BR112015005500B1

BR112015005500B1 - Composto, composição farmacêutica, combinação de um composto, uso de um composto e dispositivo

Info

Publication number: BR112015005500B1
Application number: BR112015005500-1A
Authority: BR
Inventors: Eleonora Ghidini
Original assignee: Chiesi Farmaceutici S.P.A.
Priority date: 2012-09-13
Filing date: 2013-08-23
Publication date: 2022-11-22
Also published as: US20150376226A1; US9155747B2; HK1209756A1; PH12015500534B1; NZ705902A; KR101719524B1; JP2015533801A; EA201590390A1; JP2018162270A; SG11201501902RA; ZA201501691B; SA515360134B1; PL2895495T3; AR092547A1; UA116545C2; CN104619714A; KR20150042264A; WO2014040837A1; PE20150675A1; TN2015000093A1

Abstract

COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, COMBINAÇÃO DE UM COMPOSTO, USO DE UM COMPOSTO E DISPOSITIVO. A presente invenção refere-se a novos compostos anti-inflamatórios e antialérgicos da série dos glicocorticosteroides, métodos para preparar tais compostos, composições farmacêuticas os compreendendo e a combinações e usos terapêuticos dos compostos. Mais especificamente, a invenção refere-se a certos glicocorticosteroides que são derivados da isoxazolidina.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001]. A presente invenção refere-se a novos compostos anti- inflamatórios e antialérgicos da série dos glicocorticosteroides, métodos para preparar tais compostos, composições farmacêuticas os compreendendo e as combinações e usos terapêuticos dos compostos. Mais especificamente, a invenção refere-se a certos glicocorticosteroides que são derivados da isoxazolidina.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002]. Os corticosteroides são agentes anti-inflamatórios potentes, capazes de diminuir o número, a atividade e o movimento de células inflamatórias.

[003]. Esses agentes são comumente usados para tratar uma ampla gama de condições inflamatórias crônicas e agudas, incluindo asma, doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), rinite alérgica, artrite reumatoide, doença intestinal inflamatória e doenças autoimunes.

[004]. Os corticosteroides mediam seus efeitos através do receptor de glicocorticoides (GR). A ligação de corticosteroides ao GR induz a sua translocação nuclear, a qual, por sua vez, afeta uma série de vias subsequentes por intermédio de mecanismos dependentes (por exemplo, transativação) e independentes da ligação ao DNA (por exemplo, transexpressão).

[005]. Os corticosteroides no tratamento de condições inflamatórias crônicas no pulmão, como asma e DPOC, são atualmente administrados através de inalação. Uma das vantagens de se empregar corticosteroides inalados (ICS) é a possibilidade de liberar o fármaco diretamente no sítio de ação, limitando a ocorrência de efeitos colaterais sistêmicos, assim resultando em resposta clínica mais rápida e índice terapêutico mais alto.

[006]. Embora o tratamento com ICS possa proporcionar benefícios importantes, especialmente na asma, é importante minimizar a exposição sistêmica aos ICS, a qual leva à ocorrência e à gravidade de efeitos colaterais indesejados que podem associar-se à administração crônica. Além do mais, a duração limitada de ação dos ICS atualmente disponíveis na prática clínica contribui para o controle insuficiente da doença. Conquanto a tecnologia do inalador represente um ponto fundamental para o direcionamento ao pulmão, a modulação dos substituintes no arcabouço molecular dos corticosteroides é importante para a otimização de propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas a fim de reduzir a biodisponibilidade oral, restringir a atividade farmacológica somente no pulmão (pró-fármacos e fármacos leves) e aumentar a depuração sistêmica. Além disso, a atividade duradoura dos ICS no pulmão é altamente desejável, pois a administração diária uma vez do ICS permitiria reduzir a frequência da administração e, assim, melhorar substancialmente a aderência do paciente e, como resultado, o gerenciamento e controle da doença. Em suma, há uma necessidade médica premente de serem desenvolvidos ICS com características farmacocinéticas e farmacodinâmicas melhoradas.

[007]. Derivados glicocorticoides de isoxazolidina são, por exemplo, descritos em WO 2006/005611, GB 1578446 e no artigo "Synthesis and topical anti-inflammatory activity of some steroidal [16α,17α-d] isoxazolidines" (J. Med. Chem., 25, 1492-1495, 1982).

[008]. Alguns derivados glicocorticoides de isoxazolidina são também descritos nos pedidos de patentes copendentes WO 2011/029547, WO 2012/123482 e WO 2012/123493.

[009]. Surpreendentemente, foi descoberto que os compostos da presente invenção mostram características farmacocinéticas e farmacodinâmicas melhoradas, tais como exposição sistêmica, seletividade e duração de ação.

DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO

[0010]. A presente invenção diz respeito a compostos anti- inflamatórios e antialérgicos da série dos glicocorticosteroides, a processos para o seu preparo, a composições os compreendendo, a usos terapêuticos e combinações com outros ingredientes farmacêuticos ativos para o tratamento de transtornos respiratórios, entre os quais agonistas beta-2, agentes antimuscarínicos, inibidores de proteínas quinases ativadas por mitógenos (P38 MAP quinase), inibidores da subunidade beta da quinase kappa-B do fator nuclear (IKK2), inibidores da elastase neutrofílica humana (HNE), inibidores da fosfodiesterase 4 (PDE4), moduladores do leucotrieno, agentes anti-inflamatórios não esteroidais (NSAIDs), agentes antitussígenos, reguladores do muco, mucolíticos, expectorantes/moduladores mucocinéticos, peptídeos mucolíticos, antibióticos, inibidores de JAK, inibidores de SYK, inibidores de PI3Kdelta ou PI3Kgama, antagonistas M3/agonistas beta-2 (MABA) e antagonistas M3/inibidores de PDE4 (MAPI).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0011]. Especificamente, a invenção é dirigida aos compostos da Fórmula geral (I):

em que: - R1 é selecionado a partir do grupo constituído por (C1- C16)alquila linear ou ramificado, (C2-C18)alquenila linear ou ramificado, -OR6, arila, aril(C1-C16)alquila, -SR6, -N(R4)(R5), (C3-C8)cicloalquila, (C3- C8)heterocicloalquila e heteroarila, em que opcionalmente um ou mais átomos de hidrogênio são substituídos por (C1-C6,)alquila e em que R4 e R5 são independentemente selecionados a partir de H ou (C1-C6,)alquila linear ou ramificado e R6 é (C1-C16)alquila linear ou ramificado; - R2 é arila opcionalmente substituído com um ou mais átomos de halogênio; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

[0012]. Na presente descrição, a menos que indicado de outra forma, o termo “halogênio” inclui átomos de flúor, cloro, bromo e iodo.

[0013]. O termo "(C1-C16)alquila" refere-se a grupos alquila de cadeia linear ou ramificada, em que o número de átomos de carbono é de 1 a 16. Os exemplos dos referidos grupos são metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila, terc-butila, pentila, hexila, heptila, octila, etil-butila, propril-butila, metil-butila, etil-metil-propila, hexadecila, undecila, dodecila, tridecila, quaterdecila, quindecila, hexadecila e os semelhantes.

[0014]. A expressão “(C2-C18)alquenila” refere-se a cadeias lineares ou ramificadas de carbono com uma ou mais ligações duplas, em que o número de átomos de carbono é de 2 a 18. Os exemplos dos referidos grupos incluem etenila, propenila, butenila, pentenila, hexenila, heptenila, octenila, nonenila, decenila, undecenila, dodecenila, tridecenila, quaterdecenila, quindecenila, hexadecenila, heptadecenila e os semelhantes.

[0015]. A expressão “(C3-C8)cicloalquila” refere-se a grupos hidrocarbonetos mono ou bi-cicloalifáticos com de 3 a 8 átomos de carbono. Os exemplos incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, cicloheptila, biciclo[2.2.1]hept-2-ila e os semelhantes.

[0016]. A expressão "(C3-C8)heterocicloalquila" refere-se a grupos (C3-C8)cicloalquila, nos quais pelo menos um átomo de carbono no anel é substituído por um heteroátomo ou grupo heteroaromático (por exemplo, N, NH, S ou O). Os exemplos incluem piperazinila, tiazolidinila, pirrolidinila, piperidinila, morfolinila e os semelhantes.

[0017]. A expressão "arila" refere-se a sistemas de anel mono ou bi ou tricíclico com 6 a 20 átomos no anel, de preferência de 6 a 15 e em que pelo menos um anel é aromático.

[0018]. Os exemplos de sistemas arila monocíclico adequados incluem o radical benzeno e os semelhantes.

[0019]. Os exemplos de sistemas arila bicíclico adequados incluem os radicais naftaleno, bifenileno e os semelhantes.

[0020]. Os exemplos de sistemas de arila tricíclico adequados incluem o radical fluoreno e os semelhantes.

[0021]. A expressão "aril(C1-C6)alquila" refere-se a grupos (C1- C6)alquila substituídos ainda com arila.

[0022]. Neste relatório descritivo, o termo “heteroarila” refere-se a sistema de anel mono, bi ou tricíclico com 5 a 20 átomos no anel, de preferência de 5 a 15, nos quais pelo menos um anel é aromático e nos quais pelo menos um átomo no anel é um heteroátomo ou grupo heteroaromático (por exemplo, N, NH, S ou O).

[0023]. Os exemplos de sistemas de heteroarila monocíclico adequados incluem os radicais de tiofeno, pirrol, pirazol, imidazol, isoxazol, oxazol, isotiazol, tiazol, piridina, imidazolidina, piridina, piperazina e furano tais como tetrahidrofurano e os semelhantes.

[0024]. Os exemplos de sistemas heteroarila bicíclico adequados incluem os radicais de purina, pteridina, benzotriazol, quinolina, isoquinolina, indol, isoindol, benzofurano, benzodioxano, benzotiofeno e os semelhantes.

[0025]. Será evidente para os técnicos no assunto que os compostos da Fórmula geral (I) contêm centros assimétricos pelo menos nas posições 4a, 4b, 5, 6a, 6b, 9a, 10a, 10b e que, portanto, podem existir na forma de muitos estereoisômeros ópticos e suas misturas.

[0026]. Por conseguinte, a invenção é também dirigida a todas essas formas e suas misturas.

[0027]. Os compostos preferidos são aqueles da Fórmula geral (I) em que a estereoquímica dos átomos estereogênicos de carbono é conforme relatada na Fórmula (I’) abaixo, cuja configuração absoluta é designada com base na nomenclatura de Cahn-Ingold-Prelog de acordo com as prioridades dos grupos:

e em que os significados de R1 e R2 são como definidos acima.

[0028]. Em uma modalidade preferida, para compostos da Fórmula (I'), a configuração absoluta no centro assimétrico 4a é (S), em 4b é (R), em 5 é (S), em 6a é (S), em 6b é (R), em 9a é (S), em 10a é (S), em 10b é (S) e em 12 é (S).

[0029]. Os compostos da Fórmula geral (I) podem formar sais de adição de ácidos, especialmente com ácidos farmaceuticamente aceitáveis.

[0030]. Os sais de adição de ácidos farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da Fórmula (I), assim abrangendo também aqueles da Fórmula (I'), incluem os sais com ácidos inorgânicos, por exemplo, ácidos halogenídricos como ácidos fluorídrico, clorídrico, bromídrico ou iodrídico; nítrico, sulfúrico, fosfórico; e ácidos orgânicos, por exemplo, ácidos monocarboxílicos alifáticos como fórmico, acético, trifluoroacético e propiônico; ácidos hidroxílicos alifáticos como láctico, cítrico, tartárico ou málico; ácidos dicarboxílicos como maleico, fumárico, oxálico ou succínico; ácidos carboxílicos aromáticos tais como benzoico; ácidos hidroxi aromáticos e ácidos sulfônicos.

[0031]. Esses sais podem ser preparados a partir de compostos da Fórmula (I) ou (I') por procedimentos conhecidos de formação de sais.

[0032]. Deverá ser entendido que todos os grupos preferidos ou as modalidades descritas abaixo para compostos da Fórmula (I) podem ser combinados entre si e se aplicam também mutatis mutandis.

[0033]. Um grupo preferido de compostos da Fórmula geral (I) ou (I') é aquele em que R1 é selecionado a partir do grupo constituído por (C1- C16)alquila linear ou ramificado, (C2-C18)alquenila linear ou ramificado, -OR6, arila, aril(C1-C16)alquila, -SR6, -N(R4)(R5), (C3-C8)cicloalquila, (C3- C8)heterocicloalquila e heteroarila, em que opcionalmente um ou mais átomos de hidrogênio são substituídos por (C1-C6)alquila e em que R4 e R5 são independentemente selecionados a partir de H ou (C1-C6)alquila linear ou ramificado e R6 é (C1-C16)alquila linear ou ramificado; e R2 é arila opcionalmente substituído com um ou mais átomos de halogêneo.

[0034]. Ainda mais preferidos dentro desse grupo são os compostos da Fórmula (I) ou (I') em que R1 é selecionado a partir do grupo constituído por metila, isopropila, etila, quindecila, butila, hexila, heptadecenila, metoxi, metilsulfanila, isobutila, isopentila, terc-butila, metilamino, dimetilamino, fenila, ciclopropila, ciclopentila, metilpropanoxi, benzila, piridila, piperazinila, piperidinila, pirrolidinila, tiazolidinila e furila; e R2 é p-clorofenol.

[0035]. A seguir, os compostos da Fórmula (I) e (I') e seus sais farmaceuticamente aceitáveis e solvatos são referidos como "compostos da invenção".

[0036]. Os exemplos de compostos preferidos da invenção são:

[0037]. De acordo com procedimentos e métodos análogos aqui descritos, os seguintes compostos preferidos da invenção podem ser obtidos:

[0038]. A invenção também provê composições farmacêuticas compreendendo um composto da invenção, seja como tal ou na forma de sal farmaceuticamente aceitável, e um ou mais veículos e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[0039]. Os compostos da invenção podem ser administrados como o único agente ativo ou em combinação com outros ingredientes farmacêuticos ativos, incluindo aqueles correntemente usados no tratamento de transtornos respiratórios, por exemplo, agonistas beta-2, agentes antimuscarínicos, inibidores de proteínas quinases ativadas por mitógenos (P38 MAP quinase), inibidores da subunidade beta da quinase kappa-B do fator nuclear (IKK2), inibidores da elastase neutrofílica humana (HNE), inibidores da fosfodiesterase 4 (PDE4), moduladores do leucotrieno, agentes anti-inflamatórios não esteroidais (NSAIDs), agentes antitussígenos, reguladores do muco, mucolíticos, expectorantes/moduladores mucocinéticos, peptídeos mucolíticos, antibióticos, inibidores de JAK, inibidores de SYK, inibidores de PI3Kdelta ou PI3Kgama, antagonistas M3/agonistas beta-2 (MABA) e antagonistas M3/inibidores de PDE4 (MAPI).

[0040]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção, seja como tal ou na forma de sal farmaceuticamente aceitável, com um agonista β2 selecionado a partir do grupo constituído por carmoterol, GSK-642444, indacaterol, milveterol, arformoterol, tartarato de arformoterol, formoterol, fumarato de formoterol, salmeterol, xinafoato de salmeterol, salbutamol, albuterol, levalbuterol, terbutalina, indacaterol (QAB-149), AZD-3199, BI-1744-CL, LAS-100977, GSK159797, GSK59790, GSK159802, GSK642444, GSK678007, GSK96108, bambuterol, isoproterenol, procaterol, clembuterol, reproterol, fenoterol, bitolterol, brodxatelor e ASF-1020 e os sais destes.

[0041]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção, seja como tal ou na forma de sal farmaceuticamente aceitável, com um agente antimuscarínico selecionado a partir do grupo constituído por aclidínio, tiotrópio, brometo de tiotrópio (Spiriva®), ipratrópio, brometo de ipratrópio, tróspio, glicopirrolato, NVA237, LAS34273, GSK656398, GSK233705, GSK57319, LAS35201, QAT370 e sais de oxitrópio.

[0042]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção, seja como tal ou na forma de sal farmaceuticamente aceitável, com um inibidor de PDE4 selecionado a partir do grupo constituído por NA-2728, NA-2898, CBS-3595, apremislaste, ELB-353, KF-66490, K-34, LAS-37779, IBFB-211913, AWD-12-281, cipanfilina, cilomilaste, roflumilaste, BAY19-8004 e SCH-351591, indus-82010, TPI-PD3, ELB- 353, CC-11050, GSK-256066, oglemilaste, OX-914, tetomilaste, MEM-1414 e RPL-554.

[0043]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção, seja como tal ou na forma de sal farmaceuticamente aceitável, com um inibidor de P38 MAP quinase selecionado a partir do grupo constituído por semapimode, talmapimode, pirfenidona, PH-797804, GSK-725, GSK856553, GSK681323, minoquina e losmapimode e os sais destes.

[0044]. Em uma modalidade preferida, a invenção provê combinações de um composto da invenção com um inibidor de IKK2.

[0045]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção com um inibidor de HNE selecionado a partir do grupo constituído por AAT, ADC-7828, aeriva, TAPI, AE-3763, KRP-109, AX- 9657, POL-6014, AER-002, AGTC-0106, respriva, AZD-9668, zemaira, AAT IV, PGX-100, elafina, SPHD-400, prolastina C e prolastina inalada.

[0046]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção com um modulador do leucotrieno selecionado a partir do grupo constituído por montelucaste, zafirlucaste e pranlucaste.

[0047]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção com um NSAID selecionado a partir do grupo constituído por ibuprofeno e cetoprofeno.

[0048]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção com um agente antitussígeno selecionado a partir do grupo constituído por codeína e dextramorfano.

[0049]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção com um mucolítico selecionado a partir do grupo constituído por N acetil cisteína e fudosteína.

[0050]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção com um expectorante/modulador mucocinético, selecionado a partir do grupo constituído por ambroxol, soluções hipertônicas (por exemplo, salina ou manitol) e surfactante.

[0051]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção com peptídeo mucolítico, selecionado a partir do grupo constituído por desoxirribonuclease I humana recombinante (dornase-alfa e rhDNase) e helicidina.

[0052]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção com um antibiótico, selecionado a partir do grupo constituído por azitromicina, tobramicina e aztreonam.

[0053]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção com regulador do muco selecionado a partir do grupo constituído por INS-37217, diquafosol, sibenadete, CS-003, talnetante, DNK-333, MSI-1956 e gefitinibe.

[0054]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção, seja como tal ou na forma de sal farmaceuticamente aceitável, com um inibidor de JAK, selecionado a partir do grupo constituído por CP-690550 e GLPG0634.

[0055]. A invenção também provê combinações de um composto da invenção, seja como tal ou na forma de sal farmaceuticamente aceitável, com um inibidor de SYK selecionado a partir do grupo constituído por R406, R343 e PRT062607.

[0056]. A invenção também provê um composto da invenção para uso como medicamento.

[0057]. A invenção também se refere ao uso de um composto da invenção para diminuir o número, a atividade e o movimento das células inflamatórias in vitro e/ou in vivo.

[0058]. A invenção é também dirigida a certos compostos da invenção para uso na prevenção ou no tratamento de qualquer doença em que a diminuição no número, a atividade e o movimento de células inflamatórias está envolvido.

[0059]. Em um aspecto adicional, a invenção provê o uso de compostos da invenção para a prevenção e/ou o tratamento de qualquer doença em que a diminuição no número, a atividade e o movimento de células inflamatórias está envolvido.

[0060]. Especificamente, os compostos da invenção, sejam isoladamente ou combinados com um ou mais ingredientes ativos, podem ser administrados para a prevenção e/ou o tratamento de uma doença do trato respiratório caracterizada por obstrução das vias aéreas, tal como asma e DPOC.

[0061]. Em um aspecto adicional, a invenção provê o uso de compostos da invenção para preparar um medicamento destinado à prevenção e/ou ao tratamento de qualquer doença em que a diminuição no número, a atividade e o movimento de células inflamatórias está envolvido.

[0062]. Além do mais, a invenção provê um método para prevenção e/ou tratamento de qualquer doença em que a diminuição no número, a atividade e o movimento de células inflamatórias está envolvido, o referido método compreendendo administrar a um paciente com necessidade de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção.

[0063]. A invenção também provê preparados farmacêuticos de compostos da invenção adequados para a administração por inalação, injeção, por via oral ou intranasal.

[0064]. Os preparados para inalação incluem pós inaláveis, aerossóis dosimétricos contendo propelente ou formulações para inalação sem propelentes.

[0065]. A invenção é também dirigida a um dispositivo que pode ser um inalador de pó seco de dose única ou de múltiplas, um inalador dosimétrico ou um nebulizador, especialmente um nebulizador que cria uma névoa suave compreendendo um composto da invenção.

[0066]. A invenção é também dirigida a um kit compreendendo as composições farmacêuticas de compostos da invenção, isoladamente ou combinadas ou em mistura com um ou mais veículos e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis, e um dispositivo que pode ser um inalador de pó seco de dose única ou de múltiplas, um inalador dosimétrico ou um nebulizador.

[0067]. Os compostos da invenção podem ser preparados de acordo com uma variedade de etapas sintéticas, que são conduzidas de acordo com métodos e técnicas convencionais ou que estão descritos abaixo.

[0068]. Em um aspecto, a invenção provê processos para preparar compostos da invenção e seus intermediários.

[0069]. A partir de todo o precedente, é evidente para o técnico no assunto que pela seleção do material de partida com uma configuração estereoquímica apropriada, qualquer um dos possíveis estereoisômeros da Fórmula (I) pode ser obtido.

[0070]. Alguns dos processos empregados para preparar os compostos da Fórmula (I’), como descrito no Esquema abaixo, podem também ser aplicados a certos compostos da Fórmula (I).

Procedimento para o preparo dos compostos da invenção

[0071]. Os compostos da invenção podem ser preparados de acordo com diferentes vias descritas no esquema acima, dependendo da natureza dos substituintes R1 e R2.

[0072]. Em geral, os compostos da presente invenção podem ser preparados pelos métodos ilustrados no esquema geral de reações ou por modificação deste, utilizando materiais de partida facilmente disponíveis, reagentes e procedimentos convencionais de síntese. Nessas reações, é também possível fazer uso de variantes que são bem conhecidas pelo técnico no assunto.

[0073]. Os compostos da Fórmula (III) podem ser rapidamente preparados a partir de compostos conhecidos por métodos conhecidos, partindo de compostos da Fórmula geral (II) (J. Med. Chem. 1982, 25, 1492-1495). Além disso, estão também disponíveis comercialmente.

[0074]. Os compostos da Fórmula (IV) podem ser preparados convenientemente de acordo com procedimentos padrões relatados na literatura. Por exemplo, podem ser preparados pelo tratamento de compostos da Fórmula geral (III) com uma base, como acetato de potássio. Essa reação é normalmente realizada em um solvente polar adequado como DMF e tipicamente prossegue a uma faixa de temperatura de 80 a 100 °C durante um período de 0,5 a 4 horas.

[0075]. Os compostos da Fórmula (V) podem ser preparados hidrolisando os compostos da Fórmula (IV). Essa reação é realizada de preferência submetendo os compostos (IV) à ação de uma enzima, como Lipase imobilizada de Candida antarctica (Sigma Aldrich) (Tetrahedron, 50, 13165-13172, 1994).

[0076]. Os compostos da Fórmula geral (VII) podem ser preparados partindo da reação de um Composto de fórmula (V) com um Composto de fórmula (VI) na presença de paraformaldeído, utilizando procedimentos conhecidos para a formação de isoxazolidina, por cicloadição de nitronas (J. Med. Chem., 25, 1492-1495, 1982). A reação é realizada convenientemente em um solvente protogênico, como etanol, a temperaturas que variam de 80 a 100 °C. A hidroxilamina da Fórmula (VI) está disponível comercialmente ou pode ser preparada facilmente empregando procedimentos conhecidos, por exemplo, reduzindo um oxima com um agente redutor, como o complexo borano-piridina (J. Med. Chem., 40, 1955-1968, 1997), ou pela reação de O-tetrahidropiranil hidroxilamina com um agente alquilante adequado, como alquil haletos (Chem. Pharm. Bull., 46, 966-972, 1998).

[0077]. A conversão do grupo hidroxila de compostos da Fórmula geral (VII) em um éster, carbonato, carbamato ou tiocarbonato pode ser facilmente realizada reagindo compostos da Fórmula geral (VII) com compostos da Fórmula geral (VIII), (IX), (X), (XI), (XII) ou (XIII) seguindo a via sintética descrita (Via A-D).

[0078]. O técnico no assunto pode introduzir, quando apropriado, variações adequadas às condições especificamente descritas na seção experimental a fim de adaptar as vias sintéticas ao fornecimento de mais compostos da invenção. Tais variações podem incluir, entre outras, uso de materiais de partida apropriados para gerar compostos diferentes, mudanças no solvente e na temperatura de reações, substituições de um reativo com função química análoga, introdução ou remoção de estágios de proteção/desproteção de grupos funcionais sensíveis às condições e aos reagentes das reações, bem como introdução ou remoção de etapas sintéticas específicas orientadas para elaborar teoricamente mais o arcabouço químico.

[0079]. A reação dos intermediários da Fórmula geral (VII) com cloretos de acila (VIII), seguindo a Via A, para obter compostos da Fórmula geral (I), é convenientemente realizada em DCM (diclorometano) como solvente na presença de uma base como trietilamina ou DIPEA (N,N- Diisopropiletilamina) ou piridina à temperatura ambiente (RT) durante um período de 4 a 50 horas.

[0080]. Alternativamente, pela Via B, a conversão do grupo hidroxila de compostos da Fórmula geral (VII) em um carbamato pode ser realizada facilmente reagindo compostos da Fórmula geral (VII) com compostos da Fórmula geral (IX), seguindo procedimentos conhecidos. A reação é realizada convenientemente em DCM como solvente na presença de uma base como DMAP, a RT durante um período de 4 a 50 horas.

[0081]. Seguindo a Via C, a reação dos intermediários da Fórmula geral (VII) com CDI (1,1’-carbonildiimidazol), seguida pela adição do desejado álcool (X) ou tiol (XI) ou amina (XII) para obter compostos da Fórmula geral (I), é realizada convenientemente em THF (tetrahidrofurano) a RT durante um período de 4 a 50 horas.

[0082]. Alternativamente, pela Via D, a conversão do grupo hidroxila de compostos da Fórmula geral (VII) em compostos da Fórmula geral (I) pode ser alcançada reagindo compostos da Fórmula geral (XIII) com HOBt (hidroxibenzotriazol), seguido pela adição de compostos da Fórmula geral (VII), EDC (1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida) e DMAP (4-dimetilaminopiridina). A reação é realizada convenientemente em DMF como solvente a RT durante um período de 4 a 50 horas.

[0083]. A partir de todo o precedente, deve estar claro que qualquer um dos grupos descritos pode estar presente como tal ou em qualquer forma apropriadamente protegida.

[0084]. Especificamente, grupos funcionais presentes no intermediário e nos compostos e que poderiam gerar uma reação colateral indesejada e subprodutos, precisam ser apropriadamente protegidos antes que aconteça a alquilação, a acilação, o acoplamento ou a sulfonilação. Do mesmo modo, a desproteção subsequente dos mesmos grupos protegidos pode seguir-se após a conclusão das referidas reações.

[0085]. Na presente invenção, a menos que indicado de outra forma, o termo “grupo protetor” designa o grupo de proteção que foi adaptado para preservar a função do grupo ao qual está ligado. Tipicamente, os grupos de proteção são usados para preservar as funções amino, hidroxila ou carboxila. Os grupos protetores apropriados podem assim incluir, por exemplo, benzila, benziloxicarbonila, t-butoxicarbonila, alquila ou ésteres de benzila, ou os semelhantes, os quais são bem conhecidos pelos técnicos no assunto [ver, para uma referência geral, 20 T.W. Green; Protective Groups in Organic Synthesis (Wiley, N.Y., 1981)].

[0086]. Vantajosamente, os compostos da invenção podem ser administrados, por exemplo, a uma dose compreendida entre 0,001 e 1000 mg/dia, preferivelmente entre 0,1 e 500 mg/dia.

[0087]. Quando são administrados pela via de inalação, a dose dos compostos da invenção está vantajosamente compreendida entre 0,01 e 20 mg/dia, preferivelmente entre 0,1 e 10 mg/dia.

[0088]. De preferência, os compostos da invenção, isoladamente ou combinados com outros ingredientes ativos, podem ser administrados para a prevenção e/ou o tratamento de qualquer doença respiratória obstrutiva, tais como asma, bronquite crônica e doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC).

[0089]. No entanto, os compostos da invenção podem ser administrados para a prevenção e/ou o tratamento de qualquer doença em que a diminuição no número, a atividade e o movimento de células inflamatórias está envolvido.

[0090]. Os exemplos de tais doenças incluem: doenças envolvendo inflamação como asma e outros transtornos alérgicos, DPOC, rinite aguda; rejeição inversa aguda do transplante e exacerbações agudas de transtornos autoimunes selecionados, doença do enxerto contra o hospedeiro em transplantes da medula óssea; transtornos autoimunes como artrite reumatoide e de outros tipos; condições cutâneas como lúpus eritematoso sistêmico, dermatomiosite sistêmica, psoríase; doença intestinal inflamatória, doenças oftálmicas inflamatórias, doenças hematológicas autoimunes e exacerbações agudas de esclerose múltipla; transplantes de rim, fígado, coração e de outros órgãos; síndrome ocular aguda de Behçet, uveíte endógena, dermatite atópica, doença intestinal inflamatória e síndrome nefrótica; doença de Hodgkin e linfoma não Hodgkin, mieloma múltiplo e leucemia linfocítica crônica (LLC); anemia hemolítica autoimune e trombocitopenia associada à LLC; leucemia e linfoma maligno.

[0091]. Os compostos da invenção podem ser preferivelmente administrados para a prevenção e/ou o tratamento de doenças respiratórias tais como condições agudas de leves a graves de asma e DPOC.

[0092]. A invenção será descrita agora mais detalhadamente por meio dos exemplos a seguir.

[0093]. Nos procedimentos experimentais relatados, as seguintes abreviações podem ser usadas: TEA = trietilamina; DCM = diclorometano; RT = temperatura ambiente; AcOEt = acetato de etila; DMF = N,N- dimetilformamida; DMSO = dimetilsulfóxido; HATU = hexafluorofosfato de O- (7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametilurônio; DMAP = 4- dimetilaminopiridina; DIPEA = etildiisopropilamina. Exemplo 1

Intermediário 2 Composto 1 Preparo de 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro- fenil)-4b,12-difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo- 2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-tetradecahidro-7-oxa-8-aza- pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido isobutírico (Composto 1)

[0094]. A uma solução agitada do Intermediário 2 (600 mg, 1,124 mmol) e DIPEA (0,391 ml, 2,247 mmol) em diclorometano seco (30 ml), sob atmosfera de nitrogênio a 5 °C, adicionou-se cloreto de isobutirila (0,235 ml, 2,247 mmol) e a mistura de reação foi agitada a 5 °C por 10 minutos e a RT por 16 horas. Adicionou-se mais DIPEA (0,196 ml, 1,124 mmol) e cloreto de isobutirila (0,118 ml, 1,124 mmol) e a mistura foi agitada a RT por 72 horas. Outra porção de DIPEA (0,196 ml, 1,124 mmol) e de cloreto de isobutirila (0,118 ml, 1,124 mmol) foram ainda adicionadas, e a mistura foi agitada a RT por 1 hora e a 50 °C por 1,5 horas.

[0095]. A mistura de reação foi diluída com DCM (100 ml) e a camada orgânica foi lavada com HCl 1 N, uma solução saturada de NaHCO3 e salmoura, seca (Na2SO4) e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia ultrarrápida em sílica gel com gradiente de eluição de DCM/AcOEt 98:2 para DCM/AcOEt 92:8 para fornecer 481 mg de composto puro (71% de rendimento; Rf = 0,37 em AcOEt/DCM 10:90).

[0096]. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) ppm 7,31 - 7,45 (m, 2 H), 7,26 (dd, 1 H), 6,98 - 7,10 (m, 2 H), 6,29 (dd, 1 H), 6,08 (s, 1 H), 5,62 (d, 1 H), 5,42 - 5,78 (m, 1 H), 5,06 (d, 1 H), 4,90 (d, 1 H), 4,18 - 4,32 (m, 1 H), 4,17 (t, 1 H), 3,44 - 3,62 (m, 1 H), 2,56 - 2,71 (m, 2 H), 2,63 (spt, 1 H), 2,04 - 2,34 (m, 3 H), 1,84 - 1,96 (m, 1 H), 1,63 - 1,83 (m, 1 H), 1,52 - 1,63 (m, 2 H), 1,50 (s, 3 H), 1,14 (d, 3 H), 1,13 (d, 3 H), 0,94 (s, 3 H)

[0097]. LC-MS (ESI POS): 604,10 MH+

[0098]. [α]D25 = + 58,3 (c 0,2; MeOH).

[0099]. Os compostos listados na Tabela foram preparados como previamente descrito para o Composto 1, por acilação do Intermediário 2 com cloretos de acila adequados:

Exemplo 2 Intermediário 2 Composto 15 Preparo de 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro- fenil)-4b,12-difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo- 2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-tetradecahidro-7-oxa-8-aza- pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido ciclopentanocarboxílico (Composto 15)

[00100]. Ácido ciclopentanocarboxílico (137 mg, 1,2 mmol, 1,2 eq) foi dissolvido em DMF (5 ml), hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (162 mg, 1,2 mmol, 1,2 eq) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada por 20 minutos. O Intermediário 2 (534 mg, 1 mmol), 4-(dimetilamino)piridina (305 mg, 2,5 mmol, 2,5 eq) e EDC*HCl (230 mg, 1,2 mmol, 1,2 eq) foram adicionados nessa ordem e a mistura de reação foi agitada a RT durante a noite. A conversão foi monitorada por análise TLC (Hex/EtOAc 7,6). A reação foi interrompida com HCl 0,6N e o produto extraído duas vezes com EtOAc. As fases orgânicas coletadas foram lavadas com solução saturada de NaHCO3, salmoura e secas com Na2SO4 anidro. O produto bruto foi purificado pelo tratamento com NaOH 1N (10 ml), piridina (usada para transferir o ácido ciclopentanocarboxílico na camada aquosa, 2 ml) e EtOAc (30 ml). A camada orgânica foi lavada duas vezes com água e filtrada em uma camada de sílica. O Composto 15 foi obtido em forma de sólido que foi seco sob vácuo a 50 °C por 2 horas (300 mg, 47,6% de rendimento).

[00101]. LC-MS (ESI POS): 630,10 MH+

[00102]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,34 (d, J=8,82 Hz, 2 H), 7,19 - 7,28 (m, 1 H), 7,04 (d, J=8,82 Hz, 2 H), 6,18 - 6,37 (m, 1 H), 5,97 - 6,13 (m, 1 H), 5,46 - 5,75 (m, 2 H), 4,78 - 5,17 (m, 2 H), 4,06 - 4,31 (m, 2 H), 3,42 - 3,55 (m, 1 H), 2,78 - 2,93 (m, 1 H), 2,54 - 2,74 (m, 2 H), 2,09 (m, 3 H), 1,49 (m, 15 H), 0,93 (s, 3 H).

[00103]. Os compostos listados na Tabela 2 foram preparados como previamente descrito para o Composto 15, partindo do ácido carboxílico correspondente:

Exemplo 3

Intermediário 2 Composto 18 Preparo de 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro- fenil)-4b,12-difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo- 2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-tetradecahidro-7-oxa-8-aza- pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster de isobutil metil carbonato (Composto 18)

[00104]. Ao Intermediário 2 (350 mg, 0,66 mmol) em THF (3 ml), adicionou-se CDI (127 mg, 0,79 mmol, 1,2 eq) em porções a RT. A mistura de reação foi agitada 1 hora: a conversão foi detectada por análise de TLC (EtOAc 100%). Após ter-lhe sido adicionado álcool isobutílico (1,0 ml, 10 mmol) a 0 °C, a mistura de reação foi agitada 1 hora a RT. Traços do produto desejado foram observados. A mistura de reação foi depois aquecida para 50 °C por quatro horas: a conversão aumenta. Após 12 horas a 50 °C, a conversão completa foi detectada por análise de TLC (hexano/EtOAc 3/7). O solvente foi evaporado sob vácuo e o produto bruto tratado com EtOAc/H2O. As camadas orgânicas coletadas foram secas com Na2SO4 anidro e o produto bruto foi purificado em uma camada de sílica para fornecer o Composto 18 (240 mg, rendimento de 58%).

[00105]. LC-MS (ESI POS): 634,2 LC-MS

[00106]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,34 (d, J=8,82 Hz, 2 H), 7,20 - 7,30 (m, 1 H), 7,04 (d, J=8,82 Hz, 2 H), 6,21 - 6,37 (m, 1 H), 6,00 - 6,12 (m, 1 H), 5,47 - 5,72 (m, 2 H), 4,83 - 5,17 (m, 2 H), 4,10 - 4,29 (m, 2 H), 3,91 (dd, J=6,62; 0,88 Hz, 2 H), 3,43 - 3,60 (m, 1 H), 2,55 - 2,74 (m, 2 H), 2,04 - 2,29 (m, 3 H), 1,81 - 1,99 (m, 2 H), 1,64 - 1,76 (m, 1 H), 1,49 (m, 5 H), 0,81 - 0,96 (m, 9 H).

[00107]. O Composto 19 foi preparado como descrito previamente para o Composto 18, partindo de álcool hexílico:

Exemplo 4

Intermediário 2 Composto 20 Preparo de 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro- fenil)-4b,12-difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo- 2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-tetradecahidro-7-oxa-8-aza- pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster de dimetilcarbamato (Composto 20)

[00108]. Ao Intermediário 2 (310 mg, 0,58 mmol) em CH2Cl2 (3 ml), adicionou-se CDI (111 mg, 0,70 mmol, 1,2 eq) em porções a RT. A mistura foi agitada por 1 hora: a conversão completa foi detectada por análise de TLC (EtOAc 100%). CH2Cl2 foi evaporado sob vácuo e o produto bruto foi dissolvido em THF (2 ml) e, após ter-lhe sido adicionado uma solução de dimetilamina 2 M em THF a 0 °C (1,15 ml, 2,32 mmol), foi agitado 1 hora a RT. A conversão completa foi detectada por análise de TLC (hexano/EtOAc 2/8). O solvente foi evaporado sob vácuo e o produto bruto tratado com CH2Cl2/H2O. As camadas orgânicas coletadas foram secas com Na2SO4 anidro, o produto bruto foi purificado em uma camada de sílica, depois o sólido bege obtido foi triturado em uma mistura de hexano/acetato de etila (8/2, 8 ml) por uma noite. O sólido filtrado foi seco sob vácuo a 50 °C até que apresentasse peso constante, produzindo o Composto 20 (200 mg, rendimento de 57%).

[00109]. LC-MS (ESI POS): 605,2 LC-MS

[00110]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,31 - 7,44 (m, 2 H), 7,21 - 7,30 (m, 1 H), 6,99 - 7,07 (m, 2 H), 6,20 - 6,43 (m, 1 H), 6,01 - 6,12 (m, 1 H), 5,47 - 5,76 (m, 2 H), 4,69 - 5,10 (m, 2 H), 4,08 - 4,25 (m, 2 H), 3,43 - 3,59 (m, 1 H), 2,80 - 3,00 (m, 6 H), 2,55 - 2,72 (m, 2 H), 2,03 - 2,28 (m, 3 H), 1,83 - 1,96 (m, 1 H), 1,65-1,81 (m, 1 H), 1,49 (m, 5 H), 0,93 (s, 3 H).

[00111]. O Composto 21 foi preparado como descrito previamente para o Composto 20, partindo de metilamina:

Exemplo 5

Preparo de 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro- fenil)-4b,12-difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo- 2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-tetradecahidro-7-oxa-8-aza- pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido piperizina-1- carboxílico (Composto 22)

[00112]. Ao Intermediário 2 (500 mg, 0,94 mmol) em THF (3,5 ml), adicionou-se CDI (180 mg, 1,12 mmol, 1,2 eq) em porções a RT. A mistura de reação foi agitada 1 hora: a conversão completa no intermediário ativado foi detectada por análise de TLC (Hexano:EtOAc 3/7). A mistura de reação foi resfriada para 10 °C e, depois de ter-lhe sido adicionado piperazina-1- carboxilato de terc-butila (174 mg, 0,94 mmol, 1,0 eq), foi agitada a RT durante a noite. A conversão foi detectada por análise de TLC (hexano/EtOAc 3/7). O solvente foi evaporado sob vácuo e o produto bruto tratado com EtOAc/H2O. As camadas orgânicas coletadas foram secas com Na2SO4 anidro e o composto Intermediário 3 bruto foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional (260 mg, rendimento de 37%).

[00113]. Uma solução do Intermediário 3 (260 mg, 0,35 mmol) em CH2CI2 (5 ml) foi resfriada para 0 °C, e trifluorometanossulfonato de trimetil- silila (63 μl, 1,0 eq) foi-lhe adicionado gota a gota. A mistura de reação foi agitada 1 hora a 0 °C e depois interrompida com água desmineralizada. A camada orgânica foi lavada com solução saturada de NaHCO3 e depois com água desmineralizada, seca com Na2SO4 anidro produzindo um composto bruto que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluindo com EtOAc/TEA 99:1) e seca sob vácuo até que apresentasse peso constante para fornecer o Composto 22 (190 mg, 84% de rendimento).

[00114]. LC-MS (ESI POS): 646,4 MH+

[00115]. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,33 (d, J=8,82 Hz, 3 H), 7,03 (d, J=8,82 Hz, 2 H), 6,19 - 6,39 (m, 1 H), 6,07 (s, 1 H), 5,46 - 5,76 (m, 2 H), 4,76 - 5,14 (m, 2 H), 4,05 - 4,28 (m, 2 H), 3,41 - 3,60 (m, 1 H), 3,18 -3,30 (m, 5 H), 2,66 (m, 6 H), 1,95 - 2,28 (m, 3 H), 1,81 - 1,95 (m, 1 H), 1,57 - 1,79 (m, 1 H), 1,48 (m, 5 H), 0,93 (s, 3 H).

[00116]. Os compostos listados na Tabela a seguir foram preparados como descrito previamente para o Composto 22, partindo do intermediário correspondente:

Legenda NMR s = singleto d = dupleto t = tripleto q = quarteto dd = dupleto de dupletos m = multipleto br = largo ESI-POS = ionização por electrospray em modo positivo LC-MS = cromatografia líquida-espectrometria de massa Petição 870210044031, de 14/05/2021, pág. 67/184

ATIVIDADE FARMACOLÓGICA DOS COMPOSTOS DA INVENÇÃO Estudos in vivo Exemplo 6 Neutrofilia pulmonar induzida por lipopolissacarídeos (LPS)

[00117]. A potência e duração de ação dos compostos descritos na presente invenção foram avaliadas in vivo em um modelo de inflamação pulmonar aguda seguindo um método descrito em Am. J. Respir. Crit. Care Med. Vol. 162, pág. 1455-1461, 2000, com modificações mínimas.

[00118]. Os testes foram realizados em ratos Sprague-Dawley machos (200 g).

[00119]. A instilação intratraqueal de LPS resultou em um aumento estatisticamente significante na concentração de neutrófilos no BALF [lavado broncoalveolar], uma característica marcante de inflamação pulmonar aguda em andamento.

[00120]. Para o teste de avaliação da dose de glicocorticoide que produz 75% de inibição (dose ED75), os compostos (0,01-1 μmoles/Kg de peso corporal) foram administrados por via intratraqueal em suspensão (Tween 80 0,2% em NaCl 0,9%) 1 hora antes do desafio com LPS.

[00121]. Uma curva de dose-resposta do efeito inibitório dos compostos em teste sobre neutrofilia induzida por LPS foi construída, e a dose ED50 de glicocorticoide foi considerada como uma medida de potência nesse bioensaio. Os valores da dose ED50 para alguns compostos representativos da presente invenção estavam compreendidos entre 0,05 e 0,16 μmoles/Kg de peso corporal.

[00122]. Em uma segunda série de experimentos, que visavam avaliar a duração de ação, os compostos foram administrados em suspensão por via intratraqueal, na dose ED75, administrada 24 horas antes do desafio com LPS. Os compostos mais interessantes eram ativos (percentual de inibição acima de 50%) quando administrados 24 horas antes do desafio com LPS. Estudos in vitro

Exemplo 7 Protocolo do ensaio de translocação do receptor de glicocorticoides (GR)

[00123]. Uma aferição quantitativa de translocação nuclear de GR dos compostos da presente invenção foi realizada de acordo com ASSAY Drug Devel. Technol., 4(3), 263-272, 2006, por intermédio de um novo ensaio celular de translocação de GR no formato de Complementação de Fragmento Enzimático (EFC) desenvolvido pela DiscoveRx (Fremont, CA).

[00124]. Na ausência do glicocorticoide, o receptor de glicocorticoides (GR) está presente dentro do citosol em complexo com uma variedade de proteínas incluindo as proteínas de choque térmico.

[00125]. Quando um glicocorticoide difunde-se através da membrana celular para o citoplasma e se liga ao receptor de glicocorticoides (GR), há, como resultado, liberação das proteínas de choque térmico e a translocação do receptor ativado para o núcleo onde modula a transcrição gênica.

[00126]. O ensaio DiscoveRx faz uso de EFC da b-galactosidase (b- gal) como indicador da translocação de GR em células CHO-K1 biossensoras sintéticas. O fragmento aceitador de enzima (EA) de b-gal está presente no núcleo, conforme concebido por meio de um conjunto de adições e modificações de sequências de propriedade exclusiva. O pequeno fragmento peptídico doador de enzima (ED) de b-gal foi fundido diretamente ao terminal C de GR, e localizava-se no citoplasma na ausência de sinalização do receptor. Quando da ligação a um ligante de GR, o complexo transloca-se para o núcleo, onde a atividade da enzima intacta foi restaurada por complementação e a atividade de b-gal foi detectada.

[00127]. Células CHO-K1 com expressão estável do fragmento aceitador de enzima (EA)-NLS de b-gal e do fragmento doador de enzima (ED)-GR foram mantidas em meio F12 (Invitrogen, Carlsbad, CA) a 37 °C em uma atmosfera umidificada contendo CO2 5% e ar 95%. O meio continha FBS 10%, L-glutamina 2 mM, penicilina 50 U/ml, estreptomicina 50 μg/ml, higromicina 250 μg/ml e G418 500 μg/ml (Invitrogen).

[00128]. A translocação de GR foi aferida utilizando o kit de detecção PathHunter contendo reagente de permeabilização de membranas celulares e substrato de beta-gal (DiscoveRx, Fremont, CA). Todos os compostos foram rastreados empregando concentrações variadas na faixa de 10-11 a 10-6 M. O ensaio foi realizado em placas de 48 poços (105 células/poço). A incubação com os compostos rastreados foi realizada a 37 °C por 2 horas. A detecção foi efetuada adicionando o tampão de detecção do kit fornecido pela DiscoveRx e incubação a RT por uma hora. A luminescência foi detectada usando um leitor de microplaca CENTRO LB 960 (Berthold Technologies).

[00129]. A análise estatística e as determinações de EC50s foram realizadas utilizando o programa Prism versão 3.0 da Graphpad Software (San Diego, CA).

[00130]. Alguns compostos representativos da invenção analisados com a translocação de GR exibiram uma EC50 incluída entre 3,2 nM e 207 nM.

Exemplo 8 Inibição de produção de óxido nítrico induzida por LPS em macrófagos RAW 264-7

[00131]. Um modelo in vitro com base na linhagem celular murina de macrófagos RAW 264.7 foi usado para testar os efeitos anti-inflamatórios dos corticosteroides da presente invenção.

[00132]. Durante o processo inflamatório, grandes quantidades de óxido nítrico (NO) foram geradas pelas isoformas induzíveis de NO sintase (iNOS). Lipopolissacarídeo (LPS) bacteriano foi comumente empregado em contextos experimentais para estimular respostas inflamatórias em macrófagos.

[00133]. As células foram cultivadas em meio de cultura (RPMI suplementado com soro fetal bovino 10% inativado pelo calor, glutamina 2 mM, penicilina 100 U/ml e estreptomicina 0,1 mg/ml) sem fenol vermelho. A estimulação celular foi suscitada incubando as células por 24 horas com LPS para concentrações finais variando a partir de 100 ng/ml. Os tratamentos com os compostos da invenção foram realizados adicionando tais compostos em DMSO como veículo (concentração final: 0,1%) até as concentrações finais desejadas 15 minutos antes da exposição ao LPS. Como índice da produção de óxido nítrico, a concentração de nitrito foi medida nos meios condicionados usando a reação colorimétrica de Griess (J. Neuroimmunol., 150, 29-36, 2004).

[00134]. A análise estatística e as determinações de IC50s foram realizadas utilizando o programa Prism versão 3.0 da Graphpad Software (San Diego, CA). Os valores de IC50 no teste de alguns compostos representativos da invenção estavam incluídos entre 12,2 e 151 nM.

Exemplo 9 Protocolo do ensaio de liberação de interleucina-8 (IL-8)

[00135]. A fim de avaliar os efeitos anti-inflamatórios de novos corticosteroides inalados, avaliou-se uma seleção desses compostos na inibição da liberação de IL-8 induzida por TNFα por células da musculatura lisa de vias aéreas humanas (ASMCs).

[00136]. hASMCs expostas a uma variedade de mediadores inflamatórios (Fator de Necrose Tumoral (TNF)-α ou IL-13) podem sofrer alterações fenotípicas e secretar quimiocinas e citocinas, que podem participar ou até mesmo perpetuar alterações inflamatórias via ativação e recrutamento de células inflamatórias (Damera et al., 2009; Howarth et al., 2004; Chung, 2000; Koyama et al., 2000).

[00137]. As evidências atuais sugerem que a secreção de quimiocinas e citocinas induzida por mediadores inflamatórios é inibida por glicocorticoides em hASMCs e fibroblastos pulmonares (John et al., 1998; Spoelstra et al., 2002; Tobler et al., 1992). Os esteroides podem inibir a secreção induzida por citocinas de quimiocinas por uma interação inibitória direta entre receptores de glicocorticoides ativados e fatores de transcrição ativados, tais como fator nuclear-kappa B e proteína ativadora-1 que modularam a expressão gênica inflamatória. Além disso, os glicocorticoides podem regular a expressão de quimiocinas ao reduzirem a estabilidade de mRNA por intermédio da indução rápida do inibidor endógeno potente de p38 MAP Quinase, MKP-1, que é um dos genes transativados por esteroides (King et al., 2009).

[00138]. Células primárias da musculatura lisa de via aérea humana (ASMCs) foram adquiridas da LONZA (Basileia, CH) e cultivadas em meio DMEM suplementado com Soro Bovino Fetal 10%, glutamina 2 mM, penicilina 100 U e estreptomicina 100 μg/ml (Invitrogen), em atmosfera de ar 95% e CO2 5% a 37 °C.

[00139]. ASMCs foram semeadas em 0,5 ml de DMEM contendo FBS 10% em placas de cultura de tecido com 48 poços na densidade de 104 células/poço e cresceram por 24 horas a 37 °C com CO2 5%. Em seguida, as células foram privadas de soro por 18 horas antes do tratamento com diferentes concentrações de LAGRA (10-12M-10-6M, concentração final de DMSO: 0,1%) durante 60 minutos antes da estimulação com TNFα (0,1 ng/ml como concentração final para ASMCs). Depois de 18 horas de incubação em DMEM livre de soro, a liberação de IL8 no sobrenadante foi analisada utilizando o kit ELISA (Invitrogen). As potências dos compostos foram expressas em concentração capaz de inibir a metade (50%) da liberação máxima de IL8 [IC50] na curva de dose-resposta obtida após a estimulação com TNFα.

[00140]. Todos os valores declarados são em média ± erro padrão da média (SEM). As potências dos compostos (expressas como a metade (50%) da concentração inibitória máxima [IC50]) foram derivadas a partir de uma análise do ajuste não linear de curva iterativa de quatro parâmetros utilizando o software Prism (Graph Pad Software, San Diego, CA). A análise estatística, o desenho e a análise de curvas sigmoides foram realizados utilizando o software Prism (Graph Pad Software, San Diego, CA).

Claims

1. COMPOSTO de fórmula geral (I):

caracterizado por: R1 ser selecionado a partir do grupo constituído por (C1-C16)alquila linear ou ramificado, (C2-C18)alquenila linear ou ramificado, -OR6, aril(C1-C16)alquila, - SR6, -N(R4)(R5), (C3-C8)cicloalquila e (C3-C8)heterocicloalquila, em que opcionalmente um ou mais átomos de hidrogênio são substituídos por (C1- C6)alquila, e em que R4 e R5 são independentemente selecionados a partir de H ou (C1-C6)alquila linear ou ramificado e R6 é (C1-C16)alquila linear ou ramificado; R2 ser arila opcionalmente substituído com um ou mais átomos de halogênio; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que arila é um sistema de anel monocíclico com 6 átomos no anel.

2. COMPOSTO de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela estereoquímica de carbonos estereogênicos ser conforme retratada na Fórmula geral (I’):

3. COMPOSTO de acordo com uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pelo R1 ser selecionado a partir do grupo constituído por metila, isopropila, etila, quindecila, butila, hexila, heptadecenila, metoxi, metilsulfanila, isobutila, isopentila, terc-butila, metilamino, dimetilamino, fenila, ciclopropila, ciclopentila, metilpropanoxi, benzila, piridila, piperazinila, piperidinila, pirrolidinila, tiazolidinila e furila; e R2 é p-clorofenol; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

4. COMPOSTO de acordo com uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por ser: 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido isobutírico; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido propiônico; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido hexadecanoico; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido octadec-9-enoico; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido pentanoico; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido acético; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido benzoico; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster de metil carbonato; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster de S-metil carbonotioato; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido 3-metilbutanoico; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido piválico; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido 2-fenilacético; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido furan-2-carboxílico; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido ciclopentano-carboxílico; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido ciclopropano-carboxílico; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido isonicotínico; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster de isobutil metil carbonato; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster de hexil carbonato; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil carbamato de dimetila; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil carbamato de metila; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido piperizina-1-carboxílico; 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)-4b,12- difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo-2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12- tetradecahidro-7-oxa-8-aza-pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster do ácido tiazolidina-4-carboxílico; Prolina, 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)-8-(4-cloro-fenil)- 4b,12-difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo- 2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-tetradecahidro-7-oxa-8-aza- pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster; Ácido piperidina-4-carboxílico, 2-[(4aS,4bR,5S,6aS,6bR,9aS,10aS,10bS,12S)- 8-(4-cloro-fenil)-4b,12-difluoro-5-hidroxi-4a,6a-dimetil-2-oxo- 2,4a,4b,5,6,6a,8,9,9a,10,10a,10b,11,12-tetradecahidro-7-oxa-8-aza- pentaleno[2,1-a]fenantren-6b-il]-2-oxo-etil éster; ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

5. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA caracterizada por compreender um composto conforme definido em uma das reivindicações 1 a 4, juntamente com um ou mais veículos e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

6. USO DE UM COMPOSTO conforme definido por uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por ser na preparação de um medicamento.

7. USO, de acordo com uma das reivindicações 6, caracterizado pelo medicamento ser para a prevenção e/ou no tratamento de uma doença respiratória.

8. USO, de acordo com uma das reivindicações 6 ou 7, caracterizado pelo medicamento ser para a prevenção e/ou no tratamento de asma e doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC).

9. DISPOSITIVO caracterizado por compreender a composição farmacêutica conforme defina pela reivindicação 5 e que pode ser um inalador de pó seco de dose única ou de múltiplas, um inalador dosimétrico ou um nebulizador que cria uma névoa suave.