BR112014021605B1

BR112014021605B1 - método para aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta

Info

Publication number: BR112014021605B1
Application number: BR112014021605A
Authority: BR
Inventors: Hara Masakazu; Nakanishi Motoyasu
Original assignee: The Shizuoka Chamber Of Commerce And Ind
Priority date: 2012-04-03
Filing date: 2013-04-02
Publication date: 2019-12-10
Also published as: AU2013244472A1; EP2759201A4; AU2013244472B9; JP5544450B2; EP2759201A1; EP2759201B1; US20140364316A1; JPWO2013151041A1; AU2013244472B2; WO2013151041A1

Abstract

resumo "composição para aperfeiçoamento de resistência ao estresse ambiental de planta e método para aperfeiçoamento de resistência ao estresse ambiental de planta" trata-se de uma composição para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta, cujo ingrediente ativo tem sido esclarecido e, portanto, que é aplicável a uma planta que precisa ser altamente segura, tal como uma planta comestível, e pode conferir um efeito estável. a composição para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta compreende como o ingrediente ativo ao menos um elemento selecionado a partir de sanguinarina representada pela fórmula (i) e um sal da mesma.

Description

"MÉTODO PARA APERFEIÇOAMENTO DA RESISTÊNCIA AO ESTRESSE AMBIENTAL DE UMA PLANTA" CAMPO DA TÉCNICA

[001]A presente invenção refere-se a uma composição para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta, e um método para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta.

TÉCNICA ANTERIOR

[002]Nos últimos anos, de acordo com o progresso do aquecimento global, as mudanças ambientais, tais como o aumento de temperatura e o aumento da secura, têm surgido, e as mudanças estão afetando até a extensão do crescimento de plantas comestíveis, tais como grãos. Com a finalidade de tratar dessa situação, um método para ajustar um ambiente de crescimento de planta, por exemplo, horticultura protegida, e uma fábrica de plantas, e um método para aperfeiçoar a resistência ao estresse ambiental de uma planta por si mesma, pode ser considerado. No primeiro método, não somente é necessário construir e manter as instalações, mas também, no caso em que uma planta é na realidade cultivada em uma escala comercial, energia considerável é continuamente consumida e, desse modo, em consideração do custo, esse método não pode ser facilmente empregado.

[003]No último método, (1) a fertilização cruzada, (2) recombinação de genes de resistência ao estresse ambiental e (3) o uso de materiais biológicos, podem ser considerados. Em um método de (1), necessita-se de muitos anos para estabelecer as variedades de geração e, desse modo, não se pode lidar com a situação que precisa ser assistida nesses dias. Em um método de (2), as instalações são exigidas a fim de cultivar a planta modificada geneticamente, e permanece o mesmo problema que no primeiro método descrito acima. Por outro lado, em um método de (3), conforme descrito nas literaturas de patente 1 e 2, não são exigidas instalações especiais, e a resistência ao estresse ambiental pode ser aperfeiçoada somente proporcionando-se materiais biológicos, tais como produtos de degradação de levedura, e extratos brutos de medicina herbária, para uma planta quando necessário, portanto, esse método é considerado como o mais prático.

[004]Por outro lado, os alcalóides de planta entre os materiais naturais podem ser separados de maneira relativamente fácil e, adicionalmente, é confirmado que não somente os efeitos repelentes de inseto, mas também os efeitos farmacológicos sobre o corpo humano são mantidos. Os métodos de produção específica e métodos de utilização já têm sido propostos, conforme nas Literaturas de patente 3 a 9.

LISTA DE CITAÇÃO

LITERATURA DE PATENTE

[005]Literatura de patente 1: Publicação de patente japonesa não examinada no. 11-199419A

[006]Literatura de patente 2: Publicação de patente japonesa não examinada no. 2007-45709A

[007]Literatura de patente 3: Patente no. U.S. 5.133.981 [008]Literatura de patente 4: Publicação de patente japonesa não examinada do pedido PCT no. 2008-524130 [009]Literatura de patente 5: Publicação de patente japonesa não examinada do pedido PCT no. 2011-521982 [010]Literatura de patente 6: Publicação de patente japonesa não examinada do pedido PCT no. 2011 -512370 [011]Literatura de patente 7: Publicação de patente japonesa não examinada no. 05-124944A

[012]Literatura de patente 8: Publicação de patente japonesa não examinada no. 2008-37775A

[013]Literatura de patente 9: Publicação de patente japonesa não examinada no. 2009-46411A

LITERATURA NÃO PATENTÁRIA

[014]Literatura de não patente 1: páginas 145 a 155, Safety assessment of sanguiritrin, alkaloid fraction of Macleaya cordata, in rats, Psotova et al., Veterinarni Medicina, 51,2006 (4) SUMÁRIO DA INVENÇÃO

PROBLEMAS A SEREM RESOLVIDOS PELA INVENÇÃO

[015]No entanto, no que se refere a materiais biológicos, tais como produtos de degradação de levedura, e extratos brutos de medicina herbária, os quais são descritos nas Literaturas de patente 1 e 2, os ingredientes ativos são desconhecidos, portanto, teme existido um problema de segurança na aplicação dos materiais biológicos a uma planta comestível. Adicionalmente, os materiais biológicos são obtidos a partir de matérias-primas biológicas e, desse modo, a variação dos efeitos tem sido às vezes observada.

[016]Por outro lado, nas Literaturas de patente 3 a 9, conforme descrito acima, há uma revelação que os alcalóides de planta são usados para diversas aplicações. No entanto, não tem sido relatado que os alcalóides de planta são usados para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta.

[017]Portanto, um objetivo da presente invenção consiste em fornecer uma composição para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta, cujos ingredientes ativos têm sido esclarecidos e, desse modo, que podem ser aplicados a uma planta que tem necessidade de ser segura, tal como, uma planta comestível, e ainda pode fornecer um efeito estável.

[018]Além disso, outro objetivo da presente invenção consiste em fornecer uma composição para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta, que contém alcalóides de planta como um ingrediente ativo.

[019]Adicionalmente, outro objetivo da presente invenção consiste em fornecer um método para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta mediante o uso da composição descrita acima.

MEIO PARA RESOLVER OS PROBLEMAS

[020]Com a finalidade de resolver os problemas acima, a composição para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta, da presente invenção, contém ao menos um tipo de sanguinarina ou um sal da mesma representada pela seguinte fórmula (I), como um ingrediente ativo.

[Fórmula química I] [021]Uma composição para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta da presente invenção contém como um ingrediente ativo ao menos um tipo de sanguinarina ou um sal da mesma que é representada pela fórmula acima, a qual é um tipo de alcalóides de planta. Com a aplicação da composição da presente invenção a uma planta, a resistência ao estresse ambiental de uma planta é otimizada e, desse modo, a planta pode ser cultivada em um ambiente hostil, tal como secura, e calor intenso. A sanguinarina ou um sal da mesma, o qual é um ingrediente ativo, tem um efeito confiável com a baixa concentração, tal como várias ppm a várias dezenas de ppm e a pequena quantidade de aplicação, portanto, um efeito estável de aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental pode ser fornecido para uma planta. Além disso, no que se refere à sanguinarina, conforme relatado na Literatura de não patente 1, os distúrbios de importância especial não foram observados em cada um dos itens relacionados aos distúrbios fisiológicos, como consequência de um teste de administração da sanguinarina a ratos e, desse modo, a sanguinarina tem uma alta segurança. Portanto, a sanguinarina tem uma alta segurança, e pode ser aplicada até a uma planta que tem necessidade de ser segura, tal como uma planta comestível. Adicionalmente, na sanguinarina ou um sal da mesma na presente invenção, um derivado de sanguinarina ou um sal do mesmo também é incluído.

[022]Além disso, o estresse ambiental inclui, de preferência, estresse à alta temperatura, estresse à seca ou estresse à alta temperatura e estresse à seca. De acordo com isso, de acordo com a composição da presente invenção, é selecionado o estresse ambiental que pode ter a resistência de uma planta adequadamente aperfeiçoada é selecionado.

[023]Adicionalmente, o ingrediente ativo de uma composição para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta da presente invenção é, de preferência, uma substância derivada a partir de uma planta que contém ao menos um tipo de sanguinarina ou um sal da mesma. De acordo com isso, com a sanguinarina contida em uma substância derivada a partir de uma planta, ou um sal da mesma, a resistência ao estresse ambiental pode ser fornecida para uma planta que deveria ser protegida. Além disso, um ingrediente ativo da composição da presente invenção pode ser obtido a partir de um produto natural e, desse modo, a composição da presente invenção pode ser obtida sem depender de um meio químico, tal como síntese química.

[024]Adicionalmente, a substância derivada a partir de uma planta é, de preferência, uma substância derivada a partir de Macleaya cordata. De acordo com isso, um material de planta que á adequado como uma substância derivada a partir de uma planta é selecionado. Com a sanguinarina contida na substância ou um sal da mesma derivada a partir de Macleaya cordata, a resistência ao estresse ambiental pode ser concedida a uma planta que deveria ser protegida.

[025]Adicionalmente, prefere-se que a substância derivada a partir de Macleaya cordata seja uma substância derivada a partir de uma semente de Macleaya cordata. De acordo com isso, entre os órgãos de planta de Macleaya cordata, um órgão adequado que contém o ingrediente ativo em uma grande quantidade é selecionado.

[026]Adicionalmente, prefere-se também que a substância derivada a partir de uma planta seja um extrato obtido executando-se ao menos um tratamento de extração selecionado a partir do grupo que consiste em um tratamento de extração com solvente, um tratamento de extração com água subcrítica e um tratamento de extração com calor, a uma planta que contém ao menos um tipo de sanguinarina ou um sal da mesma. De acordo com isso, um ingrediente ativo da composição da presente invenção pode ser obtido de modo eficaz por um simples tratamento, tal como um tratamento de extração com solvente, um tratamento de extração com água subcrítica e um tratamento de extração com calor.

[027]Além disso, o método para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta de acordo com a presente invenção é dotado de uma etapa de aplicar a composição para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta descrita acima ao corpo da planta ou solo antes da planta ser submetida ao estresse ambiental. Antes de a planta ser submetida ao estresse ambiental, mediante a aplicação da composição da presente invenção a uma planta que deveria ser protegida, a resistência ao estresse ambiental é conferida para a planta antecipadamente, como consequência disso, a função de recuperação da planta exposta ao estresse ambiental é acelerada e, desse modo, o crescimento adicional pode ser facilitado.

EFEITO DA INVENÇÃO

[028]De acordo com a presente invenção, uma composição para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta, a qual tem os seguintes efeitos vantajosos, pode ser fornecida.

[029](1) O ingrediente ativo é ao menos um tipo de sanguinarina ou um sal da mesma, portanto, a segurança é alta, e os efeitos são manifestados em uma baixa concentração.

[030](2) A resistência ao estresse ambiental de uma planta, tal como alta temperatura e secura, pode ser estavelmente aperfeiçoada.

[031](3) O ingrediente ativo pode ser obtido como uma substância derivada a partir de uma planta a partir de uma planta que contém ao menos um tipo de sanguinarina ou um sal da mesma e, desse modo, a composição da presente invenção pode ser obtida em um baixo custo sem depender de um meio químico, tal como síntese química.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[032]A Figura 1 é um gráfico que mostra o peso fresco de Arabidopsis thaliana no 10° dia após o tratamento de exposição de alta temperatura a 55 °C no Exemplo 3 da presente invenção;

[033]A Figura 2 é uma imagem que mostra o estado de crescimento de Arabidopsis thaliana no 10° dia após o tratamento de exposição de alta temperatura a 55 °C no Exemplo 3 da presente invenção;

[034]A Figura 3 é uma imagem que mostra o estado de crescimento de Arabidopsis thaliana no 4° dia após os tratamentos de exposição de alta temperatura a 35 °C por uma hora e 45 °C por duas horas no Exemplo 4 da presente invenção;

[035]A Figura 4 é um gráfico que mostra o grau médio (%) de dano de Arabidopsis thaliana no Exemplo 4 da presente invenção;

[036]A Figura 5 é uma imagem que mostra o estado de crescimento de mudas de tomate após o tratamento de exposição de alta temperatura a 40 °C por uma semana no Exemplo 5 da presente invenção;

[037]A Figura 6 é um gráfico que mostra o peso fresco de Komatsuna (espinafre mostarda japonês) após o tratamento de exposição a seco por 14 dias no Exemplo 6 da presente invenção;

[038]A Figura 7 é um gráfico que mostra as mudanças em teor de umidade saturada (%) do solo durante os testes no Exemplo 7 da presente invenção;

[039]A Figura 8 é uma imagem que mostra o estado de crescimento de alfafa após o tratamento de exposição a seco, antes da reirrigação no Exemplo 7 da presente invenção;

[040]A Figura 9 é figuras que mostram o estado de crescimento de alfafa no 7° dia após o tratamento de exposição a seco no Exemplo 7 da presente invenção, e inclui (a) uma imagem de recipientes de plástico visualizados a partir do lado superior, (b) uma imagem de recipientes de plástico visualizados a partir do lado frontal e (c) uma imagem que mostra alfafa coletada;

[041]A Figura 10 é um gráfico que mostra o peso fresco de alfafa no 7° dia após o tratamento de exposição a seco no Exemplo 7 da presente invenção;

[042]A Figura 11 é imagens que mostram o estado de crescimento de qing-geng-cai (repolho chinês) no 7° dia após o tratamento de exposição a seco no Exemplo 8 da presente invenção, e inclui (a) uma imagem de recipientes de plástico visualizados a partir do lado obliquamente superior e (b) uma imagem de recipientes de plástico visualizados a partir do lado superior; e [043]A Figura 12 é um gráfico que mostra o peso fresco de qing-geng-cai no 7° dia após o tratamento de exposição a seco no Exemplo 8 da presente invenção.

DESCRIPTION OF EMBODIMENTS

[044]A composição para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta de acordo com a presente invenção contém como um ingrediente ativo ao menos um tipo de sanguinarina ou um sal da mesma representada pela seguinte fórmula (I).

[045]A sanguinarina é um alcalóide de planta que tem um esqueleto de benzofenantridina que está contido principalmente em uma planta de Papaveraceae de natureza. Adicionalmente, na sanguinarina ou um sal da mesma na presente invenção, um derivado de sanguinarina ou um sal do mesmo que tem substancialmente a mesma função ou efeito que a sanguinarina também está incluído. No presente relatório descritivo, mais adiante nesse documento, em uma substância descrita como "sanguinarina", a sanguinarina ou um sal da mesma obviamente está incluído e, adicionalmente, um derivado de sanguinarina ou um sal do mesmo também está incluído.

[046]A sanguinarina contida na composição da presente invenção pode ser qualquer uma dentre uma substância derivada a partir de um material natural, tal como um extrato natural, um composto químico e uma substância derivada a partir de um microrganismo por um método de fermentação microbiana, no entanto, a partir do ponto de vista de que a composição da presente invenção pode ser obtida sem depender de um meio químico, tal como síntese química, uma substância derivada a partir de um material natural é preferida, e uma substância derivada a partir de uma planta é mais preferida. Além disso, um sal de sanguinarina não é particularmente limitado, os exemplos do sal de sanguinarina incluem um sal de ácido inorgânico, tal como um carbonato, um cloridrato, um nitrato, um sulfato ou um fosfato; e um sal orgânico, tal como um acetato, um propionato, um butirato, ou um sal de ácido graxo.

[047]A sanguinarina está contida em um corpo de planta de Macleaya cordata, Eschscholzia californica, quelidônia-maior, Sangurinaria canadensis, e similares, as quais são um tipo de uma planta de Papaveraceae. Portanto, a sanguinarina pode ser obtida a partir de uma planta que contém tal sanguinarina ou um sal da mesma pela extração de sanguinarina que é um ingrediente ativo da composição da presente invenção, ou similares.

[048]Particularmente, Macleaya cordata é uma erva perene de Papaveraceae e é comumente observada em campo ensolarado, um terreno baldio, e similares, e considera-se que a Macleaya cordata que cresce em tal lugar contém uma grande quantidade de sanguinarina. Portanto, no caso em que a sanguinarina é obtida a partir de um produto natural, isto é, a partir de uma planta, prefere-se obter a sanguinarina a partir de Macleaya cordata. Além disso, Macleaya cordata contém a sanguinarina em qualquer órgão da planta dentre uma semente, uma folha, um caule, um fruto e uma raiz, e o teor em uma semente é predominantemente maior do que de outros órgãos da planta. Portanto, a partir do ponto de vista de alta eficiência, prefere-se obter a sanguinarina a partir de uma semente de Macleaya cordata. Adicionalmente, as sementes de Macleaya cordata estão em um fruto com uma casca, portanto, prefere-se que um fruto com uma casca seja coletado primeiro e, então, as sementes removidas do fruto com uma casca são usadas, ou também que o fruto inteiro seja usado. Além disso, quando cultivada em um modo sem interferência em um ambiente natural, espera-se que a Macleaya cordata floresça e obtenha o fruto com uma casca duas vezes ao ano (no início do verão e final do outono), portanto, se a Macleaya cordata for cultivada nessa técnica, um fruto com casca pode ser colhido de modo eficaz.

[049]No caso em que a sanguinarina é obtida a partir de uma planta, que inclui Macleaya cordata, a substância derivada a partir de uma planta pode conter outros ingredientes que estão contidos na planta. Como um exemplo, na substância derivada a partir de Macleaya cordata, adicionalmente à sanguinarina, alcalóides contidos em Macleaya cordata, tais como queleritrina, quelirrubina e protopina, podem estar contidos. Entre os mesmos, a queleritrina é um alcalóide que tem um esqueleto de benzofenantridina similar à sanguinarina que é um ingrediente ativo da composição da presente invenção, e tem uma estrutura que é quase comum àquela da sanguinarina. Adicionalmente, tem sido mostrado que tanto a sanguinarina como a queleritrina têm uma atividade de antagonista de proteína quinase C (PKC), uma atividade antibacteriana e uma propriedade antifúngica, e a sanguinarina e a queleritrina têm as funções e ações em comum uma com a outra. Portanto, a queleritrina pode ser usada como um derivado de sanguinarina e, desse modo, também como um ingrediente ativo da composição da presente invenção.

[050]Mais adiante nesse documento, um método para obter a sanguinarina que é um ingrediente ativo da composição da presente invenção, a partir de uma planta que contém sanguinarina será explicado. Em uma substância derivada a partir de uma planta, um próprio corpo de planta e um extrato de planta são incluídos. Por exemplo, os exemplos do próprio corpo de planta incluem um corpo de planta que é obtido mediante a secagem da planta que contém sanguinarina e, então, triturando a planta seca e, adicionalmente, um corpo de planta que é obtido pelo processamento da planta seca e triturada em uma forma de pó, uma forma granular, uma forma de pasta fluida ou uma forma de pasta.

[051]Por outro lado, o extrato de planta de acordo com a presente invenção pode ser obtido executando-se um tratamento de extração no qual um material de planta que contém sanguinarina é imerso ou colocado em contato com o solvente de extração. O tratamento de extração pode ser executado sob pressão normal ou sob pressão aumentada. A extração de planta pode ser executada em uma temperatura de extração em uma faixa de 0 °C a 150 °C e, de preferência, temperatura normal a 120 °C, e no tempo de extração de 1 minuto a 24 horas e, de preferência, 1 minuto a 3 horas. O solvente usado para a extração não é particularmente limitado e os exemplos do solvente incluem água; uma base ácida, tal como uma solução de ácido clorídrico aquoso, uma solução de ácido sulfúrico aquoso, uma solução de ácido acético aquoso e uma solução de hidróxido de sódio aquoso; um álcool, tal como metanol, etanol, isopropanol, polietileno glicol, glicerina e sorbitol; uma cetona, tal como acetona, e dimetil cetona; acetato de etila; tolueno; éter dietílico; cloreto de metileno; sulfóxido de dimetila; clorofórmio; hexano; e uma mistura dos mesmos. Entre esses, em vista da facilidade de manuseio, e da segurança no momento da preparação da composição, água, ácido clorídrico diluído, ácido acético, álcoois, ou uma mistura dos mesmos é adequada. O processo de extração não é particularmente limitado, e especificamente, um tratamento de extração com solvente, um tratamento de extração com água subcrítica, um tratamento de extração com calor, um tratamento de extração com pressão, um tratamento de extração com água quente pressurizada, um tratamento de extração por um extrator, um tratamento de extração supercrítica, um tratamento de extração ultrassônica, um tratamento de extração por degradação enzimática, e similares, pode ser aplicado.

[052]O tratamento de extração com solvente se refere a um tratamento de extração no qual a extração é executada mediante a imersão de um material de planta em um solvente adequado descrito acima, e deixando-se o material de planta no solvente por um determinado período de tempo. No que se refere à temperatura de processamento, uma temperatura ambiente ou uma temperatura aquecida até um ponto menor do que o ponto de ebulição do solvente pode ser usada para executar o processo. Adicionalmente, a extração também pode ser facilitada agitando-se o solvente, ou pressurizando-se o material de planta, durante a imersão. A extração com solvente de acordo com uma modalidade da presente invenção pode ser obtida mediante a imersão de um objeto a ser extraído, tal como sementes, folhas e caules de Macleaya cordata, e similares, em ácido clorídrico diluído que tem sido aquecido até 50 °C a 70 °C, por 10 minutos a 24 horas, de preferência, 30 minutos a 6 horas, e com mais preferência 1 hora a 3 horas.

[053]O tratamento de extração com calor se refere a um tratamento de extração mo qual a extração é executada com o uso de um solvente contendo água a 50 °C ou mais. A extração com calor de acordo com uma modalidade da presente invenção pode ser obtido colocando-se um objeto a ser extraído tal como sementes, folhas e caules de Macleaya cordata, e similares, em contato com ou imergindo-se o objeto em um solvente contendo água que tem uma temperatura de 50 °C ou mais, e, então, mediante o aquecimento do objeto por 3 minutos a 24 horas, de preferência, 3 minutos a 3 horas, e com mais de preferência, 5 minutos a 60 minutos, ou executando-se um tratamento de ebulição no objeto.

[054]O tratamento de extração com água subcrítica se refere a um tratamento de extração no qual a extração é executada com o uso de um solvente que está em um estado subcrítico sob as condições da temperatura e pressão menores do que o ponto crítico (ponto crítico da água é de 22 MPa, e 374 °C). A extração com água subcrítica de acordo com uma modalidade da presente invenção pode ser obtido ajustando-se um solvente, no qual um solvente de água ou água, e um solvente hidrofílico, tal como metanol, e ácido acético é misturado, em um estado subcrítico e, então, executando-se um tratamento de extração de um objeto a ser extraído, tal como sementes, folhas e caules de Macleaya cordata, e similares, por 1 minuto a 24 horas, de preferência, 1 minuto a 60 minutos, e com mais preferência, 3 minutos a 10 minutos. No que se refere a condições subcríticas, uma pressão de 0,2 MPa a 15 MPa, e uma temperatura de 100 °C a 200 °C são usadas de preferência.

[055]Quando um extrato de planta é obtido a partir de uma planta que contém sanguinarina, tal como Macleaya cordata, e quelidônia-maior pelo método descrito acima, um corpo vivo ou um corpo seco pode ser usado como o material de planta. No entanto, no caso em que a secagem é insuficiente, ou o corpo seco é deixado por um longo tempo após a secagem, em alguns casos, o bolor tende a ser gerado facilmente e, desse modo, considera-se que pode existir um caso em que a estabilidade da sanguinarina extraída é reduzida. Até na verificação real, no 7° dia após a colheita, a redução significante já foi observada. Portanto, mesmo no caso em que a secagem é executada, prefere-se que seja submetida ao tratamento de extração previamente.

[056]Além disso, o extrato de planta obtido conforme acima, é obtido em uma forma líquida que foi extraída em solvente de extração, e mediante adição de um ácido ou uma base nesse solvente, o tratamento de neutralização pode ser executado. Adicionalmente, o extrato de planta é submetido a um tratamento com o uso de um método de concentração a vácuo, ou um método de absorção de gel, e como consequência disso, pode ser um líquido no qual a concentração de sanguinarina é aumentada. Além disso, com o uso de um secador por aspersão, um secador a vácuo, ou similares, o extrato de planta pode ser processado em uma forma de pó. Adicionalmente, o extrato processado em uma forma de pó é dissolvido em outro solvente além do solvente de extração e, como consequência disso, o manuseio do extrato de planta se torna fácil, e também a estabilidade de conservação pode ser aumentada. Adicionalmente, quando se pretende que a pureza da sanguinarina contida no extrato de planta seja aumentada, o extrato de planta que contém sanguinarina de alta pureza pode ser obtido executando-se a purificação por absorção com uma resina de troca iônica, gel de sílica, carbono ativado, e similares, ou executando-se a purificação com cromatografia de coluna, recristalização ou similares.

[057]Na composição de acordo com a presente invenção, o extrato de planta obtido conforme acima, à medida que pode ser usado, e dentro de uma faixa em que a atividade da sanguinarina que é um ingrediente ativo não é perdida e um efeito adverso não é exercido sobre a planta a ser aplicada, um extrato de planta em que um tratamento secundário tem sido executado, pode ser usado. Adicionalmente, não somente o extrato de planta, mas também a sanguinarina obtida por síntese química, ou a sanguinarina obtida por fermentação microbiana pode ser usada para uma composição da presente invenção. Além disso, a composição da presente invenção pode ser processada não somente em uma forma líquida, mas, com uma maneira convencional, também em uma forma em pó, uma forma granular, uma forma de suspensão, ou similares.

[058]O teor de ingrediente ativo em uma composição da presente invenção, isto é, o teor de sanguinarina, não é particularmente limitado, no entanto, a fim de obter a concentração até a qual a composição da presente invenção é diluída, e na qual a composição pode ser usada, o teor de sanguinarina é, de preferência, de 10 ppm ou mais e, com mais preferência 100 ppm ou mais. Adicionalmente, a quantidade da composição da presente invenção por aplicação, embora a quantidade dependa do peso do corpo de planta, se a composição for aplicada a uma muda de uma planta comestível comum, é conforme o conteúdo de sanguinarina por um corpo de planta, de preferência, 0,001 pg a 10 mg, com mais preferência, 0,005 pg a 2 mg, e com mais preferência ainda, 0,01 pg a 0,5 mg. Mesmo se a aplicação for executada em tal concentração baixa, pela composição da presente invenção, a resistência ao estresse ambiental para uma planta que deveria ser protegida pode ser aperfeiçoada. Além disso, na aplicação para um corpo de planta com a composição da presente invenção, a resistência ao estresse ambiental para uma planta que deveria ser protegida pode ser suficientemente aperfeiçoada, executando-se a aplicação somente uma vez durante todo o período de cultivo. Com a finalidade de aperfeiçoar de maneira suficiente a resistência ao estresse ambiental, prefere-se aplicar a composição múltiplas vezes.

[059]No estresse ambiental, a alta temperatura, secura, baixa temperatura, chuva excessiva, raios ultravioletas, danos salinos, pragas, ou similares, estão incluídos. Especificamente, a resistência à alta temperatura se refere à resistência ao calor intenso no verão, a resistência ao estresse à seca se refere à resistência a um estado no qual não existe água por um determinado período de tempo, e a resistência à baixa temperatura se refere à resistência à baixa temperatura ou congelamento. Adicionalmente, o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental se refere ao fato de que é considerado que a planta está em um estado mais favorável em comparação com uma planta na parcela de controle, na situação de crescimento do corpo de planta (peso fresco de corpo de planta, grau prolongado, e similares), a condição que é visualmente avaliada a partir da aparência, o grau médio de danos, ou similares. Além disso, o alvo do aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental não é limitado a todo o corpo de planta, e pode ser ao menos um dentre os órgãos da planta, que incluem uma flor, uma folha, um fruto, um caule, uma raiz, ou similares.

[060]A espécie de planta que deveria ser protegida, a qual é submetida ao aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental, pode ser uma planta dicotiledônea ou uma planta monocotiledônea, e não é particularmente limitada. No entanto, os exemplos das espécies de planta que deveriam ser protegidas incluem uma planta solanácea, tal como um tomate, um berinjela, um pimentão, um pimentão vermelho e uma batata; uma planta umbelífera, tal como uma cenoura, aipo e Bupleurum falcatum; uma planta da família Chenopodiaceae, tal como uma beterraba, e espinafre; uma planta da família Asteraceae, tal como crisântemo, alface, um bardana e um gerbera; uma planta leguminosa, tal como uma soja, uma ervilha, alcaçuz, alfafa e uma ervilha de cheiro; uma planta lilácea, tal como um alho-poró, uma cebola, alho e uma tulipa; uma planta rosácea, tal como um morango, uma rosa, uma maçã, um pêssego e uma pera; uma planta cucurbitácea, tal como uma melancia, um melão e um pepino; uma planta da família Convolvulaceae, tal como uma batata doce; uma planta teácea, tal como chá, uma camélia; uma planta cupressácea, tal como um cedro e um cipreste; uma planta mirtácea, tal como um eucalipto; uma planta oleácea, tal como uma azeitona; uma planta rutácea, tal como uma tangerina e limão; uma planta vitácea, tal como uma uva; uma planta labiada, tal como perila, manjericão, hortelã, um alecrim e sálvia; uma planta gramínea, tal como uma planta de arroz, milho, grama e azevém; uma planta crucífera, tal como uma Komatsuna (espinafre mostarda japonês), um qing-geng-cai (repolho chinês), um brócolis e repolho; uma planta musácea, tal como uma banana; uma planta anacardiácea, tal como uma manga; uma planta caricácea; e outras plantas tropicais.

[061]Adicionalmente, na composição da presente invenção, um agente difusor, um tensoativo, um polímero solúvel em água, um lubrificante, um antioxidante, um conservante, ou similares, pode ser adicionado. Além disso, mediante a adição de um aditivo que tem uma ação de esterilização ou praga, pretende-se que uma ação sinérgica possa ser obtida. Conforme descrito acima, dependendo da condição comercial no mercado, da condição de armazenamento e da condição de uso, não somente a composição para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental da presente invenção inclui um extrato de planta que contém sanguinarina ou uma simples substância de sanguinarina sozinha, mas também uma mudança pode ser adicionada à composição na medida em que não perca a eficácia como a sanguinarina.

[062]No que se refere ao método de aplicação da composição da presente invenção, quando a composição está em uma forma em pó ou forma granular, a composição pode ser aplicada por espalhamento direto, ou por espalhamento, aspersão, derramamento, irrigação, ou similares, depois que a composição for dissolvida em um solvente, tal como água, e, então, o resultante é diluído até a concentração predeterminada. Adicionalmente, quando a composição da presente invenção está em uma forma líquida ou uma forma de suspensão, a composição pode ser aplicada por espalhamento direto, ou por espalhamento, aspersão, derramamento, irrigação, ou similares, depois que a composição é diluída até a concentração predeterminada. Além disso, a aplicação da composição da presente invenção é executada a ao menos um dentre os órgãos da planta (uma flor, uma folha, um fruto, um caule, uma raiz, ou similares), ou à base do corpo de planta ou do solo, da planta que deveria ser protegida.

[063]Conforme mostrado nos exemplos descritos abaixo, por meio da aplicação da composição da presente invenção antes da planta ser submetida ao estresse ambiental, a planta aplicada tem um efeito que o corpo de planta é continuamente mantido durante o recebimento do estresse ambiental, ou o corpo de planta é rapidamente restaurado após o recebimento do estresse ambiental. Conforme descrito acima, somente por meio da aplicação da composição da presente invenção antecipadamente, a resistência ao estresse ambiental pode ser aperfeiçoada, portanto, a planta que deveria ser protegida, em particular, uma planta de cultura, uma planta de jardim, e similares, pode ser protegida contra o estresse ambiental por meio de um processo simples. Além disso, o tempo da aplicação da composição da presente invenção pode ser enquanto a planta que deveria ser protegida estiver recebendo o estresse ambiental.

[064]Mais adiante nesse documento, os exemplos da presente invenção são mostrados, no entanto, a presente invenção não deveria ser interpretada como limitada aos exemplos a seguir.

Exemplo 1 [Produção de um extrato de Macleaya cordata 1] [065]1 kg de frutos com casca de Macleaya cordata, os quais nasceram e amadureceram a partir do verão ao outono, foi coletado, deixado em um local bem ventilado de um dia para o outro e seco naturalmente. Em um fruto de Macleaya cordata e uma semente no fruto, a sanguinarina está contida predominantemente.

No dia seguinte, 200 g dos frutos com vagens (contendo sementes nos mesmos) foram imersos em 5 L de ácido clorídrico diluído (0,1 N), cuja temperatura tinha sido ajustada para 60 °C. Adicionalmente, os frutos foram pressionados a partir de cima com um bastão de madeira, e sob a compressão dos frutos e sementes, a extração foi provocada. Depois disso, a temperatura de manutenção de 60 °C foi liberada e, desse modo, os frutos e sementes foram deixados no ácido clorídrico diluído por 1 hora para a extração. Após serem deixados, o ácido clorídrico diluído contendo os frutos e sementes foi filtrado através de um papel filtro de 60 cm de diâmetro, o filtrado foi coletado e, desse modo, um extrato bruto do primeiro conjunto dos frutos e sementes de Macleaya cordata foi obtido.

[066]O resíduo resultante foi novamente imerso em 5 L de ácido clorídrico diluído (0,1 N), cuja temperatura tinha sido ajustada para 60 °C e, então, da mesma maneira que acima, o resíduo dos frutos e sementes pressionado a partir de cima com um bastão de madeira, e sob a compressão dos frutos e sementes, a extração foi provocada. A temperatura de retenção de 60 °C foi liberada e o resíduo dos frutos e sementes foi deixado no ácido clorídrico diluído por 1 hora para a extração e, então, o ácido clorídrico diluído que contém os frutos e sementes foi filtrado através de um papel filtro de 60 cm de diâmetro, o filtrado foi coletado e, desse modo, um extrato bruto do segundo conjunto dos frutos e sementes de Macleaya cordata foi obtido. Então, um extrato, no qual o extrato bruto do primeiro conjunto e o extrato bruto do segundo conjunto foram incluídos em conjunto, foi usado como o extrato bruto dos frutos e sementes de Macleaya cordata.

[067]Em seguida, o extrato bruto dos frutos e sementes de Macleaya cordata foi submetido à purificação. O gel de sílica esférico para a purificação (Wakogel (marca registrada) 50C18 fabricado por Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) foi tratado com etanol a 95% e ativado e, então, o álcool deixado foi substituído por água. O gel de sílica foi colocado sobre uma superfície de um papel filtro que foi disposto em um funil e, desse modo, a preparação do dispositivo de filtração foi terminada. A partir de cima no gel de sílica, o extrato bruto obtido acima dos frutos e sementes de Macleaya cordata foi derramado sobre o gel de sílica, como consequência disso, a sanguinarina que é uma substância visada como um ingrediente principal foi adsorvida sobre o gel de sílica. Adicionalmente, o gel de sílica foi lavado com água encanada, então, eluiu-se o adsorbato com etanol a 95% e, desse modo, em torno de 700 mL do líquido de extração dos frutos e sementes de Macleaya cordata foram obtidos. Com o uso de HPLC, quando a concentração da sanguinarina que estava contida no líquido de extração obtido foi medido, foi confirmado que, nesse líquido de extração, em torno de 1.500 ppm da sanguinarina derivada a partir dos frutos e sementes de Macleaya cordata estavam contidas. O líquido de extração obtido é descrito doravante como "extrato TG". Nos Exemplos 3 e 5 a 8 a seguir, esse "extrato TG" foi diluído até diversas concentrações, e usado para cada teste.

Exemplo 2 [Produção de um extrato de Macleaya cordata 2] [068]1 kg de frutos com vagens maduros de Macleaya cordata foi coletado, deixado em um local bem ventilado de um dia para o outro e seco naturalmente. No dia seguinte, os frutos com vagens (contendo sementes nos mesmos) foram submetidos à extração por ebulição (térmica) e extração por água subcrítica. Como o solvente, tanto na extração por ebulição como na extração por água subcrítica, 500 mL do solvente, no qual água, metanol e ácido acético foram misturados em uma razão de 10:9:1 (razão de volume), foram usados.

[069]A extração por ebulição foi executada por 20 g dos frutos (contendo sementes nos mesmos) sob as condições de pressão normal e um tempo de ebulição de 30 minutos.

[070]Por outro lado, a extração por água subcrítica foi executada para 20 g dos frutos (contendo sementes nos mesmos) sob as seguintes três condições: as condições de uma temperatura de 100 °C, uma pressão de 3 MPa e um tempo de tratamento de 5 minutos; as condições mudando-se somente a temperatura acima para 140 °C; e as condições mudando-se somente a temperatura acima para 180 °C.

[071]A concentração da sanguinarina contida no líquido de extração por ebulição obtido e cada um dos líquidos de extração por água subcrítica foi medida com o uso de HPLC (UPLC (marca registrada), fabricado por Nihon Waters K.K.). Os resultados foram mostrados na Tabela 1. Os valores descritos em cada um dos processos de extração mostram a área de pico do ingrediente que corresponde à sanguinarina contida em cada um dos líquidos de extração na medição de HPLC.

[072]Conforme mostrado na Tabela 1, foi confirmado que a área de pico da sanguinarina é de 400 no processo de extração por ebulição, mas 1.300 a 1.400 no processo de extração por água subcrítica. De acordo com esses resultados, conforme comparado com a extração por ebulição, na extração por água subcrítica, a sanguinarina foi extraída em uma concentração maior três vezes ou mais e, desse modo, descobriu-se que uma extração altamente eficaz pode ser realizada. De acordo com os resultados dos Exemplos 1 e 2, foi confirmado que na sanguinarina pode ser extraída a partir de Macleaya cordata por diversos métodos de extração.

Exemplo 3 [Avaliação de resistência à alta temperatura 1: Arabidopsis thaliana] [073]As sementes de Arabidopsis thaliana foram semeadas e cultivadas em um recipiente de plástico, no qual o solo de cultura foi colocado. As condições de ambiente de cultivo foram um ciclo de [lugar claro por 16 horas + lugar escuro por 8 horas] em local interno, e uma temperatura de 23 °C. O extrato TG (concentração de teor de sanguinarina: em torno de 1.500 ppm) obtido no Exemplo 1 foi diluído com água e um líquido de amostra para cada parcela de teste foi respectivamente preparada de tal modo que a concentração de teor de sanguinarina fosse de 2 ppm, 20 ppm, 200 ppm ou 0 ppm (sem extrato TG, somente água). Cada líquido de amostra foi aplicado por gotejamento com o uso de um conta-gotas em uma parte de folha da Arabidopsis thaliana no 25° dia após o início do cultivo. A quantidade de gotejamento foi de 0,5 mL por um corpo de planta. Portanto, a quantidade de sanguinarina aplicada por um corpo de planta em cada parcela de teste foi de 0,001 mg na parcela de teste de 2 ppm, 0,01 mg na parcela de teste de 20 ppm e 0,1 mg na parcela de teste de 200 ppm. Após o gotejamento, sob as condições de ambiente de cultivo iniciais, o cultivo foi continuado por 2 dias, então, a temperatura ambiente foi aumentada para 55 °C, e a exposição à alta temperatura foi executada a 55 °C por 1 hora em um lugar claro. Depois disso, as condições foram retornadas para as condições de ambiente de cultivo iniciais, e o cultivo foi continuado por 10 dias. Adicionalmente, exceto pela não execução da exposição à alta temperatura a 55 °C, sob as mesmas condições de ambiente de cultivo que aquelas descritas acima, a Arabidopsis thaliana foi cultivada e, então, um teste no qual cada líquido de amostra é aplicado por gotejamento também foi executado. Além disso, o número de amostras N em cada parcela de teste e na parcela de controle foi 4.

[074]A Figura 1 mostra o resultado da medição de peso fresco de um corpo de planta de Arabidopsis thaliana em cada parcela de teste (2 ppm, 20 ppm ou 200 ppm) e na parcela de controle (0 ppm) no 10° dia após a exposição à alta temperatura a 55 °C por 1 hora. Adicionalmente, a Figura 2 mostra a aparência de Arabidopsis thaliana na parcela de teste (20 ppm) e na parcela de controle, no 10° dia após a exposição à alta temperatura a 55 °C por 1 hora. A partir dos resultados de medição do peso de Arabidopsis thaliana mostrados na Figurai, foi confirmado que em qualquer um dos corpos de planta de um líquido de amostra, no qual a concentração de sanguinarina é de 2 ppm, 20 ppm ou 200 ppm, o crescimento foi relativamente favorável em comparação com aquele na parcela de controle (0 ppm).

[075]Além disso, também a partir da avaliação da aparência, foi confirmado que no corpo de planta de um líquido de amostra, no qual a concentração de sanguinarina é de 20 ppm, o crescimento é claramente favorável, e a resistência ao estresse ambiental contra a alta temperatura é aperfeiçoado, conforme comparado com aquele na parcela de controle (0 ppm).

Exemplo 4 [Avaliação de resistência à alta temperatura 2: Arabidopsis thaliana] [076]Na avaliação de resistência à alta temperatura de Arabidopsis thaliana no Exemplo 3, um líquido de extrato de solvente ácido de Macleaya cordata (extrato TG) obtido no Exemplo 1 foi usado, também no caso do uso de um reagente de alta pureza de sanguinarina, foi testado se a resistência ao estresse ambiental contra a alta temperatura de uma planta é aperfeiçoada ou não, conforme no Exemplo 3.

[077]Como um reagente de sanguinarina disponível no mercado, um hidrato de cloreto de sanguinarina (S5890-25MG fabricado por Sigma-Aldrich Japão K.K.) foi obtido, o hidrato de cloreto de sanguinarina foi dissolvido em água de tal modo que a concentração de sanguinarina fosse de 0,2 ppm, 2 ppm ou 20 ppm e, desse modo, um líquido de amostra para cada parcela de teste foi respectivamente preparado. Além disso, como um líquido de amostra para a parcela de controle, uma solução de DMSO a 0,5% foi preparada. Com o uso desses líquidos de amostra, os seguintes testes foram executados.

[078]As sementes de Arabidopsis thaliana foram semeadas e cultivadas em um cubo de lã de rocha que tinha sido saturado com um diluente do HYPONEX (marca registrada) diluído por 1.000 vezes. As condições de ambiente de cultivo foram um ciclo de [lugar claro por 16 horas + lugar escuro por 8 horas], e uma temperatura de 22 °C. Em torno da deformação de Arabidopsis thaliana no 14° dia após o início do cultivo, um líquido de amostra composto de uma solução de sanguinarina aquosa que tinha sido ajustada para diversas concentrações, e uma solução de DMSO a 0,5% para a parcela de controle foram respectivamente aplicados por gotejamento com o uso de um conta-gotas. A quantidade de gotejamento foi ajustada para 100 pl por um corpo de planta. Portanto, a quantidade de sanguinarina aplicada por um corpo de planta em cada parcela de teste foi de 0,02 pg na parcela de teste de 0,2 ppm, 0,2 pg na parcela de teste de 2 ppm e 0,002 mg na parcela de teste de 20 ppm. Após o gotejamento, sob as condições de ambiente de cultivo iniciais, o cultivo foi continuado por 2 dias, então, a temperatura ambiente foi aumentada para 35 °C, e a exposição foi executada por 1 hora em um lugar claro. Adicionalmente, a temperatura ambiente foi aumentada para 45 °C e a exposição à alta temperatura foi executada por 2 horas em um lugar escuro. Depois disso, as condições foram retornadas para as condições de ambiente de cultivo iniciais, e o cultivo foi continuado por 4 dias. Além disso, o número de amostras N em cada parcela de teste e na parcela de controle foi 18 (6 corpos de planta foram testados por um contentor de cultivo, e os três contentores de cultivo foram usados).

[079]A Figura 3 mostra a aparência de Arabidopsis thaliana em cada parcela de teste (0,2 ppm, 2 ppm ou 20 ppm) e na parcela de controle (DMSO a 0,5%) no 4° dia após a exposição à alta temperatura a 35 °C por 1 hora e a 45 °C por 2 horas.

[080]Além disso, a Figura 4 mostra um gráfico que mostra o grau médio (%) de dano de Arabidopsis thaliana nos presentes exemplos. O estado das folhas reais crescidas de Arabidopsis thaliana no 4° dia após a exposição à alta temperatura sob as condições acima foi visualmente avaliado em uma escala de quatro níveis (índice, 3: morte da planta, 2: morte parcial da planta, 1: branqueamento parcial e 0: normal), e designando-se os valores para a seguinte equação, o grau médio de dano foi calculado.

Grau de dano = Σ (3 x N3 + 2 x N2 + 1 x N1) / (3 x número total de indivíduos) N1 a N3: número de indivíduos de cada índice [081]A partir da aparência de Arabidopsis thaliana mostrada na Figura 3, e o grau médio (%) de dano mostrado na Figura 4, foi confirmado que, mesmo no corpo de planta em qualquer uma das parcelas de teste, nas quais cada concentração de sanguinarina é de 0,2 ppm, 2 ppm ou 20 ppm, o crescimento foi relativamente favorável, conforme comparado com aquele na parcela de controle (solução de DMSO a 0,5%), e à medida que a dosagem de sanguinarina é aumentada, o grau médio de dano de Arabidopsis thaliana é reduzido. Além disso, descobriu-se que no corpo de planta na parcela de teste na qual a concentração de sanguinarina foi de 20 ppm (a dosagem de sanguinarina foi de 0,002 mg por um corpo de planta), o grau médio de dano foi significantemente a partir de menos do que 10%. De acordo com esses resultados, conforme no líquido de extrato de solvente ácido de Macleaya cordata (extrato TG) usado no Exemplo 3, foi confirmado que mesmo no caso do uso de um reagente de alta pureza de sanguinarina, a resistência ao estresse ambiental contra a alta temperatura de uma planta foi aperfeiçoada.

Exemplo 5 [Avaliação de resistência à alta temperatura 3: tomate] [082]Nos Exemplos 3 a 4, no que se refere à Arabidopsis thaliana que é um organismo modelo de planta, o efeito do aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de sanguinarina foi confirmado, portanto, continuamente, o teste para confirmar se o mesmo efeito é observado ou não também em outras plantas foi executado. Como a planta a ser testada, um tomate que é uma planta comestível foi selecionado.

[083]As sementes de tomate foram semeadas e cultivadas em um aparelho de cultivo de mudas. As condições de ambiente de cultivo foram um ciclo de [lugar claro por 16 horas + lugar escuro por 8 horas] em local interno e uma temperatura de 23 °C. O extrato TG (concentração de teor de sanguinarina: em torno de 1500 ppm) obtido no Exemplo 1 foi diluído com água e um líquido de amostra para cada parcela de teste foi respectivamente preparado, de tal modo que a concentração de teor de sanguinarina fosse de 2 ppm, 20 ppm ou 0 ppm (sem extrato TG, somente água). Adicionalmente, no solo de cultura em torno da base da muda de tomate, na qual as folhas da semente tinham se desenvolvido no 13° dia após o início do cultivo, cada líquido de amostra foi respectivamente derramado e aplicado. A quantidade de aplicação foi de 200 mL para 14 mudas, isto é, foi aplicado em torno de 14 mL por um corpo de planta. Portanto, a quantidade de sanguinarina aplicada por um corpo de planta em cada parcela de teste foi de 0,028 mg na parcela de teste de 2 ppm e 0,28 mg na parcela de teste de 20 ppm. Após a aplicação, sob as condições de ambiente de cultivo iniciais, 2 semanas após a aplicação, a muda de tomate, na qual uma folha verdadeira havia começado a se desenvolver, foi colocada em um aparelho de cultura, e a exposição à alta temperatura foi executada sob uma atmosfera de 40 °C por 1 semana. Durante a exposição à alta temperatura, o caldo de cultura foi suplementado uma vez ao dia. Além disso, o número de amostras N em cada parcela de teste e na parcela de controle foi 14.

[084]A Figura 5 mostra a aparência da muda de tomate em uma parcela de teste (2 ppm ou 20 ppm) e na parcela de controle (0 ppm, ou nenhuma aplicação) após a exposição à alta temperatura a 40 °C por 1 semana. De acordo com isso, foi confirmado que em qualquer um dos corpos de planta de um líquido de amostra, no qual a concentração de teor de sanguinarina é de 2 ppm ou 20 ppm, o crescimento é claramente favorável, e a resistência ao estresse ambiental contra a alta temperatura é aperfeiçoado, conforme comparado com aqueles na parcela de controle (0 ppm, ou nenhuma aplicação). Além disso, foi confirmado que na muda de tomate na parcela de teste, na qual a concentração de teor de sanguinarina é de 20 ppm, as folhas normais foram observadas com mais frequência conforme comparado com aquelas na parcela de teste de 2 ppm, e à medida que a dosagem de sanguinarina é aumentada, o efeito do aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental da muda de tomate é aumento.

Exemplo 6 [Avaliação de resistência à seca 1: Komatsuna] [085]As sementes de Komatsuna foram semeadas em um recipiente de plástico, no qual o solo de cultura foi colocado, e cultivados 3 corpos de planta por um recipiente. As condições de ambiente de cultivo foram um ciclo de [lugar claro por 16 horas + lugar escuro por 8 horas] em local interno e uma temperatura de 23 °C. O extrato TG (concentração de teor de sanguinarina: em torno de 1500 ppm) obtido no Exemplo 1 foi diluído com água e um líquido de amostra usado para cada parcela de teste foi respectivamente preparado, de tal modo que a concentração de teor de sanguinarina fosse de 1,5 ppm, 15 ppm ou 0 ppm (sem extrato TG, somente água). Então, na base da Komatsuna no 14° dia após o início do cultivo, cada líquido de amostra foi respectivamente espargido. A quantidade de aplicação foi 10 mL por um recipiente e a quantidade de aplicação por um corpo de planta foi de 3,3 mL. Portanto, a quantidade de sanguinarina aplicada por um corpo de planta em cada parcela de teste foi de 0,005 mg na parcela de teste de 1,5 ppm e 0,05 mg na parcela de teste de 15 ppm. Após o espargimento, sem o fornecimento de qualquer água, o cultivo foi continuado por 14 dias. O número de amostras N em cada parcela de teste e na parcela de controle foi 3.

[086]A Figura 6 mostra os resultados da medição de peso fresco de um corpo de planta da Komatsuna que foi cultivada sob uma condição seca sem o fornecimento de qualquer água por 14 dias em cada parcela de teste (1,5 ppm ou 15 ppm) e na parcela de controle (0 ppm). A partir dos resultados de medição do peso de Komatsuna mostrados na Figura 6, foi confirmado que em qualquer uma das parcelas de teste, nas quais a concentração de teor de sanguinarina em cada líquido de amostra é de 1,5 ppm ou 15 ppm, o crescimento é relativamente favorável, a resistência à seca é favorável, e o peso de cerca de 2 a 3 vezes é mantido sem murchar, conforme comparado com aquele na parcela de controle (0 ppm). De acordo com esses resultados, descobriu-se que, mediante a administração de sanguinarina, a resistência ao estresse ambiental contra a secura da planta é aperfeiçoada.

Exemplo 7 [Avaliação de resistência à seca 2: alfafa] [087]Em um recipiente de plástico de 10 cm de diâmetro, Peatban (marca registrada) foi colocado em torno de 80% do volume do recipiente e, então, no recipiente de plástico 15, as sementes de alfafa (Medicago sativa L. cultivar "Tipo P", Nakahara Saishujo, Fukuoka, Japão) foram semeadas. Primeiramente, o cultivo foi executado mediante a aplicação de um jornal sobre o recipiente em temperatura normal em uma sala. Em torno do 4° dia após o início do cultivo, a alfafa germinou e, desse modo, o recipiente de plástico foi movido para o ar livre para cultivar a alfafa no mesmo. No 7° dia após o início do cultivo, a alfafa germinada foi submetida ao adelgaçamento em cada recipiente, e 4 corpos de planta foram deixados em cada recipiente. O extrato TG (concentração de teor de sanguinarina: em torno de 1.500 ppm) obtido no Exemplo 1 foi diluído com água, e um líquido de amostra para cada parcela de teste foi respectivamente preparado, de tal modo que a concentração de teor de sanguinarina fosse de 0,015 ppm, 0,15 ppm, 1,5 ppm, 15 ppm ou 0 ppm (sem extrato TG, somente água). Então, no 9° dia após o início do cultivo, cada líquido de amostra foi respectivamente aspergido sobre as folhas da alfafa a partir da distância de cerca de 5 cm longe das folhas. A quantidade de aspersão foi ajustada para 0,73 mL por um corpo de planta. Portanto, a quantidade de sanguinarina aplicada por um corpo de planta em cada parcela de teste foi de 0,011 pg na parcela de teste de 0,015 ppm, 0,11 pg na parcela de teste de 0,15 ppm, 1,1 pg na parcela de teste de 1,5 ppm e 0,011 mg na parcela de teste de 15 ppm. Após o tratamento de aspersão, a partir do 10° dia ao 25° dia, a irrigação foi parada, e a alfafa foi cultivada sob a condição de seca. No 25° dia após o início do cultivo, um prato foi colocado sob o recipiente e a irrigação foi suficientemente executado no recipiente e, então, sob as condições de ambiente de cultivo iniciais, o cultivo foi continuado até o 33° dia após o início do cultivo. Durante o cultivo, o teor de umidade no solo (Peatban, marca registrada) de cada recipiente foi continuamente medido por um medidor de teor de umidade manual, e o estado da exposição à seca foi confirmado. Além disso, o número de amostras N em cada parcela de teste e na parcela de controle foi 4.

[088]A Figura 7 mostra as mudanças no teor de umidade saturada (%) do soo em cada recipiente durante o teste de cultivo. Descobriu-se que no 10° dia após o início do cultivo, a irrigação foi parada, desse modo, o teor de umidade no solo foi gradualmente reduzido em uma velocidade constante, e no 20° dia após o início do cultivo, o teor de umidade no solo se tornou quase zero. Esse estado foi continuado até o 25° dia após o início do cultivo, no qual a reirrigação foi iniciada. Portanto, foi confirmado que a alfafa testada tinha sido exposta ao estado de seca rigorosa por ao menos 5 dias. Adicionalmente, quando a reirrigação foi iniciada no 25° dia após o início do cultivo, o teor de umidade no solo foi aumentado para quase 100%.

[089]A Figura 8 mostra a aparência de alfafa em uma parcela de teste (0,015 ppm, 0,15 ppm, 1,5 ppm ou 15 ppm) e na parcela de controle (0 ppm) após a exposição à seca, antes da reirrigação (no 25° dia após o início do cultivo). Além disso, as Figuras 9(a) a 9(c) mostram a aparência de alfafa em cada parcela de teste e na parcela de controle no 7° dia após a exposição à seca (no 33° dia após o início do cultivo). Adicionalmente, a Figura 10 mostra os resultados da medição do peso fresco do corpo de planta de alfafa em cada parcela de teste e na parcela de controle no 7° dia após a exposição à seca (no 33° dia após o início do cultivo).

[090]Quando a alfafa foi observada após a exposição à seca, conforme mostrado na Figura 8, as alfafas tanto em uma parcela de teste como na parcela de controle perderam a vitalidade e estavam a ponto de murchar. Por outro lado, quando a alfafa no dia em que uma semana tinha transcorrido após a exposição à seca foi observada, conforme mostrado nas Figuras 9(a) a 9(c), no que se refere ao corpo de planta em uma parcela de teste, na qual um extrato TG que contém sanguinarina tinha sido administrado, foi confirmado que, embora uma diferença em grau fosse observada dependendo da concentração de sanguinarina, a alfafa foi quase recuperada, a cor da folha foi favorável e a alfafa ainda cresceria. No entanto, o corpo de planta na parcela de controle morreu sem recuperação. Adicionalmente, a partir dos resultados de medição do peso de alfafa mostrados na Figura 10, foi confirmado que em qualquer uma das parcelas de teste, nas quais a concentração de teor de sanguinarina em cada líquido de amostra é de 0,015 ppm, 0,15 ppm, 1,5 ppm ou 15 ppm, o crescimento é relativamente favorável, conforme comparado com aquele na parcela de controle (0 ppm), e mesmo quando a concentração de teor de sanguinarina foi tão baixa quanto 0,15 ppm, um alto efeito foi exibido. A partir desses resultados, descobriu-se que com a administração de sanguinarina, a resistência ao estresse ambiental contra a secura da planta é aperfeiçoada.

Exemplo 8 [Avaliação de resistência à seca 3: qing-geng-cai] [091]Em um recipiente de plástico de 10 cm de diâmetro, Peatban (marca registrada) foi colocado em torno de 80% do volume do recipiente e, então, no recipiente de plástico 12, as sementes de qing-geng-cai foram semeadas. O recipiente de plástico foi colocado ao ar livre, no 7° dia após o início do cultivo, o qing-geng-cai foi submetido ao adelgaçamento em cada recipiente, e 4 corpos de planta foram deixados em cada recipiente. O extrato TG (concentração de teor de sanguinarina: em torno de 1.500 ppm) obtido no Exemplo 1 foi diluído com água, e um líquido de amostra para cada parcela de teste foi respectivamente preparado, de tal modo que a concentração de teor de sanguinarina fosse de 0,015 ppm, 0,15 ppm, 1,5 ppm, 15 ppm ou 0 ppm (sem extrato TG, somente água). Então, no 12° dia após o início do cultivo, cada líquido de amostra foi respectivamente aspergido em folhas do qing-geng-cai a partir da distância de cerca de 5 cm longe das folhas. A quantidade de aspersão foi ajustada para 0,73 mL por um corpo de planta. Portanto, a quantidade de sanguinarina aplicada por um corpo de planta em cada parcela de teste foi de 0,011 pg na parcela de teste de 0,015 ppm, 0,11 pg na parcela de teste de 0,15 ppm, 1,1 pg na parcela de teste de 1,5 ppm e 0,011 mg na parcela de teste de 15 ppm. Após o tratamento de aspersão, a partir do 12° dia ao 26° dia, a irrigação foi parada, e o qing-geng-cai foi cultivado sob a condição de seca. No 26° dia após o início do cultivo, um prato foi colocado sob o recipiente e a irrigação foi suficientemente executada no recipiente e, então, sob as condições de ambiente de cultivo iniciais, o cultivo foi continuado até o 33° dia após o início do cultivo. Além disso, o número de amostras N em cada parcela de teste foi 4 e o número de amostras N na parcela de controle foi 8.

[092]A Figura 11 mostra a aparência de qing-geng-cai em cada parcela de teste e na parcela de controle no 7° dia após a exposição à seca (no 33° dia após o início do cultivo). Adicionalmente, a Figura 12 mostra os resultados da medição do peso fresco do corpo de planta de qing-geng-cai em cada parcela de teste e na parcela de controle no 7° dia após a exposição à seca (no 33° dia após o início do cultivo).

[093]Conforme mostrado na Figura 11, no que se refere ao corpo de planta na parcela de teste, na qual um extrato TG que contém sanguinarina tinha sido administrado, foi confirmado que, embora uma diferença em grau fosse observada dependendo da concentração de sanguinarina, o qing-geng-cai foi quase recuperado, a cor da folha foi favorável, e o qing-geng-cai ainda cresceria. No entanto, o corpo de planta na parcela de controle morreu sem recuperação. Adicionalmente, a partir dos resultados de medição do peso de qing-geng-cai mostrados na Figura 12, foi confirmado que em qualquer uma das parcelas de teste, nas quais a concentração de teor de sanguinarina em cada líquido de amostra é de 0,015 ppm, 0,15 ppm, 1,5 ppm ou 15 ppm, o crescimento é relativamente favorável, conforme comparado com aquele na parcela de controle (0 ppm), e mesmo quando a concentração de teor de sanguinarina foi tão baixa quanto 0,15 ppm, um alto efeito foi exibido. A partir desses resultados, descobriu-se que com a administração de sanguinarina, a resistência ao estresse ambiental contra a secura de planta é aperfeiçoada.

APLICABILIDADE INDUSTRIAL

[094]A composição para o aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta da presente invenção, cujo ingrediente ativo tem sido esclarecido, pode ser, desse modo, aplicada a uma planta que tem necessidade de ser segura, tal como uma planta comestível. Adicionalmente, um efeito estável de aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental pode ser fornecido para uma planta que deveria ser protegida.

REIVINDICAÇÕES

Claims

1. Método para aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta CARACTERIZADO pelo fato de que compreende aplicar ao menos um tipo de sanguinarina ou um sal da mesma representada pela seguinte fórmula (I) a uma planta ou solo antes da planta ser submetida ao estresse ambiental [Fórmula química I] em que que o estresse ambiental é estresse à alta temperatura, estresse à seca ou estresse à alta temperatura e estresse à seca.

2. Método para aperfeiçoamento da resistência ao estresse ambiental de uma planta CARACTERIZADO pelo fato de que compreende aplicar ao menos um tipo de sanguinarina ou um sal da mesma representada pela seguinte fórmula (I) a uma planta ou solo [Fórmula química I] em que que o estresse ambiental é estresse à alta temperatura, estresse à seca ou estresse à alta temperatura e estresse à seca.