BR112015008065A2 - método de preparo de caldo fermentado de imp ou caldo fermentado de ácido glutâmico como matéria-prima para o preparo de flavorizante natural. - Google Patents

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Abstract

método de preparo de caldo fermentado de imp ou caldo fermentado de ácido glutâmico como matéria-prima para o preparo de flavorizante natural. a presente invenção se refere a um método para o preparo de um caldo fermentado de inosina-5'-monofosfato (imp) ou um caldo fermentado de ácido glutâmico como um matéria-prima para o preparo de um flavorizante natural e, mais particularmente, a um método de preparo de um caldo fermentado de imp ou de um caldo fermentado de ácido glutãmico por meio de uma primeira etapa de fermentação fúngica e uma segunda etapa de fermentação bacteriana, um caldo fermentado de imp e caldo fermentado de ácido glutâmico preparados deste modo, um método para o preparo de um flavorizante natural que compreende preparo do caldo fermentado de imp ou caldo fermentado de ácido glutãmico fermentado, um flavorizante natural assim preparado e uma composição alimentícia que compreende o mesmo. o caldo fermentado de imp e o caldo fermentado de ácido glutâmico podem ser usados como matéria-prima para o preparo de flavorizantes naturais. além disso, os flavorizantes naturais são inofensivos e seguros para o uso no corpo humano e podem ser adicionados a alimentos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção: ’’MÉTODO DE PREPARO DE CALDO FERMENTADO DE IMF OU CALDO FERMENTADO DE ÁCIDO GLUTÂMICO COMO MATÉRIA-PRIMA PARA O PREPARO DE FLAVORIZANTE NATURAL”.
CAMPO TÉCNICO [001] A presente invenção se refere a um método para o preparo de um caldo fermentado de ínosina-5’~monofosfato (lnosine-5’-Monophosphate - IMP) ou um caldo fermentado de ácido glutãmico fermentado como um matéria-prima para o preparo de um flavorizante natural et mais particularmente, a um método de preparo de um caldo fermentado de IMP ou um caldo fermentado de ácido glutâmíco por meio de um processo de fermentação em duas etapas compreendendo uma primeira etapa de fermentação para fermentação fúngica e uma segunda etapa de fermentação para fermentação bacteriana, um caldo fermentado de IMP e caldo fermentado de ácido glutâmíco preparados através do mesmo, um método para o preparo de um flavorizante natural o qual compreende uma etapa de preparo do caldo fermentado de IMF5 ou caldo fermentado de ácido glutâmíco, um flavorízante natural preparado através do mesmo e uma composição alimentícia que compreende o mesmo.
ANTECEDENTES TÉCNICOS [002] Aminoácidos e peptideo são usados como componentes flavorizantes. Em anos recentes, materiais fiavorizantes naturais, incluindo aminoácidos e peptideos extraídos por meio de fermentação de fontes de proteínas vegetais, tais como soja, trigo ou milho, com mícro-organlsmos, tais como fungos, bacilos, bactérias produtoras de ácido láotíco ou levedura, e hidrólise do produto de fermentação, têm sido desenvolvidos de várias maneiras. [003] Em geral, a tecnologia foi desenvolvida para aprimorar os componentes flavorizantes extraídos (aminoácidos e peptideos) ao aumentar o grau de hidrólise de fontes de proteínas vegetais ou aumentar a competitividade de preço ao aumentar o rendimento em termos de massa. No entanto, quando apenas fontes de proteínas vegetais são usadas, há uma desvantagem pelo fato
2/40 de que nenhum componente de ácido nucleico está presente nu material flavorizante resultante e, assim, a intensidade do sabor umami do material flavorizante é fraca. Além disso, é requerido que materiais flavorizantes contenham ácido glutâmico juntamerrte com ácidos nucleicos, tais como inosina5-monofosfato (inosine-5’-MunoPhosphate - IMP) ou guanosine monofosfato (Guanosine MonoPhosphate - GMP), de forma a aumentar o valor comercial dos mesmos.
[004] Nos últimos anos, de forma a superar a desvantagem descrita acima do hidrolísado de proteína vegetal, em geral, materiais contendo ácido nucleic© naturais, tais como extratos de levedura, têm sido usados. No entanto, os extratos de levedura podem afetar adversamente o sabor inerente de alimentos processados em virtude de um sabor desagradável e aroma desagradável resultantes de aroma fermentado peculiar dos mesmos e seu teor de ácidos nucleicos é limitado (teor máximo de ácidos nucleicos' 20%). Além disso, misturas de materiais de proteina vegetal com extratos de levedura para uso em alimentes processados naturais têm baixa competitividade de preço comparado com materiais flavorizantes convencionais, tais como gíutamato monossódico (MonoSodíum Glutamate - MSG), ácido nucleic© IG ou proteína vegetal hídroíisada (Hydrolyzed Vegetable Protein - HVP).
[005] Entretanto, IMP juntamente com GMP é uma substância que é amplamente usada como um aditivo flavorizante alimentício. Quando IMF é usado especificamente oom gíutamato monossódico (MonoSodium Glutamate MSG), ele tem uma capacidade significativa de melhorar o sabor. Assim, IMP é uma substância flavorizante com base em ácido nucleico que vem recebendo atenção como uma substância flavorizante.
[006] Métodos para fermentação de IMP e GMP para uso como substâncias flavorizantes incluem um método de degradação de RNA de levedura e um método de preparo de IMF e GMP através de duas etapas (fermentação e fosforilação química.) após preparo de inosina e guanosine. No entanto, nos últimos anos, em vários países, incluindo a Europa, as normas em relação a
3/40 flavorizantes naturais foram reforçadas e os regulamentos se tomaram mais rigorosos e, assim, flavorizantes os quais não são constituídos apenas de componentes naturais, mas são preparados realizando processos quimscos ou adição de componentes extras, não são reconhecidos como flavorizantes naturais. Por esta razão, componentes de ácido nucleico naturais devem ser preparados por meio de um método de fermentação direta de açúcar com bactérias, [007] Sob tais circunstâncias, os presentes inventores fizeram esforços consideráveis para preparar um flavorizante natural que não contém nenhum componente adicional sem realizar qualquer processo químico e. como um resultado, descobriram que, quando um caldo fermentado de IMP ou ácido glutâmico produzido por meio de um processo de fermentação em duas etapas compreendendo uma primeira etapa de fermentação para fermentação fúngíca e uma segunda etapa de fermentação para fermentação bacterlana é usado, uma variedade de flavorizantes eficazes podem ser produzidos, mesmo quando apenas o caldo fermentado é usado para uma reação subsequente, deste modo, concluindo a presente invenção.
DIVÜLGAÇAO
PROBLEMA TÉCNICO [008] É um objetivo da presente invenção proporcionar um método de preparo de um caldo fermentado de inosina-5’-monofosfato (Inosine-S’McncPhosphate - IMP) ou um caldo fermentado de ácido glutâmico através de uma primeira etapa de fermentação para fermentação fúngica e uma segunda etapa de fermentação para fermentação bacteriana.
[009] Outro objetivo da presente invenção é proporcionar um caldo fermentado de IMP ou caldo fermentado de ácido glutâmico preparado por meio do método descrito acima.
[010] Ainda um outro objetivo da presente Invenção é proporcionar um método para o preparo de um flavorizante natural, o método compreendendo preparo de um caldo fermentado de IMP ou um caldo fermentado de ácido *47*40 glutâmico através de unia primeira etapa de fermentação para fermentação fúngica e uma segunda etapa de fermentação para fermentação bacteriana.
[011] Ainda outro objetivo da presente invenção consiste em proporcionar um flavorizante natural preparado por meio do método de preparo acima e uma composição alimentícia que compreende o mesmo.
SOLUÇÃO TÉCNICA [012] Para alcançar os objetivos acima, em um aspecto, a presente invenção proporciona um método para o preparo de um caldo fermentado de inosina~5’-monofosfato (lnosíne-5’-MonoPhosphate - IMP) ou um caldo fermentado de ácido glutâmico, o método compreendendo as etapas de: (a) fermentação de um fonte de proteína vegetal com fungos para obter um caldo fermentado de cereal; e (b) fermentação do caldo fermentado de cereal com bactérias.
[013] O caldo fermentado de IMP e/ou ácido glutâmico preparado pode ser usado como uma matéria-prima para o preparo de um flavorizante natural. Em outras palavras, um flavorizante natural pode ser preparado usando o caldo fermentado de IMP e/ou ácido glutâmico.
[014] A Figura 1 mostra esquematicamente um método para o preparo de um flavorizante natural de acordo com a presente invenção.
[015] Um caldo fermentado de ácido glutâmico, um caldo fermentado de IMP e um caldo fermentado de cereal são preparados através de uma primeira etapa de fermentação para fermentação fungíca e uma segunda etapa de fermentação para fermentação bacteriana e são, finalmente, submetidos a uma reação ou tratamento adequado para cada flavorizante, deste modo, preparando vários fiavorizantes naturais.
[016] Assim, a presente invenção é caracterizada pelo fato de que um caído fermentado de IMP ou um caldo fermentado de ácido glutâmico natural que são usados çomo matérias-primas para o preparo de fiavorizantes naturais são preparados por meio de um processo de fermentação em duas etapas compreendendo uma primeira etapa de fermentação para fermentação fúngica
5/40 e uma segunda etapa de fermentação para fermentação bacteriana.
[017] A primeira etapa de fermentação para fermentação fúngíca é uma etapa de produção de peptídeos e amínoácídos usando uma fonte de proteína. Quando apenas a primeira etapa de fermentação para fermentação fúngica é realizada, grandes quantidades de peptídeos e aminoâcídos podem ser produzidas e. assim, ácido glutâmico, o qual pode ser usado como um flavorízante, pode ser produzido. No entanto, há uma desvantagem pelo fato de que uma substância de ácido nucleico, tal como IMP ou guanosina monofosfato (Guanosine MonoPhosphate - GMP), que pode conferir um sabor umami, não pode ser produzida, Além disso, há um problema pelo fato de que, quando uma fonte de proteína vegetal é usada, ela é submetida apenas a um processo proteolítíco e; assim, o peptídeo e aminoácido que podem ser produzidos dependem da concentração ou teor de proteína na fonte de proteina. Por exemplo, quando feijão é usado, o teor de ácido glutâmico no oaldo fermentado produzido será menos do que 10% e, quando glúten de trigo é usado, o teor de ácido glutâmico no caldo fermentado produzido será menos do que 15%, [Ô1S] Entretanto, a segunda etapa de fermentação para fermentação bacteriana é uma etapa de preparo de caldos fermentados de ácido nucleico e ácido glutâmico, Quando apenas a segunda etapa de fermentação para fermentação bacteriana é realizada, ácido nucleico e ácido glutâmíoo podem ser efícazmente produzidos, mas há uma desvantagem pelo fato de que o teor de outros aminoácidos e peptídeos é produzido em uma concentração de menos de 1% e, assim, o caído fermentado com bactérias não pode ser usado como flavorízante, mesmo embora ele tenha um bom sabor umami. Em outras palavras, há uma desvantagem pelo fato de que, de forma a usar o caldo fermentado obtido apenas por fermentação bacteriana como um flavorízante, é requerido que componentes adicionais sejam adicionados ao caldo de fermentação, de modo que o caldo fermentado possa ser aplicado a alimentos.
[019] Consequentemente, os presentes inventores desenvolveram um método de produção de um caldo fermentado que é usado como uma matéria
6/40 prima para um flavorizante natural, ao mesmo tempo em que supera a desvantagem de cada um do processo de fermentação fungica e do processo de fermentação bacteriana. Além disso, os presentes inventores descobriram que, quando o caldo fermentado de IMP ou caldo fermentado de ácido glutâmíco preparado por meio do método desenvolvido é usado, um ftevorizante natural pode ser preparado usando apenas o caldo fermentado preparado sem adição de qualquer componente adicional e sem realizar qualquer processo químico.
[020] Para preparar um caldo fermentado de ácido nuclelco e ácido glutâmico usando o processo de fermentação em duas fases, vários sais minerais, aminoácidos e vitaminas, juntamente com uma fonte de carbono e uma fonte de nitrogênio, são necessários. Particularmente, no estado da técnica, extrato de levedura ou proteína vegetal hidrolisada (Hydrolyzed Vegetable Protein - HVP) foi usada como fonte de nitrogênio mas, neste caso, há desvantagens pelo fato de que o caído fermentado resultante tinha um sabor desagradável e um aroma desagradável e pelo fato de que o rendimento é um pouco baixo. Além disso, o teor d© componentes flavorizantes no caldo de cultura resultante, bem como o sabor global, diferem grandemente dependendo de vários materiais que são usados para fermentação bacteriana. Assim, na presente invenção, um caldo fermentado de cereal (hidrolisado de proteína de cereal), o qual é obtido por fermentação fúngíca (primeira etapa de fermentação) e pode conter vários aminoácidos e peptldeos, ao mesmo tempo em que serve como uma fonte de nitrogênio, é usado como um substrato para a segunda etapa de fermentação para fermentação bacteriana.
[021] Em processos convencionais para o preparo de ácido nucteíco ou MSG usando bactérias, importância especial foi dada ao aumento apenas das concentrações de ácido nucteíco e MSG em caldos de cultura e aos rendimentos dos mesmos. Este aumento foi eficaz em aumentar o sabor umami mas, em alguns casos, afetou adversamente o sabor das substâncias flavorizantes resultantes. No entanto, quando um fiavorízarite natural é preparado usando o caldo fermentado de IMP ou ácido glutâmíco da presente invenção por meio de
7/40 processos de reação e mistura adicionais, há uma vantagem pelo fato de que o sabor pode ser melhorado ao controlar as concentrações de IMF e ácido glutâmíco, es quais são componentes do sabor umami, bem como vários amínoácidos, sacarídeos, ácidos orgânicos e íons inorgânicos, etc-, [022] Aqui, cada etapa do método da invenção para o preparo de um caldo fermentado de IMP ou ácido glutâmico será descrita.
[023] A etapa (a) do método da presente invenção é uma etapa de fermentação de uma fonte de proteína vegetal oom fungos para obter um caído fermentado de cereal.
[024] Na etapa (a), a fermentação fúngíca é realizada usando uma fonte de proteina vegetal, deste modo, obtendo um caldo fermentado de cereal que contém vários aminoácidos e peptídeos e inclui componentes, tal como glutamina, que pode ser usado como uma fonte de nitrogênio na segunda etapa de fermentação para fermentação bacteriana. Específicamente, fungos são cultivados usando um material de cereal como um substrato para preparar um caldo de cultura de células contendo protease o qual é, então, adicionado a uma fonte de proteína vegetal, seguido por hidrólise, deste modo, preparando um hidrolisado de proteína de cereal. Então, o hidrolisado de proteína de cereal ê filtrado e as células são removidas do mesmo, deste modo, preparando um caldo fermentado de cereal. O hidrolisado de proteina de cereal pode ter um teor total de nitrogênio de 2% (peso/v) ou mais, de modo a constituir uma fonte de nitrogênio para a segunda etapa de fermentação para fermentação bacteriana.
[025] Como a fonte de proteina vegetal, qualquer material conhecido na técnica pode ser usado na presente invenção, contanto que ele possa ser fermentado com fungos. Exemplos da fonte de proteína vegetal incluem, porém sem limitações, soja, milho, arroz, glúten de trigo, etc. Entretanto, quando-glúten de trigo é usado, ele pode, vantajosamente aumentar o rendimento da fermentação bacteriana, uma vez que ele contêm uma grande quantidade de glutamina. Assim, de preferência, glúten de trigo pode ser usado como a fonte de proteína vegetal.
8/40 [026] Como os fungos, quaisquer fungos podem ser usados na presente invenção, contanto que eles possam fermentar a fonte de proteina vegetal para preparar o oaido fermentado de cereal da presente invenção. Os fungos que são usados na presente invenção pode ser, de preferência, microorganismos AspergsWs sp< e, mais preferivelmente, míoro-organismos Aspergífes orrzae ou Asperg/fe? so/ae, porem sem limitação aos mesmos.
[027] Em um exemplo da presente invenção, a primeira etapa de fermentação para fermentação fúngíca foi realizada usando Asperg/fes sq/ae CJCCJ)80124P (KCCM11026P), conforme descrito no Registo de Patente Coreana N° 10-1191010 (que corresponde à Publicação Internacional PCT ΙΨ WO 2011-046249).
[028] Conforme usado aqui, o termo caldo fermentado de cereal se refere a um produto obtido por meio de fermentação de uma fonte de proteina vegeta! (cereal) oom fungos. O oaido fermentado de cereal pode ser usado como um substrato para a segunda etapa de fermentação para fermentação bacteriana e pode também ser usado em uma etapa final de preparo de um flavonzante ao submeter o caldo fermentado de cereal a processos de filtração e remoção de células após fermentação. Assim, o caldo fermentado de cereal pode ser usado para duas finalidades, conforme descrito acima.
[029] A etapa (b) é uma etapa de fermentação do caldo fermentado de cereal obtido na etapa (a) com bactérias. Nesta etapa, um caldo fermentado de IMP e um caldo fermentado de ácido glutâmico, os quais são usados como matérias-primas para um flavorízante natural, podem ser preparados. Especificamente, o caldo fermentado de cereal obtido na primeira etapa de fermentação para fermentação fúngica é usado como um substrato para fermentação bacteriana e o caldo fermentado de IMP e o caldo fermentado de ácido glutâmico podem ser preparados ao submeter o caldo fermentado de cereal à fermentação bacteriana em um meio suplementado com uma fonte de carbono.
[030] A fermentação bactenana pode ser realizada por meio de um método
9/40 geral de cultura bacteriana conhecido na técnica e, de preferência, pode ser composta de três etapas: cultura em balão volumétríco, cultura de expansão e cultura principal. Especificamente, cultura em balão volumétrico e cultura de expansão são realizadas usando meio de cultura primaria e um meio de cultura secundária de modo a obter expansão, após o que á fermentação bacteriana é realizada usando o caldo fermentado de cereal da etapa (a) como um substrato no meio de cultura principal, ao mesmo tempo em que fornece continuamente açúcar adicional, deste modo, obtendo um caldo fermentado de IMP e um caldo fermentado de ácida giutâmíco.
[031] 0 meio para a fermentação bacteriana pode compreender uma fonte de carbono, tal como glicose, frutose ou similar. Particularmente, o meio para o preparo do caldo fermentada de ácida giutâmíco pode compreender açúcar bruta como fonte de carbono. O meio pode compreender várias saís minerais, vitaminas, aminoácidos e assim por diante e a composição do meio pode variar, dependendo do produto de fermentação desejado, isto é, o caldo fermentado de IMP ou o caldo fermentado de ácido giutâmíco.
[032] Por exemplo, quando o calda fermentada de IMP está sendo preparado, o meio de cultura principal pode compreender glicose, frutose, sulfato de magnésio, ácido fosfórico, hidróxido de potássio e o oaido fermentado de cereal De preferência, o meio de cultura principal pode compreender, com base no volume totaí do meio, 4,4-5,2% em peso de glicose, 3,7-4,3% em pesa de frutose, 1,3-1,7% em peso de sulfato de magnésio, 2,0-2,4% em pese de fosfórico ácido, 1,4-1,8% em peso de hidróxido de potássio e 0,5-0,9% em peso do caldo fermentado de cereal. Além disso, quando o caldo fermentado de ácido giutâmíco está sendo preparado, o meio de cultura principal pode compreender glicose, frutose, açúcar bruto, betaína, sulfato de magnésio, fosfato de potássio e ácido fosfórico, e de preferência, o mesmo pode compreender, com base na peso total do meio, 0,5-07% em peso de glicose, 0,9-1,1% em peso de frutose, 4,5-5,5% em peso de açúcar bruto, 0,005-0,015% em peso de betaína, 0,3-0,5% em peso de sulfata de magnésio, 0.8-1,0% em peso de fosfato de potássio e 0,210/40
0,4% em peso de ácido fosfórico.
(033] Além disso, o meio pode, se necessário, conter pequenas quantidades de outros componentes, por exemplo, sulfato de ferro, sulfato de manganês, sulfato de cobre, sulfato dexínco, CAPA, NCA(nicotinamida), biotina, cloreto de cálcio, tiamina, vitamina C e assim por diante. Exemplos típicos de cada um dos meios contendo estes componentes são mostrados nas Tabelas 5 a 8 e 9 a 12.
[034] Como um resultado da fermentação fúngica na etapa (a), a fonte de proteína vegetal é decomposta em aminoácidos e peptídeos, e íons inorgânicos, tais como os íons de cálcio, magnésio e fosfato, e vitaminas são aluídos da fonte de proteína. Os aminoácidos produzidos pela fermentação fúngica incluem glutamina, cisteina, metionina, valína, leucina, isoleucina e assim por diante e podem ser usados como uma fonte de nitrogênio na fermentação bacteriana na etapa (b). Particularmente, uma alta concentração de glutamina é um componente essencial para a bíossíntese de purinas e pode atuar como um promotor principal para a produção de aítos teores de IMP e ácido glutâmíco. Além disso, os íons inorgânicos e vitaminas eluidos podem ser úteis no crescimento de células bacterianas na fermentação bacteriana. Em um exemplo da presente invenção, foi mostrado que, quando o produto obtido pela fermentação fúngica era usado como uma fonte de nutrientes, a proliferação e crescimento de células bacterianas se tornaram mais rápidos (Figura 4), Isto demonstra ainda a vantagem do processo em duas etapas da presente invenção. [03S] Conforme usado aqui, o termo ’’bactérias se refere a todas as bactérias que possam fermentar o caldo de fermentação de cereal na etapa (a) para produzir de caldo fermentada de IMP e caldo fermentado de ácido glutâmíco. Para preparar um ffevorizante natural de acordo com a presente invenção, uma cepa nâo-GMO pode ser usada. As bactérias que são usadas na presente invenção podem ser quaisquer bactérias conhecidas na técnica como tendo a capacidade de produzir IMP e ácido glutâmíco por meio de fermentação. Por exemplo, quando um caldo fermentado de IMP está sendo preparado, micro»
11/40 organismos fíac/7/us sp., Corynebacferium sp. ou Escherichia sp. podem ser usados e, quando um caldo fermentado de ácido glutâmicc está sendo preparado, micro-organismos Carynebaoterium sp.< M/crobacterium sp., 8ac/7fc/s sp., Strepfomyces sp., PeniciUiuni sp., Pseudomonas sp., Ártrirobacter sp., Semaffa sp., Cand/da sp., Kfebs/e//a sp., Enwh/a sp., Panfoea sp. ou Enferohacter sp, podem ser usados. Mais preferivelmente, as bactérias que são usadas na presente invenção podem ser microorganismos Corynedactendm sp. Mais preferivelmente, Corynebaóteriua? ammon/agenes pode ser usado para preparar o caldo fermentado de IMP e Corynebacferiam g/utanwoum pode ser usado para preparar o caldo fermentado de ácido glutâmico, Além disso, como as bactérias, várias bactérias, descritas nos documentos de Patente anteriores e conhecidas por terem a capacidade de produzir IMP e ácido glutâmico, podem ser usadas. Por exemplo, o caldo fermentado de IMP pode ser preparado usando bactérias Bacillus sp. ou Escherichia sp. descritas na Publicação de Patente Coreana Depositada em Aberto Na 10-2007-000507 (que corresponde à Publicação de Patente Internacional PCT N * WO 2005-095627) e o caldo fermentado de ácido glutâmioo pode ser preparado usando bactéria atembactersp. ou Kfebs.«?//a sp. descritas na Publicação de Patente Coreana Depositada em Aberto N” 10-20000029174 (que corresponde à Patente dos Estados Unidos N° 7.247.459), mas não estão limitados às mesmas.
(036| Em um exemplo dà presente invenção, pára preparar um caldo fermentado de IMP, Co/ynebacterium ammon/agenes GJIPÔ09 foi usada (KCCM-10226) descrita no Registo de Patente Coreana N'J 10-0.397321 (que corresponde à Publicação de Patente Internacional WO N° W02002-051984) e, para preparar um caldo fermentado de ácido glutâmico, Ccrynebactarium gfufamlcum (Brev/bacterium factofermeníi/rn) CJ971010 (KFCC11039), descrita no Registo de Patente Coreana ΝΓ 10-0264740, foi usada.
[037] O caldo fermentado obtido por meio de fermentação bacferiana na etapa (b) tem um teor de sólidos de cerca de 150 g/L A presente invenção é caracterizada pelo fato de que o caldo fermentado de IMP e/ou ácido glutâmico
12/40 obtido por meio de fermentação bacteriana é usado em um processo de preparo flavorizante natural, sem adição de qualquer componente adicional ao mesmo, o caldo fermentado contendo grandes quantidades de ácido glutâmico e IMP que são os componentes desejados, [03S] Assim, o sólido no caldo fermentado de IMP preparado pela primeira etapa de fermentação para fermentação fúngica e a segunda etapa de fermentação para fermentação bacteriana pode, de preferência, ter um teor de IMP de 30% ou mais e, mais preferivelmente, 50% ou mais, porém sem limitação ao mesmo. Consequentemente, a concentração de IMP no caldo fermentado de IMP pode, de preferência, ser de 50 g/L a 150 g/L e, mais preferivelmente, 70 g/L a 130 g/L [039] Ainda, uma vez que o produto produzido pela primeira etapa de fermentação para fermentação fúngica contém aminoácídos, o ácido glutâmico pode ser obtido em uma concentração elevada e rendimento elevado comparado com aqueles do IMP. O teor de sólidos no caldo fermentado de ácido glutâmico preparado pode, de preferência, ter um teor de ácido glutâmico de 50% ou mais e, mais preferivelmente, 60% ou mais, porém sem limitação ao mesmo. Assim, a concentração de ácido glutâmico no caldo fermentado de ácido glutâmico pode, de preferência, ser de 75 g/L a 150 g/L e, mais preferivelmente, 90 g/L a 130 g/L.
(040] Em virtude do elevado teor de IMP e ácido glutâmico no caldo fermentado conforme descrito acima, quando o caldo fermentado é pulverizado por meio de um processo tal como secagem, ele pode ser apropriadamente adicionado aos alimentos.
[041] Uma vez que o caldo fermentado da presente invenção é caracterizado pelo fato de que ele é usado em um processo de preparo de fíavorizante natural sem adição de quaisquer componentes adicionais e sem submetê-lo a um processo químico de purificação adicional, tal como purificação, todos os componentes do meio devem ser materiais de grau alimentício, de forma que o caldo fermentado possa ser incluído diretamente no alimento, por
13/40 exemplo, alimentos processados. Assim, todas os componentes do meio que são adicionados durante a fermentação são, de preferência, materiais de grau alimentício. Em um exemplo da presente invenção, de modo a usar materiais de grau alimentício como componentes do meio, β-aíanina foi substituída por pantotenato de cálcio (CAIcium PAnthothenate - CAPA) e, todavia, foi mostrado que um caldo fermentado de IMP com uma concentração de IMP de 70 g/L ou mais podería ser preparado. Assim, o meio de fermentação bacteríana de acordo com a presente invenção pode, de preferência, conter CAPA.
[042] Entretanto, o método da invenção para o preparo de um caldo fermentado de IMP ou um caldo fermentado de ácido glutâmico pode compreender ainda a etapa (c) de tratamento do caído fermentado, obtido por meio de fermentação bacteríana, com carvão ativado, de modo a usar o caldo fermentado em um processo de preparo de um flavorízante natural através de um processo de filtração, Além disso, o método da invenção pode compreender, após a etapa de tratamento do caldo fermentado com carvão ativado, uma etapa de centrifugação ou filtração do caldo fermentado. Após o caldo fermentado ser tratado com carvão ativado, ele pode ainda ser tratado com terra diatomáoea como auxiliar de filtração. Além disso, antes que o caldo fermentado seja tratado com carvão ativado, ele pode ser submetido a um processo de pré-tratamento de aquecimento do caldo fermentado para induzir à Use celular, de modo a aumentar o rendimento do processo de filtração que é subsequentemente realizado. O processo de aquecimento pode, de preferência, ser realizado a 7090 °C e o tempo de aquecimento pode, de preferência, ser de 15 minutos ou mais e. mais preferivelmente, 15-60 minutos.
[043] Cada um do caldo fermentado de IMP e do caldo fermentado de ácido glutâmico pode ser preparado por meio do processo de fermentação em duas etapas que compreende as etapas (a) e (b) e o caldo fermentado preparado pode, finalmente, ser submetido a uma terceira etapa para reação e pode ser usado em um processo de preparo de diversos flavorízantes. Com base no caldo fermentado de IMP e no caldo fermentado de ácido glutâmico, diversos
14/40 flavorizantes naturals, par exemplo, flavorizantes neutros e flavorizantes de carne de vaca, galinha, porco, kokumi e assim por diante, podem ser preparados usando diferentes matérias-primas ou variando ligeiramente a composição do meio ou controlando as condições de processo, incluindo temperatura, pressão e tempo, no processo de mistura dos caldos fermentados ou uma reação ou processo de etetrodiálise. Dentre os flavorizantes naturais preparados, um flavorizante adequado para a finalidade de cada alimento pode ser adicionado ao alimento para conferir o sabor ótimo.
[044J Portanto, em outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para o preparo de um flavorizante natural, o método compreendendo as etapas de: (a) fermentação de uma fonte de proteína vegetal com fungos para obter um caldo fermentado de cereal; e (b) fermentação do caldo fermentado de cereal com bactérias para preparar um caldo fermentado de IMF ou um caído fermentado de ácido glutâmíco. O método para o preparo do flavorizante natural pode compreender ainda a etapa (c) de mistura de dois ou mais caldos fermentados selecionados do grupo que consiste no caldo fermentado de cereal da etapa (a) e o caldo fermentado de IMP e o caldo fermentado de ácido glutâmíco da etapa (b),
P45] Conforme usado aqui, o termo flavorizante se refere a uma substância que é adicionada para melhorar o sabor dos alimentos. O flavorizante pode ser classificado, de acordo com seu componente, em vários sabores. Exemplos específicos do flavorizante incluem um flavorizante neutro, um flavorizante de carne de vaca, um flavorizante de galinha, um flavorizante de porco e um flavorizante kokumi, Cada um dos flavorizantes pode ser preparado usando o caldo fermentado de IMP e o caldo fermentado de ácido glutâmíco preparado por meio do processo de fermentação em duas etapas da presente invenção. Por exemplo, o termo flavorizante neutro” se refere a um flavorizante que confere um sabor suave e puro ao maximizar um sabor umami e minimizar outros sabores. Os termos ’'flavorizante de carne de vaca, flavorizante de galinha e flavorizante de porco se referem a flavorizantes que têm os sabores
15/40 de came de vaca, came de poroo e came de galinha, respectivamente, e o termo ’’sabor kokumi” se refere a uma substância que produz kokumi (japonês) que indica um sabor rico, um sabor encorpado, um sabor que enche a boca , um sabor denso ou um sabor viscoso.
[046] Entretanto, o flavorízante da presente invenção é caracterizado pelo fato de ser um flavorízante natural e é preparado usando apenas o caldo fermentado obtido por meio do processo de fermentação sem a adição de qualquer componente adicional ao caldo fermentado e sem submeter o caldo de fermentação a um processo químico adicional. Assim, o flavorízante da presente invenção é um fiavorizante natural que tem um conceito oposto a um flavorízante sintético.
[047] O método da invenção para o preparo do fiavorizante natural compreende as etapas de fermentação de uma fonte de proteína vegetal com fungos para obter um flavorízante fermentado de cereal e fermentação do caldo fermentado de cereal com bactérias para obter um caldo fermentado de IMP ou um caldo fermentado de ácido glutâmíoo. O fiavorizante natural da presente invenção pode ser produzido por meio de preparo de cada um dos caldos fermentados pelas duas etapas de fermentação (fermentação fúngíca e fermentação bacteriana) e usando os caldos fermentados preparados sem submeter os caldos fermentados a qualquer tratamento. Cada uma das etapas de fermentação é conforme descrito acima.
[048] Além disso, o método da invenção para o preparo do flavorízante natural pode ainda compreender, apos preparo de cada caldo de fermentação conforme descrito acima, uma etapa de mistura de dois ou mais caldos fermentados selecionados do caldo fermentado de cereal, do caldo fermentado de IMP e do caldo fermentado de ácido glutâmíco. Nesta etapa, nenhum componente extra ê adicionado aos caídos fermentados, os caldos fermentados não são submetidos a um processo químico adicionai e os caldos fermentados são misturados um com o outro e, então, reagidos sob condições adequadas, incluindo temperatura, pressão e tempo, de acordo com o uso pretendido do
16/40 flavorizante desejado, deste modo, preparando diversos flavorizantes naturais, Aqui, a proporção de mistura dos caídos fermentados e a temperatura, pressão e tempo para a reação apôs o processo de mistura podem ser controlados em função do uso pretendido de cada flavorízante e não estão (imitados a condições específicas. A presente invenção é caracterizada pelo fato de que um flavorízante natural é preparado usando cada um dos caldos fermentados.
[049] Entretanto, a etapa de mistura pode compreender ainda uma etapa de etetrodiálise de cada um dos caídos fermentados de acordo com o uso pretendido para o flavorízante. A etapa de etetrodiálise pode remover um sabor desagradável e aroma desagradável para eliminar um sabor desagradável ou amargo do flavorizante e permitir que o flavonzante tenha um sabor mais puro e suave e pode ser selecionada de acordo com as características do flavorízante resultante a ser preparado, [050] Em um exemplo da presente invenção, um flavorízante foi preparado usando o processo de etetrodiálise e os atributos sensonais do flavorízante preparado foram comparados com aqueles de uma amostra preparada sem o processo de eíetrodíálíse. Como um resultado, foi mostrado que a intensidade de sabor metálico, sabor amargo, intensidade desagradável e cor escura do flavorízante preparado foram todos reduzidos e, portanto, o flavorízante preparado tinha um sabor puro e suave e a preferência global peto flavorízante aumentou (Figura 5).
[051] Conforme usado aqui, o termo etetrodiálise (EtectroDialysís - ED)” se refere a um processo de separação de componentes iônícos de uma solução. Teoricamente, ela se baseia no principio da transferência por massa na qual os componentes iônícos em solução são passados seletivamente por meio de uma membrana de resina de permuta catiônica e uma membrana de resina de permute aniônica através de uma voltagem aplicada a um campo elétrico. Ela é um processo em membrana que é mais frequentemente usado juntamente com processos de osmose reversa e ultrafiltração, Uma vez que o processo de etetrodiálise nâo é considerado como um processo químico, ele pode ser usado
17/40 no processo de preparo do fiavorizante natural de acordo com a finalidade da presente invenção, Para fins da presente invenção, os ions no caldo fermentado, por exemplo, ions de metal, particularmente cátions e anions monovalehtes e divalentes, podem ser removidos por meio do processo de etetrodiálise, deste modo, removendo o aroma desagradável, [052] Entretanto, a etapa de mistura da presente invenção pode ainda compreender uma etapa de concentração do caldo fermentando e secagem do concentrado para preparar um pó. A etapa de preparo do caldo fermentado em pó pode ser realizada antes ou após mistura dos caldos fermentados e, de preferência, pode ser realizada antes de mistura dos caldos fermentados, A secagem pode, de preferência, ser realizada através de secagem por pulverização ou secagem a vácuo, O caldo fermentado pode, finalmente, ser preparado em um pó ou pasta, a qual é adequada para adição a alimentos, [053] Em ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona um caldo fermentado de IMP ou caldo fermentado de ácido glutâmico preparado por meio do método de preparo da presente invenção. Em ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona um fiavorizante natural preparado por meio do método de preparo da presente invenção. Em ainda outro aspecto, a presente invenção proporciona também uma composição alimentícia que compreende o fiavorizante natural.
[054] O caldo fermentado de IMP ou caldo fermentado de ácido glutâmico da presente invenção pode ser usado como uma matéria-prima para o preparo de um fiavorizante natural de acordo com a preferência do consumidor, Um fiavorizante natural preparado usando o caldo fermentado de IMP ou caldo fermentado de ácido glutâmico da presente invenção pode ser adicionado a um alimento adequado para seu sabor a fim de maximizar o sabor dos alimentos e pode também ser aplicado a rações para animais. Por exemplo, o fiavorizante natural neutro pode ser adicionado a condimentos para petiscos, temperos para sopas, sabores comerciais, molhos e assim por diante para produzir um sabor puro e o fiavorizante de carne natural pode ser adicionado a presunto, salsicha
18/40 e similares para produzir urn sabor de carne e o flavorizante kokumi natural pode ser adicionado à pasta de soja, pasta de feijão, sopa de macarrão, curry e similares para produzir kokumi.
EFEITOS VANTAJOSOS [055] O caído fermentado de IMP e caldo fermentado de ácido gíutâmico preparadas de acordo cam a método da presente invenção podem ser usados de várias maneiras cama matérias-primas para o preparo de flavorizantes naturais. Além disso, os flavorízantes naturais preparados usando os caldos fermentados são produzidos usando matérias-primas naturais e, portanto, são inofensivos e seguros para o uso no corpo humana, e podem ser adicionados a alimentos para produzir diversos sabores e melhorar o sabor do alimento.
DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [056] A Figura 1 é uma vista esquemática que mostra um processo geral para o prepara do caldo fermentado de IMP e caldo fermentado de ácido gíutâmico da presente invenção e um flavorizante natural usando estes caídos fermentados.
[057] A Figura 2 mostra um processo de hidrólise ácida de AMP de modo a substituir a adenina por um material de grau alimentício natural de acordo com a presente invenção.
[058] A Figura 3 mostra uma via metabólica para derivação de CAPA para substituir β-alanina por um material de grau alimentício natural.
[059] A Figura 4 mostra o grau de proliferação de células bacterianas no caso onde uma proteína vegetal degradada por fermentação fúngica de acordo com a presente invenção foi adicionada como uma fonte de nutrientes e no caso onde a proteína vegetal não foi adicionada.
[060] A Figura 5 mostra os resultados de avaliação de atributos sensoríaís antes e após um processo de eletrodiálise, [661] A Figura 6 mostra os resultados da comparação de atributos sensoriais entre o flavorizante neutro preparado na presente invenção e um extrato de levedura.
19/40
MODO PARA A INVENÇÃO [062] Daqui em diante, a presente invenção será descrita em maiores detalhes oom referência a exemplos. No entanto, será obvio para aqueles versados na técnica que estes exemplos são apenas para fins ilustrativos e não se destinam a limitar o âmbito da presente invenção.
[063] Exemplo 1: Fermentação Fúngica de Fonte de Proteína Vegetal [064] Para fermentação fúngica primária, um substrato incluindo materiais de cereal, tais como soja, milho, arroz ou trigo, foi cultivado usando microorganismos Aspergrfos sp, como uma cepa fúngica em uma temperatura de 2035 X durante 24-72 horas, deste modo, preparando um caído de cultura fúngica com uma alta concentração de protease. Então, uma fonte de proteína vegetal, tal como soja, milho, arroz ou trigo, foi misturada com água em uma concentração elevada de 25-35% e esterilizada e o caldo de cultura fúngica preparado acima contendo uma alta concentração de protease foi adicionado à fonte de proteína vegetal esterilizada em um estado isento de sal para hidrolisar a fonte de proteína vegetal. Aqui, o caldo de cultura fúngica foi adicionado em uma quantidade de 10-100% com base na solução de substrato esterilizada e o substrato foi degradado a 40-50 °C durante 48-96 horas para preparar um hidrolisado de proteína de cereal.
[065] Especifíoamente, cultura em balão volumétrico e cultura de expansão foram realizadas usando Asper$///us sq/ae CdCC_080124P (KCCM11026P), conforme descrito no Registo de Patente Coreana N° 10-1191010 (que corresponde à Publicação Internacional PCT N* WO 2011-046249) e, então, um caldo de cultura fúngica foi preparado usando soja desengordurada, e glúten de trigo como substrato foi hidrolisado, deste modo, preparando um hidrolisado de proteína de cereal. Mais especifícamente, 200 ml de uma cultura primária foram distribuídos em um balão volumétrico de 1 L e esterilizados e 200 ml de células fúngicas foram inoculados no baião volumétrico em uma densidade de 1,7 x 1010 células fúngicas/400 ml e cultivados a 30 CC e 100 rpm durante 7 horas. Então, uma cultura secundária foi adicionada a um fermentador de 250 L e esterilizada
20/40 e 600 ml do caldo de cultura primária foram Inoculados no mesmo e cultivados a 30 °C e 70 rpm durante 24 horas. Em seguida, um meio dé cultura principal foi adicionado a um tanque de preparo de 5 toneladas e aquecido a 90 °C durante 30 minutos, depois transferido para um femientador de 8 toneladas, e 100 L de água e 2 L de um antiespumante foram adicionados ao mesmo. Então, 144 L de caldo de cultura secundária foram inoculados no meio de cultura principal e, então, cultivados a 30 *C e 700 rpm durante 43 horas, deste modo, preparando assim um caldo de cultura fúngica. Finalmente, uma matéria-prima para hidrólise de substrato foi adicionada a um tanque de preparo de 5 toneladas e aquecida a 55 °C durante 1 hora, depois transferida para um fermentado/ de 20 toneladas, e 100 L de água e 2 L de um antiespumante foram adicionados ao mesmo, seguido por esterilização. Então, 5760 L de caldo de cultura fúngica foram inoculados no substrato e cultivados a 45 eC e 30 rpm durante 96 horas, deste modo, preparando um hídrolísado de proteína de cereal. As composições dos meios usados para o preparo do hídrolísado de proteína de cereal são mostradas nas Tabelas 1 a 4 abaixo.
[086] Tabela 1
Cultura primária para fermentação fúngica
Componente do meio | Unidade Quantidade | %
Glicose fg 1................................................................[.......................... <» —1. 03 j
KH2PO4 I g 6 1 3
Extrato de levedura ~1 g 05 J 1 .........1 05 5
Água mi 182 j
[067] Tabelai
Cultura secundária para fermentação fúngica
1 Componente do meio Unidade : [ Glicose 1 kg pKFhPCú q ΐ Extrato de levedura [ kg 1 Quantidade i ΓΤφΓ “'jl' 1,44 i 1 (ϊ,44 ί 1
i Água j kg 138,6 j L________________1____
21/40 [068] Tabela 3
Meio de cultura principal para fermentação fúngioa
Componente do meio i Unidade Quantidade %......I
Soja desengorduraria kg 103,68 1.9 I
KHsPCu | kg 57,6 1 i i
Agua í kg 5352 5
[666] Tabela 4
Matéria-prima para hidrólise de substrato j Matéria-prima i Unidade | Quantidade I [ Glúten de trigo | kg | 2650 | [’Agua............................JT......................ΓζβΟΟ.....................| [070] O hidrolisado de proteína de cereal preparado conforme descrito acima foi filtrado através de um filtro de pressão para remover as células fúngícas, deste modo, preparando um caldo fermentado de cereal tendo um teor total de nitrogênio de 2% (peso/v) ou mais e um grau de hidrólise de 50% ou mais. Entretanto, o caldo fermentado de cereal foi preparado como um meio para fermentação bacteriana secundária.
[071] Exemolo 2; Fermentação Bacteriana [672] Para preparar um caldo fermentado de IMF e um caldo fermentado de ácido glutâmíco usando o caldo fermentado de cereal, uma fonte de carbono, tal como glicose ou frutose, sais minerais, tais como Fe, Mg, Mn e Zn, e vitaminas foram adicionados ao caldo fermentado de cereal preparado no Exemplo 1, seguido por esterilização, deste modo, preparando meios para fermentação bacteriana. Os meios para preparo de um caldo fermentado de IMP e um caldo fermentado de ácido glutâmíco foram preparados e, para cada um dos caldos fermentados, foram preparados meios para cultura em balão volumetric© (cultura primária), cultura de expansão (cultura secundária) e da cultura principal.
[073] 2-1; Preparo de Caldo Fermentado de IMP [074] Usando Coryn&bacteríum ammoni&gen&s CJIP0Ô9 (KCCM-10226) descrito no Registo de Patente Coreana Nr' 10-0397321 (que corresponde à
22/40
Publicação de Patente Internacional Nc W02002-051984), um caldo fermentado de IMP com uma concentração de IMP de 70 g/L ou mais foi preparado, [075] Específicamente, 50 mL de uma cultura primária ajustada para um pH de 7,2 usando NaOH foram distribuídos em um balão volumétricu de 500 mi e esterilizados a 121 °Ç durante 15 minutos, então, a cepa bacteriana foi inoculada no meio e cultivada a 32 eC e 200 rpm durante 22-28 horas. Então. 2,1 L de uma cultura secundária foram distribuídos em um recipiente de 5 L, esterilizados e esfriados, após o que 300 ml do caldo de cultura primária foram ínoculados no mesmo e cultivados em 2 L de ar a 32 *C e 900 rpm durante 27-30 horas, enquanto se ajustava o pH para 7,2, Então, 8,5 L de um meio de cultura primária foram distribuídos em um recipiente de 30 L, esterilizados e esfriados, após o que 1500 ml do caldo de cultura secundária foram inoculados no mesmo e em 5 L de ar a 32 X e 400 rpm durante 5-6 dias, enquanto se ajustava o pH para 7,2 e fornecia um açúcar adicional compreendendo uma mistura de glicose e frutose a qualquer momento. Após fornecimento do açúcar adicional final, o cultivo fui realizado durante 7 horas ou mais, de modo a que o açúcar pudesse ser completamente consumido. As composições dos meios usados para o preparo do caldo fermentado de ÍMP são mostradas nas Tabelas 5 a 8 abaixo.
[076] Tabela 5
Cultura primária para preparo de caldo fermentado de IMP
Componente do meio Uriidí sde ] Quantidade % |
Glicose g | io Ϊ
Caldo fermentado de cereal g | 35 3,5
NaCI g | 2,5 0,25 1
Volume de meio ml j 1000 .................i
[077] Tabela 6
Cultura secundária para preparo de caldo fermentado de IMP
Componente do meio Unidade Quantidade %
Glicose g 78,93 8
Caldo fermentado de cereal g 21,43 2
23/40
H3PO4 (85%) g 2/14 0,21
KÕH (85%) g 1,77 0,18
MgSOzTHzO g 1,43 0,14
(NH42SÕ4 9 7,14 0,71
L-oisteína HCI mg 28,6
CAPA mg 21,4
Biotina mg 0,09
Tiamina mg 7,1
FeSCMHzÕ mg 28,6
MnSCUZHsO mg 14,3
ZhSÕaTHzÕ mg 14,3
Volume de meio ml 1000
[078] Tabela 7
Meio principal para preparo de caldo fermentado de IMP
Componente do meio Unidade Quantidade %
H3PO4 (85%) 9 22,21 2,2
KOH (85%) 9 15,86 1,6
Caldo fermentado de cereal 9 7 0,7
CuSO45H2O mg 12,2
FeSCWFW mg 36,5
ZnSCVHsO mg 36.5
MnSCu7HzO mg 109,6
L-cisteína HCI mg 40,4
CAPA mg 34,7
MCA mg 34,9
Biotina mg 0.15
CaCI22H2O mg 182,6
Tiamina mg 23,5
MgSO47HzO g 14,61 1,5
24/40
Componente do meio Unidade Quantidade %
Glicose 9 48,21 4,8
Frutose 9 40,22 4
Volume de meio ................................ , .................... ml 1000
[079] Tabela 8
Açúcar adicional para preparo de caldo fermentado de IMP
Componente do meio
Unidade Quantidade I %
Glicose
Frutose
NCA
OÃPA mg mg
358,97
299>
772
W~
35,9
30......
0,08
0Ό9
5,6
I 13,5 ΓΤοοο
HsPOa (85%) lWH(W%r~
Volume de meio
WÕ] 2-2; Preparo de Caldo FermentadodeÃçidg Glutâmico [0S1] Usando Coryneãacter/um g/utamicítm (Brevfbacfenum tectofe/mentum) CJ971010 (KFCC 11039) descrito no Registo de Patente
Coreana N° 10-0264740, um caldo fermentado de ácido glutâmico tendo uma concentração de ácido glutâmico de 90 g/L ou mais foi preparado.
[082] Específicamente, 30 mL de uma cultura primária foram distribuídos em um balão volumêtrico de 250 ml e esterilizados e a cepa bacteriana foi inoculada no meio e cultivada durante 5-8 horas. Então, 1,4 L de uma cultura secundária foram distribuídos em um recipiente de 5 L, esterilizados e esfriados e, então, 20 ml do caldo de cultura primária foram inoculados no mesmo e cultivados durante 20-28 horas. Então, 9,2 L de um meio de cultura principal foram distribuídos em um recipiente de 30 L, esterilizados e esfriados, após o que 800 ml do caldo de cultura secundária foram inoculados no mesmo e cultivados durante 36-45 horas, enquanto fornecia um açúcar adicional a qualquer momento.
[083] Após fornecimento do açúcar adicional final, o cultivo foi realizado
25/40 durante 7 horas ou mais, de modo que o açúcar pudesse ser completamente consumido. As composições dos meios usados para e prepare do caldo fermentado de ácido glutâmico são mostradas nas Tabelas 9 a 12 abaixo.
[084] Tabela 9
Cultura primária para preparo de caldo fermentado de ácido glutâmico
Componente do meio Açúcar bruto (98,5%) Unidade 9 Quantidade ”20’3 0Λ *1 /0 i i '2 1
Caldo fermentado de cereal g 13 1,3 |
(NH4)2SÕ4 9 13,72 1,4 |
KH2PO4 9 5,2 0,5 |
fcHPCU g 10,7 1 |
MgSCUTHsO 9 0,5 0,05 |
d-biotina mg 1.8
fiamina-HCI mg 9
CAPA mg 9
Niacinamida (nicotinamida) mg 60
Volume de meio ml 1000
R5] Tabela 10
Cultura secundária para preparo de caldo fermentado de ácido glutâmico
Componente do meio Unidade Quantidade %
Glicose g 81,79 8,2
Frutose 9 23,14 2,3
H3PO4 (85%) 9 2,73 0,27
MgSO^HsÓ 9 1,03 0,1
Betalna 9 0,14 0,01
DL-Met 9 0,15 0,01
FeSCWHzO mg 18,6
MnSÕ47H2Õ mg 18,6
CUSO45H2O mg 3,6
26/40
Componente do meio Unidade Quantidade % |
| ZnSCWHzO mg 3,6 I
Tiamina-HCI mg 7,1
Vitamina C (ácido asoórbíco) mg 7,1
Succínato mg 1,1
d-bíotina mg 17,4
Vitamina B12 (cianooobaíamina) mg 0,057
Caldo fermentado de cereal Volume de meio 9 mi 42,86 10ÕO 4,3
[086] Tabelai!
Melo de cultura principal para preparo de caldo fermentado de ácido glutâmico
Componente do meio Unidade Quantidade %
Glicose 9 5,86 0,6
Frutose 9 10,48 1
Açúcar bruto 9 50 5
Betaína g 0,97 0,1
MgSCuZHsO g 3,69 0,4
K2HPO4 g 9 0,9
H3PÕ4 (85%) g 3,1 0,3
FeSÕ47H2Õ mg 22,9
MnSO47HzO mg 22,9
CuSÕ^HsQ mg 2,3
ZnSÕ^HzÕ mg 2,3
CAPA mg 2,9
NCÃ mg 2,9
Biotina mg 0,29
CaChSHzO mg 71,4
Tiamina-HCI mg 0.4
Vitamina C (ácido (ascórbíco) mg 1.7
27/40 j Volume de meto J ml | ÍÕÕÕ | [ [087] Tabeia'12 ............................................................................................ ‘
Açúcar adicional para prepare de caldo fermentado de ácido glutâmíco
Componente do meio Unidade Quantidade í %
Glicose 9 192.3 19.2
Frutose J....................... 54.33 | 5,4
Açúcar bruto______ Betaina Caldo fermentado de cereal CAPA NCÃ ................... ...............— J....................... ..:9...................... T9................. (Pig 147,33 i 0,67 ΐ 4 i 15.87 I 15.87 i 14,7 0,07 0,4
Volume de meio ml 1000 i
[088] De modo a preparar o caldo fermentado de IMF usando os meios para preparo do caldo fermentado de IMP e usar o caldo fermentado de IMF como um flavorizante para adição a alimentos, vários componentes do meio devem ser substituídos por materiais de grau alimentício, de forma a satisfazer o requisito de um aditivo alimentício. Assim, adenina e β-aianlna, necessárias para crescimento celular, foram substituídas por materiais de grau alimentício.
[088] Primeiro, a adenina foi preparada por meio de hidrõlise àcída de AMP para clivar uma ligação p-N-glicosídíca com ribose para, deste modo, liberar a adenina. Foi mostrado que, quando o cultivo era realizado usando a adenina preparada conforme descrito acima, um caído fermentado de IMP tendo uma concentração de IMP de 70 g/L ou maior podería ser preparado (Figura 2).
[080] Então, como um resultado de análise da via metabôlica de Corynebacterium ammoníagenes. esperava-se que β-alanina fosse substituída por pantotenato de cálcio (CAIcium PAnthothenate - CAPA). Assim, o cultivo foi realizado usando CAPA em lugar de β-alanina e, como um resultado, foi mostrado que um caldo fermentado de IMP tendo uma concentração de IMP de 70 g/L ou maior podería ser preparado (Figura 3).
[091 ] Exemplo 3: Análise de Taxa de Crescimento Celular no Caso Onde o Produto de Fermentação Fúngíca É Usado em Fermentação Bacteriana [092] De modo a confirmar a vantagem no caso onde a primeira etapa de
28/40 fermentação para fermentação fúngíca e a segunda etapa de fermentação para fermentação bacteriana são realizadas continuamente, a taxa de crescimento e grau de proliferação das células bacterianas no caso onde a proteína vegetal degradada pela primeira etapa de fermentação fúngíca é adicionada como uma fonte de nutrientes e no caso onde a proteína, vegetai não é adicionada foram anaiísados.
[093] Como um resultado, conforme pode ser visto na Figura 4, no caso onde a proteína vegetal degradada pela primeira etapa de fermentação fúngíca foi adicionada como uma fonte de nutrientes, as células bacterianas proliferaram em uma taxa elevada e em grande quantidade comparado com aquela no caso onde a proteína vegetal não foi adicionada (Figura 4).
[094] Exemplo 4; Anáiise da Alteração na Característica de Sabor de Caldo Fermentada de Acido Giutâmíco de Acordo Com o Ti pode Fonte de Carbono [095] As fontes de carbono que podem ser usadas na fermentação de ácido giutâmíco incluem glicose, frutose, melaço de cana, açúcar bruto, etc, Embora alguns outros componentes do meio variem dependendo do tipo de fonte de carbono, a concentração de ácido giutâmíco do caldo fermentada resultante não depende signíficativamente do tipo de fonte de carbono. Ne entanto, o sabor do caldo fermentado muda signíficativamente dependendo do tipo de fonte de carbono e, para desenvolver um flavorizante neutro, o caldo fermentado resultante tem, de preferência, um sabor mais puro. Melaço de cana é um excelente componente de meio em termos de fermentação miorobiana em virtude dos vários íons inorgânicos contidos no mesmo, mas tern uma desvantagem pelo fato de que o valor de uso do mesmo como um flavorizante neutro é baixo porque a cor do meio em si ê muito escura e um sabor causado pela carameíízação permanece no caldo de cultura resultante.
[095] Assim, açúcar bruto foi usado em lugar de melaço de cana no preparo de um caldo fermentado de ácido giutâmico para preparo de um flavorizante neutro e a alteração resultante na característica de sabor do caldo de cultura foi analisada. Aqui, embora o melaço de cana tenha sido substituído por açúcar
29/40 bruto, grandes íons inorgânicos e vitaminas contidos no melaço de cana foram adicionalmente acrescentados ao meio. Como um resultado, pode ser visto que, quando o melaço de cana foi substituído por açúcar bruto, o sabor desagradável foi removido e, portanto, uma característica de sabor adequada para o preparo de um fiavorizante neutro apareceu (Tabela 13). Além disso, o caldo fermentado de ácido glutâmico preparado usando açúcar bruto também continha uma concentração elevada (96 g/L ou mais) de ácido glutâmico, a qual é a concentração de ácido glutâmico adequada para o preparo de um fiavorizante neutro.
[0971 Tabela 13
Alteração na característica de sabor de caldo de cultura como uma função da proporção de melaço de cana e açúcar bruto
i i Neutralidade Melaço de cana (100%) ---------....-----...... ~· Melaço de cana + açúcar bruto (5:5) --------............................................... 4- Açúcar bruto (100%) +4-
i Sabor desagradável 4- - ________________________________________
[098] Exemplo 5:Preparo de Fiavorizante Neutro [099] Usando o caldo fermentado de ácido glutâmico e caído fermentado de IMP preparado no Exemplo 2, um fiavorizante neutro foi preparado.
[100] Especificamente, de forma a aumentar o rendimento de um processo de filtragem a ser realizado subsequentemente, cada um dos caídos fermentados foi aquecido a 70-90 °C durante 16 minutos ou mais para induzir à üse celular Este processo de pré-tratamento pode aumentar o rendimento de fíltração para 85% ou maior. Então, para remover o sabor desagradável e o aroma desagradável do caldo fermentado de ácido glutâmico e do caldo fermentado de IMP, carvão ativado foi adicionado em uma quantidade de 1-3% (peso/v) com base no volume do caldo fermentado o qual foi, então, tratado com o carvão ativado a 50-70 °C durante 2-24 horas. Após tratamento com carvão ativado, 1~ 3% (peso/v) de terra diatomáoea como auxiliar de fíltração foram adicionados ao caldo de fermentação o qual foi, então, filtrado através de uma prensa de filtro.
30/40 [101] O filtrado tratado com carvão ativado foi submetido à eletrodiálise para remover os íons monovalentes e divalentes, incluindo íons de Ca, Fe, K, Mg e NH4 para, deste modo, remover 0 sabor desagradável resultante da amônia e íons metálicas, deste moda, preparando um flavonzante neutro.
[102] Quando o caldo fermentada foi submetida à eletrodíálise em um fluxo de 6-20 L/h.m2, íons monovalentes e divalentes, tais como ions de Ca, Fe, K, Mg e Mn, foram reduzidos em 30-60%. Os teores dos componentes do caldo de fermentação antes e após realização do processo de eletrodíálise são mostrados na Tabela 14 abaixo. Conforme pode ser visto na mesma, o teor de ions inorgânicos no caldo fermentado diminuiu após 0 processo de eletrodíálise, ao mesmo tempo em que o flavorizante fermentado tinha um sabor mais puro e mais suave.
[103] Finalmente, sal refinado e maltodextrina foram adicionados ao filtrado obtido por meia dos processos de cultura e filtraçãa, conforme descrito acima, e a mistura foi transformada em pó através de secagem por pulverização, deste modo, preparando um flavonzante natural da presente invenção.
[104] Tabela 14 | IMP
I (g/L)
Antes tratamento , 69,6
ED |
Após tratamento I ; 63,7
ED
Ca —---------,--------87 <0,1
Fe
Mg
Mn
Ma
Ζ.Π n--ClSO.í
PO4
NH<s ( [105] —
0,8
251 <0,1
...........i............
234 i <0,1
64 1100
<0,1 390
13700
5720
6230
..........
3350
.............I
Exemplo 6:Avaiiaçâa dosAtributos Sensoriais Causados Pelo ! <0,1
0.3
0,2
Prpçesso de Eletrodiálise [106] De forma a verificar 0 sabor do flavorizante neutro da invenção preparado conforme descrito acima, avaliação das atributos sensoriais foi realizada.
[107] Cada uma de uma amostra da qual íons inorgânicos foram removidos por meio de eletrodiálise e uma amostra não submetida à eletrodíálise foi transformada em pó e, então, os atributos sensoriais das amostras foram avaliados por julgadores. Os julgadores foram profissionalmente treinados, de
31/40 modo que eles pudessem ser sensíveis aos atributos sensoríaís, e foi fornecida aos julgadores a mesma concentração das amostras de modo a avaliar os atributos sensoriais e intensidade de cada amostra, [10S] Como um resultado, conforme mostrado na Figura 5, a intensidade de sabor umami não diferia substancíaimente entre antes e após o processo de eletrodiálise mas, no caso do caldo fermentado antes do processo de eletrodiálise, o sabor metálico, sabor amargo, intensidade desagradável e cor escura, os quais atuam como fatores negativos em atributos sensoriais, foram todos elevados e, assim, a pureza e preferência global do caldo fermentado eram baixas. No entanto, no caso do caldo fermentado submetido ao processo de eletrodiálise, a intensidade do sabor metálico, sabor amargo, intensidade desagradável e cor escura foram todos baixos e, assim , as preferências de sabor e cor foram todas altas e a pureza e a preferência geral eram altas. Consequentemente, pode ser visto que, guando o processo de eletrodiálise foi realizado, um flavorizante neutro pode ser preparado tendo um sabor puro e pelo qual houve uma preferência aprimorada quando comparado com aquela antes do processo de eletrodiálise.
[159] Exempla 7: Comparação de Atributos Sensoríaís Com Extrato de Levedura [110] De forma a analisar o efeito de flavorízação do flavorizante neutro da presente invenção, os atributos sensoriais do mesmo foram comparados com aqueles de um extrato de levedura, o qual é um dos flavorízantes naturais que têm sido recentemente mais ampla e diversamente usados, [111] Em alguns casos, o extrato de levedura é usado vantajosamente em alimentos processados mas, na maioria dos casos, o uso do mesmo em alimentos processados é limitado, uma vez que seu sabor peculiar prejudica o equilíbrio de sabores dos alimentos processados pelo sabor desagradável e aroma desagradável resultantes de seu aroma fermentado peculiar (o assim denominado sabor de extrato de levedura).
[112] Assim, um modelo alimentar simples foi desenvolvido e cada um do
32/40 extrato de levedura e o flavorízante neutro da invenção foi adicionado ao mesmo, após o que os atributos sensoriais dos mesmos foram avaliados por um grupo de julgadores que consiste em investigadores (n - 45).
[113] Como um resultado, conforme mostrado na Figura 6, no grupo ao qual o extrato de levedura foi aplicado, a intensidade do sabor de levedura foi alta, a preferência pelo extrato de levedura foi baixa e surgiu uma tendência em reconhecer o extrato de levedura como sabor desagradável e aroma desagradável. Assim, foi mostrado que a preferência de sabor global foi relativamente elevada no flavorízante neutro da presente invenção, [114] Estes resultados sugerem que o sabor desagradável e aroma desagradáveis resultantes de íons inorgânicos foram eficazmente removidos do flavorízante neutro da presente invenção e, assim, o flavorízante neutro produz um bom sabor quando está sendo aplicado ao alimento.
[116] Adicionalmente, os atributos sensoriais do flavorízante neutro da invenção e do extrato de levedura foram comparados por nove julgadores treinados usando análise descritiva quantitativa modificada. Especificamente, os julgadores foram treinados durante 6 horas, os atributos sensoriais foram medidos repetidamente três vezes e 6 tipos de amostras foram simultaneamente fornecidas aos julgadores e ingeridas aleatoriamente pelos julgadores. Um total de 16 atributos foram avaliadas em uma escala de 16 pontos (0-15). Os 16 atributos avaliados foram seis atributos de aroma, 5 atributos de sabor, 3 atributos de sabor e aroma e 2 atributos de sensação na boca. Após a amostra ser ingerida, seu gosto foi removido usando arroz instantâneo ou água e a amostra seguinte foi ingerida. 70 ml de cada amostra contidos em um copo de cerâmica foram fornecidos ao Julgador e análise estatística (Média, MANOVA, PCA) foi realizada.
[116] Como um resultado, no caso do sabor flavorízante da presente invenção, um sabor de açúcar queimado, um cheiro acre e um sabor de ohá Solomon’s Seal foram fortemente sentidos comparado com o extrato de levedura, e, assim, o flavorízante natural tinha um sabor delicado e ácido. Além
33/40 disso, no caso do flavorizante neutro, um sabor ou fragrância de batata cozida presumivelmente produzido pelo componente do meio não foi sentida e um cheiro de soja cozida, considerado como um aroma fermentado, foi signifícativamente baixo comparado com aquele do extrato de levedura. Além disso, o flavorizante neutro natural da presente invenção tinha uma intensidade de revestimento da boca signifícativamente alta comparado com outros flavorizantes fabricados por outras empresas, o que sugere que o flavorizante neutro natural pode mostrar facilmente uma sensação de revestimento da boca, mesmo quando ele é usado em uma pequena quantidade. Especificamente, com as características individuais do flavorizante neutro natural da invenção, em relação ao ácido glutâmico, a intensidade umami foi muito alta e a fragrância ou sabor de cereal queimado (chá Solomon’s Seal) foi intenso e, em relação ao IMP, a intensidade umami foi similar àquela do extrato de levedura, a fragrância de açúcar queimado foi intensa e o flavorizante neutro tinha um sabor amargo. Além disso, pode ser visto que o extrato de levedura tinha uma fragrância ou sabor de batata cozida ou um cheiro de soja cozida.
[117] Exemplo 8: Preparo de Flavorizante de Carne [118] Usando o caldo fermentado de cereal preparado no Exemplo 1 eo caldo fermentado de ácido glutâmico e caldo fermentado de IMP preparados no Exemplo 2, um flavorizante de carne foi preparado.
[11S] Específicamênte, de forma a aumentar o rendimento de um processo de filtração a ser realizado subsequentemente, cada um dos caldos de fermentação foi aquecido a 70-90 °C durante 15 minutos ou mais para induzir à lise celular. Este processo de pré-tratamento pode aumentar o rendimento de filtração para 85% ou maior. Então, para remover o sabor desagradável e aroma desagradável do caldo fermentado de ácido glutâmico e do caldo fermentado de IMP, carvão ativado foi adicionado em uma quantidade de 1-3% (peso/v) com base no volume do caído fermentado o qual foi, então, tratado com o carvão ativado a 50-70 °C durante 2-24 horas. Apôs tratamento com carvão ativado, 13% (peso/v) de terra diatomàoea, como auxiliar de filtração, foram adicionados
34/40 ao caldo de fermentação o qual foi então, filtrado através de uma prensa de filtro. Então o caldo fermentado filtrado por meio do processo acima foi usado.
[120] Entretanto, o caldo fermentado obtido por meio de fermentação fúngíca e fermentação bacteriana da proteína vegetal contém aminoácidos contendo enxofre, tais como çlstelna e metionína, ácidos orgânicos, açúcares e similares, derivados da proteína vegetal e produzidos pela via metabólica de bactérias.
[121] O caído fermentado de cereal e o caído fermentado de IMP foram misturados um com o outro em uma proporção de 1:4 e submetidos a uma reação de Maillard a 80-120 °C e 0,8-1,5 bar durante 0,5-24 horas. Aqui, em 10% do IMP produzido por fermentação bacteriana, a ligação entre o grupo fosfato e pentose é clivada pela temperatura elevada para produzir pentose e a pentose produzida pode ser usada como um precursor para a reação de Mailíard e, assim, um flavorízante de carne pode ser preparado, mesmo quando de adição de açúcar adicional. A reação de Mailíard produziu compostos de rearranjo de Amadori, 2,6-dimetilpírazína, 2,3-dímetílpirazina e dimetilpirazina e, em virtude destes compostos, um flavorízante de carne foi formado,
1122] Em outra via de reação, após término da fermentação bacteriana, amônia não foi fornecida no último estágio da reação para ajustar o pH para 5-7 e 3f4-didesoxi-glícosuíos-3~eno foi produzido pela reação em alta temperatura/alta pressão de componentes no caldo de cultura, seguido pela produção de compostos de furano, deste modo, formando um flavorízante de carne, [123] A solução de reação preparada por meio da reação descrita acima foi seca por pulverização ou seca a vácuo, deste modo, preparando um flavorízante de carne. Específicamente, sal refinado e dextrins foram adicionados a solução de reação para um teor de sólidos de 35-50% e a mistura foi seca por pulverização ou seca a vácuo para formar um pó ou foi concentrada para um teor de sólidos de 70% para formar uma pasta. O flavorízante de carne pode mostrar um efeito similar à adição de carne pela reação do caldo fermentado microbiano,
35/40 mesmo embora não contenha nenhuma matéria-prima animai, [124] Exemplo 9; Ava|ação de Atributos Sensoriais Resultantes de Aplicação de Fíavorizante de Carne [125] De forma a verificar se a aplicação do fíavorizante de carne da presente invenção aumenta o sabor de carne comparado com o uso de um tempero convencional tendo um sabor de carne, a avaliação de atributos sensoriaís foi realizada.
[1 26] 9-1: Sopa Carne de Vaca e Rabanete [127] Sopa de Carne de Vaca e Rabanete, à qual um fíavorizante de carne de vaca convencionai foi adicionado, foi preparada e o fíavorizante de carne da presente invenção foi adícionalmente acrescentado. Os atributos sensoriais do fíavorizante de carne de vaca foram avaliados antes e após adição do fíavorizante de carne de vaca da presente invenção, A anáíise sensorial foi realizada por 84 donas de casa que usaram os temperos.
[128] Atributos sensoriais, tais como preferência e intensidade, foram avaliados em uma escala de 5 pontos. Como um resultado, conforme mostrado na Tabela 15 abaixo, no grupo ao qual o fíavorizante de carne de vaca foi aplicado, a preferência de sabor global foi maior em 0,2 pontos do que antes de aplicação do fíavorizante de carne e, particularmente, a intensidade e preferência do sabor de carne de vaca após aplicação do fíavorizante de came foram significativamente mais elevadas do que aquelas antes de aplicação dc fíavorizante de carne de vaca.
[129] Tabeía 15
Atributos Convencionai Apôs aplicação de fíavorizante da carne de vaca Diferença (entre antes e após aplicação}
Preferência da- sabor global 3.4 3.6 0,2
Preferência de aparência 3,5 3,7 0,2
Preferência de sabor de carne de vaca 3,3 3.5 0,2
Preferência da sabor profundo 3,0 3.4 0,4
36/40
Intensidade de sabor de carne de vaca 3,0 3,6 ............................................ 0,6
Intensidade umami 3.2 3.5 0,3
Sensação de sabor profundo 2,3 3,3 0,4
[130] 9-2: Fonte de Carne com Tomate [131] A uma fonte de tomate com carne compreendendo as mesmas quantidades de tomate e carne, o flavorizante de carne em pó foi adicionado e os atributos sensoriais da fonte de carne com tomate antes e após adição do flavorizante de carne de vaca foram avaliados por 80 donas de casa. Os atributos sensoriais, tais como preferência e intensidade, foram avaliados em uma escala de 5 pontos.
[132] Como um resultado, conforme mostrado na Tabela 16 abaixo, no grupo ao qual o flavorizante de carne de vaca foi aplicado, a preferência de sabor global foi maior em 0,2 pontos do que antes de aplicação do flavorizante de carne de vaca e a intensidade e a preferência do sabor de carne, apôs aplicação do flavorizante de carne, foram signifícatívamente mais elevadas do que aquelas antes de aplicação do flavorizante de carne. Taís resultados sugerem que, mesmo quando o flavorizante de carne de vaca é aplicado a um produto com base em sabor de carne, ele pode aumentar o sabor de carne do produto para aumentar a qualidade de sabor global do produto.
[133] Tabela 16
Atributos Convencional Após aplicação de flavorizante de carne Diferença (entre antes e após aplicação)
Preferência de sabor global 3,6 3.8 0,2
Preferência de sabor unamí 3,5 3,7 0.2
Preferência de sabor de unamí 3.7 3,7 0
Preferência de sabor de tomato 3,8 3.8 0
intensidade de sabor de tornâto 3.5 3,7 0,2
Preferência de sabor de carne 3,7 3,9 0.2
de vaca do produto
37/40
Diferença
Atributos I Após aplicação de Convencional í flavorizante de carne (entre antes e após aplicação)
intensidade de sabor de carne Ί— — . ------ -------- ----------
3.5 | 3.8 0.3
de vaca do produto
[134] Exemplo 10: Preparo de Flavorizante Kgkumi [135] Usando o caldo fermentado de cereal preparado no Exemplo 1 e o caldo fermentado de ácido glutâmico e caldo fermentado de IMP preparados no Exemplo 2, um flavorizante kokumi foi preparado.
[136] Especifícamente, de forma a aumentar o rendimento de um processo de filtração a ser realizado subsequentemente, cada um dos caldos de fermentação foi aquecido a 70-90 °C durante 15 minutos ou mais para induzir à lise celular. Este processo de pré-tratamento pode aumentar o rendimento de filtração para 85% ou maior. Então, para remover o sabor desagradável e aroma desagradável do caldo fermentado de ácido glutâmico e do caldo fermentado de IMP, carvão ativado foi adicionado em urna quantidade de 1-3% (peso/v) com base no volume do caldo fermentado o qual foi, então, tratado com o carvão ativado a 50 a 70 CC durante 2 a 24 horas. Após tratamento com carvão ativado, 1-3% (peso/v) de terra diatomácea, como auxiliar de filtração, foram adicionados ao caldo de fermentação o qual foi, então, filtrado através de uma prensa de filtro. Então, o caldo de fermentação filtrado por meio do processo acima foi usado.
[137] Entretanto, quando uma fonte de proteína vegetal é fermentada com fungos, os teores de peptideos de baixo peso molecular e aminoácidos na fonte de proteína aumentam. Em outras palavras, o teor de peptideos de baixo peso molecular tendo um peso molecular de 2000 Da ou menor é de 30% ou mais e, de preferência, o teor de peptideos de baixo peso molecular tendo um peso molecular de 1500 Da ou menor é de 40-60%. Além disso, a fonte de proteína tem peptideos de baixo peso molecular, cada um consistindo em uma média de 14 ou menos resíduos de aminoácidos. Quando o caldo fermentado de cereal produzido por meio de fermentação fúngica é usado como uma fonte de
38/4Q nutrientes em fermentação bacteriana e é finalmente misturado de uma maneira adequada, um flavorízante kokumi composto dó ácido nucteíoo:ácida glutâmico:peptideo em uma proporção de cerca de 1:1:1 a 1:1:5 pode ser produzido. Especificamente, o caldo fermentado de cereal, o caldo fermentado de IMP e o caldo fermentado de ácido glutâmíco foram misturados e reagidos a 70-100 °C durante 0,5-24 horas. Após a reação ter terminado, sal refinado e dextrina foram adicionados á solução de reação para um teor em sólidos de 3550% e a mistura foi seca por pulverização ou seca a vácuo para formar um pó ou foi concentrada para um teor de sólidos de 70% para formar uma pasta. O flavorízante kokumi pode melhorar a sensação de produto encorpado e pode mostrar o efeito de melhora dc sabor salgado.
[138] Exemplo 11: Avaliação de Atributos Sensoriais Resultantes de Aplicação do Flavorízante Kokumi [139] Quando o flavorízante kokumi da presente invenção é aplicado, ele pode melhorar a sensação encorpada de um produto, a assim denominada sensação de textura e produto encorpado na boca, e pode mostrar e efeito de melhora do sabor salgado do produto. Para verificar estes efeitos, a avaliação dos atributas sensoriais foi realizada.
[140] 11-1: Pasta de Soja com Baixo Tear de Sal [141] No caso de uma pasta de soja fermentada em um estado de baixo teor de sal, o sabor delicado é baixo e, particularmente, a sensação encorpada intermediária se torna fraca quando o equilíbrio d® sabores é quebrada e, por esta razão, o sabor global é reduzido. Para confirmar os efeitos do flavorizante kokumi sobre aprimoramentos na sensação encorpada e sabor salgado da pasta de soja, uma pasta de soja convencional, uma pasta de soja com baixo teor de sal e uma pasta de soja que compreende 0,3% (peso/pesa) do flavorizante kokumi na pasta de soja com baixo teor de sal foram apresentadas aos julgadores e avaliação sensorial quanto ao sabor global de cada uma das pastas de soja foi realizada pelos julgadores.
[142] Atributos sensoriais, tais como preferência e intensidade, foram
39/40 avaliados em uma escala de 5 pontas. Como um resultado, conforme mostrado na Tabela 17 abaixo, a pasta de soja com baixo teor de saí mostrou uma redução nos atributos sensoriais gerais comparado com a pasta de soja convencional, mas a pasta de soja que compreende o flavorizante kokumi adicionado à mesma mostrou um aumento nos atributos sensoriais. Especifícamente, o sabor delicado é um atributo que influencia a sensação encorpada intermediária de alimentos e é o principal atributo da pasta de soja. A intensidade e preferência do sabor delicado eram baixas no caso da pasta de soja com baixo teor de sal, mas aumentou no caso da pasta de soja que compreende o flavorízante kokumi adicionado. Além disso, no caso da pasta de soja que compreende o flavorizante kokumi adicionado, a intensidade e preferência de sabor salgado foram mais elevadas do que aquelas no caso da pasta de soja convencional, o que sugere que o flavorizante kokumi pode aumentar a sensação encorpada e sabor salgado da pasta de soja.
[143] Tabela 17
Atributos Pasta de soja convencional Paste de soja com baixo teor de sal Paste de soja com baixo teor de sal + flavorizante kokumi
Preferência de sabor global 3.0 2.8 3,2
Preferência de aparência 3.6 35 3,6
Preferência de sabor 3,1 3,0 3,1
Preferência de sensação na boca 3,3 3.4 3,6
Preferência de sabor desagradável 3.0 2.9 3,0
Preferência de sabor dehoado 3,2 2,9 3,3
Preferência de sabor umami 3,2 3,0 3,3
Preferência de sabor salgado 3,0 2,8 3,3
Preferência de .sabor doce 3,2 3,1 3,3
Preferência de sabor amargo 2,9 2,9 2,9
Intensidade de -sabor delicado 2,9 2,6 3,1
Intensidade de sabor umami 3,1 2,7 3,1
40/40
Intensidade d® sabor salgado .......................... .................... .......................................
l Intensidade de sabor doce i Intensidade de sabor amargo 2,8 2,8 2.8 2,7 2,8 2,8
i Intensidade de sabor desagradável 1,2 1.2
/ aroma desagradável
[144] 11 -2 Sopa de Creme de Coqume PS
[145] Para confirmar o efeito do flavorizante kokumi sobre a melhora do sabor salgado, sopa de creme de cogumelos compreendendo 0,1% (peso/peso) do flavorizante kokumi adicionado foi apresentada aos julgadores e a intensidade percebida do sabor salgado da sopa de creme de cogumelos foi avaliada pelos julgadores, Qs julgadores consistiam em julgadores profissionais treinados, de modo que eles reconhecessem absolutamente o sabor salgado, A amostra foi fornecida em uma temperatura de 40 a 50 °C e a amostra foi fornecida em triplicate. O valor médio das intensidades percebidas do sabor salgado foi analisado por ANOVA. Quando a intensidade percebida do sabor salgado foi avaliada, uma escaía de referência foi aplicada de modo a eliminar a variação subjetiva.
[146] Como um resultado, conforme mostrado na Tabela 18. no caso da sopa compreendendo o flavorizante kokumi (KF) adicionada à mesma, a intensidade percebida de sabor salgado aumentou em 14,5% comparado com a sopa à qual o flavorizante kokumi não foi adicionado, Apesar do fato de que o flavorizante kokumi preparado por meio de um processo sem sal não influenciar o teor de sal do produto, pode ser visto que o flavorízante kokumi teve o efeito de aumentar o sabor salgado do produto.
[147] Tabela 18
Sopa de creme de cogumelos
1 Concentração de NaCI 1 i na sopa de creme de í cogumelos (%) i 0,60% I............................................................... Média de intensidades percebidas de 1 1 Aumenta {%} na sabor salgado | ------,---?,-------------------i intensidade percebida Sem KF | Compreendendo KF | ___________________________}________________________________________________,___________i_______________________________________________________________ 10,3 ] 11,8 [ 14,5
1/4

Claims (29)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Método para o preparo de um caldo fermentado de inosina-5’monofosfato (IMP) ou um caldo fermentado de ácido glutâmico caracterizado por compreender:
    (a) fermentação de uma fonte de proteína vegetal com fungos para obter um caldo fermentado de cereal; e (b) fermentação do caldo fermentado de cereal com bactérias.
  2. 2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o caldo fermentado de IMP ou o caldo fermentado de ácido glutâmico ser uma matéria-prima para o preparo de um flavorizante natural.
  3. 3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a fonte de proteina vegetal ser selecionada do grupo que consiste em soja, milho, arroz, trigo © glúten de trigo.
  4. 4. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o fungo ser um micro-organismo Asperg///us sp.
  5. 5. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por o micro-organismo Asperg<;//us sp. ser Aspe/g$tos so/ae.
  6. 6. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a bactéria ser um micro-organismo Çoryn&baçteríam sp.
  7. 7. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por o mícro-organismo Cofyn&baGterium sp. ser Corynebactenum ammoníagenes.
  8. 8. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por o micro-organismo Corynebací&m/m sp. ser Coryn&baciemm g/feamfeum.
  9. 9. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a composição de meio para fermentação bacteriana para o preparo do caldo fermentado de IMP ou do caldo fermentado de ácido glutâmico compreender um material de grau alimentício.
  10. 10. Método de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por a composição de meio para fermentação bacteriana compreender pantotenato de cálcio (CAPA).
    2/4
  11. 11. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por um meio de fermentação bacteriana para preparo do caldo fermentado de IMP compreender glicose, frutose, sulfato de magnésio, ácido fosfórico, hidróxido de potássio e um caldo fermentado de cereal
  12. 12. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por um meio de fermentação bacteriana para preparo do caldo fermentado de áoido glutâmico compreender glicose, frutose, açúcar bruto, betaína, sulfato de magnésio, fosfato de potássio e ácido fosfórico.
  13. 13. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por uma fonte de carbono em um meio de fermentação bacteriana para preparo do caldo fermentado de ácido glutâmico ser açúcar bruto.
  14. 14. Método de acordo com: a reivindicação 1, caracterizado por a .<? * MMMUUMMUMUMMMMMMMMMUMUUMMUUWUUUMUUUUUUWUMOUUUWWUUMk concentração de IMF no caldo fermentado de IMP preparado ser de 50 g/L a 150 g/L
  15. 15. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o teor de IMP em sólidos no caldo fermentado de IMP preparado ser de 30% em peso ou mais.
  16. 16. Método de acordo com a reivindicação 1, çaractenzadp por a concentração de ácido glutâmico no caldo fermentado de ácido glutâmico preparado ser de 75 g/L a 150 g/L.
  17. 17. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o teor de ácido glutâmico em sólidos no caldo fermentado de ácido glutâmico preparado ser de 50% em peso ou mais.
  18. 18. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ainda compreender (c) tratamento do caldo fermentado obtido por meio de fermentação bacteriana com carvão ativado,
  19. 19. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado por ainda compreender, após tratamento do caldo fermentado com carvão ativado, filtração ou centrifugação do caído fermentado tratado.
  20. 20. Método de acordo com a reivindicação 18, caracterizado por
    3/4 ainda compreender, antes de tratamento do caldo fermentado com carvão ativado, aquecimento do caldo fermentado em uma temperatura de 70 a 90 °C durante 15 a 60 minutos para induzir à lise celular.
  21. 21. Caldo fermentado de IMP caracterizado por ser preparado através do método tal como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 20.
  22. 22. Caldo fermentado de ácido glutâmico caracterizado por ser preparado através do método tal como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 20.
  23. 23. Método para o preparo de um flavorizante natural, caracterizado por compreender:
    (a) fermentação de uma tente de proteína vegetal com fungos para obter um caldo fermentado de cereal; e (b) fermentação do caldo de cereal fermentado com bactérias para preparar um caldo fermentado de IMP ou um caído fermentado de ácido glutâmico.
  24. 24. Método de acordo com a reivindicação 23, caracterizado por ainda compreender (c) mistura de dois ou mais caldos fermentados selecionados do grupo que consiste no caldo fermentado de cereal da etapa (a) e o caldo fermentado de IMP e caldo fermentado de ácido glutâmico da etapa (b)>
  25. 25. Método de acordo com a reivindicação 23 ou 24, caracterizado por o flavorízante natural ser preparado usando apenas o caldo fermentado sem a adição de qualquer componente adicional.
  26. 26. Método de acordo com a reivindicação 23 ou 24, caracterizado por o flavorízante natural ser preparado usando o caldo fermentado sem submeter o caldo fermentado a um processo químico adicional.
  27. 27. Método de acordo com a reivindicação 24, caracterizado por ainda compreender, antes da etapa (c), etetrodiálise do caldo fermentado de IMP ou do caldo fermentado de ácido glutâmico.
  28. 28. Flavorízante natural caracterizado por ser preparado através do
    4/4 método tel como definido na reivindicação 23.
  29. 29. Composição alimentícia caracterizada por compreender o fiavorizante natural tal como definido na reivindicação 28.
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