ES2764421T3 - Compuestos fotodinámicos de tiofeno a base de metal y su uso - Google Patents

Compuestos fotodinámicos de tiofeno a base de metal y su uso Download PDF

Info

Publication number
ES2764421T3
ES2764421T3 ES13726902T ES13726902T ES2764421T3 ES 2764421 T3 ES2764421 T3 ES 2764421T3 ES 13726902 T ES13726902 T ES 13726902T ES 13726902 T ES13726902 T ES 13726902T ES 2764421 T3 ES2764421 T3 ES 2764421T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
optionally substituted
phenanthroline
group
certain embodiments
imidazo
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES13726902T
Other languages
English (en)
Inventor
Sherri Ann Mcfarland
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Application granted granted Critical
Publication of ES2764421T3 publication Critical patent/ES2764421T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/555—Heterocyclic compounds containing heavy metals, e.g. hemin, hematin, melarsoprol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F15/00—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic Table
    • C07F15/0006—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic Table compounds of the platinum group
    • C07F15/002—Osmium compounds
    • C07F15/0026—Osmium compounds without a metal-carbon linkage
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F15/00—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic Table
    • C07F15/0006—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic Table compounds of the platinum group
    • C07F15/0046—Ruthenium compounds
    • C07F15/0053—Ruthenium compounds without a metal-carbon linkage
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F15/00—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic Table
    • C07F15/02—Iron compounds
    • C07F15/025—Iron compounds without a metal-carbon linkage

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula (I): **(Ver fórmula)** incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: M es seleccionado entre el grupo que consiste en manganeso, molibdeno, renio, hierro, rutenio, osmio, cobalto, rodio, iridio, níquel, platino, y cobre; X es seleccionado entre el grupo que consiste en Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, y SO4-2; n = 0, 1, 2, 3, 4 ó 5; y= 1, 2 ó 3; z = 0, 1 ó 2; Lig en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en **(Ver fórmula)** y **(Ver fórmula)** R1 es seleccionado entre el grupo que consiste en **(Ver fórmula)** R2a, R2b, R2c, R2d, R2e, y R2f en cada aparición cada uno es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido; R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h R3i, R3j, R3k, R3l, y R3m en cada aparición cada uno es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, y CO2R8; R4a, R4b, y R4c en cada aparición cada uno es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR7 2, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido; R4a y R4b en cada aparición en un anillo de tiofeno se toman junto con el átomo al que están unidos para formar un anillo opcionalmente sustituido el cual tiene 6 átomos en el anillo que contienen 2 átomos de oxígeno; R5 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido; ...

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos fotodinámicos de tiofeno a base de metal y su uso
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
1. CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a compuestos fotodinámicos útiles como agentes terapéuticos y como agentes de diagnóstico in vivo. En particular, la invención proporciona compuestos fotodinámicos de tiofeno a base de metal modificables que se pueden activar para escindir el ADN después de irradiación con luz visible mediante un fotoproceso de Tipo 1 o Tipo 2.
2. DESCRIPCIÓN DE LA TÉCNICA RELACIONADA
La terapia fotodinámica (PDT) en la actualidad es un área activa de investigación para el tratamiento de enfermedades asociadas con células no deseadas y/o hiperproliferativas tal tales como cáncer y lesiones no malignas. La PDT también ha encontrado uso en otros contextos, que incluyen, pero no se limitan a, el tratamiento del acné, la psoriasis, las enfermedades afecciones no malignas proliferativas, las úlceras y las heridas. El desarrollo de nuevos compuestos fotodinámicos (PDC) (o fotosensibilizadores (PS)) para la terapia fotodinámica (PDT) se ha incrementado cada vez más en complejos metalosupramoleculares obtenidos a partir de metales tales como rutenio y rodio. La investigación en curso de nuevos PS para PDT surge a partir de las limitaciones asociadas con las porfirinas tradicionales de base orgánica tal como la FOTOFRINA, las cuales se deben activar con longitudes de onda de luz relativamente cortas y no funcionan en entornos hipóxicos. Se han realizado avances significativos para superar estas limitaciones con la introducción de complejos de metales mixtos que poseen estados excitados 3MMCT (transferencia de carga de metal a metal) de baja altitud. Hasta la fecha, sin embargo, ha habido informes limitados de compuestos fotodinámicos, particularmente aquellos con un diseño mononuclear o dinuclear, que son capaces de proporcionar terapia fotodinámica para el tratamiento de enfermedades asociadas con células no deseadas y/o hiperproliferativas tales como el cáncer y las lesiones no malignas, y/o capaces de tratar otras afecciones, que incluyen, pero no se limitan a, enfermedades infecciosas e infecciones por patógenos, así como esterilización.
Diversos complejos que contienen tiofeno se describen en Cai et al., J. Mol. Struct., 2011, 1006(1), 282-7, Pedras et al., Inorganica Chimica Acta, Vol. 381, 2012, 95-103, Srinivasan et al., Inorganica Chimica Acta, Vol. 366 (1), 2011, 116-121, y Li et al., Inorganica Chimica Acta, Vol. 370 (1), 2011, 132­ 140, pero los compuestos estructuralmente relacionados con los presentes compuestos fotodinámicos no se desvelan como agentes terapéuticos. La patente PL 197 232 B1 desvela el complejo [Co(bpy)2(phen)]Cl2 en el tratamiento del cáncer. La "Introduction to Medicinal Chemistry" de A. Gringauz (1997) analiza diversos enfoques para el tratamiento de enfermedades tales como el cáncer, incluyendo intercalado de ADN.
Desde hace mucho tiempo existe la necesidad de nuevos compuestos fotodinámicos (PDC) que sean útiles como fotosensibilizadores para PDT que sean tanto modificadores de la enfermedad como eficaces en el tratamiento de pacientes con enfermedades causadas por células no deseadas y/o hiperproliferativas, por ejemplo, el cáncer. También existe una necesidad desde hace tiempo de nuevos PDC que sean útiles como agentes de diagnóstico in vivo. Además, se desea proporcionar PDC novedosos que tengan: (1) aumento de la fotoestabilidad, (2) incremento de la absorción en la longitud de onda de activación, (3) luz roja, y preferiblemente NIR, absorción, (4) actividad máxima independientemente de los niveles de oxígeno (posiblemente utilizando un mecanismo para cambiar entre fotosensibilización de Tipo 1 y de Tipo 2), y (5) direccionamiento de ADN nuclear intracelular. La presente invención aborda la necesidad de desarrollar PDC novedosos que sean útiles como fotosensibilizadores para PDT que sean tanto modificadores de la enfermedad como eficaces para el tratamiento de una o más de las afecciones que se han discutido anteriormente, tal como tratamiento de pacientes con enfermedades causadas por células no deseadas y/o hiperproliferativas, por ejemplo, el cáncer. La presente invención también aborda la necesidad sentida durante mucho tiempo de nuevos PDC que sean útiles como agentes de diagnóstico in vivo.
Todas las referencias citadas en el presente documento se incorporan en el presente documento por referencia en su totalidad.
BREVE RESUMEN DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a nuevos compuestos de fórmula (I),
Figure imgf000003_0001
incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en los que:
M es seleccionado entre el grupo que consiste en manganeso, molibdeno, renio, hierro, rutenio, osmio, cobalto, rodio, iridio, níquel, platino, y cobre;
X es seleccionado entre el grupo que consiste en Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, y SO4-2;
n = 0, 1, 2, 3, 4 ó 5;
y = 1,2 ó 3;
z = 0, 1 ó 2;
Lig en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en
Figure imgf000003_0002
R1 es seleccionado entre el grupo que consiste en
Figure imgf000004_0001
u es un número entero;
R2a, R2b, R2c, R2d, R2e, y R2f en cada aparición son cada uno seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido;
R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h R3i, R3j, R3k, R31, y R3m en cada aparición son cada uno seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, y CO2R8;
R4a, R4b, y R4c en cada aparición cada uno es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido;
R4a y R4b en cada aparición en un anillo de tiofeno son tomados junto con el átomo al cual están unidos para formar un anillo opcionalmente sustituido que tiene 6 átomos en el anillo que contienen 2 átomos de oxígeno;
R5 en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
R6 en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
R7 en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
R8 en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
en el que el compuesto no es [2-(2-Tienil)-1H-imidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina-KN7, k N8] bis(1,10-fenantrolina-KN1,KN10)-níquel(2+), ylos compuestos que tienen las siguientes estructuras son excluidos de ciertas realizaciones de los compuestos de fórmula (I):
Figure imgf000005_0001
Los compuestos de la presente invención incluyen compuestos que tienen la fórmula (II),
Figure imgf000005_0002
incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en los que: M es seleccionado entre el grupo que consiste en manganeso, molibdeno, renio, hierro, rutenio, osmio, cobalto, rodio, iridio, níquel, platino, y cobre;
X es seleccionado entre el grupo que consiste en Cl-, PFa", Br, BF4", ClÜ4', CF3SÜ3", y SÜ4'2; n = 0, 1, 2 ó 3;
Lig en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en
Figure imgf000006_0001
R1 se seleccionado entre el grupo que consiste en
Figure imgf000006_0002
a
y
Figure imgf000007_0001
u es un número entero;
R2a, R2b, R2c, R2d, R2e, y R2f en cada aparición cada uno es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido;
R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h R3i, R3j, R3k, R31, y R3m en cada aparición cada uno es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, y CO2R8;
R4a, R4b, y R4c en cada aparición cada uno son seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido;
R4a y R4b en cada aparición en un anillo de tiofeno son tomados junto con el átomo al cual están unidos para formar un anillo opcionalmente sustituido que tiene 6 átomos en el anillo que contienen 2 átomos de oxígeno;
R5 en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
R6 en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
R7 en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
R8 en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
Los compuestos que tienen las siguientes estructuras son exluídos de ciertas realizaciones de los compuestos de fórmula (II):
Figure imgf000007_0002
Los compuestos de la presente invención incluyen compuestos que tienen la fórmula (III):
Figure imgf000008_0001
incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en la que M, Lig, X y los grupos R son como se ha definido anteriormente, y g es 0, 1, 2, 3, 4 ó 5.
Los compuestos de la presente invención incluyen compuestos que tienen la fórmula (IV):
Figure imgf000008_0002
incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en la que M, X y los grupos R son como se ha definido anteriormente, y h es 0, 1, 2, 3, 4 ó 5.
La presente invención también es dirigida a nuevos compuestos de fórmula (V):
Figure imgf000008_0003
incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en los que:
Lig en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en
Figure imgf000009_0001
molibdeno, renio, hierro, rutenio, osmio, cobalto, rodio, iridio, níquel, platino, y cobre;
X y los grupos R son como se han definido anteriormente;
t es un número entero, y es preferiblemente 1,2, 3, 4, 5 ó 6;
q = 0, 1, 2, 3, 4 ó 5;
El compuesto que tiene la siguiente estructura es excluído de ciertas realizaciones de los compuestos de fórmula (V):
Figure imgf000009_0002
La presente invención también se dirige a nuevos usos de los compuestos de las estructuras y
Figure imgf000010_0001
La presente solicitud además desvela composiciones que comprenden una cantidad eficaz de uno o más compuestos de acuerdo con la presente invención y un excipiente.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de la invención como un agente de unión a ADN.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención y un excipiente como un agente de unión a ADN.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de la invención como un agente de fotoescisión de ADN.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención y un excipiente como un agente de fotoescisión de ADN.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de la invención como un agente de condensación de ADN.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención y un excipiente como agente de condensación de ADN.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de la invención como un agente que produce el efecto de cambio de luz en el ADN.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención y un excipiente como un agente que produce el efecto de cambio de luz en el ADN.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de la invención como un fotosensibilizador con una eficacia de un 100 % para la producción de oxígeno singlete.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención y un excipiente como un fotosensibilizador con una eficacia de un 100 % para la producción de oxígeno singlete.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de la invención como un fotosensibilizador que puede funcionar en fotoprocesos tanto de Tipo I como de Tipo II.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención y un excipiente como un fotosensibilizador que puede funcionar en fotoprocesos tanto de Tipo I como de Tipo II.
La presente invención también se refiere a los compuestos fotodinámicos de la invención para su uso para destruir células, incluyendo células hiperproliferativas.
La presente invención también se refiere a los compuestos fotodinámicos de la invención para su uso para destruir células, incluyendo células hiperproliferativas, usando luz como un activador.
La presente invención también se refiere a los compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención y un excipiente para su uso para destruir células, incluyendo células hiperproliferativas. La presente invención también se refiere a los compuestos fotodinámicos de la invención para su uso para inducir la apoptosis en células, incluyendo células hiperproliferativas.
La presente invención también se refiere a los compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención y un excipiente para su uso para inducir la apoptosis en células, incluyendo células hiperproliferativas.
La presente invención también se refiere a los compuestos fotodinámicos de la invención para su uso para inducir necrosis en células, incluyendo células hiperproliferativas.
La presente invención también se refiere a los compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención y un excipiente para su uso para inducir necrosis en células, células hiperproliferativas. La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de la invención para producir reticulación cruzada de ADN en células, incluyendo células hiperproliferativas. La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención y un excipiente para producir reticulación cruzada de ADN en células, incluyendo células no deseadas y/o hiperproliferativas.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedades que implican etiología de células hiperproliferativas, incluyendo, por ejemplo, el cáncer, comprendiendo dicho uso administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención.
La presente invención se refiere también a los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedades que implican etiología de células hiperproliferativas, incluyendo, por ejemplo, el cáncer, en la que dicho uso comprende administrar a un sujeto una composición que comprende una cantidad eficaz de uno o más compuestos de acuerdo con la presente invención y un excipiente.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedades que implican células hiperproliferativas en su etiología, incluyendo, por ejemplo, el cáncer, comprendiendo dicho uso administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención y un agente de reducción intracelular tal como glutatión.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedades que implican células hiperproliferativas en su etiología, incluyendo, por ejemplo, el cáncer, comprendiendo dicho uso administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención y un excipiente y un agente de reducción intracelular tal como glutatión.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedades que implican células hiperproliferativas en su etiología, incluyendo, por ejemplo, el cáncer, comprendiendo dicho uso administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención y un agente de oxidación intracelular tal como oxígeno.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedades que implican células hiperproliferativas en su etiología, incluyendo, por ejemplo, el cáncer, comprendiendo dicho uso administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención y un excipiente y un agente de oxidación intracelular tal como oxígeno.
La presente invención también se refiere a los compuestos fotodinámicos de la invención para su uso como un agente medicinal antipatógeno y desinfectante, por ejemplo, para eliminar microbios en entornos normóxicos e hipóxicos.
La presente invención también se refiere a los compuestos fotodinámicos de la invención para su uso como un agente de diagnóstico in vivo a través de luminiscencia intracelular.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso para destruir patógenos.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención y un excipiente para su uso para destruir patógenos.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso para destruir patógenos usando luz como un activador.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso para destruir células no deseadas, incluyendo células hiperproliferativas y células microbianas.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso para destruir virus.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso para destruir células no deseadas, incluyendo células hiperproliferativas y células microbianas, usando luz como un activador.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso para destruir virus usando luz como un activador.
La presente invención también se refiere a los compuestos de acuerdo con la presente invención y un excipiente para su uso para destruir células no deseadas, incluyendo células hiperproliferativas y células microbianas.
La presente invención también se refiere a los compuestos de acuerdo con la presente invención y un excipiente para su uso para destruir virus.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso para destruir células, incluyendo bacterias, hongos y protozoos.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso para destruir células, incluyendo bacterias, hongos y protozoos, usando luz como un activador.
La presente invención también se refiere a los compuestos de acuerdo con la presente invención y un excipiente para su uso para destruir células, incluyendo bacterias, hongos y protozoos.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso para inducir apoptosis en células, incluyendo células hiperproliferativas.
La presente invención también se refiere a los compuestos de acuerdo con la presente invención y un excipiente para su uso para inducir apoptosis en células, incluyendo células hiperproliferativas.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos de la invención para inducir senesencia en células, incluyendo células no deseadas o hiperproliferativas.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos de acuerdo con la presente invención y un excipiente para inducir senesencia en células, incluyendo células no deseadas o hiperproliferativas.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos de la invención para impartir reticulación de ADN en células, incluyendo células no deseadas y/o hiperproliferativas.
La presente solicitud también desvela un método para usar los compuestos de acuerdo con la presente invención y un excipiente para producir reticulación cruzada de ADN en células, incluyendo células no deseadas y/o hiperproliferativas.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento do prevención de enfermedades que implican etiología de células hiperproliferativas, incluyendo, por ejemplo, cáncer, comprendiendo dicho uso administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención.
La presente invención se refiere también a los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedades que tienen células hiperproliferativas en su etiología, incluyendo, por ejemplo, el cáncer, en la que dicho uso comprende administrar a un sujeto una composición que comprende una cantidad eficaz de uno o más compuestos de acuerdo con la presente invención y un excipiente.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedades que implican células hiperproliferativas en su etiología, incluyendo, por ejemplo, el cáncer, comprendiendo dicho uso administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención y un agente de reducción intracelular tal como glutatión.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedades que implican células hiperproliferativas en su etiología, incluyendo, por ejemplo, el cáncer, comprendiendo dicho uso administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención y un excipiente and un agente de reducción intracelular tal como glutatión.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedades que implican células hiperproliferativas en su etiología, incluyendo, por ejemplo, el cáncer, comprendiendo dicho uso administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención y un agente de oxidación intracelular tal como oxígeno.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso en el tratamiento o prevención de enfermedades que implican células hiperproliferativas en su etiología, incluyendo, por ejemplo, el cáncer, comprendiendo dicho uso administrar a un sujeto una cantidad eficaz de un compuesto o composición de acuerdo con la presente invención y un excipiente and un agente de oxidación intracelular tal como oxígeno.
La presente invención también se refiere a los compuestos de la invención para su uso como un agente de diagnóstico in vivo a través de luminiscencia via intracelular o métodos colorimétricos. La presente invención también se refiere a un método para preparar los compuestos fotodinámicos de la presente invención.
Estos y otros objetos, características, y ventajas llegarán a ser evidentes para las personas con una experiencia habitual en la materia partir de la lectura de la siguiente descripción detallada y las reivindicaciones adjuntas. Todos los porcentajes, relaciones y proporciones en el presente documento son en peso, a menos que se indique de otro modo. Todas las temperaturas están en grados Celsius (°C) a menos que se indique de otro modo. Todos los documentos citados son incorporados, de forma relevante, en el presente documento como referencia; la mención de cualquier documento no se debe interpretar como una admisión de que es técnica anterior con respecto a la presente invención.
BREVE DESCRIPCIÓN DE VARIAS VISTAS DE LOS DIBUJOS
La invención se describirá en conjunto con los siguientes dibujos en los cuales los números de referencia designan elementos similares y en los que:
La Figura 1 muestra un conjunto de compuestos representativos de la divulgación (compuestos 1a, 2a, 10a, 10b, 3a, 3b, 14a y 14b).
La Figura 2 es un gráfico de los espectros de absorción UV-Vis de 1a, 10a, and 14a en MeCN. Los perfiles de absorción integrada para 1a, 10a, y 14a en el espectro visible (25.000­ 15.000 cm-1) son 5841, 8190 y 14.100, respectivamente.
Figura 3: Absorción de luz por los PDC 1a, 10a, 14a, y 16a disueltos a 20 pM en agua.
Figura 4: es un gráfico de la emisión de 1Ü2 sensibilizado por los PDC 1a, 10a, y 14a en MeCN. Los rendimientos cuánticos de 1Ü2 para 1a, 10a, y 14a son 0,47, 0,74, y 1,0, respectivamente.
Figura 5: (a) Valoración de 10a (20 pM) con ADN de CT (Tris 10 mMNaCl 100 mM, pH 7,5). Inserción: isoterma de unión a 372 nm. (b) Valoración de 10b (50 pM) con ADN de CT (Tris 10 mMNaCl 100 mM, pH 7,5). Inserción: isoterma de unión a 380 nm.
Figura 6: células HL60 cargadas con 14a visualizadas con un microscopio confocal de barrido láser. La excitación del PDC a 458/488 nm produjo una emisión en el espectro rojo que fue recogida a través de un filtro LP510. Las imágenes fueron recogidas con un microscopio confocal de barrido láser (Zeiss LSM510 con el sistema operativo ZEN) usando 40x/NA1.3, aceite o 63x/NA1.4, objetivos de inmersión en aceite. La excitación fue 458/488 nm de argón/kriptón y las señales fueron recogidas a través de un filtro LP510. (a) Emisión desde el 14a, (b) Contraste de interferencia diferencial (DIC), y (c) recubrimiento de emisión/DIC. Figura 7: Desnaturalización térmica de ADN de timo de bovino (50 pM, NP) en Tris 5 mM con NaCl 50 mM, pH 7,4) solo y en presencia de 1a, 1b, 10a, y 10b (5 p, [PDC]/[NP] = 0,1). Figura 8: Efecto de desplazamiento de luz del ADN producido por los PDC: (a) 1a, (b) 10a, y 14a.
Figura 9: Imágenes de epi-luminiscencia (EL) y campo brillante (BF) de células HL-60 tratadas con PDC: a) control sin tratar, (b) 1a (100 pM), 5 min. oscuridad (c) 1a (100 pM), 40 h. oscuridad, y (d) 1a (100 pM), 40 h después de irradiación. Las imágenes de EL se recogieron usando un cubo de filtro TRITC (Aex = 540 nm, Aem = 605 nm) sin tinción. La luminiscencia observada es de 1 a.
Figura 10: Imágenes de epi-luminiscencia (EL) y campo brillante (BF) de células HL-60 tratadas con PDC: (a) control sin tratar, (b) 10a (100 pM), 5 min. oscuridad (c) 10a (100 pM), 40 h. oscuridad, y (d) 10a (100 pM), 40 h después de irradiación. Las imágenes de EL fueron recogidas usando un cubo de filtro TRITC (Aex = 540 nm, Aem = 605 nm) sin tinción. La luminiscencia observada es de 10a.
Figura 11: Imágenes de epi-luminiscencia (EL) y campo brillante (BF) de células HL-60 tratadas con PDC: (a) control sin tratar, (b) 10b (100 pM), 5 min. oscuridad (c) 10b (100 pM), 40 h. oscuridad, y (d) 10b (100 pM), 40 h después de irradiación. Las imágenes de EL fueron recogidas usando un cubo de filtro TRITC (Aex = 540 nm, Aem = 605 nm) sin tinción. La luminiscencia observada es de 10 b.
Figura 12: Imágenes de epi-luminiscencia (EL) y campo brillante (BF) de células HL-60 tratadas con PDC: (a) control sin tratar, (b) 14a (100 pM), 5 min. oscuridad (c) 14a (100 pM), 40 h. oscuridad, y (d) 14a (100 pM), 40 h después de irradiación. Las imágenes de EL fueron recogidas usando un cubo de filtro TRITC (Aex = 540 nm, Aem = 605 nm) sin tinción. La luminiscencia observada es de 14a.
Figura 13: Análisis electroforético en gel (gel de agarosa al 1 % conteniendo 0,75 pg mL'1 de bromuro de etidio, 1X TAE, 8 V cm-1, 30 min.) de fotoescisión de ADN con los PDC de la divulgación en solución saturada con aire con irradiación a 420 nm: (a) 1a, (b) 10a, (b) 10b, y (d) 14a. Las calles 1, 2 y 10 son calles de control, y las calles 3-9 son calles de reacción: calle 1, 0 pM (-hv); calle 2, 0 pM ; calle 3, 0,5 pM ; calle 4, 0,75 pM; calle 5, 1,0 pM; calle 6, 2,5 pM; calle 7, 5,0 pM; calle 8, 7,5 pM; calle 9, 10 pM; calle 10, 10 pM (-hv).
Figura 14: Análisis electroforético en gel (gel de agarosa al 1 % que contiene 0,75 pg mL-1 de bromuro de etidio, 1X TAE, 8 V cm-1, 30 min.) de fotoescisión de ADN con los PDC en solución saturada con aire con irradiación visible: (a) 1a, (b) 10a, (b) 10b, y (d) 14a. Las calles 1, 2, 14 y 15 son calles de control, y las calles 2-13 son calles de reacción: calle 1, 0 pM (-hv); calle 2, 0 pM ; calle 3, 0,75 pM; calle 4, 1,5 pM; calle 5, 3 pM; calle 6, 5 pM; calle 7, 8 pM; calle 8, 10 pM; calle 9, 12 pM; calle 10, 16 pM; calle 11, 18 pM; calle 12, 20 pM; calle 13, 25 pM; calle 14, 25 pM (-hv); calle 15, 25 pM (-pUC19).
Figura 15: Análisis electroforético en gel (gel de agarosa al 1 % fundido previamente con 0,75 pg ml-1 de bromuro de etidio, 1X TAE, 8 V cm_1, 30 min.) de fotoescisión de pUC19 mediada por PDC en solución saturada con aire y desoxigenada : irradiación a 420 nm de pUC19 (NP 20 pM en Tris 10 mMNaCl 100 mM, pH 7,4) durante 1 h. Las calles 1 (-PDC, -hv), 2 (300 pM [Ru(bpy)3]2+, -hv), 5 (2 pM 10a, -hv), 8 (4 pM 10b, -hv), y 11 (8 pM 14a, -hv) son controles de oscuridad. Las calles 3 (300 pM [Ru(bpy)3]2+, hv), 6 (2 pM 10a, hv), 9 (4 pM 10b, hv), y 12 (8 pM 14a, hv) son muestras que se irradiaron en aire; las calles 4, 7, 10, y 13 son las muestras correspondientes irradiadas en argón.
Figura 16: Análisis electroforético en gel (gel de agarosa al 1 % fundido previamente con 0,75 pg ml-1 de bromuro de etidio, 1X TAE, 8 V cm_1, 30 min.) de fotoescisión de pUC19 mediada por PDC en solución saturada con aire y desoxigenada : irradiación visible de pUC19 (NP 20 |jM en Tris 10 mMNaCI 100 mM, pH 7,4) durante 1 h. con tubos fluorescentes de color blanco frío, 21 W/m2. Las calles 1 (-PDC, -hv), 2 (500 jM [Ru(bpy)3]2+, -hv), y 5 (2 jM 10a, -hv) son controles. Las calles 3 (500 jM [Ru(bpy)3]2+, hv) y 6 (2 jM 10a, hv) contienen muestras que fueron irradiadas en aire; las calles 4 y 7 son las muestras correspondientes irradiadas en argón.
Figura 17: Citotoxicidad (■) y fotocitotoxidad (□) de células HL-60 (4 h de incubación previa, 15 min de irradiación en el espectro vis, 4 J/cm2) con concentraciones crecientes de 10a y 10b observadas mediante tinción de viabilidad con Azul de Tripano. (a) 18 h. y (b) 40 h. A 100 jM [PDC], la acción fotodinámica para 10a es de un 47 % a las 18 h y de un 72 % a las 40 h mientras que para 10 b es de un 11 % a las 18 h y de un 0 % (realmente un aumento de la viabilidad de un 5 %) a las 40 h (referenciado con respecto a pocillo de oscuridad 100 jM). Figura 18: Citotoxicidad (■) y fotocitotoxicidad (□) de células HL-60 (4 h de incubación previa, 15 min de irradiación en el espectro vis 4 J/cm2) con concentraciones crecientes de (a) 1a, (b) 10a, y (c) 14a observadas mediante tinción de viabilidad con Azul de Tripano.
Figura 19: La citotoxicidad y la fotocitotoxicidad de las células HL-60 con concentraciones variables de 14a observadas mediante tinción de morfología nuclear con AO-EB. (a) 1 jM 14a, -hv; (b) 14a 5 jM , -hv; (c) 10 jM 14a, -hv; (d) 1 jM 14a, hv; (e) 14a 5 jM , hv; (f) 10 jM 14a, hv. AO (fluorescencia de color verde) tiñe las células viables; EB (fluorescencia de color rojo) tiñe las células no viables.
Figura 20: Citotoxicidad (■) y fotocitotoxicidad (□) de células HL-60 (4 h de incubación previa, 15 min. irradiación visible, 4 J/cm2) con concentraciones crecientes de (a) 1a, (b) 10a, y (c) 14a observadas mediante tinción de viabilidad con Azul de Tripano.
Figura 21: Citotoxicidad (■) y fotocitotoxicidad (□) de células HL-60 tratadas con PDC (4 h de incubación previa, 15 min de irradiación en el espectro vis, 4 J/cm2) con concentraciones crecientes de (a) 1a, (b) 10a, y (c) 14a observadas mediante tinción de viabilidad a las 18 h. después de irradiación con Azul de Tripano.
Figura 22: Citotoxicidad (■) y fotocitotoxicidad (□) de células HL-60 tratadas con PDC (4 h de incubación previa, 15 min de irradiación en el espectro vis, 4 J/cm2) con concentraciones crecientes de (a) 1a, (b) 10a, y (c) 14a observadas mediante tinción de viabilidad a las 40 h después de irradiación con Azul de Tripano.
Figura 23: Citotoxicidad (■) y fotocitotoxicidad (□) de células HL-60 tratadas con PDC (4 h de incubación previa, 15 min. irradiación visible, 4 J/cm2) con concentraciones crecientes de (a) 1a, (b) 10a, y (c) 14a observadas mediante tinción de viabilidad a las 18 h. después de irradiación con Azul de Tripano. Los PDC se preparan mediante síntesis en microondas. Figura 24: Citotoxicidad (■) y fotocitotoxicidad (□) de células HL-60 tratadas con PDC (4 h de incubación previa, 15 min. irradiación visible, 4 J/cm2) con concentraciones crecientes de (a) 1a, (b) 10a, y (c) 14a observadas mediante tinción de viabilidad a las 40 h después de irradiación con Azul de Tripano. Los PDC son preparados mediante síntesis en microondas. Figura 25: Citotoxicidad (■) y fotocitotoxicidad (□) de células HL-60 tratadas con PDC (4 h de incubación previa, 15 min. irradiación visible, 4 J/cm2) con concentración creciente de 14a a las (a) 18 h. y (b) 40 h después de irradiación observadas mediante tinción de viabilidad con Azul de Tripano.
Figura 26: Formación de cuerpos apoptóticos en células HL-60 con 10a 100 jM [parte inferior, célula en la parte izquierda en (a)-(c)] observada mediante tinción de morfología nuclear con AO-EB. (a) Exposición durante 130 ms en campo brillante, 10a 100 jM , hv, 1000X; (b) exposición durante 40 ms a epi-fluorescencia (FITC), 10a 100 jM , hv, 1000X; (c) exposición durante 40 ms a epi-fluorescencia (TRITC), 10a 100 jM , hv, 1000X.
Figura 27: Imágenes apoptóticas de epi-luminiscencia (EL) y campo brillante (BF) de células HL-60 tratadas con PDC a las 18 h después de irradiación: (a) control de oscuridad, 14a (5 jM ) (b) 14a (5 jM), y (c) 14a (5 jM). Las imágenes de EL se recogieron usando un cubo de filtro TRITC (Aex = 540 nm, Aem = 605 nm) con tinción con EB.
Figura 28: Imágenes de campo brillante (BF) y epi-luminiscencia (EL) de células HL-60 tratadas con PDC en la oscuridad [(a)-(b)] y con irradiación visible [(c)-(f)] observadas mediante tinción de morfología nuclear con AO-EB a las 40 h después de irradiación. (a) 14a 5 jM , -hv, BF 1000X; (b) 14a 5 jM , -hv, EL 1000X; (c) 14a 5 jM , hv, BF 1000X; (d) 14a 5 jM , hv, EL 1000X; (e) 14a 5 jM , hv, EL 100X; (f) 14a 5 jM , hv, EL 100X (con zoom). AO (fluorescencia de color verde) tiñe las células viables; EB (fluorescencia de color rojo) tiñe las células no viables. Los cuerpos apoptóticos son evidentes en (d) y (f).
Figura 29: Distribución por tamaño de células HL-60 tratadas con PDC a las 40 h después de irradiación para control, 10a, y 10 b.
Figura 30: Distribución por tamaño de células HL-60 tratadas con PDC a las 40 horas después de irradiación.
Figura 31: Voltamograma cíclico de 14a.
Figura 32: Absorción y emisión de 14a a 77 K.
Figura 33: Fotoescisión de ADN por aumento de la concentración de 14a: (a) sin GSH, y (b) GSH 4 mM. Las calles 1-10 contienen ADN de plásmido pBR322 (NP 20 pM) expuesto a 14a (0,5-5 pM) e irradiado a 420 nm durante 30 min en Tris 5 mM, NaCl 50 mM, pH 7,5.
Figura 34: El efecto de GSH en el fotodaño del ADN aumenta al aumentar n: (a) 1a, n = 1, (b) 10a, n = 2, y (c) 14a, n = 3. Las calles 1-6 y 17-18 son calles de control. Las calles 7-16 contienen a Dn de plásmido pBR322 (NP 20 pM) expuesto a PDC (2 pM) y concentración creciente de GSH e irradiadas a 420 nm durante 30 min en Tris 5 mM, NaCl 5 mM, pH 7,5. Figura 35: El efecto de AA en el fotodaño del ADN con 14a. Las calles 1-6 y 14-15 son calles de control. Las calles 7-13 contienen ADN de plásmido pBR322 (NP 20 pM) expuesto a PDC (2 pM) y concentración creciente de AA e irradiadas a 420 nm durante 30 min en Tris 5 mM, NaCl 5 mM, pH 7,5.
Figura 36: Fórmula para determinar la constante de unión al ADN para compuestos de la divulgación.
Figura 37: Citotoxicidad (•) y fotocitotoxicidad (▲ ) de células HL-60 (4 h de incubación previa, 15 min de irradiación en el espectro vis, 4 J/cm2) con concentraciones crecientes de 16a. Figura 38: Citotoxicidad (•) y fotocitotoxicidad (▲) de células HL-60 (4 h de incubación previa, 15 min de irradiación en el espectro vis, 4 J/cm2) con concentraciones crecientes de 16c. Figura 39: La eficacia de los PDC 10A, 14A y 16A en la muerte celular en células CT26.WT (parte superior), U87 (parte media), y F98 (parte inferior) expresada como el número de células muertas como un porcentaje de control (sin PDC, sin luz). Se muestran los efectos de los PDC sin luz (toxicidad en oscuridad, paneles en la parte izquierda) y con luz (PDT, paneles en la parte derecha). Los datos se muestran como barras de media / error estándar. Figura 40: Una comparación de las dosis eficaces para los PDC 14A, 14C, FOTOFRINA, y Ácido Aminolevulínico (ALA) usadas en estudios de PDT para destrucción tumoral en modelos de ratón.
Figura 41: Eficacia de la muerte celular de PDC 14A con respecto a ALA en células CT26.WT (parte superior), U87 (parte media), y F98 (parte inferior) expresada como el número de células muertas como un porcentaje de control (sin PDC, sin luz). Se muestran los efectos de los PDC sin luz (toxicidad en oscuridad, paneles en la parte izquierda) y con luz (PDT, paneles en la parte derecha.
Figura 42: Los espectros de absorción de los fotosensibilizadores 14C (línea continua) y PPIX (línea discontinua). La longitud de onda usada para los experimentos de PDT se muestra mediante una línea discontinua vertical.
Figura 43: Los espectros de absorbancia para PDC 14C (cuadrado) en comparación con PPIX (diamante) después de 60 minutos de irradiación (525 nm, 78 mW/cm2). Las DO se registraron a la absorbancia máxima en la región visible para cada PDC, 423 nm para 14C, 411 nm para PPIX.
Figura 44: Los compuestos de la presente invención, ilustrados con TLD1411 (14a) y TLD1433 (14c), pueden ser usados para destruir tumores in vivo. Las curvas de Kaplein-Meier describen porcentajes de supervivencia animal para ratones portadores de tumores como una función de los días después de PDT para ratones tratados con luz solo (onda continua (cw) o pulsada), fotosensibilizador solo (dosis elevadas o bajas), o luz (cw o pulsada) en combinación con foto sensibilizador (dosis alta o baja).
Figura 45: Media de reducciones log10 en la carga microbiana (CFU ml-1) generadas por el fotosensibilizador 14a en la oscuridad y activación con luz. La activación con luz fue consiguida mediante iluminación con un LED a 530 nm (98 mW cm'2) durante 10 minutos para proporcionar una dosis de luz total de 58,8 J cm’2. PDI se informa como la diferencia de las reducciones log10 medias de la carga microbiana entre condiciones de luz y oscuridad. Figura 46: Media de reducciones log10 en la carga microbiana (CFU ml-1) generadas por el fotosensibilizador 14c en la oscuridad y activación con luz. La activación con luz se consiguió mediante iluminación con un LED a 530 nm (98 mW cm_2) durante 10 minutos para proporcionar una dosis de luz total de 58,8 J cm-2. PDI se informa como la diferencia de las reducciones log10 medias de la carga microbiana entre condiciones de luz y oscuridad.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE REALIZACIONES PREFERIDAS DE LA INVENCIÓN
A lo largo de la descripción, cuando se describe que las composiciones tienen, incluyen, o comprenden componentes específicos, o cuando se describe que los procesos tienen, incluyen, o comprenden etapas del proceso específicas, se contempla que las composiciones de las presentes enseñanzas también consisten esencialmente en, o consisten en, los componentes mencionados, y que los procesos de las presentes enseñanzas también consisten esencialmente en, o consisten en, las etapas de procesamiento mencionadas.
En la solicitud, cuando se dice que un elemento o componentes se incluye y/o se selecciona entre un listado de elementos componentes mencionados, se debería entender que el elemento componente puede ser uno cualquiera de los elementos componentes mencionados y se pueden seleccionar entre el grupo que consiste en uno o más de los elementos o componentes mencionados.
En el presente documento del uso del singular incluye el plural (y viceversa) a menos que se indique específicamente de otro modo. Además, cuando el uso del término "aproximadamente" se realiza antes de un valor cuantitativo, las presentes enseñanzas también incluyen el propio valor cuantitativo específico, a menos que se indique de forma específica de otro modo.
Se debería entender que el orden de las etapas u orden de realización de ciertas acciones es inmaterial siempre y cuando las presentes enseñanzas sigan siendo operativas. Además, dos o más etapas o acciones se pueden llevar a cabo de forma simultánea. Como se usa en el presente documento, el término "halógeno" hará referencia a cloro, bromo, flúor y yodo.
Como se usa en el presente documento, a menos que se indique de otro modo, "alquilo" y "alifático" si se usarán solos o como parte de un grupo sustituyentes se refiere a cadenas de carbono lineales y ramificadas que tienen de 1 a 20 átomos de carbono o cualquier número dentro de este intervalo, por ejemplo, de 1 a 6 átomos de carbono o de 1 a 4 átomos de carbono. Los números de átomos de carbono designados (por ejemplo, C1-6) harán referencia independientemente al número de átomos de carbono en un resto de alquilo o a la parte de alquilo de un sustituyente que contiene un alquilo superior. Los ejemplos no limitantes de grupos alquilo incluyen metilo, etilo, n-propilo, /so-propilo, nbutilo, sec-butilo, /so-butilo, terc-butilo, y similares. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos. Los ejemplos no limitativos de grupos alquilo sustituido incluyen hidroximetilo, clorometilo, trifluorometilo, aminometilo, 1 -cloroetilo, 2-hidroxietilo, 1,2-difluoroetilo, 3-carboxipropilo, y similares. En los grupos sustituyentes con múltiples grupos alquilo tal como (alquil C1-6)2amino, los grupos alquilo pueden ser iguales o diferentes.
Como es usado en el presente documento, los términos grupos "alquenilo" y "alquinilo", si son usados solos o como parte de un grupo sustituyente, se refieren a cadenas de carbono lineales y ramificadas que tienen 2 o más átomos de carbono, preferiblemente de 2 a 20, en los que una cadena de alquenilo tiene al menos un doble enlace en la cadena una cadena de alquinilo tiene al menos un triple enlace en la cadena. Los grupos alquenilo y alquinilo pueden ser opcionalmente sustituidos. Los ejemplos no limitantes de grupos alquenilo incluyen etenilo, 3-propenilo, 1 -propenil (tamb/én 2-metiletenilo), isopropenilo (tamb/én 2-metileten-2-ilo), buten-4-ilo, y similares. Los ejemplos no limitantes de grupos alquenilo sustituidos incluyen 2-cloroetenilo (tamb/én 2-clorovinilo), 4-hidroxibuten-1-ilo, 7-hidroxi-7-metiloct-4-en-2-ilo, 7-hidroxi-7-metiloct-3,5-dien-2-ilo, y similares. Los ejemplos no limitantes de grupos alquinilo incluyen etinilo, prop-2-inilo (tamb/én propargilo), propin-1-ilo, y 2-metil-hex-4-in-1-ilo. Los ejemplos no limitantes de grupos alquinilo substituídos incluyen, 5-hidroxi-5-metilhex-3-inilo, 6-hidroxi-6-metilhept-3-in-2-ilo, 5-hidroxi-5-etilhept-3-inilo, y similares.
Como se usa en el presente documento, "cicloalquilo," si se usa solo o como parte de otro grupo, se refiere a un anillo que no contiene carbono aromático incluyendo alquilo ciclizado, alquenilo, y grupos alquinilo, por ejemplo, que tienen de 3 a 14 átomos de carbono en el anillo, preferiblemente de 3 a 7 o de 3 a 6 átomos de carbono en el anillo, o incluso de 3 a 4 átomos de carbono en el anillo, y que contienen opcionalmente uno o más (por ejemplo, 1, 2 ó 3) dobles o triples enlaces. Los grupos cicloalquilo pueden ser monocíclicos (por ejemplo, ciclohexilo) o policíclicos (por ejemplo, que contienen sistemas de anillos fusionados, unidos por puente, y/o espiral), en los que los átomos de carbono están situados dentro o fuera de los sistemas de anillos. Cualquier posición adecuada en el anillo del grupo cicloalquilo se puede unir mediante enlace covalente a la estructura química definida. Los anillos de cicloalquilo pueden ser opcionalmente sustituidos. Los ejemplos no limitantes de los grupos cicloalquilo incluyen: ciclopropilo, 2-metil-ciclopropilo, ciclopropenilo, ciclobutilo, 2,3-dihidroxiciclobutilo, ciclobutenilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclopentadienilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, cicloheptilo, ciclooctanilo,decalinilo,2,5-dimetilciclopentilo,3,5-diclorociclohexilo,4 hidroxiciclohe-xilo,3,3,5-trimetilciclohex-1-ilo,octahidropentalenilo,octahidro-1H-indenilo ,3a,4,5,6,7,7ahexahidro-3H-in-den-4ilo,decahidroazulenilo; biciclo [6.2.0] decanilo, decahidronaftalenilo, y dodecahidro-1H-fluorenilo. El término "cicloalquilo" también incluye anillos carboxílicos los cuales son anillos de hidrocarburo bicíclicos, cuyos ejemplos no limitantes incluyen, biciclo-[2.1.1]hexanilo, biciclo[2.2.1]heptanilo, biciclo[3.1.1]heptanilo,1,3-dimetil[2.2.1]heptan-2-ilo,biciclo[2.2.2]octanilo,y biciclo [3.3.3]undecanilo.
"Haloalquilo" pretende incluir grupos hidrocarburo alifático saturado tanto ramificados como de cadena lineal que tienen el número especificado de átomos de carbono, sustituidos con 1 o más halógeno. Los grupos haloalquilo incluyen grupos perhaloalquilo, en los que todos los hidrógenos de un grupo alquilo han sido sustituidoS por halógenos (por ejemplo, -CF3, -CF2CF3). Los grupos haloalquilo pueden ser opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes además de halógeno. Los ejemplos de grupos haloalquilo incluyen, pero no se limitan a, grupos fluorometilo, dicloroetilo, trifluorometilo, triclorometilo, pentafluoroetilo, y pentacloroetilo.
El término "alcoxi" se refiere al grupo -O-alquilo, en el que el grupo alquilo es como se ha definido anteriormente. Los grupos alcoxi pueden ser opcionalmente sustituidos. El término alcoxi C3-C6 cíclico se refiere a un anillo que contiene de 3 a 6 átomos de carbono y al menos un átomo de oxígeno (por ejemplo, tetrahidrofurano, tetrahidro-2H-pirano). Los grupos alcoxi C3-C6 cíclico pueden ser opcionalmente sustituidos.
El término "arilo," cuando se usa solo o como parte de otro grupo, en el presente documento se define como un anillo monocíclico aromático, insaturado de 6 miembros de carbono o se refiere a un anillo policíclico aromático, insaturado de 10 a 14 miembros de carbono. Los anillos de arilo pueden ser, por ejemplo, un anillo de fenilo o naftilo cada uno opcionalmente sustituido con uno o más restos capaces de reemplazar uno o más átomos de hidrógeno. Los ejemplos no limitantes de grupos arilo incluyen: fenilo, naftilen-1 -ilo, naftilen-2-ilo, 4-fluorofenilo, 2-hidroxifenilo, 3-metilfenilo, 2-amino-4-fluorofenilo, 2-(N,N-dietilamino)fenilo, 2-cianofenilo, 2,6-di-ferc-butilfenilo, 3-metoxifenilo, 8-hidroxinaftilen-2-ilo 4,5-dimetoxinaftilen-1-ilo, y 6-ciano-naftilen-1-ilo. Los grupos arilo también incluyen, por ejemplo, anillos de fenilo o naftilo fusionados con uno o más anillos de carbono saturados o parcialmente saturados (por ejemplo, biciclo[4.2.0]octa-1,3,5-trienilo, indanilo), que pueden estar sustituidos en uno o más átomos de carbono de los anillos aromáticos y/o saturados o parcialmente saturados.
El término "arilalquilo" o "aralquilo" se refiere al grupo -alquil-arilo, en el que los grupos alquilo y arilo son como se definen en el presente documento. En la presente invención los grupos aralquilo son opcionalmente sustituidos. Los ejemplos de grupos arilalquilo incluyen, por ejemplo, bencilo, 1-feniletilo, 2-feniletilo, 3-fenilpropilo, 2-fenilpropilo, fluorenilmetilo y similares.
Los términos "heterocíclico" y/o "heterociclo" y/o "heterociclilo", si se usan solos o como parte de otro grupo, se definen en el presente documento como uno o más anillos que tienen de 3 a 20 átomos en los que al menos un átomo en al menos un anillo es un heteroátomo seleccionado entre nitrógeno (N), oxígeno (O), o azufre (S), y en los que además el anillo que incluye el heteroátomo no es aromático. En los grupos heterocíclicos que incluyen 2 o más anillos fusionados, el anillo que no porta heteroátomo puede ser arilo (por ejemplo, indolinilo, tetrahidroquinolinilo, cromanilo). Los grupos heterociclo a modo de ejemplo tienen de 3 a 14 átomos en el anillo de los cuales de 1 a 5 son heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno (N), oxígeno (O), o azufre (S). Uno o más átomos de N o S en un grupo heterociclo se pueden oxidar. Los grupos heterocíclicos pueden ser opcionalmente sustituidos.
Los ejemplos no limitantes de unidades heterocíclicas que tienen un solo anillo incluyen: diazirinilo, aziridinilo, urazolilo, azetidinilo, pirazolidinilo, imidazolidinilo, oxazolidinilo, isoxazolinilo, isoxazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, isotiazolinilo oxatiazolidinonilo, oxazolidinonilo, hidantoinilo, tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, morfolinilo, piperazinilo, piperidinilo, dihidropiranilo, tetrahidropiranilo, piperidin-2-onilo (valerolactama), 2,3,4,5-tetrahidro-1H-azepinilo, 2,3-dihidro-1H-indol, y 1,2,3,4-tetrahidro-quinolina. Los ejemplos no limitantes de unidades heterocíclicas que tienen 2 o más anillos incluyen: hexahidro-1H-pirrolizinilo, 3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-1H-benzo[d]imidazolilo,3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-1H-indolilo, 1,2,3,4-tetrahidroquinolinilo, cromanilo, isocromanilo, indolinilo, isoindolinilo, y decahidro-1H-cicloocta[b]pi rrolilo.
El término "heteroarilo," si se usa solo o como parte de otro grupo, en el presente documento es definido como uno o más anillos que tienen de 5 a 20 átomos en el que al menos un átomo en al menos un anillo es un heteroátomo elegido entre nitrógeno (N), oxígeno (O), o azufre (S), y en el que además al menos uno de los anillos que incluye un heteroátomo es aromático. En los grupos heteroarilo que incluyen 2 o más anillos fusionados, el anillo que no porta heteroátomo puede ser un carbociclo (por ejemplo, 6,7-Dihidro-5H-ciclopentapirimidina) o arilo (por ejemplo, benzofuranilo, benzotiofenilo, indolilo). Los grupos heteroarilo a modo de ejemplo tienen de 5 a 14 átomos en el anillo y contienen de 1 a 5 heteroátomos en el anillo seleccionados independientemente entre nitrógeno (N), oxígeno (O), o azufre (S). Uno o más átomos de N o S en un grupo heteroarilo pueden ser oxidados. Los grupos heteroarilo pueden ser sustituidos. Los ejemplos no limitantes de anillos heteroarilo que contienen un solo anillo incluyen: 1,2,3,4-tetrazolilo, [1,2,3]triazolilo, [1,2,4]triazolilo, triazinilo, tiazolilo, 1H-imidazolilo, oxazolilo, furanilo, tiofenoílo, pirimidinilo, 2-fenilpirimidinilo, piridinilo, 3-metilpiridinilo, y 4-dimetilaminopiridinilo. Los ejemplos no limitantes de anillos de heteroarilo que contienen 2 o más anillos fusionados incluyen: benzofuranilo, benzotiofenilo, benzoxazolilo, benzotiazolilo, benzotriazolilo, cinnolinilo, naftiridinilo, fenantridinilo,7H-purinilo,9H-purinilo,6-amino-9H-purinilo,5H-pirrolo[3,2d]pirimidinilo, 7H-pirrolo[2,3-d]pirimidinilo, pirido[2,3-d]pirimidinilo, 2-fenilbenzo[d]tiazolilo, 1H-indolilo,4,5,6,7-tetrahidro-1-H-indolilo,quinoxalinilo,5-metilquinoxalinilo, quinazolinilo, quinolinilo, 8-hidroxi-quinolinilo, y isoquinolinilo.
Un ejemplo no limitante de un grupo heteroarilo como se ha descrito anteriormente es heteroarilo C1C5, que tiene de 1 a 5 átomos de carbono en el anillo y al menos un átomo adicional en el anillo que es un heteroátomo (preferiblemente de 1 a 4 átomos adicionales en el anillo que son heteroátomos) seleccionado independientemente entre nitrógeno (N), oxígeno (O), o azufre (S). Los ejemplos de heteroarilo C1-C5 incluyen, pero no se limitan a, triazinilo, tiazol-2-ilo, tiazol-4-ilo, imidazol-1-ilo, 1H-imidazol-2-ilo, 1H-imidazol-4-ilo, isoxazolin-5-ilo, furan-2-ilo, furan-3-ilo, tiofen-2-ilo, tiofen-4-ilo, pirimidin-2-ilo, pirimidin-4-ilo, pirimidin-5-ilo, piridin-2-ilo, piridin-3-ilo, y piridin-4-ilo.
A menos que se indique de otro modo, cuando dos substituyentes se toman juntos para formar un anillo que tiene un número especificado de átomos en el anillo (por ejemplo, R2 y R3 tomados junto con el nitrógeno (N) a que se unen para formar un anillo de 3 a 7 miembros), el anillo puede tener átomos de carbono y opcionalmente uno o más (por ejemplo, de 1 a 3) heteroátomos adicionales seleccionados independientemente entre nitrógeno (N), oxígeno (O), o azufre (S). El anillo puede estar saturado o parcialmente saturado y puede estar opcionalmente sustituido.
Para los fines de la presente invención se considerará que las unidades de anillos fusionados, así como anillos espirocíclicos, anillos bicíclicos y similares, los cuales comprenden un solo heteroátomo pertenecen a la familia cíclica que corresponde al anillo que contiene heteroátomo. Por ejemplo, 1,2,3,4-tetrahidroquinolina que tiene la fórmula:
Figure imgf000018_0001
se considera, para los fines de la presente invención, una unidad heterocíclica. 6,7-Dihidro-5H-ciclopentapirimidina que tiene la fórmula:
Figure imgf000018_0002
se considera, para los fines de la presente invención, una unidad de heteroarilo. Cuando una unidad de anillos fusionados contiene heteroátomos en un anillo tanto saturado como en un anillo de arilo, el anillo de arilo predominará y determinará el tipo de categoría a la cual se asigna el anillo. Por ejemplo, 1,2,3,4-tetrahidro-[1,8]naftiridina que tiene la fórmula:
Figure imgf000018_0003
se considera, para los fines de la presente invención, una unidad de heteroarilo.
Siempre que un término o cualquiera de sus raíces de prefijo aparecen en un nombre de un sustituyente, se debe interpretar que el nombre incluye esas limitaciones proporcionadas en el presente documento. Por ejemplo, siempre que el término "alquilo" o "arilo" o cualquiera de sus raíces de prefijo aparecen en un nombre de un sustituyente (por ejemplo, arilalquilo, alquilamino) se debe interpretar que el nombre incluye esas limitaciones dadas anteriormente para "alquilo" y "arilo." El término "sustituido" se usa a lo largo de la memoria descriptiva. El término "sustituido" en el presente documento se define como un resto, ya sea acíclico o cíclico, que tiene uno o más átomos de hidrógeno sustituidos con un sustituyente o varios (por ejemplo, de 1 a 10) sustituyentes como se define en el presente documento a continuación. Los sustituyentes son capaces de sustituir uno o dos átomos de hidrógeno de un solo resto de una vez. Además, estos sustituyentes pueden sustituir dos átomos de hidrógeno en dos carbonos adyacentes para formar dicho sustituyente, nuevo resto o unidad. Por ejemplo, una única sustituida que requiere una sustitución de un solo átomo de hidrógeno incluye halógeno, hidroxilo, y similares. Una sustitución de dos átomos de hidrógeno incluye carbonilo, oximino, y similares. Una sustitución de dos átomos de hidrógeno de átomos de carbono adyacentes incluye epoxi, y similares. El término "sustituido" se usa a lo largo de la presente memoria descriptiva para indicar que un resto que tiene uno o más de los átomos de hidrógeno está sustituido con un sustituyente. Cuando un resto se describe como "sustituido" se puede sustituir cualquier número de los átomos de hidrógeno. Por ejemplo, difluorometilo es un alquilo C1 sustituido; trifluorometilo es un alquilo C1 sustituido; 4-hidroxifenilo es un anillo aromático sustituido; (N,N-dimetil-5-amino)octanilo es un alquilo Cs sustituido; 3-guanidinopropilo es un alquilo C3 sustituido; y 2-carboxipiridinilo es un heteroarilo sustituido.
Los grupos variables que se definen en el presente documento, por ejemplo, los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, alcoxi, ariloxi, arilo, heterociclo y heteroarilo que se definen en el presente documento, si se usan solos o como parte de otro grupo, pueden ser opcionalmente sustituidos. Los grupos opcionalmente sustituidos se indicarán de ese modo.
Los siguientes son ejemplos no limitantes de sustituyentes los cuales pueden sustituir átomos de hidrógeno en un resto: halógeno (cloro (Cl), bromo (Br), flúor (F) y yodo (I)), -CN, -NO2, oxo (=O), -OR9, -SR9, -N(R9)2, -NR9C(O)R9, -SO2RVSO2OR9 -SO2N(R9)2, -C(O)R9, -C(O)OR9, -C(O)N(R9)2, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, alcoxi C1-6, C2-8 alquenilo, C2-8 alquinilo, C3-14 cicloalquilo, arilo, heterociclo, o heteroarilo, en la que cada uno de los grupos alquilo, haloalquilo, alquenilo, alquinilo, alcoxi, cicloalquilo, arilo, heterociclo, y heteroarilo está opcionalmente sustituido con 1-10 (por ejemplo, 1-6 ó 1-4) grupos seleccionados independientemente entre halógeno, -CN, -NO2, oxo, y Rx; en la que Rx, en cada caso, independientemente es hidrógeno, -OR10, -SR10, -C(O)R10, -C(O)OR10, -C(O)N(R10)2, -SO2R10, -S(O)2OR10, -N(R10)2, -NR10C(O)R10, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, alquenilo C2-8 alquinilo, C2-8, cicloalquilo (por ejemplo, cicloalquilo C 3-6), arilo, heterociclo, o heteroarilo, o dos unidades Rx tomadas junto con el átomo o átomos a los cuales se unen formando un carbociclo o heterociclo opcionalmente sustituido en el que dicho carbociclo o heterociclo tiene de 3 a 7 átomos en el anillo; en el que R10, en cada caso, es independientemente hidrógeno, alquilo C1-6, haloalquilo C1-6, alquenilo C2-8, alquinilo C2-8, cicloalquilo (por ejemplo, cicloalquilo C3-6), arilo, heterociclo, o heteroarilo, o dos unidades R10 tomadas juntas con el átomo o átomos al que se unen formando un carbociclo o heterociclo opcionalmente sustituido en el que dicho carbociclo o heterociclo tiene preferentemente de 3 a 7 átomos en el anillo.
En ciertas realizaciones, los sustituyentes son seleccionados entre
i) -OR11; por ejemplo, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2CH3;
ii) -C(O)R11; por ejemplo, -COCH3, -COCH2CH3, -COCH2CH2CH3;
iii) -C(O)OR11; por ejemplo, -CO2CH3, -CO2CH2CH3, -CO2CH2CH2CH3;
iv) -C(O)N(R11)2; por ejemplo, -CONH2, -CONHCH3, -CON(CH3)2;
v) -N(R11)2; por ejemplo, -NH2, -NHCH3, -N(CH3)2, -NH(CH2CH3);
vi) halógeno: -F, -Cl, -Br, y -I;
vii) -CHeXg; en el que X es halógeno, m es de 0 a 2, e g = 3; por ejemplo,-CH2F, -CHF2, -CF3, -CCl3, o -CBr3;
viii) -SO2R11; por ejemplo, -SO2H; -SO2CH3; -SO2C6H5;
ix) alquilo C1-C6 lineal, ramificado, o cíclico;
x) Ciano
xi) Nitro;
xii) N(R11)C(O)R11;
xiii) Oxo (=O);
xiv) Heterociclo; y
xv) Heteroarilo.
en el que cada R11 es independientemente hidrógeno, alquilo C1-C6 lineal o ramificado opcionalmente sustituido (por ejemplo, alquilo C1-C4 lineal o ramificado opcionalmente sustituido), o cicloalquilo C3-C6 opcionalmente sustituido (por ejemplo, cicloalquilo C3-C4 opcionalmente sustituido); o dos unidades R11 pueden ser tomadas en conjunto para formar un anillo que comprende 3-7 átomos en el anillo. En ciertos aspectos, cada R11 es independientemente hidrógeno, alquilo C1-C6 lineal o ramificado opcionalmente sustituido con halógeno o cicloalquilo C3-C6 o cicloalquilo C3-C6.
En diversos lugares de la presente memoria descriptiva, los sustituyentes de los compuestos se desvelan en grupos o en intervalos. De forma específica se pretende que la descripción incluye a todas y cada una de las subcombinaciones individuales de los miembros de los grupos e intervalos de ese tipo. Por ejemplo, el término "alquilo C1-6" pretende desvelar de forma específica individualmente alquilo C1, C2, C3, C4, C5, C6, C1-C6, C1-C5, C1-C4, C1-C3, C1-C2, C2-C6, C2-C5, C2-C4, C2-C3, C3-C6, C3-C5, C3-C4, C4-C6, C4-C5, y C5-C6.
Para los fines de la presente invención los términos "compuesto", "análogo", y "composición de materia" son igualmente adecuados para los compuestos fotodinámicos que se describen en el presente documento, incluyendo todas las formas enantioméricas, formas diastereoméricas, sales, y similares, y los términos "compuesto", "análogo", y "composición de materia" son usadas indistintamente a lo largo de la presente memoria descriptiva.
Para los fines de la presente invención el término "bpy" será igualmente adecuado para 2,2'-bipiridina y [2,2']bipi ridina.
Para los fines de la presente invención el término "phen" será igualmente adecuado para [1,10]fenantrolina y 1,10-fenantrolina.
Para los fines de la presente invención el término "dmb" será igualmente adecuado para 4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina.
Los compuestos que se describen en el presente documento puede contener un átomo asimétrico (también denominado centro quiral), y algunos de los compuestos pueden contener uno o más átomos o centros asimétricos, lo cual de ese modo puede dar lugar a isómeros ópticos (enantiómeros) y diastereómeros. Las presentes enseñanzas y compuestos que se desvelan en el presente documento incluyen enantiómeros y diastereómeros de ese tipo, así como los estereoisómeros R y S enantioméricamente puros, racémicos y resueltos, así como otras mezclas de los R y S estereoisómeros y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Los isómeros ópticos pueden ser obtenidos en forma pura mediante procedimientos convencionales conocidos por los expertos en la materia, los cuales incluyen, pero no se limitan a, formación de sales diastereoméricas, resolución cinética y síntesis asimétrica. Las presentes enseñanzas también incluyen los isómeros cis y trans de compuestos que contienen restos alquenilo (por ejemplo, alquenos e iminas). También se entiende que las presentes enseñanzas incluyen todos los regioisómeros posibles, y mezclas de los mismos, los cuales se pueden obtener en forma pura mediante procedimientos de separación convencional conocidos por los expertos en la materia, e incluyen, pero no se limitan a, cromatografía en columna, cromatografía en capa fina y cromatografía líquida de alto rendimiento.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de las presentes enseñanzas, que pueden tener un resto ácido, se pueden formar usando bases orgánicas e inorgánicas. Se contemplan sales tanto mono como polianiónicas, dependiendo del número de hidrógenos ácidos disponibles para la desprotonación. Las sales adecuadas formadas con bases incluyen sales de metales, tales como sales de metal alcalino o de metal alcalinotérreo, por ejemplo sales de sodio, potasio, o magnesio; sales de amoniaco y sales de amina orgánica, tal como las formadas con morfolina, tiomorfolina, piperidina, pirrolidina, a alquilamina mono-, di- o tri-inferior (por ejemplo, etil-terc-butil-, dietil-, diisopropil-, trietil-, tributil- o dimetilpropilamina), o una alquilamina mono-, di-, o trihidroxi inferior (por ejemplo, mono-, di- o trietanolamina). Los ejemplos no limitantes específicos de bases inorgánicas incluyen NaHCO3, Na2CO3, KHCO3, K2CO3, Cs2CO3, LiOH, NaOH, KOH, NaH2PO4, Na2HPO4, y Na3PO4. También se pueden formar sales internas. De forma análoga, cuando un compuesto desvelado en el presente documento contiene un resto básico, se pueden formar sales usando ácidos orgánicos e inorgánicos. Por ejemplo, se pueden formar sales a partir de los siguientes ácidos: acético, propiónico, láctico, bencenosulfónico, benzoico, canforsulfónico, cítrico, tartárico, succínico, dicloroacético, etenosulfónico, fórmico, fumárico, glucónico, glutámico, hipúrico, bromhídrico, clorhídrico, isetiónico, láctico, maleico, málico, malónico, mandélico, metanosulfónico, múcico, naftalenosulfónico, nítrico, oxálico, pamoico, pantoténico, fosfórico, ftálico, propiónico, succínico, sulfúrico, tartárico, toluenosulfónico, y canforsulfónico así como otros ácidos farmacéuticamente aceptables conocidos.
Cuando cualquier variable aparece más de una vez en cualquier componente o en cualquier fórmula, su definición en cada aparición es independiente de su definición en cada otra aparición (por ejemplo, en N(R6)2, cada R6 pueden ser iguales o diferentes al otro). Las combinaciones de sustituyentes y/o variables sólo se permiten si dichas combinaciones dan como resultado compuestos estables.
Los términos "tratar" y "tratando" y "tratamiento" como se usa en el presente documento, se refieren a aliviar, inhibir, mejorar y/o atenuar parcial o completamente una afección que se sospecha que un paciente padece.
Como se usa en el presente documento, "terapéuticamente eficaz" y "dosis efectiva" se refieren a una sustancia o una cantidad que provoca una actividad o efecto biológico deseado.
Como se usa en el presente documento, la expresión "terapia fotodinámica" hará referencia a un tratamiento para destruir células y tejido mediante el uso de un fármaco que se puede activar con la luz de una cierta longitud de onda y dosis.
Como se usa en el presente documento, la expresión "compuesto fotodinámico" hará referencia a un compuesto que proporciona terapia fotodinámica.
Excepto cuando se indica, los términos "sujeto" o "paciente" se usan indistintamente y se refieren a mamíferos tales como pacientes humanos y primates no humanos, así como a animales experimentales tales como conejos, ratas, y ratones, y otros animales. Por lo tanto, el término "sujeto" o "paciente" como se usa en el presente documento se refiere a cualquier paciente o sujeto mamífero al cual se le pueden administrar los compuestos de la invención. En una realización de la presente invención a modo de ejemplo, para identificar los pacientes objeto de tratamiento de acuerdo con los métodos de la invención, se usan métodos de identificación sistemática aceptados para determinar factores de riesgo asociados con una enfermedad o afección dirigida o sospechosa o para determinar el estado de una enfermedad o afección existente en un sujeto. Estos métodos de identificación sistemática incluyen, por ejemplo, ensayos de diagnóstico convencionales para determinar factores de riesgo que pueden estar asociados con la enfermedad o afección dirigida o sospechosa. Estos y otros métodos de rutina permiten al médico seleccionar pacientes con necesidad de terapia usando los métodos y compuestos de la presente invención.
Los Compuestos Fotodinámicos
Los compuestos fotodinámicos de la presente invención son tiofenos a base de metal modificables, e incluyen todas las formas enantioméricas y diastereoméricas y sales farmacéuticamente aceptables
Figure imgf000021_0001
incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en los que:
M se selecciona entre el grupo que consiste en manganeso, molibdeno, renio, hierro, rutenio, osmio, cobalto, rodio, iridio, níquel, platino, y cobre;
X se selecciona entre el grupo que consiste en Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, y SO4-2; n = 0, 1, 2, 3, 4 ó 5;
y = 1, 2 ó 3;
z = 0, 1 ó 2;
Lig en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en
Figure imgf000021_0002
R1 se selecciona entre el grupo que consiste en
Figure imgf000022_0001
u es un número entero, y en ciertas realizaciones, es 1-1000 ó 1-500 ó 1-100 ó 1-10, o es al menos 2 o al menos 3 o al menos 4 o al menos 5 o al menos 10, o es cualquier número entero de 1-5 ó 1-10 ó 1-20, o cualquier valor por encima del cual la procesabilidad se hace problemática debido a agregación y/o insolubilidad;
R2a, R2b, R2c, R2d, R2e, y R2f en cada aparición cada uno es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido;
R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h R3i, R3j, R3k, R31, y R3m en cada aparición cada uno es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, y CO2R8;
R4a, R4b, y R4c en cada aparición cada uno se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido;
R4a y R4b en cada aparición en un anillo de tiofeno se toman junto con el átomo al que están unidos para formar un anillo opcionalmente sustituido que tiene 6 átomos en el anillo que contienen 2 átomos de oxígeno;
R5 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
R6 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
R7 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
R8 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
en el que el compuesto no es [2-(2-Tienil)-1H-imidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina-KN7,KN8] bis( 1,10-fenantrolina-KN1,KN10)-níquel(2+), y compuestos de las estructuras
Figure imgf000023_0003
así como el compuesto C2 de la siguiente fórmula
Figure imgf000023_0001
están excluidos de los nuevos compuestos de fórmula (I).
Los compuestos de la presente invención incluyen compuestos que tienen la fórmula (II),
Figure imgf000023_0002
incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que:
M se selecciona entre el grupo que consiste en manganeso, molibdeno, renio, hierro, rutenio, osmio, cobalto, rodio, iridio, níquel, platino, y cobre;
X se selecciona entre el grupo que consiste en Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, y SO4-2; n = 0, 1, 2 ó 3;
Lig en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000025_0001
u es un número entero, y en ciertas realizaciones, es 1-1000 ó 1-500 ó 1-100 ó 1-10, o es al menos 2 o al menos 3 o al menos 4 o al menos 5 o al menos 10, o es cualquier número entero de 1-5 ó 1-10 ó 1-20, o cualquier valor por encima del cual la procesabilidad se hace problemática debido a agregación y/o insolubilidad;
R2a, R2b, R2c, R2d, R2e, y R2f en cada aparición cada uno se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido;
R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h R3i, R3j, R3k, R31, y R3m en cada aparición cada uno se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, y CO2R8;
R4a, R4b, y R4c en cada aparición cada uno se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido;
R4a y R4b en cada aparición en un anillo de tiofeno se toman junto con el átomo al que están unidos para formar un anillo opcionalmente sustituido que tiene 6 átomos en el anillo que contienen 2 átomos de oxígeno;
R5 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
R6 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
R7 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
R8 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
Los compuestos de las estructuras
Figure imgf000025_0002
están excluidos de los nuevos compuestos de fórmula (II).
Los compuestos de la presente invención incluyen compuestos que tienen la fórmula (III),
Figure imgf000026_0001
incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en la que M, Lig, X y los grupos R son como se han definido anteriormente, y g es 0, 1, 2, 3, 4 ó 5.
La presente invención también se dirige a nuevos compuestos de fórmula (IV):
Figure imgf000026_0002
incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos en la que M, X y los grupos R son como se han definido anteriormente, y h es 0, 1, 2, 3, 4 ó 5.
La presente invención también se dirige a nuevos compuestos de fórmula (V):
Figure imgf000026_0003
incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que:
Lig en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en
Figure imgf000027_0001
y
M en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en manganeso, molibdeno, renio, hierro, rutenio, osmio, cobalto, rodio, iridio, níquel, platino, y cobre;
X y los grupos R son como se han definido anteriormente;
t es un número entero, y es preferentemente 1, 2, 3, 4, 5 ó 6;
q = 0, 1, 2, 3, 4 ó 5.
El compuesto que tiene la siguiente estructura está excluido de ciertas realizaciones de los compuestos de fórmula (V):
Figure imgf000027_0002
La presente invención también se dirige hacia nuevos usos de los compuestos de la estructura
Figure imgf000028_0002
En ciertas realizaciones, M es manganeso molibdeno, renio, hierro, rutenio, osmio, cobalto, rodio, iridio, níquel, platino, o cobre.
En ciertas realizaciones, X es Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, o SO4-2.
En ciertas realizaciones, n es 0 ó 1 ó 2 ó 3 ó 4 ó 5.
En ciertas realizaciones, y es 1 ó 2 ó 3.
En ciertas realizaciones, z es 0 ó 1 ó 2.
En ciertas realizaciones, g es 0 ó 1 ó 2 ó 3 ó 4 ó 5.
En ciertas realizaciones, h es 0 ó 1 ó 2 ó 3 ó 4 ó 5.
En ciertas realizaciones, t es un número entero.
En ciertas realizaciones,
En ciertas realizaciones,
Figure imgf000028_0001
Figure imgf000029_0001
Figure imgf000030_0001
En ciertas realizaciones, R1 es
Figure imgf000031_0001
R Aa' R 413
En ciertas realizaciones, R1 es
Figure imgf000031_0002
En ciertas realizaciones,
Figure imgf000031_0003
En ciertas realizaciones, es
Figure imgf000031_0004
En ciertas realizaciones, R1 es
Figure imgf000031_0005
En ciertas realizaciones, R1 es
Figure imgf000031_0006
En ciertas realizaciones, R1 es
Figure imgf000031_0007
En ciertas realizaciones, u es un número entero, y en ciertas de estas realizaciones, es 1­ 1000 ó 1-500 ó 1-100 ó 1-10, o es al menos 2 o al menos 3 o al menos 4 o al menos 5 o al menos 10, o es cualquier número entero de 1-5 ó 1-10 ó 1-20, o cualquier valor por encima del cual la procesabilidad se hace problemática debido a agregación y/o insolubilidad.
En ciertas realizaciones, R1 es
Figure imgf000032_0001
En ciertas realizaciones, R1 es
Figure imgf000032_0002
En ciertas realizaciones, R1 es
Figure imgf000032_0003
En ciertas realizaciones, R1 es
Figure imgf000032_0004
En ciertas realizaciones, R1 es
Figure imgf000032_0005
En ciertas realizaciones, R1 es
Figure imgf000032_0006
En ciertas realizaciones, R1 es
Figure imgf000033_0001
En ciertas realizaciones,
Figure imgf000033_0002
En ciertas realizaciones, R1 es
Figure imgf000033_0003
En ciertas real izaciones, R2a es hidrógeno.
En ciertas real izaciones, R2a es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas real izaciones, R2a es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas real izaciones, R2a es cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido. En ciertas real izaciones, R2a es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido. En ciertas real izaciones, R2a es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas real izaciones, R2a es CO2R5.
En ciertas real izaciones, R2a es CONR62.
En ciertas real izaciones, R2a es NR72.
En ciertas real izaciones, R2a es sulfato.
En ciertas real izaciones, R2a es sulfonato.
En ciertas real izaciones, R2a es arilo opcionalmente sustituido.
En ciertas real izaciones, R2a es ariloxi opcionalmente sustituido.
En ciertas real izaciones, R2a es heteroarilo opcionalmente sustituido.
En ciertas real izaciones, R2a es heterociclo opcionalmente sustituido.
En ciertas real izaciones, R2b es hidrógeno.
En ciertas real izaciones, R2b es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas real izaciones, R2b es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas real izaciones, R2b es cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido. En ciertas real izaciones, R2b es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido. En ciertas real izaciones, R2b es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas real izaciones, R2b es CO2R5.
En ciertas real izaciones, R2b es CONR62.
En ciertas real izaciones, R2b es NR72.
En ciertas real izaciones, R2b es sulfato.
En ciertas real izaciones, R2b es sulfonato.
En ciertas real izaciones, R2b es arilo opcionalmente sustituido.
En ciertas real izaciones, R2b es ariloxi opcionalmente sustituido.
En ciertas real izaciones, R2b es heteroarilo opcionalmente sustituido.
En ciertas real izaciones, R2a es heterociclo opcionalmente sustituido.
En ciertas real izaciones, R2c es hidrógeno.
En ciertas real izaciones, R2c es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas real izaciones, R2c es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas real izaciones, R2c es cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2c es haloalquilo Ci-6 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R2c es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2c es CO2R5.
En ciertas realizaciones R2c es CONR62.
En ciertas realizaciones R2c es NR72.
En ciertas realizaciones R2c es sulfato.
En ciertas realizaciones R2c es sulfonato.
En ciertas realizaciones R2c es arilo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2c es ariloxi opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2c es heteroarilo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2c es heterociclo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2d es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R2d es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2d es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R2d es cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R2d es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R2d es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2d es CO2R5.
En ciertas realizaciones R2d es CONR62.
En ciertas realizaciones R2d es NR72.
En ciertas realizaciones R2d es sulfato.
En ciertas realizaciones R2d es sulfonato.
En ciertas realizaciones R2d es arilo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2d es ariloxi opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2d es heteroarilo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2d es heterociclo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2e es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R2e es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2e es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R2e es cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R2e es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R2e es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2e es CO2R5.
En ciertas realizaciones R2e es CONR62.
En ciertas realizaciones R2e es NR72.
En ciertas realizaciones R2e es sulfato.
En ciertas realizaciones R2e es sulfonato.
En ciertas realizaciones R2e es arilo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2e es ariloxi opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2e es heteroarilo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2e es heterociclo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2f es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R2f es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2f es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R2f es cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R2f es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R2f es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2f es CO2R5.
En ciertas realizaciones R2f es CONR62.
En ciertas realizaciones R2f es NR72.
En ciertas realizaciones R2f es sulfato.
En ciertas realizaciones R2f es sulfonato.
En ciertas realizaciones R2f es arilo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2f es ariloxi opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2f es heteroarilo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R2f es heterociclo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3a es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R3a es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3a es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R3a es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R3a es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3a es CO2R8.
En ciertas realizaciones R3b es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R3b es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3b es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R3b es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R3b es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3b es CO2R8.
En ciertas realizaciones R3c es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R3c es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3c es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R3c es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R3c es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3c es CO2R8.
En ciertas realizaciones R3d es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R3d es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3d es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R3d es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R3d es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3d es CO2R8.
En ciertas realizaciones R3e es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R3e es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3e es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R3e es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R3e es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3e es CO2R8.
En ciertas realizaciones R3f es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R3f es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3f es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R3f es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R3f es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3f es CO2R8.
En ciertas realizaciones R3g es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R3g es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3g es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R3g es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R3g es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3g es CO2R8.
En ciertas realizaciones R3h es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R3h es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3h es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R3h es C1-6 opcionalmente sustituido haloalquil En ciertas realizaciones R3h es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3h es CO2R8.
En ciertas realizaciones R3i es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R3i es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3i es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R3i es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3i es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3i es CO2R8.
En ciertas realizaciones R3j es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R3j es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3j es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R3j es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3j es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3j es CO2R8.
En ciertas realizaciones R3k es hidrógeno.
En ciertas realizaciones R3k es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3k es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado. En ciertas realizaciones R3k es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido. En ciertas realizaciones R3k es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones R3k es CO2R8.
En ciertas rea izaciones R31 es hidrógeno.
En ciertas rea izaciones R31 es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R31 es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado.
En ciertas rea izaciones R31 es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R31 es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R31 es CO2R8
En ciertas rea izaciones R3m es hidrógeno.
En ciertas rea izaciones R3m es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R3m es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado.
En ciertas rea izaciones R3m es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R3m es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R3m es CO2R8.
En ciertas rea izaciones R4a es hidrógeno.
En ciertas rea izaciones R4a es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4a es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado.
En ciertas rea izaciones R4a es cicloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4a es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4a es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4a es CO2R5.
En ciertas rea izaciones R4a es CONR62
En ciertas rea izaciones R4a es NR72.
En ciertas rea izaciones R4a es sulfato.
En ciertas rea izaciones R4a es sulfonato.
En ciertas rea izaciones R4a está arilo opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4a está ariloxi opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4a está heteroarilo opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4a está heterociclo opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4b es hidrógeno.
En ciertas rea izaciones R4b es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4b es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado.
En ciertas rea izaciones R4b es cicloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4b es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4b es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4b es CO2R5.
En ciertas rea izaciones R4b es CONR62
En ciertas rea izaciones R4b es NR72.
En ciertas rea izaciones R4b es sulfato.
En ciertas rea izaciones R4b es sulfonato.
En ciertas rea izaciones R4b es arilo opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4b es ariloxi opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4b es heteroarilo opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4b es heterociclo opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4c es hidrógeno.
En ciertas rea izaciones R4c es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4c es alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado.
En ciertas rea izaciones R4c es cicloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4c es haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4c es alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4c es CO2R5.
En ciertas rea izaciones R4c es CONR62
En ciertas rea izaciones R4c es NR72.
En ciertas rea izaciones R4c es sulfato.
En ciertas rea izaciones R4c es sulfonato.
En ciertas rea izaciones R4c es arilo opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4c es ariloxi opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4c es heteroarilo opcionalmente sustituido.
En ciertas rea izaciones R4c es heterociclo opcionalmente sustituido.
En ciertas re alizaciones R4a y R4b se toman junto con el átomo al cual están unidos para formar un anil o opcionalmente sustituido que tiene que 6 átomos en el anillo que contienen 2 átomos de oxí geno.
En ciertas rea izaciones, R5 es hidrógeno.
En ciertas realizaciones, R5 es alquilo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones, R6 es hidrógeno.
En ciertas realizaciones, R6 es alquilo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones, R7 es hidrógeno.
En ciertas realizaciones, R7 es alquilo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones, R8 es hidrógeno.
En ciertas realizaciones, R8 es alquilo opcionalmente sustituido.
En ciertas realizaciones, q es 0 ó 1 ó 2 ó 3 ó 4 ó 5.
En ciertas realizaciones, t es 1 ó 2 ó 3 ó 4 ó 5 ó 6.
Realizaciones a modo de ejemplo incluyen compuestos que tienen la fórmula (VI) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos:
Figure imgf000037_0001
en la que los ejemplos no limitantes de M, Lig, y R1 se definen en el presente documento a continuación en la Tabla 1.
Tabla 1:
Figure imgf000037_0002
(continuación)
Figure imgf000038_0001
(continuación)
Figure imgf000039_0001
(continuación)
Figure imgf000040_0001
(continuación)
Figure imgf000041_0001
(continuación)
Figure imgf000042_0001
(continuación)
Figure imgf000043_0001
(continuación)
Figure imgf000044_0001
(continuación)
Figure imgf000045_0001
(continuación)
Figure imgf000046_0001
(continuación)
Figure imgf000047_0001
(continuación)
Figure imgf000048_0001
(continuación)
Figure imgf000049_0001
(continuación)
Figure imgf000050_0001
(continuación)
Figure imgf000051_0001
(continuación)
Figure imgf000052_0001
(continuación)
Figure imgf000053_0001
(continuación)
Figure imgf000054_0001
(continuación)
Figure imgf000055_0001
(continuación)
Figure imgf000056_0001
(continuación)
Figure imgf000057_0001
(continuación)
Figure imgf000058_0001
(continuación)
Figure imgf000059_0001
(continuación)
Figure imgf000060_0001
(continuación)
Figure imgf000061_0001
(continuación)
Figure imgf000062_0001
(continuación)
Figure imgf000063_0001
(continuación)
Figure imgf000064_0001
(continuación)
Figure imgf000065_0001
(continuación)
Figure imgf000066_0001
(continuación)
Figure imgf000067_0001
(continuación)
Figure imgf000068_0001
(continuación)
Figure imgf000069_0001
(continuación)
Figure imgf000070_0001
(continuación)
Figure imgf000071_0001
(continuación)
Figure imgf000072_0001
(continuación)
Figure imgf000073_0001
(continuación)
Figure imgf000074_0001
(continuación)
Figure imgf000075_0001
(continuación)
Figure imgf000076_0001
(continuación)
Figure imgf000077_0001
(continuación)
Figure imgf000078_0003
Realizaciones a modo de ejemplo incluyen compuestos que tienen la fórmula (VII) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos:
Figure imgf000078_0001
en la que los ejemplos no limitantes de M, Lig, y R1 se definen en el presente documento a continuación en la Tabla 2.
Tabla 2:
Figure imgf000078_0002
(continuación)
Figure imgf000079_0001
(continuación)
Figure imgf000080_0001
(continuación)
Figure imgf000081_0001
(continuación)
Figure imgf000082_0001
(continuación)
Figure imgf000083_0001
(continuación)
Figure imgf000084_0001
(continuación)
Figure imgf000085_0001
(continuación)
Figure imgf000086_0001
(continuación)
Figure imgf000087_0001
(continuación)
Figure imgf000088_0001
(continuación)
Figure imgf000089_0001
(continuación)
Figure imgf000090_0001
(continuación)
Figure imgf000091_0001
(continuación)
Figure imgf000092_0001
(continuación)
Figure imgf000093_0001
(continuación)
Figure imgf000094_0001
(continuación)
Figure imgf000095_0001
(continuación)
Figure imgf000096_0001
(continuación)
Figure imgf000097_0001
(continuación)
Figure imgf000098_0001
(continuación)
Figure imgf000099_0001
(continuación)
Figure imgf000100_0001
(continuación)
Figure imgf000101_0001
(continuación)
Figure imgf000102_0001
(continuación)
Figure imgf000103_0001
(continuación)
Figure imgf000104_0001
(continuación)
Figure imgf000105_0001
(continuación)
Figure imgf000106_0001
(continuación)
Figure imgf000107_0001
(continuación)
Figure imgf000108_0001
(continuación)
Figure imgf000109_0001
(continuación)
Figure imgf000110_0001
(continuación)
Figure imgf000111_0001
(continuación)
Figure imgf000112_0001
(continuación)
Figure imgf000113_0001
(continuación)
Figure imgf000114_0001
(continuación)
Figure imgf000115_0002
Realizaciones a modo de ejemplo incluyen compuestos que tienen la fórmula (VIII) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos:
Figure imgf000115_0001
en la que los ejemplos no limitantes de M, R1, X, y h se definen en el presente documento a continuación en la Tabla 3.
Tabla 3:
Figure imgf000115_0003
(continuación)
Figure imgf000116_0001
(continuación)
Figure imgf000117_0001
(continuación)
Figure imgf000118_0001
(continuación)
Figure imgf000119_0001
(continuación)
Figure imgf000120_0001
(continuación)
Figure imgf000121_0001
(continuación)
Figure imgf000122_0001
(continuación)
Figure imgf000123_0001
(continuación)
Figure imgf000124_0001
(continuación)
Figure imgf000125_0001
(continuación)
Figure imgf000126_0001
(continuación)
Figure imgf000127_0001
(continuación)
Figure imgf000128_0001
(continuación)
Figure imgf000129_0001
(continuación)
Figure imgf000130_0001
(continuación)
Figure imgf000131_0001
(continuación)
Figure imgf000132_0001
(continuación)
Figure imgf000133_0001
(continuación)
Figure imgf000134_0001
(continuación)
Figure imgf000135_0001
(continuación)
Figure imgf000136_0001
(continuación)
Figure imgf000137_0001
(continuación)
Figure imgf000138_0001
(continuación)
Figure imgf000139_0001
(continuación)
Figure imgf000140_0001
(continuación)
Figure imgf000141_0001
(continuación)
Figure imgf000142_0001
(continuación)
Figure imgf000143_0001
(continuación)
Figure imgf000144_0001
(continuación)
Figure imgf000145_0001
(continuación)
Figure imgf000146_0001
(continuación)
Figure imgf000147_0001
(continuación)
Figure imgf000148_0001
(continuación)
Figure imgf000149_0001
(continuación)
Figure imgf000150_0001
(continuación)
Figure imgf000151_0001
(continuación)
Figure imgf000152_0001
(continuación)
Figure imgf000153_0001
(continuación)
Figure imgf000154_0001
Realizaciones a modo de ejemplo incluyen compuestos que tienen la fórmula (IX) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos:
Figure imgf000155_0001
en la que los ejemplos no limitantes de M, Lig, t, X, y q son definidos en el presente documento a continuación en la Tabla 4.
Tabla 4:
Figure imgf000155_0002
(continuación)
Figure imgf000156_0001
(continuación)
Figure imgf000157_0001
(continuación)
Figure imgf000158_0001
(continuación)
Figure imgf000159_0001
(continuación)
Figure imgf000160_0001
(continuación)
Figure imgf000161_0001
(continuación)
Figure imgf000162_0001
(continuación)
Figure imgf000163_0001
(continuación)
Figure imgf000164_0001
(continuación)
Figure imgf000165_0001
(continuación)
Figure imgf000166_0001
(continuación)
Figure imgf000167_0001
(continuación)
Figure imgf000168_0001
(continuación)
Figure imgf000169_0001
(continuación)
Figure imgf000170_0001
(continuación)
Figure imgf000171_0001
Realizaciones a modo de ejemplo incluyen compuestos que tienen la fórmula (X) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos:
Figure imgf000172_0001
en la que los ejemplos no limitantes de M, Lig, t, X, y q son definidos en el presente documento a continuación en la Tabla 5.
Tabla 5:
Figure imgf000172_0002
(continuación)
Figure imgf000173_0001
(continuación)
Figure imgf000174_0001
(continuación)
Figure imgf000175_0001
(continuación)
Figure imgf000176_0001
(continuación)
Figure imgf000177_0001
(continuación)
Figure imgf000178_0001
(continuación)
Figure imgf000179_0001
(continuación)
Figure imgf000180_0001
(continuación)
Figure imgf000181_0001
(continuación)
Figure imgf000182_0001
(continuación)
Figure imgf000183_0001
(continuación)
Figure imgf000184_0001
(continuación)
Figure imgf000185_0001
(continuación)
Figure imgf000186_0001
(continuación)
Figure imgf000187_0001
(continuación)
Figure imgf000188_0001
Realizaciones a modo de ejemplo incluyen compuestos que tienen la fórmula (Xa) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos:
Figure imgf000189_0001
en la que los ejemplos no limitantes de M, X, n, y R1 son definidos en el presente documento a continuación en la Tabla 5a.
Tabla 5a:
Figure imgf000189_0002
(continuación)
Figure imgf000190_0001
(continuación)
Figure imgf000191_0001
(continuación)
Figure imgf000192_0001
(continuación)
Figure imgf000193_0001
Realizaciones a modo de ejemplo incluyen compuestos que tienen la fórmula (Xb) o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos:
Figure imgf000194_0001
en la que los ejemplos no limitantes de M, Lig, R1 X, y n son defiidos en el presente documento a continuación en la Tabla 5b.
Tabla 5b:
Figure imgf000194_0002
(continuación)
Figure imgf000195_0001
(continuación)
Figure imgf000196_0001
(continuación)
Figure imgf000197_0001
(continuación)
Figure imgf000198_0001
(continuación)
Figure imgf000199_0001
Para los fines de la presente invención, un compuesto representado por la fórmula racémica representará igualmente bien cualquiera de los dos enantiómeros o mezclas de los mismos, o en el caso de que esté presente un segundo centro quiral, todos los diastereómeros.
En todas las realizaciones que se proporcionan en el presente documento, los ejemplos de sustituyentes opcionales adecuados no pretenden limitar el alcance de la invención reivindicada. Los compuestos de la invención pueden contener cualquiera de los sustituyentes, o combinaciones de sustituyentes, que se proporciona en el presente documento.
Propiedades fotofísicas de los compuestos de la invención:
El carácter modular de los compuestos de la divulgación permite ajustar a medida sus propiedades fotofísicas a través de pequeños cambios en el andamiaje molecular. Por ejemplo, en la serie 1a, 10a, y 14a (Figura 2), los espectros de absorción cambian de forma sistemática a longitudes de onda más largas, lo que lleva a aumentos correspondientes en los coeficientes de extinción en la región visible (Tabla 6). Cuando R es un tiofeno individual tal como en 1a, la absorción integrada de luz visible (£ frente a cm-1) es aproximadamente 5841 (Figura 2). La incorporación de unidades adicionales de tiofeno en el grupo colgante R aumenta esta sección transversal de absorción; para 10a y 14a, estas mejoras son de un 40 % y un 141 %, respectivamente (Tabla 7). De acuerdo con esta progresión, la absorción de luz visible aumentará de forma sistemática en los complejos homolépticos correspondientes a medida que aumenta el número de conectores de tiofeno. Tales mejoras en la absorción de luz visible son críticas para la optimización de PDC para aplicaciones tales como PDT.
Figure imgf000200_0001
- -
Figure imgf000200_0003
La naturaleza modular de los compuestos de la divulgación permite un ajuste a medida de sus propiedades fotofísicas a través de cambios sistemáticos en el andamiaje molecular. Por ejemplo, en la serie 1a, 10a, 14a, y 16a, los espectros de absorción se extienden a longitudes de onda más largas a medida que aumenta el número de anillos de tiofeno, lo que lleva a una absorción en la región del infrarrojo cercano cuando están presentes 4 tiofenos (16a). Además, la absorción integrada a partir de 400-900 nm es casi 4 veces mayor para 16a frente a 1a (Tabla 8 y Figura 3).
Figure imgf000200_0002
Los sensibilizadores actuales para PDT dependen de la generación de 1O2 para la acción fotodinámica hacia las células diana. De forma similar a la tendencia en absorción visible, los rendimientos cuánticos durante la producción de 1O2 para estos compuestos también aumentan con el número de unidades de tiofeno (Figura 4). El 01O2 medido durante 1a es 0,47, mientras que 10a y 14a producen 0,74 y 1,0, respectivamente (Tabla 9). Se ha demostrado que dos compuestos adicionales de esta familia incluyendo 14a (Figura 1, 3a y 3b), exhiben una eficacia de un 100 % durante la sensibilización con 102 , superando al fármaco PDT FOTOFRINA (01Ü2 = 0,75, etanol). De forma interesante, a pesar de los notables rendimientos cuánticos de 1Ü2, los compuestos de la divulgación tienen un rendimiento cuántico para la emisión de menos de un 1 % en solución desoxigenada (por ejemplo, 14a, 01Ü2 < 0,15 %). Por lo tanto, otra vía no radiactiva se vuelve importante en ausencia de O2 y puede predominar en condiciones de hipoxia, impartiendo independencia de O2 a los compuestos de la divulgación como agente PDT. El hecho de que los compuestos de la divulgación fotodañen el ADN en condiciones de hipoxia es evidencia de una independencia potencial de O2 en términos de actividad fotobiológica.
Figure imgf000201_0001
Propiedades de unión a ADN de los compuestos de la divulgación:
Como se muestra en la Figura 5, 10a se une muy fuertemente al ADN, teniendo una de las constantes de unión más grandes conocidas para este tipo de interacción (Kb = 9,1 x 107 a 372 nm; 4,4 x 107 a 460 nm) determinada por absorción de UV-Vis. La magnitud de esta interacción de unión se ve respaldada por mediciones de emisión (Kb = 4,2 x 107 a 625 nm) y también se observa para otros PDC de la divulgación, tales como 14a. Esta unión se produce en las células y se puede ver como una tinción nuclear difusa por las células PDC 14a en HL60 cuando se observa mediante microscopía confocal de barrido de láser (Figura 6).
Los cambios en la identidad de los ligandos auxiliares (10b) o una reducción en el número de tiofenos en el ligando sustituido de C2 (1a) atenúa la afinidad de unión en un orden de magnitud, lo que indica que las modificaciones sutiles conducen a efectos profundos dentro de una sola familia de los PDC estructuralmente relacionados de la divulgación (Tabla 10).
Figure imgf000201_0002
Los PDC de la divulgación también difieren en la medida en la cual estabilizan una hélice de ADN cuando se unen (Figura 7, Tabla 11). A pesar de que 1a exhibe una unión más débil a ADN en relación con 10a, el resto de tiofeno adicional en 10a conduce a una menor estabilización de la hélice tras la unión al ADN como se observa mediante solo un ligero aumento en Tm de 1 °C. De hecho, el análisis electroforético en gel indica que 10a desestabiliza sustancialmente la estructura del ADN nativo, evidenciado por la incapacidad del intercalador bromuro de etidio para teñir el ADN de manera eficaz en [10a]: [ADN] > 0,4 (Figura 14, (b) Calles 8 -14); por el contrario, 1a no interfiere con la intercalación de bromuro de etidio, y las bandas de gel producidas por tinción con bromuro de etidio permanecen visibles con la concentración creciente de pDc (Figura 14, (a) Calles 8-14).
Tabla 11: Parámetros de desnaturalización térmica para CT-ADN con 1a, 1b, 10a, y 10b añadido
([PDC]/[NP] = 0,1).
r T-ADN n n i PD f 7 ° .
Figure imgf000202_0001
Efectos de interruptor de luz del ADN de los compuestos de la invención
Mientras que los PDC de la divulgación, excluyendo 1a y 1b, tienen un rendimiento cuántico para la emisión de menos de un 1 % en el aire, se vuelven sensiblemente emisivos en ausencia de oxígeno (Tabla 9) o en presencia de ADN (Figura 8), conociéndose esto ultimo como el efecto de interruptor de luz del ADN. Este efecto aumenta con el número de unidades de tiofeno en el grupo colgante R: aproximadamente 2, 3 y 4 veces para 1a, 10a y 14a, respectivamente (Tabla 12).
Tabla 12: Mejora medida para el efecto de interruptor de luz del ADN producida por los PDC 1a, 10a, y
14a
Figure imgf000202_0002
La mejora en la luminiscencia puede ser explotada para detectar los PDC de la divulgación en presencia de biomoléculas y/o entornos de hipoxia o para determinar la localización subcelular. Por ejemplo, 10a se localiza fuera del núcleo en células no irradiadas (Figura 10c) mientras que 14a parece teñir la cromatina (Figura 12c). En las células irradiadas, tanto 10a como 14a son distribuidas por todo el citoplasma y el núcleo (Figuras 10d y 12d). De forma interesante, 10a y 10b tiñen las células no viables en la oscuridad a los 5 minutos (Figuras 10b y 11b). 1a, siendo 1-2 órdenes de magnitud más emisivo que 10a ó 14a en aire o argón, se puede usar como tinción a una concentración mucho más baja.
Propiedades de fotoescisión de ADN de los compuestos de la divulgación:
Tal vez debido, en parte, a interacciones de unión muy fuertes con el ADN, los PDC de la divulgación causan daños extensos en el ADN en forma de roturas de la cadena sencilla tras la irradiación con luz visible. La observación de que no se producen roturas de cadena a concentraciones similares de PDC sin activación de luz es muy prometedora como mecanismo para la destrucción celular basada en la acción fotodinámica (Figuras 13 y 14). Dado que el ADN es el modelo para todas las funciones celulares, la acción fotodinámica dirigida a esta biomolécula iniciará vías apoptóticas que destruyen selectivamente las células irradiadas que han tomado el PDC de la divulgación. El mecanismo para el daño del ADN no está confirmado, pero con rendimientos cuánticos de 1Ü2 de unidad para PDC tales como 14a, es probable que el fotodaño mediado por 1Ü2 juegue un papel importante en condiciones de oxigenación. En condiciones de hipoxia, el fotodaño en el ADN de estos compuestos sigue siendo significativo (Figuras 15 y 16, Tablas 12 y 13), lo que indica que las células con deficiencia de oxígeno son susceptibles a la acción fotodinámica por PDC tales como 10a y 14a. Este daño de ADN independiente del oxigeno es corroborado aún más por el hecho de que el rendimiento cuántico para la emisión de un compuesto tal como 14a sigue siendo muy bajo (0,13 %) en ausencia de oxígeno. Por lo tanto, la transferencia de electrones intra o intramolecular, lo cual es común a la fotofísica de tiofeno, también contribuye a la desintegración no radiativa en estos sistemas. Dichas vías de transferencia de electrones se pueden volver importantes en ausencia de oxígeno molecular, dando lugar a fotoprocesos con biomoléculas de Tipo I. Los experimentos preliminares indican que la energía frente a la transferencia de electrones se rige por el medio ambiente. En otras palabras, puede que no haya una división de la energía del estado excitado entre numerosas vías; en su lugar, la presencia de oxígeno sirve para cambiar entre dos vías principales no radiativas: la transferencia de electrones y la transferencia de energía, siendo ambas extremadamente eficientes para invocar el daño del a Dn . Este interruptor fotodinámico entre los fotoprocesos de Tipo I y Tipo II asegura que la acción fotodinámica sea óptima independientemente de la concentración de oxígeno. Un PDC tan versátil elimina la necesidad de distintos fotosensibilizadores de Tipo I y Tipo II para maximizar la acción fotodinámica de acuerdo con los niveles de oxígeno en las células diana.
Tabla 12: Porcentajes calculados de las formas de ADN observadas para la fotoescisión de pUC19 mediada por PDC en una solución desoxigenada y saturada de aire con irradiación a 420 nm, Figura
15.
Figure imgf000203_0001
Tabla 13: Porcentajes calculados de las formas de ADN observadas para la fotoescisión de pUC19
Figure imgf000203_0002
Citotoxicidad y fotocitotoxicidad de los compuestos de la invención
Un hospedador de PDC de la divulgación exhibe una marcada fotocitotoxicidad sin toxicidad en la oscuridad sustancial incluso a valores tan altos como 100 pM (verificado a las 12, 18, 24, 36 y 48 h después de la irradiación). Como se observa para 1a, 10a y 14a en términos de absorción visible integrada, 01O2, unión al ADN y fotodaño de ADN, existe un profundo efecto de la estructura general sobre la fotocitotoxicidad hacia las células HL-60. A ilustrar, 10a, que difiere de 10b sólo en que Lig = [2,2']bipiridina en lugar de [1,10]fenantrolina, es fototóxico hacia las células a 20 pM, mientras que 10b no muestra fotocitotoxicidad incluso a 100 pM (Figura 17). Para las series 1a, 10a y 14a, en la que Lig = [2,2']bipiridina y R1 difiere según el número de tiofenos que conforman la unidad colgante C2, existe una diferencia drástica en la fotocitotoxicidad hacia las células HL-60, por lo que la acción fotodinámica es un 100 % a menos de 10 pM para 14a y virtualmente cero a concentraciones similares de 1a (Figura 18). De forma interesante, a medida que aumenta el número de tiofenos que componen R1, también lo hace la acción fotodinámica hacia las células HL-60. Esta progresión fue confirmada mediante una tinción de viabilidad con azul de Tripano mediante un sistema comercial de recuento de células, así como una tinción de viabilidad de AO-EB mediante microscopía de epifluorescencia (Figura 19). Esta actividad es paralela a las tendencias observadas para la absorción visible integrada, 0 1O2 y el fotodaño del ADN, lo cual juntos determinan la fotocitotoxicidad general para un PDC dado hacia una célula particular.
Para discernir si existe una variabilidad de lote a lote en la acción fotodinámica para los PDC de la divulgación, fueron sintetizados 1a, 10a y 14a utilizando un método novedoso para la preparación de compuestos de la divulgación usando irradiación de microondas. Sus estructuras moleculares fueron confirmadas por RMN 1H, HRMS y análisis elemental y son idénticas a las estructuras obtenidas mediante la metodología estándar. La fotocitotoxicidad observada para los PDC 1a, 10a y 14a preparados por irradiación de microondas exhibe la misma tendencia que se ha documentado para los PDC 1a, 10a y 14a preparados de acuerdo con métodos estándar: en concreto, 14a > 10a > 1a (Figura 20). De forma análoga, las concentraciones eficaces en las cuales la fotocitotoxicidad observada para cada PDC no varían de forma sustancial entre los dos lotes preparados independientemente para los tiempos empleados posteriores a la irradiación empleados (18 h, Figura 21 y 40 h, Figura 22). La acción fotodinámica de 14a se ilustra mejor en las Figuras 23-25, donde se produce un 100 % de fotocitotoxicidad en el intervalo de 5-10 pM.
Activación de vías apoptóticas mediante los compuestos de la divulgación
Tanto 10a como 14a ejercen su fotocitotoxicidad por activación de las vías apoptóticas. La condensación nuclear y la formación de cuerpos apoptóticos se puede ver claramente con tinción de morfología nuclear de AO-EB a las 18 y 40 h después de la irradiación por microscopía de epifluorescencia de células tratadas con 10a (Figura 26, Panel C). AO tiñe los núcleos viables y emite fluorescencia de color verde intenso (Figura 26, Panel B, celda superior derecha) mientras que EB tiñe núcleos no viables y fluoresce rojo intenso (Figura 26, Panel C, celda inferior izquierda). De forma análoga, la condensación nuclear y la formación de cuerpos apoptóticos son evidentes en las células teñidas con AO-EB tratadas con 14a a las 18 (Figura 27) y 40 h (Figura 28) después de la irradiación. El apoyo adicional para la apoptosis como mecanismo principal para la destrucción celular se basa en los grandes cambios en el diámetro celular que tienen lugar tras la irradiación de las células que han sido tratadas con 10a ó 14a. Es bien conocido que los diámetros de las células apoptóticas son significativamente más pequeños que las células normales o necróticas. Las células sanas HL-60 pueden oscilar entre 9 y 25 pm de diámetro, aunque 13 pm es lo habitual. Las células HL-60 que se usan en estos estudios de citotoxicidad tienen un diámetro promedio de 11-13 pm. En presencia de 10a 50 pM, un 70 % de las células HL-60 irradiadas que permanecen a las 40 h tienen aproximadamente la mitad de su tamaño original (diámetro medio < 6 pm), mientras que la misma concentración de 10b tiene poco efecto sobre el diámetro medio de la celda (Figura 29). La misma tendencia existe para 14a, mientras que 1a, la cual no muestra fotocitotoxicidad significativa, no altera notablemente la distribución del diámetro de la célula HL-60 irradiada (Figura 30). De forma interesante, 1a produce una pequeña población (< 30 % a las 40 h) de células HL-60 con diámetros inferiores a 6 pm en la oscuridad. Este hallazgo es corroborado por la ligera toxicidad en la oscuridad observada para 1a (Figura 18a). Juntos, estos cambios en la distribución del tamaño tras la irradiación de células tratadas con PDC subrayan además que la estructura de los compuestos de la divulgación tiene un efecto importante y distintivo en la fotobiología de estas PDC de la divulgación. La variación sistemática que se puede lograr en términos de sus propiedades fotofísicas, fotoquímicas y fotobiológicas ofrece una vía para el diseño racional de PDC y la optimización de los compuestos de la divulgación.
PDC de la divulgación como oxidantes y reductores en estado excitado:
Los compuestos de la divulgación son capaces de actuar como oxidantes y reductores en estado excitado. Por ejemplo, los potenciales de reducción y oxidación del estado excitado de 14a se estiman en 1,31 y -0,87 V, respectivamente, lo que hace factible tanto la oxidación de guanina como la reducción de cistosina o timina tras la fotoactivación (Tabla 14, Figuras 31 y 32). Los compuestos de la divulgación actúan como fotorreductores para el ADN, respaldado por la observación de que los reductores endógenos tales como glutatión (GSH) y ácido ascórbico (AA) facilitan el fotodaño del ADN mediante los compuestos de la divulgación.
Tabla 14: Potenciales rédox en estado fundamental en estado excitado de 14a
Figure imgf000204_0001
La fotoescisión de ADN producida mediante 14a es mejorada en gran medida mediante reductores endógenos tales como glutatión (GSH). Para concentraciones submicromolares de 14a, GSH 4 mM da como resultado roturas detectables de doble cadena, mientras que el ADN expuesto solo al PDC está intacto en su mayor parte (Figura 33, Calle 1). Para 14a 3 pM, la presencia de GSH da como resultado una degradación total del ADN (Figura 33, Calle 6). Es bien conocido que la concentración de GSH es alta en las células tumorales humanas, disminuyendo los efectos citotóxicos de los agentes alquilantes electrofílicos (tales como cisplatino) y la radiación, y también disminuyendo los efectos de PDT. En el presente documento, los presentes inventores divulgan una familia de agentes PDT que se activan preferentemente mediante GSH.
La capacidad de GSH para facilitar el daño del ADN es de amplio alcance y es válida para compuestos adicionales de la divulgación (por ejemplo, 14c y 16c), y para otros reductores (ascorbato, DTT, NADH, etc.). La Figura 34 (Calles 7-16) ilustra que para 1a, la adición de GSH (0,5-7 mM) no tiene ningún efecto en la fotoescisión del ADN, y la forma predominante de ADN es superenrollada (Forma I). Para 10a, GSH estimula la formación de roturas de ADN de cadena sencilla y doble, y para 14a, GSH estimula la degradación total del ADN. Para los 3 complejos, la calle 17 muestra la cantidad de daño de ADN para pBR322 que resulta con la fotoactivación de PDC 2 |jM en ausencia de GSH. A modo de comparación, la calle 14 muestra el efecto de GSH 6 mM en el fotodaño de ADN por los PDC: (a) no hay efecto sobre la fotoescisión de ADN mediante 1a; (b) GSH facilita la formación de roturas de doble cadena mediante 10a; y (c) GSH facilita la degradación total del ADN mediante 14a. La Figura 35 demuestra la facilitación del fotodaño de ADN mediante 14a para otro reductor, ácido ascórbico (AA). Una comparación entre las calles 13 y 14 muestra claramente que la presencia de AA convierte un fotoescisor de ADN principalmente monocatenario en un degradador de ADN muy potente (se ha de observar el frotis en las Calles 9-13).
Destrucción de células cancerígenas mediante los compuestos de la invención
Los compuestos de la divulgación con baja toxicidad en la oscuridad son capaces de destruir de forma eficaz las células cancerígenas mediante PDT a muy bajo contenido de células ex vivo (es decir, en una célula fuera de un animal). Un PDC ideal debería exhibir efectos de PDT a bajas concentraciones de PDC mientras que tiene una baja toxicidad en la oscuridad, es decir, la muerte celular del PDC sólo sin exposición a la luz. La toxicidad en la oscuridad y los efectos de PDT sobre la muerte celular para los PDC 10A, 14A y 16A se sometieron a ensayo ex vivo en las siguientes líneas celulares: CT26.WT (carcinoma de colon murino), U87 (glioblastoma humano), F98 (glioma de rata). La irradiación se llevó a cabo a 45 J/cm2 (fuente de luz TLC-3000, A = 530 nm, intervalo de luz PS de 4-6 horas) y la viabilidad celular se midió 24 horas después de la irradiación utilizando el ensayo de viabilidad celular Presto Blue. La Figura 39 muestra que ni 10A, 14A ni 16A solos (sin luz) demostraron una muerte celular significativa. Sin embargo, se observó un fuerte efecto fotodinámico (PDC más luz) con 10A, 14A y 16A; un 60-100 % de muerte celular en las tres líneas celulares, dependiendo de la concentración de PDC. El mejor efecto sobre la muerte celular se mostró para 14A y 16A, seguido de 10A.
Eficacia in vivo de los compuestos de la divulgación:
Los compuestos de la divulgación tienen dosis de PDT in vivo eficaces comparables a FOTOFRINA y Ácido Aminolevulínico (ALA) aprobados por la FDA. La dosis tóxica media que causa la muerte en un 50 % de los animales sometidos a ensayo (MTD50) se determinó para los PDC 14A y 14C. MTD50 se identificó por administración de una serie de dosis crecientes y decrecientes de fármaco, comenzando con una concentración 102 inferior en magnitud hasta la MTD50 supuesta de los estudios in vitro. Las MTD50 para los PDC 14A y 14C son las dosis eficaces que se utilizan en otros estudios de PDT. Como se muestra en la figura 40, las dosis eficaces de PDT para 14A y 14C caen dentro del intervalo de FOTOFRINA y ALA, es decir, 36 mg/kg para 14A, 98 mg/kg para 14C, 10 mg/kg para FOTOFRINA y 250 mg/kg para ALA. Nota: la dosis eficaz de protoporfirina IX (PPIX, el metabolito fotoactivo de ALA), es 1/4 de la dosis de administración de ALA.
Potencia ex vivo de los compuestos de la divulgación
Los compuestos de la divulgación son más eficaces en la eliminación de células cancerígenas ex vivo en comparación con ALA. Por ejemplo, 14A es más eficaz en la eliminación de células cancerígenas ex vivo en comparación con ALA. ALA es un PDC aprobado por la FDA que se usa en la actualidad para tratar cánceres de piel, vejiga y cerebro. Como se muestra en la Figura 41, la toxicidad en la oscuridad de 14A (PDC sólo y sin luz) fue débil o insignificante en las tres líneas celulares de cáncer (CT26.WT, U87, F980) que fue comparable al nivel de toxicidad en la oscuridad de ALA en las mismas concentraciones. La eficacia de 14a más luz (fuente de luz TLC-3000, 530 nm, 45 J/cm2) en la eliminación de células también fue mucho mayor en comparación con la eficacia de ALA. 14A dio como resultado una muerte celular de un 100 % a concentraciones muy bajas, mientras que ALA no produjo, o produjo muy poca, muerte celular.
Penetración tisular de los compuestos de la divulgación
Los PDC deben absorber la luz a longitudes de onda más largas con el fin de que penetren de forma eficaz en el tejido. La absorbancia a longitudes de onda más cortas logrará una menor penetración en el tejido y puede conducir a fotosensibilidad de la piel. Para medir la absorbancia de cada PDC, las soluciones de trabajo de PDC se diluyeron con el mismo solvente para lograr una densidad óptica (DO) de 0,2 a 525 nm (6,7 |jM para 14C, 1,2 j M para PPIX). Las densidades ópticas se midieron de 300 nm a 800 nm. Como se muestra en la figura 42, tanto 14C como PPIX tienen una absorción similar y relativamente baja a 525 nm. La irradiación de PDT a longitudes de onda de 525 nm o más, como se ve en los compuestos de la divulgación, está clínicamente justificada, mientras que el uso de longitudes de onda más cortas no está clínicamente justificado.
Fotoestabilidad de los compuestos de la divulgación
Los compuestos de la divulgación exhiben una mayor fotoestabilidad en comparación con PPIX. Un PDC eficaz debe mantener una alta estabilidad fotoquímica, permitiendo una larga vida útil. Para medir la fotoestabilidad, se irradió cada PDC y se midió la DO en las longitudes de onda correspondientes a la absorbancia máxima (423 nm para 14C, 411 nm para PPIX), cada 5 minutos durante 60 minutos de tiempo de irradiación total. La Figura 43 muestra que el PDC 14C es fotoblanqueado en aproximadamente un 50 %. PPIX se sometió a un considerable fotoblanqueo en 60 minutos de irradiación (aproximadamente un 70 %). 14C es, por lo tanto, más fotoestable que PPIX. Los compuestos de la divulgación aumentan el tiempo de supervivencia de ratones portadores de tumores
Los compuestos de la divulgación, ilustrados con TLD1411 (14a) y TLD1433 (14c), pueden ser usados para destruir tumores in vivo. Las curvas de Kaplein-Meier (Figura 44) describen los porcentajes de supervivencia animal para ratones portadores de tumores en función de los días posteriores a la TFD para ratones tratados sólo con luz (onda continua (cw) o pulsada), fotosensibilizador solo (dosis altas o bajas), o luz (cw o pulsada) en combinación con fotosensibilizador (dosis alta o baja). Los resultados demuestran que tanto la concentración del fotosensibilizador como el modo de suministro de luz (cw frente a pulsada) se pueden usar para optimizar PDT en animales vivos. Los mejores resultados en este modelo se obtuvieron con fotosensibilizadores de alta dosis activados mediante una fuente de luz cw.
Los compuestos de la divulgación pueden ser usados para destruir bacterias, particularmente en presencia de luz, un tratamiento conocido como inactivación fotodinámica (PDI) o quimioterapia antimicrobiana fotodinámica (PACT). Los compuestos se pueden usar para esterilización, incluidas las cepas de bacterias resistentes a los antibióticos. En varios casos, se pueden lograr más de 7 log de reducción con la activación de luz (Figuras 45 y 46).
Los compuestos de la divulgación se pueden usar para destruir células a baja tensión de oxígeno como se ilustra en 14a y 14c frente a SA y MRSA. Se pueden mantener más de 7 log de reducción en algunos casos en condiciones de hipoxia. Por lo tanto, estos compuestos pueden servir como fotosensibilizadores tipo 1 (Figuras 45 y 46).
PROCESOS
La presente solicitud desvela un proceso para la preparación de los compuestos fotodinámicos de la presente invención.
Los compuestos de las presentes enseñanzas pueden ser preparados de acuerdo con los procedimientos que se describen en el presente documento, a partir de materiales de partida disponibles en el mercado, compuestos conocidos en la bibliografía, o compuestos intermedios preparados con facilidad, empleando métodos sintéticos estándar y procedimientos conocidos por los expertos en la materia. Los métodos y procedimientos sintéticos estándar para la preparación de moléculas orgánicas y complejos de coordinación y transformaciones y manipulaciones de grupos funcionales se pueden obtener fácilmente en la bibliografía científica pertinente o en los libros de texto estándar en el campo. Se ha de entender que cuando se dan condiciones de proceso habituales o preferentes (es decir, temperatura de la reacción, tiempos, proporciones molares de reactivos, disolventes, presiones, etc.), también se pueden usar otras condiciones de proceso a menos que se indique de otro modo. Las condiciones de reacción óptimas pueden variar con los particulares reactivos o disolventes usados, pero tales condiciones se pueden determinar por parte del experto en la materia mediante procedimientos de optimización de rutina. Los expertos en la materia de la síntesis orgánica e inorgánica reconocerán que la naturaleza y el orden de las etapas sintéticas presentadas pueden variar con el fin de optimizar la formación de los compuestos que se describen en este presente documento.
Los procesos que se describen en el presente documento se pueden monitorizar de acuerdo con cualquier método adecuado conocido en la técnica. Por ejemplo, la formación del producto puede ser monitorizado por medios espectroscópicos, tal como espectroscopía de resonancia magnética nuclear (por ejemplo, 1H o 13C), espectroscopía de infrarrojos, espectrofotometría (por ejemplo, UV-visible), espectrometría de masas, o por cromatografía tal como cromatografía líquida de alta presión (HPLC), cromatografía de gases (GC), cromatografía de permeación en gel (GPC), o cromatografía en capa fina (TLC).
La preparación de los compuestos puede implicar protección y desprotección de varios grupos químicos. Un experto en la materia puede determinar fácilmente la necesidad de protección y desprotección y la selección de grupos protectores apropiados. La química de los grupos protectores se puede encontrar, por ejemplo, en Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed. (Wiley & Sons, 1991), cuya divulgación completa se incorpora por referencia en el presente documento para todos los fines.
Las reacciones o los procesos que se describen en el presente documento se pueden llevar a cabo en disolventes adecuados que pueden ser seleccionados fácilmente por un experto en la materia de síntesis orgánica e inorgánica. Los disolventes adecuados normalmente son sustancialmente no reactivos con los reactantes, compuestos intermedios, y/o productos a las temperaturas a las cuales se llevan a cabo las reacciones, es decir, temperaturas que pueden variar desde la temperatura de congelación del polímero hasta la temperatura de ebullición del disolvente. Una reacción dada se puede llevar a cabo en un disolvente o una mezcla de más de un disolvente. Dependiendo de la etapa de reacción en particular, se pueden seleccionar disolventes adecuados para una etapa de reacción particular.
Los compuestos de estas enseñanzas pueden ser preparados mediante métodos conocidos en la técnica de la química orgánica e inorgánica. Los reactivos usados en la preparación de los compuestos de estas enseñanzas se pueden obtener en el mercado o se pueden preparar mediante procedimientos convencionales que se describen en la bibliografía. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención se pueden preparar de acuerdo con el método ilustrado en los Esquemas Sintéticos Generales:
ESQUEMAS SINTÉTICOS GENERALES PARA LA PREPARACIÓN DE COMPUESTOS
Los reactivos usados en la preparación de los compuestos de la presente invención se pueden obtener en el mercado o se pueden preparar mediante procedimientos convencionales que se describen en la bibliografía. De acuerdo con la presente invención, los compuestos del género se pueden producir mediante uno de los siguientes esquemas de reacción.
Los compuestos de fórmula (I) pueden ser preparados de acuerdo con el proceso reseñado en los siguientes esquemas.
Figure imgf000207_0001
Por lo tanto, un compuesto sustituido adecuadamente de la fórmula (XI), un compuesto conocido o un compuesto preparado mediante métodos conocidos, se hace reaccionar con un compuesto sustituido adecuadamente de la fórmula (XII) en presencia de una sal de amonio tal como acetato amónico, formiato amónico, cloruro de amonio, bromuro de amonio, sulfato de amonio y similares en un disolvente tal como ácido acético, ácido fórmico, ácido propiónico y similares, opcionalmente en presencia de metanol, etanol, N,N-dimetilformamida y similares, opcionalmente calentado, opcionalmente calentado con irradiación de microondas, para proporcionar un compuesto de la fórmula (XIII). Un compuesto de la fórmula (XIII) a continuación se hizo reaccionar con un compuesto de la fórmula (XIV) en un disolvente tal como metanol, etanol, isopropanol, etilenglicol, glicerol, agua, 1,4-dioxano, dimetil formamida, mezclas de los disolventes que se han mencionado anteriormente, y similares, opcionalmente calentado, opcionalmente calentado con irradiación de microondas, para proporcionar un compuesto de la fórmula (II). Los compuestos de la fórmula (II) pueden ser convertidos en formas de sal alternativas mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia.
Los compuestos de fórmula (III) pueden ser preparados de acuerdo con el proceso que se describe en el Esquema 2.
Figure imgf000208_0001
Por lo tanto, un compuesto sustituido adecuadamente de la fórmula (XI) se hace reaccionar con un compuesto de la fórmula (XV) en un disolvente tal como metanol, etanol, isopropanol, etilenglicol, glicerol, agua, 1,4-dioxano, dimetil formamida, mezclas de los disolventes que se han mencionado anteriormente, y similares, opcionalmente calentado, opcionalmente calentado con irradiación de microondas, para proporcionar un compuesto de la fórmula (III). Los compuestos de la fórmula (III) pueden ser convertidos en formas de sal alternativas mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia.
Los compuestos de fórmula (IV) pueden ser preparados de acuerdo con el proceso que se describe en el Esquema 3.
Figure imgf000208_0002
Por lo tanto, un compuesto sustituido adecuadamente de la fórmula (XI) se hace reaccionar con un compuesto de la fórmula (XVI) en un disolvente tal como metanol, etanol, isopropanol, etilenglicol, glicerol, agua, 1,4-dioxano, dimetil- formamida, mezclas de los disolventes que se han mencionado anteriormente, y similares, opcionalmente calentado, opcionalmente calentado con irradiación de microondas, para proporcionar un compuesto de la fórmula (IV). Los compuestos de la fórmula (IV) pueden ser convertidos en formas de sal alternativas mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia.
Los compuestos de fórmula (V) pueden ser preparados de acuerdo con el proceso descrito en el Esquema 4.
Figure imgf000209_0001
Por lo tanto, un compuesto sustituido adecuadamente de la fórmula (XI), un compuesto conocido o un compuesto preparado mediante métodos conocidos, se hace reaccionar con un compuesto sustituido adecuadamente de la fórmula (XVI) en presencia de una sal de amonio tal como acetato amónico, formiato amónico, cloruro de amonio, bromuro de amonio, sulfato de amonio y similares en un disolvente tal como ácido acético, ácido fórmico, ácido, ácido propiónico y similares, opcionalmente en presencia de metanol, etanol, N, N-dimetilformamida y similares, opcionalmente calentado, opcionalmente calentado con irradiación de microondas, para proporcionar un compuesto de la fórmula (XVII). Un compuesto de la fórmula (XVII) a continuación se hizo reaccionar con un compuesto de la fórmula (XVIII) en un disolvente tal como metanol, etanol, isopropanol etilenglicol, glicerol, agua, 1,4-dioxano y similares, opcionalmente calentado, opcionalmente calentado con irradiación de microondas, para proporcionar un compuesto de la fórmula (V). Los compuestos de la fórmula (V) pueden ser convertidos en formas de sal alternativas mediante métodos convencionales conocidos por los expertos en la materia.
Los compuestos de la fórmula (II) pueden ser preparados de acuerdo con el proceso descrito en el esquema 5.
Figure imgf000209_0002
Por no tanto, un compuesto de la fórmula (XIVa) es reaccionado con un compuesto de la fórmula (XVa) en un disolvente tal como metanol, etanol, isopropanol, etilenglicol, glicerol, agua, 1,4-dioxano, dimetil formamida, mezclas de los disolventes que se han mencionado anteriormente, y similares, se calentó opcionalmente calentado opcionalmente calentado con irradiación de microondas, opcionalmente en presencia de un ácido tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, y similares para proporcionar un compuesto de la fórmula (XVIa). Un compuesto de la fórmula (XVIa) se hace reaccionar con un compuesto de la fórmula (XVIIa) en un disolvente tal como metanol, etanol, isopropanol, etilenglicol, glicerol, agua, 1,4-dioxano, dimetil formamida, mezclas de los disolventes que se han mencionado anteriormente, y similares, opcionalmente calentado, opcionalmente en presencia de una base tal como trietilamina, diisopropiletilamina, piridina, y similares, opcionalmente calentado con irradiación de microondas, opcionalmente en una atmósfera de argón, opcionalmente en una atmósfera de nitrógeno para proporcionar un compuesto de la fórmula (XVIIIa). Un compuesto de la fórmula (XVIIIa) se hace reaccionar con un compuesto de la fórmula (XIII) en un disolvente tal como metanol, etanol, isopropanol, etilenglicol, glicerol, agua, 1,4-dioxano y similares, opcionalmente calentado, opcionalmente calentado con irradiación de microondas, opcionalmente en una atmósfera de argón, opcionalmente en una atmósfera de nitrógeno, para proporcionar un compuesto de la fórmula (II).
La invención se ilustrará con más detalle con referencia a los siguientes Ejemplos, pero debe entenderse que no se considera que la presente invención se limite a esto.
Los Ejemplos que se proporcionan a continuación proporcionan métodos representativos para la preparación de compuestos a modo de ejemplo de la presente invención. El experto en la materia sabrá cómo sustituir los reactivos apropiados, materiales de partida y métodos de purificación conocidos por los expertos en la materia, con el fin de preparar los compuestos de la presente invención.
Los espectros de RMN 1H se obtuvieron en un aparato de RMN Bruker Avance 300-MHz. Los datos de los espectros de masas de alta y baja resolución se determinaron con un instrumento Bruker Daltonics micrOTOF.
EJEMPLOS
Figure imgf000210_0001
Preparación de 14L: 10-Fenantrolina-5,6-diona (166,6 mg, 0,800 mmol), acetato amónico (616 mg, 8,00 mmol) y 5-formil-2,2':5',2"-tertiofeno (221,12, 0,800 mmol) se combinaron con ácido acético glacial (4,0 ml) en una cámara de reacción de microondas y se hizo reaccionar con 300 W a 180 °C durante 10 minutos. La solución cambió de un color amarillo claro a un color rojo oscuro y se dejó enfriar a temperatura ambiente. La solución se neutralizó mediante adición gota a gota de NH4OH acuoso (6 ml) hasta que el producto precipitó en forma de un sólido de color amarillo/marrón. El sólido se recogió usando un filtro de frita de vidrio sinterizado y se lavó con H2O (15 ml). El producto se secó al vacío para dar un polvo de color tostado. (256 mg, 69 %). Rf = (H2O al 2 %, cHcb al 43 %, Acetona al 25 %, MeOH al 30 % NH4OH al 1 %). RMN 1H (DMSO-de) 7,14 (dd; 1H; J = 4,37 Hz), 7,33-7,43 (m; 4H), 7,55 (m; 1H), 7,75-7,79 (m; 3H), 8,82 (d; 2H; J = 8,01 Hz), 8,97 (d; 2H; J = 3,00 Hz).
Figure imgf000210_0002
Preparación de 14a: Ru(2,2'-bipiridina)2Cl2-2H2O (156,1 mg, 0,300 mmol) y 14L (140,0 mg, 0,300 mmol) y etanol al 100 % (6,0 ml) se combinaron en un tubo de microondas y se purgó en atmósfera de argón durante 10 minutos introduciendo argón a través de una aguja en la tapa del tubo. La tapa se cambió por una nueva antes de su colocación en el microondas. La solución se hizo reaccionar con 300 W a 180 °C durante 10 minutos. La solución resultante tenía un color rojo oscuro, profundo. Se añadió KPF6 saturado gota a gota a la solución acuosa hasta que no precipitó producto adicional (2 - 4 ml). El producto en bruto se aisló por filtración a través de un filtro de frita de vidrio sinterizado proporcionando un sólido de color rojo brillante/naranja (307,8 mg, 88 %). La purificación se llevó a cabo en una columna de sílice, eluyendo con una solución de H2O al 10 %:MeCN que contenía KNO3 al 2,5 %, y la mancha de color rojo principal se recogió (Rf = 0,46). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y a continuación se secaron al vacío para dar el complejo de NO3- correspondiente y exceso de KNO3. Para retirar la sal no deseada, el producto se disolvió en H2O con sonicación. Se añadió KPF6 saturado (3 - 4 ml), y el producto se retiró de la solución por precipitación. El complejo de PF6- deseado se extrajo usando CH2Cl2 (3 x 75 ml). La fase orgánica se separó, se concentró a presión reducida, y se secó al vacío para dar el producto puro final en forma de un sólido de color rojo-naranja (169 mg, 48 %). Rf = 0,41 (H2O al 10 %:MeCN KNO3 al 2,5 %). RMN 1H (CD3CN): 8,65 (d; 2H; J = 7,89 Hz), 8,51-8,55 (m; 4H), 8,11­ 7,96 (m; 6H), 7,85 (d; 2H; J = 5,49 Hz), 7,72 (d; 1H; J = 3,81 Hz), 7,61-7,67 (m; 4H), 7,46 (t; 2H; J = 6,93 Hz), 7,37 (d; 1H; J = 5,10 Hz), 7,06-7,30 (m; 7H). MS (ESI+) m/z: 440,0 [M-2PF6]2+, 879,1 [M-2PF6-1H]+. HRMS (ESI+) m/z para C45H30NaRuS3; calcd 440,0399; encontrado 440,0382.
El complejo de PF6- se disolvió en una solución a 1:1 de MeCN/MeOH y se convirtió en su correspondiente sal de C1- en resina de intercambio iónico Amberlite IRA-410 (30 cm x 1,5 cm, 30 g de resina) eluyendo con MeOH. Anál. Calc. C45H30C12NsRuS3-4,065(H2O): C, 52,77 %; H, 3,75 %; N,
Figure imgf000211_0001
Preparación de 14C: Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2Cl2-2H2O (60,2 mg, 0,104 mmol) y 14L (48,5 mg, 0,104 mmol) y etanol al 100 % (2,0 ml) se combinaron en un tubo de microondas y se purgó en atmósfera de argón durante 15 minutos introduciendo argón a través de una aguja en la tapa del tubo. La tapa se cambió por una nueva antes de su colocación en el microondas. La solución se hizo reaccionar con 300 W a 180 °C durante 10 minutos. La solución resultante tenía un color rojo oscuro, profundo. Se añadió KPF6 saturado gota a gota a la solución acuosa hasta que no precipitó producto adicional (2 - 3 ml). El producto en bruto se aisló por filtración a través de un filtro de frita de vidrio sinterizado proporcionando un sólido de color rojo/marrón (112,6 mg, 88 %). La purificación se llevó a cabo en una columna de sílice, eluyendo con una solución de H2O al 10 %:MeCN que contenía KNO3 al 2,5 %, y la mancha de color rojo principal se recogió (Rf = 0,54). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y a continuación se secaron al vacío para dar el complejo de NO3' correspondiente y exceso de KNO3. Para retirar la sal no deseada, el producto se disolvió en H2O con sonicación. Se añadió KPF6 saturado (3 - 4 mL), y el producto se retiró de la solución por precipitación. El complejo de PF6' deseado se extrajo usando CH2O 2 (3 x 50 ml). La capa orgánica se separó, se concentró a presión reducida, y se secó al vacío para dar el producto puro final en forma de un sólido de color rojo-naranja (76,0 mg, 59 %). Rf = 0,54 (H2O al 10 %:MeCN KNO3 al 2,5 %). RMN 1H (CD3CN): 8,87 (d; 2H; J = 6,60 Hz), 8,38 (d; 4H; J = 10,1 Hz), 8,02 (m; 2H; J = 4,50 Hz), 7,84 (d; 2H; J = 4,02 Hz), 7,74 (a; 2H), 7,67 (d; 2H; J = 5,67 Hz), 7,53 (d; 1H; J = 6,42 Hz), 7,42 (d; 2H; J = 5,67 Hz), 7,25-7,31 (m; 6H), 7,07-7,14 (m; 3H). MS (ESI+) m/z: 468,1 [M-2PF6]2+, 1081,2 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C49H38NsRuS3; calcd 468,0707; encontrado 468,0697.
El complejo de PF6' se disolvió en una solución a 1:1 de MeCN/MeOH y se convirtió en su sal de Clcorrespondiente sobre resina de intercambio iónico Amberlite IRA-410 (30 cm x 1,5 cm, 30 g de resina) eluyendo con MeOH.
Figure imgf000212_0001
Preparación de 16x: éster de pinicol del ácido 2,2'-5,2"-tertiofeno-5-borónico (236,1 mg, 0,780 mmol), 5-bromo-2-tiofeno carboxaldehído (57,4 uL, 0,59 mmol) y Pd(PPh3)4 (55 mg) se combinaron en un tubo de microondas purgado en atmósfera de argón. El tubo de microondas se purgó de nuevo en atmósfera de argón y a continuación se añadió DME (5,66 mL) y solución acuosa de Na2CO32 M (0,4 mL) por separado mediante una jeringa. La solución se hizo reaccionar a 200 W y 175 °C durante 1 hora. La solución de color verde se filtró en una frita fina para retirar el catalizador y se lavó con cantidades pequeñas de acetato de etilo. El filtrado se diluyó con EtOAc adicional, se transfirió un separador de 125 ml, y se lavó con NaCl acuoso saturado (3 x 50 mL). La capa orgánica se concentró a presión reducida, secó al vacío para dar el producto en bruto (130,9 mg, 62 %). La purificación se llevó a cabo en una columna de sílice, eluyendo con DCM:hexanos a 1:1. Una mancha de movimiento lento que presentaba una tinción positiva para aldehido por Dinitrofenilhidrazina se recogió, se concentró a presión reducida, y se secó al vacío para dar el producto puro (14,1 mg, 6,7 %). Rf = 0,20 (DCM:hexanos a 1:1). RMN 1H (CDCla) 9,86 (s; 1H), 7,67 (d; 1H; J = 3,96 Hz), 7,21-7,29 (m; 3H), 7,20 (d; 1H; J = 3,54 Hz), 7,11-7,14 (m; 3H), 7,04 (t; 1H; J = 4,89 Hz).
Figure imgf000212_0002
Preparación de 16L: 1,10-Fenantrolina-5,6-diona (41,6 mg, 0,200 mmol), acetato amónico (154 mg, 2,00 mmol) y 16x (71,7 mg, 0,200 mmol) se combinaron con ácido acético glacial (1,0 ml) en una cámara de reacción de microondas y se hizo reaccionar a 300 W a 180 °C durante 10 minutos. La solución se dejó enfriar a temperatura ambiente seguido de neutralización mediante la adición gota a gota de NH4OH acuoso (2-4 mL) hasta que el producto precipitó en forma de un sólido de color marrón. El sólido se recogió usando un filtro de frita de vidrio sinterizado y se lavó con H2O (15 mL). El producto se secó al vacío para dar el producto en bruto en forma de un polvo de color marrón (105,9 mg, 96 %). La purificación se llevó a cabo mediante recristalización en MeOH caliente para dar el producto puro (31,1 mg, 28 %). RMN 1H (DMSO-d6) 9,04 (a; 2H), 8,84 (d; 2H; J = 7,35 Hz), 7,86 (br; 2H), 7,33-7,57 (m; 8H); 7,11 (br; 1H). MS (ESI+) m/z: 549,0 [M+1H]+. HRMS (ESI+) m/z para C29H17N4S4; calcd 549,0331; encontrado 549,0307.
Figure imgf000213_0001
Preparación de 16a: Ru(2,2'-bipiridina)2Cl2-2H2O (81,2 mg, 0,156 mmol) y 16L (85,7 mg, 0,156 mmol) y etanol al 100 % (3,0 ml) se combinaron en un tubo de microondas y se purgó en atmósfera de argón durante 10 minutos introduciendo argón a través de una aguja en la tapa del tubo. La tapa se cambió por una nueva antes de su colocación en el microondas. La solución se hizo reaccionar con 300 W a 180°C durante 10 minutos. La solución resultante tenía un color rojo oscuro, profundo. Se añadió KPF6 saturado gota a gota a la solución acuosa hasta que no precipitó producto adicional (2 - 4 mL). El producto en bruto se aisló por filtración a través de un filtro de frita de vidrio sinterizado proporcionando un sólido de color rojo oscuro/naranja (155,2 mg, 64 %). La purificación se llevó a cabo en una columna de sílice, eluyendo con una solución de H2O al 7 %:MeCN que contenía KNO3 al 2,5 %, y la mancha de color rojo principal se recogió (Rf = 0,46). Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y a continuación se secaron al vacío para dar para dar el complejo de NO3- correspondiente y exceso de KNO3. Para retirar la sal no deseada, el producto se disolvió en H2O con sonicación. Se añadió KPF6 saturado (3 - 4 ml), y el producto se retiró de la solución por precipitación. El complejo de PF6- deseado se extrajo usando CH2O 2 (3 x 75 ml). La fase orgánica se separó, se concentró a presión reducida, y se secó al vacío para dar el producto en forma de un sólido de color rojo-naranja (169 mg, 48 %). El complejo de PF6-se disolvió en una solución a 1:1 de MeCN/MeOH y se convirtió en su sal de Cl- correspondiente sobre resina de intercambio iónico Amberlite IRA-410 (30 cm x 1,5 cm, 30 g de resina) eluyendo con MeOH. El producto se purificó adicionalmente sobre Sephadex LH-50 en metanol y la mancha de color rojo principal se recogió. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y a continuación se secaron al vacío para dar el producto final (12,7 mg, 6,5 %) Rf = 0,35 (H2O al 10 %:MeCN KNO3 al 2,5 %). RMN 1H (CD3CN): 8,91 (d; 2H; J = 7,32 Hz), 8,50 (t; 4H; J = 7,92 Hz), 8,08 (t; 2H; J = 7,74 Hz), 7,99 (br; 4H), 7,84 (br; 3H), 7,74 (br; 4H), 7,60 (br; 2H), 7,44 (t; 2H; J = 5,55 Hz), 7,37 (br; 1H) 7,08-7,27 (m; 9H). MS (ESI+) m/z: 498,1 [M-2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C49H32NsRuS4; calcd 481,0333; encontrado 481,0341.
Figure imgf000214_0001
Preparación de 16c: Ru(dmb)2Cl2-2H2Ü (88,93 mg, 0,156 mmol) y 16L (85,7 mg, 0,156 mmol) y etanol al 100 % (3,0 ml) se combinaron en un tubo de microondas y se purgó en atmósfera de argón durante 10 minutos introduciendo argón a través de una aguja en la tapa del tubo. La tapa se cambió por una nueva antes de su colocación en el microondas. La solución se hizo reaccionar con 300 W a 180°C durante 10 minutos. La solución resultante tenía un color rojo oscuro, profundo. Se añadió KPF6 saturado gota a gota a la solución acuosa hasta que no precipitó producto adicional (1-2 mL). El producto en bruto se aisló por filtración a través de un filtro de frita de vidrio sinterizado proporcionando un producto de color rojo oscuro (156,7 mg, 92 %). La purificación se llevó a cabo en una columna de sílice, eluyendo con una solución de H2O al 7 %:MeCN que contenía KNO3 al 2,5 %, y la mancha de color rojo principal se recogió. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y a continuación se secaron al vacío para dar el complejo de NO3- correspondiente y exceso de KNO3. Para retirar la sal no deseada, el producto se disolvió en H2O con sonicación. Se añadió KPF6 saturado (3 - 4 mL), y el producto se retiró de la solución por precipitación. El complejo de PF6- deseado se extrajo usando CH2O 2 (3 x 75 mL). La capa orgánica se separó, se concentró a presión reducida, y se secó al vacío para dar el producto en forma de un sólido de color rojo (69,9 mg, 41 %). El complejo de PF6- se disolvió en una solución a 1:1 de MeCN/MeOH y se convirtió en su sal de Cl- correspondiente sobre resina de intercambio iónico Amberlite IRA-410 (30 cm x 1,5 cm, 30 g de resina) eluyendo con MeOH. El producto se purificó adicionalmente sobre Sephadex LH-50 en metanol y la mancha de color rojo principal se recogió. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y a continuación se secaron al vacío para dar el producto final (23,0 mg, 13 %) Rf = 0,33 (H2O al 10 %:MeCN KNO3 al 2,5 %). RMN 1H (CD3CN): 8,92 (br; 2H), 8,34 (s; 4H), 7,97 (a; 2H), 7,87 (br; 1H), 7,62-7,65 (m; 4H), 6,92-7,42 (m; 14H), 2,54, (s; 6H), 2,46 (s; 6H). MS (ESI+) m/z: 509,1 [M-2PF6]2+, 1163,1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C53H40NaRuS4; calcd 509,0646; encontrado 509,0663.
Figure imgf000214_0002
Preparación de 2L: 1,10-Fenantrolina-5,6-diona (234,1 mg, 1,11 mmol), acetato amónico (1,77 g, 23,0 mmol) y 2,5-tiofeno dicarboxaldehído (77,9 mg, 0,556 mmol) se combinaron en ácido acético glacial (20 mL) y se calentó a reflujo en aire a 135°C durante 6 horas. La solución cambió de un color amarillo claro a un color rojo oscuro y el producto precipitado fue recogido usando un filtro de frita de vidrio sinterizado medio y se lavó con H2O (10 mL). El producto se secó al vacío para dar el producto puro final en forma de un polvo de color naranja claro. No fue necesaria purificación. (90,7 mg, 31,3 %). Rf = característico a 0,60 (H2O al 2 %, CHCl3 al 43 %, Acetona al 25 %, MeOH al 30 % NH4OH al 1 %).
RMN 1H (300 MHz) [(CÜ3)2SO]: 9,07 (d; 4H; J = 3,03 Hz), 8,90 (d; 4H; J = 8,22 Hz), 8,04 (s; 2H), 7,86­ 7,90 (a; 4H). MS (ESI+) m/z: 521,1 [M+H]+. HRMS (ESI+) m/z para C30H17N8S; calcd 521,1291;
Figure imgf000215_0001
Preparación de 3L:1,10-Fenantrolina-5,6-diona (18,9 mg, 0,0900 mmol), acetato amónico (138,7 mg, 1,80 mmol) y 2,2'-bitiofeno-5,5'-dicarbaldehído (10 mg, 0,0450 mmol) se combinaron en ácido acético glacial (5 ml) y se calentó a reflujo en aire a 135°C durante 6 horas. La solución cambió de un color amarillo claro a un color rojo oscuro y el producto precipitó en forma de un polvo precipitado de color naranja claro. La reacción se enfrió a temperatura ambiente. La solución se neutralizó mediante adición gota a gota de NH4OH acuoso (5 mL) hasta que más producto deseado acabó precipitando en forma de un sólido de color naranja. El precipitado de color naranja se recogió usando un filtro de frita de vidrio sinterizado y se lavó con H2O (10 ml). El producto se secó al vacío para dar un polvo de color naranja el cual mostraba el producto y contaminante por RMN. (12,6 mg, 47 %). También se llevó a cabo una síntesis de microondas alternativa implicaba a 1,10-Fenantrolina-5,6-diona (18,9 mg, 0,0900 mmol), acetato amónico (138,7 mg, 1,80 mmol) y 2,2'-bitiofeno-5,5'-dicarbaldehído (10 mg, 0,0450 mmol) combinados en ácido acético glacial (1,0 ml) en una cámara de reacción de microondas y se hizo reaccionar con 300 W a 180°C durante 10 minutos. La solución cambió de un color amarillo claro a un color rojo oscuro y se dejó enfriar a temperatura ambiente. Se observó un precipitado de color naranja del producto. La solución se neutralizó mediante adición gota a gota de NH4OH acuoso (1 ml) hasta que el producto más deseado acabó precipitando en forma de un sólido de color naranja. El sólido se recogió usando un filtro de frita de vidrio sinterizado y se lavó con H2O (10 mL). El producto se secó al vacío para dar un polvo de color naranja que mostraba el producto y contaminante por RMN. (25,3 mg, 93 %) Rf = tvaza a 0,68 (H2O al 2 %, CHCla al 43 %, Acetona al 25 %, MeOH al 30 % NH4OH al 1 %). RMN 1H (300 MHz) [(CD3)2SO]: 9,02 (br), 8,85 (br; 4H), 7,84 (m; 2H), 7,70 (br).
Figure imgf000215_0002
Preparación de 2a: Ru(bpy)2Ch-2H2O (60 mg, 0,115 mmol) y 2L (30 mg, 0,0576 mmol) se combinaron en glicerol (3 ml) y se calentaron a reflujo en atmósfera de argón durante 16 horas a 100°C. En primer lugar se añadió el glicerol a un matraz de reacción seco el cual estaba unido a una línea de Schlenk. El matraz de reacción se evacuó hasta que se produjo burbujeo en el glicerol y a continuación se cargó con argón seco. La evacuación y la purga con argón se repitieron dos veces más. Ru(bpy)2Cl2-2 H2O se añadió al glicerol y el matraz de reacción se evacuó y se cargó argón tres veces más. El glicerol resultante y la solución de Ru(bpy)2CL-2H2O se calentó a 100°C durante 30 minutos. Después de calentar el compuesto 2L se añadió a la solución y el matraz de reacción se evacuó y se cargó con argón tres veces más. La solución de color púrpura oscuro se puso en atmósfera de argón usando un globo cargado y se hizo reaccionar durante 16 horas a 100°C. La solución resultante tenía un color rojo oscuro profundo/púrpura y se enfrió a temperatura ambiente. Se añadieron 12 mL de H2O a la solución y se filtró sobre una frita media de vidrio sinterizado. Se añadió KPF6 saturado gota a gota a la solución acuosa hasta que no precipitó producto adicional (1- 2 mL). El producto en bruto se aisló por filtración a través de un filtro de frita de vidrio sinterizado proporcionando un sólido de color rojo oscuro/marrón (106,1 mg, 0,0550 mmol). La purificación se llevó a cabo en una columna de sílice, eluyendo con una solución de H2O al 20 %:MeCN que contenía KNO3 al 2,5 %, y la mancha de color rojo principal se recogió. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y a continuación se secaron al vacío para dar el producto y un exceso de KNO3. Para retirar la sal no deseada, el producto se disolvió en H2O con sonicación. El producto no se disolvió en H2O, se añadió una cantidad de H2O (aproximadamente 50 - 100 ml) para asegurar que el exceso de KNO3 se podría disolver en la solución seguido de la adición de cantidades abundantes de KPF6 saturado (10 - 12 mL). El complejo de PF6-deseado se extrajo usando CH2O 2 (3 x 50-150 ml). La capa orgánica se separó, se concentró a presión reducida, y se secó al vacío para dar el producto puro final en forma de un sólido de color rojonaranja (38,8 mg, 35 %). Rf = 0,19 (H2O al 20 %:MeCN KNO3 al 2,5 %). RMN 1H (300 MHz) [(CD3)2SO]: 9,02-9,10 (dd; 4H; J = 9,06 Hz), 8,88 (t; 8H; J = 8,52 Hz), 8,24 (t; 4H; J = 6,60 Hz), 8,09­ 8,15 (m; 10H), 7,97 (br; 4H), 7,85 (d; 4H; J = 4,14 Hz), 7,61 (m; 8H), 7,36 (t; 4H; J = 4,68 Hz). RMN 13C [(CD3CN] 158,0, 157,8, 152,8, 151,3, 148,3, 146,7, 138,7, 138,2, 135,6, 135,6, 131,2, 129,0, 128,3, 126,8, 125,1, 122,1. Anál. Calc C70H4sF24N16P4Ru2S-6(H2O)-0,5(C3H6O): C, 41,60 %; H, 3,08 %; N, 10,86 %, Encontrado: C, 41,74 %; H, 2,72 %; N, 10,16 %.
El complejo de PF6' se disolvió en una solución a 1:1 de MeCN/MeOH y se convirtió en su sal de Clcorrespondiente sobre resina de intercambio iónico Amberlite IRA-410 (30 cm x 1,5 cm, 30 g de resina) eluyendo con MeOH. MS (ESI+) m/z: 673,1 [M-4Cl-2H]2+, 449,1 [M-4Cl-H]3+. HRMS (ESI+) m/z para C70H46N16RU2S; caled 673,0944; encontrado 673,0945.
Figure imgf000216_0001
Preparación de 3a: Ru(bpy)2Cte-2H2O (50,0 mg, 0,0960 mmol) y 3L (30,0 mg, 0,0500 mmol) se combinaron en glicerol (3 ml) y se calentaron a reflujo en atmósfera de argón durante 16 horas a 100°C. En primer lugar se añadió el glicerol a un matraz de reacción seco el cual estaba unido a una línea de Schlenk. El matraz de reacción se evacuó hasta que se produjo burbujeo en el glicerol y a continuación se cargó con argón seco. La evacuación y la purga con argón se repitieron dos veces más. Ru(bpy)2Cl2-2 H2O se añadió al glicerol y el matraz de reacción se evacuó y se cargó argón tres veces más. El glicerol resultante y la solución de Ru(bpy)2Ch-2H2O se calentó a 100°C durante 30 minutos. Después de calentar el glicerol el compuesto 3L se añadió a la solución y el matraz de reacción se evacuó y se cargó con argón tres veces más. La solución de color púrpura oscuro se puso en atmósfera de argón usando un globo cargado y se hizo reaccionar durante 16 horas a 100°C. La solución resultante tenía un color rojo oscuro profundo/púrpura y se enfrió a temperatura ambiente. Se añadieron 12 mL de H2O a la solución y se filtró sobre una frita media de vidrio sinterizado. Se añadió KPF6 saturado gota a gota al filtrado hasta que el producto se retiró completamente de la solución por precipitación. El producto en bruto se obtuvo a través de filtración y se lavó con H2O (5 ml). El producto crudo tenía un color rojo oscuro/negro (78,1 mg, 0,0389 mmol). La purificación se llevó a cabo en una columna de sílice, eluyendo con una solución de H2O al 20 %:MeCN que contenía KNO3 al 2,5 %, y la mancha de color rojo principal se recogió. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se evaporaron a presión reducida, y a continuación se secaron al vacío para dar el producto y un exceso de KNO3. Para retirar la sal no deseada, el producto se intentó disolver en H2O con sonicación. El producto no se disolvió en H2O y una cantidad de H2O (aproximadamente 50 ml) se añadió para asegurar que el exceso de KNO3 se podría disolver en la solución seguido de la adición de cantidades abundantes de KPF6 (10 - 12 mL). El complejo de PF6' deseado se extrajo usando CH2O 2 (3 x 50-150 mL). La capa orgánica se separó, se concentró a presión reducida, y se secó al vacío para dar el producto puro final en forma de un sólido de color rojo-naranja (19,4 mg, 19 %). Rf = 0,27 (H2O al 20 %:MeCN KNO3 al 2,5 %). RMN 1H (300 MHz) [(CDâ SO]: 9,04 (dd; 4H; J = 11,25 Hz), 8,87 (t; 8H; J = 10,41 Hz), 8,23 (t; 4H; J = 6,57 Hz), 8,07-8,15 (m; 8H), 7,93-8,03 (m; 6H), 7,84 (br; 4H), 7,74 (br; 2H), 7,60 (br; 8H), 7,36 (t; 4H; J = 6,30 Hz). Anál. Calc. C74H50F24N16P4Ru2S2-8(H2O)-2(C6H14): C, 44,41 %; H, 4,07 %; N, 9,64 %, Encontrado: C, 44,76 %; H, 3,61 %; N, 8,52 %. MS (ESI+) m/z: 714,1 [M-4PF6-2H]2+, 476,4 [M-4PF6-1H]3+. HRMS (ESI+) m/z para C74H49N16Ru2S2; calcd 476,3946; encontrado 476,3941. El complejo de PF6' se disolvió en una solución a 1:1 de MeCN/MeOH y se convirtió en su sal de Cl- correspondiente sobre resina de intercambio iónico Amberlite IRA-410 (30 cm x 1,5 cm, 30 g de resina) eluyendo con MeOH.
Figure imgf000217_0001
Preparación de 2b: El compuesto 2b se preparó mediante el mismo procedimiento que 2a usando Ru(phen)2Cl2. RMN 1H (300 MHz) [(CD3CN]: 9,01 (d; 2H; J = 10,17 Hz), 8,86 (d; 2H; J = 7,68 Hz), 8,63 (d; 8H; J = 7,98 Hz), 8,29 (s; 8H;), 8,13 (br; 4H), 8,00-8,04 (m; 10H), 7,66 (m; 12H). Anál. Calc. C37H26F12NaP2RuS-0,5(H2O): C, 43,79 %; H, 2,68 %; N, 11,04 %, Encontrado: C, 44,66 %; H, 2,98 %; N, 10,16 %. El complejo de PF6' se disolvió en una solución a 1:1 de MeCN/MeOH y se convirtió en su sal de Cl- correspondiente sobre resina de intercambio iónico Amberlite IRA-410 (30 cm x 1,5 cm, 30 g de resina) eluyendo MeOH. MS (ESI+) m/z: 721,1 [M-4Cl-2H]2+, 481,1 [M-4Cl-H]3+. HRMS (ESI+) m/z para C78H46N16RU2S; calcd 721,0944; encontrado 721,0971.
Figure imgf000217_0002
Preparación de 3b: El compuesto 3b se preparó con el mismo procedimiento que 2a usando Ru(phen)2Cl2. RMN 1H (300 MHz) [CD3CN]: 8,94 (d; 4H; J = 20,31 Hz), 8,63 (d; 8H; J = 7,95 Hz), 8,28 (s; 8H), 8,11 (br; 4H), 8,04 (br; 4H), 7,99 (br; 4H), 7,93 (br; 2H), 7,63-7,70 (m; 12H), 7,56 (br; 2H). Anál. Calc. C92H50F24N16P4Ru2S2 ■ 3(C6H14) ■ 8(CH3OH): C, 49,50 %; H, 4,77 %; N, 8,55 %, Encontrado: C, 49,15 %; H, 3,94 %; N, 7,64 %. MS (ESI+) m/z: 908,1 [M-2PF6]2+, 508,4 [M-4PF6-1 H]3+, 381,5 [M-4PF6]4+. HRMS (ESI+) m/z para Cs2H50F12N16P2Ru2S2; calcd 908,0603; encontrado 908,0641. El complejo de PF6 se disolvió en una solución a 1:1 de MeCN/MeOH y se convirtió en su sal de Clcorrespondiente sobre resina de intercambio iónico Amberlite IRA-410 (30 cm x 1,5 cm, 30 g de resina) eluyendo MeOH.
Figure imgf000218_0001
Preparación de 10b: El compuesto 10b se preparó con el mismo procedimiento que 2a usando Ru(phen)2Cl2. RMN 1H (DMSO-cfe) 57,17 (m, 1H), 7,50 (m, 2H), 7,63 (d, 1H), 7,77 (m, 6H), 7,90 (m, 1H), 7,99 (d, 2H), 8,07 (d, 2H), 8,12 (d, 2H), 8,40 (s, 4H), 8,78 (d, 4H), 8,99 (d, 2H). MS (ESI+) m/z: 845,0 [M-2PF6]+, 423,0 [M-2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C45H28NsRuS2; calcd 846,0922; encontrado 846,0910. El complejo de PF6- se disolvió en una solución a 1:1 de MeCN/MeOH y se convirtió en su sal de Cl- correspondiente sobre resina de intercambio iónico Amberlite IRA-410 (30 cm x 1,5 cm, 30 g de resina) eluyendo MeOH.
Figure imgf000218_0002
Preparación de 14b: El compuesto 14b se preparó con el mismo procedimiento que 2a usando Ru(phen)2Cl2. RMN 1H (300 MHz) [CDaCN]: 8,56-8,63 (m; 6H; C, 7, 4), 8,31-8,26 (m; 8H; 6, 5, 9), 8,01 (d; 2H; J = 5,10 Hz; 2), 7,88 (d; 2H; J = 4,95 Hz; A), 7,72 (br; 2H; B), 7,60 (m; 3H; 8, 1H-R), 7,29-7,40 (m; 3H; 3, 1H-R), 7,02 (m; 2H; 2H-R), 6,87 (d; 1H; J = 3,72 Hz; 1H-R), 6,68-7,73 (m; 2H; 2H-R). MS (ESI+) m/z: 464,0 [M-2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C49H30NaRuS3; calcd 464,0400; encontrado 464,0381. El complejo de PF6- se disolvió en una solución a 1:1 de MeCN/MeOH y se convirtió en su sal de Cl- correspondiente sobre resina de intercambio iónico Amberlite IRA-410 (30 cm x 1,5 cm, 30 g de resina) eluyendo MeOH. Anál. Calc. C49H30NsCl2RuS3 ■ 4(H2O) ■ 6(CH3OH): C, 52,29 %; H, 4,95 %; N, 8,87 %, Encontrado: C, 53,11 %; H, 4,31 %; N, 8,33 %.
Los siguientes compuestos se pueden reparar con el procedimiento que se describe en el presente documento. El experto en la materia sabrá cómo sustituir los reactivos apropiados, materiales de partida y métodos de purificación conocidos por los expertos en la materia, con el fin de preparar los compuestos que se proporcionan en el presente documento. A menos que se indique de otro modo en el presente documento, RMN 1H y MS se llevaron a cabo en sales de PF6 de los complejos, y los datos biológicos se recogieron sobre las sales de Cl.
Figure imgf000219_0001
Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina) 1c RMN 1H (300 MHz, Acetonitrilo-da) 58,92 - 8,75 (m, 3H), 8,42 - 8,36 (m, 4H), 8,05 - 8,00 (m, 2H), 7,93 (d, J = 3,7 Hz, 2H), 7,73 (dd, J = 8,3, 5,2 Hz, 3H), 7,67 (d, J = 4,3 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 3,5 Hz, 2H), 7,07 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 2,59 (s, 6H), 2,49 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 386,1 [M-2PF6]2+, 771,2 [M-2PFe-H]+.
Figure imgf000219_0002
Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-(2,2"-bitiofeno)-imidazo[4,5/][1,10]fenantrolina) 10c RMN 1H (300 MHz, Acetonitrilo-cfe) 58,93 (s, 2H), 8,38 (d, J = 12,8 Hz, 4H), 8,06 - 8,00 (m, 2H), 7,90 (d, J = 3,9 Hz, H), 7,77 (dd, J = 8,2, 5,3 Hz, 2H), 7,67 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 7,51 - 7,44 (m, 2H), 7,40 (d, J = 5,1 Hz, 2H), 7,33 - 7,27 (m, 2H), 7,17 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 2,59 (s, 6H), 2,49 (s, 6H).
Figure imgf000219_0003
Ru(4,4'-di-f-butil-2,2'-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina) 1d RMN 1H (300 MHz, DM-SO-cfe) 59,02 (dd, J = 17,7, 8,0 Hz, 2H), 8,93 - 8,81 (m, 5H), 8,07 - 7,82 (m, 6H), 7,71 - 7,57 (m, 5H), 7,46 (dd, J = 5,9, 2,5 Hz, 2H), 7,33 (dd, J = 7,9, 5,6 Hz, 3H), 1,42 (s, 18H), 1,34 (s, 18H). MS (ESI+) m/z: 470,2 [M-2PF6]2+, 1085,3 [M-2PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para CasHasNaRuS; calcd 470,1769; encontrado 470,1786.
Ru(4,4’-d¡-f-but¡l-2,2’-b¡p¡r¡d¡na)2(2-(2’,2"-b¡t¡ofeno)-¡m¡dazo[4,5-f][1,10]fenantrol¡na) 10d RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe) 58,98 - 8,90 (m, 2H), 8,90 - 8,81 (m, 5H), 7,82 (d, J = 7,6 Hz, 4H), 7,78 - 7,73 (m, 1H), 7,69 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 7,61 (dd, J = 6,1, 1,9 Hz, 3H), 7,55 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,39 - 7,33 (m, 3H), 7,18 - 7,10 (m, 1H), 1,43 (s, 18H), 1,34 (s, 18H). MS (ESI+) m/z: 511,2 [M-2PF6]2+, 1021,3 [M-H-2PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C57H60N8RUS2; calcd
Figure imgf000220_0003
Ru(4,4’-d¡-f-but¡l-2,2’-b¡p¡r¡d¡na)2(2-(2’,2":5",2"’-tert¡ofeno)-¡m¡dazo[4,5-/][1,10] fenantrol¡na) 14d RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe) 59,03 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,97 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 8,87 (d, J = 9,5 Hz, 5H), 7,96 (dt, J = 21,6, 7,2 Hz, 5H), 7,69 - 7,53 (m, 6H), 7,48 (dd, J = 10,4, 5,0 Hz, 3H), 7,41 (s, 1H), 7,39 - 7,28 (m, 3H), 7,14 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 1,42 (s, 18H), 1,33 (d, J = 1,5 Hz, 18H). MS (ESI+) m/z: 552,2 [M-2CI]2+, 1103,3 [M-CI]+. HRMS (ESI+) m/z para Ce-^NsRuSs; calcd 552,1646; encontrado 552,1626.
Figure imgf000220_0001
Ru(4,4’-d¡metox¡-2,2’-b¡p¡r¡d¡na)2(2-(2’,2":5",2"’-tert¡ofeno)-¡m¡dazo[4,5-/][1,10] fenantrol¡na) 14e MS (ESI+) m/z: 500,1 [M-2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C49H38NsO4RuS3; calcd 500,0605; encontrado 500,0597.
Figure imgf000220_0002
Ru(5,5’-d¡met¡l-2,2’-b¡p¡r¡d¡na)2(2-t¡ofen¡m¡dazo[4,5-/][1,10]fenantrol¡na)1f RMN 1H (300 MHz, DM-SO-cfe) 59,00 (d, J = 13,7 Hz, 2H), 8,66 (td, J = 13,9, 12,1, 6,6 Hz, 5H), 8,01 (dd, J = 13,2, 7,8 Hz, 5H), 7,91 (d, J = 10,8 Hz, 5H), 7,50 (d, J = 16,2 Hz, 2H), 7,30 (dd, J = 17,9, 7,8 Hz, 3H), 2,23 (s, 6H), 2,01 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 386,1 [M-2PF6]2+, 917,1 [M-2PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C41H34F6N8PRuS; calcd 917,1307; encontrado 917,1320.
Figure imgf000221_0001
Ru(5,5'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2M-bitiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina)10f RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe) 58,97 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 8,69 (dd, J = 15,4, 8,4 Hz, 5H), 8,14 - 7,97 (m, 5H), 7,91 (d, J = 8,1 Hz, 5H), 7,63 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,60 - 7,48 (m, 4H), 7,30 (s, 2H), 7,18 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 2,23 (s, 6H), 2,02 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 427,1 [M-2PF6]2+, 853,1 [M-H-2PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para
Figure imgf000221_0002
Ru(5,5'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2":5",2"'-tertiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10] fenantrolina) 14f RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe) 58,97 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 8,75 - 8,62 (m, 5H), 8,02 (d, J = 8,4 Hz, 5H), 7,94 -7,83 (m, 5H), 7,58 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 7,54 (s, 2H), 7,46 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,35 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 2,3 Hz, 2H), 7,14 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 2,23 (s, 6H), 2,01 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 468,1 [M-2PF6]2+, 1081,1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C49H38NsRuS3; calcd 468,0707; encontrado 468,0689.
Figure imgf000221_0003
Ru(6,6'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina) 10 g RMN 1H (300 MHz, DMSO-cfe) 58,90 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 8,83 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 8,63 (dd, J = 8,0, 3,6 Hz, 2H), 8,32 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 8,19 (s, 3H), 7,83 (d, J = 17,3 Hz, 4H), 7,72 - 7,65 (m, 2H), 7,62 (s, 1H), 7,51 - 7,43 (m, 2H), 7,16 (dd, J = 6,5, 3,7 Hz, 1H), 7,00 (m, J = 9,0, 4,1 Hz, 2H), 1,83 (s, 6H), 1,49 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 427,1 [M-2PF6]2+, 999,1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C45H36N8RuS2; calcd 427,0768; encontrado 427,0761.
Figure imgf000222_0001
u(6,6’-d¡met¡l-2,2’-b¡p¡r¡d¡na)2(2-(2’,2":5",2"’-tert¡ofeno)-¡m¡dazo[4,5-/][1,10] fenantrolina) 14 g RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 58,90 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 8,82 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 8,65 - 8,57 (m, 2H), 8,32 (t, J = 7,9 Hz, 2H), 8,19 (s, 2H), 7,80 (dt, J = 16,1, 6,7 Hz, 5H), 7,69 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,60 - 7,54 (m, 1H), 7,51 - 7,42 (m, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,34 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 7,14 (dd, J = 6,5, 3,0 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 2,09 (s, 4H), 1,85 (s, 4H), 1,51 (s, 4H). MS (ESI+) m/z: 468,1 [M-2PF6]2+, 1081,1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C49H38N8R11S3; calcd 468,0707; encontrado 468,0701.
Figure imgf000222_0002
Ru(4,4’-d¡(met¡lcarbox¡)-2,2’-b¡p¡r¡d¡na)2(2-(2’,2":5",2"’-tert¡ofeno)-¡m¡dazo[4,5-f] [1,10] fenantrolina) 14i MS (ESI+) m/z: 556,1 [M-2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C53H38N8O8RUS3; calcd 556,0504; encontrado 556,0522.
Figure imgf000222_0003
Ru(2,2’-b¡p¡r¡m¡d¡na)2(2-(2’,2":5",2"’-tert¡ofeno)-¡m¡dazo[4,5-/][1,10]fenantrol¡na)14j HRMS (ESI+) m/z para C41H26N12R11S3; calcd 442,0299; encontrado 442,0314.
Figure imgf000222_0004
Síntes¡s de Ru(2,2’-b¡p¡r¡m¡d¡na)(4,4’-d¡met¡l-2,2’-b¡p¡r¡d¡na)(2-(2’,2":5",2"’-tert¡ofeno)-¡m¡dazo[4,5-/][1,10]fenantrol¡na) 14cj: RuCb (10,0 g, 48 mmol) y 4,4’-d¡met¡l-2,2’-b¡p¡r¡d¡na (10,7 g, 58 mmol) se comb¡naron en 50 ml de 1,0 N HCl. La mezcla se ag¡tó para suspender los sól¡dos, se detuvo, y se dejo en reposo durante tres semanas. El producto se aisló por filtración, se lavó con agua, y se secó adicionalmente al vacío para dar Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)Cl4 en forma de un polvo de color negro (13,7 g) con un rendimiento de un 80 %.
Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)Cl4 (214 mg, 0,5 mmol), 2,2'-bipirimidina (79 mg, 0,5 mmol) y trietilamina (83 mL, 0,6 mmol) se combinaron en etanol (20 mL) y se purgó al vacío con argón 3 veces. La mezcla de reacción se calentó a reflujo hasta que TLC mostró el consumo de los materiales de partida seguido de concentración a presión reducida. El sólido resultante se suspendió en éter dietílico y a continuación se recogió en una frita de vidrio sinterizado fino para producir Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)(2,2'-bipirimidina)Cl2 con un rendimiento cuantitativo.
Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)(2,2'-bipirimidina)Cl2 (55 mg, 0,1 mmol) y 14L (47 mg, 0,1 mmol) se combinaron en etanol al 100 % (6 mL) purgado en atmósfera de argón y se irradió en un reactor de microondas de un solo recipiente (180 °C, 300 W) durante 10 minutos. La mezcla de reacción se dejó enfriar y se repartió entre agua y ChhCh. La fase acuosa se lavó con ChhCh para retirar el ligando sin reaccionar, and a continuación una solución acuosa de NH4PF6 se añadió gota a gota hasta que no se formaba precipitado adicional. El producto se extrajo en CH2O 2 y se concentró a presión reducida para producir un sólido de color rojo oscuro (52 mg, 43 %). RMN 1H (300 MHz, Acetonitrilo-cfe) 59,12 (dt, J = 4,0, 1,8 Hz, 1H), 9,02 (dt, J = 4,0, 1,6 Hz, 1H), 8,87 - 8,79 (m, 2H), 8,38 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 8,17 -8,13 (m, 2H), 7,96 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 7,79 (t, J = 3,2 Hz, 2H), 7,73 (c, J = 6,5 Hz, 2H), 7,64 - 7,49 (m, 2H), 7,39 (c, J = 5,2, 4,7 Hz, 2H), 7,31 (dd, J = 9,7, 4,8 Hz, 4H), 7,20 (s, 1H), 7,09 (d, J = 5,4 Hz, 2H) 2,57 (s, 3H), 2,48 (s, 3H). MS (ESI+) m/z: 455,0 [M-2PF6]2+, 1055,1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C45H32N10RUS3; caled 455,0503; encontrado 455,0502.
Figure imgf000223_0001
Síntesis de Os(2,2'-bipiridina)2(2-(2',2":5",2"'-tertiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10] fenantrolina) Os14a: dicloruro de bis(2,2'-bipiridil)Os(II) se preparó por combinación de (NH4)2[OsCl6] (439 mg, 1 mmol) con 2 equiv. de 2,2'-bipiridina (312 mg, 2 mmol) en etilenglicol (22 mL) y agitando a reflujo hasta que la reacción era completa por TLC. La reducción de Os3+ a Os2+ se consiguió con una solución acuosa saturada de Na2S2O4 (22 mL) para formar un precipitado que se filtró y se lavó con agua y a continuación éter dietílico para producir un sólido de color púrpura oscuro (486 mg, 80 %). Os(bpy)2Cl2 (61 mg, 0,1 mmol) y 14L (47 mg, 0,1 mmol) se combinaron en etilenglicol (2,5 ml) purgado en atmósfera de argón y se en un reactor de microondas de un solo recipiente (180 °C, 300 W) durante 10 minutos. La mezcla de reacción se dejó enfriar y se repartió entre agua y CH2O 2. La fase acuosa se lavó con CH2O 2 para retirar el ligando sin reaccionar, y a continuación una solución acuosa de NH4PF6 se añadió gota a gota hasta que no se formó un precipitado adicional. El producto se extrajo en CH2O 2 y se concentró a presión reducida para producir un sólido de color púrpura oscuro con un rendimiento cuantitativo, que se sometió a metátesis aniónica para formar el complejo de cloruro correspondiente (40 mg, eficacia de la conversión de un 99 %) sobre Amberlite IRA-410, RMN 1H (300 MHz, Acetonitrilo-cfe) 58,73 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 8,56 - 8,41 (m, 4H), 7,97 - 7,85 (m, 5H), 7,84 - 7,73 (m, 4H), 7,66 (m, J = 8,0, 5,0, 2,4 Hz, 3H), 7,50 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 7,43 - 7,30 (m, 4H), 7,30 - 7,21 (m, 3H), 7,17 - 7,08 (m, 3H). MS (ESI+) m/z: 485,1 [M-2PF6]2+, 1115,1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C45H30NsOsS3; calcd 485,0680; encontrado 485,0666.
Los siguientes compuestos se pueden preparar de acuerdo con el procedimiento para Osl4a. El experto en la materia sabrá cómo sustituir los reactivos apropiados, materiales de partida y métodos de purificación conocidos por los expertos en la materia, con el fin de preparar los compuestos que se proporcionan en el presente documento.
Figure imgf000224_0003
Os(2,2'-bipiridina)2(2-(2',2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina) Os10a RMN 1H (300 MHz, DM-SO-cfe) 58,84 (dd, J = 11,9, 8,0 Hz, 6H), 8,01 (dd, J = 11,1, 6,3 Hz, 4H), 7,94 (d, J = 3,7 Hz, 2H), 7,91 (s, 1H), 7,88 (s, 3H), 7,75 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 7,64 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,56 - 7,44 (m, 6H), 7,24 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 7,18 (t, J = 4,3 Hz, 1H). MS (ESI+) m/z: 444,1 [M-2PF6]2+, 1033,1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C41H28N8OSS2; caled 444,0741; encontrado 444,0740.
Figure imgf000224_0001
Os(1,10-fenantrolina)2(2-tiofenimidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina) Os1b RMN 1H (300 MHz, Acetonitriloda) 58,76 (d, J = 8,1 Hz, 2H; c), 8,60 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,45 - 8,33 (m, 5H), 8,31 - 8,21 (m, 5H), 8,06 - 7,90 (m, 6H), 7,87 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 7,68 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,56 (tc, J = 7,6, 2,8, 2,2 Hz, 7H), 7,35 - 7,26 (m, 1H). MS (ESI+) m/z: 427,1 [M-2PF6]2+, 853,1 [M-2PF6-H]+, 999,1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C41H26N8OSS; caled 427,0802; encontrado 427,0797.
Figure imgf000224_0002
Os(1,10-fenantrolina)2(2-(2',2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina) Os10b RMN 1H (300 MHz, Acetonitrilo-ds) 58,72 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,57 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,42 - 8,34 (m, 5H), 8,24 (s, 5H), 8,03 - 7,95 (m, 3H), 7,92 (d, J = 5,0 Hz, 3H), 7,89 - 7,81 (m, 4H), 7,61 - 7,50 (m, 8H), 7,46 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,40 (dd, J = 6,6, 3,8 Hz), 7,13 (dd, J = 5,2, 3,6 Hz, 2H). MS (ESI+) m/z: 468,1 [M-2PF6]2+, 935,1 [M-2PF6-H]+, 1081,1[M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C45H28N8OSS2; calcd 468,0741; encontrado 468,0743.
Figure imgf000225_0001
Os(1,10-fenantrolina)2(2-(2',2":5",2"'-tertiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10] fenantrolina) Os14b RMN 1H (300 MHz, Acetonitrilo-d3) 58,69 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,55 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,38 (d, J = 8,0 Hz, 4H), 8,25 (s, 4H), 8,00 (t, J = 4,3 Hz, 2H), 7,92 (d, J = 5,4 Hz), 7,87 (dd, J = 5,5, 1,2 Hz), 7,84 - 7,79 (m, 1H), 7,61 - 7,49 (m, 6H), 7,41 - 7,37 (m, 1H), 7,34 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 3,7 Hz, 2H), 7,20 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 7,08 (dd, J = 5,2, 3,6 Hz, 1H). MS (ESI+) m/z: 509,1 [M-2PF6]2+, [M-PF6]+, 1017,1, [M-2PF6-FI]+. FIRMS (ESI+) m/z para C49H30N8OSS3; calcd 509,0680; encontrado 509,0669.
Figure imgf000225_0002
Os(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina) Osle RMN 1H (300 MHz, Acetonitrilo-ds) 58,82 - 8,67 (m, 2H), 8,66 - 8,51 (m, 2H), 8,32 (d, J = 15,6 Hz, 5H), 7,94 (d, J = 4,5 Hz, 3H), 7,66 (dd, J = 8,7, 5,6 Hz, 3H), 7,60 - 7,50 (m, 2H), 7,41 (s, 1H), 7,33 - 7,15 (m, 5H), 6,93 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 2,64 (s, 6H), 2,52 (s, 6H). MS (ESI+) m/z: 431,1 [M-2PF6]2+, 1007,1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C41H34N8OsS; calcd 431,1115; encontrado 431,1126.
Figure imgf000225_0003
Os(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridma)2(2-(2',2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolma) Os10c RMN 1H (300 MHz, Acetonitrilo-cfe) 58,70 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 8,56 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 8,35 (s, 2H), 8,29 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 7,93 (s, 2H), 7,85 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 7,63 (m, J = 7,0 Hz, 3H), 7,56 (s, 2H), 7,47 - 7,39 (m, 6H), 7,26 (s, 2H), 7,21 (d, 2H), 7,14 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 6,95 (d, 2H), 2,64 (s, 6H), 2,53 (s, 6H), MS (ESI+) m/z: 472,1 [M-2PF6]2+, 943,2 [M-2PF6-H]+, 1089,1 [M-PF6]+. HRMS (ESI+) m/z para C45H36N8OsS2; calcd 472,1054; encontrado 472,1065.
Figure imgf000226_0002
b¡p¡r¡d¡na)22c, 1c-2 RMN 1H (300 MHz, DMSO- 6) 59,03 (t, J = 7,9 Hz, 4H), 8,74 (d, J = 11,8 Hz, 8H), 8,16 (s, 2H), 8,10 (d, J = 5,1 Hz, 4H), 8,00 - 7,90 (m, 4H), 7,66 (d, J = 5,8 Hz, 4H), 7,46 - 7,36 (m, 8H), 7,19 - 7,13 (m, 4H), 2,56 (s, 12H), 2,46 (s, 12H). MS (ESI+) m/z: 365,1 [M-4PF6]4+. HRMS (ESI+) m/z para C7sH64N16Ru2S; calcd 365,0821; encontrado 365,0836.
El s¡gu¡ente compuesto se puede preparar de acuerdo con el proced¡m¡ento para 2a excepto porque Ru(bpy)2Cl2 se sust¡tuyó por Os(bpy)2Cl2. El experto en la mater¡a sabrá cómo sust¡tu¡r los react¡vos aprop¡ados, mater¡ales de part¡da y métodos de pur¡f¡cac¡ón conoc¡dos por los expertos en la mater¡a, con el fin de preparar los compuestos que se proporcionan en el presente documento.
Figure imgf000226_0001
(300 MHz, DMSO- 6) 58,86 (m, 8H), 8,19 (s, 2H), 8,02 (m, J = 7,5 Hz, 8H), 7,94 - 7,87 (m, 8H), 7,77 (d, J = 5,5 Hz, 4H), 7,52 (t, J = 6,6 Hz, 8H), 7,25 (t, J = 6,7 Hz, 8H). MS (ESI+) m/z: 381,6 [M-4PF6]4+. HRMS (ESI+) m/z para C70H4sN16Os2S; calcd 382,0794; encontrado 382,0805.
El s¡gu¡ente compuesto se puede preparar de acuerdo con el proced¡m¡ento para 2a excepto porque Ru(bpy)2Cl2 fue sust¡tu¡do por Os(phen)2Cl2. El experto en la mater¡a sabrá cómo sust¡tu¡r los react¡vos aprop¡ados, mater¡ales de part¡da y métodos de pur¡f¡cac¡ón conoc¡dos por los expertos en la mater¡a, con el f¡n de preparar los compuestos que se proporc¡onan en el presente documento.
Figure imgf000227_0001
(1,10-fenantrolina)2Os(2-tiofeno-bis[imidazo[4,5/][1, 10]fenantrolina]) Os( 1, 10-fenantrolina)2 Os1 b-2 RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 58,89 - 8,76 (m, 4H), 8,57 (d, J = 8,2 Hz, 8H), 8,40 (s, 6H), 8,17 (s, 2H), 8,11 -7,91 (m, 10H), 7,82 - 7,61 (m, 11H). MS (ESI+) m/z: 405,6 [M-4PF6]4+, 589,1 [M-3PF6]3+, 956,1 [M-2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C78H4sN16Os2S; calcd 406,0794; encontrado 406,0781.
El siguiente compuesto se puede preparar de acuerdo con el procedimiento para 2a excepto porque Ru(bpy)2Cl2 se sustituyó por Os(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2Cl2. El experto en la materia sabrá cómo sustituir los reactivos apropiados, materiales de partida y métodos de purificación conocidos por los expertos en la materia, con el fin de preparar los compuestos que se proporcionan en el presente documento.
Figure imgf000227_0002
(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2Os(2-tiofeno-bis [imidazo [4,5/] [1,10] fenantrolina]) Os(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2 RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) 58,79 (t, J = 7,5 Hz, 4H), 8,74 - 8,64 (m, 8H), 8,17 (s, 2H), 8,09 - 7,94 (m, 4H), 7,92 - 7,77 (m, 4H), 7,57 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 7,44 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 7,31 - 7,23 (m, 4H), 7,07 (d, J = 6,0 Hz) 2,64 (s, 12H), 2,58 (s, 12H). Os1c-2 MS (ESI+) m/z: 409,6 [M-4PF6]4+, 594,5 [M-3PF6]3+, 964,2 [M-2PF6]2+. HRMS (ESI+) m/z para C7sH64N16Os2S; calcd 410,1107; encontrado 410,1105.
FORMULACIONES
La presente solicitud también desvela composiciones o formulaciones las cuales comprenden los compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención. En general, estas composiciones comprenden una cantidad eficaz de uno o más compuestos fotodinámicos y sales de los mismos de acuerdo con la presente invención las cuales son eficaces para proporcionar terapia fotodinámica; y uno o más excipientes.
Para los fines de la presente invención el término "excipiente" y "vehículo" se usan indistintamente a lo largo de la descripción de la presente invención y dichos términos se definen en el presente documento como "ingredientes que se usan en la práctica de formulación de una composición farmacéutica segura y eficaz".
El formulador comprenderá que los excipientes se usan principalmente para servir para administrar un producto farmacéutico seguro, estable y funcional, que sirve no sólo como parte del vehículo general para el suministro sino también como un medio para lograr una absorción eficaz por parte del receptor del principio activo. Un excipiente puede desempeñar un papel tan sencillo y directo como ser una carga inerte, o un excipiente como se usa en el presente documento puede ser parte de un sistema estabilizador de pH o revestimiento para asegurar la administración de los ingredientes de manera segura al estómago. El formulador también puede aprovechar el hecho de que los compuestos de la presente invención tienen una potencia celular mejorada, propiedades farmacocinéticas, así como una biodisponibilidad oral mejoradas.
Las presentes enseñanzas también proporcionan composiciones farmacéuticas que incluyen al menos un compuesto descrito aquí y uno o más vehículos, excipientes, o diluyentes farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de dichos vehículos son bien conocidos por los expertos en la materia y se pueden preparar de acuerdo con procedimientos farmacéuticos aceptables, tales como, por ejemplo, los que se describen en Pharmaceutical Sciences de Remington, 17a edición, ed. Alfonoso R. Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, PA (1985), cuya divulgación completa se incorpora por referencia en el presente documento para todos los fines. Como se usa en el presente documento, "farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sustancia que es aceptable para su uso en aplicaciones farmacéuticas desde un punto de vista toxicológico y no interactúa negativamente con el principio activo. Por lo tanto, los vehículos farmacéuticamente aceptables son aquellos que son compatibles con los otros ingredientes en la formulación y son biológicamente aceptables. En las composiciones farmacéuticas también se pueden incorporar principios activos suplementarios.
Los compuestos de las presentes enseñanzas se pueden administrar por vía oral o parenteral, puros o en combinación con vehículos farmacéuticos convencionales. Los vehículos sólidos aplicables pueden incluir una o más sustancias que también pueden actuar como agentes aromatizantes, lubricantes, solubilizantes, agentes de suspensión, rellenos, sustancias de deslizamiento, adyuvantes de compresión, aglutinantes o agentes disgregantes de comprimidos o materiales de encapsulación. Los compuestos se pueden formular de manera convencional, por ejemplo, de manera similar a la usada para compuestos fotodinámicos conocidos. Las formulaciones orales que contienen un compuesto que se desvela en el presente documento pueden comprender cualquier forma oral usada de forma convencional, incluyendo comprimidos, cápsulas, formas bucales, grageas, pastillas y líquidos orales, suspensiones o soluciones. En los polvos, el vehículo puede ser un sólido finamente dividido, que es una mezcla con un compuesto finamente dividido. En los comprimidos, un compuesto que se desvela en el presente documento se puede mezclar con un vehículo que tenga las propiedades de compresión necesarias en proporciones adecuadas y compactado en la forma y tamaño deseados. Los polvos y comprimidos pueden contener hasta un 99 % del compuesto.
Las cápsulas pueden contener mezclas de uno o más compuesto(s) que se desvelan en el presente documento con carga(s) y/o diluyente(s) tales como almidones farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, almidón de maíz, patata o tapioca), azúcares, agentes edulcorantes artificiales, celulosas en polvo (por ejemplo, celulosas microcristalinas y cristalinas), harinas, gelatinas, gomas, y similares. Las formulaciones de comprimido útiles se pueden preparar mediante compresión convencional, granulación en estado húmedo o métodos de granulación en estado seco y utilizar diluyentes, aglutinantes, lubricantes, desintegrantes, agentes modificadores de la superficie (tensioactivos) farmacéuticamente aceptables, agentes de suspensión o estabilizantes, que incluyen, pero no se limitan a, estearato de magnesio, ácido esteárico, lauril sulfato de sodio, talco, azúcares, lactosa, dextrina, almidón, gelatina, celulosa, metil celulosa, celulosa microcristalina, carboximetil celulosa de sodio, carboximetilcelulosa de calcio, polivinilpirrolidina, ácido algínico, goma arábiga, goma de xantano, citrato de sodio, citrato de sodio, silicatos complejos, carbonato de calcio, glicina, sacarosa, sorbitol, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, lactosa, caolín, manitol, cloruro sódico, ceras de baja fusión y resinas de intercambio iónico. Los agentes modificadores de superficie incluyen agentes modificadores de superficie no iónicos y aniónicos. Los ejemplos representativos de agentes modificadores de la superficie incluyen, pero no se limitan a, poloxámero 188 , cloruro de benzalconio, estearato de calcio, alcohol cetostearílico, cera emulsionante de cetomacrogol, ésteres de sorbitán, dióxido de silicio coloidal, fosfatos, dodecilsulfato de sodio, silicato de magnesio aluminio y trietanolamina. En el presente documento las formulaciones orales pueden utilizar formulaciones convencionales de liberación retardada o de liberación prolongada para alterar la absorción de los compuestos. La formulación oral también puede consistir en la administración de un compuesto que se desvela en el presente documento en agua o zumo de frutas, que contiene solubilizantes o emulsionantes apropiados según sea necesario.
En la preparación de soluciones, suspensiones, emulsiones, jarabes, elixires se pueden utilizar vehículos líquidos y para la administración por inhalación. Un compuesto de las presentes enseñanzas se puede disolver o suspender en un vehículo líquido farmacéuticamente aceptable tal como agua, un compuesto orgánico, o una mezcla de ambos, o aceites o grasas farmacéuticamente aceptables. El vehículo líquido puede contener otros aditivos farmacéuticos adecuados, tales como solubilizantes, emulsionantes, tampones, conservantes, edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes de suspensión, agentes espesantes, colorantes, reguladores de viscosidad, estabilizadores y reguladores osmóticos. Los ejemplos de vehículos líquidos para administración oral y administración parenteral incluyen, pero no se limitan a, agua (que contienen aditivos específicos como se describe en el presente documento, por ejemplo, derivados de celulosa como una solución de celulosa carboximetil de sodio), alcoholes (incluidos alcoholes monohídricos y alcoholes polihídricos, por ejemplo, glicoles) y sus derivados de los mismos, y aceites (por ejemplo, aceite de coco fraccionado y aceite de cacahuete). Para la administración parenteral, el vehículo puede ser un éster oleoso tal como oleato de etilo y miristato de isopropilo. Los vehículos líquidos estériles se usan en composiciones en forma líquida estéril para administración parenteral. El vehículo líquido para composiciones presurizadas puede ser hidrocarburo halogenado u otros propulsores farmacéuticamente aceptables.
Las composiciones farmacéuticas líquidas, que son soluciones o suspensiones estériles, se pueden utilizar, por ejemplo, mediante inyección intramuscular, intraperitoneal o subcutánea. Las soluciones estériles también se pueden administrar por vía intravenosa. Las composiciones para administración oral pueden ser en forma líquida o sólida.
Preferiblemente la composición farmacéutica es en forma de dosificación unitaria, por ejemplo, tal como comprimidos, cápsulas, polvos, soluciones, suspensiones, emulsiones, gránulos, o supositorios. En una forma de ese tipo, la composición farmacéutica se puede subdividir en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas del compuesto. Las formas de dosificación unitarias pueden ser composiciones envasadas, por ejemplo, polvos envasados, viales, ampollas, jeringas cargadas previamente o sobres que contienen líquidos. Como alternativa, la forma de dosificación unitaria puede ser una cápsula o comprimido, o puede ser el número apropiado de cualquiera de las composiciones de ese tipo en forma de paquete. Dicha forma de dosificación unitaria puede contener aproximadamente 1 mg/kg de compuesto y aproximadamente 500 mg/kg de compuesto, y se puede administrar en una dosis única o en dos o más dosis. Dichas dosis se pueden administrar de cualquier manera útil para dirigir el compuesto(s) al torrente sanguíneo del receptor, incluso por vía oral, a través de implantes, por vía parenteral (incluyendo inyecciones intravenosas, intraperitoneales y subcutáneas), rectal, vaginal y transdérmica.
Cuando se administra para el tratamiento o la inhibición de un estado o trastorno de enfermedad particular, se entiende que una dosis eficaz puede variar dependiendo del compuesto particular utilizado, el modo de administración y la gravedad de la afección que se está tratando, así como los diversos factores físicos relacionados con el individuo que se está tratando. En aplicaciones terapéuticas, un compuesto de las presentes enseñanzas se puede proporcionar a un paciente que ya padece una enfermedad en una cantidad suficiente para curar o al menos mejorar parcialmente los síntomas de la enfermedad y sus complicaciones. La dosis a utilizar en el tratamiento de un individuo específico debe ser determinada de forma subjetiva por el médico tratante. Las variables implicadas incluyen la condición específica y su estado, así como el tamaño, la edad y el patrón de respuesta del paciente.
En algunos casos, puede ser deseable administrar un compuesto directamente a las vías respiratorias del paciente, usando dispositivos tales como, pero no limitados a, inhaladores de dosis medidas, inhaladores activados por la respiración, inhaladores de múltiples dosis de polvo seco, bombas, dispensadores de aerosol nebulizado activado por compresión, dispensadores de aerosol y nebulizadores de aerosol. Para la administración por inhalación intranasal o intrabronquial, los compuestos de las presentes enseñanzas se pueden formular en una composición líquida, una composición sólida, o una composición de aerosol. La composición líquida puede incluir, a modo de ilustración, uno o más compuestos de las presentes enseñanzas disueltos, parcialmente disueltos, suspendidos en uno o más disolventes farmacéuticamente aceptables y se puede administrar, por ejemplo, mediante una bomba o un dispensador de pulverización nebulizada privada por compresión. Los disolventes pueden ser, por ejemplo, solución salina isotónica o agua bacteriostática. La composición sólida puede ser, a modo de ilustración, una preparación en polvo que incluye uno o más compuestos de las presentes enseñanzas mezclados con lactosa u otros polvos inertes que son aceptables para uso intrabronquial, y se puede administrar, por ejemplo, con un dispensador de aerosol o un dispositivo que rompe o perfora una cápsula que encierra la composición sólida y administra la composición sólida para inhalación. La composición de aerosol puede incluir, a modo de ilustración, uno o más compuestos de las presentes enseñanzas, propulsores, tensioactivos y codisolventes, y se puede administrar, por ejemplo, mediante un dispositivo medidor. Los propulsores pueden ser un clorofluorocarbono (CFC), un hidrofluoroalcano (HFA) u otros propulsores que sean fisiológica y ambientalmente aceptables.
Los compuestos que se describen en el presente documento se pueden administrar por vía parenteral o por vía intraperitoneal. Las soluciones o suspensiones de estos compuestos o sales farmacéuticamente aceptables, hidrato, o ésteres de los mismos se pueden preparar en agua líquida mezclada con un tensioactivo tal como hidroxil-propilcelulosa. Las dispersiones también se pueden preparar en glicerol, polietilenglicoles líquidos y mezclas de los mismos en aceites. En condiciones normales de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservante para inhibir el crecimiento de microorganismos.
Las formas farmacéuticas adecuadas para inyección pueden incluir soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. En ciertas realizaciones, la forma se puede esterilizar y su viscosidad la permite fluir a través de una jeringa. La forma preferible es estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento y se puede conservar frente a la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El vehículo puede ser un disolvente o medio de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido), mezclas adecuadas de los mismos y aceites vegetales.
Los compuestos que se describen en el presente documento se pueden administrar por vía transdérmica, es decir, se pueden administrar a través de la superficie del cuerpo y los revestimientos internos de los conductos corporales, incluyendo tejidos epiteliales y mucosa. Una administración de ese tipo se puede realizar usando los compuestos de las presentes enseñanzas, incluyendo las sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, ésteres de los mismos, en lociones, cremas, espumas, parches, suspensiones, soluciones y supositorios (rectales y vaginales).
La administración transdérmica se puede realizar a través del uso de un parche transdérmico que contiene un compuesto, tal como un compuesto que se desvela en el presente documento, y un vehículo que puede ser inerte para el compuesto, puede ser no tóxico para la piel y puede permitir la administración del compuesto para absorción sistémica en el torrente sanguíneo a través de la piel. El vehículo puede adoptar cualquier cantidad de formas, tal como cremas y pomadas, pastas, geles y dispositivos oclusivos. Las cremas y pomadas pueden ser emulsiones líquidas viscosas o semisólidas, ya sea del tipo aceite en agua o agua en aceite. Las pastas formadas por polvos absorbentes dispersados en vaselina o vaselina hidrófila que contienen el compuesto también pueden ser adecuadas. Se puede usar una diversidad de dispositivos oclusivos para liberar el compuesto en el torrente sanguíneo, tal como una membrana semipermeable que cubre un depósito que contiene el compuesto con o sin vehículo, o una matriz que contiene el compuesto. En la bibliografía se conocen otros dispositivos oclusivos.
Los compuestos que se describen en el presente documento se pueden administrar por vía rectal o por vía vaginal en forma de un supositorio convencional. Las formulaciones de supositorios se pueden preparar a partir de materiales tradicionales, tal como manteca de cacao, con o sin la adición de ceras para alterar el punto de fusión del supositorio y glicerina. También se pueden usar bases de supositorio solubles en agua, tal como polietilenglicoles de diversos pesos moleculares.
Las formulaciones de lípidos o las nanocápsulas se pueden usar para introducir compuestos de las presentes enseñanzas en células hospedadoras in vitro o in vivo. Las formulaciones de lípidos y las nanocápsulas pueden ser preparadas mediante métodos conocidos en la técnica.
Para aumentar la eficacia de los compuestos de las presentes enseñanzas, puede ser deseable combinar un compuesto con otros agentes eficaces en el tratamiento de la enfermedad diana. Por ejemplo, otros compuestos activos (es decir, otros principios o agentes activos) eficaces para tratar la enfermedad diana se pueden administrar con los compuestos de las presentes enseñanzas. Los otros agentes se pueden administrar al mismo tiempo o en momentos diferentes a los compuestos que se desvela en el presente documento.
Los compuestos de las presentes enseñanzas pueden ser útiles para el tratamiento o inhibición de una afección o trastorno patológico en un mamífero, por ejemplo, un sujeto humano. Por lo tanto, las presentes enseñanzas proporcionan métodos para tratar o inhibir una afección o trastorno patológico al proporcionar un compuesto de las presentes enseñanzas fluyendo su sal farmacéuticamente aceptable) o una composición farmacéutica que incluye uno o más compuestos de las presentes enseñanzas en combinación o asociación con vehículos farmacéuticamente aceptables. Los compuestos de las presentes enseñanzas se pueden administrar solos o en combinación con otros compuestos o terapias terapéuticamente eficaces para el tratamiento o inhibición de la afección o trastorno patológico.
Los ejemplos no limitativos de composiciones de acuerdo con la presente invención incluyen aproximadamente 0,001 mg a aproximadamente 1000 mg de uno o más compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención y uno o más excipientes; de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 100 mg de uno o más compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención y uno o más excipientes; y de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 10 mg de uno o más compuestos fotodinámicos de acuerdo con la presente invención; y uno o más excipientes.
PROCEDIMIENTOS
Los siguientes procedimientos se pueden utilizar para evaluar y seleccionar compuestos como compuestos fotodinámicos.
Extracción de la actividad de topoisomerasa II a partir de células HL60
Los extractos nucleares precipitaron por afinidad como se describe en 'Extractos Topo I y II de preparación a pequeña escala de células de cultivo de tejidos (optimizado para células HeLa)' en el sitio web de TopoGEN (http:www.topogen.com/html/extracts.html). Todas las etapas que se llevaron a cabo en hielo o a 4 °C. En resumen, se transfirieron 10 mL de células HL-60 de crecimiento exponencial (1 x 106 células/ml) a un tubo de centrífuga cónico de 15 mL estéril (Fisher Scientific, Canadá) y se sedimentaron en una centrífuga eppendorf 5804R (radio de 16,1 cm) a 2100 rpm durante 3 min a 4 °C. Las células se lavaron dos veces con 3 ml de solución salina tamponada con fosfato (PBS) helada que contenía cloruro de potasio 2,68 mM, fosfato potásico monobásico 1,47 mM, cloruro sódico 0,137 M, y fosfato sódico dibásico 8,10 mM, pH 7,4, como sigue a continuación: el sedimento celular se colocó en suspensión con tampón PBS (mezclado por pipeteo hacia arriba y hacia abajo), se centrifugó a 2100 rpm (3 min, 4 °C), y el sobrenadante se vertió suavemente. Después del segundo lavado, las células se resuspendieron en 3 mL de tampón hipotónico frío (Tris-HCl 10 mM, pH 7,5, EDTA 1 mM, MgCl24 mM, fluoruro de fenilmetilsulfonilo (Pm Sf ) 0,5 mM), y los grumos se dispersaron pipeteando arriba y abajo. Las células se sedimentaron de nuevo (2100 rpm, 3 min, 4 °C), se resuspendieron y dispersaron en 3 ml del mismo tampón hipotónico frío, y se dejaron en hielo durante 10 minutos para que se hincharan. Las membranas celulares se rompieron con un homogeneizador Dounce frío (Pirex, 15 mL), usando 6-8 golpes. El lisado se transfirió a un tubo de microcentrífuga estéril limpio de 1,5 ml (Fisher Scientific, Canadá) y se centrifugó (2900 rpm, 10 min, 4 °C). El sedimento, que contiene los núcleos, se lavó dos veces con el mismo tampón hipotónico frío, de la siguiente manera: el tampón frío se añadió al sedimento y los núcleos se suspendieron de nuevo pipeteando hacia arriba y hacia abajo, a continuación se sedimentaron (2900 rpm, 10 min, 4 °C) ), el sobrenadante se retiró suavemente y se desechó. Después del segundo lavado, los núcleos se resuspendieron en 4 volúmenes de sedimentos (aproximadamente 500 pL) de tampón hipotónico frío sin MgCl2. Un volumen igual de NaCl 1 M frío se añadió al sedimento resuspendido y se dejó en hielo durante 45 min, seguido de sedimentación en una microcentrífuga (14.000 rpm, 15 min, 4 °C). El sobrenadante (extracto nuclear), suspendido en Tris-HCl 5 mM (pH 7,5), EDtA 0,5 mM, PMSF 0,25 mM y NaCl 0,5 M, se usó para ensayos de relajación de ADN.
La concentración total de proteína (BSA equivalente) del extracto se determinó utilizando un kit de proteína total Micro Lowry (Kit de Proteína Total, Micro Lowry, modificación de Peterson), siguiendo las instrucciones del fabricante para 'Determinación de proteínas sin precipitación de proteínas'. En resumen, cinco patrones de proteína BSA se prepararon a partir de una solución de reserva de 400 pg/mL en agua pura hasta un volumen de 200 pL en tubos de microcentrífuga estériles de 1,5 mL (los valores finales de BSA fueron 10, 20, 40, 60, 80 pg). Un sexto tubo que contenía agua pura sólo se usó como un blanco. Un séptimo tubo, que contiene 50 pL de extracto nuclear y 150 pL (dilución elegida de forma aleatoria), se preparó para medir su contenido de proteína contra los patrones de BSA. Todos los tubos se mezclaron bien con agitación vorticial, a continuación se añadieron 200 pL de solución de reactivo de Lowry a todos los tubos seguidos por agitación vorticial para mezclar. Las soluciones se mantuvieron a temperatura ambiente durante 20 minutos, a continuación se añadieron 100 pl de reactivo de fenol Folin Ciocalteu (dilución 6X de solución de reserva 2 N) en cada tubo, seguido de agitación vorticial para mezclar. Se permitió que el color se desarrollara durante 30 min. Las soluciones se transfirieron una a la vez a una cubeta de cuarzo, con una longitud de trayectoria de 1 cm, y la absorbancia de los patrones y los tubos de muestra con respecto al blanco se midió a una longitud de onda de 750 nm. Se construyó una gráfica (Excel, 2007) de los valores de absorbancia de los patrones con respecto a sus correspondientes proteínas protectores y se usó la regresión lineal para calcular la concentración de proteína en la muestra de extracto nuclear, teniendo en cuenta la dilución 10x. El resultado fue una concentración de proteína de 559 pg/mL ó 279 pg (equivalentes de BSA) del extracto nuclear.
Actividad del extracto de topoisomerasa en ensayos de relajación de ADN:
La actividad de relajación del extracto nuclear, que contiene topo I y II, se determinó detectando la conversión del ADN plasmídico superenrollado a su forma relajada en presencia de ATP. Los tubos de reacción (volúmenes de 20 pl) se ensamblaron en hielo mediante la adición ordenada de: (i) agua pura (variable, compuesta hasta un volumen de 20 pl); (ii) 4 pl de tampón de relajación (Tris-HCl 250 mM, pH 8, NaCl 0,75 M, MgCh 50 mM, ditiotreitol 2,5 mM, 150 pg de BSA/ mL y ATP 10 mM); (iii) ADN plasmídico superenrollado pUC19 (250 ng, o bases 38,6 pM); y (iv) extracto de topo (1, 2, 3 ó 4 pL). La reacción se inició calentando los tubos en una incubadora a 37 °C durante 30 minutos. La reacción se detuvo añadiendo 2 pL de SDS al 10 % (en agua estéril), y la proteína unida al ADN se digirió a continuación añadiendo 2 pL de proteinasa K (0,50 mg/ml de solución de reserva en Tris-HCl 10 mM, EDTA 1 mM, pH 7,5) y se incubó a 37 °C durante 15 min. A continuación, se cargaron 2 pL de colorante de carga con ficoll (azul de bromofenol al 0,25 %, ficoll al 15 %, en tampón IX TBE) y a continuación se añadieron muestras de ADN mediante electroforesis en gel de agarosa al 1,5 % usando tampón IX TBE (50 V, 180 min). Los geles se tiñeron con bromuro de etidio (1 pg/ml) durante 30 minutos con una destinción posterior durante 30 minutos en agua, y se visualizaron con transiluminación de UV (transiluminador de UVP) usando el sistema de imágenes Gel-Doc-It (UVP). Una unidad de actividad de ADN topoisomerasa II se definió como la cantidad de enzima capaz de relajar 250 ng de ADN superenrollado en 30 minutos a 37 °C (en este caso, una unidad = 2 pL de extracto). La presencia de topo I se evaluó mediante el ensayo de relajación del plásmido pUC19 (250 ng) en ausencia de ATP durante 30 minutos a 37 °C. En estas condiciones, no se detectó la relajación del plásmido pUC19 (lo que indica poco o nada de topo I).
Ensayos de topoisomerasa II:
La inhibición de la actividad de topoisomerasa II por los compuestos de la divulgación se midió mediante un ensayo de relajación de ADN superenrollado usando un kit de detección de fármacos de topoisomerasa II (TopoGEN). En resumen, 0,23 pg de ADN de plásmido pUC19 superenrollado (3,5 pl de solución de reserva de 64,5 ng/pL en Tris-Cl 10 mM, pH 8,5) se suspendieron en tampón de reacción a pH 8,0 (Tris-Cl 250 mM, NaCl 0,75 M, MgCl250 mM, ditiotreitol 2,5 mM, 150 pg de BSA/ml y ATP 10 mM). Se añadió agua pura (variable, formada por hasta 20 pL de volumen), a continuación se añadieron alícuotas de 2 pl de compuestos de rutenio (diluciones en serie de 1, 10, 50, 100, 500, 1000 pM), haciendo muestras finales de concentraciones de 0,1, 1, 5, 10, 50 y 100 pM. Las muestras de control se prepararon de la siguiente manera: (i) solo plásmido (sin extracto nuclear); (ii) plásmido con extracto nuclear; (iii) plásmido con la concentración de rutenio más alta (sin extracto nuclear); y (iv) plásmido con extracto nuclear (sin ATP en el tampón). Los tubos se mezclaron bien (se agitarón suavemente y se centrifugaron) antes de iniciar la reacción mediante la adición de 2 pL (una unidad) de extracto nuclear. Después de 30 minutos de incubación a 37 °C, la reacción se detuvo mediante la adición de 2 pL de SDS al 10 % (en agua estéril). La proteína unida al ADN se digirió mediante la adición de 2 pL de proteinasa K (solución de reserva de 0,50 mg/mL en Tris-HCl 10 mM, EDTA 1 mM, pH 7,5) a 37 °C durante 15 min, sin la extracción opcional con cloroformo: alcohol isoamílico (las extracciones anteriores no mostraron mejoras cosméticas en los resultados). Por último, 2 pL de tinte de carga ficoll (azul de bromofenol al 0,25 %, ficoll al 15 %, en tampón IX TBE) se analizaron y las muestras de ADN se analizaron mediante electroforesis en gel de agarosa al 1,5 % usando tampón IX TBE (50 V, 180 min). El gel se tiñó con bromuro de etidio (1 pg/mL) durante 30 minutos con subsecuente desteñido durante 30 minutos en agua pura, y se visualizó con transiluminación de UV (transiluminador de UVP) usando el sistema de formación de imágenes Gel-Doc-It (UVP).
Unión a ADN por UV-vis:
Las valoraciones ópticas se llevaron a cabo en soluciones de 0,5-2 ml de los PDC con cantidades crecientes de ADN timo de ternero o esperma de arenque para dar una relación [bases de ADN]/[PDC] entre 0,1 y 10. El ADN se necesita en incrementos de 1-5 pl para soluciones de compuesto (10 pM) en MOPS 10 mM, MOPS 10 mM con NaCl 50 mM, Tris-HCl 5 mM, o Tris-HCl 5 mM con NaCl 50 mM a pH 7,5. La dilución de los compuestos de la divulgación al final de cada valoración, aunque insignificante, se tuvo en cuenta en los análisis de unión constante. La constante de unión al ADN (Kb) se obtuvo a partir de los ajustes de los datos de valoración a equiv. 1 (Figura 36), en la que b = 1 KbCt Kb[ADN]t/2s, Ct y [ADN]t representan las concentraciones totales de PdC y ADN, respectivamente, s es el tamaño del sitio de unión, y £a, £f, y £b representan los coeficientes de extinción molar de los PDC aparentes, libres y unidos, respectivamente. £f se calculó a 414 nm para 7 y 412 nm para 8 antes de la adición de ADN, y £a se determinó a estas longitudes de onda después de cada adición de ADN. El valor de £b se determinó a partir de la meseta de la valoración de ADN, en la que la adición de ADN no dio como resultado ninguna disminución adicional en la señal de absorción. Los ajustes detallados de los datos de valoración se obtuvieron usando Kaleidagraph y Gnuplot. Se construyeron curvas de fusión de ADN midiendo la absorbancia (A260) de una solución de 2 ml, de ADN 25 pM (MOPS 40 mM, pH 7,5) como una función de la temperatura (20-100 °C) en ausencia y presencia de un compuesto de la divulgación (5 pM). Se permitió que las soluciones de ADN y un compuesto de la divulgación para los experimentos de fusión se equilibraran durante 30 minutos a 25°C antes de la medición. El controlador de temperatura ETC-505T se enfrió con agua enfriada con hielo (4 °C) usando una bomba de acuario de peces, y se suministró una corriente de gas argón a través de la válvula de entrada de gas al compartimento de la muestra para evitar la condensación en las ventanas de la cubeta durante los experimentos de temperatura variable.
Valoraciones de Fotoescisión:
Los experimentos de fotoescisión de ADN se llevaron a cabo de acuerdo con un ensayo general de ADN plasmídico con volúmenes de muestra total de 20pL en tubos de microcentrífuga de 0,5 ó 1,5 ml que contienen plásmido pUC19 transformado (200 ng, > 95 % de Forma I) en tampón MOPS 10 mM y NaCl 100 mM, pH 7,4. Se suministró ADN (1-5 pl) a los tubos de ensayo como una solución en Tris-Cl 10 mM (pH 8,5) y se diluyó con MOPS (pH 7,5, concentración final 10 mM) y NaCl (concentración final 100 mM). Las soluciones de los compuestos de la divulgación se añadieron para dar de 0 a 500 pM, y la mezcla de reacciones se diluyeron hasta un volumen final de 20 pl, cuando fuera necesario, con ddH2O. Los complejos se disolvieron inicialmente en acetonitrilo (soluciones de reserva de 2 pM), y todas las diluciones posteriores se prepararon con ddH2O en las que los tubos de ensayo finales contenían < 1 % de acetonitrilo. Para los ensayos basados en la concentración, las muestras (sin periodo de incubación previa) se irradiaron al aire durante 30 minutos con luz de 420 nm dentro de un fotorreactor (Luzchem LZC-4X). Cuando se requirió irradiación de muestras desoxigenadas, el argón se burbujeó a través de las soluciones durante 15 minutos antes de la irradiación bajo una presión positiva de argón. Todas las muestras se enfriaron mediante la adición de tampón de carga de gel (4 pl), se cargaron sobre geles de agarosa al 1 % que contenían bromuro de etidio (0,75 pg mL'1) y se sometieron a electroforesis durante 30 minutos a 8-12 V cmr1 en IX TAE (Trisacetato 40 mM, EDTA 1 mM, pH 8,2). Las bandas se visualizaron con transiluminación de UV (transiluminador de UVP) y se cuantificaron utilizando el sistema de formación de imágenes Gel Doc-It (UVP) o el Programa de manipulación de imágenes GNU (GIMP).
Cultivo de células HL-60:
Las células HL-60 de leucemia promielocítica humana (ATCC CCL-240) se cultivaron a 37 °C en atmósfera de CO2 al 5 % en IMDM de Hyclone, suplementado con FBS al 20 % y se pasaron 3-4 veces a la semana de acuerdo con procedimientos asépticos convencionales. Los cultivos se iniciaron en 200.000 células ml-1 en matraces de cultivo de tejidos de 25 cm2 y se subcultivaron antes de que el crecimiento alcanzara 750.000 células mL'1 para evitar la senescencia asociada con una alta densidad celular prolongada. Los medios completos se preparan en porciones de 200 mL según sea necesario combinando IMDM (160 mL), FBS (40 ml, tomando previamente alícuotas e inactivado por calor) y sulfato de gentamicina (100 |jL de 50 mg mL_1 de solución de reserva) en una copa de esterilización al vacío de 250 mL de Millipore (0,22 jm ) y se filtró.
Ensayos de citotoxicidad y fotocitotoxicidad
Las células HL-60 que crecen en fase logarítmica (aproximadamente 8x105) se transfirieron en partes alícuotas de 50 j l a dos microplacas de cultivo de tejidos de 96 pocillos (Corning Costar, Acton, MA) que contenían 100 jL de medio de cultivo caliente y se colocaron a 37 °C, incubadora de CO2 al 5 % con camisa de agua (Thermo Electron Corp., Forma Series II, Modelo 3110, Clase 100 de HEPA) durante una hora para equilibrar. Todos los pocillos de microplacas vacías contenían 200 jL de solución salina tamponada con fosfato (PBS) que contenía cloruro de potasio 2,68 mM, fosfato potásico monobásico 1,47 mM, cloruro sódico 0,137 M y fosfato de sodio dibásico 8,10 mM, pH 7,4, para ayudar minimizar la pérdida por evaporación. Las alícuotas calientes de 50 jL de solución de compuestos de la divulgación (4, 20, 40, 200 jM), recién preparadas en PBS, se añadieron a las células y se incubaron a 37 °C en atmósfera de CO2 al 5 % durante 4 h (las vulnerabilidades finales fueron 1, 5, 10, 50 jM). Una de las microplacas se irradió con luz visible (400 - 700 nm) en un fotorreactor Luzchem (tubos fluorescentes de luz blanca fría, 21 W/m2) durante 15 minutos; la otra microplaca se incubó en condiciones idénticas en la oscuridad. Ambas microplacas se incubaron (37 °C en atmósfera de CO2 al 5 %) durante 40 h. Se utilizó un Cellometer Auto T4 (ESBE Scientific) para determinar el número de células, la viabilidad, el diámetro y el % de viabilidad celular. Las suspensiones celulares (20 jL ) se diluyeron a 1:1 con un 0,2 % de colorante azul de tripano (Sigma Aldrich, Canadá), se cargaron en una cámara de recuento de células y se insertaron en el aparato de recuento automático de células basado en imágenes. La concentración celular y la viabilidad celular se determinaron de forma automática (Software Cellometer Auto Counter) basándose en el recuento celular total, el factor de dilución y la exclusión del colorante azul de tripano. Los parámetros óptimos del tipo de célula se establecieron importando la configuración de las células h L-60, y los datos se importaron posteriormente en una hoja de cálculo de Microsoft Excel (Microsoft Office 2010) para el análisis de datos.
Ensayos de citotoxicidad y fotocitotoxicidad:
Las células HL-60 que crecen en fase logarítmica se transfirieron (partes alícuotas de 25 jl) a placas de cultivo tisular de 96 pocillos (Corning Costar, Acton, MA) que contenían medio de cultivo, ya sea con o sin diferentes tipos de compuestos de la divulgación para dar volúmenes finales en los pocillos de cultivo de 100 jL y 10.000-20.000 células. Las soluciones de los compuestos de la divulgación en medios completos se prepararon en porciones de 1 mL, en las que el acetonitrilo de los compuestos iniciales de la solución de reserva de divulgación fue < 0,5 % en v/v, y las jeringas de 3 ml con filtro estéril equipadas con Filtros Nalgene de 0,22 jm . Las placas se incubaron a 37 °C en atmósfera de CO2 al 5 % durante 30 minutos antes de la exposición a la luz de 420 nm en un fotorreactor Luzchem durante 30 minutos; los controles de oscuridad se incubaron en condiciones idénticas en la oscuridad. Los controles de oscuridad, o ensayos de citotoxicidad (CT), se refieren a ensayos que incluyen compuestos de la divulgación pero no que no se expusieron a la luz, y los controles de luz se refieren a ensayos expuestos a la luz que no contenían compuestos de la divulgación. Los ensayos de fotocitotoxicidad (PCT) contenían PDC y se expusieron a la luz. El recuento celular y la tinción de viabilidad se llevaron a cabo inmediatamente y a ~24 h después de la exposición a la luz. Se realizaron recuentos manuales en 25 j l de mezclas de cultivo de ensayo a 1:1 y solución de azul de tripano en un hemocitómetro de Neubauer visto bajo un microscopio óptico invertido en modo de contraste de fase (objetivo 4X, aumento total 60X). En estas condiciones, las células viables parecían de color blanco brillante y las células no viables eran de color azul. Todos los experimentos se llevaron a cabo por triplicado, y los datos que se observa en la gráfica son el promedio de tres ensayos.
Tinción de viabilidad:
La viabilidad se estableció de acuerdo con un protocolo publicado por el cual una solución de reserva 100X de bromuro de etidio/naranja de acridina (EB/AO) se preparó disolviendo bromuro de etidio (50 mg) y naranja de acridina (15 mg) en etanol al 95 % (1 mL) y se diluyó a 1/50 con ddhhO. La solución 100X se dividió en partes alícuotas de 1 mL y se almacenó a -20 °C. Se preparó una solución de trabajo IX descongelando una alícuota de 1 mL de la solución de reserva 100X y diluyendo a 1/100 con solución salina tamponada con fosfato. La solución de trabajo se almacenó en un frasco ámbar a 4 °C hasta 1 mes. Para la tinción de viabilidad celular, una alícuota de suspensión celular se ajustó a 1-5 x106 células ml1 en IMDM tamponado con fosfato. Una alícuota de 25 gl de esta suspensión celular se mezcló con solución de tinción IX EB/AO (25 gl) en un tubo de microcentrífuga; una alícuota de 25 gl de esta mezcla de tinción celular se transfirió a un hemocitómetro y se observó bajo un microscopio de luz invertida Nikon Eclipse TE2000-U que funciona en modo de epi-fluorescencia (objetivo 10X ó 40X, aumento total 150X ó 600X). En estas condiciones, las células viables tomaron AO y excluyeron EB, dando como resultado solamente fluorescencia de color verde con excitación UV. Las células no viables (apoptóticas o necróticas) asimilaron el EB y la excitación de color rojo con verde fluorescente, superando a cualquier fluorescencia de color verde de AO. Las células apoptóticas se distinguieron de la formación de cuerpos apoptóticos más pequeños que presentaban fluorescencia de color rojo.
Tinción nuclear para microscopía confocal de barrido láser (LSCM)
Las células HL-60 de leucemia promielocítica humana (ATCC CCL-240) que crecen en fase logarítmica se transfirieron en partes alícuotas de 100 gl (aproximadamente 50.000 células) a una microplaca de cultivo de tejidos de 96 pocillos (Corning Costar, Acton, MA) que contenía 150 gl de medio de cultivo caliente(IMDM de Hyclone suplementado con FBS al 20 %) y se colocó en una incubadora con camisa de agua a 37 °C, atmósfera de CO2 al 5 % (Thermo Electron Corp., Forma Series II, Modelo 3110, HEPA Clase 100) durante una hora para equilibrar. A continuación, se añadieron 50 gl de una solución de 600 gM de un compuesto de la descripción (calentada a 37 °C), preparada en solución salina tamponada con fosfato (PBS) que contiene cloruro de potasio 2,68 mM, fosfato potásico monobásico 1,47 mM, cloruro sódico 0,137 M, y fosfato de sodio dibásico 8,10 mM, pH 7,4. La microplaca se devolvió a la incubadora durante 15 min. La muestra de 300 gl a continuación se transfirió a una placa de cultivo de tejidos con fondo de vidrio recubierta con colágeno (FluoroDish FD35COL, World Precision Instruments Inc.) y se devolvió a la incubadora durante 10-15 minutos para permitir que las células se adhieran a la placa recubierta. El volumen de la placa de cultivo de tejidos se completó posteriormente hasta 2 ml de PBS caliente para LSCM.
Inactivación fotodinámica (PDI) de organismos microbianos y quimioterapia antimicrobiana fotodinámica (PACT).
Staphylococcus aureus (SA, ATCC 25923) y S. aureus resistente a la meticilina (MRSA, ATCC 33592), se cultivaron durante una noche a 37 °C en medio de Columbia (BD, Canadá) en condiciones atmosféricas aerobias o hipóxicas como se describe en el presente documento. Las placas de agar Columbia se usaron para cultivar colonias para SA, mientras que las placas de agar de detección de resistencia a oxacilina (Oxoid, Canadá) fueron necesarias para el recuento de MRSA CFU. Un LED de alta potencia, fabricado por Theralase, Inc., (530 ± 25 nm) con una irradiancia promedio de 98+2 mW cm'2 sirvió como fuente de luz primaria para todos los experimentos de PDI.
PDI (normoxia). Los cultivos se cultivaron durante una noche en caldo de cultivo Columbia. Las alícuotas de referencia bacterianas se prepararon mediante una dilución del cultivo durante una noche en medios recién preparados con una DOa = 600nm de 0,3, que es equivalente a 108 cfu mL-1. Las soluciones de reserva de PS de 2 mM se prepararon en agua purificada (MilliQ, 18,5 mü), y las diluciones en serie se prepararon en condiciones de poca luz para lograr concentraciones finales que varían de 12 a 0,03 gM. Las alícuotas bacterianas se añadieron a una placa de 96 pocillos (60 gl por pocillo) seguido de 60 gl de media con la dilución de PS apropiada, incluyendo los controles para cada cepa de SA sin PS. Las placas se prepararon por duplicado, por lo que una placa sirvió como control de oscuridad y se incubó durante 30 minutos con el PS en la oscuridad a 37 °C. La otra placa con bacterias y concentraciones de PS idénticas se expuso a la luz durante 10 minutos (exposición total a la radiación de 58,8 J cm’2). La cuantificación bacteriana se llevó a cabo mediante recuento manual. Para el recuento manual, se colocaron alícuotas de 20 gL diluidas en PBS en placas de agar Columbia y el recuento de las colonias se hizo después de 24 horas de incubación a 37 °C.
PDI (hipoxia). Con el fin de crear condiciones hipóxicas, dos bolsas de 5 L de Anaerogen (Oxoid, Canadá) se pusieron en una cámara ambiental y una mezcla de CO2 al 0,5 % en atmósfera de N2 (Praxair, Toronto, ON) se introdujo durante 30 minutos para consumir el oxígeno residual. Todos los reactivos líquidos, incluyendo los medios y el agua, también se rociaron con CO2 al 0,5 % en atmósfera de N2. Una mezcla de tioglicolato de sodio (0,68 gM) y resazurina (17,45 gM) se añadió como medio antes de mezclar las bacterias para asegurar el consumo completo de oxígeno. Se utilizaron tubos de vidrio con tapones de goma para preservar las condiciones hipóxicas durante la incubación bacteriana antes de la exposición a la luz PDT. Para minimizar aún más el O2, todas las herramientas y las placas de plástico se mantuvieron en la cámara con N2 equilibrado con O2 al 0,5 %/CÜ2 al 5 % durante 12 horas antes de comenzar los experimentos. Los procedimientos de PDI posteriores se llevaron a cabo como se ha descrito para condiciones normóxicas dentro de la cámara hipóxica. El ensayo de CFU fue el método convencional utilizado para recuperar el índice de supervivencia bacteriana después del tratamiento con PDI; no se usó ensayo colorimétrico.
Citotoxicidad en oscuridad y luz hacia las células HL60 de los compuestos de la divulgación:
Las células HL-60 de leucemia promielocítica humana (ATCC CCL-240) que crecen en fase logarítmica se transfirieron en alícuotas de 50 pL (aproximadamente 40.000 células) a dos microplacas de cultivo de tejidos de 96 pocillos (Corning Costar, Acton, MA) que contenían 25 pL de medio de cultivo caliente (medio RPMI-1640 suplementado con FBS al 20 %), y se colocaron en una incubadora con camisa de agua a 37 °C, CO2 al 5 % (Thermo Electron Corp., Forma Series II, Modelo 3110, HEPA Clase 100) durante una hora para equilibrar. Las alícuotas calientes de 25 pl de compuestos de la presente invención diluidas en serie, recién preparadas en PBS (cloruro de potasio 2,68 mM, fosfato potásico monobásico 1,47 mM, cloruro sódico 0,137 M y fosfato de sodio dibásico 8,10 mM, pH 7,4), se añadieron a las células y se incubaron a 37 °C en atmósfera de CO2 al 5 % durante 1-24 horas. Después de este periodo de incubación previa con PDT, una de las microplacas se irradió con luz mientras que la otra microplaca se mantuvo en la oscuridad. La fuente de luz empleada puede variar de acuerdo con el color, la densidad de energía, el método de suministro (continuo o pulsado), etc. Un tratamiento de PDT representativo podría usar luz de 400 - 700 nm desde un proyector de 190 W (BenQ MS510) durante 1 h (0,0278 mWcm-2, dosis de luz total 100 Jcm 2). A continuación ambas microplacas se incubaron (37°C en atmósfera de CO2 al 5 %) durante aproximadamente 48 h. La proliferación y la viabilidad celular se determinaron mediante métodos de recuento de células manuales convencionales y mediante varios métodos de alto rendimiento. Un método representativo de alto rendimiento utilizado en la presente invención emplea el indicador redox de Alamar, el cual se basa en la capacidad de las células metabólicamente activas para convertir el reactivo en un indicador fluorescente. En resumen, se añadieron alícuotas de 10 pl de reactivo azul Alamar caliente (Life Technologies DAL 1025) a todos los pocillos de muestra aproximadamente a las 48 h después de la PDT, y las microplacas se incubaron durante otras 24 h a 37 °C en atmósfera de CO2 al 5 %. Las microplacas a continuación se colocaron en un lector de microplacas de fluorescencia Cytofluor 4000 con el filtro de excitación ajustado a 530 ± 25 nm y el filtro de emisión ajustado a 620 ± 40 nm. Los recuentos de fluorescencia de cada pocillo se importaron posteriormente en una hoja de cálculo de Microsoft Excel (Microsoft Office 2010) y se procesaron usando Prism 60 (GraphPad Software La Jolla, CA) para construir curvas de respuesta a la dosis.
La citotoxicidad en oscuridad y luz hacia las células HL60 de compuestos representativos de la divulgación se describe en la tabla 15:
Tabla 15: Citotoxicidad en oscuridad y luz hacia las células HL60 informada como valores de CE50 para compuestos de la divulgación. PI = índice fotodinámico, definido como la proporción de toxicidad en oscuridad con respecto a luz como valores de CE50. Pro-white: proyector de 190 W, 0,0278 mWcm-2; PR-vis: fotorreactor con 12 tubos fluorescentes, 0,0077 mWcm-2; CE50 = concentración eficaz, definida como la concentración a la cual la viabilidad celular se ha reducido a un 50 % con respecto a muestras de control que no contienen compuesto. Los códigos que siguen a "Pro-white" o "PR-vis" se refieren a referencias internas para las condiciones experimentales.
Figure imgf000235_0001
(continuación)
Figure imgf000236_0001
(continuación)
Figure imgf000237_0001
(continuación)
Figure imgf000238_0001
Efecto de la terapia fotodinámica de compuestos representativos de la divulgación en condiciones normóxicas e hipóxicas:
En condiciones normóxicas, 16A y 16C demostraron un gran efecto de PDT a concentraciones tan bajas como 4 pM (Tabla 16). De los dos PS, sólo 16C demostró un efecto de PDT sustancial en condiciones hipóxicas, por lo cual se requirió una mayor concentración de la PS (40 pM). Es de destacar que los cambios relativamente menores en la fórmula química de 16C en comparación con 16A en comparación con 16A fueron acompañados por cambios radicales en las propiedades de PS: 16C, a diferencia de 16A, es soluble en agua y es capaz de provocar un fuerte efecto de PDT en condiciones hipóxicas.
Las evidencias experimentales para PDT in vitro en normoxia (16A y 16C) y en hipoxia (16C>16A) se muestran en la Tabla 16. Las condiciones hipóxicas se refieren a un entorno que tiene aproximadamente un 0,1-0,5 % de oxígeno. Los efectos de 16A (4, 40 pM) y 16C (4, 40 pM) sin luz (toxicidad en oscuridad) y con luz en la muerte celular se expresan como un porcentaje de un control combinado (sin PS, sin luz). Dosis de luz: 635 nm, 90 Jcm -2. El efecto de PDT se calcula restando la muerte celular debida a la luz sola y la muerte celular debida a PS solo (toxicidad en oscuridad) de la muerte celular PDT total.
La línea celular se adquirió en ATCC (Mannassas, VA): U87MG (U87, N.° HTB-14). Se han verificado los perfiles cortos de repetición en tándem (STR) para todas las líneas celulares. Las células se cultivaron en medio DMEM suplementado con suero bovino fetal al 10 % y penicilina al 1 % (5.000 unidades ml-1) y estreptomicina (5.000 ml ml-1) (todas de Gibco, Invitrogen, CA, USA) en matraces de 75 cm2 (Falcon, Invitrogen, CA, USA) y se mantuvieron a 37 °C en una atmósfera de CO2 al 5 %. Las células se pasaron a un 80 % de confluencia, y el intercambio de medios completo se realizó cada 2-3 días. Se utilizaron células entre 6 y 27 pases.
24 horas antes de los experimentos, 15.000 células por pocillo fueron sembradas en placas duplicadas de 96 pocillos (Falcon, Invitrogen, CA, USA) utilizando 200 pl de suspensión celular por pocillo. Al día siguiente, los medios fueron reemplazados con medios más un compuesto de la divulgación a concentraciones variables. Después de 4-6 horas de carga de PS, el PS no unida se retiró mediante un intercambio de medios completo con medios recién preparados exentos de piruvato de sodio, seguido de irradiación de luz PDT.
La irradiación de toda la placa de 96 pocillos se llevó a cabo usando una fuente de luz de matriz de LED de color rojo que emite a 635 /- 25 nm proporcionada por Theralase Inc. (Toronto, ON, Canadá). Se administró una exposición radiante de 90 Jcm-2 a una irradiación de 125 mW cm-2. La irradiación fue homogénea dentro de un 12 % en todos los pocillos. El enfriamiento activo con aire mantuvo la temperatura del medio de cultivo tisular por debajo de 3 °C a partir de la temperatura ambiente.
Para experimentos hipóxicos, todas las soluciones usadas se mantuvieron en condiciones hipóxicas durante al menos 24 horas antes del experimento. Para facilitar la unión, las placas de 96 pocillos que contenían células se transfirieron a una cámara hipóxica (InvivO2400 Ruskinn Technology Ltd., Reino Unido) 4 horas después de la siembra normóxica. Las placas permanecieron en condiciones hipóxicas durante 24 horas antes de la irradiación de luz PDT. La cámara hipóxica tenía una atmósfera de O2 al 0,5 %, CO2 al 5 %, equilibrada con N2, a 37 °C y una humedad de un 95 %. Al igual que en las condiciones normóxicas, los medios con PS se seleccionaron y a continuación se reemplazaron con medios recién preparados después de la carga de PS de 4 a 6 horas. Las células se mantuvieron durante 2 horas en una atmósfera de O2 al 0,1 % para reducir aún más el oxígeno disponible en el pocillo experimental. Los tiempos de difusión de oxigeno a través de la columna de líquido de ~3 mm son mucho más cortos que los tiempos de exposición de ~7 min y por lo tanto es necesario limitar la reoxigenación del en torno exterior sin comprometer la supervivencia celular independiente de PDT. Después de la irradiación, las células se mantuvieron en una atmósfera de O2 al 0,5 % durante 24 horas hasta llevar a cabo las mediciones de viabilidad celular. Para todos los procedimientos llevados a cabo en condiciones ambientales normales (irradiación de luz, mediciones de destrucción celular), las placas que contenían células hipóxicas se sellaron herméticamente con una película adhesiva impermeable al oxígeno (Evergreen Scientific, USA). Cuando las placas se devolvieron a condiciones hipóxicas, el sellado hermético se retiró y los cubreplacas se sustituyeron. Esto no alteró la pO2 en los pocillos experimentales, como se sometió a ensayo con un ensayo colorimétrico (Suflita, J. y Concannon, F., 1995).
La viabilidad celular se midió en el duplicado de 96 pocillos, 24 horas después de la irradiación usando el ensayo de viabilidad celular Presto Blue (Invitrogen, CA, USA), de acuerdo con el protocolo del fabricante, con la lectura proporcionada por un SpectroMax M5 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA).
Tabla 16: Efecto de la terapia fotodinámica de compuestos representativos de la divulgación en condiciones normóxicas e hi óxicas
Figure imgf000239_0001
(continuación)
Figure imgf000240_0001
A partir de la divulgación menciona anteriormente debería ser evidente que la actividad biológica de los compuestos de la invención se puede alterar de forma significativa con una modificación estructural sutil. Por ejemplo, el aumento del número de unidades de tiofeno en la cadena de oligotiofeno aumenta la toxicidad a la luz en una serie dada con un conjunto definido de ligandos auxiliares, por lo que el índice de tiofeno aumenta de uno a cuatro y más allá. En la descripción de la presente invención, la serie 16 contiene cuatro unidades de tiofeno; la serie 14 contiene tres unidades de tiofeno; la serie 10 contiene dos unidades de tiofeno; y serie 1 contiene una unidad de tiofeno. Esta modificación racional se extiende a otros metales (además del rutenio) que incorporan un ligando de imidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina sustituida en la posición 2. La Tabla 15 demuestra este concepto para Os14a/Os10a/Os1a, Os14b/Os10b/Os1b y Os14c/Os10c/Os1c así como agentes adicionales relacionados con las estructuras de base de rutenio.
El número de unidades de tiofeno también se puede utilizar para extender la longitud de onda más larga de absorción, ilustrada comparando la absorción roja de 16c con la absorción verde de 14c, por lo que 16c contiene cuatro unidades de tiofeno mientras que 14c contiene tres.
Dentro de una serie dada que contiene cadenas de tiofeno de longitud idéntica, la identidad de los ligandos auxiliares se puede utilizar para ajustar aún más diversas propiedades químicas, físicas y biológicas. Por ejemplo, 16c muestra PDT in vitro en hipoxia (actividad fotodinámica de Tipo 1) mientras que 16a no se muestra en la Tabla 16. La única diferencia entre los dos compuestos es la incorporación de dos grupos metilo en las posiciones 4,4' de 2,2'-bipiridina en el caso de 16c. Los grupos metilo adicionales también conducen a una mayor solubilidad en agua y otros medios biológicos. La identidad del ligando auxiliar también se puede utilizar para ajustar la toxicidad lumínica general de formas más radicales, y este efecto se muestra para 14d, en el que la sustitución de los grupos metilo en 14c por grupos t-butilo en 14d disminuye de forma significativa la actividad fotodinámica en las condiciones usadas (Tabla 15). Estos conceptos se extienden a complejos trisheterolépticos del tipo [Ru(LL')(LL")(LL"')]X2, complejos obtenidos a partir de otros metales, y también a armazones multimetálicos. Por ejemplo, 14cj contiene 14L como un ligando único y 4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina y 2,2'-bipirimidina como otros dos ligandos únicos. La combinación de 14l con estos dos ligandos auxiliares conduce a una actividad fotodinámica similar a la de 14a y 14c. Los complejos dinucleares obtenidos a partir de rutenio y osmio muestran actividad fotodinámica, y esta actividad también está influenciada por la naturaleza de los ligandos auxiliares (Tabla 15).
En general, la presente invención demuestra que el número de tiofenos, la identidad de los ligandos auxiliares, el armazón empleado (mononuclear con respecto a dinuclear) y la naturaleza del metal se pueden usar para ajustar las propiedades químicas, físicas y biológicas de los compuestos para conseguir actividad fotodinámica.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto que tiene la fórmula (I):
    Figure imgf000241_0001
    incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que:
    M es seleccionado entre el grupo que consiste en manganeso, molibdeno, renio, hierro, rutenio, osmio, cobalto, rodio, iridio, níquel, platino, y cobre;
    X es seleccionado entre el grupo que consiste en Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, y SO4-2; n = 0, 1, 2, 3, 4 ó 5;
    y= 1, 2 ó 3;
    z = 0, 1 ó 2;
    Lig en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en
    Figure imgf000241_0002
    y
    Figure imgf000242_0001
    R1 es seleccionado entre el grupo que consiste en
    Figure imgf000242_0002
    u es un número entero;
    R2a, R2b, R2c, R2d, R2e, y R2f en cada aparición cada uno es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido;
    R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h R3i, R3j, R3k, R31, y R3m en cada aparición cada uno es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, y CO2R8;
    R4a, R4b, y R4c en cada aparición cada uno es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido;
    R4a y R4b en cada aparición en un anillo de tiofeno se toman junto con el átomo al que están unidos para formar un anillo opcionalmente sustituido el cual tiene 6 átomos en el anillo que contienen 2 átomos de oxígeno;
    R5 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
    R6 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
    R7 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
    R8 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
    en el que el compuesto no es [2-(2-Tienil)-1H-imidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina-KN7,KN8]bis(1,10-fenatrolina-KN1,KN10)-níquel(2+), y
    los compuestos de las siguientes estructuras están excluidos:
    Figure imgf000243_0001
    así como el compuesto C2 de la siguiente fórmula
    Figure imgf000243_0002
    2. El compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula (II):
    Figure imgf000244_0001
    incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que:
    M se selecciona entre el grupo que consiste en manganeso, molibdeno, renio, hierro, rutenio, osmio, cobalto, rodio, iridio, níquel, platino, y cobre;
    X es seleccionado entre el grupo que consiste en Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3-, y SO4-2; n = 0, 1, 2 o 3;
    Lig en cada aparición es seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en
    Figure imgf000245_0001
    u es un número entero;
    R2a, R2b, R2c, R2d, R2e, y R2f en cada aparición cada uno se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido;
    R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h R3i, R3j, R3k, R31, y R3m en cada aparición cada uno se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, y CO2R8 *105;
    R4a, R4b, y R4c en cada aparición cada uno se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido ramificado, cicloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, haloalquilo C1-6 opcionalmente sustituido, alcoxi C1-6 opcionalmente sustituido, CO2R5, CONR62, NR72, sulfato, sulfonato, arilo opcionalmente sustituido, ariloxi opcionalmente sustituido, heteroarilo opcionalmente sustituido, y heterociclo opcionalmente sustituido;
    R4a y R4b en cada aparición en un anillo de tiofeno se toman junto con el átomo al que están unidos para formar un anillo opcionalmente sustituido que tiene 6 átomos en el anillo que contienen 2 átomos de oxígeno;
    R5 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
    R6 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
    R7 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
    R8 en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno y alquilo opcionalmente sustituido;
    en el que los compuestos de las siguientes estructuras están excluidos
    Figure imgf000246_0001
    4. El compuesto de la reivindicación 1, que tiene la fórmula (IV):
    Figure imgf000247_0001
    incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: h = 0, 1, 2, 3, 4 ó 5.
    5. Un compuesto de la fórmula 1 que es:
    Ru(2,2'-bipiridina)2(2-(2',2":5",2"'-tertiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Ru(2,2'-bipiridina)2(2-(2',2":5",2"';5"',2""-cuatertiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Ru(4,4’-d¡met¡l-2,2’-b¡p¡r¡d¡na)2(2-(2’,2"-b¡t¡ofeno)-im¡dazo[4,5-fj[1,10]fenantrol¡na);
    Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2(2-(2',2":5",2'"-tertiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina);
    Ru(4,4’-d¡met¡l-2,2’-bip¡r¡d¡na)2(2-(2’,2":5",2"’;5"’,2""-cuatert¡ofeno)-¡m¡dazo[4,5-f][1,10]fenantrol¡na); Ru(4,4’-di-f-butil-2,2’-bipi ridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Ru(4,4’-di-f-butil-2,2’-bipi ridina)2(2-(2’,2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Ru(4,4’-di-f-butil-2,2’-bipi ridina)2(2-(2’,2":5",2"’-tertiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Ru(4,4’-dimetoxi-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2":5",2"’-tertiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Ru(5,5’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Ru(5,5’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Ru(5,5’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2":5",2’"-tertiofeno)-imidazo[4,5-fj[1,10]fenantrolina);
    Ru(6,6’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Ru(6,6’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina);
    Ru(6,6’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2":5",2"’-tertiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina);
    Ru(4,4’-di(metilcarboxi)-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2":5",2"’-tertiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina); Ru(2,2’-bipirimidina)2(2-(2’,2":5",2"’-tertiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina);
    Ru(2,2’-bipirimidina)(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)(2-(2’,2":5",2"’-tertiofeno)-imidazo[4,5-Z][1,10]fenantrolina)
    Ru(1,10-fenantrolina)2(2-tiofenimidazo[4,5-fj[1, 10]fenantrolina);
    Os(2,2’-bipi ridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Os(2,2’-bipi ridina)2(2-(2’,2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Os(2,2’-bipi ridina)2(2-(2’,2":5",2"’-tertiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Os(1, 10-fenantrolina)2(2-tiofenimidazo[4,5-f][1, 10]fenantrolina);
    Os(1, 10-fenantrolina)2(2-(2’,2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-/][1, 10]fenantrolina):
    Os(1,10-fenantrolina)2(2-(2’,2":5",2"’-tertiofeno)-imidazo[4,5-fj[1, 10]fenantrolina);
    Os(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-tiofenimidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Os(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2"-bitiofeno)-imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina);
    Os(4,4’-dimetil-2,2’-bipiridina)2(2-(2’,2":5",2"’-tertiofeno)-imidazo[4,5-f][1,10]fenantrolina):
    o una forma de farmacéuticamente aceptable del mismo.6
    6. Un compuesto de la reivindicación 1 que tiene la fórmula (V):
    Figure imgf000248_0001
    incluyendo hidratos, solvatos, y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: Lig en cada aparición se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en
    Figure imgf000248_0002
    y
    Figure imgf000249_0001
    q = 0, 1, 2, 3, 4 ó 5;
    en la que el siguiente compuesto está excluido:
    Figure imgf000249_0002
    7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 6 que es:
    (2,2'-bipiridina)2Ru(2-tiofeno-bis[imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina)Ru(2,2'-bipiridina)2;
    (4,4'-dimetil-2,2'-bipi ridina)2Ru(2-tiofeno-bis[imidazo[4,5/][1,10]fenantrolina])Ru(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2;
    (2,2'-bipiridina)2Ru(2-(2',2"-bitiofeno)-bis[imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina])Ru(2,2'-bipiridina)2; (1,10-fenantrolina)2Ru(2-(2',2"-bitiofeno)-bis[imidazo[4,5-/][1, 10]fenantrolina])Ru( 1,10-fenantrolina)2;
    (2,2'-bipiridina)2Os(2-tiofeno-bis[imidazo[4,5-/][1,10]fenantrolina)Os(2,2'-bipiridina)2;
    (1,10-fenantrolina)2Os(2-tiofeno-bis[imidazo[4,5f][1,10]fenantrolina])Os(1,10-fenantrolina)2;
    4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2Os(2-tiofeno-bis[imidazo[4,5t][1,10]fenantrolina])Os(4,4'-dimetil-2,2'-bipiridina)2;
    o una forma farmacéuticamente aceptable del mismo.
    8. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para su uso en el tratamiento de una enfermedad asociada con células hiperproliferativas.
    9. Un compuesto para su uso en el tratamiento de una enfermedad asociada con células hiperproliferativas, teniendo dicho compuesto una estructura seleccionada entre
    Figure imgf000249_0003
    10. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para su uso para destruir patógenos o para conseguir asepsis cuando se administra a un sujeto.
    11. Un compuesto para su uso para destruir patógenos o para conseguir asepsis cuando se administra a un sujeto, teniendo dicho compuesto una estructura seleccionada entre
    Figure imgf000250_0002
    12. Uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para destruir patógenos o esterilización, excluyendo un tratamiento médico de un cuerpo humano o animal.
    13. Uso de un compuesto para destruir patógenos o esterilización, excluyendo un tratamiento médico de un cuerpo humano o animal, teniendo dicho compuesto una estructura seleccionada entre
    Figure imgf000250_0001
    14. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para su uso en diagnósticos.
    15. Un compuesto para su uso en diagnóstico, teniendo dicho compuesto una estructura seleccionada entre
    y
    Figure imgf000251_0001
ES13726902T 2012-04-15 2013-04-15 Compuestos fotodinámicos de tiofeno a base de metal y su uso Active ES2764421T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261624391P 2012-04-15 2012-04-15
PCT/US2013/036595 WO2013158550A1 (en) 2012-04-15 2013-04-15 Metal-based thiophene photodynamic compounds and their use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2764421T3 true ES2764421T3 (es) 2020-06-03

Family

ID=48576499

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES13726902T Active ES2764421T3 (es) 2012-04-15 2013-04-15 Compuestos fotodinámicos de tiofeno a base de metal y su uso

Country Status (8)

Country Link
US (2) US9345769B2 (es)
EP (1) EP2854948B1 (es)
CN (1) CN105120957B (es)
BR (1) BR112014025702B1 (es)
CA (1) CA2883068C (es)
ES (1) ES2764421T3 (es)
RU (1) RU2677855C2 (es)
WO (1) WO2013158550A1 (es)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105377862B (zh) 2013-03-15 2019-09-13 希瑞·安·麦克法兰 用作光动力化合物的金属基配合物及其用途
CN106687176B (zh) * 2014-04-29 2019-06-04 锡拉莱斯科技有限公司 多波长光动力疗法设备
US9969759B2 (en) 2014-05-22 2018-05-15 Northwestern University Duplex-selective organometallic DNA intercalators
EP3247397B1 (en) * 2015-01-19 2021-05-19 Theralase Technologies Inc. Metal-glycoprotein complexes and their use as chemotherapeutic compounds
US10111936B2 (en) 2015-01-19 2018-10-30 Theralase Technologies, Inc. Metal-glycoprotein complexes and photodynamic therapy of immune privileged sites with same
CA3000625C (en) 2015-10-01 2024-02-13 Richter Life Science Development Ab Detection of microbial peptides
US10335608B2 (en) 2016-04-20 2019-07-02 Theralase Technologies, Inc. Photodynamic compounds and methods for activating them using ionizing radiation and/or other electromagnetic radiation for therapy and/or diagnostics
EP3621629A4 (en) * 2017-05-11 2021-03-17 Theralase Biotech Inc. VACCINE CONTAINING CANCER CELLS INACTIVATED BY PHOTODYNAMIC TREATMENT WITH METAL-BASED COORDINATION COMPLEXES, AND IMMUNOTHERAPY METHOD USING THE LATTER
WO2019078871A1 (en) * 2017-10-19 2019-04-25 Texas State University PHOTOACTIVABLE PRODRANT AGAINST CANCER
US11793818B2 (en) 2018-03-26 2023-10-24 Theralase Technologies, Inc. Method for treating conditions associated with hyperproliferating cells comprising combined administration of a cannabinoid receptor agonist and radiation therapy
CN110396092B (zh) * 2019-07-09 2020-06-30 北京师范大学 含噻吩基钌配合物作为高效单线态氧产生光敏剂
CN110872330B (zh) * 2019-11-19 2021-09-21 华南理工大学 一种联吡啶钌邻菲罗啉苯并咪唑配合物及其制备方法和用途

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002098417A1 (en) * 2001-06-06 2002-12-12 Brookhaven Science Associates Novel metalloporphyrins and their uses as radiosensitizers for radiation therapy
PL197232B1 (pl) * 2004-06-03 2008-03-31 Univ Wroclawski Nowe kompleksy kationowe żelaza(II) i kobaltu(II) z 2,2'-bipirydyną, z 2,2'-bichinoliną i 1,10-fenantroliną oraz ich pochodnymi, sposób wytwarzania tych kompleksów i zastosowanie

Also Published As

Publication number Publication date
CA2883068A1 (en) 2013-10-24
RU2014145281A (ru) 2016-06-10
EP2854948A1 (en) 2015-04-08
CA2883068C (en) 2021-04-20
EP2854948B1 (en) 2019-09-25
CN105120957A (zh) 2015-12-02
US9676806B2 (en) 2017-06-13
RU2677855C2 (ru) 2019-01-22
CN105120957B (zh) 2019-06-25
US20160229878A1 (en) 2016-08-11
US20130331367A1 (en) 2013-12-12
BR112014025702A2 (pt) 2018-12-18
WO2013158550A1 (en) 2013-10-24
US9345769B2 (en) 2016-05-24
BR112014025702B1 (pt) 2022-10-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2764421T3 (es) Compuestos fotodinámicos de tiofeno a base de metal y su uso
Gao et al. A fluorescent dye with large Stokes shift and high stability: synthesis and application to live cell imaging
CA2907356C (en) Metal-based coordination complexes as photodynamic compounds and their use
Ciubini et al. Design and synthesis of symmetrical pentamethine cyanine dyes as NIR photosensitizers for PDT
Keleş et al. A comparative study on DNA/BSA binding, DNA photocleavage and antioxidant activities of water soluble peripherally and non-peripherally tetra-3-pyridin-3-ylpropoxy-substituted Mn (III), Cu (II) phthalocyanines
Sayed et al. Design and synthesis of novel indole derivatives with aggregation-induced emission and antimicrobial activity
Barut et al. The water soluble peripherally tetra-substituted zinc (II), manganese (III) and copper (II) phthalocyanines as new potential anticancer agents
Yang et al. Organic small molecular nanoparticles based on self-assembly of amphiphilic fluoroporphyrins for photodynamic and photothermal synergistic cancer therapy
Tang et al. Heavy atom enhanced generation of singlet oxygen in novel indenofluorene-based two-photon absorbing chromophores for photodynamic therapy
Nas et al. The photophysical and photochemical properties of new unmetallated and metallated phthalocyanines bearing four 5-chloroquinolin-8-yloxy substituents on peripheral sites
Mantareva et al. Lutetium (III) acetate phthalocyanines for photodynamic therapy applications: Synthesis and photophysicochemical properties
Ma et al. Enhanced singlet oxygen generation of a soft salt through efficient energy transfer between two ionic metal complexes
Almammadov et al. A hydrogen peroxide responsive resorufin-based phototheranostic agent for selective treatment of cancer cells
Gorman et al. The synthesis and properties of unsymmetrical 3, 7-diaminophenothiazin-5-ium iodide salts: Potential photosensitisers for photodynamic therapy
ES2396076B2 (es) Internalización y activación fotocontrolada de moléculas pequeñas capaces de unirse al adn de doble hebra.
Li et al. Novel D-π-AD Type aggregation induced emission luminogens based nanoparticles as efficient 1O2 photosensitizer and bright NIR imaging agent
US20220315539A1 (en) Phenazine derivative and use thereof for the treatment of cancer
US11977028B2 (en) Mechanical-bond-induced exciplex fluorescence
Wilson et al. Syntheses and DNA photocleavage by mono-and bis-phenothiazinium–piperazinexylene intercalators
Rad-Moghadam et al. The deep eutectic melt of sorbitol and metformin hydrochloride: synthesis of 3-substituted 2-aminonaphtho [2, 3-b] furan-4, 9-diones and their photophysical properties
Yakubovskyi et al. Boradipyrromethenecyanines of different electronic symmetry: A demonstration of the potential of BODIPY nucleus as end group in polymethine chromophoric system
Vijayan Effects of Heterocycles on Biologically Relevant Molecules
KR20240001502A (ko) 광역학 암치료를 위한 신규한 화합물, 이를 포함하는 조성물 및 광역학 암치료 방법
Aliosman et al. Aminophenoxy-substituted zinc (II) phthalocyanines as basic photosensitizers for conjugation with biologically active moieties via amide bond
Li et al. BODIPY-based photocages: rational design and their biomedical application