J = 8,50 Hz, 2 H), 6,71 (d, J = 8,50 Hz, 2 H), 5,31 -5,41 (m, 4 H), 4,58-4,62 (m, 1 H), 4,39-4,42 (m, 1 H), 3,99-4,08 (m, 2 H), 3,70-3,73 (m, 1 H), 3,59-3,67 (m, 1 H), 3,09-3,12 (m, 1 H), 2,96-3,00 (m, 1 H), 2,78- 2,79 (m, 3 H), 2,25-2,31 (m, 1 H), 2,1 8-2,22 (m, 2 H), 1,99-2,13 (m, 7 H), 1,56-1,64 (m, 3 H), 1,31 -1,42 (m, 18 H), 0,93 (t, J = 7,10 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calculado para C36H54N4O7 654,4, encontrado m/z 655 (M + H+).
EXEMPLO 1.6: PALMITOIL-L-FENILALANIL-L-PROLILGLICIL-L-TIROSINA (PAL-FPGY-OH)
[00150] RMN de 1H (500 MHz, CD3OD) δ 7,27-7,28 (m, 5 H), 7,07 (d, J = 8,45 Hz, 2 H), 6,71 (d, J = 8,30 Hz, 2 H), 4,59-4,63 (m, 1 H), 4,40-4,42 (m, 1 H), 3,99-4,02 (m, 1 H), 3,85-3,89 (m, 1 H), 3,73-3,78 (m, 1 H), 3,52-3,55 (m, 1 H), 3,09-3,16 (m, 2 H), 2,86-3,02 (m, 3 H), 1,95- 2,22 (m, 8 H), 1,44-1,62 (m, 4 H), 1,31 (m, 25 H), 0,92 (t, J = 7,10 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calculado para C41H60N4O7 720,4, encontrado m/z 721,1 (M + H+).
EXEMPLO 1.7:HEXANOIL-L — PROLIL-L-PROLILGLICIL-L — TIROSINA (HEXANOIL-PPGY—OH)
[00151] RMN de 1H (500 MHz, CD3OD) δ 7,05 (d, J= 8,50 Hz, 2 H), 6,70 (d, J= 8,50 Hz, 2 H), 4,66- 4,68 (m, 1 H), 4,54-4,57 (m, 1 H), 4,40-4,44 (m, 1 H), 3,96-4,00 (m, 1 H), 3,85-3,89 (m, 1 H), 3,73-3,76 (m, 1 H), 3,51-3,68 (m, 3 H), 3,08-3,12 (m, 1 H), 2,973,02 (m, 1 H), 2,31- 2,41 (m, 2 H), 2,20-2,29 (m, 2 H), 1,922,12 (m, 5 H), (m, 8 H), 1,57-1,66 (m, 3 H), 1,31- 1,38 (m, 5 H), 0,93 (t, J= 7,00 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calculado para C27H38N4O7 530,3, encontrado m/z 530,7 (M + H+).
EXEMPLO 1.8: OCTANOIL-L-PROLIL-L-PROLILGLICIL-L-TIROSINA (OCTANOIL-PPGY-OH)
[00152] RMN de 1H (500 MHz, CD3OD) δ 7,05 (d, J = 8,50 Hz, 2 H), 6,71 (d, J = 8,50 Hz, 2 H), 4,66- 4,68 (m, 1 H), 4,54-4,57 (m, 1 H), 4,40-4,42 (m, 1 H), 3,96-4,00 (m, 1 H), 3,85-3,89 (m, 1 H), 3,73-3,77 (m, 1 H), 3,51 -3,68 (m, 3 H), 3,08-3,12 (m, 1 H), 2,97-3,02 (m, 1 H), 2,1 8- 2,34 (m, 4 H), 1,92-2,12 (m, 5 H), 1,57-1,61 (m, 2 H), 1,32-1,35 (m, 10 H), 0,92 (t, J = 7,00 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calculado para C29H42N4O7 558,3, encontrado m/z 558,5 (M + H+).
EXEMPLO 1.9: DECANOIL-L-PROLIL-L-PROLILGLICIL-L-TIROSINA (DECANOIL-PPGY-OH)
[00153] RMN de 1H (500 MHz, CD3OD) δ 7,03 (d, J = 8,55 Hz, 2 H), 6,71 (d, J = 8,40 Hz, 2 H), 4,66- 4,68 (m, 1 H), 4,54-4,57 (m, 1 H), 4,40-4,42 (m, 1 H), 3,96-4,00 (m, 1 H), 3,85-3,89 (m, 1 H), 3,73-3,77 (m, 1 H), 3,51 -3,68 (m, 3 H), 3,08-3,12 (m, 1 H), 2,97-3,02 (m, 1 H), 2,1 8- 2,39 (m, 5 H), 1,92-2,14 (m, 6 H), 1,57-1,61 (m, 2 H), 1,32-1,36 (m, 14 H), 0,92 (t, J = 7,15 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calculado para C31H46N4O7 586,3, encontrado m/z 586,8 (M + H+).
EXEMPLO 1.10: ESTEAROIL-L-PROLIL-L-PROLILGLICIL-L-TIROSINA (ESTEAROIL-PPGY-OH)
[00154] RMN de 1H (500 MHz, CD3OD) δ 7,03 (d, J= 8,55 Hz, 2 H), 6,71 (d, J= 8,25 Hz, 2 H), 4,66- 4,68 (m, 1 H), 4,55-4,57 (m, 1 H), 4,40-4,44 (m, 1 H), 3,96-4,02 (m, 1 H), 3,84-3,89 (m, 1 H), 3,71-3,76 (m, 1 H), 3,48-3,68 (m, 4 H), 3,08-3,12 (m, 1 H), 2,973,02 (m, 1 H), 2,14- 2,42 (m,5H), 1,90-2,14 (m, 6 H), 1,57-1,61 (m, 2 H), 1,32-1,35 (m, 30 H), 0,92 (t, J=7,15 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calculado para C39H62N4O7 698,5, encontrado m/z 698,5 (M + H+).
EXEMPLO 1.11: HEX-5-ENOIL-L-PROLIL-L-PROLILGLICIL-L-TIROSINA (5-HEXENOIL- PPGY-OH)
[00155] RMN de 1H (500 MHz, CD3OD) δ 7,05 (d, J = 8,55 Hz, 2 H), 6,70 (d, J = 8,25 Hz, 2 H), 5,78-5,89 (m, 1 H), 4,98-5,08 (m, 3 H), 4,66-4,69 (m, 1 H), 4,54-4,57 (m, 1 H), 4,40- 4,44 (m, 1 H), 3,97-4,01 (m, 1 H), 3,84-3,90 (m, 1 H), 3,73-3,76 (m, 1 H), 3,47-3,68 (m, 4 H), 3,08-3,1 2 (m, 1 H), 2,97-3,01 (m, 1 H), 2,33-2,42 (m, 2 H), 2,20-2,30 (m, 2 H), 2,06- 2,15 (m, 4 H), 1,92-2,04 (m, 4 H), 1,67-1,76 (m, 3 H). LC-MS (ESI): calculado para C27H36N4O7 528,3, encontrado m/z 529 (M + H+).
EXEMPLO 1.12: OLEOIL-L—PROLIL-L-PROLILGLICIL-L—TIROSINA (OLEIL- PPGY-OH)
[00156] RMN de H (500 MHz, CD3OD) δ 7,03 (d, J = 8,50 Hz, 2 H), 6,71 (d, J = 8,50 Hz, 2 H), 5,34-5,38 (m, 2 H), 4,66-4,68 (m, 1 H), 4,55-4,57 (m, 1 H), 4,40-4,42 (m, 1 H), 3,96-4,01 (m, 1 H), 3,84-3,90 (m, 1 H), 3,73-3,77 (m, 1 H), 3,53-3,69 (m, 4 H), 3,08-3,1 2 (m, 1 H), 2,97-3,01 (m, 1 H), 2,18-2,39 (m, 5 H), 2,06-2,12 (m, 2 H), 1,92-2,05 (m, 3 H), 1,58-1,61 (m, 3 H), 1,31 -1,35 (m, 25 H), 0,92 (t, J = 7,0 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calculado para C39H60N4O7 696,4, encontrado m/z 697,3 (M + H+).
EXEMPLO 1.13: ((9Z,12Z)-OCTADECA-9,12-DIENOIL)-L-PROLIL-L- PROLILGLICIL-L- TIROSINA (LINOLEIL-PPGY—OH)
[00157] RMN de 1H (500 MHz, CD3OD) δ 7,05 (d, J = 8,45 Hz, 2 H), 6,71 (d, J = 8,45 Hz, 2 H), 5,32-5,41 (m, 4 H), 4,66-4,68 (m, 1 H), 4,55-4,57 (m, 1 H), 4,40- 4,43 (m, 1 H), 3,96-4,01 (m, 1 H), 3,84-3,89 (m, 1 H), 3,73-3,77 (m, 1 H), 3,53-3,68 (m, 4 H), 3,08-3,1 2 (m, 1 H), 2,97-3,01 (m, 1 H), 2,80 (t, J = 6,40 Hz, 2 H), 2,19-2,39 (m, 5 H), 1,93-2,13 (m, 10 H), 1,59-1,61 (m, 3 H), 1,31 -1,40 (m, 15 H), 0,92 (t, J = 6,59 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calculado para C39H58N4O7 694,4, encontrado m/z 695,2 (M + H+).
EXEMPLO 1.14: PALMITOIL-L-VALIL-L-PROLIL-L-PROLILGLICIL-L- TIROSINA (PAL- VPPGY-OH)
[00158] RMN de 1H (500 MHz, CD3OD) δ 7,04 (d, J = 8,35 Hz, 2 H), 6,71 (d, J = 8,35 Hz, 2 H), 4,67-4,70 (m, 1 H), 4,52-4,58 (m, 1 H), 4,39-4,43 (m, 1 H), 3,77-4,05 (m, 4 H), 3,64- 3,73 (m, 2 H), 3,49-3,60 (m, 1 H), 3,01-3,11 (m, 2 H), 1,87-2,31 (m, 15 H), 1,61-1,63 (m, 3 H), 1,31 (m,24 H), 1,01 (d, J=6,58 Hz, 3 H), 0,98 (d, J=6,58 Hz, 3 H), 0,92 (t, J =6,96 Hz, 3 H). LC-MS (ESI), calculado para C42H67N5O8 769,5, encontrado m/z 770,7 (M + H+).
EXEMPLO 1.15: DECANOIL-L-VALIL-L-PROLIL-L-PROLILGLICIL-L- TIROSINA (DECANOIL-VPPGY-OH)
[00159] RMN de 1H (500 MHz, CD3OD) δ 7,05 (d, J = 8,45 Hz, 2 H), 6,71 (d, J = 8,45 Hz, 2 H), 4,67-4,70 (m, 1 H), 4,50-4,57 (m, 1 H), 4,39-4,43 (m, 1 H), 3,95-4,05 (m, 2 H), 3,80- 3,91 (m, 1 H), 3,65-3,70 (m, 2 H), 3,64-3,73 (m, 2 H), 3,53-3,57 (m, 1 H), 3,01-3,10 (m, 2 H), 1,89-2,31 (m, 12 H), 1,61-1,63 (m, 3 H), 1,31 (m, 24 H), 1,01 (d, J= 6,68 Hz, 3 H), 0,97 (d, J= 6,55 Hz, 3 H), 0,92 (t, J = 7,05 Hz, 3 H). LC-MS (ESI), calculado para C36H55N5O8 685,4, encontrado m/z 686,6 (M + H+).
[00160] A Tabela 1 retrata os compostos de acordo com os Exemplos 1.1 a 1.15. TABELA 1: COMPOSTOS DE ACORDO COM OS EXEMPLOS 1.1 A 1.15
EXEMPLO 2: ENSAIOS EXEMPLO 2.1: SUPRESSÃO DA EXPRESSÃO DE IL-6
[00161] Para avaliar a supressão da expressão de IL-6 pelos compostos da presente invenção, o experimento a seguir foi realizado.
[00162] Primeiramente, células macrófagos RAW 264.7 foram adquiridas junto à Coleção de Cultura do Tipo Americana (ATCC; Manassas, VA) e foram cultivadas a uma temperatura de 37 °C, sob atmosfera de CO2 de 5%, com o uso de Soro Fetal Bovino 10% (FBS) e meio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) contendo penicilina/estreptomicina 1%.
[00163] As células macrófagos RAW 264.7 foram divididas em uma placa de cultura de células de 6 cavidades. Após 24 horas, as células foram pré-tratadas com o composto 1.1, o composto 1.2 e smaducina-6, respectivamente, em uma concentração de 100 nM por 30 min e adicionalmente tratadas com lipopolissacarídeos (LPS) por duas horas. Essas células foram coletadas com o uso de TRIzol®, e o RNA foi extraído. De 2 μg do RNA extraído, cDNAs (ácidos desoxirribonucleicos complementares) foram sintetizados, e reações em cadeia de polimerase de transcrição reversa (RT-PCR) e reações em cadeia de polimerase em tempo real (PCR em Tempo Real) foram realizadas. As amostras da RT-PCR foram confirmadas por eletroforese em géis de agarose e quantificadas com o uso de densitômetro. Um gene de gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (GAPDH) foi usado como um controle de carregamento para o gene de interleucina-6.
[00164] A Figura 1A mostra imagens que retratam a supressão da expressão de interleucina-6 pelo composto 1.1 e pelo composto 1.2, e a Figura 1B é um gráfico que mostra a supressão quantificada da expressão de interleucina-6 pelo composto 1.1 e pelo composto 1.2. Em comparação à amostra não tratada, quando as células tratadas com o composto de acordo com a presente invenção, a expressão de interleucina-6, que foi induzida pelo tratamento com LPS, foi suprimida.
[00165] Adicionalmente, células macrófagos RAW 264.7 cultivadas conforme descrito acima foram também divididas em uma placa de 6 cavidades, após 24 horas, foram pré-tratadas com 100 nM do composto 1.1 por 30 minutos e adicionalmente tratadas com LPS por duas horas. A cultura celular acima foi coletada, e, com o uso de um arranjo de citocina (arranjo de citocina de camundongo C3, RayBiotech), alterações nas quantidades de citocina e quimiocina foram quantificadas por um densitômetro. As citocinas e quimiocinas detectadas pelo composto da presente invenção incluíram G-CSF, IL-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-9, MCP-1, MIP-3a, IL12p40/70, MIG, TNF-a e VCAM-1. Em comparação às amostras não tratadas, quando as células foram tratadas com os compostos da presente invenção, a expressão das citocinas e quimiocinas acima, que foram induzidas pelo tratamento com LPS, foi suprimida como estatisticamente significativa (Figura 2).
[00166] Células macrófagos RAW 264.7 foram tratadas com concentrações variadas do 1.1 de 50 pM a 500 nM por 30 minutos e tratadas com 100 ng/ml de LPS por duas horas. A expressão induzida de interleucina-6 foi quantificada conforme descrito acima, e os resultados foram apresentados na Figura 3. Nas células macrófagos RAW 264.7, a concentração do composto 1.1 em que a expressão de interleucina-6 foi suprimida a 50% ou inferior (isto é, IC50) foi cerca de 1.6 nM.
EXEMPLO 2.2: SUPRESSÃO DA ATIVIDADE DE NF-KB
[00167] Para avaliar se o sinal de NF-KB induzido por LPS foi especificamente suprimido pelos compostos da presente invenção, os experimentos a seguir foram realizados.
[00168] Especificamente, o plasmídeo-repórter 5x NF-kB-LUC foi transfectado em células RAW 264.7 com o uso de Effectene (Qiagen, EUA). As células transfectadas foram pré-tratadas com 100 nM do composto 1.1 por 30 minutos e adicionalmente tratadas com LPS (100 ng/ml) por duas horas, e a atividade de luciferase nas células foi medida (a Figura 4 retrata um gráfico que mostra as atividades de inibição relativas do composto 1.1 e do composto 1.2 à ativação de NF-kB). Quando as células tratadas com o composto 1.1 e o composto 1.2 de acordo com a presente invenção, a ativação de NF-kB, que foi induzida por LPS, foi inibida (Figura 4).
[00169] Adicionalmente, o plasmídeo-repórter 5x NF-kB-LUC foi transfectado em células macrófagos RAW 264.7 e tratado com os compostos da presente invenção, conforme descrito acima. Após 24 horas de transfecção, as células foram pré-tratadas com DMSO (controle), o composto 1.1, o composto de referência 1 (composto em que o ácido palmítico é removido do composto 1.1) e smaducin- 6 foram tratados a várias concentrações de 100 pM, 1 nM, e 100 nM por 30 minutos, e, então, as células foram tratadas com 100 ng/ml de LPS por duas horas. A atividade de luciferase nas células foi medida, e os resultados são apresentados na Figura 5.
[00170] Conforme mostrado na Figura 5, quando as células foram pré-tratadas com o composto 1.1 (similarmente às células pré- tratadas com smaducin-6), a inibição da atividade de NF-KB, que foi induzida pelo tratamento com LPS, foi aumentada na medida em que a dose do composto 1.1 aumentou. Em contraste, quando as células foram pré-tratadas com DMSO ou com o composto de referência 1, a atividade de NF-kB não foi inibida de maneira dependente de dose.
EXEMPLO 2.3: SELETIVIDADE DE TRAJETÓRIA DE SINALIZAÇÃO
[00171] Para avaliar a seletividade de trajetória de sinalização do composto 1.1 de acordo com a presente invenção, os experimentos a seguir foram realizados. Os experimentos a seguir foram realizados para testar se o composto 1.1 suprimiu especificamente uma trajetória de sinalização induzida por um indutor individual.
[00172] Especificamente, o plasmídeo-repórter 5x NF-kB-LUC, o plasmídeo-repórter SBE-Luc e o plasmídeo-repórter BRE-Luc foram individualmente transfectados em células macrófagos RAW 264.7. Após 24 horas, as células transfectadas com o plasmídeo-repórter NF-KB-LUC foram tratadas com 100 ng/ml de LPS, as células transfectadas com o plasmídeo-repórter SBE-Luc foram tratadas com 5 ng/ml de TFG-βl, e as células transfectadas com o plasmídeo-repórter BRE-Luc foram tratadas com 100 ng/ml de BMP6 por duas horas.
[00173] A Figura 6 é um gráfico que mostra as atividades de supressão relativas do composto 1.1 a diferentes trajetórias de sinalização. Conforme mostrado na Figura 6, quando as células tratadas com o composto 1.1 de acordo com a presente invenção, a ativação de NF-KB, que foi induzida pelo tratamento com LPS, foi inibida. Entretanto, a ativação de BRE, que foi induzida pelo tratamento com BMP6, ou a ativação de SBE, que foi induzida pelo tratamento com TFG-β1, não foi inibida pelo composto 1.1. Consequentemente, o composto 1.1 inibiu seletivamente a ativação da trajetória de sinalização de NF-kB.
[00174] Particularmente, estudos recentes relataram que, para tratar uma doença inflamatória intestinal, as trajetórias de sinalização de TFG-β e BMP podem se relacionar especificamente à cura de ferimentos mucosais e similares (Nature 449 (2007), 361 a 365, Am J Path, 162(2), (2003), Nature Immunol. 6, (2005), 507 a 514, J Cell Physiol. 196(2): (2003); 258 a 264) e Nature Protocols, 8(3), (2013) 627 a 637, que são incorporados ao presente documento a título de referência), e TFG-β poderia ser um fator importante no controle da afecção inflamatória (condicionamento de célula dendrítica) em intestinos (J. Clin. Invest., 111 (2003), 1.297 a 1.308, Immunity, 10 (1999), 39 a 49, Eur. J. Immunol., 36 (2006), 864 a 874, Immunity, 25 (2006), 319 a 329, Cell 118 (2004), 229 a 241 e J. Immunol. 179 (2007), 2.690 a 2.694, que são incorporados ao presente documento a título de referência). Consequentemente, os compostos da presente invenção não suprimem a ativação de trajetórias de sinalização de TFG-β e BMP que indicaram que aqueles compostos são marcadamente eficazes para o tratamento da doença inflamatória intestinal.
EXEMPLO 2.4: INTERRUPÇÃO DA FORMAÇÃO DO COMPLEXO DE SINALIZAÇÃO E DEGRADAÇÃO DO INIBIDOR KB (IKB)
[00175] A fim de testar se o composto da presente invenção pode interromper a formação do complexo de proteína de trajetória de sinalização de inflamação mediado por MyD88 e/ou RIP1, por exemplo, complexo de proteína de trajetória de sinalização de receptores do tipo Toll (TLRs), experimentos de imunoprecipitação foram realizados. Ao mesmo tempo, os experimentos a seguir foram realizados para medir a degradação de IKB pelo composto da presente invenção como alterações de medição da concentração de IKB.
[00176] Especificamente, com o uso de anticorpos que correspondem às proteínas que se relacionam à formação do complexo de proteína de trajetória de sinalização de receptores do tipo Toll (TLRs) (por exemplo, IRAKI, TRAF6, MyD88, RIP1 e Pellino-1), a interrupção da formação de complexos de proteína de trajetória de sinalização inflamatória foi afirmada por imunoprecipitação. Como um controle de referência, uma quantidade relativa da expressão de β-actina do lisato celular total foi comparada e apresentada com o uso de Western blot.
[00177] Células macrófagos RAW264.7 foram individualmente tratadas novamente com o composto 1.1 e o composto 1.2 e smaducin-6 e adicionalmente tratadas com LPS. Essas células macrófagos RAW264.7 foram coletadas, lisadas em um tampão de lise (PBS contendo Triton X- 100 0,5%, HEPES a 20 mM (pH 7,4), NaCI 150 mM, fosfato de β-glicerol a 12,5 mM, MgCI2 a 1,5 mM, NaF a 10 mM, DTT a 2 mM, Na304V a 1 mM, EGTA a 2 mM e Inibidor de Protease (PMSF) a 1 mM) e centrifugadas a 13.000 rpm por 10 minutos. Para ensaios de imunoprecipitação, o sobrenadante foi incubado a 4 °C por 12 horas, com microesferas de agarose de proteína-A e os anticorpos correspondentes às proteínas, e as microesferas foram subsequentemente lavadas três vezes com o tampão de lise. As substâncias imunoprecipitadas foram dissociadas das microesferas com adição de tampão amostra 2x e foram fervidas. As amostras preparadas foram carregadas em gel de SDS-poliacrilamida (Figura 7).
[00178] Para medir as alterações na concentração de IKB, células macrófagos RAW264.7 foram individualmente pré-tratadas com o composto 1.1, o composto 1.2 e smaducin-6 a uma concentração de 100 nM e, então, tratadas com LPS. O lisato celular extraído foi usado para immunoblotting com anticorpo IkBα, e β-actina foi usada como referência (Figura 7).
[00179] A Figura 7 mostra imagens de imunoprecipitação que indicam que o composto 1.1 e o composto 1.2 interromperam os complexos de proteína de trajetória de sinalização inflamatória que são mediados por MyD88 ou RIP1 e que indicam adicionalmente alterações na concentração de IkB por esses compostos. Quando as células foram tratadas com os compostos de acordo com a presente invenção, em comparação ao controle do lisato celular total, a formação do complexo de proteína de trajetória de sinalização inflamatória (que é mediado por MyD88 ou RIP1) foi interrompida (Figura 7). As células tratadas com o composto da presente invenção foram estabilizadas pela desfosforilação de IKB em comparação à expressão da referência de β-actina.
[00180] Quando as células foram tratadas com os compostos de acordo com a presente invenção, em comparação ao controle de lisato celular total, a formação do complexo de proteína MyD88 e o complexo de proteína RIP1 e atividades dos mesmos foram substancialmente interrompidas e inibidas (Figura 7). Esses resultados indicaram que os compostos na presente invenção podem ser usados para o tratamento de doenças relacionadas a Pellino- 1. Ademais, adicionalmente às doenças inflamatórias intestinais descritas acima, os compostos da presente invenção podem ser eficazes para prevenir ou tratar atrofia geográfica, doença macular relacionada à idade úmida (AMD úmida), doença macular relacionada à idade seca (AMD seca), retinopatia diabética, esclerose múltipla (MS), inflamação pulmonar, pneumonia bacteriana, pneumonia viral, linfoma difuso de grandes células B (DLBCL, tipo GCB ou tipo ABC) e alopecia (Journal of Clinical Investigation, 124(11), (2014), 4.976 a 4.988, J Virology, 86(12), (2012), 6.595 a 6.604, Nature Medicine, 19(5), (2013), 595 a 602, J. Immunol., 187 (2011), 1 a 14, J. Inv. Derm., 132 (2012), 43 a 49, Med. Inflamm., (2010), ID de artigo 928030, Hair The Transplant, 4 (2014), 4:1, Exp. Derm., 17 (2007), 12 a 19 e DDT Dis. Mech. 5 (2009), e163 a 171), que são incorporados ao presente documento a título de referência).
[00181] Células macrófagos derivadas da medula óssea (BMDM) foram individualmente pré-tratadas com o composto 1.1, o composto de referência 1 e smaducin-6 a várias concentrações de 100 pM, 1 nM e 100 nM e, então, adicionalmente tratadas com 100 ng/ml de LPS. Os lisatos celulares extraídos foram usados para immunoblot conforme descrito acima, e os resultados foram mostrados na Figura 8.
[00182] No caso de células pré-tratadas com o composto 1.1 em comparação às células pré-tratadas com smaducin-6, a formação do complexo de trajetória de sinalização inflamatória (por exemplo, receptores do tipo Toll (TLR)), que foi mediado por MyD88 e RIP1, foi adicionalmente interrompida de uma maneira dependente de dose crescente do composto 1.1 (Figura 8). Entretanto, as células pré-tratadas com DMSO ou composto de referência 1 formaram o complexo de trajetória de sinalização inflamatória que é mediado por MyD88 e RIP1 de uma maneira dependente de dose.
[00183] Igualmente, em comparação ao controle de lisato celular total, quando as células foram pré-tratadas com o composto 1.1 da presente invenção, a formação do complexo de trajetória de sinalização inflamatória, que é mediado por MyD88 e RIP1, foi substancialmente interrompida. Os experimentos que usam células BMDM com o composto da presente invenção indicaram que o composto da presente invenção é eficaz para prevenir e tratar múltiplas doenças relacionadas à MyD88, prevenir e tratar doenças relacionadas à expressão de Pellino-1 tais como infecção viral (infecção viral respiratória, pneumonia viral), pneumonia bacteriana, doença autoimune, câncer de sangue incluindo linfoma, tumores em vários órgãos internos (por exemplo, fígado, pulmão, intestino, próstata, pâncreas e similares) e prevenir e tratar esclerose múltipla (MS).
[00184] Conforme ilustrado na Figura 9, as células macrófagos RAW 264.7 (topo) e as células BMDM (fundo) foram individualmente pré-tratadas com o composto 1.1, o composto de referência 1 e smaducine-6 a várias concentrações de 100 pM, 1 nM e 100 nM e, então, adicionalmente tratadas com 100 ng/ml de LPS. Os resultados foram comparados com a expressão da referência de β- actina. A expressão de IKB foi aumentada nas células na medida em que a dose do composto 1.1 pré-tratado e smaducin-6 aumentou. Entretanto, IkB foi degradado em células pré-tratadas com DMSO ou composto de referência 1 devido ao fato de que o mesmo mostrou ser fosforilado. Consequentemente, o composto 1.1 da presente invenção inibiu a degradação de IkB.
EXEMPLO 2.5: AVALIAÇÃO DA CORRELAÇÃO ENTRE A DOSE E O ÍNDICE DE ATIVIDADE DE DOENÇA
[00185] Para avaliar o índice de atividade de doença dos compostos da presente invenção em um modelo animal com colite crônica induzida por dextrano sulfato de sódio (DSS), os experimentos a seguir foram realizados.
[00186] Camundongos (7 a 8 semanas, fêmeas, C57BL/6) foram alimentados com polímero de DSS 2% (MW de cerca de 50.000 Da) em água potável por 5 a 7 dias, e colite foi induzida a cada 2 a 15 dias. O composto 1.1 foi, então, administrada por via oral aos camundongos, que tiveram colite crônica induzida por DSS, em uma quantidade de 50 mg/kg, 100 mg/kg, 200 mg/kg e 400 mg/kg, respectivamente, a partir do terceiro dia alimentando DDS, diariamente, por 11 dias. Os pesos corporais, diarreia e hemafecia dos camundongos foram verificados diariamente, e os índices de atividade de doença foram medidos (Figura 10).
[00187] A Figura 10 é um gráfico que indica pontuações de índice de atividade de doença no modelo animal com colite crônica induzida por DSS de acordo com a dose do composto 1.1 e do composto 1.2 administrados por via oral. Conforme mostrado na Figura 10, quando o composto 1.1 da presente invenção foi administrado a diferentes doses de 50 mg/kg a 400 mg/kg, a atividade de doença do mesmo foi diminuída na medida em que a dose aumentou, e a diminuição na atividade de doença foi saturada a uma dose de 200 mg/kg. Consequentemente, o composto da presente invenção aumentou proporcionalmente a atividade de uma maneira dependente de dose.
EXEMPLO 2.6: SUPRESSÃO DA ATIVIDADE DE DOENÇA INTESTINAL
[00188] Para avaliar a atividade de supressão dos compostos da presente invenção em um modelo animal com colite aguda induzida (que é induzida por DSS), os experimentos a seguir foram realizados.
[00189] Camundongos (7 a 8 semanas, fêmeas, C57BL/6) foram alimentados com polímero de DSS 2% (MW de cerca de 50.000 Da) em água potável por 7 a 8 dias, e colite foi induzida. Então, cada camundongo que tem colite aguda recebeu sulfassalazina em uma quantidade de 500 mg/kg e o composto 1.1 em uma quantidade de 100 mg/kg diariamente por 14 dias. Os pesos corporais, diarreia e hemafecia dos camundongos foram verificados diariamente, e os índices de atividade de doença (DAI) foram medidos (Figura 11A).
[00190] O DAI foi medido da seguinte forma:
[00191] 1) perda de peso (0 ponto: sem perda de peso; 1 ponto: peso reduzido em 1 a 5%, 2 pontos: peso reduzido em 6 a 10%, 3 pontos: peso reduzido em 11 a 20%; 4 pontos: peso reduzido em 20% ou mais);
[00192] 2) diarreia (0 ponto: evacuação intestinal normal; 2 pontos: evacuação intestinal solta; 4 pontos: diarreia); e
[00193] 3) hemafecia (0 ponto: fezes normais; 2 pontos: presença de sangue nas fezes moderada; 4 pontos: forte presença de sangue nas fezes).
[00194] A Figura 11 A é um gráfico que indica as pontuações de índice de atividade de doença apresentando as atividades de supressão dos compostos administrados no modelo animal com colite aguda induzida por DSS. Em comparação à sulfassalazina anti-inflamatória, o composto da presente invenção tinha pontuação de índice de atividade de doença suficiente a uma dose reduzida, e, assim, o composto da presente invenção é mais eficaz para tratar colite (Figura 11A).
[00195] Entretanto, conforme mostrado na Figura 11B, camundongo que sofrem de colite crônica induzida por DSS receberam por via oral sulfassalazina em uma quantidade de 500 mg/kg e o composto 1.1 em uma quantidade de 100 mg/kg diariamente por 10 dias. Após 10 dias de administração, tecidos do intestino grosso foram obtidos a partir dos camundongos, e a expressão de quimiocinas (CCL20, CCL2 e CX3CL1) nos tecidos foi medida com o uso de reação em cadeia de polimerase em tempo real (PCR em Tempo Real) conforme descrito acima. O composto 1.1 foi um bloqueador de quimiocina eficaz inibindo a quimiotaxia de células imunológicas patogênicas nos tecidos inflamados.
EXEMPLO 2.7: ANÁLISES HISTOLÓGICAS DE VILOSIDADES DO CÓLON
[00196] Para confirmar o efeito de tratamento da colite crônica induzida por DDS pelo composto 1.1 da presente invenção, vilosidades do intestino grosso de um grupo não tratado, um grupo de modelo com colite crônica induzida por DDS e um grupo tratado com o composto 1.1 foram fotografadas (Figuras 12 a 16).
[00197] As Figuras 12 a 14 são imagens que mostram os formatos de vilosidades do intestino grosso do grupo não tratado, do grupo de modelo de colite crônica induzida por DDS e do grupo tratado com o composto 1.1. Conforme mostrado nas Figuras 12 a 14, em comparação às vilosidades do intestino grosso do modelo com colite crônica induzida por DSS, as vilosidades do grupo tratado com o composto 1.1 eram similares às vilosidades do grupo não tratado.
[00198] A Figura 15 mostra imagens fotográficas de tecidos do intestino grosso obtidas a partir do grupo não tratado, do grupo de modelo com colite crônica induzida por DDS, do grupo tratado com o composto 1.1 (100 mpk) e do grupo tratado com sulfassalazina (500 mpk) como um fármaco anti-inflamatório para tratamento de colite. A Figura 16 mostra imagens fotográficas da morfologia de membranas mucosas do intestino grosso obtidas a partir do grupo não tratado, o grupo de modelo com colite crônica induzida por DDS, o grupo tratado com o composto 1.1 (100 mpk) e o grupo tratado com sulfassalazina (500 mpk) como um fármaco anti-inflamatório para tratamento com colite, e as membranas mucosas foram manchadas com azul de Alcian. Conforme mostrado nas Figuras 15 e 16, quando o modelo com colite crônica induzida por DDS foi tratado com o composto 1.1, os danos histológicos, que podem ser encontrados em tecidos inflamados, foram aliviados. Adicionalmente, em comparação ao grupo não tratado e ao grupo tratado com sulfassalazina, o grupo tratado com o composto 1.1 teve maior recuperação das membranas mucosas bloqueando as células inflamadas no tecido.
[00199] A Figura 17 é um gráfico que mostra o nível de recuperação da parede do intestino grosso no grupo não tratado, no grupo de modelo com colite crônica induzida por DDS, no grupo tratado com o composto 1.1 (100 mpk) e no grupo tratado com sulfassalazina (500 mpk).
[00200] Especificamente, conforme descrito em Nature Protocols, 8(3), (2013) 627 a 637, no 8o dia 8 de tratamento em modelos com colite crônica induzida por DDS, FITC-Dextrano foi administrado por via oral a uma dose de 44 mg por 100 g de peso corporal. Após quatro horas de administração, sangue em uma quantidade de 300 a 400 μl foi coletado do coração dos camundongos. O FITC-Dextrano liberado na corrente sanguínea foi medido com o uso de um espectrofluorômetro.
[00201] A Figura 17 mostra quantitativamente que, analisando- se o FITC-Dextrano liberado na corrente sanguínea, uma junção apertada no tecido epitelial do intestino grosso causada pela embolização da membrana mucosa do intestino grupo ou função na parede do intestino grupo foram recuperadas tanto quanto o tratamento com sulfassalazina atual. Consequentemente, o composto da presente invenção tinha um efeito significativo na recuperação da barreira epitelial intestinal e funções de junção apertada nos tecidos com colite crônica.
EXEMPLO 2.8: CONCENTRAÇÃO PLASMÁTICA
[00202] Para avaliar as alterações da concentração sanguínea (corrente sanguínea) da administração intravenosa e oral do composto 1.1 da presente invenção, os experimentos a seguir foram realizados.
[00203] O composto 1.1 foi administrado a um rato por via intravenosa (I.V., 5 mg/kg) ou por via oral (50 mg/kg), e, 24 horas após a administração, a concentração do composto 1.1 no plasma foi medida (Figuras 18 e 19).
[00204] Alterações na concentração do composto 1.1 quando administrado por via intravenosa em vários intervalos de tempo foram medidas (Figura 18). A concentração foi diminuída a 1/100 da concentração inicial do mesmo dentro de 1 a 2 horas e dentro de 8 horas da administração. O composto 1,1 foi detectado no sangue a uma concentração bastante baixa.
[00205] Alterações na concentração sanguínea do composto 1.1 em vários cursos de tempo quando administrado por via oral foram medidas (Figura 19). Após 30 minutos da administração oral, o composto 1.1 não foi detectado no sangue.
[00206] A Tabela 2 mostra os parâmetros farmacocinéticos do composto 1.1. TABELA 2: PARÂMETROS FARMACOCINÉTICOS DO COMPOSTO 1.1
EXEMPLO 2.9: DISTRIBUIÇÃO DE TECIDO
[00207] Para avaliar a distribuição de tecido do composto 1.1 de acordo com a presente invenção, os experimentos a seguir foram realizados.
[00208] O composto 1.1 foi administrado por via oral a um rato a uma dose de 10 mg/kg, e, após 2 horas e 8 horas, as concentrações do composto 1.1 foram medidas no tecido do intestino delgado, tecido do intestino delgado, tecido do apêndice, excremento no intestino delgado e excremento no intestino grosso. Os resultados são mostrados na Tabela 3 a seguir. TABELA 3: CONCENTRAÇÃO DO COMPOSTO 1.1 APÓS ADMINISTRAÇÃO ORAL ND: Não determinado Faixa de quantificação: intestino 8 a 2.000 ng/kg, excremento 30 a 1.000 ng/ml
[00209] Conforme mostrado na Tabela 3, o composto 1.1 foi distribuído nos tecidos intestinais tais como tecidos do intestino delgado, do intestino grosso e do apêndice em 2 horas e 8 horas de administração em uma faixa quantitativa, e, ademais, o composto 1.1 foi distribuído em tecidos internos 8 horas após administração.
[00210] Consequentemente, quando administrado por via oral, uma concentração eficaz do composto da presente invenção é continuamente mantida em tecidos intestinais, mesmo após 8 horas. Como o composto da presente invenção é um fármaco de molécula pequena, o composto pode ser prontamente retirado dos intestinos de modo que a concentração eficaz do mesmo possa ser prontamente alcançada. Consequentemente, por administração oral, o composto descrito no presente documento pode ser usado para tratar eficazmente doenças inflamatórias intestinais.
EXEMPLO 2.10: INIBIÇÃO DA ATIVIDADE DA TRAJETÓRIA DE SINALIZAÇÃO MAPK
[00211] Para testar se o composto 1.1 e o composto 1.2 da presente invenção suprimem a trajetória de sinalização MAPK/ERK, uma análise de Western blot foi realizada (Figura 20).
[00212] Células macrófagos RAW 246.7 foram pré-tratadas com o composto 1.1, o composto 1.2 e o composto de referência 1 a uma concentração de 100 nM por 30 minutos e, então, adicionalmente tratadas com LPS por 0 hora, 0,5 hora, 1 hora e 2 horas. A fosforilação das proteínas de trajetória de sinalização MAPK (ERK1 /2, JNK, p38) das células tratadas com o composto 1.1 e o composto 1.2 foi ativada em 0,5 hora com o mesmo padrão que o caso do composto de referência 1, e, após 1 hora ou 2 horas de tratamento, a fosforilação dessas proteínas foi gradualmente diminuída com o mesmo padrão que o caso com o composto de referência 1. β-actina foi usada como o controle de referência. Alterações da concentração mediante a fosforilação de cada proteína foram medidas por immunoblotting com o uso de anticorpos antifosforilação. O composto de referência 1, o composto 1,1 e o composto 1.2 não inibiram a fosforilação das proteínas de trajetória de sinalização MAPK.
[00213] A Figura 21 mostra imagens que determinam a inibição da fosforilação das proteínas de trajetória de sinalização MAPK (ERK1 /2, JNK, p38). As células BMDM foram pré-tratadas com DMSO, composto de referência 1, composto 1.1 e smaducin-6 a várias concentrações de 100 pM, 1 nM e 100 nM e, então, adicionalmente tratadas com LPS por 2 horas. Posteriormente, a análise de Western blot foi realizada. O composto 1.1 de acordo com a presente invenção não foi relacionado à supressão da fosforilação de proteínas de trajetória de sinalização MAPK/ERK apesar do aumento da dose que foi similar a DMSO e ao composto de referência 1.
EXEMPLO 2.11: COMPARAÇÃO COM O INIBIDOR DE IRAK1/4
[00214] Conforme descrito no Exemplo 2.3, o plasmídeo-repórter 5x NF-KB-LUC foi transfectado para células macrófagos RAW 246.7. Após 24 horas, as células transfectadas com o plasmídeo-repórter NF-KB-LUC foram pré-tratadas com o composto 1.1 (100 nM), inibidor de quinase-1/4 associado ao receptor de interleucina-1 (IRAK1/4) (25 μM, CAS 509093-47-4) e smaducin-6 (100 nM) por 30 minutos e, então, adicionalmente tratadas com LPS (100 ng/ml) por 2 horas. Subsequentemente, as atividades de luciferase nas células foram medidas.
[00215] A Figura 22 mostra a inibição da ativação de NF-KB pelo composto 1.1 e inibidor de IRAK1/4 (Figura 22B) relativamente. A uma alta concentração de inibidor de IRAK1/4 (por exemplo, 25 μM), a ativação de NF-kB foi inibida, que foi similar ao composto 1.1.
[00216] As alterações na concentração de IKB no lisato celular de células macrófagos RAW 246.7, que foram pré-tratadas com o composto 1.1 (100 nM), inibidor de IRAK1/4 (25 μM) e smaducin-6 (100 nM) e, então, adicionalmente tratadas com LPS (100 ng/ml), foram medidas (Figura 23). O inibidor de RAK1/4 também suprimiu a degradação de IkB similarmente ao composto 1.1 (Figura 23).
[00217] A Figura 24 mostra um gráfico e imagens comparando a supressão da trajetória de sinalização MAPK/ERK pelo composto 1.1 e pelo inibidor de IRAK1/4. Especificamente, as células macrófagos RAW 246.7 foram pré-tratadas com DMSO, o composto 1.1 (100 nM), o inibidor de IRAK1/4 (25 μM) e smaducin-6 (100 nM) por 30 minutos e, então, adicionalmente tratadas com LPS (100 ng/ml) por duas horas. A Figura 24A mostra especificamente os resultados de immunoblotting para avaliar se a fosforilação das proteínas de trajetória de sinalização MAPK tais como ERK, JNK e p38 foi inibida pelo tratamento acima, β-actina foi usada como referência. O composto 1.1 e smaducin-6 nem suprimiram a trajetória de sinalização MAPK nem inibiram a fosforilação das proteínas. Em contraste, o inibidor de IRAK1/4 suprimiu pelo menos uma ou mais dentre as trajetórias de sinalização MAPK.
[00218] Adicionalmente, para verificar um efeito colateral inesperado (por exemplo, a partir do fato de que o inibidor de IRAK1/4 suprime o sinal de transcrição AP-1 na trajetória MAPK induzida com LPS, que é contrário ao composto 1.1), os experimentos a seguir foram realizados.
[00219] As células macrófagos RAW 246.7 foram transfectadas com o plasmídeo-repórter AP-1-Luc conforme descrito no Exemplo 2.3. Após 24 horas, as células transfectadas com plasmídeo- repórter AP-1-Luc foram pré-tratadas com o composto 1.1 (100 nM), o inibidor de IRAK1/4 (25 μM) e smaducin-6 (100 nM) por 30 minutos e, então, adicionalmente tratadas com LPS (100 ng/ml) por 2 horas. A atividade de luciferase nas células foi medida, e os resultados são apresentados na Figura 24B. O composto 1.1 da presente invenção inibiu seletivamente a atividade da trajetória de sinalização NF-KB, mas não suprimiu trajetórias de sinalização MAPK o que é importante para a atividade biológica das células. Entretanto, o inibidor de IRAK1/4 inibiu a trajetória de sinalização MAPK, o que pode resultar na inibição de fatores transcricionais AP-1, de modo que, quando aplicado em um sujeito biológico, efeitos colaterais inesperados possam ocorrer.
[00220] Os resultados nos Exemplos 2.1 a 2.11 acima indicaram que os compostos da presente invenção podem (1) inibir a expressão de interleucina-6 e a atividade de NF-KB, que são induzidas com tratamento com LPS; (2) interromper trajetórias de sinalização inflamatórias mediadas por MyD88 e RIP1; e (3) fornecer índice de atividade de doença similar a uma dose menor do que a dose de sulfassalazina que é o fármaco anti-inflamatório atual para colite. Adicionalmente, quando os compostos na presente invenção são administrados por via oral, a concentração na corrente sanguínea é baixa, enquanto que a concentração eficaz é mantida nas células e/ou tecidos. Particularmente, em tecidos intestinais, a concentração eficaz dos mesmos pode ser mantida até mesmo após 8 horas de administração. Consequentemente, os compostos da presente invenção são usados para tratar uma doença inflamatória em tecidos intestinais e, em particular, são eficazmente usadas para prevenir, aliviar ou tratar uma doença inflamatória intestinal tal como colite ulcerativa, doença de Behcet, doença de Crohn e similares.
EXEMPLO 2.12: EFEITO EM CÉLULAS DO EPITÉLIO DO PIGMENTO DA RETINA
[00221] O composto 1.1 influenciou fatores relacionados à angiogênese ou fatores de supressão.
[00222] As células ARPE-19 foram tratadas com 5,5 mM de glicose como controle de referência. Para o grupo experimental, as células ARPE-19 foram tratadas com 30 mM de glicose por 48 horas para induzir uma condição de alto teor de glicose no sangue e simultaneamente tratadas com DMSO, o composto 1.1 (10 nM) e o composto 1.1 (50 nM). As alterações na expressão das proteínas Nox-4, VEGF, VEGFR1 , VEGFR2, Ang1, Ang2, Tie-2, EPO e EPOR foram medidas por análise de Western blot.
[00223] Ang1 e Tie-2, que são fatores que controlam hemorragia reforçando os vasos sanguíneos, foram aumentados de acordo com a concentração aumentada do composto 1.1 (Figura 25A). Entretanto, a expressão de Nox4 para produzir o fator de ROS (espécie de oxigênio reativo), VEGF para induzir o fator de novos vasos sanguíneos, VEGFR1 ,2, Ang2 para antagonizar o fator para Ang1 e EPO e EPOR de fatores para retinopatia diabética foi reduzida pelo tratamento com o composto 1.1.
[00224] Adicionalmente, as células HRMEC foram tratadas com 5,5 mM de glicose por grupo de referência. Para o grupo experimental, as células HRMEC foram tratadas com 30 mM de glicose por 48 horas para induzir uma condição de alto teor de glicose no sangue e simultaneamente tratadas com DMSO, o composto 1.1 (10 nM) e o composto 1.1 (50 nM). As alterações na expressão das proteínas Nox-4, VEGF, VEGFR1 , VEGFR2, Ang1, Ang2, Tie-2, EPO e EPOR foram quantitativamente medidas por qRT-PCR (RT-PCR quantitativa). A expressão do precursor de VEGF como fator estimulante de novos vasos sanguíneos foi reduzida pelo tratamento com o composto 1.1 (Figura 25B).
[00225] Para avaliar o efeito do composto 1.1 na formação de tubos durante a angiogênese, células HRMEC (8x103) foram cultivadas em microlâminas revestidas com Matrigel e tratadas com 20 ng/ml de VEGF por 4 horas para induzir a formação de tubos. Simultaneamente, para o grupo de referência, as células foram tratadas com DMSO, e, para o grupo experimental, as células foram tratadas com 50 nM do composto 1.1 e 1 uM de calceína-AM. As células foram observadas com o uso de microscópio de fluorescência.
[00226] A Figura 26 mostra imagens da formação de tubos nas células com o uso de microscópio de fluorescência que podem mostrar que o composto 1.1 suprimiu a formação de tubos. De fato, em células ARPE-19 de células do epitélio do pigmento da retina humanas, o composto 1.1 suprimiu a expressão das proteínas Nox- 4, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, Ang2, EPO e EPOR de acordo com o gradiente de concentração do mesmo, e uma expressão aumentada de Ang1 e Tie-2 foi observada. Como tal, o composto 1.1 é eficazmente usado para prevenir, aliviar ou tratar indicações oftálmicas tal como retinopatia diabética. Adicionalmente, interrompendo-se a formação do complexo de trajetória de sinalização de Myd88, o composto 1.1 é eficazmente usado para prevenir, aliviar ou tratar atrofia geográfica, doença macular relacionada à idade úmida (AMD úmida), doença macular relacionada à idade seca (AMD seca) e similares (Cell. 149(4), (2012); 847 a 859).
EXEMPLO 2.13: EFEITO NA RETINOPATIA DIABÉTICA
[00227] Estreptozotocina (STZ) foi administrada a uma dose de 50 mg/kg a camundongos diariamente por 5 dias, e um modelo de camundongo que tem retinopatia diabética induzida foi obtido. O grupo experimental do modelo de camundongo foi injetado com o composto 1.1, em uma quantidade de 0,2 μg em um olho do camundongo, do 20o dia ao 24 o da administração, três vezes com dois dias de intervalo. Após 50 dias de administração, uma amostra DR que não foi tratada com o composto 1.1 e uma amostra DR tratada com o composto 1.1 foram coletadas.
[00228] Os tecidos de retina coletados de cada grupo de camundongo conforme descrito acima foram manchados com 5 μM de di-hidroetídio, e as taxas de oxigênio ativo de cada grupo foram medidas (Figura 27B). A amostra DR injetada com o composto 1.1 mostrou taxa de oxigênio ativo reduzido em comparação à amostra DR não tratada. Consequentemente, o composto 1.1 da presente invenção é eficazmente usado para prevenir, aliviar ou tratar indicações oftálmicas tal como retinopatia diabética dos experimentos biológicos que usam camundongos.
EXEMPLO 2.14: EFEITO NA ESCLEROSE MÚLTIPLA
[00229] Para confirmar o efeito do composto 1.1 na esclerose múltipla, camundongos (10 semanas de idade, fêmeas) foram sensibilizados com MOG35-55/CFU e PTX, e um modelo de camundongo com encefalomielite autoimune experimental foi obtido. Os métodos experimentais foram descritos em Oncotarget, Volume 7 (2016), no 13, 15382-15393, que é incorporado ao presente documento a título de referência.
[00230] Conforme mostrado na Figura 28A, o composto 1.1 foi hipodermicamente injetado a uma dose de 1 mg/kg e 40 mg/kg por 25 dias uma vez a cada dia. Como um grupo de referência, 10.000 unidades de Interferon-beta foram hipodermicamente injetadas por 25 dias, uma vez a cada dois dias. As pontuações clínicas foram medidas e apresentadas. Consequentemente, o composto 1.1 mostrou ser eficaz no tratamento para esclerose múltipla a uma dose mínima de 1 mg/kg em comparação ao fármaco convencional interferon-beta atualmente usado para tratamento de esclerose múltipla. Adicionalmente, quando as alterações nos pesos corporais foram medidas a partir de cada grupo experimental, o grupo tratado com o composto 1.1 não teve peso reduzido em comparação ao grupo de modelo de doença EAE (Figura 28B). Em outras palavras, o composto 1.1, em comparação ao fármaco primário atual para tratar esclerose múltipla, por exemplo, interferon-beta, exibiu efeito e segurança de tratamento iguais ou maiores e, assim, é eficazmente usado para prevenir, aliviar ou tratar esclerose múltipla em modelo de encefalomielite autoimune experimental.
EXEMPLO 2.15: EFEITO EM SEPTICEMIA
[00231] Para confirmar os efeitos do composto 1.1 em septicemia, 10 camundongos em cada grupo (7 semanas de idade, machos) foram anestesiados, e, posteriormente, os apêndices foram expostos por incisão do abdômen. A porção inferior da válvula ileocecal do apêndice exposto foi presa, e um único orifício foi feito com o uso de uma agulha de seringa de calibre 22. O apêndice tratado foi reinserido na cavidade abdominal e enxertado com o uso de fio para obter um modelo de camundongo induzido por septicemia (modelo de ligação cecal e punção, modelo CLP). Os métodos experimentais foram descritos em EMBO Mol Med. (2015) 12 de março; 7(5):577 a 592, que é incorporado ao presente documento a título de referência.
[00232] O composto 1.1 foi hipodermicamente injetado nos camundongos tratados a uma dose de 1 mg/kg, após 2 horas do procedimento CLP, com intervalos de 12 horas, três vezes. Como um controle de referência, smaducin-6 foi hipodermicamente injetada a uma dose de 12 mg/kg como o mesmo método usado para o composto 1.1. As taxas de sobrevivência dos camundongos de cada grupo foram medidas (Figura 29). O grupo comparativo simulado não foi tratado após a incisão do abdômen e anastomose, o grupo comparativo CLP+PBS foi tratado com solução salina tamponada com fosfato (PBS) em vez do composto farmacêutico após o modelo de ligação cecal e punção ter sido preparado. Como um resultado, o composto 1.1 (1 mg/kg) foi eficaz para o tratamento de septicemia, que não foi anteriormente tratada com fármacos convencionais a dosagens baixas em comparação às altas dosagens de smadudin-6 (por exemplo, 12 mg/kg), com 60% de taxa de sobrevivência. Em outras palavras, o composto 1.1 foi eficaz no modelo de ligação cecal e punção (CLP), indicando que o composto 1.1 é eficazmente usado para prevenir, aliviar ou tratar septicemia.
[00233] Os grânulos foram preparados em método conhecido na técnica.
[00234] Os tabletes foram preparados em método conhecido na técnica.
[00235] As cápsulas foram método conhecido na técnica.
[00236] As injeções foram preparadas em conformidade com o método conhecido na técnica. REFERÊNCIAS 1. Toxicology and Applied Pharmacology 279 (2014) 311 a 321 2. International Immunopharmacology 23 (2014) 294 a 303 3. Seminars in Immunology 26 (2014) 75 a 79 4. Neurobiology of Aging 22 (2001) 863 a 871 5. J. Immunology 175 (2005) 3.463 a 3.468 6. Prot Natl Acad Sci. 86 (1989) 6.367 a 6.371; J. Immunol. 143 (1989) 3.949 a 3.955; Nature 332 (1988) 83 a 85 7. FASEB J. 4 (1990) 2.860 a 2.867 8. J. Immunol. 147 (1 991) 2.777 a 2.786 9. Cell 46(5) (1986) 705 a 716 10. Annu Rev Immunol. 16 (1998) 225 11. Nature 395 (1998) 297 a 300; Cell 93 (1998) 1.231 a 1.240 12. Nature 449 (2007), 361 a 365 13. American Journal of Pathology, 162(2), (2003) 14. Nature Immunol. 6, (2005), 507 a 514 15. J Cell Physiol. 196(2): (2003); 258 a 264) 16. Nature Protocols, 8(3), (2013) 627 a 637. 17. The Journal of Clinical Investigation, 124(11), (2014), 4.976 a 4.988. 18. J. Virology, 86(12), (2012), 6.595 a 6.604. 19. J. Clin. Invest., 111 (2003), 1.297 a 1.308. 20. Immunity, 10 (1 999), 39 a 49. 21. Eur. J. Immunol., 36 (2006), 864 a 874. 22. Immunity, 25 (2006), 319 a 329. 23. Cell 118 (2004), 229 a 241. 24. J. Immunol. 179 (2007), 2.690 a 2.694. 25. Oncotarget, Volume 7 (2016), no 13, 15.382 a 15.393. 26. Cell. 149(4), (2012); 847 a 859. 27. Nature Medicine, 19(5), (2013), 595 a 602. 28. J. Immunol., 187 (2011), 1 a 14. 29. J. Inv. Derm., 132 (2012), 43 a 49. 30. Med. Inflamm., (2010), ID do Artigo 928030 31. Hair The Transplant, 4 (2014), 4:1 32. Exp. Derm., 17 (2007), 12 a 19 33. DDT Dis. Mech. 5 (2009), e163 a 171 34. EMBO Mol Med. (201 5) Mar 12; 7(5):577 a 592 35. Expert opinion on emerging drugs (2015) 20(3):349 a 352 36. Cell. (2010) 19 de março; 140(6): 883 a 899 37. Progress in Retinal and Eye Research 37(2013) 68e89 38. P&T 41 (2016), 6 de junho 39. Gut 56(2007):725 a 732. 40. . World J Gastroenterol (2005);11 (16):2.462 a 2.466
[00237] Todas as publicações, incluindo, porém, sem limitação, patentes e pedidos de patente, citados neste relatório descritivo estão incorporados ao presente documento a título de referência como se cada publicação individual estivesse específica e individualmente indicada como estando incorporada à título de referência ao presente documento como apresentado por completo.

Claims (17)

1. Composto representado pela Fórmula 1 a seguir, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, [FÓRMULA 1] caracterizado pelo fato de que: n é 0, 1 ou 2; A é -a1- que é um aminoácido independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em alanina, (Ala, A), arginina (Arg, R), asparagina (Asn, N), ácido aspártico (Asp, D), cisteína (Cis, C), ácido glutâmico (Glu, E), glutamina (Gin, Q), glicina (Gli, G), histidina (His, H), isoleucina (Ile, I), leucina (Leu, L), lisina (Lis, K), metionina (Met, M), fenilalanina (Phe, F), prolina (Pro, P), serina (Ser, S), treonina (Thr, T), triptopfano (Trp, W), tirosina (Tir, i) e valina (Val, V), sendo que ambas as extremidades terminais dos aminoácidos são ligadas a um grupo carbonila ou um grupo amina por uma ligação de amida; e R1 é uma alquila C1-36 de cadeia linear ou ramificada, uma alquenila C2-36 de cadeia linear ou ramificada incluindo pelo menos uma ligação dupla ou uma alquinila C2-36 de cadeia linear ou ramificada incluindo pelo menos uma ligação tripla.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: n é 0, 1 ou 2; a1 é ambas as extremidades terminais do qual são ligadas a um grupo carbonila ou grupo amina do mesmo por uma ligação de amida; e R1 é uma alquila C1-36 de cadeia linear ou ramificada.
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir do grupo que consiste nos compostos a seguir:
4. Método para preparar o composto, conforme definido na reivindicação 1, representado pela Fórmula 1, caracterizado pelo fato de que compreende, conforme representado pelo seguinte Esquema de Reação 1: reagir um composto 2 com um composto 3 para preparar um composto 4; hidrolisar o composto 4 na presença de uma base para preparar um composto 5; reagir o composto 5 com um composto 6 para preparar um composto 7; hidrolisar o composto 7 na presença de uma base para preparar um composto 8; reagir o composto 8 com um composto 9 para preparar um composto 10; hidrolisar o composto 10 na presença de uma base para preparar o composto, conforme definido na reivindicação 1; [ESQUEMA DE REAÇÃO 1] em que A, R1 e n são os mesmos definidos na reivindicação 1, e R2 é uma alquila C1-5 de cadeia linear ou de cadeia ramificada.
5. Uso de uma composição caracterizado pelo fato de que o dito uso é para o preparo de um medicamento para prevenir, melhorar ou tratar uma doença inflamatória intestinal, em que a dita composição compreende, como um componente ativo, o composto ou o sal, conforme definido na reivindicação 1.
6. Uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a dita composição inibe a formação de um complexo de transdução de sinal inflamatório mediado por MyD88, inibe a formação de um complexo de transdução de sinal inflamatório mediado por Pellino-1, inibe a formação de um complexo de transdução de sinal inflamatório mediado por Rip1, suprime a expressão de pelo menos uma proteína selecionada a partir do grupo que consiste em G-CSF, IL-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-9, MCP-1, MIP-3a, IL1 2p40/70, MIG, TNF-a e VCAM-1 ou suprime a atividade de NF-KB.
7. Uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória intestinal inclui colite ulcerativa, doença de Behcet e doença de Crohn.
8. Uso de uma composição caracterizado pelo fato de que o dito uso é para o preparo de um medicamento para prevenir, melhorar ou tratar uma doença ou síndrome, em que a dita composição compreende, como um componente ativo, o composto ou o sal, conforme definido na reivindicação 1, em que a doença ou síndrome inclui atrofia geográfica, doença macular relacionada à idade úmida, doença macular relacionada à idade seca e retinopatia diabética.
9. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o composto ou o sal, conforme definido na reivindicação 1, tem um efeito farmacêutico em células do epitélio do pigmento da retina.
10. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o composto ou o sal, conforme definido na reivindicação 1, inibe a expressão, em células do epitélio do pigmento da retina, de pelo menos uma proteína selecionada a partir do grupo que consiste em Nox-4, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, Ang2, EPO e EPOR.
11. Uso, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o composto ou o sal, conforme definido na reivindicação 1, aumentam a expressão, em células do epitélio do pigmento da retina, de Ang 1, Tie2 ou ambos.
12. Uso de uma composição caracterizado pelo fato de que o dito uso é para o preparo de um medicamento para prevenir, melhorar ou tratar uma doença ou síndrome, em que a dita composição compreende, como um componente ativo, o composto ou o sal, conforme definido na reivindicação 1, em que a doença ou síndrome inclui sepse e esclerose múltipla.
13. Uso de uma composição caracterizado pelo fato de que o dito uso é para o preparo de um medicamento para prevenir, melhorar ou tratar alopecia, em que a dita composição compreende, como um componente ativo, o composto ou o sal, conforme definido na reivindicação 1, em que o componente ativo inibe a expressão de IL-6 em folículos capilares e no couro cabeludo.
14. Uso de uma composição caracterizado pelo fato de que o dito uso é para o preparo de um medicamento para prevenir, melhorar ou tratar uma doença ou síndrome, em que a dita composição compreende, como um componente ativo, o composto ou o sal, conforme definido na reivindicação 1, em que a doença ou síndrome envolve a formação de um complexo de transdução de sinal inflamatório induzido por Pellino-1 que contém MyD88, RIP1 ou ambos.
15. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a doença ou síndrome inclui esclerose múltipla, psoríase, sepse, atrofia geográfica, doença macular relacionada à idade úmida, doença macular relacionada à idade seca, retinopatia diabética, doenças pulmonares infecciosas, pneumonia bacteriana, pneumonia viral, linfoma difuso de grandes células B, infecção viral, doença autoimune, câncer de sangue incluindo linfoma e tumores em órgãos internos.
16. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a doença ou síndrome é doença inflamatória intestinal.
17. Uso, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a doença inflamatória intestinal inclui colite ulcerativa, doença de Behcet e doença de Crohn.
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2784703T3 (es) 2015-07-08 2020-09-30 Research & Business Found Sungkyunkwan Univ Derivados de la pirrolidina carboxamida y métodos para preparar y utilizar la misma
WO2019168357A1 (en) * 2018-02-28 2019-09-06 Bridge Biotherapeutics, Inc. Water soluble salts of lipidated peptides and methods for preparing and using the same
WO2020097344A1 (en) * 2018-11-08 2020-05-14 Arizona Board of Regents on Behalf Arizona State University Synthetic immunomodulation with a crispr super-repressor in vivo
KR102104507B1 (ko) * 2019-08-23 2020-04-24 브릿지바이오테라퓨틱스(주) 팔미토일-l-프롤릴-l-프롤릴-글리실-l-타이로신 나트륨을 포함하는 약제학적 제제 및 이의 제조방법
WO2021075870A1 (ko) * 2019-10-17 2021-04-22 주식회사 스템모어 Rip 키나아제 억제제를 포함하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물
KR102268702B1 (ko) * 2019-10-17 2021-06-24 주식회사 에피바이오텍 Rip 키나아제 억제제를 포함하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물
KR102394875B1 (ko) * 2021-05-11 2022-05-06 주식회사 비드테크 피롤리딘을 링커로 포함하는 화합물 및 이를 포함하는 약학 조성물

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3839127A1 (de) * 1988-11-19 1990-05-23 Hoechst Ag Pyrrolidon-2-carbonsaeure-derivate mit psychotroper wirkung
AUPM906594A0 (en) 1994-10-26 1994-11-17 Peptide Technology Limited Synthetic polyunsaturated fatty acid analogues
AU726594B2 (en) * 1996-05-01 2000-11-16 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Carboxamide derivatives of pyrrolidine, piperidine and hexahydroazepine for the treatment of thrombosis disorders
EP1004578B1 (en) * 1998-11-05 2004-02-25 Pfizer Products Inc. 5-oxo-pyrrolidine-2-carboxylic acid hydroxamide derivatives
US7049283B2 (en) * 2000-12-06 2006-05-23 Novartis Ag Pharmaceutical compositions for the oral delivery of pharmacologically active agents
JP2002297664A (ja) 2001-04-03 2002-10-11 Fuji Photo Film Co Ltd 画像データ提供装置および画像データ提供プログラム
US20030022938A1 (en) 2001-06-25 2003-01-30 Burstein Sumner H. N-fatty acid-amino acid conjugates and therapeutic uses
DE10259672A1 (de) * 2002-12-18 2004-07-01 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von Alkoxycarbonylamino-triazinen
JP2006157623A (ja) * 2004-11-30 2006-06-15 Funai Electric Co Ltd 放送受信装置
WO2006113942A2 (en) * 2005-04-20 2006-10-26 Schering Corporation Method of inhibiting cathepsin activity
US7842662B2 (en) * 2006-11-10 2010-11-30 Cara Therapeutics, Inc. Synthetic peptide amide dimers
CA2695374A1 (en) * 2007-08-15 2009-02-19 Amunix, Inc. Compositions and methods for modifying properties of biologically active polypeptides
US8797234B2 (en) 2008-06-26 2014-08-05 Sharp Kabushiki Kaisha Display device including light-transmitting cover with lens portion and electronic device including same
AU2009283821B2 (en) 2008-08-18 2014-05-29 Entera Bio Ltd. Methods and compositions for oral administration of proteins
KR101033041B1 (ko) 2008-11-13 2011-05-09 조선대학교산학협력단 경보장치 고정 장치
WO2010059922A1 (en) * 2008-11-21 2010-05-27 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Pyrrolidine carboxamide compounds
KR101151878B1 (ko) 2010-06-08 2012-05-31 미원상사주식회사 지방산 트리펩타이드염 및 이를 함유하는 항균 조성물
KR20100110282A (ko) 2010-08-16 2010-10-12 황규태 쓰레기봉투용 뚜껑
KR101348284B1 (ko) * 2010-09-09 2014-01-03 주식회사 나이벡 인간 유래 세포 투과성 펩타이드와 생리활성 펩타이드 결합체 및 그 용도
KR20120048864A (ko) 2010-11-08 2012-05-16 주식회사 네오디엠 트리 펩타이드 유도체를 함유한 아토피 피부염 예방 및 치료용 조성물과 그 제조방법
KR20130038426A (ko) 2011-10-07 2013-04-18 성균관대학교산학협력단 지방산이 결합된 항당뇨 펩티드가 소수성 결합된 글리콜 키토산 히드로겔 및 이를 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101359886B1 (ko) 2011-12-28 2014-02-12 성균관대학교산학협력단 스매드 6번(Ｓｍａｄ６)으로부터 유래된 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 패혈증 또는 패혈성 쇼크의 치료용 조성물
WO2013190497A2 (en) * 2012-06-21 2013-12-27 Radikal Therapeutics Inc. Compositions and methods for treatment of inflammatory diseases of the lung
WO2015057820A2 (en) * 2013-10-15 2015-04-23 Roberts S Kenny Peptide constructs and well-defined aggregates thereof
ES2784703T3 (es) 2015-07-08 2020-09-30 Research & Business Found Sungkyunkwan Univ Derivados de la pirrolidina carboxamida y métodos para preparar y utilizar la misma

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