BR112014025702B1 - Compostos de tiofeno fotodinâmicos a base de metal e seus usos - Google Patents

Compostos de tiofeno fotodinâmicos a base de metal e seus usos Download PDF

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Abstract

Compostos de tiofeno fotodinâmicos a base de metal e seus usos A presente invenção se refere à composições que incluem compostos de tiofeno fotodinâmicos baseados em metal sintonizáveis úteis como agentes terapêuticos e como agentes de diagnóstico in vivo para tratar ou prevenir doenças que envolvem etiologia celular indesejada e/ou hiperproliferativa incluindo câncer e doenças associadas a células indesejadas e/ou hiperproliferativas. As composições também são úteis para tratar doenças infecciosas e para desinfecção patogênica e/ou esterilização.

Description

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO 1. CAMPO DA INVENÇÃO
[0001] Esta invenção se refere a compostos fotodinâmicos úteis como agentes terapêuticos e como agentes de diagnóstico in vivo. Em particular, a invenção fornece compostos de tiofeno fotodinâmicos a base de metal sintonizáveis que podem ser ativados para dividir DNA com a irradiação de luz visível através de fotoprocesso Tipo 1 ou Tipo 2.
2. DESCRIÇÃO DA ARTE RELACIONADA
[0002] A terapia fotodinâmica (PDT) é atualmente uma área ativa de pesquisa para o tratamento de doenças associadas a células indesejadas e/ou hiperproliferativas como o câncer e lesões não-malignas. PDT também encontrou uso em outros contextos, incluindo mas não limitado ao tratamento da acne, psoríase, transtornos não malignos proliferativos, úlceras e ferimentos. O desenvolvimento de novos compostos fotodinâmicos (PDCs) (ou fotosensibilizadores (PSs)) para terapia fotodinâmica (PDT) tem se concentrado cada vez mais em complexos metalosupramoleculares derivados de metais como o rutênio e o ródio. A investigação existente de novos PSs para linhagens de PDT a partir das limitações associadas a porfirinas a base orgânica tradicional como PHOTOFRIN, que devem ser ativadas com ondas de luz relativamente curtas e não funcionam em ambientes hipóxicos. Avanços significativos tem sido feitos na direção da superação dessas limitações com a introdução de complexos de metais misturados que possuem estados excitados de 3MMCT de baixa altitude (transferência de carga metal-a-metal). Até hoje, entretanto, existem relatos limitados de compostos fotodinâmicos, particularmente aqueles com um design mononuclear ou dinuclear, que são capazes de fornecer terapia fotodinâmica para o tratamento de doenças associadas a células indesejadas e/ou hiperproliferativas como o câncer e lesões não-malignas, e/ou capazes de tratar outros transtornos incluindo mas não limitado a doenças infecciosas e infecções patogênicas bem como esterilização.
[0003] Existe uma antiga necessidade de novos compostos fotodinâmicos (PDCs) que sejam úteis como fotosensibilizadores para PDT que sejam ao mesmo tempo modificadores de doença e eficazes no tratamento de pacientes com doenças causadas por células indesejadas e/ou hiperproliferativas, por exemplo, o câncer. Existe ainda uma antiga necessidade de novos PDCs que sejam úteis como agentes de diagnóstico in vivo. Além disso, é desejável fornecer novos PDCs tendo: (1) maior fotoestabilidade, (2) maior absorção no comprimento de onda de ativação, (3) absorção de luz vermelha, e preferivelmente NIR, (4) atividade máxima independentemente de níveis de oxigênio (possivelmente usando um mecanismo para troca entre a fotosensibilização Tipo 1 e a Tipo 2), e (5) direcionamento de DNA nuclear intracelular.
[0004] A presente invenção se dirige à necessidade de se desenvolver novos PDCs que sejam úteis como fotosensibilizadores para PDT que sejam ao mesmo tempo modificadores de doença e eficazes no tratamento de um ou mais dos transtornos discutidos acima, tais como o tratamento de pacientes com doenças causadas por células indesejadas e/ou hiperproliferativas, por exemplo, o câncer. A presente invenção também se dirige à antiga necessidade de novos PDCs que sejam úteis como agentes de diagnóstico in vivo.
[0005] Todas as referências aqui citadas estão aqui incorporadas a título de referência em sua totalidade.
BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0006] A presente invenção é direcionada a novos compostos de fórmula (I),
Figure img0001
Incluindo hidratos, solvatos, sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e complexos dos mesmos, nos quais: M é selecionado do grupo consistindo de manganês, molibdênio, rênio, ferro, rutênio, ósmio, cobalto, ródio, irídio, níquel, platina, e cobre; X é selecionado do grupo consistindo de Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, e SO4-2; n = 0, 1, 2, 3, 4, or 5; y = 1, 2, or 3; z = 0, 1, or 2; Lig a cada ocorrência é selecionado do grupo consistindo de
Figure img0002
R1 é selecionado do grupo consistindo de
Figure img0003
Figure img0004
Figure img0005
u é um inteiro; R2a, R2b, R2c, R2d, R2e, e R2f a cada ocorrência são cada um independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C3-7 cicloalquil opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcoxi opcionalmente substituído, C02R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, aril opcionalmente substituído, ariloxi opcionalmente substituído, heteroaril opcionalmente substituído, e heterociclo opcionalmente substituído; R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h R3i, R3j, R3k, R3l, e R3m a cada ocorrência são cada um independentemente selecionado do grupo consistindo de C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcoxi opcionalmente substituído, e C02R8; R4a, R4b, and R4c a cada ocorrência são cada um independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C1-6 cicloalquil opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcoxi opcionalmente substituído, C02R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, aril opcionalmente substituído, ariloxi opcionalmente substituído, heteroaril opcionalmente substituído, e heterociclo opcionalmente substituído; R4a and R4b a cada ocorrência em um anel de tiofeno são tomados juntamente com o átomo ao qual estão ligados para formar um anel opcionalmente substituído tendo a partir de 6 átomos de anel contendo 2 átomos de oxigênio; R5 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e C1-6 alquil opcionalmente substituído; R6 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e C1-6 alquil opcionalmente substituído; R7 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e C1-6 alquil opcionalmente substituído; R8 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e C1-6 alquil opcionalmente substituído;
[0007] Compostos tendo as seguintes estruturas são excluídos de certas representações dos compostos de fórmula (I):
Figure img0006
[0008] Os compostos da presente invenção incluem compostos tendo fórmula (II),
Figure img0007
incluindo hidratos, solvatos, sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e complexos dos mesmos, nos quais: M é selecionado do grupo consistindo de manganês, molibdênio, rênio, ferro, rutênio, ósmio, cobalto, ródio, irídio, níquel, platina, e cobre; X é selecionado do grupo consistindo de Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, e SO4-2; n = 0, 1, 2, or 3; Lig a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de
Figure img0008
Figure img0009
R1 é selecionado do grupo consistindo de
Figure img0010
Figure img0011
Figure img0012
u é um inteiro; R2a, R2b, R2c, R2d, R2e, e R2f a cada ocorrência são cada um independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C3-7 cicloalquil opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcoxi opcionalmente substituído, C02R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, aril opcionalmente substituído, ariloxi opcionalmente substituído, heteroaril opcionalmente substituído, e heterociclo opcionalmente substituído; R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h R3i, R3j, R3k, R3l, e R3m a cada ocorrência são cada um independentemente selecionado do grupo consistindo de C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcoxi opcionalmente substituído, e C02R8; R4a, R4b, e R4c a cada ocorrência são cada um independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C1-6 cicloalquil opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcoxi opcionalmente substituído, C02R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, aril opcionalmente substituído, ariloxi opcionalmente substituído, heteroaril opcionalmente substituído, e heterociclo opcionalmente substituído; R4a e R4b a cada ocorrência em um anel de tiofeno são tomados juntamente com o átomo ao qual estão ligados para formar um anel opcionalmente substituído tendo a partir de 6 átomos de anel contendo 2 átomos de oxigênio; R5 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e C1-6 alquil opcionalmente substituído; R6 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e C1-6 alquil opcionalmente substituído; R7 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e C1-6 alquil opcionalmente substituído; R8 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e C1-6 alquil opcionalmente substituído;
[0009] Compostos tendo as seguintes estruturas são excluídos de certas representações dos compostos de fórmula (II):
Figure img0013
[0010] Os compostos da presente invenção incluem compostos tendo fórmula (III):
Figure img0014
incluindo hidratos, solvatos, sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e complexos dos mesmos onde M, Lig, X e os grupos R são conforme definidos abaixo, e g é 0, 1, 2, 3, 4, ou 5.
[0011] Os compostos da presente invenção incluem compostos tendo fórmula (IV):
Figure img0015
incluindo hidratos, solvatos, sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e complexos dos mesmos onde M, X e os grupos R são conforme definidos abaixo, e g é 0, 1, 2, 3, 4, ou 5.
[0012] A presente invenção é também direcionada a novos compostos de fórmula (V):
Figure img0016
Incluindo hidratos, solvatos, sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e complexos dos mesmos, onde: Lig a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de
Figure img0017
Figure img0018
M a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de manganês, molibdênio, rênio, ferro, rutênio, ósmio, cobalto, ródio, irídio, níquel, platina, e cobre; X e os grupos R são conforme definido abaixo; t é um inteiro, e é preferivelmente 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; q = 0, 1, 2, 3, 4 ou 5;
[0013] O composto tendo a seguinte estrutura é excluído de certas representações dos compostos de fórmula (V):
Figure img0019
[0014] A presente invenção é também direcionada a novos métodos de uso dos compostos das estruturas
Figure img0020
Figure img0021
[0015] A presente invenção se refere ainda a composições compreendendo uma quantidade eficaz de um ou mais compostos de acordo com a presente invenção e um excipiente.
[0016] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos da invenção como um agente de ligação de DNA.
[0017] A presente invenção também se refere a um método para usar compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção e um excipiente como um agente de ligação de DNA.
[0018] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos da invenção como um agente de fotoclivagem.
[0019] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção e um excipiente como um agente de fotoclivagem de DNA.
[0020] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos da invenção como um agente de condensação de DNA.
[0021] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção e um excipiente como agente de condensação de DNA.
[0022] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos da invenção como um agente que produz o efeito de interruptor de luz de DNA.
[0023] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção e um excipiente como um agente que produz o efeito de interruptor de luz de DNA.
[0024] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos da invenção como um fotosensibilizador com 100% de eficiência para a produção de oxigênio singlete.
[0025] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção e um excipiente como um fotosensibilizador com 100% de eficiência para a produção de oxigênio singlete.
[0026] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos da invenção como um fotosensibilizador que pode funcionar em ambos os fotoprocessos Tipo I e Tipo II.
[0027] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção e um excipiente como um fotosensibilizador que pode funcionar em ambos os fotoprocessos Tipo I e Tipo II.
[0028] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos da invenção para destruir células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas.
[0029] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos da invenção para destruir células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas, usando luz como um ativador.
[0030] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção e um excipiente para destruir células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas.
[0031] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos da invenção para induzir a apoptose em células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas.
[0032] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção e um excipiente para induzir a apoptose em células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas.
[0033] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos da invenção para induzir a necrose em células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas.
[0034] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção e um excipiente para induzir a necrose em células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas.
[0035] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos da invenção para conferir a reticulação de DNA em células, incluindo células hiperproliferativas.
[0036] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção e um excipiente para conferir a reticulação de DNA em células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas.
[0037] A presente invenção também se refere a um método para tratar ou prevenir doenças que envolvem a etiologia de células indesejadas e/ou hiperproliferativas, incluindo, por exemplo, câncer, o dito método compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um composto ou composição de acordo com a presente invenção.
[0038] A presente invenção se refere ainda a um método para tratar ou prevenir doenças que envolvem a etiologia de células indesejadas e/ou hiperproliferativas, incluindo, por exemplo, câncer, o dito método compreendendo administrar a um paciente uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um ou mais compostos de acordo com a presente invenção e um excipiente.
[0039] A presente invenção também se refere a um método para tratar ou prevenir doenças que envolvem células indesejadas e/ou hiperproliferativas em sua etiologia, incluindo, por exemplo, câncer, o dito método compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um composto ou composição de acordo com a presente invenção e um agente redutor intracelular como o glutatião.
[0040] A presente invenção também se refere a um método para tratar ou prevenir doenças que envolvem células indesejadas e/ou hiperproliferativas em sua etiologia, incluindo, por exemplo, câncer, o dito método compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um composto ou composição de acordo com a presente invenção e um excipiente e um agente redutor intracelular como o glutatião.
[0041] A presente invenção também se refere a um método para tratar ou prevenir doenças que envolvem células indesejadas e/ou hiperproliferativas em sua etiologia, incluindo, por exemplo, câncer, o dito método compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um composto ou composição de acordo com a presente invenção e um agente oxidante intracelular como o oxigênio.
[0042] A presente invenção também se refere a um método para tratar ou prevenir doenças que envolvem células indesejadas e/ou hiperproliferativas em sua etiologia, incluindo, por exemplo, câncer, o dito método compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um composto ou composição de acordo com a presente invenção e um excipiente e um agente oxidante intracelular como o oxigênio.
[0043] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos da invenção como um agente medicinal anti- patogênico e desinfetante, ex., para matar micróbios em ambientes normóxicos e hipóxicos.
[0044] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos fotodinâmicos da invenção como um agente de diagnóstico in vivo via luminiscência intracelular.
[0045] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos da invenção para destruir patógenos.
[0046] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos da invenção e um excipiente para destruir patógenos.
[0047] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos da invenção para destruir patógenos usando luz como ativador.
[0048] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos da invenção para destruir células indesejadas, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas e células microbiais.
[0049] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos da invenção para destruir vírus.
[0050] A presente invenção também se refere a um método para usar os compostos da invenção para destruir células indesejadas, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas e células microbiais, usando luz como ativador.
[0051] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos da invenção para destruir vírus usando luz como ativador.
[0052] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos de acordo com a presente invenção e um excipiente para destruir células indesejadas, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas e células microbiais.
[0053] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos de acordo com a presente invenção e um excipiente para destruir vírus.
[0054] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos da invenção para destruir células, incluindo bactérias fungos e protozoários.
[0055] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos da invenção para destruir células, incluindo bactérias fungos e protozoários, usando luz como ativador.
[0056] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos de acordo com a presente invenção e um excipiente para destruir células, incluindo bactérias fungos e protozoários.
[0057] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos da invenção para induzir a apoptose em células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas.
[0058] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos de acordo com a presente invenção e um excipiente para induzir a apoptose em células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas.
[0059] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos da invenção para induzir a senescência em células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas.
[0060] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos de acordo com a presente invenção e um excipiente para induzir a senescência em células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas.
[0061] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos da invenção para conferir reticulação de DNA em células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas.
[0062] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos de acordo com a presente invenção e um excipiente para conferir reticulação de DNA em células, incluindo células indesejadas e/ou hiperproliferativas.
[0063] A presente invenção também se refere a um método para tratar ou prevenir doenças que envolvem a etiologia de células indesejadas e/ou hiperproliferativas, incluindo, por exemplo, câncer, o dito método compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um composto ou composição de acordo com a presente invenção.
[0064] A presente invenção também se refere a um método para tratar ou prevenir doenças que envolvem células indesejadas e/ou hiperproliferativas em sua etiologia, incluindo, por exemplo, câncer, o dito método compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um ou mais compostos de acordo com a presente invenção e um excipiente.
[0065] A presente invenção também se refere a um método para tratar ou prevenir doenças que envolvem a etiologia de células indesejadas e/ou hiperproliferativas, incluindo, por exemplo, câncer, o dito método compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um composto ou composição de acordo com a presente invenção e um agente redutor intracelular como o glutatião.
[0066] A presente invenção também se refere a um método para tratar ou prevenir doenças que envolvem a etiologia de células indesejadas e/ou hiperproliferativas, incluindo, por exemplo, câncer, o dito método compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um composto ou composição de acordo com a presente invenção e um excipiente e um agente redutor intracelular como o glutatião.
[0067] A presente invenção também se refere a um método para tratar ou prevenir doenças que envolvem a etiologia de células indesejadas e/ou hiperproliferativas, incluindo, por exemplo, câncer, o dito método compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um composto ou composição de acordo com a presente invenção e um agente oxidante intracelular como o oxigênio.
[0068] A presente invenção também se refere a um método para tratar ou prevenir doenças que envolvem a etiologia de células indesejadas e/ou hiperproliferativas, incluindo, por exemplo, câncer, o dito método compreendendo administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um composto ou composição de acordo com a presente invenção e um excipiente e um agente oxidante intracelular como o oxigênio.
[0069] A presente invenção também se refere a um método usando os compostos da invenção como um agente de diagnóstico in vivo via luminiscência intracelular ou métodos colorimétricos.
[0070] A presente invenção também se refere a um método para preparar os compostos fotodinâmicos da presente invenção.
[0071] Esses e outros objetos, características e vantagens ficarão claros para os profissionais da área a partir da leitura da seguinte descrição detalhada das reivindicações anexas. Todas as percentagens, índices e proporções aqui são por peso, salvo indicação em contrário. Todas as temperaturas são em graus Celsius (°C) salvo indicação em contrário. Todos os documentos aqui citados são em parte relevante, incorporados aqui por referência; a citação de qualquer documento não deve ser considerada como uma admissão de que seja estado da arte em relação à presente invenção.
BREVE DESCRIÇÃO DE VÁRIAS VISÕES DOS DESENHOS
[0072] A invenção será descrita em conjunção com os seguintes desenhos nos quais numerais de referência semelhantes designam elementos semelhantes e onde:
[0073] A Figura 1 mostra um conjunto de compostos representativos da divulgação (compostos 1a, 2a, 10a, 10b, 3a, 3b, 14a e 14b).
[0074] A Figura 2 é um gráfico dos espectros de absorção de UV-Vis de 1a, 10a, e 14a em MeCN. Os perfis de absorção integrada para 1a, 10a, e 14a no limite visível (25,000-15,000 cm-1) são 5841, 8190 e 14,100, respectivamente.
[0075] Figura 3: Absorção de luz por PDCs 1a, 10a, 14a, e 16a dissolvido em 20 DM em água.
[0076] Figura 4: é um gráfico da emissão de 1O2 sensibilizada por PDCs 1a, 10a, e 14a em MeCN. Os rendimentos quantum de 1O2 para 1a, 10a, e 14a são 0.47, 0.74, e 1.0, respectivamente.
[0077] Figura 5: (a) Titulação de 10a (20 μM) com CT DNA (10 mM Tris^100 mM NaCl, pH 7.5). Inserção: isoterma de ligação em 372 nm. (b) Titulação de 10b (50 μM) com CT DNA (10 mM Tris^100 mM NaCl, pH 7.5). Inserção: isoterma de ligação em 380 nm.
[0078] Figura 6: células HL60 carregadas com 14a vistas por microscopia confocal de varredura a laser. Excitação do PDC a 458/488 nm produziu emissão vermelha que foi coletada através de um filtro LP510. Imagens foram coletadas por um microscópio confocal de varredura a laser (Zeiss LSM510 com sistema operacional ZEN) usando 40x/NA1.3, óleo ou 63x/NA1.4, objetivos a óleo. A excitação foi de 458/488nm de argon/kripton e sinais foram coletados através de um filtro LP510. (a) Emissão do PDC 14a, (b) Contrato de interferência diferencial (DIC), e (c) revestimento emissão/DIC.
[0079] Figura 7: Desnaturação térmica de DNA de timo de vitelo (50 μM, NP) em 5 mM Tris com 50 mM NaCl, pH 7.4) sozinho e na presença de 1a, 1b, 10a, e 10b (5 μM, [PDC]/[NP] = 0.1).
[0080] Figura 8: DNA efeito de acendimento de luz produzido por PDCs: (a) 1a, (b) 10a, e 14a.
[0081] Figura 9: Epi-luminiscência (EL) e campo de brilho (BF) imagens de células PDC-tratadas HL-60: a) controle sem tratamento, (b) 1a (100 μM), 5 min. escuro (c) 1a (100 μM), 40 hr. escuro, e (d) 1a (100 μM), 40 hr. pós- irradiação. EL imagens foram coletadas usando um cubo de filtro TRITC (□ ex = 540 nm, Dem = 605 nm) sem manchas. A luminiscência observada é de 1a.
[0082] Figura 10: Epi-luminiscência (EL) e campo de brilho (BF) imagens de células PDC-tratadas HL-60: (a) controle sem tratamento, (b) 10a (100 μM), 5 min. escuro (c) 10a (100 μM), 40 hr. escuro, e (d) 10a (100 μM), 40 hr. pós- irradiação. EL imagens foram coletadas usando um cubo de filtro TRITC (□ ex = 540 nm, Dem = 605 nm) sem manchas. A luminiscência observada é de 10a.
[0083] Figura 11: Epi-luminescência (EL) e campo de brilho (BF) imagens de células PDC-tratadas HL-60: (a) controle sem tratamento, (b) 10b (100 μM), 5 min. escuro (c) 10b (100 μM), 40 hr. escuro, e (d) 10b (100 μM), 40 hr. pós-irradiação. EL imagens foram coletadas usando um cubo de filtro TRITC (□ ex = 540 nm, Dem = 605 nm) sem manchas. A luminiscência observada é de 10b.
[0084] Figura 12: Epi-luminiscência (EL) e campo de brilho (BF) imagens de células PDC-tratadas HL-60: (a) controle sem tratamento, (b) 14a (100 μM), 5 min. escuro (c) 14a (100 μM), 40 hr. escuro, e (d) 14a (100 μM), 40 hr. pós- irradiação. EL imagens foram coletadas usando um cubo de filtro TRITC (□ ex = 540 nm, Dem = 605 nm) sem manchas. A luminiscência observada é de 14a.
[0085] Figura 13: Análise eletroforética de gel (1% agarose gel contendo 0.75 μg mL-1 brometo de etídio, 1X TAE, 8 V cm-1, 30 min.) de DNA fotoclivagem por PDCs da divulgação em solução ar-saturada com 420-nm irradiação: (a) 1a, (b) 10a, (b) 10b, e (d) 14a. As faixas 1, 2 e 10 são faixas de controle, e as faixas 3-9 são faixas de reação: faixa 1, 0 μM (-hv); faixa 2, 0 μM; faixa 3, 0.5 μM; faixa 4, 0.75 μM; faixa 5, 1.0 μM; faixa 6, 2.5 μM; faixa 7, 5.0 μM; faixa 8, 7.5 μM; faixa 9, 10 μM; faixa 10, 10 μM (-hv).
[0086] Figura 14: Análise eletroforética de gel (1% agarose gel contendo 0.75 μg mL-1 brometo de etídio, 1X TAE, 8 V cm-1, 30 min.) de DNA fotoclivagem por PDCs em solução ar-saturada com irradiação visível: (a) 1a, (b) 10a, (b) 10b, e (d) 14a. As faixas 1, 2, 14 e 15 são faixas de controle, e as faixas 2-13 são faixas de reação: faixa 1, 0 μM (-hv); faixa 2, 0 μM; faixa 3, 0.75 μM; faixa 4, 1.5 μM; faixa 5, 3 μM; faixa 6, 5 μM; faixa 7, 8 μM; faixa 8, 10 μM; faixa 9, 12 μM; faixa 10, 16 μM; faixa 11, 18 μM; faixa 12, 20 μM; faixa 13, 25 μM; faixa 14, 25 μM (-hv); faixa 15, 25 μM (-pUC19).
[0087] Figura 15: Análise eletroforética de gel (1% agarose gel pré- fabricada com 0.75 μg mL-1 brometo de etídio, 1X TAE, 8 V cm-1, 30 min.) de PDC-mediado pUC19 fotoclivagem em solução ar-saturada e desoxigenada: 420-nm irradiação de pUC19 (20 μM NP in 10 mM Tris-100 mM NaCl, pH 7.4) por 1 hr. Faixas 1 (-PDC, -hv), 2 (300 μM [Ru(bpy)3]2+, -hv), 5 (2 μM 10a, -hv), 8 (4 μM 10b, -hv), e 11 (8 μM 14a, -hv) são controles escuros. Faixas 3 (300 μM [Ru(bpy)3]2+, +hv), 6 (2 μM 10a, +hv), 9 (4 μM 10b, +hv), e 12 (8 μM 14a, +hv) são amostras que foram irradiadas em ar; faixas 4, 7, 10, e 13 são as amostras correspondentes irradiadas em argon.
[0088] Figura 16: Análise eletroforética de gel (1% agarose gel pré- fabricado com 0.75 μg mL-1 brometo de etídio, 1X TAE, 8 V cm-1, 30 min.) de PDC-mediado pUC19 fotoclivagem em solução ar-saturada e desoxigenada: irradiação visível de pUC19 (20 μM NP em 10 mM Tris^100 mM NaCl, pH 7.4) por 1 hr. com tubos fluorescentes brancos frios, 21 W/m2. Faixas 1 (-PDC, -hv), 2 (500 μM [Ru(bpy)3]2+, -hv), e 5 (2 μM 10a, -hv) são controles. Faixas 3 (500 μM [Ru(bpy)3]2+, +hv) e 6 (2 μM 10a, +hv) contem amostras que foram irradiadas em ar; faixas 4 e 7 são as amostras correspondentes irradiadas em argon.
[0089] Figura 17: Citotoxicidade (■) e fotocitotoxicidade (□) de células HL-60 (4 hr. pre-incubação, 15 min. vis irradiação, 4 J/cm2) com maiores concentrações de 10a e 10b observadas por viabilidade com corante Trypan Blue. (a) 18 hr. e (b) 40 hr. Em 100 μM [PDC], a ação fotodinâmica para 10a é de 47% em 18 hr. e 72% em 40 hr enquanto que para 10b é de 11% em 18 hr. e 0% (realmente 5% de aumento em viabilidade) em 40 hr. (referenciado com relação a 100 μM poço escuro).
[0090] Figura 18: Citotoxicidade (■) e fotocytotoxicidade (□) de células HL-60 (4 hr. pré-incubação, 15 min. vis irradiação 4 J/cm2) com maiores concentrações de (a) 1a, (b) 10a, e (c) 14a observadas por viabilidade com corante Trypan Blue.
[0091] Figura 19: Citotoxicidade e fotocitotoxicidade de células HL- 60com concentrações variadas de14a observadas por coloração de morfologia nuclear com AO-EB. (a) 1 μM 14a, -hv; (b) 5 μM 14a, -hv; (c) 10 μM 14a, -hv; (d) 1 μM 14a, +hv; (e) 5 μM 14a, +hv; (f) 10 μM 14a, +hv. AO células viáveis de coloração (fluorescência verde); EB células não viáveis de coloração (fluorescência vermelha).
[0092] Figura 20: Citotoxicidade (■) e fotocitotoxicidade (□) de células HL-60 (4 hr. pré-incubação, 15 min. irradiação visível, 4 J/cm2) com maiores concentrações de (a) 1a, (b) 10a, e (c) 14a observadas por viabilidade com corante Trypan Blue.
[0093] Figura 21: Citotoxicidade (■) e fotocitotoxicidade (□) de células PDC-tratadas HL-60 (4 hr. pré-incubação, 15 min. vis irradiação, 4 J/cm2) com maiores concentrações de (a) 1a, (b) 10a, e (c) 14a observadas por viabilidade com corante em 18 hr. pós-irradiação com Trypan Blue.
[0094] Figura 22: Citotoxicidade (■) e fotocitotoxicidade (□) de células PDC-tratadas HL-60 (4 hr. pré-incubação, 15 min. vis irradiação, 4 J/cm2) com maiores concentrações de (a) 1a, (b) 10a, e (c) 14a observadas por viabilidade com corante em 40 hr. pós-irradiação com Trypan Blue.
[0095] Figura 23: Citotoxicidade (■) e fotocitotoxicidade (□) de células PDC-tratadas HL-60 (4 hr. pré-incubação, 15 min. irradiação visível, 4 J/cm2) com maiores concentrações de (a) 1a, (b) 10a, e (c) 14a observadas por viabilidade com corante em 18 hr. pós-irradiação com Trypan Blue. PDCs preparados por síntese de microondas.
[0096] Figura 24: Citotoxicidade (■) e fotocitotoxicidade (□) de células PDC-tratadas HL-60 (4 hr. pré-incubação, 15 min. irradiação visível, 4 J/cm2) com maiores concentrações de (a) 1a, (b) 10a, e (c) 14a observadas por viabilidade com corante em 40 hr. pós-irradiação com Trypan Blue. PDCs preparados por síntese de microondas.
[0097] Figura 25: Citotoxicidade (■) e fotocitotoxicidade (□) de células PDC-tratadas HL-60 (4 hr. pré-incubação, 15 min. irradiação visível, 4 J/cm2) com maior concentração de 14a em (a) 18 hr. e (b) 40 hr. pós-irradiação observada por viabilidade com corante com Trypan Blue.
[0098] Figura 26: Formação de corpos apoptóticos em células HL-60 com 100 μM 10a [inferior, célula esquerda em (a)-(c)] observada por morfologia nuclear de corante com AO-EB. (a) Campo de brilho 130 ms exposição, 100 μM 10a, +hv, 1000X; (b) epi-fluorescência (FITC) 40 ms exposição, 100 μM 10a, +hv, 1000X; (c) epi-fluorescência (TRITC) 40 ms exposição, 100 μM 10a, +hv, 1000X.
[0099] Figura 27: Epi-luminiscência (EL) e campo de bilho (BF) imagens apoptóticas de células PDC-tratadas HL-60em 18 hr. pós-irradiação: (a) controle escuro, 14a (5 μM) (b) 14a (5 μM), e (c) 14a (5 μM). Imagens EL foram coletadas usando um cubo de filtro TRITC (Àex = 540 nm, Àem = 605 nm) com corante EB.
[00100] Figura 28: Campo de brilho (BF) e epi-luminiscência (EL) imagens de células PDC-tratadas HL-60 no escuro [(a)-(b)] e com radiação visível [(c)-(f)] observadas por morfologia nuclear de corante com AO-EB em 40 hr. pós-irradiação. (a) 5 μM 14a, -hv, BF 1000X; (b) 5 μM 14a, -hv, EL 1000X; (c) 5 μM 14a, +hv, BF 1000X; (d) 5 μM 14a, +hv, EL 1000X; (e) 5 μM 14a, +hv, EL 100X; (f) 5 μM 14a, +hv, EL 100X (ampliado). Células viáveis de corante (fluorescência verde) AO; células não viáveis de corante (fluorescência vermelha) EB. Corpos apoptóticos são evidentes em (d) e (f).
[00101] Figura 29: Distribuição de tamanho de células PDC-tratadas HL- 60 em 40 hr. pós-irradiação para controle, 10a, e 10b.
[00102] Figura 30: Distribuição de tamanho de células PDC-tratadas HL- 60 em 40 horas pós-irradiação.
[00103] Figura 31: Voltamograma cíclico de 14a.
[00104] Figura 32: Absorção e emissão de 14a em 77K.
[00105] Figura 33: fotoclivagem de DNA através do aumento da concentração de 14a: (a)sem GSH, e (b) 4 mM GSH. Faixas 1-10 contem o plasmídeo de DNA pBR322 (20 μM-NP) exposto a 14a (0.5-5 μM) e irradiado em 420 nm por 30 min. em 5 mM Tris, 50 mM NaCl, pH 7.5.
[00106] Figura 34: O efeito de GSH no fotodano de DNA aumenta com maior n: (a) 1a, n = 1, (b) 10a, n = 2, e (c) 14a, n = 3. Faixas 1-6 e 17-18 são faixas controle. Faixas 7-16 contem o plasmídeo de DNA pBR322 (20 μM-NP) exposto a PDC (2 μM) e maior concentração de GSH e irradiado em 420 nm por 30 min. em 5 mM Tris, 50 mM NaCl, pH 7.5.
[00107] Figura 35: O efeito de AA no fotodano de DNA por 14a. Faixas 1-6 e 14-15 são faixas controle. Faixas 7-13 contem plasmídeo de DNA pBR322 (20 μM-NP) exposto a PDC (2 μM) e maior concentração de AA e irradiado em 420 nm por 30 min. em 5 mM Tris, 50 mM NaCl, pH 7.5.
[00108] Figura 36: Fórmula para determinar ligação constante de DNA para compostos da divulgação.
[00109] Figura 37: Citotoxicidade (•) e fotocitotoxicidade (▲) de células HL-60 (4 hr. pré-incubação, 15 min. vis irradiação, 4 J/cm2) com maiores concentrações de 16a.
[00110] Figura 38: Citotoxicidade (•) e fotocitotoxicidade (▲) de células HL-60 (4 hr. pré-incubação, 15 min. vis irradiação, 4 J/cm2) com maiores concentrações de 16c.
[00111] Figura 39: A eficácia de PDCs 10A, 14A e 16A na morte de célula em CT26.WT (superior), U87 (médio), e F98 (inferior) células expressas como o número de células mortas como uma percentagem de controle (sem PDC, sem luz). Os efeitos de PDCs sem luz (toxicidade escura, painéis esquerdos) e com luz (PDT, painéis direitos) são mostrados. Os dados são mostrados como meio +/- barras de erro padrão.
[00112] Figura 40: Uma comparação das doses eficazes para PDCs 14A, 14C, PHOTOFRIN, e Ácido Aminolevulínico (ALA) usados em estudos de PDT destruição de tumor em modelos camundongos.
[00113] Figura 41: Eficácia de morte de célula de PDC 14A versus ALA em CT26.WT (superior), U87 (médio), e F98 (inferior) células expressas como o número de células mortas como uma percentagem de controle (sem PDC, sem luz). Os efeitos de PDC sem (toxicidade escura, painéis esquerdos) e com luz (PDT, painéis direitos) são mostrados.
[00114] Figura 42: Os espectros de absorção para os fotosensibilizadores 14C (sólido) e PPIX (tracejado). O comprimento de onda usado para os experimentos de PDT é mostrado por uma linha vertical tracejada.
[00115] Figura 43: Os espectros de absorção para PDC 14C (quadrado) comparado com PPIX (diamante) após 60 minutos de irradiação (525nm, 78mW/cm2). ODs foram registrados na absorção máxima na região visível para cada PDC, 423nm para 14C, 411 nm para PPIX.
[00116] Figura 44: Os compostos desta invenção, ilustrados com TLD1411 (14a) e TLD1433 (14c), podem ser usados para destruir tumores in vivo. As curvas Kaplein-Meier descrevem a percentagem de sobrevivência de animais para camundongos com tumores como uma função de dias pós-PDT para camundongos tratados apenas com luz (onda contínua (cw) ou pulsada), apenas fotosensibilizador (doses altas ou baixas), ou luz (cw ou pulsada) em combinação com fotosensibilizador (dose alta ou baixa).
[00117] Figura 45: Reduções de meio log10 em carga microbial (CFU mL-1) geradas por fotosensibilizadores 14a no escuro e com ativação de luz. A ativação de luz foi conseguida por iluminação com um 530-nm LED (98 mW cm-2) por 10 minutos para fornecer uma dose total de luz de 58.8 J cm-2. PDI é registrado como a diferença nas reduções de meio log10 em carga microbial entre condições de luz e escuridão.
[00118] Figura 46: Reduções de meio log10 em carga microbial (CFU mL-1) geradas por fotosensibilizador 14c no escuro e com ativação de luz. A ativação de luz foi conseguida por iluminação com um 530-nm LED (98 mW cm-2) por 10 minutos para fornecer uma dose total de luz de 58.8 J cm-2. PDI é registrado como a diferença nas reduções de meio log10 em carga microbial entre condições de luz e escuridão.
DESCRIÇÃO DETALHADA DE REPRESENTAÇÕES PREFERIDAS DA INVENÇÃO
[00119] Através do relatório, onde composições são descritas como tendo, incluindo, ou compreendendo componentes específicos, ou onde processos são descritos como tendo, incluindo, ou compreendendo etapas específicas de processo, considera-se que composições dos presentes ensinamentos também consistem essencialmente de, ou consistem de, os componentes relatados, e que os processos dos presentes ensinamentos também consistem essencialmente de, ou consistem de, as etapas de processamento relatadas.
[00120] Neste pedido, onde se diz que um elemento ou componente está incluído em e/ou selecionado de uma lista de elementos ou componentes relacionados, deve-se entender que o elemento ou componente pode ser qualquer um dos elementos ou componentes relacionados, e pode ser selecionado do grupo consistindo de dois ou mais dos elementos ou componentes relacionados.
[00121] O uso do singular aqui inclui o plural (e vice-versa) salvo especificação em contrário. Além disso, quando o uso do termo “aproximadamente” vem antes de um valor quantitativo, os presentes ensinamentos também incluem a própria quantidade específica do valor, salvo especificação em contrário.
[00122] Deve-se compreender que a ordem das etapas ou ordem de realização de determinadas ações é imaterial contanto que os presentes ensinamentos permaneçam operáveis. Além disso, duas ou mais etapas ou ações podem ser conduzidas simultaneamente.
[00123] Conforme é aqui usado, o termo “halógeno” significa cloro, bromo, flúor e iodo.
[00124] Conforme são aqui usados, salvo especificação em contrário, “alquil” e “alifático” sejam usados sozinhos ou como parte de um grupo substituinte se referem a cadeias de carbono diretas e ramificadas tendo de 1 a 20 átomos de carbono ou qualquer número dentro desse limite, por exemplo, de 1 a 6 átomos de carbono ou de 1 a 4 átomos de carbono. Números designados de átomos de carbono (ex. C1-6) devem se referir independentemente ao número de átomos de carbono em uma porção de alquil ou à parte de alquil de um substituinte maior contendo alquil. Exemplos não limitadores de grupos alquil incluem metilo, etilo, n-propil, iso-propil, n-butil, sec-butil, iso-butil, tert-butil e outros. Grupos alquil podem ser opcionalmente substituídos. Exemplos não limitadores de grupos alquil substituídos incluem hidroximetilo, clorometilo, trifluorometilo, aminometilo, 1-cloroetilo, 2- hidroxietilo, 1,2-difluoroetilo, 3-carboxipropilo, e outros. Em grupos substituintes com múltiplos grupos alquil como (C1-6alquil)2amino, os grupos alquil podem ser os mesmos ou diferentes.
[00125] Conforme são aqui usados, os termos grupos “alquenil” e “alquinil”, sejam usados sozinhos ou como parte de um grupo substituinte, se referem a cadeias de carbono diretas ou ramificadas tendo 2 ou mais átomos de carbono, preferivelmente de 2 a 20, onde uma cadeia alquenil tem pelo menos uma dupla ligação na cadeia e uma cadeia alquinil tem pelo menos uma tripla ligação na cadeia. Grupos alquenil e alquinil podem ser opcionalmente substituídos. Exemplos não limitadores de grupos alquenil incluem etenil, 3- propenil, 1-propenil (também 2-metiletenil), isopropenil (também 2-metileten-2- il), buten-4-il, e outros. Exemplos não limitadores de grupos alquenil substituídos incluem 2-cloroetenil (também 2-clorovinil), 4-hidroxibuten-1-il, 7- hidroxi-7-metiloct-4-en-2-il, 7-hidroxi-7-metiloct-3,5-dien-2-il, e outros. Exemplos não limitadores de grupos alquinil incluem etinil, prop-2-inil (também propargil), propin-1-il, e 2-metil-hex-4-in-1-il. Exemplos não limitadores de grupos alquinil substituídos incluem, 5-hidroxi-5-metilhex-3-inil, 6-hidroxi-6- metilhept-3-in-2-il, 5-hidroxi-5-etilhept-3-inil, e outros.
[00126] Conforme é aqui usado, “cicloalquil”, seja usado sozinho ou como parte de outro grupo, se refere a um anel contendo carbono não aromático incluindo alquil ciclizado, alquenil, e grupos alquinil, ex., tendo de 3 a 4 átomos de carbono de anel, preferivelmente de 3 a 7 ou de 3 a 6 átomos de carbono de anel, ou mesmo de 3 a 4 átomos de carbono de anel, e opcionalmente contendo um ou mais (ex., 1, 2, ou 3) ligações duplas ou triplas. Grupos cicloalquil podem ser monocíclicos (ex., ciclohexil) ou policíclicos (ex., contendo sistemas de anel fundidos, em ponte ou espiro), onde os átomos de carbono são localizados no interior ou no exterior do sistema de anel. Qualquer posição de anel apropriada do grupo cicloalquil pode ser ligada covalentemente à estrutura química definida. Anéis de cicloalquil podem ser opcionalmente substituídos. Exemplos não limitadores de grupos cicloalquil incluem: ciclopropil, 2-metil-ciclopropil, ciclopropenil, ciclobutil, 2,3-dihidroxiciclobutil, ciclobutenil, ciclopentil, ciclopentenil, ciclopentadienil, ciclohexil, ciclohexenil, cicloheptil, ciclooctanil, decalinil, 2,5-dimetilciclopentil, 3,5-diclorociclohexil, 4- hidroxiciclohexil, 3,3,5-trimetilciclohex-1-il, octahidropentalenil, octahidro-1H- indenil, 3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-3H-inden-4-il, decahidroazulenil; biciclo[6.2.0]decanil, decahidronaftalenil, e dodecahidro-1H-fluorenil. O termo “cicloalquil” também inclui anéis carboxílicos que são anéis de hidrocarbono bicíclico, cujos exemplos não limitadores incluem, biciclo-[2.1.1]hexanil, biciclo[2.2.1]heptanil, biciclo[3.1.1]heptanil, 1,3-dimetil[2.2.1]heptan-2-il, biciclo[2.2.2]octanil, e biciclo[3.3.3]undecanil.
[00127] “Haloalquil” deve incluir grupos de hidrocarbono alifático saturados tanto ramificados quanto diretos tendo o número específico de átomos de carbono, substituídos por 1 ou mais halógenos. Grupos haloalquil incluem grupos perhaloalquil, onde todos os hidrogênios de um grupo alquil foram substituídos por halógenos (ex., -CF3, -CF2CF3). Grupos haloalquil podem ser opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes em adição ao halógeno. Exemplos de grupos haloalquil incluem, mas não estão limitados a, grupos fluorometil, dicloroethil, trifluorometil, triclorometil, pentafluoroetil, e pentacloroetil.
[00128] O termo “alcoxi” se refere ao grupo -0-alquil, onde o grupo alquil é conforme definido abaixo. Grupos alcoxi opcionalmente podem ser substituídos. O termo alcoxi cíclico C3-C6 se refere a um anel contendo de 3 a 6 átomos de carbono e pelo menos um átomo de oxigênio (ex., tetrahidrofurano, tetrahidro-2H-piran). Grupos alcoxi C3-C6 opcionalmente podem ser substituídos.
[00129] O termo “aril”, seja usado sozinho ou como parte de outro grupo, é definido aqui como um anel monocíclico aromático não saturado de 6 membros de carbono ou como um anel policíclico aromático não saturado de 10 a 14 membros de carbono. Anéis aril podem ser, por exemplo, anel fenil ou naftil cada um opcionalmente substituído por uma ou mais porções capazes de substituir um ou mais átomos de hidrogênio. Exemplos não limitadores de grupos aril incluem: fenil, naftilen-1-il, naftilen-2-il, 4-fluorofenil, 2-hidroxifenil, 3- metilfenil, 2-amino-4-fluorofenil, 2-(N,N-dietilamino)fenil, 2-cianofenil, 2,6-di-tert- butilfenil, 3-metoxifenil, 8-hidroxinaftilen-2-il 4,5-dimetoxinaftilen-1-il, e 6-ciano- naftilen-1-il. Grupos aril também incluem, por exemplo, anéis fenil ou naftil fundidos com um ou mais anéis de carbono saturados ou parcialmente saturados (ex., biciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trienil, indanil), que podem ser substituidos em um ou mais átomos de carbono e/ou anéis saturados ou parcialmente saturados.
[00130] O termo “arilalquil” ou “aralquil” se refere ao grupo -alquil-aril, onde os grupos alquil e aril são conforme definidos aqui. Grupos aralquil da presente invenção são opcionalmente substituídos. Exemplos de grupos arialquil incluem, por exemplo, benzil, 1-feniletil, 2-feniletil, 3-fenilpropil, 2- fenilpropil, fluorenilmetil e outros.
[00131] Os termos “heterocíclico” e/ou “heterociclo” e/ou “heterocilil”, sejam usados sozinhos ou como parte de outro grupo, são aqui definidos como um ou mais anéis tendo de 3 a 20 átomos onde pelo menos um átomo em pelo menos um anel é um heteroátomo selecionado de nitrogênio (N), oxigênio (O), ou enxofre (S), e onde ainda o anel que inclui o heteroátomo é não aromático. Em grupos heterocíclicos que incluem dois ou mais anéis fundidos, o anel não tendo heteroátomo pode ser aril (ex., indolinil, tetrahidroquinolinil, cromanil). Grupos heterocíclicos exemplares tem de 3 a 14 átomos de anel dos quais de 1 a 5 são heteroátomos independentemente selecionados dentre nitrogênio (N), oxigênio (O), ou enxofre (S). Um ou mais átomos N ou S em um grupo heterocíclico podem ser oxidados. Grupos heterocíclicos podem ser opcionalmente substituídos.
[00132] Exemplos não limitadores de unidades heterocíclicas tendo um único anel incluem: diazirinil, aziridinil, urazolil, azetidinil, pirazolidinil, imidazolidinil, oxazolidinil, isoxazolinil, isoxazolil, tiazolidinil, isotiazolil, isotiazolinil oxatiazolidinonil, oxazolidinonil, hidantoinil, tetrahidrofuranil, pirrolidinil, morfolinil, piperazinil, piperidinil, dihidropiranil, tetrahidropiranil, piperidin-2-onil (valerolactam), 2,3,4,5-tetrahidro-1H-azepinil, 2,3-dihidro-1H- indole, e 1,2,3,4-tetrahidro-quinolina. Exemplos não limitadores de unidades heterocíclicas tendo 2 ou mais anéis incluem: hexahidro-1H-pirrolizinil, 3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-1H-benzo[d]imidazolil, 3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-1H- indolil, 1,2,3,4-tetrahidroquinolinil, cromanil, isocromanil, indolinil, isoindolinil, e decahidro-1H-cicloocta[b]pirrolil.
[00133] O termo “heteroaril”, seja usado sozinho ou como parte de outro grupo, é definido aqui como um ou mais anéis tendo de 5 a 20 átomos onde pelo menos um átomo em pelo menos um anel é um heteroátomo escolhido entre nitrogênio (N), oxigênio (O) ou enxofre (S), e onde ainda pelo menos um dos anéis que incluem um heteroátomo é aromático. Em grupos heteroaril que incluem 2 ou mais anéis fundidos, o anel sem heteroátomo pode ser um carbociclo (ex., 6,7-Dihidro-5H-ciclopentapirimidina) ou aril (ex., benzofuranil, benzotiofenil, indolil). Grupos heteroaril exemplares tem de 5 a 14 átomos de anel e contem de 1 a 5 heteroátomos de anel independentemente selecionados entre nitrogênio (N), oxigênio (O) ou enxofre (S). Um ou mais átomos N ou S em um grupo heteroaril podem ser oxidados. Grupos heteroaril podem ser substituídos. Exemplos não limitadores de anéis heteroaril contendo um único anel incluem: 1,2,3,4-tetrazoll, [1,2,3]triazoll, [1,2,4]triazolil, triazinil, thiazolil, 1H-imidazolil, oxazolil, furanil, tiofeneil, pirimidinil, 2-fenilpirimidinil, piridinil, 3- metilpiridinil, e 4-dimetilaminopiridinil. Exemplos não limitadores de anéis heteroaril contendo 2 ou mais anéis fundidos incluem: benzofuranil, benzotiofenil, benzoxazolil, benztiazolil, benztriazolil, cinnolinil, nafthiridinil, fenantridinil, 7H-purinil, 9H-purinil, 6-amino-9H-purinil, 5H-pirrolo[3,2- d]pirimidinil, 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidinil, pirido[2,3-d]pirimidinil, 2- fenilbenzo[d]tiazolil, 1H-indolil, 4,5,6,7-tetrahidro-1-H-indolil, quinoxalinil, 5- metilquinoxalinil, quinazolinil, quinolinil, 8-hidroxi-quinolinil, e isoquinolinil.
[00134] Um exemplo não limitador de um grupo heteroaril conforme descrito acima é heteroaril C1-C5, que tem de 1 a 5 átomos de anel de carbono e pelo menos um átomo de anel adicional que é um heteroátomo (preferivelmente de 1 a 4 átomos de anel adicionais que são heteroátomos) independentemente selecionado entre nitrogênio (N), oxigênio (O), ou enxofre (S). Exemplos de heteroaril C1-C5 incluem, mas não estão limitados a, triazinil, tiazol-2-il, tiazol-4-il, imidazol-1-il, 1H-imidazol-2-il, 1H-imidazol-4-il, isoxazolin- 5-il, furan-2-il, furan-3-il, tiofen-2-il, tiofen-4-il, pirimidin-2-il, pirimidin-4-il, pirimidin-5-il, piridin-2-il, piridin-3-il, e piridin-4-il.
[00135] Salvo observação em contrário, quando dois substituintes são tomados juntos para formar um anel tendo um número especificado de átomos de anel (ex., R2 e R3 tomados juntos com o nitrogênio (N) ao qual eles são ligados para formar um anel tendo de 3 a 7 membros de anel), o anel pode ter átomos de carbono e opcionalmente um ou mais (ex. de 1 a 3) heteroátomos adicionais independentemente selecionados entre nitrogênio (N), oxigênio (O), ou enxofre (S). O anel pode ser saturado ou parcialmente saturado e pode ser opcionalmente substituído.
[00136] Para o propósito da presente invenção unidades de anel fundidas, bem como anéis espirocíclicos, anéis bicíclicos e outros, que compreendem um único heteroátomo serão considerados como pertencendo à família cíclica correspondente ao anel contendo heteroátomo. Por exemplo, 1,2,3,4-tetrahidroquinolina tendo a fórmula:
Figure img0022
é, para o propósito da presente invenção, considerada uma unidade heterocíclica. 6,7-Dihidro-5H-ciclopentapirimidina tendo a fórmula:
Figure img0023
é, para o propósito da presente invenção, considerada uma unidade heteroaril. Quando uma unidade de anel fundido contem heteroátomos tanto em um anel saturado quanto em um anel aril, o anel aril predominará e determinará o tipo de categoria à qual o anel é designado. Por exempl, 1,2,3,4-tetrahidro- [1,8]naftiridina tendo a fórmula:
Figure img0024
é, para o propósito da presente invenção, considerada uma unidade heteroaril.
[00137] Sempre que um termo ou qualquer uma de suas raízes prefixais aparecer em um nome de um substituinte, o nome deve ser interpretado incluindo aquelas limitações aqui fornecidas. Por exemplo, sempre que o termo “alquil” ou “aril” ou qualquer uma de suas raízes prefixais aparecer em um nome de um substituinte (ex., arialquil, alquilamino) o nome deve ser interpretado incluindo aquelas limitações fornecidas acima para “alquil” e “aril”.
[00138] O termo “substituído” é usado através de todo o relatório. O termo “substituído” é aqui definido como uma porção, seja ela acíclica ou cíclica, que tem um ou mais átomos de hidrogênio substituídos por um substituinte ou vários (ex., 1 a 10) substituintes conforme definido abaixo. Os substituintes são capazes de substituir um ou dois átomos de hidrogênio de uma única porção ao mesmo tempo. Em adição, esses substituintes podem substituir dois átomos de hidrogênio ou dois carbonos adjacentes para formar o dito substituinte, nova porção ou unidade. Por exemplo, uma unidade substituída que requer a substituição de um único átomo de hidrogênio inclui halógeno, hidroxil, e outros. A substituição de um átomo de dois hidrogênios inclui carbonilo, oximino, e outros. A substituição de um átomo de dois hidrogênios de átomos de carbono adjacentes inclui epóxi, e outros. O termo “substituído” é usado através de todo o presente relatório para indicar que uma porção pode ter um ou mais dos átomos de hidrogênio substituídos por um substituinte. Quando uma porção é descrita como “substituída” qualquer número de átomos de hidrogênio pode ser substituído. Por exemplo, difluorometilo é um C1 alquil substituído; trifluorometilo é um C1 alquil substituído; 4-hidroxifenil é um anel aromático substituído; (N,N-dimetil-5- amino)octanil é um C8 alquil substituído; 3-guanidinopropilo é um C3 alquil substituído; e 2-carboxipiridinil é um heteroaril substituído.
[00139] Os grupos variáveis aqui definidos, ex., alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, alkoxi, ariloxi, aril, grupos heterociclo e heteroaril aqui definidos, sejam usados sozinhos ou como parte de outro grupo, podem ser opcionalmente substituídos. Grupos opcionalmente substituídos serão assim indicados.
[00140] Os seguintes são exemplos não limitadores de substituintes que podem substituir átomos de hidrogênio em uma porção: halógeno (cloro(C1), bromo (Br), flúor (F) e iodo (I)), -CN, -NO2, oxo (=O), -OR9, -SR9, -N(R9)2, - NR9C(O)R9, -SO2R9, -SO2OR9, -SO2N(R9)2, -C(O)R9, -C(O)OR9, - C(O)N(R9)2, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C1-6 alcoxi, C2-8 alquenil, C2-8 alquinil, C3-14 cicloalquil, aril, heterociclo, ou heteroaril, onde cada um de alquil, haloalquil, alquenil, alquinil, alcoxi, cicloalquil, aril, heterociclo, e grupos heteroaril é opcionalmente substituido por 1-10 (ex., 1-6 or 1-4) grupos selecionados independentemente de halógeno, -CN, -NO2, oxo, e Rx; onde Rx, a cada ocorrência, independentemente é hidrogênio, -OR10, -SR10, - C(O)R10, -C(O)OR10, -C(O)N(R10)2, -SO2R10, -S(O)2OR10, -N(R10)2, - NR10C(O)R10, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-8 alquenil, C2-8 alquinil, cicloalquil (ex., C3-6 cicloalquil), aril, heterociclo, ou heteroaril, ou duas unidades Rx tomadas juntamente com o(s) átomo(s) aos quais elas são ligadas formam um carbociclo ou heterociclo onde o dito carboxiclo ou heterociclo tem de 3 a 7 átomos de anel; onde R10, a cada ocorrência, independentemente é hidrogênio, C1-6 alquil, C1-6 haloalquil, C2-8 alquenil, C2-8 alquinil, cicloalquil (ex., C3-6 cicloalquil), aril, heterociclo, ou heteroaril, ou duas unidades R10 tomadas juntamente com o(s) átomo(s) ao qual elas estão ligadas formam um carbociclo ou heterociclo onde o dito carboxiclo ou heterociclo tem de 3 a 7 átomos de anel.
[00141] Em certas representações, os substituintes são selecionados de i) -OR11; por exemplo, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2CH3; ii) -C(O)R11; por exemplo, -COCH3, -COCH2CH3, -COCH2CH2CH3; iii) -C(O)OR11; por exemplo, -CO2CH3, -CO2CH2CH3, - CO2CH2CH2CH3; iv) -C(O)N(R11)2; por exemplo, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2; v) -N(R11)2; por exemplo, -NH2, -NHCH3, -N(CHs)2, -NH(CH2CH3); vi) halógeno: -F, -Cl, -Br, e -I; vii) -CHeXg; onde X é halógeno, m é de 0 a 2, e+g =3; por exemplo, -CH2F, -CHF2, -CF3, -CCl3, ou -CBr3; viii) -SO2R11; por exemplo, -SO2H; -SO2CH3; -SO2C6H5; ix) Alquil C1-C6 linear, ramificado ou cíclico; x) Ciano xi) Nitro; xii) N(R11)C(O)R11; xiii) Oxo (=O); xiv) Heterociclo; e xv) Heteroaril. onde cada R11 é independentemente hidrogênio, opcionalmente alquil C1-C6 linear ou ramificado (ex., alquil C1-C4 linear ou ramificado opcionalmente substituído), ou cicloalquil C3-C6 opcionalmente substituído (ex. cicloalquil C3-C4 opcionalmente substituído); ou duas unidades R11 podem ser tomadas juntas para formar um anel compreendendo 3-7 átomos de anel. Em certos aspectos, cada R11 é independentemente hidrogênio, alquil C1-C6 linear ou ramificado opcionalmente substituído por halógeno ou cicloalquil C3-C6 ou cicloalquil C3C6.
[00142] Em vários locais no presente relatório, substituintes de compostos são divulgados em grupos ou em limites. É especificamente pretendido que o relatório inclua cada uma e toda subcombinação individual dos membros desses grupos e limites. Por exemplo, o termo “alquil C1-6” pretende especificamente divulgar alquil C1, C2, C3, C4, C5, C6, C1-C6, C1-C5, C1-C4, C1-C3, C1-C2, C2-C6, C2-C5, C2-C4, C2-C3, C3-C6, C3-C5, C3-C4, C4-C6, C4-C5, e C5-C6.
[00143] Para o propósito da presente invenção os termos “composto”, “análogo”, e “composição de matéria” significam de modo igual os compostos fotodinâmicos aqui descritos, incluindo todas as formas enantioméricas, formas diastereoméricas, sais, e outros, e os termos “composto”, análogo”, e “composição de matéria” são usados intercambiavelmente através do presente relatório.
[00144] Para o propósito da presente invenção o termo “bpy” significará igualmente 2,2'-bipiridina e [2,2']bipiridina.
[00145] Para o propósito da presente invenção o termo “fen” significará igualmente [1,10]fenantrolina e 1,10-fenantrolina.
[00146] Para o propósito da presente invenção o termo “dmb” significará igualmente 4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina.
[00147] Compostos aqui descritos podem conter um átomo assimétrico (também chamado de centro quiral), e alguns dos compostos podem conter um ou mais átomos assimétricos ou centros, que podem assim fazer surgir isômeros óticos (enantiômeros) e diastereômeros. Os presentes ensinamentos e compostos aqui divulgados incluem esses enantiômeros e diastereômeros, bem como os estereoisômeros R e S enantiomericmente puros, racêmicos e resolvidos, bem como outras misturas dos estereoisômeros R e S e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Isômeros óticos podem ser obtidos em forma pura através de procedimentos padrão conhecidos, que incluem, mas não estão limitados a, formação de sal diaestereomérico, resolução cinética e síntese assimétrica. Os presentes ensinamentos também abrangem isômeros cis e trans de compostos contendo porções alquenil (ex., alquenes e imines). Deve ser também entendido que os presentes ensinamentos abrangem todos os possíveis regioisômeros, e misturas dos mesmos, que podem ser obtidos na forma pura através de procedimentos padrão de separação conhecidos, e incluem, mas não estão limitados a, cromatografia de coluna, cromatografia de camada fina, e cromatografia líquida de alta performance.
[00148] Sais farmaceuticamente aceitáveis de compostos dos presentes ensinamentos, que podem ter uma porção ácida, podem ser formados usando bases orgânicas e inorgânicas. Tanto os sais mono quanto os polianiônicos são contemplados, dependendo do número de hidrogênios ácidos disponíveis para desprotonação. Sais apropriados formados com bases incluem sais de metal, tais como metal álcali ou sais de metal terroso alcalino, por exemplo sódio, potássio ou sais magnésio; sais de amônia e sais amina orgânicos, tais como aqueles formados com morfolina, tiomorfolina, piperidina, pirrolidina, uma mono-, di- ou tri-baixa alquilamina (ex., etilo-tert-butil-, dietilo-, diisoporopilo-, trietilo-, tributilo-, ou dimetilpropilamina), ou uma mono-, di-, ou trihidroxi baixa alquilamina (ex., mono-, di-, ou trietanolamina). Exemplos específicos não limitadores de bases inorgânicas incluem NaHCO3, Na2CO3, KHCO3, K2CO3, Cs2CO3, LiOH, NaOH, KOH, NaH2PO4, Na2HPO4, e Na3PO4. Sais internos também podem ser formados. Similarmente, quando um composto divulgado aqui contem uma porção básica, sais podem ser formados usando ácidos orgânicos e inorgânicos. Por exemplo, sais podem ser formados dos seguintes ácidos: acético, propiônico, lático, benzenesulfônico, benzoico, canforsulfônico, cítrico, tartárico, sucínico, dicloroacético, etenesulfônico, fórmico, fumárico, glucônico, glutâmico, hipúrico, hidrobrômico, isetiônico, lático, maleico, málico, malônico, mandélico, metanesulfônico, múcico, naftalenesulfônico, nítrico, oxálico, pamóico, pantotênico, fosfórico, ftálico, propiônico, sucínico, sulfúrico, tartárico, toluenesulfônico, e canforsulfônico bem como outros ácidos farmaceuticamente aceitáveis conhecidos.
[00149] Quando qualquer variável ocorre mais de uma vez em qualquer constituinte ou em qualquer fórmula, a sua definição em cada ocorrência é independente da sua definição em qualquer outra ocorrência (ex., em N(R6)2, cada R6 pode ser o mesmo ou diferente do outro). Combinações de substituintes e/ou variáveis são permitidas apenas se tais combinações resultam em compostos estáveis.
[00150] Os termos “tratar”, “tratando” e “tratamento” conforme usados aqui, se referem ao alívio, inibição, melhora e/ou abrandamento parcial ou completo de uma condição da qual um paciente é suspeito de sofrer.
[00151] Conforme são usados aqui, “terapeuticamente eficaz” e “dose eficaz” se referem a uma substância ou quantidade que provoque uma atividade ou efeito biologicamente desejável.
[00152] Conforme é usado aqui, o termo “terapia fotodinâmica” significa um tratamento para destruir células e tecido através do uso de uma droga que pode ser ativada por luz de um determinado comprimento de onda e dose.
[00153] Conforme é usado aqui, o termo “composto fotodinâmico” significa um composto que fornece terapia fotodinâmica.
[00154] Exceto quando assinalado, os termos “sujeito” ou “paciente” são usados de modo intercambiável e se referem a mamíferos como os pacientes humanos e primatas não humanos, bem como animais de experimentação como coelhos, ratos, e camundongos, e outros animais. Consequentemente, o termo “sujeito” ou “paciente” conforme aqui usado significa qualquer paciente ou sujeito mamífero ao qual os compostos da invenção podem ser administrados. Em uma representação exemplar da presente invenção, para identificar pacientes sujeitos para tratamento de acordo com os métodos da invenção, são empregados métodos de triagem aceitos para determinar fatores de risco associados a uma doença ou condição objetivada ou suspeitada ou para determinar a situação de uma doença ou condição existente em um sujeito. Os métodos de triagem incluem, por exemplo, esforços convencionais para determinar fatores de risco que podem estar associados à doença ou condição objetivada ou suspeitada. Esses e outros métodos de rotina permitem que o clínico selecione pacientes com necessidade de terapia usando os métodos e compostos da presente invenção.
[00155] Os Compostos Fotodinâmicos
[00156] Os compostos fotodinâmicos da presente invenção são tiofenos baseados em metal sintonizáveis, e incluem todas as formas enantioméricas e diastereoméricas e seus sais farmaceuticamente aceitáveis tendo a fórmula (I),
Figure img0025
incluindo hidratos, solvatos, sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e seus complexos, onde: M é selecionado do grupo consistindo de manganês, molibdênio, rênio, ferro, rutênio, ósmio, cobalto, ródio, irídio, níquel, platina, e cobre; X é selecionado do grupo consistindo de Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, e SO4-2; n = 0, 1, 2, 3, 4, ou 5; y = 1, 2, or 3; z = 0, 1, or 2; Lig a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de
Figure img0026
Figure img0027
R1 é selecionado do grupo consistindo de
Figure img0028
Figure img0029
and
Figure img0030
u é um inteiro, e em certas representações, é 1-1000 or 1-500 or 1-100 or 1-10, ou é pelo menos 2 ou pelo menos 3 ou pelo menos 4 ou pelo menos 5 ou pelo menos 10, ou é qualquer inteiro de 1-5 ou 1-10 ou 1-20, ou qualquer valor até o ponto em que a processabilidade se torna problemática devido à agregação e/ou insolubilidade; R2a, R2b, R2c, R2d, R2e, e R2f a cada ocorrência são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C3-7 cicloalquil opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcoxi opcionalmente substituído, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, aril opcionalmente substituído, ariloxi opcionalmente substituído, heteroaril opcionalmente substituído, e heterociclo opcionalmente substituído; R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h R3i, R3j, R3k, R3l, e R3m a cada ocorrência são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcoxi opcionalmente substituído, e CO2R8; R4a, R4b, e R4c a cada ocorrência são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C1-6 cicloalquil opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcoxi opcionalmente substituído, CO2R5, CONR62, NR72 , sulfato, sulfonato, aril opcionalmente substituído, ariloxi opcionalmente substituído, heteroaril opcionalmente substituído, e heterociclo opcionalmente substituído; R4a e R4b a cada ocorrência em um anel de tiofeno são tomados junto com o átomo ao qual eles são ligados para formar um anel opcionalmente substituído tendo a partir de 6 átomos de anel contendo 2 átomos de oxigênio; R5 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; R6 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; R7 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; R8 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído.
[00157] Compostos das estruturas
Figure img0031
Figure img0032
and
Figure img0033
são excluídos dos novos compostos de fórmula (I).
[00158] Os compostos da presente invenção incluem compostos tendo a fórmula (II),
Figure img0034
incluindo hidratos, solvatos, sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e seus complexos, onde: M é selecionado do grupo consistindo de manganês, molibdênio, rênio, ferro, rutênio, ósmio, cobalto, ródio, irídio, níquel, platina, e cobrer; X é selecionado do grupo consistindo de Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, e SO4-2; n = 0, 1, 2 ou 3; Lig a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de
Figure img0035
R1 é selecionado do grupo consistindo de
Figure img0036
Figure img0037
u é um inteiro, e em certas representações, é 1-1000 or 1-500 or 1-100 or 1-10, ou é pelo menos 2 ou pelo menos 3 ou pelo menos 4 ou pelo menos 5 ou pelo menos 10, ou é qualquer inteiro de 1-5 ou 1-10 ou 1-20, ou qualquer valor até o ponto em que a processabilidade se torne problemática devido á agregação e/ou insolubilidade; R2a, R2b, R2c, R2d, R2e, e R2f a cada ocorrência são independentemente selecionados do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C3-7 cicloalquil opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcoxi opcionalmente substituído, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, aril opcionalmente substituído, ariloxi opcionalmente substituído, heteroaril opcionalmente substituído, e heterociclo opcionalmente substituído; R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h R3i, R3j, R3k, R3l, e R3m a cada ocorrência são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcoxi opcionalmente substituído, e CO2R8; R4a, R4b, e R4c a cada ocorrência são cada um independentemente selecionados do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C1-6 cicloalquil opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcoxi opcionalmente substituído, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, aril opcionalmente substituído, ariloxi opcionalmente substituído, heteroaril opcionalmente substituído, e heterociclo opcionalmente substituído; R4a e R4b a cada ocorrência em um anel de tiofeno são tomados junto com o átomo ao qual eles são ligados para formar um anel opcionalmente substituído tendo a partir de 6 átomos de anel contendo 2 átomos de oxigênio; R5 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; R6 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; R7 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; R8 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído;
[00159] Compostos das estruturas
Figure img0038
e
Figure img0039
são excluídos dos novos compostos de fórmula (II).
[00160] Os compostos da presente invenção incluem compostos tendo a fórmula (III),
Figure img0040
incluindo hidratos, solvatos, sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e complexos dos mesmos, onde M, Lig, X e os grupos R são conforme definido abaixo, e g é 0, 1, 2, 3, 4, ou 5.
[00161] A presente é também direcionada a novos compostos de fórmula (IV):
Figure img0041
incluindo hidratos, solvatos, sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e seus complexos onde M, X e os grupos R são conforme definido abaixo, e h é 0, 1, 2, 3, 4, ou 5.
[00162] A presente invenção é também direcionada a novos compostos de fórmula (V):
Figure img0042
incluindo hidratos, solvatos, sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e seus complexos, onde: Lig a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de
Figure img0043
Figure img0044
Figure img0045
M a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de manganês, molibdênio, rênio, ferro, rutênio, ósmio, cobalto, ródio, irídio, níquel, platina, e cobre; X e os grupos R são conforme definido abaixo; t é um inteiro, e é preferivelmente 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; q = 0, 1, 2, 3, 4 ou 5.
[00163] O composto tendo a seguinte estrutura é excluído de certas representações dos compostos de fórmula (V):
Figure img0046
[00164] A presente invenção é também direcionada a novos métodos de uso dos compostos da estrutura
Figure img0047
Figure img0048
[00165] Em certas representações, M é manganês molibdênio, rênio, ferro, rutênio, ósmio, cobalto, ródio, irídio, níquel, platina, ou cobre.
[00166] Em certas representações, X é Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, ou SO4-2.
[00167] Em certas representações, n é 0 ou 1 ou 2 ou 3 ou 4 ou 5.
[00168] Em certas representações, y é 1 ou 2 ou 3.
[00169] Em certas representações, z é 0 ou 1 ou 2.
[00170] Em certas representações, g é 0 ou 1 ou 2 ou 3 ou 4 ou 5.
[00171] Em certas representações, h é 0 ou 1 ou 2 ou 3 ou 4 ou 5.
[00172] Em certas representações, t é um inteiro.
[00173] Em certas representações, t é 1 ou 2 ou 3 ou 4 ou 5 ou 6.
[00174] Em certas representações, q é 0 ou 1 ou 2 ou 3 ou 4 ou 5.
[00175] Em certas representações, Lig é
Figure img0049
[00176] Em certas representações, Lig é
Figure img0050
[00177] Em certas representações, Lig é
Figure img0051
[00178] Em certas representações, Lig é
Figure img0052
[00179] Em certas representações, Lig é
Figure img0053
[00180] Em certas representações, Lig é
Figure img0054
[00181] Em certas representações, Lig é
Figure img0055
[00182] Em certas representações, Lig é
Figure img0056
[00183] Em certas representações, Lig é
Figure img0057
[00184] Em certas representações, Lig é
Figure img0058
[00185] Em certas representações, Lig é
Figure img0059
[00186] Em certas representações, Lig é
Figure img0060
[00187] Em certas representações, Lig é
Figure img0061
[00188] Em certas representações, Lig é
Figure img0062
[00189] Em certas representações, Lig é
Figure img0063
[00190] Em certas representações, R1 é
Figure img0064
[00191] Em certas representações, R1 é
Figure img0065
[00192] Em certas representações, R1 é
Figure img0066
[00193] Em certas representações, R1 é
Figure img0067
[00194] Em certas representações, R1 é
Figure img0068
[00195] Em certas representações, R1 é
Figure img0069
[00196] Em certas representações, R1 é
Figure img0070
[00197] Em certas representações, u é um inteiro, e em algumas dessas representações, é 1-1000 ou 1-500 ou 1-100 ou 1-10, ou é pelo menos 2 ou pelo menos 3 ou pelo menos 4 ou pelo menos 5 ou pelo menos 10, ou é qualquer inteiro de 1-5 ou 1-10 ou 1-20, ou qualquer valor até o ponto em que a processabilidade se torne problemática devido á agregação e/ou insolubilidade.
[00198] Em certas representações, R1 é
Figure img0071
[00199] Em certas representações, R1 é
Figure img0072
[00200] Em certas representações, R1 é
Figure img0073
[00201] Em certas representações, R1 é
Figure img0074
[00202] Em certas representações, R1 é
Figure img0075
[00203] Em certas representações, R1 é
Figure img0076
[00204] Em certas representações, R1 é
Figure img0077
[00205] Em certas representações, R1 é
Figure img0078
[00206] Em certas representações, R1 é
Figure img0079
[00207] Em certas representações, R1 é
Figure img0080
[00208] Em certas representações, R1 é
Figure img0081
[00209] Em certas representações, R1 é
Figure img0082
[00210] Em certas representações, R2a is hidrogênio.
[00211] Em certas representações, R2a é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00212] Em certas representações, R2a é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00213] Em certas representações, R2a é C3-7 cicloalquil opcionalmente substituído.
[00214] Em certas representações, R2a é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00215] Em certas representações, R2a é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00216] Em certas representações, R2a é CO2R5.
[00217] Em certas representações, R2a é CONR62.
[00218] Em certas representações, R2a é NR72.
[00219] Em certas representações, R2a é sulfato.
[00220] Em certas representações, R2a é sulfonato.
[00221] Em certas representações, R2a é aril opcionalmente substituído.
[00222] Em certas representações, R2a é ariloxi opcionalmente substituído.
[00223] Em certas representações, R2a é heteroaril opcionalmente substituído.
[00224] Em certas representações, R2a é heterociclo opcionalmente substituído.
[00225] Em certas representações, R2b é hidrogênio.
[00226] Em certas representações, R2b é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00227] Em certas representações, R2b é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00228] Em certas representações, R2b é C3-7 cicloalquil opcionalmente substituído.
[00229] Em certas representações, R2b é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00230] Em certas representações, R2b é C1-6 alcoxi opcionalment substituído.
[00231] Em certas representações, R2b é CO2R5.
[00232] Em certas representações, R2b é CONR62.
[00233] Em certas representações, R2b é NR72.
[00234] Em certas representações, R2b é sulfato.
[00235] Em certas representações, R2b é sulfonato.
[00236] Em certas representações, R2b é aril opcionalmente substituído.
[00237] Em certas representações, R2b é ariloxi opcionalmente substituído.
[00238] Em certas representações, R2b é heteroaril opcionalmente substituído.
[00239] Em certas representações, R2a é heterociclo opcionalmente substituído.
[00240] Em certas representações, R2c é hidrogênio.
[00241] Em certas representações, R2c é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00242] Em certas representações, R2c é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00243] Em certas representações, R2c é C3-7 cicloalquil opcionalmente substituído.
[00244] Em certas representações, R2c é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00245] Em certas representações, R2c é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00246] Em certas representações, R2c é CO2R5.
[00247] Em certas representações, R2c é CONR62.
[00248] Em certas representações, R2c é NR72.
[00249] Em certas representações, R2c é sulfato.
[00250] Em certas representações, R2c é sulfonato.
[00251] Em certas representações, R2c é aril opcionalmente substituído.
[00252] Em certas representações, R2c é ariloxi opcionalmente substituído.
[00253] Em certas representações, R2c é heteroaril opcionalmente substituído.
[00254] Em certas representações, R2c é heterociclo opcionalmente substituído.
[00255] Em certas representações, R2d é hidrogênio.
[00256] Em certas representações, R2d é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00257] Em certas representações, R2d é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00258] Em certas representações, R2d é C3-7 cicloalquil opcionalmente substituído.
[00259] Em certas representações, R2d é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00260] Em certas representações, R2d é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00261] Em certas representações, R2d é CO2R5.
[00262] Em certas representações, R2d é CONR62.
[00263] Em certas representações, R2d é NR72.
[00264] Em certas representações, R2d é sulfato.
[00265] Em certas representações, R2d é sulfonato.
[00266] Em certas representações, R2d é aril opcionalmente substituído.
[00267] Em certas representações, R2d é ariloxi opcionalmente substituído.
[00268] Em certas representações, R2d é heteroaril opcionalmente substituído.
[00269] Em certas representações, R2d é heterociclo opcionalmente substituído.
[00270] Em certas representações, R2e é hidrogênio.
[00271] Em certas representações, R2e é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00272] Em certas representações, R2e é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00273] Em certas representações, R2e é C3-7 cicloalquil opcionalmente substituído.
[00274] Em certas representações, R2e é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00275] Em certas representações, R2e é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00276] Em certas representações, R2e é CO2R5.
[00277] Em certas representações, R2e é CONR62.
[00278] Em certas representações, R2e é NR72.
[00279] Em certas representações, R2e é sulfato.
[00280] Em certas representações, R2e é sulfonato.
[00281] Em certas representações, R2e é aril opcionalmente substituído.
[00282] Em certas representações, R2e é ariloxi opcionalmente substituído.
[00283] Em certas representações, R2e é heteroaril opcionalmente substituído.
[00284] Em certas representações, R2e é heterociclo opcionalmente substituído.
[00285] Em certas representações, R2f é hidrogênio.
[00286] Em certas representações, R2f é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00287] Em certas representações, R2f é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00288] Em certas representações, R2f é C3-7 cicloalquil opcionalmente substituído.
[00289] Em certas representações, R2f é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00290] Em certas representações, R2f é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00291] Em certas representações, R2f é CO2R5.
[00292] Em certas representações, R2f é CONR62.
[00293] Em certas representações, R2f é NR72.
[00294] Em certas representações, R2f é sulfato.
[00295] Em certas representações, R2f é sulfonato.
[00296] Em certas representações, R2f é aril opcionalmente substituído.
[00297] Em certas representações, R2f é ariloxi opcionalmente substituído.
[00298] Em certas representações, R2f é heteroaril opcionalmente substituído.
[00299] Em certas representações, R2f é heterociclo opcionalmente substituído.
[00300] Em certas representações, R3a é hidrogênio.
[00301] Em certas representações, R3a é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00302] Em certas representações, R3a é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00303] Em certas representações, R3a é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00304] Em certas representações, R3a é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00305] Em certas representações, R3a é CO2R8.
[00306] Em certas representações, R3b é hidrogênio.
[00307] Em certas representações, R3b é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00308] Em certas representações, R3b é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00309] Em certas representações, R3b é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00310] Em certas representações, R3b é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00311] Em certas representações, R3b é CO2R8.
[00312] Em certas representações, R3c é hidrogênio.
[00313] Em certas representações, R3c é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00314] Em certas representações, R3c é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00315] Em certas representações, R3c é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00316] Em certas representações, R3c é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00317] Em certas representações, R3c é CO2R8.
[00318] Em certas representações, R3d é hidrogênio.
[00319] Em certas representações, R3d é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00320] Em certas representações, R3d é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00321] Em certas representações, R3d é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00322] Em certas representações, R3d é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00323] Em certas representações, R3d é CO2R8.
[00324] Em certas representações, R3e é hidrogênio.
[00325] Em certas representações, R3e é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00326] Em certas representações, R3e é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00327] Em certas representações, R3e é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00328] Em certas representações, R3e é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00329] Em certas representações, R3e é CO2R8.
[00330] Em certas representações, R3f é hidrogênio.
[00331] Em certas representações, R3f é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00332] Em certas representações, R3f é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00333] Em certas representações, R3f é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00334] Em certas representações, R3f é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00335] Em certas representações, R3f é CO2R8.
[00336] Em certas representações, R3g é hidrogênio.
[00337] Em certas representações, R3g é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00338] Em certas representações, R3g é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00339] Em certas representações, R3g é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00340] Em certas representações, R3g é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00341] Em certas representações, R3g é CO2R8.
[00342] Em certas representações, R3h é hidrogênio.
[00343] Em certas representações, R3h é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00344] Em certas representações, R3h é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00345] Em certas representações, R3h é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00346] Em certas representações, R3h é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00347] Em certas representações, R3h é CO2R8.
[00348] Em certas representações, R3i é hidrogênio.
[00349] Em certas representações, R3i é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00350] Em certas representações, R3i é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00351] Em certas representações, R3i é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00352] Em certas representações, R3i é C1-6 alcoxi opcionalmente substitído.
[00353] Em certas representações, R3i é CO2R8.
[00354] Em certas representações, R3j é hidrogênio.
[00355] Em certas representações, R3j é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00356] Em certas representações, R3j é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00357] Em certas representações, R3j é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00358] Em certas representações, R3j é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00359] Em certas representações, R3j é CO2R8.
[00360] Em certas representações, R3k é hidrogênio.
[00361] Em certas representações, R3k é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00362] Em certas representações, R3k é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00363] Em certas representações, R3k é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00364] Em certas representações, R3k é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00365] Em certas representações, R3k é CO2R8.
[00366] Em certas representações, R3l é hidrogênio.
[00367] Em certas representações, R3l é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00368] Em certas representações, R3l é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00369] Em certas representações, R3l é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00370] Em certas representações, R3l é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00371] Em certas representações, R3l é CO2R8.
[00372] Em certas representações, R3m é hidrogênio.
[00373] Em certas representações, R3m é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00374] Em certas representações, R3m é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00375] Em certas representações, R3m é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00376] Em certas representações, R3m é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00377] Em certas representações, R3m é CO2R8.
[00378] Em certas representações, R4a é hidrogênio.
[00379] Em certas representações, R4a é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00380] Em certas representações, R4a é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00381] Em certas representações, R4a é C1-6 cicloalquil opcionalmente substituído.
[00382] Em certas representações, R4a é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00383] Em certas representações, R4a é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00384] Em certas representações, R4a é CO2R5.
[00385] Em certas representações, R4a é CONR62
[00386] Em certas representações, R4a é NR72.
[00387] Em certas representações, R4a é sulfato.
[00388] Em certas representações, R4a é sulfonato.
[00389] Em certas representações, R4a é aril opcionalmente substituído.
[00390] Em certas representações, R4a é ariloxi opcionalmente substituído.
[00391] Em certas representações, R4a é heteroaril opcionalmente substituído.
[00392] Em certas representações, R4a é heterociclo opcionalmente substituído.
[00393] Em certas representações, R4b é hidrogênio.
[00394] Em certas representações, R4b é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00395] Em certas representações, R4b é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00396] Em certas representações, R4b é C1-6 cicloalquil opcionalmente substituído.
[00397] Em certas representações, R4b é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00398] Em certas representações, R4b é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00399] Em certas representações, R4b é CO2R5.
[00400] Em certas representações, R4b é CONR62
[00401] Em certas representações, R4b é NR72.
[00402] Em certas representações, R4b é sulfato.
[00403] Em certas representações, R4b é sulfonato.
[00404] Em certas representações, R4b é aril opcionalmente substituído.
[00405] Em certas representações, R4b é ariloxi opcionalmente substituído.
[00406] Em certas representações, R4b é heteroaril opcionalmente substituído.
[00407] Em certas representações, R4b é heterociclo opcionalmente substituído.
[00408] Em certas representações, R4c é hidrogênio.
[00409] Em certas representações, R4c é C1-6 alquil opcionalmente substituído.
[00410] Em certas representações, R4c é C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído.
[00411] Em certas representações, R4c é C1-6 cicloalquil opcionalmente substituído.
[00412] Em certas representações, R4c é C1-6 haloalquil opcionalmente substituído.
[00413] Em certas representações, R4c é C1-6 alcoxi opcionalmente substituído.
[00414] Em certas representações, R4c é CO2R5.
[00415] Em certas representações, R4c é CONR62
[00416] Em certas representações, R4c é NR72.
[00417] Em certas representações, R4c é sulfato.
[00418] Em certas representações, R4c é sulfonato.
[00419] Em certas representações, R4c é aril opcionalmente substituído.
[00420] Em certas representações, R4c é ariloxi opcionalmente substituído.
[00421] Em certas representações, R4c é heteroaril opcionalmente substituído.
[00422] Em certas representações R4c é heterociclo opcionalmente substituído.
[00423] Em certas representações, R4a e R4b são tomados junto com o átomo ao qual eles são ligados para formar um anel opcionalmente substituído tendo a partir de 6 átomos contendo 2 átomos de oxigênio.
[00424] Em certas representações, R5 é hidrogênio.
[00425] Em certas representações, R5 é alquil substituído.
[00426] Em certas representações , R6 é hidrogênio.
[00427] Em certas representações, R6 é alquil substituído.
[00428] Em certas representações, R7 é hidrogênio.
[00429] Em certas representações, R7 é alquil substituído.
[00430] Em certas representações, R8 é hidrogênio.
[00431] Em certas representações, R8 é alquil substituído.
[00432] Em certas representações, q é 0 ou 1 ou 2 ou 3 ou 4 ou 5.
[00433] Em certas representações, t é 1 ou 2 ou 3 ou 4 ou 5 ou 6.
[00434] Representações exemplares incluem compostos tendo a fórmula (VI) ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos:
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onde exemplos não limitadores de M, Lig, e R1 são definidos aqui abaixo na Tabela 1.
[00435] Tabela 1:
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[00436] Representações exemplares incluem compostos tendo a fórmula (VII) ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos:
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onde exemplos não limitadores de M, Lig, e R1 são definidos aqui abaixo na Tabela 2.
[00437] Tabela 2:
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[00438] Representações exemplares incluem compostos tendo a fórmula (VIII) ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos:
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onde exemplos não limitadores de M, R1, X, e h são definidos aqui abaixo na Tabela 3.
[00439] Tabela 3:
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[00440] Representações exemplares incluem compostos tendo a fórmula (IX) ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos:
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onde exemplos não limitadores de M, Lig, t, X, e q são definidos aqui abaixo na Tabela 4.
[00441] Tabela 4:
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[00442] Representações exemplares incluem compostos tendo a formula (X) ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos:
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onde exemplos não limitadores de M, Lig, t, X, e q são definidos aqui abaixo na Tabela 5.
[00443] Tabela 5:
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[00444] Representações exemplares incluem compostos tendo a fórmula (Xa) ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos:
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onde exemplos não limitadores de M, X, n, e R1 são definidos aqui abaixo na Tabela 5a.
[00445] Tabela 5a:
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[00446] Representações exemplares incluem compostos tendo a fórmula (Xb) ou uma forma de sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos:
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onde exemplos não limitadores de M, Lig, R1 X, e n são definidos aqui abaixo na Tabela 5b.
[00447] Tabela 5b:
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[00448] Para o propósito da presente invenção, um composto descrito pela fórmula racêmica significará igualmente qualquer um dos dois enantiômeros ou misturas dos mesmos, ou no caso em que um Segundo centro quiral esteja presente, todos os diastereômeros.
[00449] Em todas as representações aqui fornecidas, exemplos de substituintes opcionais apropriados não pretendem limitar o escopo da invenção reivindicada. Os compostos da invenção podem conter qualquer um dos substituintes, ou combinações de substituintes, aqui fornecidos.
[00450] Propriedades fotofísicas dos compostos da invenção:
[00451] A natureza modular dos compostos da divulgação permite a sintonia fina das suas propriedades fotofísicas atraves de alterações de menor importância no andaime molecular. Por exemplo, nas series 1a, 10a, e 14a (Figura 2), os espectros de absorção mudam sistematicamente para ondas mais longas, levando a aumentos correspondentes nos coeficientes de extinção na região visível (Tabela 6). Quando R é um único tiofeno como em 1a, a absorção integrada de luz visível (ε vs. cm-1) é de aproximadamente 5841 (Figura 2). A incorporação de unidades de tiofeno adicionais no grupo R pendente aumenta essa seção cruzada de absorção; para 10a e 14a, esses aumentos são de 40% e 141%, respectivamente (Tabela 7). De acordo com essa progressão, a absorção de luz visível aumentará sistematicamente nos complexos homolépticos correspondentes à medida que o número de ligadores de tiofeno é aumentado. Esses melhoramentos na absorção de luz visível são críticos para a otimização de PDCs para aplicações como PDT.
[00452] Tabela 6: Absorção eletrônica e máxima emissão para PDCs e os compostos de referência
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[00453] Tabela 7: Perfis de absorção integrada para PDCs no limite visível (25,000-15,000 cm-1).
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[00454] A natureza modular dos compostos da divulgação permite a sintonia fina das suas propriedades fotofísicas através de mudanças sistemáticas no andaime molecular. Por exemplo, nas series 1a, 10a, 14a, e 16a, os espectros de absorção se estendem para ondas mais longas à medida que o número de anéis de tiofeno é aumentado, levando a absorção na região infravermelha mais próxima quando 4 tiofenos estão presentes (16a). Também, a absorção integrada de 400-900 nm é quase quatro vezes maior para 16a versus 1a (Tabela 8 e Figura 3).
[00455] Tabela 8: Perfis de absorção integrada para PDCs 1a, 10a, 14a, e 16a na região visível e região NIR.
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[00456] Os atuais sensibilizadores para PDT se baseiam na geração de 1O2 para ação fotodinâmica direcionada a células alvo. Similar à tendência em absorção visível, o rendimento quântico para a produção de 1O2 para esses compostos também aumenta com o número de unidades de tiofeno (Figura 4). O C1O2 medido para 1 a é de 0,47 enquanto que 10a e 14a rendem 0,74 e 1,0, respectivamente (Tabela 9). Dois compostos adicionais nessa família incluindo 14a (Figura 1, 3a e 3b) apresentaram 100% de eficiência para sensibilização 1O2, excedendo a droga de PDT PHOTOFRIN (D1O2 = 0.75, etanol). Interessantemente, apesar dos rendimentos quânticos 1O2 notáveis, compostos da divulgação tem um rendimento quântico para emissão menor do que 1% em solução desoxigenada (ex., 14a □1O2< 0.15%). Consequentemente, outra via não radioativa se torna importante na ausência de O2 e pode predominar sob condições hipóxicas, transmitindo a independência O2 para os compostos da divulgação como um agente PDT. O fato de que compostos da invenção fotodanificam o DNA sob condições hipóxicas é evidência para a potencial independência de O2 em termos de atividade fotobiológica.
[00457] Tabela 9: Propriedades fotofísicas para PDCs
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*purge de argonio, 30 min. at 30±5 mm Hg.
[00458] Propriedades de ligação de DNA dos compostos da divulgação:
[00459] Conforme mostrado na Figura 5, 10a liga DNA muito fortemente, tendo um dos maiores constantes de ligação conhecidos para esse tipo de interação (Kb = 9.1x107 em 372 nm; 4.4x107 at 460 nm) determinada pela absorção UV-Vis. A magnitude dessa interação de ligação é ainda sustentada por medições de emissão (Kb = 4.2 x 107 at 625 nm) e é também observado para outros PDCs da invenção como 14a. Essa ligação ocorre em células e pode ser vista como coloração nuclear difusa pelo PDC 14a em células HL60 quando visto pelo microscópio confocal de triagem a laser (Figura 6).
[00460] Alterações na identidade dos ligantes auxiliares (10b) ou uma redução no número de tiofenos no ligante C2-substituído (1a) atenua a afinidade de ligação por uma ordem de magnitude, indicando que modificações sutis levam a efeitos profundos dentro de uma única família de PDCs estruturalmente relacionados da divulgação (Tabela 10).
[00461] Tabela 10: Constantes de ligação de DNA de titulações óticas de absorção e emissão
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[00462] Os PDCs da divulgação também diferem até o ponto em que eles estabilizam uma hélice de DNA quando ligam (Figura 7, Tabela 11). Mesmo que 1a apresente uma ligação mais fraca ao DNA em relação a 10a, a porção adicional de tiofeno em 10a leva à menor estabilização da hélice sobre a ligação de DNA conforme observado por apenas um leve aumento em Tm de 1 oC. Na verdade, a análise eletroforética de gel indica que 10a desestabiliza substancialmente a estrutura de DNA nativa, evidenciado pela incapacidade do brometo de etídio intercalador de colorir o DNA efetivamente em [10a]:[DNA] >0.4 (Figura 14, (b) Faixas 8-14); em contraste, 1a não interfere com a intercalação de brometo de etídio, e as faixas de gel produzidas pela coloração de brometo de etídio permanecem visíveis com a maior concentração de PDC (Figura 14, (a) Faixas 8-14).
[00463] Tabela 11: Parametros para desnaturação térmica para CT-DNA com 1a, 1b, 10a, e 10b adicionados ([PDC]/[NP]=0.1). Tm para CT-DNA na ausência de um PDC foi de 78.6 oC.
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[00464] Efeitos de Interruptor de Luz em DNA dos Compostos da Invenção
[00465] Ao mesmo tempo em que os PDCs da divulgação, excluindo 1a e 1b, tem um rendimento quântico para emissão de menos de 1% no ar, eles se tornam mensuravelmente emissivos na ausência de oxigênio (Tabela 9) ou na presença de DNA (Figura 8), esse último conhecido como o efeito interruptor de luz em DNA. Esse efeito aumenta com o número de unidades de tiofeno no grupo R pendente: aproximadamente 2-, 3-, e 4- vezes para 1a, 10a, e 14a, respectivamente (Tabela 12).
[00466] Tabela 12: Aumento medido para efeito de interruptor de luz em DNA produzido por PDCs 1a, 10a , e 14a
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[00467] O aumento na luminiscência pode ser explorado para detectar os PDCs da invenção na presença de biomoléculas e/ou ambientes hipóxicos ou para verificar a localização subcelular. Por exemplo, 10a localiza fora do núcleo em células não irradiadas (Figura 10c) enquanto 14a parece colorir a cromatina (Figura 12c). Em células irradiadas, tanto 10a quanto 14a são distribuídos através do citoplasma e núcleo (Figuras 10d e 12d). Interessantemente, 10a e 10b colorem células não viáveis no escuro em 5 minutos (Figuras 10b e 11b). 1a, sendo de 1-2 ordens de magnitude mais emissivo do que 10a ou 14a em ar ou argão, pode ser usado como um corante em concentração muito mais baixa.
[00468] Propriedades de Fotoclivagem de DNA dos compostos da divulgação:
[00469] Talvez devido, em parte, a interações de ligação muito fortes com DNA, PDCs da divulgação causam extensos danos de DNA na forma de quebras de cadeia simples com a irradiação com luz visível. A observação de que não ocorrem quebras de cadeia em concentrações similares de PDC sem ativação de luz é muito promissora como um mecanismo para destruição celular baseada na ação fotodinâmica (Figuras 13 e 14). Dado que o DNA é a cópia heliográfica para toda a função celular, a ação fotodinâmica direcionada para essa biomolécula iniciará vias apoptóticas que destroem seletivamente células irradiadas que tenham tomado o PDC da divulgação. O mecanismo para o dano de DNA não está confirmado, mas com rendimentos quânticos de unidade 1O2 para PDCs como 14a, é provável que o fotodano 1O2-mediado desempenhe um papel significativo em condições oxigenadas. Sob condições hipóxicas, o fotodano de DNA por esses compostos permanece significativo (Figuras 15 e 16, Tabelas 12 e 13), indicando que células deficientes em oxigênio são suscetíveis à ação fotodinâmica por PDCs como 10a e 14a. Esse dano de DNA oxigênio-independente é ainda corroborado pelo fato de que o rendimento quântico de emissão para um composto como 14a permanece muito baixo (0.13%) na ausência de oxigenio. Consequentemente, a transferência de elétron intra- ou intermolecular, que é comum em fotofísica de tiofeno, também contribui para o decaimento não radioativo nesses sistemas. Essas vias de transferência de elétron podem se tornar importantes na ausência de oxigênio molecular, fazendo surgir o fotoprocesso Tipo I com biomoléculas. Experimentos preliminares indicam que energia versus transferência de elétron é governada pelo ambiente. Em outras palavras, pode não haver uma divisão de energia em estado excitado entre numerosas vias; em vez disso, a presença de oxigênio serve para trocar entre duas vias não radioativas principais: transferência de elétron e transferência de energia, ambas extremamente eficientes para invocar o dano de DNA. Essa troca fotodinâmica entre fotoprocessos Tipo I e Tipo II assegura que a ação fotodinâmica é ideal independentemente da concentração de oxigênio. Um PDC assim versátil elimina a necessidade de fotosensibilizadores distintos Tipo I e Tipo II para maximizar a ação fotodinâmica de acordo com níveis de oxigênio em células alvo.
[00470] Tabela 12: Percentagens calculadas de formas de DNA observadas para fotoclivagem pUC19 PDC-mediada em solução ar-saturada e desoxigenada com irradiação de 420-nm, Figura 15.
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[00471] Tabela 13: Percentagens calculadas de formas de DNA observadas para fotoclivagem pUC19 PDC-mediada em solução ar-saturada e desoxigenada com irradiação visível , Figura 16.
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[00472] Citotoxicidade e Fotocitotoxicidade dos Compostos da Invenção
[00473] Um hospedeiro de PDCs da divulgação apresenta fotocitotoxicidade marcada com nenhuma toxicidade escura substancial até mesmo em concentrações tão altas quanto 100 μM (checado em 12, 18, 24, 36, e 48 hrs. pós-irradiação). Conforme observado para 1a, 10a, e 14a em termos de absorção visível integrada, Φ1O2, ligação de, e fotodano de DNA, existe um efeito profundo de estrutura total na fotocitotoxicidade em direção a células HL-60. Para ilustrar, 10a, que difere de 10b apenas no fato de que Lig = [2,2']bipiridina em vez de [1,10]fenantrolina, é fototóxica em direção a células em 20 μM, enquanto que 10b não apresenta fotocitotoxicidade até mesmo em 100 μM (Figura 17). Para as séries 1a, 10a, e 14a, onde Lig = [2,2']bipiridina e R1 diferem pelo número de tiofenos que formam a unidade pendente C2, há uma diferença drástica na fotocitotoxicidade em direção a células HL-60, pela qual a ação fotodinâmica é de 100% em menos de 10 μM para 14a e virtualmente zero em concentrações similares de 1a (Figura 18). Interessantemente, à medida que o número de tiofenos que formam R1 aumenta, assim também a ação fotodinâmica em direção a células HL-60. Essa progressão foi confirmada através de coloração de viabilidade com Trypan Blue usando um sistema comercial de contagem de células bem como coloração de viabilidade AO-EB usando microscopia por epi-fluorescência (Figura 19). Essa atividade coloca em paralelo as tendências observadas para absorção visível integrada, Φ1O2, e fotodano de DNA, que juntos determinam a fotocitotoxicidade total para um determinado PDC em direção a uma determinada célula.
[00474] Para discernir se a variabilidade lote-a-lote na ação fotodinâmica existe para os PDCs da divulgação, 1a, 10a, e 14a foram sintetizados usando um novo método para preparar compostos da divulgação usando irradiação por microondas. As suas estruturas moleculares foram confirmadas por 1H NMR, HRMS, e análise elementar e foram idênticas às estruturas obtidas via metodologia padrão. A fotocitotoxicidade observada para os PDCs 1a, 10a, e 14a preparada por irradiação por microondas apresenta a mesma tendência que foi documentada para os PDCs 1a, 10a, e 14a preparados de acordo com métodos padrão: a saber, 14a > 10a > 1a (Figura 20). Da mesma forma, as concentrações efetivas nas quais a fotocitotoxicidade é observada para cada PDC não varia substancialmente entre os dois lotes preparados independentmente para os tempos pós-irradiação empregados (18 hrs., Figura 21 e 40 hrs., Figura 22). A ação fotodinâmica de 14a é melhor ilustrada nas Figuras 23-25, onde 100% de fotocitotoxicidade ocorre no limite 5-10 μM.
[00475] Ativação de Vias Apoptóticas por Compostos da Divulgação
[00476] Tanto 10a quanto 14a exercem a sua fotocitotoxicidade ativando vias apoptóticas. A condensação nuclear e a formação de corpos apoptóticos podem ser vistas claramente com coloração de morfologia nuclear AO-EB em 18 e 40 hrs. pós-irradiação por microscopia por epi-fluorescência de células tratadas com 10a (Figura 26, Painel C). AO colore núcleos viáveis e floresce verde intenso (Figura 26, Painel B, célula superior direita) enquanto que EB colore núcleos não viáveis e floresce vermelho intenso (Figura 26, Painel C, célula inferior esquerda). Da mesma forma a condensação nuclear e a formação de corpos apoptóticos são evidentes em células com corante AO-EB tratadas com 14a em 18 (Figura 27) e 40 hrs. (Figura 28) pós-irradiação.
[00477] Outra sustentação para apoptóse como principal mecanismo para destruição celular é baseada nas grandes alterações no diâmetro celular que ocorre com a irradiação de células que foram tratadas com 10a ou 14a. É bastante conhecido o fato de que os diâmetros de células apoptóticas são significativamente menores do que os de células normais ou necróticas. Células HL-60 saudáveis podem ter de 9-25 μm de diâmetro, embora 13 μm seja típico. As células HL-60 usadas nesses estudos de citotoxicidade tem em média 11-13 μm de diâmetro. Na presença de 50 μM 10a, 70% das células HL- 60 irradiadas que permanecem em 40 hrs. tem dificilmente metade do seu tamanho original (diâmetro médio <6 μm) enquanto que a mesma concentração de 10b tem pouco efeito sobre o diâmetro celular médio (Figura 29). A mesma tendência existe para 14a enquanto que 1a, que não apresenta fotocitotoxicidade significativa, não altera notavelmente a distribuição de diâmetro da célula HL-60 irradiada (Figura 30). Interessantemente, 1a produz uma pequena população (<30% em 40 hrs.) de células HL-60 com diâmetros menores do que 6 μm no escuro. Essa descoberta é corroborada pela ligeira toxicidade escura observada para 1a (Figura 18a). Juntas, essas alterações na distribuição de tamanho com a irradiação de células PDC tratadas ainda destaca que a estrutura de compostos da divulgação tem um efeito importante e distinto na fotobiologia desses PDCs da divulgação. A variação sistemática que pode ser alcançada em termos das suas propriedades fotofísicas, fotoquímicas, e fotobiológicas oferece um caminho para o design racional de PDC e otimização dos compostos da divulgação.
[00478] PDCs da divulgação como oxidantes e redutores em estado exitado:
[00479] Os compostos da divulgação são capazes de agir como oxidantes e redutores em estado exitado. Por exemplo, os potenciais de redução e oxidação em estado excitado de 14a são estimados em 1.31 e -0.87 V, respectivamente, tornando tanto a oxidação de guanina e cistosina quanto a redução de timina viáveis com a fotoativação (Tabela 14, Figuras 31 e 32). Compostos da divulgação agem como fotoredutores para DNA, sustentados pela observação de que redutores endógenos como glutationa (GSH) e ácido ascórbico (AA) facilitam o fotodano de DNA por compostos da divulgação.
[00480] Tabela 14: Estado fundamental e potenciais redox em estado excitado de 14a
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[00481] A fotoclivagem de DNA produzida por 14a é bastante aumentada por redutores endógenos como glutationa (GSH). Em concentrações submicromolares de 14a, 4 mM de GSH resulta em quebras de cadeia dupla detectáveis enquanto o DNA exposto ao PDC sozinho é na maior parte intacto (Figura 33, Faixa 1). Em 3 μM 14a, a presença de GSH resulta na total degradação do DNA (Figura 33 Faixa 6). É bastante conhecido o fato de que a concentração de GSH é alta em células tumorais humanas, diminuindo os efeitos citotóxicos de agentes de alquilação eletrofílica (tais como cisplatina) e radiação e também dimunuindo os efeitos de PDT. Aqui divulgamos uma família de agentes PDT que é preferencialmente ativada por GSH.
[00482] A capacidade de GSH de facilitar o dano de DNA é ampla em escopo e se aplica a compostos adicionais da divulgação (ex., 14c e 16c), e a outros redutores (ascorbato, DTT, NADH, etc.). A Figura 34 (Faixas 7-16) ilustra em mrelação a 1a, a adição de GSH (0.5-7 mM) não tem efeito na fotoclivagem de DNA, e a forma predominante de DNA é super-enrolada (Forma I). Para 10a, GSH promove a formação de quebras de cadeia simples e de cadeia dupla de DNA, e para 14a, GSH promove a total degradação do DNA. Para todos os três complexos, a Faixa 17 mostra a quantidade de dano de DNA para pBR322 que resulta em fotoativação de 2 μM PDC na ausência de GSH. Para comparação, a Faixa 14 mostra o efeito de 6 mM GSH no fotodano de DNA pelos PDCs: (a) não há efeito na fotoclivagem de DNA por 1a; (b) GSH facilita a formação de quebras de cadeia dupla por 10a; e (c) GSH facilita a total degradação de DNA por 14a. A Figura 35 demonstra a facilitação do fotodano de DNA por 14a para outro redutor, ácido ascórbico (AA). Uma comparação entre as Faixas 13 e 14 mostra claramente que a presença de AA transforma um fotoclivador de DNA de cadeia predominantemente simples em um degradador de DNA muito poderoso (note mancha nas Faixas 9-13).
[00483] Destruição de Células Cancerígenas por Compostos da Invenção
[00484] Compostos da divulgação com baixa toxicidade escura são capazes de destruir efetivamente células cancerígenas por PDT em concentrações muito baixas ex vivo (i.e., em uma célula fora de um animal). Um PDC ideal deveria apresentar efeitos de PDT em baixas concentrações de PDC tendo ao mesmo tempo uma baixa toxicidade escura, i.e., a morte celular do PDC sozinho sem exposição à luz. A toxicidade escura e os efeitos do PDT na morte celular para os PDCs 10A, 14A, e 16A foram testados ex vivo nas seguintes linhagens celulares: CT26.WT (carcinoma de cólon murino), U87 (glioblastoma humano), F98 (glioma de rato). A irradiação foi conduzida a 45 J/cm2 (TLC-3000 fonte de luz, À=530nm, 4-6 horas PS-intervalo de luz) e a viabilidade celular foi medida 24 horas pós-irradiação usando o teste de viabilidade celular Presto Blue. A Figura 39 mostra que nem 10A, 14A, nem 16A sozinhos (sem luz) demonstraram significativa morte celular. Entretanto, um forte efeito fotodinâmico (PDC mais luz) foi observado com 10A, 14A, e 16A; 60-100% de morte celular em todas as três linhagens celulares, dependendo da concentração de PDC. O melhor efeito em morte celular foi mostrado para 14A e 16A, seguido por 10A.
[00485] Eficácia in vivo dos componentes da divulgação:
[00486] Compostos da divulgação tem doses de PDT in vivo eficazes comparáveis com as aprovadas pelo FDA PHOTOFRIN e Ácido Aminolevulínico (ALA). A dose tóxica média que causa morte de 50% dos animais testados (MTD50) foi determinada para os PDCs 14A e 14C. MTD50 foi identificado atraves da administração de uma série de doses da droga crescentes e decrescentes, começando em uma concentração 102 mais baixa em magnitude em relação ao MTD50 presumido a partir dos estudos in vitro. MTD50s para PDCs 14A e 14C são as doses eficazes que são usadas em outros estudos de PDT. Conforme mostrado na Figura 40, as doses eficazes de PDT para 14A e 14C caem dentro do limite de PHOTOFRIN e ALA, i.e., 36 mg/kg para 14A, 98 mg/kg para 14C, 10 mg/kg para PHOTOFRIN, e 250 mg/kg para ALA. Nota: a dose eficaz de protoporfirina IX (PPIX, o metabólito fotoativo de ALA), é de 1/4 da dose administrativa de ALA.
[00487] Potência Ex Vivo de Compostos da Divulgação
[00488] Compostos da divulgação são mais eficazes para matar células cancerígenas ex vivo se comparado com ALA. Por exemplo, 14A é mais eficaz em matar células cancerígenas ex vivo comparado com ALA. ALA é um PDC atualmente aprovado pelo FDA usado para tartar cânceres de pele, bexiga, e cérebro. Conforme mostrado na Figura 41, a toxicidade escura de 14A (PDC sozinho e sem luz) foi fraca ou insignificante em todas as três linhagens celulares cancerígenas (CT26.WT, U87, F980) que foi comparável ao nível de toxicidade escura de ALA nas mesmas concentrações. A eficácia de 14A mais luz (TLC-3000 fonte de luz, 530nm, 45J/cm2) em matar células foi também muito mais alta comparado com a eficácia de ALA. 14A resultou em 100% de morte celular em concentrações muito baixas, considerando que ALA produziu nenhuma, ou muito pouca, morte celular.
[00489] Penetração no Tecido de Compostos da Divulgação
[00490] PDCs deveriam absorver luz em ondas mais longas de modo a penetrar mais efetivamente no tecido. A absorção em ondas mais curtas alcançará menor penetração de tecido e pode levar a sensibilidade da pele. Para medir a absorção para cada PDC, PDC soluções concentradas foram diluidas com o mesmo solvente para alcançar uma densidade ótica (OD) de 0.2 em 525nm (6.7μM para 14C, 1.2μM para PPIX). As densidades óticas foram medidas de 300nm a 800nm. Conforme mostrado na Figura 42, tanto 14C quanto PPIX tem absorção similar e relativamente baixa em 525nm. A irradiação de PDT em ondas de 525nm ou mais longas, conforme visto com os compostos da divulgação, é clinicamente garantida, enquanto que o uso de ondas mais curtas não é clinicamente justificado.
[00491] Fotoestabilidade de Compostos da Divulgação
[00492] Compostos da divulgação apresentam maior fotoestabilidade comparado com PPIX. Um PDC eficaz deveria manter alta estabilidade fotoquímica, permitindo um longo prazo de validade. Para medir a fotoestabilidade, cada PDC foi irradiado com o OD nas ondas correspondentes à máxima absorção (423nm para 14C, 411 nm para PPIX), foi medido a cada 5 minutos durante 60 minutos de tempo total de irradiação. A Figura 43 mostra que o PDC 14C é fotobranqueado em aproximadamente 50%. PPIX sofreu um considerável fotobranqueamento durante 60 minutos de irradiação (aproximadamente 70%). 14C é, consequentemente, mais fotoestável do que PPIX.
[00493] Compostos da divulgação aumentam tempo de sobrevivência de camundongos com tumores
[00494] Os compostos da divulgação, ilustrados com TLD1411 (14a) e TLD1433 (14c), podem ser usados para destruir tumores in vivo. As curvas de Kaplein-Meier (Figura 44) descrevem as percentagens de sobrevivência animal para camundongos com tumores como uma função de dias pós-PDT para camundongos tratados apenas com luz (onda contínua (cw) ou pulsada), apenas fotosensibilizador (doses altas ou baixas), ou luz (cw ou pulsada) em combinação com fotosensibilizador (dose alta ou baixa). Os resultados demonstram que tanto a concentração do fotosensibilizador quanto o modo de administração da luz (cw versus pulsada) podem ser usados para otimizar o PDT em animais vivos. Os melhores resultados nesse modelo foram obtidos com alta dose de sensibilizador ativado por uma fonte de luz cw.
[00495] Os compostos da divulgação podem ser usados para destruir bactérias, particularmente na presença de luz, um tratamento conhecido como inativação fotodinâmica (PDI) ou quimioterapia fotodinâmica antimicrobial (PACT). Os compostos podem ser usados para esterilização, incluindo cepas de bactérias resistentes a antibióticos. Em um número de casos, mais de 7 logs de redução podem ser obtidos com ativação de luz (Figura 45 e 46).
[00496] Os compostos da divulgação podem ser usados para destruir células em baixa tensão de oxigênio conforme ilustrado para 14a e 14c contra SA e MRSA. Mais de 7 logs de redução podem ser mantidos em alguns casos sob condições hipóxicas. Consequentemente, esses compostos podem servir como fotosensibilizadores Tipo 1 (Figuras 45 e 46).
PROCESSO
[00497] A presente invenção se refere ainda a um processo para preparar os compostos fotodinâmicos da presente invenção.
[00498] Os compostos dos presentes ensinamentos podem ser preparados de acordo com os procedimentos aqui definidos a partir de materias primas comercialmente disponíveis, compostos conhecidos na literatura, ou intermediários facilmente preparados, empregando métodos sintéticos padrão e procedimentos conhecidos dos especialistas. Métodos sintéticos padrão e procedimentos para a preparaçãode moléculas orgânicas e complexos de coordenação e transformações e manipulações de grupos funcionais podem ser facilmente obtidos a partir da literatura científica relevante ou de livros texto padrão no campo. Pode-se observar que onde condições de processo típicas ou preferiveis (i.e., temperaturas de reação, tempos, proporções de reagentes, solventes, pressões, etc.) são dadas, outras condições de processo também podem ser usadas, salvo indicação em contrário. As condições ideais de reação podem variar com os reagentes ou solventes em particular usados, mas essas condições podem ser determinadas por qualquer especialista através de procedimentos de otimização de rotina. Os especialistas em síntese orgânica e inorgânica reconhecerão que a natureza e ordem das etapas sintéticas apresentadas podem ser variadas com o objetivo de otimizar a formação dos compostos aqui descritos.
[00499] Os processos aqui descritos podem ser monitorados de acordo com qualquer método conhecido adequado. Por exemplo, a formação do produto pode ser monitorada através de meio estretoscópico, como espectroscopia por ressonância magnética nuclear (ex., 1H or 13C), espectroscopia por infravermelho, espectrofotometria (ex., UV-visível), espectrometria de massa, ou por cromatografia assim como cromatografia líquida de alta pressão (HPLC), cromatografia por gás (GC), cromatografia por gel-permeação (GPC), ou cromatografia por camada fina (TLC).
[00500] A preparação dos compostos pode envolver a proteção e desproteção de vários grupos químicos. A necessidade de proteção e desproteção e a seleção de grupos de proteção apropriados pode ser facilmente determinada por qualquer especialista. A química de grupos de proteção pode ser encontrada, por exemplo, em Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed. (Wiley & Sons, 1991), cuja divlgação está aqui incorporada em sua totalidade para todos os propósitos.
[00501] As reações ou os processos aqui descritos podem ser realizados em solventes apropriados que podem se facilmente selecionados por qualquer especialista em síntese orgânica e inorgânica. Solventes apropriados tipicamente são substancialmente não-reativos com os reagentes, intermediários, e/ou produtos na temperatura em que as reações são realizadas, i.e., temperaturas que vão desde a temperatura de congelamento do solvente até a teperatura de ebulição do solvente. Uma determinada reação pode ser realizada em um solvente ou em uma mistura de mais de um solvente. Dependendo da etapa de reação em particular, solventes apropriados para uma determinada etapa de reação podem ser selecionados.
[00502] Os compostos desses ensinamentos podem ser preparados através de métodos conhecidos na ciência da química orgânica e inorgânica. Os reagentes usados na preparação dos compostos destes ensinamentos podem ser ou obtidos comercialmente ou preparados através de procedimentos padrão descritos na literatura. Por exemplo, compostos da presente invenção podem ser preparados de acordo com o método ilustrado no Esquema Sintético Geral:
ESQUEMA SINTÉTICO GERAL PARA A PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS
[00503] Os reagentes usados na preparação dos compostos desta invenção podem ser obtidos comercialmente ou podem ser preparados através de procedimentos padrão descritos na literatura. De acordo com esta invenção, compostos no gênero podem ser produzidos por um dos seguintes esquemas de reação.
[00504] Compostos de fórmula (I) podem ser preparados de acordo com o processo definido nos seguintes esquemas.
Figure img0232
[00505] Consequentemente, um composto adequadamente substituido da fórmula (XI), um composto conhecido ou composto preparado por métodos conhecidos, é reagido com um composto adequadamente substituido da fórmula (XII) na presença de um sal de amônio tal como acetato de amônio, formato de amônio, cloreto de amônio, brometo de amônio, sulfato de amônio e outros em um solvente como ácido acético, ácido fórmico, ácido propiônico e outros, opcionalmente na presença de metanol, etanol, N, N-dimetilformamida e outros, opcionalmente aquecido, opcionalmente aquecido por irradição de microondas, para fornecer um composto da fórmula (XIII). Um composto da fórmula (XIII) foi então reagido com um composto da fórmula (XIV) em um solvente como o metanol, etanol, isopropanol, etileno glicol, glicerol, água, 1,4- dioxano, dimetil formamida, misturas dos solventes acima mencionados, e outros, opcionalmente aquecidos, opcionalmente aquecidos com irradiação de microondas, para fornecer um composto da fórmula (II). Compostos da fórmula (II) podem ser convertidos em formas de sal alternativas através de métodos convencionais conhecidos.
[00506] Compostos de fórmula (III) podem ser preparados de acordo com o processo definido no Esquema 2.
Figure img0233
[00507] Consequentemente, um composto adequadamente substituído da fórmula (XI) é reagido com um composto da fórmula (XV) em um solvente como o metanol, etanol, isopropanol, etileno glicol, glicerol, água, 1,4-dioxano, dimetil formamida, misturas dos solventes acima mencionados, e outros, opcionalmente aquecidos, opcionalmente aquecidos com irradiação de microondas, para fornecer um composto da fórmula (III). Compostos da fórmula (III) podem ser convertidos em formas de sal alternativas através de métodos convencionais conhecidos.
[00508] Compostos de fórmula (IV) podem ser preparados de acordo com o processo definido no Esquema 3.
Figure img0234
[00509] Consequentemente, um composto adequadamente substituído da fórmula (XI) é reagido com um composto da fórmula (XVI) em um solvente como o metanol, etanol, isopropanol, etileno glicol, glicerol, água, 1,4-dioxano, dimetil formamida, misturas dos solventes acima mencionados, e outros, opcionalmente aquecido, opcionalmente aquecido com irradiação de microondas, para fornecer um composto da fórmula (IV). Compostos da fórmula (IV) podem ser convertidos em formas de sal alternativas através de métodos convencionais conhecidos.
[00510] Compostos de fórmula (V) podem ser preparados de acordo com o processo definido no Esquema 4.
Figure img0235
[00511] Consequentemente, um composto adequadamente substituído da fórmula (XI), um composto conhecido ou composto preparado através de métodos conhecidos, é reagido com um composto adequadamente substituído da fórmula (XVI) na presença de um sal de amônio como o acetato de amônio, formato de amônio, cloreto de amônio, brometo de amônio, sulfato de amônio e outros em um solvente como o ácido acético, ácido fórmico, ácido, ácido propiônico e outros, opcionalmente na presença de metanol, etanol, N, N- dimetilformamida e outros, opcionalmente aquecido, opcionalmente aquecido com irradiação de microondas, para fornecer um composto da fórmula (XVII). Um composto da fórmula (XVII) foi então reagido com um composto da fórmula (XVIII) em um solvente como o metanol, etanol, isopropanol etileno glicol, glicerol, água, 1,4-dioxano e outros, opcionalmente aquecido, opcionalmente aquecido com irradiação de microondas, para fornecer um composto da fórmula (V). Compostos da fórmula (V) podem ser convertidos em formas de sal alternativas através de métodos convencionais conhecidos.
[00512] Compostos da fórmula (II) podem ser preparados de acordo com o processo definido no Esquema 5.
Figure img0236
[00513] Consequentemente, um composto da fórmula (XIVa) é reagido com um composto da fórmula (XVa) em um solvente como o metanol, etanol, isopropanol, etileno glicol, glicerol, água, 1,4-dioxano, dimetil formamida, misturas dos solventes acima mencionados, e outros, opcionalmente aquecido, opcionalmente aquecido com irradiação de microondas, opcionalmente na presença de um ácido como o ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, e outros para fornecer um composto da fórmula (XVIa). Um composto da fórmula (XVIa) é reagido com um composto da fórmula (XVIIa) em um solvente como o metanol, etanol, isopropanol, etileno glicol, glicerol, água, 1,4-dioxano, dimetil formamida, misturas dos solventes acima mencionados, e outros, opcionalmente aquecido, opcionalmente na presença de uma base como trietilamina, diisopropiletilamina, piridina, e outros, opcionalmente aquecido com irradiação de microondas, opcionalmente sob uma atmosfera de argon, opcionalmente sob uma atmosfera de hidrogênio para fornecer um composto da fórmula (XVIIIa). Um composto da fórmula (XVIIIa) é reagido com um composto da fórmula (XIII) em um solvente como o metanol, etanol, isopropanol, etileno glicol, glicerol, água, 1,4-dioxano e outros, opcionalmente aquecido, opcionalmente aquecido com irradiação de microondas, optionalmente sob uma atmosfera de argon, opcionalmente sob uma atmosfera de nitrogênio, para fornecer um composto da fórmula (II).
[00514] A invenção será ilustrada mais detalhadamente com referência aos Exemplos seguintes, mas deve ser entendido que a presente invenção não está limitada pelos mesmos.
[00515] Os Exemplos fornecidos abaixo fornecem métodos representativos para preparar compostos exemplares da presente invenção. Um profissional saberá como substituir os reagentes apropriados, matéria prima e métodos de purificação conhecidos, de modo a preparar os compostos da presente invenção.
[00516] Os espectros 1H-NMR foram obtidos em um Bruker Avance 300MHz NMR. Dados espectrais de massa de baixa e alta resolução foram determinados com um instrumento Bruker Daltonics micrOTOF. EXEMPLOS
Figure img0237
[00517] Preparação de 14L: 10-fenantrolina-5,6-diona (166.6 mg, 0.800 mmol), acetato de amônio (616 mg, 8.00 mmol), e 5-formil-2,2’:5’,2”-tertiofeno (221.12, 0.800 mmol) foram combinados com ácido acético glacial (4.0 mL) em uma câmara de reação de microondas e reagidos com 300 W a 180 oC por 10 minutos. A solução mudou de uma coloração amarelo claro para uma coloração vermelho escuro e foi deixada esfriar em temperatura ambiente. A solução foi neutralizada por adição gota-a-gota de NH4OH aquoso (6 mL) até que o produto precipitasse como um sólido amarelo/marrom. O sólido foi coletado usando um filtro poroso de vidro sinterizado fino e lavado com H2O (15 mL). O produto foi secado sob vácuo para dar um pó amarronzado. (256 mg, 69%). Rf = (2% H2O, 43% CHCl3, 25% Acetona, 30% MeOH + 1% NH4OH). 1H NMR (DMSO-d6) 7.14 (dd; 1H; J = 4.37 Hz), 7.33-7.43 (m; 4H), 7.55 (m; 1H), 7.75-7.79 (m; 3H), 8.82 (d; 2H; J = 8.01 Hz), 8.97 (d; 2H; J = 3.00 Hz).
Figure img0238
[00518] Preparação de 14a: Ru(2,2'-bipiridina)2C^2H2O (156.1 mg, 0.300 mmol) e 14L (140.0 mg, 0.300 mmol) e 100% etanol (6.0 mL) foram combinados em um tubo de microondas e purgados em argon por 10 minutos passando o argon através de uma agulha na tampa do tubo. A tampa foi trocada por uma nova antes de ser colocada no microondas. A solução foi reagida com 300 W a 180 oC por 10 minutos. A solução resultante tinha uma coloração vermelho bem escuro. KPF6 saturado foi adicionado gota-a-gota à solução aquosa até que mais nenhum produto precipitasse (2 - 4 mL). O produto bruto foi isolado por filtração através de um filtro poroso de vidro sinterizado fino produzindo um sólido vermelho/laranja brilhante (307.8 mg, 88%). A purificação foi feita em uma coluna de sílica, eluindo com uma solução de 10% H2O:MeCN contendo 2.5% KNO3, e o ponto vermelho de princípio foi coletado (Rf = 0.46). As frações contendo o produto desejado foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida, e ainda secadas sob vácuo para dar o correspondente complexo NO3- e excesso KNO3. Para remover o sal indesejado, o produto foi dissolvido em H2O com sonicação. KPF6 saturado foi adicionado (3 - 4 mL), e o produto precipitado para fora da solução. O complexo PF6- desejado foi extraído usando CH2Cl2 (3 x 75 mL). A camada orgânica foi separada, concentrada sob pressão reduzida, e secada sob vácuo para dar o produto final puro como um sólido vermelho-laranja (169 mg, 48%). Rf = 0.41 (10% H2O:MeCN + 2.5% KNO3). 1H NMR (CD3CN): 8.65 (d; 2H; J = 7.89 Hz), 8.51-8.55 (m; 4H), 8.11-7.96 (m; 6H), 7.85 (d; 2H; J = 5.49 Hz), 7.72 (d; 1H; J = 3.81 Hz), 7.61-7.67 (m; 4H), 7.46 (t; 2H; J = 6.93 Hz), 7.37 (d; 1H; J = 5.10 Hz), 7.06-7.30 (m; 7H). MS (ESI+) m/z: 440.0 [M-2PF6]2+, 879.1 [M- 2PF6-1H]+. HRMS (ESI+) m/z para C45H30N8RuS3; calcd 440.0399; encontrado 440.0382.
[00519] O complexo PF6- foi dissolvido em uma solução de 1:1 de MeCN/MeOH e convertido ao seu sal Cl- correspondente em resina de troca de íon Amberlite IRA-410 (30 cm x 1.5 cm, 30 g of resin) eluindo com MeOH. Anal. Calc. C45H3oCi2N8RuS3 • 4.065(H2O): C, 52.77 %; H, 3.75 %; N, 10.94 %, Encontrado: C, 51.78 %; H, 4.25 %; N, 10.20 %.
Figure img0239
[00520] Preparação de 14C: Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2C^2H2O (60.2 mg, 0.104 mmol) e 14L (48.5 mg, 0.104 mmol) e 100% etanol (2.0 mL) foram combinados em um tubo de microondas e purgados em argon por 15 minutos passando o argon através de uma agulha na tampa do tubo. A tampa foi trocada por uma nova antes de ser colocada no microondas. A solução foi reagida com 300 W a 180 oC por 10 minutos. A solução resultante foi de uma coloração vermelho bem escuro. KPF6 saturado foi adicionado gota-a-gota à solução aquosa até que nenhum produto precipitasse (2 - 3 mL). O produto bruto foi isolado por filtração através de um filtro de vidro poroso sinterizado fino produzindo um sólido vermelho/marrom (112.6 mg, 88%). A purificação foi feita em uma coluna de sílica, eluindo com uma solução de 10% H2O:MeCN contendo 2.5% KNO3, e o ponto vermelho de princípio foi coletado (Rf = 0.54). As frações contendo o produto desejado foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida, e ainda secadas sob vácuo para dar o correspondente complexo NO3- e excesso KNO3. Para remover o sal indesejado, o produto foi dissolvido em H2O com sonicação. KPF6 saturado foi adicionado (3 - 4 mL), e o produto precipitado para fora da solução. O complexo PF6- desejado foi extraído usando CH2Cl2 (3 x 50 mL). A camada orgânica foi separada, concentrada sob pressão reduzida, e secada sob vácuo para dar o produto final puro como um sólido vermelho-laranja (76.0 mg, 59%). Rf = 0.54 (10% H2O:MeCN + 2.5% KNO3). 1H NMR (CD3CN): 8.87 (d; 2H; J = 6.60 Hz), 8.38 (d; 4H; J = 10.1 Hz), 8.02 (m; 2H; J = 4.50 Hz), 7.84 (d; 2H; J = 4.02 Hz), 7.74 (br; 2H), 7.67 (d; 2H; J = 5.67 Hz), 7.53 (d; 1H; J = 6.42 Hz), 7.42 (d; 2H; J = 5.67 Hz), 7.25-7.31 (m; 6H), 7.07-7.14 (m; 3H). MS (ESI+) m/z: 468.1 [M-2PF6]2+, 1081.2 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C49H38N8RuS3; calcd 468.0707; encontrado 468.0697.
[00521] O complexo PF6- foi dissolvido em uma solução de 1:1 de MeCN/MeOH e convertido no seu sal Cl- correspondente em resina de troca de íon Amberlite IRA-410 (30 cm x 1.5 cm, 30 g of resin) eluindo com MeOH.
Figure img0240
[00522] Preparação de 16x: 2,2’-5,2’’-Tertiofeno-5-ácido boronico pinicol éster (236.1 mg, 0.780 mmol), 5-bromo-2-tiofeno carboxaldido (57.4 uL, 0.59 mmol), e Pd(PPh3)4 (55 mg) foram combinados em um tubo de microondas purgado com argon. O tubo de microondas foi novamente purgado com argon e DME (5.66 mL) e 2M Na2CO3 de solução aquosa (0.4 mL) foram então adicionados separadamente por seringa. A solução foi reagida em 200 W e 175 oC por 1 hora. A solução verde escuro foi filtrada em um filtro poroso para remover o catalisador e lavada com pequenas quantidades de acetato de etilo. O filtrado foi diluído com EtOAc adicional, transferido para um separador de 125-mL, e lavado com solução aquosa saturada NaCl (3x50 mL). A camada orgânica foi concentrada sob pressão reduzida, e secada sob vácuo para dar o produto bruto (130.9 mg, 62%). A purificação foi feita em uma coluna de sílica, eluindo com 1:1 DCM:hexanos. Um ponto de movimento lento que coloriu como positivo para ter aldeído por Dinitrophenylhydrazine foi coletado, concentrado sob pressão reduzida, e secado sob vácuo para dar o produto puro (14.1 mg, 6.7%). Rf = 0.20 (1:1 DCM:hexanos). 1H NMR (CDCl3) 9.86 (s; 1H), 7.67 (d; 1H; J = 3.96 Hz), 7.21-7.29 (m; 3H), 7.20 (d; 1H; J = 3.54 Hz), 7.11-7.14 (m; 3H), 7.04 (t; 1H; J = 4.89 Hz).
Figure img0241
[00523] Preparação de 16L: 1,10-Fenantrolina-5,6-dione (41.6 mg, 0.200 mmol), acetato de amônio (154 mg, 2.00 mmol), e 16x (71.7 mg, 0.200 mmol) foram combinados com ácido acético glacial (1.0 mL) em uma câmara de reação de micro-ondas e reagido em 300 W a 180 oC por 10 minutos. A solução foi deixada esfriar em temperatura ambiente seguido de neutralização por adição gota-a-gota de NH4OH aquoso (2-4 mL) até o produto precipitar como um sólido marrom. O sólido foi coletado usando um filtro poroso de vidro sinterizado fino e lavado com H2O (15 mL). O produto foi secado sob vácuo para dar o produto bruto como um pó marrom. A purificação foi feita por recristalização do MeOH quente para dar o produto puro (31.1 mg, 28%). 1H NMR (DMSO-d6) 9.04 (br; 2H), 8.84 (d; 2H; J = 7.35 Hz), 7.86 (br; 2H), 7.337.57 (m; 8H); 7.11 (br; 1H). MS (ESI+) m/z: 549.0 [M+1H]+. HRMS (ESI+) m/z para C29H17N4S4; calcd 549.0331; encontrado 549.0307.
Figure img0242
[00524] Preparação de 16a: Ru(2,2'-bipiridina)2C^2H2θ (81.2 mg, 0.156 mmol) e 16L (85.7 mg, 0.156 mmol) e 100% etanol (3.0 mL) foram combinados em um tubo de microondas e purgados em argon por 10 minutos passando o argon através de uma agulha na tampa do tubo. A tampa foi trocada por uma nova antes de ser colocada no microondas. A solução foi reagida com 300 W a 180oC por 10 minutos. A solução resultante foi de uma coloração vermelha bem escura. KPF6 saturado foi adicionado gota-a-gota à solução aquosa até que mais nenhum produto precipitasse (2 - 4 mL). O produto bruto foi isolado por filtração através de filtro poroso de vidro fino sinterizado produzindo um sólido vermelho escuro/laranja (155.2 mg, 64%). A purificação foi feita em uma coluna de sílica, eluindo com uma solução de 7% H2O:MeCN contendo 2.5% KNO3, e o ponto vermelho de princípio foi coletado (Rf = 0.46). As frações contendo o produto desejado foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida, e ainda secadas sob vácuo para dar o correspondente complexo NO3- e excesso KNO3. Para remover o sal indesejado, o produto foi dissolvido em H2O com sonicação. KPF6 saturado foi adicionado (3 - 4 mL), e o produto precipitado da solução. O complexo PF6- desejado foi extraído usando CH2Cl2 (3 x 75 mL). A camada orgânica foi separada, concentrada sob pressão reduzida, e secada sob vácuo para dar o produto como um sólido vermelho- laranja (169 mg, 48%). O complexo PF6- foi dissolvido em uma solução a 1:1 de MeCN/MeOH e convertida ao seu sal Cl- correspondente em resina de troca de íon Amberlite IRA-410 (30 cm x 1.5 cm, 30 g of resin) eluindo com MeOH. O produto foi ainda purificado em Sephadex LH-50 em metanol e o ponto vermelho principal foi coletado. As frações contendo o produto desejado foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida, e ainda secadas sob vácuo para dar o produto final (12.7 mg, 6.5%) Rf = 0.35 (10% H2O:MeCN + 2.5% KNO3). 1H NMR (CD3CN): 8.91 (d; 2H; J = 7.32 Hz), 8.50 (t; 4H; J = 7.92 Hz), 8.08 (t; 2H; J = 7.74 Hz), 7.99 (br; 4H), 7.84 (br; 3H), 7.74 (br; 4H), 7.60 (br; 2H), 7.44 (t; 2H; J = 5.55 Hz), 7.37 (br; 1H) 7.08-7.27 (m; 9H). MS (ESI+) m/z: 498.1 [M-2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C49H32N8RuS4; calcd 481.0333; encontrado 481.0341.
Figure img0243
[00525] Preparação de 16c: Ru(dmbhC^2H2O (88.93 mg, 0.156 mmol) e 16L (85.7 mg, 0.156 mmol) e 100% etanol (3.0 mL) foram combinados em um tubo de microondas e purgados em argon por 10 minutos passando o argon através de uma agulha na tampa do tubo. A tampa foi trocada por uma nova antes de ser colocada no microondas. A solução foi reagida com 300 W a 180oC por 10 minutos. A solução resultante foi de uma coloração vermelha bem escura. KPF6 saturado foi adicionado gota-a-gota à solução aquosa até que mais nenhum produto precipitasse (1-2 mL). O produto bruto foi isolado por filtração através de um filtro poroso de vidro fino sinterizado produzindo um vermelho escuro (156.7 mg, 92%). A purificação foi feita em uma coluna de sílica, eluindo com uma solução de 7% H2O:MeCN contendo 2.5% KNO3, e o ponto vermelho de princípio foi coletado. As frações contendo o produto desejado foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida, e ainda secadas sob vácuo para dar o complexo NO3- correspondente e excesso KNO3. Para remover o sal indesejado, o produto foi dissolvido em H2O com sonicação. KPF6 saturado foi adicionado (3-4 mL), e om produto precipitado da solução. O complexo PF6- desejado foi extraído usando CH2Cl2 (3 x 75 mL). A camada orgânica foi separada, concentrada sob pressão reduzida, e secada sob vácuo para dar o produto como um sólido vermelho (69.9 mg, 41%). O complexo PF6- foi dissolvido em uma solução a 1:1 de MeCN/MeOH e convertido ao seu sal Cl- correspondente em resina de troca de íon Amberlite IRA-410 (30 cm x 1.5 cm, 30 g of resin) eluindo com MeOH. O produto foi ainda purificado em Sephadex LH-50 em metanol e o ponto vermelho principal foi coletado. As frações contendo o produto desejado foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida, e ainda secadas sob vácuo para dar o produto final (23.0 mg, 13%) Rf = 0.33 (10% H2O:MeCN + 2.5% KNO3). 1H NMR (CD3CN): 8.92 (br; 2H), 8.34 (s; 4H), 7.97 (br; 2H), 7.87 (br; 1H), 7.62-7.65 (m; 4H), 6.92-7.42 (m; 14H), 2.54, (s; 6H), 2.46 (s; 6H). MS (ESI+) m/z: 509.1 [M-2PF6]2+, 1163.1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C53H40N8RuS4; calcd 509.0646; encontrado 509.0663.
Figure img0244
[00526] Preparação de 2L: 1,10-Fenantrolina-5,6-diona (234.1 mg, 1.11 mmol), acetato de amônio (1.77 g, 23.0 mmol), e 2,5-tiofeno dicarboxaldeído (77.9 mg, 0.556 mmol) foram combinados em ácido acético glacial (20 mL) e refluxados em ar a 135oC por 6 horas. A solução mudou de uma coloração amarelo claro para uma coloração vermelho escuro e o produto precipitou como um precipitado viscoso laranja claro. A reação foi resfriada até temperatura ambiente. O precipitado laranja foi coletado usando um filtro poroso de vidro sinterizado fino e lavado com H2O (10 mL). O produto foi secado sob vácuo para dar o produto final puro como um pó laranja claro. Não foi necessária purificação. (90.7 mg, 31.3%). Rf = traço para 0.60 (2% H2O, 43% CHCl3, 25% Acetona, 30% MeOH + 1% NH4OH). 1H NMR (300 MHz) [(CD3)2SO]: 9.07 (d; 4H; J = 3.03 Hz), 8.90 (d; 4H; J = 8.22 Hz), 8.04 (s; 2H), 7.86-7.90 (br; 4H). MS (ESI+) m/z: 521.1 [M+H]+. HRMS (ESI+) m/z para C30H17N8S; calcd 521.1291; encontrado 521.1265.
Figure img0245
[00527] Preparação de 3L:1,10-Fenantrolina-5,6-diona (18.9 mg, 0.0900 mmol), acetato de amônio (138.7 mg, 1.80 mmol), e 2,2'-bitiofeno-5,5’- dicarbaldeído (10 mg, 0.0450 mmol) foram combinados em ácido acético glacial (5 mL) e refluxados em ar a 135oC por 6 horas. A solução mudou de uma coloração amarelo claro para uma coloração vermelho escuro e o produto precipitado como um pó precipitado laranja claro. A reação foi resfriada até temperatura ambiente. A solução foi neutralizada por adição gota-a-gota de NH4OH (5 mL) aquoso até que mais produto desejado terminasse de precipitar como um sólido laranja. O precipitado laranja foi coletado usando um filtro poroso de vidro sinterizado fino com H2O (10 mL). O produto foi secado sob vácuo para dar um pó laranja que mostrou o produto e contaminante por NMR. (12.6 mg, 47%). Uma sintese de microondas alternada também foi realizada envolvendo 1,10-Fenantrolina-5,6-diona (18.9 mg, 0.0900 mmol), acetato de amônio (138.7 mg, 1.80 mmol), e 2,2'-bitiofeno-5,5’-dicarbaldeído (10 mg, 0.0450 mmol) sendo combinado em ácido acético glacial (1.0 mL) em uma câmara de reação de micro-ondas e reagido com 300 W a 180oC por 10 minutos. A solução mudou de uma coloração amarelo clara para uma coloração vermelho escura e foi deixada resfriar até temperatura ambiente. Um precipitado laranja do produto foi visto. A solução foi neutralizada pela adição gota-a-gota de NH4OH (1 mL) aquoso até que mais produto desejado terminasse de precipitar como um sólido laranja. O sólido foi coletado usando um filtro poroso de vidro sinterizado fino e lavado com H2O (10 mL). O produto foi secado sob vácuo para dar um pó laranja que mostrou o produto e contaminante por NMR. (25.3 mg, 93%) Rf= traço para 0.68 (2% H2O, 43% CHCl3, 25% Acetona, 30% MeOH + 1% NH4OH). 1H NMR (300 MHz) [(CD3)2SO]: 9.02 (br), 8.85 (br; 4H), 7.84 (m; 2H), 7.70 (br).
Figure img0246
[00528] Preparação de 2a: Ru(bpy)2C^2H2O (60 mg, 0.115 mmol) e 2L (30 mg, 0.0576 mmol) foram combinados em glicerol (3 mL) e refluxados em argon por 16 horas a 100oC. O glicerol foi primeiramente adicionado a um frasco de reação seca que foi conectado a uma linha Schlenk. O frasco de reação foi evacuado até que ocorreu borbulho no glicerol e então foi preenchido com argon seco. A evacuação e purga no argon foi repetida mais duas vezes. Ru(bpy)2C^2H2O foi adicionado ao glicerol e o frasco de reação foi evacuado e preenchido com argom mais três vezes. A solução resultante de glicerol e Ru(bpy)2C^2H2O foi aquecida a 100oC por 30 minutos. Após o aquecimento o 2L foi adicionado à solução e o frasco de reação foi evacuado e preenchido com argon mais três vezes. A solução roxo escura foi colocada sob argon usando um balão cheio e reagida por 16 horas a 100oC. A solução resultante foi de uma coloração vermelho escuro/roxo e resfriada até temperatura ambiente. 12 mL de H2O foi adicionado á solução e filtrado sobre um filtro poroso de vidro sinterizado médio. KPF6 saturado foi adicionado gota- a-gota à solução aquosa até que mais nenhum produto precipitasse (1 - 2 mL). O produto bruto foi isolado por filtração através de um filtro poroso de vidro sinterizado fino produzindo um sólido vermelho escuro/marrom (106.1 mg, 0.0550 mmol). A purificação foi feita em uma coluna de sílica, eluindo com uma solução de 20% H2O:MeCN contendo 2.5% KNO3, e o ponto vermelho de princípio foi coletado. As frações contendo o produto desejado foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida, e ainda secadas sob vácuo para dar o produto e excesso KNO3. Para remover o sal indesejado, o produto foi dissolvido em H2O com sonicação. O produto não dissolveu em H2O, uma quantidade de H2O (aproximadamente 50 - 100 mL) foi adicionada para assegurar que o excesso KNO3 dissolveria na solução seguido da adição de quantidades copiosas de KPF6 saturado (10 - 12 mL). O complexo PF6— desejado foi extraído usando CH2Cl2 (3 x 50-150 mL). A camada orgânica foi separada, concentrada sob pressão reduzida, e secada sob vácuo para dar o produto final puro como um sólido vermelho-laranja (38.8 mg, 35%). Rf = 0.19 (20% H2O:MeCN + 2.5% KNO3). 1H NMR (300 MHz) [(CD3)2SO]: 9.02-9.10 (dd; 4H; J = 9.06 Hz), 8.88 (t; 8H; J = 8.52 Hz), 8.24 (t; 4H; J = 6.60 Hz), 8.098.15 (m; 10H), 7.97 (br; 4H), 7.85 (d; 4H; J = 4.14 Hz), 7.61 (m; 8H), 7.36 (t; 4H; J = 4.68 Hz). 13C NMR [(CD3CN] 158.0, 157.8, 152.8, 151.3, 148.3, 146.7, 138.7, 138.2, 135.6, 135.6, 131.2, 129.0, 128.3, 126.8, 125.1, 122.1. Anal. Calc C70H48F24N16P4RU2S • 6(H2O) • 0.5(C3H6O): C, 41.60 %; H, 3.08 %; N, 10.86 %, Encontrado: C, 41.74 %; H, 2.72 %; N, 10.16 %.
[00529] O complexo PF6- foi dissolvido em uma solução 1:1 de MeCN/MeOH e convertido ao seu sal Cl- correspondente em resina de troca de íon Amberlite IRA-410 (30 cm x 1.5 cm, 30 g of resin) eluindo com MeOH. MS (ESI+) m/z: 673.1 [M-4Cl-2H]2+, 449.1 [M-4Cl-H]3+. HRMS (ESI+) m/z para C70H46N16Ru2S; calcd 673.0944; encontrado 673.0945.
Figure img0247
[00530] Preparação de 3a: Ru(bpy)2Cl2-2H2O (50.0 mg, 0.0960 mmol) e 3L (30.0 mg, 0.0500 mmol) foram combinados em glicerol (3 mL) e refluxados em argon por 16 horas a 100oC. O glicerol foi primeiramente adicionado a um frasco de reação seca que foi conectado a uma linha Schlenk. O frasco de reação foi evacuado até que ocorresse borbulho no glicerol e então foi preenchido com argon seco. A evacuação e o preenchimento com argon foram repetidos mais duas vezes. Ru(bpy)2C^2H2O foi adicionado ao glicerol e o frasco de reação foi evacuado e preenchido com argon mais três vezes. A solução resultante de glicerol e Ru(bpy)2C^2H2O foi aquecida até 100oC por 30 minutos. Após aquecer o glicerol o 3L foi adicionado à solução e o frasco de reação foi evacuado e preenchido com argon mais três vezes. A sloução roxo escura foi colocada sob argon usando um balão cheio e reagida por 16 horas a 100oC. A solução resultante foi de uma coloração vermelho escuro/roxo e resfriada até temperatura ambiente. 12 mL de H2O foi adicionado à solução e filtrado sobre um filtro poroso de vidro sinterizado médio. KPF6 saturado foi adicionado gota-a-gota ao filtrado até que o produto precipitasse completamente da solução. O produto bruto foi obtido através de filtração e lavado com H2O (5 mL). O produto bruto tinha a coloração vermelho escuro/preto (78.1 mg, 0.0389 mmol). A purificação foi feita em uma coluna de sílica, eluindo com uma solução de 20% H2O:MeCN contendo 2.5% KNO3, e o ponto vermelho de princípio foi coletado. As frações contendo o produto desejado foram combinadas, evaporadas osb pressão reduzida, e ainda secadas sob vácuo para dar o produto e excesso KNO3. Para remover o sal indesejado, tentou-se dissolver o produto em H2O com sonicação. O produto não dissolveu em H2O e uma quantidade de H2O (aproximadamente 50 mL) foi adicionada para assegurar que o excesso KNO3 dissolveria na solução seguido pela adição de copiosas quantidades de KPF6 (10 - 12 mL). O complexo PF6— desejado foi extraído usando CH2Cl2 (3 x 50-150 mL). A camada orgânica foi separada, concentrada sob pressão reduzida, e secada sob vácuo para dar o produto final puro como um sólido vermelho-laranja (19.4 mg, 19%). Rf = 0.27 (20% H2O:MeCN + 2.5% KNO3). 1H NMR (300 MHz) [(CD3)2SO]: 9.04 (dd; 4H; J = 11.25 Hz), 8.87 (t; 8H; J = 10.41 Hz), 8.23 (t; 4H; J = 6.57 Hz), 8.07-8.15 (m; 8H), 7.93-8.03 (m; 6H), 7.84 (br; 4H), 7.74 (br; 2H), 7.60 (br; 8H), 7.36 (t; 4H; J = 6.30 Hz). Anal. Calc. C74H50F24N16P4RU2S2 • 8(H2O) • 2(C6Hi4): C, 44.41 %; H, 4.07 %; N, 9.64 %, Encontrado: C, 44.76 %; H, 3.61 %; N, 8.52 %. MS (ESI+) m/z: 714.1 [M-4PF6-2H]2+, 476.4 [M-4PF6-1H]3+. HRMS (ESI+) m/z para C74H49N16Ru2S2; calcd 476.3946; encontrado 476.3941. O complexo PF6- foi dissolvido em uma solução 1:1 de MeCN/MeOH e convertido ao seu sal Cl- correspondente em resina de troca de íon Amberlite IRA-410 (30 cm x 1.5 cm, 30 g de resina) eluindo com MeOH.
Figure img0248
[00531] Preparação de 2b: O composto 2b foi preparado pelo mesmo procedimento que 2a usando Ru(phen)2Cl2. 1H NMR (300 MHz) [(CD3CN]: 9.01 (d; 2H; J = 10.17 Hz), 8.86 (d; 2H; J = 7.68 Hz), 8.63 (d; 8H; J = 7.98 Hz), 8.29 (s; 8H;), 8.13 (br; 4H), 8.00-8.04 (m; 10H), 7.66 (m; 12H). Anal. Calc. C37H26F12N8P2RUS • 0.5(H2O): C, 43.79 %; H, 2.68 %; N, 11.04 %, Encontrado: C, 44.66 %; H, 2.98 %; N, 10.16 %. O complexo PF6- foi dissolvido em uma solução 1:1 de MeCN/MeOH e convertido ao seu sal Cl- correspondente em resina de troca de íon Amberlite IRA-410 (30 cm x 1.5 cm, 30 g de resina) eluindo MeOH. MS (ESI+) m/z: 721.1 [M-4Cl-2H]2+, 481.1 [M-4Cl-H]3+. HRMS (ESI+) m/z para C78H46N16Ru2S; calcd 721.0944; encontrado 721.0971.
Figure img0249
[00532] Preparação de 3b: O composto 3b foi preparado pelo mesmo procedimento que 2a usando Ru(phen)2Cl2. 1H NMR (300 MHz) [CD3CN]: 8.94 (d; 4H; J = 20.31 Hz), 8.63 (d; 8H; J = 7.95 Hz), 8.28 (s; 8H), 8.11 (br; 4H), 8.04 (br; 4H), 7.99 (br; 4H), 7.93 (br; 2H), 7.63-7.70 (m; 12H), 7.56 (br; 2H). Anal. Calc. C82H50F24N16P4RU2S2 • 3(C6Hi4) • 8(CH3OH): C, 49.50 %; H, 4.77 %; N, 8.55 %, Encontrado: C, 49.15 %; H, 3.94 %; N, 7.64 %. MS (ESI+) m/z: 908.1 [M-2PF6]2+, 508.4 [M-4PF6-1H]3+, 381.5 [M-4PF6]4+. HRMS (ESI+) m/z para C82H50F12N16P2Ru2S2; calcd 908.0603; encontrado 908.0641. O complexo PF6- foi dissolvido em uma solução 1:1 de MeCN/MeOH e convertido ao seu sal Cl- correspondente em resina de troca de íon Amberlite IRA-410 (30 cm x 1.5 cm, 30 g de resina) eluindo MeOH.
Figure img0250
[00533] Preparação de 10b: O composto 10b foi preparado pelo mesmo procedimento que 2a usando Ru(phen)2Cl2. 1H NMR (DMSO-d6) δ 7.17 (m, 1H), 7.50 (m, 2H), 7.63 (d, 1H), 7.77 (m, 6H), 7.90 (m, 1H), 7.99 (d, 2H), 8.07 (d, 2H), 8.12 (d, 2H), 8.40 (s, 4H), 8.78 (d, 4H), 8.99 (d, 2H). MS (ESI+) m/z: 845.0 [M-2PF6]+, 423.0 [M-2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C45H28N8RuS2; calcd 846.0922; encontrado 846.0910. O complexo PF6- foi dissolvido em uma solução 1:1 de MeCN/MeOH e convertido ao seu sal Cl- correspondente em resina de troca de íon Amberlite IRA-410 (30 cm x 1.5 cm, 30 g de resina) eluindo MeOH.
Figure img0251
[00534] Preparação de 14b: O composto 14b foi preparado pelo mesmo procedimento que 2a usando Ru(phen)2Cl2. 1H NMR (300 MHz) [CD3CN]: 8.56-8.63 (m; 6H; C, 7, 4), 8.31-8.26 (m; 8H; 6, 5, 9), 8.01 (d; 2H; J = 5.10 Hz; 2), 7.88 (d; 2H; J = 4.95 Hz; A), 7.72 (br; 2H; B), 7.60 (m; 3H; 8, 1H-R), 7.29-7.40 (m; 3H; 3, 1H-R), 7.02 (m; 2H; 2H-R), 6.87 (d; 1H; J = 3.72 Hz; 1H-R), 6.687.73 (m; 2H; 2H-R). MS (ESI+) m/z: 464.0 [M-2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C49H30N8RuS3; calcd 464.0400; encontrado 464.0381. O complexo PF6- foi dissolvido em uma solução 1:1 de MeCN/MeOH e convertido ao seu sal Cl- correspondente em resina de troca de íon Amberlite IRA-410 (30 cm x 1.5 cm, 30 g de resina) eluindo MeOH. Anal. Calc. C49H30N8CI2RUS3 • 4(H2O) • 6(CH3OH): C, 52.29 %; H, 4.95 %; N, 8.87 %, Encontrado: C, 53.11 %; H, 4.31 %; N, 8.33 %.
[00535] Os seguintes compostos podem ser preparados pelo procedimento aqui descrito. O profissional capacitado saberá como substituir os reagentes adequados, matérias primas e métodos de purificação conhecidos, de modo a preparar os compostos aqui fornecidos. Salvo aqui indicado em contrário, 1H NMR e MS foram realizados em sais PF6 dos complexos, e os dados biológicos foram coletados nos sais Cl.
Figure img0252
[00536] Ru(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) 1c 1H NMR (300 MHz, Acetonitrilo-d3) δ 8.92 - 8.75 (m, 3H), 8.42 - 8.36 (m, 4H), 8.05 - 8.00 (m, 2H), 7.93 (d, J = 3.7 Hz, 2H), 7.73 (dd, J = 8.3, 5.2 Hz, 3H), 7.67 (d, J = 4.3 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 3.5 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 2.59 (s, 6H), 2.49 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 386.1 [M-2PF6]2+, 771.2 [M-2PF6-H]+.
Figure img0253
[00537] Ru(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2’’-bitiofeno)-imidazo[4,5- f][1,10]fenantrolina) 10c 1H NMR (300 MHz, Acetonitrilo-d3) δ 8.93 (s, 2H), 8.38 (d, J = 12.8 Hz, 4H), 8.06 - 8.00 (m, 2H), 7.90 (d, J = 3.9 Hz, 2H), 7.77 (dd, J = 8.2, 5.3 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 7.51 - 7.44 (m, 2H), 7.40 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 7.33 - 7.27 (m, 2H), 7.17 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 2.59 (s, 6H), 2.49 (s, 6H).
Figure img0254
[00538] Ru(4,4’-di-t-butilo-2,2’-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) 1d 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.02 (dd, J = 17.7, 8.0 Hz, 2H), 8.93 - 8.81 (m, 5H), 8.07 - 7.82 (m, 6H), 7.71 - 7.57 (m, 5H), 7.46 (dd, J = 5.9, 2.5 Hz, 2H), 7.33 (dd, J = 7.9, 5.6 Hz, 3H), 1.42 (s, 18H), 1.34 (s, 18H). MS (ESI+) m/z: 470.2 [M-2PF6]2+, 1085.3 [M-2PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C53H58N8RuS; calcd 470.1769; encontrado 470.1786.
Figure img0255
[00539] Ru(4,4’-di-t-butilo-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2’’-bitiofeno)-imidazo[4,5- f][1,10]fenantrolina) 10d 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.98 - 8.90 (m, 2H), 8.90 - 8.81 (m, 5H), 7.82 (d, J = 7.6 Hz, 4H), 7.78 - 7.73 (m, 1H), 7.69 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 7.61 (dd, J = 6.1, 1.9 Hz, 3H), 7.55 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.39 - 7.33 (m, 3H), 7.18 - 7.10 (m, 1H), 1.43 (s, 18H), 1.34 (s, 18H). MS (ESI+) m/z: 511.2 [M-2PF6]2+, 1021.3 [M-H- 2PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C57H60N8RuS2; calcd 511.1707; encontrado 511.1693.
Figure img0256
[00540] Ru(4,4’-di-t-butilo-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2’’:5’’,2’’’-tertiofeno)- imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) 14d 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.97 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 8.87 (d, J = 9.5 Hz, 5H), 7.96 (dt, J = 21.6, 7.2 Hz, 5H), 7.69 - 7.53 (m, 6H), 7.48 (dd, J = 10.4, 5.0 Hz, 3H), 7.41 (s, 1H), 7.39 - 7.28 (m, 3H), 7.14 (t, J = 4.5 Hz, 1H), 1.42 (s, 18H), 1.33 (d, J = 1.5 Hz, 18H). MS (ESI+) m/z: 552.2 [M-2Cl]2+, 1103.3 [M-Cl]+. HRMS (ESI+) m/z para C61H62N8RuS3; calcd 552.1646; encontrado 552.1626.
Figure img0257
Ru(4,4’-dimetoxi-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2’’:5’’,2’’’-tertiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) 14e MS (ESI+) m/z: 500.1 [M-2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C49H38N8O4RuS3; calcd 500.0605; encontrado 500.0597.
Figure img0258
[00541] Ru(5,5’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) 1f 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.00 (d, J = 13.7 Hz, 2H), 8.66 (td, J = 13.9, 12.1, 6.6 Hz, 5H), 8.01 (dd, J = 13.2, 7.8 Hz, 5H), 7.91 (d, J = 10.8 Hz, 5H), 7.50 (d, J = 16.2 Hz, 2H), 7.30 (dd, J = 17.9, 7.8 Hz, 3H), 2.23 (s, 6H), 2.01 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 386.1 [M-2PF6]2+, 917.1 [M-2PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C41H34F6N8PRuS; calcd 917.1307; encontrado 917.1320.
Figure img0259
[00542] Ru(5,5’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2’’-bitiofeno)-imidazo[4,5- f][1,10]fenantrolina) 10f 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.97 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 8.69 (dd, J = 15.4, 8.4 Hz, 5H), 8.14 - 7.97 (m, 5H), 7.91 (d, J = 8.1 Hz, 5H), 7.63 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.60 - 7.48 (m, 4H), 7.30 (s, 2H), 7.18 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 2.23 (s, 6H), 2.02 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 427.1 [M-2PF6]2+, 853.1 [M- H-2PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C45H35N8RuS2; calcd 853.1464; encontrado 853.1481.
Figure img0260
[00543] Ru(5,5’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2’’:5’’,2’’’-tertiofeno)- imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) 14f 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.97 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 8.75 - 8.62 (m, 5H), 8.02 (d, J = 8.4 Hz, 5H), 7.94 - 7.83 (m, 5H), 7.58 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 7.54 (s, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.35 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 7.14 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 2.23 (s, 6H), 2.01 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 468.1 [M-2PF6]2+, 1081.1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C49H38N8RuS3; calcd 468.0707; encontrado 468.0689.
Figure img0261
[00544] Ru(6,6’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) 1g 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.89 - 8.80 (m, 4H), 8.65 - 8.60 (m, 2H), 8.32 (d, J = 7.8 Hz, 3H), 8.14 - 8.05 (m, 3H), 7.81 - 7.74 (m, 4H), 7.70 - 7.66 (m, 2H), 7.24 - 7.18 (m, 1H), 6.99 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 1.83 (s, 6H), 1.49 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 386.1 [M-2PF6]2+, 917.1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C41H34N8RuS; calcd 386.0830; encontrado 386.0819.
Figure img0262
[00545] Ru(6,6’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2’’-bitiofeno)-imidazo[4,5- f][1,10]fenantrolina) 10g 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.90 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 8.83 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 8.63 (dd, J = 8.0, 3.6 Hz, 2H), 8.32 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 8.19 (s, 3H), 7.83 (d, J = 17.3 Hz, 4H), 7.72 - 7.65 (m, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.51 - 7.43 (m, 2H), 7.16 (dd, J = 6.5, 3.7 Hz, 1H), 7.00 (m, J = 9.0, 4.1 Hz, 2H), 1.83 (s, 6H), 1.49 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 427.1 [M-2PF6]2+, 999.1 [M- PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C45H36N8RuS2; calcd 427.0768; encontrado 427.0761.
Figure img0263
[00546] Ru(6,6’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2’’:5’’,2’’’-tertiofeno)- imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) 14g 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.90 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 8.82 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 8.65 - 8.57 (m, 2H), 8.32 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 8.19 (s, 2H), 7.80 (dt, J = 16.1, 6.7 Hz, 5H), 7.69 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.60 - 7.54 (m, 1H), 7.51 - 7.42 (m, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.34 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 6.5, 3.0 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 2.09 (s, 4H), 1.85 (s, 4H), 1.51 (s, 4H). MS (ESI+) m/z: 468.1 [M-2PF6]2+, 1081.1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C49H38N8RuS3; calcd 468.0707; encontrado 468.0701.
Figure img0264
[00547] Ru(4,4’-di(metilcarboxi)-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2’’:5’’,2’’’- tertiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) 14i MS (ESI+) m/z: 556.1 [M- 2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C53H38N8O8RuS3; calcd 556.0504; encontrado 556.0522.
Figure img0265
Ru(2,2’-bipirimidina)2(2-(2’,2’’:5’’,2’’’-tertiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) 14j HRMS (ESI+) m/z para C41H26N12RuS3; calcd 442.0299; encontrado 442.0314.
Figure img0266
[00548] Síntese de Ru(2,2’-bipirimidina)(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)(2- (2’,2’’:5’’,2’’’-tertiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) 14cj: RuCl3 (10.0 g, 48 mmol) e 4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina (10.7 g, 58 mmol) foram combinados em 50 mL de 1.0 N HCl. A mistura foi agitada para suspender os sólidos, fechada, e deixada descansar por três semanas. O produto foi isolado por filtração, lavado com água, e ainda secado em vácuo para dar Ru(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)Cl4 como um pó preto (13.7 g) em 80% de rendimento.
[00549] Ru(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)Cl4 (214 mg, 0.5 mmol), 2,2’- bipirimidina (79 mg, 0.5 mmol), e trietilamina (83 DL, 0.6 mmol) foram combinados em etanol (20 mL) e purgados em vácuo com argon 3 vezes. A mistura de reação foi aquecida em refluxo até que TLC mostrou o consumo das materias primas seguido pela concentração sob pressão reduzida. O sólido resultante foi suspendido em dietil éter e então coletado em um filtro poroso de vidro sinterizado fino para produzir Ru(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)(2,2’- bipirimidina)Cl2 em rendimento quantitativo.
[00550] Ru(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)(2,2’-bipirimidina)Cl2 (55 mg, 0.1 mmol) e 14L (47 mg, 0.1 mmol) foram combinados em argon-purgado 100% etanol (6 mL) e irradiados em um reator de microondas de recipiente único (180 oC, 300 W) por 10 minutos. A mistura de reação foi deixada esfriar e separada entre água e CH2Cl2. A fase aquosa foi lavada com CH2Cl2 para remover ligantes não reagidos, e então uma solução aquosa de NH4PF6 foi adicionada gota-a-gota até que mais nenhum precipitado se formasse. O produto foi extraído em CH2Cl2 e concentrado sob pressão reduzida para produzir um sólido vermelho escuro (52 mg, 43%). 1H NMR (300 MHz, Acetonitrilo-d3) δ 9.12 (dt, J = 4.0, 1.8 Hz, 1H), 9.02 (dt, J = 4.0, 1.6 Hz, 1H), 8.87 - 8.79 (m, 2H), 8.38 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.17 - 8.13 (m, 2H), 7.96 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 7.79 (t, J = 3.2 Hz, 2H), 7.73 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 7.64 - 7.49 (m, 2H), 7.39 (q, J = 5.2, 4.7 Hz, 2H), 7.31 (dd, J = 9.7, 4.8 Hz, 4H), 7.20 (s, 1H), 7.09 (d, J = 5.4 Hz, 2H) 2.57 (s, 3H), 2.48 (s, 3H). MS (ESI+) m/z: 455.0 [M-2PF6]2+, 1055.1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C45H32N10RuS3; calcd 455.0503; encontrado 455.0502.
Figure img0267
[00551] Síntese de Os(2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2’’:5’’,2’’’-tertiofeno)- imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) Os14a: Bis(2,2’-bipiridil)Os(II) dicloreto foi preparado combinando (NH4)2[OsCl6] (439 mg, 1 mmol) com 2 eq. of 2,2’- bipiridina (312 mg, 2 mmol) em etileno glicol (22 mL) e agitando em refluxo até que a reação fosse completa por TLC. A redução de Os3+ para Os2+ foi obtida com uma solução aquosa saturada de Na2S2O4 (22 mL) para formar um precipitado que foi filtrado e lavado com água e então dietil éter para produzir um sólido roxo escuro (486 mg, 80%). Os(bpy)2Cl2 (61 mg, 0.1 mmol) e 14L (47 mg, 0.1 mmol) foram combinados em argon-purgado etileno glicol (2.5 mL) e irradiados em um reator de microondas de recipiente único (180 oC, 300 W) por 10 minutos. A mistura de reação foi deixada esfriar e separada entre água e CH2Cl2. A fase aquosa foi lavada com CH2Cl2 para remover ligante não reagido, e então uma solução aquosa de NH4PF6 foi adicionada gota-a-gota até que mais nenhum precipitado se formasse. O produto foi extraído em CH2Cl2 e concentrado sob pressão reduzida para produzir um sólido roxo escuro em rendimento quantitativo, que foi sujeitado a metátese de anion para formar o complexo de cloreto correspondente (40 mg, 99% de eficiência de conversão) em Amberlite IRA-410.1H NMR (300 MHz, Acetonitrilo-d3) δ 8.73 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 8.56 - 8.41 (m, 4H), 7.97 - 7.85 (m, 5H), 7.84 - 7.73 (m, 4H), 7.66 (m, J = 8.0, 5.0, 2.4 Hz, 3H), 7.50 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 7.43 - 7.30 (m, 4H) , 7.30 - 7.21 (m, 3H), 7.17 - 7.08 (m, 3H). MS (ESI+) m/z: 485.1 [M-2PF6]2+, 1115.1 [M- PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C45H30N8OsS3; calcd 485.0680; encontrado 485.0666.
[00552] Os seguintes compostos podem ser preparados de acordo com o procedimento para Os14a. O profissional capacitado saberá como substituir os reagentes apropriados, matérias primas e métodos de purificação conhecidos, de modo a preparar os compostos aqui fornecidos.
Figure img0268
[00553] Os(2,2’-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) Os1a 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.90 - 8.74 (m, 6H), 8.01 (t, J = 7.8 Hz, 3H), 7.89 (t, J = 7.7 Hz, 4H), 7.76 (d, J = 5.2 Hz, 5H), 7.49 (d, J = 5.6 Hz, 4H), 7.24 (t, J = 7.0 Hz, 2H). MS (ESI+) m/z: 403.1 [M-2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C37H26N8OsS; calcd 403.0802; encontrado 403.0787.
Figure img0269
[00554] Os(2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2’’-bitiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) Os10a 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.84 (dd, J = 11.9, 8.0 Hz, 6H), 8.01 (dd, J = 11.1, 6.3 Hz, 4H), 7.94 (d, J = 3.7 Hz, 2H), 7.91 (s, 1H), 7.88 (s, 3H), 7.75 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 7.64 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.44 (m, 6H), 7.24 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 7.18 (t, J = 4.3 Hz, 1H). MS (ESI+) m/z: 444.1 [M- 2PF6]2+, 1033.1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C41H28N8OsS2; calcd 444.0741; encontrado 444.0740.
Figure img0270
[00555] Os(1,10-fenantrolina)2(2-tiofenimidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) Os1b 1H NMR (300 MHz, Acetonitrilo-d3) δ 8.76 (d, J = 8.1 Hz, 2H; c), 8.60 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.45 - 8.33 (m, 5H), 8.31 - 8.21 (m, 5H), 8.06 - 7.90 (m, 6H), 7.87 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.56 (tq, J = 7.6, 2.8, 2.2 Hz, 7H), 7.35 - 7.26 (m, 1H). MS (ESI+) m/z: 427.1 [M-2PF6]2+, 853.1 [M-2PF6-H]+, 999.1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z encontrado 427.0797.
Figure img0271
[00556] Os(1,10-fenantrolina)2(2-(2’,2’’-bitiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) Os10b 1H NMR (300 MHz, Acetonitrilo-d3) δ 8.72 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.57 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.42 - 8.34 (m, 5H), 8.24 (s, 5H), 8.03 - 7.95 (m, 3H), 7.92 (d, J = 5.0 Hz, 3H), 7.89 - 7.81 (m, 4H), 7.61 - 7.50 (m, 8H), 7.46 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 6.6, 3.8 Hz), 7.13 (dd, J = 5.2, 3.6 Hz, 2H). MS (ESI+) m/z: 468.1[M-2PF6]2+, 935.1 [M-2PF6-H]+, 1081.1[M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C45H28N8OsS2; calcd 468.0741; encontrado 468.0743.
Figure img0272
[00557] Os(1,10-fenantrolina)2(2-(2’,2’’:5’’,2’’’-tertiofeno)-imidazo[4,5- f][1,10] fenantrolina) Os14b 1H NMR (300 MHz, Acetonitrilo-d3) δ 8.69 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.38 (d, J = 8.0 Hz, 4H), 8.25 (s, 4H), 8.00 (t, J = 4.3 Hz, 2H), 7.92 (d, J = 5.4 Hz), 7.87 (dd, J = 5.5, 1.2 Hz), 7.84 - 7.79 (m, 1H), 7.61 - 7.49 (m, 6H), 7.41 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 3.7 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 5.2, 3.6 Hz, 1H). MS (ESI+) m/z: 509.1 [M-2PF6]2+, [M-PF6]+, 1017.1, [M-2PF6-H]+. HRMS (ESI+) m/z para C49H30N8OsS3; calcd 509.0680; encontrado 509.0669.
Figure img0273
[00558] Os(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) Os1c 1H NMR (300 MHz, Acetonitrilo-d3) δ 8.82 - 8.67 (m, 2H), 8.66 - 8.51 (m, 2H), 8.32 (d, J = 15.6 Hz, 5H), 7.94 (d, J = 4.5 Hz, 3H), 7.66 (dd, J = 8.7, 5.6 Hz, 3H), 7.60 - 7.50 (m, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.33 - 7.15 (m, 5H), 6.93 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 2.64 (s, 6H), 2.52 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 431.1 [M- 2PF6]2+, 1007.1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C41H34N8OsS; calcd 431.1115; encontrado 431.1126.
Figure img0274
[00559] Os(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2’’-bitiofeno)-imidazo[4,5- f][1,10] fenantrolina) Os10c 1H NMR (300 MHz, Acetonitrilo-d3) δ 8.70 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 8.56 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 8.35 (s, 2H), 8.29 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 7.93 (s, 2H), 7.85 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 7.63 (m, J = 7.0 Hz, 3H), 7.56 (s, 2H), 7.47 - 7.39 (m, 6H), 7.26 (s, 2H), 7.21 (d, 2H), 7.14 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 6.95 (d, 2H), 2.64 (s, 6H), 2.53 (s, 6H), MS (ESI+) m/z: 472.1 [M-2PF6]2+, 943.2 [M-2PF6-H]+, 1089.1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C45H36N8OsS2; calcd 472.1054; encontrado 472.1065.
Figure img0275
[00560] Os(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2’’:5’’,2’’’-tertiofeno)- imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina) Os14c 1H NMR (300 MHz, Acetonitrilo-d3) δ 8.70 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 8.34 (d, J = 13.5 Hz, 5H), 7.95 (d, J = 5.7 Hz, 3H), 7.72 - 7.62 (m, 3H), 7.58 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 7.40 - 7.25 (m, 7H), 7.24 (s, 2H;), 7.13 (s, 1H), 6.97 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 2.66 (s, 6H), 2.55 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 513.1 [M-2PF6]2+, 1171.1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C49H38N8OsS3; calcd 513.0993; encontrado 513.0973.
[00561] Os seguintes compostos podem ser preparados de acordo com o procedimento para 2a. O profissional capacitado saberá como substituir os reagentes apropriados, matérias primas e métodos de purificação conhecidos, de modo a preparer os compostos aqui fornecidos.
Figure img0276
[00562] (4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)2Ru(2-tiofeno-bis[imidazo[4,5f][1,10] fenantrolina])Ru(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)2 2c, 1c-2 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.03 (t, J = 7.9 Hz, 4H), 8.74 (d, J = 11.8 Hz, 8H), 8.16 (s, 2H), 8.10 (d, J = 5.1 Hz, 4H), 8.00 - 7.90 (m, 4H), 7.66 (d, J = 5.8 Hz, 4H), 7.46 - 7.36 (m, 8H), 7.19 - 7.13 (m, 4H), 2.56 (s, 12H), 2.46 (s, 12H). MS (ESI+) m/z: 365.1 [M-4PF6]4+. HRMS (ESI+) m/z para C78H64N16Ru2S; calcd 365.0821; encontrado 365.0836.
[00563] O seguinte composto pode ser preparado de acordo com o procedimento para 2a exceto que Ru(bpy)2Cl2 foi substituído por Os(bpy)2Cl2. O profissional capacitado saberá como substituir reagentes apropriados, matérias primas e métodos de purificação conhecidos, de modo a preparar os compostos aqui fornecidos.
[00564]
Figure img0277
[00565] (2,2’-bipiridina)2Os(2-tiofeno-bis[imidazo[4,5- f][1,10]fenantrolina)Os(2,2’-bipiridina)2 Os1a-2 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.86 (m, 8H), 8.19 (s, 2H), 8.02 (m, J = 7.5 Hz, 8H), 7.94 - 7.87 (m, 8H), 7.77 (d, J = 5.5 Hz, 4H), 7.52 (t, J = 6.6 Hz, 8H), 7.25 (t, J = 6.7 Hz, 8H). MS (ESI+) m/z: 381.6 [M-4PF6]4+. HRMS (ESI+) m/z para C70H48N16Os2S; calcd 382.0794; encontrado 382.0805.
[00566] O seguinte composto pode ser preparado de acordo com o procedimento para 2a exceto que Ru(bpy)2Cl2 Foi substituido por Os(phen)2Cl2. O profissional capacitado saberá como substituir os reagentes apropriados, matérias primas e métodos de purificação conhecidos, de modo a preparar os compostos aqui fornecidos.
Figure img0278
[00567] (1,10-fenantrolina)2Os(2-tiofeno- bis[imidazo[4,5f][1,10]fenantrolina]) Os(1,10-fenantrolina)2 Os1b-2 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.89 - 8.76 (m, 4H), 8.57 (d, J = 8.2 Hz, 8H), 8.40 (s, 6H), 8.17 (s, 2H), 8.11 - 7.91 (m, 10H), 7.82 - 7.61 (m, 11H). MS (ESI+) m/z: 405.6 [M-4PF6]4+, 589.1 [M-3PF6]3+, 956.1 [M-2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C78H48N16Os2S; calcd 406.0794; encontrado 406.0781.
[00568] O seguinte composto pode ser preparado de acordo com o procedimento para 2a exceto que Ru(bpy)2Cl2 foi substituido por Os(4,4’- dimetil-2,2’-bipiridina)2Cl2. O profissional capacitado saberá como substituir os reagentes apropriados, matérias primas e métodos de purificação conhecidos, de modo a preparar os compostos aqui fornecidos.
Figure img0279
[00569] (4,4’-dimetil-2,2’-bipridina)2Os(2-tiofeno-bis[imidazo[4,5f][1,10] fenantrolina])Os(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)2 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.79 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 8.74 - 8.64 (m, 8H), 8.17 (s, 2H), 8.09 - 7.94 (m, 4H), 7.92 - 7.77 (m, 4H), 7.57 (d, J = 5.9 Hz, 3H), 7.44 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 7.31 - 7.23 (m, 4H), 7.07 (d, J = 6.0 Hz) 2.64 (s, 12H), 2.58 (s, 12H). Os1c-2 MS (ESI+) m/z: 409.6 [M-4PF6]4+, 594.5 [M-3PF6]3+, 964.2 [M- 2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C78H64N16Os2S; calcd 410.1107; encontrado 410.1105.
FORMULAÇÕES
[00570] A presente invenção também se refere a composições ou formulações que compreendem os compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção. De modo geral, as composições da presente invenção compreendem uma quantidade eficaz de um ou mais compostos fotodinâmicos e sais dos mesmos de acordo com a presente invenção que são eficazes para proporcionar terapia fotodinâmica; e um ou mais excipientes.
[00571] Para os propósitos da presente invenção os termos “excipiente” e “veículo” são usados de modo intercambiável através do relatório da presente invenção e os ditos termos são aqui definidos como, “ingredientes que são usados na prática da formulação de uma composição farmacêutica segura e eficaz.”
[00572] O formulador entenderá que excipientes são usados primariamente para servir na administração de um produto farmacêutico seguro, estáve e funcional, servindo não apenas como parte do veículo total para administração mas também como um meio para obter a efetiva absorção pelo receptor do ingrediente ativo. Um excipiente pode desempenhar um papel tão simples e direto como ser um preenchedor inerte, ou um excipiente conforme usado aqui pode ser parte de um sistema ou revestimento estabilizador de pH para assegurar a administração dos ingredientes de modo seguro ao estômago. O formulador pode também tirar vantagem do fato de que os compostos da presente invenção tem maior potência celular, propriedades farmacocinéticas, bem como maior biodisponibilidade oral.
[00573] Os presentes ensinamentos também fornecem composições farmacêuticas que incluem pelo menos um composto descrito aqui e um ou mais veículos, excipientes ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos desses veículos são bastante conhecidos e podem ser preparados de acordo com procedimentos farmacêuticos aceitáveis, tais como, por exemplo, aqueles descritos em Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th edition, ed. Alfonoso R. Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, PA (1985), cuja divulgação está aqui incorporada como referência em sua totalidade para todos os propósitos. Conforme é usado aqui, “farmacêuticamente aceitável” se refere a uma substância que é aceitável para uso em aplicações farmacêuticas a partir de uma perspectiva toxicológica e não interage adversamente com o ingrediente ativo. Dessa forma, veículos farmacêuticamente aceitáveis são aqueles que são compatíveis com os outros ingredientes na formulação e são biologicamente aceitáveis. Ingredientes ativos suplementares também podem ser incorporados às composições farmacêuticas.
[00574] Compostos dos presentes ensinamentos podem ser administrados de modo oral ou parenteral, puros ou em combinação com veículos farmacêuticos convencionais. Veículos sólidos aplicáveis podem incluir uma ou mais substâncias que podem também agir como agentes aromatizantes, lubrificantes, solubilizantes, agentes de suspensão, preenchedores, glidantes, auxiliares de compressão, ligantes ou agentes desintegrantes de tablete, ou materiais encapsulantes. Os compostos podem ser formulados de modo convencional, por exemplo, de uma maneira similar àquela usada para compostos fotodinâmicos conhecidos. Formulações orais contendo um composto divulgado aqui podem compreender qualquer forma oral usada convencionalmente, incluindo tabletes, cápsulas, formas bucais, trociscos, pastilhas e líquidos orais, suspensões ou soluções. Em pó, o veículo pode ser um sólido finamente dividido, que é uma mistura com um composto finamente dividido. Em tabletes, um composto divulgado aqui pode ser misturado com um veículo tendo as propriedades de compressão necessárias em proporções adequadas e compactado no formato e tamanho desejados. Os pós e tabletes podem conter até 99 % do composto.
[00575] Cápsulas podem conter misturas de um ou mais compostos divulgados aqui com preenchedores inertes e/ou diluentes como amidos farmaceuticamente aceitáveis (ex., amido de milho, batata ou tapioca), açúcares, agentes adoçantes artificiais, celuloses em pó (ex., celuloses cristalinas e microcristalinas), farinhas, gelatinas, gomas, e outros.
[00576] Formulações úteis em tablete podem ser feitas por compressão convencional, métodos de granulação úmida ou granulação seca e utilizar diluentes farmaceuticamente aceitáveis, agentes de ligação, lubrificantes, desintegrantes, agentes modificadores de superfície (incluindo surfactantes), agentes de suspensão ou estabilização, incluindo, mas não limitados a, estearato de magnésio, ácido esteárico, lauril sulfato de sódio, talco, açúcares, lactose, dextrina, amido, gelatina, celulose, metil celulose, celulose microcristalina, carbometil celulose de sódio, carboximetilcelulose de cálcio, polivinilpirrolidina, ácido algínico, goma acácia gum, goma xantina, citrato de sódio, silicatos complexos, carbonato de cálcio, glicina, sacarrose, sorbitol, fosfato dicálcio, sulfato de cálcio, lactose, caolin, manitol, cloreto de sódio, ceras de baixo derretimento, e resinas de troca de íon. Agentes modificadores de superfície incluem agentes modificadores de superficie noniônicos e aniônicos. Exemplos representativos de agentes modificadores de superfície incluem, mas não estão limitados a, poloxâmero 188, cloreto de benzalcônio, estearato de cálcio, álcool cetostearílico, cera emulsificante de cetomacrogol, ésteres de sorbitano, dióxido de silicone coloidal, fosfatos, dodecilsulfato de sódio, silicato alumínio magnésio, e trietanolamina. Formulações orais aqui podem utilizar formulações padrão de retardo ou de liberação programada para alterar a absorção do(s) composto(s). A formulação oral também pode consistir da administração de um composto divulgado aqui em água ou suco de fruta, contendo solubilizantes e emulsificantes aprpriados conforme necessário.
[00577] Veículos líquidos podem ser usados para preparar soluções, suspensões, emulsões, xaropes, elixires, e para administração por inalação. Um composto dos presentes ensinamentos pode ser dissolvido ou suspendido em um veículo liquido farmaceuticamente aceitável como água, um solvente orgânico, ou uma mistura de ambos, ou óleos ou gorduras farmaceuticamente aceitáveis. O veículo líquido pode conter outros aditivos farmaceuticamente adequados tais como solubilizantes, emulsificantes, tampões, preservativos, adoçantes, agentes aromatizantes, agentes de suspensão, agentes de espessamento, cores, reguladores de viscosidade, estabilizantes, e osmo- reguladores. Exemplos de veículos líquidos para administração oral e parenteral incluem, mas não estão limitados a, água (particularmente contendo aditivos conforme descrito aqui, ex., derivados de celulose tais como uma solução de sódio carboximetil celulose), alcoóis (incluindo alcoóis monohídricos e polihídricos, ex., glicóis) e seus derivados, e óleos (ex., óleo de coco fracionado e óleo de amendoim). Para administração parenteral, o veículo pode ser um éster oleoso tais como oleato etílico e miristato isopropílico. Veículos líquidos estéreis são usados em composições em forma líquida estéril para administração parenteral. O veículo líquido para composições pressurizadas pode ser hidrocarboneto halogenado ou outros propulsores farmaceuticamente aceitáveis.
[00578] Composições farmacêuticas líquidas, que são soluções ou suspensões estéreis, podem ser utilizadas através de, por exemplo, injeção intramuscular, intraperitoneal ou subcutânea. Soluções estéreis também podem ser administradas intravenosamente. Composições para administração oral podem ser na forma líquida ou sólida.
[00579] Preferivelmente a composição farmacêutica é em forma de unidade de dosagem, por exemplo, como tabletes, cápsulas, pós, soluções, suspensões, emulsões, grânulos, ou supositórios. Nessa forma, a composição farmacêutica pode ser subdividida em unidade(s) de dosagem contendo quantidades adequadas do composto. As formas de unidade de dosagem podem ser composições embaladas, por exemplo, pós embalados, frascos, âmpolas, seringas preenchidas ou sachês contendo líquidos. Alternativamente, a forma de unidade de dosagem pode ser uma própria cápsula ou tablete, ou pode ser a quantidade apropriada de quaisquer dessas composições na forma embalada. Essa forma de unidade de dosagem pode conter de aproximadamente 1 mg/kg de composto a aproximadamente 500 mg/kg de composto, e pode ser administrada em uma única dose ou em duas ou mais doses. Essas doses podem ser administradas através de qualquer maneira útil no direcionamento do(s) composto(s) para a corrente sanguínea do receptor, incluindo oralmente, via implantes, parenteralmente (incluindo injeção intravenosa, intraperitoneal e subcutânea), de forma rertal, vaginal, e transdérmica.
[00580] Quando administrada para o tratamento ou inibição de um determinado estado de doença ou transtorno, entende-se que uma dosagem eficaz pode variar dependendo do composto em particular utilizado, do modo de administração, e severidade da condição sendo tratada, bem como os vários fatores físicos relacionados ao indivíduo sendo tratado. Em aplicações terapêuticas, um composto dos presentes ensinamentos pode ser fornecido a um paciente sofrendo de uma doença em uma quantidade suficiente para curar ou pelo menos melhorar parcialmente os sintomas da doença e suas complicações. A dosagem a ser usada no tratamento de um indivíduo específico tipicamente deve ser subjetivamente determinada pelo médico atendente. As variáveis envolvidas incluem a condição específica e seu estado bem como o tamanho, idade e padrão de resposta do paciente.
[00581] Em alguns casos pode ser desejável administrar um composto diretamente às vias aéreas do paciente, usando dispositivos tais como, mas não limitado a, inaladores dosimetrados, inaladores operados por respiração, inaladores de pó seco multidose, bombas, dispensadores de spray nebulizados acionados por aperto, dispensadores em aerosol, e nebulizadores em aerosol. Para administração por inalação intranasal ou intrabronquial, os compostos dos presentes ensinamentos podem ser formulados em uma composição líquida, uma composição sólida, ou uma composição em aerosol. A composição líquida pode incluir, a título de ilustração, um ou mais compostos da presente invenção dissolvidos, partialmente dissolvidos, ou suspendidos em um ou mais solventes farmaceuticamente aceitáveis e pode ser administrada através de, por exemplo, uma bomba ou dispensador de spray nebulizado acionado por aperto. Os solventes podem ser, por exemplo, água salina isotônica ou bacteriostática. A composição sólida pode ser, a título de ilustração, uma preparação em pó incluindo um ou mais compostos dos presentes ensinamentos intermixados com lactose ou outros pós inertes que sejam aceitáveis para uso intrabronquial, e possa ser administrados através de, por exemplo, um dispensador em aerosol ou um dispositivo que quebre ou perfure uma cápsula contendo a composição sólida e forneça a composição sólida para inalação. A composição em aerosol pode incluir, a título de ilustração, um ou mais compostos dos presentes ensinamentos, propulsores, surfactantes, e co-solventes, e pode ser administrada através de, por exemplo, um dispositivo dosimetrado. Os propulsores podem ser um clorofluorocarboneto (CFC), um hidrofluoroalcano (HFA), ou outros propulsores que sejam fisiologicamente e ambientalmente aceitáveis.
[00582] Compostos aqui descritos podem ser administrados de modo parenteral ou intraperitoneal. Soluções ou suspensões desses compostos ou sais, hidratos, ou ésteres farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos podem ser preparados em água adequadamente misturada com um surfactante como hidroxil-propilcelulose. Dispersões também podem ser preparadas em glicerol, polietileno glicóis líquidos, e misturas dos mesmos em óleos. Sob condições ordinárias de armazenamento e uso, essas preparações tipicamente contem um preservativo para inibir o crescimento de microorganismos.
[00583] As formas farmacêuticas apropriadas para injeção podem incluir soluções aquosas estéreis ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões injetáveis estéreis. Em determinadas representações, a forma pode estéril e a sua viscosidade permite que ela flua através de uma seringa. A forma é preferivelmente estável sob as condições de manufatura e armazenamento e pode ser preservada contra a ação de contaminação de microoganismos como bactérias e fungos. O veículo pode ser um meio de solvente ou dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (ex., glicerol, propileno glicol e polietileno glicol líquido), misturas apropriadas dos mesmos, e óleos vegetais.
[00584] Os compostos descritos aqui podem ser administrados de forma intradérmica, i.e., administrados através da superfície do corpo e as camadas internas das passagens corporais incluindo tecidos epiteliais e da mucosa. Essa administração pode ser realizada usando os compostos dos presentes ensinamentos incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos, ou ésteres dos mesmos, em loções, cremes, espumas, adesivos, suspensões, soluções, e supositórios (retal e vaginal).
[00585] A administração transdérmica pode ser realizada através do uso de um adesivo transdérmico contendo um composto, como um composto divulgado aqui, e um veículo que pode ser inerte ao composto, pode ser não tóxico para a pele, e pode permitir a distribuição do composto para absorção sistêmica na corrente sanguínea através da pele. O veículo pode ter qualquer número de formas como cremes e unguentos, pastas, géis, e dispositivos oclusivos. Os cremes e unguentos podem ser liquido viscoso ou emulsões semi-sólidas de óleo-em-água ou tipo óleo-em-água. Pastas compreendendo pós absorvíveis dispersados em petróleo ou petróleo hidrofílico contendo o composto também podem ser apropriadas. Uma variedade de dispositivos oclusivos podem ser usados para liberar o composto na corrente sanguínea, tais como uma membrana semi-permeável cobrindo um reservatório contendo o composto com ou sem um veículo, ou uma matriz contendo o composto. Outros dispositivos oclusivos são conhecidos na literatura.
[00586] Os compostos descritos aqui podem ser administrados de modo retal ou vaginal na forma de um supositório convencional. Formulações em supositório podem ser feitas de materiais tradicionais, incluindo manteiga de cacau, com ou sem a adição de ceras para alterar o ponto de derretimento do supositório, e glicerina. Bases de supositórios solúveis em água, tais como polietileno glicóis de vários pesos moleculares, também podem ser usadas.
[00587] Formulações lipídicas ou nanocápsulas podem ser usadas para introduzir compostos dos presentes ensinamentos em células hospedeiras in vitro ou in vivo. Formulações lipídicas e nanocápsulas podem ser preparadas através de métodos conhecidos na arte.
[00588] Para aumentar a eficácia de compostos dos presentes ensinamentos, pode ser desejável combinar um composto com outros agentes eficazes no tratamento da doença alvo. Por exemplo, outros compostos ativos (i.e., outros ingredientes ou agentes ativos) eficazes no tratamento da doença alvo podem ser administrados com compostos dos presentes ensinamentos. Os outros agentes podem ser administrados ao mesmo tempo ou em tempos diferentes dos compostos divulgados aqui.
[00589] Os compostos dos presentes ensinamentos podem ser úteis para o tratamento ou inibição de uma condição patológica ou transtorno em um mamífero, por exemplo, um humano. Os presentes ensinamentos consequentemente fornecem métodos para tratamento ou inibição de uma condição patológica ou transtorno fornecendo a um mamífero um composto dos presentes ensinamentos incluindo seu sal farmaceuticamente aceitável) ou uma composição farmacêutica que inclua um ou mais compostos dos presentes ensinamentos em combinação ou associação com veículos farmaceuticamente aceitáveis. Os compostos dos presentes ensinamentos podem ser administrados sozinhos ou em combinação com outros compostos ou terapias terapeuticamente eficazes para o tratamento ou inibição de uma condição patológica ou transtorno.
[00590] Exemplos não limitadores de composições de acordo com a presente invenção incluem de aproximadamente 0.001 mg a aproximadamente 1000 mg de um ou mais compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção e um ou mais excipientes; de aproximadamente 0.01 mg a aproximadamente 100 mg de um ou mais compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção e um ou mais excipientes; e de aproximadamente 0.1 mg a aproximadamente 10 mg de um ou mais compostos fotodinâmicos de acordo com a presente invenção; e um ou mais excipientes.
PROCEDIMENTOS
[00591] Os seguintes procedimentos podem ser utilizados para avaliar e selecionar compostos como compostos fotodinâmicos.
[00592] Extração da atividade de topoisomerase II das células HL60
[00593] Extratos nucleares foram precipitados por afinidade conforme descrito em ‘Small Scale Preparation of Topo I and II Extracts from Tissue Culture Cells (Optimized for HeLa Cells)’ no website TopoGEN (http:www.topogen.com/html/extracts.html). Todas as etapas foram conduzidas em gelo ou a 4°C. Resumindo, 10 mL de células HL-60 crescendo exponencialmente (1 x 106 celulas/mL) foram transferidas para um tubo de centrífuga cônico de 15 mL (Fisher Scientific, Canada) e empelotadas em uma centrífuga eppendorf 5804R (16.1 cm raio) a 2100 rpm por 3 min a 4°C. As células foram lavadas duas vezes com 3 mL de solução salina tamponada de fosfato gelada (PBS) contendo 2.68 mM de cloreto de potássio, 1.47 mM de monobásico de fosfato de potássio, 0.137 M de cloreto de sódio, e 8.10 mM de dibásico de fosfato de sódio, pH 7.4, da seguinte forma: a pelota de célula foi resuspendida com PBS tamponado (misturado por pipeta para cima e para baixo), centrifugada a 2100 rpm (3 min, 4°C), e o sobrenadante gentilmente derramado para fora. Após a segunda lavagem, as células foram resuspendidas em 3 mL de tamponado hipotônico frio (10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 1 mM EDTA, 4 mM MgCl2, 0.5 mM fenilmetilsulfonil fluoreto (PMSF)), e os caroços foram dispersados por pipeta para cima e para baixo. As células foram empelotadas novamente (2100 rpm, 3 min, 4°C), resuspendidas e dispersadas em 3 mL do mesmo tamponado hipotônico frio, e deixadas em gelo por 10 min para inchar. As membranas celulares foram rompidas com um homogeinizador Dounce frio (Pyrex, 15 mL), usando 6-8 batidas. O lisado foi transferido para um tubo de microcentrífuga estéril limpo de 1.5 mL (Fisher Scientific, Canada) e centrifugado (2900 rpm, 10 min, 4°C). A pelota, contendo núcleos, foi lavada duas vezes com o mesmo tamponado hipotônico frio, da seguinte forma: tamponado frio foi adicionado à pelota e os núcleos foram resuspendidos por pipeta para cima e para baixo, então empelotados (2900 rpm, 10 min, 4°C), o sobrenadante gentilmente removido e descartado. Após a segunda lavagem, os núcleos foram resuspendidos em 4 volumes de pelotas (aproximadamente 500 μL) de tamponado hipotônico frio sem MgCh Um volume igual de 1 M NaCl frio foi adicionado à pelota resuspendida e deixado em gelo por 45 min, seguido pelo empelotamento em uma microcentrífuga (14,000 rpm, 15 min, 4°C). O sobrenadante (extrato nuclear), suspendido em 5 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.5 mM EDTA, 0.25 mM PMSF, e 0.5 M NaCl, foi usado para testes de relaxamento de DNA.
[00594] A concentração total de proteínaT (BSA equivalente) do extrato foi determinada usando um kit de proteína total Micro Lowry (Total Protein Kit, Micro Lowry, modificação de Peterson), seguindo as instruções do fabricante para ‘Protein Determination without Protein Precipitation.’ Em resumo, cinco padrões de proteína BSA foram preparados a partir de uma solução concentrada de 400 μg/mL em água pura para um volume de 200 μL em 1.5 mL de tubos de microcentrífuga estéril (concentrações finais de BSA foram de 10, 20, 40, 60, 80 μg). Um sexto tubo contendo água pura foi usado apenas como um espaço vazio. Um sétimo tubo, contendo 50 μL de extrato nuclear e150 μL (diluição escolhida aleatoriamente) foi preparado para medir o seu conteúdo de proteína em relação aos padrões de BSA. Todos os tubos foram misturados por turbilhonamento, então 200 μL de solução reagente Lowry foi adicionada a todos os tubos seguido por turbilhonamento para misturar. As soluções descansaram em temperatura ambiente por 20 min, então 100 μL de reagente fenol Folin Ciocalteu (6X diluição de 2 N de solução concentrada) foi adicionada a cada tubo, seguido de turbilhonamento para misturar. A cor foi deixada a desenvolver por 30 min. As soluções foram transferidas uma de cada vez para uma bacia de quartz, com uma extensão de 1 cm, e a absorção dos padrões e tubos de amostra foram medidos em uma onda de 750 nm. Foi construído um diagrama (Excel, 2007) dos valores de absorção dos padrões versus suas concentrações protéicas correspondentes e regressão linear foi usada para calcular a concentração de proteína na amostra de extrato nuclear, levando em conta a diluição de 10x. O resultado foi uma concentração de proteína de 559 μg/mL ou 279 μg (BSA equivalentes) do extrato nuclear.
[00595] Atividade do extrato de Topoisomerase em testes de relaxamento de DNA:
[00596] A atividade de relaxamento do extrato nuclear, contendo topo I e II, foi determinada detectando-se a conversão do plasmídeo de DNA superenrolado à sua forma relaxada na presença de ATP. Tubos de reação (20 μL volumes) foram reunidos em gelo pela adição ordenada de: (i) água pura (variável, até 20 μL de volume); (ii) 4 μL de tamponado de relaxamento (250 mM Tris-HCl, pH 8, 0.75 M NaCl, 50 mM MgCl2, 2.5 mM ditiotreitol, 150 μg BSA/mL, and 10 mM ATP); (iii) pUC19 plasmídeo de DNA superenrolado (250 ng, or 38.6 μM bases); e (iv) topo extrato (1, 2, 3, ou 4 μL). A reação foi iniciada pelo aquecimento dos tubos em uma incubadora a 37°C por 30 min. A reação foi interrompida pela adiçãode 2 μL de 10% SDS (em água estéril), e a proteina de ligação de DNA foi então digerida pela adição de 2 μL proteinase K (0.50 mg/mL concentrada em 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7.5) e incubada a 37°C por 15 min. Então, 2 μL de carregamento de corante com ficoll (0.25% bromofenol azul, 15% ficoll, em 1X TBE tampão) foi adicionado e amostras de DNA foram então analisadas por 1.5% eletroforese por gel de agarose usando 1X TBE tampão (50 V, 180 min). Os géis foram coloridos com brometo de etídio (1 μg/mL) por 30 min com a subsequente descoloração por 30 min em água, e visualizados com UV-transiluminação (UVP transiluminador) usando o sistema Gel-Doc-It Imaging (UVP). Uma unidade de atividade de topoisomerase II de DNA foi definida como a quantidade de enzima capaz de relaxar 250 ng DNA superenrolado em 30 minutos a 37°C (nesse caso, uma unidade = 2 μL extrato). A presença de topo I foi avaliada através do teste relativo ao relaxamento do plasmídeo pUC19 (250 ng) na ausência de ATP por 30 min a 37°C. Sob essas condições, o relaxamento do plasmídeo pUC19 não foi detectado (indicando de pouco a nenhum topo I).
[00597] Testes de Topoisomerase II:
[00598] A inibição da atividade de topoisomerase II pelos compostos da divulgação foi medida por um teste de relaxamento de DNA superenrolado usando um kit de triagem de droga topoisomerase II (TopoGEN). Em resumo, 0.23 μg de plasmídeo de DNA superenrolado pUC19 (3.5 μL of 64.5 ng/μL solução concentrada em 10 mM Tris-Cl, pH 8.5) foi suspendido em tamponado de reação pH 8.0 (250 mM Tris-HCl, 0.75 M NaCl, 50 mM MgCl2, 2.5 mM ditiotreitol, 150 μg BSA/mL, e 10 mM ATP). Água pura foi adicionada (variável, até 20 μL de volume), então 2 μL de aliquotas de compostos de rutênio (1, 10, 50, 100, 500, 1000 μM diluições seriais) foram adicionadas, criando concentrações finais de amostra de 0.1, 1, 5, 10, 50, e 100 μM. Amostras controle foram preparadas da seguinte forma: (i) apenas plasmídeo (sem extrato nuclear); (ii) plasmídeo com extrato nuclear; (iii) plasmídeo com a maior concentração de rutênio (sem extrato nuclear); e (iv) plasmídeo com extrato nuclear (sem ATP no tamponado). Os tubos foram bem misturados (gentilmente agitados e desacelerados) antes de iniciar a reação através da adição de 2 μL (uma unidade) de extrato nuclear. Após 30 min de incubação a 37°C, a reação foi interrompida pela adição de 2 μL de 10% SDS (em água estéril). A proteina de ligação de DNA foi digerida pela adição de 2 μL de proteinase K (0.50 mg/mL concentrada em 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7.5) a 37°C por 15 min, sem o clorofórmio opcional: extração de álcool isoamil (extrações anteriores não apresentaram melhora cosmética nos resultados). Por fim, 2 μL de carregamento de corante ficoll (0.25% bromofenol azul, 15% ficoll, em tampão 1X TBE) foi adicionado e as amostras de DNA foram analisadaspor eletroforese por gel de agarose a 1.5% usando tampão 1X TBE (50 V, 180 min). O gel foi colorido com brometo de etídio (1 μg/mL) por 30 min com subsequente descoloração por 30 min em água pura, e visualizado com UV-transiluminação (UVP transiluminador) usando o sistema Gel-Doc-It Imaging (UVP).
[00599] Ligação de DNA por UV-vis:
[00600] Titulações óticas foram realizadas em soluções de 0.5-2 mL dos PDCs com quantidades crescentes de DNA do esperma de timo de vitelo ou arenque para dar [DNA bases]/[PDC] entre 0.1 e 10. DNA foi adicionado em 15 μL de incrementos para soluções de composto (10 μM) em 10 mM MOPS, 10 mM MOPS com 50 mM NaCl, 5 mM Tris-HCl, ou 5 mM Tris-HCl com 50 mM NaCl at pH 7.5. A diluição de compostos da divulgação no final de cada titulação, embora insignificante, foi levada em conta nas constantes de ligação. A constante de ligação de DNA (Kb) foi obtida com ajustes dos dados de titulação para eq. 1 (Figura 36), onde b = 1 + KbCt + Kb[DNA]t/2s, Ct e [DNA]t representam as concentrações totais de PDC e DNA, respectivamente, s é o tamanho do local de ligação, e εa, Sf, e Sb representam os coeficientes de extinção molar dos PDCs aparentemente livres e ligados, respectivamente. Sf foi calculado em 414 nm por 7 e 412 nm por 8 antes da adição de DNA, e Sa foi determinado naquelas ondas após cada adição de DNA. O valor de Sb foi determinado a partir do platô da titulação de DNA, onde a adição de DNA não resultou em mais nenhuma diminuição no sinal de absorção. Ajustes detalhados dos dados de titulação foram obtidos usando Kaleidagraph e Gnuplot.
[00601] As curvas de derretimento de DNA foram construídas medindo a absorção (A260) de uma solução de 2 mL, 25 μM DNA (40 mM MOPS, pH 7.5) como uma função de temperatura (20-100 oC) na ausência e presença de um composto da divulgação (5 μM). Soluções de DNA e um composto da divulgação para experimentos de derretimento foram deixados a equilibrar por 30 min a 25 oC antes da medição. O controlador de temperatura ETC-505T foi resfriado com água gelada (4 oC) usando uma bomba de aquário de peixes, e uma corrente de gás de argon foi fornecida através da válvula de entrada de gás para o compartimento de amostra para evitar a condensação nas janelas da bacia durante experimentos de temperatura variável.
[00602] Titulações de Fotoclivagem:
[00603] Experimentos de fotclivagem de DNA foram realizados de acordo com um teste geral de plasmídeo de DNA com 20 μL de volumes totais de amostra em tubos de microcentrífuga de 0.5 ou 1.5 mL contendo plasmídeo pUC19 transformado (200 ng, >95% Form I) em 10 mM MOPS tamponado e 100 mM NaCl, pH 7.4. DNA (1-5 μL) foi distribuído aos tubos de ensaio como uma solução em 10 mM Tris-Cl (pH 8.5)ed diluído com MOPS (pH 7.5, concentração final 10 mM) e NaCl (concentração final 100 mM). Soluções dos compostos da divulgação foram adicionadas para dar de 0 a 500 μM , e as misturas de reação foram diluídas até um volume final de 20 μL, quando necessário, com ddH2O. Complexos foram dissolvidos inicialmente em acetonitrilo (2 μM soluções concentradas), e todas as diluições subsequentes foram feitas com ddH2O onde os tubos de ensaio finais continham <1% acetonitrilo. Para testes baseados em concentração, amostras (sem período de pré incubação) foram irradiadas em ar por 30 min com 420 nm de luz no interior de um fotoreator (Luzchem LZC-4X). Onde a irradiação de amostras desoxigenadas foi necessária, o argon foi borbulhado através das soluções por 15 min antes da irradiação sob uma pressão positiva de argon. Todas as amostras foram extintas pela adição de tamponado de carregamento de gel (4 μL), carregado em 1% de géis de agarose contendo brometo de etídio (0.75 μg mL -1), e eletroforado por 30 min a 8-12 V cm -1 em 1X TAE (40 mM Trisacetate, 1 mM EDTA, pH 8.2). As faixas foram visualizadas com UV-transiluminação (UVP transiluminador) e quantificadas usando o sistema Gel Doc-It Imaging (UVP) ou GNU Image Manipulation Program (GIMP).
[00604] Cultura de Célula HL-60:
[00605] Células de leucemia promielocítica humana HL-60 (ATCC CCL- 240) foram cultivadas a 37°C sob 5% CO2 em Hyclone’s IMDM, suplementadas com 20% FBS e foram passadas 3-4 vezes por semana de acordo com procedimentos assépticos padrão. As culturas foram iniciadas em 200,000 células mL- 1 em 25 cm2 frascos de cultura de tecido e foram subcultivadas antes que o crescimento alcançasse 750,000 células mL- 1 para evitar a senescência associada à alta densidade celular prolongada. Um meio completo foi preparado em porções de 200 mL conforme necessário combinando IMDM (160 mL), FBS (40 mL, pre-aliquotado e inativado por calor), e sulfato de gentamicina (100 μL of 50 mg mL- 1 solução concentrada) em um recipiente “stericup” a vácuo 250 mL Millipore (0.22 μm) e filtragem.
[00606] Testes de Citotoxicidade e fotocitotoxicidade
[00607] Células HL-60 crescendo em uma fase log (aproximadamente 8x105) foram transferidas em 50 μL aliquotas para duas microplacas de cultura de tecido de 96-poços (Corning Costar, Acton, MA) contendo 100 μL de meio de cultura aquecido e colocadas em uma incubadora de jaqueta de água a 37°C, 5% CO2 (Thermo Electron Corp., Forma Series II, Model 3110, HEPA Class 100) por uma hora para equilibrar. Todos os poços de microplaca vazios continham 200 μL de solução salina tamponada de potássio (PBS) contendo 2.68 mM de cloreto de potássio, 1.47 mM de monobásico de fosfato de potássio, 0.137 M de cloreto de sódio, e 8.10 mM de dibásico de fosfato de sódio, pH 7.4, para ajudar a minimizar a perda de evaporação. Alíquotas quentes 50 μL de solução de compostos da divulgação (4, 20, 40, 200 μM), recém feitas em PBS, foram adicionadas às células e incubadas a 37°C sob 5% de CO2 por 4 hr (as concentrações finais foram 1, 5, 10, 50 μM). Uma das microplacas foi irradiada com luz visível (400 - 700 nm) em um fotoreator Luzchem (tubos fluorescentes brancos de luz fria, 21 W/ m2) por 15 min; a outra microplaca foi incubada sob condições idênticas no escuro. Ambas as microplacas foram então incubadas (37°C sob 5% CO2) por 40 hr. Um Cellometer Auto T4 (ESBE Scientific) foi usado para determinar o número de células, viabilidade, diâmetro, e % de viabilidade celular. Suspensões de células (20 μL) foram diluídas em 1:1 com 0.2% de corante trypan azul (Sigma Aldrich, Canada), carregadas em uma câmara deslizante de contagem celular, e inseridas no contador de células automático baseado em imagem. A concentração celular e a viabilidade celular foram automaticamente determinadas (Cellometer Auto Counter Software) com base na contagem celular total, o fator de diluição, e a exclusão do corante trypan azul. Os parâmetros ideais de tipo celular foram estabelecidos importando as configurações para as células HL-60, e os dados foram subsequentemente importados para uma planilha Microsoft excel (Microsoft Office 2010) para análise dos dados.
[00608] Testes de Citotoxicidade e Photocitotoxicidade:
[00609] As células HL-60 crescendo em fase log foram transferidas (tipicamente 25 μL aliquotas) para placas de cultura de tecido de 96-poços (Corning Costar, Acton, MA) contendo meio de cultura com ou sem concentrações variáveis dos compostos da divulgação para dar volumes finais nos poços de cultura de 100 μL e 10,000-20,000 células. Soluções de compostos da divulgação em meios completos foram preparadas em porções de 1 mL, onde o acetonitrilo da solução concentrada dos compostos iniciais da divulgação foi <0.5% v/v, e filtrado esterilmente em seringas de 3 mL equipadas com filtros 0.22 μm Nalgene. Placas foram incubadas a 37 oC sob 5% CO2 por 30 min antes da exposição a 420 nm de luz em um fotoreator Luzchem por 30 min; controles escuros foram incubados sob condições idênticas no escuro. Controles escuros, ou testes de citotoxicidade (CT), se referem a testes que incluem compostos da divulgação mas que não foram expostos á luz, e controles de luz se refere a testes expostos a luz que não contem compostos da divulgação. Testes de fotocitoxicidade (PCT) continham PDC e foram expostos a luz. Contagem celular e coloração de viabilidade foram realizadas imediatamente e em ~24 h após a exposição a luz. Contagens manuais foram realizadas em misturas de 25 μL 1:1 de cultura de teste e solução trypan azul em um hemocitômetro Neubauer visto sob um microscópio de luz invertida em modo de fase-contraste (4X objectiva, 60X ampliação total). Sob essas condições, as células viáveis apareceram em branco brilhante, e as células não viáveis foram azuis. Todos os experimentos foram realizados em triplicata, e os dados grafados são a média de três testes.
[00610] Coloração de Viabilidade:
[00611] A viabilidade foi estabelecida de acordo com um protocolo publicado através do qual uma solução concentrada 100X de brometo de etídio /laranja de acridina (EB/AO) foi preparada dissolvendo brometo de etídio (50 mg) e laranja de acridina (15 mg) em 95% de etanol (1 mL) e diluindo 1/50 com ddH2O. A solução 100X foi dividida em 1 mL aliquotas e armazenada a -20 oC.Uma solução de trabalho 1X foi feita descongelando-se uma alíquota de 1 mL da solução concentrada 100X e diluindo 1/100 com solução salina fosfato- tamponada. A solução de trabalho foi armazenada em um frasco âmbar a 4 oC por até um mês. Para coloração de viabilidade celular, uma alíquota de suspensão celular foi ajustada para 1-5 x106 células mL-1 em IMDM fosfato- tamponada. Uma alíquota de 25 μL dessa suspensão celular foi misturada com 1X EB/AO de solução de coloração (25 μL) em um tubo de microcentrífuga; uma alíquota de 25 μL dessa mistura célula-colorida foi transferida para um hemocitômetro e vista sob um microscópio de luz invertida Nikon Eclipse TE2000-U operando no modo de epi-fluorescência (10X ou 40X objectiva, 150X ou 600X ampliação total). Sob essas condições, as células viáveis tomaram AO e excluíram EB, resultando em apenas fluorescência verde com UV-excitação. Células não viáveis (apoptóticas or necróticas) assimilaram EB e fluoresceram em vermelho com excitação verde, sobrepujando qualquer fluorescência verde de AO. As células apoptóticas foram discernidas da formação de corpos apoptóticos menores que fuoresceram em vermelho.
[00612] Coloração nuclear para microscopia confocal de triagem a laser (LSCM)
[00613] Células leucêmicas promielocíticas humanas HL-60 (ATCC CCL-240) crescendo em fase log foram transferidas em alíquotas de 100 μL (aproximadamente 50,000 células) para uma microplaca de cultura de tecido de 96-poços (Corning Costar, Acton, MA) contendo 150 μL de em meio de cultura aquecido (Hyclone’s IMDM suplementado com 20% FBS), e colocado em uma incubadora de jaqueta de água a 37°C, 5% CO2 (Thermo Electron Corp., Forma Series II, Model 3110, HEPA Class 100) por uma hora para equilibrar. Então, 50 μL de uma solução de 600 μM de um composto da divulgação (aquecido a 37°C), feito em solução salina fosfato-tamponada (PBS) contendo 2.68 mM de cloreto de potássio, 1.47 mM de monobásico de fosfato de potássio, 0.137 M de cloreto de sódio, e 8.10 mM de dibásico de fosfato de sódio, pH 7.4, foi adicionado. A microplaca foi devolvida à incubadora por 15 min. A amostra de 300 μL foi então transferida para um prato de cultura de tecido com fundo de vidro revestido de colágeno (FluoroDish FD35COL, World Precision Instruments Inc.) e devolvida à incubadora por 10-15 min para permitir que as células aderissem ao prato revestido. O volume do prato de cultura de tecido foi subsequentemente complementada até 2 mL com PBS aquecido para LSCM.
[00614] Desativação fotodinâmica (PDI) de organismos microbiais e quimioterapia antimicrobial fotodinâmica (PACT).
[00615] Staphylococcus aureus (SA, ATCC 25923) e S. aureus resistente a meticilina (MRSA, ATCC 33592), foram cultivados durante a noite em um meio Columbia a 37°C (BD, Canada) em condições atmosféricas aeróbicas ou hipóxicas conforme descrito aqui. Placas de agar Columbia foram usadas para cultivar colônias para SA, enquanto que placas Agar de triagem de resistência a oxacilina (Oxoid, Canada) foram necessárias para contagem MRSA CFU. Um LED de alta potência, fabricado por Theralase, Inc., (530 ± 25 nm) com uma irradiação média de 98±2 mW cm-2 serviu como a fonte de luz primária para todos os experimentos PDI.
[00616] PDI (normoxia). Culturas foram cultivadas durante a noite em caldo Columbia. Alíquotas de referência bacterial foram preparadas por uma diluição da cultura de durante a noite em meio fresco com um ODx=600nm of 0.3, que é equivalente a 108 cfu mL-1. PS soluções concentradas de 2 mM foram preparadas em água purificada (MilliQ, 18.5mQ), e diluições seriais foram preparadas em condições de luz baixa para obter concentrações finais entre 12 a 0.03 μM. Alíquotas bacteriais foram adicionadas a uma placa de 96 poços (60 μl por poço) seguido de 60 μl de meio com a apropriada diluição PS, incluindo controles para cada cepa SA sem PS. Placas foram preparadas em duplicata, onde uma placa serviu como um controle escuro e foi incubada por 30 minutes com o PS no escuro a 37°C. A outra placa com bactéria idêntica e concentrações de PS foi exposta a luz por 10 minutos (exposição de radiância total de 58.8 J cm-2). A quantificação bacterial foi realizada por contagem manual. Para contagem manual, 20 μL de aliquotas diluídas em PBS foram colocadas sobre placas de agar Columbia, e as colônias foram contadas após 24-horas de incubação a 37°C.
[00617] PDI (hypoxia). De modo a criar condições hipóxicas, duas bolsas de 5-L de Anaerogen (Oxoid, Canada) foram colocadas em uma câmara ambiental e uma mistura de 0.5% CO2 em N2 (Praxair, Toronto, ON) foi introduzida por 30 minutos para consumir o oxigênio residual. Todos os reagentes líquidos, incluindo meios e água, também foram lavados com 0.5% CO2 em N2. Uma mistura de tioglicolato de sódio (0.68 μM) e resazurin (17.45 μM) foi adicionada ao meio antes de misturar com a bactéria para assegurar o consumo completo do oxigênio. Tubos de vidro com tampas de borracha foram usados para preservar as condições hipóxicas durante a incubação bacterial antes da exposição à luz PDT. Para minimizar ainda O2, todas as ferramentas e pratos de plastico foram mantidos na câmara a 0.5% O2,/5% CO2-balanceado N2 por 12 horas antes que os experimentos fossem iniciados. Procedimentos subsequentes de PDI foram realizados conforme o descrito para condições normóxicas no interior da câmara hipóxica. O teste CFU foi o método padrão usado para recuperar o número de sobreviventes bacteriais após o tratamento com PDI; nenhum teste colorimétrico foi usado.
[00618] Citotoxicidade Escura e com Luz em relação a células HL60 de compostos da divulgação:
[00619] Células leucêmicas promielocíticas humanas HL-60 (ATCC CCL-240) crescendo em fase log foram transferidas em aliquotas de 50 μL (aproximadamente 40,000 células) para duas microplacas de cultura de tecido de 96-poços (Corning Costar, Acton, MA) contendo 25 μL de meio de cultura aquecido (meios RPMI-1640 suplementados com 20% FBS), e colocados em uma incubadora de jaqueta de água a 37°C, 5% CO2 (Thermo Electron Corp., Forma Series II, Model 3110, HEPA Class 100) por uma hora para equilibrar. Alíquotas aquecidas de 25 μL- de compostos serialmente diluídos desta invenção, recém feitas em PBS (2.68 mM de cloreto de potássio, 1.47 mM de monobásico de fosfato de potássio, 0.137 M de cloreto de sódio, e 8.10 mM de dibásico de fosfato de sódio, pH 7.4), foram adicionadas às células e incubadas a 37°C sob 5% CO2 por 1-24 horas. Após esse periodo de pré-PDT incubação, uma das microplacas foi irradiada com luz fraca enquanto a outra microplaca foi mantida no escuro. A fonte de luz empregada pode ser variada de acordo com cor, densidade de energia, método de fornecimento (contínua ou pulsada), etc. Um tratamento PDT representativo poderia usare 400 - 700 nm de luz de um projetor de 190 W (BenQ MS510) por 1 hr (0.0278 mWxm-2, dose total de luz 100 J^cm2). Ambas as microplacas foram então incubadas (37°C sob 5% CO2) por aproximadamente 48 hr. A proliferação e viabilidade celular podem ser determinadas através de métodos padrão de contagem celular e através de vários métodos de alta capacidade. Um método de alta capacidade representativo usado nesta invenção emprega o indicador redox Alamar, que se baseia na capacidade das células metabolicamente ativas de converter o reagente em um indicador fluorescente. Em resumo, 10-μL aliquotas de reagente aquecido Alamar Blue (Life Technologies DAL 1025) foram adicionadas a todos os poços de amostras em aproximadamente 48 hr pós- PDT, e as microplacas foram incubadas por até mais 24 hr a 37°C sob 5% CO2. As microplacas foram então colocadas em um leitor de fluorescência de microplaca Cytofluor 4000 com o filtro de excitação fixado em 530 ± 25 nm e o filtro de emissão fixado em 620 ± 40 nm. A contagem de fluorescência de cada poço foi subsequentemente importada para uma planilha Microsoft excel (Microsoft Office 2010) e então processada usando Prism 6.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA) para construir curvas de resposta de dose.
[00620] Citotoxicidade escura e com luz em relação a células HL60 de compostos representativos da divulgação são descritos na tabela 15:
[00621] Tabela 15: Citotoxicidade escura e com luz em relação a células HL60 relatada como valores EC50 para compostos da divulgação. PI= índice fotodinâmico, definido como o índice de toxicidade de escuro a luz EC50. Pro-branco: 190 W projetor, 0.0278 mW.cm-2; PR-vis: fotoreator com 12 tubos fluorescentes, 0.0077 mW.cm-2; EC50 = concentração efetiva, definida como a concentração na qual a viabilidade celular tenha sido reduzida para 50% em relação a amostras controle contendo nenhum composto. Códigos após “Pro-branco” or “PR-vis” se referem a referência interna para as condições experimentais.
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[00622] Efeito da terapia fotodinâmica de compostos representativos da divulgação sob condições normóxicas e hipóxicas:
[00623] Em condições normóxicas, 16A e 16C demonstraram um amplo efeito de PDT em concentrações tão baixas quanto 4 μM (Tabela 16). Dos dois PSs, somente 16C demonstrou um efeito substancial de PDT em condições hipóxicas, para o qual uma maior concentração do PS (40 μM) foi requerida. É digno de nota o fato de que alterações relativamente pequenas na fórmula química de 16C comparado com 16A foram acompanhadas de alterações dramáticas nas propriedades de PS: 16C, em contraste com 16A, é solúvel em água e capaz de evocar um forte efeito de PDT em condições hipóxicas.
[00624] Evidências experimentais para PDT in vitro em normoxia (16A e 16C) e em hypoxia (16C>16A) são mostradas na Tabela 16. Condições hipóxicas se referem a um ambiente que é de aproximamente 0.1-0.5% de oxigênio. Os efeitos de 16A (4, 40 μM) and 16C (4, 40 μM) sem luz (toxicidade escura) e com luz em morte celular são expressados como uma percentagem de um controle compatível (sem PS, sem luz). Dose de luz: 635 nm, 90 J.cm-2. O efeito de PDT é calculado pela subtração de morte celular devido a apenas luz e morte celular devido a apenas PS (toxicidade escura) da morte celular total de PDT.
[00625] A linhagem celular foi adquirida de ATCC (Mannassas, VA): U87MG (U87, #HTB-14). Os perfis de repetição curta em tandem (STR) para todas as linhagens celulares foram verificados. As células foram cultivadas em meio DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino e 1% de penicilina (5,000 unidades ml-1) e estreptomicina (5,000 μl ml-1) (todos de Gibco, Invitrogen, CA, USA) em frascos de 75 cm2 (Falcon, Invitrogen, CA, USA) e mantidas a 37 °C em 5% CO2. As células foram passadas em confluência de 80%, e foi realizada a troca completa de meio a cada 2-3 dias. As células foram usadas entre 6 e 27 passagens.
[00626] 24 horas antes dos experimentos 15,000 células por poço foram revestidas em placas de 96 poços em duplicata (Falcon, Invitrogen, CA, USA) usando 200 μL de suspensão celular por poço. No dia seguinte, os meios foram substituídos por meios mais um composto da divulgação em variadas concentrações. Após 4-6 horas de carregamento de PS, o PS não ligado foi removido por uma troca completa de meios por meios frescos livres de piruvato de sódio, seguido de irradiação de luz PDT.
[00627] A irradiação de toda a placa de 96-poços foi conduzida usando uma fonte de luz de matriz de LED vermelho emitindo a 635 +/- 25 nm fornecida por Theralase Inc. (Toronto, ON, Canada). Uma exposição radiante de 90 Jcm-2 foi distribuída em uma irradiação de 125 mW cm-2. A irradiação foi homogênea para 12% através de todos os poços. A refrigeração a ar ativa manteve a temperatura do meio de cultura de tecido subindo abaixo de 3oC da temperatura ambiente.
[00628] Para experimentos hipóxicos, todas as soluções usadas foram mantidas sob condições hipóxicas por pelo menos 24 horas antes do experimento. Para facilitar a fixação, as placas de 96 poços contendo células foram transferidas para uma câmara hipóxica (InvivO2 400 Ruskinn Technology Ltd., UK) 4 horas pós semeadura normóxica. As placas permaneceram em condições hipóxicas por 24 horas antes da irradiação de luz PDT. A câmara hipóxica tinha uma atmosfera de 0.5% O2, 5% CO2, equilíbrio com N2, at 37oC e 95% de umidade. Como sob condições normóxicas, o meio com PS foi adicionado e então substituído por meio fresco seguido de 4-6 horas de carregamento PS. As células foram mantidas por 2 horas a 0.1% O2 para posteriormente reduzir o oxigênio disponível no poço experimental. O tempo de difusão do oxigênio através da coluna líquida de ~3 mm é mais curto do que o tempo de exposição de ~7 min e consequentemente a re-oxigenação do ambiente externo precisou ser limitada sem comprometer a sobrevivência celular independente de PDT. Após a irradiação, as células a 0.5% O2 por 24 horas até que as medições de viabilidade celular fossem realizadas. Para todos os procedimentos conduzidos sob condições ambientais normais (irradiação de luz, medições de morte celular), as placas contendo células hipóxicas foram vedadas hermeticamente com um filme adesivo oxigênio-impermeável (Evergreen Scientific, USA). Quando as placas foram devolvidas às condições hipóxicas, a vedação foi removida e as coberturas das placas foram substituídas. Isso não alterou o pO2 nos poços experimentais, conforme testado com um teste colorimétrico (Suflita, J. and Concannon, F.,1995).
[00629] A viabilidade celular foi medida nos 96-poços em duplicata, 24 horas pós irradiação usando o teste Presto Blue Cell Viability (Invitrogen, CA, USA), de acordo com o protocolo do fabricante, com a leitura fornecida por um SpectroMax M5 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, US).
[00630] Tabela 16: Efeito da terapia fotodinâmica de compostos representativos da divulgação sob condições normóxicas e hipóxicas
Figure img0286
Figure img0287
[00631] Deve ficar claro a partir da divulgação acima que a atividade biológica de compostos da invenção pode ser significativamente alterada com sutil modificação estrutural. Por exemplo, aumentar o número de unidades de tiofeno na cadeia de oligotiofeno aumenta a toxicidade à luz em uma determinada série com um conjunto definido de ligantes auxiliares, através do que o número de tiofenos aumenta de um a quatro e além. No relatório desta invenção, a série 16 contem quatro unidades de tiofeno; a série 14 contem três unidades de tiofeno; a série 10 contem duas unidades de tiofeno; e a série 1 contem uma unidade de tiofeno. Essa modificação racional se estende para outros metais (além do rutênio) que incorpora um ligante 2-substituído imidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina. A Tabela 15 demonstra esse conceito para Os14a/Os10a/Os1a, Os14b/Os10b/Os1b e Os14c/Os10c/Os1c bem como exemplos adicionais pertencendo às estruturas rutênio-baseadas.
[00632] O número de unidades de tiofeno também pode ser usado para estender a onda mais longa de absorção, ilustrado por comparação da absorção vermelha de 16c com a absorção verde de 14c, pelo qual 16c contem quatro unidades de tiofeno enquanto que 14c contem três.
[00633] Dentro de uma determinada série contendo cadeias de tiofeno de comprimento idêntico, a identidade dos ligantes auxiliares pode ser usada para ajustar ainda várias propriedades químicas, físicas e biológicas. Por exemplo, 16c apresenta PDT in vitro em hipoxia (atividade fotodinâmica Tipo 1) enquanto que 16a não, conforme demonstrado na Tabela 16. A única diferença entre os dois compostos é a incorporação de dois grupos metilo nas posições de 4,4’-de 2,2’-bipiridina no caso de 16c. Os grupos metilo adicionais também levaram a maior solubilidade em água e outros meios biológicos. A identidade do ligante auxiliar também pode ser usada para sintonizar a toxicidade total à luz de maneiras mais dramáticas, e esse efeito é mostrado para 14d onde a substituição dos grupos metilo em 14c por grupos t-butyl em 14d diminui significativamente a atividade fotodinâmica sob as condições empregadas (Tabela 15). Esses conceitos se estendem a complexos tris-heterolépticos do tipo [Ru(LL’)(LL’’)(LL’’’)]X2, complexos derivados de outros metais, e também a andaimes multimetálicos. Por exemplo, 14cj contem 14L como um ligante único e 4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina e 2,2’-bipirimidina como dois outros ligantes únicos. A combinação de 14L com esses dois ligantes auxiliaries leva a uma atividade fotodinâmica que é similar a 14a e 14c. Complexos dinucleares derivados de rutênio e de ósmio apresentam atividade fotdinâmica, e essa atividade é influenciada pela natureza dos ligantes auxiliares também (Tabela 15).
[00634] No geral, essa invenção demonstra que o número de tiofenos, a identidade dos ligantes auxiliares, o andaime empregado (mononuclear versus dinuclear), e a natureza do metal podem ser usados para ajustar as propriedades químicas, físicas e biológicas dos compostos para conseguir a atividade fotodinâmica.
[00635] Embora esta invenção tenha sido descrita em detalhes e com referência aos exemplos específicos da mesma, ficará claro para os especialistas no assunto que várias alterações e modificações podem ser feitas a ela sem se afastar do espírito e escopo da mesma.

Claims (13)

1. Composto caracterizado por ter a fórmula (I):
Figure img0288
incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e complexos dos mesmos, onde: M é selecionado do grupo consistindo de manganês, molibdênio, rênio, ferro, rutênio, ósmio, cobalto, ródio, irídio, níquel, platina e cobre; X é selecionado do grupo consistindo de Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, e SO4-2; n = 0, 1, 2, 3, 4, ou 5; y = 1, 2, ou 3; z = 0, 1, ou 2; Lig em cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de
Figure img0289
Figure img0290
R1 é selecionado do grupo consistindo de
Figure img0291
Figure img0292
u é um inteiro; R2a, R2b, R2c, R2d, R2e, e R2f a cada ocorrência são cada um independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C3-7 cicloalquil opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcóxi opcionalmente substituído, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, aril opcionalmente substituído, ariloxi opcionalmente substituído, heteroaril opcionalmente substituído, e heterociclo opcionalmente substituído; R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h R3i, R3j, R3k, R3l, e R3m a cada ocorrência são cada um independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcóxi opcionalmente substituído, e CO2R8; R4a, R4b, e R4c a cada ocorrência são cada um independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C1-6 cicloalquil opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcóxi opcionalmente substituído, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, aril opcionalmente substituído, ariloxi opcionalmente substituído, heteroaril opcionalmente substituído, e heterociclo opcionalmente substituído; R4a e R4b a cada ocorrência em um anel de tiofeno são tomados juntamente com o átomo ao qual estão ligados para formar um anel opcionalmente substituído tendo a partir de 6 átomos no anel contendo 2 átomos de oxigênio; R5 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; R6 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; R7 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; R8 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; onde compostos das seguintes estruturas são excluídos: onde o composto não é [2-2(2-tienil)-1H-imidazol[4,5-f][1,10]fenilantrolina-KN7, KN8]bis(1,10-fenantrolina-KN1,KN10-niquel(2+), e onde compostos das seguintes estruturas são excluídos:
Figure img0293
Figure img0294
bem como o composto C2 da seguinte fórmula
Figure img0295
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ter a fórmula (II):
Figure img0296
incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e complexos dos mesmos, onde: M é selecionado do grupo consistindo de manganês, molibdênio, rênio, ferro, rutênio, ósmio, cobalto, ródio, irídio, níquel, platina e cobre; X é selecionado do grupo consistindo de CI-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, e SO4-2; n= 0, 1, 2, ou 3; Lig a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de:
Figure img0297
Figure img0298
R1 é selecionado do grupo consistindo de
Figure img0299
U é um inteiro; R2a, R2b, R2c, R2d, R2e, e R2f a cada ocorrência são cada um independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C3-7 cicloalquil opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcóxi opcionalmente substituído, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, aril opcionalmente substituído, ariloxi opcionalmente substituído, heteroaril opcionalmente substituído, e heterociclo opcionalmente substituído; R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h R3i, R3j, R3k, R3l, e R3m a cada ocorrência são cada um independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C1-6 alquil ramificado opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcóxi opcionalmente substituído, e CO2R8; R4a, R4b, e R4c a cada ocorrência são cada um independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio, C1-6 alquil opcionalmente substituído, C16 alquil ramificado opcionalmente substituído, C1-6 cicloalquil opcionalmente substituído, C1-6 haloalquil opcionalmente substituído, C1-6 alcóxi opcionalmente substituído, C02R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, aril opcionalmente substituído, ariloxi opcionalmente substituído, heteroaril opcionalmente substituído, e heterociclo opcionalmente substituído; R4a e R4b a cada ocorrência em um anel de tiofeno são tomados juntamente com o átomo ao qual estão ligados para formar um anel opcionalmente substituído tendo a partir de 6 átomos no anel contendo 2 átomos de oxigênio; R5 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; R6 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; R7 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; R8 a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de hidrogênio e alquil opcionalmente substituído; onde compostos das seguintes estruturas são excluídos:
Figure img0300
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ter a fórmula (III):
Figure img0301
Incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e complexos dos mesmos, onde: g= 0, 1, 2, 3, 4, ou 5.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ter a fórmula (IV):
Figure img0302
incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e complexos dos mesmos, onde: h= 0, 1, 2, 3, 4, ou 5.
5. Composto de acordo com a fórmula 1 caracterizado por ser: Ru(2,2'-bipiridina)2(2-(2',2":5",2"'-tertiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina); Ru(2,2'-bipiridina)2(2-(2',2":5",2"';5"',2""-quatertiofeno)-imidazo[4,5- f][1,10] fenantrolina); Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina); Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2"-bitiofeno)-imidazo [4,5-f] [1,10] fenantrolina); Ru(4,4'-dimethyl-2,2'-bipyridine)2(2-(2',2'’:5’',2’’’-tertiofeno)-imidazo[4,5- f][l,10] fenantrolina); Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2'’:5’',2’’’;5’’’,2'’’’-quatertiofeno)- imidazo [4,5 -f] [1,10] fenantrolina); Ru(4,4'-di-t-butil-2,2'-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina); Ru(4,4'-di-t-butil-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2"-bitiofeno)-imidazo [4,5-f] [1,10] fenantrolina); Ru(4,4'-di-t-butil-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2'':5'',2’’'-tertiofeno)-imidazo[4,5- f][1,10] fenantrolina); Ru(4,4'-dimetoxi-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2'':5'',2'''-tertiofeno)-imidazo[4,5-f] [1,10] fenantrolina); Ru(5,5'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-tiofenimidazo [4,5-f] [1,10]fenantrolina); Ru(5,5'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-f] [1,10] fenantrolina); Ru(5,5'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2'':5'',2'''-tertiofeno)-imidazo[4,5-f] [1,10] fenantrolina); Ru(6,6'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina); Ru(6,6'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-f] [1,10] fenantrolina); Ru(6,6'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2":5",2"'-tertiofeno)-imidazo[4,5-f] [1,10] fenantrolina); Ru(4,4'-di(metilcarboxi)-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2'':5'',2'''-tertiofeno)- imidazo[4,5-f] [1,10] fenantrolina); Ru(2,2'-bipirimidina)2(2-(2',2":5",2"'-tertiofeno)-imidazo[4,5-f] [1,10] fenantrolina); Ru(2,2'-bipirimidina)(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)(2-(2',2":5",2"'-tertiofeno)- imidazo [4,5-f] [1,10]fenantrolina) Ru(1,10-fenanthroline)2(2-tiofenimidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina); Os (2,2'-bipiridina)2(2-tiofenimidazo [4,5-f][1,10]fenantrolina); Os(2,2'-bipiridina)2(2-(2',2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina); Os(2,2'-bipiridina)2(2-(2',2":5",2"'-tertiofeno)-imidazo[4,5- f][1,10]fenantrolina); Os(1,10-fenantrolina)2(2-tiofenimidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina); Os(1,10-fenantrolina)2(2-(2',2"-bitiofeno)-imidazo [4,5-f][1,10] fenantrolina): Os(1,10-fenantrolina)2(2-(2',2":5",2"'-tertiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina); Os(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5 -f][1,10]fenantrolina); Os(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10] fenantrolina); Os(4,4'-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2',2'':5’’,2’’’-tertiofeno)-imidazo[4,5- f][l,10] fenantrolina): ou uma forma farmaceuticamente aceitável do mesmo.
6. Composto de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por ter a fórmula (V):
Figure img0303
incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, prodrogas e complexos dos mesmos, onde: Lig a cada ocorrência é independentemente selecionado do grupo consistindo de:
Figure img0304
e t é um inteiro; q= 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; onde o seguinte composto é excluído:
Figure img0305
7. Composto de acordo com a reivindicação 6 caracterizado por ser: (2,2'-bipiridina)2Ru(2-tiofeno-bis[imidazo[4,5f-][1,10]fenantrolina)Ru(2,2'- bipiridina)2; (4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2Ru(2-tiofeno- bis[imidazo[4,5f][1,10]fenantrolina])Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2; (2,2'-bipiridina)2Ru(2-(2',2"-bitiofeno)-bis[imidazo[4,5f- ][1,10]fenantrolina])Ru(2,2'-bipiridina)2; (1,10-fenantrolina)2Ru(2-(2',2"-bitiofeno)-bis[imidazo[4,5- f][1,10]fenantrolina])Ru(1,10-fenantrolina)2; (2,2'-bipiridina)2Os(2-tiofeno-bis[imidazo[4,5f-][1,10]fenantrolina)Os(2,2'- bipiridina)2; (1,10-fenantrolina)2Os(2-tiofeno- bis[imidazo[4,5f][1,10]fenantrolina])Os(1,10-fenantrolina)2; 4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2Os(2-tiofeno- bis[imidazo[4,5f][1,10]fenantrolina])Os(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2; ou uma forma farmaceuticamente aceitável do mesmo.
8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 caracterizado por ser para tratar uma doença associada com células hiperproliferativas.
9. Composto caracterizado por ser para uso no tratamento de uma doença associada com células hiperproliferativas, dito composto possuindo uma estrutura selecionada de
Figure img0306
10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 caracterizado por ser para uso na destruição de patógenos ou esterilização quando administrado em um indivíduo.
11. Composto caracterizado por ser para uso na destruição de patógenos ou esterilização quando administrado em um indivíduo, dito composto possuindo a estrutura selecionada de:
Figure img0307
12. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7 caracterizado por ser para uso como um agente de diagnóstico.
13. Composto caracterizado por ser para uso como um reagente de diagnóstico, dito composto sendo selecionado dentre
Figure img0308
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Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105377862B (zh) 2013-03-15 2019-09-13 希瑞·安·麦克法兰 用作光动力化合物的金属基配合物及其用途
CN106687176B (zh) * 2014-04-29 2019-06-04 锡拉莱斯科技有限公司 多波长光动力疗法设备
US9969759B2 (en) 2014-05-22 2018-05-15 Northwestern University Duplex-selective organometallic DNA intercalators
EP3247397B1 (en) * 2015-01-19 2021-05-19 Theralase Technologies Inc. Metal-glycoprotein complexes and their use as chemotherapeutic compounds
US10111936B2 (en) 2015-01-19 2018-10-30 Theralase Technologies, Inc. Metal-glycoprotein complexes and photodynamic therapy of immune privileged sites with same
CA3000625C (en) 2015-10-01 2024-02-13 Richter Life Science Development Ab Detection of microbial peptides
US10335608B2 (en) 2016-04-20 2019-07-02 Theralase Technologies, Inc. Photodynamic compounds and methods for activating them using ionizing radiation and/or other electromagnetic radiation for therapy and/or diagnostics
EP3621629A4 (en) * 2017-05-11 2021-03-17 Theralase Biotech Inc. VACCINE CONTAINING CANCER CELLS INACTIVATED BY PHOTODYNAMIC TREATMENT WITH METAL-BASED COORDINATION COMPLEXES, AND IMMUNOTHERAPY METHOD USING THE LATTER
WO2019078871A1 (en) * 2017-10-19 2019-04-25 Texas State University PHOTOACTIVABLE PRODRANT AGAINST CANCER
US11793818B2 (en) 2018-03-26 2023-10-24 Theralase Technologies, Inc. Method for treating conditions associated with hyperproliferating cells comprising combined administration of a cannabinoid receptor agonist and radiation therapy
CN110396092B (zh) * 2019-07-09 2020-06-30 北京师范大学 含噻吩基钌配合物作为高效单线态氧产生光敏剂
CN110872330B (zh) * 2019-11-19 2021-09-21 华南理工大学 一种联吡啶钌邻菲罗啉苯并咪唑配合物及其制备方法和用途

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002098417A1 (en) * 2001-06-06 2002-12-12 Brookhaven Science Associates Novel metalloporphyrins and their uses as radiosensitizers for radiation therapy
PL197232B1 (pl) * 2004-06-03 2008-03-31 Univ Wroclawski Nowe kompleksy kationowe żelaza(II) i kobaltu(II) z 2,2'-bipirydyną, z 2,2'-bichinoliną i 1,10-fenantroliną oraz ich pochodnymi, sposób wytwarzania tych kompleksów i zastosowanie

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